KR20240022213A - Composition for controlling plant diseases and antibacterial comprising Citronella extract - Google Patents

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Abstract

본 발명은 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 식물 병해 방제 및 항균용 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 천연의 재료로부터 추출한 시트로넬라 추출물을 유효성분으로 이용하여 고추(red-pepper)에서 발병하는 식물병인 고추 탄저병(anthracnose), 고추 잿빛곰팡이병(Gray mold), 또는 고추 세균점무늬병(Bacterial spot)에 대한 방제 활성 및 이들 식물병의 원인균에 대한 항균 활성을 확인하였으므로, 이를 이용함으로써 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서도 고추 탄저병 병해를 크게 감소시킬 수 있다.The present invention relates to a composition for plant disease control and antibacterial use containing an extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella). The composition uses citronella extract extracted from natural ingredients as an active ingredient and uses red-pepper extract as an active ingredient. ), the control activity against pepper anthracnose, pepper gray mold, or pepper bacterial spot, which are plant diseases that occur in It is harmless to the human body and can significantly reduce pepper anthracnose disease without causing environmental pollution.

Description

시트로넬라 추출물을 포함하는 식물 병해 방제 및 항균용 조성물 {Composition for controlling plant diseases and antibacterial comprising Citronella extract}Composition for controlling plant diseases and antibacterial comprising Citronella extract}

본 발명은 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 식물 병해 방제 및 항균용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 시트로넬라 에탄올 추출물을 고추에서 발병하는 식물병인 고추 탄저병(anthracnose), 고추 잿빛곰팡이병(Gray mold), 또는 고추 세균점무늬병(Bacterial spot)에 대한 방제 용도 및 이들 식물병의 원인균에 대한 항균 용도로 활용하는 기술에 관한 것이다.The present invention relates to a plant disease control and antibacterial composition containing an extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella). More specifically, the ethanol extract of Citronella is used to treat anthracnose, a plant disease that occurs in peppers. It relates to technology used for controlling gray mold or pepper bacterial spot and for antibacterial purposes against the causative bacteria of these plant diseases.

농작물이 병원균이나 해충에 의해 병충해를 입게 되면 수확량이 저하되거나 품질이 떨어져 경제적인 피해를 초래한다. 기후변화에 따른 기온 상승 등으로 다양한 신종 병해 뿐만 아니라 기존에 발생하던 병해의 발생량 또한 증가하여 수확량이 심히 감소하고 품질이 저하되는 현상이 발생하고 있다. 특히 곰팡이 병해에 의한 농작물 감염은 인간을 비롯한 축산에 심각한 피해를 주는 균독소를 생산하므로 경제적인 피해 뿐만 아니라 인간의 건강을 위협하는 요인이 된다.When crops are damaged by pathogens or pests, yields are reduced or quality is reduced, resulting in economic damage. Due to temperature rise due to climate change, not only various new diseases but also the amount of existing diseases is increasing, resulting in a significant decrease in harvest and deterioration in quality. In particular, infection of crops by fungal diseases produces mycotoxins that cause serious damage to livestock, including humans, and thus poses not only economic damage but also a threat to human health.

이러한 심각한 영향을 끼치는 다양한 작물병해를 방제하는 방법은 주로 국내외에 등록된 농약을 이용하는 방법이 일반적인 방법이지만, 최근 이들 농약에 대한 저항성 병원균이 출현하고 농약의 잔류에 의한 환경 피해 등이 발생하므로 이를 대체할 수 있는 다양한 환경친화적인 병 방제제 개발이 절실한 상황이다.The general method of controlling various crop diseases that have such serious effects is to use pesticides registered at home and abroad. However, as pathogens resistant to these pesticides have recently emerged and environmental damage caused by residues of pesticides has occurred, these methods have been replaced. There is an urgent need to develop a variety of environmentally friendly disease control agents.

특히 탄저병(anthracnose)은 다양한 작물에 발생하는 다범성 병으로서, 고온 다습한 조건에서 발생하여 수확량 감소의 주요 원인이 되는 병해이다. 탄저병의 원인균은 콜렉토트리쿰(Collectotrichum) 속 또는 글레오스포리움(Gloeosporium) 속에 속하는 병원균이다. 주로 작물의 잎에 먼저 발생하고 꽃이나 열매에 발병하여 심각한 경제적인 피해를 초래하는 병이다.In particular, anthracnose is a widespread disease that occurs in a variety of crops and is a major cause of yield reduction as it occurs under high temperature and humidity conditions. The causative agent of anthrax is a pathogen belonging to the genus Collectotrichum or Gloeosporium . It is a disease that mainly occurs on the leaves of crops first and then spreads to flowers and fruits, causing serious economic damage.

고추 탄저병의 경우 고온 다습한 기온인 6월 중하순부터 발생하기 시작하며, 열매에 발생하여 작물의 수확량 감소를 초래하고 상품과의 품질을 저하시키며, 약제 방제에 따른 경영비 증가로 인한 경제적 손실, 농약의 지속적인 살포에 의한 잔류 독성, 약제 저항성 병원균 출현 등의 다양한 이유로 인하여 방제가 어려운 병해 중 하나이다.In the case of pepper anthracnose, it begins to occur in mid- to late June when temperatures are high and humid, and occurs in fruits, causing a decrease in crop yield and deteriorating product quality, economic loss due to increased management costs due to chemical control, and pesticide use. It is one of the diseases that is difficult to control due to various reasons such as residual toxicity due to continuous spraying and the emergence of drug-resistant pathogens.

따라서 병해를 예방하고 농작물의 수확량을 유지시키고 질 좋은 농작물을 얻기 위한 많은 방법들이 시도되고 있다. 국내 살균제 농약 총 매출액 6,649억 중 탄저병 방제 관련 매출액은 1,120억원의 시장에 해당하며 주로 화학 살균제에 의존하고 있다.Therefore, many methods are being attempted to prevent diseases, maintain crop yields, and obtain high-quality crops. Of the total domestic disinfectant pesticide sales of KRW 664.9 billion, sales related to anthrax control account for a market worth KRW 112 billion and are mainly dependent on chemical disinfectants.

이러한 대안으로, 지모잎 추출물과 분리화합물을 이용한 고추탄저병 방제조성물, 울금 추출물 또는 데메톡시 커큐민을 유효성분으로 하는 고추 탄저병 방제용 조성물 등 이들 화학농약을 대체할 다양한 천연물 살균제와 같은 생물 농약 등의 개발이 이루어지고 있다.As an alternative to this, development of biological pesticides such as various natural fungicides to replace these chemical pesticides, such as a composition for controlling pepper anthracnose using zygote leaf extract and isolated compounds, and a composition for controlling pepper anthracnose using turmeric extract or demethoxy curcumin as an active ingredient. This is being done.

한편, 시트로넬라(Cymbopogon nardus, citronella grass)는 열대 아시아가 기원인 벼과에 속하는 여러해살이 식물이다. 시트로넬라유로 알려진 방향유의 원료로 불쾌한 특성으로 인해 먹을 수는 없으나, 실내 방향제와 탈취제로 효과적인 오일로서 긴장 완화와 진정 작용을 하고, 풀 같으면서도 잔향의 레몬을 떠올리게 하는 향기를 풍기며, 로션바, 샴프, 향초 등으로 응용되어 사용되고 있다.Meanwhile, citronella ( Cymbopogon nardus , citronella grass) is a perennial plant belonging to the Poaceae family that originates from tropical Asia. It is a raw material for an aromatic oil known as citronella oil. Although it is inedible due to its unpleasant properties, it is an effective oil for indoor air fresheners and deodorizers, has a relaxing and soothing effect, and has a herbaceous yet lingering scent reminiscent of lemon, and is used in lotion bars. It is used in shampoos, scented candles, etc.

또한 시트로넬라는 곤충 기피제로 알려져 있어 벌레, 벼룩, 모기 퇴치제로서 모기를 죽이기 위한 살충용이 아닌 천연오일로서의 기피용 제품으로서 모기를 쫓아주는 역할에 도움을 준다. 사용예로는 화장솜에 묻혀서 장롱에 넣어 두면 훌륭한 천연 의류 방충제 역할을 한다.In addition, citronella is known as an insect repellent, so it is not a insecticide to kill mosquitoes as a bug, flea, and mosquito repellent, but it is a natural oil that helps to repel mosquitoes. For example, if you put it on a cotton pad and put it in a closet, it acts as an excellent natural clothing insect repellent.

시트로넬라에 함유되어 있는 공지된 성분으로는 시트로넬라유, 보르네올, 게라니올, 네롤, 시트랄, 시트로네랄, 칸펜, 지펜텐, 리모넨 등이 있다.Known ingredients contained in citronella include citronella oil, borneol, geraniol, nerol, citral, citroneral, canfen, zipentene, and limonene.

이에 본 발명자들은 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 에탄올 추출물로부터 고추에서 식물병을 유발하는 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 및 산토모나스 유베스카토리아(Xanthomonas euvescatoria)에 대한 방제 효과 및 균 생장 억제 효과가 우수한 것을 확인하였다.Accordingly, the present inventors used the ethanol extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella) to extract Colletotrichum acutatum , Botrytis cinerea , and Santo Monastery, which are causative bacteria that cause plant diseases in peppers. It was confirmed that the control effect and bacterial growth inhibition effect on Xanthomonas euvescatoria was excellent.

이에, 본 발명의 목적은 시트로넬라 추출물을 포함하는 식물 병해 방제용 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, the purpose of the present invention is to provide a composition for controlling plant diseases containing citronella extract.

본 발명의 다른 목적은 시트로넬라 추출물을 포함하는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an antibacterial composition containing citronella extract.

본 발명의 또 다른 목적은 시트로넬라 추출물의 식물 병해 방제 또는 항균 용도를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a plant disease control or antibacterial use of Citronella extract.

본 발명은 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 식물 병해 방제 및 항균용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 조성물은 고추(red-pepper)에서 발병하는 식물병인 고추 탄저병(anthracnose), 고추 잿빛곰팡이병(Gray mold), 또는 고추 세균점무늬병(Bacterial spot)에 대한 방제 활성 및 이들 식물병의 원인균에 대한 항균 활성을 나타낸다.The present invention relates to a plant disease control and antibacterial composition containing an extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella). The composition according to the present invention is directed to anthracnose, a plant disease that occurs in red pepper, It shows control activity against pepper gray mold or pepper bacterial spot and antibacterial activity against the causative bacteria of these plant diseases.

본 발명자들은 시트로넬라 에탄올 추출물로부터 고추에서 식물병을 유발하는 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 및 산토모나스 유베스카토리아(Xanthomonas euvescatoria)에 대한 방제 효과 및 균 생장 억제 효과가 우수한 것을 확인하였다.The present inventors have discovered that the ethanol extract of Citronella can be used to treat bacteria causing plant diseases in peppers, such as Colletotrichum acutatum , Botrytis cinerea , and Xanthomonas euvescatoria . It was confirmed that the control effect and bacterial growth inhibition effect were excellent.

이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 일 양태는 시트로넬라 추출물을 포함하는 식물 병해 방제용 조성물이다.One aspect of the present invention is a composition for controlling plant diseases containing a citronella extract.

본 발명에 있어서 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나의 추출용매에 의하여 추출된 것일 수 있다.In the present invention, the extract may be extracted using at least one extraction solvent selected from water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, polyhydric alcohols, or mixtures thereof.

상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 또는 부탄올을 이용할 수 있고, 다가 알코올로는 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 글리세롤 등을 이용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be methanol, ethanol, propanol, or butanol, and the polyhydric alcohol may include butylene glycol, propylene glycol, pentylene glycol, glycerol, etc., but is not limited thereto. .

본 명세서상의 용어 “추출물”은 용매 조추출물, 특정 용매 가용 추출물(용매 분획물) 및 용매 조추출물의 용매 분획물을 포함하며, 상기 시트로넬라 추출물은 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.The term “extract” herein includes solvent crude extracts, specific solvent-soluble extracts (solvent fractions), and solvent fractions of solvent crude extracts, and the Citronella extract may be in the form of a solution, concentrate, or powder.

시트로넬라의 조추출물 제조에 사용되는 한 용매에 물과 알코올의 혼합물을 사용하는 경우에는 10%이상 내지 100%(v/v)미만, 20%이상 내지 100%(v/v)미만, 30%이상 내지 100%(v/v)미만, 40%이상 내지 100%(v/v)미만, 50%이상 내지 100%(v/v)미만, 60%이상 내지 100%(v/v)미만, 70%이상 내지 100%(v/v)미만, 10%이상 내지 90%(v/v)미만, 20%이상 내지 90%(v/v)미만, 30%이상 내지 90%(v/v)미만, 40%이상 내지 90%(v/v)미만, 50%이상 내지 90%(v/v)미만, 60%이상 내지 90%(v/v)미만 또는 70%이상 내지 90%(v/v)미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액, 예를 들어, 70%이상 내지 80%(v/v)미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the case of using a mixture of water and alcohol as a solvent used in the production of crude extract of Citronella, 10% or more to less than 100% (v/v), 20% or more to less than 100% (v/v), 30 % or more to less than 100% (v/v), 40% or more to less than 100% (v/v), 50% or more to less than 100% (v/v), 60% or more to less than 100% (v/v) , 70% or more to less than 100% (v/v), 10% or more to less than 90% (v/v), 20% or more to less than 90% (v/v), 30% or more to 90% (v/v) ) less than 40% to less than 90% (v/v), more than 50% to less than 90% (v/v), more than 60% to less than 90% (v/v) or more than 70% to 90% (v/v) /v) An aqueous solution of a straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example, an aqueous solution of 70% to 80% (v/v) of a straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms can be used. It is not limited to this.

또한, 상기 알코올 수용액은 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 프로판올 수용액, 및 부탄올 수용액으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 예를 들어, 에탄올 수용액인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Additionally, the alcohol aqueous solution may be one or more selected from the group consisting of an aqueous methanol solution, an aqueous ethanol solution, an aqueous propanol solution, and an aqueous butanol solution. For example, it may be an aqueous ethanol solution, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 시트로넬라 추출물은 용매 조추출물을 추가의 용매로 분획한 용매 분획물일 수 있으며, 예를 들면 상기 용매 조추출물에 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물인 것일 수 있다.The Citronella extract according to the present invention may be a solvent fraction obtained by fractionating a crude solvent extract with an additional solvent, for example, adding one or more solvents selected from the group consisting of ethyl ether, ethyl acetate, and butanol to the crude solvent extract. It may be a solvent fraction using .

예를 들면, 상기 시트로넬라를 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 용매 조추출물을 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물인 것일 수 있다.For example, the crude solvent extract obtained by extracting the Citronella with one or more solvents selected from the group consisting of water and straight-chain or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms is mixed with one selected from the group consisting of ethyl ether, ethyl acetate, and butanol. It may be a solvent fraction using more than one type of solvent.

본 발명의 일 양태는 시트로넬라 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다.One aspect of the present invention relates to a method for producing citronella extract.

상기 시트로넬라 추출물은 시트로넬라의 용매 조추출물, 용매 분획물을 포함하며 상술한 바와 같다.The Citronella extract includes the solvent crude extract and solvent fraction of Citronella and is as described above.

상기 시트로넬라 추출물은 시트로넬라의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을, 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있다.The Citronella extract is obtained by extracting one or more species selected from the group consisting of leaves, stems and roots of Citronella with one or more solvents selected from the group consisting of water and straight-chain or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms. It may be a crude extract.

상기 용매는 10%이상 내지 100%(v/v)미만, 20%이상 내지 100%(v/v) 미만, 30%이상 내지 100%(v/v)미만, 40%이상 내지 100%(v/v)미만, 50%이상 내지 100%(v/v)미만, 60%이상 내지 100%(v/v)미만, 70%이상 내지 100%(v/v)미만, 10%이상 내지 90%(v/v)미만, 20%이상 내지 90%(v/v)미만, 30%이상 내지 90%(v/v)미만, 40%이상 내지 90%(v/v)미만, 50%이상 내지 90%(v/v)미만, 60%이상 내지 90%(v/v)미만 또는 70%이상 내지 90%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액, 예를 들어, 70%이상 내지 80%(v/v)미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다.The solvent is 10% or more and less than 100% (v/v), 20% or more and less than 100% (v/v), 30% or more and less than 100% (v/v), and 40% or more and 100% (v). /v), 50% or more to less than 100% (v/v), 60% or more to less than 100% (v/v), 70% or more to less than 100% (v/v), 10% or more to 90% Less than (v/v), 20% or more to less than 90% (v/v), 30% or more to less than 90% (v/v), 40% or more to less than 90% (v/v), 50% or more Less than 90% (v/v), more than 60% to less than 90% (v/v), or more than 70% to 90% (v/v) of an aqueous solution of straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example, It may be 70% or more to less than 80% (v/v) of an aqueous solution of straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms.

본 발명에 따른 시트로넬라 추출물의 제조 과정을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다: 시트로넬라를 절단하고 물로 세척하여 협착물을 제거한 후, 필요에 따라 건조시킨다. 상기 시트로넬라의 중량에 대하여 약 2 내지 20배 중량의 추출용매로 1 내지 40시간 동안 열수추출, 냉침추출, 온침추출, 환류냉각추출, 초음파추출 등의 방법으로 추출한다. 또한, 상술한 추출방법 뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 추출물에 포함될 수 있다. 추출 후 여과하여 여과액을 모은다. 추출 온도는 특별한 제한은 없지만 10 내지 150℃, 바람직하게는 20 내지 90℃인 것이 좋다.The manufacturing process of the citronella extract according to the present invention is described in more detail as follows: Citronella is cut, washed with water to remove constrictions, and then dried as necessary. The citronella is extracted using methods such as hot water extraction, cold needle extraction, warm needle extraction, reflux cooling extraction, and ultrasonic extraction for 1 to 40 hours with an extraction solvent of about 2 to 20 times the weight of the citronella. In addition, in addition to the extraction method described above, it also includes extracts that have undergone a conventional purification process. For example, active fractions obtained through various additional purification methods, such as separation using an ultrafiltration membrane with a certain molecular weight cut-off value and separation using various chromatographies, may also be included in the extract. After extraction, filter and collect the filtrate. The extraction temperature is not particularly limited, but is preferably 10 to 150°C, preferably 20 to 90°C.

추출공정은 1회 또는 수회 반복할 수 있으며, 본 발명의 한 바람직한 예에서는 1차 추출 후 다시 재추출하는 방법을 채택할 수 있는데, 이는 천연추출물을 대량 생산하는 경우 효과적으로 여과를 한다 하더라도 천연물 자체의 수분 함량이 높기 때문에 손실이 발생하게 되어 1차 추출만으로는 추출효율이 떨어지므로 이를 방지하기 위함이다.The extraction process can be repeated once or several times, and in a preferred example of the present invention, a method of re-extraction after the first extraction can be adopted, which means that even if the natural extract is mass-produced and filtered effectively, the natural product itself is damaged. This is to prevent loss as the moisture content is high, which reduces extraction efficiency through primary extraction alone.

본 발명의 일 예에서, 추출공정을 2회 반복하는 경우, 상기 얻어진 잔사에 다시 추출용매, 약 5 내지 15 부피배, 바람직하게는 8 내지 12 부피배로 환류 추출한다. 추출 후 여과하고 이전에 얻어진 여과액과 합쳐서 감압농축을 하여 시트로넬라 추출물을 제조한다. 이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물이 추출 회수에 한정되는 것은 아니다.In one example of the present invention, when the extraction process is repeated twice, the obtained residue is refluxed and extracted again with about 5 to 15 times the volume of the extraction solvent, preferably 8 to 12 times the volume. After extraction, it is filtered, combined with the previously obtained filtrate, and concentrated under reduced pressure to prepare a citronella extract. In this way, extraction efficiency can be increased by performing two extractions and mixing the filtrate obtained after each extraction, but the extract of the present invention is not limited to extraction recovery.

상기 시트로넬라 추출물 제조 시에 사용되는 용매의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음의 정제단계에서 사용되는 용매의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있으므로, 용매의 사용량은 상기 범위로 하는 것이 좋다.If the amount of solvent used in preparing the Citronella extract is too small, stirring becomes difficult and the solubility of the extract decreases, resulting in lower extraction efficiency. If it is too large, the amount of solvent used in the next purification step increases, making it economical. Failure to do so may cause handling problems, so it is recommended that the amount of solvent used be within the above range.

이와 같이 얻어진 여과된 추출물은 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30 중량배, 바람직하게는 15 내지 25 중량배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조하여 분말상태의 시트로넬라 추출물로서 제조될 수 있다.The filtered extract thus obtained is about 10 to 30 times by weight, preferably 15 to 25 times by weight, and more preferably about 20 times by weight of the total amount of the concentrate in order to adjust the content of remaining lower alcohol to be suitable for use. It can be prepared as a powdered citronella extract by azeotropically concentrating with water 1 to 5 times, preferably 2 to 3 times, suspending it homogeneously by adding the same amount of water again, and then freeze-drying.

본 발명에 있어서 “추출”은 액체 또는 고체 원료 중에 포함되어 있는 유용한 가용성 성분을 용매에 녹여 분리하는 방법으로, 통상적으로 사용되는 모든 방법일 수 있으며, 예를 들어, 열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법, 용매 추출법, 수증기 증류법, 초음파 추출법, 용출법, 압착법일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, “extraction” is a method of separating useful soluble components contained in liquid or solid raw materials by dissolving them in a solvent, and may be any commonly used method, for example, hot water extraction, cold immersion extraction, and reflux cooling. It may be an extraction method, solvent extraction method, steam distillation method, ultrasonic extraction method, elution method, or compression method, but is not limited thereto.

본 발명에 있어서 상기 조성물은 시트로넬라 추출물을 0.01 내지 2.00 중량% 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 0.02 내지 2.00 중량%, 0.05 내지 2.00 중량%, 0.10 내지 2.00 중량%, 0.20 내지 2.00 중량%, 0.01 내지 1.00 중량%, 0.02 내지 1.00 중량%, 0.05 내지 1.00 중량%, 0.10 내지 1.00 중량%, 0.20 내지 1.00 중량%, 0.01 내지 0.50 중량%, 0.02 내지 0.50 중량%, 0.05 내지 0.50 중량%, 0.10 내지 0.50 중량%, 0.20 내지 0.50 중량%, 0.01 내지 0.20 중량%, 0.02 내지 0.20 중량%, 또는 0.05 내지 0.20 중량% 포함하는 것일 수 있고, 예를 들어, 0.10 내지 0.20 중량% 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the composition may contain 0.01 to 2.00% by weight of citronella extract, preferably 0.02 to 2.00% by weight, 0.05 to 2.00% by weight, 0.10 to 2.00% by weight, 0.20 to 2.00% by weight, 0.01 to 1.00% by weight, 0.02 to 1.00% by weight, 0.05 to 1.00% by weight, 0.10 to 1.00% by weight, 0.20 to 1.00% by weight, 0.01 to 0.50% by weight, 0.02 to 0.50% by weight, 0.05 to 0.50% by weight, 0.10 to 0.10% by weight It may contain 0.50 wt%, 0.20 to 0.50 wt%, 0.01 to 0.20 wt%, 0.02 to 0.20 wt%, or 0.05 to 0.20 wt%, for example, it may contain 0.10 to 0.20 wt%. It is not limited.

본 발명에 있어서 상기 식물 병해는 탄저병, 잿빛곰팡이병 및 세균점무늬병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.In the present invention, the plant disease may be one or more species selected from the group consisting of anthracnose, gray mold, and bacterial spot.

본 발명에 있어서 상기 식물 병해는 콜레토트리쿰 속, 보트리티스 속, 및 산토모나스 속으로 이루어진 군으로부터 선택되는 원인균에 의해 발병하는 것일 수 있다.In the present invention, the plant disease may be caused by a causative bacterium selected from the group consisting of Colletotrichum genus, Botrytis genus, and Santomonas genus.

본 발명에 있어서 상기 식물 병해는 고추를 대상으로 발병하는 것일 수 있고, 상기 고추는 고추 잎 또는 고추 열매인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 방제용 조성물은 토양 또는 생장 중인 고추의 열매, 잎 등에 처리함으로써 고추를 대상으로 발명하는 식물 병해를 방제할 수 있다.In the present invention, the plant disease may occur in peppers, and the peppers may be pepper leaves or pepper fruits, but are not limited thereto. The control composition of the present invention can control plant diseases targeting peppers by treating the soil or the fruits and leaves of growing peppers.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 시트로넬라 추출물은 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 또는 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스에 대해 우수한 균사 생육 억제 및 포자 발아 억제 활성을 나타내므로 이를 효과적으로 고추 탄저병의 방제에 사용할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the Citronella extract exhibits excellent mycelial growth inhibition and spore germination inhibition activities against Coletotrichum acutatum or Coletotrichum gloeosporioides, which are the causative agents of pepper anthracnose. It can be effectively used to control pepper anthracnose.

본 발명의 고추 탄저병 방제제는 시트로넬라 추출물 자체일 수 있고, 또한 공지의 부형제, 보조제, 고체 희석제, 또는 기타 적당한 보조제, 예를 들면 유화제, 분산제 또는 기포제 등의 계면활성제 등을 추가로 포함할 수 있다.The pepper anthracnose control agent of the present invention may be the Citronella extract itself, and may further include known excipients, adjuvants, solid diluents, or other suitable adjuvants, such as surfactants such as emulsifiers, dispersants, or foaming agents. You can.

본 발명의 고추 탄저병 방제제는 농약분야에 공지된 다양한 제형으로 제제화시켜 사용할 수 있으며, 제제화를 위해서는 농약분야에서 통상적으로 사용되는 제제화 방법을 어느 것이나 사용할 수 있다. 가령, 수화제, 입제, 분제, 유제, 스프 레이상, 연막제, 캅셀형 또는 젤상의 제형으로 제제화될 수 있다.The pepper anthracnose control agent of the present invention can be formulated and used in various formulations known in the pesticide field, and for formulation, any formulation method commonly used in the pesticide field can be used. For example, it can be formulated in the form of a wettable powder, granule, powder, emulsion, spray, aerosol, capsule, or gel.

또한, 본 발명의 고추 탄저병 방제제는 시트로넬라 추출물을 물, 에탄올, 또는 이들의 혼합물에 희석하여 사용할 수 있다. 고추의 품종, 생육 정도, 경작지 환경, 발병 정도 등을 고려하여 시트로넬라 추출물의 농도는 적절하게 조절할 수 있고, 예를 들어, 0.00001 내지 90.00000 중량%의 농도로 희석하여 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Additionally, the pepper anthracnose control agent of the present invention can be used by diluting Citronella extract with water, ethanol, or a mixture thereof. The concentration of the citronella extract can be appropriately adjusted considering the variety, growth level, cultivation environment, disease severity, etc. of the pepper. For example, it can be diluted to a concentration of 0.00001 to 90.00000% by weight, but is limited thereto. That is not the case.

본 발명의 다른 양태는 시트로넬라 추출물을 포함하는 항균용 조성물이다.Another aspect of the present invention is an antibacterial composition containing citronella extract.

본 발명에 있어서 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나의 추출용매에 의하여 추출된 것일 수 있다.In the present invention, the extract may be extracted using at least one extraction solvent selected from water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, polyhydric alcohols, or mixtures thereof.

상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 또는 부탄올을 이용할 수 있고, 다가 알코올로는 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 글리세롤 등을 이용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be methanol, ethanol, propanol, or butanol, and the polyhydric alcohol may include butylene glycol, propylene glycol, pentylene glycol, glycerol, etc., but is not limited thereto. .

본 발명에 있어서 상기 조성물은 시트로넬라 추출물을 0.01 내지 2.00 중량% 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 0.02 내지 2.00 중량%, 0.05 내지 2.00 중량%, 0.10 내지 2.00 중량%, 0.20 내지 2.00 중량%, 0.01 내지 1.00 중량%, 0.02 내지 1.00 중량%, 0.05 내지 1.00 중량%, 0.10 내지 1.00 중량%, 0.20 내지 1.00 중량%, 0.01 내지 0.50 중량%, 0.02 내지 0.50 중량%, 0.05 내지 0.50 중량%, 0.10 내지 0.50 중량%, 0.20 내지 0.50 중량%, 0.01 내지 0.20 중량%, 0.02 내지 0.20 중량%, 또는 0.05 내지 0.20 중량% 포함하는 것일 수 있고, 예를 들어, 0.10 내지 0.20 중량% 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the composition may contain 0.01 to 2.00% by weight of citronella extract, preferably 0.02 to 2.00% by weight, 0.05 to 2.00% by weight, 0.10 to 2.00% by weight, 0.20 to 2.00% by weight, 0.01 to 1.00% by weight, 0.02 to 1.00% by weight, 0.05 to 1.00% by weight, 0.10 to 1.00% by weight, 0.20 to 1.00% by weight, 0.01 to 0.50% by weight, 0.02 to 0.50% by weight, 0.05 to 0.50% by weight, 0.10 to 0.10% by weight It may contain 0.50 wt%, 0.20 to 0.50 wt%, 0.01 to 0.20 wt%, 0.02 to 0.20 wt%, or 0.05 to 0.20 wt%, for example, it may contain 0.10 to 0.20 wt%. It is not limited.

본 발명에 있어서 상기 조성물은 콜레토트리쿰 속, 보트리티스 속, 및 산토모나스 속으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대하여 항균 활성을 발휘하는 것일 수 있다.In the present invention, the composition may exhibit antibacterial activity against one or more species selected from the group consisting of the genus Colletotrichum, Botrytis, and Santomonas.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 시트로넬라 추출물은 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 또는 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스에 대해 우수한 균사 생육 억제 및 포자 발아 억제 활성을 나타냈다.In one embodiment of the present invention, the Citronella extract showed excellent mycelial growth inhibition and spore germination inhibition activities against Coletotrichum acutatum or Coletotrichum gloeosporioides, which are the causative agents of pepper anthracnose.

본 발명은 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 식물 병해 방제 및 항균용 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 천연의 재료로부터 추출한 시트로넬라 추출물을 유효성분으로 이용하여 고추(red-pepper)에서 발병하는 식물병인 고추 탄저병(anthracnose), 고추 잿빛곰팡이병(Gray mold), 또는 고추 세균점무늬병(Bacterial spot)에 대한 방제 활성 및 이들 식물병의 원인균에 대한 항균 활성을 확인하였으므로, 이를 이용함으로써 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서도 고추 탄저병 병해를 크게 감소시킬 수 있다.The present invention relates to a composition for plant disease control and antibacterial use containing an extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella). The composition uses citronella extract extracted from natural ingredients as an active ingredient and uses red-pepper extract as an active ingredient. ), the control activity against pepper anthracnose, pepper gray mold, or pepper bacterial spot, which are plant diseases that occur in It is harmless to the human body and can significantly reduce pepper anthracnose disease without causing environmental pollution.

도 1a는 본 발명의 일 실시예에 따라 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물 살포 후 고추 탄저병(anthracnose) 원인균이 접종된 고추 잎으로부터 측정된 질병 중증도(Disease severity; DS) 차이를 나타낸 그래프이다.
도 1b는 본 발명의 일 실시예에 따라 시트로넬라 추출물 살포 후 고추 탄저병 원인균이 접종된 고추 잎으로부터 측정된 방제가(control value)를 나타낸 그래프이다.
Figure 1a is a graph showing the difference in disease severity (DS) measured from pepper leaves inoculated with the causative bacteria of pepper anthracnose after spraying Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella) extract according to an embodiment of the present invention. .
Figure 1b is a graph showing the control value measured from pepper leaves inoculated with the causative bacteria of pepper anthracnose after spraying Citronella extract according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through the following examples. However, these examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these examples.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량)%, 고체/액체는 (중량/부피)%, 그리고 액체/액체는 (부피/부피)%이다.Throughout this specification, “%” used to indicate the concentration of a specific substance means (weight/volume)% for solid/solid, (weight/volume)% for solid/liquid, and Liquid/liquid is (volume/volume)%.

제조예 1: 시트로넬라 추출물의 제조Preparation Example 1: Preparation of Citronella extract

암 상태에서 7일 건조한 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 전초(전체 부위)에 10배수 중량의 70% 에탄올 수용액을 가한 후 80℃에서 3시간 동안 가열하여 액상의 시트로넬라 추출물을 추출하였다.A 10-fold weight of 70% ethanol aqueous solution was added to Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella) whole plant (whole part) dried for 7 days in the dark, and then heated at 80°C for 3 hours to extract liquid Citronella extract.

실시예 1: 시트로넬라 추출물에 의한 균사 생장 억제 효과의 확인Example 1: Confirmation of mycelial growth inhibition effect by Citronella extract

시트로넬라 추출물의 식물병 원인균(병원균)의 농도별 균사 생장(Mycelial growth) 억제율을 조사하기 위해서 0.45 ㎛ 필터를 이용하여 여과한 후 사용하였다. 시트로넬라 추출물은 멸균수로 10배 희석한 후 0.1 내지 1.0%(w/w) 농도로 각각 준비하여 감자 한천 배지(PDA; potato dextrose agar, broth 24 g, agar 15 g, 증류수 1,000 ml, PDA Difco Inc., Detroit, USA)와 혼합하여 페트리디쉬에 부어 굳혔다.To investigate the mycelial growth inhibition rate of citronella extract by concentration of plant disease-causing bacteria (pathogens), the extract was filtered using a 0.45 ㎛ filter before use. Citronella extract was diluted 10-fold with sterilized water and then prepared at a concentration of 0.1 to 1.0% (w/w), respectively, on potato agar medium (PDA; potato dextrose agar, broth 24 g, agar 15 g, distilled water 1,000 ml, PDA). Difco Inc., Detroit, USA) and poured into a Petri dish to solidify.

고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum, KACC 40689) 균주 및 고추 잿빛곰팡이병의 원인균인 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea) 균주를 PDA 배지에 접종하여 25℃에서 7일간 배양한 후 5 mm의 절편을 각 농도의 시트로넬라 추출물이 혼합된 PDA 배지 위에 치상하여 5일 후 균사 생육 길이를 측정하였다. Colletotrichum acutatum (KACC 40689), the causative agent of pepper anthracnose, and Botrytis cinerea, the causative agent of pepper gray mold, were inoculated into PDA medium and cultured at 25°C for 7 days. Then, 5 mm slices were placed on PDA medium mixed with each concentration of Citronella extract, and the mycelial growth length was measured after 5 days.

균사 생장 억제율(%)은 시트로넬라 추출물이 함유되지 않은 0% PDA 배지에서의 병원균 균사 생육 길이에 대비하여 시트로넬라 추출물이 함유된 PDA 배지에서의 균사 생육 길이를 측정하여 아래의 식으로 산출하여 표 1에 나타내었다:The mycelial growth inhibition rate (%) is calculated by measuring the mycelial growth length in PDA medium containing Citronella extract compared to the growth length of pathogen mycelia in 0% PDA medium without Citronella extract, and calculated using the formula below. This is shown in Table 1:

균사 생장 억제율(%) = (대조구 배지의 균사 생육 길이(mm)-처리구 균사 생육 길이(mm)/대조구 배지 균사 생육 길이 x 100).Mycelial growth inhibition rate (%) = (Mycelial growth length of control medium (mm) - Mycelial growth length of treatment medium (mm) / Mycelial growth length of control medium x 100).

원인균별 균사체 성장 억제를 위한 시트로넬라 추출물의 유효 투여량 값.Effective dosage values of citronella extract for inhibiting mycelium growth by causative bacteria. 원인균causative bacteria EC50 ppm(95% 신뢰구간)EC 50 ppm (95% confidence interval) EC90 ppm(95% 신뢰구간)EC 90 ppm (95% confidence interval) 회귀식, R2 Regression equation, R 2 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum) Colletotrichum acutatum 188 (167 - 213)
1,100배
188 (167 - 213)
1,100 times
619 (514 - 778)
350배
619 (514 - 778)
350 times
Y=0.4479x-0.5461 R2=0.9103Y=0.4479x-0.5461 R2=0.9103
보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea) Botrytis cinerea 147(138 - 159),
1,300배
147(138 - 159);
1,300 times
221(201 - 252),
900배
221(201 - 252),
900 times
Y=0.4655X-0.555,
R2=0.7867
Y=0.4655X-0.555,
R 2 =0.7867

표 1에서 확인할 수 있듯이, 균사 생장 억제 효과를 발휘하는 시트로넬라 추출물의 유효 투여량으로서, 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼에 대한 EC50 값은 188 ppm, EC90 값은 619 ppm이었다. 고추 잿빛곰팡이병의 원인균인 보트리티스 시네리아에 대한 EC50 값은 147 ppm, EC90 값은 221 ppm 수준이었다.As can be seen in Table 1, as an effective dosage of Citronella extract that exerts a mycelial growth inhibition effect, the EC 50 value for Coletotrichum acutatum, the causative agent of pepper anthracnose, is 188 ppm and the EC 90 value is 619 ppm. It was. The EC 50 value for Botrytis cineria, the causative agent of pepper gray mold disease, was 147 ppm and the EC 90 value was 221 ppm.

실시예 2: 시트로넬라 추출물에 의한 생육 억제 효과의 확인Example 2: Confirmation of growth inhibition effect by citronella extract

시트로넬라 추출물에 의한 고추 세균점무늬병의 원인균인 산토모나스 유베스카토리아(Xanthomonas euvescatoria) 균주 생육 억제율을 측정하였다.The growth inhibition rate of Xanthomonas euvescatoria strain, the causative agent of pepper bacterial spot disease, by citronella extract was measured.

구체적으로, 산토모나스 유베스카토리아를 보통한천배지(nutrient agar) 플레이트(plate)에서 48시간 동안 상온 조건에서 생육시킨 후, 멸균수로 회수하여 1.0 X 106 cfu/ml의 균수가 되도록 현탁하였다. 다양한 농도의 시트로넬라 추출물을 2배 비율로 희석한 후 1:1의 비율로 영양 배지(nutrient broth)와 혼합한 다음 96웰 마이크로플레이트(well microplate)에 분주하고, 산토모나스 유베스카토리아 현탁액을 접종하였다.Specifically, Santomonas eubescatoria was grown on a nutrient agar plate at room temperature for 48 hours, then recovered in sterilized water and suspended to a bacterial count of 1.0 Citronella extracts of various concentrations were diluted two-fold, mixed with nutrient broth at a 1:1 ratio, dispensed into a 96-well microplate, and the Santo Monas eubescatoria suspension was added to the nutrient broth. Inoculated.

균주를 접종한 마이크로플레이트를 상온에서 24시간 동안 쉐이커(shaker)에서 배양한 다음 분광광도계에서 OD 값을 600 nm로 하여 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복 진행하였다. 시트로넬라의 고추 세균점무늬병 원인균에 대한 생육 억제율은 아래의 식으로 산출하였다:The microplate inoculated with the strain was cultured in a shaker at room temperature for 24 hours, and then the OD value was measured at 600 nm in a spectrophotometer. All experiments were repeated three times. The growth inhibition rate of Citronella against the causative agent of pepper bacterial spot disease was calculated using the formula below:

생육 억제율(%) = ((대조구 OD - 처리구 OD)/대조구 OD) X 100.Growth inhibition rate (%) = ((control OD - treatment OD)/control OD)

시트로넬라 추출물 농도별 산토모나스 유베스카토리아의 생육 억제율은 probit 방법을 활용하여 EC50과 EC90 값을 산출하여 표 2에 나타내었다.The growth inhibition rate of Santomonas eubescatoria by concentration of Citronella extract was calculated using the probit method to calculate EC 50 and EC 90 values and are shown in Table 2.

원인균의 생육 억제에 대한 시트로넬라 추출물의 유효 투여량 값.Effective dosage value of citronella extract for inhibiting growth of causative bacteria. 원인균causative bacteria EC50 ppm
(95% 신뢰구간)
EC 50 ppm
(95% confidence interval)
EC90 ppm
(95% 신뢰구간)
EC 90ppm
(95% confidence interval)
회귀식, R2 Regression equation, R 2
산토모나스 유베스카토리아(Xanthomonas euvescatoria) Xanthomonas euvescatoria 70 (63 - 76),
2,800배
70 (63 - 76),
2,800 times
180 (158 - 218),
1,100배
180 (158 - 218),
1,100 times
Y=1.0414x-1.4213,
R2=0.988
Y=1.0414x-1.4213,
R 2 =0.988

표 2에서 확인할 수 있듯이, 산토모나스 유베스카토리아에 대하여 생육 억제 효과를 발휘하는 시트로넬라 추출물의 유효 투여량으로서, EC50 값은 70 ppm, EC90 값은 180 ppm이었다.As can be seen in Table 2, the effective dosage of Citronella extract that exerts a growth inhibitory effect on Santomonas eubescatoria had an EC 50 value of 70 ppm and an EC 90 value of 180 ppm.

실시예 3: 시트로넬라 추출물에 의한 포자 발아 억제 효과의 확인Example 3: Confirmation of spore germination inhibition effect by Citronella extract

시트로넬라 추출물에 의한 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 균주 및 고추 잿빛곰팡이병의 원인균인 보트리티스 시네리아 균주의 포자 발아 억제 효과를 측정하였다.The effect of citronella extract on inhibiting spore germination of Coletotrichum acutatum strain, the causative agent of pepper anthracnose, and Botrytis cineria strain, the causative agent of pepper gray mold disease, was measured.

구체적으로, 상기 2종 균주의 포자 형성을 위해 PDA 배지에서 배양한 후 배지 표면의 균사를 제거하고 형광등 조명하의 25℃ 온도 조건에서 72시간 후 형성된 분생포자를 멸균수로 씻어내어 포자를 얻었다.Specifically, for the formation of spores of the above two strains, the hyphae on the surface of the medium were removed after being cultured on PDA medium, and the conidia formed after 72 hours at a temperature of 25°C under fluorescent lighting were washed with sterilized water to obtain spores.

시트로넬라 추출물은 다양한 농도 조건을 설정하기 위하여 멸균수로 희석한 후 준비하였다. 회수된 균주는 1/3 감자 한천 배지(PDB)와 혼합하여 200 ㎕의 포자 현탁액(1 X 105 spores/ml)을 수득하였다. 그리고 포자 현탁액을 시트로넬라 추출물과 혼합한 후 25℃에서 20시간 동안 배양하면서 포자 발아율을 조사하였다. 대조구로는 멸균수를 사용하였다.Citronella extract was prepared after dilution with sterilized water to set various concentration conditions. The recovered strain was mixed with 1/3 potato agar medium (PDB) to obtain 200 ㎕ of spore suspension (1 Then, the spore suspension was mixed with Citronella extract and cultured at 25°C for 20 hours to examine the spore germination rate. Sterile water was used as a control.

광학현미경하에서 발아관의 길이가 포자 장경의 1/2 이상인 것을 발아한 것으로 계산하여 회차별 200개 이상의 포자에 대한 발아유무를 관찰하였으며 3회 반복으로 조사하였다. 시트로넬라 추출물의 농도별 포자 발아율(Spore germination)은 probit 방법을 활용하여 EC50과 EC90 값을 산출함으로써 표 3에 나타내었다.Under an optical microscope, germination was calculated when the length of the germ tube was more than 1/2 of the long diameter of the spore. Germination was observed for more than 200 spores per round, and the examination was repeated three times. Spore germination rate by concentration of Citronella extract is shown in Table 3 by calculating EC 50 and EC 90 values using the probit method.

원인균 균주별 포자 발아율에 대한 시트로넬라 추출물의 유효 투여량 값.Effective dosage value of Citronella extract on spore germination rate by causative bacterial strain. 원인균causative bacteria EC50 ppm
(95% 신뢰구간)
EC 50ppm
(95% confidence interval)
EC90 ppm
(95% 신뢰구간)
EC 90ppm
(95% confidence interval)
회귀식, R2 Regression equation, R 2
콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum) Colletotrichum acutatum 75(73 - 76),
2,700배
75(73 - 76);
2,700 times
89 (85 - 93),
2,100배
89 (85 - 93),
2,100 times
Y=3.1871x-5.4761,
R2=0.8481
Y=3.1871x-5.4761,
R 2 =0.8481
보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea) Botrytis cinerea 75(72 - 77),
2,700배
75(72 - 77);
2,700 times
93 (90 - 97),
2,100배
93 (90 - 97),
2,100 times
Y=2.019x-3.2418,
R2=0.7792
Y=2.019x-3.2418,
R 2 =0.7792

표 3에서 확인할 수 있듯이, 포자 발아 억제 효과를 발휘하는 시트로넬라 추출물의 유효 투여량으로서, 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼에 대한 EC50 값은 75 ppm, EC90 값은 89 ppm이었다. 고추 잿빛곰팡이병의 원인균인 보트리티스 시네리아에 대한 EC50 값은 75 ppm, EC90 값은 93 ppm이었다.As can be seen in Table 3, the effective dosage of Citronella extract that exerts the effect of inhibiting spore germination is that the EC 50 value for Coletotrichum acutatum, the causative agent of pepper anthracnose, is 75 ppm and the EC 90 value is 89 ppm. It was. The EC 50 value for Botrytis cineria, the causative agent of pepper gray mold disease, was 75 ppm and the EC 90 value was 93 ppm.

실시예 4: 시트로넬라 추출물에 의한 고추 탄저병 원인균 방제 효과의 확인Example 4: Confirmation of the effect of controlling the causative bacteria of pepper anthracnose by citronella extract

고추 탄저병의 방제효과를 검증하기 위한 시트로넬라 추출물은 상기 제조예 1에서 준비한 시트로넬라 추출물을 500배와 1,000배로 각각 희석하여 살포구에 사용하였다. 대조 약제로는 탄저병 방제제로 등록되어 있는 안트라콜(Bayer)을 1,000배로 희석하여 양성 대조구, 멸균수를 음성 대조구로 이용하였다. 모든 실험은 3회씩 2번 반복하였다(n= 6).Citronella extract to verify the control effect of pepper anthracnose was diluted 500-fold and 1,000-fold, respectively, and used in the sprayer. As a control agent, Anthracol (Bayer), registered as an anthrax control agent, was diluted 1,000 times and used as a positive control, and sterilized water was used as a negative control. All experiments were repeated twice in triplicate (n=6).

유묘 검정을 위해 고추 청양품종을 포트에 파종하여 6-8 엽기가 될 때까지 온도 25℃ 습도 60%의 온실에서 생육시켰다. 6-8 엽기 유묘에 시트로넬라 추출물을 잎에 흘러내릴 정도로 충분히 살포하고 24시간 후에 고추 탄저병의 원인균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼의 포자를 5 X 106 conidia/ml의 농도로 조절하여 고추 잎의 뒷면에 살포하였다. 병원균이 살포된 고추 유묘는 28℃의 습실 생장상에서 24시간 동안 생장시켰다. 7일 후에 10번째 잎을 기준으로 병 발생정도를 육안으로 확인하여 질병 중증도(Disease severity; DS)를 측정하였다.For seedling testing, the Cheongyang variety of pepper was sown in pots and grown in a greenhouse at a temperature of 25°C and humidity of 60% until the 6th to 8th leaf stage. Spray 6-8 leaf seedlings with enough citronella extract to drip onto the leaves, and 24 hours later, spores of Colletotrichum acutatum, the causative agent of pepper anthracnose, are adjusted to a concentration of 5 Sprayed on the back side. Pepper seedlings sprayed with pathogens were grown in a humid room growth bed at 28°C for 24 hours. After 7 days, the degree of disease occurrence was visually confirmed based on the 10th leaf, and disease severity (DS) was measured.

질병 중증도 지수는 다음을 기준으로 조사하였다:Disease severity index was investigated based on:

0: 증상 없음; 1: 병반 면적 5% 미만; 2: 병반 면적율 5% 이상 15% 미만; 3: 15% 이상 25% 미만; 4: 25% 이상 50% 미만; 5: 50% 이상.0: no symptoms; 1: lesion area less than 5%; 2: Lesion area ratio 5% to 15%; 3: 15% or more but less than 25%; 4: 25% or more but less than 50%; 5: More than 50%.

방제가(control value)는 아래의 계산식에 의해 계산하였다:The control value was calculated using the formula below:

방제가(%)= (대조구 발병 심각도 - 처리구 발병 심각도)/대조구 발병 심각도 X 100.Control value (%) = (control group outbreak severity - treatment group outbreak severity) / control outbreak severity X 100.

데이터는 SPSS23 for windows(IBM Corporation, Somers, New York, USA)로 계산하였으며, 처리구별 질병 중증도는 비모수 ANOVA(Kruska-Wallis test)를 진행하여 분석하였으며, Dunn's 사후분석으로 P= 0.05 수준에서 유의성 검정을 수행하였다. 각 처리 방제가 평균간의 차이에 의한 유의성 검정 통계분석은 SPSS 23.0 software(IBM Corporation, Somers, New York, USA)를 사용하여 일원배치분산분석(ANOVA)을 수행하였다. F 값이 유의한 경우에만 Duncan의 다중검정방법(Duncan's multiple range test)과 유의수준 0.05에서 통계적 유의성을 검정하였다.Data were calculated using SPSS23 for windows (IBM Corporation, Somers, New York, USA), and disease severity by treatment group was analyzed using non-parametric ANOVA (Kruska-Wallis test), and significance was tested at the P= 0.05 level using Dunn's post hoc analysis. was carried out. The statistical analysis of the significance test based on the difference between the means of each treatment control was performed using one-way analysis of variance (ANOVA) using SPSS 23.0 software (IBM Corporation, Somers, New York, USA). Only when the F value was significant, statistical significance was tested using Duncan's multiple range test and a significance level of 0.05.

음성 대조구
(멸균수)
voice control
(sterilized water)
양성 대조구
(안트라콜)
positive control
(Anthracol)
살포구
(500배 희석액)
Spray hole
(500 times diluted solution)
살포구
(1,000배 희석액)
Spray hole
(1,000-fold dilution)
질병 중증도disease severity 1.30± 1.14(SD)1.30± 1.14(SD) 1.10±1.35(SD)1.10±1.35(SD) 0.03±0.18(SD)0.03±0.18(SD) 0.43±0.62(SD)0.43±0.62(SD) 방제가(%)Control price (%) -- 28.228.2 97.497.4 66.666.6

표 4, 도 1a 및 1b에서 확인할 수 있듯이, 시트로넬라 추출물을 고추 탄저병균 접종 1일 전에 살포한 결과로서, 고추 잎 탄저병에 대한 방제가가 500배 희석액 살포구에서 약 90%, 1,000배 희석액 살포구에서 약 60% 정도로 나타났다.As can be seen in Table 4 and Figures 1a and 1b, as a result of spraying Citronella extract 1 day before inoculation with pepper anthracnose, the control value for pepper leaf anthracnose was about 90% in the 500-fold dilution spray port and 1,000-fold dilution. It was found to be about 60% in the spray area.

Claims (11)

시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 식물 병해 방제용 조성물.A composition for controlling plant diseases comprising an extract of Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella). 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나의 추출용매에 의하여 추출된 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The composition for controlling plant diseases according to claim 1, wherein the extract is extracted with at least one extraction solvent selected from water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, polyhydric alcohols, or mixtures thereof. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 시트로넬라 추출물을 0.01 내지 1.00 중량% 포함하는 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The composition for controlling plant diseases according to claim 1, wherein the composition contains 0.01 to 1.00% by weight of citronella extract. 제1항에 있어서, 상기 식물 병해는 탄저병(anthracnose), 잿빛곰팡이병(Gray mold) 및 세균점무늬병(Bacterial spot)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The composition for controlling plant diseases according to claim 1, wherein the plant diseases are at least one species selected from the group consisting of anthracnose, gray mold, and bacterial spot. 제1항에 있어서, 상기 식물 병해는 콜레토트리쿰(Collectotrichum) 속, 보트리티스(Botrytis) 속, 및 산토모나스(Xanthomonas) 속으로 이루어진 군으로부터 선택되는 원인균에 의해 발병하는 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The plant disease according to claim 1, wherein the plant disease is caused by a causative bacterium selected from the group consisting of the genus Colletotrichum , Botrytis , and Xanthomonas . Composition for pest control. 제1항에 있어서, 상기 식물 병해는 고추(red-pepper)를 대상으로 발병하는 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The composition for controlling plant diseases according to claim 1, wherein the plant diseases occur in red pepper. 제6항에 있어서, 상기 고추는 고추 잎 또는 고추 열매인 것인, 식물 병해 방제용 조성물.The composition for controlling plant diseases according to claim 6, wherein the pepper is pepper leaves or pepper fruits. 시트로넬라(Cymbopogon nardus; Citronella) 추출물을 포함하는 항균용 조성물.An antibacterial composition containing a Citronella ( Cymbopogon nardus ; Citronella) extract. 제8항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나의 추출용매에 의하여 추출된 것인, 항균용 조성물.The antibacterial composition according to claim 8, wherein the extract is extracted with at least one extraction solvent selected from water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, polyhydric alcohols, or mixtures thereof. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 시트로넬라 추출물을 0.01 내지 1.00 중량% 포함하는 것인, 항균용 조성물.The antibacterial composition according to claim 8, wherein the composition contains 0.01 to 1.00% by weight of citronella extract. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 콜레토트리쿰(Collectotrichum) 속, 보트리티스(Botrytis) 속, 및 산토모나스(Xanthomonas) 속으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대하여 항균 활성을 발휘하는 것인, 항균용 조성물.The method of claim 8, wherein the composition exhibits antibacterial activity against one or more species selected from the group consisting of Colletotrichum genus, Botrytis genus, and Xanthomonas genus. Phosphorus, antibacterial composition.
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