KR20230148045A - 박테리오파지의 장기 유통 저장 안정성 유지를 위한 신규 부형제 조성물 - Google Patents

박테리오파지의 장기 유통 저장 안정성 유지를 위한 신규 부형제 조성물 Download PDF

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KR20230148045A KR1020220047176A KR20220047176A KR20230148045A KR 20230148045 A KR20230148045 A KR 20230148045A KR 1020220047176 A KR1020220047176 A KR 1020220047176A KR 20220047176 A KR20220047176 A KR 20220047176A KR 20230148045 A KR20230148045 A KR 20230148045A
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Abstract

박테리오파지의 장기 유통 저장 안정성 유지를 위한 신규 박테리오파지 안정성 개선용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 무수황산나트륨을 포함함으로써 박테리오파지의 보관 안정성이 우수하다.

Description

박테리오파지의 장기 유통 저장 안정성 유지를 위한 신규 부형제 조성물{Novel excipient to maintain the long-term storage stability of bacteriophages}
박테리오파지의 장기 유통 저장 안정성 유지를 위한 신규 부형제 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
식중균에 의한 식품매개질환은 전 세계적으로 발생하는 문제로 심각한 공중 보건 문제 중의 하나로 인식되어 오고 있다. 따라서 식품산업에 있어서 맛있고 영양적인 식품을 소비자에게 제공하는 것뿐만 아니라, 질병을 일으킬 수 있는 식중독세균이 존재하지 않는 안전한 식품을 공급하는 것 또한 중요하다.
박테리오파지는 박테리아를 숙주세포로 하는 바이러스의 일종으로 박테리아에만 특이적으로 결합하기 때문에 인체 독성을 나타내지 않는다. 이러한 특징으로 인해 박테리오파지는 세균에 의해 발생된 감염의 임상 치료에도 널리 이용되어 오고 있으며, 특히 가축의 질병을 예방하거나 억제하기 위한 사료 첨가제로서 사용되고 있다 (한국 10-2021-0145038 특허공개공보).
한편, 사료 첨가용 박테리오파지 제품의 생산 및 유통에 따른 장기 저장 시, 기존에 사용되는 부형제는 박테리오파지의 역가 하락에 따른 생산성 및 제품 품질 저하의 문제점이 있다. 이에 사료 첨가용 박테리오파지 제품 장기 유통 시, 품질 유지를 위한 부형제에 대한 연구가 필요하다.
[선행기술문헌]
(특허문헌 1) KR 10-2021-0145038 A
본 출원의 일 예는 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 박테리오파지의 안정성(예를 들어, 저장 안정성 등)을 장기간 유지 및/또는 증가시키기 위한 것일 수 있다.
다른 예는 박테리오파지 및 무수황산나트륨을 포함하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물일 수 있다.
다른 예는 박테리오파지와 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 혼합하는 단계를 포함하는, 박테리오파지 안정성 개선 방법을 제공한다.
일 양상은, 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 제공한다.
무수황산나트륨 (Sodium sulfate anhydrous, Na2SO4, 142.04 g/mol, CAS Number: 7757-82-6)은 나트륨의 황산염으로, 무색의 결정이다. 상기 무수황산나트륨은 외부의 10개 물분자와 결합하여 황산나트륨(Sodium sulfate, Na2SO4·10H2O; 322.20 g/mol)으로 변하므로, 수분이 있는 환경에서 흡습 역할을 할 수 있다.
상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물은 부형제 성분을 추가적으로 포함하거나, 또는 부형제로서 사용될 수 있다.
상기 부형제는 사료, 식품, 또는 의약품 등을 먹기 쉽게 하거나 일정한 형태를 만들기 위하여 첨가하는 물질을 의미할 수 있다. 부형제의 종류로 분말 원료에 결합력을 주어 성형을 용이하게 하는 결합제, 붕해성을 촉진하는 붕해제, 과립형태의 제품의 압축조작을 원활하고 흐름성이 좋게 하고, 점착을 방지하기 위해 첨가하는 활택제, 액체의 원료를 흡수하여 타블렛(알약)으로 만들 수 있게 하는 흡착제 등이 있다. 주로 사용되는 부형제 성분으로 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC), 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC), 젖당 (함수, 무수, 일수산화물, 분무건조 형태 등), 미결정셀룰로오스(microcrystalline cellulose) 이산화티타늄(titanium dioxide), 이산화규소 (콜로이드성, colloidal silicon dioxide 등), 스테아린산마그네슘(magnesium stearate), 폴리에틸렌글리콜, 크로스카멜로스 나트륨(croscarmellose sodium), 알파전분(starch pregelatinized), 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate), 크로스포비돈(crosspovidone), 탈크(talc), 밀가루(곡물가루, Wheat powder), 탄산칼슘(Calcium carbonate), 실리카(Silica) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 예시할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 출원에서 제공되는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물은 무수황산나트륨에 더하여 상기 부형제 성분들 중 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다.
상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물 내 포함되는 무수황산나트륨의 비율은 중량 기준으로, 1 내지 50%(w/w), 1 내지 45%(w/w), 1 내지 40%(w/w), 1 내지 35%(w/w), 1 내지 30%(w/w), 5 내지 50%(w/w), 5 내지 45%(w/w), 5 내지 40%(w/w), 5 내지 35%(w/w), 5 내지 30%(w/w), 10 내지 50%(w/w), 10 내지 45%(w/w), 10 내지 40%(w/w), 10 내지 35%(w/w), 10 내지 30%(w/w), 15 내지 50%(w/w), 15 내지 45%(w/w), 15 내지 40%(w/w), 15 내지 35%(w/w), 15 내지 30%(w/w), 20 내지 50%(w/w), 20 내지 45%(w/w), 20 내지 40%(w/w), 20 내지 35%(w/w), 20 내지 30%(w/w), 25 내지 50%(w/w), 25 내지 45%(w/w), 25 내지 40%(w/w), 25 내지 35%(w/w), 25 내지 30%(w/w), 30 내지 50%(w/w), 30 내지 45%(w/w), 30 내지 40%(w/w), 또는 30 내지 35%(w/w) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 용어 "박테리오파지 안정성 개선"은 박테리오파지의 저장 안정성을 장기간 유지, 개선, 또는 향상시키는 것일 수 있다. 즉, 박테리오파지 안정성 개선 효과는 박테리오파지의 역가 유지, 또는 역가 감소량을 낮추는 효과를 의미할 수 있다.
박테리오파지는 세균과 고세균을 숙주로 하는 바이러스를 통칭하는 말로, 세균에 특이적으로 감염할 수 있다. 이에 박테리오파지의 항생 효과를 이용하여 사료 (사료 첨가제를 포함한다), 식품, 의약품, 소독제 등의 제품에 사용되고 있으나, 상기 제품의 생산 또는 유통에 따른 저장 시 박테리오파지의 역가가 하락하여 제품의 생산성 및 품질 저하의 문제가 있다. 즉, 박테리오파지의 안정성 개선 효과는 이러한 박테리오파지를 포함하는 제품의 보관 시 박테리오파지의 역가를 유지하거나, 박테리오파지의 역가 감소량을 낮추는 것을 의미할 수 있다.
일 예에서, 박테리오파지에 상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 적용하는 경우 (예컨대, 혼합 등), 상기 박테리오파지를 45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 보관 시,
0일 차에 측정한 박테리오파지의 역가과 비교하여 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 7일 후, 8일 후, 9일 후, 10일 후, 11일 후, 12일 후, 13일 후, 또는 14일 후 측정한 박테리오파지의 역가가 2 log(pfu/g) 이하, 1.9 log(pfu/g) 이하, 1.8 log(pfu/g) 이하, 1.7 log(pfu/g) 이하, 1.6 log(pfu/g) 이하, 1.5 log(pfu/g) 이하, 또는 1.4 log(pfu/g) 이하, 예컨대 1.4 log(pfu/g) 감소하거나, 또는,
20% 이하, 19% 이하, 18% 이하, 17% 이하, 16% 이하, 또는 15% 이하로 감소할 수 있다.
다른 예에서, 박테리오파지에 상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 적용하는 경우 (예컨대, 혼합 등), 대조군 (예컨대, 박테리오파지에 무수황산나트륨을 적용하지 않은 경우)과 비교하여,
상기 박테리오파지를 45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 보관 시,
0일 차에 측정한 박테리오파지의 역가와 비교하여 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 7일 후, 8일 후, 9일 후, 10일 후, 11일 후, 12일 후, 13일 후, 또는 14일 후 측정한 박테리오파지의 역가 감소량 (log(pfu/g))이 0.5 내지 3, 0.5 내지 2.5, 0.5 내지 2, 0.5 내지 1.5, 0.6 내지 3, 0.6 내지 2.5, 0.6 내지 2, 0.6 내지 1.5, 0.7 내지 3, 0.7 내지 2.5, 0.7 내지 2, 0.7 내지 1.5, 0.8 내지 3, 0.8 내지 2.5, 0.8 내지 2, 0.8 내지 1.5, 0.9 내지 3, 0.9 내지 2.5, 0.9 내지 2, 0.9 내지 1.5, 1 내지 3, 1 내지 2.5, 1 내지 2, 1 내지 1.5, 0.5 이상, 0.6 이상, 0.7 이상, 0.8 이상, 0.9 이상, 1.0 이상, 또는 1.1 이상, 예컨대 1.1만큼 더 낮거나, 또는,
5 내지 20%p, 5 내지 15%p, 6 내지 20%p, 6 내지 15%p, 7 내지 20%p, 7 내지 15%p, 8 내지 20%p, 8 내지 15%p, 9 내지 20%p, 9 내지 15%p, 10 내지 20%p, 10 내지 15%p, 5%p 이상, 6%p 이상, 7%p 이상, 8%p 이상, 9%p 이상, 10%p 이상, 또는 11%p 이상, 예컨대 11%p만큼 더 낮을 수 있다.
다른 예에서, 박테리오파지에 상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 적용하는 경우 (예컨대, 혼합 등), 대조군 (예컨대, 박테리오파지에 무수황산나트륨을 적용하지 않은 경우)과 비교하여,
45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 보관 시,
박테리오파지의 역가가 2 내지 40%, 2 내지 35%, 2 내지 30%, 2 내지 25%, 2 내지 20%, 2 내지 15%, 2 내지 10%, 5 내지 40%, 5 내지 35%, 5 내지 30%, 5 내지 25%, 5 내지 20%, 5 내지 15%, 5 내지 10%, 10 내지 40%, 10 내지 35%, 10 내지 30%, 10 내지 25%, 10 내지 20%, 10 내지 15%, 2% 이상, 3% 이상, 4% 이상, 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 또는 15% 이상 높은 것일 수 있다.
상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 박테리오파지에 적용하는 경우, 박테리오파지를 고온다습 조건 등의 극한 환경에서 장기간 보관 시에도 박테리오파지의 역가 감소량이 낮아 박테리오파지를 안정적으로 보관할 수 있는 장점이 있다.
상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물은 무수황산나트륨을 포함함으로써, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 박테리오파지 안정성 개선 효과가 우수할 수 있다.
상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물은, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등의 제조에 사용되는 것일 수 있다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨을 포함하는 조성물, 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등을 제공한다. 또는, 박테리오파지 및 상기 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는 조성물, 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등을 제공한다.
상기 박테리오파지는, 박테리오파지의 종류와 수를 특별히 제한하지 않고 어느 것이나 사용할 수 있으며, 미오비리대 (Myoviridae), 시포비리대 (Siphoviridae) 및 포도비리대 (Podoviridae) 과 (Family)에 속하는 박테리오파지들 중 하나 또는 그 이상(예컨대, 2종, 3종의 조합)의 박테리오파지를 선택하여 사용할 수 있다.
상기 박테리오파지는 에스케리챠속 (Escherichia) (예컨대, 대장균 (E. coli), E. albertii, E. fergusonii, E. hermannii, E. vulneris 등), 살모넬라속 (Salmonella) (예컨대, S. bongori S. enterica 등), 또는 클로스트리듐속 (Clostridium) (예컨대, 보툴리누스균 (C. botulinum), 파상풍균 (C. tetani), 가스괴저균 (C. perfringens), C. hisolyticum, C. sordellii, C. butyricum 등)에 속하는 세균에 특이적으로 감염하는 박테리오파지일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 조성물 (예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등)에 포함되는 박테리오파지의 최초 함량(또는 역가, titer)은 특별히 제한되지 않으나 1x101 내지 1x1015 pfu/g 범위에서 일반적으로 사용될 수 있고, 또는 상기 조성물에 포함되는 박테리오파지와 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)의 양은, 최종 제조되는 조성물 (예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등)의 사용 목적을 고려하여 당업자가 적절하게 결정할 수 있다.
상기 조성물 (예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등)에서, 박테리오파지와 박테리오파지 안정성 개선용 조성물 중 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 비율은, 중량 기준으로, 90 내지 99.9%(w/w), 90 내지 99.5%(w/w), 90 내지 99%(w/w), 90 내지 98%(w/w), 90 내지 97%(w/w), 90 내지 96%(w/w), 90 내지 95%(w/w), 91 내지 99.9%(w/w), 91 내지 99.5%(w/w), 91 내지 99%(w/w), 91 내지 98%(w/w), 91 내지 97%(w/w), 91 내지 96%(w/w), 91 내지 95%(w/w), 92 내지 99.9%(w/w), 92 내지 99.5%(w/w), 92 내지 99%(w/w), 92 내지 98%(w/w), 92 내지 97%(w/w), 92 내지 96%(w/w), 92 내지 95%(w/w), 93 내지 99.9%(w/w), 93 내지 99.5%(w/w), 93 내지 99%(w/w), 93 내지 98%(w/w), 93 내지 97%(w/w), 93 내지 96%(w/w), 93 내지 95%(w/w), 94 내지 99.9%(w/w), 94 내지 99.5%(w/w), 94 내지 99%(w/w), 94 내지 98%(w/w), 94 내지 97%(w/w), 94 내지 96%(w/w), 94 내지 95%(w/w), 95 내지 99.9%(w/w), 95 내지 99.5%(w/w), 95 내지 99%(w/w), 95 내지 98%(w/w), 95 내지 97%(w/w), 또는 95 내지 96%(w/w)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 조성물 (예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등)에서, 박테리오파지와 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 혼합비는, 중량 기준으로, 1: 8 내지 1: 999, 1: 8 내지 5: 995, 1: 8 내지 1: 99, 1: 8 내지 2: 98, 1: 8 내지 3: 97, 1: 88 내지 4: 96, 1: 8 내지 5: 95, 1: 9 내지 1: 999, 1: 9 내지 5: 995, 1: 9 내지 1: 99, 1: 9 내지 2: 98, 1: 9 내지 3: 97, 1: 9 내지 4: 96, 1: 9 내지 5: 95 등 일 수 있으나 (이상, 박테리오파지의 중량: 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 중량), 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 조성물 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등에서, 박테리오파지와 박테리오파지 안정성 개선용 조성물 중 무수황산나트륨의 비율은, 중량 기준으로, 4 내지 45%(w/w), 4 내지 40%(w/w), 4 내지 30%(w/w), 4 내지 20%(w/w), 4 내지 18%(w/w), 4 내지 15%(w/w), 4 내지 10%(w/w), 4 내지 5%(w/w), 4 내지 4.5%(w/w), 4.5 내지 45%(w/w), 4.5 내지 40%(w/w), 4.5 내지 30%(w/w), 4.5 내지 20%(w/w), 4.5 내지 18%(w/w), 4.5 내지 15%(w/w), 4.5 내지 10%(w/w), 4.5 내지 5%(w/w), 15 내지 45%(w/w), 15 내지 40%(w/w), 15 내지 30%(w/w), 15 내지 20%(w/w), 15 내지 18%(w/w), 18 내지 45%(w/w), 18 내지 40%(w/w), 18 내지 30%(w/w), 18 내지 20%(w/w), 20 내지 45%(w/w), 20 내지 40%(w/w), 20 내지 30%(w/w), 30 내지 45%(w/w), 30 내지 40%(w/w), 또는 40 내지 45%(w/w) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 예에서, 상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 또는, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는 조성물 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등은,
45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 보관 시,
0일 차에 측정한 박테리오파지의 역가과 비교하여 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 7일 후, 8일 후, 9일 후, 10일 후, 11일 후, 12일 후, 13일 후, 또는 14일 후 측정한 박테리오파지의 역가가 2 log(pfu/g) 이하, 1.9 log(pfu/g) 이하, 1.8 log(pfu/g) 이하, 1.7 log(pfu/g) 이하, 1.6 log(pfu/g) 이하, 1.5 log(pfu/g) 이하, 또는 1.4 log(pfu/g) 이하, 예컨대 1.4 log(pfu/g) 감소하거나, 또는,
20% 이하, 19% 이하, 18% 이하, 17% 이하, 16% 이하, 또는 15% 이하로 감소할 수 있다.
일 예에서, 상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨, 또는, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는 조성물, 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등 은, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 조성물 과 비교하여,
45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 보관 시,
0일 차에 측정한 박테리오파지의 역가과 비교하여 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 7일 후, 8일 후, 9일 후, 10일 후, 11일 후, 12일 후, 13일 후, 또는 14일 후 측정한 박테리오파지의 역가 감소량 (log(pfu/g))이 0.5 내지 3, 0.5 내지 2.5, 0.5 내지 2, 0.5 내지 1.5, 0.6 내지 3, 0.6 내지 2.5, 0.6 내지 2, 0.6 내지 1.5, 0.7 내지 3, 0.7 내지 2.5, 0.7 내지 2, 0.7 내지 1.5, 0.8 내지 3, 0.8 내지 2.5, 0.8 내지 2, 0.8 내지 1.5, 0.9 내지 3, 0.9 내지 2.5, 0.9 내지 2, 0.9 내지 1.5, 1 내지 3, 1 내지 2.5, 1 내지 2, 1 내지 1.5, 0.5 이상, 0.6 이상, 0.7 이상, 0.8 이상, 0.9 이상, 1.0 이상, 또는 1.1 이상, 예컨대 1.1만큼 더 낮거나, 또는,
5 내지 20%p, 5 내지 15%p, 6 내지 20%p, 6 내지 15%p, 7 내지 20%p, 7 내지 15%p, 8 내지 20%p, 8 내지 15%p, 9 내지 20%p, 9 내지 15%p, 10 내지 20%p, 10 내지 15%p, 5%p 이상, 6%p 이상, 7%p 이상, 8%p 이상, 9%p 이상, 10%p 이상, 또는 11%p 이상, 예컨대 11%p만큼 더 낮을 수 있다.
일 예에서, 상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 또는, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는 조성물, 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등은, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 조성물 과 비교하여,
45 내지 60 ℃, 45 내지 58 ℃, 45 내지 55 ℃, 45 내지 52 ℃, 45 내지 50 ℃, 45 내지 48 ℃, 48 내지 60 ℃, 48 내지 58 ℃, 48 내지 55 ℃, 48 내지 52 ℃, 48 내지 50 ℃, 50 내지 60 ℃, 50 내지 58 ℃, 50 내지 55 ℃, 또는 50 내지 52 ℃의 온도 조건; 및/또는
80 내지 100%, 80 내지 99%, 80 내지 98%, 80 내지 97%, 80 내지 96%, 80 내지 95%, 80 내지 92%, 80 내지 90%, 80 내지 88%, 80 내지 85%, 85 내지 100%, 85 내지 99%, 85 내지 98%, 85 내지 97%, 85 내지 96%, 85 내지 95%, 85 내지 92%, 85 내지 90%, 85 내지 88%, 90 내지 100%, 90 내지 99%, 90 내지 98%, 90 내지 97%, 90 내지 96%, 90 내지 95%, 90 내지 92%, 95 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 98%, 95 내지 97%, 또는 95 내지 96%의 상대 습도 (relative humidity) 조건에서 1일 내지 7일, 1일 내지 14일, 7일 내지 14일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 보관 시,
박테리오파지의 역가가 2 내지 40%, 2 내지 35%, 2 내지 30%, 2 내지 25%, 2 내지 20%, 2 내지 15%, 2 내지 10%, 5 내지 40%, 5 내지 35%, 5 내지 30%, 5 내지 25%, 5 내지 20%, 5 내지 15%, 5 내지 10%, 10 내지 40%, 10 내지 35%, 10 내지 30%, 10 내지 25%, 10 내지 20%, 10 내지 15%, 2% 이상, 3% 이상, 4% 이상, 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 또는 15% 이상 높은 것일 수 있다.
상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는 조성물 예컨대, 사료 조성물, 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등)은, 고온다습 조건 등의 극한 환경에서 장기간 보관 시에도 박테리오파지의 역가 감소량이 낮아 박테리오파지를 안정적으로 보관할 수 있는 장점이 있다.
이에 상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 포함하는 조성물은 가정, 산업, 의학, 및 환경분야에서의 구체적인 목적에 맞추어 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 일 예에서 사료 조성물 (사료 첨가제 조성물을 포함한다), 식품 조성물, 약학 조성물, 또는 항균용 조성물 등의 형태로, 제조될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 포함하는 사료 조성물을 제공한다.
본 출원에서, "사료"란, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 일 예에 따른 사료 조성물에는 농후사료, 및/또는 특수사료가 추가로 포함될 수 있다. 상기 농후사료는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자 열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말 찌꺼기의 주성분인 잔존 녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물을 농축시킨 것인 피시솔루블 (fish soluble), 육분, 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카세인을 제조할 때의 잔액인 훼이 (whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질사료, 효모, 클로렐라, 및/또는 해조류 등일 수 있다.
일 예에 따른 사료 조성물은 최종적으로 동물이 섭취하는 형태의 사료, 사료에 배합될 수 있는 식이 보조제, 및/또는 사료 첨가제를 의미할 수 있다. 상기 식이 보조제란, 예를 들어 치료제 또는 소화제를 동물에 제공하는 제제 함유 조성물로, 통상 생체의 열량 섭취 공급원, 즉 에너지 공급원은 아니지만, 통상의 동물 사료에 추가하여 섭취되는 조성물을 의미할 수 있다. 상기 사료 첨가제란, 영양소 보충 및 체중감소 예방, 사료 내 섬유소의 소화 이용성 증진, 유질개선, 번식장애 예방 및 수태율 향상, 하절기 고온 스트레스 예방 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 의미할 수 있다. 상기 사료 첨가제가 첨가될 수 있는 사료는 시판되는 사료, 또는 곡물류, 근과류, 식품가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류, 곡물부산물류, 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 단세포 단백질, 동물성 플랑크톤류, 남은 음식물 등으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 예에서, 상기 사료 조성물은 사료 첨가제일 수 있고, 일 예에 따른 사료 첨가제가 사료 (예를 들면, 동물에 최종적으로 섭취되는 배합사료 및/또는 단미사료)에 배합될 때, 전체 사료 중량을 기준으로 0.001% 이상, 0.005% 이상, 0.01% 이상, 0.05% 이상, 0.1% 이상, 0.5% 이상, 1% 이하, 0.5% 이하, 0.1% 이하, 0.05% 이하, 0.01% 이하, 0.005% 이하, 0.001 내지 1%, 0.001 내지 0.5%, 0.001 내지 0.1%, 0.001 내지 0.05%, 0.001 내지 0.01%, 0.001 내지 0.005%, 0.005 내지 1%, 0.005 내지 0.5%, 0.005 내지 0.1%, 0.005 내지 0.05%, 0.005 내지 0.01%, 0.01 내지 1%, 0.01 내지 0.5%, 0.01 내지 0.1%, 0.01 내지 0.05%, 0.05 내지 1%, 0.05 내지 0.5%, 0.05 내지 0.1%, 0.1 내지 1%, 0.1 내지 0.5%, 또는 0.5 내지 1%의 중량으로 첨가되어 사료 원료, 보조 사료, 보조제, 및/또는 일 예에 따른 유효성분 외 다른 종류의 첨가제 등과 배합될 수 있다.
상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 사료에 혼합하여 공급함으로써, 사료 내 세균을 감소시키거나 제거할 수 있다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 혼합하는 단계를 포함하는, 사료 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 사료 조성물은 앞에서 설명한 바와 같다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 박테리오파지는 세균을 특이적으로 사멸시키므로, 세균 감염 예방을 위하여 가공 식품 또는 비가공 식품 또는 식재료의 처리에 사용될 수 있다. 일 예에 따른 식품 조성물은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등을 의미할 수 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
상기 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 식품에 혼합하여 공급함으로써, 식품 내 세균을 감소시키거나 제거할 수 있다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 혼합하는 단계를 포함하는, 식품 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 식품 조성물은 앞에서 설명한 바와 같다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 포함하는, 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균의 감염 또는 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균에 의하여 유발되는 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 다른 예는 상기 박테리오파지 및 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 약학적 유효량을 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균의 감염 또는 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균에 의하여 유발되는 질병의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균의 감염 또는 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균에 의하여 유발되는 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 박테리오파지는 세균(예컨대, 에스케리챠속, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균)을 특이적으로 사멸시키므로, 이에 의해 유발되는 질병의 예방, 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
상기 에스케리챠속 세균은 대장균 (E. coli), E. albertii, E. fergusonii, E. hermannii, 또는 E. vulneris 등일 수 있고, 상기 살모넬라속 세균은 S. bongori 또는 S. enterica 등일 수 있고, 상기 클로스트리듐속 세균은 보툴리누스균 (C. botulinum), 파상풍균 (C. tetani), 가스괴저균 (C. perfringens), C. hisolyticum, C. sordellii, 또는 C. butyricum 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 에스케리챠속 세균의 감염 또는 이에 의하여 유발되는 질병은 장염, 크론병, 궤양성 대장염, 세균성이질, 요로감염증, 피부감염, 균혈증, 또는 패혈증 등일 수 있고, 상기 살모넬라속 세균의 감염 또는 이에 의하여 유발되는 질병은 살모넬라균 감염증(Salmonellosis), 살모넬라 식중독 등일 수 있고, 상기 클로스트리듐속 세균의 감염 또는 이에 의하여 유발되는 질병은 보톨리누스 식중독, 클로스트리듐 퍼프린젠스 식중독, 클로스트리듐 디피실리 유도 결장염, 클로스트리듐 괴사성 장염, 호중구감소성 소장결장염, 또는 신생아 괴사성 전장염 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 예에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
일 예에 따른 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있고, 본 출원에서, "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 출원 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 사용된 본 출원의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 일 예에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
일 예에 따른 약학 조성물의 투여량은 예를 들면, 포유동물에 하루 동안 0.0001 내지 10,000mg/g, 0.0001 내지 5,000mg/g, 0.0001 내지 1,000mg/g, 0.0001 내지 500mg/g, 0.0001 내지 100mg/g, 0.0001 내지 50mg/g, 또는 0.0001 내지 10mg/g, 으로 투여할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 출원의 약학 조성물의 투여 빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 출원의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 명세서에서 제공되는 약학 조성물의 투여 대상은 인간, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 염소, 토끼, 마우스, 래트 등을 포함하는 포유동물 또는 이로부터 분리된 세포, 조직, 또는 이의 배양물일 수 있으며, 일 예에서 상기 대상은 앞서 설명한 바와 같은 질병의 예방, 개선, 및/또는 치료를 필요로 하거나, 상기 질병을 가지는 개체 (인간 등의 포유동물) 또는 이로부터 분리된 세포, 조직, 또는 이의 배양물일 수 있다. 상기 질병은 대장균, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균의 감염 또는 대장균, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균에 의하여 유발되는 질병일 수 있다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 혼합하는 단계를 포함하는, 약학적 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 앞에서 설명한 바와 같다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨(또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 항균 활성은 세균의 성장을 저해하거나, 및/또는 사멸시키는 등의 활성을 의미할 수 있으며, 항균용 조성물은 상기 항균 활성을 가지는 조성물을 의미할 수 있다. 상기 항균 활성은 항생 활성 등과 혼용되어 사용될 수 있으며, 상기 항균용 조성물은 세균의 성장 저해능 및/또는 사멸능을 갖는 모든 형태의 제제를 포괄하는 것으로, 특별한 언급이 없는 한 항균제, 항생제, 방부제, 살균제, 소독제 등과 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
일 예에서, 상기 항균용 조성물은 세균 감염을 막기 위한 제제를 총칭하는 것으로, 일반 생활 소독제, 식품 및 조리 장소 및 설비의 소독제, 양계장, 축사 등의 건물, 축체, 음수, 깔짚, 난좌, 운반차량, 식기 등의 각종 생육 용품의 소독 등에 사용될 수 있다. 상기 세균은 대장균, 살모넬라속, 또는 클로스트리듐속 세균일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은, 박테리오파지 및 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 혼합하는 단계를 포함하는, 항균용 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 항균용 조성물은 앞에서 설명한 바와 같다.
다른 양상은, 박테리오파지와 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 혼합하는 단계를 포함하는, 박테리오파지 안정성 개선 방법을 제공한다. 상기 박테리오파지 또는 박테리오파지 안정성 개선은 앞에서 설명한 바와 같다.
다른 양상은, 박테리오파지와 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 항균이 필요한 대상에 적용하는 단계를 포함하는, 항균 방법을 제공한다. 상기 항균 방법은 세균의 방제 방법 (세균을 방제하는 방법), 세균의 감소 방법 (세균을 감소시키는 방법), 세균의 억제 방법 (예컨대, 세균 생장 억제 방법 등), 또는 세균 사멸 방법 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은, 박테리오파지와 무수황산나트륨 (또는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물)을 세척이 필요한 대상에 적용하는 단계를 포함하는, 세척 방법을 제공한다.
본 출원은 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 사용하여 박테리오파지의 보관 안정성을 향상시킬 수 있다.
도 1은 박테리오파지 샘플 (5종 혼합 박테리오파지 4 g 및 무수황산나트륨을 포함하지 않는 부형제)을 50±2 ℃, 90±5% RH 조건에서 보관하고 0일차, 7일차 및 14일차에서 박테리오파지의 역가를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 박테리오파지 샘플 (5종 혼합 박테리오파지 4 g 및 무수황산나트륨 20%(w/w)를 포함하는 부형제)을 50±2 ℃, 90±5% RH 조건에서 보관하고 0일차, 7일차 및 14일차에서 박테리오파지의 역가를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 박테리오파지 샘플 (5종 혼합 박테리오파지 4 g 및 무수황산나트륨 50%(w/w)를 포함하는 부형제)을 50±2 ℃, 90±5% RH 조건에서 보관하고 0일차, 7일차 및 14일차에서 박테리오파지의 역가를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 박테리오파지 샘플을 50±2 ℃, 90±5% RH 조건에서 보관하고 0일차와 14일차에서 측정한 박테리오파지의 역가 감소(Δlog(pfu/g))를 그래프로 나타낸 것이다. 부형제로 무수황산나트륨을 포함하지 않는 부형제, 무수황산나트륨 20%(w/w)를 포함하는 부형제, 및 무수황산나트륨 50%(w/w)를 포함하는 부형제를 사용하였다.
이하 본 발명을 다음의 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 그러나 이들은 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 무수황산나트륨의 저장 안정성 평가
1. 박테리오파지 샘플 제작
5종 혼합 박테리오파지 4 g을 부형제 36 g과 혼합하여, 아래 표 1과 같이 박테리오파지 샘플 1 내지 샘플 3을 샘플당 2포씩 제조하였다. 샘플 1은 밀가루 (사조동아원, 밀가루(2등급), 중력2등) 90%(w/w), 실리카 (FuJian SanMing Zheng Yuan Chemical, Precipitated Sillica, ZJ-516B) 5%(w/w), 및 탄산칼슘 (Omya Korea, 탄산칼슘) 5%(w/w)을 혼합하여 제조한 부형제를 사용하였다. 샘플 2 및 샘플 3은 상기와 같이 밀가루, 실리카, 및 탄산칼슘을 혼합하여 제조한 부형제 성분(기존 부형제)과 무수황산나트륨을 혼합하여 제조한 혼합 부형제를 사용하였다. 아래 표 1에 샘플 1 내지 샘플 3의 조성을 정리하였다.
5종 혼합 박테리오파지는 아래와 같은 조성으로 준비하였다:
CJ7: 6×109 PFU/g, CJ11: 4×109 PFU/g, CJ23: 1×109 PFU/g, CJ24: 5×109 PFU/g, CJ22: 3×108 PFU/g.
박테리오파지 샘플 조성
샘플1 5종 혼합 박테리오파지 4 g부형제 36 g (기존 부형제 100%(w/w))
샘플2 5종 혼합 박테리오파지 4 g혼합 부형제 36 g (기존 부형제 80%(w/w)+무수황산나트륨 20%(w/w))
샘플3 5종 혼합 박테리오파지 4 g혼합 부형제 36 g (기존 부형제 50%(w/w)+무수황산나트륨 50%(w/w))
상기 박테리오파지의 종명, 타겟 균주 및 입수처는 아래 표 2와 같다:
실험군 파지종명 타겟균종 기탁번호
CJ7 Siphoviridae Salmonella spp. KCCM11030P
CJ11 Siphoviridae Salmonella spp. KCCM11208P
CJ23 Podoviridae Escherichia coli KCCM11365P
CJ24 Siphoviridae Escherichia coli KCCM11462P
CJ22 Siphoviridae Clostridium perfringens KCCM11364P
2. 보관 조건
각 샘플 40 g을 알루미늄 백에 넣고 heat sealing 3회 진행하였다. 각 샘플은 50±2 ℃, 90±5% RH (relative humidity, 상대습도) 조건에서 보관하였다.
3. 파지 titer 측정
샘플 보관 후 7일 후, 14일 후 각각의 샘플을 SM 버퍼 (5.8 g/L NaCl, 2 g/L MgSO4·7H2O, 0.05 M Tris-Cl (pH 7.5))에 10배 희석하였다 (샘플 20 g + SM 버퍼 180 ml). 희석액 50 ml를 원심분리 (10,000 rpm, 10분) 후, 박테리오파지 용액을 0.2 μm 필터로 여과하였다.
4. Plaque assay titration
박테리오파지 용액을 적정 농도로 serial dilution 후, 0.7% soft agar (BD DIFCO, Cat. No. 44164) 5 ml에 희석된 박테리오파지 샘플 100 μl와 파지별 indicator 균주 50 μl (OD600 nm=2)를 혼합하였다.
일반 LB (Luria-Bertani, 호기) 또는 BHI (Brain Heart Infusion, 혐기) 배지에 pouring 하여 plating 한 후, 인큐베이터에 배양(호기; 30 ℃, 18h, 혐기; 37 ℃, 18h) 후 plaque 수를 측정하여 박테리오파지를 정량하였다.
5. 실험결과
샘플 보관 7일 후 및 14일 후, 각 샘플의 박테리오파지 정량 결과를 도 1 내지 3 및 표 2 내지 표 4에 나타내었다 (샘플1: 도 1, 표 2; 샘플2: 도 2, 표 3; 샘플3: 도 3, 표 4). 0일 차의 역가값 (log(pfu/g)) 및 14일 차의 역가값 (log(pfu/g))의 차이를 Δlog로 나타내었으며, 이를 0일 차의 역가값으로 나누어 역가 감소량을 기재하였다. 도 4에 샘플 1 내지 샘플 3에 포함되어 있는 5종 박테리오파지 (CJ7, CJ11, CJ23, CJ24, CJ22)의 샘플 보관 14일 후 역가 감소(Δlog)를 그래프로 나타내었다.
샘플1 0 day
(pfu/g)
14 day
(pfu/g)
0 day
log(pfu/g)
14 day
log(pfu/g)
Δlog 역가 감소량
CJ 7 6.1E+09 3.7E+08 9.8 8.6 1.2 12.24%
CJ 11 4.3E+09 1.3E+06 9.6 6.1 3.5 36.46%
CJ 23 1.2E+09 1.0E+06 9.1 6.0 3.1 34.07%
CJ 24 5.6E+09 1.0E+07 9.7 7.0 2.7 27.84%
CJ 22 3.8E+08 2.7E+06 8.6 6.4 2.2 25.58%
샘플2 0 day
(pfu/g)
14 day
(pfu/g)
0 day
log(pfu/g)
14 day
log(pfu/g)
Δlog 역가 감소량
CJ 7 4.9E+09 1.9E+09 9.7 9.3 0.4 4.12%
CJ 11 3.9E+09 1.7E+07 9.6 7.2 2.4 25.00%
CJ 23 1.2E+09 1.2E+07 9.1 7.1 2.0 21.98%
CJ 24 6.7E+09 1.9E+09 9.8 9.3 0.6 6.12%
CJ 22 3.9E+08 2.2E+07 8.6 7.3 1.2 13.95%
샘플3 0 day
(pfu/g)
14 day
(pfu/g)
0 day
log(pfu/g)
14 day
log(pfu/g)
Δlog 역가 감소량
CJ 7 4.9E+09 3.4E+09 9.7 9.5 0.2 2.06%
CJ 11 3.2E+09 3.4E+07 9.5 7.5 2.0 21.05%
CJ 23 6.1E+09 7.2E+07 9.8 7.9 1.9 19.39%
CJ 24 6.1E+09 2.0E+09 9.8 9.3 0.5 5.10%
CJ 22 3.8E+08 2.6E+07 8.6 7.4 1.2 13.95%
정량 결과, 기존 부형제 (샘플1) 사용 시 부형제 내 5종의 박테리오파지 (CJ7, CJ11, CJ23, CJ24, CJ22)는 50±2 ℃, 90±5% RH에서 14일 동안 노출되었을 때 평균 2.5 로그의 박테리오파지 역가 감소 (평균 27.2% 감소)를 보였다 (도 1, 표 3).
반면, 부형제와 무수황산나트륨을 혼합한 혼합 부형제 사용 시 부형제 내 5종의 박테리오파지는 각각 약 1.3 로그 (평균 14.2% 감소) (샘플2, 도 2, 표 4), 1.2 로그 (평균 12.3% 감소) (샘플3, 도 3, 표 5)의 박테리오파지 역가 감소를 보였다.
즉, 기존 부형제와 비교하여 무수황산나트륨을 혼합한 혼합 부형제 사용 시 평균 1.3 로그의 박테리오파지 안정성 유지 효과를 나타내었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (15)

  1. 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 무수황산나트륨을 5 내지 50중량%로 포함하는 것인, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 미오비리대(Myoviridae), 시포비리대(Siphoviridae), 및 포도비리대(Podoviridae) 박테리오파지로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 박테리오파지의 안정성을 개선하기 위한 것인, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 사료용, 식품용, 또는 항균용 조성물의 제조에 사용하기 위한, 박테리오파지 안정성 개선용 조성물.
  5. 박테리오파지 및 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는, 사료 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 사료 조성물 내 포함되는 박테리오파지 및 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 혼합비는, 중량 기준으로 1: 9 내지 1: 99 (이상, 박테리오파지의 중량: 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 중량)인 것인, 사료 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 사료 조성물은,
    45 내지 60 ℃의 온도 및 80 내지 100%의 상대 습도 조건에서 1일 내지 14일 보관 시,
    사료 조성물 내 포함되는 박테리오파지의 역가가, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 사료 조성물보다 10% 이상 높은 것인, 사료 조성물.
  8. 박테리오파지 및 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는, 식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 식품 조성물 내 포함되는 박테리오파지 및 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 혼합비는, 중량 기준으로 1: 9 내지 1: 99 (이상, 박테리오파지의 중량: 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 중량)인 것인, 식품 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 식품 조성물은,
    45 내지 60 ℃의 온도 및 80 내지 100%의 상대 습도 조건에서 1일 내지 14일 보관 시,
    식품 조성물 내 포함되는 박테리오파지의 역가가, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 식품 조성물보다 10% 이상 높은 것인, 식품 조성물.
  11. 박테리오파지 및 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 포함하는, 항균용 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항균용 조성물 내 포함되는 박테리오파지 및 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 혼합비는, 중량 기준으로 1: 9 내지 1: 99 (이상, 박테리오파지의 중량: 박테리오파지 안정성 개선용 조성물의 중량)인 것인, 항균용 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 항균용 조성물은,
    45 내지 60 ℃의 온도 및 80 내지 100%의 상대 습도 조건에서 1일 내지 14일 보관 시,
    항균용 조성물 내 포함되는 박테리오파지의 역가가, 무수황산나트륨을 포함하지 않는 항균용 조성물보다 10% 이상 높은 것인, 항균용 조성물.
  14. 박테리오파지와 무수황산나트륨을 포함하는 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 혼합하는 단계를 포함하는, 박테리오파지 안정성 개선 방법.
  15. 박테리오파지 및 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 박테리오파지 안정성 개선용 조성물을 항균이 필요한 대상에 적용하는 단계를 포함하는, 항균 방법.
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