KR20240029907A - 홍삼 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 조성물 및 유산균 배양 배지 - Google Patents

홍삼 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 조성물 및 유산균 배양 배지 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유산균 생장 촉진용 조성물, 이를 포함하는 유산균 배양 배지 및 유산균의 배양방법에 관한 것으로, 본 발명의 조성물, 배양 배지 및 배양 방법은, 식물성 오일, 특히 홍삼 오일이 나타내는 유산균의 생장 촉진 효과를 이용하여, 더 많은 유산균을 수득할 수 있는 장점이 있다. 본 발명의 조성물을 이용하면 배양성이 개선되고 내산성이 우수한 유산균을 제공할 수 있어, 비용과 품질 개선 측면에서 이점이 있다.

Description

홍삼 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 조성물 및 유산균 배양 배지{Composition for promoting growth of Lactic acid bacteria and a culture medium for Lactic acid bacteria comprising Red Ginseng Oil}
본 발명은 식물성 오일, 특히 홍삼 오일을 포함하는 유산균 배양용 배지 및 이를 이용한 유산균의 배양방법에 관한 것이다.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오갈피나무과(Araliaceae) 인삼속(Panax)에 속하는 다년생 초본으로 한방에서 사용되는 한약재 중의 하나로 달면서 쓴맛이 있고, 따뜻한 기운을 가지고 있으며, 원기를 보하고 비장을 보호하며, 폐를 튼튼하게 해주는 등 본초학적 효능을 가지고 있다. 인삼의 주요 생리활성 물질은 진세노사이드라고도 불리는 사포닌과 정유성분, 폴리아세틸렌, 페놀성분, 배당체 및 산성펩타이드 등이 있으며, 그 밖에도 비타민, 당류, 무기질과 같은 다양한 성분들이 함유되어 있다. 일반적인 인삼의 생리활성 효능은 중추신경계의 작용, 면역기능 강화 작용, 항암 작용 등이 보고되어 있다. 특히 진세노사이드는 지금까지 약 40여 종이 발견되고 있으며 중추 신경계를 비롯하여 내분비계, 면역계, 대사계 등에 광범 위한 영향을 미쳐 신체기능 조절, 즉 생리기능 정상화에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 확인되고 있다. 이들 진세노사이드는 서로 비슷한 작용을 하거나 또는 서로 반대되는 작용을 나타내기도 하는데, 특정 성분이 단독으로 또는 여러 종류가 상호작용을 통해서 다양한 효능을 발휘하는 것으로 알려지고 있다.
인삼과 홍삼은 약리 활성성분 외에도 단백질, 펩타이드, 탄수화물, 지방, 미네랄, 탄수화물 등의 영양성분을 더 포함하고 있다. 그러나 영양성분 중 지용성 성분 함량은 1~2% 정도이며, 홍삼 오일에 대한 화학성분 및 생리활성에 관한 연구는 아직 미비한 실정이다. 홍삼 오일은 기존의 다른 식물성 오일과는 차별화된 특이적 성분 특성이 있으며, 생리활성 효과에서 우수한 것으로 평가되어 화장품의 기능성 소재 또는 건강기능식품 소재로서 활용하기 위한 연구가 계속되고 있다.
한편, 유산균은 발효를 통해 여러 가지 유용 물질을 만들어낼 수 있는 미생물로, 동서양의 역사 속에서 다양한 식품에 유산균을 이용하여 왔다. 예를 들어, 치즈, 요거트, 김치 등의 식품들은 유산균의 발효 과정을 이용하여 만들어지는 식품들이며, 유산균과 유산균에 의해 만들어지는 성분들을 함유하고 있다는 점에서 이를 취식하는 사람의 건강에 도움이 되고 질병의 예방이나 치료에 효과가 있는 것으로 널리 알려져 있다. 유산균을 배양하기 위해 MRS 배지를 이용하는 경우가 많으나, 이러한 시판 배지의 경우 단가가 높아 대량 배양에 적합하지 않고, 일정 시간이 경과한 뒤에는 pH 저하로 인한 유산균 생장 저해의 문제점과 이를 극복하기 위한 염기성 물질의 첨가에 따른 문제점이 발생할 수밖에 없는 단점이 있다. 유산균은 대개 온도, 산도, 압력 등에 취약하기 때문에 유통 과정이나 보관하는 환경에 따라 유산균의 양이 식약처 권장 기준 함량에 미치지 못하는 경우도 있다. 이에, 유산균 배양 배지의 pH를 조절하기 위한 성분을 첨가하거나, 다양한 종류의 아미노산을 배지에 첨가함으로써 유산균의 생장률을 개선하려는 시도가 있었다. 같은 맥락에서, 유산균 배양은 조건에 따라 유산균의 생균 수가 크게 달라질 수 있기 때문에 유산균의 배양성을 개선할 수 있는 조건에 대한 연구도 지속적으로 이루어지고 있다.
본 발명은 식물성 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 유산균 배양 배지를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 배양 배지를 이용한 유산균 배양법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 측면은, 식물성 오일을 포함하는 유산균 배양용 배지 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 측면은 상기 식물성 오일을 포함하는 유산균 배양용 배지 조성물을 포함하는 유산균 배양 배지를 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 측면은, 식물성 오일을 포함하는 유산균 배양 배지에 유산균을 배양하는 단계;를 포함하는 유산균의 배양 방법을 제공한다.
본 발명의 유산균 생장 촉진용 조성물은 식물성 오일, 특히 인삼 오일을 포함하고 있으므로 유산균의 생장을 촉진하는 효과가 있다. 따라서 상기 조성물을 유산균의 배양 배지에 첨가할 경우 통상적인 유산균 배양 배지를 이용할 때에 비해 유산균의 생장을 획기적으로 향상시킬 수 있다. 또한 내산성을 비롯한 안정성이 개선된 우수한 품질의 유산균을 제공할 수 있다. 본 발명의 인삼 오일이 포함된 유산균 배양용 배지는 유산균의 배양성과 안정성을 향상시켜, 유산균의 대량 배양에 유용하게 이용될 수 있고, 인삼의 부산물을 활용할 수 있어 비용 측면에서 이점이 있다.
다만, 본 출원의 효과는 상기에서 언급한 효과로 제한되지 아니하며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 하기의 기재로부터 당업자에게 명확히 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
유산균 생장 촉진용 또는 내산성 향상용 조성물
본 발명의 일 측면은 식물성 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 조성물을 제공한다.
상기 식물성 오일은 일반적으로 식물로부터 추출한 지용성 성분 또는 트라이글리세라이드를 의미한다. 상기 식물성 오일은 실온에서 액체 상태를 유지하는 기름만 또는 주어진 온도 조건에 대한 물질의 상태에 관계없이 모든 범위의 식물성 유지를 의미한다. 예컨대, 인삼 오일, 카놀라유, 콩기름, 포도씨유, 유채씨유, 아몬드유, 아보카도유, 치아씨유, 코코넛오일, 옥수수유, 아마씨유, 대마씨유, 올리브유, 팜유, 땅콩유, 호두기름, 들기름, 해바라기씨유, 피마자유, 면실유 등일 수 있고, 예컨대 인삼 오일, 카놀라유, 콩기름 또는 포도씨유 등일 수 있고, 구체적으로 인삼 오일, 특히 그 중에서도 홍삼 오일일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
상기 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오갈피나무과(Araliaceae) 인삼속(Panax)에 속하는 다년생 초본으로 한방에서 사용되는 한약재 중의 하나로 달면서 쓴맛이 있고, 따뜻한 기운을 가지고 있으며, 원기를 보하고 비장을 보호하며, 폐를 튼튼하게 해주는 등 본초학적 효능을 가지고 있다. 상기 인삼은 고려삼(Panax ginseng), 회기삼(P. quiquefolius), 전칠삼(P. notoginseng), 죽절삼(P. japonicus), 삼엽삼(P. trifolium), 히말라야삼(P. pseudoginseng), 베트남삼(P. vietnamensis), 또는 미국삼 (P. quinquefolium) 등일 수 있다.
또한, 상기 인삼은 수삼, 백삼, 홍삼 또는 산삼일 수 있고, 구체적으로 홍삼일 수 있다. 인삼은 일반적으로 가공 방법에 따라 수삼, 백삼과 홍삼으로 구분된다. 수삼은 밭에서 채굴한 건조시키지 아니한 인삼이며, 백삼은 수삼을 그대로 건조한 것을 지칭하며 홍삼은 인삼을 증숙하여 건조 가공한 것으로 제조 과정에서 사포닌 전환과 아미노산 변화 등 여러 화학적인 변화가 수반된다. 또한 상기 홍삼은 증숙하여 건조하는 과정을 여러 번 거친 흑삼도 포함할 수 있다. 상기와 같은 가공방법에서 가해지는 열에 의해 수삼에 존재하지 않는 진세노사이드 성분이 생성되며, 홍삼 특유의 유효 성분은 암 예방 작용, 암세포 성장 억제 작용, 혈압 강하 작용, 뇌신경세포 보호, 학습 능력 개선 작용을 나타낸다. 상기 산삼은 산에서 자연상태로 발아하여 생장한 인삼이다. 본 발명에서 인삼은 인삼의 잎, 어린 새싹, 줄기, 줄기 껍질, 뿌리, 뿌리 껍질, 종자, 열매, 미숙과, 완숙과, 과육, 과피, 꽃, 수술군(androecium), 암술군(gynoecium), 꽃받침, 수술, 꽃잎, 꽃받침 조각, 심피 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 증숙하여 수득할 수 있으며, 구체적인 공정은 통상적인 방식에 의할 수 있다.
본 발명에서 ‘인삼오일 ’은 인삼의 지용성 성분을 분리 정제한 것으로, 인삼으로부터 지용성 성분을 제조 분리하는 방법은 통상의 방식에 의할 수 있다. 예를 들어, 인삼 오일은 인삼과 인삼의 부산물로부터 지용성 성분을 유기 용매로 추출한 것일 수 있다. 이때 인삼은 통상적인 공정을 통해 제조된 것을 사용할 수 있고, 인삼의 부산물은, 인삼 가공시 발생되는 인삼의 꽃, 줄기, 잎, 잔근, 가공박일 수 있고, 구체적으로 인삼의 사포닌을 물 등의 극성 또는 수성 용매로 추출하고 남은 잔사를 건조시킨 인삼박 또는 이를 분쇄한 것일 수 있고, 구체적으로 홍삼박 또는 이를 분쇄한 것일 수 있다.
상기 인삼 오일의 추출은 용매 추출법, 냉침법, 온침법, 침적법 등 여러 방법이 가능하며, 구체적으로는 초임계 용매 추출법일 수 있다. 상기 용매 추출법에서 사용하는 유기 용매는 인삼 또는 인삼의 부산물 내 지용성 성분인 식물성스테롤을 효과적으로 추출하기 위한 용매를 사용한다. 대표적으로, 상기 유기 용매로는 주정, 헥산, 사이클로헥산, 클로로포름, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, 아세톤, 테트라하이드로푸란, 헵탄, 벤젠, 석유 에테르, 디프로필 에테르, 푸르푸롤, 트리에틸아민, 아세토니트릴 및 이들의 혼합용매일 수 있고, 구체적으로는 주정, 헥산, 아세톤 및 이들의 혼합 용매일 수 있다.
이때 용매 추출은 이 분야에서 공지된 방법이 사용될 수 있으며, 본 발명에서 특별히 한정하지 않는다. 구체적으로, 높은 추출 수율을 얻기 위해, 초임계 조건에서 추출이 가능하다. 상기 초임계 추출은 인삼 또는 인삼 부산물, 구체적으로 홍삼 또는 홍삼 부산물과 유기 용매의 혼합물을 초임계 추출조에 넣고, 초임계 유체(일예로, 이산화탄소)를 공급한 다음, 추출조의 압력을 300 내지 500bar로 유지하며 상온에서 0.5-10시간, 1-8시간 또는 2-6시간 동안 수행하는 것일 수 있다. 상기 추출용매의 함량, 온도 및 시간은 추출 수율에 영향을 주는 것으로, 경제적인 것을 고려하여 최대의 추출 수율을 얻기 위한 범위이다.
상기 인삼 오일은 필요한 경우 정제 공정을 수행한다. 이러한 정제는 본 발명에서 특별히 한정하지 않으며, 공지된 방법을 이용할 수 있다. 일예로 박막 증류장치를 이용한 증류과정, 감압 여과 후 이온교환수지, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 거친 후 동결 건조하거나 농축시켜 용매를 제거할 수 있다. 구체적으로 박막 증류장치를 이용할 수 있으며, 이는 물질 고유의 증기압(Vapor Pressure) 특성으로 온도가 상승하고 압력이 낮아질 때 증기화되는 원리를 이용하여 인삼의 지용성 성분만을 분리정제하는 방법이다.
이렇게 추출된 인삼 오일은 다양한 성분을 포함하며, 바람직하기로, 주성분으로 80 중량% 이상이 유지로 구성되고, 0.1∼10 중량%가 식물성스테롤(phytosterol), 0.1∼10 중량%의 인지질, 및 0.1∼5 중량%의 폴리아세틸렌을 포함할 수 있다. 홍삼 오일은 지방산으로 이루어지며, C6~C24의 포화 및 불포화 지방산을 주성분으로 포함한다. 구체적으로, 상기 지방산으로 C14:1 미리스트산, C14:0 미리스트올레산, C15:0 펜타데카노익산, C16:0 팔미트산, C16:1 팔미트올레 산, C17:0 헵타데카노익산, C17:1 시스-10-헵타데세노익산, C18:0 스테아르산, C18:1 올레산, C18:2 리놀레산, C18:3 리놀렌산, C20:0 아라키돈산, C20:2 시스-11,14-에이코사티리에노익산, C21:0 시스-11-에이코세노익산, C22:0 베헤닉산, C20:3 시스-11,14,17-에이코사트리에노익산, C20:4 아라키돈산, C22:1 에루스산, C22:2 시스13,16-도코사디에노익산, C23:0 트리코사노익산, 시스-5,8,11,14,17-에이코사펜타에노익산, C24:0 리그노세릭산, C24:1 네르보닉산 등을 포함하며, 그 중 50% 이상이 리놀레산으로 이루어진다. 리놀렌산, 올레산, 팔미트산 순으로 많이 포함된 특징이 있다. .
또한, 인삼 오일은 식물성스테롤(phytosterol)을 홍삼 오일 내 0.1∼10 중량%, 구체적으로 8∼10 중량%으로 포함할 수 있다. 그 중 특히 β-시스테롤의 함량이 80% 이상의 비중으로 매우 높다는 점이 다른 식물성오일과 차별화된 특징이다. 식물성스테롤은 캄페스테롤(campesterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), β-시토스테롤(β-sitosterol) 및 기타 식물성스테롤 등으로 구성된다. 이러한 식물성스테롤은 혈중 콜레스테롤 수치를 저하 작용, 해독 작용, 면역기능 증강 작용 등이 공지되어 있다. 특히, β-시토스테롤은 프로비타민D의 일종으로, 이미 임상에서 콜레스테롤 축적에 의한 동맥경화, 협심증, 심근경색, 뇌혈관성 질환 등의 치료제에 포함되어 사용되고 있으며, 홍삼 오일을 구성하는 식물성스테롤 조성 내 80 중량% 이상 고함량으로 존재하는 특징이 있다.
또한, 인삼 오일은 인삼의 지용성 성분으로서 비사포닌 계열 유효성분을 포함하고 있다. 상기 인삼 오일은 사포닌 계열 Rb1, Rg3, Rg1, Re 등의 진세노사이드 성분이 포함되어 있지 않을 수 있으나. 특히, 홍삼 오일은 홍삼으로의 가공과정에서 비사포닌 계열 유효성분인 폴리아세틸린계 성분, 산성 다당체(acidic polysaccharide) 성분, 아미노산과 그 유도체 성분이 풍부해진다. 이러한 성분은 홍삼의 생리활성에 중요한 역할을 하고, 따라서 본 발명에서 인삼 오일은 항암, 항산화 등 다양한 생리활성 기능도 나타낼 수 있다. 본 발명에서 인삼 오일은 유산균의 생장을 촉진하거나, 유산균의 내산성을 향상시키는 효과가 있다.
상기 조성물은 인삼 오일을 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 5.중량% 포함할 수 있다. 구체적으로, 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 중량% 이상, 0.01 중량% 내지 5.0중량%, 0.05 중량% 내지 3중량%, 0.1 중량% 내지 1.0중량%의 범위일 수 있다. 인삼 오일이 상기와 같은 함량으로 본 발명의 조성물에 포함될 경우, 상기 인삼 오일에 의한 유산균의 생장 촉진 효과 및 생장 수율이 가장 높게 나타나면서도, 인삼 오일이 지나치게 다량으로 함유되지 않아 제조 공정의 효율 측면에서도 유리한 장점이 있다.
상기 “유산균의 생장”은, 유산균의 성장 속도를 증가시키는 것을 의미하며, 이는 유산균의 배양 시작 시점으로부터 단위시간 당 유산균의 생균 수 증가율 향상을 의미한다. 상기 유산균의 생균 수는 배양 이후 나타난 유산균의 집락 수를 세어 측정할 수 있으며, ㎖ 당 생균 수(CFU/㎖)로 나타낼 수 있다. 상기 유산균 생장 촉진은 유산균의 분열에 도움을 주어 이의 세포 수 증가를 촉진하는 것이거나, 유산균의 생장 억제 작용을 저해하는 것일 수 있다. 또한, 상기 유산균 생장 촉진은, 상기 유산균을 배양 배지에서 배양하고자 할 때 이의 생장을 촉진하는 것이거나, 식품 내에 함유된 유산균의 생장을 촉진하는 것일 수 있다. 배양 배지에서의 유산균의 생장을 촉진시키기 위하여, 본 발명의 조성물은 유산균 배양 배지에 첨가되어 이용될 수 있고, 식품 내 유산균의 생장을 촉진시키기 위하여, 본 출원의 조성물은 유산균을 함유하는 식품에 처리되어 이용될 수 있다. 상기 식품은 발효 식품일 수 있으며, 예컨대, 발효유, 요거트, 김치, 치즈, 간장, 된장, 젓갈, 빵, 주류 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 홍삼 오일 및 다른 식물성 오일을 첨가한 배지에서 유산균의 대조군 대비 증식률이 크게 증가하는 것을 확인하여, 식물성 오일이 유산균의 생장을 촉진하는 것을 확인하였다.
상기 내산성은 균주가 산성의 환경에서 잘 생존할 수 있는 성질을 의미하는 것으로서, 내산성이 향상된다는 것은 상기 조성물이 첨가된 경우 첨가되지 않은 음성 대조군보다 산성 환경에서 유산균의 생균 수가 증가하거나, 유산균의 생장 속도가 증가된다는 것을 의미할 수 있다.
상기 산성 환경은 pH 5 이하의 환경, 예컨대 pH 4 이하, pH 3 이하, pH 2.5 이하의 환경일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 식물성 오일을 첨가한 배지에서 배양한 유산균은 대조군에 비해 생존율이 크게 증가하였으며, 특히 pH 2.5의 조건에서 홍삼 오일을 첨가한 배지에서 유산균의 생존율이 가장 우수하게 증가함을 확인하였다.
본 발명의 "유산균(Lactic acid bacteria)"은 그람-양성균의 일종으로 젖산균으로도 불리며, 탄수화물의 발효를 통해 젖산(유산)을 주요한 산물로 생산하는 특징이 있는 미생물을 의미한다. 상기 유산균은 이를 섭취한 사람의 장내에서 병원성 미생물의 작용을 억제하고 항상성의 유지에 도움을 주는 등의 활성이 있다. 상기 유산균은 유산을 대사 산물로서 많이 생성하는 세균을 총칭하는 것으로, 예를 들어, 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.), 스트렙토코커스 속(Streptococcus sp.), 락토코커스 속(Lactococcus sp.), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.), 페디오코커스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 비셀라 속(Weissella sp.) 등일 수 있다.
일 예로서, 상기 유산균은 락토바실러스 에시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델부르키 아종 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 델부르키아종 락티스(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 락토코커스 락티스 아종 크레모리스(Lactococcus lactis subsp. cremoris), 락토코커스 락티스 아종 락티스 생물형 디아세틸락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis biovar diacetylactis), 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophiles), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 슈도메센테로이데스(Leuconostoc pseudomesenteroides), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 바실러스 코아귤런스(Bacillus coagulans) 등일 수 있으며, 상기 유산균에 제한되지 않고 식품용 또는 사료용으로 사용 가능한 모든 유산균을 포함한다.
유산균 배양 배지
또한, 본 발명의 다른 측면은 상기 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물을 포함하는, 유산균 배양 배지를 제공한다.
상기 유산균 생장 촉진용 조성물에 관한 설명은 상기에서 설명한 바와 동일하며, 구체적으로 상기 인삼, 인삼 오일, 인삼 오일의 제조방법, 이의 함량, 유산균 생장 촉진 등에 관한 설명은 상기의 설명을 원용한다.
본 발명의 "유산균 배양 배지"는, 유산균을 배양하기 위한 목적의 배지를 의미하며, 유산균의 생장에 도움을 줄 수 있는 것으로 본 출원의 기술분야에서 통상적으로 알려진 성분을 포함할 수 있다.
상기 유산균 배양 배지는 액체 또는 고체 형태일 수 있으며, 액체 형태의 배지를 한천(agar)과 혼합하여 고체화한 것일 수 있다.
본 발명의 유산균 생장 촉진용 조성물을 포함함에 따라, 상기 유산균 배양 배지는 상기 인삼 오일을 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 중량% 이상, 0.01 중량% 내지 5.0중량% 함량으로 포함될 수 있으며, 상기 조성물의 농도 및 함량을 적절히 조절할 수 있다. 구체적으로, 상기 인삼 오일은 유산균 배양 배지 내에 0.01 중량% 내지 5.0중량%, 0.05 중량% 내지 3중량%, 0.1 중량% 내지 1.0중량% 함량으로 포함될 수 있다. 인삼 오일이 상기와 같은 범위의 함량으로 본 발명의 유산균 배양 배지에 포함될 경우, 상기 인삼 오일에 의한 유산균의 생장 촉진 효과가 충분히 발휘되면서도, 유산균의 생장에 도움을 줄 수 있는 상기 배양 배지 내 다른 성분들의 함량도 지나치게 감소되지 않을 수 있어 유산균의 생장 수율이 가장 높게 나타날 수 있는 장점이 있다. 또한, 상기 식물성 오일이 지나치게 다량으로 함유되지 않아 제조 공정의 효율 측면에서도 유리한 장점이 있다. 상기 유산균 배양 배지는 탄소원, 질소원, 무기염 등을 더 포함할 수 있으며, 유산균의 배양에 최소로 요구되는 성분이나, 유산균의 생장에 도움을 줄 수 있는 성분이라면 제한없이 포함할 수 있다.
상기 탄소원은 글루코오스(glucose), 말토오스(maltose), 락토오스(lactose), 셀로비오스(cellobiose), 만노오스(mannose), 트레할로오스(trehalose), 프락토오스(fructose), 멜리비오스(melibiose), 갈락토오스(galactose), 라피노오스(raffinose), 수크로오스(sucrose), 스타키오스(stachyose), 만니톨(mannitol), 아라비노오스(arabinose), 소비톨(sorbitol), 자일로오스(xylose), 에스쿨린(esculin), 람노오스(rhamnose), 살리신(salicin), 전분 등의 당류, 및/또는 구연산, 주석산, 사과산 등의 유기산, 글리세롤 및/또는 저분자량의 지방산일 수 있다.
상기 질소원은 카제인, 효모추출물(yeast extract), 비프 추출물(beef extract), 간추출물(liver extract), 카제인펩톤(casein peptone), 대두펩톤(soy peptone), 완두펩톤(pea peptone), 밀펩톤(wheat peptone), 감자펩톤(potato peptone), 쌀펩톤(rice peptone), 맥아추출물(malt extract), 및/또는 트립톤(tryptone) 일 수 있다.
상기 무기염은 P, Na, K, Mg, S, 및/또는 Mn일 수 있으며, 상기 배양 배지는 그 외 미량의 무기염을 더 포함할 수 있다. 상기 무기염은, 예컨대 폴리소베이트 80, 제2인산칼륨(K2HPO4),Na-아세테이트, 시트르산 암모늄((NH4)2citrate),황산마그네슘(MgSO4× 7H2O),황산망간(MnSO4× H2O)등의 형태로 포함될 수 있고, 상기 무기염의 종류 및 함량은 배양 배지의 pH, 삼투압에 따라 적절히 선택할 수 있다. 또한, 소고기 추출물, 펩톤, 효모 추출물 등 천연의 성분을 배지에 이용할 경우에는, 상기 천연 재료 내 포함되는 무기염을 고려하여, 별도의 무기염을 더 첨가하지 않거나 그 함량을 적게 설정할 수 있다.
상기 탄소원, 질소원, 및 무기염 성분의 함량은 상기 인삼 오일에 의한 유산균 생장 촉진 또는 안정성 향상 효능을 억제 하지 않는 범위 내에서 유산균의 배양 목적, 목표 유산균 수 등에 따라 설정될 수 있다.
상기 유산균 배양 배지는 유산균의 배양에 통상적으로 사용되는 배지 성분 또는 시판 배지성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, MRS, BL, M17, NB, BHI 배지등을 사용할 수 있다. 구체적으로 상기 유산균 배양 배지 조성물은 MRS 배지 성분을 더 포함할 수 있다. 상기 MRS 배지는 유산균의 배양에 이용되는 배지로, 락토바실러스 속 유산균의 생장에 도움을 줄 수 있다. 상기 MRS 배지 성분은 프로테오스 펩톤, 비프(beef) 추출물, 효모(yeast) 추출물, 덱스트로스, 폴리소베이트 80, 시트르산 암모늄, 황산마그네슘, 황산망간, 및/또 는 제2인산칼륨일 수 있다. 상기 MRS 배지 성분의 함량은 상기 인삼 오일에 의한 유산균 생장 촉진 효능을 억제하지 않는 범위 내에서 유산균의 배양 목적, 목표 유산균 수 등에 따라 설정될 수 있다.
상기 유산균 배양 배지는 유산균의 생장 촉진에 도움을 줄 수 있는 성분을 더 포함할 수 있으며, 상기 성분의 종류 및 함량은 인삼 오일에 의한 유산균 생장 촉진 효능을 억제하지 않는 범위 내에서 유산균의 배양 목적, 목표 유산균 수 등에 따라 설정될 수 있으며, 예컨대 비타민 등을 더 포함할 수 있다.
유산균의 배양 방법
또한, 본 발명의 다른 측면은, 식물성 오일을 포함하는 유산균 배양 배지에 유산균을 배양하는 단계;를 포함하는 유산균의 배양 방법을 제공한다.
상기 식물성 오일, 구체적으로 인삼 오일, 인삼 오일의 제조 방법, 인삼 오일의 함량, 유산균 등에 관한 설명은 전술한 바와 동일하여 이를 원용한다.
본 발명의 상기 식물성 오일은 유산균의 생장을 촉진하고, 유산균의 내산성을 향상시키는 효과가 있는바, 이를 유산균 배양 배지에 첨가하여 유산균을 배양하는 경우 유산균의 생장이 촉진되어 배양성이 향상되고, 더 많은 수의 유산균을 수득할 수 있다. 또한, 유산균의 내산성이 향상되어 품질이 개선된 유산균을 수득할 수 있다. 특히, 상기 배양 배지가 인삼 오일, 구체적으로 홍삼 오일을 포함하는 경우 유산균의 배양성이나 내산성을 개선하는 효과가 우수하다.
상기 유산균을 배양하는 단계는, 배양 배지에 먼저 유산균 또는 이의 배양액을 첨가한 후 상기 인삼 오일을 첨가하는 것이거나, 상기 인삼 오일을 먼저 배양 배지에 첨가한 후 유산균 또는 이의 배양액을 첨가하는 것일 수 있으며, 유산균 또는 이의 배양액과 상기 인삼 오일을 혼합하여 배양 배지에 첨가하는 것일 수도 있다. 상기 유산균 배양 배지는 유산균 배양 배지는 유산균의 배양에 통상적으로 이용되는 배양 배지라면 제한 없이 적용될 수 있다. 상기 배양 배지는 탄소원, 질소원, 및 무기염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 상기 탄소원, 질소원, 및 무기염에 관한 설명은 상기에서 설명한 바와 동일하다.
또한, 상기 유산균을 배양하는 단계는 당해 40℃, 또는 35 내지 40℃, 또는 35 내지 37℃의 온도에서, 질소 가스 또는 이산화탄소 가스로 치환된 혐기 조건 하에서, 6 내지 48 시간 동안 수행될 수 있다. 다만 이에 한정되지 않고, 일반적으로 유산균 배양의 최적 조건에 따라서 실시하면 좋고, 특별히 한정되지 않는다. 또한, 이 때의 배양 조건으로서는, 정치, 교반, 진탕, 통기 등으로부터 이용되는 유산균의 배양에 적합한 방법을 적절히 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 상기 배양 방법에 의해 얻어지는 유산균 또는 이의 배양물은 식품, 화장품, 의약품 등의 용도에 사용될 수 있다. 이 때 유산균 또는 이의 배양물은 단독으로 또는 담체와 혼합되어 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 비교예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 제조예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
시료 및 배양 배지의 준비
홍삼 오일은 홍삼을 초임계 이산화탄소로 추출한 홍삼 오일 또는 이를 박막 증류 장치를 이용하여 정제하여 제조한 홍삼 오일을 사용하였다. 나머지 식물성 오일 3종(카놀라유, 포도씨유, 콩기름)은 시판 오일을 구매하여 사용하였다. 상기 홍삼 오일 또는 식물성 오일을 농도별로 첨가한 MRS 배지를 준비하였다.
[실시예 2]
유산균의 생장 촉진 효과 확인
상기 실시예 1에서 준비한 홍삼 오일을 첨가한 MRS 배지를 이용하여, 본 발명의 조성물 또는 배양배지의 유산균 생장 촉진 효과를 확인하였다.
구체적으로, 상기 홍삼 오일을 농도별(미첨가/0.1%/0.5%/1.0%)로 첨가한 MRS 배지를 준비하였다. 시험 균주로는 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum) 균주를 사용하였다. 상기 3종의 시험 균주를 상기 홍삼 오일을 첨가한 MRS 배지에 접종하여 37℃에서 진탕 배양한 후, 배양시간별(0시간, 16시간, 24시간)로 생균수(CFU/mL)를 측정하여, 초기 대비 증식률을 계산하였다. 홍삼 오일을 첨가하지 않은 무첨가군을 대조군(control)으로 하였다.
그 결과, 하기 표 1에 나타난 바와 같이, 상기 시험 균주 3종에 대하여, 홍삼 오일 함유 배지에서 배양 시, 락토바실러스 3종 균주 모두 대조군 대비 배양성이 향상되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 락토바실러스 플란타룸 균주의 경우, 홍삼 오일 함유 배지에서 배양 시 무첨가 대조군 대비 증식률이 약 200% 이상으로 증가하여 시험 균주 3종 중 홍삼오일 첨가로 인해 배양성이 가장 크게 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
시험균주 배지 첨가 원료 16 h 24 h
생균수
(CFU/mL)		 무첨가군 대비 증식률 생균수
(CFU/mL)		 무첨가군 대비 증식률
Lactobacillus reuteri 무첨가군(control) 2.19.E+09 - 2.09.E+09 -
홍삼오일 0.1% 첨가군 2.30.E+09 105% 2.07.E+09 88%
홍삼오일 0.5% 첨가군 2.77.E+09 127% 2.35.E+09 100%
홍삼오일 1.0% 첨가군 2.48.E+09 113% 2.54.E+09 107%
Lactobacillus fermentum 무첨가군(control) 1.02.E+09 - 1.58.E+09 -
홍삼오일 0.1% 첨가군 1.43.E+09 137% 1.76.E+09 154%
홍삼오일 0.5% 첨가군 1.33.E+09 130% 1.82.E+09 163%
홍삼오일 1.0% 첨가군 1.18.E+09 116% 1.66.E+09 149%
Lactobacillus plantarum 무첨가군(control) 1.74.E+09 - 1.84.E+09 -
홍삼오일 0.1% 첨가군 2.88.E+09 244% 3.52.E+09 229%
홍삼오일 0.5% 첨가군 3.23.E+09 274% 3.11.E+09 202%
홍삼오일 1.0% 첨가군 3.18.E+09 270% 3.07.E+09 199%
[실시예 3]
홍삼 오일 첨가에 따른 유산균의 내산성 향상 효과 확인
유산균 배양 배지에 홍삼 오일을 첨가하는 경우, 유산균의 내산성이 향상되는지 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 2에서 홍삼 오일을 농도별로 첨가한 MRS 배지에서 16시간 진탕 배양한 3종의 유산균을 원심분리하여 상등액을 제거하고 균체를 회수하였다. 상기 상등액이 모두 제거된 균체를 pH 2.5의 PBS 버퍼에 재부유하여, 37℃에서 3시간 배양하고 생균수를 측정하여, 초기값 대비 생존율을 확인하였다. 홍삼 오일을 첨가하지 않은 배지에서 배양한 유산균을 대조군으로 하였다.
그 결과, 하기 표 2에 나타난 바와 같이, 시험 균주 3종에 대하여 홍삼 오일 함유 배지에서 배양 시, 상기 3종 균주 모두 무첨가 대조군 대비 생존율이 증가하여 pH 2.5 환경에서 내산성이 향상됨을 확인하였다. 락토바실러스 루테리 균주의 경우 홍삼 오일이 첨가된 배지에서 대조군 대비 생존율이 약 1.1배 증가하였다. 락토바실러스 플란타룸 균주의 경우, 홍삼 오일 0.1% 함유 배지에서 배양한 균주는 대조군 대비 생존율이 약 2.1배 증가하였으며, 홍삼 오일 0.5%, 1.0% 함유 배지에서 배양한 균주 생존율이 대조군 대비 약 3.5배로 유사한 수준으로 증가하였다.
락토바실러스 퍼멘텀 균주의 경우, 첨가한 홍삼 오일의 농도가 높을수록 초기값 대비 생존율이 증가하였으며, 그 값은 무첨가 대조군과 비교하여 초기값 대비 생존율이 각각 1.9배(홍삼오일 0.1% 첨가군), 2.5배(홍삼오일 0.5% 첨가군), 3.1배(홍삼오일 1.0% 첨가군) 증가하였다.
시험 균주 배지 첨가 원료
(pH 2.5)		 생균수(CFU/mL) 초기값 대비 생존율
0 h 3 h
Lactobacillus reuteri 무첨가군(control) 2.31.E+08 1.56.E+08 67.1%
홍삼오일 0.1% 첨가군 2.12.E+08 1.64.E+08 77.3%
홍삼오일 0.5% 첨가군 2.43.E+08 1.90.E+08 78.1%
홍삼오일 1.0% 첨가군 2.33.E+08 1.71.E+08 73.3%
Lactobacillus fermentum 무첨가군(control) 0.90.E+08 0.11.E+07 3.9%
홍삼오일 0.1% 첨가군 1.45.E+08 1.34.E+07 7.4%
홍삼오일 0.5% 첨가군 2.22.E+08 2.76.E+07 9.6%
홍삼오일 1.0% 첨가군 2.23.E+08 3.31.E+07 11.9%
Lactobacillus plantarum 무첨가군(control) 2.43.E+08 1.60.E+07 6.6%
홍삼오일 0.1% 첨가군 2.61.E+08 3.85.E+07 14.3%
홍삼오일 0.5% 첨가군 2.72.E+08 6.40.E+07 22.8%
홍삼오일 1.0% 첨가군 2.64.E+08 5.95.E+07 22.6%
[실시예 4]
오일 종류에 따른 유산균의 생장 촉진 및 내산성 향상 효과 비교
홍삼 오일 또는 다른 식물성 오일을 첨가한 배지에서 배양한 유산균의 배양성 및 내산성 증진 효과를 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 2 및 실시예 3과 같은 방법으로 식물성 오일 3종(콩기름, 카놀라유, 포도씨유)을 각 0.5% 농도로 첨가한 MRS 배지에 유산균을 배양하여 유산균의 배양성 및 내산성이 향상되는지 확인하였다.
그 결과, 하기 표 3에 나타난 바와 같이, 락토바실러스 플란타룸 균주의 경우, 홍삼 오일 첨가군 및 식물성 오일 첨가군 모두 대조군 대비 증식률이 증가하였다. 특히, 홍삼 오일 첨가군은 대조군 대비 증식률이 270% 이상 증가하여 다른 식물성 오일 첨가군보다 배양성이 훨씬 향상되었음을 확인할 수 있었다. 또한, pH 2.5 환경에서 식물성 오일 첨가군 모두 대조군 대비 생존율이 증가하였으나, 홍삼 오일 첨가군은 3.47배 증가하여 내산성이 가장 우수하게 향상됨이 확인되었다.
락토바실러스 루테리 및 락토바실러스 퍼멘텀 균주의 경우, 홍삼 오일 첨가군 및 식물성 오일 첨가군 모두 비슷한 정도로 증식률이 증가하였다. 또한, pH 2.5 환경에서 홍삼 오일 첨가군, 식물성 오일 3종 첨가군 모두 대조군 대비 생존율이 1.46배 내지 3.47배 증가하여 유산균의 내산성을 향상시키는 것을 확인하였다.
시험균주 배지 첨가 원료 배양성 결과
(대조군 대비 증식률)		 내산성 결과
(pH 2.5, 대조군 대비 생존율)
16h 24h
Lactobacillus reuteri 홍삼오일 0.5% 첨가군 127% 100% 1.16배
카놀라유 0.5% 첨가군 75% 111% 1.18배
포도씨유 0.5% 첨가군 81% 135% 1.11배
콩기름 0.5% 첨가군 79% 130% 1.10배
Lactobacillus fermentum 홍삼오일 0.5% 첨가군 130% 163% 2.50배
카놀라유 0.5% 첨가군 121% 98% 2.67배
포도씨유 0.5% 첨가군 128% 108% 2.26배
콩기름 0.5% 첨가군 119% 103% 1.82배
Lactobacillus plantarum 홍삼오일 0.5% 첨가군 274% 202% 3.47배
카놀라유 0.5% 첨가군 124% 148% 1.57배
포도씨유 0.5% 첨가군 112% 128% 1.20배
콩기름 0.5% 첨가군 121% 143% 1.46배
위와 같은 결과로부터, 유산균의 배양을 위하여 사용되는 MRS 배지에 홍삼 오일을 비롯한 식물성 오일을 첨가할 경우, 유산균의 생장이 증대되는 효과가 나타날 수 있으며, 그 중에서도 홍삼 오일의 경우 유산균의 배양성이 촉진되는 효과가 가장 우수하게 나타남을 확인할 수 있었다. 식물성 오일을 첨가하는 경우 유산균의 배양성이 증대될 뿐 아니라 유산균의 내산성이 증가하므로, 이에 따라 상기 식물성 오일 또는 이를 포함하는 조성물을 우수한 품질의 유산균의 생장을 촉진하기 위한 용도로 이용할 수 있음을 알 수 있다.

Claims (9)

  1. 식물성 오일을 포함하는 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 식물성 오일은 인삼 오일, 카놀라유, 콩기름 및 포도씨유로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것인, 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서,
    상기 인삼은 홍삼, 수삼, 백삼 또는 산삼인 것인, 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.), 스트렙토코커스 속(Streptococcus sp.), 락토코커스 속(Lactococcus sp.), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.), 페디오코커스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 비셀라 속(Weissella sp.)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 하나 이상의 유산균 생장 촉진용 또는 유산균의 내산성 향상용 조성물을 포함하는 유산균 배양 배지.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 식물성 오일은 상기 유산균 배양 배지에 대하여, 0.01 중량% 내지 5.0 중량%의 함량으로 포함되는 것인, 유산균 배양 배지.
  7. 청구항 5에 있어서,
    탄소원, 질소원 및 무기염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 더 포함하는 유산균 배양 배지.
  8. 청구항 7에 있어서,
    상기 탄소원은 글루코오스(glucose), 말토오스(maltose), 락토오스(lactose), 셀로비오스(cellobiose), 만노오스(mannose), 트레할로오스(trehalose), 프락토오스(fructose), 멜리비오스(melibiose), 갈락토오스(galactose), 라피노오스(raffinose), 수크로오스(sucrose), 스타키오스(stachyose), 만니톨(mannitol), 아라비노오스(arabinose), 소비톨(sorbitol), 자일로오스(xylose), 에스쿨린(esculin), 람노오스(rhamnose), 살리신(salicin), 전분, 구연산, 주석산, 사과산 및 글리세롤로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나이고,
    상기 질소원은 카제인, 효모추출물(yeast extract), 비프 추출물(beef extract), 간추출물(liver extract), 카제인펩톤(casein peptone), 대두펩톤(soy peptone), 완두펩톤(pea peptone),　밀펩톤(wheat peptone), 감자펩톤(potato peptone), 쌀펩톤(rice peptone), 맥아추출물(malt extract), 트립톤(tryptone), 펩톤(peptone)으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나이고,
    상기 무기염은 P, Na, K, Mg, S, 및 Mn으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인 것인, 유산균 배양 배지.
  9. 유산균을 식물성 오일을 포함하는 유산균 배양 배지에서 배양하는 단계;를 포함하는 유산균의 배양 방법.
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