KR920700294A - 개선된 프라이머 연장반응 - Google Patents

개선된 프라이머 연장반응

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KR920700294A
KR920700294A KR1019900702622A KR900702622A KR920700294A KR 920700294 A KR920700294 A KR 920700294A KR 1019900702622 A KR1019900702622 A KR 1019900702622A KR 900702622 A KR900702622 A KR 900702622A KR 920700294 A KR920700294 A KR 920700294A
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dna polymerase
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polymerase
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KR1019900702622A
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스테인리 테이보
챨스 씨. 리챠드슨
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원본미기재
프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하버드 컬리지
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Publication date
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N9/14—Hydrolases (3)
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q1/6848—Nucleic acid amplification reactions characterised by the means for preventing contamination or increasing the specificity or sensitivity of an amplification reaction

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Abstract

내용 없음

Description

개선된 프라이머 연장반응
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (19)

  1. 제1단일가닥 부위에 상등한 제2가닥부위를 갖는 템플레이트 분자상에 제1단일가닥 부위를 가지며, 반응혼합물 중에서 상기 템플레이트의 제2단일가닥 부위상에 프라이머의 상기 제1단일가닥 부위를 연장시킬 수 있는 Tag 폴리러라제, T7－형 DNA 폴리머라제, T4 DNA 폴리머라제, Φ29 DNA 폴리머라제 및 T5 DNA 폴리머라제 및 역전사효소에서 선택한 DNA폴리머라제 및 시약이 부재한 연장반응에서 생성되는 양이하로 상기 반응혼합물중의 피로포스페이트의 양을 경감시킬수 있는 시약을 함유하는 올리고 뉴클레오티드 프라이머의 연장반응에 유용한 용액.
  2. 제1항에 있어서, 상기의 T7－형 DNA 폴리머라제가 T7 DNA폴리머라제인 용액.
  3. 제1항에 있어서, 상기의 시약기 효소인 용액.
  4. 제3항에 있어서, 상기의 효소가 피로포스파라제인 용액.
  5. 제4항에 있어서, 상기의 피로포스파라제가 60℃ 내지 95℃의 온도에서 상기 반응 혼합물중의 피로포스페이트 양을 경감시킬 수 있는 충분한 활성을 보유한 용액.
  6. 제1단일가닥 부위에 상등한 제2가닥부위를 갖는 템플레이트 분자상에 제1단일가닥 부위를 가지며, 반응혼합물중에서 상기 템플레이트의 제2단일가닥 부위상에 프라이머의 상기 제2단일가닥 부위를 연장시킬 수 있는 Tag폴리러라제, T7－형 DNA 폴리머라제, T4 DNA 폴리머라제, Φ29 DNA 폴리머라제, T5 DNA 폴리머라제 및 역전사효소에서 선택한 DNA폴리머라제 및 시약이 부재한 연장반응에서 생성되는 양이하로 상기 반응혼합물중의 피로포스페이트의 양을 경감시킬수 있는 시약을 함유하는 올리고 뉴클레오티드 프라이머의 연장반응에 유용한 키트(kit).
  7. 제6항에 있어서, 상기의 T7－형 DNA 폴리머라제가 T7 DNA 폴리머라제인 키트.
  8. 제6항에 있어서, 상기의 시약이 효소인 키트.
  9. 제8항에 있어서, 상기의 효소가 피로포스타파제인 키트.
  10. 제9항에 있어서, 상기의 피로포스타파제가 60℃ 내지 95℃의 온도에서 상기 반응 혼합물중의 피로포스페이트 양을 경감시킬 수 있는 충분한 활성을 보유한 키트.
  11. 제1단일가닥 부위에 상동한 제2가닥 부위를 갖는 템플레이트 분자상에 제1단일가닥 부위를 가지며, 상기 템플레이트의 상에 상기 프라이머를 연장시킬 수 있는 Tag 폴리머라제, T7－형 DNA 폴리머라제, T4 DNA 폴리머라제, Φ29 DNA 폴리머라제, T5 DNA 폴리머라제 및 역전사효소에서 선택한 DNA 폴리머라제를 포함하고 및 시약이 부재한 연장반응에서 생성되는 양이하로 상기 피로포스페이트의 양을 경감시킬 수 있는 시약을 함유하는 것이 개선된 올리고 뉴클레오티드 프라이머의 개선된 연장방법.
  12. 제11항에 있어서, 제1단일가닥 부위를 갖는 2개의 올리고 뉴클레오티드 프라이머와 상기의 제1단일가닥 부위에 상동한 제2가닥 부위를 갖는 2개의 상동성 템플레이트 분자를 제공하며, 상기 프라이머를 상기의 템플레이트 분자에 어닐링하여 어닐링된 혼합물을 형성하는 단계를 더 포함하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 어닐링된 혼합물이 상기 DNA 폴리머라제와 시약과 함께 상기 프라이머의 연장반응을 일으키도록 제공하는 단계를 더 포함한 반응.
  14. 제12항에 있어서, 상기의 연장 반응 이후 상기의 템플레이트 분자로 부터 상기의 프라이머를 분리하여 단일가닥 분자를 제공하는 단계를 더 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 2개의 프라이머 올리고 뉴클레오티드를 제공하고, 상기의 프라이머를 연장하고 및 상기의 프라이머를 분리하는 단계를 반복하는 것을 더 포함한 방법.
  16. 시약이 부재한 반응에서 생성되는 양이하로 반응에서 피로 포스페이트의 양을 경감시킬 수 있는 시약의 존재하에 Tag 폴리머라제, T7－형 DNA 폴리머라제, T4 DNA 폴리머라제, Φ29 DNA 폴리머라제, T5 DNA 폴리머라제 및 역전사효소에서 선택한 DNA 폴리머라제로 폴리머라제 쇄반응을 수행하는 단계를 포함한 DNA증폭 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기의 시약이 피로포스파타제인 방법.
  18. 제16항에 있어서, 상기의 어닐링된 혼합물을 디데옥시 뉴클레오시드 트리포스페이트와 함께 제공하는 단계를 더 포함한 방법.
  19. Φ29 DNA 폴리머라제와 증폭될 DNA의 용액중에 시약이 부재한 상기 용액중에서 생성되는 양이하로 용액중의 피로 포스페이트의 양을 경감시킬 수 있는 시약을 제공하는 것을 포함한 DNA 증폭 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개되는 것임.
KR1019900702622A 1989-04-12 1990-04-10 개선된 프라이머 연장반응 KR920700294A (ko)

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