KR20240095003A - 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 떨림 또는 이상 동작 개선용 식품 조성물과 의약 조성물 - Google Patents
새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 떨림 또는 이상 동작 개선용 식품 조성물과 의약 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240095003A KR20240095003A KR1020230153075A KR20230153075A KR20240095003A KR 20240095003 A KR20240095003 A KR 20240095003A KR 1020230153075 A KR1020230153075 A KR 1020230153075A KR 20230153075 A KR20230153075 A KR 20230153075A KR 20240095003 A KR20240095003 A KR 20240095003A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- tremor
- picoyp
- strain
- kwonp
- aldehyde dehydrogenase
- Prior art date
Links
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 138
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 title claims abstract description 137
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 title claims abstract description 91
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 51
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 37
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 87
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 84
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 82
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 claims description 41
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 31
- KABXUUFDPUOJMW-BYPYZUCNSA-N L-glutamic 5-semialdehyde Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC=O KABXUUFDPUOJMW-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 26
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 claims description 12
- UIUJIQZEACWQSV-UHFFFAOYSA-N succinic semialdehyde Chemical compound OC(=O)CCC=O UIUJIQZEACWQSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- -1 amine compound Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 208000012661 Dyskinesia Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 113
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 63
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 63
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 63
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 62
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 60
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 34
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 34
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 31
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 30
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 29
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 23
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 23
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 23
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 21
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 19
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 18
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 15
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 201000006517 essential tremor Diseases 0.000 description 11
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 11
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 9
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 9
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 101100055268 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) ALD3 gene Proteins 0.000 description 7
- 101100055273 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) ALD5 gene Proteins 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- AZDRQVAHHNSJOQ-XCIZNGPVSA-N trideuterioalumane Chemical compound [2H][Al]([2H])[2H] AZDRQVAHHNSJOQ-XCIZNGPVSA-N 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N Methylglyoxal Chemical compound CC(=O)C=O AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 6
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 5
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 4
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 229960002393 primidone Drugs 0.000 description 4
- DQMZLTXERSFNPB-UHFFFAOYSA-N primidone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NCNC1=O DQMZLTXERSFNPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 4
- IADQVXRMSNIUEL-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxyphenylacetaldehyde Chemical compound OC1=CC=C(CC=O)C=C1O IADQVXRMSNIUEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010022520 Intention tremor Diseases 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 206010071390 Resting tremor Diseases 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHUJOXJDUAROKJ-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarbaldehyde Chemical compound CC1C(C=O)=CNC=C1C=O GHUJOXJDUAROKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N D-tagatose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 2
- AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N O6-alpha-D-Galactopyranosyl-D-galactose Natural products OCC1OC(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)C(O)C(O)C1O AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010069917 Orthostatic tremor Diseases 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 206010072377 Psychogenic tremor Diseases 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 208000029650 alcohol withdrawal Diseases 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 2
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 2
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229940107187 fructooligosaccharide Drugs 0.000 description 2
- FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N fructooligosaccharide Chemical compound OC[C@H]1O[C@@](CO)(OC[C@@]2(OC[C@@]3(OC[C@@]4(OC[C@@]5(OC[C@@]6(OC[C@@]7(OC[C@@]8(OC[C@@]9(OC[C@@]%10(OC[C@@]%11(O[C@H]%12O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]%12O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%11O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%10O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]9O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]8O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]7O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]6O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N gentiobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N methyl alpha-D-mannoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 2
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- JVJFIQYAHPMBBX-FNORWQNLSA-N (E)-4-hydroxynon-2-enal Chemical compound CCCCCC(O)\C=C\C=O JVJFIQYAHPMBBX-FNORWQNLSA-N 0.000 description 1
- HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXZCIYUJYUESMD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-(morpholin-4-ylmethyl)pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CN1CCOCC1 XXZCIYUJYUESMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033816 Aldehyde dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical compound CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015879 Cerebellar disease Diseases 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 206010060891 General symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004867 Hydro-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090001042 Hydro-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108010009513 Mitochondrial Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N N-anilino-N-nitronitramide Chemical compound [N+](=O)([O-])N(NC1=CC=CC=C1)[N+](=O)[O-] WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 206010029216 Nervousness Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010034432 Performance fear Diseases 0.000 description 1
- 206010073211 Postural tremor Diseases 0.000 description 1
- 101710181816 Pyruvate-formate-lyase deactivase Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 101100213970 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ypt3 gene Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000032930 Spastic paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- SFYLHIMXJQGKGZ-RQOWECAXSA-N acetaldehyde (Z)-hydrazone Chemical compound C\C=N/N SFYLHIMXJQGKGZ-RQOWECAXSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000025938 carbohydrate utilization Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003120 clonazepam Drugs 0.000 description 1
- DGBIGWXXNGSACT-UHFFFAOYSA-N clonazepam Chemical compound C12=CC([N+](=O)[O-])=CC=C2NC(=O)CN=C1C1=CC=CC=C1Cl DGBIGWXXNGSACT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 238000012812 general test Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000008185 minitablet Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000011929 mousse Nutrition 0.000 description 1
- 235000021096 natural sweeteners Nutrition 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000024053 secondary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- XWZCREJRXRKIRQ-UHFFFAOYSA-M sodium;heptane-1-sulfonate;hydrate Chemical compound O.[Na+].CCCCCCCS([O-])(=O)=O XWZCREJRXRKIRQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007218 ym medium Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는, 떨림 또는 이상 동작(movement disorder)개선을 위한 식품 그리고 의약 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 서열번호1의 유전자와 98% 이상의 상동성을 갖는 유전자에 의하여, 특히 서열번호2를 포함하는 서열번호 1의 유전자에 의하여 코딩되는 알데히드탈수소효소를 함유하는, 떨림 또는 이상 동작 개선을 위한 식품 그리고 의약 조성물에 대한 것이다. 또한 본 발명은 KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP, KCTC14983BP, KCTC14984BP 그리고 KCTC14985BP으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 또는 이들이 혼합된 효모 용해물(lysate)에 함유된 알데히드탈수소효소를 함유하는, 식품 조성물과 의약 조성물에 대한 것이다.
Description
본 발명은 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는, 떨림(tremor) 또는 이상 동작(movement disorder)개선을 위한 식품 그리고 의약 조성물에 관한 것이다.
보다 구체적으로는, 본 발명은 서열번호1의 유전자와 98% 이상의 상동성을 갖는 유전자에 의하여, 특히 서열번호2를 포함하는 서열번호 1의 유전자에 의하여 코딩되는 알데히드탈수소효소를 함유하는, 떨림 또는 이상 동작 개선을 위한 식품 그리고 의약 조성물에 대한 것이다.
보다 상세하게는, 본 발명은 수탁번호 KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP, KCTC14983BP, KCTC14984BP 그리고 KCTC14985BP으로 이루어지는 군에서 선택되는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)돌연변이 효모 어느 하나 또는 이들이 혼합된 돌연변이 효모의 건조물 또는 용해물(lysate)에 함유된, 서열번호2를 포함하는 서열번호1의 유전자에 의해 코딩되는 알데히드탈수소효소를 함유하는, 떨림 또는 이상 동작 개선용 식품 조성물과 의약 조성물에 대한 것이다.
떨림 또는 이상 동작(movement disorder) 증상(이하, 진전으로 약칭함)은, 손 이외에도 머리, 목, 턱, 혀, 목소리에서도 나타나는 떨림 현상이다. 이러한 진전 증상은 드물지만, 다리, 발 등 전신에서 발생될 수 있다.
진전 증상은, 본태성 진전(essential tremor), 안정시 진전(resting tremor), 파킨슨 진전(parkinsonian tremor), 심인성 진전(psychogenic tremor), 소뇌성 진전(cerebellar tremor), 의도 진전(intention tremor), 알코올 금단에 의한 진전증(alcohol withdrawal tremor), 기립성 진전(orthostatic tremor)으로 분류된다.
본태성 진전(essential tremor) 경우 원인이 아직 규명되지 아니하였다. 50% 이상의 본태성 진전 환자가 가족력이 있다. 본태성 진전은 전연령대에서 발병한다. 특히 65세 이상의 나이에서 발병되는 본태성 진전을, 노인성 진전(Senile tremor)이라고 지칭한다.
안정시 진전(Resting tremor)과 파킨슨씨병 진전(Parkinsonian tremor)은, 파킨슨씨병 환자에게서 나타난다. 이러한 진전은 환자가 가만히 쉬고 있을 때 주로 나타나며, 환자가 목적하는 행동을 진행하는 동안에는 감소되거나 사라진다.
인위적인 진전 또는 심인성 진전(factitious or Psychogenic tremor)은, 히스테리성 진전이라고도 한다. 이러한 진전에서는, 떨림 현상이 나타나고 있는 부위로부터 환자의 관심을 다른 곳으로 돌리면, 떨림이 없어지는 현상을 나타낼 수 있다.
이상 동작이 계속되거나 세밀한 동작 조절이 필요한 경우에 규칙적이지 못한 떨림이 일시적으로 나타나는 경우가 있다. 이를 소뇌성 진전(cerebellar tremor), 의도 진전(intention tremor)하고 한다. 이런 형태의 진전 증상은 대부분 소뇌나 소뇌와의 연결 부분의 이상에 의해 나타나게 된다. 소뇌 기능장애가 있는 환자들은 동작실조나 동작 조절 곤란 등의 이상 동작 증상이 나타난다.
불안 및 초조감, 무대 공포증, 중요한 시합이 있는 경우 등 어떤 이유로 떨림의 진폭이 커져 육안으로 관찰되는 떨림을, 강조된 생리적 진전(Enhanced physiologic tremor)이라고 한다.
이러한 진전 증상들 이외에도, 알코올 금단에 의한 진전(Alcohol withdrawal tremor) 및 기립성 진전(Orthostatic tremor)등이 있다.
또한 음주 과다로 인하여 발생하는 숙취 현상의 원인이 되는 아세트알데히드도, 떨림(tremor) 또는 이상 동작(movement disorder) 증상을 야기한다. 축구나 농구완 같은 격렬한 운동 경기 도중에 운동 선수들의 체내에 급격하게 증가하는 말론디알데히드는, 통증을 수반하는 근육 경련과 같은 떨림(tremor) 또는 이상 동작(movement disorder) 증상을 야기한다.
수전증은 일반적으로 손이 떨리는 진전(tremor) 증상이 나타나는 경우를 말한다. 수전증에는, 안정시 떨림(resting tremor), 자세 떨림(postural tremor), 운동 떨림(Kinetic tremor), 작업 관련 떨림(task-specific tremor) 및 의도 떨림(intention tremor)이 포함된다.
수전증은 신경의 기능적 이상으로 인해 발생하는 가장 흔한 동작 장애 질환 중 하나이다. 수전증은 전 세계 인구의 약 1%에 영향을 미치며, 발생률은 나이가 들수록 증가한다.
수전증의 주요 증상은 활동 떨림이며, 자발적인 활동 중에 발생하는 떨림이다. 수전증은 노화가 진행되면서 점진적으로 발전하여, 결국 식사 및 운전 등과 같은 일상 활동에 어려움을 초래할 뿐 아니라, 삶의 질을 저해하는 문제를 초래한다.
진전(떨림) 환자를 진찰하고 증상을 객관적으로 평가하기 위해 기본적인 신경학적 진찰 외에 몇 가지 방법이 사용된다. 학술적인 목적으로 FTM (Fahn-Tolosa-Marin scale)방법이 널리 사용되며[9], 일상생활장애 평가도 시행한다.
환자에게 아르키메데스 나선(archimedes spiral)을 그리게 하거나 글씨체와 글씨쓰는 모습을 관찰하여,동작 떨림을 객관적으로 평가할 수 있다. 가속도 측정 이용하여 떨림 증상을 객관적으로 측정할 수 있다. 대부분의 환자에게서 떨림 증상에 대한 자세한 육안 관찰이 진단에 중요하다.
본 명세서에의 "진전"이라고 표현된 단어의 의미는, 이상에서 열거한 각종 떨림(tremor) 또는 이상 동작(movement disorder) 증상을 모두 포함한다.
본태성 진전(떨림)의 치료에는 증상을 호전시키기 위한 약물이 사용된다. 가장 널리 사용되고 있는 약물은 프로프라놀롤(propranolol)과 프리미돈(primidone)이다. 프로프라놀롤은 비 선택적인 beta-adrenergic antagonist이며, 프리미돈은 항전간제로 개발된 약물이다. 이들은 본태성 떨림에 억제 효과를 나타낸다.
프리미돈은 프로프라놀롤과 함께 사용할 때, 단독요법 보다 더 큰 치료 효과를 나타낸다. 클로나제팜(clonazepam)은 당뇨와 천식 환자들 또는 프리미돈 투여가 어려운 환자들에게 적합한 진전(떨림) 치료 약물이다.
본태성 떨림은 흔한 증상이고 치료를 통해 호전될 수 있다. 그러나, 많은 환자들이 본태성 떨림이 나이 때문에 생기는 현상으로 인식하여 치료를 받지 아니한다. 본태성 떨림은 매우 다양한 원인에 의해 발생하기 때문에, 떨림의 원인을 정확하게 진단해야 한다.
이런 본태성 떨림을 포함한 알츠하이머병(AD) 및 파킨슨병(PD)과 같은 신경 퇴행성 질환들의 정확한 원인은 아직 정확하게 규명되지 아니하였다. 최근 연구들에 따르면, 신경퇴행성 질환의 주된 요인은 신경 세포의 산화 스트레스 증가인 것으로 추정되고 있다.
산화 스트레스는 반응성 알데히드(Reactive aldehyde)의 세포내 축적에 기인한다. 이러한 반응성 알데히드는, 글루타민으로부터 유래되는 Glutamate semialdehyde(GSA), Succini semialdehyde(SSA), 또는 에탄올로부터 생성되는 아세트알데히드와 같은 내인성 알데히드가 포함된다.
이러한 반응성 알데히드들은 산화 스트레스를 증가시키고, 체내의 주요 단백질, DNA, 지질 등과 결합하여 염증 반응을 유발한다. 인체의 산화 스트레스와 만성 염증은 인체의 노화를 촉진시킨다. 이러한 노화에 따라 떨림 또는 이상 동작을 야기하는 신경퇴행성 질환이 발생하기도 한다.
인체에는 이러한 내인성 알데히드를 분해할 수 있는 약19종류의 이상의 ALDH(aldehyde dehydrogenase)가 존재한다. 이러한 ALDH들 중에서 미토콘드리아 ALDH2는 내인성 알데히드 분해 과정에서 중요한 역할을 수행한다.
ALDH는 이러한 내인성 알데히드를 제거하는 역할을 담당하여 산화 스트레스로부터 세포를 보호한다. ALDH는 활성산소 소거제 역할을 통해 세포를 안정화시키고 활성 알데히드의 체내 축적을 예방한다. 결과적으로, ALDH는 신경 세포 사멸을 방어하여 신경 퇴행에 따른 떨림 또는 이상 동작 발생을 억제한다.
본 발명의 식품 조성물과 의약 조성물이 예방 또는 치료하고자 하는 질환인 진전 증상의 원인으로서, 내인성 아세트알데히드, 말론디알데히드, 신경전달 물질로 기능하는 글루타메이트(Glu, Glutamate)로 부터 유래되는 Glutamate semialdehyde(GSA)와 Succinic semialdehyde(SSA)가 주목되고 있다.
GABA는 전구체인 glutamate으로부터 체내에서 생성된다[17]. MAOB(monoamine oxidase B)의 작용에 의해 GABA aldehyde로 변환된다. [13]. GABA aldehyde (Succinic semialdehyde, 이하 SSA로 약칭함)는 인체내의 ALDH의 작용에 의해 숙신산(Succinic acid)으로 산화된다.
한편, 경직성하반신 마비(spacitic paraplegia)증상의 발현 과정에서 나타나는 떨림(tremor) 증상은, 글루타메이트(Glutamate)의 대사체인 글루타메이트세미알데히드(GSA, Glutamate-5-semialdehyde)의 관련이 있다.
인체의 알데히드탈수소효소(ALDH) 발현이 줄어들거나 돌연변이가 발생하는 경우, 인체내에서 아세트알데히드, 말론디알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA)와 Succinic semialdehyde(SSA)의 분해가 지연된다. 그 결과 인체의 산화스트레스가 증가하고 운동 신경의 이상을 초래하여, 진전(떨림) 증상 또는 이상 동작(movement disorder) 증상이 나타난다.
1. Haubenberger, D., & Hallett, M. (2018). Essential Tremor. New England Journal of Medicine, 378(19), 1802-1810. doi:10.1056/nejmcp1707928
2. Louis, E. D. (2005). Essential tremor. The Lancet Neurology, 4(2), 100-110. doi:10.1016/s1474-4422(05)00991-9
3. Abboud, H.; Ahmed, A.; Fernandez, H. H., Essential tremor: choosing the right management plan for your patient. Cleve Clin J Med 2011, 78, (12), 821-8.
4. Vilarino-Gell, C.; Ross, O. A.; Wider, C.; Jasinska-Myga, B.; Cobb, S. A.; Soto-Ortolaza, A. I.; Kachergus, J. M.; Keeling, B. H.; Dachsel, J. C.; Melrose, H. L., LINGO1 rs9652490 is associated with essential tremor and Parkinson disease. Parkinsonism & related disorders 2010, 16, (2), 109-111.
5. Louis, E. D.; Ferreira, J. J., How common is the most common adult movement disorder? Update on the worldwide prevalence of essential tremor. Movement Disorders 2010, 25, (5), 534-541.
6. Lorenz, D.; Poremba, C.; Papengut, F.; Schreiber, S.; Deuschl, G., The psychosocial burden of essential tremor in an outpatient and a community-based cohort. European Journal of Neurology 2011, 18, (7), 972-979.
7. Dogu, O.; Louis, E. D.; Sevim, S.; Kaleagasi, H.; Aral, M., Clinical characteristics of essential tremor in Mersin, Turkey: A population-based door-to-door study. Journal of neurology 2005, 252, 570-574.
8. Louis, E. D.; Barnes, L.; Albert, S. M.; Cote, L.; Schneier, F. R.; Pullman, S. L.; Yu, Q., Correlates of functional disability in essential tremor. Mov Disord 2001, 16, (5), 914-20.
9. Fahn, S.; Tolosa, E.; Marn, C., Clinical rating scale for tremor. Parkinson’s disease and movement disorders 1993, 2, 271-280.
10. Deuschl, G.; Raethjen, J.; Hellriegel, H.; Elble, R., Treatment of patients with essential tremor. Lancet Neurol 2011, 10, (2), 148-61.
11. Zesiewicz, T. A.; Elble, R. J.; Louis, E. D.; Gronseth, G. S.; Ondo, W. G.; Dewey, R. B., Jr.; Okun, M. S.; Sullivan, K. L.; Weiner, W. J., Evidence-based guideline update: treatment of essential tremor: report of the Quality Standards subcommittee of the American Academy of Neurology. Neurology 2011, 77, (19), 1752-5.
12. Young, R. R.; Growdon, J. H.; Shahani, B. T., Beta-adrenergic mechanisms in action tremor. N Engl J Med 1975, 293, (19), 950-3.
13. Heo, J. Y.; Nam, M. H.; Yoon, H. H.; Kim, J.; Hwang, Y. J.; Won, W.; Woo, D. H.; Lee, J. A.; Park, H. J.; Jo, S.; Lee, M. J.; Kim, S.; Shim, J. E.; Jang, D. P.; Kim, K. I.; Huh, S. H.; Jeong, J. Y.; Kowall, N. W.; Lee, J.; Im, H.; Park, J. H.; Jang, B. K.; Park, K. D.; Lee, H. J.; Shin, H.; Cho, I. J.; Hwang, E. M.; Kim, Y.; Kim, H. Y.; Oh, S. J.; Lee, S. E.; Paek, S. H.; Yoon, J. H.; Jin, B. K.; Kweon, G. R.; Shim, I.; Hwang, O.; Ryu, H.; Jeon, S. R.; Lee, C. J., Aberrant Tonic Inhibition of Dopaminergic Neuronal Activity Causes Motor Symptoms in Animal Models of Parkinson's Disease. Curr Biol 2020, 30, (2), 276-291 e9.
14. Raethjen, J.; Deuschl, G., Tremor. Curr Opin Neurol 2009, 22, (4), 400-5.
15.Abboud, H.; Ahmed, A.; Fernandez, H. H., Essential tremor: choosing the right management plan for your patient. Cleve Clin J Med 2011, 78, (12), 821-8.
16. Jo, S.; Yarishkin, O.; Hwang, Y. J.; Chun, Y. E.; Park, M.; Woo, D. H.; Bae, J. Y.; Kim, T.; Lee, J.; Chun, H.; Park, H. J.; Lee, D. Y.; Hong, J.; Kim, H. Y.; Oh, S. J.; Park, S. J.; Lee, H.; Yoon, B. E.; Kim, Y.; Jeong, Y.; Shim, I.; Bae, Y. C.; Cho, J.; Kowall, N. W.; Ryu, H.; Hwang, E.; Kim, D.; Lee, C. J., GABA from reactive astrocytes impairs memory in mouse models of Alzheimer's disease. Nat Med 2014, 20, (8), 886-96.
17. Nam, M. H.; Cho, J.; Kwon, D. H.; Park, J. Y.; Woo, J.; Lee, J. M.; Lee, S.; Ko, H. Y.; Won, W.; Kim, R. G.; Song, H.; Oh, S. J.; Choi, J. W.; Park, K. D.; Park, E. K.; Jung, H.; Kim, H. S.; Lee, M. C.; Yun, M.; Lee, C. J.; Kim, H. I., Excessive Astrocytic GABA Causes Cortical Hypometabolism and Impedes Functional Recovery after Subcortical Stroke. Cell Rep 2020, 32, (3), 107975.
18. Woo, J.; Min, J. O.; Kang, D. S.; Kim, Y. S.; Jung, G. H.; Park, H. J.; Kim, S.; An, H.; Kwon, J.; Kim, J.; Shim, I.; Kim, H. G.; Lee, C. J.; Yoon, B. E., Control of motor coordination by astrocytic tonic GABA release through modulation of excitation/inhibition balance in cerebellum. Proc Natl Acad Sci U S A 2018, 115, (19), 5004-5009.
19. Ishibashi, M.; Egawa, K.; Fukuda, A., Diverse Actions of Astrocytes in GABAergic Signaling. Int J Mol Sci 2019, 20, (12).
20. Yoon, B. E.; Lee, C. J., GABA as a rising gliotransmitter. Front Neural Circuits 2014, 8, 141.
21. Edenberg, H. J., The genetics of alcohol metabolism: role of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase variants. Alcohol Res Health 2007, 30, (1), 5-13.
23. Keung, W. M.; Vallee, B. L., Daidzin and its antidipsotropic analogs inhibit serotonin and dopamine metabolism in isolated mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A 1998, 95, (5), 2198-203.
이상과 같은 다양한 선행 연구를 통하여, 아세트알데히드, 말론디알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 또는 Succini semialdehyde(SSA)가 체내에 증가하면서, 진전(떨림) 또는 이상 동작(movement disorder) 증상이 발생하는 것으로 규명되고 있다.
따라서 본 발명은, 아세트알데히드, 말론디알데히드, 글루타메이트로부터 유래되는 내인성 알데히드인 Glutamate Semialdehyde(GSA) 그리고 Succini semialdehyde(SSA)를 산(acid) 화합물로 신속하게 전환시키는, 알데히드탈수소효소를 함유하는 식품 조성물과 의약 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
즉, 본 발명은, 인체내의 알데히드 탈수소 효소(ALDH)의 작용이 완전하지 아니하여, 아세트알데히드, 말론디알데히드, Glutamate semialdehyde (GSA), Succini semialdehyde(SSA)의 산화와 배출 과정 이상 때문에 발생하는 다양한 진전 증상을 억제하는 식품 조성물이나 의약 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 서열번호 1의 유전자에 의해 코딩되는 알데히드탈수소 효소(ALDH)를 함유하는, 진전 억제용 식품 조성물이나 의약 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP의 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 효모들로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합물의 용해물의 건조 분말(이하, KARC로 약칭함)을 함유하는, 진전 억제용 식품 조성물이나 의약 조성물을 제공하는 것이다.
이상과 같은 본 발명의 목적은, KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP의 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 돌연변이 효모 어느 하나 또는 이들이 혼합된 돌연변이 효모 용해물의 건조 분말을 제공함으로써 달성된다.
본 발명의 또 다른 목적은, 아세트알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA), Succini semialdehyde(SSA)를 산(acid)화합물로 전환시키는, KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP의 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 돌연변이 효모들 중에서 선택되는 어느 하나의 건조물 또는 용해물(lysate)의 혼합한 것(KARC)을 함유하는, 진전 억제용 식품 조성물이나 의약 조성물을 제공함으로써 달성된다.
[도 1, 2]은 생체 내인성 알데히드의 생성 및 분해 과정을 나타내는 화학식이다.
알코올 섭취, 의약품 복용, 스트레스 증가 등에 의해 생체내에서 생성된 다양한 종류의 내인성 에탄올(R1-C2H4-OH)들은 알코올탈수소효소(Alcohol dehydrogenase, ADH) 및 알데히드탈수소효소(ALDH)의 효소 반응으로 독성 물질인 아세트알데히드(R1-CH2-CHO)를 거쳐 최종적으로 아세트산(R1-CH2-CO2H)의 형태로 분해되며, 이를 알코올 대사 혹은 아세트알데히드 무독화대사라 한다.
내인성 모노아민(R2-C2H4-NH2)은 마오(MAO) 효소에 의해 알데히드(R2-CH2-CHO)로 변환된 후, 알코올 대사와 같은 방식으로 알데히드탈수소효소 및 알코올탈수소효소반응 등에 의해 아세트산(R2-CH2-CO2H)으로 무독화 분해가 이뤄진다.
[도 3]은 감마아미노부틸산(GABA)의 분해과정을 나타내는 화학식이다.
모노아민 신경물질인 가바(GABA)는 2개의 탄소사슬과 1개의 아민(R-CH2-CH2-NH2)으로 이루어진 구조적 특징을 가지며, 마오(monoamine oxidase, MAO) 효소에 의해 산화되어 내인성 알데히드(-CHO)인 Succinic semialdehyde (SSA)로 전환되어 주변의 단백질과 결합, 변성을 유도하는 등 세포 독소로 작용한다.
이러한 독성 알데히드들은 알데히드탈수소효소(ALDH)에 의해 산화되어 무독화되며, 최종적으로 산(-CO2H) 물질인 숙신산(Succinic acid)로 전환된다.
[도 4]는 본 발명의 KARC의 인체내 아세트알데히드 분해능력을 보여주는 그래프이다.
[도 5]는 본 발명의 KARC에 의한 인체내 말론디알데히드 분해 능력을 보여주는 그래프이다.
[도 6]은 KARC에 의한 생체내 아세트알데히드 분해능력을 보여주는 그래프이다. 이 결과는 인체내의 혈중 아세트알데히드 감소[도 4]와 혈중 말론디알데히드 감소[도 5] 확인 시험에서, 본 발명의 KARC 복용에 의한 숙취 및 피로와 심혈관질환 생체마커인 아세트알데히드와 말론디알데히드 감소 효과가 확인되었고, [도 6]에서는 의약품 복용 등에 의해 산화스트레스가 높아진 상태에서 본 발명의 KARC 복용 후, 산화스트레스와 활성산소의 생체마커인 말론디알데히드가 낮아졌다. 이는 음주 및 피로 등에 의한 산화스트레스를 낮추어 손 떨림을 포함하는 진전 증상 또는 이상 동작을 억제할 수 있음을 보여준다.[도 4, 5, 6]
[도 7]과 [도 8]에서는 의약품 복용 등에 의해 산화 스트레스의 혈중 말론디알데히드를 증가시킨 동물 실험에서, KARC가 산화스트레스와 활성산소의 생체마커인 말론디알데히드가 감소되는 결과를 보여준다. 본 발명의 KARC는 혈중 말론디알데히드를 감소시켜 생체내 산화 스트레스를 낮추어 주기 때문에, 진전 증상 완화 효과를 나타낸다.
[도 9]는 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-1 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 10]은 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-2 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 11]은 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-3 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 12]는 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 13]은 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP-01 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 14]는 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP-02 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 9, 10, 11, 12, 13, 14]에서는 위장의 소화과정과 유사한 조건인 1<pH<5의 및 약 90분의 조건에서 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01,PicoYP-2를 경구 투여하였을때, ALDH 효소 활성의 변화를 측정하였다. 음식물의 섭취시에 관찰되는 산성조건인 pH = 5 에서 ALDH 효소 활성이 최소 37.29 unit/g 에서 최대 52.24% 유지되어 음식물과 함께 KARC 의 경구 투여시 효소 활성이 유지 됨을 확인하였다.
[도 15]은 본 발명의 KwonP-1 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 16]는 본 발명의 KwonP-2 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 17]는 본 발명의 KwonP-3 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 18]은 본 발명의 PicoYP 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 19]은 본 발명의 PicoYP-01 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 20]은 본 발명의 PicoYP-02 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 15, 16, 17, 18, 19, 20]에서는 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-01을 각각 동딜 조건인 5L 배양조에서 YPD 배지릉 사용하여 30℃, 200 rpm에서 48시간 동안 진행하였다. 각각의 균들의 성장곡선(OD660nm)과 ALDH 효소 활성을 Type strain 과 비교하였을 때, ALDH 효소 활성은 최소 10.5배 에서 최대 18.75배 더 높았다. PicoYP-01는 ALDH 활성은 52.68 unit/g 으로 제일 높았으며 KwonP-3에서 29.5 unit/g의로 가장 낮았다.
[도 21]는 증류수와 SSA 혼합물의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 22]은 본 발명의 KARC와 SSA의 혼합물을 1시간 동안 37˚C에서 유지한 이후의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 23]는 본 발명의 KARC와 SSA의 혼합물을 3시간 동안 37˚C에서 유지한 이후의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 21, 22, 23] 에서, 37℃에서 KARC 를 처리하였을 때, 1시간 동안 55% 감소하였고 3시간 동안 74.9%가 감소하였다. KARC가 GABA가 대사될때 만들어내는 알데히드 SSA를 산화시켰다.
알코올 섭취, 의약품 복용, 스트레스 증가 등에 의해 생체내에서 생성된 다양한 종류의 내인성 에탄올(R1-C2H4-OH)들은 알코올탈수소효소(Alcohol dehydrogenase, ADH) 및 알데히드탈수소효소(ALDH)의 효소 반응으로 독성 물질인 아세트알데히드(R1-CH2-CHO)를 거쳐 최종적으로 아세트산(R1-CH2-CO2H)의 형태로 분해되며, 이를 알코올 대사 혹은 아세트알데히드 무독화대사라 한다.
내인성 모노아민(R2-C2H4-NH2)은 마오(MAO) 효소에 의해 알데히드(R2-CH2-CHO)로 변환된 후, 알코올 대사와 같은 방식으로 알데히드탈수소효소 및 알코올탈수소효소반응 등에 의해 아세트산(R2-CH2-CO2H)으로 무독화 분해가 이뤄진다.
[도 3]은 감마아미노부틸산(GABA)의 분해과정을 나타내는 화학식이다.
모노아민 신경물질인 가바(GABA)는 2개의 탄소사슬과 1개의 아민(R-CH2-CH2-NH2)으로 이루어진 구조적 특징을 가지며, 마오(monoamine oxidase, MAO) 효소에 의해 산화되어 내인성 알데히드(-CHO)인 Succinic semialdehyde (SSA)로 전환되어 주변의 단백질과 결합, 변성을 유도하는 등 세포 독소로 작용한다.
이러한 독성 알데히드들은 알데히드탈수소효소(ALDH)에 의해 산화되어 무독화되며, 최종적으로 산(-CO2H) 물질인 숙신산(Succinic acid)로 전환된다.
[도 4]는 본 발명의 KARC의 인체내 아세트알데히드 분해능력을 보여주는 그래프이다.
[도 5]는 본 발명의 KARC에 의한 인체내 말론디알데히드 분해 능력을 보여주는 그래프이다.
[도 6]은 KARC에 의한 생체내 아세트알데히드 분해능력을 보여주는 그래프이다. 이 결과는 인체내의 혈중 아세트알데히드 감소[도 4]와 혈중 말론디알데히드 감소[도 5] 확인 시험에서, 본 발명의 KARC 복용에 의한 숙취 및 피로와 심혈관질환 생체마커인 아세트알데히드와 말론디알데히드 감소 효과가 확인되었고, [도 6]에서는 의약품 복용 등에 의해 산화스트레스가 높아진 상태에서 본 발명의 KARC 복용 후, 산화스트레스와 활성산소의 생체마커인 말론디알데히드가 낮아졌다. 이는 음주 및 피로 등에 의한 산화스트레스를 낮추어 손 떨림을 포함하는 진전 증상 또는 이상 동작을 억제할 수 있음을 보여준다.[도 4, 5, 6]
[도 7]과 [도 8]에서는 의약품 복용 등에 의해 산화 스트레스의 혈중 말론디알데히드를 증가시킨 동물 실험에서, KARC가 산화스트레스와 활성산소의 생체마커인 말론디알데히드가 감소되는 결과를 보여준다. 본 발명의 KARC는 혈중 말론디알데히드를 감소시켜 생체내 산화 스트레스를 낮추어 주기 때문에, 진전 증상 완화 효과를 나타낸다.
[도 9]는 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-1 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 10]은 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-2 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 11]은 본 발명의 KARC에 포함되는 KwonP-3 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 12]는 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 13]은 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP-01 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 14]는 본 발명의 KARC에 포함되는 PicoYP-02 균주를 경구투여하였을 때 효소활성의 변화이다.
[도 9, 10, 11, 12, 13, 14]에서는 위장의 소화과정과 유사한 조건인 1<pH<5의 및 약 90분의 조건에서 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01,PicoYP-2를 경구 투여하였을때, ALDH 효소 활성의 변화를 측정하였다. 음식물의 섭취시에 관찰되는 산성조건인 pH = 5 에서 ALDH 효소 활성이 최소 37.29 unit/g 에서 최대 52.24% 유지되어 음식물과 함께 KARC 의 경구 투여시 효소 활성이 유지 됨을 확인하였다.
[도 15]은 본 발명의 KwonP-1 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 16]는 본 발명의 KwonP-2 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 17]는 본 발명의 KwonP-3 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 18]은 본 발명의 PicoYP 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 19]은 본 발명의 PicoYP-01 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 20]은 본 발명의 PicoYP-02 균주를 5L 발효조에 배양하였을 때 성장곡선 및 효소활성을 보여준다.
[도 15, 16, 17, 18, 19, 20]에서는 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-01을 각각 동딜 조건인 5L 배양조에서 YPD 배지릉 사용하여 30℃, 200 rpm에서 48시간 동안 진행하였다. 각각의 균들의 성장곡선(OD660nm)과 ALDH 효소 활성을 Type strain 과 비교하였을 때, ALDH 효소 활성은 최소 10.5배 에서 최대 18.75배 더 높았다. PicoYP-01는 ALDH 활성은 52.68 unit/g 으로 제일 높았으며 KwonP-3에서 29.5 unit/g의로 가장 낮았다.
[도 21]는 증류수와 SSA 혼합물의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 22]은 본 발명의 KARC와 SSA의 혼합물을 1시간 동안 37˚C에서 유지한 이후의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 23]는 본 발명의 KARC와 SSA의 혼합물을 3시간 동안 37˚C에서 유지한 이후의 HPLC 스펙트럼이다.
[도 21, 22, 23] 에서, 37℃에서 KARC 를 처리하였을 때, 1시간 동안 55% 감소하였고 3시간 동안 74.9%가 감소하였다. KARC가 GABA가 대사될때 만들어내는 알데히드 SSA를 산화시켰다.
이하 본 발명의 돌연변이 효모 제조 과정과 돌연변이 효모에 함유된 신규한 알데히드탈수소 효소(ALDH)가 아세트알데히드, 말론디알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 또는 Succini semialdehyde(SSA)를 분해하여, 진전(떨림) 또는 이상 동작(movement disorder)증상을 완화시키는 실시예들을 제시하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 이러한 실시예들은 본 발명의 권리범위를 이러한 예시로만 한정하고자 하는 것은 아니다.
따라서 이하에서 설명하는 실시예들의 내용을 일부 변경하더라도, 이 기술 분야의 통상의 지식을 가진자라면 본 발명의 균등 범위에서 본 발명의 다양한 변형 실시가 가능하다.
[실시예 1]
돌연변이를 진행할 야생 효모 모균주(parent strain) 선별
본 발명에서는 한국의 전통주인 국산 막걸리에 0.9% NaCl 용액을 혼합하여 막걸리 현탁액을 제조하였다. 막걸리 현탁액을 200rpm으로 1시간 동안 교반하였다. 효모 야생균주가 포함된 상층액을 YPD(yeast extract peptone dextrose broth) 배지로 희석하였다. 희석액은 원액의 10-6 배율이 되도록 제조하였다.
YPD 한천 배지에 희석액을 도말하였다. 한천 배지는 30℃, 호기성 조건에서 1주일간 정치배양을 하였다. 사카로마이세스 세레비지에는 콜로니의 형태학적 특징, YM 배지에서의 성장 특징, 현미경 관찰을 기준으로 1차 선별하였다.
선별된 사카로마이세스 세레비지에는 알데히드탈수효소 활성과 글루타치온 함량을 측정하였다. 알데히드탈수소효소 활성과 글루타치온 생산량을 기준으로 모균주(parent strain)를 선별하였다.
1-1: 알데히드탈수소효소 측정
아세트알데히드는 DNPH(Dinitrophenylhydrazine)와 반응하여 아세트알데히드-하이드라존(Ach-DNPH) 화합물을 형성하였다. Ach-DNPH 화합물은 C18 column이 장착된 HPLC에 의해 360nm에서 검출하였다. 검출된 Ach-DNPH 화합물의 양을 통해 알데히드탈수소효소(ALDH)가 분해시키는 반응으로 감소된 알데히드의 양을 정량하였다.
효소 반응은 reaction mixture[50mM potassium phosphate buffer(pH 8.0), 1.5mM acetaldehyde and 3mM NADP+] 990ul와 효모 lysate 10ul를 혼합하여 30℃에서 진행하였다. 효소 반응이 종료된 혼합액은 10mM DNPH 50 ul를 첨가하여 Ach-DNPH 형성을 유도하였다. Ach-DNPH 형성은 22℃에서 1시간동안 진행되었다.
Ach-DNPH 형성은 3M Sodium acetate(pH 9)의 첨가로 종료되었다. 2배 부피의 acetonitrile을 첨가하여 형성된 Ach-DNPH 화합물을 분리하였다. 분리된 Ach-DNPH 화합물(in ACN)을 HPLC에 주입하여 분석하였다.
Ach-DNPH 화합물의 농도는 C18 컬럼에 1ml/min의 속도로 이동상(acetonitril, water)을 전개하는 조건으로 HPLC를 세팅하여 360nm 파장에서 분석하였다. HPLC 결과로 얻어진 크로마토그램의 면적 값은 aldehyde-DNPH(Sigma-Aldrich)의 물질 표준곡선을 이용해 변환하여 Ach-DNPH 화합물의 농도를 정량하였다. 분당 감소된 Ach-DNPH의 농도 1mM을 알데히드탈수소효소의 1 unit으로 계산하였다. 알데히드탈수소효소의 활성은 Unit/mg-protein 통일하였다.
1-2: 글루타치온 측정 방법
사카로마이세스 세레비지에 배양액 1ml을 원심분리하여 균체를 수확하였다. 균체에 1ml의 물을 첨가하여 현탁액을 제조하였다. 현탁액을 2시간 동안 85℃에서 1,000rpm으로 교반하여 글루타치온을 추출하였다. 현탁액을 원심분리하여 균체를 제거하고, 상등액을 0.22 μm 필터로 여과하여 글루타치온이 포함된 시료를 확보하였다.
시료 내 글루타치온의 농도는 C18 컬럼을 장착한 HPLC(Shimazu LC-20AD)로 분석하였다. 글루타치온의 농도는 1ml/min의 속도로 이동상(2.02 g/L Sodium 1-heptanesulfonate monohydrate, 6.8 g/L Potassium dihydrogen phosphate, pH 3.0, 메탄올 혼합)을 전개하는 조건으로 210nm 파장에서 분석하였다. HPLC 결과로 얻어진 크로마토그램의 면적 값은 글루타치온의 표준곡선을 이용해 분석하였다.
한국산 막걸리에서 얻어진 200종의 서로 다른 효모를 대상으로 알데히드탈수소효소 활성과 글루타치온 함량을 분석하였다. 표 1에 정리한 10종의 효모는 다른 효모 대비 알데히드탈수소효소 활성 혹은 글루타치온 생성 능력이 높았다.
Yeast #97의 알데히드탈수소효소 활성은 0.10 Unit/mg-protein으로 전체에서 2번째로 높았다. Yeast #97의 글루타치온 함량은 0.42%로 전체에서 가장 높았다. Yeast #97를 모균주(parent strain)으로 선정하여 돌연변이 유도 절차를 수행하였다.
[실시예 2] 본 발명의 돌연변이 과정에 사용된 모 균주의 동정
야생형 모균주(Yeast #97, Wild-type yeast)의 정확한 균종을 확인하기 위해 동정을 수행하였다. 효모의 단일 집락을 YPD 한천 배지 전체에 도말하여 DNA 추출에 필요한 충분한 균을 확보하였다. HiGeneTM Genomic DNA prep kit(BIOFACT Co., Ltd, Daejeon, Korea)를 제조사의 사용지침에 따라 수행하여 DNA를 추출하였다.
효모의 ITS region rRNA 유전자를 증폭하기 위해 효모의 chromosomal DNA를 ITS5(forward) 및 ITS4(reverse)를 primer로 이용하여 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하였다. PCR 결과물의 염기서열을 분석하였다.
Bioedit 프로그램을 통해 모 균주의 DNA 염기서열을 분리하였다. PCR 결과물의 reverse strand를 reverse complete process 기능을 이용하여 상보적인 염기서열로 변환하였다.
Clustal X 프로그램을 통해, forward strand의 염기서열과 reverse strand에 상보적인 염기서열이 일치함을 확인하였다. 상기 실험 과정을 통해 확인된 서열정보와 일치하는 모균주를 미국 국립생명공학정보센터(NCBI)에서 제공하는 BLAST 데이터베이스를 이용하여 동정(확인)하였다. 동정 결과, 모균주의 ITS rRNA는 사카로마이세스 세레비지에와 100% 일치함을 확인하였다.
[실시예 3] 알데히드탈수소효소 생산 능력이 우수한 돌연변이 후보 균주의 선별
본 발명의 야생형(wild-type) 사카로마이세스 세레비지에 모균주(parent strain)에 대한 돌연변이 유도 과정은, 미합중국 특허출원 제 17/176,365호에 기재된 방법에 따라 진행하였다.
효모 모균주에 돌연변이를 유도하기 위해 알데히드탈수소효소와 글루타치온을 모두 생산하는 야생 효모 균주를 에틸메탄설포네이트(EMS) 또는 니트로소구아니딘(NGD)으로 처리하였다. 돌연변이가 유도된 효모 균주를 다양한 농도의 메틸글리옥살에 노출시켰다. 메틸글리옥살에 적응력이 우수한 돌연변이 균주를 선택하였다. 선택된 효모 균주를 다양한 농도의 라이신에 노출시켰다. 라이신에 적응력이 우수한 돌연변이 균주를 선택하였다. 메틸글리옥살과 라이신에 적응력이 뛰어난 돌연변이 균주 30종을 확보하였다. 확보된 30종의 돌연변이 균주들의 성장곡선, ALDH 및 ADH 효소 활성, 조효소 함량, 글루타치온 함량을 기준으로 선별을 진행하였다.
3-1: 성장곡선(Growth characteristics)
사카로마이세스 세레비지에는 크랩트리 효과(Crabtree effect)가 positive인 미생물로서, 호기 조건에서 성장과 동시에 에탄올을 생성한다. 높은 수율로 효모 균을 성장시키기 위해서는, 높은 에탄올 저항성을 가진 사카로마이세스 세레비지에가 필요하다.
0, 5, 7, 10%의 각기 다른 농도의 에탄올이 함유된 YPD 배지와 OD660nm 값이 1이 되도록 농도를 조정한 사카로마이세스 세레비지에 배양액을 99:1로 혼합하였다. 효모가 혼합된 YPD배지는 30℃, 200rpm에서 진탕배양하였다. 돌연변이 균주의 성장곡선은 48시간 동안 3시간 간격으로 측정하였다. 돌연변이 균주의 성장특성은 유도기(lag phase)의 시간, 대수 증식기(exponential phase)의 비 증식속도(specific growth rate, OD660nm/hr), 최종 성장 정도(OD660nm)를 기준으로 평가하였다.
YPD배지의 에탄올 농도가 증가함에 따라 유도기(lag phase)의 시간은 증가하였으며, 최종 성장정도와 비증식속도는 감소하였다. 저농도(에탄올 5%) 및 고농도(에탄올 10%)에서 돌연변이 균주들의 최종 성장 정도를 상대비교한 결과, 9종의 돌연변이 균주에서 저농동에서의 성장 대비 고농도에서의 성장이 50% 유지 되었다. 다른 균주와 구별되는 9종의 돌연변이 균주들의 성장 특성은 고농도 에탄올에서의 짧은 유도기, 높은 비 증식속도였다.
# | 5% ethanol | 7% ethanol | 10% ethanol | 선별 | ||||||
hr | OD660nm/hr | OD660nm | hr | OD660nm/hr | OD660nm | hr | OD660nm/hr | OD660nm | ||
1 | 9 | 0.6477 | 22.2 | 15 | 0.5210 | 16.5 | 24 | 0.1968 | 4.81 | |
2 | 12 | 0.3675 | 12.34 | 24 | 0.1835 | 4.11 | 36 | 0.0140 | 0.212 | |
3 | 9 | 0.4285 | 15.8 | 15 | 0.2888 | 9.12 | 24 | 0.0880 | 2.16 | |
4 | 15 | 0.9683 | 25.3 | 15 | 0.8815 | 25.3 | 15 | 0.4085 | 12.4 | K-1 |
5 | 12 | 0.7368 | 14.12 | 15 | 0.7337 | 12.23 | 21 | 0.2205 | 5.68 | |
6 | 12 | 0.9683 | 9 | 15 | 0.8815 | 5.44 | 33 | 0.6269 | 0.448 | |
7 | 24 | 0.9664 | 22.3 | 27 | 0.8467 | 16.8 | 30 | 0.2673 | 5.17 | |
8 | 6 | 0.7268 | 23 | 9 | 0.6222 | 21.5 | 15 | 0.3778 | 12.11 | K-2 |
9 | 6 | 0.8433 | 22.12 | 9 | 0.7484 | 25.34 | 15 | 0.3005 | 9.41 | |
10 | 3 | 0.4880 | 14.5 | 18 | 0.2013 | 6.12 | 24 | 0.0808 | 2.14 | |
11 | 3 | 0.2766 | 11.15 | 9 | 0.2223 | 8.22 | 24 | 0.0988 | 2.41 | |
12 | 6 | 0.7149 | 21.68 | 9 | 0.5969 | 20.52 | 17 | 0.3317 | 11.4 | K-3 |
13 | 9 | 0.6106 | 22.4 | 12 | 0.4906 | 16.4 | 15 | 0.1813 | 5.68 | |
14 | 12 | 0.6136 | 20.6 | 24 | 0.3060 | 6.85 | 36 | 0.0278 | 0.41 | |
15 | 12 | 0.4759 | 15.45 | 18 | 0.1751 | 5.41 | 33 | 0.0707 | 0.896 | |
16 | 9 | 0.8533 | 23.8 | 15 | 0.8065 | 20.9 | 21 | 0.4953 | 12.1 | K-4 |
17 | 21 | 0.6016 | 14.85 | 24 | 0.3955 | 8.45 | 24 | 0.0547 | 1.26 | |
18 | 12 | 0.7766 | 19.25 | 18 | 0.4437 | 12.4 | 24 | 0.1219 | 2.85 | |
19 | 3 | 0.5050 | 14.75 | 9 | 0.4463 | 14.6 | 21 | 0.2521 | 6.23 | |
20 | 27 | 0.0666 | 1.41 | 36 | 0.0278 | 0.36 | - | - | - | |
21 | 3 | 0.6044 | 22.14 | 9 | 0.6051 | 20.64 | 12 | 0.3247 | 11.1 | K-5 |
22 | 24 | 0.5798 | 13.4 | 27 | 0.5080 | 10.1 | 30 | 0.1604 | 3.1 | |
23 | 15 | 0.6455 | 16.9 | 15 | 0.5877 | 16.9 | 15 | 0.2003 | 6.3 | |
24 | 3 | 0.7269 | 20.4 | 6 | 0.6375 | 18.6 | 12 | 0.3522 | 10.5 | K-6 |
25 | 9 | 0.4858 | 16.7 | 15 | 0.3908 | 12.4 | 24 | 0.1476 | 3.6 | |
26 | 6 | 0.6559 | 17.2 | 9 | 0.5821 | 19.7 | 15 | 0.3177 | 9.6 | K-7 |
27 | 9 | 0.2857 | 10.5 | 15 | 0.1925 | 6.1 | 24 | 0.0587 | 1.4 | |
28 | 12 | 0.6315 | 12.1 | 15 | 0.6289 | 10.5 | 21 | 0.1890 | 4.9 | |
29 | 6 | 0.5451 | 17.3 | 9 | 0.4667 | 16.1 | 15 | 0.2834 | 9.1 | K-8 |
30 | 9 | 0.7826 | 21.8 | 9 | 0.6614 | 19.9 | 21 | 0.3267 | 10.6 | K-9 |
3-2:알코올탈수소효소와 알데히드탈수소효소 활성 측정
알코올탈수소효소(ADH)의 활성은 990μl reaction mixture[50mM potassium phosphate buffer(pH 8.0), 2mM NAD+, 1% ethanol]에 10μl의 본 발명의 효모 용해물(Lysate)를 첨가하여 측정하였다. 알데히드탈수소효소(ALDH)의 활성은 990μl reaction mixture[50mM potassium phosphate buffer(pH 8.0), 3mM NAD+, 1.5mM acetaldehyde]에 10μl의 본 발명의 효모 용해물(Lysate)를 첨가하여 측정하였다. 알코올탈수소효소 및 알데히드탈수소효소의 효소 반응은 30℃에서 5분간 진행하였으며, 효소 반응 결과 생성된 NAD(P)H의 농도는 340nm에서의 흡광도를 통해 측정하였다.
본 발명에서 선별된 돌연변이 균주 9종(K-1 내지 K-9)의 효소 활성을 측정하였다. 돌연변이 균주의 알코올탈수소효소 활성은 최소 382.69unit/g, 최대 975.29unit/g이었다. 돌연변이 균주의 효소 활성은 type-strain(대조용 기준 효모, KCTC7296)의 효소 활성 대비 최소 5.1, 최대 13.1 배 증가하였다. 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소 활성은 최소 15.23 unit/g, 최대 72.16 unit/g 이었다. 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소 활성은 type-strain의 효소 활성 대비 최소 5.3, 최대 24.9 배 증가하였다.
Type-strain과 비교하여, 6종의 돌연변이 균주(K-1, 4, 6, 7, 8, 9)는 ADH와 ALDH 효소 활성 증가 비율이 유사하였다. Type-strain과 비교하여, 3종의 돌연변이 균주(K-2, 3, 5)의 ALDH 효소 활성 증가율은 각각 18.3, 23.2, 24.9배 높았다. Type-strain과 비교하여, 3종의 돌연변이 균주(K-2, 3, 5)의 ADH 효소 활성 증가율은 각각 9.7, 11.6, 13.1배 높았다. 3종의 돌연변이 균주(K-2, 3, 5)의 ALDH 효소 활성 증가율은 ADH 효소 활성 증가율 보다 2배 높았다.
본 발명자는 알데히드탈수소효소(ALDH) 활성 증가에 특화된 3종의 돌연변이 균주(K-2, 3, 5)를 각각 PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02로 명명하였다. 3종의 신규 돌연변이 균주를 한국생명공학연구원의 생물자원센터에 기탁하여 KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP의 기탁번호를 각각 부여받았다.
3-3: 본 발명의 돌연변이 균주들의 조효소(NAD, NADP) 생성 능력 비교
NADH/NAD quantification kit 및 NADPH/NADP quantification kit를 이용하여, 본 발명의 돌연변이 균주 용해물(lysate)의 NADtotal 및 NADPtotal 함량을 측정하였다. NAD(P) cycling buffer와 NAD(P) cycling enzyme mix를 이용하여 시료 내 NAD(P)를 NAD(P)H로 전환하였다. NAD(P) developer를 이용하여 발색 반응을 유도하였다. 발색 반응 결과는 450nm에서의 흡광도로 측정하였다. 측정된 흡광도는 표준 곡선에 대입하여 효모 용해물 내에 존재하는 NAD(P)total의 함량을 계산하였다.
본 발명에서 선별된 돌연변이 균주 9종(K-1 내지 K-9)의 조효소 함량을 측정하였다. 돌연변이 균주의 NADtotal 함량은 최소 126 nmole/g, 최대 195 nmole/g 이었다. 돌연변이 균주의 NADtotal 함량은 type-strain 대비 최소 7.3배, 최대 10.8배 증가하였다. 돌연변이 균주의 NADPtotal 함량은 최소 2.4 nmole/g, 최대 5.8 nmole/g 이었다. 돌연변이 균주의 NADPtotal 함량은 type-strain 대비 최소 11.4배, 최대 27.6배 증가하였다.
6종의 돌연변이 균주(K-1, 4, 6, 7, 8, 9)의 NADPtotal 함량 증가율은 NADtotal 함량 증가율 대비 2배 미만이었다. 본 발명의 신규 돌연변이 균주 3종(PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)의 NADPtotal 함량 증가율은 각각 25.7, 22.9, 27.6배였다. 본 발명의 신규 돌연변이 균주 3종의 NADtotal 함량 증가율은 각각 10.8, 9.9, 11.3배였다. 본 발명의 신규 돌연변이 균주 3종의 NADPtotal 증가율은 NADtotal 증가율 대비 2배 이상이었다.
3-4: 돌연변이 사카로마이세스 세레비지에의 글루타치온 생산력 비교
본 발명의 돌연변이 균주 9종의 글루타치온 함량은 실시예 1-2와 동일한 방법으로 측정하였다. 돌연변이 균주의 글루타치온 함량은 최저 0.85%, 최고 1.05%였다. 돌연변이 균주의 글루타치온 함량은 type strain 대비 최저 2.7, 최고 3.3배 증가하였다. 본 발명의 신규 돌연변이 균주 3종(PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)은 나머지 효모 대비 알데히드탈수소효소의 활성 증가율과 조효소의 함량 증가율이 높았다.
본 발명의 신규 돌연변이 효모 3종(PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)은 기존의 기탁 균주(Kwon P-1, Kwon P-2, Kwon P-3)와 글루타치온 생산 능력이 비슷했다. 반면, 본 발명의 신규 돌연변이 효모 3종은 기존의 기탁 균주 대비 ADH 및 ALDH 효소 활성, 조효소 함량이 유의미하게 증가하였다.
Strain | Enzyme activity* | Coenzyme concentration** | GSH(%) | Name | ||||
ADH | ALDH | NADtotal | NADPtotal | |||||
Type-strain | 74.6 | 2.9 | 17.2 | 0.21 | 0.32 | 대조용균주 | KCTC7296 | |
K-1 | 542.26 | 23.11 | 169.8 | 4.1 | 1.00 | KwonP-1 | KCTC13925BP | |
K-2 | 725.11 | 53.1 | 185 | 5.4 | 0.86 | PicoYP | KCTC14983BP | |
K-3 | 866.41 | 67.4 | 171 | 4.8 | 0.85 | PicoYP-01 | KCTC14984BP | |
K-4 | 625.11 | 31.4 | 176 | 5.1 | 0.98 | KwonP-2 | KCTC14122BP | |
K-5 | 975.29 | 72.16 | 195 | 5.8 | 0.89 | PicoYP-02 | KCTC14985BP | |
K-6 | 458.88 | 16.21 | 154 | 3.1 | 1.05 | - | ||
K-7 | 382.69 | 15.23 | 126 | 2.4 | 1.00 | - | ||
K-8 | 422.17 | 16.19 | 142 | 2.9 | 0.99 | - | ||
K-9 | 533.54 | 20.68 | 167 | 3.2 | 1.00 | KwonP-3 | KCTC14123BP |
대조용기준 균주 Type-strain 대비 증가율(배)을 [표 3]에 나타내었다.
Strain | Enzyme activity* | Coenzyme concentration** | GSH(%) | Name | |||
AD.H | ALDH | NADtotal | NADPtotal | ||||
Type-strain | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | - | KCTC7296 |
K-1 | 7.3 | 8.0 | 9.9 | 19.5 | 3.1 | KwonP-1 | KCTC13925BP |
K-2 | 9.7 | 18.3 | 10.8 | 25.7 | 2.7 | PicoYP | KCTC14983BP |
K-3 | 11.6 | 23.2 | 9.9 | 22.9 | 2.7 | PicoYP-01 | KCTC14984BP |
K-4 | 8.4 | 10.8 | 10.2 | 17.1 | 3.1 | KwonP-2 | KCTC14122BP |
K-5 | 13.1 | 24.9 | 11.3 | 27.6 | 2.8 | PicoYP-02 | KCTC14985BP |
K-6 | 6.2 | 5.6 | 9.0 | 14.8 | 3.3 | - | |
K-7 | 5.1 | 5.3 | 7.3 | 11.4 | 3.1 | - | |
K-8 | 5.7 | 5.6 | 8.3 | 13.8 | 3.1 | - | |
K-9 | 7.2 | 7.1 | 9.7 | 15.2 | 3.1 | KwonP-3 | KCTC14123BP |
[실시예 4] 돌연변이 균주들의 탄소원 이용 정도 측정(API test)비교
본 발명자가 2020년 2월18일에 한국특허 출원하였던 "ALDH와 글루타치온 동시 생산을 위한 돌연변이 균주 3종" (KwonP-1:KCTC13925BP, KwonP-2:KCTC14122BP, KwonP-3:14123BP)들이 성장에 이용하는 각종 탄소원을 측정하였다. 대조용 기준 효모 균주(KCTC7296)가 성장에 이용하는 각종 탄소원을 측정하였다. 본 발명의 ALDH 생산 능력 극대화를 위한 신규 돌연변이 균주 3종 (PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)들이 성장에 이용하는 각종 탄소원을 측정하였다.
각 균주의 당 이용에 관한 특성 및 신규성은 API 50 CHL kit(API systems, BioMreus, SA, France)로 분석하였다.
8ml YPD 배지를 15ml conical tube에 분주하였다. 7종의 효모를 서로 다른 conical tube에 접종하였다.
30℃, 200rpm의 조건에서 24시간 배양하여, 급속성장단계(대수증식기, exponential growth phase) 구간에서 대수 증식기의 각각의 돌연변이 균주를 분리 및 확보하였다. 배지 내 탄소원의 영향을 제거하기 위해 원심분리기를 이용하여 효모를 3회 세척하였다. API 50 CHL medium을 이용하여 2McFarland 농도의 효모 현탁액을 제조하였다. 제조된 효모 현탁액을 strip의 튜브에 채웠다. 현탁액을 분주한 strip을 30℃에서 24시간 배양하였다.
API test에 이용되는 API 50 CHL medium은 보라색이었다. 에너지 대사에 의해 산이 생성되면 API 50 CHL medium은 파란색, 초록색을 거쳐 최종적으로 노란색으로 변하였다. API 50 CHL medium의 색 변화를 기준으로 탄소원의 사용 여부를 판단하였다.
탄소원 사용 정도 및 효모의 성장 정도를 +의 개수로 표시하여 기록하였다(보라색: X, 파란색: +, 초록색: ++, 노란색: +++).
실험에 이용된 7종의 효모는 모두 19종의 탄소원(L-arabinose, ribose, D-xylose, D-galactose, D-glucose, D-fructose, D-mannose, mannitol, N-acetyl-glucosamine, arbutin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, raffinose, gentiobiose)을 에너지원으로 이용하였다..
Rhamnose는 3종의 효모(KwonP-1, PicoYP-01, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. Sorbitol은 4종의 효모(KwonP-2, KwonP-3, PicoYP-01, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. α-methyl-D-mannoside는 4종의 효모(type-strain, KwonP-1, KwonP-2, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. Amygdalin은 6종의 효모(KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. D-turanose는 4종의 효모(type-strain, KwonP-1, KwonP-3, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. D-tagatose는 3종의 효모(type-strain, KwonP-3, PicoYP-02)가 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다. Gluconate는 type-strain 만이 성장을 위한 탄소원으로 이용하였다.
알코올성 탄소원에 해당하는 mannitol과 sorbitol는 효모의 성장에 유의한 영향을 주었다. 본 발명의 신규 돌연변이 균주 3종(PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)은 성장에 이용하는 당의 종류가 나머지 4종의 효모(type-strain, KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3)와 달랐다. 돌연변이 균주 간에도 선호하는 당의 종류에 차이가 있었다.
대조용 기준 균주 | KwonP-1 | KwonP-2 | KwonP-3 | Pico YP |
Pico YP-01 |
Pico YP-02 |
|
L-Arabinose | ++ | +++ | ++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
Ribose | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
D-Xylose | + | ++ | + | + | ++ | ++ | + |
D-Galactose | + | +++ | ++ | ++ | +++ | ++ | ++ |
D-Glucose | ++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ++ | ++ |
D-Fructose | ++ | +++ | ++ | ++ | +++ | ++ | ++ |
D-Mannose | ++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ++ | ++ |
Rhamnose | + | ++ | ++ | ||||
Mannitol | + | + | + | + | ++ | +++ | +++ |
Sorbitol | + | + | +++ | +++ | |||
α-Methyl-D-Mannoside | +++ | + | + | +++ | |||
N-Acetyl-Glucosamine | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
Amygdalin | + | + | + | ++ | ++ | ++ | |
Arbutin | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
Salicin | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
Cellobiose | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
Maltose | ++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
Lactose | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ |
Melibiose | ++ | + | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
Sucrose | ++ | +++ | ++ | ++ | +++ | +++ | ++ |
Trehalose | ++ | + | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ |
Raffinose | ++ | + | + | ++ | ++ | ++ | +++ |
Gentiobiose | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ |
D-Turanose | + | + | + | + | |||
D-Tagatose | ++ | + | ++ | ||||
Gluconate | + |
[실시예 5] 위산에서 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소 활성 변화
KARC가 경구로 투여될 때, 장내에서 효소활성이 유지되기 위해서는 펩신(pepsin)과 같은 강력한 단백질 분해 효소를 분비하는 위산에 의해 효소 활성이 파괴되지 않고, 안전하게 통과되어야 한다.
위에서 음식물을 섭취하였을 때의 환경을 조성하기 위해 인공 위액(Artificial gastric juice, pH 1.17)을 NaOH 용액을 이용해 pH 3과 pH 5로 제조하였다. 본 발명의 KARC 1g에 인공위액(pH 1.17, 3, 5) 7ml을 넣고 36.5℃에서 5, 30, 60, 90분 동안 반응시켰다. 반응이 종료된 다음 sodium hydroxide (NaOH) 용액을 이용해 반응 혼합물을 pH 7로 중화하여 최종 부피가 10ml인 혼합물을 제조하였다. 본 발명의 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소(ALDH) 활성을 측정하였다.
pH 1.17의 위액과 본 발명의 돌연변이 균주를 반응시킨 결과, 반응 5분 후에 알데히드탈수소효소(ALDH) 활성은 대조군 대비 평균 92.88% 이상 감소하였다. 반응시간이 길어질수록 알데히드탈수소효소(ALDH) 활성은 감소하여 반응 90분 후에는 대조군 대비 평균 98.89% 감소하였다. pH 3 및 pH 5에서는 좀 더 높은 효소 활성이 유지되었으며, 반응 90분 후 pH 3에서는 대조군 대비 평균 96.66%, pH 5에서는 56.83% 감소하였다.
보다 상세하게는, 위액(pH 1.17)과 KwonP-1(KCTC13925BP)을 반응시켰을 때, 반응5분 후 알데히드탈수소효소(ALDH) 활성은 대조군 대비 90.94% 감소하여, 5.57 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소의 활성은 감소하였고, 반응 90분 후에는 대조군 대비 98.57% 감소하여 0.88 unit/g으로 측정되었다[도 9]. pH 3 및 pH 5에서는 효소의 활성이 pH 1.17보다 더 높게 유지되었다. 반응시간 90분 후 효소의 활성은 pH 3에서는 대조군에 비하여 96.66% 감소한 2.05 unit/g, pH 5에서는 대조군에 비하여 47.76% 감소한 32.12 unit/g으로 측정되었다.
위액(pH 1.17)과 KwonP-2(KCTC14122BP)을 반응시킨 결과, 효소 반응 5분 후 ALDH의 활성은 대조군에 비하여 91.18% 감소하였고, 5.43 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소 활성은 감소하였고, 반응 90분 후에는 대조군에 비하여 98.81% 감소하여 0.73 unit/g으로 측정되었다[도 10]. pH 3 및 pH 5에서는 pH 1.17보다 더 높은 효소 활성이 유지되었다. 반응시간 90분 후 효소 활성은 pH 3에서는 대조군에 비하여 97.62% 감소한 1.47 unit/g, pH 5에서는 대조군에 비하여 56.11% 감소한 26.99 unit/g으로 측정되었다.
위액(pH 1.17)과 KwonP-3(KCTC14123BP)을 반응시킨 결과, 반응 5분 후 ALDH 활성은 대조군 대비 89.99% 감소하여, 6.16 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소의 활성은 감소하였고, 반응 90분 후에는 대조군 대비 97.85% 감소하여 1.32 unit/g으로 측정되었다[도 11]. pH 3 및 pH 5에서는 pH 1.17보다 더 높은 효소 활성이 유지되었다. 반응시간 90분 후 효소의 활성은 pH 3에서는 대조군 대비 92.61% 감소한 4.55 unit/g, pH 5에서는 대조군 대비 62.31% 감소한 23.18 unit/g으로 측정되었다.
위액(pH 1.17)과 PicoYP(KCTC14983BP)을 반응시킨 결과, 반응 5분 후 ALDH 활성은 대조군 대비 92.84% 감소하여, 4.40 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소 활성은 감소하였고, 반응 90분 후에는 대조군 대비 98.33% 감소하여 1.03 unit/g으로 측정되었다[도 12]. pH 3 및 pH 5에서는 더 높은 효소 활성이 유지되었다. 반응시간 90분 후 효소의 활성은 pH 3에서는 대조군 대비 96.66% 감소한 2.05 unit/g, pH 5에서는 대조군 대비 53.97% 감소한 28.31 unit/g으로 측정되었다.
위액(pH 1.17)과 PicoYP-01(KCTC14984BP)을 반응시킬 때, 반응 5분 후 ALDH 활성은 대조군 대비 95.71% 감소하여, 2.64 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소 활성은 감소하였고, 반응 90분 후에 효소 활성은 대조군 대비 99.76% 감소하여 0.15 unit/g으로 측정되었다[도 13]. pH 3 및 pH 5에서는 위액보다 더 높은 효소 활성이 유지되었다. 반응시간 90분 후 효소 활성은 pH 3에서는 대조군 대비 98.21% 감소한 1.10 unit/g, pH 5에서는 대조군 대비 58.74% 감소한 25.38 unit/g으로 측정되었다.
위액(pH 1.17)과 PicoYP-02(KCTC14985BP)을 반응시킬 때, 반응 5분 경과한 후 ALDH 활성은 대조군 대비 96.66% 감소하여, 2.05 unit/g으로 측정되었다. 반응시간이 길어질수록 효소 활성은 감소하여, 반응 90분 후에는 효소 활성이 관찰되지 않았다[도 14]. pH 3 및 pH 5에서는 위액에서보다 더 높은 효소 활성이 유지되었다. 반응시간이 90분 경과한 후 효소 활성은 pH 3에서는 대조군 대비 98.21% 감소한 1.10 unit/g, pH 5에서는 대조군 대비 62.08% 감소한 23.32 unit/g으로 측정되었다.
pH 1.17은 극단적인 수치로, 음식물을 섭취할 때 분비되는 위액 원액의 pH이다. 위액 원액과 음식물이 위에서 섞이면 pH가 3에서 5로 올라가기 때문에 pH 1.17이 될 가능성은 희박하다. 그럼에도 본 발명의 돌연변이 균주에 함유된 ALDH는 극단적인 조건인 pH 1.17에서도 효소활성이 남아있었다.
이상과 같은 결과에서, 본 발명의 신규한 돌연변이 효모 균주(PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)가 극단적인 pH 1.17에서 5분 동안 반응했을 때는, 효소활성이 심하게 92-97% 파괴된다. 하지만 효소활성이 2-5 unit 남는데, 이는 장내에서 충분히 작용할 수 있는 값이다. pH 3, 5에서는 상당량의 효소활성이 잔존하였다. 본 발명의 돌연변이 균주 유래 효소를 경구 투여용으로 사용할 수 있다는 결론을 얻었다.
[실시예 6] 5L 배양조 배양 시험
YPD 액체배지(2% peptone, 1% yeast extract, 2% glucose)에 효모를 접종하고 30℃, 200 rpm에서 18시간 동안 1차 종균 배양을 진행하였다. YPD 액체배지 1980 ml에 종균 배양액 20ml을 접종하여 5L 배양조 배양을 하였다. 5L 배양조 배양은 30℃, 200 rpm에서 48시간 동안 진행하였다. 배양 중 배양액 10ml을 채취하여 균의 성장(OD660nm) 및 효소 활성의 변화를 측정하였다.
KwonP-1(KCTC13925BP)의 최종 성장(OD660nm)는 134.4 이었다. KwonP-1의 최종 성장은 type-strain(KCTC7296) 대비 4.35% 높았다. KwonP-1의 성장곡선의 특징 및 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain과 유사하였다. KwonP-1의 ALDH 활성은 33.6 unit/g 이었다. KwonP-1의 ALDH 활성은 type-strain 대비 11.96배 높았다[도 15].
KwonP-2(KCTC14122BP)의 최종 성장(OD660nm)는 133.8 이었다. KwonP-2의 최종 성장은 type-strain 대비 3.88% 높았다. KwonP-2의 성장은 type-strain 보다 일찍 종료되었다. KwonP-2의 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain 대비 14.8% 높았다. KwonP-2의 ALDH 활성은 31.5 unit/g 이었다. KwonP-2의 ALDH 활성은 type-strain 대비 11.21배 높았다[도 16].
KwonP-3(KCTC14123BP)의 최종 성장(OD660nm)는 134.1 이었다. KwonP-3의 최종 성장은 type-strain 대비 4.12% 높았다. KwonP-3의 성장은 type-strain 보다 일찍 종료되었다. KwonP-3의 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain 대비 6.08% 높았다. KwonP-3의 ALDH 활성은 29.5 unit/g 이었다. KwonP-3의 ALDH 활성은 type-strain 대비 10.5 배 높았다[도 17].
PicoYP(KCTC14983BP)의 최종 성장(OD660nm)는 123.8 이었다. PicoYP의 최종 성장은 type-strain 대비 3.88% 높았다. PicoYP의 성장곡선의 특징은 type-strain과 유사하였다. PicoYP의 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain 대비 6.22% 높았다. PicoYP의 ALDH 활성은 44.2 unit/g 이었다. PicoYP의 ALDH 활성은 type-strain 대비 15.73 배 높았다[도 18].
PicoYP-01(KCTC14984BP)의 최종 성장(OD660nm)는 126.9이었다. PicoYP-01의 최종 성장은 type-strain 대비 1.47% 높았다. PicoYP-01의 성장곡선의 특징은 type-strain과 유사하였다. PicoYP-01의 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain 대비 2.14% 높았다. PicoYP-01의 ALDH 활성은 47.1 unit/g 이었다. PicoYP-01의 ALDH 활성은 type-strain 대비 16.76 배 높았다[도 19].
PicoYP-02(KCTC14985BP)의 최종 성장(OD660nm)는 148.1 이었다. PicoYP-02의 최종 성장은 type-strain 대비 14.99% 높았다. PicoYP-02의 성장곡선은 type-strain 대비 상단에 위치하였다. PicoYP-02의 비성장속도(OD660nm/hr)는 type-strain 대비 9.64% 낮았다. PicoYP-02의 ALDH 활성은 52.68 unit/g 이었다. PicoYP-02의 ALDH 활성은 type-strain 대비 18.75 배 높았다[도 20].
[실시예 7] 본 발명의 돌연변이 균주 용해물(KARC)의 제조
본 발명의 돌연변이 효소 용해물에 포함된 효소(ALDH, ADH)의 보존을 위해 단백질 분해효소(protease)를 제거 및 억제하였다. 본 발명의 돌연변이 효소 용해물에 포함된 효소(ALDH, ADH)의 보존을 위해 세포 구조물(cell debris)을 제거하였다. 그 후 돌연변이 균주들의 건조물 또는 용해물(lysate)을 혼합하여, 본 발명의 KARC 조성물을 제조하였다.
본 발명의 돌연변이 균주와 이를 배양한 배지에는 효모의 대사산물과 효모가 분비하는 단백질 분해효소 등 다양한 물질이 존재하였다. 효모에 존재하는 알데히드탈수소효소 및 조효소, 글루타티온을 추출 및 보존하기 위해서는 효모 균 외부의 물질을 충분히 제거할 필요가 있으며, 이를 위해 세척 과정을 수행하였다. 돌연변이 균주의 세척은 50ml conical tube에 40ml씩 배양액을 분주하고, 13,000rpm에서 15분간 원심분리 후 상등액을 제거하여 진행하였다.
원심분리 결과, 효모 균들이 뭉쳐서 생성되는 펠렛(pellet) 내부에 잔여 배지가 남아있었다. 30ml 정제수를 첨가한 후, vortexing을 통해 펠렛을 충분히 풀어주었고, 이전의 과정을 3회 반복하여 잔여 배지를 충분히 제거하였다.
효모의 에탄올 저항성은 최대 13%으로 알려져 있으며, 높은 농도의 에탄올에 노출되면 효모 균이 사멸하게 된다. 세척된 펠렛을 효모 균의 사멸을 유도하기 위해 20% 에탄올 용액 10ml을 이용하여 충분히 풀어주었다. 그 후 에탄올에 풀어준 펠렛을 100rpm에서 30분간 교반하여 효모 균의 사멸 공정을 진행하였다. 반응시간이 종료되면 30ml 정제수를 첨가하여 에탄올 농도를 5%까지 낮추었다. 이전의 세척 과정을 3회 반복하여 에탄올을 충분히 제거하였다.
효모 세포 내에 존재하는 단백질 분해효소의 분해작용으로부터 ALDH 및 ADH를 보존하기 위해 단백질 분해효소 억제제(Pierce protease inhibitor mini tablets, EDTA-free, Thermo Scientific) 2 tablet을 녹인 1X PBS 10ml을 준비하였다. 위 용액을 세척이 종료된 효모 균 펠렛에 첨가하여 충분히 풀어주었다.
본 발명에서 제조한 돌연변이 균주의 용해물을 제조하고자 유리 구슬(Glass beads) 4g을 투여 및 교반하여 효모 세포벽을 파괴하였다. 그 후 효모 균의 파쇄 과정에서 발생하는 열에 의한 효소의 변성을 방지하기 위해 30초 vortexing, 30초 ice incubation을 6회 반복하여 수행하였다.
효모 균의 세포벽 파쇄가 완료된 후에 100mM potassium phosphate buffer 10ml을 첨가하고 3-5 초 동안 vortexing 하여 혼합하였다. 13,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 효모 세포벽 등의 세포 구조물과 유리 구슬을 제거하였다. 이후 상등액을 0.2μm 필터(Minisartⓡ Syringe Filter, Sartorius, Goettingen, Germany)로 여과하여, 본 발명의 KARC 조성물을 제조하였다.
본 발명의 돌연변이 효소 용해물에 포함된 효소(ALDH, ADH)의 보존을 위하여 세포 내 단백질 분해효소(protease)를 제거 및 억제하고, 세포벽 등의 세포 구조물(cell debris)을 제거하였다. 이를 통해 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02의 돌연변이 균주들 중에서 선택되는 어느 하나의 용해물(lysate) 또는 이들이 자유로운 비율로 혼합된 본 발명의 KARC 조성물을 제조하였다(표 6).
KwonP-1로부터 제조한 KARC1의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 461.4 unit/g, 28.6 unit/g으로 나타났다. KwonP-1로부터 제조한 KARC1의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 176.2 μmole/g, 5.1 μmole/g으로 나타났다. KwonP-1로부터 제조한 KARC1의 GSH 함량은 0.98 wt%로 나타났다.
KwonP-2로부터 제조한 KARC2의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 482.1 unit/g, 29.8 unit/g으로 나타났다. KwonP-2로부터 제조한 KARC2의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 175.4 μmole/g, 5.2 μmole/g으로 나타났다. KwonP-2로부터 제조한 KARC2의 GSH는 0.96 wt%로 나타났다.
KwonP-3로부터 제조한 KARC3의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 477.5 unit/g, 28.1 unit/g으로 나타났다. KwonP-3로부터 제조한 KARC3의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 177.2 μmole/g, 5.1 μmole/g으로 나타났다. KwonP-3로부터 제조한 KARC3의 GSH는 1.00 wt%로 나타났다.
PicoYP로부터 제조한 KARC4의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 586.8 unit/g, 33.8 unit/g으로 나타났다. PicoYP로부터 제조한 KARC4의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 184.3 μmole/g, 5.7 μmole/g으로 나타났다. PicoYP로부터 제조한 KARC4의 GSH는 0.84 wt%로 나타났다.
PicoYP-01로부터 제조한 KARC5의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 621.6 unit/g, 38.2 unit/g으로 나타났다. PicoYP-01로부터 제조한 KARC5의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 186.9 μmole/g, 5.6 μmole/g으로 나타났다. PicoYP-01로부터 제조한 KARC5의 GSH는 0.83 wt%로 나타났다.
PicoYP-02로부터 제조한 KARC6의 ADH, ALDH 효소 활성은 각각 664.1 unit/g, 41.6 unit/g으로 나타났다. PicoYP-02로부터 제조한 KARC6의 조효소인 NADtotal 및 NADPtotal 함량은 각각 195.0 μmole/g, 5.8 μmole/g으로 나타났다. PicoYP-02로부터 제조한 KARC6의 GSH는 0.88 wt%로 나타났다.
본 발명의 KARC는 본 발명자가 기탁한 돌연변이 균주 6종의 용해물의 혼합물이었다. KARC의 알코올탈수소효소(ADH, ADH) 및 알데히드탈수소효소(ALDH, ALDH) 활성은 각각 547.6 unit/g, 33.1 unit/g으로 나타났다. KARC 내 조효소인 NADtotal, NADPtotal의 함량은 각각 180.4 μmole/g, 5.4 μmole/g으로 나타났다. KARC의 글루타티온(glutathione, GSH) 함량은 0.84 wt%로 나타났다.
이 결과를 통해 본 발명의 KARC의 알데히드 분해 능력이 용해물(lysate) 제조 과정에서 유지됨을 확인할 수 있었다. 또한 높은 알데히드 탈수소 반응을 촉진하는 능력으로 인하여, 인체 내에서 생성되는 HNE, MDA, 3,4-dihydroxyphenyl acetaldehyde(DOPAL) 등의 독성 알데히드를 제거하는 능력을 나타내었다.
명칭 | 균주 | ADH (Unit/g) |
ALDH (Unit/g) |
NADtotal (nmole/g) |
NADPtotal (nmole/g) |
GSH (wt %) |
KARC1 | KwonP-1 | 461.4 | 28.6 | 176.2 | 5.1 | 0.98 |
KARC2 | KwonP-2 | 482.1 | 29.8 | 175.4 | 5.2 | 0.96 |
KARC3 | KwonP-3 | 477.5 | 28.1 | 177.2 | 5.1 | 1.00 |
KARC4 | PicoYP | 586.8 | 33.8 | 184.3 | 5.7 | 0.84 |
KARC5 | PicoYP-01 | 621.6 | 38.2 | 186.9 | 5.6 | 0.83 |
KARC6 | PicoYP-02 | 664.1 | 41.6 | 195.0 | 5.8 | 0.88 |
KARC | 전체 평균 | 547.6 | 33.1 | 180.4 | 5.4 | 0.91 |
[실시예 8] 본 발명의 돌연변이 균주가 함유하는 알데히드탈수소효소의 염기서열 분석
본 발명의 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소와 돌연변이 이전의 모균주의 알데히드탈수소효소의 유전자 염기서열의 차이를 확인하였다. 모균주 및 KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02의 돌연변이 균주들의 유전자 염기서열 분석(Whole genome sequencing)를 진행하였다. 돌연변이 균주들의 순수한 콜로니를 고체 배지 전체에 도말하여 균을 확보하였다. 확보된 균의 유전자 염기서열 분석을 진행하였다.
효모 균주들이 각각 생산하는 알데히드탈수소효소(ALD, Yeast aldehyde dehydrogenases) 효소 중, ALD2(서열번호3번), ALD3(서열번호4번)는 13번 염색체(chromosome)에 연속적으로 연결되어 위치하고 있었다. ALD2(서열번호3번), ALD3(서열번호4번) 사이에는 689개 염기서열로 구성된 non-coding region이 존재하였다.
효모 균들의 ALD2, ALD3는 같은 유전체에 연속되게 존재하였다. ALD2와 ALD3는 각각의 알데히드탈수소효소를 코딩하고 있었다. ALD2와 ALD3는 각각 1,521개 염기(nucleotide)로 구성되며, 506개 아미노산(amino acid)을 코딩하고 있는 등 유사한 점이 있다. 125개 염기서열(8.2%)에서 서로 차이를 보이는 서로 다른 별개의 알데히드탈수소효소로 확인되었다.
본 발명자가 기탁한 6종의 돌연변이 균주(KwonP-1, KwonP-2, KwonP-3, PicoYP, PicoYP-01, PicoYP-02)들에서는, ALD2 염기서열 말단에 종결 코돈이 존재하지 않아 연속적으로 단백질이 합성된다. 그 결과 ALD2의 일부분과 ALD3이 연결된 거대해진 신규한 알데히드탈수소효소를 생성한다[서열번호1].
보다 상세하게는, 기존의 대조용 효모균주(KCTC7296)의 알데히드탈수소효소(ALD2)[서열번호3]는 3말단에 종결 코돈을 제외한 9개 아미노산 (N-VHINLSLDN-C)을 코딩하고 있는 30개의 염기서열 (5'-GTTCACATAAATCTCTCTTTGGACAACTAA-3')이 존재하였다.
본 발명의 6종의 돌연변이 균주의 알데히드탈수소효소들의 ALD2와 ALD3의 5말단 사이에는 14개 아미노산(N-RYRLYTFRKLAKRK-C)를 코딩하는 42개의 염기서열(5'-AGATATAGATTATACACATTTAGAAAATTAGCCAAAAGAAAA-3')의 특징적인 염기서열이 존재하였다[서열번호2]
이와 같이, 본 발명의 돌연변이 균주 6종에서는 ALD2의 1,492번째 염기부터 non-coding region의 647번째 염기까지 소멸하였다. 결과적으로 ALD2의 종결 코돈이 없어지게 되어 총 3,054개 염기로 이루어진 새로운 유전자가 신규한 알데히드탈수소효소를 코딩하고 있었다. [서열번호1]
[실시예 9]
본 발명의 KARC에 의한 GABA aldehyde(SSA) 화합물의 분해대사
본 발명의 KARC에 의한 Succinic semialdehyde (SSA)가 Succinic acid로 전환되는 정도를 관찰하였다.
9-1: In vitro SSA 분해 실험
50mM, pH 7.5 HEPES 완충액에 KCl을 200 mM이 되도록 녹였다. 이 완충액 845μl를 마이크로튜브에 분주하고, 100mM EDTA 수용액 15μl, 100mM NADP+ 수용액 30μl, 10mM GBA in acetonitrile 용액 100μl, 300mg/mL KARC 10μl를 추가 분주하였다. 음성 대조군으로, 완충액 845μl를 마이크로튜브에 분주하고, 100mM EDTA 수용액 15μl, 100mM NADP+ 수용액 30μl, 10mM SSA in acetonitrile 용액 100μl, 증류수 10μl를 추가 분주하였다.
반응물은 Hot plate stirrer를 이용하여 30℃ 또는 37℃에서 1시간 또는 3시간 동안 교반되었다. 반응이 끝난 후, 각 반응물로부터 500μl를 분주하여 마이크로튜브에 분주하였다. 용기에 메탄올 470μl, 50mM DNPH (2,4-Dinitrophenyl hydrazine in acetonitrile) 용액 20μl, 6N HCl 10μl를 추가 분주하고, 70℃에서 40분 가열하였다. 가열한 반응물을 식힌 뒤, 10μl를 정량하여 HPLC에 주입하여 분석하였다.
HPLC 분석 조건은 C18 컬럼을 사용하여 용매(Acetonitrile(1v/v% Trifluoroacetic acid), water(1v/v% Trifluoroacetic acid))를 Water(1v/v% Trifluoroacetic acid) 80%에서 시작하여 15분 후 20%가 되도록 역상으로 흘려, 자외선 검출기 360nm 파장에서 얻어 분석하였다. 결과는 음성대조군 대비 실험군 내 DNPH-SSA 복합체의 감소량을 통해 알데히드가 소모되는 반응의 진행 정도를 확인하였다[도 21, 22, 23].
37℃에서 1시간 반응시켰을 때, 반응물 내 DNPH-GBA 복합체의 양은 55.0% 감소하였다[도 22]. 37℃에서 3시간 반응시켰을 때, 반응물 내 DNPH-GBA 복합체의 양은 74.9% 감소하였다[도 23].
이러한 결과는, 알데히드탈수소효소(ALDH)를 함유하는 본 발명의 효모 조성물(KARC)에 의해, GABA 유래 알데히드인 SSA가 인체에 무해한 Succinic acid로 전환되는 사실을 보여준다.
[실시예 10]
KARC 경구투여에 의한 아세트알데히드와 말론디알데히드(MDA) 분해 시험
아세트알데히드 및 MDA 동물 실험에는 5주령 수컷 Sprague Dawley(SD) 쥐(Rat)를 사용하였다. KARC 조성물을 10unit/kg 또는 20unit/kg 쥐(Rat)에게 경구 투여하였고, KARC 주입 30분 후에 쥐(Rat)에게 알코올(3g/kg)를 경구 투여하였다. 투여 처리가 끝난 후 KARC 주입 후 0, 1, 3, 5, 8 시간에 꼬리 정맥에서 혈액 샘플을 채취하였으며, 원심분리 후 혈장(plasma)를 -80℃에서 보관하였다[4, 5].
10-1: KARC 경구투여에 의한 아세트알데히드의 감소 효과
KARC 경구 투여에 의한 총 아세트알데히드 감소 효과는 Acetaldehyde assay kit(LSBio, Seattle, WA, USA)를 사용하였다. 각 샘플은 96 well plate의 2개 well에 20μl씩 분주한 후, 1개의 well에는 80μl의 working reagent(75 μl assay buffer, 8 μl NAD/MTT, 1 μl Enzyme A, 1 μl Enzyme B)을, 나머지 1개의 well에는 80μl의 blank working reagent(75 μl assay buffer, 8 μl NAD/MTT, 1 μl Enzyme B)를 분주하였다. Plate를 가볍게 섞어준 후 상온에서 30분간 반응시켰다. 반응이 종료되면 565nm(520-600nm)에서 흡광도를 측정하였다.
아세트알데히드의 농도는 에탄올 투여 1시간 후 최대치에 도달하였고, KARC 조성물 투여군에서 감소하는 경향을 보였다. KARC 투여군에서 에탄올 투여 1시간, 3시간 및 5시간 후 대조군(Vehicle) 대비 아세트알데히드 농도가 유의하게 감소하였으며, 특히, KARC 고용량 투여군(F)에서 혈중 아세트알데히드 농도는 각각 0.356, 0.224, 0.091mM로 대조군 대비 각각 39.2%, 58.4%, 72.1% 감소하였다[도 4].
10-2: KARC 경구투여에 의한 MDA의 감소 효과
혈액 내 총 말론디알데히드 함량은, 제조사(ZeptoMetric, Buffalo, NY, USA)의 포로토콜에 따라 OxiTecTM TBARS assay kit를 사용하여 분석하였다. Conical tube에 100μl 샘플과 100μl 8.1% SDS solution, 4ml의 색 지시약(TBA, 10% NaOH 용액, 20% 아세트산)을 첨가한 후, 95℃의 항온수조에서 60분간 반응시켰다. 반응 종료 후, 샘플을 4℃, 1,600rpm에서 10분간 원심 분리하여 상온에서 30분간 안정화시켰다. 96 well plate에 상등액 150μl를 옮기고, 530-540nm에서 흡광도를 측정하였다.
대조군(Vehicle)에서 에탄올 투여 3시간 후에 혈중 MDA의 농도가 최대값에 도달한 반면, KARC를 투여한 군에서는 에탄올 투여 1시간 후에 최대 값에 도달했다. 이후 혈중 MDA 농도가 감소하여 에탄올 투여 3시간 및 5시간 후 대조군과 유의미한 차이를 보였다. KACR 고용량 투여군(F)의 혈중 MDA 농도는 각각 0.232, 0.137μM로 대조군 대비 80.4%, 86.3% 감소하였다[도 5].
이러한 결과는, KARC의 경구 투여가 혈액 내 아세트알데히드(Ach) 및 말론디알데히드(MDA) 등 다양한 내인성 알데히드를 감소시키는 효과를 나타내었다.
[실시예 11]
KARC 경구 투여에 의한 산화스트레스 감소 효과.
활성산소나 산화 스트레스는 음주시 알코올이 알코올탈수소효소(ADH)에 의해서 과잉의 아세트알데히드(Ach)가 생성되어 증가하지만, 알데히드탈수소효소(ALDH)가 작용하여 초산으로 전환시켜 체외로 배출시킨다. 알데히드탈수소효소 유전자 돌연변이로 인한 경우이거나 알코올 과잉에 의한 알데히드 과잉 상태는 지방의 과산화 반응(Lipid peroxidation)을 유발한다.
그 결과 생성되는 아세트알데히드와 말론디알데히드는 산화스트레스를 악화시키고 미토콘드리아 에너지 대사를 방해한다. 또한 세포에 변성 단백질 축적을 통해 소포체 스트레스를 유발시켜 세포가 사멸하게 된다.
음주 후 시간에 따른 혈중 아세트알데히드의 농도를 측정하였다[도 6]. 그 결과 혈중 아세트알데히드(Ach)의 곡선 하부 면적(Area under the curve; AUC)은 알코올 단독 섭취시 13.02 ± 1.18 mg h/dL이었다. 10unit/kg KARC 복용시에는 혈중 아세트알데히드(Ach)의 곡선 하부 면적이 9.39 ± 1.07 mg h/dL 로 알코올 단독 섭취시 대비 26.13% 통계적으로 유의하게 감소하였다(P=0.005).
20unit/kg KARC 복용시에는 혈중 아세트알데히드(Ach)의 곡선 하부 면적이 5.22 ± 0.99 mg h/dL으로 알코올 단독 섭취시 대비 통계적으로 유의하게 55.71% 감소하였다(P<0.001). 또한 10unit/kg KARC 복용군과 20unit/kg KARC 복용군을 비교했을 때도, 20unit/kg KARC 복용군의 혈중 아세트알데히드(Ach)가 유의하게 감소하였다(P=0.034). 이로 인해, KARC는 용량 의존적으로 시간에 따른 혈중 아세트알데히드(Ach)의 총량을 감소시켰다.
결론적으로, KARC 복용에 따른 아세트알데히드(Ach) 혈중 농도의 감소는 산화스트레스를 감소시킴으로 건강에 긍정적인 영향을 나타낸다.
항암 치료(chemotherapy) 기간 중 혈중 말론디알데히드(MDA)의 농도를 측정했다[도 7]. 그 결과 대조군의 혈중 말론디알데히드(MDA)의 농도는 0.607 ± 0.161 μM 이었다. KARC를 복용하며 치료를 진행한 군의 혈중 말론디알데히드(MDA)의 농도는 0.223 ± 0.033 μM로 대조군 대비 63.3% 유의하게 감소하였다(P<0.001).
또한, 대조군에서는 혈중 말론디알데히드(MDA)의 농도가 최저 0.427 μM, 최고 0.885 μM로 편차가 매우 컸지만, KARC 복용군에서는 최저 0.158 μM, 최고 0.269 μM로 편차가 큰 폭으로 감소하였다. 이를 통해 혈중 말론디알데히드(MDA)의 농도를 감소시킬 뿐 아니라 안정화시키는 효과를 확인하였다[도 8].
약물 복용, 과도한 스트레스, 극렬한 운동 등은 인체내 활성산소(ROS, reactive oxygen species)를 증가시켜서, 지질과산화(Lipid peroxidation)를 유발하여 말론디알데히드(MDA), 아세트알데히드(Ach)를 증가시킨다. 신경전달물질에서 유래되는 glutamate semialdehyde(GSA) 그리고 succinic semialdehyde(SSA)도 증가된다. 이러한 반응성 알데히드 물질이 세포에 축적되면 진전(떨림) 증상 또는 이상 동작(movement disorder) 증상이 야기된다.
특히, 격렬한 운동을 통하여 산화 스트레스가 과도하게 발생하면, 말론디알데히드, 아세트알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 그리고 succinic semialdehyde(SSA)가 체내에 증가하면서, 진전(떨림) 증상 또는 이상 동작(movement disorder) 증상이 발생한다.
또한 이렇게 생성된 반응성 알데히드는 주변 단백질과 반응하거나 또는 이차 대사 과정을 통해 Malondialdehyde-acetaldehyde adduct(MAA), Malonedialdehyde lysine adducts(M-lys adducts) 등 반응성 알데히드의 안정화된 최종산물(Advanced Lipidperoxidation End Product)로 축적되어 다양한 세포에 독소로 작용하여 산화스트레스 더욱 악화시키는 상승 작용을 일으킨다.
돌연변이 효모 조성물인 KARC는, 말론디알데히드, 아세트알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 그리고 succinic semialdehyde(SSA)를 동시에 감소시켜 인체 내 활성산소와 산화스트레스를 감소시켜, 진전(떨림) 증상 또는 이상 동작(movement disorder) 증상 억제 효과를 나타낸다.[도 4] 내지 [도 8], [도 15] 내지 [도 18].
[실시예 12] 본 발명의 조성물의 단기투여 독성 시험
실시예 12-1. 실험 동물의 준비
실험동물은 암컷, 수컷 ICR 마우스(7 주령)를 분양받아 7일간 순화시켰으며 순화 기간 중 일반증상을 관찰하여 건강한 동물만 시험에 사용하였다. 사료와 물은 자유 섭취시켰고 경구투여 전날 평균 체중 약 20g을 기준으로 각 군별 암,수 5수씩 총 10수가 되도록 군 분리를 진행하였다.
실시예 12-2 시험 물질의 투여
시험 물질은 본 발명의 돌연변이 효모 용해물 KARC의 함량을 기준으로 실험동물의 투여용량이 각 0, 750, 3000, 5000mg/Kg이 되도록 생리식염수에 녹여 제조하였다.
투여 용량의 기준은 식약처의 Korea national Toxicology Program(KNTP) 독성 시험 매뉴얼에 따랐다. KNTP 매뉴얼에서 가이드하는 적용 최대 용량 5000mg/Kg을 본 실험의 최대 농도로 적용하였다. 각 군별로 준비된 시료를 시험동물에 대하여 각 1회 경구투여를 실시 하였으며, 정상군(G1)의 경우 생리식염수를 투여하였다.
실시예 12-3. 관찰 및 부검
모든 시험군의 동물에 대하여 입수일부터 부검일까지 매일 1회 이상 증상관찰을 실시하였으며, 경구투여 후 7일 동안 증상을 관찰하였다. 증상 관찰 종류 후, 부검을 진행하였고 부검 시 육안으로 각 장기에 대한 변화를 관찰하였다.
마우스를 사용하여 본 발명의 ALDH 함유 KARC 조성물의 단회 투여독성 시험을 실시한 결과, 돌연변이 효모 KARC 5000mg/kg까지의 농도에서 7일간 사망예를 관찰할 수 없었으며, 체중증가, 사료 섭취량 등의 특이점을 발견할 수 없었다. 또한 관찰 종료 후 진행한 부검 결과에서도 특이한 소견은 발견되지 아니하였다.
[실시예 13]
말론디알데히드, 아세트알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 그리고 succinic semialdehyde(SSA)를 감소시켜, 진전(tremor and movement disorder) 증상을 억제하는 식품 또는 의약 조성물의 제조:
본 발명의 KARC를 유효성분으로서 함유하는, 진전(떨림) 그리고 이상 동작(movement disorder) 증상을 억제하는 식품 조성물과 의약 조성물을 제조하였다. 본 발명의 KARC 분말을 함유하는 다양한 조성비의 식품 또는 의약 조성물의 제조가 가능하지만, 하나의 예시로서, 본 발명에 따르는 분말 조성물은 1일 2회, 1회 13g 조성물 섭취를 통하여 진전(떨림) 그리고 이상 동작(movement disorder) 증상을 억제하는 식품 조성물과 의약 조성물의 성분과 성분간 중량 비율을 [표 6]에 나타내었다.
원 재 료 명 | 중량비 (wt%) | |
진전(떨림) 그리고 이상 동작(movement disorder) 증상을 억제하는 식품 조성물과 의약 조성물 | KARC 건조 분말 | 50 |
프락토올리고당 | 9 | |
효소처리 스테비아 | 5 | |
무수구연산 | 10 | |
이소말토 | 4.3 | |
자일리톨 | 2.5 | |
감귤과즙분말 | 6.2 | |
감귤향분말 | 13 |
본 발명의 식품과 의약 조성물에는 KARC건조 분말과, 부형제 및 감미료로서 프락토 올리고당, 효소처리 스테비아, 무스구연산, 이소말토, 자일리톨 천연 감미료와 감귤과즙 분말 그리고 감귤향 분말을 첨가하였다. 본 발명의 식품 또는 의약 조성물의 원료와 최종 제품의 가공과 검사는, 대한민국 식품 공전에 기재된 일반시험법과 건강기능식품법에 따라 진행하였다.
이상의 실시예들을 통하여 본 발명의 알데히드탈수소효소(ALDH)를 함유하는 돌연변이 효모 조성물인 KARC의, 진전(tremor and movement disorder) 증상을 억제하거나 개선하는 조성물의 제조 방법, 약리 효과, 투여방법, 유효량, 단기투여 급성 독성과 이를 함유하는 식품 또는 의약조성물에 대한 대표적인 사례들을 상세하게 설명하였지만, 이들은 본 발명의 하나의 사례에 불과하다.
따라서 이 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 전술한 본 발명의 실시 사례로부터 다양한 변형 및 본 발명과 균등한 또 다른 실시예를 용이하게 도출할 수 있다.
따라서 특허청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 요지를 구현하는 변형된 형태의 알데히드탈수소효소를 함유하는 식품이나 치료제라도, 본 발명의 법률적 보호범위에 속한다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (11)
- 서열번호 1의 유전자와 98% 이상의 상동성을 갖는 유전자에 의하여 코딩되는 알데히드탈수소효소를 함유하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 제1항의 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물에 있어서, 서열번호 2를 포함하는 서열번호 1의 유전자에 의해 코딩되는 알데히드탈수소효소를 포함하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 제1항 또는 제2항의 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물에 있어서, 상기 알데히드가 생체 내인성 알데히드인 것을 특징으로 하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 제3항의 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물에 있어서, 상기 내인성 알데히드가, 알콜 또는 내인성아민 화합물의 산화로 인하여 생성되는 내인성 알데히드인 것을 특징으로 하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 제4항의 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물에 있어서, 상기 내인성알데히드가 아세트알데히드, 말론디알데히드, Glutamate semialdehyde(GSA) 그리고 Succinic semialdehyde(SSA)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 제1항 또는 제2항의 알데히드탈수소효소가, KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP의 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 효모들로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합물에서 유래되는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP, KCTC14983BP, KCTC14984BP 그리고 KCTC14985BP으로 이루어지는 군에서 선택되는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)돌연변이 효모 어느 하나 또는 이들이 혼합된 돌연변이 효모의 건조물 또는 용해물(lysate)을 함유하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제 식품 조성물.
- 서열번호 1의 유전자와 98% 이상의 상동성을 갖는 유전자에 의하여 코딩되는 알데히드탈수소효소를 함유하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제용 의약 조성물.
- 제8항의 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제용 의약 조성물이, 서열번호 2를 포함하는 서열번호 1의 유전자에 의해 코딩되는 알데히드탈수소효소를 포함하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제용 의약 조성물.
- 제8항 또는 제9항의 알데히드탈수소효소가, KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP KCTC14983BP, KCTC14984BP, KCTC14985BP로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합물에서 유래된, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제용 의약 조성물.
- KCTC13925BP, KCTC14122BP, KCTC14123BP, KCTC14983BP, KCTC14984BP 그리고 KCTC14985BP으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 또는 이들이 혼합물의 용해물(lysate)을 함유하는, 진전 또는 이상 동작(movement disorder) 억제용 의약 조성물.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/KR2023/019183 WO2024117701A1 (en) | 2022-12-01 | 2023-11-25 | Food and drug composition containing novel aldehyde dehydrogenase for suppressing tremor or movement disorder |
US18/519,569 US20240189400A1 (en) | 2022-12-01 | 2023-11-27 | Food and drug composition containing novel aldehyde dehydrogenase for suppressing tremor or movement disorder |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020220165794 | 2022-12-01 | ||
KR1020220165794A KR20220167789A (ko) | 2022-12-01 | 2022-12-01 | 내인성 알데히드 무독화 조성물 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20240095003A true KR20240095003A (ko) | 2024-06-25 |
Family
ID=84536832
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020220165794A KR20220167789A (ko) | 2022-12-01 | 2022-12-01 | 내인성 알데히드 무독화 조성물 |
KR1020230153075A KR20240095003A (ko) | 2022-12-01 | 2023-11-07 | 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 떨림 또는 이상 동작 개선용 식품 조성물과 의약 조성물 |
KR1020230153007A KR20240095002A (ko) | 2022-12-01 | 2023-11-07 | 내인성 알데히드 무독화 식품 또는 의약 조성물 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020220165794A KR20220167789A (ko) | 2022-12-01 | 2022-12-01 | 내인성 알데히드 무독화 조성물 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020230153007A KR20240095002A (ko) | 2022-12-01 | 2023-11-07 | 내인성 알데히드 무독화 식품 또는 의약 조성물 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (3) | KR20220167789A (ko) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116439344B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-03-29 | 宿迁市产品质量监督检验所 | 辛弗林或者橙皮苷和辛弗林二元联用作为丙烯醛抑制剂的应用 |
-
2022
- 2022-12-01 KR KR1020220165794A patent/KR20220167789A/ko unknown
-
2023
- 2023-11-07 KR KR1020230153075A patent/KR20240095003A/ko unknown
- 2023-11-07 KR KR1020230153007A patent/KR20240095002A/ko unknown
Non-Patent Citations (23)
Title |
---|
1. Haubenberger, D., & Hallett, M. (2018). Essential Tremor. New England Journal of Medicine, 378(19), 1802-1810. doi:10.1056/nejmcp1707928 |
10. Deuschl, G.; Raethjen, J.; Hellriegel, H.; Elble, R., Treatment of patients with essential tremor. Lancet Neurol 2011, 10, (2), 148-61. |
11. Zesiewicz, T. A.; Elble, R. J.; Louis, E. D.; Gronseth, G. S.; Ondo, W. G.; Dewey, R. B., Jr.; Okun, M. S.; Sullivan, K. L.; Weiner, W. J., Evidence-based guideline update: treatment of essential tremor: report of the Quality Standards subcommittee of the American Academy of Neurology. Neurology 2011, 77, (19), 1752-5. |
12. Young, R. R.; Growdon, J. H.; Shahani, B. T., Beta-adrenergic mechanisms in action tremor. N Engl J Med 1975, 293, (19), 950-3. |
13. Heo, J. Y.; Nam, M. H.; Yoon, H. H.; Kim, J.; Hwang, Y. J.; Won, W.; Woo, D. H.; Lee, J. A.; Park, H. J.; Jo, S.; Lee, M. J.; Kim, S.; Shim, J. E.; Jang, D. P.; Kim, K. I.; Huh, S. H.; Jeong, J. Y.; Kowall, N. W.; Lee, J.; Im, H.; Park, J. H.; Jang, B. K.; Park, K. D.; Lee, H. J.; Shin, H.; Cho, I. J.; Hwang, E. M.; Kim, Y.; Kim, H. Y.; Oh, S. J.; Lee, S. E.; Paek, S. H.; Yoon, J. H.; Jin, B. K.; Kweon, G. R.; Shim, I.; Hwang, O.; Ryu, H.; Jeon, S. R.; Lee, C. J., Aberrant Tonic Inhibition of Dopaminergic Neuronal Activity Causes Motor Symptoms in Animal Models of Parkinson's Disease. Curr Biol 2020, 30, (2), 276-291 e9. |
14. Raethjen, J.; Deuschl, G., Tremor. Curr Opin Neurol 2009, 22, (4), 400-5. |
15.Abboud, H.; Ahmed, A.; Fernandez, H. H., Essential tremor: choosing the right management plan for your patient. Cleve Clin J Med 2011, 78, (12), 821-8. |
16. Jo, S.; Yarishkin, O.; Hwang, Y. J.; Chun, Y. E.; Park, M.; Woo, D. H.; Bae, J. Y.; Kim, T.; Lee, J.; Chun, H.; Park, H. J.; Lee, D. Y.; Hong, J.; Kim, H. Y.; Oh, S. J.; Park, S. J.; Lee, H.; Yoon, B. E.; Kim, Y.; Jeong, Y.; Shim, I.; Bae, Y. C.; Cho, J.; Kowall, N. W.; Ryu, H.; Hwang, E.; Kim, D.; Lee, C. J., GABA from reactive astrocytes impairs memory in mouse models of Alzheimer's disease. Nat Med 2014, 20, (8), 886-96. |
17. Nam, M. H.; Cho, J.; Kwon, D. H.; Park, J. Y.; Woo, J.; Lee, J. M.; Lee, S.; Ko, H. Y.; Won, W.; Kim, R. G.; Song, H.; Oh, S. J.; Choi, J. W.; Park, K. D.; Park, E. K.; Jung, H.; Kim, H. S.; Lee, M. C.; Yun, M.; Lee, C. J.; Kim, H. I., Excessive Astrocytic GABA Causes Cortical Hypometabolism and Impedes Functional Recovery after Subcortical Stroke. Cell Rep 2020, 32, (3), 107975. |
18. Woo, J.; Min, J. O.; Kang, D. S.; Kim, Y. S.; Jung, G. H.; Park, H. J.; Kim, S.; An, H.; Kwon, J.; Kim, J.; Shim, I.; Kim, H. G.; Lee, C. J.; Yoon, B. E., Control of motor coordination by astrocytic tonic GABA release through modulation of excitation/inhibition balance in cerebellum. Proc Natl Acad Sci U S A 2018, 115, (19), 5004-5009. |
19. Ishibashi, M.; Egawa, K.; Fukuda, A., Diverse Actions of Astrocytes in GABAergic Signaling. Int J Mol Sci 2019, 20, (12). |
2. Louis, E. D. (2005). Essential tremor. The Lancet Neurology, 4(2), 100-110. doi:10.1016/s1474-4422(05)00991-9 |
20. Yoon, B. E.; Lee, C. J., GABA as a rising gliotransmitter. Front Neural Circuits 2014, 8, 141. |
21. Edenberg, H. J., The genetics of alcohol metabolism: role of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase variants. Alcohol Res Health 2007, 30, (1), 5-13. |
23. Keung, W. M.; Vallee, B. L., Daidzin and its antidipsotropic analogs inhibit serotonin and dopamine metabolism in isolated mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A 1998, 95, (5), 2198-203. |
3. Abboud, H.; Ahmed, A.; Fernandez, H. H., Essential tremor: choosing the right management plan for your patient. Cleve Clin J Med 2011, 78, (12), 821-8. |
4. Vilarino-Gell, C.; Ross, O. A.; Wider, C.; Jasinska-Myga, B.; Cobb, S. A.; Soto-Ortolaza, A. I.; Kachergus, J. M.; Keeling, B. H.; Dachsel, J. C.; Melrose, H. L., LINGO1 rs9652490 is associated with essential tremor and Parkinson disease. Parkinsonism & related disorders 2010, 16, (2), 109-111. |
5. Louis, E. D.; Ferreira, J. J., How common is the most common adult movement disorder? Update on the worldwide prevalence of essential tremor. Movement Disorders 2010, 25, (5), 534-541. |
6. Lorenz, D.; Poremba, C.; Papengut, F.; Schreiber, S.; Deuschl, G., The psychosocial burden of essential tremor in an outpatient and a community-based cohort. European Journal of Neurology 2011, 18, (7), 972-979. |
7. Dogu, O.; Louis, E. D.; Sevim, S.; Kaleagasi, H.; Aral, M., Clinical characteristics of essential tremor in Mersin, Turkey: A population-based door-to-door study. Journal of neurology 2005, 252, 570-574. |
8. Louis, E. D.; Barnes, L.; Albert, S. M.; Cote, L.; Schneier, F. R.; Pullman, S. L.; Yu, Q., Correlates of functional disability in essential tremor. Mov Disord 2001, 16, (5), 914-20. |
9. Fahn, S.; Tolosa, E.; Marn, C., Clinical rating scale for tremor. Parkinson’s disease and movement disorders 1993, 2, 271-280. |
미합중국 특허출원 공개공보US-2021-0254023-Al 2021.8.19(USSN17/176,365호) |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20240095002A (ko) | 2024-06-25 |
KR20220167789A (ko) | 2022-12-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106103696B (zh) | 新颖的拟干酪乳杆菌菌株 | |
KR102368627B1 (ko) | 지방 축적 억제용 조성물 | |
US20190336553A1 (en) | Agent for reducing the number of intestinal bacteria, food, and pharmaceutical product | |
TW201811346A (zh) | 利用乳酸菌預防或治療運動障礙之方法 | |
KR20240095003A (ko) | 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 떨림 또는 이상 동작 개선용 식품 조성물과 의약 조성물 | |
KR102328743B1 (ko) | 신규한 페디오코커스 펜토사세우스 균주 및 이의 유청 발효물을 포함하는 비만 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 | |
KR102401535B1 (ko) | 간 손상 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 | |
KR20240087540A (ko) | 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 기억 장애 및 인지기능 개선 식품 조성물 | |
KR102577596B1 (ko) | 페디오코커스 펜토사세우스 ki62 및 이의 용도 | |
JPWO2015182155A1 (ja) | 新規乳酸菌及び該乳酸菌を含む組成物 | |
US20240189400A1 (en) | Food and drug composition containing novel aldehyde dehydrogenase for suppressing tremor or movement disorder | |
KR102007980B1 (ko) | 신규 유산균을 이용한 퇴행성 뇌질환 예방 및 치료용 조성물 | |
AU2023254626A1 (en) | eNAMPT INCREASING AGENT, SIRTUIN ACTIVATION OR EXPRESSION ENHANCER, NAD+ INCREASING AGENT, AND SENESCENT CELL INHIBITOR | |
KR20230007252A (ko) | 소포체 스트레스를 완화시키는 조성물 | |
US20240182915A1 (en) | Food and pharmaceutical composition for detoxifying endogenous aldehydes | |
US20240191210A1 (en) | Food and pharmaceutical composition containing novel aldehyde dehydrogenase for improving memory and cognitive function | |
KR102328742B1 (ko) | 신규한 와이셀라 시바리아 균주 및 이의 유청 발효물을 포함하는 비만 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 | |
AU2020320244B2 (en) | Composition and method for preventing, alleviating, or treating liver injury | |
US20240189399A1 (en) | Novel aldehyde dehydrogenase food and drug composition for improving behavior and motor function | |
US20100173025A1 (en) | Fat absorption inhibitory composition | |
US20240180985A1 (en) | Food and pharmaceutical composition for treatment of fatty liver and inflammation by relieving endoplasmic reticulum stress | |
RU2810601C2 (ru) | Композиция и способ для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени | |
KR20240087539A (ko) | 새로운 알데히드탈수소효소를 함유하는 행동 및 운동 기능 개선 식품 그리고 의약 조성물 | |
JP2021529183A (ja) | 酵母抽出物を含む糖尿改善または抗酸化用の組成物と酵母抽出物の製造方法 | |
KR102612548B1 (ko) | 락토바실러스 부크너리 200793 균주를 포함하는 우울증예방, 개선 또는 치료용 조성물 |