KR20220164351A - 케피어 유래 유산균의 배양물, 및 이를 포함하는 항균 조성물 및 기능성 식품 - Google Patents
케피어 유래 유산균의 배양물, 및 이를 포함하는 항균 조성물 및 기능성 식품 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 유제품 및 첨가제를 포함하는 배지에서 배양된 케피어 유래 유산균의 배양물, 및 이를 포함하는 항균 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다. 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 유해 병원균인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 살모넬라 엔테리카(Salmonella enteritidis), 대장균(Escherichia coli), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii)에 대하여 항균 활성을 나타낸다. 이에 따라, 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 유해 병원균에 의한 오염을 방지하는 천연 항균제로서 식품, 화장품 등에 사용될 수 있고, 인체에 상재하는 유해 병원균의 수를 감소시키기 위한 기능성 식품에 사용될 수 있으며, 유해 병원균에 의해 발생하는 식중독을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 케피어 유래 유산균의 배양물, 및 이를 포함하는 항균 조성물 및 기능성 식품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 유제품 및 첨가제를 포함하는 배지에서 배양되어 유해 병원균에 대해 생육 억제 활성을 나타내는 케피어 유래 유산균의 배양물, 및 이를 포함하는 항균 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다.
세균은 자연계에 널리 분포하는 미생물의 일종이다. 대부분의 세균은 무해하거나 심지어 유익할 수 있지만, 일부 세균은 숙주에게 유해한 영향을 주고 병을 일으키기도 한다. 이와 같이 숙주에게 병을 일으키는 성질이 있는 세균을 병원균(pathogenic bacteria)이라고 하며, 병원균에 오염된 식품을 섭취할 경우 식중독 질환이 발병할 수 있고, 피부에 접촉 시 염증 등을 유발할 수 있다.
병원균에 의한 오염 및 질병 문제를 해결하기 위하여, 병원균의 성장을 억제하는 항균제가 다양한 분야에서 널리 사용되고 있다. 항균제는 형태 및 사용 목적에 따라 방부제, 항생제 등으로 분류될 수 있다. 방부제는 미생물의 증식에 의한 제품의 변질을 억제하기 위한 보존료를 의미한다. 방부제로는 주로 벤조일 페록사이드, 파라벤 등의 화학 합성 방부제가 사용되고 있으나, 피부에 접촉되면 독성을 일으킬 수 있다는 문제가 있어 대체재에 대한 개발이 필요하다. 또한, 항생제는 미생물의 생장을 억제하거나 사멸시키는 약제로, 미생물의 물질대사 과정에서 생성된 생물질 유래의 항균제를 의미한다. 항생제로는 현재 수많은 종류의 약제가 개발되어 있지만, 병원균이 특정 항생제에 내성을 나타내는 경우 대체재가 필요하므로 항생제 개발은 지속적으로 이루어져야 하는 연구 과제 중 하나이다.
이와 같은 항균제와 관련한 연구의 일종으로서, 프로바이오틱스(probiotics)를 이용하고자 하는 시도가 있다. 프로바이오틱스(probiotics)는 숙주의 건강에 이로움을 제공하는 살아있는 미생물, 즉 생균류를 의미한다. 프로바이오틱스는 여러 감염증을 방지하고 장내 불균형 위험을 감소시키는 것으로 주로 알려져 있으나, 최근 몇몇 연구들은 프로바이오틱스의 항균 활성을 보고하고 있다. 예를 들어, 대한민국 등록특허공보 제10-1839375호는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 녹농균 등(Pseudomonas aeruginosa)에 항균활성을 나타내는 균주로서 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) 균주를 개시하고 있다. 다만, 프로바이오틱스는 생균이므로 유통 및 보관 과정에서 균의 감소가 불가피하며, 체내 효능을 내기 위한 최소 균 수가 보장되어야 한다.
프로바이오틱스의 대안으로는 프로바이오틱스를 사균체, 배양액 등의 형태로 사용하는 포스트바이오틱스(postbiotics)를 이용할 수 있다. 포스트바이오틱스의 항균 활성과 관련하여, 대한민국 공개특허공보 제10-2015-0005486호에서는 울금을 기질로 유산균을 배양하여 얻은 발효겔이 대장균(Escherichia coli), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) 및 프로피오니박테리움 에크니(Propionibacterium acne)에 항균 작용을 나타내어, 화장품 원료 및 기능성 식품에 이용될 수 있다고 개시하고 있다. 다만 상기 기술에서는 3종의 병원균에 대해서만 항균 활성을 확인하였다.
한편, 케피어(Kefir)는 코카서스 산간 지방에서 유래한 발효유의 일종으로, 유산균(Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Acetobacter, 및 Streptococcus 종), 초산균 및 효모(Saccharomyces, Kluyveromyces, Torula 및 Candida 종)를 포함하는 다양한 미생물을 함유하고 있다. 케피어는 항돌연변이성, 콜레스테롤 저하, 항비만성, 지방간 예방 등의 효과를 갖는 것으로 알려지고 있지만, 케피어를 이용하여 우수한 항균 활성을 달성하기 위한 연구는 미흡한 실정이다.
이와 같은 상황에서, 본 발명의 발명자들은 케피어 유래 유산균을 배양시켜 얻은 배양물이 유해 병원균에 대해 항균 활성을 나타낼 뿐 아니라, 특히 케피어 유래 유산균을 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상의 유제품, 및 이스트(yeast) 및 덱스트로스(dextrose)로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제를 포함하는 배지에서 배양시켜 얻은 배양물이 8종의 유해 병원균에 대해 모두 우수한 항균 활성을 나타낸다는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 항균 활성이 우수한 케피어 유래 유산균의 배양물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 케피어 유래 유산균을, 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 유제품; 및 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 첨가제를 포함하는 배지에서 배양하여 수득된, 케피어 유래 유산균의 배양물을 제공한다.
본 발명에서, 상기 첨가제는 이스트를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 첨가제는 이스트 및 덱스트로스를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 이스트 및 덱스트로스의 중량비는 6:1 내지 1:4인 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 첨가제는 유제품에 대하여 1 내지 100g/L의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명에서, 상기 케피어 유래 유산균은 락토바실러스 케피어리(Lactobacillus kefiri) 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명에서, 상기 케피어 유래 유산균은 락토바실러스 케피어리 DH5(Lactobacillus kefiri DH5)인 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 배양물은 배지에 대해 케피어 유래 유산균을 1 x 103 내지 1 x 1010 CFU/ml 접종하여 배양한 것일 수 있다.
본 발명에서, 상기 배양물은 배양 후 배양액을 원심 분리하여 얻은 상등액일 수 있다.
본 발명에서, 상기 배양물은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 살모넬라 엔테리카(Salmonella enteritidis), 대장균(E. coli), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 병원균에 대해 항균 활성을 가질 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 항균 조성물은 항균 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 기능성 식품을 제공한다.
본 발명에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물은 유해 병원균에 대하여 항균 활성을 가지며, 특히 식중독 및 기타 피부질환을 유발하는 8종의 유해 병원균에 대해 생육 억제 효과를 나타낸다. 이에 따라, 상기 케피어 유래 유산균의 배양물은 유해 병원균에 의한 오염을 방지하는 천연 항균제로서 식품, 화장품 등에 사용될 수 있고, 인체에 상재하는 유해 병원균의 수를 감소시키기 위한 기능성 식품에 사용될 수 있으며, 유해 병원균에 의해 발생하는 식중독을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 사용된 디스크 디퓨전 어세이(disc diffusion assay)의 실험 절차를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 배양물 샘플 및 미배양 배지 샘플의 흡광도 차이를 측정하여 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 배양물 샘플 및 양성 대조군의 흡광도를 측정하여 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 배양물 샘플 및 미배양 배지 샘플의 흡광도 차이를 측정하여 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 배양물 샘플 및 양성 대조군의 흡광도를 측정하여 나타낸 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 케피어 유래 유산균의 배양물에 관한 것으로, 케피어 유래 유산균을 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상의 유제품, 및 이스트(yeast) 및 덱스트로스(dextrose)로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제를 포함하는 배지에서 배양시켜 수득한 배양물이 유해 병원균에 대해 항균 활성을 나타낸다는 것을 밝힌 발명이다.
본 발명에서, 상기 케피어 유래 유산균의 배양물은 8종의 유해 병원균에 대해 모두 항균 활성을 나타내므로 식품, 화장품 등 다양한 제품에서 균의 번식을 억제하는 항균제로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 상기 케피어 유래 유산균의 배양물을 섭취하거나 피부에 도포함으로써 인체에 존재하는 병원균을 감소시킬 수 있는 바, 기능성 식품, 기능성 화장품 등에 사용될 수 있고, 식중독 예방 또는 치료용 약학 조성물의 성분으로 사용될 수 있다.
본 발명에서, 용어 "배양물"이란 균주를 배지에 접종하고 배양시켜 얻을 수 있으며, 배양 과정에서 생성된 대사산물을 포함하는 의미로 해석된다. 구체적으로, 상기 배양물은 균주를 배지에 배양한 후 생성된 배양액; 배양액의 상등액, 농축액 또는 희석액; 배양액의 건조물 또는 정제물; 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 배양물은 균주를 배지에 배양하여 수득한 배양액에서 균주의 균체를 제거한 것일 수 있고, 더 바람직하게는, 배양액의 상등액일 수 있다.
본 발명에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물은, 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상의 유제품에 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제를 첨가하여 배지를 준비하는 단계; 및 상기 배지에 케피어 유래 유산균을 접종하여 배양하는 단계에 의해 수득할 수 있다.
본 발명에서, 케피어(kefir)는 코카서스 산간 지방에서 유래한 발효유의 일종으로, 케피어는 유산균과 효모 복합체인 케피어 그레인으로 불리우는 균종을 개시제로 하여 우유를 발효시켜 얻어진 요구르트상의 음료를 의미한다.
본 발명에서, 케피어 유래 유산균은 락토바실러스 케피어리(Lactobacillus kefiri) 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.
바람직하게, 본 발명에서 적용 가능한 케피어 유래 유산균은 락토바실러스 케피어리 DH1, 락토바실러스 케피어리 DH3, 락토바실러스 케피어리 DH5, 류코노스톡 메센테로이데스 DH1606, 류코노스톡 메센테로이데스 DH1607, 류코노스톡 메센테로이데스 DH1608 및 류코노스톡 메센테로이데스 DH1609로부터 선택된 1종 이상이다. 본 발명의 실시예에서는, 락토바실러스 케피어리 DH5의 배양물이 8종의 유해 병원균에 대하여 우수한 항균 활성을 나타낸다는 것을 확인하였다.
본 발명에서, 케피어 유래 유산균을 배양하는 배지의 주 성분으로는 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상의 유제품을 이용할 수 있으며, 상기 유제품에 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제를 첨가하는 것을 특징으로 한다. 상기 배지를 이용하여 케피어 유래 유산균을 배양하는 경우, MRS 배지와 같은 통상적인 배지를 이용한 배양물에 비해 더 다양한 병원균에 대하여 우수한 항균 활성을 나타낼 수 있다.
유청(whey)은 우유가 응고된 뒤 남은 액체를 의미하는 것으로, 보통 치즈나 카제인 제조 과정에서 부산물로 생성된다. 탈지유(skim milk)는 전지유(whole milk)에서 지방을 제거한 것으로, 1중량% 이하, 바람직하게는 0.5중량% 이하의 지방을 갖는 우유를 의미한다. 이러한 유제품은 유산균의 배양 배지로 종종 사용되지만, 본 발명의 실시예에 따르면 케피어 유래 유산균을 유청 또는 탈지유에서 배양하는 경우에는 항균 활성을 나타내지 않았다.
한편, 이스트(yeast)는 균류의 일종으로 빵과 맥주의 발효에 사용되는 균으로 알려져 있으며, 덱스트로스(dextrose)는 포도당의 이성질체 중 우선형을 갖는 D형 포도당, 즉 D-글루코스(D-glucose)를 일컫는 말이다. 이러한 이스트 및 덱스트로스는 단순히 균의 생육을 돕기 위한 성분으로 사용될 뿐, 유제품 배지에 이들을 첨가하여 케피어 유래 유산균을 배양하는 경우, 케피어 유래 유산균의 대사산물이 현저히 우수한 항균 활성을 나타낼 수 있다는 사실은 밝혀진 바 없었다.
본 발명에서는, 유청 또는 탈지유를 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제와 혼합한 배지에서 케피어 유래 유산균을 배양하는 경우, 유산균의 대사산물이 8종의 유해 병원균에 대해 우수한 항균 활성을 나타낸다는 것을 발견하였다.
바람직하게, 상기 첨가제는 이스트 및 덱스트로스를 모두 포함하는 것일 수 있다. 이 때, 이스트 및 덱스트로스는 6:1 내지 1:4, 바람직하게는 5:1 내지 3:1의 중량비로 사용될 수 있다. 본 발명의 실시예에서는, 이스트 또는 덱스트로스를 첨가한 배지와 비교하여 이스트 및 덱스트로스를 모두 포함하는 배지에서 배양하는 경우 항균 활성이 더 높은 것을 확인하였다. 또한, 첨가제의 중량비가 4:1, 1:1, 1:4인 경우에서 모두 항균 활성이 우수하게 나타나며, 특히 4:1인 경우 가장 우수하다는 것을 확인하였다.
상기 배지에서, 첨가제는 유제품 1L를 기준으로 1 내지 100g/L, 바람직하게는 10 내지 50g/L, 더 바람직하게는 20 내지 30g/L의 양으로 첨가될 수 있다. 배지에서 첨가제의 함량이 너무 적은 경우에는 유산균 배양이 제대로 진행되지 않을 수 있고, 배양물의 항균 활성이 저하될 수 있다. 또한, 첨가제를 너무 많이 사용하는 경우, 과량의 첨가제가 유산균의 생육을 방해하는 문제가 발생할 수 있다. 특히, 이스트를 너무 많이 첨가하면 배지의 pH가 지나치게 저하되어 유산균 생육에 적합하지 않을 수 있고, 덱스트로스를 너무 많이 첨가하면 삼투압이 상승하여 오히려 유산균의 생육이 저해될 수 있다.
상기 배지는 상기 유제품 및 첨가제를 혼합한 후, 멸균하여 준비될 수 있다. 멸균은 80℃ 이상의 온도에서 1분 이상 수행될 수 있다.
본 발명에서, 준비된 배지에 케피어 유래 유산균을 접종하여 배양함으로써 배양물을 얻을 수 있다.
본 발명에서, 상기 케피어 유래 유산균은 배지에 대해 1 x 103 내지 1 x 1010 CFU/ml, 바람직하게는 1 x 105 내지 1 x 108 CFU/ml의 양으로 접종될 수 있으며, 배양은 10 내지 200시간, 바람직하게는 24시간 내지 120시간, 더 바람직하게는 48 내지 96시간 동안 수행될 수 있다. 유산균의 양이 많은 경우 배양 시간을 줄이고, 양이 적은 경우에는 배양 시간을 늘려, 이로부터 생산되는 대사산물의 양을 조절할 수 있다.
배양이 완료되면, 상기 배양물에서 균체를 제거하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 배양물을 원심분리한 후 상등액만을 수득함으로써, 균체가 제거된 배양물을 얻을 수 있다. 이후, 수득한 상등액은 여과, 동결건조 등의 단계를 거칠 수 있다.
상기 원심분리는, 1,000 내지 5,000 x g, 구체적으로 2,000 내지 4,000 x g의 속도로, 1분 내지 1시간, 구체적으로 5분 내지 30분 수행될 수 있다.
본 발명에서는 상기 케피어 유래 유산균의 배양물을 바실러스 세레우스, 녹농균, 황색포도상구균, 살모넬라 엔테리카, 대장균, 리스테리아 모노사이토제네스, 엔테로코쿠스 페칼리스 및 크로노박터 사카자키에 처리한 결과, 병원균의 생육이 억제되는 것을 확인하였다. 상기 8종의 유해 병원균의 유해성 및 관련 질환에 대해 설명하면 아래와 같다.
먼저, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 각종 식품에서 검출될 수 있는 병원균으로, 조리된 식품을 실온에 오래 방치하면 바실러스 균이 이상 증식하게 된다. 바실러스 세레우스는 사람과 동물에게 구토형 또는 설사형 식중독을 유발할 수 있다. 상기 바실러스 세레우스는 페니실린 등의 항생제에 내성을 갖는 것으로 알려져 있다.
녹농균(Pseudomonas aeruginosa)은 토양이나 물속 등 자연계에 광범위하게 존재하는 강한 병원성 균으로, 폐렴 및 축농증, 요도염, 전립선염, 수술 후 창상 감염, 골관절염 등 각종 감염증을 유발할 수 있다. 또한, 녹농균이 피부에 접하면 피부 발진이 나타날 수 있다. 상기 녹농균은 사람을 포함하여 동물에서도 질병을 일으키며, 면역이 저하된 환자에게서 쉽게 질병을 일으키는 기회감염세균의 일종이다.
황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 자연계에 널리 분포되어 있는 세균의 하나이며 식중독을 일으키는 장독소를 생성한다. 황색포도상구균은 구토, 설사와 심한 복통을 유발하는 급성위장염 증상의 식중독을 유발할 수 있으며, 식중독뿐만 아니라 피부의 화농, 중이염, 방광염 등 화농성질환을 일으키는 원인균으로도 알려져 있다. 황색포도상구균은 페니실린, 메티실린, 젠타마이신, 스트렙토마이신 등 여러 항생물질에 대해 내성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
살모넬라 엔테리카(Salmonella enteritidis)는 식품 속이나 표면 또는 주변 환경에서 잘 생존하는 것으로 알려져 있고, 대부분의 포유류 가축과 조류, 파충류, 양서류, 곤충 등에 폭넓게 분포한다. 살모넬라 균에 감염된 동물의 고기, 살균하지 않은 계란, 우유나 그 밖에 생산품들이 살모넬라증의 원인이 된다. 살모넬라 엔테리카는 장티푸스, 파라티푸스 등의 전염병 또는 감염형 식중독으로서 급성위장염을 일으킬 수 있다.
대장균(Escherichia coli)은 세균성 식중독의 원인체 중 가장 높은 비율을 차지하는 것으로, 날 것 혹은 제대로 요리되지 않은 특히, 덜 익힌 간 쇠고기나 다진 쇠고기 그리고 발효되지 않은 우유 등에 분포한다. 대장균은 영유아뿐만 아니라 가축 및 성인의 설사질환을 유발할 수 있다.
리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)는 30%의 치사율을 갖은 치명적인 식중독균 중의 하나로, 산모와 태아간 전염이 가능하며, 동물에게도 병을 일으킬 수 있어 수의학계에서도 위해요소로 분류된다. 리스테리아 모노사이토제네스는 모든 생식품에 잠재적으로 존재하며, 조리된 후 오염에 의해 증식할 수 있으므로 즉석섭취조리식품에서 우려스러운 위해요소 중 하나이다.
엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis)는 식품 표면에 잘 축적하는 식중독 원인균의 일종으로, 토양, 물, 식물, 우유, 육류 등의 비가열 식품에 존재할 수 있고, 살균 처리한 가공식품에도 잔류할 수 있다. 엔테로코쿠스 페칼리스는 복통, 설사, 구역질, 구토 등의 증상을 일으킬 수 있고, 치주염, 요로감염증, 농양, 패혈증을 유발할 수 있는 병원성 세균이다.
크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii)는 분유류와 곡류 조제식 등에 존재하는 식중독 원인균으로서, 영유아 식품, 특히 분유에 오염돼 영유아에게 뇌수막염과 같은 심각한 질병을 일으키거나, 심한 경우 사망에 이르게 할 수 있는 치명적인 병원균이다.
이와 같이, 상기 8종의 유해 병원균은 식중독 및 기타 피부질환을 유발하는 주요 원인균이다. 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 상기 8종의 유해 병원균에 대해 항균 활성을 나타내므로, 식품 및 화장료 조성물에서 병원균에 의한 오염을 방지하는 항균제 역할을 할 수 있다. 또한, 섭취 또는 피부에 적용시 인체 내 유해 병원균의 생육을 억제할 수 있으므로, 기능성 식품, 기능성 화장품 또는 식중독을 예방 또는 치료하는 약학 조성물에 적용될 수 있다. 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 기존에 사용되던 방부제, 항생제 등을 대체하는 천연 항균 소재로 사용할 수 있다.
이에 따라, 본 발명은 또한, 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시 형태에서, 본 발명에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물은 식품에 사용되어 유해 병원균의 번식을 막는 방부제로 사용될 수 있다. 본 발명에서 항균 활성을 확인한 8종의 유해 병원균은 모두 식품 매개 병원균으로서, 본 발명의 항균 조성물을 식품에 적용하면 식품에서 병원균의 생장을 효과적으로 억제할 수 있다.
본 발명의 다른 실시 형태에서, 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은, 화장료 조성물의 방부제로 사용되거나, 항균 기능을 갖는 기능성 화장료 조성물에 사용될 수 있다.
화장품은 다양한 미생물이 이용할 수 있는 유기물 및 무기물을 다량 함유하고 있기 때문에 미생물 오염 가능성이 높으며, 국내에서도 테스터 화장품에서 바실러스 균, 황색포도상구균 등의 병원균이 다수 검출되었다는 보고가 있다. 유해균이 산포된 화장품을 피부에 적용하게 되면 피부염을 일으킬 수 있으므로, 화장품 내 미생물 오염을 방지하기 위한 방부제의 개발이 중요하다. 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 병원균에 대한 항균 활성을 나타내므로 화장품의 천연 방부제로 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 인간의 피부에 상재하는 유해균의 생육을 억제하는 기능성 또한 나타낼 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있고, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 또는 스프레이로 이루어진 군에서 선택된 화장료 제형일 수 있으며, 상기 제형에 대하여 특별히 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 제형은 또한, 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있으며, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 화장료의 제형 또는 사용목적에 따라 어려움 없이 선정하여 배합할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 케피어 유래 유산균의 배양물 뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는 항균 기능성 식품을 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물을 식품에 적용함으로써 인체 내 유해 병원균의 생육을 억제하여 건강을 증진시킬 수 있고, 식중독에 의한 위험을 줄일 수 있는 항균 기능성 식품을 제공할 수 있다.
식중독은 병원균, 바이러스, 기생충, 자연독 등에 오염된 음식물 섭취의 결과로 발생하는 모든 종류의 질환으로, 구토, 설사, 패혈증, 피부염과 같은 각종 염증 질환 등의 증상을 나타낼 수 있다. 식중독은 병원균에 의한 것이 가장 빈번하며, 특히 국내 통계에 의하면 대장균 및 살모넬라균에 의한 식중독 발생률이 매우 높은 것으로 알려져 있다. 그 외에, 바실러스 세레우스, 황색포도상구균, 리스테리아균 등이 식중독 유발 병원균으로 작용한다.
본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 바실러스 세레우스, 녹농균, 황색포도상구균, 살모넬라 엔테리카, 대장균, 리스테리아 모노사이토제네스, 엔테로코쿠스 페칼리스 및 크로노박터 사카자키에 대해 생육 저해 활성을 나타내는 바, 이들 세균에 의해 유발되는 식중독에 의한 위험을 줄일 수 있고, 인체 내 유해 병원균의 생육을 억제하여 건강을 증진시킬 수 있다.
상기 식품은 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류일 수 있으며, 더욱 자세히는, 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 젤리류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방 제품, 유제품 음료 (dairy drink) 및 우유 음료, 차, 두유 및 콩 유제품 (soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체 음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 케이크, 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 식품은 사람 뿐만 아니라 동물용 식품 및 사료 첨가제를 포함하는 의미일 수 있다. 상기 동물은 개, 고양이, 소, 돼지, 양, 염소, 사슴, 닭, 오리, 거위, 꿩 등을 포함할 수 있다. 또한, 용어 "사료 첨가제"는 가축의 생산성 향상, 반려동물의 건강을 증진 및/또는 유지시키거나 신체 컨디션 유지를 위하여 사료에 첨가되는 물질을 의미한다. 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물을 동물용 식품 및 사료 첨가제에 이용하면, 기존의 항생제를 대체하는 천연 항생 물질로 기능할 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 케피어 유래 유산균의 배양물은 식중독의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 이용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 케피어 유래 유산균의 배양물을 유효성분으로서 함유하며, 통상의 방법에 따른 적절한 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 레밍턴의 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)]에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여 모두 가능하며, 비경구 투여는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등을 포함한다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리 식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다. 또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 통상의 지식을 가진 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01 내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따라 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상의 유제품; 및 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상의 첨가제를 포함하는 배지에서 케피어 유래 유산균을 배양하는 경우, 이로부터 얻은 배양물이 우수한 항균 활성을 나타낼 수 있다. 상기 케피어 유래 유산균의 배양물은 8종의 유해 병원균, 구체적으로 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 살모넬라 엔테리카(Salmonella enteritidis), 대장균(E. coli), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii)에 대하여 항균 활성을 나타내는 바, 병원균에 의한 오염을 방지하는 항균제로서 식품 및 화장료 조성물에 적용될 수 있다. 또한, 기능성 식품, 기능성 화장품 또는 식중독을 예방 또는 치료하는 약학 조성물에 적용되어, 인체 내 유해 병원균의 생육을 억제할 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
제조예: 배양물 샘플 제조 및 대조군 준비
유산균 준비
케피어 유래 유산균으로 락토바실러스 케피어리 DH5(이하, "DH5") 또는 류코노스톡 메센테로이데스 DH1604(이하, "LCM4")를 MRS 고체배지(Man Rogosa Sharpe(MRS) agar)에 평판도말(spreading)하여 48시간 동안 배양하였다. 이 때, 락토바실러스 케피어리 DH5는 37℃에서, 류코노스톡 메센테로이데스 LCM4는 30℃에서 배양하였다. 이들은 모두 건국대학교 수의학대학 식품안전연구센터에서 입수할 수 있으며, 락토바실러스 케피어리 DH5는 한국미생물보존센터에 수탁번호 KCCM11837P(수탁일자: 2016년 4월 29일)로 기탁되어 있고, 류코노스톡 메센테로이데스 DH1604는 한국미생물보존센터에 수탁번호 KCCM12117P(수탁일자: 2017년 9월 21일)로 기탁되어 있다.
배지 준비
배지로서 MRS 액체배지(MRS), 유청(W) 및 탈지유(S)를 준비하였다. 또한, 유청에 이스트 및 덱스트로스를 혼합한 배지(WYD)와, 탈지유에 이스트 및 덱스트로스를 혼합한 배지(SYD)를 준비하였다. WYD 배지 또는 SYD 배지의 경우, 유청 또는 탈지유 1L에 이스트 추출물 5g 및 덱스트로스 20g을 혼합하여 121℃에서 15분 동안 멸균한 후 40℃로 냉각시킨 것을 사용하였다.
배양물 제조
유산균을 준비된 배지에 각각 1 x 108 CFU/ml 접종하고 48시간 동안 발효 배양을 진행하였다. 이 때, DH5는 37℃에서, LCM4는 30℃에서 배양하였다. 발효가 끝난 배양액을 3,134 x g의 속도로 10분간 원심분리하여, 균체는 버리고 상등액을 수거한 후에 0.45㎛ pore-size로 필터링하여, 배양물을 수득하였다.
실험예 1: 8종의 식품 매개 병원균에 대한 Disc diffusion assay 분석
상기 제조예에서 제조된 배양물을 이용하여, Disc diffusion assay로 8종의 식품 매개 병원균에 대한 항균 활성을 시험하였다. 실험에 사용된 배양물 샘플과, 각 샘플의 원심분리 후 pH 및 균수를 하기 표 1에 나타내었다.
대조군으로는 균을 첨가하지 않은 배지(MRS, W 및 S)를 사용하였으며, 이종의 대조군으로서 포도씨 분말 추출물(GSE)을 사용하였다. GSE는 선행 연구들에서 7종의 유해균에 대해 생육 억제 효능이 밝혀진 물질로서, 포도씨 분말을 80% 에탄올로 추출한 추출물을 실험에 사용하였다. 상기 대조군들의 샘플명 및 pH를 표 1에 함께 나타내었다.
샘플명 | 균주 | 배지 조성 | pH | 균수(CFU/mL) |
GSE | - | - | 4.40 | - |
MRS | - | MRS | 6.58 | - |
MRS-DH5 | DH5 | MRS | 4.31 | 1.07 x 109 |
W | - | 유청 | 6.12 | - |
W-DH5 | DH5 | 유청 | 6.31 | 2.00 x 103 |
WYD-DH5 | DH5 | 유청 1L, 이스트 0.5g, 덱스트로스 2g | 4.12 | 1.10 x 108 |
S | - | 탈지유 | 6.61 | - |
SYD-DH5 | DH5 | 탈지유 1L, 이스트 0.5g, 덱스트로스 2g | 4.20 | 1.55 x 108 |
S-LCM4 | LCM4 | 탈지유 | 4.09 | 1.63 x 109 |
SYD-LCM4 | LCM4 | 탈지유 1L, 이스트 0.5g, 덱스트로스 2g | 3.99 | 7.60 x 108 |
상기 표 1의 샘플을 이용하여, 하기 표 2의 8종의 식품 매개 병원균에 대해 Disc diffusion assay로 항균 효과를 측정하였다.
균주명 | ATCC 번호 |
Staphylococcus aureus | 6538 |
Escherichia coli | 25922 |
Salmonella Enteritidis | originally obtained from the Food and Drug Administration [FDA], College Park, USA |
Enterococcus faecalis | 19433 |
Listeria monocytogenes | 51776 |
Bacillus cereus | 14579 |
Pseudomonas aeruginosa | 15522 |
Cronobacter sakazakii | 29544 |
8종의 병원균 균주 각각을 Mueller-Hinton (MH) 고체배지(agar)에 획선도말(streaking)한 후, 37℃에서 배양하였다. 이 후 MH 액체배지(broth)에 옮겨 37℃에서 24시간씩 2회 계대 배양하였다. 각 병원균 배양액을 MH 액체배지로 희석하여 0.5McF로 맞춘 후, 멸균 면봉(sterilized cotton swab)을 이용하여 MH 고체배지에 평판도말(spreading)하였다. 8mm paper disc 위에 상기 표 1의 각 샘플을 100㎕ 분주한 뒤, 병원균을 도말한 플레이트에 배양물 디스크를 올려놓고 37℃에서 24시간 배양하였다. 상기 실험 절차를 도 1에 나타내었으며, 배양 후 병원균의 생육 저해 영역(growth inhibition zone)을 측정하여, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 생육 저해 영역은 디스크 주위의 억제환(clear zone)의 직경(mm)을 의미한다.
샘플명 | 생육 저해 영역(mm) | |||||||
S. aureus | E. coli | Sal. Enteritidis | E. faecalis | L. monocytogenes | B. cereus | P. aeruginosa | C. sakazakii | |
GSE | 1.2±0.2 | - | 0.5±0.0 | 1.8±0.2 | 0.8±0.2 | 2.0±0.0 | 0.5±0.0 | 1.3±0.3 |
MRS | - | - | - | - | - | - | - | - |
MRS-DH5 | 1.0±0.0 | 1.2±0.2 | 1.2±0.2 | - | 0.7±0.2 | - | 1.0±0.0 | 0.7±0.2 |
W | - | - | - | - | - | - | - | - |
W-DH5 | - | - | - | - | - | - | - | - |
WYD-DH5 | 1.8±0.2 | 1.3±0.3 | 1.2±0.2 | 0.7±0.2 | 1.2±0.2 | 0.5±0.0 | 1.8±0.2 | 1.3±0.2 |
S | - | - | - | - | - | - | - | - |
SYD-DH5 | 2.7±0.3 | 1.0±0.0 | 2.3±0.3 | 2.2±0.4 | 1.0±0.0 | 2.0±0.0 | 1.3±0.3 | 1.2±0.6 |
S-LCM4 | - | - | - | - | - | - | - | - |
SYD-LCM4 | - | - | - | - | - | - | - | - |
표 3의 결과를 참조하면, Lactobacillus kefiri DH5(이하, "DH5")를 유청, 이스트 및 덱스트로스를 포함하는 배지에서 배양한 샘플(WYD-DH5) 및 탈지유, 이스트 및 덱스트로스를 포함하는 배지에서 배양한 샘플(SYD-DH5)의 경우, 8종의 식품 유래 병원균 모두에 대해 생육 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다. 이러한 본 발명의 배양물은 천연 항균 소재로 알려진 포도씨 분말 추출물(GSE)이 항균 활성을 나타내지 않는 대장균(E. coli)에 대해 항균 활성을 나타냈으며, 나머지 균들에 대해서도 GSE에 비해 더욱 우수한 항균 활성이 나타나는 경향을 보였다.
반면, DH5를 MRS 배지에서 배양한 샘플(MRS-DH5)의 경우 E. faecalis 및 B. cereus에 대해서는 생육 저해 활성이 나타나지 않았다. 나머지 6종의 식품 유래 병원균에 대해 생육 저해 활성을 나타내었으나, 저해 효과가 WYD-DH5 및 SYD-DH5에 비해 낮은 것을 확인하였다. 또한, DH5를 유청 배지에서 배양한 샘플(W-DH5)은 8종의 병원균 모두에서 생육 저해 활성이 나타나지 않았다.
또한, DH5가 아닌 Leuconostoc mesenteroides DH1604(이하, "LCM4") 균을 배양시킨 경우, LCM4를 탈지유 배지에 배양한 샘플(S-LCM4) 및 탈지유에 이스트 및 덱스트로스를 첨가한 배지에 배양한 샘플(SYD-LCM4) 모두 병원균에 대한 생육 저해 활성이 나타나지 않았다.
이러한 결과로부터, 케피어 유래 유산균 중 Lactobacillus kefiri DH5의 배양물에 병원균의 생육 억제 활성이 있다는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 DH5 배지로서 유청 또는 탈지유에 이스트 및 덱스트로스를 첨가한 배지를 이용함으로써 DH5의 배양물이 식품 유래 병원균의 생육 억제에 우수한 활성을 나타낸다는 것을 알 수 있었다.
실험예 2: 배지 조성에 따른 포도상구균 생육 저해 활성 분석
제조예의 방법으로 배지를 준비하되, 유청에 이스트 추출물 및 덱스트로스를 하기 표 4의 조성으로 첨가하여 배지를 제조하고, 각 배지에서 제조예의 방법에 따라 Lactobacillus kefiri DH5(이하, "DH5")를 각각 배양하여 배양물 샘플을 제조하였다.
샘플명 | 균주 | 유청(L) | 이스트(g) | 덱스트로스(g) | pH | 균수(CFU/mL) |
WY-DH5 | DH5 | 1 | 2.5 | - | 4.41 | 1.73 x 108 |
WYD(4:1)-DH5 | DH5 | 1 | 2 | 0.5 | 4.47 | 2.79 x 108 |
WD-DH5 | DH5 | 1 | - | 2.5 | 5.03 | 8.25 x 107 |
각 샘플을 포도상구균에 처리하고, 24시간 후 흡광도를 측정하였다. 구체적으로, MH 액체배지에 2회 활성시킨 포도상구균 현탁액을 0.9% 멸균생리식염수를 이용하여 0.5McF로 맞춘 후, 웰(well) 당 10㎕씩 분주하고, 각 샘플을 MH 액체배지에 25%(v/v)로 희석하여 well 당 190㎕씩 분주하였다. 상기 과정을 3회 반복한 후, 마이크로 플레이트 리더(microplate reader, Multiskan FC; Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 595nm에서 2시간 간격으로 24시간 동안 흡광도(optical density)를 측정하였다.
각 배지에 DH5를 첨가하지 않은 미배양 샘플(blank)을 준비하여 동일한 방법으로 흡광도를 측정하고, 각 배지의 미배양 샘플과 배양물 샘플의 포도상구균 흡광도 차이를 계산하여 도 2에 나타내었다. 흡광도 차이는 "미배양 샘플 처리시의 24시간 후 흡광도 - 배양물 샘플 처리시의 24시간 후 흡광도"로 계산하였다.
도 2를 참조하면, 흡광도의 차가 양의 값을 나타내는 결과로부터, 배양물 샘플 처리시의 포도상구균 흡광도가 미배양 샘플 처리시의 흡광도에 비해 낮은 것을 확인하였다.
이에 따라, 유청에 이스트 및/또는 덱스트로스를 첨가한 배지에 DH5를 배양시킨 배양물 샘플의 경우, DH5를 배양시키지 않은 배지 자체에 비해 항균 활성이 높게 나타나는 것을 확인하였다.
특히, 덱스트로스보다 이스트를 첨가한 배지에서 배양한 샘플의 항균 활성이 더 우수하였으며, 유청에 이스트 및 덱스트로스를 모두 첨가한 배지에 배양한 샘플의 항균 활성이 가장 뛰어난 것을 확인하였다.
실험예 3: 배지의 첨가제 혼합비에 따른 포도상구균 생육 저해 활성 분석
제조예의 방법으로 배지를 준비하되, 유청에 이스트 및 덱스트로스를 하기 표 5의 조성으로 첨가하여 배지를 제조하고, 각 배지에서 제조예의 방법에 따라 Lactobacillus kefiri DH5(이하, "DH5")를 각각 배양하여 샘플을 제조하였다.
샘플명 | 균주 | 유청(L) | 이스트(g) | 덱스트로스(g) | pH | 균수(CFU/mL) |
WYD(4:1)-DH5 | DH5 | 1 | 2 | 0.5 | 4.47 | 2.79 x 108 |
WYD(1:1)-DH5 | DH5 | 1 | 1.25 | 1.25 | 4.48 | 8.60 x 107 |
WYD(1:4)-DH5 | DH5 | 1 | 0.5 | 2 | 4.54 | 1.44 x 108 |
상기 샘플을 실험예 2의 방법에 따라 포도상구균에 처리하고 24시간 후 흡광도를 측정하여 그 결과를 도 3에 나타내었다. 비교를 위하여, 양성 대조군(PC)으로서 포도상구균에 아무 물질도 처리하지 않은 대조군을 이용하여 동일한 시험을 수행하고 그 결과를 도 3에 함께 나타내었다.
도 3을 참조하면, 유청에 이스트 및 덱스트로스를 첨가한 배지에서 DH5를 배양한 샘플을 처리하였을 때, 흡광도가 PC에 비해 현저히 낮은 것을 확인하였다. 따라서 본 발명에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물이 포도상구균에 대해 우수한 항균 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다.
또한, 배양물 제조 시 사용한 배지의 이스트 및 덱스트로스의 비율이 4:1 내지 1:4인 경우에서 전체적으로 포도상구균의 생육 억제 효과가 나타났으며, 이스트와 덱스트로스를 4:1의 비율로 혼합한 배지에서 배양한 배양물의 항균 활성이 가장 우수하였다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (13)
- 케피어 유래 유산균을, 유청 및 탈지유로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 유제품; 및 이스트 및 덱스트로스로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 첨가제를 포함하는 배지에서 배양하여 수득된, 케피어 유래 유산균의 배양물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 첨가제가 이스트를 포함하는, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 첨가제가 이스트 및 덱스트로스를 포함하는, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 3 항에 있어서,
상기 이스트 및 덱스트로스의 중량비가 6:1 내지 1:4인, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 첨가제가 유제품에 대하여 1 내지 100g/L의 양으로 포함되는, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 케피어 유래 유산균이 락토바실러스 케피어리(Lactobacillus kefiri) 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 선택된 1종 이상인, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 케피어 유래 유산균이 락토바실러스 케피어리 DH5(Lactobacillus kefiri DH5)인, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 케피어 유래 유산균을 배지에 대해 1 x 103 내지 1 x 1010 CFU/ml 접종하여 배양된, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서,
상기 배양물이 배양 후 배양액을 원심 분리하여 얻은 상등액인, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항에 있어서
바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 살모넬라 엔테리카(Salmonella enteritidis), 대장균(E. coli), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 병원균에 대해 항균 활성을 가지는 것인, 케피어 유래 유산균의 배양물. - 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는, 항균 조성물.
- 제 11 항에 있어서,
상기 항균 조성물이 항균 화장료 조성물인, 항균 조성물. - 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 케피어 유래 유산균의 배양물을 포함하는, 항균 기능성 식품.
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