KR20230113914A

KR20230113914A - A functional cosmetic composition that prevents and improves atopic dermatitis, which contains a gojiberry leaf extract from which chlorophyll has been removed as an active ingredient

Info

Publication number: KR20230113914A
Application number: KR1020220009769A
Authority: KR
Inventors: 이선영; 배은영; 이한솔
Original assignee: 충남대학교산학협력단
Priority date: 2022-01-24
Filing date: 2022-01-24
Publication date: 2023-08-01

Abstract

본 발명은 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로서, 세척 및 건조된 구기자 잎 100중량부에 용매 500~1,000중량부를 첨가하여 2~5시간 동안 60~80℃에서 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 구기자 잎 추출물을 제조한 후, 상기 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하여 제조하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따르면, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 최적의 조건을 확립하여 추출함으로써 원료 표준화를 제공하고, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선할 수 있는 효과가 있다. The present invention relates to a functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, containing as an active ingredient a chlorophyll-free goji berry leaf extract, and adding 500 to 1,000 parts by weight of a solvent to 100 parts by weight of washed and dried goji berry leaves After repeated extraction 2-4 times at 60-80 ° C for 2-5 hours, filtering, concentrating with a rotary evaporator and freeze-drying to prepare a goji berry leaf extract, dissolving the extracted goji ja leaf extract with chloroform , It is characterized by preparing by further adding methanol to precipitate the pigment, and then removing chlorophyll using a charcoal column and silica gel column chromatography.
According to the present invention, by establishing and extracting the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed, it is possible to standardize raw materials and improve the symptoms of atopic dermatitis through an atopic dermatitis animal model.

Description

A functional cosmetic composition that prevents and improves atopic dermatitis, which contains a gojiberry leaf extract from which chlorophyll has been removed as an active ingredient}

본 발명은 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 추출하고, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증하여, 천연물 추출물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없고, 장기적으로 사용 가능한 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention extracts a goji berry leaf extract from which chlorophyll components have been removed, and verifies the efficacy of improving the symptoms of atopic dermatitis through an animal model for atopic dermatitis, thereby obtaining a functional cosmetic with a preventive and improving effect of atopic dermatitis as a natural extract. When used as a raw material of the composition, it is free from toxicity and side effects, and relates to a functional cosmetic composition having a long-term usable chlorophyll component-free gojija leaf extract containing as an active ingredient atopic dermatitis preventing and improving effects.

최근 사회경제적 성장에 따른 산업화, 도시화로 인한 생활환경의 변화와 대기오염 등으로 인해 알레르기 질환의 악화요인이 증가하여 면역체계 이상에 의해 발생하는 염증, 알레르기 및 아토피성 피부염 등의 알레르기 질환이 증가하고 있다.Recent social and economic growth has led to changes in the living environment due to industrialization and urbanization, as well as air pollution, causing aggravating factors of allergic diseases to increase. there is.

아토피성 피부염은 피부에 발생하는 만성 알레르기 염증성 질환으로 우리나라 유아 및 어린이의 20% 이상 고통받고 있으며, 치료를 위한 시간적, 경제적 및 정신적 부담으로 인하여 삶의 질을 현저히 떨어뜨리는 질환으로 분류되고 있다. 또한, 아토피 환자의 50% 이상이 천식, 75% 이상이 알레르기성 비염으로 진행되는 등 천식, 알레르기 비염 및 식품 알레르기와도 연관이 많아 아토피성 피부염에 대한 심각성이 대두되고 있다. Atopic dermatitis is a chronic allergic inflammatory disease that occurs on the skin and suffers from more than 20% of infants and children in Korea, and is classified as a disease that significantly reduces quality of life due to time, economic and mental burdens for treatment. In addition, more than 50% of atopic patients develop asthma, and more than 75% develop allergic rhinitis. Asthma, allergic rhinitis, and food allergy are also closely related, and the seriousness of atopic dermatitis is emerging.

아토피성 피부염은 항원에 대한 이상적 피부반응으로 세균감염에 의해 악화된다고 알려져 있으며, 피부장벽 손상(microbiome, physical, chemical, immunological barrier), TSLP 발현, Th1/Th2 불균형, 각질형성세포(keratinocyte), 비만 세포(mast cell), 수지상 세포(dendritic cell) 등의 세포과다활성 등 다양한 면역반응에 총체적으로 문제가 생기는 질환이다. 따라서, 아토피성 피부염의 치료에는 다양한 악화인자를 억제하는 복합적 치료가 필요한 상황이다. Atopic dermatitis is known to be aggravated by bacterial infection as an ideal skin response to antigens, skin barrier damage (microbiome, physical, chemical, immunological barrier), TSLP expression, Th1/Th2 imbalance, keratinocytes, obesity It is a disease that causes overall problems in various immune responses, such as hyperactivity of cells such as mast cells and dendritic cells. Therefore, in the treatment of atopic dermatitis, a complex treatment for suppressing various exacerbating factors is required.

특히, 아토피성 피부염은 만성적인 피부의 염증성 질환으로 환경오염, 과도한 항생제 사용, 스트레스 등으로 인하여 환자가 급증하고 있다. 아토피 환자수는 고혈압, 당뇨병보다 많으며 매년 환자 수가 급증하고 있지만, 병원을 찾지 않고 단순 보습제, 민간요법 등으로 치료하는 이들을 감안하면 최고 800만 명에 이른다.In particular, atopic dermatitis is a chronic inflammatory disease of the skin, and the number of patients is rapidly increasing due to environmental pollution, excessive use of antibiotics, and stress. The number of atopic patients is higher than those of hypertension and diabetes, and the number of patients is rapidly increasing every year.

아토피성 피부염 치료제는 스테로이드나 타크로리무스(tacrolimus) 같은 비특이적 면역억제제이거나 항생제, 항히스타민제 같은 증상완화제로 근본적인 치료제가 없으며 항생제와 스테로이드는 장기복용시의 부작용으로 인하여 국민이 선택할 수 있는 치료법이 제한되어 있다. 또한, 아토피성 피부염은 예방적인 차원에서 복용 및 사용할 수 있는 소재의 개발이 전무하며, 아토피의 특성상 장기사용이 필요하므로, 독성과 부작용이 없고 장기적으로 사용 가능한 예방 및 개선용 소재의 개발이 필요하다.Treatments for atopic dermatitis are non-specific immunosuppressants such as steroids or tacrolimus, or symptom relievers such as antibiotics and antihistamines. There is no fundamental treatment, and antibiotics and steroids have side effects when taken for a long time. In addition, atopic dermatitis has no development of materials that can be taken and used in a preventive way, and long-term use is required due to the nature of atopy, so it is necessary to develop materials for prevention and improvement that are free from toxicity and side effects and can be used for a long time. .

한편, 구기자는 구기자 나무의 열매(Lycii fructus)를 말하고, 뿌리의 껍질은 지골피, 잎은 구기엽, 어린순은 청정초라고 한다. 동의보감에 의하면 구기자는 자양, 강장, 보혈, 지갈 등에 효능이 있다고 하며, 본초강목에 의하면 구기자는 독성이 없고, 구기자 복용시 근골이 단단해지고 더위와 추위를 타지 않으며 가슴의 염증과 갈증을 수반하는 당뇨병이나 신경이 마비되는 질병에 좋고 폐와 신장의 기능을 촉진시켜 시력을 좋아지게 하는 것으로 기록되어 있다. 구기자는 betain, cholin, physalien, rutin, β-sitosterol, zeazanthin 등 다양한 기능성 성분을 함유하고 있으며, 항산화, 항균, 항암, 면역증진, 간 기능개선 및 혈중 콜레스테롤 저하 효과 등 다양한 생리활성을 나타낸다. 아시아 지방이 원산지인 낙엽송 소관목인 구기자 나무(Lycium chinense Mill.)는 우리나라의 충남 청양군과 전남 진도군을 비롯한 중국, 대만, 일본, 유럽 등지에 자생하거나 재배되고 있다. 구기자 열매에는 세포복제, 해독반응에 중요한 역할을 담당하는 betaine과 beta-carotine, cholesterol, glycine, linoleic acid, nicotinic acid, physaline, vitamin B₁, B₂ 등이 함유되어 있으며, 잎인 구기엽에는 cytidylic acid B, hypoxanthine, inosine, pyroglutamic acid 등이 함유되어 있다. 그러나, 구기자의 잎에 대량 함유되어있는 클로로필(chlorophyll)은 유효성분의 추출 효율을 낮추고 제품의 색상 및 생리활성을 감소시키는 단점을 가지고 있다.On the other hand, goji refers to the fruit of the goji tree (Lycii fructus), the bark of the root is called phagocytic, the leaves are called goji, and the young shoot is called clean grass. According to Donguibogam, goji berries are said to be effective in nourishing, tonic, blood, and sedation. It is good for diseases that paralyze the nerves and it is recorded to improve the eyesight by promoting the function of the lungs and kidneys. Goji berry contains various functional ingredients such as betain, cholin, physalien, rutin, β-sitosterol, and zeazanthin, and exhibits various physiological activities such as antioxidant, antibacterial, anticancer, immune enhancement, liver function improvement, and blood cholesterol lowering effect. Goji berry ( Lycium ) , a larch subfamily native to Asia chinense Mill.) grows wild or is cultivated in China, Taiwan, Japan, and Europe, including Cheongyang-gun, Chungcheongnam-do and Jindo-gun, Jeollanam-do in Korea. Goji berries contain betaine, beta-carotine, cholesterol, glycine, linoleic acid, nicotinic acid, physaline, vitamins B ₁ and B ₂ , which play an important role in cell replication and detoxification reactions. It contains B, hypoxanthine, inosine, and pyroglutamic acid. However, chlorophyll, which is contained in large amounts in the leaves of goji berries, has the disadvantage of lowering the extraction efficiency of active ingredients and reducing the color and physiological activity of the product.

클로로필은 식물체의 잎, 조류 또는 해조류의 엽록체 내에 존재하는 광합성 색소로서 녹색식물의 엽록체 속에서 빛 에너지를 흡수하여 이산화탄소를 유기화합물인 탄수화물로 동화시키는데 쓰인다. 클로로필은 인체에 흡수되었을 때 세포의 성장을 돕고 항염증 및 혈행을 돕는 등 유익한 효능을 보이는 물질로 알려져 있어 최근 녹조류 등에서 추출하여 건강기능 식품으로 이용되고 있다. 그러나, 식품 가공시 클로로필이나 리보플라빈 등의 색소 성분들은 감광제로 작용하여 공기 중의 산소로부터 triplet oxygen을 생성하고 이어서 반응성이 매우 높은 singlet oxygen을 만들므로 지질과산화를 일으키는 등 pro-oxidant의 역할을 하게 된다. 또한, 클로로필을 함유한 소재들은 식품이나 화장품, 비누 등으로 가공시 열과 pH 등에 의하여 색상이 변화되어 소비자 만족도가 감소하는 특성을 보이므로 가공시 클로로필을 제거하거나 발색을 조절하는 기술이 필수로 요구된다.Chlorophyll is a photosynthetic pigment present in the chloroplasts of leaves, algae or algae of plants, and is used to assimilate carbon dioxide into carbohydrates, which are organic compounds, by absorbing light energy in the chloroplasts of green plants. Chlorophyll is known as a substance that shows beneficial effects such as helping cell growth, anti-inflammation and blood circulation when absorbed into the human body, and has recently been extracted from green algae and used as a health functional food. However, during food processing, pigment components such as chlorophyll and riboflavin act as photosensitizers to generate triplet oxygen from oxygen in the air, and then create highly reactive singlet oxygen, which causes lipid peroxidation and acts as a pro-oxidant. In addition, materials containing chlorophyll change color due to heat and pH when processed into food, cosmetics, soap, etc., resulting in a decrease in customer satisfaction. Therefore, technology to remove chlorophyll or control color development during processing is required. .

따라서, 구기자 잎의 유효성분 추출조건으로 온도, 추출용매, 추출시간의 조건을 확립하여 원료 표준화를 실현하고, 구기자 잎에 함유된 클로로필(chlorophyll)을 제거한 유효성분 추출방법을 확립하여, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증함을 통해, 천연물 추출물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없고, 장기적으로 사용 가능한 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 소재의 개발이 필요한 실정이다.Therefore, standardization of raw materials is realized by establishing the conditions of temperature, extraction solvent, and extraction time as the conditions for extracting the active ingredient of goji berry leaves, and a method for extracting active ingredients by removing chlorophyll contained in goji berry leaves is established, which is effective for atopic dermatitis. Through the verification of the efficacy of improving the symptoms of atopic dermatitis through a dermatitis animal model, when used as a raw material for a functional cosmetic composition having a prevention and improvement effect of atopic dermatitis as a natural extract, there is no toxicity and side effects, and it can be used for a long time. There is a need to develop a functional cosmetic material containing goji ja leaf extract from which chlorophyll has been removed as an active ingredient and having an effect of preventing and improving atopic dermatitis.

KRKR 10-2020-0109592 10-2020-0109592 A(2020.09.23.)A(2020.09.23.) KRKR 10-1310980 10-1310980 B1(2013.B1 (2013. 09.09. 13.)13.)

본 발명은 상기 종래기술이 갖는 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물을 제공함에 그 목적이 있다. The present invention has been made to solve the problems of the prior art, and the problem to be solved in the present invention is a functional cosmetic containing goji ja leaf extract from which chlorophyll is removed as an active ingredient and having an effect of preventing and improving atopic dermatitis Its purpose is to provide a composition.

또 다른 목적으로는 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 최적의 조건을 확립하여 추출함으로써 원료 표준화를 제공하고, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증하며, 천연물 추출물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없고, 장기적으로 사용 가능하도록 함에 그 목적이 있다. Another purpose is to provide raw material standardization by extracting the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed by establishing optimal conditions, verifying the efficacy of improving the symptoms of atopic dermatitis through an atopic dermatitis animal model, and natural products When used as a raw material for a functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis as an extract, the purpose is to have no toxicity and side effects and to be usable for a long time.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물은 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물 0.1~10중량%를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다. In order to achieve the above object, the functional cosmetic composition having the effect of preventing and improving atopic dermatitis containing the chlorophyll-free gojija leaf extract as an active ingredient according to the present invention is a chlorophyll-free gojija leaf extract 0.1 to 10 It is characterized by containing weight% as an active ingredient.

또, 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 한다. In addition, the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component is removed is characterized by extracting with a solvent selected from the group consisting of water, an organic solvent, and a mixed solvent thereof.

또, 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 100% 에탄올을 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 한다. In addition, the goji ja leaf extract from which the chlorophyll component is removed is characterized in that it is extracted using 100% ethanol.

또, 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 용매를 통해 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하는 것을 특징으로 한다. In addition, the goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed is dissolved in chloroform by dissolving the goji ja leaf extract extracted through a solvent, further adding methanol to precipitate the pigment, and then using a charcoal column and silica gel column chromatography ( It is characterized in that chlorophyll is removed using silica gel column chromatography).

또, 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 용매를 통해 추출하되, 상기 용매에 NaOH 및 KOH 중에서 선택되는 염기 또는 HCl 및 CH₃COOH 중에서 선택되는 산을 더 첨가하는 것을 특징으로 하는 한다. In addition, the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component is removed is extracted through a solvent, characterized in that a base selected from NaOH and KOH or an acid selected from HCl and CH ₃ COOH is further added to the solvent.

또, 상기 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 에센스, 영양에센스, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 아이크림, 핸드크림, 팩, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스프레이, 파운데이션, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 한다. In addition, the composition is softening lotion, astringent lotion, nutrient lotion, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, essence, nutrient essence, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, cream, massage cream, nutrient cream, moisture Cream, eye cream, hand cream, pack, hair tonic, shampoo, conditioner, hair conditioner, hair treatment, gel, spray, foundation, sunscreen, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser It is characterized in that it is prepared in any one selected formulation.

또, 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 제조방법은 세척 및 건조된 구기자 잎 100중량부에 용매 500~1,000중량부를 첨가하여 2~5시간 동안 60~80℃에서 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 구기자 잎 추출물을 제조한 후, 상기 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하여 제조하는 것을 특징으로 한다. In addition, the method for producing goji ja leaf extract from which chlorophyll components are removed according to the present invention is 2 to 4 times at 60 to 80 ° C. for 2 to 5 hours by adding 500 to 1,000 parts by weight of a solvent to 100 parts by weight of washed and dried goji ja leaf. After repeated extraction and filtration, concentration with a rotary evaporator and freeze-drying to prepare a wolfberry leaf extract, the extracted wolfberry leaf extract was dissolved in chloroform, methanol was further added to precipitate the pigment, and then a charcoal column ( It is characterized in that it is prepared by removing chlorophyll using charcoal column) and silica gel column chromatography.

본 발명에 따르면, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 최적의 조건을 확립하여 추출함으로써 원료 표준화를 제공하고, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선할 수 있는 효과가 있다. According to the present invention, by establishing and extracting the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed, it is possible to standardize raw materials and improve the symptoms of atopic dermatitis through an atopic dermatitis animal model.

또한, 천연물 추출물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없고, 장기적으로 사용 가능한 효과가 있다. In addition, when used as a raw material of a functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis as a natural extract, there is no toxicity and side effects, and there is an effect that can be used for a long time.

도 1은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 HepG2 세포 생존력에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 HepG2 세포에서 세포 내 ROS 수준의 생산에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 nitric oxide 생성 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 염증성 사이토카인 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 iNOS, COX-2, p-NF-κB p65, NF-κB p65 단백질 발현을 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 혈청 염증성 사이토카인 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 HaCaT cell에서 항산화능을 나타낸 도면이다.
도 8은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 HaCaT cell에서 추출물이 세포생존율에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 9는 본 발명에 따른 구기자 잎 추출물과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 통해 NC/Nga 마우스에서의 임상 피부를 비교한 도면이다.
도 10은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 통해 NC/Nga 마우스에서의 체중 측정을 비교한 도면이다.
도 11은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 DNCB Nc/Nga 마우스에 의한 아토피 피부염의 혈청 IgE 생성에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 12는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 DNCB Nc/Nga 마우스에 의해 유도된 아토피 피부염에서 혈청 TNF-a 및 IL-6의 생성에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 13은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 통해 DNCB Nc/Nga 마우스에 의해 유도된 아토피 피부염에서 NC/Nga 마우스의 표피 두께를 측정한 도면이다.
도 14는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 조직 병리학 특성을 나타낸 도면이다.
도 15는 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 DNCB Nc/Nga 마우스에 의해 유도된 아토피 피부염에서 IL-6의 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 16은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 HaCaT 세포 생존력에 미치는 영향을 나타낸 도면이다.
도 17은 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물이 TNF-α 및 IFN-γ 유도 HaCaT 세포에서 TARC 및 MDC의 발현에 미치는 영향을 나타낸 도면이다. 1 is a view showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention has on HepG2 cell viability.
Figure 2 is a view showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention on the production of intracellular ROS levels in HepG2 cells.
Figure 3 is a view showing the nitric oxide production inhibitory effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention.
Figure 4 is a view showing the inflammatory cytokine inhibitory effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention.
5 is a diagram showing the protein expression of iNOS, COX-2, p-NF-κB p65, and NF-κB p65 in the goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention.
Figure 6 is a view showing the serum inflammatory cytokine inhibitory effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention.
Figure 7 is a view showing the antioxidant activity in HaCaT cells of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention.
Figure 8 is a view showing the effect of the extract on cell viability in HaCaT cells of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention.
9 is a view comparing clinical skin in NC/Nga mice through the gojija leaf extract according to the present invention and the wolfberry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed.
Figure 10 is a comparison of body weight measurement in NC / Nga mice through the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention.
Figure 11 is a view showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention on serum IgE production in atopic dermatitis caused by DNCB Nc / Nga mice.
12 is a diagram showing the effect of the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention affects the production of serum TNF-a and IL-6 in atopic dermatitis induced by DNCB Nc/Nga mice.
13 is a diagram showing the thickness of the epidermis of NC/Nga mice in atopic dermatitis induced by DNCB Nc/Nga mice through the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component was removed according to the present invention.
14 is a view showing the histopathological characteristics of the goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention.
15 is a view showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention on the mRNA expression of IL-6 in atopic dermatitis induced by DNCB Nc/Nga mice.
16 is a view showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed according to the present invention affects HaCaT cell viability.
17 is a diagram showing the effect of the gojija leaf extract from which the chlorophyll components are removed according to the present invention affects the expression of TARC and MDC in TNF-α and IFN-γ induced HaCaT cells.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명하면 다음과 같다. Hereinafter, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 발명은 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a functional cosmetic composition containing goji ja leaf extract from which chlorophyll is removed as an active ingredient and having an effect of preventing and improving atopic dermatitis.

본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 용매추출 및 클로로필 성분을 제거하여 제조한 것으로서, 세포독성이 없고 부작용 등에 대한 안정성이 보장되며, 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 예방 및 개선 효과를 갖는 우수한 항산화 활성 효과가 있음을 확인하였다. The goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed according to the present invention is prepared by solvent extraction and removal of the chlorophyll component, has no cytotoxicity, and is guaranteed to be stable against side effects, and prevents and It was confirmed that there is an excellent antioxidant activity effect having an improvement effect.

본 발명의 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 세척 및 건조된 구기자 잎에 용매를 첨가하여 추출, 여과 및 감압농축하고 동결건조하여 구기자 잎 추출물을 제조한 후, 상기 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하여 제조한다. The chlorophyll-free goji ja leaf extract of the present invention is extracted by adding a solvent to the washed and dried goji ja leaves, filtered, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to prepare a goji ja leaf extract, and then the extracted goji ja leaf extract with chloroform It is prepared by dissolving, precipitating the pigment by further adding methanol, and removing chlorophyll using a charcoal column and silica gel column chromatography.

이를 통해, 구기자 잎의 유효한 성분은 충분히 추출시키고, 유효성분의 추출 효율을 낮추고 제품의 색상 및 생리활성을 감소시키는 구기자의 잎에 대량 함유되어있는 클로로필(chlorophyll) 성분을 제거할 수 있게 된다. Through this, it is possible to sufficiently extract the active ingredients of the goji berry leaves and remove the chlorophyll component contained in large amounts in the leaves of goji berries, which lowers the extraction efficiency of the active ingredients and reduces the color and physiological activity of the product.

더 상세하게는, 세척 및 건조된 구기자 잎 100중량부에 용매 500~1,000중량부를 첨가하여 2~5시간 동안 60~80℃에서 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 구기자 잎 추출물을 제조한 후, 상기 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하여 제조한다. More specifically, 500 to 1,000 parts by weight of solvent was added to 100 parts by weight of the washed and dried goji berry leaves, extracted 2 to 4 times at 60 to 80 ° C for 2 to 5 hours, filtered, and then concentrated with a rotary evaporator. After preparing a wolfberry leaf extract by freeze-drying, the extracted wolfberry leaf extract was dissolved in chloroform, methanol was further added to precipitate the pigment, and then charcoal column and silica gel column chromatography It is prepared by removing chlorophyll using chromatography).

여기서, 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나게 되면 추출효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다. Here, if the extraction temperature and extraction time are out of range, the extraction efficiency may decrease or the components may change.

바람직하게는, 세척 및 건조된 구기자 잎 100중량부에 용매 800중량부를 첨가하여 3시간 동안 70℃에서 3회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 구기자 잎 추출물을 제조한 후, 상기 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거하여 제조하는 것이다. Preferably, 800 parts by weight of a solvent was added to 100 parts by weight of the washed and dried goji ja leaf, extracted three times at 70 ° C. for 3 hours, filtered, concentrated with a rotary evaporator, and lyophilized to prepare a goji ja leaf extract. Then, the extracted goji berry leaf extract was dissolved in chloroform, methanol was further added to precipitate the pigment, and chlorophyll was removed using a charcoal column and silica gel column chromatography to obtain is to manufacture

본 발명에서 사용되는 용매는 물, 유기용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 100% 에탄올을 선택하여 추출한다.The solvent used in the present invention may be selected from the group consisting of water, organic solvents, and mixed solvents thereof, and preferably 100% ethanol is selected and extracted.

여기서, 추출용매로 100% 에탄올을 사용하는 것은 추출용매로 50, 70 및 100% 에탄올을 사용하여 구기자 추출물을 제조하고, 이에 따른 용매 추출조건에 따른 효능을 측정해 본 결과, 100% 에탄올에서 총 폴리페놀 함량 및 항산화활성이 가장 높게 측정되어 가장 우수한 효과를 보였기 때문이다. 따라서, 본 발명에서는 추출용매로 100% 에탄올을 사용하여 추출물을 제조한다.Here, the use of 100% ethanol as the extraction solvent is the result of preparing the goji berry extract using 50, 70, and 100% ethanol as the extraction solvent, and measuring the efficacy according to the solvent extraction conditions accordingly, in 100% ethanol This is because polyphenol content and antioxidant activity were measured the highest and showed the best effect. Therefore, in the present invention, an extract is prepared using 100% ethanol as an extraction solvent.

그리고, 본 발명에서 사용되는 상기 차콜 컬럼(charcoal column)은 입자상 활성탄소를 이용하여 클로로필 성분을 제거하는 것을 특징으로 한다. 상기 차콜(charcoal)은 분말형태의 활성탄도 사용이 가능하나, 컬럼에 충진하여 사용되기 위해서는 입자상 활성탄이 바람직하다. In addition, the charcoal column used in the present invention is characterized in that the chlorophyll component is removed using particulate activated carbon. The charcoal (charcoal) can also be used in the form of powdered activated carbon, but particulate activated carbon is preferred in order to be used by filling a column.

또한, 본 발명에서는 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 총 페놀류 성분의 함량을 증가시켜 항산화 능력을 향상시키기 위해 상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 추출과정에서, 용매에 NaOH 및 KOH 중에서 선택되는 염기 또는 HCl 및 CH₃COOH 중에서 선택되는 산을 더 첨가할 수 있다. In addition, in the present invention, in the extraction process of the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed, in order to increase the content of total phenolic components of the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed to improve the antioxidant capacity, the solvent is selected from NaOH and KOH A base or an acid selected from HCl and CH ₃ COOH may be further added.

더 상세하게는, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 추출과정에서, 용매 100중량부에 대하여 NaOH 및 KOH 중에서 선택되는 염기 또는 HCl 및 CH₃COOH 중에서 선택되는 산을 0.1~10중량부 더 첨가하는 것이다. More specifically, in the extraction process of the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed, 0.1 to 10 parts by weight of a base selected from NaOH and KOH or an acid selected from HCl and CH ₃ COOH based on 100 parts by weight of the solvent is added. will be.

만약, 염기 또는 산의 첨가함량이 상기 범위 미만이면 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물 중의 총 페놀류 성분의 함량이 증가되는 정도가 미미하며, 상기 범위를 초과하면 유효 물질이 가수분해되어 미용 활성이 낮아질 수 있어 바람직하지 않다. If the added content of the base or acid is less than the above range, the degree to which the content of total phenolic components in the gojija leaf extract from which the chlorophyll component is removed is increased is insignificant, and if it exceeds the above range, the active substance is hydrolyzed and the cosmetic activity is lowered. may not be desirable.

또한, 추출물의 총 페놀류 성분의 함량을 증가시켜 항산화 능력을 향상시키기 위해 상기 추출과정 이전에 상기 구기자 잎 분말을 셀룰레이즈(cellulase), 펙티네이즈(pectinase), 헤미셀룰레이즈(hemicellulase), 아라비네이즈(arabinase), 베타-글루카네이즈(β-glucanase), 자일라네이즈(xylanase), 아밀레이즈(amylase), 아밀로글루코시데이즈(amyloglucosidase)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 어느 하나의 가수분해 효소로 처리하는 과정을 포함할 수 있다.In addition, cellulase, pectinase, hemicellulase, arabinase (cellulase), pectinase, hemicellulase, arabinase ( arabinase), beta-glucanase (β-glucanase), xylanase (xylanase), amylase (amylase), treatment with at least one hydrolase selected from the group consisting of amyloglucosidase process may be included.

상기 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물로 사용될 수 있다.Goji ja leaf extract from which the chlorophyll component is removed can be used as a functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis.

또한, 전체 조성물에 대하여, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 0.1~10중량%를 유효성분으로 포함하는 것이 바람직하다. In addition, with respect to the total composition, it is preferable to include 0.1 to 10% by weight of the goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed as an active ingredient.

최소한의 효과를 달성할 수 있도록 조성물의 함량은 상기 최소치 이상인 것이 바람직하며, 또한 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용가능성을 고려하여 조성물의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다.The content of the composition is preferably equal to or greater than the minimum value so as to achieve the minimum effect, and the content of the composition is preferably equal to or less than the maximum value in consideration of deterioration in usability due to excessive addition and applicability to various formulations.

또한, 본 발명의 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 에센스, 영양에센스, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 아이크림, 핸드크림, 팩, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스프레이, 파운데이션, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다.In addition, the functional cosmetic composition having the effect of preventing and improving atopic dermatitis containing the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed as an active ingredient of the present invention can be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example For example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays may be formulated, but are limited thereto. it is not going to be More specifically, softening lotion, astringent lotion, nourishing lotion, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, essence, nutrient essence, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, cream, massage cream, nutrient cream, moisture Cream, eye cream, hand cream, pack, hair tonic, shampoo, conditioner, hair conditioner, hair treatment, gel, spray, foundation, sunscreen, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser It can be prepared in any one selected formulation.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component. can

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and additionally chlorofluorohydrocarbon, propane/butane or dimethyl ether It may contain propellants such as

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산에스테르가 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or sorbitan may be used.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Star cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth and the like may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세린, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleanser, as carrier components, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, fatty alcohols, fatty acid glycerin, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.Ingredients included in the cosmetic composition of the present invention include ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to active ingredients and carrier ingredients, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and conventional adjuvants such as fragrances. can include

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다. The cosmetic composition of the present invention includes a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, high-molecular peptides, high-molecular polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extracts.

수용성 비타민으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다. Any water-soluble vitamins may be included as long as they can be incorporated into cosmetics, but preferably vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine hydrochloride, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, and vitamins. H and the like, and their salts (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate, etc.) or derivatives (sodium ascorbic acid-2-phosphate, magnesium salt of ascorbic acid-2-phosphate, etc.) can also be used in the present invention. It is included in the water-soluble vitamins. Water-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as a microbial transformation method, a purification method from a microbial culture, an enzymatic method, or a chemical synthesis method.

유용성 비타민으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 포함할 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.Any useful vitamins may be included as long as they can be formulated into cosmetics, but preferably include vitamin A, carotene, vitamin D2, vitamin D3, vitamin E (d1-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol), etc. , their derivatives (ascorbine palmitate, ascorbine stearate, ascorbine dipalmitate, dl-alpha tocopherol acetate, DL-pantothenyl alcohol, D-pantothenyl alcohol, pantothenyl ethyl ether) and the like are also used in the present invention. Included in useful vitamins. The useful vitamins can be obtained by conventional methods such as microbial transformation, purification from microbial culture, enzymatic or chemical synthesis.

고분자 펩티드로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 포함할 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다. The polymer peptide may include anything as long as it can be incorporated into cosmetics, but preferably includes collagen, hydrolyzed collagen, gelatin, elastin, hydrolyzed elastin, keratin, and the like. Polymer peptides can be purified and obtained by conventional methods such as a purification method from a culture medium of microorganisms, an enzyme method, or a chemical synthesis method, or can be used after being purified from natural products such as pig or cow dermis or silkworm silk fibers.

고분자 다당으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 포함할 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다. The polymeric polysaccharide may include anything as long as it can be blended in cosmetics, but preferably includes hydroxyethyl cellulose, xanthan gum, sodium hyaluronate, chondroitin sulfate or a salt thereof (sodium salt, etc.). For example, chondroitin sulfate or a salt thereof can be used after being purified from mammals or fish.

스핑고 지질로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 포함할 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.The sphingolipid may include any material as long as it is compatible with cosmetics, but preferably includes ceramide, phytosphingosine, sphingoglycolipid, and the like. Sphingolipids can be purified by conventional methods or obtained by chemical synthesis from mammals, fish, shellfish, yeast, or plants.

해초 엑기스로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.The seaweed extract may include anything as long as it can be blended in cosmetics, but preferably brown algae extract, red algae extract, green algae extract, etc. are mentioned, and calrageenan, arginic acid, and algae purified from these seaweed extracts Sodium ginsate, potassium alginate, etc. are also included in the seaweed extract used in the present invention. Seaweed extract can be obtained by purifying from seaweed by a conventional method.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위를 제한하는 것이 아님은 통상의 기술자에게 있어서 명백한 사실이다. 즉, 본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 통상의 기술자에 의하여 쉽게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, it is clear to those skilled in the art that the following examples are only intended to specifically illustrate the present invention and do not limit the scope of the present invention. That is, simple modifications or changes of the present invention can be easily performed by a person skilled in the art, and all such modifications or changes can be considered to be included in the scope of the present invention.

실시예 1 : 본 발명에 따른 구기자 잎 추출물 제조Example 1: Preparation of goji ja leaf extract according to the present invention

세척 및 건조된 구기자 잎에 8배량의 50, 70 및 100% 에탄올을 각각 첨가하여 3시간 동안 70℃에서 3회 반복추출하여 여과지로 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 제조한다.It is prepared by adding 8 times the amount of 50, 70, and 100% ethanol to washed and dried goji berry leaves, respectively, extracting three times at 70 ° C. for 3 hours, filtering with filter paper, concentrating with a rotary evaporator, and freeze-drying.

여기서, 50, 70 및 100% 에탄올을 이용하여 제조된 구기자 잎 추출물은 도면, 표 및 실험내용상에 LL50, LL70 및 LL100으로 기재하였다. Here, goji ja leaf extracts prepared using 50, 70 and 100% ethanol were described as LL50, LL70 and LL100 on drawings, tables and experimental details.

실시예 2 : 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물 제조 Example 2: Preparation of goji ja leaf extract from which chlorophyll components are removed according to the present invention

상기 100% 에탄올을 사용하여 추출된 구기자 잎 추출물을 클로로포름으로 용해시키고, 메탄올을 더 첨가하여 색소를 침전시킨 후, 차콜 컬럼(charcoal column) 및 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 이용하여 클로로필을 제거한다.The goji berry leaf extract extracted using 100% ethanol was dissolved in chloroform, methanol was further added to precipitate the pigment, and then, using a charcoal column and silica gel column chromatography, Remove chlorophyll.

여기서, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 도면, 표 및 실험내용상에 LL100 Ch- 또는 LLE with CR로 기재하였다.Here, the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component was removed was described as LL100 Ch- or LLE with CR on the drawings, tables, and experimental details.

실험 1 : 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 수율, 클로로필 및 폴리페놀 함량 측정 Experiment 1: Measurement of yield, chlorophyll and polyphenol contents of goji japonica leaf extract from which chlorophyll components have been removed according to the present invention

본 발명에서는 클로로필(chlorophyll)을 제거하였을 때 그 제거율을 보기 위하여 100% 에탄올 구기자 잎 추출물(실시예 1)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(실시예 2)의 클로로필(chlorophyll) a 함량을 측정하였다. In the present invention, in order to see the removal rate when chlorophyll is removed, the chlorophyll a content of the 100% ethanol goji berry leaf extract (Example 1) and the chlorophyll-free goji berry leaf extract (Example 2) is measured did

표 1에 나타난 바와 같이, 클로로필(chlorophyll) a가 99.9% 제거된 것으로 확인되었다. 100% 에탄올 구기자 잎 추출물의 수율은 20.5%이었으며, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 수율은 16.4%로 클로로필 제거로 인해 수율이 20% 감소하였다. As shown in Table 1, it was confirmed that 99.9% of chlorophyll a was removed. The yield of the 100% ethanol goji berry leaf extract was 20.5%, and the yield of the chlorophyll-free goji berry leaf extract was 16.4%, which was reduced by 20% due to the removal of chlorophyll.

또한, 50%, 70%, 100%의 에탄올로 추출한 구기자 잎 추출물(LL50, LL70, LL100)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LL100 Ch-)의 폴리페놀 함량을 측정한 결과, LL100의 총 폴리페놀 함량은 140.51±7.45mg GAE/g로 LL70의 62.60±5.57mg GAE/g이나 LL50의 64.74±7.72mg GAE/g에 비해 유의하게 높았고 LL100 Ch-의 폴리페놀함량은 312.89±10.21mg GAE/g로 LL100 의 폴리페놀 함량에 대비하여 2배 이상 높았다. In addition, as a result of measuring the polyphenol content of the goji berry leaf extracts (LL50, LL70, LL100) extracted with 50%, 70%, and 100% ethanol and the chlorophyll-free goji berry leaf extract (LL100 Ch-), the total The polyphenol content was 140.51±7.45mg GAE/g, which was significantly higher than 62.60±5.57mg GAE/g of LL70 or 64.74±7.72mg GAE/g of LL50, and the polyphenol content of LL100 Ch- was 312.89±10.21mg GAE/g. In g, it was more than twice as high as the polyphenol content of LL100.

실험 2 : 본 발명에 따른 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 항산화 효능 평가Experiment 2: Antioxidant efficacy evaluation of goji berry leaf extract from which chlorophyll components have been removed according to the present invention

1) 추출물의 항산화 효능 평가 1) Evaluation of antioxidant efficacy of extracts

구기자 잎 추출물과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 항산화 활성을 측정한 결과는 다음 표 2와 같다. The results of measuring the antioxidant activity of the goji ja leaf extract and the chlorophyll-free goji ja leaf extract are shown in Table 2 below.

DPPH radical 소거 활성을 측정한 결과, 50%, 70%, 100%의 에탄올로 추출한 구기자 잎 추출물(LL50, LL70, LL100)군들의 IC50값은 각각 1.01±0.01mg/mL, 0.82±0.03mg/mL, 0.34±0.02mg/mL였고, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LL100 Ch-)군의 IC 50값은 0.14±0.05mg/mL로 추출용매의 알코올 농도가 높아질수록 DPPH radical 소거능은 높아졌으며, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 DPPH radical 소거활성은 클로로필을 제거하지 않은 시료에 비해 2배 이상 높았다. 동일한 방법으로 측정한 ascorbic acid IC50값은 0.08±0.00mg/mL으로 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물은 ascorbic acid의 57% 수준이었다. As a result of measuring the DPPH radical scavenging activity, the IC50 values of the goji berry leaf extracts (LL50, LL70, LL100) groups extracted with 50%, 70%, and 100% ethanol were 1.01±0.01mg/mL and 0.82±0.03mg/mL, respectively. , 0.34±0.02mg/mL, and the IC 50 value of the goji berry leaf extract (LL100 Ch-) group from which the chlorophyll component was removed was 0.14±0.05mg/mL. As the alcohol concentration of the extraction solvent increased, the DPPH radical scavenging ability increased, The DPPH radical scavenging activity of the goji berry leaf extract from which chlorophyll was removed was more than twice as high as that of the sample without chlorophyll. The ascorbic acid IC50 value measured by the same method was 0.08±0.00mg/mL, which was 57% of ascorbic acid in the goji berry leaf extract from which chlorophyll was removed.

ABTS radical 소거활성을 측정한 결과, LL50, LL70, LL100군들의 IC50값은 각각 0.55±0.01mg/mL, 0.49±0.00mg/mL, 0.27±0.00mg/mL이었다. LL100 Ch-군의 IC50값은 0.08±0.05mg/mL로 클로로필 제거 전에 비하여 ABTS radical 소거활성이 약 3배 이상 증가하였고, 이는 ascorbic acid(IC50 값, 0.02±0.00mg/mL)의 25% 수준이었다. As a result of measuring the ABTS radical scavenging activity, the IC50 values of the LL50, LL70, and LL100 groups were 0.55±0.01mg/mL, 0.49±0.00mg/mL, and 0.27±0.00mg/mL, respectively. The IC50 value of the LL100 Ch-group was 0.08±0.05mg/mL, which increased the ABTS radical scavenging activity by more than three times compared to before chlorophyll removal, which was 25% of ascorbic acid (IC50 value, 0.02±0.00mg/mL). .

FRAP value를 측정한 결과, LL50, LL70, LL100군들에서 각각 0.15±0.01mM, 0.16±0.01mM, 0.37±0.01mM였으며, LL100 Ch-군의 FRAP value는 1.28±0.08mM로 클로로필 제거 전에 비하여 유의하게 높았다.As a result of measuring the FRAP value, it was 0.15±0.01mM, 0.16±0.01mM, and 0.37±0.01mM in the LL50, LL70, and LL100 groups, respectively, and the FRAP value of the LL100 Ch-group was 1.28±0.08mM, which was significantly higher than before chlorophyll removal. It was high.

2) 세포에서의 항산화 효능 평가 2) Evaluation of antioxidant efficacy in cells

① 세포독성 확인 ① Confirmation of cytotoxicity

구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR)을 31.25~1,000μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리한 결과, Raw264.7, Caco-2, HepG2 세포의 생존율은 모든 시료에서 1,000μg/mL까지 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다. 그 결과는 도 1에 나타내었다. As a result of treatment with Goji berry leaf extract (LLE) and chlorophyll-free Goji berry leaf extract (LLE with CR) at concentrations of 31.25 to 1,000 μg/mL for 24 hours, the survival rates of Raw264.7, Caco-2, and HepG2 cells were In all samples, it was confirmed that there was no cytotoxicity up to 1,000 μg/mL. The results are shown in Figure 1.

② HepG2 cell에서 ROS 측정② ROS measurement in HepG2 cells

구기자 잎 추출물(LLE), 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR)을 H₂O₂와 함께 처리한 경우 H₂O₂ 단독처리군에 비하여 LLE군에서는 15.6μg/mL의 농도부터 유의하게 ROS 생성량이 감소하였으며, 1,000μg/mL의 농도로 처리하였을 때 H₂O₂ 단독처리군에 비해 ROS 생성은 각각 32%와 33% 감소하였다(p<0.05). LLE with CR 처리군에서는 31.25μg/mL의 농도부터 ROS 생성량이 유의하게 감소하였으며, 1,000μg/mL일 때 H₂O₂ 단독처리군에 비해 36%정도 ROS 생성량이 감소하였다(p<0.05). 그 결과는 도 2에 나타내었다. Gojija leaf extract (LLE) and Gojija leaf extract from which chlorophyll was removed (LLE with CR) were treated together with H ₂ O ₂ H ₂ O ₂ Compared to the single treatment group, in the LLE group, the amount of ROS production was significantly decreased from the concentration of 15.6 μg/mL, and when treated with the concentration of 1,000 μg/mL, H ₂ O ₂ Compared to the single treatment group, ROS production was reduced by 32% and 33%, respectively (p<0.05). In the LLE with CR treatment group, the amount of ROS production significantly decreased from the concentration of 31.25 μg/mL, and at 1,000 μg/mL, H ₂ O ₂ Compared to the single treatment group, ROS production was reduced by 36% (p<0.05). The results are shown in Figure 2.

③ 항산화 효소 활성(super oxide dismutase(SOD), catalase) 측정③ Measurement of antioxidant enzyme activity (super oxide dismutase (SOD), catalase)

H₂O₂처리로 산화적 스트레스를 유발한 HepG2 cell에서 구기자 잎 추출물과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 SOD 활성과 catalase 활성을 측정한 결과는 표 3과 같다. Table 3 shows the results of measuring SOD activity and catalase activity to confirm the antioxidant effect of goji berry leaf extract and chlorophyll-free goji berry leaf extract in HepG2 cells induced oxidative stress by H ₂ O ₂ treatment.

SOD 활성을 측정한 결과, 정상대조군(14.84±0.45 U/mL)에 비해 H₂O₂ 단독처리군의 SOD 활성(5.57±1.68U/mL)은 60% 정도 낮아졌으며, 구기자 잎 추출물을 병행처리한 모든 군의 SOD 활성은 정상대조군과 차이가 없는 정도로 증가하였다(LL50, LL70, LL100, LL100 Ch- 군 각각 15.57±0.53U/mL, 15.41±0.54U/mL, 15.49±0.63U/mL, 15.41±0.43U/mL, P<0.05). 또한, 구기자 잎 추출물을 처리한 각 군 간의 차이는 보이지 않았으며 클로로필 제거 전후의 차이도 보이지 않았다.As a result of measuring SOD activity, compared to the normal control group (14.84±0.45 U/mL), H ₂ O ₂ The SOD activity (5.57±1.68 U/mL) of the single treatment group was lowered by about 60%, and the SOD activity of all groups treated with gojija leaf extract in parallel increased to the extent that there was no difference from the normal control group (LL50, LL70, LL100, LL100 Ch- group 15.57±0.53 U/mL, 15.41±0.54 U/mL, 15.49±0.63 U/mL, 15.41±0.43 U/mL, respectively, P<0.05). In addition, there was no difference between each group treated with gojija leaf extract, and no difference was seen before and after chlorophyll removal.

Catalase 활성을 측정한 결과, 정상대조군(271.18±19.35nmol/min/mL)에 비해 H₂O₂ 단독처리군의 catalase 활성(191.51±26.98nmol/min/mL)이 29% 낮아졌으며, 구기자 잎 추출물을 함께 처리한 모든 군에서 catalase 활성이 유의하게 높아졌다(LL50, LL70, LL100, LL100 Ch- 군 각각 325.18±32.27 nmol/min/mL, 324.51±35.60nmol/min/mL, 292.29±22.72nmol/min/mL, 252.07±41.22nmol/min/mL, P<0.05). 또한 LL50군과 LL70군의 catalase 활성은 정상대조군보다 유의하게 더 높았으며, LL100과 LL100 Ch-는 정상대조군과 비슷한 수준이었다. As a result of measuring catalase activity, compared to the normal control group (271.18±19.35 nmol/min/mL), H ₂ O ₂ The catalase activity (191.51 ± 26.98 nmol/min/mL) of the single treatment group was lowered by 29%, and the catalase activity was significantly increased in all groups treated with goji berry leaf extract (LL50, LL70, LL100, LL100 Ch- group, respectively). 325.18±32.27 nmol/min/mL, 324.51±35.60 nmol/min/mL, 292.29±22.72 nmol/min/mL, 252.07±41.22 nmol/min/mL, P<0.05). In addition, the catalase activity of the LL50 and LL70 groups was significantly higher than that of the normal control group, and LL100 and LL100 Ch- levels were similar to those of the normal control group.

실험 3 : 항염효능 평가 Experiment 3: Anti-inflammatory effect evaluation

1) nitric oxide 생성 억제 효과 측정1) Measurement of nitric oxide generation inhibitory effect

LPS 처리 군에서 33.68μM, LPS를 처리하지 않은 군에서 0.86μM로 약 39배 정도 NO 생성이 증가한 것으로 보아 LPS에 의해 염증반응이 잘 유도된 것을 알 수 있었다. LPS와 동시에 구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR)을 처리한 군은 각각 250μg/mL, 62.5μg/mL 농도에서부터 농도 의존적으로 NO 생성이 유의하게 저해되었으며, 모두 1,000μg/mL 농도에서 LPS 단독 처리군 대비 약 75%의 저해율을 보였다(LLE군 8.48μM, LLE with CR군 8.40μM, p<0.05). NO 생성 억제 효과는 LLE with CR군 > LLE군 순으로 나타났다. 그 결과는 도 3에 나타내었다. NO production was increased by about 39 times to 33.68 μM in the LPS-treated group and 0.86 μM in the LPS-untreated group, indicating that the inflammatory response was well induced by LPS. At the same time as LPS, the group treated with wolfberry leaf extract (LLE) and chlorophyll-free wolfberry leaf extract (LLE with CR) significantly inhibited NO production in a concentration-dependent manner from concentrations of 250 μg/mL and 62.5 μg/mL, respectively. At a concentration of 1,000μg/mL, the inhibition rate was about 75% compared to the LPS alone treatment group (LLE group 8.48μM, LLE with CR group 8.40μM, p<0.05). The NO production inhibitory effect was shown in the order of LLE with CR group > LLE group. The results are shown in Figure 3.

2) 염증성 사이토카인 측정2) Measurement of inflammatory cytokines

TNF-α 생성량은 LPS 처리 군에서 119.1ng/mL로 아무것도 처리하지 않은 정상세포군의 18.7ng/mL에 비해 약 6배 정도 높아졌으며, 구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR)을 LPS와 동시에 처리한 군에서는 31.25μg/mL부터 농도 의존적으로 유의하게 TNF-α 생성이 억제되었음을 확인하였다(p<0.05). 1,000μg/mL에서 LPS 처리군 대비 LLE군은 74.8%, LLE with CR군은 77.9%의 저해율을 보였다(LLE 28.8ng/mL, LLE with CR 26.3ng/mL). 또한 IL-6 생성량은 LPS 처리 군에서 205.8ng/mL, LPS를 처리하지 않은 군에서 0.5ng/mL로 유의하게 증가하였으며, LLE, LLE with CR을 처리하였을 경우에 LLE군과 LLE with CR군은 62.5μg/mL농도에서부터 유의하게 감소하기 시작하여 이후 농도 의존적으로 감소하였다(p<0.05). 1,000μg/mL에서는 LPS 처리군 대비 LLE군은 83%, LLE with CR군은 68.2%의 저해율을 보였다(LLE군 41.3 ng/mL, LLE with CR군 65.5 ng/mL). 추출물이 IL-1β 생성량에 미치는 영향은 TNF-α와 비슷한 변화를 보였는데 LPS를 처리한 군에서 IL-1β 생성량이 177pg/mL로 증가하였으나, IL-1β 생성이 LLE군은 31.25μg/mL에서부터, LLE with CR군은 62.5μg/mL농도에서부터 유의한 감소를 보였다(p<0.05). LLE with CR를 1,000μg/mL로 처리했을 때 IL-1β 생성량이 LPS 단독 처리군 대비 53.1% 저해율을 보였고(LLE with CR 83 pg/mL), LLE군의 경우는 IL-1β 생성을 LPS를 처리하지 않은 군 수준까지 감소시켰다. 그 결과는 도 4에 나타내었다. The amount of TNF-α produced was 119.1 ng/mL in the LPS-treated group, about 6 times higher than 18.7 ng/mL in the untreated normal cell group. In the group treated with LLE with CR) at the same time as LPS, it was confirmed that TNF-α production was significantly inhibited in a concentration-dependent manner from 31.25 μg/mL (p<0.05). At 1,000 μg/mL, compared to the LPS-treated group, the LLE group showed 74.8% inhibition and the LLE with CR group showed 77.9% inhibition rate (LLE 28.8ng/mL, LLE with CR 26.3ng/mL). In addition, IL-6 production significantly increased to 205.8 ng/mL in the LPS-treated group and 0.5 ng/mL in the LPS-untreated group. It started to decrease significantly from the 62.5μg/mL concentration and then decreased in a concentration-dependent manner (p<0.05). At 1,000μg/mL, compared to the LPS-treated group, the LLE group showed an inhibition rate of 83% and the LLE with CR group showed an inhibition rate of 68.2% (41.3 ng/mL in the LLE group and 65.5 ng/mL in the LLE with CR group). The effect of the extract on IL-1β production showed a change similar to that of TNF-α. IL-1β production increased to 177pg/mL in the LPS-treated group, but IL-1β production increased from 31.25μg/mL in the LLE group to 177pg/mL. , LLE with CR group showed a significant decrease from the 62.5μg/mL concentration (p<0.05). When LLE with CR was treated at 1,000 μg/mL, IL-1β production was inhibited by 53.1% compared to the LPS-only treatment group (LLE with CR 83 pg/mL), and in the case of the LLE group, IL-1β production was inhibited by LPS treatment. It was reduced to the level of the group that did not. The results are shown in FIG. 4 .

3) iNOS, COX-2, p-NF-κB p65, NF-κB p65 단백질 발현 측정3) Measurement of iNOS, COX-2, p-NF-κB p65, NF-κB p65 protein expression

iNOS와 COX-2의 발현량이 LPS를 처리하지 않은 RAW264.7 세포에서는 거의 발현되지 않았지만, LPS 처리군에서는 LPS 자극에 의하여 현저하게 증가함을 확인하였다. LFE군 및 LLE군, LLE with CR군은 LPS에 의해 증가한 iNOS 단백질의 발현을 각각 65%, 95%, 99% 감소시켰고, COX-2 단백질 발현에서 LPS군 대비 LFE군은 86%, LLE군은 75%, LLE with CR군은 99%의 저해율을 보여 iNOS 단백질 발현의 감소와 유사한 경향을 나타내었다. 그 결과는 도 4에 나타내었다. The expression levels of iNOS and COX-2 were hardly expressed in RAW264.7 cells not treated with LPS, but significantly increased in the LPS-treated group by LPS stimulation. The LFE, LLE, and LLE with CR groups reduced the expression of iNOS protein increased by LPS by 65%, 95%, and 99%, respectively. The 75% and LLE with CR groups showed a 99% inhibition rate, showing a similar trend to the decrease in iNOS protein expression. The results are shown in FIG. 4 .

4) 혈청 염증성 사이토카인 측정 4) Measurement of serum inflammatory cytokines

LPS 투여 2시간 경과 후 혈청 TNF-α 생성량은 LPS 투여군에서 1219.87pg/mL로 정상대조군에 비해 약 1,200배 정도 증가하여 이를 통해 염증 반응이 잘 유도되었음을 알 수 있었다. 혈청 TNF-α 농도가 LPS 단독 투여군과 비교하여 LLE 투여군에서 1038.23pg/mL로서 약 14.9%, LLE with CR 투여군에서 629.67pg/mL로 약 48.4% 저해함을 확인하였다. LPS 투여 8시간 경과 후에는 혈청 TNF-α 농도를 LPS 단독 투여군(202.05 pg/mL)과 비교했을 때, 추출물을 투여한 군에서는 LPS 단독 투여군 대비 각각 23.1%, 61.1% 저해함을 확인하였다(LLE 투여군 155.29pg/mL, LLE with CR 투여군 78.6pg/mL). LPS 투여 2시간, 8시간 경과 후 TNF-α의 생성량은 LPS 단독 투여군 대비 구기자 추출물 투여군에서 모두 유의하게 낮은 수준을 보였다(p<0.05). LPS 투여 2시간 경과 후에 혈청 IL-6 농도는 LPS 투여군에서 21,666.38pg/mL로 정상대조군에 비해 유의하게 증가하고 있었으나, LLE 투여군은 17,355.88pg/mL로 약 19.9%의 감소 경향을 보여주었고, LLE with CR 투여군에서는 10,898.88pg/mL로서 약 49.7%의 저해율을 보였다(p<0.05). LPS 투여 8시간 경과 후에는 혈청 IL-6 농도는 LPS 단독 투여군(8365.63 pg/mL)과 비교했을 때, 추출물을 투여한 군에서는 LPS 단독 투여군 대비 각각 23.7%, 82.3% 저해함을 확인하였다(LLE 투여군 6,386.32pg/mL, LLE with CR 투여군 1,482pg/mL). LPS 투여 2시간, 8시간 경과 후 IL-6 생성량은 LPS 단독 투여군 대비 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물에서는 유의하게 낮은 수준을 보였으나, 구기자 잎 추출물에서는 낮아지는 경향만 확인하였다(p<0.05). 혈청 TNF-α와 IL-6의 농도로 보아 LLE 추출물에 비해 LLE with CR 추출물의 저해 효과가 더 높았다. 그 결과는 도 5에 나타내었다. After 2 hours of LPS administration, the amount of serum TNF-α produced in the LPS-administered group was 1219.87 pg/mL, which was about 1,200-fold higher than that of the normal control group, indicating that the inflammatory response was well induced. It was confirmed that the serum TNF-α concentration was inhibited by about 14.9% as 1038.23pg/mL in the LLE-administered group and 629.67pg/mL in the LLE with CR-administered group by about 48.4% compared to the LPS-only administration group. After 8 hours of LPS administration, when the serum TNF-α concentration was compared with that of the LPS-only group (202.05 pg/mL), it was confirmed that the extract-administered group inhibited 23.1% and 61.1%, respectively, compared to the LPS-only group (LLE 155.29 pg/mL in the administration group, 78.6 pg/mL in the LLE with CR administration group). After 2 hours and 8 hours of LPS administration, the production of TNF-α was significantly lower in both the goji berry extract group compared to the LPS alone group (p<0.05). After 2 hours of LPS administration, the serum IL-6 concentration in the LPS-administered group was 21,666.38 pg/mL, which was significantly increased compared to the normal control group. In the CR-administered group, an inhibition rate of about 49.7% was 10,898.88 pg/mL (p<0.05). After 8 hours of LPS administration, the serum IL-6 concentration was inhibited by 23.7% and 82.3%, respectively, compared to the LPS alone administration group (8365.63 pg/mL), and the LPS administration group in the extract administration group (LLE 6,386.32 pg/mL in the administration group, 1,482 pg/mL in the LLE with CR administration group). After 2 hours and 8 hours of LPS administration, the amount of IL-6 produced was significantly lower in the wolfberry leaf extract from which the chlorophyll component was removed compared to the LPS alone administration group, but only a decrease was confirmed in the wolfberry leaf extract (p<0.05). . In terms of serum TNF-α and IL-6 concentrations, the inhibitory effect of the LLE with CR extract was higher than that of the LLE extract. The results are shown in FIG. 5 .

5) DNA 손상 억제 효과5) DNA damage inhibitory effect

Tail DNA, tail length, tail moment의 모든 지표에서 LPS 단독 투여군에 비해 LL 및 LLCh- 투여군의 값이 유의하게 감소하였다(p<0.05). 구기자 잎 추출물(LLE) 투여군의 tail DNA 8.42%, tail length 20.23μm, tail moment 2.29였고, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR) 투여군에서는 tail DNA 8.57%, tail length 14.77μm, tail moment 1.93으로 나타났다. 그 결과는 표 4에 나타내었다. In all indicators of tail DNA, tail length, and tail moment, the values of the LL and LLCh-administered groups were significantly decreased compared to the LPS-only administered group (p<0.05). Tail DNA 8.42%, tail length 20.23μm, tail moment 2.29 in the wolfberry leaf extract (LLE)-administered group, and tail DNA 8.57%, tail length 14.77μm, tail moment in the wolfberry leaf extract (LLE with CR)-treated group with chlorophyll removed It turned out to be 1.93. The results are shown in Table 4.

6) HaCaT cell에서 항산화능 평가6) Evaluation of antioxidant capacity in HaCaT cells

HaCaT cell에서 추출물이 세포생존율에 미치는 영향을 보기 위하여 처리한 결과는 다음 그림과 같다. 다른 세포에서와 마찬가지로 구기자 잎 추출물과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 각각 15.625~1,000㎍/mL 농도로 24시간 동안 처리한 결과, HacaT 세포의 생존율은 모두 1,000㎍/mL까지 독성이 없는 것으로 확인되었다. 그 결과는 도 7에 나타내었다. The result of processing to see the effect of the extract on cell viability in HaCaT cells is shown in the following figure. As in other cells, when the goji berry leaf extract and the chlorophyll-free goji berry leaf extract were treated at concentrations of 15.625 to 1,000 μg/mL, respectively, for 24 hours, the survival rate of HacaT cells was confirmed to be non-toxic up to 1,000 μg/mL. It became. The results are shown in FIG. 7 .

HaCaT 세포에서 IFN-r 와 TNF-a를 처리하여 산화스트레스를 유도한 세포는 정상 세포에 비해 ROS 생성량이 77% 증가하였다. 구기자 잎 추출물과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 IFN-r 와 TNF-a와 함께 처리한 경우 IFN-r 와 TNF-a 단독 처리군에 비해 모두 15.6㎍/mL의 저농도부터 유의하게 ROS 생성량이 감소하였다. LLE50군의 ROS 생성량은 1000㎍/mL의 농도에서 IFN-r 와 TNF-a 단독 처리군에 비해 ROS 생성량이 82% 감소되었으며 LLE70, LLE100, LLE100(Ch-)군은 1000㎍/ml의 농도에서 각각 84%, 86%, 85% 감소시켰다. LLE50, LLE70, LLE100(ch-) 군들은 125㎍/mL의 농도부터, LLE100군은 62.5㎍/mL 농도부터 1,000ug/mL 농도까지 정상세포군에서 보다 유의하게 낮은 ROS 생성량을 보여주었다. 그 결과는 도 8에 나타내었다. In HaCaT cells treated with IFN-r and TNF-a to induce oxidative stress, ROS production increased by 77% compared to normal cells. When the goji berry leaf extract and the chlorophyll-free goji berry leaf extract were treated together with IFN-r and TNF-a, compared to the IFN-r and TNF-a alone treatment groups, both at a low concentration of 15.6 μg/mL, the amount of ROS produced was significant. decreased. The amount of ROS produced in the LLE50 group was reduced by 82% compared to the IFN-r and TNF-a alone treatment groups at a concentration of 1000 μg/mL, and in the LLE70, LLE100, and LLE100 (Ch-) groups at a concentration of 1000 μg/ml 84%, 86%, and 85%, respectively. The LLE50, LLE70, and LLE100(ch-) groups showed significantly lower ROS production than the normal cell group from the concentration of 125 μg/mL, and the LLE100 group from the concentration of 62.5 μg/mL to 1,000 μg/mL. The results are shown in FIG. 8 .

7) Cu² ⁺-induced human LDL의 oxidation 억제 효과 평가 7) ^Evaluation of oxidation inhibitory effect of Cu ²⁺ -induced human LDL

Cu² ⁺로 유도된 human LDL의 oxidation에 대하여 구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR) 각각의 저해율(%)은 40.5%, 58.2%로 클로로필을 제거한 구기자 잎 추출물의 저해율이 약간 높게 나타났다. 이는 양성대조군으로 이용된 Probucol(3μM)의 저해율이 51.9%임과 비교하였을 때 클로로필을 제거한 구기자 잎 추출물이 더 높은 수준으로 LDL 산화 억제효과가 평가된다. 그 결과는 표 5에 나타내었다. On the oxidation of human LDL induced by Cu ²⁺ , the inhibition rate (%) of Goji berry leaf extract (LLE ⁾ and Goji berry leaf extract from which chlorophyll was removed (LLE with CR) was 40.5% and 58.2%, respectively. The inhibition rate of the extract was slightly higher. Compared to the inhibition rate of Probucol (3 μM) used as a positive control group of 51.9%, the LDL oxidation inhibitory effect of the goji berry leaf extract from which chlorophyll was removed is higher. The results are shown in Table 5.

실험 4 : 항아토피 효능 평가 Experiment 4: Evaluation of anti-atopic efficacy

1) 피부병변 관찰1) Observation of skin lesions

DNCB로 아토피 유발 후 쥐의 등 피부를 정상대조군과 비교하여 살펴보았을 때 홍반, 부종, 건조, 짓무름, 발진 등의 증상이 나타남을 확인하였다. 이러한 아토피 피부염의 형태학적인 변화는 육안으로 살펴보았을 때 LLE와 LLE(Ch-) 추출물을 함유한 식이가 아토피 증상을 완화시킨다고 볼 수 있다. 그 결과는 도 9에 나타내었다. After inducing atopy with DNCB, it was confirmed that symptoms such as erythema, edema, dryness, soreness, and rash appeared when the back skin of the rat was compared with that of the normal control group. These morphological changes of atopic dermatitis can be seen with the naked eye that a diet containing LLE and LLE (Ch-) extract alleviates atopic symptoms. The results are shown in FIG. 9 .

2) 체중 및 장기 측정 2) Weight and organ measurement

① 체중 측정① Weight measurement

평균 체중 19.86±1.1g인 실험동물을 6마리씩 군분리 후 실험을 진행하였다. 정상대조군의 체중은 실험시작 직후 체중 21.24±1.10g 보다 7주 후 33.04±2.97g으로 7.2% 증가하였고 DNCB만 도포한 군, LLE투여군, LLE(Ch-)투여군에서 7주간 각각 11.2%, 9.7%, 11.12% 정도의 체중 감소를 보였다. 그 결과는 도 10 및 표 6에 나타내었다.The experiment was conducted after separating the experimental animals with an average body weight of 19.86 ± 1.1g into groups of 6 each. The weight of the normal control group increased by 7.2% from 21.24±1.10g right after the start of the experiment to 33.04±2.97g after 7 weeks, and the DNCB-only group, LLE-administered group, and LLE(Ch-)-administered group increased by 11.2% and 9.7% for 7 weeks, respectively. , showed a weight loss of about 11.12%. The results are shown in Figure 10 and Table 6.

② 장기 측정② Long-term measurement

체중 100g당 장기무게는 spleen에서는 정상대조군(2.10±0.51)과 DNCB군 (4.45±1.81), LLE군(4.69±0.98), LLE(Ch-)(3.67±1.03) 군들 간에 유의한 차이가 있었으며, LLE(Ch-)군이 LLE군에 비하여 감소하는 경향을 보였다. Kidney 무게는 실험군 간에 유의한 차이를 보이지 않았으나, N군에 가장 낮았고 C군<LLE(Ch-)군<LLE군의 순서로 나타났으나 C군과 구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR)의 투여군들 간에 통계적 유의성은 나타나지 않았다. Thymus는 정상대조군(2.16±0.50)이 다른 군들(LLE군, 0.79±0.49; DNCB군, 1.12±0.60)에 비하여 유의하게 높았으며(p<0.05), LLE(Ch-)군이 C군에 비하여 조금 더 높은 경향을 보였다. 그 결과는 표 7에 나타내었다. There was a significant difference in organ weight per 100 g of body weight between the normal control group (2.10 ± 0.51), DNCB group (4.45 ± 1.81), LLE group (4.69 ± 0.98), and LLE (Ch-) (3.67 ± 1.03) group in spleen. The LLE (Ch-) group showed a tendency to decrease compared to the LLE group. Kidney weight did not show a significant difference between the experimental groups, but it was the lowest in group N, and appeared in the order of group C<LLE(Ch-)<LLE group. There was no statistical significance between the treatment groups of goji berry leaf extract (LLE with CR). Thymus was significantly higher in the normal control group (2.16±0.50) than in the other groups (LLE group, 0.79±0.49; DNCB group, 1.12±0.60) (p<0.05), and the LLE (Ch-) group was significantly higher than the C group. showed a slightly higher trend. The results are shown in Table 7.

3) 혈액분석 평가 3) Blood analysis evaluation

① IgE 측정① IgE measurement

측정시작 직후 혈중 IgE 수준은 모든 군 간에 차이가 없었으며 DNCB 유도 후 2주째 정상대조군에 비해 모든 DNCB 도포군 17.624ng/ml로 정상대조군에 비해 17배 정도 증가하여 아토피 반응이 잘 유도되었음을 알 수 있다. 혈청 IgE 농도가 DNCB만 도포한 군과 비교하여 LLE투여군에서 11.309ng/ml로 약 35.83%, LLE(Ch-)군에서 12.625ng/ml로 약 28.36% 저해함을 확인하였다. DNCB로 아토피를 유발한 쥐들의 혈청 IgE농도는 DNCB만 단독으로 도포한 군 대비 구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE with CR) 투여군에서 모두 유의하게 낮은 수준을 보였다.(P<0.005) 그 결과는 도 11에 나타내었다. Immediately after the start of measurement, there was no difference between all groups in the blood IgE level, and at 2 weeks after induction of DNCB, all DNCB application groups were 17.624ng/ml compared to the normal control group, which increased by 17 times compared to the normal control group, indicating that the atopic reaction was well induced. . It was confirmed that the serum IgE concentration was inhibited by about 35.83% at 11.309ng/ml in the LLE administration group and by about 28.36% at 12.625ng/ml in the LLE (Ch-) group compared to the group applied only with DNCB. Serum IgE levels of mice induced atopy with DNCB were significantly lower in both the goji berry leaf extract (LLE) and chlorophyll-free goji berry leaf extract (LLE with CR) administration groups compared to the group applied with DNCB alone. (P<0.005) The results are shown in FIG. 11 .

② 혈청 염증성 cytokine(TNF-a, IL-6) 생성량② Serum inflammatory cytokine (TNF-a, IL-6) production amount

DNCB 도포군의 혈청 TNF-a 농도는 26.972pg/ml로 정상 대조군에 비해 약 3배 증가하였다. 혈청 TNF-a 농도가 DNCB만 도포한 군과 비교하여 LLE투여군에서 12.111pg/ml로서 약 55.10% LLE(Ch-)군에서 12.250pg/ml로 약 54.58% 저해함을 확인하였다. DNCB도포 후 TNF-a 의 생성량은 DNCB단독 도포군 대비 모두 유의하게 낮은 수준을 보였다. IL-6농도는 DNCB 도포군에서 73.413pg/ml로 정상대조군에 비해 유의하게 증가하였으며 LLE투여군에서 19.744 pg/ml로 약 73.1%, LLE(Ch-)투여군에서는 21.920 pg/ml로 약 70.14%의 저해율을 보였다. 그 결과는 도 12에 나타내었다. The serum TNF-a concentration of the DNCB-applied group was 26.972 pg/ml, which was about 3 times higher than that of the normal control group. Compared to the group applied only with DNCB, the serum TNF-a concentration was 12.111 pg/ml in the LLE administration group and about 55.10% in the LLE (Ch-) group and 12.250 pg/ml in the LLE (Ch-) group, which was about 54.58% inhibition. After application of DNCB, the amount of TNF-a produced was significantly lower than that of the DNCB alone application group. The concentration of IL-6 was significantly increased compared to the normal control group at 73.413 pg/ml in the DNCB-applied group, 19.744 pg/ml in the LLE-administered group, about 73.1%, and 21.920 pg/ml in the LLE (Ch-)-administered group, about 70.14%. showed inhibition. The results are shown in FIG. 12 .

③ DNA 손상 억제 평가 ③ DNA damage inhibition evaluation

정상 대조군에 비하여 DNCB를 도포한 군의 tail DNA 24.39%, tail length 73.09um, tail moment 18.43으로 정상대조군에 비해 각각 20%, 16%, 33% 증가하는 경향을 보였다. 구기자 잎 추출물(LLE) 투여군의 tail DNA 20.4%, tail length 20.23um, tail moment 68.48였고, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE(Ch-)) 투여군에서는 tail DNA 14.9%, tail length 54.05um, tail moment 10.08로 나타나 전반적으로 LLE(Ch-)군이 LLE 군에 비하여 DNA보호 효과가 있는 것으로 볼 수 있다. 그 결과는 표 8에 나타내었다. Compared to the normal control group, the tail DNA of the DNCB-applied group was 24.39%, tail length 73.09um, and tail moment 18.43, respectively, showing a tendency to increase by 20%, 16%, and 33% compared to the normal control group. Tail DNA 20.4%, tail length 20.23um, and tail moment 68.48 in the gojija leaf extract (LLE)-administered group, and tail DNA 14.9%, tail length 54.05um, The tail moment was 10.08, and it can be seen that the LLE (Ch-) group has a DNA protection effect compared to the LLE group. The results are shown in Table 8.

4) 병리검사 4) Pathological examination

① Epidermal thickness(H&E stain)① Epidermal thickness (H&E stain)

정상대조군의 경우 표피의 두께가 14.26±1.53um로 얇게 관찰되나 DNCB를 도포한 군은 자극으로 인하여 두께가 77.90±8.32um로 두꺼워 진 것을 알 수 있다. LLE 추출물을 포함한 식이를 한 군의 경우 정상 대조군보다는 두껍지만 60.50±9.00um로 DNCB군 보다 얇은 것을 볼 수 있으며, LLE(Ch-)군의 경우 유의적인 차이는 없으나 71.60±4.96um로 피부표피의 두께가 감소하는 경향을 보였다. 그 결과는 도 13에 나타내었다. In the case of the normal control group, the thickness of the epidermis was observed as thin as 14.26±1.53um, but in the group applied with DNCB, it was found that the thickness became thicker as 77.90±8.32um due to stimulation. In the case of the group fed with the LLE extract, although thicker than the normal control group, it was thinner than the DNCB group at 60.50±9.00um. The thickness tended to decrease. The results are shown in FIG. 13 .

② Mast cell counting(Toluidin blue stain)② Mast cell counting (Toluidin blue stain)

비만세포의 개수는 DNCB를 감작시킨 군에서 31.6±1.15로 정상 대조군의 11.35±2.06보다 유의하게 증가하였다. 그러나, 구기자 잎 추출물(LLE)이 투여군에서는 19.38±2.89로 약 40% 정도 수치가 감소한 것을 알 수 있었으며 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE(Ch-)이 포함된 식이를 한 군에서는 21.6±4.48로 약 25.7%정도 수치가 감소하였다. 알레르기성 염증 반응에 관여하여 알레르기 염증의 초기반응을 일으키고 만성적으로 염증을 지속시키는데 중요한 역할을 하는 mast cell의 숫자가 DNCB를 도포한 군보다 시료 군에서 그 수가 감소한 것으로 미루어 보아 아토피 피부염의 완화에 긍정적인 영향을 미치는 것을 알 수 있다. 그 결과는 도 14에 나타내었다. The number of mast cells was significantly increased to 31.6±1.15 in the DNCB-sensitized group compared to 11.35±2.06 in the normal control group. However, it was found that the value of goji berry leaf extract (LLE) decreased by about 40% to 19.38 ± 2.89 in the administered group, and 21.6 ± 21.6 ± 21.6 ± The value decreased by about 25.7% to 4.48 The number of mast cells, which play an important role in causing the initial reaction of allergic inflammation and chronically sustaining inflammation by being involved in the allergic inflammatory response, was significantly lower in the sample group than in the DNCB-applied group. Judging from the decrease in the number, it can be seen that it has a positive effect on the alleviation of atopic dermatitis.The results are shown in FIG.

5) PCR5) PCR

Small intenstine IL-6 mRNA 발현량은 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군에 비하여 DNCB를 도포한 실험군에서 IL-6 mRNA발현량이 유의하게 증가함에 따라 IL-6의 발현이 유도되었음을 확인하였다. 또한, IL-6 mRNA 발현은 LLE와 LLE(Ch-) 투여에 의해 유의하게 감소되었다. DNCB 단독 도포군 대비 LLE가 포함된 식이를 한 군에서는 약 14%, LLE(Ch-)이 포함된 식이를 한 군에서는 약 33% mRNA의 발현량이 감소됨에 따라 시료군에서 IL-6 mRNA level을 개선하는 효능이 있는 것으로 나타났으며 그 효과는 LLE(Ch-)군에서 더 크게 나타났다. 그 결과는 도 15에 나타내었다. Small intenstine IL-6 mRNA expression level was significantly increased in the experimental group treated with DNCB compared to the normal control group without any treatment, confirming that IL-6 expression was induced. In addition, IL-6 mRNA expression was significantly reduced by LLE and LLE(Ch-) administration. Compared to the DNCB-only application group, the group with LLE-containing diet decreased by about 14% and the group with LLE (Ch-) by about 33%. It was found to have an improvement effect, and the effect was greater in the LLE (Ch-) group. The results are shown in FIG. 15 .

6) HaCaT cell에서 케모카인 생성 억제효과6) Inhibition of chemokine production in HaCaT cells

구기자 잎 추출물(LLE)과 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물(LLE(Ch-)을 HaCaT 세포에 24시간 동안 처리한 결과, 고농도인 1,000㎍/mL까지 세포 독성이 나타나지 않았다. TNF-α와 IFN-γ을 처리한 control군의 MDC의 mRNA 발현량은 normal군l과 비교해 유의하게 증가하였다(p<0.05)(Fig. 9). 반면, LLE와 LLE(Ch-)를 사이토카인과 동시에 처리한 군에서는 사이토카인을 단독으로 처리한 군에 비해 모든 농도에서 TARC와 MDC가 감소된 것을 확인하였다. 반면, LLE와 LLE(Ch-)를 처리한 군에서는 control군에 비해 모든 농도에서 TARC와 MDC의 발현량이 유의하게 감소하였으며 최종 수준은 normal군과 차이가 없었다. 그 결과는 도 16 및 도 17에 나타내었다. When HaCaT cells were treated with goji berry leaf extract (LLE) and chlorophyll-free goji berry leaf extract (LLE(Ch-)) for 24 hours, no cytotoxicity was observed up to a high concentration of 1,000 μg/mL. TNF-α and IFN The mRNA expression level of MDC in the control group treated with -γ increased significantly (p<0.05) compared to the normal group (Fig. 9). In the group, it was confirmed that TARC and MDC were decreased at all concentrations compared to the group treated with cytokine alone, whereas in the group treated with LLE and LLE (Ch-), TARC and MDC were decreased at all concentrations compared to the control group. The expression level was significantly decreased, and the final level was not different from that of the normal group.The results are shown in Figures 16 and 17.

본 발명에 따르면, 클로로필 성분이 제거된 구기자 잎 추출물을 최적의 조건을 확립하여 추출함으로써 원료 표준화를 제공하고, 이를 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선할 수 있는 효과가 있다. 또한, 천연물 추출물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없고, 장기적으로 사용 가능한 효과가 있다. According to the present invention, by establishing and extracting the goji berry leaf extract from which the chlorophyll component has been removed, it is possible to standardize raw materials and improve the symptoms of atopic dermatitis through an atopic dermatitis animal model. In addition, when used as a raw material of a functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis as a natural extract, there is no toxicity and side effects, and there is an effect that can be used for a long time.

Claims

A functional cosmetic composition containing goji berry leaf extract from which chlorophyll has been removed as an active ingredient and having an effect of preventing and improving atopic dermatitis.

According to claim 1,
A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, containing 0.1 to 10% by weight of goji berry leaf extract from which chlorophyll has been removed as an active ingredient.

According to claim 1,
Goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed,
A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, characterized in that it is extracted with a solvent selected from the group consisting of water, organic solvents and mixed solvents thereof.

According to claim 1,
Goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed,
A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, characterized in that it is extracted using 100% ethanol.

According to claim 1,
Goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed,
Goji leaf extract extracted through a solvent is dissolved in chloroform, methanol is further added to precipitate the pigment, and then chlorophyll is removed using a charcoal column and silica gel column chromatography A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, characterized in that.

According to claim 3 or 4,
Goji ja leaf extract from which the chlorophyll component has been removed,
Extracted through a solvent,
A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, characterized in that a base selected from NaOH and KOH or an acid selected from HCl and CH ₃ COOH is further added to the solvent.

According to claim 1,
The composition,
Softening lotion, astringent lotion, nourishing lotion, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, essence, nutrient essence, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, cream, massage cream, nutrient cream, moisture cream, eye cream, Any formulation selected from hand cream, pack, hair tonic, shampoo, conditioner, hair conditioner, hair treatment, gel, spray, foundation, sunscreen, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser A functional cosmetic composition having an effect of preventing and improving atopic dermatitis, characterized in that produced by.

After adding 500 to 1,000 parts by weight of solvent to 100 parts by weight of the washed and dried goji berry leaves, repeatedly extracting 2 to 4 times at 60 to 80 ° C for 2 to 5 hours, filtering, concentrating with a rotary evaporator, and freeze-drying the leaves. After preparing the extract, the extracted wolfberry leaf extract was dissolved in chloroform, and methanol was further added to precipitate the pigment, and then, using a charcoal column and silica gel column chromatography, Method for producing goji ja leaf extract from which chlorophyll is removed, characterized in that it is prepared by removing chlorophyll.

According to claim 8,
The solvent is
Method for producing a goji berry leaf extract from which the chlorophyll component is removed, characterized in that it is selected from the group consisting of water, organic solvents and mixed solvents thereof.

According to claim 8,
The solvent is
Method for producing goji ja leaf extract from which chlorophyll components are removed, characterized in that 100% ethanol is used.

According to claim 8,
Method for producing a goji berry leaf extract from which chlorophyll components are removed, characterized in that further adding a base selected from NaOH and KOH or an acid selected from HCl and CH ₃ COOH to the solvent.

According to claim 8,
The goji berry leaf extract,
800 parts by weight of solvent is added to 100 parts by weight of washed and dried goji berry leaves, extracted three times at 70 ° C for 3 hours, filtered, concentrated with a rotary evaporator, and lyophilized to remove the chlorophyll component, characterized in that Method for producing goji ja leaf extract.