TW202400201A - 維持噬菌體之長期儲存穩定性的新穎賦形劑 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種用於改善噬菌體穩定性以維持噬菌體之長期儲存穩定性的新穎組成物，且該組成物藉由包含無水硫酸鈉而具有噬菌體之極佳儲存穩定性。

Description

維持噬菌體之長期儲存穩定性的新穎賦形劑
相關申請案的交叉參考
本申請案主張基於2022年4月15日申請之韓國專利申請案第10-2022-0047176號的優先權之權益，且對應韓國專利申請案之文獻的全部內容作為本說明書之一部分併入。
本發明係關於一種用以維持噬菌體之長期儲存穩定性的新穎賦形劑組成物及其用途。
由食源性細菌引起之食源性疾病已被公認為嚴重的公共衛生問題之一，嚴重的公共衛生問題係會在世界範圍內發生的問題。因此，在食品行業中，重要的係不僅要提供消費者美味及營養的食品，且亦供應不存在可能導致疾病之食源性細菌的安全食品。
噬菌體為一種類型的病毒，其使用細菌作為宿主細胞，且因為其僅特異性結合至細菌而不顯示人體毒性。歸因於此特徵，噬菌體已廣泛用於臨床治療由細菌引起之感染，且尤其已用作用於預防或抑制家畜疾病之飼料添加劑（韓國專利公開案第10-2021-0145038號）。
另一方面，根據飼料添加用噬菌體產品的生產及分銷，習知使用之賦形劑在長期儲存期間，歸因於噬菌體效價降低而有生產力及產品品質下降的問題。因此，在飼料添加用噬菌體產品長期分銷的情況下，有必要研究用於品質維護之賦形劑。 [先前技術]
（專利文獻1）KR 10-2021-0145038 A
[技術問題]
本申請案之一個具體實例提供一種用於改善噬菌體之穩定性之包含無水硫酸鈉的組成物。該組成物可用於維持及/或增加噬菌體之長期穩定性（例如儲存穩定性等）。
另一具體實例提供一種組成物，其包含噬菌體及無水硫酸鈉。組成物可為飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物。
其他具體實例提供一種用於改善噬菌體之穩定性的方法，其包含混合噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性之包含無水硫酸鈉的組成物。
其他具體實例提供一種無水硫酸鈉用於改善噬菌體之穩定性或製造用於改善噬菌體之穩定性的組成物的用途。
其他具體實例提供一種噬菌體及無水硫酸鈉用於製造飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物之用途。
其他具體實例提供一種噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物用於製造飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物的用途。 [技術解決方案]
一個態樣提供一種用於改善噬菌體之穩定性之包含無水硫酸鈉的組成物。
無水硫酸鈉（硫酸鈉無水，Na 2SO 4，142.04 g/mol，CAS編號：7757-82-6）係鈉之硫酸鹽且係無色晶體。無水硫酸鈉結合至10個外部水分子且變為硫酸鈉（Na 2SO 4·10H 2O；322.20 g/mol），因此其可在潤濕環境中發揮吸濕性作用。
用於改善噬菌體之穩定性的組成物可進一步包含賦形劑組分，或可用作賦形劑。
賦形劑可意謂使飼料、食品或醫藥易於進食或製成某一形狀的添加物質。作為至於賦形劑之類型，有藉由賦予粉末原材料結合力而有助於模製之黏合劑、促進崩解之崩解劑、為確保壓縮操作順滑及粒狀產物流動性良好而添加之潤滑劑、吸收液體原材料且使其成為錠劑（丸劑）之吸附劑及其類似賦形劑類型。選自由以下者組成之群的至少一者可例示作為主要使用之賦形劑組分（但不限於此）：羥丙基甲基纖維素（hydroxypropylmethyl cellulose，HPMC）、羥丙基纖維素（hydroxypropyl cellulose，HPC）、乳糖（含水、無水、單水合物、噴霧乾燥形式等）、微晶纖維素、二氧化鈦、二氧化矽（膠態，膠態二氧化矽等）、硬脂酸鎂、交聯羧甲纖維素鈉、α澱粉（預糊化澱粉）、羥基乙酸澱粉鈉、交聯普維酮（crosspovidone）、滑石、小麥粉（穀物粉末，小麥粉末）、碳酸鈣、二氧化矽及其類似物。用於改善本申請案中所提供之噬菌體之穩定性的組成物可進一步包含至少一個除無水硫酸鈉之外的賦形劑組分。
包含於用於改善噬菌體之穩定性的組成物中的無水硫酸鈉之比率以重量計可為1至50%（w/w）、1至45%（w/w）、1至40%（w/w）、1至35%（w/w）、1至30%（w/w）、5至50%（w/w）、5至45%（w/w）、5至40%（w/w）、5至35%（w/w）、5至30%（w/w）、10至50%（w/w）、10至45%（w/w）、10至40%（w/w）、10至35%（w/w）、10至30%（w/w）、15至50%（w/w）、15至45%（w/w）、15至40%（w/w）、15至35%（w/w）、15至30%（w/w）、20至50%（w/w）、20至45%（w/w）、20至40%（w/w）、20至35%（w/w）、20至30%（w/w）、25至50%（w/w）、25至45%（w/w）、25至40%（w/w）、25至35%（w/w）、25至30%（w/w）、30至50%（w/w）、30至45%（w/w）、30至40%（w/w）或30至35%（w/w）或其類似者，但不限於此。
在本說明書中，術語「改善噬菌體之穩定性」可維持、改善或增強噬菌體之長期儲存穩定性。換言之，改善噬菌體之穩定性的作用可意謂維持噬菌體之效價或降低效價減少量的作用。
噬菌體為使用細菌及古細菌作為宿主且可特異性感染細菌之病毒的集合術語。因此，在使用噬菌體之抗生素作用的情況下，其用於諸如飼料（包括飼料添加劑）、食品、醫藥、消毒劑及其類似物之產品，但根據產品之生產或分銷，由於噬菌體在儲存期間效價降低，存在產品之生產力及品質下降的問題。換言之，改善噬菌體之穩定性的作用可意謂在儲存包含此類噬菌體之產品期間維持噬菌體之效價，或降低噬菌體之效價減少量。
在一個具體實例中，當將用於改善噬菌體之穩定性的組成物施加至噬菌體中（例如混合等）時，當噬菌體儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下時， 相比於在第0天量測之噬菌體的效價，在第1天至第7天、第1天至第14天、第7天至第14天、在第1天之後、第2天之後、第3天之後、第4天之後、第5天之後、第6天之後、第7天之後、第8天之後、第9天之後、第10天之後、第11天之後、第12天之後、第13天之後或第14天之後量測之噬菌體的效價可減少2 log(pfu/g)或更少、1.9 log(pfu/g)或更少、1.8 log(pfu/g)或更少、1.7 log(pfu/g)或更少、1.6 log(pfu/g)或更少、1.5 log(pfu/g)或更少、或1.4 log(pfu/g)或更少，例如1.4 log(pfu/g)，或 可減少20%或更少、19%或更少、18%或更少、17%或更少、16%或更少、或15%或更少。
在另一具體實例中，當將用於改善噬菌體之穩定性的組成物施加至噬菌體中（例如混合等）時，相比於對照組（例如不將無水硫酸鈉施加至噬菌體之情況）， 當噬菌體儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下時， 相比於在第0天量測之噬菌體的效價，在第1天至第7天、第1天至第14天、第7天至第14天、在第1天之後、第2天之後、第3天之後、第4天之後、第5天之後、第6天之後、第7天之後、第8天之後、第9天之後、第10天之後、第11天之後、第12天之後、第13天之後或第14天之後量測之噬菌體的效價減量（log(pfu/g)）可低至0.5至3、0.5至2.5、0.5至2、0.5至1.5、0.6至3、0.6至2.5、0.6至2、0.6至1.5、0.7至3、0.7至2.5、0.7至2、0.7至1.5、0.8至3、0.8至2.5、0.8至2、0.8至1.5、0.9至3、0.9至2.5、0.9至2、0.9至1.5、1至3、1至2.5、1至2、1至1.5、0.5或更多、0.6或更多、0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、1.0或更多、或1.1或更多，例如1.1，或 可低至5至20%p、5至15%p、6至20%p、6至15%p、7至20%p、7至15%p、8至20%p、8至15%p、9至20%p、9至15%p、10至20%p、10至15%p、5%p或更多、6%p或更多、7%p或更多、8%p或更多、9%p或更多、10%p或更多、或11%p或更多，例如11%p。
在其他具體實例中，當將用於改善噬菌體之穩定性的組成物施加至噬菌體中（例如混合等）時，相比於對照組（例如不將無水硫酸鈉施加至噬菌體之情況）， 當噬菌體儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下1天至7天、1天至14天、7天至14天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天時， 噬菌體之效價可比以下值高：2至40%、2至35%、2至30%、2至25%、2至20%、2至15%、2至10%、5至40%、5至35%、5至30%、5至25%、5至20%、5至15%、5至10%、10至40%、10至35%、10至30%、10至25%、10至20%、10至15%、2%或更多、3%或更多、4%或更多、5%或更多、6%或更多、7%或更多、8%或更多、9%或更多、10%或更多、11%或更多、12%或更多、13%或更多、14%或更多、或15%或更多。
當將用於改善噬菌體之穩定性的組成物施加至噬菌體時，即使在諸如高溫及潮濕條件及其類似者之極端環境下之噬菌體長期儲存期間，噬菌體之效價減量較低，因此存在可穩定儲存噬菌體之優勢。
相比於不包含無水硫酸鈉之組成物，用於改善噬菌體之穩定性的組成物藉由包含無水硫酸鈉可具有改善噬菌體之穩定性的極佳作用。
用於改善噬菌體之穩定性的組成物可用於製造飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物。
另一態樣提供一種包含噬菌體及無水硫酸鈉之組成物，例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物。除此以外，其提供包含噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物的組成物，例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物。
至於噬菌體，噬菌體之種類及數目不受特別限制，且可使用任何物品，且可選擇及使用屬於肌尾病毒科（Myoviridae）、長尾病毒科（Siphoviridae）及短尾病毒科（Podoviridae）族之噬菌體的一或多種（例如2種類型、3種類型之組合）噬菌體。
噬菌體可為一種噬菌體，其特異性感染屬於以下者之細菌：埃希氏菌（ Escherichia）菌屬（例如大腸桿菌（ E. coli）、艾伯特埃希氏菌（ E. albertii）、費格森埃希氏菌（ E. fergusonii）、赫氏埃希氏菌（ E. hermannii）、傷口埃希氏菌（ E. vulneris）等）、沙門氏菌（ Salmonella）菌屬（例如邦戈沙門氏菌（ S. bongori）、腸道沙門氏菌（ S. enterica）等）或梭菌（ Clostridium）菌屬（例如肉毒芽孢梭菌（ C. botulinum）、破傷風梭菌（ C. tetani）、產氣莢膜梭菌（ C. perfringens）、溶組織梭菌（ C. hisolyticum）、索氏梭菌（ C. sordellii）、酪酸梭菌（ C. butyricum）等），但不限於此。
包含於組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物等）中之噬菌體的初始含量（或效價）不受特別限制，但其一般可在1×10 1至1×10 15pfu/g範圍內使用，且除此以外，包含於組成物中之噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的量可由熟習此項技術者在考慮最後製備之組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物等）的用途之目的適當地確定。
在組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物等）中，以重量計，用於改善噬菌體之穩定性的組成物在噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物中的比率可為90至99.9%（w/w）、90至99.5%（w/w）、90至99%（w/w）、90至98%（w/w）、90至97%（w/w）、90至96%（w/w）、90至95%（w/w）、91至99.9%（w/w）、91至99.5%（w/w）、91至99%（w/w）、91至98%（w/w）、91至97%（w/w）、91至96%（w/w）、91至95%（w/w）、92至99.9%（w/w）、92至99.5%（w/w）、92至99%（w/w）、92至98%（w/w）、92至97%（w/w）、92至96%（w/w）、92至95%（w/w）、93至99.9%（w/w）、93至99.5%（w/w）、93至99%（w/w）、93至98%（w/w）、93至97%（w/w）、93至96%（w/w）、93至95%（w/w）、94至99.9%（w/w）、94至99.5%（w/w）、94至99%（w/w）、94至98%（w/w）、94至97%（w/w）、94至96%（w/w）、94至95%（w/w）、95至99.9%（w/w）、95至99.5%（w/w）、95至99%（w/w）、95至98%（w/w）、95至97%（w/w）或95至96%（w/w），但不限於此。
組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物等）中，以重量計，噬菌體與用於改善噬菌體之穩定性的組成物的混合比率可為1: 8至1: 999、1: 8至5: 995、1: 8至1: 99、1: 8至2: 98、1: 8至3: 97、1: 88至4: 96、1: 8至5: 95、1: 9至1: 999、1: 9至5: 995、1: 9至1: 99、1: 9至2: 98、1: 9至3: 97、1: 9至4: 96、1: 9至5: 95或其類似者，但不限於此。
在組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物）中，以重量計，無水硫酸鈉在噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物中的比率可為4至45%（w/w）、4至40%（w/w）、4至30%（w/w）、4至20%（w/w）、4至18%（w/w）、4至15%（w/w）、4至10%（w/w）、4至5%（w/w）、4至4.5%（w/w）、4.5至45%（w/w）、4.5至40%（w/w）、4.5至30%（w/w）、4.5至20%（w/w）、4.5至18%（w/w）、4.5至15%（w/w）、4.5至10%（w/w）、4.5至5%（w/w）、15至45%（w/w）、15至40%（w/w）、15至30%（w/w）、15至20%（w/w）、15至18%（w/w）、18至45%（w/w）、18至40%（w/w）、18至30%（w/w）、18至20%（w/w）、20至45%（w/w）、20至40%（w/w）、20至30%（w/w）、30至45%（w/w）、30至40%（w/w）或40至45%（w/w）或其類似者，但不限於此。
在一個具體實例中，當包含噬菌體及無水硫酸鈉或用於改善噬菌體之穩定性的組成物的組成物，例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物 儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下時， 相比於在第0天量測之噬菌體的效價，在第1天至第7天、第1天至第14天、第7天至第14天、在第1天之後、第2天之後、第3天之後、第4天之後、第5天之後、第6天之後、第7天之後、第8天之後、第9天之後、第10天之後、第11天之後、第12天之後、第13天之後或第14天之後量測之噬菌體的效價可減少2 log(pfu/g)或更少、1.9 log(pfu/g)或更少、1.8 log(pfu/g)或更少、1.7 log(pfu/g)或更少、1.6 log(pfu/g)或更少、1.5 log(pfu/g)或更少、或1.4 log(pfu/g)或更少，例如1.4 log(pfu/g)，或 可減少20%或更少、19%或更少、18%或更少、17%或更少、16%或更少、或15%或更少。
在一個具體實例中，當包含噬菌體及無水硫酸鈉或用於改善噬菌體之穩定性的組成物的組成物，例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物 儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下時， 相比於在第0天量測之噬菌體的效價，在第1天至第7天、第1天至第14天、第7天至第14天、在第1天之後、第2天之後、第3天之後、第4天之後、第5天之後、第6天之後、第7天之後、第8天之後、第9天之後、第10天之後、第11天之後、第12天之後、第13天之後或第14天之後量測之噬菌體的效價減量可低至0.5至3、0.5至2.5、0.5至2、0.5至1.5、0.6至3、0.6至2.5、0.6至2、0.6至1.5、0.7至3、0.7至2.5、0.7至2、0.7至1.5、0.8至3、0.8至2.5、0.8至2、0.8至1.5、0.9至3、0.9至2.5、0.9至2、0.9至1.5、1至3、1至2.5、1至2、1至1.5、0.5或更多、0.6或更多、0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、1.0或更多、或1.1或更多，例如1.1，或 可低至5至20%p、5至15%p、6至20%p、6至15%p、7至20%p、7至15%p、8至20%p、8至15%p、9至20%p、9至15%p、10至20%p、10至15%p、5%p或更多、6%p或更多、7%p或更多、8%p或更多、9%p或更多、10%p或更多、或11%p或更多，例如11%p。
在一個具體實例中，當包含噬菌體及無水硫酸鈉或用於改善噬菌體之穩定性的組成物的組成物，例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物 儲存在45至60℃、45至58℃、45至55℃、45至52℃、45至50℃、45至48℃、48至60℃、48至58℃、48至55℃、48至52℃、48至50℃、50至60℃、50至58℃、50至55℃或50至52℃之溫度條件下；及/或 在80至100%、80至99%、80至98%、80至97%、80至96%、80至95%、80至92%、80至90%、80至88%、80至85%、85至100%、85至99%、85至98%、85至97%、85至96%、85至95%、85至92%、85至90%、85至88%、90至100%、90至99%、90至98%、90至97%、90至96%、90至95%、90至92%、95至100%、95至99%、95至98%、95至97%或95至96%之相對濕度條件下1天至7天、1天至14天、7天至14天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天時， 相比於不包含無水硫酸鈉之組成物， 噬菌體之效價可比以下值高：2至40%、2至35%、2至30%、2至25%、2至20%、2至15%、2至10%、5至40%、5至35%、5至30%、5至25%、5至20%、5至15%、5至10%、10至40%、10至35%、10至30%、10至25%、10至20%、10至15%、2%或更多、3%或更多、4%或更多、5%或更多、6%或更多、7%或更多、8%或更多、9%或更多、10%或更多、11%或更多、12%或更多、13%或更多、14%或更多、或15%或更多。
當包含噬菌體及無水硫酸鈉或用於改善噬菌體之穩定性的組成物的組成物（例如飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物）在諸如高溫及潮濕條件之極端環境下時，即使在噬菌體之長期儲存期間，具有噬菌體之較低效價減量，因此存在可穩定儲存噬菌體之優勢。
因此，包含噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的組成物可以各種形式製備以符合在家庭、工業、醫療及環境領域中之特定目的，且在一個具體實例中，其可以飼料組成物（包括飼料添加劑組成物）、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物或其類似物之形式製備，但不限於此。
其他態樣提供一種包含噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的飼料組成物。
在本申請案中，「飼料」可意謂動物食用、攝入及消化或適用於其之任何天然或人造飲食、一種粉料（meal）或其類似物或一種粉料之組分。根據一個具體實例之飼料組成物可進一步包含濃縮飼料及/或專用飼料。濃縮飼料可為種子果實，包括穀物，諸如小麥、燕麥、玉米及其類似物；麩，包括米麩、小麥麩、大麥麩及其類似物，作為由精煉穀物獲得之副產物；芝麻渣，其為由大豆、流質（fluid）、芝麻籽、亞麻籽、椰樹（coco palm）及其類似物榨油獲得之副產物；及殘餘物，諸如殘餘澱粉，其為自甜馬鈴薯及馬鈴薯及其類似物移除澱粉之後係剩餘物的澱粉殘餘之主要組分；魚溶物（fish soluble），其為自魚粉料、魚殘餘物及魚獲得之新鮮液體的濃縮產物；動物飼料，諸如肉粉料、血粉料、羽毛粉料、脫脂乳粉末；脫水乳清，其為當由乳製備乳酪且由脫脂乳及其類似物製備酪蛋白時的殘餘液體；酵母、綠球藻（chlorella）及/或海藻及其類似物。
根據一個具體實例之飼料組成物可意謂呈最終由動物食用、可在飼料中混合之膳食補充劑及/或飼料添加劑之形式的飼料。膳食補充為例如含有向動物提供治療劑或消化劑之製劑的組成物，及通常不為活體內卡路里攝入來源，亦即能量來源但除正常動物飼料以外攝取的組成物。飼料添加劑可指添加至飼料中以用於各種作用之物質，諸如營養補充劑及重量減輕預防、飼料中纖維之消化性的改善、油品質改善、再生性病症預防及受孕比例改善、夏季高溫應力預防及其類似者。可添加飼料添加劑之飼料可選自由以下者組成之群：可商購的飼料，或穀物、根類果實（root fruit）、食品加工副產物、海藻、纖維、醫藥副產物、油及脂肪、澱粉、粉料、穀物副產物、蛋白質、無機物、礦物質、單一細胞蛋白質、浮游動物、殘餘食物及其類似物，但不限於此。
在一個具體實例中，飼料組成物可為飼料添加劑，且在根據一個具體實例將飼料添加劑混合至飼料（例如混合飼料及/或最終由動物攝入之配料飼料）時，以總飼料重量計，其可以0.001%或更多、0.005%或更多、0.01%或更多、0.05%或更多、0.1%或更多、0.5%或更多、1%或更少、0.5%或更少、0.1%或更少、0.05%或更少、0.01%或更少、0.005%或更少、0.001至1%、0.001至0.5%、0.001至0.1%、0.001至0.05%、0.001至0.01%、0.001至0.005%、0.005至1%、0.005至0.5%、0.005至0.1%、0.005至0.05%、0.005至0.01%、0.01至1%、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%、0.05至1%、0.05至0.5%、0.05至0.1%、0.1至1%、0.1至0.5%或0.5至1%之重量添加，且其可與飼料原材料、補充飼料、補充劑及/或除根據一個具體實例之活性成分外的其他類別之添加劑及其類似物混合。
藉由將噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）混合且供應至飼料，可減少或移除飼料中之細菌。
其他態樣提供一種用於製造飼料組成物之方法，其包含混合噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。飼料組成物係如上文所描述。
其他態樣提供一種包含噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的食品組成物。噬菌體特異性地殺滅細菌，因此其可用於處理加工食品或非加工食品或食品配料以預防細菌感染。根據一個具體實例之食品組成物可意謂肉、香腸、麵食、巧克力、糖果、點心、甜食、披薩餅、拉麵、其他麵條、口香糖、乳製品（包括霜淇淋）、各種類型之湯、飲料、茶、飲品、酒精飲料、維生素複合物、保健功能性食品及保健食品及其類似物，且包括習知意義中之所有食品。
藉由將噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）混合且供應至食品，可減少或移除食品中之細菌。
其他態樣提供一種用於製造食品組成物之方法，其包含混合噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。食品組成物係如上文所描述。
其他態樣提供一種用於預防或治療埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌感染或由埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌所致之疾病的醫藥組成物，其包含噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。其他具體實例提供一種預防或治療埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌感染或由埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌所致之疾病的方法，其包含向需要預防或治療埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌感染或由埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌所致之疾病的個體投予醫藥學上有效劑量的噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物。噬菌體特異性地殺滅細菌（例如埃希氏菌、沙門氏菌或梭菌菌屬之細菌），因此其可有效地用於預防或治療由此引起之疾病。
埃希氏菌屬細菌可為大腸桿菌、艾伯特埃希氏菌、費格森埃希氏菌、赫氏埃希氏菌或傷口埃希氏菌或其類似者，且沙門氏菌屬細菌可為邦戈沙門氏菌或腸道沙門氏菌或其類似者，且梭菌屬細菌可為肉毒芽孢梭菌、破傷風梭菌、產氣莢膜梭菌、溶組織梭菌、索氏梭菌或酪酸梭菌或其類似者，但不限於此。
埃希氏菌屬細菌之感染或由此所致之疾病可為腸炎、克羅恩氏病（Crohn's disease）、潰瘍性結腸炎、細菌性痢疾、泌尿道感染、皮膚感染、菌血症或敗血症或其類似者，且沙門氏菌屬細菌之感染或由此所致之疾病可為沙門氏桿菌病、沙門氏菌屬食物中毒或其類似者，且梭菌屬細菌之感染或由此所致之疾病可為肉毒桿菌食物中毒、產氣莢膜梭菌食物中毒、難養芽孢梭菌（Clostridium difficile）誘發之結腸炎、梭菌屬壞死性腸結腸炎（enterocolitis）、嗜中性白血球減少腸結腸炎（neutropenic enterocolitis）或新生兒壞死性腸結腸炎，但不限於此。
根據一個具體實例之醫藥組成物可進一步包含常用於製造醫藥組成物之適當載劑、賦形劑或稀釋劑。特定言之，醫藥組成物可根據常見方法分別以口服調配物（諸如散劑（powder）、粒劑、錠劑、膠囊、懸浮液、乳液、糖漿、氣霧劑及其類似物）、外用製劑、栓劑及無菌注射溶液形式調配使用。
根據一個具體實例之醫藥組成物可以醫藥學上有效劑量投予，且在本申請案中，「醫藥學上有效劑量」意謂足夠以適用於醫學治療或預防之合理益處/風險比治療或預防疾病的量，且有效劑量含量可根據包括以下因素確定：疾病嚴重程度；藥物活性；患者之年齡、體重、健康、性別；患者對藥物之敏感性；投予時間；投予途徑及本申請案所用之組成物的分泌速率；治療期；與本申請案所用之組成物組合或同時使用的藥物以及醫學領域中熟知的其他因素。根據一個具體實例之醫藥組成物可作為個別治療劑投予或與其他治療劑組合投予，且可與習知治療劑相繼地或同時地投予。另外，其可係單次或多次投予。考慮到以上所有因素，投予能夠在無副作用之情況下以最小量獲得最大作用的量係至關重要的。
根據一個具體實例之醫藥組成物的劑量可為每天向哺乳動物投予0.0001至10,000mg/g、0.0001至5,000mg/g、0.0001至1,000mg/g、0.0001至500mg/g、0.0001至100mg/g、0.0001至50mg/g或0.0001至10mg/g，但不限於此。本申請案之醫藥組成物的投予頻率不受另外特定限制，但其可一天一次投予，或藉由劃分劑量來投予若干次。劑量不意欲以任何方式限制本申請案之範圍。
本說明書中所提供之醫藥組成物的投予個體可為哺乳動物，包括人類、犬、貓、馬、豬、羊、兔、小鼠、大鼠及其類似者，或自其分離之其細胞、組織或培養物，且在一個具體實例中，個體可為需要預防、改善及/或治療如上文所描述之疾病的個體（哺乳動物，諸如人類及其類似者）或自其分離之其細胞、組織或培養物。疾病可為大腸桿菌、沙門氏菌或梭菌屬細菌之感染，或由大腸桿菌、沙門氏菌或梭菌屬細菌所致之疾病。
其他態樣提供一種用於製造醫藥組成物之方法，其包含混合噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。
其他態樣提供一種包含噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的抗細菌組成物。
在本說明書中，抗細菌活性可意謂抑制及/或殺滅細菌生長之活性或其類似活性，且抗細菌組成物可意謂具有抗細菌活性之組成物。抗細菌活性可與抗生素活性及其類似者組合使用，且抗細菌組成物涵蓋所有類型的能夠抑制細菌生長及/或能夠殺滅細菌生長之製劑，且除非另外提及，否則其可與抗細菌劑、抗生素、防腐劑、殺菌劑、消毒劑及其類似物互換使用。
在一個具體實例中，抗細菌組成物統指用於預防細菌感染之製劑，且可用作一般生活消毒劑、用於食物及烹調場所及設施之消毒劑、各種生長產物（growth product）（諸如包括養雞場及廄舍及其類似者之建築物、家畜、飲用水、垃圾、蛋床（egg bed）、運輸車輛、餐具及其類似者）的消毒用品。細菌可為大腸桿菌、沙門氏菌或梭菌屬細菌，但不限於此。
其他態樣提供一種用於製造抗細菌組成物之方法，其包含混合噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。抗細菌組成物係如上文所描述。
其他態樣提供一種用於改善細菌穩定性之方法，其包含混合噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）。噬菌體或改善噬菌體之穩定性係如上文所描述。
其他態樣提供一種抗細菌方法，其包含向需要抗細菌之個體施加噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的步驟。抗細菌方法可為細菌之控制方法（用於控制細菌之方法）、細菌之減少方法（用於減少細菌之方法）、細菌之抑制方法（例如用於抑制細菌生長之方法等）或細菌之殺滅方法或其類似方法，但不限於此。
其他態樣提供一種洗滌方法，其包含向需要洗滌之個體施加噬菌體及無水硫酸鈉（或用於改善噬菌體之穩定性的組成物）的步驟。
其他態樣提供一種無水硫酸鈉用於改善噬菌體之穩定性或製造用於改善噬菌體之穩定性的組成物的用途。
其他態樣提供一種噬菌體及無水硫酸鈉用於製造飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物之用途。
其他態樣提供一種噬菌體及用於改善噬菌體之穩定性的組成物用於製造飼料組成物、食品組成物、醫藥組成物或抗細菌組成物的用途。 [有利作用]
本申請案可藉由使用用於改善噬菌體之穩定性之包含無水硫酸鈉的組成物來改善噬菌體之儲存穩定性。
在下文中，將藉由以下實例更具體地描述本發明。然而，其僅意欲說明本發明，但本發明之範圍不受此等實例限制。 實例 1. 評估無水硫酸鈉之儲存穩定性 1. 噬菌體樣品製造
藉由將4 g之5種混合噬菌體與36 g賦形劑混合，由每個樣品2個袋來製備噬菌體樣品1至樣品3，如下表1。樣品1使用藉由混合90%（w/w）之小麥粉（Sajo Dongaone，小麥粉（第2級，中筋2類（medium 2 class）））、5%（w/w）之二氧化矽（FuJian SanMing Zheng Yuan Chemical，沈澱二氧化矽，ZJ-516B）及5%（w/w）之碳酸鈣（Omya Korea，碳酸鈣）而製備的賦形劑。樣品2及樣品3使用藉由混合賦形劑組分及無水硫酸鈉製備之混合賦形劑，該賦形劑組分由混合如上所述之小麥粉、二氧化矽及碳酸鈣製備（習知賦形劑）。樣品1至樣品3之組成概述於下表1中。
5種混合噬菌體製備有以下者組成： CJ7：6×10 9PFU/g，CJ11：4×10 9PFU/g，CJ23：1×10 9PFU/g，CJ24：5×10 9PFU/g，CJ22：3×10 8PFU/g。 [表1]
噬菌體樣品 組成
樣品1 4 g之5種混合噬菌體，36 g賦形劑（習知賦形劑100%（w/w））
樣品2 4 g之5種混合噬菌體，36 g賦形劑（習知賦形劑80%（w/w）+無水硫酸鈉20%（w/w））
樣品3 4 g之5種混合噬菌體，36 g賦形劑（習知賦形劑50%（w/w）+無水硫酸鈉50%（w/w））
噬菌體之常用名稱、目標菌株及獲取來源如下表2： [表2]
實驗組 噬菌體常用名稱 目標菌株 登錄號
CJ7 長尾病毒科 沙門氏菌屬 KCCM11030P
CJ11 長尾病毒科 沙門氏菌屬 KCCM11208P
CJ23 短尾病毒科 大腸桿菌 KCCM11365P
CJ24 長尾病毒科 大腸桿菌 KCCM11462P
CJ22 長尾病毒科 產氣莢膜梭菌 KCCM11364P
2. 儲存條件
將40 g各樣品置放於鋁袋中且進行熱密封3次。各樣品在50±2℃、90±5% RH（相對濕度）條件下儲存。 3. 噬菌體效價量測
在樣品儲存7天及14天後，各樣品在SM緩衝液（5.8 g/L NaCl、2 g/L MgSO 4·7H 2O、0.05 M Tris-Cl（pH 7.5））中稀釋10次（樣品20 g + SM緩衝液180 ml）。離心（10,000 rpm，10分鐘）50 ml稀釋溶液之後，用0.2 μm過濾器過濾噬菌體溶液。 4. 溶菌斑檢測滴定
在將噬菌體溶液連續稀釋至適當濃度之後，將100 μl稀釋於5 ml之0.7%軟瓊脂（BD DIFCO，目錄號44164）中的噬菌體樣品與50 μl噬菌體之指示菌株（OD 600 nm=2）混合。
在倒入一般LB（Luria-Bertani，好氧）或腦心浸出液（BHI，Brain Heart Infusion，厭氧）培養基且塗鋪後，量測在培育箱中培養之後（好氧；30℃，18h，厭氧；37℃，18h）的溶菌斑數目以定量噬菌體。 5. 實驗結果
在樣品儲存之後7天及14天中，定量各樣品之噬菌體的結果示於圖1至圖3及表2至表4中（樣品1：圖1，表2；樣品2：圖2，表3；樣品3：圖3，表4）。第0天之效價值（log(pfu/g)）與第14天之效價值（log(pfu/g)）之間的差值表示為Δlog，且將其除以第0天之效價值以描述效價減量。在圖4中，將樣品1至樣品3中所包含之5種噬菌體（CJ7、CJ11、CJ23、CJ24、CJ22）進行樣品儲存之後的14天中的效價減量（Δlog）顯示為圖式。 [表3]
樣品1 第0天 （pfu/g） 第14天 （pfu/g） 第0天 log(pfu/g) 第14天 log(pfu/g) Δlog 效價減量
CJ 7 6.1E+09 3.7E+08 9.8 8.6 1.2 12.24%
CJ 11 4.3E+09 1.3E+06 9.6 6.1 3.5 36.46%
CJ 23 1.2E+09 1.0E+06 9.1 6.0 3.1 34.07%
CJ 24 5.6E+09 1.0E+07 9.7 7.0 2.7 27.84%
CJ 22 3.8E+08 2.7E+06 8.6 6.4 2.2 25.58%
[表4]
樣品2 第0天 （pfu/g） 第14天 （pfu/g） 第0天 log(pfu/g) 第14天 log(pfu/g) Δlog 效價減量
CJ 7 4.9E+09 1.9E+09 9.7 9.3 0.4 4.12%
CJ 11 3.9E+09 1.7E+07 9.6 7.2 2.4 25.00%
CJ 23 1.2E+09 1.2E+07 9.1 7.1 2.0 21.98%
CJ 24 6.7E+09 1.9E+09 9.8 9.3 0.6 6.12%
CJ 22 3.9E+08 2.2E+07 8.6 7.3 1.2 13.95%
[表5]
樣品3 第0天 （pfu/g） 第14天 （pfu/g） 第0天 log(pfu/g) 第14天 log(pfu/g) Δlog 效價減量
CJ 7 4.9E+09 3.4E+09 9.7 9.5 0.2 2.06%
CJ 11 3.2E+09 3.4E+07 9.5 7.5 2.0 21.05%
CJ 23 6.1E+09 7.2E+07 9.8 7.9 1.9 19.39%
CJ 24 6.1E+09 2.0E+09 9.8 9.3 0.5 5.10%
CJ 22 3.8E+08 2.6E+07 8.6 7.4 1.2 13.95%
至於定量之結果，當使用習知賦形劑（樣品1）時，賦形劑中5種噬菌體（CJ7、CJ11、CJ23、CJ24、CJ22）在暴露於50±2℃、90±5% RH下14天時，顯示平均2.5 log之噬菌體效價減少量（平均減少27.2%）（圖1，表3）。
另一方面，當使用混合賦形劑（其中賦形劑與無水硫酸鈉混合）時，賦形劑中之5種噬菌體分別顯示約1.3 log（平均減少14.2%）（樣品2，圖2、表4）及1.2 log（平均減少12.3%）（樣品3，圖3、表5）之噬菌體效價減少量。
換言之，相比於習知賦形劑，當使用其中混合有無水硫酸鈉之混合賦形劑時，顯示維持平均1.3 log之噬菌體穩定性的作用。
根據以上描述，本發明之熟習此項技術者應理解，本發明可在不改變其技術精神或基本特徵之情況下以其他特定形式實施。就此而言，上文所描述之實例應理解為在所有方面均為例示性的而非限制性的。本發明之範圍應視為包括衍生自下文所描述之申請專利範圍之含義及範圍的所有改變或修改形式及其等效物而非上文的詳細敘述。
無
[圖1]顯示藉由在50±2℃、90±5% RH之條件下儲存噬菌體樣品（4 g之5種混合噬菌體及不包含無水硫酸鈉之賦形劑）之後在第0天、第7天及第14天量測噬菌體之效價的圖。
[圖2]顯示藉由在50±2℃、90±5% RH之條件下儲存噬菌體樣品（4 g之5種混合噬菌體及包含無水硫酸鈉20%（w/w）之賦形劑）之後在第0天、第7天及第14天量測噬菌體之效價的圖。
[圖3]顯示藉由在50±2℃、90±5% RH之條件下儲存噬菌體樣品（4 g之5種混合噬菌體及包含無水硫酸鈉50%（w/w）之賦形劑）之後在第0天、第7天及第14天量測噬菌體之效價的圖。
[圖4]顯示在50±2℃、90±5% RH之條件下儲存噬菌體樣品之後在第0天及第14天所量測之噬菌體的效價降低（Δlog(pfu/g)）。至於賦形劑，使用不包含無水硫酸鈉之賦形劑、包含無水硫酸鈉20%（w/w）之賦形劑及包含無水硫酸鈉50%（w/w）之賦形劑。

Claims (17)

  1. 一種用於改善噬菌體之穩定性的組成物，其包含無水硫酸鈉。
  2. 如請求項1之用於改善噬菌體之穩定性的組成物，其包含5至50重量%之無水硫酸鈉。
  3. 如請求項1之用於改善噬菌體之穩定性的組成物，其用於改善至少一種選自由以下者組成之群的噬菌體之穩定性：肌尾病毒科（Myoviridae）、長尾病毒科（Siphoviridae）及短尾病毒科（Podoviridae）噬菌體。
  4. 如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物，其用於製造飼料、食品或抗細菌組成物。
  5. 一種飼料組成物，其包含噬菌體及如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物。
  6. 如請求項5之飼料組成物，其中包含於該飼料組成物中之噬菌體與用於改善噬菌體之穩定性的組成物的混合比率為1:9至1:99（以上，噬菌體的重量:用於改善噬菌體之穩定性的組成物的重量）。
  7. 如請求項5之飼料組成物，其中該飼料組成物有下列特徵： 在45至60℃之溫度及80至100%之相對濕度的條件下儲存1天至14天時，包含於該飼料組成物中之噬菌體的效價比不包含無水硫酸鈉之飼料組成物高10%或更多。
  8. 一種食品組成物，其包含噬菌體及如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物。
  9. 如請求項8之食品組成物，其中包含於該食品組成物中之噬菌體與用於改善噬菌體之穩定性的組成物的混合比率為1:9至1:99（以上，噬菌體的重量:用於改善噬菌體之穩定性的組成物的重量）。
  10. 如請求項8之食品組成物，其中該食品組成物有下列特徵： 在45至60℃之溫度及80至100%之相對濕度的條件下儲存1天至14天時，包含於該食品組成物中之噬菌體的效價比不包含無水硫酸鈉之食品組成物高10%或更多。
  11. 一種抗細菌組成物，其包含噬菌體及如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物。
  12. 如請求項11之抗細菌組成物，其中包含於該抗細菌組成物中之噬菌體與用於改善噬菌體之穩定性的組成物的混合比率為1:9至1:99（以上，噬菌體的重量:用於改善噬菌體之穩定性的組成物的重量）。
  13. 如請求項11之抗細菌組成物，其中該抗細菌組成物有下列特徵： 在45至60℃之溫度及80至100%之相對濕度的條件下儲存1天至14天時，包含於該抗細菌組成物中之噬菌體的效價比不包含無水硫酸鈉之抗細菌組成物高10%或更多。
  14. 一種用於改善噬菌體之穩定性的方法，其包含混合噬菌體及如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物的步驟。
  15. 一種抗細菌方法，其包含向需要抗細菌之個體施加噬菌體及如請求項1至3中任一項之用於改善噬菌體之穩定性的組成物的步驟。
  16. 一種無水硫酸鈉之用途，其用於改善噬菌體之穩定性。
  17. 一種用於改善噬菌體之穩定性之包含無水硫酸鈉的組成物之用途，其係用於製造飼料、食品或抗細菌組成物。
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