KR20240053647A - 플렉신-a1의 막횡단 펩티드 길항제 및 이의 치료 용도 - Google Patents

플렉신-a1의 막횡단 펩티드 길항제 및 이의 치료 용도 Download PDF

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도미니크 바그나드
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Abstract

본 출원은 뉴로필린-1/플렉신-A1 이종이량체화를 억제하는 플렉신-A1의 막횡단 도메인으로부터 유래된 펩티드에 관한 것이다. 이들 펩티드는 세포 이동 및 혈관신생에 대한 Sema3A의 억제 효과를 중화시키고, Sema3A 및/또는 뉴로필린-1/플렉신-A1 활성과 관련된 질환, 예를 들어 탈수초성 질환 및 암과 같은 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환의 치료에 유용할 수 있다.

Description

플렉신-A1의 막횡단 펩티드 길항제 및 이의 치료 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 9월 8일에 출원된 EP 특허 출원 번호 21306229의 이익을 주장하며, 이는 참조로 본원에 포함된다.
발명의 분야
본 개시내용은 신경퇴행성 질환과 같은, 뉴로필린/플렉신-A1 수용체의 활성과 관련된 질환 및 병태의 치료에 관한 것이다.
다발성 경화증 (MS)은 젊은 성인에게 가장 흔한 만성 신경 장애이며 미국에서 거의 백만 명의 사람들에게 영향을 미친다. MS는 환자 자신의 면역 세포가 뇌의 뉴런을 보호하는 미엘린 수초를 공격하고 파괴하는 자가면역 질환이다. 희소돌기아교세포에 의한 이러한 뉴런의 재수초화는 질환이 진행됨에 따라 효과가 없어지고 결과적으로 돌이킬 수 없는 신경 손상과 점진적인 장애를 일으키는 자발적인 현상이다. 현재 MS 치료용으로 승인된 화합물은 파괴적인 면역 공격을 제한하도록 설계되었다.
다발성 경화증 전문가들은 희소돌기아교세포에 의해 생성된 수초의 재생을 자극하는 약물이 뉴런을 보호하여 추가 손상을 방지하고 궁극적으로 신경 기능을 회복함으로써 MS 환자에게 도움이 되는 혁신적인 접근 방식이라는 데 동의한다.
수초화의 초기 단계를 조절하는 많은 요인 중에서, 세마포린 계열의 구성원은 희소돌기아교세포 전구체 세포의 이동을 조절하고 성숙을 억제하는 것으로 나타났다. 그 중, 수초화의 억제 조절자로서 sema3A의 역할이 인식되고 있지만, 관련 수용체의 중요성은 아직 명확하지 않다.
WO2007/000672는 세마포린/뉴로필린 복합체의 길항 활성을 갖는 막횡단 펩티드가 기술되어 있다. 플렉신-A1은 특히 펩티드의 기원 중 하나이며 이와 관련된 특별한 치료적 관심은 없다.
Biname 등 (EMBO Mol Med (2019) 11: e10378)은 희소돌기아교세포 억제제 세마포린 3A의 신호전달 수용체인 플렉신-A1이 MS 환자에서 과발현된다는 것을 보여주었다. 저자는 시험관 내에서 희소돌기아교세포 이동 및 분화에 대한 Sema3A 억제 효과를 중화할 수 있는 플렉신-A1을 길항하는 펩티드 길항제 (MTP-PlexA1이라고 함)를 설명한다. MTP-PlexA1은 플렉신-A1의 막횡단 도메인 (TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK, 서열 번호 1)을 모방한 합성 펩티드다. 펩티드 투여는 또한 보호 효과를 보여, 실험적 자가면역 뇌염 (EAE)의 맥락에서 탈수초화의 중증도를 감소시켰다.
그러나 새로운 길항성 펩티드를 식별할 필요가 남아 있다.
본 개시내용은 억제 신호전달 경로 Sema3A-뉴로필린 1-플렉신-A1에 관여하는 플렉신-A1 수용체를 차단하는 새로운 펩티드를 제공한다. 펩티드는 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호 작용과 Sema3A의 세포 이동 억제 효과를 억제한다. 이들 펩티드는 다양한 단계의 재수초화를 차단하는 데 관여하는 경로 중 하나를 억제하여 재수초화를 증가시킬 수 있으며 다발성 경화증 (EAE-PLP 및 EAE-MOG) 모델의 실험 동물 모델에 보호 효과가 있어, 다발성 경화증과 같은 탈수초성 질환의 치료에 대한 이들의 치료 가능성을 입증한다. 또한, 본 발명자는 혈관 신생을 억제하는 펩티드의 능력에 대한 증거를 제공함으로써, 종양 성장 및 전이, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증, 또는 죽상동맥경화증과 같은 비정상적인 혈관 형성과 관련된 다른 질환에서 차단 펩티드의 잠재적인 사용을 확대한다.
본 발명자는 길항성 펩티드를 설계하기 위한 규칙을 확인했다. 펩티드에서, 모티프 GxxxG가 활성에 관여한다. 첫 번째 글리신이 세린으로 대체될 수 있음이 밝혀졌다. 또한, 펩티드 설계의 또 다른 중요한 양태는 막에 모티프 G/SxxxG의 고정 및 막 표면과 모티프 G/SxxxG 사이의 거리이다. 실제로, 모티프 G/SxxxG의 위치가 핵심이다. 보다 구체적으로, 펩티드에 N-말단 막 고정이 있는 경우, N-말단 막 고정 모티프와 모티프 G/SxxxG 사이에 5개의 아미노산이 삽입되어야 한다. 펩티드에 C-말단 막 고정이 있는 경우, 모티프 G/SxxxG와 양전하를 띤 아미노산이 있는 C-말단 막 고정 모티프 사이에 13개의 아미노산이 삽입되어야 하며 모티프 G/SxxxG와 음전하를 띤 아미노산이 있는 C-말단 막 고정 모티프 사이에 11개의 아미노산이 삽입되는 것이 바람직하다. 이러한 규칙이 결정되면, 본 발명자는 놀랍게도 펩티드가 막 고정 모티프의 반대편에서 모티프 G/SxxxG까지 단축될 수 있음을 관찰했다. 이러한 양태는 더 짧은 펩티드의 설계를 가능하게 한다.
본 개시내용은 다음을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되는, 바람직하게는 50, 45 또는 40개 이하의 아미노산의 펩티드에 관한 것이고:
- 서열 G/S-X-X-X-G의 제1 도메인,
- 서열의 제2 도메인: 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)11-(CterpolyD/E) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)11-(CterpolyD/E); 모티프의 N-말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X)5- (즉, (NterGp)-(X)5- G/S-X-X-X-G); 또는 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)13-(CterGp) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)13-(CterGp); 및
- X는 임의의 아미노산 (D- 또는 L-)이지만 X 중 2개 이하가 하전된 아미노산이고;
CterpolyD/E는 적어도 2개의 음전하를 띤 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이고; NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이고, CterGp는 적어도 3개의 양전하를 띤 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이거나;
또는 이의 레트로 또는 레트로인버소 서열,
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염,
여기서 펩티드는 서열 TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK (서열 번호 1)를 포함하거나 이로 구성되지 않는다.
구현예에서, 펩티드는 30개 이하의 아미노산 길이를 갖는다. 구현예에서, 펩티드는 28개 이하의 아미노산 길이를 갖는다. 구현예에서, 펩티드는 26개 이하의 아미노산 길이를 갖는다. 구현예에서, 펩티드는 25개 이하의 아미노산 길이를 갖는다. 구현예에서, 펩티드는 20개 이하의 아미노산 길이를 갖는다.
본 개시내용은 다음을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되는 펩티드에 관한 것이고:
- 모티프 G/S-X-X-X-G,
- 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)11-(CterpolyD/E) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)11-(CterpolyD/E); 모티프의 N-말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X)5- (즉, (NterGp)-(X)5- G/S-X-X-X-G); 또는 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)13-(CterGp) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)13-(CterGp); 및
- X는 임의의 아미노산 (D- 또는 L-)이지만 X 중 2개 이하가 하전된 아미노산이고;
- NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이고, CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이고, CterpolyD/E는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산 (D- 또는 L-) 그룹이거나,
또는 이의 레트로 또는 레트로인버소 유사체,
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염,
여기서 펩티드는 본 명세서에 상세히 설명된 방법에 의해 측정된 바와 같이 이동에 대한 Sema3A의 억제 효과를 억제하고/하거나 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하고; 그리고
여기서 펩티드는 MTP-PlexA1의 서열 (TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK, 서열 번호 1)을 갖지 않는다.
보다 구체적으로, 본 발명자는 막횡단 펩티드와 관련하여 유리한 특성을 갖는 새로운 부류의 길항 펩티드를 확인했다. 이들 펩티드는 MTP-PlexA1에 비해 향상된 용해도와 안정성을 제공한다. 이는 24시간보다 긴 혈장 반감기와 뇌 및 척수와 같은 표적 기관에 도달하는 데 적합한 생체 분포를 나타낸다.
이러한 유리한 양태에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 2);
V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 3);
I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 4);
A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 5);
P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 6);
I/L-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 7); 및
T-I/L-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 8);
여기서 CterpolyD/E는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산 그룹이고, 그리고
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
선택적으로, CterpolyD/E는 X"1은 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, Z는 음으로 하전된 잔기 (예를 들어, D 또는 E)이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수인 -X"1-X"2-(Z)n의 서열; 또는 X"1 및 X"1비스는 I 또는 L과 같은 긴 지방족 아미노산이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수인 -X"1-X"1비스-X"2-(E)n의 서열을 갖는다.
선택적으로, 펩티드는 다음 아미노산 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성된다:
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-E-V-A/LI-Y-(D/E)n (서열 번호 9)
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 및/또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이다.
선택적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10);
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11);
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12);
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13);
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14); 및
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15);
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 및/또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 97);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDDDDD (서열 번호 99);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101);
dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108);
dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113);
여기서 서열은 여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
구현예에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101);
dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108);
dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113);
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
구현예에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113);
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
펩티드가 N-말단 막 고정 모티프 (즉, NterGp)를 제시하는 또 다른 양태에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G (서열 번호 22);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V (서열 번호 23);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V (서열 번호 24);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E (서열 번호 25);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L (서열 번호 26);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L (서열 번호 27);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E (서열 번호 28);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V (서열 번호 29);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I (서열 번호 30);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V (서열 번호 31);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E (서열 번호 32);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V (서열 번호 33);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L (서열 번호 34); 및
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I (서열 번호 35);
여기서 NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, 그리고
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
선택적으로, NterGp는 X1 및 X3는 2개의 하전된 아미노산이고, 선택적으로 하나는 양으로 하전되고 다른 하나는 음으로 하전되고, X2는 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고 X4는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)인 4개의 아미노산 X1-X2-X3-X4의 서열을 가지며, 더욱 바람직하게는 NterGp는 KGDW (서열 번호 116)이다.
펩티드가 양으로 하전된 아미노산 (즉, CterGp)을 갖는 C-말단 막 고정 모티프를 포함하는 다른 양태에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성된다:
A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 36);
I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 37);
V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 38); 및
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 39);
여기서 CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고,
여기서 서열은 굵은 글씨 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환을 포함할 수 있다.
선택적으로, CterGp는 X'1은 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고, X'2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, X'3, X'4 및 X'5는 염기성 아미노산인 5개의 아미노산 X'1-X'2-X'3-X'4-X'5의 서열을 가지며, 더욱 바람직하게는 CterGp는 AYKRK (서열 번호 76), AYKKR (서열 번호 77), AYKRR (서열 번호 78), AYRRK (서열 번호 79) 및 AYRKK (서열 번호 80)로부터 선택된 서열이다.
선택적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성된다:
KGDWLPAIT-G/S-LVGGVGLL (서열 번호 40)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGVVLL (서열 번호 41)
KGDWIPALV-G/S-GGGGGGLL (서열 번호 42)
KGDWLPALV-G/S-IGGGVGLL (서열 번호 43)
KGDWIPALV-G/S-LGGGGGLL (서열 번호 44)
KGDWLIAIV-G/S-IGGG (서열 번호 45)
KGDWLPVIV-G/S-IGGG (서열 번호 46)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGGLL (서열 번호 47)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGGL (서열 번호 48)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGG (서열 번호 49)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGG (서열 번호 50)
KGDWLPAIV-G/S-IGGG (서열 번호 51)
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10)
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11)
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12)
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13)
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14)
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15)
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
매우 특정한 양태에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성된다:
KGDWLPAITGLVGGVGLL (서열 번호 52)
KGDWLPAIVSIGGGVVLL (서열 번호 53)
KGDWIPALVGGGGGGGLL (서열 번호 54)
KGDWLPALVSIGGGVGLL (서열 번호 55)
KGDWIPALVGLGGGGGLL (서열 번호 56)
KGDWLIAIVGIGGG (서열 번호 57)
KGDWLPVIVGIGGG (서열 번호 58)
KGDWLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 59)
KGDWLPAIVGIGGGGGL (서열 번호 60)
KGDWLPAIVGIGGGGG (서열 번호 61)
KGDWLPAIVGIGGGG (서열 번호 62)
KGDWLPAIVGIGGG (서열 번호 63)
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16)
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17)
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18)
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19)
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20)
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21)
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 97);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDDDDD (서열 번호 99);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101);
dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108);
dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113);
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
구현예에서, 펩티드는 아미노산 서열 TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20), TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100), TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108) 또는 TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113)를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 구성된다.
본 개시내용은 또한 세포를 유효량의 본원에 정의된 임의의 펩티드와 접촉시키는 것을 포함하는 세포에서 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 세포에서 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하기 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 세포에서 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하기 위한 약제의 제조를 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 세포에서 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하기 위해 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 펩티드에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 신경교세포를 본원에 정의된 유효량의 임의의 펩티드와 접촉시키는 것을 포함하는 신경교세포 (예를 들어, 희소돌기아교세포)에서 Sema3A의 항-이동 및 항-분화 효과를 억제하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 신경교세포 (예를 들어, 희소돌기아교세포)에서 Sema3A의 항-이동 및 항-분화 효과를 억제하기 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 신경교세포 (예를 들어, 희소돌기아교세포)에서 Sema3A의 항-이동 및 항-분화 효과를 억제하기 위한 약제의 제조를 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 신경교세포 (예를 들어, 희소돌기아교세포)에서 Sema3A의 항-이동 및 항-분화 효과를 억제하기 위해 사용하기 위한 본원에 정의된 펩티드에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 탈수초성 질환을 앓고 있는 대상체와 같은 대상체에서 재수초화를 자극하기 위해 사용하기 위한 본원에 정의된 펩티드에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 약물로서 사용하기 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 개시내용은 추가로 탈수초성 질환, 특히, 다발성 경화증을 포함하는 탈수초성 자가면역 또는 염증성 질환, 횡단성 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)) 구형세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 길랭-바레 증후군 (GBS) 및 만성 염증성 탈수초성 다근신경근병증을 포함하는 다근신경근병증, 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올/담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환의 치료; 또는 혈관신생을 감소시키는 치료가 필요한 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애 (예를 들어, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상동맥경화증)의 치료 및/또는 암 치료를 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 탈수초성 질환, 특히 본원에 정의된 질환을 포함하는 탈수초성 자가면역 질환, 또는 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애의 치료의 치료, 및/또는 암 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본원에 정의된 임의의 펩티드를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 마지막으로, 이는 탈수초성 질환, 특히 본원에 정의된 질환을 포함하는 탈수초성 자가면역 질환, 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애, 또는 이를 필요로 하는 대상체의 암의 치료 방법에 관한 것으로, 이는 대상체에게 본원에 정의된 임의의 펩티드를 포함하는 약학 조성물의 치료 유효량을 투여한다.
다양한 양태 및 구현예에서, 본 개시내용은 다음 항목 1 내지 68을 제공한다:
1. 하기를 포함하는 펩티드
서열 X37-X5-X6-X7-G의 제1 도메인, 및,
(i) 화학식 I의 제2 도메인: 제1 도메인의 카르복시 말단에 직접 연결된 -(X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36)-(CterpolyD/E);
(ii) 화학식 II의 제2 도메인: 제1 도메인의 카르복시 말단에 직접 연결된 -(X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25)-(CterGp); 또는
(iii) 화학식 II의 제2 도메인: 제1 도메인의 아미노 말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X8-X9-X10-X11-X12)-;
여기서
X37은 Gly, L-Ser 또는 D-Ser이고;
X5, X6 및 X7은 독립적으로 임의의 아미노산이고;
X8, X9, X10, X11 및 X12는 독립적으로 임의의 아미노산이고,
X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25는 독립적으로 임의의 아미노산이고, 여기서 X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 및 X36은 독립적으로 임의의 아미노산이고, 여기서 X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
CterpolyD/E는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산 그룹이고
NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, 그리고
CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고,
또는 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태,
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염,
여기서 펩티드는 서열 TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK (서열 번호 1)를 포함하거나 이로 구성되지 않는다.
2. 항목 1에 있어서, X5, X6 및 X7은 지방족 비하전 아미노산인 펩티드.
3. 항목 2에 있어서, X5, X6 및 X7은 각각 독립적으로 Gly, D 또는 L-Ala, D 또는 L-Val, D 또는 L-Leu 및 D 또는 L-Ile인 펩티드.
4. 항목 3에 있어서, X5는 D-Leu, L-Leu, D-Ile 또는 L-Ile이고; X6은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고/거나; X7은 Gly인 펩티드.
5. 항목 4에 있어서, X5는 L-Leu이고/거나 X6은 L-Val인 펩티드.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, X6이 Gly, D-Val 또는 L-Val인 펩티드.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, X37이 Gly인 펩티드.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, X26은 지방족 비하전 아미노산이고; X27은 지방족 비하전 아미노산이고; X28은 지방족 비하전 아미노산이고; X29는 지방족 비하전 아미노산이고; X30은 지방족 비하전 아미노산이고; X31은 음으로 하전된 아미노산이고; X32는 지방족 비하전 아미노산이고; X33은 지방족 비하전 아미노산이고; X34는 지방족 비하전 아미노산이고; X35는 음으로 하전된 아미노산이고/거나; X36은 지방족 비하전 아미노산인 펩티드.
9. 항목 8에 있어서, X26은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고; X27은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고; X28은 D 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X29는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X30은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X31은 D 또는 L-Glu이고; X32는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X33은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X34는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X35는 D 또는 L-Glu이고/거나; X36은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
10. 항목 9에 있어서, X26은 L-Val이고; X27은 Gly이고; X28은 L-Leu이고; X29는 L-Leu이고; X30은 L-Leu이고; X31는 L-Glu이고; X32는 L-Val이고; X33은 L-Ile이고; X34는 L-Val이고; X35는 L-Glu이고/거나; X36은 L-Val인 펩티드.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36은 VGLLLEVIVEV (서열 번호 91), GGELLLVIVE (서열 번호 92), VVLLLEVIVEV (서열 번호 93), VGLLVEVIVEV (서열 번호 117), 또는 VGLVLEVIVEV (서열 번호 118)인 펩티드.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, CterpolyD/E는 -X"1-X"2-Z 또는 -X"3-X"3비스-X"2-Z의 서열을 포함하고,
여기서
X"1은 작은 아미노산이고,
X"2는 방향족 아미노산이고,
X"3 및 X"3비스는 독립적으로 긴 지방족 아미노산이고
Z는 2 내지 10개의 D/L-Asp 및/또는 D/L-Glu 잔기인 펩티드.
13. 항목 12에 있어서, X"1은 D- 또는 L-Ala인 펩티드.
14. 항목 12 또는 13에 있어서, X"3 및 X"3비스는 독립적으로 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
15. 항목 14에 있어서, X"3는 D- 또는 L-Leu이고, X"3비스는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
16. 항목 12 내지 15 중 어느 하나에 있어서, Z는 3 내지 6개의 D/L-Asp 및/또는 D/L-Glu 잔기인 펩티드.
17. 항목 12 내지 16 중 어느 하나에 있어서, Z는 3 내지 5개의 L-Glu 잔기인 펩티드.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 펩티드가 화학식 I 또는 II의 제2 도메인을 포함하고, 제1 도메인의 아미노 말단에 연결된 1 내지 10개 아미노산의 제3 도메인을 추가로 포함하는 펩티드.
19. 항목 18에 있어서 제3 도메인이 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드.
20. 항목 19에 있어서, 제3 도메인이 화학식 IV: X38-X39-X40-X41-X42-X43의 것이고, 여기서
X3은 D-Thr 또는 L-Thr이거나 존재하지 않으며;
X39는 D- 또는 L-Leu, D- 또는 L-Ile이거나 존재하지 않으며;
X40은 Pro, D- 또는 L-Ile이거나 존재하지 않으며;
X41은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val이거나 존재하지 않으며;
X42는 D- 또는 L-Leu, D- 또는 L-Ile이거나 존재하지 않으며; 그리고
X43은 D- 또는 L-Val, D-Thr 또는 L-Thr인 펩티드.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 35개 이하의 아미노산을 포함하는 펩티드.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩티드.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 97);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDDDDD (서열 번호 99);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVVYEEEEE (서열 번호 105);
dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108);
dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113).
24. 항목 23에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108); 또는
TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113).
25. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, X8은 지방족 잔기이고; X9는 Pro, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X10은 지방족 잔기이고; X11은 지방족 잔기이고/거나; X12는 지방족 잔기인 펩티드.
26. 항목 25에 있어서, X8은 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X9는 Pro이고; X10은 D- 또는 L-Ala, 또는 D- 또는 L-Val이고; X11은 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고/거나; X12는 D- 또는 L-Thr, 또는 D- 또는 L-Val인 펩티드.
27. 항목 26에 있어서, X8-X9-X10-X11-X12는 LPAIT (서열 번호 82), LPAIV (서열 번호 83), IPALV (서열 번호 84), LPALV (서열 번호 85), LIAIV (서열 번호 86) 또는 LPVIV (서열 번호 87)인 펩티드.
28. 항목 1 내지 7 및 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, NterGp가 하나의 양으로 하전된 아미노산 및 하나의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 펩티드.
29. 항목 28에 있어서, NterGp가 화학식 V: X1-X2-X3-X4의 4개 아미노산 서열을 가지며, 여기서 X1은 양으로 하전된 잔기이고 X3는 음으로 하전된 잔기이고, X2는 작은 아미노산이고, X4는 방향족 아미노산인 펩티드.
30. 항목 29에 있어서, X1은 D- 또는 L-Lys이고, X2는 Gly이고, X3는 D- 또는 L-Asp이고/거나 X4는 D- 또는 L-Trp인 펩티드.
31. 항목 30에 있어서, NterGp가 KGDW (서열 번호 116)인 펩티드.
32. 항목 1 내지 7 및 25 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 제2 도메인이 화학식 III이고, 여기서 펩티드가 제1 도메인의 카르복시 말단에 연결된 1 내지 10개 아미노산의 제3 도메인을 추가로 포함하는 펩티드.
33. 항목 32에 있어서, 제3 도메인이 화학식 VI: X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35의 것이고, 여기서 X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34 및 X35는 항목 1 및 8 내지 11 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 펩티드.
34. 항목 1 내지 7 및 25 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
KGDWLPAITGLVGGVGLL (서열 번호 52);
KGDWLPAIVSIGGGVVLL (서열 번호 53);
KGDWIPALVGGGGGGGLL (서열 번호 54);
KGDWLPALVSIGGGVGLL (서열 번호 55);
KGDWIPALVGLGGGGGLL (서열 번호 56);
KGDWLIAIVGIGGG (서열 번호 57);
KGDWLPVIVGIGGG (서열 번호 58);
KGDWLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 59);
KGDWLPAIVGIGGGGGL (서열 번호 60);
KGDWLPAIVGIGGGGG (서열 번호 61);
KGDWLPAIVGIGGGG (서열 번호 62); 또는
35. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, X13은 지방족 및/또는 작은 잔기이고; X14는 지방족 및/또는 작은 잔기이고; X15는 지방족 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X16은 지방족 잔기이고; X17은 지방족 잔기이고; X18은 지방족 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X19은 지방족 잔기이고; X20은 지방족 잔기이고; X21은 지방족 잔기이고; X22는 작은 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X23은 지방족 잔기이고; X24는 지방족 잔기이고/거나; X25는 지방족 잔기인 펩티드.
36. 항목 35에 있어서, X13은 Gly 또는 D- 또는 L-Val; X14는 Gly 또는 D- 또는 L-Val이고; X15는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X16은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X17은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X18은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X19는 D- 또는 L-Val이고; X20은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X21은 D- 또는 L-Val이고; X22는 D- 또는 L-Ala이고; X23은 D- 또는 L-Val이고; X24는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고/거나; X25는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu인 펩티드.
37. 항목 35에 있어서, X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25는 GGLLLLVIVAVLI (서열 번호 88)인 펩티드.
38. 항목 1 내지 7 및 35 내지 37 중 어느 하나에 있어서, CterGp가 Lys 및 Arg 잔기의 혼합물을 포함하는 펩티드.
39. 항목 38에 있어서, CterGp가 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드: AYKRK (서열 번호 76), AYKKR (서열 번호 77), AYKRR (서열 번호 78), AYRRK (서열 번호 79) 또는 AYRKK (서열 번호 80).
40. 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
41. 약제로서 사용하기 위한, 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물.
42. 대상체의 탈수초성 질환의 치료에 사용하기 위한 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물.
43. 탈수초성 질환이 탈수초성 자가면역 질환인, 항목 42에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
44. 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)) 구형세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다근신경신경병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사에 의한 탈수초성 질환인, 항목 42 또는 43에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
45. 다발근신경병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발신경근병증인, 항목 44에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
46. 탈수초성 질환이 다발성 경화증인, 항목 44에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
47. 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 항목 40에 따른 약학 조성물.
48. 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 눈 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증, 또는 죽상동맥경화증인, 항목 47에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
49. 펩티드, 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 함께 조합하여 사용하기 위한 것인, 항목 42 내지 48 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 펩티드, 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
50. 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 것인, 항목 49에 따라 사용하기 위한 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물.
51. 대상체에서 탈수초성 질환의 치료용 약제의 제조를 위한, 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물의 용도.
52. 항목 51에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 탈수초화 자가면역 질환인 용도.
53. 항목 51 또는 52에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 확산성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)), 구형 세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다발성 신경근병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환인 용도.
54. 항목 53에 있어서, 상기 다발신경근병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발근신경병증인 용도.
55. 항목 53에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증인 용도.
56. 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물의 용도.
57. 항목 56에 있어서, 상기 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상동맥경화증인 용도.
58. 항목 51 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제가 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 사용하기 위한 용도.
59. 항목 58에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 용도.
60. 이를 필요로 하는 대상체에서 탈수초성 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 항목 1 내지 39중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 방법.
61. 항목 60에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 탈수초성 자가면역 질환인 방법.
62. 항목 60 또는 61에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 확산성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)), 구형 세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다발성 신경근병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환인 방법.
63. 항목 62에 있어서, 상기 다발신경근병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발근신경병증인 방법.
64. 항목 62에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증인 방법.
65. 이를 필요로 하는 대상체에서 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 항목 1 내지 39중 어느 하나에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 항목 40에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 방법.
66. 항목 65에 있어서, 상기 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상경화증인 방법.
67. 항목 60 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물이 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 사용하기 위한 방법.
68. 항목 67에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 방법.
도 1. 막 표적화 펩티드는 NRP1-플렉신A1 수용체 이량체화를 차단한다. 막 표적화 펩티드의 간섭 활성은 근접 결찰 분석으로 측정한 Nrp1과 플렉신A1 사이의 상호작용을 감소시킨다.
도 1a-b: 근접 결찰 분석에 의해 측정된 상이한 용량의 GUNGNIR 또는 MIMMING으로 처리된 Oli-neu 세포당 NRP1-플렉신A1 상호작용의 정량화 (데이터는 평균 ± SEM로 나타냄, 클러스칼-왈리스 검정, ***P < 0.0001 **P < 0.01).
도 2a-g: 막 표적화 펩티드는 희소돌기아교세포 세포주 Oli-neu의 이동에 대한 Sema3A의 부정적인 효과를 중화한다. 도 2a: G-X-X-X-G 모티프 구조 이동을 포함하는 상이한 합성 서열을 갖는 펩티드 (SKOLL 및 HATI n=1 제외 n=3). 도 2b: G/S-X-X-X-G 모티프를 갖는 펩티드, G-X-X-X-S 또는 S-X-X-X-A 모티프를 갖는 펩티드는 아님, Sema3A로 처리된 Oli-neu 세포의 구조 이동 (SKIRNIR n=1을 제외한 n=3). 도 2c: Sema3A로 처리된 Oli-neu 세포의 N-말단 또는 C-말단 구조 이동 상의 G-X-X-X-G 모티프 옆에 결실이 있는 펩티드, 그러나 모티프 중 하나의 G가 결실되면 펩티드 활성이 무효화된다 (n=1). 도 2d: (NterGp)와 G-X-X-X-G 모티프 사이의 N-말단 단축은 펩티드 효율을 손상시킨다 (BROKK 및 EITRI n=1 제외 n=3). 도 2e: (CterpolyD/E)를 갖는 다른 펩티드 서열 중, RATI 및 GUNGNIR 및 MIMMING 구조 이동 (n=3). 도 2f: GUNGNIR IC50 계산 at 1,2 nM (n=3). 도 2g: MTP-PlexA1 (서열 번호 1)과 이의 레트로 유사체 (ODIN)의 비교. n=3 독립적인 실험일 때 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다, 비히클 조건에 대한 ANOVA 및 본페리니의 다중 비교 검정 **P < 0.01, ***P < 0.0001.
도 3: 막 표적화 펩티드의 생체분포 분석. 표시된 용량 (μg/kg)을 복강 내 주사한 후 4시간 동안 상이한 기관에서 GUNGNIR-Cy5의 생물발광 비율.
도 4a-b: GUNGNIR은 EAE 중증도를 감소시킨다. 도 4a: 10 mg/kg GUNGNIR는 PLP 면역화 후 EAE 임상 점수를 감소시킨다. 도 4b: 10 mg/kg GUNGNIR는 MOG 면역화 후 EAE 임상 점수를 감소시킨다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다, n = 7 (도 4a) 및 n = 10 (도 4b) 비선형 회귀 (종 모양)를 플롯팅하고 통계적 유의성을 위해 사용했다 P < 0.0001 (도 4a) P=0,0002 (도 4b).
도 5a: 막 표적화 펩티드는 혈관신생을 억제한다. HUVEC 튜브형 구조 교차점을 계산하여 세뇨관 형성을 측정했다. 튜브형 구조 교차점 수가 감소하는 것은 MTP에 의한 혈관신생이 억제된다는 것을 나타낸다.
도 5b는 HUVEC 세포에 대한 MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5 디페닐 테트라졸륨 브로마이드) 독성 분석 결과를 보여준다.
도 6a-b: 비히클과 100 μg/kg GUNGNIR 그룹 간에 서로 다른 것으로 밝혀진 두 가지 매개변수를 보여주는 6일 재수초화 후 보행 분석 결과. 도 6a: 추진 6일 오른쪽 뒤. 도 6b: 최소 dA/dT 6일 왼쪽 뒤.
도 7a-f: 비히클과 10 또는 100 μg/kg GUNGNIR 그룹 간에 다른 것으로 밝혀진 5가지 매개변수를 보여주는 11일 재수초화 후 보행 분석 결과. 도 7a: 최소 dA/dT 11일 오른쪽 앞. 도 7b: 자세 요인 11일 왼쪽 앞. 도 7c: 추진 11일 오른쪽 뒤. 도 7d: 자세 11일 오른쪽 뒤. 도 7e: 피크 자세에서 발 영역 가변성 11일 왼쪽 뒤.
도 8a-b: 쿠프리존 유도된 마우스의 뇌 조직에서 주요 미엘린 단백질 PLP에 대한 염색 (도 8a) 및 미엘린 인지질의 룩솔-패스트-블루 (LFB) 염색 (도 8b)을 보여주는 조직학 실험의 결과.
도 9a-g: 쿠프리존에 의해 유도된 탈수초화를 받은 마우스의 체중 결과. 도 9a: GUNGNIR 치료 시작 전 (즉, 21일) 체중. 도 9b: 실험 시작 시 체중. 도 9c: 실험 종료 시 체중. 도 9d: 6일 재수초화 그룹에서 21일째 체중 감소. 도 9e: 11일 재수초화 그룹에서 21일째 체중 감소. 도 9f: 6일 재수초화 그룹에서 5주차 체중 감소. 도 9g: 11일 재수초화 그룹의 5주차 체중 감소.
도 10: EAE-PLP 마우스의 다양한 그룹에서 실험 과정에 걸친 체중 모니터링.
도 11a-f: EAE-PLP 마우스의 다양한 그룹에서의 질환 중증도의 임상 점수. 도 11a: 실험 과정에 걸친 임상 점수. 도 11b-f: 각각 22일, 26일, 28일, 38일 및 39일의 임상 점수.
도 12: EAE-MOG 마우스의 다양한 그룹에서 실험 과정에 걸친 체중 모니터링.
도 13a-o: EAE-MOG 마우스의 다양한 그룹에서의 질환 중증도의 임상 점수. 도 13a: 실험 과정에 걸친 임상 점수. 도 13b-o: 각각 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 39 및 30일의 임상 점수.
본원에 제공된 임의 및 모든 예 또는 예시적인 언어 ("예를 들어", "와 같은", 등)의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 달리 주장하지 않는 한 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
본원에서, 용어 "약"은 일반적인 의미를 갖는다. 용어 "약"은 값이 값을 결정하기 위해 사용되는 장치 또는 방법에 대한 고유한 오류 변화를 포함하거나, 인용된 값에 가까운 값, 예를 들어 인용된 값의 10% 또는 5% 이내 (또는 값의 범위)를 포함함을 나타내기 위해 사용된다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본원에 개시된 구현예 및 특징의 임의 및 모든 조합 및 하위 조합은 본 발명에 포함된다.
본 개시내용은 뉴로필린-1/플렉신-A1 사이의 상호작용 및/또는 Sema3A의 이동 억제 효과를 억제할 수 있는 새로운 길항성 펩티드를 제공하고 이러한 길항성 펩티드를 포함하는 약학 조성물 및 이의 약물로서의 용도에 관한 것이다.
정의
플렉신-A1은 PLXNA1 유전자에 의해 암호화되는 단백질이다. 이는 UniProt ID 번호 Q9UIW2; HGNG ID 번호 9099과 같은 여러 데이터베이스에 설명되어 있다. 참조 서열은 Genbank에서 mRNA의 경우 NM_032242.3으로, 단백질의 경우 NP_115618.3으로 공개되어 있다.
뉴로필린-1은 NRP1 유전자에 의해 암호화되는 단백질이다. 이는 UniProt ID 번호 O14786; HGNG ID 번호 8004와 같은 여러 데이터베이스에 설명되어 있다. 참조 서열은 Genbank에서 mRNA의 경우 NM_001330068.1로, 단백질의 경우 NP_001316997.1로 공개되어 있다.
"구성된다," "본질적으로 구성된다" 또는 "실질적으로 구성된다": 요소 또는 요소들에 대한 언급과 같은 용어를 사용하여 본 개시내용의 임의의 양태 또는 구현예에 대한 본원의 설명은 달리 명시되지 않거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한, 특정 요소 또는 요소들로 "구성된", "본질적으로 구성되는" 또는 "실질적으로 구성되는" 발명의 유사한 양태 또는 구현예에 대한 지지를 제공하도록 의도된다. 예를 들어, 특정 서열을 포함하는 것으로 본원에 기술된 펩티드 또는 단백질은 달리 명시되지 않거나 문맥상 명확하게 모순되지 않는 한, 해당 서열로 구성된 펩티드 또는 단백질을 기술하는 것으로 이해되어야 한다. "본질적으로 구성된다"는 펩티드 또는 단백질이 해당 서열로 구성되지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 치환, 첨가, 결실 또는 이들의 혼합물, 특히 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환, 첨가, 결실 또는 이들의 혼합, 더욱 특히 1, 2 또는 3개의 치환, 첨가, 삭제 또는 이들의 혼합을 또한 포함할 수 있음을 의도한다. 특히, "본질적으로 구성되는"은 펩티드가 N 및/또는 C 말단에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산, 특히 1, 2, 3, 4 또는 5개의 추가 아미노산, 보다 특히 1, 2 또는 3개의 추가 아미노산, 및/또는 1, 2 또는 3개의 치환, 결실, 첨가, 또는 이들의 혼합을 포함할 수 있음을 의도할 수 있다. 특정 양태에서, 서열은 2개 또는 3개 이하의 치환을 갖는다. 바람직하게는, 치환, 첨가, 결실 또는 이들의 혼합의 수는 서열의 길이에 따라 달라진다. 예를 들어, 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합의 백분율은 30% 이하, 바람직하게는 25% 이하, 더욱 바람직하게는 8 또는 10% 이하일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치환"은 펩티드 서열에서 단일 아미노산을 다른 아미노산으로 교환을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "결실"은 펩티드 서열에서 단일 아미노산의 제거를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "삽입" 또는 "첨가"는 동등하며, 펩티드 서열에 단일 아미노산의 첨가를 지칭한다.
"치환, 첨가, 결실"은 하나의 아미노산의 치환, 첨가, 결실을 의미한다. 그러면, "1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 치환, 첨가, 결실 또는 이들의 혼합", "1, 2, 3, 4, 또는 5개의 치환, 첨가, 결실 또는 이들의 혼합" 또는 "1, 2 또는 3개의 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합"을 언급할 때, 각각 "치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합으로부터 선택된 아미노산의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 변형(들)", "치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합으로부터 선택된 아미노산의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 변형(들)" 또는 "치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합으로부터 선택된 아미노산의 1, 2 또는 3개의 변형(들)"을 의미한다. "1, 2, 3, 4, 또는 5개의 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합"은 또한 "1 내지 5개의 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합"을 의미한다. "1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합"은 또한 "1 내지 3개의 치환, 결실, 첨가 또는 이들의 혼합"을 의미한다.
본원에 개시된 펩티드 서열에서, 아미노산은 다음 명명법에 따라 1문자 코드 또는 3문자 코드로 표시된다: A: Ala, 알라닌; C: Cys, 시스테인; D: Asp, 아스파르트산; E: Glu, 글루탐산; F: Phe, 페닐알라닌; G: Gly, 글리신; H: His, 히스티딘; I: Ile, 이소류신; K: Lys, 리신; L: Leu, 류신　; M: Met, 메티오닌　; N: Asn, 아스파라긴　; P: Pro, 프롤린　; Q: Gln, 글루타민　; R: Arg, 아르기닌　; S: Ser, 세린　; T: Thr, 트레오닌　; V: Val, 발린　; W: Trp, 트립토판 및 Y: Tyr, 티로신.
보존적 치환은 주어진 아미노산 잔기를 유사한 화학적 특성 (예를 들어, 전하, 벌크 및/또는 소수성)을 측쇄 ("R-그룹")를 갖는 다른 잔기로 대체하는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않는다. 보존적 치환 및 해당 규칙은 최신 기술에 잘 설명되어 있다. 예를 들어, 보존적 치환은 다음 표에 반영된 아미노산 그룹 내의 치환으로 정의될 수 있다:
표 A - 아미노산 잔기
표 B - 대안적인 보존적 아미노산 잔기 치환 그룹
표 C - 아미노산 잔기의 추가 대체 물리적, 기능적 분류
본원에 기술된 펩티드는 펩티드의 합성 유사체를 제조하기 위해 펩티드 화학에 사용되는 자연 발생 아미노산뿐만 아니라 다른 아미노산 (예를 들어, 자연 발생 아미노산, 비-자연 발생 아미노산, 핵산 서열 등에 의해 암호화되지 않는 아미노산)의 L- 및 D-이성질체를 포함할 수 있다. 자연 발생 아미노산의 예는 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 트레오닌 등이다. 다른 아미노산은 예를 들어 아미노산의 비유전적으로 암호화된 형태뿐만 아니라 L-아미노산의 보존적 치환을 포함한다. 천연 발생 비유전적으로 암호화된 아미노산은 예를 들어, 베타-알라닌, 3-아미노-프로피온산, 2,3-디아미노 프로피온산, 알파-아미노이소부티르산 (Aib), 4-아미노-부티르산, N-메틸글리신 (사르코신), 히드록시프롤린, 오르니틴 (예를 들어, L-오르니틴), 시트룰린, t-부틸알라닌, t-부틸글리신, N-메틸이소류신, 페닐글리신, 시클로헥실알라닌, 노르류신 (Nle), 노르발린, 2-나프틸알라닌, 피리딜알라닌, 3-벤조티에닐 알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 2-플루오로페닐알라닌, 3-플루오로페닐알라닌, 4-플루오로페닐알라닌, 페니실라민, 1,2,3,4-테트라히드로-이소퀴놀린-3-카르복실산, 베타-2-티에닐알라닌, 메티오닌 술폭시드, L-호모르기닌 (Hoarg), N-아세틸 리신, 2-아미노부티르산, 2-아미노부티르산, 2,4,-디아미노부티르산 (D- 또는 L-), p-아미노페닐알라닌, N-메틸발린, 호모시스테인, 호모세린 (HoSer), 시스테산, 엡실론-아미노 헥산산, 델타-아미노 발레르산, 또는 2,3-디아미노부티르산 (D- 또는 L-) 등을 포함한다. 이들 아미노산은 생화학/펩티드 화학 분야에 잘 알려졌다.
본원에 기술된 펩티드는 모든 L-아미노산, 모든 D-아미노산 또는 L- 및 D-아미노산의 혼합물을 포함할 수 있다. 구현예에서, 펩티드는 L-아미노산만을 포함한다.
위에 설명된 치환 외에도, 유사한 측쇄 기능을 제공하는 합성 아미노산도 펩티드에 도입될 수 있다. 예를 들어, 방향족 아미노산은 D- 또는 L-나프틸알라닌, D- 또는 L-페닐글리신, D- 또는 L-2-티에닐알라닌, D- 또는 L- 1-, 2-, 3-, 또는 4-피레닐알라닌, D- 또는 L-3-티에닐알라닌, D- 또는 L-(2-피리디닐)-알라닌, D- 또는 L-(3-피리디닐)-알라닌, D- 또는 L-(2-피라지닐)-알라닌, D- 또는 L-p-시아노-페닐알라닌, D- 또는 L-(4-이소프로필)-페닐글리신, D- 또는 L-(트리플루오로메틸)-페닐글리신, D- 또는 L-(트리플루오로메틸)-페닐알라닌, D- 또는 L-p-플루오로페닐알라닌, D- 또는 L-p-비페닐알라닌, D- 또는 L-p-메톡시비페닐알라닌, D- 또는 L-2-인돌(알킬)알라닌, 및 D- 또는 L-알킬알라닌으로 대체될 수 있고 여기서, 알킬기는 치환 또는 비치환된 메틸, 에틸, 프로필, 헥실, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소-부틸, 및 이소-펜틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
측쇄에 1차 아민을 포함하는 리신의 유사체는 오르니틴, 호모리신, 2,3- 디아미노프로피온산 (Dap), 및 2,4-디아미노부티르산 (Dab)을 포함한다.
히스티딘의 유사체는 예를 들어, Ikeda 등, Protein Eng.　(2003)　16　(9):　699-706에 기술된 것 (예를 들어, β-(1,2,3-트리아졸-4-일)-DL-알라닌), Stefanucci 등, Int. J. Mol. Sci. 2011, 12(5), 2853-2890에 기술된 것 (아자-히스티딘, 호모-히스티딘, β2-호모-히스티딘, β3-호모-히스티딘, 노르-히스티딘), N-이미다졸릴알라닌, 메틸 히스티딘, 디메틸히스티딘, C-트리아졸릴알라닌, 히스티딘 메틸 에스테르, 히스티디놀 및 히스티딘아미드를 포함한다.
트립토판의 유사체는 예를 들어, 나프틸알라닌, 인데닐알라닌, 2Me-Trp (또는 Mrp), 5-메틸-DL-트립토판, 아자트립토판 (7-아자트립토판), 히드록시트립토판 (5-히드록시트립토판), 플루오로트립토판, 아미노트립토판, 트립타민 및 데사아미노트립토판,　α-메틸-트립토판; β-(3-벤조티에닐)-D-알라닌; β-(3-벤조티에닐)-L-알라닌; 1-메틸-트립토판; 4-메틸-트립토판; 5-벤질옥시-트립토판; 5-브로모-트립토판; 5-클로로-트립토판; 5-플루오로-트립토판; 5-히드록시-트립토판; 5-히드록시-L-트립토판; 5-메톡시-트립토판; 5-메톡시-L-트립토판; 5-메틸-트립토판; 6-브로모-트립토판; 6-클로로-d-트립토판; 6-클로로-트립토판; 6-플루오로-트립토판; 6-메틸-트립토판; 7-벤질옥시-트립토판; 7-브로모-트립토판; 7-메틸 트립토판; D-1,2,3,4-테트라히드로-노르하르만-3-카르복실산; 6-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로노르하르만-1-카르복실산; L-1,2,3,4-테트라히드로-노르하르만-3-카르복실산; 5-메톡시-2-메틸-트립토판; 2,3,4,9-테트라히드로-1H-β-카르볼린-3-카르복실산 (Tca); 및 6-클로로-L-트립토판을 포함한다.
알라닌, 글리신, 발린 및 류신의 유사체는 β-알라닌, 아미노이소부티르산 (α 또는 β), 메틸알라닌, t-부틸알라닌, 아미노헥산산, 알파,베타-디아미노프로피온산, 프로파르길글리신, 베타-시클로헥실-L-알라닌, 베타-히드록시류신, 아미노카프로산, 및 알릴글리신을 포함한다.
서열이 X/Z를 포함하는 경우, 이는 서열이 아미노산 X 또는 아미노산 Z를 포함함을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "서열 동일성" 또는 "동일성"은 두 펩티드의 아미노산 대 아미노산의 정확한 일치를 지칭한다. 동일성 백분율은 정렬된 두 서열 사이의 정확한 일치 수를 계산하고, 더 짧은 서열의 길이로 나누고, 결과를 100으로 곱함으로써 두 분자 사이의 서열 정보를 직접 비교함으로써 결정될 수 있다.
서열 동일성은 두 서열의 길이에 따라 전역 또는 국소 정렬 알고리즘을 사용하여 두 펩티드 서열을 정렬하여 결정할 수 있다. 유사한 길이의 서열은 바람직하게는 전체 길이에 걸쳐 서열을 최적으로 정렬하는 전역 정렬 알고리즘 (예를 들어, 니들맨 분쉬)을 사용하여 정렬되는 반면, 실질적으로 다른 길이의 서열은 바람직하게는 국소 정렬 알고리즘 (예를 들어, 스미스 워터맨)을 사용하여 정렬된다. 그런 다음 서열은 이들이 (예를 들어 기본 매개변수를 사용하는 GAP 또는 BESTFIT 프로그램에 의해 최적으로 정렬된 경우) 서열 동일성의 특정 최소 백분율을 공유하는 경우 "실질적으로 동일한" 또는 "본질적으로 유사한" 것으로 지칭될 수 있다. GAP는 니들맨 및 분쉬 전역 정렬 알고리즘을 사용하여 두 서열을 전체 길이 (전장)에 걸쳐, 정렬하여 일치 항목 수를 최대화하고 간격 수를 최소화한다. 2개의 서열이 유사한 길이를 가질 때 서열 동일성을 결정하기 위해 전역 정렬이 적합하게 사용된다.
용어 "레트로 형태" 또는 "레트로 유사체"는 참조 펩티드에 대해 역방향으로 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 지칭한다. 용어 "레트로인버소 형태" 또는 "레트로인버소 유사체"는 참조 펩티드에 대해 역방향의 아미노산 서열을 포함하고 또한 L에서 D로 반전된 아미노산의 키랄성을 갖는 펩티드를 지칭한다. 본 개시내용에 따른 레트로 및 레트로인버소 형태는 참조 펩티드의 생물학적 활성을 유지하며, 예를 들어, 뉴로필린-1과 플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하는 능력을 갖는다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약리학적으로 허용 가능하고 투여되는 대상체에게 실질적으로 무독성인 본원에 기술된 펩티드의 염을 지칭한다. 보다 구체적으로, 이러한 염은 펩티드의 생물학적 효과와 특성을 유지하며 적합한 무독성 유기 또는 무기 산 또는 염기로부터 형성된다.
예를 들어, 이들 염은 그러한 염을 형성하기에 충분히 염기성인 본원에 기술된 펩티드의 산 부가 염을 포함한다. 이러한 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 저급 알칸설포네이트, 예를 들어 메탄설포네이트, 트리플루오로메탄설포네이트 또는 에탄설포네이트, 아릴설포네이트, 예를 들어 벤젠설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트 또는 톨루엔설포네이트 (토실레이트로도 알려짐), 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 신나메이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소염, 황산수소염, 2-히드록시에탄술포네이트, 이타코네이트, 락테이트, 말레산염, 만델산염, 메탄술포네이트, 니코틴산염, 질산염, 옥살산염, 파모산염, 펙틴산염, 과염소산염, 과황산염, 3-페닐프로피오네이트, 인산염, 피크산염, 피발산염, 프로피오네이트, 살리실산염, 숙신산염, 황산염, 술포네이트, 주석산염, 티오시아네이트, 운데카노에이트 등을 포함한다.
추가로, 일반적으로 염기성 약학 화합물로부터 약학적으로 유용한 염의 형성에 적합한 것으로 간주되는 산은, 예를 들어, P. Stahl 등, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge 등, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson 등, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; 및 The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C.)에 의해 논의되어 있다.
또한, 본원에 기술된 펩티드가 충분히 산성인 경우, 본 개시내용의 염은 무기 또는 유기 염기로 형성된 염기 염을 포함한다. 이러한 염은 나트륨, 리튬 및 칼륨염과 같은 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염과 같은 알칼리 토금속염; 알루미늄염, 철염, 아연염, 구리염, 니켈염, 및 코발트염과 같은 금속염; 암모늄과 같은 무기 아민염 또는 트리메틸암모늄염과 같은 치환된 암모늄염; 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민)를 갖는 염 예를 들어 클로로프로카인염, 디벤질아민염, 디시클로헥실아민염, 디에탄올아민 염, 에틸아민 염 (디에틸아민염 및 트리에틸아민염 포함), 에틸렌디아민염, 글루코사민염, 구아니딘염, 메틸아민염 (디에틸아민염 및 트리에틸아민염 포함), 모르폴린염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염, N-벤질-페네틸아민염, N-메틸글루카민염, 페닐글리신 알킬 에스테르염, 피페라진염, 피페리딘염, 프로카인염, t-부틸 아민염, 테트라메틸암모늄염, t-옥틸아민염, 트리스-(2-히드록시에틸)아민염, 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄염을 포함한다.
이러한 염은 표준 기술을 사용하여 당업자에 의해 매우 쉽게 형성될 수 있다. 실제로, 약제학적 펩티드를 염으로 화학적으로 변형시키는 것은 약제학적 화학자에게 잘 알려진 기술이다, (예를 들어, H. Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995) pp. 196 및 1456-1457 참조). 본원에 기술된 펩티드의 염은 예를 들어, 염이 침전되는 것과 같은 매질 또는 수성 매질에서 펩티드를 일정량의 산 또는 염기, 예를 들어 등가량과 반응시킨 후 동결건조함으로써 형성될 수 있다.
"증가된", "증가하다" 또는 "강화하다"는 동일한 조건에서 시험한 펩티드가 없을 때 측정된 값과 비교했을 때 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 % 증가한 측정값을 지칭하는 것을 의도한다. "감소된" 또는 "감소하다"는 동일한 조건에서 시험한 펩티드가 없을 때 측정된 값과 비교했을 때 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 % 감소한 측정값을 지칭하는 것을 의도한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하다" 또는 "치료하는"은 질환 또는 장애의 치료, 완화 또는 지연과 같이 환자의 건강 상태를 개선하기 위한 모든 행위를 지칭한다. 예방적 치료뿐만 아니라 치료적 치료도 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, "약학 조성물"은 생리학적으로 적합한 담체 및 부형제와 같은 선택적인 다른 화학적 성분과 함께 본 개시내용에 따른 펩티드를 포함하는 것과 같은 하나 이상의 활성제의 제제를 지칭한다. 약학 조성물의 목적은 유기체에 대한 활성제의 투여를 촉진하는 것이다. 본 개시내용의 조성물은 임의의 통상적인 투여 경로 또는 용도에 적합한 형태일 수 있다. 한 구현예에서, "조성물"은 전형적으로 활성제, 예를 들어, 화합물 또는 조성물과 자연 발생 또는 비천연 발생 담체, 불활성 (예를 들어, 검출 가능한 제제 또는 표지) 또는 활성, 예를 들어 보조제, 희석제, 결합제, 안정화제, 완충제, 염, 친유성 용매, 보존제, 보조제 등의 조합을 의도하고 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에 언급된 "허용 가능한 비히클" 또는 "허용 가능한 담체"는 약학 조성물을 제형화하는데 유용한 것으로 당업자에게 알려진 임의의 공지된 화합물 또는 화합물의 조합이다.
본원에 사용된 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 활성제와 조합하여 대상체에 치료 효과를 부여하는 데 필요한 활성제의 양, 예를 들어, 표적 질환이나 장애를 치료하거나 원하는 효과를 내기 위해 필요한 활성제의 양을 지칭한다. "유효량"은 제제(들), 질환 및 그 중증도, 연령, 신체 상태, 크기, 성별 및 체중을 포함하여 치료할 대상체의 특성, 치료 기간, 동시 치료의 특성 (있는 경우), 특정 투여 경로 및 보건의료인의 지식 및 전문성 내에서 유사한 요인에 따라 다를 것이다. 이러한 요인들은 당업자에게 잘 알려졌으며 일상적인 실험만으로 해결할 수 있다. 개별 성분 또는 이들의 조합의 최대 용량, 즉 건전한 의학적 판단에 따라 가장 안전한 용량을 사용하는 것이 일반적으로 바람직하다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제"는 장애 또는 질환에 대한 치료 또는 예방 특성을 갖는 임의의 물질 또는 조성물을 지칭한다.
용어 "치료"는 질환 또는 질환의 증상의 치료, 방지, 예방 및 지연 등 환자의 건강상태를 개선하기 위한 모든 행위를 지칭한다. 이는 질환의 치유적 치료 및/또는 예방적 치료를 모두 지정한다. 치유적 치료는 질환이나 질환의 증상 또는 질환이 직접적으로 또는 간접적으로 유발하는 고통을 경감, 개선 및/또는 제거, 감소 및/또는 안정화시키는 치료 또는 치료를 초래하는 치료로 정의된다. 예방적 치료는 질환의 예방을 초래하는 치료와 질환의 진행 및/또는 발생 또는 그 발생 위험을 감소 및/또는 지연시키는 치료 모두를 포함한다. 특정 구현예에서, 이러한 용어는 질환, 장애, 감염 또는 이와 관련된 증상의 개선 또는 근절을 지칭한다. 본 개시내용에 따른 치료는 반드시 100% 또는 완전한 치료를 의미하지는 않는다. 오히려, 당업자가 잠재적인 이익 또는 치료 효과를 갖는 것으로 인식하는 치료의 정도는 다양하다. 바람직하게는, 용어 "치료"는 하나 이상의 활성제를 포함하는 조성물을 장애/질환이 있는 대상체에게 적용하거나 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "장애" 또는 "질환"은 유전적 또는 발달 오류, 감염, 독극물, 영양 결핍 또는 불균형, 독성, 또는 불리한 환경 요인의 효과로 유발된 신체의 기관, 부분, 구조 또는 시스템이 잘못 기능하는 것을 지칭한다. 바람직하게는, 이러한 용어는 건강 장애 또는 질환, 예를 들어, 정상적인 신체적 또는 정신적 기능을 방해하는 질병을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체", "개체" 또는 "환자"는 상호교환 가능하며 동물, 바람직하게는 포유동물, 훨씬 더욱 바람직하게는 성인, 어린이, 신생아를 포함하는 인간을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단리된"은 언급된 물질 (예를 들어, 화합물, 펩티드, 항체, 폴리펩티드, 핵산 등)이 자연에서 발생하는 다른 물질로부터 실질적으로 분리되거나 그에 비해 풍부하다는 것을 나타낸다. 특히, "단리된" 펩티드는 자연 환경의 구성요소로부터 확인, 분리 및/또는 회수된 펩티드다.
길항 펩티드
본 발명자는 위에서 정의한 바와 같이 플렉신A1의 길항 펩티드를 설계하는 규칙을 정의했다.
펩티드에서, G/S-X-X-X-G 모티프 또는 도메인은 활성에 관여한다. 제1 Gly 잔기를 Ser 잔기로 대체할 가능성은 G-X-X-X-G 모티프가 일반적으로 필수적인 것으로 간주되기 때문에 놀랍고 예측할 수 없다. X 잔기는 임의의 아미노산일 수 있다. 특정 양태에서, 3개의 X 잔기 중에서, 2개 이하의 잔기가 하전된 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 3개의 X 잔기 중 어느 것도 하전되지 않는다. 특정 양태에서, 이들은 지방족 비하전 아미노산 (Gly, Ala, Val, Leu 및 Ile) 중에서 선택되고 보다 구체적으로 Gly, Val, Ile 및 Leu로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
또한, 펩티드 설계의 또 다른 중요한 양태는 막에 G/S-X-X-X-G 모티프의 고정과 막 표면과 G/S-X-X-X-G 모티프 사이의 거리이다. 실제로, 모티프의 위치가 핵심이며, 모티프의 부적절한 위치 지정은 펩티드의 길항 활성의 감소 또는 손실을 초래한다.
보다 구체적으로, 펩티드가 NterGp와 같은 N-말단 막 고정을 갖는 경우, N-말단 막 고정 모티프와 G/S-X-X-X-G 모티프 사이에 5개의 아미노산을 삽입하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 6개의 아미노산을 갖는 plexA1-S1, 및 각각 4개의 아미노산과 2개의 아미노산을 갖는 BROKK 또는 EITRI는 희소돌기아교세포의 이동에 대한 Sema3A의 부정적인 효과를 상쇄할 수 없었다 (도 2d). 반대로, 모두 N-말단 막 고정 모티프와 G/S-X-X-X-G 모티프 사이에 5개의 아미노산을 갖는, 펩티드 BALDR, FREYR, BRAGI, NJORD, ULLR, SKOLL, HATI, plexA1-S2, FJALAR, GALAR, IVALDI 및 ALVISS는 희소돌기아교세포의 이동에 대한 Sema3A 부정적인 효과를 상쇄시켰다 (도 2a-2d).
펩티드가 C-말단 막 고정을 가지면, G/S-X-X-X-G 모티프와 CterGp와 같은 양으로 하전된 아미노산을 갖는 C-말단 막 고정 모티프 사이에 13개의 아미노산을 삽입하는 것이 바람직하고, G/S-X-X-X-G 모티프와 CterpolyD/E와 같은 음으로 하전된 아미노산을 갖는 C-말단 막 고정 모티프 사이에 11개의 아미노산을 삽입하는 것이 바람직하다. 보다 구체적으로, CterpolyD/E와 같은 음으로 하전된 아미노산을 갖는 C-말단 막 고정 모티프를 갖는 펩티드의 맥락에서 G/S-X-X-X-G 모티프와 C-말단 막 고정 모티프 사이에 11개의 아미노산을 갖는 펩티드 KVASIR, GERD, THRUD, RATI, GUNGNIR 및 MIMMING는 모두 G/S-X-X-X-G 모티프와 C-말단 막 고정 모티프 사이에 12개의 아미노산이 있는 펩티드 DRAUPNIR와 달리, 희소돌기아교세포의 이동에 Sema3A 부정적인 효과를 상쇄할 수 있었다.
이러한 규칙이 결정되면, 발명자들은 놀랍게도 펩티드가 막 고정 모티프의 반대편에서 모티프 G/S-X-X-X-G까지 단축될 수 있음을 관찰했다. 이러한 양태는 더 짧은 펩티드의 설계를 가능하게 한다.
예를 들어, 길이가 29개 아미노산인 펩티드 MTP-PlexA1과 비교하여, 펩티드 BALDR, FREYR, BRAGI, NJORD, ULLR 및 plexA1-S2는 단지 18개 아미노산 길이이고, 펩티드 FJALAR은 단지 17개 아미노산 길이, 펩티드 GALAR은 단지 16개 아미노산 길이, 펩티드 IVALDI 단지 15개 아미노산 길이, 및 펩티드 SKOLL, HATI 및 ALVISS는 단지 14개 아미노산 길이이다. 유사하게, C-말단 폴리E의 5개 아미노산을 포함하여, 펩티드 KVASIR, GERD, THRUD는 각각 26, 24 및 23개 아미노산 길이이다.
따라서, 본 개시내용은 다음을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성되는 펩티드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이고
- 서열 G/S-X-X-X-G의 모티프,
- 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)11-(CterpolyD/E) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)11-(CterpolyD/E); 모티프의 N-말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X)5- (즉, (NterGp)-(X)5- G/S-X-X-X-G); 또는 모티프의 C-말단에 직접 연결된 -(X)13-(CterGp) (즉, G/S-X-X-X-G-(X)13-(CterGp); 및
- X는 임의의 아미노산이지만 X 중 2개 이하가 하전된 아미노산이고;
- NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, 그리고 CterpolyD/E는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산의 그룹이고,
여기서 펩티드는 명세서에 상세히 설명된 방법에 의해 측정된 바와 같이 이동에 대한 sema3A의 억제 효과를 억제하고/하거나 뉴로필린-1/플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하고; 그리고
여기서 펩티드는 MTP-PlexA1 (TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK, 서열 번호 1)의 서열을 갖지 않는다.
본 개시내용은 또한 다음을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성되는 펩티드에 관한 것이고
- 서열 G/S-X5-X6-X7-G의 제1 도메인, 및
- (i) 화학식 I의 제2 도메인: 제1 도메인의 C-말단에 직접 연결된 -(X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36)-(CterpolyD/E), (즉, G/S-X-X-X-G-(X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36)-(CterpolyD/E);
- (ii) 화학식 II의 제2 도메인: 제1 도메인의 C-말단에 직접 연결된 -(X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25)-(CterGp), (즉, G/S-X-X-X-G-(X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25)-(CterGp); 또는
- (iii) 화학식 III의 제2 도메인: 제1 도메인의 N-말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X8-X9-X10-X11-X12)- (즉, (NterGp)- (X8-X9-X10-X11-X12)-G/S-X-X-X-G);
함께
X5, X6 및 X7은 임의의 아미노산, 바람직하게는 비하전 아미노산, 그리고 더욱 바람직하게는 지방족 비하전 아미노산 예를 들어 Gly, Ala, Val, Leu 및 Ile이고;
X8, X9, X10, X11 및 X12는 임의의 아미노산, 바람직하게는 비하전 아미노산, 그리고 더욱 바람직하게는 지방족 또는 비극성 비하전 아미노산이고;
X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25는 임의의 아미노산이며, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 및 X36은 임의의 아미노산이며, X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 및 X36 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
NterGp는 하전된 아미노산을 포함하는, 바람직하게는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산을 포함하는 막 고정 모티프이고,
CterGp는 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 막 고정 모티프, 바람직하게는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산을 포함하는 막 고정 모티프이고, 그리고
CterpolyD/E는 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 막 고정 모티프, 바람직하게는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산을 포함하는 막 고정 모티프이다.
펩티드는 이동에 대한 Sema3A의 억제 효과를 억제하거나 뉴로필린-1/플렉신-A1 사이의 상호작용을 억제하는 기능적 특징과 연관되어 있다. 바람직하게는, 펩티드는 두 가지 특징을 모두 충족한다.
뉴로필린-1/플렉신-A1 사이 상호작용과 펩티드에 의한 이러한 상호작용의 억제는 이용 가능한 임의의 방법으로 측정할 수 있다. 보다 구체적으로, 이는 실시예 섹션에 구체적으로 설명된 근접 결찰 분석에 의해 측정될 수 있다. 뉴로필린-1/플렉신-A1 사이의 상호작용은 펩티드가 없을 때의 상호작용과 비교하여 적어도 10, 20, 30, 40 또는 50% 억제된다.
이동에 대한 sema3A의 억제 효과에 대한 펩티드의 효과는 임의의 이용 가능한 방법에 의해 측정될 수 있다. 보다 구체적으로, 실시예 섹션에 설명된 바와 같이 세포 이동 분석에 의해 측정될 수 있다. 펩티드가 양성 대조군 이동의 적어도 80%를 회복할 수 있는 경우 펩티드는 이동에 대한 sema3A의 억제 효과를 억제하는 것으로 간주된다.
(NterGp), (CterGp) 및 (CterpolyD/E)는 또한 본 개시내용에서 막 고정 모티프라고 불린다. 이들은 막 표면에 펩티드를 고정시키는 아미노산 그룹이다. 막 고정 모티프는 일반적으로 하나 또는 여러 개의 하전된 아미노산, 예를 들어 적어도 2개의 하전된 아미노산, 예를 들어 2-7개의 하전된 아미노산을 포함한다.
보다 구체적으로, NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹일 수 있다. 예를 들어, NterGp는 Glu 또는 Asp와 같은 하나의 양으로 하전된 아미노산 및 Lys 또는 Arg와 같은 하나의 음으로 하전된 아미노산; 또는 Glu 또는 Asp와 같은 2개의 양으로 하전된 아미노산; 또는 Lys 또는 Arg와 같은 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함할 수 있다. 매우 구체적인 양태에서, NterGp는 KGD 모티프를 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로, NterGp는 방향족 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 특정 양태에서, NterGp는 4개의 아미노산 X1-X2-X3-X4의 서열을 가지며 X1 및 X3은 2개의 하전된 아미노산이고, 바람직하게는 하나는 양으로 하전되고 다른 하나는 음으로 하전되고, X2는 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고 X4는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, 더욱 바람직하게는 NterGp는 KGDW (서열 번호 116)이다. NterGp는 바람직하게는 막의 세포외측에 위치하도록 선택된다.
구현예에서, X5는 지방족 잔기, 예를 들어 L 또는 I, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X6은 P 또는 I, 바람직하게는 P이다. 구현예에서, X7은 지방족 잔기, 예를 들어 A 또는 V, 바람직하게는 A이다. 구현예에서, X8은 지방족 잔기, 예를 들어 L 또는 I, 바람직하게는 I이다. 구현예에서, X9는 지방족 및/또는 작은 잔기, 예를 들어 T 또는 V, 바람직하게는 V이다. 추가 구현예에서, X8-X9-X10-X11-X12는 LPAIT (서열 번호 82), LPAIV (서열 번호 83), IPALV (서열 번호 84), LPALV (서열 번호 85), LIAIV (서열 번호 86) 또는 LPVIV (서열 번호 87)이다.
선택적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성되고:
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G (서열 번호 22);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V (서열 번호 23);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V (서열 번호 24);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E (서열 번호 25);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L (서열 번호 26);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L (서열 번호 27);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E (서열 번호 28);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V (서열 번호 29);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I (서열 번호 30);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V (서열 번호 31);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E (서열 번호 32);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V (서열 번호 33);
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L (서열 번호 34); 및
(NterGp)-L/I-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I (서열 번호 35);
여기서 NterGp는 상기 정의된 바와 같고, 예를 들어, 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, 그리고
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및/또는 N-말단 및/또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
구현예에서, 펩티드는 화학식 II의 제2 도메인을 포함하고, 여기서 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 5개 이하의 아미노산을 포함한다. 구현예에서, 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 4개 이하의 아미노산을 포함한다. 구현예에서, 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 3개 이하의 아미노산을 포함한다. 구현예에서, 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 2개 이하의 아미노산을 포함한다. 구현예에서, 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 1개의 아미노산을 포함한다. 구현예에서, 펩티드는 제1 도메인의 N-말단에 어떠한 아미노산도 포함하지 않는다.
구현예에서, 펩티드는 화학식 II의 제2 도메인을 포함하고, 여기서 펩티드는 28개 아미노산 이하, 27개 아미노산 이하, 또는 26개 아미노산 이하의 길이를 갖는다. 구현예에서, 펩티드는 화학식 II의 제2 도메인을 포함하고 23 내지 26개 아미노산의 길이를 갖는다.
구현예에서, X13은 지방족 및/또는 작은 잔기, 예를 들어 G 또는 V, 바람직하게는 G이다. 구현예에서, X14는 지방족 및/또는 작은 잔기, 예를 들어 G 또는 V, 바람직하게는 G이다. 구현예에서, X15는 L 또는 E, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X16은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X17은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X18은 L 또는 E, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X19는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X20은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 I이다. 구현예에서, X21은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X22는 A 또는 E, 바람직하게는 A이다. 구현예에서, X23은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X24는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X25는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다.
추가 구현예에서, X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25는 GGLLLLVIVAVLI (서열 번호 88)이다.
보다 구체적으로, CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, CterGp는 KRK, KKR, RRK 또는 KRR을 포함할 수 있다. 선택적으로, 이는 방향족 아미노산 및/또는 작은 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 매우 구체적인 양태에서, CterGp는 5개의 아미노산 X'1-X'2-X'3-X'4-X'5의 서열을 가지며 X'1은 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고, X'2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, X'3, X'4 및 X'5는 염기성 아미노산이며, 더욱 바람직하게는 CterGp는 AYKRK (서열 번호 76), AYKKR (서열 번호 77), AYKRR (서열 번호 78), AYRRK (서열 번호 79) 및 AYRKK (서열 번호 80)에서 선택되는 서열이다. CterGp는 바람직하게는 막의 세포내측에 위치하도록 선택된다.
선택적으로, 펩티드는 하기로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성되고
A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 36);
I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 37);
V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 38); 및
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-L-I-(CterGp) (서열 번호 39);
여기서 CterGp는 상기 정의된 바와 같고, 예를 들어, 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고,
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, CterpolyD/E는 음으로 하전된 아미노산 클러스터, 특히 Glu를 포함한다. 예를 들어, 이는 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개의 음으로 하전된 아미노산, 예를 들어, Glu, Asp 또는 Glu와 Asp의 조합을 포함하는 4-10개의 아미노산 그룹일 수 있다. CterpolyD/E 도메인은 2, 3, 4 또는 5개의 Glu 잔기, 2, 3, 4 또는 5개의 Asp 잔기, 또는 2, 3, 4 또는 5개의 Glu와 Asp 잔기의 조합을 포함할 수 있다. 특정 양태에서, CterpolyD/E는 -X"1-X"2-(Z)n의 서열을 가지며 X"1은 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, Z는 D 또는 E이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이거나; 또는 -X"1-X"1비스-X"2-(Z)n의 서열을 가지며 X"1 및 X"1비스는 I 또는 L과 같은 긴 지방족 아미노산이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, Z는 D 또는 E이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이다. 매우 구체적인 양태에서, CterpolyD/E는 -X"1-X"2-(E)n의 서열을 가지며 X"1은 작은 아미노산 (예를 들어, G 또는 A)이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이거나; 또는 -X"1-X"1비스-X"2-(E)n의 서열을 가지며 X"1 및 X"1비스는 I 또는 L과 같은 긴 지방족 아미노산이고, X"2는 방향족 아미노산 (예를 들어, Y 또는 W)이고, n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이다. CterpolyD/E는 바람직하게는 막의 세포내측에 위치하도록 선택된다. 구현예에서, CterpolyD/E는 서열 AYEEEEE (서열 번호 89) 또는 LIYEEEEE (서열 번호 90)를 포함하거나 이로 구성된다.
CterpolyD/E 막 고정 모티프의 존재는 이러한 막 고정 모티프를 포함하는 펩티드가 가용성이고 안정적이어서 24시간보다 긴 혈장 반감기와 뇌 및 척수와 같은 표적 기관에 도달하기에 적합한 생체 분포를 허용하기 때문에 특히 바람직한 양태이다.
구현예에서, X26은 지방족 및/또는 작은 잔기, 예를 들어 G 또는 V, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X27은 지방족 및/또는 작은 잔기, 예를 들어 G 또는 V, 바람직하게는 G이다. 구현예에서, X28은 L 또는 E, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X29는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X30은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X31은 L 또는 E, 바람직하게는 L이다. 구현예에서, X32는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X33은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 I이다. 구현예에서, X34는 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다. 구현예에서, X35는 A 또는 E, 바람직하게는 E이다. 구현예에서, X36은 지방족 잔기이고, 바람직하게는 V이다.
구현예에서, X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36은 VGLLLEVIVEV (서열 번호 91), 또는 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 밑줄 친 잔기를 제외하고 보존적 치환과 같은 아미노산 치환을 갖는 이의 변이체이다. 구현예에서, X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36은 VGLLLEVIVEV (서열 번호 91), 또는 밑줄 친 잔기를 제외하고 보존적 치환과 같은 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 갖는 이의 변이체이다. 구현예에서, 변이체는 1 또는 2개의 아미노산 치환, 예를 들어 보존적 치환을 갖는다. 구현예에서, 변이체는 1개의 아미노산 치환, 예를 들어 보존적 치환을 갖는다.
구현예에서, X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36은 VGLLLEVIVEV (서열 번호 91), GGELLLVIVE (서열 번호 92), VVLLLEVIVEV (서열 번호 93), VGLLVEVIVEV (서열 번호 117), VGLVLEVIVEV (서열 번호 118)이다.
또 다른 구현예에서, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성되고:
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 2);
V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 3);
I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 4);
A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 5);
P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 6);
I/L-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 7); 및
T-I/L-P/I-A/V-I/L-V/T-G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-A/E-V-(CterpolyD/E) (서열 번호 8);
여기서 CterpolyD/E는 상기 정의된 바와 같고, 예를 들어, 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산의 그룹이고, 그리고
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및/또는 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
선택적으로, CterpolyD/E는 본원에 개시된 임의의 특정 양태 또는 구현예에 따른다.
선택적으로, 펩티드는 다음 아미노산 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성되고
G/S-I/G/L-G/V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L-L/E-V-I-V-E-V-A/LI-Y-(E)n (서열 번호 9); 또는
G/S-L-V-G-G-G/V-G/V-L/E-L-L/V-L/E-V-I-V-E-V-A-Y-(E/D)n (서열 번호 119);
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및/또는 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 n은 2-10, 바람직하게는 4-6 사이의 정수이다. "A/LI"은 펩티드가 아미노산 A 하나 또는 2개의 아미노산 LI를 포함함을 의미한다. 선택적으로, n은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10, 바람직하게는 4, 5, 6, 7, 및 8, 예를 들어 4, 5 또는 6으로 구성된 군에서 선택되는 정수이다. 선택적으로, 펩티드는 N-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
선택적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성되고:
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10);
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11);
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12);
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13);
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14); 및
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15);
여기서 서열은 굵은 글씨의 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
매우 구체적인 양태에서, 펩티드는 다음에서 선택된 서열로 구성된다
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10);
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11);
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12);
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13);
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14); 및
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15);
여기서 서열은 굵은 글씨의 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 추가로 포함할 수 있다.
추가적인 매우 구체적인 양태에서, 펩티드는 다음에서 선택된 서열로 구성된다:
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10);
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11);
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12);
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13);
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14); 및
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15).
선택적으로, 펩티드는 다음으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나 구성되고:
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20); 및
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
여기서 서열은 굵은 글씨의 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 추가로 포함할 수 있다.
매우 구체적인 양태에서, 펩티드는 다음에서 선택된 서열로 구성되고
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20); 및
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
여기서 서열은 굵은 글씨의 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 추가로 포함할 수 있다.
추가적인 매우 구체적인 양태에서, 펩티드는 다음에서 선택된 서열로 구성된다
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20); 및
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21).
따라서, 본 개시내용의 펩티드는 다음으로부터 선택된 아미노산 서열을 가질 수 있고:
KGDWLPAIT-G/S-LVGGVGLL (서열 번호 40)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGVVLL (서열 번호 41)
KGDWIPALV-G/S-GGGGGGLL (서열 번호 42)
KGDWLPALV-G/S-IGGGVGLL (서열 번호 43)
KGDWIPALV-G/S-LGGGGGLL (서열 번호 44)
KGDWLIAIV-G/S-IGGG (서열 번호 45)
KGDWLPVIV-G/S-IGGG (서열 번호 46)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGGLL (서열 번호 47)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGGL (서열 번호 48)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGGG (서열 번호 49)
KGDWLPAIV-G/S-IGGGG (서열 번호 50)
KGDWLPAIV-G/S-IGGG (서열 번호 51)
AIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 10)
T-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 11)
G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 12)
TLPAIV-G/S-IGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 13)
TLPAIT-G/S-LVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 14)
TLPAIV-G/S-IGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 15)
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
매우 특정 양태에서, 펩티드는 다음으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 가지며
KGDWLPAITGLVGGVGLL (서열 번호 52)
KGDWLPAIVSIGGGVVLL (서열 번호 53)
KGDWIPALVGGGGGGGLL (서열 번호 54)
KGDWLPALVSIGGGVGLL (서열 번호 55)
KGDWIPALVGLGGGGGLL (서열 번호 56)
KGDWLIAIVGIGGG (서열 번호 57)
KGDWLPVIVGIGGG (서열 번호 58)
KGDWLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 59)
KGDWLPAIVGIGGGGGL (서열 번호 60)
KGDWLPAIVGIGGGGG (서열 번호 61)
KGDWLPAIVGIGGGG (서열 번호 62)
KGDWLPAIVGIGGG (서열 번호 63)
AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16)
TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17)
GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18)
TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19)
TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20)
TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21)
여기서 서열은 굵은 잔기를 제외한 임의의 위치에서 하나의 아미노산의 1, 2 또는 3개의 치환 (예를 들어, 보존적 치환) 및 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다.
특정 양태에서, 펩티드는 35, 34, 33, 32, 31 또는 30개 아미노산 이하, 특히 25 또는 20개 이하의 아미노산 길이를 갖는다.
특정 양태에서, 펩티드는 자연에서는 발견되지 않는다. 펩티드는 비천연 펩티드다. 이는 정제, 분리 또는 재조합될 수 있다. 이는 잘 알려진 펩티드 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 기술된 펩티드의 N- 및 C-말단은 선택적으로 단백질분해에 대해 보호될 수 있다. 바람직한 구현예에서, N-말단은 아세틸기 형태일 수 있고/있거나 C-말단은 아미드기 형태일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 펩티드는 자유 C-말단을 갖는다.
대안적으로 또는 추가적으로, 단백질분해에 저항성을 갖는 펩티드의 내부 변형도 구상되며, 예를 들어 적어도 -CONH- 펩티드 결합이 변형되고 (CH2NH) 환원 결합, (NHCO) 레트로-인버소 결합, (CH2-O) 메틸렌-옥시 결합, (CH2-S) 티오메틸렌 결합, (CH2CH2) 카르바 결합, (CO-CH2) 세토메틸렌 결합, (CHOH-CH2) 히드록시에틸렌 결합), (N-N) 결합, E-알센 결합 또는 또한 -CH=CH-결합에 의해 대체된다. 특정 양태에서, 펩티드는 본원에 개시된 임의의 펩티드의 레트로 유사체 (동일한 서열이지만 역방향임) 또는 본원에 개시된 임의의 펩티드의 레트로인버소 유사체 (동일한 서열이지만 역방향 및 L에서 D로 반전된 아미노산의 키랄성)일 수 있다.
예를 들어, 펩티드는 아세틸화, 아실화, 아미드화, 가교, 고리화, 이황화 결합 형성, 공유 가교 형성, 시스테인 형성, 피로글루타메이트 형성, 포르밀화, 감마-카르복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 수산화, 요오드화, 메틸화, 미리스틸화, 산화, 인산화 등에 의해 변형될 수 있다.
본 개시내용에 따른 펩티드는 희귀 아미노산인 하나 이상의 아미노산 특히 히드록시프롤린, 히드록시리신, 알로히드록시리신, 6-N-메틸리신, N-에틸글리신, N-메틸글리신, N-에틸아스파라긴, 알로-이소류신, N-메틸이소류신, N-메틸발린, 피로글루타민, 아미노부티르산; 또는 합성 아미노산 특히 오르니틴, 노르류신, 노르발린 및 시클로헥실-알라닌을 포함할 수 있다.
선택적으로, 펩티드는 선택적으로 링커 또는 스페이서 (예를 들어, 디글리신)를 통해 추가 모이어티에 연결되어, 예를 들어, 접합체를 형성할 수 있다. 선택적으로, 펩티드는 융합 단백질의 일부일 수 있다. 추가 모이어티는 귀소 펩티드; PEG (폴리에틸렌 글리콜), 올리고-N-메톡시-에틸글리신 (NMEG), 알부민, 알부민 결합 단백질 또는 면역글로불린 Fc 도메인과 같은 안정화제; 면역태그, 비오틴, 렉틴, 킬레이트제 등의 친화도 태그; His-태그와 같은 정제 태그; 광학 태그, 킬레이트화된 란타미드, 형광 염료, 또는 FRET/BRET 수용체/공여체와 같은 검출 가능한 표지; 표적화 모이어티; 분비 신호 펩티드; 분비 신호 펩티드일 수 있다. 추가 모이어티는 예를 들어, 예를 들어 암세포 또는 희소돌기아교세포와 같은 세포의 특정 표적화를 허용할 수 있다. 예를 들어, Nguyen 등 (J Control Release. (2019) 298:142-153) 또는 Gamper 등 (2019, Cancers, 11, 1609)에 자세히 설명된대로 펩티드는 나노담체에 부착된 표적화 모이어티와 결합될 수 있다. 따라서, 특정 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 펩티드에 연결된 나노담체 (예를 들어, 나노입자)에 관한 것이다. 나노담체는 예를 들어 인공 나노담체 또는 바이러스 유래 나노입자일 수 있다 (Steinmetz 등, Org. Biomol. Chem, 2007, 5, 2891-2902; Hashizume 등, Am. J. Pathol. 2000, 156, 1363-1380; Maeda 등, J. Control. Release, 2000, 65, 271-284; Allen 등, Science 2004, 303, 1818-1822; Cho 등, J. Vis. Exp. 2011, 52, e2808　; Gamper 등, 2019, Cancers, 11, 1609). 펩티드는 신경계 (예를 들어, 중추신경계 (CNS))에 펩티드를 표적화하고/하거나 혈액 뇌 장벽을 통해 CNS로 펩티드의 진입을 촉진하기 위해 모이어티에 연결될 수 있다.
추가 모이어티는 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 추가될 수 있거나, 펩티드의 아미노산 중 하나 이상의 측쇄에 부착될 수 있다 (예를 들어, 리신 또는 시스테인 잔기). 바람직하게는, 추가 모이어티는 막 고정 모티프를 운반하는 말단에서 융합되거나 접합된다.
본 개시내용의 또 다른 양태에서, 펩티드는 C-말단 말단 또는 리신 잔기에 의해 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 분자와 같은 중합체, 특히 1500 또는 4000 MW의 PEG에 공유 결합되어, 소변 소실 및 치료 용량을 사용하고 혈장 반감기를 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 미소구체를 형성하는 약물 전달 시스템을 위한 생분해성 및 생체적합성 고분자 물질에 펩티드를 포함시킴으로써 펩티드 반감기가 증가된다. 중합체 및 공중합체는 예를 들어, 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLGA) (US2007/0184015에 예시됨)이다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용에 따른 펩티드의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산과 같은 약학적으로 허용 가능한 무기산의 염; 아세트산, 시트르산, 말레산, 말산, 숙신산, 아스코르브산 및 타르타르산과 같은 약학적으로 허용 가능한 유기산의 염; 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 또는 암모늄의 염과 같은 약학적으로 허용 가능한 미네랄 염기의 염; 또는 제약 기술에 일반적으로 사용되는 염분화 가능한 질소를 함유한 유기 염기의 염일 수 있다. 상기 염을 제조하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 핵산, 예를 들어 본 개시내용에 따른 펩티드를 암호화하는 mRNA 분자에 관한 것이다.
약학 조성물
본 개시내용은 본원에 개시된 펩티드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 펩티드는 활성 성분이다.
약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 비히클을 추가로 포함할 수 있다.
펩티드를 포함하는 약학 조성물은 당업자에게 알려진 표준 약제학적 관행 (Lippincott Williams & Wilkins, 2000 및 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York)에 따라 제제화된다.
예를 들어, 조성물은 에멀젼, 마이크로에멀젼, 수중유 에멀젼, 무수 지질 및 기타 유형의 에멀젼을 포함할 수 있다. 조성물은 희석제, 부형제, 안정화제 및 보존제와 같은 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
한 양태에서, 본 개시내용은 펩티드 또는 이의 염을 포함하는 본 개시내용에 따른 약학 조성물의 비경구 주사용 안정한 제제를 제공하며, 여기서 펩티드는 건조된 후 사용 전에 용매에 재구성된다. 펩티드 (또는 제제가 2개 이상의 펩티드를 포함하는 구현예에서는 각각의 펩티드)를 비휘발성 완충액과 혼합하고 건조시켜 건조 펩티드 분말을 얻는다. 적합한 완충제는 글리신 완충제, 시트레이트 완충제, 인산염 완충제, 및 이들의 혼합물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 한 양태에서, 완충제는 글리신 완충제이다. 다른 양태에서 완충제는 시트레이트 완충제와 인산염 완충제의 혼합물이다. 대안적으로, 본 개시내용에 따른 약학 조성물은 수성 상태로 저장될 수 있다. 용액은 원할 경우 활성 성분과 조화되어야 하는 추가 첨가제 또는 부형제를 함유할 수 있으며, 동결 건조 단계에서 제거되지 않는 경우 투여 경로와도 조화되어야 한다.
경구 투여의 경우, 조성물은 정제, 캡슐제, 산제, 과립제, 시럽제, 엘릭서제, 농축 점적제 등의 액상 제제와 같은 통상적인 경구 투여 형태로 제제화될 수 있다. 예를 들어, 약학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 사카린 나트륨, 활석, 셀룰로오스, 글루코스, 수크로스, 마그네슘, 탄산염 등을 포함하는 무독성 고체 담체 또는 희석제가 사용될 수 있다. 압축정의 경우, 분말제에 응집성을 부여하는 제제인 결합제도 필요하다. 예를 들어, 전분, 젤라틴, 락토스이나 포도당과 같은 당, 천연 또는 합성 검을 결합제로 사용할 수 있다. 정제의 분해를 촉진하기 위해 정제에 붕해제도 필요하다. 붕해제에는 전분, 점토, 셀룰로오스, 알긴, 검 및 가교 중합체가 포함된다. 또한, 정제에는 제조과정에서 정제원료가 표면에 달라붙는 것을 방지하고, 제조시 분말원료의 유동특성을 향상시키기 위해 윤활제 및 활택제도 포함된다. 콜로이드 이산화규소는 활택제로 가장 일반적으로 사용되며 활석이나 스테아르산과 같은 화합물은 윤활제로 가장 일반적으로 사용된다.
경피 투여의 경우, 조성물은 연고, 크림 또는 겔 형태로 제제화될 수 있으며 침투를 촉진하기 위해 디메틸 술폭시드, 디메틸 아세트아미드 및 디메틸포름아미드와 같은 적절한 침투제 또는 세제가 사용될 수 있다.
경점막 투여의 경우, 비강 스프레이, 폐내 흡입, 직장 또는 질 좌약을 사용할 수 있다. 한 구현예에서, 본 개시내용의 펩티드, 그의 염 또는 조성물은 당업계에 공지된 방법에 따라 폐내 약물 전달 장치를 사용하여 투여되는 건조 분말 또는 액체 제제를 사용하여 폐내 경로로 투여될 수 있다. 활성 화합물 (펩티드 또는 이의 염)은 당업계에 공지된 방법에 의해 임의의 공지된 좌약 기제에 혼입될 수 있다. 이러한 기제의 예는 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 (카보왁스), 폴리에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트, 및 이들과 융점 또는 용해 속도를 변경하기 위한 다른 상용성 물질의 혼합물을 포함한다.
약학 조성물의 형태, 투여 경로, 투여량 및 요법은 자연스럽게 치료할 상태, 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중 및 성별 등에 따라 달라진다.
본 개시내용에 따른 약학 또는 치료적 조성물은 국소, 경구, 비경구, 비강 내, 정맥 내, 근육 내, 종양 내, 피하 또는 안구 내 투여 등을 위해 제제화될 수 있다. 비경구 투여의 경우, 조성물은 피내, 피하, 근육 내 또는 정맥 내로 주사할 수 있다.
구현예에서, 본 개시내용에 따른 약학 또는 치료적 조성물은 대상체의 신경계, 예를 들어 중추신경계 (CNS)로 투여, 두개 내 주사 또는 뇌척수액 내로의 주사 (예를 들어, 척수강 내 주사)를 위해 제제화된다.
특정 양태에서, 본 개시내용에 따른 약학 조성물은 체중 kg당 0.01 ng 내지 10 mg의 본 개시내용의 펩티드를 포함한다. 한 양태에서, 본 개시내용에 따른 약학 조성물은 체중 kg당 0.1 ng 내지 1 g의 본 개시내용의 펩티드를 포함한다.
치료 용도
본 개시내용의 길항 펩티드는 억제 신호 전달 경로 Sema3A-뉴로필린 1-플렉신-A1에 관여하는 플렉신-A1 수용체를 차단함으로써 예방 또는 치료될 수 있는 임의의 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다.
구현예에서, 본 개시내용은 탈수초성 질환의 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 펩티드, 이의 염 또는 조성물, 탈수초성 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본원에 기술된 펩티드, 이의 염 또는 조성물의 용도, 및 본원에 기재된 바와 같은 펩티드, 그의 염 또는 조성물의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 수초성 질환의 치료 방법에 관한 것이다. 펩티드 또는 이의 염의 치료 효과는 희소돌기아교세포 이동 및 분화에 대한 Sema3A 억제 효과를 억제하여 탈수초화를 감소시키고/시키거나 재수초화를 촉진시키는 것을 포함할 수 있다.
탈수초성 질환은 자가면역 탈수초성 질환일 수 있다. 구현예에서, 탈수초성 질환은 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HTLV-I 관련 골수병증 (HAM), 구형세포 백질이영양증, 이염성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 및 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초성 다근신경병증을 포함하는 다근신경병증이다. 추가 구현예에서, 탈수초성 질환은 다발성 경화증과 같은 자가면역 또는 염증성 탈수초성 질환이다. 추가 구현예에서, 다발성 경화증은 재발성 다발성 경화증이다. 다른 구현예에서, 다발성 경화증은 진행성 다발성 경화증이다.
또한, 펩티드, 그의 염 또는 조성물은 탈수초성 질환의 치료에 사용되는 다른 활성 성분과 조합하여 사용될 수 있거나 약학 조성물은 이러한 다른 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 펩티드, 그의 염 또는 조성물은 테리플루노미드, 인터페론 베타-la, 인터페론 베타-lb, 글라티라머 아세테이트, 핑골리모드, 미톡산트론 또는 코르티코스테로이드와 같은 다발성 경화증의 치료에 사용되는 활성 성분과 조합하여 사용될 수 있다. 구현예에서, 펩티드, 그의 염 또는 조성물은 핑골리모드와 조합하여 사용된다.
본 개시내용의 길항 펩티드 또는 그의 염은 암, 보다 구체적으로 플렉신A1/NRP1-발현 암의 치료에 유용할 수 있다. 실제로, Sema3A-의존성 암세포 이동을 차단하여, 전이 발생을 예방하거나 감소시키는 데 사용될 수 있다. 또한, 실시예에 나타난 바와 같이, 상기 펩티드는 항혈관신생 효과를 나타내어 암 치료 효과를 나타낼 수 있다. (Albrecht 등, Frontiers in Oncology, 2020, 10, Article 519). NRP1/PlexA1 이종이량체화의 중단은 이전에 플렉신A1의 혈관신생 촉진 활성을 차단하고 종양 성장을 억제하는 것으로 나타났다 (Jacob 등, 2016, Oncotarget, 7, 57851-57865).
따라서, 본 개시내용은 암 (플렉신A1/NRP1-발현 암)의 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물, 암 (플렉신A1/NRP1-발현 암)의 치료용 약제의 제조를 위한 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물의 용도, 및 대상체에서 치료학적으로 유효한 양의 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 암 (플렉신A1/NRP1-발현 암)의 치료에 사용하기 위한 방법에 관한 것이다. 펩티드의 치료 효과는 특히 암세포 이동의 감소, 종양 성장의 감소 및/또는 혈관신생의 감소에 의한 전이 발생의 감소를 포함할 수 있다.
암은 조혈암 또는 고형 종양, 바람직하게는 고형 종양으로부터 선택될 수 있다. 암의 예는 고형 종양 및 암종, 림프종, 모세포종 (수모세포종 및 망막모세포종 포함), 육종 (지방육종 및 윤활막 세포 육종 포함), 신경내분비 종양 (카르시노이드 종양, 가스트린종 및 섬세포암 포함), 중피종, 신경초종 (청각신경종 포함), 수막종, 선암종, 흑색종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하는 조혈암을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평 세포암 (예를 들어 상피 편평 세포암), 소세포 폐암을 포함하는 폐암, 비소세포 폐암, 폐 선암종 및 폐 편평 암종, 복막암, 간세포암, 위장암을 포함한 위암, 췌장암, 교모세포종, 신경모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로암, 간종양, 유방암, 대장암, 직장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁암종, 침샘암종, 신장암 또는 신장암, 전립선암, 외음부암, 전립선암, 외음부암, 항문 암종, 음경 암종, 고환암, 식도암, 담도 종양뿐만 아니라 두경부암을 포함한다. 선택적으로, 암은 교모세포종 또는 위암과 같이 플렉신A1을 과발현하는 암일 수 있다. 바람직한 양태에서, 암은 CNS 암, 예를 들어 섬모성상세포종, 미만성 성상세포종, 역형성 성상세포종, 교모세포종, 희소돌기아교 종양, 뇌실막 종양, 수모세포종, 송과체 종양, 수막 종양 및 생식 세포 종양, 특히 교모세포종이다.
또한, 펩티드, 이의 염 또는 조성물은 암 치료에 사용되는 다른 활성 성분 또는 치료법과 조합하여 사용될 수 있거나 약학 조성물은 이러한 다른 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다. 암 치료에 사용되는 활성 성분 또는 치료법의 예는 화학요법 (예를 들어, 빈카 알칼로이드, 미세소관 형성을 방해하는 제제 (예를 들어 콜히친 및 그 유도체), 항혈관신생제, 치료 항체, EGFR 표적화제, 티로신 키나제 표적화제 (예를 들어 티로신 키나제 억제제), 전이 금속 복합체, 프로테아좀 억제제, 대사길항제 (예를 들어 뉴클레오시드 유사체), 알킬화제, 백금 기반 제제, 안트라사이클린 항생제, 토포이소머라제 억제제, 마크로라이드, 레티노이드 (예를 들어 올트랜스 레티노산 또는 이의 유도체), 젤다나마이신 또는 이의 유도체 (예를 들어 17-AAG), 수술, 면역 체크포인트 억제제 또는 면역치료제 (예를 들어, 항-PD-1/PD-L1 항체와 같은 PD-1/PD-L1 억제제, 항-CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4 억제제, 항-B7-1/B7-2 항체와 같은 B7-1/B7-2 억제제, 항-TIM3 항체와 같은 TIM3 억제제, 항-BTLA 항체와 같은 BTLA 억제제, 항-CD47 항체와 같은 CD47 억제제, 항-GITR 항체와 같은 GITR 억제제), 종양 항원에 대한 항체 (예를 들어, 항-CD19, 항-CD22 항체), 세포-기반 치료법 (예를 들어, CAR T 세포, CAR NK 세포), 및 IL-2, IL-7, IL-21, 및 IL-15와 같은 사이토카인을 포함한다.
추가적인 양태에서, 본 개시내용은 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물, 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본원에 기술된 펩티드, 이의 염 또는 조성물의 용도, 및 본원에 기술된 펩티드, 이의 염 또는 조성물의 용도, 및 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 펩티드, 그의 염 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애의 치료 방법에 관한 것이다. 펩티드의 치료 효과는 혈관신생의 억제를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애"는 혈관신생을 매개하는 과정의 조절 장애로 인해 발생하는 질환을 지칭한다. 특히, 비정상적인 혈관신생 관련 질환은 혈관종, 건선, 카포시 육종, 자궁내막증, 죽상동맥경화증, 고혈압, 종양 성장, 염증, 류마티스 관절염, 습성형 노인성 황반변성 (AMD), 맥락막 혈관신생, 안구 또는 망막 신생혈관, 및 당뇨병성 망막증을 지칭한다. 특정 양태에서, 비정상적인 혈관신생과 연관된 질환 또는 장애는 종양 성장 및 전이, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상동맥경화증 중에서 선택된다.
플렉신A1 및/또는 NRP1의 억제는 또한 면역세포 침윤을 억제하고 염증을 감소시키고, 염증성 또는 자가면역 질환의 치료에 적합한 것으로 나타났다 (예를 들어, EP 2　497 498 A1 및 WO 2016/033699 참조). 따라서, 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 염증성 또는 자가면역 질환 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물, 염증성 또는 자가면역 질환 또는 병태의 치료용 약제의 제조를 위한 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물의 용도, 및 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 펩티드, 이의 염 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 염증성 또는 자가면역 질환 또는 병태의 치료를 위한 방법에 관한 것이다. 펩티드의 치료 효과는 면역 세포 침윤 및/또는 염증의 억제를 수반할 수 있다.
구현예에서, 염증성 또는 자가면역 질환 또는 병태는 빈혈 (재생 불량성 빈혈, 용혈성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 특발성 혈소판 감소증), 자가면역 간염, 홍채모양체염, 공막염, 포도막염, 고환염, 특발성 혈소판감소 자반증, 베세도우병, 하시모토 갑상선염, 청소년기-발병 당뇨병, 염증성 장질환, 애디슨병, 탈수초성 뇌염, 다발성 경화증, 패혈성 쇼크, 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 피부 염증, 당뇨병, 포도막염, 당뇨병성 망막병증, 노인성 황반변성 (AMD), 망막병증 미숙아, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 노인성 인지 저하/알츠하이머병, 뇌졸중, 아토피성 피부염, 만성 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 쇼그렌 증후군, 또는 건선이다.
본 발명의 추가 양태 및 장점은 다음의 실시예 섹션에서 개시될 것이며, 이는 예시적인 것으로 간주되어야 하며 본 출원의 범위를 제한하지 않는 것으로 간주되어야 한다. 본 명세서에는 다수의 참고문헌이 인용되어 있다; 이들 인용된 참고문헌 각각은 본원에 참고로 포함된다.
실시예
실시예 1: 근접 결찰 분석
뉴로필린-1 및 플렉신A1의 이종이량체화를 방해하는 막 표적화 펩티드 (MTP)의 능력을 입증하기 위해, 세포를 Lab-Tek Permanox 슬라이드에 밤새 접종한 다음, 적절한 펩티드로 1시간 동안 처리했다. 1% PFA로 10분 동안 고정한 후, 슬라이스를 PBS/0.1% Triton X-100으로 투과화시켰다. 1차 항체 (Evitria의 NRP1, 1:500; 및 Abcam의 플렉신-A1, ab23391, 1:200)를 밤새 4℃ PBS에서 배양했다. 그런 다음 수용체 이량체 (뉴로필린-1/플렉신-A1)를 시각화할 수 있는 근접 결찰 분석을 "검출 오렌지" 키트 (Sigma)를 사용하여 제조업체의 권장 사항에 따라 수행했다. 상호작용 (세포 표면의 형광 점)의 정량화는 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 수행되었다.
결과는 GUNGNIR가 NRP1/플렉신A1 상호작용 수의 -60% 감소를 유도했음을 보여준다. MIMMING은 유사한 -51% 감소를 유도한 반면 대조군 비활성 펩티드 SURTR은 NRP1/플렉신A1 이량체 수에 아무런 영향을 미치지 않았다 (표 1).
표 1: 10-7 M에서 펩티드로 처리된 Oli-neu 세포당 NRP1-플렉신A1 상호작용의 수
도 1a 및 1b에 나타낸 바와 같이, GUNGNIR 및 MIMMING 모두 각각, 74 pM 및 17 nM의 IC50로 NRP1/플렉신A1 상호작용 수에서 용량 의존적 효과를 나타냈다.
NRP1/플렉신A1 이량체를 방해하는 MTP의 능력을 입증하는 동시에, 이러한 결과는 MTP가 NRP1/플렉신A1 수용체 이량체화의 서열 의존적 차단을 나타냄을 보여준다.
실시예 2: 세포 이동 분석
MTP가 희소돌기아교세포 세포주 Oli-neu의 이동에 대한 Sema3A의 부정적인 영향을 구제한다는 것을 입증하기 위해, xCELLigence RTCA DP 기기 (ACEA Biosciences Inc.)와 Transwell CIM-플레이트 16 (8 μm 기공 크기 필터 ACEA Biosciences, Inc.)을 사용한 세포 이동 분석을 수행했다. 세포를 비히클 단독 또는 MTP와 함께 1시간 동안 미리 배양하였다. 1 Х 105 세포를 상부 챔버에 150 μl의 배지로 접종했다. 바닥 웰은 화학유인을 위한 2% 소 태아 혈청 및 반발을 위한 20 ng/ml Sema3A (재조합 마우스 세마포린 3A Fc 키메라 단백질 담체 유리 ref: 5926-S3/CF; RnD Systems)가 보충된 배지 160 μl를 함유했다. 제조업체의 지침에 따라 이동 8시간 후에 분석을 수행했다. 데이터는 양성 대조군 이동, 즉, Sema3A 없이 2% 혈청을 사용하는 Oli-neu의 이동 백분율로 표현된다.
결과는 상이한 서열을 갖는 MTP가 이동을 구제하여 이동을 제어함으로써 Sema3A 억제 효과를 상쇄한다는 것을 보여준다 (도 2a). G/S-X-X-X-G 모티프가 G-X-X-X-S 또는 S-X-X-X-A로 대체된 펩티드와 대조적으로, G/S-X-X-X-G 모티프를 갖는 펩티드는 이동을 구제했다 (SKIRNIR n=1을 제외하고 n=3, 도 2b). N-말단 또는 C-말단 측면에서 G-X-X-X-G 모티프 옆에 결실이 있는 펩티드는 이동을 구제했지만, 모티프 중 하나의 G가 결실되면 불활성 펩티드가 생성되었다 (도 2c). (NterGp)와 G-X-X-X-G 모티프 사이 N-말단 단축은 펩티드 효율을 손상시킨다 (BROKK 및 EITRI n=1을 제외하고 n=3, 도 2d). (CterpolyD/E)를 갖는 다른 펩티드 서열 중에서, RATI, GUNGNIR 및 MIMMING은 이동을 구제했다 (n=3, 도 2e). 따라서, 본 기능 분석에서, GUNGNIR의 IC50은 1.2 nM인 것으로 확인되었다 (도 2f). 마지막으로, MTP-PlexA1 (서열 번호 1) ) 및 이의 레트로 유사체, ODIN, (서열 번호 81)에 대해 유사한 활성이 관찰되었으며 (도 2g), 이는 본원에 기술된 펩티드의 레트로 유사체가 상응하는 펩티드와 유사한 생물학적 활성을 나타낸다는 증거를 제공한다.
전반적으로, 이러한 결과는 MTP가 희돌기아교세포 이동에 대한 Sema3A 억제 효과의 서열 의존적 구조를 나타냄을 보여준다. 이는 최소 G/S-X-X-X-G 모티프 (도 2a-c) 및 (N-terGp) (도 2d) 및 (C-terGp) (도 2e)로부터의 적절한 거리에 따라 달라진다.
실시예 3: 용해도 연구
MTP의 용해도는 인산염 완충 식염수 (PBS) 또는 PBS 와 리튬 도데실 황산염 (LDS)의 혼합물에서 시험되었다. 결과는 표 1에 보고되어 있다:
표 1: PBS 및 PBS/LDS에서의 MTP 용해도
흡광도 측정을 통해 농도를 검출하지 못하면 CterpolyD/E가 없는 펩티드는 PBS 100%에 용해되지 않으며 LDS와 같은 추가 비히클이 필요한 반면, CterpolyD/E가 있는 펩티드는 PBS 100%에 용해된다는 것을 보여준다. 이는 C-말단 도메인을 제외하고 동일한 서열을 포함하는 MTP-PlexA1 및 DRAUPNIR에 의해 더욱 구체적으로 예시된다 (MTP-PlexA1: TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAY KRK (서열 번호 1); DRAUPNIR: TLPAIVGIGGGGGLLLEVIVEVLIAY EEEEE (서열 번호 72).
실시예 4: 생체분포 연구
MTP의 생물학적 이용 가능성을 다루기 위해 생체 내에서, 용량 반응 실험에서 3마리 CD1 8주령 암컷 마우스에 1, 10, 100 및 1000 μg/kg의 용량으로 GUNGNIR-cy5를 복강 내 주사했다. 이전에 설명한 바와 같이 (Destouches 등 2011, Cancer Res., 71(9):3296-305; Page 등 2011, Ann Rheum Dis.;70(5):837-43), Bioimager (Nightowl LB-983, Berthold) 덕분에 가스 마취된 동물에서 형광이 검출되었다. 4시간째에 마우스를 희생시킨 후 각 기관에 대해 형광을 측정하였다. 획득은 분석을 위해 10초 동안 수행되었고, Nightowl 프로그램을 이용하여 형광의 표면과 강도를 측정하였다. 도 3에 도시된 바와 같이, GUGNIR는 용량 의존적으로 제거 기관 (간 및 신장)을 포함하는 대규모 생체분포 프로파일을 나타낸다. 뇌와 척수의 함량은 말초기관 (심장, 폐)에서 측정한 것과 유사하여 혈액 뇌 장벽을 효율적으로 통과하는 것으로 나타났다. 따라서, GUNGNIR는 중추신경계에 도달할 수 있어 신경퇴행성질환 등 신경질환 치료에 적합할 수 있다.
실시예 5: 활성 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE)의 유도 및 평가
GUNGNIR의 치료 가능성을 평가하기 위해, 탈수초화를 유발한 마우스에 생체 내 투여를 수행했다. 마우스는 Janvier에서 구입했다 (면역화를 수행할 때 8-9주령). 모든 생쥐는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있는 통제된 환경 (25℃)에서 사육되었으며 12시간/12시간 주야간 주기로 사육되었다. 마우스는 쌍을 이루어 수용되었고 (케이지 당 동일한 수의 각 처리), 케이지는 매주 교체되었다. 모든 조작은 아침에 수행되었다. SJL/JRj 암컷 마우스는 PLP 면역화와 함께 EAE 프로토콜에 사용되었고 EAE MOG 면역화에는 C57BL/6 암컷 마우스가 사용되었다. 1주간의 환경 적응 후, 마우스를 Hooke 연구소에서 개발한 키트 (EK-2120 또는 EK-2110)를 사용하여 면역화했다 (이소플루란을 사용한 단기 마취 중). EAE PLP: CFA (완전 프로인트 보조제) 중 PLP139-151 단편 (HSLGKWLGHPDKF, 서열 번호 74)의 에멀젼을 제조업체의 프로토콜에 따라 50 μl의 4회 피하 주사로 투여했다. 면역화일에 마우스에게 0.4 μg의 백일해 독소를 복강 내로 투여했다. EAE MOG: CFA (완전 프로인트 보조제) 중 MOG35-55 단편 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK, 서열 번호 75)의 에멀젼을 제조업체의 프로토콜에 따라 100 μl의 2회 피하 주사로 투여했다. 마우스는 면역화일에 0.4 μg의 백일해 독소를 복강 내로 투여받았고 1일차에 두 번째 투여를 받았다.
PBS (10 μg/kg)에 희석된 100 μl의 PBS 또는 GUNGNIR를 주 3회 (월요일/수요일/금요일) 복강 내 투여에 따라 면역화 후 1일 (EAE PLP) 또는 면역화 후 3일 (EAE MOG)에 펩티드 처리를 시작했다. 임상 점수는 면역화 후 6일째부터 매일 평가되었으며 펩티드 주입 전에 체계적으로 수행되었다. EAE는 다음 기준에 따라 매일 맹검 상태에서 임상적으로 평가되었다: 0, 질환 없음; 1, 꼬리 톤 감소; 2, 정위 반사 장애 및 부분적인 뒷다리 마비; 3, 완전한 뒷다리 마비; 4, 앞다리 부분 마비를 동반한 뒷다리 마비; 및 5, 빈사 상태이거나 사망.
분석은 동물이 PLP (다발성 경화증의 재발 완화 형태를 모방)에서 10 μg/kg GUNGNIR를 투여받았을 때 임상 점수가 유의하게 감소한 것으로 나타냈다 (도 4a). 유사하게, GUNGNIR를 투여받은 마우스의 임상 점수의 유의미한 감소가 EAE MOG 모델 (다발성 경화증의 진행성 형태 모방)에서 과도하게 나타났다 (도 4b).
전반적으로 이러한 결과는 GUNGNIR가 PLP 및 MOG 모델에서 EAE의 중증도를 감소시킨다는 것을 보여준다.
실시예 6: 혈관신생 분석
혈관신생 관련 병리 (비정상적인 혈관신생을 초래하는 암 및 기타 질환 포함)에서 플렉신-A1을 표적화하는 MTP의 임상적 가능성을 다루기 위해, 혈관신생을 차단하는 펩티드의 능력을 측정하는 혈관신생 분석을 수행했다. 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)를 내피 세포 성장 보충제 (ECGS, 4 μL/mL), 태아 송아지 혈청 (FCS, 20 μL/mL, Thermo Fisher Scientific), 인간 표피 성장 인자 (hEGF, 0.1 ng/mL), 및 인간 기본 섬유아세포 성장 인자 (hbFGF, 1 ng/mL, Thermo Fisher Scientific)가 보충된 내피 세포 성장 배지 (PromoCell, Heidelberg, 독일)에서 5% CO2 하에서 37℃에서 배양했다. 분석을 위해, 플레이트 (15 μ-슬라이드 혈관신생, Ibidi 플레이트, Biovalley, Nanterre, 프랑스)를 매트리겔 (Merck-Millipore, Billerica, MA, USA)로 37℃에서 1시간 동안 코팅했다. 이어서, 펩티드 처리된 배양 배지 (50μL)에 담긴 5000개의 HUVEC을 각 웰에 3시간 동안 첨가했다 (37℃, 5% CO2). 각 웰의 세포를 DIC 현미경 (Leitz DM RB, Leica, Nanterre, 프랑스)으로 이미지화하고 조건당 3 내지 5개의 웰에 대해 닫힌 튜브의 수를 계산했다.
결과는 GUNGNIR 및 RATI가 혈관신생을 억제하는 능력을 보여주는 반면, 비활성 대조 펩티드 HODR은 이 분석에서 효과를 나타내지 않았다 (표 2). GUNGNIR의 여러 유사체도 혈관신생을 억제하는 것으로 나타났다 (도 5a).
표 2: 세관형성의 억제
실시예 7: MTT 분석
MTP의 독성은 MTT 분석을 사용하여 평가되었다. HUVEC 세포는 웰당 (96-웰 플레이트) 100 μL에서 20,000개 세포의 농도로 이 분석에 사용되었다. 37℃에서 24시간 배양한 후, 펩티드 또는 이의 비히클 (PBS)을 10-7M의 농도로 첨가했다. 37℃에서 4시간 배양한 후, 배지를 제거하고 Gey의 균형 염 용액 (GBSS)을 1/20로 희석한 MTT로 교체했다 (스톡 농도 5 mg/mL). 37℃에서 4시간 배양한 후, 세포를 웰을 통해 100μL의 이소프로판올로 용해시키고 플레이트를 570 nm의 파장에서 분광광도법으로 분석했다.
결과는 도 5b에 보고된다.
실시예 8: 재수초화 연구
실험 설계 및 조건
다음으로 GUNGNIR이 마우스 모델에서 구리 킬레이트제인 쿠프리존에 의해 유도된 탈수초화 후 CNS의 재수초화 및 운동 기능 회복을 유도할 수 있는지를 평가했다. 쿠프리존을 경구 중독시키면 며칠 내에 희소돌기아교세포의 세포사멸이 유도되고, 이어서 뇌의 선천성 면역 세포, 즉 성상교세포와 소교세포가 활성화되어 최종적으로 뚜렷한 백질 및 회백질 뇌 영역의 탈수초화가 발생한다.
다음 치료군이 연구에 포함되었다:
(a) 대조군 (n=5)
(b) 5주 쿠프리존 (탈수초화를 입증하기 위해; n=10)
(c) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 6일 동안 비히클을 사용한 치료 (n=10)
(d) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 6일 동안 GUNGNIR (10 μg/kg)로 치료 (n=10)
(e) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 6일 동안 GUNGNIR (100 μg/kg)로 치료 (n=10)
(f) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 11일 동안 비히클을 사용한 치료 (n=10)
(g) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 11일 동안 GUNGNIR (10 μg/kg)로 치료 (n=10)
(h) 5주 쿠프리존, 이어서 연속 11일 동안 GUNGNIR (100 μg/kg)로 치료 (n=10)
연속 5주 동안 ~8주령 (19-21 g) 수컷 마우스에게 지상 표준 설치류 먹이에 혼합된 0.25% 쿠프리존 [비스(시클로헥사논)옥살디히드라존; Sigma-Aldrich Inc., St Louis, MO, USA]을 함유하는 식이를 중독시켜 급성 탈수초화를 유도했다. 비히클 또는 GUNGNIR 화합물 (10 및 100 μg/kg) 처리는 쿠프리존 투여 3주 후(즉, 4주차 시작 시점)부터 시작하여 실험 종료 시까지 (즉, 재수초화 6일 또는 11일 후) 주 3회 복강내 (i.p.) 주사 치료를 수행했다.
수초화의 평가는 면역조직화학 및 조직화학에 의해 수행되었다. 중추신경계 내의 주요 미엘린 단백질인 미엘린 마커 단백지질 단백질 (PLP)은 다음 항체를 사용하여 면역조직화학으로 시각화되었다: Bio-Rad Cat# MCA839G, RRID:AB_2237198, 1:5000. 온전하고 손상되지 않은 미엘린은 룩솔-패스트-블루 (LFB)/과요오드산-Shiff (PAS) 조직화학 염색을 사용하여 추가로 시각화되었다.
운동 기능 평가 (보행 분석)는 고속 복부 평면 비디오그래피를 사용하여 수행되었다. 보행 분석은 이전에 설명한 대로 (Zhan 등, 2019) DigiGait™ 15.0 분석 소프트웨어 (Mouse Specifics, Inc.; Quincy MA)와 함께 DigiGait™ 이미징 시스템을 사용하여 모든 실험 쥐에 대한 실험이 종료되기 전에 한 번 수행되었다.
개별 실험군 간의 차이는 적절한 다중 비교를 통해 통계적으로 시험되었다. 보행 분석을 위해 군 d-e (즉, 6일 재수초화) 및 f-h (즉, 11일 재수초화)를 콜모고로프-스미르노프 검정을 사용하여 정규 데이터 분포에 대해 별도로 시험했다. 이후 모수적 데이터는 일반 일원 분산 분석, 이어서 던네트 다중비교 검정을 수행한 반면 비모수적 데이터는 클러스칼-왈리스 검정에 이어서 던의 다중비교 검정을 수행했다. 각각의 경우에, 비히클과 저용량 및 고용량 군을 비교하여 다중 비교를 수행했다.
조직학적 LFB/PAS 관련 데이터의 경우, 비모수적 클러스칼-왈리스 검정에 이어 던의 다중 비교 검정을 6일 및 11일 재수초화 동안 별도로 수행하였다. 면역조직학적 항-PLP 관련 데이터의 경우, 매개변수적 일반 일원 분산 분석에 이어서 던네트의 다중 비교 검정을 6일 및 11일 재수초화 동안 별도로 수행하였다. 모든 결과는 평균 ± SEM으로 나타낸다.
군 간의 가중치는 일반 일원 분산 분석에 이어서 던네트의 다중 비교 검정 또는 비모수적 클러스칼-왈리스 검정에 이어서 던의 다중 비교 검정을 사용하여 시험되었다.
결과
A. 보행 분석
최대 41개의 서로 다른 보행 지표가 각 발 (동측, 왼쪽 앞발, 오른쪽 앞발, 왼쪽 뒷발 및 오른쪽 뒷발)에 대해 개별적으로 DigiGait™ 이미징 소프트웨어로 평가되었다. 도 6a-b에 요약된 바와 같이, 재수초화 6일 후, 1개의 보행 매개변수는 비히클과 10 μg/kg 군 간에 유의하게 달랐고 1개의 보행 매개변수는 비히클과 100 μg/kg 군 간에 달랐다. 도 7a-e에 요약된 바와 같이, 재수초화 11일 후, 1개의 보행 매개변수는 비히클과 10 μg/kg 군 간에 유의하게 달랐고 4개의 보행 매개변수는 비히클과 100 μg/kg 군 간에 유의하게 달랐다.
B. 조직학
도 8a에 입증한 바와 같이, 고 항-PLP 염색 강도가 대조군 마우스에서 발견되었으며 5주 쿠프리존-처리 마우스 (5주)에서는 현저한 감소가 나타났다. 6일과 11일의 재수초화 기간 동안 염색 강도가 증가했다. 11일차에, 항-PLP 염색 강도는 비히클 군에 비해 100 μg/kg에서 더 높은 경향을 보였다 (p = 0.071). LFB-처리된 절편에서도 동일한 염색 패턴이 관찰되었다. 도 8b에 입증된 바와 같이, 대조군 마우스에서 고 LFB 염색 강도가 발견되었으며 5주 쿠프리존-중독된 마우스 (5주)에서 뚜렷한 감소를 보였다. 다시, 염색 강도는 회복되었지만 범위는 더 느려졌다. 주목할 만한 점은 11일차에 LFB 염색 강도가 비히클 군에 비해 100 μg/kg에서 유의하게 더 높았다는 것이다 (비히클에서 22±3.3 대 100 μg/kg 처리 마우스에서 40±5.8).
C. 체중
실험의 다른 시점에서 체중을 평가했다. 도 9a에 입증한 바와 같이, 쿠프리존 투여 시작 전 (즉, 21일), 쿠프리존-처리군 간 마우스 체중의 유의한 차이가 없었다. 일원 분산 분석에 이어서 던네트의 다중 비교 검정 (6일 및 11일 군을 서로 개별적으로 비교). 이에 비해, 도 9b 및 도 9c에 도시된 바와 같이, GUNGNIR 처리군 각각은 실험 시작 시점과 종료 시점에서 차이가 관찰되지 않았다. 도 9d-g에 입증한 바와 같이, 3주 및 5주차 체중 감소율은 비히클 처리군에 비해 일부 GUNGNIR 처리군에서 유의하게 덜 두드러졌다
실시예 9: 재발성 완화 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE-PLP) 모델에서의 병용 요법
실험 설계 및 조건
GUNGNIR, 핑골리모드 및 GUNGNIR와 핑골리모드 조합의 효과를 재발성 완화 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE-PLP) 마우스 모델에서 연구되었다. GUNGNIR의 경우 PBS에서 복강 내 (IP)로 10 μg/kg을 주당 3회, 핑골리모드의 경우 1 mg/kg IP로 D12 (최고점)부터 매일 치료제를 투여했다. 결과를 비히클 (PBS 그 다음 D12부터 25% 에탄올이 포함된 PBS)로 주당 3회 처리한 대조군과 비교했다. GUNGNIR의 경우 유도 후 D2 (D1) 및 핑골리모드의 경우 유도 후 D12에 치료를 시작했다. 치료제는 5주 동안 투여되었다. 점수는 D7부터 매일 평가되었으며 체중도 평가되었다.
제조사의 지시에 따라 Hooke Kit™ [ser140 ]-PLP139-151/CFA 에멀젼 PTX (카탈로그 번호 EK-2120)로 유도된 3% 이소플루란으로 마우스를 마취시켰다. 간단히 말하면, 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 엉덩이와 왼쪽 및 오른쪽 어깨에 각각 0.05 ml의 PLP 에멀젼을 피하 주사했다 (마우스당 총 0.2 ml를 의미함). 그런 다음, 백일해 독소 (PTX)를 백일해 배치의 농도에 따라 마우스당 30 ng씩 복강 내 주사했다.
결과
실험 기간 동안, 모든 마우스는 윤리적 한계점 (-20%)에 도달하지 않은 체중 감소를 나타냈다. 모든 군은 질환의 유사한 경과를 나타내므로 비교가 가능하다 (도 10). 어떤 처리도 모든 실험군에서 유사한 최고점 강도에 영향을 미치지 않았다 (도 11a). 그러나, 3개의 치료군은 대조군에 비해 유의미한 회복을 보였다 (도 11a). 효과의 진폭은 모든 치료에서 유사했지만 GUNGNIR + 핑골리모드 처리 (조합)은 시간이 지남에 따라 더 나은 효능을 나타냈다 (도 11a). D24부터, 핑골리모드 또는 GUGNIR은 단독으로 중간 점수를 나타낸 반면 GUNGNIR + 핑골리모드 조합은 점수가 1에 도달하지 않는 거의 완전한 보호 효과를 나타냈다 (도 11a). 개별 점수 분석을 통해 GUNGNIR + 핑골리모드 조합이 독립형 조건에서 볼 수 있듯이 변동성이 적은 가장 효율적인 치료 효과를 제공한다는 것이 확인되었다 (도 11b-f).
실시예 10: 진행성 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE-MOG) 모델에서의 병용 요법
실험 설계 및 조건
GUNGNIR, 핑골리모드 및 GUNGNIR와 핑골리모드 조합의 효과를 진행성 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE-MOG) 마우스 모델에서 연구했다. GUNGNIR의 경우 PBS에서 복강 내 (IP)로 10 μg/kg을 주당 3회, 핑골리모드의 경우 1 mg/kg IP로 D14부터 매일 치료제를 투여했다. 결과를 비히클 (PBS 그 다음 D14부터 25% 에탄올이 포함된 PBS)로 주당 3회 처리한 대조군과 비교했다. GUNGNIR의 경우 유도 후 D3 (D1) 및 핑골리모드의 경우 유도 후 D14에 치료를 시작했다. 치료제는 5주 동안 투여되었다. 점수는 D7부터 매일 평가되었으며 체중도 평가되었다.
제조사의 지시에 따라 Hooke Kit™ MOG35-55/CFA 에멀젼 PTX (카탈로그 번호 EK-2110)로 유도된 3% 이소플루란으로 마우스를 마취시켰다. 간단히 말하면, 쥐의 등 위쪽에 0.1 ml의 MOG 에멀젼을 피하 주사하였고, 마찬가지로 아래쪽 등에도 0.1 ml의 에멀젼을 피하 주사했다. 2시간 후, 백일해 독소 (PTX) 용액을 마우스당 80 ng씩 복강내 주사했다. 24시간 후에 동일한 양의 PTX를 두 번째 IP 주입했다.
결과
실험 기간 동안, 모든 마우스는 윤리적 한계점 (-20%)에 도달하지 않은 체중 감소를 나타냈다. 모든 군은 질환의 유사한 경과를 나타내므로 비교가 가능하다 (도 12).
본 실험에서, 대조군은 D17에 질환의 최고점에 도달했다. 대조군의 모든 동물은 프로토콜의 나머지 13일 동안 질환의 지속성을 보여주었다 (도 13a). 놀랍게도, 치료받은 모든 동물은 D15부터 질환 중증도가 감소한 것으로 나타났다. 치료 효과는 D22부터 연구 마지막 날까지 1점 미만의 점수를 받은 GUNGNIR + 핑골리모드 조합의 경우 더 강력했다. 핑골리모드 또는 GUGNIR은 단독으로 중간 점수를 보여주었다. 개별 점수 분석을 통해 GUNGNIR + 핑골리모드 조합이 최고의 치료 효과를 나타내는 것으로 확인되었다 (도 13b-o). 흥미롭게도 이 군이 또한 개체 간 변동성이 더 작았다.
펩티드 서열
BALDR KGDWLPAITGLVGGVGLL (서열 번호 52)
FREYR KGDWLPAIVSIGGGVVLL (서열 번호 53)
BRAGI KGDWIPALVGGGGGGGLL (서열 번호 54)
NJORD KGDWLPALVSIGGGVGLL (서열 번호 55)
ULLR KGDWIPALVGLGGGGGLL (서열 번호 56)
SKOLL KGDWLIAIVGIGGG (서열 번호 57)
HATI KGDWLPVIVGIGGG (서열 번호 58)
plexA1-S2 KGDWLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 59)
FJALAR KGDWLPAIVGIGGGGGL (서열 번호 60)
GALAR KGDWLPAIVGIGGGGG (서열 번호 61)
IVALDI KGDWLPAIVGIGGGG (서열 번호 62)
ALVISS KGDWLPAIVGIGGG (서열 번호 63)
KVASIR AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16)
GERD TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17)
THRUD GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18)
RATI TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19)
GUNGNIR TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20)
MIMMING TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21)
SURTR TLPVIGVIVLVGSAVLELIAEGVYEEEEE(서열 번호 64), MIMMING의 스크램블
HODR TLPAIGVITLVGLGVLELVAEGVYEEEEE (서열 번호 65), GUNGNIR의 스크램블
GULLVEIG KGDWLPAIVSIGGAVVLL (서열 번호 66)
SKIRNIR KGDWLPAIVGIGGSVVLL (서열 번호 67)
RATATOSK KGDWLPAIVGIGG (서열 번호 68)
plexA1-S1 KGDWTLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 69)
BROKK KGDWPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 70)
EITRI KGDWIVGIGGGGGLL (서열 번호 71)
DRAUPNIR TLPAIVGIGGGGGLLLEVIVEVLIAYEEEEE (서열 번호 72)
MJOLLNIR TLPAITGLVGGVGLLVEVAVEIAYEEEEE (서열 번호 73)
G1a TLPAITGVVVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 94)
G1b TLPAITGLVVGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 95)
G2a TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEE (서열 번호 96)
G2b TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 97)
G2c TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98)
G2d TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDDDDD (서열 번호 99)
G3a TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100)
G3b TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101)
G3c TLPAITGLVGGVGLLLVVIVEVAYEEEEE (서열 번호 102)
G3d TLPAITGLVGGVGLLLEVVVEVAYEEEEE (서열 번호 103)
G3e TLPAITGLVGGVGLLLEVIVVVAYEEEEE (서열 번호 104)
G3f TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVVYEEEEE (서열 번호 105)
Pep1 dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106)
Pep2 TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107)
Pep3 TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108)
Pep4 TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEE (서열 번호 109)
Pep5 TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 110)
Pep6 dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111)
Pep7 TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112)
Pep8 TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113)
Pep9 TLPAITGLVGGVGLLLEVAVEVAYEEEEE (서열 번호 114)
Pep10 TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEIAYEEEEE (서열 번호 115)

Claims (68)

  1. 하기를 포함하는 펩티드:
    서열 X37-X5-X6-X7-G의 제1 도메인 및,
    (i) 화학식 I의 제2 도메인: 제1 도메인의 카르복시 말단에 직접 연결된 -(X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36)-(CterpolyD/E);
    (ii) 화학식 II의 제2 도메인: 제1 도메인의 카르복시 말단에 직접 연결된 -(X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25)-(CterGp); 또는
    (iii) 화학식 III의 제2 도메인: 제1 도메인의 아미노-말단에 직접 연결된 (NterGp)-(X8-X9-X10-X11-X12)-를 포함하며,
    여기서
    X37은 Gly, L-Ser 또는 D-Ser이고;
    X5, X6 및 X7은 독립적으로 임의의 아미노산이고;
    X8, X9, X10, X11 및 X12는 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25는 독립적으로 임의의 아미노산이고, 여기서 X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24 및 X25 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
    X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 및 X36은 독립적으로 임의의 아미노산이고, 여기서 X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35 중 2개 이하의 아미노산은 하전된 아미노산이고;
    CterpolyD/E는 적어도 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 4-10개의 아미노산 그룹이고
    NterGp는 적어도 2개의 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고, 그리고
    CterGp는 적어도 3개의 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 3-5개의 아미노산 그룹이고,
    또는 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태,
    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염,
    여기서 펩티드는 서열 TLPAIVGIGGGGGLLLLVIVAVLIAYKRK (서열 번호 1)을 포함하거나 이로 구성되지 않음.
  2. 제1항에 있어서, 상기 X5, X6 및 X7은 지방족 비하전 아미노산인 펩티드.
  3. 제2항에 있어서, 상기 X5, X6 및 X7은 각각 독립적으로 Gly, D 또는 L-Ala, D 또는 L-Val, D 또는 L-Leu 및 D 또는 L-Ile인 펩티드.
  4. 제3항에 있어서, 상기 X5는 D-Leu, L-Leu, D-Ile 또는 L-Ile이고; X6은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고/거나; X7은 Gly인 펩티드.
  5. 제4항에 있어서, 상기 X5는 L-Leu이고/거나 X6은 L-Val인 펩티드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X6은 Gly, D-Val 또는 L-Val인 펩티드.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X37은 Gly인 펩티드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X26은 지방족 비하전 아미노산이고; X27은 지방족 비하전 아미노산이고; X28은 지방족 비하전 아미노산이고; X29는 지방족 비하전 아미노산이고; X30은 지방족 비하전 아미노산이고; X31은 음으로 하전된 아미노산이고; X32는 지방족 비하전 아미노산이고; X33은 지방족 비하전 아미노산이고; X34는 지방족 비하전 아미노산이고; X35는 음으로 하전된 아미노산이고/거나; X36는 지방족 비하전 아미노산인 펩티드.
  9. 제8항에 있어서, 상기 X26은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고; X27은 Gly, D-Val 또는 L-Val이고; X28은 D 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X29는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X30은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X31은 D 또는 L-Glu이고; X32는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X33은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X34는 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X35는 D 또는 L-Glu이고/거나; X36은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val, D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
  10. 제9항에 있어서, 상기 X26은 L-Val이고; X27은 Gly이고; X28은 L-Leu이고; X29는 L-Leu이고; X30은 L-Leu이고; X31은 L-Glu이고; X32는 L-Val이고; X33은 L-Ile이고; X34는 L-Val이고; X35는 L-Glu이고/거나; X36은 L-Val인 펩티드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36은 VGLLLEVIVEV (서열 번호 91), GGELLLVIVE (서열 번호 92), VVLLLEVIVEV (서열 번호 93), VGLLVEVIVEV (서열 번호 117), 또는 VGLVLEVIVEV (서열 번호 118)인 펩티드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CterpolyD/E는 -X"1-X"2-Z 또는 -X"3-X"3bis-X"2-Z의 서열을 포함하고,
    여기서
    X"1은 작은 아미노산이고,
    X"2는 방향족 아미노산이고,
    X"3 및 X"3비스는 독립적으로 긴 지방족 아미노산이고
    Z는 2 내지 10개의 D/L-Asp 및/또는 D/L-Glu 잔기인 펩티드.
  13. 제12항에 있어서, 상기 X"1은 D- 또는 L-Ala인 펩티드.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 X"3 및 X"3비스는 독립적으로 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
  15. 제14항에 있어서, 상기 X"3은 D- 또는 L-Leu이고, X"3비스는 D- 또는 L-Ile인 펩티드.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Z는 3 내지 6개의 D/L-Asp 및/또는 D/L-Glu 잔기인 펩티드.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Z는 3 내지 5개의 L-Glu 잔기인 펩티드.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 화학식 I 또는 II의 제2 도메인을 포함하고, 제1 도메인의 아미노 말단에 연결된 1 내지 10개의 아미노산으로 이루어진 제3 도메인을 추가로 포함하는 펩티드.
  19. 제18항에 있어서, 상기 제3 도메인이 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드.
  20. 제19항에 있어서, 상기 제3 도메인은 화학식 IV: X38-X39-X40-X41-X42-X43의 것이고, 여기서
    X38은 D-Thr 또는 L-Thr이거나, 존재하지 않고;
    X39는 D- 또는 L-Leu, D- 또는 L-Ile이거나, 존재하지 않고;
    X40은 Pro, D- 또는 L-Ile이거나, 존재하지 않고;
    X41은 D- 또는 L-Ala, D- 또는 L-Val이거나, 존재하지 않고;
    X42는 D- 또는 L-Leu, D- 또는 L-Ile이거나, 존재하지 않고; 그리고
    X43은 D- 또는 L-Val, D-Thr 또는 L-Thr인 펩티드.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 35개 이하의 아미노산을 포함하는 펩티드.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 30개 이하의 아미노산을 포함하는 펩티드.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
    AITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 16);
    TGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 17);
    GLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 18);
    TLPAIVGIGGGGGELLLVIVEVLIYEEEEE (서열 번호 19);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
    TLPAIVSIGGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 21);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEE (서열 번호 97);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEE (서열 번호 98);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDDDDD (서열 번호 99);
    TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
    TLPAITGLVGGVGLVLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 101);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVVYEEEEE (서열 번호 105);
    dEdEdEdEdEdYdAdVdEdVdIdVdEdLdLdLGdVGGdVdLGdTdIdAdPdLdT (서열 번호 106);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDD (서열 번호 107);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108);
    dTLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 111);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVdEVAYEEEEE (서열 번호 112); 또는
    TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113).
  24. 제23항에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 20);
    TLPAITGLVGGVVLLLEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 100);
    TLPAITGLVGGVGLLLEVIVEVAYDEDED (서열 번호 108); 또는
    TLPAITGLVGGVGLLVEVIVEVAYEEEEE (서열 번호 113).
  25. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X8은 지방족 잔기이고; X9는 Pro, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X10은 지방족 잔기이고; X11은 지방족 잔기이고/거나; X12는 지방족 잔기인 펩티드.
  26. 제25항에 있어서, 상기 X8은 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고; X9는 Pro이고; X10은 D- 또는 L-Ala, 또는 D- 또는 L-Val이고; X11은 D- 또는 L-Leu, 또는 D- 또는 L-Ile이고/거나; X12는 D- 또는 L-Thr, 또는 D- 또는 L-Val인 펩티드.
  27. 제26항에 있어서, 상기 X8-X9-X10-X11-X12는 LPAIT (서열 번호 82), LPAIV (서열 번호 83), IPALV (서열 번호 84), LPALV (서열 번호 85), LIAIV (서열 번호 86) 또는 LPVIV (서열 번호 87)인 펩티드.
  28. 제1항 내지 제7항 및 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NterGp는 하나의 양으로 하전된 아미노산 및 하나의 음으로 하전된 아미노산을 포함하는 펩티드.
  29. 제28항에 있어서, 상기 NterGp는 화학식 V: X1-X2-X3-X4의 4개 아미노산 서열을 갖고, 여기서 X1은 양으로 하전된 잔기이고 X3는 음으로 하전된 잔기이고, X2는 작은 아미노산이고, X4는 방향족 아미노산인 펩티드.
  30. 제29항에 있어서, 상기 X1은 D- 또는 L-Lys이고, X2는 Gly이고, X3는 D- 또는 L-Asp이고/거나; X4는 D- 또는 L-Trp인 펩티드.
  31. 제30항에 있어서, 상기 NterGp가 KGDW (서열 번호 116)인 펩티드.
  32. 제1항 내지 제7항 및 제25항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 도메인은 화학식 III의 것이고, 여기서 펩티드는 제1 도메인의 카르복시 말단에 직접 연결된 1 내지 10개의 아미노산을 추가로 포함하는 펩티드.
  33. 제32항에 있어서, 상기 제3 도메인은 화학식 VI: X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35의 것이고, 여기서 X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34 및 X35는 제1항, 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 펩티드.
  34. 제1항 내지 제7항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드:
    KGDWLPAITGLVGGVGLL (서열 번호 52);
    KGDWLPAIVSIGGGVVLL (서열 번호 53);
    KGDWIPALVGGGGGGGLL (서열 번호 54);
    KGDWLPALVSIGGGVGLL (서열 번호 55);
    KGDWIPALVGLGGGGGLL (서열 번호 56);
    KGDWLIAIVGIGGG (서열 번호 57);
    KGDWLPVIVGIGGG (서열 번호 58);
    KGDWLPAIVGIGGGGGLL (서열 번호 59);
    KGDWLPAIVGIGGGGGL (서열 번호 60);
    KGDWLPAIVGIGGGGG (서열 번호 61);
    KGDWLPAIVGIGGGG (서열 번호 62); 또는
  35. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X13은 지방족 및/또는 작은 잔기이고; X14는 지방족 및/또는 작은 잔기이고; X15는 지방족 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X16은 지방족 잔기이고; X17은 지방족 잔기이고; X18은 지방족 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X19는 지방족 잔기이고; X20은 지방족 잔기이고; X21은 지방족 잔기이고; X22는 작은 잔기 또는 음으로 하전된 잔기이고; X23은 지방족 잔기이고; X24는 지방족 잔기이고/거나; X25는 지방족 잔기인 펩티드.
  36. 제35항에 있어서, 상기 X13은 Gly 또는 D- 또는 L-Val이고; X14는 Gly 또는 D- 또는 L-Val이고; X15는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X16은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X17은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X18은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X19는 D- 또는 L-Val이고; X20은 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고; X21은 D- 또는 L-Val이고; X22는 D- 또는 L-Ala이고; X23은 D- 또는 L-Val이고; X24는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu이고/거나; X25는 D- 또는 L-Ile, 또는 D- 또는 L-Leu인 펩티드.
  37. 제35항에 있어서, 상기 X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25가 GGLLLLVIVAVLI (서열 번호 88)인 펩티드.
  38. 제1항 내지 제7항 및 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CterGp가 Lys와 Arg 잔기의 혼합물을 포함하는 펩티드.
  39. 제38항에 있어서, 상기 CterGp가 다음 서열 중 하나를 포함하는 펩티드: AYKRK (서열 번호 76), AYKKR (서열 번호 77), AYKRR (서열 번호 78), AYRRK (서열 번호 79) 또는 AYRKK (서열 번호 80).
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  41. 약제로 사용하기 위한, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물.
  42. 대상체에서 탈수초성 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 탈수초성 질환이 탈수초성 자가면역 질환인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)), 구형 세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다발성 신경근병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  45. 제44항에 있어서, 상기 다발근신경병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발신경근병증인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  46. 제44항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  47. 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물.
  48. 제47항에 있어서, 상기 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 눈 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  49. 제42항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물이 하나 이상의 추가 치료제와 함께 조합하여 사용하기 위한 것인 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  50. 제49항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 조성물.
  51. 대상체에서 탈수초성 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물의 용도.
  52. 제51항에 있어서, 탈수초성 질환이 탈수초성 자가면역 질환인 용도.
  53. 제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)), 구형 세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다발성 신경근병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환인 용도.
  54. 제53항에 있어서, 상기 다발신경근병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발근신경병증인 용도.
  55. 제53항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증인 용도.
  56. 비정상적인 혈관신생 관련 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물의 용도.
  57. 제56항에 있어서, 상기 비정상적인 혈관신생 관련 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상동맥경화증인 용도.
  58. 제51항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제가 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것인 용도.
  59. 제58항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 용도.
  60. 이를 필요로 하는 대상체에서 탈수초성 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 탈수초성 자가면역 질환인 방법.
  62. 제60항 또는 제61항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증, 횡단 척수염, 시신경척수염 (데빅병), 급성 출혈성 백질뇌염, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 스킬더의 미만성 뇌경화증, 부신백질이영양증, 알렉산더병, 카나반병, 크라베병, 발로병, 샤르코마리투스병 (CMT), HIV 뇌염, HTLV-I 관련 척수병증 (HAM), 빈스방거병 (피질하 백질뇌병증 및 피질하 동맥경화성 뇌병증 (SAE)), 구형 세포 백질이영양증, 이염색성 백질이영양증, 펠리자우스-메르츠바허병, 진행성 다초점 백질뇌병증, 마르키아파비-비냐미병, 중추교교골수용해증, 다발성 신경근병증, 또는 항종양제, 일산화탄소, 비타민 B12 결핍, 수은 중독, 알코올 또는 담배 약시, 저산소증 또는 방사선 조사로 인한 탈수초성 질환인 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 다발신경근병증이 길랭-바레 증후군 (GBS) 또는 만성 염증성 탈수초 다발근신경병증인 방법.
  64. 제62항에 있어서, 상기 탈수초성 질환이 다발성 경화증인 방법.
  65. 이를 필요로 하는 대상체에서 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제40항에 따른 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  66. 제65항에 있어서, 상기 비정상적인 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애가 암, 혈관종, 건선, 카포시 육종, 안구 혈관신생, 류마티스 관절염, 자궁내막증 또는 죽상동맥경화증인 방법.
  67. 제60항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드, 이의 레트로 또는 레트로인버소 형태, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 조성물이 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것인 방법.
  68. 제67항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 핑골리모드를 포함하는 방법.
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