KR20240053635A - 변형된 짧은 간섭 핵산 (sina) 분자 및 그의 용도 - Google Patents

변형된 짧은 간섭 핵산 (sina) 분자 및 그의 용도 Download PDF

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KR20240053635A
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엔. 틸라니 에스. 데 코스타
슈안 루옹
아니르반 바타차르야
레오니드 베이겔만
제롬 데발
사울 마르티네스 몬테로
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알리고스 테라퓨틱스 인코포레이티드
머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨
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Abstract

변형된 뉴클레오티드를 포함하는 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자 및 그의 용도가 본원에 개시된다. siNA 분자는 이중-가닥일 수 있고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 선택된 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 인산화 차단제, 접합 모이어티, 또는 5'-안정화된 말단 캡을 비롯한 추가의 변형을 포함하는 siNA 분자가 본원에 추가로 개시된다. siNA 분자는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소 또는 억제할 수 있다.

Description

변형된 짧은 간섭 핵산 (SINA) 분자 및 그의 용도
본 출원은 2021년 9월 8일에 출원된 발명의 명칭 "변형된 짧은 간섭 핵산 (SINA) 분자 및 그의 용도"의 미국 특허 가출원 번호 U.S. 63/241,940을 우선권 주장하며, 이는 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
<기술분야>
변형된 뉴클레오티드를 포함하는 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자, 그의 조성물 및 용도가 기재된다.
RNA 간섭 (RNAi)은 내인성 기생충 및 외인성 병원성 핵산 둘 다에 대한 저항성을 매개하고 단백질-코딩 유전자의 발현을 조절하는 이중-가닥 RNA에 대한 생물학적 반응이다. 짧은 간섭 핵산 (siNA), 예컨대 siRNA는 다양한 질환을 치료하기 위한 RNAi 요법을 위해 개발되었다. 예를 들어, RNAi 요법은 대사 질환, 신경변성 질환, 암, 및 병원성 감염의 치료를 위해 제안되었다 (예를 들어, 문헌 [Rondindone, Biotechniques, 2018, 40(4S), doi.org/10.2144/000112163, Boudreau and Davidson, Curr Top Dev Biol, 2006, 75:73-92, Chalbatani et al., Int J Nanomedicine, 2019, 14:3111-3128, Arbuthnot, Drug News Perspect, 2010, 23(6):341-50, and Chernikov et al., Front. Pharmacol., 2019, doi.org/10.3389/fphar.2019.00444] 참조, 이들 각각은 그 전문이 참조로 포함됨). 그러나, RNAi 요법의 주요 제한은 siRNA를 표적 세포에 효과적으로 전달하는 능력 및 siRNA의 분해이다.
비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD)은 세계적인 건강 문제로 부상하고 있으며, 제2형 당뇨병, 심혈관 질환 및 만성 신장 질환에 대한 잠재적 위험 인자이다. NAFLD의 진행성 형태인 비알콜성 지방간염 (NASH)은 간경변증 및 간세포성 암종의 발생에 대한 소인이 되는 인자이다. NASH의 증가하는 유병률은 신규 치료 접근법에 대한 필요성을 강조한다. 17β-HSD 유형 13 (또는 HSD17B13)으로도 공지된 17β-히드록시스테로이드 데히드로게나제 유형 13은 간세포에서 풍부한 효소이며, 여기서 이는 세포하 지질 액적에 국재화된다. HSD17B13은 NAFLD 및 NASH를 갖는 환자의 간에서 유의하게 상향조절되고, 지질생성을 증진시킨다. 지질생성에서의 HSD17B13의 역할은 그의 레티노이드 데히드로게나제 활성에 의해 매개되는 것으로 보인다. HSD17B13 단백질 수준의 감소는 ALT 및 AST의 감소된 수준 및 NAFLD 및 NASH의 개선된 간 조직학으로 이어질 수 있다.
본 개시내용은 HSD17B13을 표적화하여 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생산을 감소 또는 억제하는 siNA 분자를 제공한다. siNA 분자는 변형된 뉴클레오티드의 최적화된 조합 및 수, 뉴클레오티드 길이, 설계 (예를 들어, 평활 말단 또는 오버행, 뉴클레오시드간 연결, 접합체), 및 개선된 전달 및 안정성을 나타내는 변형 패턴을 포함한다.
본 개시내용의 한 측면은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하며, 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13) 유전자의 발현을 하향조절하는 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하며, 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13) 유전자의 발현을 하향조절하는 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 siNA 듀플렉스 ID 번호 D1-D178 또는 MD1-MD178 중 어느 하나로부터 선택된 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 본 개시내용에 따른 siNA 분자 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 HSD17B13-관련 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것을 투여하고, 그에 의해 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HSD17B13-관련 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 간 질환은 NAFLD, 간세포성 암종 (HCC), 및/또는 NASH 및/또는 지방간일 수 있다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 간 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것을 투여하고, 그에 의해 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 간 질환은 NAFLD, HCC 및/또는 NASH 및/또는 지방간일 수 있다.
본 개시내용의 또 다른 측면은, 간 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하고, 추가로 대상체에게 적어도 1종의 추가의 활성제를 투여하고, 그에 의해 대상체를 치료하는 것을 포함하며, 여기서 적어도 1종의 추가의 활성제는 간 질환 치료제인, 상기 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은, HSD17B13의 발현 수준의 감소를 필요로 하는 환자에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siRNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것을 투여하고, 그에 의해 환자에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 것을 포함하는, 상기 환자에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
본 기술은 (a) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥; 및 (b) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함하는 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자를 제공한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 (VIII)에 의해 나타내어진 분자를 제공한다:
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이고; n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고; n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이이고; n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고; q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고; q6은 0-5개의 뉴클레오티드 길이이고; q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이이고; q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이다.
임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고/거나 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200, 231-260 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 316-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고/거나 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
임의의 실시양태에서, siNA는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소시키거나 억제한다. 임의의 실시양태에서, siNA는 HSD17B13의 발현 또는 활성을 감소시킨다.
임의의 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥은 제1 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(들), 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결(들), 5' 안정화 말단 캡(들), 인산화 차단제(들), 갈락토사민(들), 본원에 개시된 바와 같은 접합 모이어티 또는 모이어티들, 본원에 개시된 탈안정화 뉴클레오티드(들), 본원에 개시된 변형된 뉴클레오티드(들), 열적 탈안정화 뉴클레오티드(들), 또는 그의 2종 이상의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 5' 안정화 말단 캡(들), 인산화 차단제(들), 본원에 개시된 바와 같은 접합 모이어티 또는 모이어티들, 갈락토사민(들), 본원에 개시된 탈안정화 뉴클레오티드(들), 본원에 개시된 변형된 뉴클레오티드(들), 열적 탈안정화 뉴클레오티드(들), 또는 그의 2종 이상의 조합은 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 센스 및/또는 안티센스 가닥에 부착된다.
본원에 개시된 siNA 중 임의의 것을 포함하는 조성물 및 의약을 본원에 추가로 개시한다.
임의의 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자, 조성물, 및/또는 의약은 질환, 예컨대 간 질환의 치료에 사용될 수 있다. 임의의 실시양태에서, 간 질환은 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD), 간세포성 암종 (HCC), 또는 비알콜성 지방간염 (NASH)을 포함할 수 있다.
도 1은 예시적인 siNA 분자를 도시한다.
도 2는 예시적인 siNA 분자를 도시한다.
도 3A-3H는 예시적인 이중-가닥 siNA 분자를 도시한다.
도 4 및 도 5는 투여 7일 후 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 6은 1.5 mpk의 투여 7일 후 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 7은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 8은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 9는 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 10은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 11은 투여 7일 후 ds-siNA 137, ds-siNA 144, ds-siNA 148 및 ds-siNA 151에 의한 HSD17B13 단백질 녹다운을 나타내는 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 12는 도 11로부터의 웨스턴 블롯의 정량화를 도시한다.
도 13은 투여 7일 후 ds-siNA 137, ds-siNA 144, ds-siNA 148 및 ds-siNA 151에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 14는 투여 14일 후 ds-siNA 137, ds-siNA 144, ds-siNA 148 및 ds-siNA 151에 의한 HSD17B13 단백질 녹다운을 나타내는 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 15는 도 14로부터의 웨스턴 블롯의 정량화를 도시한다.
도 16은 투여 14일 후 ds-siNA 137, ds-siNA 144, ds-siNA 148 및 ds-siNA 151에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 17은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 18은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 19는 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
도 20은 본 개시내용에 따른 변형된 siNA 듀플렉스에 의한 HSD17B13 mRNA 녹다운을 도시한다.
본 섹션은 본 개시내용을 대표하는 많은 상이한 측면 및 실시양태의 상세한 설명을 제시한다. 본 설명은 다양한 세부사항 및 특이성의 여러 예시적인 설명에 의한 것이다. 이들 실시양태의 다른 특징 및 이점은 다양한 실시예를 비롯한 본원에 제공된 추가의 설명으로부터 명백하다. 제공된 실시예는 본 개시내용의 다양한 실시양태를 실시하는 데 유용한 상이한 성분 및 방법론을 예시한다. 실시예는 청구된 개시내용을 제한하도록 의도되지 않는다. 본 개시내용에 기초하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용을 실시하는 데 유용한 다른 성분 및 방법론을 확인하고 이용할 수 있다.
본 개시내용은 하기 정의를 참조하여 보다 잘 이해될 것이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.
본원에 사용된 단수 용어는 "하나 이상"을 의미하고, 문맥상 부적절하지 않는 한 복수형을 포함한다.
측정가능한 값 (예를 들어, 중량, 시간 및 용량)을 언급할 때 본원에 사용된 용어 "약"은 명시된 값의 ± 10%, ± 5%, ± 1% 또는 ± 0.1%와 같은 변동을 포괄하는 것으로 의도된다.
달리 나타낸 경우를 제외하고는, 명세서 및 청구범위에 사용된 성분의 양, 반응 조건 등을 표현하는 모든 숫자는, 용어 "약"이 숫자 앞에 존재하든 존재하지 않든, 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 나타내지 않는 한, 하기 명세서 및 첨부된 청구범위에 제시된 수치 파라미터는 본 개시내용에 의해 수득하고자 하는 목적하는 특성에 따라 달라질 수 있는 근사치이다. 최소한, 그리고 청구범위의 범주에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도로 간주되어서는 안되며, 각각의 수치 파라미터는 유효 숫자의 수 및 통상적인 반올림 규칙에 비추어 해석되어야 한다.
추가로, 본 명세서 내의 수치 범위의 개시는 그 범위 내의 모든 수치 값 및 범위의 개시인 것으로 간주된다. 예를 들어, 범위가 약 1 내지 약 50인 경우, 이는 예를 들어 1, 50, 7, 34, 46.1, 23.7, 또는 범위 내의 임의의 다른 값 또는 범위를 포함하는 것으로 간주된다. 또한, 본원에 사용된 용어 "적어도"는 언급된 수를 포함하며, 예를 들어 "적어도 50"은 50을 포함한다.
일반적으로, 백분율을 명시하는 조성물은 달리 명시되지 않는 한 중량 백분율을 명시한다. 추가로, 가변가 정의에 의해 수반되지 않는 경우, 가변기의 이전 정의가 적용된다.
용어 "포함하는"은 어구 "포함하나 이에 제한되지는 않는"을 의미하기 위해 본원에 사용되고, 그와 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "siRNA" 및 "siRNA 분자" 및 "siNA" 및 "siNA 분자"는 상호교환가능하게 사용되고, 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있는 화학적으로 변형된 RNA를 포함한 짧은 (또는 작은) 간섭 리보핵산 (RNA)을 지칭한다. 본원에 사용된 siRNA는 당, 핵염기 및/또는 포스포디에스테르 백본 (뉴클레오시드간 연결) 및 뉴클레오시드 유사체에서의 변형을 포함한 변형된 뉴클레오티드, 뿐만 아니라 접합체 또는 리간드를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "siNA 듀플렉스" 또는 "siRNA 듀플렉스"는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 갖는 이중-가닥 ("ds") siRNA 또는 "dsRNA" 또는 "ds-NA"를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "백본"은 자연 발생 핵산의 중합체성 당-백본, 뿐만 아니라 특정 핵산 분자의 염기 서열을 규정하는 핵염기에 공유 부착된 그의 변형된 대응물 및 모방체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 백본은 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결을 포함한다 (이 경우에 이는 "포스포디에스테르 백본"으로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결에 추가로, 백본은 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 비-포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결 (예컨대, 예를 들어 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결은 선행 뉴클레오시드의 당 모이어티 (예를 들어, 리보스)의 3' 위치를 후속 뉴클레오시드의 당 모이어티의 5' 위치에 연결한다 (3'-5' 포스포디에스테르 연결). 일부 실시양태에서, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결은 선행 뉴클레오시드의 당 모이어티 (예를 들어, 리보스)의 2' 위치를 후속 뉴클레오시드의 당 모이어티의 5' 위치에 연결한다 (2'-5' 포스포디에스테르 연결). 마찬가지로, 비-포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결)은 선행 뉴클레오시드의 당 모이어티 (예를 들어, 리보스)의 3' 위치를 후속 뉴클레오시드의 당 모이어티의 5' 위치에 연결하거나 (3'-5' 포스포로티오에이트 연결) 또는 선행 뉴클레오시드의 당 모이어티 (예를 들어, 리보스)의 2' 위치를 후속 뉴클레오시드의 당 모이어티의 5' 위치에 연결할 수 있다 (2'-5' 포스포로티오에이트 연결). 일부 실시양태에서, siRNA는 3'-5' 뉴클레오시드간 연결을 독점적으로 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA는 2'-5' 뉴클레오시드간 연결을 독점적으로 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA는 3'-5' 뉴클레오시드간 연결 및 2'-5' 뉴클레오시드간 연결의 혼합물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "안티센스 가닥" 또는 "가이드 가닥"은 표적 서열, 예를 들어 HSD17B13 mRNA에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 siRNA 분자의 가닥을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "센스 가닥" 또는 "패신저 가닥"은 그 용어가 본원에 정의된 바와 같은 안티센스 가닥의 영역에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 siRNA 분자의 가닥을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "변형된 뉴클레오티드"는 독립적으로 당, 핵염기 및/또는 포스포디에스테르 백본 (뉴클레오시드간 연결) 및 뉴클레오시드 유사체에서의 변형을 갖는 뉴클레오티드를 지칭한다. 따라서, 용어 변형된 뉴클레오티드는 뉴클레오시드간 연결, 당 모이어티 또는 핵염기에 대한, 예를 들어 관능기 또는 원자의 치환, 부가 또는 제거를 포괄한다. 본 개시내용의 siRNA에 사용하기에 적합한 변형은 본원에 개시되거나 관련 기술분야에 공지된 모든 유형의 변형을 포함한다. siNA 또는 siRNA 분자에서 사용되는 임의의 이러한 변형은 본 명세서 및 특허청구범위의 목적을 위해 "siRNA" 및 "siRNA 분자" 및 "siRNA 듀플렉스" 및 "siNA" 및 "siNA 분자" 및 "siNA 듀플렉스"에 포함된다. 또한, 용어 "뉴클레오티드"는 또한 본원에 추가로 상술된 바와 같이 변형된 뉴클레오티드를 지칭할 수 있는 것으로 이해될 것이다.
본원에 사용된 용어 "핵염기"는 자연-발생 핵염기 및 그의 유사체를 지칭한다. 자연-발생 핵염기 또는 그의 유사체의 예는 티민, 우라실, 아데닌, 시토신, 구아닌, 아릴, 헤테로아릴, 및 그의 유사체 또는 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "뉴클레오티드 오버행" 또는 "오버행"은 이중-가닥 RNA의 듀플렉스 구조 (예를 들어, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA)로부터 돌출된 적어도 1개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 지칭한다. 예를 들어, dsRNA의 한 가닥의 3' 말단이 다른 가닥의 5' 말단 너머로 연장되거나 또는 그 반대의 경우에 뉴클레오티드 오버행이 존재한다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. 게다가, 오버행의 뉴클레오티드(들)는 dsRNA의 안티센스 및/또는 센스 가닥의 5' 말단, 3' 말단 또는 양쪽 말단 상에 존재할 수 있고, 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일반적으로, 본원에 정의된 바와 같은 임의의 뉴클레오티드 오버행이 존재하는 경우, 이러한 오버행의 서열은 2개의 서열 사이의 상보성 정도를 결정하는 데 고려되지 않고, 이러한 오버행은 상보성 결정과 관련하여 미스매치로 간주되지 않아야 한다. 예로서, 혼성화하여 각각의 가닥의 3' 말단에 2개 뉴클레오티드 오버행을 갖는 19개 염기 쌍 듀플렉스 영역을 형성하는, 21개의 뉴클레오티드 길이의 센스 가닥 및 21개의 뉴클레오티드 길이의 안티센스 가닥은 상기 용어가 본원에 사용된 바와 같이 완전히 상보적인 것으로 간주될 것이다.
본원에 사용된 용어 "평활 말단"은 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 갖지 않는, 즉 뉴클레오티드 오버행을 갖지 않는 dsRNA의 말단을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 평활 말단은 dsRNA의 한쪽 또는 양쪽 말단에 존재할 수 있다.
본원에서 용어 "상보적", "완전히 상보적" 및 "실질적으로 상보적"은 그의 사용 문맥으로부터 이해될 바와 같이, 듀플렉스 siRNA 또는 dsRNA의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이, 또는 siRNA의 안티센스 가닥과 표적 서열 사이의 염기 쌍형성과 관련하여 사용될 수 있다. 본원에 사용된 제1 서열은, 제1 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 특정 조건, 예컨대 생리학적 조건 하에 제2 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 혼성화하여 듀플렉스 영역을 형성할 수 있는 경우에 제2 서열에 "상보적"이다. 다른 이러한 조건은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 중간 또는 엄격한 혼성화 조건을 포함할 수 있다. 제1 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 임의의 미스매치 없이 하나 또는 둘 다의 뉴클레오티드 서열의 전체 길이에 걸쳐 제2 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 염기 쌍을 형성하는 경우, 제1 서열은 제2 서열에 완전히 상보적인 (100% 상보적인) 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 서열이 표적 서열에 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 경우, 서열은 표적 서열에 "실질적으로 상보적"이다. 퍼센트 상보성은, 예를 들어 제2 또는 표적 서열 내의 상응하는 위치에서의 염기에 상보적인 제1 서열 내의 염기의 수를 제1 서열의 총 길이로 나눔으로써 계산될 수 있다. 이러한 계산은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 충분히 있다. 서열은 또한, 예를 들어 2개의 서열이 혼성화되는 경우에 30개 염기 쌍 듀플렉스 영역에 걸쳐 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미스매치가 존재하는 경우에 또 다른 서열에 실질적으로 상보적인 것으로 언급될 수 있다. 본원에 사용된 "상보적" 서열은 또한, 이들이 혼성화하는 그의 능력에 관한 상기 요건이 충족되는 한, 비-왓슨-크릭 염기 쌍 및/또는 변형된 뉴클레오티드로부터 형성된 염기 쌍을 포함할 수 있거나 또는 전적으로 그로부터 형성될 수 있다.
퍼센트 동일성 (즉, "동일한")의 사용은 2개의 핵산 서열 사이의 핵염기에서의 차이의 수를 규정하는 통상의 방식이다. 예를 들어, 제1 서열이 ACGT인 경우, ACGA의 제2 서열은 1개의 차이를 갖는 "비-동일한" 서열로 간주될 것이다. 퍼센트 동일성은 서열의 전체 길이에 걸쳐, 또는 서열의 일부에 걸쳐 계산될 수 있다. 퍼센트 동일성은 그것이 비교되는 서열에 상응하는 동일한 염기 쌍형성을 갖는 핵염기의 수에 따라 계산될 수 있다. 비-동일한 핵염기는 서로 인접하거나, 서열 전반에 걸쳐 분산되거나, 또는 둘 다일 수 있다. 이러한 계산은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 충분히 있다.
본원에 사용된 "미스센스 돌연변이"는 단일 염기 쌍에서의 변화가 생성된 단백질에서 상이한 아미노산의 치환을 발생시키는 경우를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 유익한 또는 목적하는 결과를 달성하기에 충분한 본 개시내용의 siRNA의 양, 예컨대 예를 들어 연구원, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출할 양을 지칭한다. 치료 유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있고, 특정한 제제 또는 투여 경로로 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 일부 실시양태에서, "치료 유효량"은 인간 환자에서 적어도 1종의 임상 증상, 예를 들어 HSD17B13-연관 질환 또는 간 질환의 적어도 1종의 증상을 완화시키는 양을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "환자" 및 "대상체"는 본 개시내용의 방법을 비롯한 의학적 상태의 예방 또는 치료를 위해 본 개시내용의 siRNA 분자를 사용하는 유기체를 지칭한다. 이러한 유기체는 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 본원에 사용된, 기존 상태의 치료 또는 예방적 치료를 "필요로 하는" 대상체는 의료 전문가에 의한 필요의 결정 뿐만 아니라 이러한 치료에 대한 환자의 요망 둘 다를 포괄한다. 대상체에게 화합물 (예를 들어, 본 개시내용의 siNA 또는 siRNA)을 투여하는 것은 자기-투여 및 또 다른 것에 의한 환자에게의 투여 둘 다를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "활성제" 또는 "활성 성분" 또는 "치료제"는 관련 용량에서 약리학적 효과, 예컨대 치료 효과를 갖는 성분을 지칭한다. 이는 본 개시내용에 따른 siRNA 분자를 포함한다.
본원에 사용된 "간 질환 치료제"는 단독으로 또는 또 다른 활성제와 조합하여 간 질환을 치료하는 데 사용될 수 있는 활성제이고, 본 개시내용의 siRNA 이외의 것이다.
본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 조성물을 생체내 또는 생체외 진단 또는 치료 용도에 특히 적합하게 하는, 불활성 또는 활성인 담체와의 적어도 1종의 활성제의 조합을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 용어 "제약 조성물"은 본원에 기재된 바와 같은 siRNA 분자, 및 사용되는 투여 방식 및 투여 형태에 따라 제약상 허용되는 담체, 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클, 예컨대 보존제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁화제, 감미제, 향미제, 퍼퓸제, 항박테리아제, 항진균제, 윤활제 및 분배제로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 성분을 포함하는 조성물을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체"는 제약, 예컨대 예를 들어 인간에게 투여하기에 적합한 제약을 제제화하는 데 사용하기에 허용되는 임의의 제약 담체, 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클, 예컨대 본원에 기재된 것들, 예를 들어 용매, 완충제, 용액 (예를 들어, 포스페이트 완충 염수 용액), 물, 에멀젼 (예를 들어, 예컨대 오일/물 또는 물/오일 에멀젼), 다양한 유형의 습윤제, 안정화제, 보존제, 항박테리아제 및 항진균제, 분산 매질, 코팅, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 지칭한다. 담체의 예에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 상태, 질환, 장애 등; 또는 상태, 질환 또는 장애와 연관된 1종 이상의 증상; 또는 상태, 질환 또는 장애의 원인(들)의 개선을 일으키는 임의의 효과, 예를 들어 경감, 감소, 조정, 호전 또는 제거를 포함한다. 예를 들어, HSD17B13-연관 질환과 관련하여, 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 HSD17B13 유전자 발현 및/또는 HSD17B13 단백질 생산과 연관된 1종 이상의 증상, 예를 들어 지방간 (지방증), 비알콜성 지방간염 (NASH), 간 경변증, 간에서의 지방 축적, 간의 염증, 간세포성 괴사, 간 섬유증, 비만, 간세포성 암종 (HCC) 또는 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)의 완화 또는 호전을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "치료"는 또한 치료의 부재 시 예상된 생존과 비교하여 생존을 연장시키는 것을 의미할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "완화하다" 및 "완화시키는"은 상태 및/또는 그의 증상의 중증도를 감소시키는 것, 예컨대 중증도를 예를 들어 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 감소시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "하향조절하다" 또는 "하향조절하는"은 "감소시키는", "억제하는" 또는 "저해하는" 또는 다른 유사한 용어와 상호교환가능하게 사용되고, 임의의 수준의 하향조절을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "HSD17B13 유전자"는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 유전자를 지칭하고, 그의 변이체를 포함한다. HSD17B13은 진뱅크 수탁 번호 NM_178135.5의 코딩 서열의 뉴클레오티드 서열 (뉴클레오티드 42에서 944)에 상응하는 서열식별번호: 261의 뉴클레오티드 서열에 제시된 서열을 가지며, 이는 그 전문이 참조로 포함된다. 다른 포유동물 유전자를 포함한 HSD17B13 유전자 서열의 추가의 예는, 예를 들어 NCBI RefSeq, 진뱅크, 유니프롯 및 OMIM을 포함한 공중 데이터베이스를 사용하여 용이하게 입수가능하다.
명세서 전반에 걸쳐, 조성물이 특정한 성분을 갖거나, 포함하거나 또는 포함한 것으로 기재된 경우, 또는 공정 및 방법이 특정한 단계를 갖거나, 포함하거나 또는 포함한 것으로 기재된 경우, 추가적으로 언급된 성분으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어지는 본 개시내용의 조성물이 존재하고, 언급된 가공 단계로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어지는 본 개시내용에 따른 공정 및 방법이 존재하는 것으로 고려된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 하기 참고문헌은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 발명에 사용된 많은 용어의 일반적 정의를 제공한다: 문헌 [Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al., (eds.), Springer Verlag (1991); and Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)]. 본원에 사용된 하기 용어는 달리 명시되지 않는 한 하기에서 그들에게 부여된 의미를 갖는다. 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하기 위한 것이며, 본 개시내용을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
siRNA 분자
히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HDS17B13) 유전자의 발현을 특이적으로 하향조절하는 이중-가닥 짧은 (또는 작은) 간섭 RNA (siRNA) 분자가 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는 (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는 (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 서열식별번호: 1-100 또는 201-230 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 서열식별번호: 101-200 또는 231-260 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 1-100 또는 201-230 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 (b) 서열식별번호: 101-200 또는 231-260 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 서열식별번호: 316-445 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 서열식별번호: 446-575 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 316-445 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 (b) 서열식별번호: 446-575 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 서열식별번호: 262-287, 314 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 서열식별번호: 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 262-287, 314 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 (b) 서열식별번호: 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 서열식별번호: 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 서열식별번호: 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥 및 (b) 서열식별번호: 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함하는 센스 가닥; 및/또는 (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는 (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자의 적어도 1개의 말단은 평활 말단이다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자의 양쪽 말단은 평활 말단이다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자의 1개의 말단은 평활 말단을 포함하고, 이중-가닥 siRNA 분자의 1개의 말단은 오버행을 포함한다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자의 적어도 1개의 말단은 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 1개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자의 적어도 1개의 말단은 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 2개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자의 양쪽 말단은 오버행을 포함하며, 여기서 오버행은 적어도 1개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자의 양쪽 말단은 오버행을 포함하며, 여기서 오버행은 적어도 2개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 센스 가닥의 3' 말단에 2개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 안티센스 가닥의 3' 말단에 2개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 센스 가닥의 3' 말단 및 안티센스 가닥의 3' 말단에 2개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 siNA 듀플렉스 ID 번호 ds-siNA D1-D178 또는 mds-siNA MD1-MD178 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 siRNA 듀플렉스 ID 번호 ds-siNA D1-D178 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 siRNA 듀플렉스 ID 번호 mds-siNA MD1-MD178 중 어느 하나로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 8 또는 표 9 또는 표 10 또는 표 11 또는 표 12의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 8의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 9의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 10의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 11의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 표 12의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 siRNA 분자는 약 17 내지 약 29개의 염기 쌍 길이, 또는 19-23개의 염기 쌍, 또는 19-21개의 염기 쌍 길이이고, 그의 한 가닥은 표적 mRNA에 상보적이고, 이는 표적 mRNA를 갖는 세포에 첨가되거나 생체내에서 세포에서 생산될 때 표적 mRNA의 분해를 유발한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 표적 유전자의 발현을 억제하는 방식으로 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열과 상호작용한다.
siRNA 분자는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술 중 어느 하나를 사용하여 얻을 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 2개의 별개의 상보적 핵산 분자로서, 또는 2개의 상보적 영역을 갖는 단일 핵산 분자로서 합성될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 siRNA는 적절하게 보호된 리보뉴클레오시드 포스포르아미다이트 및 통상적인 RNA 합성기 또는 다른 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 또한, siRNA는 상업적 공급업체, 예컨대 예를 들어 다마콘(Dharmacon)/호리즌(Horizon) (미국 콜로라도주 라파예트), 글렌 리서치(Glen Research) (미국 버지니아주 스털링), 켐진스(ChemGenes) (미국 매사추세츠주 앳슈랜드) 및 크루아켐(Cruachem) (영국 글라스고)에 의해 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 플라스미드에 의해 코딩될 수 있다.
센스 가닥
본원에 기재된 siRNA 분자 중 임의의 것은 센스 가닥을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 50개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 45개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 40개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 35개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 30개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 15 내지 약 25개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 17 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 17 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 17 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 18 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 18 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 18 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 19 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 19 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 15개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 16개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 17개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 18개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 19개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 20개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 50, 45, 40, 35, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20 또는 19개 미만 또는 그 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 30개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 25개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 24개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 23개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 22개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 21개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 20개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 약 19개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 70% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 75% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 85% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 적어도 약 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 약 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 50개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 45개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 40개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 35개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 30개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 15 내지 약 25개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 17 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 17 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 17 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 18 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 18 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 18 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 19 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 19 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 19 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 또는 그 초과의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 적어도 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 50, 45, 40, 35, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20 또는 19개 미만 또는 그 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 35개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 30개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 25개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 24개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 23개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 22개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 21개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 20개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 19개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 5개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 4개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 3개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 2개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편과 1개 이하의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 0개의 핵염기 차이를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 70% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 75% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열과 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 5개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 4개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 3개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 2개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 1개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 0개의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 8 또는 표 9 또는 표 10 또는 표 11 또는 표 12에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 8에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 9에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 10에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 11에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 표 12에 열거된 센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 오버행 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 1개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 2개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 3개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 4개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 5개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 또는 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 위치 3, 7-9, 12 및 17에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 위치 3, 7, 8 및 17에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11, 14, 및 19에서 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 19 내지 23개, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 19 내지 23개, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 존재한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 19 내지 23개, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11, 14, 및 19에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9, 10 및/또는 11의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
안티센스 가닥
본원에 기재된 siRNA 분자 중 임의의 것은 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 50개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 45개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 40개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 35개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 30개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 15 내지 약 25개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 17 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 17 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 17 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 18 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 18 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 18 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 19 내지 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 19 내지 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 15개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 16개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 17개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 18개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 19개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 20개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 21개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 22개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 약 23개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 50, 45, 40, 35, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20 또는 19개 미만 또는 그 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 30개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 25개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 24개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 23개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 22개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 21개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 20개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 약 19개 미만의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 70% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 75% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 80% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 85% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 90% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 적어도 약 95% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 약 100% 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 50개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 45개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 40개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 35개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 30개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 15 내지 약 25개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 17 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 17 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 17 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 18 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 18 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 18 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 19 내지 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편의 약 19 내지 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 19 내지 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 또는 그 초과의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 적어도 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 50, 45, 40, 35, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20 또는 19개 미만 또는 그 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 35개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 30개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 25개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 24개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 23개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 22개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 21개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 20개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 HSD17B13 유전자의 단편에 상보적인 약 19개 미만의 연속적인 뉴클레오티드를 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 5개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 4개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 3개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 2개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 1개 이하의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 HSD17B13 유전자의 단편에 대해 0개의 미스매치를 갖는 서열을 포함하며, 여기서 HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 15개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 16개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 HSD17B13 유전자의 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 70% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 75% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 17개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 18개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 19개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 20개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 21개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 22개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 23개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 5개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 4개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 3개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 2개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 1개 이하의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 안티센스 가닥의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 0개의 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 8 또는 표 9 또는 표 10 또는 표 11 또는 표 12에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 8에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 9에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 10에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 11에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 표 12에 열거된 안티센스 가닥 중 임의의 것에서의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 3' 또는 5' 말단에 오버행 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 1개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 2개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 3개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 4개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 적어도 약 5개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행 서열은 UU 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 또는 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14 및 17에 2'-플루오로 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 17 내지 23개, 또는 19 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 17 내지 23개, 또는 19 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 17 내지 23개, 또는 19 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14, 및 17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 17 내지 23개, 또는 19 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 위치 2,6, 10, 14, 및 18에 존재한다.
변형된 siRNA
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 분자는 화학적으로 변형될 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는, 예를 들어 안정성 및/또는 생체이용률을 증진시키고/거나 시험관내, 생체내 및/또는 생체외에서 달리 유익한 특징을 제공하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, siRNA 분자는 2개의 가닥 (센스 및 안티센스)이 서로 혼성화하는 능력을 유지하고/하거나 siRNA 분자가 표적 서열에 혼성화하는 능력을 유지하도록 변형될 수 있다. siRNA 변형의 예는 본원에 기재된 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 리보스 당, 핵염기 및/또는 포스포디에스테르 백본에 대한 변형을 포함한다. siRNA 변형의 비제한적 예는, 예를 들어 WO 2020/243490; WO 2020/097342; WO 2021/119325; PCT/US2021/019629; PCT/US2021/019628; PCT/US2021/021199; 문헌 [Sig. Transduct. Target Ther. 5 (101), 1-25, 2020; and J. Am. Chem. Soc. 136 (49), 16958-16961, 2014]에 기재되어 있으며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 분자는 리보스 당의 변형을 갖는 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 이들 당 변형은 펜토스 고리의 2' 및/또는 5' 위치에서의 변형 뿐만 아니라 비시클릭 당 변형을 포함할 수 있다. 2'-변형된 뉴클레오티드는 H 또는 OH 이외의 다른 2' 위치에 치환기를 갖는 펜토스 고리를 갖는 뉴클레오티드를 지칭한다. 이러한 2' 변형은 2'-OH, 2'-S-알킬, 2'-N-알킬, 2'-O-알킬, 2'-S-알케닐, 2'-N-알케닐, 2'-O-알케닐, 2'-S-알키닐, 2'-N-알키닐, 2'-O-알키닐, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-플루오로, 2'-O-메틸 (OMe 또는 OCH3), 2'-O-메톡시에틸, 2'-ara-F, 2'-OCF3, 2'-O(CH2)2SCH3, 2'-O-아미노알킬, 2'-아미노 (예를 들어, NH2), 2'-O-에틸아민 및 2'-아지도를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환 또는 비치환될 수 있다. 펜토스 고리의 5' 위치에서의 변형은 5'-메틸 (R 또는 S), 5'-비닐, 및 5'-메톡시를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 당 변형은 또한 예를 들어 LNA, UNA, GNA 및 DNA를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 1개 이상의 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 그의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 약 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 24, 15 내지 23, 15 내지 22, 15 내지 21, 17 내지 30, 17 내지 25, 17 내지 24, 17 내지 23, 17 내지 22, 17 내지 21, 18 내지 30, 18 내지 25, 18 내지 24, 18 내지 23, 18 내지 22, 18 내지 21, 19 내지 30, 19 내지 25, 19 내지 24, 19 내지 23, 19 내지 22, 19 내지 21, 20 내지 25, 20 내지 24, 20 내지 23, 21 내지 25, 21 내지 24, 또는 21 내지 23개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 약 2 내지 20개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 약 5 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 약 10 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 약 12 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 12개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 13개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 14개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 16개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 17개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 18개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 19개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 21개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 20개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 19개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 18개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 17개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 16개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 15개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 14개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 13개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 4개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서 적어도 5개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 12의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 및/또는 18에서의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 및/또는 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 및/또는 18에서의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 및/또는 18에서의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 및/또는 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 10의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 11의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 12의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19에서의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 7, 8, 9, 10, 11, 14 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 7, 8, 및/또는 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7, 9, 10, 및/또는 11의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9, 10, 11, 14 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 4의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 6의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 10의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 12의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 16의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 17 및/또는 18에서의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 14, 16 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및/또는 16의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및/또는 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (V)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00001
, 여기서 Rx는 독립적으로 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고, Q1 및 Q2는 독립적으로 S 또는 O이고, R5는 독립적으로 -OCD3, -F 또는 -OCH3이고, R6 및 R7은 독립적으로 H, D 또는 CD3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (16) - 화학식 (20)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00002
, 여기서 Rx는 독립적으로 핵염기이고, R2는 F 또는 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00003
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00004
, 여기서 Rx는 핵염기이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00005
, 여기서 B 및 Ry는 핵염기이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열은 리보핵산 (RNA)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열은 변형된 RNA를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 변형된 RNA는 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 변형된 뉴클레오티드는 독립적으로 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 분자는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 말단 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 분자는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단에 포스페이트 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단은 포스페이트 모방체 또는 유사체 (예를 들어, "5' 말단 포스페이트 모방체")를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단은 비닐 포스포네이트 또는 그의 변경 (예를 들어, "5' 말단 비닐 포스포네이트")을 포함한다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1개의 백본 변형, 예컨대 변형된 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 siRNA 분자는 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 및/또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 말단에 위치할 수 있다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1개의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드의 오버행을 포함한다. siRNA 분자가 뉴클레오티드 오버행을 포함하는 일부 실시양태에서, 오버행 내의 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드 중 2개 이상이 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결에 의해 연결될 수 있다. 특정 실시양태에서, 안티센스 가닥 및/또는 센스 가닥의 3' 말단의 뉴클레오티드 오버행 내의 모든 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결에 의해 연결된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 및/또는 센스 가닥의 5' 말단에서의 뉴클레오티드 오버행 내의 모든 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결에 의해 연결된다. 일부 실시양태에서, 임의의 뉴클레오티드 오버행 내의 모든 쌍형성되지 않은 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결에 의해 연결된다.
일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 또는 그 미만의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 본원에 기재된 임의의 센스 또는 안티센스 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자 내로 혼입될 수 있는 변형된 뉴클레오티드는 본원에 기재된 하나 초과의 화학적 변형을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 리보스 당에 대한 변형 뿐만 아니라 포스포디에스테르 백본에 대한 변형을 가질 수 있다. 예로서, 변형된 뉴클레오티드는 2' 당 변형 (예를 들어, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸), 및 변형된 뉴클레오티드가 폴리뉴클레오티드 내로 혼입되었을 때 변형된 뉴클레오시드간 연결을 생성할 5' 포스페이트에 대한 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 당 변형, 예컨대 예를 들어 2'-플루오로 변형 또는 2'-O-메틸 변형, 뿐만 아니라 5' 포스포로티오에이트 기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥은 2' 변형된 뉴클레오티드 및 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥은 2' 당 변형, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결, 및 5' 말단 비닐 포스포네이트의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 2개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 5개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 8개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 10개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 20개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 30개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 35개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 40개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 45개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자 내의 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 2개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 5개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 8개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 10개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 17개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 18개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 19개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 20개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 21개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 내의 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 2개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 5개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 8개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 10개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 17개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 18개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 19개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 20개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 21개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 22개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 23개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 내의 모든 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 10%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 30%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 50%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 60%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 70%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 80%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 90%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 100%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 10%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 30%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 50%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 60%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 70%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 80%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 90%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것 내의 뉴클레오티드의 적어도 약 100%는 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다.
siRNA 접합체
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 분자는 1개 이상의 접합체 또는 리간드를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "접합체" 또는 "리간드"는 또 다른 화합물 또는 분자와 직접 또는 간접적으로 상호작용할 수 있는 임의의 화합물 또는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 리간드는 그가 부착되는 siRNA 분자의 하나 이상의 특성, 예컨대 siRNA 분자의 약역학, 약동학, 결합, 흡수, 세포 분포, 세포 흡수, 전하 및/또는 클리어런스 특성을 변형시킬 수 있다. 이러한 접합체의 비제한적 예는, 예를 들어 WO 2020/243490; WO 2020/097342; WO 2021/119325; PCT/US2021/019629; PCT/US2021/019628; PCT/US2021/021199; 문헌 [Sig. Transduct. Target Ther. 5 (101), 2020; ACS Chem. Biol. 10 (5), 1181-1187, 2015; J. Am. Chem. Soc. 136 (49), 16958-16961, 2014; Nucleic Acids Res. 42 (13), 8796-8807, 2014; Molec. Ther. 28 (8), 1759-1771, 2020; and Nucleic Acid Ther. 28 (3), 109-118, 2018]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 리간드는, 예컨대 뉴클레오티드에의 공유 부착을 통해 siRNA의 센스 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 리간드는 링커를 통해 siRNA 분자의 센스 또는 안티센스 가닥에 공유 부착된다. 리간드는 본 개시내용의 siRNA 분자의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥)의 핵염기, 당 모이어티, 또는 뉴클레오시드간 연결에 부착될 수 있다.
일부 실시양태에서, 사용된 접합체 또는 리간드의 유형 및 본 개시내용의 siRNA 분자의 접합 정도는, 예를 들어 siRNA 분자의 개선된 약동학적 프로파일, 생체이용률 및/또는 안정성에 대해 평가될 수 있고, 동시에 RNAi 활성을 매개하는 siRNA의 능력을 유지할 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 그가 혼입되는 siRNA 분자의 분포, 표적화 또는 수명을 변경시킨다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는, 예를 들어 이러한 리간드가 부재하는 분자와 비교하여, 선택된 표적, 예를 들어 분자, 세포 또는 세포 유형, 구획 (예를 들어, 세포 또는 기관 구획), 조직, 기관 또는 신체 영역에 대해 증진된 친화도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 자연 발생 물질 또는 재조합 또는 합성 분자를 포함할 수 있다. 접합체 및 리간드의 비제한적 예는 혈청 단백질 (예를 들어, 인간 혈청 알부민, 저밀도 지단백질, 글로불린), 콜레스테롤 모이어티, 비타민 (예를 들어, 비오틴, 비타민 E, 비타민 B12), 폴레이트 모이어티, 스테로이드, 담즙산 (예를 들어, 콜산), 지방산 (예를 들어, 팔미트산, 미리스트산), 탄수화물 (예를 들어, 덱스트란, 풀루란, 키틴, 키토산, 이눌린, 시클로덱스트린, 히알루론산 또는 N-아세틸-갈락토사민 (GalNAc)), 글리코시드, 인지질, 항체 또는 그의 결합 단편 (예를 들어, siRNA를 특정 세포 유형, 예컨대 간으로 표적화하는 항체 또는 결합 단편), 염료, 삽입제 (예를 들어, 아크리딘), 가교제 (예를 들어, 프소랄렌, 미토마이신 C), 포르피린 (TPPC4, 텍사피린, 사피린), 폴리시클릭 방향족 탄화수소 (예를 들어, 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클레아제 (예를 들어, EDTA), 친지성 분자 (예를 들어, 콜레스테롤, 토코페롤, 긴 지방산 (예를 들어, 도코산산, 팔미토일, 도코사헥사엔산), 콜산, 아다만탄 아세트산, 1-피렌 부티르산, 디히드로테스토스테론, 1,3-비스O (헥사데실)글리세롤, 게라닐옥시헥실 기, 헥사데실글리세롤, 보르네올, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실 기, 03-(올레오일)리토콜산, 03-(올레오일)콜렌산, 디메톡시트리틸 또는 페녹사진), 펩티드 (예를 들어, 안텐나페디아 펩티드, Tat 펩티드, RGD 펩티드), 알킬화제, 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) (예를 들어, PEG-40K), 폴리 아미노산, 폴리아민 (예를 들어, 스페르민, 스페르미딘), 알킬, 치환된 알킬, 방사성표지된 마커, 효소, 합텐 (예를 들어, 비오틴), 수송/흡수 촉진제 (예를 들어, 아스피린, 비타민 E, 폴산), 합성 리보뉴클레아제 (예를 들어, 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 접합체, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체), 디니트로페닐, HRP 또는 AP를 포함한다.
일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 탄수화물을 포함한다. 탄수화물은 당 (예를 들어, 약 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9개의 모노사카라이드 단위를 함유하는 모노사카라이드, 디사카라이드, 트리사카라이드, 테트라사카라이드, 및 올리고사카라이드) 및 폴리사카라이드, 예컨대 전분, 글리코겐, 셀룰로스 및 폴리사카라이드 검을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 리간드에 혼입된 탄수화물은 펜토스, 헥소스 또는 헵토스로부터 선택된 모노사카라이드 및 이러한 모노사카라이드 단위를 포함하는 디- 및 트리-사카라이드이다.
일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드에 혼입된 탄수화물은 아미노 당, 예컨대 갈락토사민, 글루코사민, N-아세틸-갈락토사민 (GalNAc), 및 N-아세틸-글루코사민이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 N-아세틸-갈락토사민 및 그의 유도체를 포함한다. 본 개시내용의 siRNA 내로 혼입될 수 있는 GalNAc- 또는 갈락토스-함유 리간드의 비제한적 예는 WO 2020/243490; WO 2020/097342; WO 2021/119325; PCT/US2021/019629; PCT/US2021/019628; PCT/US2021/021199; 문헌 [Sig. Transduct. Target Ther. 5 (101), 1-25, 2020; ACS Chem. Biol. 10 (5), 1181-1187, 2015; J. Am. Chem. Soc. 136 (49), 16958-16961, 2014; Nucleic Acids Res. 42 (13), 8796-8807, 2014; Molec. Ther. 28 (8), 1759-1771, 2020; and Nucleic Acid Ther. 28 (3), 109-118, 2018]에 기재되어 있으며, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
접합체 또는 리간드는 siRNA 분자에 직접 또는 간접적으로 부착 또는 접합될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 리간드는 siRNA 분자의 센스 또는 안티센스 가닥에 직접 공유 부착된다. 다른 실시양태에서, 리간드는 링커를 통해 siRNA 분자의 센스 또는 안티센스 가닥에 공유 부착된다. 리간드는 본 개시내용의 siRNA 분자의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥)의 핵염기, 당 모이어티, 또는 뉴클레오시드간 연결에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 부착될 수 있다. 특정 실시양태에서, 리간드는 센스 가닥의 5' 말단에 공유 부착된다. 일부 실시양태에서, 리간드는 센스 가닥의 3' 말단에 공유 부착된다. 일부 실시양태에서, 리간드는 센스 가닥의 5' 말단 뉴클레오티드 또는 센스 가닥의 3' 말단 뉴클레오티드에 부착된다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥에 공유 부착된 접합체 또는 리간드는 GalNAc 유도체를 포함한다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, GalNAc 유도체는 센스 가닥의 5' 말단 및 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 1개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 2개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 3개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 4개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 5개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 접합체 또는 리간드는 6개의 단량체 GalNAc 단위를 포함하는 GalNAc 유도체이다. 일부 실시양태에서, 다양한 양의 단량체 GalNAc 단위가 센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 다양한 양의 단량체 GalNAc 단위가 안티센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 단량체 GalNAc 단위가 센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 단량체 GalNAc 단위가 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 단량체 GalNAc 단위가 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 단량체 GalNAc 단위가 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 동일한 수의 단량체 GalNAc 단위가 센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단 양쪽 모두에 부착된다. 일부 실시양태에서, 동일한 수의 단량체 GalNAc 단위가 안티센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단 양쪽 모두에 부착된다. 일부 실시양태에서, 상이한 수의 단량체 GalNAc 단위가 센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 상이한 수의 단량체 GalNAc 단위가 안티센스 가닥의 5' 말단 및 3' 말단에 부착된다.
일부 실시양태에서, siRNA 듀플렉스 ID 번호 ds-siNA D1-D178 또는 mds-siNA MD1-MD178 중 어느 하나의 이중-가닥 siRNA 분자는 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 부착된 GalNAc 유도체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 표 8 또는 표 9 또는 표 10 또는 표 11 또는 표 12의 siRNA 듀플렉스 중 어느 하나로부터 선택된 이중-가닥 siRNA 분자는 siRNA 분자의 센스 및/또는 안티센스 가닥의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 부착된 GalNAc 유도체를 추가로 포함한다.
HSD17B13
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 특이적으로 하향조절한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 30% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 50% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 60% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 70% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 75% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 80% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 85% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 90% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 95% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것은 세포에서 HSD17B13 유전자 또는 그의 변이체의 발현을 적어도 약 100% 특이적으로 하향조절하며, 여기서 발현의 하향조절의 퍼센트는 siRNA와 접촉되지 않은 세포와 비교된다.
HSD17B13 유전자의 발현은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정된다. HSD17B13 유전자의 발현을 측정하기 위한 예시적인 방법은 정량적 PCR, RT-PCR, RT-qPCR, 웨스턴 블롯, 서던 블롯, 노던 블롯, FISH, DNA 어레이, 타일링 어레이 및 RNA-Seq를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. HSD17B13 유전자의 발현은, 예를 들어 HSD17B13 유전자 발현과 연관된 임의의 변수, 예를 들어 HSD17B13 mRNA 수준, HSD17B13 단백질 수준, 및/또는 아밀로이드 침착물의 수 또는 정도의 수준 또는 수준의 변화에 기초하여 평가될 수 있다. 이러한 수준은, 예를 들어 개별 세포에서 또는 예를 들어 대상체로부터 유래된 샘플을 포함한 세포 군에서 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 하향조절 또는 억제는 대조군 수준과 비교하여 HSD17B13 발현과 연관된 하나 이상의 변수의 절대 또는 상대 수준의 감소에 의해 평가될 수 있다. 대조군 수준은 관련 기술분야에서 이용되는 임의의 유형의 대조군 수준, 예를 들어 투여전 기준선 수준, 또는 비처리되거나 또는 대조군 (예컨대, 예를 들어 완충제 단독 대조군 또는 불활성 또는 약독화된 작용제 대조군)으로 처리된 유사한 대상체, 세포 또는 샘플로부터 결정된 수준일 수 있다.
일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자는 서열식별번호: 261의 전장에 걸쳐 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 서열 (진뱅크 수탁 번호 NM_178135.5 (뉴클레오티드 42에서 944))에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자는 서열식별번호: 261의 전장에 걸쳐 서열식별번호: 261의 뉴클레오티드 서열에 대해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이하의 뉴클레오티드 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, HSD17B13 유전자의 단편은 약 10 내지 약 50, 또는 약 15 내지 약 50, 또는 약 15 내지 약 45개 뉴클레오티드, 또는 약 15 내지 약 40, 또는 약 15 내지 약 35, 또는 약 15 내지 약 30, 또는 약 15 내지 약 25, 또는 약 17 내지 약 23개 뉴클레오티드, 또는 약 17 내지 약 22, 또는 약 17 내지 약 21, 또는 약 18 내지 약 23, 또는 약 18 내지 약 22, 또는 약 18 내지 약 21, 또는 약 19 내지 약 23, 또는 약 19 내지 약 22, 또는 약 19 내지 약 21개의 뉴클레오티드 길이이다.
siRNA의 투여
본원에 개시된 siRNA 중 임의의 것의 투여는 하기 기재된 바와 같은 것을 비롯하여 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 본 개시내용의 siRNA는 전신으로 또는 국부로, 예를 들어 경구로, 비강으로, 비경구로, 국소로, 수조내로, 질내로 또는 직장으로 제공될 수 있고, 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다.
본 개시내용의 siRNA 분자를 세포, 예를 들어 대상체, 예컨대 인간 대상체 (예를 들어, HSD17B13 유전자 발현과 연관된 질환, 장애 또는 상태를 갖는 대상체를 포함한, 그를 필요로 하는 대상체) 내의 세포에 전달하는 것은 다수의 상이한 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 전달은 세포를 시험관내에서, 생체내에서, 또는 생체외에서 본 개시내용의 siRNA와 접촉시킴으로써 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생체내 전달은, 예를 들어 대상체에게 siRNA 분자를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생체내 전달은 siRNA를 코딩하고 그의 발현을 지시하는 하나 이상의 벡터를 투여함으로써 수행될 수 있다.
일반적으로, 핵산 분자를 전달하는 임의의 방법 (시험관내, 생체내 또는 생체외)이 본 개시내용의 siRNA 분자와 함께 사용하기 위해 개조될 수 있다. 생체내 전달의 경우, siRNA 분자를 전달하기 위해 고려되는 인자는, 예를 들어 전달되는 분자의 생물학적 안정성, 비-특이적 효과의 방지, 및 표적 조직 및 비-표적 조직에서의 전달된 분자의 축적을 포함한다.
일부 실시양태에서, siRNA의 비-특이적 효과는 국소 투여에 의해, 예를 들어 조직 내로의 직접 주사 또는 이식에 의해, 또는 제제를 국소로 투여함으로써 최소화될 수 있다. 치료 부위로의 국부 투여는, 예를 들어 작용제의 국부 농도를 최대화하고, 작용제에 의해 손상될 수 있거나 또는 작용제를 분해할 수 있는 전신 조직에 대한 작용제의 노출을 제한하고, 보다 낮은 총 용량의 siRNA 분자가 투여되도록 할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 또는 siRNA를 포함하는 제약 조성물은 예를 들어 주사, 주입 펌프 또는 스텐트를 통해 생체중합체 내에 혼입되거나 혼입되지 않으면서 생체외에서 또는 생체내에서 관련 조직에 국소적으로 투여될 수 있다.
질환의 치료를 위해 siRNA를 투여하기 위해, siRNA는 변형되거나 또는 다르게는 약물 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있고; 둘 다의 방법은, 예를 들어 생체내 엔도- 및 엑소-뉴클레아제에 의한 dsRNA의 급속한 분해를 방지하는 작용을 할 수 있다. siRNA 또는 제약 담체의 변형은 또한 siRNA 조성물의 표적 조직으로의 표적화를 허용하고 바람직하지 않은 오프-타겟 효과를 피할 수 있다. 예를 들어, siRNA 분자는, 예를 들어 세포 흡수를 증진시키고 분해를 방지하기 위해 상기 기재된 바와 같이 친지성 기, 예컨대 콜레스테롤에의 접합에 의해 변형될 수 있다.
일부 실시양태에서, siRNA는 약물 전달 시스템, 예컨대 나노입자, 덴드리머, 중합체, 리포솜, 또는 양이온성 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 양으로 하전된 양이온성 전달 시스템은 siRNA 분자 (음으로 하전됨)의 결합을 용이하게 할 수 있고, 또한 음으로 하전된 세포 막에서의 상호작용을 증진시켜 세포에 의한 siRNA의 효율적인 흡수를 허용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 양이온성 지질, 덴드리머 또는 중합체는 siRNA에 결합되거나, 또는 siRNA를 감싸는 소포 또는 미셀을 형성하도록 유도될 수 있다. 소포 또는 미셀의 형성은, 예를 들어 전신 투여 시 siRNA의 분해를 추가로 방지할 수 있다.
siRNA의 전신 전달에 유용한 약물 전달 시스템의 일부 비제한적 예는 DOTAP, 카르디올리핀, 폴리에틸렌이민, Arg-Gly-Asp (RGD) 펩티드, 및 폴리아미도아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, siRNA는 전신 투여를 위해 시클로덱스트린과 복합체를 형성한다.
제약 조성물
본 개시내용의 siRNA 분자는 포유동물, 특히 인간을 포함한 동물에게, 제약으로서 그 자체로, 서로와의 혼합물로, 및/또는 제약 조성물의 형태로 투여될 수 있다.
본 개시내용은 본 개시내용의 siRNA 분자를 포함하는 제약 조성물 및 제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 제약 조성물로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 본 개시내용의 1개 이상의 siRNA 분자 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 본 개시내용에서 siRNA 분자가 언급되는 경우, 적절한 경우에 siRNA 분자를 함유하는 제약 조성물이 또한 언급되는 것으로 이해되어야 한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 또는 그 초과의 본원에 개시된 siRNA 분자 중 임의의 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 제약 조성물은 1종 이상의 부형제, 담체, 습윤제, 희석제, 유화제, 윤활제, 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제, 보존제 및 항산화제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 "네이키드" 형태로 투여될 수 있고, 여기서 변형 또는 비변형된 siRNA 분자는 "유리 siRNA"로서 수성 또는 적합한 완충제 용매 중에 직접 현탁된다. 유리 siRNA는 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카르보네이트, 또는 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있는 적합한 완충제 용액 중에 존재할 수 있다. 한 실시양태에서, 완충제 용액은 포스페이트 완충 염수 (PBS)이다. siRNA를 함유하는 완충제 용액의 pH 및 오스몰랄농도는 대상체에게 투여하기에 적합하도록 조정될 수 있다.
제약상 허용되는 항산화제의 예는 (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 시클로덱스트린, 셀룰로스, 리포솜, 미셀 형성제, 예를 들어 담즙산, 및 중합체 담체, 예를 들어 폴리에스테르 및 폴리무수물로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제; 및 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siRNA 분자)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 언급된 조성물은 본 개시내용의 siRNA 분자를 경구로 생체이용가능하게 한다.
이들 제제 또는 제약 조성물의 제조 방법은 예를 들어 본 개시내용의 siRNA 분자를 담체 및 임의로 1종 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 본 개시내용의 siRNA 분자를 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합시킨 다음, 필요한 경우에 생성물을 성형함으로써 제조된다.
본 개시내용의 제약 조성물의 투여는 임의의 통상적인 경로를 통할 수 있고, 이들은 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 이러한 경로는 비경구 (예를 들어, 피하, 근육내, 복강내 또는 정맥내), 경구, 비강, 기도 (예를 들어, 에어로졸), 협측, 피내, 경피, 설하, 직장 및 질을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 투여는 간 조직 내로의 직접 주사 또는 간 문맥을 통한 전달에 의한 것이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 비경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 피하 또는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 피하로 투여된다.
경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제약 조성물은, 예를 들어 캡슐 (예를 들어, 경질 또는 연질 캡슐), 카쉐, 환제, 정제, 로젠지 (향미 베이스, 통상적으로 예를 들어 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트를 사용함), 분말, 과립의 형태로, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼으로서, 또는 엘릭시르 또는 시럽으로서, 또는 파스틸 (불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용함)로서 및/또는 구강 세정제 등으로서 존재할 수 있으며, 각각은 활성 성분으로서 미리 결정된 양의 본 개시내용의 siRNA 분자를 함유한다. 본 개시내용의 siRNA 분자는 또한 볼루스, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 본 개시내용의 고체 투여 형태 (캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립, 트로키 등)에서, 활성 성분은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 예를 들어 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘, 및/또는 하기 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 함습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨; (5) 용해 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대 4급 암모늄 화합물 및 계면활성제, 예컨대 폴록사머 및 소듐 라우릴 술페이트; (7) 습윤제, 예컨대 예를 들어 세틸 알콜, 글리세롤 모노스테아레이트 및 비-이온성 계면활성제; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 스테아르산아연, 스테아르산나트륨, 스테아르산 및 그의 혼합물; (10) 착색제; 및 (11) 제어 방출 작용제, 예컨대 크로스포비돈 또는 에틸 셀룰로스.
캡슐, 정제 및 환제의 경우, 제약 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-쉘 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다.
정제는, 예를 들어 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는, 예를 들어 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예를 들어, 소듐 스타치 글리콜레이트 또는 가교 소듐 카르복시메틸 셀룰로스), 표면-활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형 정제는, 예를 들어 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말화 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제, 및 본 개시내용의 제약 조성물의 다른 고체 투여 형태, 예컨대 당의정, 캡슐, 환제 및 과립은 임의로 스코어링될 수 있거나, 또는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 제약-제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 목적하는 방출 프로파일을 제공하는 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 마이크로구체를 사용하여 그 안의 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 이들은 급속 방출을 위해 제제화될 수 있고, 예를 들어 동결-건조될 수 있다.
이들은, 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수 또는 일부 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입시킴으로써 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 임의로 불투명화제를 함유할 수 있고, 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로 위장관의 특정 부분에서, 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한 적절한 경우에 상기 기재된 부형제 중 1종 이상을 갖는 마이크로-캡슐화된 형태일 수 있다.
본 개시내용의 siRNA 분자의 경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 예를 들어 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 추가로, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (예를 들어, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 착색제, 퍼퓸제 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은 siRNA 분자에 추가로 현탁화제, 예를 들어 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천 및 트라가칸트, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
직장 또는 질 투여를 위한 본 개시내용의 제약 조성물의 제제는 좌제로서 제공될 수 있으며, 이는 본 개시내용의 1개 이상의 siRNA 분자를, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 1종 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있고, 이는 예를 들어 실온에서는 고체이지만 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 siRNA 분자를 방출할 것이다.
질 투여에 적합한 본 개시내용의 제제는 또한, 예를 들어 관련 기술분야에 적절한 것으로 공지된 바와 같은 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포체 또는 스프레이 제제를 포함한다.
본 개시내용의 siRNA 분자의 국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 예를 들어 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. siRNA 분자는 멸균 조건 하에 제약상 허용되는 담체, 및 요구될 수 있는 임의의 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합될 수 있다.
연고, 페이스트, 크림 및 겔은 본 개시내용의 활성 siRNA 분자에 추가로 부형제, 예컨대, 예를 들어 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는 본 개시내용의 siRNA 분자에 추가로 부형제, 예를 들어 락토스, 활석, 규산, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아미드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 통상의 추진제, 예컨대 예를 들어 클로로플루오로히드로카본 및 휘발성 비치환된 탄화수소, 예컨대 부탄 및 프로판을 추가적으로 함유할 수 있다.
경피 패치는 본 개시내용의 siRNA 분자의 신체로의 제어 전달을 제공하는 추가의 이점을 갖는다. 이러한 투여 형태는 siRNA 분자를 적절한 매질 중에 용해 또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 흡수 증진제는 또한 피부를 가로지르는 siRNA 분자의 유동을 증가시키는 데 사용될 수 있다. 이러한 유동의 속도는, 예를 들어 속도 제어 막을 제공하거나 또는 siRNA 분자를 중합체 매트릭스 또는 겔 중에 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제약 조성물은 본 개시내용의 1개 이상의 siRNA 분자를 1종 이상의 제약상 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 포함하며, 이는 예를 들어 당, 알콜, 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 제제를 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 대상 화합물에 대한 미생물 작용의 방지는, 예를 들어 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는, 예를 들어 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.
일부 실시양태에서, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 예를 들어 피하 또는 근육내 주사로부터의 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는, 예를 들어 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이어서, 약물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 따라 달라지며, 이는 다시 결정 크기 및 결정질 형태에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구-투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.
일부 실시양태에서, 투여는 데포 주사를 통한 것이다. 주사가능한 데포 형태는 생분해성 중합체, 예컨대 폴리락티드-폴리글리콜리드 중에 대상 siRNA 분자의 마이크로캡슐화 매트릭스를 형성함으로써 제조될 수 있다. 약물 대 중합체의 비, 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)를 포함한다. 주사가능한 데포 제제는 또한, 예를 들어 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼 중에 약물을 포획함으로써 제조될 수 있다.
데포 주사는 장기간에 걸쳐 일관된 방식으로 siRNA를 방출할 수 있다. 따라서, 데포 주사는 목적하는 효과, 예를 들어 HSD17B13의 목적하는 억제, 또는 치료적 또는 예방적 효과를 얻는 데 필요한 투여 빈도를 감소시킬 수 있다. 데포 주사는 또한 보다 일관된 혈청 농도를 제공할 수 있다. 데포 주사는, 예를 들어 피하 주사 또는 근육내 주사를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 데포 주사는 피하 주사이다.
일부 실시양태에서, 투여는 펌프를 통해 이루어진다. 펌프는 외부 펌프 또는 외과적으로 이식된 펌프일 수 있다. 특정 실시양태에서, 펌프는 피하로 이식된 삼투 펌프이다. 다른 실시양태에서, 펌프는 주입 펌프이다. 주입 펌프는, 예를 들어 정맥내, 피하, 동맥 또는 경막외 주입에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 주입 펌프는 피하 주입 펌프이다. 다른 실시양태에서, 펌프는 대상체에게 siRNA를 전달하는 외과적으로 이식된 펌프이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 투여를 위한 장치와 함께 포장되거나 또는 그 내에 저장된다. 주사가능한 제제를 위한 장치는 주사 포트, 사전-충전 시린지, 자가 주사기, 분사 펌프, 온-바디 주사기 및 주사 펜을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸화 또는 분말 제제를 위한 장치는 흡입기, 취입기, 흡인기 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 따라서, 본 개시내용은 본원에 기재된 장애 중 1종 이상을 치료 또는 예방하기 위한 본 개시내용의 제약 조성물을 포함하는 투여 장치를 포함한다.
투여 방식은, 예를 들어 국부 또는 전신 치료가 바람직한지 여부에 기초하여 및 치료할 영역에 기초하여 선택될 수 있다. 투여 경로 및 부위는, 예를 들어 표적화를 증진시키기 위해 선택될 수 있다.
선택된 투여 경로와 무관하게, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 개시내용의 siRNA 분자 및/또는 본 개시내용의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해 제약상 허용되는 투여 형태로 제제화될 수 있다. 제약 조성물의 제제화 방법은 투여 경로, 치료될 질환 또는 장애의 유형 및 정도, 및/또는 투여될 용량을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 기준에 따라 달라진다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 의도된 전달 경로에 기초하여 제제화된다. 제약 조성물의 제조는 공지된 방식으로 수행될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 1종 이상의 화합물은 1종 이상의 고체 또는 액체 제약 담체 물질 및/또는 첨가제 (또는 보조 물질)와 함께, 및 원하는 경우에 치료적 또는 예방적 작용을 갖는 다른 제약 활성 화합물과 조합하여 적합한 투여 형태 또는 투여형으로 된다.
제약 조성물은 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 제약 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 숙주 및 특정한 투여 방식에 따라, 예를 들어 하기 기재된 바와 같이 달라질 것이다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로, 예를 들어 치료 효과를 생성하는 siRNA 분자의 양일 것이다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 100 퍼센트 중에서, 상기 양은 약 0.1 퍼센트 내지 약 99 퍼센트, 또는 약 5 퍼센트 내지 약 70 퍼센트, 또는 약 10 퍼센트 내지 약 30 퍼센트의 활성 성분의 범위일 것이다.
본 개시내용의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이 아니면서 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 제약 조성물 중의 siRNA 분자는 HSD17B13 유전자의 발현을 하향조절하기에 충분한 투여량으로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 siRNA 분자 및 제약 조성물은 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서, 예를 들어 하기 기재된 방법에서 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.
투여량
본 개시내용의 siRNA 분자를 이용하는 투여량 및/또는 요법은, 예를 들어 사용되는 본 개시내용의 특정 siRNA 분자, 또는 그의 염의 활성; 치료될 상태의 중증도; 투여 경로; 투여 시간; 사용되는 특정 siRNA 분자의 배출 또는 대사 속도; 흡수 속도 및 정도; 치료 기간; 사용되는 특정 siRNA 분자와 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질; 치료될 환자의 종류, 종, 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력; 환자의 신장 및 간 기능; 및 의학 기술분야에 널리 공지된 기타 인자를 포함하는 다양한 인자에 따라 선택될 수 있다. 이들 인자의 고려사항은 치료 유효량을 결정할 목적으로 통상의 숙련된 임상의의 권한 내에 충분히 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자의 적합한 1일 용량은, 예를 들어 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 최저 용량인 siRNA 분자의 양이다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 본 개시내용의 siRNA 분자의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 시작하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 이러한 유효 용량은, 예를 들어 상기 기재된 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 siRNA 분자는 HSD17B13 유전자의 발현을 하향조절하거나 억제하기에 충분한 투여량으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자는 약 0.01 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 또는 약 0.5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 0.25, 0.26, 0.27, 0.28, 0.29, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 또는 1 mg/kg 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 mg/kg 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 또는 15 mg/kg 이하의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자의 총 1일 용량은 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 100 mg 이상이다.
일부 실시양태에서, 치료 유효량의 본 개시내용의 siRNA 분자를 사용한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 단일 용량으로 투여되거나 또는 다중 용량으로 분할될 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자의 유효 1일 용량은 임의로 단위 투여 형태로 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 그 초과의 용량 또는 하위-용량으로서 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1일 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 매주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1일에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1주 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1개월 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31일마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 3일마다 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1개월 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개월마다 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70일의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53주의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53개월의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 1주 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 1주 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 2주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 2주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 4주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 4주마다 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 반복-용량 요법은 규칙적으로, 예컨대 격일로, 매주 1회, 분기마다 1회 (즉, 약 3개월마다), 또는 1년에 1회 치료 유효량의 siRNA의 투여를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여량 및/또는 빈도는 초기 치료 기간 후에 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 siRNA 분자가 또 다른 활성제와 공-투여되는 경우, 치료 유효량은 siRNA 분자가 단독으로 사용되는 경우보다 적을 수 있다.
방법 및 용도
또한, HSD17B13-연관 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 siRNA 분자 및/또는 상기 siRNA 분자를 포함하는 제약 조성물 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HSD17B13-연관 질환을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 간 질환이다.
본 개시내용의 siRNA 분자가 인간 및 동물에게 의약으로서 투여될 때, 이들은 그 자체로, 또는 예를 들어 0.1 내지 99% (보다 바람직하게는, 10 내지 30%)의 siRNA 분자를 제약상 허용되는 담체와 조합하여 함유하는 상기 설명된 제약 조성물로서 제공될 수 있다.
일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 소정량의 본원에 개시된 siRNA 분자 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 양은 치료 유효량이다. 일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 소정량의 본원에 개시된 임의의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 양은 치료 유효량이다.
일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 본원에 개시된 siRNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것을 추가의 활성제와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가의 활성제는 간 질환 치료제이다. 한 실시양태에서, siRNA 분자의 양은 치료 유효량이다. 한 실시양태에서, 추가의 활성제의 양은 치료 유효량이다.
일부 실시양태에서, siRNA 분자 및 간 질환 치료제는 개별적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자 또는 제약 조성물 및 간 질환 치료제는 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자 또는 제약 조성물 및 간 질환 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자 또는 제약 조성물은 간 질환 치료제를 투여하기 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 분자 또는 제약 조성물은 간 질환 치료제를 투여한 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 siRNA 및 간 질환 치료제를 포함한다.
또한, HSD17B13의 발현 수준의 감소를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siRNA 분자 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 한 실시양태에서, 추가의 활성제의 양은 치료 유효량이다. 일부 실시양태에서, HSD17B13의 발현 수준의 감소를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용에 따른 siRNA 분자 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 방법은, siRNA 분자 또는 제약 조성물의 투여 후에 대상체에서 간세포에서의 HSD17B13의 발현 수준을 siRNA 또는 제약 조성물을 받지 않은 환자에서의 HSD17B13 발현 수준과 비교하여 감소시킨다.
또한, 간 질환의 적어도 1종의 증상의 예방을 필요로 하는 대상체에게 소정량의 본 개시내용의 siRNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것의 양을 투여하고, 그에 의해 대상체에서 간 질환의 적어도 1종의 증상을 예방하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 간 질환의 적어도 1종의 증상을 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 한 실시양태에서, 추가의 활성제의 양은 치료 유효량이다.
또 다른 측면에서, 간 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 siRNA 분자 또는 제약 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 포유동물에서 HSD17B13 유전자의 발현을 억제하기 위한 의약의 제조에서의 포유동물의 세포에서 HSD17B13 유전자를 표적화하는 본 개시내용의 siRNA 분자 또는 본 개시내용의 siRNA를 포함하는 제약 조성물의 용도를 제공한다.
본원에 개시된 방법 및 용도는 포유동물, 예를 들어 인간에게 포유동물의 세포에서 HSD17B13 유전자를 표적화하는 siRNA 분자를 포함하는 제약 조성물을 투여하고, HSD17B13 유전자의 mRNA 전사체의 분해를 수득하기에 충분한 시간 동안 유지하고, 그에 의해 포유동물에서 HSD17B13 유전자의 발현을 억제하는 것을 포함한다.
기재된 방법의 환자 또는 대상체는 포유동물일 수 있고, 이는 인간 및 비-인간 포유동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간, 예컨대 성인 인간, 인간 십대, 인간 소아, 인간 유아 또는 인간 영아이다.
본 개시내용의 siRNA 분자 및/또는 제약 조성물은 개시된 방법 및 용도에서 상기 기재된 것들을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 투여 경로, 예컨대 예를 들어 피하, 정맥내, 경구, 복강내 또는 비경구 경로, 예컨대 예를 들어 두개내 (예를 들어, 뇌실내, 실질내 및 척수강내), 근육내, 경피, 기도 (에어로졸), 비강, 직장 및 국소 (협측 및 설하 포함) 투여에 의해 투여될 수 있다.
본 개시내용의 siRNA 분자 및/또는 제약 조성물은 상기 기재된 임의의 투여량 또는 투여 요법으로 개시된 방법 및 용도로 투여될 수 있다.
HSD17B13-연관 질환
본원에 개시된 siRNA 및/또는 제약 조성물 및/또는 방법 및/또는 용도 중 임의의 것은 질환, 장애 및/또는 상태를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 및/또는 상태는 HSD17B13 발현 또는 활성과 연관된다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 및/또는 상태는 간 질환이다. 본원에 사용된 용어 "HSD17B13-연관 질환"은 HSD17B13 유전자 발현, 복제 또는 활성의 하향조절로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 상태를 포함한다. HSD17B13-연관 질환의 비제한적 예는 지방간 (지방증), 비알콜성 지방간염 (NASH), 간 경변증, 간에서의 지방 축적, 간 염증, 간세포성 괴사, 간 섬유증, 비만, 간세포성 암종 (HCC), 또는 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 NAFLD이다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 NASH이다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 지방간 (지방증)이다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 NAFLD이다. 한 실시양태에서, HSD17B13-연관 질환은 HCC이다.
조합 요법
본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 제약 조성물에서 또는 본 개시내용에 따른 임의의 방법에서 또는 간 질환을 치료하는 데 사용하기 위해 1종 이상의 추가의 활성제와 조합할 수 있다. 추가의 활성제는 관련 용량에서 약리학적 효과를 갖는 성분을 지칭하고; 추가의 활성제는 본 개시내용에 따른 또 다른 siRNA, 본 개시내용에 따르지 않는 siRNA, 또는 비-siRNA 활성제일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 siRNA가 조합 요법에서 조합된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 조합 요법에서 간 질환 치료제와 조합된다. 일부 실시양태에서, 간 질환 치료제는 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 인크레틴-기반 요법, PNPLA3 억제제, 및 갑상선 호르몬 수용체 (THR) 조정제로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 PPAR 효능제와 조합된다. 일부 실시양태에서, PPAR 효능제는 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중 PPARα 효능제는 피브레이트이다. 일부 실시양태에서, PPARα/δ 효능제는 엘라피브라노르이다. 일부 실시양태에서, PPARγ 효능제는 티아졸리딘디온 (TZD)이다. 일부 실시양태에서, TZD는 피오글리타존이다. 일부 실시양태에서, 이중 PPARα/γ 효능제는 사로글리타자르이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 FXR 효능제와 조합된다. 일부 실시양태에서, FXR 효능제는 오베티콜산 (OCA) 및 TERN-1010으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 지질-변경제와 조합된다. 일부 실시양태에서, 지질-변경제는 아람콜이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 인크레틴-기반 요법과 조합된다. 일부 실시양태에서, 인크레틴-기반 요법은 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제 또는 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제이다. 일부 실시양태에서, GLP-1 수용체 효능제는 엑세나티드 또는 리라글루티드이다. 일부 실시양태에서, DPP-4 억제제는 시타글립틴 또는 빌다플립틴이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siRNA 또는 제약 조성물 중 임의의 것은 THR 조정제와 조합된다. 일부 실시양태에서, THR 조정제는 THR-베타 조정제 및 갑상선 호르몬 유사체로부터 선택된다. 예시적인 THR 조정제는 문헌 [Jakobsson, et al., Drugs, 2017, 77(15):1613-1621, Saponaro, et al., Front Med (Lausanne), 2020, 7:331, and Kowalik, et al., Front Endocrinol, 2018, 9:382]에 기재되어 있으며, 이들은 그 전문이 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, THR-베타 조정제는 THR-베타 효능제이다. 일부 실시양태에서, THR-베타 효능제는 KB141, 소베티롬, Sob-AM2, 에프로티롬, VK2809, 레스메티롬, MB07344, IS25, TG68, GC-24 및 미국 특허 번호 11,091,467 (이는 그 전문이 본원에 포함됨)에 개시된 화합물 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 갑상선 호르몬 유사체는 L-94901 및 CG-23425로부터 선택된다.
일반적으로, 간 질환 치료제는 단일 투여 제제 (예를 들어, 고정 용량 약물 조합물)로, 또는 대상체에게 활성제의 공동 또는 순차적 투여 (개별 활성제의 공-투여)를 가능하게 하는 하나 이상의 개별 투여 제제로 본 개시내용의 siRNA 분자와의 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 및 간 질환 치료제는 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA 및 간 질환 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA는 간 질환 치료제를 투여하기 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, siRNA는 간 질환 치료제를 투여한 후에 투여된다. siRNA 및 간 질환 치료제가 투여되는 순서 및 빈도는 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 및 간 질환 치료제는 별개의 용기 내에 있다. 일부 실시양태에서, siRNA 및 간 질환 치료제는 동일한 용기 내에 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 siRNA 및 간 질환 치료제를 포함한다. siRNA 및 간 질환 치료제는 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 개시내용의 또 다른 실시양태는 하기 특색을 갖는다.
본 기술은 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자를 제공한다. siNA는 단일-가닥일 수 있다. 대안적으로, siNA는 이중-가닥 (ds-siNA) 분자일 수 있다. 임의의 실시양태에서, 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 비-변형된 뉴클레오티드, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. siNA는 적어도 5개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 siNA 분자는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 선택된 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
임의의 실시양태에서, siNA는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소 또는 억제할 수 있다. 임의의 실시양태에서, siNA는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13) 유전자를 표적화할 수 있다.
임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결(들)을 포함할 수 있다.
임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 인산화 차단제를 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 갈락토사민을 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 접합 모이어티를 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 탈안정화 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 열적 탈안정화 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 1개 이상의 평활 말단을 포함할 수 있다. 임의의 실시양태에서, 본원에 기재된 siNA 분자는 1개 이상의 오버행을 포함할 수 있다.
한 측면에서, siNA 분자는 (a) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥; 및 (b) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 하기 화학식 (VIII)에 의해 나타내어진 분자를 제공한다.
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이고; n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고; n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이이고; n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고; q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고; q6은 0-5개의 뉴클레오티드 길이이고; q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이이고; q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이다.
본 개시내용의 예시적인 siNA 분자는 도 1에 도시되어 있다. 도 1에 도시된 바와 같이, 예시적인 siNA 분자는 센스 가닥(101) 및 안티센스 가닥(102)을 포함한다. 센스 가닥(101)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)을 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)의 5' 또는 3' 말단 단부의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)의 5' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)은 1개 이상의 2'-플루오로 뉴클레오티드(110)를 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)은 1개 이상의 2'-O-메틸 뉴클레오티드(111)를 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(103)은 2'-플루오로 뉴클레오티드(110) 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드(111)로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 센스 가닥(101)은 인산화 차단제(105)를 추가로 포함할 수 있다. 센스 가닥(101)은 갈락토사민(106)을 추가로 포함할 수 있다. 안티센스 가닥(102)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)을 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)의 5' 또는 3' 말단 단부의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)의 5' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(109)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)의 3' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)은 1개 이상의 2'-플루오로 뉴클레오티드(110)를 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)은 1개 이상의 2'-O-메틸 뉴클레오티드(111)를 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(104)은 2'-플루오로 뉴클레오티드(110) 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드(111)로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 안티센스 가닥(102)은 5'-안정화된 말단 캡(107)을 추가로 포함할 수 있다. siNA는 1개 이상의 평활 말단을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, siNA의 1개의 말단은 오버행(108)을 포함할 수 있다. 오버행(108)은 센스 가닥(101)의 일부일 수 있다. 오버행(108)은 안티센스 가닥(102)의 일부일 수 있다. 오버행(108)은 제1 뉴클레오티드 서열(103)과 별개일 수 있다. 오버행(108)은 제2 뉴클레오티드 서열(104)과 별개일 수 있다. 오버행(108)은 제1 뉴클레오티드 서열(103)의 일부일 수 있다. 오버행(108)은 제2 뉴클레오티드 서열(104)의 일부일 수 있다. 오버행(108)은 1개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(108)은 1개 이상의 데옥시리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(108)은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(108)은 1개 이상의 변형된 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 센스 가닥(101)은 안티센스 가닥(102)보다 짧을 수 있다. 센스 가닥(101)은 안티센스 가닥(102)과 동일한 길이일 수 있다. 센스 가닥(101)은 안티센스 가닥(102)보다 길 수 있다.
본 개시내용의 예시적인 siNA 분자는 도 2에 도시되어 있다. 도 2에 도시된 바와 같이, 예시적인 siNA 분자는 센스 가닥(201) 및 안티센스 가닥(202)을 포함한다. 센스 가닥(201)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)을 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)의 5' 또는 3' 말단 단부의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)은 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)의 5' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)은 1개 이상의 2'-플루오로 뉴클레오티드(210)를 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)은 1개 이상의 2'-O-메틸 뉴클레오티드(211)를 포함할 수 있다. 제1 올리고뉴클레오티드 서열(203)은 2'-플루오로 뉴클레오티드(210) 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드(211)로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 센스 가닥(201)은 인산화 차단제(205)를 추가로 포함할 수 있다. 센스 가닥(201)은 갈락토사민(206)을 추가로 포함할 수 있다. 안티센스 가닥(202)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)을 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)의 5' 또는 3' 말단 단부의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)의 5' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결(209)은 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)의 3' 말단으로부터 처음 3개의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)은 1개 이상의 2'-플루오로 뉴클레오티드(210)를 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)은 1개 이상의 2'-O-메틸 뉴클레오티드(211)를 포함할 수 있다. 제2 올리고뉴클레오티드 서열(204)은 2'-플루오로 뉴클레오티드(210) 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드(211)로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 안티센스 가닥(202)은 5'-안정화된 말단 캡(207)을 추가로 포함할 수 있다. siNA는 1개 이상의 오버행(208)을 추가로 포함할 수 있다. 오버행(208)은 센스 가닥(201)의 일부일 수 있다. 오버행(208)은 안티센스 가닥(202)의 일부일 수 있다. 오버행(208)은 제1 뉴클레오티드 서열(203)과 별개일 수 있다. 오버행(208)은 제2 뉴클레오티드 서열(204)과 별개일 수 있다. 오버행(208)은 제1 뉴클레오티드 서열(203)의 일부일 수 있다. 오버행(208)은 제2 뉴클레오티드 서열(204)의 일부일 수 있다. 오버행(208)은 제1 뉴클레오티드 서열(203)의 3' 말단에 인접할 수 있다. 오버행(208)은 제1 뉴클레오티드 서열(203)의 5' 말단에 인접할 수 있다. 오버행(208)은 제2 뉴클레오티드 서열(204)의 3' 말단에 인접할 수 있다. 오버행(208)은 제2 뉴클레오티드 서열(204)의 5' 말단에 인접할 수 있다. 오버행(208)은 1개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(208)은 1개 이상의 데옥시리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(208)은 TT 서열을 포함할 수 있다. 오버행(208)은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 오버행(208)은 본원에 개시된 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, 2-플루오로 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체, 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체, 또는 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오티드)를 포함할 수 있다. 오버행(208)은 1개 이상의 변형된 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 센스 가닥(201)은 안티센스 가닥(202)보다 더 짧을 수 있다. 센스 가닥(201)은 안티센스 가닥(202)과 동일한 길이일 수 있다. 센스 가닥(201)은 안티센스 가닥(202)보다 길 수 있다.
도 3A-3H는 예시적인 ds-siNA 변형 패턴을 도시한 것이다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, 예시적인 ds-siNA 분자는 하기 화학식을 가질 수 있다:
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5' 안정화된 말단 캡 또는 인산화 차단제를 포함하는 뉴클레오티드이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이고; n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고; n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이이고; n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고; q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고; q6은 0-5개의 뉴클레오티드 길이이고; q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이이고; q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이다.
ds-siNA는 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 접합 모이어티는 본원에 개시된 임의의 갈락토사민을 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 5'-안정화 말단 캡을 추가로 포함할 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 비닐 포스포네이트일 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다.
예시적인 ds-siNA 분자는 하기 화학식을 가질 수 있다:
5'-A2-6 B1A1-3 B2-3 A2-10 B0-1A0-4B0-1 A0-2-3'
3'-C2A0-2B0-1A0-3B0-1A0-5B0-1A2-7 B1A2-11 B1A1-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5' 안정화된 말단 캡 또는 인산화 차단제를 포함하는 뉴클레오티드이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이다.
ds-siNA는 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 접합 모이어티는 본원에 개시된 임의의 갈락토사민을 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 5'-안정화 말단 캡을 추가로 포함할 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 비닐 포스포네이트일 수 있다. 비닐 포스포네이트는 중수소화 비닐 포스포네이트일 수 있다. 중수소화 비닐 포스포네이트는 모노-중수소화 비닐 포스포네이트일 수 있다. 중수소화 비닐 포스포네이트는 모노-디-중수소화 비닐 포스포네이트일 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다. 5'-안정화 말단 캡은 센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다.
도 3A-3H에 도시된 예시적인 ds-siNA는 (i) 19-21개의 뉴클레오티드를 포함하는 센스 가닥; 및 (ii) 21-23개의 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. ds-siNA는 (iii) 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 접합 모이어티는 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착된다. ds-siNA는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 20 및 21에서 뉴클레오티드로 이루어진 2개의 뉴클레오티드 오버행을 포함할 수 있다. ds-siNA는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 22 및 23에서 뉴클레오티드로 이루어진 2개 뉴클레오티드 오버행을 포함할 수 있다. ds-siNA는 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 포스포로티오에이트 (ps) 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1과 2 또는 위치 2와 3의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1과 2 또는 위치 2와 3의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터의 위치 19와 20, 위치 20과 21, 위치 21과 22, 또는 위치 22와 23의 뉴클레오티드 사이에 있을 수 있다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, 센스 가닥 내의 4-6개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드일 수 있다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, 안티센스 가닥 내의 2-5개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드일 수 있다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, 센스 가닥 내의 13-15개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드일 수 있다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, 안티센스 가닥 내의 14-19개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드일 수 있다. 도 3A-3H에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 센스 및 안티센스 가닥 상의 2'-플루오로 뉴클레오티드 사이에 염기 쌍을 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다.
일부 실시양태에서, (a) 센스 가닥은 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9, 12 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 10, 11 및 13-16에 존재하고; (b) 안티센스 가닥은 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다. 도 3A에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 3, 7-9, 12, 및 17번 위치에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 1, 2, 4-6, 10, 11, 13-16, 18, 및 19번 위치에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 2 및 14번 위치의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; 여기서 위치 1, 3-13, 및 15-21의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, f2P, 또는 fX 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 및 9-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다. 도 3B에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 3, 7, 8, 및 17번 위치에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 1, 2, 4-6, 9-16, 18, 및 19번 위치에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 2 및 14번 위치의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; 여기서 위치 1, 3-13, 및 15-21의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, f2P, 또는 fX 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6 및 10-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 존재한다. 도 3C에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 3, 7-9, 12 및 17번 위치에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 1, 2, 4-6, 10, 11, 13-16, 18, 및 19번 위치에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 안티센스 가닥의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴을 포함하고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 안티센스 가닥 상에 2 내지 5개의 1:3 교대 변형 패턴을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, f2P, 또는 fX 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, f2P, 또는 fX 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 존재한다. 도 3D에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-19에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 안티센스 가닥의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴을 포함하고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 안티센스 가닥 상에 2 내지 5개의 1:3 교대 변형 패턴을 포함할 수 있다. 1:3 교대 변형 패턴은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10, 14, 및/또는 18 중 임의의 것의 뉴클레오티드에서 시작할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14, 및 17에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 4, 6, 7, 9-13, 15, 및 16에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다. 도 3E에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-19에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 안티센스 가닥의 뉴클레오티드는 1:2의 교대 변형 패턴을 포함하고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 안티센스 가닥 상에 2 내지 5개의 1:2 교대 변형 패턴을 포함할 수 있다. 1:2 교대 변형 패턴은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14, 및/또는 17 중 임의의 것의 뉴클레오티드에서 시작할 수 있다. 일부 실시양태에서, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6 및 10-19에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 4, 6, 7, 9-13, 15, 16 및 18-21에 존재하는 것인 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 교대되는 1:2 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다. 도 3F에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 19개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드가 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-19에 존재하는 것인 센스 가닥; (b) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17-21에 존재하는 것인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 1, 2, 3 또는 4개는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 1개는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 2개는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 3개 이하는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 2개 이하는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f4P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 1, 2, 3 또는 4개는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 1개는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 적어도 2개는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 3개 이하는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14 및 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드 중 2개 이하는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 16의 2'-플루오로-뉴클레오티드는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6-8,12, 13 및 15-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18, 20, 및 21에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-23에 존재한다. 도 3G에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11, 14, 및 19에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6-8, 12, 13, 15-18, 20, 및 21에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-23에 존재하는 것인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 및 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 19 및 20; 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
일부 실시양태에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-6, 8, 및 12-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 존재한다. 도 3H에 도시된 바와 같이, ds-siNA는 (a) 21개의 뉴클레오티드로 이루어진 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1-6, 8, 및 12-21에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 안티센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17-23에 존재하는 것인 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. 임의로, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 22 및 23의 뉴클레오티드는 비잠금 뉴클레오티드일 수 있다. 임의로, ds-siNA는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된 접합 모이어티를 추가로 포함할 수 있다 (도시되지 않음). ds-siNA는 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된 안정화 말단 캡을 포함할 수 있다 (도시됨). ds-siNA는 (i) 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2, 위치 2 및 3, 및 위치 20 및 21의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (ii) 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2; 위치 2 및 3; 위치 21 및 22, 및 위치 22 및 23의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터 위치 1의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 d2vd3 뉴클레오티드, d2vd3U 뉴클레오티드, omeco-d3 뉴클레오티드, omeco-d3U 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, 4hU 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, d2vm 뉴클레오티드, 또는 d2vmA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 fB, fN, f(4nh)Q, f4P, 또는 f2P 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 센스 또는 안티센스 가닥 상의 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 내의 1개 이상의 뉴클레오티드는 푸라노스 고리의 3' 위치와 4' 위치 사이의 결합이 파괴된 3',4' 세코 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, mun34)일 수 있다.
본원에 개시된 siNA 중 임의의 것은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. 센스 가닥은 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이의 제1 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 안티센스 가닥은 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이의 제2 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (ds-siNA) 분자는 (a) 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19번 위치의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (ds-siNA) 분자는 (a) 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 7번 위치의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (ds-siNA) 분자는 (a) 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 7, 9, 10 및/또는 11번 위치의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (ds-siNA) 분자는 (b) 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (ds-siNA) 분자는 (b) 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제2 뉴클레오티드 서열의 위치 2의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함한다.
임의의 실시양태에서, ds-siNA 분자는 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 임의의 실시양태에서, ds-siNA 분자는 1개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 임의의 실시양태에서, ds-siNA 분자는 인산화 차단제, 갈락토사민, 5'-안정화된 말단 캡, 접합 모이어티, 탈안정화된 뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드, 열적 탈안정화된 뉴클레오티드, 또는 그의 2개 이상의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 인산화 차단제 또는 갈락토사민을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 5'-안정화된 말단 캡을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 인산화 차단제 또는 갈락토사민을 추가로 포함하고, 안티센스 가닥은 5'-안정화된 말단 캡을 추가로 포함한다.
본 기술은 본원에 기재된 siNA 분자 중 1개 이상을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 기술은 또한 본원에 기재된 siNA 분자 중 2개 이상을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 기술은 기재된 siNA 분자 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 기술은 의약으로서 사용하기 위한, 본원에 기재된 siNA 분자 중 2개 이상을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 기술은 의약으로서 사용하기 위한, 기재된 siNA 분자 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 기술은, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 siNA 분자 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 기술은 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 siNA 분자 중 임의의 것의 용도를 제공한다.
짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자
상기 나타낸 바와 같이, 본 개시내용은 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 siNA 분자를 제공한다. 본원에 기재된 siNA 분자 중 임의의 것은 이중-가닥 siNA (ds-siNA) 분자일 수 있다. 용어 "siNA 분자" 및 "ds-siNA 분자"는 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, ds-siNA 분자는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. siNA는 본원에 개시된 제1 뉴클레오티드, 제2 뉴클레오티드, 센스 가닥, 또는 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다. siNA는 5 내지 100개, 5 내지 90개, 10 내지 100개, 10 내지 90개, 10 내지 80개, 10 내지 70개, 10 내지 60개, 10 내지 50개, 10 내지 30개, 10 내지 25개, 15 내지 100개, 15 내지 90개, 15 내지 80개, 15 내지 70개, 15 내지 60개, 15 내지 50개, 15 내지 30개, 또는 15 내지 25개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. siNA는 적어도 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. siNA는 50, 45, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20 또는 19개 이하의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드일 수 있다. siNA는 단일-가닥일 수 있다. siNA는 이중-가닥일 수 있다.
siNA 센스 가닥
본원에 기재된 siNA 분자 중 임의의 것은 센스 가닥을 포함할 수 있다. 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 23, 17 내지 23, 19 내지 23, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 적어도 19개의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 적어도 21개의 뉴클레오티드 길이이다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열과 동일한 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열보다 길다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열보다 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 데옥시리보핵산 (DNA)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, DNA는 티민 (T)이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 TT 서열을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 본원에 개시된 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체, 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체, 또는 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오티드) 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 약 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 24, 15 내지 23, 15 내지 22, 15 내지 21, 17 내지 30, 17 내지 25, 17 내지 24, 17 내지 23, 17 내지 22, 17 내지 21, 18 내지 30, 18 내지 25, 18 내지 24, 18 내지 23, 18 내지 22, 18 내지 21, 19 내지 30, 19 내지 25, 19 내지 24, 19 내지 23, 19 내지 22, 19 내지 21, 20 내지 25, 20 내지 24, 20 내지 23, 21 내지 25, 21 내지 24, 또는 21 내지 23개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 약 2 내지 20개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 약 5 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 약 10 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 약 12 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 12개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 13개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 14개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 16개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 17개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 18개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 19개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 21개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 20개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 19개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 18개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 17개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 16개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 15개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 14개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 13개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 2 내지 15개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 2 내지 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 2 내지 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 1 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 2개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 3개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 4개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 5개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3개 또는 그 미만의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 10개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 7개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 6개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 4개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 3개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 4개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 5개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 12의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 10의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 11의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 12의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및/또는 17의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 9, 12 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 9, 12 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 7, 8, 및/또는 9의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9, 10, 11, 12 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9, 10, 11, 14 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9, 10 및/또는 11의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (V)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00006
, 여기서 Rx는 독립적으로 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고, Q1 및 Q2는 독립적으로 S 또는 O이고, R5는 독립적으로 -OCD3, -F 또는 -OCH3이고, R6 및 R7은 독립적으로 H, D 또는 CD3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (16) - 화학식 (20)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00007
, 여기서 Rx는 독립적으로 핵염기이고, R2는 F 또는 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)을 포함할 수 있다:
Figure pct00008
, 여기서 B 및 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00009
, 여기서 B 및 Ry는 핵염기이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 리보핵산 (RNA)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 변형된 RNA를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 변형된 RNA는 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 변형된 뉴클레오티드는 독립적으로 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 포스포디에스테르 (PO) 뉴클레오시드간 연결, 포스포로티오에이트 (PS) 뉴클레오시드간 연결, 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결 (Ms), 포스포로디티오에이트 뉴클레오시드간 연결, 및 PS-모방체 뉴클레오시드간 연결로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, PS-모방체 뉴클레오시드간 연결은 술포 뉴클레오시드간 연결이다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 또는 그 미만의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 또는 그 초과의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 또는 그 미만의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 1 내지 2개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 2 내지 4개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 하기 "변형된 뉴클레오티드" 표제의 하위-섹션에 개시된 변형된 뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있고, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 "5'-안정화된 말단 캡" 표제의 하위-섹션에 개시된 것들로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함한다.
siNA 안티센스 가닥
본원에 기재된 siNA 분자 중 임의의 것은 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. 안티센스 가닥은 제2 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 23, 17 내지 23, 19 내지 23, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 적어도 19개의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 적어도 21개의 뉴클레오티드 길이이다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제2 뉴클레오티드 서열과 동일한 길이이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제2 뉴클레오티드 서열보다 길다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제2 뉴클레오티드 서열보다 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 센스 가닥과 동일한 길이이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 센스 가닥보다 길다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 센스 가닥보다 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 데옥시리보핵산 (DNA)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, DNA는 티민 (T)이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 TT 서열을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 본원에 개시된 변형된 뉴클레오티드 (예를 들어, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체, 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체, 또는 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오티드) 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 약 15 내지 30개, 15 내지 25개, 15 내지 24개, 15 내지 23개, 15 내지 22개, 15 내지 21개, 17 내지 30개, 17 내지 25개, 17 내지 24개, 17 내지 23개, 17 내지 22개, 17 내지 21개, 18 내지 30개, 18 내지 25개, 18 내지 24개, 18 내지 23개, 18 내지 22개, 18 내지 21개, 19 내지 30개, 19 내지 25개, 19 내지 24개, 19 내지 23개, 19 내지 22개, 19 내지 21개, 20 내지 25개, 20 내지 24개, 20 내지 23개, 21 내지 25개, 21 내지 24개, 또는 21 내지 23개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 약 2 내지 20개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 약 5 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 약 10 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 약 12 내지 25개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 12개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 13개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 14개상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 15개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 16개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 17개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 18개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 약 19개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 21개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 20개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 19개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 18개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 17개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 16개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 15개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 14개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 13개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 2 내지 15개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 2 내지 10개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 2 내지 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 1 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 2개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 3개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 4개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 5개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3개 또는 그 미만의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 10개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 7개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 6개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 4개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 3개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 피리미딘이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 퓨린이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 화학식 (V)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00010
, 여기서 Rx는 독립적으로 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고, Q1 및 Q2는 독립적으로 S 또는 O이고, R5는 독립적으로 -OCD3, -F 또는 -OCH3이고, R6 및 R7은 독립적으로 H, D 또는 CD3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (16) - 화학식 (20)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00011
, 여기서 Rx는 핵염기이고, R2는 독립적으로 F 또는 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00012
, 여기서 B 및 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 하기 화학 구조를 갖는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드(들)를 포함할 수 있다:
Figure pct00013
, 여기서 B 및 Ry는 핵염기이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 2개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 3개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 4개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 5개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및/또는 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6 및/또는 16의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및/또는 16의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10, 14 및/또는 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 6의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 8의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 10의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 14의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 16의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 1:3 교대 변형 패턴은 적어도 2회 발생한다. 일부 실시양태에서, 1:3 교대 변형 패턴은 2-5회 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 1:3 교대 변형 패턴이 연속적으로 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 1:3 교대 변형 패턴이 비연속적으로 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2, 6, 10, 14, 및/또는 18에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 6에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 10에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 14에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 18에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 1:2 교대 변형 패턴은 적어도 2회 발생한다. 일부 실시양태에서, 1:2 교대 변형 패턴은 2-5회 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 1:2 교대 변형 패턴이 연속적으로 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 1:2 교대 변형 패턴이 비연속적으로 발생한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2, 5, 8, 14, 및/또는 17에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 5에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 8에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 14에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 17에서 시작한다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 리보핵산 (RNA)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 변형된 RNA를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 변형된 RNA는 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 변형된 뉴클레오티드는 독립적으로 2'-O-메틸 RNA 및 2'-플루오로 RNA로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 포스포디에스테르 (PO) 뉴클레오시드간 연결, 포스포로티오에이트 (PS) 뉴클레오시드간 연결, 포스포로디티오에이트 뉴클레오시드간 연결, 및 PS-모방체 뉴클레오시드간 연결로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, PS-모방체 뉴클레오시드간 연결은 술포 뉴클레오시드간 연결이다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 또는 그 미만의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 3 내지 8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 4 내지 8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 (a) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결; 및 (b) 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 내지 3의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 또는 그 초과의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 또는 그 미만의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1 내지 2개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 2 내지 8개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 3 내지 8개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은 4 내지 8개의 메실 포스포르아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.
일부 실시양태에서, ds-siNA의 적어도 1개의 말단은 평활 말단이다. 일부 실시양태에서, ds-siNA의 적어도 1개의 말단은 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ds-siNA의 양쪽 말단은 오버행을 포함하며, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행은 1 내지 5개의 뉴클레오티드, 1 내지 4개의 뉴클레오티드, 1 내지 3개의 뉴클레오티드, 또는 1 내지 2개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 오버행은 1 내지 2개의 뉴클레오티드로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥은 하기 "변형된 뉴클레오티드" 표제의 하위-섹션에 개시된 변형된 뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있고, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 "5'-안정화된 말단 캡" 표제의 하위-섹션에 개시된 것들로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함한다.
변형된 뉴클레오티드
본원에 개시된 siNA 분자는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접하고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접하고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드로 대체된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드로 대체된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자, siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥, 및 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 또는 그 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA 분자, siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%는 변형된 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체, 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체, 잠금 핵산, 비잠금 핵산, 및 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 비잠금 핵산은 2',3'-비잠금 핵산이다. 일부 실시양태에서, 비잠금 핵산은 푸라노스 고리에 3'과 4 탄소 사이의 결합이 결여된 3',4'-비잠금 핵산 (예를 들어, mun34)이다.
일부 측면에서, 본 개시내용의 siNA는
Figure pct00014
(여기서, Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H임),
Figure pct00015
(여기서, B 및 Ry는 핵염기임), 및
Figure pct00016
또는 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 이들 변형된 뉴클레오티드 중 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은
Figure pct00017
(여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H임),
Figure pct00018
(여기서 B 및 Ry는 핵염기임), 및
Figure pct00019
또는 그의 조합 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 또는 그 초과를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥은
Figure pct00020
(여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H임),
Figure pct00021
(여기서 B 및 Ry는 핵염기임), 및
Figure pct00022
또는 그의 조합 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 또는 그 초과를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥 둘 다는 각각 독립적으로
Figure pct00023
(여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H임),
Figure pct00024
(여기서 B 및 Ry는 핵염기임), 및
Figure pct00025
또는 그의 조합 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 또는 그 초과를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것은 다른 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 개시된 siNA는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 또는 그 초과의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 중 임의의 것은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 또는 그 초과의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 또는 그 초과의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 중 임의의 것은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 또는 그 초과의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 또는 그 초과의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (16) - 화학식 (20)의 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00026
, 여기서 Rx는 핵염기이고, R2는 독립적으로 F 또는 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자는 적어도 1개의 2'-플루오로 뉴클레오티드, 적어도 1개의 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 및 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 인접한다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체를 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은
Figure pct00027
(여기서, Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H임);
Figure pct00028
(여기서, Ry는 핵염기임) 또는
Figure pct00029
(여기서, B는 핵염기임)인 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.
인산화 차단제
인산화 차단제를 포함하는 siNA 분자가 본원에 추가로 개시된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하는 뉴클레오티드로 대체된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하는 뉴클레오티드로 대체된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 함유하도록 추가로 변형된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (IV)의 인산화 차단제를 포함한다:
Figure pct00030
, 여기서 Ry는 핵염기이고, R4는 -O-R30 또는 -NR31R32이고, R30은 C1-C8 치환 또는 비치환된 알킬이고; R31 및 R32는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성한다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 화학식 (IV):
Figure pct00031
화학식 (IV)의 인산화 차단제를 포함하며, 여기서, Ry는 핵염기이고, R4는 -OCH3 또는 -N(CH2CH2)2O이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, siNA 분자는 (a) Ry가 핵염기이고, R4가 -O-R30 또는 -NR31R32이고, R30이 C1-C8 치환 또는 비치환된 알킬이고; R31 및 R32가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하는 것인 하기 화학식 (IV)의 인산화 차단제; 및 (b) 인산화 차단제가 접합된 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함한다.
Figure pct00032
일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, siNA 분자는 (a) Ry가 핵염기이고, R4가 -OCH3 또는 -N(CH2CH2)2O인 하기 화학식 (IV)의 인산화 차단제; 및 (b) 인산화 차단제가 접합된 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함한다.
Figure pct00033
화학식 (IV)
일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 메실 포스포르아미데이트 링커 및 포스포로디티오에이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
접합 모이어티
접합 모이어티를 포함하는 siNA 분자가 본원에 추가로 개시된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 갈락토사민, 펩티드, 단백질, 스테롤, 지질, 인지질, 비오틴, 페녹사진, 활성 약물 물질, 콜레스테롤, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린 및 염료로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 포스포로디티오에이트 링커, 및 메실 포스포르아미데이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 갈락토사민이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것은 갈락토사민인 접합 모이어티에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 N-아세틸갈락토사민 (GalNAc)이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 GalNAc를 포함한다. 일부 실시양태에서, GalNAc는 하기 화학식 (VI)의 것이다:
Figure pct00034
, 여기서 m은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고; 각각의 n은 독립적으로 1 또는 2이고; p는 0 또는 1이고; 각각의 R은 독립적으로 H 또는 제1 보호기이고; 각각의 Y는 독립적으로 -O-P(=O)(SH)-, -O-P(=O)(O)-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(S)S-, 및 -O-로부터 선택되고; Z는 H 또는 제2 보호기이고; L은 링커이거나 또는 L 및 Y는 조합하여 링커이고; A는 H, OH, 제3 보호기, 활성화된 기, 또는 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제1 보호기는 아세틸이다. 일부 실시양태에서, 제2 보호기는 트리메톡시트리틸 (TMT)이다. 일부 실시양태에서, 활성화된 기는 포스포르아미다이트 기이다. 일부 실시양태에서, 포스포르아미다이트 기는 시아노에톡시 N,N-디이소프로필포스포르아미다이트 기이다. 일부 실시양태에서, 링커는 C6-NH2 기이다. 일부 실시양태에서, A는 짧은 간섭 핵산 (siNA) 또는 siNA 분자이다. 일부 실시양태에서, m은 3이다. 일부 실시양태에서, R은 H이고, Z는 H이고, n은 1이다. 일부 실시양태에서, R은 H이고, Z는 H이고, n은 2이다.
일부 실시양태에서, GalNAc는 하기 화학식 (VII)의 것이다:
Figure pct00035
, 여기서 Rz는 OH 또는 SH이고; 각각의 n은 독립적으로 1 또는 2이다.
일부 실시양태에서, 갈락토사민은 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 갈락토사민은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 포스포디에스테르 (p 또는 po) 링커, 포스포로티오에이트 (ps) 링커, 메실 포스포르아미데이트 링커 (Ms), 포스포르아미다이트 (HEG) 링커, 트리에틸렌 글리콜 (TEG) 링커, 및/또는 포스포로디티오에이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 p-(PS)2, (PS)2-p-TEG-p, (PS)2-p-HEG-p, 및 (PS)2-p-(HEG-p)2로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 지질 모이어티이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것은 지질 모이어티인 접합 모이어티에 부착된다. 지질 모이어티의 예는 콜레스테롤 모이어티, 티오에테르, 예를 들어 헥실-S-트리틸티올, 티오콜레스테롤, 지방족 쇄, 예를 들어 도데칸디올 또는 운데실 잔기, 인지질, 예를 들어 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1-디-O-헥사데실-rac-글리세로-S-H-포스포네이트, 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄, 아다만탄 아세트산, 팔미틸 모이어티, 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 활성 약물 물질이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것은 활성 약물 물질인 접합 모이어티에 부착된다. 활성 약물 물질의 예는 아스피린, 와파린, 페닐부타존, 이부프로펜, 수프로펜, 펜부펜, 케토프로펜, (5)-(+)-프라노프로펜, 카프로펜, 단실사르코신, 2,3,5-트리아이오도벤조산, 플루페남산, 폴린산, 벤조티아디아지드, 클로로티아지드, 디아제핀, 인도메티신, 바르비투레이트, 세팔로스포린, 술파 약물, 항당뇨병제, 항박테리아제 또는 항생제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
5'-안정화된 말단 캡
5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 siNA 분자가 본원에 추가로 개시된다. 본원에 사용된 용어 "5'-안정화된 말단 캡" 및 "5' 말단 캡"은 상호교환가능하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5'-안정화된 말단 캡을 함유하는 뉴클레오티드로 대체된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5'-안정화된 말단 캡을 함유하는 뉴클레오티드로 대체된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5'-안정화된 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것 내의 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 5'-안정화된 말단 캡을 함유하도록 추가로 변형된다.
일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 5' 포스페이트 모방체이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 변형된 5' 포스페이트 모방체이다. 일부 실시양태에서, 변형된 5' 포스페이트는 화학적으로 변형된 5' 포스페이트이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 5'-비닐 포스포네이트이다. 일부 실시양태에서, 5'-비닐 포스포네이트는 5'-(E)-비닐 포스포네이트 또는 5'-(Z)-비닐 포스포네이트이다. 일부 실시양태에서, 5'-비닐 포스포네이트는 중수소화 비닐 포스포네이트이다. 일부 실시양태에서, 중수소화 비닐 포스포네이트는 모노-중수소화 비닐 포스포네이트이다. 일부 실시양태에서, 중수소화 비닐 포스포네이트는 디-중수소화 비닐 포스포네이트이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 포스페이트 모방체이다. 포스페이트 모방체의 예는 문헌 [Parmar et al., 2018, J Med Chem, 61(3):734-744], 국제 공개 번호 WO2018/045317 및 WO2018/044350, 및 미국 특허 번호 10,087,210에 개시되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기로부터 선택된 뉴클레오티드 포스페이트 모방체를 포함하는 siNA를 제공한다:
Figure pct00036
, 여기서 Ry는 핵염기이고, R15는 H 또는 CH3이다. 일부 실시양태에서, 핵염기는 티민, 시토신, 구아닌, 아데닌, 우라실, 및 그의 유사체 또는 유도체로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 개시된 뉴클레오티드 포스페이트 모방체는 하기 구조를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
; 여기서 R15는 H 또는 CH3이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기로부터 선택된 뉴클레오티드 포스페이트 모방체를 포함하는 siNA를 제공한다:
Figure pct00040
; 여기서 R15는 H 또는 CH3이다. 일부 실시양태에서, 이들 신규 뉴클레오티드 포스페이트 모방체 (예를 들어, omeco-d3 뉴클레오티드, 4h 뉴클레오티드, v-mun 뉴클레오티드, c2o-4h 뉴클레오티드, omeco-munb 뉴클레오티드, 또는 d2vm 뉴클레오티드) 중 하나는 안티센스 가닥의 5' 말단에 위치하지만; 이들 신규 뉴클레오티드 포스페이트 모방체는 또한 센스 가닥의 5' 말단, 안티센스 가닥의 3' 말단, 또는 센스 가닥의 3' 말단에 혼입될 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 하기 화학식 (Ia)의 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 5'-안정화된 말단 캡 둘 다를 포함할 수 있다:
Figure pct00041
, 여기서 Rx는 H, 핵염기, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; R26은
Figure pct00042
, -CH=CD-Z, -CD=CH-Z, -CD=CD-Z, -(CR21R22)n-Z, 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z이고, R20은 H이거나; 또는 R26 및 R20은 함께 -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z로 치환된 3- 내지 7-원 카르보시클릭 고리를 형성하고; n은 1, 2, 3, 또는 4이고; Z는 -ONR23R24, -OP(O)OH(CH2)mCO2R23, -OP(S)OH(CH2)mCO2R23, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)(OCH3), -P(O)(OH)(OCD3), -SO2(CH2)mP(O)(OH)2, -SO2NR23R25, -NR23R24, -NR23SO2R24이고; R21 및 R22는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 R21 및 R22는 함께 옥소기를 형성하고; R23은 수소 또는 C1-C6 알킬이고; R24는 -SO2R25 또는 -C(O)R25이거나; 또는 R23 및 R24는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고; R25는 C1-C6 알킬이고; m은 1, 2, 3, 또는 4이다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 다에 하기 화학식 (Ib)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00043
, 여기서 Rx는 H, 핵염기, 아릴 또는 헤테로아릴이고; R26은
Figure pct00044
, -CH=CD-Z, -CD=CH-Z, -CD=CD-Z, -(CR21R22)n-Z, 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z이고, R20은 H이거나; 또는 R26 및 R20은 함께 -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z로 치환된 3- 내지 7-원 카르보시클릭 고리를 형성하고; n은 1, 2, 3 또는 4이고; Z는 -ONR23R24, -OP(O)OH(CH2)mCO2R23, -OP(S)OH(CH2)mCO2R23, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)(OCH3), -P(O)(OH)(OCD3), -SO2(CH2)mP(O)(OH)2, -SO2NR23R25, -NR23R24, -NR23SO2R24이고; R21 및 R22는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 R21 및 R22는 함께 옥소기를 형성하고; R23은 수소 또는 C1-C6 알킬이고; R24는 -SO2R25 또는 -C(O)R25이거나; 또는 R23 및 R24는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고; R25는 C1-C6 알킬이고; m은 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 다에 하기 화학식 (Ic)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00045
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고, R26은
Figure pct00046
, -CH=CD-Z, -CD=CH-Z, -CD=CD-Z, -(CR21R22)n-Z, 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z이고, R20은 수소이거나; 또는 R26 및 R20은 함께 -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z로 치환된 3- 내지 7-원 카르보시클릭 고리를 형성하고; n은 1, 2, 3, 또는 4이고; Z는 -ONR23R24, -OP(O)OH(CH2)mCO2R23, -OP(S)OH(CH2)mCO2R23, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)(OCH3), -P(O)(OH)(OCD3), -SO2(CH2)mP(O)(OH)2, -SO2NR23R25, -NR23R24 또는 -NR23SO2R24이고; R21 및 R22는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 R21 및 R22는 함께 옥소 기를 형성하고; R23은 수소 또는 C1-C6 알킬이고; R24는 -SO2R25 또는 -C(O)R25이거나; 또는
R23 및 R24는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고; R25는 C1-C6 알킬이고; m은 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 다에 하기 화학식 (IIa)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00047
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고, R26은
Figure pct00048
이고, R9는 -SO2CH3 또는 -COCH3이고,
Figure pct00049
은 이중 또는 단일 결합이고, R10 = -CH2PO3H 또는 -NHCH3이고, R11은 -CH2- 또는 -CO-이고, R12는 H이고, R13은 CH3이거나, 또는 R12 및 R13은 함께 -CH2CH2CH2-를 형성한다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 다에 하기 화학식 (IIb)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00050
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고, R26은
Figure pct00051
이고, R9는 -SO2CH3 또는 -COCH3이고,
Figure pct00052
은 이중 또는 단일 결합이고, R10 = -CH2PO3H 또는 -NHCH3이고, R11은 -CH2- 또는 -CO-이고, R12는 H이고, R13은 CH3이거나, 또는 R12 및 R13은 함께 -CH2CH2CH2-를 형성한다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 다에 하기 화학식 (III)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00053
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고, L은 -CH2-, -CH=CH-, -CO-, 또는 -CH2CH2-이고, A는 -ONHCOCH3, -ONHSO2CH3, -PO3H, -OP(SOH)CH2CO2H, -SO2CH2PO3H, -SO2NHCH3, -NHSO2CH3, 또는 -N(SO2CH2CH2CH2)이다. 일부 실시양태에서, R1은 아릴이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 개시된 siNA 분자는 하기 화학식 (1) 내지 화학식 (16), 화학식 (9X) 내지 화학식 (12X), 화학식 (16X), 화학식 (9Y) 내지 화학식 (12Y), 화학식 (16Y), 화학식 (21) 내지 화학식 (36), 화학식 36X, 화학식 (41) 내지 (56), 화학식 (49X) 내지(52X), 화학식 (49Y) 내지 (52Y), 화학식 56X, 화학식 56Y, 화학식 (61) 및 화학식 (62)로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함할 수 있다:
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 화학식 (50), 화학식 (50X), 화학식 (50Y), 화학식 (56), 화학식 (56X), 화학식 (56Y), 화학식 (61), 및 화학식 (62)로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다:
Figure pct00059
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 화학식 (71) 내지 화학식 (86), 화학식 (79X) 내지 화학식 (82X), 화학식 (79Y) 내지 (82Y), 화학식 86X, 화학식 86X', 화학식 86Y, 및 화학식 86Y'로 이루어진 군으로부터 선택되는 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다:
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (78), 화학식 (79), 화학식 (79X), 화학식 (79Y), 화학식 (86), 화학식 (86X) 및 화학식 (86X')으로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다:
Figure pct00063
, 여기서 Rx는 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (1A)-(15A), 화학식 (1A-1)-(7A-1), 화학식 (1A-2)-(7A-2), 화학식 (1A-3)-(7A-3), 화학식 (1A-4)-(7A-4), 화학식 (9B)-(12B), 화학식 (9AX)-(12AX), 화학식 (9AY)-(12AY), 화학식 (9BX)-(12BX), 및 화학식 (9BY)-(12BY)로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다.
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (21A)-(35A), 화학식 (29B)-(32B), 화학식 (29AX)-(32AX), 화학식 (29AY)-(32AY), 화학식 (29BX)-(32BX), 및 화학식 (29BY)-(32BY)로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다.
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (71A)-(86A), 화학식 (79XA)-(82XA), 화학식 (79YA)-(82YA); 화학식 (86XA), 화학식 (86X'A), 화학식 (86Y) 및 화학식 (86Y')로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다.
Figure pct00072
Figure pct00073
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것은 하기 화학식 (78A), 화학식 (79A), 화학식 (79XA), 화학식 (79YA), 화학식 (86A), 화학식 (86XA), 및 화학식 (86X'A)로 이루어진 군으로부터 선택된 5'-안정화된 말단 캡을 포함한다.
Figure pct00074
일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 통해 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 포스포디에스테르 (p 또는 po) 링커, 포스포로티오에이트 (ps) 링커, 메실 포스포르아미데이트 (Ms) 링커, 포스포르아미다이트 (HEG) 링커, 트리에틸렌 글리콜 (TEG) 링커, 및/또는 포스포로디티오에이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 p-(PS)2, (PS)2-p-TEG-p, (PS)2-p-HEG-p, 및 (PS)2-p-(HEG-p)2로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
상기 나타낸 바와 같이, 본 개시내용은 본원에 기재된 siNA 분자, 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함하는 조성물을 제공한다. 개시된 siNA 및 그의 조성물은 다양한 질환 및 상태 (예를 들어, 바이러스성 질환, 간 질환 등)의 치료에 사용될 수 있다.
링커
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 뉴클레오시드간 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 뉴클레오시드간 링커는 포스포디에스테르 (p 또는 po) 링커, 포스포로티오에이트 (ps) 링커, 메실 포스포르아미데이트 (Ms) 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것은 접합 모이어티, 인산화 차단제 및/또는 5' 말단 캡을 siNA, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 안티센스 가닥 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열에 부착시키는 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 링커를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 링커는 포스포디에스테르 (p 또는 po) 링커, 포스포로티오에이트 (ps) 링커, 메실 포스포르아미데이트 (Ms), 포스포르아미다이트 (HEG) 링커, 트리에틸렌 글리콜 (TEG) 링커, 및/또는 포스포로디티오에이트 링커로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 링커는 p-(PS)2, (PS)2-p-TEG-p, (PS)2-p-HEG-p, 및 (PS)2-p-(HEG-p)2로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
표적 유전자
이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 세포 내로의 진입 시, 본원에 개시된 임의의 ds-siNA 분자는 세포 내의 단백질과 상호작용하여 RNA-유도된 침묵 복합체 (RISC)를 형성할 수 있다. ds-siNA가 RISC의 일부이면, ds-siNA는 풀려 단일-가닥 siNA (ss-siNA)를 형성할 수 있다. ss-siNA는 ds-siNA의 안티센스 가닥을 포함할 수 있다. 안티센스 가닥은 상보적 메신저 RNA (mRNA)에 결합할 수 있으며, 이는 mRNA를 코딩하는 유전자의 침묵을 유발한다.
표적 유전자는 임의의 히드록시스테로이드 데히드로게나제 유전자일 수 있다. 임의의 실시양태에서, 유전자는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13)이다. HSD17B13은 진뱅크 수탁 번호 NM_178135.5의 코딩 서열의 뉴클레오티드 서열 (뉴클레오티드 42에서 944)에 상응하는 서열식별번호: 261의 뉴클레오티드 서열에 제시된 서열을 가지며, 이는 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 261 내의 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 23, 15 내지 22, 15 내지 21, 17 내지 25, 17 내지 23, 17 내지 22, 17 내지 21, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 상보적이다.
일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드는 서열식별번호: 261 내의 티민 (Ts)이 우라실 (U)로 대체된 것을 제외하고는 서열식별번호: 261 내의 뉴클레오티드 영역에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 261 내의 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 23, 15 내지 22, 15 내지 21, 17 내지 25, 17 내지 23, 17 내지 22, 17 내지 21, 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일하다.
조성물
상기 나타낸 바와 같이, 본 개시내용은 본원에 기재된 siNA 분자, 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함하는 조성물을 제공한다. 조성물은 본원에 기재된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개 또는 그 초과의 siNA 분자를 포함할 수 있다. 조성물은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 및 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제1 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 및 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제2 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다.
대안적으로, 조성물은 (a) 인산화 차단제; 및 (b) 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 본원에 개시된 인산화 차단제 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 변형 패턴 중 임의의 것을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 접합 모이어티; 및 (b) 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 본원에 개시된 갈락토사민 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 변형 패턴 중 임의의 것을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 5'-안정화된 말단 캡; 및 (b) 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 본원에 개시된 5-안정화된 말단 캡 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 변형 패턴 중 임의의 것을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 적어도 1개의 인산화 차단제, 접합 모이어티, 또는 5'-안정화된 말단 캡; 및 (b) 짧은 간섭 핵산 (siNA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인산화 차단제는 본원에 개시된 인산화 차단제 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 본원에 개시된 갈락토사민 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 본원에 개시된 5-안정화된 말단 캡 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 siNA 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 기재된 센스 가닥, 안티센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 또는 제2 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, siNA는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 및 2'-O-메틸 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, siNA는 본원에 개시된 변형 패턴 중 임의의 것을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
조성물은 제약 조성물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제제화된 소정량의 본원에 기재된 siNA 분자 중 1개 이상을 포함한다. 제약 조성물은 고체 또는 액체 형태, 예를 들어 (1) 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협측, 설하 및 전신 흡수를 위해 표적화된 것, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 비경구 투여, 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의해, 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속-방출 제제로서; (3) 국소 적용, 예를 들어 크림, 연고, 또는 피부에 적용되는 제어-방출 패치 또는 스프레이로서; (4) 질내로 또는 직장내로, 예를 들어 페사리, 크림 또는 발포체로서; (5) 설하로; (6) 안구로; (7) 경피로; 또는 (8) 비강으로 투여하기 위해 적합화된 형태로 투여하기 위해 특별히 제제화될 수 있다.
조성물은 제약 조성물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제제화된 소정량의 본원에 기재된 siNA 분자 중 1개 이상을 포함한다. 제약 조성물은 고체 또는 액체 형태, 예를 들어 (1) 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협측, 설하 및 전신 흡수를 위해 표적화된 것, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 비경구 투여, 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의해, 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속-방출 제제로서; (3) 국소 적용, 예를 들어 크림, 연고, 또는 피부에 적용되는 제어-방출 패치 또는 스프레이로서; (4) 질내로 또는 직장내로, 예를 들어 페사리, 크림 또는 발포체로서; (5) 설하로; (6) 안구로; (7) 경피로; 또는 (8) 비강으로 투여하기 위해 적합화된 형태로 투여하기 위해 특별히 제제화될 수 있다.
본원에 사용된 어구 "치료 유효량"은 동물 내 세포의 적어도 하위집단에서 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비로 일부 목적하는 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 본 개시내용의 siNA를 포함하는 화합물, 물질 또는 조성물의 양을 의미한다.
어구 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대 소듐 라우릴 술페이트 및 스테아르산마그네슘, 뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제, 보존제 및 항산화제가 또한 조성물에 존재할 수 있다.
제약상 허용되는 항산화제의 예는 (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
본 개시내용의 제제는 경구, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 것을 포함한다. 제제는 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 제약 기술분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 숙주, 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 담체 물질과 조합하여 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 양일 것이다. 일반적으로, 100 퍼센트 중에서, 상기 양은 약 0.1 퍼센트 내지 약 99 퍼센트, 바람직하게는 약 5 퍼센트 내지 약 70 퍼센트, 가장 바람직하게는 약 10 퍼센트 내지 약 30 퍼센트의 활성 성분의 범위일 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제제는 시클로덱스트린, 셀룰로스, 리포솜, 미셀 형성제, 예를 들어 담즙산, 및 중합체 담체, 예를 들어 폴리에스테르 및 폴리무수물로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제; 및 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 언급된 제제는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 경구로 생체이용가능하게 한다.
이들 제제 또는 조성물의 제조 방법은 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 담체 및 임의로 1종 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합시킨 후, 필요한 경우에 생성물을 성형함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제제는 캡슐, 카쉐, 환제, 정제, 로젠지 (향미 베이스, 통상적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트를 사용함), 분말, 과립의 형태로, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼으로서, 또는 엘릭시르 또는 시럽으로서, 또는 파스틸 (불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용함)로서 및/또는 구강 세정제 등으로서 존재할 수 있으며, 각각은 활성 성분으로서 미리 결정된 양의 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 함유한다. 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)은 또한 볼루스, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 본 개시내용의 고체 투여 형태 (캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립, 트로키 등)에서, 활성 성분은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘, 및/또는 하기 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 함습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨; (5) 용해 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대 4급 암모늄 화합물 및 계면활성제, 예컨대 폴록사머 및 소듐 라우릴 술페이트; (7) 습윤제, 예컨대, 예를 들어 세틸 알콜, 글리세롤 모노스테아레이트 및 비-이온성 계면활성제; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 스테아르산아연, 스테아르산나트륨, 스테아르산 및 그의 혼합물; (10) 착색제; 및 (11) 제어 방출 작용제, 예컨대 크로스포비돈 또는 에틸 셀룰로스.
캡슐, 정제 및 환제의 경우, 제약 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-쉘 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다.
정제는 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예를 들어, 소듐 스타치 글리콜레이트 또는 가교 소듐 카르복시메틸 셀룰로스), 표면-활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말화 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제, 및 본 개시내용의 제약 조성물의 다른 고체 투여 형태, 예컨대 당의정, 캡슐, 환제 및 과립은 임의로 스코어링될 수 있거나, 또는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 제약-제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 목적하는 방출 프로파일을 제공하는 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 마이크로구체를 사용하여 그 안의 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 이들은 급속 방출을 위해 제제화될 수 있고, 예를 들어 동결-건조될 수 있다.
이들은, 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수 또는 일부 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입시킴으로써 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 임의로 불투명화제를 함유할 수 있고, 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로 위장관의 특정 부분에서, 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한 적절한 경우에 상기 기재된 부형제 중 1종 이상을 갖는 마이크로-캡슐화된 형태일 수 있다.
본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 추가로, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 착색제, 퍼퓸제 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은 활성 화합물 (예를 들어, siNA 분자)에 추가로 현탁화제, 예를 들어 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천 및 트라가칸트, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
직장 또는 질 투여를 위한 본 개시내용의 제약 조성물의 제제는 좌제로서 제공될 수 있으며, 이는 본 개시내용의 1종 이상의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 1종 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있고, 이는 실온에서는 고체이지만 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 활성 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 방출할 것이다.
질 투여에 적합한 본 개시내용의 제제는 또한 관련 기술분야에 적절한 것으로 공지된 바와 같은 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포체 또는 스프레이 제제를 포함한다.
본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 화합물 (예를 들어, siNA 분자)은 멸균 조건하에 제약상 허용되는 담체, 및 요구될 수 있는 임의의 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합될 수 있다.
연고, 페이스트, 크림 및 겔은 본 개시내용의 활성 화합물 (예를 들어, siNA 분자)에 추가로 부형제, 예컨대 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)에 추가로 부형제, 예컨대 락토스, 활석, 규산, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아미드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 통상의 추진제, 예컨대 클로로플루오로히드로카본 및 휘발성 비치환된 탄화수소, 예컨대 부탄 및 프로판을 추가로 함유할 수 있다.
경피 패치는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 신체로의 제어 전달을 제공하는 추가의 이점을 갖는다. 이러한 투여 형태는 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 적절한 매질 중에 용해 또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 흡수 증진제는 또한 피부를 가로지르는 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 유동을 증가시는 데 사용될 수 있다. 이러한 유동의 속도는 속도 제어 막을 제공하거나 또는 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 중합체 매트릭스 또는 겔 중에 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
안과용 제제, 안연고, 분말, 용액 등이 또한 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다.
비경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제약 조성물은 본 개시내용의 1종 이상의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)을 1종 이상의 제약상 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 포함하며, 이는 당, 알콜, 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 제제를 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 대상 화합물에 대한 미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등의 포함에 의해 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터의 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이어서, 약물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 따라 달라지며, 이는 다시 결정 크기 및 결정질 형태에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구-투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.
주사가능한 데포 형태는 생분해성 중합체, 예컨대 폴리락티드-폴리글리콜리드 중에 대상 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 마이크로캡슐화 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비, 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)를 포함한다. 주사가능한 데포 제제는 또한 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼 중에 약물을 포획함으로써 제조된다.
본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)이 인간 및 동물에게 제약으로서 투여되는 경우, 이는 그 자체로, 또는 예를 들어, 0.1 내지 99% (보다 바람직하게는, 10 내지 30%)의 활성 성분을 제약상 허용되는 담체와 함께 함유하는 제약 조성물로서 제공될 수 있다.
치료 및 투여
본 개시내용의 siNA 분자는 그를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 본원에 개시된 siNA 분자 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 본원에 개시된 조성물 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 제제 (예를 들어, siNA 분자 또는 조성물)는 경구, 비경구, 국소, 또는 직장으로 제공될 수 있다. 이들은 물론 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 예를 들어, 이들은 정제 또는 캡슐 형태, 주사, 주입 또는 흡입에 의한 투여; 로션 또는 연고에 의한 국소; 및 좌제에 의한 직장으로 투여된다. 경구 투여가 바람직하다.
본원에 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 경장 및 국소 투여 이외의 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에 사용된 어구 "전신 투여", "전신으로 투여된", "말초 투여" 및 "말초로 투여된"은 화합물, 약물 또는 다른 물질이 환자의 전신으로 들어가서 대사 및 다른 유사 과정에 적용되도록 중추 신경계로의 직접 투여 이외의 방식으로 투여, 예를 들어 피하 투여를 의미한다.
이들 화합물은 요법을 위해 인간 및 다른 동물에게 임의의 적합한 투여 경로에 의해, 예컨대 경구로, 비강으로, 예를 들어 스프레이에 의해, 직장으로, 질내로, 비경구로, 수조내로 및 국소로, 예컨대 분말, 연고 또는 점적제에 의해, 예컨대 협측으로 및 설하로 투여될 수 있다.
선택된 투여 경로와 상관없이, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자), 및/또는 본 개시내용의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 제약상 허용되는 투여 형태로 제제화된다.
본 개시내용의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이 아니면서 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용되는 본 개시내용의 특정 화합물 (예를 들어, siNA 분자), 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 또는 대사 속도, 흡수 속도 및 정도, 치료 기간, 사용되는 특정 화합물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료될 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력, 및 의학 기술분야에 널리 공지된 기타 인자를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술을 가진 의사 또는 수의사는 요구되는 제약 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 시작하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.
일반적으로, 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 적합한 1일 용량은 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 기재된 인자에 따라 달라진다. 바람직하게는, 화합물은 약 0.01 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 약 0.1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 보다 더 바람직하게는 약 0.5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 0.25, 0.26, 0.27, 0.28, 0.29, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 또는 1 mg/kg 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 또는 15 mg/kg 이하의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물의 총 1일 용량은 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 100 mg 이상이다.
본원에 기재된 화합물 (예를 들어, siNA 분자)이 또 다른 것과 공-투여되는 경우, 유효량은 화합물이 단독으로 사용되는 경우보다 적을 수 있다.
원하는 경우, 활성 화합물 (예를 들어, siNA 분자)의 유효 1일 용량은 임의로 단위 투여 형태로 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 초과의 하위-용량으로서 투여될 수 있다. 바람직한 투여는 1일에 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1주 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1개월 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21일마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주마다 1회 투여된다.
질환
본원에 기재된 siNA 분자 및 조성물은 질환을 치료하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 추가로, 질환 치료용 의약의 제조에서의 본원에 개시된 siNA 분자 또는 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 개시되어 있다.
임의의 실시양태에서, 질환은 간 질환이다. 임의의 실시양태에서, 간 질환은 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)이다. 일부 실시양태에서, NAFLD는 비알콜성 지방간염 (NASH)이다. 일부 실시양태에서, 간 질환은 간세포성 암종 (HCC)이다. 일부 실시양태에서, 질환은 비알콜성 지방간염 (NASH)이다.
siNA의 투여
본원에 개시된 siNA 중 임의의 것의 투여는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, siNA는 피하 (SC) 또는 정맥내 (IV) 전달에 의해 투여된다. 본 개시내용의 제제 (예를 들어, siNA 또는 조성물)는 경구, 비경구, 국소 또는 직장으로 제공될 수 있다. 이들은 물론 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 예를 들어, 이들은 정제 또는 캡슐 형태, 주사, 주입 또는 흡입에 의한 투여; 로션 또는 연고에 의한 국소; 및 좌제에 의한 직장으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 피하 투여가 바람직하다.
본원에 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 경장 및 국소 투여 이외의 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에 사용된 어구 "전신 투여", "전신으로 투여된", "말초 투여" 및 "말초로 투여된"은 화합물, 약물 또는 다른 물질이 환자의 전신으로 들어가서 대사 및 다른 유사 과정에 적용되도록 중추 신경계로의 직접 투여 이외의 방식으로 투여, 예를 들어 피하 투여를 의미한다.
이들 화합물은 요법을 위해 인간 및 다른 동물에게 임의의 적합한 투여 경로에 의해, 예컨대 경구로, 비강으로, 예를 들어 스프레이에 의해, 직장으로, 질내로, 비경구로, 수조내로 및 국소로, 예컨대 분말, 연고 또는 점적제에 의해, 예컨대 협측으로 및 설하로 투여될 수 있다.
선택된 투여 경로와 상관없이, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA), 및/또는 본 개시내용의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 제약상 허용되는 투여 형태로 제제화된다.
본 개시내용의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이 아니면서 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용되는 본 개시내용의 특정한 화합물 (예를 들어, siNA), 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정한 화합물의 배출 또는 대사 속도, 흡수 속도 및 정도, 치료 지속기간, 사용되는 특정한 화합물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료될 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력, 및 의학 기술분야에 널리 공지된 기타 인자를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술을 가진 의사 또는 수의사는 요구되는 제약 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA)의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 시작하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 적어도 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 또는 15 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 3 mg/kg 내지 50 mg/kg, 3 mg/kg 내지 40 mg/kg, 3 mg/kg 내지 30 mg/kg, 3 mg/kg 내지 20 mg/kg, 3 mg/kg 내지 15 mg/kg, 3 mg/kg 내지 10 mg/kg, 4 mg/kg 내지 50 mg/kg, 4 mg/kg 내지 40 mg/kg, 4 mg/kg 내지 30 mg/kg, 4 mg/kg 내지 20 mg/kg, 4 mg/kg 내지 15 mg/kg, 4 mg/kg 내지 10 mg/kg, 5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 5 mg/kg 내지 20 mg/kg, 5 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 5 mg/kg 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 적어도 1일 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회, 적어도 1주 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회, 또는 적어도 1개월 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21일마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54 또는 55주의 기간 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 5 mg/kg의 단일 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 10 mg/kg의 단일 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 1주 1회 10 mg/kg의 3회 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 3일마다 1회 10 mg/kg의 3회 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 3일마다 1회 10 mg/kg의 5회 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 또는 조성물은 1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 2 mg/kg 내지 15 mg/kg, 2 mg/kg 내지 10 mg/kg, 3 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 3 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위의 6회 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 용량 및 제2 용량은 적어도 3일 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 용량 및 제3 용량은 적어도 4일 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제3 용량 및 제4 용량, 제4 용량 및 제5 용량, 또는 제5 용량 및 제6 용량은 적어도 7일 간격으로 투여된다.
일반적으로, 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, siNA)의 적합한 1일 용량은 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 기재된 인자에 따라 달라진다. 바람직하게는, 화합물은 약 0.01 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 약 0.1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 보다 더 바람직하게는 약 0.5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 0.25, 0.26, 0.27, 0.28, 0.29, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 또는 1 mg/kg 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 mg/kg 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 또는 15 mg/kg 이하의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물의 총 1일 용량은 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 100 mg 이상이다.
원하는 경우, 활성 화합물 (예를 들어, siNA)의 유효 1일 용량은 임의로 단위 투여 형태로 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회 또는 그 초과의 용량 또는 하위-용량으로서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15회 투여된다. 바람직한 투여는 1일에 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1주 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1개월 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21일마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 3일마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개월마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70일의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53주의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53개월의 기간에 걸쳐 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 1주 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 1주 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 2주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 2주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70주의 기간 동안 적어도 4주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70개월의 기간 동안 적어도 4주마다 1회 투여된다.
기재된 방법의 대상은 포유동물일 수 있고, 이는 인간 및 비-인간 포유동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간, 예컨대 성인이다.
조합 요법
본원에 개시된 방법 중 임의의 것은 대상체에게 간 질환 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 개시된 조성물 중 임의의 것은 간 질환 치료제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 간 질환 치료제는 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 및 인크레틴-기반 요법으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PPAR 효능제는 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 이중 PPARα 효능제는 피브레이트이다. 일부 실시양태에서, PPARα/δ 효능제는 엘라피브라노르이다. 일부 실시양태에서, PPARγ 효능제는 티아졸리딘디온 (TZD)이다. 일부 실시양태에서, TZD는 피오글리타존이다. 일부 실시양태에서, 이중 PPARα/γ 효능제는 사로글리타자르이다. 일부 실시양태에서, FXR 효능제는 오베티콜산 (OCA)이다. 일부 실시양태에서, 지질-변경제는 아람콜이다. 일부 실시양태에서, 인크레틴-기반 요법은 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제 또는 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제이다. 일부 실시양태에서, GLP-1 수용체 효능제는 엑세나티드 또는 리라글루티드이다. 일부 실시양태에서, DPP-4 억제제는 시타글립틴 또는 빌다플립틴이다. 일부 실시양태에서, siNA 및 간 질환 치료제는 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 및 간 질환 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA는 간 질환 치료제를 투여하기 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA는 간 질환 치료제를 투여한 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, siNA 및 간 질환 치료제는 별개의 용기 내에 있다. 일부 실시양태에서, siNA 및 간 질환 치료제는 동일한 용기 내에 있다.
<실시예>
하기 실시예는 본 개시내용을 예시하기 위해 제공된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 하기 방법, 절차 및/또는 물질의 공지된 변형이 사용될 수 있음을 용이하게 이해할 것이다. 이들 실시예는 추가의 예시의 목적으로 제공되며, 본 개시내용에 대한 제한으로 의도되지 않는다.
서열을 포함한 본 개시내용 전반에 걸쳐 약어 및 두문자어는 달리 나타내지 않는 한 하기 의미로 사용될 수 있다:
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00081
실시예 1. siNA 합성
본 실시예는 ds-siNA를 합성하는 예시적인 방법을 기술한다.
2'-OMe 포스포르아미다이트 5'-O-DMT-데옥시 아데노신 (NH-Bz), 3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 5'-O-DMT-데옥시 구아노신 (NH-ibu), 3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 5'-O-DMT-데옥시 시토신 (NH-Bz), 3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 5'-O-DMT-우리딘 3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트를 미국 위스콘신주 밀워키 써모 피셔로부터 구입하였다.
Figure pct00082
2'-F-5'-O-DMT-(NH-Bz) 아데노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 2'-F-5'-O-DMT-(NH-ibu)-구아노신, 3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 5'-O-DMT-(NH-Bz)-시토신, 2'-F-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트, 5'-O-DMT-우리딘, 2'-F-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필 포스포르아미다이트를 미국 위스콘신주 밀워키 써모 피셔로부터 구입하였다.
Figure pct00083
모든 단량체를 건조제를 갖는 진공 데시케이터에서 건조시켰다 (P2O5, RT 24h). 뉴클레오시드에 부착된 고체 지지체 (CPG) 및 범용 지지체를 LGC 및 켐진스로부터 입수하였다. 합성후 작업흐름을 위한 화학물질 및 용매를 VWR/시그마와 같은 상업적으로 입수가능한 공급원으로부터 구입하였고, 어떠한 정제 또는 처리 없이 사용하였다. 용매 (아세토니트릴) 및 용액 (아미다이트 및 활성화제)을 합성 동안 분자체 상에 저장하였다.
올리고뉴클레오티드를 DNA/RNA 합성기 (엑스페다이트(Expedite) 8909 또는 ABI-394 또는 MM-48) 상에서 표준 올리고뉴클레오티드 포스포르아미다이트 화학을 사용하여 CPG 지지체 상에 사전로딩된 올리고뉴클레오티드의 3' 잔기로부터 출발하여 합성하였다. 고체 결합된 올리고뉴클레오티드에 5-(에틸티오)-1H-테트라졸 활성화제의 존재 하에 CH3CN 중 포스포르아미다이트의 0.1 M 용액의 연장된 커플링에 이어서 표준 캡핑, 산화 및 탈보호로 변형된 올리고뉴클레오티드를 수득하였다. 0.1 M I2, THF:피리딘;물-7:2:1을 산화제로서 사용하면서 DDTT ((디메틸아미노-메틸리덴)아미노)-3H-1,2,4-디티아자올린-3-티온을 올리고리보뉴클레오티드 포스포로티오에이트의 합성을 위한 황-전달제로서 사용하였다. 모든 변형된 포스포르아미다이트의 단계적 커플링 효율은 98% 초과였다.
Figure pct00084
절단 및 탈보호:
고체 지지체로부터의 탈보호 및 절단을 65℃에서 15분 동안 암모니아 메틸아민 (1:1, AMA)의 혼합물을 사용하여 달성하였다. 범용 링커를 사용한 경우, 탈보호를 65℃에서 90분 동안 방치하거나, 또는 고체 지지체를 수성 암모니아 (28%) 용액과 함께 55℃에서 8-16시간 동안 가열하여 염기 불안정성 보호기를 탈보호하였다.
조 siNA의 정량화
샘플을 탈이온수 (1.0 mL) 중에 용해시키고, 하기와 같이 정량화하였다: 먼저 써모 사이언티픽(Thermo Scientific)™ 나노드롭(Nanodrop) UV 분광광도계 또는 바이오텍(BioTek)™ 에포크(Epoch)™ 플레이트 판독기 상에서 물 단독 (2 ul)으로 블랭킹을 수행한 다음, 올리고 샘플을 260 nm에서 판독하였다. 조 물질을 건조시키고, -20℃에서 저장하였다.
조 HPLC/LC-MS 분석
조 샘플의 0.1 OD를 HPLC 및 LC-MS에 의해 분석하였다. 조 LC-MS 데이터를 확인한 후, 이어서 정제 단계를 필요에 경우에 순도에 기초하여 수행하였다.
HPLC 정제
비접합 및 GalNAc 변형된 올리고뉴클레오티드를 음이온-교환 HPLC에 의해 정제하였다. 완충제는 10% CH3CN, pH 8.5 중 20 mM 인산나트륨 (완충제 A) 및 10% CH3CN, 1.0 M NaBr, pH 8.5 중 20 mM 인산나트륨 (완충제 B)이었다. 전장 올리고뉴클레오티드를 함유하는 분획을 풀링하였다.
정제된 siNA의 탈염
이어서, 정제된 건조 siNA를 세파덱스 G-25 M (아머샴 바이오사이언시스)을 사용하여 탈염시켰다. 카트리지를 탈이온수 10 mL로 3회 컨디셔닝하였다. 최종적으로, 2.5 mL의 RNAse 무함유 물에 완전히 용해된 정제된 siNA를 카트리지에 적가하여 적용하였다. 무염 siNA를 탈이온수 3.5 mL를 사용하여 스크류 캡 바이알로 직접 용리시켰다. 대안적으로, 일부 비접합된 siNA를 폴 아크로프렙(Pall AcroPrep)™ 3K MWCO 탈염 플레이트를 사용하여 탈염시켰다.
IEX HPLC 및 전기분무 LC/MS 분석
대략 0.10 OD의 siNA를 물에 용해시킨 후, IEX-HPLC 및 LC/MS 분석을 위해 HPLC 오토샘플러 바이알에 피펫팅하였다. 분석용 HPLC 및 ES LC-MS는 화합물의 정체 및 순도를 확인하였다.
듀플렉스 제조:
단일-가닥 올리고뉴클레오티드 (센스 및 안티센스 가닥)를 어닐링시켜 (몰 당량으로 1:1, 90℃에서 2분 동안 가열, 이어서 실온에서 점차 냉각) 듀플렉스 ds-siNA를 수득하였다. 최종 화합물을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 상에서 분석하였다.
실시예 2: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00085
Figure pct00086
(2)의 제조: DMF (150 mL) 중 1 (15 g, 57.90 mmol)의 용액에 AcSK (11.24 g, 98.43 mmol) 및 TBAI (1.07 g, 2.89 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, EA (200 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL * 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 2 (14.5 g, 96.52% 수율, 98% 순도)를 무색 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: 254.28 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.78 - 4.65 (m, 2H), 3.19 (d, J=14.1 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.32 (t, J=6.7 Hz, 12H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 20.59.
(3)의 제조: CH3CN (50 mL) 및 MeOH (25 mL) 중 2 (14.5 g, 57.02 mmol)의 용액에 NaOH (3 M, 28.51 mL)를 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 CH3CN 및 CH3OH를 제거하였다. 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고, 6 M HCl에 의해 pH=7로 조정하고, 혼합물을 EA (50 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL * 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3 (12.1 g, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하였다.
(4)의 제조: CH3CN (25 mL) 및 MeOH (25 mL) 중 3 (12.1 g, 57.01 mmol)의 용액에 A (14.77 g, 57.01 mmol)를 25℃에서 적가하고, 혼합물을 Ar 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 4 (19.5 g, 78.85% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.80 - 4.66 (m, 4H), 2.93 (d, J=11.3 Hz, 4H), 1.31 (dd, J=3.9, 6.1 Hz, 24H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 22.18.
(5)의 제조: MeOH (100 mL) 및 H2O (100 mL) 중 4 (19.5 g, 49.95 mmol)의 용액에 옥손 (61.41 g, 99.89 mmol)을 25℃에서 여러 부분으로 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 잔류물을 EA (50 mL *3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL * 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 i-Pr2O 및 n-헥산 (1:2, 100 mL)으로 25℃에서 30분 동안 연화처리하여 5 (15.6 g, 73.94% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.92 - 4.76 (m, 4H), 4.09 (d, J=16.1 Hz, 4H), 1.37 (dd, J=3.5, 6.3 Hz, 24H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 10.17.
(7)의 제조: THF (20 mL) 중 5 (6.84 g, 16.20 mmol)의 혼합물에 LiBr (937.67 mg, 10.80 mmol), 및 이어서 DIEA (1.40 g, 10.80 mmol, 1.88 mL)를 용해될 때까지 아르곤 하에 15℃에서 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 15분 동안 교반하였다. 6 (4 g, 10.80 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 H2O (40 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 역상 크로마토그래피 (120 g C-18 칼럼, 0~60% ACN/H2O 구배의 용리액 @ 80 mL/분)에 의해 정제하여 7 (5.7 g, 61.95% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: 611.2 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3); δ = 9.26 (s, 1H), 7.50 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.01 (s, 2H), 5.95 (d, J=2.7 Hz, 1H), 5.80 (dd, J=2.1, 8.2 Hz, 1H), 4.89 - 4.72 (m, 2H), 4.66 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 3.77 (dd, J=2.7, 4.9 Hz, 1H), 3.62 (d, J=3.1 Hz, 1H), 3.58 (d, J=3.1 Hz, 1H), 3.52 (s, 3H), 1.36 (td, J=1.7, 6.1 Hz, 12H), 0.92 (s, 9H), 0.12 (s, 6H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 9.02
(8)의 제조: THF (80 mL) 중 7 (5.4 g, 8.84 mmol)의 혼합물에 N2 하에 Pd/C (5.4 g, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고, H2로 수회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 8 (5.12 g, 94.5% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 613.3 [M+H]+ ; H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.31 (s, 1H), 7.37 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.80 - 5.69 (m, 2H), 4.87 - 4.75 (m, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.80 - 3.74 (m, 1H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.57 - 3.52 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.46 - 3.38 (m, 1H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.16 - 2.03 (m, 1H), 1.89 - 1.80 (m, 1H), 1.37 - 1.34 (m, 12H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 9.41.
(9)의 제조: THF (7.2 mL) 중 8 (4.4 g, 7.18 mmol)의 용액에 TBAF (1 M, 7.18 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고, EA (50 mL*4)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~5%, MeOH/DCM 구배 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 9 (3.2 g, 88.50% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 499.2 [M+H]+ 1 ; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.21 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5.81 - 5.72 (m, 2H), 4.88 - 4.74 (m, 2H), 3.99 - 3.87 (m, 2H), 3.84 (dd, J=1.9, 5.4 Hz, 1H), 3.66 - 3.47 (m, 7H), 2.98 (s, 1H), 2.44 - 2.15 (m, 2H), 1.36 (d, J=6.0 Hz, 12H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 9.48.
(실시예 2 단량체)의 제조: MeCN (50 mL) 중 9 (3.4 g, 6.82 mmol, 1 당량) 및 4A MS (3.4 g)의 혼합물에 0℃에서 P1 (2.67 g, 8.87 mmol, 2.82 mL, 1.3 당량)을 첨가하고, 이어서 0℃에서 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (886.05 mg, 7.50 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (100 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL * 2)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용 HPLC: 칼럼: YMC-트리아트 정제용 C18 250*50 mm*10 um; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 15%에 의해 정제하여 불순한 생성물을 수득하였다. 불순한 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 (0.5% TEA를 함유하는 DCM 중 0%에서 5% i-PrOH)에 의해 추가로 정제하여 실시예 2 단량체 (2.1 g, 43.18% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 721.2 [M+Na]+ ; H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.29 (s,1H), 7.45 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.81 (d, J=4.2 Hz, 1H), 5.65 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.79 - 4.67 (m, 2H), 4.26 - 4.05 (m, 2H), 4.00 - 3.94 (m, 1H), 3.89 - 3.63 (m, 6H), 3.53 - 3.33 (m, 5H), 2.77 - 2.61 (m, 2H), 2.31 - 2.21 (m, 1H), 2.16 - 2.07 (m, 1H), 1.33 - 1.28 (m, 12H), 1.22 - 1.16 (m, 1H), 1.22 - 1.16 (m, 11H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 149.89, 149.78, 10.07, 10.02.
실시예 3. 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00087
(2)의 제조: DMF (50 mL) 중 1 (5 g, 13.42 mmol)의 용액에 PPh3 (4.58 g, 17.45 mmol) 및 2-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (2.85 g, 17.45 mmol), 및 이어서 DMF (10 mL) 중 DIAD (4.07 g, 20.13 mmol, 3.91 mL)의 용액을 15℃에서 적가하였다. 생성된 용액을 15℃에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석하고, H2O (60 mL*3) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 이어서, 잔류물을 EtOH (55 mL)로 30분 동안 연화처리하고, 수집된 백색 분말을 EtOH (10 mL*2)로 세척하고, 건조시켜 2 (12.2 g, 85. 16% 수율)를 백색 분말로서 수득하였다 (반응물을 2개의 배치로 설정하고, 합함). ESI-LCMS: 518.1 [M+H]+.
(3)의 제조: 2 (6 g, 11.59 mmol)를 MeOH (50 mL) 중에 현탁시킨 다음, NH2NH2.H2O (3.48 g, 34. 74 mmol, 3.38 mL, 50% 순도)를 20℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 EA (20 mL)로 희석하고, NaHCO3 (10 mL*2) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 이어서, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 3 (8.3 g, 92.5% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다. (반응을 2개의 배치로 설정하고 합함). ESI-LCMS: 388.0 [M+H]+ ; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ =11.39 (br s, 1H), 7.72 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.24 - 6.09 (m, 2H), 5.80 (d,J=4.9 Hz, 1H), 5.67 (d, J=8.1 Hz,1H), 4.26 (t, J=4.9 Hz, 1H), 4.03 -3.89 (m, 1H), 3.87 - 3.66 (m, 3H),3.33 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (d, J=1.3 Hz, 6H)
(4)의 제조: DCM (130 mL) 중 3 (7 g, 18.06 mmol) 및 Py (1.43 g, 18.06 mmol, 1.46 mL)의 용액에 N2 하에 -78℃에서 DCM (50 mL) 중 MsCl (2.48 g, 21.68 mmol, 1. 68 mL)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 15℃로 30분 내에 가온되도록 하고, 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 빙수 (70 mL)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, DCM (50 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 30 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% i-PrOH/DCM 구배의 용리액 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 4 (6.9 g, 77.94% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 466.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.41 (br s, 1H), 10. 15 (s, 1H), 7. 69 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.80 (d, J=4.4 Hz, 1H), 5.65 (d, J=8. 1 Hz, 1H), 4.24 (t, J=5.2 Hz, 1H), 4.16 - 3.98 (m, 3H), 3. 87 (t, J=4.8 Hz, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0. 10 (d, J=1.5 Hz, 6H)
(5)의 제조: THF (70 mL) 중 4 (6.9 g, 14.82 mmol)의 용액에 15℃에서 TBAF (1 M, 16.30 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~9% MeOH/에틸 아세테이트 구배의 용리액 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 5 (1.8 g, 50.8% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 352.0 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.40 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.83 (d, J=4. 9 Hz, 1H), 5.65 (dd, J=1. 8, 8. 1 Hz, 1H), 5.36 (d, J=6. 2 Hz, 1H), 4.13 - 4.00 (m, 4H), 3. 82 (t, J=5.1 Hz, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.00 (s, 3H)
(실시예 3 단량체)의 제조: ACN (90 mL) 중 5 (3 g, 8.54 mmol) 및 DIEA (2.21 g, 17.08 mmol, 2.97 mL)의 혼합물에 CEPCl (3.03 g, 12.81 mmol)을 15℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 5시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 EA (40 mL)로 희석하고, 5% NaHCO3 (20 mL)로 켄칭하였다. 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~15% i-PrOH/(DCM과 함께 2% TEA) 구배의 용리액 @ 20 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 3 단량체 (2.1 g, 43.93% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 552.3 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 8.78 (br s, 1H), 7.57 (dd, J=4.6, 8.2 Hz, 1H), 5.97 - 5.80 (m, 1H), 5.67 (d, J=8. 3Hz, 1H), 4.46 - 4.11 (m, 4H), 3.95 -3.58 (m, 5H), 3.44 (d, J=16. 3 Hz, 3H), 3.02 (d, J=7. 5 Hz, 3H), 2. 73 -2.59 (m, 2H), 1.23 - 1.15 (m, 12H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.30, 150.10
실시예 4: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00088
(2)의 제조: DCM (50 mL) 중 1 (5 g, 12.90 mmol) 및 TEA (1.57 g, 15.48 mmol, 2.16 mL)의 용액에 N2 하에 15℃에서 DCM (10 mL) 중 P-4 (2.24 g, 15.48 mmol, 1.67 mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC (PE: EtOAc = 0:1)에 의해 모니터링하여 완결된 후, 반응 혼합물을 농축 건조시키고, H2O (20 mL)로 희석하고, EA (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~95% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 2 (5.3 g, 71.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 496.1 [M+H]+ ; H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 0.10 (d, J=4.02 Hz, 6 H) 0.91 (s, 9 H) 3.42 - 3.54 (m, 3 H) 3.65 - 3.70 (m, 1 H) 3.76 - 3.89 (m, 6 H) 4.00 (dd, J=10.92, 2.89 Hz, 1 H) 4.08 - 4.13 (m, 1 H) 4.15 - 4.23 (m, 2 H) 5.73 (dd, J=8.28, 2.01 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=2.76 Hz, 1 H) 6.86 (d, J=15.81 Hz, 1 H) 7.72 (d, J=8.03 Hz, 1 H) 9.10 (s, 1 H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 9.65
(3)의 제조: THF (50 mL) 중 2 (8.3 g, 16.75 mmol)의 용액에 TBAF (1 M, 16.75 mL) 및 CH3COOH (1.01 g, 16.75 mmol, 957.95 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA = 0~100%; MeOH /EA = 0~10%)에 의해 정제하여 3 (5 g, 77.51% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 382.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 3.35 (s, 3 H) 3.65 (br d, J=2.76 Hz, 3 H) 3.68 (d, J=2.76 Hz, 3 H) 3.77 (t, J=5.08 Hz, 1 H) 3.84 - 4.10 (m, 4 H) 5.33 (br d, J=5.52 Hz, 1 H) 5.62 (d, J=7.77 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=4.94 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=7.71 Hz, 1 H) 9.08 (d, J=16.81 Hz, 1 H) 11.39 (br s, 1 H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 15.41
(실시예 4 단량체)의 제조: MeCN (21 mL) 및 피리딘 (7 mL) 중 3 (2 g, 5.25 mmol) 및 DIPEA (2.03 g, 15.74 mmol, 2.74 mL, 3 당량)의 용액에 CEOP[N(iPr)2]2/CEP[N(iPr)2]2/CEP/CEPCl (1.86 g, 7.87 mmol)을 20℃에서 적가하고, 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EA (50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~45% (에틸 아세테이트: EtOH=4:1)/석유 에테르 구배)에 의해 정제하여 실시예 4 단량체 (1.2 g, 38.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 604.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ= 1.12 - 1.24 (m, 12 H) 2.61 - 2.77 (m, 2 H) 3.43 (d, J=17.64 Hz, 3 H) 3.59 - 3.69 (m, 2 H) 3.71 - 3.78 (m, 6 H) 3.79 - 4.14 (m, 5 H) 4.16 - 4.28 (m, 1 H) 4.29 - 4.42 (m, 1 H) 5.59 - 5.72 (m, 1 H) 5.89 (t, J=4.53 Hz, 1 H) 7.48 (br d, J=12.76 Hz, 1 H) 7.62 - 7.74 (m, 1 H) 9.26 (br s, 1 H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.57, 149.96, 9.87
실시예 5: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00089
(2)의 제조: CH3CN (1.2 L) 및 Py (60 mL) 중 1 (30 g, 101.07 mmol, 87% 순도)의 용액에 10℃에서 I2 (33.35 g, 131.40 mmol, 26.47 mL) 및 PPh3 (37.11 g, 141.50 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 48시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 혼합물을 포화 수성 Na2S2O3 (300 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (300 mL)으로 희석하고, 농축시켜 CH3CN을 제거하고, EtOAc (300 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 330 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% 메탄올/디클로로메탄 구배의 용리액 @ 100 mL/분)에 의해 정제하여 2 (28.2 g, 72% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 369.1 [M+H]+ ; H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.43 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.86 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.46 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.08 - 3.96 (m, 2H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 1H), 3.40 (dd, J=6.9, 10.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H).
(3)의 제조: DCM (150 mL) 중 2 (12 g, 32.6 mmol)의 용액에 AgNO3 (11.07 g, 65.20 mmol), 2,4,6-트리메틸피리딘 (11.85 g, 97.79 mmol, 12.92 mL), 및 DMTCl (22.09 g, 65.20 mmol)을 10℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% 에틸 아세테이트/석유 에테르구배의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 3 (17 g, 70.78% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 693.1 [M+Na]+ 1; H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.46 (s, 1H), 7.60 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 6H), 7.29 - 7.23 (m, 1H), 6.93 (d, J=8.8 Hz, 4H), 5.97 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.69 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.05 - 4.02 (m, 1H), 3.75 (d, J=1.2 Hz, 6H), 3.57 (t, J=5.6 Hz, 1H), 3.27 (s, 4H), 3.06 (t, J=10.4 Hz, 1H), 2.98 - 2.89 (m, 1H).
(4)의 제조: DMF (200 mL) 중 3 (17 g, 25.35 mmol)의 용액에 25℃에서 AcSK (11.58 g, 101.42 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (600 mL)로 희석하고, EtOAc (300 mL * 4)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 4 (15.6 g, 조 물질)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 직접 추가 정제 없이 사용하였다. ESI-LCMS: 641.3 [M+H]+.
(5)의 제조: CH3CN (200 mL) 중 4 (15.6 g, 25.21 mmol)의 용액에 Ar 하에 10℃에서 DTT (11.67 g, 75.64 mmol, 11.22 mL) 및 LiOH.H2O (1.06 g, 25.21 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 CH3CN을 제거하고, 잔류물을 H2O (400 mL)로 희석하고, EtOAc (200 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 220 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 100 mL/분)에 의해 정제하여 5 (8.6 g, 56.78% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 599.3 [M+Na]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.79 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 4H), 7.36 - 7.27 (m, 3H), 6.85 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 4H), 5.85 (d, J=1.3 Hz, 1H), 5.68 (dd, J=2.0, 8.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.29 (m, 1H), 3.91 (dd, J=4.8, 8.2 Hz, 1H), 3.81 (d, J=1.6 Hz, 6H), 3.33 (s, 3H), 2.85 - 2.80 (m, 1H), 2.67 - 2.55 (m, 2H), 1.11 (t, J=8.8 Hz, 1H).
(실시예 5 단량체)의 제조: DCM (120 mL) 중 5 (6 g, 10.40 mmol)의 용액에 Ar 하에 10℃에서 P1 (4.08 g, 13.53 mmol, 4.30 mL) 및 DCI (1.35 g, 11.45 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 희석하고, DCM (20 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: YMC-트리아트 정제용 C18 250*50 mm*10 um; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 35%-81%,20분)에 의해 정제하여 실시예 5 단량체 (3.54 g, 43.36% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 776.4 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.65 - 7.38 (m, 7H), 7.37 - 7.22 (m, 3H), 6.90 ( d, J=8.4 Hz, 4H), 5.92 ( s, 1H), 5.66 ( t, J=8.2 Hz, 1H), 4.13 ( d, J=4.0 Hz, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.87 - 3.59 (m, 10H), 3.33 ( d, J=5.8 Hz, 3H), 3.12 - 2.94 (m,1H), 2.78 - 2.60 (m, 3H), 2.55-2.48 (m, 1H), 1.36 - 0.98 (m, 12H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ = 162.69.
실시예 6: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00090
(2)의 제조: DCM (500 mL) 및 H2O (125 mL) 중 1 (22.6 g, 45.23 mmol)의 용액에 0℃에서 TEMPO (6.40 g, 40.71 mmol) 및 DIB (29.14 g, 90.47 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 20시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 포화 수성 NaHCO3을 혼합물에 첨가하여 pH >8로 조정하였다. 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고, DCM (100 mL * 3)으로 세척하였다. 수성 층을 수집하고, HCl (4 M)에 의해 pH < 5로 조정하고, DCM (200 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 2 (17.5 g, 68.55% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 514.2 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.27 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.06 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 2H), 6.28 (d, J=6.8 Hz, 1H), 4.82 - 4.76 (m, 1H), 4.54 (dd, J=4.1, 6.7 Hz, 1H), 4.48 (d, J=1.8 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.18 (d, J=4.8 Hz, 6H).
(3)의 제조: MeOH (20 mL) 중 2 (9.3 g, 18.11 mmol)의 용액에 SOCl2 (3.23 g, 27.16 mmol, 1.97 mL)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (80 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 수성 층을 DCM (80 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~5%, MeOH/DCM 구배 @ 85 mL/분)에 의해 정제하여 3 (5.8 g, 60% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 528.3 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.28 (s, 1H), 8.79 (d, J=7.3 Hz, 2H), 8.06 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 2H), 6.28 (d, J=6.6 Hz, 1H), 4.87 (dd, J=2.4, 4.0 Hz, 1H), 4.61 (dd, J=4.3, 6.5 Hz, 1H), 4.57 (d, J=2.2 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.17 (d, J=2.2 Hz, 6H).
(4)의 제조: CD3OD (120 mL) 중 3 (5.7 g, 10.80 mmol)의 혼합물에 NaBD4 (1.63 g, 43.21 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 AcOH (~ 10 mL)로 중화시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~5%의 용리액, MeOH/DCM 구배 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 4 (4.15 g, 7.61 mmol, 70.45% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 502.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.23 (s, 1H), 8.76 (s, 2H), 8.04 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 6.14 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.60 - 4.51 (m, 2H), 3.98 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.13 (d, J=1.5 Hz, 6H).
(5)의 제조: 피리딘 (50 mL) 중 4 (4.85 g, 9.67 mmol)의 용액에 25℃에서 DMTrCl (5.90 g, 17.40 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 피리딘을 제거하였다. 잔류물을 EtOAc (150 mL)로 희석하고, H2O (50 mL * 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~70%, EA/PE 구배 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 5 (6.6 g, 84.06% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 804.3[M+H]+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.22 (s, 1H), 8.68 (d, J=11.0 Hz, 2H), 8.03 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.68 - 7.60 (m, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 7H), 6.88 - 6.79 (m, 4H), 6.17 (d, J=4.2 Hz, 1H), 4.72 (t, J=5.0 Hz, 1H), 4.60 (t, J=4.5 Hz, 1H), 4.03 - 3.98 (m, 1H), 3.71 (s, 6H), 0.83 (s, 9H), 0.12 - 0.03 (m, 6H).
(6)의 제조: THF (16 mL) 중 5 (6.6 g, 8.21 mmol)의 용액에 TBAF (1 M, 8.21 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 EA (150 mL)로 희석하고, H2O (50 mL*3)로 세척하였다. 유기 층을 염수 (150 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 10- 100%, EA/PE 구배 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 6 (5.4 g, 94.4% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 690.3 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.24 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.30 - 7.18 (m, 7H), 6.84 (dd, J=5.9, 8.9 Hz, 4H), 6.19 (d, J=4.8 Hz, 1H), 5.36 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.59 - 4.52 (m, 1H), 4.48 (q, J=5.1 Hz, 1H), 4.11 (d, J=4.8 Hz, 1H), 3.72 (d, J=1.0 Hz, 6H), 3.40 (s, 3H).
(실시예 6 단량체)의 제조: MeCN (150 mL) 중 6 (8.0 g, 11.60 mmol)의 용액에 0℃에서 P-1 (4.54 g, 15.08 mmol, 4.79 mL), 및 이어서 DCI (1.51 g, 12.76 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 20℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (250 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (50 mL * 2)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 (PE 중 0%에서 60% EA는 0.5% TEA를 함유함)에 의해 정제하여 실시예 6 단량체 (5.75 g, 55.37% 수율, 99.4% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 890.4 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.55 (s, 1H), 8.63 - 8.51 (m, 1H), 8.34 - 8.24 (m, 1H), 7.98 (br d, J=7.5 Hz, 2H), 7.65 - 7.55 (m, 1H), 7.53 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.32 - 7.17 (m, 7H), 6.84 - 6.77 (m, 4H), 6.14 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.84 - 4.73 (m, 1H), 4.72 - 4.65 (m, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 3.91 - 3.61 (m, 9H), 3.50 - 3.43 (m, 3H), 2.72 - 2.61 (m, 1H), 2.50 (t, J=6.0 Hz, 1H), 1.21 - 1.15 (m, 10H), 1.09 (d, J=6.8 Hz, 2H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.01, 149.65
실시예 7: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00091
(2)의 제조: CH3CN (200 mL) 및 H2O (50 mL) 중 1 (10 g, 27.22 mmol)의 용액에 TEMPO (3.85 g, 24.50 mmol) 및 DIB (17.54 g, 54.44 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOAc (600 mL)로 30분 동안 연화처리하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 수집된 고체를 EtOAc (300 mL*2)로 세척하여 2 (20.09 g, 91.5% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 382.0 [M+H]+.
(3)의 제조: MeOH (100 mL) 중 2 (6 g, 15.73 mmol)의 용액에 SOCl2 (2.81 g, 23.60 mmol, 1.71 mL)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 NaHCO3 (4 g)의 첨가에 의해 켄칭하고, 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 3 (18.8 g, 95.6% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. (반응을 병행 3개 배치로 설정하고 합함). ESI-LCMS: 396.1 [M+H]+;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 12.26 - 11.57 (m, 2H), 8.42 - 8.06 (m, 1H), 6.14 - 5.68 (m, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.33 (dd, J=4.0, 7.3 Hz, 1H), 3.77 (m, 3H), , 3.30 (s, 3H), 2.81 - 2.69 (m, 1H), 1.11 (s, 6H)
(4 & 5)의 제조: CD3OD (120 mL) 중 3 (10.1 g, 25.55 mmol)의 혼합물에 NaBD4 (3.29 g, 86.86 mmol, 3.4 당량)를 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 AcOH (~ 15 mL)로 중화시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~7.4%, MeOH/DCM 구배 @ 80 mL/분)에 의해 정제하여 4 (2.98 g, 6.88 mmol, 27% 수율)를 황색 고체로서 ESI-LCMS: 370.1[M+H]+ 및 5 (10.9 g, 조 물질)를 황색 고체로서 ESI-LCMS: 300.1[M+H]+ 수득하였다; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 7.85 (s, 1H), 5.87 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 1H), 4.34 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.08 (d, J=3.1 Hz, 1H), 3.49 - 3.38 (m, 4H)
6의 제조: 피리딘 (19 mL) 중 4 (1.9 g, 4.58 mmol, 85.7% 순도)의 용액에 DMTrCl (2.02 g, 5.96 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 MeOH (10 mL)에 의해 켄칭하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 H2O (10 mL*3)로 희석하고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~77%의 용리액, PE: (10%EtOH 함유 EA): 1%TEA@ 35 mL/분)에 의해 정제하여 6 (2.6 g, 81.71% 수율, 96.71% 순도)을 백색 발포체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 672.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 12.02 ( s, 1H), 7.96 ( s, 1H), 7.83 (s, 1H),7.51 (d, J=7.4 Hz, 2H), 7.37(d, J=8.6 Hz, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 2H),6.80 (t, J=8.4 Hz, 4H), 5.88 (d, J=6.3 Hz, 1H), 4.69 (t, J=5.7 Hz,1H), 4.64 (s, 1H), 4.54 (s, 1H),4.19 (d, J=2.9 Hz, 1H), 3.77 (d, J=4.5 Hz, 6H), 3.60 - 3.38 (m, 3H),2.81 (s, 1H), 1.81 (td, J=6.9, 13.7Hz, 1H), 0.97 (d, J=6.8 Hz, 3H),0.80 (d, J=6.9 Hz, 3H).
실시예 7 단량체의 제조: MeCN (80 mL) 중 6 (8.4 g, 12.5 mmol)의 용액에 0℃에서 P-1 (4.9 g, 16.26 mmol, 5.16 mL)을 첨가하고, 이어서 Ar 하에 0℃에서 DCI (1.624 g, 13.76 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (20 mL)으로 켄칭하고, DCM (50 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~52% PE: EA (10%EtOH): 5%TEA의 용리액, @ 80 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 7 단량체 (3.4 g, 72.1% 수율)를 백색 발포체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 872.4 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ= 12.46 - 11.07 (m, 1H), 9.29 (s, 1H), 7.84 (d, J=14.6 Hz, 1H), 7.42 (t, J=6.9 Hz, 2H), 7.34 - 7.17 (m, 7H), 6.85 - 6.77 (m, 4H), 5.95 - 5.77 (m, 1H), 4.56 - 4.40 (m, 2H), 4.24 (dd, J=4.0, 13.3 Hz, 1H), 3.72 (d, J=2.0 Hz, 7H), 3.66 - 3.53 (m, 3H), 3.42 (d, J=11.8 Hz, 3H), 2.69 - 2.61 (m, 1H), 2.60 - 2.42 (m, 2H), 1.16 - 1.00 (m, 18H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 149.975, 149.9.
실시예 8: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00092
(2)의 제조: DMF (60 mL) 중 1 (40 g, 58.16 mmol)의 용액에 이미다졸 (11.88 g, 174.48 mmol), NaI (13.08 g, 87.24 mmol), 및 TBSCl (17.52 g, 116.32 mmol)을 20℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 혼합물을 EA (200 mL)로 희석하였다. 유기 층을 염수/물 (80 mL/80 mL *4)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 2 (50.8 g, 조 물질)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 802.3 [M+H]+
(3)의 제조: DCM (120 mL) 중 2 (8.4 g, 10.47 mmol)의 용액에 Et3SiH (3.06 g, 26.3 mmol, 4.2 mL) 및 TFA (1.29 g, 0.84 mL)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (15 mL) 및 염수 (80 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~83% EA/PE 구배의 용리액 @ 80 mL/분)에 의해 정제하여 3 (2.92 g, 55.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 500.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.79 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.64 - 7.58 (m,1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 5.98 - 5.93 (m, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.23 (s, 1H), 3.98 (dd, J=1.5, 13.1 Hz, 1H), 3.75 (dd, J=1.5, 13.1 Hz, 1H), 3.28 (s, 3H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.00 - 0.90 (m, 9H), 0.15 (d, J=7.0 Hz, 6H).
(4)의 제조: 3 (6 g, 12.01 mmol) 및 tert-부틸 N-메틸술포닐카르바메이트 (3.52 g, 18.01 mmol)를 톨루엔 (50 mL)과 공증발시키고, 건조 THF (100 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이어서, PPh3 (9.45 g, 36.03 mmol)을 첨가하고, 이어서 건조 THF (30 mL) 중 DIAD (7.28 g, 36.03 mmol, 7.00 mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 18시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 이어서 반응 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석하고, 물 (70 mL) 및 염수 (70 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~100% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 60 mL/분), 및 이어서 역상 HPLC (0.1% NH3.H2O 조건, 74%에서 용리액)에 의해 정제하여 4 (2.88 g, 25% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 677.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 9.24 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.05 (br d,J=7.3 Hz, 2H), 7.66 - 7.42 (m, 4H), 6.16 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.52 (br t, J=4.5 Hz, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 1H), 3.97 (br dd, J=8.0, 14.8 Hz, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 1.54 (s, 9H), 0.95 (s, 9H), 0.14 (d, J=0.8 Hz, 6H).
(5)의 제조: THF (20 mL) 중 4 (2.8 g, 4.14 mmol)의 용액에 TBAF (4 M, 1.03 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~6% MeOH/에틸 아세테이트 구배의 용리액 @ 20 mL/분)에 의해 정제하여 5 (2.1 g, 83.92% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 563.1[M+H]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.85 - 8.77 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.11 - 7.99 (m, 2H), 7.64 -7.50 (m, 4H), 6.19 (d, J=2.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.33 (m, 1H), 4.29 (br d, J=4.3 Hz, 1H), 4.22 - 4.02 (m, 2H), 3.65 - 3.59 (m, 3H), 3.28 (s, 3H), 1.54 (s, 9H).
(6)의 제조: DCM (20 mL) 중 5 (2.1 g, 3.73 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA (7.70 g, 67.53 mmol, 5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 24시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하여 pH 7에 도달하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 저압에서 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~7% DCM/MeOH 구배의 용리액 @ 20 mL/분)에 의해 정제하여 1.6 g (불순함, 75% LCMS 순도)을 수득하고, 이어서 정제용 HPLC [FA 조건, 칼럼: 보스톤 유니 C18 40*150*5 um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 8%-38%,7.7분]에 의해 정제하여 6 (1.04 g, 63.7% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 485.0 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 11.27 - 11.21 (m, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.68 -7.62 (m, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 2H), 7.39 (t, J=6.3 Hz, 1H), 6.16 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.48 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.55 (t,J=5.5 Hz, 1H), 4.43 - 4.37 (m, 1H), 4.08 - 4.02 (m, 1H), 3.41 - 3.36 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 2.91(s, 3H).
(실시예 8 단량체)의 제조: Ar 분위기 하에 DCM (30 mL) 중 6 (1 g, 2.16 mmol)의 용액에 P1 (977.58 mg, 3.24 mmol, 1.03 mL), 및 이어서 DCI (306.43 mg, 2.59 mmol)를 0℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, Ar로 3회 퍼징하고, 20℃로 가온하고, Ar 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC (PE: EtOAc = 4:1)에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)로 희석하고, DCM (50 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 역상 HPLC (40 g C18 칼럼: 중성 조건, H2O/CH3CN 에테르 구배 중 0~57%의 0.3% NH4HCO3의 용리액 @ 35 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 8 단량체 (0.49 g, 33.7% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 663.1[M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ= 1.19 - 1.29 (m, 12 H) 2.71 (q, J=5.77 Hz, 2 H) 2.94 (d, J=6.27 Hz, 3 H) 3.35 (d, J=15.56 Hz, 3 H) 3.40 - 3.52 (m, 2 H) 3.61 - 3.97 (m, 4 H) 4.23 - 4.45 (m, 1 H) 4.55 - 4.74 (m, 2 H) 6.02 (dd, J=10.67, 6.40 Hz, 1 H) 7.25 (br s, 1 H) 7.47 - 7.57 (m, 2 H) 7.59 - 7.68 (m, 1 H) 8.01 (d, J=7.78 Hz, 2 H) 8.28 (s, 1 H) 8.66 (s, 1 H) 9.69 (br s, 1 H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.92, 149.78.
실시예 9. 5'-안정화된 말단 캡 변형된 올리고뉴클레오티드의 합성
본 실시예는 본원에 개시된 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 siNA를 합성하는 예시적인 방법을 제공한다. 5'-안정화된 말단 캡 및/또는 중수소화 포스포르아미다이트를 무수 아세토니트릴 중에 용해시키고, 표준 포스포르아미다이트 화학을 사용하여 엑스페다이트 8909 합성기 상에서 올리고뉴클레오티드 합성을 수행하였다. 벤질-티오-테트라졸 (BTT) 활성화제의 존재 하에 무수 CH3CN 중 포스포르아미다이트의 0.12 M 용액을 고체 결합된 올리고뉴클레오티드에 연장 커플링시킨 후 (12분), 표준 캡핑, 산화 및 황화시켜 변형된 올리고뉴클레오티드를 생성하였다. 0.02 M I2, THF:피리딘:물 7:2:1을 산화제로서 사용하면서 DDTT (디메틸아미노-메틸리덴)아미노)-3H-1,2,4-디티아자올린-3-티온을 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고리보뉴클레오티드의 합성을 위한 황-전달제로서 사용하였다. 모든 변형된 포스포르아미다이트의 단계적 커플링 효율은 약 98% 달성되었다. 합성 후, 고체 지지체를 수성 암모니아 (28%) 용액과 함께 45℃에서 16시간 동안 가열하거나, 또는 메탄올 중 0.05 M K2CO3을 사용하여 염기 불안정성 보호기를 탈보호하였다. 조 올리고뉴클레오티드를 이소프로판올로 침전시키고, 원심분리하여 (에펜도르프 5810R, 3000g, 4℃, 15분) 펠릿을 수득하였다. 이어서, 조 생성물을 이온 교환 크로마토그래피 (TSK 겔 칼럼, 20 mM NaH2PO4, 10% CH3CN, 1 M NaBr, 20 칼럼 부피에 걸쳐 구배 20-60% 1 M NaBr)를 사용하여 정제하고, 분획을 HPLC 상에서 이온 변화 크로마토그래피에 의해 분석하였다. 순수한 분획을 풀링하고, 세파덱스 G-25 칼럼에 의해 탈염시키고, 증발 건조시켰다. 순도 및 분자량을 HPLC 분석 및 ESI-MS 분석에 의해 결정하였다. 단일-가닥 RNA 올리고뉴클레오티드 (센스 및 안티센스 가닥)를 90℃에서 3분 동안, 이어서 RT 40분 동안 어닐링하여 (몰 당량으로 1:1), 듀플렉스를 생산하였다.
실시예 10. 단량체의 합성
Figure pct00093
(2a)의 제조: ACN (200.0 mL) 중 1a (10.0 g, 29.5 mmol)의 용액에, KSAc (13.5 g, 118.6 mmol)를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, TLC는 1a가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 실리카 겔에 의해 여과하고, 필터 케이크를 DCM (100.0 mL)으로 세척하고, 여과물을 농축시켜 조 2a (11.1 g)를 오일로서 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.32-7.24 (m, 5H), 7.16 (d, J = 8.9 Hz, 4H), 6.82 (d, J = 8.9 Hz, 4H), 3.82 (s, 6H), 2.28 (s, 3H).
(3a)의 제조: THF (290.0 mL) 중 조 2a (11.1 g, 29.2 mmol)의 용액에, LiAlH4 (2.0 g, 52.6 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 10분 동안 유지하고, 반응물을 N2 하에 실온에서 5시간 동안 교반하고, TLC는 2a가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 수성 NaHCO3 용액에 넣고, EA (500.0 mL*2)로 추출하고, 유기 상을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 30:1에서 10:1)에 의해 정제하여 3a (8.1g, 95% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 335.3 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.24 (m, 5H), 7.19 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 3.83 (s, 6H), 3.09 (s, 1H).
(2)의 제조: 피리딘 (400.0 mL) 중 1 (20.0 g, 81.3 mmol)의 용액에, MsCl (10.23 g, 89.43 mmol)을 -10℃에서 적가하고, 반응물을 -10℃에서 1시간 동안 교반하고, LCMS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈고, 100.0 mL 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, DCM (100.0 mL*2)으로 추출하고, 유기 상을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 30:1에서 10:1)에 의해 정제하여 2 (9.5 g, 97% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 325.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (s, 1H), 7.64-7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.92-5.85 (m, 2H), 5.65-5.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.26-5.11 (m, 1H), 4.53-4.37 (m, 2H), 4.27-4.16 (m, 1H), 4.10-4.04 (m, 1H), 3.23 (s, 3H).
(3)의 제조: 중간체 3을 참고문헌 [Helvetica Chimica Acta, 2004, 87. 2812]에 기재된 반응 조건에 따라 제조함으로써 제조하였다. 건조 DMSO (130.0 mL) 중 2 (9.2 g, 28.3 mmol)의 용액에 DMTrSH (14.31 g, 42.5 mmol)를 첨가하고, 이어서 테트라메틸구아니딘 (3.6 g, 31.2 mmol)을 N2 하에 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, LCMS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 100.0 mL H2O를 첨가하고, EA (100.0 mL*2)로 추출하고, 유기 상을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 5:1에서 1:1)에 의해 정제하여 3 (12.0 g, 97% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 563.2 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.43-11.42 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.57-7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.33-7.17 (m, 9H), 6.89-6.86 (m, 4H), 5.80-5.74 (m, 1H), 5.65-5.62 (m, 1H), 5.58-5.57 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.16-5.01 (m, 1H), 3.98-3.90 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.73-3.67 (m, 1H), 2.50-2.37 (m, 2H).
실시예 10 단량체의 제조: 질소의 불활성 분위기 하에 디클로로메탄 (120.0 mL) 중 3 (10.0 g, 17.7 mmol)의 용액에 실온에서 CEOP[N(iPr)2]2 (6.4 g, 21.2 mmol) 및 DCI (1.8 g, 15.9 mmol)를 순서대로 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1.0시간 동안 교반하고, 디클로로메탄 50 mL로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 2 x 50 mL 및 포화 수성 염화나트륨 1 x 50 mL로 각각 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류 용매가 감압 하에 남아있지 않을 때까지 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 6/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 10 단량체 (12.8 g, 98% 순도, 93% 수율)를 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 765.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.44 (s, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.32-7.18 (m, 9H), 6.89-6.85 (m, 4H), 5.80-5.64 (m, 2H), 5.38-5.22 (m, 1H), 4.38-4.15 (m, 1H), 3.81-3.70 (m, 8H), 3.61-3.43 (m, 3H), 2.76-2.73 (m, 1H), 2.66-2.63 (m, 1H), 2.50-2.41 (m, 2H), 1.12-1.05 (m, 9H), 0.97-0.95 (m, 3H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.01, 148.97, 148.74, 148.67; 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ 149.01, 148.97, 148.74, 148.67.
실시예 11. 단량체의 합성
Figure pct00094
(2)의 제조: 피리딘 (20 mL) 중 1 (2.0 g, 8.8 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (3.3 g, 9.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, DCM: MeOH=50:1~20:1)에 의해 정제하여 2 (3.7 g, 7.2 mmol, 80.1%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 527 [M-H]-.
(3)의 제조: 건조 DMF (56 mL) 중 2 (2.8 g, 5.3 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 (CD3O)2Mg (2.9 g, 31.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 빙조로 냉각시키면서, 반응물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EA (300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (2.0 g, 3.6 mmol, 67.9%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 562 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.38 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.46-7.19 (m, 9H), 6.91 (d, J = 7.4 Hz, 4H), 5.81-5.76 (AB, J = 20 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 4.25-4.15 (m, 1H), 3.99-3.92 (m, 1H), 3.85-3.79 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.34-3.18 (m, 31H).
실시예 11 단량체의 제조: DCM (20 mL) 중 3 (2.0 g, 3.5 mmol)의 현탁액에 DCI (357 mg, 3.0 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.3 g, 4.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 11 단량체 (2.1 g, 2.7 mmol, 77.1%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 764 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, ACN-d3): δ 9.45-8.90 (m, 1H, D2O로 교환됨), 7.88-7.66 (m, 1H), 7.50-7.18 (m, 9H), 6.93-6.80 (m, 4H), 5.85 (d, J = 8.2 Hz, 1H),5.29-5.16 (m, 1H), 4.57-4.37 (m, 1H), 4.18-4.09 (m, 1H), 3.98-3.90 (m, 1H), 3.90-3.74 (m, 7H), 3.74-3.50 (m, 3H), 3.48-3.31 (m, 2H), 2.70-2.61 (m, 1H), 2.56-2.46 (m, 1H), 1.24-1.12 (m, 9H), 1.09-0.99 (m, 3H). 31P-NMR (162 MHz, ACN-d3): δ= 149.87, 149.55.
실시예 12. 단량체의 합성
Figure pct00095
(2)의 제조: DMF (390.0 mL) 중 1 (39.2 g, 151.9 mmol)의 용액에 0℃에서 이미다졸 (33.0 g, 485.3 mmol) 및 TBSCl (57.2 g, 379.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (500.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 2 (85.6 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 487.7 [M+H]+.
(3)의 제조: TFA/H2O = 1/1의 혼합물 용매 (400.0 mL) 및 THF (400.0 mL) 중 조 2 (85.6 g)의 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 진한 NH3*H2O를 pH = 7까지 첨가한 다음, EA (500.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (36.6 g, 98.4 mmol, 2 단계에 걸쳐 64.7%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 372.5 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.36 (d, J = 1 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 5 Hz, 1H), 5.67-5.65 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.30 (t, J = 5 Hz, 1H), 3.85-3.83 (m, 2H), 3.68-3.52 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
(4)의 제조: 건조 DCM (200.0 mL) 및 DMF (50.0 mL) 중 3 (36.6 g, 98.4 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 PDC (73.9 g, 196.7 mmol), tert-부틸 알콜 (188.0 mL) 및 Ac2O (93.0 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE/EA = 4:1 ~ 2:1)에 의해 정제하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 4 (24.3 g, 54.9 mmol, 55.8%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 443.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.30 (d, J = 1 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.67-5.65 (m, 1H), 4.33-4.31 (m, 1H), 4.13 (d, J = 3 Hz, 1H), 3.73-3.70 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 0.77 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
(5)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (145.0 mL) 중 4 (18.0 g, 40.7 mmol)의 용액에 NaBD4 (5.1 g, 122.1 mmol)를 50℃에서 1시간 동안 3회 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, CH3COOD를 사용하여 pH 값을 7로 조정하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (300.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (10.4 g, 27.8 mmol, 68.3%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 375.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.36 (d, J = 1 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 5 Hz, 1H), 5.67-5.65 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.30 (t, J = 5 Hz, 1H), 3.85-3.83 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
(6)의 제조: 피리딘 (100.0 mL) 중 5 (10.4 g, 27.8 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (12.2 g, 36.1 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하고, 반응물을 물로 켄칭하고, EA (200.0 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (13.5 g, 19.9 mmol, 71.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 677.8 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.39 (d, J = 1 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.35-7.21 (m, 9H), 6.90-6.88 (m, 4H), 5.78 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.30-5.27 (m, 1H), 4.33-4.30 (m, 1H ), 3.91 (d, J = 7 Hz, 1H), 3.85-3.83 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.38 (s, 3H), 0.77 (s, 9H), 0.03 (s, 3H), 0.01 (s, 3H).
(7)의 제조: THF (130.0 mL) 중 6 (13.5 g, 19.9 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (19.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (500.0 mL)을 첨가하고, EA (300.0 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (10.9 g, 19.4 mmol, 97.5%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 563.6 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.39 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.36-7.23 (m, 9H), 6.90 (d, J = 8 Hz, 4H), 5.81 (d, J = 3 Hz, 1H), 5.30-5.28 (m, 1H), 5.22 (d, J = 7 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 7 Hz, 1H), 3.81 (t, J = 5 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.41 (s, 3H).
실시예 12 단량체의 제조: DCM (100.0 mL) 중 7 (10.9 g, 19.4 mmol)의 현탁액에 DCI (1.8 g, 15.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (6.1 g, 20.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 물로 2회 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 12 단량체 (12.5 g, 14.5 mmol, 74.7%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 863.6 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.39 (s, 1H), 7.81-7.55 (m, 1H), 7.40-7.22 (m, 9H), 6.92-6.87 (m, 4H), 5.83-5.80 (m, 1H), 5.32-5.25 (m, 1H), 4.46-4.34 (m, 1H), 4.10-3.98 (m, 2H), 3.84-3.73 (m, 7H), 3.60-3.50 (m, 3H), 3.42, 3.40 (s, 3H), 2.78 (t, J = 6 Hz, 1H), 2.62-2.59 (m, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.17-0.96 (m, 12H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.37, 149.06.
실시예 13. 단량체의 합성
(2)의 제조: DMF (100 mL) 중 1 (13.0 g, 52.8 mmol)의 용액에 0℃에서 이미다졸 (12.6 g, 184.8 mmol) 및 TBSCl (19.8 g, 132.0 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 생성물을 EA (500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 2 (30.6 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 475 [M+H]+. WO2017106710A1
(3)의 제조: TFA/H2O = 1/1 (100 mL) 및 THF (100 mL)의 혼합물 용매 중 조 2 (30.6 g)의 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 진한 NH3*H2O를 pH = 7.5까지 첨가한 다음, 혼합물을 EA (500 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (2 단계에 걸쳐 12.0 g, 33.3 mmol, 65.8%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 361 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.39 (s, J = 1 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 7.88 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.91-5.86 (m, 1H), 5.66-5.62 (m, 1H), 5.21 (t, J = 5.2 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 5.18-5.03 (m, 1H), 4.37-4.29 (m, 1H), 3.87-3.83 (m, 1H), 3.78-3.73 (m, 1H), 3.56-3.51 (m, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). WO2017106710A1.
(4)의 제조: 건조 DCM (60 mL) 및 DMF (15 mL) 중 3 (11.0 g, 30.5 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 PDC (21. g, 61.0 mmol), tert-부틸 알콜 (45 mL) 및 Ac2O (32 mL)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE: EA=4:1~2:1)에 의해 정제하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 4 (9.5 g, 22.0 mmol, 72.3%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 431 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (s, J = 1 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 7.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.02-5.97 (m, 1H), 5.76-5.74 (m, 1H), 5.29-5.14 (m, 1H), 4.59-4.52 (m, 1H), 4.29-4.27 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.12 (s, 6H).
(5)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (80 mL) 중 4 (8.5 g, 19.7 mmol)의 용액에 NaBD4 (2.5 g, 59.1 mmol)를 50℃에서 1시간당 3회 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, CH3COOD를 사용하여 pH 값을 7로 조정하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (3.5 g, 9.7 mmol, 50.3%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 363 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.41 (s, J = 1 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 7.88 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.91-5.86 (m, 1H), 5.66-5.62 (m, 1H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 5.18-5.03 (m, 1H), 4.37-4.29 (m, 1H), 3.87-3.83 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.10 (s, 6H).
(6)의 제조: 피리딘 (35 mL) 중 5 (3.4 g, 9.7 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (3.4 g, 10.1 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (PCT 국제 출원, 2019173602) (5.5 g, 8.3 mmol, 85.3%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 665 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.50 (d, J = 1 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 7.92 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.44-7.27 (m, 9H), 6.96-6.93 (m, 4H), 5.94 (d, J = 20.5 Hz, 1H), 5.39-5.37 (m, 1H), 5.32-5.17 (m, 1H ), 4.60-4.51 (m, 1H ), 4.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 6H), 0.80 (s, 9H), 0.09 (s, 3H), -0.05 (s, 3H).
(7)의 제조: THF (50 mL) 중 6 (5.5 g, 8.3 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (9 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (500 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (300 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (4.1 g, 7.5 mmol, 90.0%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 551 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.42 (s, 1H, D2O로 교환됨), 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.39-7.22 (m, 9H), 6.90-6.88 (m, 4H), 5.83 (d, J = 20.5 Hz, 1H), 5.65 (d, J = 7.0 Hz, 1H, D2O로 교환됨), 5.29 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.18-5.03 (m, 1H), 4.40-4.28 (m, 1H), 4.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H).
실시예 13 단량체의 제조: DCM (40 mL) 중 7 (4.1 g, 7.5 mmol)의 현탁액에 DCI (0.7 g, 6.4 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (2.9 g, 9.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 13 단량체 (5.0 g, 6.6 mmol, 90.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 751 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.43 (s, 1H), 7.85-7.82 (m, 1H), 7.40-7.23 (m, 9H), 6.90-6.85 (m, 4H), 5.94-5.86 (m, 1H), 5.40-5.24 (m, 2H), 4.74-4.49 (m, 1H), 4.12-4.09 (m, 2H), 3.79-3.47 (m, 10H), 2.78-2.59 (m, 2H), 1.14-0.93 (m, 12H) . 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.67, 149.61, 149.32, 149.27.
실시예 14. 단량체의 합성
(4)의 제조: 피리딘 (150 mL) 중 3 (14.3 g, 25.4 mmol, 반응식 2)의 용액에 0℃에서 이미다졸 (4.5 g, 66.6 mmol) 및 TBSCl (6.0 g, 40.0 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 4 (18.0 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 676 [M-H]-.
(5)의 제조: DCM (200 mL) 중 DCA (6%)의 용액 중 조 4 (18.0 g)의 용액에 TES (50 mL)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5-10분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 피리딘을 pH = 7까지 첨가한 다음, 용매를 제거하고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (6.5 g, 17.2 mmol, 2 단계에 대해 67.7%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 376 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.92 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.68-5.63 (m, 1H), 5.20-5.15 (m, 1H), 4.32-4.25 (m, 1H), 3.87-3.80 (m, 2H), 3.69-3.61 (m, 1H), 3.57-3.49 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
(6)의 제조: 건조 DCM (35 mL) 및 DMF (9 mL) 중 5 (6.5 g, 17.2 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 PDC (12.9 g, 34.3 mmol), tert-부틸 알콜 (34 mL) 및 Ac2O (17 mL)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE:EA = 4:1~2:1)에 의해 정제하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (5.5 g, 12.3 mmol, 70.1%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 446 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.29 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.71-5.61 (m, 1H), 4.35-4.28 (m, 1H), 4.12 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.75-3.67 (m, 1H), 1.33 (s, 9H), 0.76 (s, 9H), 0.00 (d, J = 1.6 Hz, 6H).
(7)의 제조: THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (44 mL) 중 6 (5.4 g, 12.1 mmol)의 용액에 NaBD4 (1.5 g, 36.3 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, CH3COOD를 사용하여 pH 값을 7로 조정하였다. 물을 첨가하고, 생성된 혼합물을 EA (500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (2.6 g, 6.8 mmol, 56.1%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 378 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.35 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.69-5.60 (m, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.34-4.20 (m, 1H), 3.88-3.76 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
(8)의 제조: 피리딘 (30 mL) 중 7 (2.6 g, 6.8 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (3.5 g, 10.3 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (4.3 g, 6.3 mmol, 90.1%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 678 [M-H]-; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.39 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42-7.17 (m, 9H), 6.96-6.83 (m, 4H), 5.82-5.69 (m, 2H), 5.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36-4.25 (m, 1H), 3.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.86-3.80 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 0.75 (s, 9H), 0.02 (s, 3H), -0.04 (s, 3H).
(9)의 제조: THF (45 mL) 중 8 (4.3 g, 6.3 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (6 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (200 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (200 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (3.5 g, 6.1 mmol, 90.1%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 678 [M-H]-; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41-7.19 (m, 9H), 6.94-6.85 (m, 4H), 5.81 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.21 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.06-3.90 (m, 2H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.74 (s, 6H).
실시예 14 단량체의 제조: DCM (20 mL) 중 9 (2.1 g, 3.7 mmol)의 현탁액에 DCI (373 mg, 3.1 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.3 g, 4.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 14 단량체 (2.2 g, 3.5 mmol, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 766 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, ACN-d3): δ 9.65-8.86 (m, 1H, D2O로 교환됨), 7.93-7. 68 (m, 1H), 7.52-7.19 (m, 9H), 6.94-6.78 (m, 4H), 5.95-5.77 (m, 1H), 5.31-5.17 (m, 1H), 4.61-4.37 (m, 1H), 4.20-4.07 (m, 1H), 4.01-3.51 (m, 10H), 2.74-2.59 (m, 1H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.27-1.10 (m, 9H), 1.09-0.95 (m, 3H). 31P-NMR (162 MHz, ACN-d3): δ= 149.88, 149.55.
실시예 15. 단량체의 합성
(7)의 제조: ACN (170 mL) 중 6 (17 g, 25.1 mmol, 반응식 3)의 용액에 DMAP (6.13 g, 50.3 mmol) 및 TEA (5.1 g, 50.3 mmol, 7.2 mL)를 첨가한 다음, TPSCl (11.4 g, 37.7 mmol)을 N2 분위기 하에 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 진한 NH3.H2O (27.3 g, 233.7 mmol)를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 농축시켜 조 7 (17.0 g)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
(8)의 제조: 피리딘 (170 mL) 중 7 (17.0 g, 25.1 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 BzCl (4.3 g, 30.1 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (19.0 g, 24.3 mmol, 2 단계에 걸쳐 95.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 780 [M+H]+.
(9)의 제조: THF (190 mL) 중 8 (19.0 g, 24.3 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (24 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.0시간 동안 교반하였다. LC-MS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (500 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (300 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (15.2 g, 23.1 mmol, 95.5%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 666 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.28 (s, 1H), 8.41 (m, 1H), 8.00-7.99 (m, 2H),7.63-7.15 (m, 13H), 6.93-6.89 (m, 4H), 5.87(s, 1H), 5.20(d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.75 (s, 7H), 3.53 (s, 3H).
실시예 15 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 9 (10.0 g, 15.0 mmol)의 현탁액에 DCI (1.5 g, 12.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (5.4 g, 18.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 15 단량체 (11.5 g, 13.5 mmol, 90.7%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 866 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.28 (s, 1H), 8.48-8.41 (m, 1H), 8.00-7.99 (m, 2H),7.63-7.11 (m, 13H), 6.93-6.89 (m, 4H), 5.92(m, 1H), 4.55-4.44 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.80-3.62 (m, 7H), 3.57-3.46 (m, 5H), 3.32 (s, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.62-2.59 (m, 1H), 1.19-0.94 (m, 12H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ= 149.52, 148.82.
실시예 16. 단량체의 합성
(5)의 제조: 건조 ACN (200 mL) 중 4 (18.8 g, 반응식 5)의 용액에 TPSCl (16.8 g, 65.2 mmol) 및 TEA (5.6 g, 65.2 mmol) 및 DMAP (6.8 g, 65.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 5 (22.0 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 677 [M-H]+.
(6)의 제조: 피리딘 (150 mL) 중 5 (22.0 g)의 용액에 빙조 하에 BzCl (6.8 g, 48.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 5가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 조 6 (20.8 g, 26.7 mmol, 2 단계에 걸쳐 82% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 781 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.30 (s, 1H), 8.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00-7.98 (m, 2H), 7.74-7.66(m, 1H), 7.60-7.50(m, 2H), 7.47-7.31(m, 4H), 7.30-7.2(m, 5H), 7.20-7.1(m, 1H), 6.91 (d, J = 7.4 Hz, 4H), 5.91-5.86 (AB, J = 20.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.87-3.78(s, 1H), 3.78-3.70 (m, 6H), 3.62-3.51 (m, 1H), 3.28-3.2 (m, 1H), 2.15-2.05 (m, 3H), 0.73 (s, 9H), 0.00 (m, 6H).
(7)의 제조: THF (210 mL) 중 6 (20.8 g, 26.7 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (32 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (600 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (400 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (12.4 g, 18.6 mmol, 70%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 667 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.03 (m, 1H), 8.51-8.48 (m, 1H), 8.08-7.95 (m, 2H), 7.63-7.54(m, 1H), 7.52-7.19 (m, 9H), 7.16-7.07(m,1H), 6.94-6.89 (m, 3H), 5.95-5.87 (m, 1H), 5.31-5.17 (m, 1H), 4.61-4.37 (m, 1H), 4.20-4.07 (m, 1H), 3.82-3.47 (m, 7H), 2.57-2.42 (m, 2H).
실시예 16 단량체의 제조: DCM (120 mL) 중 7 (12.4 g, 18.6 mmol)의 현탁액에 DCI (1.7 g, 15.8 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (7.3 g, 24.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 16 단량체 (13.6 g, 15.7 mmol, 84.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 867 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.03 (m, 1H), 8.51-8.48 (m, 1H), 8.08-7.95 (m, 2H), 7.63-7.54(m, 1H), 7.52-7.19 (m, 9H), 7.16-7.07(m,1H), 6.94-6.89 (m, 3H), 5.95-5.87 (m, 1H), 5.31-5.17 (m, 1H), 4.61-4.37 (m, 1H), 4.20-4.07 (m, 1H), 3.82-3.47 (m, 10H), 2.74-2.59 (m, 1H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.27-1.10 (m, 9H), 1.09-0.95 (m, 3H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.59, 148.85.
실시예 17. 단량체의 합성
(4)의 제조: 피리딘 (130 mL) 중 3 (13.1 g, 35.2 mmol, 반응식 3)의 용액에 -10~0℃ 하에 MsCl (4.8 g, 42.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH =15:1)는 반응이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 이로써 생성물 4 (14.2 g)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 451 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.43(m, 1H), 7.67-7.65(m, 1H), 5.90-5.80(m, 1H), 5.75-5.64(m, 1H), 4.52-4.21(m, 3H), 4.12-3.90(m, 2H), 3.48-3.21(m, 6H), 0.95-0.78(s, 9H), 0.13-0.03(s, 6H).
(5)의 제조: DMSO (200 mL) 중 4 (14.2 g)의 용액에 실온에서 DMTrSH (19.6 g, 63.2 mmol) 및 테트라메틸구아니딘 (5.1 g, 47.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, PE/EA = 10:1 ~1:1)에 의해 정제하여 5 (14.2 g, 20.6 mmol, 58.5% 수율, 2 단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 689 [M+H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.39(m, 1H), 7.63-7.61(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.1(m, 9H), 6.91-6.81(m, 4H), 5.80-5.70(m, 2H), 4.01-3.91(m, 1H), 3.85-3.78(m, 1H), 3.78-3.65(m, 6H), 3.60-3.51(m, 1H), 3.43-3.2(m, 3H), 2.50-2.32(m, 2H), 0.95-0.77(s, 9H), -0.00-0.02(s, 6H).
(6)의 제조: THF (140 mL) 중 5 (14.2 g, 20.6 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (20 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (10.5 g, 18.2 mmol, 88.5%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 576 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.38(m, 1H), 7.56-7.54(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.1(m, 9H), 6.91-6.81(m, 4H), 5.80-5.70(m, 2H), 4.05-4.00(m, 1H), 3.81-3.79(m, 1H), 3.74(m, 2H), 3.78-3.65(m, 6H), 3.60-3.51(m, 1H), 3.43-3.2(m, 3H), 2.40-2.32(m, 1H).
실시예 17 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 9 (10.5 g, 18.2 mmol)의 현탁액에 DCI (1.7 g, 15.5 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (7.2 g, 23.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 17 단량체 (12.5 g, 16.1 mmol, 88%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 776 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.41(m, 1H), 7.64-7.59(m, 1H), 7.40-7.25(m, 4H), 7.25-7.10(m, 5H), 6.89-6.86(m, 4H), 5.72-5.67(m, 2H), 4.02-4.00(m, 2H), 3.76-3.74(m, 8H), 3.74-3.73(m, 3H), 3.51-3.49(d, J =8 Hz, 1H), 3.33-3.29(m, 1H), 2.77-2.73(m, 1H) , 2.63-2.60 (m, 1H), 2.50-2.47(m, 1H) , 1.12-0.99(m, 12H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 148.92, 148.84.
실시예 18. 단량체의 합성
Figure pct00101
(7)의 제조: ACN (160 mL) 중 6 (16 g, 24.1 mmol, 반응식 4)의 용액에 DMAP (5.9 g, 48.2 mmol) 및 TEA (4.8 g, 48.2 mmol)를 첨가한 다음, TPSCl (10.9 g, 36.1 mmol)을 0℃에서 N2 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 이어서, 진한 NH3.H2O (30 mL)를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 농축시켜 조 7 (16.0 g)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
(8)의 제조: 피리딘 (160 mL) 중 7 (16.0 g, 24.1 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 BzCl (4.1 g, 28.9 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (18.0 g, 23.4 mmol, 97.0%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 768 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.31 (s, 1H), 8.47(d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.65-7.16 (m, 13H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 6.01 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.18-5.04 (dd, 1H), 4.58-4.52 (m, 1H), 4.07 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.75 (s, 6H), 0.73 (s, 9H), 0.05 (s, 3H), -0.06 (s, 3H).
(9)의 제조: THF (180 mL) 중 8 (18.0 g, 23.4 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (23 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (500 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (300 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (13.7 g, 21.1 mmol, 90.5%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 654.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.31 (s, 1H), 8.35(d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.01 (m, 2H), 7.65-7.16 (m, 13H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.94 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.12-4.98 (dd, 1H), 4.51-4.36 (m, 1H), 4.09 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.75 (s, 6H).
실시예 18 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 9 (10.6 g, 16.2 mmol)의 현탁액에 DCI (1.6 g, 13.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (5.8 g, 19.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 18 단량체 (10.5 g, 14.5 mmol, 75.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 854.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.31 (s, 1H), 8.41-8.37(m, 1H), 8.01 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.65-7.16 (m, 13H), 6.92-6.88 (m, 4H), 6.06-5.98 (m, 1H), 5.33-5.15 (m, 1H), 4.78-4.58 (m, 1H), 4.23-4.19 (m, 1H), 3.81-3.73 (m, 6H), 3.60-3.50 (m, 3H), 3.32 (s, 1H), 2.76 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 2.60 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 1.15-0.94 (m, 12H) ; 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 150.23, 150.18, 149.43, 149.38.
실시예 19. 단량체의 합성
Figure pct00102
(9)의 제조: ACN (200 mL) 중 8 (18.8 g, 26.4 mmol, 반응식 5)의 용액에 TPSCl (16.8 g, 55.3 mmol) 및 DMAP (5.6 g, 55.3 mmol) 및 TEA (6.8 g, 55.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 진한 NH4OH (28 mL)로 희석하였다. 혼합물을 물 및 EA로 희석하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 9 (18.5 g)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
(10)의 제조: 피리딘 (200 mL) 중 9 (18.8 g, 27.69 mmol)의 용액에 빙조 하에 BzCl (5.8 g, 41.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 9가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 10 (19.8 g, 25.3 mmol, 91% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 783 [M-H]-; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02-8.00(m,2H), 7.64-7.62(m,1H), 7.60-7.41(m,2H),7.47.41-7.19 (m, 9H), 6.94-6.85 (m, 4H), 5.81 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.21 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.06-3.90 (m, 2H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.74 (s, 6H).
(11)의 제조: THF (190 mL) 중 10 (18.8 g, 26.4 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (28 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (200 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (200 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 11 (17.1 g, 25.6 mmol, 96%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 669 [M-H]-; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02-8.00(m,2H), 7.64-7.62(m,1H), 7.60-7.41(m,2H),7.47.41-7.19 (m, 9H), 6.94-6.85 (m, 4H), 5.81 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.21 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.06-3.90 (m, 2H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.74 (s, 6H).
실시예 19 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 11 (10.8 g, 16.2 mmol)의 현탁액에 DCI (1.5 g, 13.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (5.8 g, 19.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 19 단량체 (11.3 g, 13 mmol, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 868 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.03 (m, 1H), 8.51-8.48 (m, 1H), 8.08-7.95 (m, 2H), 7.63-7.54(m, 1H), 7.52-7.19 (m, 9H), 7.16-7.07(m,1H), 6.94-6.89 (m, 3H), 5.95-5.87 (m, 1H), 5.31-5.17 (m, 1H), 4.61-4.37 (m, 1H), 4.20-4.07 (m, 1H), 3.82-3.47 (m, 10H), 2.74-2.59 (m, 1H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.27-1.10 (m, 9H), 1.09-0.95 (m, 3H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.52, 148.81.
실시예 20. 단량체의 합성
Figure pct00103
(2)의 제조: 피리딘 (1000 mL) 중 1 (100.0 g, 406.5 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (151.2 g, 447.1 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (3000 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 100:1)에 의해 정제하여 2 (210.0 g, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 548.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.43 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.21(m, 9H), 6.92-6.88(m, 4H), 5.89 (d, J = 20.0 Hz, 1H), 5.31-5.29 (m, 1H), 5.19-5.04 (dd, 1H), 4.38-4.31 (m, 1H), 4.02-3.98 (m, 1H), 3.74(s, 6H), 3.30 (d, J = 3.2 Hz, 2H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -199.51.
(3)의 제조: 피리딘 (1000 mL) 중 2 (100.0 g, 182.8 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 MsCl (31.2 g, 274.2 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 조 물질 (114.0 g)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. DMF (2000 mL) 중 조 물질 (114.0 g, 187.8 mmol)의 용액에 K2CO3 (71.5 g, 548.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 30:1)에 의해 정제하여 3 (100.0 g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 531.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.21(m, 9H), 6.89-6.83(m, 4H), 6.14 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.02-5.90 (dd, 1H), 5.87 (d, J = 20.0 Hz, 1H), 5.45 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 3.73(d, J = 1.9 Hz, 6H), 3.30-3.15 (m, 2H), 1.24-1.16 (m, 1H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -204.23.
(4)의 제조: THF (1000 mL) 중 3 (100 g, 187.8 mmol)의 용액에 6 N NaOH (34 mL, 206.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 H2O를 첨가한 다음, 혼합물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 30:1)에 의해 정제하여 4 (90.4 g, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 548.2 [M+H]+; 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -184.58.
(5)의 제조: 피리딘 (1000 mL) 중 4 (90.4 g, 165.2 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 MsCl (61.5 g, 495.6 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA = 1:1)에 의해 정제하여 5 (75.0 g, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 626.2 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.51 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.43-7.23(m, 10H), 6.92-6.88(m, 4H), 6.08 (d, J = 20.0 Hz, 1H), 5.55-5.39 (m, 2H), 4.59 (m, 1H), 3.74(s, 6H), 3.48-3.28 (m, 2H), 3.17 (s, 3H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -187.72.
(6)의 제조: DMF (1500 mL) 중 5 (75.0 g, 120.4 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 110℃에서 KSAc (71.5 g, 548.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반한 후, N2 분위기 하에 KSAc (71.5 g, 548.4 mmol)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA = 1:1)에 의해 정제하여 6 (29.0 g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 605.2 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.95(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38-7.21 (m, 9H), 6.92-6.87 (m, 4H), 5.93 (m, 1H), 5.50-5.36 (dd, 1H), 5.25-5.23 (dd, 1H), 4.54-4.42 (m, 1H), 4.17-4.12 (m, 1H), 3.74 (m, 7H), 3.35-3.22 (m, 2H), 2.39 (s,1H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -181.97.
(7)의 제조: THF /MeOH의 혼합물 용매 (1:1, 200 mL) 중 6 (22 g, 36.3 mmol)의 용액에 1 N NaOMe (70 mL, 72.6 mmol)를 첨가하고, 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 H2O를 첨가한 다음, 혼합물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/3에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (10.5 g, 14.5 mmol, 75.9%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 565.1 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (s, 1H), 7.83(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.23 (m, 9H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.88 (m, 1H), 5.29-5.15 (m, 2H), 3.72 (m, 7H), 3.43 (m, 2H), 2.78 (d, J = 10.6 Hz, 1H).
실시예 20 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 7 (10.5 g, 18.6 mmol)의 현탁액에 DCI (1.8 g, 15.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (6.7 g, 22.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 20 단량체 (10.5 g, 14.5 mmol, 75.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 765.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.40 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 7.90-7.86(m, 1H), 7.41-7.24 (m, 9H), 6.91-6.89 (m, 4H), 5.97 (m, 1H), 5.33-5.10 (m, 2H), 4.18-4.16 (m, 1H), 3.91-3.39 (m, 17H), 2.81 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 2.66 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.33-0.97 (m, 12H) ; 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 164.57, 160.13.
실시예 21. 단량체의 합성
Figure pct00104
(2)의 제조: 피리딘 (1000 mL) 중 1 (100.0 g, 387.5 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (151.2 g, 447.1 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (3000 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 100:1)에 의해 정제하여 2 (200.0 g, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 561 [M+H]+.
(3)의 제조: 피리딘 (730 mL) 중 2 (73.0 g, 130.3 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 MsCl (19.5 g, 169.2 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 조 물질 (80.0 g)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. DMF (1600 mL) 중 조 물질 (80.0 g, 130.3 mmol)의 용액에 K2CO3 (71.5 g, 390.9 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 30:1)에 의해 정제하여 3 (55.0 g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 543. [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.21(m, 9H), 6.89-6.83(m, 4H), 5.96(s, 1H), 5.83 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.46 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.72(s, 6H), 3.44(s, 3H), 3.18-3.12 (m, 2H).
(4)의 제조: THF (550 mL) 중 3 (55 g, 101.8 mmol)의 용액에 6 N NaOH (34 mL, 206.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 H2O를 첨가한 다음, 혼합물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 30:1)에 의해 정제하여 4 (57.4 g, 87%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 561 [M+H]+ .
(5)의 제조: 피리딘 (550 mL) 중 4 (57.4 g, 101.8 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 MsCl (61.5 g, 495.6 mmol)을 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA = 1:1)에 의해 정제하여 5 (57.0 g, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 639 [M+H]+ .
(6)의 제조: DMF (600 mL) 중 5 (57.0 g, 89.2 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 110℃에서 KSAc (71.5 g, 448.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반한 후, N2 분위기 하에 KSAc (71.5 g, 448.4 mmol)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA = 1:1)에 의해 정제하여 6 (29.0 g, 47%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 619.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.41 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.40-7.23 (m, 9H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.82 (s, 1H), 5.10-5.08 (dd, 1H), 4.38-4.34 (m, 1H), 4.08-4.02 (m, 3H), 3.74 (s, 6H), 3.45 (s, 3H),3.25 (m, 2H), 2.37 (s, 3H); ESI-LCMS: m/z 619 [M+H]+ .
(7)의 제조: THF /MeOH의 혼합물 용매 (1:1, 200 mL) 중 6 (22 g, 35.3 mmol)의 용액에 1 N NaOMe (70 mL, 72.6 mmol)를 첨가하고, 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 H2O를 첨가한 다음, 혼합물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/3에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (14.0 g, 70.9%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 576.1 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.38 (s, 1H), 7.90(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.23 (m, 9H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.80 (s, 1H), 5.15-5.13 (dd, 1H), 3.93 (m, 1H),3.87 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.59 (m, 2H), 3.49 (s, 3H),3.39 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 2.40 (d, J = 10.2 Hz, 1H).
실시예 21 단량체의 제조: DCM (100 mL) 중 7 (10.5 g, 18.6 mmol)의 현탁액에 DCI (1.8 g, 15.7 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (6.7 g, 22.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 21 단량체 (10.5 g, 14.5 mmol, 75.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 776.3 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.40 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 8.04-7.96(dd, 1H), 7.43-7.24 (m, 9H), 6.92-6.87 (m, 4H), 5.84 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.91-3.39 (m, 17H), 2.82 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 2.68 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.22-0.97 (m, 12H) ; 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 165.06, 157.59.
실시예 22. 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00105
(2)의 제조: DCM (120 mL) 중 1 (11.2 g, 24.7 mmol)의 용액에, 이미다졸 (4.2 g, 61.9 mmol) 및 TBSCl (5.6 g, 37.1 mmol)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, LCMS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 혼합물에 물 (500 mL)을 첨가하고, DCM (50 mL*2)으로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 2 (16.0 g)를 후속 단계를 위한 오일로서 수득하였다.
(3)의 제조: 2 (16.0 g, 28.4 mmol)의 용액에 실온에서 DCM 중 6% DCA (160 mL) 및 트리에틸실란 (40 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (300 mL)을 첨가하고, 혼합물을 DCM (50 mL*4)으로 추출하고, 유기 상을 Na2SO4에 의해 건조시키고, 감압에 의해 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 10:1에서 1:1)에 의해 정제하여 3 (4.9 g, 65.9% 수율)을 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 263 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.84-4.50(m, 1H), 4.3-4.09(m, 1H), 3.90-3.80(m, 1H), 3.75-3.67(m, 1H), 3.65-3.57(m, 2H), 3.50-3.44(m, 1H), 3.37-3.28(m, 4H), 0.95-0.78(s, 9H), 0.13-0.03(s, 6H).
(4)의 제조: DMSO (33 mL) 중 3 (3.3 g, 12.6 mmol)의 용액에 EDCI (7.2 g, 37.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물에 피리딘 (1.1 g, 13.8 mmol) 및 TFA (788.6 mg, 6.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. TLC (PE/EA = 4:1)는 3이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 이로써 4 (3.23 g)를 후속 단계를 위한 오일로서 수득하였다.
(5)의 제조: 톨루엔 (30 mL) 중 4 (3.3 g, 12.6 mmol)의 용액에 실온에서 POM 에스테르 4a (4a 대해 문헌 [Journal of Medicinal Chemistry, 2018, 61 (3), 734-744] 참조) (7.9 g, 12.6 mmol) 및 KOH (1.3 g, 22.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 8시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 물로 희석하고, EA를 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 91/9에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (5.4 g, 9.5 mmol, 75.9% 수율)를 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 567.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.89-6.77(m, 1H), 6.07-5.96(m, 1H), 5.86-5.55(m, 4H), 4.85 -4.73(m, 1H), 4.36-4.27(m, 1H), 4.05-3.96(m, 1H), 3.95-3.85(m, 1H), 3.73-3.65(m, 1H), 3.44-3.35 (m, 3H), 1.30-1.25(s, 18H), 0.94-0.84(s, 9H), 0.14-0.05(s, 6H). 31P-NMR (162 MHz, CDCl3) δ 18.30, 15.11.
(6)의 제조: HCOOH (30 mL) /H2O (30 mL) = 1:1 중 5 (5.4 g, 9.5 mmol)의 용액에 실온에서. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 pH = 7.5가 될 때까지 진한 NH4OH로 희석하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 45분 내에 CH3CN/H2O (0.5% HCOOH) = 30/70에서 CH3CN/H2O (0.5% HCOOH) = 70/30 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% HCOOH) = 59/41에서 수집하였음, 검출기, UV 220 nm. 이로써 6 (2.4 g, 5.7 mmol, 59.4% 수율)을 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 453.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.84-6.68(m, 1H), 6.07-5.90(m, 1H), 5.64- 5.55(m, 4H), 5.32-5.24(m, 1H), 4.23-4.15(m, 1H), 4.00-3.90(m, 1H), 3.89-3.80(m, 1H), 3.78-3.69(m, 2H), 3.37-3.30(s, 3H), 1.30-1.10(s, 18H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 18.14.
실시예 22 단량체의 제조: DCM (21 mL) 중 6 (2.1 g, 4.5 mmol)의 용액에 실온에서 DCI (452.5 mg, 3.8 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.8 g, 5.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 6이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 물로 희석하였다. 생성물을 DCM (30 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 28분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 80/20에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 22 단량체 (2.8 g, 4.3 mmol, 95.2% 수율)를 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 653.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.89-6.77(m, 1H), 6.11-5.96(m, 1H), 5.65-5.50(m, 4H), 4.39-4.34(d, J = 20 Hz, 1H), 4.18-3.95(m, 2H), 3.94-3.48(s, 6H), 3.40-3.28(m, 4H), 2.84-2.75 (m, 2H), 1.26-1.98(s, 30H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 149.018, 148.736, 17.775, 17.508.
실시예 23. 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00106
(2)의 제조: DMF (106 mL) 중 1 (1에 대해 문헌 [Tetrahedron , 2013, 69, 600-606] 참조) (10.60 g, 47.32 mmol)의 용액에 이미다졸 (11.26 g, 165.59 mmol) 및 TBSCl (19.88 g, 132.53 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하고, LCMS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 첨가하고, EA로 추출하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 후속 단계를 위한 2 (20.80 g, 45.94 mmol, 97.19% 수율)를 수득하였다.
(3)의 제조: THF (248 mL) 중 2 (20.80 g, 45.94 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA (124 mL) 및 H2O (124 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. LCMS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (10.00 g, 29.59 mmol, 64.31% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.33-7.18(m, 5H), 4.83-4.80(m, 1H), 4.61-4.59(m, 1H), 4.21-4.19(m, 1H), 3.75-3.74(m, 1H), 3.23(m, 3H), 3.13(m, 3H),2.41-2.40(m, 1H), 0.81(m, 9H), 0.00(m, 6H).
(4)의 제조: DMSO (37 mL) 중 3 (3.70 g, 10.95 mmol)의 용액에 EDCI (6.30 g, 32.84 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 피리딘 (0.95 g, 12.05 mmol) 및 TFA (0.69 g, 6.02 mmol)를 N2 분위기에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 EA에 붓고, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
(5)의 제조: 톨루엔 (100.00 mL) 중 4의 용액에 4a (6.93 g, 10.97 mmol) 및 KOH (1.11 g, 19.78 mmol)를 첨가하였다. 이것을 N2 분위기 하에 40℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS는 4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, EA로 추출하고, 물 및 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (4.30 g, 6.70 mmol, 61.17% 수율)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.27-7.26(m, 4H), 7.17(m, 1H), 6.94-6.82(m, 1H), 6.13-6.02(m, 1H), 5.63-5.56(m, 4H), 4.90-4.89(m, 1H), 4.45-4.41(m, 1H), 3.98-3.95(m, 1H), 3.39-3.29(m, 4H), 1.90(m, 1H), 1.12-0.83(m, 29H), 0.00(m, 7H); 31P-NMR (162 MHz, CDCl3): δ 18.021, 14.472.
(6)의 제조: THF (43.00 mL) 중 5 (4.30 g, 6.70 mmol)의 용액에 HCOOH (100 mL) 및 H2O (100 mL)를 첨가하였다. 이를 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. NH4OH를 여기에 붓고, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (2.10 g, 3.98 mmol, 59.32% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.40-7.28(m, 5H), 7.11-7.00(m, 1H), 6.19-6.14(m, 1H), 5.71-5.68(m, 4H), 4.95-4.94(m, 1H), 4.48-4.47(m, 1H), 4.05-4.03(m, 1H), 3.62-3.61(m, 1H), 3.46(m, 3H), 3.00-2.99(m, 1H), 1.22(m, 18H); 31P-NMR (162 MHz, CDCl3): δ 18.134.
실시예 23 단량체의 제조: DCM (21 mL) 중 6 (2.10 g, 3.98 mmol)의 용액에 DCI (410 mg, 3.47 mmol)를 첨가하였다. CEP (1.40 g, 4.65 mmol)를 N2 분위기에서 첨가하였다. LCMS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. DCM 및 H2O를 붓고, 유기 상을 물 및 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 40℃에서 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 23 단량체 (2.10 g, 2.88 mmol)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.39-7.32(m, 6H), 6.21-6.11(m, 1H), 5.64-5.61(m, 4H), 4.91-4.85(m, 1H), 4.59(m, 1H), 4.28-4.25(m, 1H), 3.84-3.60(m, 5H), 3.36-3.36(m, 2H), 2.83-2.79(m, 2H), 1.18-1.14(m, 29H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.588, 148.920, 17.355, 17.010.
실시예 24. 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00107
(2)의 제조: DMF (60.00 mL) 중 1 (5.90 g, 21.50 mmol)의 용액에 이미다졸 (4.39 g, 64.51 mmol) 및 TBSCl (7.63 g, 49.56 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하고, LCMS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 첨가하고, EA로 추출하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 후속 단계를 위한 2 (11.00 g, 21.91 mmol, 98.19% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 225.1 [M+H]+.
(3)의 제조: THF (55.00 mL) 중 2 (11.00 g, 21.91 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA (110.00 mL) 및 H2O (55.00 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. LCMS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (6.20 g, 16.32 mmol, 72.94% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 411.2 [M+H]+.
(4)의 제조: DMSO (35.00 mL) 중 3 (3.50 g, 9.02 mmol)의 용액에 EDCI (5.19 g, 27.06 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 피리딘 (0.78 g, 9.92 mmol) 및 TFA (0.57 g, 4.96 mmol)를 N2 분위기에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 물을 여기에 붓고, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 406.2 [M+H]+.
(5)의 제조: 톨루엔 (100.00 mL) 중 4의 용액에 4a (5.73 g, 9.07 mmol) 및 KOH (916.3 g, 16.33 mmol)를 첨가하였다. 이것을 N2 분위기 하에 40℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 이어서, EA로 추출하고, 물 및 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (5.02 g, 7.25 mmol, 80.44% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 693.2 [M+H]+; 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 17.811
(6)의 제조: THF (46.00 mL) 중 5 (4.59 g, 6.63 mmol)의 용액에 HCOOH (92.00 mL) 및 H2O (92.00 mL)를 첨가하였다. 이를 실온에서 밤새 교반하였다. NH4OH를 여기에 붓고, EA로 추출하고, 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (2.52 g, 4.36 mmol, 65.80% 수율)을 수득하였다.
실시예 24 단량체의 제조: DCM (21.00 mL) 중 6 (2.00 g, 3.46 mmol)의 용액에 DCI (370.00 mg, 3.11 mmol)를 첨가하고, CEP (1.12 g, 4.15 mmol)를 N2 분위기 하에 첨가하였다. DCM 및 H2O를 붓고, 유기 상을 물 및 포화 NaCl (수성)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과물을 감압 하에 38℃에서 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 24 단량체 (2.10 g, 2.70 mmol, 78.07% 수율)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.39-7.32(m, 6H), 6.21-6.11(m, 1H), 5.64-5.61(m, 4H), 4.91-4.85(m, 1H), 4.59(m, 1H), 4.28-4.25(m, 1H), 3.84-3.60(m, 5H), 3.36-3.36(m, 2H), 2.83-2.79(m, 2H), 1.18-1.14(m, 29H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.588, 148.920, 17.355, 17.010.
실시예 25. 단량체의 합성
Figure pct00108
(2)의 제조: DMF (350 mL) 중 1 (35.0 g, 53.2 mmol)의 용액에 이미다졸 (9.0 g, 133.0 mmol)을 첨가한 다음, TBSCl (12.0 g, 79.8 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 조 2 (41.6 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 772 [M+H]+.
(3)의 제조: 0℃에서 3% DCA (53.1 mmol, 350 mL) 및 Et3SiH (53.1 mmol, 100 mL) 중 2 (41.0 g, 53.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. NaHCO3을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, DCM/MeOH = 100:1~20:1) 하였다. 이로써 3 (20.0 g, 41.7 mmol, 2 단계에 걸쳐 78.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 470 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 6.12-6.07 (dd, J = 15 Hz, 1H), 5.75 (d, J = 5 Hz, 1H), 5.48-5.24 (m, 2H), 4.55-4.49 (m, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.75-3.55 (m, 2H), 2.79-2.76 (m, 1H), 1.12 (d, J = 6 Hz, 6H), 0.88 (s, 9H), 0.11(d, J = 6 Hz, 6H).
(4)의 제조: 건조 DCM (100 mL) 및 DMF (60 mL) 중 3 (20 g, 42.6 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 PDC (20. g, 85.1 mmol), tert-부틸 알콜 (63.1 g, 851.8 mmol) 및 Ac2O (43.4 g, 425.9 mmol)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE:EA = 4:1~2:1)에 의해 정제하여 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 4 (16.0 g, 29.0 mmol, 68.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 540 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (s, 1H), 11.69 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 6.21-6.17 (dd, J = 15 Hz, 1H), 5.63-5.55 (m, 1H), 4.75-4.72 (m, 1H), 4.41 (d, J = 5 Hz, 1H), 2.79-2.76 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.13-1.11 (m, 6H), 0.90 (s, 9H), 0.14(d, J = 2 Hz, 6H).
(5)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (195 mL) 중 4 (16.0 g, 29.6 mmol)의 용액에 NaBD4 (3.4 g, 88.9 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, CH3COOD를 사용하여 pH 값을 7로 조정하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 용액을 감압 하에 백색 고체로서의 조 5 (11.8 g)로 농축시키고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 402 [M+H]+.
(6)의 제조: 피리딘 (50 mL) 중 5 (5.0 g, 12.4 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 iBuCl (2.6 g, 24.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 피리딘 (50 mL) 중 조 물질의 용액에 0℃에서 2 N NaOH (MeOH/H2O=4:1, 15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NH4Cl 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3)=4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (6 g, 10.86 mmol, 87.17% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 472.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 6.12-6.07 (dd, J = 15 Hz, 1H), 5.48-5.24 (m, 2H), 5.22 (s, 1H), 4.55-4.49 (m, 1H), 3.97 (d, J = 5 Hz, 1H), 2.79-2.76 (m, 1H), 1.12 (d, J = 6 Hz, 6H), 0.88 (s, 9H), 0.11(d, J = 6 Hz, 6H).
(7)의 제조: 피리딘 (40 mL) 중 6 (3.8 g, 8.1 mmol)의 용액에 20℃에서 DMTrCl (4.1 g, 12.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 7의 조 생성물 (6 g, 7.6 mmol, 94.3% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 775 [M+H]+.
(8)의 제조: THF (60 mL) 중 7 (6.0 g, 7.75 mmol)의 용액에 TBAF (2.4 g, 9.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (4.0 g, 5.9 mmol, 76.6% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 660 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.34-7.17 (m, 9H), 6.83-6.78 (m, 4H), 6.23-6.18 (m, 1H), 5.66 (d, J = 7 Hz, 1H), 5.48-5.35 (m, 1H), 4.65-4.54 (m, 1H), 3.72 (d, J = 2 Hz, 6H), 2.79-2.73 (m, 1H), 1.19-1.06 (m, 6H).
실시예 25 단량체의 제조: DCM (40 mL) 중 9 (4.0 g, 6.1 mmol)의 용액에 N2 하에 DCI (608 mg, 5.1 mmol) 및 CEP (2.2 g, 7.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 25 단량체 (5.1 g, 5.81 mmol, 95.8% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 860 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.34-7.17 (m, 9H), 6.83-6.78 (m, 4H), 6.23-6.18 (m, 1H), 5.67-5.54 (m, 1H), 4.70-4.67 (m, 1H), 4.23-4.20 (m, 1H), 3.72 (m, 6H), 3.60-3.48 (m, 3H), 2.79-2.58 (m, 3H), 1.13-0.94 (m, 18H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 150.31, 150.26, 140.62, 149.57.
실시예 26: 단량체의 합성
Figure pct00109
(2)의 제조: DMF (350 mL) 중 1 (35 g, 130.2 mmol)의 용액에 0℃에서 이미다졸 (26.5 g, 390.0 mmol), 및 이어서 TBSCl (48.7 g, 325.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 조 2 (64.6 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 498 [M+H]+.
(3)의 제조: THF (300 mL) 중 2 (64.6 g, 130.2 mmol)의 용액에 TFA/H2O (1:1, 300 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. NaHCO3을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, DCM: MEOH = 100:1~20:1)에 의해 정제하였다. 이로써 3 (31.3 g, 81.7 mmol, 2 단계에 걸쳐 62.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 384 [M+H]+.
(4)의 제조: ACN/H2O (1:1, 350 mL) 중 3 (31.3 g, 81.7 mmol)의 용액에 DAIB (78.0 g, 244.0 mmol) 및 Tempo (3.8 g, 24.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하여 4 (22.5 g, 55.5 mmol, 70.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 398 [M+H]+.
(5)의 제조: 얼음/MeOH 조를 사용하여 -15℃에서 유지된 MeOH (225 mL) 중 4 (22.5 g, 55.5 mmol)의 용액에 SOCl2 (7.6 mL, 94.5 mmol)를 반응 온도가 7℃를 초과하지 않는 속도로 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 냉각을 제거하고, 반응물을 실온에서 교반되도록 하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 조 5 (23.0 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 298 [M+H]+.
(6)의 제조: DMF (220 mL) 중 5 (23 g, 55.5 mmol)의 용액에 0℃에서 이미다졸 (11.6 g, 165.0 mmol), 및 이어서 TBSCl (12.3 g, 82.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, DCM: MEOH = 100:1~20:1)에 의해 정제하였다. 이로써 6 (21.3 g, 51.1 mmol, 2 단계에 걸쳐 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 412 [M+H]+.
(7)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (260.5 mL) 중 6 (21.0 g, 51.0 mmol)의 용액에 NaBD4 (6.4 g, 153.1 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 CH3COOD를 pH = 7까지 첨가하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 386 [M+H]+.
(8)의 제조: 피리딘 (50 mL) 중 7 (14.0 g, 35 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 BzCl (17.2 g, 122.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. TLC는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. 이어서, 피리딘 (300 mL) 중 조 물질의 용액에 0℃에서 2 M NaOH (MeOH: H2O=4:1, 60 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NH4Cl 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (14 g, 28.02 mmol, 69.21% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 490 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.24 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.71 (m, 1H), 8.04 (d, J = 7 Hz, 2H),7.66-7.10 (m, 5H), 6.40-6.35 (dd, 1H), 5.71-5.56 (m, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.79-4.72 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.14 (m, 6H).
(9)의 제조: 피리딘 (50 mL) 중 8 (5.1 g, 10.4 mmol)의 용액에 DMTrCl (5.3 g, 15.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 792 [M+H]+.
(10)의 제조: THF (80 mL) 중 9 (7.9 g, 10.0 mmol)의 용액에 THF 중 1 M TBAF (12 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 10을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 678 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.25 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.04 (d, J = 7 Hz, 2H),7.66-7.53 (m, 3H), 7.33-7.15 (m, 9H), 6.82-6.78 (m, 4H), 6.43 (d, J = 20 Hz,1H), 5.76-5.60 (m, 1H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.13 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.71 (m, 6H).
실시예 26 단량체의 제조: DCM (60 mL) 중 10 (6.2 g, 9.1 mmol)의 용액에 N2 하에 DCI (1.1 g, 9.4 mmol) 및 CEP (3.3 g, 10.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 26 단량체 (7.5 g, 8.3 mmol, 90.7%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 878 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.25 (s, 1H), 8.68-8.65 (dd, 2H), 8.04 (m, 2H),7.66-7.53 (m, 3H), 7.33-7.15 (m, 9H), 6.82-6.78 (m, 4H), 6.53-6.43 (m, 1H), 5.96-5.81 (m, 1H), 5.36-5.15 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 3.86-3.52 (m, 10H), 2.79-2.61 (m, 2H), 1.21-0.99 (m, 12H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.60, 149.56, 149.48.
실시예 27. 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00110
(2)의 제조: 건조 피리딘 (200.0 mL) 중 1 (20.0 g, 71.2 mmol)의 용액에 TBSCl (26.8 g, 177.9 mmol) 및 이미다졸 (15.6 g, 227.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 DCM (300.0 mL)으로 켄칭하였다. DCM 층을 H2O (100.0 mL*2) 및 염수로 세척하였다. DCM 층을 농축시켜 조 2 (45.8 g)를 황색 오일로서 수득하였다. 조 물질을 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS m/z 510.5 [M+H]+.
(3)의 제조: THF (300.0 mL) 중 2 (45.8 g)의 혼합물 용액에 H2O (100.0 mL) 및 TFA (100.0 mL)의 혼합물을 0℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물 pH를 NH3.H2O (100 mL)를 사용하여 7-8로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 EA (500.0 mL*2)로 추출하였다. 합한 EA 층을 염수로 세척하고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (PE:EA = 5:1 ~ 1:0)에 의해 정제하여 화합물 3 (21.0 g, 53.2 mmol, 74.7% 수율, 2 단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z 396.2 [M+H]+.
(4)의 제조: ACN (100.0 mL) 및 물 (100.0 mL) 중 3 (21.0 g, 53.2 mmol)의 용액에 (디아세톡시아이오도)벤젠 (51.0 g, 159.5 mmol) 및 TEMPO (2.5 g, 15.9 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 결정화 (ACN)에 의해 정제하여 4 (14.5 g, 35.4 mmol, 66.2% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS m/z 410.1[M+H]+.
(5)의 제조: 톨루엔 (90.0 mL) 및 MeOH (60.0 mL) 중 4 (14.5 g, 35.4 mmol)의 용액에 트리메틸실릴디아조메탄 (62.5 mL, 2.0 M, 141.8 mmol)을 0℃에서 첨가한 다음, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 결정화 (ACN)에 의해 정제하여 5 (10.0 g, 23.6 mmol, 66.6% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS m/z 424.2 [M+H]+
(6)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (100.0 mL) 중 5 (10.0 g, 23.6 mmol)의 용액에 NaBD4 (2.98 g, 70.9 mmol)를 40℃에서 1시간 동안 3회 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2.0시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 CH3COOD를 첨가하여 pH = 7.5로 변화시키고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (50.0 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 c.c. (PE/EA = 1:1 ~ 1:0)에 의해 정제하였다. 이로써 6 (6.1 g, 15.4 mmol, 65.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z 398.1 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.23 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.42-4.41(m, 1H), 4.35-4.32 (m,1H), 3.82 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.14 (s, 3H), 0.78 (s, 9H), 0.00 (d, J = 0.9 Hz, 6H).
(7)의 제조: 피리딘 (60.0 mL) 중 6 (6.1 g, 15.4 mmol)의 용액에 벤조일 클로라이드 (6.5 g, 46.2 mmol)를 5℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고, H2O (20.0 mL)로 켄칭하고, EA (200.0 mL*2)로 추출하고, EA 층을 합하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질 (12.0 g)을 수득하고, 이를 피리딘 (60.0 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 20.0 mL NaOH (메탄올 중 2 M: H2O = 4: 1)를 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 반응물을 염화암모늄의 포화 용액에 의해 켄칭하고, 수성 층을 EA (200.0 mL*2)로 추출하고, EA 층을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 c.c. (PE/EA = 10:1 ~ 1:1)에 의해 정제하여 7 (7.0 g, 13.9 mmol, 90.2% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS m/z 502.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 11.24 (s, 1H, D2O로 교환됨) 8.77 (s, 2H), 8.04-8.06 (m, 2H), 7.64-7.66 (m, 2H), 7.54-7.58 (m, 2H), 6.14-6.16 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.20-5.23 (m, 1H),4.58-4.60 (m, 1H), 4.52-4.55 (m,1H), 3.99-4.01 (m, 1H), 3.34 (s, 4H), 0.93 (s, 9H), 0.14-0.15 (d, J = 1.44 Hz, 6H).
(8)의 제조: DMSO (55.0 mL) 중 7 (5.5 g, 10.9 mmol)의 교반 용액에 EDCI (6.3 g, 32.9 mmol), 피리딘 (0.9g, 10.9 mmol) 및 TFA (0.6 g,5.5 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA (100.0 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물 8 (4.8 g)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 517.1 [M+H2O]+ .
(9b)의 제조: 건조 ACN (180.0 mL) 중 9a (35.0 g, 150.8 mmol) 및 NaI (90.5 g, 603.4 mmol)의 용액에 클로로메틸 피발레이트 (113.6 g, 754.3 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물에 의해 켄칭한 다음, 혼합물을 EA (500.0 mL *3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염화암모늄의 포화 용액, 및 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 c.c.에 의해 정제하고, 이로써 9b (38.0 g, 60.1 mmol, 39.8% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z 655.2 [M+Na]+; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.74-5.67 (m, 8H), 2.67 (t, J = 21.6 Hz, 2H), 1.23 (s, 36H).
(9)의 제조: 10% Pd/C 3.8 g을 무수 THF (30.0 mL)로 3회 세척하였다. 이어서, 9b (38.0 g, 60.1 mmol) 및 용매 (건조 THF:D2O=5:1, 400.0 mL)를 채운 둥근 바닥 플라스크에 옮기고, 혼합물을 1 L H2풍선 하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EA (500.0 mL *3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 백색 고체로서의 잔류물 9 (3.0 g, 3.7 mmol, 38.8% 수율)를 추가 정제 없이 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS m/z 657.2 [M+Na]+; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.74-5.67 (m, 8H), 1.23 (s, 36H).
(10)의 제조: 건조 THF (60.0 mL) 및 D2O (20.0 mL) 중 8 (4.8 g, 9.6 mmol), 9 (7.3 g, 11.5 mmol) 및 K2CO3 (4.0 g, 38.8 mmol)의 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. LC-MS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 EA (300.0 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 c.c. (PE/EA = 5:1 ~ 1:1) 및 MPLC에 의해 정제하였다. 이로써 10 (3.0 g, 3.7 mmol, 38.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z 806.4[M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.25 (s, 1H, D2O로 교환됨) 8.75 (s, 2H), 8.07-8.05 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.67-7.54 (m, 3H), 6.05 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.65-5.58 (m, 4H), 4.80-4.70 (m, 2H), 4.59-4.57 (m,1H), 3.36 (s, 3H), 1.11 (s, 9H), 1.10 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.17-0.16 (m, 6H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 17.02.
(11)의 제조: 둥근 바닥 플라스크에 H2O (30.0 mL), HCOOH (30.0 mL)의 혼합물 중 10 (3.0 g, 3.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 15시간 동안 교반하였다. LC-MS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 진한 NH3.H2O (100.0 mL)를 사용하여 pH = 6-7로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 DCM (100.0 mL*3)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여과물을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/2에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물 11 (1.8 g, 2.6 mmol, 70.3% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS m/z = 692.2[M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.11 (s, 1H, D2O로 교환됨) 8.71-8.75 (d, J=14.4, 2H), 8.04-8.06 (m, 2H), 7.64-7.65 (m, 1H), 7.54-7.58 (m, 2H), 6.20-6.22 (d, J=5.4, 2H), 5.74-5.75 (d, J=5.72, 2H), 5.56-5.64 (m, 4H), 4.64-4.67 (m, 1H), 4.58-4.59(m, 1H), 4.49-4.52 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 1.09-1.10 (d, J=1.96, 18H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 17.46.
실시예 27 단량체의 제조: DCM (18.0 mL) 중 11 (1.8 g, 2.6 mmol)의 용액에 DCI (276.0 mg, 2.3 mmol)를 첨가한 다음, CEP[N (ipr)2]2 (939.5 mg, 3.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (50.0 mL*2) 및 염수 (50.0 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 9/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물을 농축시켜 실시예 27 단량체 (2.0 g, 2.2 mmol, 86.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z 892.3[M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.27 (s, 1H, D2O로 교환됨) 8.72-8.75 (m, 2H), 8.04-8.06 (m, 2H), 7.54-7.68 (m, 3H), 6.20-6.26 (m, 1H), 5.57-5.64 (m, 4H), 4.70-4.87 (m, 3H), 3.66-3.88 (m, 4H), 3.37-3.41 (m, 3H),2.82-2.86 (m, 2H) , 1.20-1.21 (m, 12H) , 1.08-1.09 (m, 18H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 150.03, 149.19, 17.05, 16.81.
실시예 28. 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00111
(6)의 제조: DMSO (80.0 mL) 중 5 (8.0 g, 21.3 mmol, 반응식 3)의 교반 용액에 실온에서 EDCI (12.2 g, 63.9 mmol), 피리딘 (1.7 g,21.3 mmol), TFA (1.2 g, 10.6 mmol)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA (200.0 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물 6을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 372.3 [M+H]+.
(8)의 제조: 건조 THF (60.0 mL) 및 D2O (20.0 mL) 중 K2CO3 (5.5 g, 8.3 mmol)의 용액에 건조 THF (10.0 mL) 중 6 (8.0 g, 21.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LC-MS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 EA (300.0 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (5.0 g, 7.3 mmol, 40.0%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 679.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, 클로로포름-d): δ 9.91 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.65 - 5.54 (m, 4H), 4.43 (dd, J = 7.2, 3.2 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 7.2, 5.0 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 5.1, 2.7 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 1.13 (s, 18H), 0.82 (s, 9H), 0.01 (d, J = 4.8 Hz, 6H); 31P NMR (162 MHz, 클로로포름-d): δ 16.40.
(9)의 제조: HCOOH (50.0 mL) 및 H2O (50.0 mL)의 용액에 8 (5.0 g, 7.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. LC-MS는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. NaHCO3의 용액 (500.0 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (300.0 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (3.0 g, 5.4 mmol, 73.2%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 565.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.43 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 5.69 - 5.56 (m, 5H), 5.54 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.37 (dd, J = 6.1, 2.9 Hz, 1H), 4.12 (q, J = 6.1 Hz, 1H), 3.96 (dd, J = 5.4, 4.3 Hz, 1H), 3.39 (s, 3H), 1.16 (s, 18H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 17.16.
실시예 28 단량체의 제조: DCM (40.0 mL) 중 9 (2.6 g, 4.6 mmol)의 현탁액에 DCI (0.5 g, 5.6 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.7 g, 5.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.0시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 28 단량체 (3.0 g, 3.9 mmol, 85.2%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 765.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.44 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 8.1, 3.8 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 4.4, 2.5 Hz, 1H), 5.74-5.53 (m, 5H), 4.59-4.33 (m, 2H), 4.20-4.14 (m, 1H), 3.88-3.53 (m, 4H), 3.39 (d, J = 16.2 Hz, 3H), 2.80 (td, J = 5.9, 2.9 Hz,2H), 1.16 (d, J = 1.9 Hz, 30H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 147.68, 149.16, 16.84, 16.55.
실시예 29. 단량체의 합성
Figure pct00112
(2)의 제조: DMF (400 mL) 중 1 (26.7 g*2, 0.1 mol)의 용액에 수소화나트륨 (4.8 g, 0.1 mol)을 30분 동안 첨가한 다음, CD3I (16 g, 0.1mol)를 0℃에서 2.5시간 동안 첨가하였다 (선택적 2'-O-알킬화 반응 조건에 대해 문헌 [J. Org. Chem. 1991, 56, 5846-5859] 참조). 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 투명한 용액을 증발 건조시키고, CH3OH로 증발시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, DCM/MeOH = 50:1~15:1)에 의해 정제하였다. 이로써 생성물 2 (35.5 g, 124.6 mmol, 62% 수율)를 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 285 [M+H]+.
(3)의 제조: 피리딘 (360 mL) 중 2 (35.5 g, 124.6 mmol)의 용액에 이미다졸 (29.7 g, 436.1 mmol) 및 TBSCl (46.9 g, 311.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응물을 물 (500 mL)로 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (1 L)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, PE/EA = 4:1~1:1)에 의해 정제하였다. 이로써 생성물 3 (20.3 g, 39.6 mmol, 31.8% 수율)을 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 513 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.32 (m, 1H), 8.13 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 6.02-6.01(d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.60-4.58 (m, 1H), 4.49-4.47(m,1H), 3.96-3.86 (m, 2H), 3.72-3.68 (m, 1H), 0.91-0.85 (m, 18H), 0.13-0.01 (m, 12H).
(4)의 제조: THF (80 mL) 중 3 (20.3 g, 39.6 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA (20 mL) 및 물 (20 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 진한 NH4OH를 0℃에서 혼합물에 첨가하여 pH = 7.5까지 반응물을 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 PE/EA = 5:1에 의해 세척하였다. 이로써 4 (10.5 g, 26.4 mmol, 66.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 399 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (m, 1H), 8.14 (m, 1H), 7.37 (m, 2H), 5.99-5.97(d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.43 (m, 1H), 4.54-4.44 (m,2H), 3.97-3.94 (m, 1H), 3.70-3.53 (m, 2H), 0.91 (m, 9H), 0.13-0.12 (m, 6H).
(5)의 제조: ACN/H2O = 1:1 (100 mL) 중 4 (10.5 g, 26.4 mmol)의 용액에 DAIB (25.4 g, 79.2 mmol) 및 TEMPO (1.7 g, 7.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 ACN으로 세척하였다. 이로써 5 (6.3 g, 15.3 mmol, 57.9% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 413 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.48 (m, 1H), 8.16 (m, 1H), 7.41 (m, 2H), 6.12-6.10(d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.75-4.73 (m, 1H), 4.42-4.36 (m, 2H), 3.17 (m, 6H), 2.07 (m, 2H), 0.93 (m, 9H), 0.17-0.15 (m, 6H).
(6)의 제조: 톨루엔 (36 mL) 및 메탄올 (24 mL) 중 5 (6.3 g, 15.3 mmol)의 용액에 (트리메틸실릴)디아조메탄 (7.0 g, 61.2 mmol)을 황색이 사라지지 않을 때까지 실온에서 2분 동안 첨가하였다. LCMS는 반응물이 소모되었음을 나타냈다. 용매를 제거하여 경화된 6 (6.0 g)을 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 427 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.45 (m, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.35 (m, 2H), 6.12-6.10(d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.83-4.81 (m, 1H), 4.50-4.46 (m, 1H), 3.73 (m, 3H), 3.31 (m, 1H), 0.93 (m, 9H), 0.15-0.14 (m, 6H).
(7)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (78 mL) 중 6 (6 g)의 용액에 실온에서 NaBD4 (2.3 g, 54.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, CH3COOD를 사용하여 pH 값을 7로 조정하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 7 (5.7 g)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 401 [M+H]+.
(8)의 제조: 빙조 하에 피리딘 (60 mL) 중 7 (5.7 g)의 용액에 BzCl (10.0 g, 71.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 7이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 7/3에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 조 8 (6.2 g, 8.7 mmol, 57% 수율, 2 단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 713 [M+H]+.
(9)의 제조: 피리딘 (70 mL) 중 8 (6.2 g, 8.7 mmol)의 용액에 1 M NaOH (MeOH/H2O = 4/1) (24 mL)를 첨가하였다. LCMS는 8이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물에 pH = 7.5가 될 때까지 포화 NH4Cl을 첨가하였다. 혼합물을 물 및 EA로 희석하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 67/33에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 생성물 10 (4.3 g, 8.5 mmol, 98% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 505 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.23 (m, 1H), 8.77 (m, 2H), 8.06-8.04 (m, 2H), 7.66-7.63 (m, 2H), 7.57-7.53 (m, 3H), 6.16-6.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.17 (m, 1H), 4.60-4.52 (m, 2H), 3.34 (m, 1H), 0.93 (m, 9H), 0.14 (m, 6H).
(10)의 제조: 피리딘 (45 mL) 중 9 (4.3 g, 8.5 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (3.3 g, 9.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =97/3에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 생성물 10 (6.5 g, 8.1 mmol, 95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 807 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.23 (m, 1H), 8.70-8.68 (m, 2H), 8.04-8.02 (m, 2H), 7.66-7.62 (m, 1H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.35-7.26 (m, 2H), 7.25-7.17 (m, 7H), 6.85-6.82 (m, 4H), 6.18-6.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.73-4.70 (m, 1H), 4.61-4.58 (m, 1H), 3.71 (m, 6H), 3.32 (m, 1H), 0.83 (m, 9H), 0.09-0.03 (m, 6H).
(11)의 제조: THF (35 mL) 중 10 (3.5 g, 4.3 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (100 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (100 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 62/38에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 11 (2.7 g, 3.9 mmol, 90.7%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 693 [M+H]+.
실시예 29 단량체의 제조: DCM (30 mL) 중 11 (2.7 g, 3.9 mmol)의 현탁액에 DCI (0.39 g, 3.3 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.4 g, 4.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 73/27에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 29 단량체 (3.3 g, 3.7 mmol, 94.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 893 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.24 (m, 1H), 8.66-8.64 (m, 2H), 8.06-8.03 (m, 2H), 7.65-7.53(m, 3H), 7.42-7.38 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 2H), 7.25-7.19 (m, 7H), 6.86-6.80 (m, 4H), 6.20-6.19 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.78 (m, 2H), 4.22-4.21 (m, 1H), 3.92-3.83 (m, 1H), 3.72 (m, 6H), 3.62-3.57 (m, 3H), 2.81-2.78 (m, 1H), 2.64-2.61 (m, 1H), 1.17-1.04 (m, 12H); 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.51, 149.30.
실시예 30. 단량체의 합성
Figure pct00113
(3)의 제조: 건조 아세토니트릴 (700 mL) 중 1 (70 g, 138.9 mmol)의 용액에 2 (27.0 g, 166.7 mmol), BSA (112.8 g, 555.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -5℃로 냉각시키고, TMSOTf (46.2 g, 208.3 mmol)를 혼합물에 천천히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3을 첨가하고, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE: EA=3:1~1:1)에 의해 정제하여 3 (70 g, 115.3 mmol, 81.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 605 [M-H]+.
(4)의 제조: 메틸암모늄 용액 (1 M, 700 mL) 중 3 (70.0 g, 115.3 mmol)의 용액에, 반응 혼합물을 40℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 EA로부터 결정화하였다. 고체를 여과에 의해 단리시키고, PE로 세척하고, 45℃ 진공 하에 밤새 건조시켜 4 (31.0 g, 105.4 mmol, 91.1%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 295 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO): δ 11.63 (s, 1H) , 8.07-7.99 (m, 1H) , 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72-7.63 (m, 1H), 7.34-7.26 (m, 1H), 6.18 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.24 (s, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.58-4.47 (m, 1H), 4.19-4.10 (m, 1H), 3.85-3.77 (m, 1H), 3.75-3.66 (m, 1H), 3.66-3.57 (m, 1H).
(5)의 제조: 무수 DMF (200 mL) 중 (4) (20.0 g, 68.0 mmol)의 용액에 DPC (18.9 g, 88.0 mmol) 및 NaHCO3 (343 mg, 4 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 150℃에서 35분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물을 tert-부틸 메틸 에테르 (4 L)에 부었다. 고체를 여과에 의해 단리시키고, PE로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 조 5 (21.0 g)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다 (5에 대해 문헌 [Journal of Organic Chemistry, 1989, vol. 33, p. 1219 - 1225] 참조). ESI-LCMS: m/z 275 [M-H]-.
(6)의 제조: 피리딘 (200 mL) 중 5 (조 물질, 21.0 g)의 용액에 AgNO3 (31.0 g, 180.0 mmol) 및 콜리딘 (88.0 g, 720 mmol) 및 TrtCl (41.5 g, 181 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 수득하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (10.0 g, 13.1 mmol, 3 단계에 걸쳐 20% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 761 [M+H]+.
(7)의 제조: THF (100 mL) 중 6 (10.0 g, 13.1 mmol)의 용액에 실온에서 6 N NaOH (30 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. NH4Cl을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 9/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (9.3 g, 11.9 mmol, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 777 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H) , 8.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.88-7.81 (m, 1H), 7.39-7.18 (m, 30H), 7.09-6.99 (m, 30H), 6.92-6.84 (m, 30H), 6.44 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.87 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.37-4.29 (m, 1H), 4.00-3.96 (m, 1H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.22-3.13 (m, 1H), 3.13-3.04 (m, 1H).
(8)의 제조: 건조 DCM (80 mL) 중 7 (8.3 g, 10.7 mmol)의 용액에 0℃에서 피리딘 (5.0 g, 64.2 mmol) 및 DAST (6.9 g, 42.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. NH4Cl을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 검출하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 8 (6.8 g, 8.7 mmol, 81.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 779 [M-H]+; 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -183.05.
(9)의 제조: 무수 ACN (60 ml) 중 8 (5.8 g, 7.5 mmol)의 용액에 TEA (1.5 g, 15.1 mmol), DMAP (1.84 g, 15.1 mmol) 및 TPSCl (4.1 g, 13.6 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물에 NH3.H2O (12 mL)를 첨가하였다. 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 검출하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (5.5 g, 7 mmol, 90.2%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 780 [M+H]+.
(10)의 제조: 질소의 불활성 분위기 하에 DCM (50 mL) 중 9 (5.5 g, 7 mmol)의 용액에 피리딘 (5.6 g, 70.0 mmol) 및 BzCl (1.2 g, 8.5 mmol)을 0℃에서 순서대로 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용액을 DCM (100 mL)으로 희석하고, 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, PE: EA=5:1~2:1)에 의해 정제하여 10 (5.4 g, 6.1 mmol, 90.6%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 884 [M+H]+; 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -183.64.
(11)의 제조: DCM (60 mL) 중 DCA (6%)의 용액 중 10 (5.4 g, 6.1 mmol)의 용액에 TES (15 mL)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5-10분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 NaHCO3을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EA로부터 결정화하였다. 고체를 여과에 의해 단리하고, PE로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 밤새 건조시켜 11 (2.0 g, 5.0 mmol, 83.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 400 [M+H]+.
(12)의 제조: 건조 피리딘 (20 mL) 중 11 (2.0 g, 5.0 mmol)의 용액에 DMTrCl (2.0 g, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 11이 소모되었음을 나타냈고, 물 (200 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (200 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 c.c. (PE: EA = 4:1~1:1)에 의해 정제하여 조 12를 수득하였다. 조 물질을 추가로 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 12 (2.1 g, 3 mmol, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 702 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.63 (s, 1H), 8.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 7.67-7.58 (m, 1H), 7.57-7.49 (m, 2H), 7.49-7.39 (m, 1H), 7.39-7.31 (m, 2H), 7.27-7.09 (m, 7H), 6.82-6.69 (m, 4H), 6.23 (d, J = 26.1 Hz, 1H), 5.59-5.49 (m, 1H), 4.83-4.61 (m, 1H), 4.15-4.01 (m, 1H), 3.74-3.59 (m, 6H), 3.33-3.28 (m, 1H), 3.16-3.05 (m, 1H). 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -191.66.
실시예 30 단량체의 제조: DCM (20 mL) 중 12 (2.1 g, 3.0 mmol)의 현탁액에 DCI (310 mg, 2.6 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.1 g, 3.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 12가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 수득하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 30 단량체 (2.1 g, 2.3 mmol, 80.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 902 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.64 (s, 1H), 8.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.93-7.88 (m, 2H), 7.67-7.58 (m, 1H), 7.56-7.42 (m, 3H), 7.41-7.29 (m, 2H), 7.27-7.08 (m, 7H), 6.82-6.64 (m, 4H), 6.37-6.18 (m, 1H), 6.03-5.72 (m, 1H), 5.26-4.83 (m, 1H), 4.28-4.12 (m, 1H), 3.88-3.72 (m, 1H), 3.71-3.37 (m, 9H), 3.15-3.00 (m, 1H), 2.83-2.75 (m, 1H), 2.66-2.57 (m, 1H), 1.21-0.88 (m, 12H). 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -189.71. 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.48, 149.50, 148.95, 148.88.
실시예 31. 단량체의 합성
Figure pct00114
(2)의 제조: ACN (100 mL) 중 1 (40.0 g, 79.3 mmol), 1a (7.6 g, 80.1 mmol)의 용액에. 이어서, BSA (35.2 g, 174.4 mmol)를 N2 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물을 용액이 투명해질 때까지 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 0℃로 냉각시키고, TMSOTf (18.5 g, 83.2 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 75℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 EA로 희석하고, H2O로 2회 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 540 [M+H]+.
(3)의 제조: 30%CH2NH2/MeOH 용액 (200 mL) 중 2 (37.1 g, 68.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EA로 2회 세척하여 3 (12.5 g, 55.2 mmol) (중간체 3에 대해, 문헌 [Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1996, Vol. 6, No. 4, pp. 373-378,] 참조)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 228 [M+H]+.
(4)의 제조: 피리딘 (125 mL) 중 3 (12.5 g, 55.2 mmol)의 용액에 DMAP (1.3 g, 11.0 mmol), TrtCl (30.7 g, 110.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. TLC는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. H2O를 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시킨 다음, ACN을 첨가하고, 여과하여 4a (17.0 g, 35.4 mmol, 64% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
DMF (200 mL) 중 4a (17.0 g, 35.4 mmol)의 용액에 콜리딘 (5.2 g, 43.5 mmol), TrCl (13.1 g, 47.1 mmol)을 2시간 후에 첨가하고, 이어서 다시 3시간 후에 TrCl (13.1 g, 47.1 mmol), AgNO3 (8.0 g, 47.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. TLC는 4a가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시킨 다음, ACN을 첨가하고, 여과하여 4 (14.2 g, 19.5 mmol, 54% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 712 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.83 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.42-7.20 (m, 30H), 6.18 (d, J = 7 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 8 Hz, 2H), 5.60 (d, J = 7 Hz, 1H), 4.22 (m, 1H), 3.90 (d, J = 5 Hz, 1H), 2.85 (d, J = 10 Hz, 1H), 2.76 (s, 1H), 2.55-2.50 (dd, 1H).
(5)의 제조: DCM (150 mL) 중 4 (14.2 g, 19.9 mmol)의 용액에 DMAP (2.4 g, 19.9 mmol), TEA (4.0 g, 39.9 mmol, 5.6 mL)를 첨가하였다. 이어서, 0℃로 냉각시키고, DCM (150 mL) 중에 용해시킨 TfCl (6.7 g, 39.9 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시켜 5 (16.8 g, 19.9 mmol)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 844 [M+H]+.
(6)의 제조: DMF (200 mL) 중 5 (16.8 g, 19.9 mmol)의 용액에 KOAc (9.7 g, 99.6 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하고, 50℃에서 3시간 동안 교반하고, TLC는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시켜 6a (15.0 g, 18.9 mmol, 90% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. 30% CH3NH2/MeOH 용액 (100 mL) 중 6a (15.0 g, 19.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하고, TLC는 6a가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 cc (DCM 중 0-5% MeOH)에 의해 정제하여 6 (11.6 g, 16.3 mmol, 82% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 712 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.37-7.22 (m, 30H), 6.01 (d, J = 8 Hz, 2H), 5.84 (d, J = 3 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.78-3.70 (m, 3H), 3.10 (t, J = 9 Hz, 1H), 2.53 (d, J = 4 Hz, 6H), 1.77 (s, 6H).
(7)의 제조: DCM (200 mL) 중 6 (11.6 g, 16.32 mmol)의 용액에, DAST (7.9 g, 48.9 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하고, TLC는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 EA로 희석하고, NaHCO3으로 2회 세척하고, 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3)=1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (11.6 g, 13.8 mmol, 84% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 714 [M+H]+.
(8)의 제조: DCM (100 mL) 중 7 (11.6 g, 16.2 mmol)의 용액에 TFA (10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (DCM 중 0~20% MeOH) 및 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =0/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3)=1/3으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =0/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (1.7 g, 7.2 mmol, 45% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 229.9 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.91 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.14 (d, J = 8 Hz, 2H), 5.81-5.76 (m, 2H), 5.28 (t, J = 5 Hz, 1H), 5.13-4.97 (t, J = 4 Hz, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 3.74-3.58 (m, 2H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -206.09.
(9)의 제조: 피리딘 (14 mL) 중 8 (1.4 g, 6.1 mmol)의 용액에 20℃에서 DMTrCl (2.5 g, 7.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 반응물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (2.5 g, 4.6 mmol, 76 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 532.2 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.87-7.84 (m, 2H), 7.40-7.22 (m, 9H), 6.91-6.87(m, 4H), 5.98-5.95 (m, 2H), 5.88-5.77 (m, 2H), 5.16-5.02 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.35 (m, 2H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -202.32.
실시예 31 단량체의 제조: DCM (20 mL) 중 9 (2.2 g, 4.1 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 DCI (415 mg, 3.5 mmol) 및 CEP (1.5 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 31 단량체 (2.6 g, 3.5 mmol, 85% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 732.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.87-7.84 (m, 2H), 7.40-7.22 (m, 9H), 6.91-6.87(m, 4H), 5.98-5.95 (m, 2H), 5.90-5.88 (m, 1H), 5.30-5.17 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 3.78-3.73 (m, 7H), 3.62-3.35 (m, 5H), 2.78 (t, J = 5 Hz, 1H), 2.63 (t, J = 6 Hz, 1H),1.14-0.96 (m, 12H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -200.77, 200.80, 201.62, 201.64. 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 150.31, 150.24, 149.66, 149.60.
실시예 32. 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00115
(8)의 제조: DMSO (135 mL) 중 7 (13.4 g, 35.5 mmol, 반응식 5)의 교반 용액에 실온에서 EDCI (6.3 g, 32.9 mmol) 및 피리딘 (0.9g, 10.9 mmol), TFA (0.6 g, 5.5 mmol)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA (1800 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 유기 상을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물 8 (13.2 g, 35.3 mmol, 99.3% 수율)을 수득하였다. 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z =375 [M+H2O]+
(10)의 제조: 무수 THF (160 mL) 및 D2O (53 mL) 중 8 (13.2 g, 35.3 mmol), 9 (26.8 g, 42.3 mmol, 반응식 18) 및 K2CO3 (19.5 g, 141.0 mmol)의 용액을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 8이 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 EA (2500 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 c.c. (PE: EA = 10:1 ~ 1:2)에 의해 정제하여 생성물 10 (8.1 g, 11.8 mmol, 33.4% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z = 682 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.42 (s, 1H), 7.69-7.71 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.78-5.79 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 5.65-5.67 (m, 1H), 5.59-5.63 (m, 4H), 4.29-4.35 (m, 2H), 3.97-3.99 (m, 1H), 1.15 (s, 18H), 0.87 (s, 9H), 0.07-0.08 (d, J=5.1 Hz, 6H). 31P-NMR (162 MHz, DMS O-d6) δ 16.62.
(11)의 제조: 둥근 바닥 플라스크에 HCOOH (80 mL) 및 H2O (80 mL)의 혼합물 중 10 (7.7 g, 11.1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 진한 NH3.H2O (100 mL)를 사용하여 pH = 7.0으로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 DCM (100 mL*3)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여과물을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/2에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물 11 (5.5 g, 9.6 mmol, 86.1% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z = 568 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6): δ 11.42 (s, 1H, D2O로 교환됨), 7.62-7.64 (d, J=8.1, 1H), 5.81-5.82 (d, J=4.3, 1H), 5.58-5.66 (m, 5H), 5.52-5.53 (d, J=6.6, 1H), 4.34-4.37 (m, 1H), 4.09-4.13 (m, 1H), 3.94-3.96 (t, J=9.7, 1H), 1.15 (s, 18H), 0 (s, 1H). 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 17.16.
실시예 32 단량체의 제조: DCM (40 mL) 중 11 (5.3 g, 9.3 mmol)의 용액에 DCI (1.1 g, 7.9 mmol)를 첨가한 다음, CEP[N (ipr)2]2 (3.4 g, 11.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL*2) 및 염수 (50 mL*1)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물을 농축시켜 실시예 32 단량체 (6.2 g, 8.0 mmol, 85.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z = 768 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.43 (s, 1H), 7.68-7.71 (m, 1H), 5.79-5.81 (m, 1H), 5.58-5.67 (m, 5H), 4.34-4.56 (m, 2H), 4.14-4.17 (m, 1H), 3.54-3.85 (m, 4H), 2.78-2.81 (m, 2H), 1.13-1.17 (m, 30H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.66, 149.16, 16.84, 16.56.
실시예 33. 단량체의 합성
Figure pct00116
(2)의 제조: 무수 DMF (400 ml) 중 1 (20.0 g, 66.4 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (1.9 g, 79.7 mmol)을 30분 동안 첨가한 후, 무수 DCM (40 ml) 중의 CD3I (9.1 g, 79.7 mmol)를 -20℃에서 5.5시간 동안 첨가하였다. LCMS는 반응이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 투명한 용액을 증발 건조시키고, CH3OH로 증발시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, DCM/MeOH = 50:1~10:1)에 의해 정제하였다. 이로써 생성물 2 (7.5 g, 23.5 mmol, 35.5% 수율)를 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 319 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d3): δ = 8.38 (m, 1H), 6.97 (m, 2H), 5.93-5.81 (m, 1H), 5.27-5.26 (d, J= 4 Hz, 1H), 5.13-5.11 (m, 1H), 4.39-4.31 (m, 1H), 4.31-4.25 (m, 1H), 3.96-3.94 (m, 1H), 3.66-3.63 (m, 1H), 3.63-3.56 (m, 1H).
(3)의 제조: 건조 DMF (75 mL) 중 2 (7.5 g, 23.5 mmol)의 용액에 이미다졸 (5.6 g, 82.3 mmol) 및 TBSCl (8.9 g, 58.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응물을 물 (300 mL)로 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 경화된 3 (9.8 g)을 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 547 [M+H]+.
(4)의 제조: THF (40 mL) 중 3 (9.8 g)의 용액에 0℃에서 TFA (10 mL) 및 물 (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 진한 NH4OH를 0℃에서 혼합물에 첨가하여 pH = 7.5까지 반응물을 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 경화된 4 (8.4 g)를 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 433 [M+H]+.
(5)의 제조: DCM/H2O = 2:1 (84 mL) 중 4 (8.4 g)의 용액에 DAIB (18.8 g, 58.4 mmol) 및 TEMPO (0.87 g, 5.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 DCM으로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 이로써 5 (14.4 g)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 447 [M+H]+.
(6)의 제조: 톨루엔 (90 mL) 및 메탄올 (60 mL) 중 5 (14.4 g)의 용액에 2 M TMSCHN2 (8.9 g, 78.1 mmol)를 실온에서 10분 동안 황색이 사라지지 않을 때까지 첨가하였다. LCMS는 5가 소모되었음을 나타냈다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =65/35에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 생성물 6 (3.5 g, 7.6 mmol, 32.3% 수율, 3 단계에 걸침, 70% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 461 [M+H]+.
(7)의 제조: 건조 THF/MeOD/D2O = 10/2/1 (45 mL) 중 6 (3.5 g, 7.6 mmol)의 용액에 NaBD4 (0.96 g, 22.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물에 CH3COOD를 pH = 7까지 첨가하고, 물을 첨가한 후, 생성된 혼합물을 EA (100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 7 (3.3 g)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 435 [M+H]+.
(8)의 제조: 빙조 하에 건조 DCM (30 mL) 중 7 (3.3 g)의 용액에 DCM (6 mL) 중 피리딘 (5.9 g, 74.5 mmol) 및 iBuCl (2.4 g, 22.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 7이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 87/13에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 조 8 (1.6 g, 2.8 mmol, 36.8% 수율, 2 단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 575 [M+H]+.
(9)의 제조: H2O/디옥산 = 1:1 (30 ml) 중 8 (1.6 g, 2.8 mmol)의 용액에 K2CO3 (772.8 mg, 5.6 mmol) 및 DABCO (739.2 mg, 2.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 8이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 9 (1.8 g)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 557 [M+H]+..
(10)의 제조: 피리딘 (20 mL) 중 9 (1.8 g)의 용액에 2 M NaOH (MeOH/H2O = 4/1) (5 mL)를 0℃에서 1시간 동안 첨가하였다. LCMS는 9가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물에 pH = 7.5가 될 때까지 포화 NH4Cl을 첨가하였다. 혼합물을 물 및 EA로 희석하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 이로써 생성물 10 (1.5 g)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 487 [M+H]+.
(11)의 제조: 피리딘 (20 mL) 중 10 (1.5 g)의 교반 용액에 실온에서 DMTrCl (1.1 g, 3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 빙조 냉각 하에, 반응물을 물로 켄칭하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 7/3에서 수집하였음, 검출기, UV 254 nm. 이로써 생성물 11 (1.9 g, 2.4 mmol, 두 단계에 걸쳐 85.7% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 789.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.10 (m, 1H), 11.63 (m, 1H), 8.20 (m, 1H), 7.35 -7.33 (m, 2H), 7.29-7.19 (m, 7H), 6.86-6.83 (m, 4H), 5.89-5.88 (d, J= 4 Hz, 1H), 4.40-4.28 (m, 2H), 3.72 (m, 6H), 2.81-2.76 (m, 1H), 1.13-1.11 (m, 6H), 0.80 (m, 9H), 0.05-0.01(m, 7H).
(12)의 제조: THF (20 mL) 중 11 (1.9 g, 2.4 mmol)의 용액에 1 M TBAF 용액 (3 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물 (100 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (50 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 58/42에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 12 (1.5 g, 2.2 mmol, 91.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 675.3 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.09 (m, 1H), 11.60 (m, 1H), 8.14 (m, 1H), 7.35 -7.27 (m, 2H), 7.25-7.20 (m, 7H), 6.85-6.80 (m, 4H), 5.96-5.94 (d, J= 8 Hz, 1H), 5.26-5.24 (m, 1H), 4.35-4.28 (m, 2H), 3.72 (m, 6H), 3.32 (m, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 1.13-1.11 (m, 6H).
실시예 33 단량체의 제조: DCM (15 mL) 중 11 (1.5 g, 2.2 mmol)의 현탁액에 N2 하에 DCI (220.8 mg, 1.9 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (795.7 mg, 2.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 11이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 33 단량체 (1.6 g, 1.8 mmol, 83% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 875 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (m, 1H), 11.60 (m, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.37 -7.29 (m, 2H), 7.27-7.20 (m, 7H), 6.86-6.81 (m, 4H), 5.94-5.88 (m, 1H), 4.54-4.51 (m, 2H), 4.21-4.20 (m, 1H), 3.73-3.54 (m, 10H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.61-2.58 (m, 1H), 1.19-1.11 (m, 19H). 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ= 149.77, 149.71.
실시예 34. 단량체의 합성
Figure pct00117
(2)의 제조: ACN (500.0 mL) 중 1 (50.0 g, 99.2 mmol) 및 1a (11.3 g, 119.0 mmol)의 용액에. 이어서, BSA (53.2 g, 218.0 mmol)를 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 용액이 투명해질 때까지 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 0℃로 냉각시키고, TMSOTf (26.4 g, 119.0 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 75℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응물을 0℃에서 중탄산나트륨 용액에 의해 켄칭한 다음, 용액을 EA로 희석하고, H2O로 2회 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 조 2 (60.1 g)를 후속 단계에서 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 540.2 [M+H]+.
(3)의 제조: CH3NH2/에탄올 (500.0 mL) 중 2 (60.1 g)의 용액에. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 c.c. (MeOH:DCM = 50:1 ~ 10:1)에 의해 정제하여 3 (22.0 g, 96.9 mmol, 97.3% 수율, 2 단계에 걸침)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 228.0 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.01-7.98 (m, 1H), 7.43-7.38 (m, 1H), 6.37-6.35 (m, 1H), 6.27-6.23 (m, 1H), 6.03 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 5.39 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.11 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.98-3.95 (m, 2H), 3.91-3.88 (m, 1H), 3.74-3.57 (m, 2H).
(4)의 제조: 피리딘 (250.0 mL) 중 3 (22.0 g, 96.9 mmol)의 용액에 TrtCl (30.7 g, 110.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. TLC는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈고, H2O를 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 여과하고, 여과물을 EA로 희석하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시킨 다음, c.c. (PE/EA = 5:1 ~ 0:1)에 의해 정제하여 4 (38.8 g, 82.5 mmol, 85.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 470.1 [M+H]+.
(5)의 제조: DMF (500.0 mL) 중 4 (38.8 g, 82.5 mmol)의 용액에 콜리딘 (10.0 g, 107.3 mmol), TrtCl (27.6 g, 99.1 mmol), 및 이어서 AgNO3 (18.0 g, 105.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. TLC는 4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 여과물을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시킨 다음, c.c. (PE/EA = 5:1 ~ 1:1)에 의해 정제하여 5의 혼합물 (52.3 g, 73.5 mmol, 86.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 711.1 [M+H]+.
(6)의 제조: DCM (500.0 mL) 중 5 (52.3 g, 73.5 mmol)의 용액에 DMAP (8.9 g, 73.5 mmol), TEA (14.9 g, 147.3 mmol, 20.6 mL)를 첨가하고, 0℃로 냉각시키고, DCM (100.0 mL) 중에 용해시킨 TfCl (16.1 g, 95.6 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시켜 조 6 (60.2 g)을 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 844.2 [M+H]+.
(7)의 제조: DMF (500.0 mL) 중 6 (60.2 g)의 용액에 KOAc (36.1 g, 367.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하고, 50℃에서 3시간 동안 교반하고, TLC는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 여과하고, 용액을 EA로 희석하였다. 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 c.c. (PE/EA = 5:1 ~ 1:1)에 의해 정제하여 7 (28.0 g, 39.3 mmol, 53.5% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 710.2 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.25 (m, 33H), 6.34-6.31 (m, 2H), 6.13-6.10 (m, 1H), 5.08 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.12 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 2.72-2.69 (m, 1H).
(8)의 제조: DCM (300.0 mL) 중 7 (28.0 g, 39.3 mmol)의 용액에 DAST (31.6 g, 196.6 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하고, TLC는 7이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 EA로 희석하고, NaHCO3으로 2회 세척하고, 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 c.c. (PE/EA = 5:1 ~ 3:1)에 의해 정제하여 8 (5.0 g, 7.0 mmol, 17.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 748.2 [M+2NH4]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.57-7.18 (m, 35H), 6.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 19.5 Hz, 1H), 5.92-5.88 (m, 1H), 4.22-4.17 (m, 2H), 3.94 (s, 0.5H), 3.80 (s, 0.5H), 3.35-3.31 (m, 1H), 3.14-3.10 (m, 1H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -193.54.
(9)의 제조: DCM (60.0 mL) 중 8 (5.0 g, 7.0 mmol)의 용액에 DCA (3.6 mL) 및 TES (15.0 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 8이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =0/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/3으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =0/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (1.6 g, 6.9 mmol, 98.5% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 229.9 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.06-8.04 (m, 1H), 7.48-7.43 (m, 1H), 6.39 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.31-6.27 (m, 1H), 6.16-6.11 (m, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.95-4.81 (m, 1H), 4.20-411 (m, 1H), 3.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.84 (d, J =12.4 Hz, 1H), 3.64 (d, J =12.1 Hz, 1H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -201.00.
(10)의 제조: 피리딘 (20.0 mL) 중 9 (1.6 g, 6.9 mmol)의 용액에 DMTrCl (3.5 g, 10.5 mmol)을 20℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. TLC는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 물을 첨가하고, EA로 추출하고, 유기 층을 NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 10 (2.2 g, 4.2 mmol, 60.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 530.1 [M-H]-; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.93-7.91 (m, 1H), 7.47-7.23 (m, 10H), 6.91-6.89 (m, 4H), 6.41 (d, J =8.8 Hz, 1H), 6.13 (d, J =18.8 Hz, 1H), 6.00-5.96 (m, 1H), 5.68 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 4.2 Hz, 0.5H), 4.88 (d, J = 4.2 Hz, 0.5H), 4.42-4.31 (m, 1H), 4.10-4.08 (m, 1H), 3.74 (s, 6H),3.40-3.34 (m, 2H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -199.49.
실시예 34 단량체의 제조: DCM (20.0 mL) 중 10 (2.2 g, 4.2 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 DCI (415 mg, 3.5 mmol) 및 CEP (1.5 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성물을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하였다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 cc (PE/EA = 5:1 ~ 1:1) 및 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3)=1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) =1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 34 단량체 (2.1 g, 3.0 mmol, 73.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI- ESI-LCMS: m/z 732.2 [M+H]+; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.98-7.92 (m, 1H), 7.42-7.24 (m, 10H), 6.91-6.85 (m, 4H), 6.43-6.39 (m, 1H), 6.18-6.11 (m, 1H), 6.01-5.97 (m, 1H), 5.22-5.19 (m, 0.5H), 5.09-5.06 (m, 0.5H), 4.73-4.52 (m, 1H), 4.21-4.19 (m, 1H), 3.79-3.62 (m, 7H), 3.57-3.47 (m, 4H), 3.32-3.28 (m, 1H), 2.75-2.58 (m, 1H), 1.13-0.92 (m, 12H); 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -196.82, -196.84, -197.86, -197.88; 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.88, 149.83, 149.39, 149.35.
실시예 35. 단량체의 합성
Figure pct00118
(2)의 제조: 무수 THF (15 mL) 중 브로모벤젠 (2.1 g, 13.6 mmol)의 용액에 1.6 M n-BuLi (7 mL, 11.8 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 1 (3.0 g, 9.1 mmol, 문헌 [Wang, Guangyi et al , Journal of Medicinal Chemistry, 2016,59(10), 4611-4624])을 THF (15 mL) 중에 용해시키고, -78℃에서 유지하면서 혼합물에 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 포화 수성 NH4Cl에 첨가하고, 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 2 (3.0 g, 7.3 mmol, 80.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 391 [M-OH]-.
(3)의 제조: DCM (40 mL) 중 2 (4.0 g, 9.8 mmol)의 용액에 -78℃에서 TES (1.9 g, 11.7 mmol)를 첨가하고, 혼합물에 BF3.OEt2 (2.1 g, 14.7 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 용액을 포화 수성 NaHCO3에 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 7/3에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (3.1 g, 5.3 mmol, 54.0%)을 투명한 물 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 410 [M+H2O]+ ; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3: δ 7.48-7.25 (m, 15H), 5.24-5.13 (m, 1H), 4.93-4.74 (m, 1H), 4.74-4.46 (m, 4H), 4.37-4.25 (m, 1H), 4.19-4.05 (m, 1H), 4.00-3.80 (m, 1H), 3.77-3.63 (m, 1H). 19F-NMR (376 MHz, CDCl3): δ -196.84.
(4)의 제조: 건조 DCM (20 mL) 중 3 (2.1 g, 5.3 mmol)의 용액에 1 M BCl3 (25 mL, 25.5 mmol)을 -78℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물을 물 (50 mL)에 부었다. 용액을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. MeOH (4 mL) 중 조 물질에 1 M NaOH (15 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5~10분 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액, DCM: MeOH = 40:1~15:1)에 의해 정제하여 4 (1.0 g, 4.7 mmol, 88.6%)를 물 투명한 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 211 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.58-7.19 (m, 5H), 5.41 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.09-5.95 (m, 1H), 5.95-4.84 (m, 1H), 4.82-4.59 (m, 1H), 4.14-3.94 (m, 1H), 3.89-3.80 (m, 1H), 3.78-3.67 (m, 1H), 3.65-3.53 (m, 1H). 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -196.46.
(5)의 제조: 피리딘 (10 mL) 중 4 (1.0 g, 4.7 mmol)의 용액에 DMTrCl (2.0 g, 5.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈고, 물 (100 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (100 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 추가로 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 9/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 5 (2.1 g, 4.1 mmol, 87.0%)를 적색 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 513 [M-H]- ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.56-7.16 (m, 14H), 6.94-9.80 (m, 4H), 5.45 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.21-5.09 (m, 1H), 4.89-4.68 (m, 1H), 4.18-4.03 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.33-3.29 (m, 1H), 3.26-3.17 (m, 1H). 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -194.08.
실시예 35 단량체의 제조: DCM (20 mL) 중 5 (2.1 g, 4.1 mmol)의 현탁액에 DCI (410 mg, 3.4 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.5 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 실시예 35 단량체 (2.1 g, 2.9 mmol, 70.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 715 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.16 (m, 14H), 6.94-9.80 (m, 4H), 5.26-5.12 (m, 1H), 5.06-4.77 (m, 1H), 4.50-4.20 (m, 1H), 4.20-4.10 (m, 1H), 3.83-3.63 (m, 7H), 3.59-3.37 (m, 4H), 3.25-3.13 (m, 1H), 2.80-2.66 (m, 1H), 2.63-2.53 (m, 1H), 1.18-0.78 (m, 12H). 19F-NMR (376 MHz, DMSO-d6): δ -194.40, -194.42, -194.50, -194.53. 31P-NMR (162 MHz, DMSO-d6): δ 149.38, 149.30, 149.02, 148.98.
실시예 36: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00119
(2)의 제조: 1 (15 g, 58.09 mmol) 및 tert-부틸 N-메틸술포닐카르바메이트 (17.01 g, 87.13 mmol)를 THF (250 mL) 중에 용해시키고, PPh3 (30.47 g, 116.18 mmol)을 첨가하고, 이어서 DIAD (23.49 g, 116.18 mmol, 22.59 mL)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH=10/1)에 의해 모니터링 시 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% MeOH/DCM 구배의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 2 (6.9 g, 24.28% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 457.9 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.64 (br s, 1H), 7.64 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J=1.9 Hz, 1H), 5.80 (dd, J=2.2, 8.2 Hz, 1H), 4.19 - 4.01 (m, 3H), 3.90 (dt, J=5.5, 8.2 Hz, 1H), 3.82 - 3.78 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 2.75 (d, J=8.9 Hz, 1H), 1.56 (s, 9H).
(3)의 제조: 2 (6.9 g, 15.85 mmol)를 MeOH (40 mL) 중에 용해시키고, HCl/MeOH의 용액 (4 M, 7.92 mL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~10% MeOH/DCM 구배의 용리액 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 3 (2.7 g, 50.30% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 336.0 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.20 (br s, 1H), 7.52 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.75 (d, J=3.8 Hz, 1H), 5.64 (dd, J=2.0, 8.1 Hz, 1H), 5.60 - 5.52 (m, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 1H), 3.96 - 3.81 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.44 - 3.35 (m, 1H), 3.34 - 3.26 (m, 1H), 2.92 (s, 3H).
(실시예 36 단량체)의 제조: DCM (20 mL) 중 3 (2.14 g, 6.38 mmol)의 용액에 3-비스(디이소프로필아미노)포스파닐옥시프로판니트릴 (2.50 g, 8.30 mmol, 2.63 mL)을 0℃에서 적가하고, 이어서 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (829 mg, 7.02 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 혼합물을 5% NaHCO3 (20 mL)으로 켄칭하고, DCM (20 mL*2)으로 추출하고, 염수 (15 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~10%의 용리액 (상 B: i-PrOH/DCM=1/2)/상 A: 5% TEA 구배를 갖는 DCM @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 36 단량체 (1.73 g, 48.59% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 536.3 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 7.58 - 7.48 (m, 1H), 5.83 - 5.78 (m, 1H), 5.71 - 5.64 (m, 1H), 4.40 - 4.29 (m, 1H), 4.19 - 4.07 (m, 1H), 3.98 (td, J=5.3, 13.3 Hz, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 2H), 3.73 - 3.59 (m, 3H), 3.41 (d, J=14.8 Hz, 4H), 2.92 (br d, J=7.0 Hz, 3H), 2.73 - 2.63 (m, 2H), 1.23 - 1.11 (m, 12H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 149.81, 150.37.
실시예 37: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00120
(2)의 제조: DMF (23 mL) 중 1 (10 g, 27.16 mmol)의 용액에 25℃에서 이미다졸 (3.70 g, 54.33 mmol) 및 TBSCl (8.19 g, 54.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (30 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 2 (13 g, 99.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 482.9 [M+H]+.
(3)의 제조: DMF (200 mL) 중 2 (35.00 g, 72.56 mmol)의 용액에 NaN3 (14.15 g, 217.67 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 17시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고, EA (200 mL* 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3 (31.8 g, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 398.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=11.21 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.57 (d, J=4.5 Hz,1H), 5.46 (dd, J=2.1, 8.0 Hz, 1H), 4.06 (t, J=5.2 Hz, 1H), 3.81 - 3.64 (m, 2H), 3.44 - 3.30 (m, 2H), 2.31 -2.25 (m, 3H), 0.65 (s, 9H), -0.13 (s, 6H).
(4)의 제조: THF (60 mL) 중 3 (7 g, 17.61 mmol)의 용액에 25℃에서 Pd/C (2 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 분위기 (15 PSI) 하에 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 4 (5.4 g, 75.11% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 372.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ =7.93 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.81 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.65 (d, J=8.3 Hz,1H), 4.28 (t, J=4.6 Hz, 1H), 3.88 (t, J=5.3 Hz, 1H), 3.74 (q, J=4.6 Hz,1H), 3.31 (s, 3H), 2.83 - 2.66 (m,2H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
(5)의 제조: DCM (30 mL) 중 4 (3 g, 8.08 mmol)의 용액에 TEA (2.45 g, 24.23 mmol, 3.37 mL)를 첨가하고, 이어서 3-클로로프로판-1-술포닐 클로라이드 (1.50 g, 8.48 mmol, 1.03 mL)를 25℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고, DCM (50 mL * 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL* 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~30% MeOH/DCM의 용리액 @ 50 mL/분)에 의해 정제하여 5 (3.6 g, 84.44% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 512.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ =11.42 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.1 Hz,1H), 7.49 (t, J=6.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.70 - 5.61 (m, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 1H), 3.95 (t, J=5.5Hz, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.73(t, J=6.5 Hz, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.26- 3.12 (m, 4H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.11 (d, J=3.3 Hz, 6H).
(6)의 제조: DMF (45 mL) 중 5 (5 g, 9.76 mmol)의 용액에 DBU (7.43 g, 48.82 mmol, 7.36 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 수득하고, H2O (50 mL)로 희석하고, EA (50 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~80% EA/PE의 용리액 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 6 (4.4 g, 89.06% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 476.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ =11.43 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.82 (d, J=4.8 Hz,1H), 5.67 (dd, J=2.1, 8.1 Hz, 1H), 4.22 (t, J=5.1 Hz, 1H), 3.99 - 3.87 (m, 2H), 3.33 - 3.27 (m, 6H), 3.09 (dd, J=6.6, 14.7 Hz, 1H), 2.26 - 2.16 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.10 (d, J=3.8 Hz, 6H).
(7)의 제조: MeOH (2 mL) 중 6 (200 mg, 420.49 umol)의 용액에 NH4F (311.48 mg, 8.41 mmol, 20 당량)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 4 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% MeOH/DCM의 용리액 @ 20 mL/분)에 의해 정제하여 7 (120 mg, 76.60% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 362.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ =11.37 (br s, 1H), 7.68 (d, J=8.1 Hz,1H), 5.81 (d, J=4.6 Hz, 1H), 5.65 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.02 (q, J=5.6 Hz,1H), 3.95 - 3.83 (m, 2H), 3.34 (s, 9H), 3.09 (dd, J=6.9, 14.6 Hz, 1H), 2.26 - 2.14 (m, 2H).
(실시예 37 단량체)의 제조: CH3CN (12 mL) 중 7 (1.5 g, 4.15 mmol)의 용액에 0℃에서 3-비스(디이소프로필아미노)포스파닐옥시프로판니트릴 (1.63 g, 5.40 mmol, 1.71 mL) 및 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (539.22 mg, 4.57 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 서서히 가온하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 NaHCO3 (20 mL)으로 희석하고, DCM (20 mL * 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0.5% TEA를 갖는 0~85% EA /PE의 용리액 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 37 단량체 (800 mg, 33.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 562.3 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.28 (br s,1H), 7.55 (br dd, J=8.3, 12.8 Hz,1H), 5.86 (br d, J=3.9 Hz, 1H), 5.65(br d, J=8.0 Hz, 1H), 4.33 - 4.06 (m, 2H), 4.00 - 3.89 (m, 1H), 4.08 - 3.86(m, 1H), 3.89 - 3.72 (m, 4H), 3.43 (br d, J=15.1 Hz, 6H), 3.23 - 3.05 (m, 3H), 2.69 (br s, 2H), 2.36 - 2.24 (m, 2H), 1.26 - 1.10 (m, 12H) ； 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 149.94 , 149.88.
실시예 38: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00121
(2)의 제조: CH3CN (1.2 L) 및 Py (60 mL) 중 1 (30 g, 101.07 mmol, 87% 순도)의 용액에 10℃에서 I2 (33.35 g, 131.40 mmol, 26.47 mL) 및 PPh3 (37.11 g, 141.50 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 추가로 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 Na2S2O3 (300 mL) 및 수성 NaHCO3 (300 mL)으로 희석하고, 농축시켜 CH3CN을 제거한 다음, EtOAc (300 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 330 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% 메탄올/디클로로메탄 구배의 용리액 @ 100 mL/분)에 의해 정제하여 2 (28.2 g, 72.00% 수율, 95% 순도)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 369.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.43 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.86 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.46 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.08 - 3.96 (m, 2H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 1H), 3.40 (dd, J=6.9, 10.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H).
(3)의 제조: DMF (90 mL) 중 2의 용액에 이미다졸 (4.25 g, 62.48 mmol) 및 TBSCl (6.96 g, 46.18 mmol)을 15℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (300 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, EtOAc (300 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3 (13.10 g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 483.0 [M+H]+.
(4)의 제조: MeOH (20 mL), H2O (80 mL), 및 디옥산 (20 mL) 중 3 (10 g, 20.73 mmol)의 용액에 Na2SO3 (15.68 g, 124.38 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 수성 층을 EtOAc (80 mL * 2)로 추출하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 MeOH (100*3 mL)로 연화처리하여 4 (9.5 g, 94.48% 수율, 90% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 437.0 [M+H]+.
(5)의 제조: DCM (120 mL) 중 4 (11 g, 21.42 mmol, 85% 순도)의 용액에 DMF (469.65 mg, 6.43 mmol, 494.37 uL)를 0℃에서 첨가하고, 이어서 옥살릴 디클로라이드 (13.59 g, 107.10 mmol, 9.37 mL)를 적가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (60 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 유기 층 5 (0.1125 M, 240 mL DCM)를 후속 단계에서 직접 사용하였다. (이 반응을 2개의 배치에 대해 설정하고 합함) ESI-LCMS: m/z 455.0 [M+H]+.
(6)의 제조: 5 (186.4 mL, DCM 중 0.1125 M)를 DCM (60 mL)으로 희석하고, 메틸아민 (3.26 g, 41.93 mmol, 40% 순도)으로 처리하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~10%, MeOH/DCM 구배 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 AGS-9-3-008 (1.82 g, 18.53% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 472.0 [M+Na]+ ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.08 (s, 1H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.78 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.57 (d, J=3.8 Hz, 1H), 4.61 - 4.48 (m, 1H), 4.41 - 4.27 (m, 2H), 4.13 - 4.03 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 2.78 (d, J=5.2 Hz, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.13 (s, 6H).
(7)의 제조: MeOH (12 mL) 중 6 (2.3 g, 5.12 mmol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 6.39 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0~15%, MeOH/DCM 구배 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 7 (1.4 g, 79.98% 수율)을 분홍색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 336.1 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.12 (s, 1H), 7.39 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.79 (d, J=3.3 Hz, 1H), 5.66 (dd, J=2.1, 8.2 Hz, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.13 (t, J=4.0, 7.4 Hz, 1H), 4.07 - 4.02 (m, 1H), 3.87 (dd, J=3.3, 5.5 Hz, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 2.65 (d, J=4.5 Hz, 3H).
(실시예 38 단량체)의 제조: MeCN (18 mL) 중 7 (1.7 g, 5.07 mmol) 및 4A MS (1.4 g)의 혼합물에 0℃에서 3-비스(디이소프로필아미노)포스파닐옥시프로판니트릴 (1.99 g, 6.59 mmol, 2.09 mL)을 첨가하고, 이어서 0℃에서 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (658.57 mg, 5.58 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (40 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 (20 mL * 2)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 (5% TEA를 함유하는 DCM 중 0%에서 5% i-PrOH)에 의해 정제하여 실시예 38 단량체 (1.30 g, 46.68% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 536.2 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.00 (s, 1H), 7.40 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.85 - 5.76 (m, 1H), 5.64 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.08 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.42 - 4.21 (m, 2H), 4.00 (td, J=4.6, 9.3 Hz, 1H), 3.89 - 3.61 (m, 4H), 3.47 - 3.40 (m, 4H), 3.37 - 3.22 (m, 1H), 2.71 - 2.60 (m, 5H), 1.21 - 1.16 (m, 11H), 1.21 - 1.16 (m, 1H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.07, 149.97
실시예 39: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00122
(2)의 제조: THF (100 mL) 중 1 (13.10 g, 27.16 mmol)의 용액에 DBU (20.67 g, 135.78 mmol, 20.47 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (600 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, EA (600 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50%의 용리액 (상 B: 에틸 아세테이트:디클로로메탄=1:1) / 상 A: 석유 에테르 구배 @ 45 mL/분)에 의해 정제하여 2 (5.9 g, 60.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 355.1 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.61 - 11.30 (m, 1H), 7.76 - 7.51 (m, 1H), 6.04 (d, J=5.4 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.73 - 5.67 (m, 1H), 4.78 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.41 (d, J=1.1 Hz, 1H), 4.30 (t, J=4.8 Hz, 1H), 4.22 (d, J=1.4 Hz, 1H), 4.13 (t, J=5.1 Hz, 1H), 4.06 - 3.97 (m, 1H), 3.94 - 3.89 (m, 1H), 3.82 - 3.75 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.30 (s, 2H), 1.17 (t, J=7.2 Hz, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.16 - 0.09 (m, 6H).
(3)의 제조: DCM (40 mL) 중 2 (4 g, 11.28 mmol)의 용액에 Ru(II)-Pheox (214.12 mg, 338.53 umol)를 1 부분으로 첨가한 다음, 디아조(디메톡시포스포릴)메탄 (2.54 g, 16.93 mmol)을 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 반응물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~4% MeOH/DCM의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 3 (5 g, 86.47% 수율)을 적색 액체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 477.1 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.46 (s, 1H), 7.49 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.01 - 5.87 (m, 1H), 5.75 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, 1H), 4.58 (d, J=3.8 Hz, 1H), 4.23 (dd, J=3.8, 7.8 Hz,1H), 3.80 - 3.68 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 1.65 - 1.46 (m, 2H), 1.28 - 1.16 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.10 (d, J=4.3 Hz, 6H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ = 27.5
(4)의 제조: CH3CN (30 mL) 중 3 (2.8 g, 5.88 mmol) 및 NaI (1.76 g, 11.75 mmol)의 혼합물에 25℃에서 클로로메틸 2,2-디메틸프로파노에이트 (2.21 g, 14.69 mmol, 2.13 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 4 (2.1 g, 51.23% 수율, 97% 순도)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 677.3 [M+H]+.
(5)의 제조: H2O (1.5 mL) 및 HCOOH (741.81 mg, 15.44 mmol, 6 mL) 중 4 (2.09 g, 3.09 mmol)의 혼합물을 15℃에서 40시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (300 mL)에 의해 켄칭하고, EA (300 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 20 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~5% 메탄올/디클로로메탄의 용리액 @ 45 mL/분)에 의해 정제하여 5 (1.51 g, 85.19% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 585.1 [M+Na]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.45 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J=8.2 Hz, 1H), 6.04 (d, J=7.5 Hz,1H), 5.78 -5.51 (m, 6H), 4.39 (t, J=4.4 Hz, 1H), 4.15 (dd, J=4.3, 7.4 Hz, 1H), 4.03 (q, J=7.1 Hz, 1H),1.99 (s, 1H), 1.66 (dd, J=8.6, 10.8 Hz, 1H), 1.55 - 1.29 (m, 2H), 1.18 (d, J=2.0 Hz, 18H).
(실시예 39 단량체)의 제조: MeCN (30 mL) 중 5 (2.5 g, 4.44 mmol)의 용액에 Ar 하에 0℃에서 3-비스(디이소프로필아미노)포스파닐옥시프로판니트릴 (1.74 g, 5.78 mmol, 1.84 mL), 및 이어서 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (577.36 mg, 4.89 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 20℃로 서서히 가온하고, 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (50 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (250 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 용액 (50 mL * 2)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 (0%에서 50% EA /PE, 0.5% TEA 함유)에 의해 정제하여 실시예 39 단량체 (1.85 g, 54.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 785.2 [M+Na]+ ; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.18 (s, 1H), 7.31 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.72 - 5.60 (m, 5H), 4.85 - 4.76 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.93 - 3.64 (m, 4H), 3.41 (d, J=16.6 Hz, 3H), 2.80 - 2.62 (m, 2H), 1.76 - 1.49 (m, 3H), 1.23 - 1.19 (m, 30H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 150.66 (s), 150.30 , 24.77 , 24.66.
실시예 40: 5' 말단 캡 단량체의 합성
Figure pct00123
(2)의 제조: DCM (75 mL) 중 1 (15 g, 137.43 mmol)의 용액에 0℃에서 Boc2O (31.49 g, 144.30 mmol, 33.15 mL) 및 DMAP (839.47 mg, 6.87 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 2 (29.9 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 3.23 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 1.51 (s, 9H).
(3)의 제조: Ar 하에 THF (250 mL) 중 2 (24.9 g, 118.99 mmol)의 용액에 n-BuLi (2.5 M, 47.60 mL)를 -78℃에서 적가하고, -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. P-3 (17.19 g, 118.99 mmol, 12.83 mL)을 0℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (100 mL)에 의해 켄칭한 다음, EA (100 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% 에틸아세테이트/석유 에테르구배의 용리액 @ 65 mL/분)에 의해 정제하여 3 (7.1 g, 18.62% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ESI-LCMS: 339.9 [M+Na]+ ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.12 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 1.51 (s, 9H).
(5)의 제조: DMSO (75 mL) 중 4 (15 g, 40.27 mmol) 및 PPTS (10.12 g, 40.27 mmol)의 혼합물에 20℃에서 EDCI (23.16 g, 120.81 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (150 mL)로 희석하고, EA (150 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (150 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 5 (12 g, 조 물질)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 371.2[M+H]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 9.77 (s, 1H), 7.62 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.83 - 5.76 (m, 2H), 4.53 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.43 (br t, J=4.4 Hz, 1H), 3.95 (br t, J=4.7 Hz, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 5H), 0.92 (s, 9H), 0.13 (d, J=5.8 Hz, 6H).
(6)의 제조: THF (40 mL) 중 P4 (8.02 g, 25.27 mmol)의 용액에 n-BuLi (2.5 M, 8.42 mL)를 Ar 하에 -78℃에서 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. THF (40 mL) 중 4 (7.8 g, 21.05 mmol)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 0℃로 가온되도록 하고, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl 용액 (80 mL)에 의해 켄칭하고, EA (80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (80 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~38% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 7 (7.7 g, 13.43 mmol, 63.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 506.2 [M-tBu]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.97 (s, 1H), 7.25 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.95 - 6.88 (m, 1H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 5.83 - 5.77 (m, 2H), 4.58 (dd, J=4.4, 6.7 Hz, 1H), 4.05 (dd, J=5.0, 7.5 Hz, 1H), 3.82 - 3.77 (m, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (d, J=2.5 Hz, 6H).
(7)의 제조: MeOH (10 mL) 중 6 (7.7 g, 13.71 mmol)의 용액에 20℃에서 HCl/MeOH (4 M, 51.40 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~4% MeOH/DCM의 용리액 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 7 (4.1 g, 86.11% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 369.9 [M+Na]+; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 11.44 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.11 (q, J=4.9 Hz, 1H), 6.69 (dd, J=6.0, 15.1 Hz, 1H), 6.56 - 6.47 (m, 1H), 5.82 (d, J=4.0 Hz, 1H), 5.67 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, 1H), 5.56 (br s, 1H), 4.42 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.13 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.97 (t, J=4.8 Hz, 1H), 3.39 (s, 3H), 2.48 (d, J=5.3 Hz, 3H)
(8)의 제조: THF (25 mL) 중 7 (2.5 g, 7.20 mmol)의 용액에 H2 분위기 하에 Pd/C (2.5 g, 10% 순도)를 첨가하고, 현탁액을 탈기하고, H2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~5% 에틸아세테이트/석유 에테르구배의 용리액 @ 50 mL/분)에 의해 정제하여 8 (2.2 g, 87.49% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 372.1 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.40 (s, 1H), 7.62 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.93 (q, J=4.9 Hz, 1H), 5.76 (d, J=4.5 Hz, 1H), 5.66 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.26 (d, J=6.3 Hz, 1H), 3.97 (q, J=5.9 Hz, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.14 - 3.00 (m, 2H), 2.56 (d, J=5.0 Hz, 3H), 2.07 - 1.87 (m, 2H).
(실시예 40 단량체)의 제조: CH3CN (25 mL) 중 8 (2.2 g, 6.30 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 P-1 (2.47 g, 8.19 mmol, 2.60 mL, 1.3 당량)을 첨가한 다음, 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (818.07 mg, 6.93 mmol, 1.1 당량)을 Ar 하에 0℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (25 mL)에 의해 켄칭하고, DCM (25 mL * 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (25 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 40~85% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 40 단량체 (2.15 g, 61.32% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: 572.2 [M+Na]+ ;1H NMR (400MHz, CD3CN) δ = 9.32 (br s, 1H), 7.39 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.82 - 5.75 (m, 1H), 5.66 (dd, J=0.7, 8.1 Hz, 1H), 5.14 (qd, J=4.9, 9.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.02 (m, 2H), 3.99 - 3.93 (m, 1H), 3.90 - 3.60 (m, 4H), 3.43 (d, J=17.5 Hz, 3H), 3.18 - 3.08 (m, 2H), 2.74 - 2.61 (m, 5H), 2.19 - 2.11 (m, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 1H), 1.19 (ddd, J=2.4, 4.0, 6.6 Hz, 12H).31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 149.77 (s), 149.63 (br s).
실시예 41
2의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 5000-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 우리딘 (150.00 g, 614.24 mmol, 1.00 당량), 피리딘 (2.2 L), TBDPSCl (177.27 g, 644.95 mmol, 1.05 당량)을 넣었다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3 x 1000 mL로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 생성된 혼합물을 0.5 N HCl (수성) 3 x 1L 및 0.5 N NaHCO3 (수성) 2 x 500 mL로 세척하였다. 생성된 혼합물을 H2O 2 x 1 L로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시켰다. 이로써 262 g (조 물질) 2를 수득하였다. LC-MS (m/z) 483.00 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.35 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.64 (m, 4H), 7.52 - 7.40 (m, 6H), 5.80 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.28 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.15 - 4.05 (m, 2H), 4.00 - 3.85 (m, 2H), 3.85 - 3.73 (m, 1H), 1.03 (s, 9H).
3의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 10 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 MeOH (5000 mL) 중 2 (260.00 g, 538.7 mmol, 1.0 당량)의 용액을 넣었다. 후속적으로 H2O (1600 mL) 중 NaIO4 (126.8 g, 592.6 mmol, 1.1 당량)의 용액을 여러 배치로 0℃에서 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃에서 Na2S2O3(포화) 3 L의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3x1 L로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시켰다. 이로써 290 g (조 물질)의 3을 백색 고체로서 수득하였다.
4의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 5 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 3 (290 g, 603.4 mmol, 1.0 당량), EtOH (3L)를 넣었다. 후속적으로 NaBH4 (22.8 g, 603.4 mmol, 1.0 당량)를 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 2000 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3x1000 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시켰다. 이로써 230 g (조 물질)의 4를 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS:m/z 485.10 [M+H]+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.63 - 7.37 (m, 11H), 5.84 (dd, J = 6.4, 4.9 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz, 1H), 5.11 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.78 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 11.4, 5.7 Hz, 1H), 3.60 - 3.52 (m, 5H), 3.18 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 0.96 (s, 9H).
5의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징하고 유지한 5000-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 DCM (1200 mL) 중 4 (120 g, 1 당량)의 용액을 넣었다. 후속적으로 0℃에서 DIEA (95.03 g, 3 당량)를 첨가하였다. 여기에 메탄술폰산 무수물 (129g, 3 당량)을 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 1000 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시켰다. 이로써 160 g (조 물질)의 5를 황색 고체로서 수득하였다. LC-MS (m/z) 641.05[M+H]+.
6의 제조
1 L 둥근 바닥 플라스크에 THF (1600 mL) 중 5 (160.00 g, 1.00 당량)의 용액, DBU (108g, 2.8 당량)를 넣었다. 생성된 용액을 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 3000 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시켰다. 이로써 150 g (조 물질)의 6을 갈색 오일로서 수득하였다. LC-MS:(ES,m/z) :567.25[M+H]+
1 HNMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.55 (m, 4H), 7.55 - 7.35 (m, 6H), 6.05 (dd, J = 5.9, 1.7 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.81 (dd, J = 10.4, 5.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.46 (m, 2H), 4.42 (p, J = 5.2, 4.6 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 10.6, 5.9 Hz, 1H), 3.79 - 3.70 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 0.98 (s, 9H).
7의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 3000-mL 둥근 바닥 플라스크에 6 (150.00 g, 201.950 mmol, 1. 당량), DMF (1300.00 mL), 벤조산칼륨 (44.00 g, 1.0 당량)을 넣었다. 생성된 용액을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 500 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄 3x500 mL로 추출하였다. 생성된 혼합물을 H2O 3 x1000 ml로 세척하였다. 생성된 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 EA/PE (99:1)로 실리카 겔 칼럼 상에 적용하였다. 수집된 분획을 합하고, 농축시켰다. 이로써 40 g의 7을 황색 오일로서 수득하였다. LC-MS: m/z 571.20 [M+H]+ ; 1HNMR:(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 - 7.91 (m, 2H), 7.89 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.74 - 7.51 (m, 7H), 7.51 - 7.31 (m, 6H), 6.16 (m, 1H), 5.76 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 2H), 4.38 (m, 1H), 3.82 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 0.97 (s, 9H)
8b의 제조
2-L 둥근 바닥 플라스크에 7 (30.00 g, 1 당량), MeOH (1.20 L), p-톨루엔술폰산 (4.50 g, 0.5 당량)을 넣었다. 생성된 용액을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 NaHCO3(포화) 3 L의 첨가에 의해 켄칭하였다. 용액의 pH 값을 NaHCO3 (포화)을 사용하여 7로 조정하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x1 L로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, 실리카 겔; 이동상, 30 내에 PE/EA=50/50에서 PE/EA=25/75로 증가; 검출기, 254. 이로써 11.5 g (7 단계에서 3.1% 수율) 8b를 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: m/z 625.15[M+Na]+; 1HNMR:(400 MHz, DMSO-d6) δ 11.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.99 - 7.93 (m, 2H), 7.74 - 7.65 (m, 1H), 7.63 - 7.50 (m, 7H), 7.50 - 7.33 (m, 6H), 6.08 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.43 (m, 1H), 4.03 - 3.96 (m, 1H), 3.70 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.62 - 3.49 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 0.97 (s, 9H).
9의 제조
2-L 둥근 바닥 플라스크에 8b (11.50 g)를 넣었다. MeOH (690.00 mL) 중 상기 7 M NH3 (g)을 30℃에서 도입하였다. 생성된 용액을 30℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, 실리카 겔; 이동상, 60 내에서 PE/EA=60/40에서 PE/EA=1/99로 증가; 검출기, 254. 이로써 8.1 g (97% 수율)의 9를 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS-: m/z 499.35 [M+H]+ ; 1HNMR-: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H), 7.64 - 7.50 (m, 5H), 7.48 - 7.35 (m, 6H), 6.02 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.80 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.58 (m, 7H), 3.27 (s, 3H), 0.96 (s, 9H).
10의 제조
250-mL 둥근 바닥 플라스크에, 9 (8.10 g, 1 당량), 피리딘 (80.0 mL), DMTr-Cl (7.10 g, 1.3당량)을 넣었다. 플라스크를 배기시키고, 아르곤으로 3회 플러싱하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 NaHCO3 (포화) 500 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 2x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, C18; 이동상, 30 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, 254. 이로써 11.5 g (88% 수율)의 10을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: m/z 823.40 [M+Na]+ ; 1HNMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.37 (s, 1H), 7.55 - 7.18 (m, 20H), 6.92 - 6.83 (m, 4H), 6.14 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.74 (m, 7H), 3.57 (m, 4H), 3.25 (m, 5H), 0.84 (s, 9H).
11의 제조
1000-mL 둥근 바닥 플라스크에 10 (11.5 g, 1.00 당량), THF (280.00 mL), TBAF (14.00 mL, 1.00 당량)를 넣었다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물 1 L의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, C18; 이동상, 30 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, 254. 이로써 7.8 g (98% 수율)의 11을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: m/z 561.20 [M-H]- ; 1HNMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.32 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 - 7.39 (m, 2H), 7.39 - 7.20 (m, 7H), 6.96 - 6.83 (m, 4H), 6.17 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.90 - 3.46 (m, 9H), 3.26 (s, 5H), 3.19 - 2.98 (m, 2H).
12의 제조
3-L 둥근 바닥 플라스크에 11 (7.80 g, 1.00 당량), DCM (300.00 mL), NaHCO3 (3.50 g, 3 당량)을 넣었다. 이어서, 0℃에서 교반하면서 데스-마르틴 (7.06 g, 1.2 당량)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 생성된 용액을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물/빙조를 사용하여 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 반응물을 NaHCO3:Na2S2O3=1:1 500 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, C18; 이동상, 30 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, 254. 이로써 5.8 g (75% 수율)의 12를 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: m/z 558.80 [M-H]-; 1HNMR-:(300 MHz, DMSO-d6) δ 11.35 - 11.22 (m, 1H), 9.43 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.19 (m, 8H), 6.90 (m, 5H), 6.00 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.66 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.75 (s, 7H), 3.70 - 3.56 (m, 3H), 3.29 (d, J = 3.7 Hz, 3H).
13의 제조
250-mL 3-둥근 바닥 플라스크에 THF (150.00 mL), NaH (1.07 g, 60wt%, 3.00 당량)를 넣었다. 플라스크를 배기시키고, 아르곤으로 3회 플러싱하고, 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시켰다. 후속적으로 -78℃에서 10분 동안 교반하면서 [[(비스[[(2,2-디메틸프로파노일)옥시]메톡시]포스포릴)메틸([(2,2-디메틸프로파노일)옥시]메톡시)포스포릴]옥시]메틸 2,2-디메틸프로파노에이트 (14.60 g, 2.6 당량, 60 mL THF 중)를 적가하고, 생성된 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 후속적으로 -78℃에서 10분 동안 교반하면서 12 (5.00 g, 1.00 당량, 50 mL THF 중)를 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 NH4Cl (포화) 400 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x400 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, C18; 이동상, 30 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, 254. 이로써 7.2 g (조 물질)의 13을 고체로서 수득하였다. LC-MS: m/z :865.10 [M-H].-
14의 제조
500-mL 둥근 바닥 플라스크에 13 (6.00 g), H2O (30.00 mL), AcOH (120.00 mL)를 넣었다. 생성된 용액을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물/빙조를 사용하여 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 반응물을 NaHCO3 (포화) 2 L의 첨가에 의해 켄칭하였다. 용액의 pH 값을 NaHCO3 (포화)을 사용하여 7로 조정하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x500 mL로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하였다: 칼럼, C18; 이동상, 30 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, 254. 이로써 2.6 g (두 단계에서 44% 수율)의 14를 황색 오일로서 수득하였다. LC-MS: m/z 587.25 [M+Na]+; 1 HNMR:(300 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.63 (ddd, J = 24.2, 17.2, 4.2 Hz, 1H), 6.14 - 5.96 (m, 2H), 5.65 - 5.48 (m, 5H), 5.09 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.17 (s, 1H), 3.65 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 1.15 (d, J = 3.7 Hz, 18H); 31PNMR-:(162 MHz, DMSO-d6) δ 17.96.
15의 제조
250-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 DCM (60.00 mL), DCI (351.00 mg, 1.2 당량), 3-[[비스(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시]프로판니트릴 (971.00 mg, 1.3 당량), 4A MS를 넣었다. 플라스크를 배기시키고, 아르곤으로 3회 플러싱하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 후속적으로 0℃에서 30초 동안 교반하면서 14 (1.40 g, 1.00 당량, 30 mL DCM 중)를 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물 50 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 3x50 mL로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 생성된 혼합물을 NaCl (포화) 3 x50 ml로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건을 사용하여 정제용-아키랄-SFC에 의해 정제하였다: 칼럼: 얼티메이트 디올, 2*25 cm, 5 μm; 이동상 A: CO2, 이동상 B: ACN (0.2% TEA); 유량: 50 mL/분; 구배: 등용매 30% B; 칼럼 온도 (20℃): 35; 배압 (bar): 100; 파장: 254 nm; RT1 (분): 2.58; 샘플 용매: MeOH--HPLC; 주입 부피: 1 mL; 실행 횟수: 4. 이로써 1.31 g (65% 수율)의 15를 황색 오일로서 수득하였다. LC-MS: m/z 763.40 [M-H]- ; 1HNMR-: (300 MHz, 아세토니트릴-d3) δ 9.05 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.64 (dddd, J = 23.8, 17.1, 4.8, 1.9 Hz, 1H), 6.23 - 5.92 (m, 2H), 5.70 - 5.51 (m, 5H), 4.38 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.96 - 3.56 (m, 8H), 3.35 (s, 3H), 2.70 (m, 2H), 1.33 - 1.14 (m, 30H); 31 PNMR-:(아세토니트릴-d3) δ 148.75, 148.53, 16.68.
실시예 42
1의 제조
MeOH (1000 mL) 중 실시예 41로부터의 7 (23 g, 40.300 mmol, 1.00 당량) 및 p-TsOH (9.02 g, 52.390 mmol, 1.3 당량)의 용액을 아르곤 분위기 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 중탄산나트륨 (수성)으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2x500 mL)로 세척하고, 무수MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건을 사용하여 역 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN, 30분 내에 10%에서 90% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 1 (5.3 g, 36.%)을 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS:(ES, m/z): 365 [M+H]+; 1H-NMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.20 (s, 1H), 8.09 - 7.78 (m, 2H), 7.63 - 7.50 (m, 2H), 7.51 - 7.35 (m, 2H), 5.95 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.41(dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 11.9, 6.3 Hz, 1H), 3.69 (dq, J = 10.1, 6.8, 6.3 Hz, 1H), 3.48 - 3.40 (m, 2H), 3.39 - 3.29 (m, 2H), 3.07 (s, 3H).
2의 제조
250-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 1 (7.00 g, 19.212 mmol, 1.00 당량), ACN (60.00 mL), H2O (60.00 mL), TEMPO (0.72 g, 4.611 mmol, 0.24 당량), BAIB (13.61 g, 42.267 mmol, 2.20 당량)를 넣었다. 생성된 용액을 30℃에서 하루 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 200 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 2x200 mL로 추출하고, 생성된 혼합물을 물 2 x200 ml로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하여: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 30분 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, UV 254 nm; 생성물을 수득하였다. 이로써 5 g (68.8%)의 2를 고체로서 수득하였다. LC-MS:(ES, m/z): 379 [M+H]+; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.24 (s, 1H), 11.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.18 - 7.83 (m, 2H), 7.81 - 7.63 (m, 2H), 7.61 - 7.42 (m, 2H), 6.01 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.61 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz,1H), 4.72 - 4.40 (m, 3H), 3.73 - 3.55 (m, 2H), 3.22 (s, 3H).
3의 제조
250-mL 둥근 바닥 플라스크에 2 (4.5g, 11.894 mmol, 1.00 당량), DMF (90.00 mL,), Pb(OAc)4 (15.82 g, 35.679 mmol, 3.00 당량)를 넣었다. 생성된 용액을 30℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 200 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 2x200 mL로 추출하였다. 생성된 혼합물을 물 2 x200 ml로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬에 의해 다음 조건 (인텔플래쉬-1)을 사용하여 정제하여: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 30분 내에 ACN/H2O=5/95에서 ACN/H2O=95/5로 증가; 검출기, UV 254 nm; 생성물을 수득하였다. 이로써 4 g 3을 오일로서 수득하였다; LC-MS:(ES, m/z): 415 [M+Na]+; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 24.2, 7.6 Hz, 2H), 7.75 - 7.46 (m, 4H), 6.35 - 6.03 (m, 2H), 5.71 - 5.47 (m, 1H), 4.60 - 4.14 (m, 2H), 3.88 - 3.54 (m, 2H), 3.26(d, J = 6.7 Hz, 3H), 2.03 (d, J = 49.7 Hz, 3H).
4의 제조
아르곤의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 3 (4.00 g, 10.195 mmol, 1.00 당량), DCM (80.00 mL), 디메틸 히드록시메틸포스포네이트 (22.85 g, 163.114 mmol, 16.00 당량), BF3.Et2O (28.94 g, 203.91 mmol, 20 당량)를 넣었다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음 500 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 2x500 mL로 추출하였다. 생성된 혼합물을 물 2x500 ml로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (20/1)을 사용하여 실리카 겔 칼럼 상에 적용하였다. 이로써 4 2 g (41.5%)을 고체로서 수득하였다.
LC-MS:(ES, m/z): 490 [M+H2O]+; 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.96 (dt, J = 11.5, 9.3 Hz, 2H), 7.81 - 7.40 (m, 4H), 6.29 - 5.98 (m, 1H), 5.56 (dd, J = 12.2, 8.1 Hz, 1H), 5.28 - 4.99 (m, 1H),4.29 (dp, J = 25.1, 5.9 Hz, 2H), 4.16 - 3.84 (m, 2H), 3.75 - 3.53 (m, 7H), 3.28 (d, J = 12.5 Hz, 2H).
5의 제조
100-mL 둥근 바닥 플라스크에 4 (2.00 g, 4.234 mmol, 1.00 당량)를 넣고, THF (20.00 mL) 중 7 M NH3 (g)을 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 sfc 칼럼에 의해 정제하였다: 룩스 5 um i-셀룰로스-5, 3*25 cm, 5 μm; 이동상 A: CO2, 이동상 B: MeOH (0.1% 2 M NH3-MEOH); 유량: 70 mL/분; 구배: 등용매 50% B; 칼럼 온도 (25℃): 35; 배압 (bar): 100; 파장: 220 nm; RT1(분): 3.75; RT2(분): 4.92; 샘플 용매: MeOH:DCM=1:1; 주입 부피: 1 mL; 실행 수: 15, 이로써 330 mg (21.2%)의 5를 고체로서 수득하였다. 1H-NMR-: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.14 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.06 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 3.70 (dd, J = 10.7, 1.2 Hz, 8H), 3.63 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz,1H), 3.29 (s, 3H).
6의 제조
DCM (10 mL) 중 3-{[비스(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시}프로판니트릴 (324.10 mg, 1.075 mmol, 1.2 당량) 및 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (126.99 mg, 1.075 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 25℃에서 5 (330 mg, 0.9 mmol, 1.00 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물/얼음으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2x10 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 칼럼: 얼티메이트 디올, 2*25 cm, 5 μm; 이동상 A: CO2, 이동상 B: ACN; 유량: 50 mL/분; 구배: 등용매 30% B; 칼럼 온도 (25℃): 35; 배압 (bar): 100; 파장: 254 nm; RT1 (분): 3.95; 샘플 용매: ACN; 주입 부피: 1 mL; 실행 수: 10, 이로써 6 (349 mg, 68.4%)을 담황색 오일로서 수득하였다. LC-MS:(ES, m/z): 567.25 [M+H]+; 1H-NMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.38 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 8.0, 1.3 Hz, 1H), 6.09 (dt, J = 5.8, 3.4 Hz, 1H), 5.65 (dd, J = 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.83 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 4.03 (dt, J = 9.7, 2.2 Hz, 2H), 3.83 - 3.40 (m, 14H), 3.30 (s, 3H), 2.77 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.12 (ddd, J = 9.2, 6.7, 1.7 Hz, 12H) ; 31P NMR (DMSO-d6) δ 148.0, 147.6, 23.1
실시예 43
Figure pct00126
1의 제조
100-mL 둥근 바닥 플라스크에 실시예 42로부터의 4 (2.00 g, 4.234 mmol, 1.00 당량)를 넣고, THF (20.00 mL) 중 7 M NH3 (g)을 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 sfc 칼럼에 의해 정제하였다: 룩스 5 um i-셀룰로스-5, 3*25 cm, 5 μm; 이동상 A: CO2, 이동상 B: MeOH (0.1% 2 M NH3-MeOH); 유량: 70 mL/분; 구배: 등용매 50% B; 칼럼 온도 (℃): 35; 배압 (bar): 100; 파장: 220 nm; RT1(분): 3.75; RT2(분): 4.92; 샘플 용매: MeOH:DCM=1:1; 주입 부피: 1 mL; 실행 수: 15, 이로써 320 mg (22.8%)의 1을 고체로서 수득하였다. 1 H-NMR- -14-3-40: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.11 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.03 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.76 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.07 - 3.85 (m, 1H), 3.79 (dd, J = 13.9, 9.3 Hz, 1H), 3.73 - 3.55 (m, 9H), 3.41 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H).
2의 제조
DCM 중 3-{[비스(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시}프로판니트릴 (517.58 mg, 1.717 mmol, 1.2 당량) 및 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (202.79 mg, 1.717 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액/혼합물에 아르곤 분위기 하에 25℃에서 1 (527 mg, 1.431 mmol, 1.00 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물/얼음으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2x10 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 칼럼: 얼티메이트 디올, 2*25 cm, 5 μm; 이동상 A: CO2, 이동상 B: ACN (0.1% DEA)--HPLC--merk; 유량: 50 mL/분; 구배: 등용매 30% B; 칼럼 온도 (℃): 35; 배압 (bar): 100; 파장: 254 nm; RT1(분): 4.57; 샘플 용매: ACN; 주입 부피: 1 mL; 실행 수: 10으로 2 (264.8 mg, 31.7%)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC-MS:(ES, m/z): 567.25 [M-H]-; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.24 (s, 1H), 11.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.18 - 7.83 (m, 2H), 7.81 - 7.63 (m, 2H), 7.61 - 7.42 (m, 2H), 6.01 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.61 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz,1H), 4.72 - 4.40 (m, 3H), 3.73 - 3.55 (m, 2H), 3.22 (s, 3H); 31P NMR (DMSO-d6) δ 148.01, 147.67, 22.8.
실시예 44
Figure pct00127
1의 제조
H2O (1.00 L) 중 아스코르브산 (100.00 g, 567.78 mmol, 1.00 당량) 및 CaCO3 (113.0 g, 1129.02 mmol, 2 당량)의 교반 혼합물에 H2O2(30%) (236.0 g, 6938.3 mmol, 12.22 당량)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 목탄으로 처리하고, 퍼옥시드가 더 이상 검출되지 않을 때까지 70℃로 가열하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 따뜻한 물 (3x300 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 고체를 MeOH (200 mL)로 희석하고, 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (3x80 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 L-트레오네이트 (86 g, 96.6%)를 백색 조 고체로서 수득하였다. 1H-NMR-: (300 MHz, 산화중수소) δ 4.02 (dd, J = 4.6, 2.4 Hz, 1H), 3.91 (ddt, J = 7.6, 5.3, 2.2 Hz, 1H), 3.78 - 3.44 (m, 2H).
2의 제조
5 L 둥근 바닥 플라스크에 실온에서 L-트레오네이트 (70.00 g, 518.150 mmol, 1.00 당량) 및 H2O (2 L)를 첨가하였다. 잔류물을 다우엑스 50wX8,H(+)-형태를 사용하여 pH=1로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 물 (2x1 L)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 고체를 (2x2 L)로 공증발시켰다. 이어서, 고체를 ACN (700.00 mL)으로 희석하고, TsOH (5.35 g, 31.089 mmol, 0.06 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 대기 분위기 하에 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 ACN (2x500 mL)으로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 황색 오일로서의 2 (70g, 조 물질)로 농축시켰다.
3의 제조
피리딘 (280.00 mL) 중 2 (70.0 g 조 물질, 593.2 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 0℃에서 벤조일 클로라이드 (207.62 g, 1.483 mol, 2.5 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성) (500 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2x300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc로 용리시키면서 정제하여 3 (80g, 41.4%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 327 [M+H]+ ; 1H-NMR: (300 MHz, CDCl3) δ 8.18 - 8.04 (m, 4H), 7.68 - 7.61 (m, 2H), 7.50 (tt, J = 7.1, 1.4 Hz, 4H), 5.96 - 5.57 (m, 2H), 5.11 - 5.00 (m, 1H), 4.45 - 4.35 (m, 1H).
4의 제조
THF (1.50 L) 중 3 (125 g, 383.078 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 DIBAL-H (1 M) (600 mL, 2 당량)를 -78℃에서 아르곤 분위기 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 목적 생성물을 LCMS에 의해 검출하였다. 반응물을 0℃에서 MeOH로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (600 mL)로 희석하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc (3x800 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 이로써 4 (73g, 조 물질)를 무색 고체로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 392 [M+Na+ACN]+; 1H-NMR-: (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.22 - 7.99 (m, 8H), 7.62 (dtd, J = 7.4, 4.4, 2.2 Hz, 4H), 7.48 (td, J = 7.8, 2.4 Hz, 8H), 5.87 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 5.77 (dt, J = 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.56 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 5.50 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.63 (ddd, J = 10.4, 7.9, 6.1 Hz, 2H), 4.28 (dd, J = 10.3, 3.8 Hz, 1H), 3.99 (dd, J = 10.6, 3.2 Hz, 1H).
5의 제조
DCM (365.00 mL) 중 (4) (73.00 g, 222.344 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP (271.63 mg, 2.223 mmol, 0.01 당량) 및 피리딘 (365.00 mL)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 0℃에서 Ac2O (24.97 g, 244.6 mmol, 1.1 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 CuSO4 (3x200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc로 용리시키면서 정제하여 5 (60 g, 73%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 434 [M+Na+ACN]+; 1H-NMR: (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.17 - 8.02 (m, 8H), 7.63 (tddd, J = 7.9, 6.6, 3.2, 1.6 Hz, 4H), 7.57 - 7.44 (m, 8H), 6.66 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.83 - 5.53 (m, 4H), 4.67 (ddd, J = 23.4, 10.5, 6.2 Hz, 2H), 4.24 (dd, J = 10.5, 3.8 Hz, 1H), 4.19 - 4.01 (m, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.06 (d, J = 3.2 Hz, 3H).
6의 제조
캔 (500.00 mL) 중 5 (50.00 g, 135.005 mmol, 1.00 당량) 및 우라실 (15.13 g, 135.005 mmol, 1 당량)의 교반 혼합물에 BSA (54.81 g, 270.010 mmol, 2 당량)를 대기 분위기 하에 실온에서 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, TMSOTf (90.02 g, 405.0 mmol, 3 당량)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성)으로 pH=7로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (3 x 400 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2x400 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (1:1)로 용리시키면서 정제하여 6 (43 g, 75.4%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): [M+H]+; 423 464 [M+H+ACN]+ ; 1H-NMR- : (300 MHz, 클로로포름-d) δ 9.08 - 8.89 (m, 1H), 8.17 - 7.94 (m, 4H), 7.70 - 7.43 (m, 7H), 6.19 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.84 - 5.71 (m, 2H), 5.62 (td, J = 3.3, 2.8, 1.4 Hz, 1H), 4.59 -4.44 (m, 2H), 4.14 (q, J = 7.2 Hz, 1H).
7의 제조
6의 용액 (52.00 g, 123.108 mmol, 1 당량)을 실온에서 MeOH/H2O/TEA (5:1:1) 642 ml 중에 용해시키고, 출발 물질이 더 이상 검출되지 않을 때까지 (2~3시간) 환류 하에 가열하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (600 mL) 중에 용해시키고, 유기 층을 물 (5x800 mL)로 추출하였다. 수성 층을 진공 하에 농축시켜 7 (21 g, 조 물질)을 회백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에서 직접 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS-: (ES, m/z): 213 [M-H]- ; 1 H-NMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.26 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.10 - 3.97 (m, 4H).
8의 제조
DCM (80.00 mL) 및 DMF (200.00 mL) 중 7 (16.00 g, 74.705 mmol, 1.00 당량) 및 DBU (22.75 g, 149.409 mmol, 2 당량)의 교반 혼합물에 아르곤 분위기 하에 실온에서 DMTr-Cl (7.88 g, 25.680 mmol, 1.1 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성) (100 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2x50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE (0.5%TEA)/EtOAc (2:3)로 용리시키면서 정제하여 8 (25 g, 64.8%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 515 [M-H]-; 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.33 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.45 - 7.13 (m, 9H), 6.86 (t, J = 8.5 Hz, 4H), 5.94 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 3H), 3.73 (d, J = 2.3 Hz, 6H), 3.33 (d, J = 2.5 Hz, 1H).
9의 제조
THF (240.00 mL) 중 8 (6.00 g, 11.616 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 0℃에서 NaH (60%) (1.40 g, 35.003 mmol, 3 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 디메틸 에테닐포스포네이트 (15.81 g, 116.2 mmol, 10.00 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 실온에서 포화 NH4Cl (수성)로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3x80 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 다음 조건을 사용하여 역 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여: 칼럼, C18 이동상, 물 중 ACN, 30분 내에 5%에서 95% 구배; 검출기, UV 254 nm, 9 (3.65 g, 48.15%)를 백색 고체로서 수득하였다.
LC-MS: (ES, m/z): 675 [M+Na]+; 1 H-NMR-: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 3H), 7.34 - 7.21 (m, 7H), 6.93 - 6.83 (m, 4H), 6.08 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.55 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.08 (d, J = 11.0 Hz, 1H),3.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.82 - 3.71 (m, 7H), 3.57 (dd, J = 10.9, 3.6 Hz, 6H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 3.06 - 2.86 (m, 2H), 1.96 (dt, J = 18.1, 7.1 Hz, 2H).
10의 제조
AcOH (12.00 mL) 및 H2O (3.00 mL) 중 9 (2.80 g, 4.3 mmol, 1.00 당량)의 용액을 대기 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 3x20 mL로 세척하였다. 생성물은 수층에 존재한다. 수층을 감압 하에 농축시켰다. 생성물을 다음 조건을 사용하여 정제용 SFC (정제용 SFC80-2)에 의해 정제하여: 칼럼, 그린 셉 베이직, 3*15 cm,; 이동상, CO2(70%) 및 IPA (0.5% 2 M NH3-MeOH)(30%); 검출기, UV 254 nm; 생성물을 수득하였다. 이로써 870 mg (57.89%)의 10을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 351 [M+Na]+ ; 1H-NMR-: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.65 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.56 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.10 (d, J =4.3 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 1H), 3.87 (dt, J = 4.1, 1.3 Hz, 1H), 3.72 - 3.49 (m, 8H), 2.08 (dd, J = 7.1, 2.8 Hz, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H).
11의 제조
250 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 실온에서 몰레큘라시브 및 ACN (30.00 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 교반 용액에 3-[[비스(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시]프로판니트릴 (1058.46 mg, 3.512 mmol, 1.5 당량) 및 DCI (359.12 mg, 3.043 mmol, 1.30 당량)를 첨가하였다. 이어서, ACN 30 mL 중 디메틸 10 (820.00 mg, 2.341 mmol, 1.00 당량)을 아르곤 분위기 하에 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (60 mL)로 희석하였다. 합한 유기 층을 여과 후 물 (3x40 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (PE 중 0.5% TEA/EtOAc 중 10% EtOH 1:9)에 의해 정제하여 11 (800 mg, 62.1%)을 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS: (ES, m/z): 549 [M-H]- ; 1H-NMR: (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.34 (s, 1H), 7.61 (dd, J = 8.1, 1.7 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 15.0, 1.8 Hz, 1H), 5.60 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.48 - 4.23 (m, 2H), 4.17 - 3.98 (m, 2H), 3.88 - 3.73 (m, 2H), 3.72 - 3.51 (m, 10H), 2.79 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.07 (dtt, J = 17.9, 7.1, 3.2 Hz, 2H), 1.15 (ddd, J = 6.3, 3.8, 2.1 Hz, 12H) ; 31P NMR (DMSO-d6) δ 149.71, 149.35, 30.85, 30.75
실시예 45
Figure pct00128
2의 제조: (문헌 [J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1992, 1943-1952]) DMF (2.0 L) 중 1 (150.0 g, 1.0 mol)의 용액에 2,2-디메톡시프로판 (312.0 g, 3.0 mol) 및 p-TsOH (1.7 g, 10.0 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 반응 후, 용매를 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
3의 제조: (문헌 [J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1992, 1943-1952]) 피리딘 (2.0 L) 중 2 (190.0 g, 1.0 mol)의 용액에 BzCl (560.0 g, 4.0 mol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 반응 후, 반응 혼합물을 빙수에 붓고, EA를 첨가하여 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (EA:PE=1:5에서 1:1)에 의해 정제하여 3 (350.0 g, 87.9% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =421.2 [M+Na]+.
4의 제조: (문헌 [J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1992, 1943-1952]) MeCN (3.0 L) 중 3 (240.0 g, 815.5 mmol)의 용액에 N-(2-옥소-1H-피리미딘-4-일) 벤즈아미드 (193.0 g, 897.0 mmol) 및 BSA (496.6 g, 2.4 mol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, TMSOTf (271.5 g, 1.2 mol)를 0℃에서 혼합물에 첨가한 다음, 반응 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 후, 용매를 농축시켜 오일을 수득한 다음, 혼합물을 약간 알칼리성으로 유지하면서 오일을 NaHCO3의 용액에 붓고, EA를 추출을 위해 첨가하고, 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (EA:PE=1:3에서 1:1)에 의해 정제하여 4 (180.0 g, 44.9% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =491.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.19 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.01-7.84 (m, 4H), 7.73-7.57 (m, 2H), 7.50 (dt, J = 10.4, 7.7 Hz, 4H), 7.40 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.33 (dd, J = 9.4, 7.3 Hz, 1H), 4.66 (dd, J = 7.3, 5.3 Hz, 1H), 4.45-4.35 (m, 2H), 4.22 (dd, J = 13.7, 2.5 Hz, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
5의 제조: 피리딘 (800.0 mL) 중 4 (78.0 g, 158.7 mmol)의 용액에 H2O 및 MeOH의 혼합물 용매 (4:1, 2 N) 중 NaOH (6.3 g, 158.7 mmol)의 용액을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 혼합물을 NH4Cl의 용액에 붓고, EA를 추출을 위해 첨가하고, 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (DCM:MeOH=30:1에서 10:1)에 의해 정제하여 5 (56.0 g, 91.0% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =388.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.29 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.08-7.99 (m, 2H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.63 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.35-4.13 (m, 3H), 3.78 (dt, J = 9.6, 6.5 Hz, 1H), 3.19 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 1.53 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
6의 제조: DCM (200.0 mL) 중 5 (15.0 g, 38.7 mmol)의 용액에 Ag2O (35.8 g, 154.8 mmol), CH3I (54.6 g, 387.2 mmol) 및 NaI (1.1 g, 7.7 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 반응 후, 여과물을 여과를 통해 수득하고, 여과물을 용매를 농축시켜 생성물 6 (13.0 g, 75.2% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =402.30 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.00 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.71-7.20 (m, 4H), 5.56 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.33 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 6.2, 2.1 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 13.5, 2.5 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 9.3, 6.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
7의 제조: 6 (12.0 g, 29.9 mmol)의 용액에 CH3-COOH (120.0 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 용매를 농축시켜 조 생성물 7 (10.0 g, 83.3% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =362.1 [M+H]+.
8의 제조: 디옥산:H2O=3:1 (120.0 mL) 중 7 (10.0 g, 24.9 mmol)의 용액에 NaIO4(8.8 g, 41.5 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaBH4 (2.4 g, 41.5 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 NH4Cl을 혼합물에 첨가하여 pH를 약간 알칼리성이 되도록 조정하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (PE:EA=5:1에서 1:1)에 의해 정제하여 8 (8.0 g, 79.5% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =364.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.26 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.07-7.94 (m, 2H), 7.67-7.59 (m, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (s, 1H), 5.91 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 11.5, 5.0, 2.5 Hz, 1H), 3.57-3.39 (m, 6H), 3.31 (s, 3H).
9의 제조: 피리딘 (50.0 mL) 중 8 (4.0 g, 11.0 mmol)의 용액에 DMTrCl (5.5 g, 16.5 mmol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였으며, LC-MS는 원료가 20.0%였음을 나타냈고, 생성물 대 부산물의 비는 3.5:1이었으며, 이어서 용매를 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하여 정제된 생성물 및 부산물을 총 5 g으로 수득한 다음, 생성물을 SFC에 의해 정제하여 9 (3.0 g, 40.9% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =666.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.33 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.64 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 7.36-7.18 (m, 7H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 5.96 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.79 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.66-3.46 (m, 4H), 3.37 (s, 3H), 3.16 (ddd, J = 10.1, 7.1, 3.0 Hz, 1H), 3.04 (dt, J = 10.9, 3.4 Hz, 1H), 2.08 (s, 1H).
10의 제조: DCM (30.0 mL) 중 9 (2.8 g, 4.2 mmol)의 용액에 CEP[N(iPr)2]2 (1.3 g, 4.2 mmol) 및 DCI (601.2 mg, 5.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 NaHCO3의 용액으로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20.0분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 90/10에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 10 (2.8 g, 76.8% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =866.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.34 (s, 1H), 8.22 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.09-7.98 (m, 2H), 7.64 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 9.1 Hz, 5H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.96 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.02-3.86 (m, 1H), 3.84-3.63 (m, 11H), 3.56 (dtq, J = 13.3, 6.6, 3.5, 3.1 Hz, 3H), 3.37 (s, 2H), 3.16 (ddd, J = 10.0, 6.8, 3.3 Hz, 1H), 3.04 (ddd, J = 10.7, 5.5, 3.0 Hz, 1H), 2.75 (td, J = 5.9, 2.3 Hz, 2H), 1.18-1.07 (m, 12H); 31P NMR (DMSO-d6) δ 148.02 (d, J = 12.0 Hz).
실시예 46
Figure pct00129
10의 제조: N2 하에 0℃에서 ACN (2000.0 mL) 중 3 (200.0 g, 0.5 mol)의 용액에 DCM (1000.0 mL) 중 SnCl4의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 포화 중탄산나트륨 용액에 붓고, 생성된 생성물을 EA (3*500.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (PE:EA=5:1에서 0:1)에 의해 정제하여 10 (65.0 g, 31.4% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =412.0 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.74-7.60 (m, 2H), 7.59-7.57 (m, 1H), 7.44-7.40 (m, 2H),7.24 (s, 2H), 5.90 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 7.4 Hz, 1H), 4.63 (t, 1H), 4.50-4.30 (m, 2H), 4.21 (dd, J = 13.6 Hz, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
11의 제조: DCM (500.0 mL) 중 10 (40.0 g, 97.3 mmol)의 용액에 실온에서 Et3N (30.0 g, 297.0 mmol) 및 DMAP (1.2 g, 9.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 3회 대체한 다음, MMTrCl (45.0 g, 146.1 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 10이 소모되었음을 나타냈고, 반응 혼합물을 빙수 중 NaHCO3의 수용액에 첨가하였다. 이어서, 생성물을 EA로 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 농축시켜 11 (66.5 g)을 조 물질로서 수득하였으며, 후속 단계를 직접 사용하였다.
12의 제조: 피리딘 (600.0 mL) 중 11 (66.5 g, 97.3 mmol)의 용액에 실온에서 2 N NaOH (H2O:MeOH=4:1) (200.0 mL)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 혼합물을 NH4Cl의 용액에 붓고, EA를 첨가하여 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (EA:PE=1:5에서 1:1)에 의해 정제하여 12 (50.0 g, 2 단계에 대해 88.7% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =580.4 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.44 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.36-7.16 (m, 13H), 6.89-6.80 (m, 2H), 5.59 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.32-4.12 (m, 4H), 4.08-3.95 (m, 3H), 3.72 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.54 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
13의 제조: CH3I (200.0 mL) 중 12 (46.0 g, 79.4 mmol)의 용액에 Ag2O (36.6 g, 158.4 mmol) 및 NaI (6.0 g, 42.5 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 농축시켜 생성물 13 (46.0 g, 97.6% 수율)을 수득하고, 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z =594.3 [M+H]+.
14의 제조: DCM (750.0 mL) 중 DCA (22.5 mL)의 교반 용액에 실온에서 13 (46.0 g, 77.5 mmol) 및 Et3Si (185.0 mL)를 첨가하였다. 그리고 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하고, 이를 NaHCO3의 용액 (50.0 mL)으로 슬러리화하여 14 (19.0 g, 76% 수율)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
15의 제조: 피리딘 (200.0 mL) 중 14 (16.0 g, 49.7 mmol)의 용액에 0℃에서 BzCl (9.0 g, 64.7 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 6이 완전히 소모되었음을 나타냈고, 이어서 혼합물을 0℃로 냉각시키고, MeOH 중 NaOH의 용액 및 H2O (2 N, 50.0 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 NH4Cl의 용액에 부었다. 생성물을 EA (300.0 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 슬러리에 의해 PE:EA (8:1, 900.0 mL)를 사용하여 정제하여 15 (20.0 g, 95.0% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =426.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 8.77-8.69 (m, 2H), 8.06 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.34-7.23 (m, 4H), 7.23-7.12 (m, 5H), 6.89-6.80 (m, 4H), 5.90 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.36-4.29 (m, 1H), 4.06 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 25.0, 6.9 Hz, 0H), 3.72 (d, J = 1.0 Hz, 7H), 3.59 (dt, J = 10.4, 6.6 Hz, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.97 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 2.76 (q, J = 5.5 Hz, 2H), 1.14 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 12H).
16의 제조: HCOOH (180.0 mL) 및 H2O (20.0 mL)의 혼합물 용액에 15 (19.0 g, 44.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LC-MS는 15가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 MeOH (100.0 mL)를 사용하여 슬러리에 의해 정제하여 16 (16.0 g, 92.7% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =385.9 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 8.77 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 8.09-8.02 (m, 2H), 7.70-7.61 (m, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.56 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.18 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 4.09 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 3.88-3.71 (m, 4H), 3.21-3.14 (m, 6H).
17의 제조: 디옥산 (200.0 mL) 중 16 (16.0 g, 41.4 mmol)의 용액에 H2O (32.0 mL), 및 NaIO4 (9.7 g, 45.5 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 원료가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaBH4 (1.7 g, 45.5 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC는 중간체 상태가 사라졌음을 나타냈고, 이어서 NH4Cl을 혼합물에 첨가하여 pH를 약간 알칼리성이 되도록 조정하고, 실온에서 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (DCM:MeOH=20:1에서 8:1)에 의해 정제하여 17 (16.0 g, 99.5% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =388.0 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.09-7.99 (m, 2H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.90 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.88 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.67 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.08-3.98 (m, 2H), 3.78 (ddd, J = 12.1, 5.2, 3.1 Hz, 1H), 3.68-3.39 (m, 4H), 3.36 (s, 0H), 3.20 (s, 3H), 1.99 (s, 1H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 1H).
18의 제조: 피리딘 (50.0 mL) 중 17 (12.0 g, 31.0 mmol)의 용액에 DMTrCl (11.5 g, 34.1 mmol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS는 원료가 15.0% 남아있고 생성물 대 부산물의 비가 3.5:1임을 나타냈다. 이어서, 반응 용액을 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하여 정제된 생성물 및 부산물 총 13.0 g을 수득한 다음, 4.0 g 조 물질을 SFC에 의해 정제하여 18 (3.3 g, 15.4% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =690.3 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.10-8.03 (m, 2H), 7.70-7.61 (m, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.35-7.12 (m, 9H), 6.90-6.80 (m, 4H), 5.94 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.88 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.36 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.11 (dt, J = 7.4, 3.6 Hz, 1H), 3.82 (ddd, J = 11.9, 5.1, 3.1 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 1.3 Hz, 7H), 3.64 (ddd, J = 11.9, 6.2, 4.2 Hz, 1H), 3.45 (qd, J = 7.0, 4.9 Hz, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.09 (ddd, J = 9.9, 6.4, 3.2 Hz, 1H), 2.97 (ddd, J = 9.9, 5.7, 3.2 Hz, 1H), 1.23 (s, 0H), 1.06 (t, J = 7.0 Hz, 1H).
19의 제조: DCM (40.0 mL) 중 18 (3.3 g, 4.8 mmol)의 현탁액에 DCI (0.5 g, 4.0 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.6 g, 5.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 NaHCO3의 용액으로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 19 (3.0 g, 3.9 mmol, 81.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =765.3 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.22 (s, 1H), 8.80-8.71 (m, 2H), 8.11-8.04 (m, 2H), 7.65 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.36-7.24 (m, 4H), 7.24-7.15 (m, 5H), 6.89-6.82 (m, 4H), 5.92 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.34 (dt, J = 7.5, 3.5 Hz, 1H), 4.08 (ddd, J = 10.7, 7.3, 2.7 Hz, 1H), 4.03-3.89 (m, 1H), 3.80-3.72 (m,10H), 3.67-3.53 (m, 2H), 3.47 (dp, J = 10.5, 3.4 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H) 3.11 (ddd, J = 10.3, 6.2, 3.5 Hz, 1H), 3.00 (q, J = 6.6, 5.2 Hz, 1H), 2.77 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 2.08 (s, 1H), 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 12H).; 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 148.30, 147.99.
실시예 47
Figure pct00130
19의 제조: EtOH (50.0 mL) 중 8 (8.0 g, 22.0 mmol)의 용액에 CH3NH2 (50.0 mL)의 용액을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 반응 후, 용매를 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 EA (20.0 mL) 및 PE (10.0 mL)의 혼합물 용매에 첨가한 다음, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 여과하여 19 (5.5 g, 96.5% 수율)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
20의 제조: (문헌 [J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1992, 1943-1952]) H2O (50.0 mL) 및 AcOH (50.0 mL) 중 19 (5.0 g, 19.3 mmol)의 용액에 NaNO2 (65.0 g, 772.0 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 반응 후, 반응 혼합물을 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 (DCM: MeOH=20:1에서 6:1) 및 MPLC (ACN: H2O = 0:100에서 10:90)에 의해 정제하여 20 (3.0 g, 59.6% 수율)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =261.2 (M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.29 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 17.5, 7.6 Hz, 2H), 4.74 (d, J = 36.0 Hz, 2H), 3.86-3.63 (m, 1H), 3.58-3.40 (m, 6H).
21의 제조: 피리딘 (30.0 mL) 중 20 (3.0 g, 11.5 mmol)의 용액에 DMTrCl (3.9 g, 11.5 mmol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, LC-MS는 원료가 20.0%임을 나타냈고, 생성물 대 부산물의 비는 3:1이었으며, 이어서 혼합물을 NaHCO3의 용액 (100.0 mL)에 붓고, EA (100.0 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하여 정제된 생성물 및 부산물을 총 5.0 g으로 수득한 다음, 생성물을 SFC에 의해 정제하여 21 (1.8 g)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =561.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.45-7.15 (m, 8H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 5.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.79 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.60 (s, 1H), 3.51 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 3.11 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H).
22의 제조: DCM (20.0 mL) 중 21 (1.8 g, 3.2 mmol)의 용액에 CEP[N(iPr)2]2 (1.0 g, 3.4 mmol) 및 DCI (321.0 mg, 2.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 21이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 NaHCO3의 용액으로 2회 세척하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20.0분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 90/10에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 22 (2.0 g, 82% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =761.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.35 (s, 1H), 7.73 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35-7.18 (m, 7H), 6.94-6.82 (m, 4H), 5.81-5.74 (m, 1H), 5.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.11-3.85 (m, 1H), 3.82-3.67 (m, 11H), 3.67-3.50 (m, 5H), 3.17-3.09 (m, 1H), 3.09-3.01 (m, 1H), 2.74 (td, J = 5.8, 2.9 Hz, 2H), 1.13 (dd, J = 9.2, 6.7 Hz, 13H); 31P NMR (DMSO-d6) δ 148.09 (d, J = 41.8 Hz).
실시예 48
Figure pct00131
2의 제조 (문헌 [J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1992, 1943-1952]): DMF (1000.0 mL) 중 1 (150.0 g, 999.1 mmol)의 용액에 P-TsOH (1.7 g, 10.0 mmol), 및 이어서 2,2-디메톡시-프로판 (312.2 g, 3.0 mol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 90.0% 1이 TLC에 의해 소모되었다. 이어서, NaHCO3 (8.4 g, 99.9 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 30분 후에 고체를 여과하고, 유기 상을 진공에 의해 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (PE: EA=1:1에서 0:1)에 의해 정제하여 화합물 2 (115.0 g, 60.5% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
22의 제조: 피리딘 (600.0 mL) 중 2 (115.0 g, 604.6 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시킨 다음, Ac2O (185.2 g, 1.81 mol)를 반응 혼합물에 적가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 원료는 TLC에 의해 소모되었다. 반응 용액을 물에 첨가하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 22 (150.0 g, 90.4% 수율)를 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.20 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.17 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 7.0, 3.4 Hz, 1H), 4.40-4.25 (m, 3H), 4.21 (dd, J = 7.0, 6.1 Hz, 1H), 4.16-4.02 (m, 3H), 3.95 (dd, J = 12.9, 4.4 Hz, 1H), 2.17 (s, 1H), 2.15-2.03 (m, 12H), 1.56 (d, J = 4.0 Hz, 6H), 1.37 (d, J = 3.1 Hz, 6H).
23의 제조: ACN (2200.0 mL) 중 22 (150.0 g, 546.9 mmol)의 용액에 6-클로로구아닌 (139.1 g, 820.4 mmol) 및 BSA (333.7 g, 1.6 mol)를 실온에서 첨가한 다음, 반응 혼합물을 N2로 3회에 걸쳐 대체하였다. 반응물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 N2 하에 0℃로 냉각시켰다. 이어서, TMSOTf (182.1 g, 820.4 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 첨가한 후, 반응물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 대부분의 유기 용매를 진공에 의해 농축시킨 다음, 잔류물을 빙수 중 NaHCO3의 수용액에 첨가하고, 생성물을 EA (4.0 L)로 추출하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM에서 DCM: EA=5:1)에 의해 정제하여 화합물 23 (82.0 g, 35.0% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =384.8 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.23 (s, 1H), 7.04 (d, J = 22.3 Hz, 2H), 5.57 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.40 (dd, J = 9.6, 7.3 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 7.4, 5.4 Hz, 1H), 4.40-4.30 (m, 2H), 4.11 (dd, J = 13.6, 2.4 Hz, 1H), 1.81 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
24의 제조: DCM (1000.0 mL) 중 23 (82.0 g, 192.3 mmol)의 용액에 실온에서 Et3N (59.4 g, 576.9 mmol) 및 DMAP (2.4 g, 19.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 3회 대체한 다음, MMTrCl (90.9 g, 288.4 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 92.0% 원료가 소모되었음을 나타냈고, 반응 혼합물을 빙수 중 NaHCO3의 수용액에 첨가한 다음, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM)에 의해 정제하여 화합물 24 (110.0 g, 86.4% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =657.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.37-7.31 (m, 4H), 7.29-7.23 (m, 6H), 7.20-7.15 (m, 2H), 6.86-6.80 (m, 2H), 5.75 (s, 1H), 5.23 (dd, J = 9.6, 7.2 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.44-4.16 (m, 3H), 3.71 (s, 4H), 1.70 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.31 (s, 3H).
25의 제조: THF (500.0 mL) 및 MeOH (160.0 mL)의 혼합 용매 중 24 (110.0 g, 164.3 mmol)의 용액에 NH4OH (330.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 원료는 TLC 및 LC-MS에 의해 소모되었다. 반응액을 물에 첨가하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척한 다음, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (PE: EA=10:1-1:2)에 의해 정제하여 화합물 25 (98.0 g, 94.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =615.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 7.36 (dt, J = 8.2, 1.4 Hz, 4H), 7.31-7.21 (m, 6H), 7.15 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 6.85-6.76 (m, 2H), 5.57 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.25 (dt, J = 5.1, 2.4 Hz, 1H), 4.03 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 3.70 (s, 3H), 3.62-3.44 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.31 (s, 3H).
26 (WO2011/95576, 2011, A1 참조)의 제조: CH3I (350.0 mL) 중 25 (70.0 g, 114.0 mmol)의 용액에 실온에서 Ag2O (79.2 g, 342.0 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 잔류물을 규조토로 여과하고, 여과물을 진공에 의해 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (PE: EA=10:1-1:1)에 의해 정제하여 화합물 26 (28.0 g, 31.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =629.1 [M+H]+.
27의 제조: THF (200.0 mL) 중 3-히드록시-프로피오니트릴 (15.6 g, 219.7 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 3회에 걸쳐 N2로 대체하였다. 이어서, NaH (12.4 g, 310.0 mmol, 60.0%)를 반응 혼합물에 차례로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 반응물을 0℃로 다시 냉각시켰다. THF (150.0 mL) 중 26 (26.0 g, 33.0 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 반응액을 물에 첨가하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM: MeOH=50:1-30:1)에 의해 정제하여 화합물 27 (18.0 g, 88.0% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =610.7 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.68 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.34-7.15 (m, 12H), 6.92-6.81 (m, 2H), 4.46 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.22 (dt, J = 5.5, 2.5 Hz, 1H), 4.07 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 13.5, 2.1 Hz, 1H), 3.64-3.54 (m, 1H), 3.36 (dd, J = 13.3, 2.8 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.59 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
28의 제조 (Beigelman, Leonid; Deval, Jerome; Jin , Zhinan WO2014/209979, 2014, A1): DCM (300.0 mL) 중 27 (18.0 g, 29.5 mmol)의 용액에 실온에서 트리에틸실란 (70.0 mL) 및 DCA (10.0 mL)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 대부분의 유기 용매를 진공에 의해 농축시킨 다음, PE (600.0 mL)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 상을 여과하여 고체를 수득하고, 이를 MPLC (MeCN: H2O=40:60에서 50:50)에 의해 정제하여 화합물 28 (7.5 g, 75.0% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =338.3 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.70 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 6.49 (s, 2H), 5.15 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.20 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.93 (ddd, J = 13.3, 10.6, 3.7 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 1.33 (s, 3H);
29의 제조: Pyr (150.0 mL) 중 28 (7.0 g, 20.6 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 반응 혼합물에 i-BuCl (6.6 g, 61.8 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 반응액을 빙수에 첨가하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM: MeOH=100:1-30:1)에 의해 정제하여 화합물 29 (5.8 g, 68.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =409.4 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.13 (s, 1H), 11.66 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 5.24 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.36-4.23 (m, 3H), 3.99-3.88 (m, 2H), 3.27 (s, 4H), 2.78 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
30의 제조: 29 (5.8 g, 14.1 mmol)의 용액을 실온에서 HCOOH (54.0 mL) 및 H2O (6.0 mL)의 혼합 용매에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 반응 용액을 진공 하에 실온에서 농축시켜 화합물 30 (5.2 g, 14.0 mmol, 98.0% 수율)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z =368.4 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.13 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.14 (s, 2H), 5.19 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.93 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 12.4, 1.9 Hz, 1H), 3.77 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 3.69-3.62 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.79 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 1.13 (dd, J = 6.9, 1.2 Hz, 6H).
31의 제조: 디옥산 (90.0 mL) 및 H2O (30.0 mL) 중 30 (5.2 g, 14.0 mmol)의 용액에 실온에서 NaIO4 (3.7 g, 15.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈고, 반응 용액을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, NaBH4 (970.0 mg, 25.2 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, LC-MS에 의해 3시간 후에 원료가 소모되었다. 반응액을 염화암모늄으로 켄칭하고, 1 N HCl을 사용하여 pH를 6-7로 조정하고, 혼합물 용액을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM: MeOH=100:1-30:1)에 의해 정제하여 화합물 31 (4.0 g, 68.6% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =370.4 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.91 (d, J = 151.0 Hz, 2H), 8.62-8.51 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.44-7.33 (m, 1H), 5.62 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.84 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 7.7, 3.5 Hz, 1H), 3.76 (ddd, J = 12.1, 4.7, 2.7 Hz, 1H), 3.60 (ddd, J = 12.0, 5.8, 3.6 Hz, 1H), 3.46 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.77 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 1.12 (dd, J = 6.8, 2.4 Hz, 6H);
32의 제조: 31 (4.0 g, 6.4 mmol)의 용액을 피리딘 (100.0 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 N2로 3회 대체한 다음, DMTrCl (5.1 g, 8.9 mmol)을 반응 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응물을 30분 동안 교반하고, TLC 및 LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 반응액을 빙수에 첨가하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 c.c. (DCM: MeOH=100:1-30:1) 및 SFC에 의해 정제하여 화합물 32 (2.7 g, 37.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =672.7 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.50 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.32-7.24 (m, 4H), 7.22-7.12 (m, 5H), 6.84 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 4H), 5.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.95 (dt, J = 7.4, 3.3 Hz, 1H), 3.85-3.77 (m, 1H), 3.73 (s, 7H), 3.65-3.57 (m, 1H), 3.43 (ddt, J = 9.9, 6.9, 3.4 Hz, 1H), 3.05 (ddd, J = 10.0, 6.2, 3.3 Hz, 1H), 2.96 (ddd, J = 10.0, 5.6, 3.4 Hz, 1H), 2.78 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 1.11 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
33의 제조: DCM (35.0 mL) 중 32 (2.7 g, 2.4 mmol)의 용액에 실온에서 DCI (390.0 mg, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 이어서, CEP[N(iPr)2]2 (1.2 g, 2.5 mmol)를 반응 혼합물에 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. LC-MS는 원료가 소모되었음을 나타냈다. 반응액을 빙수 중 NaHCO3의 수용액에 첨가하고, 생성물을 DCM으로 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20.0분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가시킴, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 100/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 화합물 33 (2.0 g, 56.4% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z =872.3 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.79 (s, 2H), 8.23 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.35-7.07 (m, 9H), 6.92-6.75 (m, 4H), 5.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.10-3.99 (m, 1H), 3.84-3.65 (m, 10H), 3.63-3.52 (m, 2H), 3.45 (ddd, J = 10.2, 6.7, 3.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.07 (ddd, J = 10.2, 6.4, 3.4 Hz, 1H), 2.97 (ddd, J = 10.0, 5.6, 3.5 Hz, 1H), 2.78 (dt, J = 12.2, 6.4 Hz, 3H), 1.20-1.05 (m, 18H), 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 148.20,147.13.
실시예 49
Figure pct00132
실시예 50
Figure pct00133
2의 제조: 건조 THF (100.0 mL) 중 1-브로모나프탈렌 (5.2 g, 25.0 mmol)의 용액에 n-BuLi (13.5 mL, 21.7 mmol, 1.6 M)를 -78℃에서 적가한 다음, 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 THF (20.0 mL) 중 1 (5.5 g, 16.7 mmol)의 용액을 혼합물에 적가한 다음, 반응 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 1이 완전히 소모되었음을 나타냈고, 반응물을 포화 염화암모늄 용액 (80.0 mL)으로 켄칭하고, EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 2 (5.8 g, 76.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 441 [M-OH]-.
3의 제조: DCM (100.0 mL) 중 2 (5.8 g, 12.6 mmol)의 용액에 -78℃에서 TES (1.7 g, 14.7 mmol), BF3을 첨가하였다. Et2O (2.7 g, 18.9 mmol)를 혼합물에 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 2가 완전히 소모되었음을 나타냈고, 용액을 포화 중탄산나트륨 용액 (50.0 mL)에 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 25분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 2/3에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 4/1로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 7/3에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 3 (2.7 g, 48.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 460 [M+H2O]+ ; 1H-NMR (600 MHz, CDCl3): δ 8.01-8.00 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.88-7.87 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.77-7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.56-7.49 (m, 2H), 7.38-7.23 (m, 11H), 6.98-5.94 (d, J = 26.9 Hz, 1H), 5.09-4.99 (dd, J = 61.1 Hz, 1H), 4.71-4.69 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.66-4.59 (m, 2H), 4.43-4.41 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 4.14-4.08 (m, 1H), 4.02-4.00 (dd, J = 13.4 Hz, 1H), 3.81-3.78 (dd, J = 14.8 Hz, 1H); 19F-NMR (CDCl3): δ -193.24.
4의 제조: 건조 DCM (40.0 mL) 중 3 (2.7 g, 6.0 mmol)의 용액에 BCl3 (36.0 mL, 36.0 mmol, 1 M)을 -78℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응이 완결된 후, 생성된 혼합물을 MeOH (20.0 mL)로 켄칭한 다음, 수산화나트륨 용액 (40.0 mL, 2 M)으로 중화시켰다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 조 물질을 MeOH (30.0 mL) 중에 용해시키고, 수산화나트륨 용액 (30.0 mL, 4 M)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM: MeOH = 40:1~15:1)에 의해 정제하여 4 (1.3 g, 81.2%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 261 [M-H]-; 1H-NMR (DMSO-d6): δ 7.98-7.97 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 7.89-7.87 (m, 2H), 7.63-7.49 (m, 3H), 5.80-5.76 (d, J = 26.3 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.85-4.76 (d, J = 58.4 Hz, 1H), 4.03-3.85 (m, 3H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.65-3.53 (m, 1H); 19F-NMR (DMSO-d6): δ -192.76.
5의 제조: 피리딘 (20.0 mL) 중 4 (1.3 g, 5.0 mmol)의 용액에 실온에서 DMTrCl (6.1 g, 16.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 4가 소모되었음을 나타냈고, 물 (100.0 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 추가로 실리카 겔 (EA: PE=1:30~1:10)에 의해 정제하여 5 (2.2 g, 78.5%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 563 [M-H]- ; 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 8.03-7.99 (m, 2H), 7.91-7.86 (m, 2H), 7.64-7.57 (m, 2H), 7.49-7.48 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.40-7.24 (m, 8H), 6.89-6.88 (m, 4H), 5.92-5.88 (d, J = 26.6 Hz, 1H), 5.50-5.49 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.96-4.87 (d, J = 56.2 Hz, 1H), 4.18-4.14 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.42-3.40 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.33 (m, 2H); 19F-NMR (DMSO-d6): δ -192.18.
6의 제조: DCM (20.0 mL) 중 5 (2.2 g, 3.9 mmol)의 현탁액에 DCI (391.0 mg, 3.3 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2 (1.4 g, 4.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 포화 중탄산나트륨 용액 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (2.5 g, 83.8%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 765 [M+H]+ ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.07-7.86 (m, 4H), 7.64-7.56 (m, 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.41-7.21 (m, 8H), 6.89-6.84 (m, 4H), 6.02-5.93 (m, 1H), 5.19-4.98 (m, 1H), 4.61-4.34 (m, 1H), 4.26-4.24 (m, 1H), 3.74-3.73 (m, 6H), 3.70-3.61 (m, 1H), 3.57-3.42 (m, 4H), 3.29-3.24 (m, 1H), 2.67-2.64 (m, 1H), 2.56-2.52 (m, 1H), 1.09-1.04 (m, 1H), 0.98-0.97 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.89-0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H); 19F-NMR (DMSO-d6): δ -191.75, -191.76, -191.84, -191.85; 31P-NMR (DMSO-d6): δ 149.51, 149.47, 149.16, 149.14.
실시예 51
Figure pct00134
9의 제조
DMF (70 mL) 중 8 (실시예 44로부터) (6.6 g, 10.86 mmol, 85% 순도, 1 당량) 및 DBU (3.31 g, 21.72 mmol, 3.27 mL, 2 당량)의 용액에 0℃에서 BOMCl (2.55 g, 16.29 mmol, 2.26 mL, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (180 mL)로 희석하고, H2O (80 mL*3), 및 염수 (80 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 10-60%의 용리액, EtOAc/PE 구배 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 9 (5.2 g, 70% 수율)를 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 659.1. ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.63 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.15(m, 14H), 6.85 (t, J=8.0 Hz, 4H), 5.97 (s, 1H), 5.75 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.39 - 5.26 (m, 2H), 5.24 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.94 - 3.83 (m, 2H), 3.68 (d, J=10.0 Hz, 6H), 3.38 (s, 1H)
10의 제조
THF (50 mL) 중 9 (5.2 g, 8.17 mmol, 1 당량) 및 디메톡시포스포릴메틸 트리플루오로메탄술포네이트 (6.67 g, 24.50 mmol, 3 당량)의 용액에 -5℃에서 NaH (816.65 mg, 20.42 mmol, 60% 순도, 2.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, EtOAc (100 mL)로 희석한 다음, H2O (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0-50%, EtOAc/DCM 구배 @ 60 mL/분)에 의해 정제하여 10 (4.2 g, 66.42% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 781.1 [M+Na]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.49 - 7.25 (m, 14H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 6.82 (d, J=8.8 Hz, 4H), 6.46 (s, 1H), 5.65 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.57 - 5.39 (m, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.16 - 4.07 (m, 2H), 3.93 (dd, J=2.6, 10.8 Hz, 1H), 3.81 - 3.59 (m, 11H), 3.81 - 3.59 (m, 1H), 3.24 (dd, J=10.6, 13.5 Hz, 1H), 3.10 (dd, J=9.8, 13.3 Hz, 1H), 2.79 (d, J=2.2 Hz, 1H); 31P NMR (CD3CN) δ = 22.37 (s)
11의 제조
MeCN (15 mL) 중 10 (4.6 g, 6.06 mmol, 1 당량) 및 NaI (2.73 g, 18.19 mmol, 3 당량)의 용액에 클로로메틸 2,2-디메틸프로파노에이트 (3.65 g, 24.25 mmol, 3.51 mL, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0-50%, EtOAc/PE 구배 @ 40 mL/분)에 의해 정제하여 11 (2.7 g, 44.6% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS (m/z): 981.1 [M+Na]+.
12의 제조
DCM (20 mL) 중 11 (2.7 g, 2.82 mmol, 1 당량)의 용액에 Et3SiH (645.45 mg, 2.82 mmol, 5 mL, 1 당량)를 첨가하고, 이어서 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL, 4.80 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0-50%, EtOAc/DCM 구배 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 12 (1.6 g, 84.82% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI):, m/z 679.1 [M+Na]+, ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.44 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 5H), 5.76 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.69 - 5.62 (m, 4H), 5.51 - 5.43 (m, 1H), 5.51 - 5.43 (m, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.30 (s, 1H), 4.26 - 4.06 (m, 4H), 3.90 (dd, J=4.9, 8.4 Hz, 2H), 3.22 - 3.06 (m, 1H), 1.22 (s, 18H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 20.25 (s, 1P).
13의 제조
이소프로판올 (20 ml) 및 H2O (2 mL) 중 12 (1.4 g, 2.13 mmol, 1 당량)의 혼합물에 N2 하에 Pd/C (1.4 g,) 및 HCOOH (51.22 mg, 1.07 mmol, 2 mL)를 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고, H2로 수회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (15 PSI) 하에 15℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 24 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0-50%, EtOAc/DCM 구배 @ 30 mL/분)에 의해 정제하여 13 (848 mg, 74.14% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 537.0 [M+H]+ ; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.01 (s, 1H), 7.53 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.78 - 5.63 (m, 6H), 4.40 (s, 1H), 4.35 - 4.22 (m, 3H), 4.11 (d, J=1.5 Hz, 1H), 3.88 (d, J=8.5 Hz, 2H), 1.22 (s, 18H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 20.17 (s, 1P.)
14의 제조
DCM (10 mL) 중 13 (848 mg, 1.58 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 3-비스(디이소프로필아미노)포스파닐옥시프로판니트릴 (571.73 mg, 1.90 mmol, 602.45 uL, 1.2 당량)을 첨가하고, 이어서 1H-이미다졸-4,5-디카르보니트릴 (186.7 mg, 1.58 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (20 mL)으로 희석하였다. 이어서, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (10 mL * 2)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 용리액 0-50%, 상 A: PE, 0.5%TEA 포함; 상 B: EA, 10%EtOH 포함, 30 mL/분)에 의해 정제하여 14 (720 mg, , 61.21% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 737.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.17 (s, 1H), 7.49 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.91 - 5.77 (m, 1H), 5.65 - 5.54 (m, 5H), 4.49 - 4.26 (m, 2H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.92 - 3.55 (m, 6H), 2.71 - 2.61 (m, 2H), 1.24 - 1.16 (m, 30H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ = 151.59.
실시예 52: 102의 합성
Figure pct00135
실시예 53: 103의 합성
Figure pct00136
실시예 54: 104의 합성
Figure pct00137
실시예 55: 105의 합성
Figure pct00138
실시예 56
Figure pct00139
2의 제조: 자기 교반기 및 온도계가 구비된 2 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 건조 DMF (600.0 mL) 중 1 (60.0 g, 228.8 mmol)을 실온에서 채우고, 이미다졸 (95.2 g, 1.3 mol)을 혼합물 반응물에 첨가한 다음, 반응 혼합물을 5℃로 냉각시키고, TBSCl (76.8 g, 499.3 mmol)을 혼합물 반응물에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반되도록 하였다. LCMS에 의해 1이 소모된 다음, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (1.0 L)에 첨가하고, 반응물을 켄칭한 후, 수성 층을 EA (400.0 mL*2)로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 농축시켜 조 2 (110.2 g, 212.8 mmol, 93.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였으며, 조 생성물을 정제 없이 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z= 487.3 [M+H]+.
3의 제조: 자기 교반기 및 온도계가 구비된 3 L 3구 둥근 바닥 플라스크를 실온에서 THF (550.0 mL) 중 2 (117.0 g, 225.9 mmol)로 충전하고, 물 (275.0 mL)을 혼합물 반응물에 첨가한 다음, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 4시간 후 일정 압력 깔때기에 의해 TFA (275.0 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 2는 TLC에 의해 소모되었다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 수산화암모늄 (250.0 mL) 및 물 (800.0 mL)의 혼합물 용매 중에 첨가하고, 반응을 켄칭한 후, 수성 층을 EA (500.0 mL*2)로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (PE:EA = 10:1에서 0:1)에 의해 정제하여 화합물 3 (51.1 g, 59.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ =11.35 (s, 1H), 7.919 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 5.65 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.65 (d, J = 12 Hz, 1H), 3.53 (d, J = 6Hz, 1H), 3.32 (d, J = 6 Hz, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.08 (s, 6H). ESI-LCMS: m/z=373.1 [M+H]+.
4의 제조: 자기 교반기 및 온도계가 장착된 3 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 DCM (250.0 mL) 및 DMF (70.0 mL)의 혼합물 용매 중 3 (50.0 g, 131.5 mmol)을 실온에서 채우고, 혼합물 용액을 냉각시켜 5℃로 만들고, PDC (63.1 g, 164.4 mmol) 및 t-BuOH (200.0 mL)를 혼합물 반응물에 첨가하고, 반응물을 5℃에서 유지하고, 0.5시간 후에 Ac2O (130.0 mL)를 일정한 압력 깔때기에 의해 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. lc-ms에 의해 3이 소모된 다음, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (400.0 mL)에 첨가하고, 반응물을 켄칭한 후, 수성 층을 DCM (500.0 mL*2)으로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (PE:EA = 10:1에서 2:1)에 의해 정제하여 화합물 4 (29.8 g, 50.6% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (DMSO d6): δ =11.42 (s, 1H), 8.04 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 5.78 (d, J = 6 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.84 (s, 1H), 3.32 (s, 3H), 1.46 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.12 (s, 6H). ESI-LCMS: m/z=443.1 [M+H]+.
5의 제조: 건조 THF (330.0 mL) 중 4 (33.0 g, 74.7 mmol)의 용액에 실온에서 CH3OD (66.0 mL) 및 D2O (33.0 mL)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물에 NaBD4 (9.4 g, 224.0 mmol)를 50℃에서 1시간당 3회 첨가하였다. 용액을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 4가 소모되었음을 나타냈다. 물 (300.0 mL)을 첨가하였다. 생성물을 EA (2*300.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (PE:EA=10:1에서 3:1)에 의해 정제하여 5 (19.1 g, 68.5% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO d6): δ =11.35 (s, 1H), 7.92-7.91 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.83-5.82 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.66-5.65 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.30-4.28 (m, 1H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). ESI-LCMS: m/z 375 [M+H] +.
6의 제조: 건조 ACN (190.0 mL) 중 5 (19.1 g, 51.1 mmol)의 용액에 실온에서 Et3N (20.7 g, 204.6 mmol) 및 0℃에서 TMSCl (11.1 g, 102.1 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. LCMS는 5가 소모되었음을 나타냈고, 중간체가 형성되었다. 이어서, 용액에 DMAP (12.5 g, 102.3 mmol), Et3N (10.3 g, 102.1 mmol) 및 TPSCl (23.2 g, 76.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 중간체가 소모되었음을 나타냈고, 이는 또 다른 중간체에 부합하였다. 이어서, NH4OH (200.0 mL)를 첨가하고, 실온에서 24시간 동안 교반하여 생성물의 혼합물을 수득하였다. 생성물을 EA (2*200.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O = 1/2에서 CH3CN/H2O = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 6 (14.0 g, 73.7% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (DMSO- d6): δ =7.89-7.88 (d, J = 6 Hz, 1H), 7.20-7.18 (d, J = 12 Hz, 2H), 5.85-5.84 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.73-5.72 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.24-4.23 (m, 1H), 3.81-3.80 (d, J = 6 Hz, 1H), 3.69-3.68 (m, 1H), 3.36 (s, 3H),0.87 (s, 9H), 0.07 (s, 6H). ESI-LCMS: m/z 374 [M+H]+.
7의 제조: 피리딘 (140.0 mL) 중 6 (14.0 g, 37.5 mmol)의 용액에 0℃에서 TMSCl (6.3 g, 58.0 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 6이 소모되었음을 나타냈고, 중간체 (a)가 형성되었다. 이어서, BzCl (10.8 g, 76.8 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 중간체가 소모되었음을 나타냈고, 또 다른 중간체가 형성되었다. 이어서, 혼합물에 NH4OH (30.0 mL)를 첨가하고, 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 중간체가 소모되었음을 나타냈다. 물 (300.0 mL)을 첨가하였다. 용액을 EA (2*200.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O = 1/1에서 CH3CN/H2O = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O = 1/0에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 7 (10.5 g, 58.6% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO d6): δ =11.29 (s, 1H), 8.53-8.52 (d, J = 6 Hz, 1H), 8.01-8.00 (d, J = 6 Hz, 2H), 7.63-7.61 (m, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.28-4.26 (m, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.81-3.79 (m, 1H), 3.46 (s, 3H),0.87 (s, 9H), 0.08 (s, 6H). ESI-LCMS: m/z 478 [M+H]+.
8의 제조: DMSO (105.0 mL) 중 7 (10.5 g, 22.0 mmol)의 용액에 0℃에서 EDCI (12.7 g, 66.0 mmol), 건조 피리딘 (1.7 g, 22.0 mmol) 및 TFA (1.3 g, 11.0 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 7이 소모되었음을 나타냈다. 물 (100.0 mL)을 첨가하였다. 용액을 EA (2*200.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물 8을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 475 [M+H]+ .
9의 제조: 건조 THF (120.0 mL) 및 D2O (40.0 mL) 중 8의 용액에 K2CO3(12.2 g, 88.1 mmol) 및 7a (16.8 g, 26.5 mmol)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 35℃에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 95% 7이 소모되었음을 나타냈다. 물 (60.0 mL)을 첨가하였다. 용액을 EA (2*150.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 조 물질을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O = 1/1에서 CH3CN/H2O = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O = 4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9 (9.3 g, 54.1% 수율)를 수득하였다. 1H-NMR (DMSO-d6) δ = 11.33 (s, 1H), 8.17-8.15 (d, J = 12, 1H), 8.02-8.00 (d, J = 12, 1H), 7.64-7.62 (m, 1H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.44-7.42 (d, J = 12, 1H), 4.46-4.44 (d, J = 12, 1H), 4.24-4.23 (d, J = 6, 1H), 3.93-3.91 (d, J = 12, 1H), 1.16 (s, 18H), 0.86 (s, 9H)), 0.08-0.06 (d, J = 12, 6H). ESI-LCMS: m/z 782 [M+H]+ . 31P-NMR (DMSO-d6) δ = 16.77, 16.00.
10의 제조: HOAc (140.0 mL) 및 H2O (140.0 mL)의 혼합물 용액 중 9 (9.3 g, 11.9 mmol)를 30℃에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 9가 소모되었음을 나타냈다. 용액을 빙수에 첨가하고, EA (2*300.0 mL)로 추출하였다. 유기 층을 pH = 6-7로 켄칭한 다음, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 조 물질을 압력 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O = 1/1에서 CH3CN/H2O = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O = 2.5/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 10 (5.1 g, 64.6% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (DMSO-d6) δ = 9.09 (s, 1H), 7.92-7.85 (m, 3H), 7.60-7.48 (m, 4H), 6.02 (s, 1H), 5.71-5.64 (m, 4H), 4.53-4.51 (m, 1H), 3.94-3.70 (m, 5H), 3.31 (s, 1H), 1.21 (s, 18H). 31P-NMR (DMSO-d6) δ = 16.45. ESI-LCMS: m/z 668 [M+H] + .
11의 제조: DCM (45.0 mL) 중 10 (4.6 g, 6.9 mmol)의 현탁액에 CEOP[N (ipr)2]2 (2.5 g, 8.3 mmol), DCI (730.4 mg, 6.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 10이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 용액을 물 (40.0 mL)로 켄칭하고, 염수 (2*20.0 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O = 1/1에서 CH3CN/H2O = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O = 4/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 이로써 11 (4.7 g, 5.4 mmol, 78.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ = 11.34 (s, 1H), 8.18-8.16 (m, 1H), 8.02-8.01 (d, J = 6, 2H ), 7.65-7.42 (m, 4H), 5.95-5.93(m, 1H), 5.66-5.61 (m, 4H), 4.64-4.57 (m, 1H), 4.32-4.31 (d, J = 6, 1H )，4.12-4.10 (m, 1H), 3.81-3.45(m, 7H), 2.81-2.79 (m, 2H), 1.16-1.13 (m, 30H). 31P-NMR (CDCl3-d6) δ = 150.65, 150.20, 16.64, 15.41. ESI-LCMS: m/z 868 [M+H]+.
실시예 57
Figure pct00140
2의 제조: 1 (94.5 g, 317.9 mmol)을 N2 분위기 하에 건조 DMF (1000 mL) 중에 용해시켰다. 용액에 TBSCl (119.3 g, 794.7 mmol) 및 이미다졸 (75.8 g, 1.1 mol)을 25℃에서 첨가하고, 17시간 동안 교반하였다. LCMS는 1이 모두 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (3000*2 mL), EA (2000*2 mL) 및 염수 (1500 mL)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 2 (200 g, 조 물질)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 526 [M+H]+.
3의 제조: 2 (175.1 g, 333.0 mmol)를 피리딘과 함께 증발시키고, 진공 하에 2회 건조시켰다. 잔류물을 피리딘 (1500 mL) 중에 N2 하에 용해시켰다. 용액에 i-BuCl (88.7 g, 832.6 mmol)을 N2 분위기 하에 5℃에서 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 2가 모두 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (3000*2 mL), EA (2000*2 mL) 및 염수 (1500 mL)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 3 (228 g, 조 물질)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 596 [M+H]+.
4의 제조: THF (2000 mL) 중 3 (225 g, 377.6 mmol)의 용액에 H2O (500 mL)를 첨가하고, TFA (500 mL)를 5℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 5℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 3이 모두 소모되었음을 나타냈다. 진한 NH4OH (수성)를 혼합물에 첨가하여 pH=7-8까지 반응물을 켄칭한 다음, H2O (2000*2 mL), EA (2000*2 mL) 및 염수 (1500 mL)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 cc에 의해 정제하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 4 (155.6 g, 83.9% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 482 [M+H]+.
5의 제조: 4 (100 g, 207.6 mmol)를 N2 하에 건조 DMF (1000 mL) 중에 용해시켰다. 용액에 t-BuOH (307.8 g, 4.2 mol), PDC (156.1 g, 0.4 mol) 및 Ac2O (212.0 g, 2.1 mol)를 N2 분위기 하에 25℃에서 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC는 4가 모두 소모되었음을 나타냈다. NaHCO3 (수성)를 혼합물에 첨가하여 pH=7-8까지 반응물을 켄칭한 다음, H2O (500*2 mL), EA (500*2 mL) 및 염수 (500 mL)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 cc. 및 MPLC에 의해 정제하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 5 (77.3 g, 61.6% 수율)를 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 552 [M-H]+.
6의 제조: 5 (40.0 g, 72.6 mmol)를 N2분위기하에 무수 THF (400 mL)에 용해시켰다. 용액에 MeOD (80 mL) 및 D2O (40 mL)를 N2 분위기 하에 25℃에서 첨가한 다음, NaBD4 (9.1 g, 217.4 mmol)를 3회 첨가하고, 15시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC는 5가 모두 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 후속 단계에서 사용하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 6 (30 g, 조 물질)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 414 [M+H]+
7의 제조: 6 (30 g, 조 물질)을 피리딘과 함께 증발시키고, 진공 하에 2회 건조시켰다. 잔류물을 N2 하에 건조 피리딘 (300 mL) 중에 용해시켰다. 이어서, iBuCl (15.5 g, 145.3 mmol)을 반응 혼합물에 N2 분위기 하에 0℃에서 천천히 첨가하고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC는 6이 모두 소모되었음을 나타냈다. NaHCO3 (수성)을 혼합물에 첨가하여 pH = 7.5까지 반응물을 켄칭한 다음, H2O (1500 mL), EA (1000*2 mL) 및 염수 (1500 mL)로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 잔류물 R1을 수득하였다. NaOH (8 g, 0.2 mol), MeOH (80 mL) 및 H2O (20 mL)를 NaOH (수성)로 구성하였다. 잔류물 R1 (40 g, 3.63 mmol)을 피리딘 (20 mL) 중에 용해시켰다. 용액에 2 N NaOH (수성) (100 ml)를 용액에 첨가하고, 반응물을 5℃에서 15분 동안 교반하였다. TLC는 R1이 모두 소모되었음을 나타냈다. 혼합물에 NH4Cl을 pH=7-8로 5℃에서 첨가하고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 cc에 의해 정제하였다. 생성물을 농축시켜 7 (15.5 g, 33.00% 수율, 2 단계에 걸침)을 수득하였다. ESI-LCMS: m/z 484[M+H]+.
8의 제조: DMSO (150 mL) 중 7 (15.5 g, 32.1 mmol)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 실온에서 EDCI (18.5 g, 96.3 mmol), 피리딘 (2.5 g, 32.1 mmol), TFA (1.8 g, 16.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA (300.0 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 조 8 (17.3 g, 조 물질)을 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z =481 [M+H]+.
10의 제조: 건조 THF (204 mL) 및 D2O (34 mL) 중 8 (17.3 g, 조 물질), 9 (21.4 g, 33.7 mmol) 및 K2CO3 (13.3 g, 96.3 mmol)의 용액을 40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 켄칭하고, EA (600.0 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (PE:EA = 5:1 ~ 1:1)에 의해 정제하여 10 (9.3 g, 36.6% 수율, 2 단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-LCMS m/z = 787[M+H]+.
1H-NMR (DMSO-d6): δ 11.24 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 8.05-8.04 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.65 (t, 1H), 7.57-7.54 (t, 2H), 6.20 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.64-5.58 (m, 4H), 4.77 (t, 1H), 4.70 (t, 1H), 4.57-4.56 (t,1H), 3.35 (s, 3H), 1.09 (d, J = 6.5 Hz, 18H), 0.93 (s, 9H), 0.15 (d, J = 1.8 Hz, 6H); 31P NMR (DMSO-d6): δ 17.05.
11의 제조: 둥근 바닥 플라스크에 H2O (93 mL) 및 HCOOH (93 mL)의 혼합물 중 10 (9.3 g, 11.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반하고, 35℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (500.0 mL)로 추출하고, 물, NaHCO3 용액 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/2에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 3/2에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물 11 (6.3 g, 78% 수율)을 수득하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 12.17 (s, 1H, D2O로 교환됨), 11.51 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 6.02-6.03 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.63-5.72 (m, 5H), 4.60 (s, 1H), 4.43-4.45 (m, 2H), 3.40 (s, 1H), 3.38 (s, 1H), 2.83-2.88 (m, 1H), 1.15-1.23 (m, 24H); 31P NMR (DMSO-d6) δ=17.69. ESI-LCMS m/z = 674 [M+H]+.
12의 제조: DCM (55.0 mL) 중 11 (5.6 g, 8.3 mmol)의 용액에 DCI (835 mg, 7.1 mmol)를 첨가한 다음, CEP[N (ipr)2]2 (3.3 g, 10.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (50.0 mL) 및 염수 (50.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 압력 하에 증발시켰다. 잔류물을 다음 조건을 사용하여 플래쉬-정제용 HPLC (인텔플래쉬-1)에 의해 정제하였다: 칼럼, C18 실리카 겔; 이동상, 20분 내에 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/1에서 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 1/0으로 증가, 용리된 생성물을 CH3CN/H2O (0.5% NH4HCO3) = 9/1에서 수집하였음; 검출기, UV 254 nm. 생성물을 농축시켜 12 (6.3 g, 87% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (DMSO-d6): δ 12.14 (s, 1H, D2O로 교환됨), 11.38 (s, 1H), 8.27-8.28 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.92-5.98 (m, 1H), 5.59-5.65 (m, 4H), 4.57-4.68 (m, 3H), 3.61-3.85 (m, 4H), 3.37 (s, 1H), 3.32 (s, 1H), 2.81-2.85 (m, 3H), 1.09-1.20 (m, 36H); 31P NMR (DMSO-d6): δ 150.60, 149.97, 17.59, 17.16; ESI-LCMS m/z = 874 [M+H]+.
실시예 58. COS-7 세포에서의 루시페라제 리포터 검정
합성된 모든 siNA를 3-포인트 루시페라제 리포터 검정을 이용하여 시험관내 활성에 대해 시험하고, 후보의 하위세트를 용량-반응 루시페라제 리포터 검정에서 시험하였다.
psiCHECK™-2 리포터 플라스미드에서, 레닐라 루시페라제는 그의 번역 정지 코돈의 하류에 클로닝된 HSD17B13 유전자 (NM_178135.5)와 함께 1차 리포터 유전자로서 사용된다. 제2 리포터 유전자인 반딧불이 루시페라제를 또한 발현시키고, 형질감염 대조군으로서 사용한다. COS-7 세포 (ATCC, CRL-1651)를 96-웰 마이크로플레이트에 시딩하고, 리포펙타민 3000 (인비트로젠, L3000001)을 사용하여 리포터 플라스미드로 형질감염시켰다. 이어서, 세포를 리포펙타민 RNAiMAX (인비트로젠, 13778100)를 사용하여 10, 1, 또는 0.1 nM siNA로 형질감염시켰다. 1x 포스페이트-완충 염수를 형질감염시키는 것으로 이루어진 모의 약물 무함유 대조군을 포함시켰다. 72시간의 siNA 처리 후, 듀얼-글로(Dual-Glo)® 루시페라제 검정 시스템 (프로메가, E2940)을 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 반딧불이 및 레닐라 루시페라제 활성을 정량화하였다. 모든 발광을 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 측정하였다. 레닐라:반딧불이 발광 비를 각각의 웰에 대해 계산하였다. 이어서, siNA-처리된 웰로부터의 비를 모의 -처리된 웰의 비로 정규화하고, 백분율 억제를 계산하였다. 셀타이터-글로® 발광 세포 생존율 검정을 유사하게 처리된 COS-7 세포를 사용하여 병행하여 실행하였다. 검정을 제조업체의 프로토콜에 따라 수행하고, 발광을 엔비전 플레이트 판독기 상에서 측정하였다. 이어서, siNA-처리된 웰로부터의 발광을 모의 -처리된 웰의 발광에 대해 정규화하고, 백분율 생존율을 계산하였다.
이어서, siNA 후보의 하위세트를 용량-반응 루시페라제 리포터 검정에서 시험하였다. 용량-반응 검정을 유사하게 수행하였으나, 대신 각각의 siNA에 대해 시험된 총 9개의 농도에 대해 10 nM에서 출발하는 siNA의 연속 농도 (1:5 희석)로 수행하였다. 용량-반응 곡선을 가변 기울기를 갖는 비선형 회귀에 의해 피팅하고, EC50 값 및 최대 백분율 억제를 계산하였다. siNA는 시험된 농도에서 COS-7 세포에서의 유의한 세포독성 효과를 나타내지 않았다.
표 1. COS-7에서의 루시페라제 리포터 검정 - 3-포인트 데이터
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
A = ≥76%; B = 51-75%; C = 26-50%; D = ≤25%
표 2. COS-7에서의 셀타이터-글로 - 3-포인트 데이터
Figure pct00145
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
A = ≥ 95%; B = 85-94%; C = 75-84%; D = ≤ 74%
표 3. COS-7에서의 루시페라제 리포터 검정 - 용량-반응 데이터
Figure pct00149
A = ≥ 0.51; B = 0.31-0.5; C = 0.11-0.3; D = ≤ 0.1
AA = ≥ 91%; BB = 81-90%; CC = 71-80%
실시예 59. AAV-HSD17β13 마우스 모델에서의 siNA 생체내 활성
방법. 특정 siRNA 분자를 생체내 초기 약동학/약역학 연구를 위해 선택하였다. 간세포로의 표적화 전달을 증진시키기 위해, GalNAc 리간드를 표준 포스포르아미다이트 화학을 통해 센스 가닥의 3' 말단에 혼입시켰다. 하기 나타낸 사용된 특정 GalNAc 리간드 ("GalNAc4-ps-GalNAc4-ps GalNAc4" 또는 "p-(ps)2-GalNAc4")는 2개의 포스포로티오에이트 연결을 통해 연결된 3개의 단량체 "GalNAc4" 유도체 단위를 포함하며, 여기서 1개의 GalNAc4 단위는 표준 포스포디에스테르 연결을 통해 센스 가닥 상의 3' 말단 뉴클레오티드에 연결된다.
Figure pct00150
"GalNAc4 포스포르아미다이트"의 구조
Figure pct00151
"GalNAc4"의 구조
Figure pct00152
"GalNAc4-ps-GalNAc4-ps GalNAc4" 또는 "p-(ps)2-GalNAc4"의 구조
특정 HSD17B13 siRNA 작용제를 평가하기 위해, AAV-HSD17β13 마우스 모델을 사용하였다. 마우스 (n=4/군)에게 인간 HSD17β13을 발현하는 아데노-연관 바이러스 (AAV)를 주사하였다. AAV 주사 7일 후에, 마우스에게 단일 용량 (1.5 내지 5 mg/kg 범위)의 siRNA를 피하 투여하였다. 투여 7 내지 14일 후에, 간에서의 인간 HSD17β13 발현을 PBS가 주사된 대조군 동물의 인간 HSD17β13 발현에 대해 정규화한 후에 RTqPCR 및 웨스턴 블롯 분석에 의해 결정하였다.
제1 연구에서는, 투여 7일 후 HSD17B13 mRNA 녹다운을 관찰하면서 1.5 및/또는 5 mpk에서 siRNA 듀플렉스의 선택을 시험하였다. 결과를 도 4-10 및 13 및 표 4에 나타낸다.
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00157
Figure pct00158
*는 1회 초과의 시험에 대한 평균을 나타낸다.
여러 듀플렉스에 대한 단백질 녹다운을 또한 7일 후 (도 11) 및 정량화 (도 12 및 표 5) 및 14일 후 (도 14) 및 정량화 (도 15 및 표 6)에 의해 웨스턴 블롯에 의해 평가하였다. 또한, 일부 듀플렉스에 대한 14일 후의 HSD17B13 mRNA 녹다운 결과를 도 16 및 표 7에 나타낸다.
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
mX = 2'-O-메틸 뉴클레오티드; fX = 2'-플루오로 뉴클레오티드; v = 5' 비닐 포스포네이트; vmX = 5' 비닐 포스포네이트 2'-O-메틸 뉴클레오티드; ps = 포스포로티오에이트 연결.
Figure pct00176
mX = 2'-O-메틸 뉴클레오티드; fX = 2'-플루오로 뉴클레오티드; v = 5' 비닐 포스포네이트; vmX = 5' 비닐 포스포네이트 2'-O-메틸 뉴클레오티드; ps = 포스포로티오에이트 연결.
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
mX = 2'-O-메틸 뉴클레오티드; fX = 2'-플루오로 뉴클레오티드; v = 5' 비닐 포스포네이트; vmX = 5' 비닐 포스포네이트 2'-O-메틸 뉴클레오티드; ps = 포스포로티오에이트 연결.
Figure pct00180
Figure pct00181
Figure pct00182
Figure pct00183
Figure pct00184
mX = 2'-O-메틸 뉴클레오티드; fX = 2'-플루오로 뉴클레오티드; ps = 포스포로티오에이트 연결.
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
Figure pct00192
Figure pct00193
<예시적 실시양태>
예시적 실시양태가 하기에 제공된다:
실시양태 1. (a) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 센스 가닥; 및 (b) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 (i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고; (ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인 안티센스 가닥을 포함하는 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자.
실시양태 2. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
실시양태 3. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200 또는 231-260, 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
실시양태 4. 임의의 상기 실시양태에서, 표적 유전자는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13)일 수 있다. 임의의 실시양태에서, siNA는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소 또는 억제할 수 있다. 임의의 실시양태에서, siNA 분자는 HSD17B13의 발현 또는 활성을 감소시킨다.
실시양태 5. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태 6. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다.
실시양태 7. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 8. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 9. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다.
실시양태 10. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다.
실시양태 11. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태 12. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이다.
실시양태 13. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 14. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 15. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다.
실시양태 16. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다.
실시양태 17. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및/또는 17의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 18. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이다.
실시양태 19. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 1:3 교대 변형 패턴은 2-5회 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 2개의 1:3 교대 변형 패턴이 연속적으로 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 2개의 1:3 교대 변형 패턴이 비연속적으로 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 1:3 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2, 6, 10, 14, 및/또는 18에서 시작한다.
실시양태 20. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열된다. 임의의 실시양태에서, 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 1:2 교대 변형 패턴은 2-5회 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 2개의 1:2 교대 변형 패턴이 연속적으로 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 2개의 1:2 교대 변형 패턴이 비연속적으로 발생한다. 임의의 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 1:2 교대 변형 패턴이 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 뉴클레오티드 위치 2, 5, 8, 14, 및/또는 17에서 시작한다.
실시양태 21. 하기 화학식 (VIII)에 의해 나타내어진 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자:
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이고; n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고; n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이이고; n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이이고; 각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고; q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고; q6은 0-5개의 뉴클레오티드 길이이고; q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이이고; q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이다.
실시양태 22. 실시양태 21에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
실시양태 23. 실시양태 21 또는 22에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200 또는 231-260, 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
실시양태 24. 실시양태 21-23 중 어느 하나에서, siNA는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소 또는 억제할 수 있다.
실시양태 25. 실시양태 21-24 중 어느 하나에서, siNA는 하기 화학식 (IX)에 의해 나타내어질 수 있다.
5'-A2-6B1A1-3B2-3A2-10B0-1A0-4B0-1A0-2-3'
3'-C2A0-2B0-1A0-3B0-1A0-5B0-1A2-7B1A2-11B1A1-5'
여기서: 상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고; 각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡 또는 인산화 차단제를 포함하는 뉴클레오티드이고; B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고; C는 오버행잉 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드 또는 우라실이다.
실시양태 26. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9, 12 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 10, 11 및 13-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다.
실시양태 27. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 및 9-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다.
실시양태 28. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 및 10-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 존재한다.
실시양태 29. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 존재한다.
실시양태 30. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14, 및 17에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 4, 6, 7, 9-13, 15, 및 16에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다.
실시양태 31. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 교대되는 1:2 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 존재한다.
실시양태 32. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6-8,12, 13 및 15-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18, 20, 및 21에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-23에 존재한다.
실시양태 33. 실시양태 21-25 중 어느 하나에서, (a) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-6, 8, 및 12-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및 (b) 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥. 일부 실시양태에서, 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재한다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이다. 임의의 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 존재한다. 임의의 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어진다. 임의의 실시양태에서, 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 존재한다.
실시양태 34. 임의의 상기 실시양태에서, 센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함할 수 있다.
실시양태 35. 임의의 상기 실시양태에서, 안티센스 가닥은 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함할 수 있다.
실시양태 36. 임의의 상기 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다.
실시양태 37. 임의의 상기 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있다.
실시양태 38. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함한다.
실시양태 39. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열은 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함한다.
실시양태 40. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 41. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 42. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 43. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 44. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 1개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함할 수 있거나, 제2 뉴클레오티드 서열은 1개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결 또는 그의 조합을 추가로 포함한다. 임의의 실시양태에서, 센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 임의의 실시양태에서, 안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함한다.
실시양태 45. 실시양태 44에서, 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 46. 실시양태 44 또는 45에서, 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 47. 실시양태 44-46 중 어느 하나에서, 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 48. 실시양태 44-47 중 어느 하나에서, 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결은 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있다.
실시양태 49. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 포함한다.
실시양태 50. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드는 5' 안정화 말단 캡을 포함한다.
실시양태 51. 실시양태 49 또는 50에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (I')일 수 있다:
Figure pct00194
, 여기서: R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고, R26은
Figure pct00195
, -CH=CD-Z, -CD=CH-Z, -CD=CD-Z, -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z이고, R20은 수소이거나; 또는 R2 및 R20은 함께 -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z로 치환된 3- 내지 7-원 카르보시클릭 고리를 형성하고; n은 1, 2, 3 또는 4이고; Z는 -ONR23R24, -OP(O)OH(CH2)mCO2R23, -OP(S)OH(CH2)mCO2R23, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)(OCH3), -P(O)(OH)(OCD3), -SO2(CH2)mP(O)(OH)2, -SO2NR23R25, -NR23R24이고, R21 및 R22는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이거나; R21 및 R22는 함께 옥소 기를 형성하고; R23은 수소 또는 C1-C6 알킬이고; R24는 -SO2R25 또는 -C(O)R25이거나; 또는 R23 및 R24는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고; R25는 C1-C6 알킬이고; R100은 -OCH3, -OCD3 또는 -F이고; m은 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (1) 내지 화학식 (15), 화학식 (9X) 내지 화학식 (12X), 및 화학식 (9Y) 내지 화학식 (12Y)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00196
Figure pct00197
, 여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (1A)-(15A), 화학식 (9B)-(12B), 화학식 (9AX)-(12AX), 화학식 (9AY)-(12AY), 화학식 (9BX)-(12BX), 및 화학식 (9BY)-(12BY)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00198
Figure pct00199
Figure pct00200
. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (21) 내지 화학식 (35)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00201
, 여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (21A)-(35A), 화학식 (29B)-(32B), 화학식 (29AX)-(32AX), 화학식 (29AY)-(32AY), 화학식 (29BX)-(32BX), 및 화학식 (29BY)-(32BY)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
, 여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이다.
실시양태 52. 실시양태 49-51 중 어느 하나에서, 5'-안정화된 말단 캡은 5' 비닐 포스포네이트 또는 중수소화 5' 비닐 포스포네이트를 포함할 수 있다.
실시양태 53. 실시양태 49 또는 50에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (IIA) 또는 (IIB)일 수 있다:
Figure pct00205
; 여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이다.
실시양태 54. 실시양태 49 또는 50에서, 5'-안정화된 말단 캡은 하기 화학식 (IIIA) 또는 (IIIB)일 수 있다:
Figure pct00206
; 여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고; R15는 H 또는 CH3이다.
실시양태 55. 실시양태 49 또는 50에서, 5'-안정화된 말단 캡은
Figure pct00207
일 수 있다.
실시양태 56. 실시양태 49-55 중 어느 하나에서, 안티센스 가닥의 5' 말단은 1개 이상의 링커를 통해 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된다.
실시양태 57. 실시양태 49-56 중 어느 하나에서, 센스 가닥의 5' 말단은 1개 이상의 링커를 통해 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된다.
실시양태 58. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 포함한다.
실시양태 59. 임의의 상기 실시양태에서, 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드는 인산화 차단제를 포함한다.
실시양태 60. 실시양태 58 또는 59에서, 인산화 차단제는 하기 화학식 (IV)의 인산화 차단제일 수 있다:
Figure pct00208
, 여기서 R1은 핵염기이고, R4는 -O-R30 또는 -NR31R32이고, R30은 C1-C8 치환 또는 비치환된 알킬이고; R31 및 R32는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성한다.
실시양태 61. 임의의 상기 실시양태에서, siNA 분자는 하기 화학식 (IV)의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다:
Figure pct00209
.
실시양태 62. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 센스 가닥의 5' 말단에 부착된다.
실시양태 63. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
실시양태 64. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다.
실시양태 65. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
실시양태 66. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 및 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 센스 가닥의 5' 말단에 부착된다.
실시양태 67. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 및 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
실시양태 68. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 및 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착된다.
실시양태 69. 임의의 상기 실시양태에서, 인산화 차단제는 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커 및 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착된다.
실시양태 70. 임의의 상기 실시양태에서, siNA 분자는 갈락토사민을 추가로 포함한다.
실시양태 71. 실시양태 70에서, 갈락토사민은 하기 화학식 (VII)의 N-아세틸갈락토사민 (GalNAc)이다:
Figure pct00210
, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1 또는 2이다.
실시양태 72. 실시양태 70에서, 갈락토사민은 하기 화학식 (VI)의 N-아세틸갈락토사민 (GalNAc)이다:
Figure pct00211
, 여기서 m은 1, 2, 3, 4 또는 5이고; 각각의 n은 독립적으로 1 또는 2이고; p는 0 또는 1이고; 각각의 R은 독립적으로 H이고; 각각의 Y는 독립적으로 -O-P(=O)(SH)-, -O-P(=O)(O)-, -O-P(=O)(OH)-, 및 -O-P(S)S-로부터 선택되고; Z는 H 또는 제2 보호기이고; L은 링커이거나 또는 L 및 Y는 조합하여 링커이고; A는 H, OH, 제3 보호기, 활성화된 기, 또는 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, A는 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, A는 1-2개의 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 dTdT이다.
실시양태 73. 실시양태 70-72 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 74. 실시양태 70-73 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 75. 실시양태 70-74 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 76. 실시양태 70-75 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 77. 실시양태 70-76 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 78. 실시양태 70-77 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 80. 실시양태 70-78 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 안티센스 가닥의 3' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 81. 실시양태 70-79 중 어느 하나에서, 갈락토사민은 포스포디에스테르 링커, 포스포로티오에이트 링커, 또는 포스포로디티오에이트 링커로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 링커를 통해 안티센스 가닥의 5' 말단에 부착될 수 있다.
실시양태 82. 임의의 상기 실시양태에서, 안티센스 가닥, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열은
Figure pct00212
또는 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1개의 열적 탈안정화 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태 83. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 하기 화학식 (V)의 2'-플루오로 또는 2-O-메틸 뉴클레오티드 모방체이다:
Figure pct00213
, 여기서 R1은 독립적으로 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고; Q1 및 Q2는 독립적으로 S 또는 O이고; R5는 독립적으로 -OCD3, -F 또는 -OCH3이고; R6 및 R7은 독립적으로 H, D 또는 CD3이다.
실시양태 84. 실시양태 83에서, 2'-플루오로 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 모방체는 하기 화학식 (16) - 화학식 (20)의 뉴클레오티드 모방체일 수 있다:
Figure pct00214
, 여기서 R1은 핵염기이고, R2는 독립적으로 F 또는 -OCH3이다.
실시양태 85. 임의의 상기 실시양태에서, 적어도 1개의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체일 수 있다.
실시양태 86. 실시양태 85에서, 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열 상의 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
실시양태 87. 실시양태 85 또는 86에서, 안티센스 가닥 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
실시양태 88. 실시양태 85-87 중 어느 하나에서, 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열 상의 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
실시양태 89. 실시양태 85-88 중 어느 하나에서, 센스 가닥 또는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 및/또는 17의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체이다.
실시양태 90. 실시양태 85-89 중 어느 하나에서, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 f4P 뉴클레오티드 (
Figure pct00215
)이다.
실시양태 91. 실시양태 85-90 중 어느 하나에서, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2개 이하의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 f4P 뉴클레오티드 (
Figure pct00216
)이다.
실시양태 92. 실시양태 85-91 중 어느 하나에 있어서, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 f2P 뉴클레오티드 (
Figure pct00217
)이다.
실시양태 93. 실시양태 85-92 중 어느 하나에서, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2개 이하의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 f2P 뉴클레오티드 (
Figure pct00218
)이다.
실시양태 94. 실시양태 85-93 중 어느 하나에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 초과의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 fX 뉴클레오티드 (
Figure pct00219
)이다.
실시양태 95. 실시양태 85-94 중 어느 하나에서, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2개 이하의 2'-플루오로 뉴클레오티드 모방체는 fX 뉴클레오티드 (
Figure pct00220
)이다.
실시양태 96. 임의의 상기 실시양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드 또는 제2 뉴클레오티드 서열은 d2vd3 뉴클레오티드 (
Figure pct00221
)이다.
실시양태 97. 임의의 상기 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 말단으로부터의 제1 뉴클레오티드 또는 제2 뉴클레오티드 서열은 d2vd3 뉴클레오티드 (
Figure pct00222
)이다.
실시양태 98. 임의의 상기 실시양태에서, siNA의 적어도 1개의 말단은 평활 말단이다.
실시양태 99. 임의의 상기 실시양태에서, siNA의 적어도 1개의 말단은 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태 100. 임의의 상기 실시양태에서, siNA의 양쪽 말단은 오버행을 포함하며, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함한다.
실시양태 101. 임의의 상기 실시양태에서, 표적 유전자는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13)이다.
실시양태 102. 임의의 상기 실시양태에서, 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200, 231-260 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
실시양태 103. 임의의 상기 실시양태에 따른 siNA 분자 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
실시양태 104. 실시양태 103에서, 추가의 간 질환 치료제를 추가로 포함한다.
실시양태 105. 실시양태 103 또는 104에서, 추가의 siNA를 추가로 포함한다.
실시양태 106. 실시양태 103-105 중 어느 하나에서, 간 질환 치료제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 간 질환 치료제는 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 및 인크레틴-기반 요법으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 간 질환 치료제는 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택된 PPAR 효능제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 간 질환 치료제는 피브레이트, 엘라피브라노르, 티아졸리딘디온 (TZD), 피오글리타존, 사로글리타자르, 오베티콜산 (OCA), 아람콜, 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제, 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제, 엑세나티드, 리라글루티드 시타글립틴, 및 빌다플립틴으로부터 선택될 수 있다.
실시양태 107. 실시양태 103-106 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 조성물.
실시양태 108. 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서 임의의 상기 실시양태에 따른 siNA 분자 또는 조성물의 용도.
실시양태 109. 질환의 치료에 있어서 임의의 상기 실시양태에 따른 siNA 분자 또는 조성물의 용도.
실시양태 110. 실시양태 1-102 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 siNA 분자.
실시양태 111. 실시양태 1-102 중 어느 하나에 있어서, 질환의 치료에 사용하기 위한 siNA 분자.
실시양태 112. 실시양태 109-111 중 임의의 것에서, 질환은 간 질환이다.
실시양태 113. 실시양태 109-112 중 임의의 것에서, 질환은 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD) 또는 간세포성 암종 (HCC)이다.
실시양태 114. 실시양태 109-113 중 임의의 것에서, 질환은 비알콜성 지방간염 (NASH)이다.
실시양태 115. 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자로서,
(a) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은:
(i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고;
(ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인
센스 가닥;
(b) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은
(i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고;
(ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열 또는 그의 조합을 포함하는 것인
siNA 분자.
실시양태 116. 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자로서,
(a) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은:
(i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고;
(ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 17 및/또는 19의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인
센스 가닥;
(b) 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은
(i) 15 내지 30개의 뉴클레오티드 길이이고;
(ii) 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 15개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고, 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
여기서 siNA는 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소시키거나 억제하는 것인
siNA 분자.
실시양태 117. 실시양태 115 또는 실시양태 116에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개, 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고/거나;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%가 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이고/거나;
제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고/거나;
제1 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고/거나;
제1 뉴클레오티드 서열의 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고/거나;
제1 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
siNA 분자.
실시양태 118. 실시양태 115-117 중 어느 하나에 있어서, 제2 뉴클레오티드 서열이 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23개, 또는 그 초과의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;
임의로 여기서:
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드의 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%가 2'-O-메틸 뉴클레오티드 및 2'-플루오로 뉴클레오티드로부터 독립적으로 선택된 변형된 뉴클레오티드이고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열의 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 이하의 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
siNA 분자.
실시양태 119. 실시양태 115-118 중 어느 하나에 있어서, 적어도:
제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및/또는 17의 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고/이거나;
제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 6, 8, 10, 14, 16, 17 및/또는 18의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드인
siNA 분자.
실시양태 120. 실시양태 115-119 중 어느 하나에 있어서,
(i) 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드가 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고,
(ii) 1개의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고;
임의로 여기서 1:3 교대 변형 패턴이 2-5회 발생하는 것인
siNA 분자.
실시양태 121. 실시양태 115-119 중 어느 하나에 있어서,
(i) 제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고,
(ii) 1개의 뉴클레오티드가 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드이고;
임의로 여기서 1:2 교대 변형 패턴이 2-5회 발생하는 것인
siNA 분자.
실시양태 122. 하기 화학식 (VIII)에 의해 나타내어진 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자:
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서:
상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고;
B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고;
C는 오버행 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드, 또는 우라실이고;
n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고;
각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고;
각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고;
n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이;
n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이;
각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고;
q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고;
q6은 길이가 0-5개의 뉴클레오티드이고;
q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이; 및
q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이고;
여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314, 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 101-200, 231-260, 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
실시양태 123. 하기 화학식 (VIII)에 의해 나타내어진 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자로서, 히드록시스테로이드 데히드로게나제의 생성을 감소시키거나 억제하는 siNA 분자:
5'-An 1Bn 2An 3Bn 4An 5Bn 6An 7Bn 8An 9-3'
3'-Cq 1Aq 2Bq 3A q 4Bq 5Aq 6Bq 7Aq 8Bq 9Aq 10Bq 11Aq 12-5'
여기서:
상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고;
B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고;
C는 오버행 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드, 또는 우라실이고;
n1 = 1-6개의 뉴클레오티드 길이이고;
각각의 n2, n6, n8, q3, q5, q7, q9, q11 및 q12는 독립적으로 0-1개의 뉴클레오티드 길이이고;
각각의 n3 및 n4는 독립적으로 1-3개의 뉴클레오티드 길이이고;
n5는 1-10개의 뉴클레오티드 길이;
n7은 0-4개의 뉴클레오티드 길이;
각각의 n9, q1 및 q2는 독립적으로 0-2개의 뉴클레오티드 길이이고;
q4는 0-3개의 뉴클레오티드 길이이고;
q6은 길이가 0-5개의 뉴클레오티드이고;
q8은 2-7개의 뉴클레오티드 길이; 및
q10은 2-11개의 뉴클레오티드 길이이다.
실시양태 124. 실시양태 123에 있어서, 하기 화학식 (IX)에 의해 나타내어진 siNA 분자:
5'-A2-6B1A1-3B2-3A2-10B0-1A0-4B0-1A0-2-3'
3'-C2A0-2B0-1A0-3B0-1A0-5B0-1A2-7B1A2-11B1A1-5'
여기서:
상부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥이고, 여기서 제1 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
하부 가닥은 표적 유전자에 상응하는 RNA에 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적인 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥이고, 여기서 제2 뉴클레오티드 서열은 15 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 A는 독립적으로 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 뉴클레오티드 또는 인산화 차단제이고;
B는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고;
C는 오버행 뉴클레오티드를 나타내고, 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 데옥시 뉴클레오티드, 또는 우라실이다.
실시양태 125. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
a. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9, 12, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 10, 11, 및 13-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
b. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 126. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
c. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7, 8, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 및 9-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
d. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 127. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
e. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 3, 7-9, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 2, 4-6, 및 10-16에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
f. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10, 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13, 및 15-17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 128. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
g. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
h. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 10, 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-9, 11-13 및 15-17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18에 존재하고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 129. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
i. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
j. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 5, 8, 14, 및 17에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3, 4, 6, 7, 9-13, 15, 및 16에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 130. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
k. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5 및 7-9에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6, 및 10-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
l. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 19개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18 및 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21 또는 19-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 131. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
m. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 5, 9-11 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-4, 6-8,12, 13 및 15-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
n. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 14에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-13, 및 15-17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18, 20, 및 21에 존재하고/거나;
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 19에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-23에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 132. 실시양태 123 또는 실시양태 124에 있어서,
o. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥으로서, 여기서 2'-플루오로 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 7 및 9-11에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1-6, 8, 및 12-17에 존재하는 것인 센스 가닥; 및
p. 17 내지 23개의 뉴클레오티드로 이루어진 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥으로서, 여기서:
2'-플루오로 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2, 6, 14, 및 16에 존재하고, 여기서 2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1, 3-5, 7-13, 15, 및 17에 존재하거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:3 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 3개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드이거나; 또는
제2 뉴클레오티드 서열 내의 뉴클레오티드는 1:2 교대 변형 패턴으로 배열되고, 여기서 1개의 뉴클레오티드는 2'-플루오로 뉴클레오티드이고, 2개의 뉴클레오티드는 2'-O-메틸 뉴클레오티드인
안티센스 가닥
을 포함하고;
임의로 여기서:
제1 뉴클레오티드 서열은 21개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 존재하고/거나;
제2 뉴클레오티드 서열은 23개의 뉴클레오티드로 이루어지고/거나;
2'-O-메틸 뉴클레오티드는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 18-21에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 133. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 센스 가닥이 제1 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함하거나, 안티센스 가닥이 제2 뉴클레오티드 서열에 인접한 TT 서열을 추가로 포함하거나 또는 그의 조합인 siNA 분자.
실시양태 134. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열이 1개 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 또는 그의 조합을 추가로 포함하고:
임의로 여기서:
센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 포함하고;
안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함하는 것인
siNA 분자.
실시양태 135. 실시양태 134에 있어서,
(i) 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(ii) 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(iii) 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(iv) 적어도 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 136. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 1개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열이 1개 이상의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결 또는 그의 조합을 추가로 포함하고;
임의로 여기서:
센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함하고;
안티센스 가닥은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 추가로 포함하는 것인
siNA 분자.
실시양태 137. 실시양태 136에 있어서,
(i) 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(ii) 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 5' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(iii) 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 1 및 2의 뉴클레오티드 사이에 있고/거나;
(iv) 적어도 1개의 메실 포스포로아미데이트 뉴클레오시드간 연결이 제1 뉴클레오티드 서열 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열의 3' 말단으로부터 위치 2 및 3의 뉴클레오티드 사이에 있는 것인
siNA 분자.
실시양태 138. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 센스 가닥이 안정화 말단 캡을 추가로 포함하거나, 안티센스 가닥이 안정화 말단 캡을 추가로 포함하거나 또는 그의 조합인 siNA 분자.
실시양태 139. 실시양태 138에 있어서, 하기 화학식 (I')의 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 siNA 분자:
Figure pct00223
여기서:
R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고,
R26은
Figure pct00224
, -CH=CD-Z, -CD=CH-Z, -CD=CD-Z, -(CR21R22)n-Z, 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z이고, R20은 수소이거나; 또는
R26 및 R20은 함께 -(CR21R22)n-Z 또는 -(C2-C6 알케닐렌)-Z로 치환된 3- 내지 7-원 카르보시클릭 고리를 형성하고;
n은 1, 2, 3, 또는 4이고;
Z는 -ONR23R24, -OP(O)OH(CH2)mCO2R23, -OP(S)OH(CH2)mCO2R23, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)(OCH3), -P(O)(OH)(OCD3), -SO2(CH2)mP(O)(OH)2, -SO2NR23R25, -NR23R24이고,
R21 및 R22는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이거나; R21 및 R22는 함께 옥소 기를 형성하고;
R23은 수소 또는 C1-C6 알킬이고;
R24는 -SO2R25 또는 -C(O)R25이거나; 또는
R23 및 R24는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
R25는 C1-C6 알킬이고;
R100은 -OCH3, -OCD3, 또는 -F이고;
m은 1, 2, 3, 또는 4이다.
실시양태 140. 실시양태 138 또는 실시양태 139에 있어서, 5'-안정화된 말단 캡이 5' 비닐 포스포네이트 또는 중수소화 5' 비닐 포스포네이트를 포함하는 것인 siNA 분자.
실시양태 141. 실시양태 138에 있어서, 하기 화학식 (IIA) 또는 (IIB)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 siNA 분자:
Figure pct00225
여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이다.
실시양태 142. 실시양태 135에 있어서, 하기 화학식 (IIIA) 또는 (IIIB)의 5'-안정화된 말단 캡을 포함하는 siNA 분자:
Figure pct00226
여기서 R1은 핵염기, 아릴, 헤테로아릴, 또는 H이고; R15는 H 또는 CH3이다.
실시양태 143. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 센스 가닥이 인산화 차단제를 추가로 포함하거나, 안티센스 가닥이 인산화 차단제를 추가로 포함하거나 또는 그의 조합인 siNA 분자.
실시양태 144. 실시양태 143에 있어서, 인산화 차단제가 하기 화학식 (IV)의 인산화 차단제인 siNA 분자:
Figure pct00227
여기서:
R1은 핵염기이고,
R4는 -O-R30 또는 -NR31R32이고,
R30은 C1-C8 치환 또는 비치환된 알킬이고;
R31 및 R32는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리를 형성한다.
실시양태 145. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 하기 화학식 (IV)의 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 siNA 분자.
Figure pct00228
실시양태 146. 임의의 상기 실시양태에 있어서, siNA가 갈락토사민을 추가로 포함하는 것인 siNA 분자.
실시양태 147. 실시양태 146에 있어서, 갈락토사민이 하기 화학식 (VI) 또는 화학식 (VII)의 N-아세틸갈락토사민 (GalNAc)인 siNA 분자:
Figure pct00229
Figure pct00230
여기서:
m은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
각각의 n은 독립적으로 1 또는 2이고;
p는 0 또는 1이고;
각각의 R은 독립적으로 H이고;
각각의 Y는 독립적으로 -O-P(=O)(SH)-, -O-P(=O)(O)-, -O-P(=O)(OH)-, 및 -O-P(S)S-로부터 선택되고;
Z는 H 또는 제2 보호기이고;
L은 링커이거나 또는 L 및 Y는 조합하여 링커이고;
A는 H, OH, 제3 보호기, 활성화된 기 또는 올리고뉴클레오티드이다.
실시양태 148. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 안티센스 가닥, 센스 가닥, 제1 뉴클레오티드 서열, 및/또는 제2 뉴클레오티드 서열이
Figure pct00231
또는 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1개의 열적 탈안정화 뉴클레오티드를 포함하는 것인 siNA 분자.
실시양태 149. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 적어도 1개의 2'-플루오로 뉴클레오티드 또는 2'-O-메틸 뉴클레오티드가 하기 화학식 (V)의 2'-플루오로 또는 2-O-메틸 뉴클레오티드 모방체인 siNA 분자:
Figure pct00232
여기서
R1은 독립적으로 핵염기, 아릴, 헤테로아릴 또는 H이고,
Q1 및 Q2는 독립적으로 S 또는 O이고,
R5는 독립적으로 -OCD3, -F, 또는 -OCH3이고,
R6 및 R7은 독립적으로 H, D 또는 CD3이다.
실시양태 150. 임의의 상기 실시양태에 있어서,
(i) siNA의 적어도 1개의 말단이 평활 말단이고/거나;
(ii) siNA의 적어도 1개의 말단이 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함하는 오버행을 포함하거나; 또는
(iii) siNA의 양쪽 말단이 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함하는 오버행을 포함하는 것인
siNA 분자.
실시양태 151. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 표적 유전자가 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13)인 siNA 분자.
실시양태 152. 임의의 상기 실시양태에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314 또는 315 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 제2 뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 101-200, 231-260 또는 288-313 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
실시양태 153. 임의의 상기 실시양태에 따른 siNA 분자 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
실시양태 154. 실시양태 153에 있어서,
(i) 추가의 간 질환 치료제; 및/또는
(ii) 추가의 siNA
를 추가로 포함하는 조성물.
실시양태 155. 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서 상기 실시양태 중 어느 하나에 따른 siNA 분자 또는 조성물의 용도.
실시양태 156. 실시양태 155에 있어서,
(i) 질환이 간 질환이거나;
(ii) 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD) 또는 간세포성 암종 (HCC)이거나; 또는
(iii) 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인
용도.
실시양태 157. 실시양태 155 또는 실시양태 156에 있어서, 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인 용도.
실시양태 158. 실시양태 115-152 중 어느 하나에 있어서, 질환의 치료에 사용하기 위한 siNA.
실시양태 159. 실시양태 158에 있어서,
(i) 질환이 간 질환이거나;
(ii) 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD) 또는 간세포성 암종 (HCC)이거나; 또는
(iii) 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인
siNA.

Claims (108)

  1. 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자로서,
    (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥; 및/또는
    (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥
    을 포함하고,
    여기서 siNA 분자는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13) 유전자의 발현을 하향조절하는 것인
    siNA 분자.
  2. 제1항에 있어서, 센스 가닥이 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 안티센스 가닥이 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  4. 이중-가닥 짧은 간섭 핵산 (siNA) 분자로서,
    (a) 서열식별번호: 1-100, 201-230, 262-287, 314-445, 576-603 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥, 및/또는
    (b) 서열식별번호: 101-200, 231-260, 288-313, 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥
    을 포함하고,
    여기서 siNA 분자는 히드록시스테로이드 17-베타 데히드로게나제 13 (HSD17B13) 유전자의 발현을 하향조절하는 것인
    siNA 분자.
  5. 제4항에 있어서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥이 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 것인 siNA 분자.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥이 리보스 당에 대한 변형, 핵염기에 대한 변형, 및 포스포디에스테르 백본에 대한 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 변형을 포함하는 것인 siNA 분자.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥이 2'-O-메틸, 2'-플루오로, 잠금 핵산, 뉴클레오시드 유사체, 5' 말단 비닐 포스포네이트, 및 5' 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는 것인 siNA 분자.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 서열식별번호: 316-445, 576-603, 또는 638 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 가닥이 서열식별번호: 446-575, 604-637 또는 639-644 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자의 적어도 1개의 말단이 평활 말단인 siNA 분자.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자의 적어도 1개의 말단이 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함하는 것인 siNA 분자.
  12. 제1항 내지 제7항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자의 양쪽 말단이 오버행을 포함하고, 여기서 오버행은 적어도 1개의 뉴클레오티드를 포함하는 것인 siNA 분자.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 듀플렉스 식별 번호 D1-D178 또는 MD1-MD178 중 어느 하나로부터 선택되는 siNA 분자.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, HSD17B13 유전자가 서열식별번호: 261의 전장에 걸쳐 서열식별번호: 261의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, HSD17B13 유전자가 서열식별번호: 261의 전장에 걸쳐 서열식별번호: 261의 뉴클레오티드 서열에 대해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이하의 뉴클레오티드 미스매치를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 siNA 분자.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 siNA 분자를 포함하는 제약 조성물.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 siNA 분자를 포함하는 제약 조성물.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 활성제를 추가로 포함하고, 여기서 적어도 1종의 추가의 활성제는 간 질환 치료제인 제약 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 간 질환 치료제가 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 인크레틴-기반 요법 및 갑상선 호르몬 수용체 (THR) 조정제로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, PPAR 효능제가 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 이중 PPARα 효능제가 피브레이트인 제약 조성물.
  22. 제20항에 있어서, PPARα/δ 효능제가 엘라피브라노르인 제약 조성물.
  23. 제20항에 있어서, PPARγ 효능제가 티아졸리딘디온 (TZD)인 제약 조성물.
  24. 제23항에 있어서, TZD가 피오글리타존인 제약 조성물.
  25. 제20항에 있어서, 이중 PPARα/γ 효능제가 사로글리타자르인 제약 조성물.
  26. 제19항에 있어서, FXR 효능제가 오베티콜산 (OCA) 및 TERN-101로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  27. 제19항에 있어서, 지질-변경제가 아람콜인 제약 조성물.
  28. 제19항에 있어서, 인크레틴-기반 요법이 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제 또는 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제인 제약 조성물.
  29. 제28항에 있어서, GLP-1 수용체 효능제가 엑세나티드 또는 리라글루티드인 제약 조성물.
  30. 제28항에 있어서, DPP-4 억제제가 시타글립틴 또는 빌다플립틴인 제약 조성물.
  31. 제19항에 있어서, THR 조정제가 THR-베타 조정제 및 갑상선 호르몬 유사체로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  32. 제31항에 있어서, THR-베타 조정제가 THR-베타 효능제인 제약 조성물.
  33. 제32항에 있어서, THR-베타 효능제가 KB141, 소베티롬, Sob-AM2, 에프로티롬, VK2809, 레스메티롬, MB07344, IS25, TG68 및 GC-24로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  34. 제31항에 있어서, 갑상선 호르몬 유사체가 L-94901 및 CG-23425로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  35. 간 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 siNA 분자를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법.
  36. 간 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법.
  37. 제35항 또는 제36항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)인 방법.
  38. 제35항 또는 제36항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인 방법.
  39. 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 적어도 1종의 추가의 활성제를 투여하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 적어도 1종의 추가의 활성제는 간 질환 치료제인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 간 질환 치료제가 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 인크레틴-기반 요법 및 갑상선 호르몬 수용체 (THR) 조정제로부터 선택되는 것인 방법.
  41. 제40항에 있어서, PPAR 효능제가 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택되는 것인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 이중 PPARα 효능제가 피브레이트인 방법.
  43. 제41항에 있어서, PPARα/δ 효능제가 엘라피브라노르인 방법.
  44. 제41항에 있어서, PPARγ 효능제가 티아졸리딘디온 (TZD)인 방법.
  45. 제44항에 있어서, TZD가 피오글리타존인 방법.
  46. 제41항에 있어서, 이중 PPARα/γ 효능제가 사로글리타자르인 방법.
  47. 제40항에 있어서, FXR 효능제가 오베티콜산 (OCA) 및 TERN-101로부터 선택되는 것인 방법.
  48. 제40항에 있어서, 지질-변경제가 아람콜인 방법.
  49. 제40항에 있어서, 인크레틴-기반 요법이 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제 또는 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제인 방법.
  50. 제49항에 있어서, GLP-1 수용체 효능제가 엑세나티드 또는 리라글루티드인 방법.
  51. 제49항에 있어서, DPP-4 억제제가 시타글립틴 또는 빌다플립틴인 방법.
  52. 제40항에 있어서, THR 조정제가 THR-베타 조정제 및 갑상선 호르몬 유사체로부터 선택되는 것인 방법.
  53. 제52항에 있어서, THR-베타 조정제가 THR-베타 효능제인 방법.
  54. 제53항에 있어서, THR-베타 효능제가 KB141, 소베티롬, Sob-AM2, 에프로티롬, VK2809, 레스메티롬, MB07344, IS25, TG68 및 GC-24로부터 선택되는 것인 방법.
  55. 제52항에 있어서, 갑상선 호르몬 유사체가 L-94901 및 CG-23425로부터 선택되는 것인 방법.
  56. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자 및 간 질환 치료제가 공동으로 투여되는 것인 방법.
  57. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자 및 간 질환 치료제가 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  58. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 간 질환 치료제를 투여하기 전에 투여되는 것인 방법.
  59. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 간 질환 치료제를 투여한 후에 투여되는 것인 방법.
  60. 제35항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 적어도 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 또는 15 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  61. 제35항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 3 mg/kg 내지 50 mg/kg, 3 mg/kg 내지 40 mg/kg, 3 mg/kg 내지 30 mg/kg, 3 mg/kg 내지 20 mg/kg, 3 mg/kg 내지 15 mg/kg, 3 mg/kg 내지 10 mg/kg, 4 mg/kg 내지 50 mg/kg, 4 mg/kg 내지 40 mg/kg, 4 mg/kg 내지 30 mg/kg, 4 mg/kg 내지 20 mg/kg, 4 mg/kg 내지 15 mg/kg, 4 mg/kg 내지 10 mg/kg, 5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 5 mg/kg 내지 20 mg/kg, 5 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 5 mg/kg 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  62. 제35항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회 투여되는 것인 방법.
  63. 제35항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 적어도 1일 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회, 적어도 1주 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회, 또는 적어도 1개월 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여되는 것인 방법.
  64. 제35항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일마다 1회 투여되는 것인 방법.
  65. 제35항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54 또는 55주의 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  66. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 5 mg/kg의 단일 용량으로 투여되는 것인 방법.
  67. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 10 mg/kg의 단일 용량으로 투여되는 것인 방법.
  68. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 1주 1회 10 mg/kg의 3회 용량으로 투여되는 것인 방법.
  69. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 3일마다 1회 10 mg/kg의 3회 용량으로 투여되는 것인 방법.
  70. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 3일마다 1회 10 mg/kg의 5회 용량으로 투여되는 것인 방법.
  71. 제35항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자가 1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 2 mg/kg 내지 15 mg/kg, 2 mg/kg 내지 10 mg/kg, 3 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 3 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위의 6회 용량으로 투여되는 것인 방법.
  72. 제71항에 있어서, 제1 용량 및 제2 용량이 적어도 3일 간격으로 투여되는 것인 방법.
  73. 제71항 또는 제72항에 있어서, 제2 용량 및 제3 용량이 적어도 4일 간격으로 투여되는 것인 방법.
  74. 제71항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 용량 및 제4 용량, 제4 용량 및 제5 용량, 또는 제5 용량 및 제6 용량이 적어도 7일 간격으로 투여되는 것인 방법.
  75. 제35항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, siNA 분자 또는 제약 조성물이 정맥내 또는 피하 투여되는 것인 방법.
  76. 간 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 siNA 분자 또는 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물의 용도.
  77. 제76항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)인 용도.
  78. 제76항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인 용도.
  79. 제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 의약의 제조에서 적어도 1종의 추가의 활성제를 추가로 포함하고, 여기서 적어도 1종의 추가의 활성제는 간 질환 치료제인 용도.
  80. 제79항에 있어서, 간 질환 치료제가 퍼옥시솜 증식자-활성화제 수용체 (PPAR) 효능제, 파르네소이드 X 수용체 (FXR) 효능제, 지질-변경제, 인크레틴-기반 요법 및 갑상선 호르몬 수용체 (THR) 조정제로부터 선택되는 것인 용도.
  81. 제80항에 있어서, PPAR 효능제가 PPARα 효능제, 이중 PPARα/δ 효능제, PPARγ 효능제 및 이중 PPARα/γ 효능제로부터 선택되는 것인 용도.
  82. 제81항에 있어서, 이중 PPARα 효능제가 피브레이트인 용도.
  83. 제81항에 있어서, PPARα/δ 효능제가 엘라피브라노르인 용도.
  84. 제81항에 있어서, PPARγ 효능제가 티아졸리딘디온 (TZD)인 용도.
  85. 제84항에 있어서, TZD가 피오글리타존인 용도.
  86. 제81항에 있어서, 이중 PPARα/γ 효능제가 사로글리타자르인 용도.
  87. 제80항에 있어서, FXR 효능제가 오베티콜산 (OCA)인 용도.
  88. 제80항에 있어서, 지질-변경제가 아람콜인 용도.
  89. 제80항에 있어서, 인크레틴-기반 요법이 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 수용체 효능제 또는 디펩티딜 펩티다제 4 (DPP-4) 억제제인 용도.
  90. 제89항에 있어서, GLP-1 수용체 효능제가 엑세나티드 또는 리라글루티드인 용도.
  91. 제89항에 있어서, DPP-4 억제제가 시타글립틴 또는 빌다플립틴인 용도.
  92. 제80항에 있어서, THR 조정제가 THR-베타 조정제 및 갑상선 호르몬 유사체로부터 선택되는 것인 용도.
  93. 제92항에 있어서, THR-베타 조정제가 THR-베타 효능제인 방법.
  94. 제93항에 있어서, THR-베타 효능제가 KB141, 소베티롬, Sob-AM2, 에프로티롬, VK2809, 레스메티롬, MB07344, IS25, TG68 및 GC-24로부터 선택되는 것인 방법.
  95. 제92항에 있어서, 갑상선 호르몬 유사체가 L-94901 및 CG-23425로부터 선택되는 것인 방법.
  96. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 siNA 분자.
  97. 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 제약 조성물.
  98. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 간 질환의 치료에 사용하기 위한 siNA 분자.
  99. 제98항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)인 siNA 분자.
  100. 제98항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인 siNA 분자.
  101. 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 간 질환의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
  102. 제101항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)인 제약 조성물.
  103. 제101항에 있어서, 간 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH)인 제약 조성물.
  104. HSD17B13의 발현 수준의 감소를 필요로 하는 대상체에게 소정량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 siNA 분자 또는 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 투여하고, 그에 의해 대상체에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HSD17B13의 발현 수준을 감소시키는 방법.
  105. 간 질환의 적어도 1종의 증상의 예방을 필요로 하는 대상체에게 소정량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 siNA 분자 또는 제16항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 투여하고, 그에 의해 상기 대상체에서 간 질환의 적어도 1종의 증상을 예방하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 간 질환의 적어도 1종의 증상을 예방하는 방법.
  106. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드를 추가로 포함하는 siNA 분자.
  107. 제106항에 있어서, 리간드가 적어도 1개의 GalNAc 유도체를 포함하는 것인 siNA 분자.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 리간드가
    인 siNA 분자.
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