KR20230155625A - 가는보라색우무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물 - Google Patents
가는보라색우무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물에 관한 것으로, 가는보라색우무 추출물이 활성 산소 억제, NO(nitric oxide)와 PGE2 활성 저해 및 그람양성세균 활성 저해를 통해 항산화, 항염증 및 항균 효과를 나타내는 것을 확인함으로써, 항산화, 항염증 또는 항균용 조성물로서 유용하게 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물에 관한 것이다.
가는보라색우무(Symphyocladia linearis)는 일본 혼슈우 중부 이북에 분포하고, 우리나라에는 강원도, 영일만, 부산에 분포하는 홍조식물 비단풀목 빨간검둥이과의 해조로, 몸 하부에 있는 모상근으로 점심대(upper sublittoral belt) 윗부분의 바위 위에 붙어 자란다. 몸의 하부는 원주상인데 위쪽으로 갈수록 가늘고 편평한 성상으로 되고, 복우상으로 분기한다. 크기 10~30cm 정도의 가지 양 가장자리에서 치상열편을 호생한다. 사분포자낭은 위쪽 열편에 형성되고, 질은 연하고 막질이며 대지에 붙는다. 현재 가는보라색우무에 대한 연구가 활발히 진행되고 있지 않은 상황이고, 가는보라색우무의 효능에 대한 연구 또한 현재까지 보고된 바 없다.
본 발명의 목적은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물이 활성 산소 억제, NO(nitric oxide)와 PGE2 활성 저해 및 그람양성세균 활성 저해를 통해 항산화, 항염증 및 항균 효과를 나타내는 것을 확인함으로써, 항산화, 항염증 또는 항균용 조성물로서 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물의 항산화 효과를 분석한 결과이다.
도 2는 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물의 NO(nitric oxide) 저해를 통한 항염증 효과를 분석한 결과이다.
도 3은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물의 PGE2 저해를 통한 항염증 효과를 분석한 결과이다.
도 2는 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물의 NO(nitric oxide) 저해를 통한 항염증 효과를 분석한 결과이다.
도 3은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물의 PGE2 저해를 통한 항염증 효과를 분석한 결과이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C4 알콜 또는 이의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 추출물은 그람양성세균에 대한 항균 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다.
상기 그람양성세균은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 또는 세레우스균(Bacillus cereus)인 것을 특징으로 하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로 서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물에 포함되는 첨가제의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니며 통상의 제제화에 사용되는 함량 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다.
상기 약학 조성물은 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립, 정제, 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 외용제 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 제형화를 위해 추가로 있는 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제는 전분, 당 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면 활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제는 대상체에게 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제의 예로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있다. 경구 투여일 경우, 정제, 트로키제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 현탁액, 유성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제 등으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여일 경우, 주사액, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 크림 등으로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이 체질 특이성, 제제의 성질, 질병의 정도, 조성물의 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설율 및 약물 형태에 따라 그 범위가 다양할 수 있으며, 이 분야 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예컨대, 약 0.1 내지 10,000mg/kg의 범위일 수 있으나 이에 제한되지 않으며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여될 수 있다.
상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여되거나 비경구 투여(예를 들면, 정맥 내, 피하 내, 복강 내 또는 국소에 적용)될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수도 있다.
또한, 본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 이너 뷰티(inner beauty)용인 것을 특징으로 한다.
상기 "이너 뷰티(inner beauty)"란, 먹는 화장품을 의미하는 것으로, 화장품을 바르는 등 인위적인 방법으로 피부 표면만을 일시적으로 좋게 만드는 것이 아니라, 식품 등을 통해 피부 속, 내부에서부터 건강한 피부를 가꾸는 것을 의미한다.
바람직하게는, 상기 조성물은 항산화, 항염증 또는 항균 효과를 가질 수 있다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
발명에 따른 이너 뷰티용 조성물은 연화제, 항산화제, 현탁화제, 발포제, 계면활성제, 정제수, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 중에서 선택된 어느 하나 이상의 보조제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않고, 화장품학적으로 허용가능한 화장품 보조제, 약학적으로 허용가능한 약학 보조제, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조제, 생물학적 활성 화합물, 흡수성 물질, 퍼스널 케어 화합물(personal care compound), 활성 성분, 미용 보조제 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 더 포함할 수 있다.
상기 조성물은 구강 점막용 필름, 정제, 시럽, 캡슐, 환제, 과립, 분말, 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 통상적으로 이용되는 식품으로써 일반적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기 "건강기능식품"이라 함은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
상기 건강기능식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 "식품 첨가물"로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 "식품 첨가물 공전"에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다. 예를 들어, 캡슐 형태의 건강기능식품 중 경질 캡슐제는 통상의 경질 캡슐에 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합 및 충진 하여 제조할 수 있으며, 연질 캡슐제는 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합하고 젤라틴 등 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캡슐제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의 는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 통상적인 의미에서의 건강 기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에서 용어 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 억 제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 용어 “치료”는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말 한다. 본 발명에서 "개선"이란 본 발명의 조성물을 개체에 투여하거나 섭취시켜 질환의 나쁜 상태를 좋게 하는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명은 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화되는 것을 특징으로 하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.
다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
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실험예
1] 시료 확보 및 추출물 제조
가는보라색우무는 강원도 강릉에서 채집하여 물을 이용하여 세척 후, -80℃에서 1일 동안 동결 보관하였다. 동결 보관한 시료는 동결건조기를 이용하여 4일간 건조하였다. 건조 시료는 분쇄기를 이용하여 분쇄하여 분말형태로 제조하였다. 분말형태의 건조시료에 70% 에탄올을 넣고 상온에서 1시간 동안 초음파 추출기로 8회 반복 추출하였다. 각 추출마다 여과지를 이용해 여과하였으며, 여과된 추출물은 감압 농축기를 이용하여 농축하였다. 농축된 시료는 완전한 건조를 위해 -80℃에서 동결 후 4~5일 동안 동결건조기를 이용하여 건조하였다. 건조된 추출물은 분말 형태로 만들어 실험에 사용하기 전까지 -80℃에서 동결 보관하였다.
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실험예
2]
가는보라색우무의
세포 독성 및 항산화 효과 분석
가는보라색우무의 항산화 효과를 측정하기 전, 세포 독성 유무를 먼저 측정하였다. 세포 내 LPS에 의해 유도된 라디칼 독성에 대한 소화가수분해물의 세포보호 효과를 평가하기 위해, CCK assay를 통해 세포 생존율을 측정하였다. 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물과 LPS 처리된 세포를 대상으로 10μL CCK(1μg/mL)를 가한 다음 1시간 동안 배양 후 생성된 formazan 염을 녹인 후 450nm 파장에서 측정하였다.
가는보라색우무의 항산화 효과를 확인하기 위해, 96 well-plate에서 배양된 RAW 264.7 세포를 5μM DCFH-DA와 30분 동안 암실에서 반응시킨 후, 농도별로(10, 25, 50 및 100μg/mL) 희석한 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물을 처리하여 1시간 동안 배양하고 PBS로 3회 세척한 다음 1μg/mL 농도의 LPS를 가하였다. LPS 처리에 따라 유도된 세포 내 라디칼에 의해 산화된 DCFH의 산화물인 DCF의 흡수 형광 시그널 강도를 λexcitation = 492nm, λemission = 525nm 파장 조건으로 측정하였다.
[
실험예
3]
가는보라색우무의
항염증 효과 분석
1-1. NO(nitric oxide) 저해활성 측정
RAW 264.7 세포주를 대상으로 NO 저해활성을 측정하기 위해, macrophage 세포수를 측정하여 24 well-plate에 10% FBS가 포함된 DMEM 배지를 가하여 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 해당 세포에 인위적으로 LPS를 처리하여 NO의 농도를 과량으로 유도한 다음, 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물을 농도별로(10, 25, 50 및 100μg/mL) 처리하여 세포에서 분비한 NO의 농도를 Griess 시약을 활용하여 측정하였다. 추출물과 LPS가 처리된 세포를 24시간 배양 후 세포가 분비한 NO의 농도를 측정하기 위해 배양된 배지를 96-well plate에 100μL씩 분주한 후 Giress 시약 100μL를 넣어 암실에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm 파장에서 측정하여 NO 농도를 측정하였다.
1-2.
PGE
2
저해활성 측정
RAW 264.7 세포주를 대상으로 PGE2 저해활성을 측정하기 위해, macrophage 세포수를 측정하여 24 well-plate에 10% FBS가 포함된 DMEM 배지를 가하여 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 해당 세포에 인위적으로 LPS를 처리하여 PGE2의 농도를 과량으로 유도한 다음, 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물을 농도별로(10, 25, 50 및 100μg/mL) 처리하여 세포에서 분비한 PGE2의 농도를 Enzyme-Linked Immunosorbant assay(ELISA) kit를 활용하여 측정하였다.
[
실험예
4]
가는보라색우무의
항균 효과 분석
1-1. Paper disc diffusion method
표준균주로는 그람양성 세균은 Staphylococcus aureus ATCC 6538P 및 Bacillus cereus ATCC 14579, 그람음성 세균은 Escherchia coli KCTC 2571 및Salmonella typhimurium KCTC 1925를 사용하였다. 균주 접종균수를 위한 탁도 표준품을 제조하여 사용하였고, 0.5 McFarland standard 또는 광도계 장치에 동등하게 맞출 수 있는 BaSO4 탁도를 사용하였다. 먼저 사용할 균주를 한천 plate에서 18~24시간 배양시킨 후, 독립 colony를 멸균된 희석수에 접종시켜 0.5 McFarland standard 탁도에 도달할 수 있게 접종균주를 준비하였다. 이때 접종균주의 colony는 약 1~2 × 108 CFU/mL로 조절하였다. 15분 이내로 접종균주 현탁액의 탁도를 조정하고, 멸균된 면봉을 1~2 × 108 CFU/mL 균수로 조절된 희석수에 면봉을 여러 번 돌린 후, 용액 위쪽의 벽면에 단단히 눌러 면봉으로부터 과도한 접종균주 현탁액을 제거하였다. 건조된 Mueller-Hinton Agar(MHA) 플레이트 표면에 면봉으로 streak를 실시하였고, MHA plate를 약 60°로 회전시켜가며 streak를 두 번 더 반복하여 접종균주를 균일하게 분포시켰다. 멸균된 disc에 해양생물자원 추출물 1mg을 loading하여 충분히 건조시킨 후, 접종균주가 streak된 한천의 표면에 미리 건조된 해양생물자원 추출물 disc를 15분 내로 배치하여 35±2℃로 설정된 인큐베이터에 넣어 16~18시간 배양시킨 후 clear zone을 확인하였다.
1-2. 최소억제농도 측정(
MIC
)
표준균주로는 그람양성 세균은 Staphylococcus aureus ATCC 6538P 및 Bacillus cereus ATCC 14579, 그람음성 세균은 Escherchia coli KCTC 2571 및 Salmonella typhimurium KCTC 1925를 사용하였다. 균주 접종균수를 위한 탁도 표준품을 제조하여 사용하였고, 0.5 McFarland standard 또는 광도계 장치에 동등하게 맞출 수 있는 BaSO4 탁도를 사용하였다. 먼저 사용할 균주를 한천 plate에서 18~24시간 배양시킨 후, 독립 colony를 접종시켜 멸균된 희석수에 0.5 McFarland standard 탁도에 도달할 수 있게 접종균주를 준비하였고, 15분 이내로 접종균주 현탁액의 탁도를 조정하였다. 원형 또는 원추형 바닥 well이 있는 멸균 플라스틱 microdilution tray에 배지를 분배하여 사용하였다. 각 well에는 각각의 실험균주를 Mueller-Hinton broth에 약 5 × 105 CFU/ml(범위 2~8 × 105 CFU/ml) 도포하였다. 15분 이내로 샘플을 첫 번째 행에 접종한 후, 첫 번째 행의 well에 있는 부피의 10%를 초과하지 않는 부피를 전달하는 접종장치를 사용하여 microdilution tray의 각 well을 접종하여 샘플의 농도를 희석했다. 접종된 microdilution tray를 주변 공기 인큐베이터에서 16~20시간 동안 35±2℃에서 배양하였다. Ending point를 결정할 때는 control well 성장량과 비교하여 탁도가 발생하지 않도록 하였다.
[
실시예
1]
가는보라색우무의
세포 독성 및 항산화 효과 분석
가는보라색우무 70% 에탄올 추출물의 세포에 대한 독성 유무를 확인한 결과, 100μg/ml 농도 이내에서 독성이 나타나지 않았다. 또한, 세포 독성이 나타나지 않은 농도 범위의 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물을 처리하여 세포 내 발생된 활성산소의 생성을 DCFH-DA 시약을 활용하여 측정한 결과, 10, 25, 50 및 100μg/ml 농도에서 각각 10.1%, 38.2%, 49.3% 및 48.8%로 활성산소의 생성을 억제하는 것을 확인하였다(도 1).
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실시예
2]
가는보라색우무의
항염증 효과 분석
세포 독성이 나타나지 않은 농도 범위의 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물의 NO 생성 억제 효과를 확인한 결과, 10, 25 및 50μg/ml 농도에서 각각 5.4%, 44.4% 및 57.4%의 억제율을 나타냈고, 100μg/ml 농도에서 약 81.4%의 억제율을 나타냈다(도 2).
또한, 세포 독성이 나타나지 않은 농도 범위의 가는보라색우무 70% 에탄올 추출물의 PGE2 생성 억제 효과를 확인한 결과, 10, 25 및 50μg/ml 농도에서 각각 7.9%, 73.5% 및 85.9%의 억제율을 나타냈고, 100μg/ml 농도에서 약 94.8%의 억제율을 나타냈다(도 3).
[
실시예
3]
가는보라색우무의
항균 효과 분석
가는보라색우무 70% 에탄올 추출물의 항균 효과를 확인하기 위해, paper disc diffusion method 및 MIC을 실시한 결과, 그람양성세균의 경우, Paper disc diffusion method에서 Staphylococcus aureus ATCC 6538P 및 Bacillus cereus ATCC 14579의 성장저지환이 각각 10.0mm와 8.0mm로 항균 효과를 나타냈고, MIC에서 Staphylococcus aureus ATCC 6538P 및 Bacillus cereus ATCC 14579가 각각 256μg/mL와 1024μg/mL로 항균 효과를 나타냈다(표 1 및 표 2). 그람음성세균의 경우, Paper disc diffusion method에서 항균 효과가 나타나지 않았고, MIC도 또한 >1024μg/mL로 항균 효과가 나타나지 않았다.(표 1 및 표 2).
| 시료명 | Staphylococcus aureus ATCC 6538P |
Bacillus cereus ATCC 14579 |
Escherchia coli KCTC 2571 |
Salmonella typhimurium KCTC 1925 |
| 가는보라색 우무 |
10.0 | 8.0 | - | - |
| 1mg/6mm disc | ||||
| 시료명 | Staphylococcus aureus ATCC 6538P |
Bacillus cereus ATCC 14579 |
Escherchia coli KCTC 2571 |
Salmonella typhimurium KCTC 1925 |
| 가는보라색우무 | 256 | 1024 | - | - |
| Unit(μg/mL) | ||||
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
Claims (8)
- 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4 알콜 또는 이의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 그람양성세균에 대한 항균 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 청구항 3에 있어서, 상기 그람양성세균은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 또는 세레우스균(Bacillus cereus)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 건강기능식품 조성물.
- 청구항 5에 있어서, 상기 조성물은 이너 뷰티(inner beauty)용인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
- 가는보라색우무(Symphyocladia linearis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 화장료 조성물.
- 청구항 7에 있어서, 상기 추출물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220054574A KR20230155625A (ko) | 2022-05-03 | 2022-05-03 | 가는보라색우무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 항균용 약학 조성물 |
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| KR20230155625A true KR20230155625A (ko) | 2023-11-13 |
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ID=88746893
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| KR (1) | KR20230155625A (ko) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100745023B1 (ko) | 2006-09-27 | 2007-08-01 | 신라대학교 산학협력단 | 참보라색우무 추출물을 이용한 여드름 피부용 화장료조성물 |
-
2022
- 2022-05-03 KR KR1020220054574A patent/KR20230155625A/ko unknown
Patent Citations (1)
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