KR20240007204A

KR20240007204A - 키메라 항원 수용체 및 이를 포함하는 변형된 세포

Info

Publication number: KR20240007204A
Application number: KR1020237042205A
Authority: KR
Inventors: 살바토레 알바니
Original assignee: 싱가포르 헬스 서비시즈 피티이 엘티디
Priority date: 2021-05-11
Filing date: 2022-05-11
Publication date: 2024-01-16
Also published as: CA3215528A1; AU2022271707A9; WO2022240360A9; AU2022271707A1; JP2024517027A; CN117616039A; WO2022240360A1; EP4337684A1

Abstract

본 발명은 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 결합하는 세포외 도메인, 막관통/힌지 도메인 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 인터루킨-10 및 TGF-베타의 발현을 유도하는 Fox3p 및 CAR 활성화-의존성 NFAT 프로모터를 추가로 포함하는 상기 CAR을 암호화하는 작제물을 발현하는 T 조절(Treg) 세포. 이는 또한 CAR을 제조하는 방법, 상기 CAR을 발현하는 Treg 세포 및 자가면역 질환, 예를 들어 이식 거부, 이식편대숙주 질환(GVHD) 및 사이토카인 방출 증후군을 치료하기 위한 상기 CAR의 용도에 관한 것이다.

Description

키메라 항원 수용체 및 이를 포함하는 변형된 세포

관련 출원

본 출원은 2021년 5월 11일에 출원된 싱가포르 가출원 제10202104940X호로부터 자격을 파생하며, 이의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 바이오공학 및 바이오엔지니어링 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor) 및 이를 포함하는 변형된 세포, 예를 들어 변형된 T 세포에 관한 것이다.

염증성 질환 또는 상태는 전 세계적으로 주요 문제이며 전염증성 사이토카인에 의해 유발되거나 관련될 수 있다.

고형 장기 이식은 현재 말기 장기 부전에 대한 선택 치료법이다. 초기 단계의 이식편 생존율은 공여자와 수용자의 보다 양호한 매칭 및 개선된 면역억제 약물 요법(therapy)에 의해 개선되었다. 그러나, 면역억제 약물의 장기간 사용은 해로운 부작용과 연관이 있는 것으로 나타났다.

이식과 유사하게, 자가면역 장애를 가진 환자에서의 면역억제 약물 투여는 면역 및 자가면역 반응을 표적으로 하여 면역을 저하시키는 것을 목표로 한다.

따라서, 염증성 질환 또는 병태(condition), 동종 이식 및/또는 자가면역 질환 또는 병태와 관련된 면역 활성 및 반응을 조절하기 위한 신규하거나 개선된 치료법이 필요하다.

한 측면에서, 본 개시내용은 세포외 도메인(extracellular domain), 막관통 도메인(transmembrane domain), 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에 관한 것이며, 여기서 세포외 도메인은 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 결합한다.

구체적인 예에서, 염증 관련 인자(들)는 전염증성 사이토카인 또는 염증-관련 케모카인이다. 구체적인 예에서, 하나 이상의 염증 관련 인자는 인터루킨 1 (IL-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파), 인터페론 감마 (IFN-감마), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 18 (IL-18), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 (GMCSF), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 8 (IL-8), 인터루킨 17A (IL-17), CXCL1, CXCL2, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL16 및 CCL2-20으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

구체적인 예에서, 본 개시내용은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에 관한 것이며, 여기서 세포외 도메인은 하나 이상의 전염증성 사이토카인에 결합한다. 추가의 예에서, 하나 이상의 전염증성 사이토카인은 인터루킨 1 (IL-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파), 인터페론 감마 (IFN-감마), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 18 (IL-18), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 (GMCSF), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 8 (IL-8) 및 인터루킨 17A (IL-17)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파)이다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 인터페론 감마 (IFN-감마)이다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 인터루킨 8 (IL-8)이다.

한 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 세포외 도메인은 하나 이상의 항원 결합 도메인을 포함하고, 여기서 상기/각각의 항원 결합 도메인은 항체, 항체 단편, 단일쇄 가변 단편 (scFv), 케모카인 수용체, 또는 이의 기능적 변이(functional variation)로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된다. 하나의 구체적인 예에서, 케모카인 수용체는 CCR5, CXCR3, CCR1, 및 CCR2로 이루어진 그룹으로부터 추가로 선택된다. 또 다른 구체적인 예에서, 상기/각각의 항원 결합 도메인은 단일-쇄 가변 단편 (single-chain variable fragment; scFv)이다. 구체적인 예에서, 세포외 도메인은 하기 중 임의의 하나 이상을 포함한다: TNF-알파에 결합하는 scFv, IFN-감마에 결합하는 scFv; 및 IL-17a에 결합하는 scFv.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 하기 표 1에 정의된 바와 같은 항체와 염증 관련 인자(들)에 결합하기 위해 경쟁한다.

한 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 TNF-알파에 결합하기 위해 서열 번호 1; 19 및 20; 64; 65 및 66; 80 및 81; 85 및 86; 162 및 163; 또는 165를 포함하는 항체와 경쟁한다.

한 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 IFN-감마에 결합하기 위해 서열 번호 3; 5; 34 및 35; 49 및 50; 100 및 101; 또는 112 및 113을 포함하는 항체와 경쟁한다.

한 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 IL-17a에 결합하기 위해 서열 번호 127 및 128; 또는 141 및 142를 포함하는 항체와 경쟁한다.

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 20, 35, 50, 66, 81, 86, 101, 113, 128, 142 또는 163에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL), 또는 표 1에 제시된 임의의 VL; 및

(b) 서열 번호 19, 34, 49, 65, 80, 85, 100, 112, 127, 141 또는 162에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 또는 표 1에 제시된 임의의 VH.

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 20 또는 서열 번호 163에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 19 또는 서열 번호 162에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 35에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 34에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 50에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 49에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 66에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 65에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 81에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 80에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 86에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 85에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 101에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 100에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 113에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 112에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 128에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 127에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 142에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 141에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 29, 30, 44, 45, 59, 60, 75, 76, 95, 96, 107, 108, 122, 123, 137, 138, 151 또는 152의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 31, 32, 46, 47, 61, 62, 77, 78, 97, 98, 109, 110, 124, 125, 139 또는 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33, 48, 63, 79, 84, 99, 111, 126, 140 또는 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 21, 22, 23, 36, 37, 38, 51, 52, 53, 67, 68, 69, 87, 88, 89, 114, 115, 116, 129, 130, 131, 143, 144 또는 145의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 24, 25, 26, 39, 40, 41, 54, 55, 56, 70, 71, 72, 90, 91, 92, 102, 103, 104, 117, 118, 119, 132, 133, 134, 146, 147 또는 148의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27, 28, 42, 43, 57, 58, 73, 74, 82, 83, 93, 94, 105, 106, 120, 121, 135, 136, 149 또는 150의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 29의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 31의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 21의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 24의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 29의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 31의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 22의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 25의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 30의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 32의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 23의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 26의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 28의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 44의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR); 서열 번호 46의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 36의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 39의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 44의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 46의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 37의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 40의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 45의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 47의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 38의 서열에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 41의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 43의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 59의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 61의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 51의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 54의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 59의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 61의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 52의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 55의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 60의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 62의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 53의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 56의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 58의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 75의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 67의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 70의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 75의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 68의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 71의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 76의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 78의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 69의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 72의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 74의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 75의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 67의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 70의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 75의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 68의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 71의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 76의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 78의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 69의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 72의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 83의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 95의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 97의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 87의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 90의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 95의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 97의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 88의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 91의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 96의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 98의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 89의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 92의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 94의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 107의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 109의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 21의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 102의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 107의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 109의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 22의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 103의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 108의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 110의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 23의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 104의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 106의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 122의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 124의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 114의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 117의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 122의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 124의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 115의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 118의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 123의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 125의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 116의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 119의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 121의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 137의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 139의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 129의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 132의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 137의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 139의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 130의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 133의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 138의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 125의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 131의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 134의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 136의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 151의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 153의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 143의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 146의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 151의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 153의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 144의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 147의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 152의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 47의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 145의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 148의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 150의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

한 실시양태에서, 항원 인식 도메인은 다음을 포함한다:

(a) 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(b) 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(c) 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(d) 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH), 또는

(e) 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (VL); 및

(f) 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열 번호 148의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 (VH).

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성(identity)을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 CDR 영역 이외의 하나 이상의 위치에 0 내지 10개의 아미노산 삽입, 결실, 치환, 부가, 또는 이들의 조합을 갖는 서열 번호 1 또는 서열 번호 166에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 CDR 영역 이외의 하나 이상의 위치에 0 내지 10개의 아미노산 삽입, 결실, 치환, 부가, 또는 이들의 조합을 갖는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 CDR 영역 이외의 하나 이상의 위치에 0 내지 10개의 아미노산 삽입, 결실, 치환, 부가, 또는 이들의 조합을 갖는 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

보다 구체적인 예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되고; 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되고; 또는 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

보다 구체적인 예에서, i)의 scFv는 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열을 갖고; ii)의 scFv는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 갖고; iii)의 scFv는 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 지칭한다. 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산은 또한 제1 핵산으로서 지칭될 수 있다 (본 개시내용이 제2 및/또는 제3 핵산을 지칭하는 문맥에서).

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 본원에 개시된 제1 핵산 또는 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 작제물 또는 벡터를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자의 발현은 전사 조절 서열의 조절하에 있다. 일부 실시양태에서, 전사 조절 서열은 구성적 프로모터 또는 유도성 프로모터일 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터로서, 이는 면역 세포, 예를 들어 T 세포를 형질전환하여 CAR의 발현을 유도하는데 사용될 수 있다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본원에 개시된 CAR을 포함하는 유전자 변형 세포가 제공된다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본원에 기재된 핵산 분자, 또는 본원에 기재된 핵산 작제물 또는 벡터, 또는 작제물 또는 벡터의 게놈적으로 통합된 형태를 포함하는 유전자 변형 세포가 제공된다. 유전자 변형 세포는 T 세포, 예를 들어 Treg, iPSC-유래 T 세포, 예를 들어 iPSC-유래 Treg 세포, 또는 CD34+ iPSC일 수 있다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체, 본원에 개시된 제1 폴리뉴클레오티드 또는 제1 핵산, 및/또는 본원에 개시된 핵산 작제물 또는 벡터를 포함하는 변형된 T 세포가 제공된다. 변형된 T 세포는 Treg 세포, 예를 들어 iPSC-유래 Treg 세포일 수 있다.

한 실시양태에서, 유전자 변형 세포, 바람직하게는 T 세포는 하나 이상의 면역억제 분자를 발현하도록 추가로 변형된다. 발현은 구성적 발현 또는 유도성 발현일 수 있다. 바람직하게는, 하나 이상의 면역억제 분자는 변형된 T 세포가 활성화될 때, 예를 들어 T 세포가 본원에 개시된 키메라 항원 수용체에 의해 활성화될 때 발현되고 변형된 T 세포에 의해, 특이적으로 이의 신호전달 도메인(signalling domain)을 통해 발현된다.

한 실시양태에서, 유도성 발현은 NFAT-유도성 시스템에 의해 가능해진다. 바람직하게는, 변형된 T 세포는 NFAT(nuclear factor of activated T cells; 활성화된 T 세포의 핵 인자)에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함하는 프로모터를 암호화하는 제2 핵산 또는 폴리뉴클레오티드, 및 하나 이상의 면역억제 분자를 포함하고; 여기서 프로모터에 대한 NFAT의 결합은 하나 이상의 면역-억제 분자의 발현을 유도한다.

한 예에서, 본원에 개시된 제1 및 제2 핵산 또는 폴리뉴클레오티드 둘 모두는 하나의 핵산 발현 서열로부터 발현된다.

예시적인 면역억제제 또는 면역-억제 분자는 IL-10, TGF-베타, FOXP3 및 이들의 조합이지만, 이에 제한되지 않는다. 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 효과기(effector) T 세포의 활성을 억제할 수 있거나 효과기 T 세포에서 아네르기(anergy)를 유도할 수 있다. 특정 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 IL-10, TGF-베타, CTLA-4, LAG3, PD-L1 및 PD-1로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 IL-10 및/또는 TGF-베타이다. 특정 예에서, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 서열을 포함한다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본원에 개시된 유전자 변형 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 벡터로 Treg를 형질도입(transducing)하여 형질도입된 Treg가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 함으로써 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 것을 포함한다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) 대상체로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 조절 T 세포 (Treg)를 단리하는 단계; b) 생체외에서 단리된 Treg를 확장하는 단계; 및 c) 확장된 Treg를 본원에 개시된 벡터로 형질도입하여 형질도입된 Treg가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계를 포함한다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성(hypoimmunogenic) T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) CD34+ iPSC를 변형시켜 (i) B2 마이크로글로불린 및 클래스 II MHC 전사활성화제의 발현 또는 활성의 수준을 감소 또는 제거하고, (ii) CD47 또는 이의 기능적 변이체를 과발현시키는 단계; b) 변형된 CD34+ iPSC를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여 형질도입된 CD34+ iPSC가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계; c) CAR 저면역원성 iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 iPSC-유래 T 세포는 iPSC-유래 T-조절(Treg) 세포이다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성 T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) CD34+ iPSC를 제공하는 단계, b) CD34+ iPSC에서 B2 마이크로글로불린 및 클래스 II MHC 전사활성화제의 활성의 발현 수준을 감소 또는 제거하는 단계; c) b)의 CD34+ iPSC에서 CD47 또는 이의 기능적 변이체를 과발현하는 단계; d) c)의 CD34+ iPSC를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여 형질도입된 CD34+ iPSC가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계; e) CAR 저면역원성 iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 iPSC-유래 T 세포는 iPSC-유래 T-조절 (Treg) 세포이다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성 T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) B2M(B2 마이크로글로불린) 및 CIITA(클래스 II MHC 전사활성화제) 유전자의 기능적 유전자 산물의 발현을 감소시키거나 제거하기 위해 CD34+ iPSC의 게놈을 편집하는 단계; c) CD34+ iPSC에서 CD47 또는 이의 기능적 변이체를 과발현하는 단계; d) c)의 CD34+ iPSC를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여 형질도입된 세포가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계; e) CAR 저면역원성 iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 iPSC-유래 T 세포는 iPSC-유래 T-조절 (Treg) 세포이다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성 T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) CD34+ 유도 만능 줄기 세포; b) B2M(B2 마이크로글로불린) 및 CIITA(클래스 II MHC 전사활성화제) 유전자를 모두 녹아웃하기 위해 CD34+ iPSC의 게놈을 편집하는 단계; c) CD47 또는 이의 기능적 변이체를 유전적으로 삽입하는 단계(여기서, 형질도입된 iPSC는 CD47을 과발현한다); d) e)의 T 세포를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 T 세포가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계; f) CAR 저면역원성 iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 대상체로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 조절 T 세포 (Treg)를 단리하는 단계; 생체외에서 단리된 Treg를 확장하는 단계; 및 확장된 Treg를 본원에 개시된 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 Treg가 본원에 개시된 CAR을 발현하도록 하는 단계를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 치료법에 사용하기 위한 본 개시내용의 유전자 변형 세포 또는 변형된 T 세포에 관한 것이다. 바람직하게는 변형된 T 세포는 본 개시내용의 CAR을 발현하는 변형된 Treg 세포이다. 한 실시양태에서, Treg 세포는 iPSC-유래 Treg 세포일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 자가면역 질환, 이식 거부, 이식편대숙주 질환 (GVHD), 사이토카인 방출 증후군 또는 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태의 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 유전자 변형 세포 또는 변형된 T 세포에 관한 것이다. 바람직하게는 변형된 T 세포는 본 개시내용의 CAR을 발현하는 변형된 Treg 세포이다. 한 실시양태에서, Treg 세포는 iPSC-유래 Treg 세포일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 자가면역 질환, 이식 거부, 이식편대숙주 질환 (GVHD), 사이토카인 방출 증후군 또는 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태를 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본 개시내용의 유전자 변형 세포 또는 변형된 T 세포를 투여하여 자가면역 질환, 이식 거부, 또는 이식편대숙주 질환 (GVHD)을 치료하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 내성(immune tolerance)을 유도하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 T 세포를 투여하여 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 내성을 유도하는 것을 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 하향조절하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 T 세포를 투여하여 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 하향조절하는 것을 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 효과기 T 세포의 활성을 국소적으로 또는 전신적으로 억제하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 본원에 개시된 바와 같은 변형된 T 세포, 또는 치료적으로 유효한 수의 본 개시내용의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 T 세포를 대상체에게 국소적으로 또는 전신적으로 투여하여 대상체에서 효과기 T 세포의 활성을 국소적으로 또는 전신적으로 억제하는 것을 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 발명은

· 자가면역 질환, 이식 거부, 이식편대숙주 질환 (GVHD), 사이토카인 방출 증후군 또는 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태를 치료하거나;

· 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 내성을 유도하거나;

· 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 하향조절하거나;

· 대상체에서 효과기 T 세포의 활성을 국소적으로 또는 전신적으로 억제하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 핵산, 핵산 작제물, 또는 변형된 세포의 용도를 제공한다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본 개시내용에 제공된 바와 같은 서열을 포함하는 벡터가 제공된다.

본 발명은 비제한적인 실시예 및 첨부된 도면과 함께 고려될 때 상세한 설명을 참조하여 더 잘 이해될 것이며, 여기서:
도 1은 전염증성 사이토카인에 결합하는 키메라 항원 수용체 및 면역억제 분자를 암호화하는 유도성 발현 카세트의 예시적인 설계의 개략도를 보여준다. 이러한 예에서, TNF-알파 및/또는 IFN-감마는 키메라 항원 수용체의 항원 결합 도메인(들)에 의해 표적화되는 전염증성 사이토카인이다. 또한 이러한 예에서, 면역 억제 분자는 IL-10 및 TGF-베타이다.
도 2는 예를 들어 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파; TNFa)를 표적화하는 예시적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 암호화하고, 활성화된 T 세포의 핵 인자 (NFAT) 유도성 발현 카세트를 추가로 암호화하는 폴리뉴클레오티드 작제물의 개략적 맵을 보여준다. (a) 이러한 예에서, 키메라 항원 수용체 작제물 PMC882는 전염증성 사이토카인 TNF-알파에 결합하는 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하고, CD28 공동-자극 도메인 뿐만 아니라 CD3-제타 신호전달 도메인을 포함한다. 이러한 예에서, 키메라 항원 수용체 코딩 서열은 CD8 리더 서열에 의해 선행되고, 이는 MNDU3 프로모터에 의해 선행된다. 이러한 특정 예에서, 도 2a에서, 작제물은 또한 CAR 카세트의 다운스트림에서 발견되는 NFAT 유도성 발현 카세트를 암호화한다. NFAT 유도성 발현 카세트는 6(NFAT)최소 IL-2 프로모터를 암호화하고, 이어서 이 예에서 예시된 두 개의 면역억제 분자인 TGF-베타 및 IL-10의 코딩 서열을 암호화한다. 자가-절단 가능한 T2A 펩티드는 또한 두 개의 면역억제제 사이에 암호화된다. (B) 또 다른 예에서, 면역억제제 분자의 또 다른 예인 FOXP3은 CAR 카세트와 공동-발현되고, 자가-절단 가능한 T2A 펩티드에 의해 CD3-제타 신호전달 도메인으로부터 분리된다.
도 3은 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 사용한 건강한 공여자 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 예시적인 분류 뿐만 아니라 분류된 집단의 순도를 보여준다. (A) 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 항-CD14, CD4, CD25, CD127 표면 마커로 표지하고 나타낸 바와 같이 분류하였다. (B) 이러한 분류 전략은 CD4⁺, CD25^-, CD127⁺ T 효과기 세포 (하단 패널)와 비교하여 FOXP3 발현에 기반하여 높은 순도의 CD4⁺, CD25⁺, CD127^- T_reg (상단 패널)를 산출하였다. 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 단리된 T_reg를 후속적으로 형질도입하고 확장시켜 CAR T_reg를 생성하였다.
도 4는 형질도입된 CAR Treg의 확장 및 발현의 결과를 보여준다. (A)는 14일에 걸쳐 CAR Treg의 생산에서 건강한 Treg의 배수 확장을 보여주는 그래프이다. 결과는 150배 이상의 강력한 확장을 나타낸다. (B) GFP⁺ CAR Treg는 형질도입되지 않은 확장된 Treg에 비해 확장된 Treg에서 75%의 형질도입을 보여준다.
도 5는 CAR PMC882로 형질도입된 Jurkat 세포의 결과를 보여준다. 그래프는 형질도입되지 않은 Jurkat를 능가하는, CD69+ 세포의 유세포 분석에 의해 결정된 활성화 마커 CD69의 표면 발현 증가를 보여준다. 이러한 증가된 발현은 TNFa의 존재로 인한 활성화를 입증한다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; *p<0.05.
도 6은 TNFa의 존재 또는 부재하에서 형질도입된 (A) Jurkat 세포, (B) 건강한 Treg 및 (C) 활동성 질환 Treg에서 TGF 베타 및 IL10의 세포내 염색에 기반한 유세포 분석의 결과를 보여준다. 이것은 NFAT 프로모터에 의한 유도성 발현을 시뮬레이션하고 입증하기 위해 수행되었다. (A) CAR PMC882로 형질도입된 Jurkat 세포는 TNFa 자극이 없는 것과 비교하여 TNFa의 존재하에서 면역억제 TGFb 및 IL10의 증가된 발현을 입증하였다. (B) 건강한 공여자 및 (C) 활동성 질환(소아 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis); JIA)을 가진 공여자로부터의 CAR PMC882 Treg는 TNFa 자극이 없는 것과 비교하여 TNFa의 존재하에서 TGFb 및 IL10의 증가된 발현을 보여주었다. 이러한 결과는 PMC882에서 NFAT 프로모터를 사용한 TGFb 및 IL10의 유도성 발현을 예시한다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; *p<0.05.
도 7은 24시간 공동-배양 동안 CD3/28 활성제의 존재하에 형질도입되지 않은 Treg와 비교하여 (A) 건강한 공여자 및 (B) 활동성 질환 공여자 (JIA)로부터의 CAR Treg PMC882와의 공동-배양에 의한 염증성 T 세포의 감소를 나타내는 데이터를 보여준다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; *p<0.05.
도 8은 7일에 걸쳐 PMC882 형질도입된 CAR Treg에 의한 CD3/28 활성제에 의해 활성화된 증식 효과기 T 세포의 억제를 보여준다. (A) 건강한 공여자 Treg 뿐만 아니라 (B) 활동성 JIA 질환 Treg를 CAR PMC882로 형질도입하였다. 결과는 증식 T 세포의 억제를 보여준다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; *p<0.05; **p<0.005.
도 9는 NSG GvHD 마우스 모델에서 PMC882 CAR Treg 처리의 효과를 보여준다. (A) 처리되지 않은 마우스와 비교하여 PMC882 CAR Treg 처리된 마우스의 임상 GvHD 점수. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; 곡선하 면적 ****p<0.0001; 그룹당 n=6. (B)처리되지 않은 마우스와 비교하여 PMC882 CAR Treg 처리된 마우스의 생존 곡선. 로그 순위 검정 *p<0.05. (c) 말초 혈액에서 인간 CD45의 생착 퍼센트는 14일째에 처리되지 않은 마우스에 비해 PMC882 CAR Treg 처리된 마우스에서 억제된다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; 스튜던트 t-검정 **p<0.005; n=6. (d) 35일째에 실험 종료시의 인간 CD45 생착의 퍼센트, PMC882 CAR Treg 처리된 마우스는 처리되지 않은 마우스에 비해 인간 CD45 생착의 현저한 억제를 보였다. 스튜던트 t-검정 **p<0.005; n=4. (E) T 세포가 조직에 침윤함을 나타내는 CD4⁺(황색) 및 CD8⁺(적색)에 대해 염색하는 VECTRA를 사용한 간 조직 분석. (F) CAR Treg 처리된 마우스(중간 패널) 및 처리되지 않은 마우스(하단 패널)로부터의 잘 분리된 클러스터를 보여주는 CyToF(상단 패널)를 사용한 말초 혈액 내 CD3⁺ T 세포의 고차원 축소 tSNE 분석. (G) CAR Treg 처리된 마우스(왼쪽) 및 처리되지 않은 마우스(오른쪽)로부터의 클러스터를 구성하는 마커의 히트맵.
도 10은 항-IFNy CAR Jurkat (A) 및 건강한 공여자 Treg (B)가 가용성 인간 IFNy에 반응하고, TGFb ((A) 및 (B) 각각에서 좌측 2개 컬럼) 및 IL10 ((A) 및 (B) 각각에서 우측 2개 컬럼)을 유도함을 보여준다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다; 스튜던트 t-검정 *p<0.05. 3개의 독립적인 실험의 데이터.
도 11은 항-TNFa CAR PMC882 및 항-IFNy CAR Treg 둘 다가 건강한 공여자에서 형질도입되지 않은 Treg보다 효과기 T 세포가 증식하는 것을 유의하게 더 잘 억제할 수 있음을 입증한다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 나타낸다; 이원 ANOVA, Tukey의 다중 비교 검정; *p<0.05; **p<0.005. 3명의 건강한 공여자로부터 및 3개의 독립적인 실험으로부터의 데이터.
도 12는 유전적으로 조작된 iPS 세포가 야생형 iPS 세포와 비교하여 유세포 분석에 의한 표면 염색에 의해 HLA A, B, C (A) 및 HLA DR, DP, DQ (B)의 녹아웃 뿐만 아니라 CD47 (C)의 과발현을 입증한다는 것을 보여준다. (D)는 조작된 iPS가 야생형 iPS 세포에 비해 T 세포 증식을 유도하지 않는다는 것을 보여준다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 나타낸다; 일원 ANOVA, Tukey의 다중 비교 검정; ***p<0.0005. 3명의 건강한 공여자로부터의 데이터.
도 13은 12일째 iPS 세포에서 CD34+ 세포로의 분화 (A) 및 CD3, CD4 및 CD8의 발현을 보여주는 T 세포로의 후속 분화 (B)를 상세히 설명한다. 유도성 NFAT 프로모터하에서 및 PMA 자극시 GFP와 함께 항-TNFa CAR로 형질도입된 iPS-유래 T 세포는 GFP 발현의 상향조절을 보여준다.

서열의 설명

표 1. 본 발명의 서열

정의

본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 뉴클레오티드의 쇄로서 정의된다. 본원에 사용된 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드" (또는 단수 버전)는 상호교환 가능하다. 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 DNA, RNA 또는 DNA와 RNA의 조합일 수 있다. 당업계의 숙련가는 핵산이 단량체 "뉴클레오티드"로 가수분해될 수 있는 폴리뉴클레오티드라는 것을 쉽게 이해할 것이다.

본원에 사용된 용어 "항체"는 항원과 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 항체는 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래된 무손상 면역글로불린 (예를 들어, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE)일 수 있고, 무손상 면역글로불린의 면역반응성 부분일 수 있다. 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 본원에서 사용되고, 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한, 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적, 삼중특이적 항체), 다가 항체 (예를 들어, 2가, 3가 항체), 단일 쇄 항체, 항체 단편 (즉, Fv, Fab, F(ab)2 등), 및 인간화 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "벡터"는 코딩 정보를 숙주 세포에 전달하기 위해 사용되는 임의의 분자를 지칭한다. 핵산, 선형 폴리뉴클레오티드, 이온성 또는 양친매성 화합물과 관련된 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 및 바이러스를 포함하지만 이에 제한되지 않는 수많은 벡터가 당업계에 공지되어 있다. 따라서, 용어 "벡터"는 자율적으로 복제하는 플라스미드 또는 바이러스를 포함한다. 상기 용어는 또한 핵산의 세포 내로의 전달을 촉진하는 비-플라스미드 및 비-바이러스 화합물, 예를 들어, 폴리리신 화합물, 리포솜 등을 포함한다. 바이러스 벡터의 예는 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역" (동의어 CDR; 즉, CDR1, CDR2, 및 CDR3)은 이들의 존재가 특이적 항원 결합에 주요한 기여인자인 항체 가변 영역의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각각의 가변 영역 도메인 (VH 또는 VL)은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 식별되는 3개의 CDR을 갖는다. VH의 CDR은 또한 본원에서 각각 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3으로 지칭되며, 여기서 CDRH1은 VH의 CDR1에 상응하고, CDRH2는 VH의 CDR2에 상응하며, CDRH3은 VH의 CDR3에 상응한다. 마찬가지로, VL의 CDR은 각각 본원에서 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3으로 지칭되며, 여기서 CDRL1은 VL의 CDR1에 상응하고, DRL2는 VL의 CDR2에 상응하고, CDRL3은 VL의 CDR3에 상응한다. 한 예에서, CDR에 할당된 아미노산 위치는 1987년 및 1991년 메릴랜드주 베데스다에 소재하는 미국 국립 보건원의 면역학적 관심 단백질의 Kabat 서열에 따라 정의된다 (본원에서는 "Kabat 넘버링 시스템"이라고 함). 또 다른 예에서, CDR에 할당된 아미노산 위치는 본원에서 "AbM 넘버링 시스템"으로도 지칭되는 Enhanced Chothia 넘버링 체계에 따라 정의된다 (http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html; Abhinandan & Martin, Mol. Immunology. 45(14): 3832-3839, 2008). 또 다른 예에서, CDR에 할당된 아미노산 위치는 국제 ImMunoGeneTics 정보 시스템(IMGT)에 따라 정의된다(Lefranc, Immunology Today. 18: 509, 1997; Lefranc, The Immunologist. 7: 132-136, 1999). 본 발명은 Kabat 넘버링 시스템에 의해 정의된 CDR에 제한되지 않고, 정준 넘버링 시스템 또는 문헌(Chothia 및 Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342:877-883, 1989; 및/또는 Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948, 1997))의 시스템; 또는 문헌(Honnegher 및 Plukthun J. Mol. Biol. 309: 657-670, 2001)의 넘버링 시스템을 포함하지만 이에 제한되지 않는 모든 넘버링 시스템을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "염증 관련 인자"는 염증에 관여하거나 염증과 관련된 것으로 알려진 임의의 인자를 지칭한다. 염증 관련 인자는 단백질, 핵산 및 지질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 염증 관련 인자는 염증 과정의 유도제 또는 촉진제일 수 있거나, 또는 증가된 염증의 결과로서 상향조절 및/또는 분비될 수 있다. 특정 예에서, 염증 관련 인자는 전염증성 사이토카인 또는 염증-관련 케모카인이다. 본원에 사용된 용어 "사이토카인"은 세포 신호전달에 관여하는 작은 단백질 또는 펩티드를 지칭하며, 일반적으로 면역 세포, 예를 들어 T 세포 및 대식세포에 의해 분비된다. 전염증성 사이토카인은 염증 반응의 상향조절에 관여하는 사이토카인이며, 예를 들어, 인터루킨 1(IL-1), 종양 괴사 인자 알파(TNF-알파), 인터페론 감마(IFN-감마), 인터루킨 12(IL-12), 인터루킨 18(IL-18), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GMCSF), 인터루킨 6(IL-6), 인터루킨 8(IL-8), 인터루킨 17A(IL-17) 등을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "케모카인"은 화학주성을 매개하는 기능(즉, 다른 세포, 특히 면역 세포에 유인물질로서 작용)에 대해 주로 알려진 특수한 유형의 사이토카인을 지칭한다. 염증성 케모카인이라고도 하는 염증 관련 케모카인은 염증 반응, 예를 들어 염증 부위로의 면역 세포의 유인에 적극적인 역할을 한다. 염증-관련 케모카인의 예는 CXCL1, CXCL2, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL16, CCL2-20 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

"코돈 축퇴"로 알려져 있는 본원에 사용된 용어 "코돈 중복 서열(codon redundant sequence)" 또는 "코돈 중복"은 아미노산을 특정하는 3-염기쌍 코돈 조합의 다중성을 지칭한다. 즉, 하나의 아미노산은 핵산의 상이한 삼중항(코돈)에 의해 암호화될 수 있다. 그러나, 핵산의 하나의 삼중항(코돈)은 단지 하나의 아미노산만을 초래할 수 있다.

용어 "암호화"는 생물학적 과정에서 다른 중합체 및 거대분자의 합성을 위한 주형으로서 기능하기 위한 유전자, cDNA(이식유전자의 것을 포함함), 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오티드 (또는 전체 폴리뉴클레오티드) 내의 뉴클레오티드의 특정 서열의 고유한 특성을 지칭한다. 중합체 및 거대분자는 뉴클레오티드의 정의된 서열 (즉, rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 아미노산의 정의된 서열을 갖는다. 따라서, 유전자는 그 유전자에 상응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 상기 단백질을 생산하는 경우 단백질을 암호화한다. 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로서 사용되는, 뉴클레오티드 서열이 mRNA 서열과 동일한 코딩 가닥, 및 비-코딩 가닥 둘 다는 그 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 산물을 암호화하는 것으로 지칭될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는, 이의 천연 상태로 또는 당업계의 숙련가들에게 잘 알려진 방법에 의해 조작될 때, 폴리펩티드 또는 이의 단편에 대한 mRNA를 생산하기 위해 전사 및/또는 번역될 수 있다면 폴리펩티드를 "암호화"하는 것으로 지칭된다. 안티센스 가닥은 이러한 핵산의 보체이며, 암호화 서열은 이로부터 추론될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "CRISPR-Cas9"는 예를 들어 스트렙토코커스 피로게네스(Streptococcus pyogenes)로부터의 규칙적인 간격을 두고 군집된 회문 반복체(CRISPR) 및 CRISPR-관련 단백질-9 뉴클레아제(Cas9)가 예를 들어 CRISPR-Cas9 복합체에 통합된 합성 가이드 RNA(sgRNA) 서열에 상보적인 특정 위치에서 이중-가닥(ds) DNA 절단을 유도하는 능력에 기초한 게놈 편집 기술을 지칭한다. 이는 유전자 및/또는 다른 게놈 요소, 예를 들어 전사 요소, 프로모터, 프로모터 인핸서, 전사 인핸서, 제한 부위, 돌연변이, 선택 마커, 예를 들어 항생제 선택 카세트 등의 결실, 추가 및/또는 변형을 허용한다. 예를 들어, 항생제 선택 카세트, 또는 임의의 다른 선택 마커는 CRISPR 기술을 사용하여 유전 물질의 삽입 전, 동시 또는 후에 게놈에 추가할 수도 있다. CRISPR(규칙적인 간격을 두고 군집된 짧은 회문 반복체) 및 CRISPR-관련(Cas) 유전자의 기능은 선택된 박테리아 및 고세균의 적응 면역에 필수적이며, 유기체가 침입하는 유전 물질에 반응하여 제거할 수 있도록 한다. 지금까지 다양한 유형의 CRISPR 메커니즘이 확인되었으며 그 중 유형 II가 가장 잘 연구되었다. 또한, CRISPR의 다른 조합, 예를 들어 CRISPR-Cpf1이 개발되었다. 또한 Cas 단백질 또는 기능적으로 유사한 단백질이 스트렙토코커스 피로게네스로부터 단리되지 않는 CRISPR 기술의 사용이 본원에서 고려된다. Cas 9 단백질의 예는 Cas 9 단백질, 또는 스트렙토코커스 피로게네스 , 스타필로코커스 아우레우수 (Staphylococcus aureus ), 또는 고세균계의 임의의 대표자로부터 단리된 동일한 기능을 갖는 단백질이지만, 이에 제한되지 않는다 (Woese, Kandler & Wheelis, 1990). Cas 9 단백질은 또한 소위 CasX 및 CasY 단백질로 치환될 수 있다. 또 다른 예에서, Cpf1 단백질, 또는 동일한 기능을 갖는 단백질의 예는 이에 제한되지 않지만 아시드아미노코커스 종( Acidaminococcus sp .) 및 라크로스피라시에(Lachnospiraceae)로부터 단리된다. 적응 면역의 측면에서, CRISPR-Cas9 매개 방어의 메커니즘은 다음과 같다: 바이러스 또는 플라스미드로부터 침입한 DNA를 작은 단편으로 절단하고 일련의 짧은 반복체(약 20bps) 중에 CRISPR 유전자좌에 통합시킨다. 유전자좌가 전사된 다음 전사체가 처리되어 서열 상보성을 기반으로 침입 DNA를 표적으로 하는 효과기 엔도뉴클레아제를 안내하는 데 사용되는 작은 RNA(crRNA - CRISPR RNA; 시험관내 설정에서 합성 가이드 RNA(sgRNA)라고도 함)를 생성한다. 유전자 편집의 측면에서, CRISPR-Cas9는 동일한 원리에 따라 작동하며, sgRNA는 효과기 뉴클레아제를 절제할 DNA의 원하는 부분으로 안내한다.

본원에 사용된 용어 "활성화"는 검출 가능한 세포 증식 또는 사이토카인 생산을 나타내도록 충분히 자극된 면역 세포, 예를 들어 T 세포의 상태를 지칭한다. 본원에 개시된 한 예에서, 활성화는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 이의 하나 이상의 표적 항원의 결합에 의한 자극의 결과이다. 변형된 T 세포가 하나 이상의 전염증성 사이토카인과 결합할 수 있는 키메라 항원 수용체를 포함하는 본 개시내용의 특정 예에서, 하나 이상의 전염증성 사이토카인과 키메라 항원 수용체의 결합은 키메라 항원 수용체의 신호전달 도메인(들)의 활성을 통해 변형된 T 세포를 활성화시킨다.

본원에 사용된 용어 "면역 내성" (면역학적 내성, 또는 면역내성으로도 알려짐)은 국소적으로 또는 전신적으로 인간 대상체에서 면역 반응을 유도할 수 있는 물질에 대한 면역계의 무반응 또는 감소된 반응의 상태를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "자가(autologous)"는 나중에 재도입되는, 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 대조적으로, 용어 "동종이계(allogeneic)"는 상이한 개체로부터 유래된 이식편을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "Treg"는 다음 특징 중 하나 이상을 갖는, 억제 T 세포로도 알려진 T 세포의 하위집단인 조절 T 세포를 지칭한다: CD4 발현; FOXP3 발현; CD25 발현; CD4+, FOXP3+ 및 CD25+ T 세포; 효과기 T 세포의 유도 및 증식을 하향 조절하는 능력; CD4+ FOXP3+ CD25 (높은) T 세포; 또는 효과기 T 세포보다 더 큰 T 세포 수용체 (TCR) 다양성.

본원에 사용된 용어 "자가면역 질환"은 그 자체에 대한 숙주에 의한 반응의 결과이거나 그러한 반응으로 초래되는 질환 또는 장애로서 정의된다. 따라서 자가면역 질환은 자가 항원에 대한 부적절하고 과도한 반응의 결과이다. 자가면역 질환의 예는 특히 애디슨병(Addision's disease), 원형 탈모증(alopecia greata), 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 자가면역 이하선염(autoimmune parotitis), 크론병(Crohn's disease), 당뇨병(diabetes)(제1형), 이영양성 수포성 표피박리증(dystrophic epidermolysis bullosa), 부고환염(epididymitis), 사구체신염(glomerulonephritis), 이식된 장기 등의 일반적인 거부(general rejection of transplanted organs), 이식편대숙주병(Graft vs. host disease), 그레이브스병(Graves' disease), 길랭-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 하시모토병(Hashimoto's disease), 용혈성 빈혈(haemolytic anaemia), 염증(inflammation), 전신성 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus)(루푸스), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease), 중증 근무력증(myasthenia gravis), 심상성 천포창(pemphigus vulgaris), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 건선(psoriasis), 류머티즘(rheumatism), 류마티스 열(rheumatic fever), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 소아 류마티스 관절염(juvenile rheumatoid arthritis), 유육종증(sarcoidosis), 경피증(scleroderma), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 척추관절병증(spondyloarthropathies), 갑상선염(thyroiditis), 혈관염(vasculitis), 백반증(vitiligo), 점액부종(myxoedema), 악성 빈혈(pernicious anaemia), 궤양성 대장염(ulcerative colitis)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "작동 가능하게 연결된"은 제1 및 제2 핵산 서열 사이의 연결을 지칭하며, 이에 의해 연결은 두 핵산 서열 모두의 기능적 발현이 일어나도록 한다. 즉, 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때, 제1 핵산 서열은 제2 핵산 서열과 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 프로모터는 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 연속적이며, 필요한 경우 동일한 판독 프레임에서 두 개의 단백질 코딩 영역을 결합한다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 자가면역 질환; 이식 거부, 이식편대숙주 질환 (GVHD), 사이토카인 방출 증후군 또는 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태를 앓을 수 있는 임의의 동물을 지칭한다. 관심의 특정 대상체는 인간, 및 마우스, 래트, 흰 족제비, 기니피그, 햄스터, 비인간 영장류, 개, 돼지 및 양과 같은 과학적으로 관련된 종, 또는 말, 개, 고양이 및 소와 같은 경제적으로 관련된 동물이다. 바람직한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

"대상체에게 제공하는"에 대한 언급은 대상체에게 유전자 변형 세포를 투여하는 것에 관한 것이다. 대안적으로, 유전자 변형 세포는 대상체 내에서 생성될 수 있다. 예를 들어, 유전자 변형 세포는 대상체가 유전자 변형 세포의 내인성 집단을 갖도록 생체내에서 생성될 수 있다. 이러한 생체내 생성에 적합한 수단은 당업계에 공지되어 있으며, 대상체의 유전자 요법을 포함한다.

본 발명의 상세한 설명

조절 T 세포(Treg, T 세포의 서브세트)는 말초 면역 내성의 유도 및 유지에 중요한 역할을 하며 과도한 면역 반응 및 자가면역을 예방하는 데 중요하다.

입양 세포 요법의 진전으로 연구자/임상의는 합성 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 유전자의 도입을 통해 환자 자신의 면역 세포에 선택된 항원에 대한 반응성을 부여할 수 있게 되었다.

이러한 이유로, Treg의 기능은 면역 반응을 약화시키거나 억제하기 위해 본 개시내용에 따라 사용된다. 이것은 염증성 장애를 갖는 대상체, 및 이식을 받는 대상체를 위한 치료 옵션을 제공한다. 본원에 나타낸 바와 같이, 유전자 변형에 의한 Treg, 또는 유사한 면역억제 세포의 억제 특성의 강화는 자가면역 장애, 이식 거부, 이식편대숙주 질환 (GVHD), 사이토카인 방출 증후군 및 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태를 치료하기 위한 양식을 제공한다.

본원에는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 형질도입된 T 세포의 입양 세포 전달의 전략이 개시되어 있다. 대부분의 항암 CAR T 세포 요법에서 볼 수 있는 바와 같이 종양-특이적 항원과 결합하고 면역 반응/활성을 촉진하는 대신, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는 전염증성 사이토카인에 결합하거나 결합할 수 있다. 활성화시, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 포함하는 변형된 T 세포는 효과기 T 세포의 사멸 및/또는 억제를 유도하고, 이에 의해 면역 반응 및 활성을 억제하는 것으로 나타났다. 또한 본원에는 염증성 면역 반응을 조절하고, 자가면역 및 이식 거부와 같은 내성이 요구되는 질환에서 장기간 무약물 면역 내성(long term drug free immune tolerance)을 유도하기 위한 물질 및 방법이 개시되어 있다.

본 발명의 조성물 및 방법은 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 조절 T 세포 (Treg) 또는 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)-유래 T 세포를 사용하여 동종 이식 및 자가면역 질환과 관련된 면역 반응을 조절한다. 변형된 세포, 예를 들어 변형된 Treg, 또는 iPSC-유래 T 세포는 염증 관련 인자에 결합하여 염증의 감소 및 해소를 유도하는 단일-쇄 가변 단편(scFv)을 갖는 키메라 항원 수용체(CAR)와 조합된다.

키메라 항원 수용체

따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에 관한 것이며, 여기서 세포외 도메인은 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 결합한다. 특정 예에서, 염증 관련 인자(들)는 전염증성 사이토카인 또는 염증 관련 케모카인이다. 특정 예에서, 하나 이상의 염증 관련 인자는 인터루킨 1 (IL-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파), 인터페론 감마 (IFN-감마), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 18 (IL-18), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 (GMCSF), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 8 (IL-8), 인터루킨 17A (IL-17), CXCL1, CXCL2, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL16 및 CCL2-20으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

특정 예에서, 본 개시내용은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에 관한 것이며, 여기서 세포외 도메인은 하나 이상의 전염증성 사이토카인에 결합한다. 추가의 예에서, 하나 이상의 전염증성 사이토카인은 인터루킨 1 (IL-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파), 인터페론 감마 (IFN-감마), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 18 (IL-18), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 (GMCSF), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 8 (IL-8) 및 인터루킨 17A (IL-17)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 종양 괴사 인자 알파 (TNF-알파)이다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 인터페론 감마 (IFN-감마)이다. 한 예에서, 전염증성 사이토카인은 인터루킨 8 (IL-8)이다.

특정 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 도메인은 TNF-알파에 결합하는 scFv를 포함하고, 여기서 힌지 영역(hinge region)은 CD8a 또는 CD28 힌지이고, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인이고, 신호전달 도메인은 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인이고, 공동자극 도메인은 CD28의 세포내 신호전달 도메인이다. 특정 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 도메인은 IFN-감마에 결합하는 scFv를 포함하고, 여기서 힌지 영역은 CD8a 또는 CD28 힌지이고, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인이고, 신호전달 도메인은 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인이고, 공동자극 도메인은 CD28의 세포내 신호전달 도메인이다. 또 다른 특정 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 도메인은 IL-17a에 결합하는 scFv를 포함하고, 여기서 힌지 영역은 CD8a 또는 CD28 힌지이고, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인이고, 신호전달 도메인은 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인이고, 공동자극 도메인은 CD28의 세포내 신호전달 도메인이다.

항원 결합 도메인

한 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 세포외 도메인은 하나 이상의 항원 결합 도메인을 포함한다.

항원-인식 도메인은 하나 이상의 염증 관련 인자(들)(예를 들어, 전염증성 사이토카인 또는 염증-관련 케모카인)를 인식할 수 있는 임의의 적합한 도메인일 수 있다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "항원-인식 도메인"은 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 대한 CAR의 특이성을 제공하는 CAR의 부분을 지칭한다. 항원-인식 도메인은 CAR의 세포외 영역의 전부일 수 있거나, 또는 단지 일부일 수 있다. 적합한 항원-인식 도메인은, 염증 관련 인자에 결합하는 항체 또는 이의 단편의 항원 결합 부위에 대한 서열 상동성을 갖는 폴리펩티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 따라서, 본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 항원-인식 도메인은 염증 관련 인자에 결합하는 항체 또는 이의 단편에 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-인식 도메인의 일부는 염증 관련 인자에 결합하는 항체 또는 이의 단편에 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 소스 상동성 항체 서열은 염증 관련 인자에 대한 친화성을 갖는 항체의 임의의 적합한 서열일 수 있다. 예를 들어, 서열은 하기 종 중 하나 이상으로부터 유래하는 항체와 서열 상동성을 공유할 수 있다; 인간, 비인간 영장류, 마우스, 래트, 토끼, 양, 염소, 흰 족제비, 개, 닭, 고양이, 기니피그, 햄스터, 말, 소 또는 돼지. 항원-인식 도메인은 하이브리도마 세포주로부터 생산된 단클론 항체의 서열과 서열 상동성을 공유할 수 있다. 상동성 항체 서열의 기원 종이 인간이 아닌 경우, 항체는 바람직하게는 인간화 항체이다. 상동성 항체 서열은 또한 연골 어류와 같은 비포유류 동물 종으로부터 유래할 수 있다 (예를 들어, 상어 IgNAR 항체 - 제WO2012/073048호 참조). 대안적으로, 항원 결합 도메인은 상어 IgNAR 항체에 기반한 결합 모이어티를 갖는 i-바디와 같은 상어 항체와 유사한 기능을 제공하는 변형된 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다 (제WO2005/118629호 참조). 추가로, 항원-인식 도메인은 CAR 신호전달 도메인을 활성화시키기에 충분한 친화도를 갖는 염증 관련 인자와 선택적으로 상호작용할 수 있는 임의의 다른 적합한 결합 분자 또는 펩티드일 수 있거나 이로부터 유래될 수 있거나, 이와 서열 상동성을 공유할 수 있다. 특히 패닝 파지 디스플레이 라이브러리, 단백질 친화성 크로마토그래피, 공동면역침전 및 효모 2-하이브리드 시스템과 같은 항원 결합 단백질의 동정을 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다(참조; Srinivasa Rao, V. et al. Int J Proteomics, 2014; article ID 147648).

일부 실시양태에서, CAR의 항원-인식 도메인은 염증 관련 인자에 결합하는 항체의 단편-항원 결합 (Fab) 부분의 아미노산 서열에 대한 아미노산 서열 상동성을 포함한다. 당업계에 이해되는 바와 같이, 항체의 Fab 부분은 항체의 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 불변 영역 및 하나의 가변 영역으로 구성된다. Fab는 항체의 항원 결정기 영역이고, 항체로부터 Fc 영역을 효소적으로 절단함으로써 생성될 수 있다.

본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 항원-인식 도메인은 염증 관련 인자에 결합하는 단일쇄 가변 단편 (scFv)의 아미노산 서열에 대한 아미노산 서열 상동성을 포함한다. 당업계에 이해되는 바와 같이, scFv는 항체의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)와 상동성을 공유할 수 있거나 동일할 수 있는 2개의 부분을 포함하는 융합 단백질이며, 이 2개의 부분은 링커 펩티드로 함께 연결된다. 예를 들어, scFv는 염증 관련 인자를 인식하는 항체로부터 유래된 VH 및 VL 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 맥락에서, 용어 "유래된"은 폴리펩티드 그 자체의 공급원에 대한 언급이 아니라, 오히려 항원 결합 영역의 일부를 구성하는 아미노산 서열의 유도를 지칭한다는 것을 이해할 것이다. 결론적으로, 용어 "유래된"은 염증 관련 인자에 결합하는 항체에 대한 서열 동일성을 공유하는 합성적으로, 인공적으로 또는 달리 생성된 폴리펩티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항원-인식 도메인은 염증 관련 인자에 결합하는 다가 scFv의 아미노산 서열에 대한 아미노산 서열 상동성을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다가 scFv는 2가 또는 3가 scFv이다.

본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 항원-인식 도메인은 염증 관련 인자에 결합하는 단일-항체 도메인 (sdAb)의 아미노산 서열을 갖는다.

일부 예에서, 각각의 항원 결합 도메인은 항체, 항체 단편, 단일-쇄 가변 단편 (scFv), 케모카인 수용체, 또는 이들의 기능적 변이로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된다. 하나의 특정 예에서, 케모카인 수용체는 CCR5, CXCR3, CCR1, 및 CCR2로 이루어진 그룹으로부터 추가로 선택된다. 또 다른 특정 예에서, 각각의 항원 결합 도메인은 단일-쇄 가변 단편 (scFv)이다.

특정 예에서, 세포외 도메인은 하기 중 어느 하나 이상을 포함한다: TNF-알파에 결합하는 scFv, IFN-감마에 결합하는 scFv; 및 IL-17a에 결합하는 scFv. 보다 구체적인 예에서, i)의 scFv는 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열을 갖고; ii)의 scFv는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 갖고; iii)의 scFv는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

아미노산 서열을 비교할 때, 서열은 폴리펩티드의 길이에 의해 결정되는 비교 창을 통해 비교되어야 한다. 비교 창은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열(부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 약 20% 이하의 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 비교 창을 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어, 문헌[Altschul et al., 1997, Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402]에 개시된 바와 같은 프로그램의 BLAST 패밀리와 같은 알고리즘의 전산화된 구현에 의해 수행될 수 있다. 글로벌 정렬 프로그램은 또한 대략 동일한 크기의 유사한 서열을 정렬하는 데 사용될 수 있다. 글로벌 정렬 프로그램의 예는 EMBOSS 패키지의 일부인 NEEDLE (www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/에서 사용 가능) (Rice P et al., 2000, Trends Genet., 16 : 276-277) 및 FASTA 패키지의 일부인 GGSEARCH 프로그램 (fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_www.cgi?rm=compare&pgm=gnw에서 사용 가능) (Pearson W and Lipman D, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444-2448)를 포함한다. 이들 프로그램 둘 다는 전체 길이에 걸쳐 두 서열의 최적 정렬(갭 포함)을 찾는 데 사용되는 Needleman-Wunsch 알고리즘을 기반으로 한다. 서열 분석에 대한 상세한 논의는 Ausubel 등의 Unit 19.3("Current Protocols in Molecular Biology" John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15, 1998)에서도 찾을 수 있다.

상기 나타낸 바와 같이, 기능적 변이체는 본원에, 예를 들어 표 2에 기재된 아미노산 서열 중 하나에 대한 개별적인 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다. 예를 들어, 당업계의 숙련가는 임의의 아미노산이 화학적으로 (기능적으로) 유사한 아미노산으로 치환될 수 있고 폴리펩티드의 기능을 보유할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 이러한 보존적 아미노산 치환은 당업계에 잘 알려져 있다. 표 2의 하기 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 아미노산을 함유한다.

표 2

예시적인 아미노산 보존적 치환

또한, 경우에 따라, 비천연 아미노산 또는 화학적 아미노산 유사체가 본원에 포함되는 폴리펩티드 내로의 치환 또는 부가로서 도입될 수 있다. 이러한 아미노산은 일반적인 아미노산의 D-이성질체, 2,4-디아미노부티르산, α-아미노 이소부티르산, 4-아미노부티르산, 2-아미노부티르산, 6-아미노헥산산, 2-아미노 이소부티르산, 3-아미노 프로피온산, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 호모시트룰린, 시스테인산, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 페닐글리신, 사이클로헥실알라닌, β-알라닌, 플루오로-아미노산, 디자이너 아미노산, 예를 들어 β-메틸 아미노산, Cα-메틸 아미노산, Nα-메틸 아미노산 및 일반적인 아미노산 유사체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

힌지

한 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치한 힌지 영역을 추가로 포함한다. 특정 예에서, 힌지 영역은 CD8a 힌지, CD28 힌지, IgG 힌지, IgD 힌지 및 이들의 기능적 변이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 힌지 영역은 서열 번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CD8a 힌지이다. 또 다른 예에서, 힌지 영역은 IgG 힌지 영역, 예를 들어 서열 번호 156에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 IgG4 힌지 영역이다. 또 다른 예에서, 힌지 영역은 서열 번호 157에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 IgD 힌지 영역이다. 바람직한 예에서, 힌지 영역은 CD28 힌지 영역이다. 이러한 특정 예에서, 힌지 영역은 서열 번호 7에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 코돈 중복 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 특정 실시양태에서, 힌지 영역은 서열 번호 7, 156, 157 또는 164에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

신호전달 도메인

또 다른 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 세포내 도메인은 신호전달 도메인 및 임의로 하나 이상의 공동자극 도메인을 포함한다.

한 예에서, 신호전달 도메인은 활성화 수용체로부터 유래된 부분을 포함한다.

본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "부분"은, 활성화 수용체 또는 공동자극 수용체와 관련하여 사용될 때, 수용체와 이의 동족 항원 또는 리간드의 상호작용에 뒤따르는 세포내 신호전달 캐스케이드의 개시/유도를 담당하거나 관여하는 서열을 포함하는 수용체의 임의의 세그먼트에 관한 것이다. CD3를 통한 T 세포 수용체 (TCR)에 대한 세포내 신호전달 캐스케이드의 개시/유도의 예는 아래에 요약되어 있다.

이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, TCR의 세포외 부분은 주로 클론형 TCRα 및 TCRβ 쇄(TCRα/β 수용체) 또는 TCRγ 및 TCRδ 쇄(TCRγδ 수용체)의 이종이량체를 포함한다. 이러한 TCR 이종이량체는 일반적으로 고유한 신호 전달 능력이 부족하므로 CD3의 다중 신호 전달 서브유닛(주로 CD3-제타, -감마, -델타 및 -엡실론)과 비공유 결합된다. CD3의 감마, 델타 및 엡실론 쇄 각각은 단일 면역-수용체-티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 세포내(세포질) 부분을 갖는 반면 CD3-제타 쇄는 3개의 탠덤 ITAM을 포함한다. MHC의 존재하에서 이의 동족 항원에 의한 TCR의 관여, 및 CD4 또는 CD8과 같은 필수 공동 수용체의 결합시, 신호전달이 개시되어 CD3 쇄의 세포내 ITAM(들) 내의 2개의 티로신 잔기를 인산화하는 티로신 키나제(즉, Lck)가 야기된다. 그후, 두 번째 티로신 키나제(ZAP-70 - Lck 인산화에 의해 자체 활성화됨)가 모집되어 ITAM을 이중인산화한다. 그 결과, 여러 다운스트림 표적 단백질이 활성화되어 결국 세포내 구조적 변화, 칼슘 동원 및 액틴 세포골격 재배열을 야기하여, 조합될 때, 궁극적으로 전사 인자의 활성화 및 T 세포 면역 반응의 유도로 이어진다.

본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "활성화 수용체"는 T 세포 수용체 (TCR) 복합체의 성분을 형성하거나 TCR 복합체의 형성에 관여하는 수용체 또는 공동-수용체, 또는 항원성 또는 다른 면역원성 자극의 인식의 결과로서 면역 세포의 특이적 활성화에 관여하는 수용체에 관한 것이다.

이러한 활성화 수용체의 비제한적인 예는 T 세포 수용체-CD3 복합체의 성분 (CD3-제타, -감마, -델타, 및 -엡실론), CD4 공동-수용체, CD8 공동-수용체, FC 수용체 또는 자연 살해 (NK) 세포 관련 활성화 수용체, 예를 들어 LY-49 (KLRA1), 자연 세포독성 수용체 (NCR, 바람직하게는 NKp46, NKp44, NKp30 또는 NKG2 또는 CD94/NKG2 이종이량체)를 포함한다. 결론적으로, 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 CD3 공동수용체 복합체 (바람직하게는 CD3-ζ 쇄 또는 이의 부분), CD4 공동-수용체, CD8 공동-수용체, Fc 수용체 (FcR) (바람직하게는 FcεRI 또는 FcγRI) 또는 LY-49와 같은 NK 관련 수용체의 구성원 중 임의의 하나 이상으로부터 유래된 부분을 포함한다.

일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 CD3 (바람직하게는 CD3-ζ 쇄 또는 이의 일부) 또는 FC 수용체 (바람직하게는 FcεRI 또는 FcγRI) 중 어느 하나로부터 유래된 부분을 포함한다.

활성화 수용체의 부분의 다양한 조합은 CAR의 막관통(TM) 및 세포내(IC) 부분, 예를 들어 CD3ζTM 및 CD3ζ IC (Landmeier S. et al. Cancer Res. 2007; 67:8335-43; Guest RD. et al., J Immunother. 2005, 28:203-11; Hombach AA. et al. J Immunol. 2007; 178: 4650-7), CD4 TM 및 CD3ζ IC (James SE. et al. J Immunol. 2008;180:7028-38), CD8 TM 및 CD3ζ IC (Patel SD. et al. Gene Ther. 1999; 6: 412-9), 및 FcεRIγ TM 및 FcεRIγ IC (Haynes NM. et al. J Immunol. 2001; 166: 182-7; Annenkov AE. et al. J Immunol. 1998; 161: 6604-13)를 형성하는데 사용될 수 있다.

한 예에서, 신호전달 도메인은 하나 이상의 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다. 특정 예에서, 신호전달 도메인은 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 제타, CD22, CD79a, CD79b, CD66d, 및 이들의 기능적 변이/단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 단백질 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 추가의 특정 예에서, 신호전달 도메인은 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 세포내 신호전달 도메인이다.

하나의 특정 예에서, 신호전달 도메인은 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 특정 실시양태에서, 신호전달 도메인은 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 코돈 중복 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

공동-자극 영역

본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "공동자극 수용체"는 활성화 수용체의 항원 특이적 유도시 면역 세포의 활성화를 돕는 수용체 또는 공동-수용체에 관한 것이다. 이해되는 바와 같이, 공동자극 수용체는 항원의 존재를 필요로 하지 않고, 항원 특이적이지는 않지만, 전형적으로 면역 세포 반응의 유도에 필요한 2개의 신호 중 하나(다른 하나는 활성화 신호이다)이다. 면역 반응의 맥락에서, 공동-자극 수용체는 전형적으로 수지상 세포 또는 대식세포와 같은 항원-제시 세포 (APC)의 표면 상의 이의 발현된 리간드의 존재에 의해 활성화된다. T 세포와 관련하여, 공동-자극은 세포 활성화, 증식, 분화 및 생존 (이들 모두는 일반적으로 T 세포 활성화의 우산하에 지칭됨)을 유도하는 데 필요한 반면 공동-자극의 부재하에서 T 세포에 대한 항원의 제시는 아네르기, 클론 결실 및/또는 항원 특이적 내성의 발달을 야기할 수 있다.

T 세포 공동자극 수용체의 비제한적인 예는 CD27, CD28, CD30, CD40, DAP10, OX40, 4-1BB (CD137), ICOS를 포함한다. 구체적으로, CD27, CD28, CD30, CD40, DAP10, OX40, 4-1BB (CD137) 및 ICOS는 모두 T 세포 반응의 활성화를 향상시키는 '양성' 공동자극 분자를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 CD27, CD28, CD30, CD40, DAP10, OX40, 4-1BB (CD137) 및 ICOS 중 임의의 하나 이상으로부터 유래된 부분을 포함한다.

본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 CD28, OX40 또는 4-1BB 공동자극 수용체로부터 유래된 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 CD28 공동자극 수용체의 일부를 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 OX40 공동자극 수용체의 일부를 포함한다.

공동자극 수용체의 부분의 다양한 조합이 CAR의 막관통(TM) 및 세포내(IC) 부분을 형성하는데 사용될 수 있다. 예를 들어 CD8 TM 및 DAP10 IC 또는 CD8 TM 및 4-1BB IC (Marin V. et al. Exp Hematol. 2007; 35: 1388-97), CD28 TM 및 CD28 IC (Wilkie S. et al. J Immunol. 2008;180: 4901-9; Maher J. et al. Nat Biotechnol. 2002; 20: 70-5), 및 CD8 TM 및 CD28 IC (Marin V. et al. Exp Hematol. 2007; 35: 1388-97).

한 예에서, 하나 이상의 공동자극 도메인 각각은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다: CD28, CD28T, OX40, 4-1BB/CD137, CD2, CD4, CD5, CD7, CD9, CD16, CD22, CD27, CD30, CD 33, CD37, CD40, CD 45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, PD-l, ICOS, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-l/CD11a/CDl8), CD247, CD276(B7-H3), LIGHT(종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), NKG2C, Ig 알파 (CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 I 분자, TNF, TNFr, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자, BTLA, 톨 리간드 수용체, ICAM-l, B7-H3, CDS, ICAM-l, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD 103, IT GAL, CD1la, LFA-l, ITGAM, CD11b, ITGAX, CDl1c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD 18, LFA-l, ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRT AM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD 150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CDl9a, CD83 리간드, FOXP3, 기능적 변이/단편 및 이들의 조합. 또 다른 예에서, 세포내 도메인은 FOXP3을 포함한다. 특정 예에서, 하나 이상의 공동자극 도메인 각각은 CD28, 41BB, IL2Rb, TLR2, MyD88, 및 CD40으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 바람직한 예에서, 하나 이상의 공동자극 도메인은 CD28의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.

하나의 특정 예에서, 신호전달 도메인은 서열 번호 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 특정 실시양태에서, 신호전달 도메인은 서열 번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 코돈 중복 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

상기 언급된 활성화 및 공동자극 수용체에 대한 서열 정보는 다양한 데이터베이스에서 쉽게 접근 가능하다. 예를 들어, 이들 수용체에 대한 인간 아미노산, 유전자 및 mRNA 서열의 실시양태는 표 3에 제공된다.

표 3

활성화 및 공동자극 수용체 서열 정보의 요약

표 3은 인간 활성화 및 공동자극 수용체와 관련하여 제공되지만, 각 수용체의 상동성 및 이종상동성 버전이 대다수의 포유동물 및 척추동물 종에 존재한다는 것은 당업계의 숙련가에 의해 이해될 것이다. 따라서, 상기 언급된 서열은 본원에 기재된 바와 같은 CAR에 포함될 수 있는 수용체 서열의 비제한적인 예로서만 제공되며, 임의의 원하는 종으로부터의 상동성 및 이종상동성 서열은 주어진 종에 적합한 CAR을 생성하는데 사용될 수 있다.

한 예에서, 세포내 도메인 및/또는 세포외 도메인은 자기-절단 펩티드를 포함한다. 또 다른 예에서, 자기-절단 펩티드는 P2A, E2A, F2A, 및 T2A이지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 예에서, 자기-절단 펩티드는 T2A이다.

막관통 도메인

또 다른 예에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 막관통 도메인은 CD28, CD28T, OX-40, 4-1BB/CD137, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, 프로그램된 사멸-l(PD-1), 유도성 T 세포 공동-자극기(ICOS), 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-l, CD11a/CD18), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD247, CD276 (B7-H3), LIGHT, (TNFSF14), NKG2C, Ig 알파 (CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 1 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 및 이들의 기능적 변이/단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질의 막관통 도메인이다. 특정 예에서, 막관통 도메인은 CD3 엡실론 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체이다.

특정 예에서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인이고, 바람직하게는 CD28 막관통 도메인은 서열 번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 특정 실시양태에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 10에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 코돈 중복 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

본원에 개시된 키메라 항원 수용체의 특정 예에서, 힌지 영역은 nIgG4 힌지이고, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인이고, 신호전달 도메인은 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인이고, 공동자극 도메인은 CD28의 세포내 신호전달 도메인이다.

보다 구체적인 예에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 12, 서열 번호 160, 서열 번호 161 또는 서열 번호 165의 아미노산 서열, 또는 표 1에 기재된 임의의 다른 CAR 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 또 다른 구체적인 예에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 12, 서열 번호 160, 서열 번호 161 또는 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되며, 여기서 "ASA" 잔기는 결실되거나 알라닌 및 세린의 임의의 조합; 또는 3개의 아미노산의 임의의 다른 조합으로 치환된다. 보다 구체적인 예에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 11의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.

핵산

본 개시내용은 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드, 핵산 또는 핵산 작제물을 제공한다. 예를 들어, 핵산은 서열 번호 11의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이들로 구성될 수 있다.

본 개시내용은 또한 서열 번호 13, 서열 번호 14 또는 서열 번호 15의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이들로 구성된 폴리뉴클레오티드, 핵산 또는 핵산 작제물을 제공한다.

본 개시내용은 또한 표 1에 기재된 아미노산 서열 중 임의의 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이들로 구성된 폴리뉴클레오티드, 핵산 또는 핵산 작제물을 제공한다.

본 개시내용은 또한 서열 번호 11에 제시된 CD28 힌지, 또는 서열 번호 14 또는 15에 제시된 IgG4 힌지; 서열 번호 11, 14, 또는 15에 제시된 CD28 막관통 도메인; 서열 번호 11, 14, 또는 15에 제시된 CD28 공동자극 도메인; 및/또는 서열 번호 11, 14, 또는 15로 제시된 CD3 제타 신호전달 도메인을 포함하거나 이들로 구성된 폴리뉴클레오티드, 핵산 또는 핵산 작제물을 제공한다.

핵산 작제물은 다음 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: 하나 이상의 숙주에 대한 복제 기점; 하나 이상의 숙주에서 활성인 선택 가능한 마커 유전자; 및/또는 하나 이상의 전사 조절 서열.

본원에 사용된 용어 "선택 가능한 마커 유전자"는 그것이 발현되는 세포 상에 표현형을 부여하여, 작제물로 형질감염 또는 형질전환되는 세포의 확인 및/또는 선택을 용이하게 하는 임의의 유전자를 포함한다.

"선택 가능한 마커 유전자"는, 작제물로 형질전환된 세포에 의해 발현될 때, 이들 형질전환된 세포의 확인 및/또는 선택을 용이하게 하는 표현형을 세포 상에 부여하는 임의의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 광범위한 적합한 선택 가능한 마커를 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, Mortesen, R. M. 및 Kingston RE. Curr Protoc Mol Biol, 2009; Unite 9.5). 선택 가능한 마커를 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 다음을 포함한다: 형광-활성화 세포 분류(FACS)와 같은 기술을 사용한 세포의 광학 선택을 가능하게 하는 것 중에서, 아데노신 데아미나제(ADA) 유전자; 시토신 데아미나제(CDA) 유전자; 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자; 히스티디놀 탈수소효소(hisD) 유전자; 퓨로마이신-N-아세틸 전이효소(PAC) 유전자; 티미딘 키나제(TK) 유전자; 크산틴-구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(XGPRT) 유전자 또는 항생제 내성 유전자, 예를 들어 암피실린-내성 유전자, 퓨로마이신-내성 유전자, 블레오마이신-내성 유전자, 하이그로마이신-내성 유전자, 카나마이신-내성 유전자 및 암피실린-내성 유전자; 형광 리포터 유전자, 예를 들어 녹색, 적색, 황색 또는 청색 형광 단백질-암호화 유전자; 및 발광-기반 리포터 유전자, 예를 들어 루시페라아제 유전자.

또한, 선택 가능한 마커 유전자는 작제물에서 별개의 개방 판독 프레임일 수 있거나, 또는 다른 폴리펩티드 (예를 들어 CAR)와의 융합 단백질로서 발현될 수 있다는 것을 주지해야 한다.

상기 제시된 바와 같이, 핵산 작제물은 또한 하나 이상의 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 용어 "전사 조절 서열"은 작동 가능하게 연결된 핵산의 전사를 수행하는 임의의 핵산 서열을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 전사 조절 서열은 예를 들어, 리더, 폴리아데닐화 서열, 프로모터, 인핸서 또는 업스트림 활성화 서열, 및 전사 터미네이터를 포함할 수 있다. 전형적으로, 전사 조절 서열은 적어도 프로모터를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "프로모터"는 세포에서 핵산의 발현을 부여, 활성화 또는 증진시키는 임의의 핵산을 설명한다.

본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 하나 이상의 전사 조절 서열은 본 발명의 핵산 분자에 작동 가능하게 연결된다. 본 명세서의 목적을 위해, 전사 조절 서열은 전사 조절 서열이 핵산 분자의 전사를 촉진, 억제 또는 달리 조절할 수 있을 때 주어진 핵산 분자에 "작동 가능하게 연결된" 것으로 간주된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 전사 조절 서열, 예를 들어 구성적 프로모터 또는 유도성 프로모터의 조절하에 있다.

"핵산 작제물"은 임의의 적합한 형태, 예를 들어 플라스미드, 파지, 트랜스포존, 코스미드, 염색체, 벡터 등의 형태일 수 있으며, 이는 적절한 조절 요소와 회합될 때 복제가 가능하고 작제물 내에 함유된 유전자 서열을 세포 사이에 전달할 수 있다. 따라서, 상기 용어는 클로닝 및 발현 비히클 뿐만 아니라 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 벡터이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.

프로모터는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 기관에 대하여 구성적으로, 또는 차등적으로 작동 가능하게 연결된 핵산 분자의 발현을 조절할 수 있다. 이와 같이, 프로모터는, 예를 들어, 구성적 프로모터, 또는 유도성 프로모터를 포함할 수 있다. "구성적 프로모터"는 대부분의 환경적 및 생리학적 조건하에서 활성인 프로모터이다. "유도성 프로모터"는 특정의 환경적 또는 생리학적 조건하에서 활성인 프로모터이다. 본 발명은 관심있는 세포에서 활성인 임의의 프로모터의 사용을 고려한다. 이와 같이, 프로모터의 광범위한 배열은 당업계의 통상의 숙련가에 의해 용이하게 확인될 것이다.

포유동물 구성적 프로모터는 유인원 바이러스 40 (SV40), 사이토메갈로바이러스 (CMV), P-액틴, 유비퀴틴 C (UBC), 신장 인자-1 알파 (EF1A), 포스포글리세레이트 키나제 (PGK) 및 CMV 초기 인핸서/닭 β 액틴 (CAGG)을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

유도성 프로모터는 화학적 유도성 프로모터 및 물리적 유도성 프로모터를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 화학적 유도성 프로모터는 알코올, 항생제, 스테로이드, 금속 이온 또는 다른 화합물과 같은 화학적 화합물에 의해 조절되는 활성을 갖는 프로모터를 포함한다. 화학적 유도성 프로모터의 예는 다음을 포함한다: 테트라사이클린 조절된 프로모터 (예를 들어 미국 특허 제5,851,796호 및 미국 특허 제5,464,758호 참조); 스테로이드 반응성 프로모터, 예를 들어 글루코코르티코이드 수용체 프로모터 (예를 들어 미국 특허 제5,512,483호 참조), 엑디손 수용체 프로모터 (예를 들어 미국 특허 제6,379,945호 참조) 등; 및 메탈로티오네인 프로모터와 같은 금속-반응성 프로모터 (예를 들어 미국 특허 제4,940,661호, 미국 특허 제4,579,821호 및 미국 제4,601,978호 참조).

상기 언급된 바와 같이, 조절 서열은 또한 터미네이터를 포함할 수 있다. 용어 "터미네이터"는 전사의 종결을 신호하는 전사 단위의 말단에 있는 DNA 서열을 지칭한다. 터미네이터는 일반적으로 폴리아데닐화 신호를 함유하는 3'-비-번역된 DNA 서열이며, 이는 1차 전사체의 3'-말단에 폴리아데닐레이트 서열의 첨가를 용이하게 한다. 프로모터 서열과 마찬가지로, 터미네이터는 그것이 사용되도록 의도된 세포, 조직 또는 기관에서 작동 가능한 임의의 터미네이터 서열일 수 있다. 적합한 터미네이터는 당업계의 숙련가에게 공지되어 있을 것이다.

이해되는 바와 같이, 핵산 작제물은 추가의 서열, 예를 들어 향상된 발현, 세포질 또는 막 수송, 및 위치 신호를 허용하는 서열을 추가로 포함할 수 있다. 구체적인 비제한적인 예는 내부 리보솜 진입 부위(IRES)를 포함한다.

본 발명은 본원에 기재된 바와 같이 본질적으로 모든 유전적 작제물로 확장된다. 이들 작제물은 진핵생물에서 유전적 작제물의 유지 및/또는 복제 및/또는 진핵 세포의 게놈 내로의 유전적 작제물 또는 이의 일부의 통합을 위한 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함할 수 있다.

핵산과 같은 외인성 유전 물질을 진핵 세포 내로 고의적으로 도입(형질감염/형질도입)하기 위한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이해되는 바와 같이, 핵산 작제물을 목적하는 숙주 세포 내로 도입하기에 가장 적합한 방법은 많은 인자, 예를 들어 핵산 작제물의 크기, 숙주 세포의 유형, 원하는 형질감염/형질도입의 효율 및 형질감염된/형질도입된 세포의 최종 원하는 또는 요구되는 생존력에 의존한다. 이러한 방법의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 양이온성 중합체, 인산칼슘과 같은 화학물질 또는 리포솜 및 덴드리머와 같은 구조물을 사용한 화학적 형질감염; 전기천공법, 초음파천공법, 열충격 또는 광학적 형질감염과 같은 비-화학적 방법; '유전자 총' 전달, 마그네토펙션(magnetofection), 임팔레펙션(impalefection) 또는 바이러스 형질도입과 같은 입자-기반 방법.

핵산 작제물은 원하는 형질감염/형질도입 방법에 따라 선택될 것이다. 일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 바이러스 벡터이고, 핵산 작제물을 숙주 세포 내로 도입하는 방법은 바이러스 형질도입이다. PBMC에서 CAR의 발현을 유도하기 위해 바이러스 형질도입을 이용하는 방법(Parker, L.L. et al. Hum Gene Ther. 2000; 11:2377-87) 및 보다 일반적으로 포유동물 세포의 형질도입을 위한 레트로바이러스 시스템을 이용하는 방법(Cepko, C. and Pear, W. Curr Protoc Mol Biol. 2001, unit 9.9)은 당업계에 공지되어 있다. 다른 실시양태에서, 핵산 작제물은 플라스미드, 코스미드, 인공 염색체 등이고, 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 세포 내로 형질감염될 수 있다.

본원에 개시된 도메인 및 영역 외에, 본원에 제시된 핵산 서열은 또한 본원에 개시된 CAR 작제물의 기능적 발현을 위해 요구될 수 있거나 요구되는 임의의 다른 서열과 함께, CAR 작제물의 발현을 위해 특이적으로 의도된 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 한 예에서, CAR 작제물의 발현을 위한 핵산 서열은 이의 5' 또는 N 말단에 프로모터를 포함한다. 또 다른 예에서, CAR 작제물의 발현 서열은 리더 서열 (또한 신호 펩티드로서 지칭될 수 있음)을 포함하고, 이에 의해 리더 서열은 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결된다. 한 예에서, 프로모터는 MNDU3이다. 또 다른 예에서, 리더 서열은 CD8 리더 서열이다. 한 예에서, 발현을 위한 서열은 MNDU3 프로모터 및 CD8 리더 서열 둘 다를 포함한다. CAR 작제물의 발현의 서열의 예는 예를 들어 도 2a 및 도 2b에서 찾을 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 프로모터 및 리더 서열은 여기에 개시된 CAR 작제물의 세포외 도메인을 암호화하는 서열의 업스트림에 삽입되거나 존재하며, 이에 작동 가능하게 연결된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 키메라 항원 수용체를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 본원에 개시된 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 구체적인 예에서, 벡터는 바이러스 벡터, 임의로 렌티바이러스 벡터이다.

변형된 세포

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체, 본원에 개시된 제1 폴리뉴클레오티드, 핵산 또는 핵산 작제물, 및/또는 본원에 개시된 벡터를 포함하는 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포가 제공된다.

유전자 변형될 세포는 임의의 적절한 공급원으로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 임의의 측면의 일부 실시양태에서, 유전자 변형될 세포는 자가 세포이고, 치료될 대상체에서 자가 유래된 세포이다. 유리하게는, 자가 세포는 대상체의 면역계에 의해 '비-자기'로 인식되지 않을 것이고, 따라서 대상체에 의해 용인될 것이다. 그러나, 자가 세포는 쉽게 이용 가능하지 않을 수 있다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태에서, 유전자 변형될 세포는 동종이계 또는 이종 세포이다.

한 예에서, 본 개시내용의 변형된 T 세포는 조절 T 세포(Treg)로부터 변형된다. 이러한 예에서, Treg는 대상체로부터 단리되거나, 대상체로부터 단리되어 생체외에서 확장된다. 한 예에서, Treg는 생체외에서 단리되고 임의로 확장된 후에 본 개시내용의 하나 이상의 벡터의 형질감염으로 변형된다. 또 다른 예에서, 변형된 T 세포는 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 유래된다. 구체적인 예에서, iPSC는 본 개시내용의 변형된 T 세포에 도달하기 위해 본 개시내용의 하나 이상의 벡터의 형질감염으로 변형된다. 바람직한 예에서, iPSC는 공여자 T 세포로부터 유래된다.

본 개시내용에 따라 유전자 변형 세포 생성시, 치료에 사용하기 위해 이용 가능한 총 세포 수를 증가시키기 위해 시험관내 세포 집단을 확장하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 CAR에 대한 항원에 세포를 노출시키는 단계를 사용하여 수행될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 또한 본원에 기재된 바와 같이 유전자 변형 세포를 시험관내에서 확장시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 세포를 CAR에 대한 항원에 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 세포를 사이토카인에 노출시키는 추가의 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용은 또한 유전자 변형 세포를 시험관내에서 확장시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은 CAR에 대한 항원에 세포를 노출시키는 단계 및 동시에 세포를 사이토카인에 노출시키는 단계를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같이 유전자 변형 세포를 시험관내에서 확장시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 세포를 고정화된 항-CD3 및 항-CD28 항체에 노출시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 비드화 기질 (예를 들어 "인간 활성제" 다이나비드™) 상에 고정화된다. 일부 실시양태에서, 항체는 대체 표면, 예를 들어 조직 배양 용기, 배양 플라스크, 플레이트 또는 생물반응기의 표면 상에 고정화된다.

당업계의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, CAR의 신호전달 도메인에 따라, CAR에 의한 이의 동족 항원의 인식은 궁극적으로 세포 증식을 유도할 수 있는 세포내 신호전달로 이어질 것이다. 따라서, 적은 수의 세포, 또는 심지어 개별 세포가 확장(또는 단일 세포의 경우, 클론적으로 확장)되어 치료적으로 유의한 수를 형성할 수 있다. 이 과정은 사이토카인의 제공에 의해 더욱 향상될 수 있다.

유전자 변형 세포의 전달 또는 투여는 세포 단독의 전달 또는 투여, 또는 적절한 약제학적 조성물로 제형화된 세포의 전달 또는 투여일 수 있다. 따라서, 본 발명은 유전자 변형 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

면역요법을 위한 CAR-함유 세포를 제공하는 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 참조; Kershaw, MH. et al. Clin Cancer Res. 2006;12(20): 6106-15; Parker LL. et al. Hum Gene Ther 2000;11: 2337-87). 또한, 포유동물 CAR-발현 세포의 제조, 확장 및 평가를 위한 프로토콜 및 방법은 당업계에 공지되어 있으며 (예를 들어, 참조; Cheadle, EJ. et al. Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition, Methods in Molecular Biology, vol. 907: 645-66) 아래 실시예에 요약되어 있다.

약제학적 조성물은 또한 투여될 세포의 특정 물리적 및 화학적 특성을 고려하여, 약제학적으로 허용되는 염, 아미노산, 폴리펩티드, 중합체, 용매, 완충제, 부형제 및 벌킹제를 포함하는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 첨가제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 적합한 매질, 예를 들어 등장성 염수 용액 중의 유전자 변형 세포의 현탁액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상기한 바와 같은 하나 이상의 사이토카인과 같은 적합한 보조제를 포함할 수 있다.

약제학적 조성물의 투여는 또한 정맥내, 뇌실내, 복강내, 근육내 또는 두개내 주사, 또는 종양 또는 암성 덩어리의 부위에의 국소 주사를 포함하는 비경구 수단을 통해 이루어질 수 있다.

면역억제 분자 및 유도성 시스템

한 예에서, 변형된 T 세포는 하나 이상의 면역억제 분자를 발현한다. 상기 발현은 구성적 발현 또는 유도성 발현일 수 있다. 구체적인 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 변형된 T 세포가 활성화될 때 발현된다. 특정 예에서, T 세포는 본원에 개시된 키메라 항원 수용체에 의해 활성화되고, 변형된 T 세포에 의해, 특이적으로 이의 신호전달 도메인을 통해 발현된다.

구체적인 예에서, 유도성 발현은 NFAT-유도성 시스템에 의해 가능해진다. 구체적인 예에서, 변형된 T 세포는 NFAT(nuclear factor of activated T cells)에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함하는 프로모터를 암호화하는 제2 폴리뉴클레오티드, 및 하나 이상의 면역억제 분자를 포함하고; 여기서 프로모터에 대한 NFAT의 결합은 하나 이상의 면역-억제 분자의 발현을 유도한다. 한 예에서, 본원에 개시된 바와 같은 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드 둘 다는 하나의 핵산 발현 서열로부터 발현된다. NFAT가 (CD3 제타 및 CD28 신호전달을 통한) T 세포 활성화에 대한 주요 반응이며, 따라서 면역억제제의 발현을 본원에 개시된 바와 같은 키메라 항원 수용체의 활성화와 결합시키기 위해 선택되는 분자라는 것이 기술 분야에서 알려져 있다. 이러한 면역억제제는 IL-10, TGF-베타, FOXP3 및 이들의 조합이지만, 이에 제한되지 않는다. 그럼에도 불구하고, NF-kB와 같은 인자는 다른 많은 비-CD3제타 의존적 방식에 의해 잠재적으로 유도될 수 있으며 그에 따라 키메라 항원 수용체가 변형될 수 있다. 보다 구체적인 예에서, 프로모터는 인터루킨-2 (IL-2), 또는 이의 유도체의 프로모터이거나 이를 포함한다. IL2 프로모터 내의 NFAT 모티프는 잘 특성화되어 있으며, 따라서 프로모터에 대한 바람직한 예이다. NFAT 결합 부위의 수가 활성화 수준을 지시할 수 있다는 것이 당업계에 일반적으로 알려져 있다. 구체적인 예에서, 프로모터는 6개의 NFAT 결합 부위를 포함하는 6(NFAT) 최소 IL-2 프로모터이다. 제2 폴리뉴클레오티드가 하나 이상의 면역억제 분자를 암호화하는 예에서, 면역억제 분자의 코딩 서열은 하나 이상의 링커 서열(linker sequence)에 의해 분리될 수 있다. 특정 예에서, 하나 이상의 링커 서열은 글리신-세린 (GS) 링커, 예를 들어 GSG 링커를 암호화한다. 추가의 예에서, 하나 이상의 링커 서열 각각은 자기-절단 펩티드, 바람직하게는 T2A 펩티드를 추가로 암호화한다. 한 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 효과기 T 세포의 활성을 억제할 수 있거나 또는 효과기 T 세포에서 아네르기를 유도할 수 있다. 구체적인 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 IL-10, TGF-베타, CTLA-4, LAG3, PD-L1 및 PD-1로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 구체적인 예에서, 하나 이상의 면역억제 분자는 IL-10 및/또는 TGF-베타이다. 구체적인 예에서, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 서열을 포함한다. 제1, 제2 및/또는 제3 폴리뉴클레오티드는 1, 2, 3개 또는 그 이상의 벡터 상에 및 임의의 조합에서 암호화될 수 있다는 것이 당업계의 숙련가에게 즉시 명백할 것이다. 예를 들어, CAR 작제물을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드는 제2 또는 제3 폴리뉴클레오티드, 또는 둘 다를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 제2 폴리뉴클레오티드가 상이한 벡터 상에 암호화된 여러 폴리뉴클레오티드 세그먼트로 분해되는 것이 고려될 수 있으며, 여기서 각각의 폴리뉴클레오티드 세그먼트는 상이한 면역억제제를 발현하는 역할을 한다.

유도성 카세트를 암호화하는 핵산 서열과 관련하여, 상기한 바와 같이, CAR 작제물의 각 부분을 암호화하는 서열은 하나 이상의 (핵산) 발현 서열 상에서 발견될 수 있다. 한 예에서, 본원에 기재된 바와 같은 프로모터, 리더 서열, 세포외 서열, 막관통 도메인, 세포내 도메인 및 유도성 카세트를 발현하기 위한 핵산 서열은 하나의 발현 서열 상에서 발견된다. 또 다른 예에서, 본원에 기재된 바와 같은 프로모터, 리더 서열, 세포외 서열, 막관통 도메인, 세포내 도메인 및 유도성 카세트를 발현하기 위한 핵산 서열은 별개의 발현 서열 상에서 발견되며, 이에 의해 별개의 발현 서열은 기능적 CAR 작제물의 발현을 가능하게 하는 방식으로 서로 작동 가능하게 연결된다.

유도성 자살 시스템

추가의 예에서, 변형된 T 세포는 제3 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하고, 상기 제3 폴리뉴클레오티드는 유도성 자살 시스템을 암호화하며, 여기서 변형된 T 세포에 의한 유도인자 분자의 접촉은 상기 변형된 T 세포에서 세포 사멸을 유도할 것이다. 유도성 자살 시스템의 예는 카스파제-9(iCasp9) 자살 유전자 시스템이다. 이 시스템에서, 유도인자는 CID(AP1903/Rimiducid로도 알려짐)이다. iCasp9 기반 유도성 자살 시스템의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 다음의 비전면 간행물 리스트에 기재되어 있다: 유도성 카스파제 9 안전 스위치는 세포 요법-유도성 자가면역 질환을 중지시킬 수 있고 (de Witte MA, Jorritsma A, Swart E, Straathof KC, de Punder K, Haanen JB, Rooney CM, Schumacher TN; J Immunol. 2008 May 1; 180(9):6365-73); CD20 키메라 항원 수용체와 유도성 카스파제 9 자살 스위치를 결합하면 림프종에 대한 T 세포 입양 면역요법의 효능 및 안전성이 개선된다 (Budde LE, Berger C, Lin Y, Wang J, Lin X, Frayo SE, Brouns SA, Spencer DM, Till BG, Jensen MC, Riddell SR, Press OW PLoS One. 2013; 8(12):e82742).

저면역원성 변형 세포

한 예에서, 본원에 개시된 변형된 T 세포는 저면역원성이다. 구체적인 예에서, 변형된 T 세포는 저면역원성이 되도록 유전적으로 편집된다. 구체적인 예에서, 주요 조직적합성 부류(MHC) I의 하나 이상의 유전자, 및 주요 조직적합성 부류(MHC) II의 하나 이상의 유전자가 결실되거나 돌연변이되며, 여기서 유전자의 돌연변이의 결실은 MHC I 및 MHC II 복합체의 기능장애를 초래한다. 보다 구체적인 예에서, MHC I 및 II의 하나 이상의 유전자는 적어도 B2M (B2 마이크로글로불린) 및 CIITA (클래스 II MHC 전사활성화제)를 포함한다. 구체적인 예에서, 추가의 편집은 이의 저면역원성을 증가시키기 위해 변형된 T 세포에 도입될 수 있다. 한 예에서, 변형된 T 세포는 CD47 (분화 클러스터 47) 또는 이의 기능적 변이체를 과발현하도록 추가로 변형된다. 세포 표면 상의 CD47의 과발현은 비-자가-숙주 면역계에 의한 변형된 T 세포의 인식 및 제거를 추가로 방지할 수 있다. 상기 언급된 유전자 편집은 iPSC-유래 또는 Treg-유래된 변형된 T 세포에 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 저면역원성 변형 T 세포는 개체에게 투여될 때 면역계에 의해 표적화되지 않는 "스텔스" 세포로서 기능할 수 있다. 저면역원성 변형된 T 세포는 동종 투여에 적합하며, 여기서 세포는 투여를 받는 개체로부터 유래되거나 조직적합성일 필요는 없다.

유전자 변형 세포를 생성하는 방법

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 벡터로 Treg를 형질도입하여, 형질도입된 Treg가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 함으로써, 키메라 항원 수용체 (CAR)-조절 T 세포 (CAR-Treg)를 생성하는 것을 포함한다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성 T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) CD34+ iPSC를 변형시켜 (i) B2 마이크로글로불린 및 클래스 II MHC 전사활성화제의 발현 또는 활성의 수준을 감소 또는 제거하고, (ii) CD47 또는 이의 기능적 변이체를 과발현시키는 단계; b) 변형된 CD34+ iPSC를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여 형질도입된 CD34+ iPSC가 본 개시내용의 CAR을 발현하도록 하는 단계; c) CAR 저면역원성 iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 iPSC-유래 T 세포는 iPSC-유래 T-조절(Treg) 세포이다.

본 개시내용의 또 다른 측면에서, 변형된 저면역원성 T 세포를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 a) CD34+ 유도 만능 줄기 세포; b) B2M(B2 마이크로글로불린) 및 CIITA(클래스 II MHC 전사활성화제) 유전자를 모두 녹아웃하기 위해 CD34+ iPSC의 게놈을 편집하는 단계; c) CD47 또는 이의 기능적 변이체를 암호화하는 주형으로 b)로부터의 iPSC를 유전자 편집하는 단계(여기서, 녹인된(knocked in) iPSC는 CD47을 과발현한다); d) 유전자 편집된 iPSC를 본 개시내용의 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 iPSC가 본 개시내용의 키메라 항원 수용체를 발현하도록 하는 단계; e) 유전자 편집된 CAR-iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 단계를 포함한다.

특정 예에서, 단계 b) 및 c), 또는 본원에 기재된 게놈의 임의의 편집은 CRISPR-Cas 유전자 편집 시스템을 사용하여 수행된다. CRISPR-Cas 유전자 편집을 활용하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 쉽게 이용 가능한 상업용 키트와 함께를 널리 사용된다.

iPSC를 iPSC-유래 T 세포로 분화하는 방법은 또한 이용 가능한 상업용 키트를 사용하여 당업계에 잘 알려져 있다. 이 방법에 대한 상세한 예는 문헌[Kaneko S. (2016), In Vitro Generation of Antigen-Specific T Cells from Induced Pluripotent Stem Cells of Antigen-Specific T Cell Origin. In: Bondanza A., Casucci M. (eds) Tumor Immunology. Methods in Molecular Biology, vol 1393. Humana Press, New York, NY. DOI: 10.1007/978-1-4939-3338-9_6]에서 찾아볼 수 있다.

추가의 예에서, 상기 방법은 다음 중 임의의 하나 이상을 추가로 포함한다: g) 본 개시내용의 키메라 항원 수용체의 발현을 시험하는 단계; h) 염증 관련 인자와의 접촉에 반응하여 하나 이상의 면역억제 분자를 생산하기 위한 키메라 항원 수용체-Treg 또는 변형된 T 세포의 기능적 잠재력(functional potential)을 시험하는 단계; 및 i) 효과기 T 세포의 활성화/증식을 억제하기 위한 키메라 항원 수용체-Treg 또는 변형된 T 세포의 기능적 잠재력을 시험하는 단계.

상기한 바와 같은 방법의 구체적인 예에서, 벡터는 바이러스 벡터, 바람직하게는 렌티바이러스 벡터이다. 본 개시내용의 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스 또는 이들의 임의의 조합으로부터 단리되거나 유래된 서열을 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 아데노-관련 바이러스(AAV)로부터 단리되거나 유래된 서열을 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 재조합 AAV(rAAV)를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 예시적인 아데노-관련 바이러스 및 재조합 아데노-관련 바이러스는 본 개시내용의 CAR을 암호화하는 서열 옆에 시스에 위치하는 2개 이상의 역말단 반복 (ITR) 서열을 포함한다. 본 개시내용의 예시적인 아데노-관련 바이러스 및 재조합 아데노-관련 바이러스는 모든 혈청형 (예를 들어 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, 및 AAV9)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 예시적인 아데노-관련 바이러스 및 재조합 아데노-관련 바이러스는 자가-상보적 AAV (scAAV) 및 하나의 혈청형의 게놈 및 다른 혈청형의 캡시드를 함유하는 AAV 하이브리드 (예를 들어, AAV2/5, AAV-DJ 및 AAV-DJ8)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

치료 방법

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 요법에 사용하기 위한 본 개시내용의 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포에 관한 것이다.

예를 들어 본원에 개시된 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 임의의 질환/병태는 본원에 개시된 바와 같은 변형된 세포 (예를 들어, 변형된 T 세포 또는 CAR Treg 세포) 또는 핵산을 사용하여 치료될 수 있다. 전형적으로, 염증 관련 인자는 TNF 알파 및/또는 IFN 감마이다. 상기 질환/병태는 염증성 자가면역 질환, 이식, 사이토카인 방출 증후군 및 본원에 기재된 임의의 다른 질환 또는 병태를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

임의의 측면 또는 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 병태 발병기전이 TNF 알파 또는 IFN 감마를 수반하는 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 자가면역 질환; 이식 거부, 또는 이식편대숙주병(GVHD)의 치료에 사용하기 위한 본 개시내용의 변형된 세포 (예를 들어, 변형된 T 세포, 또는 CAR Treg 세포) 또는 핵산에 관한 것이다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 자가면역 질환, 이식 거부, 또는 이식편대숙주병(GVHD)을 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포, 또는 일정량의 핵산을 투여하는 단계를 포함한다.

한 예에서, 치료하고자 하는 자가면역 질환은 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 건선(psoriasis), 루푸스(lupus), 소아 류마티스 관절염(juvenile rheumatoid arthritis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease) 및 크론병(Crohn's disease)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 예에서, 치료하고자 하는 이식 거부는 장기 이식 거부, 줄기 세포 이식 거부, 및 골수 이식 거부로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 내성을 유도하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포, 또는 일정량의 핵산을 투여하는 단계를 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 하향조절하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 치료적으로 유효한 수의 본원에 개시된 바와 같은 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포, 또는 일정량의 핵산을 투여하는 단계를 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 효과기 T 세포의 활성을 국소적으로 또는 전신적으로 억제하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 본 개시내용의 변형된 세포, 바람직하게는 변형된 T 세포, 또는 핵산을 대상체에게 국소적으로 또는 전신적으로 투여하는 단계를 포함한다.

백혈구 성분채집술 산물로부터의 T 세포 단리

백혈구 성분채집술 산물 또는 혈액은 폐쇄 시스템 및 표준 방법(예를 들어, COBE 스펙트럼 성분채집술 시스템)을 사용하여 임상 현장에서 대상체로부터 수집될 수 있다. 바람직하게는, 산물은 표준 백혈구 성분채집술 수집 백에서 표준 병원 또는 기관의 백혈구 성분채집술 절차에 따라 수집된다. 예를 들어, 본 개시내용의 방법의 바람직한 실시양태에서, 백혈구 성분채집술 동안 통상적으로 사용되는 것 이외에 추가적인 항응고제 또는 혈액 첨가제(헤파린 등)는 포함되지 않는다.

대안적으로, 백혈구(WBC)/말초 혈액 단핵 세포(PBMC)(Biosafe Sepax 2(폐쇄형/자동) 사용) 또는 T 세포(CliniMACS® Prodigy(폐쇄형/자동) 사용)를 전혈로부터 직접 단리할 수 있다. 그러나, 특정 대상체(예를 들어, 암으로 진단되고/되거나 암에 대해 치료받은 대상체)에서, WBC/PBMC 수율은 백혈구 성분채집술에 의해 단리될 때보다 전혈로부터 단리될 때 유의하게 낮을 수 있다.

백혈구 성분채집술 절차 및/또는 직접 세포 단리 절차 중 어느 하나가 본 개시내용의 임의의 대상체에 대해 사용될 수 있다.

백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물은 절연 용기에 포장되어야 하며 임상 프로토콜과 함께 사용하도록 승인된 기관 혈액 수집 절차의 표준 병원에 따라 제어된 실온(+19℃ 내지 +25℃)에 보관해야 한다. 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T 세포 조성물은 냉장 보관해서는 안된다.

세포 농도 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T 세포 조성물은 운송 동안 mL당 0.2x10⁹개 세포를 초과해서는 안된다. 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물의 강렬한 혼합은 피해야 한다.

백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물을 예를 들어 밤새 보관해야 하는 경우, 제어된 실온에서 보관해야 한다(상기와 동일). 보관 동안, 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물의 농도는 mL당 0.2x10⁹개 세포를 초과해서는 안된다.

바람직하게는, 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물의 세포는 자가 혈장에 저장되어야 한다. 특정 실시양태에서, 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물의 세포 농도가 mL당 0.2x109 세포보다 높은 경우, 산물은 자가 혈장으로 희석되어야 한다.

바람직하게는, 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물은 표지화 및 분리 절차를 시작할 때 24시간보다 오래되지 않아야 한다. 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T-세포 조성물은 폐쇄형 및/또는 자동화 시스템(예를 들어, CliniMACS Prodigy)을 사용하여 세포 표지화를 위해 처리 및/또는 준비될 수 있다.

자동화된 시스템은 가능하게는 세포 산물(예를 들어, 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T 세포 조성물)의 피콜레이션(ficolation) 및/또는 세척에 의해 추가의 버피 코트 단리를 수행할 수 있다.

폐쇄형 및/또는 자동화 시스템이 (예를 들어 백혈구 성분채집술 산물, 혈액, WBC/PBMC 조성물 및/또는 T 세포 조성물로부터) T 세포 단리를 위해 세포를 준비하고 표지하는데 사용될 수 있다.

WBC/PBMC가 직접 뉴클레오펙션될 수 있지만(이는 더 쉽고 추가 단계를 절약함), 본 개시내용의 방법은 뉴클레오펙션 전에 먼저 T 세포를 단리하는 것을 포함할 수 있다.

T 세포는 단방향 표지화 절차에서 표지된 세포의 농축 또는 표지된 세포의 고갈에 의해 직접적으로 또는, 간접적으로, 2단계 표지화 절차에서 단리될 수 있다. 본 개시내용의 특정 농축 전략에 따르면, T 세포는 세포 수집 백(Cell Collection Bag)에 수집되고, 비표지된 세포(비-표적 세포)는 음성 분획 백(Negative Fraction Bag)에 수집될 수 있다. 본 개시내용의 농축 전략과는 대조적으로, 비-표지된 세포(표적 세포)는 세포 수집 백에 수집되고, 표지된 세포(비-표적 세포)는 각각 음성 분획 백 또는 비표적 세포 백에 수집된다. 선택 시약은 항체-코팅된 비드를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 항체-코팅된 비드는 변형 및/또는 확장 단계 전에 제거되거나, 변형 및/또는 확장 단계 전에 세포 상에 유지될 수 있다. 세포 마커의 하기 비제한적인 예 중 하나 이상이 T 세포를 단리하는데 사용될 수 있다: CD3, CD4, CD8, CD25, 항-비오틴, CD1c, CD3/CD19, CD3/CD56, CD14, CD19, CD34, CD45RA, CD56, CD62L, CD133, CD137, CD271, CD304, IFN-감마, TCR 알파/베타, 및/또는 이들의 임의의 조합. T-세포를 단리하기 위한 방법은 T 세포를 단리하는 데 사용될 수 있는 세포 마커의 하기 비제한적인 예 중 하나 이상을 특이적으로 결합하고/하거나 검출 가능하게 표지하는 하나 이상의 시약을 포함할 수 있다: CD3, CD4, CD8, CD25, 항-비오틴, CD1c, CD3/CD19, CD3/CD56, CD14, CD19, CD34, CD45RA, CD56, CD62L, CD133, CD137, CD271, CD304, IFN-감마, TCR 알파/베타 및/또는 이들의 조합. 이러한 시약은 "우수 제조 관리 기준"("GMP") 등급일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 시약은 Thermo DynaBeads 및 Miltenyi CliniMACS 제품을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 T 세포를 단리하는 방법은 표지화 및/또는 단리 단계의 다중 반복을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 T 세포를 단리하는 방법의 임의의 시점에서, 원치 않는 세포 및/또는 원치 않는 세포 유형은 원치 않는 세포 및/또는 원치 않는 세포 유형을 양성 또는 음성으로 선택함으로써 본 개시내용의 T 세포 산물 조성물로부터 고갈될 수 있다. 본 개시내용의 T 세포 산물 조성물은 CD4, CD8, 및/또는 다른 T 세포 마커(들)를 발현할 수 있는 추가의 세포 유형을 함유할 수 있다.

T 세포의 뉴클레오펙션을 위한 본 개시내용의 방법은, 예를 들어, 뉴클레오펙션 후, TCR 신호전달을 통한 단리 단계 또는 선택적 확장 단계를 포함하는 WBC/PBMC의 집단 또는 조성물에서의 T 세포의 뉴클레오펙션을 위한 공정에 의해 T 세포 단리의 단계를 없앨 수 있다.

특정 세포 집단은 T 세포 농축 및/또는 분류 전 또는 후에 양성 또는 음성 선택에 의해 고갈될 수 있다. 세포 산물 조성물로부터 고갈될 수 있는 세포 조성물의 예는 골수 세포, CD8+ 세포독성 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 적혈구 세포, 비만 세포, 감마-델타 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해(NK)-유사 세포(예를 들어, 사이토카인 유도 살해(CIK) 세포), 유도된 자연 살해(iNK) T 세포, NK T 세포, B 세포, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.

T 세포 단리를 위한 바람직한 방법은 손대지 않은 pan T 세포를 생성하기 위한 음성 선택 전략을 포함할 수 있으며, 이는 생성된 T-세포 조성물이 조작되지 않고 T 세포의 내인성-발생 다양성/비율을 함유하는 T-세포를 포함한다는 것을 의미한다.

양성 또는 음성 선택에 사용될 수 있는 시약은 자성 세포 분리 비드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 자성 세포 분리 비드는 본 개시내용의 T 세포 단리 방법에서 다음 단계를 수행하기 전에 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두의 혼합된 집단의 선택된 집단으로부터 제거 또는 고갈될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다.

T 세포 조성물 및 T 세포 산물 조성물은 동결보존, 표준 T 세포 배양 배지에서의 저장, 및/또는 유전자 변형을 위해 준비될 수 있다.

T 세포 조성물, T 세포 산물 조성물, 자극되지 않은 T 세포 조성물, 휴지기 T 세포 조성물 또는 이의 임의의 부분은 높은 회수율, 생존력, 표현형 및/또는 기능적 능력을 갖는 인간 세포를 저장 및 회수하기 위해 최적화된 표준 동결보존 방법을 사용하여 동결보존될 수 있다. 상업적으로 이용 가능한 동결보존 배지 및/또는 프로토콜이 사용될 수 있다. 본 개시내용의 동결보존 방법은 동결-관련 독성을 감소시키는 DMSO 비함유 동결보존제(예를 들어, CryoSOfree™ DMSO-비함유 동결보존 배지)를 포함할 수 있다.

T 세포 조성물, T 세포 산물 조성물, 자극되지 않은 T 세포 조성물, 휴지기 T 세포 조성물 또는 이의 임의의 부분은 배양 배지에 저장될 수 있다. 본 개시내용의 T 세포 배양 배지는 세포 저장, 세포 유전자 변형, 세포 표현형 및/또는 세포 확장을 위해 최적화될 수 있다. 본 개시내용의 T 세포 배양 배지는 하나 이상의 항생제를 포함할 수 있다. 세포 배양 배지 내에 항생제를 포함시키면 뉴클레오펙션을 통한 유전자 변형 후 형질감염 효율 및/또는 세포 수율이 감소할 수 있기 때문에, 뉴클레오펙션을 통한 유전자 변형 후 최적의 형질감염 효율 및/또는 세포 수율을 위해 특정 항생제(또는 이들의 조합) 및 이들의 각각의 농도(들)를 변경할 수 있다.

본 개시내용의 T 세포 배양 배지는 혈청을 포함할 수 있고, 또한, 혈청 조성 및 농도는 최적의 세포 결과를 위해 변경될 수 있다. 인간 AB 혈청이 T 세포의 배양을 위해 FBS/FCS보다 바람직하며, 이는 FBS/FCS가 본 개시내용의 T 세포 배양 배지에서 사용하기 위해 고려되지만 이종-단백질(xeno-protein)을 도입할 수 있기 때문이다. 혈청은 배양물 중의 T 세포 조성물이 투여를 위해 의도된 대상의 혈액으로부터 단리될 수 있으며, 따라서, 본 개시내용의 T 세포 배양 배지는 자가 혈청을 포함할 수 있다. 무혈청 배지 또는 혈청-대체물이 또한 본 개시내용의 T 세포 배양 배지에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 T 세포 배양 배지 및 방법의 특정 실시양태에서, 무혈청 배지 또는 혈청-대체물은 더 큰 생존력을 갖는 더 건강한 세포를 산출하고, 더 높은 효율로 뉴클레오펙션하고, 뉴클레오펙션 후 더 큰 생존력을 나타내고, 더 바람직한 세포 표현형, 및/또는 확장 기술의 추가시 더 큰/더 빠른 확장을 나타내는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 이종-혈청을 갖는 배지를 보충하는 것을 능가하는 이점을 제공할 수 있다.

T 세포 배양 배지는 상업적으로 이용 가능한 세포 성장 배지를 포함할 수 있다. 예시적인 상업적으로 이용 가능한 세포 성장 배지는 PBS, HBSS, OptiMEM, DMEM, RPMI 1640, AIM-V, X-VIVO 15, CellGro DC 배지, CTS OpTimizer T 세포 확장 SFM, TexMACS 배지, PRIME-XV T 세포 확장 배지, ImmunoCult-XF T 세포 확장 배지, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

T 세포 조성물, T 세포 산물 조성물, 자극되지 않은 T 세포 조성물, 휴지기 T 세포 조성물 또는 이의 임의의 부분은 유전자 변형을 위해 준비될 수 있다. 유전자 변형을 위한 T 세포 조성물, T 세포 산물 조성물, 자극되지 않은 T 세포 조성물, 휴지기 T 세포 조성물 또는 이의 임의의 부분의 준비는 목적하는 뉴클레오펙션 완충액에서의 세포 세척 및/또는 재현탁을 포함할 수 있다. 동결보존된 T-세포 조성물을 해동하고 뉴클레오펙션에 의한 유전자 변형을 위해 준비할 수 있다. 동결보존된 세포는 표준 또는 공지된 프로토콜에 따라 해동될 수 있다. 동결보존된 세포의 해동 및 준비는 더 큰 생존력을 갖는 세포를 산출하고, 더 높은 효율로 뉴클레오펙션하고, 뉴클레오펙션 후 더 큰 생존력을 나타내고, 더 바람직한 세포 표현형, 및/또는 확장 기술의 추가시 더 큰/더 빠른 확장을 나타내도록 최적화될 수 있다. 예를 들어, Grifols Albutein(25% 인간 알부민)이 해동 및/또는 준비 공정에 사용될 수 있다.

입양 세포 요법으로서의 변형된 세포의 주입

본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위해 선택 및/또는 확장된 본 개시내용의 하나 이상의 CAR을 발현하는 변형된 세포를 제공한다. 본 개시내용의 변형된 세포는 실온 및 체온을 포함하는 임의의 온도에서 저장하도록 제형화될 수 있다. 본 개시내용의 변형된 세포는 동결보존 및 후속적인 해동을 위해 제형화될 수 있다. 본 개시내용의 변형된 세포는 멸균 포장으로부터 대상체에게 직접 투여하기 위해 약제학적으로 허용되는 담체에서 제형화될 수 있다. 본 개시내용의 변형된 세포는 세포 기능 및 CAR 발현의 최소 수준을 보장하기 위해 세포 생존력 및/또는 CAR 발현 수준의 지표를 갖는 약제학적으로 허용되는 담체에서 제형화될 수 있다. 본 개시내용의 변형된 세포는 추가 확장을 억제하고/하거나 세포 사멸을 방지하기 위해 하나 이상의 시약과 함께 규정된 밀도로 약제학적으로 허용되는 담체에서 제형화될 수 있다.

본원에 예시적으로 기재된 본 발명은 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들의 부재하에서 적합하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 용어 "포함하는(comprising)", "포함하는(including)", "함유하는(containing)" 등은 제한 없이 광범위하게 해석되어야 한다. 추가적으로, 본원에 사용된 용어 및 표현은 제한이 아닌 설명의 용어로서 사용되었으며, 이러한 용어 및 표현의 사용에 있어서 도시되고 설명된 특징의 등가물 또는 이의 일부를 배제하려는 의도는 없으나, 청구된 발명의 범위 내에서 다양한 변형이 가능한 것으로 인지된다. 따라서, 본 발명이 바람직한 실시양태들 및 선택적인 특징들에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본원에 개시된 그 안에 구현된 발명의 수정 및 변형은 당업계의 숙련가들에 의해 이용될 수 있으며, 이러한 수정 및 변형은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주된다는 것을 이해해야 한다.

본 출원에서 사용되는 단수형 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 참조대상을 포함한다. 예를 들어, 용어 "유전자 마커(a genetic marker)"는 이들의 혼합물 및 조합을 포함하는 복수의 유전자 마커를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "약"은, 제형의 성분의 농도의 맥락에서, 전형적으로 명시된 값의 +/- 5%, 보다 전형적으로 명시된 값의 +/- 4%, 보다 전형적으로 명시된 값의 +/- 3%, 보다 전형적으로 명시된 값의 +/- 2%, 훨씬 더 전형적으로 명시된 값의 +/- 1%, 및 훨씬 더 전형적으로 명시된 값의 +/- 0.5%를 의미한다.

본 개시내용 전반에 걸쳐, 특정 실시양태들은 범위 포맷으로 개시될 수 있다. 범위 포맷의 설명은 단지 편의와 간결성을 위한 것이며, 개시된 범위의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안 된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위에 대한 설명은 그 범위 내의 개별적인 수치 뿐만 아니라 가능한 모든 하위 범위를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 1 내지 6과 같은 범위의 설명은 그 범위 내의 개별 수, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 및 6 뿐만 아니라 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등과 같은 구체적으로 개시된 하위 범위를 갖는 것으로 간주되어야 한다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.

특정 실시양태들은 또한 본원에서 광범위하고 일반적으로 기재될 수 있다. 일반적인 개시내용 내에 속하는 각각의 더 좁은 종 및 하위-속 그룹도 본 개시내용의 일부를 형성한다. 이는 삭제된 자료가 본원에 구체적으로 언급되었는지 여부에 관계없이 속으로부터 임의의 대상을 제거하는 단서 또는 부정적 제한을 갖는 실시양태의 일반적인 설명을 포함한다.

본 발명은 본원에서 광범위하고 일반적으로 기재되었다. 일반적인 개시내용 내에 속하는 각각의 더 좁은 종 및 하위-속 그룹도 본 개시내용의 일부를 형성한다. 이는 삭제된 자료가 본원에 구체적으로 언급되었는지 여부에 관계없이 속으로부터 임의의 대상을 제거하는 단서 또는 부정적 제한을 갖는 실시양태의 일반적인 설명을 포함한다.

다른 실시양태는 다음의 청구항 및 비제한적인 실시예 내에 있다. 또한, 본 발명의 특징 또는 측면이 마르쿠쉬 그룹의 관점에서 기재되는 경우, 당업계의 숙련가들은 본 발명이 또한 마르쿠쉬 그룹의 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 하위그룹의 관점에서 기재된다는 것을 인지할 것이다.

실험 섹션

실시예 1 - 작제물의 합성

작제물의 합성 및 렌티바이러스 벡터로의 작제물의 클로닝은 본 발명의 분야에서 일반적이며 공지된 기술이다. 본원에 개시된 실시예에서, 합성 및 바이러스 패키징은 4개의 플라스미드로 구성된 3세대 렌티바이러스 패키징 플라스미드를 사용한다. 작제물을 설계하고, 개시된 서열을 함유하는 전달 플라스미드로 클로닝한다.

실시예 2 - CAR Treg 세포 생성

자가 키메라 항원 수용체(CAR) Treg 세포는 환자로부터 조절 T 세포(Treg)의 단리 및 확장에 의해 생성될 수 있으며, 이는 그후 치료 목적으로 사용될 수 있다. 조절 T 세포를 CD25⁺ 및 CD127^- CD4⁺ T 세포에 대해 상업적으로 이용 가능한 면역자기 조절 T 세포 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하거나 CD4⁺, CD25⁺, CD127^- CD14^- 세포의 마커에 대해 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 건강한 공여자로부터의 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리한다. 단리된 세포의 순도는 CD3, CD4, CD25, FOXP3, CD127(조절 T 세포를 식별하는데 사용되는 마커)에 대한 염색에 의해 유세포 분석을 사용하여 확인한다. 단리된 Treg를 CD3/28 자기 비드를 사용하여 14일 동안 확장한다.

실시예 3 - Treg의 렌티바이러스 -기반 형질도입 및 검증

단리된 Treg를 폴리브렌(8μg/ml; Sigma-Aldrich) 또는 GMP-등급 형질도입 활성화제(LentiBOOST; Sirion Biotech)의 존재하에 CD3/28 비드로 활성화 후 1일에 개시된 키메라 항원 수용체(CAR) 서열을 함유하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입한다. 14일의 확장의 종료시, CAR Treg를 ELISA 및 유세포 분석에 의해 재조합 TNF 알파 및 IFN 감마에 반응하여 형질도입된 세포에 의한 사이토카인 생산에 대해 검증한다(도 6). 또한, CAR Treg 세포의 억제 잠재력을 활성화된 T 세포 억제 분석을 사용하여 평가한다.

실시예 4 - iPSC -유래 T 세포의 생성

자가 치료의 한계를 극복하고 기성 치료법의 일관성을 제공하기 위해, 유도 만능 줄기 세포(iPSC)를 분화하여 iPSC-유래 T 세포로 되게 할 수 있다. 첫 번째이자 바람직한 방법에서, 인간 CD34⁺ iPS 세포는 Riken BioResource Research Center 또는 ATCC와 같은 큐레이팅된 iPS 세포 은행 소스로부터 유래한다. 이러한 CD34⁺ iPSC를 STEMdiff™ T 세포 키트(Stemcell Technologies)와 같은 상업적으로 이용 가능한 키트를 사용하여 iPSC-유래 T 세포로 분화할 수 있다. TNF 알파 및/또는 IFN 감마를 통해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로 인해 발생하는 임의의 질환/병태는 본원에 개시된 CAR Treg 세포를 사용하여 잠재적으로 치료할 수 있다. 이들은 염증성 자가면역 질환, 이식 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또한, 본원에 제공된 바와 같은 기성품 iPSC-유래 CAR Treg 세포는 CAR-T 생성을 위한 자가 T 세포의 요건을 무색하게 한다.

실시예 5 - iPSC의 유전자 편집

첫째, CD34⁺ iPSC는 저면역원성으로 만들기 위해 2차례의 유전자 변형을 거친다. 첫 번째 라운드는 B2M 및 CIITA 유전자의 CRISPR-Cas 기반 녹아웃을 포함한다. IDT Alt-R CRISPR 시스템과 같은 상업적으로 이용 가능한 키트는 제조업체의 프로토콜에 따라 사용된다. 간략히 말해서, gRNA를 합성하고 (B2M 가이드 RNA: GAGTAGCGCGAGCACAGCTA; CIITA 가이드 RNA TCCAGGTAGCCACCTTCTAG) 최적화된 재조합 cas9 단백질을 첨가하여 전기천공 또는 리포솜을 통해 세포 내로 형질감염되는 리보핵단백질(RNP)을 형성한다. 형질감염 후, 단세포 클론을 단리하고 콜로니로 확장한다. 유전자 파괴에 대해 시퀀싱할 뿐만 아니라 오프-타겟 효과가 없는지 확인함으로써 성공적인 CRISPR 편집에 대해 콜로니를 스크리닝한다. 또한, 세포를 다 능성 및 정상 핵형에 대해 시험한다. 유전자 편집의 두 번째 라운드는 과발현 CD47 주형의 부위-특이적 통합을 위한 CRISPR-cas9 유도된 상동 인도 복구(homology directed repair)를 포함한다.

그후 성공적으로 CRISPR-편집된 저면역원성 iPSC를 여기에 개시된 CAR 서열로 렌티바이러스에 의해 형질도입한다. CAR 작제물을 성공적으로 통합하고 발현하는 iPSC를 이후에 단세포 클로닝하여 보관한다.

실시예 6 - 저면역원성 CAR- iPSC의 CAR- iPSC 유래 T 세포로의 분화

저면역원성 CAR-iPSC를 rhVEGF(재조합 인간 혈관 내피 성장 인자)를 함유한 EB 배지(Embryoid Body Formation Medium)에서 7일 동안 피더 세포(feeder cell)와 함께 배양한 다음 rhCSF(재조합 인간 콜로니 자극 인자-1) 및 rhFlt-3L(재조합 인간 Fms-관련 티로신 키나제 3 리간드)를 첨가한다. 14일째에, 조혈 전구 세포를 수집하여 rhIL7 (재조합 인간 인터루킨-7) 및 rhFlt-3L의 존재하에 OP9-DL1 세포 상으로 옮긴다. T 세포를 수확하고 rhIL7 및 덱사메타손의 존재하에서 자극한다. 다른 방법으로는 STEMdiff™ T 세포 키트(Stemcell Technologies)와 같은 피더 비함유 조건(feeder free condition) 뿐만 아니라 Iriguchi, S., Yasui, Y., Kawai, Y., Arima, S., Kunitomo, M., Sato, T., & Kaneko, S. (2021)에 의해 개발된 방법을 사용하는 것을 포함한다. 유도 만능 줄기 세포로부터의 T 세포를 위한 피더-비함유 분화 및 확장.

실시예 7 - 저면역원성 , iPSC 유래 CAR-T 세포

CAR-T 세포-기반 치료법의 한계는 조작을 위한 자가 세포의 가용성이다. 세포 요법을 위한 "기성품" 동종 세포의 개발은 CAR-T 분야의 큰 목표 중 하나이다. 본원에는 동종 T 세포를 저면역원성 CAR-T 세포로 변형시키는 방법이 개시되어 있다. 간단히 말해서, 건강한 공여자로부터의 T 세포를 유도 만능 줄기 세포로 재프로그래밍하거나 확장의 용이성 및 세포의 준비된 공급을 위해 선별된 CD34+ iPS를 사용하여 재프로그래밍한다. 이들 iPSC는 MHC 클래스 I 및 II의 불활성화 및 CD47의 과발현에 의해 저면역원성으로 만들어진다. 그후 이러한 세포는 분화되어 iPS-유래 T 세포를 생성하며, 이는 추가로 변형되어 항원-특이적으로 될 수 있다. 이러한 항원 특이성은 조절 T 세포의 마스터 전사 인자인 FOXP3의 발현과 함께 키메라 항원 수용체(CAR)를 도입하여 조절 기능을 계승한 결과이다.

실시예 8 - 염증성 가용성 인자 특이적 CAR의 작제

PMC882라는 유도성 카세트에 대한 CAR 설계는 두 부분을 함유한다(도 2a). 첫 번째 부분은 CAR 카세트가 염증성 가용성 인자에 특이성을 갖는 항원 인식 도메인(scFv)을 함유한다는 것이다. 이러한 인자에 결합시, CAR 공동-자극 도메인인 CD28 및 CD3제타가 인산화되어 세포를 활성화시킨다(도 1). 두 번째 부분은 면역억제 사이토카인인 TGF 베타(종양 성장 인자 베타) 및 IL10(인터루킨 10)을 함유하는 면역억제 카세트이다. 유도성 프로모터 NFAT(nuclear factor of activated T cell)는 세포가 활성화될 때만 이러한 사이토카인의 발현을 유도한다.

또 다른 설계는 조절 T 세포의 전사 인자인 FOXP3(포크헤드 박스(forkhead box) P3)를 번역 자가-절단 펩티드 서열인 T2A에 의해 분리된 CAR 카세트와 함께 추가한다(도 2b).

실시예 9 - CAR 설계의 발현 및 항원 특이성

본원에 개시된 CAR 설계는 현재 공지된 CAR T 세포 요법에서와 같이, 표면 결합된 항원보다는 염증성 가용성 인자에 의해 활성화된다. 자가면역 질환에서, 이러한 염증성 가용성 인자는 병원성이며 질환 진행에서 역할을 한다. 본원에 개시된 설계는 CAR Treg가 염증 부위에서 활성화되고 후속적으로, 예를 들어 TGF 베타 및 IL10과 같은 면역억제 인자를 방출할 수 있게 한다. 건강한 또는 자가면역 질환에 걸린 (예를 들어, 이에 제한되지 않지만, 류마티스 관절염) 1차 조절 T 세포 (Treg)를 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 형광-활성화 세포 분류 (FACS)를 사용하여 단리하였다. CD4, CD14, CD25 및 CD127로 염색된 PBMC(도 3a)는 Treg 마커 FOXP3에 의해 지시된 바와 같이 Treg를 고순도로 분류하였다(도 3b). CD3/28 Dynabead의 사용 및 1차 Treg의 작제물 항-TNFa scFv PMC882의 렌티바이러스 형질도입은 Tregs의 확장(도 4a) 및 CAR 양성 Treg(GFP+)의 높은 비율을 야기하였다. 건강한 공여자로부터의 PMC882 CAR Jurkat 세포(도 6a), 건강한 공여자로부터의 PMC882 CAR Treg(도 6b) 및 소아 특발성 관절염 (JIA) 활동성 질환 공여자로부터의 PMC882 CAR Treg(도 6c)는 TNF 알파의 존재하에서 TGF 베타 및 IL10 양성 세포의 증가를 보였다.

실시예 10 - 억제 분석에서 형질도입되지 않은 Treg보다 우수한 CAR Treg

건강한 공여자(도 7a) 및 활동성 질환 공여자(도 7b) 둘 다로부터의 PMC882 CAR Treg는 CD3 및 CD28 활성화에 기반하여 자가 전염증성 T 세포를 감소시킬 수 있었다. 자가 효과기 T 세포 억제 분석에서, PMC882 CAR Treg는 건강한 공여자(도 8a) 및 활동성 질환 공여자(도 8b)로부터의 형질도입되지 않은 Treg에 비해 억제를 증가시켰다 (억제는 활성화된 효과기 T 세포의 확장을 억제함). 이것은 활성화된 효과기 T 세포를 억제하는 데 있어서의 TGF 베타 및 IL10의 면역억제 카세트를 갖는 CAR Treg의 기능을 입증한다.

실시예 11 - CAR Treg는 NSG GvHD 마우스 모델에서 생존율을 증가시킨다

NSG 마우스를 0일째에 500만 개의 인간 PBMC를 주사하여 급성 GvHD를 유도하고, 1일째에 PMC882 CAR Treg 처리를 투여하였다. NSG GvHD 마우스 모델에서 PMC882 CAR Treg 처리는 처리되지 않은 마우스에 비해 유의하게 더 우수한 임상 점수 (도 9a) 및 생존율 (도 9b)을 보인다(도 9b에서 결과는 모든 처리되지 않은 마우스가 생존하지 못했음을 보여준다). 질환 진행의 지표인 마우스 말초 혈액 중의 인간 CD45 생착의 퍼센트는 PMC882 CAR Treg 처리된 마우스가 처리되지 않은 마우스에 비해 14일째에 (도 9c) 및 35일째 실험 종료시(도 9d) 인간 CD45 생착을 유의하게 억제할 수 있음을 보여준다. 처리되지 않은 마우스(아래)에 비해 CAR Treg 처리된 마우스(위)의 간 조직 분석은 간 장기로의 인간 T 세포 침윤물의 차이를 보여주며, 여기서 처리되지 않은 마우스는 주로 세포독성 CD8⁺ T 세포(빨간색)를 많이 보이는 반면 CAR Treg 처리된 마우스는 더 많은 CD4⁺ T 세포(노란색)를 보여 CAR Treg 처리로 인한 조직 환경의 변화를 입증한다(도 9e). 마우스 말초 혈액으로부터의 인간 CD3 양성 세포의 질량 CyToF 분석의 고차원 축소 분석 tSNE 플롯(위)은 CAR Treg 처리된 마우스 (중간)와 처리되지 않은 마우스 (아래) 사이의 명확한 분리를 보여준다(도 9f). 클러스터 1, 5 및 9에서 발견된 마커의 히트맵은 CD45RA 및 CD62L의 천연 T 세포 마커가 CAR Treg 처리된 마우스에서 풍부하다는 것을 보여주며, 이는 이전에 활성화되지 않았거나 활발하게 증식하지 않은 T 세포를 나타낸다. 처리되지 않은 마우스에서 풍부한 클러스터 4, 12, 13 및 15는 기억 T 세포 마커 CD45RO, CD69 및 그랜자임 B의 활성화 마커, 증식 마커 Ki67 및 탈진 마커 LAG3의 높은 발현을 가졌으며, 이는 처리되지 않은 마우스에서 활성화되고 자극될 뿐만 아니라 활발하게 증식하는 T 세포를 나타낸다(도 9g).

실시예 12 - 항- IFNy CAR은 가용성 인간 인터페론 감마에 반응성이다

CAR Jurkat 세포로 형질도입된 항-IFNy CAR 작제물 (도 10a), 건강한 공여자로부터의 항-IFNy CAR Treg (도 8a)는 50ng/ml에서 인간 IFNy의 존재하에서 TGF 베타 및 IL10 양성 세포의 증가를 나타내었다.

실시예 13 - CAR Treg는 효과기 T 세포 증식을 억제하는 데 있어 확장된 Treg보다 우수하다

건강한 조절 T 세포로 형질도입된 항-TNFa CAR PMC882 및 항-IFNy CAR은 형질도입되지 않은 Treg에 비해 활성화된 효과기 T 세포의 보다 우수한 억제를 입증한다(도 11). 항-TNFa CAR PMC882 Treg의 경우, 2 Treg 대 1 Teff에서 형질도입되지 않은 Treg를 능가하는 유의한 억제가 나타났다. 항-IFNy CAR Treg의 경우, 2 대 1, 1 대 1 및 1 대 2의 Treg 대 Teff의 모든 비율에서 형질도입되지 않은 Treg를 능가하는 유의한 억제가 나타났다.

실시예 14 - 조작된 iPS 세포는 MHC I 및 MHC II 녹아웃 및 CD47 발현을 입증하며 저면역원성이다

유도 만능 줄기 세포(iPSC)는 CRISPR을 사용하여 절제된 주요 조직적합성 클래스 I(MHC I) 유전자 B2M 및 클래스 II(MHC II) 유전자 CIITA를 가졌다. 항-HLA A, B, C (도 12a) 및 항-HLA-DR, DP, DQ (도 12b)는 이들의 각각의 유전자의 단백질 녹다운을 보여준다. CD47은 야생형 iPS에 비해 CD47의 발현이 높아야 과발현 프로모터 하에서 AAVS 1 유전자좌 내로 녹킹되었다(도 12c). 유전적으로 편집된 iPS는 공동-배양 동안 T 세포 증식을 유도하지 않기 때문에 야생형 iPS 세포에 비해 CD3+ T 세포에 대해 저면역원성인 것으로 나타났다(도 12d).

실시예 15 - iPS로부터 유래된 T 세포는 T 세포 마커를 가지며, T 세포 자극시 유도 가능하다

유도 만능 세포는 CD34+ 세포로 분화되고(도 13a), 후속적으로 T 세포로 분화되어, 분화 24일째에 CD3, CD4 및 CD8을 발현한다(도 13b). 이들 iPS-유래 T 세포는 또한 NFAT 유도성 프로모터 하에서 GFP와 함께 항-TNFa CAR을 함유하는 렌티바이러스로 형질도입될 수 있고, 활성화시, GFP 신호의 증가를 보이며, 이는 이들 T 세포에서 NFAT 프로모터의 유도성(inducibility)을 입증한다 (도 13c).

SEQUENCE LISTING <110> Singapore Health Services Pte. Ltd. <120> Chimeric antigen receptors and modified cells comprising the same <130> 53174317 <150> 10202104940X <151> 2021-05-11 <160> 166 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a TNF-alpha scFv clone P3H2 <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 130 135 140 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr 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gaggttctgg tggcggtggt tctgacatcc agatgaccca gtctccatcc 420 tccctgtctg catctgtagg agacagagtc accatcactt gccgggcaag tcagagcatt 480 agcagctatt taaattggta tcagcagaaa ccagggaaag cccctaagct cctgatctat 540 agtgcatcct atttgcaaag tggggtccca tcaaggttca gtggcagtgg atctgggaca 600 gatttcactc tcaccatcag cagtctgcaa cctgaagatt ttgcaactta ctactgtcaa 660 caggctaata atgctcctac tacgttcggc caagggacca aggtggaaat caaa 714 <210> 3 <211> 246 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of an IFN-gamma scFv TII 6AE52 <400> 3 Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Val Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Glu Asp 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gattggcgct atttatcctg gaattagtga tactagttac 180 aaccagaagt tcaaggtcaa ggccaaactg actgcagtca catccaccag cactgcctac 240 atggagctca gcagcctgac aaatgaggac tctgcggtct attattgtac aagagatgag 300 gatttcgacg gctttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgcaggtggt 360 ggtgggtctg gcggaggtgg tagtggaggt ggtgggtctg atgttttgat gacccaaact 420 ccactctccc tgcctgtcag tcttggagat caagcctcca tctcttgcag atctagtcag 480 agtattgtac atagtaatgg aaacacctat ttagactggt acctgcagaa accaggccag 540 tctccaaagc tcctgatcta caaagtttcc aaccgatttt ctggggtccc agacaggttc 600 agtggcagtg gatcagggac agatttcaca ctcaggatca gcagagtgga ggctgaggat 660 ctgggagttt attactgctt tcgaggatca catgctccgt acacgttcgg aggggggacc 720 aagctggaaa taaaacgg 738 <210> 5 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of IFN-gamma scFv TII 2G1G7 <400> 5 Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln 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Exemplary amino acid sequence of the co-stimulatory intracellular signalling domain of CD28 <400> 9 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 10 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a CD28 transmembrane domain <400> 10 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 11 <211> 1380 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary coding sequence of a CAR comprising IFN-gamma scFv TII 2G1G7, a IgG4 hinge region, a CD28 transmembrane domain, a CD28 co-stimulatory domain, and a CD3 zeta signalling domain <400> 11 atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60 ccgcaagtta agctggagca gtcaggacct ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc 120 atcacttgca ctgtctctgg gttttcatta accagctatg gtgtacactg ggttcgccag 180 tctccaggaa agggtctgga gtggctggga gtaatatggg ctggtggaag cacaaattat 240 aattcggctc tcatgtccag actgagcatc agtaaagaca actccaagag ccaagttttc 300 ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac acagccatgt actactgtgc cagaagagat 360 ggtaacaggt actatactat ggactactgg ggtcaaggag cttcagtcac cgtctcctca 420 ggtggtggtg ggtctggcgg aggtggtagt ggaggtggtg ggtctgaaaa tgtgctcacc 480 cagtctccag caatcatgtc tgcatctcca ggggaaaagg tcaccatgac ctgcagggcc 540 agctcaagtg taagttccag ttacttgcac tggtaccagc agaagtcagg tggctccccc 600 aaactctgga tttatagaac atccaacttg gcttctggag tccctgctcg cttcagtggc 660 agtgggtctg ggacctctta ctctctcaca atcagcagtg tggaggctga agatgctgcc 720 acttattact gccagcagta cagtggttac ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 780 gagctgaaac gggctagcgc agaaagcaag tatggtcctc cctgcccccc gtgcccattt 840 tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 900 tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 960 atgactccaa gacgcctagg tcccactcgc aagcattacc agccctatgc 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260 265 270 Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His 275 280 285 Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val 290 295 300 Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr 305 310 315 320 Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu 325 330 335 His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg 340 345 350 Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg 355 360 365 Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 370 375 380 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 385 390 395 400 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 405 410 415 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 420 425 430 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 435 440 445 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 450 455 460 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 465 470 475 480 Arg <210> 13 <211> 1958 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary coding sequence of an NFAT-inducible expression cassette, encoding a 6(NFAT) minimal IL-2 promoter, a TGF-beta gene, a T2A peptide separating the TGF-beta and IL-10, and an IL-10 gene <400> 13 ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 60 ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 120 ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 180 cagaattaac agtataaatt gcatctcttg ttcaagagtt ccctatcact cgagcggtcg 240 ccaccatgcc accttctgga ctgcggttgc ttccgttgct gttgccactg ctttggctgc 300 ttgttctgac acctggcaga cccgcagccg gtttgtcaac atgcaaaacg atcgacatgg 360 agctggtaaa gcgcaagcgc attgaggcaa tcagagggca gatcttgagc aagcttcggc 420 tcgcctctcc tccaagccag ggcgaggtgc cacccggtcc gctgccggaa gcggttctcg 480 ctctctataa cagcactaga gatagggtcg caggtgagtc tgctgaacct gaacctgaac 540 cggaagctga ctattacgct aaagaggtga cgagagttct catggtggaa actcacaatg 600 agatttatga taaatttaaa cagtctaccc acagcattta tatgtttttt aacaccagtg 660 agctccgcga ggctgtccct gaacctgtcc tcctttccag ggcagaattg cggcttctga 720 ggctgaagct taaagtagag caacacgtgg agctctacca gaaatatagt aataacagct 780 ggagatatct gtcaaaccga ctgctggcgc cctccgacag tccagagtgg ctttcctttg 840 acgttactgg cgtggtgcgg caatggcttt caagaggcgg ggaaatcgag ggcttcaggc 900 ttagcgctca ctgctcatgt gatagtaggg ataacacact tcaggtagac attaatgggt 960 tcacgacagg aagaagagga gatctggcta cgattcatgg catgaatagg cctttcctcc 1020 tgcttatggc tacgccattg gagcgcgcgc aacatctcca gtccagccgc cacagacgag 1080 ctctggatac taactactgc ttctccagca ctgagaagaa ctgctgcgta agacagcttt 1140 acatcgactt ccgcaaggac ctgggttgga agtggataca cgagcccaag ggatatcatg 1200 ccaacttctg cctcgggccc tgtccctaca tctggtcatt ggatacacag tacagcaagg 1260 tactcgctct gtacaaccag cacaaccctg gtgcaagcgc agctccctgc tgtgttcccc 1320 aggctctgga accattgcct attgtttatt atgtaggacg aaaaccgaag gtcgagcagc 1380 tcagtaacat gatcgttcgg agctgcaagt gctctggctc aggcgagggc agaggcagcc 1440 tgctgacatg tggcgacgtg gaagagaacc ccgggcctag tccaggtcaa ggtacacaga 1500 gtgagaacag ttgcacacac tttcccggca acttgcctaa tatgctgagg gacctccggg 1560 atgctttctc tcgggtaaaa actttttttc aaatgaaaga ccaactcgat aacctccttc 1620 tgaaggagag cctcctggag gacttcaagg gatatttggg gtgccaagct ttgtccgaga 1680 tgattcagtt ctacttggaa gaggtgatgc cacaagcgga gaaccaagac ccggacatca 1740 aggctcacgt caatagcttg ggagaaaacc tgaagaccct gcggttgagg ctgcgccgct 1800 gtcataggtt ccttccatgt gagaacaaat ccaaagctgt ggaacaggtc aaaaatgctt 1860 tcaacaaact gcaggagaaa ggtatatata aggccatgtc tgaatttgac atatttatca 1920 actacataga ggcgtatatg accatgaaga ttcgcaat 1958 <210> 14 <211> 4902 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Full coding sequence of the CAR construct comprising the TNF-alpha scFv, IgG4 hinge, CD28 transmembrane domain, CD28 co-stimulatory domain, CD3 zeta signalling domain with a T2A skip peptide to FOXP3 in the same cassette and a NFAT inducible <400> 14 atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60 ccggactata aagatgacga tgataagggc gggtccgagg tgcagctggt ggagtctggg 120 ggaggcttgg tacagcccgg caggtccctg agactctcct gtgcggcctc tggattcacc 180 tttgatgatt atgccatgca ctgggtccgg caagctccag ggaagggcct ggaatgggtc 240 tcagctatca cttggaatag tggtcacata gactatgcgg actctgtgga gggccgattc 300 accatctcca gagacaacgc caagaactcc ctgtatctgc aaatgaacag tctgagagct 360 gaggatacgg ccgtatatta ctgtgcgaaa gtctcgtacc ttagcaccgc gtcctccctt 420 gactattggg gccaaggtac cctggtcacc gtctcgagtg gtggtggtgg gtctggcgga 480 ggtggtagtg gaggtggtgg gtctgacatc cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct 540 gcatctgtag gggacagagt caccatcact tgtcgggcaa gtcagggcat cagaaattac 600 ttagcctggt atcagcaaaa accagggaaa gcccctaagc tcctgatcta tgctgcatcc 660 actttgcaat caggggtccc atctcggttc agtggcagtg gatctgggac agatttcact 720 ctcaccatca gcagcctaca gcctgaagat gttgcaactt attactgtca aaggtataac 780 cgtgcaccgt atacttttgg ccagggcacc aaggtggaaa tcaaagctag cgcagaaagc 840 aagtatggtc ctccctgccc cccgtgccca ttttgggtgc tggtggtggt tgggggagtc 900 ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag 960 aggagcaggc tcctgcacag tgactacatg aacatgactc caagacgcct aggtcccact 1020 cgcaagcatt accagcccta tgccccacca cgcgacttcg cagcctatcg ctccagagtg 1080 aagttcagca ggagcgcaga cgctccagct taccagcagg gccagaacca gctctataac 1140 gagctcaatc taggacgaag agaggagtac gatgttttgg acaagagacg tggccgggac 1200 cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg 1260 cagaaagata agatggcgga ggcctacagt gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg 1320 ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac 1380 gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc ggctcaggcg agggcagagg cagcctgctg 1440 acatgtggcg acgtggaaga gaaccccggg cctatgccta atcctcggcc tggaaagcct 1500 agcgctcctt ctcttgctct gggaccttct cctggcgcct ctccatcttg gagagccgct 1560 cctaaagcca gcgatctgct gggagctaga ggacctggcg gcacatttca gggcagagat 1620 cttagaggcg gagcccacgc tagctcctcc agccttaatc ctatgcctcc tagccagctc 1680 cagctgccta cactgcctct ggttatggtg gctcctagcg gagctagact gggccctctg 1740 cctcatctgc aagctctgct gcaggacaga ccccacttca tgcaccagct gagcaccgtg 1800 gatgcccacg caagaacacc tgtgctgcag gttcaccctc tggaatcccc agccatgatc 1860 agcctgacac ctccaacaac agccaccggc gtgttcagcc tgaaagccag acctggactg 1920 cctcctggca tcaatgtggc cagcctggaa tgggtgtcca gagaacctgc tctgctgtgc 1980 acattcccca atccaagcgc tcccagaaag gacagcacac tgtctgccgt gcctcagagc 2040 agctatcccc tgcttgctaa cggcgtgtgc aagtggcctg gatgcgagaa ggtgttcgag 2100 gaacccgagg acttcctgaa gcactgccag gccgatcatc tgctggacga gaaaggcaga 2160 gcccagtgtc tgctccagcg cgagatggtg cagtctctgg aacagcagct ggtcctggaa 2220 aaagaaaagc tgagcgccat gcaggcccac ctggccggaa aaatggccct gacaaaggcc 2280 agcagcgtgg cctcttctga taagggcagc tgctgcattg tggccgctgg atctcaggga 2340 cctgtggttc ctgcttggag cggacctaga gaggcccctg attctctgtt tgccgtgcgg 2400 agacacctgt ggggctctca cggcaactct actttccccg agttcctgca caacatggac 2460 tacttcaagt tccacaacat gcggcctcca ttcacctacg ccacactgat cagatgggcc 2520 attctggaag cccctgagaa gcagagaacc ctgaacgaga tctaccactg gtttacccgg 2580 atgttcgcct tcttccggaa tcaccctgcc acctggaaga acgccatccg gcacaatctg 2640 agcctgcaca agtgcttcgt gcgcgtggaa tctgagaaag gcgccgtgtg gacagtggac 2700 gagctggaat tcagaaagaa gagaagccag cggcctagcc ggtgcagcaa tcctacacct 2760 ggaccttaat agacgcgtgg gttaggggag gcgcttttcc caaggcagtc tggagcatgc 2820 gctaagcgat cgcgcccgct gggcacttgg cgctacacaa gtggcctctg gcctcgcaca 2880 cattccagga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 2940 aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 3000 aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 3060 aaggcgtcag aattaacagt ataaattgca tctcttgttc aagagttccc tatcactcga 3120 gcggtcgcca ccatgccacc ttctggactg cggttgcttc cgttgctgtt gccactgctt 3180 tggctgcttg ttctgacacc tggcagaccc gcagccggtt tgtcaacatg caaaacgatc 3240 gacatggagc tggtaaagcg caagcgcatt gaggcaatca gagggcagat cttgagcaag 3300 cttcggctcg cctctcctcc aagccagggc gaggtgccac ccggtccgct gccggaagcg 3360 gttctcgctc tctataacag cactagagat agggtcgcag gtgagtctgc tgaacctgaa 3420 cctgaaccgg aagctgacta ttacgctaaa gaggtgacga gagttctcat ggtggaaact 3480 cacaatgaga tttatgataa atttaaacag tctacccaca gcatttatat gttttttaac 3540 accagtgagc tccgcgaggc tgtccctgaa cctgtcctcc tttccagggc agaattgcgg 3600 cttctgaggc tgaagcttaa agtagagcaa cacgtggagc tctaccagaa atatagtaat 3660 aacagctgga gatatctgtc aaaccgactg ctggcgccct ccgacagtcc agagtggctt 3720 tcctttgacg ttactggcgt ggtgcggcaa tggctttcaa gaggcgggga aatcgagggc 3780 ttcaggctta gcgctcactg ctcatgtgat agtagggata acacacttca ggtagacatt 3840 aatgggttca cgacaggaag aagaggagat ctggctacga ttcatggcat gaataggcct 3900 ttcctcctgc ttatggctac gccattggag cgcgcgcaac atctccagtc cagccgccac 3960 agacgagctc tggatactaa ctactgcttc tccagcactg agaagaactg ctgcgtaaga 4020 cagctttaca tcgacttccg caaggacctg ggttggaagt ggatacacga gcccaaggga 4080 tatcatgcca acttctgcct cgggccctgt ccctacatct ggtcattgga tacacagtac 4140 agcaaggtac tcgctctgta caaccagcac aaccctggtg caagcgcagc tccctgctgt 4200 gttccccagg ctctggaacc attgcctatt gtttattatg taggacgaaa accgaaggtc 4260 gagcagctca gtaacatgat cgttcggagc tgcaagtgct ctggctcagg cgagggcaga 4320 ggcagcctgc tgacatgtgg cgacgtggaa gagaaccccg ggcctatgca cagctcagca 4380 ctgctctgtt gcctggtcct cctgactggg gtgagggcca gtccaggtca aggtacacag 4440 agtgagaaca gttgcacaca ctttcccggc aacttgccta atatgctgag ggacctccgg 4500 gatgctttct ctcgggtaaa aacttttttt caaatgaaag accaactcga taacctcctt 4560 ctgaaggaga gcctcctgga ggacttcaag ggatatttgg ggtgccaagc tttgtccgag 4620 atgattcagt tctacttgga agaggtgatg ccacaagcgg agaaccaaga cccggacatc 4680 aaggctcacg tcaatagctt gggagaaaac ctgaagaccc tgcggttgag gctgcgccgc 4740 tgtcataggt tccttccatg tgagaacaaa tccaaagctg tggaacaggt caaaaatgct 4800 ttcaacaaac tgcaggagaa aggtatatat aaggccatgt ctgaatttga catatttatc 4860 aactacatag aggcgtatat gaccatgaag attcgcaatt ga 4902 <210> 15 <211> 4815 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Full sequence of a CAR construct comprising of IFN-gamma scFv TII 2G1G7, an IgG4 hinge, CD28 transmembrane domain, CD28 co-stimulatory domain, CD3 zeta signalling domain with a T2A skip peptide to FOXP3 in the same cassette and a NFAT inducible <400> 15 atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60 ccgcaagtta agctggagca gtcaggacct ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc 120 atcacttgca ctgtctctgg gttttcatta accagctatg gtgtacactg ggttcgccag 180 tctccaggaa agggtctgga gtggctggga gtaatatggg ctggtggaag cacaaattat 240 aattcggctc tcatgtccag actgagcatc agtaaagaca actccaagag ccaagttttc 300 ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac acagccatgt actactgtgc cagaagagat 360 ggtaacaggt actatactat ggactactgg ggtcaaggag cttcagtcac cgtctcctca 420 ggtggtggtg ggtctggcgg aggtggtagt ggaggtggtg ggtctgaaaa tgtgctcacc 480 cagtctccag caatcatgtc tgcatctcca ggggaaaagg tcaccatgac ctgcagggcc 540 agctcaagtg taagttccag ttacttgcac tggtaccagc agaagtcagg tggctccccc 600 aaactctgga tttatagaac atccaacttg gcttctggag tccctgctcg cttcagtggc 660 agtgggtctg ggacctctta ctctctcaca atcagcagtg tggaggctga agatgctgcc 720 acttattact gccagcagta cagtggttac ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 780 gagctgaaac gggctagcgc agaaagcaag tatggtcctc cctgcccccc gtgcccattt 840 tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 900 tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 960 atgactccaa gacgcctagg tcccactcgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 1020 gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc tccagcttac 1080 cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1140 gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1200 cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1260 attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1320 agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgcggc 1380 tcaggcgagg gcagaggcag cctgctgaca tgtggcgacg tggaagagaa ccccgggcct 1440 atgcctaatc ctcggcctgg aaagcctagc gctccttctc ttgctctggg accttctcct 1500 ggcgcctctc catcttggag agccgctcct aaagccagcg atctgctggg agctagagga 1560 cctggcggca catttcaggg cagagatctt agaggcggag cccacgctag ctcctccagc 1620 cttaatccta tgcctcctag ccagctccag ctgcctacac tgcctctggt tatggtggct 1680 cctagcggag ctagactggg ccctctgcct catctgcaag ctctgctgca ggacagaccc 1740 cacttcatgc accagctgag caccgtggat gcccacgcaa gaacacctgt gctgcaggtt 1800 caccctctgg aatccccagc catgatcagc ctgacacctc caacaacagc caccggcgtg 1860 ttcagcctga aagccagacc tggactgcct cctggcatca atgtggccag cctggaatgg 1920 gtgtccagag aacctgctct gctgtgcaca ttccccaatc caagcgctcc cagaaaggac 1980 agcacactgt ctgccgtgcc tcagagcagc tatcccctgc ttgctaacgg cgtgtgcaag 2040 tggcctggat gcgagaaggt gttcgaggaa cccgaggact tcctgaagca ctgccaggcc 2100 gatcatctgc tggacgagaa aggcagagcc cagtgtctgc tccagcgcga gatggtgcag 2160 tctctggaac agcagctggt cctggaaaaa gaaaagctga gcgccatgca ggcccacctg 2220 gccggaaaaa tggccctgac aaaggccagc agcgtggcct cttctgataa gggcagctgc 2280 tgcattgtgg ccgctggatc tcagggacct gtggttcctg cttggagcgg acctagagag 2340 gcccctgatt ctctgtttgc cgtgcggaga cacctgtggg gctctcacgg caactctact 2400 ttccccgagt tcctgcacaa catggactac ttcaagttcc acaacatgcg gcctccattc 2460 acctacgcca cactgatcag atgggccatt ctggaagccc ctgagaagca gagaaccctg 2520 aacgagatct accactggtt tacccggatg ttcgccttct tccggaatca ccctgccacc 2580 tggaagaacg ccatccggca caatctgagc ctgcacaagt gcttcgtgcg cgtggaatct 2640 gagaaaggcg ccgtgtggac agtggacgag ctggaattca gaaagaagag aagccagcgg 2700 cctagccggt gcagcaatcc tacacctgga ccttaataga cgcgtgggtt aggggaggcg 2760 cttttcccaa ggcagtctgg agcatgcgct aattagctag ccccgctggg cacttggcgc 2820 tacacaagtg gcctctggcc tcgcacacat tccaggagga aaaactgttt catacagaag 2880 gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtggagga aaaactgttt catacagaag 2940 gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtggagga aaaactgttt catacagaag 3000 gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtcagaat taacagtata aattgcatct 3060 cttgttcaag agttccctat cactcgagcg gtcgccacca tgccaccttc tggactgcgg 3120 ttgcttccgt tgctgttgcc actgctttgg ctgcttgttc tgacacctgg cagacccgca 3180 gccggtttgt caacatgcaa aacgatcgac atggagctgg taaagcgcaa gcgcattgag 3240 gcaatcagag ggcagatctt gagcaagctt cggctcgcct ctcctccaag ccagggcgag 3300 gtgccacccg gtccgctgcc ggaagcggtt ctcgctctct ataacagcac tagagatagg 3360 gtcgcaggtg agtctgctga acctgaacct gaaccggaag ctgactatta cgctaaagag 3420 gtgacgagag ttctcatggt ggaaactcac aatgagattt atgataaatt taaacagtct 3480 acccacagca tttatatgtt ttttaacacc agtgagctcc gcgaggctgt ccctgaacct 3540 gtcctccttt ccagggcaga attgcggctt ctgaggctga agcttaaagt agagcaacac 3600 gtggagctct accagaaata tagtaataac agctggagat atctgtcaaa ccgactgctg 3660 gcgccctccg acagtccaga gtggctttcc tttgacgtta ctggcgtggt gcggcaatgg 3720 ctttcaagag gcggggaaat cgagggcttc aggcttagcg ctcactgctc atgtgatagt 3780 agggataaca cacttcaggt agacattaat gggttcacga caggaagaag aggagatctg 3840 gctacgattc atggcatgaa taggcctttc ctcctgctta tggctacgcc attggagcgc 3900 gcgcaacatc tccagtccag ccgccacaga cgagctctgg atactaacta ctgcttctcc 3960 agcactgaga agaactgctg cgtaagacag ctttacatcg acttccgcaa ggacctgggt 4020 tggaagtgga tacacgagcc caagggatat catgccaact tctgcctcgg gccctgtccc 4080 tacatctggt cattggatac acagtacagc aaggtactcg ctctgtacaa ccagcacaac 4140 cctggtgcaa gcgcagctcc ctgctgtgtt ccccaggctc tggaaccatt gcctattgtt 4200 tattatgtag gacgaaaacc gaaggtcgag cagctcagta acatgatcgt tcggagctgc 4260 aagtgctctg gctcaggcga gggcagaggc agcctgctga catgtggcga cgtggaagag 4320 aaccccgggc ctagtccagg tcaaggtaca cagagtgaga acagttgcac acactttccc 4380 ggcaacttgc ctaatatgct gagggacctc cgggatgctt tctctcgggt aaaaactttt 4440 tttcaaatga aagaccaact cgataacctc cttctgaagg agagcctcct ggaggacttc 4500 aagggatatt tggggtgcca agctttgtcc gagatgattc agttctactt ggaagaggtg 4560 atgccacaag cggagaacca agacccggac atcaaggctc acgtcaatag cttgggagaa 4620 aacctgaaga ccctgcggtt gaggctgcgc cgctgtcata ggttccttcc atgtgagaac 4680 aaatccaaag ctgtggaaca ggtcaaaaat gctttcaaca aactgcagga gaaaggtata 4740 tataaggcca tgtctgaatt tgacatattt atcaactaca tagaggcgta tatgaccatg 4800 aagattcgca attga 4815 <210> 16 <211> 160 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of IL-10 <400> 16 Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro 1 5 10 15 Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg 20 25 30 Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu 35 40 45 Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala 50 55 60 Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu 85 90 95 Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu 100 105 110 Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe 115 120 125 Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp 130 135 140 Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn 145 150 155 160 <210> 17 <211> 389 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of TGF-beta <400> 17 Pro Pro Ser Gly Leu Arg Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Leu Val Leu Thr Pro Gly Arg Pro Ala Ala Gly Leu Ser Thr Cys 20 25 30 Lys Thr Ile Asp Met Glu Leu Val Lys Arg Lys Arg Ile Glu Ala Ile 35 40 45 Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Ala Ser Pro Pro Ser Gln 50 55 60 Gly Glu Val Pro Pro Gly Pro Leu Pro Glu Ala Val Leu Ala Leu Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Arg Asp Arg Val Ala Gly Glu Ser Ala Glu Pro Glu Pro 85 90 95 Glu Pro Glu Ala Asp Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Thr Arg Val Leu Met 100 105 110 Val Glu Thr His Asn Glu Ile Tyr Asp Lys Phe Lys Gln Ser Thr His 115 120 125 Ser Ile Tyr Met Phe Phe Asn Thr Ser Glu Leu Arg Glu Ala Val Pro 130 135 140 Glu Pro Val Leu Leu Ser Arg Ala Glu Leu Arg Leu Leu Arg Leu Lys 145 150 155 160 Leu Lys Val Glu Gln His Val Glu Leu Tyr Gln Lys Tyr Ser Asn Asn 165 170 175 Ser Trp Arg Tyr Leu Ser Asn Arg Leu Leu Ala Pro Ser Asp Ser Pro 180 185 190 Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Gly Val Val Arg Gln Trp Leu Ser 195 200 205 Arg Gly Gly Glu Ile Glu Gly Phe Arg Leu Ser Ala His Cys Ser Cys 210 215 220 Asp Ser Arg Asp Asn Thr Leu Gln Val Asp Ile Asn Gly Phe Thr Thr 225 230 235 240 Gly Arg Arg Gly Asp Leu Ala Thr Ile His Gly Met Asn Arg Pro Phe 245 250 255 Leu Leu Leu Met Ala Thr Pro Leu Glu Arg Ala Gln His Leu Gln Ser 260 265 270 Ser Arg His Arg Arg Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser Thr 275 280 285 Glu Lys Asn Cys Cys Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys Asp 290 295 300 Leu Gly Trp Lys Trp Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn Phe 305 310 315 320 Cys Leu Gly Pro Cys Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr Ser 325 330 335 Lys Val Leu Ala Leu Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala 340 345 350 Pro Cys Cys Val Pro Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr Tyr 355 360 365 Val Gly Arg Lys Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Arg 370 375 380 Ser Cys Lys Cys Ser 385 <210> 18 <211> 431 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of FOXP3 <400> 18 Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met 245 250 255 Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser 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Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 20 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 VL <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 & Anti-IFNy NovImmune Clone A6 - Emapalumab - CDRH1 (Kabat) <400> 21 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 & Anti-IFNy NovImmune Clone A6 - Emapalumab - CDRH1 (AbM) <400> 22 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 & Anti-IFNy NovImmune Clone A6 - Emapalumab - CDRH1 (IMGT) <400> 23 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 - CDRH2 (Kabat) <400> 24 Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 - CDRH2 (AbM) <400> 25 Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr 1 5 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Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFvclone P3H2 - CDRL2 (IMGT) <400> 32 Ser Ala 1 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-TNF-alpha scFv clone P3H2 - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 33 Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro Thr Thr 1 5 <210> 34 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 VH <400> 34 Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Val Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 35 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv 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39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRH2 (Kabat) <400> 39 Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRH2 (AbM) <400> 40 Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser 1 5 10 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRH2 (IMGT) <400> 41 Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRH3 (Kabat, AbM) <400> 42 Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRH3 (IMGT) <400> 43 Thr Arg Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 44 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRL1 (Kabat, AbM) <400> 44 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRL1 (IMGT) <400> 45 Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRL2 (Kabat, AbM) <400> 46 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 47 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 & Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRL2 (IMGT) <400> 47 Lys Val 1 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 6AE52 - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 48 Phe Arg Gly Ser His Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 49 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 VH <400> 49 Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val 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Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 58 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRH3 (IMGT) <400> 58 Ala Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRL1 (Kabat, AbM) <400> 59 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His 1 5 10 <210> 60 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRL1 (IMGT) <400> 60 Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRL2 (Kabat, AbM) <400> 61 Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 62 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRL2 (IMGT) <400> 62 Arg Thr 1 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma scFv TII 2G1G7 - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 63 Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 64 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of anti-TNFa scFv clone 2DE7 <400> 64 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro 130 135 140 Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 145 150 155 160 Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 165 170 175 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr 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Fontolizumab - CDRH3 (IMGT) <400> 121 Ala Arg Gly Phe Leu Pro Trp Phe Ala Asp 1 5 10 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IFNy HuZAF - Fontolizumab - CDRL1 (Kabat, AbM) <400> 122 Lys Ala Ser Glu Asn Val Asp Thr Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 123 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IFNy HuZAF - Fontolizumab - CDRL1 (IMGT) <400> 123 Glu Asn Val Asp Thr Tyr 1 5 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IFNy HuZAF - Fontolizumab - CDRL2 (Kabat, AbM) <400> 124 Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 125 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IFNy HuZAF - Fontolizumab & Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRL2 (IMGT) <400> 125 Gly Ala 1 <210> 126 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IFNy HuZAF - Fontolizumab - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 126 Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 127 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab VH <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 128 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab VL <400> 128 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 129 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH1 (Kabat) <400> 129 Asn Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 130 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH1 (AbM) <400> 130 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Asn 1 5 10 <210> 131 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH1 (IMGT) <400> 131 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp 1 5 <210> 132 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH2 (Kabat) <400> 132 Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 133 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH2 (AbM) <400> 133 Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr 1 5 10 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH2 (IMGT) <400> 134 Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys 1 5 <210> 135 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH3 (Kabat, AbM) <400> 135 Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp Tyr Phe 1 5 10 15 Asp Leu <210> 136 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRH3 (IMGT) <400> 136 Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp 1 5 10 15 Tyr Phe Asp Leu 20 <210> 137 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRL1 (Kabat, AbM) <400> 137 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 138 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRL1 (IMGT) <400> 138 Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 139 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRL2 (Kabat, AbM) <400> 139 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 140 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone AIN457 - Secukinumab - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 140 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Cys Thr 1 5 <210> 141 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab VH <400> 141 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 142 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab VL <400> 142 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 143 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH1 (Kabat) <400> 143 Asp Tyr His Ile His 1 5 <210> 144 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH1 (AbM) <400> 144 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Ile His 1 5 10 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH1 (IMGT) <400> 145 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His 1 5 <210> 146 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH2 (Kabat) <400> 146 Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 147 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH2 (AbM) <400> 147 Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp 1 5 10 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH2 (IMGT) <400> 148 Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr 1 5 <210> 149 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH3 (Kabat, AbM) <400> 149 Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr 1 5 10 <210> 150 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRH3 (IMGT) <400> 150 Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr 1 5 10 <210> 151 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRL1 (Kabat, AbM) <400> 151 Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 152 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRL1 (IMGT) <400> 152 Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 153 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRL2 (Kabat, AbM) <400> 153 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile 1 5 <210> 154 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL17A Clone Mab126 - Ixekizumab - CDRL3 (Kabat, AbM, IMGT) <400> 154 Ser Gln Ser Thr His Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 155 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a CD8 transmembrane domain <400> 155 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 20 <210> 156 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a IgG4 hinge <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 156 Xaa Xaa Xaa 1 <210> 157 <211> 282 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a IgD hinge <400> 157 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 158 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a 4-1BB co-stimulatrory intracellular signalling domain <400> 158 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 159 <211> 48 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exmplary amino acid sequence of a CD27 co-stimulatory intracellular signalling domain <400> 159 Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro 1 5 10 15 Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr 20 25 30 Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro 35 40 45 <210> 160 <211> 459 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a CAR comprising IFN-gamma scFv TII 2G1G7, a IgG4 hinge region, a CD28 transmembrane domain, a CD28 co-stimulatory domain, and a CD3 zeta signalling domain (with leader sequence) <400> 160 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 35 40 45 Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys 85 90 95 Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala 100 105 110 Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met 165 170 175 Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr 180 185 190 Gln Gln Lys Ser Gly Gly Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Arg Thr Ser 195 200 205 Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala 225 230 235 240 Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 275 280 285 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 290 295 300 Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn 305 310 315 320 Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr 325 330 335 Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser 340 345 350 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 355 360 365 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 370 375 380 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 385 390 395 400 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 405 410 415 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 420 425 430 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 435 440 445 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 161 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of CAR PMC882 comprising the TNF alpha scFv, a CD28 hinge, a CD28 transmembrane domain, a CD28 co-stimulatory domain, and a CD3 zeta signalling domain (without leader sequence) <400> 161 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 130 135 140 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile 145 150 155 160 Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 165 170 175 Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 195 200 205 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn 210 215 220 Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ala Ser 225 230 235 240 Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser 245 250 255 Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro 260 265 270 Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly 275 280 285 Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile 290 295 300 Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met 305 310 315 320 Asn Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro 325 330 335 Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe 340 345 350 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 355 360 365 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 370 375 380 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 162 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TNFa scFv clone P3H2 VH <400> 162 Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 20 25 30 Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser 50 55 60 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 163 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TNFa scFv clone P3H2 VL <400> 163 Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro 85 90 95 Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala 100 105 110 <210> 164 <211> 78 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a CD8a hinge <400> 164 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr 35 40 45 Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys 50 55 60 His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 65 70 75 <210> 165 <211> 438 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a CAR comprising IFN-gamma scFv TII 2G1G7, a IgG4 hinge region, a CD28 transmembrane domain, a CD28 co-stimulatory domain, and a CD3 zeta signalling domain (without leader sequence) <400> 165 Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile 130 135 140 Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser 145 150 155 160 Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly 165 170 175 Gly Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 210 215 220 Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Leu Lys Arg Ala Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 245 250 255 Cys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr 260 265 270 Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys 275 280 285 Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg 290 295 300 Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp 305 310 315 320 Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 325 330 335 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 340 345 350 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 355 360 365 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 370 375 380 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 385 390 395 400 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 405 410 415 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 420 425 430 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 <210> 166 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary amino acid sequence of a TNF-alpha scFv clone P3H2 - v2 <400> 166 Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 20 25 30 Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser 50 55 60 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln 145 150 155 160 Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 165 170 175 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro 180 185 190 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 195 200 205 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala 210 215 220 Asn Asn Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 225 230 235 240 Arg Ala Ala Ala

Claims

세포외 도메인(extracellular domain), 막관통 도메인(transmembrane domain), 및 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 도메인이 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 결합하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR).
제1항에 있어서, 하나 이상의 염증 관련 인자(들)가 인터루킨 1(IL-1), 종양 괴사 인자 알파(TNF-알파), 인터페론 감마(IFN-감마), 인터루킨 12(IL-12), 인터루킨 18(IL-18), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GMCSF), 인터루킨 6(IL-6), 인터루킨 8(IL-8), 인터루킨 17A(IL-17), CXCL1, CXCL2, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL16 및 CCL2-20으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 키메라 항원 수용체.
제1항 또는 제2항에 있어서, 세포외 도메인이 하나 이상의 항원 결합 도메인을 포함하고, 여기서 각각의 항원 결합 도메인이 항체, 항체 단편, 단일-쇄 가변 단편(single-chain variable fragment; scFv), 케모카인 수용체, 또는 이들의 기능적 변이(functional variation)로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택되는 키메라 항원 수용체.
제3항에 있어서, 케모카인 수용체가 CCR5, CXCR3, CCR1, 및 CCR2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 키메라 항원 수용체.
제3항 또는 제4항에 있어서, 각각의 항원 결합 도메인이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 세포외 도메인이 다음 중 하나 이상을 포함하는 키메라 항원 수용체:
i) TNF-알파에 결합하는 scFv,
ii) IFN-감마에 결합하는 scFv; 및
iii) IL-17에 결합하는 scFv.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 TNF-알파에 결합하기 위해 서열 번호 1; 19 및 20; 64; 65 및 66; 80 및 81; 85 및 86; 및 162 및 163을 포함하는 항체와 경쟁하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 IFN-감마에 결합하기 위해 서열 번호 3; 5; 34 및 35; 49 및 50; 100 및 101; 112 및 113을 포함하는 항체와 경쟁하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 IL-17a에 결합하기 위해 서열 번호 127 및 128; 141 및 142를 포함하는 항체와 경쟁하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 20, 35, 50, 66, 81, 86, 101, 113, 128, 142 또는 163에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 19, 34, 49, 65, 80, 85, 100, 112, 127, 141 또는 162에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 20 또는 서열 번호 163에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 19 또는 서열 번호 162에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역 (CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 35에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 34에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 50에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 49에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 66에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 65에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 81에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 80에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 86에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 85에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 101에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 100에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 113에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 112에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 128에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 127에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 142에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 141에 제시된 아미노산 서열의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 29, 30, 44, 45, 59, 60, 75, 76, 95, 96, 107, 108, 122, 123, 137, 138, 151 또는 152의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 31, 32, 46, 47, 61, 62, 77, 78, 97, 98, 109, 110, 124, 125, 139 또는 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2: 서열 번호 33, 48, 63, 79, 84, 99, 111, 126, 140 또는 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 21, 22, 23, 36, 37, 38, 51, 52, 53, 67, 68, 69, 87, 88, 89, 114, 115, 116, 129, 130, 131, 143, 144 또는 145의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1: 서열 번호 24, 25, 26, 39, 40, 41, 54, 55, 56, 70, 71, 72, 90, 91, 92, 102, 103, 104, 117, 118, 119, 132, 133, 134, 146, 147 또는 148의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2: 서열 번호 27, 28, 42, 43, 57, 58, 73, 74, 82, 83, 93, 94, 105, 106, 120, 121, 135, 136, 149 또는 150의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 인식 도메인이 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체:
(a) 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(b) 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(c) 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(d) 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 또는
(e) 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL); 및
(f) 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 상보성 결정 영역(CDR) 1; 서열 번호 148의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR2; 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성(identity)을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 사이의 임의의 백분율의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 세포외 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치하는 힌지 영역(hinge region)을 추가로 포함하는 키메라 항원 수용체.
제38항에 있어서, 힌지 영역이 CD8a 힌지, CD28 힌지, 및 IgG 힌지로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 키메라 항원 수용체.
제39항에 있어서, 힌지 영역이 CD8a 힌지 영역 또는 IgG4 힌지이거나 이를 포함하는 키메라 항원 수용체.
제38항 또는 제39항에 있어서, 힌지 영역이 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 도메인이 다음 중 하나 이상을 포함하는 키메라 항원 수용체: 신호전달 도메인(signalling domain), 하나 이상의 공동-자극 도메인, 및 포크헤드 박스(forkhead box) P3(FOXP3) 전사 인자.
제42항에 있어서, 신호전달 도메인이 하나 이상의 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 키메라 항원 수용체.
제42항 또는 제43항에 있어서, 신호전달 도메인이 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 제타, CD22, CD79a, CD79b, CD66d, 및 이들의 기능적 변이/단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 신호전달 도메인이 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 세포내 신호전달 도메인인 키메라 항원 수용체.
제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 신호전달 도메인이 서열 번호 5에 제시된 뉴클레오티드 서열 또는 이의 코돈 중복 서열(codon redundant sequence)에 의해 암호화되는 키메라 항원 수용체.
제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 공동-자극 도메인 각각이 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질(예를 들어, 공동-자극 수용체, 인테그린, NK 수용체 등) 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체: CD28, CD28T, OX40, 4-1BB/CD137, CD2, CD4, CD5, CD7, CD9, CD16, CD22, CD27, CD30, CD33, CD37, CD40, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, PD-l, ICOS, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-l/CD11a/CDl8), CD247, CD276(B7-H3), LIGHT(종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), NKG2C, Ig 알파 (CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 I 분자, TNF, TNFr, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자, BTLA, 톨 리간드 수용체, ICAM-l, B7-H3, CDS, ICAM-l, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD 103, IT GAL, CD1la, LFA-l, ITGAM, CD11b, ITGAX, CDl1c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD 18, LFA-l, ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRT AM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD 150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CDl9a, CD83 리간드, 및 이들의 기능적 변이/단편.
제47항에 있어서, 하나 이상의 공동-자극 도메인 각각이 CD28, 41BB, IL2Rb, TLR2, MyD88, 및 CD40으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질 중 어느 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제48항에 있어서, 하나 이상의 공동-자극 도메인이 CD28의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 도메인이 공동-자극 도메인을 포함하고, 여기서 공동-자극 도메인이 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CD28 세포내 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 막관통 도메인이 CD28, CD28T, OX-40, 4-1BB/CD137, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, 프로그램된 사멸-l(PD-1), 유도성 T 세포 공동-자극기(ICOS), 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-l, CD11a/CD18), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD247, CD276 (B7-H3), LIGHT, (TNFSF14), NKG2C, Ig 알파 (CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 1 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 및 이들의 기능적 변이/단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질의 막관통 도메인인 키메라 항원 수용체.
제51항에 있어서, 막관통 도메인이 CD3 엡실론 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체인 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 막관통 도메인이 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 CD28 막관통 도메인인 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 세포외 도메인 및/또는 세포내 도메인이 자기-절단 펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체.
제54항에 있어서, 자기-절단 펩티드가 P2A, E2A, F2A, 및 T2A로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 영역이 IgG4 힌지를 포함하고, 막관통 도메인이 CD28 막관통 도메인을 포함하고, 공동-자극 도메인이 CD28의 세포내 신호전달 도메인이고, 신호전달 도메인이 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포내 도메인이 FOXP3을 포함하고, 여기서 CD3 제타 및 FOX3P의 세포내 신호전달 도메인이 자기-절단 펩티드 TA2에 의해 분리되는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 영역이 IgG4 힌지를 포함하고, 막관통 도메인이 CD28 막관통 도메인을 포함하고, 공동-자극 도메인이 CD28의 세포내 신호전달 도메인이고, 신호전달 도메인이 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 서열 번호 12의 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체.
제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오티드.
제59항의 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
제60항에 있어서, 벡터가 바이러스 벡터, 임의로 렌티바이러스 벡터인 벡터.
제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체, 제59항의 제1 폴리뉴클레오티드, 및/또는 제60항 또는 제61항의 벡터를 포함하는 변형된 세포.
제62항에 있어서, 변형된 세포가 변형된 T 세포인 변형된 세포.
제63항에 있어서, 변형된 T 세포가 하나 이상의 면역억제 분자를 발현하는 변형된 세포.
제64항에 있어서, 변형된 T 세포가, 변형된 T 세포가 활성화될 때, 하나 이상의 면역억제 분자를 발현하는 변형된 세포.
제65항에 있어서, 하나 이상의 면역억제 분자의 발현을 위해, 변형된 T 세포가 다음을 암호화하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하고:
a. NFAT(nuclear factor of activated T cell; 활성화된 T 세포의 핵 인자)에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함하는 프로모터, 및
b. 하나 이상의 면역억제 분자;
여기서 프로모터에 대한 NFAT의 결합이 하나 이상의 면역억제 분자의 발현을 유도하는 변형된 세포.
제66항에 있어서, 프로모터가 인터루킨-2 (IL-2) 또는 이의 유도체의 프로모터를 포함하거나 인터루킨-2 (IL-2) 또는 이의 유도체의 프로모터인 변형된 세포.
제66항 또는 제67항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오티드가 하나 이상의 면역억제 분자를 암호화하는 경우, 면역억제 분자의 코딩 서열이 하나 이상의 링커 서열(linker sequence)에 의해 분리되는 변형된 세포.
제68항에 있어서, 하나 이상의 링커 서열이 글리신-세린(GS) 링커, 예를 들어 GSG 링커를 암호화하는 변형된 세포.
제68항 또는 제69항에 있어서, 하나 이상의 링커 서열 각각이 제24항 또는 제25항에 정의된 바와 같은 자기-절단 펩티드를 추가로 암호화하는 변형된 세포.
제63항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 면역억제 분자가 효과기(effector) T 세포의 활성을 억제할 수 있거나 효과기 T 세포에서 아네르기(anergy)를 유도할 수 있는 변형된 세포.
제63항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 면역억제 분자가 IL-10, TGF-베타, CTLA-4, LAG3, PD-L1, FOXP3, 및 PD-1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 변형된 세포.
제63항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 면역억제 분자가 IL-10, TGF-베타, 및 FOXP3으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 변형된 세포.
제73항에 있어서, 면역억제 분자가 IL-10 및 TGF-베타, 또는 IL-10, TGF-베타 및 FOXP3인 변형된 세포.
제66항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오티드가 서열 번호 13에 제시된 서열을 포함하는 변형된 세포.
제63항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 제3 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하고, 상기 제3 폴리뉴클레오티드가 유도성 자살 시스템을 암호화하며, 여기서 변형된 T 세포에 의한 유도인자 분자의 접촉이 상기 변형된 T 세포에서 세포 사멸을 유도하는 변형된 세포.
제76항에 있어서, 유도성 자살 시스템이 카스파제-9(iCasp9) 자살 유전자 시스템인 변형된 세포.
제76항 또는 제77항에 있어서, 유도인자가 CID (AP1903/Rimiducid로도 알려짐)인 변형된 세포.
제63항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드가 하나의 벡터 상에 암호화되거나 또는 상이한 벡터 상에 암호화되는 변형된 세포.
제76항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 폴리뉴클레오티드가 하나의 벡터 상에 포함되거나, 또는 2개 이상의 상이한 벡터 상에 암호화되는 변형된 세포.
제63항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 조절 T 세포(Treg)로부터 변형되는 변형된 세포.
제81항에 있어서, Treg가 대상체로부터 단리되거나, 또는 Treg가 대상체로부터 단리되고 생체외 확장되는 변형된 세포.
제82항에 있어서, Treg가 대상체로부터 단리되는 경우, Treg가 대상체의 PBMC로부터 단리되는 변형된 세포.
제63항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 유래되는 변형된 세포.
제84항에 있어서, iPSC가 공여자 CD34⁺ iPSC로부터 유래되는 변형된 세포.
제63항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 저면역원성(hypoimmunogenic)인 변형된 세포.
제86항에 있어서, 주요 조직적합성 부류(MHC) I의 하나 이상의 유전자 및 주요 조직적합성 부류(MHC) II의 하나 이상의 유전자가 결실되거나 돌연변이되고, 여기서 유전자의 섭동(perturbation)이 MHC I 및 MHC II 단백질 복합체의 기능장애를 초래하는 변형된 세포.
제87항에 있어서, MHC I 및 II의 하나 이상의 유전자가 적어도 B2M (β2 마이크로글로불린) 및 CIITA (클래스 II MHC 전사활성화제)를 포함하는 변형된 세포.
제63항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 CD47 또는 이의 기능적 변이체를 과발현하도록 추가로 변형되는 변형된 세포.
c. 대상체로부터의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 조절 T 세포(Treg)를 단리하는 단계;
d. 생체외에서 단리된 Treg를 확장하는 단계; 및
e. 확장된 Treg를 제60항 또는 제61항에 따른 벡터로 형질도입(transducing)하여, 형질도입된 Treg가 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 CAR을 발현하도록 하는 단계를 포함하여, 키메라 항원 수용체(CAR)-조절 T 세포(CAR-Treg)를 생성하는 방법.
f. B2M(B2 마이크로글로불린) 및 CIITA(클래스 II MHC 전사활성화제) 유전자를 모두 녹아웃(knock-out)하기 위해 CD34⁺-iPSC의 게놈을 편집하는 단계;
g. CD47 또는 이의 기능적 변이체를 유전적으로 편집하고 녹인(knock-in)하는 단계(여기서, 녹인된 T-iPSC는 CD47을 과발현한다);
h. 저면역원성 CD34⁺ iPSC를 제60항 또는 제61항의 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 T 세포가 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 발현하도록 하는 단계;
i. 저면역원성 CAR-iPSC를 분화하여 변형된 iPSC-유래 T 세포를 생성하는 단계를 포함하여, 변형된 저면역원성 iPSC-유래 T 세포를 생성하는 방법.
제91항에 있어서, 단계 a. 및 b.가 CRISPR-Cas 유전자 편집 시스템을 사용하여 수행되는 방법.
제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 다음 중 임의의 하나 이상을 추가로 포함하는 방법:
e. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체의 발현을 시험하는 단계;
f. 염증 관련 인자와의 접촉에 반응하여 하나 이상의 면역억제 분자를 생산하기 위한 키메라 항원 수용체-Treg 또는 CAR-iPSC-유래 T 세포의 기능적 잠재력(functional potential)을 시험하는 단계; 및
g. 효과기 T 세포의 활성화/증식을 억제하기 위한 CAR-Treg 또는 CAR-iPSC-유래 T 세포의 기능적 잠재력을 시험하는 단계.
제90항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 바이러스 벡터, 바람직하게는 렌티바이러스 벡터인 방법.
제63항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 요법(therapy), 바람직하게는 하나 이상의 염증 관련 인자(들)에 의해 매개되는 조절되지 않는 염증 반응을 수반하거나 그로부터 초래되는 질환 또는 병태(condition)를 치료하기 위한 요법에 사용하기 위한 변형된 세포.
제63항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 자가면역 질환; 이식 거부, 이식편대숙주 질환(GVHD), 또는 사이토카인 방출 증후군의 치료에 사용하기 위한 변형된 세포.
치료적으로 유효한 수의 제63항 내지 제89항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하여, 자가면역 질환, 이식 거부, 이식편대숙주 질환(GVHD) 또는 사이토카인 방출 증후군을 치료하는 방법.
제96항; 또는 제97항에 있어서, 자가면역 질환이 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 건선(psoriasis), 루푸스(lupus), 소아 류마티스 관절염(juvenile rheumatoid arthritis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease) 및 크론병(Crohn's disease)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 변형된 세포; 또는 방법.
제96항; 또는 제97항에 있어서, 이식 거부가 장기 이식 거부, 줄기 세포 이식 거부, 및 골수 이식 거부로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 변형된 세포; 또는 방법.
치료적으로 유효한 수의 제63항 내지 제89항 중 어느 한 항의 변형된 세포를 투여하는 단계를 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 내성(immune tolerance)을 유도하는 방법.
치료적으로 유효한 수의 제63항 내지 제89항 중 어느 한 항의 변형된 세포를 투여하는 단계를 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 국소적으로 또는 전신적으로 하향조절하는 방법.
제63항 내지 제89항 중 어느 한 항의 변형된 세포를 대상체에게 국소적으로 또는 전신적으로 투여하는 단계를 포함하여, 대상체에서 효과기 T 세포의 활성을 국소적으로 또는 전신적으로 억제하는 방법.
서열 번호 14 또는 15에 제시된 서열을 포함하는 벡터.