KR950009099B1

KR950009099B1 - 항후천성면역결핍증바이러스효과를갖는생약추출조성물및그추출방법

Info

Publication number: KR950009099B1
Application number: KR1019920010894A
Authority: KR
Inventors: 한영복; 문정조; 경홍기; 김종배; 김경태; 김해리; 김정한; 신현길; 김경례; 홍은경; 김춘원
Original assignee: 한영복; 사단법인한국창조과학회; 김영길
Priority date: 1992-06-23
Filing date: 1992-06-23
Publication date: 1995-08-14
Also published as: KR940000110A; DE4320889C2; US5468487A; JPH072686A; JP2531487B2; DE4320889A1

Abstract

내용 없음.

Description

항 후전성 면역 결핍증 바이러스(HIV) 추출조성물 및 그 추출방법

제1도는 본 발명의 추출공정도.

제2도는 본 발명품에 이용한 면역결핍 바이러스 시험대조군 현미경사진.

제3도는 본 발명품(10㎍/㎖)을 투여한 시험군 현미경사진.

제4도는 본 발명품(50㎍/㎖)을 투여한 시험군 현미경사진.

제5도는 본 발명품(100㎍/㎖)을 투여한 시험군 현미경사진.

제6도는 본 발명품을 극성에 따라 물질로 분획한 공정도.

제7도는 제6도와 관련한 분획과 베르베린의 박층색층분석도.

제8도는 분획 6의 이온교환수지를 이용한 분획물들의 박층 색층분석도.

제9도는 분획 6의 고성능 액체 색층분석도.

제10도는 분획 6-5와 베르베린의 적회선 공명 분광도.

제11도는 분획 6-5의¹H 핵자기 공명 분광조사도.

제12도는 베르베린의¹H 핵자기 공명 분광조사도.

제13도는 분획 6-5의¹³C 핵자기 공명 분광조사도.

제14도는 베르베린의¹³핵자기 공명 분광조사도.

제15도는 분획 6-5와 베르베린의 MS분광사도.

본 발명은 후천성 면역 결핍증 바이러스(HIV) 증식을 억제하는 추출물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 리치니 세멘(Ricini Semen)의 탈지한 전분질과 콥티스(Coptis)속 식물 뿌리를 혼합하여 추출한 추출물로서 부작용이 없으면서도 항면역결핍 바이어스 효과를 얻는데 적합한 추출물과 그 제조방법에 관한 것이다. 1983년에 후천성 면역결핍성(AIDS : Acquired Immune Deficiency Syndrome)의 원인자가 면역 결핍 바이러스 1형(HIV-1)으로 밝혀진 이후 유전자 구조 및 바이러스(virus)증식 조절에 대한 많은 연구가 이루어지고 있다.

면역 결핍 바이러스(이하 "HIV"라 칭함)의 티임파구(T_H. helper Tcell)에 대한 선택적인 감염은 티(T_H)임파구의 소실로 인해 면역 체계의 이상의 후천성 면역 결핍증을 일으키는데, 잠복기에는 바이러스의 DNA가 숙주세포의 염색체(chromosome)에 들어가 있다가 잠복기가 끝나면 바이러스가 증식되어 세포간의 융합을 일으켜 다핵세포(syncytia)를 만들어 결국 세포를 죽게하는 급성감염과 숙주세포가 치명적인 효과(cytopathic effect)를 주지 않으면서 바이러스가 계속적으로 증식하는 만성감염 상태가 있다.

이와같은 바이러스는 숙주세포에 존재하는 씨디4(CD4)수용체를 바이러스(virus)의 막단백질인 지피120(gp120)이 인지하여 결합함으로 바이러스가 세포안으로 들어가 자신이 갖고 있는 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용하여 바이러스의 유전자인 RNA를 DNA로 바꾸어 숙주세포의 유전자에 들어가게 된다.

그후 숙주세포 증식에 필요한 여러 신호들과 인자들을 세포내에서 이용하여 바이러스의 유전자를 복제하고 바이러스 유전자에 의해 발현되는 유전자 발현조절 단백질(transacting regulatory proteins)의 작용에 따라 긴 단백질 사슬이 만들어지고, 이어 면역결핍 바이러스(HIV)의 특이한 단백질 분해효소(protease)가 필요한 단백질로 분해하여 만들고, 이들 단백질중 어떤 것은 당 단백질로 변형되어 서로 결합함으로 운전한 바이러스로 이루어진다.

따라서 항 면역결핍 약제(anti-HIV dryg)를 개발하기 위해서는 HIV의 봉제과정(cycle)중 화학 요법으로서 다음과 같은 저해단계로 나눌 수 있다. 가) 바이러스의 막단백질인 gp120과 숙주세포의 CD4 수용체간의 작용을 저해하거나, 나) 바이러스 RNA를 프로바이러스 디엔에이(proviral DNA)로 바꾸는 역전사 효소를 저해하거나, 다)바이러스 조절 단백질(viral regulatory protenis, tat, rev)의 작용 저해, 라) 바이러스 적구단백질(viral precusor protein)의 분해 저해, 마) 당 단백질로의 변화방지를 위해 포도당 분해효소(glucosidase) 또는 만노즈 분해효소(mannosidase)의 저해 등을 들 수 있다.

그동안 HIV와 사람세포 간의 차이점을 이용하여 선택적인 항 바이러스 효과를 가지는 약제의 개발이 이루어지고 있는데, 현재까지는 바이러스 세포증식을 억제하는 저해제로서 상기의 가)의 작용을 저해하는 유화덱스트란(dextran sulfate), 펩타이드 티(peptide T)가 있고, 상기의 나)와 같이 역전사 효소의 저해제로서는 디데옥시씨이티딘(dideoxcytidine), 디데옥시이노신(dideoxyinosine), 포스포노포믹산(phosphonoformate)등이 있다.

그리고 그외에도 라바비린(ribavirin), 카스타노스퍼민(castanospermine), 지엘큐 223(GLQ 223), 항센스 올리고헥산(antisense oligonucleotides)이 있으며, 단백질 분해효소 저해제(protease inhibitor)등이 있다. 그러나 상기한 약제들은 아직도 효과적인 AIDS 치료약으로 쓰이지 못하고 있는 실정이다.

또한 현재 실용화되고 있는 약제중에는 지이도 부딘등(Zidovudine, azidothymidine, AZT)이 있으나, 이들은 두통, 구토, 고열과 반점등의 증상을 비롯하여 조혈계, 신경계, 간기능에 손상을 주는 등 부작용이 심하고, 장기 치료시 약물에 대한 내성이 형성되는 등의 문제점이 있다.

이에 본 발명은 바이러스의 복제과정(cycle)중 어느 한 단계를 저해하여 HIV의 증식을 억제하기 위해 천연식물중 리치니 세멘(Ricini semen) 식물과 콥티스(Coptis)속 식물을 이용하여 부작용이 없는 항 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출물을 제공하고자 하는데 그 목적이 있다. 이하 본 발명을 설명한다. 본 발명은 리치니 세멘식물을 탈지한 전분질과 콥티스속 식물 뿌리를 일정 비율 혼합하여 추출한 후천성 면역 결핍증 바이러스(HIV) 증식억제 효과를 갖는 추출물로서, 부작용이 없음과 함께 바이러스 증식 억제작용이 양호한 항 에이즈(ADIS)치료제이다.

이와같은 본 발명품은 리치니 세멘 식물 : 콥티스 식물의 혼합조성비가 2 : 5-5 : 2의 비율로 이루어지며, 이런 추출물 중에는 독성을 갖는 단백 리산(ricin) 및 독성알카로이드 리시닌(alkaloid ricinine)은 제1도의 공정을 통하여 분해 제거되어 이루어진다.

본 발명품은 정상세포에 대하여는 무해함과 함께 바이러스 증식을 선택적으로 억제한다.

본 발명에 사용되는 식물 원료중 리치니 세멘은 30-50%의 지방과 글로불린(globulin), 뉴클레오 알부민(nucleoalbumin), 글루코프로테인(glucoprotein), 리신(ricin), 리파제(lipase)등의 단백질과 독성 알카로이드 리시닌(alkaloid ricinine)등이 함유된 식물로서, 이는 인도 및 열대 아프리카 원산으로 한대지방을 제외하고는 세계적으로 널리 분포되어 있다.

특히 동북지방에서 대량재배되며 아메리카 및 지바등에서도 많이 재배된다. 열대 및 난대지방의 것은 작은 수목이고 온대지방의 것은 일년생 초목이다. 이 식물의 대표적인 것은 리치너스 코무니스엘(Ricinus Communis L)(파자마)이다. 또한 본 발명에 사용되는 다른 식물로서, 콥티스(황련) 속식물은 아시아 각국의 야산에서 자생 또는 재생되는 다년생 초본이다. 중국산은 콥티스 차이넨시스 프란차(Coptis chinensis FRANCH), 콥티스 델토이디스씨 와이 챙 애 히사오(Coptis deltoidis C.Y. CHENG et HISAO), 콥티스 퀴인퀘섹타 더블유 티 왕(Coptis quinquesecta W.T.WANG), 콥티스 테토이드 씨 와이 챙(Coptis teetoide C.Y. CHENG) 콥티스 차이넨시스 프란치 바 브레비세팔라 더블유 티 왕 애 히사오(Coptis chinensis FRANCH var brevisepala W.T. WANG et HISIAO)등이 있고, 인도 및 네팔산 콥티스 데타웰(Coptis teeta WALL), 그리고 일본산은 콥티스 자포니카 마키노 바 디섹타 니카이(Coptis japonica MAKINO var dissecta NAKAI), 콥티스 자포니카 마키노 바 자포니카 사타케(Coptis joponica MAKINO var japonica SATACKE)가 있다. 그리고 한국산은 제퍼소미아 두비아 벤타 에 후커(Jeffersomia dubia BENTHAN et Hooker)등을 포함한다.

이와 같은 콥티스 식물 뿌리의 황색 또는 황갈색 물질은 주로 알칼로이드 베르베린(Alkaloid berberine)이며 그 밖에 팔마틴(palmatine), 라테오리진(raterrhizin), 캅티신(captisin), 마그노플로린(magnoflorine)등이 포함되고 있다. 이 성분들은 담즙 및 췌액분비 촉진작용과 동맥경화에 대한 예방효과 그리고 항염작용등이 인정되고 있다. 따라서 콥티스식물은 임상적으로 소염성 고미건위 및 진정약으로 충혈 및 염증에 응용되고 있다.

이와같은 본 발명에 사용되는 리치너스 콤뮤너스 엘과 톱티스속 식물 뿌리를 혼합추출하지 않고 각각 하나의 식물 만을 추출한 추출물은 부작용이 심할 뿐만 아니라 항 HIV효과가 매우 낮다.

따라서 본 발명은 상기 두 식물을 혼합 추출하는데 특징이 있다. 제1도는 본 발명품의 추출공정도로서 이에 따라 설명한다.

본 발명은 리치너스 콤뮤너스엘을 탈지한 전분질과 콥티스속 식물 뿌리를 2 : 5-5 : 2의 중량 비율로 혼합하고(여기서 가장 바람직하게는 4 : 5-5 : 4로 혼합) 여기에 지방산의 에스테르중 1종 이상의 유기 용매로 하되 가장 바람직하기로는 클로로포름(chloroform)이나 헥산(hexane)용매를 가하여 20-25℃의 실온에서 20-25시간 교반하면서 용출하고 상기 용출액을 반복하여 감압여과 분리하여 잔사를 얻는 공정과, 이 잔사를 건조하여 상기 유기 용매를 제거한 다음 여기에 증류수 약 5000㎖를 넣고, 100℃에서 3-4시간 동안 가열추출하는 공정과, 이 추출액을 1500㎖가 될 때까지 감압하여 농축하고 이 농축액을 증기압으로 포화시켜서 생긴 침전물을 제거하는 공정과, 이 추출여액에 다시 클로로포름등의 유기용매를 넣고, 진탕하여, 분리시켜 클로로포름층은 제거하고, 남은 수용액층에 헥산을 가해 기름성분을 모두 헥산층으로 이행시켜 수용액층 만을 분취하여 유기용매를 제거하는 공정과, 이렇게 분취한 수용액층을 탈크로 정제하는 공정과, 이어서 감압여과하여 여액을 얻고, 이 여액을 막여과(me-mbrane filter)장치로 여과한 후 동결 건조하여 황갈색 분말을 얻는 공정으로 이루어진다.

상기 제조공정에서 이용되는 유기용매는 지방족, 방향족, 알코올, 탄소수가 1-8인 동종 또는 이종 할로겐을 1-6개 포함한 할로겐(F, Cl, Br, I)탄화수소, 메틸 또는 에틸, 프로필, 부틸 및 아밀을 함유한 지방산의 에스테르, 초산 에스테르, 탄소수가 1-8개의 지방족 또는 방향족, 방향족 원자단을 가진 케톤, 지방족 또는 방향족 탄화수소로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 유기용매를 사용할 수 있다.

상기와 같은 전 공정을 통하여 독성을 갖는 단백질 리신(ricin)과 알카로이드리신(alkal-oid ricinine)이 제거된다.

이와 같은 제조방법에 의해 얻어진 추출물은 사람에게 투여가능한 제제의 형태로 만들어 투여할 수 있으며 이때는 바람직하기로는 증류수나 생리 식염수에 용해하여 주사제로서 사용할 수 있다. 이하 실시예를 통하여 설명한다.

[실시예 1]

본 실시예는 실험관내 실험으로서, 숙주세포(T cell line : Sup T1. 119)에 대한 본 발명의 독성을 검사하고 항바이러스 제제(antiviral agent)의 최대 허용치를 결정하기 위하여(표 1)과 같이 1.0ppm에서 100ppm의 여러 농도를 시험하였다. 각 농도의 본 발명품을 오십만-팔십만(0.5-0.8million)세포에 처리하여 배양하면서 세포계수기(hemocytometer)를 이용하여 세포수를 측정함으로써 적정 농도를 결정하였다.

[사용 바이러스 :]

본 실험에 사용된 바이러스는 재조합 바이러스로서, 자신의 복제에 필요하지 않는 면역 결핍 바이러스 엔이에프(HIV-1 nef) 유전자대신 클로람페니콜 아세틸 전이효소(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)가 치환된 pSVCAT이다.

이 바이러스를 이용하면 다핵세포 형성분포(syncytium-forming assay) 뿐만 아니라 필요한 경우 클로람페니콜 아세틸 전이효소 활성(CAT activity)을 측정하여 바이러스의 복제 정도를 알 수 있는 장점이 있고, 시미안 면역결핍 바이러스(simian Immune deficiency virus)의 경우 엔이에프(nef)유전자가 생체내(in vivo)에서는 바이러스 복제에 필수적인 것으로 증명되었으므로 면역 결핍 바이러스(HIV-1)의 경우도 이와 유사하다면 안전성의 문제도 해결할 수 있는 장점이 있다. 상기와 같은 바이러스를 제2도와 같은 대조군으로서 이를 이용하여 다음과 같이 실험하였다.

[실험조건 및 효과 :]

5×10⁴개의 숙주세포(Sup T¹세포)를 시험관(96-well plate)에 넣고 (표 1)과 같은 여러 농도의 본 발명품을 처리하고 TCID₅₀의 바이러스(pSVCAT)를 넣어 3일간 배양한 후 다핵세포 형성을 측정하였다.

본 발명품에 의한 다핵세포 형성(syncytium formation)의 억제정도를 (표 2)와 같은 대조군(AZT treated control)과 비교조사하였다.

이와같은 방법으로 효과가 나타나는 농도를 선택하여 숙주세포(H9세포)에 바이러스와 본 발명품을 처리하고 3일 간격으로 배양액(media)의 3/4를 같은 농도의 본 발명품 약품이 들어 있는 새로운 배양액(freash media)으로 바꾸어 주었다. 그리고 9일후 1㎖을 15㎖의 원추형관(conical tube)에 넣고 350g에서 10분간 원심분리하였다.

그 결과 본 발명품은 (표 1) 및 제3도-제5도에 나타난 바와 같이 10㎍/㎖농도에서부터 다핵세포 수가 나타나지 않은 것으로 보아 HIV증식을 억제하는 강한 항 바이러스 효과를 갖는 물질이 들어있음을 알 수 있다. (표 2)는 기존 AZT에 대한 효과를 나타난 것이고 (표 3)은 베르베린 그 자체 만을 대상으로 하는 효과가 나타낸 것이다.

제2도는 본 발명품을 시험하기 위한 시험 대조군을 나타낸 현미경 사진으로서 이런 대조군을 이용하여 본 발명품을 각각 10㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖ 투여한 결과 각각 제3도-제5도와 같이 다핵세포가 나타나지 않았음이 현미경 사진으로 관찰되었다. 다만, 본 발명품은 (표 2)의 AZT에 비해 같은 농도에서는 효과 정도가 약하나 AZT는 구토, 두통, 고열등 신체 여러분야에 심각한 부작용을 일으키므로 장기간 투여가 어려운데 반해 본 발명품은 AIDS치료에 효과적으로 사용할 수 있다.

[표 1]

본 발명품

[표 2]

AZT

[표 3]

베르베린

상기 [표 1]-[표 3]에서

[실시예 2]

본 실시예는 본 발명의 추출물에 대한 유용성분의 분리실험으로서, 본 발명품을 화합물의 유기화학적 성질에 따른 분리를 제6도와 같이 하여 5개의 각기 다른 분획(2-6)으로 나누어 박층색층분석(TLC)(Thin Layer Chromatography)과 함께 조사하였다.

본 발명품 10g을 물과 에탄올(methanol)의 혼합용액 100㎖에 녹인 후 여과하여 여액(filtrate)과 잔사(residue)구분하고, 여액중의 메탄올을 완전히 증발시킨 다음 100㎖ 증류수로 녹인다.

이렇게 하여 얻어진 수용액(aqueous solution)을 분획, (#1)이라 하며, 이 #1을 다시 pH 2.0으로 맞춘 후 클로로포름(chloroform)로 추출하여 클로로포름층과 수용액층(aqueous la-yer)으로 분리하며 클로로포름은 완전히 증발시킨 후 100㎖ 증류수로 녹인다.

이 수용액을 분획 3(#3)으로 한다. 그리고 #1에서 부리한 수용액층을 다시 pH 10.0으로 한후 클로로포름과 메탄올의 혼합용액을 3 : 1비율로 하여 추출하여 클로로포름과 수용액층으로 분리하고, 클로로포름을 증발시킨 후 100㎖ 증류수로 녹인 분획(#5)를 얻는다. 그리고 수용액층은 증발시킨 후 100㎖ 증류수를 다시 녹여 분획 6(#6)을 얻는다. 또한, 본 발명품에서 여과한 잔사(residue)를 에틸 아세테이트(ethyl acetate)로 추출하여 여액과 잔사로 분리하여 여액 중의 에틸 아세테이트를 증발시킨 후 100㎖ 증류수를 첨가하여 분획 4(#4)를 만들고, 잔사는 100㎖ 증류수로 녹인 분획 2(#2)를 얻었다.

이상의 분리 실험에서와 같이 각 유기용매층은 완전히 증발시킨 후 100㎖의 증류수로 녹였으며, 농도에 따른 각 화합물들의 활성차이를 배제하도록 각 분획을 본 발명품 원액 100g/ℓ에 상응하는 농도에 맞추어 실험하였다.

단 분획 #2는 물에 대한 용해도가 낮아 원액 50g/ℓ에 상응하는 농도로 만들었으며 대신 다른 분획들의 2배량을 사용하여 실험하였다.

분획 1부터 6까지 분석을 위한 TLC조건은 고정상은 정상 실리카판(normal phase silica plate), 전개용매는 부탄올(butanol) : 아세트산(aceticacid) : 물=4 : 1 : 1비율로 하고, 시료의 검출은 자외선등(UV lamp)로 행하였으며, 콥티스(Coptis)속의 주요 4차원적 알카로이드(quarternary alkaloid)인 베르베린(berberine)(Siga Chem. Co, U. S. A)를 참고(reference)물질로 하여 본 발명품 원액과 각 분획을 비교한 결과 제7도에 나타난 바와 같이 분획 1과 분획 6은 본 발명품 원액과 같은 TLC를 나타났다.

따라서 본 발명품의 대부분의 구성물질은 분획 6의 quarternary alkaloid와 N-oxide등의 극성(polar)물질들로서, 베르베린(berberine)과 같은 RF값을 갖는 화합물이 있음을 알 수 있었다.

[실시예 3]

유용성분의 이온 성질에 따른 분리로서, 실시예 2의 분획 6을 다시 Mono Q와 Mono S의 이온 교환 카트리지(ion exchange catridge)를 이용하여 다시 #6-5과 #6-Q인 2개의 분획으로 분리하여 전개용매인 butanol : acetic acid : 물=4 : 1 : 1비율하에서 TLC를 행하였다. 즉, Mono S, Mono Q의 두 카트리지를 메탄올로 세척하고 증류수로 포화시켜준 다음 분획 6을 1.0㎖씩 각각의 컬럼(column)에 주입(loading)하여 각 컬럼의 여백을 분획 6 및 베르베린과 비교하여 TLC를 행하였다. 그 결과 제8도와 같이 나타났다.

[실시예 4]

고성능 액체색층(HPLC)(High Performance Liquid Chromtography)분석을 이용한 유용성분시험으로서, 실시예 2와 실시예 3의 분획 6을 제9도와 같이 다시 6개의 분획(6-1, 6-2, 6-3, 6-4, 6-5, 6-6)으로 분취하였다.

각 분취액의 유기 용매를 날려보내는 50㎖ 증류수에 녹인 후 HPLC 이동상의 인산염(phosphate)를 제거하기 위해 Sep-Pak C₁₈catridge를 이용하여 50㎖ 수용액을 Sep-Pak C₁₈에 loading한 후 충분한 증류수로 씻어내어 여액에 짠맛이 없어진 후 메탄올로 흡착된 화합물을 용출시켰다. 그리고 HPLC로 분석한 결과 제9도에 나타난 바와 같이 분획 6-5는 베르베린과 머무름시간(retention time)이 같았다.

[실시예 5]

실시예 4에서 나타난 분획 6-5의 구조 결정을 분석한 것이다. 적외선 분광도(IR)(Infrared spectroscopy),¹H 핵자기 공명 분광조사(1H NMR)(1H Nuclear magnetic reasonance spectroscopy),¹³C NMR, 질량분석기(MS)(Mass spectrometry)를 이용하여 베르베린과 비교 분석한 결과, IR은 제10도에 나타난 바와 같이 (a)로 표시된 본 발명의 분획 6-5의 스펙스럼로 나타났고, 1H NMR의 스펙트럼에서 분획 6-5호와 베르베른은 각각 제11도 및 제12도와 같이 나타났다. 또한¹³C NMR 스펙트럼에서 분획 6-5와 베르베린은 각각 제13도 및 제14도와 같이 나타났다. 그리고 MS스펙트럼은 제15도와 같이 6-5는 (a)이고 베르베린은 (b)로 나타났다. 이와같은 스펙트럼 분석에서 알 수 있는 바와 같이 분획 6-5에는 약간의 불순물은 있으나 베르베린이 함유되어 있음을 알 수 있었다.

Claims

리치니 세멘(Ricini semen)의 식물을 탈지한 전분질과 콥티스(Coptis)속 식물의 뿌리로 구성된 혼합물로부터 추출하여 이루어진 항후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를갖는 추출조성물.
제1항에 있어서, 리치니 세멘 전분질과 콥티스속 식물의 뿌리로부터 추출된 추출물이 2 : 5-5 : 2의 비율로 혼합되어 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 추출물중 단백리신(ricin)과 알카로이드 리시닌(alkaloid ricinine)이 제거되어 이루어진 항후천성 면역결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출조성물.
제1항에 있어서, 리치니 세멘 식물이 리치너스 콤무니스 엘(Ricinus communis L)로 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출조성물.
제1항에 있어서, 추출물중 베르베르(berberin)이 함유된 항 후천성 면역결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출조성물.
제1항에 있어서, 추출물이 주사제, 수액제, 캅셀제, 정제의 형태로 투여하는데 유용한 항 후천성 면역결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출 조성물.
리치너스 세멘의 식물을 탈지한 전분질과 콥티스속 식물의 뿌리로 구성된 혼합물을 유기 용매로 용출하여 용출물과 잔사로 분리하는 공정과 잔사를 이용하여 열수, 유기 용매로 유효성분을 추출하는 공정과 정제하는 공정으로 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출조성물.
제7항에 있어서, 잔사를 증류수 또는 물로 가온 추출하고, 고압에서 포화하여 침전물을 제거한 다음 수용액을 얻고, 이 수용액을 정제하는 공정으로 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출물을 추출하는 방법.
제8항에 있어서, 탈크를 가하여 정제하는 공정으로 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출물을 추출하는 방법.
제7항에 있어서, 잔사중 유기 용매를 제거하여 증류수 또는 물로 가온추출하는 공정과 이 추출액에 감압하여 농축하여 증기압을 포화시켜 침전물을 제거한 추출액을 얻는 공정과, 이 추출액에서 유기용매를 진탕하고, 유기용매를 분리하여 수용액층을 얻는 공정과, 이 수용액층에 핵산을 가하여 기름성분을 제거한 수용액층을 얻는 공정과, 이 수용액층에 탈크를 가하여 정제하는 공정으로 이루어진 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출물을 추출하는 방법.
제7항 또는 제10항에 있어서, 유기용매는 지방족, 방향족 알코올, 탄소수가 1-8인 동종 또는 이종 할로겐을 1-6개 포함한 할로겐(F, KCl, Br, I)탄화수소, 메틸 또는 에틸, 프로필, 부틸 및 아밀을 함유한 지방산의 에스테르, 초산에스테르, 탄소수가 1-8개의 지방족 또는 방향족, 방향족 원자단을 가진 케톤, 지방족 또는 방향족 탄화수소로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 유기용매임을 특징으로 하는 항 후천성 면역 결핍증 바이러스 효과를 갖는 추출물을 추출하는 방법.