KR20240007316A

KR20240007316A - 암 치료를 위한 면역원성 화합물

Info

Publication number: KR20240007316A
Application number: KR1020247000094A
Authority: KR
Inventors: 로랑 쉔; 알반 마티유; 마띠유 피차우드; 프란체스코 스트로치
Original assignee: 엔터롬 에스.에이.
Priority date: 2016-10-07
Filing date: 2017-10-09
Publication date: 2024-01-16
Also published as: CN117801066A; CN110022893A; IL302345B1; KR102622188B1; IL302345A; US11478537B2; JP2019534884A; WO2018065623A3; KR20190066028A; IL265751B; IL296165B1; EP3522915A2; US20230201322A1; AU2022200872A1; KR102686875B1; AU2017339577B2; JP2022120137A; CA3039322A1; JP2023156414A; CN110022893B

Abstract

본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이며, 여기서 항원성 펩타이드는 명세서에 기술된 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.

Description

암 치료를 위한 면역원성 화합물{IMMUNOGENIC COMPOUNDS FOR CANCER THERAPY}

발명의 분야

본 발명은 보다 특히 면역치료학적 방법을 통한, 암 치료요법의 분야에 관한 것이다.

발명의 배경

암은 전세계에 걸쳐서 사망의 주요 원인들 중 하나이다. 세계 보건기구(World Health Organization)에 따르면, 2012년에만, 1400만개의 신규 사례 및 820만개의 암-관련된 사망이 전세계적으로 보고되었으며, 신규 암 사례의 수는 차기 20년 내에 약 70%까지 증가할 것으로 예측된다. 지금까지, 세계의 전체의 신규한 매년의 사례 중 60% 이상이 아프리카, 아시아 및 중앙 및 남아메리카에서 발생하고 있다. 이들 지역은 또한 세계의 암 사망의 70%를 차지한다. 남성 중에서, 암의 5가지의 가장 일반적인 부위는 폐, 전립선, 결장직장(colorectum), 위 및 간이나; 여성에서는 이러한 부위가 유방, 결장직장, 폐, 자궁경부, 및 위이다.

암은 수술, 방사선 치료요법, 세포독성 화학치료요법, 및 내분비 조절을 사용하여 오랫동안 처리되어 왔으며, 이는 전형적으로 순차적인 순서로 조합되어 질환을 가장 우수하게 조절하고 있다. 그러나, 이러한 표준 치료요법의 실제 효능에 대한 주요 제한은 치료, 저 치유율, 및 고유의 약물 내성으로 초래되는 정상 조직의 이차적인 손상을 이끄는 이들의 부정확한 특이성이다.

지난 수년 동안, 종양 및 정상 세포의 발현 프로파일링(expression profiling)에 있어서 주목할만한 큰 진전으로 인하여 암 치료요법의 발달에 있어 엄청난 증가가 있어왔으며, 면역치료요법, 또는 분자 표적화된 치료요법의 최근의 연구 및 제1의 임상 결과는 이러한 질환에 대한 우리의 인식을 변화시키기 시작하여 왔다.

본 발명에 이르러 촉망되는 항암 면역치료요법이 실현되어 왔으며 숙주 면역계가 종양 항원을 인식할 수 있다는 증거는 미국 식품 의약국(FDA) 및 유럽 의약국(European Medicines Agency: EMA)과 같은 규제 기관에 의해 현재 승인되고 있는 항암 약물의 개발을 이끌어 왔다. 다양한 치료학적 시도는 다른 것들 중에서, 생체외(ex　vivo) 확장된 종양-침윤성 림프구, 암 세포 백신, 면역자극성 사이토킨 및 이의 변이체, 패턴 인식수용체(PRR) 효능제, 및 종양 항원을 표적화하는 면역조절성 모노클로날 항체 또는 면역 체크포인트의 입양 전달(adoptive transfer)을 포함한다. (Galuzzi et al., Classification of current anticancer immunotherapies. Oncotarget. 2014 Dec 30;5(24):12472-508).

불행히도, 환자의 유의적인 퍼센트는 여전히 이러한 면역치료요법 중 일부에 대해 고유의 내성을 나타낼 수 있거나 심지어 치료 과정 동안에 내성을 획득할 수 있다. 예를 들면, 3년 생존율은 절제불가능하거나 전이성 흑색종에서 항-CTLA-A 항체 이필루무맙을 사용하여 대략 20%인 것으로 보고된 반면(Snyder et al., Genetic basis for clinical response to CTLA-4 blockade in melanoma. N Engl J Med. 2014 Dec 4;371(23):2189-2199; Schadendorf et al., Pooled Analysis of Long-Term Survival Data From Phase II and Phase III Trials of Ipilimumab in Unresectable or Metastatic Melanoma. J Clin Oncol. 2015 Jun 10;33(17):1889-94), 다른 체크 포인트 억제제인, PD1을 표적화하는 니볼루맙을 사용한 3년 생존율은 신장 세포 암종(RCC)에서 44% 및 NSCLC에서 18%인 것으로 보고되었다(Mc Dermott et al., Survival, Durable Response, and Long-Term Safety in Patients With Previously Treated Advanced Renal Cell Carcinoma Receiving Nivolumab. J Clin Oncol. 2015 Jun 20;33(18):2013-20; Gettinger et al., Overall Survival and Long-Term Safety of Nivolumab (Anti-Programmed Death 1 Antibody, BMS-936558, ONO-4538) in Patients With Previously Treated Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer. J Clin Oncol. 2015 Jun 20;33(18):2004-12). 따라서, 근본적인 약물 내성은 이러한 면역치료요법의 효능에 대한 고정된 장벽을 나타낸다. 따라서, 암 치료에 대한 상이한 시도가 이러한 장벽을 파괴하기 위해 요구됨이 명백하다.

이러한 면역치료요법으로 치료된 많은 수의 대상체에서 반응의 부재는 결핍성 항-종양 면역 반응(APC에 의한 항원 제시(presentation) 또는 T 세포에 의한 항원 인식에 있어서의 결함으로서)과 관련될 수 있다. 다시 말해서, 면역치료요법에 대한 양성 반응은 사람 암 세포에 의해 발현된 MHC 부류 I-제한된 항원을 인식할 수 있는 특이적인 림프구 서브세트(lymphocyte subset)를 발달시키는 면역계의 능력과 연관되어 있다(Kvistborg et al., Human cancer regression antigens. Curr Opin Immunol. 2013 Apr;25(2):284-90). 이러한 가설은 종양-침윤성 림프구의 입양 전달에 대한 반응이 환자에 형질주입된 CD8⁺ T-세포의 수와 직접 연관되어 있음을 입증하는 데이타에 의해 강력하게 뒷받침된다(Besser et al., Adoptive transfer of tumor-infiltrating lymphocytes in patients with metastatic melanoma: intent-to-treat analysis and efficacy after failure to prior immunotherapies. Clin Cancer Res. 2013 Sep 1;19(17):4792-800). 따라서, 강력한 항종양 반응은 면역반응성 펩타이드의 제시 및 이러한 항원을 인식하도록 "훈련된" 충분한 수의 반응성 세포의 존재에 의존할 것이다.

종양 항원-기반 백신화는 환자 자신의 면역계가 특이적이고 내구적인 방식으로 종양을 인식하여, 공격하고 파괴하도록 협력할 수 있으므로 고려할만한 관심을 획득한 암 치료요법에 대한 유일한 시도를 나타낸다. 종양 세포는 실제로 면역계에 의해 인식되기 쉬운 다수의 펩타이드 항원을 발현하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 이러한 항원을 기반으로 한 백신은 환자의 전체 생존을 증진시킬 뿐만 아니라 면역 반응의 모니터링 및 종양 항원의 저 독성 및 저 분자량 덕분에 GMP-등급의 생성물의 제조를 위한 큰 기회를 제공한다. 종양 항원의 예는 다른 것들 중에서도, 일반적으로 사일런트 유전자(silent gene) 또는 과발현된 유전자로부터 및 종양바이러스에 의해 발현된 단백질로부터 전사된 단백질의 부산물(Kvistborg et al., Human cancer regression antigens. Curr Opin Immunol. 2013 Apr;25(2):284-90), 및 세포 단백질의 점 돌연변이로부터 생성되는 신생-항원(neo-antigen)을 포함한다. 후자가 CTLA-4 억제제로 치료한 환자에서 증가된 전반적인 생존과 직접적으로 연관된 것이 발혀졌으므로 특히 관심이 집중되고 있다(Snyder et al., Genetic basis for clinical response to CTLA-4 blockade in melanoma. N Engl J Med. 2014 Dec 4;371(23):2189-2199; Brown et al., Neo-antigens predicted by tumor genome meta-analysis correlate with increased patient survival. Genome Res. 2014 May;24(5):743-50).

그럼에도 불구하고, 암 백신이 개발될 수 있는 사람 종양 항원의 수는 제한되어 있다. 특히, 돌연변이되거나 변형된 자가-단백질로부터 기원한 항원은 면역 내성 및/또는 원하지 않는 자가면역성 부작용을 유도할 수 있다.

따라서, 이러한 분야에서 직면한 한계, 특히 현재 이용가능한 면역치료요법에 대한 내성을 극복할 수 있는 대안적인 암 치료제를 확인하는 것이 당해 분야에서 요구되고 있다.

본 발명은 위에서 언급한 요구를 충족하기 위한 목적을 갖는다.

발명의 요약

본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다시 말해서, 본 발명은 서열 번호: 1 내지 106 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항원성 펩타이드에 관한 것이다. 본 발명에 따른 항원성 펩타이드는 면역원성 화합물의 형태일 수 있다.

따라서, 특정의 구현예에 따라서, 본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106, 및 특히 서열 번호: 71로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다시 말해서, 본 발명은 서열 번호: 1 내지 106 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이다.

보다 특히, 본 발명은 위에서 정의한 바와 같은 면역원성 화합물에 관한 것이며, 여기서 상기 항원성 펩타이드는 담체 단백질에 연결되어 있다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 적어도 항원성 펩타이드 또는 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역원성 화합물, 및 임의로 보조제(adjuvant)가 로딩된(loaded) 나노입자에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물을 포함하는 조성물에 관한 것이며, 상기 조성물은 바람직하게는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 첨가제를 추가로 포함한다.

따라서, 특정의 구현예에 따라서, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 첨가제를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 면역원성 조성물은 하나 이상의 면역자극제를 추가로 포함할 수 있다.

상기 하나 이상의 면역자극제는 면역-보조제 및 항원-제시 세포(antigen-presenting cell)를 포함하는(또는 이로 이루어진) 그룹에서 선택될 수 있다.

상기 항원-제시 세포는 수지상 세포로 이루어질 수 있다.

다른 구현예에 따라서, 본 발명은 암의 예방 또는 치료시 사용하기 위한, 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 상기 정의한 바와 같은 면역원성 화합물에 관한 것이다.

추가의 구현예에 따라서, 본 발명은 암의 예방 또는 치료시 사용하기 위한 면역원성 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 암의 치료 또는 방지를 위한 의약을 제조하기 위한, 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 상기 정의한 바와 같은 면역원성 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 개인에서 암을 예방하거나 치료하기 위한 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 상기 개인에게 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 상기 정의한 바와 같은 면역원성 화합물 또는 상기 정의한 바와 같은 면역원성 조성물 또는 본 발명에 따른 나노입자 또는 본 발명에 따른 핵산 또는 본 발명에 따른 조합물을 투여하는 단계를 포함한다.

여전히 추가의 구현예에 따라서, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물을 암호화하는 핵산에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 면역원성 화합물의 조합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드의 조합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 나노입자의 조합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 핵산의 조합물에 관한 것이다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물 중 2개의 구별되는 성분은 동일하거나 별개의 조성물 속에 포함된다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물 중 2개의 구별되는 성분은 동일하거나 별개의 투여 경로를 통해 투여된다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물 중 2개의 구별되는 성분은 거의 동시에 또는 연속적으로 투여된다.

또한, 본 발명은 또한

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 핵산, 또는

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 포함하는 키트(kit)에 관한 것이다.

도면의 설명
도 1: IL13RA2를 표적화하는 종양 항원-기반 면역치료요법의 개념 증명의 확인을 위한 일반적인 프로토콜.
도 2: 면역화 개략도의 개략적인 개관. d: 일.
도 3: 그룹 1(IL13RA2-B) 및 그룹 2(IL13RA2-A)에 대한 ELISPOT-IFNγ 결과. 백신화(각각의 그룹 하에서 괄호안 사이의)에 사용된 펩타이드 및 ELISPOT 배양에 사용된 자극(X-축)을 그래프에 나타낸다. (A) 특이적인 ELISPOT-IFNγ 스폿(spot)의 수(배지 조건은 뺀다). 각각의 스폿은 4회의 상응하는 조건으로부터 1명의 개인/마우스에 대한 평균 값을 나타낸다. (B) 각각의 개인에 대해, 특이적인 ELISPOT-IFNγ 반응의 수준을 ConA 자극과 비교한다(값: 100%). 통계적 분석: 그룹 간 비교를 위한 쌍을 이룬 t-시험 및 그룹간 비교를 위한 쌍을 이루지 않은 t-시험; * p<0.05.

발명의 상세한 설명

본 발명자들은 종양 세포에 대해 특이적인 면역 반응을 유도하는데 사용될 수 있는 항원성 펩타이드의 세트를 확인하였다.

이러한 항원성 펩타이드 모두는 표 1a 및 표 1b에 개시된 유전자의 세트에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 특성을 공유한다.

예를 들면, 인터루킨-13 수용체 소단위 알파-2(IL-13Rα2 또는 IL13RA2)는 사람내에서 IL13RA2 유전자에 의해 암호화된 막 결합 단백질이다. 대략적인 방식으로, IL13RA2는 잠재적인 면역치료요법 표적으로 보고되었다(참고: Beard et al.; Clin Cancer Res; 72(11); 2012). IL13RA2의 고 발현은 또한 결장직장 암에서의 침입성의, 간 전이 및 불량한 예후와 연관되어 왔다(Barderas et al.; Cancer Res; 72(11); 2012).

따라서, 본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 지닌 항원성 펩타이드에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.

본원에 사용된 바와 같은 표현 "종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는"은 특히 IL13RA2와 같은 (참고) 종양 항원의 단편의 서열 변이체를 지칭한다.

서열 변이체는 특히 서열의 전체 길이에 걸쳐, 참고 서열, 즉, (참고) 종양 항원의 단편과 적어도 50% 서열 동일성(sequence identity)을 공유한다. 바람직하게는, 서열 변이체는 참고 서열, 즉, (참고) 종양 항원의 단편과 적어도 60%, 바람직하게는 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 85%, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 90%, 특히 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 적어도 99% 서열 동일성을 공유한다. 서열 동일성은 하기 기술한 바와 같이 계산될 수 있다. 바람직하게는, 서열 변이체는 참고 서열의 특이적인 기능, 예를 들면, 에피토프로서 이의 기능을 보존한다. 특히, 아미노산 서열 변이체는 변경된 서열을 가지며, 여기서 참고 서열내 하나 이상의 아미노산은 결실 또는 치환되거나, 하나 이상의 아미노산은 참고 아미노산 서열의 서열내로 삽입된다. 예를 들면, 적어도 90% 동일한 변이체 서열은 10개 이하의 변경, 즉, 참고 서열의 100개의 아미노산 당 결실, 삽입, 또는 치환의 임의의 조합을 갖는다.

2개 이상의 서열의 동일성(유사성)을 비교하는 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 2개의 서열이 동일한 퍼센트는 예컨대, 수학적 알고리즘을 사용하여 측정할 수 있다. 사용될 수 있는 바람직하지만, 제한되지 않는 수학적 알고리즘의 예는 Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 BLAST 계열의 프로그램, 예컨대, NCBI의 홈페이지(world wide web site ncbi.nlm.nih.gov) 및 FASTA(Pearson (1990), Methods Enzymol. 183, 63-98; Pearson and Lipman (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 85, 2444-2448)를 통해 접근가능한, BLAST 또는 NBLAST 프로그램(참고: 또한 Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215, 403-410 또는 Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res, 25:3389-3402) 내에 통합된다. 다른 서열과 특정한 정도로 동일한 서열은 이러한 프로그램에 의해 확인할 수 있다. 또한, 위스콘신 서열 분석 패키지(Wisconsin Sequence Analysis Package), 버젼 9.1에서 이용가능한 프로그램(Devereux et al., 1984, Nucleic Acids Res., 387-395), 예를 들면, 프로그램 BESTFIT 및 GAP을 또한 사용하여 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이의 동일성 % 및 2개의 (폴리)펩타이드 서열 사이의 동일성 %를 측정할 수 있다. BESTFIT는 Smith and Waterman (1981), J. Mol. Biol. 147, 195-197의 "국소 상동성" 알고리즘을 사용하며 2개의 서열 사이의 유사성의 가장 우수한 단일 영역을 찾는다.

참고 서열로서 전형적으로 제공되는 (참고) 종양 항원의 "단편"은 적어도 7개, 바람직하게는 적어도 8개 및 가장 바람직하게는 (적어도) 9개의 아미노산 또는 10개의 아미노산을 포함한다.

유리하게는, 이러한 항원성 펩타이드는 특히 암의 예방 또는 치료시 사용하기 위한 면역원성 화합물의 형태이다.

따라서, 본 발명은 또한 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다시 말해서, 본 발명은 서열 번호: 1 내지 106 중 임의의 하나로 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항원성 펩타이드를 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)를 제공한다. 본 발명이 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나로 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)를 제공하는 것이 또한 바람직하다. 보다 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나로 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)를 제공한다. 심지어 보다 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 51, 52, 55 또는 56 중 임의의 하나로 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)를 제공한다. 본 발명이 서열 번호: 101 또는 102 중 임의의 하나로 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)를 제공하는 것이 또한 심지어 보다 바람직하다.

본원의 실시예에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 특이적인 항원성 펩타이드는 자체에 대해 강력한 면역 반응을 일으키도록 하며, 가장 중요하게는 IL13RA2 종양 항원에 포함된 상기 펩타이드가 자체적으로 내성이지만, IL13RA2 종양 항원에 포함된 이와 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드에 대해 강력한 면역 반응을 일으키도록 한다.

임의의 특수한 이론에 얽메이려는 의도없이, 본 발명자들은 본원에 기술된 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 조성물의 생체내(in vivo) 투여 후 측정된 감마 인터페론의 고 발현이 항원성 펩타이드-특이적인 T-세포의 활성화, 및 특히 항원성 펩타이드-특이적인 CTL의 활성화를 나타낸다고 믿으며, 이러한 세포는 당해 분야에서 항-암 면역 반응의 관련된 면역 효과기인 것으로 알려져 있다.

본원에 달리 규정되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학적 및 기술적 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 내용이 달리 요구하지 않는 한, 본원에 사용된 명명법, 및 세포 및 조직 배양물의 기술은 당해 분야에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용된 것이다.

이러한 기술은 오웬(Owen) 등(Kuby Immunology, 7^th, edition, 2013 - W. H. Freeman) 및 삼브룩(Sambrook) 등(Molecular cloning: A laboratory manual 4th edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press - Cold Spring Harbor, NY, USA, 2012)과 같은 문헌에 충분히 설명되어 있다.

그럼에도 불구하고, 본 명세서 전체에서 상이한 용어의 사용과 관련하여, 다음의 정의가 보다 특히 적용된다.

용어 "펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 본원에서 펩타이드 결합(-NHCO-)을 통해 함께 연결된 임의의 길이의 아미노산의 순차적인 쇄를 지칭하며, 이는 시험관내(in vitro) 및/또는 생체내에서 구조적 및/또는 기능적 역활을 담당할 수 있다. 이는 크기가 2 내지 적어도 약 1000개의 아미노산 잔기의 범위인 아미노산 쇄를 포함한다. 용어 "펩타이드"는 바람직하게는 본원에서 크기가 약 30개 미만의 아미노산인 아미노산 쇄를 포함하지만, 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 바람직하게는 크기가 적어도 30개 아미노산인 아미노산 쇄를 포함한다. 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 당해 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 펩타이드, 폴리펩타이드 및 단백질은 핵산에 의해 암호화될 수 있다.

용어 "항원성 펩타이드"는 펩타이드를 지칭하며, 이는 바람직하게는 종양 단백질과 아미노산 유사성을 가지며, 이는 이것이 투여되는 대상체에서 상기 펩타이드에 대해 면역학적 반응을 유도하거나 유지하는 경향이 있다.

용어 "면역원성 화합물"은 상기 정의된 바와 같은 항원성 펩타이드를 포함하는 화합물을 지칭하며, 이는 또한 이것이 투여되는 대상체로부터의 상기 펩타이드에 대해 면역학적 반응을 유도하거나 유지할 수 있다.

일부 구현예에서, 면역원성 화합물은 적어도 하나의 항원성 펩타이드, 또는 대안적으로 단백질에 연결된, 이러한 항원성 펩타이드를 포함하는 적어도 하나의 화합물을 포함하며, 이는 담체 단백질을 포함한다.

담체 단백질은 일반적으로 단백질이며, 이는 본 발명에 따른 항원성 펩타이드와 같은 카고(cargo)를 수송할 수 있다. 예를 들면, 담체 단백질은 막을 통해 이의 카고를 수송할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 담체 단백질은 이에 연결된 항원성 펩타이드에 대해 면역 반응을 유발할 수 있는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 특히 (또한) 포함한다. 담체 단백질은 당해 분야에 알려져 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 바와 같은, 항원성 펩타이드 또는 상기 항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드는 예를 들면, 공유 결합 또는 비-공유 결합에 의해 서열 MAKTIAYDEEARRGLERGLN(서열 번호: 144)의 HHD-DR3 펩타이드와 같은, 면역-보조제 특성을 가진 단백질에 연결시킬 수 있다.

대안적으로, 이러한 담체 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 면역 보조제의 형태로 공투여될 수 있다.

바람직하게는, 본원에 기술된 바와 같은 항원성 펩타이드, 또는 항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드는 예를 들면, 공유결합 또는 비-공유 결합에 의해 CD4+ Th1 세포의 자극을 제공하는 것과 같은 면역-보조제 특성을 갖는 단백질/펩타이드에 공-투여되거나 연결될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 항원성 펩타이드는 바람직하게는 MHC 부류 I에 결합되지만, CD4+ 헬퍼 에피토프(helper epitope)는 효율적인 면역 반응을 제공하기 위해 추가로 사용될 수 있다. Th1 헬퍼 세포는 인터페론-감마(IFN-γ), 종양 괴사 인자-알파(TNF-α) 및 인터루킨-2(IL-2)를 분비시키고 DC 및 T 세포 위에서 공자극 시그날의 발현을 향상시킴으로써 효율적인 수지상 세포(DC) 활성화 및 특이적인 CTL 활성화를 지속시킬 수 있다(Galaine et al., Interest of Tumor-Specific CD4 T Helper 1 Cells for therapeutic Anticancer Vaccine. Vaccines (Basel). 2015 Jun 30;3(3):490-502).

예를 들면, 보조제 펩타이드/단백질은 바람직하게는 면역 기억을 소생하거나 비-특이적인 도움을 제공하거나 특이적인 종양-기원한 헬퍼 펩타이드일 수 있는 비-종양 항원일 수 있다. 수개의 헬퍼 펩타이드가 테타누스 헬퍼 펩타이드, 키홀 림펫 헤모시아닌 펩타이드 또는 PADRE 펩타이드와 같은 비특이적인 T 세포 도움을 제공하기 위해 문헌에 기술되어 왔다(Adotvi et al., Targeting antitumor CD4 helper T cells with universal tumor-reactive helper peptide derived from telomerase for cancer vaccine. Hum Vaccin Immunother. 2013 May;9(5):1073-7, Slingluff CL, The present and future of peptide vaccines for cancer: single or multiple, long or short, alone or in combination? Cancer J. 2011 Sep-Oct;17(5):343-50). 따라서, 테타누스 헬퍼 펩타이드, 키홀 림펫 헤모시아닌 펩타이드 및 PADRE 펩타이드는 이러한 보조제 펩타이드/단백질의 바람직한 예이다. 더욱이, 특이적인 종양 기원한 헬퍼 펩타이드가 바람직하다. 특이적인 종양 기원한 헬퍼 펩타이드는 특히 HLA-DR, HLA-DP 또는 HLA-DQ에 의해, 전형적으로 MHC 부류 II에 의해 제시된다. 특이적인 종양 기원한 헬퍼 펩타이드는 HER2, NY-ESO-1, hTERT 또는 IL13RA2와 같은 공유되고 과발현된 종양 항원의 서열의 단편일 수 있다. 이러한 단편은 바람직하게는 길이가 적어도 10개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 11개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 12개의 아미노산 및 가장 바람직하게는 적어도 13개의 아미노산이다. 특히, 길이가 13 내지 24개 아미노산인 HER2, NY-ESO-1, hTERT 또는 IL13RA2와 같은 공유되고 과발현된 종양 항원이 바람직하다. 바람직한 단편은 MHC 부류 II에 결합하므로 예를 들면, IEDB의 MHC 부류 II 결합 예측 도구를 사용하여 확인할 수 있다(Immune epitope database and analysis resource; Supported by a contract from the National Institute of Allergy and Infectious Diseases, a 성분 of the National Institutes of Health in the Department of Health and Human Services　; URL: http://www.iedb.org/; http://tools.iedb.org/mhcii/).

상기 정의된 바와 같은 면역원성 화합물을 포함하고, 하나 이상의 면역-보조제 물질을 추가로 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물은 또한 본 명세서에서 "면역원성 조성물" 또는 일부 구현예에서 "백신 조성물"로 명명될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "면역원성 조성물"은, 포유동물에 투여되는 경우 및 특히 사람 개인에게 투여되는 경우, 면역 반응을 유도하거나 유지할 수 있는, 특히 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물을 지칭한다.

본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "핵산", "핵산 분자", "핵산 서열", "폴리뉴클레오타이드", "뉴클레오타이드 서열"은 cDNA, 게놈성 DNA, 리보소옴 DNA와 같은 단일-가닥 또는 이중 가닥 DNA 또는 RNA, 및 RNA, rRNA, mRNA와 같은 상기 DNA의 전사 생성물에 상응하는 정밀한 연속된 천연 뉴클레오타이드(예컨대, A, T, G, C 및 U), 또는 합성 뉴클레오타이드; 안티센스 DNA, 안티센스 RNA; 상보성 RNA 및/또는 DNA 서열; 발현 요소, 조절 요소, 및/또는 프로모터를 지니거나 지니지 않는 RNA 및/또는 DNA 서열; 벡터; 및 이의 조합을 지칭한다. 특이적인 아미노산 서열을 암호화할 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 측정하는 것은 당해 분야의 기술자의 기술 내에 있다.

본 발명에 따른 (폴리)펩타이드 및/또는 핵산은 임의의 합성 방법, 임의의 재조합 방법, 임의의 생체외(ex vivo) 생성 방법 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는 당해 분야에서 임의의 공지된 방법, 및 이의 임의의 조합을 포함하는 당해 분야에서 임의의 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 이러한 기술은 상술한 바와 같은 문헌에 충분히 설명되어 있다.

본 발명의 맥락에서, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드는 종양 항원과 유사성을 갖는 항원을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "종양 항원"은 종양-특이적인 항원 및 종양-관련된 항원을 포함한다. 일반적으로, 용어 "종양 항원" 또는 "종양 단백질"은 본원에서 종양 세포, 및 때때로 또한 정상 세포에서 생산된 항원성 물질을 일컬으며, 이는 대상체에서 투여시 면역 반응을 개시할 수 있다. 사람에서, 이들은 이들의 발현 양식, 기능 또는 유전적 기원에 따라 분류되어 왔으며, 과발현된 자가-항원(예를 들면, HER2/neu 및 이의 변이체 dHER2, p53, 빌름스 종양(Wilm's tumor)　1, 에프린 수용체, 프로테아제-3, 무신-1, 메소텔린, EGFR, CD20); 암-고환(CT) 항원(예를 들면, MAGE-1, BAGE, GAGE, NY-ESO-1); 네오-항원(예를 들면, MUM-1, bcr-abl, ras, b-raf, p53, CDK-4, CDC27, 베타-카테닌, 알파-악테닌-4로부터의 돌연변이체)으로도 공지된 돌연변이성 항원; 조직-특이적인 분화 항원(예를 들면, 흑색종 항원 Melan A/MART-1, 타이로시나제, TRP1/pg75, TRP2, gp100 및 강글리오사이드 GM3, GM2, GD2 및 GD3; 프로테아제 암 항원 PSMA, PSA 및 PAP); 온코바이러스에 의해 발현된 바이러스 항원(예를 들면, HPV, EBV); 종양태아성 항원(예를 들면, 알파페토단백질 AFP 및 암배아 항원 CEA); 및 공통의(universal) 항원(텔로머라제, hTERT, 수르비빈, mdm-2, CYP-1B1)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다(Srinivasan and Wolchok, tumor antigens for cancer immunotherapy: therapeutic potential of xenogeneic DNA vaccines. J Transl Med. 2004 Apr 16;2(1):12).

본원에 기술된 본 발명의 상이한 국면 및 구현예에 따라서, "대상체" 또는 "숙주"는 바람직하게는 포유동물을 지칭하고, 가장 바람직하게는 사람을 지칭한다. 상기 대상체는 암, 예를 들면 흑색종, 결장직장 암 또는 투명 세포 신장 세포 암종을 가지거나, 이로 진행될 위험이 있는 것으로 예측되었을 수 있다.

"약제학적으로 허용되는 첨가제"에서, 이는 본원에서 활성제의 전달, 안정성 또는 생이용성(bioavailability)을 증진시키고, 이것이 투여되는 대상체에 의해 대사될 수 있고 무-독성인 약제학적 등급의 화합물을 의미한다. 본 발명에 따른 바람직한 첨가제는 예를 들면, 물, 염수, 인산염 완충된 염수, 덱스트로즈, 글리세롤, 에탄올 등, 및 이의 조합과 같은, 약제학적 생성물에서 일반적으로 사용된 임의의 첨가제를 포함한다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들면, 당, 만니톨, 소르비톨과 같은 다가알코올, 또는 염화나트륨을 조성물 내에 포함하는 것이 바람직할 수 있을 것이다. 약제학적으로 허용되는 첨가제는 습윤제 또는 유화제, 또는 방부제와 같은 소량의 보조 물질을 추가로 포함할 수 있다.

"백신"에서, 이는 본원에서 살아있는 유기체의 면역계를 자극시킴으로써 예방을 통하거나 치료요법을 통해, 유해한 항원에 대해 보호를 제공하는 조성물을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "암"은 악성 신생물을 지칭한다. 특히, 용어 "암"은 세포의 조절되지 않은 분열 및 침입을 통한 인접한 조직내로 직접적인 성장에 의해 또는 전이에 의해 먼 부위내로의 이식에 의해, 다른 조직을 침범하는 이러한 세포의 능력에 의해 특징화되는 질환 또는 장애의 부류의 임의의 구성원을 지칭한다. 전이는 암 세포가 혈류계 또는 림프계를 통해 수송되는 단계로서 정의된다. 이는 다른 것들 중에서도, 식도암, 위암, 십이지장암, 소장암, 충수암, 대장암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 항문암, 췌장암, 간암, 담낭암, 비장암, 신장암, 방광암, 전립샘암, 고환암, 자궁암, 자궁내막암, 난소암, 질암, 외음부암, 유방암, 폐암, 갑상선암, 흉선암, 뇌암, 신경계암, 경구암, 피부암, 혈액암, 림프종, 눈암, 골암, 골수암, 근육암 등을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 흑색종, 두경부, 유방, 결장직장암 또는 투명 세포 신장 세포 암종이 바람직하다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "예방하는", "예방("prevention", "prophylaxis")" 또는 "예방하다"는 일반적으로 이의 발생 전에 질환 또는 상태의 발생 또는 발달을 피하거나 최소화하는 것을 의미하지만, 용어 "치료하는", "치료" 또는 "치료하다"는 이의 발병 후 질환 또는 상태(또는 질환 또는 상태의 증상)을 감소시키거나, 완화시키거나 치유함을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 암의 예방 및/또는 치료는 예를 들면, 대상체내에서 종양 세포의 비-증식, 약화, 감소되거나 지연된 증식 또는 대상체내에서 종양 세포의 완전하거나 거의 완전한 제거를 초래할 수 있다. 용어 "예방하는"은 "의 발생 경향성의 감소" 또는 "재발 경향성의 감소"를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 "유효량" 또는 "유효 용량"은 목적한 효과를 제공하는 양이다. 치료학적 목적을 위해, 유효량은 유리하거나 바람직한 임상 결과를 제공하기에 충분한 양이다. 제공된 적용을 위한 바람직한 유효량은 고려사항, 예를 들면, 대상체의 크기, 연령, 체중, 예방되거나 치료되어야 할 암의 유형, 및 암이 시작된 이래로 경과 시간을 고려하여 숙련가에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예방 또는 치료의 측면에서, 본 발명의 맥락에서 조성물의 유효량은 암에 대해 지시된 체액성 및/또는 세포-매개된 면역 반응을 유도하기에 충분한 양이다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "포함하는"은 "로 이루어진"을 포함한다.

추가의 정의는 명세서 전반에 걸쳐서 제공된다.

본 발명은 본 발명의 바람직한 구현예, 및 본원에 포함된 실시예를 포함하는, 다음의 상세한 설명을 참고로 보다 용이하게 이해될 수 있다.

따라서, 본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다시 말해서, 본 발명은 서열 번호: 1 내지 106 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공한다. 본 발명이 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공한다. 심지어 보다 바람직하게는, 본 발명은 서열 번호: 51, 52, 55 또는 56 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공한다. 본 발명이 서열 번호: 101 또는 102 중 임의의 하나에서 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 항원성 펩타이드(를 포함하는 면역원성 화합물)을 제공하는 것이 또한 심지어 보다 바람직하다.

예시적인 구현예에 따라서, 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드는 서열 번호: 71의 펩타이드이다.

일 구현예에 따라서, 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드, 또는 상기 항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드는 예를 들면 공유 결합 또는 비-공유 결합에 의해 담체 단백질에 연결된다.

일부 구현예에 따라서, 본 발명은 화학식 I의 항원성 펩타이드를 포함하는, 상기 정의한 바와 같은 면역원성 화합물에 관한 것이다:

[화학식 I]

PepNt- CORE-PepCt

여기서:

- "PepNt"는 0 내지 30개의 아미노산 잔기로 변하는 아미노산 길이를 지니고 화학식 I의 폴리펩타이드의 N-말단 끝에 위치하는 폴리펩타이드로 이루어지고;

- CORE는 서열 번호: 1 내지 106(이는 서열 번호: 71을 포함한다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 특히 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열과 같은, 서열 번호: 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 이루어진 폴리펩타이드로 이루어지며;

- "PepCt"는 0 내지 30개 아미노산 잔기로 변하는 아미노산 길이를 가지고 화학식 I의 폴리펩타이드의 C-말단 끝에 위치한 폴리펩타이드로 이루어진다.

바람직하게는, 화학식 I의 항원성 펩타이드는 융합 펩타이드 또는 융합 단백질, 특히 재조합 융합 펩타이드 또는 단백질이다. 용어 "재조합"은 이것이 천연에 존재하지 않음을 의미한다.

본 발명은 또한

- 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역원성 화합물, 또는

- 본 발명에 따른 적어도 하나의 항원성 펩타이드;

및, 임의로 보조제로 로딩된 나노입자에 관한 것이다.

본 발명은

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자, 또는

- 본 발명에 따른 핵산,

및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 첨가제를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.

면역원성 조성물은 하나 이상의 면역자극제를 추가로 포함할 수 있다.

특히, 상기 면역자극제는 면역-보조제 및 항원-제시 세포로 이루어진 그룹에서 선택된다.

보다 특히, 항원-제시 세포는 수지상 세포로 이루어질 수 있다.

특히, 면역원성 조성물은

(i) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 면역원성 화합물;

(ii) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드;

(iii) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 나노입자; 또는

(iv) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 핵산을 포함할 수 있다.

이와 관련하여, 2개의 구별되는 성분은 특히 본 발명에 따른 구별되는 항원성 펩타이드(이에는 면역원성 화합물, 나노입자 및/또는 핵산이 포함된다)를 지칭한다. 본 발명에 따른 이러한 2개의 구별되는 성분, 특히 2개의 구별되는 항원성 펩타이드(2개의 구별되는 성분에 포함된)는 바람직하게는 동일한 유형의 암, 예를 들면, 이러한 암과 관련된 동일하거나 구별되는 항원 및/또는 이러한 암과 관련된 항원내 동일하거나 구별되는(참고) 에피토프에 관한 것이다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 따른 2개의 구별되는 성분, 특히 2개의 구별되는 항원성 펩타이드(2개의 구별되는 성분에 포함된)는 동일한 종양(관련되거나 특이적인) 항원에 관한 것이다. 본 발명에 따른 2개의 구별되는 성분, 특히 2개의 구별되는 항원성 펩타이드(2개의 구별되는 성분 내에 포함된)는 또한 동일하거나 구별되는 (참고) 종양(관련되거나 특이적인) 항원(들)에 관한 것일 수 있다.

본 발명은 또한

암의 예방 또는 치료시 사용하기 위한

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 (숙주) 세포,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 핵산, 또는

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물 중 임의의 하나에 관한 것이다.

상이한 유형의 암 중에서, 치료 및/또는 예방을 위해 보다 특히 고려된 것들은 특히 표적화된 종양 항원의 측면에서, 본원의 하기 표 1b에 설명되어 있다.

[표 1b]

따라서, 일 구현예에 따라서, 본 발명은 표 1b로부터 선택된 암의 예방 또는 치료시 사용하기 위한 본원에 기술된 항원성 펩타이드 및 면역원성 화합물 중 임의의 하나, 및 본원에 기술된 면역원성 조성물 중 임의의 하나에 관한 것이다.

본 발명은 또한 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 암호화하는 핵산에 관한 것이며, 여기서 펩타이드는 다음으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다:

- 서열 번호: 1 내지 106으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항원성 펩타이드; 및/또는

- 본원에 기술된 바와 같은, 화학식 I, 또는 화학식 Ia, 또는 화학식 Ib의 항원성 펩타이드.

특히, 상기 정의된 바와 같은 핵산은 서열 번호: 71을 포함하는, IL13RA2과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항원성 펩타이드를 암호화할 수 있다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에게 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 또는 본 발명에 따른 면역원성 화합물 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물 또는 본 발명에 따른 나노입자 또는 본 발명에 따른 핵산 또는 본 발명에 따른 조합물을 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 암을 예방하거나 치료하거나, 항-종양-반응을 개시하거나, 향상시키거나 연장시키는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물을 암호화하는 핵산에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 면역원성 화합물의 조합물에 관한 것이다.

더욱이, 본 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드의 조합물에 관한 것이다.

더욱이, 본 발명은 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 나노입자의 조합물에 관한 것이다.

더욱이, 본 발명은 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 2개의 구별되는 핵산의 조합물에 관한 것이다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물의 2개의 구별되는 성분은 동일하거나 상이한 조성물에 포함된다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물의 2개의 구별되는 성분은 동일하거나 상이한 투여 경로를 통해 투여된다.

특정의 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합물의 2개의 구별되는 성분은 거의 동일한 시간에(동시에) 또는 연속적으로 투여된다.

더욱이, 본 발명은 또한

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 (숙주) 세포,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 핵산, 또는

항원성 펩타이드, 면역원성 화합물, 핵산, 나노입자 및 세포

반대로 참고하지 않는 한, ≪　항원성 펩타이드　≫를 지칭하는 모든 구절은 ≪　면역원성 화합물　≫에 또한 적용될 수 있다.

본 발명에 따른 항원성 펩타이드는 하기 표 1a에 나열되어 있으며, 이는 또한 이들을 암호화하는 유전자의 명칭과 함께 상응하는 "참고" 사람 종양 항원(에피토프), 및 비-제한적인 방식으로 종양내 이들의 기록된 국재화에 관한 정보를 제공한다. N.A. = 적용가능하지 않음. 서열 번호: 1 내지 106의 서열 번호는 항원성 펩타이드를 지칭한다.

[표 1a]

이들 106개 항원성 펩타이드 서열은 IL13RA2로부터 기원한 종양 항원과 같은, 참고 종양 항원의 서열을 기반으로 추가로 정의될 수 있다.

따라서, 본 발명은 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 항원성 펩타이드를 포함하는 면역원성 화합물에 관한 것이며, 이러한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1 내지 106으로 이루어진 그룹 중에서 선택되며, 이는:

- 유전자 PLIN2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 1로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 ALDH1A1에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 2 내지 3으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 AFP에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 4 내지 5로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 PTPRC에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 6 내지 11로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 CEACAM5에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 12 내지 25로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 ENAH에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 26으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 EZH2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 27로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 PMEL에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 28로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 ERBB2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 29 내지 70으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 IL13RA2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 71로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MAGEA1에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 72로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MAGEA3에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 73 내지 75로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MAGEA4에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 77 내지 80으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MAGEC1에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 77 내지 80으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MAGEC2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 81 내지 85로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 SCGB2A2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 86 및 87로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MLANA에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 88 및 89로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MDK에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 90 및 91로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 MMP2에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 92 및 93으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 CTAG1B에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 94로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 ACPP에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 95 내지 99로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 STEAP1에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 100 내지 102로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 TAG1에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 103 내지 105로 이루어진 그룹 중에서 선택된다);

- 유전자 TYR에 의해 암호화된 종양 항원과 아미노산 유사성을 갖는 펩타이드(상기 항원성 펩타이드는 서열 번호: 106으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다).

따라서, 이러한 106개의 항원성 펩타이드는 이들의 참고 펩타이드에 따라 다수의 구별되는 계열로 추가로 분류될 수 있다:

- 계열 ≪　SVASTITGV 　≫ (서열 번호: 107)(이러한 계열은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　LLYKLADLI 　≫ (서열 번호: 108)(이러한 계열은 서열 번호: 2 및 3의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　QLAVSVILRV　≫ (서열 번호: 109)(이러한 계열은 서열 번호: 4 및 5의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　KFLDALISL 　≫ (서열 번호: 110)(이러한 계열은 서열 번호: 6 내지 11의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　GVLVGVALI 　≫ (서열 번호: 111)(이러한 계열은 서열 번호: 12 내지 24의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　HLFGYSWYK ≫ (서열 번호: 112)(이러한 계열은 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　TMNGSKSPV　≫ (서열 번호: 113)(이러한 계열은 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　FMVEDETVL　≫ (서열 번호: 114)(이러한 계열은 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　ITDQVPFSV ≫ (서열 번호: 115)(이러한 계열은 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　IISAVVGIL　≫ (서열 번호: 116)(이러한 계열은 서열 번호: 29 내지 40의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　ILHNGAYSL　≫ (서열 번호: 117)(이러한 계열은 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　KIFGSLAFL　≫ (서열 번호: 118)(이러한 계열은 서열 번호: 42 및 43의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　PLTSIISAV　≫ (서열 번호: 119)(이러한 계열은 서열 번호: 44 내지 46의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　RLLQETELV　≫ (서열 번호: 120)(이러한 계열은 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　TLEEITGYL　≫ (서열 번호: 121)(이러한 계열은 서열 번호: 48 내지 50의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　VVLGVVFGI　≫ (서열 번호: 122)(이러한 계열은 서열 번호: 51 내지 70의 아미노산 서열을 포함한다);

- 서열 서열 번호: 71을 포함하는 계열 ≪　WLPFGFILI　≫ (서열 번호: 123);

- 계열 ≪　KVLEYVIKV　≫ (서열 번호: 124)(이러한 계열은 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　EVDPIGHLY　≫ (서열 번호: 125)(이러한 계열은 서열 번호: 73 및 74의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　VAELVHFLL ≫ (서열 번호: 126)(이러한 계열은 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　EVDPASNTY　≫ (서열 번호: 127)(이러한 계열은 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함한다);

- 계열 ≪　KVVEFLAML　≫ (서열 번호: 128)(이러한 계열은 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　SFSYTLLSL　≫ (서열 번호: 129)(이러한 계열은 서열 번호: 78 및 79의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　VSSFFSYTL　≫ (서열 번호: 130)(이러한 계열은 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　ALKDVEERV　≫ (서열 번호: 131)(이러한 계열은 서열 번호: 81 내지 83의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　ASSTLYLVF　≫ (서열 번호: 132)(이러한 계열은 서열 번호: 84 및 85의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　PLLENVISK　≫ (서열 번호: 133)(이러한 계열은 서열 번호: 86 및 87의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　ILTVILGVL　≫ (서열 번호: 134)(이러한 계열은 서열 번호: 88 및 89의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　ALLALTSAV　≫ (서열 번호: 135)(이러한 계열은 서열 번호: 90 및 91의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　GLPPDVQRV　≫ (서열 번호: 136)(이러한 계열은 서열 번호: 92 및 93의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　LAMPFATPM　≫ (서열 번호: 137)(이러한 계열은 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　ALDVYNGLL　≫ (서열 번호: 138)(이러한 계열은 서열 번호: 95 내지 97의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　FLFLLFFWL　≫ (서열 번호: 139)(이러한 계열은 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　TLMSAMTNL　≫ (서열 번호: 140)(이러한 계열은 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　MIAVFLPIV　≫ (서열 번호: 141)(이러한 계열은 서열 번호: 100 내지 102의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　SLGWLFLLL　≫ (서열 번호: 142)(이러한 계열은 서열 번호: 103 내지 105의 아미노산 서열을 포함한다).

- 계열 ≪　MLLAVLYCL ≫ (서열 번호: 143)(이러한 계열은 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함한다).

바람직한 구현예에 따라서, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

예시된 구현예에 따라서, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드이다.

보다 바람직하게는, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 어느 하나에 따른 아미노산을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또한, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 어느 하나에 따른 아미노산을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것이 보다 바람직하다. 심지어 보다 바람직하게는, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 어느 하나에 따른 아미노산을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 여전히 보다 바람직하게는, 본 발명의 항원성 펩타이드는 서열 번호: 51, 52, 55 또는 56 중 어느 하나에 따른 아미노산을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 항원성 펩타이드가 서열 번호: 101 또는 102 중 어느 하나에 따른 아미노산을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것이 여전히 보다 바람직하다.

일부 구현예에 따라서, 면역원성 화합물은 화학식 I의 항원성 펩타이드를 포함하거나,이로 이루어진다:

[화학식 I]

PepNt-CORE-PepCt

여기서,

- "PepNt"는 0 내지 500개의 아미노산 잔기로 변하는 아미노산 길이를 갖고 화학식 I의 폴리펩타이드의 N-말단 끝에 위치한 폴리펩타이드로 이루어지고;

- CORE는 서열 번호: 1 내지 106(이는 서열 번호: 71을 포함한다)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 특히 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열과 같은 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 이루어진 폴리펩타이드로 이루어지며;

- "PepCt"는 0 내지 500개의 아미노산 잔기로 변하는 아미노산 길이를 가지고 화학식 I의 폴리펩타이드의 C-말단 끈에 위치한 폴리펩타이드로 이루어진다.

하나의 특수한 구현예에 따라서, 면역원성 화합물은 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 항원성 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진다:

[화학식 Ia]

PepNt- CORE; 또는

[화학식 Ib]

CORE-PepCt.

여기서 "PepNt" 및 "PepCt" 및 CORE는 위에서 정의한 바와 같다.

일부 심지어 보다 특수한 구현예에 따라서, 상기 정의된 바와 같은, 상기 항원성 펩타이드 또는 면역원성 펩타이드는 9 내지 1000개의 아미노산을 포함하고; 이는 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67? 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 및 1000개의 아미노산을 포함한다.

상기 구현예에 따라서, 적용가능한 경우, "PepNt" 및 "PepCt"의 길이는 상응하게 정의된다.

따라서, 상기 정의된 바와 같은 "PepNt" 및 "PepCt"는 0 내지 500개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며; 이는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 및 500개의 아미노산 잔기를 포함한다.

담체 분자에 연결된 화학식 I의 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진 것과 같은, 본 발명의 면역원성 화합물을 생성하는데 사용된 담체 분자의 유형은 또한 당해 분야의 기술자의 일반적인 지식 내에 양호하게 존재한다. 담체 분자의 기능은 종양 항원에 대해 면역 반응을 향상시키기 위한 사이토킨 헬프(또는 T-세포 헬프)를 제공하기 위한 것이다.

바람직하게는, 항원성 펩타이드는 바람직하게는 공유결합 또는 비-공유결합성 결합에 의해 담체 분자, 특히 담체 단백질에 연결된다. 펩타이드가 임의 결합된 담체 분자는 광범위한 공지된 항체로부터 선택될 수 있다. 백신 목적을 위한 담체 분자의 예는 사람 또는 소 혈청 알부민 및 키홀 림펫 해모시아닌(KLH)과 같은 단백질 및 지방산을 포함한다. 화학식 I의 항원성 펩타이드가 공유 결합될 수 있는 담체 분자의 다른 구현예는 디프테리아, 콜레라, 이. 콜라이(E. coli) 열 불안정성 또는 테타누스 독소와 같은 세균 독소 또는 변성독소, 엔. 메닝기티디스(N. meningitidis) 외막 단백질(유럽 특허원 제EP0372501호), 합성 펩타이드(유럽 특허원 제EP0378881호 및 제EP0427347호), 열 소크 단백질(PCT 출원 제W093/17712호), 페르투시스 단백질 (PCT 출원 제W098/58668호), 에이치. 인플루엔자에(H. influenzae)로부터의 단백질 D(PCT 출원 제WO00/56360호) 및 씨. 디피실레(C. difficile)로부터의 독소 A 또는 B(국제 특허원 제WO00/61761호)를 포함한다.

일 구현예에 따라서, 담체 단백질 또는 담체 펩타이드는 HHD-DR3 담체 펩타이드 MAKTIAYDEEARRGLERGLN(서열 번호: 144)이다.

일 구현예에 따라서, "PepNt" 및/또는 "PepCt"는 HHD-DR3 담체 펩타이드 MAKTIAYDEEARRGLERGLN(서열 번호: 144)와 같은 담체 단백질 또는 담체 펩타이드에 상응할 수 있다.

일 구현예에 따라서, 면역원성 화합물은 서열 서열 번호: 71의 항원성 펩타이드의 N-말단에 공유결합으로 연결된 서열 서열 번호: 144의 담체 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진다.

보다 바람직하게는, 담체 단백질 또는 담체 펩타이드는 본원에 기술된 바와 같은 CD4+ Th1 세포의 자극을 제공하는 것과 같은, 면역-보조 특성을 갖는 단백질/펩타이드이다. 이의 바람직한 예는 면역 기억을 소생하거나 비-특이적인 도움을 제공하거나 테타누스 헬퍼 펩타이드, 키홀 림펫 헤모시아닌 펩타이드 또는 PADRE 펩타이드와 같은 특이적인 종양-기원한 헬퍼 펩타이드일 수 있는 비-종양 항원이다. 다른 바람직한 예는 특이적인 종양 기원한 헬퍼 펩타이드이며, 이는 MHC II에 의해, 특히 공유된 과발현된 종양 항원의 단편, 예컨대, 상기 기술된 바와 같은, HER2, NY-ESO-1, hTERT 또는 IL13RA2와 같은, HLA-DR, HLA-DP 또는 HLA-DQ에 의해 제시될 수 있다.

따라서, "PepNt" 및/또는 "PepCt"는 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 CD4+ Th1 세포의 자극을 제공하는 것과 같은 면역-보조제 특성을 갖는 이러한 단백질/펩타이드에 상응한다.

더욱이, 면역원성 화합물은 서열 번호: 1 내지 106(이는 서열 번호: 71을 포함한다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 특히 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열과 같은 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 항원성 펩타이드의 N-말단에 공유결합으로 연결된, 본원에 기술된 바와 같은 CD4+ Th1 세포의 자극을 제공하는 것과 같은, 면역-보조 특성을 갖는 이러한 단백질/펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진다.

일 구현예에 따라서, 상기 항원성 펩타이드는 링커 모이어티(linker moiety)를 통해 담체 분자에 공유결합으로 결합된다.

링커제(linker agent)의 상기 제한된 계열은 GMBS, 설포-GMBS, SMPB 및 설포-SMPB로 명명된 링커제를 포함하거나, 심지어 이로 이루어진다.

상기 정의된 바와 같은 면역원성 화합물의 일부 구현예에서, 상기 링커제는 GMBS (N-[γ-말레이미도부티릴-옥시]석신이미드 에스테르), 설포-GMBS(N-[γ-말레이미도부티릴-옥시]설포석신이미드 에스테르), SMPB(석신이미딜 4-[p-말레이미도페닐]부티레이트) 및 설포-SMPB(설포석신이미딜 4-[p-말레이미도페닐]부티레이트)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

2개의 단백질을 일반적으로 링커제, 및 보다 특히 GMBS, 설포-GMBS, SMPB 및 설포-SMPB로 이루어진 그룹으로부터 선택된 링커제와 접합시키는 방법은 당해 분야의 기술자에 의해 잘 알려져 있다. 대안적으로, 이러한 프로토콜은 Pierce Company (미국 일리노이즈주)에 의해 공공 이용가능한 전단에 개시되어 있다. GMBS, 설포-GMBS, SMPB 및 설포-SMPB는 N-하이드록시석신이미드(NHS) 에스테르 그룹 및 말레이미드 그룹 둘 다를 함유하는 헤테로이작용성 링커제로 이루어진다. GMBS, 설포-GMBS, SMPB 또는 설포-SMPB를 사용한 접합은 일반적으로 2-단계 과정에 의해 수행된다. 제1 단계에서, 아민-함유 단백질을 수배 몰 과량의 링커와 pH 7-9에서 반응시켜 아미드 결합을 형성시킨 후, 일반적으로 탈염(desalting) 또는 투석에 의해, 과량의 반응하지 않은 링커제를 제거한다. 제2 단계에서, 설프하이드릴-함유 분자(예컨대, 화학식 I의 펩타이드)를 가하여 제1 단백질에 이미 부착된 말레이미드 그룹과 pH 6.5-7.5에서 반응시켜 안정한 티오에테르 결합을 형성시킨다.

화학식 I의 펩타이드를 아민-함유 담체 단백질에 공유결합으로 연결시키기 위한 링커제로서 SMPB 또는 설포-SMPB를 사용하면 하기 화학식 II의 접합체를 생성한다:

[화학식 II]

상기 화학식 II에서,

- R1은 아민-함유 담체 단백질의 하나의 반응성 그룹으로 이루어져 있고, 여기서 이에 부착된 NH 그룹은 (i) 아민-함유 담체 단백질의 N-말단 끝에 위치한 알파 아미노 그룹 또는 (ii) 아민-함유 담체 단백질의 라이신 (K) 아미노산 잔기로부터의 측쇄 아미노 그룹으로부터 기원한다.

- R2는 화학식 I의 펩타이드로 이루어지고, 여기서 이에 부착된 황(S) 원자는 화학식 I의 펩타이드의 N-말단 끝 또는 C-말단 끝에 위치한 시스테인 잔기의 설프하이드릴(SH) 그룹으로부터 기원한다. 일부 구현예에서, 설프하이드릴 모이어티는 비천연 아미노산의 부분, 또는 화학식 I의 펩타이드의 끝에 존재하는 임의의 다른 분자일 수 있다.

화학식 I의 펩타이드를 아민-함유 담체 단백질, 특히 CRM197 담체에 공유결합으로 연결시키기 위한 링커제로서 GMBS 또는 설포-GMBS를 사용하면 하기 화학식 III의 접합체를 생성한다:

[화학식 III]

상기 화학식 III에서,

- R1은 아민-함유 담체 단백질의 하나의 반응성 그룹으로 이루어지고, 여기서 이에 부착된 NH 그룹은 (i) 아민-함유 담체 단백질의 N-말단 끝에 위치한 알파 아미노 그룹 또는 (ii) 아민-함유 담체 단백질의 라이신(K) 아미노산 잔기로부터의 측쇄 아미노산 그룹으로부터 기원한다.

- R2는 화학식 I의 펩타이드로 이루어지고, 여기서 이에 부착된 황(S) 원자는 화학식 I의 펩타이드의 N-말단 끝 또는 C-말단 끝에 위치한 시스테인 잔기의 설프하이드릴(SH) 그룹으로부터 기원한다. 일부 구현예에서, 설프하이드릴 모이어티는 비천연 아미노산의 부분, 또는 화학식 I의 펩타이드의 말단에 존재하는 임의의 다른 분자일 수 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역원성 화합물 또는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항원성 펩타이드가 로딩된 세포를 제공한다. 바람직한 항원성 펩타이드는 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열과 같은, 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 또는 폴리펩타이드이다. 또한, 이의 조합, 즉, 본 발명에 따른 분명한 항원성 펩타이드(또는 각각의 면역원성 화합물(들))가 로딩된 세포가 바람직하다.

바람직한 세포는 항원 제시 세포(APC), 보다 바람직하게는 수지상 세포(DC)이다.

항원-제시 세포(APC)는 항원을 가공하여 이를 면역계의 T 세포에 대한 세포 표면 위에 나타냄으로써, 생체내에서 T-세포 반응을 개시하거나 조절하므로, 특히 관심이 있다. 본 발명의 맥락에서, APC는 본 발명에 따른 항원성 펩타이드(들) 및/또는 면역원성 화합물(들)로 로딩되는 것이 바람직하며, 이는 시험관내에서 APC를 상기 항원성 펩타이드(들) 및/또는 면역원성 화합물(들)에 노출시킴으로써 수행될 수 있다(Rizzo MM, Alaniz L, Mazzolini G.Ex vivo loading of autologous dendritic cells with tumor antigens. Methods Mol Biol. 2014;1139:41-4; Rolinski J, Hus I. Breaking immunotolerance of tumors: a new perspective for dendritic cell therapy. J Immunotoxicol. 2014 Oct;11(4):311-8).

본 발명에 따른 바람직한 항원-제시 세포는 수지상 세포(DC)이다. 본 발명에 따른 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물을 수지상 세포와 조합시키는 것이 또한 유리할 수 있는데, 이는 이들이 가장 강력한 항원-제시 세포이며 암 환자에서 흔히 기능적으로 결합이 있는 것으로 보고되었기 때문이다. 수지상 세포는 건강한 적격 공여체(compatible donor)(즉, 수지상 세포는 HLA-관련되어 있다) 또는 환자 자체(단 이들은 기능성(즉, 수지상 세포는 자가조직이다)이다)로부터 예를 들면, 말초 혈액으로부터 직접적인 단리, 또는 CD14+ 단핵세포 또는 CD34+ 조혈 전구체와 같은 말초 혈액 세포로부터의 유도체화에 의해서, 당해 분야의 기술자에 의해 용이하게 수득될 수 있다(Figdor CG, de Vries IJ, Lesterhuis WJ, Melief CJ. Dendritic cell immunotherapy: mapping the way. Nat Med. 2004 May;10(5):475-80). 수지상 세포는 실제로 S100, p55, CD83, 및/또는 OX62와 같은 이들의 표면 마커에 의해 말초 혈액의 다른 세포로부터 구별될 수 있으므로 당해 분야에 잘 알려진 세포 배양 기술을 사용하여 상기 마커를 기반으로 단리되어 정제될 수 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 또는 본 발명에 따른 면역원성 화합물을 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 면역원성 화합물은 펩타이드 또는 단백질이다. 바람직하게는, 항원성 펩타이드는 서열 번호: 26, 28, 47, 51, 52, 55, 56, 77, 93, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 서열 번호: 51, 52, 55, 56, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열과 같은, 17, 31, 32, 51, 52, 55, 56, 59, 68, 89, 94, 100, 101 또는 102 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열; 및/또는 상술한 바와 같은 화학식 I의 항원성 펩타이드를 갖는 펩타이드 또는 폴리펩타이드이다.

핵산은 바람직하게는 단일 가닥, 이중 가닥 또는 부분 이중 가닥의 핵산, 바람직하게는 게놈성 DNA, cDNA, RNA, 안티센스 DNA, 안티센스 RNA, 발현 요소가 있거나 없는 상보성 RNA/DNA 서열, 미니-유전자(mini-gene), 유전자 단편, 조절 요소, 프로모터, 및 이의 조합물로부터 선택된 것을 포함한다. 핵산(분자) 및/또는 폴리뉴클레오타이드의 추가로 바람직한 예는 예컨대, 재조합 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 올리고뉴클레오타이드, rRNA, mRNA, 또는 tRNA와 같은 RNA 분자, 또는 상기 기술된 바와 같은 DNA 분자를 포함한다. 따라서, 핵산(분자)은 DNA 분자 또는 RNA 분자이고; 바람직하게는 게놈성 DNA; cDNA; rRNA; mRNA; 안티센스 DNA; 안티센스 RNA; 상보성 RNA 및/또는 DNA 서열; 발현 요소, 조절 요소, 및/또는 프로모터가 있거나 없는 RNA 및/또는 DNA 서열; 벡터; 및 이의 조합으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

따라서, 핵산 분자는 벡터일 수 있다. 본 발명의 맥락에서 사용된 바와 같은, 용어 "벡터"는 핵산 분자, 바람직하게는 인공 핵산 분자, 즉, 천연에 존재하지 않는 핵산 분자를 지칭한다. 본 발명의 맥락에서 벡터는 목적한 핵산 서열을 혼입시키거나 보유하는데 적합하다. 이러한 벡터는 저장 벡터, 발현 벡터, 클로닝 벡터, 이전 벡터(transfer vector) 등일 수 있다. 저장 벡터는 핵산 분자의 편리한 저장을 허용하는 벡터이다. 따라서, 벡터는 예컨대, 본 발명에 따른 목적한 항원성 펩타이드에 상응하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 RNA, 예컨대, mRNA, 또는 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질과 같은 발현 생성물의 생산에 사용될 수 있다. 예를 들면, 발현 벡터는 프로모터 서열과 같이, 벡터의 서열 스트래치(sequence stretch)의 전사에 필요한 서열을 포함할 수 있다. 클로닝 벡터는 전형적으로 클로닝 부위를 함유하는 벡터이며, 이는 핵산 서열을 벡터내로 혼입시키는데 사용될 수 있다. 클로닝 벡터는 예컨대, 플라스미드 벡터 또는 박테리오파아지 벡터일 수 있다. 이전 벡터는 핵산 분자를 세포 또는 유기체에 이전시키는데 적합한 벡터, 예를 들면, 바이러스 벡터일 수 있다. 본 발명의 맥락에서 벡터는 예컨대, RNA 벡터 또는 DNA 벡터일 수 있다. 바람직하게는, 벡터는 DNA 분자이다. 예를 들면, 본원의 의미에서 벡터는 클로닝 부위, 항생제 내성 인자와 같은 선택 마커, 및 복제 오리진(origin of replication)과 같은, 벡터의 증식에 적합한 서열을 포함한다. 바람직하게는, 본원의 맥락에서 벡터는 플라스미드 벡터이다. 바람직하게는, 본원의 맥락에서 벡터는 발현 벡터이다. 바람직한 벡터는 세균 세포내에서 발현을 위한 벡터이다. 보다 바람직하게는, 벡터는 소위 "살아있는 세균 백신 벡터" 내에서 발현에 유용하며, 여기서 살아있는 세균 세포(예컨대, 세균 또는 세균 포자, 예컨내, 내생포자, 외생포자 또는 미생물 낭)는 백신으로서 작용할 수 있다. 이의 바람직한 예는 da Silva et al., Live bacterial vaccine vectors: an overview; Braz J Microbiol. 2015 Mar 4;45(4):1117-29에 기술되어 있다.

본 발명에 따른 항원성 펩타이드를 암호화하는 핵산은 네이키드 핵산(naked nucleic acid), 또는 플라스미드 또는 바이러스 벡터내로 클로닝된 핵산의 형태일 수 있으며(Tregoning and Kinnear, Using Plasmids as DNA Vaccines for Infectious Diseases. Microbiol Spectr. 2014 Dec;2(6). doi: 10.1128/microbiolspec.PLAS-0028-2014), 후자가 특히 바람직하다. 본 발명에 따른 적합한 바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV), 헤르페스 바이러스 및 폭스바이러스 벡터(poxvirus vector)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 핵산을 당해 분야의 표준 재조합 기술을 사용하여 플라스미드 또는 바이러스 벡터내로 클로닝하는 것은 당해 분야의 기술자의 기술내에 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은 또한 발명에 따른 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공하며, 여기서 핵산은 바람직하게는 벡터이다. 바람직하게는, 숙주 세포는 세균 세포이다. 이러한 숙주 세포는 바람직하게는 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 또는 본 발명에 따른 면역원성 화합물의 생산을 위해 사용될 수 있다. 더욱이, 이러한 숙주 세포는 또한 백신 속에서 활성 성분일 수 있다.

바람직하게는, 숙주 세포는 세균 세포, 바람직하게는 소화관 세균 세포이다. 이러한 세균 숙주 세포는 "살아있는 세균 백신 벡터"로서 작용할 수 있으며, 여기서 살아있는 세균 세포(세균 또는 세균 포자, 예컨대, 내생포자, 외생포자 또는 미생물 낭과 같은)는 백신으로서 작용할 수 있다. 이의 바람직한 예는 문헌 'da Silva et al., Live bacterial vaccine vectors: an overview; Braz J Microbiol. 2015 Mar 4;45(4):1117-29'에 기술되어 있다.

세균 세포(예컨대, 세균 또는 세균 포자, 예컨대, 내생포자, 외생포자 또는 미생물 낭), 특히 (전체) 소화관 세균 종은 이들이 함유한 (폴리)펩타이드 또는 핵산보다 더 큰 면역 반응을 개시할 가능성을 가지고 있으므로 유리할 수 있다.

대안적으로, 본 발명에 따른 세균 세포, 특히 소화관 세균은 프로바이오틱(probiotics), 즉, 살아있는 소화관 세균의 형태일 수 있으며, 이는 따라서 이것이 제공할 수 있는 건강 이점으로 인하여 식품 첨가물로서 사용될 수 있다. 이들은 예를 들면, 과립, 환(pill) 또는 캡슐 속에서 동결건조될 수 있거나 소비용 유제품과 직접 혼합될 수 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은

- 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역원성 화합물, 또는

- 본 발명에 따른 적어도 하나의 항원성 펩타이드;

및, 임의로 보조제로 로딩된 나노입자를 제공한다.

특히 백신으로서 사용하기 위한 나노입자는 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, 문헌: Shao et al., Nanoparticle-based immunotherapy for cancer, ACS Nano 2015, 9(1):16-30; Zhao et al., Nanoparticle vaccines, Vaccine 2014, 32(3):327-37; and Gregory et al., Vaccine delivery using nanoparticles, Front Cell Infect Microbiol. 2013, 3:13, doi: 10.3389/fcimb.2013.00013. eCollection 2013, Review에 기술되어 있다. 특히, 나노입자는 항원성 펩타이드(또는 항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드/단백질/핵산)의 전달에 사용되며 임의로 또한 보조제로서 작용할 수 있다. 항원성 펩타이드(항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드/단백질/핵산)는 전형적으로 나노입자 내에 캡슐화되거나 나노입자의 표면에 연결/결합(위에 장식)된다("코팅"). 통상의 시도와 비교하여, 나노입자는 주변의 생물학적 환경으로부터 페이로드(항원/보조제)를 보호하거나, 반감기를 증가시키거나, 전신계 독성을 최소화하거나, APC로의 전달을 촉진시키거나, 심지어 TAA-특이적인 T-세포의 활성화를 직접 개시할 수 있다. 바람직하게는, 나노입자는 크기(직경)가 300 nm 이하, 보다 바람직하게는 200 nm 이하 및 가장 바람직하게는 100 nm 이하이다. 이러한 나노입자는 순환 및 긴 순환 횟수에서 고 구조적 통합성으로, 식세포 흡수로부터 적절하게 차폐될 수 있고, 종양 성장 부위에서 축적될 수 있으며, 종양 덩어리내로 깊이 침투할 수 있다.

나노입자의 예는 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG) 및 폴리(D,L-락틱-코글리콜산)(PLGA)과 같은 중합체성 나노입자; 금 나노입자, 산화철 비드(bead), 산화철 산화아연 나노입자, 탄소 나노튜브 및 중공 실릭나노입자(mesoporous silicnanoparticle)와 같은 무기 나노입자; 양이온성 리포좀과 같은 리포좀; 면역자극성 복합체(ISCOM); 바이러스-유사 입자(VLP); 및 자가-조립된 단백질과 같은 중합체성 나노입자를 포함한다.

중합체성 나노입자는 폴리(d,l-락타이드-코-글리콜라이드)(PLG), 폴리(d,l-락틱-코글리콜산)(PLGA), 폴리(g-글루탐산)(g-PGA), 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG), 및 폴리스티렌과 같은 중합체를 기반으로 하는/이를 포함하는 나노입자이다. 중합체성 나노입자는 항원(예컨대, 항원성 펩타이드 또는 이를 포함하는 (폴리)펩타이드)를 인트랩핑(entrapping)하거나 항원(예컨대, 항원성 펩타이드 또는 이를 포함하는 (폴리)펩타이드)에 결합/접합시킬 수 있다. 중합체성 나노입자는 예컨대, 특정 세포로 전달하는데 사용될 수 있거나, 이들의 느린 생분해 속도의 덕분에 항원 방출을 지연시킬 수 있다. 예를 들면, g-PGA 나노입자를 사용하여 소수성 항원을 캡슐화할 수 있다. 폴리스티렌 나노입자는 다양한 기능성 그룹으로 표면-개질될 수 있으므로, 다양한 항원에 접합시킬 수 있다. 폴리(L-락트산)(PLA), PLGA, PEG, 및 다당류와 같은 천연 중합체와 같은 중합체를 또한 사용하여 하이드로겔 나노입자를 합성할 수 있으며, 이는 나노-크기의 친수성의 3차원 중합체 네트워크의 유형이다. 나노겔(nanogel)은 굴곡성 메쉬 크기, 다가 접합을 위한 거대 표면적, 높은 수분함량, 및 항원에 대한 고 로딩 능력을 포함하는 양호한 특성을 갖는다. 따라서, 바람직한 나노입자는 키토산 나노겔과 같은 나노겔이다. 바람직한 중합체성 나노입자는 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG) 및 폴리(D,L-락틱-코글리콜산)(PLGA)을 기반으로 하는/이를 포함하는 나노입자이다.

무기 나노입자는 무기 물질을 기반으로 하는/이를 포함하는 나노입자이며, 이러한 나노입자의 예는 금 나노입자, 산화철 비드, 산화철 산화아연 나노입자, 탄소 나노입자(예컨대, 탄소 나노튜브) 및 메조다공성(mesoporous) 실리카 나노입자를 포함한다. 무기 나노입자는 강성(rigid) 구조 및 조절가능한 합성을 제공한다. 예를 들면, 금 나노입자는 구, 막대, 큐브와 같은, 상이한 형태로 용이하게 생산될 수 있다. 무기 나노입자는 예컨대, 탄수화물로 표면-개질될 수 있다. 탄소 나노입자는 우수한 생체적합성을 제공하며 예를 들면, 나노튜브 또는 (메조다공성) 구로서 생산될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드(또는 이를 포함하는 (폴리)펩타이드)의 다중 카피를 탄소 나노입자, 예컨대, 탄소 나노튜브에 접합시킬 수 있다. 메조다공성 탄소 나노입자는 경구 투여에 바람직하다. 실리카-기반 나노입자(SiNP)가 또한 바람직하다. SiNP는 생체적합성이며 선택적인 종양 표적화 및 백신 전달에 있어서 탁월한 특성을 나타낸다. SiNP의 표면에서 풍부한 실란올 그룹을 추가의 개질화에 사용하여 세포 인식, 특이적인 생체분자의 흡수, 세포와의 상호작용의 증진, 및 세포 흡수의 향상과 같은 추가의 기능성을 도입할 수 있다. 메조다공성 실리카나노입자가 특히 바람직하다.

리포좀은 전형적으로 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄 프로판(DOTAP)과 같은 인지질에 의해 형성된다. 일반적으로, 양이온성 리포좀이 바람직하다. 리포좀은 인지질 이층 쉘(shell) 및 수성 코어로 자가-조립된다. 리포좀은 단일라멜라 소낭(단일의 인지질 이층(bilayer)을 가짐) 또는 다중라멜라 소낭(물의 층에 의해 분리된 수개의 동심원성 인지질 쉘을 가짐)로 자가-조립된다. 따라서, 항원은 코어 내에 또는 상이한 층/쉘 사이에 캡슐화될 수 있다. 바람직한 리포좀 시스템은 Inflexal® V 및 Epaxal®과 같이 사람 용으로 승인된 것들이다.

면역자극 복합체(ISCOM)는 약 40 nm(직경)의 케이지(cage) 유사 입자이며, 이는 예를 들면, 사포닌 보조제 Quil A, 콜레스테롤, 인지질, 및 (폴리)펩타이드 항원(항원성 펩타이드 또는 이를 포함하는 폴리펩타이드와 같은)으로 제조된 콜로이드성 사포닌 함유 미셀이다. 이러한 구형 입자는 비극성상호작용에 의해 항원을 트랩핑할 수 있다. 2개 유형의 ISCOM이 기술되어 있으며, 이들 둘 다는 콜레스레톨, 인지질(전형적으로 포스파티딜에탄올아민 또는 포스파티딜콜린) 및 사포닌(QuilA와 같은)으로 이루어진다.

바이러스-유사 입자(VLP)는 생체적합성 캡시드 단백질의 자가-조립에 의해 형성된 자가-조립되는 나노입자이다. 천연적으로 최적화된 나노입자 크기 및 반복된 구조적 순서로 인하여 VLP는 강력한 면역 반응을 유도할 수 있다. VLP는 크기가 20 nm 내지 800 nm의 범위, 전형적으로 20 내지 150 nm의 범위인 다양한 바이러스로부터 기원할 수 있다. VLP는 이들 펩타이드/단백질을 입자에 융합시키거나 다중 항원을 발현시킴으로서 추가의 펩타이드 또는 단백질을 발현하도록 가공될 수 있다. 더욱이, 항원은 바이러스 표면에 화학적으로 커플링되어 생체접합체 VLP를 생산할 수 있다.

자가-조립된 단백질의 예는 페리틴 및 주요 볼트 단백질(major vault protein: MVP)을 포함한다. 페리틴은 거의 구형의 10 nm 구조로 자가-조립될 수 있는 단백질이다. 96 단위의 MVP가 배럴형 볼트 나노입자로 자가-조립될 수 있으며, 크기는 대략 40 nm 너비 및 70 nm 길이이다. 최소의 상호작용 도메인으로 유전적으로 융합되는 항원이 MVP와 혼합되는 경우 자가-조립 과정에 의해 볼트 나노입자내로 패키지될 수 있다. 따라서, 항원(예컨대, 이를 포함하는 폴리펩타이드의 본 발명에 따른 항원성 펩타이드)을 자가-조립 단백질 또는 MVP의 최소 상호작용 도메인과 같은 이의 단편/도메인에 융합시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 자가-조립 단백질(또는 이의 단편/도메인) 및 본 발명에 따른 항원성 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다.

일반적으로, 나노입자(NP)의 바람직한 예는 산화철 비드, 폴리스티렌 미세구, 폴리(γ-글루탐산)(γ-PGA) NP, 산화철-산화아연 NP, 양이온화된 젤라틴 NP, 플루로닉-안정화된 폴리(프로필렌 설파이드)(PPS) NP, PLGA NP, (양이온성) 리포좀, (pH-반응성) 중합체성 미셀(micelle), PLGA, 암 세포 막 코팅된 PLGA, 지질-칼슘-인산염(LCP) NP, 리포좀-프로타민-하이알루론산(LPH) NP, 폴리스티렌 라텍스 비드, 자기 비드, 철-덱스트란 입자 및 양자점 나노결정을 포함한다.

바람직하게는, 나노입자는 보조제, 예를 들면 톨-유사 수용체(toll-like receptor: TLR) 효능제를 추가로 포함한다. 이에 의해, 항원성 펩타이드(항원성 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드/단백질/핵산)는 보조제와 함께, 예를 들면, 수지상 세포(DC)와 같은 항원-제시 세포(APC)에 전달할 수 있다. 보조제는 나노입자에 의해 캡슐화될 수 있거나 나노입자의 표면, 바람직하게는 유사하게 항원성 펩타이드에 결합/접합될 수 있다.

특히 바람직한 보조제는 폴리이노신산;폴리사이티딜산(또한 "폴리 I:C"로서 지칭됨) 및/또는 이의 유도체 폴리-ICLC이다. 폴리 I:C는 이노신산의 중합체인 하나의 쇄, 사이티딜산의 중합체인 다른 쇄를 지닌 미스매치된 이중 가닥 RNA이다. 폴리 I:C는 톨-유사 수용체 3(TLR3)과 상호작용하는 것으로 알려진 면역자극인자이다. 폴리 I:C는 이중-가닥 RNA와 구조적으로 유사하며, 이는 TLR3의 "천연" 자극인자이다. 따라서, 폴리 I:C는 이중 가닥 RNA의 합성 유사체로 고려될 수 있다. 폴리-ICLC는 카복시메틸셀룰로즈, 폴리이소신성-폴리사이디틸산과, 폴리-L-라이신 이중 가닥 RNA의 합성 복합체이다. 폴리 I:C와 유사하게, 또한 폴리-ICLC는 TLR3에 대한 리간드이다. 폴리 I:C 및 폴리-ICLC는 전형적으로 세포독성 사이토킨의 방출을 자극한다. 폴리-ICLC의 바람직한 예는 Hiltonol^®이다.

면역원성 조성물 및 키트

본 발명에 따른 면역원성 조성물은 다음 중 적어도 하나를 포함한다:

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산, 또는

- 본 발명에 따른 숙주 세포.

바람직하게는, 면역원성 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 첨가제 또는 담체를 추가로 포함한다.

본 발명의 면역원성 조성물은 본 발명의 목적에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 액체 현탁제, 고체 투여형(과립제, 환제, 캅셀제 또는 정제), 또는 페이스트제 또는 겔제와 같은, 비경구, 장 또는 국소 투여에 적합한 형태일 수 있다. 의도된 목적을 위한 조성물의 적절한 형태를 선택하는 것은 당해 분야의 기술 내에 있다.

실제로, 본 발명의 맥락에서, 재분류, 감염 또는 재조합에 대한 가능성 없이 저 비용 및 상대적인 안전성에서 이들의 제작 용이성으로 인하여, (폴리)펩타이드, 또는 이를 암호화하는 핵산을 사용하는 것이 특히 유리할 수 있다.

본 발명의 항원성 펩타이드는 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따라 함께 로딩된 세포, 본 발명에 따른 나노입자, 본발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포 및/또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태로 투여될 수 있다.

일 구현예에 따라서, 이들은 소화관 세균 종과 같은 미생물 유기체의 형태로 투여될 수 있다.

전체 소화관 세균 종은 이들이 함유한 (폴리)펩타이드 또는 핵산보다 더 큰 면역 반응을 개시하기 위한 잠재능을 가지므로 또한 유리할 수 있다.

대안적으로, 본 발명에 따른 소화관 세균은 프로바이오틱, 즉, 살아있는 소화관 세균의 형태일 수 있으며, 따라서 이는 이것이 제공할 수 있는 건강 이점 덕분에 식품 첨가물로서 사용될 수 있다. 이들은 예를 들면, 과립제, 환제 또는 캅셀제 속에 동결건조될 수 있거나, 소비용 유제품과 직접 혼합될 수 있다.

당해 분야의 기술자는 본 발명의 항원성 펩타이드가 예방되거나 치료될 암의 특성, 및/또는 상기 암과 관련된 사람 유전자/사람 종양 항원을 기반으로 선택될 수 있다. 예를 들면, 당단백질　100(gp100), TRP1, TRP2, 타이로시나제 및/또는 멜란 A/MART1 항원이 관련된 흑색종을 예방하거나 치료하기를 원하는 경우, 표 1a에 기술된 바와 같은 상응하는 임의의 항원성 펩타이드(들)를 선택할 수 있다.

본 발명의 수개의 항원성 펩타이드의 공-투여가 면역 반응을 향상시키기 위해 특히 바람직함은 이해될 수 있다.

따라서, 바람직한 구현예에 따라서, 본 발명의 조성물은 상기 정의된 바와 같은 적어도 2개의 항원성 펩타이드(이는 면역원성 화합물의 형태일 수 있다)를 포함하며, 이는 적어도 3개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 4개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 5개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 6개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 7개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 8개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 9개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 10개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 11개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 12개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 13개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 14개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 15개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 20개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 25개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 50개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 100개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 500개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 1000개의 항원성 펩타이드, 또는 적어도 1500개의 항원성 펩타이드를 포함한다. 의도된 목적에 적합한 항원성 펩타이드 및/또는 면역원성 화합물의 조합물을 선택하는 것은 당해 분야의 기술자의 기술 내에 있다. 예를 들면, 표 1b에 따른 유전자에 의해 암호화된 종양 항원이 관련된 흑색종을 예방하거나 치료하기를 원하는 경우, 표 1a에 기술된 바와 같은 상응하는 항원성 펩타이드의 임의의 조합을 선택할 수 있다.

특히 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드(예컨대, 동일한 유형의 암 및/또는 동일한 참고 항원과 관련된)가 조합된다. 다시 말해서, 본 발명에 다른 조성물은 바람직하게는

(i) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 면역원성 화합물;

(ii) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드;

(iii) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 나노입자; 또는

(iv) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 핵산을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 예를 들면, 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물의 효과를 향상시킬 수 있는, 다른 활성제를 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로, 조성물은 임의의 다른 활성제(즉, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 외에, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 또는 본 발명에 따른 숙주 세포)를 포함하지 않을 수 있다.

바람직한 구현예에 따라서, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 면역자극제를 포함함으로써, 특히 항원성 펩타이드에 의해 매개된 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 본 발명에 따른 바람직한 면역자극제는 제한없이, 면역 보조제, 항원-제시 세포, 및 이의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 면역자극제는 면역 보조제 또는 항원-제시 세포(APC)이다.

일부 면역 보조제는 실제로 항원과 면역계 사이의 상호작용 기간을 선호하여 연장시킬 수 있지만, 다른 것은 천연 면역성의 세포를 보충하고 활성화시켜 적응성 반응(adaptive reaction)을 유도할 수 있다. 전자의 부류에 속하는 보조제는 제한없이, 명반, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 수산화인산칼슘과 같은 무기질 화합물; 및 파라핀 오일, 전분 오일, 프레운드 완전/불완전 보조제(Freund's complete/imcomplete adjuvant)(FCA/FIA), 사포닌(예컨대, 식물 퀼라자(Quillaja), 대두, 폴리갈라 세네가(Polygala senega)로부터의)과 같은 오일-기반 유화액을 포함한다. 후자의 범주에 속하는 보조제는 제한없이, 사이토킨(예컨대, GM-CSF; IL-1, IL-2, IL6, IL8, 또는 IL12와 같은 인터루킨; TNFα 또는 TNFβ와 같은 종양 괴사 인자(TNF); IFNα, IFNβ, IFNγ 또는 IFNδ 등과 같은 인터페론 IFNS); 이미퀴모드, 레시퀴모드 또는 MPL과 같은 톨-유사 수용체(TLR)의 리간드; 수지상 세포(DC) 또는 종양 세포로부터 기원한 엑소좀(exosome)과 같은 엑소좀; 열 쇼크 단백질(gp96, hsp90, hsp70, 칼레티쿨린, hsp110, hsp170와 같은 HSP), 병원체-관련 분자 양식(PAMP), 트레할로즈 디미콜레이트(TDM), 무라밀디펩타이드(MDP), 다당류-K와 같은 다당류(PLS)를 포함한다.

일 구현예에 따라서, 면역 보조제는 HHD-DR3 펩타이드 MAKTIAYDEEARRGLERGLN(서열 번호: 144)일 수 있다.

보다 바람직하게는, 면역 보조제는 본원에 기술된 바와 같은 CD4+ Th1 세포의 자극을 제공하는 것과 같은, 면역-보조제 특성을 갖는 단백질/펩타이드이다. 이의 바람직한 예는 면역 기억을 소생시키거나 비-특이적인 도움을 제공하거나 본원에 기술된 바와 같은, 테타누스 헬퍼 펩타이드, 키홀 림펫 헤모시아닌 펩타이드 또는 PADRE 펩타이드와 같은 특이적인 종양-기원한 헬퍼 펩타이드일 수 있는 비-종양 항원이다. 다른 바람직한 예는 특이적인 종양 기원한 헬퍼 펩타이드이며, 이는 MHC II에 의해, 특히 상기 기술된 바와 같이, 공유되고 과발현된 종양 항원의 단편, 예컨대, HER2, NY-ESO-1, hTERT 또는 IL13RA2와 같은, HLA-DR, HLA-DP 또는 HLA-DQ에 의해 제시될 수 있다.

특히 바람직한 보조제는 폴리이노신산:폴리사이티딜산(또한 "폴리 I:C"로 지칭됨) 및/또는 이의 유도체 폴리-ICLC이다. 폴리 I:C는 하나의 가닥은 이노신산이고 다른 가닥은 사이디딜산의 중합체인 미스매치된 이중 가닥 RNA이다. 폴리 I:C는 톨-유사 수용체 3(TLR3)과 상호작용하는 것으로 알려진 면역자극인자이다. 폴리 I:C는 이중 가닥 RNA와 구조적으로 유사하며,이는 TLR3의 "천연" 자극인자이다. 따라서, 폴리 I:C는 이중 가닥 RNA의 합성 유사체인 것으로 고려될 수 있다. 폴리-ICLC는 카복시메틸셀룰로즈, 폴리이노신산, 및 폴리-L-라이신 이중 가닥 RNA의 합성 복합체이다. 폴리 I:C와 유사하게, 또한 폴리-ICLC는 TLR3에 대한 리간드이다. 폴리 I:C 및 폴리-ICLC는 세포독성 사이토킨의 방출을 전형적으로 자극한다. 폴리-ICLC의 바람직한 예는 Hiltonol^®이다.

항원-제시 세포(APC)는 또한, 이들의 주요 기능이 항원을 가공하여 이를 면역계의 T 세포에 대한 세포 표면에 존재하도록 함으로써, 생체내에서 T-세포 반응을 개시하고 조절하는 것이므로, 특히 관심이 있다. 본 조성물에서, APC가 본 발명에 따른 항원성 펩타이드(들) 및/또는 본 발명에 따른 면역원성 화합물(들)로 로딩되는 것이 바람직하며, 이는 시험관내에서 APC를 상기 항원성 펩타이드(들) 및/또는 면역원성 화합물(들)로 노출시킴에 의해 수행될 수 있다(Rizzo et al., Ex vivo loading of autologous dendritic cells with tumor antigens. Methods Mol Biol. 2014;1139:41-4; Rolinski and Hus, Breaking immunotolerance of tumors: a new perspective for dendritic cell therapy. J Immunotoxicol. 2014 Oct;11(4):311-8).

본 발명에 따른 바람직한 항원-제시 세포는 수지상 세포(DC)이다. 실제로, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물을 수지상 세포와 합하는 것이 유리할 수 있는데, 이는 이것이 가장 강력한 항원-제시 세포이고 암 환자에서 흔히 기능적으로 결함이 있는 것으로 보고되었기 때문이다 수지상 세포는 건강한 양립성(compatible) 공여체(즉, 수지상 세포는 HLA-관련되어 있다) 또는 환자 자체(단, 이들은 기능성(즉, 수지상 세포는 자가조직이다)이다)로부터 예를 들면, 말초 혈액으로부터의 직접적인 단리, 또는 CD14+ 단핵세포 또는 CD34+ 조혈 전구체와 같은 말초 혈액 세포로부터의 유도체화에 의해서, 당해 분야의 기술자에 의해 용이하게 수득될 수 있다(Emens et al., 2008). 수지상 세포는 실제로 S100, p55, CD83, 및/또는 OX62와 같은 이들의 표면 마커에 의해 말초 혈액의 다른 세포로부터 구별될 수 있으므로 당해 분야에 잘 알려진 세포 배양 기술을 사용하여 상기 마커를 기반으로 단리되어 정제될 수 있다.

바람직한 구현예에 따라서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 항-암 치료제를 추가로 포함할 수 있다. 따라서 상기 치료제는 바람직하게는 본 발명에 따른 항원성 펩타이드가 사용된 것보다 동일한 유형의 암을 예방하고/하거나 치료할 수 있다. 본 발명에 따른 특히 바람직한 항-암 치료제는 제한없이, 항체, 종양 세포 분해물, 화학치료제, 방사선치료제 및 이의 조합물을 포함한다. 가장 바람직하게는, 항-암 치료제는 항체, 종양 세포 분해물, 화학치료제, 방사선치료제, 면역 체크포인트 조절인자 및 이의 배합물로부터 선택된다.

항체는 암 세포 표면에서 특이적인 항원에 결합함으로써 치료요법을 종양에 대해 지시하거나(즉, 이들은 종양-표적화 항체로서 지칭된다), 암에서 잘못조절된 면역 체크포인트를 차단할 수 있으므로(즉, 이들은 본원에서 면역조절성 항체로 지칭된다) 암 치료요법에서 특히 유리하다. 후자의 유형의 항체의 목적은 암 면역 내성을 억제하기 위한 것이며, 이는 특히 종양 항원에 대해 특이적인 T 세포에 대해 관찰될 수 있다. 실제로, 당해 분야에 잘 알려진 바와 같이, 정상의 생리학적 조건 하에서, 면역 체크포인트는 자가-내성을 유지하고(즉, 자가면역성의 예방) 면역계가 병원성 감염에 대해 반응하는 경우 손상으로부터 조직을 보호하기 위해 중요하다. 그러나, 암에서, 면역-체크포인트 발현은 면역 내성의 중요한 메카니즘으로서 잘못조절될 수 있다. 상기 내성은 특히 PD-L1 체크포인트와 관련하여 흑색종, 난소, 폐, 교모세포종, 유방, 및 췌장 암에서 관찰되었다(Konishi et al., B7-H1 expression on non-small cell lung cancer cells and its relationship with tumor-infiltrating lymphocytes and their PD-1 expression. Clin Cancer Res. 2004 Aug 1;10(15):5094-100; Ghebeh et al., The B7-H1 (PD-L1) T lymphocyte-inhibitory molecular is expressed in breast cancer patients with infiltrating ductal carcinoma: correlation with important high-risk prognostic factors. Neoplasia. 2006 Mar;8(3):190-8; Hino et al., Tumor cell expression of programmed cell death-1 ligand 1 is a prognostic factor for malignant melanoma. Cancer. 2010 Apr 1;116(7):1757-66). 면역 체크포인트의 다른 예는 제한없이, PD-L2, PD1, CD80, CD86 ,CTLA4, B7H3, B7H4, PVR, TIGIT, GAL9, LAG-3, GITR, CD137, TIM3, VISTA, VISTA-R를 포함한다(Pico de Coaa et al., Checkpoint blockade for cancer therapy: revitalizing a suppressed immune system. Trends Mol Med. 2015 Aug;21(8):482-91; Pardoll DM. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 2012 Mar 22;12(4):252-64).

항체는 일반적으로 네이키드 모노클로날 항체(즉, 비-접합된) 또는 세포에 대해 독성이거나 방사활성일 수 있는 다른 분자에 접합된 형태로 상기 목적을 위해 사용된다.

암 면역치료요법에 사용된 잘-공지된 모노클로날 종양-표적화 항체의 예는 제한없이, 알렘투주맙(만성 림프세포성 백혈병), 베바키주맙(결장직장 암, 다형성교아종, 경부암, 폐암, 신장암), 브렌툭시맙/베도틴(림프종), 블리나투무맙(급성 림프모구백혈병), 카누막소맙(EPCAM+ 암에서 악성 복수액), 세툭시맙(두경부 암, 결장직장 암), 데노수맙(유방, 전립선 및 골암), 겜투주맙/오조가미신(급성 골수성 케울레미아(myeloid keulemia)), 이브리투모맙/티욱세탄(비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma)), 파니투무맙(결장직장 암), 페르투주맙(유방 암), 오비누투주맙(만성 림프세포성 백혈병), 오파투무맙(만성 림프세포성 백혈병), 오필리무맙(흑색종), 라무시루맙(위장 및 위-식도(oeasophageal) 암), 리툭시맙(만성 림프세포성 백혈병 및 비-호지킨 림프종), 실툭시맙(다중심의 캐슬맨 질환(multicentric's Catsleman's disease)), 토시투모맙(비-호지킨 림프종), 및 트라스투주맙(유방, 위 및 위-식도 암)을 포함하나; 면역조절성 항체의 예는 제한없이, CTLA4-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 이필리무맙(흑색종), 둘다 PDCD1-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 니볼루맙(흑색종, 폐암) 및 프렘브롤리주브맙(흑색종) 뿐만 아니라 모두 PD-L1-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 MPDL3280A, MEDI4736, MEDI0680, 및 MSB0010718C를 포함한다(Sharma and Allison, The future of immune checkpoint therapy. Science. 2015 Apr 3;348(6230):56-61).

암 면역치료요법을 위한 다른 항체는 문헌: Buqu et al., Trial Watch: Immunomodulatory monoclonal antibodies for oncological indications. Oncoimmunology. 2015 Mar 2;4(4):e1008814. eCollection 2015 Apr); 레드만(Redman) emd(Redman et al., Mechanisms of action of therapeutic antibodies for cancer. Mol Immunol. 2015 Oct;67(2 Pt A):28-45); Simpson and Caballero, Monoclonal antibodies for the therapy of cnacer MC Proc. 2014; 8(Suppl 4): O6 뿐만 아니라 항체 집단 웹사이트(웹링크 http://www.antibodysociety.org/news/approved_mabs.php에서 이용가능한 유럽 연합 또는 미국에서 승인되거나 검토 중인 치료학적 모노클로날 항체의 목록)에 기술되어 있다.

종양 세포 분해물은 또한 본 발명에 따른 항원성 펩타이드(들)와 조합될 수 있다. 종양 세포는 실제로 내인성 펩타이드-MHC 복합체를 제시함으로써, 및 또한 상기 분해물에 의해 전달된 항원을 가공하여 나타낼 수 있는 숙주의 수지상 세포(DC)를 통해, 면역 반응을 프라이밍(priming)할 수 있다. 이에 의해 유도될 수 있는 면역 반응에 대한 항원의 범위가 증가된다. 종양 세포 분해물은 종양 세포를 열 쇼크 및/또는 화학적 처리에 의해 처리함으로써 용이하게 수득할 수 있으며, 자가(즉, 환자로부터 단리된), 또는 동종이계(즉, 다른 대상체로부터 단리된)일 수 있다.

표준 화학치료학적 약물 및 방사선치료제는 문헌, 특히 바스카(Baskar) 등(Baskar et al., Cancer and radiation therapy: current advances and future directions. Int J Med Sci. 2012;9(3):193-9), 파시(Paci) 등(Paci et al., Review of therapeutic drug monitoring of anticancer drugs part 1--cytotoxics. Eur J Cancer. 2014 Aug;50(12):2010-9) 및 위드머(Widmer) 등(Widmer et al., Review of therapeutic drug monitoring of anticancer drugs part two--targeted therapies. Eur J Cancer. 2014 Aug;50(12):2020-36)에 의해 집중적으로 기술되어 있으므로, 본원에 추가로 기술될 필요가 없다. 이러한 약물 및 제제의 목록은 또한 웹사이트: cancer.gov website (http://www.cancer.gov/about-cancer/treatment/drugs)에서 이용가능하다.

바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은 항원성 펩타이드와 조합하기 위한 면역 체크포인트 조절인자는 CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR, ICOS, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, TIM-3, VISTA, CEACAM1, GARP, PS, CSF1R, CD94/NKG2A, TDO, GITR, TNFR 및/또는 FasR/DcR3로부터 선택된 하나 이상의 면역 체크포인트 포인트 분자(들)의 활성화제 또는 억제제; 또는 이의 하나 이상의 리간드의 활성화제 또는 억제제이다.

보다 바람직하게는, 면역 체크포인트 조절인자는 (공-)조절성 체크포인트 분자의 활성화제 또는 억제성 체크포인트 분자의 억제제 또는 이의 조합물이다. 따라서, 면역 체크포인트 조절인자는 보다 바람직하게는 (i) CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR 및/또는 ICOS의 활성화제 또는 (ii) A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CD40, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PDL-1, PD-L2, TIM-3, VISTA, CEACAM1, GARP, PS, CSF1R, CD94/NKG2A, TDO, TNFR 및/또는 FasR/DcR3의 억제제이다.

심지어 보다 바람직하게는, 면역 체크포인트 조절인자는 억제성 체크포인트 분자의 억제제(그러나 바람직하게는 자극성 체크포인트 분자의 억제제가 아님)이다. 따라서, 면역 체크포인트 조절인자는 심지어 보다 바람직하게는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PDL-1, PD-L2, TIM-3, VISTA, CEACAM1, GARP, PS, CSF1R, CD94/NKG2A, TDO, TNFR 및/또는 DcR3의 억제제 또는 이의 리간드이다.

또한, 면역 체크포인트 조절인자는 자극성 또는 공자극성 체크포인트 분자의 활성화제(그러나 바람직하게는 억제성 체크포인트 분자의 활성화제가 아님)이다. 따라서, 면역 체크포인트 조절인자는 보다 바람직하게는 CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR 및/또는 ICOS 또는 이의 리간드의 활성화제이다.

면역 체크포인트 조절인자가 CD40 경로, IDO 경로, LAG3 경로, CTLA-4 경로 및/또는 PD-1 경로의 조절인자인 것이 심지어 보다 바람직하다. 특히, 면역 체크포인트 조절인자는 바람직하게는 CD40, LAG3, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1 및/또는 IDO의 조절인자이고, 보다 바람직하게는 면역 체크포인트 조절인자는 CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, LAG3, 및/또는 IDO의 억제제 또는 CD40의 활성화제이며, 심지어 보다 바람직하게는 면역 체크포인트 조절인자는 CTLA-4, PD-L1, PD-1, LAG3 및/또는 IDO의 억제제이고, 심지어 보다 바람직하게는 면역 체크포인트 조절인자는 LAG3, CTLA-4 및/또는 PD-1의 억제제이며, 가장 바람직하게는 면역 체크포인트 조절인자는 CTLA-4 및/또는 PD-1의 억제제이다.

따라서, 항원성 펩타이드와 조합하기 위한 체크포인트 조절인자는 CTLA-4 경로 또는 PD-1 경로의 공지된 조절인자로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은 항원성 펩타이드와 조합하기 위한 체크포인트 조절인자는 CTLA-4 경로 또는 the PD-1 경로의 공지된 조절인자로부터 선택될 수 있다. 특히 바람직하게는, 면역 체크포인트 조절인자는 PD-1 억제제이다. CTLA-4 경로 및 PD-1 경로의 바람직한 억제제는 모노클로날 항체 Yervoy^®(이필리무맙; Bristol Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer/MedImmune) 뿐만 아니라 Opdivo^®(니볼루맙; Bristol Myers Squibb), Keytruda^®(펨브롤리주맙; Merck), 두르발루맙(MedImmune/AstraZeneca), MEDI4736(AstraZeneca; 참고: WO 2011/066389 A1), MPDL3280A(Roche/Genentech; 참고 미국 8,217,149 B2), 피딜리주맙(CT-011; CureTech), MEDI0680(AMP-514; AstraZeneca), MSB-0010718C(Merck), MIH1(Affymetrix) 및 람브롤리주맙(예컨대, WO2008/156712에 hPD109A 및 이의 사람화된 유도체 h409All, h409A16 및 h409A17로서 개시됨; Hamid et al., 2013; N. Engl. J. Med. 369: 134-144)을 포함한다. 보다 바람직한 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제 Yervoy^®(이필리무맙; Bristol Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer/MedImmune) 뿐만 아니라 PD-1 억제제 Opdivo^®(니볼루맙; Bristol Myers Squibb), Keytruda^®(펨브롤리주맙; Merck), 피딜리주맙(CT-011; CureTech), MEDI0680(AMP-514; AstraZeneca), AMP-224 및 람브롤리주맙(예컨대, WO2008/156712에 hPD109A 및 이의 사람화된 유도체 h409All, h409A16 및 h409A17로서 개시됨; Hamid O. et al., 2013; N. Engl. J. Med. 369: 134-144)을 포함한다.

또한, 본원에 정의된 바와 같은 항원성 펩타이드와 조합하기 위한 면역 체크포인트 조절인자는 펨브롤리주맙, 이필리무맙, 니볼루맙, MPDL3280A, MEDI4736, 트레멜리무맙, 아벨루맙, PDR001, LAG525, INCB24360, 바를릴루맙, 우렐루맙, AMP-224 및 CM-24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

본 발명의 목적을 위해 적절한 면역 항-암 치료제를 선택하는 것은 당해 분야의 통상의 기술내에 있다. 예를 들면, 흑색종을 예방하거나 치료하기를 원하는 경우, 흑색종 세포로부터의 분해물 및/또는 항체 오필리무맙을 바람직하게는 표 1a에 기술된 바와 같은 상응하는 항원성 펩타이드와 함께, 사용할 수 있다.

항-암 치료제는 또한 본 발명의 조성물과 함께, 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여할 수 있다. 조성물 및 치료제를 별도의 방식으로 또는 순차적인 방식으로 투여할 경우, 이들은 구별되는 약제학적 형태로 투여될 수 있다.

따라서, 다른 국면에서, 본 발명은 동시, 별도, 또는 순차적인 투여용의 조합된 제제로서, 본 발명의 조성물 및 상술한 바와 같은 적어도 하나의 항-암 치료제의 조성물에 관한 것이다. 다른 측면에서, 본 발명은 동시, 별도, 또는 순차적인 투여를 위한, 본 발명의 조성물 및 상술한 적어도 하나의 항-암 치료제의 조합된 용도를 제시한다.

추가의 국면에서, 본 발명은 또한 바람직하게는 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 부분 키트(kit-of-part)에 관한 것이며, 이러한 키트는

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물 중 적어도 하나를 포함한다.

특히, 본 발명의 부분 키트는 상술한 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 부분 키트는 적어도 2개의 상이한 면역원성 화합물, 적어도 2개의 상이한 항원성 펩타이드, 적어도 2개의 상이한 나노입자, 적어도 2개의 상이한 세포, 적어도 2개의 상이한 핵산, 적어도 2개의 상이한 숙주 세포, 및/또는 적어도 2개의 상이한 면역원성 조성물을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기한 바와 같은 부분 키트에 의해 포함된 이러한 상이한 성분은 본 발명에 따른 항원성 펩타이드에 있어서 상이한데, 예를 들면, 하나의 성분은 제1의 항원성 펩타이드에 관한 것이고, 하나의 성분은 제2의 항원성 펩타이드(제1의 항원성 펩타이드과는 별개의)에 관한 것이다.

예를 들면, 키트는 본 발명에 따른 2개의 구별되는 면역원성 화합물을 포함할 수 있다.

예를 들면, 키트는 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드를 포함할 수 있다.

예를 들면, 키트는 본 발명에 따른 2개의 구별되는 나노입자를 포함할 수 있다.

예를 들면, 키트는 본 발명에 따른 2개의 구별되는 핵산을 포함할 수 있다.

부분 키트의 다양한 성분은 하나 이상의 용기에 포장될 수 있다. 상기 성분은 동결건조된 또는 무수 형태로 제공되거나 적합한 완충액 속에 용해될 수 있다. 키트는 또한 예를 들면, 방부제, 성장 매질, 및/또는 상술한 성분의 저장 및/또는 재구성을 위한 완충액, 세척 용액 등을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 부분 키트는 임의로 사용 설명서를 포함할 수 있다.

더욱이, 본 발명은 또한 본원에 기술된 바와 같은 면역원성 조성물 또는 본원에 기술된 바와 같은 백신 및 상기 면역원성 조성물 또는 암의 예방 및/또는 치료시 상기 백신의 사용을 위한 설명서를 포함하는, 암을 치료하고/하거나 예방하고/하거나 안정화시키기 위한 예방접종 키트를 제공한다.

바람직하게는, 이러한 키트는 또한 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 사용함으로써 암을 예방하거나 치료하기 위한 지시사항이 있는 패키지 삽입물 또는 설명서 전단을 추가로 포함한다.

상술한 임의의 성분 외에, 키트가 본원에 기술된 바와 같은 항-암 치료제를 포함하는 것이 또한 바람직하다.

의학적 치료 및 용도

상기 기술된 바와 같이, 본 발명의 조성물은 치료학적 목적을 위한, 특히 특수한 종양 항원/단백질에 대한 특이적인 면역 반응을 개시함으로써, 이를 필요로 하는 환자에서 암을 예방하거나 치료하는데 특히 유용할 수 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 제공한다. 바람직하게는 상기 암은 상술한 바와 같은 항원성 펩타이드의 (참고) 항원에 관한 것이다.

따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포,

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 또는

- 본 발명에 따른 본원에 기술된 바와 같은 조합물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 암을 예방 및/또는 치료하거나 항-종양-반응을 개시하거나, 향상시키거나 연장시키는 방법을 제공한다.

더욱이, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포,

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 또는

- 본 발명에 따른 본원에 기술된 바와 같은 조합물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 CD8⁺ 세포독성 T 세포에 의존성인 하나 또는 다중 에피토프에 대한 면역반응을 유발하거나 증진시키기 위한 방법을 제공한다.

CD8⁺ 반응에 의존성인 면역반응은 본 발명의 화합물의 투여 전의 수준에 대해 하나 이상의 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 mRNA 또는 단백질의 발현에 있어서의 증가를 포함하는, 염증 반응, 전-염증성 사이토킨 반응을 평가함으로써 측정할 수 있다. 이는 또한 HLA-펩타이드 다량체 염색, ELISPOT 검정, 및 지연된 유형의 고과민성 시험에 의해 측정된, 본 발명의 화합물의 투여 후 항원-특이적인 T 세포의 빈도 또는 절대 수에 있어서의 증가에 의해 측정할 수 있다. 이는 또한 항원-특이적인 T 헬퍼 세포에 대해 의존성인 항원-특이적인 혈청 항체에 있어서의 증가에 의해 간접적으로 측정될 수 있다.

본 발명은 또한 대상체에서 다중 MHC 부류 I 분자에 의해 제한된 하나 또는 다수의 항원 또는 항원성 에피토프에 대해 면역 반응을 유발하거나 증진시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 상기 대상체에게:

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포,

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 또는

- 본 발명에 따른 본원에 기술된 바와 같은 조합물 중 어느 하나를 투여함을 포함한다.

대상체에서 다중 MHC 부류 I 분자에 의해 제한된, 본원에 기술된 바와 같은 다수의 에피토프에 대해 면역 반응을 유발하거나 증진시키는 방법은 본 발명의 화합물의 투여 전, 항원 제시 세포에서 별개의 MHC 부류 I 분자에 대한 개개 펩타이드 결합을 사용한 T 세포의 시험관내 자극 후 수준에 대해 하나 이상의 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 mRNA 또는 단백질의 발현에 있어서의 증가를 포함하는, 사이토킨 반응을 평가함으로써 측정할 수 있다. MHC 부류 I 분자에 대한 제한은 또한 MHC 부류 I 분자를 발현하는 항원 제시 세포를 사용하거나, MHC 부류 I 차단 항체를 사용함으로써 입증할 수 있다. 이는 또한 MHC 부류 I 분자와 조립된 다량체를 사용하여, HLA-펩타이드 다량체 염색에 의해 측정된, 본 발명의 화합물의 투여 후 항원-특이적인 T 세포의 빈도 또는 절대 수에 있어서의 증가에 의해 측정될 수 있다.

따라서, 다른 국면에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 더욱이

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포,

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 또는

- 본 발명에 따른 본원에 기술된 바와 같은 조합물은 의약으로서 사용될 수 있다.

본 발명은 보다 특히 면역치료요법용 백신으로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 더욱이,

- 본 발명에 따른 면역원성 화합물,

- 본 발명에 따른 항원성 펩타이드,

- 본 발명에 따른 나노입자,

- 본 발명에 따른 세포,

- 본 발명에 따른 핵산,

- 본 발명에 따른 숙주 세포,

- 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 또는

- 본 발명에 따른 본원에 기술된 바와 같은 조합물은 특히 (암) 면역치료요법용 백신으로서 사용될 수 있다.

본 발명의 맥락에 사용된 바와 같은, 용어 "백신"은 전형적으로 특수한 질환, 바람직하게는 암에 대해 선천성 및/또는 적응성 면역력을 제공하는 생물학적 제제를 지칭한다. 따라서, 백신은 치료될 대상체의 면역계의 선천성 및/또는 적응성 면역 반응을 뒷받침한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드는 전형적으로 치료될 환자에서 적응성 면역 반응을 초래하거나 뒷받침한다.

본 발명의 맥락에서, 백신(조성물)은 종양 항원에 대한 특이적인 면역 반응을 유도할 수 있으므로, 암을 예방하거나 치료하는데 바람직하게 사용된다. 이는 또한 본원에서 암 백신으로서 지칭될 수 있다.

따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 보다 정확하게, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 예방하거나 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이다.

다시 말해서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게, 본 발명의 조성물의 유효량을 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 암을 예방하거나 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

의약의 투여 방법은 당해 분야의 기술자에게 잘 알려져 있다. 본 발명의 조성물과 관련하여, 이는 대상체 내로, 영향받은 기관내로(즉, 국소 투여로) 또는 전신계로(즉, 장 또는 비경구 투여로) 직접 투여될 수 있거나, 심지어 대상체에 후속적으로 투여된 사람 세포주 또는 대상체로부터 기원한 세포로 생체외(ex vivo) 적용되거나, 심지어 대상체로부터 기원한 면역 세포의 소집단을 선택하기 위해 시험관내에서 사용된 후, 상기 대상체에게 재-투여된다. 본원에 사용된 바와 같은, 장 투여는 경구 및 직장 투여뿐만 아니라, 위 공급 튜브(gastric feeding tube), 십이지장 공급 튜브 또는 위루형성술(gastrostomy)을 포함하나, 비경구 투여는 다른 것들 중에서도 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 피내, 골내, 뇌내 및 척추 강내 주사를 포함한다. 투여 방법은 조성물 속에 존재하는 항원성 펩타이드(들) 및/또는 면역원성 화합물(들), 및 치료될 암의 유형 및 상기 조성물 속에 함유될 수 있는 다른 활성제에 흔히 의존할 것이다. 예를 들면, 면역원성 화합물이 상기 정의된 바와 같은 핵산인 경우, 투여는 바람직하게는 근육내 또는 피내 주사이며, 상기 핵산이 바이러스 벡터내로 클로닝되는 경우 경구/비강 투여가 특히 바람직하다. 대안적으로, 항원성 펩타이드 및/또는 면역원성 화합물이 상기 정의한 바와 같은 (폴리)펩타이드이거나 본원에 기술된 바와 같은 나노입자 속/상에 로딩되는 경우 투여는 바람직하게는 근육내, 피내 또는 경구 투여이다. 아직 여전히 대안적으로, 항원성 펩타이드 및/또는 면역원성 화합물이 상기 정의한 바와 같은 소화관 세균의 형태로 전달되거나, 특히 소화관 세균이 프로바이오틱의 형태인 경우 투여는 바람직하게는 경구 투여이다.

본 발명에 따른 항원성 펩타이드 및/또는 면역원성 화합물은 또한 캡슐화되어 이를 필요로 하는 대상체에 대한 이의 투여를 촉진할 수 있다. 예를 들면, 이들은 펩타이드 나노담체(바람직하게는 면역원성 화합물이 핵산 또는 (폴리)펩타이드인 경우), 비로솜(virosome)(바람직하게는 면역원성 화합물이 핵산 또는 (폴리)펩타이드인 경우), 또는 리포좀-다가양이온-DNA 복합체(바람직하게는 면역원이 핵산 또는 (폴리)펩타이드인 경우)과 같은 지질-계 담체 시스템 내로 캡슐화할 수 있다(Trovato M, De Berardinis P. Novel antigen delivery systems. World J Virol. 2015 Aug 12;4(3):156-68; Saade F, Petrovsky N. Technologies for enhanced efficacy of DNA vaccines. Expert Rev Vaccines. 2012 Feb;11(2):189-209; Li et al., Peptide Vaccine: Progress and Challenges. Vaccines (Basel). 2014 Jul 2;2(3):515-36).

조성물은 또한 1회 이상 투여되어 목적한 효과를 달성할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 반복적으로, 적어도 2회, 및 바람직하게는 2회 이상 투여된다. 이는 매주, 격주, 매달, 매년, 또는 대상체가 적절히 면역화됨을 보증하기 위해 제1 투여 후 심지어 수년과 같이, 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.

일 구현예에 따라서, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 또는 면역원성 화합물은 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 예방하거나 치료하기 위한 조성물 및/또는 면역원성 조성물의 제조에 사용될 수 있다.

조합 치료요법

특히 본 발명에 따른 방법 및 용도에서 본 발명에 따른 항원성 펩타이드, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 및 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 투여는 단독으로 또는 항-암 치료제와 같은, 암의 치료 및/또는 예방에 유용한 보조제와 함께 수행될 수 있다.

따라서, 상기 치료제는 바람직하게는 본 발명에 따른 항원성 펩타이드가 사용되는 것과 같은 동일한 유형의 암을 예방하고/하거나 치료할 수 있다. 본 발명에 따른 특히 바람직한 항-암 치료제는 제한없이, 항체, 종양 세포 분해물, 화학치료제, 방사선치료제, 면역 체크포인트 조절인자 및 이의 조합을 포함한다.

항체는 암 세포의 표면에서 특이적인 항원에 결합함으로써 종양에 대한 치료요법을 지시하거나(즉, 이는 종양-표적화 항체로 지칭된다), 암에서 잘못조절된 면역 체크포인트를 차단할 수 있으므로(즉, 이는 본원에서 면역조절성 항체로서 지칭된다) 암 치료요법에 특히 유리하다. 후자 유형의 항체의 목적은 암 면역 내성을 억제하는 것이며, 이는 특히 종양 항원에 대해 특이적인 T 세포에 대해 관찰될 수 있다. 실제로, 당해 분야에 잘 공지된 바와 같이, 정상의 생리학적 조건 하에서, 면역 체크포인트는 자가-내성의 유지(즉, 자가면역성의 예방) 및 면역계가 병원성 감염에 반응하는 경우 손상으로부터 조직을 보호하는데 중요하다. 그러나, 암에서, 면역-체크포인트 발현은 면역 내성의 중요한 메카니즘으로서 잘못조절될 수 있다. 상기 내성은 특히 PD-L1 체크포인트와 관련된 흑색종, 난소, 폐, 교모세포종, 유방, 및 췌장 암에서 관찰되었다(Konishi et al., B7-H1 expression on non-small cell lung cancer cells and its relationship with tumor-infiltrating lymphocytes and their PD-1 expression. Clin Cancer Res. 2004 Aug 1;10(15):5094-100; Ghebeh et al., The B7-H1 (PD-L1) T lymphocyte-inhibitory molucule is expressed in breast cancer patients with infiltrating ductal carcinoma: correlation with important high-risk prognostic factors. Neoplasia. 2006 Mar;8(3):190-8; Hino et al., Tumor cell expression of programmed cell death-1 ligand 1 is a prognostic factor for malignant melanoma. Cancer. 2010 Apr 1;116(7):1757-66). 면역 체크포인트의 다른 예는 제한없이, PD-L2, PD1, CD80, CD86 ,CTLA4, B7H3, B7H4, PVR, TIGIT, GAL9, LAG-3, GITR, CD137, TIM3, VISTA, VISTA-R을 포함한다(Pico de Coaa et al., Checkpoint blockade for cancer therapy: revitalizing a suppressed immune system. Trends Mol Med. 2015 Aug;21(8):482-91; Pardoll DM1. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 2012 Mar 22;12(4):252-64).

항체는 일반적으로 상술한 목적을 위해 네이키드 모노클로날 항체(즉, 비-접합된)의 형태로, 또는 세포에 대해 독성이거나 방사활성일 수 있는 다른 분자에 접합된 형태로 사용된다.

암 면역치료요법에 사용된 잘 공지된 모노클로날 종양-표적화 항체의 예는 제한 없이, 알레투주맙(만성 림프세포성 백혈병), 베바키주맙(결장직장 암, 다형성교아종, 경부암, 폐암, 신장암), 브렌툭시맙/베도틴(림프종), 블리나투무맙(급성 림프모구백혈병), 카투막소맙(EPCAM+ 암에서 악성 악성 복수액), 세툭시맙(두경부 암, 결장직장 암), 데노수맙(유방, 전립선 및 골 암), 겜투주맙/오조가미신(급성 골수성 케울레마), 이브리투모맙/티욱세탄(비-호지킨 림프종), 파니투무맙(결장직장 암), 페르투주맙(유방 암), 오비누투주맙(만성 림프세포성 백혈병), 오파투무맙(만성 림프세포성 백혈병), 오필리무맙(흑색종), 라무시루맙(위장 및 위-식도 암), 리툭시맙(만성 림프세포성 백혈병 및 비-호지킨 림프종), 실툭시맙(다중심의 캐슬맨 질환), 토시투모맙(비-호지킨 림프종), 및 트라스투주맙(유방, 위 및 위-식도 암)을 포함하나; 면역조절성 항체의 예는 제한없이, CTLA4-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 이필리무맙(흑색종), 둘다 PDCD1-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 니볼루맙(흑색종, 폐암) 및 프렘브롤리주브맙(흑색종) 뿐만 아니라 모두 PD-L1-의존성 면역 체크포인트를 차단하는 MPDL3280A, MEDI4736, MEDI0680, 및 MSB0010718C를 포함한다(Sharma and Allison, The future of immune checkpoint therapy. Science. 2015 Apr 3;348(6230):56-61).

암 면역치료요법을 위한 다른 항체는 부퀴(Buqu) 등(Buqu et al., Trial Watch: Immunomodulatory monoclonal antibodies for oncological indications. Oncoimmunology. 2015 Mar 2;4(4):e1008814. eCollection 2015 Apr); 레드만(Redman) 등(Redman et al., Mechanisms of action of therapeutic antibodies for cancer. Mol Immunol. 2015 Oct;67(2 Pt A):28-45), 및 Simpson and Caballero, Monoclonal antibodies for the therapy of cnacer MC Proc. 2014; 8(Suppl 4): O6 및 또한 항체 집단 웹사이트 (웹링크 http://www.antibodysociety.org/news/approved_mabs.php에서 이용가능한 유럽 연합 또는 미국에서 승인되거나 검토 중인 치료학적 모노클로날 항체의 목록)에 기술되어 있다.

종양 세포 분해물은 또한 본 발명에 따른 항원성 펩타이드(들)와 조합될 수 있다. 종양 세포는 실제로 내인성 펩타이드-MHC 복합체를 제시함으로써, 및 상기 분해물에 의해 전달된 항원을 가공하여 나타낼 수 있는 숙주의 수지상 세포(DC)를 통해, 면역 반응을 프라이밍할 수 있다. 면역 반응이 유도될 수 있는 것에 대한 항원의 범위가 이에 의해 증가된다. 종양 세포 분해물은 종양 세포를 열 쇼크 및/또는 화학적 처리에 의해 처리함으로써 용이하게 수득할 수 있으며, 자가(즉, 환자로부터 단리된), 또는 동종이계(즉, 다른 대상체로부터 단리된)일 수 있다.

표준 화학치료학적 약물 및 방사선치료제는 문헌, 특히 바스카(Baskar) 등(Baskar et al., Cancer and radiation therapy: current advances and future directions. Int J Med Sci. 2012;9(3):193-9), 파시(Paci) 등(Paci et al., Review of therapeutic drug monitoring of anticancer drugs part 1--cytotoxics. Eur J 암. 2014 Aug;50(12):2010-9) 및 위드머(Widmer) 등(Widmer et al., Review of therapeutic drug monitoring of anticancer drugs part two--targeted therapies. Eur J Cancer. 2014 Aug;50(12):2020-36)에 집중적으로 기술되어 있으므로, 본원에 추가로 기술될 필요가 없다. 이러한 약물 및 제제의 목록은 또한 웹사이트 'cancer.gov website (http://www.cancer.gov/about-cancer/treatment/drugs)'에서 이용가능하다.

심지어 보다 바람직하게는, 면역 체크포인트 조절인자는 억제성 체크포인트 분자의 억제제(그러나 바람직하게는 자극성 체크포인트 분자의 억제제가 아님)이다. 따라서, 면역 체크포인트 조절인자는 심지어 보다 바람직하게는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PDL-1, PD-L2, TIM-3, VISTA, CEACAM1, GARP, PS, CSF1R, CD94/NKG2A, TDO, TNFR 및/또는 DcR3, 또는 이의 리간드의 억제제이다.

또한, 면역 체크포인트 조절인자는 자극성 또는 공자극성 체크포인트 분자의 억제제(그러나 바람직하게는 억제성 체크포인트 분자의 억제제가 아님)인 것이 바람직하다. 따라서, 면역 체크포인트 조절인자는 보다 바람직하게는 CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR 및/또는 ICOS 또는 이의 리간드의 활성화제이다.

본 발명의 목적을 위해 적절한 면역 항-암 치료제를 선택하는 것은 당해 분야의 통상의 기술내에 있다. 예를 들면, 흑색종을 예방하거나 치료하기를 원하는 경우, 흑색종 세포로부터의 분해물 및/또는 항체 오필리무맙을 본원에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 상응하는 항원성 펩타이드와 함께, 바람직하게 사용할 수 있다.

항-암 치료제는 또한 본 발명에 따른 항원성 펩타이드, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물과 함께, 본원에 기술된 바와 같이 동시에 또는 순차적으로 및 동일하거나 구별되는 약제학적 형태로 투여될 수 있다.

따라서, 다른 국면에서, 본 발명은 동시, 별도, 또는 순차적인 투여용의 조합된 제제로서, 본 발명의 조성물 및 상술한 바와 같은 적어도 하나의 항-암 치료제의 조성물에 관한 것이다. 다른 측면에서, 본 발명은 동시, 별도, 또는 순차적인 투여를 위한, 본 발명의 조성물 및 상술한 적어도 하나의 항-암 치료제의 조합된 용도를 제안한다.

더욱이, 본 발명은 또한 본원에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 (적어도) 2개의 구별되는 항원성 펩타이드를 제공한다. 이와 관련하여, "(적어도) 2개의 구별되는 항원성 펩타이드는 임의의 형태, 예컨대, 면역원성 화합물, 나노입자, (면역원성) 조성물 또는 이와 함께 로딩된 세포에 포함되거나 핵산에 의해 암호화된 "네이키드"일 수 있다(예컨대, 벡터). 따라서, (적어도) 2개의 구별되는 항원성 펩타이드는 (조합될) (적어도) 2개의 성분 속에 포함될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 조합물의 2개의 별개의 성분은 특히 본 발명에 따른 구별되는 항원성 펩타이드(이는 면역원성 화합물, 나노입자에 의해 포함되거나, 핵산 등에 의해 암호화된다)를 지칭한다. 이러한 2개의 구별되는 성분, 특히, 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드(2개의 구별되는 성분에 포함된)는 바람직하게는 동일한 유형의 암, 예를 들면, 이러한 암과 관련된 동일하거나 구별되는 항원 및/또는 이러한 암과 관련된 항원내 동일하거나 구별되는(참고) 에피토프에 관한 것이다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 따른 2개의 구별되는 성분, 특히 (2개의 구별되는 성분에 포함된) 2개의 구별되는 항원성 펩타이드는 동일한 종양(관련되거나 특이적인) 항원에 관한 것이다. 본 발명에 따른 2개의 구별되는 성분, 특히 구별되는 항원성 펩타이드(2개의 구별되는 성분에 포함된)는 또한 동일하거나 구별되는 (참고) 종양(관련되거나 특이적인) 항원(들)에 관한 것일 수 있다.

더욱이, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드는 또한 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프(펩타이드 "계열"과 관련하여 상기 기술된 바와 같은)와 조합될 수 있다. 이에 의해, 종양에 대해 매우 효율적인 T-세포 클론의 선택이 수득/뒷받침된다. 특히, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 및 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프가 공-투여될 수 있다. 이러한 공-투여는 거의 동일한 시간(동시)에 또는 연속적으로 투여될 수 있으며, 이에 의해 연속적인 투여에서, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드가 먼저 투여되고 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프가 이후 투여되는 것이 바람직하다. 특히, 본 발명에 따른 항원성 펩타이드가 먼저 투여되고, 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프가 (재)부스트(boost)로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 서열 번호: 47에 따른 항원성 펩타이드를 서열 번호: 120에 따른 참고 펩타이드와 조합할 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 51, 52, 55, 또는 56에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 122에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 77에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 128에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 93에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 136에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 28에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 115에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 101 또는 102에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 141에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다. 다른 예에서, 서열 번호: 26에 따른 항원성 펩타이드는 서열 번호: 113에 따른 참고 펩타이드와 조합될 수 있다.

(a) 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 및 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프 또는 (b) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드와 같은, 조합될 수 있는 펩타이드 둘 다는:

- 본 발명에 따른 동일한 면역원성 화합물 또는 구별되는 면역원성 화합물로 투여되거나,

- 본 발명에 따른 동일한 나노입자 또는 본 발명에 따른 구별되는 나노입자 내에 (로딩)되거나,

- 본 발명에 따른 동일한 세포 또는 본 발명에 따른 구별되는 세포내에 (로딩)되거나,

- 본 발명에 따른 동일한 핵산 또는 본 발명에 따른 구별되는 핵산에 의해 (암호화)되거나,

- 본 발명에 따른 동일한 숙주 세포 또는 본 발명에 따른 구별되는 숙주 세포에 의해 (발현)되거나, 또는

- 본 발명에 따른 동일한 면역원성 조성물 또는 본 발명에 따른 구별되는 면역원성 조성물 속에 (포함)될 수 있다.

예를 들면, 본 발명은

암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한

(i) 본 발명에 따른 제1의 항원성 펩타이드를 포함하는 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 및

(ii) 본 발명에 따른 제2의 항원성 펩타이드를 포함하는 본 발명에 따른 면역원성 화합물의 조합물을 제공한다.

예를 들면, 본 발명은

암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한

(i) 본 발명에 따른 제1의 항원성 펩타이드, 및

(ii) 본 발명에 따른 제2의 항원성 펩타이드의 조합물을 제공한다.

예를 들면, 본 발명은

암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한

(i) 본 발명에 따른 제1의 항원성 펩타이드를 포함하는 본 발명에 따른 나노입자, 및

(ii) 본 발명에 따른 제2의 항원성 펩타이드를 포함하는 본 발명에 따른 나노입자의 조합물을 제공한다.

예를 들면, 본 발명은

암의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한

(i) 본 발명에 따른 제1의 항원성 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명에 따른 핵산, 및

(ii) 본 발명에 따른 제1의 항원성 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명에 따른 핵산의 조합물을 제공한다.

바람직하게는, 조합될 수 있는, (a) 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 및 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프 또는 (b) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드, 특히 성분 (i) 및 (ii)와 같은 펩타이드 둘 다는 거의 동일한 시간에 투여된다. 보다 일반적으로, 임의의 제형(예컨대, 본원에서 "제1의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭된, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물) 속의 제1의(항원성) 펩타이드는, 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물; 본원에서 "제2의(항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 중 제2의(항원성) 펩타이드와 거의 동일한 시간에 투여되는 것이 바람직하며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 동일한 유형의 제형, 예컨대, 둘 다 나노입자로서, 둘 다 면역원성 조성물로서, 등)로 투여된다.

본원에 사용된 바와 같은, "거의 동일한 시간에"는 특히 동시 투여 또는 (i) 제1의 (항원성) 펩타이드 성분의 투여 직 후, (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분을 투여하거나 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분의 투여 직 후 (i) 제1의 (항원성) 펩타이드 성분을 투여하는 것을 의미한다. 숙련가는 "직후"가 제2의 투여를 준비하는데 필요한 시간 - 특히 제2의 투여를 위한 위치의 노출 및 소독뿐만 아니라 "투여 장치"(예컨대, 주사기, 펌프 등)의 적절한 제조에 필요한 시간을 포함함을 이해한다. 동시 투여는 또한 (i) 제1의(항원성) 펩타이드 성분 및 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분의 투여 기간이 중첩되거나, 예를 들면, 하나의 성분이 예컨대, 주입에 의해 30분, 1시간, 2시간 또는 심지어 2시간 이상의 보다 긴 기간에 걸쳐 투여되고, 다른 성분이 이러한 긴 기간 동안의 일부 시간에 투여되는 경우를 포함한다. 거의 동일한 시간에 (i) 제1의 (항원성) 펩타이드 성분 및 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분의 투여는 상이한 투여 경로 및/또는 상이한 투여 부위가 사용디는 경우 특히 바람직하다.

조합되어야 하는, (a) 본 발명에 따른 항원성 펩타이드 및 상응하는 (사람) 종양 항원 에피토프 또는 (b) 본 발명에 따른 2개의 구별되는 항원성 펩타이드, 특히 성분 (i) 및 (ii)와 같은 펩타이드 둘 다는 연속적으로 투여하는 것이 바람직하다. 보다 일반적으로 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태; 본원에서 "제1의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제1의(항원성) 펩타이드 및 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태; 본원에서 "제2의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨)은 연속적으로 투여되며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 동일한 유형의 제형, 예컨대, 둘 다 나노입자, 둘 다 면역원성 조성물로서, 등)로 투여된다.

이는 (i) 제1의(항원성) 펩타이드 성분이 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분 전 또는 후에 투여됨을 의미한다. 연속적인 투여에서, 제1의 성분의 투여와 제2의 성분의 투여 사이의 시간은 바람직하게는 1주 이하, 보다 바람직하게는 3일 이하, 심지어 보다 바람직하게는 2일 이하 및 가장 바람직하게는 24시간 이하이다. (i) 제1의(항원성) 펩타이드 성분 및 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분이 제1의 성분(제1의 또는 제2의 (항원성) 펩타이드)의 투여와 제2의 성분 (제1의 또는 제2의 (항원성) 펩타이드 외에 다른 것)의 투여 사이의 시간과 동일한 날, 바람직하게는 6 시간 이하, 보다 바람직하게는 3 시간 이하, 심지어 보다 바람직하게는 2시간 이하 및 가장 바람직하게는 1시간 이하로 투여되는 것이 특히 바람직하다.

바람직하게는, (i) 제1의 (항원성) 펩타이드 성분과 (ii) 제2의 (항원성) 펩타이드 성분은 동일한 투여 경로를 통해 투여된다. 보다 일반적으로, 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물; 본원에서 "제1의(항원성) 펩타이드 성분"으로서 지칭됨) 속의 제1의 (항원성) 펩타이드 및 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태; 본원에서 "제2의 (항원성) 펩타이드 성분"으로서 지칭됨) 속의 제2의 (항원성) 펩타이드는 동일한 투여 경로를 통해 투여되며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 제형의 동일한 형태, 예컨대, 둘 다 나노입자로서, 둘 다 면역원성 조성물로서, 등)로 투여된다.

성분 (i) 및 (ii)가 구별되는 투여 경로를 통해 투여되는 것이 바람직하다. 보다 일반적으로, 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태; 본원에서 "제1의(항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제1의(항원성) 펩타이드 및 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 숙주 세포, 또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 형태; 본원에서 "제2의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제2의 (항원성) 펩타이드 성분이 구별되는 투여 경로를 통해 투여되는 것이 바람직하며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 동일한 유형의 제형, 예컨대, 둘 다 나노입자로서, 둘 다 면역원성 조성물로서, 등)로 투여된다.

바람직하게는, 성분 (i) 및 (ii)는 동일한 조성물 속에 포함된다. 보다 일반적으로, 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 또는 본 발명에 따른 숙주 세포의 형태; 본원에서 "제1의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제1의 (항원성) 펩타이드 및 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 또는 본 발명에 따른 숙주 세포의 형태; 본원에서 "제2의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제2의 (항원성) 펩타이드는 동일한 조성물 속에 포함되며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 동일한 유형의 제형, 예컨대, 둘 다 나노입자로서, 등)로 투여되는 것이 바람직하다.

성분 (i) 및 (ii)이 구별되는 조성물 속에 포함되는 것이 또한 바람직하다. 보다 일반적으로, 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 또는 본 발명에 따른 숙주 세포의 형태; 본원에서 "제1의(항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제1의(항원성) 펩타이드 및 임의의 제형(예컨대, 본 발명에 따른 면역원성 화합물, 본 발명에 따른 나노입자, 본 발명에 따른 세포, 본 발명에 따른 핵산, 또는 본 발명에 따른 숙주 세포의 형태; 본원에서 "제2의 (항원성) 펩타이드 성분"으로 지칭됨) 속의 제2의 (항원성) 펩타이드가 구별되는 조성물 속에 포함되는 것이 바람직하며, 여기서 (항원성) 펩타이드 둘 다는 바람직하게는 동일한 형태(즉, 동일한 유형의 제형, 예컨대, 둘 다 나노입자로서, 등)로 투여되는 것이 바람직하다.

실시예

실시예 1 및 2는 둘 다 도 1에 기술된 일반적인 프로토콜에 연결되어 있다.

실시예 1: HLA-A*0201 대립형질에 대해 우수한 친화성을 갖는 후보물 항원성 펩타이드의 확인.

본 실시예는 서열 서열 번호: 71(본원에서 또한 IL13RA2-B로서 지칭된 ≪ FLPFGFILV　≫)의 항원성 펩타이드가 HLA-A*0201 대립형질에 대해 고 친화성을 가지지만, IL13RA2로부터 기원한 상응하는 참고 사람 펩타이드(≪ WLPFGFILI ≫, 서열 번호: 123, 본원에서 또한 IL13RA2-H로서 지칭됨)이 저 친화성을 가진다는 증거를 제공한다.

A. 물질 및 방법

A1. T2 세포주에 대한 펩타이드의 친화성의 측정.

실험 프로토콜은 HLA-A*0201에 의해 제시된 펩타이드에 대해 입증되었던 것과 유사하다(Tourdot et al., A general strategy to enhance immunogenicity of low-affinity HLA-A2.1-associated peptides: implication in the identification of cryptic tumor epitopes. Eur J Immunol. 2000 Dec; 30(12):3411-21). 펩타이드의 친화성 측정은 HLA-A*0201 분자를 발현하지만, TAP1/2 음성이고 내인성 펩타이드를 제시할 수 없는 사람 종양 세포 T2로 달성된다.

T2 세포(웰당 2.10⁵개의 세포)를 100 μM 내지 0.1 μM의 감소하는 농도의 펩타이드와 함께 100 ng/μl의 사람 β2m으로 보충된 AIMV 배지 속에서 37℃에서 16시간 동안 항온처리한다. 이후에, 세포를 2회 세척하고 PE(클론 BB7.2, BD Pharmagen)에 커플링된 항-HLA-A2 항체로 표시한다.

분석은 FACS(Guava Easy Cyte)로 달성한다.

각각의 펩타이드 농도에서, 목적한 펩타이드와 관련된 표지의 기하 평균을 배경 노이즈(noise)로부터 감하고 100μM의 농도에서 참고 펩타이드 HIV pol 589-597에 대해 수득된 HLA-A*0202 표지의 기하 평균의 퍼센트로서 기록한다. 이후에 상대적인 친화성을 다음과 같이 측정한다:

상대적인 친화성 = HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도하는 각각의 펩타이드의 농도 / HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도하는 참고 펩타이드의 농도.

A2. 펩타이드의 가용화

각각의 펩타이드를 아미노산 조성을 고려함으로써 용해시킨다. 어떠한 시스테인, 메티오닌, 또는 트립토판도 포함하지 않는 펩타이드의 경우, DMSO의 첨가는 총 용적의 10% 까지 가능하다. 다른 펩타이드를 물 또는 PBS pH 7.4 속에 현탁시킨다.

B. 결과

T2 ATCC 세포의 경우: 다양한 펩타이드 농도에 대한 평균 형광성 강도: 커플 IL13RA2 펩타이드(IL13RA2-H 및 IL13RA2-B)와 관련하여, 사람 펩타이드는 HLA-A*0201에 강력하게 결합하는 후보물 펩타이드 IL13RA2-B와는 대조적으로 HLA-A*0201에 결합하지 않는다: 100 μM에서 112.03 대 18.64; 10 μM에서 40.77 대 11.61; 1 μM에서 12.18 대 9.41; 0.1 μM에서 9.9 대 7.46.

또한, 4.4μM에서 IL13RA2-B는 HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도한다(IL13RA2-H의 경우 100 μM에 대해).

유사한 결과가 제2의 구별되는 T2 세포 클론으로부터 수득되었다.

실시예 2: 마우스에서 후보물 항원성 펩타이드를 사용한 예방접종은 ELISPOT-IFNγ 검정에서 증진된 T 세포 반응을 유도한다.

A. 물질 및 방법

A.1 마우스 모델

사용된 모델의 특징은 표 2에 요약한다:

[표 2]

A.2. 면역화 계획

면역화 계획은 도 2에 나타나 있다. 요약하면, 14 β/A2/DR3 마우스를 2개의 실험 그룹으로 무작위로(마우스 성별 및 연령을 기준으로) 지정하였으며, 각각을 일반적인 헬퍼 펩타이드(h-pAg)에 결합된 특이적인 예방접종 펩타이드(vacc-pAg)로 면역화하였다(하기 표 3에 요약한 바와 같음). vacc-pAg를 커플(그룹 1 대 그룹 2)로 비교하였다. 이에 의해, 단일의 펩타이드의 천연 및 최적화된 버젼 둘 다를 각각의 파장에서 비교하였다.

[표 3]

펩타이드를 다음과 같이 제공하였다:

· vacc-pAg의 커플: IL13RA2-H 및 IL13RA2-B; 모두를 생산하여 4 mg/ml(4mM) 농도로 제공하였다;

· h-pAg: HHD-DR3; 동결건조시키고(50.6 mg; Eurogentec batch 1611166) 순수한 증류수 속에 10 mg/mL 농도로 재현탁시켰다;

동물을 0일째(d0)에 프라임 주사로, 및 d14에 부스트 주사로 면역화하였다. 각각의 마우스에게 꼬리 기저부에 100 μL의 다음을 함유하는 오일-계 유화액을 피하 주사하였다:

· 100 μg의 vacc-pAg(25 μL의 마우스당 4 mg/mL 원료(stock));

· 150 μg의 h-pAg(15 μL의 마우스당 10 mg/mL 원료);

· 50 μL의 총 용적에 이르는 10 μL의 PBS(마우스 당);

· 1:1(v:v) 비(마우스당 50 μL)로 첨가된 불완전 프루언트 보조제(IFA).

별도의 유화액을 각각의 vacc-pAg에 대해, 다음과 같이 제조하였다: IFA 시약을 15mL의 튜브 속에서 vacc-pAg/h-pAg/PBS 혼합물에 가하고 와류(vortex)에서 진한 유화액이 형성될 때까지 1분의 반복된 주기 동안 혼합하였다.

A.3. 마우스 분석

부스트 주사 후 7일째(즉, d21)에, 동물을 안락사시키고 비장을 수거하였다. 비장세포를 기관을 기계적으로 파괴한 후 70 μm-여과 및 피콜 밀도 구배 정제(Ficoll density gradient purification)에 의해 제조하였다.

비장세포를 ELISPOT-IFNγ 검정(표 4)에 즉시 사용하였다. 실험 조건을 웰당 2*10⁵개의 총 비장세포를 사용하여 4회 반복하고 vacc-pAg(10 μM), 콘카나발린 A(ConA, 2.5 μg/mL) 또는 배지 단독의 존재하에서 배양하여 IFNγ를 분리하는 이들의 능력에 대해 평가하였다. 시판되는 ELISPOT-IFNγ 키트(Diaclone Kit Mujrine IFNγ ELISpot)를 다음의 제조업자 지시사항에 따라 사용하고, 검정을 약 16시간의 항온처리 후 수행하였다.

[표 4]

스폿(spot)을 ImmunoSpot 5.4 소트트웨어에 접하고 있는 Grand ImmunoSpot^® S6 Ultimate UV 영상 분석기(CTL-Europe)에서 계수하였다. 데이타 플롯팅 및 통계적 분석을 Prism-5 소트트웨어(GraphPad Software Inc.)로 수행하였다.

세포 현탁액은 또한 T 세포 수 표준화를 위해, 유동 세포분석기로 분석하였다. 모노클로날 항체 칵테일(cocktail)(데이타는 나타내지 않음)을 쥐를 표적화하는 Fc-차단 시약(1:10 희석된 '항-mCD16/CD32 CF11 클론' - 내부 공급원) Fc 수용체의 존재하에서 정제된 백혈구 위에 적용하였다. 항온처리를 96-웰 플레이트 속에서 암실에서 4℃에서 15 내지 20분 동안 수행하였다. 세포를 염색 후 원심분리에 의해 세척하여 과량의 모노클로날 항체 칵테일을 제거하고, 데이타 획득을 위해 PBS 속에 재-현탁시켰다.

모든 데이타 획득을 FACS-Diva 소트트웨어와 접하고 있는 LSR-II Fortessa 유동 세포분석기(BD Bioscience)로 수행하였다. 데이타의 분석은 FlowJo-9 소프트웨어(TreeStar Inc.)를 사용하여 게이팅 전략(gating strategy)(나타내지 않음)으로 수행하였다.

[표 5]

B. 결과

총 14마리의 β/A2/DR3 마우스를 본 실험에 사용하였다(참고: 표 6). 희생 시기에, 비장 T 세포 집단을 유동 세포분석법으로 분석하였으며, 거의 대부분이 CD4+ T 세포 소세트에 속하였음을 나타낸다.

[표 6]

플레이팅 및 적절한 자극과 함께 항온처리 후, IFNγ를 생산하는 세포를 나타내고 계수하였다. 이후에, 10⁶개의 총 T 세포당 데이타를 특이적인 스폿의 수로 데이타를 표준화하였다('배지 단독'의 조건에서 수득된 평균을 감한다).

개개의 평균 값(4회로부터 수득함)을 다음에 사용하여 그룹 평균 값을 플롯팅하였다(참고: 도 3의 A). T 세포의 기능적 능력은 개인간에 변할 수 있으므로, 데이타를 또한 개인 당 ConA 반응의 퍼센트로 나타내었다(참고: 도 3의 B).

전체적으로, IL13RA2-B pAg(후보물) 펩타이드를 사용한 예방접종은 IL13RA2-H pA (참고 사람)-예방접종된 동물(그룹 2)과 비교하여 ELISPOT-IFNγ 검정에서 증진된 T 세포 반응을 유도하였다. 그룹 1(IL13RA2-B)의 경우, IL13RA2-B pAg를 사용한 생체외 재자극은 IL13RA2-H pAg보다 더 높은 반응을 촉진시켰다. 이는 그룹 2(IL13RA2-H)의 경우가 아니었다. 각각의 조건에 대한 ConA-유도된 반응의 퍼센트(평균 +/- SEM)는 다음과 같았다:

· 그룹 1 (IL13RA2-B) / IL13RA2-B pAg: 56.3% +/- 18.1

· 그룹 1 (IL13RA2-B) / IL13RA2-H pAg: 32.3% +/- 11.8

· 그룹 2 (IL13RA2-H) / IL13RA2-B pAg: 2.0% +/- 0.8

· 그룹 2 (IL13RA2-H) / IL13RA2-H pAg: 1.1% +/- 0.8

따라서, 이러한 결과는 IL13RA2를 표적화하는 종양-항원 면역치료요법이 생체내에서 T 세포 반응을 증진시킬 수 있으며 IL13RA2-B 후보물 펩타이드(서열 번호: 71)가 이러한 목적에 특히 효율적이라는 실험 증거를 제공한다.

실시예 3: HLA-A*0201 대립형질에 대해 우수한 친화성을 갖는 추가의 후보물 항원성 펩타이드의 확인

본 실시예는 서열 서열 번호: 47(본원에서 또한 ERBB2-1B로 지칭된 ≪ RLLEETDLV　≫); 서열 번호: 51(본원에서 또한 ERBB2-3B1로 지칭된 ≪ VMLGVVFGV　≫); 서열 번호: 52(본원에서 또한 ERBB2-3B2로 지칭된 ≪ VLLGVVFGV　≫); 서열 번호: 55 (본원에서 또한 ERBB2-3B3로 지칭된 ≪ VMLGVVFGI　≫); 및 서열 번호: 56(본원에서 또한 ERBB2-3B4로서 지칭된 ≪ ILLGVVFGI　≫)의 항원성 펩타이드가 ERBB2(≪RLLQETELV ≫, 서열 번호: 120, 본원에서 또한 ERBB2-1H로서 지칭됨; (≪VVLGVVFGI ≫, 서열 번호: 122, 본원에서 또한 ERBB2-3H로서 지칭됨)로부터 기원한 상응하는 참고 사람 펩타이드보다 더 높은 친화성을 가진다는 증거를 제공한다.

A. 물질 및 방법

A1. T2 세포주에 대한 펩타이드의 친화성의 측정.

실험 프로토콜은 HLA-A*0201에 의해 나타낸 펩타이드에 대해 입증된 것과 유사하다(Tourdot et al., A general strategy to enhance immunogenicity of low-affinity HLA-A2.1-associated peptides: implication in the identification of cryptic tumor epitopes. Eur J Immunol. 2000 Dec; 30(12):3411-21). 펩타이드의 친화성 측정은 HLA-A*0201 분자를 발현하지만, TAP1/2 음성이고 내인성 펩타이드를 제시할 수 없는 사람 종양 세포 T2를 사용하여 달성한다.

T2 세포(웰당 2.10⁵개의 세포)를 100 μM 내지 0.1 μM의 감소하는 농도의 펩타이드와 함께 100 ng/μl의 사람 β2m이 보충된 AIMV 배지 속에서 37℃로 16 시간 동안 항온처리한다. 이후에, 세포를 2회 세척하고 PE(클론 BB7.2, BD Pharmagen)에 커플링된 항-HLA-A2 항체로 표시한다.

분석은 FACS(Guava Easy Cyte)로 달성한다.

각각의 펩타이드 농도에 대해, 목적한 펩타이드와 관련된 표지의 기하 평균을 배경 노이즈로부터 감하고 100μM의 농도에서 참고 펩타이드 HIV pol 589-597에 대해 수득된 HLA-A*0202 표지의 기하 평균의 퍼센트로서 보고한다. 이후에, 상대적인 친화성은 다음과 같이 측정한다:

A2. 펩타이드의 가용화

각각의 펩타이드를 아미노산 조성을 고려하여 용해시킨다. 어떠한 시스테인, 메티오닌, 또는 트립토판도 포함하지 않는 펩타이드의 경우, DMSO의 첨가는 총 용적의 10% 까지 가능하다. 다른 펩타이드는 물 또는 PBS pH 7.4 속에 재현탁시킨다.

B. 결과

결과는 표 7에 나타낸다:

[표 7]

*

표 7에 나타낸 바와 같이(참고, 특히, 상술한 바와 같이 계산된 "상대적인 친화성"), 항원성 펩타이드 ERBB2-1B는 상응하는 사람 펩타이드 ERBB2-1H보다 더 높은 친화성(보다 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 항원성 펩타이드 ERBB2-3B1, ERBB2-3B2, ERBB2-3B3 및 ERBB2-3B4는 상응하는 사람 펩타이드 ERBB2-1B보다 더 높은 친화성(더 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 보다 낮은 농도의 항원성 펩타이드 ERBB2-1B, ERBB2-3B1, ERBB2-3B2, ERBB2-3B3 및 ERBB2-3B4(사람 참고 펩타이드와 비교한 것으로서)는 HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도하는데 요구된다.

실시예 4: HLA-A*0201 대립형질에 대해 우수한 친화성을 갖는 추가의 후보물 항원 펩타이드의 확인.

본 실시예는 서열 서열 번호: 77(본원에서 또한 MAGE C1B로 지칭된 ≪ KLVEWLAML　≫); 서열 번호: 93(본원에서 또한 MMP2-B로 지칭된 ≪ SLPPDVQQV　≫); 서열 번호: 28(본원에서 또한 PMEL-B로 지칭된 ≪ ITSDVPFSV　≫); 서열 번호: 101 (본원에서 또한 STEAP-B1로 지칭된 ≪ MLAVFLPLV　≫); 및 서열 번호: 102(본원에서 또한 STEAP-B2로서 지칭된 ≪YLAVFLPIV ≫)의 항원성 펩타이드가 MAGE C1(≪KVVEFLAML ≫, 서열 번호: 128, 본원에서 또한 MAGE C1H로 지칭됨), MMP2(≪GLPPDVQRV ≫, 서열 번호: 136, 본원에서 또한 MMP2-H로 지칭됨), PMEL(≪ITDQVPFSV ≫, 서열 번호: 115, 본원에서 또한 PMEL-H로 지칭됨), 및 STEAP(≪MIAVFLPIV ≫, 서열 번호: 141, 본원에서 또한 STEAP-H로 지칭됨)로부터 기원한 상응하는 참고 사람 펩타이드보다 HLA-A*0201 대립형질에 대해 더 높은 친화성을 가진다는 증거를 제공한다.

A. 물질 및 방법

A1. T2 세포주에 대한 펩타이드의 친화성의 측정.

분석은 FACS(Guava Easy Cyte)로 달성한다.

A2. 펩타이드의 가용화

B. 결과

결과는 표 8에 나타낸다:

[표 8]

*

표 8에 나타낸 바와 같이(참고, 특히, 상술한 바와 같이 계산된 "상대적인 친화성"), 항원성 펩타이드 MAGE C1B는 상응하는 사람 펩타이드 MAGE C1H보다 더 높은 친화성(보다 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 항원성 펩타이드 MMP2-B는 상응하는 사람 펩타이드 MMP2-H보다 더 높은 친화성(더 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 항원성 펩타이드 MPEL-B는 상응하는 사람 펩타이드 PMEL-H보다 더 높은 친화성(더 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 항원성 펩타이드 STEAP-B1 및 STEAP-B2는 상응하는 사람 펩타이드 STEAP-H보다 더 높은 친화성(더 낮은 값)을 나타낸다. 더욱이, 보다 낮은 농도의 항원성 펩타이드 MAGE C1B, MMP2-B, PMEL-B, STEAP-B1 및 STEAP-B2(사람 참고 펩타이드와 비교한 것으로서)는 HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도하는데 요구된다.

실시예 5: HLA-A*0201 대립형질에 대해 우수한 친화성을 갖는 추가의 후보물 항원성 펩타이드의 확인.

본 실시예는 서열 서열 번호: 26 (본원에서 또한 ENAH-B로 지칭된 ≪ TMNGKSSPV　≫)의 항원성 펩타이드가 HLA-A*0201 대립형질에 대해 고 친화성을 가지지만, ENAH(≪TMNGSKSPV ≫, 서열 번호: 113, 본원에서 또한 ENAH-H로 지칭됨)로부터 기원한 상응하는 사람 펩타이드는 저 친화성을 가진다는 증거를 제공한다.

A. 물질 및 방법

A1. T2 세포주에 대한 펩타이드의 친화성의 측정.

분석은 FACS(Guava Easy Cyte)로 달성한다.

A2. 펩타이드의 가용화

각각의 펩타이드를 아미노산 조성을 고려하여 가용화시킨다. 어떠한 시스테인, 메티오닌, 또는 트립토판도 포함하지 않는 펩타이드의 경우, DMSO의 첨가는 총 용적의 10% 까지 가능하다. 다른 펩타이드는 물 또는 PBS pH 7.4 속에 재현탁시킨다.

B. 결과

결과는 표 9에 나타낸다:

[표 9]

표 9에 나타낸 바와 같이(참고, 특히, 상술한 바와 같이 계산된 "상대적인 친화성"), 항원성 펩타이드 ENAH-B는 상응하는 사람 펩타이드 ENAH-H보다 더 높은 친화성(보다 낮은 값)을 나타낸다. 특히, 사람 펩타이드 ENAH-H는 HLA-A*0201에 결합하지 않는 것으로 여겨진다(ND... 측정되지 않음).

더욱이, 보다 낮은 농도의 항원성 펩타이드 ENAH-B(사람 참고 펩타이드 ENAH-H와 비교하여)는 HLA-A*0201의 발현의 20%를 유도하는데 필요하였다.

SEQUENCE LISTING <110> ENTEROME <120> IMMUNOGENIC COMPOUNDS FOR CANCER THERAPY <130> EB01P002WO <150> EP16192948.4 <151> 2016-10-07 <160> 144 <170> BiSSAP 1.3.2 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 1 Ser Leu Ala Gly Thr Ile Thr Gly Val 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 2 Leu Leu Met Lys Leu Ala Asp Leu Val 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 3 Leu Leu Tyr Lys Ile Ala Asp Leu Val 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 4 Ser Leu Ala Leu Ser Val Ile Leu Arg Val 1 5 10 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 5 Ser Leu Ala Val Ser Val Ile Leu Arg Ala 1 5 10 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 6 Lys Leu Leu Asp Ala Val Ile Ser Leu 1 5 <210> 7 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<223> peptide <400> 136 Gly Leu Pro Pro Asp Val Gln Arg Val 1 5 <210> 137 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 137 Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met 1 5 <210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 138 Ala Leu Asp Val Tyr Asn Gly Leu Leu 1 5 <210> 139 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 139 Phe Leu Phe Leu Leu Phe Phe Trp Leu 1 5 <210> 140 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 140 Thr Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 141 Met Ile Ala Val Phe Leu Pro Ile Val 1 5 <210> 142 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 142 Ser Leu Gly Trp Leu Phe Leu Leu Leu 1 5 <210> 143 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 143 Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu 1 5 <210> 144 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <223> "peptide" <220> <223> peptide <400> 144 Met Ala Lys Thr Ile Ala Tyr Asp Glu Glu Ala Arg Arg Gly Leu Glu 1 5 10 15 Arg Gly Leu Asn 20

Claims

서열 번호 71에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 항원성 펩타이드.
제1항에 따른 항원성 펩타이드가 로딩된 나노입자.
제2항에 있어서, 보조제(adjuvant)가 추가로 로딩된 나노입자.
제1항에 따른 항원성 펩타이드가 로딩된 세포.
제1항에 따른 항원성 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산.
제5항에 있어서, 핵산이 DNA 분자인 것인 핵산.
제5항에 있어서, 핵산이 RNA 분자인 것인 핵산.
제6항에 있어서, 상기 DNA 분자가 게놈성 DNA; cDNA; 안티센스 DNA; 상보성(complementary) DNA 서열; 발현 요소, 조절 요소 또는 프로모터가 있거나 없는 DNA 서열; 벡터; 및 이의 조합으로부터 선택된 것인 핵산.
제7항에 있어서, 상기 RNA 분자가 siRNA; rRNA; mRNA; 안티센스 RNA; 리보자임; 상보성(complementary) RNA 서열; 발현 요소, 조절 요소 또는 프로모터가 있거나 없는 RNA 서열; 벡터; 및 이의 조합으로부터 선택된 것인 핵산.
제5항에 따른 핵산을 포함하는 숙주(host) 세포.
제10항에 있어서, 상기 핵산은 벡터인 것인 숙주 세포.
- 제1항에 따른 항원성 펩타이드,
- 제2항에 따른 나노입자,
- 제4항에 따른 세포,
- 제5항에 따른 핵산, 또는
- 제10항에 따른 숙주 세포,
및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 첨가제(excipient)를 포함하는 면역원성 조성물.
제12항에 있어서, 하나 이상의 면역자극제(immunostimulatory agent)를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
제1항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 항원성 펩타이드.
제2항에 있어서, 약물로 사용하기 위한 나노입자.
제4항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 세포.
제5항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 핵산.
제10항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 숙주 세포.
제12항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 면역원성 조성물.
제1항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항원성 펩타이드.
제2항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 나노입자.
제4항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 세포.
제5항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 핵산.
제10항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 숙주 세포.
제12항에 있어서, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제1항에 따른 항원성 펩타이드,
- 제2항에 따른 나노입자,
- 제4항에 따른 세포,
- 제5항에 따른 핵산, 또는
- 제10항에 따른 숙주 세포
를 포함하는, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 키트(kit).
제12항에 따른 면역원성 조성물을 포함하는, 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 키트(kit).