KR20240049862A

KR20240049862A - 청상방풍산 추출물을 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20240049862A
Application number: KR1020220129023A
Authority: KR
Inventors: 김경호; 강윤미; 김태인; 김연지; 김광연; 김한해
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Filing date: 2022-10-07
Publication date: 2024-04-18

Abstract

본 발명은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

청상방풍산 추출물을 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{A composition for preventing, improving or treating dyslipidemia or dyslipidemia-related diseases comprising Cheongsangbangpoongsan extract}

현대사회는 급속한 자동화에 따른 편리한 생활환경, 가공식품 및 외식의 증가에 따른 과다 영양 섭취 및 신체 활동량의 감소로 인해 비만 인구가 빠르게 증가하고 있으며, 이에 따라 이상지질혈증 및 고혈압, 당뇨병, 동맥경화증, 심근경색, 뇌졸중과 같은 이상지질혈증 관련 질환이 증가되고 있는 추세이다.

이상지질혈증(dyslipidemia)은 혈액 내 총콜레스테롤, 중성지방, LDL-콜레스테롤 농도가 높거나 HDL-콜레스테롤 농도가 낮은 상태를 말한다. 일반적으로 LDL-콜레스테롤은 혈관벽에 침착되는 성질을 갖고 있기 때문에 나쁜 콜레스테롤로 알려져 있고, 이와는 반대로 HDL-콜레스테롤은 혈관벽에 지방성분이 침착되는 것을 억제하는 기능을 하기 때문에 좋은 콜레스테롤이라고 한다. 따라서, 혈중 LDL-콜레스테롤이나 중성지방과 같은 지질성분이 증가하게 되면 혈액의 흐름이 원활하지 않게 되고 동맥벽에 지질성분들이 부착되면서 만성적인 염증반응을 일으키게 되고 동맥내벽이 좁아지면서 혈관이 굳어지는 동맥경화(arteriosclerosis)가 유발된다. 장기적으로는 이로부터 생성된 혈전이 심장관상동맥이나 뇌혈관 등을 막아 심근경색, 뇌졸중이나 뇌경색 등을 일으키는 원인이 된다(E. Falk et al., Circulation 92, 657-671, 1995). 현재 고콜레스테롤혈증 치료제는 간에서의 콜레스테롤의 합성과정에 중요한 역할을 하고 있는 HMG-CoA 환원효소(HMG-CoA reductase) 억제활성을 갖고 있는 '스타틴(statin)' 계열의 약물들이 사용되고 있는데 장기간 사용할 경우 간독성이나 근육독성 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, LDL-콜레스테롤이 높거나 고중성지방혈증이 있는 경우에는 일반적으로 피브린산 유도체(fibric acid derivatives)를 투여하는데 소화장애가 흔히 동반되며 근육병증과 같은 부작용이 생길 수 있다.

한편, 인체에 안전하며 부작용이 없으면서도 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 천연물에 대한 연구가 진행되고 있으나(대한민국 등록특허 제0345040호), 여전히 보다 효과적인 치료제의 개발 필요성이 대두되고 있다.

본 발명의 하나의 목적은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 약학적 조성물을 인간을 제외한 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

본 발명의 하나의 양태로서, 본 발명은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어, "청상방풍산"은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 혼합 추출물로서, 본 발명에서 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 혼합 추출물은 "청상방풍산 추출물" 또는 "청상방풍탕(CBT)"과 혼용되어 사용될 수 있다. 본 발명의 용어, "방풍"은 산형과의 방풍(Ledebouriella seseloides)의 뿌리로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "백지"는 산형과의 구릿대(Angelica dahurica) 또는 그 변종의 뿌리로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "연교"는 물푸레나무과 의성개나리(Forsythia viridissima Lindley) 또는 연교(Forsythia suspensa Vahl)의 열매를 의미한다

본 발명의 용어, "길경"은 초롱꽃과 도라지(Platycodon grandiflorum A. DC. 또는 Platycodon graucum Nakai)의 뿌리 또는 주피로 만든 약재를 의미하며, 방도, 백약, 경초, 이여 등과 혼용될 수 있다.

본 발명의 용어, "황금"은 꿀풀과의 속썩은풀(Scutellaria baicalensis)의 뿌리 또는 주피로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "천궁"은 산형과의 천궁(Cnidium officinale Makino) 또는 중국천궁(Ligusticum chuanxiong Hort.)의 뿌리줄기로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "형개"는 꿀풀과 형개(Schizonepeta　tenuifolia　Briq.)의 전초로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "치자"는 꼭두서니과의 치자나무(Gardenia　jasminoides　Ellis) 열매로 만든 약재를 의미하며, 산치자, 목단, 월도 등과 혼용될 수 있다.

본 발명의 용어, "황련"은 바구지과의 황련(Coptis chinensis Franch.)과 같은 속의 식물(Coptis sp.)의 뿌리줄기로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "지각"은 운향과의 탱자나무(Poncirus　trifaliata　RAFIN.) 또는 광귤나무(Citrus　aurantium　L.)의 과실로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "박하"는 꿀풀과의 박하(Mentha arvensis L. var. piperascens Malinv.)의 전초로 만든 약재를 의미한다.

본 발명의 용어, "감초"는 콩과 식물인 감초(Glycyrrhiza uralensis Fisch.) 또는 곧은감초(Glycyrrhiza glabra L.)의 뿌리로 만든 약재를 의미한다.

본 발명에서 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 청상방풍산 추출물은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 혼합 추출물이나, 일부 성분을 가감하여 사용하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 용어, "추출물"은 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산을 다양한 용매에 침지한 다음, 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다. 이에 따라, 본 발명에서 제공하는 청상방풍산 추출물은 일 예로, 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 다른 예로 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 또 다른 예로 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또 다른 예로 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함하는 것으로 해석될 수 있다.

상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초는 식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들어 뿌리, 지상부, 줄기, 잎, 꽃, 열매의 몸통, 열매의 껍질 등에서 추출 가능하다.

본 발명의 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

상기 추출에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있고, 구체적으로 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 구체적으로 물 또는 알코올이 사용될 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 상기 에탄올은 10 내지 99 %, 구체적으로 50 내지 90 % 에탄올일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 실시예에서는 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 혼합하고, 혼합물 대비 10배의 물을 첨가하여 2시간 동안 열탕추출 한 후, Whatman 여과지를 이용하여 순차적으로 여과시키고, 여과물을 동결건조하여 청상방풍산 추출물을 획득하였다.

일 구현예로, 상기 청상방풍산 추출물은 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 각각 1 내지 20 중량 %로 혼합하여 추출한 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한 다른 일 구현예로, 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 각각 4 내지 15 중량 %로 혼합하여 추출한 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 용어 "이상지질혈증(dyslipidemia)"은 혈액 내의 중성지방, LDL 콜레스테롤, 인지질 및 유리 지방산 등의 지질 성분이 증가된 상태거나, HDL-콜레스테롤이 감소된 상태를 의미한다. 그 외에도 지단백 대사이상 등의 문제로 나타나는 비정상적 지질상태를 의미한다. 상기 이상지질혈증은 고지혈증, 고 LDL-콜레스테롤혈증, 저 HDL-콜레스테롤혈증 및 고중성지방혈증을 포함한다.

본 발명에서 "이상지질혈증 관련 질환"은 이상지질혈증으로 인한 다양한 질환을 통칭하는 것으로, 본 발명의 약학적 조성물로 치료 또는 예방할 수 있는 질환은 제한 없이 포함되나, 그 예로 동맥경화, 심근경색, 뇌졸중, 뇌경색, 고혈압, 탄지에르병(tangier disease), 허혈성 심장질환 및 허혈성 뇌질환으로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물이 간세포 내 지질 축적 억제, 체중 감소, 혈중 지질 감소, 콜레스테롤 조절 인자 및 지질 축적 인자의 발현 억제의 기능을 하여 이상지질혈증 및 이상지질혈증 관련 질환을 예방 또는 치료하는 효과가 있음을 확인하였다 (실시예 1 내지 4).

본 발명의 용어 "예방"이란, 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 "치료"란, 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 "약학적 조성물"은 이상지질혈증 및 이상지질혈증 관련 질환의 예방 및/또는 치료의 용도를 갖는다. 예방적 용도에 있어, 본 발명의 약학적 조성물은 본 발명에 기술된 질환, 장애, 또는 상태를 가지고 있거나 발병 위험이 있는 것으로 의심되는 개체에 투여된다. 즉, 이상지질혈증 및 그 관련 질환의 발병 위험이 있는 개체에게 투여될 수 있다. 치료적 용도에 있어, 본 발명의 약학적 조성물은 본 발명에 기술된 질병을 이미 앓고 있는 환자와 같은 개체에 본 발명에 기술된 질병, 장애, 또는 상태의 증상을 치료하거나 적어도 부분적으로 정지시키기 위해 충분한 양으로 투여된다. 이러한 사용에 효과적인 양은 질환, 장애 또는 상태의 심각도 및 경과, 이전의 치료, 개체의 건강 상태와 약물에 대한 반응성, 및 의사 또는 수의사의 판단에 따라 달려있을 것이다.

상기 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

또한 상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.001 내지 80, 구체적으로 0.001 내지 70, 더욱 구체적으로 0.001 내지 60 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 약학적 조성물은 간세포 내 지질의 합성 및 축적을 감소 또는 억제하는 것일 수 있으며, 체중 또는 체지방을 감소시키거나, 증가를 억제하는 것일 수 있고, 혈액 내 총 콜레스테롤 또는 중성지방을 감소시키거나, 증가를 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 하나의 양태로서, 상기 약학적 조성물을 인간을 제외한 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

이때 상기 용어, “약학적 조성물”, “이상지질혈증”, "이상지질혈증 관련 질환", “예방” 및 “치료”는 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명의 용어, "투여"는 적절한 방법으로 개체에게 상기 추출물을 포함하는 조성물을 도입하는 행위를 의미한다.

본 발명의 용어, "개체"는 이상지질혈증이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 청상방풍산 추출물은 1일 0.01 내지 5000 mg/kg으로, 구체적으로 10 내지 1000 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다.

상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

또한, 상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

본 발명의 다른 하나의 양태는 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

이때 상기 용어 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하, 감초, 청상방풍산, 추출물, 이상지질혈증, 이상지질혈증 관련 질환 및 예방은 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명의 용어 "개선"은, 상기 조성물을 투여하여 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 "식품"이란, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.

상기 건강 기능 식품(functional food)은, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 '기능'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 식품의 제형은 식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다.

상기 건강 식품(health food)은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강 기능 식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용된다.

구체적으로, 상기 건강 기능 식품은 본 발명의 조성물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다.

이때, 상기 식품에 포함되는 추출물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 구체적으로는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 천연물을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품은 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.

이때 상기 용어 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하, 감초, 청상방풍산, 추출물, 이상지질혈증, 이상지질혈증 관련 질환, 예방 및 개선은 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명의 용어 "사료"는, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.

상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박 류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물 성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.

본 발명의 사료 조성물에 포함되는 본 발명의 청상방풍산 추출물은 사료의 사용목적 및 사용조건에 따라 달라질 수 있으며, 일 예로 가축 사료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 구체적으로는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물은 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과가 우수하므로, 안정성이 높고 부작용이 완화된 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 응용될 수 있다.

도 1은 청산방풍산 추출물의 간세포에 대한 세포독성 평가 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 청산방풍산 추출물의 간세포 내 지질 합성 및 축적 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 3은 5개의 실험군인 정상식이군(NOR), 60% 고지방식이군(HFD), Atorvastatin 10mg/kg 투여군(AT), 100mg/kg 청상방풍탕 투여군(CBTL), 200mg/kg 청상방풍탕 투여군(CBTH)을 나타낸 도이다.
도 4는 청산방풍산 추출물이 고지방식이로 이상지질혈증을 유도한 마우스의 체중에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 5는 청상방풍산 추출물이 고지방식이로 이상지질혈증을 유도한 마우스의 혈중 지질에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 6은 청상방풍산 추출물이 고지방식이로 이상지질혈증을 유도한 마우스의 간에서 콜레스테롤 조절에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 7은 청상방풍산 추출물이 고지방식이로 이상지질혈증을 유도한 마우스의 간 지방 축적에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 청상방풍산 추출물의 제조

방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초 원물을 각 2.75, 3.00, 3.00, 3.00, 2.62, 2.62, 1.87, 1.87, 1.87, 1.87, 1.87 및 1.12 g으로 혼합하고, 혼합물 대비 10배의 물을 첨가하여 2시간 동안 열탕 추출한 후 Whatman 여과지를 이용하여 순차적으로 여과시켰다. 여과물을 동결건조하여 시료를 획득하였으며, 수율은 원물 대비 25.9 %였다.

실시예 2. 청상방풍산 추출물의 세포 독성 평가 (MTT Assay 실험)

세포 독성 평가를 위하여, HepG2 인간 간세포주를 10% bovine calf serum, 1% antibiotics를 함유하는 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)로 5% CO2가 공급되는 37℃배양기(incubator)에서 배양하였다. 세포 생존율 측정을 위해 세포를 96-well plate에 각 well 당 5Х104으로 분주하여 배양기에서 24시간 배양하였다. 이후, 청상방풍산 추출물(CBT)을 농도별(0 ~ 1000 μg/ml)로 처리하여 24시간 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)를 각 well에 추가하여 배양기에서 4시간 반응시켰다. 상층액을 제거하고 이소프로필 알코올(isoprophyl alcohol)을 이용하여 생성된 포마잔(formazan)을 용해시킨 뒤, microreader기를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율(%)은 시료 미처리군 대비 흡광도의 백분율로 나타내었다.

데이터는 3회의 실험의 평균 ± 표준 편차 (SD)로 나타내었다. 통계적으로 유의한 것은 ANOVA와 Dunnett의 post hoc test를 사용하여 결정하였으며, 0.05 이하의 P 값은 통계적으로 유의하다고 간주되었다.

HepG2 간 세포에 농도별(0 ~ 1000 μg/ml)로 청상방풍산 추출물(CBT)을 처리하여 24시간 배양한 결과, 도 1에 나타난 것과 같이, 간 세포에서는 1000 μg/ml까지 세포독성을 보이지 않아, 청상방풍산 추출물의 세포 안전성을 확인하였다. ***는 청상방풍산 추출물(CBT) 미처리군 대비 세포 생존율이 통계적으로 유의미하게 증가했다는 것이며, p<0.001임을 의미한다.

실시예 3: 청상방풍산 추출물의 간세포 내 지질 축적에 미치는 영향

간세포 지질 축적 억제 효능을 평가하기 위해 각 well 당 1×10⁵으로 분주하여 배양기에서 24시간 배양하였고, 지방산 oleic acid (OA)와 palmitic acid (PA)를 2:1로 첨가한 배지로 교환하여 세포에 지질 축적을 유도하였다. 지방산을 첨가한 배지교환과 동시에 청상방풍산 추출물(CBT)을 처리하였다. 24시간 후 배양이 끝난 HepG2 세포를 phosphate buffered saline로 2회 세척한 후 10% formalin을 1 mL씩 넣어 실온에서 1시간 동안 고정하였다. 그 후 증류수로 2회 세척한 후 Oil red O 용액을 증류수로 3:2로 희석한 후 1 mL씩 주입 후 1시간 동안 세포 내 지질을 염색하였다. 증류수로 3~4회 세척 후 isopropanol을 주입하여 염료를 용출시킨 뒤 microreader기를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

중성지방을 염색시키는 oil red O 염색 결과, 도 2에 나타난 것과 같이, OA+PA 처리군에서는 대조군 대비 지질의 함량이 유의적으로 증가하였으며, 청상방풍산 추출물(CBT) 처리군에서는 처리 농도가 증가할수록 간 세포 내 지질의 합성 및 축적을 억제하는 것을 확인하였다. ###는 미처리군 대비 OA+PA 처리로 지질의 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001임을 의미하고; *는 OA+PA 처리군 대비 지질 축적이 유의미하게 감소하였다는 것으로, **는 p<0.05, ***는 p<0.001임을 의미한다.

실시예 4: 청상방풍산 추출물이 고지방식이로 유도한 이상지질혈증 마우스에 미치는 영향

실시예 4-1: 실험동물의 준비 및 고지방식이를 이용한 이상지질혈증 유도 및 시료 처치

실험동물로 DooYeol Biotech(Seoul, Republic of Korea)에서 6-8주령 수컷 C57BL/6 마우스(22 ± 3 g)를 구입하여 실험하였다. 실험이 시작하기 전 1주 동안 적응기간을 둔 후 실험하는 12주간 사료와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였으며 12시간 간격으로 빛을 조절해주는 환경에서 온도 22 ± 2 °C, 습도 50 ± 5 %의 환경을 유지해주었다. 이 동물실험은 한국한의학연구원 실험동물윤리위원회의 사전 심의를 받아 동물실험윤리위원회의 규정에 따라 수행되었다.

실험동물은 도 3에 나타낸 것과 같이, 무작위로 총 5개의 군(n=10): 정상식이군(NOR); 60% 고지방식이군 (HFD); Atorvastatin 10 mg/kg 투여군(AT); 100 mg/kg 청상방풍탕 (CBT) 투여군 (CBTL); 200 mg/kg 청상방풍탕 투여군 (CBTH)으로 나누었다. Atorvastatin 투여군은 스타틴(statin) 계열의 고지혈증 치료제로 청상방풍탕의 효능을 비교하는 양성대조군으로 사용되었다.

마우스에 고지방식이를 섭취시켜 14주간 이상지질증을 유도하고 5주차부터 청상방풍탕 및 atorvastatin을 매일 경구투여하였다. 희생된 마우스의 혈액 및 간 조직은 채취하여 보관하였다.

모든 데이터는 3회의 실험의 평균 ± 표준 편차 (SD)로 나타내었다. 통계적으로 유의한 것은 ANOVA와 Dunnett의 post hoc test를 사용하여 결정하였으며, 0.05 이하의 P 값은 통계적으로 유의하다고 간주되었다.

실시예 4-2: 마우스의 체중에 미치는 영향

실험 기간동안 마우스의 체중변화를 매주 일정한 시간에 측정한 결과, 도 4에 나타난 것과 같이, 고지방식이를 섭취한 마우스의 무게는 14주간 꾸준히 증가하였으며 실험 5주차부터 정상대조군 대비 유의적으로 증가함을 확인하였다. 청상방풍산 추출물(CBT)을 경구투여 하였을 때, 8주차부터 HFD군 대비 유의적인 체중의 감소를 보였으며 양성대조군, CBT 저농도군, CBT 고농도군 순으로 체중감소 효과가 좋음을 확인하였다. ###는 NOR군 대비 HFD군에서 마우스의 체중이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, #는 p<0.01, ##는 p<0.05, ###는 p<0.001임을 의미하고; *는 HFD군 대비 AT 또는 청상방풍탕(CBT) 투여로 체중이 유의미하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.01, **는 p<0.05, ***는 p<0.001임을 의미한다.

실시예 4-3: 마우스의 혈중 지질에 미치는 영향

마우스의 심장에서 채취한 혈액을 4 °C, 1,700Хg 조건에서 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 혈청 내 total cholesterol (TC), triglyceride (TG)의 생성량을 enzyme-linked immunosorbent assay kit를 사용하여 측정하였다.

이상지질혈증의 대표적인 지질관련 혈청 바이오마커로서 총 콜레스테롤(TC)과 중성지방(TG)의 혈청 수치를 비교한 결과, 도 5에 나타난 것과 같이, HFD군에서 TC와 TG의 level은 각각 601 mg/dL, 48 mg/dL로 정상대조군 대비 유의적인 증가를 보였다. 반면, 청상방풍산 추출물(CBT) 투여는 HFD군 대비 TC와 TG의 level을 유의적으로 감소시켰다. ###는 p<0.001임을 의미하고; *는 HFD군 대비 AT 또는 청상방풍탕(CBT) 투여로 혈중 지질이 유의미하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.01, **는 p<0.05, ***는 p<0.001임을 의미한다.

실시예 4-4: 마우스의 콜레스테롤 조절에 미치는 영향

분리한 간 조직으로부터 Easy Blue kit (Intron Biotechnology, Inc., Seoul, Korea)를 사용하여 Total RNA를 얻었고, Epoch micro-volume spectrophotometer system (BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA)를 사용하여 정량하였다. 추출된 total RNA (2 μg)와 d(T)16 primer 및 AMV 역전사효소(reverse transcriptase)를 사용하여 cDNA를 얻었다. 유전자들의 상대적인 양은 SYBR Primix ExTaq (Takara) 을 사용한 realtime RT-PCR법 (Real Time PCR System7500, Applied biosystems, Foster, CA)에 의해 정량하였다. 타겟 유전자의 CT 값을 GAPDH 유전자의 CT 값으로 gene express 2.0 프로그램 (Applied biosystems)을 이용하여 보정하였다. 또한 melting curve 분석을 통하여 증폭된 PCR 산물의 특이성을 확인하였다.

콜레스테롤 합성의 중요 기작인 HMGCoR와 SREBP2의 유전자 발현을 고지방식이로 유도한 이상지질혈증 마우스 간 조직에서 확인한 결과, 도 6에 나타난 것과 같이, 고지방식이를 섭취한 HFD군에서 정상대조군보다 유의적으로 높았다. 청상방풍산 추출물(CBT) 투여는 HFD군 대비 HMGCoR와 SREBP2의 유전자 발현을 유의적 수준으로 억제하였다. ###는 NOR군 대비 HFD군에서 마우스 간에서 HMGCoR 및 SREBP2의 유전자 발현이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, ###는 p<0.001임을 의미하고; *는 HFD군 대비 AT 또는 청상방풍탕(CBT) 투여로 유전자 발현이 유의미하게 감소하였다는 것으로, **는 p<0.05, ***는 p<0.001임을 의미한다.

실시예 4-5: 마우스의 간 지방 축적에 미치는 영향

일정량의 간 조직으로부터 protease & phosphatase inhibitor cocktail을 포함하는 lysis buffer로 균질화하여 단백질을 추출 및 분리하고, Bradford assay 방법으로 정량하였다. 적정량의 단백질을 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)에 분리한 후, PVDF membrane으로 단백질을 전이시켰다. 5% BSA를 처리하여 비특이적인 단백질을 block하였고, 각각의 1차 항체를 4 에서 Overnight 반응시킨 후, HRP가 중합된 2차 항체를 반응시켰다. Immuno-positive bands는 enhanced chemiluminescent (Thermo Scientific, USA)에 의해 감광시켜 cheiluminescent detection system을 이용하여 현상하였다.

고지방식이로 유도한 이상지질혈증 마우스의 간 조직 내에서 SREBP1과 FAS의 단백질 발현을 확인한 결과, 도 7에 나타난 것과 같이, 정상군 대비 HFD군에서는 발현이 유의하게 증가한 반면, 청상방풍산 추출물(CBT)을 투여하였을 때는 HFD군에 비하여 SREBP1과 FAS의 단백질 발현을 유의하게 감소시킴을 확인하였다. ###는 NOR군 대비 HFD군에서 마우스 간에서 SREBP1 및 FAS의 단백질 발현이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, ###는 p<0.001임을 의미하고; *는 HFD군 대비 AT 또는 청상방풍탕(CBT) 투여로 단백질 발현이 유의미하게 감소하였다는 것으로, ***는 p<0.001임을 의미한다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 청상방풍산 추출물은 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 각각 1 내지 20 중량 %로 혼합하여 추출한 것인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 청상방풍산 추출물은 상기 방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 물, C1 내지 C4의 알코올, 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 이상지질혈증은 고지혈증, 고LDL-콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증 및 저HDL-콜레스테롤혈증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 이상지질혈증 관련 질환은 동맥경화, 심근경색, 뇌졸중, 뇌경색, 고혈압, 탄지에르병(Tangier disease), 허혈성 심장 질환 및 허혈성 뇌 질환으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 간세포 내 지질의 합성 및 축적을 감소 또는 억제하는 것인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 체중 또는 체지방을 감소시키거나, 증가를 억제하는 것인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 혈액 내 총 콜레스테롤 또는 중성지방을 감소시키거나, 증가를 억제하는 것인, 약학적 조성물.
방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
방풍, 백지, 연교, 길경, 황금, 천궁, 형개, 치자, 황련, 지각, 박하 및 감초를 포함하는 청상방풍산 추출물을 유효성분으로 포함하는 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 인간을 제외한 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 이상지질혈증 또는 이상지질혈증 관련 질환의 예방 또는 치료 방법.