KR930000044B1 - 의약유제 - Google Patents

Abstract

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Description

의약유제

제1도는 천연의 달걀노른자 인지질로부터 순수한 인지질을 추출하기 위한 공정을 대략적으로 나타낸다.

제2도는 유제 제조 공정을 대략적으로 나타낸다.

제3도는 어떠한 약품도 함유하지 않는 조성물(a)과 암포테리신 B를 함유하는 조성물(b)에서의 소적 크기 분포를 나타낸다.

제4도는 암포테리신 B를 함유하는 조성물(a)과 호지성 약품을 함유하지 않는 조성물(b)를 4℃에서 3개월 보관한 후의 소적 크기 분포를 나타낸다.

제5도는 Fungizone(상품명), 본 발명에 따른 암포테리신 B유제 및 염(Saline)의 주입후 아구창 칸디다(Candida Albican)감염 쥐의 시간경과에 따른 생존능력을 나타낸다.

본 발명은 물속 오일유제(oil-in-water emulsion)의 형태인 수소성 약제의 조제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 의해 제공된 조제 조성물은 장기간 안정성을 나타내고, 부가하며 다양한 투여방법에서 지속된 해리 특성을 보유한다. 이들 조제 조성물은 내열성 약품을 포함할 경우 오토클래빙(quto claving)에 의한 살균에 대해 뛰어나게 안정하다.

본 발명의 관련 선행 기술로는 다음과 같은 것들이 있다.

1)미합중국 특허 제 3,172,816호

2)EP-A2-214561

3)EP-A3-215313

4)Benita, S., Fredman, D. 및 Wein stock, m(1986) 공저. Interational Jou rnol of Pharmaceutics, 30 : 47-55.

5)Singh,M. 및 Ravin,J. (1986) 공저, J.Parenteral Sci. Technol. 37 : 34-41.

6)Von Dardel, O., Mebius, C. 및 Mossberg, T (1976)공저, Aeta Anaesth. Scand. 20 : 211-224.

낮은 물 용해도를 보유하는 약품의 유제 형태로 조제 조성물을 이용하는 것은 이 기술분야에서 잘 알려져 있다.

그러나, 일반적으로 이러한 조성물은 유제가 캐리어로서 제공되는 소수성 약품에 의해 증가되는 유상과 수상 사이의 빠른 상분리에 기인한 낮은 안정도를 지닌다.

많은 소수성 약품이 다양한 의약 치료방법에 있어 중요하지만, 그들은 비교적 불안정하고 물에 불용성이기 때문에, 가장 유용한 투여 형태로는 물속 오일형 유제 조성물에 의한 것이며, 여기에서 약품은 유상으로 용해되어 있다. 사실상 이러한 소수성 약품은 정맥주사로 투여되는 것이 실용적이다.

선행 기술에 의하면, 이러한 유형의 조성물의 안정도는 소수성 약품이 이러한 조성물을 불안정하게 하므로 만족스럽지 못하다. 선행 기술이 또 다른 단점은 상기 조성물을 가장 효율적이고 가장 비용이 적게 드는 살균 방식인 오토클래브에서 살균하게 될때 그들의 안정도를 손실시킨다는데 있다.

오토클래빙하는 중 유제의 유성 소적은 합착되어 크리밍(creaming)또는 상분리가 일어난다. 따라서 EP-A2-214661 및 EP-A3-215313에서 기술된 여과와 같은 살균의 다른 형태를 이용하는 것이 필요하게 된다.

본 발명의 목적은 장기간 보관시 안정하며, 내열성이 있고, 성질에서의 변화 또는 안정도의 손실이 없이 오토클래빙에 의해 살균될 수 있는 소수성 약품을 함유하는 물속 오일형 유제의 조성물을 제공하는데 있다. 또한 볼 발명은 상기 약품의 비경구, 경구, 눈 및 국소 투여용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명에 의해서, 식물성 오일과 임의로 혼합한 중간체인 트리글리세라이드 (MCT) 오일인 오일 캐리어, 인지질, 비이온성 계면활성제, 및 담관 계면활성제이거나 또는 장기간 그리고 오토클래빙시 선행 기술의 호지성 약품-함유 유제보다 훨신 안정한 콜산인 이온성 계면활성제로 구성되는 소수성 약품의 물속 오일형 유제가 제조되었다.

본 발명에 따라서 조성물의 개선된 안정성은 다양한 성분들 즉, 상기 유성 캐리어, 인지질, 비이온성 계면활성제 및 이온성 계면활성제 사이에 존재하는 공력작용 (sy nergism)에 의해 얻어진다는 것을 발견하였다.

이하 설명 및 청구범위에서 모든 %표시는 중량에 의한 것이다(W/V-성분의 무게/전체 조성물의 부피). 이하 주어진 모든 농도는 일정치로서 이해되어야 하고 누적적이지 않다.

본 발명은 효율적인 양의 소수성 약품을 포함하는 물속 오일형 유제인 조제 조성물을 제공하는데, 이 조성물은 실물 오일과 임의로 혼합한 MCT 오일로 이루어진 유성 캐리어3-50%, 인지질 0.05-20%, 비이온성 계면활성제 0.03-10%, 및 이온성 담관 계면활성제, 콜산, 그들의 계면활성 유도체 및 그들의 염으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 이온성 계면활성제 0.05-5%를 포함함을 특징으로 한다.

일반적으로 물속 오일형 유제는 수용액(이후에는“수성상”이라함)에서 보유하는 유성 캐이어(이후에는“유성상”이라함)을 포함하는 매우 작은 유성 소적을 포함한다.

유성조직은 인지질, 비이온성 계면활성제 및 이온성 계면

활성제에 의해 형성된 안정화된 계면 필름(이후에는 “중간체”이라함)에 의해 둘러싸여 있다.

MCT 오일은 식물성 오일보다 많은 이점을 보유하는데 그들 중에는 다음과 같은 것이 있다. 산화에 대한 낮은 감수성, 식물성 오일의 밀도보다 높고 물의 밀도에 가까운 0.94-0.95의 밀도를 보유하여 안정한 유제를 얻도록 도와주며, 식물성 오일보다 소수성이 낮으며, 따라서 용해된 보다 큰 농도의 약품을 얻을 수 있으며, 조성물에서 점도를 증가시키지 않고서 유성상의 보다 큰 농도를 얻을 수 있는 보다 낮은 점도를 얻을 수 있다.

한편, 식물성 오일은 가격면에서 MCT보다 유리하다.

따라서, 본 발명에 의하면 유성 캐리어로서 MCT 오일만을 사용하는 것이 선호되지만, 식물성 오일을 다소 대체하는 것이 실용적이다.

본 발명에 따른 조성물은 호지성 약품의 비경구, 국소, 눈 및 경구 투여 방법에 적절하다. 바람직하기로는 상기 조성물은 단일 투약 형식으로 제공된다. 본 발명의 조성물이 주사 투여 방법에 사용되는 경우, 상기 조성물은 살균되어야 하는데, 바람직하기로는 살균 오토클래빙에 의해 실시된다. 주사 투여 방법에 사용되는 조성물에서의 성분은 주사 등급을 보유할 것이고, 이러한 투여를 위해 의학적으로 공인되어 있다.

주사 조성물은 점성이 커서는 안된다. 일반적으로 유제의 점도는 유성 캐리어, 인지질, 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제 및 소수성 약품으로 구성되는 비수성 상 즉, 유성상 및 중간체상의 상대적인 비율의 증가와 함께 증가한다.

따라서 본 발명에 의하면, 주사 조성물에서 비수성상의 상대적인 비율은 30%를 초과하지 않는 것이 선호된다. 또한 본 발명에 의하면 주사 조성물에서 비수성상의 상대적인 비율은 약 25%이하인 것이 보다 선호된다.

한편, 국소용 조성물은 점성이 있는 것이 바람직하고 비수성상의 상대적인 비율은 약 30%이상인 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 주사 조제 조성물의 성분이 선호된 범위는 유성상 약 10-20%, 인지질 약 0.5-2%, 바람직하기로는 0.75-2%, 비이온성 계면활성제 약 0.6-3%, 이온성 계면활성제 약 0.3-10%, 바람직하기로는 0.5-2%, 약품 약 0.02-2%이다.

본 발명의 조성물의 수성상의 선호된 pH는 약 5,0-8.5이지만, 6.0-8.0이 국소투여용으로 특히 선호된다.

본 발명의 조성물에서 사용되는 MCT오일의 예로는 TCR(상품명-Societe des Oleagineaux, France)아 Miglyol 812(상품명-Dynamit Nobel, Sweden)이 있다.

본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 식물성 오일의 예로는 콩오일, 면실유, 올리브유, 및 참깨오일이 있다.

본 발명에 의한 조성물에서 사용될 수 있는 인지질의 예로는 레시틴 정제된 달걀노른자 인지질(Ovothin계) 및 콩오일 인지질(Epikuron계)과 같은 천연 원료로 부터의 포스파티딜콜린과 포스파틸딜에탄올라민의 혼합물인 Epikuron 또는 Ovotin 160(상품명-독일의 Lucas Meyer의 의해 제조됨), 정제된 인지질 혼합물, 인지질 E-80(상품명-Lipoid KG. Ludwigshafen, FRG에 의해 제조됨)이 있다.

본 발명에 의한 조성물에서 사용될 수 있는 비이온성 계면활성제의 예로는 폴리옥시에틸렌과 포리옥시프로필렌의 공중합체인 Poloxamer(Pluronic F-68 BASF, Ludwigshafen FRG)가 있다.

본 발명에 의한 조성물에서 사용되는 이온성 계면활성제의 예로는 통상적으로 얻을 수 있는 콜산, 및 데옥시콜산과 그의 표면 활성 유도체 및 염이 있다. 콜산 및 데옥시콜산과 그의 나트륨염이 선호되는데 특히, 데옥시콜산과 그의 나트륨이 선호된다.

본 발명에 의해 사용된 이온성 계면활성제는 비교적 약산의 음이온이고, 따라서 pH가 감소될대 전기적으로 중성이 되도록 양이온과 결합할 수 있다.

이들 물질은 음이온 상태에서 계면활성으므로, 제조하는 동안 pH는 산이 음이온과 양이온으로 해리되도록 한다.

즉 pH가 pka보다 높은 값을 보유해야 한다.(pka-산의 반정도가 해리되는 pH). 그러나 조성물이 이미 제조된 후에는 pH가 감소하더라도 안정도는 감소하지 않는다.

바람직하기로는 본 발명의 조제 조성물은 주사 투여용으로 수용되는 메틸-, 에틸-, 프로필- 및 부틸 파라벤과 같은 방부제를 포함한다. 그러나, 본 발명에 의하면 안정도를 감소시키지 않으면서 오토클래빙에 의해 조성물이 살균될 수 있으므로 방부제는 필요하지 않다. 원한다면, 본 발명의 조제 조성물은 만니톨 또는 글리세린과 같은 삼투압 조절제, 주사투여용으로 선호되는 글리세린 및 경구 투여용의 만니톨을 포함 할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 α-토코페롤과 같은 산화 방지제를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 소수성 약품 즉, 낮은 물 용해도를 보유하는 약품의 투여에 적절하다. 상기 소수성 약품의 예로는, 암포테리신 B와 같은 소수성 또는 호지성 항생제, 알칼로이드 염 예를들어, 몰핀-염과 같은 소수성 및 호지성 마취제, 디아제팜, 플루펜아진 데코노에이트 및 로타제팜과 같은 소수성 벤조디아제핀, 피록시캄 및 인도메타신과 같은 비-스테로이달 함염 호지성 약품, 미콘아졸 및 클로트림아졸과 같은 호지성 아졸, 사이클로스포린과 같은 호지성 폴리펩티드, 데시옥시코르톤 및 칼시페롤과 같은 호지성 스테롤, 호지성 세팔로스포린, 디머캅톨이 있다. 이러한 조성물에서 약품이 암포테리신 B인것의 농도는 약 0.015-0.15%이며 바람직하기로는 0.075이다. 상기 조성물에서 약품이 몰핀염인 것의 농도는 바람직하기로는 약 0.2-2%이다. 상기 조성물에서 약품이 디아제팜 또는 인도메타시인 것의 농도는 약 0.1-1%이며 바람직하기로는 약 0.4-0.5%이다.

상기 조성물에서 약품이 사이클로스포린인 것의 농도는 바람직하기로는 약2-5%이다. 상기 조성물에서 약품이 미콘아졸인 것의 농도는 바람직하기로는 약 1-3%이다. 일반적으로, 의료용 물속 오일 유제에서 유성 소적은 보다 작을 수록 보관시보다 안정하므로 1㎛ 이하, 바람직하기로는 0.5㎛ 보다 바람직하기로는 0.2㎛ 이하이다. 또한 소적의 크기는 큰 소적이 작은 모세혈관을 용이하게 통과하지 못할 것이므로 유제가 비경구적 투여 특히 주사 투여에 사용될 경우 특히 중요하다.

본 발명의 조성물은 작은 유성 소적을 얻는데 특히 적절하다.

본 발명의 조성물은 여러가지 방법으로 제조될 수 있다.

한 제조방법에 의하면, 수용액과 유성용액이 따로따로 제조되는데, 상기 수용액은 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제 및 인지질과 임의로 삼투압 조절제와 방부제를 포함하고, 유성용액은 유성캐리어, 소수성 약품 및 임의로 산화방지제를 포함한다. 이러한 방법을 약간 수정하며, 상기 수용액은 앞서 제조된 두용액 즉, 이온성 계면활성제와 인지질을 함유하는 제1의 알콜 용액과 몰에서 비이온성 계면활성제와 원하는 경우 상기된 기타 임의의 성분을 함유하는 제2용액으로부터 제조된다. 그 다음 상기 수용액은 제1용액과 제2용액을 혼합시키므로써 제조되며, 그후에 상기 수용액을 얻기위해 증발에 의해 알콜을 제거한다.

이러한 방법은 예를들어 약품이 디아제팜 또는 미콘아졸 및 그와 유사한 것인 본 발명의 조성물의 제조방법에 적절하다.

그 다음 수용액과 유성 용액은 서로 혼합된다. 그러나, 이렇게하여 얻어진 혼합물은 충분히 작은 소적으로 구성되어 있지 않는데, 그 크기(자석교반기로서 혼합후 얻어진)는 약 10㎛이다.

본 조성물의 소적 크기는 약 1.1㎛의 평균 직경을 보유하는 소적을 얻는 ultra T urrax(Jankl and Kunkel, staufen, FRG)와 같은 유화 장치, 또는 약 0.65㎛의 평균 직경을 보유하는 소적을 얻는 예를들어 polytron(Kinematica, Lucerne, Switzerl and)와 같은 높은 전단 혼합기(high shear mixer)를 사용하므로써 감소될 수 있다.

스프링 탄지 밸브와 밸브 시트사이의 환상 공간을 통한 높은 압력하에 초기 분산이 행해지고, 제2단계는 유제가 2회의 매우 빠른 분산공정이 실시되도록 제1단계에 바로 이어서 행해지는 2-단계 압력 균질기를 사용할때 본 조성물에서 작은 소적이 얻어진다. 이러한 장치의 예로는 Gaulin Homogenizer(APV Gaulin, Hilversum, The Neth erlands)가 있다. 본 발명에 따라서 이러한 장치를 사용하게 되면 소적이 비교적 작은 편차를 지니는 약 0.27㎛의 평균 직경을 보유하는 조성물을 얻게 된다.

보다 작은 소적은 유화 공정에서 polytron-형 고전단 혼합기와 뒤이어 균질기를 병합 사용 할때에 본 발명에 의하여 얻어진다. 이러한 병합 방법에서 얻어진 소적크기는 약 0.1-0.15㎛이다. 이러한 소적크기를 얻는 것은 조성물에서의 안정도를 증가시키는 충분한 효과로 인해 상당히 중요한데, 이러한 것은 조성물의 제조에 사용된 성분 즉, MCT 오일과 임의의 식물성 오일, 인지질, 비이온성 계면활성제 및 상기 이온성 계면활성제 뿐만 아니라 상기 제조방법에서도 마찬가지이다.

본 발명에서는 또한 상기 조성물을 제조하기 위해 새로운 방법을 제공한다. 상기방법은 특히 약품이 소수성이고 빈약한 오일 용해도를 보유하는 즉, 조성물에 존재하는 약품이 중간체상인 본 발명에 따른 조성물의 제조방법에 적합하다. 또한 본 발명의 방법은 이후 기술될 것인 바와 같이, 소수성 약품이 호지성 즉, 토일 용해성이고 따라서 조성물에서 오일 상으로 존재하는 본 발명의 조성물의 제조방법에 적합하다.

본 발명의 방법에 의하면, 본 조성물은 사전에 따로따로 제조된 리포조옴 혼합물과 유성 혼합물을 함께 혼합시키므로써 제조된다.

상기 리포조음 혼합물은 최종 조성물에서 유성상 즉, 인지질, 비이온성 계면활성제, 이온성 표면활성제 및 원한다면 임의의 삼투압 조절제와 방부제의 유성상 부분을 형성하지 않는 모든 성분을 포함한다. 약품이 암포테리신 B와 같이 빈약한 오일 용해도를 지니는 것 또한 리포조음 혼합물에 포함된다. 이들 성분으로부터 리포좀 혼합물의 제조는 공지된 방법에 의해 실시될 수 있다.

유성 홉합물은 상기 캐리어와 원한다면 임의의 산화방지제를 포함한다. 약품이 호지성인 것 또한 유성 혼합물에 포함된다.

리포조옴 혼합물이 유성 혼합물과 혼합된 후에, 약 10㎛의 비교적 큰 소적을 보유하는 유제가 형성되는데, 이것은 미세한 균질 소적이 얻어질 때까지 제1제조 방법과 관련하여 기술된 것과 유사한 방식으로 처리된다.

내열성 약품을 함유하는 본 발명의 조성물은 오토클래브에서의 살균을 우수하게 견디어 낸다. 이러한 살균 방법은 EP-A2-214561 및 EP-A3-245313에서 기술된 여과에 의한 살균 방법보다 실시하기에 용이하며 공업적인 규모에 보다 실용적이다. 그러나, 약품이 암포테리신 B와 같이 열에 민감한 것은 표준 무균 조건이 이용될 수 있다.

이하 실시예에서, 본 발명에 의하여 몇몇 조성물의 제조 방법이 기술되어 있는데 , 이들 실시예는 설명을 목적으로한 것이며, 본 발명이 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시방법

다음 실시예에서 기록된 테스트에서 유제 성질의 측정방법이 다음과 같이 수행되었다.

A.입자크기의 분석

암포테리신 B 유제의 소적크기 분포는 두가지의 보충적인 방법 즉, 1㎛이하의 소적크기를 얻는데 가장 적절한 것으로 고려되는 컴퓨터화 레이저광 산란 장치를 사용한 광자 상관 스펙트로스코피(PCS)(Malvern System, Maivern, England)와 0.6㎛이상의 소적크기를 측정할 수 있는 컴퓨터화 레이저 검사 시스템(Calai Cis-1,Migdal Haemek, Israel)에 의해 결정되었다. Malvern 시스템에서, 각 유제 견본은 25℃에서 측정하기에 앞서 여과된 등장 용액(물에서 2.25%의 글리세린)으로서 적당한 농도로 희석되었다. 2개의 견본이 채취되어 각 견본은 10회 분석되었다. Galai 시스템에서, 견본은 또한, 2.25%글리세린으로서 희석되었고, 2회 측정이 각 견본에서 이루어졌다.

희석은 점도를 증가시키는데 필요한 것이며, 그리하여 표면을 향한 소적의 이동 속도를 감소시킨다.

광범위하게 사용된 Colulter Counter 시스템보다 Gaalai Cis-1 시스템이 유리한 이유는 유제의 용해도에 영향을 미칠 수 있는 전해질 용액을 필요로 하지 않는다는 사실에 의해 입증된다. 양방법 모두 100 내지 3000㎚범위의 소적크기를 정확하게 측정할 수 있기 때문에 필요한 것이다. 대부분의 경우에, 테스트된 유제의 소적 크기는 100 내지 200㎚범위이다. 그러나, 유제가 가속화된 안정도 테스트를 필요로 할 경우, 보다 큰 평균소적 크기가 이론적으로 예상되며, 따라서 0.6 내지 2.0㎛범위로 직경을 측정하는 것이 필요하였다. 따라서, 응력조건하에 있는 유제의 소적 크기 분포는 Gaalai Cis-1 과 Malvern시스템을 사용하여 분석되었다.

B.제타 전위의 측정

제타 전위는 정확한 전기 이동도 데이터를 얻기 위해 계면전기이동 기술을 사용하여 측정되었다. 전기이동도의 측정과 전기이동도 데이터를 제타 전위로 전환시키는 것은 전술한 바와 같이 유사하게 실시되었으며(Benita, et, al., 1984, J.pharm. Sci, 73 : 1751-1755), 전해질은 전기 이동도를 변경시키지 않고서 이동계면을 안정화 시키도록하는(보통 수용성 매질에서 발생하는 삼투압에 기인한 소적의 자유 확산을 방지하는)1% 글리세리과 0.75% Pluronic F-68을 함유하는 수용액으로 구성된다.

각각의 유제 견본은 실험에 앞서, 물 9부에 대해 견본 1부로 희석되었다. 측정방법의 신뢰도를 확인하기위해 Intralipid(상품명 Kabi-Vitrum에 의해 제조) 지방유제(영양을 위해 사용된 유제이며 10-20% 콩오일, 인지질 및 글리세린 포함)가 이 기술에 의해 측정되어, 문헌에 기재된 상등하는 제타 전위치에 실험오차의 한계치내에서 동일지가 확인되었다. 또한 이러한 방법의 신뢰성의 확인은 결과의 반복성으로 부터 제공된다.

C. PH 측정

유제 견본의 PH는 PH 미터(radiometer pH M63, Copenhagen, Denemark)를 사용하여 측정되었다.

[실시예 1 : ]

디아제팜을 함유하는 유제의 제조

A)유성, 알콜 및 수용성 용액이 다음과 같이 따로따로 제조되었다.(이하 모든 분량은 총 유제부피에 관련하여 % W/V로 주어진다).

Ⅰ.유성용액:

유성용액은 다음 성분으로 구성된다.

1)10% MCT(Societe Industrielle de 01eagineaux, St. Laurent, Blangy, francy), 및 10% 정제 콩오일(Bertin, Courbevoie, France), 함납물질을 제거하기 위해 약 1주간 냉장되었다.

2)0.05% α-토코페롤(Sigma Chemicals, St. Louis, MO, U.S.A).

3)0.5% 디아제팜(Teva Pharmaceuticals Inc., Kfar Saba, Israel).

Ⅱ.알콜용액

알콜 용액은 다음 성분으로 구성된다.

1)0.5% 데옥시콜산-D.C.A(Sigma, St, Louis, MO, U.S.A).

2)첨부된 도면의 제1도에서 개략적으로 나타낸 바와 같이, Schuberth 와 Wre thind(Acta. Chir. Scand. Suppl. 278 : 1-21,1961)에 보고된 기술의 수정에 따라서 천연 달걀 노른자 인지질(Sigma Chemicals, St. Louis, MO, U.S.A)로 부터 제조된 1.0%정제 분류된 달걀 노른자 인지질.

정제는 일반적으로 추출용매로서 페트롤륨 에테르 80-100으로 4회 추출한다. 이들 정제 인지질은 주로 포스파티 딜콜린 및 포스파티딜에탄올아민과 소량의 포스파티딜세릴, 포스파티딜이노지톨 및 포스파티딕산으로 구성된다(표준 TLC 공정에 의해 확인).

Ⅲ.수용액

수용액은 다음 성분으로 구성된다.

1)2% Poloxamer (Pluronic F-68, BASF, Ludwigshafen, FRG)

2)2.25% 글리세린(Merck, Darmatadt, FRG)

3)0.2% 메틸파라벨(메틸 P-하이드록시벤조 에스테르, Sigma Chemicals, St, Louis, MO., U.S.A) 및 0.075% 부틸 파라벤(부틸 P-하이드록시벤조 에스테르, Sigma).

4)100%까지 첨가된 복증류수(DDW).

성분(3)은 항상 존재하지는 않으며 단지 오토클래빙이 적용되지 않을때에만 첨가된다.

알콜 용액은 수용액와 혼합되었고 알콜은 증발에 의해 제거되었다. 이렇게하여 얻어진 용액은 이후에 “수용액”으로 인용된 것이다.

유제 제조

유제를 제조하기 위한 전체 공정은 질소분위기 하에서 무균조건하에 실시되었다. 이 공정은 첨부된 도면의 제2도에서 개략적으로 표현되었다.

두용액이 0.22㎛의 밀리포어막 휠터(millpore memberane filter)를 사용하여 적당히 여과되었다.

여과후 수용액과 유성 용액은 따로따로 70℃까지 가열되었고 자석 교반기에 의해 분산되었다.

또한 온도가 85℃에 도달할때가지 혼합하면서 열이 가해졌다. 이 온도에서 두 용액은 고전단 혼합기[Polytron (상품명)Kinematica, Switzerland]를 사용하여 5분간 혼합 및 유화되었다.

그다음 40-70℃에서 약 8500psi 압력하에 2-단계 균질 밸브 어셈블리 (Gau lin homogenzer, APV Gaulin, Hilversum, The Netherlands)를 사용하여 20회 균질화하여 미세한 단일분산 유제(즉, 작은 소적 크기범위를 보유함)가 얻어졌다.

균질화이후, PH가 10%NaOH 용액을 사용하여 8.0으로 조절되고, 유제되는 유화 및 균질화 공정에서 발생된 굵은 소적 및 기타 부스러기를 제거하기 위해 1㎛훨터를 사용하여 여과되었다.

이렇게 여과된 미세하고 깨끗한 유제의 견본은 10ml 갈색 유리병에 보관되었고, 14개월이상 경과하여도 상분리는 관찰되지 않았다.

[실시예 2 :]

디아제팜을 함유하는 유제의 제조

정제 분류된 달걀 노른자 인지질(유성 용액의 성분 3)이 Ovothin 160(Lucas Meyer, Hambrug, Federal Republic of Germany)으로 대치되는 것을 제외하고는 실시예1에 기술된 것과 유사한 방법으로 디아제팜 함유 유제가 제조되었다.

실시예1과 마찬가지로, 12개월이상 보관하여도 상분리는 관찰되지 않았다.

[실시예 3 : ]

유제의 안정도

실시예 1과 2의 유제의 안정도는 유제의 제조후 다양한 시간 간격으로 유제의 변수를 측정하므로써 결정되었다.

유제는 40℃에서 보관되었다. PH, 제타전위, 평균소적 크기, 소적크기 분포 및 약품 함량의 변화는 유제 제조후 14개월 이상이 경과되어도 관찰되지 않았다. 안정도 테스트는 여전히 평가하에 있다.

상기 유제의 몇몇 배치(batch)는 유제의 제조후 오토클래빙(1.1atm., 121℃, 15분)에 의해 열충격이 가해진다. 이러한 열충격은 이 기술분야에서 유제 안정도를 평가하기 위해 효과적인 가속화 테스트로서 고려된다.

그러나, 이 유제에서도 안정도의 손실은 관찰되지 않았으며 살균이 실시된 후 14개월 이상이 경과하여도 초기 성질을 그대로 보유하였다.

[실시예 4 :]

데옥시콜산 또는 소디움 데옥시콜레이트 중 하나와 함께 제조된 유제의 안정도.

실시예 2의 유제가 아래 표Ⅰ에서 나타낸 바와 같이 4가지의 상이한 제제를 제공하기 위해 완전히 수정되었다.

[표 1]

* SDC -소디움 데옥시콜레이트(Sodium deoxycholate)

** DCA -데옥시콜산(Deoxy Cholic acid)

다양한 제제의 제타 전위와 소적크기가 아래 표Ⅱ에 나타나 있다.

[표 2]

*S.D. -표준 편차(Standard deviation)

단독 유성캐리어로서 MCT오일을 포함하는 조성물은 MCT와 실물성 오일을 동일 농도로하여 제조된 것과 비교하여 개선된 성질을 보유함을 알수 있다. 부가하여, DCA를 포함하는 유제는 SDC를 포함하는 조성물보다 작으며, 보다 균일한 소적과 보다 높은 제타 전위를 보유함을 나타내었다. 따라서, SDC 보다 DCA를 사용하는 것이 선호된다.

[실시예 5 : ]

디아제팜 함유 유제에서 인지질, 비이온성 계면활성제 및 데옥시콜산 사이의 공력작용

실시예 2의 유제(α-토코페롤이 없음)가 표Ⅲ에서 나타낸 바와 같이 상이한 제제의 유제를 제공하기 위해 완전히 수정되었다.

[표 3]

모든 제제는 실시예 1에서 기술된 것과 동일한 시료와 동일한 제조 공정을 사용하여 동일 날짜에 제조되었다. 제조후 유제는 오토클레빙(121℃, 1.1atm, 15분)에 의해 살균되었다.

유제는 우선 크리밍 정도를 결정하기 위해 가시적으로 체크되었고 1주후에 소적크기 및 제타 전위를 결정하기 위해 체크되었다.

다음 결과가 얻어졌다.

[제제 FⅠ]

실시예 1중 하나인 이 유제는 가장 안정한 것이고 14개월이상 경과하여도 안정하게 유지되고, 크리밍 및 상분리도 관찰되지 않았다.

이 유제의 제타전위는 -45mv로 측정되었고 평균소적 직경은 약117nm로 측정되었다.

[제제 FⅡ]

이 유제는 불안정하며, 제조후 3-4주가 경과하면 상분리가 관찰된다. 이러한 상분리는 유제의 상부 표면에 오일 방울의 출현으로서 입증된다.

[제제 FⅢ]

상분리는 유제의 제조후 1일내에 관찰된다.

[제제 FⅣ]

크리밍이 유제의 제조후 1일내에 관찰된다. 크리밍을 유발하며 시간이 경과함에 따라 총 상분리가 전개되는 보다 큰 직경의 방울이 보다 작은 비율로 존재한다.

[제제 FⅤ]

유제는 불안정하며 총상분리는 2일내에 관찰되었다.

[제제 FⅥ]

크리밍이 2의 제조후 1일내에 유제에서 관찰되었다.

다음날에 증가된 크리밍의 정도는 완전한 상 분리를 초래한다.

[제제 FⅦ]

유제는 매우 불안정하며, 상 분리는 그의 제조 중에 이미 관찰되었다.

[요약]

제제 FⅠ의 유제만이 모든 성분을 함유하는 것이다.

제제 FⅡ 내지 FⅦ의 유제중 어느 것보다 안정도가 수배 증가하여 오일, 인지질, 비이온성 계면활성제 및 데옥시콜산이 조성물의 긴 안정도를 보유하는 공력 작용에 기여한다.

[실시예 6 : ]

데아제팜 함유 유제에 대한 열 충격의 효과.

실시예 4의 유제가 오토클래브(15분, 121℃, 1.180atm)에서 살균에 의해 열 충격이 가해진다. 평균 소적 크기(M.D.S)와 표준편차(S.D.)가 오토클래빙 전후에 결정되었고 그 결과는 아래 표Ⅳ에 주어졌다.

[표 4]

상기 결과는 살균화가 유제의 소적크기에 약간의 영향만을 미친다는 것을 나타내었고 이러한 결과는 물속오일-형의 공지된 유제의 불안정도와는 대조적인 것이다.

[실시예 7 :]

미콘아졸 염 함유 유제의 오토클래빙에 대한 안정도

실시예 1에서 기술된 것과 유사한 방식으로, 다음 성분을 함유하는 유제가 제조되었다(% W/V) ;

미콘아졸 염 -10 ; MCT 오일 -20.0 ; Ovothin 160 -1.0 ; α-토코페롤 -0.02 ; Pluronic F -68 -2.0 ; DCA -0.5 ; 글리세롤 2.25 ; 및 물 100.

소적크기 및 표준편차는 실시예 6에서와 같이 오토클래브에서 살균 전후에 측정되었고 그 결과는 다음 표Ⅴ에 나타내었다.

[표 5]

여기에서, 오토클래빙에 대한 유제의 놀랄만한 안정도가 입증되었다.

[실시예 8 :]

암포테리신 B를 함유하는 유제의 제조

암포테리신 B가 초음파 분히처리(Sonication)(15분)에 의해 메탄올(0.8㎎/ ml)에 용해되었다. 인지질 E-80(주로 80%의 포스파티딜콜린과 8%의 포스파티딜 에탄올아민을 함유)이 클로로포름에 용해되었다. 두 용액이 혼합되어, 발열성 물질과 집합체(aggregates)를 제거하게 위해 유리섬유 예비휠터(GF. 92, Shleicher and Schuel, FRG)와 0.45㎛재생 셀룰로오스 막 휠터(RC 5, Schleicher and Schuel, FRG)로 구성된 복합 여과 시스템을 통해 여과되었다. 얻어진 깨끗한 용액은 40℃에서 감압하에 회전 증발에 의해 둥근-바닥 플라스크의 벽에 얇은 필름으로서 용착되어 있다. Poloxam er, 소디움 데옥시콜레이트 및 글리세린을 함유하는 수성상은 0.22㎛ 밀리포어(상품명, Millipore, Bedford, Mass., U.S.A) 휠터를 통해 여과되어, 플라스크로 주입되고 균질의 리포조말 혼합물이 얻어질때까지 초음파 분해 처리된다.

0.22㎛밀리포어 휠터를 통해 여과되고 α-토코페롤을 함유하는 MCT 오일은 70℃로 가열되고 45℃로 가열된 리포조말 혼합물로 부가 혼합되고 그 안에서 자석 교반기에 의해 분산된다. 유화는 고전단 혼합기인 Polytron(Kinematica, Luzern, Switze rland)을 사용하여 동일 온도를 유지하면서 수행된다. 얻어진 거친 유제는 신속하게 냉각되었다. 미세한 단일 분산 유제는 2-단계 균질기(APV Gaulin, Hilversum, The Netherlands)를 사용하여 얻어진다.

유제의 PH는 10%의 비완충 NaOH용액으로 8.0으로 조절되었고 최종 유제는 거친 소적과 유화 및 균질화 공정중 생성된 부스러기를 제거하기 위해 0.45㎛ 밀리포어 휠터를 통해 여과되었다.

모든 공정은 무균 조건하에 실시되었다. 유제의 살균은 Bactec 46장치 (John son Laboratories, Towson, MD)를 사용하여 실시된다. 이 장치는 유리병내에 방사성 이산화탄소(14CO2)의 존재에 대해 접종된 Bactec 배양유리병을 테스트 하기 위해 사용된다. 호기성 또는 혐기성 유기체를 배양하기 위해 사용된 유리병에 14CO2가 많이 존재한다면, 그것은 원래의 접종물에 생물학적 미생물이 존재함을 지적한다. 이러한 기술을 사용하여 얻어진 결과는 유제가 살균되었음을 나타낸다.

최종 유제에서 다양한 성분의 상대적 함량은 다음과 같다.

0.075%암포테리신 B, 20% MCT 오일, 0.5% 인지질 E 80, 2.0% Polozamer, 1.0% 소디움 디옥시콜레이트, 2,25% 글리세린, 0.02% α-토코페롤 및 복 증류수 200%.

이후 보고된 비교 테스트롤 위해, 순수 유제 즉, 어떠한 호지성 약품도 함유하지 않는 유제가 동일실험 조건하에 암포테리신의 존재와 함께 제조되었다.

[실시예 9 : ]

암포테리신 B함유 유제의 성질의 평가

실시에 8의 유제가 평가되었는데 제3도에서 나타낸바와 같이 약 100㎚의 평균 소적크기를 보유한다는 것이 발견되었다.

또한, 이 도면에서 볼 수 있는 바와같이, 암포테리신 유제가 순수 유제사이에서 소적크기의 현저한 차이는 발견되지 않았다.

그 결과는 다음 표Ⅵ에 나타내었다.

[표 6]

(*)S.D. -표준편차

(*)Poly D. -Plydisperily, 집단의 균질성을 반영하는 인자

표Ⅵ에서 볼수 있는 바와같이, 두 유제의 소적크기는 매우 균질하다. 또한 두 유제의 제타 전위에서도 현저한 차이는 존재하지 않는다.

실시예 8의 암포테리신 유제는 4℃에서 3개월간 보관되었다.

보관후, 제타전위, PH 뿐만 아니라 두 유제의 입자크기 분포는 실제로 변화하지 않는다. 또한 HPLC에 의해 결정된 암포테리신의 함량은 4℃에서 3개월이 경과하여도 변화하지 않았으며, 이것은 암포테리신의 안정도가 유제에 혼합하므로써 영향을 받지 않는다는 것을 지적한다.

암포테리신 유제는 48시간 동안 25℃에서 분당 100스트로크의 진탕속도로 가속 진탕 안정도 테스트가 실시된다. 1㎛이상이 직경을 보유하는 소적은 Galai Cis-1 시스템에 의해 검출되지 않았지만, 유제의 소적크기에서의 증가는 Malvern PCS방법에 의해 관찰되었다.

이들 결과는 암포테리신 유제가 기계작 응력에도 불구하고 안정한 상태로 보존된다는 것을 지적한다.

4℃에서 3개월 보관후의 암포테리신 유제와 순수 유제의 소적크기 분포는 제4도에서 나타내었다.

도면에서 두 유제사이의 크기 분포상의 차는 존재하지 않음을 볼수 있으며, 제3도의 결과와 비교하므로써 보관후의 소적크기 분포에서의 차이도 존재하지 않음을 볼수 있다.

[실시예 10 : ]

암포테리신 제제로서의 동물 실험

30balb/c 쥐(약20g 중량)에 꼬리 정맥을 통해 0.1ml의 염속의 5×10⁵의 Candida albican, strain 562가 주사되었다. 이 투여량은 감염된 주가 5내지 10일내에 모두 죽도록 한다.

감염이 시작된지 48시간 후 각 쥐들은 후감염처리된다.

쥐들은 10마리씩 3그룹으로 분류되어 각 그룹은 상이하게 처리된다. 처리는 다음 제제 중 하나를 꼬리 정맥에 0.1ml 주사로 이루어진다.

a)암포테리신을 0.4㎎/㎏ 함유하는 통상적인 암포테리신 B제제인 Fungizone(상품명, F.R. Sguid ＆ Sons Ltd. 에 의해 제조), 전술한 함량을 얻기 위해 적당한 희석이 이루어진다.

b)실시예 8의 유제, 0.4㎎/㎏의 함량, 전술한 함량을 얻기 위해 배치 제제의 희석이 “순수유제”로서 이루어진다(참조실시예8).

c)염(Saline)

각 그룹에서 생존 동물의 수는 매일 기록되고, 생존결과는 제5도에서 나타내었다.

모든 처리되지 않은 감염 제어 동물은 Candida albicans 접종후 7일내 모두 죽었음을 볼수 있다.

Fungizone 으로서 처리된 모든 감염 쥐들은 접종 후 11-19일 부터 죽기 시작했으며, 본 발명에 따른 암포테리신유제를 주사한 동물에서 장시간 생존률이 관찰되었고, 접종후 50일에는 55%의 쥐들이 생존하였고 양호한 상태를 나타내었다.

이들 결과는 본 발명에 따른 유제의 개선된 의학적인 성질을 입증하였다.

Claims (6)

1. 효율적인 양의 소수성 약품을 포함하는 물속-오일형 유제인 제약조성물로서, 상기 조성물은 임의의 식물성 오일과 혼합한 MCT오일로 구성된 유성캐리어 3-50%, 인지질 0.05-20%, 비이온성 계면활성제 0.03-10%, 및 담관 계면활성제, 콜산 및 그들의 유도체로 구성되는 그룹으로부터 선택된 이온성 계면활성제 0.05-5%를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
2. 제1항에 있어서, MCT 오일을 단독 유성캐리어로서 함유함을 특징으로 하는 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 비경구적 투여에 적합한 형태로 되어 있음을 특징으로 하는 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 호지성 약품은 소수성 또는 호지성 항생제 또는 마취제, 소수성 벤도디아제핀, 비-스테로아달 항염호지성 약품, 호지성 스테로이트, 호지성 아졸, 폴리펩티드, 호지성 스테로이트, 호지성 세팔로스포린 및 디머캅톨로 구성되는 그룹으로부터 선택됨을 특징으로 하는 조성물.
5. 제4항에 있어서, 상기 약품은 암포테리신 B, 몰핀-염, 디아제팜, 플루펜다진 데코노에이트, 로라제팜, 피록시캄, 인도메타신, 프로게스테론, 테스토스테론 프로피온에이트, 미콘아졸, 클로트림아졸, 사이클로스포린, 데옥시코르톤, 칼시페롤, 세팔로스포린, 및 디머캅톨로 구성되는 그룹으로부터 선택됨을 특징으로 하는 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 호지성 약품은 암로테리신 B임을 특징으로 하는 조성물.

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