KR20240134906A - 화장용 카로티노이드 조성물의 제조 - Google Patents
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Abstract
캡시컴 아늄 추출물 조성물(600)은 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 1% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함한다. 조성물은 적어도 부분적으로, 역류 추출을 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 소비된 물질로부터 생성되며, 조성물은 피부, 눈, 또는 모발을 향상시킨다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
[0001] 본 출원은 2022년 1월 12일에 출원되고 발명의 명칭이 "Manufacture of Cosmetic Carotenoid Compositions"(Sevanti Mehta)인 미국 가출원 제63/298,804호의 혜택을 청구한다.
[0002] 캡시컴 아늄(capsicum annum) 추출물 조성물은 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 1% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함한다. 조성물은 적어도 부분적으로, 역류 추출을 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 소비된 물질로부터 생성되며, 조성물은 피부, 눈, 또는 모발을 향상시킨다.
[0003] 조성물을 제조하기 위한 방법은 소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계를 포함하며, 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용하는 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 생성된다. 상기 방법은 초임계 유체 추출을 사용하여 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법은 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키도록 역류 추출을 사용하여 농축된 카로티노이드를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
[0004] 조성물을 제조하기 위한 방법은 소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계를 포함하며, 상기 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용하는 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 생성된다. 상기 방법은 초임계 유체 추출을 사용하여 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법은 조성물이 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 15% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하고 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키도록 역류 추출을 사용하여 가수분해된 카로티노이드를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
[0005] 따라서, 하기 실시예 중 하나 이상에 따라 조성물 및 방법이 제공된다. 도면에서:
[0006] 도 1은 조성물을 제조하는 예시적인 방법이다.
[0007] 도 2는 안내압의 저하를 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0008] 도 3 내지 도 5는 항-비만 효과를 평가하기 위한 연구의 결과를 도시하는 예시적인 다이아그램이다.
[0009] 도 6은 예시적인 조성물이다.
[0010] 도 7은 멜라닌 억제를 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0011] 도 8은 티로시나제 억제를 나타내는 예시적인 막대 차트이다. 그리고
[0012] 도 9는 배수 증가에 대한 유전자 전사체의 유전자 발현 분석을 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0013] 그러나, 도면 및 이에 대한 상세한 설명에 제공된 특정 구현예는 본 개시를 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 반대로, 이들은 첨부된 청구범위에서 제공된 구현예들 중 하나 이상과 함께 포함되는 대안적인 형태, 등가물, 및 변형을 당업자가 식별할 수 있는 기초를 제공한다.
[0006] 도 1은 조성물을 제조하는 예시적인 방법이다.
[0007] 도 2는 안내압의 저하를 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0008] 도 3 내지 도 5는 항-비만 효과를 평가하기 위한 연구의 결과를 도시하는 예시적인 다이아그램이다.
[0009] 도 6은 예시적인 조성물이다.
[0010] 도 7은 멜라닌 억제를 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0011] 도 8은 티로시나제 억제를 나타내는 예시적인 막대 차트이다. 그리고
[0012] 도 9는 배수 증가에 대한 유전자 전사체의 유전자 발현 분석을 나타내는 예시적인 막대 차트이다.
[0013] 그러나, 도면 및 이에 대한 상세한 설명에 제공된 특정 구현예는 본 개시를 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 반대로, 이들은 첨부된 청구범위에서 제공된 구현예들 중 하나 이상과 함께 포함되는 대안적인 형태, 등가물, 및 변형을 당업자가 식별할 수 있는 기초를 제공한다.
[0014] 특정 용어는 특정 시스템 구성요소 및 구성을 지칭하기 위해 하기 설명 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용된다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 회사는 구성요소를 상이한 이름으로 지칭할 수 있다. 이러한 문서는 이름은 다르지만 기능이 상이하지 않은 구성요소들을 구별하도록 의도되는 것은 아니다. 하기 논의 및 청구범위에서, 용어 "포함하는(including)" 및 "포함하는(comprising)"은 개방형 방식으로 사용되고, 따라서 "...을 포함하지만 이로 제한되지 않는"을 의미하는 것으로 해석되어야 한다.
[0015] 카로티노이드는 식물 및 동물에서 널리 발견되고 8개의 이소프렌 단위로 구성된 긴 지방족 폴리엔 사슬을 화학적으로 특징으로 하는 카로틴(caroten)과 같은 임의의 다양한 안료이다. 캡산틴은 베타-카로틴, 리코펜, 루테인, 및 제아잔틴과 마찬가지로 카로티노이드이다. 이러한 안료는 적색, 주황색, 황색 및 녹색 열매 및 채소에서 발견된다. 카로티노이드는 신체의 질환 예방 기전을 돕는 항산화제 테트라테르페노이드이다.
[0016] 캡시컴 아늄은 야채, 향신료, 및/또는 색소로 사용되는 널리 소비되는 천연 식료품이며, 파프리카 추출물은 캡시컴 아늄 속의 열매의 추출물이다. 중미 및 남부 아메리카에서 기원하는 속은 솔라나케아이(solanaceae) 과에 속하고, 순한 피망(mild bell pepper)에서 매운 하바네로(spicy habanero)에 이르기까지 모든 후추를 포함한다. 캡시컴에는 5개의 순화종, 즉, 아늄(annum), 프루테스센스(frutescens), 차이넨스(chinense), 푸베센스(pubescens), 및 바카툼(baccatum)이 존재하며, 아늄, 프루테스센스 및 차이넨스가 가장 널리 분포되어 있다. 전 세계적으로 처음으로 소개된 것은 멕시코에서 유래한 아늄이었다. 그것은 이전에 스위트(또는 순한) 후추와 핫(또는 칠리) 후추의 두 가지 범주로 나뉘었지만, 현대 식물 육종에서는 이러한 구분이 제거되었다. 현재, 아늄은 가계 소비 및 산업 프로세싱의 관점에서 가장 널리 분포되어 있다.
[0017] 아늄은 식품 착색용 파프리카 추출물을 제조하는 데 사용되는 품종이다. 착색 추출물은 향미제로 사용된 추출물과 비교하여 낮은 함량의 캡사이신을 갖는다. 적색 품종에서, 캡산틴 및 캡소루빈은 적색을 일으키는 주요 화합물이다. 아늄 열매로부터 유래된 순수한 카로티노이드 결정은 크산토필, 예컨대, 캡산틴, 제아잔틴, 및 크립토잔틴을 포함한다. 카로티노이드의 화학 구조는 궁극적으로 안료가 가질 수 있는 잠재적인 생물학적 기능(들)을 결정한다. 카로티노이드의 폴리엔 백본에서 단일 및 이중 결합이 교대하는 독특한 패턴은 이들이 다른 분자로부터 과잉 에너지를 흡수할 수 있게 하는 반면, 카로티노이드 상의 특정 말단 기의 특성은 이들의 극성에 영향을 미칠 수 있다. 캡산틴 및 캡소루빈에 존재하는 카보닐 기는 루테인 및 제아잔틴과 같은 다른 카로티노이드와 비교할 때 이들을 독특하게 만든다.
[0018] 연령-관련 황반 변성("AMD")은 50세 이상의 사람들 사이에서 흔한 의학적 눈 병태 및 시력 상실의 주요 원인이다. 이는 예리한 중심 시력에 사용되는 망막 중심 근처의 타원형 착색 영역인 황반의 손상을 포함한다. AMD는 건성(위축성) 또는 습성(삼출성)의 두 가지 유형일 수 있다. 노화 이외에, 고혈압, 산화 스트레스, 청색광 노출, 비만 등이 또한 AMD를 유발할 수 있다. 황반의 카로티노이드는 햇빛의 청색 파장을 여과하고 망막 근처의 자유 라디칼을 감소시키는 데 도움이 되는데, 둘 모두 눈 세포에 해롭다. 루테인 및 제아잔틴은 망막에 존재하는 카로티노이드이며, 이들은 광 산화 손상으로부터 눈 세포를 보호한다. 구체적으로, AMD의 주요 원인인 청색광에 대한 만성 노출은 원추체 밀도 및 원추체 감도의 감소를 야기하고, 제아잔틴은 청색광을 흡수함으로써 AMD를 예방할 수 있다.
[0019] 스킨케어는 미용상의 문제일 뿐만 아니라 특히 햇빛에 상당한 노출을 갖는 고령화 인구를 고려하면 주요 건강 문제이다. 스킨케어 제품은 인체의 다양한 외부 부분과 접촉하고 퇴행성 피부 장애로부터 보호하기 위한 치료 제형이다. 다양한 화장품 제형에 사용되는 합성 화학물질은 바람직하지 않은 및 때때로 비가역적인 부작용과 관련이 있고, 또한 피부 알레르기를 유발한다. 파라벤 및 프탈레이트와 같은 석유-기반 화학물질은 건강 위험으로 인식되고, 이로 인해 소비자는 천연 허브-기반 성분을 요구한다. 또한, 합성 방향제는 생식 독성, 암, 및 내분비 장애와 관련이 있다. 따라서, 천연 제품에는 바람직하지 않은 부작용이 없기 때문에, 대부분은 합성 화학 물질보다 천연 제품으로부터 유래된 화장품을 선호한다. 캡산틴의 화장용 피부과 적용은 태양 보호 인자("SPF"), 멜라닌 억제 활성, 티로시나제 억제 활성, 미생물-유발 여드름 및 비듬에 대한 효과, 및 인간 케라티노사이트 세포주에서 아쿠아포린 3("AQP-3")의 유전자 발현 유도와 같은 시험관내 실험을 통해 개시된다.
[0020] SPF는 자외선("UV") 방사선에 대한 보호 효능의 실험실 측정이다. UV 방사선에 노출되면 일광화상 및 과다색소침착이 유발된다. 시험관내 SPF는 분광광도법에 의해 결정되며, SPF가 높을수록 UV 방사선에 대한 보호도가 높아진다. 멜라닌 안료는 멜라닌세포에 의해 생성되어 주변 케라티노사이트로 전달된다. 특수 세포인 멜라닌세포는 표피의 기저층에 위치한다. 멜라닌은 주로 피부 색소침착의 원인이 되고, UV 방사선-유발 피부 손상의 예방에 중요한 역할을 한다. 효소 티로시나제, 티로시나제-관련 단백질 1("TRP1"), 및 도파크롬 호변이성질체("DCT")는 티로신의 멜라닌으로의 효소적 전환을 담당한다. 멜라닌의 합성은 UV 방사선 및 Coleus forskohlii로부터의 식물화학 포스콜린을 상승시키는 cAMP를 포함하는 다양한 인자에 의해 가속화된다. 멜라닌의 비정상적인 생합성은 기미, 주근깨, 과다색소침착, 및 검버섯과 같은 심각한 심미적 문제를 야기할 수 있다. 따라서, 개시된 조성물 및 방법은 멜라닌 생합성의 억제에 의해 피부 브라이트닝 특성을 나타낸다. 구체적으로, 색소침착은 구리-함유 효소인 티로시나제를 억제함으로써 멜라닌세포의 증식 또는 멜라닌의 생합성 억제를 감소시킴으로써 달성된다.
[0021] 친지성 말라세지아 푸르푸르는 인간 및 동물 피부에서 전형적으로 발견되는 단일계통 진균 속에 속한다. 인간 피부 진균 집단의 80% 초과는 말라세지아 푸르푸르를 구성하고, 종종 감염된 숙주와 건강한 숙주 둘 모두에서 단리된다. 말라세지아 종은 비강진, 지루성 피부염, 및 말라세지아 모낭염을 포함하는 여러 일반적인 피부 질환과 관련이 있다. 말라세지아는 아토피 피부염 및 건선과 같은 다른 피부 병태에 기여할 수 있다. 피부 병태는 항진균제로 말라세지아의 수를 감소시킴으로써 개선될 수 있다. 예를 들어, 비듬은 벗겨지고 가려운 두피를 특징으로 하고, 말라세지아 종에 의한 피부의 집락화를 수반하는 피부 병태이다. 가장 흔하고 잘 연구된 질환-유발 칸디다 종은 건강한 인간의 피부, 장 점막, 및 생식기에 자연적으로 집락화하는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)이다. 특히 입원한 환자에서 중증 감염으로 인해 높은 이환율 및 사망률이 보고되었다.
[0022] 본원에 개시된 바와 같이, 적색 파프리카로도 알려진 적색 피망 열매로부터 수득된 2가지 유형의 캡산틴 추출물은 상기 기재된 모든 병태에 대해 피부 보호를 제공한다. 캡산틴 추출물은 고성능 액체 크로마토그래피("HPLC")를 특징으로 한다. 구체적으로, 적색 피망 열매로부터 수득된 캡산틴은 UV 보호, 멜라닌 억제, 피부 브라이트닝, 티로시나제 억제, 및 인간 케라티노사이트 세포주(HaCaT)에서 아쿠아포린 3(AQP-3)의 유전자 발현 유도에 효과적이다. 캡산틴 50% w/w 결정("CAP-50CR") 및 캡산틴 1.5% w/w 연 추출물("CAP-1.5SE") 둘 모두는 이러한 효과를 나타낸다.
[0023] 도 1은 2개의 물질을 제조하는 방법(100)을 예시한다. 구체적으로, 일부 예시된 구현예에 따른 카로티노이드 조성물은 상기 기재된 이점을 갖는다. 또한, 유기 유해 용매의 흔적을 남기지 않는 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드의 특정 조성, 예컨대, 트랜스-캡산틴, 트랜스-제아잔틴, 및 베타-크립토잔틴을 함유하는 카로티노이드를 단리 및 정제하기 위한 방법이 본원에 개시된다. 방법(100)은 아늄 칠리 품종의 고착색 조성물의 선택, 용매 추출, 초임계 유체 추출("SCFE") 농축, 무수 알코올에 의한 카로티노이드 에스테르의 알칼리 가수분해, 역류 추출기를 사용한 정제, 농축, 및 건조를 포함한다. 생성된 결정은 화장품, 식이 보충물, 식품 첨가제 등에 적합한 조성물이다.
[0024] 102에서, 특정 품종의 캡시컴 아늄 열매가 선택된다. 일 구현예에서, 캡시쿰 아늄 열매는 비다기 칠리(Bydagi chili) 품종, 또는 색가가 높은 다른 칠리로부터 단독으로 또는 예컨대, 비다기-카디(Bydagi-Kaddi), 비다기-디아브노르(Bydagi-Dyavnoor), 비다기-다비(Bydagi-Dabbi), KDL 하이 컬러 칠리, 5531 하이 컬러 칠리, 및/또는 4431 하이 컬러 칠리와 같이 조합으로 선택된다. 일 구현예에서, 조합물의 비는 (1) 비다기-카디 : (1) 비다기-디아브노르 : (1) 비다기-다비이다(1:1:1의 비). 다른 구현예에서, 1:2:2 및 1:1:2의 비다기-카디 : 비다기-디아브노르 : 비다기-다비의 비를 사용하여 예상치 못한 결과가 발견되었다. 또한, 각각 1:1:2의 KDL 하이 컬러, 5531 하이 컬러, 및 4431 하이 컬러의 비를 사용하여 예상치 못한 결과가 발견되었다. 다양한 구현예에서, 비다기 칠리, 또는 다른 하이 컬러 칠리의 미국 향신료 무역 협회("ASTA") 컬러 값은 2000 내지 2600 단위의 범위 또는 2000 내지 2400 단위의 범위 내에서 선택된다.
[0025] 104에서, 카로티노이드는 적합한 용매로 열매로부터 추출된다. 일 구현예에서, 건조되고, 씨가 제거되고, 플레이크된 캡시컴 아늄 열매는 40℃ 내지 90℃, 바람직하게는 60℃ 범위의 온도에서 4시간 내지 8시간, 바람직하게는 6시간 동안 용매를 사용하여 추출된다. 이어서, 용매 추출물은 진공 하에 농축되어 카로티노이드 에스테르를 함유하는 캡시컴 아늄 올레오레진을 생산한다. 다양한 구현예에서, 추출 용매는 메탄올, 에탄올, 및/또는 이소프로필 알코올 중 하나 또는 이들의 조합일 수 있다.
[0026] 예를 들어, 2000 내지 2400 단위의 ASTA 컬러 값을 갖는 250 킬로그램의 씨를 제거한 플레이크된 캡시컴 열매는 교반기를 구비한 2000 리터 용량 반응기에 배치될 수 있다. 일정 부피의 메탄올(1000L)이 첨가될 수 있고, 혼합물은 60℃에서 6시간 동안 교반될 수 있다. 메탄올 층은 여과되고 수집될 수 있다. 이러한 메탄올 추출은 효율을 위해 3회 반복될 수 있다. 또 다른 예로서, 건조된 적색 피망 플레이크(Capsicum annum)는 40℃ 내지 60℃에서 6시간 동안 n-헥산으로 추출되고, 여과하고, 진공 하에 농축될 수 있다.
[0027] 106에서, 카로티노이드는 초임계 유체 추출을 사용하여 농축된다. 일 구현예에서, 이산화탄소가 용매로서 사용되며, 초임계 유체 추출을 위한 온도는 40℃ 내지 60℃, 바람직하게는 50℃의 범위이다. 일 구현예에서, 초임계 유체 추출에 사용되는 압력은 25 내지 50 mPa, 바람직하게는 35 mPa의 범위이다.
[0028] 상기 예에 계속하여, 모든 메탄올 층들은 조합되고 진공 하에 농축될 수 있다. 22 kg의 올레오레진이 수득되고 초임계 유체 추출기 백에서 약 110 kg의 탄산칼슘과 함께 제형화될 수 있다. 추출기 백은 추출 챔버에 배치되고 50℃ 및 35 mPa에서 추출될 수 있다. 농축된 올레오레진의 수율은 대략 11 kg일 수 있다.
[0029] 108에서, 카로티노이드 에스테르는 가수분해된다. 일 구현예에서, 농축된 올레오레진은 알코올성 포타슘 하이드록사이드로 가수분해되어 유리 카로티노이드를 생산한다. 일 구현예에서, 하이드록실화를 위한 염기는 포타슘 하이드록사이드(KOH), 소듐 하이드록사이드(NaOH), 또는 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 가수분해를 위한 용매 매질은 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알코올, 또는 이들의 조합이다. 일 구현예에서, 가수분해제의 농도는 10% 내지 30%의 범위이다. 일 구현예에서, 가수분해의 온도는 70℃ 내지 85℃, 바람직하게는 80℃의 범위이다. 일 구현예에서, 가수분해에 필요한 시간은 1시간 내지3 시간, 바람직하게는 2시간의 범위이다. 카로티노이드가 유리 형태로 가수분해됨에 따라, 이들은 보다 생물학적으로 이용 가능해진다.
[0030] 상기 예에 계속하여, 농축된 올레오레진은 500 L 유리 라이닝된 반응기에 배치될 수 있다. 별도의 용기에서, 5 kg의 포타슘 하이드록사이드가 교반하면서 40 L의 에틸 알코올에 첨가될 수 있다. 알콜성 KOH는 80℃에서 2시간 동안 교반하면서 농축된 올레오레진에 서서히 첨가될 수 있다.
[0031] 110에서, 가수분해된 카로티노이드는 역류 추출을 사용하여 정제된다. 일 구현예에서, 역류 추출에 사용되는 용매는 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 또는 이들의 조합이다. 일 구현예에서, 비혼화성 수성 상은 물 또는 염산으로 산성화된 물(pH 3 내지 4), 바람직하게는 산성화된 물이다.
[0032] 상기 예에 계속하여, HPLC에 의해 비누화도가 99% 초과가 되도록 보장한 후, 70℃의 온도에서 유지된 40 리터의 탈염된 뜨거운 물이 10분 동안 교반하면서 반응물에 첨가될 수 있다. 카로티노이드 결정을 갖는 희석된 매스(mass)는 결정을 회수하기 위해 필터 프레스로 펌핑될 수 있다. 대략 250 리터의 추가의 뜨거운 물은 필터 프레스를 통해 펌핑되어 원치 않는 불순물을 세척하고 유출물의 pH를 대략 7.0의 중성으로 낮출 수 있다. 중화를 확인한 후, 양압의 질소가 필터 프레스에 가하여 필터 내부에 포획된 결정을 압착할 수 있다. 이어서, 대략 6.7 kg의 중량을 갖는 습윤 결정이 필터 프레스로부터 수집되고, 60 L의 에틸 아세테이트에 용해되고, 역류 추출기에 충전될 수 있다. 100 L의 물이 사용될 수 있고, pH는 dil-HCl로 3 또는 4로 조정될 수 있다. 산성화된 물은 역류 추출기로 바닥 공급될 수 있다.
[0033] 또 다른 예로서, 수득된 올레오레진은 초임계 유체 추출에 의해 추가로 정제되고 40% 에탄올성 가성 포타시를 사용하여 비누화될 수 있다. 비누화된 추출물은 이후 농축되어 에탄올을 제거하고 에틸 아세테이트/물 혼합물에 의해 추가로 정제될 수 있다.
[0034] 112에서, 캡시컴 아늄 추출물이 부형제(들)와 블렌딩된다. 다양한 구현예에서, 부형제는 해바라기유, 홍화유, 대두 레시틴, 해바라기 레시틴, 해바라기 또는 대두로부터의 포스파티딜콜린, 전분, 덱스트린, 락토스, 디칼슘 포스페이트, 콜로이드성 이산화규소, 및/또는 이들의 조합이다. 다른 구현예에서, 부형제는 과립화제, 결합제, 윤활제, 붕해제, 감미제, 활택제, 부착방지제, 대전방지제, 계면활성제, 산화방지제, 검, 코팅제, 착색제, 향미제, 코팅제, 가소제, 보존제, 현탁제, 유화제, 식물 셀룰로스 물질, 구상화제, 및/또는 이들의 조합이다. 일 구현예에서, 카로티노이드는 하나 이상의 용매의 첨가, 이온성 수지의 첨가, 켄칭, 여과, 추출, 및/또는 이온 교환 수지에 의해 추가로 단리 및/또는 정제된다.
[0035] 상기 예에 계속하여, 에틸 아세테이트 층이 제거되고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조되고, 농축될 수 있다. 조성물의 수율은 약 1.1 kg일 수 있다. 분광광도계에 의해 측정된 카로티노이드 함량은 약 95.34%일 수 있고, HPLC에 의한 모든 트랜스-캡산틴, 모든 트랜스-제아잔틴, 및 모든 베타-크립토잔틴은 각각 98.71%, 8.31% 및 2.63%이다. 최종 생성물은 가스 크로마토그래피 분석에 의해 검출된 미량의 잔류 메탄올 및 에틸 아세테이트 없이 약 0.2%의 수분 함량을 함유할 수 있다.
[0036] 또 다른 예로서, 에틸 아세테이트 층이 분리되고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조되고, 진공 하에 농축되어 캡산틴 50% 결정("CAP-50CR")을 수득할 수 있다. 일반적으로 산업 폐기물인 수성 층은 소량의 캡산틴을 함유할 수 있다. 수성 층의 pH는 묽은 염산을 사용하여 5.5 내지 7.0으로 조정될 수 있고, 에틸 아세테이트가 첨가되고 55 내지 60℃로 가열될 수 있다. 분리된 에틸 아세테이트 층이 제거되고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조되고, 농축되어 캡산틴 1.5% 연 추출물("CAP-1.5SE")을 수득할 수 있다.
[0037] 도 2는 동물에서 안내압("IOP")을 낮추기 위해 개시된 조성물을 사용한 연구의 결과를 도시하고, 하기 단계 중 임의의 것은 다양한 구현예에서 방법(100)의 일부일 수 있다. 높은 안내압은 섬유주대를 통한 수양액의 배수에 대한 증가된 저항으로부터 유래하였다. 수양액의 지속적인 증가는 수양액 형성의 증가, 이의 출구의 어려움, 또는 공막외 정맥의 상승된 압력으로 인한 것일 수 있다. 이러한 연구에서, IOP는 유리체내 주사에 의해 유도되었다. 도 2는 6개의 그룹(G1 내지 G6), 및 각 그룹에 대한 좌안 및 우안 IOP를 나타내는 막대 차트를 보여준다. 처음 두 그룹(G1 및 G2)은 IOP 저하 조성물이 도입되지 않은 대조군이다. G1에서는 IOP가 유도되지 않았고, G2에서는 IOP가 유도되었다. 다음으로 그룹(G3 내지 G6)에 대한 경우, 각 눈에 대한 왼쪽 막대는 일 구현예에서 본원에 개시된 조성물의 도입 전 IOP를 나타낸다. 각 눈의 우측 막대는 조성물 도입 후 IOP를 나타낸다. 결과는 조성물의 도입이 IOP를 IOP가 유도되지 않은 그룹(G1)과 거의 동일한 수준으로 감소시키고, 조성물이 도입되지 않은 그룹(G2)보다 유의하게 더 낮음을 보여준다.
[0038] 도 3 내지 도 5는 도면에서 CapsiClear로 지칭되는 본원에 개시된 조성물의 항-비만 효과를 평가하기 위한 연구의 결과를 도시하고, 하기 단계 중 임의의 것은 다양한 구현예에서 방법(100)의 일부일 수 있다. "HFD"는 비만을 유도하는 데 사용되는 고지방 식이를 지칭한다. 6개의 그룹이 이러한 연구에서 사용되었다: G1 내지 G6. G1은 정상 식이가 제공된 그룹을 지칭하고, G2는 고지방 식이가 제공된 그룹을 지칭하고, G3은 저용량의 조성물과 함께 고지방 식이가 제공된 그룹을 지칭하고, G4는 중간 용량의 조성물과 함께 고-지방 식이가 제공된 그룹을 지칭하고, G5는 고용량의 조성물과 함께 고지방 식이가 제공된 그룹을 지칭하고, G6은 참조 약물 Orlistat와 함께 고지방 식이가 제공된 그룹을 지칭한다.
[0039] 도 3에서, y-축은 체중을 나타내는 반면, x-축은 시간(일)을 나타낸다. 알 수 있는 바와 같이, 80 mg/kg의 고용량에서 31%의 상당한 체중 감소가 관찰되었다.
[0040] 도 4는 본 연구에서 상이한 측정의 결과를 보여주는 3개의 차트(402, 404, 406)를 포함하고, 하기 단계들 중 임의의 것은 다양한 구현예에서 방법(100)의 일부일 수 있다. 402에서, 조성물이 제공된 그룹에서 간 질량이 감소되었다. 404에서, 지방 조직 중량은 고용량의 조성물이 제공된 그룹에서 유의하게 감소되었다. 406에서, 부고환 지방체 중량은 저용량 및 고용량의 조성물이 제공된 그룹에서 유의하게 감소되었다.
[0041] 도 5는 본 연구에서 상이한 측정의 결과를 보여주는 4개의 차트(502, 504, 506, 508)를 포함하고, 하기 단계들 중 임의의 것은 다양한 구현예에서 방법(100)의 일부일 수 있다. 502에서, 아디포넥틴은 중간 및 고용량의 조성물이 제공된 그룹에서 유의하게 증가하였다. 아디포넥틴의 증가는 인슐린-저항성 및 체중을 감소시킨다. 504, 506, 및 508에서, 혈장 렙틴, 혈장 유리 지방산, 및 인슐린은 각각 조성물이 제공된 모든 그룹에서 유의하게 감소하였다. 인슐린의 저하는 체중 감소를 야기하고, 혈장 유리 지방산의 저하는 개선된 미토콘드리아 기능 및 전신 인슐린 감수성을 야기하고, 혈장 렙틴의 저하는 시상하부 렙틴 감수성의 회복, 체중 증가의 감소, 및 인슐린 감수성을 유발한다. 따라서, 상기 모든 것에 기초하여, 조성물은 체중 감소 목적으로 뿐만 아니라 다른 이점과 함께 또는 다른 이점과 함께 효과적으로 사용될 수 있다.
[0042] 도 6은 약학적, 기능식품, 및/또는 코스메슈티컬 목적을 위한 캡슐 구현예에서 상기 기재된 바와 같이 제조된 캡산틴, 제아잔틴, 및 크립토잔틴을 포함하는 캡시컴 아늄 추출물의 조성물(600)을 예시한다. 다른 구현예에서, 조성물은 정제, 주사제, 크림, 겔, 연고, 로션, 용액, 음료, 당과, 에멀젼, 포말, 트로키, 로젠지, 수성 현탁액, 유성 현탁액, 패치, 치약, 스프레이, 드롭, 분말, 과립, 시럽, 엘릭서, 식료품, 및/또는 이들의 조합으로서 구현된다. . 바람직한 구현예에서, 조성물은 정제, 연질 젤라틴 캡슐, 경질 젤라틴 캡슐, 크림, 겔, 로션, 및/또는 이들의 조합을 포함한다.
[0043] 일 구현예에서, 조성물은 다양한 구현예에서 국소 투여, 경구 투여, 정맥내 투여, 관절내 투여, 근육내 투여, 및/또는 이들의 조합에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 투여 방식은 경구, 국소, 정맥내, 근육내, 및/또는 이들의 조합이다. 또한, 아마씨, 아마씨 오일, 베지테리안(vegetarian) 또는 식물성 오일, 및 다른 오일과 같은 물질이 조성물과 조합되어 활성 성분을 안정화시킬 수 있다. 조성물과 조합된 물질의 양과 관계없이, 카로티노이드의 총량에 대한 카로티노이드의 백분율은 적어도 일부 구현예에서 동일하게 유지된다.
[0044] 12주, 무작위, 플라시보-대조, 파일럿 임상 연구는 조성물이 더 나은 시각 성능과 관련된 황반 색소 밀도("MPOD")를 증가시키고, 밝은 빛에 노출된 후 회복 시간을 감소시키고, 이미 기술된 이점에 추가하여 상이한 광 조건(백색 및 청색광 둘 모두) 하에서 판독을 개선시킬 수 있음을 나타낸다.
[0045] 조성물은 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 1% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함할 수 있다. 조성물은 적어도 부분적으로, 역류 추출을 사용하여 카로티노이드를 정제하는데 소비된 물질로부터 생성될 수 있고, 조성물은 피부, 눈, 또는 모발을 향상시킨다. 상기 프로세스의 결과로서, 일 구현예에서, 카로티노이드의 조성물은 캡산틴: 50% 내지 80%, 제아잔틴: 5% 내지 15%, 크립토잔틴: 1% 내지 5%, 및 미량의 다른 카로티노이드의 범위이다. 이러한 백분율, 및 본원의 모든 백분율은 실제 백분율 및 라벨링 규정에 의해 허용되는 백분율 둘 모두를 지칭한다. 구현예에서, 총 카로티노이드의 조성물은 90% 내지 99%의 범위이다. 또 다른 구현예에서, 조성물은 10% 내지 99% 범위의 총 카로티노이드를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 카로티노이드는 트랜스-캡산틴: (3R,3'S,5'R)-3,3'-디하이드록시-β,κ-카로텐-6'-온; 트랜스-제아잔틴: 3R,3'R-β,β-카로텐-3,3'-디올; 및 베타-크립토잔틴: (3R,6'R)-4',5'-디데하이드로-5',6'-디하이드로-β,β-카로텐-3-올이다. 캡산틴은 트랜스-캡산틴(3R,3'S,5'R)-3,3'-디하이드록시-β,κ-카로텐-6'-온)을 포함할 수 있고, 제아잔틴은 트랜스-제아잔틴(3R,3'R-β,β-카로텐-3,3'-디올)을 포함할 수 있고, 크립토잔틴은 베타-크립토잔틴 (3R,6'R)-4',5'-디데하이드로-5',6'-디하이드로-β,β-카로텐-3-올을 포함할 수 있다.
[0046] 구현예에서, 카로티노이드의 칼라 값은 800,000 내지 1,250,000의 범위이다. 따라서, 조성물은 립스틱, 챕스틱, 리퀴드 글로스, 립스틱 페이스트, 블러쉬, 립 라이너, 파운데이션, 컨실러, 아이 컨투어러, 아이라이너, 마스카라, 매니큐어, 아이섀도우, 바디 메이크업 등과 같은 화장품에 칼라 및 피부 향상 특징을 제공하는데 이상적이다. WHO FAO, JECFA, 및 HPLC 분석은 참조 표준을 사용하여 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE에서 캡산틴을 확인하고 정량화하기 위해 수행될 수 있다. 참조 표준에서 캡산틴의 체류 시간의 HPLC 크로마토그램에서, CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 동일하였고, 이는 캡산틴의 존재를 확인시켜준다. 다양한 구현예에서, 방법(100)은 하기 단계들 중 임의의 것을 포함한다.
[0047] 현재, 태양 자외선 방사선의 꾸준한 증가는 전 세계적으로 보고된 비-흑색종 피부암과 관련이 있다. 태양광에 존재하는 UV 방사선이 이의 주요 원인으로 연루되어 있다. UV 방사선은 과잉 반응성 산소 종("ROS")을 유발하여, 피부 손상 및 비흑색종 피부암을 유발하는 산화 스트레스를 증가시키는 것으로 알려져 있다. 따라서, ROS 및 산화 스트레스를 감소시키는 것은 피부 손상 및 암으로부터 피부를 예방하는 데 중요하다.
[0048] 생물학에서 폴리엔 화합물의 주요 부류인 카로티노이드, 및 분자에 존재하는 긴 폴리엔 결합은 여기된 분자를 켄칭함으로써 자유 라디칼을 스캐빈징한다. 캡산틴은 이의 구조에서 11개의 컨쥬게이션된 디엔과 함께 케토 그룹의 존재로 인해 매우 강력한 카로티노이드이다. 컨쥬게이션된 디엔은 이들의 라디칼 스캐빈징 능력 및 일중항 산소 켄칭 능력을 담당한다. 캡산틴에 의해 나타나는 피부 보호, 항암, 항염증, 항비만, 항-콜레스테롤, 및 항-지방형성 활성은 이의 강력한 라디칼 켄칭 능력의 결과이다.
[0049] 자외선 차단제의 효과는 광도계 태양 보호 인자("SPF")에 의해 결정된다. 효과적인 선스크린제는 광범위한 흡광도(UV 방사선 및 피부 손상으로부터 피부를 보호하기 위해 290 및 400 nm)를 가져야 한다. 미국 FDA에 따르면, 자외선 차단제는 최소 15 SPF를 가져야 한다. 본원에 개시된 조성물인 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE에 대한 SPF 값은 각각 34.44 및 20.63이다. 이러한 값은 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE를 각각 고 및 중간 자외선 차단제로서 자격을 부여한다. 하기 표는 SPF 시도 및 평균을 보여준다. CAP-50CR의 경우, 광도 SPF 값은 3회의 시도에서 34.58, 33.62, 및 35.13으로 측정되었고, 평균은 34.44이다. CAP-1.5SE의 경우, 광도 SPF 값은 3회 시도에 걸쳐 21.96, 19.96, 및 19.97로 측정되었고, 평균은 20.63이다.
[0050] SPF 이외에, 조성물은 또한 하기 표에 제시된 바와 같이 항진균 특성을 나타낸다. 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스에 대한 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 항진균 활성은 최소 억제 농도("MIC") 방법에 의해 항진균 약물 케토코나졸과 비교된다.
[0051] 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스에 대한 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 억제 효과 검정은 배양 미세희석 기준 방법에 따라 수행될 수 있다. 항진균 약물인 케토코나졸이 표준물로 사용될 수 있다. 동결-건조된 칸디다 알비칸스(ATCC-10231) 및 말라세지아 푸르푸르(ATCC-14521) 균주가 또한 사용될 수 있다. 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스의 루프풀(loopful) 배양물은 SDA(Sabouraud Dextrose Agar)에 스트리킹될 수 있고, 각각 35±2℃ 및 25±2℃에서 48 내지 72 시간 동안 인큐베이션될 수 있다. 마지막으로, 세포는 RPMI 1640 배지에 현탁되어 1 × 106 CFU/mL의 최종 농도를 수득할 수 있다. 억제 활성의 평가를 위해, CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 효과는 각각 35±2℃ 및 25±2℃의 상이한 농도에서 48 내지 72시간 동안 96-웰 마이크로플레이트에서 배양된 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스의 균주에 대해 조사될 수 있다.
[0052] 항진균성 표준물 케토코나졸은 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스 둘 모두에 대해 0.00048 mg/mL의 MIC 값을 나타내었다. 말라세지아 푸르푸르에 대한 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE에 대한 MIC는 각각 0.625 mg/mL 및 5 mg/mL인 것으로 밝혀졌다. CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 칸디다 알비칸스에 대해 2.5 mg/mL인 동일한 MIC 값을 나타내었다. 특히, CAP-50CR 추출물은 중간 정도의 항진균 활성을 나타내었고, CAP-1.5SE는 항진균 약물 케토코나졸과 비교하여 약한 항진균 활성을 나타내었다. 따라서, 조성물은 모발 성장을 도울 수 있고, 조성물은 비듬 제거 및 예방을 도울 수 있다.
[0053] 멸균 및 성장 조절이 또한 사용될 수 있다. 효모 성장은 530 nm에서 효소-연결된 면역흡착 검정 마이크로플레이트 판독기에서 결정될 수 있다. 최소 억제 농도(MIC50)는 대조군과 비교하여 진균 성장의 50%를 감소시키는 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 최저 농도로 정의될 수 있다. 따라서, 조성물은 추가로 말라세지아 효모에 대한 항-효모제일 수 있다.
[0054] 조성물은 도 7에 도시된 바와 같이 멜라닌 억제를 도울 수 있다. 마우스 피부 흑색종 세포주 B16F10은 컨플루언트까지 37℃에서 5% CO2의 가습 대기에서 10% 불활성화된 우태아 혈청("FBS"), 페니실린(100 IU/mL), 스트렙토마이신(100 ㎍/mL), 및 암포테리신 B(5 ㎍/mL)가 보충된 DMEM-HG 배지에서 배양될 수 있다. 세포는 TPVG 용액(PBS 중 0.2% 트립신, 0.02% EDTA, 0.05% 글루코스)으로 해리될 수 있다. 스톡 배양물은 25 ㎠ 배양 플라스크에서 성장할 수 있고, 96-웰 미세역가 플레이트가 사용될 수 있다.
[0055] 단층 세포 배양물은 트립신화될 수 있고, 세포 수는 10% FBS를 함유하는 DMEM-HG 배지를 사용하여 1.0 × 105개 세포/mL로 조정될 수 있다. 0.1 mL의 희석된 세포 현탁액은 각 웰에 첨가되고 24시간 동안 유지되었다. 단층이 형성된 후, 상청액이 제거되고, 배지로 세척하고, 상이한 농도의 시험 물질 100 ㎕가 첨가되고 5% CO2 대기에서 37℃에서 48 시간 동안 인큐베이션시킬 수 있다. 현미경 검사가 수행될 수 있고, 관찰은 매 24시간 간격으로 기록될 수 있다.
[0056] 세포 생존력은 MTT 감소 검정에 의해 평가될 수 있다. 72시간의 인큐베이션 후, 약물 용액이 폐기될 수 있고, PBS 중 50 ㎕의 MTT가 각 웰에 첨가될 수 있다. 플레이트는 부드럽게 진탕되고 5% CO2 대기 중에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션될 수 있다. 상청액이 제거될 수 있고, 100 ㎕의 DMSO를 첨가될 수 있다. 플레이트는 형성된 포르마잔을 가용화시키기 위해 부드럽게 진탕될 수 있다. 흡광도는 540 nm의 파장에서 마이크로플레이트 리더를 사용하여 측정될 수 있다. 세포의 성장을 50% 억제하는데 필요한 시험 물질의 농도(CTC50)가 계산될 수 있다.
[0057] B16F10 세포주에서 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 세포독성은 CTC50 값을 결정하기 위해 평가될 수 있다. 70 내지 80% 컨플루언트일 수 있는 24시간 세포 배양은 멜라닌 억제를 결정하는 데 사용될 수 있다. 세포는 무독성 농도의 시험 물질 및 포스콜린(200 μM)으로 48시간 동안 처리될 수 있다.
[0058] 인큐베이션 기간의 말미에, 상청액은 웰로부터 흡인할 수 있고, 배양물은 따뜻한 PBS로 2회 세척될 수 있다. 세포는 트립신화에 의해 수확될 수 있고, 세포 현탁액은 2500 rpm에서 15분 동안 원심분리될 수 있다. 세포 펠렛은 PBS로 세척되고, 원심분리되고, 10% DMSO를 함유하는 400 ㎕의 1 N NaOH로 처리될 수 있다. 샘플은 60℃에서 1시간 동안 가열되고, 냉각될 수 있고, 세포 용해물의 흡광도는 450 nm에서 분광광도계로 추정될 수 있다.
[0059] CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 시험관내 세포독성은 MTT 검정에 의해 피부 흑색종 세포(B16F10)에 대해 평가될 수 있다. 1000 ㎍/mL 내지 7.8 ㎍/mL 범위의 상이한 농도가 사용되어 B16F10 세포에 대한 성장 억제 백분율을 결정할 수 있다. CAP-50CR은 B16F10 세포주에서 98.44±2.55 ㎍/mL의 CTC50 값을 나타내는 반면, CAP-1.5SE는 1000 ㎍/mL 초과의 CTC50 값을 나타낸다. 또한, 항목의 비독성 농도는 포스콜린-유도된 멜라닌 억제 활성에 대해 평가될 수 있다. 물질의 세포독성 특성은 표 3에 제공되고, 멜라닌 억제의 백분율은 도 7에 제공된다. CAP-50CR의 경우, 7 및 3 ㎍/mL의 비독성 농도는 각각 48.73±0.75% 및 42.29±5.2%의 멜라닌 억제를 나타낸다. CAP-1.5SE에 대한 멜라닌 억제는 50 및 25 ㎍/mL의 비독성 농도에 대해 각각 55.84%±1.47 및 46.44%±1.05이다.
[0060] 조성물은 도 8에 도시된 바와 같이 티로시나제를 억제할 수 있다. CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 비독성 농도에서 높은 티로시나제 억제 활성을 나타내었다. 이와 같이, 이들은 화장품 및 약물 적용을 위한 탈색소제이다. 구체적으로, 멜라닌의 과도한 생산은 비정상적인 멜라닌 생성으로 인한 색소침착 장애를 초래하고, 티로시나제는 색소 장애 및 피부 미백의 치료제를 발달시키기 위한 중요한 마커이다.
[0061] 티로시나제 억제 활성은 분광광도법으로 결정된 버섯 티로시나제의 DOPA 옥시다제 활성을 사용하여 측정될 수 있다. 10 ㎕의 DMSO이 96-웰 마이크로플레이트에 제공되고, 얼음 상에서 60 ㎕의 50 mmol/L 포스페이트 완충제(pH 6.8)와 혼합될 수 있다. 다음으로, 포스페이트 완충제 중 20 ㎕의 0.9 mg/mL L-DOPA가 첨가될 수 있다. 마지막으로, 10 ㎕의 티로시나제(포스페이트 완충제 중 500 U/mL)가 혼합물에 첨가되고, 27℃에서 10분 동안 인큐베이션될 수 있다. 인큐베이션 후, 반응 혼합물에서 도파크롬 생산의 양은 마이크로플레이트 리더에서 450 nm(OD450)에서 분광광도계로 결정될 수 있다. 50 mmol/L 포스페이트 완충제에 용해된 코직산(5 내지 100 μmol/L)이 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 50% 억제에 대한 농도(IC50)가 결정될 수 있다.
[0062] CAP-50CR 추출물은 CAP-1.5SE보다 더 큰 티로시나제 억제 활성을 나타낸다. CAP-50CR 추출물은 7 및 3 ㎍/mL의 농도에서 각각 43.78% 및 39.37%의 억제를 나타낸다. CAP-1.5SE는 50 및 25 ㎍/mL의 농도에 대해 각각 34.6% 및 22.9%를 나타낸다. 따라서, CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 티로시나제를 억제함으로써 피부 브라이트닝 효과를 나타낸다.
[0063] 조성물은 도 9에 도시된 바와 같이 인간 케라티노사이트(HaCaT)에서 유전자 발현을 유도할 수 있다. 표피를 포함하는 케라티노사이트는 로리크린, 인볼루크린, 및 필라그린을 생산하여 케라틴 필라멘트를 조합하고 각질화된 세포 외피를 형성한다. 또한, 케라티노사이트에 존재하는 히알루론산은 피부에서 보습 장벽으로 작용한다. 피부 및 다른 기관의 수분 보유율은 작은 소수성 단백질 분자인 아쿠아포린(AQP)에 의해 조절된다. 현재까지, 포유동물에서 거의 13개 유형의 AQP가 확인되었다. AQP3의 기능은 글리세롤 및 물의 수송을 포함하기 때문에 피부에 중요한 것으로 간주된다. 피부 손상에 반응하여, AQP는 하향조절된다. 이와 같이, AQP는 피부 기능을 회복시키는데 중요한 역할을 하고, 히알루론산(HA)의 생합성에 관여한다. 피부에서 HA의 감소는 주름, 탄력 상실, 및 조기 노화를 초래한다. HaCaT 세포에서 AQP3을 인코딩하는 유전자의 발현에 대한 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE의 효과는 RT-PCR을 사용하여 조사될 수 있다.
[0064] 스톡 세포는 컨플루언트까지 5% CO2의 가습 대기 중 37℃에서 10% 불활성화된 우태아 혈청(FBS), 페니실린(100 IU/mL), 스트렙토마이신(100 ㎍/mL), 및 암포테리신 B(5 ㎍/mL)가 보충된 DMEM에서 배양될 수 있다. 세포는 TPVG 용액(PBS 중 0.2% 트립신, 0.02% EDTA, 0.05% 글루코스)으로 해리될 수 있다.
[0065] 단층 세포 배양물은 트립신화될 수 있고, 세포 수는 10% FBS를 사용하여 100,000개 세포/mL로 조정될 수 있고, 0.1 mL의 희석된 세포 현탁액이 96-웰 미세역가 플레이트에 제공될 수 있다. 단층의 형성 후, 상청액이 제거되고, 배지로 세척되고, 상이한 농도를 갖는 100 ㎕의 시험 물질이 첨가되고, 5% CO2 분위기에서 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션될 수 있다. 72시간 후, 시험 용액이 폐기되고, PBS 중 50 ㎕의 MTT가 각 웰에 첨가될 수 있다. 플레이트가 부드럽게 진탕되고 5% CO2 대기에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션될 수 있다. 상청액이 폐기되고, 100 ㎕의 DMSO가 첨가되어 포르마잔을 용해시킬 수 있다. 흡광도는 540 nm의 파장에서 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정될 수 있다. 세포 성장을 50% 억제하는데 필요한 시험 물질의 농도 및 성장 억제 백분율(CTC50)이 계산될 수 있다.
[0066] HaCaT 세포는 TriExtract 시약으로 처리함으로써 세포 용해를 거칠 수 있다. 클로로포름이 첨가되고 원심분리되어 샘플로부터 총 RNA를 분리할 수 있다. 상부 층이 수집되고, 동량의 이소프로판올로 희석되고, -20℃에서 10분 동안 인큐베이션될 수 있다. 인큐베이션 후, 원심분리된 적절한 부피의 에탄올이 첨가되어 재현탁시킬 수 있다. 분리된 RNA 펠렛은 공기-건조될 수 있고, TAE 완충제가 첨가될 수 있다. 제1-가닥 cDNA는 올리고 dT 프라이머를 사용한 후 역전사효소 효소 처리를 사용하여 RNA로부터 합성될 수 있다. cDNA는 AQP-3 및 GAPDH의 증폭을 위한 PCR에 사용될 수 있다.
[0067] AQP-3의 mRNA 발현 수준은 반-정량적 역전사효소 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR) 절차를 사용하여 결정될 수 있다. AQP-3은 하기 프라이머로 증폭될 수 있다. I 가닥 합성의 경우: 올리고 dT 프라이머. II 가닥 합성의 경우: 정방향 5'-GCTGTCACTCTGGCATCCTG-3' 및 역방향: 5'-GCGTCTGTGCCAGGGTGTAG-3'. 증폭 반응은 하기 반응식으로 수행될 수 있다: 95℃에서 5분, 이어서 95℃에서 30초, 어닐링 온도, 및 72℃에서 10분 동안 10분 최종 연장과 함께 45초 동안 72℃의 35 사이클.
[0068] CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 HaCaT 세포에서 각각 76.59±3.25 ㎍/mL 및 664.95±2.88 ㎍/mL의 CTC50 값을 나타낸다. 또한, 무독성 농도에서 CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 반-정량적 RT-PCR 절차에서 대조군과 비교하여 더 낮은 및 더 높은 농도에서 AQP-3 mRNA의 수준의 증가를 나타낸다. 도 9는 AQP-3 유전자 발현의 상대적 수준이 GAPDH로 표준화된 배수 증가에 대한 유전자 전사체의 반정량적 유전자 발현 분석의 그래프이다. 값은 평균 ± SEM(n = 2)으로 표현되고, 통계적 유의성은 대조군 대 다른 치료 그룹(CAP-50CR 7.5 ㎍/mL CAP-50CR 15 ㎍/mL, CAP-1.5SE 125 ㎍/mL 및 CAP-1.5SE 250㎍/mL) 사이에서 비교된다(*** p < 0.0001, 통계적으로 유의함). 둘 모두의 물질은 반-정량적 RT-PCR 절차에서 대조군과 비교하여 더 낮은 및 더 높은 농도에서 AQP-3 mRNA의 수준의 증가를 나타내었다.
[0069] 상기에 기초하여, 조성물은 피부 보습을 돕고, 히알루론산의 생합성을 증가시킴으로써 피부 기능을 회복시킬 수 있다. 조성물은 AQP-3 mRNA의 수준을 증가시킬 수 있다. 조성물은 자외선, UVA 방사선, 및 UVB 방사선으로부터 피부를 보호하는데 도움이 될 수 있다. 조성물은 적어도 20의 자외선 차단 지수(SPF)를 제공할 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 안구 건조 증후군을 예방 및 치료할 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 분해 시간을 증가시키고 눈물 삼투압을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 생산 부피를 증가시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 각막 상피의 결함 및 찰과상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 산화 스트레스를 감소시킴으로써 안구 표면에 대한 손상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 혈청 MMP-2& MMP-9 수준을 감소시킴으로써 각막에서 분해 및 아폽토시스 세포 사멸을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈의 뮤신 층을 회복시킬 수 있다. 조성물은 IL-2, IL-6, 및 MMP-9 유전자의 발현을 감소시킬 수 있다. 조성물은 TNF-α 및 IL-4 유전자의 발현을 하향 조절할 수 있다.
[0070] CAP-50CR 및 CAP-1.5SE는 UV 방사선으로부터 피부 보호 및 과색소침착 특성을 나타낸다. 이들은 또한 항진균성, 피부 브라이트닝, 주름방지 및 보습 특성을 나타낸다. 이러한 결과는 적색 피망 열매로부터의 캡산틴이 스킨 가드 제형에서 미용적 활성 성분으로서 및 다양한 피부 질환에 대한 잠재적인 치료제로서 사용될 수 있음을 보여준다.
[0071] 본 개시의 추가적인 구현예 및 특징은 본원에 제공된 설명에 기초하여 당업자에게 명백할 것이다. 본원의 구현예 및 이의 다양한 특징 및 유리한 세부사항은 설명에서 비제한적인 구현예를 참조하여 설명된다. 본원에서 사용되는 예는 단지 본원의 구현예가 실시될 수 있는 방식의 이해를 용이하게 하고 당업자가 본원의 구현예를 실시할 수 있게 하기 위한 것이다. 따라서, 하기 실시예는 본원의 구현예의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
[0072] 일부 양태에서, 하기 실시예 중 하나 이상에 따라 조성물 및 방법이 제공된다:
[0073] 실시예 1: 캡시컴 아늄 추출물 조성물은 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 1% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함한다. 조성물은 적어도 부분적으로, 역류 추출을 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 소비된 물질로부터 생성되고, 조성물은 피부, 눈, 또는 모발을 향상시킨다.
[0074] 실시예 2: 조성물을 제조하기 위한 방법은 소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계를 포함하고, 상기 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용하는 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄나무 열매로부터 카로티노이드를 정제함으로써 생성된다. 상기 방법은 초임계 유체 추출을 사용하여 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법은 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키도록 역류 추출을 사용하여 농축된 카로티노이드를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
[0075] 실시예 3: 조성물을 제조하기 위한 방법은 소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계를 포함하고, 상기 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용하여 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드를 정제함으로써 생성된다. 상기 방법은 초임계 유체 추출을 사용하여 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법은 조성물이 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 15% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하도록 역류 추출을 사용하여 가수분해된 카로티노이드를 정제하는 단계를 추가로 포함하여, 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키도록 한다.
[0076] 하기 특징은 상기 기재된 다양한 구현예에 포함될 수 있으며, 이러한 특징은 다른 특징들 중 하나 이상과 함께 또는 개별적으로 포함된다:
[0077] 캡산틴은 트랜스-캡산틴(3R,3'S,5'R)-3,3'-디하이드록시-β,κ-카로텐-6'-온)을 포함할 수 있고, 제아잔틴은 트랜스-제아잔틴(3R, 3'R-β,β-카로텐-3,3'-디올)을 포함할 수 있고, 크립토잔틴은 베타-크립토잔틴 (3R,6'R)-4',5'-디데하이드로-5',6'-디하이드로-β,β-카로텐-3-올을 포함할 수 있다. 카로티노이드의 칼라 값은 800,000 내지 1,250,000의 범위일 수 있다. 조성물은 흐린 시력, 왜곡된 시력, 감소된 중심 시력, 및 저조도 수준을 채택하기의 어려움과 같은 연령 관련 황반 변성 병태의 관리를 도울 수 있다. 조성물은 산화성 및 소포체 스트레스의 감소를 통해 청색광 유도된 망막병증에 대해 보호할 수 있다. 조성물은 립스틱, 챕스틱, 리퀴드 글로스, 립스틱 페이스트, 블러쉬, 립 라이너, 파운데이션, 컨실러, 아이 컨투어러, 아이라이너, 마스카라, 매니큐어, 아이 섀도우, 또는 바디 메이크업과 같은 화장품을 위한 칼라를 제공할 수 있다. 조성물은 청색광 손상에 대한 광수용기의 기능적 및 형태학적 보존을 제공할 수 있다. 조성물은 긴장성 녹내장, 원발성 개방각 녹내장, 및 폐쇄각 녹내장과 관련된 안내압을 낮출 수 있다. 조성물은 체중을 낮출 수 있다. 조성물은 인슐린을 낮추어 체중을 낮출 수 있다. 조성물은 혈장 유리 지방산을 낮추어 미토콘드리아 기능 및 전신 인슐린 감수성을 개선할 수 있다. 조성물은 혈장 렙틴을 낮추어 시상하부 렙틴 감수성을 회복시키고, 체중 증가를 감소시키고, 인슐린 감수성을 향상시킬 수 있다. 조성물은 아디포넥틴을 증가시켜 인슐린-저항성 및 체중을 감소시킬 수 있다. 조성물은 지방 조직 중량 및 부고환 지방체를 감소시킬 수 있다. 조성물은 캡슐, 정제, 주사제, 크림, 겔, 연고, 로션, 용액, 음료, 과자류, 에멀젼, 포말, 트로키, 로젠지, 수성 현탁액, 유성 현탁액, 패치, 치약, 스프레이, 드롭, 분말, 과립, 시럽, 엘릭서, 또는 식품의 형태일 수 있다. 조성물은 10% 내지 99% 범위의 총 카로티노이드를 포함할 수 있다. 캡시컴 아늄 열매는 각각 1:1:2 비율의 KDL 하이 컬러, 5531 하이 컬러, 및 4431 하이 컬러일 수 있다. 피망 열매의 ASTA 컬러 값은 2000 내지 2600 단위의 범위일 수 있다. 용매는 에탄올, 메탄올, 및 이소프로필 알코올을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 추출하는 것은 40℃ 내지 90℃ 범위의 온도에서 4시간 내지 8시간 범위의 기간 동안 카로티노이드를 추출하는 것을 포함할 수 있다. 초임계 유체 추출을 위한 용매 매질은 이산화탄소일 수 있다. 카로티노이드를 농축시키는 것은 40℃ 내지 60℃ 범위의 온도에서 초임계 유체 추출을 사용하여 카로티노이드를 농축시키는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 농축시키는 것은 25 mPa 내지 50 mPa 범위의 압력에서 초임계 유체 추출을 사용하여 카로티노이드를 농축시키는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 가수분해하는 것은 KOH 및 NaOH를 사용하여 카로티노이드를 가수분해하는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 가수분해하는 것은 메탄올, 에탄올, 및 이소프로필 알코올을 사용하여 카로티노이드를 가수분해하는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 가수분해하는 것은 10% 내지 30% 범위 내의 가수분해제를 사용하여 카로티노이드를 가수분해하는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 가수분해하는 것은 70℃ 내지 85℃ 범위 내의 온도에서 카로티노이드를 가수분해하는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 가수분해하는 것은 1시간 내지 3시간의 범위 내에서 카로티노이드를 가수분해하는 것을 포함할 수 있다. 카로티노이드를 정제하는 것은 에틸 아세테이트 및 이소프로필 아세테이트를 포함하는 역류 추출용 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것을 포함할 수 있다. 비혼화성 수성 상은 역류 추출수 및 염산으로 산성화된 물(pH 3 내지 4)에 사용될 수 있다. 상기 방법은 카로티노이드를 부형제, 예컨대, 해바라기유, 잇꽃유, 대두 레시틴, 해바라기 레시틴, 해바라기 또는 대두로부터의 포스파티딜콜린, 전분, 덱스트린, 락토스, 디칼슘 포스페이트, 또는 콜로이드성 이산화규소와 블렌딩하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 캡산틴은 트랜스-캡산틴(3R,3'S,5'R)-3,3'-디하이드록시-β,κ-카로텐-6'-온)을 포함할 수 있고, 제아잔틴은 트랜스-제아잔틴(3R,3'R-β,β-카로텐-3,3'-디올)을 포함할 수 있고, 크립토잔틴은 베타-크립토잔틴 (3R,6'R)-4',5'-디데하이드로-5',6'-디하이드로-β,β-카로텐-3-올을 포함할 수 있다. 조성물은 멜라닌 억제를 도울 수 있다. 조성물은 티로시나제를 억제할 수 있다. 조성물은 비듬을 제거하고 예방하는데 도움이 될 수 있다. 조성물은 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스에 대한 항진균제일 수 있다. 조성물은 말라세지아 효모에 대한 항-효모제일 수 있다. 조성물은 모발 성장을 도울 수 있다. 조성물은 인간 케라티노사이트(HaCaT)에서 유전자 발현을 유도할 수 있다. 조성물은 피부 보습을 돕고, 히알루론산의 생합성을 증가시킴으로써 피부 기능을 회복시킬 수 있다. 조성물은 AQP-3 mRNA의 수준을 증가시킬 수 있다. 조성물은 자외선, UVA, 및 UVB 방사선으로부터 피부를 보호하는데 도움이 될 수 있다. 조성물은 적어도 20의 자외선 차단 지수(SPF)를 제공할 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 안구 건조 증후군을 예방 및 치료할 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 분해 시간을 증가시키고 눈물 삼투압을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 생산 부피를 증가시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 각막 상피의 결함 및 찰과상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 산화 스트레스를 감소시킴으로써 안구 표면에 대한 손상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 혈청 MMP-2& MMP-9 수준을 감소시킴으로써 각막에서 분해 및 아폽토시스 세포 사멸을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈의 뮤신 층을 회복시킬 수 있다. 조성물은 IL-2, IL-6, 및 MMP-9 유전자의 발현을 감소시킬 수 있다. 조성물은 TNF-α 및 IL-4 유전자의 발현을 하향 조절할 수 있다. 카로티노이드를 추출하는 것은 40℃ 내지 90℃ 범위의 온도에서 4시간 내지 8시간 범위의 기간 동안 카로티노이드를 추출하는 것을 포함할 수 있고, 카로티노이드를 농축시키는 것은 40℃ 내지 60℃에서, 카로티노이드를 농축시키는 것은 25 mPa 내지 50 mPa 범위의 압력에서 초임계 유체 추출을 사용하여 카로티노이드를 농축시키는 것을 포함할 수 있고, 카로티노이드를 정제하는 것은 에틸 아세테이트 또는 이소프로필 아세테이트를 포함하는 역류 추출을 위한 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것을 포함할 수 있다. 풍부한 카로티노이드를 정제하는 것은 적어도 50%의 캡산틴을 포함하는 유기 층을 제거하고, 산을 통해 잔류하는 수성 층의 pH를 조정하고, 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것은 에틸 아세테이트 또는 이소프로필 아세테이트를 포함하는 역류 추출을 위한 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하여, 추출이 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 15% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하는 것을 포함할 수 있다. 조성물은 비듬 제거 및 예방에 도움이 될 수 있고, 말라세지아 푸르푸르 및 칸디다 알비칸스에 대한 항진균제일 수 있다. 조성물은 모발 성장을 도울 수 있고 인간 케라티노사이트(HaCaT)에서 유전자 발현을 유도할 수 있다. 조성물은 피부 보습을 돕고 AQP-3 mRNA의 수준을 증가시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 안구 건조 증후군을 예방 및 치료할 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 분해 시간을 증가시키고 눈물 삼투압을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈물 생산 부피를 증가시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 각막 상피의 결함 및 찰과상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 산화 스트레스를 감소시킴으로써 안구 표면에 대한 손상을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 혈청 MMP-2& MMP-9 수준을 감소시킴으로써 각막에서 분해 및 아폽토시스 세포 사멸을 감소시킬 수 있다. 조성물은 경구 투여될 때 눈의 뮤신 층을 회복시킬 수 있다. 조성물은 IL-2, IL-6, 및 MMP-9 유전자의 발현을 감소시킬 수 있다. 조성물은 TNF-α 및 IL-4 유전자의 발현을 하향 조절할 수 있다.
[0078] 특정 구현예의 전술한 설명은 본원의 구현예의 일반적인 특성을 충분히 드러낼 것이며, 따라서 다른 사람들은 현재의 지식을 적용함으로써 일반적인 개념을 벗어나지 않으면서 이러한 특정 구현예를 다양한 적용에 대해 용이하게 수정 및/또는 조정할 수 있고, 따라서, 이러한 적응 및 수정은 개시된 구현예의 등가물의 의미 및 범위 내에서 이해되어야 하고 의도되어야 한다. 본원에서 사용되는 어구 또는 용어는 설명의 목적을 위한 것이며 제한을 위한 것이 아님이 이해되어야 한다. 따라서, 본 개시의 구현예는 바람직한 구현예와 관련하여 설명되었지만, 당업자는 본원의 구현예가 본원에 기재된 구현예의 사상 및 범위 내에서 변형되어 실시될 수 있음을 인지할 것이다. 다수의 다른 변형, 등가물, 및 대안은 일단 상기 개시가 완전히 이해되면 당업자에게 명백해질 것이다. 하기 청구범위는 적용 가능한 경우 이러한 모든 변형, 등가물, 및 대안을 포함하는 것으로 해석되는 것으로 의도된다.
Claims (20)
- 캡시컴 아늄(capsicum annum) 추출물 조성물(600)로서,
1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴;
0.5% 내지 1% 범위의 제아잔틴; 및
0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하며,
상기 조성물은, 적어도 부분적으로, 역류 추출을 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 소비된 물질로부터 생성되고;
상기 조성물은 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키는, 조성물. - 제1항에 있어서, 캡산틴이 트랜스-캡산틴 (3R,3'S,5'R)-3,3'-디하이드록시-β,κ-카로텐-6'-온)을 포함하고, 제아잔틴이 트랜스-제아잔틴 (3R,3'R-β,β-카로텐-3,3'-디올)을 포함하고, 크립토잔틴이 베타-크립토잔틴 (3R,6'R)-4',5'-디데하이드로-5',6'-디하이드로-β,β-카로텐-3-올을 포함하는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 티로시나제를 억제함으로써 멜라닌 억제를 돕는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 말라세지아 푸르푸르(Malassezia furfur) 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항진균제 및 말라세지아 효모에 대한 항-효모제인 것에 의해 비듬의 제거 및 예방을 돕는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 인간 케라티노사이트(HaCaT)에서 유전자 발현을 유도함으로써 모발 성장을 돕는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 AQP-3 mRNA의 수준을 증가시키는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 눈물 분해 시간(tear break up time)을 증가시키고, 눈물 생산 부피를 증가시키고, 눈물 삼투압을 감소시키는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 산화 스트레스를 감소시킴으로써 각막 상피의 결함 및 찰과상을 감소시키고 안구 표면에 대한 손상을 감소시키는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 혈청 MMP-2& MMP-9 수준을 감소시킴으로써 각막에서 분해 및 아폽토시스 세포 사멸을 감소시키는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물이 IL-2, IL-6, 및 MMP-9 유전자의 발현을 감소시키고, TNF-α 및 IL-4 유전자의 발현을 하향 조절하는, 조성물.
- 조성물을 제조하기 위한 방법(100)으로서,
소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계(102)로서, 상기 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용한 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 생성되는, 단계;
초임계 유체 추출을 사용하여 상기 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계(106); 및
상기 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키도록 역류 추출을 사용하여 농축된 카로티노이드를 정제하는 단계(11)를 포함하는, 방법. - 제11항에 있어서, 카로티노이드를 추출하는 단계가 40℃ 내지 90℃ 범위의 온도에서 4시간 내지 8시간 범위의 기간 동안 카로티노이드를 추출하는 것을 포함하고, 카로티노이드를 농축시키는 단계가 40℃ 내지 60℃ 범위의 온도에서 초임계 유체를 사용하여 카로티노이드를 농축시키는 것을 포함하고, 카로티노이드를 농축시키는 단계가 25 mPa 내지 50 mPa 범위의 압력에서 초임계 유체 추출을 사용하여 카로티노이드를 농축시키는 것을 포함하고, 카로티노이드를 정제하는 단계가 에틸 아세테이트 또는 이소프로필 아세테이트를 포함하는 역류 추출을 위한 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하는 것을 포함하는, 방법.
- 제11항에 있어서, 농축된 카로티노이드를 정제하는 단계가 적어도 50%의 캡산틴을 포함하는 유기 층을 제거하고 산을 통해 잔류하는 수성 층의 pH를 조정하는 것을 포함하고, 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하는 단계가 에틸 아세테이트 및 이소프로필 아세테이트를 포함하는 역류 추출을 위한 용매를 사용하여 카로티노이드를 정제하여, 추출이 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 15% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하는 것을 포함하는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 눈물 분해 시간을 증가시키고 눈물 삼투압을 감소시키는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 눈물 생산 부피를 증가시키는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 각막 상피의 결함 및 찰과상을 감소시키는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 산화 스트레스를 감소시킴으로써 안구 표면에 대한 손상을 감소시키는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 경구 투여될 때 혈청 MMP-2& MMP-9 수준을 감소시킴으로써 각막에서 분해 및 아폽토시스 세포 사멸을 감소시키는, 방법.
- 제11항에 있어서, 조성물이 IL-2, IL-6, 및 MMP-9 유전자의 발현을 감소시키고 TNF-α 및 IL-4 유전자의 발현을 하향 조절하는, 방법.
- 조성물을 제조하기 위한 방법(100)으로서,
소비된 물질로부터 카로티노이드를 추출하는 단계(104)로서, 상기 소비된 물질은 용매 또는 용매들을 사용하는 역류 추출을 사용하여 캡시컴 아늄 열매로부터 카로티노이드를 정제하는 것으로부터 생성되는, 단계;
초임계 유체 추출을 사용하여 상기 추출된 카로티노이드를 농축시키는 단계(106); 및
역류 추출을 사용하여 상기 추출된 카로티노이드를 정제하여 상기 조성물이 1% 내지 1.5% 범위의 캡산틴, 0.5% 내지 15% 범위의 제아잔틴, 및 0.1% 내지 0.5% 범위의 크립토잔틴을 포함하고 상기 조성물이 피부, 눈, 또는 모발을 향상시키는는 단계(110)를 포함하는, 방법.
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