KR20230159819A - 골관절염, 류마티스 관절염, 관절 및 힘줄 장애를 치료하기위한 조성물 및 방법 - Google Patents
골관절염, 류마티스 관절염, 관절 및 힘줄 장애를 치료하기위한 조성물 및 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본원에는 채널 개방을 저해하거나 차단하기 위해 코넥신 43 헤미채널에 결합하는 항체가 개시된다. 또한 Cx43 헤미채널 개방을 저해하거나 차단하는 항체를 사용하여 골관절염, 류마티스 관절염, 및 힘줄 장애 및 손상을 검출하거나 치료하는 방법이 본원에 개시된다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 1월 13일자로 제출된 미국 가출원 제63/136,753호의 출원일에 대한 이익을 주장한다. 이러한 이전 제출된 출원의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록에 대한 참조
2022년 1월 12일자로 생성되고 크기가 32,768바이트인 "21105_0082P1_SL.txt"라는 이름의 텍스트 파일로 본원에 제출된 서열 목록은 37 C.F.R. § 1.52(e)(5)에 따라 본원에 참고로 포함된다.
코넥신 헤미채널(connexin hemichannel)은 세포 및 조직 기능에서 중요한 역할을 하며, 코넥신 헤미채널의 비정상적인 기능은 본원에 기술된 것과 같은 다양한 병리학적 상태에 수반될 수 있다. 따라서, 헤미채널 활성과 연관된 병리학적 상태를 치료하기 위한 추가 요법, 뿐만 아니라 이러한 요법을 식별하는 방법에 대한 필요성이 남아 있다.
골관절염은 전 세계 수백만 명의 사람들에게 영향을 미치는 가장 흔한 형태의 관절염이다. 골관절염은 모든 관절을 손상시킬 수 있으며 가장 일반적으로 손, 무릎, 엉덩이 및 척추의 관절에 영향을 미친다. 현재 이용 가능한 치료법은 통증 관리와 연관되어 있다. 또한, 골관절염의 치료에 대한 필요성도 존재한다.
본원에는 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골하 골경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골하 골경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 연골하 골경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 골관절염 중 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 골관절염 중 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 대상체의 골관절염 중 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 개시되며, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 재조합 코넥신 43(Cx43) 헤미채널-결합 항체 또는 이의 단편이 개시된다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호 19에 상응하는 제1 VH CDR 또는 이의 단편, 서열번호 20에 상응하는 제2 VH CDR 또는 이의 단편, 서열번호 21에 상응하는 제3 VH CDR 또는 이의 단편, 서열번호 31에 상응하는 제1 VL CDR 또는 이의 단편, 서열번호 32에 상응하는 제2 VL CDR 또는 이의 단편, 및 서열번호 33에 상응하는 제3 VL CDR 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 인간화 항체일 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, 또는 서열번호 19에 상응하는 제1 VH CDR, 서열번호 20에 상응하는 제2 VH CDR, 서열번호 21에 상응하는 제3 VH CDR, 서열번호 31에 상응하는 제1 VL CDR, 서열번호 32에 상응하는 제2 VL CDR 및 서열번호 33에 상응하는 제3 VL CDR을 포함하는 유전자 변형된 IgG 부류 항체일 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 IgG 부류의 항체일 수 있고, 여기서 IgG 부류 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 부류 항체일 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호 58과 적어도 90% 동일한 VH 아미노산 서열 및/또는 이의 단편, 및/또는 서열번호 60과 적어도 90% 동일한 VL 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호 58에 따른 VH 아미노산 서열 또는 이의 단편 및/또는 서열번호 60에 따른 VL 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본 출원 전반에 걸쳐 논의된다. 본 발명의 한 측면과 관련하여 논의된 임의의 측면은 또한 본 발명의 다른 측면에도 적용되며 그 반대도 마찬가지이다. 본원에 기술된 각각의 측면은 본 발명의 다른 측면에 적용가능한 본 발명의 측면인 것으로 이해된다. 본원에 논의된 임의의 측면은 본 발명의 임의의 방법 또는 조성물과 관련하여 구현될 수 있고, 그 반대도 마찬가지임이 고려된다. 또한, 본 발명의 조성물 및 키트는 본 발명의 방법을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 장점은 다음의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 특정 예는 본 발명의 특정 실시양태를 나타내지만 단지 예시로서 주어진다는 것을 이해해야 하며, 이는 본 발명의 사상 및 범위 내에서 다양한 변화 및 수정이 이 상세한 설명으로부터 관련 기술분야의 기술자에게 명백해질 것이기 때문이다.
다음 도면은 본 명세서의 일부를 형성하고 본 발명의 특정 측면을 추가로 입증하기 위해 포함된다. 본 발명은 본원에 제시된 구체적인 실시양태의 상세한 설명과 함께 이들 도면 중 하나 이상을 참조함으로써 더 잘 이해될 수 있다.
도 1a-d는 M1 항체 치료가 연골 완전성을 보존함을 보여준다. 도 1a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인의 다이어그램이다. 도 1b는 식염수 또는 M1 항체-처리된 마우스의 사프라닌(Safranin) O/패스트 그린(Fast Green) 조직학적 염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 200μm. 도 1c는 DMM 수술 후 8주째 내측 대퇴골과(MFC, 상부 패널) 및 내측 경골 고평부(MTP, 하부 패널)의 평균 골관절염 연구 학회 국제(Averaged Osteoarthritis Research Society International: OARSI) 스코어를 보여준다. 도 1d는 관절의 3-레벨 섹션을 통한 MTP 및 MFC의 합산된 OARSI 스코어를 보여준다. *P < 0.05, **P < 0.01, n = 그룹당 8-13마리.
도 2a-b는 M1 항체 치료가 윤활막염을 저하시켰음을 보여준다. 도 2a는 윤활막염 스코어화(scoring)를 위한 식염수 또는 Cx43 항체-처리된 마우스의 대표적인 이미지를 보여준다. M, 반월판; L, 윤활막 내벽 세포. 도 2b는 DMM 수술 후 8주째 윤활막염 정도의 요약을 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 8-13마리의 마우스.
도 3a-b는 M1 항체 처리가 관절 연골에서 콜라겐 X(Col X) 수준을 감소시켰음을 보여준다. 도 3a는 식염수 또는 Cx43 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서 면역조직화학 염색된 ColX의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 50μm. 도 3b는 ColX 양성 연골 세포의 백분율의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 5마리의 마우스.
도 4a-b는 M1 항체 처리가 관절 연골에서 기질 금속단백질분해효소 13(MMP13) 수준을 감소시켰음을 보여준다. 도 4a는 식염수 또는 Cx43 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서 면역조직화학 염색된 MMP13의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 50μm. 도 4b는 MMP13 양성 연골 세포의 백분율의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n - 그룹당 5마리의 마우스.
도 5a-e는 Cx43 헤미채널의 저해가 연골하 골 경화증에 대해 보호함을 보여준다. 도 5a는 경골 고평부의 내측 및 외측 연골하 골 구획의 대표적인 2차원 마이크로컴퓨터 단층촬영(μCT) 이미지를 보여준다. 연골하 섬유주 골의 골 부피 분율(BV/TV)(도 5b), 섬유주 두께(Tb.Th)(도 5c), 섬유주 간격(Tb.Sp)(도 5d), 및 골 무기질 밀도(BMD)(도 5e)의 분석은 Cx43 항체 처리 후 DMM 마우스에서 저하된 연골하 골 경화증을 보여주었다. *P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001. n = 그룹당 6-8마리의 마우스.
도 6a-c는 M1 항체 처리가 골관절염 연관 통증 증상을 호전시켰음을 보여준다(Von Frey 필라멘트 테스트). 기계적 민감도 행동 평가는 수술 후 4주(도 6b) 및 8주(도 6a 및 6c)째에 수행했다. 뒷발의 움츠림 역치는 Von Frey 필라멘트 테스트로 측정했다. *P < 0.05, n = 그룹당 9-20마리.
도 7a-f는 M1 항체 처리가 골관절염 연관 통증 증상을 호전시켰음을 보여준다(오픈 필드 테스트). 오픈 필드 행동 평가는 수술 후 4주(도 7b 및 7e) 및 8주(도 7a, 7c, 7d 및 7f)에 마우스에 대해 수행했다. 도 7a-c는 이동한 총 거리를 나타내고, 7d-f는 10분 테스트 기간 동안 분석된 총 휴식 시간을 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 9-20마리.
도 8a-b는 M1 항체가 주로 윤활막에 결합함을 보여준다. 도 8a는 생체내 항체 결합 평가 절차에 대한 타임라인 다이어그램을 보여준다. 도 8b는 제조되어 Alexa Fluor 594-접합된 항-인간 IgG 2차 항체로 면역-표지된 동결 조직 절편을 보여준다. 스케일 바, 100μm.
도 9a-b는 M1 항체가 윤활막 대식세포와 함께 공동국재화된 것을 보여준다. 도 9a는 대식세포 마커 CD68에 의해 면역-표지된 절편을 보여주며, Cx43 항체는 윤활막 영역에서 CD68과 공동국재화했다. 스케일 바, 10μm. 도 9b는 A의 흰색 박스에 대한 확대도를 보여준다(오른쪽 패널). 스케일 바, 5μm.
도 10a-b는 M1 항체가 윤활막 섬유아세포와 함께 공동국재화된 것을 보여준다. 도 10a는 섬유아세포 마커 페리오스틴에 의해 면역-표지된 조직 절편을 보여주고, M1 항체는 페리오스틴과 함께 윤활막 영역에 공동국재화되었다. 스케일 바, 10μm. 도 10b는 도 10a의 흰색 박스의 확대도를 보여준다(오른쪽 패널). 스케일 바, 5μm.
도 11a-c는 윤활막에 전달된 M1 항체가 DMM 수술 후 헤미채널의 개방을 저해함을 보여준다. 도 11a는 DMM 수술 후 30분째에 식염수 또는 M1 항체로 처리된 마우스를 보여준다. 처리 후 2주째에 에반스 블루(Evans Blue)의 꼬리 정맥 주사를 수행했다. 동결 절편을 제조하고 헤미채널 염료 흡수는 형광 현미경으로 평가했다. 도 11b는 NIH ImageJ 소프트웨어에 의해 정량화된 오른쪽 무릎(DMM 수술)과 왼쪽 무릎(미수술)의 윤활막 영역으로부터의 에반스 블루 강도의 비율을 보여준다. 스케일 바, 50μm. **P < 0.01, n = 그룹당 마우스 4마리. 도 11c는 식염수-처리된 마우스로부터 제조된 동결 절편이 Cx43 항체로 면역-표지되었음을 보여준다. 스케일 바, 50μm.
도 12a-c는 단일 M1 항체 주사에 의해 개선된 연골 완전성을 보여준다. 도 12a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인의 다이어그램을 보여준다. 도 12b는 식염수 또는 M1 항체-처리된 마우스의 사프라닌 O/패스트 그린 조직학적 염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 200μm. 도 12c는 DMM 수술 후 8주째 내측 대퇴골과(MFC, 상부 패널) 및 내측 경골 고평부(MTP, 하부 패널)의 평균 골관절염 연구 학회 국제(OARSI) 스코어를 보여준다. *P < 0.05, **P < 0.01, n = 그룹당 3-7마리.
도 13a-b는 단일 항체 주사에 의한 관절 연골 내 MMP13 수준의 감소를 보여준다. 도 13a는 식염수 또는 M1 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서의 면역조직화학 염색된 MMP13의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 13b는 연골세포에서 MMP13의 염색 강도의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 5-6마리의 마우스.
도 14a-b는 단일 M1 항체 주사에 의한 통증 관련 행동의 완화를 보여준다. 도 14a는 뒷발의 움츠림 역치가 수술 후 8주째에 Von Frey 필라멘트 테스트에 의해 측정되었음을 보여준다. 도 14b는 오픈 필드 행동 평가가 수술 후 8주째에 수행되었음을 보여준다. 10분의 테스트 기간 동안 총 이동 거리(왼쪽 패널)와 총 휴식 시간(오른쪽 패널)을 분석했다. *P < 0.05, n = 그룹당 6-8마리.
도 15는 제안된 골관절염 모델을 보여준다. 골관절염은 관절 연골의 진행성 퇴행, 연골하 골 재형성, 골극 형성 및 윤활막 염증을 포함하는 모든 관절 조직에 영향을 미치는 질환이다. 염증이 있는 윤활막에서 활성화된 윤활막 세포는 연골 파괴를 담당하는 단백질분해 효소의 과잉 생성을 야기하는 이화작용 및 전염증성 매개인자를 생성한다. 무릎 관절의 윤활막은 Cx43을 발현하는 대식세포 및 섬유아세포를 포함한다. M1 항체의 투여는 염증성 사이토카인의 헤미채널 개방 및 방출을 차단하여 연골 파괴, 연골하 골 경화증 및 통증 증상을 완화한다.
도 16a-c는 지연된 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체) 처리가 윤활막염을 저하시킨다는 것을 보여준다. 도 16a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인을 보여준다. 도 16b는 윤활막염 스코어화를 위한 식염수 또는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)-처리된 마우스의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 16c는 DMM 수술 후 8주째 윤활막염 정도(윤활막염 스코어)를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 마우스 6마리.
도 17a-b는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 RAW264.7 및 SW982 세포에서 Cx43 헤미채널 개방을 차단했음을 보여준다. 도 17a는 마우스 대식세포 RAW264.7 세포를 LPS 및 Cx43E2 항체 또는 CBX(100μM)로 처리한 것을 보여준다. EtBr 염료 흡수 수준을 결정하고 형광 현미경 및 NIH Image J 소프트웨어로 정량화했다. B) 인간 윤활막 섬유아세포 SW982 세포는 IL1β 및 Cx43E2 항체 또는 CBX(100μM)로 처리했다. EtBr 염료 흡수 수준을 결정하고 형광 현미경 및 NIH Image J 소프트웨어로 정량화했다. 제시된 데이터는 평균 ± SEM이다. ****, P < 0.0001.
도 18은 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 RAW264.7 세포에서 LPS-유도 염증 유전자 발현을 저해했음을 보여준다. 마우스 대식세포 RAW264.7 세포를 Cx43E2 항체와 함께 또는 없이 30분 동안 사전-인큐베이션한 다음, 0.1μg/ml LPS와 함께 4시간 동안 인큐베이션했다. RNA 추출물을 제조하고 COX2, Adamts4, MMP3/13 및 IL6 mRNA 발현에 대해 qRT-PCR 분석으로 처리했다. *P<0.05, **P<0.01.
도 19는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 SW982 세포에서 IL1β-유도 염증성 유전자 발현을 저해했음을 보여준다. 인간 윤활막 섬유아세포 SW982 세포는 Cx43E2 항체와 함께 또는 없이 30분 동안 사전-인큐베이션한 다음, 1 ng/ml IL1β와 함께 14시간 동안 인큐베이션했다. RNA 추출물을 제조하고 COX2, Adamts4/5, MMP3/13 및 NOS2 mRNA 발현에 대해 qRT-PCR 분석으로 처리했다. *P<0.05, **P<0.01.
도 1a-d는 M1 항체 치료가 연골 완전성을 보존함을 보여준다. 도 1a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인의 다이어그램이다. 도 1b는 식염수 또는 M1 항체-처리된 마우스의 사프라닌(Safranin) O/패스트 그린(Fast Green) 조직학적 염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 200μm. 도 1c는 DMM 수술 후 8주째 내측 대퇴골과(MFC, 상부 패널) 및 내측 경골 고평부(MTP, 하부 패널)의 평균 골관절염 연구 학회 국제(Averaged Osteoarthritis Research Society International: OARSI) 스코어를 보여준다. 도 1d는 관절의 3-레벨 섹션을 통한 MTP 및 MFC의 합산된 OARSI 스코어를 보여준다. *P < 0.05, **P < 0.01, n = 그룹당 8-13마리.
도 2a-b는 M1 항체 치료가 윤활막염을 저하시켰음을 보여준다. 도 2a는 윤활막염 스코어화(scoring)를 위한 식염수 또는 Cx43 항체-처리된 마우스의 대표적인 이미지를 보여준다. M, 반월판; L, 윤활막 내벽 세포. 도 2b는 DMM 수술 후 8주째 윤활막염 정도의 요약을 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 8-13마리의 마우스.
도 3a-b는 M1 항체 처리가 관절 연골에서 콜라겐 X(Col X) 수준을 감소시켰음을 보여준다. 도 3a는 식염수 또는 Cx43 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서 면역조직화학 염색된 ColX의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 50μm. 도 3b는 ColX 양성 연골 세포의 백분율의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 5마리의 마우스.
도 4a-b는 M1 항체 처리가 관절 연골에서 기질 금속단백질분해효소 13(MMP13) 수준을 감소시켰음을 보여준다. 도 4a는 식염수 또는 Cx43 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서 면역조직화학 염색된 MMP13의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 50μm. 도 4b는 MMP13 양성 연골 세포의 백분율의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n - 그룹당 5마리의 마우스.
도 5a-e는 Cx43 헤미채널의 저해가 연골하 골 경화증에 대해 보호함을 보여준다. 도 5a는 경골 고평부의 내측 및 외측 연골하 골 구획의 대표적인 2차원 마이크로컴퓨터 단층촬영(μCT) 이미지를 보여준다. 연골하 섬유주 골의 골 부피 분율(BV/TV)(도 5b), 섬유주 두께(Tb.Th)(도 5c), 섬유주 간격(Tb.Sp)(도 5d), 및 골 무기질 밀도(BMD)(도 5e)의 분석은 Cx43 항체 처리 후 DMM 마우스에서 저하된 연골하 골 경화증을 보여주었다. *P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001. n = 그룹당 6-8마리의 마우스.
도 6a-c는 M1 항체 처리가 골관절염 연관 통증 증상을 호전시켰음을 보여준다(Von Frey 필라멘트 테스트). 기계적 민감도 행동 평가는 수술 후 4주(도 6b) 및 8주(도 6a 및 6c)째에 수행했다. 뒷발의 움츠림 역치는 Von Frey 필라멘트 테스트로 측정했다. *P < 0.05, n = 그룹당 9-20마리.
도 7a-f는 M1 항체 처리가 골관절염 연관 통증 증상을 호전시켰음을 보여준다(오픈 필드 테스트). 오픈 필드 행동 평가는 수술 후 4주(도 7b 및 7e) 및 8주(도 7a, 7c, 7d 및 7f)에 마우스에 대해 수행했다. 도 7a-c는 이동한 총 거리를 나타내고, 7d-f는 10분 테스트 기간 동안 분석된 총 휴식 시간을 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 9-20마리.
도 8a-b는 M1 항체가 주로 윤활막에 결합함을 보여준다. 도 8a는 생체내 항체 결합 평가 절차에 대한 타임라인 다이어그램을 보여준다. 도 8b는 제조되어 Alexa Fluor 594-접합된 항-인간 IgG 2차 항체로 면역-표지된 동결 조직 절편을 보여준다. 스케일 바, 100μm.
도 9a-b는 M1 항체가 윤활막 대식세포와 함께 공동국재화된 것을 보여준다. 도 9a는 대식세포 마커 CD68에 의해 면역-표지된 절편을 보여주며, Cx43 항체는 윤활막 영역에서 CD68과 공동국재화했다. 스케일 바, 10μm. 도 9b는 A의 흰색 박스에 대한 확대도를 보여준다(오른쪽 패널). 스케일 바, 5μm.
도 10a-b는 M1 항체가 윤활막 섬유아세포와 함께 공동국재화된 것을 보여준다. 도 10a는 섬유아세포 마커 페리오스틴에 의해 면역-표지된 조직 절편을 보여주고, M1 항체는 페리오스틴과 함께 윤활막 영역에 공동국재화되었다. 스케일 바, 10μm. 도 10b는 도 10a의 흰색 박스의 확대도를 보여준다(오른쪽 패널). 스케일 바, 5μm.
도 11a-c는 윤활막에 전달된 M1 항체가 DMM 수술 후 헤미채널의 개방을 저해함을 보여준다. 도 11a는 DMM 수술 후 30분째에 식염수 또는 M1 항체로 처리된 마우스를 보여준다. 처리 후 2주째에 에반스 블루(Evans Blue)의 꼬리 정맥 주사를 수행했다. 동결 절편을 제조하고 헤미채널 염료 흡수는 형광 현미경으로 평가했다. 도 11b는 NIH ImageJ 소프트웨어에 의해 정량화된 오른쪽 무릎(DMM 수술)과 왼쪽 무릎(미수술)의 윤활막 영역으로부터의 에반스 블루 강도의 비율을 보여준다. 스케일 바, 50μm. **P < 0.01, n = 그룹당 마우스 4마리. 도 11c는 식염수-처리된 마우스로부터 제조된 동결 절편이 Cx43 항체로 면역-표지되었음을 보여준다. 스케일 바, 50μm.
도 12a-c는 단일 M1 항체 주사에 의해 개선된 연골 완전성을 보여준다. 도 12a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인의 다이어그램을 보여준다. 도 12b는 식염수 또는 M1 항체-처리된 마우스의 사프라닌 O/패스트 그린 조직학적 염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 스케일 바, 200μm. 도 12c는 DMM 수술 후 8주째 내측 대퇴골과(MFC, 상부 패널) 및 내측 경골 고평부(MTP, 하부 패널)의 평균 골관절염 연구 학회 국제(OARSI) 스코어를 보여준다. *P < 0.05, **P < 0.01, n = 그룹당 3-7마리.
도 13a-b는 단일 항체 주사에 의한 관절 연골 내 MMP13 수준의 감소를 보여준다. 도 13a는 식염수 또는 M1 항체로 처리된 외과적 DMM 수술을 받은 마우스의 관절 연골 기질에서의 면역조직화학 염색된 MMP13의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 13b는 연골세포에서 MMP13의 염색 강도의 정량화를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 5-6마리의 마우스.
도 14a-b는 단일 M1 항체 주사에 의한 통증 관련 행동의 완화를 보여준다. 도 14a는 뒷발의 움츠림 역치가 수술 후 8주째에 Von Frey 필라멘트 테스트에 의해 측정되었음을 보여준다. 도 14b는 오픈 필드 행동 평가가 수술 후 8주째에 수행되었음을 보여준다. 10분의 테스트 기간 동안 총 이동 거리(왼쪽 패널)와 총 휴식 시간(오른쪽 패널)을 분석했다. *P < 0.05, n = 그룹당 6-8마리.
도 15는 제안된 골관절염 모델을 보여준다. 골관절염은 관절 연골의 진행성 퇴행, 연골하 골 재형성, 골극 형성 및 윤활막 염증을 포함하는 모든 관절 조직에 영향을 미치는 질환이다. 염증이 있는 윤활막에서 활성화된 윤활막 세포는 연골 파괴를 담당하는 단백질분해 효소의 과잉 생성을 야기하는 이화작용 및 전염증성 매개인자를 생성한다. 무릎 관절의 윤활막은 Cx43을 발현하는 대식세포 및 섬유아세포를 포함한다. M1 항체의 투여는 염증성 사이토카인의 헤미채널 개방 및 방출을 차단하여 연골 파괴, 연골하 골 경화증 및 통증 증상을 완화한다.
도 16a-c는 지연된 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체) 처리가 윤활막염을 저하시킨다는 것을 보여준다. 도 16a는 수술, 주사 및 평가 절차에 대한 타임라인을 보여준다. 도 16b는 윤활막염 스코어화를 위한 식염수 또는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)-처리된 마우스의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 16c는 DMM 수술 후 8주째 윤활막염 정도(윤활막염 스코어)를 보여준다. *P < 0.05, n = 그룹당 마우스 6마리.
도 17a-b는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 RAW264.7 및 SW982 세포에서 Cx43 헤미채널 개방을 차단했음을 보여준다. 도 17a는 마우스 대식세포 RAW264.7 세포를 LPS 및 Cx43E2 항체 또는 CBX(100μM)로 처리한 것을 보여준다. EtBr 염료 흡수 수준을 결정하고 형광 현미경 및 NIH Image J 소프트웨어로 정량화했다. B) 인간 윤활막 섬유아세포 SW982 세포는 IL1β 및 Cx43E2 항체 또는 CBX(100μM)로 처리했다. EtBr 염료 흡수 수준을 결정하고 형광 현미경 및 NIH Image J 소프트웨어로 정량화했다. 제시된 데이터는 평균 ± SEM이다. ****, P < 0.0001.
도 18은 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 RAW264.7 세포에서 LPS-유도 염증 유전자 발현을 저해했음을 보여준다. 마우스 대식세포 RAW264.7 세포를 Cx43E2 항체와 함께 또는 없이 30분 동안 사전-인큐베이션한 다음, 0.1μg/ml LPS와 함께 4시간 동안 인큐베이션했다. RNA 추출물을 제조하고 COX2, Adamts4, MMP3/13 및 IL6 mRNA 발현에 대해 qRT-PCR 분석으로 처리했다. *P<0.05, **P<0.01.
도 19는 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)가 SW982 세포에서 IL1β-유도 염증성 유전자 발현을 저해했음을 보여준다. 인간 윤활막 섬유아세포 SW982 세포는 Cx43E2 항체와 함께 또는 없이 30분 동안 사전-인큐베이션한 다음, 1 ng/ml IL1β와 함께 14시간 동안 인큐베이션했다. RNA 추출물을 제조하고 COX2, Adamts4/5, MMP3/13 및 NOS2 mRNA 발현에 대해 qRT-PCR 분석으로 처리했다. *P<0.05, **P<0.01.
개시된 방법 및 조성물은 다음의 특정 실시양태의 상세한 설명 및 그 안에 포함된 실시예 및 도면 및 이들의 이전 및 이후 설명을 참조함으로써 더 쉽게 이해될 수 있다.
개시된 방법 및 조성물은 달리 명시되지 않는 한, 특정 합성 방법, 특정 분석 기술 또는 특정 시약에 제한되지 않으며, 따라서 변동될 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이며 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다.
본원에 언급된 모든 간행물은 간행물이 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 물질을 개시하고 기술하기 위해 본원에 참고로 포함된다. 본원에서 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 개시내용에 대해서만 제공된다. 본원의 어떤 것도 본 개시내용이 이전의 개시내용에 의해 그러한 간행물을 선행할 자격이 없음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 본원에 제공된 공개일은 실제 공개일과 다를 수 있으므로, 독립적인 확인이 필요할 수 있다.
정의
개시된 방법 및 조성물은 이들이 변동될 수 있기 때문에 특정 방법론, 프로토콜 및 기술된 시약에 제한되지 않는 것으로 이해한다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이며 첨부된 청구범위에 의해서만 제한되는 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다.
본원 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 단수형 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다.
청구범위 및/또는 명세서에서 "포함하는"이라는 용어와 함께 사용될 때 단어 "a" 또는 "an"의 사용은 "하나"를 의미할 수 있지만, "하나 이상", "적어도 하나", 및 "하나 또는 하나 초과"의 의미와 일치하기도 한다.
"선택적" 또는 "선택적으로"는 이후에 설명된 이벤트, 상황 또는 물질이 발생 또는 존재할 수 있거나 그렇지 않을 수 있으며, 본 명세서는 이벤트, 상황 또는 물질이 발생하거나 존재하는 경우 및 발생 또는 존재하지 않는 경우를 포함한다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 "또는"이라는 단어는 특정 목록 중 어느 하나의 구성원을 의미하고 또한 해당 목록의 구성원의 임의의 조합을 포함한다. 청구범위에서 용어 "또는"의 사용은 본 개시내용이 대안 및 "및/또는"만을 지칭하는 정의를 지지하지만, 명시적으로 대안만을 지칭하거나 대안이 상호 배타적이지 않는 한 "및/또는"을 의미하기 위해 사용된다.
본 출원 전체에서, "약"이라는 용어는 값을 결정하기 위해 사용되는 장치 또는 방법에 대한 표준 오차를 포함하는 값을 나타내기 위해 사용된다.
범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 값 및/또는 "약" 또 다른 특정 값으로 표현될 수 있다. 그러한 범위가 표현될 때, 문맥이 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 하나의 특정 값으로부터 및/또는 다른 특정 값까지의 범위가 또한 구체적으로 고려되고 개시된 것으로 간주된다. 유사하게, 선행사 "약"을 사용하여 값이 근사치로 표현될 때, 특정 값은 문맥이 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 개시된 것으로 간주되어야 하는 또 다른 구체적으로 고려된 실시양태를 형성한다는 것이 이해될 것이다. 각 범위의 종점은 다른 종점과 관련하여 그리고 문맥에서 특별히 달리 나타내지 않는 한 다른 종점과 독립적으로 유의미하다는 것이 추가로 이해될 것이다. 마지막으로, 명시적으로 개시된 범위 내에 함유된 모든 개별 값 및 값의 하위 범위도 구체적으로 고려되며 문맥에서 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 개시된 것으로 간주되어야 함이 이해되어야 한다. 전술한 내용은 특정한 경우에 이들 실시양태의 일부 또는 전부가 명시적으로 개시되는지 여부에 관계없이 적용된다.
본 명세서의 상세한 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐 "포함하다(comprise)" 및 이 단어의 변형, 예컨대 "포함하는" 및 "포함하다(comprises)"는 "포함하지만, 이에 제한되지 않는"을 의미하며, 예를 들어 다른 첨가제, 구성 요소, 정수 또는 단계를 배제하려는 의도가 아니다. 특히, 하나 이상의 단계 또는 작업을 포함하는 것으로 진술된 방법에서 각 단계가 나열된 것을 포함하는 것이 구체적으로 고려되어야 하고(단계가 "이루어지는"과 같은 제한 용어를 포함하지 않는 한), 이는 각 단계가 예를 들어 단계에 나열되지 않은 다른 첨가제, 성분, 정수 또는 단계를 배제하기 위해 의도된 것이 아님을 의미한다.
본 명세서 및 청구항(들)에 사용된 바와 같이, 단어 "포함하는(comprising)"(및 "포함하다(comprise)" 및 "포함하다(comprises)"와 같은 포함하는의 임의의 형태), "갖는"(및 "갖는다(have)" 및 "갖는다(has)"와 같은 갖는의 임의의 형태), "포함하는(including)"(및 "포함하다(includes)" 및 "포함하다(include)"와 같은 포함하는의 임의의 형태) 또는 "함유하는(containing)"(및 "함유하다(contains)" 및 "함유하다(contain)"와 같은 함유하는의 임의의 형태)은 포괄적이거나 개방적 표현이며, 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다.
"저해하다", "저해하는" 및 "저해"는 활성, 수준, 반응, 상태, 질환 또는 다른 생물학적 매개변수를 약화시키거나 저하시키는 것을 의미한다. 이것은 활성, 반응, 상태 또는 질환의 완전한 제거를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 이것은 또한 예를 들어, 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 활성, 반응, 상태 또는 질환의 10% 저해 또는 감소를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 저해 또는 감소는 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, 또는 그 사이의 임의의 감소량일 수 있다. 일부 측면에서, 저해 또는 감소는 천연 또는 대조군 수준에 비해 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 또는 90-100%이다. 일부 측면에서, 저해 또는 감소는 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 0-25, 25-50, 50-75, 또는 75-100%이다.
본원에서 사용된 "조절하다", "조절하는" 및 "조절"은 활성 또는 기능 또는 수의 변화를 의미한다. 변화는 활성, 기능 또는 수의 증가 또는 저하, 향상 또는 저해일 수 있다.
"촉진하다", "촉진" 및 "촉진하는"은 활성, 반응, 상태, 질환 또는 다른 생물학적 매개변수의 증가를 지칭한다. 이는 활성, 반응, 상태 또는 질환의 개시를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 이것은 또한 예를 들어, 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 활성, 반응, 상태 또는 질환의 10% 증가를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 증가 또는 촉진은 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% 이상 또는 그 사이의 임의의 양의 촉진일 수 있다. 일부 측면에서, 증가 또는 촉진은 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 또는 90-100%이다. 일부 측면에서, 증가 또는 촉진은 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 0-25, 25-50, 50-75 또는 75-100% 또는 그 이상, 예를 들어 200, 300, 500 또는 1000% 이상이다. 일부 측면에서, 증가 또는 촉진은 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 100% 초과, 예컨대 천연 또는 대조군 수준에 비해 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500% 이상일 수 있다.
"치료" 및 "치료하는"은 대상체에 대한 치료제(예를 들어, 본원에 기술된 항-Cx43 항체)의 투여 또는 적용, 또는 질환 또는 건강-관련 상태의 치료적 이점을 수득하기 위한 목적으로 대상체에 대한 절차 또는 양식의 수행을 지칭한다. 예를 들어, 치료는 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단하는 항체 또는 이의 단편의 약제학적 유효량의 투여를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하는"은 특정 질환, 장애 및/또는 상태를 부분적으로 또는 완전히 개선, 호전, 경감시키고, 개시를 지연시키고, 진행을 저해 또는 둔화시키고, 중증도를 감소시키고, 및/또는 하나 이상의 증상 또는 특징의 빈도를 감소시키는 것을 지칭한다. 치료는 질환, 장애 및/또는 상태의 징후를 나타내지 않는 대상체, 및/또는 질환, 장애, 및/또는 상태의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 질환, 장애, 및/또는 상태와 연관된 병리상태의 발달 위험을 저하시키기 위한 목적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 질환, 장애, 및/또는 상태는 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 및 관절 장애 및 손상일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "대상체"라는 용어는 투여 표적, 예를 들어 인간을 지칭한다. 따라서, 개시된 방법의 대상체는 포유류, 어류, 조류, 파충류 또는 양서류와 같은 척추동물일 수 있다. "대상체"라는 용어는 또한 길들여진 동물(예: 고양이, 개 등), 가축(예: 소, 말, 돼지, 양, 염소 등), 및 실험 동물(예: 마우스, 토끼, 래트, 기니피그, 초파리 등)을 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 포유동물이다. 또 다른 측면에서, 대상체는 인간이다. 이 용어는 특정 연령이나 성별을 나타내지 않는다. 따라서, 성인, 소아, 청소년 및 신생아 대상체, 뿐만 아니라 태아는 남성이든 여성이든 포함되는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "환자"라는 용어는 상태, 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 지칭한다. "환자"라는 용어는 인간 및 수의학적 대상체를 포함한다. 개시된 방법의 일부 측면에서, "환자"는 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 및 관절 장애 및 손상으로 진단되었다. 개시된 방법의 일부 측면에서, "환자"는 예를 들어 투여 단계 전과 같이 치료(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 및 힘줄 및 관절 장애 및 손상에 대한 치료)가 필요하다고 진단되었다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산" 및 "아미노산 동일성"은 개시된 항체, 변이체 또는 단편의 임의의 것에 있을 수 있는 20개의 천연 발생의 아미노산 또는 임의의 비-천연 유사체 중 하나를 지칭한다. 따라서, 본원에 사용된 "아미노산"은 천연 발생의 아미노산 및 합성 아미노산을 모두 의미한다. 예를 들어, 호모페닐알라닌, 시트룰린 및 노르류신은 본 발명의 목적을 위한 아미노산으로 간주된다. 또한, "아미노산"은 프롤린 및 하이드록시프롤린과 같은 아미노산 잔기를 포함한다. 측쇄는 (R) 또는 (S) 배열일 수 있다. 일부 측면에서, 아미노산은 (S) 또는 L-배열이다. 비-천연 발생의 측쇄가 사용되는 경우, 예를 들어 생체내 분해를 방지하거나 지연시키기 위해 비-아미노산 치환체가 사용될 수 있다.
용어 "단편"은 기준 단백질 또는 핵산과 실질적으로 동일하고 기준 단백질 또는 핵산의 생물학적 활성을 보유하는 단백질 또는 핵산 분자의 부분(예를 들어, 적어도 5, 10, 25, 50, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, 400 또는 500개 등의 아미노산 또는 핵산)을 지칭할 수 있다. 일부 측면에서, 단편 또는 부분은 본원에 개시된 기준 단백질 또는 핵산의 생물학적 활성의 적어도 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99%를 보유한다. 또한, 기준 펩타이드의 단편은 기준 폴리펩타이드의 연속 또는 근접 부분일 수 있다(예를 들어, 10개 아미노산 길이인 펩타이드의 단편은 해당 펩타이드 내의 임의의 2-9개의 근접 잔기일 수 있음).
"변이체"는 N- 및/또는 C-말단 아미노산 잔기 또는 잔기들의 단지 단순한 결실 외에 다른 기준 서열로부터의 어느 정도의 차이를 의미할 수 있다. 변이체가 아미노산 잔기의 치환을 포함하는 경우, 치환은 보존적이거나 비보존적일 수 있다. 보존적 치환은 다음 그룹 내에서의 치환이다: Ser, Thr 및 Cys; Leu, Ile 및 Val; Glu 및 Asp; Lys 및 Arg; Phe, Tyr 및 Trp; 및 Gln, Asn, Glu, Asp 및 His. 변이체는 적어도 하나의 치환 및/또는 적어도 하나의 첨가를 포함할 수 있으며, 또한 적어도 하나의 결실이 있을 수 있다. 변이체는 또한 하나 이상의 비-천연 발생의 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 이들은 시스테인의 위치를 포함한, 임의의 위치에 셀레노시스테인(예를 들어, 셀레노-L-시스테인)을 포함할 수 있다. 많은 다른 "비천연" 아미노산 치환체는 관련 기술분야에 공지되어 있고 상업적 공급원으로부터 입수가능하다. 비-천연 발생 아미노산의 예로는 D-아미노산, 시스테인의 황 원자에 부착된 아세틸아미노메틸 기를 갖는 아미노산 잔기, 페길화된 아미노산 및 n이 2 내지 6개인 화학식 NH2(CH2)nCOOH의 오메가 아미노산, 중성, 비극성 아미노산, 예컨대 사르코신, t-부틸 알라닌, t-부틸 글리신, N-메틸 이소류신 및 노르류신을 포함한다. 페닐글리신은 Trp, Tyr 또는 Phe을 대체할 수 있고; 시트룰린 및 메티오닌 설폭사이드는 중성 비극성이며 시스테산은 산성이고 오르니틴은 염기성이다. 프롤린은 하이드록시프롤린으로 치환될 수 있으며 프롤린의 특성을 부여하는 배좌를 보유할 수 있다.
치환 변이체는 전형적으로 단백질 내의 하나 이상의 부위에서 하나의 아미노산을 다른 아미노산으로 교환하는 것을 함유하고, 다른 기능 또는 특성의 손실과 함께 또는 손실 없이 폴리펩타이드의 하나 이상의 특성을 조절하도록 설계될 수 있다. 치환은 보존적일 수 있고, 즉, 하나의 아미노산이 하나의 유사한 모양 및 전하의 아미노산으로 교체된다. 보존적 치환은 관련 기술분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 알라닌에서 세린으로의 변화; 아르기닌에서 라이신으로; 아스파라긴에서 글루타민 또는 히스티딘으로; 아스파테이트에서 글루타메이트로; 시스테인에서 세린으로; 글루타민에서 아스파라긴으로; 글루타메이트에서 아스파테이트로; 글리신에서 프롤린으로; 히스티딘에서 아스파라긴 또는 글루타민으로; 이소류신에서 류신 또는 발린으로; 류신에서 발린 또는 이소류신으로; 라이신에서 아르기닌으로; 메티오닌에서 류신 또는 이소류신으로; 페닐알라닌에서 티로신, 류신 또는 메티오닌으로; 세린에서 트레오닌으로; 트레오닌에서 세린으로; 트립토판에서 티로신으로; 티로신에서 트립토판 또는 페닐알라닌으로; 발린에서 이소류신 또는 류신으로의 변화를 포함한다. 대안적으로, 치환은 폴리펩타이드의 기능 또는 활성이 영향을 받도록 비보존적일 수 있다. 비보존적 변화는 전형적으로 화학적으로 상이한 잔기로의 잔기의 치환, 예컨대 비극성 또는 비하전성 아미노산 대신에 극성 또는 하전성 아미노산으로의 치환, 또는 그 반대의 치환을 수반한다.
"단일 사슬 가변 단편(scFv)"은 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 포함하는 단백질을 의미한다. scFv는 가변 중쇄, 링커 및 가변 경쇄를 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 일부 측면에서, 링커는 길이가 약 8 내지 20개 아미노산일 수 있는 짧고 유연한 단편일 수 있다. 예를 들어, (G4S)n가 사용될 수 있다(n=1, 2, 3 또는 4).
용어 "단클론 항체"(단클론 항체)는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득되는 항체 또는 유사 항체 집단을 지칭하며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않아야 하며, 예를 들어, 비제한적으로 단클론 항체는 Kohler 및 Milstein(Nature, 256: 495-497, 1975)에 의해 최초로 기술된 하이브리도마 방법, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다.
용어 "키메라 항체"(또는 "키메라 면역글로불린")는 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 중쇄 및/또는 경쇄를 포함하는 분자를 지칭하지만, 사슬(들)의 나머지는 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 또 다른 종에서 유래하거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체, 뿐만 아니라 그러한 항체의 단편에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이다(Cabilly 등 (1984), 이하 문헌 참조; Morrison 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851).
용어 "인간화 항체"는 인간 항체뿐만 아니라 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체로부터의 서열을 함유하는 항체 형태를 지칭한다. 인간화 항체는 이의 결합 및/또는 생물학적 활성을 크게 변경하지 않는 동일하거나 상이한 종으로부터의 보존적 아미노산 치환 또는 비천연 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 항체는 비-인간 면역글로불린에서 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용자의 상보적 결정 영역(CDR)의 잔기가 원하는 특성을 가진 마우스, 래트, 낙타, 소, 염소, 또는 토끼와 같은 비-인간 종의 CDR 유래의 잔기로 교체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서도, 이입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개량하고 최대화하도록 이루어진다. 따라서, 일반적으로 인간화 항체는 적어도 하나, 및 한 측면에서 2개의 가변 도메인의 전부 또는 실질적으로 전부를 포함할 수 있으며, 여기서 초가변 루프의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, FR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부 또는 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 수 있다(예를 들어, Cabilly 등, 미국 특허 제4,816,567호; Cabilly 등, 유럽 특허 제0,125,023 B1호; Boss 등, 미국 특허 제4,816,397호; Boss 등, 유럽 특허 제0,120,694 B1호; Neuberger, M. S. 등, WO 86/01533; Neuberger, M. S. 등, 유럽 특허 제0,194,276 B1호; Winter, 미국 특허 제5,225,539호; Winter, 유럽 특허 제0,239,400 B1호; Padlan, E. A. 등, 유럽 특허 출원 제0,519,596 A1호; Queen 등 (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol 86:10029-10033 참조).
본원에서 사용되는 용어 "M1H"는 하이브리도마 클론으로부터 클로닝된 항체를 의미한다. "M1"은 하이브리도마 단클론 1을 지칭하고, "H"는 가변 중쇄를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "M1M7K"는 하이브리도마 클론 M1 및 M7에서 식별된 가변 경쇄를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "항원"은 항체 또는 T-세포 수용체에 의해 결합될 수 있는 분자이다. 일부 측면에서, 항체 이외의 다른 결합 모이어티, 예를 들어 앱타머, 아비머 등은 항원에 특이적으로 결합하도록 조작될 수 있다.
용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 무손상 항체 및 이의 결합 단편/분절을 포함하기 위해 사용된다. 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 항원 결합 활성을 보유하는 항체 CDR 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 뿐만 아니라 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 및 유전자 변형된 IgG와 같은 임의의 면역학적 결합제를 광범위하게 지칭하는 것으로 의도된다. 항체는 키메라 항체, 친화도 성숙 항체, 다클론 항체, 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 또는 항원-결합 항체 단편 또는 천연 또는 합성 리간드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 전형적으로, 단편은 항원에 대한 특이적 결합을 위해 유래된 무손상 항체와 경쟁한다. 단편으로는 별도의 중쇄, 경쇄, Fab, Fab' F(ab')2, Fabc 및 Fv를 포함한다. 단편/분절은 재조합 DNA 기술 또는 무손상 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 분리에 의해 생성된다. 용어 "항체"는 또한 다른 단백질과의 융합 단백질에 화학적으로 접합되거나 융합 단백질로서 발현되는 하나 이상의 면역글로불린 사슬을 포함한다. 용어 "항체"는 또한 이중특이적 항체를 포함한다. 이중특이적 또는 이중기능성 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, Songsivilai and Lachmann, Clin Exp Immunol 79:315-21, 1990; Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-53, 1992 참조.
"항체"라는 용어는 인간 면역글로불린의 5개 상이한 부류, 즉 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 개시된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 4개 하위부류로 분류될 수 있는 항체의 IgG 부류일 수 있다. 일부 측면에서, 개시된 항체는 IgA1 및 IgA2의 2개의 하위부류로 분류될 수 있는 항체의 IgA 부류일 수 있다. 면역글로불린의 기본 구조는 2개의 상동성 L 사슬(경쇄)과 2개의 상동성 H 사슬(중쇄)로 구성된다. 면역글로불린 부류 및 하위부류는 H 사슬에 의해 결정된다. 일부 측면에서, 항체 또는 항체들 또는 이들의 변이체 또는 단편은 IgG4일 수 있다.
항원-결합 특이성은 유지하면서 IgG4의 항체 안정성은 개선될 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 예를 들어 IgG4의 아르기닌(R)을 글루탐산(E), 페닐알라닌(F), 이소류신(I), 아스파라긴(N), 글루타민(Q), 세린(S), 발린(V), 트립토판(W), 티로신(Y), 라이신(K), 트레오닌(T), 메티오닌(M) 또는 류신(L)으로 치환시킴으로써 개선될 수 있다.
"단리된"이라는 용어는 세포 물질, 박테리아 물질, 바이러스 물질 또는 이들 기원의 배양 배지(재조합 DNA 기술에 의해 생성된 경우) 또는 화학적 전구체 또는 기타 화학 물질(화학적으로 합성된 경우)이 실질적으로 없는 핵산 또는 폴리펩타이드를 지칭할 수 있다. 더욱이, 단리된 화합물은 단리된 화합물로서 대상체에게 투여될 수 있는 것을 지칭한다; 즉, 화합물이 컬럼에 부착되거나 아가로스 겔에 포매되어 있다면 단순히 "단리된" 것으로 간주될 수 없다. 더욱이, "단리된 핵산 단편" 또는 "단리된 펩타이드"는 단편으로서 천연적으로 발생하지 않고 및/또는 전형적으로 기능적 상태에 있지 않은 핵산 또는 단백질 단편이다.
항체, 항체 단편, 폴리펩타이드, 펩타이드, 항원 또는 면역원과 같은 본 발명의 모이어티는 보조제, 단백질, 펩타이드, 지지체, 형광 모이어티 또는 표지와 같은 다른 모이어티에 공유 또는 비공유적으로 접합되거나 연결될 수 있다. "접합체" 또는 "면역접합체"라는 용어는 하나의 모이어티와 또 다른 작용제의 작동적 회합을 정의하는 데 광범위하게 사용되며 임의 유형의 작동적 회합만을 지칭하려는 것이 아니며 특히 화학적 "접합"에 제한되지 않는다.
"제공하는"이라는 용어는 "사용을 위해 공급하거나 급여하는"이라는 일상적인 의미에 따라 사용된다. 일부 측면에서, 단백질은 단백질을 투여함으로써 직접 제공되는 반면, 다른 측면에서, 단백질은 단백질을 암호화하는 핵산을 투여함으로써 효과적으로 제공된다. 특정 측면에서 본 발명은 핵산, 항원, 펩타이드 및/또는 에피토프의 다양한 조합을 포함하는 조성물을 고려한다.
표적에 대해 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적으로 면역반응성"이라는 어구는 다른 생물학적 제제의 이종 집단의 존재 하에 분자의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 지정된 면역검정 조건 하에서 특정 분자는 특정 표적에 우선적으로 결합하고 샘플에 존재하는 다른 생물학적 제제에는 유의미한 양으로 결합하지 않는다. 이러한 조건 하에서 표적에 대한 항체의 특이적 결합은 표적에 대한 특이성에 대해 항체가 선택되어야 할 필요가 있다. 특정 단백질과 특이적으로 면역반응성인 항체를 선택하기 위해서는 다양한 면역검정 형식이 사용될 수 있다. 예를 들어, 고체상 ELISA 면역검정은 단백질과 특이적으로 면역반응하는 단클론 항체를 선택하기 위해 일상적으로 사용된다. 예를 들어, 특이적 면역반응성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 면역검정 형식 및 조건에 대한 설명은 Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, 1988을 참조한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 개시된 방법 및 조성물이 속하는 관련 기술 분야의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 방법 및 조성물의 실시 또는 테스트에는 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 사용될 수 있지만, 특히 유용한 방법, 장치 및 물질은 기재된 바와 같다. 본원에 인용된 간행물 및 이들에서 인용된 자료는 본원에 참고로 특별하게 포함된다. 본원의 어떤 것도 본 발명이 선행 발명에 의해 그러한 개시내용을 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 모든 참고문헌은 선행 기술을 구성한다는 것을 인정하는 것이 아니다. 참고문헌에 대한 논의는 저자가 주장하는 바를 진술하며 출원인은 인용된 문서의 정확성과 타당성에 이의를 제기할 권리를 보유한다. 본원에는 다수의 간행물이 언급되지만, 이러한 언급은 이들 문서 중 임의의 것이 관련 기술분야의 공통적인 일반 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것은 아님이 분명히 이해되어야 할 것이다.
다양한 세포는 단백질 코넥신에 의해 형성된 헤미채널 및 갭 접합부(junction)를 통해 서로 및 세포외 환경과 소통할 수 있다. 코넥신 단백질은 신체 전반에 걸쳐 편재적으로 발현된다. 6개의 코넥신 단백질이 하나의 헤미채널을 구성하고 2개의 헤미채널이 하나의 갭 접합부 채널을 구성한다. 갭 접합부는 인접한 세포 사이의 원형질막에 위치한 채널 클러스터이며 세포간 소통을 매개한다. 헤미채널은 갭 접합부 채널과 별개의 실체이다. 헤미채널은 세포내 구획과 세포외 환경 사이의 분자 교환을 허용한다.
골관절염(OA)은 관절 연골의 진행성 퇴행, 연골하 골 재형성 및 윤활막 염증을 특징으로 하는 관절 질환이며, 이는 통증과 제한된 이동성을 유발한다. 코넥신 43(Cx43)은 근골격계에서 항상성 조절자로 작용하며 이의 발현은 OA 환자의 연골 및 윤활막 조직에서 증가한다. Cx43은 이화작용 인자 및 염증 인자의 생성에 기여할 가능성이 높으며 관절 파괴를 악화시킨다. Cx43은 세포외 환경으로 ATP 및 프로스타글란딘 E2(PGE2)와 같은 소분자의 방출을 매개하는 헤미채널(HC)을 형성한다. HC의 개방 확률은 생리학적 조건 하에서 낮고; 이들의 활성화는 전염증성 사이토카인을 비롯한 여러 요인에 의해 조절된다. Cx43 HC의 활성을 특이적으로 저해하는 항체(예를 들어, M1 항체)가 본원에 기재된다.
항체
본원에는 항-코넥신 43 항체(본원에서 "항-Cx43 항체" 또는 "항-CX43 항체"라고도 함)가 개시된다. 본원에는 개방 헤미채널, 특히 Cx43 헤미채널을 저해하거나 차단할 수 있는 항-코넥신 43 항체가 개시된다. 본원에는 개방 헤미채널, 특히 Cx43 헤미채널을 활성화하거나 자극할 수 있는 항-코넥신 43 항체가 개시된다.
출원 번호 PCT/US2017/019605(WO 2017-147561)는 개시된 방법에 사용될 수 있는 항-Cx43 항체, CDR 서열, 중쇄 및 경쇄 서열, 상기 항체를 암호화하는 핵산 서열 및 상기 항체가 결합하는 에피토프 서열의 예를 제공하며, 이 문헌은 이를 교시하기 위해 본원에 참고로 포함된다.
항-Cx43 항체가 생성되었고 Cx43-결합 항체를 생산하는 클론이 식별되었다. 항-Cx43 항체가 생성되었고 Cx43-결합 항체를 생산하는 클론이 식별되었다. 본원에는 각각의 특성화된 항체에 대한 쌍형성과 함께 하기 표에 제시된 CDR 서열을 포함하는 항-Cx43 항체가 개시된다. 또한, 항-Cx43 항체 서열에 대한 DNA 및 아미노산 모두의 예는 특성화된 항체 각각에 대한 올바른 쌍형성과 함께 아래의 표에 제시된다. 항-Cx43 항체의 예로는 M1 및 M2 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. M1 항체는 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단한다. M2 항체는 Cx43 헤미채널의 개방을 활성화, 자극 및/또는 향상시킨다.
본원에 사용된 "M1 항체"는 서열번호 58에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 "M2 항체"는 서열번호 58에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 63에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 항체를 지칭한다.
또한, 인간화 항-Cx43 항체가 개시된다. 예를 들어, 본원에는 인간화 M1 및 M2 항체가 개시된다.
클로닝된 가변 도메인은 아래의 차트에 제시된다.
항-Cx43 항체 일부의 추가 DNA 서열은 항-Cx43 항체 일부의 DNA 서열에 대한 교시에 대해 본원에 참고로 포함되는 PCT/US2017/019605(WO 2017/147561)에 개시되어 있는, 개시된 항-Cx43 항체 일부의 하나 이상의 DNA 서열일 수 있다.
항-Cx43 항체 일부의 추가 아미노산 서열은 항-Cx43 항체 일부의 아미노산 서열에 대한 교시에 대해 본원에 참고로 포함되는 PCT/US2017/019605(WO 2017/147561)에 개시된 항-Cx43 항체 일부의 하나 이상의 아미노산 서열일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "CDR"은 항체 가변 도메인(예를 들어, 항-Cx43 항체의)의 상보성 결정 영역을 지칭한다. "CDR"은 "프레임워크 영역"(FR)이라고 하는 보다 보존된 영역 내에 산재된 초가변 영역이다.
CDR에 포함된 잔기의 체계적 식별은 Kabat 등(1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda)에 의해 개발되어 있다. 일부 측면에서, 가변 경쇄(VL) CDR은 서열번호 60의 위치 27-32(CDR1), 50-56(CDR2) 및 91-97(CDR3)에 있는 잔기를 포함하는 것으로 본원에 정의되어 있다. 일부 측면에서, 가변 중쇄(VH) CDR은 서열번호 58의 위치 27-33(CDR1), 52-56(CDR2) 및 95-102(CDR3)에 있는 잔기를 포함하는 것으로 본원에 정의되어 있다.
본원에 개시된 CDR은 또한 변이체를 포함할 수 있다. 일반적으로, 개별 변이체 CDR 사이의 아미노산 동일성은 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 따라서, "변이체 CDR"은 본 발명의 부모(예를 들어, 서열번호 19, 20, 21, 31, 32 또는 33) 또는 기준 CDR에 대해 특정 동일성을 갖는 것이고, 부모 CDR(예를 들어, 서열번호 19, 20, 21, 31, 32 또는 33)의 특이성 및/또는 활성의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 제한 없이 포함하는, 생물학적 기능을 공유한다. 예를 들어, "변이체 CDR"은 본 발명의 부모 또는 기준 CDR과 비교하여 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 변화를 함유하고, 부모 CDR의 생물학적 기능, 특이성 및/또는 활성을 공유하거나 개선시키는 서열일 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 CDR 서열은 부모 또는 기준 CDR과 비교하여 단일 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 CDR 서열은 부모 또는 기준 CDR과 비교하여 적어도 2개의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 아미노산 변화는 시스테인 잔기로부터 또 다른 아미노산으로의 변화일 수 있다. 일부 측면에서, 아미노산 변화는 글리신 잔기로부터 또 다른 아미노산으로의 변화일 수 있다. 개별 변이체 CDR 사이의 아미노산 동일성은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%일 수 있다. 따라서, "변이체 CDR"은 본 발명의 부모 CDR에 대해 특정한 동일성을 갖는 것일 수 있고, 부모 CDR의 특이성 및/또는 활성의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 제한 없이 포함하는 생물학적 기능을 공유한다. 예를 들어, 부모 CDR 서열은 서열번호 19, 20, 21, 31, 32 및/또는 33 중 하나 이상일 수 있다. 변이체 CDR 서열은 서열번호 19, 20, 21, 31, 32, 및/또는 33 중 어느 하나와 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성일 수 있다. 변이체 CDR 서열은 또한 부모 CDR의 특이성 및/또는 활성의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 공유할 수도 있다.
본원에서 논의된 바와 같이, 본원에 개시된 임의의 항체의 아미노산 서열의 소량의 변이는 본 개시내용에 의해 포괄되는 것으로 고려되며, 단 아미노산 서열의 변이는 부모 서열과 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 95%, 및 가장 바람직하게는 99% 서열 동일성을 유지해야 한다. 일부 측면에서, 보존적 아미노산 대체가 고려된다. 보존적 대체는 측쇄가 관련이 있는 아미노산 패밀리 내에서 일어나는 것이다. 유전자적으로 암호화된 아미노산은 일반적으로 패밀리로 나뉜다: (1) 산성 = 아스파테이트, 글루타메이트; (2) 염기성 = 라이신, 아르기닌, 히스티딘; (3) 비극성 = 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판; 및 (4) 비하전 극성=글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신. 보다 바람직한 패밀리는 다음과 같다: 세린 및 트레오닌은 지방족-하이드록시 패밀리이고; 아스파라긴 및 글루타민은 아미드 함유 패밀리이며; 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신은 지방족 패밀리이고; 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 방향족 패밀리이다. 예를 들어, 류신을 이소류신이나 발린으로, 아스파테이트를 글루타메이트로, 트레오닌을 세린으로의 단리된 교체, 또는 아미노산을 구조적으로 관련된 아미노산으로의 유사 교체는 특히 그 교체가 프레임워크 부위 내의 아미노산을 수반하지 않는다면, 결과적으로 생성된 분자의 결합 또는 특성에 주요 영향을 미치지 않을 것으로 예측하는 것은 타당하다. 아미노산 변화가 기능적 펩타이드를 초래하는지 여부는 폴리펩타이드 유도체의 비활성을 검정함으로써 쉽게 결정될 수 있다. 검정은 관련 기술분야의 기술자에게 공지되어 있다.
일부 측면에서, 아미노산 치환은 (1) 단백질분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고, (3) 단백질 복합체 형성에 대한 결합 친화도를 변경시키고, (4) 결합 친화도를 변경시키고, (4) 그러한 유사체의 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여하거나 변형시키는 것일 수 있다. 일부 측면에서, 단일 또는 다중 아미노산 치환(바람직하게는 보존적 아미노산 치환)은 중쇄, 경쇄 또는 둘 모두의 비-CDR 서열에서 이루어질 수 있다. 일부 측면에서, 중쇄, 경쇄 또는 둘 모두의 하나 이상의 CDR 서열에는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다.
Fab 및 F(ab')2 단편을 포함하여 항체 및 이들의 공통 단편의 특성을 화학적으로 표지화하고 향상시키기 위해 많은 방법이 개발되었다. 일부 항체 이황화 결합의 다소 선택적인 환원은 이전에 달성되었고, 이는 정해진 부위에서 표지화될 수 있는 항체 및 항체 단편을 산출하여, 그의 유용성 및 특성을 향상시킨다. 온화한 환원을 사용하여 F(ab')2 단편에 존재하는 2개의 힌지 이황화 결합의 선택적 환원은 유용한 것이었다. 일부 측면에서, 시스테인 및 메티오닌은 신속한 산화에 민감할 수 있으며, 이는 합성 및 후속 펩타이드 정제 동안 보호기의 절단에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 일부 경우에, 항체 생산에 사용되는 펩타이드의 시스테인 잔기는 항체의 결합활성(avidity)에 영향을 미칠 수 있는데, 그 이유는 자유 시스테인이 생체 내에서 흔하지 않고, 이에 따라 천연 펩타이드 구조에 의해서는 인식될 수 없기 때문이다. 일부 측면에서, 개시된 항체 및 이의 단편은 CDR의 외부(예를 들어, 중쇄, 경쇄 또는 둘 모두의 비-CDR 서열)에 존재하는 시스테인이 치환된 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 시스테인은 세린으로 교체될 수 있고 메티오닌은 노르류신(Nle)으로 교체될 수 있다. 펩타이드 상의 또는 개시된 항체 또는 이의 단편 중 하나에 있는 다중 시스테인 잔기는 디티오트레이톨(DTT)과 같은 환원제가 완충액에 첨가되거나 시스테인 잔기가 세린 잔기로 교체될 수 있지 않는 한, 이황화 연결을 형성하는 것에 민감할 수 있다.
아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위 또는 영역은 미리 결정되지만, 돌연변이 그 자체는 미리 결정될 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 최적화하기 위해, 표적 코돈 또는 영역에서는 무작위 돌연변이유발이 수행될 수 있고 발현된 항원 결합 단백질 CDR 변이체는 원하는 활성의 최적 조합에 대해 스크리닝된다. 공지된 서열을 갖는 DNA에서 소정 부위에 치환 돌연변이를 만들기 위한 기술은 잘 알려져 있으며, 예를 들어 M13 프라이머 돌연변이유발 및 PCR 돌연변이유발이다. 돌연변이체의 스크리닝은 본원에 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질 활성의 검정을 사용하여 수행된다.
아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기의 치환이다; 삽입은 일반적으로 약 1개 내지 약 20개의 아미노산 잔기 정도이지만, 상당히 더 큰 삽입이 허용될 수 있다. 결실은 약 1개 내지 약 20개 아미노산 잔기 범위이지만, 일부 경우에, 결실은 훨씬 더 클 수도 있다.
치환, 결실, 삽입 또는 이들의 임의의 조합이 사용되어 최종 유도체 또는 변이체에 도달할 수 있다. 일반적으로 이러한 변화는 분자의 변경, 특히 항원 결합 단백질의 면역원성 및 특이성을 최소화하기 위해 몇 개의 아미노산에 대해 수행된다. 그러나 특정 상황에서는 더 큰 변화가 허용될 수 있다.
"단편 항원-결합 단편(Fab)"은 항원에 결합하는 항체의 영역이다. 본원에서 사용된 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 VH, CH1, VL 및 CL 면역글로불린 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. Fab는 단리된 상태의 이 영역, 또는 전체 길이의 항체, 항체 단편 또는 Fab 융합 단백질의 정황에서의 이 영역, 또는 본원에 개략된 바와 같은 임의의 다른 항체 실시양태를 지칭할 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하여, 카이 도메인의 C-말단에서 추가 잔기를 포함한다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. 불변 도메인의 시스테인 잔기는 자유 티올 기를 보유한다. F(ab')2 항체 단편은 힌지 영역에서 시스테인 잔기에 의해 연결된 Fab' 단편의 쌍이다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에서 사용된 "Fv" 또는 "Fv 단편" 또는 "Fv 영역"은 단일 항체의 VL 및 VH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. Fv 영역은 하나의 중쇄와 하나의 경쇄 가변 도메인으로 이루어지는 완전한 항원-인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 단편이다. 각 가변 도메인의 3개의 CDR은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상의 항원 결합 부위를 한정한다. 종합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, "단일-사슬" 항체 또는 "scFv" 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인이 항원을 인식하고 결합하는 단일 폴리펩타이드 사슬에 포함될 때 형성되는 단일 사슬 Fv 변이체이다. 전형적으로, 단일 사슬 항체는 scFv가 항원 결합에 바람직한 3차원 구조를 형성하게 하는 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 포함한다(예를 들어, Pluckthun, In The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Rosenburg and Moore Eds., Springer-Verlag, New York, 113:269-315. 1994 참조).
본원에서 사용된 "프레임워크" 또는 "프레임워크 영역"은 CDR로 정의된 영역을 제외한 항체 가변 도메인 영역을 의미한다. 각각의 항체 가변 도메인 프레임워크는 CDR(FR1, FR2, FR3 및 FR4)에 의해 분리된 근접 영역으로 더 세분될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분"(또는 간단히 "항체 부분")은 항원(예를 들어, Cx43 헤미채널)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 전체 길이의 항체의 단편에 의해 수행될 수 있음은 밝혀져 있다. 항체의 "항원 결합 부분"이라는 용어에 포괄되는 결합 단편의 예는 (i) VL/VK, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어지는 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab일 수 있는 Fab' 단편(Fundamental Immunology(Paul ed., 3rd ed. 1993) 참조); (iv) VH 및 CH1 도메인으로 이루어지는 Fd 단편; (v) 항체의 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어지는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어지는, dAb 단편(Ward 등, (1989) Nature 341:544-546); (vii) 단리된 상보성 결정 영역(CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인과 2개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디를 포함한다.
"특이적으로 결합한다" 또는 "면역특이적으로 결합한다"라는 용어는 항체가 이의 의도된 표적에만 독점적으로 결합한다는 것을 나타내려고 의도된 것이 아니다. 오히려, 항체는 이의 의도된 표적에 대한 친화도가 비-표적 분자에 대한 친화도와 비교할 때 약 5배 더 크다면, "특이적으로 결합한다". 적절하게는, 원하지 않은 물질과 유의미한 가교 반응 또는 가교 결합은 없다. 항체의 친화도는, 예를 들어 비표적 분자에 대한 친화도보다 표적 분자에 대해 적어도 약 5배, 예컨대 10배, 예컨대 25배, 특히 50배, 특히 100배 이상 더 클 것이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 다른 결합제와 항원 사이의 특이적 결합은 적어도 106 M-1의 결합 친화도를 의미한다. 항체는 예를 들어 적어도 약 107 M-1, 예컨대 약 108 M-1 내지 약 109 M-1, 약 109 M-1 내지 약 1010 M-1, 또는 약 10-10M-1 내지 약 1011 M-1 사이의 친화도로 결합한다. 항체는, 예를 들어 50 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하, 100 pM 이하, 보다 바람직하게는 10 pM 이하의 EC50으로 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 약 60μg/ml, 59μg/ml, 58μg/ml, 57μg/ml, 56μg/ml, 55μg/ml, 54μg/ml, 53μg/ml, 52μg/ml, 51μg/ml, 50μg/ml 이하의 EC50으로 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 약 50μg/ml, 49μg/ml, 48μg/ml, 47μg/ml, 46μg/ml, 45μg/ml, 44μg/ml, 43μg/ml, 42μg/ml, 41μg/ml, 40μg/ml 이하의 EC50으로 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 약 40μg/ml, 39μg/ml, 38μg/ml, 37μg/ml, 36μg/ml, 35μg/ml, 34μg/ml, 33μg/ml, 32μg/ml, 31μg/ml, 30μg/ml 이하의 EC50으로 결합할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항체는 이들의 의도된 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 항체는 부위외 결합을 갖지 않는다. 예를 들어, 본원에 기술된 항체는 특정 표적 부위에서 의도된 표적에만 결합하고, 심장, 간 또는 척수에는 결합하지 않거나 분포하지 않는다.
본원에 기술된 항체는 제한 없이, 단편(예를 들어, Fab 단편 또는 예를 들어 사량체 항체의 F(ab')2 단편), scFv 또는 디아바디의 단편, 또는 4량체 항체의 변이체, scFv, 디아바디, 또는 하나 이상의 아미노산 잔기의 첨가 및/또는 치환에 의해 상이한 이들의 단편을 포함하는 변이체일 수 있다. 항체 모이어티는 예를 들어 디-디아바디(di-diabody)로서 추가로 조작될 수 있다.
관련 기술분야에 잘 알려진 바와 같이, 특정 유형의 항체 단편은 "전체 길이" 항체의 효소적 처리에 의해 생성될 수 있다. 파파인에 의한 분해는 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 2개의 동일한 Fab 단편, 및 나머지 Fc 단편을 생산한다. Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 카이 도메인을 함유한다. 대조적으로, 펩신에 의한 분해는 2개의 항원 결합 부위를 갖고 여전히 항원을 가교결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 산출한다.
일부 측면에서, 항체는 디아바디일 수 있다. 디아바디는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 작은 항체 단편이다. 각 단편은 VL 도메인에 결부된 VH 도메인을 함유한다. 그러나, 도메인 사이의 링커는 너무 짧아서 동일한 사슬에서 서로 쌍을 형성할 수 없으므로, 연결된 Vh-Vl 도메인을 다른 사슬의 상보적인 도메인과 쌍을 이루게 함으로써 2개의 항원 결합 부위를 생성한다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993에 더 충분히 기술되어 있다.
일부 측면에서, Cx43 단백질의 적어도 일부에 결합하고 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단하고 감소된 Mmp13 및 콜라겐 X 수준, 저하된 정도의 윤활막염 또는 감소된 윤활막 염증, 및 개선된 연골 완전성 또는 감소된 연골 분해와 연관이 있는, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편이 고려되어 있다. 일부 측면에서, Cx43 단백질의 적어도 일부에 결합하고 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단하고 Mmp13 수준 및 콜라겐 X 수준을 감소시키고, 윤활막염 정도를 저하시키거나 윤활막 염증을 감소시키고, 연골의 완전성 또는 감소된 연골 분해를 개선시키는 항체 또는 이의 단편이 고려된다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체는 단클론 항체, 다클론 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 따라서, 공지된 수단에 의해 그리고 본원에 기술된 바와 같이, Cx43 단백질, 이의 각각의 에피토프 중 하나 이상, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 접합체에 특이적인 다클론 또는 단클론 항체, 항체 단편, 및 결합 도메인 및 CDR(전술한 것 중 임의의 것의 조작된 형태 포함)이 생성될 수 있으며, 이러한 항원 또는 에피토프는 천연 공급원으로부터 단리되든지 또는 천연 화합물의 합성 유도체 또는 변이체이든지 간에 관계없다. 에피토프 서열의 예는 본원에 개시된 항-Cx43 항체 및 이의 단편이 결합할 수 있는 에피토프 서열의 교시에 대해 본원에 참고로 포함되는 출원 번호 PCT/US2017/019605(WO 2017-147561)에 기술되어 있다.
적합한 항-Cx43 항체 단편의 예로는 제한 없이, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어지는 Fab 단편; (ii) VII 및 Cm 도메인으로 이루어지는 "Fd" 단편; (iii) 단일 항체의 VL 및 VH 도메인으로 이루어지는 "Fv" 단편; (iv) VH 도메인으로 이루어지는 "dAb" 단편; (v) 단리된 CDR 영역; (vi) 2개의 연결된 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (vii) VII 도메인 및 VL 도메인이 펩타이드 링커에 의해 연결되어 2개의 도메인을 회합시켜 결합 도메인을 형성하도록 하는, 단일 사슬 Fv 분자("scFv"); (viii) 이중특이적 단일 사슬 Fv 이량체(미국 특허 제5,091,513호 참조); 및 (ix) 유전자 융합에 의해 작제된 디아바디, 다가 또는 다중특이적 단편(미국 특허 출원 공개 제20050214860호)을 포함한다. Fv, scFv 또는 디아바디 분자는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 이황화 가교의 혼입에 의해 안정화될 수 있다. CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 미니바디가 또한 제조될 수 있다(Hu 등, 1996).
항체-유사 결합 펩타이드유사체(peptidomimetic)가 또한 고려된다. Liu 등 (2003)은 "항체-유사 결합 펩타이드유사체(ABiP)"를 기술하는데, 이는 축소된 항체로 작용하고 덜 번거로운 합성 방법뿐만 아니라 더 긴 혈청 반감기의 특정 이점을 갖는 펩타이드이다.
Cx43 단백질에 특이적인 항체를 생산하기 위해 동물에게 Cx43 세포외 도메인 단백질과 같은 항원을 접종할 수 있다. 종종 항원은 면역 반응을 향상시키기 위해 다른 분자에 결합되거나 접합된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 접합체는 동물에서 면역 반응을 유도하는 데 사용되는 항원에 결합된 임의의 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 또는 비단백질성 물질이다. 항원 접종에 대한 반응으로 동물에서 생성된 항체는 B 림프구를 생성하는 다양한 개별 항체로부터 만들어진 다양한 비-동일성 분자(다클론 항체)를 포함한다. 다클론 항체는 항체 종의 혼합 집단으로, 각각의 종은 동일한 항원 상의 상이한 에피토프를 인식할 수 있다. 동물에서 다클론 항체 생산에 정확한 조건이 주어진다면, 동물 혈청 중의 대부분의 항체는 동물이 면역화된 항원 화합물 상의 종합적인 에피토프를 인식할 것이다. 이 특이성은 관심 항원 또는 에피토프를 인식하는 항체만을 선택하는 친화도 정제에 의해 더욱 향상된다.
본원에서 제공되는 바와 같이, 단클론 항체는 항체 생성 세포가 단일 B-림프구 세포주로부터 유래되기 때문에 모든 항체 분자가 동일한 에피토프를 인식하는 단일 항체 종이다. 단클론 항체(MAb)를 생성하는 방법은 일반적으로 다클론 항체를 제조하는 방법과 동일한 라인을 따라 시작한다. 일부 측면에서, 마우스 및 래트와 같은 설치류는 단클론 항체 생성에 사용된다. 일부 측면에서, 토끼, 양 또는 개구리 세포는 단클론 항체를 생성하는데 사용된다. 래트의 사용은 잘 알려져 있으며 특정 이점을 제공할 수 있다. 마우스(예: BALB/c 마우스)는 일상적으로 사용되며 일반적으로 높은 백분율의 안정한 융합체를 제공한다.
하이브리도마 기술은 무한증식성 골수종 세포(일반적으로, 마우스 골수종)와 Cx43 항원에 의해 사전 면역화된 마우스로부터의 단일 B 림프구의 융합을 수반한다. 이 기술은 동일한 항원 또는 에피토프 특이성을 갖는 구조적으로 동일한 항체(단클론 항체)의 무한한 양이 생성될 수 있도록 무한 세대 수 동안 단일 항체-생성 세포를 전파시키는 방법을 제공한다.
혈장 B 세포는 면역화된 토끼의 신선하게 제조된 토끼 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리될 수 있고 Cx43 결합 세포에 대해 추가로 선택될 수 있다. 항체 생성 B 세포를 농축한 후, 총 RNA를 단리하고 cDNA를 합성할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 둘 모두에서의 항체 가변 영역의 DNA 서열은 증폭될 수 있고, 파지 디스플레이 Fab 발현 벡터 내로 작제되고, E. 콜라이로 형질전환될 수 있다. Cx43 특이적 결합 Fab는 다중 라운드의 농축 패닝(panning)을 통해 선택될 수 있고 시퀀싱될 수 있다. 선택된 Cx43 결합 히트(hit)는 인간 배아 신장(HEK293) 세포(Invitrogen)에서 포유류 발현 벡터 시스템을 사용하여 토끼 및 토끼/인간 키메라 형태의 전체 길이의 IgG로서 발현될 수 있고 고속 단백질 액체 크로마토그래피(FPLC) 분리 단위로 단백질 G 수지를 사용하여 정제할 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체는 키메라 항체, 예를 들어, 이종의 비-인간, 인간 또는 인간화 서열(예를 들어, 프레임워크 및/또는 불변 도메인 서열)에 접목된 비-인간 공여자로부터의 항원 결합 서열을 포함하는 항체일 수 있다. 단클론 항체의 경쇄 및 중쇄 불변 도메인을 인간 기원의 유사한 도메인으로 교체하고 외래 항체의 가변 영역은 온전하게 남겨두는 방법이 개발되었다. 대안적으로, "완전한 인간" 단클론 항체는 인간 면역글로불린 유전자에 대해 돌연변이성인 마우스에서 생성될 수 있다. 또한 설치류, 예를 들어 마우스 및 인간 아미노산 서열 둘 모두를 갖는 항체 가변 도메인을 재조합적으로 작제함으로써 단클론 항체의 가변 도메인을 보다 인간 형태로 전환시키는 방법이 개발되었다. "인간화" 단클론 항체에서, 초가변 CDR만은 마우스 단클론 항체로부터 유래되고 프레임워크 및 불변 영역은 인간 아미노산 서열로부터 유래된다(미국 특허 제5,091,513호 및 제6,881,557호 참조). 설치류의 특징인 항체의 아미노산 서열을 인간 항체의 상응하는 위치에서 발견되는 아미노산 서열로 교체하면 치료적 사용 동안 유해 면역 반응의 가능성이 감소할 것으로 생각된다. 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 다른 세포는 또한 유전자 돌연변이 또는 다른 변화로 처리될 수 있으며, 이는 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 결합 특이성을 변경하거나 변경하지 않을 수 있다.
다양한 동물 종에서 다클론 항체를 생산하는 방법, 뿐만 아니라 인간화, 키메라 및 완전 인간을 비롯한 다양한 유형의 단클론 항체를 생산하는 방법은 관련 기술분야에 잘 알려져 있고 매우 예측 가능하다. 예를 들어, 다음 미국 특허 및 특허 출원은 이러한 방법의 가능한 설명을 제공한다: 미국 특허 출원 제2004/0126828호 및 제2002/0172677호; 및 미국 특허 제3,817,837호; 제3,850,752호; 제3,939,350호; 제3,996,345호; 제4,196,265호; 제4,275,149호; 제4,277,437호; 제4,366,241호; 제4,469,797호; 제4,472,509호; 제4,606,855호; 제4,703,003호; 제4,742,159호; 제4,767,720호; 제4,816,567호; 제4,867,973호; 제4,938,948호; 제4,946,778호; 제5,021,236호; 제5,164,296호; 제5,196,066호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,420,253호; 제5,565,332호; 제5,571,698호; 제5,627,052호; 제5,656,434호; 제5,770,376호; 제5,789,208호; 제5,821,337호; 제5,844,091호; 제5,858,657호; 제5,861,155호; 제5,871,907호; 제5,969,108호; 제6,054,297호; 제6,165,464호; 제6,365,157호; 제6,406,867호; 제6,709,659호; 제6,709,873호; 제6,753,407호; 제6,814,965호; 제6,849,259호; 제6,861,572호; 제6,875,434호; 및 제6,891,024호. 본원 및 그 안에 인용된 모든 특허, 특허 출원 간행물 및 기타 간행물은 본 출원에 참고로 포함된다.
항체는 조류 및 포유동물을 포함한 임의의 동물 공급원에서 생산될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 양, 뮤린(예를 들어, 마우스 및 래트), 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말 또는 닭이다. 또한 보다 최신 기술은 인간 조합 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 개발하고 스크리닝할 수 있도록 한다. 예를 들어, 박테리오파지 항체 발현 기술은 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제6,946,546호에 기술된 바와 같이, 동물 면역화의 부재 하에 특이적 항체가 생산되도록 한다. 이러한 기술은 Marks(1992); Stemmer(1994); Gram 등(1992); Barbas 등(1994); 및 Schier 등 (1996)에 추가로 기술되어 있다.
항-Cx43 항체는 동물 종, 단클론 세포주 또는 기타 항체 공급원에 관계없이 Cx43의 효과를 중화하거나 상쇄하는 능력을 가질 것임이 충분히 예상된다. 특정 동물 종은 항체의 "Fc" 부분을 통한 보체 시스템의 활성화로 인해 알레르기 반응을 일으킬 가능성이 더 높기 때문에 치료용 항체 생성에 덜 바람직할 수 있다. 그러나, 전 항체는 효소적으로 "Fc"(보체 결합) 단편, 및 결합 도메인 또는 CDR을 갖는 항체 단편으로 효소적으로 분해될 수 있다. Fc 부분의 제거는 항원 항체 단편이 바람직하지 않은 면역학적 반응을 유도해낼 가능성을 감소시키며, 따라서 Fc가 없는 항체는 예방적 또는 치료적 처리에 우선적일 수 있다. 본원에 기술된 바와 같이, 항체는 또한 키메라 또는 부분적으로 또는 완전히 인간이도록 작제되어, 다른 종에서 생산되었거나 다른 종의 서열을 갖는 항체를 동물에게 투여함으로써 초래되는 유해한 면역학적 결과를 감소시키거나 제거할 수 있다.
단백질은 재조합체일 수 있거나 시험관 내에서 합성될 수 있다. 대안적으로, 비-재조합 또는 재조합 단백질은 박테리아로부터 단리될 수 있다. 이러한 변이체를 함유하는 박테리아는 조성물 및 방법으로 구현될 수 있다는 것도 고려된다. 따라서, 단백질은 단리될 필요가 없다.
조성물에는 ml당 총 폴리펩타이드, 펩타이드, 및/또는 단백질 약 0.001 mg 내지 약 10 mg 사이가 있는 것이 고려된다. 따라서, 조성물 중 단백질의 농도는 약, 적어도 약 또는 최대 약 0.001, 0.010, 0.050, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 mg/ml 또는 그 이상(또는 이 안에서 파생될 수 있는 임의의 범위)일 수 있다. 이 중, 약, 적어도 약, 또는 최대 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%는 Cx43에 결합하는 항체일 수 있다.
항-Cx43 항체 또는 바람직하게는 항-Cx43 항체의 면역학적 부분은 다른 단백질과의 융합 단백질에 화학적으로 접합되거나 융합 단백질로서 발현될 수 있다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위의 목적을 위해, 이러한 모든 융합 단백질은 항체 또는 항체의 면역학적 부분의 정의에 포함된다.
본원에는 항체 접합체 또는 페이로드를 형성하기 위해 적어도 하나의 작용제에 연결된 Cx43, 폴리펩타이드 및 펩타이드에 대한 항-Cx43 항체 및 항-Cx43 항체 유사 분자가 기술된다. 진단제 또는 치료제로서 항체 분자의 효능을 증가시키기 위해, 항체에는 적어도 하나의 원하는 분자 또는 모이어티가 연결되거나 공유결합되거나 복합체화될 수 있다. 이러한 분자 또는 모이어티는 적어도 하나의 이펙터 또는 리포터 분자일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 이펙터 분자는 원하는 활성, 예를 들어 세포독성 활성을 갖는 분자를 포함한다. 항체에 부착된 이펙터 분자의 비제한적 예로는 독소, 치료 효소, 항생제, 방사성 표지된 뉴클레오타이드 등을 포함한다. 대조적으로, 리포터 분자는 검정을 사용하여 검출될 수 있는 임의의 모이어티로서 정의된다. 항체에 접합된 리포터 분자의 비제한적 예로는 효소, 방사성 표지, 합텐, 형광 표지, 인광 분자, 화학발광 분자, 발색단, 발광 분자, 광친화도 분자, 유색 입자 또는 리간드, 예를 들어 비오틴을 포함한다.
항체를 이의 접합체 모이어티에 부착 또는 접합시키기 위한 여러 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 일부 부착 방법은 예를 들어 항체에 부착된 디에틸렌트리아민펜타아세트산 무수물(DTPA); 에틸렌트리아민테트라아세트산; N-클로로-p-톨루엔술폰아미드; 및/또는 테트라클로로-3-6-디페닐글리코우릴-3과 같은 유기 킬레이트제를 이용하는 금속 킬레이트 착물의 사용을 수반한다. 단클론 항체는 또한 글루타르알데히드 또는 과요오드산염과 같은 커플링제의 존재 하에 효소와 반응할 수 있다. 플루오레세인 마커를 갖는 접합체는 이러한 커플링제의 존재 하에 또는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조된다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 19의 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 20의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 21의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 표 2는 항-Cx43 항체의 중쇄의 CDR의 예를 보여준다. 중쇄의 추가적인 CDR 서열은 출원 번호 PCT/US2017/019605(WO 2017-147561)에 개시된 중쇄 CDR 서열 중 하나 이상일 수 있으며, 이는 중쇄 CDR 서열의 교시를 위해 본원에 참고로 포함된다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 31의 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 32의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 33의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 표 2는 항-Cx43 항체의 경쇄의 CDR의 예를 보여준다. 경쇄의 추가적인 CDR 서열은 출원 번호 PCT/US2017/019605(WO 2017-147561)에 개시된 하나 이상의 경쇄 CDR 서열일 수 있으며, 이는 경쇄 CDR 서열의 교시를 위해 본원에 참고로 포함된다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 19의 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 20의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 21의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 서열번호 31의 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 32의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 33의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 19, 20, 또는 21에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함할 수 있다(표 2 참조). 일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 19, 20 또는 21에 제시된 서열과 적어도 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 31, 32 또는 33에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함할 수 있다(표 2 참조). 일부 측면에서, 본원에 기술된 항-Cx43 항체는 서열번호 31, 32 또는 33에 제시된 서열과 적어도 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 서열번호 52의 서열을 포함하는 M1H를 암호화하는 핵산 서열이 개시된다. 본원에는 서열번호 54의 서열을 포함하는 M1K1을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 52에 제시된 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 M1H를 암호화하는 핵산 서열이 개시된다(표 3 참조). 일부 측면에서, M1H는 서열번호 52에 제시된 서열과 적어도 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
서열번호 54에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 M1K1을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다(표 3 참조). 일부 측면에서, M1K1은 서열번호 54에 제시된 서열과 적어도 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 서열번호 16의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 17의 서열을 포함하는 CDR2; 서열번호 18의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 M1H 영역을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 28의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 29의 서열을 포함하는 CDR2; 서열번호 30의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 M1K1 영역을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 16의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 17의 서열을 포함하는 CDR2; 서열번호 18의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 서열번호 28의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 29의 서열을 포함하는 CDR2; 서열번호 30의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 항-Cx43 항체를 암호화하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 인간 Cx43에 결합하는 항-Cx43 항체 또는 이의 단편이 개시된다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 표 2 또는 4에 제공된 가변 중쇄 아미노산 서열 중 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
본원에는 인간 Cx43에 결합하는 항-Cx43 항체 또는 이의 단편이 개시된다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 표 2 또는 4에 제공된 가변 경쇄 아미노산 서열 중 하나와 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
본원에는 인간 Cx-43 헤미채널에 결합하는 항-Cx43 항체 또는 이의 단편이 개시된다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄, 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체는 서열번호 58에 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 60에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 M1H 영역을 포함한다. 일부 측면에서, M1H 영역은 서열번호 19의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 20의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 21의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 M1K1 영역을 포함한다. 일부 측면에서, M1K1 영역은 서열번호 31의 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 32의 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 33의 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
일부 경우에, 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 태그 서열을 추가로 포함한다.
본원에는 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다. 예를 들어, 본원에는 서열번호 52에 제시된 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다. 본원에는 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산 서열이 개시된다. 예를 들어, 본원에는 서열번호 52에 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다. 또한, 본원에는 서열번호 54에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다. 또한, 본원에는 서열번호 54에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 52에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 54에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다. 본원에는 서열번호 52에 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 54에 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 52에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 단일 사슬 가변 단편을 암호화할 수 있는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 54에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 단일 사슬 가변 단편을 암호화할 수 있는 핵산 서열이 개시된다.
본원에는 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 단일 사슬 가변 단편을 암호화할 수 있는 핵산 서열이 개시된다.
일부 경우에, 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 이중특이적일 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 제1 Fab 영역 및 서열번호 60의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 제2 Fab 영역을 포함할 수 있으며, 여기서 제1 및 제2 Fab 영역은 상이할 수 있다.
일부 경우에, 이중특이적 항-Cx43 항체는 삼중기능성일 수 있다.
일부 경우에, 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 마우스, 인간, 인간화, 키메라 또는 이의 조합일 수 있다.
일부 경우에, 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 단클론성이다.
추가 실시양태에서, 실시양태에 따라 사용하기 위한 항-Cx43 항체는 국제(PCT) 특허 공개 번호 WO 2015-027120 또는 WO 2017-147561에 기술된 것 중 임의의 것일 수 있고, 이 문헌은 항체, 벡터 및 항체를 제조 또는 발현하기 위한 세포의 교시에 대해 본원에 참고로 포함된다.
일부 측면에서, 제1 중쇄 영역은 서열번호 2의 잔기 13 내지 37의 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있고; 제2 중쇄 영역은 서열번호 2의 잔기 46 내지 66에 상응하는 아미노산 서열을 가지며; 제3 중쇄 영역은 서열번호 2의 잔기 97 내지 116의 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 항체는 전체 길이의 항-Cx43 항체, 항체 단편, 단일 사슬 항체, 이중특이적 항체, 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체 및 항체 융합체, 및 이의 단편을 포함할 수 있다.
방법
대상체에서 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 골관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 류마티스 관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 힘줄 장애 또는 힘줄 손상의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 연골하 골 경화증의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 연골 분해를 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 대상체에서 윤활막 염증을 감소시키는 방법이 본원에 개시된다.
대상체에서 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
대상체에서 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 대상체에서 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 대상체에서 연골 분해를 감소시키는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 대상체에서 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에는 대상체에서 골관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체(즉, 항-Cx43 항체) 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 방법은 MMP13 수준 또는 콜라겐 X 수준을 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 방법은 연골 분해를 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 방법은 윤활막 염증을 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 방법은 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상 또는 연골하 골 경화증의 하나 이상의 증상을 감소시키거나 호전시킬 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 결정 영역을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
일부 측면에서 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 글리신 잔기에서 또 다른 아미노산으로의 치환일 수 있다.
본원에는 염증성 유전자 발현을 감소시키거나 저하시키는 방법이 개시된다. 본원에는 대상체에서 염증성 유전자 발현을 감소시키거나 저하시키는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 방법은 윤활막 대식세포에서 염증성 유전자 발현을 감소시키거나 저하시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 방법은 섬유아세포에서 염증성 유전자 발현을 감소시키거나 저하시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증성 유전자의 발현은 감소되거나 저하될 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증성 유전자는 MMP3/13, 사이클로옥시게나아제 2(COX2), 트롬보스폰딘 1형 모티프 4를 갖는 ADAM 금속펩타이드분해효소(Adamts4), 또는 IL6일 수 있다.
일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에게 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나는 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환이다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1; ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1); b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는 c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 단편은 a) i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및 iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 b) i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1; ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및 iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 방법은 항-Cx43 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 발현 벡터의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 약제학적으로 허용되는 조성물로 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 약제학적 조성물은 동결건조될 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 전신 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 정맥내, 피내, 종양내, 근육내, 복강내, 피하 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 인간화 항체 또는 이의 인간화 단편일 수 있다. 일부 측면에서, 항-Cx43 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, 또는 서열번호 19에 상응하는 제1 VH CDR, 서열번호 20에 상응하는 제2 VH CDR, 서열번호 21에 상응하는 제3 VH CDR, 서열번호 31에 상응하는 제1 VL CDR, 서열번호 32에 상응하는 제2 VL CDR, 및 서열번호 33에 상응하는 제3 VL CDR을 포함하는 유전자 변형된 IgG 부류 항체일 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 IgG 부류의 항체일 수 있고, 여기서 IgG 부류 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 부류 항체이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 방법은 대상체에게 적어도 제2 치료제 또는 제2 요법을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 제2 치료제는 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID), 글루코사민, 콘드로이틴 보충제 또는 이들의 조합일 수 있다. 일부 측면에서, 제2 요법은 관절 교체 수술일 수 있다. 일부 측면에서, 제2 치료제 및 제2 요법은 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 방법에서 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 Cx43 헤미채널에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 임의의 방법에서 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단할 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 태그 서열을 추가로 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편일 수 있다.
일부 측면에서, 골관절염의 하나 이상의 증상은 통증일 수 있다. 골관절염 증상의 예로는 관절 경직, 움직임(유연성)의 저하된 범위 및 종창을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 류마티스 관절염의 하나 이상의 증상은 통증일 수 있다. 류마티스 관절염 증상의 예로는 관절 경직, 압통, 체중 감소, 발열, 피로 또는 피곤함, 및 쇠약을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 힘줄 또는 관절 장애는 소아 관절염, 건염, 건증, 부건염, 건 윤활막염, 통풍 또는 섬유근육통일 수 있다. 일부 측면에서, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상의 하나 이상의 증상은 통증일 수 있다. 힘줄 장애 또는 힘줄 손상의 증상의 예로는 종창, 경직, 압통, 발적 및 제한된 관절 이동을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 연골하 골 경화증의 하나 이상의 증상은 통증일 수 있다. 연골하 골 경화증 증상의 예로는 경직 및 유연성 상실, 삐걱거리는 느낌, 딱딱한 돌기 또는 뼈 돌출을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
질환 치료
본원에는 대상체에서 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상, 또는 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있는 항체 및 이의 단편이 개시된다. Cx43 헤미채널의 신호전달을 저해하거나 차단하는 것은 MMP13 또는 콜라겐 X 수준, 연골 분해 및/또는 윤활막 염증을 감소시키기 위한 임의의 적합한 약물 또는 치료제에 의해 달성될 수 있다. 일부 측면에서, 약물 또는 치료제는 항-Cx43 항체일 수 있다.
본원에 기술된 조성물은 임상 질환의 개시를 지연시키거나, 감소시키거나, 바람직하게는 예방하기에 충분한 양으로 대상체(예를 들어, 인간 환자)에게 투여될 수 있다. 따라서, 일부 측면에서 환자는 인간 환자일 수 있다. 치료 적용에서, 조성물은 이미 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상, 또는 연골하 골 경화증 또는 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상 또는 연골하 골 경화증의 하나 이상의 증상을 갖고 있거나 진단을 받은 대상체(예를 들어, 인간 환자)에게 징후 또는 증상을 적어도 부분적으로 개선하거나 상태의 증상, 이의 합병증 및 결과의 진행을 저해(및 바람직하게는 저지)하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 이를 달성하기에 적절한 양은 "치료적 유효량"으로 정의된다. 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 치료 유효량은 치료를 달성하는 양일 수 있지만, 그 결과는 달성될 수 있는 여러 가지 중 하나일 뿐이다. 언급된 바와 같이, 치료적 유효량은 질환, 장애, 상태 또는 손상의 개시 또는 진행이 지연, 방해 또는 예방되는 치료, 또는 질환, 장애, 상태 또는 손상 또는 질환, 장애, 상태 또는 손상의 증상이 호전되거나 그의 빈도가 감소될 수 있는 치료를 제공하는 양을 포함한다. 증상 중 하나 이상은 덜 중증일 수 있다. 치료를 받은 개체에서는 회복이 가속화될 수 있다. 예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상 또는 연골하 골 경화증의 치료는 예를 들어 MMP13 수준의 감소, 콜라겐 X 수준의 감소, 연골 분해의 감소, 윤활막 염증의 감소 또는 통증의 감소 또는 예방을 수반할 수 있다.
일부 측면에서, 관절 또는 힘줄 장애는 소아 관절염, 건염, 건증, 건주위염, 건윤활막염, 통풍 또는 섬유근육통일 수 있다.
골관절염은 뼈의 말단을 완충작용하는 보호 연골이 시간이 지남에 따라 마모될 때 발생한다. 일부 측면에서 골관절염은 모든 관절을 손상시키거나 영향을 미칠 수 있다. 일부 측면에서, 관절은 손, 무릎, 엉덩이, 척추, 발, 목 또는 어깨에 있을 수 있다.
류마티스 관절염은 자가면역 상태일 수 있다. 일부 측면에서, 류마티스 관절염은 임의의 조직 및/또는 임의의 관절을 손상시키거나 영향을 미칠 수 있다. 일부 측면에서, 조직은 관절일 수 있다. 일부 측면에서, 관절은 손, 발, 무릎, 엉덩이, 어깨 및 팔꿈치에 있을 수 있다. 일부 측면에서 류마티스 관절염은 다양한 신체 시스템을 손상시킬 수 있다. 일부 측면에서, 류마티스 관절염은 피부, 눈, 폐, 심장 및 혈관을 손상시키거나 영향을 미칠 수 있다.
연골하 골 경화증은 연골 표면 바로 아래 뼈의 경화이며, 종종 골관절염 후기에 나타난다. 일부 측면에서, 연골하 골 경화증은 부하를 견디는 관절에서 발견될 수 있다. 일부 측면에서, 연골하 골 경화증은 무릎, 엉덩이, 손, 발 또는 척추에서 발견될 수 있다.
본원에는 관절염 환자를 치료하거나 관절염 또는 연골하 골 경화증과 연관된 연골의 퇴행을 예방하는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 관절염은 골관절염 또는 류마티스 관절염일 수 있다. 또한, 본원에는 대상체에서 힘줄 장애 또는 힘줄 손상 또는 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다. 일부 측면에서, 대상체는 투여 단계 이전에 관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 연골하 골 경화증 또는 힘줄 장애 또는 힘줄 손상으로 진단받았다.
본원에 기술된 조성물은 본원에 개시된 항체 또는 이의 단편의 치료 유효량을 포함하도록 제형화될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 약제학적 제형 내에 함유될 수 있다. 일부 측면에서, 약제학적 제형은 단위 투여 제형일 수 있다.
포유동물(예를 들어, 인간)에 적용되는 본원에 개시된 바와 같은 방법에 사용되는 임의의 항-Cx43 항체 또는 이의 단편의 치료 유효량 또는 투여량은 연령, 체중, 성별, 대상체 증상의 중증도의 개인차, 및 선택된 특정 조성물 또는 투여 경로, 투여된 기타 약물 및 주치의의 판단을 고려하여 관련 기술분야의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 필요한 투여량의 변동이 예상될 수 있다. 투여량 수준의 변동은 최적화를 위한 표준 경험적 경로를 사용하여 조정할 수 있다. 환자에게 투여되는 약제학적 조성물의 특정 투여량은 다양한 고려사항(예를 들어, 암 증상의 중증도), 대상체의 연령 및 신체적 특성 및 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 기타 고려사항에 따라 달라질 것이다. 투여량은 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 임상적 접근법을 사용하여 확립될 수 있다. 항-헤미채널 항체의 치료 유효 투여량은 하나 이상의 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 초래할 수 있다. 치료 유효량의 치료 화합물 또는 항체는 대상체에서 MMP13 수준 또는 콜라겐 X 수준을 저하시키거나, 연골 분해를 저하시키거나, 윤활막 염증을 저하시키거나, 그렇지 않으면 증상을 호전시킬 수 있다.
본원에서 제공되는 임의의 조성물에 의한 치료 기간은 짧게는 1일 내지 길게는 숙주의 수명(예를 들어, 수년)까지 임의의 길이의 시간일 수 있다. 예를 들어, 조성물은 주 1회(예를 들어, 4주 내지 수개월 또는 수년); 1개월에 1회(예를 들어, 3~12개월 동안 또는 수년 동안); 또는 5년, 10년 또는 그 이상의 기간 동안 1년에 1회 투여될 수 있다. 치료 빈도는 변동될 수 있음을 또한 유의한다. 예를 들어, 본 조성물은 매일, 매주, 매월 또는 매년 1회(또는 2회, 3회 등) 투여될 수 있다.
본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 조성물의 총 유효량은 볼루스로서 또는 상대적으로 짧은 기간에 걸친 주입에 의해 단일 용량으로서 대상체에게 투여될 수 있거나, 또는 보다 장기적인 시간 기간 동안 다중 용량이 투여되는 분할 치료 프로토콜을 사용하여 투여될 수 있다. 대안적으로, 혈액에서 치료적으로 효과적인 농도를 유지하기에 충분한 연속적인 정맥내 주입도 본 개시내용의 범위 내에 있다.
본원에 기술된 항-Cx43 항체, 이의 단편 또는 조성물은 치료를 필요로 하는 대상체에게 다른 치료 양식과 함께 투여될 수 있다. 본 화합물은 다른 작용제 또는 요법으로 치료하기 전, 치료와 동시에 또는 치료 후에 제공될 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 항-Cx43 항체는 단독으로 또는 관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 연골하 골 경화증 또는 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료하는 데 사용되는 표준 요법과 함께 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 임의의 항-Cx43 항체 또는 조성물은 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID), 글루코사민 및 콘드로이틴 보충제, 관절 교체 수술 또는 이들의 조합과 함께 투여되거나 사용될 수 있다.
약제학적 조성물
본원에는 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된 단클론 항체, 이의 항원-결합 부분(들) 또는 단편 중 하나 또는 조합을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 개시된다. 이러한 조성물은 본원에 기술된 항체, 항체 단편 또는 면역접합체 중 하나 또는 조합(예를 들어, 2 이상의 상이한 것)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 표적 항원 상의 상이한 에피토프에 결합하거나 상보적 활성을 갖는 항체 또는 이의 항체 단편의 조합을 포함할 수 있다.
본원에는 본원에 기술된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편 중 임의의 것을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물이 개시된다. 또한, 본원에는 골관절염, 류마티스 관절염, 힘줄 장애 또는 힘줄 손상, 연골하 골 경화증의 치료 또는 예방, MMP13 또는 콜라겐 X 수준 감소, 연골 분해 감소 또는 윤활막 염증 감소를 위한 요법에 사용하거나 약제로서 사용하기 위한 항-Cx43 항체 또는 약제학적 조성물이 개시된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 조합 요법으로서, 즉 다른 작용제와 조합으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 적어도 하나의 다른 치료제 또는 요법과 조합된 항-헤미채널 항체를 포함할 수 있다.
본원에 사용된, "약제학적으로 허용되는 담체"라는 어구는 생리학적으로 화합성인 임의의 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게는, 담체는 정맥내, 근육내, 피하 또는 비경구 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)에 적합할 수 있다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 항체 또는 면역접합체는 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 기타 천연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하는 물질로 코팅될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예로는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일 및 에틸 올레이트와 같은 주사 가능한 유기 에스테르를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅 물질의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체는 멸균 수용 용액 또는 분산액 및 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제는 활성 화합물과 화합할 수 없는 경우를 제외하고, 본 발명의 약제학적 조성물에서의 사용이 고려된다. 보조 활성 화합물도 조성물에 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 멸균성이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬 구조로 제형화될 수 있다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어 당, 만니톨, 소르비톨과 같은 다가알코올, 또는 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다.
멸균 주사 용액은 필요에 따라 본원에 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입시킨 다음 멸균 미세여과하여 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 본원에 열거된 것으로부터 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 활성 화합물을 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분 및 임의의 바람직한 추가 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동-건조(동결건조)이다.
단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 대상체 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여량 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 해당 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 이 양은 약제학적으로 허용성인 담체와 조합된 약 0.01% 내지 약 99%의 활성 성분, 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 1% 내지 약 30%의 활성 성분 범위일 것이다.
투여 요법은 원하는 반응(예: 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스(bolus)가 투여될 수 있고, 여러 분할 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 용량이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 특히, 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여량 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여량 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단위 투여량으로 적합한 물리적으로 별개인 단위를 지칭하며; 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 함께 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 상세는 (a) 활성 화합물의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 개인의 민감성을 치료하기 위해 그러한 활성 화합물을 배합하는 기술에 내재된 제한에 의해 좌우되고 직접적으로 의존적이다.
항체 투여의 경우, 투여량은 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 보다 일반적으로 0.01 내지 5 mg/kg, 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 10 mg/kg 내지 15 mg/kg, 15 mg/kg 내지 20 mg/kg 또는 20 mg/kg 내지 25 mg/kg 숙주 체중의 범위이다. 일부 측면에서, 투여량은 0.3 mg/kg 체중, 1 mg/kg 체중, 3 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중이거나, 또는 1-10 mg/kg 범위 내일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 0.3 mg/kg 체중, 1 mg/kg 체중, 3 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중, 10 mg/kg 체중, 15 mg/kg 체중, 20 mg/kg 체중, 25 mg/kg 체중 또는 30 mg/kg 체중이거나, 또는 1-30 mg/kg 범위 내일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 5 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 15 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 20 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 측면에서, 투여량은 25 mg/kg 체중일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 1개월에 1회, 3개월에 1회 또는 3 내지 6개월에 1회 투여를 수반한다. 본 발명의 항-헤미채널 항체에 바람직한 투여 요법은 정맥내 투여를 통해 1 mg/kg 체중 또는 3 mg/kg 체중을 포함하며, 항체는 다음 투약 일정 중 하나를 사용하여 제공된다: (i) 6회 투여량 동안 4주마다, 그 다음에는 3개월마다; (ii) 3주마다; (iii) 1회 3 mg/kg 체중에 이어서 3주마다 1 mg/kg 체중.
일부 방법에서, 상이한 결합 특이성을 갖는 2개 이상의 단클론 항체가 동시에 투여되며, 이 경우 투여되는 각 항체의 투여량은 표시된 범위 내에 속한다. 항체는 일반적으로 여러 차례 투여된다. 단일 투여량 사이의 간격은 예를 들어 매주, 매월, 3개월마다 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 환자 중 표적 항원에 대한 항체의 혈중 수준을 측정하여 나타낸 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1-1000μg/ml, 일부 방법에서는 약 25-300μg/ml의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성임이 없이, 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하기 위해 변동될 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용된 본원에 개시된 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료 받는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적인 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 달라질 것이다.
본원에 개시된 임의의 조성물은 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법 중 하나 이상을 사용하는 하나 이상의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 숙련된 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항체의 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 피하, 또는 기타 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 어구 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한, 장내 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하며, 제한 없이 정맥내, 근육내, 동맥내, 복강내, 기관내, 피하, 표피하, 관절내 주사 및 주입을 포함한다.
조합 치료. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 Cx43 헤미채널의 개방을 저해 또는 차단하여, 예를 들어 MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키고, 연골의 분해를 보호, 감소 또는 예방하고, 윤활막 염증을 감소시키고, 골관절염, 류마티스 관절염, 연골하 골 경화증 또는 힘줄 장애 또는 힘줄 손상의 하나 이상의 증상을 감소시키거나 호전시키기 위한 Cx43에 대한 항체 또는 이의 항체 단편(예를 들어, 항-Cx43 항체 또는 이의 단편)을 제2 또는 추가 치료제 또는 치료법과 조합으로 수반할 수 있다. 이러한 치료법은 Cx43-매개의 윤활막 염증, 연골 분해, 또는 MMP13 또는 콜라겐 X의 증가된 수준과 연관된 임의의 질환의 치료에 적용될 수 있다. 예를 들어, 질환은 골관절염, 류마티스 관절염, 연골하 골 경화증, 또는 힘줄 장애 또는 힘줄 손상일 수 있다.
조합 요법을 포함하는 방법 및 조성물은 치료 또는 보호 효과를 향상시키고, 및/또는 또 다른 항염증제, 치료제 또는 치료법의 치료 효과를 증가시킨다. 치료 및 예방 방법 및 조성물은 원하는 효과, 예를 들어 MMP13 또는 콜라겐 X 수준 감소, 연골 분해 감소, 윤활막 염증 감소 및/또는 골관절염, 류마티스 관절염, 연골하 골 경화증 또는 힘줄 장애 또는 힘줄 손상의 하나 이상의 증상의 감소 또는 호전을 달성하기에 효과적인 조합된 양으로 제공될 수 있다. 이 과정은 세포를 항체 또는 항체 단편 및 제2 치료법 둘 모두와 접촉시키는 것을 수반할 수 있다. 조직, 종양, 또는 세포는 하나 이상의 작용제(즉, 항체 또는 항체 단편 또는 제2 치료제)를 포함하는 하나 이상의 조성물 또는 약리학적 제형(들)과 접촉될 수 있거나, 또는 2종 이상의 별개의 조성물 또는 제형과 조직, 종양, 및/또는 세포를 접촉시킬 수 있고, 여기서 하나의 조성물은 1) 항체 또는 항체 단편, 2) 제2 치료제, 또는 3) 항체 또는 항체 단편과 제2 치료제 둘 모두를 제공한다. 또한, 이러한 조합 요법은 외과적 치료법, 예를 들어 관절 교체 수술과 함께 사용될 수 있는 것으로 고려된다.
용어 "접촉된" 및 "노출된"은 세포에 적용될 때 치료 작제물 및 제2 치료제가 표적 세포로 전달되거나 표적 세포와 직접 병치되는 과정을 설명하는 것으로 본원에서 사용된다. 예를 들어 원하는 결과를 달성하기 위해 두 작용제는 원하는 결과에 효과적인 조합된 양으로 세포로 전달될 수 있다.
항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 제2 치료제 또는 치료법에 대비하여, 이전에, 중간에, 이후에 또는 다양한 조합으로 투여될 수 있다. 투여는 동시부터 수분, 수일, 수주 범위의 간격일 수 있다. 항체 또는 항체 단편이 제2 치료제 또는 치료법과 별도로 환자에게 제공되는 측면에서, 일반적으로 각 전달 시간 사이에는 상당한 기간이 만료되지 않도록 보장하여, 두 화합물이 환자에 대해 유리하게 조합된 효과를 여전히 발휘할 수 있도록 할 것이다. 이러한 경우에, 환자에게 항체 요법 및 제2 치료제 또는 치료법을 서로 약 12 내지 24 또는 72시간 이내, 보다 구체적으로는 서로 약 6 내지 12시간 이내에 제공할 수 있다는 것이 고려된다. 일부 상황에서는 치료 시간 기간을 유의미하게 연장하여 각각의 투여 사이에 수일(2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일) 내지 수주(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주)가 경과하는 것이 바람직할 수 있다.
일부 측면에서, 치료 과정은 1 내지 90일 또는 그 이상 지속될 수 있다(이러한 범위는 중간 일수를 포함함). 하나의 작용제는 1일 내지 90일 중 임의의 날짜(이러한 범위는 중간 일수를 포함함)에 제공되거나 또는 이들의 임의의 조합으로 제공될 수 있고, 또 다른 작용제는 1일 내지 90일 중 임의의 일수(이러한 범위는 중간 일수를 포함함) 또는 이들의 임의의 조합으로 제공된다. 1일(24시간) 내에 환자는 작용제(들)를 1회 또는 다중 투여로 제공될 수 있다. 더욱이, 치료 과정 후에는 제2 치료제 또는 치료법이 투여되지 않는 시간 기간이 있을 수 있음이 고려된다. 이 시간 기간은 예후, 강도, 건강 등과 같은 환자의 상태에 따라 1-7일 및/또는 1-5주 및/또는 1-12개월 이상 지속될 수 있다(이러한 범위에는 중간 일수를 포함함). 필요에 따라 치료 주기는 반복될 것으로 예상된다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 수술 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10일 이상 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 내측 반월판 불안정화의 수술일 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 골관절염 치료를 위한 일종의 수술일 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 연골 교체 수술(예를 들어, 인공 관내인공삽입물) 또는 관절성형술일 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 힘줄 복구 수술일 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 류마티스 관절염 치료와 연관될 수 있다. 일부 측면에서, 수술은 관절 교체술, 관절고정술 또는 윤활막 절제술일 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 1일 이상 간격을 두고 1회 이상 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편의 2차, 3차, 4차, 5차 등의 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일씩 분리될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 1주 이상 간격을 두고 1회 이상 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편의 2차, 3차, 4차, 5차 등의 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12주씩 분리될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 1개월 이상 간격을 두고 1회 이상 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편의 2차, 3차, 4차, 5차 등의 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월씩 분리될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 항-Cx43 항체 또는 이의 단편은 다양한 간격, 일, 주, 개월 또는 이들의 임의의 조합으로 분리된 1회 이상으로 투여될 수 있다.
다양한 조합이 이용될 수 있다. 아래 예에서 항체 요법은 "A"이고 제2 치료제 또는 치료법은 "B"이다:
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/ A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A.
본원에 개시된 임의의 화합물 또는 치료법을 환자에게 투여하는 것은 존재하는 경우 작용제의 독성을 고려하여, 이러한 화합물의 일반적인 투여 프로토콜을 따를 것이다. 따라서, 일부 측면에서 조합 요법에 기인할 수 있는 독성을 모니터링하는 단계가 있을 수 있다.
키트 및 진단
본원에는 하나 이상의 치료제 및/또는 다른 치료제 및 전달제를 포함하는 키트가 개시된다. 일부 측면에서, 키트는 본원에 개시된 치료법을 준비 및/또는 투여하기 위해 사용될 수 있다. 키트는 본원에 개시된 약제학적 조성물 중 임의의 것을 함유하는 하나 이상의 밀봉된 바이알을 포함할 수 있다. 키트는 예를 들어 적어도 하나의 항-Cx43 항체 또는 이의 단편뿐만 아니라 본원에 개시된 조성물의 성분 하나 이상을 준비, 제형화 및/또는 투여하거나 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계를 수행하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 키트는 또한 적합한 용기를 포함할 수 있으며, 이는 에펜도르프 튜브, 검정 플레이트, 주사기, 병 또는 튜브와 같은 키트의 구성요소와 반응하지 않을 용기일 수 있다. 용기는 플라스틱이나 유리와 같은 멸균 가능한 재료로 만든 것일 수 있다.
키트는 본원에 제시된 방법의 절차적 단계를 약술하는 지침서를 추가로 포함할 수 있고, 본원에 기술된 것과 실질적으로 동일한 절차를 따르거나 관련 기술분야의 기술자에게 공지되어 있을 것이다. 지침 정보는 컴퓨터를 사용하여 실행될 때 약제학적 유효량의 치료제를 전달하는 실제 또는 가상 절차를 전시하게 하는 기계-판독가능 지침을 함유하는 컴퓨터 판독 가능 매체에 있을 수 있다.
실시예
하기 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에서 잘 기능하는 것으로 본 발명자들에 의해 발견된 기술을 나타내며, 따라서 그의 실시에 바람직한 모드를 구성하는 것으로 간주될 수 있음을 관련 기술분야의 기술자라면 이해해야 한다. 그러나, 관련 기술분야의 기술자는 본 개시내용에 비추어 개시된 특정 실시양태에서 많은 변화가 이루어질 수 있고 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 같거나 유사한 결과를 여전히 수득한다는 것을 인식해야 한다.
실시예 1 - 코넥신 43 헤미채널의 차단에 의한 골관절염 진행의 저해
1차 마우스 연골세포에서 브롬화에티듐 염료 흡수 검정은 M1 항체가 IL-1β 처리로 유도된 HC 개방을 차단함을 나타냈다. OA 진행에서 Cx43 헤미채널의 기능을 조사하기 위해 내측 반월판 불안정화(DMM)의 수술을 통해 수컷 C57BL/6 마우스에서 외상 후 OA 모델을 유도했다. M1 항체 또는 식염수는 수술 후 8주 동안 복강내 주사에 의해 2회 투여했다. 연골 분해 및 윤활막 염증은 조직학 및 면역조직화학으로 분석했다. 식염수 그룹과 비교하여 M1 항체 처리는 OARSI 스코어화 시스템에 의해 정량화된 연골 완전성을 유의미하게 개선시켰고 Mmp13 및 콜라겐 X 수준의 감소와 함께 윤활막염의 정도를 저하시켰다. 연골하 골 경화증의 마이크로컴퓨터 단층 촬영(μCT)은 Cx43 헤미채널의 저해 후 BV/TV, Tb.Th의 저하 및 Tb.Sp의 증가를 보여주었다. 또한, Von Frey 필라멘트 및 오픈 필드 테스트는 M1 항체 치료 후 DMM 마우스에서 OA 연관 통증 증상을 호전시켰고, 반면 식염수와 항체 처리된 모의 마우스 간에는 차이가 관찰되지 않았다. 결과는 또한 M1 항체가 윤활막 영역에 주로 국재화되었고 M1 항체 투여 후 2주 이상 지난 후에도 신호가 검출되었음을 보여준다. 생체내 염료 흡수 및 면역형광 검정은 Cx43을 발현하는 윤활막세포에서 OA 유도된 헤미채널 개방을 차단하는 데 있어서 M1 항체의 역할을 추가로 검증했다. 종합하면, 이러한 결과는 M1 항체에 의한 Cx43 헤미채널을 표적으로 하는 것이 OA 진행 동안 관절의 이화작용 및 염증 환경을 완화하는 데 사용될 수 있는 치료 전략임을 시사한다. 유사한 작용 기전으로 인해 M1 항체 요법은 류마티스 관절염(RA) 및 기타 힘줄 장애 및 손상에 적용될 수 있다.
재료 및 방법. 동물 및 수술 모델. 사용된 마우스는 C57BL/6 배경이었다. 마우스는 특정 병원균이 없는 조건에서 명암 주기가 12시간인 온도 조절실에 수용되었다. 음식과 물은 임의로(ad libitum) 제공되었다.
내측 반월판 불안정화(DMM) 수술은 마우스의 오른쪽 무릎 관절에 대해 수행했다(Glasson SS, 등. Osteoarthritis and cartilage. 2007;15(9):1061-9). 간략하게, 원위 슬개골을 거쳐 근위 경골 고평부까지 3mm 세로 절개가 이루어졌다. 슬개건 바로 내측의 관절낭을 #15 블레이드로 절개하고 미세-홍채 가위로 관절낭을 개방시켰다. 그 다음 관절과간 영역 위의 지방 패드의 무딘 절개를 수행하여 관절과간 영역을 노출시킴으로써 내측 반월판의 내측측부 인대를 가시화했다. 무든 절개 시 지방 패드로부터의 경미한 출혈은 흡수 스피어의 압력에 의해 제어했다. 칼날이 근위-외측으로 향하게 한 미세 수술 나이프로 내측 반월상연골 인대를 절편화하여 내측 반월판의 불안정화(DMM)를 제공했다. 모의 수술은 인대를 가시화했지만 단면절개함이 없이 수행했다.
조직학. 골관절염(OA)의 유도 8주 후, DMM 및 모의 수술한 마우스로부터 단리된 대퇴골 및 경골을 2일 동안 4% 파라포름알데히드로 고정한 후 3주 동안 10% EDTA(pH 7.5)로 탈석회화했다. 샘플을 파라핀에 포매하고 유리 슬라이드에 5μm 두께의 절편으로 수집했다. 절편을 자일렌에서 탈파라핀화한 후, 단계적으로 등급에 따른 일련의 알코올 세척을 수행했다. 연골 분해 정도를 결정하기 위해 절편을 사프라닌 O/패스트 그린으로 염색했다. 무릎 관절 관절 연골 파괴를 평가하기 위해 OARSI 스코어화를 수행했다(Glasson SS, 등 Osteoarthritis and cartilage. 2010;18 Suppl 3:S17-23). 구체적으로, 내측 대퇴골과 및 내측 경골 고평부 모두를 관절의 3-레벨 절편을 통해 분석했고, OA의 중증도는 전체 관절에 대한 평균 및 합산 스코어로 표현했다.
윤활막염의 정도는 윤활막 비후 및 윤활막 과형성을 고려하여 결정했고 0~3점(0, 윤활막염 없음; 1, 경미한 윤활막염; 2, 중등도 윤활막염; 및 3, 중증 윤활막염)의 스케일로 스코어를 매긴다(Krenn V, 등 Pathology, research and practice. 2002;198(5):317-25; 및 Huesa C, 등 Annals of the rheumatic diseases. 2016;75(11):1989-97). 맹검 조직형태계측학적 평가가 수행되었다.
면역조직화학. ABC(아비딘-비오틴-퍼옥시다제 복합체) 면역염색 검정 키트(Vector Laboratories, PK-6101)를 사용했다. 간략하게, 골 조직 절편은 MMP13 염색을 위해 65℃에서 2시간 동안 구연산 나트륨 완충액(pH 6.0)을 사용하고 콜라겐 X 염색을 위해 37℃에서 30분 동안 트립신 분해 완충액(pH 7.8)을 사용하여 항원 탈마스킹했다. 골 조직 절편은 그 다음 실온에서 20분 동안 염소 정상 혈청으로 처리하여 비특이적 배경 염색을 차단했다. 조직 절편은 항-MMP13 다클론 항체(1:200 희석, Abcam, ab39012)로 염색하거나 항콜라겐 X 단클론 항체(1:100 희석, Thermo Fisher, 14-9771-82)로 4℃에서 밤새 표지화했다. 그런 다음, 절편을 비오틴-표지화된 2차 항체와 30분 동안, 그리고 VECTASTAIN ABC Reagent와 함께 30분 동안 인큐베이션했다. 샘플을 PBS 완충액으로 세척하고 DAB(SK4100) 발색단 용액(Vector Laboratories, 미국 캘리포니아주 벌링게임)으로 발색시켰다. 그런 다음, 조직을 실온에서 5분 동안 VECTOR 헤마톡실린(H-3401)으로 대비염색했다. 그런 다음, 슬라이드를 탈수, 제거 및 탑재했다. 절편은 Keyence 현미경(BZ-X710, Keyence, 일본 오사카)을 사용하여 촬영했다. MMP13 또는 Col X-양성 연골세포의 백분율은 NIH Image J 소프트웨어를 사용하여 정량화했다.
면역형광 염색. 단리된 대퇴골 및 경골은 2일 동안 4% 파라포름알데하이드에서 고정시킨 다음, 10% EDTA(pH 7.5)로 3주 동안 탈석회화하고, 그 다음 30% 수크로스/PBS에서 3일 동안 탈수시켰다. 샘플을 Tissue-Tek CRYO OCT 화합물(Thermo Fisher Scientific, 미국 펜실베니아주 피츠버그)에 포매하고, 12μm 두께의 절편을 유리 슬라이드에 수집했다. 절편을 차단하고 PBS 중 2% 염소 혈청, 2% 어피(fish skin) 젤라틴, 0.025% Triton X-100 및 1% 소 혈청 알부민으로 투과화했다. 절편을 Cx43(CT)에 대한 친화도-정제 항체(1:100)(Cherian PP, 등 The Journal of biological chemistry. 2003;278(44):43146-56)와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하고, 적절한 2차 항체와 1시간 동안 인큐베이션했다. 슬라이드는 Vectashield 탑재 매질(H-1000, Vector Lab)을 사용하여 탑재했다. 공초점 형광 이미징은 공초점 레이저 스캐닝 현미경(LSM770, Carl Zeiss, 독일 오버코헨)을 사용하여 수행했다.
동물 행동 테스트. 발 움츠림 역치는 von Frey 필라멘트 0.007 내지 2를 사용하여 측정했다. 마우스를 와이어 메쉬 격자 위에 매달린 상태로 아크릴 챔버(5.5 × 10cm)에 넣고 실험 전에 30분 동안 테스트 장치에 적응하도록 했다. 마우스가 움직이지 않을 때 von Frey 필라멘트는 필라멘트가 휘어질 때까지 발의 발바닥 표면에 대해 누르고 최대 3초 동안 유지시켰다. 필라멘트 적용 시 발이 급격히 움츠러들면 양성 반응으로 기록했다. 필라멘트 제거 직후 움찔하는 것도 양성 반응으로 간주했다(Chaplan SR, 등 Journal of neuroscience methods. 1994;53(1):55-63; 및 Bonin RP, 등 Molecular pain. 2014;10:26). 테스트는 필라멘트 번호 0.4로 시작하여 업다운 방식으로 진행했다.
자발적인 운동 활성은 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석했다. 자유롭게 탐색할 수 있도록 마우스를 25x25x25cm 크기의 챔버 중앙에 넣었다. 실험은 10분간 수행했다. 총 이동 거리, 및 부동 시간은 컴퓨터 분석으로 측정했다. 마우스 행동을 기록하고 ANY-미로 행동 추적 소프트웨어(Stoelting Co., 미국 일리노이주 우드데일)를 사용하여 비디오를 분석했다.
마이크로컴퓨터 단층촬영. 행동 시험 후, 마우스를 희생시키고 뒷다리를 즉시 절개하고 4% 파라포름알데히드에 고정시켰다. 연골하 골의 구조적 특성은 μCT 이미징 시스템(Bruker SkyScan 1173; Bruker microCT, 벨기에 콘티치)의 3D 재구성을 사용하여 평가했다. 샘플은 식염수에서 다음과 같은 세팅 하에 스캔했다: 60kV, 167mA 빔 강도, 0.5mm 알루미늄 필터, 0.7° 회전 단계, 4-프레임 평균화, 1090ms 통합 시간, 1024 × 1024 픽셀 매트릭스 및 10μm 등방성 복셀 치수. 스캔 후 크기가 4픽셀 미만인 불연속 물체를 제거하여 이미지로부터 노이즈를 제거했다. 경골 관절과가 완전히 합쳐진 제1 슬라이스부터 시작하여 근위부로 확장되는 50개의 슬라이스에 대해 형태계측학적 분석을 수행했다. 연골하 골은 피질 껍질로부터 컨투어링 도구를 사용하여 키 슬라이스(key slice)에 대해 수동적으로 분절화하고, 모든 슬라이스에서 섬유주골을 분절화하기 위해 윤곽을 자동으로 모핑했다. 형태계측학적 분석을 재구성하고 분석했다. 8비트 슬라이스 세트에서 그레이스케일 값 95를 역치로서 설정하고 두 그룹의 그레이스케일 및 이진화 이미지를 비교한 후 표본에 적용했다. 역치화 후 BV/TV(%), Tb.Th(mm), Tb.Sp(mm) 및 Tb.N(mm-1)을 정량화했다.
생체내 염료 흡수 검정. 에반스 블루 염료(Mw: 900 Da)(200 mg/kg) 및 FITC-덱스트란(Mw: 10,000 Da)(200 mg/kg)을 꼬리 정맥을 통해 항체 처리 4일 후에 공동 주사했다. 염료 투여 1시간 후, 마우스를 마취시키고, 차가운 PBS 및 4% 파라포름알데하이드로 심장 관류를 수행했다. 양쪽 뒷다리를 단리시키고 동결 절편을 위해 준비했다. 절편을 DAPI로 염색하고 Keyence 현미경(BZ-X710, Keyence, 일본 오사카)을 사용하여 사진촬영했다. 염료 흡수 강도는 NIH Image J 소프트웨어로 정량화했다.
통계 분석. GraphPad Prism5 통계 소프트웨어(GraphPad)를 사용하여 통계 분석을 수행했다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다. T 테스트 및 Tukey 테스트를 사용한 이원 분산 분석을 통계 분석에 사용했다. 별표는 대조군과 비교된 유의미한 차이의 정도를 나타낸다(*P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001).
결과. Cx43 헤미채널의 저해는 OA의 조직병리학적 변화를 호전시킨다. OA 진행에서 Cx43 헤미채널의 기능을 조사하기 위해 내측 반월판의 불안정화(DMM) 수술을 통해 수컷 C57BL/6 마우스에서 외상 후 OA 모델을 유도했다. 항-Cx43 헤미채널 차단 항체(M1 항체) 또는 식염수는 수술 후 30분 및 4주에 2회 복강내 주사하여 투여했다(도 1a). 사프라닌 O/패스트 그린의 조직학적 염색은 관절 연골 손상의 중증도를 가시화하기 위해 활용했고, 이는 OARSI(Osteoarthritis Research Society International) 스코어화 시스템(Glasson SS, 등 Osteoarthritis and cartilage. 2010;18 Suppl 3: S17-23)을 사용하여 2명의 맹검 관찰자에 의해 결정되었다(도 1b-d). OA의 DMM 유도 후 8주째에 마우스는 프로테오글리칸 손실 및 연골 침식을 특징으로 하는 OA 병리학적 변화를 나타냈고(도 1b), 평균 OARSI 스코어는 내측 경골 고평부(MTP) 및 내측 대퇴골과(MFC)에서 각각 1.95 ± 0.11 및 1.72 ± 0.18이었다. 식염수 처리된 그룹과 비교하여, M1 항체 처리는 내측 경골 고평부 및 내측 대퇴골과 모두에서 연골 퇴화 중증도의 현저한 보호 및 OARSI 스코어의 유의미한 감소를 보여주었다(도 1c). 식염수 또는 M1 항체 치료를 받은 모의-수술한 마우스는 관절 연골에서 병리학적 변화를 나타내지 않았다(도 1c). 관절의 3-레벨 절편을 통한 MTP 및 MFC의 합산된 OARSI 스코어도 정량화하여, M1 항체 처리 후 관절 연골의 구조적 완전성의 유의미한 개선을 추가로 검증했다(도 1d). 더욱이, 윤활막 과형성은 윤활막염 스코어로 정량화했다(Krenn V, 등 Pathology, research and practice. 2002;198(5):317-25; 및 Huesa C, 등 Annals of the rheumatic diseases. 2016;75 (11):1989-97). 결과는 식염수 처리군에 비해 M1 항체-처리군에서 윤활막염 정도의 현저한 감소를 보여주었다(도 2a 및 b).
Cx43 헤미채널의 저해는 OA에 의해 유도된 기질 단백질 및 프로테아제 수준을 감소시킨다. 콜라겐 X(Col X)는 비대 연골세포의 가장 중요한 마커 중 하나이며, 기질 금속단백질분해호소 13(MMP13)은 관절 연골의 주요 형태인 II형 콜라겐을 절단하는데 있어서 가장 강력한 효소이다. Col X 및 MMP13의 감소가 M1 항체의 연골보호 효과의 기초가 될 수 있는지 여부를 테스트했다. 면역조직화학을 사용하여, DMM 후 8주째에 Col X 양성 세포의 백분율은 비히클-처리된 마우스에서 52%로부터 M1 항체-처리된 마우스에서 38%로 감소했다(도 3). 유사하게, 발현 분석을 위해 MMP13의 면역조직화학적 염색을 수행했다. 결과는 식염수-처리된 DMM 마우스의 MMP13-양성 연골세포가 대퇴골 및 경골 관절과의 관절 연골의 3 구역에 분포되어 있음을 보여주었다. 대조적으로, M1 항체 처리된 마우스에서 MMP13-양성 연골세포는 주로 중간 및 심부 구역에 국재화되었다(도 4a). DMM 8주 후, 관절 연골에서 MMP-13-양성 세포의 백분율은 식염수-처리된 마우스에서 36%로부터 M1 항체 처리된 마우스에서 27%로 감소했다(도 4b). 마우스 또는 토끼 IgG는 반응성을 나타내지 않는 이소타입 대조군(도 3a 및 도 4a, 하부 패널)으로 사용했다.
Cx43 헤미채널의 저해는 OA의 연골하 골 경화증을 완화시킨다. OA는 또한 비정상적인 연골하 골 재형성을 특징으로 하므로, 연골하골 미세구조에 대한 Cx43 헤미채널 저해 효과를 연구하기 위해, 마이크로CT 분석을 수행했다. 수술후 8주째에 DMM 마우스의 3D 렌더링 및 재구성 스캔은 모의 수술을 받은 마우스와 비교하여 내연골하판의 두께를 포함한, 무릎 관절의 변경 및 연골하골의 현저한 경화증을 보여주었다(도 5a). 일관되게, 마이크로-CT 분석은 모의 수술과 비교하여, DMM 후 마우스의 경골 연골하골에서의 증가된 상대적 골 부피 분율(골 부피/총 부피, BV/TV), 섬유주 두께(Tb.Th) 및 골 무기질 밀도(BMD)가 드러났다(도 5b, c, 및 e). 식염수 처리된 DMM 마우스와 비교하여, 항-Cx43 항체의 투여는 경골 연골하골에서 상승된 섬유주 분리(Tb.Sp)와 함께(도 5d), 유의미하게 감소된 BV/TV, Tb.Th 및 BMD(도 5b, c 및 e)를 보여주었고, 이는 Cx43 헤미채널의 차단이 OA의 연골하 골 경화증을 완화시킨다는 것을 나타낸다.
Cx43 헤미채널의 저해는 OA-관련 통증 증상을 감소시킨다. OA의 진행은 2차 임상 증상인, 가장 현저하게는 통증을 동반한다(Felson DT. Arthritis research & therapy. 2009;11(1):203). 기계적 이질통은 모의 또는 DMM 수술로 뒷발의 발바닥 표면에 적용된 von Frey 필라멘트에 대한 움츠림 역치에 의해 두 시점에서 측정했다. DMM 4주 후, 식염수 처리된 마우스와 비교하여 Cx43 헤미채널의 저해는 기계적 자극에 대한 반응 역치가 약간 증가하는 경향을 보였다(도 6b). DMM 8주 후, M1 항체 처리된 마우스는 식염수 처리된 DMM 마우스에서 관찰된 것의 121.4%의 발 움츠림 역치를 보여주었으며(도 6c), 이는 이들이 식염수 처리된 그룹보다 훨씬 적은 통증을 경험함을 암시한다. 또한, 식염수/M1 항체로 처리된 모의 또는 DMM 수술 후 움직임을 정량화하기 위해 마우스를 오픈 필드 테스트로 처리하여 운동 활성을 모니터링했다. DMM 4주 후, 식염수 그룹에 비해 Cx43 항체 처리된 마우스에서 이동 거리 증가 및 부동 시간 감소 경향이 있었다(도 7b 및 e). DMM 8주 후, 식염수 처리된 DMM 마우스는 모의-수술한 마우스에 비해, 이동 거리 감소 및 부동 시간 증가를 나타낸 반면, M1 항체 처리는 이러한 통증 반응을 억제했다(도 7c 및 f). von frey 필라멘트 테스트에 의한 발 움츠림 역치(도 6a), 오픈 필드 테스트에 의한 이동한 거리 및 부동 시간(도 7a 및 d)에 관하여 8주째에 식염수 및 M1 항체 처리된 모의 마우스 간에는 차이가 관찰되지 않았다.
M1 항체는 윤활막에 결합하여 OA에서 헤미채널 개방을 저해한다. 연골의 치밀한 본성 및 항체의 큰 크기로 인해, 항체가 연골 기질을 통과할 수 없다는 인식이 널리 퍼져 있다. 무릎 관절 영역에서 항체 결합 패턴을 결정하기 위해, DMM 수술 후 30분째에 인간 IgG 에피토프를 갖는 M1 항체(25 mg/kg) 또는 식염수를 복강내(i.p.) 주사했다. 다이아그램(도 8a)에서 도시된 바와 같이, 마우스를 안락사시키고, 관류시킨 다음, 주사 후 1주 또는 2주째에 뒷다리를 단리했다. 동결 조직 절편을 준비하고 Alexa Fluor 594-접합 항-인간 IgG 2차 항체로 면역-표지화했다. 신호는 항체 투여 후 1주 및 2주째 모두에서 검출가능했고, 항체 결합 부위는 윤활막 영역에 주로 국재화되었다(도 8b). 관절의 윤활막은 윤활막액의 식세포화에 역할을 하는 대식세포-유사 A형 세포, 및 히알루론산과 뮤신을 생산하여 각각 기저의 관절 연골에 영양을 공급하고 기계적으로 보호하는 섬유아세포-유사 B형 세포를 포함한다(Donahue HJ, 등 Nature reviews Rheumatology.2017;14(1):42-51). 그런 다음 절편은 대식세포 마커 CD68로 면역-표지화했고, M1 항체는 윤활막 영역에서 CD68과 함께 공동-국재화했다(도 9). 또한, M1 항체와 윤활막 섬유아세포 마커인 페리오스틴(Periostin)의 공동국재화도 관찰되었다(도 10).
생체 내에서 Cx43 헤미채널 활성을 결정하기 위해, 에반스 블루 염료 흡수 검정을 수행했다. 마우스는 DMM 수술 후 30분째에 식염수 또는 Cx43 항체(M1 항체)(25mg/kg)로 처리했다. 처리 2주 후에 에반스 블루 염료(200 mg/kg)의 꼬리 정맥 주사를 수행했고, 에반스 블루 염료 흡수 강도는 윤활막 영역에서 정량화했다. 결과는 DMM이 헤미채널 개방을 2배 증가시켰고, 이는 M1 항체 투여에 의해 차단될 수 있음을 보여주었다(도 11a 및 b). 염수-처리된 마우스로부터 준비된 동결 절편을 M1 항체로 면역-표지화하고, Cx43을 발현하는 윤활막세포에서 골관절염 유도된 헤미채널 개방을 차단하는데 있어서 M1 항체의 역할을 추가로 검증했다(도 11c).
항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)의 단일 투여는 OA 중증도를 호전시킨다. M1 항체의 1회 투여가 OA 진행을 늦추는 효과를 보여줄 수 있는지 여부를 조사했다. 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체) 또는 식염수를 수술 후 30분째에 단 1회 복강내 주사로 투여하고, DMM 8주 후 조직학을 위해 마우스를 희생시키기 전에 행동 테스트를 수행했다(도 12a). 사프라닌 O/패스트 그린 염색 결과는 식염수 대조군과 비교하여 M1 항체 처리 후, 프로테오글리칸 손실 및 연골 침식이 더 적었음을 나타냈다(도 12b). OARSI 스코어에 의한 연골 퇴행의 정량화는 M1 항체 처리를 받은 DMM 마우스의 내측 경골 고평부 및 내측 대퇴골과 모두에서 유의미한 감소를 보여주었다(도 12c). 또한, MMP13 스코어는 적분된 광학 밀도(IOD) 대 관절 연골 면적의 비율로 결정되었으며, 이는 식염수 처리된 마우스에서 0.17 ± 0.016으로부터 M1 항체 처리된 마우스에서 0.10 ± 0.009로 감소되었다(도 13). DMM 후 8주째에, 식염수 처리된 마우스와 비교하여 Cx43 헤미채널의 저해는 기계적 자극에 대한 발 움츠림 역치가 약간 증가하는 경향을 보였다(도 14a). 일관되게, 식염수 대조군과 비교하여 M1 항체 처리를 받은 DMM 마우스에서 이동한 거리의 현저한 증가 및 부동 시간의 감소가 있었다(도 14b).
결론. 결과는 DMM 유도 OA 모델에서 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)의 투여가 관절 연골 퇴행, 윤활막염 정도 및 MMP13/ColX 발현을 감소시킨다는 것을 시사한다. 연골하 골 경화증의 MicroCT 분석은 Cx43 헤미채널 저해 후 BV/TV, Tb.Th의 저하 및 Tb.Sp의 증가를 보여준다. 또한, Von Frey 필라멘트 및 오픈 필드 테스트는 항체 처리된 DMM 마우스에서 호전된 OA 연관 통증 증상 및 개선된 이동성을 나타낸다. 생체내 염료 흡수 및 면역형광 검정은 Cx43을 발현하는 윤활막세포에서 OA 유도된 HC 개방을 차단하는데 있어서 항-Cx43 헤미채널 항체의 역할을 검증했다. 종합하면, 결과는 Cx43 헤미채널을 표적으로 하는 것이 OA 진행 동안 관절의 이화작용 및 염증 환경을 완화시키는 데 사용될 수 있는 치료 전략임을 시사한다(도 15).
실시예 2 - 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)는 골관절염 윤활막염을 저하시키고 Cx43 헤미채널 개방 및 염증성 유전자 발현을 차단했다
염료 흡수 검정. 세포는 0.1 mM 브롬화 에티듐(EtBr, MW 394 Da) 및 1 mg/ml FITC-덱스트란(MW 10 kDa)의 혼합물과 함께 5분 동안 인큐베이션했다. EtBr은 헤미채널 활성을 검출하는 추적자로 사용했고, 헤미채널을 통과하기에는 너무 크지만 죽어가는 세포에 의해 흡수되는 FITC-덱스트란은 음성 대조군으로 사용했다. 세포를 PBS로 5회 헹구고 2% 파라포름알데하이드로 10분간 고정시켰다. 20X 형광 현미경(Keyence, BZ-X710, 일본 오사카)으로 적어도 6개의 형광 필드 현미경사진을 캡춰했다. 각 이미지에 대해 EtBr 형광의 평균 강도를 측정하고 ImageJ 소프트웨어(NIH, 미국 베데스다)를 사용하여 적어도 30개의 무작위 세포로부터 정량화했다. 실험은 3번 반복했고 수집된 데이터는 임의의 단위의 픽셀 평균으로 예시되었다.
RNA 단리 및 실시간 PCR. 제조업체의 지침에 따라 TRI Reagent(Molecular Research Center, 미국 신시네티)를 사용하여 RAW264.7 및 SW982 세포에서 총 RNA를 단리했다. Nanodrop 2000에 의한 RNA 정량화 후, 고용량 RNA-to-cDNA 키트(Thermo Fisher Scientific, 미국 월텀)를 사용하여 총 RNA 1μg로부터 cDNA를 합성했다. 실시간 PCR은 ABI 7900 PCR 장치(Thermo Fisher Scientific) 및 SYBR Green(Biorad, Hercules, 미국)을 사용하여 2단계 프로토콜(94℃에서 15초 및 60℃에서 60초)로 수행했다. ΔΔCT 방법은 qPCR 데이터 분석에 사용했다. GAPDH는 하우스키핑 유전자 대조군으로 사용했다. 실험은 3반복으로 수행했다.
결과. 지연된 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체) 처리는 OA 윤활막염을 감소시켰다. 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)의 지연된 투여가 또한 OA 진행을 완화시키는데 효과를 보일 수 있는지 여부를 테스트했다. 수술 직후 항체 처리 대신에, 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체) 또는 식염수를 DMM 수술 후 10일째부터 복강내 주사하고 수술 후 25일째 및 40일째에 각각 2차 및 3차 주사하여 투여했다. DMM 수술 후 8주째에 조직학을 위해 마우스를 희생시켰다(도 16a). 윤활막 과형성증은 윤활막염 스코어로 정량화했다. 결과는 식염수-처리된 그룹과 비교하여, 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)-처리된 그룹에서 윤활막염 정도의 유의미한 감소를 보여주었다(도 16b 및 c).
항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)는 RAW264.7 및 SW982 세포에서 Cx43 헤미채널 개방 및 염증 유전자 발현을 차단했다. 항-Cx43 헤미채널 항체(M1 항체)는 생체 내에서 윤활막 대식세포 및 섬유아세포를 포함한 윤활막 영역에 주로 결합하므로, 마우스 대식세포 RAW264.7 세포 및 인간 윤활막 섬유아세포 SW982 세포를 시험관내에서 배양하여 염증 조건 하에서 Cx43 헤미채널의 역할을 연구했다. Cx43 헤미채널의 활성은 EtBr 염료 흡수 검정을 사용하여 결정했다. RAW264.7 세포 또는 SW982 세포는 각각 리포폴리사카라이드(LPS) 또는 인터루킨 1β(IL1β)로 처리했다. 도 17에 도시된 바와 같이, LPS 및 IL1β는 Cx43 헤미채널 개방의 유의미한 증가를 유도했고, 이는 Cx43E2 차단 항체(2μg/ml) 또는 카베녹솔론(CBX)에 의해 없어질 수 있었다. 다음으로, RAW264.7 세포의 LPS 처리 후 Cx43E2 항체의 유무하에, MMP3/13, 사이클로옥시게나제 2(COX2), 트롬보스폰딘 1형 모티프 4를 갖는 ADAM 금속펩타이드분해효소(Adamts4) 및 IL6 유전자 발현을 결정했다(도 18). 이러한 염증 유전자는 LPS에 의해 유도된 유의미한 상향 조절을 나타낸 반면, 이러한 변화는 Cx43E2 항체로 전처리된 세포에서 현저하게 감소했다. 또한 IL1β 처리된 SW982 세포에서 MMP3/13, COX2, Adamts4/5, 산화질소 합성효소 2(NOS2) 유전자 발현을 평가했다(도 19). Cx43E2 차단 항체는 IL1β 처리 후 이러한 염증 유전자 발현을 유의미하게 감소시켰다. 위의 결과는 Cx43 헤미채널이 대식세포 및 윤활막 섬유아세포 세포에서 염증 유전자 발현을 조절하는 데 중요한 역할을 한다는 것을 입증한다.
본원에서 개시되고 청구된 모든 방법은 본 개시내용에 비추어 과도한 실험 없이 이루어지고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 바람직한 실시양태의 관점에서 기술되었지만, 본원에 기술된 방법 및 단계 또는 단계의 순서에는 본 발명의 개념, 정신 및 범위를 벗어남이 없이 변형이 적용될 수 있음이 관련 기술분야의 기술자에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 동일하거나 유사한 결과가 달성되지만, 화학적 및 생리학적으로 관련된 특정 작용제가 본원에 기술된 작용제를 대체할 수 있음이 명백할 것이다. 관련 기술분야의 기술자에게 명백한 그러한 모든 유사한 대체물 및 수정은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 사상, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.
SEQUENCE LISTING
<110> Board of Regents of the University of Texas System
<120> Compositions and Methods for Treating Osteoarthritis, Rheumatoid
Arthritis, and Joint and Tendon Disorders
<130> 21105.0082P1
<150> US 63/136/753
<151> 2021-01-13
<160> 66
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 384
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 1
gaggttcagc tggagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggggga attaatccta gcaatggtgg tactaacttc 180
aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagagagggt 300
aacccctact atactatgaa ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 360
aaaacgacac ccccatctgt ctat 384
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 2
Glu Val Gln Leu Glu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Asn Pro Tyr Tyr Thr Met Asn Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
115 120 125
<210> 3
<211> 324
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 3
gatattgtga tgacacagac tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300
tcggaggggg gaccaagctg gaaa 324
<210> 4
<211> 108
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Pro Ser Trp Lys
100 105
<210> 5
<211> 384
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 5
gaggttcagc tggagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggggga attaatccta gcaatggtgg tactaacttc 180
aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagagagggt 300
aacccctact atactatgaa ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 360
aaaacgacac ccccatctgt ctat 384
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 6
Glu Val Gln Leu Glu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Asn Pro Tyr Tyr Thr Met Asn Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
115 120 125
<210> 7
<211> 375
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 7
gatattgtga tgacccagac tccatcctcc ctgagtgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta aacagtggaa atcaaaagac ctacttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tctacggggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaaccgattt cactcttacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga tcatagttat 300
ccattcacgt tcggctcggg gacaaagttg gaaataaaac gggctgatgc tgcaccaact 360
gtatccgcat gcacc 375
<210> 8
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser
115 120
<210> 9
<211> 405
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 9
ctggagcagc ctggggctga actggtgagg cctggggctt cagtaatgct gtcctgcaag 60
gcttctggct acatcttcac cacctactgg atgcactggc tgaagcagag gcctggacaa 120
ggccttgact ggattggaga gattagtcct agcaacggtc gttctaatta caataagaag 180
ttcaagagca aggccacact gactgtagac aaatcctcca gcacagccta catgcaactc 240
agcagcctga catctgagga ctctgcggtc tattactgtg cacgattcga cgagggggac 300
ttctggggcc aaggcaccac tctcatagtc tcctcagcca aaacaacagc cccatcggtc 360
tatccactgg cccctgtgtg tggagataca actggctcct cggtg 405
<210> 10
<211> 135
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 10
Leu Glu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Met
1 5 10 15
Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Thr Tyr Trp Met His
20 25 30
Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile Gly Glu Ile
35 40 45
Ser Pro Ser Asn Gly Arg Ser Asn Tyr Asn Lys Lys Phe Lys Ser Lys
50 55 60
Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu
65 70 75 80
Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe
85 90 95
Asp Glu Gly Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Ile Val Ser Ser
100 105 110
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
115 120 125
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val
130 135
<210> 11
<211> 324
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 11
gatattgtga tgacacagac tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300
tcggaggggg gaccaagctg gaaa 324
<210> 12
<211> 108
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Pro Ser Trp Lys
100 105
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 13
Phe Leu Ser Arg Pro Thr Glu Lys Thr Ile
1 5 10
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<400> 14
Lys Arg Asp Pro Cys Pro His Gln Val Asp
1 5 10
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 15
Leu Ser Ala Val Tyr Thr Cys Lys Arg
1 5
<210> 16
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 16
ggctacacct tcaccagcta ctat 24
<210> 17
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 17
attaatccta gcaatggtgg tact 24
<210> 18
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 18
acaagagagg gtaaccccta ctatactatg aactac 36
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 19
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 20
Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr
1 5
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 21
Thr Arg Glu Gly Asn Pro Tyr Tyr Thr Met Asn Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 22
ggctacatct tcaccaccta ctgg 24
<210> 23
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 23
attagtccta gcaacggtcg ttct 24
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 24
gcacgattcg acgaggggga cttc 24
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 25
Gly Tyr Ile Phe Thr Thr Tyr Trp
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 26
Ile Ser Pro Ser Asn Gly Arg Ser
1 5
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 27
Ala Arg Phe Asp Glu Gly Asp Phe
1 5
<210> 28
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 28
cagagtctgt taaacagtgg aaatcaaaag acctac 36
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 29
ggggcatcc 9
<210> 30
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 30
cagaatgatc atagttatcc attcacg 27
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 31
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 32
Gly Ala Ser
1
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 33
Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 34
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 34
aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat 30
<210> 35
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 35
cttgtatcc 9
<210> 36
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 36
cagcacatta gggagcttac acg 23
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 37
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 38
Leu Val Ser
1
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 39
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr
1 5
<210> 40
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 40
aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat 30
<210> 41
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 41
cttgtatcc 9
<210> 42
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 42
cagcacatta gggagcttac acgt 24
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 43
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 44
Leu Val Ser
1
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 45
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 46
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 46
gagcctctta gaaagcgatg gaaagacata t 31
<210> 47
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 47
ctggtgtct 9
<210> 48
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 48
tggcaaggta cacattttcc gtggacg 27
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 49
Gln Ser Leu Leu Glu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 50
Leu Val Ser
1
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic peptide
<400> 51
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 52
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 52
gaggtccaac tccagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggggga attaatccta gcaatggtgg tactaacttc 180
aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagagagggt 300
aacccctact atactatgaa ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 53
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 53
gaggtccaac tccagcaacc tggggctgaa ctggtgaggc ctggggcttc agtaatgctg 60
tcctgcaagg cttctggcta catcttcacc acctactgga tgcactggct gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgactg gattggagag attagtccta gcaacggtcg ttctaattac 180
aataagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc acgattcgac 300
gagggggact tctggggcca aggcaccact ctcatagtct cctca 345
<210> 54
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 54
gacattgtga tgacgcagtc tccatcctcc ctgagtgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta aacagtggaa atcaaaagac ctacttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tctacggggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaaccgattt cactcttacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga tcatagttat 300
ccattcacgt tcggctcggg gacaaagttg gaaataaaa 339
<210> 55
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 55
gacattgtgt tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300
tcggaggggg gaccaagctg gaaatcaaac 330
<210> 56
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 56
gatattgtga tgacccagtc tcccgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300
tcggaggggg ggaccaagct ggaaatcaaa 330
<210> 57
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 57
gacgttgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc 60
atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gaaagcgatg gaaagacata tttgaattgg 120
ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac 180
tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaggtac acattttccg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336
<210> 58
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 58
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Asn Pro Tyr Tyr Thr Met Asn Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 59
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Met Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser Pro Ser Asn Gly Arg Ser Asn Tyr Asn Lys Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Glu Gly Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Ile
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<400> 61
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20 25 30
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35 40 45
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Lys
Claims (48)
- 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 골관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 힘줄 장애 또는 힘줄 손상을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- MMP13 또는 콜라겐 X 수준을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골 분해를 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 윤활막 염증을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 연골하 골 경화증을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 골관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 골관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 대상체의 골관절염의 하나 이상의 증상을 감소 또는 호전시키는 방법으로서, 치료 유효량의 항-코넥신 43 항체 또는 이의 단편을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 58에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및 서열번호 60에 제시된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 방법.
- 제1항, 제2항, 제3항, 제7항, 제8항, 제9항, 제10항, 제11항, 제12항, 제16항, 제17항, 제18항, 제19항, 제21항 또는 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
a) 서열번호 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
b) 서열번호 20의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
c) 서열번호 21의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR3). - 제4항, 제5항, 제6항, 제7항, 제8항, 제9항, 제13항, 제14항, 제15항, 제16항, 제17항, 제18항, 제20항, 제21항 또는 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
a) 서열번호 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
b) 서열번호 32의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
c) 서열번호 33의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3). - 제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 또는 상기 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 중 어느 하나가 부모 CDR과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제27항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환이 시스테인 잔기에서 또 다른 아미노산으로 또는 글리신에서 또 다른 아미노산으로의 치환인, 방법.
- 제1항, 제2항, 제3항, 제7항, 제8항, 제9항, 제10항, 제11항, 제12항, 제16항, 제17항, 제18항, 제19항, 제21항, 제22항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
(a) 서열번호 19에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
(b) 서열번호 20에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
(c) 서열번호 21에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3). - 제4항, 제5항, 제6항, 제7항, 제8항, 제9항, 제13항, 제14항, 제15항, 제16항, 제17항, 제18항, 제20항, 제21항, 제23항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
(a) 서열번호 31에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
(b) 서열번호 32에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
(c) 서열번호 33에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3). - 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량의 항체 또는 이의 단편이 상기 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 발현 벡터에 존재하는, 방법.
- 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 약제학적으로 허용되는 조성물로 투여되는, 방법.
- 제1항 내지 제30항 및 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 전신 투여되는, 방법.
- 제1항 내지 제30항 또는 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 정맥내, 피내, 종양내, 근육내, 복강내, 피하 또는 국소적으로 투여되는, 방법.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체인, 방법.
- 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 적어도 제2 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
- 제36항에 있어서, 상기 제2 치료제가 비스테로이드성 항염증 약물, 글루코사민 보충제, 콘드로이틴 보충제 또는 관절 교체 수술인 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 Cx43 헤미채널에 결합하는, 방법.
- 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 태그 서열을 추가로 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 Cx43 헤미채널의 개방을 저해하거나 차단하는, 방법.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이의 단편이 Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편인, 방법.
- 제32항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조되는, 방법.
- 제7항, 제8항, 제9항, 제16항, 제17항, 제18항, 제21항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이
(a) 하기를 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역:
i) 서열번호 19와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1;
ii) 서열번호 20과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 2; 및
iii) 서열번호 21과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 3; 및
(b) 하기를 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역:
i) 서열번호 31과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 결정 영역 1;
ii) 서열번호 32와 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 결정 영역 1;
iii) 서열번호 33과 적어도 60% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 결정 영역 1
을 포함하는, 방법. - 제43항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체인, 방법.
- 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골관절염의 하나 이상의 증상이 통증인, 방법.
- 제1항, 제2항, 제3항, 제7항, 제8항, 제9항, 제10항, 제11항, 제12항, 제16항, 제17항, 제18항, 제19항, 제21항, 제22항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
(a) 서열번호 19에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
(b) 서열번호 20에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
(c) 서열번호 21에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3). - 제4항, 제5항, 제6항, 제7항, 제8항, 제9항, 제13항, 제14항, 제15항, 제16항, 제17항, 제18항, 제20항, 제21항, 제23항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이 하기를 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 방법:
(a) 서열번호 31에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 1(CDR1);
(b) 서열번호 32에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및/또는
(c) 서열번호 33에 제시된 서열과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3). - 제7항, 제8항, 제9항, 제16항, 제17항, 제18항, 제21항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편이
(a) 하기를 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역:
i) 서열번호 19와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1;
ii) 서열번호 20과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 2; 및
iii) 서열번호 21과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 3; 및
(b) 하기를 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역:
i) 서열번호 31과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제1 상보성 영역 1;
ii) 서열번호 32와 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제2 상보성 영역 1; 및
iii) 서열번호 33과 비교하여 단일 아미노산 변화를 갖는 서열을 포함하는 제3 상보성 영역 1
을 포함하는, 방법.
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