KR20240010589A - 고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents
고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240010589A KR20240010589A KR1020220086649A KR20220086649A KR20240010589A KR 20240010589 A KR20240010589 A KR 20240010589A KR 1020220086649 A KR1020220086649 A KR 1020220086649A KR 20220086649 A KR20220086649 A KR 20220086649A KR 20240010589 A KR20240010589 A KR 20240010589A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- amino acid
- accession number
- calicivirus
- number kctc
- virus
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 64
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 title claims description 41
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 title description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 title description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 91
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 87
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 claims abstract description 48
- 241000714201 Feline calicivirus Species 0.000 claims abstract description 44
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims abstract description 37
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims abstract description 32
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 13
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 113
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 87
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 87
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 77
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 17
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 17
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 16
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 15
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 15
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 claims description 14
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 13
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 13
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 11
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 claims description 11
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 claims description 11
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 10
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 9
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims description 6
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims description 5
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005232 Glossitis Diseases 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 claims description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 claims description 4
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 4
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 4
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014801 endophthalmitis Diseases 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 claims description 3
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 claims description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 10
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 208000006339 Caliciviridae Infections Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000029433 Herpesviridae infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000010717 cat disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 37
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 13
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 10
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 8
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 4
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 3
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 208000002613 Feline Panleukopenia Diseases 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 108091093078 Pyrimidine dimer Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150093578 VP2 gene Proteins 0.000 description 2
- ASJWEHCPLGMOJE-LJMGSBPFSA-N ac1l3rvh Chemical compound N1C(=O)NC(=O)[C@@]2(C)[C@@]3(C)C(=O)NC(=O)N[C@H]3[C@H]21 ASJWEHCPLGMOJE-LJMGSBPFSA-N 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- -1 four Proteins 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 2
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical class CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241001455214 Acinonyx jubatus Species 0.000 description 1
- 241000700587 Alphaherpesvirinae Species 0.000 description 1
- 102100029361 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 206010012741 Diarrhoea haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 102100030011 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 101710199605 Endoribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000725579 Feline coronavirus Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000919395 Homo sapiens Aromatase Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 241000282373 Panthera pardus Species 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282335 Procyon Species 0.000 description 1
- 241001313871 Puma Species 0.000 description 1
- 101710113029 Serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 101150118251 UL23 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150003230 UL27 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150104684 UL44 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701067 Varicellovirus Species 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150002378 gC gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229960004717 insulin aspart Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N novorapid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 108091008020 response regulators Proteins 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 1
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/08—Inactivation or attenuation by serial passage of virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/16011—Caliciviridae
- C12N2770/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 감염에 의한 고양이 질병의 예방 또는 경감용 혼합 백신 조성물, 약학 조성물, 사료 조성물 또는 사료 첨가제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신규 백신 항원은 국내에서 순환하고 있는 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스, 허피스 바이러스를 분리하여 계대한 국내-분리주 기반으로, 이를 활용한 백신은 국내에서 유행하는 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스의 감염을 보다 효과적으로 예방 또는 경감할 수 있다. 또한 불활화 백신으로 제공하여 안전성이 보장되며, CRFK 세포에서 매우 높은 증식력을 나타내어 in vitro 증식을 통한 대량생산이 용이하다.
Description
본 발명은 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 감염에 의한 고양이 질병의 예방 또는 경감용 혼합 백신 조성물, 약학 조성물, 사료 조성물 또는 사료 첨가제에 관한 것이다.
2015년 1월부터 2021년 5월까지 농림축산검역본부에 질병진단이 의뢰된 고양이 시료에서 진단된 병원체는 범백혈구감소증 감염이 가장 많이 진단되었으며, 두번째로 고양이 코로나 감염, 세번째가 칼리시 감염이며, 고양이 인플루엔자와 허피스 감염은 각각 3건 및 1건 진단되었다.
고양이 범백혈구감소증 감염은 고양이 범백혈구감소증 바이러스 (Feline panleukopenia virus: FPV)에 의해 발생한다. 고양이, 개, 너구리, 원숭이, 호랑이 및 야생의 육식동물에서 혈액이 섞인 설사를 일으키고, 감염된 동물의 50% 이상이 폐사되는 것으로 알려져 있다.
고양이 칼리시 감염은 칼리시 바이러스 (Feline calicivirus: FCV)에 의해 발생하는 것으로 주로 타액이나 비말을 통하여 전파되며, 바이러스 입자가 작기 때문에 전파 속도가 빠르다. 1년생 이하 고양이에서는 2가지의 임상형으로 나누는데 첫 번째 임상형은 피부에 미란성 궤양으로 식욕부진, 발열, 황달 등이 나타나며, 두 번째 임상형은 폐렴 이후에 갑작스럽게 폐사를 나타낸다.
고양이 허피스 감염은 허피스바이러스 계통의 바이러스아과 알파-허피스바이러스(Alphaherpesvirinae)에 속하는 바리셀로바이러스(Varicellovirus) 속의 고양이 허피스 바이러스 (Feline herpesvirus: FHV)가 원인체이다. 허피스 바이러스에 감염된 고양이는 콧물과 눈물을 흘리고 폐렴과 결막염을 일으키며, 임신한 고양이는 가끔 유산이나 사산이 되기도 한다. 고양이 허피스감염증은 전세계적으로 보고되고 있고 고양이 외에 호랑이에서도 보고되고 있으며, 주로 모체이행 항체가 떨어지는 2-3개월령 고양이에서 많이 발생한다. 전파는 주로 감염된 고양이와의 접촉을 통해 일어나며, 3차 신경절에 잠복해 있다가 강한 스트레스를 받거나 면역이 억압될 경우에 바이러스가 배출된다.
국내에서 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스, 허피스 바이러스로 인한 고양이 질병을 예방하기 위해 불활화백신과 생백신 2종류가 기초백신으로 사용되고 있다. 그러나 국내에서 사용 중인 2종류의 백신은 외국에서 분리된 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스, 허피스 바이러스를 기반으로 제조된 백신이다. 이러한 외국 분리주-기반의 백신은 국내에서 순환하고 있는 야외주와 유전적 상동성 관점에서 큰 차이를 나타내는데 칼리시 바이러스의 경우, 국내에서 분리한 칼리시 바이러스 전체 유전자의 상관관계를 확인한 결과 상동성이 20%까지 차이가 나타나는 것으로 확인되었다. 이러한 점은 현재 사용되고 있는 외국-분리주 기반의 백신이 국내에서 유행하고 있는 고양이 바이러스에 대한 면역원성 및 효능에 한계를 나타낼수 있으며, 또한 최근 나고야 의정서로 인하여 유전자원에 대한 이익공유의 문제가 대두되고 있어 국내-분리주 기반의 고양이 질병에 대한 백신 개발이 필요한 실정이다.
이러한 기술적 배경 하에, 본 발명의 목적은 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방용 혼합 백신 조성물 및 이를 이용한 예방접종 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 국내에서 순환하고 있는 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 및 허피스 바이러스를 분리하여 계대한 바이러스를 항원으로 이용하여 외국-분리주 기반 백신의 효능의 한계를 극복하고 국내에서 유행하고 있는 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스에 대해 면역원성이 우수한 백신을 제공할 수 있다. 또한, 상기 4종 바이러스 변이주를 포함하는 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 약학조성물, 사료조성물 또는 사료첨가제를 제공할 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방용 혼합 백신 조성물을 제공한다.
상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열에서 101번째 아미노산이 이소류신(I), 231번째 아미노산이 이소류신(I) 및 562번 아미노산이 류신(L)일 수 있다.
상기 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열에서 150번째 아미노산이 발린(V), 205번째 아미노산이 트레오닌(T), 427번째 아미노산이 아스파르트산(D) 및 667번째 아미노산이 이소류신(I)일 수 있다.
상기 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열에서 48번째 아미노산이 시스테인(C), 241번째 아미노산이 이소류신(I), 245번째 아미노산이 글루타민(Q), 246번째 아미노산이 세린(S), 249번째 아미노산이 메티오닌(M), 252번째 아미노산이 타이로신(Y), 268번째 아미노산이 트레오닌(T), 273번째 아미노산이 아르기닌(R), 280번째 아미노산이 메티오닌(M), 285번째 아미노산이 트레오닌(T), 406번째 아미노산이 발린(V), 435번째 아미노산이 아스파르트산(D), 441번째 아미노산이 발린(V), 497번째 아미노산이 아스파르트산(D), 519번째 아미노산이 글루탐산(E)일 수 있다.
상기 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함할 수 있다.
상기 변이주는 모두 계대 배양 시 20 내지 60초 동안 자외선(UV)에 노출된 것일 수 있다.
상기 변이주는 모두 불활화된 것일 수 있다.
상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주는 4 : 1.5 : 1.5 : 2의 부피비로 혼합되는 것일 수 있다.
상기 혼합 백신 조성물은 애주번트를 더 포함할 수 있다.
상기 애주번트는 리하이드로겔, IMS1313, 몬타나이드 01 겔(Montanide 01 gel), ISA206, ISA70 및 카보폴로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있다.
상기 애주번트는 혼합 백신 조성물 중량에 대하여 5 내지 20(w/v)%로 포함될 수 있다.
또한 본 발명은 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 약학 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 구토, 탈수, 발열, 황달, 설사, 궤양, 장염, 비루, 안루, 구내염, 결막염, 피부염, 비염, 콧물, 기침, 재채기, 설염, 침울, 식욕저하 및 체중감소로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 임상증상을 경감시킬 수 있다.
또한 본 발명은 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 사료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 사료 첨가제를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 혼합 백신 조성물을 고양이과 동물에게 투여하는 단계; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방접종 방법을 제공한다.
상기 투여는 복강내 투여, 근육내 투여, 복막내 투여, 정맥내 투여, 피하내 투여, 경구 투여, 비강 투여, 경막 외 투여, 국소 투여 또는 침지 투여일 수 있다.
상기 고양이과 동물은 2개월령 내지 4개월령의 고양이일 수 있다.
본 발명에 따른 신규 백신 항원은 국내에서 순환하고 있는 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스, 허피스 바이러스를 분리하여 계대한 국내-분리주 기반으로, 이를 활용한 백신은 국내에서 유행하는 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스의 감염을 보다 효과적으로 예방 또는 경감할 수 있다. 또한 불활화 백신으로 제공하여 안전성이 보장되며, CRFK 세포에서 매우 높은 증식력을 나타내어 in vitro 증식을 통한 대량생산이 용이하다.
도 1은 FPV19D01-70P의 유전자를 증폭한 PCR 결과(a) 및 단백질의 아미노산 변이(b)를 나타낸 도이다. 1: FPVDF/FPVDR 프라이머 적용, 2: FPVSF1/FPVSR1 프라이머 적용, 3: FPVSF2/FPVSR2 프라이머 적용, 4: FPVSF3/FPVSR3 프라이머 적용.
도 2는 FCV17D03-50P 및 FCV17D283-80P의 유전자를 증폭한 PCR 결과(a), FCV17D03-50P 단백질의 아미노산 변이(b) 및 FCV17D283-80P 단백질의 아미노산 변이(c)를 나타낸 도이다. 1: FCVF/FCVR 프라이머를 적용한 FCV17D03-50P, 2: FCVF/FCVR 프라이머를 적용한 FCV17D283-80P.
도 3은 FHV191071-100P의 유전자를 증폭한 PCR 결과(a), 중간 반복 서열(inter repeat sequence: IRS) 영역에서의 염기 삽입(b) 및 중간 보완 4 유전자(inter complement 4 gene) 영역에서의 염기 삽입(c)을 나타낸 도이다. 1: FHVgDF1/FHVgDR1 프라이머 적용, 2: FHVgDFR2/FHVgDR2 프라이머 적용, 3: FHVgBF1/FHVgBR1 프라이머 적용, 4: FHVgBF2/FHVgBR2 프라이머 적용, 5: FHVgBF3/FHVgBR3 프라이머 적용.
도 4는 FPV19D01-1P 및 FPV19D01-70P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 5는 FCV17D03-1P 및 FCV17D03-50P의 바이러스 증식능, FCV17D283-1P 및 FCV17D283-80P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 6은 FHV191071-1P 및 FHV191071-100P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 7은 마우스에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 4종 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다.
도 8은 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다(화살표는 백신접종 표시). Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 9는 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 칼리시 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. (a) 칼리시 바이러스 FCV17D03주에 대한 항체가, (b) 칼리시 바이러스 FCV17D283주에 대한 항체가. Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 10은 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 허피스 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 11은 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
도 12는 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 칼리시 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
도 13은 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 허피스 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
도 2는 FCV17D03-50P 및 FCV17D283-80P의 유전자를 증폭한 PCR 결과(a), FCV17D03-50P 단백질의 아미노산 변이(b) 및 FCV17D283-80P 단백질의 아미노산 변이(c)를 나타낸 도이다. 1: FCVF/FCVR 프라이머를 적용한 FCV17D03-50P, 2: FCVF/FCVR 프라이머를 적용한 FCV17D283-80P.
도 3은 FHV191071-100P의 유전자를 증폭한 PCR 결과(a), 중간 반복 서열(inter repeat sequence: IRS) 영역에서의 염기 삽입(b) 및 중간 보완 4 유전자(inter complement 4 gene) 영역에서의 염기 삽입(c)을 나타낸 도이다. 1: FHVgDF1/FHVgDR1 프라이머 적용, 2: FHVgDFR2/FHVgDR2 프라이머 적용, 3: FHVgBF1/FHVgBR1 프라이머 적용, 4: FHVgBF2/FHVgBR2 프라이머 적용, 5: FHVgBF3/FHVgBR3 프라이머 적용.
도 4는 FPV19D01-1P 및 FPV19D01-70P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 5는 FCV17D03-1P 및 FCV17D03-50P의 바이러스 증식능, FCV17D283-1P 및 FCV17D283-80P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 6은 FHV191071-1P 및 FHV191071-100P의 바이러스 증식능을 나타낸 도이다.
도 7은 마우스에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 4종 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다.
도 8은 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다(화살표는 백신접종 표시). Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 9는 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 칼리시 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. (a) 칼리시 바이러스 FCV17D03주에 대한 항체가, (b) 칼리시 바이러스 FCV17D283주에 대한 항체가. Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 10은 기니픽에 접종한 리하이드로겔 함유 혼합 백신 및 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 허피스 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. Weeks after vaccination - 0 : 접종 전, 2 : 1차 접종 2주차, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차, 8 : 3차 접종 2주차.
도 11은 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
도 12는 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 칼리시 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
도 13은 고양이에 접종한 카보폴 함유 혼합 백신의 고양이 허피스 바이러스에 대한 항체가를 나타낸 도이다. 0 : 접종 전, 4 : 2차 접종 2주차, 6 : 2차 접종 4주차.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 이하에 기술하는 실험 방법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 일양태로, 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 고양이 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 고양이 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 고양이 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 고양이 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방용 혼합 백신 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 용어 “고양이 범백혈구감소증 바이러스”는 FPV(Feline panleukopenia virus) 또는 범백혈구감소증 바이러스와 혼용되어 사용될 수 있다. “고양이 칼리시 바이러스”는 FCV(Feline calici virus) 또는 칼리시 바이러스와 혼용되어 사용될 수 있다. “고양이 허피스 바이러스”는 FHV(Feline herpes virs) 또는 허피스 바이러스와 혼용되어 사용될 있다.
본 발명에 따른 혼합 백신은 국내 발생 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 고양이 칼리시 바이러스 또는 고양이 허피스 바이러스 감염을 진단받은 고양이로부터 고병원성을 나타내는 바이러스 균주 FPV 1주, FCV 2주, FHV 1주를 분리하여여 계대배양한 상기 4종의 변이주를 백신의 항원으로 이용하였다. FCV 2주의 경우 교차중화시험에서 서로 교차가 되지 않는 것을 확인하여 기존 백신 제조에 있어 백신주로 1균주를 사용하는 것보다 2균주의 칼리시 바이러스를 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 의하면 상기 혼합 백신의 면역원성을 평가한 결과 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스에 대해 높은 혈구응집억제가 또는 중화항체가를 형성해 우수한 백신의 효능을 확인하였다. 상기 4종의 변이주는 계대 및 증식을 통해 최초 분리주와 비교하여 핵산 서열 또는 아미노산 서열에 변이가 발생하였는데 범백혈구감소증 바이러스 및 칼리시 바이러스의 경우 아미노산 서열의 변이로 인해 높은 바이러스 증식성을 나타내 증식 환경에 적응할 수 있는 균학적 특성이 발휘되는 것으로 추정할 수 있다.
고양이 범백혈구감소증 바이러스는 개 파보바이러스 (Canine parvovirus: CPV)와 유사하지만 개 파보바이러스는 두 개의 혈청형 (CPV1, CPV2)이 알려져 있는 반면, 고양이 범백혈구감소증 바이러스는 VP2 캡시드 단백질이 중화항체를 유도하는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일실시예에서 증식성이 좋은 FPV 1주를 70대 계대 후 16S rDNA 서열 분석으로 VP2 단백질 영역을 최초 분리주와 비교한 결과 3개의 아미노산 변이가 발생하였음을 확인하였다. 상기 아미노산 변이가 일어난 변이주의 VP2 단백질을 서열번호 2로 표시하고, 상기 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 고양이 범백혈구감소증 바이러스 변이주를 'FPV19D01-70P'로 명명하였다.
FPV19D01-70P 변이주는 생명공학연구원 2022년 03월 15일에 생물자원센터(KCTC)에 기탁하여, 2022년 04월 5일자로 수탁번호 KCTC18984P를 부여받았다.
상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 고양이 범백혈구감소증 바이러스 변이주는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열에서 101번째 아미노산이 이소류신(I), 231번째 아미노산이 이소류신(I) 및 562번 아미노산이 류신(L)일 수 있다.
칼리시 바이러스의 전체 유전자는 7,300개의 염기로 이루어진 RNA바이러스로 4개의 open reading frame (ORF)을 가지고 있다. 이중 두번째 ORF는 VP1으로 성숙한 캡시드 단백질로 중화항체를 유도하는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일실시예에서, 증식성이 좋은 FCV 2주를 각각 50대 및 80대 계대 후 16S rDNA 서열 분석으로 VP1 단백질을 최초 분리주와 비교한 결과 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열에서 4개의 아미노산 변이가 발생하고, 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열에서 12개의 아미노산 변이가 발생하였음을 확인하였다. 상기 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 고양이 칼리시 바이러스 변이주를 'FCV17D03-50P'로 명명하고, 상기 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 고양이 칼리시 바이러스 변이주를 'FCV17D283-80P'로 명명하였다.
FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주는 2022년 03월 15일에 생물자원센터(KCTC)에 기탁하여, 2022년 04월 5일자로 각각 수탁번호 KCTC18985P 및 수탁번호 KCTC18986P를 부여받았다.
상기 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 고양이 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열에서 150번째 아미노산이 발린(V), 205번째 아미노산이 트레오닌(T), 427번째 아미노산이 아스파르트산(D) 및 667번째 아미노산이 이소류신(I)일 수 있다.
상기 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고 상기 아미노산 서열에서 48번째 아미노산이 시스테인(C), 241번째 아미노산이 이소류신(I), 245번째 아미노산이 글루타민(Q), 246번째 아미노산이 세린(S), 249번째 아미노산이 메티오닌(M), 252번째 아미노산이 타이로신(Y), 268번째 아미노산이 트레오닌(T), 273번째 아미노산이 아르기닌(R), 280번째 아미노산이 메티오닌(M), 285번째 아미노산이 트레오닌(T), 406번째 아미노산이 발린(V), 435번째 아미노산이 아스파르트산(D), 441번째 아미노산이 발린(V), 497번째 아미노산이 아스파르트산(D), 519번째 아미노산이 글루탐산(E)일 수 있다.
고양이 허피스 바이러스의 전체 유전자는 135,800개의 염기로 구성되며, 23개의 바이러스 구성 단백질을 가지고 있으며, 외피는 13개의 글리코 단백질을 가지고 있다. 13개의 글리코단백질 중에서 U58 (gE), UL44 (gC), UL23 (thymidine kinase; TK), 및 U53 (serine/threonine protein kinase) 4개가 잠재적 병원성 인자로 알려져 있고, UL27 (gB), US6 (gD) 단백질은 방어면역을 유도하는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일실시예에서 증식성이 좋은 FHV 1주를 100대 계대 후 최초 분리주와 서열 비교를 하였을 때 gD 및 gB의 경우 상동성 100%로 확인되어 gD 및 gB 외의 유전적 차이를 확인하였다. 그 결과, 최초 분리주 FH191701-1Pf의 염기서열과 비교하여 106,081bp ~ 115,506bp(중간 반복 서열(inter repeat sequence: IRS))에서 115개의 염기 삽입이 발생하고, 111,816bp ~ 112,206bp(중간 보완 4 유전자(inter complement 4 gene))에서 25개의 염기 결손이 발생한 것을 확인하였다. 상기 염기 삽입/결실이 발생한 변이주의 염기 서열을 총 115,741bp로 확인하고 서열번호 7로 표시하였다.
상기 서열번호 7의 염기 서열을 포함하는 고양이 허피스 바이러스 변이주를 'FHV191071-100P'로 명명하고, 2022년 03월 15일에 생물자원센터(KCTC)에 기탁하여, 2022년 04월 5일자로 수탁번호 KCTC18987P를 부여받았다.
상기 아미노산 서열 및 핵산 서열의 변이는 바이러스주의 계대 및 증식의 과정에 동반된 자외선(UV) 조사로 인 한 것일 수 있다. 자외선 조사는 바이러스의 DNA나 RNA에 영향을 미치는데 염기서열 중에서 티민(thymine)이 두개 연속적으로 있는 경우 자외선에 노출하면 티민의 이량체(dimer)를 형성하여 다음 단계에 증식을 일어나지 못하게 하는 살바이러스 효과가 나타나기 때문에 본 발명의 일실시예에 따른 계대 배양시 자외선 노출 시간은 바람직하게는 20 내지 60초일 수 있고 더욱 바람직하게는 25 내지 35초일 수 있다.
본 발명에서 용어 "백신 조성물" 또는 "백신"은 생체에 면역을 주는 항원성 물질을 함유한 생물학적인 제제로서, 바이러스 감염증의 예방을 위하여 생물체에 주입 또는 주사하여 항체를 형성시키는 면역원을 말한다. 본 발명에 따른 상기 항원성 물질은 고양이 범백혈구감소증 바이러스 변이주 또는 이로부터 유래한 단백질, 고양이 칼리시 바이러스 변이주 또는 이로부터 유래한 단백질 및 고양이 허피스 바이러스 변이주 또는 이로부터 유래한 단백질일 수 있다.
상기 변이주는 CRFK 세포를 이용하여 증식할 수 있다. 예를 들어, 범백혈구감소증 바이러스 변이주의 경우 CRFK 세포에 동시에 접종하는 방법을 사용할 수 있고, 칼리시 바이러스 변이주 및 허피스 바이러스 변이주는 CRFK 세포가 배양되어 있는 조직배양용 플라스크에 각각의 바이러스를 접종한 뒤 D-MEM 배지를 추가하여 배양하는 방법을 사용할 수 있다. 이때 범백혈구감소증 바이러스 변이주는 5일간 배양하고 칼리시 바이러스 변이주 및 허피스 바이러스 변이주는 2일간 배양하고 수확하면 높은 함량의 바이러스를 얻을 수 있다.
상기 변이주는 모두 불활화 균체, 약독화된 균체 또는 사균체로서 사용될 수 있고, 상기 단백질은 상기 변이주 각각으로부터 통상적인 단백질 정제 또는 유전 공학적 재조합을 통해 항원을 만들어 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 혼합 백신은 불활화 백신으로 제공될 수 있고, 상기 변이주는 모두 불활화된 것일 수 있다.
상기 불활화 백신은 병원체를 증식한 후 약품을 이용하여 병원성 미생물을 죽여서 만든 백신으로, 불활성화할 때 바이러스가 복제될 수 없게 하면서 생물체 표면에 존재하는 항원의 구조를 그대로 유지시키는 것이 중요하다. 불활화 백신은 주로 체액성 면역만을 유도하지만 안전성이 높아 백신 접종의 부작용이 거의 없으며 다가 백신으로서 응용할 수 있는 장점이 있다.
상기 변이주의 불활화는 당해 기술분야에 널리 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 당해 기술분야에 알려진 불활성화제를 사용할 수 있다. 바람직하게는 포르말린 처리에 의해 불활성화시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 혼합 백신 조성물은 상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주가 4 : 1.5 : 1.5 : 2의 부피비로 혼합되는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 혼합 백신 조성물은 애주번트(Adjuvant)를 더 포함할 수 있다. 상기 애주번트는 본 발명의 조성물과 함께 투여되어 면역 반응을 증강시킬수 있다.
전형적인 애주번트로는 프로인트 애주번트((Freund adjuvant), 알룸 화합물(aluminum compound), 무라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide), 리포폴리싸카라이드(LPS), 모노포스포릴 리피드 A, 또는 쿠일 A, ISA70 에멀전 등이 있으나, 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한없이 사용할 수 있다. 바람직하게는 리하이드로겔(Rehydragel), IMS1313, 몬타나이드 01 겔(Montanide 01 gel), ISA206, ISA70 및 카보폴(Carbopol 974 PNF polymer)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있고 더욱 바람직하게는 리하이드로겔 또는 카보폴이 사용될 수 있다.
상기 애주번트는 혼합백신 조성물 중량에 대하여 5 내지 20(w/v)%로 포함될 수 있고 바람직하게는 10(w/v)%로 포함될 수 있다. 상기 애주번트는 백신 조성물과 동시에 투여되거나 시간 간격을 두고 순차적으로 투여될 수 있다.
상기 백신 조성물은 안정화제, 항생제, 보존제 또는 첨가제 등이 추가로 포함될 수 있으며, 백신의 투여 경로에 다라 증류수, 완충용액 등과도 혼합하여 사용할 수 있다. 당류나 아미노산류, 광물유, 식물유, 백반, 인산알루미늄, 벤토나이트, 실리카, 무라밀디펩티드(muramyl dipeptide) 유도체, 사이모신, 인터류킨 등이 함께 사용될 수 있으며 이에 한정되지 않고 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 잘 알려진 백신 제조에 사용되는 공지이 물질을 제한없이 사용할 수 있다.
상기 백신 조성물은 적당한 용적의, 예를 들어 약 10~500㎖ 부피의 바이알에 백신액을 분주한 다음, 밀봉하여 사용될 수 있다. 이러한 백신은 액상뿐만 아니라, 나누어 주입한 다음에 동결건조함으로써 건조 제제로 사용될 수도 있다. 상기 건조 제제는 사용 직전에 첨가한 감균액으로 건조물질을 완전하게 재용해하여 사용될 수 있다.
상기 백신 조성물은 경구형 또는 비경구형 제제로 제조할 수 있고, 바람직하게는 비경구형 제제인 주사액제로 제조하며, 진피 내, 근육 내, 복막 내, 정맥 내, 피하 내, 비강 또는 경막 외(eidural) 경로로 투여할 수 있다.
상기 백신 조성물은 면역학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 상기 면역학적으로 유효한 양은 투여 대상의 상태, 투여 경로 및 투여 형태에 따라 조절될 수 있으며, 예를 들어, 실험적인 유효량으로 투여 대상의 체중 1kg 당 0.1 내지 1 ㎖, 바람직하게는 체중 1kg당 0.2 ~ 0.4 ㎖을 2주 간격으로 2회 이상 투여하는 것이 바람직할 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 자명하게 다양한 범위 내에서 사용할 수 있다.
본 발명은 다른 양태로, 상기 혼합 백신 조성물을 고양이과 동물에게 투여하는 단계; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방접종 방법을 제공한다.
상기 고양이과 동물은 고양이, 삵, 치타, 사자, 퓨마, 표범, 호랑이 등을 포함할 수 있고, 바람직하게는 2개월령 내지 4개월령의 고양이일 수 있다.
상기 투여는 복강내 투여, 근육내 투여, 복막내 투여, 정맥내 투여, 피하 내 투여, 경구 투여, 비강 투여, 경막 외 투여, 국소 투여 또는 침지 투여일 수 있다.
본 발명은 다른 양태로, 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증은 각각 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 고양이 칼리시 바이러스 또는 고양이 허피스 바이러스에 의한 감염병을 의미한다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 4종의 변이주를 포함하는 혼합 백신 조성물을 4개월령의 고양이에게 1차 및 2차로 접종하고 2차 접종 2주차에 ATCC에서 구입한 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 고양이 칼리시 바이러스 및 고양이 허피스 바이러스를 공격 접종한 뒤 임상증상을 확인한 결과, 실험 고양이 모두 상기 바이러스 감염의 전형적인 증상인 설사나 비루, 구내염, 눈물 등의 증상을 나타내지 않았다. 또한 임상관찰 실시 15일째에 부검한 후 육안적 부검소견을 확인한 결과 소장, 구강, 혀, 폐 등에 특이한 소견을 나타내지 않고 모두 정상을 나타냄을 확인하였다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 구토, 탈수, 발열, 황달, 설사, 궤양, 장염, 비루, 안루, 구내염, 결막염, 피부염, 비염, 콧물, 기침, 재채기, 설염, 침울, 식욕저하 및 체중감소로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 임상증상을 경감시킬 수 있어 상기 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증에 대한 예방 또는 증상의 경감, 치료에 효능을 나타낼 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 이용되는 방법으로 제조할 수 있다. 상기 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다.
구체적으로, 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될수 있다. 또한, 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제에 순차로 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
상기 바이러스 감염병의 예방, 증상의 경감 또는 치료를 위해 단독으로 또는 수술 등의 외과적 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명은 또 다른 양태로, 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 사료 조성물 또는 사료 첨가제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 사료 조성물 또는 사료 첨가제는 포유동물에게 꾸준히 급이할 경우 국내에서 순환하고 있는 고양이 범밸혈구감소증 바이러스, 고양이 칼리시 바이러스 또는 고양이 허피스 바이러스에 의한 감염병을 예방하거나, 증상을 경감시킬 수 있다.
본 발명에 따른 사료 조성물 또는 사료 첨가제는 당업계에 공지된 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 상기 4종의 변이주로 구성되는 바이러스 균주를 혼합배양한 조성물을 단독으로 사용할 수도 있으며, 종래 공지된 사료 또는 사료 첨가제와 병용하여 사용할 수도 있다. 또한 공지된 사료 또는 사료 첨가제에 통상적으로 사용되는 각종 부형제, 영양제, 방부제, 보존제, 항생제, 비타민 등의 미량 영양성분 등이 더 포함될 수 있고 첨가하는 함량은 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 당업자가 통상적으로 임의 선택하여 사용할 수 있다.
상기 사료 조성물 또는 사료 첨가제는 종래의 사료 또는 사료첨가제와 순차적 또는 동시에 사용될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 4종 바이러스주의 분리
1-1. 고양이 범백혈구감소증 바이러스(FPV) 1종의 분리
국내에서 유행하는 고양이 범백혈구감소증 바이러스를 분리하기 위하여, 2017년부터 2019년까지 농림축산검역본부의 질병진단과에 질병진단을 위하여 의뢰된 시료 중에서 고양이의 소장 시료 60개를 수집하였다. 수집된 시료 1 g을 유발에 넣고, 0.5 g의 바다 모래 (sea sand)를 혼합하여 유제하였다. 이 유제액에 세포배양배지 (D-MEM) 5 ㎖를 넣어 10%의 조직 유제액을 만들고, 강렬하게 혼합한 다음 3,000 rpm에서 15분 원심 분리하였다. 시료의 상층액을 0.45 ㎛의 필터 디스크(filter disk)를 통과시켜 세균을 제거하였다. CRFK 세포(ATCC, CCL94)가 준비된 6 well plate를 인산완충용액(Phosphate buffered saline: PBS, pH 7.2)으로 2회 세척한 후 시료 100 ㎕를 접종하고, 배지 2 ㎖를 추가하였다. 접종 후 1 시간을 배양하고, 접종 시료를 제거한 후 10% FBS가 함유된 신선한 배지 5 ㎖를 각 well에 첨가하였다. 이어서, 37℃ 이산화탄소 배양기에 넣고 7일 동안 배양하면서 현미경으로 날마다 관찰하였다. 60개의 시료에서 8개의 고양이 범백혈구감소증 바이러스를 분리하고 그 중에서 높은 증식성을 나타내는 바이러스 1주를 선발하여 FPV19D01로 명명하였다.
1-2. 고양이 칼리시 바이러스(FCV) 2종의 분리
국내에서 유행하는 고양이 칼리시 바이러스를 분리하기 위하여, 2017년부터 2019년까지 농림축산검역본부의 질병진단과에 질병진단을 위하여 의뢰된 고양이의 조직에서 시료를 수집하였다. 수집된 시료로부터 상기 실시예 1-1의 바이러스 분리와 동일한 방법으로 칼리시 바이러스 5주를 분리하고 그 중에서 증식성이 좋은 2주를 선발하여 FCV17D03 및 FCV17D283로 명명하였다.
1-3. 고양이 허피스 바이러스(FHV) 1종의 분리
국내에서 유행하는 고양이 칼리시 바이러스를 분리하기 위하여, 2019년 농림축산검역본부의 질병진단과에 질병진단을 위하여 의뢰된 고양이의 조직에서 시료를 수집하였다. 수집된 시료로부터 상기 실시예 1-1의 바이러스 분리와 동일한 방법으로 허피스 바이러스 2주를 분리하고 그 중에서 증식성이 좋은 1주를 선발하여 FHV191071로 명명하였다.
실시예 2. 4종 바이러스주의 계대 및 동정
2-1. 4종 바이러스주의 계대배양
CRFK 세포를 이용하여 실시예 1에서 분리한 FPV19D01, FCV17D03, FCV17D283 및 FHV191071 분리주를 계대배양하였다.
계대 시 자외선 조사를 동반하여 변이를 유도하였다. 자외선 조사는 바이러스의 DNA나 RNA에 영향을 미치는데 염기서열 중에서 티민(thymine)이 두개 연속적으로 있는 경우 자외선에 노출하면 티민의 이량체(dimer)를 형성하여 다음 단계에 증식을 일어나지 못하게 하는 살바이러스 효과가 나타나기 때문에 자외선 노출의 적정 시간을 확인하였다.
하기 표 1을 살펴보면, FPV19D01 주는 자외선에 30초 및 60초 노출시켰을 때 바이러스의 함량이 약 10배씩 감소하고 FCV17D03주 및 FCV17D283 주는 자외선에 60초 노출시켰을 때 바이러스의 함량이 약 10배 감소하고, FHV191071 주는 자외선에 60초 노출하였을 때 약 100배 감소한 것으로 나타났다.
| 바이러스 함량(TCID50/mL) | ||||
| 자외선노출 시간 (초) |
FPV19D01 | FCV17D03 | FCV17D283 | FHV191071 |
| 0 | 7.5 | 9 | 8.9 | 8.5 |
| 30 | 6.3 | 8.6 | 8.6 | 7.5 |
| 60 | 5.5 | 8 | 7.9 | 6.5 |
따라서 자외선 노출 시간을 30초로 하여 각 분리주를 10-1부터 10-5까지 희석하여 6 well plate에서 계대배양하였다. 20대 계대까지는 CRFK 세포에서 10진 희석하여 최종 희석배수에서 세포변성효과(CPE)를 나타내는 well에서 상층액을 수집하고, 이후 21대부터 생물안전 캐비닛의 자외선 램프에 30초 노출시킨 후 10진 희석하여 바이러스를 증식시키고 CPE가 나타나는 최종 희석배수를 연속계대하였다.
구체적으로, FPV19D01주는 범백혈구감소증 바이러스의 특성상 활발하게 증식하고 있는 세포에서 잘 자라기 때문에 CRFK 세포와 동시에 접종하는 방법을 이용하였다. 자외선 노출한 21대부터 최종 70대까지 연속계대하고 이 변이주를 FPV19D01-70P로 명명하였다.
FCV17D03주 및 FCV17D283주는 칼리시 바이러스의 특성상 짧은 시간에 증식이 잘 되기 때문에 CRFK 세포를 1일 전에 준비하고 다음 날 분리주를 접종하는 방법을 이용하였다. 자외선 노출한 21대부터 최종 50대 및 80대까지 연속계대하고 각각의 변이주를 FCV17D03-50P 및 FCV17D283-80P로 명명하였다.
FHV191071주 또한 허피스 바이러스의 특성상 짧은 시간에 증식이 잘 되기 때문에 CRFK 세포를 1일 전에 준비하고 다음 날 분리주를 접종하는 방법을 이용하였다. 자외선 노출한 21대부터 최종 100대까지 연속계대하고 이 변이주를 FHV191071-100P로 명명하였다.
상기 계대별 구체적인 처리내용을 표 2에 나타냈다.
| 계대수 | 계대세포 | 처리내용 | 접종 바이러스 | 계대 후 바이러스 |
| 1-20 | CRFK cell | - | ||
| 21-70 | CRFK cell | UV 30초 노출 후 계대 | FPV19D01 | FPV19D01-70P |
| 21-50 | CRFK cell | UV 30초 노출 후 계대 | FCV17D03 | FCV17D03-50P |
| 21-80 | CRFK cell | UV 30초 노출 후 계대 | FCV17D283 | FCV17D283-80P |
| 21-100 | CRFK cell | UV 30초 노출 후 계대 | FHV191071 | FHV191071-100P |
2-2. FPV19D01-70P 변이주의 서열변이 분석
고양이 범백혈구감소증 바이러스의 주요 면역원성 단백질인 VP2(Viral capsid peptide-2)의 아미노산 확인을 위해 표 3의 특이 프라이머를 이용하여 실시예 2-1에서 FPV19D01주를 70대 계대한 FPV19D01-70P 변이주의 유전자를 증폭하고 pGEM-T easy vector에 클로닝하여 유전자의 염기서열을 분석한 결과를 도 1에 나타냈다.
도 1a에 나타난 바와 같이, FPV19D01-70P 변이주는 고양이 범백혈구감소증 바이러스 특이적인 프라이머를 이용한 유전자 증폭에서 예상된 크기의 DNA를 나타내어 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 속한 것을 확인하였다. VP2 유전자를 2008년도에 분리하여 보고한 고양이 범백혈구감소증 바이러스(KS42주)와 상동성을 확인한 결과 염기서열의 상동성은 99.5%(1747/1755), 아미노산 상동성은 99.3%(581/585)으로 확인되었다.
도 1b를 살펴보면, FPV19D01주는 70대 계대 후에 VP2 단백질에서 3개의 아미노산의 변이가 일어난 것을 확인하였다. 구체적으로 FPV19D01-1P주의 VP2 아미노산 서열 중 101번째 아미노산인 트레오닌(T), 231번째 아미노산인 아스파라긴(N), 562번 아미노산인 발린(V)이 FPV19D01-70P 변이주에서는 각각 이소류신(I), 이소류신(I) 및 류신(L)으로 변이된 것을 확인되었다. 상기 FPV19D01-70P 변이주의 VP2 유전자의 염기서열은 서열번호 1, 이의 아미노산 서열은 서열번호 2로 표시하였다.
2-3. FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주의 서열변이 분석
고양이 칼리시 바이러스의 주요 면역원성 단백질인 VP1(Viral capsid peptide-1)의 아미노산 확인을 위해 표 4의 특이 프라이머를 이용하여 실시예 2-1에서 FCV17D03주를 50대 계대한 FCV17D03-50P 및 80대 계대한 FCV17D283-80P의 유전자를 증폭하고 pGEM-T easy vector에 클로닝하여 유전자의 염기서열을 분석한 결과를 도 2에 나타냈다.
도 2a에 나타난 바와 같이, FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주는 고양이 칼리시 바이러스 특이적인 프라이머를 이용한 유전자 증폭에서 예상된 크기의 DNA를 나타내어 고양이 칼리시 바이러스에 속한 것을 확인하였다.
기존의 백신주로 보고한 고양이 칼리시 바이러스 F9주와 상동성을 확인한 결과 FCV17D03-50P 변이주 VP1의 염기서열 상동성은 76.3% (1532/2007), 아미노산 상동성은 86.7%(581/670)으로 확인되었고, FCV17D283-80P 변이주 VP1의 염기서열 상동성은 75.8% (1525/2010), 아미노산 상동성은 84.3%(565/670)으로 확인되었다.
도 2b를 살펴보면, FCV17D03주는 50대 계대 후 VP1 단백질에서 4개의 아미노산의 변이가 일어났으며 구체적으로 FCV17D03-1P주의 VP1 아미노산 서열 중 150번째 알라닌(A), 205번째 알라닌(A), 427번째 아스파라긴(N) 및 667번째 트레오닌(T)이 FCV17D03-50P 변이주에서는 각각 발린(V), 트레오닌(T), 아스파르트산(D), 이소류신(I)으로 변이된 것을 확인하였다. 상기 FCV17D03-50P 변이주의 VP1 유전자의 염기서열은 서열번호 3, 이의 아미노산 서열은 서열번호 4로 표시하였다.
또한 도 2c를 살펴보면, FCV17D03주는 80대 계대 후 VP1 단백질에서 15개의 아미노산의 변이가 일어났으며 FCV17D03-1P주의 VP1 아미노산 서열 중 48번째 타이로신(Y), 241번째 메티오닌(M), 245번째 아르기닌(R), 246번째 글리신(G), 249번째 발린(V), 252번째 시스테인(C), 268번째 알리닌(A), 273번째 글리신(G), 280번째 발린(V), 285번째 알라닌(A), 406번째 이소류신(I), 435번째 아스파라긴(N), 441번째 류신(L), 497번째 아스파라긴(N), 519번째 트레오닌(T)이 FCV17D283-80P 변이주에서는 각각 시스테인(C), 이소류신(I), 글루타민(Q), 세린(S), 메티오닌(M), 타이로신(Y), 트레오닌(T), 아르기닌(R), 메티오닌(M), 트레오닌(T), 발린(V), 아스파르트산(D), 발린(V), 아스파르트산(D), 글루탐산(E)으로 변이된 것을 확인하였다. 상기 FCV17D283-80P 변이주의 VP1 유전자 염기서열은 서열번호 5, 이의 아미노산 서열은 서열번호 6으로 표시하였다.
2-4. FHV191071-100P 변이주의 서열변이 분석
고양이 허피스 바이러스 최초 분리주 FHV191071주와 이를 100대 계대한 FHV191071-100P 변이주의 전체 유전자 염기서열을 비교하기 위해 FHV191071-1P주 및 FHV191071-100P 변이주의 DNA를 추출하여 ㈜세니젠에 whole genome sequence 서비스를 의뢰하였다. 구체적으로 gB 및 gD 유전자의 염기서열을 비교하기 위하여, 표 5의 프라이머를 이용하여 FHV191071-100P 변이주의 유전자를 증폭하고, pGEM-T easy vector에 클로닝하여 유전자의 염기서열을 분석한 결과를 도 3에 나타냈다.
도 3a에 나타난 바와 같이, FHV191071-100P 변이주는 고양이 허피스 바이러스 특이적인 프라이머를 이용한 유전자 증폭에서 예상된 크기의 DNA를 나타내어 고양이 허피스 바이러스에 속한 것을 확인하였다.
또한 FHV191071-100P 변이주의 gD 및 gB 유전자의 염기서열을 FHV191071-1P주의 유전자와 상동성을 확인한 결과 염기서열 및 아미노산의 상동성은 100% 로 확인되어, gD 및 gB 이외의 유전자에서 차이점을 분석하기 위하여 전체 유전자를 분석하였다.
도 3b를 살펴보면, 상기 FHV191071-100P 변이주의 전체 유전자 염기서열은 115,741bp를 확인할 수 있다. FHV191071-1P주와 비교하였을 때 FHV191071-100P 변이주 전체 유전자 중에서 중간 반복 염기서열 (inter repeat sequence: IRS)부위 중 106,271부터 115개의 염기가 삽입된 것으로 나타났다. 또한 도 c에서 보는 것과 같이 중간 보완 4 유전자 (inter complement 4 gene)에서 25개의 염기가 결손된 것을 확인하였다. 상기 FHV191071-100P 변이주의 유전자 염기서열을 서열번호 7로 표시하였다.
실시예 3. 4종 바이러스 변이주의 증식능 평가
3-1. FPV19D01-70P 변이주의 증식능 확인
고양이 범백혈구감소증 바이러스의 최초 분리주 FPV19D01-1P주와 FPV19D01-70P 변이주의 증식능을 비교 평가하였다.
각각의 바이러스를 25㎠의 플라스크에서 CRFK 세포와 동시에 감염시키고 접종 후 5일 후에 수확한 후 측정한 FPV19D01-1P주 및 FPV19D01-70P 변이주의 바이러스 함량을 도 4에 나타냈다.
도 4에서 보는 바와 같이, FPV19D01-1P주는 106.0 TCID50/㎖, FPV19D01-70P주는 107.8 TCID50/㎖의 바이러스 검출을 나타내어, FPV19D01-70P 변이주가 CRFK 세포에서 높은 함량의 바이러스를 나타내었다.
3-2. FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주의 교차중화시험 및 증식능 확인
고양이 칼리시 바이러스에서 분리, 계대한 2종의 FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주는 서로 VP1의 염기서열 상동성은 76.5%(1538/2010), 아미노산 서열의 상동성은 85.9%(576/670)로 상당히 큰 차이를 나타냈다.
이러한 유전적 상동성 차이가 혈청학적 차이로 나타나는지를 확인하기 위하여 FCV17D03-50P 변이주와 FCV17D283-80P 변이주를 이용하여 단일 불활화 백신을 각각 준비하였다. 6주령 마우스 4두에 FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주의 불활화 백신을 각각 2주 간격으로 2회 0.2 ml씩 근육으로 접종하고, 2차 접종 2주 후에 채혈한 후 중화시험을 실시하였다.
하기 표 6을 참고하면, FCV17D03-50P 변이주의 불활화 백신을 접종한 마우스는 FCV17D03-50P 변이주에 대하여 111.4배 (26.8)의 중화항체가를 나타냈으나, FCV17D289-80P 변이주에 대하여 중화항체가는 0배를 나타내었다. 반대로 FCV17D283-80P 변이주의 불활화 백신을 접종한 마우스는 FCV17D03-50P 변이주에 대해서는 0배의 중화항체가를 나타낸 반면, 17D283-80P 변이주에 대하여 157.6배 (27.3)를 나타내었다. 따라서 2종의 칼리시 바이러스에 대한 교차중화능이 없는 것으로 확인되어 고양이에서 칼리시 바이러스에 대한 예방을 위하여 2종의 칼리시 바이러스를 사용하는 것이 효과적임을 확인하였다.
상기 FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주와 최초 분리주 FCV17D03-1P주 및 FCV17D283-1P주의 증식능을 비교하기 위하여 각각의 바이러스를 25㎠의 플라스크에서 준비한 CRFK 세포에 감염시키고 접종 후 2일 후에 수확하여 바이러스 함량을 확인하였다.
FCV17D03-1P주, FCV17D283-1P주, FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주의 바이러스 함량을 나타낸 도 5에서 보는 바와 같이, 분리주 FCV17D03-1P주 및 FCV17D283-1P주는 각각 107.0 TCID50/㎖ 및 107.2 TCID50/㎖을 나타내고, FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주는 108.0 TCID50/㎖의 바이러스 검출을 나타내어, 최초 분리주 대비 변이주의 증식능이 증가한 것으로 나타났다.
3-3. FHV191071-100P 변이주의 증식능 확인
고양이 허피스 바이러스의 최초 분리주 FHV191071-1P주 및 100대 계대한 FHV191071-100P 변이주의 증식능을 비교 평가하였다. 25㎠의 플라스크에 CRFK 세포를 준비한 후 FHV191071-1P주 및 FHV191071-100P 변이주를 각각 감염시키고, 접종 후 2일째에 수확하여 바이러스 함량을 확인한 결과를 도 6에 나타냈다. 도 6에서 보는 바와 같이, FHV191071-1P주 및 FHV191071-100P 변이주 각각 108.5 TCID50/㎖의 바이러스 검출을 나타내어 증식성에 변화는 없는 것으로 확인되었다.
실시예 4: 4종 변이주 혼합 백신 및 면역원성 평가
4-1. 4종 변이주 혼합 백신 제조
고양이 범백혈구감소증 바이러스 1종(FPV19D01-70P 변이주), 고양이 칼리시 바이러스 2종(FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주) 및 고양이 허피스 바이러스 1종(FHV191071-100P 변이주)을 혼합한 백신의 제조에 앞서 불활화 단계를 거쳤다. 칼리시 바이러스 변이주 및 허피스 바이러스 변이주에 대해서는 포르말린을 0.15%가 되도록 37℃에서 48시간을 배양하고, 범백혈구감소증 바이러스 변이주에 대해서는 포르말린 농도를 0.2%로 조정하여 첨가하였고 37℃에서 60시간 배양하였다. 배양 후 1 ㎖를 투석막에 넣고 PBS로 24시간 투석하였다.
투석한 바이러스들이 불활화 되었는지 확인하기 위하여, 준비된 CRFK 세포에 0.1 ml씩 접종하고 5일간 배양한 결과 표 7에 나타낸 바와 같이, 4종의 바이러스 변이주는 특이적인 세포 변성효과를 나타내지 않았으며, 이 세포를 고정하여 4종의 특이적인 항체를 이용하여 염색하였을 때 형광이 나타나지 않아 불활성화된 것으로 확인하였다.
상기 불활화된 4종의 FPV19D01-70P 변이주, FCV17D03-50P 변이주, FCV17D283-80P 변이주 및 FHV191071-100 변이주를 항원으로 하고 2종의 애쥬번트, 카보폴(Carbopol 974 PNF polymer) 및 리하이드로겔(Rehydragel)을 이용하여 시험백신을 제조하였다.
애쥬번트로 카보폴을 이용한 경우, 카보폴 2 g을 증류수 94 ml에 넣고 1시간 동안 교반한 후 온도를 70℃까지 상승시켜 완전히 녹였다. 이때 1 N NaOH 6 ml를 넣고 중화시켜서 겔을 형성시켰다. 이렇게 제작한 카보폴은 20 mg/ml에 해당하며 멸균시킨 후 상온에 준비한 다음, 카보폴:FPV19D01-70P 변이주:FCV17D03-50P 변이주:FCV17D283-80P 변이주:FHV191071-100 변이주 항원을 각각 10:40:15:15:20(%v/v)로 혼합하여 카보폴의 최종 농도가 2 mg/ml이 되도록 시험 혼합 백신을 제조하였다.
애쥬번트로 리하이드로겔을 함유한 시험백신은 알루미늄 하이드록사이드 겔(Aluminum hydroxide gel; Rehydragel LV, CHEMTRADE LOGISTICS) 10% 를 준비하여, 알루미늄 하이드록사이드 겔:FPV19D01-70P 변이주:FCV17D03-50P 변이주: FCV17D283-80P 변이주:FHV191071-100P 변이주 항원을 각각 10:40:15:15:20(%v/v)로 혼합하여 시험 혼합 백신을 제조하였다.
4-2. 애쥬번트에 따른 항체가 확인
실시예 4-1에서 제조한, 카보폴을 함유하는 시험 혼합 백신 및 리하이드로겔을 함유하는 시험 혼합 백신을 각각 마우스 5두에 0.5 ml씩 1차 근육 접종 후 2주 뒤에 동일한 양을 2차 근육 접종하였다. 2차 접종 2주 후에 마우스로부터 혈액을 채취하여 4종 바이러스에 대한 항체가를 검사하였다. 항체가는 백신 접종을 하지 않은 마우스와 비교하였다.
도 7을 살펴보면 리하이드로겔을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 마우스 혈청에서 범백혈구감소증 바이러스 FPV19D01주에 대한 혈구응집억제가는 10*24.6 (242배), 칼리시 바이러스 FCV17D03주에 대해서는 27.6 (194배), 칼리시 바이러스 FCV17D28주에 대해서는 27.5 (181배), 허피스 바이러스 FHV191071주에 대해서는 21.3 (2.5배)의 항체가를 나타내었다.
카보폴을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 마우스 혈청에서는 범백혈구감소증 바이러스 FPV19D01주에 대한 혈구응집억제가는 10*23.5 (113배), 칼리시 바이러스 FCV17D03주에 대하여는 27.4 (168.9배), 칼리시 바이러스 FCV17D28주에 대하여는 28.0 (256배), 허피스 바이러스 FHV191071주에 대하여는 22.4 (5.3배)의 항체가를 나타내었다.
추가로, 상기 카보폴을 함유하는 시험 혼합 백신 및 리하이드로겔을 함유하는 시험 혼합 백신을 각각 기니픽 5두에 1 ml씩 1차 근육 접종 후 2주 뒤에 동일한 양을 2차 근육 접종하고 2차 접종 2주 후에 3차 접종을 실시하였다. 그 다음 접종 전, 1차 접종 2주차, 2차 접종 2주차, 2차 접종 4주차 및 3차 접종 2주차에 기니픽으로부터 혈액을 채취하여 4종 바이러스에 대한 항체가를 검사하였다. 백신 미접종 대조군으로부터 채혈한 기니픽 혈청과 함께 비교하였다.
도 8을 살펴보면 리하이드로겔을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서 범백혈구감소증 FPV19D01주에 대한 혈구응집억제가는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*25.6 (485배), 10*26.0 (640배) 및 10*26.4 (844.5배)로 상승하였다. 또한 카보폴을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서 범백혈구감소증 바이러스 FPV19D01주에 대한 혈구응집억제가는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*26.4 (844배), 10*26.0 (640배) 및 10*26.8 (1,114배)로 상승하였다.
도 9a를 살펴보면 칼리시 바이러스 FCV17D03주에 대해서는 리하이드로겔을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*26.4 (84.4배), 10*25.2 (36.7배) 및 10*27.0 (128배)의 항체가를 나타냈고, 카보폴을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*25.2 (36.7배), 10*25.6 (48.5배) 및 10*27.5 (181배)의 항체가로 상승하였다.
도 9b를 살펴보면 칼리시 바이러스 FCV17D28주에 대해서는 리하이드로겔을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*23.6 (12.1배), 10*25.2 (36.7배) 및 10*26.0 (64배)의 항체가를 나타냈고, 카보폴을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*26.4 (84.5배), 10*25.8 (55.7배) 및 10*27.4 (168.9배)의 항체가로 상승하였다.
도 10을 살펴보면 허피스 바이러스 FHV191071주에 대해서는 리하이드로겔을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*21.2 (2.3배), 10*20.6 (1.5배) 및 10*22.6 (6.1배)의 항체가를 나타냈고, 카보폴을 함유한 시험 혼합 백신을 접종한 기니픽 혈청에서는 2차 접종 2주차(x축 4), 2차 접종 4주차(x축 6) 및 3차 접종 2주차(x축 8)에 각각 10*20.4 (1.3배), 10*20.4 (1.3배) 및 10*24.0 (16배)의 항체가로 상승하였다.
4-3. 4종 변이주 혼합 백신의 면역원성 평가
실시예 4-2를 통해 4종의 바이러스에 대해 항체가가 상대적으로 높게 나타난 카보폴을 함유하는 시험 혼합 백신을 선발하고 상기 혼합 백신의 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 및 허피스 바이러스에 대한 면역원성을 평가하였다.
4 개월령 고양이 6두에 1 ml씩 1차로 피하 접종하고 2주 후에 2차 피하 접종을 실시하였다. 2차 접종 시행 후 42일간 임상을 관찰한 결과는 특이소견 없이 정상을 나타냈다. 접종 전(0, 파란색), 2차 접종 2주차(4, 주황색), 2차 접종 4주차(6, 검은색)에 혈액을 채취하였고, 수득한 혈청에서 고양이 범백혈구감소증 바이러스에 대하여는 혈구응집억제가(도 11)를 측정하고, 2종의 칼리시 바이러스 및 허피스 바이러스에 대하여는 중화시험(도 12 및 도 13)을 수행하였다.
도 11을 살펴보면, 2차 접종 4주차(6, 검은색)의 혈청은 범백혈구감소증 바이러스 FPV19D01주에 대한 혈구응집억제가가 10*25.3 (393.9배)의 항체가를 나타내었다.
또한 도 12a 및 도 12b를 살펴보면 2차 접종 4주차(6, 검은색)의 혈청은 칼리시 바이러스 FCV17D03주 및 FCV17D283주에 대한 중화항체가가 각각 26.0 (55.7배), 27.7 (207.9배)로 나타났고, 도 13에서 보는 바와 같이 2차 접종 4주차(6, 검은색)의 혈청은 허피스 바이러스 FHV191071주에 대한 중화항체가는 21.8(3.5배)를 나타내었다.
이러한 결과로 범백혈구감소증 바이러스 FPV19D01-70P 변이주, 칼리시 바이러스의 FCV17D03-50P 변이주 및 FCV17D283-80P 변이주 그리고 허피스 바이러스 FHV191071-100P 변이주 4종의 항원을 이용한 불활화 혼합 백신을 고양이에 접종하였을 경우 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 고양이 칼리시 바이러스 또는 고양이 허피스 바이러스에 대해 중화항체를 형성할 수 있음을 확인하였다.
4-4. 4종 변이주 혼합 백신의 접종 효능평가
실시예 4-3에서 카보폴을 함유하는 시험 혼합 백신을 2회 접종한 고양이 6두 중 1두는 백신접종에 따른 육안적 부검소견을 확인하기 위하여 부검하였다. 육안적 소견으로 소장, 폐, 간 등 모든 장기에서 정상을 나타내었다.
상기 고양이 6두 중 5두에 대하여는 2차 접종 후 2주차에 미국의 미생물 및 세포 은행 (American type culture collection: ATCC)에서 구입한 고양이 범백혈구감소증 바이러스(ATCC VR-648), 고양이 칼리시 바이러스(ATCC VR-782) 및 고양이 허피스 바이러스(ATCC VR-636)를 각각 107.3 TCID50/㎖ 함량으로 공격 접종하였다. 범백혈구감소증 바이러스는 경구로, 칼리시 바이러스와 허피스 바이러스는 비강으로 0.5 ml씩 각각 투여하고 14일간 임상증상을 확인한 결과를 표 8에 나타냈다.
| 바이러스 | 관찰항목 | 공격 접종 후 임상증상 | |||||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | ||
| 범백혈구 감소증 바이러스 (5두) |
폐사 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N |
| 침울 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 구토 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 탈수 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 설사 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 체중감소 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 식욕저하 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 칼리시 바이러스 (5두) |
폐사 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N |
| 침울 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 궤양 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 비루 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 안루 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 구내염 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 식욕저하 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 허피스 바이러스 (5두) |
폐사 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N |
| 침울 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 설염 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 비루 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 기침 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 재채기 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
| 안루 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | |
표 8에 나타난 바와 같이, 4종 변이주 혼합 백신을 접종한 고양이 5두는 모두 고양이 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스, 허피스 바이러스 감염의 전형적인 증상인 설사나 비루, 구내염, 눈물 등의 증상을 나타내지 않았다.
공격 접종 후 14일까지 임상관찰을 실시하고 15일째에 모두 부검을 실시하였을 때 육안적 부검소견을 확인한 결과 소장, 구강, 혀, 폐 등에 특이한 소견을 나타내지 않고 모두 정상을 나타냄을 확인하였다.
Claims (20)
- 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는,
고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방용 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열에서 101번째 아미노산이 이소류신(I), 231번째 아미노산이 이소류신(I) 및 562번 아미노산이 류신(L)인 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열에서 150번째 아미노산이 발린(V), 205번째 아미노산이 트레오닌(T), 427번째 아미노산이 아스파르트산(D) 및 667번째 아미노산이 이소류신(I)인 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주는 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열에서 48번째 아미노산이 시스테인(C), 241번째 아미노산이 이소류신(I), 245번째 아미노산이 글루타민(Q), 246번째 아미노산이 세린(S), 249번째 아미노산이 메티오닌(M), 252번째 아미노산이 타이로신(Y), 268번째 아미노산이 트레오닌(T), 273번째 아미노산이 아르기닌(R), 280번째 아미노산이 메티오닌(M), 285번째 아미노산이 트레오닌(T), 406번째 아미노산이 발린(V), 435번째 아미노산이 아스파르트산(D), 441번째 아미노산이 발린(V), 497번째 아미노산이 아스파르트산(D), 519번째 아미노산이 글루탐산(E)인 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 변이주는 모두 계대 배양 시 20 내지 60초 동안 자외선(UV)에 노출된 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 변이주는 모두 불활화된 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주 : 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주는 4 : 1.5 : 1.5 : 2의 부피비로 혼합되는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 애주번트를 더 포함하는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제11항에 있어서, 상기 애주번트는 리하이드로겔(Rehydragel), IMS1313, 몬타나이드 01 겔(Montanide 01 gel), ISA206, ISA70 및 카보폴(Carbopol 974 PNF polymer)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것인, 혼합 백신 조성물.
- 제11항에 있어서, 상기 애주번트는 혼합 백신 조성물 중량에 대하여 5 내지 20(w/v)%로 포함되는 것인, 혼합 백신 조성물.
- 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는,
고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 약학 조성물.
- 제14항에 있어서, 상기 조성물은 구토, 탈수, 발열, 설사, 궤양, 장염, 비루, 안루, 구내염, 결막염, 피부염, 비염, 콧물, 기침, 재채기, 설염, 침울, 식욕저하, 및 체중감소로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 임상증상을 경감시키는 것인, 약학 조성물.
- 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는,
고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 사료 조성물.
- 수탁번호 KCTC 18984P로 기탁된 범백혈구감소증 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18985P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 수탁번호 KCTC 18986P로 기탁된 칼리시 바이러스 변이주; 및 수탁번호 KCTC 18987P로 기탁된 허피스 바이러스 변이주; 를 포함하는,
고양이의 범백혈구감소증, 칼리시감염증 또는 허피스감염증 예방 또는 경감용 사료 첨가제.
- 제1항의 혼합 백신 조성물을 고양이과 동물에게 투여하는 단계; 를 포함하는, 고양이의 범백혈구감소증 바이러스, 칼리시 바이러스 또는 허피스 바이러스 예방접종 방법.
- 제18항에 있어서, 상기 투여는 복강내 투여, 근육내 투여, 경구 투여, 비강 투여, 피하 투여, 국소 투여 또는 침지 투여인 것인, 예방접종 방법.
- 제18항에 있어서, 상기 고양이과 동물은 2개월령 내지 4개월령의 고양이인 것인, 예방접종 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220086649A KR20240010589A (ko) | 2022-07-14 | 2022-07-14 | 고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220086649A KR20240010589A (ko) | 2022-07-14 | 2022-07-14 | 고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240010589A true KR20240010589A (ko) | 2024-01-24 |
Family
ID=89717941
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220086649A KR20240010589A (ko) | 2022-07-14 | 2022-07-14 | 고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240010589A (ko) |
-
2022
- 2022-07-14 KR KR1020220086649A patent/KR20240010589A/ko unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104862286B (zh) | 猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| Sedeik et al. | Comparative efficacy of commercial inactivated Newcastle disease virus vaccines against Newcastle disease virus genotype VII in broiler chickens | |
| KR0171434B1 (ko) | 인체 로타바이러스, 백신 및 방법 | |
| US20220088187A1 (en) | Recombinant non-pathogenic marek's disease virus constructs encoding multiple heterologous antigens | |
| CN105018433B (zh) | 猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| US20240123057A1 (en) | Recombinant Non-Pathogenic Marek's Disease Virus Constructs Encoding Infectious Laryngotracheitis Virus and Infectious Bursal Disease Virus Antigens | |
| CN102221618B (zh) | 猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建及疫苗的制备方法 | |
| CN102727884A (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病二联活疫苗及其制备方法 | |
| CN113943714A (zh) | 一种猫杯状病毒毒株及其应用 | |
| CN107828741B (zh) | 伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株及其应用 | |
| CN113073083B (zh) | 犬细小病毒弱毒株、及其制备的疫苗组合物和应用 | |
| CN105802921B (zh) | 表达猪瘟病毒e2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其构建方法和应用 | |
| EP3960850A1 (en) | Attenuated african swine fever virus with deleted gene and use of same as vaccine | |
| KR102365045B1 (ko) | 부유세포 배양에 적응된 O/ME-SA/Ind-2001 유전형 구제역 바이러스 백신주 및 이의 제조방법 | |
| KR20240010589A (ko) | 고양이 바이러스 감염 질병의 예방 또는 경감용 조성물 및 이의 용도 | |
| WO2019068905A2 (en) | FELINE VACCINES CONFERRING EARLY PROTECTION | |
| WO2014167582A2 (en) | Vaccine composition for prophylaxis in ruminants | |
| CN114921422A (zh) | 一种犬源猫细小病毒分离株及其应用 | |
| JP5946453B2 (ja) | 変異狂犬病ウイルス及びワクチン | |
| KR100790801B1 (ko) | 동물용 불활화 백신의 제조방법 | |
| WO2020115329A1 (en) | A recombinant koi herpesvirus (khv) and a diva vaccine for preventing and/or treating a disease caused by khv | |
| KR102365039B1 (ko) | 부유세포 배양에 적응된 A/ASIA/Sea-97 유전형 구제역 바이러스 백신주 및 이의 제조방법 | |
| KR102656435B1 (ko) | 신규한 가금 아데노바이러스 및 이를 유효성분으로 포함하는 가금 아데노바이러스 다가백신 | |
| CN116286679B (zh) | 一株经分离得到的猪流行性腹泻病毒变异株及其应用 | |
| KR102091372B1 (ko) | 엔테로바이러스 71형 불활화 백신 및 이의 용도 |