KR20250150737A

KR20250150737A - 해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20250150737A
Application number: KR1020240048831A
Authority: KR
Inventors: 박준홍; 김현용; 류지효; 김선욱; 신웅철
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2024-04-11
Filing date: 2024-04-11
Publication date: 2025-10-21

Abstract

본 발명은 해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 해라 추출물은 3T3-L1 세포 독성이 없으며, 지방세포 분화 억제를 통한 지방세포 내 중성지방 축적 억제, 지방세포 분화 조절 유전자의 발현량 조절 및 비만 유도 동물모델에서의 체중 증가를 억제함으로써 비만 개선 또는 예방 효과가 있는 것이다.

Description

해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, ameliorating or treating obesity or metabolic disease caused by fat accumulation comprising Rapana venosa extract as effective component}

본 발명은 해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

비만은 체내에 과잉 축적되는 증상으로 대표되며 주요 대사 질환 중 하나로 분류되며, 전 세계 국가들이 겪고 있는 심각한 건강문제로, 2025년에 이르면 비만 관련 질환자가 약 3억 명 이상 될 것으로 예측되어 비만 관련 약물 시장은 국내뿐만 아니라 전 세계적으로 크게 성장할 것으로 예상된다.

우리나라도 점점 더 식습관이 서구화되고, 문화수준이 향상됨에 따라 단순 비만자가 현저히 증가하고 있으며, 비만은 의한 고혈압, 동맥경화, 지방간, 당뇨 또는 심장질환 등 각종 질병의 발생에 관여하거나 악화시키는 원인이 되고 있다. 따라서 비만은 미리 예방하는 것이 좋으며, 비만증이 된 경우에는 체지방의 감소를 통하여 신체 대사가 원활하게 이루어지도록 조절하는 것이 각종 질병의 예방과 건강을 위하여 매우 중요하다.

한편, 현재 비만의 치료법으로는 식사요법, 운동요법, 약물요법이 있으나 약물 요법의 경우 투여 기간이 길어짐에 따라 안정성과 부작용 문제가 대두되면서 새로운 비만 치료제의 개발이 요구되어졌다. 현재 국내에서는 오르리스타트(orlistat) 및 로카세린(lorcaserine)이 장기적으로 사용 가능하도록 허가되어 있으며, 미국에서는 리라글루타이드(liraglutide), 펜터민/토피라메이트(phentermine/topiramate) 및 날트렉손/부프로피온(naltrexone/bupropion) 등 다양한 치료제가 개발 및 허가되었다. 그러나 대다수의 약물이 음식을 통해 섭취하는 지방의 흡수를 저해하는 방식으로 체중을 감량하도록 하기 때문에 근본적인 비만 치료 약물의 개발이 시급하다.

비만 관련 기술로서, 한국등록특허 제0673068호에 비파엽 추출물을 함유하는 비만 관련 질환의 치료 및 예방을 위한 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2016-0094313호에 모과 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물이 개시되어 있으나, 아직까지 본 발명의 해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대하여 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 해라 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 본 발명의 해라 추출물이 3T3-L1 세포 독성이 없으며, 지방세포 분화 억제를 통한 지방세포 내 중성지방 축적 억제, 지방세포 분화 조절 유전자의 발현량 조절 및 비만 유도 동물모델에서의 체중 증가를 억제함으로써 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제를 제공한다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 한약 조성물을 제공한다.

본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 해라 추출물은 3T3-L1 세포 독성이 없으며, 지방세포 분화 억제를 통한 지방세포 내 중성지방 축적 억제, 지방세포 분화 조절 유전자의 발현량 조절 및 비만 유도 동물모델에서의 체중 증가를 억제함으로써 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과가 있다.

도 1은 생체 외 지방 세포 분화 모델에서, 지방 세포의 분화 시 해라 열수 추출물의 효과를 확인한 결과이다. **, ***은 AIM(Adipogenic induction media, Control) 대비하여 본 발명의 해라 추출물 처리군에서 지방분화에 따른 지방 축적이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, **는 p<0.01, ***는 p<0.001이다.
도 2는 지방 세포에서 해라 추출물의 세포생존율을 확인한 결과이다.
도 3은 분화가 유도된 지방세포에서, 해라 열수 추출물을 처리하여 지방 분화 관련 단백질인 CEBPα(A) 및 AP2(B)의 유전자 발현량 변화를 확인한 결과이다. ###은 분화시키지 않은 지방세포(GM, growth media)에 대비하여 지방 분화가 유도된 지방세포(AIM)에서 CEBPα 또는 AP2의 유전자 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이다. *, **, ***은 지방 분화가 유도된 지방세포(AIM) 대비 본 발명의 해라 열수 추출물 처리군의 CEBPα 또는 AP2의 유전자 발현량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, **은 p<0.01이며, ***은 p<0.001이다.
도 4는 고지방식이 동물 모델에서, 해라 추출물의 섭취에 따른 체중변화를 확인한 결과로서, 고지방식이에 따른 일자별 체중변화(A) 및 1일째 및 30일째의 체중을 비교한 결과(B)이다. **은 고지방식이 30일 후, 고지방식이군 대비 해라 추출물 투여군의 체중이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.01이다.
도 5는 고지방식이 동물모델의 혈액 내 총콜레스테롤(A), 고밀도 지단백(HDL-c)(B), 저밀도 지단백(LDL-c)(C), ALT/GPT(D) 및 ALT/GPT(E)의 함량을 확인한 결과이다. ***은 일반식이한 정상대조군(NC)에 대비하여 고지방식이군(HFD)의 혈액 내 총콜레스테롤, HDL-c, LDL-c 또는 ALT/GPT 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이고, #, ##, ###은 HFD군 대비 본 발명의 해라 추출물 투여군(해라)의 혈액 내 총콜레스테롤, 저밀도 지단백, AST/GOT 및 ALT/GPT 함량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, #은 p<0.05이고, ##은 p<0.01이며, ###은 p<0.001이다.

본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

상기 해라(Rapana venosa) 추출물은 참고둥(Rapana venosa; Veined Rapa Whelk)의 신선한 고기를 건조 및 분말화하여 추출한 것으로, 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:

1) 해라(Rapana venosa)에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.

상기 단계 1)에서 추출용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물이지만 이에 한정하지 않는다.

상기 추출물의 제조방법에 있어서, 해라(Rapana venosa) 추출은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 지방 축적에 의한 대사성 질환은 비알콜성 지방간, 지방간염, 이상지질혈증, 동맥경화, 당뇨 및 고혈압 중에서 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 해라 추출물의 양을 기준으로 0.01~2,000mg/kg이고, 바람직하게는 30~500mg/kg이고, 더욱 바람직하게는 50~300mg/kg이며, 하루 1~6회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 제한하는 것은 아니다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 해라 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 에탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물 유를 들 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 충진제, 항 응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당 업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물의 유효한 양은 동물의 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강상태 또는 성별에 따른 본 발명의 유효성분에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제에 관한 것이다.

본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비 제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 한약 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 한약 조성물은 한약 제조시 사용되는 통상의 건조된 약재형태의 것을 의미한다. 본 발명의 한약 조성물을 통상의 방법에 따라 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 추출용매를 이용하여 추출한 추출액이거나, 이를 건조하여 획득한 분말 형태의 추출물일 수 있으며, 특별히 제형에 대한 제한이 없다. 예를 들어 환제, 정제, 캡슐제 또는 액제의 제형으로 제조될 수 있다.

이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

실시예 1. 해라 추출물 제조

건조한 해라(Rapana venosa) 분말 1kg에 대하여, 증류수 10ℓ를 첨가하여 3시간 동안 100℃에서 환류 추출한 후, 53μm 필터 후 감압 농축 및 건조하여 해라 추출물을 획득하였다.

실시예 2. 해라 추출물의 지방 축적 억제 효과 확인

마우스 지방 줄기세포 3T3-L1 세포를 미국 ATCC로부터 구입하였다. 37℃, 5% CO₂의인큐베이터에서 10%의 소 태아 혈청(CT26 세포) 또는 송아지 혈청(3T3-L1 세포)을 포함하고, 1%의 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 DMEM 배지에서, 상기 구입한 세포를 배양하였다.

65cm² 배양 접시에서, 상기 배양한 1×10⁵개의 3T3-L1 세포에 10% 소 태아 혈청, 0.5μM의 덱사메타손, 0.5㎍/㎖의 인슐린 및 0.5mM의 이소부틸메틸잔틴(isobutylmethylxanthine)을 48시간 동안 처리하고, 이후, 추가로 7일 동안 10% 태아 소 혈청과 0.5㎍/㎖의 인슐린을 포함하는 배양액으로 2일 마다 교환해 주면서 지방 세포 분화를 유도하였다.

지방세포의 분화를 유도한 이후, 상기 세포 모델에 해라 추출물을 25, 50, 100 및 200㎍/㎖의 농도로 각각 처리하여 지방축적량의 변화를 확인하였다. 지방 세포 분화를 평가하기 위하여 분화된 3T3-L1 세포를 4% 포름알데히드를 이용하여 고정한 후 0.3% 오일 레드 오(Oil Red O) 용액을 이용하여 중성지방을 염색하였다.

그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이, AIM 대비 해라 추출물 처리군에서 지방 축적이 통계적으로 유의미하게 감소하였다.

실시예 3. 세포 생존율 분석

마우스 지방 줄기세포(3T3-L1 세포)에서 해라 추출물의 세포 생존율 분석을 위하여, 3T3-L1 세포를 96웰 플레이트(1×10⁴ 세포/웰)에 분주하고, 해라 25, 50, 100, 200, 400㎍/㎖을 24시간 동안 배양하였다. 이후, CCK-8 시약을 2시간 동안 처리 후 흡광도를 450nm 파장에서 측정하였다.

그 결과 도 2에 개시한 바와 같이 지방세포에서 해라 추출물의 세포독성은 없는 것으로 나타났다.

실시예 4. qPCR 분석

지방 분화된 3T3-L1 세포에서의 총 RNA는 TRIzol을 이용하여 분리하였다. cDNA는 써모 피셔(Thermo Fisher)사의 고성능 cDNA 역전사 키트 합성키트를 이용하였고, qPCR 분석은 어플라이드 바이오시스템즈 퀀트스튜디오 7 플렉스 시스템(Applied Biosystems QuantStudio 7 Flex system)과 SYBR Green PCR 마스터 믹스를 이용하였다.

CEBPα 및 AP2 유전자의 프라이머 서열

유전자		서열(5'->3')	서열번호
CEBPα	정방향	CAA GAA CAG CAA CGA GTA CCG	1
CEBPα	역방향	GTC ACT CGT CAA CTC CAG CAC	2
AP2	정방향	GAT GCC TTT GTG GGA ACC T	3
AP2	역방향	CTG TCG TCT GCG GTG ATT T	4

그 결과 도 3에 개시한 바와 같이, 해라 추출물의 처리에 의해 지방 분화 관련 단백질 CEBPα 및 AP2의 유전자 발현량이 유의미하게 감소하였다.

실시예 5. 해라 추출물의 섭취에 따른 고지방 식이로 유도한 비만 동물모델의 체중 변화 확인

8주령 C57BL/6 수컷 마우스를 이용하여 고지방식이를 통한 비만 모델을 제작하였으며, 해라 추출물을 20mg/kg의 양으로 경구투여하며, 30일 동안 매일 체중을 측정하였다. 모든 마우스는 12시간의 명암(light:dark) 주기, 30~70%의 습도, 20~26℃의 온도 조건에서 케이지 당 4마리씩 무작위 배정하였다.

그 결과 도 4에 개시한 바와 같이, 시간이 지남에 따라 고지방식이에 따른 체중이 증가하였으며, 고지방식이 군에 대비하여 본 발명의 해라 추출물 투여군의 체중 증가율이 완만하였다. 최종적으로 확인한 30일 째의 체중을 확인한 결과, 고지방식이군과 해라 추출물 투여군의 체중 차이가 통계적으로 유의미하다는 것을 확인하였다.

실시예 6. 해라 추출물의 섭취에 따른 고지방 식이로 유도한 비만 동물모델의 혈액 내 총콜레스테롤, 고밀도 지단백(HDL-c), 저밀도 지단백(LDL-c) 및 간기능 지표(AST 및 ALT)의 함량 확인

8주령 C57BL/6 수컷 마우스를 이용하여 50일(7주) 동안 고지방식이를 통한 비만 모델을 제작하였다. 해라 추출물 섭취 실험군은 고지방식이(HFD)를 유지하면서, 7주 동안 20mg/kg의 해라 추출물을 경구투여하였다. 7주 동안 고지방식이 및 해라 추출물 투여를 마치고, 혈액을 채취하여 혈액 내 총콜레스테롤, 고밀도 지단백(high-density lipoprotein cholesterol), 저밀도 지단백(low-density lipoprotein cholesterol) 및 간기능 지표(AST(Aspartate aminotransferase) 및 ALT(alanine aminotransferase))의 함량 변화를 확인하였다.

혈액채취는 안면정맥채혈(Submandibular blood collection)로 획득하였고, 고속원심분리기를 이용하여 3000rpm에서 10분 동안 원심분리하여 혈장을 획득하였고, 분리된 혈장은 -20℃에서 실험전까지 보관하였다. 혈액 분석은 각각의 생화학적 지표들에 대한 진단키트(Erba Mannheim XL packs) 및 혈액생화학분석기(Erba Mannheim XL-200, Erba Mannheim, Mannheim, Germany)를 이용하여 측정하였다.

그 결과, 도 5에 개시한 바와 같이, 해라 추출물의 혈액 내 총콜레스테롤, HDL, LDL, AST 및 ALT 수치가 HFD에 대비하여 감소하였고, 특히, 총콜레스테롤, LDL 및 ALT 수치는 통계적으로 유의미한 감소를 나타냈다.

[통계 분석]

통계 분석은 GraphPad Prism 9 프로그램을 사용하여 수행하였다. 결과는 평균±표준오차(SEM)로 표시되며 유의성 분석에서, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001로 설정하였다. 다변량 분산 분석은 다중 비교하였다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 해라 추출물의 추출용매는 물, C₁~C₄의 저급알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 지방 축적에 의한 대사성 질환은 비알콜성 지방간, 지방간염, 이상지질혈증, 동맥경화, 당뇨 및 고혈압 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제6항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물.
해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제.
해라(Rapana venosa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 지방 축적에 의한 대사성 질환의 예방 또는 치료용 한약 조성물.