KR20230054569A - 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법 - Google Patents
로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 깻잎 추출물은 로즈마린산 함량이 증가하며, 로즈마린산이 증가된 깻잎 추출물은 항산화 효과, 항염증 효과, 항돌연변이작용, 항미생물작용, 항바이러스작용, 그리고 항암 활성 등의 생리활성 효과가 우수하여 식품 소재 및 의약품 소재 개발 등의 다양한 산업분야에 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
로즈마린산(rosmarinic acid)은 인체에서 형성되는 독성물질인 활성산소를 제거함으로써 인체의 노화와 각종 질병을 예방해주고, 유지식품의 산화에 의한 부패를 막아주는 물질로써, 주요작용으로는 항산화작용, 항염증작용, 항돌연변이작용, 항미생물작용, 항바이러스작용, 그리고 항암활성이 있다고 알려져 있다. 또한, 식후에 영양소가 혈중으로 들어가기 위해 혈액상태가 일시적으로 걸쭉해 지는데 로즈마린산은 맥아당을 포도당으로 분해시키는 작용을 해서 혈중에 흩어진 당분을 체외로 배출시킨다. 그로 인해 혈당치의 상승을 억제하고 고혈압, 당뇨, 고지혈증을 예방한다고 보고되고 있다.
로즈마린산은 여러 가지 기능이 있는데 두통에 효능이 있으며, 순환기 계통에 좋은 물질로 알려져 있다. 또한 로즈마린산은 강력한 방부작용이 있으며, 탈모 방지에 효능이 있어 모발의 관리에 도움을 주고 건성 및 노화된 피부를 정상으로 회복시키는 기능이 있으며, 세포의 재생을 촉진해 주름살을 줄여주는 역할을 한다. 이러한 기능들 때문에 현재 화장품 분야에서 매우 중요한 성분 물질로 등장하고 있으며, 현재 크게 주목을 받고 있는 물질이다.
로즈마린산은 주로 박하, 스피아민트, 로즈마리와 같은 허브 식물에 주로 함유되어 있으나, 이러한 식물들보다 들깻잎에 로즈마린산 성분이 더 많이 함유되어 있다는 연구 보고가 있다(Food chemistry,2004).
들깨(Perilla frutescens var japonica)는 꿀풀과에 속하는 1 년생 초본과 식물로 한국, 중국, 인도 등 동남아시아에서 광범위하게 재배되고 있다. 들깨는 통상 기름을 짜내기 위하여 재배되는 작물인데, 생육하는 동안에 잎을 수확하여 식용으로 하는 것이 바로 깻잎이다.
로즈마린산 외에 가바성분, 루테올린, 아피게닌, 페롤산 등과 같은 많은 약리 성분을 포함하고 있는 깻잎 추출물의 효능에 대한 많은 연구가 이루어지고 있으나, 아직까지 깻잎으로부터 로즈마린산 함량을 증진시키는 최적 추출 조건이나 전처리 방법에 대한 연구는 부족한 실정이다.
본 발명의 목적은 깻잎을 덖음처리하는 단계를 포함하는 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기의 제조방법으로 제조된 깻잎 추출물을 제공하는 것이다.
본 발명은 깻잎을 열풍건조하여 분쇄하는 단계; 상기 분쇄한 깻잎을 덖음 처리하여 덖음깻잎을 제조하는 단계; 및 상기 덖음깻잎을 추출 후 여과하여 농축 및 동결건조하는 단계를 포함하는, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법이다.
상기 덖음 처리는 160 ~ 250℃의 온도에서 20 ~ 70분간 수행하는 것일 수 있다.
상기 추출 용매는 에탄올일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기의 제조방법으로 제조된, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물이다.
또한, 본 발명은 상기 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물을 포함하는 항산화용 식품 조성물이다.
또한 본 발명은 상기 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물을 포함하는 화장료 조성물이다.
본 발명의 제조방법에 의해 제조된 깻잎 추출물은 로즈마린산 함량이 증가하며, 로즈마린산이 증가된 깻잎 추출물은 항산화 효과, 항염증 효과, 항돌연변이작용, 항미생물작용, 항바이러스작용, 그리고 항암 활성 등의 생리활성 효과가 우수하여 식품 소재 및 화장료 소재 개발 등의 다양한 산업분야에 활용될 수 있다.
도 1은 로즈마린산 표준물질의 검량선을 나타낸 것이다.
도 2는 로즈마린산 표준물질의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 3은 온도별(a) 및 시간별(b) 조건에 따른 덖음깻잎 추출물 및 깻잎원물의 로즈마린산 함량을 나타낸 것이다.
도 4는 대식세포 RAW 264.7에서 깻잎원물(대조군)의 NO 생성 저해활성(a) 및 덖음깻잎 추출물의 NO 생성 저해활성(b)을 나타낸 것이다.
도 2는 로즈마린산 표준물질의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 3은 온도별(a) 및 시간별(b) 조건에 따른 덖음깻잎 추출물 및 깻잎원물의 로즈마린산 함량을 나타낸 것이다.
도 4는 대식세포 RAW 264.7에서 깻잎원물(대조군)의 NO 생성 저해활성(a) 및 덖음깻잎 추출물의 NO 생성 저해활성(b)을 나타낸 것이다.
본 발명은 깻잎을 열풍건조하여 분쇄하는 단계; 상기 분쇄한 깻잎을 덖음 처리하여 덖음깻잎을 제조하는 단계; 및 상기 덖음깻잎을 추출 후 여과하여 농축 및 동결건조하는 단계를 포함하는, 로즈마린산(rosmarinic acid) 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에서 “깻잎”은 학명 Perilla frutescens, 영문 명칭으로는 Korean perilla로 표기될 수 있다. 꿀풀과의 한해살이풀 또는 그 씨를 함께 일컫는 말로, 백소, 수임, 야임, 임자로 부르기도 한다. 대한민국에서 재배되는 주요 들깨 품종으로는 동글2호, 남천들깨, 늘보라들깨, 일엽들깨, 보라들깨 등이 있다.
상기 깻잎의 열풍건조는 40 ~ 60℃의 온도에서 10 ~ 26 시간동안 수행될 수 있고, 바람직하게는 50℃에서 24시간 수행될 수 있다. 열풍건조 온도 또는 시간이 40℃ 미만 또는 10시간 미만이면 건조가 완전 되지 않아 원물보관시 미생물 등에 의한 변질 우려 및 일정한 품질 유지를 못하는 문제점이 발생할 수 있고, 60℃ 초과 또는 26시간을 초과하면 수분함량이 낮아 원물이 쉽게 바스라지거나 부서져 가공하는데 어려운 문제점이 발생할 수 있다.
본 발명에서는 50℃에서 24시간 열풍 건조하는 공정을 통해 원물의 품질 유지 및 가공이 수월하였으며 생물(원물)에 고온으로 덖는 공정에 앞서 예비 건조를 함으로써 생리활성 화합물의 변형 또는 파괴를 억제하기 때문에 본 발명의 24시간 건조시간의 생리활성 효능이 더 우수하다는 것을 확인하였다.
본 발명에서 “덖음 처리”란 오븐에서 열을 가하여 볶는 공정으로, 로스팅 과정을 의미하며, 이때 사용되는 로스팅 장치로는 원통형 드럼에 덖음 재료를 넣고 열을 가하여 회전을 하며 볶는 직화식(drum roaster), 드럼 뒤쪽에서 내부로 열풍이 전달되어 연소가스가 드럼 내부를 순환하는 반열풍식, 열풍을 덖음 재료 사이로 순환시키는 열풍식(hot air roaster) 등이 있으며, 본 발명에서 사용되는 로스팅 장치는 그 종류가 특별히 제한되는 것은 아니다.
상기 덖음 처리는 160 ~ 250℃의 온도에서 20 ~ 70분간 수행하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 180 ~ 220℃의 온도에서 30 ~ 50분간 수행하는 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 200℃의 온도에서 40분간 수행하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서, 100 ~ 300℃의 온도에서 덖은 깻잎 추출물의 로즈마린산 함량을 분석한 결과, 200℃의 온도에서 덖은 깻잎 추출물의 로즈마린산 함량이 917.01 mg/g으로 가장 높았으며, 200℃의 온도에서 10 ~ 50분간 덖음 처리하였을 때, 40분간 덖은 깻잎 추출물의 로즈마린산 함량이 917.44 mg/g으로 가장 높았다. 따라서, 덖음 조건에 따른 로즈마린산 함량을 정량한 결과, 최적 덖음 조건은 덖음 온도 200℃, 덖음 시간 40분일 수 있다.
본 발명에서 “추출”은 식물이나, 광물 등 여러 성분을 이루고 있는 물질에서 특정한 성분만을 녹여서 얻는 방법으로, 본 발명에서는 덖음처리한 깻잎에 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택되는 하나의 용매를 이용하여 생리활성 물질을 녹여서 추출하는 것을 의미한다. 상기 생리활성 물질은 구체적으로 로즈마린산(Rosmarinic acid)일 수 있다.
추출용매는 특별히 한정되는 것은 아니며, 물, 메탄올 또는 에탄올 등의 저급(C1-C4) 알코올의 극성용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 70% 에탄올일 수 있다.
본 발명에서 “로즈마린산”은 로즈마리의 이름을 따서 명명되었으며 로즈마리, 들깨, 세이지, 민트, 바질 등을 포함하는 많은 허브 식물에서 발견되는 폴리페놀 성분이다. 하기 화학식 1과 같은 구조를 가지며, 분자질량은 360.31g/mol이고, 분자식은 C18H16O8이다.
로즈마린산은 여러 가지 기능이 있는데 두통에 효능이 있으며, 순환기 계통에 좋은 물질로 알려져 있다. 또한 로즈마린산은 강력한 방부작용이 있으며, 탈모 방지에 효능이 있어 모발의 관리에 도움을 주고 건성 및 노화된 피부를 정상으로 회복시키는 기능이 있으며, 세포의 재생을 촉진해 주름살을 줄여주는 역할을 한다. 이러한 기능들 때문에 현재 식품 및 화장품 분야에서 매우 중요한 성분 물질로 주목받고 있다.
본 발명은 다른 양태로 상기 제조방법에 의해 제조된 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물에 관한 것이다. 본 발명의 깻잎 추출물은 160 ~ 250℃의 온도에서 20 ~ 70분간 덖는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으며, 구체적으로 180 ~ 220℃의 온도에서 30 ~ 50분간 덖는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으며, 더욱 구체적으로는 200℃의 온도에서 40분간 덖는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 실험예에서, 200℃의 온도로 40분간 덖음처리한 덖음깻잎 추출물은 총 플라보노이드 함량 및 총 폴리페놀 함량이 증가하고, DPPH 및 ABTS 라디컬 소거능이 증가하여 우수한 항산화 활성을 가짐을 나타냈으며, NO(산화질소) 생성 저해능이 덖음 처리하지 않은 깻잎보다 우수하게 나타남을 확인하였다.
상기와 같이 덖음 처리에 의해 깻잎 추출물에서 항산화 효능이 증가함을 확인하였는바, 본 발명의 깻잎 추출물은 항산화 용도로 식품 조성물 및 화장료 조성물로 이용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 다른 양태로 상기 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물을 포함하는 항산화용 건강기능성 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 깻잎 추출물에 대한 설명은 전술한 바와 같다.
상기 항산화용 건강기능성식품 조성물은 식품 제조시 통상적으로 첨가되는 성분, 예를 들면, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 구연산, 액 상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
상기 식품 조성물은 항산화용 건강기능식품일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 식품 조성물을 포함한 음료(차 또는 알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품 (예: 햄, 소시지, 콘드비프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등일 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품은 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제, 액제 제형 등으로 제형화된 것일 수도 있다. 이들은 담체, 희석제, 부형제 및 첨가제 중 하나 이상을 더 포함하여 제형화될 수 있다. 상기 담체, 부형제, 희석제 및 첨가제의 구체적인 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 락토즈, 덱스트로즈, 슈크로즈, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로즈, 물, 설탕시럽, 메틸셀룰로즈, 메틸 하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아트산 마그네슘 및 미네랄 오일로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1종 이상이 사용되는 것이 바람직하다.
본 발명은 또 다른 양태로 상기 깻잎 추출물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 깻잎 추출물에 대한 설명은 전술한 바와 같다.
상기 항산화용 화장료 조성물은 안정화제, 기용화제, 비타민, 안료 및 향료등과 같은 통상적인 보조제 및 담체를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
재료 및 분석방법
1. 실험재료
본 실험에 사용한 깻잎은 제주에서 재배하여 5월에 수확한 깻잎을 농가로부터 구입하였다. 표준시약으로 사용한 로즈마린산(Purity > 98%)은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)에서 구입하였다.
2. 분석방법
고속액체크로마토그래피법(HPLC)을 이용하여 덖음 처리한 깻잎시료와 덖음 처리하지 않은 깻잎(대조군)의 추출물을 분석하였다. HPLC 시스템은 Waters 2695 Alliance system 및 Waters 2995 PDA 검출기를 사용하였으며, XBridge BEH C18 (4.6mm × 250mm, 5㎛) 컬럼을 사용하여 시료 성분을 분석하였다. 하기에 HPLC 정성 및 정량 분석에 사용된 구체적인 조건을 표시하였다.
표준물질은 시그마 알드리치에서 구입한 로즈마린산을 사용하여 표준곡선을 만들어 덖음깻잎 추출물의 로즈마린산 함량을 계산하였다. 표준물질 로즈마린산에 대한 표준용액의 농도별 검량선을 확인하였을 때 0.999이상의 상관관계(R2)값을 나타내었다(도 1).
실시예 1 : 덖음 조건에 따른 깻잎 추출물의 제조
표준용액 조제
표준시약으로 로즈마린산 약 10mg을 10㎖ 에탄올로 녹여 정용한 후 이를 희석하여 사용하였다.
시험용액 조제
준비한 깻잎을 50℃ 열풍건조기에서 24시간 건조 후 분쇄한 다음, 온도별(100℃, 150℃, 200℃, 250℃, 300℃)로 덖음처리하였다. 덖음깻잎을 70% 에탄올 용액에 1:20 비율(g/v)로 혼합하고 24시간동안 침지시켰다. 추출 후 여과페이퍼(No.5A)로 여과하여 60℃에서 진공 감압농축하고 동결건조 후 분석시료로 사용하였다.
온도별 덖음처리군 중 로즈마린산 함량이 가장 높게 나타난 덖음처리 온도에서 시간별(10분, 20분, 30분, 40분, 50분)로 덖음 처리한 후, 상기와 동일한 방법으로 추출하여 진공 감압농축하고 동결건조 후 분석시료로 사용하였다.
실시예 2 : 덖음깻잎 추출물의 로즈마린산 성분 변화 분석
표준물질 로즈마린산의 검량선은 도 1에 나타난 바와 같이 0.999이상의 값이고 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 흡광도를 비교하여 로즈마린산 함량을 정량하였다. 도 2는 로즈마린산 표준물질의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다. 도 2를 참고하면, 표준물질의 머무름 시간은 8.1분에서 확인되었다.
동결건조한 추출물을 에탄올:DMSO(1:1, v/v) 혼합용매에 100 mg/㎖ 농도로 제조하여 희석 후 사용하였다. 이동상은 증류수와 아세토니트릴(ACN)에 0.1% 인산이 되도록 제조하여 25분 동안 기울기 용리를 이용하여 분석하였다. 분석용 컬럼은 C18을 이용하여 40℃에서 온도가 유지되도록 하고 표준용액과 시료을 사용하여 10 ㎕씩 HPLC에 주입하여 분석하였다.
먼저 온도별(100℃, 150℃, 200℃, 250℃, 300℃)로 덖음처리한 깻잎 추출물의 로즈마린산 함량을 분석한 결과, 100℃에서 200℃까지는 덖음 온도가 증가할수록 로즈마린산 함량이 증가되었다가 250℃, 300℃에서는 로즈마린산 함량이 점점 감소하였다.
도 3은 덖음 조건에 따른 덖음깻잎 추출물 및 미처리 깻잎(대조군)의 로즈마린산 함량을 나타낸 것이다. 도 3(a)를 참고하면, 덖음 온도 200℃에서 로즈마린산 함량이 917.01 ㎎/g으로 가장 높게 나타남을 확인할 수 있다.
로즈마린산 함량이 가장 높게 나타난 200℃의 덖음 온도에서 시간별(10분, 20분, 30분, 40분, 50분)로 덖음처리한 깻잎 추출물의 로즈마린산 함량을 분석하였다. 도 3(b)를 참고하면, 10분에서 40분까지는 덖음 시간이 증가할수록 로즈마린산 함량이 증가되었다가 50분에서는 감소됨이 나타나 200℃에서 40분간 덖었을 때 917.44 mg/g으로 가장 높은 로즈마린산 함량을 확인하였다.
따라서, 덖음 조건에 따른 로즈마린산 함량을 정량한 결과, 덖음 온도는 200℃, 덖음 시간은 40분으로 최적 덖음 조건을 확립하였다.
실험예 : 덖음깻잎 추출물의 생리활성 분석
최적 덖음 조건에 따라, 200℃ 온도에서 40분간 덖음 처리한 깻잎 추출물의 성분 변화 및 생리활성을 분석하였다.
1. 총 플라보노이드 함량 분석
시료용액 200 ㎕에 에탄올 800 ㎕와 5% 아질산나트륨(NaNO2) 60 ㎕를 첨가하여 균질하게 혼합한 후 5분간 실온에서 반응시키고 10% 염화알루미늄(AlCl3)를 60 ㎕ 첨가하여 실온에서 다시 5분간 반응시켰다. 그 후 1 M의 수산화나트륨(NaOH) 용액을 400 ㎕ 첨가하여 1분간 상온에서 반응시키고 증류수 500 ㎕를 가하여 균질화 시킨 후 200 ㎕를 취하여 96 well plate에 분주하여 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader)로 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 케르세틴(quercetin)을 이용하여 표준곡선을 작성하였고, 시료의 총 플라보노이드 함량은 mg QE(케르세틴 등가물;quercetin equivalents)/g로 나타내었다.
분석 결과, 200℃에서 40분간 덖음처리한 덖음 깻잎 추출물이 덖음 처리하지 않은 깻잎 시료와 비교하여 총 플라보노이드 함량이 36.6% 증가하여 덖음처리로 인한 기능성 유효성분이 증가되었음을 확인하였다(표 1).
| 시료 | 총 플라보노이드 함량(mg QE/g) |
| 대조군 (미처리 깻잎) |
249.30 ± 6.04 |
| 덖음 깻잎 (200℃, 40분) |
393.56 ± 11.67 |
2. 총 폴리페놀 함량 분석
총 페놀 함량은 폴린-데니스(Folin-Denis) 방법으로 측정하였다. 시료 200 ㎕와 증류수 1,800 ㎕를 혼합하고, Folin-Ciocalteau's 페놀 시약 200 ㎕를 가하여 잘 섞은 후 5분간 상온에서 반응시켰다. 이 용액에 2 M 탄산나트륨(Na2CO3) 400 ㎕를 넣어 혼합한 다음 증류수를 가하여 4 ㎖로 조정하였다. 이 용액을 실온 암소에서 1시간 동안 방치한 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하였고, 갈산(gallic acid)을 이용한 검량선과 비교하여 mg GAE(갈산 등가물;gallic acid equivalents)/g 으로 총 페놀 함량을 나타내었다.
분석 결과, 200℃에서 40분간 덖음처리한 덖음 깻잎 추출물이 덖음 처리하지 않은 깻잎 시료와 비교하여 총 폴리페놀 함량이 17.5% 증가하여 덖음처리로 인한 기능성 유효성분이 증가되었음을 확인하였다(표 2).
| 시료 | 총 폴리페놀 함량(mg GAE/g) |
| 대조군 (미처리 깻잎) |
109.24 ± 3.99 |
| 덖음 깻잎 (200℃, 40분) |
132.46 ± 1.92 |
3. 항산화 활성 분석
DPPH 라디칼 소거활성 분석은 시료 20 ㎕(1mg/㎖)와 메탄올에 100 ㎛의 농도로 녹인 DPPH 용액 980 ㎕를 혼합하여 실온에서 30분간 방치한 다음 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, DPPH 라디컬 소거활성은 아래와 같이 계산하였다.
ABTS 라디칼 소거활성 분석은 시험 용액을 증류수에 7 mM ABTS와 2.45 mM 과황산칼륨(potassium persulfate)을 첨가하여 상온에서 16시간 배양하고 ABTS 양이온을 생성시킨 후 734 nm에서 흡광도의 값이 0.7 이하가 되도록 희석하여 제조하였다. 그 다음 ABTS 용액 100 ㎕에 시료 용액 100 ㎕을 가한 후 6분 후에 흡광도를 측정하였다. 음성대조군(2.45 mM 과황산칼륨 buffer)의 흡광도와 비교하여 흡광도를 감소시키는 정도를 %로 나타내었다.
분석 결과, 200℃에서 40분간 덖음처리한 덖음 깻잎 추출물이 덖음 처리하지 않은 깻잎원물 시료와 비교하여, 1 mg/mL 분석농도에서 DPPH와 ABTS 모두 92 % 이상의 우수한 항산화 효능을 나타내었다(표 3).
| 시료 | DPPH 라디컬 소거활성 (IC50 = mg/ml) |
ABTS 라디컬 소거활성 (IC50 = mg/ml) |
| 대조군 (미처리 깻잎) |
0.07 | 0.10 |
| 덖음 깻잎 (200℃, 40분) |
0.09 | 0.03 |
4. NO 생성 저해 활성 분석
대식세포 RAW264.7를 이용하여 세포독성 시험(MTT assay)을 수행하고, 깻잎 추출물을 농도별(100 ~ 600 ㎍/㎖)로 NO(Nitric oxide) 생성 저해능을 측정하였다.
먼저, RAW264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1.5 X 105 cells/mL로 조절한 후 24 well plate에 접종한 후 24시간 배양시켰다. 그 다음 시험용액을 함유한 새로운 배지를 처리하여 24시간 배양시켰다. 5 mg/mL MTT 용액 1 ㎖을 가하여 37℃에서 4시간 반응 시켰다. 배지를 제거하여 DMSO 1 ㎖을 넣어 30분간 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하여 세포독성을 분석하였다.
그리고 RAW264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1.5 X 105 cells/mL로 조절한 후 24 well plate에 접종한 후 24시간 배양시킨 다음, 시료와 LPS 1 ㎍/㎖를 동시에 처리하여 24시간 배양시켰다. 24시간 뒤 96 well plate에 세포 배양 상등액 100 ㎕와 그리스(Griess) 시약 100 ㎕를 혼합하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산염 농도는 NaNO2 표준 곡선을 통해 계산하였다.
도 4는 RAW 264.7 세포에서 미처리 깻잎(대조군)의 NO 생성 저해활성(a) 및 덖음깻잎 추출물의 NO 생성 저해활성(b)을 나타낸 것이다. 도 4를 참고하면, 미처리 깻잎(대조군)은 600 ㎍/㎖ 농도에서 NO 생성을 59.17% 저해하였고, 덖음깻잎 추출물은 80.79%의 저해율을 보여 NO 생성 저해능이 현저하게 증가되었음을 확인할 수 있다.
Claims (6)
- 깻잎을 열풍건조하여 분쇄하는 단계;
상기 분쇄한 깻잎을 덖음 처리하여 덖음깻잎을 제조하는 단계;및
상기 덖음깻잎을 추출 후 여과하여 농축 및 동결건조하는 단계를 포함하는, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법. - 제 1항에 있어서,
상기 덖음 처리는 160 ~ 250℃의 온도에서 20 ~ 70분간 수행하는 것을 특징으로 하는, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법. - 제 1항에 있어서,
상기 추출 용매는 에탄올인 것을 특징으로 하는, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물의 제조방법. - 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된, 로즈마린산 함량이 증가된 깻잎 추출물.
- 제 4항의 깻잎 추출물을 포함하는 항산화용 건강기능성 식품 조성물.
- 제 4항의 깻잎 추출물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
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| CN116999484A (zh) * | 2023-10-07 | 2023-11-07 | 云南英格生物技术有限公司 | 紫苏籽油粕提取物在制备5α-还原酶抑制剂中的应用 |
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|---|---|---|---|---|
| KR101009957B1 (ko) | 2010-05-10 | 2011-01-20 | 강원대학교산학협력단 | 원적외선 조사를 이용한 로즈마린산 함량이 증가된 로즈마리의 제조방법 |
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-
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