KR20240010119A - 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물 - Google Patents
아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백에 우수한 효과를 보이는 조성물을 제공한다. 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1 활성을 억제하고, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제함에 따라 미백 효과를 발휘하므로 미백용 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 아로니아(Aronia melanocarpa) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부, 모발, 눈동자의 색은 멜라닌의 양에 의해 결정된다. 멜라닌(melanin)은 동물, 식물, 미생물 등에서 발견되는 검은 색소로 생육이나 발달에 필수적이지 않지만 특정 환경에 대한 생존력과 경쟁력을 높여주는 물질이다. 동물에서의 멜라닌은 피부병, 악성 멜라노마(melanoma)와 관계가 있으며, 티로시나제(tyrosinase)에 의해 타이로신(tyrosine)으로부터 생산되는 도파 멜라닌 이외에도 DHN 멜라닌, GDHB 멜라닌, 카테콜 멜라닌 등이 보고된바 있다.
멜라닌이 과잉생산되면 이를 피부 밖으로 내보내면서 국소 부위에서 기미가 생성되거나, 피부가 어두워진다. 피부에 멜라닌이 과도하게 침착되는 것을 방지하고, 피부 내 색소함량을 줄이기 위한 다양한 미백방법이 주목 받고 있으며, 자외선 차단, 멜라닌 색소를 신속하게 표백(bleaching) 시키는 방법, 생합성된 멜라닌이 멜라노좀에 실려 각질형성세포로 전단되는 단계를 차단하는 방법, 멜라닌 생합성의 속도결정 단계인 티로시나제 활성을 억제하는 방법, 멜라닌형성세포의 세포막으로부터 티로시나제 활성 및 생합성 촉징을 유도하는 신호전달을 차단하는 방법, 멜라닌 생성 세포에 특이적으로 독성을 나타내는 물질을 투여하는 방법 등이 있다(Son KH et al., Int J Cosmeti Sci. 35: 9-18, 2013).
현재까지 멜라닌 합성의 중요한 인자로 알려져 있는 티로시나제를 억제하는 대포적인 물질로는 알부틴(arbutin), 코직산(kojic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone), 비타민 C(vitamin C) 등이 있으며, 특히 알부틴은 티로시나아제 활성 억제 기능과 더불어 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid(DHICA) polymerase 활성으로 인한 멜라노좀 생성 억제 효과도 가지고 있다고 알려져 있다. 하지만 이들 물질들의 안정성 및 안전성에 대한 문제점, 그리고 부작용에 대한 논란은 계속되고 있다.
한편, 본 발명자는 부작용 우려가 낮은 천연물인 아로니아의 미백효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백 효과가 우수한 조성물을 제공하고자 한다. 본 발명의 조성물은 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명은 아로니아(Aronia melanocarpa) 추출물을 발효한 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 추출물은, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, 바람직하게는 아로니아 추출물에 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 접종하여 발효한 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 락토바실러스 람노서스는, 더욱 바람직하게는 콜라겐 코팅된 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, 바람직하게는 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 억제하는 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, 바람직하게는 TRP-1 활성을 억제하는 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, 바람직하게는 MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제하는 것이 좋다.
또한, 본 발명은 아로니아(Aronia melanocarpa) 추출물을 발효한 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백 효과가 우수한 조성물을 제공한다. 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1 활성을 억제하고, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제함에 따라 미백 효과를 발휘하므로 미백용 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성을 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 ABTS 라디칼 소거활성을 확인한 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 CCD-986sk 세포에 대한 독성실험 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 B16F1 세포에 대한 독성실험 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 웨스턴 블롯 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 B16F1 cell pelet의 색을 관찰한 도이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 PCR 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 콜라겐 함량을 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 ABTS 라디칼 소거활성을 확인한 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 CCD-986sk 세포에 대한 독성실험 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물의 B16F1 세포에 대한 독성실험 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 웨스턴 블롯 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 B16F1 cell pelet의 색을 관찰한 도이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 PCR 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 아로니아 발효 추출물 처리에 따른 콜라겐 함량을 확인한 도이다.
본 발명은 아로니아(Aronia melanocarpa) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물을 제공한다.
아로니아(Aronia melanocarpa)는 장미과에 속하는 베리류의 식물열매로, 초크베리(chokeberry)라고도 한다. 아로니아 열매에는 안토시아닌, 카테킨, 폴리페놀류 등이 다른 베리류에 비해 다량 포함되어 있으며, 특히 안토시아닌 함량은 블루베리의 5배에 달하는 것으로 보고된바 있다. 또한 아로니아는 비타민, 엽산, 퀴닌산, 페놀산, 칼슘, 철분, 아연, 칼륨 등 다양한 성분을 포함하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, DPPH 라디칼 소거활성, ABTS 라디칼 소거활성에 따른 항산화 효과가 있으며, 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제, TRP-1 활성 억제, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor) 발현 억제 효과에 따른 미백효과가 우수하다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 추출물은, 추출용매로 에탄올을 이용하는 것이 좋으며, 바람직하게는 60 내지 80 %(v/v) 에탄올을 이용하여 추출하는 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 70 %(v/v) 에탄올을 이용하여 추출하는 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 아로니아 발효 추출물은, 상기 아로니아 추출물에 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 균주를 접종하여 발효한 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) 균주를 이용하여 발효하는 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 락토바실러스 람노서스는, 바람직하게는 콜라겐 코팅된 것이 좋으며, 이에 따라 락토바실러스 람노서스의 생존율, 저장안정성, 내산성을 증가시킬 수 있다. 즉, 본 발명은 생존율, 저장안정성, 내산성이 증가된 락토바실러스 람노서스를 이용함에 따라 아로니아 추출물을 더욱 효과적으로 발효할 수 있다.
본 발명에 따른 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 아로니아(Aronia melanocarpa)로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 상기 아로니아로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 식품학/약학/화장품학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(Methanol), 에탄올(Ethanol), 프로판올(Propanol), 이소프로판올(Isopropanol), 부탄올(Butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법, 고온고압추출법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.
본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
또한 본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화 되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알콜 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강 기능성 식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강 기능성 식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강 기능성 식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀 기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
<실시예 1> 아로니아 발효 추출물의 제조
1-1. 아로니아 추출물 제조
아로니아를 흐르는 물에 세척하고 오븐에 완전건조한 뒤, 파우더 형태로 분쇄하였다. 아로니아 파우더 100 g을 70 %(v/v) 에탄올 4 L로 48시간 추출한 뒤 감압농축하여 아로니아 추출물을 제조하였다.
1-2. 아로니아 발효 추출물 제조
락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus, 생물자원센터 KCTC)를 2회 계대 후 활성형 상태에서 콜라겐을 코팅하고 동결건조하였다. 콜라겐이 코팅된 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 상기 실시예 1-1에서 제조한 아로니아 추출물 전체 중량에 대하여 4 중량% 접종하고 셰이커(shaker)에서 24시간 배양한 뒤, 3 ㎛ 필터로 3회 여과 후 감압농축 및 동결건조하여 분말 형태의 아로니아 발효 추출물을 제조하였다. 하기 실험에서는 아로니아 발효 추출물을 다양한 농도로 제조하여 사용하였다.
<실험예 1> 아로니아 발효 추출물의 DPPH radical 소거활성 확인
실시예 1의 아로니아 발효 추출물을 2, 3, 4 및 5 mg/㎖ 농도로 제조하였다. 96 well plate에 아스코르브산(ascorbic acid), 아로니아 발효 추출물, EtOH, MeOH, DPPH 순으로 각각 80 ㎕씩 분주하였다. 분주를 마친 plate는 빛이 들지 않는 곳에서 30분 동안 shaking 한 뒤, 517nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 1에서 보듯이, 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 농도의존적으로 DPPH 라디칼 소거활성이 증가하여, 항산화효과를 확인하였다.
<실험예 2> 아로니아 발효 추출물의 ABTS radical 소거활성 확인
7 mM ABTS 2 ㎖와 2 mM potassium persulfate(K2S2O8) 2 ㎖를 혼합 후 foil로 감싸 빛을 차단한 뒤, 15 시간 후 사용하였다. 큐벳을 이용하여 pH 7.4의 PBS와 ABTS 용액을 혼합하여 743 ㎚에서 흡광도 값이 0.7 ± 0.02 이 되도록 조절하였다. ABTS 혼합용액과 본 발명의 아로니아 발효 추출물을 1 mg/㎖를 처리한 뒤 암실에서 24시간 반응시켰다. 대조군으로 아스코르브산 1 mg/㎖를 처리하였다.
도 2에서 보듯이, 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 대조군인 아스코르브산 1mg 처리를 100%로 하여 비교한 결과, 아로니아 발효 추출물은 농도의존적으로 ABTS 라디칼 소거활성이 증가하여, 항산화 효과를 확인하였다.
<실험예 3> 아로니아 발효 추출물의 피부세포에 대한 독성 확인
실시예 1의 아로니아 발효 추출물을 10, 20, 25, 50, 100, 250, 500 및 800 ㎍/㎖로 제조하였다. CCD-986sk 세포는 휴먼섬유아세포이며, B16F1 세포는 마우스 흑색종 암세포이다. CCD-986sk, B16F1을 각각 10 % fetal bovine serum이 포함된 DMEM 배지를 사용하여 CO2 incubator에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다. 이를 현미경으로 관찰하여 세포가 분화된 것을 확인하였다.
CCD-986sk, B16F1세포를 DMEM 배지를 이용하여 2 × 105/well로 96 well plate에 시딩(seeding)하고, 다양한 농도의 아로니아 발효 추출물을 처리하였다. 24시간 배양한 뒤, MTT 용액을 처리하고 2시간 배양하였다. MTT-formazan 생성물은 DMSO를 첨가하여 용해시켰고, formazan의 양은 용해액을 96 well plate에 로딩한 후, 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
도 3에 아로니아 발효 추출물의 CCD-986sk 세포에 대한 독성 실험 결과를, 도 4에 아로니아 발효 추출물의 B16F1 세포에 대한 독성 실험 결과를 나타내었다. 도 3 및 도 4에서 보듯이, 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 다양한 농도에서 치명적인 독성이 확인되지 않았다.
<실험예 4> 아로니아 발효 추출물의 미백효과 확인(웨스턴 블롯)
B16F1 세포를 100파이 dish에 시딩(seeding)하고 18시간 인큐베이션 하였다. α-MSH(100 nM, negative control)과 본 발명의 아로니아 발효 추출물(50, 100, 250 ㎍/㎖), 양성 대조군(positive control)으로 알부틴(albutin, 10 mM)을 처리하고, CO2 incubator에서 37℃, 5% CO2 조건으로 48시간 배양하였다. 배양 상층액을 제거하고 PBS로 2회 세척한 뒤 단백질을 회수 및 정량하여 웨스턴 블롯을 수행하였다.
웨스턴 블롯은 pro-prep을 이용하여 세포질과 핵 단백질을 추출하고, 10 % SDS-폴리아크릴아미드 겔로 분리하여 단백질을 추출하였다. PVDF 막으로 전이시킨 후 5 % BSA로 blocking 시켰다. 각 단백질에 대한 1차 항체를 1시간동안 반응시킨 후 TST 용액으로 2회 세척하고, HRP(horse radish peroxidase)가 결합된 각 2차 항체를 60분간 반응시켰다. 반응 후 ECL 시약을 사용하여 가시화하였다. 도 5에 웨스턴 블롯 결과를 나타내었다.
본 발명의 아로니아 발효 추출물은 티로시나아제(tyrosinase)와 TRP-1의 활성을 억제 또는 저해하였다.
또한, 상기 CO2 incubator에서 37℃, 5% CO2 조건으로 48시간 배양하여 수득한 배양물의 상층액을 제거하고 PBS로 2회 세척한 뒤 세포를 모아 원심분리한 뒤 cell pelet을 회수하여 외관의 색을 관찰한 결과를 도 6에 나타내었다. 본 발명의 아로니아 발효 추출물 처리에 따라 B16F1 cell pelet의 색이 옅어지는 것을 확인하였다.
<실험예 5> 아로니아 발효 추출물의 미백효과 확인(RT-PCR)
B16F1 세포를 100파이 dish에 시딩(seeding)하고 18시간 인큐베이션 하였다. 아로니아 발효 추출물(250, 500 ㎍/㎖)을 전처리한 뒤, α-MSH(100 nM)로 자극한 후 48시간 배양하였다. 이후 PBS로 2회 세척한 뒤 PBS 1 ㎖를 가하여 세포를 포집하고, 원심분리하여 상층 PBS를 제거하였다. 남은 침전물을 TRIzol (invitrogen, USA) 1 ㎖를 혼합하여 세포를 용해시킨 후, 100 ㎕의 클로르포름(chloroform) 용액을 가하고 혼합한 뒤 15,000 rpm에서 20분간 원심 분리하여 맨 위의 상층액을 취한다. 그 후 2-propanol과 1:1로 섞은 뒤 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 남은 침전물을 75 %(v/v) 에탄올로 2회 세척하고 건조시켰다. 이후 DEPC 처리한 증류수를 50 ㎕씩 넣어 RNA를 용해시키고 정량하였다. RNA는 cDNA로 합성하였으며, 역전사 반응을 위해 total RNA 1 mg에 oligo-(dT) 0.5 mg을 넣고 70 ℃에서 10시간 변성시켰다. PCR은 92 ℃에서 30초, 57 ℃에서 45초, 72 ℃에서 30초를 40 cycle로 하였다.
도 7에 실험 결과를 나타내었다. 본 발명의 아로니아 발효 추출물은 TRP-1의 활성을 억제하였으며, 멜라닌 생성에 관여하는 유전자인 MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제하여 멜라닌 생성을 근본적으로 차단할 수 있었다.
<실험예 6> 아로니아 발효 추출물의 콜라겐 함량 확인
실시예 1의 아로니아 발효 추출물을 0.5, 1, 2 mg/㎖ 농도로 제조하였다. CCD-98sk 세포에 아로니아 발효 추출물을 처리한 뒤 24시간 후 Human Pro-Collagen I alpha 1 ELISA Kit를 이용하여 확인하였다.
도 8에서 보듯이, 본 발명의 아로니아 발효 추출물 처리에 따라 콜라겐 함량이 증가하는 것으로 나타났다. 피부는 노화에 따라 색소 침착이나 기능 저하가 유발될 수 있는데, 본 발명의 아로니아 발효 추출물 처리에 따라 콜라겐 함량이 증가되면 피부 노화가 억제되어 색소 침착이 억제될 수 있다.
Claims (8)
- 아로니아(Aronia melanocarpa) 추출물을 발효한 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 아로니아 추출물은,
물, 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 아로니아 발효 추출물은,
아로니아 추출물에 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 접종하여 발효한 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 제3항에 있어서,
상기 락토바실러스 람노서스는,
콜라겐 코팅된 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 아로니아 발효 추출물은,
티로시나아제(tyrosinase) 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 아로니아 발효 추출물은,
TRP-1 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 아로니아 발효 추출물은,
MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
- 아로니아(Aronia melanocarpa) 추출물을 발효한 아로니아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 건강기능식품 조성물.
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|---|---|---|---|---|
| KR20190000615A (ko) | 2017-06-23 | 2019-01-03 | 순천대학교 산학협력단 | 항산화 활성을 갖는 아로니아 분말 및 이의 제조방법 |
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