KR20230157947A

KR20230157947A - 암 재발 방지를 위한 방법 및 약제학적 조합

Info

Publication number: KR20230157947A
Application number: KR1020237028210A
Authority: KR
Inventors: 샤오진 리아오; 한저우 우; 홍란 추; 페이주안 주; 칭지앙 샤오; 팅팅 장; 펭홍 인; 린잉 우; 루 주앙; 웨이동 저우; 리 순
Original assignee: 샤먼 아모이탑 바이오테크 컴퍼니 리미티드; 바이오스티드 진 트랜스포메이션 테크.컴퍼니 리미티드
Priority date: 2021-01-21
Filing date: 2022-01-20
Publication date: 2023-11-17
Also published as: EP4282426A1; CN116761629A; ZA202308033B; AU2022209506A1; WO2022156733A1; CA3206005A1; TW202245826A; JP2024504340A

Abstract

본 발명은 생물의학 분야에 관한 것이다. 본원에는 대상체에게 i) 인터페론-기반 치료제를 간헐적으로 투여하는 단계, 및 임의적으로 ii) 추가적인 항암제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 재발 방지를 위한 방법이 개시된다. 본 발명은 또한 상기 방법에 사용하기 위한 약제학적 조합에 관한 것이다.

Description

암 재발 방지를 위한 방법 및 약제학적 조합

인터페론(IFN)은 다중 기능을 갖는 활성 단백질이며, 단핵구 및 림프구에 의해 생성되는 사이토카인이다. 광범위한 스펙트럼의 항바이러스 활성, 세포 성장에 대한 영향, 분화, 및 면역 기능의 조절과 같은 다양한 생물학적 활성에 따라, 이들은 현재 가장 중요한 항바이러스 감염 및 항종양 생물학적 생성물이다.

현재, 인터페론은 I형, II형, 및 III형 인터페론으로 분류된다. I형 인터페론은 IFN-α, IFN-β 등을 포함한다. IFN-α 인터페론은 주로 단핵구-대식세포에 의해 생성된다. 또한, B 세포 및 섬유아세포는 또한 IFN-α 인터페론을 합성할 수 있다. IFN-β 인터페론은 주로 섬유아세포에 의해 생성된다. IFN-α 및 IFN-β 인터페론은 둘 다 예를 들어 단핵구-대식세포, 다형핵 백혈구, B 세포, T 세포, 혈소판, 상피 세포, 내피 세포 및 종양 세포에 널리 분포되어 있는 동일한 수용체에 결합한다. IFN α에는 23개 이상의 아형이 있는 것으로 알려져 있다. IFN β에는 1개의 아형만이 있다. II형 인터페론, 또는 γ 인터페론은 주로 활성화된 T 세포(Th0, Th1 세포 및 거의 모든 CD8+ T 세포 포함) 및 NK 세포에 의해 생성되고, 소위 림포카인(lymphokine)에 속한다. IFN-γ는 세포외 기질에 연결하는 형태로 존재할 수 있어, 방관자(bystander) 효과에 의해 세포 성장을 제어할 수 있다. 이들은 성숙 적혈구를 제외한 거의 모든 세포의 표면 상에 분포될 수 있다. IFN-γ에는 1개의 아형만이 있다. III형 인터페론은 주로 인터페론 λ를 지칭한다.

인터페론, 인터페론 돌연변이체 및 인터페론 유도체는 다양한 치료에 널리 사용되는 것으로 승인되었다. 인간 임상 치료에 승인된 인터페론 및 돌연변이체는 인터페론 α 2a, 인터페론 α 2b, 인터페론 α 1b, 화합물 인터페론(인페르겐(Infergen)), 및 인터페론 돌연변이체(예컨대 노바페론(Novaferon)), 인터페론 β, 인터페론 γ(1b) 등을 포함한다. 인터페론 유도체는 페그인터페론(Peginterferon) α 2a, 페그인터페론 α 2b, 통합 인터페론 등을 포함한다.

또한, 최근 몇 년간, TLR, RLR, 및 STING와 같은 신호 경로의 발견 및 규명에 따라, 상기 신호 경로에 작용하여 인터페론을 생성하는 일련의 작용제가 발견 및 규명되었으며, 이의 용도는 또한 향후 인터페론-기반 치료의 새로운 방향이 된다. 현재, 이러한 유형의 작용제는 HBV 및 관련 종양의 치료에 사용된 바 있다.

I형 IFN은 암의 임상 요법을 위해 FDA가 승인한 면역요법 약물의 제1 배치이다. 혈액계 종양, 다음으로 림프계 종양에 가장 좋은 치유 효과를 제공하고, 악성 흑색종(malignant melanoma), 난소 종양(ovarian tumor), 결장직장암(colorectal cancer) 등과 같은 고형 종양에 가장 나쁜 치유 효과를 제공하였으며, 치유 효과는 20% 이하였다. 또한, 인터페론과 화학요법, 방사선요법 및 면역요법의 조합 적용은 현재 인터페론을 사용한 통상의 항종양 요법이다. 예를 들어, 인터페론과 5-플루오로우라실의 조합 적용은 간암(liver cancer) 및 결장직장암을 치료하기 위한 것이고, 인터페론과 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin) 등의 조합 적용은 폐암(lung cancer)을 치료하기 위한 것이다. 이들 연구는 일부 결과를 달성하였지만, 전반적인 효과는 그다지 만족스럽지 않고, 예후가 좋지 않다.

항암 치료 외에도, 암 사망률을 줄이는 중요한 방식은 암 재발을 방지하는 것이다. 그러나, 암 재발 방지를 위한 인터페론의 성공적인 적용에 대한 보고는 당업계에 없다.

일 양태에서, 본 발명은 대상체에게

i) 인터페론-기반 치료제를 투여하는 단계; 및

ii) 임의적으로, 추가적인 항암제를 투여하는 단계를 포함하는，

대상체에서 암 재발을 방지하는 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, 방법은 인터페론-기반 치료제의 적어도 1회 연속적 과정을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 방법은 인터페론-기반 치료제의 복수의 연속적 과정을 대상체에게 간헐적으로 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 대상체는 암에 걸린 것으로 진단되었지만, 항암 치료를 겪었고 관해(remission) 상태에 있다. 일부 구현예에서, 항암 치료는 수술, 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 또는 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 관해는 완전 관해이며, 예를 들어, 눈에 보이는 병변(종양)이 대상체에서 검출되지 않는다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하거나, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하거나, 내인성 인터페론의 생성을 촉진하는 물질을 포함한다.

일부 구현예에서, 인터페론은 I형, II형 또는 III형 인터페론, 예컨대 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ 또는 인터페론 λ, 바람직하게는 인터페론 α이다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 인터페론 α 2a, 인터페론 α 2b, 인터페론 α 1b, 인터페론 λ, 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함한다.

일부 구현예에서, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체는 PEG화된다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 P1101, 페그베론(Pegberon), 페가시스(Pegasys), 페그인트론(Pegintron), 인페르겐, 노바페론, 인트로나(INTRONA), 로페론-A(Roferon-A), 하프겐(Hapgen), 페그인페르(PEGINFER) 및 페그인터페론 λ로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 TLR, RLR, 및 STING 신호전달 경로의 작용제를 포함한다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 GS-9620, GS-9688, RO7020531, RO6864018, TQ-A3334, JNJ-4964, SB9200, MIW815, DMXAA, MK-1454, 및 diABZI로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정에서, 인터페론-기반 치료제는 실질적으로 전체 과정 동안, 대상체에서 네오프테린(neopterin)의 농도가 첫 번째 투여 전 네오프테린의 농도보다 더 높도록, 예를 들어 첫 번째 투여 전 네오프테린 농도의 대략 110%, 대략 120%, 대략 130%, 대략 140%, 대략 150%, 대략 200%, 대략 250% 또는 그 이상이도록 투여된다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정의 지속기간은 첫 번째 투여에서 마지막 투여까지의 기간 + 치료제의 약 5 생체내 반감기이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정의 지속기간은 약 1주 내지 약 24주, 바람직하게는 약 1주 내지 약 12주, 보다 바람직하게는 약 1주 내지 약 8주, 보다 더 바람직하게는 약 2주 내지 약 6주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 24주, 바람직하게는 약 1주 내지 약 12주, 보다 바람직하게는 약 1주 내지 약 8주, 보다 더 바람직하게는 약 2주 내지 약 6주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 8주이고, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 8주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 2주 내지 약 6주이고, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 2주 내지 약 6주이다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 2-25회 이상의 연속적 치료 과정 동안 투여된다.

일부 구현예에서, 복수의 연속적 치료 과정의 지속기간은 실질적으로 동일하다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 실질적으로 동일하다.

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 바람직하게는 대상체에서 암 재발을 방지하는 데 사용된다.

일부 구현예에서, 항암제는 다음과 같으며:

i) 화학요법제, 예컨대 알킬화제 알킬화제: 니무스틴(Nimustine), 카르무스틴(Carmustine), 로무스틴(Lomustine), 사이클로포스파미드(Cyclophosphamide), 이포스파미드(Ifosfamide), 글리시포스포르아미드(glyciphosphoramide), 세무스틴(semustine); 항대사물: 데옥시플루오구아노신(deoxyfluoguanosine), 독시플루구아니딘(doxifluguanidine), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메르캅토퓨린(mercaptopurine), 티오구아닌(thioguanine), 시타라빈(cytarabine), 플루구아노신(fluguanosine), 테가푸르(tegafur), 젬시타빈(Gemcitabine), 카르모푸르(carmofur), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 메토트렉세이트(methotrexate), UFT, 안시타빈(Ancitabine), 카페시타빈(capecitabine); 항종양 항생제: 악티노마이신 D(actinomycin D), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(Epirubicin), 미토마이신(mitomycin), 펠로마이신(pelomycin), 핑기앙마이신(pingyangmycin), 피라루비신(pirarubicin); 화학요법 항종양 동물 및 식물 성분: 이리노테칸(irinotecan), 해링토닌(harringtonine), 하이드록시캄포테신(hydroxycamptothecin), 비노렐빈(Vinorelbine), 파클리탁셀(paclitaxel), 알부민 파클리탁셀, 탁소테레(taxotere), 토포테칸(topotecan), 빈크리스틴(vincristine), 빈데신(vindesine), 빈데신, 빈블라스틴(vinblastine), 테니포시드(teniposide), 엑토포시드(etoposide), 엘레멘(elemene); 예컨대 항종양 약물 호르몬: 아타메스탄(Atamestane), 아나스트로졸(Anastrozole), 아미노글루테티미드(Aminoglutethimide), 레트로졸(Letrozole), 포르메스탄(Formestane), 메타스테론(Metasterone), 타목시펜(Tamoxifen); 화학요법 기타 제제: 아스파라기나제(asparaginase), 카르보플라틴, 시스플라틴, 다카르바진(Dacarbazine), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 록사딘(Loxadine), 엘록사틴(Eloxatin), 미토잔트론(Mitoxantrone), 또는 프로카르바진(Procarbazine); 또는

ii) 면역 체크포인트 억제제 예컨대 PD-1, PD-L1, CTLA4의 억제제, 예를 들어, 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab), 아테졸리주맙(Atezolizumab), 더발루맙(Durvalumab), 아벨루맙(Avelumab)으로부터 선택된 항체; 또는

iii) 소분자 표적화 약물, 예컨대 이마티닙(imatinib), 게피티닙(gefitinib), 보르테조밉(bortezomib), 에를로티닙(erlotinib), 소라페닙(sorafenib), 레날리도미드(lenalidomide), 수니티닙(Sunitinib), 다사티닙(dasatinib), 닐로티닙(nilotinib), 라파티닙(lapatinib), 파조파닙(pazopanib), 에베롤리무스(everolimus), 반데타닙(vandetanib), 크리조티닙(crizotinib), 베로피닙(verofinib), 룩솔리티닙(ruxolitinib), 악시티닙(axitinib), 비스모데깁(vismodegib), 카르필조밉(carfilzomib), 레고라페닙(regorafenib), 보수티닙(bosutinib), 토파시티닙(tofacitinib), 카르보티닙(carbotinib), 파나티닙(panatinib), 포말리도미드(pomalidomide), 트라메티닙(trametinib), 다브라페닙(dabrafenib), 아파티닙(Afatinib), 이코티닙(Icotinib), 이브루티닙(Ibrutinib), 세리티닙(Ceritinib), 이데랄리스(Idelaris), 아파티닙(Apatinib), 파부실립(Pabuccilib), 레바티닙(Levatinib), 악시티닙, 이코티닙, 아파티닙, 소니데깁(sonidegib), 코비메티닙(cobimetinib), 오시메르티닙(osimertinib), 알렉티닙(alectinib), 익사조밉(ixazomib); 또는

iv) 종양 연관 항원-특이적 항체 예컨대 리툭산(Rituxan), 허셉틴(Herceptin);

바람직하게는, 항암제는 옥살리플라틴, 에피루비신, 파클리탁셀 및 젬시타빈으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 젬시타빈이다.

일부 구현예에서, 암은 백혈병(leukemia)(예컨대 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 만성 골수성 백혈병(chronic myeloid leukemia, CML), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 다모세관 백혈병(polycapillary leukemia)), 간암, 폐암, 결장직장암, 피부암(skin cancer), 위암(stomach cancer), 유방암(breast cancer), 전립선암(prostate cancer), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 흑색종(melanoma), 다발성 골수종(multiple myeloma), 후두 유두종(laryngeal papilloma), 여포성 림프종(follicular lymphoma), AIDS 관련 카포시 육종(AIDS-related Kaposi's sarcoma) 및 신 세포 암종(renal cell carcinoma), 바람직하게는 간암, 폐암, 유방암, 결장직장암 또는 흑색종으로부터 선택된다.

일 양태에서, 본 발명은 인터페론-기반 치료제 및 추가적인 항암제를 포함하는, 대상체에서 암 재발을 방지하는 데 사용하기 위한 약제학적 조합을 제공한다.

일부 구현예에서, 약제학적 조합은 본 발명의 방법에 의해 대상체에서 암 재발을 방지하는 데 사용하기 위한 것이다.

일부 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 P1101, 페그베론, 페가시스, 페그인트론, 인페르겐, 노바페론, 인트로나, 로페론-A, 하프겐, 페그인페르 및 페그인터페론 λ로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 항암제는 다음과 같으며:

i) 화학요법제, 예컨대 알킬화제 알킬화제: 니무스틴, 카르무스틴, 로무스틴, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 글리시포스포르아미드, 세무스틴; 항대사물: 데옥시플루오구아노신, 독시플루구아니딘, 5-플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 티오구아닌, 시타라빈, 플루구아노신, 테가푸르, 젬시타빈, 카르모푸르, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, UFT, 안시타빈, 카페시타빈; 항종양 항생제: 악티노마이신 D, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 미토마이신, 펠로마이신, 핑기앙마이신, 피라루비신; 화학요법 항종양 동물 및 식물 성분: 이리노테칸, 해링토닌, 하이드록시캄포테신, 비노렐빈, 파클리탁셀, 알부민 파클리탁셀, 탁소테레, 토포테칸, 빈크리스틴, 빈데신, 빈데신, 빈블라스틴, 테니포시드, 엑토포시드, 엘레멘; 예컨대 항종양 약물 호르몬: 아타메스탄, 아나스트로졸, 아미노글루테티미드, 레트로졸, 포르메스탄, 메타스테론, 타목시펜; 화학요법 기타 제제: 아스파라기나제, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다카르바진, 옥살리플라틴, 록사딘, 엘록사틴, 미토잔트론, 또는 프로카르바진; 또는

ii) 면역 체크포인트 억제제 예컨대 PD-1, PD-L1, CTLA4의 억제제, 예를 들어, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙으로부터 선택된 항체; 또는

iii) 소분자 표적화 약물, 예컨대 이마티닙, 게피티닙, 보르테조밉, 에를로티닙, 소라페닙, 레날리도미드, 수니티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 파조파닙, 에베롤리무스, 반데타닙, 크리조티닙, 베로피닙, 룩솔리티닙, 악시티닙, 비스모데깁, 카르필조밉, 레고라페닙, 보수티닙, 토파시티닙, 카르보티닙, 파나티닙, 포말리도미드, 트라메티닙, 다브라페닙, 아파티닙, 이코티닙, 이브루티닙, 세리티닙, 이데랄리스, 아파티닙, 파부실립, 레바티닙, 악시티닙, 이코티닙, 아파티닙, 소니데깁, 코비메티닙, 오시메르티닙, 알렉티닙, 익사조밉; 또는

iv) 종양 연관 항원-특이적 항체 예컨대 리툭산, 허셉틴;

도 1은 mIFN-α4 발효 상청액의 SP 세파로즈 고속 유량(Sepharose Fast Flow) 용출 프로파일을 도시한다.
도 2는 SP 세파로즈 고속 유량 정제된 표적 mIFN-α4의 비환원 SDS-PAGE(14% 분리 겔, 은 염색) 전기영동 결과를 도시한다.
도 3은 글리코실-제거된 mIFN-α4의 Q 세파로즈 고속 유량 정제 용출 프로파일을 도시한다.
도 4는 글리코실-제거된 mIFN-α4의 Q 세파로즈 고속 유량 정제된 원료액의 비환원 SDS-PAGE(14% 분리 겔, 은 염색) 전기영동 결과를 도시한다.
도 5는 PEG-mIFN-α4의 SP 세파로즈 고속 유량 정제 용출 프로파일을 도시한다.
도 6은 PEG-mIFN-α4 원료액의 비환원 SDS-PAGE(은 염색) 전기영동 결과를 도시한다.
도 7은 BALB/c 마우스에 대한 PEG-mIFN-α4의 1 μg/마우스의 단일 피하 주사에 대한 혈장 농도-시간 곡선을 도시한다.
도 8. 마우스에서 이식된 간암 H22의 재발 방지에 대한 PEG-mIFN-α4 단독 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 비교 실험의 종양 발병률 곡선.
도 9. 마우스에서 이식된 간암 H22의 재발 방지를 위한 PEG-mIFN-α4 단독 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 비교 실험의 생존 곡선.
도 10. 마우스에서 이식된 결장직장암 CT26의 수술후 재발 방지에 대한 PEG-mIFN-α4 단독 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 비교 실험의 종양 발병률 곡선.
도 11. 마우스에서 이식된 결장직장암 CT26의 수술후 재발 방지에 대한 PEG-mIFN-α4 단독 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 비교 실험의 생존 곡선.

본 발명자들은 예기치 않게 인터페론을 투여함으로써, 예를 들어, 인터페론의 복수의 과정을 간헐적으로 투여함으로써 위험이 있는 환자에서 암 재발을 방지할 수 있음을 발견하였다.

따라서, 일 양태에서, 본 발명은 인터페론-기반 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 재발을 방지하는 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, 방법은 인터페론-기반 치료제의 적어도 1회 연속적 과정을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 인터페론-기반 치료제의 복수의 연속적 과정을 대상체에게 간헐적으로 투여하는 것을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, "대상체"는 포유동물, 예컨대 인간이다.

일부 구현예에서, 대상체는 암에 걸린 것으로 진단되었지만, 항암 치료를 겪었고 관해 상태에 있다. 일부 구현예에서, 항암 치료는 수술, 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 또는 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 관해는 완전 관해이며, 예를 들어, 눈에 보이는 병변(종양)이 대상체에서 검출되지 않는다.

본원에 사용된 바와 같이, "인터페론"은 인간 인터페론, 예를 들어, I형, II형 또는 III형 인터페론, 예컨대 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ 또는 인터페론 λ, 바람직하게는 인터페론 α일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "인터페론-기반 치료제"는 천연 인터페론의 효과의 적어도 일부를 생성할 수 있는 치료제를 지칭한다.

예를 들어, "인터페론-기반 치료제"는 천연 단리되거나 재조합적으로 생성된 인터페론, 예컨대 I형 인터페론, 바람직하게는 인터페론 α를 포함할 수 있다. 적합한 인터페론 α는 인터페론 α 2a, 인터페론 α 2b 또는 인터페론 α 1b를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

"인터페론-기반 치료제"는 또한 인터페론 돌연변이체, 예컨대 인페르겐(재조합 통합 인터페론)을 포함할 수 있다.

"인터페론-기반 치료제"는 또한 인터페론 유도체, 예컨대 PEG화 인터페론 또는 이의 돌연변이체, 알부민화 인터페론 또는 이의 돌연변이체, 및 또 다른 단백질 및 유기-변형된 인터페론 및 이의 돌연변이체 등을 포함할 수 있다. PEG화 변형된 인터페론 또는 이의 돌연변이체의 예는 페그인터페론 α 2a(예를 들어 페가시스, 40kD 이분지형 UPEG-NHS 변형됨), 페그인터페론 α 2b(예를 들어, 페그인트론, 12kD 선형 PEG-SC 변형됨), 페그인터페론 α 2b(예를 들어, 페그베론, Y형 40kD 2 분지형 PEG 변형됨), 배양된 인터페론 α-2(예를 들어, 페그인페르), 페그인터페론 λ, P1101 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 장기 작용성 인터페론, 예컨대 PEG화 인터페론 또는 이의 돌연변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 단기 작용성 인터페론을 포함한다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 다중 유형의 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함한다.

용어 "인터페론-기반 치료제"는 판매 승인된 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하는 다양한 치료제를 포함한다. "인터페론-기반 치료제"는 페그베론(페그인터페론 α 2b, Amoytop)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 페가시스(페그인터페론 α 2a, Roche)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 페그인트론(페그인터페론 α 2b 주사, Schering-Plough)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 인페르겐(재조합 통합 인터페론 α, Amgen, USA)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 인트론 A(Intron A)(재조합 인간 인터페론 α 2b, Schering-Plough)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 로페론-A(인터페론 α 2a, Roche)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 하프겐(재조합 인간 인터페론 α 1b, Beijing Sanyuan Jiyin Engineering Co., Ltd.)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 페그인페르(PEG화-통합 인터페론 α-2 주사, Beijing Kawin Technology Co., Ltd.)이다. 일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 페그인터페론 λ(Nanogen Pharmaceutical biotechbology)이다.

일부 바람직한 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 인터페론 α 2b를 포함한다. 일부 바람직한 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 폴리에틸렌 글리콜 변형된 인터페론 α 2b를 포함한다. 일부 바람직한 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 페그베론이다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하며, 여기서 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체는 서열번호: 1-5 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체는 서열번호: 1-5 중 임의의 하나에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 또한 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 암호화하는 핵산 분자, 예컨대 재조합 핵산 발현 벡터를 포함한다. 적합한 발현 벡터, 특히 치료적 적용에 적합한 벡터는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

"인터페론-기반 치료제"는 또한 내인성 인터페론의 생성을 촉진할 수 있는 물질, 예컨대 TLR, RLR, 및 STING 신호전달 경로의 작용제를 포함할 수 있다. 내인성 인터페론의 생성을 촉진할 수 있는 물질의 예는 GS-9620, GS-9688, RO7020531, RO6864018, TQ-A3334, JNJ-4964, SB9200, MIW815, DMXAA, MK-1454, diABZI 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다^[1]-[34].

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "연속적 치료 과정"은 치료 과정 동안, 치료제의 투여가 치료제가 투여되지 않은 경우의 농도(초기 농도 또는 기저 농도)보다 더 높게 대상체 내에서 (외인성 또는 내인성) 인터페론의 생체내 유효 농도(예를 들어, 유효 혈중 농도)를 지속적으로 유지하도록 허용하거나, 대상체 내에서 인터페론의 주요 약력학적 마커인 네오프테린(NPT)의 생체내 농도(예를 들어, 혈중 농도)를 지속적으로 유지하도록 허용함을 의미한다. 인터페론의 주요 약력학적 마커인 네오프테린과 인터페론의 투여 사이에 우수한 상관관계가 있으므로, 네오프테린의 생체내 농도(예컨대 혈중 농도)의 변화를 "연속적 치료 과정"의 지표로서 사용하는 것이 특히 바람직하다. 예를 들어, "연속적 치료 과정"은 1회 이상 동안 인터페론-기반 치료제의 투여가 실질적으로 전체 치료 과정 동안 대상체에서 네오프테린 농도를 첫 번째 투여 전 네오프테린 농도(기저 농도)보다 더 높게, 예를 들어 첫 번째 투여 전 네오프테린 농도의 대략 110%, 대략 120%, 대략 130%, 대략 140%, 대략 150%, 대략 200%, 대략 250% 또는 그 이상을 유지할 수 있는 동안의 치료 과정으로 정의될 수 있다. 네오프테린의 생체내 농도는 당업계에 알려진 방법으로 결정될 수 있다.

연속적 치료 과정에서, 인터페론-기반 치료제의 투여 계획은 일반적으로 선택된 치료제의 특성, 예컨대 생체내 반감기에 의해 결정된다. 예를 들어, 연속적 치료 과정에서, 장기 작용성 인터페론(일반적으로 30-120시간의 생체내 반감기를 가짐)은 약 주 1회, 약 2주마다 1회 투여될 수 있거나, 1개월에 1회 또는 심지어 투여량이 증가된 경우 더 오래 투여될 수 있고; 단기 작용성 인터페론(일반적으로 2-5시간의 생체내 반감기를 가짐)은 1일 1회 또는 격일마다 1회 또는 주 3회 투여될 수 있거나, 투여량이 증가된 경우(예를 들어, 9-36 MIU 또는 그 이상) 주 1회 투여될 수 있거나, 투여량이 감소된 경우 1일 수회 투여될 수 있다. 연속적 치료 과정에서, 인터페론-기반 치료제의 투여 횟수는 "연속적 치료 과정"의 상기 정의를 충족하는 한 특히 제한되지 않는다. 당업자는 인터페론-기반 치료제의 네오프테린과 같은 약력학적 마커의 생체내 농도(예컨대 혈중 농도)에 기반하여 연속적 치료 과정을 결정할 수 있다.

일부 구현예에서, "연속적 치료 과정"에서, "인터페론-기반 치료제"는 통상적인 투여 계획으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 인페르겐(재조합 통합 인터페론 α), 인터페론 α 2b(예컨대 인트론 A), 인터페론 α 2a(예컨대 로페론-A), 인터페론 α 1b(예컨대 하프겐)는 3-18 MIU의 투여량 범위로 1일 1회 또는 격일마다 1회 또는 주 3회 동안 투여될 수 있다. 페그인터페론 α 2a(예를 들어, 페가시스), 페그인터페론 α 2b(예를 들어 페그인트론 또는 페그베론), PEG화-통합 인터페론 α-2(예컨대 페그인페르) 또는 페그인터페론 λ는 45-270 μg의 투여량 범위로 주 1회 투여될 수 있다. P1101은 약 400 μg으로 2주마다 1회 투여될 수 있다. 알부민화 인터페론 α 2b는 약 900 내지 약 1800 μg으로 2주마다 1회, 또는 약 1200 μg으로 4주마다 1회 투여될 수 있다.

인터페론의 효능은 면역계에 따라 다르다. 그러나, 어떠한 이론에도 얽매이지 않고, 장기간 인터페론의 연속 투여는 면역 세포를 고갈시켜 회복이 어려워질 것이며 효능을 감소시킬 것으로 여겨진다. 따라서, 연속적 과정의 지속기간은 치료제가 특정 효과를 달성하도록 허용해야 하지만 면역 세포의 과도한 고갈은 피해야 한다. 치료 과정에서 면역 세포의 고갈은 일반적으로 생리학적/생화학적 지표의 변화에 의해 식별된다

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 적어도 약 1주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 최대 약 24주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 24주, 예를 들어, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 16주, 약 17주, 약 18주, 약 19주, 약 20주, 약 21주, 약 22주, 약 23주, 또는 약 24주이다.

일부 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 12주이다. 일부 추가의 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 8주이다. 일부 추가의 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 2주 내지 약 6주이다. 일부 추가의 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 2주이다.

일부 구현예에서, 각각의 연속적 치료 과정의 종료점(즉, 연속적 치료 과정 사이의 간격의 시작점)은 연속적 치료 과정에서 인터페론-기반 치료제의 마지막 투여 시간 + 치료제의 약 5 생체내 반감기일 수 있다. 즉, 연속적 치료 과정의 지속기간은 첫 번째 투여에서 마지막 투여까지의 기간 + 치료제의 약 5 생체내 반감기이다. 5 반감기 후, 치료제는 더 이상 실질적인 재발 방지 효과를 생성하지 않을 것으로 여겨진다.

본 발명의 방법에서, 복수의 연속적 치료 과정 사이의 간격은 면역 세포의 재생 주기에 따라 달라질 수 있다. 간격의 지속기간은 제제의 투여로 인해 감소된 대상체의 면역 세포가 재발 방지를 효과적으로 시행할 수 있는 수준으로 회복되게 해야 한다. 일반적으로 면역 세포가 증식하는 데 약 1-2주가 걸리는 것으로 여겨진다. 따라서, 복수의 연속적 치료 과정 사이의 최단 간격은 약 1주 일 수 있다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 적어도 약 1주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 최대 약 24주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 24주, 예를 들어, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 16주, 약 17주, 약 18주, 약 19주, 약 20주, 약 21주, 약 22주, 약 23주, 또는 약 24주이다.

일부 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 12주이다. 일부 보다 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 8주이다. 일부 추가의 바람직한 구현예에서, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 2주 내지 약 6주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 24주이고, 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 24주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 12주이고, 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 12주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 1주 내지 약 8주이고, 치료 과정 사이의 간격은 약 1주 내지 약 8주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 2주 내지 약 6주이고, 치료 과정 사이의 간격은 약 2주 내지 약 6주이다.

일부 구현예에서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 2주이고, 치료 과정 사이의 간격은 약 2주이다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"는 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 적어도 6회, 적어도 7회, 적어도 8회, 적어도 9회, 적어도 10회, 적어도 11회, 적어도 12회, 적어도 13회, 적어도 14회, 적어도 15회, 적어도 20회, 적어도 25회 또는 그 이상의 연속적 치료 과정 동안 투여된다.

일부 구현예에서, 치료 과정 사이의 시간 간격은 실질적으로 동일하다.

일부 특이적 구현예에서, 인터페론-기반 치료제는 페그베론이고, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간은 약 5주 내지 약 24주이고, 연속적 치료 과정 사이의 간격은 약 2주 내지 8주이다.

일부 구현예에서, 암은 백혈병(예컨대 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병, 다모세관 백혈병), 간암, 폐암, 결장직장암, 피부암, 위암, 유방암, 전립선암, 비호지킨 림프종, 흑색종, 다발성 골수종, 후두 유두종, 여포성 림프종, AIDS 관련 카포시 육종, 신 세포 암종 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 질환은 골수증식성 종양(myeloproliferative tumor, MPN)이다. 일부 바람직한 구현예에서, 질환은 간암, 폐암, 유방암, 결장직장암 또는 흑색종이다.

일부 구현예에서, 방법은 추가적인 항암제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 추가적인 항암제는 바람직하게는 대상체에서 암의 재발을 방지하는 데 사용된다.

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 예컨대 알킬화제: 니무스틴, 카르무스틴, 로무스틴, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 글리시포스포르아미드, 세무스틴; 예컨대 화학요법 항대사물: 데옥시플루오구아노신, 독시플루구아니딘, 5-플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 티오구아닌, 시타라빈, 플루구아노신, 테가푸르, 젬시타빈, 카르모푸르, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, UFT, 안시타빈, 카페시타빈; 예컨대 화학요법 항종양 항생제: 악티노마이신 D, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 미토마이신, 펠로마이신, 핑기앙마이신, 피라루비신; 예컨대 화학요법 항종양 동물 및 식물 성분: 이리노테칸, 해링토닌, 하이드록시캄포테신, 비노렐빈, 파클리탁셀, 알부민 파클리탁셀, 탁소테레, 토포테칸, 빈크리스틴, 빈데신, 빈데신, 빈블라스틴, 테니포시드, 엑토포시드, 엘레멘; 예컨대 항종양 약물 호르몬: 아타메스탄, 아나스트로졸, 아미노글루테티미드, 레트로졸, 포르메스탄, 메타스테론, 타목시펜; 예컨대 화학요법 기타 제제: 아스파라기나제, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다카르바진, 옥살리플라틴, 록사딘, 엘록사틴, 미토잔트론, 또는 프로카르바진을 포함하지만 이에 제한되지 않는 화학요법제이다.

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 이마티닙, 게피티닙, 보르테조밉, 에를로티닙, 소라페닙, 레날리도미드, 수니티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 파조파닙, 에베롤리무스, 반데타닙, 크리조티닙, 베로피닙, 룩솔리티닙, 악시티닙, 비스모데깁, 카르필조밉, 레고라페닙, 보수티닙, 토파시티닙, 카르보티닙, 파나티닙, 포말리도미드, 트라메티닙, 다브라페닙, 아파티닙, 이코티닙, 이브루티닙, 세리티닙, 이데랄리스, 아파티닙, 파부실립, 레바티닙, 악시티닙, 이코티닙, 아파티닙, 소니데깁, 코비메티닙, 오시메르티닙, 알렉티닙, 익사조밉을 포함하지만 이에 제한되지 않는 소분자 표적화 약물이다.

추가적인 항암제는 또한 리툭산, 허셉틴 등과 같은 종양 연관 항원-특이적 항체일 수 있다.

추가적인 항암제는 또한 PD1, PDL1, CTLA4 등의 억제제와 같은 면역 체크포인트 억제제, 예컨대 특이적 항체일 수 있다. 면역 체크포인트 억제제의 예는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

일부 특이적 구현예에서, 화학요법제는 옥살리플라틴이다. 일부 특이적 구현예에서, 화학요법제는 에피루비신이다. 일부 특이적 구현예에서, 화학요법제는 파클리탁셀이다.

일부 바람직한 구현예에서, 화학요법제는 젬시타빈, 카페시타빈, 및 안시타빈과 같은 항대사성 화학요법제이다. 일부 가장 바람직한 구현예에서, 화학요법제는 젬시타빈이다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"의 투여는 추가적인 항암제의 투여와 중첩되지 않는다.

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 복수의 연속적 치료 과정 사이에 투여된다. 예를 들어, 추가적인 항암제는 "인터페론-기반 치료제"의 투여 간격 동안 일정 기간 동안 투여될 수 있으며, 상기 일정 기간은 간격보다 짧거나 같다.

일부 구현예에서, "인터페론-기반 치료제"의 투여는 추가적인 항암제의 투여와 중첩된다.

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 복수의 연속적 치료 과정 동안 및 사이에 투여되며, 즉, 추가적인 항암제는 전체 치료 기간 동안 투여된다(완전히 중첩됨).

일부 구현예에서, 추가적인 항암제는 통상적인 계획, 예를 들어, 치료되는 특이적 암에 대한 통상적인 투여 계획에 따라 투여된다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 대상체에서 암의 재발을 방지하는 데 사용하기 위한 인터페론-기반 치료제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 또한 추가적인 항암제를 포함한다. 인터페론-기반 치료제 및 항암제는 위에 정의된 바와 같다.

일 양태에서, 본 발명은 인터페론-기반 치료제 및 추가적인 항암제를 포함하는, 본 발명의 방법에 의해 대상체에서 암의 재발을 방지하는 데 사용하기 위한 약제학적 조합을 제공한다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 대상체에서 암의 재발을 방지하기 위한 약제학적 조성물의 제조에서 인터페론-기반 치료제의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 또한 추가적인 항암제를 포함한다. 인터페론-기반 치료제 및 항암제는 위에 정의된 바와 같다.

일 양태에서, 본 발명은 추가적인 항암제와 조합하여 대상체에서 암의 재발을 방지하기 위한 약제학적 조성물의 제조에서 인터페론-기반 치료제의 용도를 제공한다. 인터페론-기반 치료제 및 항암제는 위에 정의된 바와 같다. 인터페론-기반 치료제 및/또는 추가적인 항암제는 본 발명의 방법에 따라 투여될 수 있다.

일 양태에서, 본 발명은 인터페론-기반 치료제, 및 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공하며, 여기서 사용 설명서는 인터페론-기반 치료제가 대상체에서 암의 재발을 방지하기 위해 본 발명의 방법에 따라 사용되거나 본 발명의 방법에 따라 투여될 수 있다는 설명을 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 추가적인 항암제를 추가로 포함한다. 인터페론-기반 치료제 및 추가적인 항암제는 위에 정의된 바와 같다.

실시예

하기 실시예는 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위해 제공되며 어떤 식으로든 본 발명을 제한하려는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1. 재조합 마우스 인터페론 α4(mIFN-α4)의 제조

인터페론은 또한 암 치료에서 광범위하게 사용되지만, 효과는 개선될 필요가 있다. 인터페론의 연속 투여가 실제로 부분적 면역 억제 및 면역 세포의 고갈을 유발하여, 좋지 않은 후속 치료 효과로 이어지는지 연구하기 위해, 인터페론 간헐적 투여 및 연속 투여의 효능을 마우스에서 비교하였다.

항종양 효과에 대한 다수의 연구는 누드 마우스(정상 흉선 결여)를 숙주로 하여 수행하였다. 누드 마우스의 면역 상태는 정상 마우스의 면역 상태보다 약하므로, 정상 상태 하의 면역 반응을 반영하기가 어렵다. 정상 마우스에 기반한 항종양 모델에서, 면역계에 대한 인터페론의 효과는 부분적으로 실현될 수 있으며, 이는 인터페론을 투여하는 항종양 요법의 효과를 반영한다. 기능 실현의 관점에서, 인터페론은 숙주의 면역계에 의존하여 완전한 항바이러스 및 항종양 효과를 행사해야 한다. 인터페론은 종 특이성이 강하기 때문에, 정상 마우스를 실시예에서 연구 대상으로 사용하였을 때, 뮤린 인터페론 또는 이의 유도체의 사용은 그의 생리학적 효과 및 구현 효과를 더 잘 반영할 수 있다. 본 발명의 마우스를 사용하는 연구 모델에서, PEG화 재조합 마우스 인터페론 α4(PEG-mIFNα4)를 대표적인 인터페론 치료 약물 및 그의 유도체로 사용하였다.

mIFN-α4(GenBank NP_034634)의 아미노산 서열에 따르면, mIFN-α4의 cDNA 서열은 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)의 바람직한 코돈에 따라 최적화 및 설계하였고, GenScript Biotechnology Co., Ltd.에 cDNA 합성을 위임하였다. mIFN-α4를 암호화하는 cDNA를 pPIC9K 플라스미드로 재조합하고, TOP10 적격 세포로 형질전환하고, LB 고체 배지에 플레이팅하고, 37℃에서 밤새 배양하였다. 단일 클론을 선별하여 LB 액체 배지에 접종한 다음, 37℃에서 밤새 배양하였다. 플라스미드를 추출하고, XhoI 및 NotI로 이중 분해를 수행하였다. 양성 클론은 핵산 전기영동으로 식별하였고, 핵산 서열분석에 의해 추가로 확인하였다. 양성 클론 플라스미드를 SalI로 분해 및 선형화하고, 피키아 파스토리스 GS115로 전기형질전환하고, RD 플레이트에 플레이팅하고, 28-30℃에서 3일 동안 배양하였다. 양성 형질전환체를 선별하여 YPD 액체 배지에 접종하고, 이를 28-30℃에서 밤새 배양하고, 약 1의 OD600 nm의 최종 농도로 BMMY 배지로 옮기고, 28-30℃에서 약 24시간 동안 배양하였다. 메탄올의 최종 농도가 약 1%가 될 때까지 메탄올을 첨가한 다음, 28-30℃에서 약 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 배지를 원심분리하여 상청액을 수집하고, SDS-PAGE 전기영동에 의해 mIFN-α4의 발현을 검출하였다. SDS-PAGE 전기영동 결과에 따르면, 발효조에서 후속 발현을 위해 더 높은 발현 및 안정한 발현을 갖는 조작된 균주를 선택하였다.

발효조는 30 L였다. 발효 배양 및 메탄올 유도에 대해 "피키아 발효 공정 지침(Pichia Fermentation Process Guidelines)"을 참조하고, 유도 시간은 약 30시간이었다. 발효 상청액을 원심분리로 수집하고, 5K 중공 섬유 막 튜브에 한외여과에 의해 3~5회 농축하고, 완충액 시스템을 20 mM 포스페이트 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-50 mM 염화나트륨 완충 용액(pH 6.5)으로 대체하였다. 이어서 SP 세파로즈 고속 유량 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare, 컬럼 베드 Φ 38 mm x 160 mm)을 로딩한 다음, 20 mM 포스페이트 완충액-20 mM 아르기닌 염산염(pH 6.5)(용액 A)을 사용하여 약 3 컬럼 부피를 세척하였다. 용액 A 및 20 mM 포스페이트 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-1M 염화나트륨 용액(pH 6.5)(용액 B)을 사용하여 구배 용출을 수행하였다. mIFN-α4 표적 샘플을 수집하였고, 비환원 SDS-PAGE(분리 겔 농도 14%, 은 염색)에 대한 샘플을 취하였다. 용출 프로파일은 도 1에 나타내고, 전기영동 결과는 도 2에 나타낸다.

mIFN-α4 SP 세파로즈 고속 유량 정제 샘플을 5K 한외여과 막 패키지를 사용하여 한외여과로 농축하고 20 mM 포스페이트 완충액-50 mM 아르기닌 염산염-10 mM 메티오닌-20 mM 염화나트륨(pH 7.0)으로 대체한 다음, 농도를 약 1.0 mg/ml로 조정하였다. 글리코시다제를 약 20:1의 mIFN-α4 단백질 대 효소의 질량 비로 첨가하고, 25℃에서 약 20시간 동안 분해하여 글리코실 기를 제거하였다. 분해된 샘플을 5 mM 붕산 완충액-10 mM 아르기닌 염산염(pH 9.0)으로 약 6회 희석하고, 샘플을 Q 세파로즈 고속 유량 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare, 컬럼 베드 Φ 50 mm x 154 mm)에 로딩하였다. 20 mM 붕산 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-10 mM 메티오닌(pH 9.0)(용액 C)을 사용하여 약 3 컬럼 부피를 세척하였다. 용액 C 및 20 mM 붕산 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-10 mM 포르마잔 티오닌-0.3M 염화나트륨(pH 9.0)(용액 D)을 구배 용출에 사용하였다. 표적 탈글리코실화 mIFN-α4 샘플을 수집하고, pH를 10% 아세트산을 사용하여 약 pH 5.0으로 조정하였다. 5K 한외여과 막을 사용하여 한외여과로 농축하고 완충액을 5 mM 아세트산/아세트산나트륨 완충액-50 mM 아르기닌 염산염-100 mM 염화나트륨(pH 5.0)으로 대체하였다. 생성된 샘플은 탈글리코실화 mIFN-α4의 스톡 용액이었다. 검사를 위해 보낼 샘플을 취하고, 나머지 샘플은 나중에 사용하기 위해 -70℃에서 동결시켰다. 용출 프로파일은 도 3에 나타내고, SDS-PAGE 전기영동 결과는 도 4에 나타낸다.

탈글리코실화 mIFN-α4 스톡 용액의 박테리아 내독소 함량은 Limulus 시약 방법에 의해 60 EU/mg 미만으로 결정하였다. 특이적 활성은 상업용 mIFN-α4(R&D, 카탈로그 번호 12115-1)를 표준으로 사용하고, 마우스 섬유아세포/뇌심근염(encephalimyocarditis) 바이러스(L929/EMCV) 세포변성 억제 방법을 사용하여 5.4 x 10⁸ U/mg로 결정하였다.

실시예 2. PEG화 재조합 마우스 인터페론(PEG-mIFN-α4)의 제조

탈글리코실화 mIFN-α4 스톡 용액을 5K 한외여과 막 패키지를 사용하여 5 mM 아세트산/아세트산나트륨 완충액-50 mM 염화나트륨(pH 5.0)의 완충액으로 한외여과를 통해 대체하였다. 약 333 ml 샘플(탈글리코실화 mIFNα4 함량 약 500 mg)을 취하여, 0.8 M 붕산/수산화나트륨 완충액(pH 9.4) 약 22 ml를 첨가하고, 잘 교반시켰다. YPEG-NHS를 약 1:8의 단백질 대 40kD Y형 폴리에틸렌 글리콜 숙신이미드 에스테르(YPEG-NHS)의 질량비에 기반하여 첨가한 다음, 빠르게 교반하고, 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 그런 다음 0.2 M 메티오닌 약 20 ml를 첨가하여 반응을 중단시키고, pH는 10% 아세트산으로 5.0으로 조정하였다. 그런 다음 550 ml 순수를 첨가한 후, 600 ml 20 mM 아세트산/아세트산나트륨 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-10 mM 메티오닌(pH 5.1)(용액 E)을 잘 혼합하였다. 그 후, 이를 SP 세파로즈 고속 유량 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare, 컬럼 베드 Φ 50 mm x 194 mm)에 로딩하고, 용액 E를 사용하여 약 5 컬럼 부피를 세척하였다. 그 후, 용액 E 및 20 mM 아세트산/아세트산나트륨 완충액-20 mM 아르기닌 염산염-10 mM 메티오닌-600 mM 염화나트륨(pH 5.1)(용액 F)을 구배 용출에 사용하고, PEG-mIFN-α4 표적 샘플을 수집하였다. 완충액을 5K 한외여과 막 패키지를 사용하여 한외여과를 통해 20 mM 포스페이트 완충액-123 mM 염화나트륨(pH 6.5)으로 대체한 다음 적절하게 농축하고, 0.5% Tween80을 첨가하여 Tween80의 최종 농도가 약 0.005%가 되게 하였다. 생성된 샘플은 PEG-mIFN-α4 스톡 용액(PEG-mIFN-α4)이었다. 샘플을 취한 다음 검사를 위해 보내고, 나머지 샘플은 나중에 사용하기 위해 -70℃에서 동결시키고 저장하였다. 용출 프로파일은 도 5에 나타내고, SDS-PAGE 전기영동 결과는 도 6에 나타낸다.

PEG-mIFN-α4 스톡 용액의 박테리아 내독소 함량은 Limulus 시약 방법에 의해 15 EU/mg 미만으로 결정하였다. 특이적 활성은 상업용 mIFN-α4(R&D, 카탈로그 번호 12115-1)를 표준으로 사용하고, 마우스 섬유아세포/뇌심근염 바이러스(L929/EMCV) 세포변성 억제 방법을 사용하여 6.1 x 10⁶ U/mg으로 결정하였다.

실시예 3. 건강한 BALB/c 마우스에서 PEG-mIFN-α4 피하 주사의 약동학 연구

이 실시예에서, BALB/c 마우스는 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입하였다. PEG-mIFN-α4의 혈중 농도는 이중-항체 샌드위치 ELISA로 검출하였다. 마우스 IFN 알파 백금 ELISA 키트(카탈로그 번호 BMS6027/ BMS6027TEN, Thermo)의 테스트 키트를 사용하였지만, 리포터 항체는 측정 결과에 대한 내인성 mIFN-α의 간섭을 피하기 위해 항-PEG 항체 3.3 비오틴(대만 중앙연구원 생화학 연구소(IBMS), 중국)으로 대체하였다.

6-8주령, SPF 등급 BALB/c 마우스(N=65)에 PEG-mIFN-α4 1 μg/마우스의 단일 주사를 목 뒤에 피하 주사하였다. 혈장 샘플을 주사 전(0시간) 및 주사 후 15시간, 24시간, 36시간, 48시간, 72시간, 96시간, 120시간, 168시간, 216시간, 264시간, 312시간에 수집하여, 혈중 농도를 결정하였다. Phoenix WinNonlin 6.4 소프트웨어를 사용하여 약동학 매개변수를 계산하였다.

혈중 농도 결정 결과는 표 1에 나타내고, 혈중 농도-투여 시간 곡선은 도 7에 나타내고, 약동학 매개변수 결과는 표 2에 나타낸다. PEG-mIFN-α4 1 μg/마우스를 BALB/c 마우스의 목 뒤에 피하로 단일 주사하면, 혈장 농도 피크 시간(T_max)은 24시간이었고, 피크 농도 시간(T_max)은 268 ng/ml이었고, 제거 반감기(T_1/2)는 28.3시간이었다.

표 1. PEG-mIFN-α4 1 μg/마우스의 단일 피하 주사를 사용한 BALB/c 마우스의 혈중 농도 결정 결과(N=5, ng/ml)

표 2. BALB/c 마우스에서 PEG-mIFN-α4 1 μg/마우스의 단일 피하 주사의 약동학 매개변수 요약

실시예 4. PEG-mIFN-α4의 간헐적 투여, 또는 젬시타빈 투여와 조합된 PEG-mIFN-α4의 간헐적 투여에 의한 마우스에서 이식된 간암 H22의 재발 방지에 대한 비교 연구

이 실시예에서, BALB/c 마우스는 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입하였고, 마우스 간암 H₂₂ 세포주는 중국생물자원센터(China Center for Type Culture Collection; CCTCC)에서 구입하였다.

종양 치료 후, 환자 몸의 종양 부하는 상대적으로 낮기 때문에, 낮은 종양 이식 부피를 사용하여 종양 치료 후 상태를 모의한다. 6-8주령, 18-22 g SPF 등급 BALB/c 마우스에 오른쪽 앞다리의 겨드랑이에 H22 세포(1x10⁴/mL, 0.2 ml/마우스)를 피하 접종하였다. 종양 접종 3일 후, 이들을 다음 실험 그룹으로 무작위로 나누었다: PEG-mIFN-α4 그룹(N=28, 14마리 암컷, 14마리 수컷), 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹(N=28, 14마리 암컷, 14마리 수컷), 생리식염수 대조군 그룹(N=28, 14마리 암컷, 14마리 수컷), 및 젬시타빈 단독 그룹(N=28, 14마리 암컷, 14마리 수컷).

PEG-mIFN-α4를 마우스 당 1 마이크로그램의 용량으로 목 뒤에 피하 주사로 투여하였다. 투여는 그룹화 다음 날 시작하였다. PEG-mIFN-α4 그룹에서, PEG-mIFN-α4를 9주 동안 1회 투여한 다음, 103일 동안 중단하였다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹에서, PEG-mIFN-α4 및 젬시타빈을 9주 동안 1회 투여한 다음, 103일 동안 중단하였다. 젬시타빈 단독 그룹에서, 젬시타빈을 9주 동안 1회 투여한 다음, 103일 동안 중단하였다. 생리식염수 대조군 그룹은 동일한 부피의 생리식염수를 제공받았다. 젬시타빈을 60 mg/kg의 용량으로 복강내 주사하였다.

종양 부피가 62.5 mm³ 이상일 때, 각 그룹의 종양 발병률을 계산하여, 종양 발생에 대해 양성으로 결정하였다. 종양 발병률의 변화는 도 8에 나타낸다. 종양 접종 후 166일까지, 종양 발병률은 생리식염수 대조군 그룹에서 85.7%, PEG-mIFN-α4 단독 그룹에서 32.1%, 젬시타빈 단독 그룹에서 57.1%, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹에서 0.0%였다. 종양 발생에 대해 음성으로 결정된 마우스를 해부하여 확인하였고, 종양 부위 및 부근에서 고형 종양이 발견되지 않았다. 각 그룹에서 종양 발병률의 비교 결과는 표 3에 나타낸다. PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 종양 발병률은 생리식염수 대조군 그룹보다 낮았으며; 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 종양 발병률은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 낮았다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 우수하였다.

생존 곡선은 도 9에 나타냈으며, 각 그룹의 중앙 생존 기간 결과는 표 4에 나타낸다. 종양 접종 후 166일까지, 중앙 생존 시간은 생리식염수 대조군 그룹에서 33.5일, 젬시타빈 단독 그룹에서 93.0일이었다. 생존율은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹에서 67.9%, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 간헐적 투여 그룹에서 100.0%였다. 젬시타빈 단독 그룹 및 PEG-mIFN-α4 단독 그룹과 비교하여, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 생존 시간은 연장되었다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 우수하였다.

결과는 저밀도 종양 접종으로 모의된 마우스에서 H22 이식된 간암의 재발에 대해, 젬시타빈과 조합된 peg화된 뮤린 인터페론 α의 간헐적 투여, 젬시타빈 단독의 투여, 및 peg화된 뮤린 인터페론 α 단독의 투여가 모두 항종양 활성을 가지며 종양 재발을 효과적으로 방지할 수 있고, 젬시타빈과 조합된 peg화된 뮤린 인터페론 그룹이 젬시타빈 단독 또는 peg화된 뮤린 인터페론 α 단독의 투여보다 우수하였음을 나타내었다.

표 3. PEG-mIFN-α4 단독 투여 또는 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 투여에 의한 마우스에서 이식된 간암 H22의 재발 방지에 대한 비교 연구의 종양 발병률 결과

표 4. PEG-mIFN-α4 단독 투여 또는 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 투여에 의한 마우스에서 이식된 간암 H22의 재발 방지에 대한 비교 연구의 중앙 생존 시간 결과

실시예 5. PEG-mIFN-α4의 간헐적 투여, 또는 젬시타빈 투여와 조합된 PEG-mIFN-α4의 간헐적 투여에 의한 마우스에서 이식된 결장직장암 CT26의 재발 방지에 대한 비교 연구

이 실시예에서, BALB/c 마우스는 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.에서 구입하였고, 마우스 결장직장암 CT26 세포주는 중국과학원 상하이생물과학원 세포자원센터(Cell Resource Center of Shanghai Academy of Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences)에서 구입하였다.

6-8주령, 18-22 g SPF 등급 BALB/c 마우스에 오른쪽 앞다리의 겨드랑이에 CT26 세포(1x10⁵개 세포/mL, 0.2 ml/마우스)를 피하 접종하였다. 종양 접종 다음날, 이들을 다음 실험 군으로 무작위로 나누었다: PEG-mIFN-α4 단독 그룹(N=20, 10마리 암컷 및 10마리 수컷), 생리식염수 대조군 그룹(N=20, 10마리 암컷 및 10마리 수컷), 젬시타빈 단독 그룹(N=20, 10마리 암컷 및 10마리 수컷), 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹(N=20, 10마리 암컷 및 10마리 수컷).

PEG-mIFN-α4를 마우스 당 1 마이크로그램의 용량으로 목 뒤에 피하 주사로 투여하였다. 투여는 그룹화 다음 날 시작하였다. PEG-mIFN-α4 단독 그룹에서, PEG-mIFN-α4를 주 1회 12회 동안 투여한 다음, 56일 동안 중단하였다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹에서, PEG-mIFN-α4 및 젬시타빈을 모두 주 1회 연속 12회 투여한 다음, 56일 동안 중단하였다. 젬시타빈 단독 그룹에서, 젬시타빈을 주 1회 12회 동안 투여한 다음, 56일 동안 중단하였다. 생리식염수 대조군 그룹은 동일한 부피의 생리식염수를 제공받았다. 젬시타빈을 60 mg/kg의 용량으로 복강내 주사에 의해 투여하였다.

종양 부피가 62.5 mm³ 이상일 때 각 그룹의 종양 발병률을 계산하여 종양 재발에 대해 양성으로 결정하였다. 종양 발병률의 변화는 도 10에 나타낸다. 종양 접종 후 134일까지, 종양 발병률은 생리식염수 대조군 그룹에서 100%, PEG-mIFN-α4 단독 그룹에서 95%, 젬시타빈 단독 그룹에서 50%, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹에서 45%였다. 각 그룹에서 종양 발병률의 비교 결과는 표 5에 제시되어 있다. PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹의 종양 발병률은 생리식염수 대조군 그룹보다 낮았으며; 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹의 종양 발병률은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 낮았다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 우수하였다.

생존 곡선은 도 11에 나타냈으며, 각 그룹의 중앙 생존 기간 결과는 표 6에 나타낸다. 종양 접종 후 134일까지, 생리식염수 대조군 그룹의 중앙 생존 시간은 48.0일이었고, 젬시타빈 단독 그룹의 생존율은 55.0%였다. PEG-mIFN-α4 단독 그룹의 중앙 생존 시간은 68.5일이었고, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 간헐적 투여 그룹의 생존율은 70.0%였다. 젬시타빈 단독 그룹 및 PEG-mIFN-α4 단독 그룹과 비교하여, 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹의 생존 시간은 연장되었다. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4 그룹은 PEG-mIFN-α4 단독 그룹 및 젬시타빈 단독 그룹보다 우수하였다.

결과는 저밀도 종양 접종으로 모의된 마우스에서 CT26 이식된 결장직장암의 재발에 대해, 젬시타빈과 조합된 peg화된 뮤린 인터페론 α의 간헐적 투여, 젬시타빈 단독의 투여, 및 peg화된 뮤린 인터페론 α 단독의 투여가 모두 항암 활성을 가지며 종양 재발을 효과적으로 방지할 수 있고, 젬시타빈과 조합된 peg화된 뮤린 인터페론 α 그룹이 젬시타빈 단독 또는 peg화된 뮤린 인터페론 α 단독의 투여보다 우수하였음을 나타내었다.

표 5. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 투여의 투여에 의한 마우스에서 CT26 이식된 결장직장암의 재발 방지에 대한 비교 연구의 종양 발병률 결과

표 6. 젬시타빈과 조합된 PEG-mIFN-α4의 투여의 투여에 의한 마우스에서 CT26 이식된 결장직장암의 재발 방지에 대한 비교 연구의 중앙 생존 시간 결과

서열 및 이의 설명

>서열번호: 1은 인터페론 α 2a(예를 들어, 로페론-A 또는 페가시스)의 아미노산 서열이다

>서열번호: 2는 인터페론 α 2b(예를 들어, 인트로나 또는 PEG-인트론 또는 페그베론)의 아미노산 서열이다

>서열번호: 3은 재조합 통합 인터페론(예를 들어, 인페르겐)의 아미노산 서열이다

>서열번호: 4는 통합 인터페론 α-2(예를 들어, 페그인페르)의 아미노산 서열이다

>서열번호: 5는 인터페론 λ의 아미노산 서열이다

>서열번호: 6은 페그인터페론 뮤린 α 4의 아미노산 서열이다

참고문헌:

Sequence Listing <110> XIAMEN AMOYTOP BIOTECH CO., LTD. BIOSTEED GENE TRANSFORMATION TECH. 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Leu 145 150 155 160 Arg Ser Lys Glu <210> 2 <211> 165 <212> PRT <213> ARTIFICIAL SEQUENCE <220> <223> interferon ┒ 2b <400> 2 Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 35 40 45 Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 50 55 60 Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 65 70 75 80 Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 85 90 95 Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 100 105 110 Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 115 120 125 Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 130 135 140 Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 145 150 155 160 Leu Arg Ser Lys Glu 165 <210> 3 <211> 167 <212> PRT <213> ARTIFICIAL SEQUENCE <220> <223> recombinant integrated interferon <400> 3 Met Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu 1 5 10 15 Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys 20 25 30 Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln 35 40 45 Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln 50 55 60 Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu 65 70 75 80 Ser Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp 85 90 95 Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu 100 105 110 Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile 115 120 125 Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val 130 135 140 Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln 145 150 155 160 Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu 165 <210> 4 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> integrated interferon ┒-2 <400> 4 Gly Ser Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn 1 5 10 15 Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe 20 25 30 Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe 35 40 45 Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu 50 55 60 Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala 65 70 75 80 Ala Trp Asp Glu Ser Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln 85 90 95 Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu 100 105 110 Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr 115 120 125 Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys 130 135 140 Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser 145 150 155 160 Thr Asn Leu Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Asp 165 170 <210> 5 <211> 182 <212> PRT <213> ARTIFICIAL SEQUENCE <220> <223> interferon ┡ <400> 5 Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys 1 5 10 15 His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe 20 25 30 Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp 35 40 45 Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu 50 55 60 Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr 65 70 75 80 Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu 85 90 95 Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala 100 105 110 Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu 115 120 125 His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala 130 135 140 Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr 145 150 155 160 Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser 165 170 175 Thr His Pro Glu Ser Thr 180 <210> 6 <211> 162 <212> PRT <213> ARTIFICIAL SEQUENCE <220> <223> peginterferon murine ┒ 4 <400> 6 Cys Asp Leu Pro His Thr Tyr Asn Leu Gly Asn Lys Arg Ala Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Glu Glu Met Arg Arg Leu Pro Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Leu Glu Lys Val Asp Asn Gln Gln Ile 35 40 45 Gln Lys Ala Gln Ala Ile Leu Val Leu Arg Asp Leu Thr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Asn Leu Phe Thr Ser Lys Asp Leu Ser Ala Thr Trp Asn Ala Thr 65 70 75 80 Leu Leu Asp Ser Phe Cys Asn Asp Leu His Gln Gln Leu Asn Asp Leu 85 90 95 Lys Ala Cys Val Met Gln Glu Pro Pro Leu Thr Gln Glu Asp Ser Leu 100 105 110 Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His Arg Ile Thr Val Tyr Leu Arg Lys 115 120 125 Lys Lys His Ser Leu Cys Ala Trp Glu Val Ile Arg Ala Glu Val Trp 130 135 140 Arg Ala Leu Ser Ser Ser Thr Asn Leu Leu Ala Arg Leu Ser Glu Glu 145 150 155 160 Lys Glu

Claims

대상체에서 암 재발을 방지하는 방법으로서,
대상체에게
i) 인터페론-기반 치료제를 투여하는 단계; 및
ii) 임의적으로, 추가적인 항암제를 투여하는 단계
를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 인터페론-기반 치료제의 적어도 1회 연속적 과정을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 인터페론-기반 치료제의 복수의 연속적 과정을 대상체에게 간헐적으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 암에 걸린 것으로 진단되었지만, 항암 치료를 겪었고 관해(remission) 상태에 있는, 방법.
제4항에 있어서, 항암 치료가 수술, 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 또는 이의 조합인, 방법.
제4항에 있어서, 관해가 완전 관해이며, 예를 들어, 눈에 보이는 병변(종양)이 대상체에서 검출되지 않는, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하거나, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하거나, 내인성 인터페론의 생성을 촉진하는 물질을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론이 I형, II형 또는 III형 인터페론, 예컨대 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ 또는 인터페론 λ, 바람직하게는 인터페론 α인, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 인터페론 α 2a, 인터페론 α 2b, 인터페론 α 1b, 인터페론 λ, 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체가 PEG화되는, 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 P1101, 페그베론(Pegberon), 페가시스(Pegasys), 페그인트론(Pegintron), 인페르겐(Infergen), 노바페론(Novaferon), 인트로나(INTRONA), 로페론-A(Roferon-A), 하프겐(Hapgen), 페그인페르(PEGINFER) 및 페그인터페론(Peginterferon) λ로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 TLR, RLR, 및 STING 신호전달 경로의 작용제를 포함하는, 방법.
제12항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 GS-9620, GS-9688, RO7020531, RO6864018, TQ-A3334, JNJ-4964, SB9200, MIW815, DMXAA, MK-1454, 및 diABZI로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정에서, 인터페론-기반 치료제가 실질적으로 전체 과정 동안, 대상체에서 네오프테린(neopterin)의 농도가 첫 번째 투여 전 네오프테린의 농도보다 더 높도록, 예를 들어 첫 번째 투여 전 네오프테린 농도의 대략 110%, 대략 120%, 대략 130%, 대략 140%, 대략 150%, 대략 200%, 대략 250% 또는 그 이상 이도록 투여되는, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정의 지속기간이 첫 번째 투여에서 마지막 투여까지의 기간 + 치료제의 약 5 생체내 반감기인, 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정의 지속기간이 약 1주 내지 약 24주, 바람직하게는 약 1주 내지 약 12주, 보다 바람직하게는 약 1주 내지 약 8주, 보다 더 바람직하게는 약 2주 내지 약 6주인, 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정 사이의 간격이 약 1주 내지 약 24주, 바람직하게는 약 1주 내지 약 12주, 보다 바람직하게는 약 1주 내지 약 8주, 보다 더 바람직하게는 약 2주 내지 약 6주인, 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간이 약 1주 내지 약 8주이고, 연속적 치료 과정 사이의 간격이 약 1주 내지 약 8주인, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정 각각의 지속기간이 약 2주 내지 약 6주이고, 연속적 치료 과정 사이의 간격이 약 2주 내지 약 6주인, 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 2 내지 25회 이상의 연속적 치료 과정 동안 투여되는, 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 연속적 치료 과정의 지속기간이 실질적으로 동일한, 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 연속적 치료 과정 사이의 간격이 실질적으로 동일한, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 항암제가 바람직하게는 대상체에서 암 재발을 방지하기 위한 것인, 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 항암제가
i) 화학요법제, 예컨대 알킬화제 알킬화제: 니무스틴(Nimustine), 카르무스틴(Carmustine), 로무스틴(Lomustine), 사이클로포스파미드(Cyclophosphamide), 이포스파미드(Ifosfamide), 글리시포스포르아미드(glyciphosphoramide), 세무스틴(semustine); 항대사물: 데옥시플루오구아노신(deoxyfluoguanosine), 독시플루구아니딘(doxifluguanidine), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메르캅토퓨린(mercaptopurine), 티오구아닌(thioguanine), 시타라빈(cytarabine), 플루구아노신(fluguanosine), 테가푸르(tegafur), 젬시타빈(Gemcitabine), 카르모푸르(carmofur), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 메토트렉세이트(methotrexate), UFT, 안시타빈(Ancitabine), 카페시타빈(capecitabine); 항종양 항생제: 악티노마이신 D(actinomycin D), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(Epirubicin), 미토마이신(mitomycin), 펠로마이신(pelomycin), 핑기앙마이신(pingyangmycin), 피라루비신(pirarubicin); 화학요법 항종양 동물 및 식물 성분: 이리노테칸(irinotecan), 해링토닌(harringtonine), 하이드록시캄포테신(hydroxycamptothecin), 비노렐빈(Vinorelbine), 파클리탁셀(paclitaxel), 알부민 파클리탁셀, 탁소테레(taxotere), 토포테칸(topotecan), 빈크리스틴(vincristine), 빈데신(vindesine), 빈데신, 빈블라스틴(vinblastine), 테니포시드(teniposide), 엑토포시드(etoposide), 엘레멘(elemene); 예컨대 항종양 약물 호르몬: 아타메스탄(Atamestane), 아나스트로졸(Anastrozole), 아미노글루테티미드(Aminoglutethimide), 레트로졸(Letrozole), 포르메스탄(Formestane), 메타스테론(Metasterone), 타목시펜(Tamoxifen); 화학요법 기타 제제: 아스파라기나제(asparaginase), 카르보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 다카르바진(Dacarbazine), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 록사딘(Loxadine), 엘록사틴(Eloxatin), 미토잔트론(Mitoxantrone), 또는 프로카르바진(Procarbazine); 또는
ii) 면역 체크포인트 억제제 예컨대 PD-1, PD-L1, CTLA4의 억제제, 예를 들어, 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab), 아테졸리주맙(Atezolizumab), 더발루맙(Durvalumab), 아벨루맙(Avelumab)으로부터 선택된 항체; 또는
iii) 소분자 표적화 약물, 예컨대 이마티닙(imatinib), 게피티닙(gefitinib), 보르테조밉(bortezomib), 에를로티닙(erlotinib), 소라페닙(sorafenib), 레날리도미드(lenalidomide), 수니티닙(Sunitinib), 다사티닙(dasatinib), 닐로티닙(nilotinib), 라파티닙(lapatinib), 파조파닙(pazopanib), 에베롤리무스(everolimus), 반데타닙(vandetanib), 크리조티닙(crizotinib), 베로피닙(verofinib), 룩솔리티닙(ruxolitinib), 악시티닙(axitinib), 비스모데깁(vismodegib), 카르필조밉(carfilzomib), 레고라페닙(regorafenib), 보수티닙(bosutinib), 토파시티닙(tofacitinib), 카르보티닙(carbotinib), 파나티닙(panatinib), 포말리도미드(pomalidomide), 트라메티닙(trametinib), 다브라페닙(dabrafenib), 아파티닙(Afatinib), 이코티닙(Icotinib), 이브루티닙(Ibrutinib), 세리티닙(Ceritinib), 이데랄리스(Idelaris), 아파티닙(Apatinib), 파부실립(Pabuccilib), 레바티닙(Levatinib), 악시티닙, 이코티닙, 아파티닙, 소니데깁(sonidegib), 코비메티닙(cobimetinib), 오시메르티닙(osimertinib), 알렉티닙(alectinib), 익사조밉(ixazomib); 또는
iv) 종양 연관 항원-특이적 항체 예컨대 리툭산(Rituxan), 허셉틴(Herceptin)이고;
바람직하게는, 항암제가 옥살리플라틴, 에피루비신, 파클리탁셀 및 젬시타빈으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 젬시타빈인, 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 백혈병(leukemia)(예컨대 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 만성 골수성 백혈병(chronic myeloid leukemia, CML), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 다모세관 백혈병(polycapillary leukemia)), 간암(liver cancer), 폐암(lung cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 피부암(skin cancer), 위암(stomach cancer), 유방암(breast cancer), 전립선암(prostate cancer), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 흑색종(melanoma), 다발성 골수종(multiple myeloma), 후두 유두종(laryngeal papilloma), 여포성 림프종(follicular lymphoma), AIDS 관련 카포시 육종(AIDS-related Kaposi's sarcoma) 및 신 세포 암종(renal cell carcinoma), 바람직하게는 간암, 폐암, 유방암, 결장직장암 또는 흑색종으로부터 선택되는, 방법.
인터페론-기반 치료제 및 추가적인 항암제를 포함하는, 대상체에서 암 재발을 방지하는 데 사용하기 위한 약제학적 조합.
제26항에 있어서, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 대상체에서 암 재발을 방지하는 데 사용하기 위한, 약제학적 조합.
제26항 또는 제27항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하거나, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하거나, 내인성 인터페론의 생성을 촉진하는 물질을 포함하는, 약제학적 조합.
제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론이 I형, II형 또는 III형 인터페론, 예컨대 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ 또는 인터페론 λ, 바람직하게는 인터페론 α인, 약제학적 조합.
제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 인터페론 α 2a, 인터페론 α 2b, 인터페론 α 1b, 인터페론 λ, 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하는, 약제학적 조합.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체가 PEG화되는, 약제학적 조합.
제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 P1101, 페그베론, 페가시스, 페그인트론, 인페르겐, 노바페론, 인트로나, 로페론-A, 하프겐, 페그인페르 및 페그인터페론 λ로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조합.
제26항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 TLR, RLR, 및 STING 신호전달 경로의 작용제를 포함하는, 약제학적 조합.
제33항에 있어서, 인터페론-기반 치료제가 GS-9620, GS-9688, RO7020531, RO6864018, TQ-A3334, JNJ-4964, SB9200, MIW815, DMXAA, MK-1454, 및 diABZI로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조합.
제26항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 항암제가
i) 화학요법제, 예컨대 알킬화제 알킬화제: 니무스틴, 카르무스틴, 로무스틴, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 글리시포스포르아미드, 세무스틴; 항대사물: 데옥시플루오구아노신, 독시플루구아니딘, 5-플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 티오구아닌, 시타라빈, 플루구아노신, 테가푸르, 젬시타빈, 카르모푸르, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, UFT, 안시타빈, 카페시타빈; 항종양 항생제: 악티노마이신 D, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 미토마이신, 펠로마이신, 핑기앙마이신, 피라루비신; 화학요법 항종양 동물 및 식물 성분: 이리노테칸, 해링토닌, 하이드록시캄포테신, 비노렐빈, 파클리탁셀, 알부민 파클리탁셀, 탁소테레, 토포테칸, 빈크리스틴, 빈데신, 빈데신, 빈블라스틴, 테니포시드, 엑토포시드, 엘레멘; 예컨대 항종양 약물 호르몬: 아타메스탄, 아나스트로졸, 아미노글루테티미드, 레트로졸, 포르메스탄, 메타스테론, 타목시펜; 화학요법 기타 제제: 아스파라기나제, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다카르바진, 옥살리플라틴, 록사딘, 엘록사틴, 미토잔트론, 또는 프로카르바진; 또는
ii) 면역 체크포인트 억제제 예컨대 PD-1, PD-L1, CTLA4의 억제제, 예를 들어, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙으로부터 선택된 항체; 또는
iii) 소분자 표적화 약물, 예컨대 이마티닙, 게피티닙, 보르테조밉, 에를로티닙, 소라페닙, 레날리도미드, 수니티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 파조파닙, 에베롤리무스, 반데타닙, 크리조티닙, 베로피닙, 룩솔리티닙, 악시티닙, 비스모데깁, 카르필조밉, 레고라페닙, 보수티닙, 토파시티닙, 카르보티닙, 파나티닙, 포말리도미드, 트라메티닙, 다브라페닙, 아파티닙, 이코티닙, 이브루티닙, 세리티닙, 이데랄리스, 아파티닙, 파부실립, 레바티닙, 악시티닙, 이코티닙, 아파티닙, 소니데깁, 코비메티닙, 오시메르티닙, 알렉티닙, 익사조밉; 또는
iv) 종양 연관 항원-특이적 항체 예컨대 리툭산, 허셉틴이고;
바람직하게는, 항암제가 옥살리플라틴, 에피루비신, 파클리탁셀 및 젬시타빈으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 젬시타빈인, 약제학적 조합.