KR20230000748A - 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 - Google Patents
감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 혼합물의 신경세포 보호 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 특정 비율로 혼합된 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 단독 처리군에 비해 현저한 신경세포 보호 효과가 있음을 확인하였다. 따라서 본 발명의 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 약학 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 혼합물의 신경세포 보호 용도에 관한 것이다.
2021년 기준 65세 이상의 노인 인구 854만 2천 명이며, 전체 인구의 16.5%를 차지하고 있다. 대한민국의 2060년 노인 인구 비중은 40.1%로 세계의 2.3배에 달할 것으로 예상한다. 노인 인구가 증가함에 따라 치매 환자 수도 증가하는 추세인데, 2018년 기준 추정 치매 환자수는 79만 4천 명으로 기타 치매가 16.3%, 혈관성 치매는 8.7% 그리고 알츠하이머 치매가 74.9%로 가장 높은 비율을 차지하고 있다. 알츠하이머 치매의 주요 원인 중 하나로 활성산소를 꼽을 수 있는데, 과도한 활성산소는 슈퍼옥사이드 디스뮤테이즈(Superoxide dismutase, SOD) 등의 체내 항산화 작용을 억제하여 신경세포에 손상을 가해 인지기능 장애를 일으킨다. 최근 치매 치료를 위한 다양한 합성 약물들이 개발되고 있으나, 대부분의 치매 치료제는 효과가 미미하거나 진행 속도를 낮추는 정도로 그치며 부작용을 동반하고 있어 질병의 치료보다는 예방을 선호하여 천연물 유래 기능성 소재에 관한 관심이 높아지고 있는 추세이다.
한편, 머위는 국화과의 여러해살이풀에 속하는 식물로써 대한민국 전역에서 자생하며 산골의 논둑 또는 민가의 울타리 부근에서 많이 자란다. 쉽게 구할 수 있을 뿐만 아니라 한 번에 많은 양을 수확할 수 있으며 독이 없어 오래전부터 약용 또는 식용으로 머위를 이용하였다.
감태는 다시마목 미역과에 속하는 갈조류의 일종으로 온대 연안에 분포하며 대한민국의 제주도에서 풍부하게 생산된다. 카로티노이드, 후코이단 및 플로로탄닌 등의 성분들이 존재하는 것으로 알려져 최근 항산화, 항염증 및 항알러지 등의 활성에 대한 많은 연구가 이뤄지고 있다.
이에 본 발명자들은 감태 추출물 및 머위 추출물을 특정 농도비로 혼합하여 신경세포 보호용 혼합물을 제조하고, 이의 신경세포 보호 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 신경세포 보호용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 신경세포 보호용 식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 시험관 내(in vitro) 신경세포 보호용 시약 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 특정 비율로 혼합된 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 단독 처리군에 비해 현저한 신경세포 보호 효과가 있음을 확인하였다. 따라서 본 발명의 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 약학 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 신경세포 보호용 혼합물의 세포 독성 평가 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 상기 조성물은 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물일 수 있고, 시험관 내 신경세포 보호용 시약 조성물일 수 있다.
본 발명에 있어서, 추출물은 원물로부터 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.
상기 감태 및 머위는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있고, 세척하여 그대로 사용하거나 건조하여 사용할 수 있으며, 건조방법으로는 양건, 음건, 열풍건조, 자연 건조하는 방법 등을 모두 사용할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 머위는 줄기, 잎 또는 뿌리를 건조시킨 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 잎 또는 줄기이나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체예에서, 상기 감태 추출물 또는 머위 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출된 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 에탄올로 추출된 것이며, 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하다.
상기 추출물의 추출 온도는 50 내지 100℃인 것이 바람직하다. 또한 추출방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 열수환류추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 다양한 방법이 사용될 수 있으나 이에 제한되지는 않고, 바람직하게는 열수추출법 또는 열수환류추출법을 사용하는 것이다.
상기 감태 추출물 또는 머위 추출물은 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조할 수도 있다. 또한 상기 감태 추출물 또는 머위 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수도 있다. 또한 상기 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 감태 추출물은 감태 건조물을 70%(v/v) 에탄올 추출물을 물-에탄올 정제하여 제조된 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 감태 건조물 중량 대비 10배(w/v)의 70%(v/v) 에탄올을 가하여 감태 에탄올 추출물을 제조한 후 이를 물-에탄올 정제하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 머위 추출물은 머위 잎 건조물을 열수환류추출하여 제조된 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 머위 잎 건조물 중량 대비 25배(w/v)의 물을 가한 후 열수환류추출하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 구체예에서, 상기 감태 추출물은 농도가 1 내지 50 μg/mL인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 10 내지 40 μg/mL, 가장 바람직하게는 25 μg/mL이다.
본 발명의 구체예에서, 상기 머위 추출물은 농도가 1 내지 250 μg/mL인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 100 내지 200 μg/mL, 가장 바람직하게는 100 또는 150 μg/mL이다.
본 발명의 구체예에서, 상기 혼합물은 감태 추출물 및 머위 추출물이 1 : 1 내지 10의 농도비로 혼합된 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 1 : 2 내지 8의 농도비이고, 가장 바람직하게는 1 : 4의 농도비 또는 1 : 6의 농도비이다. 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합 비율이 위의 범위 미만인 경우 신경세포 보호 효과과 미미할 수 있으며, 위의 범위를 초과할 경우 사용량 대비 효과 상승률이 낮아 비경제적일 수 있다.
본 발명의 구체예에서, 상기 신경세포 보호는 산화스트레스에 의해 유발되는 신경세포의 사멸 억제에 의한 것이 바람직하다. 본 발명의 실시예에서, 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물의 과산화수소 처리에 따른 신경세포 보호 효과를 확인하였다. 그 결과, 과산화수소만을 처리한 대조군은 신경세포가 사멸하였으나, 본 발명의 혼합물을 처리한 실험군은 신경세포가 사멸되는 것을 억제하는 것(즉, 신경세포의 세포 생존율이 높은 것)을 확인하였다.
본 발명에 따른 조성물이 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물인 경우, 본 발명의 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 건강기능식품, 식품 첨가제 또는 식이보조제로 사용될 수 있다.
상기 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물이 식품 첨가제로 사용할 경우, 상기 혼합물을 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 사용되는 등 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
또한 상기 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 변경될 수 있음은 물론이며, 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 95중량%로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1 내지 80중량%로 포함되는 것이다. 그 함량이 0.01중량% 미만일 경우에는 신경세포 보호 효과가 미미할 수 있으며, 95중량%를 초과할 경우 사용량 대비 효과 상승률이 낮아 비경제적일 수 있다.
구체적인 예로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하여 장기간 섭취할 경우에는 상기 범위 이하의 양으로 첨가될 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으나, 본 발명의 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물이 음료로 제조될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드; 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐 등의 합성 감미제 등이 사용될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 0.1중량%로 포함된다.
본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있으며, 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기의 첨가제 비율은 크게 제한되지는 않으나, 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 0.1중량% 범위내로 포함되는 것이 바람직하다.
건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우, 본 발명의 식품 조성물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 장기간 복용이 가능하다.
본 발명에 따른 조성물이 시험관 내 신경세포 보호용 시약 조성물인 경우, 본 발명의 조성물은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 보존하기 위한 추가 성분을 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 현저한 신경세포 보호 효과를 가지는바, 다양한 약제 스크리닝 등의 실험에 유용하게 활용될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시예에서, 본 발명에 따른 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 산화적 스트레스로부터 신경세포 보호, 즉, 산화적 스트레스에 의한 신경세포 사멸을 억제한다는 것을 실험을 통해 입증하였다. 따라서 상기 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물은 ‘산화적 스트레스에 의한 신경세포 손상’이 원인인 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료에 활용될 수 있다.
본 발명의 구체예에서, 상기 퇴행성 뇌질환은 뇌졸중, 중풍, 기억력 상실, 기억력 손상, 치매, 건망증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 피크(Pick)병 및 크로이츠펠트-야콥(Creutzfeld-Jakob)병으로 이루어진 군에서 선택한 1종 이상인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 액제, 연고제, 크림제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 겔제 또는 에어로졸제 등의 형태로 사용될 수 있다.
또한 각각의 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경구제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형을 가질 수 있다. 예컨대, 해당 부위에 국부적으로 사용되는 피부외용제인 경우에는 통상적인 첨가제, 예를 들어 보존제, 의약 침투를 보조하는 용매, 연고 및 크림의 경우 연화제 등을 포함할 수 있으며, 에탄올 또는 올레일 알코올과 같은 통상적 담체를 함유할 수 있다. 해당 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.
상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등이 있다. 상기 약학 조성물을 제제화나 제형화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 상기 성분들은 유효성분, 즉 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
본 발명에 있어서, 투여는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 약학적 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양, 즉 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양인 치료상 유효량으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자 등에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 구강, 심장내, 골수내, 경막내, 경피, 장관, 피하, 설하 또는 국소 투여할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 1 내지 10,000㎎/㎏/일, 바람직하게는 1 내지 200㎎/㎏/일의 양으로 투여할 수 있으며, 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회에 나누어 투여할 수도 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 감태 추출물 및 머위 추출물을 포함하는 신경세포 보호용 혼합물 제조
1-1. 감태 추출물 제조
감태 70%(v/v) 에탄올 추출물의 물-에탄올 정제물(즉, 감태 추출물)을 제조하였다. 구체적으로, 감태 건조 분말의 중량 대비 10배(w/v)의 70% 에탄올을 가한 후(감태 건조 분말 1 kg 및 70% 에탄올 10L) 75±5℃에서 4시간 동안 교반 추출하여 1차 추출물을 제조하였다. 상기 1차 추출물을 여과하였고, 25 내지 30 brix가 되도록 감압농축하여 농축액을 얻었다. 상기 농축액에 농축액량 대비 15배(w/v)의 상수를 가한 후 50±5℃에서 2시간 동안 교반희석(1~3 brix)하여 로딩액을 준비하였다. 준비된 로딩액을 이온교환수지(HP-20)에 로딩한 후 이온교환수지 충진량 대비 4배수(v/v)의 상수 및 에탄올 순으로 용출하고 용리액을 한데 모아 감압농축(감압건조)하여 분말 형태의 감태 추출물을 얻었다.
앞서 제조된 분말 형태의 감태 추출물 10 mg을 열수 1 ml에 녹였다. 그 후 2,000 rpm, 4℃ 및 30분 동안 원심분리한 후 상등액을 취했다. 상등액을 0.45 μm PVDF 실린지 필터 13 mm로 여과하여 감태 추출물을 제조하였다. 제조된 감태 추출물은 실험전까지 냉동보관하였다.
1-2. 머위 추출물 제조
머위 잎을 열수환류추출하여 머위 추출물을 제조하였다. 구체적으로, 머위 잎 건조물의 중량 대비 25배(w/v)의 상수를 가한 후(머위 잎 건조물 300 g + 상수 7.5 L) 100±5℃에서 8시간 동안 환류추출하여 1차 추출물을 얻었다. 상기 1차 추출물을 10 um 페이퍼로 여과한 후 감압농축(감압건조)하여 분말 형태의 머위 추출물을 얻었다. 분말 형태의 머위 추출물은 실험전까지 냉동보관하였다.
앞서 제조된 분말 형태의 머위 추출물 10 mg을 열수 1 ml에 녹였다. 그 후 2,000 rpm, 4℃ 및 30분 동안 원심분리한 후 상등액을 취했다. 상등액을 0.45 μm PVDF 실린지 필터 13 mm로 여과하여 머위 추출물을 제조하였다. 제조된 머위 추출물은 실험전까지 냉동보관하였다.
1-3. 신경세포 보호용 혼합물 제조
상기 실시예 1-2 및 1-3에서 제조된 감태 추출물 및 머위 추출물을 혼합하여 신경세포 보호용 혼합물을 제조하였다. 구체적으로, 제조된 감태 추출물 및 머위 추출물을 1:4, 1:6 또는 1:8 농도비로 혼합하여 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물(이하, 신경세포 보호용 혼합물)을 제조하였다.
실시예 2. 신경세포 배양
설치류 유래 신경세포주의 PC-12 세포는 American Type Culture Collection(ATCC, MAnassas, VA, USA)에서 구입하여 사용하였다. PC-12 세포는 10% FBS(fetal bovine serum), penicillin(100 units/mL) 및 streptomycin(100 μg/mL)을 포함하는 RPMI 1640 배지를 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 조건이 유지되는 이산화탄소 배양기(CO2 incubator BB 15, Thermo Electron LED GmbH, Langenselbold, Germany)에서 배양하였다.
실시예 3. 신경세포 보호용 혼합물의 신경세포 보호능 평가
신경세포 보호능을 평가하기 위하여, PC-12 세포에서 신경세포 보호용 조성물의 독성을 확인하였다. 구체적으로, 96웰 플레이트에 PC-12 세포를 5.0×104 cells/well로 분주하여 3시간 동안 배양하였다. 배양 종료 후 웰의 배지를 제거하였다. 그 후, 배양 배지에 각 추출물을 표 1과 같이 혼합하여 준비하였다.
감태 추출물 (μg/mL) |
머위 추출물 (μg/mL) |
비고 | |
con | - | - | 추출물 미처리, 배양 후 H2O2 미처리 |
H2O2 | - | - | 배양 후 400 μM H2O2 처리 |
실험군 1 | 25 | - | |
실험군 2 | - | 100 | |
실험군 3 | - | 150 | |
실험군 4 | - | 200 | |
실험군 5 | 25 | 100 | 신경세포 보호용 조성물(1:4) |
실험군 6 | 25 | 150 | 신경세포 보호용 조성물(1:6) |
실험군 7 | 25 | 200 | 신경세포 보호용 조성물(1:8) |
준비된 배양 배지를 각 웰당 100 μL씩 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 산화적 스트레스를 유발하기 위하여, 400 μM H2O2를 첨가해 1시간 동안 반응시킨 후, 각 웰에 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액을 첨가해 3시간 동안 반응시켰다. DMSO를 각 웰당 50 μL씩 분주하여 보라색의 포마잔(formazan)을 용해시켰으며, 마이크로플레이트 판독기(Infinite M200; Tecan Austria GmbH, Grodig, Austria)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정 값에 기초하여 세포 독성(즉, 세포 생존율)을 분석하였고, 그 결과는 도 1 및 표 2에 나타내었다.
세포 생존율(%) | ||
음성 대조군 | 100 | |
H2O2 처리군 | 53.92 | |
감태 추출물(μg/ml) | 25 | 58.39 |
머위 추출물(μg/ml) | 100 | 54.94 |
150 | 59.96 | |
200 | 64.39 | |
신경세포 보호용 혼합물(감태:머위) | 1:4 | 75.66 |
1:6 | 78.92 | |
1:8 | 79.0 |
도 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 과산화수소 처리로 인해 세포 생존율이 감소된 것을 확인하였다. 이와 달리, 감태 추출물 또는 머위 추출물을 처리한 세포는 세포 생존율이 소폭 증가한 것을 확인하였다. 특히, 머위 추출물 처리군은 농도의존적으로 세포 생존율이 증가하는 경향을 보였다. 또한 상기 실시예 1에서 제조된 신경세포 보호용 혼합물을 처리한 세포는 감태 추출물 및 머위 추출물의 복합적인 작용으로 인해 세포 생존율이 현저히 증가하는 것을 확인하였다.
상기 도 1 및 표 2의 결과에 기초하여, 세포 보호 효과를 계산하였다. 세포 보호 효과 계산식은 다음과 같으며, 계산 결과는 표 3에 나타내었다.
[계산식]
세포 보호 효과 (%) = 추출물 처리군 - H2O2 처리군
세포 보호 효과(%) | ||
감태 추출물(μg/ml) | 25 | 4.47 |
머위 추출물(μg/ml) | 100 | 1.02 |
150 | 6.04 | |
200 | 10.47 | |
신경세포 보호용 혼합물(감태:머위) | 1:4 | 21.75 |
1:6 | 25.00 | |
1:8 | 25.14 |
표 3에 나타낸 바와 같이, 감태 추출물 또는 머위 추출물을 단독으로 처리하는 것에 비해 신경세포 보호용 혼합물을 처리하는 것이 신경세포 보호능이 더 우수하다는 것을 확인하였다.
상기 도 1 및 표 2의 결과에 기초하여, 신경세포 보호용 혼합물의 상승 효과를 계산하였다. 상승 효과 계산식은 다음과 같으며, 계산 결과는 표 4에 나타내었다.
[계산식]
상승효과(%) = (신경세포 보호용 혼합물-H2O2)-{(머위 추출물-H2O2)+(감태 추출물-H2O2)}
상승 효과 (%) | ||
신경세포 보호용 혼합물(감태:머위) | 1:4 | 16.25 |
1:6 | 14.49 | |
1:8 | 10.19 |
표 4에 나타낸 바와 같이, 신경세포 보호용 혼합물은 모든 농도 비율에서 상승 효과를 나타내었으나, 머위 추출물의 농도에 따라 감태 추출물은 서로 다른 상승 효과를 보이는 것을 확인하였다. 특히, 감태 추출물 및 머위 추출물의 농도 비율이 1:4, 1:6 및 1:8의 경우 10% 이상의 상승 효과가 나타났다.
종합적으로 본 발명자들은 감태 추출물 및 머위 추출물을 특정 농도비로 혼합하여 신경세포 보호용 혼합물을 제조하고, 이의 신경세포 보호 효과를 확인하였다. 그 결과 본 발명에 따른 신경세포 보호용 혼합물이 단독 처리군(감태 추출물 또는 머위 추출물)에 비해 현저한 신경세포 보호 효과가 있음을 확인하였다. 따라서 본 발명의 신경세포 보호용 혼합물은 제약 및 건강기능식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
이하, 제제예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 제제예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 제제예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는다.
제제예 1. 식품 제제의 제조
1-1. 건강식품의 제조
감태 추출물 및 머위 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
1-2. 건강음료의 제조
감태 추출물 및 머위 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃ 에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.
Claims (10)
- 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 감태 추출물 또는 머위 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출된, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 감태 추출물은 농도가 1 내지 50 μg/mL인, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 머위 추출물은 농도가 1 내지 250 μg/mL인, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 혼합물은 감태 추출물 및 머위 추출물이 1 : 1 내지 10의 농도비로 혼합된 것인, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 신경세포 보호는 산화스트레스에 의해 유발되는 신경세포의 사멸 억제에 의한 것인, 신경세포 보호용 건강기능식품 조성물. - 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 신경세포 보호용 식품 조성물.
- 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 시험관 내(in vitro) 신경세포 보호용 시약 조성물.
- 감태 추출물 및 머위 추출물의 혼합물을 포함하는, 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 퇴행성 뇌질환은 뇌졸중, 중풍, 기억력 상실, 기억력 손상, 치매, 건망증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 피크(Pick)병 및 크로이츠펠트-야콥(Creutzfeld-Jakob)병으로 이루어진 군에서 선택한 1종 이상인, 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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