KR20240040126A - A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 - Google Patents
A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240040126A KR20240040126A KR1020247008853A KR20247008853A KR20240040126A KR 20240040126 A KR20240040126 A KR 20240040126A KR 1020247008853 A KR1020247008853 A KR 1020247008853A KR 20247008853 A KR20247008853 A KR 20247008853A KR 20240040126 A KR20240040126 A KR 20240040126A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- fviii
- composition
- colloidal particles
- factor viii
- hemophilia
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 178
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 title claims abstract description 78
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 title claims abstract description 50
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 title claims abstract description 48
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 392
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 392
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims abstract description 392
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 150
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 93
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 31
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 103
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 59
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 53
- 150000003904 phospholipids Chemical group 0.000 claims description 45
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 39
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 37
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 36
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 36
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 34
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 34
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 30
- WTJKGGKOPKCXLL-VYOBOKEXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z-octadecenoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-VYOBOKEXSA-N 0.000 claims description 15
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 15
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 15
- -1 polyhydroxyethylene stearate Polymers 0.000 claims description 11
- 208000033316 Acquired hemophilia A Diseases 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 6
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 claims description 5
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 2
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920002505 N-(Carbonyl-Methoxypolyethylene Glycol 2000)-1,2-Distearoyl-Sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine Polymers 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical group O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims 1
- 229940071238 n-(carbonyl-methoxypolyethylene glycol 2000)-1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine Drugs 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 110
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 26
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 21
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 18
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 18
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 16
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 16
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 15
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 15
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 15
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 13
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 12
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 12
- 229940110078 nuwiq Drugs 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 11
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 11
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 10
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 10
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 9
- 230000006624 extrinsic pathway Effects 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 9
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 9
- 238000013169 thromboelastometry Methods 0.000 description 9
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 7
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 7
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 229960003095 simoctocog alfa Drugs 0.000 description 6
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 5
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 5
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 5
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 4
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 4
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 4
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 4
- 208000026552 Severe hemophilia A Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000010405 clearance mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000006623 intrinsic pathway Effects 0.000 description 4
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 4
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 4
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 4
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical group CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 3
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 208000013633 acquired hemophilia Diseases 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 3
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 3
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical group NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 208000028221 Mild hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 208000033375 Moderate hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 2
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 229940112216 novoseven Drugs 0.000 description 2
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 2
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 108010013773 recombinant FVIIa Proteins 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-RXMQYKEDSA-N 2-ammonioethyl (2R)-2,3-dihydroxypropyl phosphate zwitterion Chemical compound NCCOP(O)(=O)OC[C@H](O)CO JZNWSCPGTDBMEW-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002110 C2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050009459 C2 domains Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical group NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 206010067787 Coagulation factor deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 229940124135 Factor VIII inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 101710122864 Major tegument protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710148592 PTS system fructose-like EIIA component Proteins 0.000 description 1
- 101710169713 PTS system fructose-specific EIIA component Proteins 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101710199973 Tail tube protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000008364 bulk solution Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- 208000014763 coagulation protein disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical group ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 150000002190 fatty acyls Chemical group 0.000 description 1
- 230000008713 feedback mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000900 human factor viii Drugs 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000001769 paralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
- A61K38/014—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from connective tissue peptides, e.g. gelatin, collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/37—Factors VIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
본 발명은 이전에 치료를 받지 않은 환자 또는 최소한의 Factor VIII(FVIII) 치료를 받은 환자에서 A형 혈우병 치료를 위한 콜로이드 입자의 사용에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이전에 치료를 받지 않은 환자 또는 최소한의 Factor VIII(FVIII) 치료를 받은 환자에서 A형 혈우병 치료를 위한 콜로이드 입자를 포함하는 조성물, 방법, 키트 및 제형에 관한 것이다.
Description
본 발명은 이전에 치료를 받지 않은 환자 또는 최소한의 Factor VIII(FVIII) 치료를 받은 환자에서 A형 혈우병 치료를 위한 콜로이드 입자의 사용에 관한 것이다. 콜로이드 입자는 제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질을 포함하며, 상기 제2 양친매성 지질은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기일 수 있다. 본 발명은 또한 콜로이드 입자를 포함하는 조성물, 방법, 키트 및 제형에 관한 것이다.
혈액 응고로 이어지는 혈액 응고 과정(The coagulation cascade)은 다양한 단백질과 인자가 관여하는 다단계 과정이며, 부상 시 안전하게 혈전을 형성할 수 있는 조절 피드백 메커니즘과 결합되어 있다. 혈우병과 같은 혈액 질환의 경우 이러한 인자 중 하나 이상이 결함이 있거나 결여되어 결함이 있는 또는 품질이 낮은 혈전을 유발할 수 있다.
A형 혈우병은 혈액 응고(blood clotting) Factor VIII(FVIII)가 없거나(중증 혈우병) 수치가 낮다(중등도 및 경증 혈우병).
FVIII은 '내인성(intrinsic)' 경로의 핵심 단백질로, FVIIIa로 활성화되면 FIXa와 결합하여 내인성 '테나제' 복합체를 형성하여 FX를 FXa로 전환하는 것을 가속화하고, 이는 피브리노겐(fibrinogen)을 혈전을 형성하는 피브린(fibrin)으로 전환하는 프로트롬빈(prothrombin)을 트롬빈(thrombin)으로 전환하는 데 참여한다.
FX가 FXa로 전환되는 것은 '외인성(extrinsic)' 개시 경로(initiation pathway)에 의해서도 매개될 수 있다. 조직 인자(TF)와 FVIIa의 외인성 테나제(tenase) 복합체(TF-FVIIa)의 형성은 혈액 응고 과정을 시작하여 트롬빈의 생성으로 이어지고, 이는 또한 FVIII에서 FVIIIa로 활성화되는 촉매가 된다. 그러나 외인성 경로는 내인성 경로에 비해 효율성이 떨어진다.
FVIII이 없는 경우, 혈액 응고 과정이가 FX를 FXa로 전환하는 촉매를 외인성 경로에만 의존해야 하므로 혈액 응고 과정이가 훨씬 더 느리게 진행된다.
내인성 FVIII이 없는 경우, 응고 능력(clotting capability)을 회복하기 위해 혈장 유래 또는 재조합 FVIII을 환자에게 대체 투여하는 것이 일반적이다. 환자는 외인성 FVIII(선천성 A형 혈우병 - cHA) 또는 자신의 FVIII(후천성 A형 혈우병 - aHA)에 대한 항체(저해제)를 생성할 수 있다. 저해제의 존재는 단백질이 저해제 항체에 의해 결합되고 중화되어 순환계에서 빠르게 제거되기 때문에 외인성 FVIII 환자의 치료 효과를 감소시켜 대체 인간 FVIII을 사용한 예방적 치료를 매우 어렵게 만들거나 일반적으로 불가능하게 만든다. 최적의 양에 미치지 못하는 FVIII은 혈전이 형성될 수 있다고 하더라도 혈전이 느리게 형성되거나 일단 형성되면 빠르게 분해되는 품질이 좋지 않다는 것을 의미한다.
현재 저해제 생성에 대처하는 두 가지 주요 방법은 저해제 관용 유도(Inhibitor tolerance induction, ITI) 또는 우회 요법(bypass therapies)의 사용이다. ITI는 환자가 정상적인 투여 요법으로 돌아갈 수 있도록 하기 위해 수개월에 걸쳐 FVIII을 대량으로 반복 투여하여 면역 체계에 관용을 유도하는 방법이다. 이 치료법이 항상 효과적인 것은 아니며, 수개월에 걸쳐 고용량의 FVIII을 반복적으로 주사하는 것은 환자에게 불쾌감을 줄 뿐만 아니라 의료 시스템 비용에도 큰 영향을 미친다.
우회 요법은 증폭 단계를 완전히 '우회'하여 저해제 문제를 피한다. 이러한 치료법은 단순히 FVIIa를 추가로 공급하여 외인성 경로를 강화하거나(예: 노보세븐(NovoSeven)), FVIII이 없을 때 응고 과정을 강화하는 활성 및 비활성화 인자를 혼합하여 공급할 수 있다(예: FEIBA(FVIIa, FIX, FX, FXa, 프로트롬빈 및 트롬빈의 혼합제제)를 예로 들 수 있다. 최근에는 이중 특이적 항체를 사용하여 FIXa와 FX를 결합하는 FVIIIa의 역할을 대체하려는 시도가 이루어지고 있다.
선천성 A형 혈우병 또는 후천성 A형 혈우병을 치료하기 위해 대체 Factor VIII를 사용하는 것은 임상에서 잘 확립되어 있다. 그러나 일부 환자에서 외인성 전달 Factor VIII의 효과를 감소시키는 저해 항체(inhibitory antibodies)가 생성하기 때문에 이러한 생성물의 효능은 제한적이다. 선천성 A형 혈우병 환자의 25-35%('저해제 환자(inhibitor patients')')는 외인성 Factor VIII에 대한 반응으로 저해 항체가 생성하며, 후천성 A형 혈우병의 경우 자가 면역으로 인해 환자가 자신의 Factor VIII에 대한 저해 항체를 생성하면서 질환이 생성하게 된다.
야생형 FVIII 분자는 6개의 도메인으로 구성된 2332개의 아미노산으로 구성되어 있다: A1-A2-B-A3-C1-C2. A1-A2-B 도메인은 '중쇄'(Heavy Chain, HC)로, A3-C1-C2 도메인은 '경쇄'(Light Chain, LC)로 구성되며 이 사슬은 비공유로 연결되어 있다. 생체 내에서 FVIII은 일반적으로 순환 과정에서 폰 빌레브란트 인자(von Willebrand's Factor, VWF)와 관련된다. VWF는 FVIII의 수송을 촉진하고 조기 비활성화 및 제거로부터 보호한다(Mannucci, P.M. et al. (2014) Novel investigations on the protective role of the FVIII/VWF complex in inhibitor development. Haemophilia. 20(suppl. 6), 2-16.) VWF와의 관련성(The association)은 또한 면역원성 감소, 저해제 존재 시 효능 및 면역 관용 치료에서의 유용성과 관련이 있다. SIPPET 시험에서 VWF를 함유한 혈장 유래 FVIII(pdFVIII)의 상용 농축액을 사용하면 재조합 농축액(rFVIII)보다 면역원성이 낮은 것으로 나타났다(Peyvandi, F. et al. (2016) A randomized trial of Factor VIII and neutralizing antibodies in Hemophilia A, N Engl J Med. 374, 2054-64). pdFVIII 농축액의 면역원성 감소는 VWF 샤프론과 관련이 있으며, 이는 FVIII 분자의 중요한 에피토프(epitopes)를 가리거나 그리고/또는 수지상 세포(dendritic cells)에 의한 내세포화를 방지하는 것으로 생각된다(Astermark, J. (2015) FVIII inhibitors: pathogenesis and avoidance. Blood. 125(13), 2045-51). 또한 재조합 FVIII 분자는 대부분 인간화되지 않고 비인간 세포주에서 생산되어 비인간 글리칸 에피토프(non-human glycan epitopes)가 존재하여 잠재적으로 면역원성을 향상시킬 수 있다는 추가적인 합병증을 가지고 있다.
FVIII에서 이러한 에피토프에 대한 저해제의 발생은 혈우병 치료의 가장 빈번한 부작용으로 남아 있다 (Van den Berg et al. (2020). ITI treatment is not a first-choice in children with hemophilia A and low-responding inhibitors: Evidence from a PedNet study. Coagulation and Fibrinolysis. 120, 1166-1172). 이 위험은 이전에 치료받은 적이 없는 환자(PUP)의 경우 전체 생성률이 최대 40%에 달할 정도로 높으며(ibid.), FVIII 활동을 비활성화하여 이러한 환자를 보호하기 위한 대안적이고 비용이 많이 드는 조치가 필요하다. 일부 환자에서는 면역관용 유도 요법이라는 오랜 시간이 걸리고 비용이 많이 드는 기술을 사용하여 저해제를 제거할 수 있지만 이 기술이 모든 환자에게 효과가 있는 것은 아니므로 대체 FVIII 요법을 사용할 수 없다. 저해제 생성 위험은 대체 FVIII에 노출된 첫 20일(ED) 동안 가장 높으며 최대 75일까지 지속된다(Liesner, R.J. et al. (2021) Simoctocog alfa (NuwiqTM) in previously untreated patients with severe haemophilia A: final results of the NuProtect study. Thromb Haemost. online). 이 기간 동안 환자는 저해제 생성 여부를 모니터링해야 한다.
이전에 치료받은 적이 없는 이러한 환자에게 처음부터 면역원성이 없는 FVIII 요법으로 치료하여 저해제가 생성할 가능성을 줄일 수 있다면 분명 바람직할 것이다.
따라서 저해제 생성 가능성을 줄여주는 비면역원성 FVIII 대체 요법이 필요하다.
따라서 본 발명은 혈우병 A 치료에 사용되는 페길화 콜로이드 입자(PEGylated colloidal particles)를 제공하여, FVIII으로 치료할 때 에피토프 차폐 및 반감기 연장의 조합을 통해 이전에 치료받지 않았거나 최소한의 치료를 받은 환자에서 저해제 생성의 위험을 낮출 수 있도록 한다.
페길화 리포좀은 저해제 취약 모델에서 항-FVIII 항체 생성을 방지하고 용량/투여 간격을 줄일 수 있는 것으로 밝혀졌다.
이는 이전에 치료받지 않은 환자(previously untreated patients, PUP)와 최소 치료 환자(minimally treated patients, MTP - Factor VIII(FVIII) 腋에 노출된 일수(ED) 50일 미만)를 보다 안전하게 치료할 수 있는 방법을 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 FVIII이 결핍되어 있고 FVIII에 대한 저해제가 없는 혈우병 환자를 치료하기 위한 콜로이드 입자를 포함하는 조성물, 방법, 키트 및 제형을 제공한다. 상기 조성물, 방법, 키트 및 제형은 선택적으로 비이온성 계면활성제 및/또는 FVIII을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 콜로이드 입자를 포함하는 조성물로, 상기 콜로이드 입자는, (i) 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC) 잔기(moiety)를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(phosphatidyl ethanolamine, PE), 포스파티딜 세린(phosphatidyl serine, PS) 및 포스파티딜 이노시톨(phosphatidyl inositol, PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하며, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 조성물을 제공한다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만이다.
생체 적합성 친수성 폴리머(biocompatible hydrophilic polymer)는 폴리알킬에테르(polyalkylethers), 폴리락트산(polylactic acids) 및 폴리글리콜산(polyglycolic acids)으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol, PEG)이다. 폴리에틸렌 글리콜은 약 500~약 5000달톤, 바람직하게는 약 2000달톤 또는 약 5000달톤(Dalton)의 분자량을 가질 수 있다.
제 2 양친매성 지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG)일 수 있는데, 예를 들어 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG2000) 또는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)일 수 있다.
포스파티딜콜린(PC)은 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, POPC)일 수 있다.
제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질은 90~110:10~1 또는 90~99:10~1(예: 100:3 또는 97:3)의 몰 비율(molar ratio)일 수 있다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함할 수 있다. 상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시 에틸렌 소르비탄(polyoxyethylene sorbitan), 폴리하이드록시에틸렌 스테아레이트(polyhydroxyethylene stearate) 및 폴리하이드록시에틸렌 라우릴에테르(polyhydroxyethylene laurylether )로 구성된 군 중에서 선택될 수 있다. 상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시 에틸렌 (20) 소르비탄 모노올리에이트일 수 있다. 콜로이드 입자는 제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질을 비이온성 계면활성제에 30:1 내지 2:1 w/w({제1 양친매성 지질 + 제2 양친매성 지질}:{비이온성 계면활성제})의 비율로 포함할 수 있다.
제1 양친매성 지질(first amphipathic lipid), 제2 양친매성 지질 및 비이온성 계면활성제는 10~40:1:0~4 w/w({제1 양친매성 지질}:{제2 양친매성 지질}:{비이온성 계면활성제})의 비율로 구성될 수 있다.
상기 조성물은 Factor VIII(FVIII) 분자를 더 포함할 수 있다. 콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자는 10~20:1 또는 5~10:1과 같은 1~90:1의 화학량론적 비율(stoichiometric ratio )을 가질 수 있다.
A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(congenital haemophilia A, cHA) 또는 후천성 A형 혈우병(acquired haemophilia A, aHA)일 수 있다.
상기 조성물은 치료 활성 화합물을 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 또한 부형제, 희석제 및/또는 보조제를 더 포함할 수 있다.
피험자는 소아 환자일 수 있다. 피험자는 FVIII 치료를 받지 않았을 수도 있다.
본 발명의 조성물은 사용 준비가 완료된 수성 현탁액으로 제형화되거나 동결 건조된 제형으로 제조될 수 있다. 본 발명의 동결건조 제형은 적절한 희석제, 보조제 또는 부형제(예: 생리적으로 허용되는 완충제)와 함께 별도의 제형으로 제공될 수 있다. 본 명세서에 설명된 바와 같이, 이러한 조성물은 별도의 제형으로서 Factor VIII를 추가적으로 포함하거나 본 명세서에 설명된 바와 같이 콜로이드 입자와 함께 제형화될 수 있다.
본 발명의 제2 양태에서는, 콜로이드 입자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 피험자에서 A형 혈우병을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함한다. 제 2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 기간이 50일 미만이다.
생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리알킬에테르, 폴리락트산 및 폴리글리콜산으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 폴리에틸렌 글리콜은 약 500~약 5000달톤, 바람직하게는 약 2000달톤 또는 약 5000달톤의 분자량을 가질 수 있다.
제 2 양친매성 지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG)일 수 있는데, 예를 들어 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG2000) 또는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)일 수 있다.
포스파티딜콜린(PC)은 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)일 수 있다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
본 방법의 조성물은 Factor VIII(FVIII) 분자를 더 포함할 수 있다. 또는, 이 방법은 Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 별도로 또는 후속적으로 투여하는 추가 단계를 포함할 수 있다.
A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(cHA) 또는 후천성 A형 혈우병(aHA)일 수 있다.
피험자는 소아 환자일 수 있다. 피험자는 FVIII 치료를 받지 않았을 수도 있다.
본 발명의 제3 양태에서는, (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 키트가 제공된다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다. 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군에서 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함한다. 제 2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기로 구성된다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 제4 양태에서는 (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 키트를 제공되며, 상기 키트는 피험자의 A형 혈우병 치료에 개별적, 동시적 또는 후속적으로 사용할 수 있도록 사용된다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다. 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함한다. 제 2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기로 구성된다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 제5 양태에서는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하는 콜로이드 입자를 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 약학적 조성물의 제형이 제공되며, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함할 수 있다.
본 발명은 FVIII이 결핍되어 있고 FVIII에 대한 저해제가 없는 혈우병 환자에게 적합하다.
일 실시예에서, 이 방법은 경증, 중등증 또는 중증의 혈우병 A를 가진 이전에 치료받지 않은 환자(PUP) 또는 최소한으로 치료받은 환자(MTP)를 치료하기 위한 것으로, 이전에 치료받지 않은 환자들이 저해제를 발생할 가능성을 최소화하기 위한 것이다.
다른 실시예에서, 이 방법은 이전에 저해제 감수성이 있는 것으로 나타났지만 현재 저해제가 없는 환자를 치료하여 저해제의 재발을 방지하는 것이다.
일 실시예에서, 이 방법은 이전에 저해제가 생성했지만 면역 관용 유도 치료(immune tolerance induction therapy) 과정을 거쳐 현재 저해제가 없는 환자를 치료하여 저해제의 재발을 방지하기 위한 것이다.
다른 실시예에서, 이 방법은 면역 체계의 추가 자극을 방지하기 위해 면역 관용 유도 요법을 받고 있는 환자를 치료하기 위한 것이다.
실시예에서, 이 방법은 아직 저해제가 생성하지 않았고 FVIII 대체 요법으로 저해제 생성 위험을 낮추고자 하는 경증, 중등증 또는 중증 A형 혈우병 환자를 치료하기 위한 것이다.
발명의 설명
본 발명은 Factor VIII(FVIII) 요법에 50일 미만의 노출을 받은 피험자의 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 콜로이드 입자를 포함하는 조성물, 방법, 키트 및 제형을 제공한다.
Factor VIII(FVIII) 요법은 응고 능력(clotting capability)을 회복하기 위해 혈장 유래(plasma-derived) 또는 재조합(recombinant) Factor VIII와 같은 Factor VIII 대체 요법을 환자/피험자에게 투여할 수 있다. 환자/피험자에게 저해제가 생성한 경우, 환자/피험자는 '우회(bypassing)' 요법 또는 저해제 관용 유도(inhibitor tolerance induction, ITI) 요법과 같은 요법을 받을 수 있다. 우회 요법에는 FVIIa(예: 노보세븐(NovoSeven)) 또는 활성 및 비활성화 인자의 혼합물(예: FEIBA(FVIIa, FIX, FIXa, FX, FXa, 프로트롬빈 및 트롬빈의 혼합물))이 포함된다. 저해제 관용 유도(ITI)는 수개월에 걸쳐 다량의 FVIII을 반복적으로 투여하여 면역 체계에서 FVIII에 대한 관용을 유도하는 방법이다.
FVIII에 대한 저해제(Inhibitors) 또는 항체 저해제(antibody inhibitors)는 항체 저해제(antibodies) 또는 중화 항체(neutralising antibodies)라고도 하는 FVIII에 대한 항체를 지칭한다. 항체는 내인성 FVIII에 대한 자가 항체 또는 외인성 FVIII에 대한 항체일 수 있다.
위에서 설명한 일 양태에 따라, 콜로이드 입자는 (i) 제1 양친매성 지질 및 (ii) 제2 양친매성 지질을 포함한다. 상기 제1 양친매성 지질은 포스파티딜콜린(PC) 잔기(moiety)이다. 포스파티딜콜린(PC) 잔기의 적절한 예는 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)일 수 있다. 제2 양친매성 지질은 포스파티딜에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS), 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군에서 선택된 인지질 잔기다. 포스파티딜 에탄올아민(PE)의 적절한 예는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올-35아민(DSPE)일 수 있다. 아미노프로판디올 디스테아로일(Aminopropanediol distearoyl, DS) 지질은 양친매성 지질인 카바메이트 연결 비하전성 지질 폴리머이다(carbamate-linked uncharged lipopolymer). 포스파티딜 에탄올아민(PE)의 다른 예로는 DPPE, DMPE 및 DOPE가 있다.
본 발명의 콜로이드 입자는 전형적으로 지질 소포(lipid vesicle) 또는 리포솜(liposome)의 형태이며 당업자에게 잘 알려져 있다. 본 명세서에서 콜로이드 입자에 대한 참조는 문맥에 달리 명시되지 않는 한 리포솜 및 지질 소포를 포함한다.
제 2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기다.
생체 적합성 친수성 폴리머의 목적은 콜로이드 입자를 입체적으로 안정화하여 시험관 내에서 콜로이드 입자의 융합을 방지하고 생체 내(in vivo) 망상 내피 시스템(reticuloendothelial system)에 의해 콜로이드 입자가 흡착을 피할 수 있도록 하는 것이다. 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리알킬에테르, 폴리락트산 및 폴리글리콜산으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜은 분지형(branched) 또는 비분지형(unbranched)일 수 있다. 생체 적합성 폴리머는 분자량이 약 100 ~ 약 10,000 Da, 적합하게는 약 2000 ~ 약 5000 Da일 수 있으며, 바람직한 값은 약 100 Da, 250 Da, 350 Da, 550 Da, 750 Da, 1000 Da, 1500 Da, 2000 Da, 2500 Da, 3000 Da, 3500 Da, 4000 Da, 4500 Da, 5000 Da, 5500 Da, 6000 Da, 6500 Da, 7000 Da, 7500 Da, 8000 Da, 8500 Da, 9500 Da 및 10,000 Da일 수 있다. 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질의 적절한 예로는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1),2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000)) 및 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)과 같은 디스테아로일-sn-glycero-3-포스포에탄올아민과 같은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG)이 있다.
제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질은 90~110:10~1, 90~100:10~1, 90~99:10~1, 93~99:7~1, 95~99:5~1의 몰비로, 적합하게는 100:3, 100:3, 99:3, 98:3, 97:3, 96:3 또는 95:3의 몰비로 제공될 수 있다. 97.3의 몰 비율은 32.4:1의 몰 비율로 표현할 수도 있고, 마찬가지로 100:3의 몰 비율은 33.2:1의 몰 비율로 표현할 수 있다. 또한 제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질의 비율은 예를 들어, 1:1~20:1 w/w, 적합하게는 2:1~12:1 w/w 또는 4:1~9:1 w/w, 예를 들어 4:1, 5:1, 6:1, 9:1 또는 12:1 w/w의 중량/중량비(weight/weight ratio)로 표현될 수 있다. 바람직하게, 상기 조성물은 팔미토일-올레오일 포스파티딜 콜린(POPC)과 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올-아민(DSPE)의 혼합물로 구성된 콜로이드 입자를90~99:10~1, 93~99:7~1, 95~99:5~1의 몰 비율(POPC:DSPE)로서, 적합하게는 97:3에 포함시킬 수 있다. 중량/중량비로 표현하면, 예를 들어 1:1~20:1 w/w, 적합하게는 2:1~12:1 w/w, 예를 들어 4:1, 5:1, 6:1, 9:1 또는 12:1 w/w가 될 수 있다.
일례로, 콜로이드 입자는 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000)을 97:3 몰 비율 또는 9:1 w/w 비율로 구성할 수 있다.
콜로이드 입자는 직경(diameter) 0.05~0.0.3μm 범위의 평균(mean) 입자 크기(평균 입자 크기, average particle size)를 가질 수 있으며, 적합하게는 0.1, 0.15, 0.2 또는 0.25 microns(μm) 정도이다. 평균 입자 크기(평균 입자 크기)는 100~130 nanometres(nm), 적합하게는 110~120nm, 112~118nm, 150~170nm, 155~165nm, 보다 적합하게는 110, 112, 114, 116, 118, 120, 160, 162, 164, 166, 168 또는 170nm가 될 수 있다.
평균 입자 크기는 Malvern Zetasizer Ultra ZSU 5700을 사용하여 측정할 수 있다. 이 기기는 빛의 산란을 통해 입자 크기를 측정하는데, 레이저 빛을 시료에 비추고 입자에 부딪히는 후방 산란이 173°의 각도에서 감지된다(173°는 거의 자체로 되돌아오는 각도이므로 후방 산란이라는 용어가 사용됨). 입자의 브라운 운동(Brownian motion)으로 인해 빛은 다양한 강도로 산란된다. 브라운 운동의 속도는 입자 크기와 관련이 있기 때문에 스토크스-아인슈타인 관계식(Stokes-Einstein relationship)을 통해 입자 크기를 유추할 수 있다.
평균 입자 크기는 콜로이드 입자의 평균 직경에 해당한다. 입자 크기 측정과 관련하여 인용된 다분산 지수(polydispersity index, PDI)는 콜로이드 입자의 평균 직경 주위의 분포 측정에 해당한다. 예를 들어, 본 발명에서 다분산 지수는 최대 0.2, 적합하게는 0.15, 0.12, 0.1 또는 0.5가 될 수 있다.
PDI는 표준편차/평균의 제곱으로 계산된다(예: PDI = (s/m)2 ).
평균 입자 크기와 다분산 지수를 통해 표준 편차를 계산할 수 있다. 표준 편차의 두 배를 사용하면 입자 크기 주변의 95% 신뢰 구간, 즉 시료에 있는 콜로이드 입자의 95%가 속하는 범위를 쉽게 계산할 수 있다.
적합하게, 95% 평균 입자 크기는 50~500nm, 적합하게 50~290nm, 50~285nm, 65~265nm, 65~260nm, 65~180nm, 65~175nm, 65~170nm, 65~165nm, 더 적합하게 65~173nm, 64~161nm, 65~263nm 또는 54~282nm가 될 수 있다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제와 같은 계면활성제를 더 포함할 수 있다. 비이온성 계면활성제는 폴리옥시 에틸렌 소르비탄, 폴리하이드록시에틸렌 스테아레이트 및 폴리하이드록시에틸렌 라우릴에테르로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올리에이트(폴리소르베이트 80 또는 트윈 80이라고도 함)일 수 있다. 제 1 양친매성 지질과 제 2 양친매성 지질은 비이온성 계면활성제에 대해 30:1~2:1 w/w의 비율로 제공될 수 있으며, 적합하게는 25:1, 20:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1 또는 5:1 w/w({제 1 양친매성 지질 + 제 2 양친매성 지질}:{비이온성 계면활성제} )로 제공될 수 있다. 몰 비율로 표현하면, 예를 들어 10~20:1, 12~18:1, 14~16:1, 적합하게는 14:1, 15:1 또는 16:1이 될 수 있다. 계면활성제 농도는 중량 대비 0.25%에서 5%, 예를 들어 1% ~ 3%, 1% ~ 2%일 수 있으며, 일부 예시적인 값은 0.47%, 0.85% 또는 3.5%일 수 있다.
비이온성 계면활성제는 페길화(PEGylated)될 수도 있다. 페길화 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올리에이트(폴리소르베이트 80 또는 트윈 80이라고도 함)일 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜은 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 생체 적합성 폴리머는 분자량이 약 100~약 10,000 Da, 적합하게는 약 2000~약 5000 Da일 수 있으며, 바람직한 값은 약 100 Da, 250 Da, 350 Da, 550 Da, 750 Da, 1000 Da, 1500 Da, 2000 Da, 2500 Da, 3000 Da, 3500 Da, 4000 Da, 4500 Da, 5000 Da, 5500 Da, 6000 Da, 6500 Da, 7000 Da, 7500 Da, 8000 Da, 8500 Da, 9500 Da 및 10,000 Da일 수 있다.
비이온성 계면 활성제는 콜로이드 입자와 연관되거나, 콜로이드 입자의 지질 이중층 막(the lipid bilayer membrane)에 통합되거나, 콜로이드 입자의 지질 이중층 막의 외층에 통합되거나, 콜로이드 입자의 내부 층 지질 이중층 막에 통합될 수 있다.
따라서, 제 1 양친매성 지질과 제 2 양친매성 지질과 비이온성 계면 활성제의 비율은 2~10:1:0~2, 3~9:1:0.5~1.5, 4~9:1:0.5~1 w/w, 적합하게는 9:1:0, 9:1:1, 4:1:0 또는 4:1:0.5 w/w로 제공될 수 있다 ({제1 양친매성 지질}:{제2 양친매성 지질}:{비이온성 계면활성제}). 몰 비율로 표현하면, 예를 들어 30~40:1:0~5, 30~35:1:0~2.5, 30~35:1:0~2.5, 적합하게는 33:1:0, 33:1:2 또는 32:1:3이 될 수 있다.
상기 조성물은 또한 Factor VIII(FVIII) 분자 또는 그 단편(fragment)을 더 포함할 수 있다. 조성물이 Factor VIII 단편을 포함하는 경우, Factor VIII 단편은 생물학적 활성을 유지하는 활성 단편이거나 네이티브 Factor VIII 분자와 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는 것이 적합할 수 있다. 예를 들어, 그러한 활성 단편 중 하나는 B-도메인이 절단된 Factor VIII 단편이다. 또한, 조성물은 네이티브 혈액 인자 및 그 단편을 모두 포함할 수도 있다. 콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자는 1~90:1, 바람직하게는 2~90:1, 5~85:1, 6~10:1, 7~8:1, 7.5~20:1, 10~80:1, 10~15:1, 10~16:1, 10~20:1, 13~19:1, 15~16:1, 15~75:1, 20~70:1, 25~65:1, 30~60:1, 35~55:1, 40~50:1, 예를 들어 10~20:1 및 5~10:1의 화학양론적 비율(stoichiometric ratio)로 제공될 수 있다. 달리 표현하면, 콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자는 1:1, 2:1, 5:1, 7.5:1, 10:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 22:1, 25:1, 26:1, 27:1, 28:1, 29:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1, 65:1, 70:1, 75:1, 80:1, 85:1, 86:1, 90:1, 예를 들어 15.5:1, 13:1, 8:1, 7.7:1, 7:1의 화학양론적 비율로 제공될 수 있다. 보다 구체적으로 전체 길이 FVIII 분자의 경우 화학양론적 비율은 10:1~19:1, 최적은 10~15:1 또는 5~10:1, 최적은 7.5:1일 수 있다. 베타 도메인이 삭제되거나 베타 도메인이 잘린 FVIII 분자의 경우 범위는 13~19:1, 최적은 10~16:1 또는 6~10:1, 최적은 8:1일 수 있다.
이론에 얽매이고 싶지 않지만, 조성물에 존재하는 과량의 콜로이드 입자는 유리 콜로이드 입자(free colloidal particles)가 다른 핵심 혈액 응고 인자(예: A형 혈우병의 경우 FVII 및 FIX)와 가역적으로 결합할 수 있는 충분한 양이며, 입자 관련 Factor VIII(FVIII)가 투여 후 혈소판에 포집되어 가역적으로 결합하여 혈소판에 인자를 농축하고 혈액 외 응고 경로를 촉진할 수 있다고 추정된다.
Factor VIII는 적합한 공급원으로부터 얻을 수 있으며 분자생물학적 기술을 사용하여 재조합 DNA 기술로 생산되거나 화학적으로 합성되거나 포유류의 모유에서 형질전환적으로 생산된 재조합 단백질일 수도 있고 천연 공급원(예: 혈장으로부터 정제된)에서 분리된 Factor VIII일 수도 있다. 적합한 Factor VIII는 인간 Factor VIII와 같은 포유류 Factor VIII이다.
Factor VIII와 같은 혈액 인자는 표면 부착 특성이 특징이다. 이는 혈액 응고 과정(coagulation cascade)의 필수적인 특징으로, 효소와 보조 인자가 과정의 다른 참여 물질, 혈소판 표면 및 부상 부위의 조직에 부착되어야 한다. 혈전이 부상 부위에 남아 위험한 혈전증을 유발하기 위해 표류하지 않도록 하는 것이 특히 중요하다. Factor VIII와 같은 혈액 인자는 유리 및 플라스틱 표면에 과도하게 달라붙기 때문에 이러한 특성은 의약품 제형에 어려움을 준다. 실제로 폴리옥시 에틸렌(20) 소르비탄 모노올레에이트 폴리소르베이트(Tween®80)와 같은 비이온성 계면활성제를 광범위하게 사용하면 이러한 문제를 완화할 수 있다.
콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자의 화학양론적 비율(stoichiometric ratio)을 결정하려면 다음 계산을 수행해야 한다. 먼저 FVIII IU당 FVIII 분자를 결정해야 한다. FVIII의 질량은 FVIII의 변형(예: 전체 길이와 β-도메인 삭제)에 따라 달라진다는 점에 유의해야 한다. 둘째, 콜로이드 입자 그램당 입자 수를 결정해야 한다. 마지막으로, 이에 따라 화학양론적 비율을 결정할 수 있다. 35 IU/kg FVIII(베타 도메인 삭제 및 전체 길이 모두)과 22 mg/kg 콜로이드(PEGLip)를 사용한 계산의 예는 다음과 같다:
계산 예제 1, 베타 도메인이 삭제된 rFVIII
계산 예제 2, 전체 길이 rFVIII
상기 조성물은 추가적인 치료 활성 화합물 또는 분자, 예를 들어 항염증제, 진통제 또는 항생제 또는 Factor VIII의 활성을 촉진하거나 향상시킬 수 있는 기타 약학 활성제를 포함할 수 있다.
상기 조성물은 임의의 적합한 부형제, 희석제 및/또는 보조제를 더 포함할 수 있다. 완충액과 같은 적절한 희석제는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 수용성 염과 적절한 산으로 제형화될 수 있다. 적합한 완충액은 아미노산(예: 히스티딘), 무기산의 염(예: 구연산, 젖산, 숙신산, 구연산 및 인산으로 이루어진 군으로부터 선택된 산) 및 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속(예: 나트륨 염, 마그네슘 염, 칼륨 염, 리튬 염 또는 칼슘 염 - 예: 염화나트륨, 인산염 나트륨 또는 구연산 나트륨)을 포함할 수 있지만 이에 한정되지 않는다. 이러한 부형제, 완충제 및/또는 보조제의 예로는 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS), 인산 칼륨, 인산 나트륨 및/또는 구연산 나트륨 등이 있다. 기타 생물학적 완충제에는 PIPES, MOPS 등이 포함될 수 있다.
적합한 수성 구연산염 완충액(aqueous citrate buffer)은 구연산 나트륨 완충액 또는 구연산 칼륨 완충액(예: 50mM 구연산 나트륨 완충액)일 수 있다. 적합한 인산염 완충액은 인산나트륨 완충액, 예를 들어 25mM 인산나트륨 완충액일 수 있다.
조성물에 적합한 pH 값은 일반적으로 생체 내(in vivo) 투여에 허용되는 모든 pH 값(예: pH 5.0~pH 9.0, 적합하게는 pH 6.7~pH 7.4 또는 pH6.8, pH 6.9, pH 7.0, pH 7.2)을 포함한다. pH는 적절한 산 또는 알칼리(예: 염산)로 적절히 조정할 수 있다.
본 발명의 조성물은 사용 준비가 완료된 수성 현탁액으로 제형화되거나 동결건조된 제형으로 제조될 수 있다. 본 발명의 동결건조 제형은 적절한 희석제, 보조제 또는 부형제(예: 생리적으로 허용되는 완충제)와 함께 별도의 제형으로 제공될 수 있다. 본 명세서에 설명된 바와 같이, 이러한 조성물은 별도의 제형으로서 Factor VIII를 추가로 포함하거나 본 명세서에 설명된 바와 같이 콜로이드 입자와 함께 제형화될 수 있다. 일반적으로 재구성을 위해 동결건조된 Factor VIII(FVIII) 한 바이알(vial)과 별도의 콜로이드 입자(PEGLip) 용액 한 바이알이 제공된다.
콜로이드 입자는 수성 구연산염 완충액에 총 지질 9%(w/v)의 현탁액으로 저장할 수 있으며, 적절하게는 총 지질 7%, 6%, 5%, 4%(w/v)의 현탁액으로 저장할 수 있다. 환자에게 필요한 외인성 Factor VIII(FVIII)의 농도가 알려지면, 필요한 경우 벌크 용액을 50mM 구연산나트륨 용액으로 희석하여 콜로이드 입자의 농도를 조정하여 Factor VIII(FVIII)가 첨가될 때 원하는 비율의 콜로이드 입자 대 Factor VIII(FVIII) 분자를 얻을 수 있도록 할 수 있다.
Factor VIII는 전적으로 외인성일 수 있으며, 예를 들어 저해제가 있는 중증 혈우병 환자의 경우, 혈장 농축액에서 추출하거나 재조합하여 생산할 수 있다. 또는 환자가 Factor VIII를 자가 제조할 수 있는 능력을 어느 정도 보유하고 있는 경우(예: 경증 또는 중등도 혈우병 환자 또는 후천성 혈우병 환자), 외인성 Factor VIII를 더 적은 양 또는 전혀 투여하지 않을 수 있다.
이론에 얽매이고 싶지 않지만, 조성물에 존재하는 과량의 콜로이드 입자가 유리 콜로이드 입자가 다른 핵심 혈액 응고 인자(예: 혈우병 A의 경우 FVII 및 FIX)와 가역적으로 결합할 수 있을 만큼 충분한 양으로 존재하여 투여 후 혈소판에 포집되어 가역적으로 결합하여 혈소판에 응고 인자를 집중시키고 외인성 혈액 응고 경로를 촉진할 수 있다는 추정이 있다.
주입 시 콜로이드 입자는 혈소판 표면에 가역적으로 결합하여 다른 혈소판의 막과 융합한다. 콜로이드 입자 입자가 이미 외인성 Factor VIII와 결합되어 있는 경우, 이는 혈소판 표면에 Factor VIII를 집중시키고 일부는 혈소판으로 포식되거나 생성되는 TF 함유 친응고성 미립자와 결합하여 단백질을 저해제 및 정상적인 제거 메커니즘(예: LRP-1)으로부터 보호하여 단백질의 반감기가 길어지게 한다. 중등도 또는 경증 혈우병 환자의 경우 콜로이드 입자는 또한 순환하는 Factor VIII를 포집하여 혈소판 또는 생성되는 TF 함유 친응고성 미립자 내에 농축시킨다. 주사 시 Factor VIII와 관련이 없는 콜로이드 입자는 FVII뿐만 아니라 다른 내인성 혈액 인자(예 FIX)를 혈소판 표면에서 포집하고 이를 생성된 TF 함유 친응고성 미립자와 결합하기 시작한다; 또한 인자가 부착되지 않은 입자도 혈소판 표면에 결합 및 융합하여 TF 함유 친응고성 미립자를 형성하고 혈액 응고 과정의 소용돌이 동안 혈소판 반응 표면에서 활성화된 형태인 FVIIa 및 FIXa를 포함한 추가 인자를 포집 및 집중시키는 기회주의적 함정으로 작용할 수 있다.
일반적으로 내피가 손상되면 조직 인자는 FVII를 FVIIa로 전환하여 결합한다. 그런 다음 TF-FVIIa 복합체는 활성화된 혈소판의 표면으로 이동하여 결합하고 FX를 FXa로 변환하여 프로트롬빈을 절단하여 트롬빈을 생성하기 시작하는데, 이 과정은 FXa가 (활성화된 혈소판에서 방출된) FVIIa와 결합하여 프로트롬비나제 복합체를 형성하고 활성화된 혈소판의 노출된 막 표면과 이로부터 파생된 TF 함유 친응고성 미립자에도 조립될 때 최적화된다. 본 발명은 FVII를 이 반응 표면에 근접하게 배치하여 많은 TF 함유 친응고성 미립자로 조각이 났을 수 있다. 따라서 콜로이드 입자, 즉 혈소판과 미립자에 결합된 상태로 남아있는 FVIIa로의 전환과 TF-FVIIa 복합체의 형성은 혈소판과 그 미립자의 반응 표면에서 두 가지 중요하고 즉각적인 효과와 함께 생성한다:
1)
이러한 혈소판 및 TF 함유 친응고성 미립자 표면에서도 FX가 FXa로 국소적으로 전환되어 FV('프로트롬비나제 복합체(prothrombinase complex)')와 결합하여 고도로 국소화된 트롬빈 버스트를 생성함으로써 피브린의 생산을 시작하고 동시에 증폭 단계를 촉매화하며;
2)
콜로이드 입자를 통해 공동 국소화(co-localised)된 FVIII과 연관될 수 있는 FIX에서 FIXa로의 국소적(localised) 전환은, 동일한 막 표면에 테나제 복합체를 형성하여, 위의 (1)에서 증가된 개시 단계에 의해 촉매된 증폭 단계를 공급하고 최적화한다. 대안적으로, 또한 콜로이드 입자 막은 대체 테나제 복합체를 형성하여 FX를 FXa로 유인하고 전환할 수 있다.
혈액 응고 과정이 시작되고(initiated) 피브린(fibrin)이 생성되면 혈소판은 일반적으로 응고하여 피브린 메시(fibrin mesh)를 채운다. 콜로이드 입자가 혈소판과 결합하고 융합하는 능력은 혈소판이 그물망에서 서로 접착력을 강화하여 혈전을 안정화시키는 최종 역할을 한다.
본 발명은 여러 가지 방식으로 작용하여 제한된 양의 FVIII과 FVIII에 대한 저해제가 모두 존재할 때 FX를 FXa로 전환하는 것을 개선할 수 있다. 첫째, FX의 FXa 전환을 촉매화하기 위해 FIXa와 테나제 복합체(tenase complex)를 형성할 수 있는 제한된 양의 FVIII의 잠재력을 보호, 향상 및 극대화함으로써; 둘째, FVIIIa의 작용을 모방하고 FIXa와 결합하여 대체 테나제 복합체를 제공함으로써 FX를 FXa로 전환하는 촉매를 제공함으로써; 셋째, TF 함유 친응고성 미립자의 생산을 통해 외인성 경로를 상향 조절하고, 외인성 테나제 복합체를 통해 FX를 FXa로 전환하는 것을 자극하기 위해 FVII/FVIIa를 농축함으로써; 마지막으로, 상향 조절된 외인성 경로를 통해 FIX를 FIXa로 전환하여 내인성 테나제 복합체의 형성에 공급하는 것을 향상시킨다. 이러한 작용을 통해 본 발명은 내재 경로의 테나제 복합체에서 FVIII의 활성을 보호, 보존 및 극대화하는 동시에 테나제 복합체에서 FVIIIa의 기능을 모방하고 동시에 외재 경로의 상향 조절을 통해 해당 경로를 우회함으로써 다양한 작용 모드를 갖는다.
콜로이드 입자는 외인성 경로를 통해 FX에서 FXa로의 전환을 향상시키는 우회제 역할을 할 뿐만 아니라 FVIII을 보호하고 FIX/FIXa를 농축하여 테나제 복합체 형성을 가속화하거나 FIXa와 FVIII 독립적인 테나제 복합체를 형성하여 내인성 경로를 증폭하는 이중 작용을 한다. 강화된 개시(외인성) 및 증폭(내인성) 단계를 함께 사용하면 응고가 더 빨리 시작되고 특히 저해 항체가 있는 경우 일반적으로 감소된 Factor VIII 양으로 가능한 것보다 더 단단한 응고로 결합할 수 있는 섬유소가 더 빨리 생성되어 환자의 출혈을 더 빨리 해결할 수 있다.
따라서 본 발명은 콜로이드 입자의 능력, 특히 혈소판 표면과 혈소판 내부에 정확한 양의 내인성 및 외인성 Factor VIII를 농축하는 콜로이드 입자와 Factor VIII의 특정 배합 비율에 의존할 뿐만 아니라 TF 함유 친응고성 미립자의 생산을 자극하는 능력에 의존한다. 따라서 A형 혈우병의 경우 Factor VIII 저해제가 있는 경우 제한된 양의 Factor VIII로 트롬빈 생성의 시작을 가속화하는 시너지 효과와 함께 TF-FVIIa 중심의 개시 단계(TF-FVIIa-centric initiation phase)와 혈액 응고 과정의 증폭 단계(amplification phase)가 모두 최적화된다.
주입된 외인성 Factor VIII는 저해제와 정상적인 제거 메커니즘에 의해 분해되지 않고 혈소판에서 인자를 농축하고 TF를 함유한 응고 촉진제 미세입자의 가속화 효과를 통해 더 나은 품질의 혈전이 더 빨리 형성되기 때문에 본 발명은 유전자 치료를 통해 혈소판에서 이소성(ectopic) FVIII을 생성함으로써 발견되는 다른 공급 방법보다 Factor VIII를 절약할 수 있다. 이러한 이점은 환자의 주사 횟수를 줄이거나 주사 횟수를 줄여 처방된 치료의 순응도를 높이고 우발적이고 치명적인 출혈의 가능성을 낮추는 데 도움이 될 것이다.
본 발명은 외인성 Factor VIII 및 내인성 인자(FVII/FVIIa 및 FIX/FIXa)를 혈소판 내외에 집중시키지만, 유전자 치료를 통해 혈소판에서 이소성 FVIII을 생산하려는 성공적인 시도와 달리 장기간의 발생 프로그램, 규제 부담 또는 바이러스 매개 유전자 치료의 비가역적 특성을 필요로 하지 않는다.
본 발명은 치료하고자 하는 질환에서 정상보다 낮은 수준의 제한된 양의 Factor VIII(예를 들어 A형 혈우병(HA)의 경우 FVIII)의 효과를 농축 및 증폭함으로써 Factor VIII를 절약할 수 있을 것으로 기대된다, 혈우병 환자, 특히 저해 항체가 단백질을 파괴하여 보호되지 않기 때문에 일반적으로 Factor VIII를 투여할 수 없는 저해제 환자의 경우 지혈을 위해 일반적으로 필요한 주사 횟수를 줄이거나 더 적은 용량을 투여할 수 있게 해줄 수 있다.
본 발명은 새로 엔지니어링된 Factor VIII 분자 또는 이러한 분자 또는 활성화된 형태의 모방체(mimetic)를 만드는 접근 방식과 달리, 재조합 인간(recombinant human) FVIII(rhFVIII)과 같이 분자에 외부 서열을 엔지니어링할 필요 없이 현재의 모든 혈장 유래 또는 재조합 Factor VIII 분자와 함께 사용할 수 있다. 따라서 인식되지 않은 새로운 단백질에 대한 면역 조절 반응이 발생할 위험이 줄어든다.
이 두 가지 접근법, 즉 혈소판에서 FVIII을 생산하거나 모방체(mimetic)을 사용하는 것과 달리, 본 발명은 외인성, 촉진 경로의 외인성 성분을 농축할 뿐만 아니라 내인성 인자를 농축하고 TF 함유 친응고성 미립자의 생성을 자극하여 빠른 트롬빈 버스트로 내인성 경로를 증폭시키고, 외인성 경로의 다른 주요 성분(FIXa)의 국소 생성을 촉진하여 새롭고 매우 필요한 이중 작용을 가지고 있다. 이는 Factor VIII 수준이 다시 떨어지면 트롬빈 생성으로 가는 일반적인 경로(the common pathway)를 계속 유도할 수 있게 한다.
본 발명의 사용은 유리 Factor VIII보다 Factor VIII를 절약한다. 이는 환자의 편의성(주사 횟수 감소), 순응도 개선(예방 주사 누락 감소), 의료 경제성 개선(Factor VIII 비용 절감, 혈우병 환자의 순응도가 떨어지고 출혈이 생성했을 때 응급 주입 횟수 감소)을 의미한다.
본 발명은 표준 혈장 유래 또는 재조합 생산 형태의 Factor VIII를 사용할 수 있게 함으로써 저해제가 있는 A형 혈우병 환자에게 Factor VIII 예방 치료를 가능하게 하는 비용 효율적인 솔루션을 제공하는 것이 궁극적인 목표이다.
본 발명의 사용은 저해제를 사용하는 혈우병 환자에서 우회제로서 외인성 FVIIa를 사용하는 것보다 절약된다. 본 발명은 환자 자신의 FVII를 사용할 뿐만 아니라 혈소판에서 이를 농축하고 TF 함유 친응고성 미립자의 생성을 자극하여 FVII의 효과를 극대화함으로써 외인성 FVIIa의 비용과 단백질 과다 투여로 인한 혈전 반응의 우려를 피할 수 있다.
조성물은 주사 또는 주입, 바람직하게는 정맥, 피하, 피내 또는 근육 내 투여로 투여할 수 있다. 주사는 단일 용량의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 주입은 장기간에 걸쳐 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 조성물은 적어도 하루에 1회, 적어도 하루에 2회, 일주일에 약 1회, 주당 약 2회, 2주에 약 1회 또는 한 달에 약 1회 투여할 수 있다. 또한, 본 조성물은 FVIII의 혈중 농도가 일정한 수준으로 유지되도록 간격을 두고 투여 및/또는 재투여될 수 있으며, 환자의 혈중 FVIII 농도가 치료 이하 또는 치료와 무관한 수준에 도달할 때까지 재투여를 기다릴 필요 없이 지속적이고 일정하며 예측 가능한 치료 효과를 제공할 수 있다. 기존의 관행에서는 일반적으로 피험자에게 "건강한 수준(healthy levels)" 또는 치료 효과/관련성 있는 수준의 FVIII이 혈류에 여전히 존재하는 동안에는 후속 용량의 FVIII을 투여하지 않는다. 따라서, 본 발명은 예방에 보다 이상적으로 적합한 혈류 내 FVIII의 치료적 수준을 보다 일관되게 제공한다.
피험자의 혈액에서 치료 이하 또는 치료와 무관한 수준의 FVIII은 환자가 전혈 응고 시간을 20분 이하, 15분 이하 또는 12분 이하로 유지할 수 없는 경우로 특징지을 수 있다.
본 발명은 환자가 20분 이하, 15분 이하 또는 12분 이하의 전혈 응고 시간을 유지할 수 있는 조성물을 제공한다.
놀랍게도 생체 적합성 폴리머로 유도된 콜로이드 입자(리포좀)와 결합된 혈액 인자 제제가 피하 투여에 성공하여 혈우병 환자에게 치료적으로 효과적인 용량의 혈액 인자를 투여할 수 있다는 사실이 밝혀졌다.
본 발명의 실시예에서, PEG는 혈액 인자와 결합하기 전에 소포 형성 중에 콜로이드 입자에 통합된다. 혈액 인자의 특정 아미노산 서열은 리포솜 외부에 있는 PEG 분자의 카바메이트(carbamate) 기능에 비공유 결합할 수 있는 것으로 여겨진다.
콜로이드 입자는 혈액 인자를 캡슐화하지 않는다. 혈액 인자는 리포솜 외부 표면의 폴리머 사슬과 비공유적으로 상호 작용하며 폴리머 사슬을 활성화하기 위한 화학 반응은 수행되지 않는다. 혈액 인자와 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 리포솜 사이의 상호작용의 특성은 이온 상호작용, 소수성 상호작용, 수소 결합 및 반데르발스 인력과 같은 비공유 메커니즘에 의해 이루어질 수 있다(Arakawa, T. and Timasheff, S. N., Biochemistry 24: 6756- 6762 (1985; Lee, J. C. and Lee, L. L. Y., J. Biol. Chem. 226: 625-631 (1981)). 이러한 폴리머의 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다.
친수성 폴리머로 유도체화된 소포 형성 지질을 제조하기 위해 다양한 알려진 결합 반응이 사용될 수 있다. 예를 들어, 폴리머(예: PEG)는 시아누릭 염화물기(cyanuric chloride group)를 통해 포스파티딜 에탄올아민(PE)과 같은 지질로 유도체화될 수 있다. 또는, 캡핑된 PEG를 카르보닐 디이미다졸 결합 시약으로 활성화하여 활성화된 이미다졸 화합물을 형성할 수도 있다. 카르바메이트 연결 화합물(carbamate-linked compound)은 MPEG(메톡시PEG)의 말단 수산기를 p-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)와 반응시켜 p-니트로페닐 탄산염(p-nitrophenyl carbonate)을 생성하여 제조할 수 있다. 이 생성물을 1- 아미노-2,3- 프로판디올과 반응시켜 중간 카르바메이트를 생성한다. 디올(diol)의 수산기를 아실화하여 최종 생성물을 얻는다. 1- 아미노-2, 3- 프로판디올 대신 글리세롤을 사용하는 유사한 합성을 사용하여 WO 01/05873에 설명된 대로 탄산염 연결 생성물을 생산할 수 있다. 다른 반응은 잘 알려져 있으며, 예를 들어 US 5,013,556에 설명되어 있다.
콜로이드 입자(리포솜)는 다양한 파라미터에 따라 분류할 수 있다. 예를 들어 라멜라(lamellae)의 크기와 개수(구조적 파라미터)를 파라미터로 사용할 경우 리포솜(liposomes)은 크게 세 가지 유형으로 설명할 수 있다: 다라멜라 소포(Multilamellar vesicles, MLV), 작은 단라멜라 소포(small unilamellar vesicles, SUV), 큰 단라멜라 소포(large unilamellar vesicles, LW).
MLV는 건조 인지질이 겔에서 액정 상전이 온도(Tm) 이상으로 수화될 때 자연적으로 형성되는 종이다. MLV의 크기는 이질적이며 그 구조는 동심원의 수성층과 지질층이 번갈아 가며 있는 양파 껍질과 유사하다.
SUV는 초음파 처리(sonication) 또는 압출(extrusion), 고압 균질화(high pressure homogenisation) 또는 고전단 혼합(high shear mixing)과 같은 기타 방법으로 MLV에서 형성되며 단층이다. 표면 대 부피 비율이 높은 가장 작은 종으로, 지질 무게 대비 수성 공간의 포집 부피가 가장 낮다.
세 번째 유형의 리포솜 LUV는 큰 수성 구획과 단일(단라멜라) 또는 소수(올리고라멜라(oligolamellar)) 지질층을 가지고 있다. 자세한 내용은 D. Lichtenberg and Y. Barenholz, in “Liposomes: Preparation, Characterization, and Preservation, in Methods of Biochemical Analysis”, Vol. 33, pp. 337 - 462 (1988)에 공지되어 있다.
여기서 사용되는 "로딩"이라는 용어는 로딩될 생체 폴리머 물질의 모든 종류의 상호작용, 예를 들어 캡슐화, (소포의 내부 또는 외부 벽에 대한) 접착 또는 생체 폴리머 물질의 압출 유무에 관계없이 벽에 매립하는 것과 같은 상호작용을 의미한다.
본 명세서 및 상기에서 사용된 바와 같이, "리포솜(liposome)"이라는 용어는 콜로이드 입자를 의미하며, 자발적 또는 비 자발적으로 소포화될 수 있는 양친매성 화합물의 모든 구 또는 소포, 예를 들어 적어도 하나의 아실기가 복합 인산 에스테르로 대체된 인지질을 포함하도록 의도되었다. 리포솜은 유리 상태부터 액정까지 모든 물리적 상태로 존재할 수 있다. 대부분의 트리아실글리세라이드(triacylglycerides)가 적합하며, 본 발명에 사용하기에 적합한 가장 일반적인 인지질은 인산의 콜린 에스테르에 연결된 스테아르산, 팔미트산 및 올레산의 디글리세라이드의 혼합물인 레시틴(포스파티딜콜린(PC)이라고도 함)이다. 레시틴은 달걀, 콩, 동물 조직(뇌, 심장 등)과 같은 모든 동식물에 존재하며 합성적으로도 생산할 수 있다. 인지질의 공급원이나 합성 방법은 중요하지 않으며, 자연적으로 발생하거나 합성된 인지질은 모두 사용할 수 있다.
구체적인 인지질류(phosphatides)의 예로는 L-a-(디스테아로일) 레시틴(L-a-(distearoyl) lecithin), L-a-(디팔미토일) 레시틴(L-a-(dipalmitoyl) lecithin), L-a-포스파티드산(L-a-phosphatide acid), L-a-(딜라우로일)-포스파티드산(L-a-(dilauroyl)-phosphatidic acid), L-a(디미리스토일) 포스파티드산(L-a(dimyristoyl) phosphatidic acid), L-a(디올레오일)포스파티드산(L-a(dioleoyl)phosphatidic acid), DL-a(디팔미토일) 포스파티딘산(DL-a (di- palmitoyl) phosphatidic acid), L-a(디스테아로일) 포스파티딘산(, L-a(distearoyl) phosphatidic acid) 및 뇌, 간, 난황, 심장, 대두 등으로부터 추출 또는 합성으로 제조된 다양한 유형의 L-a-포스파티딜콜린(L-a-phosphatidylcholines) 및 이들의 염이 있다. 다른 적절한 변형으로는 포스파티딜콜린(PC)의 지방 아실 잔기 가교제의 과산화 제어 및 미셀을 단독으로 형성하거나 PC의 알킬 유사체와 같은 PC와 혼합할 때 형성되는 양성자-음성자 양친매성 물질(zwitterionic amphipathates)을 들 수 있다.
인지질은 순도가 다양할 수 있으며 전체 또는 부분적으로 수소화할 수도 있다. 수소화는 원치 않는 과산화 수준을 낮추고 젤을 액체/결정 상 전이 온도(Tm )로 수정 및 제어하여 패킹 및 누출에 영향을 준다.
리포솜은 다양한 생물학적 유체를 포함한 특정 저장소의 요구 사항에 맞게 "맞춤화(tailored)"할 수 있으며, 응집이나 크로마토그래피 분리 없이 안정성을 유지하고 주입된 유체에서 잘 분산되어 현탁 상태를 유지한다. 현장 유동성은 구성, 온도, 염도, 2가 이온 및 단백질의 존재 여부에 따라 달라진다. 리포솜은 다른 용매나 계면활성제와 함께 또는 없이 사용할 수 있다.
일반적으로 적합한 지질은 적어도 계란 또는 대두 PC의 아실 사슬 성분의 전이 온도(Tm )와 관련하여 특징적인 아실 사슬 조성, 즉 하나의 사슬은 포화, 하나는 불포화 또는 둘 다 불포화인 사슬을 가질 수 있다. 그러나 두 개의 포화 사슬을 사용할 가능성도 배제할 수 없다.
리포솜은 불안정성 및/또는 응집 및/또는 크로마토그래피 분리를 유발하지 않는 한 다른 지질 성분을 포함할 수 있다. 이는 일상적인 실험을 통해 확인할 수 있다.
페길화 인지질은 콜로이드 입자의 표면에 물리적으로 부착되거나 콜로이드 입자의 막에 삽입될 수 있다. 따라서 폴리머는 콜로이드 입자에 공유 결합될 수 있다.
단라멜라(unilamellar) 또는 다라멜라(multilamellar)로 변형된 콜로이드 입자를 생산하는 다양한 방법이 알려져 있고 이용 가능하다(Lichtenberg and Barenholz, (1988) 참조):
1. 인지질의 박막을 수성 매질로 수화시킨 다음 기계적 흔들기 및/또는 초음파 조사 및/또는 적절한 필터를 통해 압출한다;
2. 인지질을 적절한 유기 용매에 용해하고 수성 매질과 혼합한 후 용매를 제거한다;
3. 임계점 이상의 가스(예: 프레온 및 CO2 또는 CO2 및 기타 기체 탄화수소의 혼합물과 같은 기타 가스)를 사용한다; 또는
4. 지질 세제 혼합 미셀(lipid detergent mixed micelles)을 준비한 다음 세제의 농도를 리포솜이 형성되는 임계 농도 이하로 낮춘다.
일반적으로, 이러한 방법은 약 0.02~10㎛ 이상의 이질적인 크기를 갖는 콜로이드 입자를 생성한다. 상대적으로 작고 크기가 잘 정의된 콜로이드 입자가 본 발명에서 사용하기에 바람직하기 때문에, "콜로이드 입자 다운사이징(colloidal particle down-sizing)"으로 정의되는 제2 처리 단계는 콜로이드 입자 현탁액의 크기 및 크기 이질성을 감소시키는 데 사용될 수 있다.
콜로이드 입자 현탁액은 약 5㎛ 미만의 크기 범위, 예를 들어 0.4㎛ 미만의 크기 범위에서 소포의 선택적 크기 분포를 달성하도록 크기가 조정될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 콜로이드 입자는 평균 입자 크기 직경이 약 0.03~0.4 또는 0.05~0.15 microns(μm), 적합하게는 약 0.1 μm이다.
이 범위의 콜로이드 입자는 적절한 필터를 통해 여과하여 쉽게 멸균할 수 있다. 또한 소포가 작을수록 보관 시 응집되는 경향이 적어 리포솜을 정맥 또는 피하 주사할 때 생성할 수 있는 심각한 막힘이나 막힘 문제를 줄일 수 있다. 마지막으로, 크기가 서브미크론(submicron) 범위로 줄어든 리포솜은 더 균일한 분포를 보이다.
본 발명에 적합한 방식으로 콜로이드 입자의 크기 및 크기 이질성을 줄이기 위한 몇 가지 기술을 사용할 수 있다. 표준 수조 또는 프로브 초음파 처리를 통해 콜로이드 입자 현탁액에 초음파를 조사하면 크기가 0.02~0.08 μm 사이의 작은 단층 소포(small unilamellar vesicles, SUV)까지 점진적으로 크기가 감소한다.
균질화(Homogenization)는 전단 에너지를 사용하여 큰 콜로이드 입자를 작은 입자로 쪼개는 또 다른 방법이다. 일반적인 균질화 절차에서는 콜로이드 입자 현탁액을 표준 에멀젼 균질화기를 통해 일반적으로 약 0.1~0.5 μm 사이의 선택된 리포솜 크기가 관찰될 때까지 재순환시킨다. 두 방법 모두에서 입자 크기 분포는 기존의 레이저 빔 입자 크기 측정으로 모니터링할 수 있다.
작은 기공의 폴리카보네이트 필터(small-pore polycarbonate filter) 또는 이와 동등한 멤브레인을 통해 콜로이드 입자를 압출하는 것도 멤브레인의 기공 크기에 따라 평균이 약 0.02~5μm 범위인 비교적 잘 정의된 크기 분포로 콜로이드 입자 크기를 줄이는 효과적인 방법이다.
일반적으로 현탁액은 원하는 콜로이드 입자 크기 분포에 도달할 때까지 하나 또는 두 개의 적층 막을 여러 번 순환한다. 콜로이드 입자는 리포솜 크기를 점진적으로 감소시키기 위해 연속적으로 더 작은 기공 막을 통해 압출될 수 있다.
원심분리 및 분자체 크로마토그래피(molecular sieve chromatography)는 입자 크기가 1μm 미만인 리포솜 현탁액을 생성하는 데 사용할 수 있는 다른 방법이다. 이 두 가지 방법은 큰 입자를 작은 입자로 변환하는 것이 아니라 큰 리포솜을 우선적으로 제거한다. 콜로이드 입자 수율은 그에 따라 감소한다.
크기 처리된(size-processed) 콜로이드 입자 현탁액은 기존의 0.45 μm 깊이 막 필터와 같이 입자 구별 크기가 약 0.4 μm인 멸균 멤브레인을 통과하여 쉽게 멸균할 수 있다. 리포솜은 동결 건조된 형태로 안정적이며 사용 직전에 물에 흡수하여 재구성할 수 있다.
콜로이드 입자를 형성하는 데 적합한 지질은 상기에 설명되어 있다. 적절한 예로는 디미리스토일포스파티딜콜린(dimirystoylphosphatidylcholine, DMPC) 및/또는 디미리스토일-포스파티딜글리세롤(dimirystoyl - phosphatidylglycerol, DMPG)과 같은 인지질, 부분 또는 완전 정제 후 직접 또는 부분 또는 완전 수소화 후 얻은 계란 및 대두 유래 인지질이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다.
다음 네 가지 방법은 WO 95/04524에 설명되어 있으며, 일반적으로 본 발명에 따라 사용되는 콜로이드 입자(리포솜)의 제조에 적합하다.
방법 A
a) 물과 섞이지 않는 유기 용매에 소포를 형성하기에 적합한 지질과 같은 양친매성 물질 혼합
b) 고체 지지체(solid support)가 존재하는 상태에서 용매 제거, 대안적으로, 건조된 양친매성 물질 또는 그 혼합물을 직접 어떤 형태(분말, 입상 등)로든 직접 사용 가능
c) 단계 b)의 생성물을 생리적으로 호환 가능한 용액에서 생체 폴리머 물질의 용액으로 흡수(taking up)
d) 용해 또는 분산 특성을 갖는 유기 용매를 첨가, 뿐만 아니라
e) 생체 폴리머 물질의 기능을 유지하는 조건에서 단계 d) 에서 얻은 분획을 건조시킨다.
방법 A의 단계 a)에 따르면, 위에서 언급한 바와 같이 소포 형성에 적합한 양친매성 물질을 물과 섞이지 않는 유기 용매에 혼합한다. 물과 섞이지 않는 유기 용매는 불소화 탄화수소, 염소화 탄화수소 등과 같은 극성 친수성 용매일 수 있다.
본 발명의 방법의 단계 b)에서 용매는 고체 지지체가 있는 상태에서 제거된다. 고체 지지체는 비드형 구조를 갖는 불활성 유기 또는 무기 물질일 수 있다. 무기 지지체의 재료는 유리일 수 있고 유기 재료는 테플론(TeflonTM ) 또는 기타 유사한 폴리머일 수 있다.
본 발명의 방법 A의 단계 c)는 단계 b)의 생성물을 생리적으로 호환되는 용액에 캡슐화할 물질의 용액으로 취하는 단계이다.
생리적으로 호환되는 용액은 최대 약 1.5 중량 %의 염화나트륨 용액과 동일할 수 있다. 예를 들어 당류 및/또는 아미노산과 같이 생리적으로 호환되는 다른 염을 냉동 보호제로 사용할 수도 있다. 예를 들어 유당(lactose), 자당(sucrose) 또는 트레할로스(trehalose)를 동결 보호제로 사용할 수 있다.
선택적으로, 가) 단계와 나) 단계 사이에 가) 단계의 바이러스 비활성화, 멸균, 탈원자화, 분획 여과 등의 단계가 제공될 수 있다. 이는 조제 초기 단계에서 약학적으로 허용되는 용액을 얻기 위해 유리할 수 있다.
방법 A의 단계 d)는 용해성 또는 분산성을 갖는 유기 용매를 첨가하는 단계이다.
유기 용매는 물과 섞일 수 있는 유기 극성 용매일 수 있다. 알킬 사슬에 1~5개의 탄소 원자가 있는 저지방족 알코올(예: 3차 부탄올(tertiary butanol, t-부탄올))도 사용할 수 있다. 물과 혼화 가능한 유기 극성 용매의 양은 리포솜에 적재할 물질과의 간섭에 따라 크게 달라진다. 예를 들어, 단백질이 로드되는 경우 단백질의 활성에 영향을 미치는 용매의 양에 따라 상한이 설정된다. 이는 로드할 물질의 특성에 따라 크게 달라질 수 있다. 예를 들어 혈액 응고 인자가 Factor IX 로 구성된 경우 약 30%의 t-부탄올이 필요한 반면, Factor VIII의 경우 10% 미만의 t-부탄올이 적합한다(Factor VIII은 t-부탄올의 영향에 훨씬 더 민감한다). 이 예에서 t 부탄올의 비율은 최종 농도에 대해 계산된 부피 대비 백분율을 기준으로 한다.
선택적으로, d) 단계 이후에 바이러스 비활성화 멸균 및/또는 d) 단계 이후에 산출된 분획의 분할을 수행할 수 있다.
본 발명의 단계 e)는 적재될 물질의 기능을 유지하는 조건 하에서 단계 d)에서 얻은 분획을 건조하는 것이다. 혼합물을 건조하는 한 가지 방법은 동결 건조이다. 동결 건조는 동결 보호제, 예를 들어 유당 또는 기타 당류 또는 아미노산의 존재 하에서 수행될 수 있다. 또는 증발 또는 분무 건조를 사용할 수도 있다.
건조된 잔류물은 사용하기 전에 수성 매질에서 흡수할 수 있다. 고체를 흡수한 후 각 리포솜의 분산액을 형성한다. 수성 매질은 식염수를 포함할 수 있으며, 형성된 분산액은 필요한 경우 리포솜의 크기를 줄이기 위해 선택적으로 적절한 필터를 통과할 수 있다. 적합하게, 리포솜은 0.02 내지 5 μm의 크기, 예를 들어 0.4 μm 미만의 범위를 가질 수 있다.
방법 A로 얻을 수 있는 리포솜은 혈액 인자의 높은 로딩을 보여준다.
따라서, 본 발명의 조성물은 또한 방법 A의 단계 c) 또는 d)의 분획을 분리하여 얻을 수 있는 중간 생성물일 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제는 방법 A의 단계 e)의 생성물을 분산액(수성 매질 내 리포좀(liposomes in aqueous medium)) 형태로 물에 취한 후 얻을 수 있는 수성 분산액을 포함할 수도 있다.
또는, 본 발명의 약학 조성물은 방법 B, C, D 및 E로 지칭되는 다음의 방법에 의해서도 얻을 수 있다.
방법 B
이 방법은 방법 A의 a), b), c) 단계도 포함하지만, 방법 A의 d), e) 단계는 생략한다.
방법 C
방법 C에서는 방법 A의 d) 단계를 최소 2회 반복해야 하는 동결 및 해동 주기로 대체한다. 이 단계는 리포솜을 생산하기 위해 선행 기술에서 잘 알려져 있다.
방법 D
방법 D는 삼투성 성분의 사용을 배제한다. 방법 D에서는 소포의 준비, 로드할 물질의 혼합 및 실질적으로 무염 용액, 이렇게 얻은 분획의 공동 건조 단계가 포함된다.
방법 E
방법 E는 위에서 설명한 방법 A - D보다 간단하다. 이 방법은 리포솜 제조에 사용되는 화합물(지질 항산화제 등)을 t-부탄올과 같은 극성 물 혼화 용매에 용해시켜야 한다. 그런 다음 이 용액을 혈액 인자를 포함하는 수용액 또는 분산액과 혼합한다. 혼합은 약제의 생물학적 및 약리학적 활성을 유지하는 데 필요한 최적의 부피 비율로 수행된다.
그런 다음 혼합물을 동결보호제의 유무에 관계없이 동결건조한다. 리포솜 제형을 사용하기 전에 재수화가 필요하다. 이러한 리포솜은 다라멜라(multilamellar)이며, WO 95/04524에 설명된 방법 중 하나를 사용하여 크기를 줄일 수 있다.
본 발명의 제 1 양태에 따른 피험자의 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 조성물은 Factor VIII(FVIII) 요법의 노출 일수가 50 일 미만인 피험자에게 사용될 수 있다. 예를 들어, 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법을 받은 적이 없을 수 있으며, 이러한 환자는 이전에 치료받지 않은 환자(PUP)로 알려져 있다. 예를 들어, 피험자는 총 98일 동안 번갈아 가며 Factor VIII(FVIII) 요법을 받았을 수 있으므로 49일 동안 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출되었을 수 있다.
이전에 치료받은 적이 없는 환자(previously untreated patient, PUP)는 Factor VIII(FVIII) 요법으로 치료받은 적이 없는 피험자로 정의된다. PUP는 외인성 FVIII에 대한 중화 항체가 생성할 위험이 가장 높다. 이러한 이전에 치료받은 적이 없는 환자를 미치료 환자 또는 Factor VIII(FVIII) 요법(therapy) 경험이 없는 환자라고도 한다.
최소 치료 환자(minimally treated patient, MTP)는 Factor VIII(FVIII) 요법 노출 일수가 50일 미만인 피험자로 정의된다. MTP는 또한 외인성 FVIII에 대한 중화 항체를 발생할 위험이 있다.
이전에 치료받은 적이 있는 환자(previously treated patients, PTP)는 50일 이상의 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 적이 있는 피험자로 정의된다. PTP는 외인성 FVIII에 대한 중화 항체를 형성할 가능성이 낮다.
본 발명의 제 1 측면의 대상에서 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 조성물은 소아 대상에 사용될 수 있다. 소아 환자는 유럽연합(EU)에서 출생부터 18세 사이의 인구의 일부로 정의된다. 소아 인구는 여러 하위 집합을 포함한다. 소아 환자의 적용 연령 분류는 다음과 같다:
·
0~27일 미만의 미숙아 및 신생아를 대상으로 한다;
·
1개월에서 23개월 사이의 영아(또는 유아)를 대상으로 한다;
·
2세부터 11세까지의 어린이
·
12세 이상 18세 미만의 청소년.
(참조: http://ec.europa.eu/health/sites/health/files/files/eudralex/vol-1/2014_c338_01/2014_c338_01_en.pdf)
A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(cHA) 또는 후천성 A형 혈우병(aHA)일 수 있다. 선천성 혈우병은 응고 Factor VIII 결핍 또는 감소를 특징으로 하는 유전성 출혈 장애이다. 후천성 혈우병은 출혈의 개인적 또는 가족력이 없는 개인에게 자가항체 저해제가 갑자기 생성되는 자가면역 질환이다. 우리 몸은 A형 혈우병에서 Factor VIII에 대한 자가항체를 생산한다.
PUP 또는 MTP는 또한 5 베데스다(Bethesda) 단위 미만의 FVIII 저해제(항체) 활성을 가질 수 있다(예: 환자는 FVIII에 대한 저해제(항체)의 존재에 대해 양성 반응을 보였을 수 있다). 따라서, 본 발명에 따라, 환자는 FVIII 저해제(FVIII에 대한 항체)의 존재 여부를 검사할 수 있다. 환자의 혈액 내 항체 저해제는 베데스다 방법을 사용하여 정량화되며, 환자의 저해제(항체) 수준을 이야기할 때 '베데스다 단위'를 사용하는 것이 일반적인 용어이다. 5베데스다 단위 이상의 FVIII 저해제 수치는 높은 역가의 저해제로 간주된다(참조: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-clinical-investigation-recombinant-human-plasma-derived-factor-viii-products-revision-2_en.pdf).
본 발명의 제1 양태의 대상에서 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 조성물은 또한 5 베데스다 단위 미만의 FVIII 저해제(항체) 활성을 갖는 대상의 치료에 사용될 수 있다.
베데스다 단위(BU)는 혈액 응고 저해제 활성도를 측정하는 단위이다. 실용 지혈학에 따르면, "1베데스다 단위(Bu)는 37°C에서 2시간 배양 후 정상 혈장 내 Factor VIII 1단위의 50%를 중화시키는 혈장 샘플 내 저해제의 양으로 정의된다."라고 설명한다. (Schumacher, Harold Robert (2000). Handbook of Hematologic Pathology. Informa Health Care, p. 583). Factor VIII 1 단위는 Factor VIII 1 IU/mL와 같다.
베데스다 분석법은 검사 혈장을 희석한 후 남은 잔류 FVIII 활성을 측정하는 것을 기반으로 한다. 이 분석은 테스트 혈장과 정상 혈장의 테스트 혼합물과 37°C에서 2시간 동안 배양한 정상 혈장과 버퍼(완충액)의 대조 혼합물을 비교해야 한다. 테스트 혼합물의 잔류 활성 백분율은 베데스다 단위(BU)로 변환된다.
베데스다 분석(Bethesda assay)은 다음과 같이 수행된다:
1. 검사(환자) 혈장의 2배 희석[보통 1/2 - 1/1024]은 이마다졸 완충 식염수로 만들고 37°C에서 동일한 부피의 정상 혈장 풀과 함께 배양한다. 니메겐 변형(Nijmegen modification)에서는 환자 혈장을 Factor VIII 결핍 혈장으로 희석한다.
2. 동일한 양의 정상 혈장과 이마다졸 완충 식염수(또는 니메겐 변형에서는 면역 제거된 Factor VIII 결핍 혈장의 경우)를 혼합한 대조군 혼합물을 준비한다. 정상 혈장 풀에는 ~ 100% [100 IU/dL] Factor VIII가 포함되어 있다. 이 혼합물의 시작 농도는 실제로 50%[50 IU/dL] Factor VIII이지만(완충액으로 50:50 희석했기 때문에) 모든 배양 혼합물에 동일한 공급원과 부피가 추가되므로 이는 중요하지 않는다. 대조군의 사용은 인큐베이션 기간 동안 Factor VIII 및 V의 저하를 보완한다.
3. 배양 기간(incubation period)이 끝나면 배양된 대조군을 100% [100 IU/dL] 표준으로 사용하여 표준 1단계 APTT 기반 분석법을 사용하여 잔류 Factor VIII VIII을 분석한다.
4. 저해제 농도는 잔류 Factor VIII 활성도 대 저해제 단위 그래프로부터 계산한다. 50%에 가장 가깝지만 30-60% 범위 내에서 잔류 Factor VIII VIII을 제공하는 검사 혈장 희석이 저해제 계산을 위해 선택된다. 각 희석에 대한 저해제 역가를 계산하여 평균을 구하는 것도 가능하다. 잔류 Factor VIII <25% [25 IU/dL] 또는 >75% [75 IU/dL]는 저해제 레벨 계산에 사용해서는 안 된다.
5. 잔류 Factor VIII 활성도가 80-100%[80-100 IU/dL]인 경우, 검체에는 저해제가 포함되어 있지 않은 것이다.
6. 그래프에서 저해제 역가를 도출하고 희석량을 곱하여 최종 역가를 구한다. 알려진 저해제 역가의 양성 대조 혈장을 포함해야 한다.
혈액 응고 과정의 활성 수준은 전혈 응고 시간(Whole Blood Clotting Time, WBCT) 검사, 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(Activated Partial Thromboplastin Time, APTT) 또는 ROTEM과 같은 적절한 분석법을 통해 측정할 수 있다. 1단계 및 2단계/발색성 분석(Chromogenic assays)에서는 대부분 분광광도법(spectrophotometry)을 사용하기 때문에 혈액 샘플을 원심분리하여 세포 단편을 제거해야 하는데, 이는 분석 방법이 분광광도법을 포함하므로 샘플이 깨끗해야 하기 때문이다. 아래의 글로벌 응고 분석은 혈전이 물리적으로 형성되는 시간 경과를 평가하므로 혈소판과 같이 혈전을 구성하는 모든 성분이 포함되므로 '실제(real life)'에 더 가깝다.
전혈 응고 시간(WBCT) 검사는 전혈이 외부 환경(일반적으로 유리관이나 접시)에서 응고를 형성하는 데 걸리는 시간을 측정한다. WBCT는 채혈 직후 2ml의 전혈을 채취하여 두 개의 유리관으로 나누어 평가할 수 있다. 그런 다음 이 두 개의 튜브를 37°C 수조에 넣고 약 20~30초마다 부드럽게 기울여 확인한다. 튜브를 수평으로 뒤집었을 때 혈장이 흘러내리지 않고 단단한 응고가 유지되면 혈전으로 판정한다.
활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT) 검사는 혈액 응고 경로의 일부 매개 변수를 측정한다. 혈우병과 정맥 내 헤파린 치료로 인해 비정상적으로 상승한다. APTT에는 정맥에서 몇 밀리리터의 혈액이 필요하다. APTT 시간은 "내인성 경로(intrinsic pathway)"로 알려진 응고 시스템의 한 부분을 측정한 것이다. APTT 값은 실험실 테스트에서 특정 응고 과정이 발생하는 데 걸리는 시간(초)이다. 이 결과는 항상 정상 혈액의 "대조(control)" 샘플과 비교된다. 검사 샘플이 대조 샘플보다 오래 걸리면 내인성 경로의 응고 능력이 저하되었음을 나타낸다. 일반적인 의학적 치료는 일반적으로 45~70초 정도의 APTT 범위를 목표로 하지만 이 수치는 정상 대비 검사 비율(예: 정상 대비 1.5배)로도 표현할 수 있다. 헤파린 치료가 없는 상태에서 높은 APTT는 혈우병으로 인한 것일 수 있으므로 추가 검사가 필요할 수 있다.
ROTEM(회전 혈전 탄성 측정법(rotational thromboelastometry))은 ROTEM Delta 2.7.2 시스템을 사용하여 NATEM 분석법을 통해 혈액 샘플의 응고성을 평가한다(재석회화에 의해서만 활성화됨). 측정을 위해 20uL의 CaCl2 와 340uL의 구연산화된 전혈 샘플을 장치에 넣는다. 분석은 신선한 혈액 샘플을 채취한 후 15분 이내에 수행된다. 이 분석은 응고 시간(CT - 혈액이 응고되기 시작하는 시간), 응고 형성 시간(CFT - 응고가 최대로 단단해지는 시간) 등 응고가 형성되는 동안의 다양한 통계를 제공한다.
본 발명은 20분 미만, 15분 미만 또는 적절하게는 12분 미만의 전혈 응고 시간을 유지할 수 있도록 하는 조성물을 제공한다.
다음은 FVIII 농도를 평가하기 위한 발색 분석법(Chromogenic assay)("2단계 분석법"이라고도 함)에 대해 설명한다.
제공된 방법을 다음과 같이 수정하여 크로모제닉스 코아매틱 Factor VIII 색소 생성 분석법(Chromogenix Coamatic Factor VIII chromogenic assay, Diapharma, K822585)을 사용하여 FVIII 혈장 활성을 측정할 수 있다:
i.
혈장 샘플 희석액과의 비교 가능성을 달성하기 위해 FVIII 표준 준비에 소량의 순혈(na
ve) 혈장을 포함시킨다,
ii.
각 테스트 항목에 특정한 FVIII 표준 사용(NuwiqTM 또는 FactaneTM),
iii. 두 가지 표준 곡선 범위 내에 추가 FVIII 활성도 값 포함.
NuwiqTM and FactaneTM FVIII 표준 스톡 용액 준비:
각 검사 물품의 바이알을 정제수와 함께 100 IU/ml로 재구성하여 -70°C에서 소량으로 냉동 보관하고 분석 당일에 37°C에서 해동할 수 있다. 해당 혈장 시료의 분석에는 연구 테스트 물품에 적합한 스톡 용액을 사용한다.
개략적인 분석 방법은 다음과 같다:
1. 테크노클론 Factor VIII 결핍 혈장(native; Diapharma 5154007) 1바이알을 정제수 1ml에 새로 용해하였다.
2. 0.990mL의 FVIII 결핍 혈장에 0.010mL의 적절한 FVIII 표준 스톡 용액(100 IU/ml)을 첨가하여 신선하게 준비한 FVIII 표준 작업 스톡 용액(1 IU/mL ),
3. Coamatic 키트 팩터 시약, S-2765 + I-2581 기질(substrate) 및 버퍼(buffer) 작업 용액은 키트 지침에 따라 준비되고 37°C로 예열하였다,
4. 20% 아세트산 정지 용액을 준비했다.
5. 연구 샘플에 적합한 FVIII 범위를 사용하여 FVIII 작동 스톡 용액(1 IU/ml)으로부터 표준 곡선(표 1 및 2 참조)을 준비했다.
6. 37°C에서 각 테스트 혈장 샘플의 한 시료 분량을 빠르게 해동하였다.
7. 25μl의 해동된 테스트 혈장 샘플을 2000μl의 버퍼 작업 용액으로 희석했다.
8. 희석된 FVIII 표준 및 희석된 테스트 혈장 샘플 50μl을 플레이트 맵에 따라 96웰 플레이트의 웰에 추가하고 37°C에서 4분간 배양하였다.
9. 각 웰에 인자 시약 50μl을 추가하고 37°C에서 2분간 (고범위 표준 곡선) 또는 4분간 (저범위 표준 곡선) 배양하였다.
10. 각 웰에 S-2765 + I-2581 기질 50μl을 추가하고 37°C에서 2분간 (고범위 표준 곡선) 또는 10분간 (저범위 표준 곡선) 배양하였다.
11. 각 웰에 20% 아세트산 정지 용액 50μl을 추가하였다. 웰의 색상이 노란색 계열로 변하고 흡광도 405nm에서 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 광밀도(optical density)를 측정하였다.
12. FVIII 표준 활성(IU/ml)을 405nm에서의 흡광도에 대해 최적의 선형 곡선을 사용하여 그래프에 표시하였다.
13. 테스트 혈장 샘플의 흡광도를 표준 곡선에 대해 읽고 FVIII 활성을 IU/ml로 보고하였다.
14. 각 시간대별 3개의 마우스 테스트 혈장 샘플에서 계산된 FVIII 활성 결과의 평균(그리고 개별 연구에서 지시된 경우 중앙값)이 계산되고 데이터는 약동학 분석에 적용되었다.
FVIII 농도를 평가하기 위한 추가 테스트에는 다음이 포함된다:
발색성 FVIII 활성 분석(Chromogenic FVIII Activity Assay)
Biophen FVIII:C 분석 키트 Ref#221406은 분석 버퍼에 1:10으로 희석한 혈장 샘플과 함께 사용되었으며 NuwiqTM 및 인간 혈장 참조 표준 곡선과 비교하여 실행되었다. 각 곡선은 개 FVIII 결핍 혈장에서 FVIII을 연속적으로 희석한 다음 분석 버퍼에서 1:10으로 희석하여 생성되었다. 두 곡선의 표준 범위는 0.003-0.4U/mL, 선형 범위는 0.13-1.00U/mL였다. 분석은 키트 프로토콜에 따라 수행되었다.
원스테이지 Factor VIII 분석 - 지멘스 BCS-XP 시스템 (One-Stage Factor VIII Assay - Siemens BCS-XP System)
샘플은 정상적인 개의 혼합 혈장을 2.5% 개 FVIII 결핍 혈장이 포함된 Owren’s Veronal Buffer로 희석하여 생성된 개 FVIII 참조 곡선에 대해 측정되었다. 곡선의 범위는 5-200%이다. 혈장 샘플은 Owren’s Veronal Buffer에서 1:10으로 희석되었고, FVIII 결핍 혈장과 혼합된 후 Actin FS가 추가되었다. 3분의 배양 후, CaCl2로 활성화가 시작되었고 405nm에서 응고 시간이 측정되었다.
상술한 제2 양태에 따라, 피험자에서 A형 혈우병을 치료하는 방법은 콜로이드 입자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함한다. 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다. 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 기간이 50일 미만이다.
생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리알킬에테르, 폴리락트산 및 폴리글리콜산으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 폴리에틸렌 글리콜은 약 500~약 5000달톤(Dalton), 바람직하게는 약 2000달톤 또는 5000달톤의 분자량을 가질 수 있다.
포스파티딜콜린(PC)은 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)일 수 있다.
제 2 양친매성 지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG)일 수 있는데, 예를 들어 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG2000) 또는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)일 수 있다.
콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 조성물은 Factor VIII(FVIII) 분자를 더 포함할 수 있다. 또는, 이 방법은 Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 개별적으로 또는 후속적으로 투여하는 추가 단계를 포함할 수 있다.
콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 Factor VIII를 포함하는 조성물은 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 적합하게, Factor VIII를 포함하는 조성물은 환자에게 투여되고, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 15~120, 15~60, 15~30분 후에 콜로이드 입자를 포함하는 조성물이 환자에게 투여될 수 있다. 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및/또는 Factor VIII를 포함하는 조성물은 환자의 혈액 내 Factor VIII의 농도가 치료 이하 또는 치료와 무관한 수준에 도달할 때까지 재투여를 기다릴 필요 없이 지속적이고 일정하며 예측 가능한 치료 효과를 제공하기 위해, 예를 들어 2~21일, 4~14일, 4~7일과 같이 적절하게 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21일 간격으로 FVIII의 혈중 농도가 일정 수준으로 유지될 수 있도록 투여 및/또는 재투여할 수 있다. 예를 들어, Factor VIII를 포함하는 조성물은 콜로이드 입자를 포함하는 조성물이 환자에게 투여되기 15분 전에 환자에게 투여될 수 있으며, 4~5일마다 두 단계의 투여가 반복될 수 있다.
또는, 콜로이드 입자와 Factor VIII를 포함하는 조성물은 환자의 혈액 내 Factor VIII의 농도가 치료 이하 또는 치료와 무관한 수준에 도달할 때까지 재투여를 기다릴 필요 없이 지속적이고 일정하며 예측 가능한 치료 효과를 제공하기 위해 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21일 간격으로, 예컨대 2-21일, 4-14일, 4-7일마다 적당히 투여하거나 재투여할 수 있다.
이러한 치료 요법은 A형 혈우병 환자를 치료하는 데 필요한 Factor VIII의 양을 줄여준다.
A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(cHA) 또는 후천성 A형 혈우병(aHA)일 수 있다.
피험자는 소아 환자일 수 있다. 피험자는 FVIII 치료를 받지 않았을 수도 있다.
본 발명은 또한 피험자가 Factor VIII(FVIII) 요법에 50일 미만의 노출을 받은 피험자의 A형 혈우병 치료를 위한 의약품 제조에 콜로이드 입자를 포함하는 조성물을 사용하는 것을 포함한다.
상술한 제3 양태에 따라, 키트는 (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 키트를 포함한다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다. 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군에서 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함한다. 제 2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다.
본 발명의 동결건조 제형은 적절한 희석제, 보조제 또는 부형제(예: 생리적으로 허용되는 완충제)와 함께 별도의 제형으로 제공될 수 있다. 키트의 콜로이드 입자 및/또는 Factor VIII(FVIII)는 동결 건조된 제형으로 제공될 수 있다. 또는, 키트의 Factor VIII(FVIII)는 동결건조된 제형으로 제공될 수 있고, 콜로이드 입자는 Factor VIII(FVIII)의 재구성을 위한 용액으로 제공될 수 있다. 본 명세서에 설명된 바와 같이, 이러한 조성물은 별도의 제형으로서 Factor VIII를 추가적으로 포함하거나 본 명세서에 설명된 바와 같이 콜로이드 입자와 함께 제형화될 수 있다. 동결건조된 형태의 Factor VIII 제제는 500 IU 바이알로 제공될 수 있다. 키트의 콜로이드 입자 및/또는 Factor VIII(FVIII)는 바로 사용할 수 있는 수성 형태로 제공될 수 있다.
콜로이드 입자는 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
키트에는 선택적으로 사용 설명서도 포함되어 있다.
상술한 제4 양태에 따라, (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 키트를 제공하며, 상기 키트는 피험자의 A형 혈우병 치료에 개별적, 동시적 또는 후속적으로 사용할 수 있도록 사용된다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다. 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 구성된 군에서 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질로 구성된다. 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다.
본 발명의 동결건조 제형은 적절한 희석제, 보조제 또는 부형제(예: 생리적으로 허용되는 완충제)와 함께 별도의 제형으로 제공될 수 있다. 키트의 콜로이드 입자 및/또는 Factor VIII(FVIII)는 동결 건조된 제형으로 제공될 수 있다. 또는, 키트의 Factor VIII(FVIII)는 동결건조된 제형으로 제공될 수 있고, 콜로이드 입자는 Factor VIII(FVIII)의 재구성을 위한 용액으로 제공될 수 있다. 본 명세서에 설명된 바와 같이, 이러한 조성물은 별도의 제형으로서 Factor VIII를 추가적으로 포함하거나 본 명세서에 설명된 바와 같이 콜로이드 입자와 함께 제형화될 수 있다. 동결건조된 형태의 Factor VIII 제제는 500 IU 바이알로 제공될 수 있다. 키트의 콜로이드 입자 및/또는 Factor VIII(FVIII)는 바로 사용할 수 있는 수성 형태로 제공될 수 있다.
콜로이드 입자는 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
키트에는 선택적으로 사용 설명서도 포함되어 있다.
전술한 제5양태에 따라, 약학 조성물의 제형은 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하는 콜로이드 입자를 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 약학적 조성물의 을 포함하며, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함한다. 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자이다.
콜로이드 입자는 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다.
제형은 환자에게 적합한 용량이 들어 있는 적절한 용기 또는 바이알(예: 250 IU, 500 IU, 750 IU 또는 1000 IU 바이알)로 제공될 수 있다. 제형은 정제 또는 액체 형태로 제공될 수도 있다. 제형은 동결 건조된 형태일 수도 있다.
본 발명에 의해 입증된 놀라운 기술적 효과는 일반적으로 면역 반응을 유발할 수 있는 FVIII의 에피토프를 마스킹하고 그에 따른 항-FVIII 항체(anti-FVIII antibodies)를 생성함으로써 달성된다.
이론에 얽매이고 싶지 않지만, 이러한 이점은 PEGLip이 FVIII의 A3 도메인에 비공유 결합하여 FVIII 경쇄 도메인의 에피토프를 신체 면역 체계에서 인식하지 못하도록 보호하거나 수지상 세포에 의한 FVIII의 내세포화를 방지하는 데서 비롯된 것으로 생각된다. 추가적인 PEG의 도입은 추가적인 결합 부위를 제공하여 잠재적으로 리포솜에 FVIII을 농축시킬 수 있다.
추가 PEG는 더 큰 수화 구체를 제공하여 정상적인 제거 메커니즘으로부터 관련 FVIII을 더 잘 보호하여 FVIII의 순환 반감기를 증가시켜 지혈 조절 기간을 연장한다. 또한 더 큰 차폐막은 항체 저해제로부터 FVIII의 에피토프를 더 잘 보호하여 FVIII에 대한 저해제(항체)가 있는 환자에서 생성물(product) 사용을 용이하게 할 수 있다.
리포솜이 FVIII의 A3 도메인 영역에 결합하면 FVIII의 C1 및 C2 도메인이 VWF와 결합할 수 있게 되며, 이로 인해 추가적인 보호 기능이 제공된다.
FVIII을 함유하는 페길화 리포솜의 융합은 혈소판과 융합하거나 혈소판에 의해 섭취되어 후자의 활성화에 역할을 하여 외인성 경로를 상향 조절하고 혈전 형성을 가속화할 수 있는 조직 인자 함유 친응고성 미립자를 생성하는 것으로 추정된다. 리포솜에 PEG 함유 지질 또는 계면활성제를 추가로 도입하면 혈소판 막이 불안정해지고 이러한 활성화가 더욱 빨라질 수 있다.
이러한 효과는 재조합 FVIII 분자에서 더 두드러지게 나타나는데, 일반적으로 야생형 FVIII에서 이러한 에피토프를 자연적으로 보호하는 VWF를 투여하지 않는다.
에피토프를 보호하는 것 외에도 PEGLip과의 연관성은 정상적인 단백질 분해 제거 메커니즘으로부터 FVIII을 보호하고 투약 간격을 연장하며 시간이 지남에 따라 환자가 FVIII에 노출되는 총량을 줄임으로써 FVIII의 반감기를 연장할 수 있다.
놀라운 관찰 결과를 다음과 같이 설명한다:
저해제가 있는 환자에게 PEGLip + FVIII을 사용하는 것을 검토하기 위해 고안된 임상시험은 이 조합이 기존 항체가 FVIII을 공격하는 것을 방지할 수 있을 것으로 기대되었다. 기존 항체가 있는 환자뿐만 아니라 FVIII을 투여받았을 때 항체가 생긴 이력이 있지만 현재 항체가 나타나지 않는 환자도 일부 포함되었다.
놀랍게도 이 환자들에게 콜로이드 입자와 FVIII 분자 비율이 15:1 ~ 16:1인 PEGLip + FVIII 조합을 투여했을 때 새로운 항체가 생성하지 않았으며, 이는 PEGLip이 수지상 / B 세포(dendritic / B-cells)로부터 에피토프를 보호하거나 FVIII의 내세포화를 막을 수 있음을 시사한다.
또한 A형 혈우병 개를 피험체로 콜로이드 입자와 FVIII 분자 비율이 15:1 ~ 16:1인 대조군으로 PEGLip + 인간 FVIII을 정맥 투여하는 실험도 실시했다. 이러한 실험은 동물의 면역 체계가 항체를 생성하여 외부(인간) 단백질에 자연적으로 반응하기 때문에 일반적으로 어려운 실험이다. 놀랍게도 이 실험에서 동물은 PEGLip을 투여했을 때 인간 단백질에 대한 항체를 생성하지 않았다.
따라서, PEGLip을 FVIII과 함께 사용하면 항체 생성을 방지할 수 있다.
- 항체 생성 이력이 있고 적용된 rFVIII에 대한 항체를 생성했어야 하는 피험자에서.
- 비인간 피험체에게 PEGLip과 함께 이물질 단백질(rFVIII)을 투여했을 때.
따라서 역사적으로 그러한 반응을 보이기 쉬운 환자/피험자에서 PEGLip+FVIII이 항체 반응을 유발할 수 없는 경우, 이전에 치료받은 적이 없는 피험자(거의 독점적으로 소아 피험자)에서 FVIII에 대한 항체를 생성한 적이 없는 PEGLip+FVIII을 사용하면 저해제 환자의 생성을 방지할 수 있다.
다음 샘플은 본 발명에 따라 제작 및 테스트되었다:
1.
DSPE-PEG 대 POPC의 높은 비율로 구성된 더 일련의 콜로이드 입자(PEGLip)로 , 상기 PEG는 PEG-2000이다.
2.
DSPE-PEG대 POPC의 비율로 구성된 일련의 콜로이드 입자(PEGLip)로, 상기 PEG는 PEG-5000이다.
3.
1번 및 2번에 따른 콜로이드 입자는 폴리소르베이트 80을 추가로 포함한다.
4.
DSPE-PEG와 POPC 및/또는 고분자량 PEG의 높은 비율로 구성된 일련의 콜로이드 입자(F-PEGLip).
특정 실시예에서, 다음과 같은 제형이 제공된다:
15~16:1 제형(15 to 16:1 formulation)
1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000))을 97:3 몰 비율로, 50mM 구연산나트륨 완충액에서 9% 현탁액으로 FVIII(NuwiqTM, Octapharma AG)과 함께 15에서 16:1의 PEGLip 입자 대 FVIII 분자 비율로 제조된다.
7~8:1 제형
1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000))을 97:3 몰 비율로, 50mM 구연산나트륨 완충액에서 제조된 9% 현탁액으로 FVIII(NuwiqTM, Octapharma AG)과 함께 7~ 8:1의 PEGLip 입자 대 FVIII 분자 비율로 제조된다.
다른 실시예에서, 다음과 같은 제형이 제공된다:
15~16:1 제형
1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000))으로 구성된 PEGLip 입자가 97:3 몰 비율로, 그리고 폴리소르베이트 80이 9:1 w/w 비율(POPC + DSPE-PEG(2000):폴리소르베이트 80)로 50mM 구연산나트륨 완충액에서 9% 현탁액으로 제형화되며, FVIII(NuwiqTM, Octapharma AG)이 PEGLip 입자 대 FVIII 분자의 15에서 16:1 비율로 혼합된다.
7~8:1 제형
1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG(2000))으로 구성된 PEGLip 입자가 97:3 몰 비율로, 그리고 폴리소르베이트 80이 9:1 w/w 비율(POPC + DSPE-PEG(2000):폴리소르베이트 80)로 50mM 구연산나트륨 완충액에서 제형화된 9% 현탁액으로, FVIII(NuwiqTM, Octapharma AG)과 함께 PEGLip 입자 대 FVIII 분자의 7~ 8:1 비율로 혼합된다.
본 발명의 특정 실시예에서, Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자의 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 조성물이 다음과 같이 제공된다:
·
포스파티딜콜린 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질과 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 97:3 몰 비율(9:1 w/w)로 포함하는 콜로이드 입자, 예를 들어 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세롤-3-포스포콜린 (POPC)과 N-(카르복실-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (DSPE-PEG2000)의 몰 비율 97:3 또는 더 무거운 페길화된 지질을 사용하는 경우 동등한 몰 비율을 적용한 중량 보정 비율 (예: 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (DSPE-PEG5000)의 중량 비율 4:1~5:1 사이)을 사용한다.
·
완충액(적합하게는 생리적으로 허용되는 pH, 예를 들어 pH 6.5 ~ 7.2)과 같은 희석제, 예를 들어 구연산염 완충액(선택적으로 50mM 농도)을 포함한다.
다른 실시예에서, Factor VIII(FVIII) 요법에 노출된 일수가 50일 미만인 피험자의 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한 조성물이 다음과 같이 제공된다:
·
포스파티딜콜린 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질과 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 97:3 몰 비율(9:1 w/w)로 포함하는 콜로이드 입자, 예를 들어, 97:1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG2000) 또는 더 무거운 페길화된 지질의 동일한 몰 비율을 사용하는 경우 중량 보정 비율(예: 4 사이의 w/w 비율)로 97:3 몰 비율(예: 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)과 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)의 4:1~5:1 사이)을 사용한다. 상기 콜로이드 입자는 폴리옥시 에틸렌 소르비탄, 폴리하이드록시에틸렌 스테아레이트 및 폴리하이드록시에틸렌 라우릴에테르, 예를 들어 폴리옥시 에틸렌 (20) 소르비탄 모노올리에이트로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 계면활성제를 더 포함한다.
·
완충액(적합하게는 생리적으로 허용되는 pH, 예를 들어 pH 6.5 ~ 7.2)과 같은 희석제, 예를 들어 구연산염 완충액(선택적으로 50mM 농도)을 포함한다.
본 발명의 제2 및 후속 양태에 대한 바람직한 특징은 일 양태와 동일하게 적용된다.
이제 본 발명은 설명의 목적으로만 제공되는 다음의 실시예를 참조하여 설명될 것이며, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한 다음 도면을 참조하여 설명한다:
도 1은 반감기가 연장된 FVIII의 정맥 투여와 피하 투여된 FVIII의 정맥 투여를 비교한 것이다. 반감기가 연장된 FVIII을 정맥으로 투여하면 FVIII이 낭비되거나(10% 선 위 음영 영역(shaded area above 10% line)) 환자에게 치료 수준 이하의 FVII가 남게 된다(선 아래 음영 영역 (shaded area below the line).). 피하 전달 저장소(subcutaneously delivered depot)를 사용하면 보다 경제적이고 안전하게 순환하는 FVIII을 정체시킬 수 있다. 적절한 SC 투여 요법(용량 크기 및 빈도)을 정의하려면 반감기와 상대적 생체 이용률이 모두 필요하다.
실시예
실시예에서는 다음과 같은 PEGLip 공식을 사용한다.
실시예 1:
혈우병 개를 대상으로 한 정맥주사 및 SC 투여 PEGLip-FVIII 연구
시험 물질:
FVIII: NuwiqTM (Octapharma , 500IU 바이알); PEGLip: 50mM 구연산염 완충액 pH 6.7(배치 19-740)의 9% 페길화 리포솜(9% PEGylated liposomes)
SubcutAte ( NuwiqTM 500IU 바이알당 9% PEGLip 3.5ml (NuwiqTM FVIII: 143 IU/ml PEGLip-FVIII)
방법:
PEGLip-FVIII의 정맥 투여
캐나다 킹스턴에 위치한 퀸즈대학교(Queens University of Queens)의 A형 혈우병 환자에게 50 IU/kg FVIII, 31.5mg/kg PEGLip 및 50IU/kg FVIII(콜로이드 입자:FVIII 분자 비율 16:1) 용량을 천천히 두정맥(cephalic vein) 주입으로 투여했다. 30분, 2, 4, 8, 12, 24, 32, 48, 56시간에 두정맥에서 정맥혈 샘플을 채취하여 전혈 응고 시간(whole blood clot times, WBCT), 회전 혈전 탄성 측정법(Rotational thromboelastometry, ROTEM) 분석, FVIII:C 활성도, 전혈구 수(CBC) 및 혈액 화학 수치를 측정했다. 또한 치료 후 1주 및 2주 후에 베데스다 분석을 위해 혈액을 채취했다.
피하 투여
캐나다 킹스턴에 위치한 퀸즈 대학교에서 A형 혈우병 개에게 목덜미(the scruff of the neck)에 피하(SQ) 주사를 통해 200 IU/kg FVIII, 126mg/kg PEGLip 및 200IU/kg FVIII(콜로이드 입자:FVIII 분자 비율 16:1)의 PEGLip-FVIII 용량을 투여했다. 1, 2, 4, 8, 12, 24, 32, 48, 72시간에 두정맥에서 정맥혈 샘플을 채취하여 전혈 응고 시간(WBCT), 회전 혈전 탄성 측정(ROTEM) 분석, FVIII:C 활성 수준, 전혈구 수(CBC) 및 혈액 화학을 측정했다. 또한 치료 후 1주 및 2주 후에 베데스다 분석을 위해 혈액을 채취했다.
결과:
응고 교정(Coagulation correction)
단일 용량의 정맥 내 PEGLip-FVIII은 투여 후 30분부터 응고 시간을 크게 줄였으며 이 효과는 56시간이 지나도 기준선으로 돌아가지 않았다. 피하 투여된 FVIII은 일반적으로 생체 이용률이 매우 낮고 응고 시간을 줄이는 데 효과가 없을 것으로 예상된다. 대조적으로 놀랍게도 이 실험에서 피하 PEGLip-FVIII은 첫 평가 시간인 1시간부터 빠른 생체이용률을 보였고 응고 시간을 단축시켰다.
생체이용률 및 반감기
생체이용률과 반감기는 투여 후 첫 48시간 동안의 응고 시간 감소(CTR)의 감소를 전혈 응고 시간(WBCT) 또는 ROTEM(응고 시간(Clotting Time, CT)에 응고 형성 시간(Clot Formation Time, CFT)을 더한 값)으로 분석하여 분석했다.
피하 투여량의 경우 최대 23%의 생체 이용률이 계산되었다. WBCT로 측정한 SC 용량을 제외하고는 반감기 추정치는 문헌에서 추정하는 NuwiqTM 반감기 15.1~17.1시간을 훨씬 초과했다. 표 1을 참조.
생체이용률과 반감기의 조합을 통해 용량 크기와 투여 간격으로 구성된 잠재적인 피하 투여 요법(subcutaneous dosing regimens)을 도출할 수 있었고, 이를 통해 FVIII 수치가 위험한 수준까지 감소하는 것을 방지할 수 있었다(도 1 참조).
저해제 생성
인간 FVIII을 정맥 주사하는 일반적인 관행에서, 이 군집의 혈우병 개들은 항상 FVIII 투여 후 10일에서 4주 사이에 다양한 역가의 항 인간 FVIII 항체를 생성한다. 그러나 이 연구 보고서에서 정맥 주사를 맞은 피험자에게는 저해 항체가 생성하지 않았다. 이는 인간 단백질을 투여한 동물에게는 놀랍고 매우 이례적인 결과이다.
SC 투여 동물은 4~17BU의 낮은 수준의 저해제를 생성했지만, 이는 일반적으로 정맥 투여(일반적으로 50~100BU)에서 예상되는 것보다 낮으며 다른 종의 단백질 200IU/kg이 면역원성 조직에 한 번에 대량으로 전달되는 배경에 비추어 볼 때 낮은 수치이다. 이는 단일 고용량의 PEGLip-FVIII을 SC로 투여하더라도 동등한 용량의 rhFVIII을 정맥으로 투여했을 때 예상되는 것보다 면역원성이 낮다는 것을 시사할 수 있다.
이러한 놀라운 결과는 FVIII의 활성을 손상시키지 않고 단백질의 에피토프를 변형시키지 않으면서 PEGLip을 FVIII과 병용 투여제로 사용하면 일반적으로 면역원성 반응이 예상되는 대상에서 저해제 생성을 예방하거나 줄일 수 있다는 것을 시사한다. 이는 PEGLip과 FVIII의 병용 투여가 후자의 면역원성을 감소시켜 이전에 치료받은 적이 없는 환자 또는 아직 저해제가 생성하지 않은 최소한의 치료를 받은 환자에게 더 안전한 대안이 될 수 있음을 시사한다.
실시예 2:
SelectAteTM 임상 연구
저해제 환자의 혈액 응고를 일정 비율의 PEGLip-FVIII이 회복시킨다는 것을 입증하기 위한 연구가 진행 중이다.
저해제가 생성하기 쉬운 A형 응고인자 결핍 환자는 PEGLip:FVIII을 주사했을 때 저해제가 생성되지 않았으며, 응고 교정을 보였다.
이번 임상시험에는 FVIII에 대한 항체 저해제를 생성한 병력이 있는 중증 혈우병 환자 4명이 참여했다. 이 환자들은 병력 때문에 저해제 생성 위험으로 인해 예방 요법으로 대체 FVIII을 투여받을 수 없다. 임상시험에서 이들 환자 중 3명은 처음에 저해제가 없었고 1명은 낮은 역가(<5BU)를 나타냈다. 모든 환자들에게 22mg/kg의 PEGLip과 35IU/kg의 재조합 인간화 FVIII(소포:FVIII 비율은 15:1 ~ 16:1)을 투여했다. 평가 첫 주에 모든 환자들은 상당한 응고 교정을 경험했으며, 이후 6주 동안 평균 6일마다(4~7일 범위) 투여할 수 있었다. 6주 동안 매주 1회씩 재투여했음에도 불구하고 저해제 없이 나타난 3명의 저해제 감수성 환자 중 요법에 대한 저해제가 생성된 환자는 없었다. 역가가 낮은 저해제를 보인 한 명의 환자는 첫 번째 단계에서 임상적으로 미미한 수준의 작은 상승을 경험했으며, 두 번째 단계에서 반복 투여하는 동안 실제로 감소했다. 저해제 생성에 취약한 환자에서 저해제 생성을 자극하지 않는 PEGLip-FVIII의 특성으로 인해 이 생성물은 치료 경험이 없거나 최소한의 치료를 받은 환자에서 저해제 생성을 예방하는 데 매우 적합할 것으로 제안된다.
| 저해제가 있는 중증 A형 혈우병 환자(N=4) |
평균
(SD) |
중앙값
(최소, 최대) |
| A단계에서 결정된 PEGLip-FVIII 주사 빈도(일) | 6.0 (1.4) |
6.5 (4.0; 7.0) |
| B단계 동안 투여된 PEGLip-FVIII 주사 빈도(일) | 5.1 (1.2) |
5.2 (3.6; 6.3) |
| 등록 전 24주 동안의 자연 출혈 병력(에피소드/월) | 0.9 (0.4) |
0.8 (0.5; 1.3) |
| B단계 동안 평가된 자연 출혈 에피소드(에피소드/월)- 환자 4명 중 3명은 자연 출혈을 경험하지 않았다. | 0.5 (0.9) |
0. 0 (0.0; 0.9) |
| 항-FVIII 항체(베데스다 유닛) - 선별 검사 | 1.1 (2.2) |
0. 0 (0.0; 4.4) |
| 항-FVIII 항체(베데스다 유닛) - A 단계 종료 | 2.0 (4.0) |
0.0 (0.0; 8.0) |
| 항-FVIII 항체(베데스다 유닛) - B 단계 종료 | 1.7 (3.4) |
0. 0 (0.0; 6.8) |
실시예 3:
저해제 감수성 및 저해제 발현 환자를 대상으로 한 PEGLiP + FVIII의 임상 연구
2상 임상 연구는 저해제 감수성 환자에서 저해제 생성을 자극하거나 저해제 보유 환자에서 저해제 역가를 증가시키지 않고 PEGLip-FVIII이 저해제 감수성 및 저해제 보유 환자의 응고를 회복시킨다는 것을 입증하기 위해 수행되었다. 이 연구는 실시예 2에 설명된 결과를 기반으로 한다.
선별 검사 시 저해제를 가지고 있거나 임상 기록상 FVIII 노출 시 저해제가 생성하기 쉬운 것으로 나타난 중증 A형 혈우병 환자들은 PEGLiP+FVIII (PLP-00+시모옥토코그 알파(simoctocog alfa)를 주사했을 때 각각 저해제 역가가 증가하거나 저해제가 생성되지 않았으며 응고 교정 및 출혈 빈도 감소를 보였다.
이번 임상시험에는 FVIII에 대한 항체 저해제 생성 병력이 있는 중증 혈우병 환자 13명이 참여했다. 이 중 8명의 환자는 병력 때문에 저해제 생성 위험으로 인해 예방 요법으로 대체 FVIII을 투여받을 수 없었다. 나머지 5명의 환자는 선별 검사에서 활성 저해제 역가(평균 2.4베데스다 유닛)가 나타났다. 모든 환자들은 22mg/kg의 PEGLip과 35IU/kg의 재조합 인간화 FVIII(콜로이드 입자:FVIII 비율 15:1 ~ 16:1)의 PEGLip + FVIII(시모옥토코그 알파)을 투여받았다. 평가 첫 주에 모든 환자들은 상당한 응고 교정을 경험했으며, 이후 6주 동안 평균 5.5일(3.0~7.4일 범위)마다 투여할 수 있어 투여 간격이 크게 연장되었다(시모옥토코그 알파의 일반적인 투여 간격은 격일 또는 주 2~3회이다). 이렇게 투여 빈도를 줄였음에도 불구하고 환자들의 월 평균 출혈 횟수는 월 평균 1건(연간 12.3건)에서 월 평균 0.3건(연간 3.2건)으로 감소하여 출혈이 현저히 감소했다.
6주 동안 매주 1회씩 재투여했음에도 불구하고 저해제가 없는 8명의 저해제 감수성 환자(inhibitor-prone) 중 요법에 대한 저해제가 생성된 환자는 없었다. 또한, 저해제가 나타난 5명의 환자들은 해당 임상시험의 6주 예방 단계 동안 저해제 역가(inhibitor titre) 가 크게 상승하지 않았다. 저해제 발현 및 저해제 취약 환자를 위한 치료뿐만 아니라, 저해제 취약 환자의 저해제 생성을 자극하지 않는 PEGLip-FVIII의 특성으로 인해 이 생성물은 이전에 치료받은 적이 없는 환자 또는 최소한의 치료를 받은 환자의 치료에도 예외적으로 적합하여 이러한 취약 환자의 저해제 생성을 예방할 수 있을 것으로 제안되고 있다.
| 저해제 환자 활성 저해제 없음 |
저해제 환자 선별 검사 시 활성 저해제 |
총 저해제 환자 수 | |
| n = | 8 | 5 | 13 |
| 베데스다 역가 (units | |||
| screening 단계 Mean (SD) units Median [Min; Max] units |
0.0 (0) 0.0 [0; 0] |
2.4 (1.3) 2.0 [1.3; 4.4] |
0.9 (1.4) 0.0 [0.0; 4.4] |
| A 단계 종료 시 Mean (SD) units Median [Min; Max] units |
0.0 (0) 0.0 [0; 0] |
2.5 (3.1) 1.1 [1.0; 8.0] |
1.0 (2.2) 0.0 [0.0; 8.0] |
| B 단계 종료 시Mean (SD) units Median [Min; Max] units |
0.0 (0) 0.0 [0; 0] |
2.4 (2.5) 1.3 [0.9; 6.8] |
0.9 (1.9) 0.0 [0.0; 6.8] |
| 변경 (B 단계-screening) (p-value) |
0 n/a |
0 P=0.975 |
0.0 p>0.999 |
|
B단계 동안 투여된 PEGLip-FVIII 주사 빈도(일) |
|||
| Mean (SD) Median [Min; Max] |
5.5 (1.3) 5.5 [3.0; 7.4] |
||
| 월별 출혈 에피소드 | |||
| 등록 24주 전 Mean (SD) Median [Min; Max] |
0.9 (0.3) 1.0 [0.5; 1.3] |
1.2(0.2) 1.3 [0.8;1.3] |
1.0 (0.3) 1.0 [0.5; 1.3] |
| B단계 중 Mean (SD) Median [Min; Max] |
0.2 (0.7) 0.0 [0.0; 1.9] |
0.3 (0.4) 0.0 [0.0; 0.8] |
0.3 (0.6) 0.0 [0.0; 1.9] |
| 평균 (B단계 - Screening) (p-value) |
-0.7 | -0.9 | -0.8 p<0.005 |
결론:
15:1에서 16:1 사이의 PEGLiP와 FVIII의 비율은 더 많은 양의 저해제 생성을 자극하지 않으면서 FVIII에 대한 저해제가 있는 환자뿐만 아니라 FVIII에 대한 저해제가 생성하기 쉬운 환자의 출혈 위험을 낮춘다.
실시예 4:
비저해제 환자에서 FVIII의 PEGLip 강화에 대한 임상 연구
2상 임상 연구는 FVIII의 예방적 투약 후 PEGLip을 주입함으로써, FVIII의 예방적 투약 간격을 안전하게 연장할 수 있으며, 여전히 출혈(bleeding episodes) 을 예방하면서 환자가 FVIII에 노출되는 횟수를 줄일 수 있음을 입증하기 위해 수행되었다.
저해제가 없는 중증 혈우병 환자 14명. 모든 환자에게 FVIII(시목토코그 알파)를 35 IU/kg 정맥 투여한 후 15분 후에 22 mg/kg의 PEGLip을 1회 정맥 주입했다.
평가 첫 주에 모든 환자들은 유의미한 응고 교정을 경험했으며, 이후 6주 동안 평균 4.9일(범위 3.1~7.3일)마다 투여할 수 있어 투여 간격이 크게 연장되었다(시목토코그 알파의 일반적인 투여 간격은 격일 또는 주 2~3회이다).
이러한 낮은 투여 빈도에도 불구하고 환자들의 출혈 발생(bleeding events)은 월 평균 1.10회(연간 13.21회)에서 월 평균 0.18회(연간 2.21회)로 감소하여 출혈이 현저히 감소했다.
6주 동안 예방 치료를 받은 환자 중 FVIII에 대한 저해제를 생성한 환자는 없었다.
이러한 방식으로 환자의 일반적인 표준 치료인 FVIII에 이어서 주사할 때 PEGLip을 사용하면 이러한 방식으로 FVIII의 투여 간격을 연장하여 이전에 치료를 받지 않았거나/최소한의 치료를 받은 환자의 FVIII 노출 횟수를 절반으로 줄여 면역원성 반응이 생성할 가능성을 줄일 수 있다고 제안한다.
| History (24 weeks prior to enrolment) |
Stage B (6 weeks |
Difference | |
| n | 14 | 14 | 14 |
| 월간 출혈 비율 (events /month) 평균 (SD) Median [Min, Max] probability |
1.10 (0.64) 1.08 [0.58; 1.58] |
0.18 (0.37) 0.00 [0.00; 0.00] |
-0.92 (0.63) -0.96 p=0.019 |
| B 단계의 투약 간격(일) (days) 평균 (SD) Median [Min, Max] |
1.08 [0.25; 2.00] |
4.9 (1.4) 0.00 [0.00; 1.09] |
Claims (44)
- 콜로이드 입자를 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 조성물로,
상기 콜로이드 입자는, (i) 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC) 잔기(moiety)를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(phosphatidyl ethanolamine, PE), 포스파티딜 세린(phosphatidyl serine, PS) 및 포스파티딜 이노시톨(phosphatidyl inositol, PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하며, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하고,
상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 50일 미만의 노출을 받은 적이 있는 경우인, 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리알킬에테르, 폴리락트산 및 폴리글리콜산으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)인 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 약 500 내지 약 5000 달톤(Dalton)의 분자량을 갖는 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 약 2000 달톤 또는 약 5000 달톤의 분자량을 갖는 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG)인 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE- PEG2000) 또는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아로일-sn-glycero-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000)인 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린(PC)은 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)인 조성물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질을 90 내지 99:10 내지 1의 몰 비율로 포함하는 조성물.
- 제9항에 있어서, 상기 조성물은 제 1 양친매성 지질과 제 2 양친매성 지질을 97:3의 몰 비율로 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 콜로이드 입자는 (iii) 폴리옥시에틸렌 소르비탄, 폴리하이드록시에틸렌 스테아레이트 및 폴리하이드록시에틸렌 라우릴에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 비이온성 계면활성제를 더 포함하는 조성물.
- 제11항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시 에틸렌 (20) 소르비탄 모노올리에이트인 조성물.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 콜로이드는 제1 양친매성 지질과 제2 양친매성 지질을 비이온성 계면활성제에 대해 30:1 내지 2:1 w/w의 비율로 포함하는 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 제1 양친매성 지질, 제2 양친매성 지질 및 비이온성 계면활성제를 10 내지 40:1: 0 내지 4 w/w의 비율로 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 Factor VIII(FVIII) 분자를 더 포함하는 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 조성물은 콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자를 1 내지 90:1의 화학량론적 비율로 포함하는 조성물.
- 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 조성물은 콜로이드 입자와 Factor VIII(FVIII) 분자를 10 내지 20:1 또는 5 내지 10:1의 화학량론적 비율로 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(cHA)인 조성물.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 A형 혈우병은 후천성 A형 혈우병(aHA)인 조성물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 치료 활성 화합물을 더 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 부형제, 희석제 또는 보조제를 더 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피험자는 소아 피험자인 조성물.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피험자가 FVIII 치료를 받지 않은 조성물.
- 콜로이드 입자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 피험자에 A형 혈우병을 치료하는 방법으로,
상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린 (PC) 잔기를 포함하는 제 1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민 (PE), 포스파티딜 세린 (PS) 및 포스파티딜 이노시톨 (PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제 2 양친매성 지질을 포함하고, 상기 제 2 양친매성 지질은 생체적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하고, 상기 피험자가 Factor VIII(FVIII) 요법에 50일 미만 노출을 받은 적이 있는 경우인, 방법. - 제24항에 있어서, 상기 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리알킬에테르, 폴리락트산 및 폴리글리콜산으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 생체 적합성 친수성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)인 방법.
- 제26항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 약 500 내지 약 5000 달톤의 분자량을 갖는 방법.
- 제27항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 약 2000달톤 또는 약 5000달톤의 분자량을 갖는 방법.
- 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG) 인 방법.
- 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DSPE- PEG2000) 또는 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-5000)-1,2-디스테아로일-sn-glycero-3-포스포에탄올아민(DSPE-PEG5000) 인 방법.
- 제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린(PC)은 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)인 방법.
- 제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함하는 방법.
- 제24항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 Factor VIII(FVIII) 분자를 더 포함하는 방법.
- 제24항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 별도로 또는 후속적으로 투여하는 추가 단계를 더 포함하는 방법.
- 제24항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 A형 혈우병은 선천성 A형 혈우병(cHA)인 방법.
- 제24항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 A형 혈우병은 후천성 A형 혈우병(aHA)인 방법.
- 제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피험자는 소아 피험자인 방법.
- 제24항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피험자는 FVIII 요법을 받지 않은 인 방법.
- (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 키트로,
상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 요법에 50일 미만의 노출을 받은 적이 있는 피험자이고, 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하고, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하는, 키트. - 제39항에 있어서, 상기 콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함하는 키트.
- (i) 콜로이드 입자를 포함하는 조성물 및 (ii) Factor VIII(FVIII) 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료에 개별적, 동시적 또는 후속적으로 사용하기 위한 키트로,
상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 치료에 50일 미만의 노출을 받은 적이 있는 피험자이고, 상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE), 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI)로 이루어진 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하고, 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하는, 키트. - 제41항에 있어서, 상기 콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함하는 키트.
- 콜로이드 입자를 포함하는 피험자의 A형 혈우병 치료용 약학적 조성물의 제형으로,
상기 콜로이드 입자는 (i) 포스파티딜콜린(PC) 잔기를 포함하는 제1 양친매성 지질 및 (ii) 포스파티딜 에탄올아민(PE)으로 구성된 군으로부터 선택된 인지질 잔기를 포함하는 제2 양친매성 지질을 포함하는 포스파티딜 세린(PS) 및 포스파티딜 이노시톨(PI), 상기 제2 양친매성 지질은 생체 적합성 친수성 폴리머로 유도체화된 인지질 잔기를 포함하고, 상기 피험자는 Factor VIII(FVIII) 치료에 50일 미만의 노출을 받은 적이 있는 피험자인, 제형. - 제43항에 있어서, 상기 콜로이드 입자는 (iii) 비이온성 계면활성제를 더 포함하는 제형.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB2111758.5A GB202111758D0 (en) | 2021-08-17 | 2021-08-17 | Modified colloidal particles for use in the treatment of haemophilia A |
| GB2111758.5 | 2021-08-17 | ||
| PCT/EP2022/073013 WO2023021115A1 (en) | 2021-08-17 | 2022-08-17 | Modified colloidal particles for use in the treatment of haemophilia a |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240040126A true KR20240040126A (ko) | 2024-03-27 |
Family
ID=77859901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247008853A KR20240040126A (ko) | 2021-08-17 | 2022-08-17 | A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4387652A1 (ko) |
| JP (1) | JP2024532165A (ko) |
| KR (1) | KR20240040126A (ko) |
| CN (1) | CN118119401A (ko) |
| AU (1) | AU2022331799A1 (ko) |
| CA (1) | CA3227245A1 (ko) |
| GB (2) | GB202111758D0 (ko) |
| IL (1) | IL310770A (ko) |
| MX (1) | MX2024002103A (ko) |
| WO (1) | WO2023021115A1 (ko) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| AU7384994A (en) | 1993-08-06 | 1995-02-28 | Opperbas Holding B.V. | A method for high loading of vesicles with biopolymeric substances |
| CA2379060A1 (en) | 1999-07-14 | 2001-01-25 | Alza Corporation | Neutral lipopolymer and liposomal compositions containing same |
| GB201518172D0 (en) * | 2015-10-14 | 2015-11-25 | Cantab Biopharmaceuticals Patents Ltd | Colloidal particles for use in medicine |
| GB201518171D0 (en) * | 2015-10-14 | 2015-11-25 | Cantab Biopharmaceuticals Patents Ltd | Colloidal particles for topical administration with therapeutic agent |
-
2021
- 2021-08-17 GB GBGB2111758.5A patent/GB202111758D0/en not_active Ceased
-
2022
- 2022-08-17 EP EP22765849.9A patent/EP4387652A1/en active Pending
- 2022-08-17 KR KR1020247008853A patent/KR20240040126A/ko unknown
- 2022-08-17 JP JP2024509471A patent/JP2024532165A/ja active Pending
- 2022-08-17 WO PCT/EP2022/073013 patent/WO2023021115A1/en active Application Filing
- 2022-08-17 CN CN202280069998.3A patent/CN118119401A/zh active Pending
- 2022-08-17 MX MX2024002103A patent/MX2024002103A/es unknown
- 2022-08-17 IL IL310770A patent/IL310770A/en unknown
- 2022-08-17 CA CA3227245A patent/CA3227245A1/en active Pending
- 2022-08-17 AU AU2022331799A patent/AU2022331799A1/en active Pending
- 2022-08-17 GB GB2403664.2A patent/GB2625007A/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3227245A1 (en) | 2023-02-23 |
| GB202403664D0 (en) | 2024-05-01 |
| MX2024002103A (es) | 2024-05-10 |
| WO2023021115A1 (en) | 2023-02-23 |
| AU2022331799A1 (en) | 2024-03-14 |
| JP2024532165A (ja) | 2024-09-05 |
| GB2625007A (en) | 2024-06-05 |
| CN118119401A (zh) | 2024-05-31 |
| EP4387652A1 (en) | 2024-06-26 |
| IL310770A (en) | 2024-04-01 |
| GB202111758D0 (en) | 2021-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2007357B1 (en) | Compositions of less immunogenic and long-circulating protein-lipid complexes | |
| JP2023002687A (ja) | Ｐｅｇ化リポソームおよび血液凝固因子の製剤処方 | |
| US7875288B2 (en) | Method for treating blood coagulation disorders | |
| US20210093721A1 (en) | Colloidal particles for use in medicine | |
| WO2017064289A1 (en) | Colloidal particles for topical administration with therapeutic agent | |
| KR20240040126A (ko) | A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 | |
| KR20240040125A (ko) | A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 | |
| KR20240042134A (ko) | A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자 | |
| WO2017064300A1 (en) | Colloidal particles for subcutaneous administration with intravenous administration of therapeutic agent |