KR910001063A - 신규 α-아밀라제-플루라나제(Amylase-Pullulanase) 효소, 동 효소를 암호화한 DNA염기 서열, 재조합 DNA분자 그리고 동 효소를 발현하는 유전자 재조합 복재 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

신규 α-아밀라제-플루라나제(Amylase-Pullulanase)효소, 동 효소를 암호화한 DNA 염기 서열, 재조합 DNA분자 그리고 동 효소를 발현하는 유전자 재조합 복재
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 서모하이드로설푸리쿰에서 유래한 서브클론된 DNA 조작의 제한효소 지도와 플라스미드 pALK351, pALK353과 pALK355를 나타낸 것이며.
제2도는 생상된 α-아밀라제-플루라나제의 겔여과의 결과를 나타낸 것이며.
제3도는 생상된 α-아밀라제-플루라나제의 이뮤노블로팅(immunoblotting)의 결과를 나타낸 것이다.

Claims (32)

  1. 적당한 벡터와 결합하여 적당한 숙주 생물에 상기의 벡터로써 전이되거나 숙주의 염색체에 통합되어 플루라나제와 α-아밀라제의 역가를 모두 갖는 효소를 생산하는 DNA조각 상기의 DNA 조각은 다음의 DNA 염이 서열의 어떤 것을 포함한다.
    (a) 제5도의 DNA 염기 서열, (b) 제5도의 아미노산 서열을 갖는 효소를 암호화하는 염기 서열.
    (c) 상기의 DNA 염기 서열과, 자연적 원인 또는 실험실에서 생성된 그들의 단일 또는 다수의 염기 치환, 삭제, 삽입 또는 역위로서 계속 상기의 역가를 갖는 효소를 암호화하는 것.
    (d) 상기의 역가를 암호화하는 상기 DNA 염기서열의 일부.
  2. 제1항에서, 플루라나제와 α-아말라제의 역가를 갖는 효소를 암호화하는 7kb의 EcoRI 조각 또는 그 일부분에 해당하는 DNA 조각, 클로스트리디움속의 미생물에서 유래된 상기의 DNA 조각.
  3. 제2항에서, 플루라나제와 α-아말라제의 역가를 갖는 효소를 암호화하는 DNA염기 서열 또는 그 일부분을 포함하는 DNA 조각, 이 조각은 크로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM 3783으로부터 유래한 것이다.
  4. 제1항에서, 크로스트리디움 종으로부터 유도된 프로모터 서열을 포함하는 DNA 조각.
  5. 제4항에서, 크로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM 3783에서 유래한 프로모터 염기 서열을 포함하는 DNA조각.
  6. 플루라나제와 α-아밀라제 역가를 모두 갖는 효소를 암호화하는 제1항으 DNA 서열을 포함하는 DNA조각을 적어도 하나 포함하는 재조합 DNA 분자.
  7. 제6항에서, 백터부분이 pUC 플라스미드의 람다 파아지들을 포함하는 집단으로부터 선택된 재조합 DNA 분자.
  8. 플루라나제와 α-아말라제 역가의 효소를 암호화하는 크로스트리듐속의 미생물로 부터 유래한 적어도 하나의 DNA 조각 또는 그 일부분을 포함하는 재조합 DNA 분자.
  9. 제8항에서, 플루라나제와 α-아말라제 역가의 효소를 암호화하는 DNA 염기 서열과 그 일부분을 포함하는 재조합 DNA 분자, 상기 조각은 크로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM 3783에서 유래한 것이다.
  10. 제6항에서, 크로스트리듐주에서 유래한 프로모터 염기 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자.
  11. 제10항에서, 크로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM 3783의 프로모터 염기 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자.
  12. 제6항에서 이.콜라이 (DSM 3533)에 재조합 클론으로 들어있는 pALK353을 포함하는 재조합 DNA 분자.
  13. 제6항에서 플루라나제와 α-아밀라제 역가의 효소를 암호화하며 적당한 벡터와 결합하여, 그 벡터에 의해 적당한 숙주생물에 전이되거나 숙주의 염색체에 융합되는 DNA 염기 서열을 적어도 하나이상 포함하는 재조합 DNA 분자, 상기의 재조합 DNA 분자는 다음의 것들을 포함하는 집단에서 선택한 DNA 염기 서열을 포함한다 : (a) 제1항의 DNA 염기 서열 (b) pALK 353(DSM5355)를 삽입한 DNA 염기 서열 (c) 상기의 어떠한 DNA 염기 서열과 융합하며, α-아말라제/풀루라나제 역가의 효소를 암호화하는 염기서열.
  14. 제13항의 재조합 클론, 여기에서 재조합 숙주는, 이, 클라이와 바실루스를 포함한 세균, 이스트 혹은 균류를 포함하는 집단에서 선택된 것이다.
  15. 제14항의 재조합 클론, 여기에서 재조합 숙주는 Y1090(r-), Y1089(r-) 또는 JM109 변종을 포함하는 집단에서 선택된 것이다.
  16. 제13항에서, 크로스트리듐 종의 미생물에서 유래되어 플루라나제와 α-아밀라제 역가를 갖는 효소를 암호화하는 DNA 적어도 하나의 조각 또는 그 일부를 포함하는 재조합 클론.
  17. 제16항에 있어서, 플루라나제와 α-아말라제 역가를 갖는 효소를 암호화하는 DNA 염기 서열과 그 일부분을 포함하는 재조합클론, 상기 조각은 클로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM3783에서 유래한 것이다.
  18. 제13항에서, 크로스트리듐 종에서 유래한 프로모터 염기 서열을 포함하는 재조합 클론.
  19. 크로스트리듐 서머하드로설푸리쿰 DSM 3783에서 유래한 프로모터 염기 서열을 포함하는 재조합 클론.
  20. α-아밀라제와 플루라나제 역가를 가지며, 제5도의 아미노산 서열을 포함하는 효소 및 상기 아미노산 서열의 일부분을 포함하며, 또한 동일한 역가를 가지는 효소들을 포함하는 효소제제.
  21. 제20항에 있어서, 크로스트리듐속의 미생물에서 유래한 DNA 조각으로부터 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 효소.
  22. 제21항에 있어서 크로스트리듐 서머하이드로설푸리쿰 DSM 3783에서 유래한 DNA 조각에서 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 효소.
  23. α-아말라제와 플루라나제의 역가를 모두 갖고, 분자량이 약 100,000-165,000이며, 80-85℃의 최적온도와 표1과 같은 내열성을 지닌 효소를 포함하는 재조합 DNA기법에 의해 만들어지는 효소제제.
  24. 제23항에서, 에세리히아 콜리(Escherichia coli)에 의해 생성되는 수용성 세포내 효소를 포함하는 효소제제.
  25. 다음의 공정으로 풀루라나제와 α-아말라제 역가를 갖는 효소를 암호화하는 DNA 조각을 분리하는 방법.
    (a) 크로스트리듐종의 염색체 DNA 를 자름, (b) DNA 조각을 적당한 벡터에 삽입, (c)적당한 숙주들이 벡터로 감염시키고, (d) 면역학적기법, 효소학적 기법 및 하이브리다이제이션 기법을 포함하는 집단중에서 선택한 방법에 의하여 선별한다.
  26. 제25항에서, DNA 염색체가 크로스트리듐 서머하이드로 설푸리쿰에서 유래한 방법.
  27. 제25항에서, 선별이 토끼의 α-아밀라제/플루라나제 항혈청을 이용하여 면역학적으로 행하는 방법.
  28. 제25항에서, 선별이 요오드로 염색된 층을 포함하는 전분으로 행하는 방법.
  29. 제25항에서, 플루라나제/ α-아밀라제 역가를 암호화하는 DNA 조각이 효소나 그 위성 단백질에 대한 프로브를 포함하는 집단에서 선별된 합성 DNA 프로브와 하이브리-다이제이션하여 감지되는 방법.
  30. 다음과 같은 공정으로 플루라나제와 α-아밀라제 역가를 가지는 효소제제를 생산하는 방법.
    (a) 상기의 효소를 암호화하는 DNA 조각을 선별하고, (b) 상기의 조각을 적당한 벡터에 삽입하여 재조합 분자를 얻고, (c) 상기 재조합 DNA 분자를 적당한 숙주에 전이하여 재조합 클론을 얻고, (d) 적당한 배지에 상기의 재조합 클론을 배양하고, (e) 배양후 상기 효소를 회수한다.
  31. 제30항에서, 숙주가 에세리히아 콜리(Escherichia cili)이고, 플루라나제와 α-아밀라제 역가를 갖는 효소가 세포를 분쇄한 후 회수되는 방법.
  32. 제23-24항에서, 전분의 가수분해를 위해 단독 또는 글루코게닉(glucogenic) 또는 말토제닉(maltogenic) 효소와 함께 효소를 사용하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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