KR20240042109A - 191P4D12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법 - Google Patents

191P4D12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법 Download PDF

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Abstract

방광암의 방광내 치료 방법 및 191P4D12 단백질(넥틴-4)에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

191P4D12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 8월 13일에 출원된 미국 출원 제63/233,048호, 2021년 9월 9일에 출원된 미국 출원 제63/242,380호 및 2022년 4월 7일에 출원된 미국 출원 제63/328,441호의 이익을 주장하며, 각각의 개시 내용은 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
전자로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 본 출원과 함께 XML 파일 형식으로 제출된 컴퓨터 판독 가능 서열목록을 포함하고, 그 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 본 출원과 함께 제출된 서열목록 XML 파일은 "14369-281-228_SEQ_LISTING.xml"이란 이름으로, 2022년 8월 2일에 생성되었으며 크기는 34,743바이트이다.
1. 기술분야
191P4D12 단백질(넥틴-4)에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
2. 배경기술
요로상피암[Urothelial cancer, UC]의 가장 흔한 형태이자 미국에서 6번째로 흔한 암인 방광암으로 인해 유럽에서 6만 5,000명 초과, 미국에서 거의 1만 8,000명(문헌[Bray 2018; Ferlay 2018; Siegel 2019])을 포함해 전 세계적으로 연간 20만 명에 가까운 환자가 사망하는 것으로 추산된다. 방광암을 진단 받은 연간 신규 발생 환자는 2018년 전 세계적으로 54만 9,000명이 넘는 것으로 추산되었다. 2020년에는 미국에서 방광암 신규 발생 환자는 8만 1,400명으로 추산되며, 이 추산치는 2021년에 8만 3,000명을 초과하는 것으로 증가하였다(문헌[American Cancer Society (ACS) 2021; National Cancer Institute (NCI) 2021]). 방광암 발병률과 사망률은 연령에 따라 크게 증가하며 인구가 고령화될수록 문제가 점점 심해질 것이다.
방광암 진단의 약 70% 내지 80%는 비근침윤성 질환으로 존재한다(문헌[Chang 2016; Woldu 2017; Kates 2020; Li 2020]). 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]은 본질적으로 유두형이며, 점막 한정인 암(Ta), 고등급이고 편평하고 상피에 국한된 암(Tis 또는 제자리 암종[Carcinoma in situ, CIS]), 및 점막하 또는 점막고유판 침윤성 암(T1)을 포함하는 암의 이종군을 의미한다(문헌[Pasin 2008]). NMIBC 환자 중에서 유두상질환이 가장 흔하여 환자의 약 70%에서 발생하는 반면, T1 질환 및 CIS는 환자의 약 20% 및 10%에서 각각 발생한다(문헌[Kirkali 2005; Anastasiadis 2012]).
NMIBC의 치료를 위한 표준치료는 경요도 방광 절제술[Transurethral resection of bladder tumor, TURBT]을 통한 방광 종양의 외과적 절제 후 추가적인 항종양 활성을 위한 치료제의 방광내 투여를 포함한다(문헌[Kawai 2013; Chang 2016; Woldu 2017; Jamil 2019; Kates 2020]). 방광내 바실러스 칼메트-게랭[Bacillus Calmette-Guerin, BCG]은 NMIBC 환자, 특히 고위험 질환의 특성이 있는 환자의 항종양 활성과 상관관계가 있는 것으로 보이는 국소 면역 반응을 촉발하는 선택 치료제로 고려된다(문헌[Kassouf 2015; Chang 2016]).
BCG-무반응성 질환은 BCG를 사용한 적절한 치료에 반응하지 못하고 질환 재발 및 UC 후속 단계로 진행될 위험이 높은 NMIBC 환자의 하위군을 나타낸다. 이러한 환자의 경우, BCG를 사용한 추가 치료는 선택할 수 없으며, 근치적 방광절제술은 여전히 이용 가능한 최선의 선택지이다. 겜시타빈, 미토마이신, 및 발루비신과 같은 방광내 화학요법제는 일부 효능을 나타내었지만, 현재의 지침은 근치적 방광절제술 이외의 치료는 BCG-무반응성 질환의 치료에 좋지 않다고 언급하고 있다(문헌[Navai 2016; Taylor 2020])(EAU. 비근침윤성 방광암 지침. 2020. https://uroweb.org/guideline/non-muscle-invasive-bladdercancer/2021년 2월 16일 접속). 전신 펨브롤리주맙이 최근 제자리 암종[CIS]이 있는 BCG-무반응성 질환 환자의 치료를 위해 승인되었지만, 펨브롤리주맙으로 치료받은 환자의 절반이 넘는 환자가 요법에 대한 완전 반응을 달성하지 못하므로, 이러한 환자 집단에서 안전하고 효과적인 방광내 요법에 대한 미충족 수요가 남아 있다.
191P4D12(넥틴-4로도 공지됨)는 넥틴 부착분자 계열에 속하는 66 kDa의 I형 막관통단백질이다. 이는 세 개의 면역글로불린(Ig)-유사 하위도메인을 포함하는 세포외 도메인[Extracellular domain, ECD], 막관통 나선 및 세포내 영역으로 이루어진다(문헌[Takai 등, Annu Rev Cell Dev Biol (2008); 24: 309-42]). 넥틴은 카드헤린을 동원하고 세포골격 재배열을 조절할 수 있는 부착연접에서 동족친화성 및 이종친화성 트랜스 상호 작용 둘 다를 통해 Ca2+-독립적 세포-세포 부착을 매개하는 것으로 생각된다(문헌[Rikitake 등, Cell Mol Life Sci (2008); 65(2): 253-63.]). 다른 넥틴 계열 구성원에 대한 넥틴-4의 서열 동일성은 낮고, ECD에서 25% 내지 30%의 범위이다(문헌[Reymond 등, Biol Chem (2001); 276(46): 43205-15]).
넥틴-4는 여러 암, 특히 요로상피, 유방, 폐, 췌장, 및 난소암에서 발현되는 것으로 밝혀졌다. 더 높은 수준의 발현은 질환 진행 및/또는 좋지 않은 예후와 연관이 있다(문헌[Fabre-Lafay 등, BMC Cancer (2007); 7: 73]).
근치적 방광절제술이 비적합하거나 비적격한 BCG-무반응성 NMIBC 환자 또는 근치적 방광절제술을 받지 않는 것으로 정보에 입각한 결정을 한 환자에 대한 안전하고 효과적인 방광내 치료에 대한 미충족 수요가 남아 있다.
3. 발명의 내용
191P4D12에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody drug conjugate, ADC]의 방광내 투여를 통해 인간 대상에서 방광암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
구현예 1. 인간 대상에서 방광암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 항체 약물 접합체[ADC]를 대상에게 방광내로 투여하는 단계를 포함하되, ADC는 모노메틸 아우리스타틴 E[Monomethyl auristatin E, MMAE]의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 방법.
구현예 2. 구현예 1에 있어서, 방광암은 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]인, 방법.
구현예 3. 구현예 2에 있어서, NMIBC는 조직학적으로 확인되었으며, 제자리 암종[Carcinoma in situ, CIS]인, 방법.
구현예 4. 구현예 3에 있어서, 대상은 유두상질환이 있는, 방법.
구현예 5. 구현예 3에 있어서, 대상은 유두상질환이 없는, 방법.
구현예 6. 구현예 2 내지 5 중 어느 한 구현예에 있어서, NMIBC는 조직학적으로 확인되고, 우세한 조직학적 성분(>50%)은 요로상피(이행 세포) 암종인, 방법.
구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 고위험 바실러스 칼메트-게랭[Bacillus Calmette-Guerin, BCG]-무반응성 질환이 있는, 방법.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 근치적 방광절제술에 비적격하거나 이를 받는 것을 거부하는, 방법.
구현예 9. 구현예 1 내지 8 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상의 모든 가시적인 유두상 Ta/T1 종양은 치료 전 60일 이내에 완전히 절제된, 방법.
구현예 10. 구현예 9에 있어서, 대상은 잔존 순수 CIS가 있는, 방법.
구현예 11. 구현예 9에 있어서, 대상은 잔존 순수 CIS가 없는, 방법.
구현예 12. 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG] 수행 상태 점수가 0점인, 방법.
구현예 13. 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 1점인, 방법.
구현예 14. 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 2점인, 방법.
구현예 15. 구현예 14에 있어서, 대상의 사구체 여과율[Glomerular filtration rate, GFR]은 50 mL/분 이상이고, 대상은 뉴욕심장학회[New York Heart Association, NYHA] 클래스 III 심부전이 없는, 방법.
구현예 16. 구현예 1 내지 15 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상은 다음으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 병태가 있는, 방법:
a. 절대호중구수[Absolute neutrophil count, ANC] ≥1,500/μL;
b. 헤모글로빈(Hgb) ≥10 g/dL;
c. 혈소판수 ≥100,000/μL;
d. 혈청 빌리루빈 ≤1.5 × 정상 상한치[Upper limit of normal, ULN] 또는 길버트 질환이 있는 대상의 경우 ≤3 × ULN;
e. 계산된 크레아티닌 청소율[Calculated creatinine clearance, CrCl] ≥30 mL/분(GFR도 크레아티닌 또는 CrCl 대신 사용될 수 있음). CrCl은 콕크로프트-가울트(Cockcroft-Gault) 방법 또는 신장 질환에서 식이조절[Modification of Diet in Renal Disease, MDRD] 공식을 사용하여 계산해야 함. ECOG 수행 상태가 2점인 대상은 GFR ≥50 mL/분이어야 함;
f. 알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase, ALT] 및 아스파테이트 아미노전이효소[Aspartate aminotransferase, AST] ≤3 × ULN; 또는
g. 국제 표준화 비율[International normalized ratio, INR] 또는 프로트롬빈 시간[Prothrombin time, PT], 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간[Activated partial thromboplastin time, aPTT] 또는 부분 트롬보플라스틴 시간[Partial thromboplastin time, PTT] ≤1.5 ULN, 단, 항응고제가 의도적으로 사용된 치료 범위 내에 PT 또는 aPTT가 있는 한 대상이 항응고제 요법을 받고 있지 않아야 함.
구현예 17. 구현예 16에 있어서, 대상은 구현예 16의 병태 (a) 내지 (g)가 모두 있는, 방법.
구현예 18. 구현예 1 내지 17 중 어느 한 구현예에 있어서, 대상의 예상 기대 수명은 2년 초과인, 방법.
구현예 19. 구현예 1 내지 18 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22로 기재된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역[Complementarity determining region, CDR]의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23으로 기재된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 20. 구현예 1 내지 19 중 어느 한 구현예에 있어서,
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나,
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 방법.
구현예 21. 구현예 1 내지 19 중 어느 한 구현예에 있어서,
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L3을 포함하거나,
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L3을 포함하는, 방법.
구현예 22. 구현예 1 내지 21 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 23. 구현예 1 내지 22 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
구현예 24. 구현예 1 내지 23 중 어느 한 구현예에 있어서, 항원 결합 단편은 Fab, F(ab′)2, Fv 또는 scFv인, 방법.
구현예 25. 구현예 1 내지 24 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체는 완전 인간 항체인, 방법.
구현예 26. 구현예 1 내지 25 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체는 IgG1이고, 경쇄는 카파 경쇄인, 방법.
구현예 27. 구현예 1 내지 26 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 재조합으로 생산되는, 방법.
구현예 28. 구현예 1 내지 27 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 MMAE의 각각의 단위에 접합되는, 방법.
구현예 29. 구현예 28에 있어서, 링커는 효소-절단형 링커이고, 링커가 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하는, 방법.
구현예 30. 구현예 28 또는 29에 있어서, 링커는 -Aa-Ww-Yy-의 화학식을 갖되, -A-는 스트레처 단위이고, a는 0 또는 1이고, -W-는 아미노산 단위이고, w는 0 내지 12 범위의 정수이고, -Y-는 스페이서 단위이고, y는 0, 1 또는 2인, 방법.
구현예 31. 구현예 30에 있어서, 스트레처 단위는 하기 화학식 1의 구조를 갖고, 아미노산 단위는 발린-시트룰린이고, 스페이서 단위는 하기 화학식 2의 구조를 포함하는 PAB기인, 방법:
[화학식 1]
[화학식 2]
.
구현예 32. 구현예 30 또는 31에 있어서, 스트레처 단위는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하고, 스페이서 단위는 카르바메이트기를 통해 MMAE에 연결되는, 방법.
구현예 33. 구현예 1 내지 32 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 20개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
구현예 34. 구현예 1 내지 33 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 10개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
구현예 35. 구현예 1 내지 34 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 2 내지 8개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
구현예 36. 구현예 1 내지 35 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 3 내지 5개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
구현예 37. 구현예 1 내지 36 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10인, 방법.
구현예 38. 구현예 37에 있어서, p는 2 내지 8인, 방법.
구현예 39. 구현예 37 또는 38에 있어서, p는 3 내지 5인, 방법.
구현예 40. 구현예 37 내지 39 중 어느 한 구현예에 있어서, p는 3 내지 4인, 방법.
구현예 41. 구현예 37 내지 40 중 어느 한 구현예에 있어서, p는 약 4인, 방법.
구현예 42. 구현예 37 내지 40 중 어느 한 구현예에 있어서, 항체 약물 접합체의 유효량의 평균 p 값은 약 3.8인, 방법.
구현예 43. 구현예 1 내지 42 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 L-히스티딘, 폴리소르베이트-20[트윈-20(TWEEN-20)] 및 트레할로스 탈수화물을 포함하는 약학 조성물로 제형화되는, 방법.
구현예 44. 구현예 1 내지 43 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 약 20 mM의 L-히스티딘, 약 0.02%(w/v)의 TWEEN-20, 약 5.5%(w/v)의 트레할로스 이수화물, 및 히드로클로리드를 포함하는 약학 조성물로 제형화되고, 약학 조성물의 pH가 25 ℃에서 약 6.0인, 방법.
구현예 45. 구현예 1 내지 43 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 약 9 mM의 히스티딘, 약 11 mM의 히스티딘 히드로클로리드 일수화물, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물을 포함하는 약학 조성물로 제형화되고, 약학 조성물의 pH가 25 ℃에서 약 6.0인, 방법.
구현예 46. 구현예 1 내지 45 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 100 mg 내지 약 1,000 mg, 약 125 mg 내지 약 950 mg, 약 125 mg 내지 약 900 mg, 약 125 mg 내지 약 850 mg, 약 125 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량인, 방법.
구현예 47. 구현예 1 내지 46 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량인, 방법.
구현예 48. 구현예 1 내지 47 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량인, 방법.
구현예 49. 구현예 1 내지 47 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량인, 방법.
구현예 50. 구현예 1 내지 47 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량인, 방법.
구현예 51. 구현예 1 내지 47 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량인, 방법.
구현예 52. 구현예 1 내지 51 중 어느 한 구현예에 있어서, 각 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 90분인, 방법.
구현예 53. 구현예 1 내지 51 중 어느 한 구현예에 있어서, 각 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 120분인, 방법.
구현예 54. 구현예 1 내지 51 중 어느 한 구현예에 있어서, 각 방광내 투여의 체류 시간은 약 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 120분인, 방법.
구현예 55. 구현예 1 내지 54 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 두 단계 동안 방광내로 투여되고, 두 단계는 유도 단계 및 유지 단계인, 방법.
구현예 56. 구현예 55에 있어서, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주, 6 내지 9주, 또는 6 내지 8주 사이에 시작하는, 방법.
구현예 57. 구현예 55 또는 56에 있어서, ADC는 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 방광내 투여되는, 방법.
구현예 58. 구현예 55 내지 57 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되는, 방법.
구현예 59. 구현예 1 내지 58 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 125 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
구현예 60. 구현예 1 내지 58 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 250 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
구현예 61. 구현예 1 내지 58 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 500 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
구현예 62. 구현예 1 내지 58 중 어느 한 구현예에 있어서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 750 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
4. 도면의 간단한 설명
도 1a~1e는 넥틴-4 단백질의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열(도 1a), Ha22-2(2.4)6.1의 중쇄(도 1b) 및 경쇄(도 1c)의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열, 및 Ha22-2(2.4)6.1의 중쇄(도 1d) 및 경쇄(도 1e)의 아미노산 서열을 도시한다.
도 2는 방광내 투여를 모방하는 조건을 사용하여 넥틴-4 과발현 방광암종 세포(즉, UM-UC-3-h넥틴-4+)에서 시험관 내 엔포르투맙 비도틴[Enfortumab vidotin, EV]의 세포독성 활성을 도시한다.
도 3a~3e는 넥틴-4+ 방광 동소 이종이식 마우스 모델에서 엔포르투맙 비도틴(EV)의 방광내 투여의 효능을 도시한다. 도 3a는 UM-UC-3-h넥틴4+-Luc+ 세포로 화학적 마모 후 동소 이식된 SCID 마우스의 생산뿐만 아니라 마우스에 방광내 EV를 투여한 후 방광 조직의 조직학적 분석을 위한 투여 일정을 도시한다. 도 3b는 종양 생착 및 EV 활성을 확인하는 생물발광 영상화 결과를 도시한다. SWFI, 멸균 주사용수. 도 3c는 EV 활성을 확인하는 항-넥틴-4 면역조직화학 결과를 도시한다. 도 3c에서 다섯 개의 우측 패널의 방광 조직은 도 3b에서 EV의 방광내 투여로 각각 처리된 다섯 마리의 마우스에서 얻은 것이다. 도 3d는 도 3b의 생물발광 영상화 결과의 정량적 분석을 도시한다. 도 3e는 방광 종양 조직에서 넥틴-4 및 MMAE의 면역조직화학[Immunohistochemistry, IHC] 염색을 도시하며, 넥틴-4 및 MMAE의 공동 국소화를 나타낸다.
도 4a~4b는 다양한 농도 및 투여 용량으로 EV의 단회 방광내 투여로 처리된 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트의 방광 조직에서 유리 MMAE를 도시한다.
도 5는 방광내 EV 전신 노출을 도시한다.
도 6은 상이한 체류 시간 길이 동안 EV의 단회 방광내 투여로 처리된 스프라그-돌리 래트의 방광 조직에서 유리 MMAE를 도시한다.
도 7은 NMIBC이 있는 성인에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK, 및 항종양 활성을 평가하기 위해 설계된 1상, 공개 라벨, 다기관, 용량 증량, 및 용량 확장 시험인 섹션 6.1에 기재된 임상시험의 도표를 도시한다. (BCG=바실러스 칼메트-게랭; CIS=제자리 암종; EV=엔포르투맙 베도틴; mTPI=변형된 독성 확률 간격; q3=매 3; q6=매 6; TURBT=경요도 방광 절제술; wkly=매주. 주어진 용량에서의 안전성 또는 계획된 용량 수준보다 낮거나 중간인 용량 수준의 조사가 고려된다.)
5. 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용
본 개시가 추가로 기재되기 전에, 본 개시가 본원에 기재된 특별한 구현예에 제한되지 않는 것으로 이해되어야 하고, 또한 본원에 사용된 용어는 특별한 구현예만을 기재하기 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않음이 이해되어야 한다.
효능과 안전성 사이의 적절한 균형을 달성하기 위해, 적어도 점적 부피, 체류 시간, 용량 농도, 총 용량, 점적의 pH, 소변의 pH, 치료 전과 치료 중의 소변 생산 감소 등을 포함하는, 방광내 치료제를 효율적으로 사용하는 데 고려될 필요가 있는 다양한 인자가 존재한다. 본 개시는 용량 농도 및 총 용량이 본원에 개시된 MMAE ADC와 같은 ADC의 효율적이고 안전한 전달을 위한 가장 중요한 인자임을 놀랍게도 밝혔다. 본 개시는 방광암(예를 들어, 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC])을 치료하기 위해 ADC의 방광내 투여를 사용하는 다양한 방법을 개발하는 데 정보를 제공하기 위해 이 지식을 사용하였다.
5.1 정의
본원에 기재되거나 참조된 기술 및 절차는 일반적으로 잘 이해되고/되거나, 예를 들어 문헌[Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed. 2001); Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010); 및 Antibody Engineering Vols 1 및 2 (Kontermann 및 Dubel eds., 2d ed. 2010)]에 기재된 널리 이용되는 방법론과 같이, 당업자에 의한 통상적인 방법론을 사용하여 일반적으로 사용되는 것을 포함한다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 설명에서 사용되는 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본 명세서를 해석하기 위해 용어에 대한 하기 설명이 적용될 것이며 적절할 때마다 단수형으로 사용된 용어는 복수형도 포함할 것이고 그 반대도 마찬가지이다. 기재된 용어에 대한 임의의 설명이 본원에 참조로 포함된 문서와 충돌하는 경우 하기 기재된 용어에 대한 설명이 우선한다.
용어 '항체', '면역글로불린' 또는 'Ig'는 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되며 가장 넓은 의미로 사용되고 예를 들어 다음에 기재된 바와 같이, 단클론 항체(효능제, 길항제, 중화 항체, 전장 또는 온전한 단클론 항체 포함), 폴리에피토프 또는 단일에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다클론 또는 일가 항체, 다가 항체, 적어도 2개의 온전한 항체, 단쇄 항체 및 이의 단편으로부터 형성된, 다중특이적 항체(예를 들어, 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한 이중특이적 항체)를 구체적으로 포함한다. 항체는 인간, 인간화, 키메라 및/또는 친화도 성숙뿐만 아니라 다른 종, 예를 들어 마우스 및 토끼 등으로부터의 항체일 수 있다. 용어 '항체'는 특정 분자 항원에 결합할 수 있고 두 개의 동일한 폴리펩티드 쇄 쌍으로 이루어지되, 각 쌍은 하나의 중쇄(약 50~70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 가지고, 각 쇄의 각 아미노 말단 부분은 약 100 내지 약 130개 이상 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 각 쇄의 각 카르복시 말단 부분은 불변 영역을 포함하는, 폴리펩티드 면역글로불린 클래스 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 문헌[Antibody Engineering (Borrebaeck ed., 2d ed. 1995); 및 Kuby, Immunology (3d ed. 1997)]을 참조한다. 특정 구현예에서, 특정 분자 항원은 폴리펩티드 또는 에피토프를 포함하는 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한 합성 항체, 재조합 생산된 항체, 카멜화된 항체, 인트라바디(intrabody), 항-이디오타입[항-Id] 항체, 및 전술한 것 중 임의의 것의 기능적 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않으며, 단편이 유래된 항체의 결합 활성의 일부 또는 전부를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 일부를 지칭한다. 기능적 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)의 비제한적인 예는 단일쇄 Fv[Single-chain Fv, scFv](예를 들어, 단일특이적, 이중특이적 등을 포함), Fab 단편, F(ab′) 단편, F(ab)2 단편, F(ab′)2 단편, 디술피드 연결된 Fv[Disulfide-linked Fv, dsFv], Fd 단편, Fv 단편, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 및 미니바디(minibody)를 포함한다. 특히, 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 예를 들어 항원 결합 도메인 또는 항원(예를 들어, 항체의 하나 이상의 CDR)에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 포함한다. 이러한 항체 단편은, 예를 들어, 문헌[Harlow 및 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989); Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers ed., 1995); Huston 등, 1993, Cell Biophysics 22:189-224; Pluckthun 및 Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515; 및 Day, Advanced Immunochemistry (2d ed. 1990)]에서 찾을 수 있다. 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 클래스(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA) 또는 임의의 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)일 수 있다. 항체는 효능성 항체 또는 길항성 항체일 수 있다.
용어 '단클론 항체'는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 얻은 항체를 지칭하며, 즉 집단을 이루는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론 항체는 매우 특이적이며 단일 항원 부위에 대해 유도된다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함할 수 있는 다클론 항체 조제물과 대조적으로, 각각의 단클론 항체는 항원상의 단일 결정인자에 대해 유도된다.
'항원'은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 구조이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐 또는 다른 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 폴리펩티드이다. 특정 구현예에서, 항원은 세포와 회합되며, 예를 들어 세포, 예를 들어 암 세포상에 또는 내에 존재한다.
'온전한' 항체는 항원 결합 부위뿐만 아니라 CL 및 적어도 중쇄 불변 영역, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 항체이다. 불변 영역은 인간 불변 영역 또는 이의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 온전한 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 갖는다.
용어 '항원 결합 단편', '항원 결합 도메인', '항원 결합 영역' 및 유사한 용어는 항원과 상호 작용하고 결합제에 그 특이성 및 항원에 대한 친화도를 부여하는 아미노산 잔기(예를 들어, CDR)를 포함하는 항체의 부분을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 '항원 결합 단편'은 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역과 같은 온전한 항체의 일부를 포함하는 '항체 단편'을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab′, F(ab′)2, 및 Fv 단편; 디아바디 및 디-디아바디(예를 들어, 문헌[Holliger 등, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-48; Lu 등, 2005, J. Biol. Chem. 280:19665-72; Hudson 등, 2003, Nat. Med. 9:129-34; WO 93/11161]; 및 미국 특허 번호 5,837,242 및 6,492,123 참조); 단쇄 항체 분자(예를 들어, 미국 특허 번호 4,946,778; 5,260,203; 5,482,858; 및 5,476,786 참조); 이중 가변 도메인 항체(예를 들어, 미국 특허 번호 7,612,181 참조); 단일 가변 도메인 항체[Single variable domain antibody, sdAb](예를 들어, 문헌[Woolven 등, 1999, Immunogenetics 50: 98-101; 및 Streltsov 등, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49] 참조); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 제한없이 포함한다.
용어 '결합하다' 또는 '결합하는'은 예를 들어 복합체를 형성하는 것을 포함하는 분자 간의 상호 작용을 지칭한다. 상호 작용은 예를 들어 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호 작용 및/또는 반 데르 발스 상호 작용을 포함하는 비공유 상호 작용일 수 있다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호 작용 또는 힘에 의해 함께 유지되는 둘 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체상의 단일 항원 결합 부위와 항원과 같은 표적 분자의 단일 에피토프 간의 전체 비공유 상호 작용의 강도가 해당 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화도이다. 일가 항원에 대한 결합 분자(예를 들어, 항체)의 결합률(kon)에 대한 해리율(koff)의 비(koff/kon)가 해리 상수 KD이며, 이는 친화도와 반비례 관계가 있다. KD 값이 작을수록 항체의 친화도가 크다. KD 값은 항체와 항원의 상이한 복합체에 따라 다르며 kon 및 koff 모두에 의존한다. 본원에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 널리 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도가 항상 항체와 항원 간의 실제 상호 작용 강도를 반영하는 것은 아니다. 다가 항원과 같이 여러 반복 항원 결정인자를 포함하는 복합 항원이 여러 결합 부위를 포함하는 항체와 접촉할 때, 한 부위에서 항체와 항원의 상호 작용은 두 번째 부위에서의 반응 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 간의 이러한 다중 상호 작용 강도를 결합력(avidity)이라고 한다.
본원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 관련하여 '에 결합하는', '에 특이적으로 결합하는'과 같은 용어 및 유사한 용어가 또한 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되며 폴리펩티드와 같은 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인의 결합 분자를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 관련 항원과 교차 반응할 수 있다. 특정 구현예에서, 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 다른 항원과 교차 반응하지 않는다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 면역검정, 옥텟(Octet)®, 비아코어(Biacore)® 또는 당업자에게 알려진 다른 기술에 의해 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, 방사선면역검정[Radioimmunoassay, RIA] 및 효소 결합 면역흡착 검정[Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA]과 같은 실험 기술을 사용하여 측정된 바와 같이 임의의 교차-반응성 항원보다 더 큰 친화도로 항체 또는 항원 결합 단편이 항원에 결합할 때 이들은 항원에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 전형적으로 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이며 배경의 10배 초과일 수 있다. 예를 들어, 결합 특이성에 관한 논의에 대해서는 문헌[Fundamental Immunology 332-36 (Paul ed., 2d ed. 1989)]을 참조한다. 특정 구현예에서, '비표적' 단백질에 대한 항체 또는 항원 결합 단편의 결합 정도는 예를 들어 형광 활성화 세포 분류[Fluorescence activated cell sorting, FACS] 분석 또는 RIA에 의해 측정된 바와 같이, 그 특정 표적 항원에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합의 약 10% 미만이다. '특이적 결합', '에 특이적으로 결합한다' 또는 '에 특이적인'과 같은 용어와 관련해서는, 비특이적 상호 작용과 눈에 띄게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조군 분자, 예를 들어 과량의 비표지 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우 탐침에 대한 표지된 표적의 결합이 과량의 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 특이적 결합이 시사된다. 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 결합 분자가 예를 들어 항원을 표적화하는 데 있어서 진단제로서 유용하도록 하기 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 1,000 nM, 800 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 상이한 종(예를 들어, 인간 및 게잡이원숭이 종 간에서)으로부터의 항원 간에서 보존되는 항원의 에피토프에 결합한다.
'결합 친화도'는 일반적으로 분자(예를 들어, 항체와 같은 결합 단백질)의 단일 결합 부위와 그 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간 비공유 상호 작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같은 '결합 친화도'는 결합 쌍의 구성원(예를 들어, 항체 및 항원) 간의 1:1 상호 작용을 반영하는 내재적 결합 친화도를 지칭한다. 그 결합 파트너 Y에 대한 결합 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것들을 포함하여 당분야에 알려진 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저친화도 항체는 일반적으로 항원에 천천히 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면, 고친화도 항체는 일반적으로 항원에 더 빨리 결합하고 더 오래 결합된 채 유지되는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당분야에 알려져 있고, 이들 중 임의의 것이 본 개시의 목적을 위해 사용될 수 있다. 특정한 예시적인 구현예는 하기를 포함한다. 한 구현예에서, 'KD' 또는 'KD 값'은 당분야에 알려진 검정, 예를 들어 결합 검정에 의해 측정될 수 있다. KD는 예를 들어 관심 항체의 Fab 버전 및 그 항원으로 수행되는, RIA에서 측정될 수 있다(문헌[Chen 등, 1999, J. Mol Biol 293:865-81]). KD 또는 KD 값은 또한 예를 들어 Octet® QK384 시스템을 사용하는 Octet®에 의한 생물층 간섭측정[Biolayer interferometry, BLI] 또는 표면 플라즈몬 공명[Surface plasmon resonance, SPR] 검정을 사용하거나, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하는 Biacore®에 의해 측정될 수 있다. '온-율(on-rate)' 또는 '결합 비율' 또는 '결합률' 또는 'kon'은 또한 예를 들어 Octet®QK384, Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하여 상기 기재된 동일한 생물층 간섭측정[BLI] 또는 표면 플라즈몬 공명[SPR] 기술로 측정될 수 있다.
특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 반면, 나머지 쇄(들)는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 '키메라' 서열뿐만 아니라, 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편을 포함할 수 있다(미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌[Morrison 등, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55 참조]).
특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 천연 CDR 잔기가 바람직한 특이성, 친화도 및 능력을 포함하는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(예를 들어, 공여자 항체)의 상응하는 CDR로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(예를 들어, 수신자 항체)을 포함하는 키메라 항체인 비인간(예를 들어, 쥣과) 항체의 '인간화' 형태의 부분을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수신자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가 정련하기 위해 이루어진다. 인간화 항체 중쇄 또는 경쇄는 적어도 하나 이상의 가변 영역을 실질적으로 모두 포함할 수 있고, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR은 비인간 면역글로불린의 CDR에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 특정 구현예에서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc)의, 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가 상세사항에 대해서는 문헌[Jones 등, 1986, Nature 321:522-25; Riechmann 등, 1988, Nature 332:323-29; Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96; Carter 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89]; 미국 특허 번호 6,800,738; 6,719,971; 6,639,055; 6,407,213; 및 6,054,297)을 참조한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 '완전 인간 항체' 또는 '인간 항체'의 일부를 포함할 수 있되, 이 용어는 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되고 인간 가변 영역 및 예를 들어 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 특정 구현예에서, 이 용어는 인간 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. '완전 인간' 항체는 특정 구현예에서 폴리펩티드에 결합하고 인간 생식계열 면역글로불린 핵산 서열의 자연 발생 체세포 변이체인 핵산 서열에 의해 암호화되는 항체를 또한 포괄할 수 있다. 용어 '완전 인간 항체'는 카바트(Kabat) 등에 의해 기재된 바와 같이 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 상응하는 가변 및 불변 영역을 포함하는 항체를 포함한다 (문헌[Kabat 등 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). '인간 항체'는 인간에 의해 생산되고/되거나 인간 항체를 만드는 임의의 기술을 사용하여 만들어진 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 특히 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 제외한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리(문헌[Hoogenboom 및 Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222:581]) 및 효모 디스플레이 라이브러리(문헌[Chao 등, 2006, Nature Protocols 1: 755-68])를 포함하는, 당분야에 알려진 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 문헌[Cole 등, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985); Boerner 등, 1991, J. Immunol. 147(1):86-95; 및 van Dijk 및 van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74]에 기재된 방법이 또한 인간 단클론 항체의 제조를 위해 이용 가능하다. 인간 항체는 항원 유발접종에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되었지만 이의 내인성 유전자좌는 불능화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어 마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다[제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술에 관해 문헌[Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66; Bruggemann 및 Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58]; 및 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참조]. 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관해, 예를 들어 문헌[Li 등, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:3557-62]을 참조한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 '재조합 인간 항체'의 일부를 포함할 수 있되, 이 어구는 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 및/또는 트랜스염색체인 동물(예를 들어 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체(예를 들어 문헌[Taylor, L. D. 등 (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 참조)와 같은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 인간 항체 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱이 관여된 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다(문헌[Kabat, E. A. 등 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 그러나 특정 구현예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용될 때, 생체내 체세포 돌연변이유발)되고 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 '단클론 항체'의 일부를 포함할 수 있되, 본원에 사용된 용어는 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻은 항체를 지칭하며, 예를 들어 집단을 이루는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하고, 각 단클론 항체는 전형적으로 항원상의 단일 에피토프를 인식한다. 특정 구현예에서, 본원에 사용된 바와 같이 '단클론 항체'는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생성된 항체이다. 용어 '단클론'은 항체를 만드는 임의의 특정 방법에 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 개시에서 유용한 단클론 항체는 문헌[Kohler 등, 1975, Nature 256:495]에서 최초로 기재된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나, 박테리아 또는 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 만들 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조). '단클론 항체'는 또한 예를 들어 문헌[Clackson 등, 1991, Nature 352:624-28 및 Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단클론 항체의 제조를 위한 다른 방법은 당분야에 잘 알려져 있다.예를 들어, 문헌[Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., 5th ed. 2002)]을 참조한다.
전형적인 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경[Light, L]쇄 및 2개의 동일한 중[Heavy, H]쇄로 이루어진 이종사량체 당단백질이다. IgG의 경우 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000달톤이다. 각각의 L 쇄는 하나의 공유 디술피드 결합에 의해 H 쇄에 연결되는 반면, 두 개의 H 쇄는 H 쇄 이소형에 따라 하나 이상의 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 각 H 및 L 쇄는 규칙적으로 간격을 둔 쇄내 디술피드 가교를 갖는다. 각 H 쇄는 N-말단에 α 및 γ 쇄 각각에 대한 3개의 불변 도메인(CH) 및 μ 및 ε 이소형에 대한 4개의 CH 도메인에 이어 가변 도메인(VH)을 갖는다. 각 L 쇄는 N-말단에 가변 도메인(VL)에 이어 그 다른 단부에 불변 도메인(CL)을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고 CL은 중쇄의 첫 번째 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH와 VL의 쌍 형성은 함께 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 클래스의 항체 구조 및 특성에 대해서는 예를 들어 문헌[Basic 등 Clinical Immunology 71 (Stites 등 eds., 8th ed. 1994); 및 Immunobiology (Janeway 등 eds., 5th ed. 2001)]을 참조한다.
용어 'Fab' 또는 'Fab 영역'은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상적인 IgG는 일반적으로 Y자형 IgG 구조의 2개의 아암 중 하나에 있는 2개의 Fab 영역을 포함한다. 각 Fab 영역은 전형적으로 각각의 중쇄 및 경쇄의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 이루어진다. 보다 구체적으로, Fab 영역에서 중쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역에서 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역의 VH, CH1, VL 및 CL은 본 개시에 따라 항원 결합 능력을 부여하기 위해 다양한 방식으로 배열될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 IgG의 Fab 영역과 유사하게 VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩티드상에 있을 수 있고 VL 및 CL 영역은 별도의 폴리펩티드상에 있을 수 있다. 또는, VH, CH1, VL 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩티드상에 있을 수 있고 하기 섹션에서 더 상세히 기재된 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
용어 '가변 영역', '가변 도메인', 'V 영역' 또는 'V 도메인'은 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노-말단에 위치하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 일부를 지칭하며 중쇄에 약 120 내지 130개 아미노산 및 경쇄에 약 100 내지 110개 아미노산의 길이를 가지며, 그 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다. 중쇄의 가변 영역은 'VH'로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 'VL'로 지칭될 수 있다. 용어 '가변'은 가변 영역의 특정 절편이 항체 간에 서열이 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하고 그 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나 가변성은 가변 영역의 110개 아미노산 범위에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신에, V 영역은 각각 약 9~12개 아미노산 길이인 '초가변 영역'으로 불리는 더 큰 가변성(예를 들어, 극도의 가변성)을 갖는 더 짧은 영역에 의해 분리되는 약 15~30개 아미노산의 프레임워크 영역[Framework region, FR]으로 불리는 덜 가변적인(예를 들어, 상대적으로 비가변적인) 스트레치로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 주로 β 시트 구성을 채택하는 4개의 FR을 포함하며, 루프 연결을 형성하고, 일부 경우 β 시트 구조의 일부를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된다. 각 쇄의 초가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고 다른 쇄의 초가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다(예를 들어, 문헌[Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed. 1991)] 참조). 불변 영역은 항체가 항원에 결합하는 데 직접 관여되지 않지만 항체 의존성 세포성 세포독성[Antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC] 및 보체 의존성 세포독성[Complement dependent cytotoxicity, CDC]에서 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체 간에서 서열이 광범위하게 상이하다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 'Kabat에 따른 가변 영역 잔기 번호 지정' 또는 'Kabat에서와 같은 아미노산 위치 번호 지정' 및 이의 변형은 Kabat 등의 상기 문헌에서 항체 집합의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 대해 사용된 번호 지정 시스템을 지칭한다. 이 번호 지정 시스템을 사용하여 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 FR 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입물(Kabat에 따른 잔기 52a) 및 잔기 82 뒤에 3개의 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 번호 지정은 '표준' Kabat 번호 지정 서열과 항체 서열의 상동성 영역에서의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Kabat 번호 지정 시스템은 일반적으로 가변 도메인 내의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1~107 및 중쇄의 잔기 1~113)를 언급할 때 사용된다(예를 들어, Kabat 등, 상기 문헌 참조). 'EU 번호 지정 시스템' 또는 'EU 인덱스'는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 언급할 때 사용된다(예를 들어, Kabat 등의 상기 문헌에서 보고된 EU 인덱스). 'Kabat에서와 같은 EU 인덱스'는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 번호 지정을 지칭한다. 예를 들어, AbM, 초티아(Chothia), 콘택트(Contact), IMGT 및 AHon에 의해 다른 번호 지정 시스템이 기재되었다.
항체와 관련하여 사용될 때 용어 '중쇄'는 약 50~70 kDa의 폴리펩티드 쇄를 지칭하되, 아미노-말단 부분은 약 120~130개 이상 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 기반하여 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)로 지칭되는 5개의 별개의 유형(예를 들어, 이소형) 중 하나일 수 있다. 별개의 중쇄는 크기가 상이하다: α, δ 및 γ는 대략 450개 아미노산을 함유하는 반면, μ 및 ε은 대략 550개 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합될 때, 이러한 별개의 유형의 중쇄는 IgG의 4개 서브클래스, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는, 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5개의 잘 알려진 항체 클래스(예를 들어, 이소형)를 생성한다.
항체와 관련하여 사용될 때 용어 '경쇄'는 약 25 kDa의 폴리펩티드 쇄를 지칭하되, 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 110개 이상 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 근사 길이는 211~217개 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파(κ) 또는 람다(λ)로 지칭되는 2개의 별개의 유형이 존재한다.
본원에 사용된 용어 '초가변 영역', 'HVR', '상보성 결정 영역' 및 'CDR'은 상호 교환 가능하게 사용된다. 'CDR'은 면역글로불린([Ig] 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(H1, H2 또는 H3) 중 하나 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다.
CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있고 잘 알려진 번호 지정 시스템에 의해 정의되었다. 예를 들어, Kabat 상보성 결정 영역[CDR]은 서열 가변성에 기반하고, 가장 일반적으로 사용된다(예를 들어, Kabat 등, 상기 문헌 참조). 대신에 Chothia는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(예를 들어, 문헌[Chothia 및 Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17] 참조). Kabat 번호 지정 규칙을 사용하여 번호 지정될 때 Chothia CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 간에서 변한다(이는 Kabat 번호 지정 체계가 H35A와 H35B에 삽입을 배치하기 때문이다. 35A도 35B도 존재하지 않는 경우에는 루프는 32에서 끝나고, 35A만 존재하는 경우에는 루프는 33에서 끝나고, 35A와 35B가 모두 존재하는 경우에는 루프는 34에서 끝남). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 간의 타협을 나타내고 옥스포드 몰큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다(예를 들어, 문헌[Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann 및d Dubel eds., 2d ed. 2010)] 참조). 'Contact' 초가변 영역은 이용 가능한 복합 결정 구조의 분석에 기반한다. 개발되어 널리 채택되고 있는 또 다른 범용 번호 지정 시스템은 이뮤노 지네틱스 인포메이션 시스템[ImMunoGeneTics(IMGT) Information System]®(문헌[Lafranc 등, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77])이다. IMGT는 인간 및 다른 척추동물의 면역글로불린(IG), T세포 수용체[T-cell receptor, TCR] 및 주조직 적합성 복합체[Major histocompatibility complex, MHC]에 특화된 통합 정보 시스템이다. 본원에서, CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열 및 위치 모두의 관점에서 언급된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 '위치'는 종 간에 보존되고 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 번호 지정 시스템을 사용하여 루프라고 하는 구조에 존재하므로, CDR 및 프레임워크 잔기는 쉽게 확인된다. 이 정보는 한 종의 면역글로불린의 CDR 잔기를 전형적으로 인간 항체의 수용체 프레임워크로 이식 및 대체하는 데 사용될 수 있다. 추가 번호 지정 시스템(AHon)이 문헌[Honegger 및 Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70]에 의해 개발되었다. 예를 들어, Kabat 번호 지정 및 IMGT 고유 번호 지정 시스템을 포함하는 번호 지정 시스템 간 대응은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, Kabat, 상기 문헌; Chothia 및 Lesk, 상기 문헌; Martin, 상기 문헌; Lefranc 등, 상기 문헌 참조). 이들 초가변 영역 또는 CDR 각각으로부터의 잔기를 하기 표 1에 표시한다.
Kabat AbM Chothia Contact IMGT
CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 L27--L38
CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 L56--L65
CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96 L105-L117
CDR-H1 H31--H35B H26--H35B H26--H32..34 H30--H35B H27--H38
(Kabat 번호 지정)
CDR-H1 H31--H35 H26--H35 H26--H32 H30--H35
(Chothia 번호 지정)
CDR-H2 H50--H65 H50--H58 H52--H56 H47--H58 H56--H65
CDR-H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101 H105-H117
주어진 CDR의 경계는 확인에 사용되는 체계에 따라 다를 수 있다. 따라서, 달리 특정되지 않는 한, 주어진 항체 또는 가변 영역과 같은 이의 영역의 용어 'CDR' 및 '상보적 결정 영역'뿐만 아니라 항체 또는 이의 영역의 개별 CDR(예를 들어, 'CDR-H1, CDR-H2)은 상기 본원에 기재된 임의의 알려진 체계에 의해 정의된 바와 같은 상보적 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우, Kabat, Chothia 또는 Contact 방법에 의해 정의된 바와 같은 CDR과 같이 특정 CDR 또는 CDR들의 확인을 위한 체계가 특정된다. 다른 경우, CDR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.
초가변 영역은 VL에서 24~36 또는 24~34(L1), 46~56 또는 50~56(L2), 및 89~97 또는 89~96(L3), 및 VH에서 26~35 또는 26~35A(H1), 50~65 또는 49~65(H2) 및 93~102, 94~102 또는 95~102(H3)와 같은 '연장된 초가변 영역'을 포함할 수 있다.
용어 '불변 영역' 또는 '불변 도메인'은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여되지 않지만 Fc 수용체와의 상호 작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 지칭한다. 이 용어는 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린의 다른 부분인, 가변 영역에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 포함할 수 있다.
용어 '프레임워크' 또는 'FR'은 CDR의 측면에 있는 가변 영역 잔기를 지칭한다. FR 잔기는 예를 들어 키메라, 인간화, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중특이적 항체에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본원에서 용어 'Fc 영역'은 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다를 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226의 아미노산 잔기 또는 Pro230으로부터 이의 카르복실-말단까지 뻗어 있는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 번호 지정 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안 또는 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 포함하는 항체 집단을 포함할 수 있다. '기능적 Fc 영역'은 천연 서열 Fc 영역의 '효과기 기능'을 보유한다. 예시적인 '효과기 기능'은 C1q 결합, CDC, Fc 수용체 결합, ADCC, 식균작용, 세포 표면 수용체의 하향조절(예를 들어, B 세포 수용체) 등을 포함한다. 이러한 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합될 것을 요구하고 당업자에게 알려진 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다. '변이체 Fc 영역'은 적어도 하나의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 부가 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 영역에서와 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 또는 이와 적어도 약 90% 상동성, 예를 들어 이와 적어도 약 95% 상동성을 보유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, '에피토프'는 당분야에서의 용어이며 결합 분자(예를 들어, 항체)가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 편재된 영역을 지칭한다. 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체형, 비선형 또는 불연속형 에피토프일 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 항원의 경우, 에피토프는 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나('선형' 에피토프), 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비인접 영역으로부터의 아미노산을 포함할 수 있다('입체형', '비선형' 또는 '불연속형' 에피토프). 일반적으로 선형 에피토프는 2차, 3차 또는 4차 구조에 의존하거나 의존하지 않을 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 결합 분자는 이들이 천연 3차원 단백질 구조로 폴딩되어 있는지 여부와 상관없이 아미노산기에 결합한다. 다른 구현예에서, 결합 분자는 에피토프를 인식하고 결합하기 위해 특정 입체형태(예를 들어, 구부림, 뒤틀림, 회전 또는 접힘)를 나타내기 위해 아미노산 잔기가 에피토프를 구성하는 것을 필요로 한다.
용어 '폴리펩티드' 및 '펩티드' 및 '단백질'은 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되고 임의의 길이의 아미노산 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비아미노산에 의해 단속될 수 있다. 이 용어는 또한 자연적으로 또는 중재; 예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포괄한다. 예를 들어, 비천연 아미노산뿐만 아니라 당분야에 알려진 다른 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 아미노산 유사체를 함유하는 폴리펩티드가 또한 정의 내에 포함된다. 본 개시의 폴리펩티드는 항체 또는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 다른 구성원에 기반할 수 있기 때문에, 특정 구현예에서 '폴리펩티드'는 단쇄로서 또는 2개 이상의 회합된 쇄로서 발생할 수 있음이 이해된다.
본원에 사용된 용어 '약학적으로 허용 가능한'은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 동물, 특히 인간에서 사용하기 위해 미국 약전, 유럽 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 등재되어 있음을 의미한다.
'부형제'는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매 또는 캡슐화 물질과 같은 약학적으로 허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 부형제는 예를 들어 캡슐화 물질 또는 흡수 가속화제와 같은 첨가제, 항산화제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 희석제, 붕해제, 유화제, 연장제, 충전제, 향미제, 수화제, 윤활제, 향료, 보존제, 추진제, 이형제, 멸균제, 감미제, 가용화제, 수화제 및 이의 혼합물을 포함한다. 용어 '부형제'는 또한 희석제, 보조제[예를 들어, 프로인트 보조제(완전 또는 불완전)] 또는 비히클을 지칭할 수 있다.
한 구현예에서, 각 성분은 약학 제형물의 다른 성분과 상용할 수 있고, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 면역원성 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직 또는 기관과 접촉하여 사용하기 적합하고, 합리적인 유익성/위해성 비에 상응한다는 의미에서 '약학적으로 허용 가능'하다. 예를 들어, 문헌[Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe 등, Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009; Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash 및 Ash Eds.; Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009]을 참조한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 부형제는 사용되는 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 무독성이다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 부형제는 수성 pH 완충 용액이다.
약어 'MMAE'는 모노메틸 아우리스타틴 E를 지칭한다.
문맥상 달리 표시되지 않는 한, 하이픈(-)은 돌출 분자에 대한 부착 지점을 지명한다.
용어 '화학치료제'는 종양 성장을 억제하는 데 효과적인 모든 화학적 화합물을 지칭한다. 화학치료제의 비제한적 예는 알킬화제; 예를 들어, 질소 머스타드, 에틸렌이민 화합물 및 알킬 설포네이트; 항대사물질, 예를 들어 엽산, 퓨린 또는 피리미딘 길항제; 유사분열 억제제, 예를 들어 빈카 알칼로이드, 아우리스타틴 및 포도필로톡신의 유도체와 같은 항튜불린제; 세포독성 항생제; DNA 발현 또는 복제를 손상시키거나 방해하는 화합물, 예를 들어 DNA 마이너 그루브 결합제; 및 성장 인자 수용체 길항제를 포함한다. 또한, 화학치료제는 세포독성제(본원에 정의된 바와 같음), 항체, 생물학적 분자 및 소분자를 포함한다.
본원에 사용된 용어 '보존적 치환'은 당업자에게 알려진 아미노산의 치환을 지칭하며 일반적으로 생성된 분자의 생물학적 활성을 변경하지 않고 이루어질 수 있다. 당업자는 일반적으로 폴리펩티드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않음을 인식한다(예를 들어, 문헌[Watson 등, MOLECULAR BIOLOGY OF THE GENE, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition 1987)] 참조). 이러한 예시적인 치환은 바람직하게는 표 2 및 표 3에 제시한 것들에 따라 이루어진다. 예를 들어, 이러한 변화는 이소류신(I), 발린(V) 및 류신(L) 중 임의의 것으로의 임의의 다른 소수성 아미노산의 치환; 아스파르트산(D)으로의 글루탐산(E)의 치환 및 그 반대; 글루타민(Q)으로의 아스파라긴(N)의 치환 및 그 반대; 그리고 세린(S)으로의 트레오닌(T)의 치환 및 그 반대를 포함한다. 특정 아미노산의 환경 및 단백질의 3차원 구조에서의 그 역할에 따라 다른 치환도 보존적인 것으로 고려될 수 있다. 예를 들어, 글리신(G) 및 알라닌(A)은 알라닌(A) 및 발린(V)과 마찬가지로 빈번하게 상호 교환 가능할 수 있다. 상대적으로 소수성인 메티오닌(M)은 빈번하게 류신 및 이소류신, 때로는 발린과 상호 교환될 수 있다. 라이신(K) 및 아르기닌(R)은 아미노산 잔기의 중요한 특징이 그 전하이고 이들 두 아미노산 잔기의 상이한 pK가 상당하지 않은 위치에서 빈번하게 상호 교환 가능하다. 또 다른 변화가 특정 환경에서 '보존적'으로 고려될 수 있다(예를 들어 본원의 표 3; 문헌["Biochemistry" 2nd ED. Lubert Stryer ed (Stanford University)의 13~15페이지; Henikoff 등 , PNAS 1992 Vol 89 10915-10919; Lei 등, J Biol Chem 1995 May 19; 270(20):11882-11886] 참조). 다른 치환도 허용 가능하며 경험적으로 또는 알려진 보존적 치환에 따라 결정될 수 있다.
아미노산 약어
1문자 3문자 전체 이름
F Phe 페닐알라닌
L Leu 류신
S Ser 세린
Y Tyr 티로신
C Cys 시스테인
W Trp 트립토판
P Pro 프롤린
H His 히스티딘
Q Gln 글루타민
R Arg 아르기닌
I Ile 이소류신
M Met 메티오닌
T Thr 트레오닌
N Asn 아스파라긴
K Lys 라이신
V Val 발린
A Ala 알라닌
D Asp 아스파르트산
E Glu 글루탐산
G Gly 글리신
아미노산 치환 또는 유사성 매트릭스
GCG 소프트웨어 9.0 블로섬62(BLOSUM62) 아미노산 치환 매트릭스(블록 치환 매트릭스)을 개조함. 값이 클수록 관련된 천연 단백질에서 치환이 발견될 가능성이 크다.
용어 '상동성' 또는 '상동성인'은 2개의 폴리뉴클레오티드 간 또는 2개의 폴리펩티드 간의 서열 유사성을 의미하는 것으로 의도된다. 유사성은 비교를 위해 정렬될 수 있는 각 서열에서의 위치를 비교함으로써 결정될 수 있다. 2개의 폴리펩티드 서열의 주어진 위치가 동일하지 않은 경우, 해당하는 위치의 유사성 또는 보존성은 예를 들어 표 3에 따라, 해당하는 위치의 아미노산의 유사성을 평가함으로써 결정될 수 있다. 서열 간의 유사성 정도는 서열이 공유하는 일치 또는 상동성인 위치의 수의 함수이다. 서열 유사성 백분율을 결정하기 위한 2개 서열의 정렬은 예를 들어 문헌[Ausubel 등, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley 및 Sons, Baltimore, MD (1999)]에 기재된 것과 같이, 당분야에 알려진 소프트웨어 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다. 바람직하게는, 기본 매개변수가 정렬을 위해 사용되며, 이의 예가 하기에 기재된다. 사용될 수 있는 당분야에서 잘 알려진 하나의 정렬 프로그램은 기본 매개변수로 설정된 블라스트(BLAST)이다. 특히, 프로그램은 다음의 기본 매개변수를 사용하는 블라스트N(BLASTN) 및 블라스트P(BLASTP)이다: 유전자 코드 = 표준; 필터 = 없음; 가닥 = 둘 다; 컷오프 = 60; 예상 = 10; 매트릭스 = BLOSUM62; 설명 = 50개 서열; 분류 기준 = 큰 점수; 데이터베이스 = 비중복, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS 번역 + SwissProtein + SPupdate + PIR. 이러한 프로그램에 대한 상세사항은 미국 국립 생명공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)에서 확인할 수 있다.
주어진 아미노산 서열 또는 핵산 서열에 대한 용어 '동족체'는 '동족체'의 상응하는 서열이 주어진 아미노산 서열 또는 핵산 서열과 실질적 동일성 또는 상동성을 갖는다는 것을 시사하는 것으로 의도된다.
2개 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 간의 동일성 백분율의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 두 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적 예는 문헌[Karlin 및 Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877]에서와 같이 변형된 문헌[Karlin 및 Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 문헌[Altschul 등, 1990, J. Mol. Biol. 215:403]의 N블라스트(NBLAST) 및 X블라스트(XBLAST) 프로그램에 포함된다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 본원에 기재된 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해, 예를 들어 점수=100, 단어 길이=12로 설정된 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 매개변수 세트로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본원에 기재된 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 예를 들어 점수 50, 단어 길이=3으로 설정된 XBLAST 프로그램 매개변수로 수행될 수 있다. 비교 목적으로 갭 포함 정렬을 얻기 위해 갭 블라스트(Gapped BLAST)가 문헌[Altschul 등, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402]에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. 또는, PSI 블라스트(PSI BLAST)가 분자 간 거리가 먼 관계를 검출하는 반복 검색을 수행하기 위해 사용될 수 있다(상동). BLAST, Gapped BLAST 및 PSI Blast 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어 XBLAST 및 NBLAST)의 기본 매개변수가 사용될 수 있다[예를 들어 월드와이드 웹에서 미국 국립 생명공학 정보 센터(NCBI), ncbi. nlm.nih.gov 참조]. 서열 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 비제한적 예는 문헌[Myers 및 Miller, 1988, CABIOS 4:11 17]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 얼라인(ALIGN) 프로그램(버전 2.0)에 포함된다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용할 때, PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4가 사용될 수 있다.
2개 서열 간의 동일성 백분율은 갭을 허용하거나 허용하지 않고 상기 기재된 것과 유사한 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 동일성 백분율 계산에서는 전형적으로 정확히 일치하는 항목만 계수된다.
용어 '세포독성제'는 세포의 발현 활성, 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/하거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 이 용어는 방사성 동위원소, 화학치료제 및 소분자 독소 또는 이의 단편 및/또는 변이체를 포함하는, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소와 같은 독소를 포함하는 것으로 의도된다. 세포독성제의 예는 아우리스타틴(예를 들어, 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 F, MMAE 및 MMAF), 오로미신, 메이탄시노이드, 리신, 리신 A-쇄, 콤브레스타틴, 듀오카르미신, 돌라스타틴, 독소루비신, 다우노루비신, 탁솔, 시스플라틴, cc1065, 에티듐 브로미드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디히드록시 안트라신 디온, 악티노미신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소[Pseudomonas exotoxin, PE] A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 젤로닌, 미토겔린, 레트스트릭토신, 페노미신, 에노미신, 큐리신, 크로틴, 칼리케아미신, 사파오나리아 오피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 및 글루코코르티코이드 및 다른 화학치료제뿐만 아니라 방사성동위원소, 예컨대 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212 또는 213, P32 및 Lu177을 포함하는 Lu의 방사성 동위원소를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 항체는 또한 전구약물을 그 활성 형태로 전환시킬 수 있는 항암 전구약물 활성화 효소에 접합될 수 있다.
본원에 사용된 용어 '유효량' 또는 '치료 유효량'은 바람직한 결과를 초래하기 충분한 본원에 제공된 결합 분자(예를 들어, 항체) 또는 약학 조성물의 양을 지칭한다.
용어 '대상' 및 '환자'는 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 특정 구현예에서, 대상은 비영장류(예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류(예를 들어 원숭이 및 인간)와 같은 포유동물이다. 특정 구현예에서, 대상은 인간이다. 한 구현예에서, 대상은 병태 또는 장애가 있는 것으로 진단된 포유동물, 예를 들어 인간이다. 또 다른 구현예에서, 대상은 병태 또는 장애가 발생할 위험이 있는 포유동물, 예를 들어 인간이다.
'투여하다' 또는 '투여'는 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달 및/또는 본원에 기재되거나 당분야에 알려진 임의의 다른 물리적 전달 방법과 같이 신체 외부에 존재하는 물질을 환자에게 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 '치료하다', '치료' 및 '치료하는'은 하나 이상의 치료법의 투여로 인해 초래되는 질환 또는 병태의 진행, 중증도 및/또는 지속 기간의 감소 또는 완화를 지칭한다. 치료는 환자가 여전히 기저 장애를 앓고 있을 수 있음에도 불구하고 환자에게서 개선이 관찰되도록 기저 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 감소, 완화 및/또는 경감이 있었는지 여부를 평가함으로써 결정될 수 있다. 용어 '치료'는 질환의 관리 및 완화를 모두 포함한다. 용어 '관리하다', '관리하는' 및 '관리'는 반드시 질환의 완치를 초래하지는 않는 치료법으로부터 대상이 얻는 유익한 효과를 지칭한다.
용어 '방지하다', '방지하는' 및 '방지'는 질환, 장애, 병태, 또는 연관된 증상(들)(예를 들어, 암)의 개시(또는 재발) 가능성 감소를 지칭한다.
용어 '암' 또는 '암 세포'는 정상 조직 또는 조직 세포와 구별되는 특징을 보유하는 신생물에서 발견되는 조직 또는 세포를 표시하기 위해 본원에서 사용된다. 이러한 특징은 역형성 정도, 형태의 불규칙성, 세포 윤곽의 불분명함, 핵 크기, 핵 또는 세포질 구조의 변화, 다른 표현형 변화, 암성 또는 전암성 상태를 시사하는 세포 단백질의 존재, 유사 분열 수 증가 및 전이 능력을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. '암'에 관한 단어는 암종, 육종, 종양, 상피종, 백혈병, 림프종, 폴립 및 굳은암종, 형질전환, 신생물 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, '국소 진행성' 암은 암이 시작된 곳으로부터 인근 조직 또는 림프절로 확산된 암을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, '전이성' 암은 암이 시작된 곳으로부터 신체의 다른 부분으로 확산된 암을 지칭한다.
용어 '방광내 투여'는 요도 카테터의 삽입을 통해 방광 내로 직접적으로 치료제를 주입하는 것을 지칭한다.
용어 '체류 시간'은 치료 물질이 치료된 대상의 특정 부분 또는 기관(예를 들어, 방광) 내에 보유될 시간의 길이를 지칭한다.
용어 '약' 및 '대략'은 20% 내, 15% 내, 10% 내, 9% 내, 8% 내, 7% 내, 6% 내, 5% 내, 4% 내, 3% 내, 2% 내, 1% 내, 또는 주어진 값 또는 범위 미만을 의미한다.
본 개시 및 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수형('a', 'an' 및 'the')은 문맥상 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수형을 포함한다.
본원에서 용어 '포함하는'과 함께 구현예가 기재되는 경우에는 '구성되는' 및/또는 '본질적으로 구성되는'의 용어로 기재된 다른 유사한 구현예가 또한 제공된다는 것이 이해된다. 또한 본원에서 어구 '본질적으로 구성되는'과 함께 구현예가 기재되는 경우 '로 구성되는'의 용어로 기재된 다른 유사한 구현예가 또한 제공된다는 것이 이해된다.
본원에서 'A 및/또는 B'와 같은 어구에서 사용되는 용어 '및/또는'은 A 및 B를 모두; A 또는 B; A(만); 및 B(만)를 포함하는 것으로 의도된다.' 마찬가지로, 'A, B 및/또는 C'와 같은 어구에서 사용되는 용어 '및/또는'은 각각의 다음의 구현예를 포괄하도록 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(만); B(만); 및 C(만).
용어 '변이체'는 구체적으로 기재된 단백질(예를 들어 도 1a에 나타낸 191P4D12 단백질)의 상응하는 위치(들)에 하나 이상의 상이한 아미노산 잔기를 갖는 단백질과 같은, 기재된 유형 또는 형식으로부터의 변이를 나타내는 분자를 지칭한다. 유사체는 변이체 단백질의 한 예이다. 스플라이스 이소형 및 단일 뉴클레오티드 다형성[Single nucleotides polymorphism, SNP]은 변이체의 추가 예이다.
본 개시의 '191P4D12 단백질' 및/또는 '191P4D12 관련 단백질'은 본원에서 구체적으로 확인된 것들(도 1a 참조)뿐만 아니라 본원에 개략적으로 설명되거나 당분야에서 쉽게 이용 가능한 방법에 따라 과도한 실험 없이 단리/생성 및 특성규명될 수 있는 대립유전자 변이체, 보존적 치환 변이체, 유사체 및 동족체를 포함한다. 상이한 191P4D12 단백질 또는 이의 단편의 부분을 조합하는 융합 단백질뿐만 아니라 191P4D12 단백질 및 이종 폴리펩티드의 융합 단백질도 포함된다. 이러한 191P4D12 단백질은 191P4D12 관련 단백질, 본 개시의 단백질 또는 191P4D12로 총칭된다. 용어 '191P4D12-관련 단백질'은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 25개 초과의 아미노산; 또는 적어도 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 330, 335, 339개 이상 아미노산의 폴리펩티드 단편 또는 191P4D12 단백질 서열을 지칭한다. 용어 '191P4D12'는 넥틴-4와 상호 교환 가능하게 사용된다.
5.2 선택된 환자를 위한 비근침윤성 방광암[Non-muscle Invasive Bladder Cancer, NMIBC]을 치료하는 방법
191P4D12에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody drug conjugate, ADC]의 방광내 투여를 통해 인간 대상에서 방광암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
한 양태에서, 인간 대상에서 방광암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 항체 약물 접합체[ADC]를 대상에게 방광내로 투여하는 단계를 포함하되, ADC는 모노메틸 아우리스타틴 E[Monomethyl auristatin E, MMAE]의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 방광암은 비근침윤성 방광암[NMIBC]이다. 일부 구현예에서, NMIBC는 조직학적으로 확인되었다. 일부 구현예에서, NMIBC는 제자리 암종[Carcinoma in situ, CIS]이다. 일부 구현예에서, NMIBC는 조직학적으로 확인되었고 제자리 암종[CIS]이다. 특정 구현예에서, 대상은 유두상질환이 있다. 특정 구현예에서, 대상은 유두상질환이 없다. 특정 구현예에서, NMIBC는 조직학적으로 확인되고, 우세한 조직학적 성분(>50%)은 요로상피(이행 세포) 암종이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 고위험 바실러스 칼메트-게랭[Bacillus Calmette-Guerin, BCG]-무반응성 질환이 있다. 특정 구현예에서, 고위험 BCG-무반응성 질환은 적절한 BCG 요법의 완료 후 12개월 이내에 지속성 또는 재발성 CIS 단독 또는 재발성 Ta/T1(비침윤성 유두상 질환/종양이 상피하 연결 조직을 침윤함) 수반 질환으로 정의된다. 특정 구현예에서, 적절한 BCG 요법은 초기 유도 코스의 6회 투여 중 5회 + 3회 투여 유지 요법 중 적어도 2회로서 정의된다. 특정 구현예에서, 적절한 BCG 요법은 초기 유도 코스의 6회 투여 중 5회 + 제2 유도 코스의 6회 투여 중 적어도 2회로서 정의된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 근치적 방광절제술에 비적격하다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 근치적 방광절제술을 받는 것을 거부한다.
일부 구현예에서, 대상의 모든 가시적인 유두상 Ta/T1 종양은 치료 전 60일 이내에 완전히 절제되었다. 일부 구현예에서, 대상은 잔존 순수 CIS가 있다. 일부 구현예에서, 대상은 잔존 순수 CIS가 없다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 충분한 방광 기능 및 사전투약되더라도 본원에서 제공된 ADC 점적투여를 최소 1시간 동안 보유하는 능력이 있다. 일부 구현예에서, 대상은 적어도 18세이다. 일부 구현예에서, 인간 대상의 예상 기대 수명은 2년 초과이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG] 수행 상태 점수가 0점이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 1점이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 2점이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 2점이고, 대상의 사구체 여과율[Glomerular filtration rate, GFR]은 50 mL/분 이상이고, 대상은 뉴욕 심장 협회[New York Heart Association, NYHA] 클래스 III 심부전이 없다.
앞 단락의 방법을 포함하여, 본원에서 제공된 방법의 추가 구현예에서, 본원에 제공된 방법이 사용될 수 있는 인간 대상은 다양한 다른 병태가 있는 인간 대상이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 절대호중구수[Absolute neutrophil count, ANC]가 1,500/μL 이상인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 헤모글로빈(Hgb)이 10 g/dL 이상인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 혈소판수가 100,000/μL 이상인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 혈청 빌리루빈이 1.5 × 정상 상한치[Upper limit of normal, ULN] 또는 길버트 질환이 있는 대상의 경우 3 × ULN 이하인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 계산된 크레아티닌 청소율[Calculated creatinine clearance, CrCl]이 30 mL/분 이상인 병태가 있다. 일부 구현예에서, CrCl은 콕크로프트-가울트(Cockcroft-Gault) 방법 또는 신장 질환에서 식이 조절[Modification of Diet in Renal Disease, MDRD] 공식을 사용하여 계산해야 한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 GFR이 30 mL/분 이상인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ECOG 수행 상태가 2점이고 GFR이 50 mL/분 이상이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase, ALT] 및 아스파테이트 아미노전이효소[Aspartate aminotransferase, AST]가 3 × ULN 이하인 병태가 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은, 국제 표준화 비율[International normalized ratio, INR] 또는 프로트롬빈 시간[Prothrombin time, PT], 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간[Activated partial thromboplastin time, aPTT] 또는 부분 트롬보플라스틴 시간[Partial thromboplastin time, PTT]이 1.5 ULN 이하인 병태가 있다. 단, 항응고제가 의도적으로 사용된 치료 범위 내에 PT 또는 aPTT가 있는 한 대상이 항응고제 요법을 받고 있지 않아야 한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 이 단락에 기재된 병태에 가까우나 이를 넘는 것이 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 이 단락에 기재된 모든 병태가 있다.
앞 단락의 방법을 포함하여, 본원에서 제공된 방법의 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법이 사용될 수 있는 인간 대상은 특정 병태가 없는 인간 대상이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 근침윤성 요로상피 암종(즉, T2, T3, 또는 T4 질환) 또는 전이성 질환의 현재 또는 이전 병력이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ADC 치료 전 3개월 이내에 수행된 컴퓨터 단층촬영[Computed tomography, CT] 또는 자기 공명 영상[Magnetic resonance imaging, MRI]에서 발견된 바와 같은 결절 또는 전이성 질환이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ADC 치료 전 3개월 이내에 수행된 복부/골반의 조영제가 동반된 CT 또는 MRI 요로조영술에서 발견된 바와 같이 동시 상부 요로 상피암종이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ADC 치료 전 6개월 내에 전립선 요도의 선행 또는 동시 요로 상피암종이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ADC 투여 전에 종양 관련 수신증이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 본원에 제공된 방법으로 치료제의 첫 투여 4주 이내에 전신 항암 요법(예를 들어, 화학요법, 생물학적 요법, 면역요법, 표적화 요법, 내분비 요법, 임상시험용 제제) 또는 본원에 제공된 방법으로 치료를 시작하기 전 6주 이내에 NMIBC의 치료를 위한 임의의 방광내 요법을 받지 않았다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 본원에 제공된 방법으로 치료를 시작하기 14 내지 60일 전에 TURBT 시술 직후에 세포독성제(예를 들어, 미토마이신 C, 독소루비신 및 겜시타빈)가 단회 점적 투여되었다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 NMIBC에 대한 사전 요법과 관련된 이상 사례[Adverse event, AE]에 대해 2차적인 진행 중인 증상(2등급 이상)이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 요로상피암의 치료를 위해 이전에 방광에 방사선을 받지 않았다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 활성 감염이 없되, 대상은 ADC 치료 시작 전 14일 이내에 전신(예를 들어, 경구 또는 정맥내) 항생제로 치료되었다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 방광내 투여 또는 방광내 외과적 조작을 용인한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 본원에 제공된 방법으로 치료하기 전 3년 이내에 악성종양의 병력, 또는 이전에 진단된 악성종양으로부터의 잔존 질환에 대한 임의의 증거가 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 무시 가능한 전이 또는 사망 위험(예를 들어, 5년 전체 생존기간[Overall survival, OS] ≥90%), 예컨대 자궁경부의 CIS, 비흑색종 피부 암종, 유방의 관 CIS, 또는 I기 자궁암이 있었다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 본원에 제공된 방법으로 치료되기 적어도 1년 전에 근치적 의도로(외과적 또는 방사선 요법으로) 치료된 전립선암의 병력(T2N0M0 이하 글리슨 점수 ≤7)이 있다. 단, 대상이 전립선암이 없는 것으로 고려되고 다음 기준을 충족한다: (1) 근치적 전립선 절제술을 거친 대상은 ADC 투여 전에 >1년 동안 검출 불가능한 전립선 특이항원[Prostate-specific antigen, PSA]을 가져야 하고, (2) 방사선을 받은 대상은 (>1개월 간격으로 측정된 적어도 3개의 값에 기반하여) >1년의 PSA 배가 시간 및 생화학적 재발에 대한 피닉스 기준을 충족하지 않는 총 PSA 값(즉, 최저치 초과 <2.0 ng/mL)을 가져야 한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 이전에 넥틴-4 표적화 요법 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)-함유 제제에 노출되지 않았다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 자가면역 또는 염증성 피부 장애가 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 건선 또는 아토피 피부염이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 진행 중인 2등급 이상의 감각 또는 운동 신경병증이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 양성 B형 간염 표면 항원 및/또는 항B형간염 중심 항체가 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 B형 간염의 중합효소 연쇄 반응[Polymerase chain reaction, PCR] 검정 결과가 음성이고 적절한 항바이러스 예방법이 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 활성 C형 간염의 감염 또는 알려진 인간 면역결핍 바이러스[Human immunodeficiency virus, HIV] 감염이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 활성 결핵이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 제어되지 않은 당뇨병이 없다. 일부 구현예에서, 제어되지 않은 당뇨병은 연관된 당뇨병 증상(다뇨증 또는 다음다갈증)과 함께 헤모글로빈 A1c[Hemoglobin A1c, HbA1c] ≥8% 또는 HbA1c 7% 내지 <8%를 갖는 대상으로 정의된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 ADC의 첫 투여 전 6개월 이내에 대뇌 혈관 사건(예를 들어, 뇌졸중 또는 일과성 허혈 발작), 불안정 협심증, 심근경색, 또는 NYHA 클래스 III~IV와 일치하는 심장 증상이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 엔포르투맙 베도틴 또는 엔포르투맙 베도틴의 약물 제제에 함유된 임의의 부형제(예를 들어, 히스티딘, 트레할로스 이수화물, 및/또는 폴리소르베이트 20)에 대해 중증(≥3등급) 과민성이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 활성 각막염 또는 각막 궤양이 없다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 치료된 인간 대상은 표층 점상 각막염이 없다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 191P4D12 RNA를 발현하거나, 191P4D12 단백질을 발현하거나, 191P4D12 RNA 및 191P4D12 단백질 둘 다를 발현하는 비근침윤성 방광암[NMIBC]이 있는 대상을 치료하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 암에서의 191P4D12 RNA 발현은 폴리뉴클레오티드 혼성화, 서열분석(서열의 상대적 존재비 평가) 및/또는 PCR(RT-PCR 포함)에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 암에서의 191P4D12 단백질 발현은 IHC, 형광-활성화 세포 분류[Fluorescence-activated cell sorting, FACS]에서의 분석, 및/또는 웨스턴 블롯팅에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 암에서의 191P4D12 단백질 발현은 한 가지 넘는 방법에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 암에서의 191P4D12 단백질 발현은 두 가지 IHC 방법에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 비근침윤성 방광암[NMIBC]은 조직학적으로, 세포학적으로, 또는 조직학적 및 세포학적 둘 다로 확인된다.
또 다른 양태에서, 유효량의 항체 약물 접합체를 대상에 투여하는 단계를 포함하되, 항체 약물 접합체는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22으로 기재된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역[CDR]의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 대상은 섹션 6에 제공된 바와 같은 임의의 적합한 특성을 갖는, 인간 대상에서 NMIBC를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 양태에서, 유효량의 항체 약물 접합체를 대상에 투여하는 단계를 포함하되, 항체 약물 접합체는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22으로 기재된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역[CDR]의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 암은 섹션 6에 제공된 바와 같은 임의의 적합한 마커 및/또는 특성을 갖는, 인간 대상에서 암을 방지 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 양태에서, 유효량의 항체 약물 접합체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 약물 접합체는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 대상은 섹션 6에 제공된 바와 같은 임의의 적합한 특성을 갖는, 인간 대상에서 암을 방지 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 추가 양태에서, 유효량의 항체 약물 접합체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 약물 접합체는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 암은 섹션 6에 제공된 바와 같은 임의의 적합한 마커 및/또는 특성을 갖는, 인간 대상에서 암을 방지 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에서 제공된 모든 방법 및 구체적으로 앞 단락에 기재된 방법에서: 사용할 수 있는 ADC는 섹션 3, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 및 6에 기재되고, 치료 대상 환자의 선택은 본원 및 이 섹션(섹션 5.2) 및 섹션 3 및 6에 예시되어 있고, 치료제 투여를 위한 투여 요법 및 약학 조성물은 하기 섹션 5.4, 5.6 및 6에 기재되어 있고, 치료제를 확인하기 위한 바이오마커, 환자 선택, 이러한 방법의 결과 결정 및/또는 이러한 방법을 위한 임의의 방법의 기준으로 역할을 하는 것은 이 섹션 및 섹션 6에 예시되어 있고, 바이오마커는 섹션 5.7에 기재된 바 또는 당업자에 의해 결정될 수 있고, 본원에 제공된 방법의 치료 결과는 이 섹션(섹션 5.2) 및 섹션 3 및 6에 기재되어 있고, 본원에 기재된 방법의 추가 치료 결과 예를 들어, 이 섹션(섹션 5.2) 및 섹션 3 및 6에 기재된 것 및 예시된 것은 본원에 기재된 바이오마커의 개선일 수 있고, ADC를 포함하는 병용 요법 및 다른 치료제는 이 섹션 및 섹션 5.5에 기재된다. 따라서, 당업자는 본원에 제공된 방법이 상기 및 하기에 기재된 바와 같은 환자의 모든 순열 및 조합, 치료제, 투여 요법, 바이오마커, 및 치료 결과의 조합을 포함한다는 것을 이해할 것이다.
5.3 방법을 위한 항체 약물 접합체
섹션 5.2에 제공된 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법의 다양한 구현예에서, 방법에서 사용된 ADC는 본원 및/또는 그 전체가 본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 8,637,642에 기재된 항-191P4D12 ADC이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원의 방법을 위해 제공된 항-191P4D12 항체 약물 접합체는 섹션 5.3.2 및 5.3.4에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)을 포함하여 본원에 제공된 바와 같은 세포독성제의 하나 이상의 단위(약물 단위 또는 D)에 접합된, 섹션 3, 5.3.1, 및 6을 포함하여 본원에 제공된 바와 같은 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포독성제(약물 단위 또는 D)는 섹션 5.3.3에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)을 포함하여 본원에 제공된 바와 같이 직접 또는 링커 단위[Linker unit, LU]를 통해 공유 연결될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 약물 접합체 화합물은 하기 화학식을 갖거나 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[화학식 I]
L - (LU-D)p
식 중,
L은 항체 단위, 예를 들어 섹션 3, 5.3.1, 및 6에 제공된 바와 같은 예를 들어, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고,
(LU-D)는 링커 단위-약물 단위 모이어티이고,
LU-는 예를 들어 섹션 5.3.3에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 바와 같은 링커 단위이고,
D는 예를 들어 섹션 5.3.2 및 5.3.4에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 바와 같은 표적 세포에 대해 세포증식억제 또는 세포독성 활성을 갖는 약물 단위이고,
p는 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 추가 예를 갖는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, p는 1 내지 20, 1 내지 19, 1 내지 18, 1 내지 17, 1 내지 16, 1 내지 15, 1 내지 14, 1 내지 13, 1 내지 12, 1 내지 11, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2 범위이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 20, 2 내지 19, 2 내지 18, 2 내지 17, 2 내지 16, 2 내지 15, 2 내지 14, 2 내지 13, 2 내지 12, 2 내지 11, 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3 범위이다. 일부 구현예에서, p는 3 내지 20, 3 내지 19, 3 내지 18, 3 내지 17, 3 내지 16, 3 내지 15, 3 내지 14, 3 내지 13, 3 내지 12, 3 내지 11, 3 내지 10, 3 내지 9, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 또는 3 내지 4 범위이다. 일부 구현예에서, p는 약 1이다. 일부 구현예에서, p는 약 2이다. 일부 구현예에서, p는 약 3이다. 일부 구현예에서, p는 약 4이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.8이다. 일부 구현예에서, p는 약 5이다. 일부 구현예에서, p는 약 6이다. 일부 구현예에서, p는 약 7이다. 일부 구현예에서, p는 약 8이다. 일부 구현예에서는, p는 약 9이다. 일부 구현예에서, p는 약 10이다. 일부 구현예에서, p는 약 11이다. 일부 구현예에서, p는 약 12이다. 일부 구현예에서, p는 약 13이다. 일부 구현예에서, p는 약 14이다. 일부 구현예에서, p는 약 15이다. 일부 구현예에서, p는 약 16이다. 일부 구현예에서, p는 약 17이다. 일부 구현예에서, p는 약 18이다. 일부 구현예에서, p는 약 19이다. 일부 구현예에서, p는 약 20이다.
일부 구현예에서, 항체 약물 접합체 화합물은 하기 화학식을 갖거나 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[화학식 II]
L - (Aa-Ww-Yy-D)p
식 중,
L은 항체 단위, 예를 들어 섹션 3, 5.3.1, 및 6에 제공된 바와 같은 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
-Aa-Ww-Yy-는 링커 단위[LU]이며,
-A-는 스트레처 단위이며,
a는 0 또는 1이고,
각각의 -W-는 독립적으로 아미노산 단위이고,
w는 0 내지 12 범위의 정수이고,
-Y-는 자기-희생 스페이서 단위이며,
y는 0, 1 또는 2이고,
각각 예를 들어 섹션 5.3.3에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 및 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 바와 같고,
D는 예를 들어 섹션 5.3.2 및 5.3.4에서의 추가 개시와 함께 섹션 3 및 6 및 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 바와 같은 표적 세포에 대해 세포증식억제 또는 세포독성 활성을 갖는 약물 단위이고,
p는 섹션 3 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)에 제공된 추가 예를 갖는 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0, 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0 또는 1이다. 구현예에서, p는 1 내지 20, 1 내지 19, 1 내지 18, 1 내지 17, 1 내지 16, 1 내지 15, 1 내지 14, 1 내지 13, 1 내지 12, 1 내지 11, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2 범위이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 20, 2 내지 19, 2 내지 18, 2 내지 17, 2 내지 16, 2 내지 15, 2 내지 14, 2 내지 13, 2 내지 12, 2 내지 11, 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3 범위이다. 일부 구현예에서, p는 3 내지 20, 3 내지 19, 3 내지 18, 3 내지 17, 3 내지 16, 3 내지 15, 3 내지 14, 3 내지 13, 3 내지 12, 3 내지 11, 3 내지 10, 3 내지 9, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 또는 3 내지 4 범위이다. 일부 구현예에서, p는 약 1이다. 일부 구현예에서, p는 약 2이다. 일부 구현예에서, p는 약 3이다. 일부 구현예에서, p는 약 4이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.8이다. 일부 구현예에서, p는 약 5이다. 일부 구현예에서, p는 약 6이다. 일부 구현예에서, p는 약 7이다. 일부 구현예에서, p는 약 8이다. 일부 구현예에서는, p는 약 9이다. 일부 구현예에서, p는 약 10이다. 일부 구현예에서, p는 약 11이다. 일부 구현예에서, p는 약 12이다. 일부 구현예에서, p는 약 13이다. 일부 구현예에서, p는 약 14이다. 일부 구현예에서, p는 약 15이다. 일부 구현예에서, p는 약 16이다. 일부 구현예에서, p는 약 17이다. 일부 구현예에서, p는 약 18이다. 일부 구현예에서, p는 약 19이다. 일부 구현예에서, p는 약 20이다. 일부 구현예에서, w가 0이 아닐 때, y는 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, w가 1 내지 12일 때, y는 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, w는 2 내지 12이고 y는 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, a는 1이고 w 및 y는 0이다.
섹션 5.2에 제공된 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법의 일부 특정 구현예에서, 방법을 위해 본원에 제공된 임의의 ADC의 일부로서의 세포독성제는 MMAE이거나, 이를 포함하거나, 이로 구성된다.
복수의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물의 경우, 약물 부하는 항체 단위당 약물 분자의 평균 수 p로 나타낸다. 약물 부하는 항체당 1~20개 약물[Drug, D] 범위일 수 있다. 접합 반응의 준비에서 항체당 평균 약물 수는 질량 분광측정, ELISA 검정 및 HPLC와 같은 통상적 수단으로 특성규명될 수 있다. p 측면에서 항체 약물 접합체의 정량적 분포도 결정될 수 있다. 일부 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 항체 약물 접합체로부터의 특정 값인 동종 항체 약물 접합체의 분리, 정제 및 특성규명은 역상 HPLC 또는 전기 영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다. 특정 예시적인 구현예에서, p는 2 내지 8이다.
본원에 제공된 방법을 위한 ADC의 추가 구현예는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
섹션 3, 5.2, 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)을 포함하여 본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴이다. 섹션 3, 5.2, 및 6 그리고 이 섹션(섹션 5.3)을 포함하여 본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴의 바이오시밀러이다.
5.3.1 항-191P4D12 항체 또는 항원 결합 단편
한 구현예에서, 넥틴-4 관련 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 넥틴-4 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다(도 1a 참조). 191P4D12 단백질을 암호화하는 상응하는 cDNA는 서열 번호 1의 서열을 갖는다(도 1a 참조).
서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 넥틴-4 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 넥틴-4 관련 단백질에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 예를 들어, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 넥틴-4 단백질에 결합하는 항체는 넥틴-4 변이체 및 이의 동족체 또는 유사체와 같은 넥틴-4 관련 단백질에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 단클론 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 도 1b 및 1c에 나타낸 바와 같이, 서열 번호 4의 아미노산 서열(서열 번호 3의 cDNA 서열)을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 6의 아미노산 서열(서열 번호 5의 cDNA 서열)을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22[서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23[서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 130번째 아미노산(아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22[서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 중쇄 가변 영역 서열의 상응하는 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23[서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 130번째 아미노산(아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 경쇄 가변 영역 서열의 상응하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22[서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23[서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 130번째 아미노산(아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22[서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 중쇄 가변 영역 서열의 상응하는 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23[서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 130번째 아미노산(아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열임]에 제시된 경쇄 가변 영역 서열의 상응하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 7 및 서열 번호 8은 도 1d 및 도 1e에 나타낸 바와 같고 하기에 나열된다:
서열 번호 22
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열 번호 23
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKR
서열 번호 7
MELGLCWVFLVAILEGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 8
MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CDR 서열은 잘 알려진 번호 지정 시스템에 따라 결정될 수 있다. 상기 기재된 바와 같이, CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있고 잘 알려진 번호 지정 시스템에 의해 정의되었다. 예를 들어, Kabat 상보성 결정 영역[CDR]은 서열 가변성에 기반하고 가장 일반적으로 사용된다(예를 들어, Kabat 등, 상기 문헌 참조). 대신에 Chothia는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(예를 들어, 문헌[Chothia 및 Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17] 참조). Kabat 번호 지정 규칙을 사용하여 번호 지정될 때 Chothia CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 간에서 변한다(이는 Kabat 번호 지정 체계가 H35A와 H35B에 삽입을 배치하기 때문이다. 35A도 35B도 존재하지 않는 경우에는 루프는 32에서 끝나고, 35A만 존재하는 경우에는 루프는 33에서 끝나고, 35A와 35B가 모두 존재하는 경우에는 루프는 34에서 끝남). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 간의 타협을 나타내며 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다(예를 들어, 문헌[Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann 및 Dubel eds., 2d ed. 2010)] 참조). 'Contact' 초가변 영역은 이용 가능한 복합 결정 구조의 분석에 기반한다. 개발되어 널리 채택되고 있는 또 다른 범용 번호 지정 시스템은 ImMunoGeneTics(IMGT) Information System®(문헌[Lafranc 등, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77])이다. IMGT는 인간 및 다른 척추동물의 면역글로불린(IG), T세포 수용체[T-cell receptor, TCR] 및 주조직 적합성 복합체[Major histocompatibility complex, MHC]에 특화된 통합 정보 시스템이다. 본원에서, CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열 및 위치 모두의 관점에서 언급된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 '위치'는 종 간에 보존되고 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 번호 지정 시스템을 사용하여 루프라고 하는 구조에 존재하므로, CDR 및 프레임워크 잔기는 쉽게 확인된다. 이 정보는 한 종의 면역글로불린의 CDR 잔기를 전형적으로 인간 항체의 수용체 프레임워크로 이식 및 대체하는 데 사용될 수 있다. 추가 번호 지정 시스템(AHon)이 문헌[Honegger 및 Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70]에 의해 개발되었다. 예를 들어 Kabat 번호 지정 및 IMGT 고유 번호 지정 시스템을 포함하는, 번호 지정 시스템 간 대응은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, Kabat, 상기 문헌; Chothia 및 Lesk, 상기 문헌; Martin, 상기 문헌; Lefranc 등, 상기 문헌 참조). 이들 각각의 초가변 영역 또는 CDR로부터의 잔기를 상기 표 1에 표시한다.
일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Kabat 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Kabat 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 AbM 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 AbM 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Chothia 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Chothia 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Contact 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Contact 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IMGT 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 IMGT 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Kabat 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Kabat 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 AbM 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 AbM 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Chothia 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Chothia 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Contact 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Contact 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IMGT 번호 지정에 따라 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 IMGT 번호 지정에 따라 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
상기 기재된 바와 같이, 상이한 번호 지정 시스템에 따른 CDR 서열은 예를 들어 항원 수용체 번호 지정 및 수용체 분류[Antigen receptor Numbering And Receptor ClassificatIon, ANARCI]에 의해 제공된 것과 같은 온라인 도구를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들어, ANARCI에 의해 결정된 바와 같은 Kabat 번호 지정에 따라 서열 번호 22 내의 중쇄 CDR 서열 및 서열 번호 23 내의 경쇄 CDR 서열을 하기 표 4에 열거한다.
서열 번호 22의 VH 서열 번호 23의 VL
CDR1 SYNMN(서열 번호 9) RASQGISGWLA(서열 번호 12)
CDR2 YISSSSSTIYYADSVKG(서열 번호 10) AASTLQS(서열 번호 13)
CDR3 AYYYGMDV(서열 번호 11) QQANSFPPT(서열 번호 14)
또 다른 예에 있어서, ANARCI에 의해 결정된 바와 같은 IMGT 번호 지정에 따라 서열 번호 22 내의 중쇄 CDR 서열 및 서열 번호 23 내의 경쇄 CDR 서열을 하기 표 5에 열거한다.
서열 번호 22의 VH 서열 번호 23의 VL
CDR1 GFTFSSYN(서열 번호 16) QGISGW(서열 번호 19)
CDR2 ISSSSSTI(서열 번호 17) AAS(서열 번호 20)
CDR3 ARAYYYGMDV(서열 번호 18) QQANSFPPT(서열 번호 21)
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열로 구성된 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열로 구성된 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22의 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23의 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 466번째 아미노산(라이신)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 236번째 아미노산(시스테인)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산)부터 466번째 아미노산(라이신)까지의 범위의 아미노산 서열로 구성된 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산)부터 236번째 아미노산(시스테인)까지의 범위의 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 특이성, 열안정성, 발현 수준, 효과기 기능, 글리코실화, 면역원성 감소 또는 용해도를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 생물학적 특성을 최적화하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 항체에 더하여, 항체 변이체가 제조될 수 있음이 고려된다. 예를 들어, 항체 변이체는 암호화 DNA에 적절한 뉴클레오티드 변화를 도입하고/하거나 바람직한 항체 또는 폴리펩티드를 합성하여 제조될 수 있다. 당업자는 아미노산 변화가 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시키거나 막 고정 특성을 변경하는 것과 같이 항체의 번역 후 과정을 변경할 수 있음을 이해한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 예를 들어 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된다. 항체 유도체는 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함할 수 있다. 특정 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 투니카미신의 대사적 합성 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 알려진 기술에 의해 임의의 수많은 화학적 변형이 수행될 수 있다. 추가로, 항체는 하나 이상의 비전통적 아미노산을 함유할 수 있다.
변이는 원래 항체 또는 폴리펩티드와 비교하여 아미노산 서열의 변화를 초래하는 단일 도메인 항체 또는 폴리펩티드를 암호화하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 포함하는 또 다른 아미노산으로 대체한 결과, 예를 들어 류신의 세린으로의 대체, 예를 들어 보존적 아미노산 대체일 수 있다. 예를 들어 아미노산 치환을 초래하는 부위 지정 돌연변이유발 및 PCR 매개 돌연변이유발을 포함하는, 당업자에게 알려진 표준 기술이 본원에 제공된 분자를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하기 위해 사용될 수 있다. 삽입 또는 결실은 선택적으로 약 1 내지 5개 아미노산 범위일 수 있다. 특정 구현예에서, 치환, 결실 또는 삽입은 원래 분자에 비해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 치환은 하나 이상의 예측된 비필수 아미노산 잔기에서 이루어진 보존적 아미노산 치환이다. 허용되는 변이는 서열에서 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 체계적으로 수행하고 모 항체에 의해 나타나는 활성에 대해 생성된 변이체를 시험함으로써 결정될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기부터 여러 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다.
연속적인 아미노산 치환에 의해 생성된 항체가 본 개시에 포함된다. 보존적 아미노산 치환에 의해 생성된 항체가 본 개시에 포함된다. 보존적 아미노산 치환에서, 아미노산 잔기는 유사한 전하를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산 잔기로 대체된다. 상기 기재된 바와 같이, 유사한 전하를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산 잔기 패밀리가 당분야에 정의되어 있다. 이러한 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들어 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 또는, 돌연변이는 포화 돌연변이유발과 같이 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체는 활성을 보유하는 돌연변이체를 확인하기 위해 생물학적 활성에 스크리닝될 수 있다. 돌연변이유발 후, 특성을 유지하기 위해 또는 유의하게 변화시키지 않기 위해 암호화된 단백질이 발현될 수 있고 단백질의 활성은 보존적(예를 들어, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 갖는 아미노산기 내) 치환으로 결정될 수 있다.
아미노산은 이의 측쇄 특성의 유사성에 따라 그룹화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Lehninger, Biochemistry 73-75 (2d ed. 1975)] 참조): (1) 비극성: Ala(A), Val(V), Leu(L), Ile(I), Pro(P), Phe(F), Trp(W), Met(M); (2) 비하전 극성: Gly(G), Ser(S), Thr(T), Cys(C), Tyr(Y), Asn(N), Gln(Q); (3) 산성: Asp(D), Glu(E); 및 (4) 염기성: Lys(K), Arg(R), His(H). 또는, 자연 발생 잔기는 공통 측쇄 특성에 기반하여 군으로 나뉠 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
예를 들어, 항체의 적절한 입체형태를 유지하는 데 관여되지 않는 임의의 시스테인 잔기도 분자의 산화 안정성을 개선하고 비정상적 가교를 방지하기 위해 예를 들어 알라닌 또는 세린과 같은 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있다.
변이는 올리고뉴클레오티드-매개(부위-지정) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝 및 PCR 돌연변이유발과 같은 당분야에 알려진 방법을 사용하여 이루어질 수 있다. 부위 지정 돌연변이유발(예를 들어, 문헌[Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7; 및 Zoller 등, 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500] 참조), 카세트 돌연변이유발(예를 들어 문헌[Wells 등, 1985, Gene 34:315-23] 참조), 또는 다른 알려진 기술이 항-항-MSLN 항체 변이체 DNA를 생성하기 위해 클로닝된 DNA 상에서 수행될 수 있다.
항체의 공유 변형은 본 개시의 범위 내에 포함된다. 공유 변형은 항체의 표적화된 아미노산 잔기를 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 것을 포함한다. 다른 변형은 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 탈아미드화, 프롤린 및 라이신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실기의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화(예를 들어, 문헌[Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983)] 참조), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카르복실기의 아미드화를 포함한다.
본 개시의 범위 내에 포함되는 항체의 다른 유형의 공유 변형은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴 변경(예를 들어, 문헌[Beck 등, 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501; 및 Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80] 참조), 및 예를 들어, 미국 특허 번호 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192; 또는 4,179,337에 제시된 방식으로 항체의 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜[Polyethylene glycol, PEG], 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나로의 연결을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 및 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄/경쇄의 이러한 구현예는 하기와 같이 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 70% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 75% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 80% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 85% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 90% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 95% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 7에 제시된 중쇄와 임의의 제공된 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄를 포함하며, CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)은 서열 번호 7에 제시된 중쇄의 CDR과 동일하다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 70% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 75% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 80% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 85% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 90% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 95% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 8에 제시된 경쇄와 임의의 제공된 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함하며, CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)은 서열 번호 8에 제시된 경쇄의 CDR과 동일하다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 임의의 조합 또는 순열로 이 단락에 제공된 바와 같은 임의의 상동성 경쇄 및 임의의 상동성 중쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 이러한 구현예가 하기와 같이 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 70% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 75% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 80% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 85% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 90% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 95% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역과 임의의 제공된 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, CDR(CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)은 서열 번호 22에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDR과 동일하다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 70% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 75% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 80% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 85% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 90% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 95% 초과의 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 23에 제시된 경쇄 가변 영역과 임의의 제공된 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하되, CDR(CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)은 서열 번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역의 CDR과 동일하다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 임의의 조합 또는 순열로 이 단락에 제공된 바와 같은 임의의 상동성 경쇄 가변 영역 및 임의의 상동성 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[American Type Culture Collection, ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 CDR 영역을 포함하되, 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3) 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열로 구성된 중쇄 및 경쇄 CDR 영역을 포함하되, 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 중쇄 가변 영역 및 인간화 경쇄 가변 영역을 포함하되,
(a) 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 중쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)을 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR(CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 중쇄 가변 영역 및 인간화 경쇄 가변 영역을 포함하되,
(a) 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 중쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)을 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열로 구성된 CDR(CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 항체는 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열로 구성된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 항체는 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다. 본 개시의 항체의 불변 영역으로서, 임의의 서브클래스의 불변 영역이 선택될 수 있다. 한 구현예에서, 중쇄 불변 영역으로서 인간 IgG1 불변 영역 및 경쇄 불변 영역으로서 인간 Ig 카파 불변 영역이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하되, 항체는 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열로 구성된 중쇄 및 경쇄를 포함하되, 항체는 본원에 제공된 항-넥틴-4 항체의 바람직한 기능적 특성을 보유한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,
(a) 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 80% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 80% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 이러한 구현예가 하기와 같이 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처(ATCC) 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 85% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 90% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성이거나 동일할 수 있다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 85% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 90% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성이거나 동일할 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 임의의 조합 또는 순열로 이 단락에 제공된 바와 같은 임의의 상동성 경쇄 가변 영역 및 임의의 상동성 중쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하되,
(a) 중쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 적어도 80% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
(b) 경쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 적어도 80% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 및 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 특정 상동성 또는 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다. 상동성 또는 동일성을 갖는 중쇄 및 경쇄의 이러한 구현예가 하기와 같이 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 적어도 85% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 중쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 적어도 90% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 중쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 중쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성이거나 동일할 수 있다. 일부 구현예에서, 경쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 적어도 85% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 경쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 적어도 90% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 경쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 경쇄는 미국 유형 배양 수집처[ATCC] 수탁 번호 PTA-11267로 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성이거나 동일할 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 임의의 조합 또는 순열로 이 단락에 제공된 바와 같은 임의의 상동성 경쇄 및 임의의 상동성 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 특정 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 VC1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VC1 도메인에 결합하지만 191P4D12의 C1C2 도메인에는 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 1번째 내지 147번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 1번째 내지 147번째 아미노산 잔기에 위치한 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 1번째 내지 10번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 11번째 내지 20번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 21번째 내지 30번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 31번째 내지 40번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 41번째 내지 50번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 51번째 내지 60번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 61번째 내지 70번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 71번째 내지 80번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 81번째 내지 90번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 91번째 내지 100번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 101번째 내지 110번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 111번째 내지 120번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 121번째 내지 130번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 131번째 내지 140번째 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12의 141번째 내지 147번째 아미노산 잔기에 결합한다. 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 특정 구현예의 결합 에피토프는 WO 2012/047724에서 결정 및 기재되었으며, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간에서 관찰되는 191P4D12 변이체 간에 공통적인 191P4D12의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간에서 관찰되는 191P4D12 다형성 간에 공통적인 191P4D12의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 암에서 관찰되는 191P4D12 다형성 간에 공통적인 191P4D12의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12 또는 191P4D12 변이체에 결합, 이를 내재화, 파괴 또는 이의 생물학적 기능을 조절할 191P4D12의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 191P4D12와 리간드, 기질 및 결합 파트너 간의 상호 작용을 파괴할 191P4D12의 에피토프에 결합한다.
본원에 제공된 조작된 항체는 VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기에 변형이 이루어진 것들을 포함한다(예를 들어, 항체의 특성을 개선하기 위해). 전형적으로, 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 하나의 접근은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 '역돌연변이'시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 거친 항체는 항체가 유래된 생식계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 이의 생식계열 구성으로 되돌리기 위해, 체세포 돌연변이는 예를 들어 부위 지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 생식계열 서열로 '역돌연변이'(예를 들어, 류신에서 메티오닌으로 '역돌연변이')될 수 있다. 이러한 '역돌연변이된' 항체가 또한 본 개시에 포괄되는 것으로 의도된다.
프레임워크 변형의 또 다른 유형은 T세포 에피토프를 제거하여 항체의 잠재적 면역원성을 감소시키기 위해 프레임워크 영역 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 돌연변이시키는 것이 관여된다. 이 접근은 '탈면역화'로도 지칭되며 카(Carr) 등의 미국 특허 공개 번호 2003/0153043에 더 상세히 기재되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형에 추가적으로 또는 대안적으로, 본 개시의 항체는 전형적으로 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원 의존적 세포성 세포독성과 같은 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하기 위해, Fc 영역 내 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 또한, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 또한 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하기 위해 화학적으로 변형되거나(예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 그 글리코실화를 변경하도록 변형될 수 있다. 이들 구현예가 각각 하기에서 더 상세히 기재된다.
한 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예를 들어 증가 또는 감소하도록 변형된다. 이 접근은 보드머(Bodmer) 등의 미국 특허 번호 5,677,425에 추가 기재되어 있다. 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나 항-191P4D12 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키기 위해 CH1의 힌지 영역에 있는 시스테인 잔기의 수가 변경된다.
또 다른 구현예에서, 항-191P4D12 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 항체의 Fc 힌지 영역이 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 스타필로코커스 단백질 A[Staphylococcyl protein A, SpA] 결합을 갖도록 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역으로 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 도입된다. 이 접근은 워드(Ward) 등의 미국 특허 번호 6,165,745에 더 상세히 기재되어 있다.
또 다른 구현예에서, 항-191P4D12 항체는 그 생물학적 반감기를 증가시키기 위해 변형된다. 다양한 접근이 가능하다. 예를 들어, 돌연변이는 Ward의 미국 특허 번호 6,277,375에 기재된 바와 같이 도입될 수 있다. 또는, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는 프레스타(Presta) 등의 미국 특허 번호 5,869,046 및 6,121,022에 기재된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개 루프로부터 취해진 구제 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
또 다른 구현예에서, Fc 영역은 항체의 효과기 기능(들)을 변경하기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 변경된다. 예를 들어, 아미노산 특이적 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 항체가 효과기 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력을 보유하도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 그에 대한 친화도가 변경되는 효과기 리간드는 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근은 둘 다 윈터(Winter) 등의 미국 특허 번호 5,624,821 및 5,648,260에 더 상세히 기재되어 있다.
항-191P4D12 항체와 191P4D12 관련 단백질의 반응성은 웨스턴 블롯, 면역침전, ELISA, 및 적절한 경우 191P4D12 관련 단백질, 191P4D12 발현 세포 또는 이의 추출물을 사용한 FACS 분석을 포함하는 다수의 잘 알려진 수단에 의해 확립될 수 있다. 191P4D12 항체 또는 이의 단편은 검출 가능한 마커로 표지되거나 제2 분자에 접합될 수 있다. 적합한 검출 가능 마커는 방사성동위원소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 화학발광 화합물, 금속 킬레이트제 또는 효소를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 2개 이상의 191P4D12 에피토프에 특이적인 이중특이적 항체는 당분야에 일반적으로 알려진 방법을 사용하여 생성된다. 동종이량체 항체는 또한 당분야에 알려진 가교 기술에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 동종이량체 항체는 또한 당분야에 알려진 가교 기술에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Wolff 등 , Cancer Res. 53: 2560-2565]).
또 다른 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체이다. Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄는 서열 번호 7의 20번째 E 잔기부터 466번째 K 잔기까지의 범위의 아미노산 서열로 구성되며 Ha22-2(2,4)6.1의 경쇄는 서열 번호 8 서열의 23번째 D 잔기부터 236번째 C 잔기까지의 범위의 아미노산 서열로 구성된다.
Ha22-2(2,4)6.1로 지명된 항체를 생성하는 하이브리도마는 2010년 8월 18일자로 미국 유형 배양 수집처(ATCC, P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108)에 (Federal Express를 통해) 발송되었고 수탁 번호 PTA-11267이 부여되었다.
항-넥틴-4 항체의 추가 구현예는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
5.3.2 세포독성제(약물 단위)
본원에 제공된 방법에서 사용된 ADC가 세포독성제에 접합된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하기 때문에, 본 개시는 방법에서 사용하기 위한 ADC의 일부로서 세포독성제에 대한 다양한 구현예를 추가로 제공한다. 섹션 5.2에 제공된 방법을 포함하여 본원에 제공된 방법의 다양한 구현예에서, 방법을 위해 본원에 제공된 임의의 ADC의 일부로서의 세포독성제는 튜불린 파괴제이거나, 이로 구성되거나, 이를 포함한다. 한 구현예에서, 세포독성제는 튜불린 파괴제이다. 일부 구현예에서, 튜불린 파괴제는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 헤미아스텔린, 빈카 알칼로이드, 메이탄시노이드, 에리불린, 콜히친, 플로카불린, 포몹신, 에포틸론, 크립토피신, 및 탁산으로 구성된 군으로부터 선택된다. 한 특정 구현예에서, 튜불린 파괴제는 아우리스타틴이다. 추가의 특정 구현예에서, 아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F[Monomethyl auristatin F, MMAF], AFP 또는 아우리스타인 T이다. 또 다른 특정 구현예에서, 아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)이다.
섹션 5.2에 제공된 방법을 포함하여 본원에 제공된 방법의 다양한 구현예에서, 방법을 위해 본원에 제공된 임의의 ADC의 일부로서의 세포독성제는 미국 특허 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재된 세포독성제를 포함하거나, 이로 구성되거나, 이로부터 선택된 임의의 제제이며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
일부 구현예에서, 아우리스타틴은 MMAE이다(여기서 물결선은 항체 약물 접합체의 링커에 대한 공유 부착을 표시함).
MMAE
일부 구현예에서, MMAE 및 링커 성분(본원에 추가로 기재됨)을 포함하는 예시적 구현예는 하기 구조를 갖는다[식 중, L은 항체(예를 들어 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편)를 나타내고 p는 1 내지 12 범위임]:
앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 1 내지 20, 1 내지 19, 1 내지 18, 1 내지 17, 1 내지 16, 1 내지 15, 1 내지 14, 1 내지 13, 1 내지 12, 1 내지 11, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2 범위이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 2 내지 20, 2 내지 19, 2 내지 18, 2 내지 17, 2 내지 16, 2 내지 15, 2 내지 14, 2 내지 13, 2 내지 12, 2 내지 11, 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3 범위이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 3 내지 20, 3 내지 19, 3 내지 18, 3 내지 17, 3 내지 16, 3 내지 15, 3 내지 14, 3 내지 13, 3 내지 12, 3 내지 11, 3 내지 10, 3 내지 9, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 또는 3 내지 4 범위이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 1이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 2이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 3이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 4이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 3.8이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 5이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 6이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 7이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 8이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 9이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 10이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 11이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 12이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 13이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 14이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 15이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 16이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 17이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 18이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 19이다. 앞 단락에 기재된 화학식의 일부 구현예에서, p는 약 20이다.
전형적으로, 펩티드 기반 약물 단위는 2개 이상의 아미노산 및/또는 펩티드 단편 간에 펩티드 결합을 형성함으로써 제조될 수 있다. 이러한 펩티드 결합은 예를 들어 펩티드 화학 분야에서 잘 알려진 액상 합성 방법(문헌[E. Schroder 및 K. Lubke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press] 참조)에 따라 제조될 수 있다. 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 단위는 US 5635483; US 5780588; 문헌[Pettit 등 (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit 등 (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R., 등 Synthesis, 1996, 719-725; Pettit 등 (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863; 및 Doronina (2003) Nat Biotechnol 21(7):778-784]의 방법에 따라 제조될 수 있다.
세포독성제의 추가 구현예는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
5.3.3 링커
전형적으로, 항체 약물 접합체는 약물 단위(예를 들어, MMAE)와 항체 단위(예를 들어, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 사이에 링커 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 링커의 절단이 세포내 환경에서 항체로부터 약물 단위를 방출하도록, 세포내 조건하에서 절단 가능하다. 또 다른 구현예에서, 링커 단위는 절단 불가능하고 예를 들어 항체 분해에 의해 약물이 방출된다. 일부 구현예에서, 링커는 세포내 환경(예를 들어, 리소좀 또는 엔도좀 또는 소포 내)에 존재하는 절단제에 의해 절단 가능하다. 링커는 예를 들어 리소좀 또는 엔도좀 프로테아제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티딜 링커는 적어도 2개 아미노산 길이 또는 적어도 3개 아미노산 길이이다. 다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 pH 민감성이며, 즉 특정 pH 값에서 가수분해에 민감하다. 전형적으로 pH 민감성 링커는 산성 조건하에 가수분해 가능하다. 예를 들어, 리소좀에서 가수분해 가능한 산-불안정 링커(예를 들어, 히드라존, 세미카바존, 티오세미카바존, 시스-아코니틱 아미드, 오르소에스테르, 아세탈, 케탈 등)가 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 링커는 환원 조건하에서 절단 가능하다(예를 들어, 디술피드 링커). 예를 들어 SATA(N-숙신이미딜-S-아세틸티오아세테이트), SPDP(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT(N-숙신이미딜-옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔), SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함하여, 다양한 디술피드 링커가 당분야에 알려져 있다.
'링커 단위'[LU]는 약물 단위와 항체 단위를 연결하여 항체 약물 접합체를 형성하기 위해 사용될 수 있는 2기능성 화합물이다. 일부 구현예에서, 링커 단위는 하기 화학식을 갖는다:
-Aa-Ww-Yy-
식 중, -A-는 스트레처 단위이고,
a는 0 또는 1이고,
각각의 -W-는 독립적으로 아미노산 단위이고,
w는 0 내지 12 범위의 정수이고,
-Y-는 자기-희생 스페이서 단위이고,
y는 0, 1 또는 2이다.
일부 구현예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0, 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0 또는 1이다. 일부 구현예에서, w가 1 내지 12일 때, y는 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, w는 2 내지 12이고, y는 1 또는 2이다. 일부 구현예에서, a는 1이고, w 및 y는 0이다. 링커 및 각각의 스트레처 단위, 아미노산 단위 및 스페이서 단위는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
항체-약물 접합체의 구현예는 하기를 포함할 수 있다:
식 중, w 및 y는 각각 0, 1 또는 2이고,
식 중, w 및 y는 각각 0이고,
, 및
5.3.4 약물 부하
약물 부하는 p로 표시되며 분자 내 항체당 약물 단위의 평균 수이다. 약물 부하는 항체당 1~20 약물 단위[Drug unit, D] 범위일 수 있다. 본원에 제공된 ADC는 다양한 약물 단위, 예를 들어 1 내지 20개와 접합된 항체 또는 항원 결합 단편의 집합을 포함한다. 접합 반응으로부터의 ADC 조제물에서 항체당 약물 단위의 평균 수는 질량 분광측정 및 ELISA 검정과 같은 통상적인 수단에 의해 특성규명될 수 있다. p의 측면에서 ADC의 정량적 분포도 결정될 수 있다. 일부 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 ADC로부터의 특정 값인 동종 ADC의 분리, 정제 및 특성규명은 전기 영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 20 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 18 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 15 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 12 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 10 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 9 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 8 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 7 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 6 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 5 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 4 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 3 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 12 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 10 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 9 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 8 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 7 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 6 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 5 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 4 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 12 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 10 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 9 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 8 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 7 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 6 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 5 범위이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 4 범위이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 1 내지 약 8, 약 2 내지 약 6, 약 3 내지 약 5, 약 3 내지 약 4, 약 3.1 내지 약 3.9, 약 3.2 내지 약 3.8, 약 3.2 내지 약 3.7, 약 3.2 내지 약 3.6, 약 3.3 내지 약 3.8, 또는 약 3.3 내지 약 3.7 범위이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12 이상이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8 또는 약 3.9이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 2 내지 20, 2 내지 19, 2 내지 18, 2 내지 17, 2 내지 16, 2 내지 15, 2 내지 14, 또는 2 내지 13 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 3 내지 20, 3 내지 19, 3 내지 18, 3 내지 17, 3 내지 16, 3 내지 15, 3 내지 14, 또는 3 내지 13 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 1이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 2이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 3이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 4이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 3.8이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 5이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 6이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 7이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 8이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 9이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 10이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 11이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 12이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 13이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 14이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 15이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 16이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 17이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 18이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 19이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 부하는 약 20이다.
특정 구현예에서, 이론적 최대치 미만의 약물 단위가 접합 반응 동안 항체에 접합된다. 항체는 예를 들어 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하지 않는 라이신 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로 항체는 약물 단위에 연결될 수 있는 유리 및 반응성 시스테인 티올기를 많이 함유하지 않고, 실제로 항체에서 대부분의 시스테인 티올 잔기는 디술피드 가교로 존재한다. 특정 구현예에서, 부분 또는 전체 환원 조건하에 디티오트레이톨[Dithiothreitol, DTT] 또는 트리카르보닐에틸포스핀[Tricarbonylethylphosphine, TCEP]과 같은 환원제로 항체가 환원되어 반응성 시스테인 티올기를 생성할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 변성 조건을 거쳐 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵기를 드러낸다. 일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위는 항체 단위 상의 라이신 잔기를 통해 접합된다. 일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위는 항체 단위 상의 시스테인 잔기를 통해 접합된다.
일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄에 있다. 일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄에 있다. 일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 힌지 영역에 있다. 일부 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fc 영역에 있다. 다른 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 불변 영역(예를 들어, 중쇄의 CH1, CH2 또는 CH3, 또는 경쇄의 CH1)에 있다. 또 다른 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 프레임워크 영역에 있다. 또 다른 구현예에서, 링커 단위 또는 약물 단위에 부착되는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 프레임워크 영역에 있다.
ADC의 부하(약물/항체 비)는 상이한 방식으로, 예를 들어 (i) 항체에 비해 몰 과량의 약물-링커 중간체 또는 링커 시약을 제한하여, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하여, (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적 또는 제한적 환원 조건, (iv) 시스테인 잔기의 수 및/또는 위치가 링커-약물 부착[예컨대, 본원 및 WO2006/034488(그 전문이 본원에 참조로서 포함됨)에 개시된 바와 같이 제조된 티오Mab 또는 티오Fab]의 수 및/또는 위치의 제어를 위해 변형되도록 항체의 아미노산 서열을 재조합 기술에 의해 조작하여 제어될 수 있다.
하나 초과의 친핵기가 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응한 다음 약물 단위 시약과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체 단위에 부착된 하나 이상의 약물 단위 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임이 이해되어야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 특이적이고 약물에 특이적인 이중 ELISA 항체 검정에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 ADC 분자는 질량 분광측정에 의해 혼합물에서 확인될 수 있고 HPLC, 예를 들어 소수성 상호 작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hamblett, K.J., 등 "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., 등 "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004] 참조). 특정 구현예에서, 단일 부하 값을 갖는 동종 ADC는 전기 영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
항체 약물 접합체를 제조, 스크리닝 및 특성규명하는 방법은 예를 들어 미국 특허 번호 8,637,642에 기재된 바와 같이 당업자에게 알려져 있으며, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법을 위한 항체 약물 접합체는 미국 특허 번호 8,637,642에 기재된 방법에 따라 제조되고 하기 화학식을 갖는 AGS-22M6E이다:
식 중, L은 Ha22-2(2,4)6.1이고 p는 1 내지 20이다.
일부 구현예에서, p는 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2 범위이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3 범위이다. 다른 구현예에서, p는 약 1이다. 다른 구현예에서, p는 약 2이다. 다른 구현예에서, p는 약 3이다. 다른 구현예에서, p는 약 4이다. 다른 구현예에서, p는 약 5이다. 다른 구현예에서, p는 약 6이다. 다른 구현예에서는, p는 약 7이다. 다른 구현예에서, p는 약 8이다. 다른 구현예에서, p는 약 9이다. 다른 구현예에서, p는 약 10이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.1이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.2이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.3이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.4이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.5이다. 다른 구현예에서, p는 약 3.6이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.7이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.8이다. 일부 구현예에서, p는 약 3.9이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.0이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.1이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.2이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.3이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.4이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.5이다. 다른 구현예에서, p는 약 4.6이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.7이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.8이다. 일부 구현예에서, p는 약 4.9이다. 일부 구현예에서, p는 약 5.0이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 사용된 ADC는 엔포르투맙 베도틴이다. 엔포르투맙 베도틴은 프로테아제 절단 가능 링커를 통해 미세소관 파괴제(MMAE)에 접합된 완전 인간 면역글로불린 G1 카파(IgG1K) 항체로 이루어진 ADC이다(문헌[Challita-Eid PM 등, Cancer Res. 2016;76(10):3003-13]). 엔포르투맙 베도틴은 세포 표면의 191P4D12 단백질에 결합하여 ADC-191P4D12 복합체의 내재화를 초래한 후, 리소좀 구획으로 이동하여 링커의 단백분해 절단을 통해 MMAE가 방출됨으로써 항종양 활성을 유도한다. MMAE의 세포내 방출은 이후 튜불린 중합을 파괴하여 G2/M기 세포 주기 정지 및 아폽토시스 세포사를 초래한다(문헌[Francisco JA 등, Blood. 2003 Aug 15;102(4):1458-65]).
상기 및 미국 특허 번호 8,637,642에 기재된 바와 같이, AGS-22M6E는 쥣과 하이브리도마 세포주로부터 유래된 ADC이다. 엔포르투맙 베도틴은 AGS-22M6E ADC의 차이니즈 햄스터 난소[Chinese hamster ovary, CHO] 세포주 유래 균등물이며 인간 치료를 위해 사용되는 예시적인 제품이다. 엔포르투맙 베도틴은 AGS-22M6E와 동일한 아미노산 서열, 링커 및 세포독성 약물을 가지고 있다. 엔포르투맙 베도틴과 AGS-22M6E의 동등성은 191P4D12에 대한 결합 친화도, 시험관내 세포독성, 및 생체내 항종양 활성과 같은 광범위한 분석적 및 생물학적 특성규명 시험을 통해 확인되었다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 ADC는 EV, PADCEV, AGS-22M6E, AGS-22C3E, AGS-22CE로도 알려진 엔포르투맙 베도틴이다. 엔포르투맙 베도틴은 항-191P4D12 항체를 포함하며, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 잔기 20 내지 아미노산 잔기 466을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 아미노산 잔기 23 내지 아미노산 잔기 236을 포함하는 경쇄를 포함한다.
엔포르투맙 베도틴은 프로테아제 절단 가능 말레이미도카프로일 발린-시트룰린(vc) 링커(SGD-1006)를 통해 소분자 미세소관 파괴제인 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)에 접합된 완전 인간 항-넥틴-4 IgG1 카파 단클론 항체(AGS-22C3)로 이루어진 넥틴-4 유도 항체-약물 접합체(ADC)이다. 접합은 대략 3.8:1의 약물 대 항체 비를 갖는 생성물을 생성하기 위해 항체의 쇄간 디술피드 결합을 포함하는 시스테인 잔기에서 일어난다. 분자량은 대략 152 kDa이다.
엔포르투맙 베도틴은 하기 구조식을 갖는다:
대략 4개 MMAE 분자가 각 항체 분자에 부착된다. 엔포르투맙 베도틴은 항체와 소분자 성분의 화학적 접합에 의해 생성된다. 항체는 포유동물(차이니즈 햄스터 난소) 세포에서 생성되며 소분자 성분은 화학적 합성에 의해 생성된다.
엔포르투맙 베도틴 주사는 정맥내 사용을 위해 단일 용량 바이알에 멸균, 보존제 비함유, 흰색 내지 회백색 동결건조 분말로 제공된다. 엔포르투맙 베도틴은 바이알당 20 mg 및 바이알당 30 mg으로 제공되며 멸균 주사용수, USP(각각 2.3 mL 및 3.3 mL)로 재구성하여 10 mg/mL의 최종 농도로 투명하거나 약간 진주광택이 있는 무색 내지 연황색 용액이 된다. 재구성 후 각 바이알은 2 mL(20 mg) 및 3 mL(30 mg) 인출을 허용한다. 재구성된 용액 1 mL마다 10 mg의 엔포르투맙 베도틴, 히스티딘(1.4 mg), 히스티딘 히드로클로리드 일수화물(2.31 mg), 폴리소르베이트 20(0.2 mg) 및 트레할로스 이수화물(55 mg)을 함유하며 pH 6.0이다.
5.4 약학 조성물
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, 방법에서 사용된 ADC는 '약학 조성물'로 제공된다. 이러한 약학 조성물은 본원에 제공된 항체 약물 접합체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능하거나 생리학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체 약물 접합체는 하나 이상의 추가 제제와 조합하여 또는 별도로 제공된다. 또한 이러한 하나 이상의 추가 제제 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능하거나 생리학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 구현예에서, 항체 약물 접합체 및 추가 제제(들)는 치료학적으로 허용 가능한 양으로 존재한다. 약학 조성물은 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 약학 조성물은 본원에 제공된 치료 방법 및 용도를 실행하기 위해 대상에 생체외 또는 생체내 투여될 수 있다. 본원에 제공된 약학 조성물은 의도된 투여 방법 또는 경로와 상용할 수 있도록 제형화될 수 있고 예시적인 투여 경로가 본원에 기재된다.
일부 구현예에서, 암 또는 종양을 조절하는 항체 약물 접합체의 약학 조성물이 제공된다.
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, ADC를 포함하는 약학 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 다양한 질환 및 장애(예를 들어, 암)의 치료 또는 방지에서 사용될 수 있는 본원에 개시되거나 당업자에게 알려진 다른 치료 활성제 또는 화합물을 추가로 포함할 수 있다. 상기 기재된 바와 같이, 추가의 치료 활성제 또는 화합물은 별도의 약학 조성물(들)에 존재할 수 있다.
약학 조성물은 전형적으로 치료 유효량의 적어도 하나의 본원에 제공된 항체 약물 접합체 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 제형화제를 포함한다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 본원에 기재된 하나 이상의 추가 제제를 추가로 포함한다.
한 구현예에서, 약학 조성물은 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 치료 유효량의 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함한다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 항체 약물 접합체는 상기 섹션 5.3에 기재된 항체 약물 접합체로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 0.1~100 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 1 내지 20 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 다른 구현예에서, 약학 조성물은 5 내지 15 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 다른 구현예에서, 약학 조성물은 8 내지 12 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 다른 구현예에서, 약학 조성물은 9 내지 11 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 9.5 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 9.6 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 9.7 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 9.8 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 9.9 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 약 10 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.1 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.2 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.3 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.3 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.4 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약 10.5 mg/mL 농도의 항체 약물 접합체를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 하기를 포함한다:
L-히스티딘, 트윈-20(TWEEN-20), 및 트레할로스 이수화물 또는 수크로스 중 적어도 하나. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 염산(HCl) 또는 숙신산을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물에서 유용한 L-히스티딘의 농도는 5 내지 50 mM 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 10 내지 40 mM 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 15 내지 35 mM 범위이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 15 내지 30 mM 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 15 내지 25 mM 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 15 내지 35 mM 범위이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 16 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 17 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 18 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 19 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 20 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 21 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 22 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 23 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 24 mM이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물 중 L-히스티딘의 농도는 약 25 mM이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물에서 유용한 TWEEN-20의 농도는 0.001 내지 0.1%(v/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0025 내지 0.075%(v/v) 범위이다. 한 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 0.005 내지 0.05%(v/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0075 내지 0.025%(v/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0075 내지 0.05%(v/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 0.01 내지 0.03%(v/v) 범위이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.01%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.015%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.016%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.017%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.018%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.019%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.02%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.021%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.022%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.023%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.024%(v/v)이다. 한 특정 구현예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.025%(v/v)이다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물에서 유용한 트레할로스 이수화물의 농도는 1% 내지 20%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 2% 내지 15%(w/v) 범위이다. 한 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 3% 내지 10%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 9%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 8%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 7%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 6%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4.5% 내지 6%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.6%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.7%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.8%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.9%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.0%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.1%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.2%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.3%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.4%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.5%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.6%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.7%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.8%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.9%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.0%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.1%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.2%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.3%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.4%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.5%(w/v)이다.
특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 50 내지 300 mM이다. 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 75 내지 250 mM이다. 일부 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 100 내지 200 mM이다. 다른 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 130 내지 150 mM이다. 일부 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 135 내지 150 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 135 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 136 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 137 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 138 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 139 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 140 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 141 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 142 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 143 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 144 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 145 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 146 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 150 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 151 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 151 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 152 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 153 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 154 mM이다. 특정 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 몰농도는 약 155 mM이다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물에서 유용한 수크로스의 농도는 1% 내지 20%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 2% 내지 15%(w/v) 범위이다. 한 구현예에서, 수크로스의 농도는 3% 내지 10%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 9%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 8%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 7%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 6%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 4.5% 내지 6%(w/v) 범위이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 4.6%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 4.7%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 4.8%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 4.9%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.0%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.1%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.2%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.3%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.4%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.5%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.6%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.7%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.8%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 5.9%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.0%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.1%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.2%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.3%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.4%(w/v)이다. 또 다른 구현예에서, 수크로스의 농도는 약 6.5%(w/v)이다.
특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 50 내지 300 mM이다. 다른 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 75 내지 250 mM이다. 일부 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 100 내지 200 mM이다. 다른 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 130 내지 150 mM이다. 일부 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 135 내지 150 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 135 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 136 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 137 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 138 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 139 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 140 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 141 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 142 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 143 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 144 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 145 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 146 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 150 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 151 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 151 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 152 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 153 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 154 mM이다. 특정 구현예에서, 수크로스의 몰농도는 약 155 mM이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 HCl을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 숙신산을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 6.1의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 6.3의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, pH는 실온에서 측정된다. 다른 구현예에서, pH는 15 ℃ 내지 27 ℃에서 측정된다. 또 다른 구현예에서, pH는 4 ℃에서 측정된다. 또 다른 구현예에서, pH는 25 ℃에서 측정된다.
일부 구현예에서, pH는 HCl에 의해 조정된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부에서 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 HCl을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, pH는 숙신산에 의해 조정된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 실온에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃ 내지 27 ℃에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 일부 추가 특정 구현예에서, 약학 조성물은 숙신산을 포함하고, 약학 조성물은 15 ℃내지 27 ℃에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물 또는 약 5%(w/v) 수크로스 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 HCl 또는 숙신산을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 일부 구현예에서, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물 및 HCl을 포함한다. 일부 구현예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 일부 구현예에서, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5%(w/v) 수크로스 및 HCl을 포함한다. 일부 구현예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 일부 구현예에서, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
다른 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물 및 숙신산을 포함한다. 일부 구현예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 일부 구현예에서, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
일부 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5%(w/v) 수크로스 및 숙신산을 포함한다. 일부 구현예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 일부 구현예에서, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 것은,
(a) 하기 구조를 포함하는 항체 약물 접합체:
식 중, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 나타내고 p는 1 내지 10이고,
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물 및 HCl을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하되, 항체 약물 접합체는 약 10 mg/mL의 농도이고, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
또 다른 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은:
(a) 하기 구조를 포함하는 항체 약물 접합체:
식 중, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 나타내고 p는 1 내지 10이고,
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5.5%(w/v) 트레할로스 이수화물 및 숙신산을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하되,
항체 약물 접합체는 약 10 mg/mL의 농도이고, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
또 다른 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은:
(a) 하기 구조를 포함하는 항체 약물 접합체:
식 중, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 항-넥틴-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 나타내고 p는 1 내지 10이고,
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02%(w/v) TWEEN-20, 약 5.0%(w/v) 수크로스 및 HCl을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하며,
항체 약물 접합체는 약 10 mg/mL의 농도이고, pH는 25 ℃에서 약 6.0이다.
특정 수치(및 이의 수치 범위)가 제공되지만, 특정 구현예에서, 예를 들어 상기 수치(또는 수치 범위)의 2%, 5%, 10%, 15% 또는 20% 내의 수치 값이 또한 고려됨이 이해된다.
비히클 중 기본 용매는 수성 또는 비수성 성질일 수 있다. 또한, 비히클은 약학 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 멸균성 또는 안정성을 변형하거나 유지하기 위한 다른 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 비히클은 수성 완충액이다. 다른 구현예에서, 비히클은 예를 들어 염화나트륨 및/또는 시트르산나트륨을 포함한다.
본원에 제공된 약학 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체 약물 접합체 및/또는 추가 제제의 방출 속도를 변형하거나 유지하기 위한 또 다른 약학적으로 허용 가능한 제형화제를 함유할 수 있다. 이러한 제형화제는 지속 방출 제형을 제조하는 당업자에게 알려진 물질을 포함한다. 약학적으로 및 생리학적으로 허용 가능한 제형화제에 관한 추가 참조를 위해, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) 1435~1712페이지, The Merck Index, 12th Ed. (1996, Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ); 및 Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.)]을 참조한다. 투여에 적절한 추가적인 약학 조성물은 당분야에 알려져 있고 본원에 제공된 방법 및 조성물에서 적용 가능하다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 액체 형태이다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 동결건조된다.
약학 조성물은 의도된 투여 경로와 상용할 수 있도록 제형화될 수 있다. 따라서, 약학 조성물은 비경구[예를 들어, 피하(sc), 정맥내, 근육내 또는 복강내], 피내, 경구(예를 들어, 섭취), 흡입, 강내, 두개내 및 경피(국소)를 포함하는 경로에 의한 투여에 적합한 부형제를 포함한다. 다른 예시적인 투여 경로가 본원에 기재된다.
약학 조성물은 멸균 주사 가능 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 이 현탁액은 본원에 개시되거나 당업자에게 알려진 적합한 분산제 또는 수화제 및 현탁제를 사용하여 제형화될 수 있다. 멸균 주사제 조제물은 또한 무독성의 비경구적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중 멸균 주사제 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄 디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용 가능한 희석제, 용매 및 분산 매질은 물, 링거 용액, 등장성 염화나트륨 용액, 크레모포르(Cremophor) EL™(BASF, Parsippany, NJ) 또는 인산염 완충 식염수[Phosphate buffered saline, PBS], 에탄올, 폴리올(예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이의 적합한 혼합물을 포함한다. 또한 멸균 신전유는 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이를 위해 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 임의의 순한 신전유가 사용될 수 있다. 더욱이, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에서 사용된다. 특정 주사제 제형의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제(예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴)를 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 국소 또는 전신 투여를 위해 주사, 주입 또는 이식에 의해 비경구적으로 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 복강내, 척수내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 활액내 및 피하 투여를 포함한다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이셀, 리포좀, 마이크로스피어, 나노시스템, 및 주사 전 액체 중 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태를 포함하는, 비경구 투여에 적합한 임의의 투여형으로 제형화될 수 있다. 이러한 투여형은 약학 과학 분야의 당업자에게 알려진 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 상기 문헌] 참조).
한 구현예에서, 비경구 투여를 위한 약학 조성물은 수성 비히클, 수혼화성 비히클, 비수성 비히클, 항균제 또는 미생물 성장에 대한 보존제, 안정화제, 용해도 향상제, 등장화제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁제 및 분산제, 수화제 또는 유화제, 착화제, 격리제 또는 킬레이트제, 냉동보호제, 동결보호제, 증점제, pH 조정제 및 불활성 기체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다.
한 구현예에서, 적합한 수성 비히클은 물, 식염수, 생리 식염수 또는 인산염 완충 식염수[PBS], 염화나트륨 주사, 링거 주사, 등장성 덱스트로스 주사, 멸균수 주사, 덱스트로스 및 락테이트화 링거 주사를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 비수성 비히클은 식물성 기원의 신전유, 피마자유, 옥수수유, 면실유, 올리브유, 땅콩유, 박하유, 홍화유, 참기름, 대두유, 수소화 식물성 오일, 수소화 대두유 및 코코넛 오일의 중쇄 트리글리세리드, 야자유를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 수혼화성 비히클은 에탄올, 1,3-부탄디올, 액체 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 300 및 폴리에틸렌 글리콜 400), 프로필렌 글리콜, 글리세린, N-메틸-2-피롤리돈, N,N-디메틸아세트아미드, 및 디메틸 술폭시드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
한 구현예에서, 적합한 항균제 또는 보존제는 페놀, 크레졸, 머큐리알, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-히드록시벤조에이트, 티메로살, 벤잘코늄 클로리드(예를 들어, 벤제토늄 클로리드), 메틸- 및 프로필-파라벤, 및 소르브산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 등장화제는 염화나트륨, 글리세린 및 덱스트로스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 완충제는 포스페이트 및 시트레이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 항산화제는 비술파이트 및 나트륨 메타비술파이트를 포함하는 본원에 기재된 것들이다. 적합한 국소 마취제는 프로카인 히드로클로리드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 현탁제 및 분산제는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함하는 본원에 기재된 것들이다. 적합한 유화제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 80 및 트리에탄올아민 올레에이트를 포함하는 본원에 기재된 것들을 포함한다. 적합한 격리제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 pH 조정제는 수산화나트륨, 염산, 시트르산 및 락트산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 착화제는 α-시클로덱스트린, β-시클로덱스트린, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 술포부틸에테르-β-시클로덱스트린, 및 술포부틸에테르 7-β-시클로덱스트린[캡티솔(CAPTISOL)®, 사이덱스(CyDex), 레넥사(Lenexa), 케이에스(KS)]을 포함하는 시클로덱스트린을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 단회 또는 다회 투여량 투여를 위해 제형화될 수 있다. 단회 투여량 제형물은 앰플, 바이알 또는 주사기에 포장된다. 다회 투여량 비경구 제형물은 정균 또는 정진균 농도의 항미생물제를 함유할 수 있다. 모든 비경구 제형물은 당분야에 알려지고 실행되는 바와 같이 멸균이어야 한다.
한 구현예에서, 약학 조성물은 즉시 사용 가능한 멸균 용액으로 제공된다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 사용 전에 비히클로 재구성될 동결건조된 분말 및 피하 정제를 포함하는 멸균 건조 가용성 제품으로 제공된다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 즉시 사용 가능한 멸균 현탁액으로 제공된다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 사용 전에 비히클로 재구성될 멸균 건조 불용성 제품으로 제공된다. 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 즉시 사용 가능한 멸균 에멀젼으로 제공된다.
한 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 지연-, 지속, 펄스화-, 제어, 표적- 및 프로그래밍-방출 형태를 포함하는 즉시 또는 변형 방출 투여형으로 제형화될 수 있다.
물을 첨가하여 수성 현탁액을 제조하기 적합한 분산성 분말 및 과립은 분산제 또는 수화제, 현탁제 및 하나 이상의 보존제와 혼합된 활성 구성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 수화제 및 현탁제가 본원에 예시된다.
약학 조성물은 또한 임플란트, 리포좀, 히드로겔, 전구약물 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같이 신체로부터의 급속한 분해 또는 제거로부터 조성물을 보호하기 위한 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 단독으로 또는 왁스와 함께 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 스테아레이트와 같은 시간 지연 물질이 사용될 수 있다. 주사제 약학 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연하는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴을 포함시킴으로써 달성될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다.
본원에 제공된 약학 조성물은 -80 ℃, 4 ℃, 25 ℃ 또는 37 ℃에서 보관할 수 있다.
동결건조된 조성물은 본원에 제공된 액체 약학 조성물을 냉동 건조함으로써 제조될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 동결건조된 약학 조성물이다. 일부 구현예에서, 약학 제형물은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여를 위해 재구성될 수 있는 동결건조된 분말이다. 이들은 또한 재구성되어 고체 또는 젤로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 동결건조 제형물의 제조는 동결건조를 위해 제형화된 벌크 용액의 배치 처리, 무균 여과, 바이알 충전, 냉동건조기 챔버에서의 바이알 냉동, 이어서 동결건조, 마개 처리 및 캡핑이 관여된다.
동결건조기는 동결건조된 제형을 제조하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어 버티스 제네시스 모델 EL(VirTis Genesis Model EL) 파일럿 장치가 사용될 수 있다. 이 장치는 3개의 작업 선반(약 0.4제곱미터의 총 사용 가능 선반 영역)이 있는 챔버, 외부 응축기 및 기계적 진공 펌핑 시스템을 포함한다. 계단식 기계적 냉각을 통해 선반을 -70 ℃ 이하로, 그리고 외부 응축기를 -90 ℃ 이하로 냉각할 수 있다. 선반 온도 및 챔버 압력은 각각 +/- 0.5 ℃ 및 +/- 2 마이크론(milliTorr)으로 자동 제어되었다. 장치에는 커패시턴스 압력계 진공 게이지, 피라니(Pirani) 진공 게이지, 압력 변환기(0부터 1 대기압까지 측정) 및 상대 습도 센서가 장착되었다.
동결건조된 분말은 본원에 제공된 항체 약물 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 유도체를 적합한 용매에 용해시켜 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 동결건조된 분말은 멸균 상태이다. 당업자에게 알려진 표준 조건하에서 용액의 후속 멸균 여과에 이은 동결건조는 바람직한 제형물을 제공한다. 한 구현예에서, 생성된 용액은 동결건조를 위해 바이알에 분배될 것이다. 각각의 바이알은 단회 투여량 또는 다회 투여량의 항체 약물 접합체를 함유할 것이다. 동결건조된 분말은 약 4 ℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건하에 보관될 수 있다.
이 동결건조 분말의 주사용수로의 재구성으로 비경구 투여용 제형물을 제공한다. 재구성을 위해 동결건조된 분말은 멸균수 또는 다른 적합한 부형제에 첨가된다. 이러한 양은 구체적 필요성에 따라 경험적으로 결정되고 조정될 수 있다.
예시적인 재구성 절차는 하기와 같이 예시된다: (1) 5 mL 또는 3 mL 주사기에 18 또는 20게이지 바늘을 끼우고 주사기에 주사용수[Water for Injection, WFI] 등급의 물을 충전한다. (2) 주사기 눈금을 사용하여 WFI의 적절한 양을 측정하고 주사기에 기포가 없음을 확인한다. (3) 고무 마개를 통해 바늘을 삽입한다. (4) 주사기의 전체 내용물을 바이알 벽 아래 용기로 분배하고 주사기와 바늘을 제거하고 뾰족한 용기에 넣는다. (4) 완전히 재구성될 때까지(예를 들어, 약 20~40초) 전체 바이알 내용물을 조심스럽게 가용화하기 위해 바이알을 계속 휘젓고 발포를 초래할 수 있는 단백질 용액의 과도한 진탕을 최소화한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 건조 멸균 동결건조 분말 또는 무수 농축물로 방수 밀봉된 용기에 공급되며, 예를 들어 대상에 투여하기 위한 적절한 농도로 물 또는 식염수로 재구성될 수 있다. 특정 구현예에서, 항체 약물 접합체는 적어도 0.1 mg, 적어도 0.5 mg, 적어도 1 mg, 적어도 2 mg, 적어도 3 mg, 적어도 5 mg, 적어도 10 mg, 적어도 15 mg, 적어도 25 mg, 적어도 30 mg, 적어도 35 mg, 적어도 45 mg, 적어도 50 mg, 적어도 60 mg, 적어도 75 mg, 적어도 80 mg, 적어도 85 mg, 적어도 90 mg, 적어도 95 mg, 또는 적어도 100 mg의 단위 투여량으로 방수 밀봉 용기에 건조 멸균 동결건조 분말로서 공급된다. 동결건조된 항체 약물 접합체는 그 원래 용기에서 2 내지 8 ℃에서 보관될 수 있으며, 항체 약물 접합체는 재구성된 후 12시간 내, 예컨대 6시간 내, 5시간 내, 3시간 내, 또는 1시간 내에 투여될 수 있다. 대안적 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 항체 약물 접합체의 양 및 농도를 표시하는 방수 밀봉 용기에 액체 형태로 공급된다. 특정 구현예에서, 액체 형태의 항체 약물 접합체는 방수 밀봉 용기에 적어도 0.1 mg/ml, 적어도 0.5 mg/ml, 적어도 1 mg/ml, 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 15 mg/ml, 적어도 25 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 60 mg/ml, 적어도 70 mg /ml, 적어도 80 mg/ml, 적어도 90 mg/ml, 또는 적어도 100 mg/ml로 공급된다.
약학 조성물에 대한 추가의 구현예는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
5.5 병용 요법을 위한 방법
화학치료법 또는 방사선 또는 둘 다와 병용될 수 있고 본원에 제공된 약학 조성물을 사용하여 종양 세포의 성장을 억제하는 방법은 본 발명의 조성물을 화학치료 요법 또는 방사선 요법을 개시하기 전, 동안 또는 그 후에 뿐만 아니라 이의 임의의 병용(즉, 화학치료 요법 및/또는 방사선 요법을 개시하기 전에 및 동안, 전에 및 후에, 동안 및 후에, 또는 전에, 동안 및 후에) 투여하는 단계를 포함한다. 치료 프로토콜 및 구체적 환자 필요성에 따라, 방법은 가장 효과적인 치료를 제공하고 궁극적으로 환자의 수명을 연장할 방식으로 수행된다. 이러한 병용 요법에 대한 추가 구현예는 미국 특허 번호 8,637,642 및 국제 출원 번호 PCT/US2019/056214(공개 번호 WO2020/117373)에 기재되어 있으며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
5.6 방법을 위한 ADC의 투여량
일부 구현예에서, 암의 방지 및/또는 치료에 효과적일 본원에 제공된 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본원에 제공된 항체 약물 접합체) 또는 약학 조성물의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 추정될 수 있다. 제형에서 이용되어야 하는 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 대상에서 암의 중증도에 따라 달라지고 진료의의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 함이 질 것임이 이해될 것이다.
일부 구현예에서, 이 섹션(섹션 5.6)에서 기재되는 다양한 투여량에 대한 방법의 ADC는 엔포르투맙 베도틴[Enfortumab vedotin, EV]이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물로 제형화된 항체 약물 접합체의 용량에 대한 환자에게 투여되는 경로는 비강내, 근육내, 정맥내, 방광내, 또는 이의 조합이지만, 본원에 기재된 다른 경로가 또한 허용 가능하다. 각 용량은 동일한 투여 경로에 의해 투여될 수 있거나 투여되지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물로 제형화된 항체 약물 접합체는 다중 투여 경로를 통해 다른 용량의 하나 이상의 추가적인 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 방광내로 투여된다.
본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물에 있어서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 10 mg 내지 약 1,000 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 950 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 900 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mg 내지 약 1,000 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mg 내지 약 1,000 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 100 mg 내지 약 900 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 125 mg 내지 약 900 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 125 mg 내지 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 125 mg 내지 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, 점적 부피는 약 10 mL 내지 약 100 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 10 mL 내지 약 50 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 15 mL 내지 약 30 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 10 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 15 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 20 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 25 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 30 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 35 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 40 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 45 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 50 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 55 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 60 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 65 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 70 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 75 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 80 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 85 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 90 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 95 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 약 100 mL이다.
일부 구현예에서, 점적 부피는 10 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 15 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 20 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 25 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 30 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 35 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 40 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 45 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 50 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 55 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 60 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 65 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 70 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 75 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 80 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 85 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 90 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 95 mL이다. 일부 구현예에서, 점적 부피는 100 mL이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 10 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 10 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 15 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 15 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 20 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 20 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 25 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 30 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 30 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 35 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 35 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 40 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 40 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 45 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 45 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 약 50 mL의 점적 부피로 약 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 100 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 125 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 150 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 200 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 250 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 300 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 350 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 400 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 450 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 500 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 550 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 600 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 650 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 700 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 750 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 800 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 850 mg의 용량이다. 일부 구현예에서, ADC의 유효량은 50 mL의 점적 부피로 900 mg의 용량이다.
일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 120분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 90분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 최대 체류 시간은 대상의 용인 체류 시간이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 30분 내지 약 120분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 30분 내지 약 90분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 30분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 40분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 50분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 60분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 70분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 80분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 90분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 100분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 110분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 약 120분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 30분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 40분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 50분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 60분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 70분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 80분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 90분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 100분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 110분이다. 일부 구현예에서, 각각의 방광내 투여의 체류 시간은 120분이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 두 단계 동안 방광내로 투여되되, 두 단계는 유도 단계 및 유지 단계이다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주, 6 내지 9주, 또는 6 내지 8주 사이에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 10주에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 9주에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 8주에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 7주에 시작한다. 일부 구현예에서, 유지 단계는 유도 단계 후 6주에 시작한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 약 1 내지 약 25회 투여되되, 용량은 필요에 따라, 예를 들어, 주별, 격주별, 월별, 격월별, 삼 개월별 등, 의사에 의해 결정된 바와 같이 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 주별로 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 격주별로 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 월별로 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 격월별로 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 삼 개월별로 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 NMIBC를 치료하기 위해 25회, 24회, 23회, 22회, 21회, 20회, 19회, 18회, 17회, 16회, 15회, 14회, 13회, 12회, 11회, 10회, 9회, 8회, 7회, 6회, 5회, 4회, 3회, 2회 또는 1회 투여되며, 용량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 10 mg 내지 약 1,000 mg이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 4주간 주당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 5주간 주당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 7주간 주당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 8주간 주당 일회 방광내로 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 6개월간 월당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 7개월간 월당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 8개월간 월당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 10개월간 월당 일회 방광내로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유지 단계 동안 11개월간 월당 일회 방광내로 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내로 투여되되, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주, 6 내지 9주, 또는 6 내지 8주 사이에 시작된다.
본원에 제공된 방법의 일부 더 구체적인 구현예에서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 125 mg의 용량으로 방광내 투여되되, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작된다.
본원에 제공된 방법의 일부 더 구체적인 구현예에서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 250 mg의 용량으로 방광내 투여되되, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작된다.
본원에 제공된 방법의 일부 더 구체적인 구현예에서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 500 mg의 용량으로 방광내 투여되되, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작된다.
본원에 제공된 방법의 일부 더 구체적인 구현예에서, ADC는 하기 구조를 갖되,
상기 구조에서, L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 750 mg의 용량으로 방광내 투여되되, 용량은 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 유지 단계는 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작된다.
5.7 바이오마커를 결정하는 방법
본 개시는 본원에 제공된 임의의 마커의 발현이 당분야에 알려진 다양한 방법에 의해 결정될 수 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 마커의 발현은 마커 유전자로부터 전사된 mRNA의 양 또는 상대량에 의해 결정될 수 있다. 한 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 양 또는 상대량에 의해 결정될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물에 의해 유도된 생물학적 또는 화학적 반응의 수준에 의해 결정될 수 있다. 추가로, 특정 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 마커 유전자의 발현과 상관관계가 있는 하나 이상의 유전자의 발현에 의해 결정될 수 있다.
상기 기재된 바와 같이, 마커 유전자의 유전자 전사체(예를 들어, mRNA)의 수준 또는 양은 마커 유전자의 발현 수준에 대한 프록시로서 사용될 수 있다. 다수의 상이한 PCR 또는 qPCR 프로토콜이 본원에 예시된 것들을 포함하여 당분야에 알려져 있다. 일부 구현예에서, 다양한 마커 유전자의 mRNA 수준을 결정하기 위해 다양한 PCR 또는 qPCR 방법이 적용되거나 적응된다. 정량적 PCR[Quantitative PCR, qPCR](실시간 PCR로도 지칭됨)은 정량적 측정뿐만 아니라 시간 및 오염 감소를 제공하기 때문에 일부 구현예에서 적용되고 적응된다. 본원에서 사용된 바와 같이, '정량적 PCR(또는 'qPCR')은 반응 생성물의 반복 샘플 수집을 필요로 하지 않고 발생하는 PCR 증폭의 진행을 직접적 모니터링을 지칭한다. 정량적 PCR에서, 반응 생성물은 신호가 배경 수준 초과로 상승한 후 반응이 안정기에 도달하기 전에 생성되고 추적될 때 신호전달 기전(예를 들어 형광)을 통해 모니터링될 수 있다. 형광의 검출 가능한 또는 '역치' 수준을 달성하는 데 필요한 주기 수는 PCR 과정 시작 시 증폭 가능한 표적의 농도에 따라 직접적으로 달라져서 신호 강도 측정을 통해 실시간 샘플 중 표적 핵산의 양 측정을 제공할 수 있게 한다. mRNA 발현 수준을 결정하기 위해 qPCR이 적용될 때 qPCR 분석 전에 mRNA를 DNA로 역전사하는 추가 단계가 수행된다. PCR 방법의 예는 문헌[Wong 등, BioTechniques 39:75-85 (2005); D'haene 등, Methods 50:262-270 (2010)]에서 찾을 수 있고, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. PCR 검정의 예는 미국 특허 번호 6,927,024에서도 찾을 수 있으며, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. RT-PCR 방법의 예는 미국 특허 번호 7,122,799에서 찾을 수 있으며, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 형광 원 위치 PCR 방법은 미국 특허 번호 7,186,507에 기재되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
하나의 특정 구현예에서, qPCR은 하기와 같이 마커 유전자의 mRNA 수준을 결정하거나 측정하기 위해 수행될 수 있다. 간단히 말해서, 마커 유전자 및 하나 이상의 하우스키핑 유전자에 대한 복제 qPCR 반응의 평균 Ct(주기 역치) 값[또는 본원에서 Cq(정량 주기)로 상호 교환 가능으로 지칭됨]이 결정된다. 마커 유전자에 대한 평균 Ct 값은 하기 예시적인 공식을 사용하여 하우스키핑 유전자의 Ct 값으로 정규화될 수 있다: 마커-유전자-ΔCt = (마커 유전자의 평균 Ct-하우스키핑 유전자 A의 평균 Ct). 그런 다음 상대적 마커-유전자-ΔCt가 예를 들어 mRNA 발현 = 2-ΔCt 공식을 사용하여, 마커 유전자 mRNA의 상대 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다. Ct 및 Cq 값의 요약은 MIQE 가이드라인(문헌[Bustin 등, The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments, Clinical Chemistry 55:4 (2009)])을 참조한다.
노던 블롯팅 및 원 위치 혼성화(문헌[Parker & Barnes, Methods in Molecular Biology 106:247-283 (1999)]); RNAse 보호 검정(문헌[Hod, Biotechniques 13:852- 854 (1992)]); 마이크로어레이(문헌[Hoheisel 등, Nature Reviews Genetics 7:200-210 (2006); Jaluria 등, Microbial Cell Factories 6:4 (2007)]); 및 중합효소 연쇄 반응(PCR)(문헌[Weis 등, Trends in Genetics 8:263-264 (1992)])을 포함하는, 마커 유전자의 발현에 대한 프록시로서 샘플 중 마커 유전자의 RNA 전사체의 정량을 위해 당분야에 알려진 다른 일반적으로 사용되는 방법도 사용될 수 있다. RNA 원 위치 혼성화[in situ hybridization, ISH]는 세포 및 조직 맥락을 보존하면서 순환 종양 세포[Circulating tumor cell, CTC]와 같은 세포 또는 조직 구획 내 특정 RNA 서열, 예를 들어 메신저 RNA[Messenger RNA, mRNA], 긴 비코딩 RNA[long non-coding RNA, lncRNA] 및 마이크로RNA[MicroRNA, miRNA]를 측정하고 국소화하기 위해 널리 사용되는 분자 생물학 기술이다. ISH는 직접적으로 또는 간접적으로 표지된 탐침과 같은 상보적 DNA 또는 RNA 가닥을 사용하여 샘플, 특히 조직 또는 세포(원 위치)의 일부 또는 구획에서 DNA 또는 RNA와 같은 특정 핵산에 결합하고 국소화하는 혼성화의 한 유형이다. 탐침 유형은 이중 가닥 DNA[Double stranded DNA, dsDNA], 단일 가닥 DNA[Single stranded DNA, ssDNA], 단일 가닥 상보적 RNA[Single stranded complimentary RNA, sscRNA], 메신저 RNA(mRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 리보솜 RNA, 미토콘드리아 RNA 및/또는 합성 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 용어 '형광 원 위치 혼성화' 또는 'FISH'는 형광 표지를 이용하는 ISH의 한 유형을 지칭한다. 용어 '발색 원 위치 혼성화' 또는 'CISH'는 발색 표지를 이용한 ISH의 한 유형을 지칭한다. ISH, FISH 및 CISH 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Stoler, Clinics in Laboratory Medicine 10(1):215-236 (1990); In situ hybridization. A practical approach, Wilkinson, ed., IRL Press, Oxford (1992); Schwarzacher and Heslop-Harrison, Practical in situ hybridization, BIOS Scientific Publishers Ltd, Oxford (2000)] 참조). 따라서 RNA ISH는 세포 및 조직 내에서 공간적-시간적 가시화뿐만 아니라 유전자 발현의 정량을 제공한다. 이는 연구 및 진단에서 폭넓게 적용된다(문헌[Hu 등, Biomark. Res. 2(1):1-13, doi: 10.1186/2050-7771-2-3 (2014); Ratan 등, Cureus 9(6):e1325. doi: 10.7759/cureus.1325 (2017); Weier 등, Expert Rev. Mol. Diagn. 2(2):109-119 (2002)]). 형광 RNA ISH는 각각 RNA 표지화 및 검출을 위해 형광 염료 및 형광 현미경을 이용한다. 형광 RNA ISH는 네 개 내지 다섯 개의 표적 서열의 다중화를 제공할 수 있다.
또는, 마커 유전자의 발현에 대한 프록시로서 샘플 중 마커 유전자의 RNA 전사체는 서열분석 기술에 의해 결정될 수 있다. 서열분석 기반 유전자 발현 분석의 대표적인 방법은 유전자 발현의 일련의 분석[Serial Analysis of Gene Expression, SAGE] 및 대량 병렬 특징부 서열분석[Massively parallel signature sequencing, MPSS]에 의한 유전자 발현 분석을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 총 전사 RNA 풀에서 마커 유전자의 RNA 전사체(예를 들어 mRNA 포함)의 상대 존재비에 의해 결정될 수 있다. 이러한 마커 유전자의 RNA 전사체의 상대 존재비는 RNA-seq로 알려진 차세대 서열분석에 의해 결정될 수 있다. RNA-seq 절차의 한 예에서, 상이한 원천(혈액, 조직, 세포)으로부터의 RNA는 정제되고, 임의로 농축되고[예를 들어, 올리고(dT) 프라이머로], cDNA로 전환되고, 단편화된다. 무작위로 단편화된 cDNA 라이브러리로부터 수백만 또는 수십억 개의 짧은 서열 판독이 생성된다. 문헌[Zhao 등 BMC genomics 16: 97 (2015); Zhao 등 Scientific Reports 8: 4781 (2018); Shanrong Zhao 등, RNA, 2020년 4월 13일에 미리 공개됨, doi: 10.1261/rna.074922.120]을 참조하며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 마커 유전자의 각각의 mRNA 전사체의 발현 수준은 정규화 시 맵핑된 단편의 총 수에 의해 결정되며, 이는 그 존재비 수준과 정비례한다. 킬로베이스 백만 개당 판독[Reads Per Kilobase Million, RPKM], 킬로베이스 백만 개당 단편[Fragments Per Kilobase Million, FPKM] 및/또는 킬로베이스 백만 개당 전사체[Transcripts Per Kilobase Million, TPM]를 포함하는, 몇몇 정규화 체계가 알려져 있고 유전자 발현을 결정하기 위한 매개변수로서 RNA 전사체의 존재비 사용을 용이하게 하기 위해 사용된다. 간단히 말해서 RPKM은 다음과 같이 계산될 수 있다: 샘플 중 총 판독 수를 계수하고 그 수치를 '백만 개당' 배율 인수인 1,000,000으로 나눈다. 판독 수를 서열분석 깊이에 대해 정규화하는 '백만 개당' 배율 인수로 나누어 백만 개당 판독 수[Reads per million, RPM]를 제공한다. RPM 값을 킬로베이스 단위의 유전자 길이로 나누어 RPKM을 얻는다. FPKM은 단편이 판독을 대체하는 것을 제외하고는 RPKM과 밀접한 관련이 있다. RPKM은 모든 판독이 서열분석된 단일 단편에 상응하는 단일 말단 RNA-seq용으로 만들어졌다. FPKM은 두 개의 판독이 단일 단편에 상응할 수 있거나, 쌍 중 하나의 판독이 매핑되지 않은 경우 하나의 판독이 단일 단편에 상응할 수 있는, 페어도-말단 RNA-seq용으로 만들어졌다. TPM은 RPKM 및 FPKM과 매우 유사하며 다음과 같이 계산된다: 판독 수를 킬로베이스 단위의 각 유전자 길이로 나누어 킬로베이스당 판독 수[Reads per kilobase, RPK]를 얻고, 샘플 중 모든 RPK 값을 계수하고 이 수치를 1,000,000으로 나누어 '백만 개당' 배율 인수를 제공하고, RPK 값을 '백만 개당' 배율 인수로 나누어 TPM을 제공한다. 문헌[Zhao 등 BMC genomics 16: 97 (2015); Zhao 등 Scientific Reports 8: 4781 (2018); Shanrong Zhao 등, RNA, 2020년 4월 13일에 미리 공개됨, doi: 10.1261/rna.074922.120]을 참조하며, 모두 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
한 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 RNA-seq, 예를 들어 TPM, RPKM 및/또는 FPKM에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 TPM에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 RPKM에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 마커 유전자의 발현은 FPKM에 의해 결정된다.
상기 기재된 바와 같이, 마커 유전자의 발현은 대상로부터의 샘플에서 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈청 샘플, 혈장 샘플, 체액(예를 들어 암 조직액을 포함하는 조직액) 또는 조직(예를 들어 암 조직 또는 암 주변 조직)이다. 일부 구현예에서, 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 조직 샘플은 포유동물, 특히 인간으로부터 단리되거나 추출된 조직 분획이다. 일부 구현예에서, 조직 샘플은 포유동물, 특히 인간으로부터 단리 또는 추출된 세포 집단이다. 일부 구현예에서, 조직 샘플은 생검으로부터 얻은 샘플이다. 특정 구현예에서, 샘플은 인간 대상을 포함하는 대상의 다양한 기관으로부터 얻을 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 암을 갖는 대상의 기관으로부터 얻는다. 일부 구현예에서, 샘플은 암을 갖는 대상에서 암을 갖는 기관으로부터 얻는다. 다른 구현예에서, 샘플, 예를 들어 참조 샘플은 환자 또는 제2 인간 대상로부터의 정상 기관으로부터 얻는다.
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, 조직은 방광, 요관, 유방, 폐, 결장, 직장, 난소, 나팔관, 식도, 자궁경부, 자궁내막, 피부, 후두, 골수, 침샘, 신장, 전립샘, 뇌, 척수, 태반, 부신, 췌장, 부갑상샘, 뇌하수체, 고환, 갑상샘, 비장, 편도선, 가슴샘, 심장, 위, 소장, 간, 골격근, 말초 신경, 중피 또는 눈으로부터의 조직을 포함한다.
본원에 제공된 방법의 추가 구현예에서, 다양한 마커 유전자의 발현은 면역조직화학[Immunohistochemistry, IHC] 검정, 면역블롯팅 검정, FACS 검정 및 ELISA를 포함하는 당분야에 알려진 다양한 면역검정에 의해 검출될 수 있다.
다양한 마커 유전자의 발현은 다양한 IHC 검정에서 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물에 대한 항체에 의해 검출될 수 있다. 조직 구획의 IHC 염색은 샘플 중 단백질의 존재를 평가하거나 검출하는 신뢰할 수 있는 방법인 것으로 나타났다. IHC 기술은 항체를 이용하여 일반적으로 발색 또는 형광 방법으로 세포 항원을 원 위치에서 탐침분석하고 가시화한다. 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물을 특이적으로 표적화하는 다클론 항혈청 및 단클론 항체와 같은 1차 항체 또는 항혈청이 IHC 검정에서 마커 유전자의 발현을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 조직 샘플은 항체-표적 결합이 일어나기 충분한 시기 동안 특정 표적에 대한 1차 항체와 접촉된다. 앞서 상세히 논의한 바와 같이 항체는 항체 자체 상의 직접적 표지, 예를 들어 방사성 표지, 형광 표지, 비오틴과 같은 합텐 표지 또는 홀스래디쉬 퍼옥시다제 또는 알칼리성 포스파타제와 같은 효소에 의해 검출될 수 있다. 또는, 표지되지 않은 1차 항체는 1차 항체에 특이적인 항혈청, 다클론 항혈청 또는 단클론 항체를 포함하는 표지된 2차 항체와 함께 사용된다. IHC 프로토콜 및 키트는 당분야에 잘 알려져 있으며 상업적으로 이용 가능하다. 슬라이드 제조 및 IHC 처리를 위한 자동화 시스템이 상업적으로 이용 가능하다. 라이카 본드 오토스테이너(Leica BOND Autostainer) 및 라이카 본드 리파인 디텍션(Leica Bond Refine Detection) 시스템은 이러한 자동화 시스템의 한 예이다.
일부 구현예에서, IHC 검정은 간접적 검정에서 표지된 2차 항체와 함께 표지되지 않은 1차 항체로 수행된다. 간접적 검정은 조직 샘플 중 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 검출을 위해 두 개의 항체를 이용한다. 먼저 접합되지 않은 1차 항체가 조직(제1층)에 적용되었으며, 이는 조직 샘플 중 표적 항원과 반응한다. 다음으로, 효소 표지된 2차 항체가 적용되며, 이는 1차 항체의 항체 이소형을 특이적으로 인식한다(제2층). 2차 항체는 1차 항체와 반응한 다음 기질-발색원 적용이 뒤따른다. 제2층 항체는 발색원 3,3'-디아미노벤지딘(DAB)과 반응하여 반응 부위에서 갈색 침전물을 생성하는, 퍼옥시다제와 같은 효소로 표지될 수 있다. 이 방법은 신호 증폭 시스템을 통한 잠재적 신호 증폭으로 인해 민감하고 다용도이다.
특정 구현예에서 검출 민감도를 증가시키기 위해 신호 증폭 시스템이 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 '신호 증폭 시스템'은 결합된 1차 또는 2차 항체를 검출하여 신호를 증가시키기 위해 사용될 수 있는 시약 및 방법 시스템을 의미한다. 신호 증폭 시스템은 표적 단백질 검출의 민감도를 증가시키고, 검출된 신호를 증가시키고, 검출 한계의 하한을 감소시킨다. 효소 표지화 시스템 및 마크로표지화 시스템을 포함하는 몇몇 유형의 신호 증폭 시스템이 존재한다. 이러한 시스템/접근은 상호 배타적이지 않으며 부가적 효과를 위해 조합하여 사용될 수 있다.
마크로표지 또는 마크로표지화 시스템은 공통 스캐폴드에 부착되거나 통합된 수십(예를 들어 피코빌리단백질) 내지 수백만(예를 들어 형광 미소구체)개의 표지 모음이다. 스캐폴드는 항체와 같은 표적 특이적 친화도 시약에 결합될 수 있으며, 이에 따라 통합된 표지는 결합 시 표적과 집합적으로 회합된다. 마크로표지의 표지는 형광단, 합텐, 효소 및/또는 방사성동위원소와 같은 본원에 기재된 임의의 표지일 수 있다. 신호 증폭 시스템의 한 구현예에서, 표지된 쇄 중합체-접합 2차 항체가 사용되었다. 중합체 기술은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 50개 이상의 2차 항체가 부착될 수 있는 덱스트란의 HRP 효소-표지 불활성 '척추' 분자를 이용하여 시스템을 더욱 민감하게 만든다.
효소 표지화 시스템에 기반한 신호 증폭 시스템은 홀스래디쉬 퍼옥시다제[Horseradish peroxidase, HRP] 또는 알칼리성 포스파타제와 같은 효소의 촉매 활성을 이용하여 원 위치에서 표적 단백질 또는 핵산 서열의 고밀도 표지화를 일으킨다. 한 구현예에서, 티라미드가 HRP의 신호를 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 시스템에서 HRP는 표지된 티라미드 유도체를 반응성이 크고 수명이 짧은 티라미드 라디칼로 효소적으로 전환한다. 이어서 표지된 활성 티라미드 라디칼은 HRP-항체-표적 상호 작용 부위 부근의 잔기(주로 단백질 티로신 잔기의 페놀 모이어티)에 공유 커플링하여 신호 편재의 확산 관련 손실을 최소화하면서 해당 부위의 표지 수 증폭을 초래한다. 결과적으로 신호는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 15, 20, 25, 30, 50, 75 또는 100배 증폭될 수 있다. 당업자에게 알려진 바와 같이, 티라미드 상의 표지는 형광단, 효소, 합텐, 방사성동위원소 및/또는 광단을 포함하는 본원에 기재된 임의의 표지일 수 있다. 다른 효소 기반 반응이 또한 신호 증폭을 생성하기 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 효소-표지 형광[Enzyme-Labeled Fluorescence, ELF] 신호 증폭이 알칼리성 포스파타제에 대해 이용 가능하며, 알칼리성 포스파타제는 약한 청색 형광 기질(ELF 97 포스페이트)을 효소적으로 절단하여 이를 비정상적으로 큰 스토크스(Stokes) 이동 및 우수한 광안정성을 나타내는 밝은 황록색 형광 침전물로 전환한다. 티라미드 기반 신호 증폭 시스템 및 ELF 신호 증폭 둘 다 예를 들어 써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific)(Waltham, MA USA 02451)에서 상업적으로 이용 가능하다.
따라서 본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 마커 유전자의 발현 수준은 신호 증폭 시스템을 사용하여 IHC로 검출된다. 일부 구현예에서, 표본이 이후 세포 및 세포하 요소를 확인하기 위해 대비염색된다.
일부 구현예에서, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 발현 수준은 면역블롯팅 검정을 사용하여 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물에 대한 항체로 또한 검출될 수 있다. 면역블롯팅 검정의 일부 구현예에서, 단백질은 종종 전기 영동에 의해 분리되고(그러나 그래야 하는 것은 아님) 막(일반적으로 니트로셀룰로스 또는 PVDF 막)상으로 옮겨진다. IHC 검정과 유사하게, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물을 특이적으로 표적화하는 다클론 항혈청 및 단클론 항체와 같은 1차 항체 또는 항혈청이 마커 유전자의 발현을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 막은 항체-항원 결합이 발생하기 충분한 시기 동안 특정 표적에 대한 1차 항체와 접촉되고 결합된 항체는 1차 항체 자체 상의 직접적 표지, 예를 들어 방사성 표지, 형광 표지, 비오틴과 같은 합텐 표지, 홀스래디쉬 퍼옥시다제 또는 알칼리성 포스파타제와 같은 효소에 의해 검출될 수 있다. 다른 구현예에서, 표지되지 않은 1차 항체는 1차 항체에 특이적인 표지된 2차 항체와 함께 상기 기재된 바와 같은 간접적 검정에서 사용된다. 본원에 기재된 바와 같이, 2차 항체는 예를 들어 효소 또는 형광 표지, 발광 표지, 비색 표지 또는 방사성동위원소와 같은 다른 검출 가능한 표지로 표지될 수 있다. 면역블롯팅 프로토콜 및 키트는 당분야에 잘 알려져 있으며 상업적으로 이용 가능하다. 면역블롯팅을 위한 자동화 시스템, 예를 들어 웨스턴 블롯팅을 위한 아이바인드 웨스턴(iBind Western) 시스템(ThermoFisher, Waltham, MA USA 02451)이 상업적으로 이용 가능하다. 면역블롯팅은 웨스턴 블롯, 세포-내 웨스턴 블롯 및 도트 블롯을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 도트 블롯은 단백질 샘플이 전기 영동으로 분리되지 않고 막상에 직접 스폿팅되는 단순화된 절차이다. 세포 내 웨스턴 블롯에는 본원에 기재된 바와 같이 마이크로타이터 플레이트에 세포를 분주하고, 세포를 고정/투과화하고, 1차 표지된 1차 항체 또는 표지되지 않은 1차 항체에 이어 표지된 2차 항체로 후속 검출하는 것이 관여된다.
다른 구현예에서, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 발현 수준은 또한 형광-활성화 세포 분류[FACS] 검정을 포함하는 유세포 측정 검정에서 본원에 기재된 항체를 사용하여 검출될 수 있다. IHC 또는 면역블롯팅 검정과 유사하게, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물을 특이적으로 표적화하는 다클론 항혈청 및 단클론 항체와 같은 1차 항체 또는 항혈청이 FACS 검정에서 단백질 발현을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 항체-항원 결합이 일어나기 충분한 시기 동안 특정 표적 단백질에 대한 1차 항체로 염색되고 결합된 항체는 1차 항체 상의 직접적 표지, 예를 들어 1차 항체 상의 형광 표지 또는 비오틴과 같은 합텐 표지에 의해 검출될 수 있다. 다른 구현예에서, 표지되지 않은 1차 항체는 1차 항체에 특이적인 형광 표지된 2차 항체와 함께 상기 기재된 바와 같이 간접적 검정에서 사용된다. FACS는 각 세포의 특정 광산란 및 형광 특성에 기반하여 한 번에 하나의 세포씩 형광 표지된 생물학적 세포의 혼합물을 분류 또는 분석하는 방법을 제공한다. 이에 따라 유세포 측정기는 표적 단백질의 발현 수준을 표시하는, 플루오리크롬-태그 항체의 강도를 검출하고 보고한다. 따라서, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 발현 수준은 이러한 단백질 생성물에 대한 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 비형광 세포질 단백질도 투과화된 세포를 염색하여 관찰될 수 있다. FACS 염색 및 분석을 수행하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며 문헌[Teresa S. Hawley 및 Robert G. Hawley in Flow Cytometry Protocols, Humana Press, 2011 (ISBN 1617379506, 9781617379505)]에 기재되어 있다.
다른 구현예에서, 마커 유전자에 의해 암호화된 단백질 생성물의 발현 수준은 또한 효소 면역 검정[Enzyme Immune Assay, EIA] 또는 ELISA와 같은 면역검정을 사용하여 검출될 수 있다. EIA 및 ELISA 검정 모두 예를 들어 혈액, 혈장, 혈청 또는 골수를 포함하는 다양한 조직 및 샘플을 검정하기 위해 당분야에 알려져 있다. 광범위한 ELISA 검정 형식이 이용 가능하며 예를 들어 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된, 미국 특허 번호 4,016,043, 4,424,279 및 4,018,653을 참조한다. 이들은 비경쟁 유형의 단일-부위 및 2-부위 또는 '샌드위치' 검정뿐만 아니라 전통적인 경쟁적 결합 검정을 모두 포함한다. 이러한 검정은 또한 표지된 항체의 표적 단백질에 대한 직접적 결합을 포함한다. 샌드위치 검정은 일반적으로 사용되는 검정 형식이다. 샌드위치 검정 기술의 여러 가지 변형이 존재한다. 예를 들어, 전형적인 정방향 검정에서 표지되지 않은 항체는 고체 기질 상에 고정화되고 시험될 샘플은 결합된 분자와 접촉하게 된다. 이어서 적절한 인큐베이션 기간 후, 항체-항원 복합체의 형성을 허용하기 충분한 시기 동안, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 리포터 분자로 표지된, 항원에 특이적인 2차 항체가 첨가되고 인큐베이션되어 항체-항원-표지 항체의 또 다른 복합체 형성에 충분한 시간을 허용한다. 임의의 반응하지 않은 물질은 세척 제거되고 리포터 분자에 의해 생성된 신호를 관찰하여 항원의 존재가 결정된다. 결과는 시각적 신호의 단순한 관찰에 의해 정성적일 수 있거나 알려진 양의 표적 단백질을 포함하는 대조군 샘플과 비교하여 정량될 수 있다.
EIA 또는 ELISA 검정의 일부 구현예에서, 효소는 제2 항체에 접합된다. 다른 구현예에서, ELISA 검정 형식의 검출 가능한 신호를 생성하기 위해 형광 표지된 2차 항체가 효소 표지된 2차 항체 대신에 사용될 수 있다. 특정 파장의 광으로 조명에 의해 활성화될 때, 형광단-표지 항체가 광 에너지를 흡수하여 분자의 여기 상태를 유도한 다음 광학 현미경으로 시각적으로 검출 가능한 특징적인 색상으로 광을 방출한다. EIA 및 ELISA에서와 같이 형광 표지된 항체는 첫 번째 항체-표적 단백질 복합체에 결합할 수 있다. 이에 결합되지 않은 시약을 세척 제거한 후 남은 3차 복합체는 적절한 파장의 광에 노출되고, 관찰된 형광은 관심 표적 단백질의 존재를 표시한다. 면역형광 및 EIA 기술은 모두 당분야에 매우 잘 확립되어 있고 본원에 개시되어 있다.
본원에 기재된 면역검정을 위해, 효소 활성 또는 비효소 표지가 각각 검출될 수 있는 한, 임의의 여러 효소 또는 비효소 표지가 이용될 수 있다. 따라서 효소는 검출 가능한 신호를 생성하며, 이는 표적 단백질을 검출하기 위해 이용할 수 있다. 특히 유용한 검출 가능한 신호는 발색 또는 형광 신호이다. 따라서, 표지로서 사용하기 특히 유용한 효소는 발색 또는 형광 기질이 이용 가능한 효소를 포함한다. 이러한 발색 또는 형광 기질은 효소 반응에 의해 쉽게 검출 가능한 발색 또는 형광 생성물로 전환될 수 있으며, 이는 현미경 또는 분광측정을 사용하여 쉽게 검출 및/또는 정량될 수 있다. 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코스 옥시다제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 이러한 효소는 당업자에게 잘 알려져 있다(문헌[Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996)] 참조). 잘 알려진 발색 또는 형광 기질을 갖는 다른 효소는 다양한 펩티다제를 포함하며, 발색 또는 형광 펩티드 기질은 단백분해 절단 반응을 검출하기 위해 이용될 수 있다. α- 및 β-갈락토시다제, β-글루쿠로니다제, 6-포스포-β-D-갈라토시드 6-포스포갈락토히드롤라제, α-글루오시다제, α-글루코시다제, 아밀라제, 뉴라미니다제, 에스터라제, 리파제 등의 사용을 포함하지만 이에 제한되지 않는 발색 및 형광 기질의 사용은 박테리아 진단에서도 잘 알려져 있고(문헌[Manafi 등, Microbiol. Rev. 55:335-348 (1991)]), 알려진 발색 또는 형광 기질을 가진 이러한 효소는 본 개시의 방법에서 사용하기 위해 용이하게 적응될 수 있다.
검출 가능한 신호를 생성하기 위한 다양한 발색 또는 형광 기질이 당업자에게 잘 알려져 있고 상업적으로 이용 가능하다. 검출 가능한 신호를 생성하기 위해 이용될 수 있는 예시적인 기질은 홀스래디쉬 퍼옥시다제에 대한 3,3'-디아미노벤지딘(DAB), 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB), 클로로나프톨(4-CN)(4-클로로-1-나프톨), 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-술폰산)(ABTS), o-페닐렌디아민 디히드로클로리드(OPD) 및 3-아미노-9-에틸카바졸(AEC); 알칼리성 포스파타제에 대한 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-1-포스페이트(BCIP), 니트로블루 테트라졸륨(NBT), 패스트 레드(Fast Red TR/AS-MX) 및 p-니트로페닐 포스페이트(PNPP); β-갈락토시다제에 대한 1-메틸-3-인돌릴-β-D-갈락토피라노시드 및 2-메톡시-4-(2-니트로비닐)페닐 β-D-갈락토피라노시드; α-글루코시다제에 대한 2-메톡시-4-(2-니트로비닐)페닐 β-D-글루코피라노시드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 형광 기질은 알칼리성 포스파타제에 대한 4-(트리플루오로메틸)움벨리페릴 포스페이트; 포스파타제에 대한 4-메틸움벨리페릴 포스페이트 비스(2-아미노-2-메틸-1,3-프로판디올), 4-메틸움벨리페릴 포스페이트 비스(사이클로헥실암모늄) 및 4-메틸움벨리페릴 포스페이트; 홀스래디쉬 퍼옥시다제에 대한 콴타블루(QuantaBlu)TM 및 콴타레드(QuantaRed)TM; β-갈락토시다제를 위한 4-메틸움벨리페릴 β-D-갈락토피라노시드, 플루오레세인 디(β-D-갈락토피라노시드) 및 나프토플루오레세인 디(β-D-갈락토피라노시드); β-글루코시다제에 대한 3-아세틸룸벨리페릴 β-D-글루코피라노시드 및 4-메틸움벨리페릴-β-D-글루코피라노시드; 및 α-갈락토시다제에 대한 4-메틸움벨리페릴-α-D-갈락토피라노시드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 검출 가능한 신호를 생성하기 위한 예시적 효소 및 기질은 또한 예를 들어 미국 공개 2012/0100540에 기재되어 있다. 발색 또는 형광 기질을 포함하는 다양한 검출 가능한 효소 기질이 잘 알려져 있고 상업적으로 이용 가능하다(Pierce, Rockford IL; Santa Cruz Biotechnology, Dallas TX; Invitrogen, Carlsbad CA; 42 Life Science; Biocare). 일반적으로 기질은 표적 핵산 부위에 침착되는 침전물을 형성하는 생성물로 전환된다. 다른 예시적인 기질은 HRP-그린(Green)(42 Life Science), 베타조이드(Betazoid) DAB, 카다시안(Cardassian) DAB, 로물린(Romulin) AEC, Biocare(Concord CA; biocare.net/products/detection/chromogens)의 바조란 퍼플(Bajoran Purple), 비나 그린(Vina Green), 딥 스페이스 블랙(Deep Space Black)™, 워프 레드(Warp Red)™, 불칸 패스트 레드(Vulcan Fast Red) 및 페란지 블루(Ferangi Blue)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
면역검정의 일부 구현예에서, 검출 가능한 표지는 1차 항체에 직접 커플링되거나 표지되지 않은 1차 항체를 검출하는 2차 항체를 가질 수 있다. 발색 또는 형광 표지를 포함하지만 이에 제한되지 않는 예시적인 검출 가능한 표지는 당업자에게 잘 알려져 있다(문헌[Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996)] 참조) 표지로서 유용한 예시적 형광단은 로다민 유도체, 예를 들어 테트라메틸로다민, 로다민 B, 로다민 6G, 술포로다민 B, 텍사스 레드(Texas Red)(술포로다민 101), 로다민 110, 및 테트라메틸로다민-5-(또는 6), 리사민 로다민 B 등과 같은 이의 유도체; 7-니트로벤즈-2-옥사-1,3-디아졸(NBD); 플루오레세인 및 이의 유도체; 단실(5-디메틸아미노나프탈렌-1-술포닐)과 같은 나프탈렌; 7-아미노-4-메틸쿠마린-3-아세트산(AMCA), 7-디에틸아미노-3-[(4'-(요오도아세틸)아미노)페닐]-4-메틸쿠마린(DCIA), 알렉사(Alexa) 플루오르 염료(Molecular Probes) 등과 같은 쿠마린 유도체; 4,4-디플루오로-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센(BODIPY)TM 및 이의 유도체(Molecular Probes; Eugene Oreg.); 캐스케이드 블루(Cascade Blue)TM 및 8-메톡시피렌-1,3,6-트리술폰산 등을 포함하는 이의 유도체와 같은 피렌 및 술폰화 피렌; 피리딜옥사졸 유도체 및 다폭실 유도체(Molecular Probes); 루시퍼 옐로우(Lucifer Yellow)(3,6-디술포네이트-4-아미노-나프탈이미드) 및 이의 유도체; 사이다이(CyDye)TM 형광 염료(Amersham/GE Healthcare Life Sciences; Piscataway NJ) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 발색단은 페놀프탈레인, 말라카이트 그린, 니트로페닐과 같은 니트로방향족, 디아조 염료, 답실(4-디메틸아미노아조벤젠-4'-술포닐) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
현미경 또는 분광측정과 같은 당업자에게 잘 알려진 방법이 결합된 1차 또는 2차 항체와 연관된 발색 또는 형광 검출 가능 신호를 가시화하기 위해 이용될 수 있다.
이 섹션(섹션 5.7)에 제공된 방법은 당분야에 알려진 다양한 암 모델과 함께 사용될 수 있다. 한 구현예에서, 마우스 이종이식 암 모델이 사용된다. 간략하게, T-24 및 UM-UC-3 세포는 ATCC에서 구입하고 권장 배지 조건을 사용하여 배양한다. T-24 h넥틴-4(인간 넥틴-4) 및 UM-UC-3 넥틴-4 세포는 pRCDCMEP-CMV-h넥틴-4 EF1-Puro 작제물을 사용하여 인간 넥틴-4를 포함하는 렌티바이러스로 모세포를 형질도입하여 생성하고 퓨로미신을 사용하여 선택한다. T-24 넥틴-4(클론 1A9) 세포를 누드 마우스에 이식하고 투관침을 통해 계대하여 약 200 mm3 종양 부피에 도달하도록 허용한 다음 단일 복강내[Intraperitoneal, IP] 용량의 엔포르투맙 베도틴(3 mg/kg) 또는 비결합 ADC(3 mg/kg)로 치료군당 7마리 동물을 치료한다. 이 모델을 사용한 후속 ICD 시험은 RNA-seq, 흐름, 면역조직화학[IHC] 및 루미넥스(Luminex)에 의한 하류 분석을 위해 처리 5일 후 종양 수집이 관여된다. 종양을 포르말린에 고정하고 FFPE 조직 블록으로 제조한다. 블록은 4 μm로 절단하고 F4/80, CD11c를 사용하여 면역조직화학을 수행한다. 면역조직화학적으로 염색된 슬라이드 구획을 라이카 AT2(Leica AT2) 디지털 전체 슬라이드 스캐너로 스캔하고 이미지는 넥틴 4, CD11c 및 F4/80 염색용 맞춤형 알고리즘을 사용하여 비지오팜(Visiopharm) 소프트웨어로 분석한다. 알고리즘은 염색 강도 및 배경 염색에 기반하여 최적화한다. 양성 염색 백분율을 넥틴 4에 대해 계산하고 mm2 당 양성 세포를 F480 및 CD11c에 대해 계산한다.
종양 구획을 세포 용해 완충액 2[R&D 시스템스(R&D Systems)®, 카탈로그 번호 895347]에서 용해시킨다. 종양 샘플로부터의 시토킨 및 케모카인은 밀리플렉스 맵(MILLIPLEX MAP) 마우스 시토킨/케모카인 자기 비드 패널(Millipore)을 사용하여 측정하고 루미넥스 맥픽스(LUMINEX MAGPIX) 시스템에서 판독한다.
RNA-seq 분석을 위해 급속 냉동 종양으로부터의 RNA를 제조업체의 프로토콜에 따라 트리졸 플러스 RNA(TRIZOL Plus RNA) 정제 키트(Life Technologies)를 사용해서 단리하여 고품질 RNA(평균 RNA 무결성 수 >8)를 생성한다. RNA 선택 방법은 폴리(A) 선택 및 일루미나(Illumina)의 mRNA 라이브러리 제조 키트를 사용하고 Hi-Seq 2 × 150 bp, 단일 인덱스(Illumina)에서 판독한다. 서열 판독을 인간 및 마우스 트랜스크립톰에 매핑하고 백만 개당 총 판독 수를 결정하였다.
본 개시는 일반적으로 다수의 구현예를 설명하기 위해 확언적인 언어를 사용하여 제공된다. 본 개시는 또한 구체적으로 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 절차, 검정 또는 분석과 같은 특정 요지 사안이 전체적으로 또는 부분적으로 제외된 구현예를 포함한다. 따라서, 비록 본 개시가 포함하지 않는 것에 관하여 본 개시가 본원에서 일반적으로 표현되지 않더라도, 본 개시에 명시적으로 포함되지 않은 양태들이 그럼에도 불구하고 본원에 개시된다.
본 개시를 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최선의 방식을 포함하여, 본 발명의 특정 구현예가 본원에 기재되어 있다. 전술한 설명을 읽을 때, 개시된 구현예의 변형은 당분야에서 일하는 개인에게 명백해질 수 있으며, 당업자는 이러한 변형을 적절하게 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 개시가 본원에 구체적으로 기재된 것과 달리 실시되고, 본 개시가 관련 법률에 의해 허용되는 바와 같이 본원에 첨부된 청구범위에 인용된 요지 사안의 모든 변형 및 균등부를 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 모든 가능한 변형의 전술한 요소들의 임의의 조합은 본원에서 달리 표시하거나 문맥에 의해 명확히 금기되지 않는 한 본 개시에 포괄된다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 수탁 번호 및 다른 참고문헌은 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 표시된 것처럼 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
본 개시의 다수의 구현예가 기재되었다. 그럼에도 불구하고, 본 개시의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음이 이해될 것이다.
6. 실시예
6.1 실시예 1 - 동물 모델에서 엔포르투맙 베도틴의 방광내 투여의 효능 및 안전성 시험
6.1.1 넥틴-4 + 방광 동소 이종이식 마우스 모델에서의 효능 시험
이 시험은 넥틴-4+ 방광 동소 이종이식 마우스 모델에서 엔포르투맙 베도틴[Enfortumab vedotin, EV]의 방광내 투여의 효능을 측정하는 것을 목표로 한다. 구체적으로, 그리고 임의의 특정 작용 기전에 의해 제한되지 않고, 방광내 투여를 통한 EV 국소 투여는 EV 전신 투여에 비해 전신 노출을 감소시키고 안전성 프로파일을 개선하면서 NMIBC 세포에 EV의 직접적인 노출을 가능하게 할 수 있다.
표 6은 마우스 및 래트에서의 전임상 실험에 대한 용량 선택을 나타낸다. 마우스 동소 모델은 인간 넥틴-4 및 루시퍼라제(즉, UM-UC-3-h넥틴4+-Luc+)를 발현시키도록 조작된 인간 요로상피 방광암 세포주 UM-UC-3을 이용하여 SCID 마우스에서 개발하였다. EV가 래트 및 인간 넥틴-4 동원체[ortholog]에 필적할만한 친화도로 결합하기 때문에 래트에서 안전성 평가를 수행하였다.
용량 선택
총 용량
(mg) 		용량
농도
(㎎/㎖) 		용량 수준 a
(㎎/㎏) 		용량/방광
표면적 b
(mg/cm 2 )
마우스 0.75 15 30 0.5
래트 26
12
20		 5
15
30
50		 10
30
60
100		 0.4
1.2
2.5
4.1
인간
(승인된 총 IV 용량) 		125 0.4
a78 kg 환자(집단 약동학적 EV 모델 집단의 평균 체중), 200 g 래트, 25 g 마우스를 가정한다.
bV=(4/3)πr3 및 SA=4πr2인 방광의 부피로부터 유래된 방광 표면적(문헌[Andersson KE, 등. Physiol Rev. 2004;84:935-986]). 주: 제한된 전신 노출 및 국소 투여 용량 경로로 인해 신체 표면적에 대한 용량 조정은 적절하지 않고 대신에, 총 용량은 관련된 전임상 용량을 보장하기 위해 방광 조직 표면적에 대해 정규화하였다(문헌[U.S. Food and Drug Administration. Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers 2005. www.fda.gov/media/ 72309/download. 2022년 3월 1일 접속]).
넥틴-4는 비근침윤성 방광암[NMIBC] 및 근침윤성 방광암[MIBC]을 포함한 방광암의 모든 단계에 걸쳐 고도로 발현된다(데이터는 나타내지 않음).
방광내 투여를 모방하는 조건하에서 시험관 내 EV의 세포독성 활성을 평가하기 위해, 넥틴-4 과발현 방광 암종 세포(UM-UC-3-h넥틴-4+)를 EV, 비접합 항-넥틴-4 항체, 비접합 MMAE, 또는 대조군 ADC에 노출하였다(도 2). IV 투여는 세포를 96시간 동안 노출시킴으로써 모델링하였다. 방광내 투여는 2시간 및 24시간 노출하여 모델링하고, 이어서 시험 물질을 씻어 내었다. 세포 사멸은 셀 티터글로(Cell TiterGlo)®(Promega Coporation, Madison, WI, USA)를 사용하여 측정하였다. 노출을 96시간에서 2시간으로 감소시키자 비접합 MMAE에 대해 44배까지 효능(EC 90)이 감소했지만 EV(2배)에 대해서는 거의 변하지 않았다. 대조군 ADC 및 비접합 항-넥틴-4는 EC90(데이터는 나타내지 않음)을 측정하기에 충분한 활성을 초래하지 않았다. 따라서, EV는 방광내 투여를 모방하는 조건을 사용하여 시험관 내에서 세포독성 활성을 유지한다(도 2).
넥틴-4+ 방광 동소 이종이식 마우스 모델인, 루시퍼라제가 형질도입된 UM-UC-3-h넥틴4+-Luc+를 작제하기 위해, 방광암 세포를 카테터를 통해 SCID-베이지 마우스에게 경요도로 주입하였다(도 3a).총 18마리의 마우스를 이 시험에 사용하였다: 3마리의 마우스는 비치료하였다(도 3b, 가장 좌측 패널, 제목이 "비치료"인 것). 5마리의 마우스는 2주 동안 주당 일회 2시간 동안 멸균수를 방광내 투여하여 처리하였다[도 3b, 좌측에서 두 번째 패널, 제목이 "비히클(SWFI) 2시간 방광내"인 것]. 5마리의 마우스는 2주 동안 주당 일회 2시간 동안 0.75 mg EV를 방광내 투여하여 처리하였다(15 mg/mL로 EV 0.05 mL)(주: 마우스에서 용량 농도 15 mg/ml는 마우스에서 용량/방광 표면적 0.5 mg/cm2에 상응한다)(도 3b, 좌측에서 세 번째 패널, 제목이 "EV 2시간 방광내"인 것). 5마리의 마우스는 2주간 주당 일회 EV 0.75 mg 정맥내 투여로 처리하였다(3 mg/mL로 EV 0.25 mL)(도 3b, 가장 우측 패널, 제목이 "EV IV 투여"인 것).EV의 효능을 측정하기 위해 마우스를 영상화하였다.또한, 약동학 분석을 위해 EV 투여 24시간 후 각각의 치료된 마우스에서 혈액을 채취하였다.본원에 포함된 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
도 3b의 생물발광 영상화 결과에 나타난 바와 같이, 방광 종양은 비치료 마우스 및 멸균수를 2시간 방광내 투여하여 처리한 마우스[도 3b, 가장 좌측 패널, 제목이 "비치료"인 것 및 좌측에서 두 번째 패널, 제목이 "비히클(SWFI) 2시간 방광내"인 것]에서 크게 성장하였다. 대조적으로, 방광 종양은 EV를 2시간 방광내 투여하여 처리한 마우스뿐만 아니라 EV를 정맥내 투여하여 처리한 마우스(도 3b, 좌측에서 세 번째 패널, 제목이 "EV 2시간 방광내"인 것 및 가장 우측 패널, 제목이 "EV IV 용량"인 것)에서 실질적으로 퇴행하였다. 도 3c에 나타낸 항-넥틴-4 면역조직화학 결과 또한 방광 종양이 EV를 2시간 방광내 투여하여 처리한 마우스에서 퇴행하였음을 나타낸다. 도 3c에서 다섯 개의 우측 패널의 방광 조직은 도 3b에서 EV의 방광내 투여로 각각 처리된 다섯 마리의 마우스에서 얻은 것이다. 또한, 도 3b의 생물발광 영상화 결과를 정량화하여 도 3d 및 표 7에 요약하였다. 2시간의 체류 시간 동안 EV를 방광내 투여하여 처리한 마우스에서, 종양 성장 억제[Tumor growth inhibition, TGI]는 17일 차에 97.1%였다[대조군과 비교하여 총 플럭스 단위(광자/초)를 분석하여 측정](도 3b, 좌측에서 세 번째 패널, 제목이 "EV 2시간 방광내"인 것, 도 3d, 및 표 7).
NMIBC 동소 모델에서 EV의 종양 성장 억제
처리 군 용량 수준 경로 % TGI
비처리 1 N/A N/A 0.0
비히클 2 N/A 방광내 57.4
AGS-22C3E 3 15 ㎎/㎖ 방광내 97.1
AGS-22C3E 4 3 mg/kg IV 99.9
종양 성장 억제는 시험 종료(개시 후 16일) 시 비처리된 대조군과 비교하여 평균 종양 생물발광 신호로부터 계산하였다. 15 mg/mL의 방광내 용량은 750 ㎍의 총 용량이었고, 방광 표면적의 0.5 mg/cm2의 용량을 나타내었다. 정맥내로 전달된 EV의 총 용량은 25 g 마우스당 대략 10배 더 낮았고 75 ㎍이었다.
또한, 방광 종양 조직에서 넥틴-4 및 MMAE의 국소화를 평가하기 위해 면역조직화학[Immunohistochemistry, IHC] 염색을 수행하였다(도 3e). 특히, 첫 EV 투여 후 여섯(6)시간 후에, 종양을 채취하고, 도 3e에 나타낸 바와 같이 넥틴-4 및 항-MMAE에 대해 염색하였다. IHC 분석은 비오틴 접합된 항-MMAE 1차 항체에 의해 검출되는 바와 같이, 약물의 공동국소화와 함께 방광 종양 조직 내의 넥틴-4의 존재를 나타내었다.
상기 결과는 본원에서 사용한 넥틴-4+ 방광 동소 이종이식 마우스 모델에서 종양(NMIBC) 생착 및 방광내 EV 활성을 확인해준다.
6.1.2 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트에서 안전성 시험
이 시험은 재구성된 엔포르투맙 베도틴(EV)에 대한 다양한 농도 및 최대 실현 가능한 농도까지의 투여 부피에서 EV의 단회 방광내 투여에 따른 스프라그-돌리 래트에서의 국소 조직, 혈장 노출 및 조직 약물 수준에 대한 효과를 특성규명하는 것을 목표로 하였다.
15, 30, 또는 50 ㎎/㎖에서 0.1, 0.2, 또는 0.4 ㎖의 EV 단회 투여를 표 8에 나타낸 시험 설계에 따라 암컷 스프라그-돌리 래트에게 2시간 동안 방광내 투여하였다.
국소 조직(신장, 방광, 요관 및 요도)에서 ADC 및 MMAE의 농도를 측정하기 위해, 이들 조직을 생체분석 및 항-MMAE 면역조직화학[IHC] 분석을 위해 EV 투여 24시간 후에 각각의 래트로부터 채취하였다. ADC 및 MMAE의 혈청 농도를 측정하기 위해, 생물학적 분석을 위한 상이한 시점(EV 투여 후 1시간, 6시간, 24시간, 72시간, 및 168시간)에서 각각의 래트로부터 300 ㎕의 혈액을 채취하였다. 본원에 포함되는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
도 4a 및 4b의 생체분석 결과 및 표 9의 항-MMAE IHC 결과에 나타난 바와 같이, 더 큰 점적투여 부피를 넘는, 더 높은 용량 농도 및 총 용량은 방광 조직에서 더 높은 MMAE 수준을 유도하였다. 구체적으로, 도 4a는 2시간의 체류 시간으로 15~50 ㎎/㎖에서 0.3~4.1 ㎎/cm2의 용량으로 암컷 래트에게 투여한 EV의 단회 방광내 투여를 나타내며, 질량 기준으로 최대 100 ㎎/㎏의 용량을 나타낸다. 24시간에서의 총 MMAE의 방광 수준을 방광 조직 중량에 대해 정규화하였다. MMAE는 용량 투여 24시간 이내에 피크 농도로 최대 7일 동안 방광 조직에서 검출되었다. 또한, MMAE는 혈청에서 검출된 최소 ADC(<1 ng/mL)로 일반적으로 검출 가능하지 않았다. 농도를 일정하게 유지하고 체류 시간이 30~120분으로 다양할 때 총 MMAE 수준에서 유의미한 차이는 없었다(데이터는 나타내지 않음). 따라서, 더 높은 총 용량 및 농도의 EV를 전달하는 것은 활성을 향상시키고, 주입 부피 또는 체류 시간의 변화보다 조직 약물 수준을 더 증가시킬 것이다. 상기 결과는 암컷 스프라그-돌리 래트에 대해 15, 30, 또는 50 ㎎/㎖에서 엔포르투맙 베도틴의 0.1, 0.2, 또는 0.4 ㎖의 단회 방광내 투여가 잘 용인되었음을 나타낸다. 따라서, EV의 방광내 투여는 스프라그-돌리 래트에서 제한된 전신 노출로 EV의 효과적인 국소 투여를 제공하였다.
- = <1% 이행 세포 염색 양성
1 = 1~25% 양성
2 = 26~50% 양성
3 = 50~75% 양성
4 = >75% 양성
독성 가능성을 평가하고 방광내 EV의 약동학을 특성규명하기 위해, 육(6)주, 주별로 암컷 래트에게 EV 또는 대조물질을 방광내 투여하였다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 피부 및 골수를 포함하는 이전에 확인된 표적 조직에서는 미시적 소견은 없었다. EV의 무효과 수준에 상응하는 용량은 승인된 인간 IV 용량의 >20배에 해당한다.
용량 독성 시험
주간 방광내 용량 수준 임상 징후, 임상 병리학, 장기(organ) 중량, 사망률, 거시적 소견 미시적 소견 결론
0.1 mg/cm2(3 mg/kg) EV 관련 소견 없음 EV 관련 소견 없음 --
0.4 mg/cm2(10 mg/kg) EV 관련 소견 없음 EV 관련 소견 없음 무효과
관찰용량
[No-observed-effect-level, NOEL]
1.2 mg/cm2(30 mg/kg) EV 관련 소견 없음 신장 및 방광의 이행 상피에서 최소/약간의 유사분열/아폽토시스 수치 유해효과 무관찰 수준
[No-observed-adverse-effect-level, NOAEL]
방광내로 투여된 EV의 혈청 농도는 검증된 ELISA-기반 검정(평균 ± SEM)을 사용하여 EV의 첫 투여 후에 측정하였다(도 5). 평균 EV Cmax는 ≤750 ng/mL(즉, 임상적으로 승인된 용량의 IV Cmax보다 >35배 더 낮음)이었고, 검증된 질량 분광법 검정에 의한 검출 가능한 혈청 MMAE는 없었다. 시간-농도 곡선하에서 혈청 면적의 추정은 단지 주입 후 최대 24시간까지 검출 가능한 최고 EV 용량(30 ㎎/㎏)으로 제한되었다. 비접합 MMAE의 혈청 농도는 정량의 하한(<10 pg/mL) 미만이었다. 따라서, EV의 방광내 투여는 낮고 일시적인 전신 흡수로 전신 노출을 제한한다.
따라서, 표 9 및 도 5는 EV의 방광내 투여가 검출 가능한 국소 또는 전신 독성 없이, 그리고 낮고 일시적인 전신 흡수는 잘 용인된다는 것을 나타낸다. 임의의 특정 작용 기전에 의해 제한되지 않고, 이러한 데이터는 또한 방광내 EV의 낮은 전신 흡수로 인해 전신 투여된 EV에서 관찰되는 가장 흔한 이상 사례가 발생하는 것을 저하시킬 수 있음을 나타낸다.
6.1.3 스프라그-돌리 래트에서의 체류 시간 길이의 효과
이 시험은 상이한 체류 시간 길이 동안 엔포르투맙 베도틴(EV)의 방광내 투여 후 스프라그-돌리 래트의 방광 조직에서 MMAE 수준을 측정하는 것을 목표로 하였다.
구체적으로, 24마리의 암컷 스프라그-돌리 래트를 무작위로 4개의 군(군당 6마리의 래트)으로 그룹화하였다. 30 ㎎/㎖에서 EV 단회 투여 0.4 ㎖를 각각의 래트에 30, 60, 90, 또는 120분 동안 방광내 투여하였다. 방광 조직에서 MMAE의 농도를 측정하기 위한 생체분석을 위해 EV 투여 24시간 후에 각각의 래트에서 방광 조직을 채취하였다. 본원에 포함되는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 30분 내지 120분 범위의 상이한 체류 시간 길이 동안 방광내로 EV를 투여한 래트에서의 방광 조직 MMAE 수준에는 실질적인 차이가 없었다. 표적 세포에 대한 ADC의 접근을 잠재적으로 억제하고, 전통적인 소분자보다 더 큰 정도로 확산을 제어할 수 있는 점액층을 포함하는 인자의 존재하에서, 이러한 생체내 결과는 다소 놀랍다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 비교적 짧은 체류 시간이 래트에서 방광 조직 MMAE가 포화에 도달하기에 충분할 수 있는 것으로 보인다.
6.2 가설 실시예 2 - 비근침윤성 방광암[NMIBC]이 있는 성인에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK 및 항종양 활성을 평가하기 위해 설계된 1상, 공개 라벨, 다기관, 용량 증량, 및 용량 확장 시험.
6.2.1 임상시험에 사용하기 위한 약물
엔포르투맙 베도틴은 미세소관 파괴제 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)에 공유 연결된 넥틴-4 표적화된 단클론 항체(AGS-22C3)이다. 엔포르투맙 베도틴은 3개의 기능적 서브유닛을 갖는다:
● 완전 인간 IgG1K 항체(AGS-22C3);
● 미세소관 파괴제 MMAE;
● MMAE를 AGS-22C3에 공유 부착하는 프로테아제-절단 가능 말레이미도카프로일-발린-시트룰린(vc) 링커.
엔포르투맙 베도틴은 넥틴-4의 V 도메인에 결합한다(문헌[Challita-Eid 등, Cancer Res (2016); 76(10): 3003-13]). 추정되는 작용 기전에서 약물은 세포 표면의 넥틴-4 단백질에 결합하고 내재화되어 vc 링커의 단백분해 절단 및 MMAE의 세포내 방출을 유발한다. 유리 MMAE는 이후 튜불린 중합을 파괴하고 유사분열 정지를 초래한다.
6.2.2 시험 요약
6.2.2.1 임상시험계획 제목
비근침윤성 방광암[NMIBC] 환자의 치료를 위한 방광내 엔포르투맙 베도틴 시험
6.2.2.2 시험 목적
1차
● NMIBC가 있는 대상에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성과 내약성을 평가하기 위해
● NMIBC가 있는 대상에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 최대허용용량[Maximum tolerated dose, MTD] 또는 권장 용량을 확인하기 위해
2차
● 방광내 엔포르투맙 베도틴의 약동학[Pharmacokinetic, PK]을 평가하기 위해
● 방광내 엔포르투맙 베도틴의 면역원성을 평가하기 위해
● 완전 반응[Complete response, CR] 비율에 의해 측정된 방광내 엔포르투맙 베도틴의 항종양 활성을 평가하기 위해
● CR 지속 기간을 평가하기 위해
● 방광절제술 비율을 평가하기 위해
● 무진행 생존 기간[Progression-free survival, PFS]을 평가하기 위해
● 무방광절제술 생존 기간[Cystectomy-free survival, CFS]을 평가하기 위해
탐색
● 반응, 독성, 약력학, 약동학/약력학[Pharmacokinetic/pharmacodynamics, PK/PD] 관계 또는 엔포르투맙 베도틴에 대한 저항성과 관련하여 바이오마커를 평가하기 위해
● 대상이 보고한 경험 및 대상이 보고한 내약성을 평가하기 위해
6.2.2.3 시험 집단
선정 기준
1. 대상은 조직학적으로 확인된 (유두상 질환이 있거나 없는) 제자리 암종[Carcinoma in situ, CIS]을 동반한 비근침윤성 요로상피(이행 세포) 암종이 있어야 한다. 조직학적 확인은 시험 치료의 첫 투여 전 60일 이내에 이루어져야 한다.
2. 우세한 조직학적 구성 요소(>50%)는 요로상피(이행 세포) 암종이어야 한다. 순수한 변이 조직학은 제외한다.
3. 대상은 다음과 같이 정의된 고위험 바실러스 칼메트-게랭[Bacillus Calmette-Guerin, BCG]-무반응성 질환이 있어야 한다:
● 적절한 BCG 요법 완료 후 12개월 이내에 지속성 또는 재발성 CIS 단독 또는 재발성 Ta/T1(비침윤성 유두상 질환/종양이 상피하 연결 조직을 침윤함) 질환이 있는 경우.
적절한 BCG 요법은 다음 중 하나로 정의된다:
● 초기 유도 코스 6회 중 5회 + 3회 용량 유지 요법 중 적어도 2회
● 초기 유도 코스 6회 중 5회 + 제2 유도 코스 6회 중 적어도 2회
주: 전 세계적인 BCG 부족으로 인해 적절한 코스를 완료하거나 감소된 용량의 BCG 요법을 받을 수 없는 대상은 의료 모니터 요원과 협의한 후 등록할 수 있다.
4. 시험자의 견해에 따라 대상은 근치적 방광절제술에 비적격하거나 이를 거부해야 한다.
5. 모든 가시적인 유두상 Ta/T1 종양은 등록 전 60일 이내에 완전히 절제해야 한다. 잔존 순수 CIS는 허용된다.
● T1 종양이 있는 것으로 발견된 모든 대상은 시험 치료를 시작하기 전에 추가적인 경요도 방광 종양 절제술[Transurethral resection of bladder tumor, TURBT]을 거쳐야 한다. TURBT 병기 재결정은 미포함(종양이 없는) 고유근을 나타내야 한다.
6. 대상은 충분한 방광 기능 및 사전 투약되더라도 시험 약물 점적투여를 최소 1시간 동안 보유할 능력이 있어야 한다.
7. 연령 18세 이상.
8. 해당되는 경우 카르노프스키 규모를 사용하여 수행 상태를 변환하는 경우 동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG] 수행 상태 점수는 0, 1 또는 2점.
ECOG 수행 상태가 2점인 대상은 다음 기준을 추가로 충족해야 한다:
● 사구체 여과율[Glomerular filtration rate, GFR] ≥50 mL/분
● 뉴욕 심장 협회[New York Heart Association, NYHA] 클래스 III 심부전이 없을 수 있음
9. 다음 기준선 실험실 데이터:
● 절대호중구수[Absolute neutrophil count, ANC] ≥1,500/μL
● 헤모글로빈(Hgb) ≥10 g/dL
● 혈소판수 ≥100,000/μL
● 혈청 빌리루빈 ≤1.5 × 정상 상한치[Upper limit of normal, ULN] 또는 길버트 질환이 있는 대상의 경우 ≤3 × ULN
● 계산된 크레아티닌 청소율[Calculated creatinine clearance, CrCl] ≥30 mL/분(GFR도 크레아티닌 또는 CrCl 대신 사용될 수 있음). CrCl은 콕크로프트-가울트(Cockcroft-Gault) 방법 또는 신장 질환에서 식이조절[Modification of Diet in Renal Disease, MDRD] 공식을 사용하여 계산해야 함. ECOG 수행 상태가 2점인 대상은 GFR ≥50 mL/분이어야 함.
● 알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase, ALT] 및 아스파테이트 아미노전이효소[Aspartate aminotransferase, AST] ≤3 × ULN
● 국제 표준화 비율[International normalized ratio, INR] 또는 프로트롬빈 시간[Prothrombin time, PT], 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간[Activated partial thromboplastin time, aPTT] 또는 부분 트롬보플라스틴 시간[Partial thromboplastin time, PTT] ≤1.5 ULN, 단, 항응고제가 의도적으로 사용된 치료 범위 내에 PT 또는 aPTT가 있는 한 대상이 항응고제 요법을 받고 있지 않아야 함.
10. 예상 기대 수명 >2년.
11. 가임 여성 대상은 여성으로 출생한 임의의 자로서, 초경을 경험하고 외과적 불임(예를 들어, 자궁적출술, 양쪽 난관절제술, 양쪽 난소절제술)을 겪지 않았거나 폐경을 완료하지 않았다. 폐경은 다른 생물학적, 생리학적 또는 약리학적 원인의 부재하에 45세 초과의 사람에서 12개월의 무월경으로 임상적으로 정의된다. 가임 여성 대상은 다음 조건을 충족해야 한다:
● 시험 기간 동안 및 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 임신을 시도하지 않는 데 동의한다.
● 1일 차 전 3일 이내의 혈청 또는 소변 임신 검사(최소 민감도 25 mIU/mL 또는 베타 인간 융모 생식샘 자극호르몬[Beta human chorionic gonadotropin, β-hCG]의 균등 단위) 결과가 음성이어야 한다. 임신 상태 결과가 음성인 검증 문서 및 위양성 결과가 있는 여성 대상이 참여하기에 적격하다.
● 이성애적 활동이 있는 경우 스크리닝에서 시작하여 시험 기간 내내, 그리고 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 실패율이 1% 미만인 매우 효과적인 피임 방법을 일관되게 사용해야 한다.
● 여성 대상은 스크리닝에서 시작하여 시험 기간 내내, 그리고 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 모유 수유 또는 난자 기증을 하지 않는 것에 동의해야 한다.
12. 자녀의 아버지가 될 수 있는 남성 대상은 남성으로 출생한 임의의 자로서, 고환이 있고 외과적 불임(예를 들어, 정관절제술, 이후 시술이 효과적이었음을 입증하는 임상검사)을 겪지 않았다. 자녀의 아버지가 될 수 있는 남성 대상은 다음 조건을 충족해야 한다:
● 스크리닝에서 시작하여 시험 기간 내내, 그리고 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 정자를 기증해서는 안 된다. 남성 대상은 시험 치료로 인한 생식 기능 및 생식력에 대한 부정적인 위험에 대한 정보를 제공받는다. 남성 대상은 치료에 앞서 생식력 보존 및 정자 동결 보존에 대한 정보를 찾도록 조언을 받아야 한다.
● 스크리닝에서 시작하여 시험 기간 내내 계속해서, 그리고 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 실패율이 1% 미만인 매우 효과적인 피임 방법을 일관되게 사용해야 한다.
● 임신 또는 모유 수유 파트너(들)가 있는 남성 대상은 임신 지속 기간 동안 또는 파트너가 시험 기간 전체에 걸쳐 모유 수유를 하는 시간 동안, 및 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 정액에 대한 2차 노출을 방지하기 위해 2개의 피임 옵션 중 하나를 일관되게 사용해야 한다.
13. 대상은 서면 사전 동의를 제공해야 한다.
제외 기준
1. 근침윤성 요로상피 암종(즉, T2, T3, 또는 T4 질환) 또는 전이성 질환의 현재 또는 이전 병력.
2. 시험 치료 시작 전 3개월 이내에 수행된 컴퓨터 단층촬영[Computed tomography, CT] 또는 자기공명영상[Magnetic resonance imaging, MRI]에서 발견된 바와 같은 결절 또는 전이성 질환.
3. 시험 치료 시작 전 3개월 이내에 수행된 복부/골반의 조영제가 동반된 CT 또는 MRI 요로조영술에서 발견된 바와 같이 동반 상부 요로 상피암종.
4. 시험 치료 시작 전 6개월 이내에 시험자에 의해 평가된 바와 같이 전립선 요도의 이전 또는 동반 요로상피 암종이 있는 것으로 알려진 대상.
5. 스크리닝에서 종양 관련 수신증이 있는 대상(종양 이외의 원인으로 인해 수신증이 있는 대상은 시험자에 의해 확인되는 경우 허용됨).
6. 대상은 하기를 제외하고 시험 치료의 첫 투여 4주 내에 임의의 다른 전신 항암 요법(예를 들어, 화학요법, 생물학적 요법, 면역요법, 표적화 요법, 내분비 요법, 임상시험용 제제) 또는 시험 치료 시작 전 6주 내에 NMIBC의 치료를 위한 임의의 방광내 요법을 받음:
● 세포독성제(예를 들어, 미토마이신 C, 독소루비신 및 겜시타빈)는 시험 치료 시작 14 내지 60일 전에 허용된 TURBT 시술 직후에 단회 점적 투여되는 경우
7. 대상은 NMIBC에 대한 이전 요법과 관련된 이상 사례[Adverse event, AE]에 대해 2차적으로 진행 중인 증상(2등급 이상)이 있다.
8. 대상은 요로상피암에 대한 이전에 방광에 대한 임의의 방사선 요법을 받았다.
9. 시험 치료 시작 전 14일 이내에 전신(예를 들어, 경구 또는 정맥내) 항생제를 필요로 하는 활성 감염. (예를 들어, 요로 감염[Urinary tract infection, UTI] 또는 만성 폐쇄성 폐 질환의 방지용) 예방적 항생제를 받은 환자는 적격하다.
10. 방광내 투약 또는 방광내 외과적 조작을 용인할 수 없는 대상.
11. 시험 약물의 첫 투여 전 3년 이내에 다른 악성종양의 병력 또는 이전에 진단된 악성종양으로 인한 잔존 질환의 임의의 증거. 예외 사항은 무시 가능한 전이 또는 사망 위험(예를 들어, 5년 전체 생존기간[Overall survival, OS] ≥90%)을 갖는 악성종양, 예컨대 자궁경부의 CIS, 비흑색종 피부 암종, 유방의 관 CIS, 또는 I기 자궁암이다.
● 시험 진입 적어도 1년 전에 근치적 의도로(외과적으로 또는 방사선 요법으로) 치료된 전립선암의 병력(T2N0M0 이하 글리슨 점수 ≤7)은 허용 가능하다. 단, 대상이 전립선암이 없는 것으로 고려되고, 다음 기준이 충족되는 경우에 한한다:
(i). 근치적 전립선 절제술을 거친 대상은 >1년 및 스크리닝 시 검출 불가능한 전립선 특이적 항원[Prostate-specific antigen, PSA]을 가져야 한다.
(ii). 방사선을 받은 대상은 (>1개월 간격으로 측정된 적어도 3개의 값에 기반하여) >1년의 PSA 배가 시간 및 생화학적 재발에 대한 피닉스 기준을 충족하지 않는 총 PSA 값(즉, 최저치 초과 <2.0 ng/mL)을 가져야 한다.
12. 넥틴-4 표적화 요법 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE) 함유 제제에 대한 이전 노출.
13. 건선 또는 아토피 피부염과 같은 임의의 치료가 필요한 활동성 질환이 있는, 자가면역 또는 염증성 피부 장애가 있는 대상.
14. 진행 중인 2등급 이상의 감각 또는 운동 신경병증이 있는 대상.
15. 양성 B형 간염 표면 항원 및/또는 항B형간염 중심 항체가 있는 대상. 중합효소 연쇄 반응[Polymerase chain reaction, PCR] 검정 결과가 음성인 대상은 적절한 항바이러스 예방법과 함께 허용된다.
16. 활성 C형 간염 감염 또는 알려진 인간 면역결핍 바이러스[Human immunodeficiency virus, HIV] 감염. C형 간염 감염 치료를 받은 대상은 ≥12주의 지속된 바이러스 반응에 대한 문서가 있는 경우 허용된다. 현지 보건당국이 의무화하지 않는 한 HIV 검사가 필요하지 않다.
17. 알려진 활성 결핵.
18. 제어되지 않은 당뇨병이 있는 대상. 제어되지 않은 당뇨병은 이외에 달리 설명되지 않는 연관된 당뇨병 증상(다뇨증 또는 다음다갈증)과 함께 헤모글로빈 A1c[Hemoglobin A1c, HbA1c] ≥8% 또는 HbA1c 7% 내지 <8%로 정의된다.
19. 엔도포르맙 베도틴의 첫 투여 전 6개월 이내에 대뇌 혈관 사건(예를 들어, 뇌졸중 또는 일과성 허혈 발작), 불안정 협심증, 심근경색, 또는 NYHA 클래스 III~IV와 일치하는 심장 증상의 기록된 병력.
20. 사전 동의 시점부터 시험 약물의 최종 투여 후 적어도 6개월까지 모유 수유, 임신 또는 임신을 계획하고 있는 대상.
21. 엔포르투맙 베도틴 또는 엔포르투맙 베도틴의 약물 제제에 함유된 임의의 부형제(예를 들어, 히스티딘, 트레할로스 이수화물, 및 폴리소르베이트 20)에 대해 중증(≥3등급)의 알려진 과민성.
22. 활성 각막염 또는 각막 궤양이 있는 대상. 표층 점상 각막염이 있는 대상은 시험자의 견해에 따라 장애가 적절히 치료되고 있다면 허용된다.
23. 시험자의 견해에 따라 대상이 계획된 치료와 추적 관찰을 받거나 용인할 수 있는 능력을 손상시킬 수 있는 기타 중증 기저 의학적 병태.
6.2.2.4 계획된 대상 수
대략 58명의 대상이 이 시험에 등록된다. 이는 용량 증량에서 평가될 최대 대략 18명의 대상 및 용량 확장에서 평가될 대략 40명의 대상(각각 대략 20명 대상의 최대 2개 코호트까지)을 포함한다.
6.2.2.5 시험 설계
이는 NMIBC가 있는 성인에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK 및 항종양 활성을 평가하기 위해 설계된 1상, 공개 라벨, 다기관, 용량 증량 및 용량 확장 시험이다.
이 시험은 다음 두 부분으로 수행된다:
용량 증량: 대략 18명의 대상을 치료하여 MTD 및/또는 권장 용량을 확인하기 위해 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성 및 전신 노출을 평가한다.
용량 확장: MTD 또는 권장 용량으로 대략 40명의 대상(각각 대략 20명의 대상의 최대 2개 코호트)을 치료하여 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, PK, 및 항종양 활성을 추가로 특성규명한다.
용량 증량 및 용량 확장에서는 (유두상 질환이 있거나 없는) CIS를 동반한 BCG-무반응성 NMIBC가 있는 성인 대상이 등록한다. 모든 대상은 시험 중인 임상시험용 제제인 엔포르투맙 베도틴을 방광내 투여를 통해 투여받는다. 시험 중 치료는 유도 및 유지 단계에서 발생하고, 대상은 유지 단계 완료 후 추적관찰 기간에 들어간다.
유도 단계 동안, 대상은 6주간 주당 일회[q1wk] 엔포르투맙 베도틴을 방광내 점적투여받는다. 유도 단계 완료 후 6 내지 8주에, 대상은 첫 시험 중 반응 평가를 받고, 그 후 유지 단계에 들어간다. 유지 단계 동안, 대상은 총 9회 투여 동안 월당 일회 엔포르투맙 베도틴을 방광내로 투여받는다.
유지 단계 완료 후, 대상은 시험의 추적관찰 단계에 들어간다. 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통한 종양 반응 평가는 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 것까지 발생한다. 질환 지속, 재발, 진행 또는 후속 항암 요법의 개시로 인한 시험 치료의 중단 후, 대상은 생존 추적관찰에 들어가고, 생존 및 후속 항암 요법 데이터는 등록 후 최대 5년 동안 추적관찰 실패, 동의 철회, 사망 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 중 먼저 발생하는 것까지 6개월(±2주)마다 수집된다.
방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려될 것이다.
첫 시험 중 3개월 평가를 포함하는 임의의 시험 중 평가에서 CIS가 있거나 없는 고등급 T1 질환 또는 병기가 진행된 것으로 밝혀진 대상은 시험 치료에서 중단된다. 첫 시험 중 3개월 평가에서 CIS 지속 또는 재발성 고등급 Ta 질환이 있는 대상은 시험 치료를 계속하는 것에 대해 재동의하고 6개월에 다시 평가를 받은 후 요법을 계속할 수 있다. 6개월 평가부터 시작하여 지속되거나 재발하는 고위험 NMIBC 또는 질환 진행이 있는 모든 대상은 시험 치료를 중단한다. 보다 낮은 등급의 종양의 출현, 존재 또는 지속은 재발로 고려하지 않는다. 보다 낮은 등급의 종양만이 있는 대상은 절제 및 조직학 확인 후 치료를 계속해야 한다.
질환의 지속, 재발 또는 진행 이외의 사유로 인하여 시험 치료를 중단한 대상은 시험의 추적관찰 단계에 남는다.
용량 증량
전신 엔포르투맙 베도틴은 현재 PD-1 또는 PD-L1 억제제 및 백금 함유 화학요법을 이전에 투여받은 국소 진행성 또는 전이성 요로상피암 환자의 치료를 위해 1.25 ㎎/㎏의 용량(최대 125 ㎎까지의 용량)으로 미국에서 승인되었다. 전신 엔포르투맙 베도틴의 안전성 프로파일은 잘 확립되어 있으며 복수의 임상시험에서 이 용량 수준에서 평가되고 있다. 이 확립된 전신 용량 및 이의 안전성 프로파일을 고려하여, 이 시험은 125 mg에서 시작하여 방광내로 투여되는 엔포르투맙 베도틴을 평가한다.
시험의 용량 증량 부분은 25 mL 부피의 점적 및 최대 90분 체류 시간(또는 대상의 용인 체류 시간, 실제 체류 시간은 적절한 전자 증례 보고서 양식에 기록될 것임)으로 4개의 계획된 용량 수준(125, 250, 500, 및 750 mg)에서 엔포르투맙 베도틴의 증량되는 농도를 평가한다. 최대 대략 18명의 대상이 등록되어 안전성, 내약성, 전신 생체이용률을 평가하고, 방광내 엔포르투맙 베도틴의 MTD 및/또는 권장 용량을 확인한다.
용량 증량은 변형된 독성 확률 간격[Modified toxicity probability interval, mTPI] 방법을 사용하여 수행한다. 등록은 코호트별로 발생한다.
엔포르투맙 베도틴은 상기 표에 나타낸 계획된 용량으로 유도 단계 동안 6주간 q1wk로 그리고 유지 단계 동안 9회 투여 동안 월간 일회로 방광내 투여된다. 임상시험의뢰자 및/또는 안전 모니터링 위원회[Safety monitoring committee, SMC]는 또한 더 낮은 및/또는 중간 용량 수준의 조사를 권장할 수 있다. MTD에 도달하지 않는 경우, 750 mg 초과의 용량 수준을 탐색할 수 있다.
용량 제한 독성
용량 제한 독성[Dose-Limiting Toxicity, DLT]은 시험의 용량 증량 부분 동안 평가한다. DLT 평가 기간은 유도 시작부터 모든 6회의 유도 투여가 완료되기까지의 시간 +1주이다. 대상은 DLT를 경험했거나 최소 5회의 엔포르투맙 베도틴의 유도 투여를 투여받은 경우 DLT 평가 가능[DLT-evaluable, DE] 대상으로 고려될 것이다.
DLT는 방광내 엔포르투맙 베도틴을 사용한 치료와 관련된 것으로 시험자에 의해 평가되는 경우 다음 중 임의의 것으로 정의된다. 등급 분류는 NCI CTCAE, 버전 5.0에 따라 결정될 것이다:
● 혈뇨, 당뇨, 요폐, 빈뇨/절박뇨 또는 방광연축과 같은 요로의 3등급 이상의 치료 유발 AE 발생
● 사타구니 또는 회음부의 3등급 이상의 국소 피부 또는 점막 반응
● 시험자 평가에 따라 시험 약물과 관련된 혈전 폐색을 초래하는 상당한 혈뇨
● 다음을 포함하는 3등급 이상의 혈액학적 독성(기준선에서 ≥2등급 증가한 경우):
o 호중구감소성 발열
- 3등급 열성 호중구감소증은 단회 온도 >38.3 ℃ (101 ℉) 또는 1시간 넘게 지속 온도 ≥38 ℃ (100.4 ℉)와 함께 ANC <1,000/mm3로 정의됨
- 4등급 열성 호중구감소증은 생명을 위협하는 결과 및 긴급한 중재가 권고되는 단회 온도 >38.3 ℃(101 ℉) 또는 1시간 넘게 지속 온도 ≥38 ℃ (100.4 ℉)와 함께 ANC <1,000/mm3로 정의됨
o 4등급 호중구감소증 또는 >7일 지속되는 혈소판감소증
o 3등급 출혈을 동반한 혈소판감소증
● 임의의 기타 3등급 이상 비혈액학적 AE, 단, 기저 의학적 병태, 병발성 질병, 또는 악성종양에 의해 설명되지 않아야 함
● >14일 지속되는 미해결 치료 관련 2등급 AE
● 기저 질환이나 외인성 원인으로 인한 것이 불분명한 임의의 사망
● Hy 법칙 증례
다음과 같은 비혈액학적 독성은 DLT로 고려하지 않는다:
● 3등급 오심/구토 또는 설사 <72시간, 적절한 항구토 및 기타 지지 요법
● 3등급 피로 <1주
● <72시간 지속되는 ≥3등급 전해질 또는 기타 비혈액학적 실험실 이상, 임상적으로 복잡하지 않고 자발적으로 해결되거나 통상적인 의학 중재에 반응함
● 췌장염의 증상 또는 임상 소견[Manifestation] 과 연관되지 않은 ≥3등급 아밀라제 또는 리파제
용량 확장
방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK, 및 항종양 활성을 추가로 특성규명하기 위해, 대략 40명의 추가 대상이 최대 2개의 용량 확장 코호트(코호트당 대략 20명의 대상)에 등록된다. MTD가 시험의 용량 증량 부분에서 확인되는 경우, 상응하는 용량 수준은 용량 확장에서 평가한다. 임상시험의뢰자는 SMC와 협의하여 MTD에 도달하지 않았거나 상이한 용량 수준이 추가 평가를 보증하는 경우 용량 확장에서 1개 초과의 용량 수준을 평가할 수도 있다. 이들 용량 확장 코호트의 개방은 용량 증량 동안 시연된 누적 안전성 및 활성에 기반하여 SMC와 협의하여 임상시험의뢰자에 의해 결정된다.
안전성 모니터링 위원회
시험기관 시험자(들) 및 임상시험의뢰자 측 담당자(시험 의료 모니터 요원, 약물 안전 담당자, 임상 과학자 및 생물 통계학자 포함)로 구성된 SMC는 대상 안전성을 모니터링하고 용량 증량 및 용량 확장 전반에 걸쳐 투여 권장사항을 결정할 것이다. SMC는 주어진 용량에서 안전성의 추가 평가(즉, 주어진 용량에서 추가 대상을 등록) 또는 계획된 용량 수준보다 낮거나 중간 수준인 용량 수준의 조사를 권장할 수 있다. SMC는 또한 누적 안전성 데이터를 검토하여 DLT 윈도우를 넘어 누적 노출로 인해 나타날 수 있는 안전성 우려를 확인한다. SMC는 또한 항종양 활성 데이터를 검토하여 유익-위해 프로파일이 용량 또는 코호트의 지속적인 시험 또는 시험 중단을 뒷받침하는지 여부를 결정할 수 있다. SMC는 권장사항을 제공하고 임상시험의뢰자가 최종 결정을 내린다. 추가적인 자세한 내용은 SMC 헌장을 참조한다.
6.2.2.6 임상시험용 의약품, 용량 및 투여 방식
엔포르투맙 베도틴은 유도 단계 중 6주간 q1wk로 그리고 유지 단계 동안 9회 투여 동안 월당 일회 방광내 투여된다.
6.2.2.7 치료 지속 기간
유도 단계 동안, 대상은 6주간 q1wk로 엔포르투맙 베도틴을 방광내 점적투여받는다. 유도 단계 완료 후 6 내지 8주에, 대상은 첫 시험 중 반응 평가를 받고, 그 후 유지 단계에 들어간다. 유지 단계 동안, 대상은 총 9회 투여 동안 월당 일회 엔포르투맙 베도틴을 방광내로 투여받는다.
6.2.2.8 112B반응/효능 평가
시험 중 종양 반응 평가는 스크리닝 시 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통해 발생하고 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 후 6개월마다 평가된다.
방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
연간 상부 요로 영상화는 대상이 시험에 참여하는 동안 임상적으로 권고된 바와 같이 수행된다.
방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려된다.
대상은 다음의 소견을 모두 가지고 있을 때 CR이 있는 것으로 고려된다:
1. 방광경 검사: 방광의 정상적인 외양. 방광경 검사에서 방광의 외양이 비정상적인 경우, 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 Ta, 악성 잠재성의 임의 등급의 유두상 요로상피 신생물, 또는 임의의 등급의 유두종을 보여야 한다. 무작위 방광 생검을 수행하면 이러한 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 질환을 보여야 한다.
2. 요세포검사: 음성.
a. 확정적이지 않은 요세포검사는 임상시험계획에 따라 평가해야 함
b. 양성인 요세포검사 결과는 방광경 검사 ± 생검 및 영상화에 의해 임상적으로 추가로 평가해야 함
3. 영상화(수행된 경우): 정상 또는 비정상으로 발견된 경우 소견은 방광의 CR을 뒷받침해야 함.
시험 치료의 방광내 투여로 인해, 암이 상부 요로에서 발견되거나 전립선 요도 및 무작위 방광 생검 결과가 음성인 경우 악성인 요세포검사 결과와 함께 방광경 검사 결과가 음성인 경우, 대상은 CR이 있는 것으로 고려한다.
지속성 질환은 유두상 질환이 있거나 없는 CIS 질환(고등급 Ta/T1)의 존재로서 정의한다.
재발은 요법 시작 후 고등급 질환(고등급 Ta, T1, 또는 CIS)의 재출현으로 정의한다. 재발은 생검으로 확인해야 한다.
진행은 다음 중 임의의 하나의 발병으로 정의한다: T1 질환(고유판 침윤), ≥T2 질환(근육 침윤), 림프절(N1+), 원격 전이(M1), 또는 낮은 등급에서 높은 등급으로의 증가.
지속, 출현 또는 저등급 질환의 존재는 재발로 고려하지 않는다. 재발성 저급 유두상 질환이 있는 대상은 절제를 거친 후 시험을 계속할 수 있다.
6.2.2.9 약동학 및 면역원성 평가
PK 및 항치료성 항체[Antitherapeutic antibody, ATA] 분석을 위한 혈액 샘플 및 PK 분석을 위한 소변 샘플을 임상시험계획에 정의된 시점에 채취한다. 추정될 엔포르투맙 베도틴에 대한 용량-관련 혈액 PK 매개변수는 농도-시간 곡선하 면적[Area under the concentration-time curve, AUC], 최대 농도[Maximum concentration, Cmax], 최대 농도까지 시간[Time to maximum concentration, Tmax], 겉보기 최종 반감기[Terminal half-life, t1/2], 및 최저 농도[Trough concentratio, Ctrough]를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가 분석물은 필요에 따라 평가한다.
6.2.2.10 약력학 및 바이오마커 평가
종양 조직 내 바이오마커
가능한 경우 등록 후 12개월 이내에 채취된 보관 종양 조직이 모든 대상에 요구된다(가장 최근에 이용 가능한 조직을 사용해야 함). 새로 잘라낸 슬라이드만 제공할 수 있는 경우 최소 10 내지 15개의 섹션이 필요하다(10개 미만인 경우 임상시험의뢰자에 문의). 생검은 12개월 차 평가에서 필요하며 다른 모든 평가에서 임상적으로 권고된 대로 수행해야 한다. 치료 중에 채취된 생검에서의 조직은 바이오마커 평가를 위해 사용한다.
치료 전 종양의 생물학적 특성과 대상 결과 사이의 관계를 이해하기 위해, TURBT에서의 조직을 검사(종양 생검)한다. 생검은 종양에서 특정 약력학, 예측적 및 예후적 바이오마커에 대해 평가한다. 조직이 등록 후 채취된 표준치료 생검에서 이용 가능한 경우, 이를 또한 반응의 바이오마커 및 치료의 작용 기전 및 저항성을 추가로 확인하기 위해 검사한다.
종양 조직에서의 바이오마커 평가는 면역조직화학 및 차세대 서열분석에 의한 넥틴-4 및 PD-L1 발현의 중앙 평가, 종양 하위유형 분류, 종양 미세환경 분석, 및 암에서 통상적으로 변경되는 유전자 또는 RNA에서의 체세포 돌연변이 또는 변경의 프로파일링을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
혈액 및/또는 소변 내 바이오마커
종양 세포에 대한 엔포르투맙 베도틴의 일차 효과는 국소, 종양 연관 및 말초 면역세포의 활성화 상태의 변화를 초래할 수 있다. 혈액 및 소변 샘플에서의 바이오마커 평가는 순환/무세포 종양 DNA, 가용성[Soluble] 넥틴-4의 효소 결합 면역흡착 검정[Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA] 평가, 소변 바이오마커의 면역검정, 및 면역 세포 서브세트 및 시토킨의 존재비를 포함하는 면역 기능의 마커를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
6.2.2.11 안전성 평가
안전성 평가에는 중대한 이상 사례[Serious adverse event, SAE]를 포함하는 AE의 감시 및 기록, 병용약물의 기록, 임상시험계획에 명시된 신체 검사 소견 및 실험실 검사의 측정치가 포함된다.
6.2.2.12 기타 평가
대상의 관점은 치료의 경험 및 내약성에 관한 주제를 다루는 45 내지 60분 동안 지속되는 전화 인터뷰를 통해 정성적으로 평가한다. 이러한 인터뷰 중 탐색되는 주제와 질문에 대한 추가적인 자세한 정보는 대상 인터뷰 가이드 문서에 기재되어 있다. 인터뷰는 다음 시점에 용량 증량 및 용량 확장 동안 수행된다: 유도 단계의 종료 시, 유지 단계 동안 5회 투여 완료 시, 유지 단계의 종료 시.
6.2.2.13 통계적 방법
MTD의 용량 증량 및 확인은 mTPI 방법을 사용하여 수행한다. 용량 증량의 말기 시, DLT의 확률에 대한 모델 기반 추정치는 95% 신용구간과 함께 제시한다. DE 분석 세트는 DLT를 경험하거나 또는 엔포르투맙 베도틴의 적어도 5회의 유도 투여를 투여받은 용량 증량에서 모든 치료된 대상을 포함한다. DE 분석 세트는 MTD의 결정을 위한 1차 집단이다.
안전성 및 항종양 활성 평가변수는 임의의 양의 시험 약물로 치료된 모든 대상을 포함하는 모든 치료된 대상 분석 세트에 기반한 기술통계(Descriptive statistic)를 사용하여 요약한다. 시험 중 임의의 시점의 CR 비율, 3, 6, 12, 18 및 24개월에서의 CR 비율 및 방광절제술 비율은 정확한 95% 양측 신뢰구간[Confidence interval, CI]과 함께 요약된다. CR, PFS 및 무방광절제술 생존 기간의 지속 기간은 카플란 마이어(Kaplan-Meier) 방법을 사용하여 추정한다.
확장 코호트에 대한 공식 가설 검사는 계획되어 있지 않다. 관찰된 CR 비율이 30% 내지 50% 범위라고 가정하고, 코호트당 20명의 대상으로 95% 및 80%의 정확한 CI를 하기 표 11에 요약하였다.
CR 비율 95% 정확한 CI(n=20) 80% 정확한 CI(n=20)
30% (12%, 54%) (17%, 47%)
40% (19%, 64%) (25%, 57%)
50% (27%, 73%) (34%, 66%)
CI=신뢰구간[Confidence interval]; CR=완전 반응[Complete response]
6.2.3 목적
이 시험은 NMIBC가 있는 대상에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK 및 항종양 활성을 평가한다. 시험에 대한 구체적인 목적 및 상응하는 평가변수를 하기 표 12에 요약하였다.
1차 목적 상응하는 1차 평가변수
NMIBC가 있는 대상에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성과 내약성을 평가하기 위해NMIBC가 있는 대상에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 MTD 또는 권장 용량을 확인하기 위해 AE의 유형, 발생률, 중증도, 중대성 및 관련성
실험실 비정상성 유형, 발생률 및 중증도
용량 수준별 DLT 발생률 및 누적 안전성
2차 목적 상응하는 2차 평가변수
방광내 엔포르투맙 비도틴의 PK를 평가하기 위해
방광내 엔포르투맙 비도틴의 면역원성을 평가하기 위해
CR 비율에 의해 측정된 방광내 엔포르투맙 베도틴의 항종양 활성을 평가하기 위해
CR 지속 기간을 평가하기 위해
방광절제술 비율을 평가하기 위해
무진행 생존 기간을 평가하기 위해
무방광절제술 생존 기간을 평가하기 위해		 AUC, Cmax, Tmax, t1/2, Ctrough를 포함하는 선택된 PK 매개변수의 추정치
ATA 발생률
시험 중 임의의 시점의 CR 비율 및 3, 6, 12, 18 및 24개월에서의 CR 비율
CR 지속 기간
방광절제술 비율
무진행 생존 기간
무방광절제술 생존 기간
탐색적 목적 상응하는 탐색적 평가변수
반응, 독성, 약력학, PK/PD 관계 또는 엔포르투맙 비도틴에 대한 저항성과 관련하여 바이오마커를 평가하기 위해
대상이 보고한 경험 및 대상이 보고한 내약성을 평가하기 위해		 약력학 측정치 및 PK, 반응, 독성 및 저항성 평가의 상관 분석
넥틴-4 및 PD-L1 발현 수준 종양 세포를 임상 활성의 탐색적 예측 바이오마커로서 평가
무세포 종양 DNA, 가용성[Soluble] 넥틴-4, 시토킨의 수준을 포함하나 이에 제한되지 않는 엔포르투맙 베도틴 매개 약력학적 효과의 바이오마커
대상 인터뷰에 의해 평가된 대상 경험
AE=이상 사례[Adverse event]; ATA=항치료성 항체[Antitherapeutic antibody]; AUC=농도-시간 곡선하 면적[Area under the concentration-time curve]; Cmax=최대 농도[Maximum concentration]; CR=완전 반응[Complete response]; Ctrough=최저 농도[Trough concentration]; DLT=용량 제한 독성[Dose-limiting toxicity]; MTD=최대허용용량[Maximum tolerated dose]; NMIBC=비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer]; PD-L1=예정사 리간드 1[Programmed death-ligand 1]; PK=약동학[Pharmacokinetic]; PK/PD=약동학/약력학[Pharmacokinetic/pharmacodynamic]; Tmax=최대 농도가 발생하는 시간[Time at which the maximum concentration occurs]; t1/2=반감기[Half life]
6.2.4 임상시험계획
6.2.4.1 시험 설계 요약
이는 NMIBC가 있는 성인에서 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK 및 항종양 활성을 평가하기 위해 설계된 1상, 공개 라벨, 다기관, 용량 증량 및 용량 확장 시험이다.
이 시험은 다음 두 부분으로 수행된다:
● 용량 증량: 대략 18명의 대상을 치료하여 최대허용용량[MTD] 및/또는 권장 용량을 확인하기 위해 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성 및 전신 노출을 평가한다.
● 용량 확장: MTD 또는 권장 용량으로 대략 40명의 대상(각각 대략 20명의 대상의 최대 2개 코호트)을 치료하여 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, PK, 및 항종양 활성을 추가로 특성규명한다.
용량 증량 및 용량 확장에서는 (유두상 질환이 있거나 없는) CIS를 동반한 BCG-무반응성 NMIBC가 있는 성인 대상이 등록한다. 모든 대상은 시험 중인 임상시험용 제제인 엔포르투맙 베도틴을 방광내 투여를 통해 투여받는다. 시험 중 치료는 유도 및 유지 단계에서 발생하고, 대상은 유지 단계 완료 후 추적관찰 기간에 들어간다.
유도 단계 동안, 대상은 6주간 주당 일회[q1wk] 엔포르투맙 베도틴을 방광내 점적투여받는다. 유도 단계 완료 후 6 내지 8주에, 대상은 첫 시험 중 반응 평가를 받고, 그 후 유지 단계에 들어간다. 유지 단계 동안, 대상은 총 9회 투여 동안 월당 일회 엔포르투맙 베도틴을 방광내로 투여받는다.
유지 단계 완료 후, 대상은 시험의 추적관찰 단계에 들어간다. 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통한 종양 반응 평가는 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 것까지 발생한다. 질환 지속, 재발, 진행 또는 후속 항암 요법의 개시로 인한 시험 치료의 중단 후, 대상은 생존 추적관찰에 들어가고, 생존 및 후속 항암 요법 데이터를 등록 후 최대 5년 동안 추적관찰 실패, 동의 철회, 사망 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 중 먼저 발생하는 것까지 6개월(±2주)마다 수집한다.
방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소
생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려된다.
첫 시험 중 3개월 평가를 포함하는 임의의 시험 중 평가에서 CIS가 있거나 없는 고등급 T1 질환 또는 병기가 진행된 것으로 밝혀진 대상은 시험 치료에서 중단된다. 첫 시험 중 3개월 평가에서 CIS 지속 또는 재발성 고등급 Ta 질환이 있는 대상은 시험 치료를 계속하는 것에 대해 재동의하고 6개월에 다시 평가를 받은 후 요법을 계속할 수 있다. 6개월 평가부터 시작하여 지속되거나 재발하는 고위험 NMIBC 또는 질환 진행이 있는 모든 대상은 시험 치료를 중단한다. 보다 낮은 등급의 종양의 출현, 존재 또는 지속은 재발될 것으로 고려하지 않는다. 보다 낮은 등급의 종양만이 있는 대상은 절제 및 조직학 확인 후 치료를 계속해야 한다.
질환의 지속, 재발 또는 진행 이외의 사유로 인하여 시험 치료를 중단한 대상은 시험의 추적관찰 단계에 남는다. 도 7은 전체 시험 설계를 나타낸다.
시험기관 시험자(들) 및 임상시험의뢰자 측 담당자(시험 의료 모니터 요원, 약물 안전 담당자, 임상 과학자 및 생물 통계학자 포함)로 구성된 안전성 모니터링 위원회[SMC]는 대상 안전성을 모니터링하고 용량 증량 및 용량 확장 전반에 걸쳐 투약 권장사항을 결정할 것이다. SMC는 주어진 용량에서 안전성의 추가 평가(즉, 주어진 용량에서 추가 대상을 등록하는 것) 또는 계획된 용량 수준보다 낮거나 중간 수준인 용량 수준의 조사를 추천할 수 있다. SMC는 또한 누적 안전성 데이터를 검토하여 용량 제한 독성[DLT] 윈도우를 넘어 누적 노출로 인해 나타날 수 있는 안전성 우려를 확인한다. SMC는 또한 항종양 활성 데이터를 검토하여 유익-위해 프로파일이 용량 또는 코호트의 지속적인 시험 또는 시험 중단을 뒷받침하는지 여부를 결정할 수 있다. SMC는 권장사항을 제공하고 임상시험의뢰자가 최종 결정을 내릴 것이다. 추가적인 자세한 내용은 SMC 헌장을 참조한다.
(i) 용량 증량 코호트
대략 18명의 대상이 용량 증량에 등록된다.
용량 증량은 안전성 및 내약성을 평가하고 방광내 엔포르투맙 베도틴의 MTD 및/또는 권장 용량을 확인하기 위해 변형된 독성 확률 간격[mTPI] 방법(문헌[Ji 2010])을 사용하여 수행한다. 안전성, PK, 약력학, 바이오마커 분석 및 예비 항종양 활성을 사용하여 권장 용량 및 일정을 결정한다.
mTPI 방법은 각각의 용량 수준의 독성 비율과 표적 DLT 비율 사이의 상대적 거리를 반영하는 3개 간격의 사후 확률을 계산하기 위해 베이지안(Bayesian) 모델을 사용한다. 5% 마진이 있는 25%의 표적 DLT 비율에 대해 투여 결정 규칙을 결정한다. 3개 간격은 (0%, 20%), (20%, 30%), 및 (30%, 100%)이고, 상응하는 투여 결정 규칙은 다음과 같다
1. 현재 용량 DLT 비율이 <20%일 것 같으면 증량.
2. 현재 용량 DLT 비율이 20% 내지 30% 사이일 것 같으면 유지.
3. 현재 용량 DLT 비율이 >30%일 것 같으면 감량.
용량 확인 결정을 표 13에 나타낸다. 'E'는 용량 증량을 나타내고, 'S'는 동일한 용량으로 유지를 나타내고, 'D'는 용량 감량을 나타낸다. 결정 'DU'는 현재 용량 수준이 높은 독성으로 인해 허용되지 않음을 의미한다. 용량은 DLT 비율이 25% 초과인 사후 확률이 95% 초과인 경우 허용될 수 없는 독성을 갖는 것으로 정의한다.
D=다음 더 낮은 용량으로 감량[De-escalate to the next lower dose]; DLT=용량 제한 독성[Dose-limiting toxicity]; DU=현재 용량은 허용할 수 없을 정도로 독성이 있음[Current dose is unacceptably toxic]; E=다음 더 높은 용량으로 증량[Escalate to the next higher dose]; mTPI=변형된 독성 확률 간격[Modified toxicity probability interval]; S=현재 용량에서 유지[Stay at the current dose].
등록은 코호트별로 발생한다. 용량 증량 및 후속 코호트 크기(최소 2명의 대상)에 대한 결정은 각 코호트 완료 후 SMC와 협의하여 임상시험의뢰자에 의해 이루어진다. 현재 코호트의 대상은 다음 코호트가 등록되기 전에 DLT 기간의 전체 기간 동안 관찰되어야 한다. 예방조치로서, 시험에서 첫 2명의 대상의 경우, 다음 대상이 투여받을 수 있게 되기 전에 각각의 대상이 시험 약물의 첫 투여를 투여받은 후, 72시간의 관찰 기간이 있다. 용량 수준 1 초과의 용량에서, 첫 대상이 그 용량 수준에서 후속 대상을 투여하기 전에 방광내 엔포르투맙 베도틴의 첫 투여를 투여받은 후 72시간 관찰 기간이 필요하다. DLT에 대해 평가 가능하지 않은 것으로 고려되는 대상은 교체된다. 용량 증량이 중단되기 전에 최소 6명의 DLT 평가 가능[DE] 대상이 추정된 MTD에서 관찰된다. MTD는 모든 평가된 용량에 걸친 모든 대상으로부터의 데이터에 기반하여 추정된다. MTD에 도달하지 않는 경우, 안전성, PK, 약력학, 및 바이오마커 데이터뿐만 아니라 예비 항종양 활성을 사용하여 권장 용량을 결정한다.
더 낮은 또는 중간 용량 수준으로의 감량은 임상시험의뢰자가 SMC와 협의하여 임의의 시점에 수행한다.
시험의 용량 증량 부분은 25 mL 부피의 점적 및 최대 90분 체류 시간(또는 대상의 용인 체류 시간, 실제 체류 시간은 적절한 전자 증례 보고서 양식[Electronic case report form, eCRF]에 기록한다)으로 4개의 계획된 용량 수준(125, 250, 500, 및 750 mg, 표 3 참조)에서 엔포르투맙 베도틴의 증량되는 농도를 평가한다. 최대 대략 18명의 대상이 시험의 용량 증량 부분에 등록된다. 엔포르투맙 베도틴은 유도 단계 중 표 14에 나타낸 계획된 용량으로 6주간 q1wk로 그리고 유지 단계 동안 9회 투여 동안 월당 일회로 방광내 투여된다. 임상시험의뢰자 및/또는 안전 모니터링 위원회[SMC]는 또한 더 낮은 및/또는 중간 용량 수준의 조사를 권장할 수 있다. MTD에 도달하지 않는 경우, 750 mg 초과의 용량 수준을 탐색한다.
용량 증량 계획
용량 수준a 용량(mg)
1 125
2 250
3 500
4 750
q1wk=주당 일회[Once a week]; SMC=안전성 모니터링 위원회[Safety monitoring committee]; 투여 빈도: 유도: 6주간 q1wk; 유지: 9회 투여 동안 월당 일회; 점적 25 mL 부피.
a SMC는 새로 발견되는 임상 데이터를 기반으로 더 낮거나 중간 용량 수준의 조사를 권장할 수 있다.
(ii) 용량 확장 코호트
방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK, 및 항종양 활성을 추가로 특성규명하기 위해, 대략 40명의 추가 대상이 최대 2개의 용량 확장 코호트(코호트당 대략 20명의 대상)에 등록된다. MTD가 시험의 용량 증량 부분에서 확인되는 경우, 상응하는 용량 수준은 용량 확장에서 평가한다. 임상시험의뢰자는 SMC와 협의하여 MTD에 도달하지 않았거나 상이한 용량 수준이 추가 평가를 보증하는 경우 용량 확장에서 1개 초과의 용량 수준을 평가할 수도 있다. 이들 용량 확장 코호트의 개방은 용량 증량 동안 시연된 누적 안전성 및 활성에 기반하여 SMC와 협의하여 임상시험의뢰자에 의해 결정된다.
(iii) 치료 지속 기간
유도 단계 동안, 대상은 6주간 q1wk로 엔포르투맙 베도틴을 방광내 점적투여받는다. 유도 단계 완료 후 6 내지 8주에, 대상은 첫 시험 중 반응 평가를 받고, 그 후 유지 단계에 들어간다.유지 단계 동안, 대상은 총 9회 투여 동안 월당 일회 엔포르투맙 베도틴을 방광내로 투여받는다.
(iv) 용량 제한 독성
DLT는 시험의 용량 증량 부분 동안 평가된다. DLT 평가 기간은 유도 시작부터 모든 6회의 유도 투여가 완료되기까지의 시간 +1주이다. 대상은 DLT를 경험했거나 최소 5회의 엔포르투맙 베도틴의 유도 투여를 투여받은 경우 DE 대상으로 고려된다.
DLT는 방광내 엔포르투맙 베도틴을 사용한 치료와 관련된 것으로 시험자에 의해 평가되는 경우 다음 중 임의의 것으로 정의된다. 국립 암 연구소 이상 사례 공통 용어 기준[National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events, NCI CTCAE] 버전 5.0에 따라 등급을 분류한다.
● 혈뇨, 당뇨, 요폐, 빈뇨/절박뇨 또는 방광연축과 같은 요로의 3등급 이상의 치료 유발 AE 발생
● 사타구니 또는 회음부의 3등급 이상의 국소 피부 또는 점막 반응
● 시험자 평가에 따라 시험 약물과 관련된 혈전 폐색을 초래하는 상당한 혈뇨
● 다음을 포함하는 3등급 이상의 혈액학적 독성(기준선에서 ≥2등급 증가한 경우):
○ 호중구감소성 발열
● - 3등급 발열성 호중구감소증은 절대호중구수[ANC]로 정의
● <1,000/mm3, 단회 온도 >38.3 ℃ (101 ℉) 또는 1시간 넘게 지속 온도 38 ℃(100.4 ℉)
● - 4등급 열성 호중구감소증은 생명을 위협하는 결과 및 긴급한 중재가 권고되는 단회 온도 >38.3 ℃ (101 ℉) 또는 1시간 넘게 지속 온도 38 ℃(100.4 ℉)와 함께 ANC <1,000/mm3로 정의됨
○ 4등급 호중구감소증 또는 >7일 지속되는 혈소판감소증
○ 3등급 출혈을 동반한 혈소판감소증
● 임의의 기타 3등급 이상 비혈액학적 AE, 단, 기저 의학적 병태, 병발성 질병, 또는 악성종양에 의해 설명되지 않아야 함
● >14일 지속되는 미해결 치료 관련 2등급 AE
● 기저 질환이나 외인성 원인으로 인한 것이 불분명한 임의의 사망
● Hy 법칙 증례
다음과 같은 비혈액학적 독성은 DLT로 고려하지 않는다:
● 3등급 오심/구토 또는 설사 <72시간, 적절한 항구토 및 기타 지지 요법
● 3등급 피로 <1주
● <72시간 지속되는 ≥3등급 전해질 또는 지속되는 기타 비혈액학적 실험실 이상,
● 임상적으로 복잡하지 않고 자발적으로 해결되거나 통상적인 의학 중재에 반응함
● 췌장염의 증상 또는 임상 소견[Manifestation]과 연관되지 않은 ≥3등급 아밀라제 또는 리파제
(v) 중단 기준
(a) 코호트 수준에서 등록 일시 중지
사망이 임상시험의뢰자에 의해 엔포르투맙 베도틴과 관련이 있는 것으로 고려되는 경우, 등록은 해당 용량 및 모든 더 높은 용량에서 다음까지 일시 중지된다:
1. 이 증례는 시험자, 임상시험의뢰자 및 SMC에 의해 검토되고,
2. 임상시험의뢰자는 해당 코호트 내 등록 재시작을 위한 안전성 평가 결과와 타당한 이유를 해당 규제 당국에 통보했으며, 현지 규정에서 요구하는 경우 재개를 승인받았음.
(b) 전체 시험에 대한 등록 중지
전체 시험 등록은 전체 유익-위해 균형이 부정적으로 고려되는 경우 임상시험의뢰자에 의해 중단된다.
독성의 발생률 및/또는 중증도로 인해 시험 집단에 허용되지 않는 위해-유익 평가가 초래되는 경우 등록 중단에 대한 고려와 함께, 안전성을 임상시험의뢰자 및 SMC에 의해 시험 전반에 걸쳐 지속적으로 모니터링한다. 임상시험의뢰자는 SMC와 협의해 이미 치료제를 투여받고 있는 대상이 계속하도록 허용하거나, 등록 계속을 위해 임상시험계획을 변형하거나, 시험을 종료할지에 대해 고려한다.
안전성의 문제로 등록이 중단되면 현지 규정에서 요구하는 경우 등록 재개에 대한 승인과 함께 적절히 수정하고 규제 당국에 통지한 후에야 등록을 재개할 수 있다.
(vi) 시험 종료
시험은 마지막 대상이 등록한 후 대략 5년 후 또는 추적관찰에 남아 있는 대상이 없을 때 중 먼저 발생하는 것의 시점에 종료된다. 또한, 임상시험의뢰자는 임의의 시점에 시험을 종료할 수 있다.
(vii) 안전성 모니터링 위원회
SMC는 용량 증량 및 용량 확장 전반에 걸쳐 엔포르투맙 베도틴의 안전성을 모니터링한다. SMC는 시험기관 시험자(들) 및 임상시험의뢰자 측 담당자(시험 의료 모니터 요원, 약물 안전 담당자, 임상 과학자 및 생물 통계학자 포함)로 구성된다. 위원회는 용량 증량 및 치료 유발[Treatment-emergent, TE] 독성과 관련된 데이터를 검토하는 것을 포함하는 정기 및/또는 임시 회의를 통해 이 시험의 대상 안전성을 모니터링한다. 최소한, SMC 회의는 코호트의 모든 대상이 DLT 평가 기간을 완료한 후 시험의 용량 증량 부분 동안 개최된다. SMC는 안전성 평가 및 DLT 결정을 위해 등록된 대상으로부터 얻은 임상 데이터를 검토한다. SMC는 mTPI 결정 규칙 차트와 함께 용량 수준 및 코호트 크기에 대한 권장사항을 결정한다. 복수의 코호트가 mTPI 모델에 따른 용량 수준에서 등록된다. SMC는 또한 누적 대상 데이터 검토를 위해 용량 확장 전반에 걸쳐 대략 분기별로 회의를 진행한다.
DLT 및 용량 증량 권장사항을 결정하는 것 외에도, SMC는 적용 가능한 대로 시험 동안 다음 중 하나 이상의 권장사항을 결정할 수 있다:
● 주어진 용량에서 안전성의 추가 평가
● 시험 약물 투여에 대한 대안적인 접근법의 평가(예를 들어, 투여 지속 기간을 증가시키거나 투여 전에 사전 투약을 필요로 함)
● 용량 증량 동안 더 낮거나 중간 용량 수준의 평가
● 확장 코호트에서 평가될 용량(들)에 대한 권장사항은 증량 동안 용량 수준의 활성 및 내약성에 기반함
● 안전성 및 활성 데이터에 기초한 방광내 엔포르투맙 베도틴에 대한 단일 제제 용량 및 일정에 대한 권장 사항
● MTD에 도달하지 않는 경우, 용량 증량 동안 더 높은 용량 수준의 평가
추가적인 자세한 내용은 SMC 헌장을 참조한다.
6.2.4.2 시험 설계에 대한 논의 및 근거
이 최초 인간 대상[First-in-human, FIH] 시험은 유도 단계 동안 6주간 q1wk로 그리고 유지 단계 동안의 총 9회 투여 동안 월당 투여된 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성 및 내약성을 평가하고, MTD를 추정하고/하거나 NMIBC가 있는 대상에서 권장 용량 및 일정을 결정하기 위한 1상, 용량 증량, 및 용량 확장 시험이다. 방광내 엔포르투맙 베도틴의 초기 임상 개발은 BCG-무반응성이고 적절한 표준 치료 옵션이 없고(예를 들어, 근치적 방광절제술에 비적격하거나 이를 거부하는) 치료 의사의 견해로는 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여의 후보인 대상에서 이의 평가를 포함한다.
용량 증량은 MTD를 추정하고/하거나 방광내 엔포르투맙 베도틴의 권장 용량을 결정하는 데 사용된다. 일단 용량 증량이 완료되고 약물의 초기 안전성이 입증되면, 대략 20명의 대상의 최대 2개의 확장 코호트를 각각 등록하여 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성 및 항종양 활성을 추가로 평가한다. 확장 코호트는 방광내 엔포르투맙 베도틴의 안전성, 내약성, PK 및 항종양 활성에 관해 추가적인 정보를 수집할 수 있게 한다. 이 정보는 방광내 엔포르투맙 베도틴의 추가 개발을 위한 기반을 제공할 것이다.
(i) 용량 증량 중 mTPI를 사용하는 근거
mTPI 용량 증량 방법은 용량 확인을 위한 전통적인 '3+3' 접근법에 비해 갖는 잠재적인 이점 때문에 이 시험을 위해 선택되었다. 이러한 이점은 임의의 사전에 명시된 DLT 비율을 표적으로 하는 능력, MTD 초과에서 더 적은 대상의 치료를 포함하여 안전성을 개선하고, 코호트 크기를 유연하게 정할 수 있게 한다(문헌[Ji 2010]). mTPI 방법은 또한 추정의 정확도를 개선하기 위해 MTD를 추정하기 위해 모든 용량 수준에서 치료된 모든 대상로부터의 정보를 사용한다.
(ii) 치료군에 대상을 배정하는 방법
용량 증량 동안, 용량 수준에 대한 대상 할당은 표 13에 예시된 바와 같이 mTPI 결정 규칙에 의해 결정되고, 임상시험의뢰자에 의한 대상 등록 승인 시에 발생한다.
용량 확장 동안, 대상은 각각 대략 20명의 대상의 최대 2개의 코호트에 등록된다. MTD가 시험의 용량 증량 부분에서 확인되는 경우, 상응하는 용량 수준은 용량 확장에서 평가한다. 임상시험의뢰자는 SMC와 협의하여 MTD에 도달하지 않았거나 상이한 용량 수준이 추가 평가를 보증하는 경우 용량 확장에서 1개 초과의 용량 수준을 평가할 수도 있다. 이들 용량 확장 코호트의 개방은 용량 증량 동안 시연된 누적 안전성 및 활성에 기반하여 SMC와 협의하여 임상시험의뢰자에 의해 결정될 것이다.
의료 모니터 요원은 시험 도중 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여의 안전성을 평가하고, 안전성의 이유로 특정 용량 수준에 대한 대상의 모델 배정을 무시할 수 있다.
(iii) 용량 선택의 근거
전신 엔포르투맙 베도틴은 이전에 PD-1 또는 PD-L1 억제제 및 신보조제[Neoadjuvant]/보조제[Adjuvant]의 백금-함유 화학요법을 투여받은, 국소적으로 진행되거나 전이성 환경에서 받은 국소적으로 진행되거나 전이된 UC 환자의 치료를 위해 1.25 ㎎/㎏의 용량(최대 125 ㎎까지의 용량)으로 미국에서 현재 승인되었고 또한 임상시험에서 이 용량에서 평가되고 있다. 이 용량 수준에서 엔포르투맙 베도틴의 안전성 프로파일은 전신 고형 종양 시험, 특히 방광암에서 잘 확립되었다(EV-101, EV-201, EV-301; 추가적인 자세한 내용은 임상시험자 자료집 참조). 내약성, 낮은 전신 흡수, 및 125 mg에서 전신 엔포르투맙 베도틴의 알려진 안전성 프로파일의 전임상 증거를 고려하여, 이 시험은 방광내로 투여된 125 mg에서 시작하여 엔포르투맙 베도틴을 평가할 것이다.
(iv) 맹검 및 맹검 해제
이는 공개 라벨 시험이다.
6.2.5 시험 집단
대상은 이 시험에 적격하려면 모든 등록 기준을 충족해야 한다. 적격성 기준은 시험자에 의해 면제되지 못할 수 있으며 임상시험 관리기준 점검 및/또는 보건 규제 당국 실사의 경우 검토 대상이다.
6.2.5.1 선정 및 제외 기준
섹션 6.2.2를 참조한다.
6.2.5.2 가임
가임자는 여성으로 출생한 임의의 자로서, 초경을 경험하고 외과적 불임(예를 들어, 자궁적출술, 양쪽 난관절제술, 양쪽 난소절제술)을 겪지 않았거나 폐경을 완료하지 않았다. 폐경은 다른 생물학적, 생리학적 또는 약리학적 원인의 부재하에 45세 초과의 사람에서 12개월의 무월경으로 임상적으로 정의된다.
자녀의 아버지가 될 수 있는 자는 남성으로 출생한 임의의 자로서, 고환이 있고 외과적 불임(예를 들어, 정관절제술, 이후 시술이 효과적이었음을 입증하는 임상검사)을 겪지 않았다.
6.2.5.3 시험 치료 또는 평가에서 대상 제외
대상이 시험 치료 또는 시험에서 철회되는 경우 시험의 임상시험의뢰자에게 통지해야 한다. 대상의 의료 기록 및 증례 보고서 양식[Case report form, CRF]에 대상의 철회 사유(들)를 기록해야 한다.
(i) 시험 치료 중단
대상의 시험 치료는 다음 중 임의의 사유 하나로 중단된다:
● 임상시험계획별로 완료됨
● 지속, 재발 또는 진행성 질환
○ 첫 시험 중 3개월 평가를 포함하는 임의의 시험 중 평가에서 CIS가 있거나 없는 고등급 T1 질환이 있는 것으로 밝혀진 대상은 시험 치료를 중단한다.
○ 첫 시험 중 3개월 평가에서 CIS 지속 또는 재발성 고등급 Ta 질환이 있는 대상은 재동의하고 시험 치료를 계속하면 6개월에 다시 평가를 받은 후 요법을 계속할 수 있다.
○ 6개월 평가부터 시작하여 지속되거나 재발하는 고위험 NMIBC 또는 질환 진행이 있는 모든 대상은 시험 치료를 중단한다.
● 보다 낮은 등급의 종양의 출현, 존재 또는 지속은 재발로 고려하지 않을 것이다. 보다 낮은 등급의 종양만이 있는 대상은 절제 및 조직학 확인 후 치료를 계속해야 한다.
● 이상 사례[AE]
● 임신
● 시험자 결정
● 대상 결정, 비AE
● 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료
● 기타, 비AE
시험 치료를 중단한 대상은 동의를 철회하지 않는 한 추적관찰을 위해 시험에 남아 있을 것이다.
(ii) 간 안전과 관련된 치료 중단 권장
바이러스성 간염, 기존재 또는 급성 간 질환, 또는 간 손상과 연관된 다른 제제에 대한 노출과 같은 증가된 간 기능 검사에 대한 설명이 부재하면, 대상은 시험 치료를 중단한다. 시험자는 시험 치료를 계속하는 것이 대상의 최선의 이익에 해당하지 않는다고 결정할 수 있다. 다음과 같은 경우에는 치료 중단을 고려해야 한다:
● ALT 또는 AST >8 × ULN
● 2주 넘는 동안 ALT 또는 AST >5 × ULN.
● ALT 또는 AST >3 × ULN 및 총 빌리루빈 >2 × ULN 또는 INR >1.5(INR 검사가 적용/평가되는 경우)
● ALT 또는 AST >3 × ULN과 함께 간 손상을 시사하는 증상의 출현(예를 들어, 우상사분면의 통증 또는 강직)의 출현 및/또는 호산구 증가증(>5%)
이러한 치료 중단 권장은 FDA 업계 지침(문헌[Drug-Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation, July 2009])에 기반한다. 해당 권장은 개발 중인 약물에 대한 축적된 임상 경험을 기반으로 한 시험자의 기본 지침이며 엔포르투맙 베도틴에 대한 임상 경험에 특정되지 않는다.
(iii) 대상의 시험 참여 철회
임의의 대상은 다음과 같은 이유로 이 시험을 중단하였다:
● 임상시험계획별로 완료된 시험
● 대상의 동의 철회
● 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료
● 추적관찰 실패
● 사망
● 기타
6.2.6 치료
6.2.6.1 투여된 치료제
모든 대상은 시험 중인 임상시험용 제제인 엔포르투맙 베도틴을 이 임상시험계획에 있는 시험에 따라 방광내 투여를 통해 투여받는다.
6.2.6.2 임상시험용 의약품
엔포르투맙 베도틴의 제조, 투여 및 보관에 대한 자세한 정보는 약학 지침서에 있다.
(i) 설명
엔포르투맙 베도틴은 항체의 시스테인 잔기에 대한 MMAE 및 링커 서브유닛 모두를 함유하는 화학적 중간체의 접합에 의해 생성된다. 생성되는 ADC는 항체당 평균 3.8개의 약물 분자를 함유한다. 엔포르투맙 베도틴 의약품은 방광내 투여를 위해 재구성해야 하는 멸균, 방부제 비함유, 백색 내지 회백색의 동결건조된 분말이다. 엔포르투맙 베도틴은 30 mg 단회 투여 바이알에 공급된다.
(ii) 용량 및 투여
엔포르투맙 베도틴은 유도 단계 중 6주간 q1wk로 그리고 유지 단계 동안 9회 투여 동안 월당 일회 방광내 투여된다.
시험의 용량 증량 부분은 25 mL 부피의 점적 및 최대 90분 체류 시간(또는 대상의 용인 체류 시간, 실제 체류 시간은 적절한 eCRF에 기록될 것임)으로 4개의 계획된 용량 수준(125, 250, 500, 및 750 mg)에서 엔포르투맙 베도틴의 증량되는 농도를 평가한다.
(iii) 용량 변형
독성에 대한 투여 지연 또는 용량 변형은 대상별로 의료 모니터 요원과 협의하여 시험자에 의해 이루어진다. 시험의 용량 증량 부분 동안, 독성이 적절하게 관리되지 않는 한, 대상이 DLT 평가 기간 동안 DLT 기준을 충족시키는 임의의 독성을 경험하는 경우 시험 치료가 중단되고, 시험자는 시험 치료의 재개를 적절한 것으로 고려하고, 의료 모니터 요원의 승인을 받는다. 관찰된 AE의 유형 및 중증도는 결정을 알리기 위해 고려된다.
투여 지연의 경우, 대상은 표준치료 및 시험 일정에 따라 3개월마다 반응 평가를 계속 받아야 한다.
(a) 유도 단계
의료 모니터 요원의 승인을 받아 유도 단계 동안 최대 14일의 투여 지연이 허용된다. 유도 단계 동안, 시험자는 해결되지 않은 독성으로 인해 1회의 예정된 유도 치료만을 건너뛸 수 있다. 예정된 유도 치료를 1회 넘게 건너뛰어야 하는 대상은 시험 치료가 중단된다.
유도 단계 동안 DLT 기준을 충족시키는 AE를 경험하는 대상은 독성이 적절하게 관리되지 않는 한 방광내 엔포르투맙 베도틴으로 추가 치료를 받지 않아야 하고, 시험자는 방광내 엔포르투맙 베도틴의 재개를 적절하게 고려하고, 의료 모니터 요원은 재개를 승인한다. 관찰된 AE의 유형 및 중증도는 결정을 알리기 위해 고려된다.
대상은 의료 모니터 요원과 논의한 후 동일한 용량 수준 또는 감소된 용량 수준에서 치료를 재개할 수 있다. 대상이 DLT로서 자격이 있는 AE 후에 치료를 계속하고 동일한 AE가 재발하는 경우, 치료를 영구적으로 중단해야 한다. 방광내 엔포르투맙 베도틴의 영구적 중단에 대한 기준을 충족시키는 AE를 경험하는 대상은 더 낮거나 변형된 용량을 포함하여 시험 치료를 재개하지 않을 수 있다.
동일한 3등급 AE가 두 번째 발생한 경우, 방광내 엔포르투맙 베도틴은 영구적으로 중단된다.
≥14일의 투여 지연이 필요한 임의의 기타 치료 비관련 AE의 경우 의료 모니터 요원에게 문의한다.
(b) 유지 단계
유지 단계 동안, 투여 지연이 필요한 미해결 치료 관련 2등급 이상의 AE가 있는 대상은 AE가 1등급 또는 기준선 중증도로 복귀할 때까지 예정된 유지 투여를 보류할 수 있다. 임의의 미해결 AE를 위해 >28일의 치료 지연을 의료 모니터 요원과 함께 논의하여 대상이 시험을 계속하는 것에 진행 중인 임상적 이점이 있는지 결정한다. 유지 투여는 건너뛰기보다는 지연되어야 한다. 미해결 치료 관련 독성으로 인해 유지 투여를 2회 연속 지연시키는 것은 허용되지 않으며 치료는 영구적으로 중단되어야 한다.
대상은 의료 모니터 요원과 논의한 후 동일한 용량 수준 또는 감소된 용량 수준에서 치료를 재개할 수 있다. 대상이 DLT로서 자격이 있는 AE 후에 치료를 계속하고 동일한 AE가 재발하는 경우, 치료를 영구적으로 중단해야 한다. 방광내 엔포르투맙 베도틴의 영구적 중단에 대한 기준을 충족시키는 AE를 경험하는 대상은 더 낮거나 변형된 용량을 포함하여 시험 치료를 재개하지 않을 수 있다.
동일한 3등급 AE가 두 번째 발생한 경우, 방광내 엔포르투맙 베도틴은 영구적으로 중단될 것이다.
(c) 치료 연관 독성에 대한 용량 변형
엔포르투맙 베도틴 연관 혈액학적 및 비혈액학적 독성에 대한 용량 변형 권장사항을 각각 표 15 및 표 16에 제시한다.
엔포르투맙 베도틴 연관 혈액학적 독성에 대한 용량 변형 권장사항
1등급 2등급 3등급 4등급
동일한 용량 수준으로
계속한다.		 동일한 용량 수준으로
계속한다.

2등급
혈소판감소증의 경우,
독성이
≤1등급이거나
기준선으로 돌아올 때까지
투약을 보류한 다음
동일한 용량 수준에서 치료를 재개한다.		 치료를 중단한다. 치료를 중단한다.
엔포르투맙 베도틴 연관 비혈액학적 독성에 대한 용량 변형 권장사항
독성 1등급 2등급 3등급 4등급
우발적인 국소 소변 또는 약물 노출과 관련이 없는 피부 발진 동일한 용량 수준에서 계속할 수 있다. 2등급 피부 발진의 경우, 독성이 ≤1등급이 되거나 기준선으로 돌아올 때까지 엔포르투맙 베도틴을 보류하고 동일한 용량 수준에서 치료를 재개하는 것을 고려한다. 치료를 중단한다. 치료를 중단한다.
안구 사건 1등급 안구 사건에 대해, 안구 증상 및/또는 시력의 변화는, 확인되는 경우, 자격을 갖춘 검안사 또는 안과의에 의해 평가되어야 한다. 치료를 중단한다. 치료를 중단한다. 치료를 중단한다.
신경병증 동일한 용량 수준에서 치료를 중단한다. 치료를 중단한다. 치료를 중단한다.
고혈당증 계속할 수 있다. 동일한 용량 수준에서 계속할 수 있다. 3등급 고혈당증 또는 혈당 >250 mg/dL의 경우, 엔포르투맙 베도틴 치료를 보류한다. 고혈당증/혈당이 ≤250 mg/dL이고 대상이 임상적 및 대사적으로 안정하면 치료를 재개한다. 시험 치료와 관련된 것으로 고려되는 4등급 고혈당증 또는 >500 mg/dL의 혈당에 대해, 엔포르투맙 베도틴 치료를 보류하고, 기저 진단을 결정하기 위해 고혈당증의 완전한 평가를 수행한다. 고혈당증/증가된 혈당이 ≤250 mg/dL로 개선되면, 의료 모니터 요원과 협의 후 면밀한 모니터링과 함께 투여를 재개할 수 있다.
시험 치료 전반에 걸쳐, 임상 후유증과 연관되지 않고 이의 발병 후 72시간 이내에 보충/적절한 관리로 교정되는 고혈당증을 제외한 3/4등급 전해질 불균형/실험실 이상은 중단하지 않아도 된다(예를 들어, 4등급 저나트륨혈증).
(iv) 보관 및 취급
엔포르투맙 베도틴을 함유하는 바이알 및 용액의 보관을 위해 냉장은 2~8 ℃로 설정되어야 한다. 통제 장소는 약사, 시험자, 또는 적법하게 지명된 자만이 접근할 수 있어야 한다. 시험 약물은 투여 전에 재구성되어야 한다.
시험 약물에 대한 광의 효과는 평가되지 않았으며, 따라서, 엔포르투맙 베도틴의 동결건조된 분말, 재구성된 의약품 및/또는 투여 용액의 바이알을 사용 시까지 광으로부터 보호하는 것이 권장된다.
시험 약물의 재구성된 바이알을 흔들지 않는다.
임의의 부분적으로 사용된 바이알 또는 제조된 투여 용액은 임상시험용 의약품 폐기 절차에 따라 시험기관이 파괴해야 한다. 미사용 바이알은 시험기관에서 폐기하거나 임상시험의뢰자의 승인을 받은 후 임상시험의뢰자에게 반환해야 한다.
6.2.6.3 필요한 사전 투약 및 사후 투약
방광내 엔포르투맙 베도틴에 필요한 사전 투약 또는 사후 투약은 없다.
피부 접촉 또는 자극을 방지하기 위해 외성기 주위에 점적투여하기 전에 국소 피부 장벽 연고제를 사용하는 것을 고려한다.
대상, 특히 여성에게는 점적투여 당일 각 배뇨 후 성기를 씻고 필요에 따라 장벽 연고제를 사용하도록 지시해야 한다.
6.2.6.4 병용요법
시험자가 대상의 복지를 위해 필요하다고 고려하는 모든 치료제는 금지되는 것으로 확인된 약물을 제외하고 시험자의 재량에 따라 지역사회 표준 진료지침을 준수하며 투여된다.
모든 병용약물 및 투여된 혈액제제는 1일 차(투여 전)부터 안전성 보고 기간까지 기록된다. 시험 임상시험계획 관련 AE를 위해 주어진 임의의 병용약물은 사전 동의 제공 시점부터 기록되어야 한다.
(i) 요구되는 병용요법
요구되는 병용요법은 없다.
(ii) 허용되는 병용요법
병용 만성 프레드니손(또는 균등물)은 ≤20 mg/일의 용량으로 사용된다. 의료적으로 지시된 바와 같이 시험 동안 발생하는 급성 병태를 치료하기 위해 더 높은 용량의 프레드니손(또는 균등물)이 제한된 지속 기간 동안 허용된다. 항구토제의 사용은 허용된다.
엔포르투맙 베도틴과 강력한 시토크롬 P450[Cytochrome P450, CYP] 3A4 억제제 또는 P-당단백질[P-glycoprotein, P-gp] 억제제를 병용투여받는 대상은 이상 반응에 대해 면밀히 모니터링되어야 한다.
백신을 사용한 일상적인 예방은 허용되며, 사용되는 백신은 살아있는 미생물을 포함하지 않는 것이 권장된다.
기준선에서 B형 간염 표면 항원 및/또는 항B형간염 중심 항체 결과가 양성이고 PCR 검정 결과가 음성인 대상은 기관의 가이드라인에 따라 적절한 항바이러스 예방 또는 정기적인 감시 모니터링을 받아야 한다.
예방적 항생제는 요로 감염의 위험을 최소화하기 위해 임상적으로 권고된 바와 같이 허용된다. 대상이 증상성 UTI가 있는 경우, 이들은 항생제 전량 치료로 치료되며, 해결될 때까지 시험 약물을 보류한다.
항콜린제는 빈뇨, 절박뇨 또는 실금 증상이 있는 대상에게 처방된다.
시험자가 대상의 복지를 위해 필요하다고 고려하는 모든 치료제는 시험자의 재량에 따라 지역사회 표준 진료지침을 준수하며 투여된다.
(iii) 금지되는 병용요법
이뇨제는 투여일 전날 밤 또는 투여일의 시험 약물 투여 전에 복용해서는 안 된다.
실현 가능한 범위에서, 방광내 엔포르투맙 베도틴 주입 4 내지 6시간 전에는 수분 섭취를 피해야 한다.
대상은 시험 동안 다른 임상시험용 의약품, 방사선 요법, 방광내 요법 또는 전신 항신생물 요법을 투여받지 못할 수 있다.
6.2.6.5 치료 유발 이상 사례 관리
(i) 고혈당 관리
시험자는 혈당 수치를 모니터링하고 고혈당증 증상이 관찰될 경우 감염 여부를 철저히 평가하는 것을 포함하여 추가 평가를 수행할 것이 권고된다. 또한, 다른 병태를 치료하기 위해 스테로이드가 사용되는 경우, 추가적으로 혈당 수준을 모니터링해야 할 수 있다. 증가된 혈당 수준이 관찰되는 경우, 대상은 현지 표준치료에 따라 치료해야 하고 내분비내과에 대한 진료의뢰서를 고려한다.
특히 당뇨병 또는 고혈당증의 병력 또는 진행 중인 이력이 있는 대상은 혈당 수준을 조절하는 것이 어려워지거나, 빈번한 배뇨, 갈증 증가, 흐린 시력, 피로 및 두통과 같은 고혈당증을 시사하는 증상을 경험하는 경우, 즉시 이들의 의사에게 통지하도록 권고되어야 한다.
기준선에서 증가된 HbA1c(≥6.5%)가 있는 채로 시험에 들어가는 대상은 혈당 관리를 위해 유도 단계 동안 적절한 의료제공자에게 진료를 의뢰해야 한다. 각 투여 전에 혈당을 확인해야 하고 >250 mg/dL 초과의 혈당의 경우 투여를 보류해야 한다. 투여는 대상의 혈당이 ≤250 mg/dL로 개선되고 대상이 임상적 및 대사적으로 안정되면 계속될 수 있다. 인슐린 사용은 표준치료의 일부로서 허용된다. 엔포르투맙 베도틴과 관련된 것으로 고려되는 혈당 >500 mg/dL는 기저 진단을 결정하기 위해 약물 일시적 중단 및 고혈당증의 완전한 평가를 필요로 한다. 고혈당증/증가된 혈당이 ≤250 mg/dL로 개선되면, 의료 모니터 요원과 협의 후 면밀한 모니터링과 함께 투여를 재개할 수 있다. 대상이 새로운 당뇨병 발병을 경험하는 경우, 대사 패널, 케톤뇨, HbA1c, C-펩티드로 평가하여, 이전의 관문 억제제 요법의 설정에서 1형 당뇨병의 새로운 발병을 평가한다.
(ii) 엔포르투맙 베도틴으로 발진 관리
엔포르투맙 베도틴은 넥틴-4 유도 항체 약물 접합체이다. 넥틴-4는 요로상피 암종에서 고발현되는 세포 부착 분자이다. 피부 각질세포, 땀샘 및 모낭을 포함하는 정상 조직에서도 낮거나 중간 수준의 넥틴-4가 발현되므로 피부 반응은 예상되는 사건이다. 이와 같이, 피부 반응은 엔포르투맙 베도틴을 이용한 모든 임상시험에서 관심 이상 사례이다.
2019년 12월 18일(미국에서 엔포르투맙 베도틴의 승인일)부터 2020년 10월 22일까지의 시판 후 안전성 데이터의 누적 검토는 IV 엔포르투맙 베도틴을 투여받은 15명의 환자에서 중증 피부 약물 이상 반응의 보고서를 확인했으며, 이들 중 일부는 치명적인 결과가 있었다. 이러한 반응은 주로 첫 치료 주기 동안 발생했다. 이들 증례에서 보고된 AE에는 스티븐스-존슨 증후군[Stevens-Johnson syndrom, SJS](5건), 수포(3건), 수포성 피부염(3건), 대칭성 약물 관련 간찰진 및 굽힘쪽 피진[Symmetrical drug-related intertriginous and flexural exanthema, SDRIFE; 2건], 및 각각 1건의 박탈성 피부염, 박탈성 발진, 표피 괴사, 구강인두 수포, 구내염 및 독성표피괴사용해[Toxic epidermal necrolysis, TEN]가 포함되었다.
요로상피 암종의 전신 엔포르투맙 베도틴 단독요법 시험에서 중증 피부 이상 반응의 중대한 이상 사례[SAE]가 749명의 대상 중 11명(1.5%)에서 보고되었으며 수포성 피부염(0.4%), 약물 발진(0.4%), 수포(0.1%), 결막염(0.1%), SJS(0.1%), 구내염(0.1%) 및 독성 피부 발진(0.1%)을 포함하였다.
대상은 또한 피부 반응, 구강 점막, 및 점막염 또는 결막염을 포함하는 안구 이상의 징후 및 증상이 있는 경우 즉시 시험자에게 연락하도록 권고되어야 한다. 첫 주기에서 시작하여 치료 동안 피부 반응에 대해 대상을 면밀히 모니터링한다. 경증 내지 중등도의 피부 반응의 경우, 임상적으로 권고된 바와 같이 국소 코르티코스테로이드 및 항히스타민제와 같은 적절한 치료제를 고려한다. 2등급 발진 또는 피부 반응이 악화되는 경우, 엔포르투맙 베도틴을 보류하는 것을 고려한다. 3 또는 4등급 발진 또는 피부 반응 또는 의심되거나 확인된 SJS 또는 TEN의 경우, 엔포르투맙 베도틴을 영구적으로 중단하고 전문 치료를 위한 진료의뢰서를 고려한다.
(a) 국소 피부 관리
피부 또는 점막 표면을 통해 노출이 발생할 때 엔포르투맙 베도틴의 안전성은 진행 중인 임상 실험 또는 전임상시험에서 평가되지 않았다. 점적투여 중 또는 점적투여 후 배뇨 중에 임의의 피부, 눈 또는 점막 표면에 약물이 우발적으로 노출되지 않도록 주의해야 한다.
점적투여, 체류 시간 또는 배뇨 동안 의도하지 않게 피부에 노출되므로, 치료 시험자는 각각의 점적투여 전에 임의의 피부 자극 또는 파괴가 있는지 국소 생식기 및 회음부 영역을 검사해야 한다. 피부 자극이나 파괴를 최소화하기 위해 이들 기간 동안 피부 노출을 방지하기 위해 국소 장벽 연고제 또는 드레싱을 적용해야 한다. 점적투여 전에 발견된 상당한 피부 변화 또는 파괴의 경우, 의료 모니터 요원 상담 이외에 필요한 예방 조치 및/또는 투여 보류를 고려해야 한다. 생식기 및 회음부 영역 또는 기타 영향을 받는 피부 영역에 대한 육안 검사는 가능한 경우 또는 대상이 우발적인 노출 또는 피부 자극과 관련된 증상을 보고한 경우 배뇨 후에 수행해야 한다.
대상은 배뇨 후 손을 씻어야 한다. 대상이 우발적으로 노출되는 경우, 노출된 피부 부위는 비누와 물로 즉시 씻어야 한다. 다음날 발적, 가려움, 부기 또는 기타 증상의 발병하는지 노출 부위를 관찰해야 한다. 임의의 증상은 즉시 치료 시험자에게 보고하여 적절한 치료와 추적관찰을 받아야 한다.
(iii) 알레르기/과민성 반응
알레르기성/과민성 반응은 알레르겐에 대한 노출로 인한 유해한 국소 또는 전신 반응을 특징으로 한다(문헌[NCI CTCAE 버전 5.0]). 알레르기성/과민성 반응은 가려움, 다양한 유형의 발진, 두드러기, 오심, 구토, 요통 또는 복통을 포함하는 징후 또는 증상의 조합으로서 나타날 수 있다.
허용되는 조치에는 용량 변형(표 16) 및 병용약물이 포함된다.
(iv) 과잉 투여 관리
엔포르투맙 베도틴을 >10%로 과잉 투여하는 경우, 시험기관은 과잉 투여를 인지하는 즉시 임상시험의뢰자에게 통지해야 한다. 환자는 이상 반응 여부에 대해 면밀히 모니터링받아야 한다. 기관 표준에 따른 지지 요법을 투여해야 한다.
6.2.6.6 치료 순응
시험 약물 투여는 임상시험기관 직원에 의해 수행되고 근거문서 및 CRF에 기록될 것이다.
6.2.7 시험 활동
6.2.7.1 시험 일정
AE 및 병용약물은 1일 차(투여 전)부터 안전성 보고 기간까지 기록된다. 임의의 시험 임상시험계획 관련 AE뿐만 아니라 AE의 치료를 위해 주어진 임의의 병용약물은 사전 동의 제공 시부터 기록해야 한다.
임상 실험실 평가[혈청 화학 패널, 차동(임상적으로 권고되는 경우 수동 차동)으로 전체 혈구 계산[Complete blood count, CBC], 및 소변 분석(비정상 결과에 반사적 현미경 사용)], 신체 검사, 체중, 및 ECOG 수행 상태는 유도 단계 1주 차, 1일 차에 시험 약물을 투여하기 3일 전에 수행하였다. 모든 관련 임상 실험실 평가의 결과는 투여 전에 검토되어야 한다. 시험 일정은 표 17에 제공한다.
AE=유해효과[Adverse event]; ALT=알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase]; AST=아스파테이트 아미노전이효소[Antitherapeutic antibody]; ATA=항치료성 항체[Antitherapeutic antibody]; CBC=전체 혈구 계산[Complete blood count]; CIS=제자리 암종[Carcinoma in situ]; CT=컴퓨터 단층촬영[Computed tomography]; D/d=일[Day]; ECOG=동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group]; ECG=심전도[Electrocardiogram]; EOT=치료 종료[End of treatment]; HbA1c=헤모글로빈 A1c(Hemoglobin A1c); MRI=자기 공명 영상[Magnetic resonance imaging]; PK=약동학[Pharmacokinetic]; PT/PTT/INR=프로트롬빈 시간/부분 트롬보플라스틴 시간/국제 표준화 비율[Prothrombin time/partial thromboplastin time/international normalized ratio]; q1wk=매주 일회[Once weekly]; TURBT=방광암 경요도 절제술[Transurethral resection of bladder tumor]; Wk=주[Week]
A 절차는 유도 단계 동안 매주 1일 차 및 2일 차에 q1wk로 수행될 것이다.
B 첫 시험 중 반응 평가(유도 단계 완료 후 6 내지 8주에 발생할 것) 후, 대상은 유지 단계로 들어갈 것이다. 절차는 유지 단계 동안 1일 차 및 15일 차에 매월 수행될 것이다.
C EOT 평가는 비임상시험계획 항암 치료의 개시 전에 얻어야 한다. EOT 평가가 마지막 시험 치료 후 30일 전에 완료되면, AE 프로파일에 변화가 발생하지 않도록 대상의 마지막 시험 치료 후 30~37일에 전화 스크리닝을 수행한다.
D 질환의 지속, 재발 또는 진행 이외의 사유로 인해 시험 치료를 중단하는 대상과 유지 단계를 완료한 대상은 시험의 추적관찰 단계로 들어갈 것이다. 등록 후 첫 2년 동안은 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안은 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 때까지 추적관찰이 이루어질 것이다.
E 유도 단계 동안 2일 차 방문은 병원 또는 원격진료/전화 통화 방문으로 수행한다. 4일 차 방문은 1, 2, 및 6주 차에만 발생한다. 2일 차 및 4일 차의 PK 샘플은 외부 가정 의료 지원 공급업체의 가정 방문을 통해 채취할 수 있다.
F 15일 차 방문은 첫 3회의 유지 투여 동안 필요하며, AE 및 병용약물을 평가하기 위해 원격진료/전화 통화를 통해 수행될 것이다.
G 1일 차 전 7일 이내에 수행되는 경우에는 필요하지 않다. 임신 검사는 유도 동안 시험 1, 3, 6, 및 9주 차 중 1일 차에, 유지 기간 동안 월당 일회 시험 1일 차에 필요하다.
H 엔포르투맙 베도틴의 마지막 투여받은 용량 후 6개월 동안 매월 수집한다.
I 1일 차 전 3일 이내에 수행되는 경우에는 필요하지 않다.
J 시험기관에서 방문이 수행되는 경우 수행된다.
K 이전 12개월 이내에 얻은 키 측정치를 활용한다.
L 임상적으로 권고된 경우 시험 동안의 임의의 시점에서 수행된다.
M 혈청 화학 패널은 유도 단계 동안의 1, 3 및 6주 차에만 요구된다.
N 임상적으로 권고된 경우.
O 활력 징후를 수집하고 투여 전 및 첫 배뇨 후 2시간 후에 AE를 기록할 것이다.
P IV 조영제를 동반한 흉부의 진단 품질 CT가 요구된다. 단, 의학적 금기이지 않은 경우에 한한다. 대상이 IV 조영제를 용인할 수 없는 경우, 비조영제 흉부 CT가 허용 가능하다. 상부 요로, 복부 및 골반 영상화의 경우, 조영제(의학적 금기이지 않은 한)를 동반한 CT 또는 MRI 요로조영술이 허용 가능하다. 시험 치료 시작 전 3개월 이내에 수행된 경우 유사한 방법의 이전 영상화가 사용된다.
Q 인터뷰는 다음 시점(+7일 윈도우)에 용량 증량 및 용량 확장 동안 수행될 것이다: 유도 단계의 종료 시, 유지 단계 동안 5회 투여 완료 시, 유지 단계의 종료 시. 유도 단계의 6주 차 이전에 중단한 대상은 최종 방문 시 퇴장 인터뷰를 거치게 될 것이다.
R 사전 동의 시점부터.
S 유지 단계 동안, 엔포르투맙 베도틴은 총 9회 투여 동안 월당 일회 방광내로 투여될 것이다.
T 가능한 경우, 등록 후 12개월 내에 채취된 가장 최근의 TURBT에서 채취된 보관된 종양 표본 또는 조직이 요구된다. 가장 최근에 이용 가능한 조직을 사용해야 한다. 새로 잘라낸 슬라이드만 제공할 수 있는 경우 최소 10 내지 15개의 섹션이 필요하다(10개 미만인 경우 임상시험의뢰자에 문의).
U 방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
V 대상은 유지 단계에 들어가기 전에 방광경 검사를 받아야 한다.
W 모든 가시적인 유두상 Ta/T1 종양은 등록 전 60일 이내에 완전히 절제해야 한다. 잔존 순수 CIS는 허용된다. T1 질환이 있는 대상은 시험을 시작하기 전에 반복 TURBT를 거쳐야 한다. TURBT 병기 재결정은 미포함 고유근을 나타내야 한다. 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통한 종양 반응 평가는 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 것까지 발생할 것이다. 모든 대상에 대해, 추가 평가(예컨대, 영상화, 생검)는 종양 평가 동안, 예컨대 방광경 검사 결과 비정상, 요세포검사 결과 양성, 및 의심스럽거나 불확실한 소견을 갖는 2개 이상의 순차적 요세포검사 표본을 갖는 소견에 기반하여 임상적으로 권고된 것으로 고려되어야 한다.
X 방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려될 것이다.
Y 질환 지속, 재발, 진행 또는 후속 항암 요법의 개시로 인한 시험 치료 중단 후, 대상은 생존 추적관찰에 들어갈 것이다. 생존 및 후속 항암 요법 데이터는 등록 후 최대 5년 동안 추적관찰 실패, 동의 철회, 사망 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 중 먼저 발생하는 것까지 6개월(±2주)마다 수집할 것이다.
Z 혈당 검증은 투여 전에 채혈 또는 손가락 채혈에 의해 <250 mg/dL로 확인되어야 한다.
AA 혈청 화학 패널은 다음의 검사를 포함한다: 알부민, 알칼리성 포스파타제, ALT, AST, 중탄산염, 혈액 요소 질소, 칼슘, 크레아티닌, 클로리드, 락테이트 탈수소효소, 인, 칼륨, 나트륨, 총 빌리루빈, 아밀라제, 리파제, 포도당, 및 요산.
BB 자격을 갖춘 검안사 또는 안과의에 의해 수행되는 종합 시력 검사에는 시력, 세극등, 안압 측정 검사 및 확장 안저 검사가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 후속 시력 검사는 임상적으로 권고된 대로 수행되어야 한다. EOT 세극등 검사는 시험 동안 각막 AE를 경험하는 대상에게 필요하며 마지막 투여부터 적어도 4주 동안 수행되어야 한다.
CC 4개월 차만. 첫 시험 중 3개월 평가에서 CIS 지속 또는 재발성 고등급 Ta 질환이 있는 대상은 시험 치료를 계속하는 것에 대해 재동의하고 6개월에 다시 평가를 받은 후 요법을 계속할 수 있다.
DD 질환의 모든 알려진 부위는 스크리닝 시 기록되어야 하고 각각 후속 종양 평가에서 재평가되어야 한다.
ATA=항치료성 항체[Antitherapeutic antibody]; cfDNA=순환 유리 DNA[Circulating free DNA]; EOT=치료 종료[End of treatment]; N/A=해당 없음[Not applicable]; PBMC=말초혈액단핵세포[Peripheral blood mononuclear cell]; PK=약동학[Pharmacokinetic]; TURBT=경요도 방광 절제술[Transurethral resection of bladder tumor]
A 종양 샘플을 시험 동안 표준치료의 일부로서 얻게되는 경우, 그 샘플의 일부는 가능한 경우 바이오마커 검사를 위해 임상시험의뢰자에게 제출해야 한다. 치료 중에 채취된 생검에서의 조직은 바이오마커 평가를 위해 사용한다.
B TURBT가 스크리닝 윈도우 내에서 수행되는 경우, 스크리닝 시 바이오마커 평가를 위한 채취는 TURBT 이전 또는 그 시점에 채취해야 한다.
C 가능한 경우, 등록 후 12개월 내에 채취된 가장 최근의 TURBT에서 채취된 보관된 종양 표본 또는 조직이 요구된다. 가장 최근에 이용 가능한 조직을 사용해야 한다. 새로 잘라낸 슬라이드만 제공할 수 있는 경우 최소 10 내지 15개의 섹션이 필요하다(10개 미만인 경우 임상시험의뢰자에 문의).
D 2일 차 및 4일 차의 PK 샘플은 외부 가정 의료 지원 공급업체의 가정 방문을 통해 채취할 수 있다.
E 방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려될 것이다.
F 등록 후 첫 2년 동안은 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안은 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 때까지 추적관찰이 이루어질 것이다.
cfDNA=순환 유리 DNA[Circulating free DNA]; EOT=치료 종료[End of treatment]; N/A=해당 없음[Not applicable]; PK=약동학[Pharmacokinetic]; TURBT=경요도 방광 절제술[Transurethral resection of bladder tumor]
A TURBT가 스크리닝 윈도우 내에서 수행되는 경우, 스크리닝 시 바이오마커 평가를 위한 채취는 TURBT 이전 또는 그 시점에 채취해야 한다.
B 체류 시간 완료 후 즉시 배뇨된 소변을 채취해야 한다. 소변 채취는 시험 약물에 대한 최대 90분 체류 시간(또는 대상의 허용 체류 시간의 종료) 후 배뇨일 것이다.
C 시험 약물을 주입한 후, 대상은 최대 90분의 체류 시간 동안, 또는 대상의 내약 체류 시간의 끝까지 시험 약물을 보유할 것이다.
D 최대 90분 체류 시간 공백(또는 대상의 허용 체류 시간 공백 종료) 완료 후 두 번째 소변 수집.
E 2일 차 및 4일 차의 PK 샘플은 외부 가정 의료 지원 공급업체의 가정 방문을 통해 채취할 수 있다.
F 등록 후 첫 2년 동안은 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안은 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 때까지 추적관찰이 이루어질 것이다.
6.2.7.2 스크리닝 방문(약 28일 차 내지 1일 차)
● 사전 동의
● 선정/제외 기준별 시험 적격성
● 병력
● 심전도[Electrocardiogram, ECG]
● 영상화(시험 치료 시작 전 3개월 이내에 수행된 경우 유사한 방법의 이전 영상화가 사용됨):
○ IV 조영제를 동반한 흉부의 진단 품질 CT가 요구된다. 단, 의학적 금기이지 않은 경우에 한한다. 대상이 IV 조영제를 용인할 수 없는 경우, 비조영제 흉부 CT가 허용 가능하다.
○ 상부 요로, 복부, 및 골반 영상화의 경우, 조영제(의학적 금기이지 않은 한)를 동반한 CT 또는 MRI 요로조영술이 허용 가능하다.
● 종합 시력 검사
● 등록 시 제출할 보관된 종양 생검 표본 채취 개시
● 방광경 검사 및 세포학(질환의 전체 알려진 부위는 스크리닝 시 문서로 기록되어야 하고 각각의 차후의 종양 평가에서 재평가되어야 한다.) T1 질환이 있는 대상은 시험을 시작하기 전에 반복 TURBT를 거쳐야 한다. TURBT 병기 재결정은 미포함 고유근을 나타내야 한다.)
● 생검(임상적으로 권고된 경우)
● 바이오마커 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플 채취(가능한 경우 및 해당되는 경우, TURBT 이전 또는 그 시점에 수집됨)
6.2.7.3 기준선 방문(약 제7일 내지 1일 차)
● 신체 검사
● 키 및 체중(이전 12개월 이내에 얻은 키 측정치를 활용)
● 활력 징후
● ECOG 수행 상태
● 다음에 대한 혈액 및 소변 샘플 채취:
○ 차동으로 CBC
○ 혈청 화학 패널(포도당 포함)
○ HbA1c
○ 혈청학(B형 및 C형 간염)
○ 프로트롬빈 시간/부분 프로트롬빈 시간/국제 표준화 비율(PT/PTT/INR)
○ 소변 분석(비정상적 결과에 반사적 현미경 사용)
○ 가임 대상에 대한 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사
6.2.7.4 유도 단계(1개월 차 내지 3개월 차)
(i) 1주 차의 1일 차 내지 6주 차(1주 차 이후에만 ±1일)
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여 전:
○ 선정/제외 기준에 따라 대상 적격성 확인, 병력 기록(1주 차에만)
○ 신체 검사, 새로운 증상 또는 진행 중인 증상에 대해 논의 *
○ 체중*
○ ECOG 수행 상태(1주 차에만) *
○ 활력 징후
○ AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
○ 다음에 대한 혈액 및/또는 소변 샘플 채취:
○ 혈청 화학 패널(1, 3, 6주 차에만)*
○ 포도당은 투여 전에 채혈 또는 손가락 채혈에 의해 <250 mg/dL로 검증되어야 함
○ 차동으로 CBC*
○ PT/PTT/INR(임상적으로 권고된 경우)
○ PK/항치료성 항체[ATA] 평가
○ 바이오마커 평가
○ 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사(1, 3 및 6주 차)(가임 대상만)(투여 전 7일 내에 채취된 경우 필요하지 않음)
○ 소변 분석(비정상적 결과에 반사적 현미경 사용)*
● 임상 실험실 평가의 결과는 검토되어야 하고 시험 약물 투여 전에 적격성을 확인해야 한다(1주 차에만)
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여(6주간 q1wk로 투여될 것)
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여 완료 후:
○ 활력 징후[첫 배뇨 후 2시간(±15분) 후 채취]
○ 첫 배뇨 후 2시간 동안 관찰
○ AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
○ PK 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플
* 1주 차의 1일 차에만, 표시된 평가물을 투여 전 3일 이내에 채취한다.
(ii) 1주 차의 2일 차 내지 6주 차
유도 단계 동안 2일 차 방문은 병원 또는 원격진료/전화 통화 방문으로 수행한다. 병원 내원 방문이 없는 대상의 경우, 가정 의료 제공자를 통해 혈액 및 소변 샘플을 채취한다.
● 신체 검사(시험기관 방문 시 수행)
● 대상 인터뷰(+7일 윈도우; 6주 차만; 유도 단계 6주 차 이전에 중단한 대상은 최종 방문 시 퇴장 인터뷰를 거치게 될 것)
● AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
● PK 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플(±4시간; 1, 2 및 6주 차에만)
(iii) 1주 차의 4일 차 내지 6주 차
병원 내원 방문이 없는 대상의 경우, 가정 의료 제공자를 통해 혈액 및 소변 샘플을 채취한다.
● AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
● PK 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플(±4시간; 1, 2 및 6주 차에만)
(iv) 9주 차의 1일 차(±3일)
혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사(가임 대상만)
6.2.7.5 유지 단계(4개월 차 내지 12개월 차)
(i) 1일 차(±3일)
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여 전:
○ 사전 동의(4개월 차만; 첫 시험 중 3개월 평가에서 지속적인 CIS 또는 재발성 고등급 Ta 질환이 있는 대상은 지속적인 시험 치료에 대해 재동의하고 6개월에 다시 평가된 후 요법을 계속할 수 있음)
○ 신체 검사, 새로운 증상 또는 진행 중인 증상에 대해 논의
○ 체중
○ ECOG 수행 상태
○ 활력 징후
○ AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
○ 다음에 대한 혈액 및/또는 소변 샘플 채취:
○ 혈청 화학 패널
○ 포도당은 투여 전에 채혈 또는 손가락 채혈에 의해 <250 mg/dL로 검증되어야 함
○ 차동으로 CBC
○ PT/PTT/INR(임상적으로 권고된 경우)
○ PK/ATA 평가
○ 바이오마커 평가
○ 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사(가임 대상만)(투여 전 7일 내에 채취된 경우 필요하지 않음)
○ 소변 분석(비정상적 결과에 반사적 현미경 사용)
○ 방광경 검사 및 세포학(대상은 유지 단계에 들어가기 전 및 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다 방광경 검사를 받아야 하며, 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료되어야 함)
○ 방광 매핑 생검[12개월 차 평가에 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려될 것이다]
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여(총 9회 투여로 월당 투여)
● 엔포르투맙 베도틴 방광내 투여 완료 후:
○ 활력 징후[첫 배뇨 후 2시간(±15분) 후 채취]
○ 첫 배뇨 후 2시간 동안 관찰
○ AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
○ PK 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플
(ii) 15일 차(±3일)
15일 차 방문은 첫 3회의 유지 투여 동안 필요하며, AE 및 병용약물을 평가하기 위해 원격진료/전화 통화를 통해 수행될 것이다.
● 대상 인터뷰[유지 단계 동안 5회 투여 완료 및 유지 단계 종료 시 수행(+7일 윈도우)]
6.2.7.6 반응 평가
시험 중 종양 반응 평가는 스크리닝 시 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통해 발생하고 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 후 6개월마다 평가된다.
방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려된다.
6.2.7.7 치료 종료 방문(시험 약물의 마지막 투여 후 30 내지 37일)
치료 종료[End of treatment, EOT] 방문은 AE로 인해 지연되지 않는 한 시험 약물의 마지막 투여 후 30 내지 37일에 발생해야 한다. 주: EOT 방문 시간은3월 차의 방광경 검사 후 치료를 중단한 대상의 경우 37일보다 길지만, EOT 평가는 새로운 항암 치료를 개시하기 전에 수행되어야 한다. EOT 평가가 마지막 시험 치료 후 30일 전에 완료되면, AE에 대해 평가하기 위해 마지막 치료 후 30 내지 37일에 대상에게 접촉한다.
● 신체 검사
● 활력 징후
● ECOG 수행 상태
● 해당되는 경우, 종합 시력 검사(EOT 세극등 검사는 시험 동안 각막 AE를 경험하는 대상에게 필요하며 마지막 투여로부터 적어도 4주 동안 수행되어야 함)
● AE 및 병용약물 수집(해당되는 경우)
● 다음에 대한 혈액 및/또는 소변 샘플 채취:
○ 혈청 화학 패널(포도당 포함)
○ 차동으로 CBC
○ PK/ATA 평가
○ 바이오마커 평가
○ 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사(가임 대상만)
○ 소변 분석(비정상적 결과에 반사적 현미경 사용)
● 질환 상태, 생존 상태, 첫 후속 요법의 수집(해당되는 경우)
6.2.7.8 추적관찰(±1주)
질환의 지속, 재발 또는 진행 이외의 사유로 인해 시험 치료를 중단하는 대상과 유지 단계를 완료한 대상은 시험의 추적관찰 단계로 들어간다. 추적관찰 단계에서, 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통한 종양 반응 평가는 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 것까지 발생한다.
등록 후 첫 2년 동안은 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안은 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 때까지 다음 평가가 수행된다:
● 신체 검사
● 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사(가임 대상만)(엔포르투맙 베도틴을 마지막으로 투여받은 후 6개월 동안 매월 수집)
● 소변 분석(비정상적 결과에 반사적 현미경 사용)
● 영상화(임상적으로 권고된 경우)
● 바이오마커 평가를 위한 혈액 및 소변 샘플
● 방광경 검사 및 세포학
● 생검(임상적으로 권고된 경우)
● 중증이고 시험 치료와 관련이 있는 것으로 고려되는 경우 AE 수집
6.2.7.9 생존 추적관찰(±2주)
질환 지속, 재발, 진행 또는 후속 항암 요법의 개시로 인한 시험 치료 중단 후, 대상은 생존 추적관찰에 들어간다. 질환 상태, 생존 및 후속 항암 요법 데이터는 등록 후 최대 5년 동안 추적관찰 실패, 동의 철회, 사망 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 중 먼저 발생하는 것까지 6개월(±2주)마다 수집된다.
6.2.7.10 시험 종료/추적관찰 종료
대상이 시험 중단 기준을 충족한 날짜 및 시험 중단 사유를 기록할 것이다.
6.2.8 시험 평가
6.2.8.1 스크리닝/기준선 평가
적격성 기준을 충족하는 대상만 이 시험에 등록된다.
대상의 병력은 유의미한 과거 병력, 현재 병태, 이전 악성종양에 대한 임의의 치료 및 이전 치료에 대한 반응, 및 임의의 병용약물에 대한 철저한 검토를 포함한다.
신체 검사에는 다음 신체 부위/신체 계통에 대한 평가가 포함되어야 한다: 복부, 사지, 머리, 심장, 폐, 목 및 신경계. 체중과 키도 측정한다. 이전 12개월 이내에 얻은 키 측정치를 활용한다.
종합 시력 검사는 스크리닝 시 수행한다.
혈액 및 소변 검사에는 차동으로 CBC, 혈청 화학 패널, HbA1c, 포도당, 혈청학(B형 간염 및 C형 간염), PT/PTT/INR 및 소변 분석(비정상적인 결과에 반사적 현미경 사용)이 포함된다. 가임 대상에 대해 혈청 또는 소변 임신 검사를 수행한다.
바이오마커 평가를 위해 혈액 및 소변 샘플을 채취한다. 가능한 경우, 등록 후 12개월 내에 채취된 가장 최근의 TURBT에서 채취된 보관된 종양 표본 또는 조직이 요구된다. 자세한 내용은 표 18 및 표 19를 참조한다.
모든 대상에 대해 스크리닝 시 ECG를 수행한다.
CT 또는 MRI 방광조영술에 의한 흉부 CT 및 상부 요로, 복부, 및 골반 영상화는 시험 치료 시작 전 3개월 이내에 요구된다. 흉부 CT의 경우, 조영제를 동반한 영상화가 바람직하다. 대상이 IV 조영제를 용인할 수 없는 경우, 비조영제 CT가 허용 가능하다. 상부 요로, 복부 및 골반 영상화의 경우, 조영제(의학적 금기이지 않은 한)를 동반한 CT 또는 MRI 요로조영술이 허용 가능하다.
6.2.8.2 반응/항종양 활성 평가
시험 중 종양 반응 평가는 스크리닝 시 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통해 발생하고 등록 후 첫 2년 동안 첫 유도 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 후 6개월마다 평가된다.
방광경 검사 및 요세포검사를 통한 반응 평가는 다음 시험 약물 투여 전 14일 이내에 완료해야 한다. 방광경 검사 결과가 비정상이거나 요세포검사 결과가 양성 또는 비정상인 대상은 시험자의 임상 재량에 따라 추가 평가(예를 들어, 영상화, 생검, 마취하 검사)를 거쳐야 한다.
연간 상부 요로 영상화는 대상이 시험에 참여하는 동안 임상적으로 권고된 바와 같이 수행된다.
백색광 방광경 검사, 협대역 영상화 방광경 검사, 또는 형광(청색광)은 시험에 대한 평가에 허용 가능하다. 가능한 한, 시험 치료를 개시한 후, 동일한 방광경 검사 방법이 시험 전반에 걸쳐 각각의 대상에 대한 질환 감시에 사용되고 시험 CRF에 포착되어야 한다.
방광 맵핑 생검은 시험의 12개월 차 평가 시 필요하다. 가시적 종양의 부재하에, 방광의 모든 사분면에서 생검을 얻어야 한다(최소 4회의 생검 필요). 생검은 다른 모든 방문에서 필요하지 않지만 효능을 고려하기 위해 임상적으로 권고될 때 고려된다.
대상은 다음의 소견을 모두 가지고 있을 때 CR이 있는 것으로 고려된다.
1. 방광경 검사: 방광의 정상적인 외양. 방광경 검사에서 방광의 외양이 비정상적인 경우, 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 Ta, 낮은 악성 잠재성의 임의 등급의 유두상 요로상피 신생물, 또는 임의의 등급의 유두종을 보여야 한다. 무작위 방광 생검을 수행하면 이러한 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 질환을 보여야 한다.
2. 요세포검사: 음성.
a. 확정적이지 않은 요세포검사는 평가되어야 함
b. 양성인 요세포검사 결과는 방광경 검사 ± 생검 및 영상화에 의해 임상적으로 추가로 평가해야 함
3. 영상화(수행된 경우): 정상 또는 비정상으로 발견된 경우 소견은 방광의 CR을 뒷받침해야 함.
시험 치료의 방광내 투여로 인해, 암이 상부 요로에서 발견되거나 전립선 요도 및 무작위 방광 생검 결과가 음성인 경우 악성인 요세포검사 결과와 함께 방광경 검사 결과가 음성인 경우, 대상은 CR이 있는 것으로 고려한다.
(i) 요세포검사 해석
● 시험 중에 대상의 요세포검사 결과가 양성인 경우, 임상적으로 권고된 바와 같이, 방광경 검사 및/또는 상부 요로 영상화로 시험자에 의해 추가 평가가 수행되어야 한다.
● 양성인 요세포검사 결과는 단독으로는 질환 진행의 지표로 사용할 수 없으며, 지지 임상시험을 수행해야 한다.
● 요세포검사 결과가 불충분하거나, 비전형 세포거나, 의심스럽거나, 확정적이지 않은 경우, 다음 21일 이내에 세포학 검사를 반복하여 수행해야 한다. 샘플 사이의 시간은 최소 >24시간이어야 한다.
● 2개의 연속적 반복 요세포검사 결과가 의심스럽거나 불확정적이라면, 이들 결과는 치료 시험자에 의해 결정되는 바와 같이 방광경 검사 및/또는 상부 요로 영상화에 의한 추가 임상 평가를 필요로 한다.
● 대상의 요세포검사 결과가 의심스럽거나 불확실하고, 생검 결과가 음성인 경우, 결과는 음성으로 해석한다.
● 만약 2개의 연속적인 결과가 불충분하거나 비전형적이라면, 전체적인 결과는 음성으로 고려될 것이다.
지속성 질환은 유두상 질환이 있거나 없는 CIS 질환(고등급 Ta/T1)의 존재로서 정의한다.
재발은 요법 시작 후 고등급 질환(고등급 Ta, T1, 또는 CIS)의 재출현으로 정의한다. 재발은 생검으로 확인해야 한다.
진행은 다음 중 임의의 하나의 발병으로 정의한다: T1 질환(고유판 침윤), ≥T2 질환(근육 침윤), 림프절(N1+), 원격 전이(M1), 또는 낮은 등급에서 높은 등급으로의 증가.
지속, 출현 또는 저등급 질환의 존재는 재발로 고려하지 않는다. 재발성 저급 유두상 질환이 있는 대상은 절제를 거친 후 시험을 계속할 수 있다.
대상의 임상 데이터는 CRF 출처 검증을 위해 이용 가능해야 한다.
6.2.8.3 약동학 및 면역원성 평가
PK 및 ATA 분석을 위한 혈액 및 소변 샘플을 표 18 및 표 19에 제공된 샘플 채취 일정에 따라 시험 전반에 걸쳐 채취하였다. 엔포르투맙 베도틴, ac-MMAE, 총 항체[Total antibody, TAb] 및 비접합 MMAE 농도는 검증된 검정을 사용하여 결정될 것이다. 검정은 효소 결합 면역흡착 검정[ELISA]뿐만 아니라 추가 특성규명이 필요한 경우 다른 검정을 포함할 수 있다. PK 샘플은 다른 엔포르투맙 베도틴 관련 종의 가능한 분석을 위해 보관한다. 전기화학발광 검정을 사용하여 혈청 중 엔포르투맙 베도틴에 대한 ATA의 수준을 결정한다. 추정될 엔포르투맙 베도틴에 대한 용량-관련 혈액 PK 매개변수는 농도-시간 곡선하 면적[AUC], 최대 농도[Cmax], 최대 농도까지 시간[Tmax], 겉보기 최종 반감기[t1/2] 및 최저 농도[Ctrough]를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
추가 분석물은 필요에 따라 평가한다.
6.2.8.4 약력학 및 바이오마커 평가
바이오마커 평가는 이 섹션 및 시험 일정에 개략적으로 설명된 대로 소변, 말초혈액, 및 종양 조직에서 수행한다. 바이오마커 평가는 대상 선택을 위해 사용하지 않는다. 반응, 저항성 또는 안전성 관찰과 연관된 탐색, 예측적 및 예후적 바이오마커는 엔포르투맙 베도틴으로 치료하기 전 및 치료 동안 모니터링된다.
종양 세포에 대한 엔포르투맙 베도틴의 일차 효과는 국소, 종양 연관 및 말초 면역세포의 활성화 상태의 변화를 초래할 수 있다. 혈액 및 소변 샘플에서의 바이오마커 평가는 순환/무세포 종양 DNA, 가용성[Soluble] 넥틴-4의 ELISA 평가, 소변 바이오마커의 면역검정, 및 면역 세포 서브세트 및 시토킨의 존재비를 포함하는 면역 기능의 마커를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
가능한 경우 등록 후 12개월 이내에 채취된 보관 종양 조직이 모든 대상에 요구된다(가장 최근에 이용 가능한 조직을 사용해야 함). 새로 잘라낸 슬라이드만 제공할 수 있는 경우 최소 10 내지 15개의 섹션이 필요하다(10개 미만인 경우 임상시험의뢰자에 문의). 생검은 12개월 차 평가에서 필요하며 다른 모든 평가에서 임상적으로 권고된 대로 수행해야 한다. 종양 샘플을 시험 동안 표준치료의 일부로서 얻게되는 경우, 그 샘플의 일부는 바이오마커 검사를 위해 임상시험의뢰자에게 제출해야 한다.
생검은 적절하게 훈련된 임상시험기관 직원이 채취해야 한다. 생검 위치의 충분한 종양 함량을 보장하고 생검 획득 및 처리 기법이 최적임을 확인하기 위해 실현 가능한 경우 생검 중에 병리학자가 참석하는 것이 권장된다(문헌[Ferry-Galow 2018]).
치료 전 종양의 생물학적 특성과 대상 결과 사이의 관계를 이해하기 위해, TURBT에서의 조직을 검사(종양 생검)한다. 생검은 종양에서 특정 약력학, 예측적 및 예후적 바이오마커에 대해 평가한다. 조직이 등록 후 채취된 표준치료 생검에서 이용 가능한 경우, 이를 또한 반응의 바이오마커 및 치료의 작용 기전 및 저항성을 추가로 확인하기 위해 검사할 수 있다.
종양 조직에서의 바이오마커 평가는 면역조직화학 및 차세대 서열분석에 의한 넥틴-4 및 PD-L1 발현의 중앙 평가, 종양 하위유형 분류, 종양 미세환경 분석, 및 암에서 통상적으로 변경되는 유전자 또는 RNA에서의 체세포 돌연변이 또는 변경의 프로파일링을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
6.2.8.5 생물표본 저장소
미국에서만, 추가적인 동의를 제공하는 대상들에 대해, 나머지 비확인된 미사용 혈액 및/또는 조직은 시험 임상시험의뢰자에 의해 보유되고, 신규 치료제에 대한 표적의 평가, ADC 민감도 및 내성 기전의 생물학, 및 ADC의 바이오마커의 확인을 포함하지만 이에 제한되지 않는 향후 시험을 위해 사용된다. 향후 시험을 위해 기증된 혈액 및 조직 샘플은 최대 25년 동안 보유된다. 추가 동의가 제공되지 않으면 시험이 완료되고 적용 가능한 모든 규제 의무가 충족된 후 남아 있는 모든 생물학적 샘플을 폐기한다.
6.2.8.6 대상 인터뷰
대상의 관점은 치료의 경험 및 내약성에 관한 주제를 다루는 45 내지 60분 동안 지속되는 전화 인터뷰를 통해 정성적으로 평가한다. 이러한 인터뷰 중 탐색되는 주제와 질문에 대한 추가적인 자세한 정보는 대상 인터뷰 가이드에 기재되어 있다. 인터뷰는 다음 시점에 용량 증량 및 용량 확장 동안 수행된다: 유도 단계의 종료 시, 유지 단계 동안 5회 투여 완료 시, 유지 단계의 종료 시.
6.2.8.7 안전성 평가
이 시험의 코스 동안 안전성 평가는 SAE를 포함하는 AE의 감시 및 기록, 병용약물의 기록, 및 임상시험계획에 명시된 신체 검사 소견 및 실험실 검사의 측정으로 구성된다.
(i) 이상 사례
(a) 정의
이상 사례
국제의약품규제조화위원회[International Council for Harmonisation, ICH] E2A 가이드라인의 정의 및 신속 보고를 위한 표준, 및 21 CFR 312.32, IND 안전 보고에 따르면, AE는 의약품을 투여받은 대상 또는 임상 조사 대상에서의 임의의 뜻밖의 의학적 사건[Occurrence]이며, 이 치료와 반드시 인과관계가 있지는 않다.
이상 사례 CRF에 대한 검사 결과, 의학적 병태 또는 기타 사고[Incident] 기록 여부를 결정할 때 다음 정보를 고려해야 한다:
● 사전 동의 시점부터 시험 1일 차 전일까지 시험 임상시험계획 관련 AE만 기록해야 한다. 임상시험계획 관련 AE는 임상시험계획에 의무화된 절차의 결과로 발생하는 뜻밖의 의학적 사건으로서 정의한다.
● NC I CTCAE 등급이 증가하는 시험 1일 차에 존재하거나 진행 중인 투여 전의 모든 의학적 병태를 기록해야 한다.
● 중증도가 악화되거나, 빈도가 증가하거나, 시험 약물과 관련되게 되거나, 임의의 다른 방식으로 악화되지만 NCI CTCAE 등급의 상승을 위한 역치를 충족하지 못하는 시험 1일 차에 존재하거나 진행 중인 투여 전의 의학적 병태를 기록해야 한다.
● (시험 약물과의 관계에 관계없이) 모든 AE는 시험 1일 차(투여 도중 및 투여 후)부터 안전성 보고 기간의 마지막까지 기록해야 한다. 모든 절차(예를 들어, 생검)와 연관되어 발생하는 합병증은 해당 절차가 임상시험계획에서 의무화되었는지 여부에 관계없이 AE로 기록해야 한다.
● 일반적으로, 비정상적인 실험실 값은 임상적 징후 또는 증상과 연관되거나, 중재가 필요하거나, SAE를 초래하거나, 시험 종료 또는 시험 치료의 일시적 중단/중단을 초래하지 않는 한 AE로서 기록해서는 안 된다. 실험실 이상으로부터 기인하는 AE를 기록할 때, 이상 자체보다는 결과인 의학적 병태를 기록해야 한다(예를 들어, '저 헤모글로빈'보다는 '빈혈'을 기록해야 한다).
중대한 이상 사례
AE가 다음 기준 중 하나를 충족하는 경우 SAE로 분류해야 한다:
치명적: AE가 죽음을 초래
생명을 위협하는: AE가 대상을 사망의 즉각적인 위험에 처하게 한다. 이 분류는 더 중대하면 가설적으로 사망의 원인이 될 수 있는 AE에는 적용되지 않는다.
입원: AE가 입원 또는 기존의 입원 기간을 연장시킨다.
시험 또는 일상적인 검사에서 사전 동의에 서명하기 전에 계획된 선택적 의료 또는 수술 절차를 위한 입원 또는 치료는 이 기준에 따르면 SAE가 아니다. 완화 유닛이나 호스피스 요양 시설에 입소하는 것은 입원으로 고려되지 않는다. 기저 암 또는 시험 표적 질환의 예정된 요법을 위한 입원 또는 장기 입원은 SAE로서 포착하지 않아도 된다.
장애화[Disabling]/불능화: 대상의 정상적인 삶의 기능을 수행하는 능력의 지속적인 또는 상당한 불능 또는 실질적인 파괴를 초래하는 AE.
선천성 이상 또는 선천성 기형:
수태 전 또는 임신 중 분자 또는 시험 치료 요법에 노출된 대상의 아이 또는 태아에서 발생하는 유해 결과.
의학적으로 유의미함: AE는 상기 기준 중 임의의 하나를 충족하지 않지만, 대상을 위태롭게 할 수 있고, 상기 열거된 결과 중 하나를 방지하기 위해 의학적 또는 외과적 중재가 필요할 수 있거나, 감염원의 의약품을 통한 전파가 의심되는 것을 포함할 수 있다. 잠재적인 DILI는 또한 의학적으로 유의미한 사건으로 고려된다.
이상 사례 중증도
AE 중증도는 NCI CTCAE, 버전 5.0을 사용하여 등급을 매겨야 한다. 이러한 기준은 시험 설명서에 제공된다.
AE 중증도와 중대성은 독립적으로 평가한다. '중증도'는 AE의 강도를 나타낸다. '중대성'은 규제적 정의이며 규제적 보고 의무를 정의하는 임상시험의뢰자에 대한 지침으로 사용된다(상기 SAE에 대한 정의 참조).
시험 치료에 대한 이상 사례의 관계
엔포르투맙 베도틴에 대한 각각의 AE의 관계는 다음 기준을 사용하여 시험자에 의해 평가되어야 한다:
관련: 다음과 같이 약물과 AE 사이의 인과 관계를 시사할 수 있는 증거가 있다:
흔하지 않고 약물 노출과 강력히 연관된 것으로 알려진 사건(예를 들어, 혈관부종, 간 손상, 스티븐스-존슨 증후군)의 단회 발생
약물 노출과 일반적으로 연관되지 않지만 약물에 노출된 집단에서 달리 흔하지 않은 사건(예를 들어, 힘줄 파열)의 한 회 이상 발생
관련 없음: AE의 또 다른 원인이 더 타당하거나(예를 들어, 기저 질환으로 인해 또는 시험 집단에서 일반적으로 발생) AE의 발병 및 시험 치료의 투여와 시간 순서의 관계를 확립할 수 없거나, 인과관계가 생물학적으로 타당하지 않은 것으로 고려됨
(b) 이상 사례 도출 및 기록 절차
시험자 및 시험 요원은, 적절한 경우, CRF 및/또는 SAE 양식에 이들을 기록함으로써, 대상 설문 동안 도출되었는지의 여부, 신체 검사, 실험실 검사 및/또는 다른 수단 동안 발견되었는지의 여부에 대해 모든 AE 및 SAE를 보고한다.
이상 사례 도출
AE의 보고를 도출하기 위해 각 시험 방문 시 개방형 또는 비지향성 질문 방법을 사용해야 한다.
이상 사례 기록
이상 사례 CRF에 기록해야 할 정보는 다음과 같다:
● 시작 날짜 및 해결 날짜를 포함하는 설명
● SAE 기준을 충족하는지 여부
● 중증도
● 시험 치료 또는 기타 인과관계와의 관계
● 결과
진단 대 징후 또는 증상
일반적으로, 통합 진단을 사용하는 것이 개별 증상을 열거하는 것보다 바람직하다. 증상을 진단으로 그룹화하는 것은 표준 의학 교본에 의해 입증되는 바와 같이 각각의 징후 및/또는 증상 구성요소가 의학적으로 확인된 진단의 구성요소인 경우에만 수행해야 한다. 징후 또는 증상의 임의의 측면이 진단의 전형적인 패턴에 맞지 않는 경우, 개별 증상은 별도의 AE로 보고한다.
중대한 이상 사례 보고
SAE의 경우, 사건(들)은 CRF 및 SAE 양식 둘 다에 기록한다. SAE를 기록할 때 다음 사항을 고려해야 한다:
● 사망은 사건의 결과이다. 사망을 초래하는 사건은 SAE 양식과 CRF 둘 다에 기록하고 보고해야 한다.
● 입원, 수술 또는 진단 절차의 경우, 수술 또는 진단 절차로 이어지는 질병은 절차 자체가 아닌 SAE로 기록해야 한다. 절차는 질병에 대응하여 취해지는 조치의 일부로서 묘사해야 한다.
기저 악성종양의 진행
기저 악성종양의 진행이 효능 변수로서 평가되고 있기 때문에, 이를 AE 또는 SAE로서 보고해서는 안 된다. 용어 '질환 진행', '질환의 진행', 또는 '악성 질환 진행' 및 기타 유사한 용어는 AE 또는 SAE를 기재하는데 사용되어서는 안 된다. 그러나, 진행의 임상적 증상은 증상을 기초 악성종양의 진행으로 인해 배타적으로 결정할 수 없거나 시험 중인 질환에 대한 진행의 예상된 패턴에 맞지 않는 경우, AE 또는 SAE로서 보고한다. 또한, 기저 악성종양의 진행으로 인한 합병증은 AE 또는 SAE로 보고해야 한다.
임신
의약품 안전에 대한 통지
임신 보고서 양식은 아이의 아버지가 될 수 있는 시험 대상의 파트너에서 발생하는 임신을 포함하여 시험 약물의 첫 투여부터 시험 약물(들)의 마지막 투여 후 6개월까지 발생하는 모든 임신에 대해 작성한다. 추정 수태 날짜가 대상의 첫 시험 약물 투여 이후인 경우 대상의 파트너에서 발생하는 임신만 보고한다. 임신 사실을 인지한 후 48시간 이내에 임상시험의뢰자의 의약품 안전 부서에 이메일 또는 팩스를 전송한다. 모든 임신은 전체 지속 기간 동안 모니터링된다. 모든 주산기 및 신생아기 결과를 보고해야 한다. 최소 8주 동안 유아를 추적해야 한다.
CRF에 대한 데이터 수집
시험 약물(들)의 마지막 투여의 30일 이내에 발생하는 모든 임신(상기 기재된 바와 같음)은 또한 이상 사례 CRF에 기록한다.
우발적이든 치료를 위한 것이든 자연적이든 유산은 SAE로 보고해야 한다. 상기 '중대성' 기준에 의해 정의된 선천성 이상 또는 선천성 기형은 SAE로 보고해야 한다.
각막 이상 사례
각막 궤양 또는 각막염 AE ≥2등급은 각각의 NCI CTCAE 범주 내에서 등급을 매겨야 한다. 1등급 각막 궤양 또는 각막염 AE는 '눈 장애 - 기타, 구체적으로 서술' 기준에 따라 등급을 매겨야 한다. 기타 각막 AE는 '눈 장애 - 기타, 구체적으로 서술' 기준에 따라 기록 및 등급을 매겨야 한다.
당뇨병 및 고혈당증
당뇨병에 대한 등급 분류는 포도당 불내성의 NCI CTCAE v5.0 사건 용어에 기반해야 한다. 고혈당증에 대한 등급 분류는 고혈당증의 NCI CTCAE v5.0 사건 용어에 기반해야 한다.
약물 유도 간 손상 가능성
Hy 법칙은 중증도와 시험 약물이 중증 간독성의 발생률을 증가시킬 수 있는 가능성을 추정하는 데 사용된다.
임상시험에서 간독성의 부재는 시험되는 임상 설정(들)에서 잠재적인 약물 유도 간 손상[Drug-induced liver injury, DILI]에 대한 제한된 예측 값을 제공한다. 그러나, 임상시험에서 1건의 Hy 법칙 증례를 발견하는 것은 불길하고, 2건의 증례를 발견하는 것은 중증 DILI의 가능성이 고도로 예측된다.
정의
간략히 말해, 잠재적인 Hy 법칙 증례는 다음의 세 가지 구성 요소를 포함한다:
1. 아미노전이효소(ALT 및/또는 AST) 증가 > 3 × ULN 및
2. 총 빌리루빈 >2 × ULN, 담즙울혈의 초기 소견 없음(즉, 증가된 혈청 알칼리성 포스파타제),
및
3. 바이러스성 간염, 기존재 만성 또는 급성 간 질환, 또는 간독성인 것으로 알려진 다른 약물(들)의 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 아미노전이효소 증가 및 고빌리루빈혈증의 다른 즉각적이고 명백한 가능한 원인은 없다.
보고 요구 사항
임의의 잠재적인 Hy 법칙 증례는 SAE로 취급해야 하며, 임상시험의뢰자에게 즉시 보고해야 한다.
보고는 이용 가능한 모든 정보를 포함해야 하며 문제가 완전히 해결되고 추가 보조적인 데이터를 얻기 위한 모든 시도가 완료될 때까지 면밀한 추적관찰을 개시해야 한다.
잠재적인 DILI를 시사하는 실험실 결과 이상에 대한 추적관찰
일반적으로, 혈청 ALT 또는 AST이 >3 × ULN으로 증가 후, 이상을 확인하고 악화되는지 여부를 결정하기 위해 혈청 ALT, AST, 알칼리성 포스파타제 및 총 빌리루빈에 대한 반복 검사를 48 내지 72시간 이내에 수행해야 한다.
잠재적인 교란인자와 간독성의 대체 원인에 대해 조사하기 위해 적절한 의학적 평가를 개시해야 한다. 이 조사 중에 시험 약물을 보류하는 것을 고려한다.
(c) 이상 사례 및 중대한 이상 사례 보고 기간
모든 AE 및 SAE에 대한 안전성 보고 기간은 시험 1일 차(투여 전)부터 마지막 시험 치료 후 30일까지이다. 그러나, 모든 시험 임상시험계획 관련 AE는 사전 동의 시점부터 기록한다. 안전성 보고 기간 이후에 발생하고 시험자의 견해로는 시험 치료와 관련된 것으로 고려되는 모든 SAE도 임상시험의뢰자에게 보고해야 한다.
SAE는 유의미한 변화가 기준선으로 돌아오고, 사건이 안정화(회복/해결)되거나 더 이상 시험자에 의해 임상적으로 유의미한 것으로 고려되지 않거나, 대상이 사망하거나 동의를 철회할 때까지 추적한다. 중대하지 않은 모든 AE는 안전성 보고 기간까지 추적한다. 중대하지 않은 특정 AE는 해결, 기준선으로 복귀, 또는 시험 종결까지 추적한다.
(d) 중대한 이상 사례는 즉시 보고해야 함
SAE를 관찰하거나 알게된 지 24시간 이내에 시험자는 시험 치료 요법에 대한 사건의 관계에 관계없이 임상시험의뢰자에게 사건을 보고한다.
최초 SAE 보고서는 사용 가능한 증례 세부 정보를 SAE 양식에 기록한다. 최소한 다음을 포함해야 한다:
● 대상 수
● 사건 발병 날짜
● 사건에 대한 설명
● 알려진 경우, 시험 치료
● 시험자의 인과성 평가
작성을 마친 SAE 양식은 24시간 이내에 임상시험의뢰자의 의약품 안전 부서에 이메일 또는 팩스로 전송한다(SAE 보고서 양식에 명시된 이메일 또는 팩스 번호 참조).
관련 추적관찰 정보는 사용 가능한 즉시 임상시험의뢰자에게 제출한다.
(e) 규제 기관에 대한 임상시험의뢰자 안전 보고
시험자는 모든 SAE를 임상시험의뢰자에게 보고해야 한다. 임상시험의뢰자는 현지 법률 또는 규제 보고 요구사항에 따라 예상하지 못한 중대한 이상 반응[Suspected unexpected serious adverse reaction, SUSAR]을 포함하는 모든 SAE를 규제 당국에 보고한다.
(f) 특별관심대상 이상 사례
해결, 기준선으로 복귀, 대상 철회, 시험 종결 또는 사건이 적절하게 특성규명될 정도로 만성화될 때까지 특정 중대하지 않은 특별관심대상 이상사례[Serious adverse events of special interest, AESI]를 추적한다(관련 병용약물의 수집 포함).
이 목적을 위한 엔포르투맙 베도틴과 관련된 AESI는 하기 목록의 사건을 포함하지만 이에 제한되지 않을 수 있다:
● 피부 반응
● 말초 신경병증
● 각막 사건
● 고혈당증
AESI는 전자 데이터 수집(Electronic Data Capture, EDC)에 의해 신속히 보고해야 한다. 사건이 중증도 기준을 충족하는 경우 24시간 이내에 증증도 사건으로 보고해야 한다.
(ii) 활력 징후
활력 징후 측정에는 심박수, 수축기 및 이완기 혈압, 및 체온이 포함된다. 활력 징후 값이 기록되고, 임상적으로 유의미한 비정상적인 활력 징후에 연관된 임의의 진단이 AE 또는 기존재 병태로서 기록된다.
(iii) 임상 실험실 검사
샘플은 현지 실험실을 위해 채취된다. 현지 실험실 검사는 안전성을 평가하고 임상 결정을 하기 위한 기관 표준 검사를 포함한다. 시험 코스 중 예정된 시점에 안전성을 평가하기 위해 현지 실험실에서 다음 실험실 평가를 수행한다(시험 일정 참조):
● 혈청 화학 패널은 다음의 시험을 포함한다: 알부민, 알칼리성 포스파타제, ALT, AST, 중탄산염, 혈액 요소 질소, 칼슘, 크레아티닌, 클로리드, 락테이트 데히드로게나제[LDH], 인, 칼륨, 나트륨, 총 빌리루빈, 아밀라제, 리파제, 포도당, 및 요산.
● HbA1c
● 포도당(투여 전에 채혈 또는 손가락 채혈에 의해 <250 mg/dL로 검증되어야 함).
● 차동으로 CBC는 다음 검사를 포함한다: 5부 차등(호중구, 림프구, 단핵구, 호산구, 및 호염기구)으로 백혈구 수 계산, 혈소판 수, Hgb 및 적혈구용적률.
● 계산된 CrCl(GFR도 크레아티닌 또는 CrCl 대신 사용될 수 있음). CrCl은 콕크로프트-가울트 방법 또는 MDRD 공식을 사용하여 계산해야 한다.
시험 코스 중 예정된 시점에 안전성을 평가하기 위해 현지 실험실에서 다음 실험실 평가를 수행한다(시험 일정 참조).
● 혈청학(B형 및 C형 간염)
● PT/PTT/INR
● 소변 분석
○ 표준 소변 분석(비정상인 경우 반사 현미경 사용)
○ 가임 대상에 대한 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사
(iv) 신체 검사
신체 검사에는 다음 신체 부위/신체 계통에 대한 평가가 포함되어야 한다: 복부, 사지, 머리, 심장, 폐, 목 및 신경계. 체중과 키도 측정한다. 이전 12개월 이내에 얻은 키 측정치를 활용한다.
각각의 방광내 엔포르투맙 베도틴 점적 전에, 대상이 다룬 제안된 질문은 (특히 하복부, 옆구리 또는 요도에서의) 복통, 발열, 오한, 폐색을 시사하는 증상, 피부 발진 및 출혈의 임의의 징후(최소 또는 육안적 혈뇨, 혈전)와 같은 임의의 새롭거나 진행 중인 증상을 포함할 수 있다. 전체 임상 평가가 AE를 암시하는 경우 치료 시험자의 재량에 따라 증상이 해결될 때까지 추가 치료를 해야 한다.
(v) ECOG 수행 상태
ECOG 수행 상태는 임상시험계획에 지정된 시점에 평가된다.
(vi) 심전도 검사
모든 대상은 스크리닝 시 세 번의 12-리드 ECG를 받는다. 임상적으로 권고되는 경우 추가 ECG를 수행해야 한다. ECG는 대상이 적어도 5분 동안 앙와위 자세에 있은 후에 수행된다. ECG는 가급적 바이오마커 샘플을 얻기 전에 수행해야 한다.
각각의 ECG 사이의 대기 기간은 필요하지 않다. 추적물의 전자 또는 종이 사본은 가능한 중앙 평가를 위해 임상시험의뢰자의 피지명자에게 제출된다.
(vii) 임신 검사
가임 대상의 경우, 기준선 시, 유도 동안 시험 1, 3, 6 및 9주 차의 1일 차에, 유지 단계 동안 매월 시험 1일 차에, EOT 방문 시, 및 엔포르투맙 베도틴의 마지막 투여받은 용량 후 6개월 동안 매월, 적어도 25 mIU/㎖의 감도로 혈청 또는 소변 β-hCG 임신 검사를 수행한다. 대상이 시험 약물을 투여받을 수 있게 되기 전에 음성 임신 결과가 요구된다. 임신 검사는 기관 검토 위원회/독립 윤리 위원회[Institutional review board/independent ethics committee, IRB/IEC]에 따라 요청되거나 현지 규정에서 요구하는 경우 반복될 수도 있다.
(viii) 영상화
대상은 스크리닝 시 상부 요로, 복부 및 골반의 CT 또는 MRI 요로조영술 및 흉부의 영상화를 거친다. 대상이 IV 조영제를 용인할 수 없는 경우, 비조영제 CT가 허용 가능하다. 상부 요로, 복부 및 골반 영상화의 경우, 조영제(의학적 금기이지 않은 한)를 동반한 CT 또는 MRI 요로조영술이 허용 가능하다. 시험 치료 시작 전 3개월 내에 수행되는 경우 유사한 모달리티를 갖는 이전 영상화가 사용된다.
(ix) 종합 시력 검사
대상은 시력, 세극등, 안압 측정 검사 및 확장 안저 검사가 포함되지만 이에 제한되지 않는, 스크리닝 시 자격을 갖춘 검안사 또는 안과의에 의해 수행되는 종합 시력 검사를 받는다. 후속 시력 검사는 임상적으로 권고된 대로 수행한다. EOT 세극등 검사는 시험 동안 각막 AE를 경험하는 대상에게 필요하며 마지막 투여부터 적어도 4주 동안 수행되어야 한다.
6.2.8.8 치료 후 평가
(i) 추적관찰 평가
질환의 지속, 재발 또는 진행 이외의 사유로 인해 시험 치료를 중단하는 대상과 유지 단계를 완료한 대상은 시험의 추적관찰 단계로 들어간다. 신체검사, 소변 분석 및 임신검사는 시험 일정에 기재된 바와 같이 수행한다. 임상적으로 권고되는 경우 영상화를 수행한다. 추적관찰 동안, 표준치료 방광경 검사(즉, 방광경 검사 ± 생검) 및 세포학을 통한 종양 반응 평가는 등록 후 첫 2년 동안 유도 첫 투여부터 3개월마다, 그리고 등록 후 5년 동안 그 이후 6개월마다 질환 재발, 진행, 후속 항암 요법의 개시, 또는 사망 중 먼저 발생하는 것까지 이루어질 것이다.
(ii) 생존 추적관찰 평가
질환 지속, 재발, 진행 또는 후속 항암 요법의 개시로 인한 시험 치료 중단 후, 대상은 생존 추적관찰에 들어간다. 생존 및 후속 항암 요법 데이터는 등록 후 최대 5년 동안 추적관찰 실패, 동의 철회, 사망 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 중 먼저 발생하는 것까지 6개월(±2주)마다 수집한다.
6.2.8.9 측정의 적절성
이 시험에서 사용된 안전성 측정은 시험 의약의 잠재적인 유해효과를 평가하기 위한 표준 절차로 고려한다.
반응은 NMIBC에서 반응을 평가하기 위한 표준인 방광경 검사 ± 생검 및 세포학에 의해 평가한다. 이 임상시험계획에서의 평가 간격은 질환 관리에 적절한 것으로 고려한다.
면역원성은 일반적으로 생물학에 대해 평가되므로, 엔포르투맙 베도틴에 대한 특이적 항체의 존재 가능성을 검출하기 위해 표준 검사를 수행한다. 약동학 평가는 또한 용량-노출-반응 관계를 특성규명하는 것을 돕기 위한 임상시험에서도 흔하다.
6.2.9 데이터 분석 방법
6.2.9.1 샘플 크기 결정
대략 58명의 대상이 이 시험에 등록된다. 이는 용량 증량에서 평가된 대략 18명의 대상 및 최대 2개의 확장 코호트로 평가된 대략 40명의 대상(각 코호트에 대략 20명의 대상)을 포함한다.
MTD에 도달하기 위해 평가된 용량 수준의 수 및 각 용량 수준에서 치료된 대상의 수에 따라 달라지기 때문에, 용량 증량을 완료하는 데 필요한 대상의 정확한 수는 알려져 있지 않다.
확장 코호트에 대한 공식 가설 검사는 계획되어 있지 않다. 관찰된 CR 비율이 30% 내지 50% 범위라고 가정하고, 코호트당 20명의 대상으로 95% 및 80%의 정확한 CI를 상기 표 11에 요약하였다.
6.2.9.2 시험 평가변수 정의
시험 평가변수는 6.1.3 목적에서 제시된다. 평가변수 정의는 이 섹션에 제시된다.
(i) 완전 반응 비율
CR 비율은 CR을 달성하는 대상의 비율로 정의된다.
대상은 다음의 소견을 모두 가지고 있을 때 CR이 있는 것으로 고려한다:
1. 방광경 검사: 방광의 정상적인 외양. 방광경 검사에서 방광의 외양이 비정상적인 경우, 수행된 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 Ta, 저위험 경계형의 임의의 등급의 유두상 요로상피 신생물, 또는 임의의 등급의 유두종을 보임. 무작위 방광 생검을 수행하면 이러한 생검 결과가 음성이거나 낮은 등급의 질환을 보여야 한다.
2. 요세포검사: 음성.
a. 확정적이지 않은 요세포검사는 평가되어야 함
b. 양성인 요세포검사 결과는 방광경 검사 ± 생검 및 영상화에 의해 임상적으로 추가로 평가해야 함
3. 영상화(수행된 경우): 정상 또는 비정상으로 발견된 경우 소견은 방광의 CR을 뒷받침해야 함.
시험 치료의 방광내 투여로 인해, 암이 상부 요로에서 발견되거나 전립선 요도 및 무작위 방광 생검 결과가 음성인 경우 악성인 요세포검사 결과와 함께 방광경 검사 결과가 음성인 경우, 대상은 CR이 있는 것으로 고려한다.
기준선 후 반응 평가를 받지 않은 대상은 CR을 달성하지 않은 것으로 고려한다.
(ii) 완전 반응 지속 기간
CR의 지속 기간은 처음 문서화된 CR부터 임의의 원인으로 인한 재발, 진행 또는 사망의 첫 증거까지 중 먼저 발생하는 것까지의 시간으로 정의한다.
CR을 달성하고, 질환 재발 및 진행 없이 분석 시점에 살아 있는 대상은 마지막 질환 평가에서 검열될 것이다. 자세한 검열 규칙은 통계 분석 계획[Statistical analysis plan, SAP]에서 제공된다.
(iii) 방광절제술 비율
방광절제술 비율은 이후 방광절제술을 겪는 대상의 비율로 정의한다.
(iv) 무진행 생존 기간
무진행 생존 기간[Progression-free survival, PFS]은 시험 치료 시작부터 임의의 원인으로 인한 진행 또는 사망의 첫 증거까지 중 먼저 발생하는 것까지의 시간으로 정의한다. 분석 시점에 살아 있고 질환 진행이 없는 대상은 마지막 질환 평가에서 검열된다. 자세한 검열 규칙은 SAP에서 제공된다.
(v) 무방광절제술 생존 기간
무방광절제술 생존 기간[Cystectomy-free survival, CFS]은 시험 치료 시작부터 임의의 원인으로 인한 방광절제술 또는 사망까지 중 먼저 발생하는 것까지 의 시간으로 정의한다. 분석 시점에 살아 있고 방광절제술을 실시하지 않은 대상은 마지막으로 알려진 생존 날짜에 검열된다. 자세한 검열 규칙은 SAP에서 제공된다.
6.2.9.3 통계 및 분석 계획
상위 수준의 통계 및 분석 계획을 하기와 같이 요약한다. SAP에서 보다 자세하고 포괄적인 계획이 제공될 것이다.
(i) 일반적인 고려사항
이는 후속 확장 코호트를 사용한 1상 용량 증량 시험이다. 모든 분석은 기술적(Descriptive)이다.
연속변수를 기재하기 위해 기술통계(평균, 중앙, 표준편차, 최소, 최대)를 사용한다. 빈도와 백분율은 범주형 변수를 기재하는 데 사용한다.
(a) 무작위 배정 및 맹검
이는 공개 라벨, 용량 증량, 및 확장 시험이다. 무작위 배정은 활용되지 않으며, 맹검은 적용 가능하지 않다.
(b) 공변량 조정
공변량 조정은 계획되지 않는다.
(c) 탈락 및 누락 데이터 취급
누락 데이터는 달리 명시되지 않는 한 무시한다. 누락된 AE 시작 및 종료 날짜는 사건의 지속 기간 및 TE 상태를 계산하기 위한 목적으로 고려한다. 누락 데이터 취급에 대한 자세한 내용은 SAP에서 제공된다.
(d) 다기관 시험
이 시험에는 복수의 기관이 있지만, 임의의 센터가 센터에 의한 분석을 보증하기에 충분한 수의 대상을 모을 것으로 예상되지 않는다.
(e) 다중 비교 및 복합성
다중 비교는 계획되지 않으며 이 1상 시험에서는 알파 조정이 필요하지 않다.
(f) 데이터 변환 및 파생
분석 계획에서 달리 명시되지 않는 한 2개의 날짜(예를 들어, 시작 날짜 및 종료 날짜)를 기반으로 하는 시간 변수는 (종료 날짜 - 시작 날짜 +1)(일)로 계산한다.
모든 통계 분석에서 사용한 기준선 값은 분석 계획에서 달리 명시되지 않는 한 시험 약물의 첫 투여 이전의 가장 최근의 비누락 측정치이다.
(g) 분석 세트
모든 치료된 대상 분석 세트
모든 치료된 대상[All-treated-subject, ATS] 분석 세트는 임의의 양의 엔포르투맙 베도틴을 투여받는 모든 대상을 포함한다. ATS 분석 세트는 안전성 및 효능 평가변수를 분석하기 위해 사용한다.
DLT 평가 가능 분석 세트
DE 분석 세트는 DLT를 경험하거나 또는 엔포르투맙 베도틴의 적어도 5회의 유도 투여를 투여받은 용량 증량에서 모든 치료된 대상을 포함한다. DE 분석 세트는 MTD의 결정에 사용된다.
(h) 하위군 평가
탐색적 분석으로서, 선택된 평가변수에 대해 하위군 분석을 수행한다. 하위군은 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다:
● 이전 요법
● 질환 하위 유형
● 넥틴-4 발현 수준
(i) 분석 타이밍
이 시험에 대한 최종 분석은 모든 대상이 치료를 완료한 후 및 추적관찰 기간 또는 임상시험의뢰자에 의한 시험 종료 후에 발생한다.
(ii) 대상 성향
시험 대상의 성향별 장부를 표로 작성하여 각 분석 세트의 대상 수를 요약할 것이다. 시험 치료를 중단하는 대상과 시험 철회를 하는 대상을 중단 또는 철회 사유와 함께 정리한다.
(iii) 대상 특성규명
인구 통계학 및 기타 기준선 특성규명을 요약한다. 자세한 내용은 SAP에 제공될 것이다.
(iv) 치료 순응
시험 약물은 임상시험기관에서 방광내로 투여된다. 치료 순응에 대한 요약은 계획되어 있지 않다.
(v) 효능 분석
효능 분석은 ATS 분석 세트를 사용하여 수행한다.
시험 중 임의의 시점에서의 CR 비율 및 3, 6, 12, 18, 및 24개월에서의 CR 비율을 정확한 95% CI와 함께 요약한다.
CR의 지속 기간은 카플란 마이어 방법을 사용하여 추정한다. CR을 달성하는 대상만 분석에 포함한다.
PFS 및 CFS는 카플란 마이어 방법을 사용하여 추정한다. 카플란 마이어 플롯은 적절한 경우 제시될 것이다. 자세한 방법론은 SAP에서 제공된다.
방광절제술 비율은 정확한 95% CI와 함께 요약된다.
(vi) 약동학 및 면역원성 분석
혈액 및 소변 내 엔포르투맙 베도틴 농도는 각 PK 샘플링 시점에서 기술통계로 요약한다. 계산될 용량 관련 PK 매개변수는 AUC, Cmax, Tmax, t1/2, 및 Ctrough를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 비구획 분석에 의해 추정되며 기술통계에 의해 요약한다. 추가 분석물은 필요에 따라 평가한다. PK와 약력학 평가변수, 안전성 또는 효능 사이의 관계를 탐색한다.
ATA의 발생률은 기술통계에 의해 요약한다.
(vii) 바이오마커 분석
항종양 활성, 안전성, 및 PK 매개변수에 대한 바이오마커 매개변수(예를 들어, 기준선 값, 기준선으로부터의 절대적 및 상대적 변화)의 관계를 탐색한다. 관심 대상으로 결정된 관계 및 연관 데이터를 요약한다. 자세한 내용은 SAP 또는 바이오마커 분석 계획에 별도로 기재된다.
(viii) 환자 보고 결과 분석
환자 보고 결과는 대상 인터뷰를 통해 수집한다. 이들 인터뷰에서 생성될 녹취록의 분석은 별도의 문서에 기재한다.
(ix) 안전성 분석
모든 안전성 분석은 ATS 분석 세트를 사용하여 수행한다.
(a) 노출 정도
치료 지속 기간, 투여 횟수, 총 용량 및 용량 강도를 요약한다. 투여 지연, 건너뛰기, 및 감소를 포함하는 용량 변형을 요약한다. 자세한 내용은 SAP에 제공된다.
(b) 이상 사례
AE의 개요는 모든 치료 유발 이상 사례[Treatment-emergent adverse even, TEAE], 치료 관련 TEAE, 3등급 이상의 TEAE, 치료 관련 3등급 이상의 TEAE, TE SAE, 치료 관련 TE SAE, 사망 초래 TEAE, 사망 초래 치료 관련 TEAE, 치료 중단 초래 TEAE, 및 치료 중단 초래 치료 관련 TEAE의 발생률의 표를 제공한다. AE는 시험 치료의 첫 투여 후 및 마지막 투여 후 30일 또는 그 전에 새로 발생하거나 악화되는 경우 치료 유발로 정의된다.
TEAE는 국제의약용어사전[Medical Dictionary for Regulatory Activities, MedDRA] 대표 용어, 중증도 및 시험 약물과의 관계로 요약된다. 1명의 대상에서 동일한 대표 용어를 갖는 동일한 AE가 다수 발행하는 경우, AE는 한 번 발생한 것으로 계산한다. 용량 변형 또는 치료 중단을 초래하는 TEAE는 동일한 방식으로 요약한다.
모든 TEAE, 3등급 이상의 TEAE, 및 치료 중단 초래 TEAE를 열거한다.
(c) 용량 제한 독성
DLT를 경험하는 대상의 수 및 백분율을 DE 분석 세트에 대해 요약한다. DLT의 확률에 대한 모델 기반 추정치는 각 용량 수준에 대한 95% 신용구간과 함께 제시한다.
(d) 사망 및 중대한 이상 사례
SAE는 TEAE와 동일한 방식으로 열거하고 요약한다. 치명적인 결과가 있는 사건을 열거한다.
(e) 임상 실험실 결과
실험실 값(예를 들어, 화학, 혈액학 및 소변 분석)은 방문별로 요약한다. 기준선에서 기준선 후 최고로의 이동 NCI CTCAE 등급을 표로 작성한다.
실험실 값은 NCI CTCAE당 등급과 함께 열거하고 값이 정상 참조 범위 밖에 있을 때 따로 표시를 해둔다.
(f) 기타 안전성 분석
활력 징후
활력 징후 측정치(수축기 및 이완기 혈압, 심박수 및 체온)를 열거한다.
ECOG 수행 상태
기준선에서 기준선 후 최고 및 최저로의 이동 점수를 표로 작성한다.
ECG
ECG 상태(정상, 임상적으로 유의미한 비정상 또는 임상적으로 유의미하지 않은 비정상)를 열거한다.
(x) 중간 분석
공식적인 중간 분석은 계획에 없다. 시험의 용량 증량 부분 동안, DLT를 결정하고 용량 증량 결정에 정보를 제공하기 위해 각 코호트 후에 임상시험의뢰자 및 SMC가 데이터를 평가한다. SMC는 안전 및 DLT에 대해 시험을 지속적으로 모니터링한다.
SMC 결정 과정 및 SMC의 역할과 책임에 대한 자세한 내용은 별도의 문서를 참조한다.
시험의 중간 데이터는 미국임상종양학회의 연례 회의와 같은 학술대회에서 제시한다.
6.2.10 약어 및 용어 정의 목록
ADC 항체-약물 접합체[Antibody-drug conjugate]
AE 이상 사례[Adverse event]
AESI 특별관심대상 이상 사례[Adverse event of special interest]
ALT 알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase]
ANC 절대호중구수[Absolute neutrophil count]
aPTT 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간[Activated partial thromboplastin time]
AST 아스파테이트 아미노전이효소[Aspartate aminotransferase]
ATA 항치료성 항체[Antitherapeutic antibody]
ATS 모든 치료된 대상[All-treated subjects]
AUA 미국 비뇨기과 협회[American Urological Association]
AUC 농도-시간 곡선하 면적[Area under the concentration-time curve]
β-hCG 베타 인간 융모 생식샘 자극호르몬[Beta human chorionic gonadotropin]
BCG 바실러스 칼메트-게랭(Bacillus Calmette-Guerin)
BICR 맹검된 독립적 중앙 검토위원회[Blinded independent central review]
Cmax 최대 농도[Maximum concentration]
CrCl 크레아티닌 청소율[Creatinine clearance]
Ctrough 최저 농도[Trough concentration]
CBC 전체 혈구 계산[Complete blood count]
CFS 무방광절제술 생존 기간[Cystectomy-free survival]
CI 신뢰도 구간[Confidence interval]
CIS 제자리 암종[Carcinoma in situ]
CR 완전 반응[Complete response]
CRF 증례 보고서 양식[Case report form]
CT 컴퓨터 단층촬영[Computed tomography]
CYP 시토크롬 P450(Cytochrome P450)
DE DLT 평가 가능[DLT-evaluable]
DILI 약물 유도 간 손상[Drug-induced liver injury]
DLT 용량 제한 독성[Dose-limiting toxicity]
DOR 반응 지속 시간[Duration of response]
DU 현재 용량은 허용할 수 없을 정도로 독성이 있음[Current dose is unacceptably toxic]
EAU 유럽 비뇨기과 협회[European Association of Urology]
ECD 세포외 도메인[Extracellular domain]
ECG 심전도[Electrocardiogram]
ECOG 동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group]
eCRF 전자 증례 보고서 양식[Electronic case report form]
ELISA 효소 결합 면역흡착 검정[Enzyme-linked immunosorbent assay]
EOT 치료 종료[End of treatment]
FIH 최초 인간 대상[First-in-human]
GFR 사구체 여과율[Glomerular filtration rate]
HbA1c 헤모글로빈 A1c(Hemoglobin A1c)
Hgb 헤모글로빈(Hemoglobin)
HIV 인간 면역결핍 바이러스[Human immunodeficiency virus]
HR 위험률[Hazard ratio]
ICH 국제의약품규제조화위원회[International Council for Harmonisation]
IEC 독립윤리위원회[Independent ethics committee]
Ig 면역글로불린(Immunoglobulin)
IND 임상시험계획승인신청[Investigational New Drug Application]
IRB 임상시험 심사 위원회[Institutional review board]
IRR 주입 관련 반응[Infusion-related reaction]
IV 정맥내[Intravenous]
LDH 락테이트 탈수소효소[Lactate dehydrogenase]
mAB 단클론 항체[Monoclonal antibody]
MDRD 신장질환에서 식이조절[Modification of Diet in Renal Disease]
MedDRA 국제의약용어사전[Medical Dictionary for Regulatory Activities]
MMAE 모노메틸 아우리스타틴 E(Monomethylauristatin E)
MRHD 최대 인체 권장 용량[Maximum recommended human dose]
MRI 자기 공명 영상[Magnetic resonance imaging]
MTD 최대허용용량[Maximum tolerated dose]
mTPI 변형된 독성 확률 간격[Modified toxicity probability interval]
NCI CTCAE 국립 암 연구소 이상 사례 공통 용어 기준[National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events]
NMIBC 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer]
NOAEL 유해효과 무관찰 수준[No-observed-adverse-effect-level]
NYHA 뉴욕심장학회[New York Heart Association]
ORR 객관적 반응률[Objective response rate]
OS 전체 생존 기간[Overall survival]
PACS 의료영상저장전송시스템[Picture archiving and communication system]
PCR 중합효소 연쇄반응[Polymerase chain reaction]
PD-1 세포예정사 단백질 1[Programmed cell death protein 1]
PD-L1 예정사 리간드 1[Programmed death-ligand 1]
PFS 무진행 생존 기간[Progression-free survival]
P-gp P-당단백질[P-glycoprotein]
PK 약동학[Pharmacokinetics]
PK/PD 약동학/약력학[Pharmacokinetics/pharmacodynamics]
PN 말초신경병증[Peripheral neuropathy]
PSA 전립선-특이적 항원[Prostate-specific antigen]
PT/PTT/INR 프로트롬빈 시간/부분 트롬보플라스틴 시간/국제 표준화 비율[Prothrombin time/partial thromboplastin time/international normalized ratio] q1wk 주당 일회[Once a week]
SAE 중대한 이상 사례[Serious adverse event]
SAP 통계학적 분석[Statistical analysis plan]
SJS 스티븐스-존슨 증후군[Stevens-Johnson syndrome]
SMC 안전성 모니터링 위원회[Safety Monitoring Committee]
SUSAR 예상하지 못한 중대한 이상 반응[Suspected unexpected serious adverse reaction]
t1/2 반감기[Half-life]
TAb 총 항체[Total antibody]
TE 치료 유발[Treatment-emergent]
TEAE 치료 유발 이상 사례[Treatment-emergent adverse event]
TEN 독성표피괴사용해[Toxic epidermal necrolysis]
Tmax 최대 농도까지의 시간[Time to maximum concentration]
TURBT 경요도 방광 절제술[Transurethral resection of the bladder tumor]
UC 요로상피암[Urothelial cancer]
ULN 정상 상한치[Upper limit of normal]
US 미국[United States]
UTI 요로 감염[Urinary tract infection]

Claims (62)

  1. 인간 대상에서 방광암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 항체 약물 접합체[Antibody drug conjugate, ADC]를 상기 대상에게 방광내로 투여하는 단계를 포함하되, 상기 ADC는 모노메틸 아우리스타틴 E[Monomethyl auristatin E, MMAE]의 하나 이상의 단위에 접합된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방광암은 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]인, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 NMIBC는 조직학적으로 확인되었으며, 제자리 암종[Carcinoma in situ, CIS]인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 대상은 유두상질환이 있는, 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기 대상은 유두상질환이 없는, 방법.
  6. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NMIBC는 조직학적으로 확인되고, 우세한 조직학적 성분(>50%)은 요로상피(이행 세포) 암종인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 고위험 바실러스 칼메트-게랭[Bacillus Calmette-Guerin, BCG]-무반응성 질환이 있는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 근치적 방광절제술에 비적격하거나 이를 받는 것을 거부하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상의 모든 가시적인 유두상 Ta/T1 종양은 치료 전 60일 이내에 완전히 절제된, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 대상은 잔존 순수 CIS가 있는, 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 대상은 잔존 순수 CIS가 없는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 동부협력종양학회[Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG] 수행 상태 점수가 0점인, 방법.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 1점인, 방법.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 동부협력종양학회[ECOG] 수행 상태 점수가 2점인, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 대상의 사구체 여과율[Glomerular filtration rate, GFR]은 50 mL/분 이상이고, 상기 대상은 뉴욕심장학회[New York Heart Association, NYHA] 클래스 III 심부전이 없는, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상은 다음으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 병태가 있는 방법:
    a. 절대호중구수[Absolute neutrophil count, ANC] ≥1,500/μL;
    b. 헤모글로빈(Hgb) ≥10 g/dL;
    c. 혈소판수 ≥100,000/μL;
    d. 혈청 빌리루빈 ≤1.5 × 정상 상한치[Upper limit of normal, ULN] 또는 길버트 질환이 있는 대상의 경우 ≤3 × ULN;
    e. 계산된 크레아티닌 청소율[Calculated creatinine clearance, CrCl] ≥30 mL/분(GFR도 크레아티닌 또는 CrCl 대신 사용될 수 있음). CrCl은 콕크로프트-가울트(Cockcroft-Gault) 방법 또는 신장 질환에서 식이조절[Modification of Diet in Renal Disease, MDRD] 공식을 사용하여 계산해야 함. ECOG 수행 상태가 2점인 대상은 GFR ≥50 mL/분이어야 함;
    f. 알라닌 아미노전이효소[Alanine aminotransferase, ALT] 및 아스파테이트 아미노전이효소[Aspartate aminotransferase, AST] ≤3 × ULN; 또는
    g. 국제 표준화 비율[International normalized ratio, INR] 또는 프로트롬빈 시간[Prothrombin time, PT], 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간[Activated partial thromboplastin time, aPTT] 또는 부분 트롬보플라스틴 시간[Partial thromboplastin time, PTT] ≤1.5 ULN, 단, 항응고제가 의도적으로 사용된 치료 범위 내에 PT 또는 aPTT가 있는 한 대상이 항응고제 요법을 받고 있지 않아야 함.
  17. 제16항에 있어서, 상기 대상은 제16항의 병태 (a) 내지 (g)가 모두 있는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상의 예상 기대 수명은 2년 초과인, 방법.
  19. 1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22로 기재된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역[Complementarity determining region, CDR]의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23으로 기재된 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하거나,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 방법.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 9의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H1, 서열 번호 10의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H2, 서열 번호 11의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H3, 서열 번호 12의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L1, 서열 번호 13의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L2, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L3을 포함하거나,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 16의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H1, 서열 번호 17의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H2, 서열 번호 18의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-H3, 서열 번호 19의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L1, 서열 번호 20의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L2, 및 서열 번호 21의 아미노산 서열로 구성되는 CDR-L3을 포함하는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, F(ab′)2, Fv 또는 scFv인, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 완전 인간 항체인, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1이고, 경쇄는 카파 경쇄인, 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합으로 생산되는, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 MMAE의 각각의 단위에 접합되는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 링커는 효소-절단형 링커이고, 상기 링커가 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하는, 방법.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 상기 링커는 -Aa-Ww-Yy-의 화학식을 갖되, -A-는 스트레처 단위이고, a는 0 또는 1이고, -W-는 아미노산 단위이고, w는 0 내지 12 범위의 정수이고, -Y-는 스페이서 단위이고, y는 0, 1 또는 2인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 스트레처 단위는 하기 화학식 1의 구조를 갖고, 상기 아미노산 단위는 발린-시트룰린이고, 상기 스페이서 단위는 하기 화학식 2의 구조를 포함하는 PAB기인, 방법:
    [화학식 1]

    [화학식2]
    .
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 스트레처 단위는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하고, 상기 스페이서 단위는 카르바메이트기를 통해 MMAE에 연결되는, 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 20개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 10개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 2 내지 8개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 3 내지 5개 단위의 MMAE를 포함하는, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 하기 구조를 갖되,

    상기 구조에서 L-은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10인, 방법.
  38. 제37항에 있어서, p는 2 내지 8인, 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, p는 3 내지 5인, 방법.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, p는 3 내지 4인, 방법.
  41. 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, p는 약 4인, 방법.
  42. 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 약물 접합체의 유효량의 평균 p 값은 약 3.8인, 방법.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 L-히스티딘, 폴리소르베이트-20[트윈-20(TWEEN-20)] 및 트레할로스 탈수화물을 포함하는 약학 조성물로 제형화되는, 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 20 mM의 L-히스티딘, 약 0.02%의 (w/v) TWEEN-20, 약 5.5%의 (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 히드로클로리드를 포함하는 약학 조성물로 제형화되고, 상기 약학 조성물의 pH가 25 ℃에서 약 6.0인, 방법.
  45. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 9 mM의 히스티딘, 약 11 mM의 히스티딘 히드로클로리드 일수화물, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물을 포함하는 약학 조성물로 제형화되고, 상기 약학 조성물의 pH가 25 ℃에서 약 6.0인, 방법.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 10 mL 내지 약 100 mL의 점적 부피로 약 100 mg 내지 약 1,000 mg, 약 125 mg 내지 약 950 mg, 약 125 mg 내지 약 900 mg, 약 125 mg 내지 약 850 mg, 약 125 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량인, 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg 내지 약 750 mg의 용량인, 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 125 mg의 용량인, 방법.
  49. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 250 mg의 용량인, 방법.
  50. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 500 mg의 용량인, 방법.
  51. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC의 유효량은 약 25 mL의 점적 부피로 약 750 mg의 용량인, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 각 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 90분인, 방법.
  53. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 각 방광내 투여의 최대 체류 시간은 약 120분인, 방법.
  54. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 각 방광내 투여의 체류 시간은 약 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 120분인, 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 두 단계 동안 방광내로 투여되고, 상기 두 단계는 유도 단계 및 유지 단계인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 유지 단계는 상기 유도 단계 후 6 내지 10주, 6 내지 9주, 또는 6 내지 8주 사이에 시작하는, 방법.
  57. 제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 ADC는 상기 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 방광내 투여되는, 방법.
  58. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 상기 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되는, 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 하기 구조를 갖되,

    상기 구조에서, L-은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 상기 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 상기 ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 125 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 상기 용량은 상기 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 상기 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 상기 유지 단계는 상기 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
  60. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 하기 구조를 갖되,

    상기 구조에서, L-은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 상기 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 상기 ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 250 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 상기 용량은 상기 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 상기 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 상기 유지 단계는 상기 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
  61. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 하기 구조를 갖되,

    상기 구조에서, L-은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 상기 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 상기 ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 500 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 상기 용량은 상기 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 상기 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 상기 유지 단계 상기 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
  62. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 하기 구조를 갖되,

    상기 구조에서, L-은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 약 3 내지 약 4이고, 상기 항체는 서열 번호 7의 20번째 아미노산(글루탐산) 내지 466번째 아미노산(라이신) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 8의 23번째 아미노산(아스파르트산) 내지 236번째 아미노산(시스테인) 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 상기 ADC는 약 25 mL의 점적 부피 및 최대 90분의 체류 시간으로 약 750 mg의 용량으로 방광내 투여되고, 상기 용량은 상기 유도 단계 동안 6주간 주당 일회 및 상기 유지 단계 동안 9개월간 월당 일회 방광내 투여되고, 상기 유지 단계는 상기 유도 단계 후 6 내지 10주 사이에 시작되는, 방법.
KR1020247008395A 2021-08-13 2022-08-12 191P4D12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체[Antibody Drug Conjugate, ADC]로 비근침윤성 방광암[Non-muscle invasive bladder cancer, NMIBC]을 치료하는 방법 KR20240042109A (ko)

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