CN117616039A - 嵌合抗原受体及包含其的经修饰细胞 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及嵌合抗原受体(CAR)，其包含结合一种或多种炎症相关因子的胞外结构域、跨膜/铰链结构域和胞内结构域。在特定实施例中，T调节性(Treg)细胞表达编码所述CAR的构建体，该构建体进一步包含Fox3p和驱动白细胞介素‑10和TGF‑β表达的CAR激活依赖性NF‑AT启动子。它还涉及产生CAR的方法、表达所述CAR的Treg细胞以及所述CAR用于治疗如移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)和细胞因子释放综合征等自身免疫性疾病的用途。

Description

嵌合抗原受体及包含其的经修饰细胞
相关申请的交叉引用
本申请从2021年5月11日提交的新加坡临时号10202104940X获得权利，其全部披露通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及生物技术和生物工程领域。特别地，本发明涉及嵌合抗原受体和包含其的经修饰细胞，例如经修饰T细胞。
背景技术
炎性疾病或病症是世界范围内的一个重大问题，可能由促炎细胞因子引起或与之相关。
实体器官移植是目前治疗终末期器官衰竭的首选方法。通过更好地匹配供体和受体以及改进免疫抑制药物方案，早期移植物存活率得到了改善。然而，长期使用免疫抑制药物已被证明与有害的副作用有关。
与移植类似，自身免疫性障碍患者的免疫抑制药物施用旨在针对免疫和自身免疫性反应，会使他们免疫功能低下。
因此，需要新的或改进的疗法来调节与炎性疾病或病症、同种异体移植和/或自身免疫性疾病或病症相关的免疫活性和反应。
发明内容
在一方面，本披露涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中该胞外结构域结合一种或多种炎症相关因子。
在特定实例中，该一种或多种炎症相关因子是促炎细胞因子或炎症相关趋化因子。在特定实例中，该一种或多种炎症相关因子选自由以下组成的组：白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17A(IL-17)、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL16和CCL2-20。
在特定实例中，本披露涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中该胞外结构域结合一种或多种促炎细胞因子。在另一个实例中，该一种或多种促炎细胞因子选自由以下组成的组：白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素17A(IL-17)。在一个实例中，该促炎细胞因子是肿瘤坏死因子α(TNF-α)。在一个实例中，该促炎细胞因子是干扰素γ(IFN-γ)。在一个实例中，该促炎细胞因子是白细胞介素8(IL-8)。
在实例中，如本文披露的嵌合抗原受体的胞外结构域包含一个或多个抗原结合结构域，其中该/每个抗原结合结构域独立地选自由以下组成的组：抗体、抗体片段、单链可变片段(scFv)、趋化因子受体或其功能变型。在一个特定实例中，该趋化因子受体进一步选自由以下组成的组：CCR5、CXCR3、CCR1和CCR2。在另一个特定实例中，该/每个抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。在特定实例中，该胞外结构域包含以下任何一种或多种：结合TNF-α的scFv、结合IFN-γ的scFv、以及结合IL-17a的scFv。
在某些实施例中，抗原结合结构域与如下表1中定义的抗体竞争结合一种或多种炎症相关因子。
在一个实施例中，抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合TNF-α：SEQ ID NO:1；19和20；64；65和66；80和81；85和86；162和163；或165。
在一个实施例中，抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合IFN-γ：SEQ ID NO:3；5；34和35；49和50；100和101；或112和113。
在一个实施例中，抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合IL-17a：SEQ IDNO:127和128；或141和142。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)含有SEQ ID NO:20、35、50、66、81、86、101、113、128、142或163所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)的轻链可变结构域(VL)，或表1中所示的任何VL；以及
(b)含有SEQ ID NO:19、34、49、65、80、85、100、112、127、141或162所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)的重链可变结构域(VH)，或表1中所示的任何VH。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:163所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:162所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:66所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:81所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:80所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:86所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:85所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:101所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:113所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:112所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:128所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:127所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:142所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:141所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:29、30、44、45、59、60、75、76、95、96、107、108、122、123、137、138、151或152的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31、32、46、47、61、62、77、78、97、98、109、110、124、125、139或153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33、48、63、79、84、99、111、126、140或154的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:21、22、23、36、37、38、51、52、53、67、68、69、87、88、89、114、115、116、129、130、131、143、144或145的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:24、25、26、39、40、41、54、55、56、70、71、72、90、91、92、102、103、104、117、118、119、132、133、134、146、147或148的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27、28、42、43、57、58、73、74、82、83、93、94、105、106、120、121、135、136、149或150的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:29的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:31的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:33的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:21的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:24的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:27的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:29的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:31的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:33的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:22的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:25的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:27的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:30的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:32的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:33的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:23的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:26的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:28的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:44的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:46的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:48的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:36的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:39的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:42的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:44的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:46的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:48的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:37的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:40的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:42的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:45的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:47的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:48的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:38的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:41的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:43的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:59的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:61的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:63的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:51的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:54的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:57的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:59的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:61的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:63的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:52的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:55的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:57的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:60的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:62的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:63的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:53的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:56的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:58的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:75的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:77的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:79的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:67的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:70的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:73的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:75的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:77的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:79的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:68的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:71的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:73的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:76的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:78的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:79的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:69的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:72的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:74的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:75的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:77的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:84的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:67的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:70的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:82的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:75的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:77的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:84的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:68的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:71的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:82的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:76的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:78的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:84的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:69的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:72的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:83的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:95的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:97的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:99的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:87的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:90的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:93的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:95的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:97的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:99的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:88的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:91的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:93的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:96的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:98的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:99的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:89的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:92的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:94的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:107的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:109的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:111的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:21的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:102的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:105的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:107的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:109的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:111的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:22的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:103的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:105的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:108的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:110的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:111的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:23的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:104的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:106的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:122的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:124的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:126的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:114的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:117的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:120的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:122的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:124的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:126的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:115的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:118的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:120的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:123的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:125的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:126的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:116的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:119的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:121的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:137的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:139的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:140的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:129的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:132的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:135的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:137的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:139的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:140的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:130的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:133的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:135的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:138的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:125的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:140的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:131的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:134的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:136的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:151的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:153的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:154的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:143的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:146的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:149的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:151的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:153的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:154的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:144的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:147的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:149的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:152的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:47的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:154的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：与SEQ ID NO:145的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：与SEQ ID NO:148的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：与SEQ ID NO:150的序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:29的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:21的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:24的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:29的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:22的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:25的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:30的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:32的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:23的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:26的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:44的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:46的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:36的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:39的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:44的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:46的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:37的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:40的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:45的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:47的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:38的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:41的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:43的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:59的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:61的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:51的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:54的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:57的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:59的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:61的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:52的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:55的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:57的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:60的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:62的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:53的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:56的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:67的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:70的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:73的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:68的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:71的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:73的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:76的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:78的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:69的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:72的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:67的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:70的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:82的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:68的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:71的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:82的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:76的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:78的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:69的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:72的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:95的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:97的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:87的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:90的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:95的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:97的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:88的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:91的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:96的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:98的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:89的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:92的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:107的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:109的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:111的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:21的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:102的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:105的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:107的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:109的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:111的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:22的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:103的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:105的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:108的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:110的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:111的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:23的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:104的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:106的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:122的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:124的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:114的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:117的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:120的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:122的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:124的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:115的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:118的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:120的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:123的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:125的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:116的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:119的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:137的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:139的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:129的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:132的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:135的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:137的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:139的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:130的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:133的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:135的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:138的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:125的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:131的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:134的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:136的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:151的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:143的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:146的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:149的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:151的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:144的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:147的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:149的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:152的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:47的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQ ID NO:145的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:148的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:150的氨基酸序列。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:166所示氨基酸序列，其中在CDR区以外的一个或多个位置具有0-10个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:3所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3所示氨基酸序列，其中在CDR区以外的一个或多个位置具有0-10个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
在某些实施例中，抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5所示氨基酸序列，其中在CDR区以外的一个或多个位置具有0-10个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。
在更特定的实例中，抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID:1所示氨基酸序列；包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3所示氨基酸序列；或包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5所示氨基酸序列。
在更特定的实例中，i)的scFv具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列；ii)的scFv具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列；并且iii)的scFv具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列。
在另一方面，本披露涉及一种核酸，其包含编码本文披露的嵌合抗原受体的核苷酸序列。编码本文披露的嵌合抗原受体的核酸也可称为第一核酸(在本披露涉及第二和/或第三核酸的背景下)。
在另一方面，本披露涉及一种第一多核苷酸，其编码本文披露的嵌合抗原受体。
在另一方面，本披露还涉及一种核酸构建体或载体，其包含本文披露的第一核酸或第一多核苷酸。在一些实施例中，核酸分子的表达受转录控制序列的控制。在一些实施例中，转录控制序列可以是组成型启动子或诱导型启动子。在一些实施例中，载体是病毒载体，其可用于转化如T细胞等免疫细胞，以诱导CAR的表达。
在本披露的另一方面，提供了包含本文披露的CAR的遗传修饰细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种遗传修饰细胞，其包含本文所述的核酸分子、或本文所述的核酸构建体或载体、或该构建体或载体的基因组整合形式。遗传修饰细胞可以是T细胞，例如Treg，iPSC来源的T细胞，例如iPSC来源的Treg细胞，或CD34+iPSC。
在本披露的另一方面，提供了一种经修饰T细胞，其包含本文披露的嵌合抗原受体、本文披露的第一多核苷酸或第一核酸、和/或本文披露的核酸构建体或载体。该经修饰T细胞可以是Treg细胞，例如iPSC来源的Treg细胞。
在一个实施例中，遗传修饰细胞(优选地T细胞)被进一步修饰以表达一种或多种免疫抑制分子。表达可以是组成型表达或诱导型表达。优选地，当经修饰T细胞被激活时，例如当T细胞被本文披露的嵌合抗原受体激活并由经修饰T细胞表达时，特别是通过其信号传导结构域，表达一种或多种免疫抑制分子。
在一个实施例中，诱导型表达是由NFAT诱导型系统实现的。优选地，经修饰T细胞包含第二核酸或多核苷酸，该第二核酸或多核苷酸编码包含一个或多个NFAT(活化T细胞核因子)结合位点的启动子，以及一种或多种免疫抑制分子；其中NFAT与该启动子的结合诱导该一种或多种免疫抑制分子的表达。
在一个实例中，本文披露的第一和第二核酸或多核苷酸均从一个核酸表达序列表达。
示例性的免疫抑制因子或免疫抑制分子是但不限于IL-10、TGF-β、FOXP3及其组合。在实例中，一种或多种免疫抑制分子能够抑制效应T细胞的活性或能够诱导效应T细胞的无反应性。在特定实例中，该一种或多种免疫抑制分子选自由以下组成的组：IL-10、TGF-β、CTLA-4、LAG3、PD-L1和PD-1。在特定实例中，该一种或多种免疫抑制分子是IL-10和/或TGF-β。在特定实例中，第二多核苷酸包含SEQ ID:10所示序列。
在本披露的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含本文披露的遗传修饰细胞和药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
在本披露的另一方面，提供了一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括用本文披露的载体转导Treg，使得转导的Treg表达本披露的CAR，从而产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)。
在本披露的另一方面，提供了一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括：a)从受试者的外周血单个核细胞(PBMC)中分离调节性T细胞(Treg)；b)对分离的Treg进行离体扩增；以及c)用本文披露的载体转导扩增的Treg，使得转导的Treg表达本披露的CAR。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)对CD34+iPSC进行修饰，以便(i)降低或消除B2微球蛋白和II类MHC反式激活因子的表达或活性水平，且(ii)过表达CD47或其功能变体；b)用本披露的载体转导经修饰的CD34+iPSC，使得转导的CD34+iPSC表达本披露的CAR；c)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，该iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)提供CD34+iPSC，b)降低或消除CD34+iPSC中B2微球蛋白和II类MHC反式激活因子的表达或活性水平；c)在b)的CD34+iPSC中过表达CD47或其功能变体；d)用本披露的载体转导c)的CD34+iPSC，使得转导的CD34+iPSC表达本披露的CAR；e)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，该iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)对CD34+iPSC的基因组进行编辑以减少或消除B2M(B2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)基因的功能性基因产物的表达；c)在CD34+iPSC中过表达CD47或其功能变体；d)用本披露的载体转导c)的CD34+iPSC，使得转导的细胞表达本披露的CAR；e)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，这些iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)CD34+诱导多能干细胞；b)对CD34+iPSC的基因组进行编辑以将B2M(B2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)基因均敲除；c)基因掺入CD47或其功能变体，其中转导的iPSC过表达CD47；d)用本披露的载体转导e)的T细胞，使得转导的T细胞表达本披露的CAR；f)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。
在另一方面，本发明涉及一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括从受试者的外周血单个核细胞(PBMC)分离调节性T细胞(Treg)；对分离的Treg进行离体扩增；以及用本文披露的载体转导扩增的Treg，使得转导的Treg表达本文披露的CAR。
在又一方面，本披露涉及本披露的遗传修饰细胞或经修饰T细胞，其用于在疗法中使用。优选地，经修饰T细胞是表达本披露的CAR的经修饰Treg细胞。在一个实施例中，Treg细胞可以是iPSC来源的Treg细胞。
在又一方面，本披露涉及本披露的遗传修饰细胞或经修饰T细胞，其用于在以下的治疗中使用：自身免疫性疾病；移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、细胞因子释放综合征或涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症。优选地，经修饰T细胞是表达本披露的CAR的经修饰Treg细胞。在一个实施例中，Treg细胞可以是iPSC来源的Treg细胞。
在又一方面，本披露涉及一种治疗以下的方法：自身免疫性疾病、移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、细胞因子释放综合征或涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症，其中该方法包括施用治疗有效数量的本披露的遗传修饰细胞或经修饰T细胞，从而治疗自身免疫性疾病、移植排斥或移植物抗宿主病(GVHD)。
在再一方面，本披露涉及一种在有需要的受试者中诱导免疫耐受的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的本文披露的经修饰T细胞，从而在该有需要的受试者中诱导免疫耐受。
在再一方面，本披露涉及一种在有需要的受试者中局部或全身下调炎症的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的本文披露的经修饰T细胞，从而在该有需要的受试者中局部或全身下调炎症。
在再一方面，本披露涉及一种在受试者中局部或全身抑制效应T细胞的活性的方法，其中该方法包括向该受试者局部或全身施用本文披露的经修饰T细胞，或治疗有效数量的本披露的本文披露的经修饰T细胞，从而局部或全身抑制受试者中效应T细胞的活性。
在再一方面，本披露提供了本文所述的核酸、核酸构建体或经修饰细胞用于制造药物的用途，该药物用于：
·治疗自身免疫性疾病、移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、细胞因子释放综合征或涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症；
·在有需要的受试者中诱导免疫耐受；
·在有需要的受试者中局部或全身下调炎症；或
·局部或全身抑制受试者中效应T细胞的活性。
在本披露的另一方面，提供了一种载体，其包含本披露中所提供的序列。
附图说明
当结合非限制性实例和附图考虑时，参考详细描述将更好地理解本发明，其中：
图1显示了结合促炎细胞因子的嵌合抗原受体和编码免疫抑制分子的诱导型表达盒的示例性设计的示意图。在该实例中，TNF-α和/或IFN-γ是嵌合抗原受体的一个或多个抗原结合结构域靶向的促炎细胞因子。同样在该实例中，免疫抑制分子是IL-10和TGF-β。
图2显示了编码靶向例如肿瘤坏死因子α(TNF-α；TNFa)的示例性嵌合抗原受体(CAR)且进一步编码活化T细胞核因子(NFAT)诱导型表达盒的多核苷酸构建体的示意简图。(A)在此实例中，嵌合抗原受体构建体PMC882包含结合促炎细胞因子TNF-α的单链可变片段(scFv)，并包含CD28共刺激结构域以及CD3-ζ信号传导结构域。在此实例中，嵌合抗原受体编码序列之前是CD8前导序列，该前导序列之前是MNDU3启动子。在此特定实例图2A中，构建体还编码NFAT诱导型表达盒，该表达盒位于CAR盒的下游。NFAT诱导型表达盒编码6(NFAT)最小IL-2启动子，随后是TGF-β和IL-10(此实例中例示的两种免疫抑制分子)的编码序列。这两种免疫抑制因子之间还编码可自切割的T2A肽。(B)在另一实例中，FOXP3(免疫抑制分子的另一实例)与CAR盒共表达，并通过可自切割的T2A肽与CD3-ζ信号传导结构域分开。
图3显示了使用荧光激活细胞分选(FACS)对健康供体外周血单个核细胞(PBMC)的示例性分选，以及所分选群的纯度。(A)外周血单个核细胞(PBMC)用抗CD14、CD4、CD25、CD127表面标记进行标记，并按所示进行分选。(B)基于FOXP3表达，相比于CD4+、CD25-、CD127+T效应细胞(下分图)，这种分选策略产生了高纯度的CD4+、CD25+、CD127-Treg(上分图)。随后对使用荧光激活细胞分选(FACS)分离的Treg进行转导和扩增以产生CAR Treg。
图4显示了转导的CAR Treg的扩增和表达结果。(A)是显示14天内健康Treg在CARTreg产生中的倍数扩增的图。结果表明了超过150倍的稳健扩增。(B)相比于未转导的扩增Treg，扩增的Treg中GFP+CAR Treg显示了75％的转导率。
图5显示了用CAR PMC882转导的Jurkat细胞的结果。该图显示，通过CD69+细胞的流式细胞术测定，与未转导的Jurkat相比，激活标记CD69的表面表达有所增加。这种增加的表达证明了由于TNFa的存在而产生的激活。误差条指示标准偏差；*p<0.05。
图6显示了在存在或不存在TNFa的情况下，基于转导的(A)Jurkat细胞、(B)健康Treg和(C)活动性疾病Treg中TGFβ和IL10的胞内染色的流式细胞术分析结果。这样做是为了模拟和演示通过NFAT启动子的诱导型表达。(A)与无TNFa刺激相比，在存在TNFa的情况下，用CAR PMC882转导的Jurkat细胞表现出免疫抑制性TGFb和IL10的表达增加。与无TNFa刺激相比，在存在TNFa的情况下，(B)来自健康供体的CAR PMC882 Treg和(C)患有活动性疾病(幼年型特发性关节炎；JIA)的供体显示出TGFb和IL10的表达增加。这些结果说明了在PMC882中使用NFAT启动子的TGFb和IL10诱导型表达。误差条指示标准偏差；*p<0.05。
图7显示的数据表明，在24小时的共培养期间，在存在CD3/28激活因子的情况下，与同未转导的Treg共培养相比，与来自(A)健康供体和(B)活动性疾病供体(JIA)的CARTreg PMC882共培养的炎性T细胞减少。误差条指示标准偏差；*p<0.05。
图8显示了PMC882转导的CAR Treg在7天内对通过CD3/28激活因子激活的增殖效应T细胞的抑制。(A)健康供体Treg以及(B)活动性JIA疾病Treg使用CAR PMC882转导。结果显示增殖T细胞受到抑制。误差条指示标准偏差；*p<0.05；**p<0.005。
图9显示了PMC882 CAR Treg处理在NSG GvHD小鼠模型中的效果。(A)PMC882 CARTreg处理的小鼠与未处理的小鼠的临床GvHD评分比较。误差条指示标准偏差；曲线下面积****p<0.0001；每组n＝6。(B)PMC882 CAR Treg处理的小鼠与未处理的小鼠的生存曲线比较。对数秩检验*p<0.05。(C)第14天时，与未处理的小鼠相比，PMC882 CAR Treg处理的小鼠外周血中人CD45的植入百分比受到抑制。误差条指示标准偏差；学生t检验**p<0.005；n＝6。(D)第35天实验结束时人CD45植入的百分比。与未处理的小鼠相比，PMC882 CAR Treg处理的小鼠显示出人CD45植入的显著抑制。学生t检验**p<0.005；n＝4。(E)针对CD4+(黄色)和CD8+(红色)染色的使用VECTRA的肝组织分析表明组织中的T细胞浸润。(F)使用CyToF的外周血中CD3+T细胞的高维降维tSNE分析(上分图)显示CAR Treg处理的小鼠(中分图)和未处理的小鼠(下分图)中分离良好的簇。(G)构成CAR Treg处理的小鼠(左)和未处理的小鼠(右)簇的标记热图。
图10显示了抗IFNy CAR Jurkat(A)和健康供体Treg(B)对可溶性人IFNy有反应并诱导TGFb((A)和(B)中各左侧两个柱)和IL10((A)和(B)中各右侧两个柱)上调。误差条指示标准偏差；学生t检验*p<0.05。数据来自3个独立实验。
图11展示了在健康供体中，抗TNFa CAR PMC882和抗IFNy CAR Treg均能够比未转导的Treg更好地抑制效应T细胞增殖。误差条指示平均值的标准误差；双因素方差分析，Tukey多重比较检验；*p<0.05；**p<0.005。数据来自3位健康供体和3个独立实验。
图12显示了与野生型iPS细胞相比，通过流式细胞术表面染色，基因工程化的iPS细胞表现出HLA A、B、C(A)和HLA DR、DP、DQ(B)的敲除以及CD47过表达(C)。(D)显示了与野生型iPS细胞相比，工程化的iPS不会诱导T细胞增殖。误差条指示平均值的标准误差；单因素方差分析，Tukey多重比较检验；***p<0.0005。数据来自3位健康供体。
图13详细展示了第12天时iPS细胞分化为CD34+细胞(A)以及随后分化为显示CD3、CD4和CD8表达的T细胞(B)。在诱导型NFAT启动子和PMA刺激下，用带有GFP的抗TNFa CAR转导的iPS来源的T细胞显示GFP表达上调。
序列说明
表1.本发明序列
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定义
如本文所用，术语“多核苷酸”或“核酸”被定义为核苷酸链。如本文所用，术语“核酸”和“多核苷酸”(或单数形式)是可互换的。多核苷酸或核酸可以是DNA、RNA或DNA和RNA的组合。本领域技术人员将容易理解，核酸是可以水解成单体“核苷酸”的多核苷酸。
如本文所用，术语“抗体”是指与抗原特异性结合的免疫球蛋白分子。抗体可以是源自天然来源或重组来源的完整免疫球蛋白(例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫反应性部分。术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性、三特异性抗体)、多价抗体(例如二价、三价抗体)、单链抗体、抗体片段(即Fv、Fab、F(ab)2等)和人源化抗体，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。
如本文所用，术语“载体”是指用于将编码信息转移至宿主细胞的任何分子。许多载体是本领域已知的，包括但不限于核酸、线性多核苷酸、与离子或两性化合物相关的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制质粒或病毒。该术语还包括促进核酸转移至细胞中的非质粒和非病毒化合物，例如像聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒载体的实例包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体等。
如本文所用，术语“互补决定区”(同义CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变区的氨基酸残基，其存在对特异性抗原结合有主要贡献。每个可变区结构域(VH或VL)典型地具有三个CDR，标识为CDR1、CDR2和CDR3。VH的CDR在本文中也分别称为CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1对应于VH的CDR1，CDRH2对应于VH的CDR2并且CDRH3对应于VH的CDR3。同样地，VL的CDR在本文中分别称为CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1对应于VL的CDR1，CDRL2对应于VL的CDR2并且CDRL3对应于VL的CDR3。在一个实例中，分配给CDR的氨基酸位置根据Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列],NationalInstitutes of Health[国立卫生研究院],Bethesda,Md.[马里兰州贝塞斯达],1987和1991中Kabat序列(本文也称为“Kabat编号系统”)来定义。在另一实例中，分配给CDR的氨基酸位置根据增强型Chothia编号方案(本文也称为“AbM编号系统”(http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html；Abhinandan和Martin,Mol.Immunology.[分子免疫学]45(14):3832-3839,2008))来定义。在另一实例中，分配给CDR的氨基酸位置根据国际免疫遗传学信息系统(international ImMunoGeneTics information system，IMGT)(Lefranc,Immunology Today.[今日免疫学]18:509,1997；Lefranc,The Immunologist.[免疫学家]7:132-136,1999)来定义。本发明不限于由Kabat编号系统定义的CDR，而是包括所有编号系统，包括但不限于经典编号系统或以下的编号系统：Chothia和Lesk J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917,1987；Chothia等人,Nature[自然]342:877-883,1989；和/或Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]273:927-948,1997；或Honnegher和Plükthun J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]309:657-670,2001的编号系统。
如本文所用，术语“炎症相关因子”是指已知涉及炎症或与炎症相关的任何因子。炎症相关因子包括但不限于蛋白质、核酸和脂质。炎症相关因子可以是炎症过程的诱导物或促进物，或者可以由于炎症增加而被上调和/或分泌。在特定实例中，炎症相关因子是促炎细胞因子或炎症相关趋化因子。如本文所用，术语“细胞因子”是指参与细胞信号传导的小蛋白质或肽，并且通常由免疫细胞(例如像T细胞和巨噬细胞)分泌。促炎细胞因子是参与炎性反应上调的细胞因子，并且包括例如白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17A(IL-17)等。如本文所用，术语“趋化因子”是指主要因其介导趋化性的功能而所知的特殊类型的细胞因子(即，充当其他细胞、特别是免疫细胞的引诱物)。炎症相关趋化因子也称为炎性趋化因子，在炎性反应中发挥积极作用，例如，在将免疫细胞吸引到炎症部位方面。炎症相关趋化因子的实例包括但不限于CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL16、CCL2-20等。
如本文所用，术语“密码子冗余序列”或“密码子冗余”也称为“密码子简并性”，是指指定氨基酸的三碱基对密码子组合的多重性。也就是说，一种氨基酸可以由不同的核酸三联体(密码子)编码。然而，一个核酸三联体(密码子)只能产生单个氨基酸。
术语“编码”是指多核苷酸(或整个多核苷酸)例如基因、cDNA(包括转基因的cDNA)或mRNA中的特定核苷酸序列的固有特性，以用作合成生物过程中其他聚合物和大分子的模板。这些聚合物和大分子具有确定的核苷酸序列(即rRNA、tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码所述蛋白质。编码链(其核苷酸序列与mRNA序列相同)和非编码链(用作基因或cDNA转录的模板)都可以称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物。如果在天然状态下或当通过本领域技术人员熟知的方法操纵时，多核苷酸可以被转录和/或翻译以产生多肽或其片段的mRNA和/或多肽或其片段，那么可称该多核苷酸“编码”该多肽。反义链是这种核酸的互补链，并且可以从中推导出编码序列。
如本文所用，术语“CRISPR-Cas9”是指基因组编辑技术，该技术基于成簇规律间隔回文重复序列(CRISPR)和来自例如酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的CRISPR相关蛋白9核酸酶(Cas9)诱导例如与整合到CRISPR-Cas9复合物中的合成向导RNA(sgRNA)序列互补的特定位置处双链(ds)DNA断裂的能力。这允许基因和/或其他基因组元件(例如转录元件、启动子、启动子增强子、转录增强子、限制性位点、突变、选择标记，例如抗生素选择盒等)的缺失、添加和/或修饰。例如，抗生素选择盒或任何其他选择标记也可以在使用CRISPR技术插入遗传物质之前、同时或之后添加到基因组中。CRISPR(成簇规律间隔短回文重复序列)和CRISPR相关(Cas)基因的功能对于特定细菌和古细菌的适应性免疫至关重要，使生物体能够响应并消除入侵的遗传物质。迄今为止，已经鉴定出多种类型的CRISPR机制，其中II型是研究最深入的。此外，还开发了其他CRISPR组合，例如CRISPR-Cpf1。本文还考虑了CRISPR技术的使用，其中Cas蛋白或功能类似的蛋白不是从酿脓链球菌中分离的。Cas 9蛋白的实例是但不限于分离自酿脓链球菌、金黄色葡萄球菌、或古细菌界的任何代表(Woese,Kandler和Wheelis,1990)的Cas 9蛋白或具有相同功能的蛋白。Cas 9蛋白也可以被所称的CasX和CasY蛋白替代。在另一实例中，Cpf1蛋白或具有相同功能的蛋白的实例分离自但不限于氨基酸球菌属物种和毛螺菌科。在适应性免疫方面，CRISPR-Cas9介导的防御机制如下：来自病毒或质粒的入侵DNA被切成小片段，并在一系列短重复序列(大约20bp)中掺入CRISPR基因座中。基因座被转录，然后处理转录物以产生小RNA(crRNA–CRISPR RNA；在体外环境中也称为合成向导RNA(sgRNA))，它们用于向导效应核酸内切酶，这些核酸内切酶根据序列互补性靶向入侵DNA。在基因编辑方面，CRISPR-Cas9按照相同的原理工作，其中sgRNA向导效应核酸酶到达DNA的所需部分，在其中进行切除。
如本文所用，术语“激活”是指免疫细胞(例如T细胞)已被充分刺激以显示可检测的细胞增殖或细胞因子产生的状态。在本文披露的一个实例中，激活是通过嵌合抗原受体(CAR)与其一种或多种靶抗原结合来刺激的结果。在本披露的特定实例中，其中经修饰T细胞包含能够与一种或多种促炎细胞因子结合的嵌合抗原受体，该一种或多种促炎细胞因子与嵌合抗原受体的结合通过嵌合抗原受体的一个或多个信号传导结构域的活性来激活经修饰T细胞。
如本文所用，术语“免疫耐受”(也称为免疫学耐受性或免疫耐受性)是指免疫系统对物质无反应性或反应性降低的状态，否则这些物质可在人受试者中局部或全身引发免疫反应。
如本文所用，术语“自体”是指源自同一个体的任何材料，随后将该材料重新引入该个体。相比之下，术语“同种异体”是指源自不同个体的移植物。
如本文所用，术语“Treg”是指调节性T细胞(一种也称为抑制性T细胞的T细胞亚群)，具有以下特征中的至少一种：表达CD4；表达FOXP3；表达CD25、CD4+、FOXP3+和CD25+T细胞；下调效应T细胞、CD4+FOXP3+CD25(高)T细胞诱导和增殖的能力；或比效应T细胞更大的T细胞受体(TCR)多样性。
如本文所用，术语“自身免疫性疾病”如本文所用定义为宿主针对其自身的反应的结果或导致这种结果的疾病或障碍。因此，自身免疫性疾病是对自身抗原的不适当和过度反应的结果。自身免疫性疾病的实例包括但不限于爱迪生氏病(Addision's disease)、斑秃(alopecia greata)、强直性脊柱炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性腮腺炎、克罗恩病、糖尿病(I型)、营养不良型大疱性表皮松解症、附睾炎、肾小球肾炎、移植器官等的全身排斥、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome)、桥本氏病(Hashimoto's disease)、溶血性贫血、炎症、系统性红斑狼疮(狼疮)、多发性硬化症、炎性肠病、重症肌无力、寻常天疱疮、银屑病性关节炎、银屑病、风湿病、风湿热、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征(Sjogren's syndrome)、脊柱关节病、甲状腺炎、血管炎、白癜风、粘液性水肿、恶性贫血和溃疡性结肠炎等。
如本文所用，术语“可操作地连接”是指第一和第二核酸序列之间的连接，由此该连接允许两个核酸序列发生功能性表达。换言之，当第一核酸序列被放置成与第二核酸序列有功能关系时，该第一核酸序列与该第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则该启动子与该编码序列可操作地连接。通常，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且在需要连接两个蛋白质编码区时，在同一阅读框中。
如本文所用，术语“受试者”是指能够患有以下的任何动物：自身免疫性疾病；移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、细胞因子释放综合征或涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症。特别感兴趣的受试者是人类，以及科学相关的物种，例如小鼠、大鼠、雪貂、豚鼠、仓鼠、非人灵长类动物、狗、猪和绵羊，或经济相关的动物，例如马、狗、猫和牛。在优选实施例中，受试者是人。
提及“向受试者提供”涉及向该受试者施用遗传修饰细胞。替代性地，该遗传修饰细胞可以在受试者体内产生。例如，可以在体内产生遗传修饰细胞，使得受试者具有内源性遗传修饰细胞群。用于这种体内产生的合适手段是本领域已知的并且包括受试者的基因疗法。
具体实施方式
调节性T细胞(Treg，T细胞的子集)在外周免疫耐受的诱导和维持中发挥着重要作用，并且是防止过度免疫反应和自身免疫的关键。
过继细胞疗法的进步使研究人员/临床医生能够通过引入编码合成嵌合抗原受体(CAR)的基因，赋予患者自身的免疫细胞对选定的一种或多种抗原的反应性。
为此，根据本披露利用Treg的功能来减弱或抑制免疫反应。这为患有炎性障碍的受试者和接受移植的受试者提供了治疗选择。如本文所示，通过基因修饰增强Treg或类似免疫抑制细胞的抑制特性提供了治疗自身免疫性障碍、移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、细胞因子释放综合征和涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症的模式。
本文披露了进行转导以表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的过继细胞转移策略。本文披露的嵌合抗原受体不是如大多数抗癌CAR T细胞疗法中所见那样与肿瘤特异性抗原结合并促进免疫反应/活性，而是与促炎细胞因子结合或能够与促炎细胞因子结合。一旦激活，包含本文披露的嵌合抗原受体的经修饰T细胞已证明导致效应T细胞的死亡和/或抑制，从而抑制免疫反应和活性。本文还披露了用于在需要耐受的疾病(例如自身免疫和移植排斥)中调节炎性免疫反应和诱导长期无药物免疫耐受的材料和方法。
本发明的组合物和方法使用经修饰细胞，优选地经修饰的调节性T细胞(Treg)或诱导多能干细胞(iPSC)来源的T细胞来调节与同种异体翻译和自身免疫性疾病相关的免疫反应。经修饰细胞(例如经修饰的Treg或iPSC来源的T细胞)与带有单链可变片段(scFv)的嵌合抗原受体(CAR)组合，该单链可变片段与炎症相关因子结合，从而减少和消除炎症。
嵌合抗原受体
因此，在一方面，本披露涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中该胞外结构域结合一种或多种炎症相关因子。在特定实例中，该一种或多种炎症相关因子是促炎细胞因子或炎症相关趋化因子。在特定实例中，该一种或多种炎症相关因子选自由以下组成的组：白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17A(IL-17)、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL16和CCL2-20。
在特定实例中，本披露涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中该胞外结构域结合一种或多种促炎细胞因子。在另一个实例中，该一种或多种促炎细胞因子选自由以下组成的组：白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素17A(IL-17)。在一个实例中，该促炎细胞因子是肿瘤坏死因子α(TNF-α)。在一个实例中，该促炎细胞因子是干扰素γ(IFN-γ)。在一个实例中，该促炎细胞因子是白细胞介素8(IL-8)。
在特定实例中，本文披露的嵌合抗原受体包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中胞外结构域包含结合TNF-α的scFv，并且其中铰链区是CD8a或CD28铰链区，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域，并且共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域。在特定实例中，本文披露的嵌合抗原受体包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中胞外结构域包含结合IFN-γ的scFv，并且其中铰链区是CD8a或CD28铰链区，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域，并且共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域。在另一个特定实例中，本文披露的嵌合抗原受体包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中胞外结构域包含结合IL-17a的scFv，并且其中铰链区是CD8a或CD28铰链区，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域，并且共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域。
抗原结合结构域
在实例中，本文披露的嵌合抗原受体的胞外结构域包含一个或多个抗原结合结构域。
抗原识别结构域可以是能够识别一种或多种炎症相关因子(例如促炎细胞因子或炎症相关趋化因子)的任何合适的结构域。如本说明书通篇所用，术语“抗原识别结构域”是指提供CAR针对一种或多种炎症相关因子的特异性的CAR部分。抗原识别结构域可以是CAR胞外区的全部，或者可以仅仅是CAR胞外区的一部分。合适的抗原识别结构域包括但不限于与结合炎症相关因子的抗体或其片段的抗原结合位点具有序列同源性的多肽。因此，在本发明任何方面的一些实施例中，抗原识别结构域包括与结合炎症相关因子的抗体或其片段具有同源性的氨基酸序列。在一些实施例中，抗原识别结构域的部分包括与结合炎症相关因子的抗体或其片段具有同源性的氨基酸序列。来源同源抗体序列可以是对炎症相关因子具有亲和力的抗体的任何合适序列。例如，该序列可以与源自一种或多种以下物种的抗体具有序列同源性：人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、兔、绵羊、山羊、雪貂、犬、鸡、猫、豚鼠、仓鼠、马、牛或猪。抗原识别结构域可以与杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体的序列具有序列同源性。当同源抗体序列的来源物种不是人时，抗体优选是人源化抗体。同源抗体序列也可以来自非哺乳动物物种，例如软骨鱼(例如鲨鱼IgNAR抗体——参见WO 2012/073048)。替代性地，抗原结合结构域可包括提供类似于鲨鱼抗体的功能的经修饰的蛋白质支架，例如具有基于鲨鱼IgNAR抗体的结合部分的i-体(i-body)(参见WO 2005/118629)。另外，抗原识别结构域可以是、可以源自任何其他合适的结合分子或肽，或者可以与任何其他合适的结合分子或肽具有序列同源性，该结合分子或肽可以以足以激活CAR信号传导结构域的亲和力选择性地与炎症相关因子相互作用。用于鉴定抗原结合蛋白的方法是本领域已知的，例如尤其是淘选噬菌体展示文库、蛋白质亲和色谱法、共免疫沉淀和酵母双杂交系统(参见Srinivasa Rao,V.等人Int J Proteomics[国际蛋白质组学杂志],2014；文章ID 147648)。
在一些实施例中，CAR的抗原识别结构域包括与结合炎症相关因子的抗体的片段-抗原结合(Fab)部分的氨基酸序列的氨基酸序列同源性。如本领域将理解的，抗体的Fab部分由抗体的重链和轻链各自的一个恒定区和一个可变区构成。Fab是抗体的抗原决定区，可以通过酶促切割抗体的Fc区来产生。
在本发明任何方面的一些实施例中，抗原识别结构域包括与结合炎症相关因子的单链可变片段(scFv)的氨基酸序列的氨基酸序列同源性。如本领域将理解的，scFv是包含两个部分的融合蛋白，这两个部分可与抗体的可变重链(VH)和可变轻链(VL)具有同源性或可与之相同，其中这两个部分通过接头肽连接在一起。例如，scFv可包括源自识别炎症相关因子的抗体的VH和VL氨基酸序列。在该背景下，应当理解术语“源自”不是指多肽本身的来源，而是指构成抗原结合区的部分的氨基酸序列的来源。因此，术语“源自”包括以合成、人工方式或以其他方式产生的多肽，这些多肽与结合炎症相关因子的抗体具有序列同一性。
在一些实施例中，抗原识别结构域包括与结合炎症相关因子的多价scFv的氨基酸序列的氨基酸序列同源性。在一些实施例中，多价scFv是二价或三价scFv。
在本发明任何方面的一些实施例中，抗原识别结构域具有结合炎症相关因子的单抗体结构域(sdAb)的氨基酸序列。
在一些实例中，该/每个抗原结合结构域独立地选自由以下组成的组：抗体、抗体片段、单链可变片段(scFv)、趋化因子受体或其功能变型。在一个特定实例中，该趋化因子受体进一步选自由以下组成的组：CCR5、CXCR3、CCR1和CCR2。在另一个特定实例中，该/每个抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
在特定实例中，该胞外结构域包含以下任何一种或多种：结合TNF-α的scFv、结合IFN-γ的scFv、以及结合IL-17a的scFv。在更特定的实例中，i)的scFv具有SEQ ID:1所示氨基酸序列；ii)的scFv具有SEQ ID:2所示氨基酸序列；并且iii)的scFv具有SEQ ID:3所示氨基酸序列。
当比较氨基酸序列时，应当在由多肽长度确定的比较窗口内比较序列。该比较窗口可包含与参考序列(其不包含添加或缺失)相比约20％或更少的添加或缺失(即空位)，以实现两个序列的最佳比对。用于比对比较窗口的序列的最佳比对可以通过算法的计算机化实施来进行，如例如由Altschul等人,1997,Nucl.Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402披露的BLAST系列程序。全局比对程序也可用于比对大小大致相等的相似序列。全局比对程序的实例包括：NEEDLE(可从www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/获得)，它是EMBOSS包(Rice P等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势],16:276-277)的一部分；以及GGSEARCH程序(可从fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_www.cgi？rm＝compare&pgm＝gnw获得)，它是FASTA包(Pearson W和Lipman D,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],85:2444-2448)的一部分。这两个程序都基于Needleman-Wunsch算法，该算法用于查找两个序列沿其整个长度的最佳比对(包括空位)。序列分析的详细讨论也可参见Ausubel等人的第19.3单元(“Current Protocols in Molecular Biology[当代分子生物学实验手册]”John Wiley&Sons Inc[约翰威利父子出版公司],1994-1998,第15章,1998)。
如上所述，功能变体可以包含相对于本文例如表2中描述的氨基酸序列之一的单独氨基酸取代、缺失或插入。例如，本领域技术人员将认识到任何氨基酸都可以被化学上(功能上)相似的氨基酸取代并保留多肽的功能。此类保守氨基酸取代是本领域熟知的。表2中的以下各组各自含有彼此保守取代的氨基酸。
表2示例性氨基酸保守取代
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此外，如果需要，可以将非天然氨基酸或化学氨基酸类似物作为取代或添加引入本文涵盖的多肽中。此类氨基酸包括但不限于常见氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、2-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟氨基酸、设计氨基酸(例如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸)和一般氨基酸类似物。
铰链
在一个实例中，本文披露的嵌合抗原受体进一步包含位于胞外结构域和跨膜结构域之间的铰链区。在特定实例中，铰链区选自由以下组成的组：CD8a铰链、CD28铰链、IgG铰链、IgD铰链及其功能变型。例如，铰链区是CD8a铰链，其包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:164所示氨基酸序列。在另一实例中，铰链区是IgG铰链区(如IgG4铰链区)，其包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:156所示氨基酸序列。在又一实例中，铰链区是IgD铰链区，其包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:157所示氨基酸序列。在优选实例中，铰链区是CD28铰链区。在此特定实例中，铰链区包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:7所示氨基酸序列或其密码子冗余序列。在某些实施例中，铰链区包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:7、156、157或164所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
信号传导结构域
在另一实例中，本文披露的嵌合抗原受体的胞内结构域包含信号传导结构域和任选地一个或多个共刺激结构域。
在实例中，信号传导结构域包括源自激活受体的部分。
如本说明书通篇所用，术语“部分”当关于激活受体或共刺激受体使用时，涉及包括如下序列的受体的任何区段，该序列负责或参与在该受体与其同源抗原或配体相互作用后胞内信号传导级联的启动/诱导。下文概述了通过CD3启动/诱导T细胞受体(TCR)的胞内信号传导级联的实例。
尽管不希望受理论束缚，TCR的胞外部分主要包含克隆型TCRα和TCRβ链(TCRα/β受体)或TCRγ和TCRδ链(TCRγδ受体)的异二聚体。这些TCR异二聚体通常缺乏固有的信号传导转导能力，因此它们与CD3的多个信号转导亚基(主要是CD3-ζ、CD3-γ、CD3-δ和CD3-ε)非共价缔合。CD3的γ、δ和ε链中每一个都有胞内(细胞质)部分，其中包括单个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)，而CD3-ζ链包括三个串联ITAM。在MHC存在的情况下，TCR与其同源抗原结合并且与必需的共受体(例如CD4或CD8)缔合后，信号传导就会启动，导致酪氨酸激酶(即Lck)磷酸化CD3链的一个或多个胞内ITAM内的两个酪氨酸残基。随后，招募第二酪氨酸激酶(ZAP-70–本身由Lck磷酸化激活)来对ITAM进行二磷酸化。结果，几个下游靶蛋白被激活，最终引起胞内构象变化、钙动员和肌动蛋白细胞骨架重新排列，这些组合起来最终引起转录因子的激活和T细胞免疫反应的诱导。
如本说明书通篇所用，术语“激活受体”涉及形成T细胞受体(TCR)复合物的组分或参与其形成的受体或共受体，或由于识别抗原性或其它免疫原性刺激物而参与免疫细胞特异性激活的受体。
此类激活受体的非限制性实例包括T细胞受体-CD3复合物(CD3-ζ、CD3-γ、CD3-δ和CD3-ε)、CD4共受体、CD8共受体、FC受体或自然杀伤(NK)细胞相关激活受体如LY-49(KLRA1)、自然细胞毒性受体(NCR，优选地NKp46、NKp44、NKp30或NKG2或CD94/NKG2异二聚体)的组分。因此，在一些实施例中，信号传导结构域包括源自CD3共受体复合物(优选地CD3-ζ链或其部分)、CD4共受体、CD8共受体、Fc受体(FcR)(优选地FcεRI或FcγRI)或NK相关受体如LY-49的成员中任何一个或多个的部分。
在一些实施例中，信号传导结构域包括源自CD3(优选地CD3-ζ链或其部分)或FC受体(优选地FcεRI或FcγRI)中任一种的部分。
激活受体部分的各种组合可用于形成CAR的跨膜(TM)和胞内(IC)部分，例如CD3ζTM和CD3ζIC(Landmeier S.等人Cancer Res.[癌症研究]2007；67:8335-43；Guest RD.等人,J Immunother.[免疫疗法杂志]2005,28:203-11；Hombach AA.等人J Immunol.[免疫学杂志]2007；178:4650-7)、CD4 TM和CD3ζIC(James SE.等人J Immunol.[免疫学杂志]2008；180:7028-38)、CD8 TM和CD3ζIC(Patel SD.等人Gene Ther.[基因疗法]1999；6:412-9)、以及FcεRIγTM和FcεRIγIC(Haynes NM.等人J Immunol.[免疫学杂志]2001；166:182-7；Annenkov AE.等人J Immunol.[免疫学杂志]1998；161:6604-13)。
在实例中，信号传导结构域包含一种或多种基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。在特定实例中，该信号传导结构域包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种的胞内信号传导结构域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b、CD66d及其功能变型/片段。在另一个特定实例中，该信号传导结构域是CD3ζ或其功能变体的胞内信号传导结构域。
在一个特定实例中，信号传导结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID:8所示氨基酸序列。在某些实施例中，信号传导结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列或其密码子冗余序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
共刺激结构域
如本说明书通篇所用，术语“共刺激受体”涉及在抗原特异性诱导激活受体时协助激活免疫细胞的受体或共受体。如将理解的，共刺激受体不需要抗原的存在并且不是抗原特异性的，但典型地是两个信号之一，另一个是诱导免疫细胞反应所需的激活信号。在免疫反应的背景下，共刺激受体典型地通过在抗原呈递细胞(APC)(例如树突状细胞或巨噬细胞)表面上其表达的配体的存在而激活。特别地，关于T细胞，共刺激对于引起细胞激活、增殖、分化和存活(所有这些通常都在T细胞激活的范畴内提及)是必需的，而在缺乏共刺激的情况下将抗原呈递至T细胞可导致无反应性、克隆缺失和/或抗原特异性耐受的形成。
T细胞共刺激受体的非限制性实例包括CD27、CD28、CD30、CD40、DAP10、OX40、4-1BB(CD137)、ICOS。特别地，CD27、CD28、CD30、CD40、DAP10、OX40、4-1BB(CD137)和ICOS均代表增强T细胞反应激活的“阳性”共刺激分子。因此，在本发明任何方面的一些实施例中，信号传导结构域包括源自CD27、CD28、CD30、CD40、DAP10、OX40、4-1BB(CD137)和ICOS中任一种或多种的部分。
在本发明任何方面的一些实施例中，信号传导结构域包括源自CD28、OX40或4-1BB共刺激受体的部分。在一些实施例中，信号传导结构域包括CD28共刺激受体的部分。在一些实施例中，信号传导结构域包括OX40共刺激受体的部分。
共刺激受体部分的各种组合可用于形成CAR的跨膜(TM)和胞内(IC)部分。例如，CD8 TM和DAP10 IC或CD8 TM和4-1BB IC(Marin V.等人Exp Hematol.[实验血液学]2007；35:1388-97)、CD28 TM和CD28 IC(Wilkie S.等人J Immunol.[免疫学杂志]2008；180:4901-9；Maher J.等人Nat Biotechnol.[自然生物技术]2002；20:70-5)以及CD8 TM和CD28IC(Marin V.等人Exp Hematol.[实验血液学]2007；35:1388-97)。
在一个实例中，该一个或多个共刺激结构域中的每一个包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种的胞内信号传导结构域：CD28、CD28T、OX40、4-1BB/CD137、CD2、CD4、CD5、CD7、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD 33、CD37、CD40、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、PD-l、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-l(LFA-l/CD11a/CDl8)、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHC I类分子、TNF、TNFr、整合素、信号传导淋巴细胞激活分子、BTLA、Toll配体受体、ICAM-l、B7-H3、CDS、ICAM-l、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD 103、IT GAL、CD1la、LFA-l、ITGAM、CD11b、ITGAX、CDl1c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD 18、LFA-l、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD 150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CDl9a、CD83配体、FOXP3、其功能变型/片段及组合。在另一实例中，胞内结构域包含FOXP3。在特定实例中，该一个或多个共刺激结构域中的每一个包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种的胞内信号传导结构域：CD28、41BB、IL2Rb、TLR2、MyD88和CD40。在优选实例中，该一个或多个共刺激结构域包含CD28的胞内信号传导结构域。
在一个特定实例中，信号传导结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:9所示氨基酸序列。在某些实施例中，信号传导结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID:9所示氨基酸序列或其密码子冗余序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
上述激活和共刺激受体的序列信息可以在各种数据库中轻松获得。例如，表3中提供了这些受体的人氨基酸、基因和mRNA序列的实施例。
表3
激活和共刺激受体序列信息汇总
虽然表3是参考人类激活和共刺激受体提供的，但本领域技术人员应当理解，每种受体的同源和直系同源形式存在于大多数哺乳动物和脊椎动物物种中。因此，上述序列仅作为可包含在本文所述的CAR中的受体序列的非限制性实例提供，并且来自任何期望物种的同源和直系同源序列可用于产生适合于给定物种的CAR。
在一个实例中，胞内结构域和/或胞外结构域包含自切割肽。在另一实例中，自切割肽是但不限于P2A、E2A、F2A和T2A。在又一实例中，自切割肽是T2A。
跨膜结构域
在另一实例中，本文披露的嵌合抗原受体的跨膜结构域是选自由以下组成的组的蛋白质的跨膜结构域：CD28、CD28T、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-l(PD-1)、诱导型T细胞共刺激因子(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-l、CD11a/CD18)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHC 1类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白、细胞因子受体、整合素及其功能变型/片段。在特定实例中，跨膜结构域是CD3ε跨膜结构域或其功能变体。
在特定实例中，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，优选地，CD28跨膜结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID:10所示氨基酸序列。在某些实施例中，CD28跨膜结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其密码子冗余序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
在本文披露的嵌合抗原受体的特定实例中，铰链区是IgG4铰链，跨膜结构域是CD28跨膜结构域，信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域，并且共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域。
在更特定的实例中，嵌合抗原受体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:161或SEQ ID NO:165的氨基酸序列或表1中描述的任何其他CAR氨基酸序列。在另一特定实例中，嵌合抗原受体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:161或SEQ ID NO:165的氨基酸序列，其中“ASA”残基缺失或被丙氨酸和丝氨酸的任何组合、或3个氨基酸的任何其他组合取代。在更特定的实例中，嵌合抗原受体包含以下或由以下组成：由SEQ ID NO:11的核苷酸序列编码的氨基酸序列。
核酸
本披露提供了包含编码本文披露的嵌合抗原受体的核苷酸序列的第一多核苷酸、核酸或核酸构建体。例如，核酸可以包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:11的核苷酸序列。
本披露还提供了包含以下或由以下组成的多核苷酸、核酸或核酸构建体：SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15的核苷酸序列。
本披露还提供了包含以下或由以下组成的多核苷酸、核酸或核酸构建体：编码表1中描述的氨基酸序列中任一种或多种的核苷酸序列。
本披露还提供了包含以下或由以下组成的多核苷酸、核酸或核酸构建体：SEQ IDNO:11所示CD28铰链，或SEQ ID NO:14或15所示IgG4铰链，SEQ ID NO:11、14或15所示CD28跨膜结构域，SEQ ID NO:11、14或15所示CD28共刺激结构域；和/或SEQ ID NO:11、14或15所示CD3ζ信号传导结构域的核苷酸序列。
核酸构建体可进一步包含以下一种或多种：一个或多个宿主的复制起点；在一个或多个宿主中有活性的选择性标记基因；和/或一个或多个转录控制序列。
如本文所用，术语“选择性标记基因”包括赋予其表达的细胞表型的任何基因，以促进用构建体转染或转化的细胞的鉴定和/或选择。
“选择性标记基因”包括任何核苷酸序列，当由用构建体转化的细胞表达时，这些核苷酸序列赋予细胞表型，从而促进这些转化细胞的鉴定和/或选择。编码合适的选择性标记的一系列核苷酸序列是本领域已知的(例如Mortesen,RM.和Kingston RE.Curr ProtocMol Biol[当代分子生物学实验手册],2009；第9.5单元)。编码选择性标记的示例性核苷酸序列包括：腺苷脱氨酶(ADA)基因；胞嘧啶脱氨酶(CDA)基因；二氢叶酸还原酶(DHFR)基因；组氨醇脱氢酶(hisD)基因；嘌呤霉素-N-乙酰转移酶(PAC)基因；胸苷激酶(TK)基因；黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(XGPRT)基因或抗生素抗性基因，例如氨苄青霉素抗性基因、嘌呤霉素抗性基因、博莱霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因；荧光报告基因，例如绿色、红色、黄色或蓝色荧光蛋白编码基因；以及基于发光的报告基因，例如荧光素酶基因，以及其他允许使用荧光激活细胞分选(FACS)等技术对细胞进行光学选择的基因。
此外，应当注意，选择性标记基因可以是构建体中的独特开放阅读框，或者可以表达为与另一种多肽(例如CAR)的融合蛋白。
如上所述，核酸构建体还可以包含一个或多个转录控制序列。术语“转录控制序列”应当理解为包括影响可操作地相连的核酸的转录的任何核酸序列。转录控制序列可包括例如前导序列、聚腺苷酸化序列、启动子、增强子或上游激活序列、以及转录终止子。典型地，转录控制序列至少包括启动子。如本文所用，术语“启动子”描述赋予、激活或增强细胞中核酸表达的任何核酸。
在本发明任何方面的一些实施方案中，至少一个转录控制序列与本发明的核酸分子可操作地相连。出于本说明书的目的，当转录控制序列能够促进、抑制或以其他方式调节核酸分子的转录时，将该转录控制序列视为与给定核酸分子“可操作地相连”。因此，在一些实施例中，核酸分子受转录控制序列的控制，例如组成型启动子或诱导型启动子。
“核酸构建体”可以呈任何合适的形式，例如呈质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、载体等的形式，该形式在与适当的控制元件缔合时能够复制并且可以在细胞之间转移构建体中包含的基因序列。因此，该术语包括克隆和表达载体以及病毒载体。在一些实施例中，核酸构建体是载体。在一些实施例中，载体是病毒载体。
启动子可以相对于表达发生的细胞、组织或器官组成型或差异性地调节可操作地相连的核酸分子的表达。因此，启动子可以包括例如组成型启动子或诱导型启动子。“组成型启动子”是在大多数环境和生理条件下有活性的启动子。“诱导型启动子”是在特定环境或生理条件下有活性的启动子。本发明考虑使用在感兴趣的细胞中有活性的任何启动子。因此，本领域普通技术人员可以容易地确定多种启动子。
哺乳动物组成型启动子可以包括但不限于猿猴病毒40(SV40)、巨细胞病毒(CMV)、P-肌动蛋白、泛素C(UBC)、延伸因子-1α(EF1A)、磷酸甘油酸激酶(PGK)和CMV早期增强子/鸡β肌动蛋白(CAGG)。
诱导型启动子可以包括但不限于化学诱导型启动子和物理诱导型启动子。化学诱导型启动子包括具有受化学化合物(例如醇、抗生素、类固醇、金属离子或其他化合物)调节的活性的启动子。化学诱导型启动子的实例包括：四环素调节的启动子(例如参见美国专利5,851,796和美国专利5,464,758)；类固醇反应性启动子，例如糖皮质激素受体启动子(例如参见美国专利5,512,483)、蜕皮素受体启动子(例如参见美国专利6,379,945)等；以及金属反应性启动子，例如金属硫蛋白启动子(例如参见美国专利4,940,661、美国专利4,579,821和US 4,601,978)等。
如上所述，控制序列还可以包括终止子。术语“终止子”是指转录单元末端的DNA序列，其发出转录终止信号。终止子是通常含有聚腺苷酸化信号的3'-非翻译DNA序列，有助于将聚腺苷酸序列添加到初级转录物的3'-末端。与启动子序列一样，终止子可以是在其预期使用的细胞、组织或器官中可操作的任何终止子序列。合适的终止子是本领域技术人员已知的。
如将理解的，核酸构建体可进一步包括额外的序列，例如允许增强的表达、细胞质或膜运输和定位信号的序列。特定的非限制性实例包括内部核糖体进入位点(IRES)。
本发明延伸至基本上如本文所述的所有遗传构建体。这些构建体可进一步包括旨在用于在真核生物中维持和/或复制遗传构建体和/或将遗传构建体或其部分整合到真核细胞基因组中的核苷酸序列。
用于将外源遗传物质例如核酸有意引入(转染/转导)至真核细胞中的方法是本领域已知的。如将理解的，最适合将核酸构建体引入所需宿主细胞的方法取决于许多因素，例如核酸构建体的大小、宿主细胞的类型、所需的转染/转导效率以及转染/转导细胞的最终期望或所需的生存力。此类方法的非限制性实例包括：使用阳离子聚合物、磷酸钙等化学物质或脂质体和树枝状聚合物等结构进行化学转染；非化学方法，例如电穿孔、声穿孔、热休克或光转染；基于粒子的方法，例如“基因枪”递送、磁转染、或刺穿转染或病毒转导。
将根据所需的转染/转导方法来选择核酸构建体。在一些实施例中，核酸构建体是病毒载体，并且用于将核酸构建体引入宿主细胞的方法是病毒转导。本领域已知利用病毒转导来引发PBMC中CAR表达(Parker,LL.等人Hum Gene Ther.[人类基因疗法]2000；11:2377-87)并且更普遍地利用逆转录病毒系统转导哺乳动物细胞(Cepko,C.和Pear,W.CurrProtoc Mol Biol.[当代分子生物学实验手册]2001,第9.9单元)的方法。在其他实施例中，核酸构建体是质粒、粘粒、人工染色体等，并且可以通过本领域已知的任何合适的方法转染至细胞中。
除了本文披露的结构域和区域之外，本文所示的核酸序列还可以包含专门用于表达CAR构建体的启动子序列，以及本文披露的CAR构建体的功能性表达可能需要或需要的任何其他序列。在一个实例中，用于表达CAR构建体的核酸序列在其5’或N末端包含启动子。在另一实例中，CAR构建体的表达序列包含前导序列(也可以称为信号肽)，由此前导序列可操作地连接至启动子序列。在一个实例中，启动子是MNDU3。在另一实例中，前导序列是CD8前导序列。在一个实例中，用于表达的序列同时包含MNDU3启动子和CD8前导序列。CAR构建体表达的示例序列可参见例如图2A和2B。因此，本文披露的启动子和前导序列被插入或存在于编码本文披露的CAR构建体的胞外结构域的序列的上游，并且与其可操作地连接。
在另一方面，本披露涉及一种第一多核苷酸，其编码本文披露的嵌合抗原受体。
在另一方面，本披露还涉及一种载体，其包含本文披露的第一多核苷酸。在特定实例中，该载体是病毒载体，任选地是慢病毒载体。
经修饰细胞
在本披露的另一方面，提供了一种经修饰细胞，优选地经修饰T细胞，其包含本文披露的嵌合抗原受体，本文披露的第一多核苷酸、核酸或核酸构建体，和/或本文披露的载体。
待遗传修饰的细胞可以从任何合适的来源获得。在本发明任何方面的一些实施例中，待遗传修饰的细胞是自体细胞，是待治疗的受试者的自体细胞。有利地，自体细胞不会被受试者的免疫系统识别为“非自身”，因此将被受试者耐受。然而，自体细胞可能不容易获得。因此，在本发明的一些实施例中，待遗传修饰的细胞是同种异体或异源细胞。
在一个实例中，本披露的经修饰T细胞是由调节性T细胞(Treg)修饰而来。在此实例中，该Treg是从受试者分离的，或者是从受试者分离的并且离体扩增的。在实例中，在分离并任选地离体扩增Treg后，通过转染本披露的一种或多种载体来修饰Treg。在另一实例中，该经修饰T细胞源自诱导多能干细胞(iPSC)。在特定实例中，通过转染本披露的一种或多种载体来修饰iPSC以得到本披露的经修饰T细胞。在优选实例中，iPSC源自供体T细胞。
根据本披露产生遗传修饰细胞后，可能需要在体外扩增细胞群以增加可用于治疗的细胞总数。这可以使用将细胞暴露于CAR的抗原的步骤来完成。因此，本披露还提供了一种体外扩增本文所述的遗传修饰细胞的方法，该方法包括将细胞暴露于CAR的抗原的步骤。在一些实施例中，该方法包括将细胞暴露于细胞因子的进一步步骤。例如，本披露还包括一种体外扩增遗传修饰细胞的方法，该方法包括将细胞暴露于CAR的抗原并同时将细胞暴露于细胞因子的步骤。
在另一方面，本披露提供了一种体外扩增本文所述的遗传修饰细胞的方法，该方法包括将细胞暴露于固定化的抗CD3和抗CD28抗体。在一些实施例中，抗体固定在珠状基质(例如“人类激活因子”DynabeadsTM)上。在一些实施例中，抗体固定在替代性表面上，例如组织培养容器、培养瓶、板或生物反应器的表面。
如本领域技术人员将理解的，取决于CAR的信号传导结构域，CAR对其同源抗原的识别将引起胞内信号传导，其可最终引起细胞增殖。因此，少量的细胞或者甚至单独的细胞可以被扩增(或者在单个细胞的情况下，克隆扩增)以形成有治疗意义的数量。该过程可通过提供细胞因子进一步增强。
遗传修饰细胞的递送或施用可以是单独的细胞的递送或施用，或配制成合适的药物组合物的细胞的递送或施用。因此，本发明提供了一种药物组合物，其包含遗传修饰细胞和药学上可接受的载剂。
本领域已知用于提供用于免疫疗法的含有CAR的细胞的方法(参见例如Kershaw,MH.等人Clin Cancer Res.[临床癌症研究]2006；12(20):6106-15；Parker LL.等人HumGene Ther[人类基因疗法]2000；11:2337-87)。此外，用于制备、扩增和评估哺乳动物CAR表达细胞的方案和方法是本领域已知的(参见例如Cheadle,EJ.等人Antibody Engineering:Methods and Protocols[抗体工程：方法和方案],第二版,Methods in MolecularBiology[分子生物学方法],第907卷:645-66)并在下文实例中进行了总结。
考虑到待施用的细胞的特定物理和化学特征，药物组合物还可以包含一种或多种药学上可接受的添加剂，包括药学上可接受的盐、氨基酸、多肽、聚合物、溶剂、缓冲剂、赋形剂和填充剂。在一些实施例中，药物组合物包含遗传修饰细胞在合适的介质(例如等渗盐水溶液)中的悬浮液。在一些实施例中，药物组合物可以包含合适的佐剂，例如如上所述的一种或多种细胞因子。
药物组合物的施用还可以通过肠胃外方式，包括静脉内、心室内、腹膜内、肌内或颅内注射，或局部注射至肿瘤或癌肿块的部位。
免疫抑制分子和诱导型系统
在实例中，经修饰T细胞表达一种或多种免疫抑制分子。表达可以是组成型表达或诱导型表达。在特定实例中，当经修饰T细胞被激活时，一种或多种免疫抑制分子被表达。在某些实例中，T细胞被本文披露的嵌合抗原受体激活并由经修饰T细胞表达，特别是通过其信号传导结构域。
在特定实例中，诱导型表达是由NFAT诱导型系统实现的。在特定实例中，经修饰T细胞包含第二多核苷酸，该第二多核苷酸编码包含一个或多个NFAT(活化T细胞核因子)结合位点的启动子，以及一种或多种免疫抑制分子；其中NFAT与该启动子的结合诱导该一种或多种免疫抑制分子的表达。在一个实例中，本文披露的第一和第二多核苷酸均从一个核酸表达序列表达。本技术领域已知NFAT是对T细胞激活(通过CD3ζ和CD28信号传导)的主要反应，因此是用于将免疫抑制因子的表达与本文披露的嵌合抗原受体的激活结合的优选分子。此类免疫抑制因子是但不限于IL-10、TGF-β、FOXP3及其组合。然而，许多其他非CD3ζ依赖性方式可能潜在地诱导NF-kB等因子，并且可以相应地修饰嵌合抗原受体。在更特定的实例中，启动子包含或者是白细胞介素-2(IL-2)或其衍生物的启动子。IL2启动子中的NFAT基序已得到充分表征，因此是启动子的优选实例。本领域通常已知NFAT结合位点的数量可以决定激活水平。在特定实例中，启动子是包含6个NFAT结合位点的6(NFAT)最小IL-2启动子。在第二多核苷酸编码多于一种免疫抑制分子的实例中，这些免疫抑制分子的编码序列可以被一个或多个接头序列分开。在某些实例中，该一个或多个接头序列编码甘氨酸-丝氨酸(GS)接头，例如GSG接头。在另一个实例中，该一个或多个接头序列中的每一个进一步编码自切割肽，优选地T2A肽。在实例中，一种或多种免疫抑制分子能够抑制效应T细胞的活性或能够诱导效应T细胞的无反应性。在特定实例中，该一种或多种免疫抑制分子选自由以下组成的组：IL-10、TGF-β、CTLA-4、LAG3、PD-L1和PD-1。在特定实例中，该一种或多种免疫抑制分子是IL-10和/或TGF-β。在特定实例中，第二多核苷酸包含SEQ ID:10所示氨基酸序列。对于本领域技术人员显而易见的是，第一、第二和/或第三多核苷酸可以在一个、两个、三个或更多个载体上并且以任何组合编码。例如，包含CAR构建体的第一多核苷酸可进一步包含第二或第三多核苷酸，或两者。还可以想象第二多核苷酸被分解成在不同载体上编码的几个多核苷酸区段，其中每个多核苷酸区段负责表达不同的免疫抑制因子。
关于编码诱导型盒的核酸序列，如上所述，编码CAR构建体的每一部分的序列可以存在于一个或多个(核酸)表达序列上。在一个实例中，本文所述的用于表达启动子、前导序列、胞外序列、跨膜结构域、胞内结构域和诱导型盒的核酸序列存在于一种表达序列上。在另一实例中，本文所述的用于表达启动子、前导序列、胞外序列、跨膜结构域、胞内结构域和诱导型盒的核酸序列存在于分开的表达序列上，由此这些分开的表达序列以能够表达功能性CAR构建体的方式彼此可操作地连接。
诱导型自杀系统
在另一个实例中，经修饰T细胞进一步包含第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码诱导型自杀系统，其中该经修饰T细胞与诱导物分子的接触将诱导所述经修饰T细胞中的细胞死亡。诱导型自杀系统的实例是胱天蛋白酶-9(iCasp9)自杀基因系统。在该系统中，诱导物是CID(也称为AP1903/Rimiducid)。基于iCasp9的诱导型自杀系统的实例是本领域已知的，并且在以下出版物的非详尽列表中进行了描述：诱导型胱天蛋白酶9安全开关可以阻止细胞疗法引发的自身免疫性疾病(de Witte MA,Jorritsma A,Swart E,Straathof KC,dePunder K,Haanen JB,Rooney CM,Schumacher TN；J Immunol.[免疫学杂志]2008年5月1日；180(9):6365-73)；将CD20嵌合抗原受体与诱导型胱天蛋白酶9自杀开关组合以提高T细胞过继免疫疗法用于淋巴瘤的功效和安全性(Budde LE,Berger C,Lin Y,Wang J,Lin X,Frayo SE,Brouns SA,Spencer DM,Till BG,Jensen MC,Riddell SR,Press OW PLoS One.[公共科学图书馆·综合]2013；8(12):e82742)。
低免疫原性的经修饰细胞
在实例中，本文披露的经修饰T细胞是低免疫原性的。在特定实例中，经修饰T细胞被基因编辑以变成低免疫原性。在特定实例中，主要组织相容性类别(MHC)I的一种或多种基因和主要组织相容性类别(MHC)II的一种或多种基因缺失或突变，其中这些基因的缺失或突变导致MHC I和MHC II复合物的功能障碍。在更特定的实例中，MHC I和II的一种或多种基因包含至少B2M(B2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)。在特定实例中，可以对经修饰T细胞引入进一步编辑以增加其低免疫原性。在实例中，经修饰T细胞被进一步修饰以过表达CD47(分化簇47)或其功能变体。CD47在细胞表面的过表达可以进一步阻止非自身宿主免疫系统对经修饰T细胞的识别和清除。应当理解，上述基因编辑可以应用于iPSC来源的或Treg来源的经修饰T细胞。低免疫原性的经修饰T细胞可以充当“隐形”细胞，当施用于个体时，这些细胞不会被免疫系统靶向。低免疫原性的经修饰T细胞适合于同种异体施用，其中细胞不必源自接受施用的个体或与接受施用的个体组织相容。
产生遗传修饰细胞的方法
在本披露的另一方面，提供了一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括用本文披露的载体转导Treg，使得转导的Treg表达本披露的CAR，从而产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)。
在本披露的另一方面，提供了一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括：a)从受试者的外周血单个核细胞(PBMC)中分离调节性T细胞(Treg)；b)对分离的Treg进行离体扩增；以及c)用本文披露的载体转导扩增的Treg，使得转导的Treg表达本披露的CAR。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)对CD34+iPSC进行修饰，以便(i)降低或消除B2微球蛋白和II类MHC反式激活因子的表达或活性水平，且(ii)过表达CD47或其功能变体；b)用本披露的载体转导经修饰的CD34+iPSC，使得转导的CD34+iPSC表达本披露的CAR；c)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，该iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)提供CD34+iPSC，b)降低或消除CD34+iPSC中B2微球蛋白和II类MHC反式激活因子的表达或活性水平；c)在b)的CD34+iPSC中过表达CD47或其功能变体；d)用本披露的载体转导c)的CD34+iPSC，使得转导的CD34+iPSC表达本披露的CAR；e)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，该iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)对CD34+iPSC的基因组进行编辑以减少或消除B2M(B2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)基因的功能性基因产物的表达；c)在CD34+iPSC中过表达CD47或其功能变体；d)用本披露的载体转导c)的CD34+iPSC，使得转导的细胞表达本披露的CAR；e)使CAR低免疫原性iPSC分化为iPSC来源的T细胞。优选地，这些iPSC来源的T细胞是iPSC来源的T调节性(Treg)细胞。
在本披露的另一方面，提供了一种产生经修饰低免疫原性T细胞的方法，所述方法包括：a)CD34+诱导多能干细胞(iPSC)；b)对iPSC的基因组进行编辑以将B2M(B2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)基因均敲除；c)用编码CD47或其功能变体的模板对来自b)的iPSCs进行基因编辑，其中敲入的iPSC过表达CD47；d)用本披露的载体转导基因编辑的iPSC，使得转导的iPSC表达本披露的嵌合抗原受体；e)使基因编辑的CAR-iPSC分化为iPSC来源的T细胞。
在特定实例中，步骤b)和c)或本文所述的任何基因组编辑是使用CRISPR-Cas基因编辑系统进行的。利用CRISPR-Cas基因编辑的方法是本领域熟知的并且广泛使用，并且有商业试剂盒可供使用。
用于使iPSC分化为iPSC来源的T细胞的方法也是本领域熟知的，并且有商业试剂盒可供使用。该方法的详细实例可参见Kaneko S.(2016),In Vitro Generation ofAntigen-Specific T Cells from Induced Pluripotent Stem Cells of Antigen-Specific T Cell Origin.[从抗原特异性T细胞来源的诱导多能干细胞体外产生抗原特异性T细胞]在以下中：Bondanza A.,Casucci M.(编辑)Tumor Immunology.[肿瘤免疫学]Methods in Molecular Biology[分子生物学方法],第1393卷.Humana Press,New York,NY.[纽约州纽约市胡玛纳出版社]DOI:10.1007/978-1-4939-3338-9_6。
在另一个实例中，该方法进一步包括以下中任何一项或多项：g)测试本披露的嵌合抗原受体的表达；h)测试嵌合抗原受体-Treg或经修饰T细胞响应于接触这些炎症相关因子而产生一种或多种免疫抑制分子的功能潜力；以及i)测试嵌合抗原受体-Treg或经修饰T细胞抑制效应T细胞激活/增殖的功能潜力。
在如上所述方法的特定实例中，载体是病毒载体，优选地慢病毒载体。本披露的病毒载体可包含分离自或源自逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒或其任何组合的序列。病毒载体可包含分离自或源自腺相关病毒(AAV)的序列。病毒载体可包含重组AAV(rAAV)。本披露的示例性腺相关病毒和重组腺相关病毒包含顺式位于编码本披露的CAR的序列旁边的两个或更多个反向末端重复(ITR)序列。本披露的示例性腺相关病毒和重组腺相关病毒包括但不限于所有血清型(例如AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8和AAV9)。本披露的示例性腺相关病毒和重组腺相关病毒包括但不限于自身互补AAV(scAAV)和含有一种血清型的基因组和另一种血清型的衣壳的AAV杂合体(例如AAV2/5、AAV-DJ和AAV-DJ8)。
疗法方法
在又一方面，本披露涉及本披露的经修饰细胞(优选地经修饰T细胞)，其用于在疗法中使用。
例如本文披露的涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症可以使用本文披露的经修饰细胞(例如，经修饰T细胞或CAR Treg细胞)或核酸进行治疗。典型地，炎症相关因子是TNFα和/或IFNγ。疾病/病症包括但不限于炎性自身免疫性疾病、移植、细胞因子释放综合征和本文描述的任何其他疾病或病症。
在任何方面或实施例中，本披露包括治疗疾病或病症的方法，其中疾病或病症发病机制涉及TNFα或IFNγ。
在又一方面，本披露涉及本披露的经修饰细胞(例如，经修饰T细胞或CAR Treg细胞)或核酸，其用于在以下的治疗中使用：自身免疫性疾病；移植排斥、或移植物抗宿主病(GVHD)。
在又一方面，本披露涉及一种治疗自身免疫性疾病、移植排斥、或移植物抗宿主病(GVHD)的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的本文披露的经修饰细胞(优选地经修饰T细胞)，或一定量的核酸。
在实例中，待治疗的自身免疫性疾病选自由以下组成的组：类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、银屑病、狼疮、幼年型类风湿性关节炎、多发性硬化症、炎性肠病和克罗恩病。在另一实例中，待治疗的移植排斥选自由以下组成的组：器官移植排斥、干细胞移植排斥和骨髓移植排斥。
在再一方面，本披露涉及一种在有需要的受试者中诱导免疫耐受的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的本文披露的经修饰细胞(优选地经修饰T细胞)，或一定量的核酸。
在再一方面，本披露涉及一种在有需要的受试者中局部或全身下调炎症的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的本文披露的经修饰细胞(优选地经修饰T细胞)，或一定量的核酸。
在再一方面，本披露涉及一种在受试者中局部或全身抑制效应T细胞的活性的方法，其中该方法包括向该受试者局部或全身施用本披露的经修饰细胞(优选地经修饰T细胞)或核酸。
在本披露的另一方面，提供了一种载体，其包含本披露中所提供的序列。
从白细胞去除术产品中分离T细胞
可以使用封闭式系统和标准方法(例如，COBE Spectra单采系统)在临床现场从受试者收集白细胞去除术产品或血液。优选地，根据标准医院或机构白细胞去除术程序将产物收集在标准白细胞去除术收集袋中。例如，在本披露的方法的优选实施例中，除了白细胞去除术期间通常使用的那些之外，不包括额外的抗凝剂或血液添加剂(肝素等)。
替代性地，可以直接从全血中分离白细胞(WBC)/外周血单个核细胞(PBMC)(使用Biosafe Sepax 2(封闭式/自动化))或T细胞(使用Prodigy(封闭式/自动化))。然而，在某些受试者(例如那些诊断患有癌症和/或治疗癌症的受试者)中，从全血中分离时的WBC/PBMC产量可能显著低于通过白细胞去除术分离时的产量。
白细胞去除术程序和/或直接细胞分离程序可用于本披露的任何受试者。
白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物应包装在保温容器中，并应根据批准用于临床方案的标准医院或机构血液采集程序保存在受控的室温(+19℃至+25℃)中。白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物不应冷藏。
在运输过程中，白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物的细胞浓度不应超过0.2x 109个细胞/mL。应避免白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物的剧烈混合。
如果必须例如过夜储存白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物，应在受控的室温(同上)中保存。在储存期间，白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物的浓度不得超过0.2x 109个细胞/mL。
优选地，白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物的细胞应储存在自体血浆中。在某些实施例中，如果白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物的细胞浓度高于0.2x 109个细胞/mL，则应当用自体血浆稀释产品。
优选地，当开始标记和分离程序时，白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物不应超过24小时。白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物可以使用封闭式和/或自动化系统(例如，CliniMACS Prodigy)进行处理和/或制备用于细胞标记。
自动化系统可以进行额外的血沉棕黄层分离，可能通过细胞产品(例如，白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物)的过滤(ficolation)和/或洗涤进行分离。
封闭式和/或自动化系统可用于制备和标记用于T细胞分离的细胞(来自例如白细胞去除术产品、血液、WBC/PBMC组合物和/或T细胞组合物)。
尽管WBC/PBMC可以直接进行核转染(这更容易并且节省额外的步骤)，但是本披露的方法可以包括在核转染之前首先分离T细胞
T细胞可以通过在单向标记(one-way labeling)程序中富集标记细胞或耗竭标记细胞来直接分离，或者在两步标记程序中间接分离。根据本披露的某些富集策略，T细胞可以收集在细胞收集袋中，并且未标记的细胞(非靶细胞)可以收集在阴性级分袋(NegativeFraction Bag)中。与本披露的富集策略相反，未标记的细胞(靶细胞)收集在细胞收集袋中，而标记的细胞(非靶细胞)分别收集在阴性级分袋或非靶细胞袋中。选择试剂可以包括但不限于抗体包被的珠。抗体包被的珠可以在修饰和/或扩增步骤之前去除，或者在修饰和/或扩增步骤之前保留在细胞上。细胞标记的以下非限制性实例中的一种或多种可用于分离T细胞：CD3、CD4、CD8、CD25、抗生物素、CD1c、CD3/CD19、CD3/CD56、CD14、CD19、CD34、CD45RA、CD56、CD62L、CD133、CD137、CD271、CD304、IFN-γ、TCRα/β、和/或其任何组合。用于分离T细胞的方法可以包括一种或多种特异性结合和/或可检测地标记可用于分离T细胞的细胞标记的以下非限制性实例中的一种或多种的试剂：CD3、CD4、CD8、CD25、抗生物素、CD1c、CD3/CD19、CD3/CD56、CD14、CD19、CD34、CD45RA、CD56、CD62L、CD133、CD137、CD271、CD304、IFN-γ、TCRα/β、和/或其任何组合。这些试剂可能是或可能不是“良好制造规范(GoodManufacturing Practices)”(“GMP”)级。试剂可以包括但不限于赛默公司(Thermo)DynaBeads和美天旎公司(Miltenyi)CliniMACS产品。本披露的分离T细胞的方法可以包括标记和/或分离步骤的多次迭代。在本披露的分离T细胞的方法中的任何点，可以通过阳性或阴性选择不需要的细胞和/或不需要的细胞类型，从本披露的T细胞产品组合物中耗竭不需要的细胞和/或不需要的细胞类型。本披露的T细胞产品组合物可以含有可以表达CD4、CD8和/或另一种或多种T细胞标记的额外的细胞类型。
本披露的用于T细胞核转染的方法可以通过例如用于WBC/PBMC群或组合物中的T细胞核转染的过程来消除T细胞分离步骤，该过程在核转染之后包括分离步骤或通过TCR信号传导的选择性扩增步骤。
在T细胞富集和/或分选之前或之后，通过阳性或阴性选择可耗竭某些细胞群。可以从细胞产品组合物中耗竭的细胞组合物的实例可以包括髓样细胞、CD8+细胞毒性T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、红细胞、肥大细胞、γ-δT细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤(NK)样细胞(例如细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞)、诱导自然杀伤(iNK)T细胞、NK T细胞、B细胞或其任何组合。
优选的用于T细胞分离的方法可包括用于产生未受影响的泛T细胞的阴性选择策略，这意味着所得T细胞组合物包括未经操纵且含有内源性发生的T细胞种类/比率的T细胞。
可用于阳性或阴性选择的试剂包括但不限于磁性细胞分离珠。在进行本披露的T细胞分离方法中的下一步骤之前，磁性细胞分离珠可以或可以不从所选的CD4+T细胞群、CD8+T细胞群或CD4+和CD8+T细胞的混合群中去除或耗竭。
T细胞组合物和T细胞产品组合物可制备用于冷冻保存、储存在标准T细胞培养基中和/或遗传修饰。
T细胞组合物、T细胞产品组合物、未刺激的T细胞组合物、静息T细胞组合物或其任何部分可以使用标准的冷冻保存方法进行冷冻保存，该方法被优化用于储存和回收具有高回收率、生存力、表型和/或功能能力的人类细胞。可以使用市售的冷冻保存介质和/或方案。本披露的冷冻保存方法可以包括无DMSO冷冻保存剂(例如CryoSOfreeTM无DMSO冷冻保存介质)，以减少冷冻相关的毒性。
T细胞组合物、T细胞产品组合物、未刺激的T细胞组合物、静息T细胞组合物或其任何部分可以储存在培养基中。本披露的T细胞培养基可以针对细胞储存、细胞遗传修饰、细胞表型和/或细胞扩增进行优化。本披露的T细胞培养基可以包含一种或多种抗生素。由于在细胞培养基中包含抗生素可能会降低通过核转染进行遗传修饰后的转染效率和/或细胞产量，因此可以改变特定抗生素(或其组合)及其各自的一种或多种浓度以获得通过核转染进行遗传修饰后的最佳转染效率和/或细胞产量。
本披露的T细胞培养基可以包含血清，此外，可以改变血清组成和浓度以获得最佳细胞结果。对于T细胞的培养，人AB血清优于FBS/FCS，因为虽然考虑用于在本披露的T细胞培养基中使用，但FBS/FCS可能引入异种蛋白。血清可以从打算施用培养物中的T细胞组合物的受试者的血液中分离，因此，本披露的T细胞培养基可以包含自体血清。无血清培养基或血清替代物也可用于本披露的T细胞培养基中。在本披露的T细胞培养基和方法的某些实施例中，无血清培养基或血清替代物可以提供优于用异种血清补充培养基的优势，包括但不限于具有更大生存力的更健康的细胞、具有更高效率的核转染、在核转染后表现出更大的生存力、展示出更理想的细胞表型、和/或在添加扩增技术时更大/更快的扩增。
T细胞培养基可以包括市售的细胞生长培养基。示例性的市售细胞生长培养基包括但不限于PBS、HBSS、OptiMEM、DMEM、RPMI 1640、AIM-V、X-VIVO 15、CellGro DC培养基、CTS OpTimizer T细胞扩增SFM、TexMACS培养基、PRIME-XV T细胞扩增培养基、ImmunoCult-XF T细胞扩增培养基或其任何组合。
T细胞组合物、T细胞产品组合物、未刺激的T细胞组合物、静息T细胞组合物或其任何部分可以制备用于遗传修饰。T细胞组合物、T细胞产品组合物、未刺激的T细胞组合物、静息T细胞组合物或其任何部分用于遗传修饰的制备可以包括细胞洗涤和/或重悬于所需的核转染缓冲剂中。冷冻保存的T细胞组合物可以解冻并制备用于通过核转染进行遗传修饰。冷冻保存的细胞可以根据标准或已知方案解冻。可以优化冷冻保存细胞的解冻和制备，以产生具有更大生存力、具有更高效率的核转染、在核转染后表现出更大的生存力、展示出更理想的细胞表型、和/或在添加扩增技术时更大/更快的扩增的细胞。例如，基立福公司(Grifols)Albutein(25％人白蛋白)可用于解冻和/或制备过程。
输注经修饰细胞作为过继细胞疗法
本披露提供了表达本披露的一种或多种CAR的经修饰细胞，这些细胞已被选择和/或扩增用于施用于有需要的受试者。本披露的经修饰细胞可以配制用于在包括室温和体温的任何温度下储存。本披露的经修饰细胞可以配制用于冷冻保存和随后的解冻。本披露的经修饰细胞可以配制在药学上可接受的载剂中，用于从无菌包装直接施用于受试者。本披露的经修饰细胞可以在药学上可接受的载剂中配制，该载剂具有细胞生存力和/或CAR表达水平的指标，以确保最低水平的细胞功能和CAR表达。本披露的经修饰细胞可以与一种或多种试剂一起以规定的密度配制在药学上可接受的载剂中，以抑制进一步扩增和/或防止细胞死亡。
本文说明性描述的本发明可以在不存在本文未特定披露的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适当地实践。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应被广泛地理解并且不受限制。另外，本文采用的术语和表达被用作说明的术语并且没有限制性，并且并非旨在使用此类术语以及表达而将本发明显示或描述的特征的任何等效物或其一部分排除在外，但是将认识到的是各种修改在所要求保护的本发明的范围内是有可能的。因此，应当理解的是尽管本发明已经通过优选实施例和任选的特征确切地进行了披露，但是在本文所披露的其中体现的本发明的修改和变化可以由本领域技术人员采取，并且此类修改和变化被认为是在本发明的范围之内。
如本申请中所用，单数形式“一个/种(a/an)”以及“该(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另有明确指明。例如，术语“遗传标记”包括多种遗传标记，包括其混合物和组合。
如本文所用，术语“约”在配制品组分浓度的背景下典型地意指陈述值的+/-5％，更典型地陈述值的+/-4％，更典型地陈述值的+/-3％，更典型地陈述值的+/-2％，甚至更典型地陈述值的+/-1％，甚至更典型地陈述值的+/-0.5％。
在本披露通篇，某些实施例可以以范围形式披露。应当理解，以范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所披露范围的范围的僵化限制。因此，范围的描述应当被认为已经特定披露了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，如1至6的范围的描述应当被认为具有特定披露的子范围，如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及该范围内的单个数字，例如1、2、3、4、5和6。无论范围有多大，这都适用。
某些实施例也可在本文中广泛且一般性地描述。落入一般披露内的每个较窄的种类和亚属分组也形成本披露的一部分。这包括实施例的一般描述，带有从该类中去除任何主题的条件或负面限制，而无论被删除的材料是否在本文中特别叙述。
本文已广泛且一般性地描述了本发明。落入一般披露内的每个较窄的种类和亚属分组也形成本发明的一部分。这包括本发明的一般描述，带有从该类中去除任何主题的条件或负面限制，而无论被删除的材料是否在本文中特别叙述。
其他实施例在以下权利要求和非限制性实例内。另外，在根据马库什组描述本发明的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本发明也因此以马库什组的任何单个成员或成员子组进行描述。
实验部分
实例1-构建体的合成
构建体的合成以及将构建体克隆到慢病毒载体中是本发明领域中常见且已知的技术。在本文披露的实例中，合成和病毒包装利用由4个质粒组成的第三代慢病毒包装质粒。设计构建体并将其克隆到含有所披露序列的转移质粒中。
实例2-CAR Treg细胞的产生
自体嵌合抗原受体(CAR)Treg细胞可以通过从患者体内分离和扩增调节性T细胞(Treg)来产生，然后其可用于治疗目的。使用市售的针对CD25+和CD127-CD4+T细胞的免疫磁性调节性T细胞分离试剂盒(干细胞技术有限公司(Stemcell Technologies))或使用针对CD4+、CD25+、CD127-CD14-细胞标记的荧光激活细胞分选(FACS)从健康供体的外周血单个核细胞中分离调节性T细胞。使用流式细胞术通过CD3、CD4、CD25、FOXP3、CD127(用于鉴定调节性T细胞的标记)染色来确认分离细胞的纯度。使用CD3/28磁珠将分离的Treg扩增14天。
实例3-基于慢病毒的Treg转导和验证
在聚凝胺(8μg/ml；西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))或GMP级转导激活因子(LentiBOOST；Sirion生物技术公司(Sirion Biotech))存在的情况下，在用CD3/28珠激活后一天时，用含有披露的嵌合抗原受体(CAR)序列的慢病毒载体转导分离的Treg。在14天扩增结束时，通过ELISA和流式细胞术验证CAR Treg，验证转导的细胞响应于重组TNFα和IFNγ的细胞因子产生(图6)。另外，使用活化T细胞抑制测定评估CAR Treg细胞的抑制潜力。
实例4-iPSC来源的T细胞的产生
为了克服自体治疗的局限性并提供现成疗法的一致性，可以使诱导多能干细胞(iPSC)分化成为iPSC来源的T细胞。在第一种也是优选的方法中，人CD34+iPS细胞来自精选的iPS细胞库来源，例如Riken生物资源研究中心(Riken BioResource Research Center)或ATCC。使用市售试剂盒(例如STEMdiffTMT细胞试剂盒(干细胞技术有限公司))可以使这些CD34+iPSC分化为iPSC来源的T细胞。涉及经由TNFα和/或IFNγ介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的任何疾病/病症可以潜在地使用本文披露的CAR Treg细胞进行治疗。这些包括但不限于炎性自身免疫性疾病、移植等。此外，本文提供的现成的iPSC来源的CAR Treg细胞消除了对自体T细胞用于CAR-T产生的需求。
实例5-iPSC的基因编辑
首先，CD34+iPSC经过2轮基因修饰，使其具有低免疫原性。第一轮涉及基于CRISPR-Cas的B2M和CIITA基因敲除。根据制造商的方案使用市售试剂盒，例如IDT Alt-RCRISPR系统。简而言之，合成gRNA(B2M向导RNA：GAGTAGCGCGAGCACAGCTA；CIITA向导RNATCCAGGTAGCCACCTTCTAG)并添加优化的重组cas9蛋白，以形成核糖核蛋白(RNP)，将其通过电穿孔或脂质体转染至细胞中。转染后，分离单细胞克隆并扩增成集落。通过对基因破坏进行测序并确保没有脱靶效应，筛选集落是否成功进行CRISPR编辑。另外，测试细胞的多能性和正常核型。第二轮基因编辑涉及CRISPR-cas9诱导的同源定向修复，以对过表达的CD47模板进行位点特异性整合。
然后，用此处披露的CAR序列对成功进行CRISPR编辑的低免疫原性iPSC进行慢病毒转导。成功整合并表达CAR构建体的iPSC随后进行单细胞克隆和储存。
实例6-低免疫原性CAR-iPSC分化为CAR-iPSC来源的T细胞
将低免疫原性CAR-iPSC与饲养细胞一起在含有rhVEGF(重组人血管内皮生长因子)的EB培养基(胚胎体形成培养基)中培养7天，然后添加rhCSF(重组人集落刺激因子-1)和rhFlt-3L(重组人Fms相关酪氨酸激酶3配体)。在第14天，收集造血祖细胞，并在rhIL7(重组人白细胞介素-7)和rhFlt-3L存在的情况下转移至OP9-DL1细胞。在rhIL7和地塞米松存在的情况下收获并刺激T细胞。其他方法包括使用无饲养物条件，例如STEMdiffTMT细胞试剂盒(干细胞技术有限公司)以及Iriguchi,S.,Yasui,Y.,Kawai,Y.,Arima,S.,Kunitomo,M.,Sato,T.,和Kaneko,S.(2021)开发的方法。来自诱导多能干细胞的T细胞的无饲养物分化和扩增。
实例7-低免疫原性、iPSC来源的CAR-T细胞
基于CAR-T细胞的疗法的一个限制是可用于工程化的自体细胞。开发用于细胞疗法的“现成”同种异体细胞是CAR-T领域的重大目标之一。本文披露了用于将同种异体T细胞修饰为低免疫原性CAR-T细胞的方法。简而言之，来自健康供体的T细胞被重新编程为诱导多能干细胞，或使用精选的CD34+iPS以便于扩增并作为现成的细胞供应。这些iPSC由于MHCI类和II类的失活以及CD47的过表达而具有低免疫原性。然后这些细胞分化产生iPS来源的T细胞(其可进一步修饰以变得具有抗原特异性)。这种抗原特异性是引入嵌合抗原受体(CAR)以及表达FOXP3(调节性T细胞的主转录因子)以继承调节性功能的结果。
实例8-炎性可溶性因子特异性CAR的构建
名为PMC882的诱导型盒的CAR设计含有两个部分(图2A)。第一部分是CAR盒，其含有对炎性可溶性因子具有特异性的抗原识别结构域(scFv)。与这些因子结合后，CAR共刺激结构域、CD28和CD3ζ被磷酸化，从而激活细胞(图1)。第二部分是免疫抑制盒，其含有免疫抑制细胞因子TGFβ(肿瘤生长因子β)和IL10(白细胞介素10)。仅当细胞被激活时，诱导型启动子NFAT(活化T细胞核因子)才会促使这些细胞因子的表达。
另一种设计添加了FOXP3(叉头框P3)(一种调节性T细胞的转录因子)和CAR盒，二者由翻译自切割肽序列T2A分开。(图2B)。
实例9-CAR设计的表达和抗原特异性
本文披露的CAR设计由炎性可溶性因子激活，而不是像当前和已知的CAR T细胞疗法那样由表面结合抗原激活。在自身免疫性疾病中，这些炎性可溶性因子具有致病性，并在疾病进展中发挥作用。本文披露的设计使得CAR Treg能够在炎症部位被激活并随后释放免疫抑制因子，例如但不限于TGFβ和IL10。使用外周血单个核细胞(PBMC)的荧光激活细胞分选(FACS)分离健康或自身免疫性疾病(例如但不限于类风湿性关节炎)初级调节性T细胞(Treg)。用CD4、CD14、CD25和CD127染色的PBMC(图3A)以高纯度分选Treg，如Treg标记FOXP3所示(图3B)。CD3/28Dynabeads和慢病毒转导初级Treg的抗TNFa scFv PMC882构建体的使用促使Treg的扩增(图4A)和高比例的CAR阳性Treg(GFP+)。PMC882 CAR Jurkat细胞(图6A)、来自健康供体的PMC882CAR Treg(图6B)和来自幼年型特发性关节炎(JIA)活动性疾病供体的PMC882 CAR Treg(图6C)显示在TNFα存在的情况下TGFβ和IL10阳性细胞增加。
实例10-CAR Treg在抑制测定中优于未转导的Treg
来自健康供体(图7A)和活动性疾病供体(图7B)的PMC882 CAR Treg能够基于CD3和CD28激活来减少自体促炎T细胞。在自体效应T细胞抑制测定中，与来自健康供体(图8A)和活动性疾病供体(图8B)的未转导的Treg相比，PMC882 CAR Treg增加了抑制(抑制是抑制激活的效应T细胞的扩增)。这证明了具有TGFβ和IL10的免疫抑制盒的CAR Treg在抑制激活的效应T细胞方面的功能。
实例11-CAR Treg增加NSG GvHD小鼠模型的存活率
NSG小鼠通过在第0天注射500万个人PBMC诱导急性GvHD，并在第1天进行PMC882CAR Treg处理。与未处理的小鼠相比，NSG GvHD小鼠模型中的PMC882CAR Treg处理显示出明显更好的临床评分(图9A)和存活率(图9B)(图9B结果显示所有未处理的小鼠均未存活)。小鼠外周血中人CD45植入的百分比(疾病进展的指标)显示，相比于未处理的小鼠，PMC882CAR Treg处理的小鼠能够在第14天(图9C)和第35天实验结束时(图9D)显著抑制人CD45植入。与未处理的(下)小鼠相比，CAR Treg处理的小鼠(上)的肝组织分析显示，人T细胞浸润到肝器官中存在差异，其中未处理的小鼠显示出大量以细胞毒性为主的CD8+T细胞(红色)，而CAR Treg处理的小鼠显示出更多的CD4+T细胞(黄色)，表明CAR Treg处理带来的组织环境变化(图9E)。对小鼠外周血中人CD3阳性细胞进行质量CyToF分析的高维降维分析tSNE图(上)显示，CAR Treg处理的小鼠(中)和未处理的小鼠(下)之间的明显分离(图9F)。簇1、5和9中发现的标记热图显示，CD45RA和CD62L的初始T细胞标记在CAR Treg处理的小鼠中富集，表明T细胞先前未激活或活跃增殖。未处理的小鼠中富集的簇4、12、13和15具有高表达的记忆T细胞标记CD45RO、CD69和颗粒酶B的激活标记、增殖标记Ki67和耗竭标记LAG3，表明在未处理的小鼠中T细胞已被激活和刺激以及活跃增殖(图9G)。
实例12-抗IFNy CAR对可溶性人干扰素γ有反应
转导至CAR Jurkat细胞中的抗IFNy CAR构建体(图10A)、来自健康供体的抗IFNyCAR Treg(图10B)显示在50ng/ml人IFNy存在的情况下TGFβ和IL10阳性细胞增加。
实例13-CAR Treg在抑制效应T细胞增殖方面优于扩增的Treg
转导到健康调节性T细胞中的抗TNFa CAR PMC882和抗IFNy CAR与未转导的Treg相比，表现出对激活效应T细胞的更优抑制(图11)。对于抗TNFa CAR PMC882Treg，在2:1Treg:Teff处观察到优于未转导的Treg的显著抑制。对于抗IFNy CAR Treg，在测试的所有Treg与Teff比率(即2:1、1:1和1:2)时，都观察到由于未转导的Treg的显著抑制。
实例14-工程化的iPS细胞表现出MHC I和MHC II敲除和CD47表达并且是低免疫原性的
诱导多能干细胞(iPSC)的主要组织相容性I类(MHC I)基因B2M和II类(MHC II)基因CIITA使用CRISPR去除。抗HLAA、B、C(图12A)和抗HLA-DR、DP、DQ(图12B)显示了它们各自基因的蛋白质敲低。CD47被敲入过表达启动子下的AAVS1基因座，与野生型iPS相比，该启动子应高表达CD47(图12C)。与野生型iPS细胞相比，基因编辑的iPS显示出对CD3+T细胞的低免疫原性，因为它们在共培养期间不诱导T细胞增殖(图12D)。
实例15-源自iPS的T细胞具有T细胞标记并且在T细胞刺激后可诱导
诱导多能细胞分化为CD34+细胞(图13A)，然后随后分化为T细胞，这些细胞在分化第24天表达CD3、CD4和CD8(图13B)。这些iPS来源的T细胞也可以用含有抗TNFa CAR的慢病毒转导，其中GFP在NFAT诱导型启动子下，并且在激活后，显示GFP信号增加，证明这些T细胞中NFAT启动子的诱导性(图13C)。
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
130 135 140
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
145 150 155 160
Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn
210 215 220
Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 2
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF-α scFv克隆P3H2的示例性编码序列
<400> 2
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt atttcttcta ctggtgcttc tacaacttac 180
gcagactccg tgaagggcag gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggtggt 300
gctgcttttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tcagcagcgg tggaggtggt 360
tctggtggag gaggttctgg tggcggtggt tctgacatcc agatgaccca gtctccatcc 420
tccctgtctg catctgtagg agacagagtc accatcactt gccgggcaag tcagagcatt 480
agcagctatt taaattggta tcagcagaaa ccagggaaag cccctaagct cctgatctat 540
agtgcatcct atttgcaaag tggggtccca tcaaggttca gtggcagtgg atctgggaca 600
gatttcactc tcaccatcag cagtctgcaa cctgaagatt ttgcaactta ctactgtcaa 660
caggctaata atgctcctac tacgttcggc caagggacca aggtggaaat caaa 714
<210> 3
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52的示例性氨基酸序列
<400> 3
Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Phe Arg Gly Ser His Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 4
<211> 738
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52的示例性编码序列
<400> 4
gaggtcaagc tggagcagtc tgggactgtg ctggcaaggc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttacc aactactgga tgcattggat aagacagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggcgct atttatcctg gaattagtga tactagttac 180
aaccagaagt tcaaggtcaa ggccaaactg actgcagtca catccaccag cactgcctac 240
atggagctca gcagcctgac aaatgaggac tctgcggtct attattgtac aagagatgag 300
gatttcgacg gctttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgcaggtggt 360
ggtgggtctg gcggaggtgg tagtggaggt ggtgggtctg atgttttgat gacccaaact 420
ccactctccc tgcctgtcag tcttggagat caagcctcca tctcttgcag atctagtcag 480
agtattgtac atagtaatgg aaacacctat ttagactggt acctgcagaa accaggccag 540
tctccaaagc tcctgatcta caaagtttcc aaccgatttt ctggggtccc agacaggttc 600
agtggcagtg gatcagggac agatttcaca ctcaggatca gcagagtgga ggctgaggat 660
ctgggagttt attactgctt tcgaggatca catgctccgt acacgttcgg aggggggacc 720
aagctggaaa taaaacgg 738
<210> 5
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7的氨基酸序列
<400> 5
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile
130 135 140
Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser
145 150 155 160
Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly
165 170 175
Gly Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
180 185 190
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu
225 230 235 240
Leu Lys Arg
<210> 6
<211> 729
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7的示例性编码序列
<400> 6
caagttaagc tggagcagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acttgcactg tctctgggtt ttcattaacc agctatggtg tacactgggt tcgccagtct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atatgggctg gtggaagcac aaattataat 180
tcggctctca tgtccagact gagcatcagt aaagacaact ccaagagcca agttttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccag aagagatggt 300
aacaggtact atactatgga ctactggggt caaggagctt cagtcaccgt ctcctcaggt 360
ggtggtgggt ctggcggagg tggtagtgga ggtggtgggt ctgaaaatgt gctcacccag 420
tctccagcaa tcatgtctgc atctccaggg gaaaaggtca ccatgacctg cagggccagc 480
tcaagtgtaa gttccagtta cttgcactgg taccagcaga agtcaggtgg ctcccccaaa 540
ctctggattt atagaacatc caacttggct tctggagtcc ctgctcgctt cagtggcagt 600
gggtctggga cctcttactc tctcacaatc agcagtgtgg aggctgaaga tgctgccact 660
tattactgcc agcagtacag tggttacccg ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag 720
ctgaaacgg 729
<210> 7
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28铰链的示例性氨基酸序列
<400> 7
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
35
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3 ζ的胞内信号传导结构域的示例性氨基酸序列
<400> 8
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 9
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28的共刺激胞内信号传导结构域的示例性氨基酸序列
<400> 9
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 10
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域的示例性氨基酸序列
<400> 10
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 11
<211> 1380
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含IFN-γ scFv TII
2G1G7、IgG4铰链区、CD28跨膜结构域、CD28
共刺激结构域和CD3 ζ信号传导结构域的CAR的示例性编码序列
<400> 11
atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60
ccgcaagtta agctggagca gtcaggacct ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc 120
atcacttgca ctgtctctgg gttttcatta accagctatg gtgtacactg ggttcgccag 180
tctccaggaa agggtctgga gtggctggga gtaatatggg ctggtggaag cacaaattat 240
aattcggctc tcatgtccag actgagcatc agtaaagaca actccaagag ccaagttttc 300
ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac acagccatgt actactgtgc cagaagagat 360
ggtaacaggt actatactat ggactactgg ggtcaaggag cttcagtcac cgtctcctca 420
ggtggtggtg ggtctggcgg aggtggtagt ggaggtggtg ggtctgaaaa tgtgctcacc 480
cagtctccag caatcatgtc tgcatctcca ggggaaaagg tcaccatgac ctgcagggcc 540
agctcaagtg taagttccag ttacttgcac tggtaccagc agaagtcagg tggctccccc 600
aaactctgga tttatagaac atccaacttg gcttctggag tccctgctcg cttcagtggc 660
agtgggtctg ggacctctta ctctctcaca atcagcagtg tggaggctga agatgctgcc 720
acttattact gccagcagta cagtggttac ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 780
gagctgaaac gggctagcgc agaaagcaag tatggtcctc cctgcccccc gtgcccattt 840
tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 900
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 960
atgactccaa gacgcctagg tcccactcgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 1020
gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc tccagcttac 1080
cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1140
gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1200
cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1260
attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1320
agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 1380
<210> 12
<211> 481
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含TNF
α scFv、CD28铰链、CD28跨膜结构域、CD28
共刺激结构域和CD3 ζ信号传导结构域的CAR PMC882的示例性氨基酸序列（有
前导序列）
<400> 12
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
145 150 155 160
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
165 170 175
Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser
195 200 205
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
210 215 220
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
245 250 255
Glu Ile Lys Ala Ser Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu
260 265 270
Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His
275 280 285
Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val
290 295 300
Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr
305 310 315 320
Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu
325 330 335
His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg
340 345 350
Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg
355 360 365
Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
370 375 380
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
385 390 395 400
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
405 410 415
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
420 425 430
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
435 440 445
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
450 455 460
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
465 470 475 480
Arg
<210> 13
<211> 1958
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NFAT诱导型表达
盒的示例性编码序列，编码6(NFAT)最小IL-2启动子、TGF-β
基因、分隔TGF-β和IL-10的T2A肽、以及
IL-10基因
<400> 13
ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 60
ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 120
ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt ggaggaaaaa ctgtttcata cagaaggcgt 180
cagaattaac agtataaatt gcatctcttg ttcaagagtt ccctatcact cgagcggtcg 240
ccaccatgcc accttctgga ctgcggttgc ttccgttgct gttgccactg ctttggctgc 300
ttgttctgac acctggcaga cccgcagccg gtttgtcaac atgcaaaacg atcgacatgg 360
agctggtaaa gcgcaagcgc attgaggcaa tcagagggca gatcttgagc aagcttcggc 420
tcgcctctcc tccaagccag ggcgaggtgc cacccggtcc gctgccggaa gcggttctcg 480
ctctctataa cagcactaga gatagggtcg caggtgagtc tgctgaacct gaacctgaac 540
cggaagctga ctattacgct aaagaggtga cgagagttct catggtggaa actcacaatg 600
agatttatga taaatttaaa cagtctaccc acagcattta tatgtttttt aacaccagtg 660
agctccgcga ggctgtccct gaacctgtcc tcctttccag ggcagaattg cggcttctga 720
ggctgaagct taaagtagag caacacgtgg agctctacca gaaatatagt aataacagct 780
ggagatatct gtcaaaccga ctgctggcgc cctccgacag tccagagtgg ctttcctttg 840
acgttactgg cgtggtgcgg caatggcttt caagaggcgg ggaaatcgag ggcttcaggc 900
ttagcgctca ctgctcatgt gatagtaggg ataacacact tcaggtagac attaatgggt 960
tcacgacagg aagaagagga gatctggcta cgattcatgg catgaatagg cctttcctcc 1020
tgcttatggc tacgccattg gagcgcgcgc aacatctcca gtccagccgc cacagacgag 1080
ctctggatac taactactgc ttctccagca ctgagaagaa ctgctgcgta agacagcttt 1140
acatcgactt ccgcaaggac ctgggttgga agtggataca cgagcccaag ggatatcatg 1200
ccaacttctg cctcgggccc tgtccctaca tctggtcatt ggatacacag tacagcaagg 1260
tactcgctct gtacaaccag cacaaccctg gtgcaagcgc agctccctgc tgtgttcccc 1320
aggctctgga accattgcct attgtttatt atgtaggacg aaaaccgaag gtcgagcagc 1380
tcagtaacat gatcgttcgg agctgcaagt gctctggctc aggcgagggc agaggcagcc 1440
tgctgacatg tggcgacgtg gaagagaacc ccgggcctag tccaggtcaa ggtacacaga 1500
gtgagaacag ttgcacacac tttcccggca acttgcctaa tatgctgagg gacctccggg 1560
atgctttctc tcgggtaaaa actttttttc aaatgaaaga ccaactcgat aacctccttc 1620
tgaaggagag cctcctggag gacttcaagg gatatttggg gtgccaagct ttgtccgaga 1680
tgattcagtt ctacttggaa gaggtgatgc cacaagcgga gaaccaagac ccggacatca 1740
aggctcacgt caatagcttg ggagaaaacc tgaagaccct gcggttgagg ctgcgccgct 1800
gtcataggtt ccttccatgt gagaacaaat ccaaagctgt ggaacaggtc aaaaatgctt 1860
tcaacaaact gcaggagaaa ggtatatata aggccatgtc tgaatttgac atatttatca 1920
actacataga ggcgtatatg accatgaaga ttcgcaat 1958
<210> 14
<211> 4902
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CAR构建体的完整编码序列，包含
TNF-α scFv、IgG4铰链、CD28跨膜结构域、CD28
共刺激结构域、CD3 ζ信号传导结构域
（同一盒中具有到FOXP3的T2A跳过肽）以及NFAT诱导型
<400> 14
atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60
ccggactata aagatgacga tgataagggc gggtccgagg tgcagctggt ggagtctggg 120
ggaggcttgg tacagcccgg caggtccctg agactctcct gtgcggcctc tggattcacc 180
tttgatgatt atgccatgca ctgggtccgg caagctccag ggaagggcct ggaatgggtc 240
tcagctatca cttggaatag tggtcacata gactatgcgg actctgtgga gggccgattc 300
accatctcca gagacaacgc caagaactcc ctgtatctgc aaatgaacag tctgagagct 360
gaggatacgg ccgtatatta ctgtgcgaaa gtctcgtacc ttagcaccgc gtcctccctt 420
gactattggg gccaaggtac cctggtcacc gtctcgagtg gtggtggtgg gtctggcgga 480
ggtggtagtg gaggtggtgg gtctgacatc cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct 540
gcatctgtag gggacagagt caccatcact tgtcgggcaa gtcagggcat cagaaattac 600
ttagcctggt atcagcaaaa accagggaaa gcccctaagc tcctgatcta tgctgcatcc 660
actttgcaat caggggtccc atctcggttc agtggcagtg gatctgggac agatttcact 720
ctcaccatca gcagcctaca gcctgaagat gttgcaactt attactgtca aaggtataac 780
cgtgcaccgt atacttttgg ccagggcacc aaggtggaaa tcaaagctag cgcagaaagc 840
aagtatggtc ctccctgccc cccgtgccca ttttgggtgc tggtggtggt tgggggagtc 900
ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag 960
aggagcaggc tcctgcacag tgactacatg aacatgactc caagacgcct aggtcccact 1020
cgcaagcatt accagcccta tgccccacca cgcgacttcg cagcctatcg ctccagagtg 1080
aagttcagca ggagcgcaga cgctccagct taccagcagg gccagaacca gctctataac 1140
gagctcaatc taggacgaag agaggagtac gatgttttgg acaagagacg tggccgggac 1200
cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg 1260
cagaaagata agatggcgga ggcctacagt gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg 1320
ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac 1380
gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc ggctcaggcg agggcagagg cagcctgctg 1440
acatgtggcg acgtggaaga gaaccccggg cctatgccta atcctcggcc tggaaagcct 1500
agcgctcctt ctcttgctct gggaccttct cctggcgcct ctccatcttg gagagccgct 1560
cctaaagcca gcgatctgct gggagctaga ggacctggcg gcacatttca gggcagagat 1620
cttagaggcg gagcccacgc tagctcctcc agccttaatc ctatgcctcc tagccagctc 1680
cagctgccta cactgcctct ggttatggtg gctcctagcg gagctagact gggccctctg 1740
cctcatctgc aagctctgct gcaggacaga ccccacttca tgcaccagct gagcaccgtg 1800
gatgcccacg caagaacacc tgtgctgcag gttcaccctc tggaatcccc agccatgatc 1860
agcctgacac ctccaacaac agccaccggc gtgttcagcc tgaaagccag acctggactg 1920
cctcctggca tcaatgtggc cagcctggaa tgggtgtcca gagaacctgc tctgctgtgc 1980
acattcccca atccaagcgc tcccagaaag gacagcacac tgtctgccgt gcctcagagc 2040
agctatcccc tgcttgctaa cggcgtgtgc aagtggcctg gatgcgagaa ggtgttcgag 2100
gaacccgagg acttcctgaa gcactgccag gccgatcatc tgctggacga gaaaggcaga 2160
gcccagtgtc tgctccagcg cgagatggtg cagtctctgg aacagcagct ggtcctggaa 2220
aaagaaaagc tgagcgccat gcaggcccac ctggccggaa aaatggccct gacaaaggcc 2280
agcagcgtgg cctcttctga taagggcagc tgctgcattg tggccgctgg atctcaggga 2340
cctgtggttc ctgcttggag cggacctaga gaggcccctg attctctgtt tgccgtgcgg 2400
agacacctgt ggggctctca cggcaactct actttccccg agttcctgca caacatggac 2460
tacttcaagt tccacaacat gcggcctcca ttcacctacg ccacactgat cagatgggcc 2520
attctggaag cccctgagaa gcagagaacc ctgaacgaga tctaccactg gtttacccgg 2580
atgttcgcct tcttccggaa tcaccctgcc acctggaaga acgccatccg gcacaatctg 2640
agcctgcaca agtgcttcgt gcgcgtggaa tctgagaaag gcgccgtgtg gacagtggac 2700
gagctggaat tcagaaagaa gagaagccag cggcctagcc ggtgcagcaa tcctacacct 2760
ggaccttaat agacgcgtgg gttaggggag gcgcttttcc caaggcagtc tggagcatgc 2820
gctaagcgat cgcgcccgct gggcacttgg cgctacacaa gtggcctctg gcctcgcaca 2880
cattccagga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 2940
aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 3000
aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag aaggcgtgga ggaaaaactg tttcatacag 3060
aaggcgtcag aattaacagt ataaattgca tctcttgttc aagagttccc tatcactcga 3120
gcggtcgcca ccatgccacc ttctggactg cggttgcttc cgttgctgtt gccactgctt 3180
tggctgcttg ttctgacacc tggcagaccc gcagccggtt tgtcaacatg caaaacgatc 3240
gacatggagc tggtaaagcg caagcgcatt gaggcaatca gagggcagat cttgagcaag 3300
cttcggctcg cctctcctcc aagccagggc gaggtgccac ccggtccgct gccggaagcg 3360
gttctcgctc tctataacag cactagagat agggtcgcag gtgagtctgc tgaacctgaa 3420
cctgaaccgg aagctgacta ttacgctaaa gaggtgacga gagttctcat ggtggaaact 3480
cacaatgaga tttatgataa atttaaacag tctacccaca gcatttatat gttttttaac 3540
accagtgagc tccgcgaggc tgtccctgaa cctgtcctcc tttccagggc agaattgcgg 3600
cttctgaggc tgaagcttaa agtagagcaa cacgtggagc tctaccagaa atatagtaat 3660
aacagctgga gatatctgtc aaaccgactg ctggcgccct ccgacagtcc agagtggctt 3720
tcctttgacg ttactggcgt ggtgcggcaa tggctttcaa gaggcgggga aatcgagggc 3780
ttcaggctta gcgctcactg ctcatgtgat agtagggata acacacttca ggtagacatt 3840
aatgggttca cgacaggaag aagaggagat ctggctacga ttcatggcat gaataggcct 3900
ttcctcctgc ttatggctac gccattggag cgcgcgcaac atctccagtc cagccgccac 3960
agacgagctc tggatactaa ctactgcttc tccagcactg agaagaactg ctgcgtaaga 4020
cagctttaca tcgacttccg caaggacctg ggttggaagt ggatacacga gcccaaggga 4080
tatcatgcca acttctgcct cgggccctgt ccctacatct ggtcattgga tacacagtac 4140
agcaaggtac tcgctctgta caaccagcac aaccctggtg caagcgcagc tccctgctgt 4200
gttccccagg ctctggaacc attgcctatt gtttattatg taggacgaaa accgaaggtc 4260
gagcagctca gtaacatgat cgttcggagc tgcaagtgct ctggctcagg cgagggcaga 4320
ggcagcctgc tgacatgtgg cgacgtggaa gagaaccccg ggcctatgca cagctcagca 4380
ctgctctgtt gcctggtcct cctgactggg gtgagggcca gtccaggtca aggtacacag 4440
agtgagaaca gttgcacaca ctttcccggc aacttgccta atatgctgag ggacctccgg 4500
gatgctttct ctcgggtaaa aacttttttt caaatgaaag accaactcga taacctcctt 4560
ctgaaggaga gcctcctgga ggacttcaag ggatatttgg ggtgccaagc tttgtccgag 4620
atgattcagt tctacttgga agaggtgatg ccacaagcgg agaaccaaga cccggacatc 4680
aaggctcacg tcaatagctt gggagaaaac ctgaagaccc tgcggttgag gctgcgccgc 4740
tgtcataggt tccttccatg tgagaacaaa tccaaagctg tggaacaggt caaaaatgct 4800
ttcaacaaac tgcaggagaa aggtatatat aaggccatgt ctgaatttga catatttatc 4860
aactacatag aggcgtatat gaccatgaag attcgcaatt ga 4902
<210> 15
<211> 4815
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CAR构建体的完整序列，包含IFN-γ scFv TII
2G1G7、IgG4铰链、CD28跨膜结构域、CD28
共刺激结构域、CD3 ζ信号传导结构域
（同一盒中具有到FOXP3的T2A跳过肽）以及NFAT诱导型
<400> 15
atggctttgc ctgtgactgc actgttgctt cccttggctc tgcttctcca tgctgctaga 60
ccgcaagtta agctggagca gtcaggacct ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc 120
atcacttgca ctgtctctgg gttttcatta accagctatg gtgtacactg ggttcgccag 180
tctccaggaa agggtctgga gtggctggga gtaatatggg ctggtggaag cacaaattat 240
aattcggctc tcatgtccag actgagcatc agtaaagaca actccaagag ccaagttttc 300
ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac acagccatgt actactgtgc cagaagagat 360
ggtaacaggt actatactat ggactactgg ggtcaaggag cttcagtcac cgtctcctca 420
ggtggtggtg ggtctggcgg aggtggtagt ggaggtggtg ggtctgaaaa tgtgctcacc 480
cagtctccag caatcatgtc tgcatctcca ggggaaaagg tcaccatgac ctgcagggcc 540
agctcaagtg taagttccag ttacttgcac tggtaccagc agaagtcagg tggctccccc 600
aaactctgga tttatagaac atccaacttg gcttctggag tccctgctcg cttcagtggc 660
agtgggtctg ggacctctta ctctctcaca atcagcagtg tggaggctga agatgctgcc 720
acttattact gccagcagta cagtggttac ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 780
gagctgaaac gggctagcgc agaaagcaag tatggtcctc cctgcccccc gtgcccattt 840
tgggtgctgg tggtggttgg gggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 900
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 960
atgactccaa gacgcctagg tcccactcgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 1020
gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc tccagcttac 1080
cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1140
gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1200
cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1260
attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1320
agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgcggc 1380
tcaggcgagg gcagaggcag cctgctgaca tgtggcgacg tggaagagaa ccccgggcct 1440
atgcctaatc ctcggcctgg aaagcctagc gctccttctc ttgctctggg accttctcct 1500
ggcgcctctc catcttggag agccgctcct aaagccagcg atctgctggg agctagagga 1560
cctggcggca catttcaggg cagagatctt agaggcggag cccacgctag ctcctccagc 1620
cttaatccta tgcctcctag ccagctccag ctgcctacac tgcctctggt tatggtggct 1680
cctagcggag ctagactggg ccctctgcct catctgcaag ctctgctgca ggacagaccc 1740
cacttcatgc accagctgag caccgtggat gcccacgcaa gaacacctgt gctgcaggtt 1800
caccctctgg aatccccagc catgatcagc ctgacacctc caacaacagc caccggcgtg 1860
ttcagcctga aagccagacc tggactgcct cctggcatca atgtggccag cctggaatgg 1920
gtgtccagag aacctgctct gctgtgcaca ttccccaatc caagcgctcc cagaaaggac 1980
agcacactgt ctgccgtgcc tcagagcagc tatcccctgc ttgctaacgg cgtgtgcaag 2040
tggcctggat gcgagaaggt gttcgaggaa cccgaggact tcctgaagca ctgccaggcc 2100
gatcatctgc tggacgagaa aggcagagcc cagtgtctgc tccagcgcga gatggtgcag 2160
tctctggaac agcagctggt cctggaaaaa gaaaagctga gcgccatgca ggcccacctg 2220
gccggaaaaa tggccctgac aaaggccagc agcgtggcct cttctgataa gggcagctgc 2280
tgcattgtgg ccgctggatc tcagggacct gtggttcctg cttggagcgg acctagagag 2340
gcccctgatt ctctgtttgc cgtgcggaga cacctgtggg gctctcacgg caactctact 2400
ttccccgagt tcctgcacaa catggactac ttcaagttcc acaacatgcg gcctccattc 2460
acctacgcca cactgatcag atgggccatt ctggaagccc ctgagaagca gagaaccctg 2520
aacgagatct accactggtt tacccggatg ttcgccttct tccggaatca ccctgccacc 2580
tggaagaacg ccatccggca caatctgagc ctgcacaagt gcttcgtgcg cgtggaatct 2640
gagaaaggcg ccgtgtggac agtggacgag ctggaattca gaaagaagag aagccagcgg 2700
cctagccggt gcagcaatcc tacacctgga ccttaataga cgcgtgggtt aggggaggcg 2760
cttttcccaa ggcagtctgg agcatgcgct aattagctag ccccgctggg cacttggcgc 2820
tacacaagtg gcctctggcc tcgcacacat tccaggagga aaaactgttt catacagaag 2880
gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtggagga aaaactgttt catacagaag 2940
gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtggagga aaaactgttt catacagaag 3000
gcgtggagga aaaactgttt catacagaag gcgtcagaat taacagtata aattgcatct 3060
cttgttcaag agttccctat cactcgagcg gtcgccacca tgccaccttc tggactgcgg 3120
ttgcttccgt tgctgttgcc actgctttgg ctgcttgttc tgacacctgg cagacccgca 3180
gccggtttgt caacatgcaa aacgatcgac atggagctgg taaagcgcaa gcgcattgag 3240
gcaatcagag ggcagatctt gagcaagctt cggctcgcct ctcctccaag ccagggcgag 3300
gtgccacccg gtccgctgcc ggaagcggtt ctcgctctct ataacagcac tagagatagg 3360
gtcgcaggtg agtctgctga acctgaacct gaaccggaag ctgactatta cgctaaagag 3420
gtgacgagag ttctcatggt ggaaactcac aatgagattt atgataaatt taaacagtct 3480
acccacagca tttatatgtt ttttaacacc agtgagctcc gcgaggctgt ccctgaacct 3540
gtcctccttt ccagggcaga attgcggctt ctgaggctga agcttaaagt agagcaacac 3600
gtggagctct accagaaata tagtaataac agctggagat atctgtcaaa ccgactgctg 3660
gcgccctccg acagtccaga gtggctttcc tttgacgtta ctggcgtggt gcggcaatgg 3720
ctttcaagag gcggggaaat cgagggcttc aggcttagcg ctcactgctc atgtgatagt 3780
agggataaca cacttcaggt agacattaat gggttcacga caggaagaag aggagatctg 3840
gctacgattc atggcatgaa taggcctttc ctcctgctta tggctacgcc attggagcgc 3900
gcgcaacatc tccagtccag ccgccacaga cgagctctgg atactaacta ctgcttctcc 3960
agcactgaga agaactgctg cgtaagacag ctttacatcg acttccgcaa ggacctgggt 4020
tggaagtgga tacacgagcc caagggatat catgccaact tctgcctcgg gccctgtccc 4080
tacatctggt cattggatac acagtacagc aaggtactcg ctctgtacaa ccagcacaac 4140
cctggtgcaa gcgcagctcc ctgctgtgtt ccccaggctc tggaaccatt gcctattgtt 4200
tattatgtag gacgaaaacc gaaggtcgag cagctcagta acatgatcgt tcggagctgc 4260
aagtgctctg gctcaggcga gggcagaggc agcctgctga catgtggcga cgtggaagag 4320
aaccccgggc ctagtccagg tcaaggtaca cagagtgaga acagttgcac acactttccc 4380
ggcaacttgc ctaatatgct gagggacctc cgggatgctt tctctcgggt aaaaactttt 4440
tttcaaatga aagaccaact cgataacctc cttctgaagg agagcctcct ggaggacttc 4500
aagggatatt tggggtgcca agctttgtcc gagatgattc agttctactt ggaagaggtg 4560
atgccacaag cggagaacca agacccggac atcaaggctc acgtcaatag cttgggagaa 4620
aacctgaaga ccctgcggtt gaggctgcgc cgctgtcata ggttccttcc atgtgagaac 4680
aaatccaaag ctgtggaaca ggtcaaaaat gctttcaaca aactgcagga gaaaggtata 4740
tataaggcca tgtctgaatt tgacatattt atcaactaca tagaggcgta tatgaccatg 4800
aagattcgca attga 4815
<210> 16
<211> 160
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IL-10的示例性氨基酸序列
<400> 16
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
145 150 155 160
<210> 17
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TGF-β的示例性氨基酸序列
<400> 17
Pro Pro Ser Gly Leu Arg Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Leu Val Leu Thr Pro Gly Arg Pro Ala Ala Gly Leu Ser Thr Cys
20 25 30
Lys Thr Ile Asp Met Glu Leu Val Lys Arg Lys Arg Ile Glu Ala Ile
35 40 45
Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Ala Ser Pro Pro Ser Gln
50 55 60
Gly Glu Val Pro Pro Gly Pro Leu Pro Glu Ala Val Leu Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Thr Arg Asp Arg Val Ala Gly Glu Ser Ala Glu Pro Glu Pro
85 90 95
Glu Pro Glu Ala Asp Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Thr Arg Val Leu Met
100 105 110
Val Glu Thr His Asn Glu Ile Tyr Asp Lys Phe Lys Gln Ser Thr His
115 120 125
Ser Ile Tyr Met Phe Phe Asn Thr Ser Glu Leu Arg Glu Ala Val Pro
130 135 140
Glu Pro Val Leu Leu Ser Arg Ala Glu Leu Arg Leu Leu Arg Leu Lys
145 150 155 160
Leu Lys Val Glu Gln His Val Glu Leu Tyr Gln Lys Tyr Ser Asn Asn
165 170 175
Ser Trp Arg Tyr Leu Ser Asn Arg Leu Leu Ala Pro Ser Asp Ser Pro
180 185 190
Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Gly Val Val Arg Gln Trp Leu Ser
195 200 205
Arg Gly Gly Glu Ile Glu Gly Phe Arg Leu Ser Ala His Cys Ser Cys
210 215 220
Asp Ser Arg Asp Asn Thr Leu Gln Val Asp Ile Asn Gly Phe Thr Thr
225 230 235 240
Gly Arg Arg Gly Asp Leu Ala Thr Ile His Gly Met Asn Arg Pro Phe
245 250 255
Leu Leu Leu Met Ala Thr Pro Leu Glu Arg Ala Gln His Leu Gln Ser
260 265 270
Ser Arg His Arg Arg Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser Thr
275 280 285
Glu Lys Asn Cys Cys Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys Asp
290 295 300
Leu Gly Trp Lys Trp Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn Phe
305 310 315 320
Cys Leu Gly Pro Cys Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr Ser
325 330 335
Lys Val Leu Ala Leu Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala
340 345 350
Pro Cys Cys Val Pro Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr Tyr
355 360 365
Val Gly Arg Lys Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Arg
370 375 380
Ser Cys Lys Cys Ser
385
<210> 18
<211> 431
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FOXP3的示例性氨基酸序列
<400> 18
Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala
20 25 30
Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg
35 40 45
Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met
50 55 60
Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala
65 70 75 80
Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu
85 90 95
Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His
100 105 110
Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met
115 120 125
Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys
130 135 140
Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp
145 150 155 160
Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala
165 170 175
Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro
180 185 190
Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe
195 200 205
Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu
210 215 220
Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln
225 230 235 240
Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met
245 250 255
Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val
260 265 270
Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln
275 280 285
Gly Pro Val Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser
290 295 300
Leu Phe Ala Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr
305 310 315 320
Phe Pro Glu Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met
325 330 335
Arg Pro Pro Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu
340 345 350
Ala Pro Glu Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr
355 360 365
Arg Met Phe Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala
370 375 380
Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser
385 390 395 400
Glu Lys Gly Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys
405 410 415
Arg Ser Gln Arg Pro Ser Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro
420 425 430
<210> 19
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 VH
<400> 19
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 VL
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2和抗IFNy NovImmune克隆A6 -
依玛鲁单抗 - CDRH1（Kabat）
<400> 21
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2和抗IFNy NovImmune克隆A6 -
依玛鲁单抗 - CDRH1（AbM）
<400> 22
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2和抗IFNy NovImmune克隆A6 -
依玛鲁单抗 - CDRH1（IMGT）
<400> 23
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRH2（Kabat）
<400> 24
Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRH2（AbM）
<400> 25
Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr
1 5 10
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRH2（IMGT）
<400> 26
Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr
1 5
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 27
Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRH3（IMGT）
<400> 28
Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr
1 5
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 29
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 30
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRL1（IMGT）
<400> 30
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 31
Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser
1 5
<210> 32
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRL2（IMGT）
<400> 32
Ser Ala
1
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNF-α scFv克隆P3H2 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 33
Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro Thr Thr
1 5
<210> 34
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 VH
<400> 34
Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 35
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 VL
<400> 35
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Arg Gly
85 90 95
Ser His Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH1（Kabat）
<400> 36
Asn Tyr Trp Met His
1 5
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH1（AbM）
<400> 37
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Met His
1 5 10
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH1（IMGT）
<400> 38
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp
1 5
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH2（Kabat）
<400> 39
Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Val
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH2（AbM）
<400> 40
Ala Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH2（IMGT）
<400> 41
Ile Tyr Pro Gly Ile Ser Asp Thr
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 42
Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRH3（IMGT）
<400> 43
Thr Arg Asp Glu Asp Phe Asp Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 44
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRL1（IMGT）
<400> 45
Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 46
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 47
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52和抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 -
CDRL2（IMGT）
<400> 47
Lys Val
1
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 6AE52 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 48
Phe Arg Gly Ser His Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 VH
<400> 49
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 VL
<400> 50
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gly Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH1（Kabat）
<400> 51
Ser Tyr Gly Val His
1 5
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH1（AbM）
<400> 52
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His
1 5 10
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH1（IMGT）
<400> 53
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH2（Kabat）
<400> 54
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 10 15
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH2（AbM）
<400> 55
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn
1 5
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH2（IMGT）
<400> 56
Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 57
Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRH3（IMGT）
<400> 58
Ala Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 59
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRL1（IMGT）
<400> 60
Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 61
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 62
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRL2（IMGT）
<400> 62
Arg Thr
1
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IFN-γ scFv TII 2G1G7 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 63
Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 64
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2DE7的示例性氨基酸序列
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 65
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7 VH
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 66
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7 VL
<400> 66
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4-
CDRH1（Kabat）
<400> 67
Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4-
CDRH1（AbM）
<400> 68
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRH1（IMGT）
<400> 69
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4-
CDRH2（Kabat）
<400> 70
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRH2（AbM）
<400> 71
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp
1 5 10
<210> 72
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRH2（IMGT）
<400> 72
Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile
1 5
<210> 73
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 73
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 74
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7 - CDRH3（IMGT）
<400> 74
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 75
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 75
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 76
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRL1（IMGT）
<400> 76
Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
1 5
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 77
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 78
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7和抗TNFa scFv克隆2SD4 -
CDRL2（IMGT）
<400> 78
Ala Ala
1
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆Humira D2E7 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 79
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 80
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2SD4 VH
<400> 80
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 81
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2SD4 VL
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 82
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2SD4 VL - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 82
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Leu Asp Asn
1 5 10
<210> 83
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2SD4 VL - CDRH3（IMGT）
<400> 83
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Leu Asp Asn
1 5 10
<210> 84
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆2SD4 VL - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 84
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala
1 5
<210> 85
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗VH
<400> 85
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser
115
<210> 86
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗VL
<400> 86
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys
100 105
<210> 87
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH1（Kabat）
<400> 87
Asn His Trp Met Asn
1 5
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH1（AbM）
<400> 88
Gly Phe Ile Phe Ser Asn His Trp Met Asn
1 5 10
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH1（IMGT）
<400> 89
Gly Phe Ile Phe Ser Asn His Trp
1 5
<210> 90
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH2（Kabat）
<400> 90
Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH2（AbM）
<400> 91
Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His
1 5 10
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH2（IMGT）
<400> 92
Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr
1 5 10
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 93
Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRH3（IMGT）
<400> 94
Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 95
Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser Ile His
1 5 10
<210> 96
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRL1（IMGT）
<400> 96
Gln Phe Val Gly Ser Ser
1 5
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 97
Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser
1 5
<210> 98
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRL2（IMGT）
<400> 98
Tyr Ala
1
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆cA2 - 英夫利昔单抗 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 99
Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe Thr
1 5
<210> 100
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗VH
<400> 100
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Ser Ser Gly Trp Tyr Val Pro His Trp Phe Asp Pro
100 105 110
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 101
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗VL
<400> 101
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Glu Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Gly
85 90 95
Ser Asn Arg Trp Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 102
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRH2（Kabat）
<400> 102
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 103
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRH2（AbM）
<400> 103
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 104
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRH2（IMGT）
<400> 104
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 105
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 105
Asp Gly Ser Ser Gly Trp Tyr Val Pro His Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 106
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRH3（IMGT）
<400> 106
Ala Lys Asp Gly Ser Ser Gly Trp Tyr Val Pro His Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 107
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 107
Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Ser Asn Tyr Val Gln
1 5 10
<210> 108
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRL1（IMGT）
<400> 108
Ser Gly Ser Ile Val Ser Asn Tyr
1 5
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 109
Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser
1 5
<210> 110
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRL2（IMGT）
<400> 110
Glu Asp
1
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy NovImmune克隆A6 - 依玛鲁单抗 - CDRL3（Kabat，AbM，
IMGT）
<400> 111
Gln Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Trp Met
1 5 10
<210> 112
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗VH
<400> 112
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Arg Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Val His Tyr Asn Gln Asp Phe Lys
50 55 60
Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Leu Pro Trp Phe Ala Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 113
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗VL
<400> 113
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg
100 105
<210> 114
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH1（Kabat）
<400> 114
Ser Ser Trp Ile Asn
1 5
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH1（AbM）
<400> 115
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Ser Trp Ile Asn
1 5 10
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH1（IMGT）
<400> 116
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Ser Trp
1 5
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH2（Kabat）
<400> 117
Arg Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Val His Tyr Asn Gln Asp Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 118
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH2（AbM）
<400> 118
Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Val
1 5
<210> 119
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH2（IMGT）
<400> 119
Arg Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Val His
1 5 10
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 120
Gly Phe Leu Pro Trp Phe Ala Asp
1 5
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRH3（IMGT）
<400> 121
Ala Arg Gly Phe Leu Pro Trp Phe Ala Asp
1 5 10
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 122
Lys Ala Ser Glu Asn Val Asp Thr Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRL1（IMGT）
<400> 123
Glu Asn Val Asp Thr Tyr
1 5
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 124
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 125
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗和抗IL17A克隆AIN457 -
苏金单抗 - CDRL2（IMGT）
<400> 125
Gly Ala
1
<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IFNy HuZAF - 芳托利珠单抗 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 126
Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 127
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗VH
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp
100 105 110
Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 128
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗VL
<400> 128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 129
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH1（Kabat）
<400> 129
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH1（AbM）
<400> 130
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 131
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH1（IMGT）
<400> 131
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
1 5
<210> 132
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH2（Kabat）
<400> 132
Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH2（AbM）
<400> 133
Ala Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr
1 5 10
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH2（IMGT）
<400> 134
Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys
1 5
<210> 135
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 135
Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Leu
<210> 136
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRH3（IMGT）
<400> 136
Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Tyr Ile His Tyr Trp
1 5 10 15
Tyr Phe Asp Leu
20
<210> 137
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 137
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 138
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRL1（IMGT）
<400> 138
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 139
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆AIN457 - 苏金单抗 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 140
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Cys Thr
1 5
<210> 141
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗VH
<400> 141
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 142
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗VL
<400> 142
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 143
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH1（Kabat）
<400> 143
Asp Tyr His Ile His
1 5
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH1（AbM）
<400> 144
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Ile His
1 5 10
<210> 145
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH1（IMGT）
<400> 145
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His
1 5
<210> 146
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH2（Kabat）
<400> 146
Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 147
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH2（AbM）
<400> 147
Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp
1 5 10
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH2（IMGT）
<400> 148
Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr
1 5
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH3（Kabat，AbM）
<400> 149
Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr
1 5 10
<210> 150
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRH3（IMGT）
<400> 150
Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr
1 5 10
<210> 151
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRL1（Kabat，AbM）
<400> 151
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 152
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRL1（IMGT）
<400> 152
Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRL2（Kabat，AbM）
<400> 153
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile
1 5
<210> 154
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL17A克隆Mab126 - 依奇珠单抗 - CDRL3（Kabat，AbM，IMGT）
<400> 154
Ser Gln Ser Thr His Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 155
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8跨膜结构域的示例性氨基酸序列
<400> 155
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 156
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG4铰链的示例性氨基酸序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 156
Xaa Xaa Xaa
1
<210> 157
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgD铰链的示例性氨基酸序列
<400> 157
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 158
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BB共刺激
胞内信号传导结构域的示例性氨基酸序列
<400> 158
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 159
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD27共刺激
胞内信号传导结构域的示例性氨基酸序列
<400> 159
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45
<210> 160
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含IFN-γ scFv
TII 2G1G7、IgG4铰链区、CD28跨膜结构域、
CD28共刺激结构域和CD3 ζ信号传导结构域的CAR的示例性氨基酸序列
（有前导序列）
<400> 160
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu
20 25 30
Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe
35 40 45
Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr
145 150 155 160
Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met
165 170 175
Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Lys Ser Gly Gly Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Arg Thr Ser
195 200 205
Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala
225 230 235 240
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
275 280 285
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
290 295 300
Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn
305 310 315 320
Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr
325 330 335
Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser
340 345 350
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
355 360 365
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
370 375 380
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
385 390 395 400
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
405 410 415
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
420 425 430
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
435 440 445
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
450 455
<210> 161
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含TNF
α scFv、CD28铰链、CD28跨膜结构域、CD28
共刺激结构域和CD3 ζ信号传导结构域的CAR PMC882的示例性氨基酸序列（无
前导序列）
<400> 161
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
130 135 140
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
145 150 155 160
Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn
210 215 220
Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ala Ser
225 230 235 240
Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
245 250 255
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
260 265 270
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
275 280 285
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
290 295 300
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
305 310 315 320
Asn Met Thr Pro Arg Arg Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
325 330 335
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe
340 345 350
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
355 360 365
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
370 375 380
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
385 390 395 400
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
405 410 415
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
420 425 430
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
435 440 445
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
450 455 460
<210> 162
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆P3H2 VH
<400> 162
Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 163
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TNFa scFv克隆P3H2 VL
<400> 163
Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Ala Pro
85 90 95
Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala
100 105 110
<210> 164
<211> 78
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8a铰链的示例性氨基酸序列
<400> 164
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr
35 40 45
Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys
50 55 60
His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
65 70 75
<210> 165
<211> 438
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含IFN-γ scFv
TII 2G1G7、IgG4铰链区、CD28跨膜结构域、
CD28共刺激结构域和CD3 ζ信号传导结构域的CAR的示例性氨基酸序列
（无前导序列）
<400> 165
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Asp Gly Asn Arg Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile
130 135 140
Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser
145 150 155 160
Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly
165 170 175
Gly Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
180 185 190
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu
225 230 235 240
Leu Lys Arg Ala Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr
260 265 270
Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg
290 295 300
Leu Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp
305 310 315 320
Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
325 330 335
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
340 345 350
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
355 360 365
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
370 375 380
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
385 390 395 400
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
405 410 415
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
420 425 430
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
435
<210> 166
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TNF-α scFv克隆P3H2 - v2的示例性氨基酸序列
<400> 166
Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Lys Gly Gly Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala
210 215 220
Asn Asn Ala Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
Arg Ala Ala Ala

Claims (103)

1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中该胞外结构域结合一种或多种炎症相关因子。
2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该一种或多种炎症相关因子选自由以下组成的组：白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素18(IL-18)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17A(IL-17)、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL16和CCL2-20。
3.如权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其中该胞外结构域包含一个或多个抗原结合结构域，其中该/每个抗原结合结构域独立地选自由以下组成的组：抗体、抗体片段、单链可变片段(scFv)、趋化因子受体或其功能变型。
4.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中该趋化因子受体选自由以下组成的组：CCR5、CXCR3、CCR1和CCR2。
5.如权利要求3至4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该/每个抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
6.如权利要求1至5中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该胞外结构域包含以下任何一种或多种：
i)结合TNF-α的scFv，
ii)结合IFN-γ的scFv，以及
iii)结合IL-17的scFv。
7.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合TNF-α：SEQ ID NO:1；19和20；64；65和66；80和81；85和86；以及162和163。
8.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合IFN-γ：SEQ ID NO:3；5；34和35；49和50；100和101；以及112和113。
9.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域与包含以下的抗体竞争结合IL-17a：SEQ ID NO:127和128；141和142。
10.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:20、35、50、66、81、86、101、113、128、142或163所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:19、34、49、65、80、85、100、112、127、141或162所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
11.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:163所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:162所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
12.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
13.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
14.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:66所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
15.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:81所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:80所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
16.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:86所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:85所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
17.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:101所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
18.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:113所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:112所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
19.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:128所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:127所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
20.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:142所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:141所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
21.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:29、30、44、45、59、60、75、76、95、96、107、108、122、123、137、138、151或152的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31、32、46、47、61、62、77、78、97、98、109、110、124、125、139或153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33、48、63、79、84、99、111、126、140或154的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:21、22、23、36、37、38、51、52、53、67、68、69、87、88、89、114、115、116、129、130、131、143、144或145的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:24、25、26、39、40、41、54、55、56、70、71、72、90、91、92、102、103、104、117、118、119、132、133、134、146、147或148的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27、28、42、43、57、58、73、74、82、83、93、94、105、106、120、121、135、136、149或150的氨基酸序列。
22.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:29的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:21的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:24的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:29的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:31的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:22的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:25的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:30的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:32的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:33的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:23的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:26的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
23.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:44的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:46的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:36的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:39的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:44的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:46的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:37的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:40的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:45的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:47的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:38的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:41的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:43的氨基酸序列。
24.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:59的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:61的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:51的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:54的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:57的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:59的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:61的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:52的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:55的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:57的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:60的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:62的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:53的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:56的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
25.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:67的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:70的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:73的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:68的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:71的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:73的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:76的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:78的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:79的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:69的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:72的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
26.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:67的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:70的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:82的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:75的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:77的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:68的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:71的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:82的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:76的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:78的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:84的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:69的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:72的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
27.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:95的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:97的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:87的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:90的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:95的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:97的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:88的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:91的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:93的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:96的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:98的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:99的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:89的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:92的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
28.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:107的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:109的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:21的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:102的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:105的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:107的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:109的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:111的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:22的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:103的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:105的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:108的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:110的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:111的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:23的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:104的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:106的氨基酸序列。
29.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:122的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:124的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:114的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:117的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:120的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:122的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:124的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:1的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:18的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:120的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:123的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:125的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:126的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:116的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:119的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
30.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:137的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:139的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:129的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:132的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:135的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:137的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:139的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:130的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:133的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:135的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:138的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:125的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:131的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:134的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:136的氨基酸序列。
31.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原识别结构域包含：
(a)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:151的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(b)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:143的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:146的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:149的氨基酸序列，或者
(c)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:151的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:153的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(d)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:144的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:147的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:149的氨基酸序列，或者
(e)轻链可变结构域(VL)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:152的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:47的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:154的氨基酸序列；以及
(f)重链可变结构域(VH)，其包含：含有以下或由以下组成的互补决定区(CDR)1：SEQID NO:145的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR2：SEQ ID NO:148的氨基酸序列；含有以下或由以下组成的CDR3：SEQ ID NO:150的氨基酸序列。
32.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
33.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:3所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
34.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或其间任何百分比的同一性。
35.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID:1所示氨基酸序列。
36.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3所示氨基酸序列。
37.如权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该抗原结合结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5所示氨基酸序列。
38.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该嵌合抗原受体进一步包含位于该胞外结构域和该跨膜结构域之间的铰链区。
39.如权利要求38所述的嵌合抗原受体，其中该铰链区选自由以下组成的组：CD8a铰链、CD28铰链和IgG铰链。
40.如权利要求39所述的嵌合抗原受体，其中该铰链区是或包含CD8a铰链区或IgG4铰链。
41.如权利要求38-39中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该铰链区包含SEQ ID:7的氨基酸序列。
42.如权利要求1-41中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该胞内结构域包含以下中一种或多种：信号传导结构域、一个或多个共刺激结构域和叉头框P3(FOXP3)转录因子。
43.如权利要求42所述的嵌合抗原受体，其中该信号传导结构域包含一种或多种基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。
44.如权利要求42或43所述的嵌合抗原受体，其中该信号传导结构域包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种的胞内信号传导结构域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b、CD66d及其功能变型/片段。
45.如权利要求42-44中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该信号传导结构域是CD3ζ或其功能变体的胞内信号传导结构域。
46.如权利要求42-45中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该信号传导结构域由SEQID:5所示核苷酸序列或其密码子冗余序列编码。
47.如权利要求42-46中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该一个或多个共刺激结构域中的每一个包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种(例如，共刺激受体、整合素、NK受体等)的胞内信号传导结构域：CD28、CD28T、OX40、4-1BB/CD137、CD2、CD4、CD5、CD7、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD 33、CD37、CD40、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、PD-l、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-l(LFA-l(CD1 la/CDl8)、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHC I类分子、TNF、TNFr、整合素、信号传导淋巴细胞激活分子、BTLA、Toll配体受体、ICAM-l、B7-H3、CDS、ICAM-l、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD1ld、ITGAE、CD 103、IT GAL、CD1la、LFA-l、ITGAM、CD1lb、ITGAX、CD1lc、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-l、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD 150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD 162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CDl9a、CD83配体及其功能变型/片段。
48.如权利要求47所述的嵌合抗原受体，其中该一个或多个共刺激结构域中的每一个包含选自由以下组成的组的蛋白质中任一种的胞内信号传导结构域：CD28、41BB、IL2Rb、TLR2、MyD88和CD40。
49.如权利要求48所述的嵌合抗原受体，其中该一个或多个共刺激结构域包含CD28的胞内信号传导结构域。
50.如权利要求1-49中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该胞内结构域包含共刺激结构域，其中该共刺激结构域是或包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CD28胞内信号传导结构域。
51.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该跨膜结构域是选自由以下组成的组的蛋白质的跨膜结构域：CD28、CD28T、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-l(PD-l)、诱导型T细胞共刺激因子(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-l、CD1la/CDl8)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHC 1类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白、细胞因子受体、整合素及其功能变型/片段。
52.如权利要求51所述的嵌合抗原受体，其中该跨膜结构域是CD3ε跨膜结构域或其功能变体。
53.如权利要求1至51中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该跨膜结构域是包含以下或由以下组成的CD28跨膜结构域：SEQ ID:10的氨基酸序列。
54.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该胞外结构域和/或该胞内结构域包含自切割肽。
55.如权利要求54所述的嵌合抗原受体，其中该自切割肽选自由以下组成的组：P2A、E2A、F2A和T2A。
56.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该铰链区包含IgG4铰链，该跨膜结构域包含CD28跨膜结构域，该共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域，该信号传导结构域包含CD3ζ的胞内信号传导结构域，该胞内结构域包含FOXP3，其中该CD3ζ的胞内信号传导结构域和该FOX3P被自切割肽TA2分开。
57.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该铰链区包含IgG4铰链，该跨膜结构域包含CD28跨膜结构域，该共刺激结构域是CD28的胞内信号传导结构域，该信号传导结构域包含CD3ζ的胞内信号传导结构域。
58.如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体，其中该嵌合抗原受体包含SEQ IDNO:12的序列。
59.一种第一多核苷酸，其编码如前述权利要求中任一项所述的嵌合抗原受体。
60.一种载体，其包含如权利要求59所述的第一多核苷酸。
61.如权利要求60所述的载体，其中该载体是病毒载体，任选地是慢病毒载体。
62.一种经修饰细胞，其包含如权利要求1-58中任一项所述的嵌合抗原受体、如权利要求59所述的第一多核苷酸、和/或如权利要求60-61中任一项所述的载体。
63.如权利要求62所述的经修饰细胞，其中该经修饰细胞是经修饰T细胞。
64.如权利要求63所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞表达一种或多种免疫抑制分子。
65.如权利要求64所述的经修饰细胞，其中当该经修饰T细胞被激活时，该经修饰T细胞表达一种或多种免疫抑制分子。
66.如权利要求65所述的经修饰细胞，其中为了表达该一种或多种免疫抑制分子，该经修饰T细胞包含编码以下的第二多核苷酸：
a.包含一个或多个NFAT(活化T细胞核因子)结合位点的启动子，以及
b.一种或多种免疫抑制分子；
其中NFAT与该启动子的结合诱导该一种或多种免疫抑制分子的表达。
67.如权利要求66所述的经修饰细胞，其中该启动子包含或者是白细胞介素-2(IL-2)或其衍生物的启动子。
68.如权利要求66或67所述的经修饰细胞，其中当该第二多核苷酸编码多于一种免疫抑制分子时，这些免疫抑制分子的编码序列被一个或多个接头序列分开。
69.如权利要求68所述的经修饰细胞，其中该一个或多个接头序列编码甘氨酸-丝氨酸(GS)接头，例如GSG接头。
70.如权利要求68或69所述的经修饰细胞，其中该一个或多个接头序列中的每一个进一步编码如权利要求24至25中任一项所定义的自切割肽。
71.如权利要求63-70中任一项所述的经修饰细胞，其中该一种或多种免疫抑制分子能够抑制效应T细胞的活性或能够诱导效应T细胞的无反应性。
72.如权利要求63-71中任一项所述的经修饰细胞，其中该一种或多种免疫抑制分子选自由以下组成的组：IL-10、TGF-β、CTLA-4、LAG3、PD-L1、FOXP3和PD-1。
73.如权利要求63-72中任一项所述的经修饰细胞，其中该一种或多种免疫抑制分子选自由以下组成的组：IL-10、TGF-β和FOXP3。
74.如权利要求73所述的经修饰细胞，其中免疫抑制分子是IL-10和TGF-β，或IL-10、TGF-β和FOXP3。
75.如权利要求66-74中任一项所述的经修饰细胞，其中该第二多核苷酸包含SEQ ID:13所示序列。
76.如权利要求63-75中任一项所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞进一步包含第三多核苷酸，所述第三多核苷酸编码诱导型自杀系统，其中该经修饰T细胞与诱导物分子的接触将诱导所述经修饰T细胞中的细胞死亡。
77.如权利要求76所述的经修饰细胞，其中该诱导型自杀系统是胱天蛋白酶-9(iCasp9)自杀基因系统。
78.如权利要求76或77所述的经修饰细胞，其中该诱导物是CID(也称为AP1903/Rimiducid)。
79.如权利要求63-78中任一项所述的经修饰细胞，其中该第一和第二多核苷酸在一个载体上编码或在不同载体上编码。
80.如权利要求76-79中任一项所述的经修饰细胞，其中该第一、第二和第三多核苷酸包含在一个载体上，或者在两个或更多个不同的载体上编码。
81.如权利要求63-80中任一项所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞是由调节性T细胞(Treg)修饰而来。
82.如权利要求81所述的经修饰细胞，其中该Treg是从受试者分离的，或者其中该Treg是从受试者分离的并且离体扩增的。
83.如权利要求82所述的经修饰细胞，其中当从受试者分离Treg时，从该受试者的PBMC分离该Treg。
84.如权利要求63-80中任一项所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞源自诱导多能干细胞(iPSC)。
85.如权利要求84所述的经修饰细胞，其中该iPSC源自供体CD34+iPSC。
86.如权利要求63-85中任一项所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞具有低免疫原性。
87.如权利要求86所述的经修饰细胞，其中主要组织相容性类别(MHC)I的一种或多种基因和主要组织相容性类别(MHC)II的一种或多种基因缺失或突变，其中这些基因的扰动导致MHC I和MHC II蛋白复合物的功能障碍。
88.如权利要求87所述的经修饰细胞，其中MHCI和II的该一种或多种基因包含至少B2M(β2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)。
89.如权利要求63-88中任一项所述的经修饰细胞，其中该经修饰T细胞被进一步修饰以过表达CD47或其功能变体。
90.一种产生嵌合抗原受体(CAR)-调节性T细胞(CAR-Treg)的方法，所述方法包括：
c.从受试者的外周血单个核细胞(PBMC)中分离调节性T细胞(Treg)；
d.对分离的Treg进行离体扩增；以及
e.用如权利要求60或61所述的载体转导扩增的Treg，使得转导的Treg表达如权利要求1-58中任一项所述的CAR。
91.一种产生经修饰低免疫原性iPSC来源的T细胞的方法，所述方法包括：
f.对CD34+-iPSC的基因组进行编辑以将B2M(β2微球蛋白)和CIITA(II类MHC反式激活因子)基因均敲除；
g.对CD47或其功能变体进行基因编辑和敲入，其中敲入的T-iPSC过表达CD47；
h.用如权利要求60或61所述的载体转导低免疫原性CD34+iPSC，使得转导的T细胞表达如权利要求1-58中任一项所述的嵌合抗原受体；
i.使低免疫原性CAR-iPSC分化以产生经修饰iPSC来源的T细胞。
92.如权利要求91所述的方法，其中步骤a.和b.使用CRISPR-Cas基因编辑系统进行。
93.如权利要求90-92中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括以下中任何一项或多项：
e.测试如权利要求1-58中任一项所述的嵌合抗原受体的表达；
f.测试嵌合抗原受体-Treg或CAR-iPSC来源的T细胞响应于接触这些炎症相关因子而产生一种或多种免疫抑制分子的功能潜力；以及
g.测试这些CAR-Treg或CAR-iPSC来源的T细胞抑制效应T细胞激活/增殖的功能潜力。
94.如权利要求90-93中任一项所述的方法，其中该载体是病毒载体，优选地是慢病毒载体。
95.如权利要求63-89中任一项所述的经修饰细胞，其用于在疗法中使用，优选地其中该疗法用于治疗涉及由一种或多种炎症相关因子介导的不受控炎症反应或由这些不受控炎症反应引起的疾病或病症。
96.如权利要求63-89中任一项所述的经修饰细胞，其用于在以下的治疗中使用：自身免疫性疾病；移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)或细胞因子释放综合征。
97.一种治疗自身免疫性疾病、移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)或细胞因子释放综合征的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的如权利要求63-89中任一项所述的经修饰T细胞。
98.如权利要求96所述的经修饰细胞，或如权利要求97所述的方法，其中该自身免疫性疾病选自由以下组成的组：类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、银屑病、狼疮、幼年型类风湿性关节炎、多发性硬化症、炎性肠病和克罗恩病。
99.如权利要求96所述的经修饰细胞，或如权利要求97所述的方法，其中该移植排斥选自由以下组成的组：器官移植排斥、干细胞移植排斥和骨髓移植排斥。
100.一种在有需要的受试者中诱导免疫耐受的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的如权利要求63-89中任一项所述的经修饰细胞。
101.一种在有需要的受试者中局部或全身下调炎症的方法，其中该方法包括施用治疗有效数量的如权利要求63-89中任一项所述的经修饰细胞。
102.一种在受试者中局部或全身抑制效应T细胞的活性的方法，其中该方法包括向该受试者局部或全身施用如权利要求63-89中任一项所述的经修饰细胞。
103.一种载体，其包含SEQ ID NO:14或15所示序列。
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