KR20240009981A - 아미노산, 뉴클레오티드 및 이를 발현하는 벡터, 및 사르베코바이러스 감염을 예방하는 데에 있어서의 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본원에는 a. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 아미노산 서열을 비교하는 단계; b. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 서열에서 동일한 아미노산을 확인하는 단계; c. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편의 서열로부터 임의의 상이한 아미노산을 제거하여 특유의 아미노산 서열을 확인하는 단계; 및 특유의 아미노산 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계로서, 여기서 아미노산 작제물이 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 것인 단계를 포함하는, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 아미노산 작제물을 제조하는 방법이 개시된다. 또한, 본 발명의 방법을 사용하여 생성된 아미노산 서열이 개시된다.
Description
관련 출원에 대한 참조
본 출원은 2021년 5월 15일에 출원된 싱가포르 특허 출원 번호 10202105099S를 우선권 주장하며, 이 출원의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 개시내용은 일반적으로 중증 급성 호흡기 증후군(Severe Acute Respiratory Syndrome) (SARS)-관련 코로나바이러스 감염, 특히 사르베코바이러스(sarbecovirus)의 치료 및/또는 예방에서 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 배경에 대한 다음의 논의는 단지 본 발명의 이해를 용이하게 하기 위한 것이다. 논의는 언급된 자료 중 임의의 것이 본 발명의 우선일 현재 어떤 관할권에서든 관련 기술분야의 통상의 기술자의 공개된, 공지된 또는 통상적인 일반 지식의 일부였음을 인정하거나 승인하는 것이 아니라는 것을 인식하여야 한다.
2002년 이후, 코로나바이러스 (CoV)에 의해 유발된 세 가지 주요 인간 감염성 질환, 2002-2003년에 SARS 코로나바이러스 (SARS-CoV) (Peiris et al. Nat Med 2004, 10:S88-97), 2012년 이후 중동 호흡기 증후군(Middle East Respiratory Syndrome) 코로나바이러스 (MERS-CoV) (Zaki et al. N Engl J Med 2012, 367:1814-1820) 및 진행중인 COVID-19 또는 SARS 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2) (Wang et al. Lancet 2020, 395:470-473)를 가졌다. 이들 질환 모두는 전 세계적으로 막대한 경제적 및 인적 손실을 유발하였다. SARS 및 MERS의 경우, 미래 감염에 대해 인류를 보호하는 허가된 백신을 여전히 갖고 있지 않다. SARS-CoV-2의 경우, 백신 개발의 전례 없는 속도는 인간용으로 많은 허가된 백신을 초래하였다 (Fauci, Science 2021, 372:109).
그러나, 최근 영국에서 검출된 SARS-CoV-2 변이체 예컨대 SARS-CoV-2 B.1.1.7/20I/501Y.V1; 남아프리카 SARS-CoV-2 B.1.351/20H/501Y.V2, 브라질 SARS-CoV-2 P.1/20J/501Y.V3/B.1.1.248, 및 미국 SARS-CoV-2 B.1.1427/B.1.429 (Mascola et al. JAMA 2021, 325:1261-1262; Zhang et al. JAMA 2021, 325(13):1324-1326)의 출현 및 원래 바이러스 균주를 기반으로 한 백신으로부터의 새로운 변이체에 대한 면역 보호의 관찰된 감소는 모든 알려진 및 미래의 SARS-CoV-2 변이체에 대한 폭넓은 효능을 지닌(broad-spectrum) 보호의 필요성에 대한 새로운 도전과제를 제기하였다.
더욱이, 야생 병원소(reservoir) 예컨대 박쥐의 SC2r-CoV RaTG13 및 천산갑(pangolin)의 SC2r-CoV GX-P5L에는 더 많은 코로나바이러스가 순환하고 있다 (Wang et al. Curr Opin Virol 2019, 34:79-89; Zhou et al. Nature 2020, 579:270-273; Lam et al. Nature 2020, 583:282-285).
또한, 상이하나 관련된 코로나바이러스에 의해 유발된 미래 발병 (SARS3, SARS4 등)의 가능성이 높다 (Calistri et al. Microorganisms 2021, 9).
코로나바이러스의 현재 분류는 도 1에 나타냈다. 4 가지의 속, 알파, 베타, 델타 및 감마가 확인되어 있다. 인간 감염에 가장 전염성 있는 바이러스는 사르베코바이러스 그룹으로부터 것들이다. 또한, 모든 사르베코바이러스가 안지오텐신-전환 효소 2 (ACE2)를 인간 숙주 세포로의 진입 수용체로서 사용하는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 사르베코바이러스에 의해 유발되는 현재 및 임의의 미래 감염의 치료 및/또는 예방용 예방적 또는 치료적 백신에 대한 필요성이 존재한다.
사르베코바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하는데 사용되는 아미노산 서열을 함유하거나 발현하는 아미노산 작제물(amino acid construct), 뉴클레오티드, 벡터 및 면역원성 조성물이 구상된다.
본 개시내용의 측면에 따르면, 서열번호: 10 내지 22, 164 및 165를 포함하는 군으로부터 선택된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 아미노산 작제물로서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질(sarbecovirus Spike proteins), 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 아미노산 작제물이 제공된다.
또 다른 측면에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물을 코딩(encoding)하는 핵산이 있다.
또 다른 측면에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물 또는 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산을 포함하는 면역원성 조성물이 있다.
또 다른 측면에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산을 포함하는 바이러스 벡터(viral vector)가 있다.
또 다른 측면에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 바이러스 벡터 또는 사르베코바이러스 감염의 치료 또는 예방에서 사용하기에 적합한 백신 제제가 존재한다.
또 다른 측면에 따르면, 사르베코바이러스 감염의 치료 또는 예방용 의약(medicament)의 제조에서 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 바이러스 벡터의 용도가 있다.
또 다른 측면에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물, 또는 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 바이러스 벡터를 포함하는 백신 분자를 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는, 사르베코바이러스에 의해 유발된 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법이 있다.
또 다른 측면에 따르면, a) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 아미노산 서열을 비교하는 단계; b) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 서열에서 동일한 아미노산을 확인하는 단계; c) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편의 서열로부터 임의의 상이한 아미노산을 제거하여 특유의 아미노산 서열을 확인하는 단계; 및 d) 특유의 아미노산 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계로서, 여기서 아미노산 작제물이 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질, 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 것인 단계를 포함하는, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물을 제조하는 방법이 있다.
본 발명의 다른 측면 및 특색은 첨부된 도면과 함께 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 다음의 설명을 검토하면 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 것이다.
단지 예로서 본 발명의 실시양태를 예시하는 도면에서,
도 1은 네 가지의 공지된 코로나바이러스 속의 가계도를 예시한다;
도 2는 계통발생 관계(phylogenetic relationship) 및 ACE2 수용체 용법을 고려하여 확립된 컨센서스(consensus) 그룹을 예시한다;
도 3은 아미노산 컨센서스 서열을 생성하기 위한 설계 방법을 예시한다;
도 4는 Nab의 신속한 멀티플렉스(multiplex) 결정을 허용한 대용 바이러스 중화 시험(surrogate virus neutralization test) (sVNT)을 예시한다;
도 5는 B) 여섯 가지의 RBD 단백질이 다음의 순서 (높은 친화도로부터 낮은 친화도까지)로 hACE2 수용체 분자에 결합가능함을 나타내는 A) 루미넥스(Luminex) 플랫폼 상에서의 멀티플렉스 sVNT를 예시한다: SARS-CoV-2 B.1.351 > SARS-CoV-2 B.1.1.7 = SC2r-CoV GX-P5L (천산갑) > SARS-CoV-2 > SARS-CoV > SC2r-CoV RaTG13 (박쥐);
도 6은 여섯 가지의 상이한 RBD (좌측에서 우측으로: SARS-CoV-2 WT, B.1.1.7, B.1.351; 박쥐 바이러스 RaTG13; 천산갑 바이러스 GX-P5L; SARS-CoV) 상에서의 멀티플렉스 sVNT를 예시한다. A) SARS 환자 (N=11); B) COVID-19 환자 (N=40); C) 건강-백신접종 (N=20). 혈청 샘플은 두 번째 용량 후 2주에 채취되었으며; D) SARS-백신접종 (N=9). SARS 생존자로부터의 혈청은 첫 번째 백신접종 후 21-62일에 채취되었다. 모든 혈청 샘플은 1:20의 단일 희석으로 시험되었다. 이전에 결정된 바와 같이 30%의 컷오프가 설정되었다.
도 7은 여섯 가지의 사르베코바이러스에 대한 상이한 그룹의 중화 항체 수준 (NT50)의 적정을 예시한다. 혈청 샘플은 4배 연속 적정에 의해 1:20에서 1:20480까지 희석하여 시험되었다.
도 8은 SARS 백신접종 그룹에서 범(pan)-사르베코바이러스 교차-중화 항체의 부스팅(boosting) 확인을 예시한다. 도 8A는 멀티플렉스 sVNT에 의해 측정한 SARS-CoV-2 우려 변이체(variants of concern), 박쥐 SC2r-CoV RaTG13, 천산갑 SC2r-CoV GX-P5L 및 SARS-CoV에 대한 mAb 5B7D7의 범-사르베코바이러스 중화를 나타낸다. 도 8B는 네 가지의 상이한 혈청 패널에 의해 상이한 RBD에 결합하는 5B7D7의 억제를 예시한다.
도 9는 상이한 베타 코로나바이러스 RBD 단백질을 표적으로 하는 토끼 고면역(hyper immune) 혈청으로부터의 중화 패턴을 예시한다.
도 10은 2회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온(foldon) 및 링커(linker) 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트(sigma adjuvant) 또는 1회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165) 및 시그마 아주반트에 이어서 1회 용량의 시노박(Sinovac) 백신을 사용한 백신접종 후 상이한 사르베코바이러스의 20개의 RBD를 사용한 시험감염(challenge)을 예시한다.
도 11은 2회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트 또는 1회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트에 이어서 1회 용량의 시노박 백신을 사용한 백신접종 후 상이한 사르베코바이러스의 20개의 RBD를 사용한 시험감염을 예시한다.
도 12는 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 화이자 바이오엔테크(Pfizer BioNTech) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 13은 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 모더나(Moderna) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 14는 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 시노박 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 164 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 1의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 1은 네 가지의 공지된 코로나바이러스 속의 가계도를 예시한다;
도 2는 계통발생 관계(phylogenetic relationship) 및 ACE2 수용체 용법을 고려하여 확립된 컨센서스(consensus) 그룹을 예시한다;
도 3은 아미노산 컨센서스 서열을 생성하기 위한 설계 방법을 예시한다;
도 4는 Nab의 신속한 멀티플렉스(multiplex) 결정을 허용한 대용 바이러스 중화 시험(surrogate virus neutralization test) (sVNT)을 예시한다;
도 5는 B) 여섯 가지의 RBD 단백질이 다음의 순서 (높은 친화도로부터 낮은 친화도까지)로 hACE2 수용체 분자에 결합가능함을 나타내는 A) 루미넥스(Luminex) 플랫폼 상에서의 멀티플렉스 sVNT를 예시한다: SARS-CoV-2 B.1.351 > SARS-CoV-2 B.1.1.7 = SC2r-CoV GX-P5L (천산갑) > SARS-CoV-2 > SARS-CoV > SC2r-CoV RaTG13 (박쥐);
도 6은 여섯 가지의 상이한 RBD (좌측에서 우측으로: SARS-CoV-2 WT, B.1.1.7, B.1.351; 박쥐 바이러스 RaTG13; 천산갑 바이러스 GX-P5L; SARS-CoV) 상에서의 멀티플렉스 sVNT를 예시한다. A) SARS 환자 (N=11); B) COVID-19 환자 (N=40); C) 건강-백신접종 (N=20). 혈청 샘플은 두 번째 용량 후 2주에 채취되었으며; D) SARS-백신접종 (N=9). SARS 생존자로부터의 혈청은 첫 번째 백신접종 후 21-62일에 채취되었다. 모든 혈청 샘플은 1:20의 단일 희석으로 시험되었다. 이전에 결정된 바와 같이 30%의 컷오프가 설정되었다.
도 7은 여섯 가지의 사르베코바이러스에 대한 상이한 그룹의 중화 항체 수준 (NT50)의 적정을 예시한다. 혈청 샘플은 4배 연속 적정에 의해 1:20에서 1:20480까지 희석하여 시험되었다.
도 8은 SARS 백신접종 그룹에서 범(pan)-사르베코바이러스 교차-중화 항체의 부스팅(boosting) 확인을 예시한다. 도 8A는 멀티플렉스 sVNT에 의해 측정한 SARS-CoV-2 우려 변이체(variants of concern), 박쥐 SC2r-CoV RaTG13, 천산갑 SC2r-CoV GX-P5L 및 SARS-CoV에 대한 mAb 5B7D7의 범-사르베코바이러스 중화를 나타낸다. 도 8B는 네 가지의 상이한 혈청 패널에 의해 상이한 RBD에 결합하는 5B7D7의 억제를 예시한다.
도 9는 상이한 베타 코로나바이러스 RBD 단백질을 표적으로 하는 토끼 고면역(hyper immune) 혈청으로부터의 중화 패턴을 예시한다.
도 10은 2회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온(foldon) 및 링커(linker) 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트(sigma adjuvant) 또는 1회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165) 및 시그마 아주반트에 이어서 1회 용량의 시노박(Sinovac) 백신을 사용한 백신접종 후 상이한 사르베코바이러스의 20개의 RBD를 사용한 시험감염(challenge)을 예시한다.
도 11은 2회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트 또는 1회 용량의 25 μg 단백질 (서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전) 및 시그마 아주반트에 이어서 1회 용량의 시노박 백신을 사용한 백신접종 후 상이한 사르베코바이러스의 20개의 RBD를 사용한 시험감염을 예시한다.
도 12는 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 화이자 바이오엔테크(Pfizer BioNTech) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 서열번호: 165, 폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 13은 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 모더나(Moderna) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 14는 별도의 투여 요법을 비교한 것을 예시한다: 첫 번째는 3회 용량의 시노박 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 164 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 1의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
본 개시내용은 사르베코바이러스 스파이크 단백질로부터의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 제공한다. 이러한 폴리펩티드는 아래에 예시되어 있다.
본 문서 전반에 걸쳐, 달리 반대로 명시하지 않는 한, 용어 "포함하는", "로 이루어진", "갖는" 등은, 완전하지 않은(non-exhaustive) 것으로 해석되어야 하거나, 환언하면, "포함하나, 이에 제한되지는 않음"을 의미하는 것으로 해석되어야 한다.
더욱이, 명세서 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구하지 않는 한, 단어 "포함하다" 또는 변형 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"는 명시된 정수 또는 정수 그룹의 포함을 의미하나 임의의 다른 정수 또는 정수 그룹의 제외를 의미하지는 않는 것으로 이해될 것이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 과학 기술 용어는 본 주제가 속하는 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
다양한 실시양태에 따르면, 서열번호: 10 내지 22, 164 및 165를 포함하는 군으로부터 선택된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 아미노산 작제물로서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질, 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물이 있다.
설명 전반에 걸쳐, 용어 '사르베코바이러스' 및 이의 복수 형태는 안지오텐신 전환 효소 2 (ACE2) 수용체를 세포 내로의 진입으로서 사용하는 임의의 베타 코로나바이러스를 포함한다는 것을 인식하여야 한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스는 ACE2 수용체를 세포 내로의 진입으로서 사용하는 임의의 베타 코로나바이러스를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스는 인간 ACE2 수용체를 인간 세포 내로의 진입으로서 사용하는 임의의 베타 코로나바이러스를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스는 임의의 공지된 또는 새로운 사르베코바이러스를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, SARS-CoV-2 B.1.1.7, SARS-CoV-2 B.1.351, SC2r-CoV RaTG13, 및 SC2r-CoV GX-P5L을 포함하거나 이로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 2종 이상의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열 또는 이의 단편과 컨센서스를 갖도록 설계된 서열을 포함한다. 이에 의해 2종 이상의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열, 또는 이의 단편이 정렬되고, 모두 동일한 아미노산이 유지되며, 첫 번째 변이(variation)는 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열, 또는 이의 단편 중 적어도 하나로부터 임의로 선택되고 후속 변이는 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열, 또는 이의 단편으로부터 선택된다. 따라서 생성된 컨센서스 서열은 그것이 유래되나 이들 각각과는 다른, 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열, 또는 이의 단편과 유사하고 컨센서스를 갖는다. 다양한 실시양태에서, 작제물은 폴드온 및 링커 서열로 변형될 수 있다. 이점은 이러한 아미노산 작제물이 면역원성 조성물로서 사용될 때, 몇몇 상이한 사르베코바이러스 감염을 중화할 수 있는 항체를 초래하며, 즉, 단백질이 범-사르베코바이러스 백신으로서 사용될 수 있다는 점이다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질은 상기 열거된 바와 같은 사르베코바이러스 중 임의의 것으로부터 확인되거나 단리된 야생형 스파이크 단백질을 지칭하며, 이의 단편은 ACE2 수용체에 결합하는 스파이크 단백질의 야생형 사르베코바이러스 수용체 결합 도메인 (receptor binding domain; RBD)을 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질은 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 SARS-CoV 스파이크 단백질을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질은 서열번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 SARS-CoV2 스파이크 단백질을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질은 서열번호: 23-163에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단백질 중 어느 하나를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 스파이크 단백질의 단편은 서열번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 SARS-CoV, RBD를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 스파이크 단백질의 단편은 서열번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 SARS-CoV2, RBD를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 스파이크 단백질의 단편은 서열번호: 3 또는 서열번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질, 또는 이의 단편에 대해 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 심지어 99.9% 중 하나를 포함하여 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는다. 다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 제1 사르베코바이러스의 야생형 스파이크 단백질 또는 이의 단편과 제2 사르베코바이러스의 스파이크 단백질 또는 이의 단편 둘 다에 대해 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 심지어 99.9% 중 하나를 포함하여 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV를 포함할 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SC1r-CoV를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV를 포함할 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SARS-CoV-2 B.1.1.7을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV를 포함할 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SARS-CoV-2 B.1.351을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV-2를 포함할 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SC2r-CoV를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV-2를 포함할 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SC2r-CoV를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 제1 사르베코바이러스는 SARS-CoV-2, 20J/501Y.V3/B.1.1.248로도 알려져 있는 브라질 SARS-CoV-2 변이체 P.1, 영국 SARS-CoV-2 변이체 B.1.1.7, 20H/501Y.V2, 또는 501Y.V2 변이체로도 알려져 있는 남아프리카 SARS-CoV-2 변이체 B.1.351, 인도 SARS-CoV-2 변이체 B1.617, SC2r-CoV RaTG13, 및 SC2r-CoV GX-P5L 중 어느 하나로부터 선택될 수 있고, 제2 사르베코바이러스는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, SARS-CoV-2 B.1.1.7, SARS-CoV-2 B.1.351, SARS-CoV-2 B1.617, SC2r-CoV RaTG13, 및 SC2r-CoV GX-P5L 중 어느 하나로부터 선택될 수 있되, 단, 제1 사르베코바이러스와는 상이하다.
설명 전반에 걸쳐, 용어 '단리된'은 표준 정제 방법에 의해 정제된 것들을 포함한다는 것을 인식하여야 한다. 이는 절대적인 순도를 필요로 하지 않으며 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 단리된 단백질, 펩티드, 핵산 또는 백신 분자를 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 단편은 적어도 2종의 사르베코바이러스 스파이크 단백질에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 심지어 99.9% 중 하나를 포함하여, 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 및 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 심지어 99.9% 중 하나를 포함하여, 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 단편은 사르베코바이러스 스파이크 단백질 및 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 단편은 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인(domain) 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 서열은 서열번호: 10 내지 22 또는 165 또는 이의 임의의 조합으로부터 선택된 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다. 다양한 실시양태에서, 아미노산 서열은 서열번호: 1 내지 9 또는 23 내지 163으로부터 선택된 서열 중 어느 하나의 적어도 2개와 적어도 75%의 서열 동일성을 갖도록 설계된 작제물을 포함하거나 이로 이루어진다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 10에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 11에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 12에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 13에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 14에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 15에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 16에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 17에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 18에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 19에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 20에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 21에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 22에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 폴드온 및 링커 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 폴드온 및 링커 서열을 포함하는 아미노산 작제물은 서열번호: 164 또는 서열번호: 165에 제시된 컨센서스 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 올리고머(oligomer) 폴리펩티드를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 올리고머 폴리펩티드는 이종올리고머를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 폴리펩티드는 융합 이량체(fusion dimer)이다.
다양한 실시양태에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물을 코딩하는 핵산이 있다.
다양한 실시양태에서, 핵산은 메신저 리보핵산 (mRNA)을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 핵산은 RNA이다. 용어 'RNA'는 하나 이상의 사르베코바이러스 감염에 대해 면역 반응을 유도할 수 있는 아미노산 작제물의 폴리펩티드를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 갖는 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 이는 2종 이상의 상이한 사르베코바이러스 감염에 대해 면역 반응을 도출할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 갖는 적어도 하나의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 아미노산 작제물은 본원에서 상기에 기재된 바와 같다.
다양한 실시양태에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 아미노산 작제물 또는 본원에서 상기에 기재된 핵산을 포함하는 면역원성 조성물이 있다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 대상체에게 투여될 때 사르베코바이러스에 대해 측정가능한 반응을 도출하거나 유도하는 재조합 사르베코바이러스 스파이크 엑토도메인 삼량체를 포함한다. 생체내 사용을 위해, 면역원성 조성물은 전형적으로 재조합 코로나바이러스 스파이크 엑토도메인 삼량체 또는 재조합 코로나바이러스 스파이크 엑토도메인 삼량체의 프로토머를 코딩하는 핵산 분자를 제약상 허용되는 담체 중에 포함할 것이며, 또한 아주반트와 같은 다른 작용제를 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 아주반트는 MF59, 아주반트 시스템(Adjuvant System) 03 (A S03), CpG 1018 또는 시그마 아주반트 시스템 (S6322)을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 대상체에게 투여될 때 사르베코바이러스에 대해 측정가능한 반응을 도출하거나 유도할 수 있는 적어도 2개의 아미노산 작제물을 포함한다. 다양한 실시양태에서 대상체 또는 개체는 사르베코바이러스 감염과 접촉할 위험이 있는 인간과 같은 포유동물과 같은 동물이다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 RNA 백신이다. 용어 'RNA 백신'은 사르베코바이러스 감염에 대해 면역반응을 유도할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 갖는 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오티드를 갖는 백신을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 사르베코바이러스 감염에 대해 면역 반응을 도출할 수 있는 2개 이상의 아미노산 작제물을 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 갖는 적어도 하나의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 지질 나노입자에 동봉된 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물, 또는 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 지질 나노입자를 포함하는 mRNA 백신이다. 다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 융합전(pre-fusion) 안정화된 스파이크-RBD-아주반트 삼량체를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 RBD 단편에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물은 재조합 RBD (rRBD)를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 직렬(tandem) 이량체 및 rRBD-Fc 융합 이량체로부터 선택된 2개의 이량체 형식을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 담체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 담체는 지질 나노입자 (LNP), 중합체성 나노입자, 지질 담체 예컨대 리피도이드, 리포솜, 리포플렉스, 펩티드 담체, 나노입자 모방체, 나노튜브, 또는 접합체 중 어느 하나이다.
다양한 실시양태에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 핵산을 포함하는 바이러스 벡터가 있다.
다양한 실시양태에서, 벡터는 재조합 홍역 바이러스 벡터(recombinant measles virus vector), 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus) (VSV) 벡터, 백시니아 바이러스 벡터(vaccinia virus vector) 또는 아데노바이러스 벡터로부터 선택된다.
다양한 실시양태에 따르면, 사르베코바이러스 감염의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물이 있다.
다양한 실시양태에 따르면, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물이 있다.
다양한 실시양태에 따르면, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물의 용도가 있다.
다양한 실시양태에 따르면, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물의 용도가 있다.
다양한 실시양태에 따르면, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물, 또는 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 바이러스 벡터를 포함하는 백신 분자를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 사르베코바이러스에 의해 유발된 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법의 용도가 있다.
다양한 실시양태에서, 포유동물 대상체에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 치료적 유효량의 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물을 포유동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다양한 실시양태에 따르면, a) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 아미노산 서열을 비교하는 단계; b) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 서열에서 동일한 아미노산을 확인하는 단계; c) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편의 서열로부터 임의의 상이한 아미노산을 제거하여 특유의 아미노산 서열을 확인하는 단계; 및 d) 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질, 또는 이의 단편에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는, 특유의 아미노산 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계를 포함하는, 본원에서 상기에 기재된 바와 같은 아미노산 작제물을 제조하는 방법이 있다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물을 제조하는 방법은 특유의 아미노산 서열을 폴드온 및 링커 서열로 변형시키는 것을 추가로 포함한다. T4 피브리틴의 C-말단 도메인 (폴드온)은 피브리틴 삼량체 구조의 형성으로 알려져 있으며 인공 삼량체화 도메인으로서 사용될 수 있다. 다양한 실시양태에서 링커는 His6-태그를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편은 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 및 170개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편 중 어느 하나를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편은 복수개의 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 복수개의 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편은 50-100, 80-150, 100-200개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 포함한다. 다양한 실시양태에서 단계 a)는 복수개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 아미노산 서열을 비교하는 것을 포함하고, 단계 b)는 복수개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터 복수개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편의 대부분에 대해 미리 결정된 서열 동일성 초과의 아미노산 서열을 확인하는 것을 포함하고, 단계 c)는 복수개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터 복수개의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 대부분에 대해 미리 결정된 서열 동일성 미만의 임의의 아미노산 서열을 제거하는 것을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 미리 결정된 서열 동일성은 85% 또는 90% 또는 95%, 또는 96% 또는 97%, 또는 98% 또는 99%이다.
다양한 실시양태에서, 방법은 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인에 상응하는 특유의 아미노산 서열 내의 단편을 확인하여 특유의 아미노산 단편 서열을 형성하는 단계; 및 특유의 아미노산 서열과 조합된 특유의 아미노산 단편 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
다양한 실시양태에서, 단계 d)에서 아미노산 작제물을 형성하는 것은 아미노산 작제물을 발현할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 핵산을 형성하는 것을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 핵산은 메신저 리보핵산 (mRNA)을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물 또는 아미노산 작제물을 발현할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 핵산은 면역원성 조성물로서 제조된다.
다양한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 아주반트를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 핵산은 바이러스 벡터에서 제조된다.
다양한 실시양태에서, 벡터는 재조합 홍역 바이러스 벡터, 수포성 구내염 바이러스 (VSV) 벡터, 백시니아 바이러스 벡터 또는 아데노바이러스 벡터로부터 선택된다.
설명 전반에 걸쳐, 단백질 또는 펩티드와 상호교환적으로 사용되는 용어 '폴리펩티드'는 자연 발생 아미노산 중합체 및 비자연 발생 아미노산 중합체를 포함하는 아미노산 중합체를 포함한다는 것을 인식하여야 한다. 폴리펩티드는 아미노 말단 (N-말단) 말단부 및 카르복시 말단 (C-말단) 말단부를 갖는다.
다양한 실시양태에서, 아미노산 작제물은 서열번호: 10; 서열번호: 11; 서열번호: 12; 서열번호: 13; 서열번호: 14; 서열번호: 15; 서열번호: 16; 서열번호: 17, 서열번호: 18; 서열번호: 19; 서열번호: 20; 서열번호: 21 ;서열번호: 22 서열번호: 164 또는 서열번호: 165에 제시된 바와 같은 컨센서스 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물은, 서열번호: 1; 서열번호: 10; 서열번호: 11; 서열번호: 12; 서열번호: 13; 서열번호: 14; 서열번호: 15; 서열번호: 16; 서열번호: 17; 서열번호: 164; 서열번호: 165에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 수용체 결합 도메인 (RBD) 단백질에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물은, 서열번호: 4; 서열번호: 18; 서열번호: 19; 서열번호: 20; 서열번호: 21; 서열번호: 22; 서열번호: 164; 또는 서열번호: 165에 제시된 바와 같은 컨센서스 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 스파이크 단백질에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물은 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,100 또는 1,200개의 아미노산 중 하나의 최소한의 길이를 가질 수 있고, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,100 또는 1,200개의 아미노산 중 하나의 최대한의 길이를 가질 수 있다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스 수용체 결합 도메인 (RBD) 단백질에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 작제물은 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200개의 아미노산 중 하나의 최소한의 길이를 가질 수 있고, 20, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200개의 아미노산 중 하나의 최대한의 길이를 가질 수 있다.
실시예
서열:
도 2는 상기에 열거된 다양한 서열로부터 형성된 복수개의 컨센서스 서열을 예시한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 77 내지 163에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 77 내지 163에 제시된 아미노산 서열의 아미노산 303 내지 571을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 4 및 서열번호: 53 내지 62 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 4 및 서열번호: 53 내지 62 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 4, 서열번호: 53 내지 62, 및 서열번호: 63 내지 65 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 7 및 서열번호: 66 내지 74. 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 7, 서열번호: 66 내지 74, 및 서열번호: 75 내지 76 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 4, 서열번호: 53 내지 62, 서열번호: 63 내지 65, 서열번호: 7, 서열번호: 66-74, 및 서열번호: 75 내지 76 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 23-35 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 1, 서열번호: 23-35, 및 서열번호: 36-38 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 2 및 서열번호: 39 내지 50 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 2, 서열번호: 39-50 및 서열번호: 51 내지 52 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 컨센서스 서열은 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 23-35, 서열번호: 36-38, 서열번호: 39-50 및 서열번호: 51 내지 52 또는 이의 임의의 조합에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 사르베코바이러스는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, SARS-CoV-2 B.1.1.7, SARS-CoV-2 B.1.351, SC2r-CoV RaTG13, SC2r-CoV GX-P5L, 및 SARS-CoV 조합된 우려 변이체 (VOC)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
도 3은 컨센서스 서열을 생성하는데 사용되는 방법을 예시한다.
용어 SARS1r hACE2/박쥐ACE2 스파이크, SARS1r hACE2 스파이크, SARS2r hACE2 스파이크, SARS2r hACE2/박쥐ACE2 스파이크, SARS1r/SARS2r hACE2 스파이크, 또는 SARS1r/SARS2r hACE2/박쥐ACE2 스파이크는 서열번호: 23 내지 52를 참조하라는 것으로 인식하여야 한다.
용어 SARS1r hACE RBD, SARS1r hACE2/박쥐ACE2 RBD, SARS2r hACE2 RBD, SARS2r hACE/박쥐ACE2 RBD, SARS1r/SARS2r hACE2 RBD, 또는 SARS1r/SARS2r hACE2/박쥐ACE2 RBD는 서열번호: 53 내지 76을 참조하라는 것으로 인식하여야 한다.
용어 SARS-CoV VOC 또는 SARS-CoV-2 VOC는 서열번호: 77 내지 163을 참조하는 것으로 이해되어야 한다.
사르베코바이러스의 유전자형으로부터 컨센서스 서열을 생성하는 방법은 다음을 포함한다: a) GISAID 게놈과 같은 게놈 데이터베이스를 사용하여 상응하는 핵산을 결정함으로써 또는 NCBI 단백질 데이터베이스로부터 직접 사르베코바이러스 스파이크 단백질 서열 (인간 SARS-CoV2 제외)을 수득하고 R (v4.0.2)에서 처리하여 완전한 단백질 서열을 필터링하는 것; b) R (v4.0.2)에서 GISAID SARS-CoV2 스파이크 단백질 돌연변이 보고서를 사내 스크립트(in-house script)로 검색 및 처리하여 마이크로프로세서를 사용하여 위치당 가장 높은 빈도의 돌연변이를 계산하는 것; c) SARS-CoV2 참조 및 조합된 우려 변이체 (VOC) 서열 (예를 들어 SARS-CoV-2 B.1.1.7 및/또는 SARS-CoV-2 B.1.351)을 생성하는 것; d) CD-hit (v4.8.1)을 사용하여 중복 제거 후, 추가 분석을 위해 163개의 특유의 스파이크 및 81개의 특유의 RBD 서열을 제네이어스 프라임(Geneious Prime) (v2021.0)과 같은 마이크로프로세서로 내수송하는 것; d) MAFFT를 사용하여 단백질 정렬을 수행하고 PhyML을 사용하여 계통수(phylogeny tree)를 플롯팅하는 것; e) RBD 계통수로부터 인간 ACE2, 박쥐ACE2 및 비-ACE2 계통을 추론하고 실험적 증거와 문헌 검색을 통해 검증하는 것; 및 f) 계통 내 아미노산 위치당 가장 높은 빈도에 따라 RBD 및 비-RBD 영역에 대한 컨센서스 서열을 생성하고 초기 서열을 조합하여 8개의 컨센서스 서열을 확립하는 것.
화이자-바이오엔테크 mRNA SARS-CoV-2 백신 BNT162b2로 백신접종을 받은 SARS 생존자의 효과는 본 개시내용에서 생성된 컨센서스 서열을 사용하는 것과 유사할 것이라는 것을 인식하여야 한다. 따라서, 다음의 실시예의 목적을 위해, 그들은 아미노산 작제물이 어떻게 작동하는지에 대한 예를 제공한다.
실시예 1: 인간 혈청 패널 연구를 수행하였다.
본 연구에 포함된 4개의 혈청 패널은 아래와 같이 설명되었다. (1) SARS 환자 (n = 11): 이들은 2021년 2월에 백신접종 프로그램이 시작되기 전에 상이한 시점 (2003, 2012 및 2020년)에 싱가포르에서 SARS 생존자로부터 수집된 혈청이었다; (2) COVID-19 환자 (n = 40): 이 혈청 그룹은 국가 종단 연구의 일환으로 2020년에 수집되었다 [19]. (3) 건강-백신접종 (n = 20): 이들은 화이자-바이오엔테크 BNT162b2 mRNA 백신의 두 번째 용량 후 14일 (또는 첫 번째 용량 후 35일)에 수집된 혈청이었다. (4) SARS-백신접종 (n=9): 첫 번째 백신접종 후 21-62일에 SARS 생존자로부터 채취한 혈청.
도 4는 Nab의 신속한 멀티플렉스 결정을 허용한, 대용 바이러스 중화 시험 (sVNT)을 나타낸다
본 발명자들은 두 가지 측면에서 sVNT를 추가로 개선하였다: 1) 본 발명자들은 바이러스 RBD를 고체 상 (자기 비드)에 고정화하고 PE-ACE2를 사용하여 바이러스-수용체 결합을 측정하였으며 (도 5), 이는 상이한 사르베코바이러스에 대한 NAb의 멀티플렉스 검출을 가능하게 하였으며; 2) 본 발명자들은 RBD 단백질을 여섯 가지의 상이한 바이러스로 확장하였다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 루미넥스 플랫폼 상에 멀티플렉스 sVNT는 6개 RBD 단백질 모두가 예상한 바와 같이 다음의 순서 (높은 친화도에서 낮은 친화도까지)로 hACE2 수용체 분자에 결합할 수 있음을 나타낸다: SARS-CoV-2 B.1.351 > SARS-CoV-2 B.1.1.7 = SC2r-CoV GX-P5L (천산갑) > SARS-CoV-2 > SARS-CoV > SC2r-CoV RaTG13 (박쥐).
여섯 가지의 상이한 사르베코바이러스로부터의 RBD를 기반으로 한 멀티플렉스 sVNT
AviTag-비오티닐화 RBD를 매그플렉스(MagPlex) 아비딘(Avidin) 미세구체 (루미넥스(Luminex))에 5 μg/100만개의 비드로 코팅하였다. 멀티플렉스 sVNT에서, RBD-코팅 미세구체 (600개의 비드/항원)를 800 rpm 교반하면서 37℃에서 1시간 동안 최종 1:20 이상에서 혈청과 함께 미리 인큐베이션하였다. 1시간 인큐베이션 후, 50 μl의 PE-접합 hACE2 (젠스크립트(GenScript), 1000 ng/ml)를 웰에 첨가하고 교반하면서 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, PBS-1% BSA로 2회 세척하였다. 데이터는 MAGPIX 시스템을 사용하여 획득하였다.
도 6은 여섯 가지의 상이한 RBD (좌측에서 우측으로: SARS-CoV-2 WT, UK, SA 균주; 박쥐 바이러스 RaTG13; 천산갑 바이러스 GX-P5L; SARS-CoV)에 대한 멀티플렉스 sVNT를 예시한다. A). SARS 환자. B) COVID-19 환자. C) 건강-백신접종. 혈청 샘플은 두 번째 용량 후 2주에 채취되었다. D) SARS-백신접종. 모든 혈청 샘플은 1:20의 단일 희석으로 시험되었다. 이전에 결정된 바와 같이 30%의 컷오프가 설정되었다.
교차-NAb 데이터는 두 가지 매우 중요한 관찰을 나타냈다: 첫 번째 관찰은 백신접종된 SARS 생존자는 연구된 모든 바이러스 (패널 D)에 대해서, 심지어 박쥐 및 천산갑 바이러스에 대해서도, 매우 높은 NAb를 생성하였다는 점이며; 두 번째 관찰은 그들은 정상적인 두 가지 용량을 받은 나이브 개체보다 SARS-CoV-2 변이체를 더 잘 중화하였다는 점이다 (패널 C).
SARS 환자는 백신접종 전에 다른 5종 바이러스 중 임의의 것에 대해 최소한의 교차-NAb를 가졌으며 (패널 A), 한편 COVID-19 환자는 다른 바이러스에 대해 교차-NAb를 가졌으며 (이들 모두는 SARS-CoV-2와 관련됨), 이들은 SARS-CoV에 대한 저항력을 그다지 갖고 있지 않았다 (패널 B).
연속 희석을 사용하여, SARS 백신접종 그룹에 의한 범-사르베코바이러스 교차-중화의 최상의 성능이 예시되었다.
도 7은 여섯 가지의 사르베코바이러스에 대한 상이한 그룹의 중화 항체 수준 (NT50)의 적정을 예시한다. 혈청 샘플은 4배 연속 적정에 의해 1:20에서 1:20480까지 희석하여 시험되었다. SAR 백신접종은 여섯 가지의 사르베코바이러스 모두에 대해 가장 높은 log NT50 역가 값을 나타낸다.
실시예 2: 마우스 연구
범-사르베코바이러스 mAb 억제 검정
RBD-코팅된 미세구체 (600개 비드/항원)를 1:100 희석 혈청과 함께 37℃에서 1시간 동안 교반하면서 미리 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 항체는 PBS-1% BSA로 2회 세척에 의해 제거되었다. 이어서 범-사르베코바이러스 mAb (1000 ng/ml)를 첨가한 후, 교반하면서 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후에 세척하였다. RBD에 대한 범-사르베코바이러스 mAb의 결합은 PE-접합 항-마우스 IgG 항체에 의해 검출되었다. 데이터는 MAGPIX 시스템을 사용하여 획득되었다.
도 8A에 도시된 바와 같이, mAb는 GX-P5L에 대한 효능이 약간 더 낮긴 하지만, 여섯 가지 바이러스를 모두 중화할 수 있다. PE-hACE2를 mAb로 대체하여 sVNT와 동일한 원리인 차단 검정을 사용하여, 본 발명자들은 네 가지 상이한 혈청 패널이 mAb의 중화 능력을 차단하는 능력을 결정하였다 (도 8B).
SARS-백신접종 그룹의 교차-중화 능력이 4개 그룹 중에서 가장 우수하다는 것을 인식하여야 한다. 둘째, 자연 감염 (SARS 및 COVID-19의 경우) 동안, SC2r-CoV와 SARS-CoV를 나타내는 두 계통에 걸쳐 교차-중화 항체의 최소한의 활성화가 있다. 셋째, mRNA 백신접종은 SCr2-CoV에 대한 전반적인 중화 능력을 부스트하였긴 하지만, 이는 SARS-CoV에 대한 교차-중화에 대해 최소한의 영향을 미쳤다.
실시예 3: 토끼 연구
여섯 가지 상이한 베타 코로나바이러스의 RBD를 표적으로 하는 토끼 고면역 혈청을 사용한 멀티플렉스 sVNT 분석
토끼 항-RBD 혈청은 젠스크립트 바이오테크(GenScript Biotech)와의 상업적 계약에 의해 생성되었다. 테스트는 마우스 연구에 기재한 것들과 본질적으로 동일하게 수행되었다. 토끼 혈청은 1:20부터 시작하여 4배 연속 희석에 의해 사용하였다.
도 9는 상이한 베타 코로나바이러스 RBD 단백질을 표적으로 하는 토끼 고면역 혈청으로부터의 중화 패턴을 나타낸다. 도 9에 제시된 데이터는 교차-중화가 다섯 가지의 SC2r-CoV 중 균주/계통 수준으로만 제한된다는 것을 나타낸다. SC2r-CoV와 SARS-CoV 사이에는 어떤 교차-중화도 없으며 음성 대조군 HKU1은 나타낸 바와 같이 어떤 바이러스/균주도 중화하지 않았다. 데이터는 인간 혈청 패널 및 마우스 연구에 대해 나타낸 바와 같은 결과와 유사하게 특정 바이러스/균주를 표적으로 하는 토끼 고면역 혈청을 사용하여 바이러스/균주-특이적 면역우세 항체를 확인해 준다.
본원에서 상기에 그리고 도 2에 언급된 바와 같은 아미노산 작제물은 상기에 마우스에서 사용되는 여섯 가지의 상이한 사르베코바이러스 또는 상기에 토끼 연구에 사용된 여섯 가지 상이한 베타 코로나바이러스에 대해 시험하기 위해 토끼 항-아미노산 작제물 혈청 또는 토끼 항-컨센서스 서열 혈청을 형성하는데 사용될 수 있음을 인식하여야 한다.
실시예 4 예시적인 단백질을 이용한 백신접종
서열번호: 165에 열거된 단백질 (폴드온 및 링커가 가진, 서열번호: 13의 변형 버전)을 시그마 아주반트 시스템(Sigma Adjuvant System) (S6322)과 함께 21일 간격으로 2회 용량으로 25 μg으로 투여하였다. 동시에, 서열번호: 165에 열거된 단백질 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커를 가짐)의 첫 번째 용량의 두 번째 투여 요법을 시그마 아주반트와 함께 투여한 후 시노박(Sinovac) 백신 단독의 두 번째 용량을 투여하였다. RBD 시험감염을 위해 투여된 이들 대상체로부터의 혈청을 추출하였다.
상이한 사르베코바이러스로부터의 20개의 RBD를 사용하여 별도의 미세구체 상에 코팅하였다. 20개의 RBD 코팅된 미세구체 (600개의 비드/항원) 각각을 1:100으로 희석된 혈청과 함께 37℃에서 1시간 동안 교반하면서 미리 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 항체는 2회 PBS-1% BSA 세척에 의해 제거되었다. 이어서, 대상체 혈청 (1000 ng/ml)을 첨가하고, 교반하면서 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 세척하였다. 다양한 RBD에 대한 대상체에서 형성된 임의의 항체의 결합은 PE-접합 항-마우스 IgG 항체에 의해 검출되었다. 데이터는 MAGPIX 시스템을 사용하여 수집되었다.
시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질의 두 가지 용량은 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)의 첫 번째 용량에 이어서 시노박 백신 단독의 두 번째 용량이 투여된 투여 요법과 비교하여 전반적으로 수행된 모든 20개의 RBD 시험감염에 걸쳐 더 높은 역가를 유도하였다 (도 10 참조).
새로운 우려 변이체를 포함한 20개의 상이한 사르베코바이러스 및 균주로부터의 RBD를 사용하여 동일한 실험을 반복하였다. 도 11에서 볼 수 있는 바와 같이, 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커를 가짐)에 열거된 단백질 (25 ug)의 두 가지 용량은 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)의 첫 번째 용량에 이어서 시노박 백신 단독의 두 번째 용량과 비교하여 전반적으로 모든 20개의 시험된 RBD에 걸쳐 더 높은 역가를 유도하였다.
실시예 5 예시적인 단백질을 이용한 부스터
별도의 투여 요법을 비교하였다: 첫 번째는 3회 용량의 화이자 바이오엔테크(Pfizer BioNTech) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 12에서 볼 수 있는 바와 같이, 시그마 아주반트와 함께 또는 없이 투여된 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질의 용량 모든 클레이드 1 사르베코바이러스는 3회 용량 후 7일과 14일 둘 다에 화이자 바이오엔테크 백신을 사용하여 3회 용량 초과로 억제되었다.
별도의 투여 요법을 비교하였다: 첫 번째는 3회 용량의 모더나(Moderna) 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 모더나 백신에 이어서 식염수의 1회 용량이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 13에서 볼 수 있는 바와 같이, 시그마 아주반트와 함께 또는 없이 투여된 2회 용량의 화이자 바이오엔테크 백신에 이어서 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질의 용량 모든 클레이드 1 사르베코바이러스는 3회 용량 후 7일과 14일 둘 다에 화이자 바이오엔테크 백신을 사용하여 3회 용량 초과로 억제되었다.
별도의 투여 요법을 비교하였다: 첫 번째는 3회 용량의 시노박 백신이고; 두 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 164 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 1의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 세 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 투여된 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 25 μg의 용량의 단백질이고; 네 번째는 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 서열번호: 165 (폴드온 및 링커 서열을 가진 서열번호: 13의 변형된 버전)에 열거된 1 μg의 용량의 단백질이고; 최종은 3회 용량의 식염수이다.
도 14에서 볼 수 있는 바와 같이, 시그마 아주반트와 함께 또는 없이 투여된 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질의 용량 모든 클레이드 1 사르베코바이러스는 3회 용량 후 7일과 14일 둘 다에 시노박 백신으로 3회 용량 초과로 억제되었다. 시그마 아주반트와 함께 투여된 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 서열번호: 165 (서열번호: 13의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질의 용량 모든 클레이드 1 및 클레이드 2 사르베코바이러스는 3회 용량 후 7일과 14일 둘 다에 2회 용량의 시노박 백신에 이어서 시그마 아주반트와 함께 서열번호: 164에 열거된 단백질 (서열번호: 1의 변형 버전, 폴드온 및 링커 가짐)에 열거된 단백질 용량으로 억제되었다. 이 결과는 서열번호: 165와 서열번호: 164에 폴드온과 링커의 동일한 변형을 적용한 바와 같은 서열번호: 1로 나타낸 바와 같은 천연 SARS-CoV-1보다 서열번호: 13의 보다 양호한 부스터 효과를 반영하였다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 발명이 기재된 실시양태에 제한되지는 않는다는 것을 인식하여야 한다. 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 변형 및 개선이 이루어질 수 있다는 것이 인식될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상호 배타적이지 않은 상기 변형 또는 개선 중 하나 이상이 추가로 조합되어 본 발명의 또 다른 실시양태를 형성할 수 있다는 것을 추가로 인색하여야 한다.
Claims (47)
- 서열번호: 10 내지 22, 164 및 165로부터 선택된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 아미노산 작제물(amino acid construct)로서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질(sarbecovirus spike protein), 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 아미노산 작제물.
- 제1항에 있어서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질이 사르베코바이러스 스파이크 단백질에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항에 있어서, 단편이 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인(domain) 단편을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 10에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 11에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 12에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 13에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 14에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 15에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 16에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 17에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 18에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 19에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 20에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 21에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 22에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제4항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이 폴드온(foldon) 및 링커(linker) 서열을 추가로 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제17항에 있어서, 아미노산 서열이 서열번호: 165에 제시된 서열을 포함하는 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고머(oligomer) 폴리펩티드를 포함하는, 아미노산 작제물.
- 제19항에 있어서, 폴리펩티드가 융합 이량체(fusion dimer)인 것인, 아미노산 작제물.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 아미노산 작제물을 코딩하는(encoding) 핵산.
- 제21항에 있어서, 메신저 리보핵산 (mRNA)을 포함하는, 핵산.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 아미노산 작제물 또는 제21항 또는 제22항의 핵산을 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제23항에 있어서, 아주반트(adjuvant)를 추가로 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제24항에 있어서, 아주반트가 시그마 아주반트 시스템(Sigma Adjuvant System) (S6533)인, 면역원성 조성물.
- 제23항에 있어서, 적어도 2종의 사르베코바이러스 바이러스 항원을 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제21항 또는 제22항의 핵산을 포함하는 바이러스 벡터(viral vector).
- 제27항에 있어서, 재조합 홍역 바이러스 벡터(recombinant measles virus vector), 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus) (VSV) 벡터, 백시니아 바이러스 벡터(vaccinia virus vector) 또는 아데노바이러스 벡터로부터 선택되는, 바이러스 벡터.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 사르베코바이러스 감염의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한, 아미노산 작제물.
- 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
- 제21항 또는 제22항에 있어서, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한, 핵산.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한, 바이러스 벡터.
- 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 아미노산 작제물의 용도.
- 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약(medicament)의 제조에서의, 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 용도.
- 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서의, 제21항 또는 제22항에 따른 핵산의 용도.
- 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서의, 제27항 또는 제28항에 따른 바이러스 벡터의 용도.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 아미노산 작제물, 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물, 제21항 내지 제22항의 핵산, 또는 제27항 또는 제28항의 바이러스 벡터를 포함하는 백신 분자를 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는, 사르베코바이러스에 의해 유발된 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법.
- a. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 아미노산 서열을 비교하는 단계;
b. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편으로부터의 서열에서 동일한 아미노산을 확인하는 단계;
c. 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질 또는 이의 단편의 서열로부터 임의의 상이한 아미노산을 제거하여 특유의 아미노산 서열을 확인하는 단계; 및
d. 특유의 아미노산 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계로서, 여기서 아미노산 작제물이 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질, 또는 이의 단편에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 것인 단계
를 포함하는, 사르베코바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 아미노산 작제물을 제조하는 방법. - 제38항에 있어서, 특유의 아미노산 서열을 폴드온 및 링커 서열로 변형시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제38항 또는 제39항에 있어서, 적어도 2종의 상이한 사르베코바이러스 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인에 상응하는 특유의 아미노산 서열 내의 단편을 확인하여 특유의 아미노산 단편 서열을 형성하는 단계; 및 특유의 아미노산 서열과 조합된 특유의 아미노산 단편 서열의 아미노산 작제물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 d에서 아미노산 작제물을 형성하는 것이 아미노산 작제물을 발현할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 핵산을 형성하는 것을 포함하는 것인, 방법.
- 제41항에 있어서, 핵산이 메신저 리보핵산 (mRNA)을 포함하는 것인, 방법.
- 제38항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 작제물 또는 아미노산 작제물을 발현할 수 있는 아미노산 작제물을 코딩하는 핵산이 면역원성 조성물로서 제조되는 것인, 방법.
- 제43항에 있어서, 면역원성 조성물이 아주반트를 포함하는 것인, 방법.
- 제44항에 있어서, 아주반트가 시그마 아주반트 시스템(Sigma Adjuvant system)인, 방법.
- 제41항 또는 제42항에 있어서, 핵산이 바이러스 벡터에서 제조되는 것인, 방법.
- 제46항에 있어서, 벡터가 재조합 홍역 바이러스 벡터, 수포성 구내염 바이러스 (VSV) 벡터, 백시니아 바이러스 벡터 또는 아데노바이러스 벡터로부터 선택되는 것인, 방법.
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