KR20240095404A - 국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법 - Google Patents

국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법 Download PDF

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니타 젤라틴 가부시키가이샤
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Abstract

누출 억제제는, 중량 평균 분자량 5000 이하의 젤라틴 가수분해물을 포함하고, 상기 젤라틴 가수분해물을 인산 완충 생리 식염수에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하이다.

Description

국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법
본 발명은, 국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법에 관한 것이다.
일본국 특허공개 2007-001989호 공보(특허문헌 1) 및 일본국 특허공개 2001-192336호 공보(특허문헌 2)는, 환부의 절제 방법 등에 이바지하기 위하여, 유효 성분의 국소에 있어서의 체류 시간을 연장하여 점막 융기를 일으키게 하는 주사제를 개시하고 있다. 유효 성분의 국소에 있어서의 체류 시간을 연장하기 위해서는, 적어도 환부로부터의 주사제의 액 누출을 저감하는 것, 즉 주사제의 누출 억제가 요청된다.
주사제의 누출 억제를 위해서는, 유효 성분을 용해 또는 분산시키기 위한 주사제용 용매에 점성을 부여하는 것이 유효하다는 것이 알려져 있다. 상기 특허문헌 1은, 주사제의 누출 억제를 위하여, 주사제 중의 유효 성분인 히알루론산을 포함하는 수용액의 점도를 40mPa·s 이상으로 하는 것이 유효하다고 하고 있다. 상기 특허문헌 2는, 중량 평균 분자량 60만~120만의 히알루론산을 0.2~1.0질량%로 사용하는 것을 교시하고 있다.
일본국 특허공개 2007-001989호 공보 일본국 특허공개 2001-192336호 공보
그러나 본 발명자들은, 중량 평균 분자량 90만의 히알루론산을 이용하여 0.2질량%의 히알루론산 수용액을 조제한 결과, 당해 수용액의 점도는 16.7mPa·s이고, 또한 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기를 이용하여 당해 수용액에 의해 주사를 행한 경우, 상술한 누출 억제 효과가 얻어지지 않는 것을 지견했다. 한편, 주사제가 높은 점성을 갖는 경우, 높은 배압이 필요하기 때문에 적절한 주사가 어려워지고, 따라서 주사제의 대부분을 환부(목적 부위)에 머물게 하는 것이 곤란해지는 것이 알려져 있다. 따라서, 주사에 높은 배압이 필요하지 않은 낮은 점성 또는 점도를 갖고 있어도 주사제의 누출을 억제할 수 있고, 또한 주사제를 목적 부위에 머물게 할 수 있는 주사제는 아직 실현되지 않았으며, 그 개발이 절망되고 있다.
상기 실정을 감안하여, 본 발명은, 주사제의 누출을 억제할 수 있고, 유효 성분 등을 목적 부위에 머물게 할 수 있는 국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은, 상기 목적을 달성하기 위하여 예의 검토하여, 본 발명에 도달했다. 우선 본 발명자들은, 소정의 중량 평균 분자량을 갖는 젤라틴 가수분해물이, 수계 용매에 고농도로 포함되어 있던 경우여도, 점도가 비교적 저위로 유지되는 것에 주목했다. 이어서 상기 젤라틴 가수분해물을 포함하는 누출 억제제를 이용하여 국소 주사제를 조제한 결과, 당해 국소 주사제는, 누출 억제 효과를 나타내고, 따라서 유효 성분을 목적 부위에서 양호하게 머물게 할 수 있다는 것을 지견하여, 본 발명을 완성시켰다.
즉 본 발명은, 이하의 특징을 갖는다.
〔1〕 본 발명에 따른 국소 주사제용의 누출 억제제는, 중량 평균 분자량 5000 이하의 젤라틴 가수분해물을 포함하고, 상기 젤라틴 가수분해물을 인산 완충 생리 식염수에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하이다.
〔2〕 상기 누출 억제제는, 상기 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 것이 바람직하다.
〔3〕 상기 누출 억제제는, 23G 이상 37G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인 것이 바람직하다.
〔4〕 상기 누출 억제제는, 23G 이상 27G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인 것이 바람직하다.
〔5〕 본 발명에 따른 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 포함한다.
〔6〕 상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고, 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 20mPa·s 이하인 것이 바람직하다.
〔7〕 상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고, 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 10mPa·s 이하인 것이 바람직하다.
〔8〕 상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고, 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 8mPa·s 이상 20mPa·s 이하인 것이 바람직하다.
〔9〕 본 발명에 따른 국소 주사제의 제조 방법은, 상기 국소 주사제의 제조 방법으로서, 상기 누출 억제제와 수계 용매와 유효 성분을 준비하는 공정과, 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 1℃ 이상 30℃ 이하에서 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정을 포함한다.
〔10〕 상기 국소 주사제를 얻는 공정은, 상기 누출 억제제를 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제1 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제1 주사제 전구체에 상기 유효 성분을 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정, 또는 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제2 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제2 주사제 전구체에 상기 누출 억제제를 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정, 또는 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 동시에 상기 수계 용매에 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정 중 어느 하나인 것이 바람직하다.
본 발명에 의하면, 주사제의 누출을 억제할 수 있고, 유효 성분 등을 목적 부위에 머물게 할 수 있는 국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법을 제공할 수 있다.
이하, 본 발명에 따른 실시 형태(이하, 「본 실시 형태」라고도 기재한다)에 대하여, 더 상세하게 설명한다. 여기서 본 명세서에 있어서 「A~B」라는 형식의 표기는, 범위의 상한 하한(즉 A 이상 B 이하)을 의미하고, A에 있어서 단위의 기재가 없이, B에 있어서만 단위가 기재되어 있는 경우, A의 단위와 B의 단위는 같다. 본 명세서에 있어서 「젤라틴」의 용어에 대해서는, 물질명, 젤라틴 겔 및 젤라틴 용액을 말하는 경우에 각각 이용하는 경우가 있다. 또한 「젤라틴 가수분해물」의 용어에 대해서도, 상기 젤라틴과 마찬가지로, 젤라틴 가수분해물의 용액을 말하는 경우에 이용하는 경우가 있다.
본 명세서에 있어서 「국소 주사」란, 정맥 내 주사 등의 혈관 내에 바늘을 찔러 넣는 방식의 주사를 제외하는 주사법의 전반을 의미하며, 예를 들어 피내 주사, 피하 주사, 근육 내 주사, 신경 또는 그 주위로의 주사, 연부 조직으로의 주사, 무릎 또는 척추의 추간 관절 등의 관절 내로의 주사 등을 의미한다. 본 명세서에 있어서, 젤라틴 가수분해물을 인산 완충 생리 식염수에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 「제1 용액」의 범주에는, 상기 젤라틴 가수분해물의 전량이 인산 완충 생리 식염수에 용해한 상태의 액체뿐만 아니라, 상기 젤라틴 가수분해물이 약간 용해되지 않고 분산되어 있는 상태의 액체도 포함되는 것으로 한다. 예를 들어 상기 젤라틴 가수분해물이 후술하는 화학 수식체 또는 유도체의 형태를 갖는 경우, 「제1 용액」은 용해되지 않고 분산되어 있는 상태의 액체가 되는 경우가 있을 수 있다.
〔국소 주사제용의 누출 억제제〕
본 실시 형태에 따른 국소 주사제용의 누출 억제제는, 중량 평균 분자량 5000 이하의 젤라틴 가수분해물을 포함한다. 또한 상기 젤라틴 가수분해물을 인산 완충 생리 식염수(이하, 「PBS 버퍼」라고도 기재한다)에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하이다. 상기 누출 억제제는, 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 것이 바람직하다. 상기 누출 억제제는, 이와 같은 특징을 구비함에 따라, 국소 주사제의 목적 부위로부터의 누출을 억제할 수 있고, 따라서 국소 주사제를 목적 부위에 머물게 할 수 있다. 또한 상기 누출 억제제는, 수계 용매에 고농도로 포함되는 경우여도, 점도를 비교적 저위로 유지할 수 있으므로, 상술한 누출 억제 효과를 갖는 국소 주사제를 용이하게 조제하는 것이 가능해진다.
＜젤라틴 가수분해물＞
상기 누출 억제제는, 상술한 바와 같이 중량 평균 분자량 5000 이하의 젤라틴 가수분해물을 포함한다. 본 명세서에 있어서 「젤라틴 가수분해물」이란, 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽을 가수분해함으로써 얻어지는 펩티드의 집합체(가수분해물)를 말한다. 즉 「젤라틴 가수분해물」은, 일반적으로 콜라겐 펩티드 또는 콜라겐 가수분해물이라고 칭해지는 펩티드의 집합체와 등가인 것을 의미한다. 그 중에서, 상기 누출 억제제에 포함되는 젤라틴 가수분해물은, 상기한 바와 같은 중량 평균 분자량(5000 이하)을 갖는다. 또한 젤라틴 가수분해물은, 상술한 바와 같은 펩티드의 집합체를 의미하기 때문에, 펩티드쇄를 구성하는 아미노산 서열에 있어서, 글리신이 3잔기마다 반복되는 일차 구조를 갖는 등의 콜라겐 및 젤라틴과 같은 특징을 갖고 있다.
본 명세서에 있어서 「젤라틴」이란, 콜라겐의 삼중 나선 구조가 열 변성, 산 변성 등에 의해 풀린 폴리펩티드, 그 화학 수식체 및 그 약학상 허용되는 염을 의미한다. 구체적으로는, 이하의 제1군~제6군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 유래로 하는 콜라겐을, 탈지 처리, 탈회 처리, 산 또는 알칼리 처리, 열수 추출 처리 등의 종래 공지의 처리를 실시함으로써 얻을 수 있다. 젤라틴은, 미생물을 이용한 발효법에 의해 얻은 폴리펩티드, 화학 합성 또는 유전자 재조합 조작에 의해 얻은 리컴비넌트 폴리펩티드 또는 합성된 폴리펩티드여도 된다. 또 「콜라겐」이란, 이하의 제1군~제6군으로 분류되는 척추동물의 피부 등에 있어서의 세포 외 기질을 유래로 하는 단백질을 말한다. 콜라겐은, 3개의 펩티드쇄로 이루어지는 오른쪽으로 감긴 나선 구조를 가지며, 그 펩티드쇄를 구성하는 아미노산 잔기는, 글리신 잔기가 3잔기마다 반복되는 일차 구조(소위 콜라겐 유사 서열)를 갖고 있다.
제1군: 소의 가죽, 피부, 뼈, 연골 및 힘줄로 이루어지는 군
제2군: 돼지의 가죽, 피부, 뼈, 연골 및 힘줄로 이루어지는 군
제3군: 양의 가죽, 피부, 뼈, 연골 및 힘줄로 이루어지는 군
제4군: 닭의 가죽, 피부, 뼈, 연골 및 힘줄로 이루어지는 군
제5군: 타조의 가죽, 피부, 뼈, 연골 및 힘줄로 이루어지는 군
제6군: 물고기의 뼈, 가죽 및 비늘로 이루어지는 군.
여기서 상기 폴리펩티드(젤라틴)의 「화학 수식체」란, 젤라틴을 구성하는 아미노산 잔기에 있어서의 아미노기, 카르복실기, 하이드록시기 또는 티올기 등이 화학 수식된 폴리펩티드를 의미한다. 화학 수식을 받은 젤라틴은, 물에 대한 용해성, 등전점 등을 변화시킬 수 있다. 구체적으로는, 젤라틴에 있어서의 하이드록시프롤린 잔기의 하이드록시기에 대해서는, O-아세틸화 등의 화학 수식을 실행할 수 있다. 젤라틴에 있어서의 글리신 잔기의 α-카르복실기에 대해서는, 에스테르화, 아미드화 등의 화학 수식을 실행할 수 있다. 젤라틴에 있어서의 프롤린 잔기의 α-아미노기에 대해서는, 폴리펩티딜화, 숙시닐화, 말레일화, 아세틸화, 탈아미노화, 벤조일화, 알킬술포닐화, 알릴술포닐화, 디니트로페닐화, 트리니트로페닐화, 카르바밀화, 페닐카르바밀화, 티올화 등의 화학 수식을 실행할 수 있다.
젤라틴의 화학 수식의 구체적 수단 및 처리 조건은, 종래 공지의 화학 수식 방법을 적용할 수 있다. 하이드록시프롤린 잔기의 하이드록시기의 화학 수식에 대해서는, 수용매 중 또는 비수용매 중에서 무수 아세트산을 작용시키는 것 등에 의해, 예를 들어 O-아세틸화를 실행할 수 있다. 글리신 잔기의 α-카르복실기의 화학 수식에 대해서는, 메탄올로의 현탁 후에 건조 염화수소 가스를 통기하는 것 등에 의해, 예를 들어 에스테르화를 실행할 수 있다. 글리신 잔기의 α-카르복실기의 화학 수식에 대해서는, 카르보디이미드 등을 작용시킴으로써 아미드화를 실행할 수 있다.
또한 상기 폴리펩티드(젤라틴)의 「유도체」에는, 젤라틴에 관능기를 도입한 젤라틴 유도체, 및 젤라틴과 락트산, 글리콜산 등과의 공중합체, 젤라틴과 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜의 공중합체 등이 포함되는 경우가 있다. 젤라틴 유도체로서는, 젤라틴에 대해 구아니딜기, 티올기, 아미노기, 카르복실기, 황산기, 인산기, 알킬기, 아실기, 페닐기, 벤질기 등의 관능기를 도입한 유도체를 예시할 수 있다.
상기 폴리펩티드(젤라틴)의 「약학상 허용되는 염」이란, 약학상 허용되며, 또한 원래의 폴리펩티드(젤라틴)의 원하는 활성(예를 들어, 겔화능)을 갖는 염을 의미한다. 약학상 허용되는 염으로서는, 예를 들어 염산염, 황산염, 인산염 및 브롬화수소산염 등의 무기산염, 아세트산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염, 숙신산염, 옥살산염, 푸마르산염 및 말레산염 등의 유기산염, 나트륨염, 칼륨염 및 칼슘염 등의 무기 염기염, 트리에틸암모늄염 등의 유기 염기염 등을 예시할 수 있다. 상법에 의해 젤라틴 중의 특정 펩티드를 약학상 허용되는 염으로 할 수 있다.
젤라틴은, 많은 생물이 보유하는 콜라겐에서 유래하는 폴리펩티드이기 때문에, 생체 적합성이 뛰어나다. 이 때문에 상기 콜라겐 및 젤라틴을 가수분해함으로써 얻어지는 젤라틴 가수분해물도, 생체 적합성이 뛰어나, 의약 용도의 국소 주사제에 포함되는 성분(누출 억제제)으로서 적합하다.
젤라틴 가수분해물은, 용매(예를 들어 물)에 용해한 경우, 25℃ 전후의 실온 하 및 2~8℃의 환경 하에서도 겔화하지 않고, 졸의 상태를 유지한다. 따라서 상기 누출 억제제는, 25℃ 전후의 실온에서 사용할 때에 졸화를 위한 가열 조작이 불필요해진다. 본 실시 형태에 있어서 「졸」이란, 분산질과 분산매로 이루어지는 분산계에 있어서, 분산매가 액체 상태인 분산계를 의미한다. 「겔」이란, 분산질과 분산매로 이루어지는 분산계에 있어서, 분산질이 가교 구조를 형성하고, 분산계 전체로서 유동성을 잃은 상태를 의미한다.
젤라틴 가수분해물은, 상술한 바와 같이 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽을 가수분해함으로써 얻을 수 있다. 이 경우의 「가수분해」에는, 산을 이용하는 가수분해, 염기를 이용하는 가수분해, 효소를 이용하는 가수분해, 및 열을 이용하는 가수분해가 모두 포함된다. 젤라틴 가수분해물은, 불순물의 오염을 방지하는 관점에서, 열을 이용하는 가수분해에 의해 얻는 것이 바람직하다. 또한 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽을, 효소를 이용하여 가수분해하는 경우, 상기 효소로서는, 예를 들어 콜라게나제, 티올프로테아제, 세린프로테아제, 산성 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 메탈로프로테아제 등을 들 수 있다. 상술한 효소는, 이들을 단독으로 또는 복수 조합하여 이용할 수 있다. 상기 티올프로테아제로서는, 식물 유래의 키모파파인, 파파인, 브로멜라인, 피신, 동물 유래의 카텝신, 칼슘 의존성 프로테아제 등을 들 수 있다. 상기 세린프로테아제로서는, 트립신, 카텝신 D 등을 들 수 있다. 상기 산성 프로테아제로서는, 펩신, 키모트립신 등을 들 수 있다.
사용하는 효소로서는, 젤라틴 가수분해물을 의약에 이용하는 것을 고려하면, 병원성 미생물 유래의 효소 이외의 효소(예를 들어, 비병원성 미생물에서 유래하는 효소)를 이용하는 것이 바람직하다. 상기 효소의 유래가 되는 비병원성 미생물로서는, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Aspergillus oryzae, Streptomyces, Bacillus amyloliquefaciens 등을 들 수 있다. 상기 효소는, 1종의 상술한 비병원성 미생물에서 유래하는 효소를 이용해도 되고, 복수 종의 상술한 비병원성 미생물에서 유래하는 효소를 조합하여 이용해도 된다. 효소 처리의 구체적인 방법은, 종래 공지의 방법을 이용하면 된다.
젤라틴 가수분해물은, 액체 또는 분체인 것이 바람직하다. 젤라틴 가수분해물이 액체인 경우, 상기 누출 억제제와, 후술하는 유효 성분 및 수계 용매로부터 국소 주사제를 용이하게 조제할 수 있다. 젤라틴 가수분해물이 분체인 경우, 상기 누출 억제제를 수계 용매에 용해 또는 분산시켜 주사제용 용매를 조제하고, 이것에 유효 성분을 첨가함으로써 국소 주사제를 용이하게 조제할 수 있다. 젤라틴 가수분해물은, 상술한 방법에 의해 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽을 가수분해한 후, 정제함으로써 액체로서 얻을 수 있다. 또한 상기 액체를 공지의 수단에 의해 가열 건조 또는 동결 건조함으로써 분체로서 얻는 것이 가능하다.
(중량 평균 분자량)
상기 젤라틴 가수분해물은, 중량 평균 분자량이 5000 이하이다. 상기 젤라틴 가수분해물은, 중량 평균 분자량이 3000 이상 5000 이하인 것이 바람직하다. 이에 의해 상기 누출 억제제는, 수계 용매에 고농도로 포함하는 경우여도, 점도가 비교적 저위로 유지되고, 따라서 국소 주사제로서 적용한 경우에, 높은 배압을 필요로 하지 않음에도 불구하고, 목적 부위에 있어서 누출 억제 효과를 발휘할 수 있다. 상세한 메커니즘은 불명확하지만, 젤라틴 가수분해물은, 중량 평균 분자량이 5000 이하인 경우, 젤라틴 분자가 적당한 길이로 분해되어 있으며, 고농도여도 분자의 얽힘이 발생하기 어려운 상태가 되기 때문에, 수계 용매에 고농도로 포함하는 경우여도 점도가 비교적 저위로 유지될 수 있다고 추정된다. 이에 의해, 누출 억제 효과를 구비한 국소 주사제를 용이하게 조제할 수 있다.
상기 젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량이 5000을 초과하는 경우, 점도가 허용 범위를 초과하여 상승할 우려가 있다. 젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량의 하한은, 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어 젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량은 500 이상인 것이 바람직하다.
상기 젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량은, 이하의 측정 조건 하에서 겔 여과 크로마토그래피를 실행함으로써 구할 수 있다.
기기: 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)(Tosoh Corporation 제조)
컬럼: TSKGel(등록상표) G2000SWXL
컬럼 온도: 30℃
용리액: 40질량% 아세토니트릴(0.05질량% TFA를 포함한다)
유속: 0.5mL/min
주입량: 10μL
검출: UV220nm
분자량 마커: 이하의 3종을 사용
Aprotinin Mw: 6512
Bacitracin Mw: 1423
Gly-Gly-Tyr-Arg Mw: 451.
구체적으로는, 상기 젤라틴 가수분해물을 포함하는 0.5g 상당의 누출 억제제를 약 100ml의 증류수에 첨가하고, 교반한 후, 0.2μm 필터를 이용하여 여과함으로써, 중량 평균 분자량을 측정하는 시료(피측정물)를 조제한다. 이 피측정물을 상술한 겔 여과 크로마토그래피의 조건에 의거하여 측정함으로써, 상기 젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량을 구할 수 있다.
(등전점)
상기 젤라틴 가수분해물은, 등전점이 pH 4.0 이상 5.5 이하인 것이 바람직하고, pH 4.0 이상 4.7 이하인 것이 보다 바람직하다. 이 조건을 만족하기 위하여, 상기 젤라틴 가수분해물은, 등전점이 pH 4.8~5.5 정도인 알칼리 처리 젤라틴의 가수분해물인 것이 바람직하다. 즉 상기 젤라틴 가수분해물은, 알칼리 처리 젤라틴의 가수분해물인 것이 바람직하다. 일반적으로 콜라겐을, 무기산을 이용하여 처리함으로써 얻은 젤라틴을 산 처리 젤라틴이라고 칭하고, 콜라겐을, 무기 염기를 이용하여 처리함으로써 얻은 젤라틴을 알칼리 처리 젤라틴이라고 칭한다. 알칼리 처리 젤라틴은, 구체적으로는 콜라겐을 수산화나트륨, 수산화칼슘 또는 수산화칼륨 등의 무기 염기를 이용하여 처리함으로써 얻을 수 있다.
본 실시 형태에 따른 국소 주사제용의 누출 억제제는, 후술하는 바와 같이 바이러스 또는 바이러스의 DNA 혹은 RNA의 단편, 혹은 바이러스의 단백질 등의 각 성분을 포함하는 국소 주사제에 적용되는 경우가 있다. 그 경우, 누출 억제제에 포함되는 젤라틴 가수분해물이 상술한 바와 같은 등전점의 pH를 나타낼 때, 상기 국소 주사제 중에서 젤라틴 가수분해물은, 바이러스의 상기 각 성분이 응집하는 것을 억제할 수 있고, 따라서 바이러스 역가의 저하를 억제할 수 있다. 상세한 메커니즘은 불명확하지만, 알칼리 처리 젤라틴이 갖는 등전점의 pH를 나타내는 젤라틴 가수분해물은, 전체적으로는 음의 전하를 나타내지만, 분자 내에 있어서 양의 전하를 나타내는 부위 및 음의 전하를 나타내는 부위 양자를 갖게 된다. 이 때문에 젤라틴 가수분해물은, 양의 전하를 나타내는 부위에 있어서 바이러스 중의 상기 각 성분과의 사이에서 약한 정전 상호 작용을 나타냄으로써, 바이러스와 결합할 수 있다. 한편, 젤라틴 가수분해물은, 음의 전하를 나타내는 부위에 있어서 바이러스 및 젤라틴 가수분해물을 구성하는 다른 펩티드쇄와 서로 반발한다. 이상으로 인해, 젤라틴 가수분해물은, 바이러스의 응집을 억제하면서, 국소 주사제 중에서 바이러스를 안정화시킬 수 있다고 추정된다.
젤라틴 가수분해물의 등전점의 pH는, 젤라틴 가수분해물의 원료가 되는 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽의 등전점의 pH를 종래 공지의 방법을 이용하여 측정함으로써 구할 수 있지만, 이하의 제타 전위를 지표로 한 등전점의 측정 방법을 이용하는 것이, 보다 정확하게 등전점의 값을 구할 수 있으므로 바람직하다. 즉, 우선 아세트산 완충액(pH 4.0~5.5)에 측정 대상으로 하는 젤라틴 가수분해물을 용해하여, 0.4w/v%의 피측정 용액을 얻는다. 다음으로 당해 피측정 용액을 0.22μm의 필터(Merck사 제조)로 여과한 후, 피측정 용액 0.8mL를 기포가 들어가지 않도록 하여 캐필러리 셀에 충전한다. 이어서, 상기 피측정 용액이 충전된 당해 캐필러리 셀을 제타 전위 측정 장치(Malvern Panalytical사 제조)에 세팅하고, 25℃의 각 pH에 있어서의 제타 전위를 측정한다. 이 때, 제타 전위가 0이 되는 pH값을 피측정 용액(측정 대상으로 한 젤라틴 가수분해물)의 등전점으로서 구할 수 있다.
(농도)
상기 누출 억제제 중의 상기 젤라틴 가수분해물의 농도는, 특별히 제한되지 않지만, 국소 주사제의 조제를 용이하게 하는 관점에서, 25질량% 이상 100질량% 이하인 것이 바람직하다. 상기 누출 억제제 중의 상기 젤라틴 가수분해물의 농도가 25질량% 미만인 경우, 국소 주사제를 조제할 때, 누출 억제 효과를 발휘하기 위하여 다량의 누출 억제제가 필요하게 되므로 곤란해진다. 상기 누출 억제제 중의 상기 젤라틴 가수분해물의 농도는, 50질량% 이상 100질량% 이하인 것이 보다 바람직하고, 상기 누출 억제제 중의 상기 젤라틴 가수분해물의 농도는 100질량%, 즉 상기 누출 억제제는 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 것도 바람직하다. 상기 누출 억제제로서 상기 젤라틴 가수분해물 이외에 포함되는 성분으로서는, 원료가 되는 젤라틴 또는 콜라겐에서 유래하는 젤라틴 가수분해물 이외의 성분 외에, 희석제, 결합제(시럽, 아라비아검, 소르비톨, 트라가칸트, 폴리비닐피롤리돈), 부형제(유당, 자당, 콘스타치, 인산칼륨, 소르비톨, 글리신), 활택제(스테아르산마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌글리콜, 실리카), 붕괴제(감자 전분) 및 습윤제(라우릴황산나트륨) 등을 들 수 있다. 상기 누출 억제제 중의 상기 젤라틴 가수분해물의 농도는, 하이드록시프롤린 정량 등의 공지의 방법에 의해 측정할 수 있다.
＜제1 용액＞
본 실시 형태에 따른 국소 주사제용의 누출 억제제에 있어서, 상기 젤라틴 가수분해물을 PBS 버퍼에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하이다. 즉 제1 용액은, 상기 누출 억제제에 포함되는 젤라틴 가수분해물을 PBS 버퍼에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 수용액, 또는 상기 젤라틴 가수분해물의 농도가 40질량%이며, 또한 상기 젤라틴 가수분해물이 약간 용해되지 않고 분산된 분산액으로서 조제된다. 또한 당해 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량% 포함함에도 불구하고, 20mPa·s 이하가 된다. 이상으로부터 상기 누출 억제제는, 수계 용매에 상기 젤라틴 가수분해물을 고농도로 포함하는 경우여도 점도가 비교적 저위를 나타내는 것이 이해된다.
이 때문에 상기 누출 억제제를 포함하는 국소 주사제는, 주사 시에 높은 배압이 필요하지 않음에도 불구하고, 목적 부위로부터의 누출 억제 효과를 발휘할 수 있다. 상기 제1 용액의 25℃에서의 점도가 20mPa·s 이하가 되는 누출 억제제를 포함하는 국소 주사제에 있어서는, 당해 국소 주사제가 충전되는 주사기에 적용되는 주사 바늘의 외경의 크기를 적절히 선택함으로써, 누출 억제 효과를 보다 발휘할 수 있다. 또한, 제1 용액의 25℃에서의 점도의 하한값은, 특별히 제한되어야 하는 것은 아니지만, 상기 누출 억제제를 포함하는 국소 주사제의 목적 부위로부터의 누출 억제 효과를 보다 발휘하는 관점에서, 2.5mPa·s 이상인 것이 바람직하다. 또 중량 평균 분자량이 5000 이하인 젤라틴 가수분해물이어도, 분자량 분포가 꽤 넓기 때문에 고분자 성분을 일정량 이상 포함하는 젤라틴 가수분해물은, 고분자들의 얽힘이 발생하여 점성이 상승하는 것이 추정된다. 이 때문에, 그와 같은 젤라틴 가수분해물을 PBS 버퍼에 용해하여 40질량% 농도로 함으로써 얻은 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s를 초과하는 경우가 있을 수 있다.
상기 제1 용액의 점도는, 25℃에서 레오미터(상품명(품번): 「MCE302」, Anton Paar Japan사 제조, 콘플레이트 R25, 1о, 전단 속도 200s-1)로 측정함으로써 구할 수 있다. 또한, 제1 용액의 점도에 대해서는, 측정 개시부터 값이 안정되어 있는 것을 확인한 다음, 측정 개시로부터 1분 후의 값을 채용한다.
＜용도＞
본 실시 형태에 따른 국소 주사제용의 누출 억제제는, 국소 주사제용이다. 특히 상기 누출 억제제는, 23G 이상 37G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인 것이 바람직하다. 상기 누출 억제제는, 23G 이상 27G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인 것도 바람직하다. 상술한 바와 같이 국소 주사란, 예를 들어 피내 주사, 피하 주사, 근육 내 주사, 신경 또는 그 주위로의 주사, 연부 조직으로의 주사, 무릎 또는 척추의 추간 관절 등의 관절 내로의 주사 등을 말하며, 정맥 내 주사 등의 혈관 내에 바늘을 찔러 넣는 방식의 주사를 제외하는 주사법의 전반을 의미한다. 따라서 상기 누출 억제제는, 젤라틴 가수분해물의 종래 알려져 있지 않은 속성, 즉 미지의 속성으로서, 피내, 피하, 근육 내, 신경 또는 그 주위, 연부 조직, 및 무릎 및 척추의 추간 관절 등의 관절 내 등의 목적 부위로부터 주사제가 누출되는 것을 억제하고, 목적 부위에 머물게 할 수 있는 작용을 갖는다. 따라서 누출 억제제는, 젤라틴 가수분해물의 유효한 새로운 용도로 할 수 있다.
여기서 「23G 이상 37G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘」이란, 구체적으로는 0.08±0.02mm~0.64±0.02mm의 외경을 갖는 주사 바늘을 말한다. 즉 23G의 주사 바늘은 0.64±0.02mm의 외경을, 24G의 주사 바늘은 0.56±0.02mm의 외경을, 25G의 주사 바늘은 0.51±0.02mm의 외경을, 26G의 주사 바늘은 0.46±0.02mm의 외경을, 27G의 주사 바늘은 0.41±0.02mm의 외경을 각각 갖는다. 28G의 주사 바늘은 0.36±0.02mm의 외경을, 29G의 주사 바늘은 0.33±0.02mm의 외경을, 30G의 주사 바늘은 0.31±0.02mm의 외경을, 31G의 주사 바늘은 0.27±0.02mm의 외경을, 32G의 주사 바늘은 0.23±0.02mm의 외경을 각각 갖는다. 33G의 주사 바늘은 0.20±0.02mm의 외경을, 35G의 주사 바늘은 0.15±0.02mm의 외경을, 36G의 주사 바늘은 0.10±0.02mm의 외경을, 37G의 주사 바늘은 0.08±0.02mm의 외경을 각각 갖는다. 따라서 누출 억제제는, 23G 이상 37G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기가 적용되는 각종 용도에 있어서, 국소 주사제 중의 유효 성분이 목적 부위로부터 누출되는 것을 억제하고, 상기 목적 부위에서 머물게 할 수 있다. 상기 누출 억제제는 특히, 23G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기가 적용되는 종양 내 투여, 및 일반적인 근육 주사 등의 용도, 그리고 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기가 적용되는 연조직에 대한 세포 이식, 및 일반적인 피내 주사 등의 용도에 적합하다. 또한 상기 누출 억제제는, 안과에서 사용되는 극세의 주사 바늘(예를 들어 37G, 외경 0.08mm, 내경 0.05mm)에도 적용할 수도 있다.
〔국소 주사제〕
본 실시 형태에 따른 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 포함한다. 이에 의해 상기 국소 주사제는, 유효 성분이 목적 부위로부터 누출되는 것을 억제하고, 상기 목적 부위에서 머물게 할 수 있다. 상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제에 더하여, 약제, 바이러스, 세포 또는 그 외의 생리 활성 물질 등의 유효 성분, 및 상기 누출 억제제를 용해 또는 분산시키는 매체가 되는 수계 용매 등을 포함할 수 있다.
＜유효 성분＞
본 실시 형태에 따른 국소 주사제는, 유효 성분으로서 약제, 바이러스 또는 바이러스의 DNA 혹은 RNA의 단편, 또는 바이러스의 단백질 등의 각 성분(이하, 「바이러스 등」이라고도 기재한다), 세포, 혹은 그 외의 생리 활성 물질을 포함할 수 있다. 상기 약제로서는, 주사제로서 적용 가능한 한, 무기 화합물을 포함하는 약제여도 되고, 유기 합성 반응에 의해 제조 가능한 화합물을 포함하는 약제여도 되고, 천연물 등으로부터 추출되는 화합물을 포함하는 약제여도 된다. 약제로서는, 예를 들어 분자량이 500Da 미만인 합성 저분자 제제, 분자량이 500~5000Da 정도인 핵산 제제 또는 펩티드 제제, 분자량이 수만Da 이상인 단백질 제제를 모두 적용할 수 있다. 약제는, 활성을 나타내는 분자의 유도체여도 되고, 상기 분자의 전구체여도 되고, 상기 분자의 염이어도 된다. 여기서 본 명세서에 있어서 분자의 「유도체」란, 분자에 관능기를 도입하거나, 분자에 대해 산화 환원 반응을 실행함에 따라, 분자의 분자 내의 일부의 구조를 개변하여 형성되는 물질을 의미한다. 분자의 「전구체」란, 분자가 생합성 또는 합성에 의해 생성되기 전의 단계에 있는 물질을 의미한다. 분자의 「염」이란, 분자 자신이 갖는 활성을 유지한 채로, 산 또는 염기에 의해 처리됨으로써 형성되는 염을 의미한다.
상기 바이러스로서는, 엔벨로프를 갖는 DNA 바이러스, 엔벨로프를 갖지 않는 DNA 바이러스, 엔벨로프를 갖는 RNA 바이러스 및 엔벨로프를 갖지 않는 RNA 바이러스를 모두 상기 국소 주사제에 이용할 수 있다. 또 이들 바이러스의 DNA 혹은 RNA의 단편, 또는 바이러스의 단백질 등의 각 성분도 상기 국소 주사제에 이용할 수 있다. 상술한 바와 같이 국소 주사제에 포함되는 젤라틴 가수분해물은, 바이러스가 응집하는 것을 억제할 수 있으므로, 바이러스 역가의 저하를 억제할 수 있고, 따라서 냉장 온도(2~8℃) 및 25℃ 전후의 실온 양자에 있어서 바이러스 또는 바이러스의 상기 각 성분을 포함하는 국소 주사제의 안정성을 향상시킬 수 있다.
상기 그 외의 생리 활성 물질로서는, 예를 들어 각종 세포(줄기 세포 및 분화한 세포 양자를 포함한다), 성장 인자, 분화 인자, 호르몬, 케모카인, 사이토카인, 세포 접착 분자, 주화(走化) 인자, 효소, 효소 인히비터, 보효소(비타민류), 광물, 지방, 지질, 안정제 및 보존제 등을 들 수 있다. 이들 생리 활성 물질을, 모두 상기 국소 주사제에 이용할 수 있다.
＜수계 용매＞
본 실시 형태에 따른 국소 주사제는, 상술한 바와 같이 수계 용매를 포함할 수 있다. 본 명세서에 있어서 「수계 용매」란, 누출 억제제를 용해 또는 분산시키는 매체를 말하며, 후술하는 아미노산, 당류 및 완충 작용을 갖는 염 등의 물 이외의 성분을 포함할 수 있는 매체를 의미한다. 예를 들어 수계 용매는, 완충 작용을 갖는 염을 포함하는 완충액인 경우가 있다. 구체적으로는, 수계 용매는, GTS 버퍼인 경우가 있다. 수계 용매에 의해 국소 주사제는, 안정성을 향상시킬 수 있다.
(완충 작용을 갖는 염)
완충 작용을 갖는 염으로서는, 인산나트륨, 인산칼륨, 인산칼슘, 인산마그네슘, 인산수소나트륨, 인산수소칼륨, 인산수소칼슘, 인산수소마그네슘, 염화나트륨, 염화칼륨 등을 예시할 수 있다. 수계 용매는, 상기 완충 작용을 갖는 염을 1종 단독으로 포함해도 되고, 2종 이상을 조합하여 포함해도 된다. 상기 완충 작용을 갖는 염을 포함하는 수계 용매로서는, 상기 GTS 버퍼, PBS 버퍼, Tris 버퍼, HEPES 버퍼, 구연산 버퍼 등을 예시할 수 있다.
(아미노산)
수계 용매는, 메티오닌, 아르기닌, 트립토판, 글루타민 및 글루타민산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다. 수계 용매는, 이들 군으로부터 선택되는 1종의 아미노산을 단독으로 포함해도 되고, 2종 이상을 조합하여 포함해도 된다. 수계 용매는, 메티오닌, 아르기닌 양자 또는 어느 한쪽의 아미노산을 포함하는 것이 보다 바람직하다. 상기 국소 주사제는, 아미노산을 포함하는 경우도 안정성의 향상에 기여할 수 있다.
(당류)
수계 용매는, 자당, 유당, 소르비톨, 이노시톨, 트레할로스, 만니톨, 말티톨, 자일리톨, 에리트리톨 및 글리세롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 당류를 포함하는 것이 바람직하다. 수계 용매는, 이들 군으로부터 선택되는 1종의 당류를 단독으로 포함해도 되고, 2종 이상을 조합하여 포함해도 된다. 수계 용매는, 자당, 유당 또는 소르비톨 중 어느 하나를 적어도 포함하는 것이 보다 바람직하다. 상기 국소 주사제는, 당류를 포함하는 경우도 안정성의 향상에 기여할 수 있다. 본 명세서에 있어서 「당류」에 포함되는 화합물로서는, 일반적으로 당류로서 분류되는 유기 화합물뿐만 아니라, 당알코올로 분류되는 유기 화합물을 포함하는 것으로 한다. 상기의 군의 당류에 있어서 당알코올로 분류되는 유기 화합물은, 상기 소르비톨, 만니톨, 말티톨, 자일리톨, 에리트리톨 및 글리세롤이다.
(국소 주사제에 포함되는 누출 억제제의 농도, 및 국소 주사제의 25℃에서의 점도)
상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하는 것이 바람직하다. 이 경우에 있어서 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 20mPa·s 이하인 것이 바람직하다. 국소 주사제에 포함되는 상기 누출 억제제의 농도가 5질량% 미만인 경우, 소정의 점도를 얻는 것이 곤란해지므로, 원하는 누출 억제 효과를 발휘하는 것이 곤란해진다. 국소 주사제에 포함되는 상기 누출 억제제의 농도가 40질량%를 초과하는 경우, 점도가 허용 범위를 초과하여 상승할 우려가 있다. 국소 주사제에 포함되는 상기 누출 억제제의 농도는, 10질량% 이상 40질량% 이하인 것이 보다 바람직하고, 20질량% 이상 40질량% 이하인 것이 보다 더 바람직하며, 20질량% 초과 40질량% 미만인 것도 보다 더 바람직하다. 상기 국소 주사제 중의 상기 누출 억제제의 농도는, 상기 누출 억제제를 실질적으로 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 것이라고 간주함으로써, 하이드록시프롤린 정량 등의 공지의 방법을 이용하여 측정할 수 있다.
상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하며, 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 10mPa·s 이하인 것도 바람직하다. 이와 같은 국소 주사제는, 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 경우, 국소 주사제 중의 유효 성분을 매우 양호하게 목적 부위에서 누출하는 일 없이 머물게 할 수 있다. 상기 국소 주사제는, 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 경우, 상기 누출 억제제를 10질량% 이상 40질량% 이하 포함하는 것이 보다 바람직하다.
또한 상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하며, 상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 8mPa·s 이상 20mPa·s 이하인 것도 바람직하다. 이와 같은 국소 주사제는, 23G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 경우, 국소 주사제 중의 유효 성분을 매우 양호하게 목적 부위에서 누출하는 일 없이 머물게 할 수 있다. 상기 국소 주사제는, 23G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 경우, 상기 누출 억제제를 10질량% 이상 40질량% 이하 포함하는 것이 보다 바람직하다.
＜작용 효과＞
본 실시 형태에 따른 국소 주사제는, 상술한 바와 같이 누출 억제제와, 유효 성분과, 수계 용매를 포함할 수 있고, 그 경우에 있어서 상기 유효 성분을 목적 부위에서 누출하는 일 없이 머물게 할 수 있다. 특히, 상기 국소 주사제는, 유효 성분으로서 바이러스 등을 포함하는 경우, 국소 주사제 중에서 바이러스 등이 응집하는 것을 억제하고, 따라서 바이러스 역가의 저하를 억제할 수도 있으므로, 냉장 온도(2~8℃) 및 25℃ 전후의 실온 양자에 있어서 국소 주사제의 안정성을 향상시킬 수 있다. 또한 국소 주사제는, 본 발명자들의 연구에 따르면, 후술하는 바와 같이 세포 체류성 및 세포 토출성도 뛰어나기 때문에, 세포 치료 등의 용도에도 적합할 것이 기대된다.
〔국소 주사제의 제조 방법〕
본 실시 형태에 따른 국소 주사제는, 바람직하게는 다음의 방법에 의해 얻을 수 있다. 즉 본 실시 형태에 따른 국소 주사제의 제조 방법은, 상기 누출 억제제와 수계 용매와 유효 성분을 준비하는 공정(제1 공정)과, 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 1℃ 이상 30℃ 이하에서 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정(제2 공정)을 포함하는 것이 바람직하다. 상기 「유효 성분」 및 「수계 용매」는, 상기의 〔국소 주사제〕 항목에서 설명한 「유효 성분」 및 「수계 용매」와 동의이며, 중복되는 설명은 반복하지 않는다.
(제1 공정)
제1 공정은, 상기 누출 억제제와 수계 용매와 유효 성분을 준비하는 공정이다. 누출 억제제에 포함되는 젤라틴 가수분해물은, 상술한 바와 같이 젤라틴 및 콜라겐 양쪽 또는 어느 한쪽을 가수분해하고, 중량 평균 분자량을 5000 이하로 함으로써 얻을 수 있다. 상기 누출 억제제는, 젤라틴 가수분해물과 그 외의 성분을, 젤라틴 가수분해물의 농도가 25질량% 이상 100질량% 이하가 되는 질량 비율로 혼합함으로써 준비할 수 있다. 상기 젤라틴 가수분해물과 그 외의 성분의 구체적인 혼합 방법은, 종래 공지의 방법을 이용할 수 있다. 수계 용매는, 예를 들면 완충 작용을 갖는 염을 포함하는 경우, 소정의 농도가 되도록 상기 염을 이온 교환수에 첨가하는 등의 종래 공지의 방법에 의해 준비할 수 있다. 유효 성분에 대해서는, 약제, 바이러스 등 또는 그 외의 생리 활성 물질을 준비하기 위한 종래 공지의 방법에 의해, 각각 준비할 수 있다.
(제2 공정)
제2 공정은, 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 1℃ 이상 30℃ 이하에서 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정이다. 제2 공정은, 1℃ 이상 30℃ 이하라고 하는 온도에서 누출 억제제 및 유효 성분을 수계 용매에 혼합하여, 국소 주사제를 조제하는 것이 가능하기 때문에, 매우 간편하게 국소 주사제를 얻을 수 있다. 제2 공정에 있어서 상기 누출 억제제, 유효 성분 및 수계 용매를 혼합하는 온도는, 국소 주사제를 간편하게 얻는 관점에서, 15℃ 이상 25℃ 이하인 것이 보다 바람직하고, 20℃ 이상 25℃ 이하인 것이 보다 더 바람직하다.
여기서 제2 공정(국소 주사제를 얻는 공정)은, 상기 누출 억제제를 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제1 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제1 주사제 전구체에 상기 유효 성분을 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정(이하, 「제2a 공정」이라고도 기재한다), 또는 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제2 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제2 주사제 전구체에 상기 누출 억제제를 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정(이하, 「제2b 공정」이라고도 기재한다), 또는, 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 동시에 상기 수계 용매에 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정(이하, 「제2c 공정」이라고도 기재한다) 중 어느 하나인 것이 바람직하다.
제2a 공정에 있어서는, 유효 성분을 혼합하기 전에, 누출 억제제와 수계 용매를 혼합하여 제1 주사제 전구체를 얻는다. 따라서, 예를 들어 가수분해 등이 빠른 화합물(예를 들어 에스테르, 아미드, 락탐과 같은 구조를 갖는 화합물) 등이 유효 성분이 되는 경우, 국소 주사제를 얻는 공정으로서 제2a 공정을 이용하면, 국소 주사의 직전에 제1 주사제 전구체에 대해 유효 성분을 혼합함으로써, 유효 성분의 분해를 최소한으로 억제한 국소 주사제를 얻을 수 있다.
제2b 공정에 있어서는, 누출 억제제를 혼합하기 전에, 유효 성분과 수계 용매를 혼합하여 제2 주사제 전구체를 얻는다. 따라서, 예를 들어 누출 억제제에 의한 점성의 변화가 작용에 영향을 미치기 쉬운 화합물 등이 유효 성분이 되는 경우, 국소 주사제를 얻는 공정으로서 제2b 공정을 이용하면, 국소 주사의 직전에 제2 주사제 전구체에 대해 누출 억제제를 혼합함으로써, 작용의 변화를 최소한으로 억제한 국소 주사제를 얻을 수 있다.
제2c 공정에 있어서는, 상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 동시에 상기 수계 용매에 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는다. 따라서 국소 주사제를 얻는 공정으로서 제2c 공정을 이용하면, 제2a 공정 및 제2b 공정에 비해 단시간 또한 간편하게 국소 주사제를 얻을 수 있다.
＜작용 효과＞
이상의 제조 방법에 의해, 본 실시 형태에 따른 국소 주사제를 얻을 수 있다. 상기 국소 주사제는, 누출 억제제와, 유효 성분과, 수계 용매를 포함함으로써, 상기 유효 성분이 목적 부위로부터 누출되는 것을 억제하고, 상기 유효 성분 등을 목적 부위에 머물게 할 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다.
〔제1 시험〕
후술하는 각 시료가 국소 주사제의 누출 억제제로서 적절한지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 이하의 시료 1 및 시료 2가 실시예이고, 시료 3 및 시료 4가 비교예이다.
＜시료(누출 억제제)의 준비＞
(시료 1)
등전점의 pH가 5인 돼지 유래의 알칼리 처리 젤라틴 가수분해물(상품명: 「비매트릭스 젤라틴 HG」, 중량 평균 분자량 4000, Nitta Gelatin Inc. 제조)을 시료 1의 누출 억제제로 했다. 이어서 상기 누출 억제제를 표 1에 나타내는 각 농도(1질량%, 5질량%, 10질량%, 20질량%, 30질량% 및 40질량%)가 되도록 PBS 버퍼에 용해함으로써, 상술한 제1 용액을 포함하는 각종 점도 측정용 용액을 얻었다. 시료 1의 누출 억제제의 등전점을 상술한 방법에 의해 측정한 결과, 4.65였다.
(시료 2)
등전점의 pH가 5인 돼지 유래의 알칼리 처리 젤라틴 가수분해물(상품명: 「비매트릭스 젤라틴 LS-H」, Nitta Gelatin Inc. 제조)을 중량 평균 분자량이 650이 되도록 열로 가수분해함으로써 젤라틴 가수분해물을 얻어, 이를 시료 2의 누출 억제제로 했다. 이어서 상기 누출 억제제를 표 1에 나타내는 각 농도(10질량%, 20질량%, 30질량%, 40질량% 및 50질량%)가 되도록 PBS 버퍼에 용해함으로써, 상술한 제1 용액을 포함하는 각종 점도 측정용 용액을 얻었다. 시료 2의 누출 억제제의 등전점을 상술한 방법에 의해 측정한 결과, 4.02였다.
(시료 3)
등전점의 pH가 5인 돼지 유래의 알칼리 처리 젤라틴 가수분해물(상품명: 「비매트릭스 젤라틴 LS-H」, Nitta Gelatin Inc. 제조)을 중량 평균 분자량이 20000이 되도록 열로 가수분해함으로써 젤라틴 가수분해물을 얻어, 이를 시료 3의 누출 억제제로 했다. 이어서 상기 누출 억제제를 표 1에 나타내는 각 농도(5질량%, 6질량%, 7질량%, 8질량%, 9질량%, 10질량% 및 20질량%)가 되도록 50℃로 가열한 PBS 버퍼에 용해함으로써, 각종 점도 측정용 용액을 얻었다. 시료 3의 누출 억제제의 등전점을 상술한 방법에 의해 측정한 결과, 4.84였다.
(시료 4)
등전점의 pH가 5인 돼지 유래의 알칼리 처리 젤라틴 가수분해물(상품명: 「비매트릭스 젤라틴 LS-H」, Nitta Gelatin Inc. 제조)을 중량 평균 분자량이 5900이 되도록 열로 가수분해함으로써 젤라틴 가수분해물을 얻어, 이를 시료 4의 누출 억제제로 했다. 이어서 상기 누출 억제제를 표 1에 나타내는 각 농도(20질량%, 30질량% 및 40질량%)가 되도록 PBS 버퍼에 용해함으로써, 제1 용액을 포함하는 각종 점도 측정용 용액을 얻었다. 시료 1의 누출 억제제의 등전점을 상술한 방법에 의해 측정한 결과, 4.71이었다.
＜점도의 측정＞
상술한 시료 1~시료 4에서 얻은 제1 용액 및 각종 점도 측정용 용액에 대해, 레오미터(Anton Paar Japan사 제조)를 이용하여 25℃에서의 점도(단위는, mPa·s)를 상술한 방법에 따라 구했다. 결과를 표 1에 나타낸다. 표 1에 있어서는, 예를 들어 시료 1의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 점도 측정용 용액의 25℃에서의 점도는, 시료 1의 행과 10질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 1의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 점도 측정용 용액의 25℃에서의 점도는, 「2.5mPa·s」였다.
＜고찰＞
표 1에 따르면, 시료 1 및 시료 2에 있어서의 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하였다. 한편, 시료 4에 있어서의 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s를 초과했다. 시료 3에 대해서는, 누출 억제제를 20질량% 포함하는 점도 측정용 용액의 25℃에서의 점도가 20mPa·s를 훨씬 초과했기 때문에, 제1 용액의 25℃에서의 점도는 당연히 20mPa·s를 초과한다고 추정되었다. 또 시료 1 및 시료 2의 등전점은, 시료 3 및 시료 4의 그것에 비해 낮아, 4.7 이하(4.65 이하)였다.
〔제2 시험〕
후술하는 각 시료가 국소 주사제로서 누출 억제 효과를 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 이하의 시료 21 및 시료 22가 실시예이고, 시료 23 및 시료 2A가 비교예이다.
＜피(被)주사 검체의 준비＞
시판의 닭다리살(일본산)을 입수하여, 이것을 37℃에서 인큐베이트함으로써 피주사 검체를 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 21)
제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 표 2에 나타내는 각 농도(1질량%, 5질량%, 10질량%, 20질량%, 30질량% 및 40질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 21)를 얻었다.
(시료 22)
제1 시험에서 제작한 시료 2의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 650)를, 표 2에 나타내는 각 농도(10질량%, 20질량%, 30질량%, 40질량% 및 50질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 22)를 얻었다.
(시료 23)
제1 시험에서 제작한 시료 3의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 20000)를, 표 2에 나타내는 각 농도(5질량%, 6질량%, 7질량%, 8질량%, 9질량% 및 10질량%)가 되도록, 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 분산시켜 분산액을 얻고, 또한 당해 분산액을 50℃로 가열함으로써 용해하여 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 23)를 얻었다.
(시료 2A)
글리세린(시약 특급, FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation 제조)을, 표 2에 나타내는 각 농도(10질량%, 40질량% 및 50질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 글리세린을 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 2A)를 얻었다.
＜누출 억제 시험＞
상술한 시료 21~시료 23 및 시료 2A의 각종 국소 주사제 1mL를, 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(TERUMO Corporation 제조)에 각각 충전함과 더불어, 당해 주사기를 상술한 피주사 검체에 주사함으로써, 당해 피주사 검체에 상기 국소 주사제 0.2mL(0.2g 상당)를 주입했다. 이어서, 당해 주사기를 피주사 검체로부터 빼내고, 피주사 검체의 천자부에 가로 세로 1cm로 커트한 시판의 여과지(ADVANTEC CO., LTD. 제조)로 덮고, 당해 여과지에 상기 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수시켰다.
마지막으로 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수한 여과지의 질량을 측정하여, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 누출률(%, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 질량/0.2g×100)을 산출했다. 본 시험에 있어서는 상기 누출률이 9.0% 이하인 경우, 당해 국소 주사제는, 목적 부위로부터의 누출이 억제되고 있다고 평가했다. 결과를 표 2에 나타낸다. 표 2에 있어서는, 예를 들어 시료 21에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 시료 21의 행과 10질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 21에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 7.0%였다.
＜고찰＞
표 2에 따르면, 시료 21은, 누출 억제제를 10~30질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 9.0% 이하가 되고, 시료 22는, 누출 억제제를 30~40질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 9.0% 이하가 되어, 각각 양호한 누출 억제 효과를 갖는 것이 시사되었다.
한편, 시료 23은, 누출 억제제를 7~8질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 9.0% 이하가 되었지만, 당해 국소 주사제는, 중량 평균 분자량 20000의 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 누출 억제제를 이용했기 때문에, 졸화를 위해 50℃로 가열하여 조제할 필요가 있다. 이 때문에 당해 국소 주사제의 실시는, 실제적이지 않으므로 부적당하다고 판단했다. 시료 2A는, 글리세린을 40~50질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 9.0% 이하가 되었지만, 글리세린은 고침투압에 의한 투여 부위에 대한 악영향이 우려되기 때문에, 당해 국소 주사제의 실시는 실제적이지 않으므로 부적당하다고 판단했다.
〔제3 시험〕
후술하는 각 시료가 국소 주사제로서 누출 억제 효과를 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 이하의 시료 31이 실시예이고, 시료 3A가 비교예이다.
＜피주사 검체의 준비＞
시판의 닭다리살(일본산)을 입수하여, 이것을 37℃에서 인큐베이트함으로써 피주사 검체를 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 31)
제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 표 3에 나타내는 각 농도(1질량%, 5질량%, 10질량%, 20질량%, 30질량% 및 40질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 31)를 얻었다.
(시료 3A)
글리세린(시약 특급, FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation 제조)을, 표 3에 나타내는 각 농도(10질량%, 40질량% 및 50질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 글리세린을 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 3A)를 얻었다.
＜누출 억제 시험＞
상술한 시료 31 및 시료 3A의 각종 국소 주사제 1mL를, 23G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(TERUMO Corporation 제조)에 각각 충전함과 더불어, 당해 주사기를 상술한 피주사 검체에 주사함으로써, 당해 피주사 검체에 상기 국소 주사제 0.2mL(0.2g 상당)를 주입했다. 이후, 상기 제2 시험과 같은 요령에 의해 가로 세로 1cm로 커트한 시판의 여과지(ADVANTEC CO., LTD. 제조)에 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수시킴과 더불어, 상기 여과지의 질량을 측정하여, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 누출률(%)을 산출했다.
본 시험에 있어서는 상기 누출률이 11.0% 이하인 경우, 당해 국소 주사제는, 목적 부위로부터의 누출이 억제되고 있다고 평가했다. 결과를 표 3에 나타낸다. 표 3에 있어서는, 예를 들어 시료 31에 있어서의 누출 억제제를 30질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 시료 31의 행과 30질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 31에 있어서의 누출 억제제를 30질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 10.0%였다.
＜고찰＞
표 3에 따르면, 시료 31은, 누출 억제제를 30~40질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 11.0% 이하가 되어, 양호한 누출 억제 효과를 갖는 것이 시사되었다. 한편, 시료 3A는, 글리세린을 소정의 농도 포함하는 각종 국소 주사제에 있어서 모두 누출률이 11.0%를 초과했다.
〔제4 시험〕
후술하는 시료 41이 국소 주사제로서 누출 억제 효과를 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 시료 41은 실시예이다.
＜피주사 검체의 준비＞
시판의 닭다리살(일본산)을 입수하여, 이것을 37℃에서 인큐베이트함으로써 피주사 검체를 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 41)
제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 표 4에 나타내는 각 농도(1질량%, 5질량%, 10질량%, 20질량%, 30질량% 및 40질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 41)를 얻었다.
＜누출 억제 시험＞
상술한 시료 41의 국소 주사제 1mL를, 25G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(TERUMO Corporation 제조)에 각각 충전함과 더불어, 당해 주사기를 상술한 피주사 검체에 주사함으로써, 당해 피주사 검체에 상기 국소 주사제 0.2mL(0.2g 상당)를 주입했다. 이후, 상기 제2 시험과 같은 요령에 의해 가로 세로 1cm로 커트한 시판의 여과지(ADVANTEC CO., LTD. 제조)에 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수시킴과 더불어, 상기 여과지의 질량을 측정하여, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 누출률(%)을 산출했다.
본 시험에 있어서는 상기 누출률이 8.0% 이하인 경우, 당해 국소 주사제는, 목적 부위로부터의 누출이 억제되고 있다고 평가했다. 결과를 표 4에 나타낸다. 표 4에 있어서는, 예를 들어 시료 41에 있어서의 누출 억제제를 30질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 시료 41의 행과 30질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 41에 있어서의 누출 억제제를 30질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 3.9%였다.
＜고찰＞
표 4에 따르면, 시료 41은, 누출 억제제를 20~40질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 8.0% 이하가 되어, 양호한 누출 억제 효과를 갖는 것이 시사되었다.
〔제5 시험〕
후술하는 시료 51이 국소 주사제로서 누출 억제 효과를 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 시료 51은 실시예이다.
＜피주사 검체의 준비＞
시판의 닭다리살(일본산)을 입수하여, 이것을 37℃에서 인큐베이트함으로써 피주사 검체를 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 51)
제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 표 5에 나타내는 각 농도(1질량%, 3질량%, 5질량%, 7.5질량%, 10질량%, 15질량% 및 20질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 51)를 얻었다.
＜누출 억제 시험＞
상술한 시료 51의 국소 주사제 1mL를, 33G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(NIPPON Genetics Co, Ltd. 제조)에 각각 충전함과 더불어, 당해 주사기를 상술한 피주사 검체에 주사함으로써, 당해 피주사 검체에 상기 국소 주사제 0.2mL(0.2g 상당)를 주입했다. 이후, 상기 제2 시험과 같은 요령에 의해 가로 세로 1cm로 커트한 시판의 여과지(ADVANTEC CO., LTD. 제조)에 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수시킴과 더불어, 상기 여과지의 질량을 측정하여, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 누출률(%)을 산출했다.
본 시험에 있어서는 상기 누출률이 2.5% 이하인 경우, 당해 국소 주사제는, 목적 부위로부터의 누출이 억제되고 있다고 평가했다. 결과를 표 5에 나타낸다. 표 5에 있어서는, 예를 들어 시료 51에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 시료 51의 행과 10질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 51에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 2.1%였다.
＜고찰＞
표 5에 따르면, 시료 51은, 누출 억제제를 7.5~10질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 2.5% 이하가 되어, 양호한 누출 억제 효과를 갖는 것이 시사되었다.
〔제6 시험〕
후술하는 시료 61이 국소 주사제로서 누출 억제 효과를 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 시료 61은 실시예이다.
＜피주사 검체의 준비＞
시판의 닭다리살(일본산)을 입수하여, 이것을 37℃에서 인큐베이트함으로써 피주사 검체를 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 61)
제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 표 6에 나타내는 각 농도(1질량%, 3질량%, 5질량%, 7.5질량% 및 10질량%)가 되도록 수계 용매(구체적으로는, PBS 버퍼)에 용해함으로써, 누출 억제제를 각종 농도로 포함하는 국소 주사제(시료 61)를 얻었다.
＜누출 억제 시험＞
상술한 시료 61의 국소 주사제 1mL를, 37G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(NIPPON Genetics Co, Ltd. 제조)에 각각 충전함과 더불어, 당해 주사기를 상술한 피주사 검체에 주사함으로써, 당해 피주사 검체에 상기 국소 주사제 0.2mL(0.2g 상당)를 주입했다. 이후, 상기 제2 시험과 같은 요령에 의해 가로 세로 1cm로 커트한 시판의 여과지(ADVANTEC CO., LTD. 제조)에 천자부로부터 누출된 국소 주사제를 흡수시킴과 더불어, 상기 여과지의 질량을 측정하여, 천자부로부터 누출된 국소 주사제의 누출률(%)을 산출했다.
본 시험에 있어서는 상기 누출률이 1.0% 이하인 경우, 당해 국소 주사제는, 목적 부위로부터의 누출이 억제되고 있다고 평가했다. 결과를 표 6에 나타낸다. 표 6에 있어서는, 예를 들어 시료 61에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 시료 61의 행과 10질량%의 열이 겹치는 개소에 나타내어진다. 즉 본 시험에 따르면, 시료 61에 있어서의 누출 억제제를 10질량% 포함하는 국소 주사제의 누출률(%)은, 1.1%였다.
＜고찰＞
표 6에 따르면, 시료 61은, 누출 억제제를 5.0~7.5질량% 포함하는 국소 주사제에 있어서 상기 누출률이 1.0% 이하가 되어, 양호한 누출 억제 효과를 갖는 것이 시사되었다.
〔제7 시험〕
후술하는 각 시료가 국소 주사제로서 양호한 세포 체류성을 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 이하의 시료 71이 실시예이고, 시료 73 및 시료 7A가 비교예이다.
＜유효 성분(세포 현탁액)의 준비＞
정상 인간 섬유아세포(Kurabo Industries Ltd. 제조)를 5.0×105cell/mL가 되도록 플라스틱 용기 중의 PBS 버퍼에 분산시킴으로써 세포 현탁액을 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 71)
상기 플라스틱 용기 중의 세포 현탁액에 대해, 제1 시험에서 제작한 시료 1의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)를, 시료 1의 최종 농도가 20질량%가 되도록 첨가함과 더불어 상기 플라스틱 용기 중에서 상기 세포를 균일하게 분산시킴으로써, 상기 세포의 최종 농도가 2.5×105cell/mL인 국소 주사제(시료 71)를 조제했다.
(시료 73)
상기 플라스틱 용기 중의 세포 현탁액에 대해, 제1 시험에서 제작한 시료 3의 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 20000)를, 시료 3의 최종 농도가 8.0질량%가 되도록 첨가함과 더불어 상기 플라스틱 용기 중에서 상기 세포를 균일하게 분산시키고, 또한 50℃로 가열함으로써, 상기 세포의 최종 농도가 2.5×105cell/mL인 국소 주사제(시료 73)를 조제했다.
(시료 7A)
상기 플라스틱 용기 중의 세포 현탁액에 대해, PBS 버퍼를 더 첨가함과 더불어 상기 플라스틱 용기 중에서 상기 세포를 균일하게 분산시킴으로써, 상기 세포의 최종 농도가 2.5×105cell/mL인 국소 주사제(시료 7A)를 조제했다.
＜세포 체류성 시험＞
상술한 시료 71, 시료 73 및 시료 7A의 국소 주사제의 파장 600nm에 대한 흡광도를, 흡광도계(Thermo Fisher Scientific Inc. 제조)를 이용하여 측정했다. 구체적으로는, 조제 후 0분, 2분, 4분, 6분, 8분 및 10분 경과 시에 있어서의 각 시료의 파장 600nm에 대한 흡광도를 상기 흡광도계로 조사했다. 각 시료의 국소 주사제에 있어서는, 조제 후 0분에 있어서 측정된 흡광도를 세포 체류율 100%로 간주하고, 각 시점에서 측정된 흡광도로부터 세포 체류율을 산출했다. 여기서 세포 체류율이란, 세포가 국소 주사제 중에서 어느 정도 균일하게 분산되어 있는지를 나타내는 지표를 말한다. 상기 흡광도는, 국소 주사제 중에서 세포가 침전하는 등 하여 균일하게 분산되지 않게 될수록 저하된다. 따라서 상기 흡광도가 낮은 값을 나타낼수록, 상기 세포 체류율은 낮아진다. 결과를 표 7에 나타낸다.
＜고찰＞
표 7에 따르면, 시료 71 및 시료 73은, 시료 7A에 비해 세포 체류율이 양호하게 유지되고 있기 때문에, 뛰어난 세포 체류성을 갖는 것이 시사된다. 따라서 시료 71 및 시료 73의 국소 주사제는, 뛰어난 세포 체류성을 갖기 때문에, 효율적으로 유효 성분인 세포를 목적 부위에 송달할 수 있는 것으로 생각된다. 단 시료 73의 국소 주사제는, 중량 평균 분자량 20000의 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 누출 억제제를 이용해서, 졸화를 위해 50℃로 가열하여 조제할 필요가 있으므로, 당해 국소 주사제의 실시는 실제적이지 않기 때문에 부적당하다고 판단했다.
〔제8 시험〕
후술하는 각 시료가 국소 주사제로서 양호한 세포 토출성을 나타내는지 여부를 평가하기 위하여, 다음과 같은 시험을 행했다. 이하의 시료 81이 실시예이고, 시료 83 및 시료 8A가 비교예이다.
＜유효 성분(세포 현탁액)의 준비＞
상기 제7 시험과 같은 요령에 의해, 세포 현탁액을 준비했다.
＜시료(국소 주사제)의 준비＞
(시료 81)
상기 제7 시험에서 조제한 시료 71의 국소 주사제와 같은 요령에 의해, 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 4000)의 농도를 20질량%로 한 국소 주사제(시료 81)를 조제했다.
(시료 83)
상기 제7 시험에서 조제한 시료 73의 국소 주사제와 같은 요령에 의해, 누출 억제제(젤라틴 가수분해물의 중량 평균 분자량: 20000)의 농도를 8.0질량%로 한 국소 주사제(시료 83)를 조제했다.
(시료 8A)
상기 제7 시험에서 조제한 시료 7A의 국소 주사제와 같은 요령에 의해, 플라스틱 용기 중에서 상기 세포를 균일하게 분산시킨 국소 주사제(시료 8A)를 조제했다.
＜세포 토출성 시험＞
상기 시료 81, 시료 83 및 시료 8A에 대해, 다음의 방법을 이용하여 세포 토출성 시험을 실행했다. 즉 상술한 시료 81, 시료 83 및 시료 8A의 국소 주사제 3mL를 각각, 27G의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기(TERUMO Corporation 제조)를 이용하여 흡인함과 더불어, 흡인 직후 및 흡인 후 정치(靜置)하고 10분 경과 시에 당해 주사기로부터 플라스틱 용기로 국소 주사제를 토출했다. 이어서, 당해 국소 주사제를 수용한 플라스틱 용기에 있어서, 각 시료의 파장 600nm에 대한 흡광도를 제7 시험에서 이용한 것과 같은 흡광도계로 조사했다. 각 시료에 관하여, 상기 주사기로 흡인하지 않고 플라스틱 용기에 충전한 국소 주사제에 있어서 측정된 흡광도를 세포 토출률 100%로 간주함으로써, 각 시료의 플라스틱 용기에서 측정된 흡광도로부터 세포 토출률을 산출했다. 여기서 세포 토출률이란, 적절하게 주사 바늘을 통과하여 세포가 어느 정도 외부로 토출되었는지를 나타내는 지표를 의미한다. 상기 흡광도는, 세포가 적절하게 주사 바늘을 통과하여 외부로 토출되지 않을수록, 플라스틱 용기 중의 세포의 밀도가 낮아지므로 저하된다. 따라서 상기 흡광도가 낮은 값을 나타낼수록, 상기 세포 토출률은 낮아진다. 결과를 표 8에 나타낸다. 표 8 중, 상기 주사기로 흡인하지 않고 플라스틱 용기에 충전한 국소 주사제를 「대조」로서 나타냈다.
＜고찰＞
표 8에 따르면, 시료 81 및 시료 83은, 시료 8A에 비해 세포 토출률이 양호하게 유지되고 있기 때문에, 뛰어난 세포 토출성을 갖는 것이 시사된다. 따라서 시료 81 및 시료 83의 국소 주사제는, 뛰어난 세포 토출성을 갖기 때문에, 효율적으로 유효 성분인 세포를 목적 부위에 송달할 수 있는 것으로 생각된다. 단 시료 83의 국소 주사제는, 중량 평균 분자량 20000의 젤라틴 가수분해물로 이루어지는 누출 억제제를 이용해서, 졸화를 위해 50℃로 가열하여 조제할 필요가 있으므로, 당해 국소 주사제의 실시는 실제적이지 않고, 또한 세포에 대한 손상이 염려되므로 부적당하다고 판단했다.
〔제9 시험: 용해성 평가〕
마그네틱 교반기(AS ONE CORPORATION 제조)로 용기 내의 PBS 버퍼 9g을 200rpm으로 교반하면서, 제1 시험에서 제작한 시료 1~시료 3을 각 1g, 상기 용기에 첨가했다. 각 시료를 첨가하고 나서 1, 2, 3분 후에 각각 교반을 멈추고, 상기 용기 내에 침전물이 관찰되는지 여부를 육안으로 확인했다. 그 결과, 시료 1은 2분 후, 시료 2는 1분 후에 각각 용해된 것이 확인되었으나, 시료 3은 3분 후에도 대부분이 침전물로서 남아 있었다. 따라서 시료 1 및 시료 2는, 상온에서도 수계 용매에 비교적 용이하게 용해되기 때문에, 주사제에 배합하기 쉽다고 생각된다.
이상과 같이 본 발명의 실시 형태 및 실시예에 대하여 설명을 행했는데, 상술한 각 실시 형태 및 실시예의 구성을 적절히 조합하는 것도 당초부터 예정하고 있다.
이번에 개시된 실시 형태 및 실시예는 모든 점에서 예시이며 제한적인 것은 아니라고 생각되어야 할 것이다. 본 발명의 범위는 상술한 설명이 아니라 청구의 범위에 의해 나타내어지며, 청구의 범위와 균등한 의미 및 범위 내에서의 모든 변경이 포함되는 것이 의도된다.

Claims (10)

  1. 중량 평균 분자량 5000 이하의 젤라틴 가수분해물을 포함하고,
    상기 젤라틴 가수분해물을 인산 완충 생리 식염수에 용해하여, 상기 젤라틴 가수분해물의 농도를 40질량%로 한 제1 용액의 25℃에서의 점도는, 20mPa·s 이하인, 국소 주사제용의 누출 억제제.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 누출 억제제는, 상기 젤라틴 가수분해물로 이루어지는, 누출 억제제.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 누출 억제제는, 23G 이상 37G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인, 누출 억제제.
  4. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 누출 억제제는, 23G 이상 27G 이하의 외경을 갖는 주사 바늘을 구비한 주사기에 충전되는 국소 주사제용인, 누출 억제제.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 기재된 누출 억제제를 포함하는, 국소 주사제.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고,
    상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 20mPa·s 이하인, 국소 주사제.
  7. 청구항 5에 있어서,
    상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고,
    상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 2mPa·s 이상 10mPa·s 이하인, 국소 주사제.
  8. 청구항 5에 있어서,
    상기 국소 주사제는, 상기 누출 억제제를 5질량% 이상 40질량% 이하 포함하고,
    상기 국소 주사제의 25℃에서의 점도는, 8mPa·s 이상 20mPa·s 이하인, 국소 주사제.
  9. 청구항 5 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 기재된 국소 주사제의 제조 방법으로서,
    상기 누출 억제제와 수계 용매와 유효 성분을 준비하는 공정과,
    상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 1℃ 이상 30℃ 이하에서 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정을 포함하는, 국소 주사제의 제조 방법.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 국소 주사제를 얻는 공정은,
    상기 누출 억제제를 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제1 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제1 주사제 전구체에 상기 유효 성분을 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정, 또는
    상기 유효 성분을 상기 수계 용매에 혼합함으로써 제2 주사제 전구체를 얻은 후, 상기 제2 주사제 전구체에 상기 누출 억제제를 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정, 또는
    상기 누출 억제제 및 상기 유효 성분을 동시에 상기 수계 용매에 혼합함으로써 국소 주사제를 얻는 공정 중 어느 하나인, 국소 주사제의 제조 방법.
KR1020247003686A 2021-11-16 2022-08-31 국소 주사제용의 누출 억제제, 이를 포함하는 국소 주사제, 및 국소 주사제의 제조 방법 KR20240095404A (ko)

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