KR20230037486A - 바이러스 억제 - Google Patents

Abstract

본원 발명은 코로나바이러스에 의한 감염 위험을 치료, 예방 또는 감소시키기 위해 개체에서 코로나바이러스를 억제하기 위해 적어도 마크로시클릭 락톤, 예컨대 이버르멕틴 및/또는 목시덱틴의 용도에 관한 것이다.

Description

바이러스 억제

본 기술은 코로나바이러스를 억제하기 위한 마크로시클릭 락톤의 용도와 관련 있다. 특히, 본 기술은 코로나바이러스를 억제 또는 코로나바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료가 필요한 개체에서 마크로시클릭 락톤, 예컨대 이버르멕틴 및/또는 목시덱틴의 용도에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 3월 13일에 출원된 호주 가특허 출원 번호 2020900778 및 2020년 5월 14일에 출원된 호주 가특허 출원 번호 2020901549에 대한 우선권을 주장한다. 이러한 출원은 그 전체가 상호 참조에 의해 통합된다.

2020년 2월 14일 현재, 전 세계적으로 64,000명 이상의 사람들이 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)에 감염되었다. 세계보건기구(WHO: World Health Organization)의 'COVID-19 Weekly Epidemiological Update'에 따르면 2021년 3월 초까지 SARS-CoV-2 누적 감염자는 전 세계적으로 110,000,000 명을 넘어섰다. SARS-CoV-2는 2019년 코로나바이러스감염증 (COVID-19) 발병의 원인 병원체로, 치사율은 약 2.4-5% 이다. COVID-19로 인해 전 세계적으로 전례 없는 공중 보건 대응이 이루어졌다. 승인된 항바이러스제나 사용 가능한 백신이 없기 때문에, 상기 대응은 증상 치료 및 모니터링 및 감염된 환자의 봉쇄(containment)/격리(isolation)로 제한되었다.

이버르멕틴은 광범위한 구충제로 FDA의 승인을 받은 마크로시클릭 락톤으로 최근 몇 년 동안 광범위한 바이러스에 대해 강력한 항바이러스 활성을 가지는 것으로 나타났다. 원래는 인간 면역결핍 바이러스-1(HIV-1) 인테그라제 단백질(IN) 및 IN 핵 유입(nuclear import)을 담당하는 임포틴(IMP) α/β1 헤테로다이머 사이의 상호작용 억제제로 확인된, 이버르멕틴은 이후 IN 핵 유입 및 HIV-1 복제를 억제하는 것으로 확인되었다. 이버르멕틴의 다른 작용이 보고되었지만, 이버르멕틴은 유인원 바이러스 SV40 대형 종양 항원(T-ag) 및 뎅기열 바이러스 비구조 단백질 5(DENV NS5)를 포함하는 숙주 및 바이러스 단백질의 핵 유입을 억제하는 것으로 나타났다. 이버르멕틴은 바이러스, 예컨대 DENV, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV) 및 인플루엔자에 의한 감염을 제한하는 것으로 입증되었으며, 이는 감염 중 RNA 바이러스가 IMP α/β1에 의존하기 때문인 것으로 생각된다.

목시덱틴은 마크로시클릭 락톤의 또 다른 예다. 목시덱틴은 인간의 사상충증(onchoceraciasis) 치료를 위해 FDA 승인을 받은 약물이다. 이것은 또한 기생충(helminthic), 외부 기생충(ectoparasitic), 곤충(insect), 진드기(acarid) 및 선충류(nematode) 감염 및 침입의 예방, 치료 또는 통제에서 항기생충제로 동물에서 사용된다. 이것은 특히 소와 양의 진드기(tick)와 벌레와 같은 기생충을 통제하는 데 유용하다. 목시덱틴은 피하 주사, 예컨대 국소 또는 "드렌츠(drench)"로서 또는 알약 또는 정제 형태의 경구를 포함한 다양한 방식으로 가축 및 기타 동물에 투여될 수 있다. 목시덱틴은 인플루엔자 H9와 같은 바이러스에 의한 감염을 제한하는 것으로 입증되었다.

많은 코로나바이러스는 숙주 세포의 핵에 위치한 뉴클레오캡시드 단백질을 가지고 있으며 이는 IMP α/β1이 이 단백질의 핵 유입에 역할을 하는 것으로 생각된다. 그러나, SARS-CoV의 뉴클레오캡시드 단백질(SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질과 본질적으로 동일함)은 거의 완전히 세포질에 위치한다. 또한, SARS-CoV의 ORF6 단백질은 IMP α/β1에 결합하여 세포질에서 격리하고 감염된 숙주 세포가 IMP α/β1이 핵에 들어가도록 요구하는 STAT1 전사 인자를 통해 항바이러스 반응을 일으키는 것을 방지한다. 따라서, 이버르멕틴과 같은 IMP α/β1 억제제는 ORF6에서 IMP α/β1을 방출할 것으로 예상되지만 이는 또한 STAT 1 유도 항바이러스 반응의 억제로 이어져 결과적으로 감염을 악화시킬 것이다.

예상되는 효과와 대조적으로, 본 발명자들은 이버르멕틴 및 목시덱틴이 SARS-CoV-2를 억제할 수 있고 따라서 이러한 마크로시클릭 락톤이 SARS-CoV-2 및 Coronaviridae(Coronavirus) 패밀리의 모든 구성원에 의한 감염을 치료하고 예방하는 데 유용하다는 것을 확인하였다.

요약

제1 양상에서, 개체에서 코로나바이러스의 억제제로서 사용하기 위한, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체를 포함하는 제제가 제공된다.

제2 양상에서, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 코로나바이러스를 억제하는 방법이 제공된다.

제3 양상에서, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 코로나바이러스 감염이 있는 개체를 치료하는 방법이 제공된다.

제4 양상에서, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 코로나바이러스 감염을 예방하는 방법을 제공한다.

제5 양상에서, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 코로나바이러스 감염의 위험을 감소시키는 방법을 제공한다.

제6 양상에서, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 항체 의존 증강(ADE) 코로나바이러스 감염을 예방하는 방법을 제공한다.

제2 내지 제6 양상의 일 구체예에서, 상기 개체에서 검출가능한 코로나바이러스의 수준은 적어도 50% 감소된다. 예컨대, 상기 개체에서 검출가능한 코로나바이러스의 수준이 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 또는 99.9% 이상 감소될 수 있다.

상기 검출가능한 코로나바이러스의 수준이 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 투여 후 1, 2, 3일 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 감소될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 개체의 약 0.1 mg/kg 내지 약 1.0 mg/kg 체중의 용량으로 투여될 수 있다.

제7 양상에서, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도를 제공한다.

제8 양상에서, 코로나바이러스 감염에 걸릴 위험을 감소시키기 위한 약제의 제조를 위한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도를 제공한다.

제9 양상에서, 개체에서 항체 의존 증강(ADE) 코로나바이러스 감염을 예방하기 위한 약제의 제조에서 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도를 제공한다.

상기 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 아베르멕틴 또는 밀베마이신일 수 있다.

예컨대, 상기 아베르멕틴은 아바멕틴, 디마덱틴, 도라멕틴, 에마멕틴, 에프리노멕틴, 이버르멕틴, 라티덱틴, 레피멕틴 및 셀라멕틴으로부터 선택될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴이다.

상기 밀베마이신은 밀베멕틴, 밀베마이신 D, 밀베마이신 옥심, 목시덱틴 및 네마덱틴으로부터 선택될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 밀베마이신은 목시덱틴이다.

다른 구체예에서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴이고 밀베마이신은 목시덱틴이다.

일 구체예에서, 상기 개체는 인간이다.

상기 코로나바이러스는 코로나바이러스 229E, 코로나바이러스 NL63, 코로나바이러스 OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2 또는 이들의 변종일 수 있다. 바람직하게는, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2 또는 SARS-CoV-2 변종이다.

정의

본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥상 명확히 달리 요구하지 않는 한, 단어 '포함하다', 또는 '함유하다' 또는 '포함하는'과 같은 변형은 명시된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 그룹의 포함(inclusion) 그러나 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 그룹은 제외(exclusion)되지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.

본 명세서 전반에 걸쳐 '~로 구성된'이라는 용어는 ~만으로 이루어진 것을 의미한다.

' ~로 본질적으로 구성된'이라는 용어는 언급된 요소(들), 정수(들) 또는 단계(들)를 포함하지만, 실질적으로 변경하지 않거나 본 발명의 작업에 기여하는 다른 요소(들), 정수(들) 또는 단계(들)도 포함될 수 있다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명의 맥락에서 특정 마크로시클릭 락톤으로 '본질적으로 구성된' 조성물은 특정 마크로시클릭 락톤이 활성제이고 상기 조성물이 치료 효과를 가질 양으로 다른(특정되지 않은) 활성제(들)를 포함하지 않는 것을 의미한다. 그러나, 당업자는 최소한의 양의 다른 화합물(예: 다른 마크로시클릭 락톤)이 예컨대 불순물로서 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 상기 조성물은 부형제, 희석제 등과 같은 불활성 성분을 포함할 수 있지만, 이러한 성분이 명시적으로 확인되지는 않는다.

본 명세서에 포함된 문서, 행위, 재료, 장치, 기사 등에 대한 모든 논의는 오로지 본 기술에 대한 맥락을 제공하기 위한 것이다. 이러한 문제 중 일부 또는 전부가 선행 기술 기반의 일부를 형성하거나 본 명세서의 각 청구항의 우선일 이전에 존재했던 현재 기술과 관련된 분야의 일반적인 일반 지식이었다는 것을 인정하는 것으로 간주되어서는 안된다.

문맥상 달리 또는 구체적으로 반대되는 것을 요구하지 않는 한, 본 명세서에서 단수 정수들, 단계들 또는 요소들로 인용된 기술의 정수, 단계 또는 요소는 인용된 정수들, 단계들 또는 요소들의 단수 및 복수 형태 모두를 명확하게 포함한다.

본 명세서의 맥락에서, 용어 '한' 및 '하나의'는 관사의 문법적 목적 중 하나 이상(즉, 적어도 하나)을 지칭하기 위해 사용된다. 예컨대, '요소'에 대한 참조는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.

본 명세서의 맥락에서 용어 '약'은 수치 또는 값에 대한 참조가 절대 수치 또는 값으로 간주되어서는 안 되며, 전형적인 오차 범위(margins of error) 또는 기기 한계(instrument limitation) 내를 포함하여, 당업자가 당업계에 따라 이해할 수 있는 수치 또는 값 위 또는 아래의 변동 여백(margins of variation)을 포함함을 의미한다. 다시 말해서, 용어 '약'의 사용은 사람 또는 당업자가 동일한 기능 또는 결과를 달성하는 맥락에서 인용된 값과 동등하다고 간주할 범위 또는 근사치를 지칭하는 것으로 이해된다.

본 명세서에서 용어 '치료하는' 및 '치료'는 치유 요법, 예방 요법, 완화 요법 및 예방 요법을 지칭하기 위해 사용된다. 따라서, 본 개시된 명세서의 맥락에서 용어 '치료하는'은 코로나바이러스 감염 또는 그의 관련 증상 중 하나 이상의 중증도를 치유, 개선 또는 완화하는 것을 포함한다.

용어 '유효량' 또는 '치료학적 유효량'은 치료되는 개체에서 원하는 치료 또는 약리학적 효과를 생성하기에 충분한 마크로시클릭 락톤의 양을 지칭한다. 상기 용어는 동의어이며 부작용, 예컨대 전형적으로 다른 치료법과 관련된 부작용을 바람직하게는 피하거나 최소화하면서 질병 중증도 및/또는 각 마크로시클릭 락톤 단독 치료에 대한 발병 빈도의 개선 목표를 달성할 각 마크로시클릭 락톤의 양을 한정하기 위한 것이다. 당업자는 당해 분야에 공지된 정보 및 통상적인 방법을 사용하여 유효 용량을 결정할 수 있다.

보다 구체적으로, 용어 '유효량' 또는 '치료학적 유효 수준' 및 유사한 용어는 (i) 특정 질병, 상태 또는 장애를 치료, (ⅱ) 특정 질병, 상태 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화, 개선 또는 제거, (ⅲ) 본 명세서에 기재된 특정 질병, 상태 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발병을 예방 또는 지연, (iv) 특정 질병, 상태 또는 장애의 진행 예방 또는 지연 또는 (v) 치료 전에 발생한 손상을 어느 정도 회복시키는 마크로시클릭의 양을 의미한다. 반전이 절대적일 필요는 없다. 투여되는 양은 치료 효과를 달성하기 위해 체내에서 요구되는 것보다 많을 수 있지만, 마크로시클릭 락톤의 흡수, 분포, 대사 및 배설(ADME) 프로파일, 투여 경로 및 투여 빈도를 고려한다.

대안적인 구체예에서, 코로나바이러스 감염에 관련된 증상의 중증도는 치료학적 유효량의 마크로시클릭 락톤을 개체에서 투여함으로써 감소될 수 있다. 증상 중증도 감소는 하나 이상의 증상이 약화, 개선 또는 제거되거나 하나 이상의 증상의 발병이 예방 또는 지연됨을 의미한다.

'약제학적 담체, 희석제 또는 부형제'는 적합한 수용성 유기 담체, 통상적인 용매, 분산 매질, 필러, 고체 담체, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제를 포함하는 임의의 생리학적 완충(즉, 약 pH 7.0 내지 7.4) 매질을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 적합한 수용성 유기 담체는 염수, 덱스트로스, 옥수수유, 디메틸설폭사이드, 및 젤라틴 캡슐을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 다른 통상적인 첨가제는 락토스, 만니톨, 옥수수 전분, 감자 전분, 결합제 예컨대 미세결정질 셀룰로오스, 셀룰로오스 유도체 예컨대 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 아카시아, 젤라틴, 붕해제 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 및 윤활제 예컨대 활석 또는 마그네슘 스테아레이트를 포함한다.

'개체'에는 인간 또는 인간이 아닌 포유동물이 포함된다. 따라서, 인간 치료에 유용할 뿐만 아니라, 본 발명의 화합물은 또한 반려 동물 및 농장 동물을 포함하는 포유동물, 예컨대 개, 고양이, 말, 소, 양, 낙타, 닭, 및 돼지의 수의학적 치료에 유용할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 구체예에서, 상기 개체는 인간이다.

본 명세서의 맥락에서 용어 '투여하는' 및 '투여하다' 및 '투여'를 포함하는 그 용어의 변형은 임의의 적절한 수단에 의해 개체에게 본 발명의 화합물 또는 조성물을 접촉, 적용, 전달 또는 제공하는 것을 포함한다.

코로나바이러스와 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 '억제'는 세포 표적에 대한 코로나바이러스에 의해 암호화된 단백질의 결합 감소, 질병 증상 또는 중증도의 감소, 또는 바이러스 로드의 감소를 지칭한다.

당업자는 본 명세서에 기재된 기술이 구체적으로 기재된 것 이외의 변형 및 수정이 가능하다는 것을 이해할 것이다. 상기 기술은 이러한 모든 변형 및 수정을 포함한다는 것을 이해해야 한다. 의심의 여지를 피하기 위해, 상기 기술은 또한 개별적으로 또는 집합적으로 본 명세서에 언급되거나 표시된 모든 단계, 특징 및 화합물, 및 상기 단계, 특징 및 화합물 중 임의의 둘 이상의 부분 또는 모든 조합을 포함한다.

도 1은 (A) SARS-CoV-2 분리주에 감염된 Vero/hSLAM 세포 또는 (B) 5 μM 이버르멕틴 처리 전과 1, 2, 및 3일 후 세포 상층액과 관련된 바이러스 RNA의 상대적인 양을 나타낸다. (C, D) E 유전자의 검출에 기초하여, 48시간에 5 μM 이버르멕틴으로 처리된 샘플의 상층액 및 세포 펠릿 모두에서 바이러스 RNA의 5000 이상 감소가 관찰되었다. (E, F) SARS-CoV-2 RdRp 유전자를 위한 특정 프라이머를 사용하여 거의 동일한 결과를 얻었다.
도 2는 이버르멕틴과 목시덱틴이 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020의 복제를 강력하게 억제한다는 것을 나타낸다. (A) 이버르멕틴과 목시덱틴은 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020에 감염된 Vero/hSLAM 세포의 배양 상층액에서 바이러스 RNA를 감소시킨다. (B-D) 이버르멕틴 및 목시덱틴은 비히클(DMSO), 이버르멕틴(닫힌 사각형) 또는 목시덱틴(열린 사각형)을 첨가하기 전에 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020에 감염된 Vero/hSLAM 세포의 배양 상층액에서 바이러스 RNA를 감소시킨다. 상층액을 24시간(B), 48시간(C) 또는 72시간(D)에 SARS-CoV-2 E 유전자에 대해 분석하였다.
도 3은 이버르멕틴이 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020에 감염된 CALU-3(인간 폐) 세포의 바이러스 로드를 감소시키는 것을 나타낸다.
도 4는 다중 용량 이버르멕틴 또는 목시덱틴 치료가 단일 치료에 비해 SARS-CoV-2-항바이러스 활성을 증강시킨다는 것을 나타낸다. Vero/hSLAM(A/C) 또는 CALU-3(B/D) 세포는 표시된 농도의 비히클(DMSO), 이버르멕틴(A/B), 또는 목시덱틴(C/D)의 첨가 전에 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020에 감염되었다.
도 5는 이버르멕틴과 목시덱틴이 Vero/hSLAM 세포에서 SARS-CoV-2에 대한 예방적 항바이러스 활성을 가지고 있음을 나타낸다. Vero/hSLAM 세포는 2시간 동안 DMSO 또는 약물의 존재 하 SARS-CoV-2(MOI = 0.01)로 감염되기 전에 표시된 농도에서 DMSO, 이버멕틴 또는 목시덱틴으로 2시간 동안 처리되었다.
도 6은 이버르멕틴과 목시덱틴이 계절성 코로나바이러스 229E의 효과적인 항바이러스 억제제임을 나타낸다. Huh-7 세포는 표시된 농도에서 비히클(DMSO), 이버르멕틴(A) 또는 목시덱틴(B)을 첨가하기 전에 229E로 감염시켰다. IC₅₀ 값을 결정하기 위해 GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 파라미터 용량 반응 곡선을 맞추었다. (C) 예방 가능성 평가를 위해 Huh-7 세포를 229E로 감염시키기 전에 DMSO 또는 이버르멕틴의 존재 하 표시된 농도에서 DMSO 또는 이버멕틴으로 처리하였다. 샘플을 흡착 후 세척하고 바이러스 로드의 정량화 전에 DMSO 또는 이버르멕틴을 함유하는 새로운 배지에서 48시간 동안 인큐베이션하였다.

본 발명자들은 마크로시클릭 락톤 이버르멕틴 및 목시덱틴이 SARS-CoV-2를 억제하는데 사용될 수 있음을 확인하였다. 특히, 이버르멕틴 및 목시덱틴은 SARS-CoV-2 바이러스 로드를 감소시키므로 감염을 치료, 감소 또는 예방하는 데 사용될 수 있다.

따라서, 개체에서 코로나바이러스를 억제하기 위한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤의 용도가 제공된다. 상기 마크로시클릭 락톤은 코로나바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하는 데 사용할 수 있으며, 이는 하기 중 하나 이상을 수반한다:

i) SARS, MERS, SARS-CoV-2를 포함하나 이에 제한되지 않는 코로나바이러스에 감염된 개체, 특히 SARS-CoV-2의 임의의 분리주 또는 균주에 감염된 개체의 바이러스 로드 감소.

ⅱ) SARS, MERS, SARS-CoV-2를 포함하나 이에 제한되지 않는 코로나바이러스에 감염된 개체에서, 특히 SARS-CoV-2의 임의의 분리주 또는 균주 감염 위험의 감소 또는 개선.

ⅲ) SARS, MERS, SARS-CoV-2를 포함하나 이에 제한되지 않는 코로나바이러스 감염, 특히 SARS-CoV-2의 임의의 분리주 또는 균주 감염이 있거나 의심되는 개체의 코로나바이러스 감염 증상 완화.

iv) 이전에 코로나바이러스 감염이 있거나 의심되는 개체에서 ADE 코로나바이러스 감염의 위험 감소 또는 개선.

대안적으로, 환자는 또한 다른 치료, 예컨대 마크로시클릭 락톤 또는 이의 조성물이 보조 요법으로 투여되는 것을 받고 있을 수 있다. 추가 요법은 통증 완화제, 예컨대 아스피린, 아세트아미노펜, 코데인 및 비스테로이드성 소염제(NSAIDS)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 동반 증상을 치료하는 요법일 수 있다. 이와 관련하여, 코로나바이러스 감염을 치료하는 방법, 또는 코로나바이러스 감염이 있거나 의심되는 환자의 증상 중증도를 감소시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 다른 치료제와 함께 하나 이상의 마크로시클릭 락톤의 유효량을 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 투여된 마크로시클릭 락톤이 개체에서 치료학적 유효 수준을 달성한다.

본 명세서에 기재된 방법 및 용도는 코로나바이러스에 노출된, 코로나바이러스에 감염된 개체, 또는 코로나바이러스에 대한 노출이 의심되는 개체에게 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 하나 이상의 마크로시클릭 락톤을 포함하는 제제를 투여하는 것을 포함한다.

개체에 마크로시클릭 락톤의 투여는 개체에서 코로나바이러스를 억제한다. 상기 억제는 많은 유익한 효과, 예컨대 바이러스 로드 감소, 코로나바이러스와 IMP α/β1과 같은 세포 표적의 상호작용 예방 또는 감소를 가지며, 이는 차례로 코로나바이러스에 의한 세포 감염을 예방하거나 감소시킨다. 이러한 바이러스 억제 효과는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료(예: 중증도 감소)에 유용하다.

위에서 언급한 바와 같이, 마크로시클릭 락톤에 의한 코로나바이러스의 억제는 코로나바이러스와 IMP α/β1과 같은 세포 표적의 상호작용을 방지하거나 감소시킬 수 있으며, 이는 차례로 코로나바이러스에 의한 세포 감염을 감소 또는 예방할 수 있으므로, 개체에 마크로시클릭 락톤의 투여는 코로나바이러스 감염의 위험을 감소시킨다.

마크로시클릭 락톤은 예컨대 의료 종사자, 간병인 또는 코로나바이러스에 노출될 위험이 있는 사람들에게 예방 조치로 투여될 수 있다.

하나의 코로나바이러스 혈청형 또는 균주에 의한 감염은 동일한 혈청형 또는 균주에 의한 재감염을 보호할 수 있지만, 개체는 다른 혈청형 또는 균주에 의한 감염에 의해 보호되지 않을 수 있다. 다른 혈청형으로의 후속 감염은 감염의 항체-의존 증강(ADE)을 초래하는 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명의 일부 구체예에서, 상기 개체는 예컨대 상이한 코로나바이러스 혈청형 또는 균주에 의한 이전 코로나바이러스 감염이 있었다. 이러한 개체는 ADE 코로나바이러스 감염 위혐이 더 높다. 본 발명의 방법은 또한 ADE 코로나바이러스 감염의 위험을 치료, 예방 또는 감소시키는데 적합하다.

ADE는 다른 코로나바이러스 혈청형에 대한 이전 감염의 항체 순환으로 인해 교차-반응성이지만 중화되지 않는 항체로 인해 바이러스 로드가 증가할 때 발생한다. ADE는 SARS-CoV 및 MERS-CoV에서 발생하는 것으로 알려져있다. ADE는 또한 감염의 더 심각한 징후의 발달과 관련된 사이토카인 인터루킨(IL) 8 및 종양 괴사 인자(TNF) α를 코딩하는 유전자와 같은 유전자의 발현을 증가시킨다.

따라서, 본 발명의 추가 구체예에서, 마크로시클릭 락톤의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, ADE 코로나바이러스 감염의 중증도를 예방하거나 감소시키는 방법이 제공된다.

또한 ADE 코로나바이러스 감염 예방을 필요로 하는 개체를 위한 약제의 제조에 유효량의 마크로시클릭 락톤의 용도가 제공된다.

일부 구체예에서, 코로나바이러스 감염이 있는 개체에 대한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤의 투여는 검출가능한 코로나바이러스(세포와 결합된 또는 유리 바이러스)의 양을 50% 이상 감소시킨다. 예컨대, 상기 검출가능한 코로나바이러스의 양이 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 또는 99.9% 이상 감소될 수 있다.

상기 검출가능한 코로나바이러스의 수준은 1, 2, 3일 또는 그 이상의 기간 동안 감소될 수 있다.

마크로시클릭 락톤에 대한 IC₅₀은 반응(검출가능한 코로나바이러스의 감소)이 절반으로 감소되는 마크로시클릭 락톤의 농도다. 일부 구체예에서, 상기 마크로시클릭 락톤은 약 10μM 미만의 IC₅₀을 갖는다. 예컨대, 상기 IC₅₀은 10μM, 9μM, 8μM, 7μM, 6μM, 5μM, 4μM, 3μM, 2μM 또는 약 1μM 미만일 수 있다.

마크로시클릭 락톤은 담체, 비히클 및 희석제를 포함하는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 약제학적 유효량의 마크로시클릭 락톤을 포함하는 제형으로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 용어 "부형제"는 그 자체가 치료제가 아니라 개체에게 치료제를 전달하기 위한 희석제, 보조제 또는 비히클로서 사용되거나 약제학적 조성물의 취급 또는 저장 특성을 개선하기 위해 추가되거나 경구, 비경구, 피내, 피하 또는 국소 적용에 적합한 고체 투여 형태, 예컨대 정제, 캡슐, 또는 용액 또는 현탁액의 형성을 허용하거나 촉진하는 임의의 물질을 의미한다. 부형제는 희석제, 붕해제, 결합제, 결합제, 습윤제, 폴리머, 윤활제, 활택제, 안정제 및 불쾌한 맛 또는 냄새를 가리거나 중화하기 위해 첨가되는 물질, 향미제, 염료, 향료 및 조성물의 외관을 개선하기 위해 첨가되는 물질을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 허용되는 부형제는 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 소듐 및 칼슘 염, 탄산마그네슘, 활석, 젤라틴, 아카시아 검, 알긴산나트륨, 펙틴, 덱스트린, 만니톨, 소르비톨, 락토스, 수크로스, 전분, 젤라틴, 셀룰로오스 재료 예컨대 알칸산의 셀룰로오스 에스테르 및 셀룰로오스 알킬 에스테르, 저융점 왁스, 코코아 버터 또는 분말, 폴리머 예컨대 폴리비닐-피롤리돈, 폴리비닐 알코올 및 폴리에틸렌 글리콜, 및 기타 약제학적으로 허용되는 재료를 포함한다. 부형제 및 이들의 용도의 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition(Lippincott Williams & Wilkins, 2000)에 기재되어 있다. 부형제의 선택은 특정 투여 방식, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 투여 형태의 특성과 같은 요인에 크게 좌우된다.

본 발명의 마크로시클릭 락톤 및 약제학적 조성물은 경구, 주사가능, 직장, 비강, 비경구, 피하, 정맥내, 국소 또는 근육내 전달을 위해 제제화될 수 있다. 특정 제제 유형의 비제한적인 예는 정제, 캡슐, 캐플릿, 분말, 과립, 주사제, 앰플, 바이알, 레디-투-유즈 용액 또는 현탁액, 동결건조된 재료, 크림, 로션, 연고, 점적제, 좌제 및 임플란트를 포함한다. 정제 또는 캡슐과 같은 고체 제제는 상기 기재된 임의의 수의 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 함유할 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 지속 전달을 위해 제형화될 수 있다.

하나 이상의 바람직한 구체예에서, 경구 투여를 위한 정제 및 캡슐은 단위 용량 제시 형태일 수 있고, 결합제 예컨대 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트, 또는 폴리비닐피롤리돈과 같은 통상적인 부형제; 필러 예컨대 락토스, 설탕, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신; 정제화 윤활제 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 활석, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카; 붕해제 예컨대 감자 전분; 또는 소듐 라우릴 설페이트와 같은 허용 가능한 습윤제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 보통의 약제학적 관행에서 잘 알려진 방법에 따라 코팅될 수 있다.

경구 액체 제제는 여컨대 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르의 형태일 수 있거나, 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클과 함께 재구성하기 위한 건조 제품으로 제공될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제 예컨대 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 글루코스 시럽, 젤라틴, 히드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 또는 수소화된 식용 지방, 유화제 예컨대 레시틴, 소르비탄 모노올레에이트 또는 아카시아와 같은 통상적인 첨가제; 비수성 비히클(식용유를 포함할 수 있음) 예컨대 아몬드 오일, 유성 에스테르 예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 에틸 알코올; 보존제 예컨대 메틸 또는 프로필 p 히드록시벤조에이트 또는 소르브산; 및 원하는 경우 통상적인 향미제 또는 착색제를 함유할 수 있다.

정맥내, 근육내, 피하 또는 복강내 투여를 포함하는 비경구 투여의 경우, 유체 단위 투여 형태는 화합물 및 멸균 비히클, 전형적으로 수용자의 혈액과 등장성인 멸균 수성 용액을 조합함으로써 제조될 수 있다. 사용된 비히클 및 농도에 따라, 상기 화합물은 비히클 또는 다른 적합한 용매에 현탁되거나 용해될 수 있다. 용액을 제조할 때, 상기 화합물을 주사용수에 용해시키고 적절한 바이알 또는 앰플에 채우고 밀봉하기 전에 여과 멸균할 수 있다. 유리하게는, 국소 마취제, 방부제 및 완충제와 같은 작용제가 비히클에 용해될 수 있다. 안정성을 증강시키기 위해, 조성물을 바이알에 채우고 진공 하에 물을 제거한 후 동결시킬 수 있다. 그 후, 건조 동결건조 분말은 바이알에 밀봉될 수 있고 주사용 물 또는 다른 적합한 액체의 수반되는 바이알은 사용 전에 액체를 재구성하기 위해 공급될 수 있다. 비경구 현탁액은 화합물이 용해되는 대신 비히클에 현탁되고 여과에 의해 멸균이 달성될 수 없다는 점을 제외하고는 실질적으로 동일한 방식으로 제조된다. 화합물은 멸균 비히클에 현탁시키기 전에 에틸렌 옥사이드에 노출시켜 멸균할 수 있다. 화합물의 균일한 분포를 촉진하기 위해 계면활성제 또는 습윤제가 조성물에 포함될 수 있다.

동결건조된 제제는 바람직하게는 주로 물(예: USP WFI 또는 주사용수) 또는 정균수(예: 0.9% 벤질 알코올이 포함된 USP WFI)로 구성된 용액으로 재구성된다. 대안적으로, 완충제 및/또는 부형제 및/또는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 용액이 사용될 수 있다. 동결-건조(freeze-drying) 또는 동결건조(lyophilization)될 액체는 바람직하게는 최종 재구성된 액체 제제에서 원하는 모든 성분을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 지속 방출 제제 또는 데포(depot)로 제제화된다. 지속 방출 제제 또는 데포의 예에는; 미소구체(microsphere); 매트릭스; 에멀젼; 지질-기반(lipid-based); 폴리머-기반(polymer-based); 나노미셀; 미셀; 나노비히클 예컨대 리포솜, 노이솜, 트랜스퍼솜, 디스콤, 파마코솜, 에멀솜 또는 스판라스틱, 특히 리포솜; 미세입자(microparticle); 나노입자(nanoparticle) 예컨대 나노캡슐 또는 나노스피어 예컨대 지질, 단백질, 알부민, 알긴산나트륨, 키토산, PLGA, PLA 및/또는 폴리카프로락톤과 같은 천연 또는 합성 폴리머로 구성된; 또는 인 시추(in situ) 히드로겔 약물 전달 시스템과 같은 인 시추 겔을 포함한다.

투여되는 치료학적으로 유효한 마크로시클릭 락톤의 양 및 본 발명의 화합물 및/또는 약제학적 조성물로 질병 상태를 치료하기 위한 투여 요법은 다양한 인자, 예컨대 연령, 체중, 성별, 및 개체의 의학적 상태, 질병의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 사용된 특정 화합물, 뿐만 아니라 치료받는 개인의 약동학적 특성(예: 흡착, 분포, 대사, 배설)에 의존하며, 따라서 광범위하게 달라질 수 있다. 이러한 치료는 필요한 만큼 자주 그리고 담당 의사가 필요하다고 판단하는 기간 동안 투여할 수 있다. 당업자는 투여될 화합물의 투여 요법 또는 치료 유효량이 각 개인에 대해 최적화될 필요가 있을 수 있음을 이해할 것이다. 상기 약학적 조성물은 예컨대 약 0.1 mg 내지 2000 mg 범위, 전형적으로 약 0.5 mg 내지 500 mg, 약 1 mg 내지 200 mg, 약 1 mg 내지 100 mg, 보다 전형적으로 약 1 mg 내지 50 mg 범위의 활성 성분을 함유할 수 있다.

약 0.01 mg/kg 내지 100 mg/kg 체중, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg 체중, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg 체중, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 체중, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg 체중의 용량이 투여 경로 및 빈도에 따라 적절할 수 있다.

일 구체예에서 마크로시클릭 락톤의 용량은 약 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.9 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 체중이다.

일부 구체예에서, 투여되는 마크로시클릭 락톤의 양은 약 0.1μM 내지 약 100μM, 0.1μM 내지 약 80μM, 0.1μM 내지 약 60μM, 0.1μM 내지 약 40μM, 0.1μM 내지 20μM, 약 0.1μM 내지 약 10μM, 또는 약 0.1μM 내지 약 5μM의 혈장 농도를 달성하기에 충분하다.

일부 구체예에서, 투여되는 마크로시클릭 락톤의 양은 약 1ng/ml 내지 약 500ng/ml, 1ng/ml 내지 약 400ng/ml, 1ng/ml 내지 약 300ng/ml 1ng/ml 내지 약 200ng/ml, 약 1ng/ml 내지 약 175ng/ml, 약 5ng/ml 내지 약 150ng/ml, 약 5ng/ml 내지 약 125ng/ml, 약 5 ng/ml 내지 약 100ng/ml, 약 5ng/ml 내지 약 75ng/ml, 또는 약 5ng/ml 내지 약 50ng/ml의 혈장 농도를 달성하기에 충분하다.

본 발명의 화합물은 상기 기재된 바와 같이 약제학적 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 투여될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 화합물은 다른 작용제, 예컨대, 다른 항바이러스제 및/또는 증상 완화에 적합한 작용제 예컨대 진통제 또는 거담제와 조합하여 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 약제학적 제제의 용도를 정의할 때 용어 '병용 요법' 또는 '보조 요법'은 약물 조합의 유익한 효과를 제공할 요법에서 순차적 방식으로 각 작용제의 투여를 포함하는 것으로 의도되며, 또한 이러한 활성제의 고정된 비율을 갖는 단일 제제 또는 각 작용제의 다중, 개별 제제와 같이 실질적으로 동시적인 방식으로 이들 작용제의 공동-투여를 포함하는 것으로 의도된다.

다양한 구체예에 따르면, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 제형화되거나 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 다양한 구체예에 따르면, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤이 다른 공지된 치료 또는 치료제, 및/또는 보조제 또는 예방제와의 조합 치료 요법에 포함될 수 있다.

프로테아제 억제제, 헬리카제 억제제, 진입 억제제와 같은 항바이러스제를 포함한 코로나바이러스 감염의 치료를 위해 선택될 수 있는 다수의 작용제가 상업적 용도, 임상 평가(예: 암로디핀 및 로자르탄) 및 전임상 개발에서 이용 가능하다. 다른 항바이러스제는 오셀타미비르(Tamiflu®), 자나미비르(Relenza®), 리바비린, 렘데시비르, 펜시클로비르, 파비파르비르, 나파모스타트, 니타족사니드, 카모스타트 메실레이트, 인터페론 α(예: 인터페론 α B2), 리토나비르, 로피나비르, ASC09, 아즈부딘, 발록사비르, 마르복실, 다루나비르, 코비시스타트 및 클로로퀸을 포함한다.

병용 요법에 사용하기에 적합한 다른 작용제는 회복기 혈장, 또는 모노클로날 항체 예컨대 밤라니비맙, 에테세비맙, 카시리비맙, 임데비맙(항-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 모노클로날 항체) 또는 이들의 조합을 포함하는 면역 기반 요법이다.

병용 요법에 사용할 수 있는 다른 적합한 작용제(예: 비스테로이드성 소염제, 아세트아미노펜, 코데인, 코르티코스테로이드(예: 덱사메타손), 인터페론 등)은 당업자에 의해 인식될 것이다. 적절한 작용제는 예컨대, Merck Index, An Encyclopaedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, 12th Ed., 1996 및 후속 판에 나열되어 있으며, 이의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 포함된다.

조합 요법은 활성제가 함께, 순차적으로, 또는 각각의 경우에 적절하게 이격되어 투여되는 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물을 포함하는 활성제의 조합은 상승적일 수 있다.

마크로시클릭 락톤의 병용 투여는 다른 활성제처럼 같은 단위 용량으로 존재하는 마크로시클릭 락톤에 의해 영향을 받거나, 또는 마크로시클릭 락톤 및 하나 이상의 다른 활성제(들)가 투여 요법 또는 일정에 따라 동일, 또는 유사한 시간, 또는 다른 시간에 투여되는 개별 및 분리 단위 용량으로 존재할 수 있다. 순차적인 투여는 필요에 따라 임의의 순서로 이루어질 수 있으며, 특히 누적 또는 상승 효과가 필요한 경우, 제2 또는 이후 화합물이 투여될 때 현재의 제1 또는 초기 화합물의 지속적인 생리학적 효과를 요구할 수 있다.

상기 마크로시클릭 락톤의 병용 투여는 다른 활성제처럼 같은 단위 용량으로 존재하는 마크로시클릭 락톤에 의해 영향을 받거나, 또는 화합물 및 하나 이상의 다른 활성제(들)가 투여 요법 또는 일정에 따라 동일, 또는 유사한 시간, 또는 다른 시간에 투여되는 개별 및 분리 단위 용량으로 존재할 수 있다. 순차적인 투여는 필요에 따라 임의의 순서로 이루어질 수 있으며, 특히 누적 또는 상승 효과가 필요한 경우, 제2 또는 이후 화합물이 투여될 때 현재의 제1 또는 초기 화합물의 지속적인 생리학적 효과를 요구할 수 있다.

코로나바이러스

본 명세서에서 기재된 바와 같이 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 개체에서 코로나바이러스를 억제하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 마크로시클릭 락톤을 사용하여 코로나바이러스 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있다.

방법 및 용도는 Coronaviridae (Coronavirus) 패밀리의 모든 구성원에게 적용된다.

예컨대, 코로나바이러스는 코로나바이러스 229E, 코로나바이러스 NL63, 돼지 유행성 설사 코로나바이러스(PEDV) 또는 돼지 급성 설사 증후군 코로나바이러스(SADS-CoV)와 같은 알파코로나바이러스일 수 있다.

일 구체예에서, 상기 알파코로나바이러스는 코로나바이러스 229E 또는 코로나바이러스 NL63이다.

일부 구체에에서, 상기 코로나바이러스는 뮤린 코로나바이러스와 같은 베타코로나바이러스일 수 있다. 다른 구체예에서 상기 코로나바이러스는 베타코로나바이러스 1 예컨대 코로나바이러스 HKU1, 뮤린 코로나바이러스, SARS(중증 급성 호흡기 증후군)-코로나바이러스(SARS-CoV), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2), MERS(중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스(MERS-CoV), 중동 호흡기 증후군 관련 코로나바이러스 또는 코로나바이러스 OC43이다.

일부 구체예에서, 상기 코로나바이러스는 코로나바이러스 OC43, SARS-CoV, MERS-CoV 또는 SARS-CoV-2이다. 일 구체예에서 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2이다.

일부 구체예에서, SARS-CoV-2에 대한 참조는 임의의 SARS-CoV-2 분리주, SARS-CoV-2 변종, SARS-CoV-2 관심 변종(variant of interest: VOI), 또는 SARS-CoV-2 우려 변종(variant of concern: VOC)에 대한 참조를 포함한다.

따라서, 일부 구체예에서 SARS-CoV-2에 대한 참조는 'UK 변종'(20I/501Y.V1, VOC 202012/01 또는 B.1.1.7로 알려짐), '남아프리카 변종'(20H/501Y.V2 또는 B.1.351로 알려짐) 및 '브라질 변종'(P.1로 알려짐)와 같은 공지된 변종에 대한 참조를 포함한다.

상기 'UK 변종'은 위치 501에서 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)의 N501Y 돌연변이가 특징이다. 이 변종은 또한 푸린 절단 부위 근처의 P681H와 69/70 결실을 포함하여 몇 가지 다른 돌연변이를 가지고 있어 스파이크 단백질의 구조적 변화를 일으킬 가능성이 있다.

상기 '남아프리카 변종'은 K417N, E484K, N501Y를 포함한 스파이크 단백질의 다중 돌연변이를 특징으로 하는 변종이다. 이 변종은 69/70 결실을 함유하지 않는다.

상기 '브라질 변종'은 스파이크 단백질 수용체 결합 도메인 K417T, E484K 및 N501Y에서의 3개 돌연변이가 특징이다.

다른 변종에는 스파이크 단백질에 D614G 돌연변이가 있는 변종, 및 덴마크에서 확인된 'ΔFVI-스파이크' 변종으로도 알려진 '클러스터 5' 변종이 포함되며, 이는 69-70deltaHV(스파이크 단백질의 69번째 및 70번째 위치에 히스티딘 및 발린 잔기 결실), Y453F, I692V 및 S1147L을 포함한 돌연변이를 특징으로 한다.

상기 SARS-CoV-2 게놈은 150개 이상의 분리주에서 시퀀싱되었다. 하나의 참조 서열은 GenBank NC 045512(Wang, C. et al. (2020) “The Establishment Of Reference Sequence for SARS-CoV-2 and variation analysis,” J. Med. Virol. 2020 Jun;92(6):667-674 (2020.03.13 온라인에서 발행)이다. 바이러스의 여러 분리주(중국 우한에서 분리된 MN988668 및 NC 045512, 및 MN938384.1, MN975262.1, MN985325.1, MN988713.1, MN994467.1, MN994468.1, 및 MN997409.1)의 서열 비교는 95% 이상의 동일성을 드러낸다. 따라서, 본 명세서에 기재된 방법은 SARS-CoV-2 분리주에 대해 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 SARS-CoV-2 변종에 적용할 수 있다.

다른 구체예에서 코로나바이러스는 감염성 기관지염 바이러스와 같은 감마 코로나바이러스, 또는 벌불 코로나바이러스 HKU11 또는 돼지 코로나바이러스와 같은 델타 코로나바이러스이다.

마크로시클릭 락톤

임의의 마크로시클릭 락톤 또는 마크로시클릭 락톤의 조합은 본 명세서에서 기재된 방법 및 제제에 사용하기에 적합하다. 적합한 마크로시클릭 락톤은 공지되어 있으며 상업적으로 또는 당업계에 공지된 합성 기술을 통해 쉽게 수득할 수 있다.

전형적으로, 상기 마크로시클릭 락톤은 아베르멕틴, 밀베마이신 또는 이들의 조합이다. 아베르멕틴 및 밀베마이신은 일반적인 마크로시클릭 락톤(ML) 고리를 포함한다. 주요 구조적 차이점은 아베르멕틴은 마크로시클릭 고리의 C13에 당기가 있는 반면, 밀베마이신은 C13에서 양성자화되었다는 것이다. 목시덱틴(밀베마이신)은 C23의 메톡심을 포함하여 다른 차이점이 있다.

아베르멕틴은 5환 16-원 락톤 화합물의 그룹이다. 아바멕틴은 아베르멕틴 B_1a(>90%) 및 아베르멕틴 B_1b(<10%)의 혼합물이다. A-계열 화합물은 5-위치에서 메톡시화되는 반면, B-계열은 해당 위치에 유도체화되지 않은 히드록실기를 갖는다. 1-하위집합 화합물은 C22 및 C23 사이에 올레핀 결합을 가지고 있으며; 2-하위집합 화합물은 이중 결합의 수화로 인해 위치 23에 히드록실기를 보유한다. 이들은 매우 유사한 생물학적 활성과 독성학적 특성을 갖는 것으로 생각된다. 전체 아베르멕틴은 다른 마크로시클릭 락톤 중에서 13-위치에 당 치환기 및 25-위치에 2차 부틸 또는 이소프로필의 존재로 특징되어 진다.

이버르멕틴은 아바멕틴의 화학적으로 환원된 22,23-디히드로 유도체이며, 22,23-디히드로아베르멕틴 B_1a(>90%)와 22,23-디히드로-아베르멕틴 B_1b(<10%)의 혼합물로, 26번 위치에서 단일 메틸렌기에 의해 아바멕틴의 요소와 다르다.

에프리노멕틴은 400-에피아세틸아미노-400-데옥시-아베르멕틴 B1로 불리는 변형된 말단 올안드로스 모이어티가 있는 아베르멕틴 B1에서 유래된 아미노-아베르멕틴이다. 도라멕틴은 돌연변이 생합성에 의해 제조되며 이버르멕틴보다 아바멕틴과 구조적으로 더 유사하다. 22-23 위치에서 디히드로 변형 없이 25 위치에 다른 치환기가 있다. 아베르멕틴 고리의 C25 위치에 시클로헥실기가 있다는 점에서 이버르멕틴과 다르다. 셀라멕틴은 도라멕틴의 반합성(semisynthetic) 단당류 옥심 유도체이다. 화학 구조 및 단당류로 인해 이당류인 아베르멕틴과 밀베마이신의 중간체이다.

밀베마이신 옥심은 원래 S. hygroscopicus에서 분리된 자연 발생 화합물이며 밀베마이신의 16-원 마크로시클릭 락톤 구조를 포함한다. 네마티시딘은 자연적으로 발생하며 밀베마이신에서 유래될 수 있다. 목시덱틴은 C-23에 메톡심 모이어티를 추가하여 네마티시딘에서 화학적으로 유도할 수 있다.

밀베마이신은 구조적으로 아베르멕틴과 유사하지만 글리코실화되지 않아 13번 위치에 비솔레안드로실 모이어티가 없다. 상기 밀베마이신은 위치-13에 당기가 없다는 점에서 아베르멕틴과 다를 뿐만 아니라, 이 위치에서 히드록실화되는 아베르멕틴 아글리콘과 대조적으로 이 위치에서 양성자화된다는 점에서 아베르멕틴 아글리콘과도 다르다. 그들은 또한 25-위치에 에틸 또는 메틸을 가지고 있다. 그들은 5- 및 25-위치의 치환기에 의해 밀베마이신마다 다를 수 있다. 목시덱틴은 25-위치에 치환된 올레핀사이드 사슬이 있고 23-위치에 메톡심 모이어티가 있는데, 이는 모두 이 약물에 특이적인 특성이며 다른 상업적인 밀베마이신 또는 아베르멕틴에서 볼 수 없다.

적합한 아베르멕틴은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예컨대 아베르멕틴, 이버르멕틴 및 아바멕틴의 세부사항은 “Ivermectin and Abamectin”, 1989, H. Fischer 및 H. Mrozik, William C. Campbell, Springer Verlag 발행, 또는 Albers-Schonberg et al. (1981), 'Avermectins Structure Determination', J. Am. Chem. Soc., 103, 4216-4221에서 찾을 수 있다. 도라멕틴에 대해서는, "Veterinary Parasitology", vol. 49, No. 1, 1993년 7월, 5-15을 참조하기 바란다. 밀베마이신에 대해서는, Davies H. G. et al., 1986, 'Avermectins and Milbemycins', Nat. Prod. Rep., 3, 87-121, Mrozik H. et al., 1983, Synthesis of Milbemycins from Avermectins, Tetrahedron Lett., 24, 5333-5336을 참조한다.

마크로시클릭 락톤은 천연 생성물이거나 이의 반합성 유도체이고 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대 적합한 마크로시클릭 락톤은 "The Merck Index" 12.sup.th ed., S. Budavari, Ed., Merck & Co., Inc. Whitehouse Station, N.J. (1996) 및 'International Nonproprietary Names for Pharmaceutical Substances (INN)', WHO Drug Information, vol. 17, no. 4, pp. 263-286, (2003)에서 인용된 참조를 통해 찾을 수 있다.

일부 구체예에서 아베르멕틴은 아바멕틴, 디마덱틴, 도라멕틴, 에마멕틴, 에프리노멕틴, 이버르멕틴, 라티덱틴, 레피멕틴, 셀라멕틴 또는 이들의 조합이다. 일 구체예에서 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴이다.

일부 구체예에서 상기 밀베마이신은 밀베멕틴, 밀베마이신 D, 밀베마이신 옥심, 목시덱틴 또는 네마덱틴이다. 일 구체예에서 상기 밀베마이신은 목시덱틴이다.

일 구체예에서 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴의 조합이며 상기 밀베마이신은 목시덱틴이다.

일 구체예에서 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 하나 이상의 아베르멕틴 및 하나 이상의 밀베마이신의 조합이다. 예컨대, 상기 아베르멕틴은 어느 하나 이상의 아바멕틴, 디마덱틴, 도라멕틴, 에마멕틴, 에프리노멕틴, 이버르멕틴, 라티덱틴, 레피멕틴, 및 셀라멕틴으로부터 선택되고; 상기 밀베마이신은 어느 하나 이상의 밀베멕틴, 밀베마이신 D, 밀베마이신 옥심, 목시덱틴 및 네마덱틴으로부터 선택된다.

일 구체예에서, 상기 적어도 하나의 마크로시클릭 락톤은 이버르멕틴 및 목시덱틴의 조합이다.

추가로, 마크로시클릭 락톤이 이름으로 언급되는 경우, 이는 적용 가능한 경우 화합물의 용매화뿐만 아니라 비용매화 형태를 포괄하는 것으로 의도된다. 따라서, 각각의 마크로시클릭 락톤(예: 이버르멕틴 또는 목시덱틴)은 수화 또는 용매화 형태뿐만 아니라 비수화 및 비용매화 형태를 포함한다. 본 명세서에서 용어 '용매화물'은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 용매 분자, 예컨대 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 설명하기 위해 사용된다. 용어 '수화물'은 상기 용매가 물일때 사용된다.

용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고 합리적인 이익/위험 비율과 상응하는 염을 의미한다. 약제학적으로 허용되는 염은 선행기술 S. M. Berge et al에 잘 알려져 있으며 약제학적으로 허용되는 염은 J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1-19에 상세히 기재되었다. 적합한 염에 대한 검토는 Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002)를 참조하기 바란다. 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 상기 염은 본 발명의 화합물의 최종 분리 및 정제 동안 인 시추, 또는 유리 염기 작용기를 적합한 유기산과 반응시켜 별도로 제조할 수 있다. 본 발명의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 산 부가염은 무기산 또는 유기산으로부터 제조될 수 있다. 이러한 무기산의 예는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 탄산, 황산 및 인산이다. 적절한 유기산은 유기산의 지방족, 지환족, 방향족, 헤테로시클릭 카르복실산 및 설폰산 류의 유기산으로부터 선택될 수 있으며, 그 예는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 글루쿠론산, 푸마르산, 말레산, 피루브산, 알킬 설폰산, 아릴설폰산, 아스파르트산, 글루탐산, 벤조산, 안트라닐산, 메실산, 메탄설폰산, 살리실산, p-히드록시벤조산, 페닐아세트산, 만델산, 앰본산, 파모산, 판토텐산, β-제닉, 설파닐산, 시클로헥실아미노설폰산, 스테아르산, 알제닉산, β-히드록시부틸산, 갈락타르산 및 갈락투론산이다. 본 발명의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 염기 부가염은 리튬, 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄 및 아연으로 이루어진 금속염, 및 콜린, 디에탄올아민, 모르폴린과 같은 유기 염기로 이루어진 유기염을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 염기 부가염은 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N 메틸글루카민), 프로카인, 암모늄 염, 4차 염 예컨대 테트라메틸암모늄염, 아미노산 부가염 예컨대 글리신 및 아르기닌과의 염으로부터 제조된 유기염을 포함한다. 고체인 화합물의 경우, 본 발명의 화합물, 작용제 및 염이 상이한 결정형 또는 다형체 형태로 존재할 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이며, 이들 모두는 본 발명 및 특정 마크로시클릭 락톤 범위 내에 있는 것으로 의도된다.

본 명세서에서 용어 '입체 이성질체'는 동일한 분자 구성을 갖고 공간에서 원자 그룹의 3차원 배열만 다른 임의의 2개 이상의 이성질체를 지칭한다. 입체이성질체는 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체일 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있고 따라서 하나 이상의 입체이성질체 형태로 존재할 수 있음을 인지할 것이다. 따라서 본 발명은 또한 하나 이상의 비대칭 중심에서 실질적으로 순수한 이성질체 형태, 예를 들어 약 90% ee 초과(거울상 이성질체 과잉), 예컨대 약 95% 또는 97% ee 또는 99% ee 초과, 뿐만 아니라 이들의 라세미 혼합물을 포함하는 혼합물의 화합물에 관한 것이다. 이러한 이성질체는 자연 발생적일 수 있거나 비대칭 합성, 예컨대 키랄 중간체를 사용하거나 키랄 분해에 의해 제조될 수 있다.

특정 구체예에서, 상기 마크로시클릭은 토토머일 수 있다. 본 명세서에서, 용어 '토토머'는 수소 원자의 하나 이상의 형식적 이동 및 원자가의 하나 이상의 변화(예: 단일 결합에서 이중 결합으로, 삼중 결합에서 단일 결합으로, 또는 그 반대)로 인해 둘 이상의 상호 전환 가능한 화합물을 포함하는 이성질체 유형이다. '토토머화'에는 산-염기 화학의 하위 집합으로 간주되는 프로토트로픽 또는 양성자-이동 토토머화가 포함된다. '프로토트로픽 토토머화' 또는 '양성자-이동 토토머화'는 결합 순서의 변화를 수반하는 양성자의 이동을 포함한다. 토토머의 정확한 비율은 온도, 용매 및 pH를 포함한 여러 요인에 달려있다. 토토머화가 가능한 경우(예: 용액에서), 토토머의 화학적 평형에 도달할 수 있다. 토토머화(즉, 토토머 쌍을 제공하는 반응)는 산 또는 염기에 의해 촉매될 수 있거나 외부 작용제의 작용 또는 존재 없이 발생할 수 있다.

'마크로시클릭 락톤'에 대한 일반적인 참조 또는 이름에 의한 마크로시클릭 락톤(예: 이버르멕틴 또는 목시덱틴)에 대한 참조는 명시적으로 달리 언급되지 않는 한 화합물 및 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체를 지칭한다는 것이 당업자에게 명백할 것이다.

본 기술이 보다 명확하게 이해될 수 있도록 하기 실시예 및 도면을 참조하여 바람직한 구체예를 설명한다.

실시예

실시예 1: 세포 배양, 바이러스 감염 및 약물 치료

Vero/hSLAM 세포는 37℃, 5% CO₂에서 7% FBS(Fetal Bovine Serum)(Bovogen Biologicals, Keilor East, AUS) 2mM L-글루타민, 1mM 피루브산나트륨, 1500mg/L 중탄산나트륨. 15mM HEPES 및 0.4mg/ml 제네티신을 함유하는 Earle's Minimum Essential Medium(EMEM)에서 유지되었다. 세포를 SARS-CoV-2(Australia/VIC01/2020 분리주)로 감염되기 24시간 전에 감염 배지에서 MOI 0.1(유지 배지에 따르지만 2% FBS만 포함)에서 2시간동안 12웰 조직 배양 플레이트에 접종하였다. 접종물을 함유하는 배지를 제거하고 표시된 농도의 이버르멕틴 또는 DMSO 단독을 함유하는 1mL의 새로운 배지(2% FBS)로 교체하고 표시된 대로 0-3일 동안 인큐베이션하였다. 적절한 시점에서 세포 상층액을 수집하고 6,000g에서 10분 동안 회전시켜 파편을 제거하고 상층액을 새로운 수집 튜브로 옮겼다. 세포 단층을 긁고 1mL 신선한 배지(2% FBS)에 재현탁하여 수집하였다. 독성 통제는 감염되지 않은 세포에 대한 모든 실험에서 병렬로 설정되었다.

실시예 2: SARS-CoV-2 cDNA의 생성

RNA는 QIAamp 96 Virus QIAcube HT Kit(Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 샘플 상층액 또는 세포 현탁액의 200μL 분취량에서 추출하고 60μl로 용리하였다. 역전사는 BioLine SensiFAST cDNA 키트(Bioline, London, United Kingdom), RNA 추출물 10μL, 5x TransAmp 완충액 4μl, 역전사 효소 1μl 및 뉴클레아제가 없는 물 5μl를 포함하는 총 반응 혼합물(20μl)을 사용하여 수행되었다. 반응을 25℃에서 10분, 42℃에서 15분, 85℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다.

실시예 3: TaqMan 실시간 RT-PCR 분석을 사용한 SARS-CoV-2의 검출.

TaqMan RT-PCR 분석은 cDNA 2.5μl, Primer Design PrecisonPLUS qPCR 마스터 믹스 1μM 정방향(5'-AAA TTC TAT GGT GGT TGG CAC AAC ATG TT-3') 10μl, 1μM 역방향(5'-TAG GCA TAG CTC TRT CAC AYT T-3')프라이머 및 BetaCoV RdRp(RNA-의존성 RNA 중합효소) 유전자 또는 정방향(5'-ACA GGT ACG TTA ATA GTT AAT AGC GT -3')을 표적으로 하는 0.2μM 프로브(5'-FAM-TGG GTT GGG ATT ATC-MGBNFQ-3'), 1μM 역방향(5'-ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A-3') 프라이머 및 BetaCoV E-유전자를 표적으로 하는 0.2μM 프로브(5'-FAM-ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG-286 NFQ-3')를 사용하여 수행되었다. 실시간 RT-PCR 분석은 Applied Biosystems ABI 7500 Fast 실시간 PCR 기계(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)에서 95℃에서 2분 동안, 95℃에서 2분 동안, 60℃에서 24초 동안의 사이클링 조건을 사용하여 수행되었다. SARS-CoV-2 cDNA(Ct~28)를 양성 대조군으로 사용하였다. 계산된 Ct 값은 ΔCt 방법(바이러스 RNA에서 변경된 배수 = 2^ΔCt)을 사용하여 대조군과 비교하여 처리된 샘플의 배수 감소로 변환되었고 DMSO 단독 샘플의 %로 표시되었다. IC₅₀ 값을 GraphPad 프리즘에서 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 사용하여 맞추었다.

실시예 3: 이버르멕틴 및 목시덱신의 효과

SARS-CoV-2에 대한 이버르멕틴의 항바이러스 활성을 테스트하기 위해 Vero/hSLAM 세포를 MOI 0.1에서 SARS-CoV-2 분리주 Australia/VIC01/2020으로 2시간 동안 감염시킨 후 5μM 이버르멕틴을 추가하였다. 상층액 및 세포 펠릿을 0-3일에 수확하고 SARS-CoV-2 RNA 복제에 대해 RT-PCR로 분석하였다(도 1A/B). 24시간에, 비히클 DMSO와 비교하여 이버르멕틴으로 처리된 샘플의 상층액(방출된 비리온을 나타냄)에 존재하는 바이러스 RNA가 93% 감소하였다. 유사하게 세포-관련 바이러스 RNA(미방출 및 비포장 비리온을 나타냄)의 99.8% 감소가 이버르멕틴 처리로 관찰되었다. 48시간까지 이 효과는 대조군 샘플과 비교하여 이버르멕틴 처리된 바이러스 RNA의 99.98/99.99% 감소로 증가했으며, 이는 이버르멕틴 처리가 본질적으로 모든 바이러스 물질의 효과적인 손실을 48시간까지 초래했음을 나타낸다. 이 아이디어와 일치하여, 72시간에 바이러스 RNA의 추가 감소가 관찰되지 않았다. 이버르멕틴의 독성은 샘플 웰 또는 병행 약물 단독 샘플에서 테스트된 모든 시점에서 관찰되지 않았다.

이버르멕틴의 효과를 추가로 결정하기 위해, SARS-CoV-2에 감염된 세포를 감염 2시간 후 이버르멕틴의 연속 희석액으로 처리하고 48시간에 RT-PCR을 위해 상층액 및 세포 펠렛을 수집하였다(도 1 C/D). 상기와 같이, 48시간에 5μM 이버르멕틴으로 처리한 샘플의 상층액과 세포 펠렛 모두에서 바이러스 RNA의 5000 이상의 감소가 관찰되었으며, 이는 이 샘플에서 바이러스 RNA의 99.98% 감소에 해당한다. 다시 말하지만, 테스트된 모든 농도에서 이버르멕틴에서는 독성이 관찰되지 않았다. 이버르멕틴 처리의 IC₅₀은 2.8 μM(도 1C) 및 2.4 μM(도 1D)으로 결정되었다. 분석이 실제로 SARS-CoV-2를 특이적으로 검출했다는 사실을 강조하면서, E 유전자(위)가 아닌 바이러스 RdRp 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 RT-PCR 실험을 반복했으며 (도 1 E/F) 방출된(상층액) 및 세포 관련 바이러스 모두에 대해 거의 동일한 결과가 관찰되었다. 특히 이버르멕틴 처리의 IC₅₀은 2.5 μM(도 1E) 및 2.2 μM(도 1F)인 것으로 결정되었다.

SARS-CoV-2에 대한 목시덱틴의 항바이러스 활성을 테스트하고 이버르멕틴의 활성과 비교하기 위해, Vero/hSLAM 세포를 MOI 0.1에서 2시간 동안 SARS-CoV-2 분리주 Australia/VIC01/2020에 감염시킨 다음, 5 μM 이버멕틴 또는 5 μM 목시덱틴을 추가하였다. SARS-CoV-2 E 유전자에 대한 프로브를 사용하여 실시간 PCR을 사용하여 바이러스 로드의 정량을 위해 상층액 및 세포 펠릿(n = 3, 생물학적 복제)을 48시간에 수확하였다. 결과는 평균 ± SEM(n=3)을 나타낸다. Welch의 보정으로 t-검정에 의해 p 값이 결정된다(도 2A).

감염된 Vero/hSLAM 세포는 비히클(DMSO), 이버르멕틴(닫힌 사각형) 또는 목시덱틴(열린 사각형)을 표시된 농도로 추가하기 전에 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020(MOI = 0.01)에 2시간 동안 감염되었다. 상층액은 24시간(도 2B), 48시간(도 2C) 또는 72시간(도 2D)에 SARS-CoV-2 E 유전자에 대해 상기와 같이 분석되었다. 결과는 평균 ± SEM(n=3)을 나타낸다. 도 2B에서 계산된 IC₅₀ 값은 이버르멕틴의 경우 1.4 μM이고, 목시덱틴의 경우 1.3 μM이다. 도 2C에서 계산된 IC₅₀ 값은 이버르멕틴의 경우 2.2μM이고, 목시덱틴의 경우 1.3μM이다. 도 2D에서 계산된 IC₅₀ 값은 이버르멕틴의 경우 3.1μM이고, 목시덱틴의 경우 2.4μM이다. 즉, 48시간에 이버르멕틴으로 처리된 샘플의 상층액(방출된 비리온을 나타냄)에 존재하는 바이러스 RNA가 99.5% 감소하고, 비히클 DMSO와 비교하여 목시덱틴으로 처리된 샘플의 상층액에 존재하는 바이러스 RNA가 99.9% 감소하였다. 목시덱틴의 독성은 샘플 웰 또는 병행 약물 단독 샘플에서 테스트된 모든 시점에서 관찰되지 않았다.

이러한 결과를 종합하면 이버르멕틴과 목시덱틴이 SARS-CoV-2 임상 분리주를 함유할 수 있는 강력한 항바이러스제이며, 바이러스 단백질의 핵 수송으로 매개된 IMP α/β1에 대한 영향을 통해 24 내지 48시간 내에 바이러스 복제를 제어할 수 있는 단일 용량으로 확인된다. 이버르멕틴과 목시덴틴은 인간 사용에 대한 안전성 프로파일을 확립했으며 FDA 승인을 받아 인간 및 다른 마크로시클릭 락톤에서 광범위한 여러 기생충 감염을 치료할 수 있으며 항바이러스제로서의 매력적인 가능성을 만든다.

실시예 4: 이버르멕틴 SARS-CoV-2 항바이러스 활성이 인간 폐 세포에서 증강된다

CALU-3(인간 폐) 세포는 도 3에 표시된 농도로 비히클(DMSO) 또는 이버르멕틴을 첨가하기 전 2시간 동안 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020(MOI = 0.01)으로 감염되었다. 샘플은 상층액의 실시간 PCR을 사용하여 바이러스 로드의 정량을 위해 감염 후 24시간 동안 채취되었다. 도 3에 표시된 결과는 DMSO 단독에 대한 평균 ± SD(n = 6)를 나타낸다. 0.42μM의 IC₅₀ 값을 결정하기 위해 GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 맞추었다.

동일한 조건에서 분석된 Vero/hSLAM 세포와 비교한 CALU-3 세포의 평균 IC₅₀ 값이 표 1에 나와 있으며, 이는 이버르멕틴 SARS-CoV-2 항바이러스 활성이 Vero/hSLAM 세포와 비교하여 인간 폐 세포에서 증강되었음을 나타낸다.

표 1: Vero/hSLAM 세포와 비교한 CALU-3 세포의 IC50 값.

* n = 독립적인 실험의 수

실시예 5: 다중 용량 이버르멕틴 또는 목시덱틴은 SARS-CoV-2 항바이러스 활성을 증강시킨다.

Vero/hSLAM 세포(도 4 A/C) 또는 CALU-3(도 4 B/D) 세포는 도 4에 표시된 농도에서 비히클(DMSO), 이버르멕틴(A/B) 또는 목시덱틴(C/D)의 첨가 전 2시간 동안 SARS-CoV-2 임상 분리주 Australia/VIC01/2020(MOI = 0.01)으로 감염되었다. 상층액을 8, 24, 32 및 48시간에 수확하고 동일한 농도의 약물 또는 DMSO를 포함하는 새로운 배지로 교체하였다. 실시간 PCR을 사용하여 바이러스 로드에 대해 샘플을 정량화하였다. 결과는 동일한 조건에서 DMSO 단독에 대한 평균 ± SD(n = 6)를 나타낸다. GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 맞추었다. 도 4에 표시된 데이터는 일련의 유사한 두 가지 실험에서 얻은 하나의 전형적인 그래프다.

실시예 6: 이버르멕틴 및 목시덱틴은 SARS-CoV-2에 대한 예방적 항바이러스 활성을 갖는다.

Vero/hSLAM 세포는 2시간 동안 DMSO 또는 약물의 존재 하 SARS-CoV-2(MOI = 0.01)로 감염되기 전에 표시된 농도에서 DMSO, 이버멕틴 또는 목시덱틴으로 2시간 동안 처리되었다. 샘플을 흡착 후 세척하고 상층액의 실시간 PCR을 사용하여 바이러스 로드를 정량하기 전에 DMSO 또는 약물을 함유하는 새로운 배지에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 도 5에 표시된 결과는 DMSO 단독에 대한 평균 ± SD(n = 6)를 나타낸다. GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 맞추어 이버르멕틴의 경우 1.6μM, 목시덱틴의 경우 1.8μM의 IC₅₀ 값을 결정하였다. 동일한 조건에서 분석된 Vero/hSLAM 세포와 비교한 CALU-3 세포의 평균 IC₅₀ 값이 표시된다(표, 오른쪽, n = 독립 실험).

표 2. 목시덱틴과 비교하여 이버르멕틴으로 예방적으로 처리된 Vero/hSLAM 세포에 대한 IC₅₀ 값.

* n = 독립적인 실험의 수

실시예 7: 이버르멕틴 및 목시덱틴은 계절성 코로나바이러스 229E의 효과적인 항바이러스 억제제이다.

Huh-7 세포는 표시된 농도에서 비히클(DMSO), 이버르멕틴(도 6A) 또는 목시덱틴 (도 6B)의 첨가 전 2시간 동안 229E(MOI = 0.01)로 감염되었다. 샘플은 상층액의 실시간 PCR을 사용하여 바이러스 로드의 정량을 위해 감염 후 48시간 동안 채취되었다. 결과는 DMSO 단독에 대한 평균 ± SD(n = 6)를 나타낸다. GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 맞추어 이버르멕틴의 경우 0.18μM, 목시덱틴의 경우 0.24μM의 IC₅₀ 값을 결정하였다.

예방 가능성 평가를 위해 Huh-7 세포를 2시간 동안 229E(MOI = 0.01)로 감염시키기 전 2시간 동안 표시된 농도에서 DMSO 또는 이버르멕틴의 존재 하에 DMSO 또는 이버멕틴으로 사전 처리하였다(도 6C). 샘플(n = 5)을 흡착 후 세척하고 DMSO 또는 이버멕틴을 함유하는 새로운 배지에서 48시간 동안 배양한 후 상기와 같이 바이러스 로드를 정량화하였다. GraphPad 프리즘을 사용하여 3개의 매개변수 용량 반응 곡선을 맞추어 이버멕틴에 대한 2.06μM의 IC₅₀ 값을 결정하였다.

본 기술 분야의 당업자라면 광범위하게 설명된 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어나지 않고 특정 구체예에 도시된 바와 같이 본 발명에 다양한 변형 및/또는 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 구체예는 모든 면에서 예시적이며 제한적이지 않은 것으로 간주되어야 한다.

Claims (30)

1. 개체에서 코로나바이러스의 억제제로서 사용하기 위한, 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체를 포함하는 제제.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 하나 이상의 마크로시클릭은 아베르멕틴, 밀베마이신, 또는 둘 다인 것인 제제.
3. 청구항 2에 있어서, 상기 아베르멕틴은 아바멕틴, 디마덱틴, 도라멕틴, 에마멕틴, 에프리노멕틴, 이버르멕틴, 라티덱틴, 레피멕틴, 및 셀라멕틴으로부터 선택되는 것인 제제.
4. 청구항 3에 있어서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴인 제제.
5. 청구항 2에 있어서, 상기 밀베마이신은 밀베멕틴, 밀베마이신 D, 밀베마이신 옥심, 목시덱틴, 및 네마덱틴으로부터 선택되는 것인 제제.
6. 청구항 5에 있어서, 상기 밀베마이신은 목시덱틴인 것인 제제.
7. 청구항 2에 있어서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴이고 밀베마이신은 목시덱틴인 것인 제제.
8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 인간인 것인 제제.
9. 청구항 8에 있어서, 상기 코로나바이러스는 코로나바이러스 229E, 코로나바이러스 NL63, 코로나바이러스 OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, 또는 이들의 변종인 것인 제제.
10. 청구항 9에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2 또는 이의 변종인 것인 제제.
11. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 개, 고양이, 말, 소, 양, 낙타, 닭 또는 돼지인 것인 제제.
12. 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 코로나바이러스를 억제하거나 코로나바이러스 감염이 있는 개체를 치료하는 방법.
13. 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 코로나바이러스 감염의 위험을 예방하거나 감소시키는 방법.
14. 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 치료학적 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 항체 의존 증강(ADE) 코로나바이러스 감염을 예방하는 방법.
15. 청구항 12 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에서 검출가능한 코로나바이러스의 수준이 50% 이상 감소되는 것인 방법.
16. 청구항 15에 있어서, 상기 개체에서 검출가능한 코로나바이러스의 수준이 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 또는 99.9% 이상 감소되는 것인 방법.
17. 청구항 15 또는 16에 있어서, 상기 검출가능한 코로나바이러스의 수준이 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 투여 후 1, 2, 3일 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 감소되는 것인 방법.
18. 청구항 12 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 아베르멕틴 또는 밀베마이신인 것인 방법.
19. 청구항 18에 있어서, 상기 아베르멕틴은 아바멕틴, 디마덱틴, 도라멕틴, 에마멕틴, 에프리노멕틴, 이버르멕틴, 라티덱틴, 레피멕틴, 또는 셀라멕틴으로부터 선택되는 것인 방법.
20. 청구항 19에 있어서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴인 것인 방법.
21. 청구항 18에 있어서, 상기 밀베마이신은 밀베마이신 D, 밀베마이신 옥심, 목시덱틴, 및 네마덱틴으로부터 선택되는 것인 방법.
22. 청구항 23에 있어서, 상기 밀베마이신은 목시덱틴인 것인 방법.
23. 청구항 20에 있어서, 상기 아베르멕틴은 이버르멕틴이고 상기 밀베마이신은 목시덱틴인 것인 방법.
24. 청구항 12 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 인간인 것인 방법.
25. 청구항 24에 있어서, 상기 코로나바이러스는 코로나바이러스 229E, 코로나바이러스 NL63, 코로나바이러스 OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, 또는 이들의 변종인 것인 방법.
26. 청구항 25에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2 또는 SARS-CoV-2 변종인 것인 방법.
27. 청구항 12 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 마크로시클릭 락톤은 개체의 약 0.1 mg/kg 내지 약 1.0 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인 방법.
28. 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도.
29. 코로나바이러스 감염에 걸릴 위험을 감소시키기 위한 약제의 제조를 위한 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도.
30. 개체에서 항체 의존 증강(ADE) 코로나바이러스 감염을 예방하기 위한 약제의 제조에서 하나 이상의 마크로시클릭 락톤 또는 이의 염, 수화물, 용매화물, 토토머 또는 입체이성질체의 용도.

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