KR930009511B1 - 리파아제 존재하의 글리세리드 제조방법 - Google Patents
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Abstract
내용 없음.
Description
제 1 도는 본 발명의 방법에 따라서 제조된 글레세리드 성분의 수소 불꽃 이온화 검출기를 사용한 얇은 막크로마토그래피의 분석에 관한 것.
* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명
MG : 모노글리세리드 1,2-DG : 1,2-디글리세리드
1,3-DG : 1,3-디글리세리드 FA : 지방산
본 발명은 효소를 상용하여 글리세리드를 제조하는 방법에 관한 것이다. 좀더 구체적으로, 본 발명은 지방산 또는 지방산 에스테르와 글리세롤을 리파아제 존재하에 반응시켜서 글리세리드를 합성하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서는, 트리글리세리드가 전혀 또는 거의 함유되지 않은, 주로 모노글리세리드와 디글리세리드로 이루어진 글리세리드를 제조하기 위해서 리파아제로 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물을 사용한다. 가장 바람직하게는, 본 발명은 지방산 또는 지방산 에스테르와 글리세롤을 리파아제 조재하에 반응시킴에 의한 글리세리드의 제조방법에 관한 것이고, 상기 리파아제는 트리글리세리드 및 디글리세리드가 전혀 또는 거의 함유되지 않고, 주로 모노글리세리드로 이루어진 글리세리드를 제조하는데 사용된다. 모노글리세리드 및 디글리세리드는 유화제 및 살균제로 유용하다.
리파아제는 유지류 및 지방산 에스테르를 가수분해시키는 효소이다. 그러나, 특정 조건하에서 리파아제는 가수분해의 역반응인 에스테르화 반응을 유발시키므로 지방산과 글리세롤 또는 지방산과 알코올로부터 글리세리드 또는 에스테르를 합성할 수 있음이 공지되어 있다(J. Gen. Appl. Microbiol., 10, 13∼22,1964 ; Proc. Ⅳ IFS : Ferment. Technol. Today, 315∼320, 1972, Society of Fermentation Technology Japan 발표 ; Biochim. Biophys. Acta, 489, 415∼422, 1977 ; Bull. Tech/Gattefoss e Rep., 76, 34∼36, 1983 ; J. Am. Oil Chem.Soc., 61, 191∼195, 1984 ; 일본국 특허공보 제 7754/1976호, 일본국 특허공보 제 23535/1982호, 일본국 특허공개 제 118094/1984호, 일본국 특허공개 제 118095/1984호, 등). 상기의 선행 기술에서 사용된 리파아제 및 가장 보편적인 리파아제는 소위 트리글리세리드 리파아제라고도 불리는 트리아실글리세롤 리파아제이다. 이러한 리파아제는 각 글리세리드에 대한 특이성은 다르지만, 트리글리세리드뿐만 아니라 디글리세리드 및 모노글리세리드에 대하여 특이성을 갖는다. 이런 트리글리세리드 리파아제의 작용을 이용한 에스테르화 반응으로 합성된 글리세리드는 통상적으로 트리글리세리드, 디글리세리드 및 모노글리세리드의 혼합물이고, 상기 글리세리드가 주로 모노글리세리드와 디글리세리드로 구성되어도, 글리세리드 혼합물내의 모노글리세리드의 함량은 적다.
모노글리세리드 및 디글리세리드는 음식물, 화장품 및 의약품 등에서 유화제로써 널리 사용된다. 유화제로서의 작용 능력에서 모노글리세리드가 디글리세리드보다 월등히 좋고, 트리글리세리드의 존재는 바람직하지 못하다는 것이 공지되어 있다. 모노라우린, 모노카프린, 등과 같은 특별한 형태의 모노글리세리드는 예를 들면 음식물에 대한 살균제 또는 방부제로 사용된다. 일반적으로 유화제로 사용되는 글리세리드는 약 90몰% 이상의 모노글리세리드를 함유하는 것이 필요하다. 따라서 상기 글리세리드의 공지된 제조방법에서, 모노글리세리드의 함량을 증가시키기 위해 글리세리드 혼합물을 분자 증류 등을 수행함이 필요하다.
본 발명의 목적은 주로 모노글리세리드로 구성된 글리세리드의 제조방법 및, 유화제 및 살균제로 유용한 주로 모노글리세리드 및 디글리세리드로 구성된 글리세리드의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따라, 지방산 또는 지방산 에스테르를 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에 글리세롤과 반응시켜, 트리글리세리드가 전혀 또는 함유되지 않고, 주로 모노글리세리드와 디글리세리드로 구성된 글리세리드를 제조한다.
더우기, 본 발명에 따라, 트리글리세리드와 디글리세리드가 전혀 또는 거의 함유되지 않고 주로 모노글리세리드로 구성된 글리세리드를 제조하기 위해, 디글리세리드와 트리글리세리드의 생성이 최소화되는 바람직한 조건에서, 지방산 또는 지방산 에스테르를 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에 글리세롤과 반응시킨다.
본 발명의 한 면에 따라, 글리세롤과 지방산 또는 지방산 에스테르를 혼합하고, 그 혼합물을 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에 교반함으로 구성된 트리글리세리드를 거의 함유하지 않은 모노글리세리드 및 디글리세리드의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 다른 면에 따라, 글리세롤과 지방산 또는 지방산 에스테르를 혼합하고, 그 혼합물을 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에 교반함으로 구성된, 트리글리세리드와 디글리세리드를 거의 함유하지 않은 모노글리세리드의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따라서, 지방산 또는 지방산 에스테르를 적당한 조건에서 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에 글리세롤과 반응시키면 트리글리세리드 또는 트리글리세리드 및 디글리세리드가 전혀 또는 거의 없는 글리세리드가 합성된다.
본 발명에서 사용한 리파아제는 글리세롤의 3개의 히드록실기중 어느 1개가 지방산으로 에스테르화된 모노글리세리드, 글리세롤의 1,2- 또는 1,3- 또는 2,3- 위치의 2개의 히드록실기가 지방산으로 에스테르화된 디글리세리드, 또는 상기 모노글리세리드와 상기 디글리세리드의 혼합물을 가수분해시킬 수는 있지만, 글리세롤의 3개의 히드록실기 모두가 지방산으로 에스테르화된 트리글리세리드에는 전혀 또는 거의 영향을 미치지 않는 효소이다. 이러한 리파아제의 예로 페니실리움 속(genus)의 곰팡이에 의해서 제조된 모노글리세리드 및 디글리세리드에 대해 특이성을 갖고 있는 리파아제뿐만 아니라, 쥐의 소장, 돼지의 지방조직 등과 같은 동물의 내부기관에서 수득한 모노글리세리드 리파아제 및 디글리세리드 리파아제도 들 수 있다. 본 발명에서는 페니실리움 속으로부터 수득한 리파아제가 바람직하다. 특히, ATCC 34613의 수탁번호하에 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 기탁되어 있는 페니실리움 시클로피움(Penicillium cyclopioum)에 의해서 제조된 리파아제가 바람직하다. 이러한 균주는 ATCC 목록에 기재되어 있고 어느 누구도 이용할 수 있다.
페니실리움 시클로피움은 트리글리세리드 리파아제를 제조할뿐만 아니라, 모노글리세리드 및 디글리세리드에 대해서 특이성을 갖는 리파아제도 제조한다고 공지되어 있다.(J. BIOCHEM., 87, 205∼211, 1980). 그러나 본 발명자들은 상기한 리파아제가 본 발명의 목적에 사용될 수 있다고 제시한 어떤 문헌도 발견할 수 없었다.
본 발명에서 사용되는 리파아제를 제조하기 위해서, 모노글리세리드, 디글리세리드 또는 이들의 혼합물에 대해서 특이성을 갖는 리파아제를 제조할 수 있는 페리실리움속의 균주를 미생물 배양에 사용되는 통상적인 배지에서 배양하여, 배양 혼합물에 축적된 리파아제를 수거한다. 배양 혼합물에서 수거한 리파아제를 공지의 정제 수단으로 정제한다 ; 그러나, 본 발명의 목적상, 상기한 리파아제를 순수한 상태로 정제할 필요는 없다. 단지 조(crude) 리파아제가 트리글리세리드 리파아제를 함유하는 경우에는 트리글리세리드 리파아제가 제거되어야 한다. 본 발명에서 바람직하게 사용되는 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613에서 수득한 배양 혼합물에 트리글리세리드 리파아제가 함유되어 있어도, 배양 혼합물로부터 조(crude) 효소용액을 크로마토그래피, 특히 바람직하게는 DEAE-세파로스 CL-6B를 사용한 크로마토그래피하면 트리글리세리드 리파아제를 분리하여 제거할 수 있다.
본 발명에서, 글리세리드 합성의 출발물질로 사용한 지방산 및 지방산 에스테르로서 C4∼22포화 또는 불포화지방산, 상기한 지방산의 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 벤질, 아밀, 비닐 및 다른 에스테르, 및 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 오토클레이브 방법, 트윗첼(twitchell) 방법, 비누화 등과 같은 물리화학적 방법에 의해서 수득하거나, 또는 트리글리세리드 리파아제를 사용하는 효소 방법에 의해서 수득한 유지류의 가수분해물도 역시 유용하다. 지방산 및 지방산 에스테르는 직쇄 또는 측쇄를 함유할 수 있다. 바람직한 지방산의 예로는 스테아르산, 올레인산, 리놀레인산(linoleic acid), 리놀렌산, 팔미트산, 미리소트산, 라우르산(lauric acid), 카프르산(capric acid), 카프릴산(caprylic.acid)카프로인산(caproic acid) 및 이소스테아르산을 들 수 있다. 바람직한 지방산 에스테르의 예로는 비닐스테아레이트, 비닐팔미테이트, 비닐라우레이트, 및 비닐카프레이트를 들 수 있다.
본 발명에 따라서, 상기의 지방산중 하나 또는 상기의 지방산 에스테르중 하나, 또는 이들의 혼합물의 존재하에 글리세롤과 20∼55℃의 온도에서 1시간 ∼5일간 교반하면서 반응 혼합물의 수분함량이 30중량% 이하가 되도록 하면서 반응시켜서, 트리글리세리드가 전혀 또는 거의 함유되지 않고, 주로 모노글리세리드와 디글리세리드로 이루어진 글리세리드를 합성한다. 사용한 리파아제의 양은 출발물질로 사용한 지방산 또는 지방산 에스테르에 대한 글리세롤의 비는 몰비로 0.2∼200이 바람직하다. 반응중의 pH 범위는 사용한 리파아제가 효과적으로 작용할 수 있는 범위 내일 수 있다. 가장 바람직한 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613 리파아제를 사용하는 경우, 확실히 트리글리세리드가 전혀 합성되지 않는다.
본 발명에 따라서 합성된 글리세리드 내의 모노글리세리드와 디글리세리드의 비는 반응조건을 적당히 선택함에 따라서 광범위하게 변할 수 있다. 따라서, 글리세리드 내의 모노글리세리드의 비는 약 50%(몰비) 내지 거의 100%까지 변할 수 있다. 대체로 모노글리세리드만 합성하기 위해서, 반응시간을 1∼50시간, 사용한 리파아제의 양을 출발물질로 사용한 지방산 또는 지방산 에스테르의 몰당 1.3∼3,300 단위 및 출발물질로 사용한 지방산 또는 지방산 에스테르에 대한 글리세롤의 비를 몰비로 0.2∼50 정도 하는 것이 바람직하다. 이런 경우, 반응 혼합물 내의 물의 양, 반응온도 및 Ph는 상기와 동일하다.
본 발명의 방법에 따라서 합성된 글리세리드 혼합물을 석유 에테르 등과 같은 유기용매로 추출하여 반응 혼합물과 분리시킨후, 진공증류 또는 알칼리 정제하여 지방산을 제거한다. 반응하지 않은 출발물질은 글리세리드 합성의 출발물질로 다시 사용할 수 있다. 수득한 글리세리드가 충분히 높은 비율의 모노글리세리드를 함유하고 있으면, 혼합물 그 자체가 유화제 또는 살균제로 사용될 수 있다. 만약 모노글리세리드의 양이 불충분하면 분자 증류 등과 같은 방법으로 모노글리세리드 함량을 증가시킨 후에 목적에 따라 글리세리드를 사용할 수 있다 ; 따라서, 이런 경우에는 분자 증류 등과 같은 처리는 불필요하다.
제 1 도는 본 발명에 따라서 올레인산과 글리세롤로부터 합성된 글리세리드에 대한 성분 분석의 전형적인 예이다. 올레인산과 글리세롤 사이의 반응 종결후, 반응 혼합물을 석유 에테르로 추출한 다음, 수득한 추출물 내의 조성은 수소불꽃 이온화 검출기(Iatron Laboratories, Inc. 가 제조한 Iatroscan TH-10)를 사용하는 실리카겔 얇은 막 크로마토그래피를 사용하여 분석한다. 제 1 도에서는 명백하듯이 수득한 글리세리드내의 성분의 대부분은 모노글리세리드(MG, 즉 모노올레인)이다 ; 1,2-디글리세리드(1,2-DG 즉 1,2-디올레인) 및 1,3-디글리세리드(1,3-DG 즉, 1,3-디올레인)은 소량 존재하고, 트리글리세리드(즉, 트리올레인)은 전혀 합성되지 않는다. 제 1 도에서 FA는 반응하지 않은 올레인산을 의미한다.
본 발명에 대해 실험과 실시예를 들어서 하기에 상세히 설명할 예정이다. 글리세리드 합성에서 소비된 지방산 또는 지방산 에스테르의 비율(이후부터는 소비율로 표기)의 측정뿐만 아니라 합성된 글리세리드의 분석도 하기와 같이 수행한다. 리파아제의 단위에 대한 정의도 역시 하기에 표시했다.
[합성된 글리세리드의 성분 분석]
반응 혼합물을 석유 에테르로 추출한다. 수득한 추출물 내의 성분을 준비된 실리카겔 얇은 막 플레이트(Whatman co. 제조 PLK 5)에 점적하고, 석유 에테르 : 디에틸 에테르 : 아세트산(80:30:1 부피비)으로 전개시킨후, 반점을 요오드 증기로 검출한다. 한 종류의 글리세리드를 함유한 각 반점을 회수한후, 트리글리세리드 리파아제, 글리세롤 키나아제, 글리세롤-3-포스페이트 옥시다아제 및 과산화효소를 사용한 효소적 트리글리세리드 판정을 위한 조성물(Wako Pure Chem. Ind., Ltd. 제조, 트리글리세리드 G-테스트 Wako)을 상용하여 각각의 특별한 글리세리드를 정량 결정한다. 각 분자종의 비율은 몰%로 표시한다.
[출발불질인 지방산 또는 지방산 에스테르의 소비율]
반응 혼합물을 석유 에테르로 추출하여 수득한 추출물 내의 성분을 불꽃 이온화 검출기를 사용하여 앞에서 언급한 얇은 막 트로마토그래피로 분석한다. 출발물질인 지방산 또는 지방산 에스테르의 소비율은 수득한 글리세리드 및 반응하지 않은 지방산 또는 지방산 에스테르의 전체 피이크 면적에 대한 수득한 글리세리드의 피이크 면적의 합의 비율로 표시한다.
[리파아제 단위의 정의]
리파아제를 함유한 50mM 인산염 완충액(pH 6.0) 0.4 ml, 글리세롤 5.0g 및 올레인산 0.5g을 혼합한다. 혼합물을 40℃에서 60분간 교반하면서 배양한후, 아세톤과 에탄올(1:1)의 혼합물 20ml을 가해서 반응을 종결한다. 그후, 잔재 올레인산의 양을 0.1 N 수산화나트륨으로 적정하여 결정한다. 상기 반응에서 분당 1미크로몰의 옥살산을 환원시키는데 필요한 리파아제의 양을 1 단위로 정의한다.
[실험 1]
모노글리세리드와 디글리세리드에 대해서 특이성을 갖는 리파아제의 제조
페니실리움 시클로피움 ATCC 34613을 2% 쌀겨와 1.5% 옥수수 담근액(corn steep liquor)을 함유한 액체 배지(pH 6.0)에 접종시킨후, 26℃에서 2일간 교반 및 통기하면서 배양한다. 이렇게 수득한 배양 혼합물에서 균사체를 여과하여 제거한다. 남은 여과액을 초원심 분리하여 농축시킨다. 수득한 농축물을 파마시아 회사 제품의 DEAE-세파로우스 CL-6B를 사용한 크로마토그래피하여, 존재하는 트리글리세리드 리파아제를 분리 및 제거하고, 정제된 리파아제 제제를 수득한다. 수득한 리파아제 제제는 모노글리세리드와 디글리세리드를 가수분해시키지만, 트리글리세리드에 대해서는 가수분해 활성이 나타내지 않음이 명백하다.
이후에는 리파아제 제제를 사용한다.
[실험 2]
합성된 글리세리드의 성분비와 반응시간 사이의 관계
올레인산 1.77g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위) 및 물 0.35ml를 혼합하여 40℃에서 교반하면서 반응시킨다. 반응 시작후, 8,24,48 및 96 시간마다 반응 혼합물의 시료를 수거하여 생성된 각각의 글리세리드 성분비 분석을 수행한다. 표 1에서 기재되었듯이, 수득한 각 글리세리드 혼합물은 단지 모노글리세리드와 디글리세리드로만 구성되고, 트리글리세리드는 전혀 검출되지 않았다. 모노글리세리드의 비율은 70% 이상이며, 반응시간이 짧아질수록 모노글리세리드의 함량은 더욱 증가한다.
[ 표 1]
[실험 3]
사용한 리파아제의 양과 합성된 글리세리드의 성분비 사이의 관계
실험 2에서, 사용한 리파아제의 양을 광범위하게 변화시키고 반응을 40℃에서 20 시간 동안 수행한다. 표 2에 기재되었듯이, 리파아제를 소량 사용할수록 합성된 모노글리세리드의 함량은 증가한다.
[표 2]
[실험 4]
(a) 출발물질의 비(지방산 대 글리세롤)와 (b) 합성된 글리세리드의 성분비 사이의 관계
실험 2에서, 올레인산과 글리세롤의 비를 광범위하게 변화시키고 반응을 40℃에서 20시간 동안 수행한다.
표 3에 기재되었듯이, 지방산에 대한 글리세롤의 비가 작아질수록 합성된 모노글리세리드의 함량은 증가한다.
[표 3]
[실시예 1]
올레인산 1.77g, 글리세롤 8.0g 및 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위)를 혼합하여 30℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 올레인산의 소비율은 47%이다. 생성된 글리세리드를 석유 에테르로 추출하여 성분비를 분석한다. 전체량의 글리세리드 내의 모노글리세리드의 비율은 98.4%이고 디글리세리드의 비율은 1.6%이다. 트리글리세리드는 전혀 검출되지 않는다.
[실시예 2]
올레인산 0.44g, 글리세롤 9.5g 및 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위)를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 올레인산의 소비율은 0.75%이고, 합성된 글리세리드는 모노글리세리드 88.2%, 디글리세리드 11.8% 및 트리글리세리드 0%로 구성된다.
[실시예 3]
올레인산 1.77g, 글리세롤 8.0g 및 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.05ml(3.7 단위), 및 물 0.05ml를 혼합한후, 30℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 올레인산의 소비율은 23%이고, 합성된 글리세리드는 모노글리세리드 94.9%, 디글리세리드 5.1% 및 트리글리세리드 0%로 구성된다.
[실시예 4]
라우르산 또는 카프르산 1.77g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위), 및 물 0.35ml를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 지방산의 소비율과 합성된 글리세리드의 성분비는 표 4에 기재되어 있다.
[표 4]
[실시예 5]
리놀레인산 1.76g 또는 리놀렌산 1.75g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위), 및 1M 매킬바인(McIlvaine) 완충액(pH 6.0) 0.35ml를 혼합하여 440℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 지방산의 소비율과 합성된 글리세리드의 성분은 표 5에 기재되어 있다.
[표 5]
[실시예 6]
스테아르산, 팔미트산, 미리스트산, 카프릴산 또는 카프로인산 1.77g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위), 및 물 0.35ml를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 합성된 각 글리세리드 혼합물은 주로 모노글리세리드로 구성된다. 각 글리세리드 혼합물 내에 디글리세리드는 단지 소량 존재하고, 트리글리세리드는 검출되지 않는다.
[실시예 7]
올레인산 1.0g, 팔미트산 1.0g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위), 및 물 0.35ml를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 지방산의 소비율은 28%이고 합성된 글리세리드는 모노글리세리드 94.4%, 디글리세리드 5.6% 및 트리글리세리드 0%로 구성된다.
[실시예 8]
비닐 라우레이트 1.77g, 글리세롤 8.0g 및 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.55ml(27.7 단위)를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 비닐 라우레이트의 소비율은 94%이고, 합성된 글리세리드는 모노글리세리드 96.2%, 디글리세리드 3.8%, 및 트리글리세리드 0%로 구성된다.
[실시예 9]
비닐 카프레이트 1.77g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(3.3 단위) 및 물 0.35ml를 혼합하여 40℃에서 20시간 동안 반응시킨다. 비닐 카프레이트의 소비율은 91%이고 합성된 글리세리드는 모노글리세리드 95.9%, 디글리세리드 4.1% 및 트리글리세리드 0%로 구성된다.
[실시예 10]
비닐 팔미테이트 1.77g 또는 비닐 스테아레이트 1.95g, 글리세롤 8.0g, 페니실리움 시클로피움에서 분리한 리파아제를 함유한 용액 0.2ml(9.2 단위) 및 물 0.35ml를 혼합하여 각 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 반응시킨다. 각 반응에서, 지방산 에스테르의 소비율과 합성된 글리세리드의 성분은 표 6에 기재되어 있다.
[표 6]
Claims (12)
- 지방산 또는 지방산 에스테르와 글리세롤을 혼합하여, 그 혼합물을 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에서 교반함을 특징으로 하는, 트리글리세리드가 실제로 함유되지 않은 모노글리세리드 및 디글리세리드의 제조방법.
- 제 1 항에 있어서, 리파아제가 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613에서 제조되고 모노글리세리드 및 디글리세리드를 특이적으로 가수분해시키는 리파아제인 방법.
- 제 2 항에 있어서, 사용한 리파아제를 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613 배양 혼합물로부터 트리글리세리드 가수분해 리파아제를 크로마토그래피로 제거하여 수득하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 반응은 원료 지방산 또는 그의 에스테르의 몰당 1.3∼3300 단위의 양으로 사용된 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하, 20∼55℃의 온도, 1시간∼5일 동안 교반하에서 및 반응 혼합물중의 수분 함량이 약 30중량% 이하에서 수행하고, 원료 지방산 또는 에스테르에 대한 글리세롤의 몰비가 0.2∼200인 방법.
- 제 1 항에 있어서, 지방산이 C4∼22포화 또는 불포화 지방산인 방법.
- 제 1 항에 있어서, 지방산 에스테르는 C4∼22포화 또는 불포화 지방산의 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 벤질, 아밀 및 비닐 에스테르로 구성된 군으로부터 선택하는 방법.
- 지방산 또는 지방산 에스테르와 글리세롤을 혼합하여, 그 혼합물을 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하에서 교반함을 특징으로 하는, 트리글리세리드 및 디글리세리드가 실제로 함유되지 않은 모노글리세리드의 제조방법.
- 제 7 항에 있어서, 리파아제가 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613에서 제조되고 모노글리세리드 및 디글리세리드를 특이적으로 가수분해시키는 리파아제인 방법.
- 제 8 항에 있어서, 사용된 리파아제는 페니실리움 시클로피움 ATCC 34613 배양 혼합물로부터 트리글리세리드 가수분해 리파아제를 크로마토그래피로 제거하여 수득하는 방법.
- 제 7 항에 있어서, 반응은 원료 지방산 또는 그의 에스테르의 몰당 1.3∼3300 단위의 양으로 사용된 모노글리세리드 리파아제, 디글리세리드 리파아제 또는 이들의 혼합물의 존재하, 20∼55℃의 온도, 1시간∼50 시간 동안 교반하에서 및 반응 혼합물중의 수분함량이 약 30중량% 이하에서 수행하고, 원료 지방산 또는 에스테르에 대한 글리세롤의 몰비가 0.2∼50인 방법.
- 제 7 항에 있어서, 지방산이 C4∼22포화 또는 불포화 지방산인 방법.
- 제 7 항에 있어서, 지방산 에스테르는 C4∼22포화 또는 불포화 지방산의 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 벤질, 아밀 및 비닐 에스테르로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
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