KR20230030649A - 인간 il23 수용체에 결합하는 폴리펩타이드 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 IL-23R (WL-23R)에 결합하는 폴리펩타이드, 조건부로 최대 활성인 SiIL~23R 결합성 단백질, 이들의 다량체 및 이들 폴리펩타이드 및 결합 단백질을 치료학적 용도로 이용하는 방법을 제공한다.

Description

인간 IL23 수용체에 결합하는 폴리펩타이드
교차-참조
본 출원은 2020년 6월 29일자 미국 가출원번호 63/045381에 대해 우선권을 주장하며, 그 전체가 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
서열목록에 관한 진술:
서열목록의 컴퓨터 판독가능한 형태는 전자 제출에 의해 본 출원과 함께 제출되며, 그 전체가 원용에 의해 본 출원에 포함된다. 서열목록은 2021년 6월 23일자에 생성된 155kb 크기의 파일명 "20-814-WO-SeqList_ST25.txt"에 수록된다.
IL-23 사이토카인은 적응 면역 및 선천 면역 둘다에서 중요한 역할을 담당한다. IL-23은 수종의 림프구 아종, 특히 그 중에서도 T-헬퍼 1형7 (Th17)뿐 아니라 선천성 림프 세포 (ILC) 및 γT 세포에서 염증성 사이토카인의 발현을 유도한다. IL-23-매개 신호전달을 파괴하는 것이 크론 질환 및 궤양성 대장염을 포함한 염증성 장 질환 (IBD)을 치료하는 유전자 측면에서 그리고 임상적으로 검증된 치료학적 전략이다. 항체 치료제는 몇가지 한계가 있다. 항체는 제조 단가가 높고, 일반적으로 안정성이 보통 내지 불량해, 제조, 보관, 수송 및 투여에 콜드 체인이 필수적이다. 항체 치료제는 환자에게 불편하고 스트레스가 될 수 있는 주입 또는 주사로 투여하여야 한다. 환자는 자가면역 질환의 치료에 일반적인 요법과 같은 면역억제 항체 요법에 전신 노출되면, 결핵 재활성화 및 기타 중증 감염 위험이 증가한다. 따라서, 환자는, 안전 조치로서, 잠복 결핵 또는 B형 간염에 양성 반응을 나타낸다면 항-TNF 또는 항-IL-23 요법을 받을 자격을 상실하므로, 인구의 비교적 높은 비율이 HBV 또는 잠복 TB에 양성인 개발도상국에서는 이러한 요법에 접근하기 제한적이다. 전형적으로 순환계에서 반감기가 긴 항체 요법에의 전신 노출은 또한 약물을 중화하여 효능 저하로 이어질 수 있는 항-약물 항체 (ADA)의 생성을 경시적으로 촉진한다. 항-TNF 항체의 간헐적 투여는 ADA 발병 가능성을 크게 높이며; 만일 환자가 보험 보장 소멸 등으로 인해 투여받지 못한다면, 약효 상실될 위험이 높아진다.
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제1 측면에서, 본 발명은 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 인간 IL-23R (hIL-23R)에 결합하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 X1, X2, X3 및 X4는 선택적이고, X5는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 구현예들에서, X5는 서열번호 3-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하거나; X3는 존재하며, 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X4는 생략되거나 또는 아미노산 링커를 포함하거나; X4는 존재하며, 아미노산 링커를 포함하거나; X3는 존재하며, 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함하거나; X5는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하거나; X3는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하거나; X4는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 36-38의 아미노산 서열을 포함하거나; X1은 존재하며, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하거나; X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나; X2는 존재하고, X2는 아미노산 링커를 포함하거나; 및/또는 X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예들에서, X1, X2, X3, X4 및 X5는 각각 존재한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69 및 74로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
제2 측면에서, 본 발명은 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 X2, X3, X4 및 X5는 선택적이고, X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하며, X1은 서열번호 101 또는 102의 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 구현예들에서, X1은 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하거나; X3는 존재하며, X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X2는 생략되거나 또는 아미노산 링커를 포함하거나; X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함하거나; X1은 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나; X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하거나; X2는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-18의 아미노산 서열을 포함하거나; X5는 존재하며, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하거나; X5는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함하거나; X4는 존재하며, X4는 아미노산 링커를 포함하거나; 및/또는 X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, X1, X2, X3, X4 및 X5는 각각 존재한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 160-163으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
제3 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 특정 폴리펩타이드의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69, 74 및 160-163으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
제4 측면에서, 본 발명은 서열번호 84-87 또는 181-228로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드 내 시스테인 잔기 2개 간의 이황화 결합을 포함한다.
제5 측면에서, 본 발명은 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질 (conditionally maximally active hIL-23R binding protein)을 제공하며, 여기서 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 융합 단백질로 존재하지 않으며,
(a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 본 발명의 제1 측면의 임의 구현예에 따라 정의되는 도메인 X3 및 X5를 포함하고;
(b) X3 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X5 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하며;
제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분이 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질은 아니고, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드는 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성한다.
제6 측면에서, 본 발명은 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질을 제공하며, 여기서 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 융합 단백질로 존재하지 않으며,
(a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 본 발명의 제2 측면의 임의 구현예에서 정의되는 바와 같은 도메인 X1 및 X3를 포함하고;
(b) X1 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X3 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하며;
제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질인 것은 아니고, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드가 비-공유적으로 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성한다.
제7 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 제1 측면의 임의 구현예에서 본원에 정의된 바와 같이 정의되는 X3를 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 폴리펩타이드는 본 발명의 제1 측면의 임의 구현예에서 정의되는 바와 같이 정의되는 X5 도메인은 포함하지 않는다.
제8 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제2 측면의 임의 구현예에서 본원에 정의된 바와 같이 정의되는 X5 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 폴리펩타이드는 본 발명의 제2 측면의 임의 구현예에서 정의되는 바와 같이 정의되는 X1 도메인은 포함하지 않는다.
다양한 기타 측면들에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 구성성분을 2 카피 이상으로 포함하는, 다량체; 본 발명의 임의 구현예의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 구성성분을 암호화하는 핵산; 본 발명의 핵산이 적절한 조절 인자와 작동가능하게 연결된 발현 벡터; 본 발명의 임의 구현예에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 다량체, 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 세포; (a) 본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터 또는 세포와, (b) 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물; 및 본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터, 세포 또는 약학적 조성물을 장애를 치료하는데 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환 (IBD) (비-제한적으로, 크론 질환 및 궤양성 대장염 등), 건선, 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 골관절염, 축성 및 말초 척추관절염, 강직성 척추염, 부착부위염 및 건염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
도 1(A-C). 컴퓨터를 이용한 설계 전략 (computational design strategy). 출발점으로서 IL-23p19:IL-23R 복합체 (A)의 결정 구조를 이용하여, 핫스팟으로서 p19 잔기 W156과 추가적인 드 노보 제작한 핫스팟 (B)을 설계에 병합하였다. IL-23R 계면에서 W156과 하나 이상의 부가적인 드 노보 핫 스팟이 통합되도록 수천개의 스캐폴드 단백질을 도킹하였다 (C). IL-23R의 8 Å 범위내 스캐폴드 잔기들은 IL-23R과의 고-친화성 상호작용을 촉진하도록 설계하였다.
도 2(A-E). 컴퓨터를 이용한 최상의 설계, 친화성-성숙화된 조합 변이체 (combinatorial variant) 및 이황화물-안정화된 변이체들에 대한 특정화. (A) 컴퓨터를 이용한 설계 23R_A에 대한 결합 적정 (binding titration). (B) 컴퓨터를 이용한 최상의 설계 2종에 대한 온도 및 화학적 변성제에 따른 용융. (C) (23R_B에 기반한) 조합 변이체 B08에 대한 결합 적정. (D) 친화성이 가장 우수한 조합 변이체들에 대한 온도 및 화학적 변성제에 따른 용융. (E) 설계한 단백질과 천연 리간드 (IL-23 사이토카인) 및 경쟁 분자 (PTG 화합물 C)에 대한 평형 결합 상수 (KD), 결합-속도 (on-rate, kon) 및 해리-속도 (off-rate, koff).
도 3. 대표적인 친화성-성숙화된 조합 변이체로서 B08 및 이황화물-안정화된 대표적인 변이체로서 B04dslf02에 대한 안정성 분석. (A) 설계한 단백질은 모의 위액 또는 장액에서 인큐베이션하고, 5분, 15분, 30분, 60분, 4시간 및 24시간 경과 시점에 SDS PAGE에 의해 분해 (degradation)를 평가하였다. (B) 온도 및 화학적 변성제 (GuHCl)에 대한 내성을 원이색법 (circular dichroism)에 의해 평가하여, 조건들에서 나선 시그니처 (222 nm에서의 신호)를 측정하고 기준선 (25℃ 및 0 M GuHCl)에 대해 정규화하여 도시한다.
도 4(A-B). IBD 요법으로서 TNFa를 표적으로 하는 임상-단계 중인 경구, 장-제한성 나노바디로서 V565-38F와 비교한, 설계한 단백질들의 단백질 분해 안정성. (A) V565-38F는 1x SIF에서 최소한으로 분해되는 것으로 보인다. (B) 트립신 및 키모트립신 농도를 3배 증가 (3x SIF)하면, V565-38F는 24시간 SIF 소화 후 현저하게 분해된다. 발표된 데이터와 일관적으로, V565-38F는 SGF에서 효과적으로 분해된다. 인간/랫 IL-23R 결합제 rA11dslf02-M1P-R8Q-K35W는 SIF에서 마찬가지로 안정적이며, V565-38F에 비해 SGF에서 훨씬 더 안정적이다. 마우스 IL-23R 결합제 mB09dslf01-T48I는 B565-38F에 비해 SIF 및 SGF에서 보다 안정적이다.
도 5(A-B). B04dslf02IB의 아미노 말단 또는 카르복시 말단에 친화성 태그 부가는 단백질 분해 안정성에 영향을 미치지만 효력에는 영향을 미치지 않는다. (A) N-말단 6-히스티딘 태그를 가진 B04dslf02IB (6H-B04dsfl02) 또는 C-말단 6-히스티딘 태그를 가진 B04dslf02IB (B04dslf02-6H)는, SGF 또는 SIF에서 최대 24시간 인큐베이션하고, SDS PAGE에 의해 분해를 평가한 것이다. (B) IL-23-매개 세포 신호전달의 저해를 IL-23 리포터 분석 (Promega)으로 평가한 것이다.
도 6. 조직 침투성이 더 우수한 소형 IL-23R 저해제를 제작하기 위한 설계 전략.
도 7. 설계한 IL-23R 저해제는 IL-23-매개 세포 신호전달을 시험관내에서 차단한다. IL-23R의 하류에서 루시퍼라제를 발현하도록 조작된 세포 (Promega)를 각 저해제 타이트레이션과 함께 30분간 예비 인큐베이션한 다음 8 ng/mL 인간 IL-23 사이토카인으로 6시간 동안 자극한다. 루시퍼라제 기질을 첨가하여 발광을 판독하고, 저해제 비-첨가 웰 대비 신호전달의 저해 %를 계산한다. 선형 회귀를 이용해 용량 반응을 피팅함으로써 IC50을 계산하고; 이들 값은 경쟁 분자인 PTG 화합물 C를 기준으로 효력의 배수 증가와 함께 나타낸다.
도 8(A-B). 23R_A (A) 및 23R_B (B)에 대한 심층 돌연변이 스캐닝 데이터를 보여주는 서열 적합도 지형도. 각 디자인에 기반한 SSM 라이브러리는 hIL-23R에 대한 고-친화성 결합으로 1회 분류한다. 분류한 풀에서 나이브 풀 (naive pool) 대비 각 돌연변이의 농화율 (enrichment ratio)을 계산하여 히트맵으로 작성한 것이다. 나타낸 값은 log2(농화율)이다.
도 9(A-F). A06dslf03 (A 및 B), B04dslf02 (C 및 D) 및 B11dslf01 (E 및 F)에 대한 심층 돌연변이 스캐닝 데이터를 보여주는 서열 적합도 지형도. 각 설계에 기반한 SSM 라이브러리는 hIL-23R에 대한 고-친화성 결합으로 1회 분류하거나 (좌측 컬럼, 도 9A, C 및 E), 또는 세포를 SIF와 예비 인큐베이션한 다음 hIL-23R에 대한 중간 친화성으로 분류한다 (우측 컬럼, 도 9B, D 및 F). 분류한 풀에서 나이브 풀 대비 각 돌연변이의 농화율을 계산하여 히트맵으로 작성한 것이다. 나타낸 값은 log2(농화율)이다.
도 10(A-H). rA11dslf02 vs. hIL-23R (A 및 B), rA11dslf02 vs. rIL-23R (C 및 D), mA03dslf03 vs. mIL-23R (E 및 F), 및 mB09dslf01 vs. mIL-23R (G 및 H)에 대한 심층 돌연변이 스캐닝 데이터를 보여주는 서열 적합도 지형도. 각 설계에 기반한 SSM 라이브러리는 표시한 랫 또는 마우스 hIL-23R에 대한 고-친화성 결합으로 1회 분류하거나 (좌측 컬럼, 도 10A, C, E 및 G), 또는 세포를 SIF와 예비 인큐베이션한 다음 랫 또는 마우스 hIL-23R에 대한 중간 친화성으로 분류한다 (우측 컬럼, 도 10B, D, F 및 H). 분류한 풀에서 나이브 풀 대비 각 돌연변이의 농화율을 계산하여 히트맵으로 작성한 것이다. 나타낸 값은 log2(농화율)이다.
도 11(A-D). 23R_mini_14 (A 및 B) 및 23R_mini_17 (C 및 D)에 대한 심층 돌연변이 스캐닝 데이터를 보여주는 서열 적합도 지형도. 각 설계에 기반한 SSM 라이브러리는 표시한 hIL-23R에 대한 고-친화성 결합으로 1회 분류하거나 (좌측 컬럼, 도 11A 및 C), 또는 세포를 SIF와 예비 인큐베이션한 다음 hIL-23R에 대한 고-친화성으로 분류한다 (우측 컬럼, 도 11B 및 D). 분류한 풀에서 모 서열 대비 각 돌연변이의 농화율을 계산하여 히트맵으로 작성한 것이다. 나타낸 값은 log2(농화율)이다.
인용된 모든 참조문헌들은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 병합된다. 본 출원에서 달리 언급되지 않은 한, 이용된 기법들은 다음과 같이 잘 공지된 몇몇 참조문헌들에서 찾아볼 수 있다: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, edited by D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA), "Guide to Protein Purification" in Methods in Enzymology (M.P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2nd Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY), Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109-128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.), 및 the Ambion 1998 Catalog (Ambion, Austin, TX).
본 발명에 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥상 달리 명시되지 않은 한 복수의 언급도 포함한다.
본 발명에 사용된 바와 같이, 아미노산 잔기는 다음과 같이 약어로 표시된다: 알라닌 (Ala; A), 아스파라긴 (Asn; N), 아스파르트산 (Asp; D), 아르기닌 (Arg; R), 시스테인 (Cys; C), 글루탐산 (Glu; E), 글루타민 (Gln; Q), 글리신 (Gly; G), 히스티딘 (His; H), 이소루신 (Ile; I), 루신 (Leu; L), 라이신 (Lys; K), 메티오닌 (Met; M), 페닐알라닌 (Phe; F), 프롤린 (Pro; P), 세린 (Ser; S), 트레오닌 (Thr; T), 트립토판 (Trp; W), 티로신 (Tyr; Y) 및 발린 (Val; V).
본원에 개시된 폴리펩타이드에 대한 모든 구현예들에서, 임의의 N-말단 메티오닌 잔기는 선택적이다 (즉, N-말단 메티오닌 잔기가 존재하거나 또는 생략될 수 있음).
본 발명의 임의 측면에 대한 모든 구현예들은 문맥상 달리 명시되지 않은 한 조합하여 이용될 수 있다.
문맥상 명확하게 달리 요구되지 않은 한, 명세서 및 청구항 전체에서 '포함한다', '포함하는' 등의 용어들은 배타적이거나 또는 전부 망라한다는 의미와는 반대되는 포괄적인 의미로, 즉, "포함하지만, 이로 제한되지 않는" 의미로 해석되어야 한다. 단수 또는 복수를 사용하는 용어들 역시 각각 복수 및 단수를 포함한다. 아울러, 용어 "여기에서", "전술한" 및 "후술한" 및 이와 유사한 의미를 가진 표현들은 본 출원에서 사용되는 경우 본 출원의 어떤 특정 부분이 아닌 본 출원의 전체를 나타내는 것이다.
본 발명은 염증성 장 질환 (IBD)(비-제한적으로, 크론 질환 및 궤양성 대장염 등), 건선, 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 골관절염, 축성 및 말초 척추관절염, 강직성 척추염, 부착부위염 및 건염의 치료를 포함하지만 이로 제한되지 않는 임의의 적절한 목적으로 이용될 수 있는, 인간 IL-23 수용체 (hIL-23R)에 결합하는 폴리펩타이드를 제공한다.
제1 측면에서, 본 발명은 X1, X2, X3 및 X4가 선택적이고; X5가 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고; X5가 서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하는, 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다 (표 1 참조). 잔기 40-47은 아미노산 12 내지 20개로 된 폴리펩타이드 내에 존재한다. X5 도메인에서 추가적인 잔기는 임의의 적합한 아미노산일 수 있다.
표 1. 23RA genus All
서열 위치 (1) 허용가능한 잔기: hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 비-전처리; 23R_A, A06dslf03, rA11dslf02 vs. 인간 및 랫, 및 mA03dslf03 vs. 마우스)
서열번호 1 		(2) 허용가능한 잔기: 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리; A06dslf03 , rA11dslf02 vs. 인간 및 랫, 및 mA03dslf03 vs. 마우스)
서열번호 2
1 A,C,D,E,F,G,H,I,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,S,T,V
2 A,D,E,G,H,I,P,T C,E
3 A,C,D,E,G,I,L,M,N,P,Q,S,T,V,Y A,C,D,E,G,K,N,P,S,V,Y
4 E C,E
5 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,G,I,K,L,M,N,P,Q
6 C,F,H,I,K,L,M,T,V,W,Y C,F,I,L,M,V,W,Y
7 A,C,I,L,T,V L,V
8 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
9 A,D,E,F,G,H,I,K,L,M,S,W,Y C,D,E,F,I,L,M,V
10 A,C,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W,Y L,M,Q
11 A,C,E,F,H,L,S,T,V,Y C,I,K,V
12 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,S,T C,D,H,K
13 C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W A,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,Y
14 A,F,H,K,L,M,Q,W,Y V,Y
15 A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,M,N,Q,S,T,V,W,Y
16 A,D,E,F,G,K,M,Q,Y A,C,D,E,G,H,L,M,N,Q,S
17 A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y C,G,H,K,Q,R
18 A,C,F,G,I,K,L,M,N,P,Q,R,T,V,W,Y A,C,F,K,N,R,S,T,V
19 A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V C,F,I,L,M,T,V
20 A,D,E,I,K,L,N,P,Q,R,S,T,V,Y A,C,D,L,M,N,Q,S,T
21 H,Q,V H,I,K,Q,V,Y
22 A,E,I,K,M,N,P,Q,R,S,T,V C,E,F,H,I,K,L,P,Q,S,T,V
23 A,D,E,G,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,Y C,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R
24 A,C,G,R A,D,V
25 I,L,M,V M,V
26 A,E,G,H,I,K,M,S,V E,F,G,H,L,M,R,S,V,Y
27 A,C,D,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W,Y C,D,E,H,M,N,R,T
28 A,C,I,L,N,V C,I,V
29 A,Q,R,W,Y G,H,Q,R,W
30 H,I,K,L,M,N,P,V C,D,E,F,I,K,L,M,N,Q,T,V,W
31 C,F,H,I,L,M,V,W,Y C,F,I,L,M,V,W,Y
32 A,P A,D,H,S
33 F,H,K,L,M,N,R,V,W A,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,T,V,Y
34 A,G,H,K,P,Q,R,S,T,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W,Y
35 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W,Y
36 D,G,H,K,N,Q C,G,H,N,P,Q
37 A,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V,W,Y C,E,G,I,L,Q,T,V,W
38 E,P,Q E
39 A,G,I,L,M,T,V A,G,I,M,T,V
40 W W
41 F,I,K,M,P,Q,R,W,Y I,K,L,M,Q,W
42 F,L,Y L,M
43 F,G,I,L,M,T,V I,V
44 F,W,Y Q,W
45 A,C,D,E,F,G,H,I,L,M,Q,S,T,V,W,Y C,E,F,H,L,M,Q,V,W,Y
46 F,Y F
47 M M
48 E,G,N,Q,S,T A,F,I,K,L,M,Q,V,Y
49 C,D,E,F,H,I,L,N,R,T,Y C
50 I,K,N,R,V T,V
51 D,E,K,N,P,R A,D,K,N,Q,T
52 A,D,E,G,H,K,L,N,P,Q,R,S,T,Y A,G,N,R,S
53 A,D,E,G,H,K,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y C,D,I,M,Q,Y
54 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W A,E,I,K,N,P,Q,V
이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는, 본원에 기술된 바와 같이, hIL-23R에 대한 본 구현예에 따른 폴리펩타이드의 1차 결합 계면을 포함한다 (도 8-10 참조).
표 1-7은 각각 서열번호에 의해 본 발명의 여러가지 폴리펩타이드를 칸 2개를 포함한다. 각 표에서, 좌측 칸은 모의 장액 (SIF)으로 전처리하지 않은, hIL-23R 고-친화성 결합에 대하여, 본 발명의 폴리펩타이드에서 돌연변이 분석에 기반하여 허용가능한 잔기를 제시하고, 우측 칸은 SIF로 전처리가 수반된, 안정성 및 hIL-23R 고-친화성 결합에 대하여, 본 발명의 폴리펩타이드에서 돌연변이 분석에 기반하여 허용가능한 잔기를 제시한다. 허용가능한 잔기는 대규모 돌연변이 분석에 기반하여 결정되며, 도 8-10을 참조한다. 일 구현예에서, X5는 서열번호 3-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열의 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함한다 (표 2-3 참조).
표 2. 23RA genus 인간 단독
서열 위치 (1) 허용가능한 잔기 : hIL -23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리 하지 않음; 23R_A, A06dslf03, rA11dslf02 vs. 인간 단독)
서열번호 3 		(2) 허용가능한 잔기: 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리; A06dslf03, rA11dslf02 vs. 인간 단독)
서열번호 4
1 A,C,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,S,T,V A,C,D,E,G,H,I,K,M,N,P,Q,S,T,V
2 A,C,D,E,G,H,I,P,T C,E
3 A,C,D,E,G,I,L,N,P,S,V,Y A,C,D,E,G,P,V
4 C,E C,E
5 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,G,I,K,M,N,P,Q
6 C,F,I,L,M,V,W,Y C,F,I,L,M,V,W,Y
7 A,C,I,L,T,V L,V
8 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
9 C,E,G,H,I,L,M,S,Y C,E,L,M
10 A,C,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W,Y L,M,Q
11 C,E,F,H,L,V,Y C
12 A,C,F,G,H,K,L,Q,R,S,T C,K
13 A,C,D,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W A,H,I,K,M,N,Q,R,T,V
14 K,Y Y
15 A,C,E,H,N,S,T,V,W,Y A,C,E,H,N,S,T,V,W,Y
16 A,C,D,E,G,M,N,Q,S A,C,D,E,G,M,N,Q,S
17 A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y G,H,K
18 ,C,F,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V,W A,C,K,N,R,S,T
19 A,C,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V C,F,I,L,T,V
20 A,C,D,E,I,K,L,M,Q,R,S,T,V A,C,L,M,Q,S,T
21 H,I,Q,V H,I,Q
22 A,C,E,I,K,N,P,Q,S,T C,E,I,K,P,Q,S,T
23 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,Y C,D,E,F,G,H,K,N,Q,R
24 A,C,G,R A
25 V V
26 E,F,G,L,M,S,V,Y E,F,G,L,M,S,V,Y
27 A,C,D,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W,Y C,D,E,H,M,N,R
28 A,C,I,N,V C,I
29 Q,R,W,Y Q,R,W
30 C,E,H,I,K,L,M,Q,V C,E,K,L,M,Q,V
31 C,F,I,L,M,V,W,Y C,F,I,L,M,V,W,Y
32 A,S A,S
33 F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W,Y F,H,I,L,N,Q,R,T,Y
34 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,T,V,W,Y
35 A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W,Y
36 G,H G,H
37 A,C,E,F,H,L,T,Y C,L
38 E,Q E
39 A,G A
40 W W
41 F,I,K,L,M,Q,R,W,Y I,K,L,M,Q,W
42 L,M L,M
43 I,T,V I,V
44 W W
45 A,C,E,F,G,H,I,L,M,Q,S,T,V,W,Y C,E,F,H,L,M,Q,V,W,Y
46 F,Y F
47 M M
48 E,F,G,I,K,L,M,N,Q,S,T,Y F,I,K,L,M,Q,Y
49 C,D,H,L,R C
50 I,K,N,R,V V
51 A,K,N,Q,R,T A,K,N,Q,T
52 A,D,E,G,H,K,L,N,P,Q,R,S,T A,G,N,R,S
53 A,C,D,E,G,H,K,M,N,P,Q,R,S,V,Y C,D
54 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W I,N,P,V
표 3. rA11dslf02
서열 위치 허용가능한 잔기: hIL-23R에의 고-친화성 결합 (SIF로 전처리 하지 않음)
서열번호 5 		허용가능한 잔기 : 안정성 및 hIL -23R에의 고-친화성 결합 (SIF로 전처리)
서열번호 6
1 D,E,F,H,I,M,N,T,Y C,D,E,G,H,I,K,M,N,P,Q,S,T,V
2 D,E C,E
3 P A,E,P,V
4 E C,E
5 K,Y A,C,D,I,K,M,N,Q
6 Y F,Y
7 L L
8 E,F,K,L,N,R A,C,D,E,G,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W
9 A,D,E,F,I,K C,E,L,M
10 L L,M,Q
11 A,C,S,T,V,Y C
12 D,E,I,K,R C,K
13 E,H,K,N,T A,H,I,K,M,N,Q,R,T,V
14 F,K,M,W,Y Y
15 A,E,F,G,H,L,N,Q,Y A,C,E,H,S,T,W,Y
16 E,F,G,K,M,Y A,C,D,E,G,M,N,Q,S
17 A,G,N G,H,K
18 G,K,L,Q,R,T A,C,K,N,R,S,T
19 L,N C,F,I,L,T,V
20 A,E,Q,S,Y A,C,L,M,Q,S,T
21 H,Q H,I,Q
22 K,P,Q,R C,E,I,K,P,Q,S,T
23 E,H C,D,E,F,G,H,K,N,Q,R
24 A A
25 V V
26 E E,F,G,L,M,S,V,Y
27 E,I,N C,D,E,H,M,N,R
28 I I
29 Q,R Q,R
30 K C,E,K,L,M,Q,V
31 Y Y
32 A A,S
33 K,R F,H,I,L,N,Q,R,T,Y
34 K,P,S,T A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,Q,T,V,W,Y
35 A,C,D,G,H,K,M,N,Q,R,Y A,E,K,M,N,Q,T,W
36 G,H,N G,H
37 I,L C,L
38 E E
39 A A
40 W W
41 K K,M,Q
42 L L,M
43 V I,V
44 W W
45 F,V,W,Y C,F,V,Y
46 F F
47 M M
48 E,Q F,I,K,L,M,Q,Y
49 C,D,F,H,I,L,N,T,Y C
50 V V
51 E,K A,K,N,Q,T
52 N,P,R A,N,R,S
53 D C,D
54 I I,N,P,V
다른 구현예에서, X3는 존재하며, X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X4는 생략되거나 또는 아미노산 링커를 포함한다. 폴리펩타이드 기술에 대한 모든 측면 및 구현예들에서, X2 및 X4의 아미노산 링커는 존재할 수 있거나 또는 생략될 수도 있다. 존재하는 경우, 아미노산 링커는 의도한 용도에 적합한 것으로 간주되는 임의 길이 또는 아미노산 조성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, X2 및/또는 X4는 존재하며, 폴리펩타이드의 전체 안정성 기여를 보조할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 비-제한적으로, 알부민 (혈청 반감기 개선), 수용체-결합 도메인 또는 형광 단백질 등의 의도한 목적에 적합한 임의의 기능성 도메인(들)을 포함할 수 있다.
다양한 구현예들에서, X3는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함한다. 이들 구현예에서, X3 도메인은 존재하며, 본 발명의 폴리펩타이드와 hIL-23R 사이의 추가적인 결합 접촉을 제공한다 (도 8-10 참조). 이들 추가적인 결합 접촉은 hIL-23R에 결합하는데 필수적인 것은 아니지만, 상호작용 표면을 연장함으로써 친화성과 결합 특이성을 더욱 높인다. 이러한 구현예에서, X3 및 X5는 바로 인접할 수 있거나, 또는 아미노산 링커, X4를 통해 연결될 수 있다. 링커는 임의의 적절한 길이 및 아미노산 조성의 링커일 수 있다.
추가적인 구현예에서, X5는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열의 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, X3는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서 X4는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 36-38의 아미노산 서열을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X1은 존재하며, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함한다. 이러한 구현예에서, X1은 폴리펩타이드가 결합-적격 입체구조 (binding-competent conformation)로 안정화되는 것을 보조하며, 따라서 hIL-23R과 직접적으로 상호작용하는 것은 아니지만 결합을 강화할 수 있다.
일 구현예에서, X1 및 X3는 둘다 폴리펩타이드에 존재한다. 이러한 구현예에서, X1 및 X3는 바로 인접할 수 있거나 또는 아미노산 링커 X2를 경유해 연결될 수 있다. 링커는 임의의 적절한 길이 및 아미노산 조성을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, X1, X3 및 X4 모두 폴리펩타이드에 존재한다. 추가적인 구현예에서, X1, X2, X3 및 X4는 모두 폴리펩타이드에 존재한다.
일 구현예에서, X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X2가 존재하며, 아미노산 링커를 포함한다. 일 구현예에서, X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, X3는 존재하고,
(a) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하고 (표 3 참조);
(b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함한다 (표 3 참조).
추가적인 구현예에서, X3는 존재하고,
(a) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하고 (표 3 참조);
(b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함한다 (표 3 참조).
다른 구현예에서, X1은 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X1, X2, X3, X4 및 X5는 각각 폴리펩타이드에 존재한다.
일 구현예에서, X5는 α 나선을 포함한다. 다른 구현예에서, X1은, 존재하는 경우, α 나선을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X1, X3 및 X5는 모두 존재하고,각각 α 나선을 포함한다.
본원의 임의 구현예에 대한 일 구현예에서, X2 및 X4가 존재하며, X2는 아미노산 4개 길이이고, X4는 아미노산 3개 길이이다.
추가적인 구현예에서, 각각의 X1, X2, X3, X4 및 X5가 존재하며,
X1은 서열번호 10-74 중 임의의 것에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X2는 서열번호 10-74 중 임의의 것에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 75% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X3는 서열번호 10-74 중 임의의 것에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X4는 서열번호 10-74 중 임의의 것에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 33%, 66% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X5는 서열번호 10-74 중 임의의 것에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구현예들에서, 각각의 X1, X3 및 X5는 서열번호 10-74 중 임의의 서열에 존재하는 해당 도메인의 아미노산 서열에 대해 각각 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 다른 구현예에서, 각각의 X1, X3 및 X5는 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 동일한 아미노산 서열에 존재하는 해당 도메인의 아미노산 서열에 대해 각각 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
더욱 추가적인 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
X2 및 X4 도메인은 밑줄 및 진하게 표시되고; X1, X3 및 X5 도메인은 X2 및 X4에 의해 이격되어 존재한다 (즉, 식 X1-X2-X3-X4-X5)). 모든 구현예들에서, N-말단 아미노산들 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 더 많은 수가 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으므로, 따라서 동일성 % 고려시, 서열번호 10-74 중 어느 하나의 참조 폴리펩타이드로부터 빠질 수 있다. 다양한 다른 구현예들에서, 폴리펩타이드는 하기 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다:
· 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열;
· 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열;
· 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X3-X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열; 또는
· 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X2-X3-X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열.
>23R_A
MESEKYLRELVKKYYE GKLS VQEAVEEVRKYARKK GLE AWMLTWMFMELVKRYI (서열번호 10)
23R_A에 기반한 농화된 조합 변이체들 (A##)
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이황화물 -안정화된 조합 변이체들
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마우스 ("m" 접두어) 및 랫 ("r" 접두어) IL-23R에의 결합성에 대해 농화된 조합 변이체들
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마우스 ("m" 접두어) 및 랫 ("r" 접두어) IL-23R에의 결합성에 대해 농화된 이황화물-안정화된 조합 변이체들
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MEPEKYVREQCKKYYE QKLS HQEAVEEVRKYARKK GLE AWKLTWYFMQCVKREI (서열번호 47)
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안정성 및 인간 IL-23R 친화성에 대해 농화된 SSM 데이터로부터 수동 선별된 변이체들
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MEPEKYLRELCKKYYE GKLS QQEAVEEIRKYARKW GLE AWKLVWYFMQCVKRDI (서열번호 67)
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>rA11dslf02_M1P_R8Q_K35W
PEPEKYLQELCKKYYE GKLS QQEAVEEIRKYARKW GLE AWKLVWYFMQCVKRDI (서열번호 69)
SIF 안정성 및 인간 IL-23R 친화성에 대해 농화된 rA11dslf02에 기반한 조합 변이체들
>rA11dslf02A
MEPEKFLKELCKAYYE GKLS QQEAVEEIRSYAMKW GLE AWMLIWYFMQCVKRDI (서열번호 70)
>rA11dslf02B
MEPEEFLLELCKAYYE GKLS QIEAVEEIRHYARSF GLE AWQLIWYFMQCVKRDI (서열번호 71)
>rA11dslf02C
PEPEKFLSELCKAYYE GKLS QIEAVEEIRSYARSW GLE AWKLIWYFMQCVKRDI (서열번호 72)
>rA11dslf02D
PEPEKFLAELCKAYYE GKLS QPEAVEEIRSYARKW GLE AWKLVWYFMLCVKRDI (서열번호 73)
>rA11dslf02E
PEPEQFLTELCKKYYE GKLS QPEAVEEIRKYARKW GLE AWKLIWYFMQCVKRDI (서열번호 74)
일 구현예에서, 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대한 치환의 예를 표 1-3에 제시한다.
일 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69 또는 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함한다.
제2 측면에서, 본 발명은 X2, X3, X4 및 X5가 선택적이고; X1이 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하되 X1이 서열번호 101 또는 102의 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하는, 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다 (표 4 참조).
표 4. 23RB 허용가능한 잔기 (전체)
서열 위치 (1) 허용가능한 잔기: hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리 하지 않음; 23R_B, B04dslf02, B11dslf01 및 mB09dslf01)
서열번호 101 		(2) 허용가능한 잔기: 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리; B04dslf02, B11dslf01 및 mB09dslf01)
서열번호 102
1 A,D,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,V D,E,G,H,N,P,Q
2 L,M,R,T,Y L,V
3 W W
4 I,K,M,P,Q,R,V,Y A,E,I,L,M,Q,V
5 A,C,F,H,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y C,I,V
6 F,Y F,Y
7 W,Y W,Y
8 C,E,F,I,K,L,M,Q,R,V,W,Y C,E,F,H,L,N,Q
9 L L
10 A,D,K,L,N,Q,R,S,T,V D,L,N,Q,S,V
11 A,E,F,H,N,Q,T,W,Y A,D,E,N,S,T
12 A,C,E,F,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,G,I,N,Q,R,S,T,V,W,Y
13 F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,W,Y E,I,T,V,Y
14 A,D,G,K,N,Q,T A,D,G,H,K,N,Q,T
15 N,Q,R,S A,C,D,E,G,K,N,Q,R,S,T,V
16 F,R,T,Y A,S,T
17 G C,G
18 A,D,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W,Y C,D,S,Y
19 A,E,G,H,I,K,L,N,P,Q,R,S,T,V A,C,E,F,G,I,P,Q,V
20 A,D,E,F,H,I,K,M,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,H,I,K,L,N,Q,R,T,V
21 A,C A,C
22 A,K,Q,S,V G,H,I,K,T,V
23 D,F,G,K,L,R,S A,C,I,K,L,N,R,S,T,V,Y
24 L,M,Q,S,Y F,I,L
25 A,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V G,I,K,L,M,S,T,V
26 A,K,R,S,T F,G,H,I,K,M,N,T,W,Y
27 A,D A,D,E,I,M,Q,V
28 L L
29 A,G,K,N,Q,R Q,R,S
30 A,D,E,H,I,K,L,M,R,S,T,Y C,D,E,M,Q,S
31 A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y A,C
32 A,C,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V C,D,L,N,V
33 A,K,L,R,T A,D,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S
34 A,E,H,I,K,L,R,S,T,W,Y A,D,E,F,G,H,I,K,M,N,Q,R,S,W,Y
35 F,G,H,I,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y F,G,N,S,W,Y
36 D,E,G,P,S,T,V,Y D,E,T
37 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y A,E,H,L,M,N,Q,T,V
38 A,F,I,K,M,N,P,Q,R A,C,D,E,G,I,K,N,P,Q,S,T,W,Y
39 A,E,F,H,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V,W,Y A,D,E,H,I,K,L,N,S,T,V,Y
40 A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V C,L,V
41 A,H,I,K,M,N,Q,R,S,W A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,N,S,W
42 A,D,E,F,G,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y C,E,T
43 C,I,L,M,N,P A,F,H,L,W,Y
44 A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,E,S
45 A,D,E,F,G,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,I,K,N,Q,R,S,T,V,W,Y
46 K,S,T,V C,D,E,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V,Y
47 A,C,E,G,I,T,V A,C,V
48 A,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,T,V,Y A,C,D,E,F,H,I,L,M,N,S,T,Y
49 A,D,E,F,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,W C,D,F,G,I,K,L,N,R,S,T,Y
50 H,I,K,R,W,Y C,M,Y
51 C,I,L,T,V,Y C,I,L
52 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,Y A,C,G,I,M,N,Q,R,T,W,Y
53 A,D,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y C,D,E,F,G,H,I,K,L,S,T,V,W
이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는 본원에 기술된 바와 같이 hIL-23R에 대한 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드의 1차 결합 계면을 포함한다 (도 8-10 참조). 따라서, 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는 본원에 기술된 임의 방법으로 이용할 수 있다. 잔기 1-10은 아미노산 12 내지 20개로 된 폴리펩타이드 도메인 내에 존재한다. X1 도메인에서 추가적인 잔기들은 임의의 적절한 아미노산일 수 있다.
일 구현예에서, X1은 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함한다 (표 5-7 참조).
표 5. 23RB 인간 단독
서열 위치 (1) 허용가능한 잔기: hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리 하지 않음; 23R_B, B04dslf02 및 B11dslf01)
서열번호 103 		(2) 허용가능한 잔기: 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합 ( SIF로 전처리; B04dslf02 및 B11dslf01)
서열번호 104
1 A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,V D,H,N,Q
2 L,M,R,T,Y L
3 W W
4 I,K,M,P,Q,R,V,Y A,E,I,L,M,Q,V
5 A,C,F,H,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y C,I,V
6 F,Y F,Y
7 Y W,Y
8 C,I,K,L,M,Q,V E,F,H,L,N,Q
9 L L
10 A,K,N,Q,R,S,V N
11 A,E,F,H,Q,T,W,Y A,E,S,T
12 A,C,E,F,H,I,K,L,N,Q,R,T,V,W,Y C,I
13 F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,W,Y I
14 A,D,G,K,N,Q,T A,D,G,H,K,N,Q,T
15 R,S A,C,D,E,G,K,N,Q,R,S,T,V
16 F,R,T,Y T
17 G G
18 A,D,F,K,L,M,N,Q,R,S,W,Y D
19 A,G,H,I,K,N,P,Q,R,S,T,V G,P
20 A,F,H,I,K,M,Q,R,S,T,V,Y A,C,D,E,H,K,N,T
21 A,C A,C
22 K G,H,I,K,V
23 K,R A,C,I,K,L,N,R,S,T
24 L,M,Q,S,Y F,L
25 A,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V G,I,K,M,S,T,V
26 K,R F,I,K,M,N,T,W
27 A A,D,E,I,M,V
28 L L
29 A,G,K,N,Q,R Q,R,S
30 A,D,E,H,I,K,L,M,R,S,T,Y D,E,M,Q,S
31 A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y A,C
32 A,C,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V C,D,L,N
33 A,K,L,R,T A,D,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S
34 K,L,R,T A,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,W,Y
35 F,G,H,I,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y F,G,S,W,Y
36 D,E,G,P,S,T,V,Y D,E,T
37 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y E,L
38 A,K,P A,D,E,I,K,N,P,Q,S,T
39 A,E,F,H,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V,W,Y A,D,E,H,I,K,N,S,T,V,Y
40 A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V C,L
41 A,H,I,K,N,Q,R,S,W A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,N,S,W
42 A,D,E,F,G,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y E
43 C,L,M,N,P A,F,L,W
44 A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,E,S
45 A,D,E,G,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,Y A,C,D,E,F,I,K,N,Q,R,S,T,V,W,Y
46 K,T,V C,D,E,K,L,M,R,S
47 A,C,E,I,T,V A,C,V
48 A,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,T,V,Y D,E,H,I,M,N,S,T
49 A,D,E,F,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,W D,G,I,K,L,N,S,T,Y
50 H,K,R,Y Y
51 I,L,T,V,Y I,L
52 A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,Y A,G,N,Q,R,T,W,Y
53 D,F,G,H,L,M,Q,R,S,T,V,Y D,E,G,H,I,ST
표 6. B04dslf02
서열 위치 (1) 허용가능한 잔기: hIL-23R에의 고-친화성 결합 (SIF로 전처리 하지 않음)
서열번호 105 		(2) 허용가능한 잔기: 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합 (SIF로 전처리)
서열번호 106
1 A,E,H,K,N,Q,S D,N
2 L,R,T,Y L
3 W W
4 K,Q,Y A,I,M,Q,V
5 H,I,K,P,Q,Y I,V
6 F F
7 Y Y
8 I,L,M,V E,F,L
9 L L
10 N N
11 A,E,H,Q,T,Y T
12 A,C,F,H,I,K,L,N,Q,R,T,V,W,Y C
13 I,M,Q,T,Y I
14 K K,T
15 R E,R
16 T T
17 G G
18 D,Y D
19 A,I,K,N,P,R,T G,P
20 H,K,S,T,Y A,E,T
21 A,C C
22 K G,H,K
23 K A,C,I,K,L
24 L,S,Y L
25 I,K,V G,K,S,T,V
26 K F,I,K,M,N,W
27 A A
28 L L
29 R R,S
30 E D,E
31 A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y A,C
32 A,I,L,M,N,Q,R,S,T,V C,L
33 K,L,T I,K,M
34 K,L,R,T K
35 G,H,R,Y G,S
36 D,G D
37 A,E,N,P,Q,S,T E,L
38 A,K,P K,P
39 A,F A
40 A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V C
41 A,H,K,N,Q,S C,D,K,N,W
42 E E
43 L,P A,L,W
44 A,E,H,K,N,Q,R,T,V A
45 D,E,K,M,N,Q,V,Y C,D,F,K,S,W,Y,
46 K C,K,M
47 A,E A,C,V
48 L,M,V E,M
49 A,K,R I,K,L,S
50 H,K,R,Y Y
51 I,L I
52 R G,R,W
53 H,S,T S
표 7. mB09dslfo1
서열 위치 허용가능한 잔기 : mIL -23R에의 결합, SIF로 전처리 하지 않음
서열번호 107 		허용가능한 잔기 : mIL -23R에의 결합, SIF로 전처리
서열번호 108
1 A,D,E,H,N,Q D,E,G,H,N,P
2 L,M,T L,V
3 W W
4 Q Q
5 I I
6 F F
7 W,Y Y
8 C,E,F,I,L,Q,R,V,W,Y C
9 L L
10 A,D,L,N,Q,S,T,V D,L,N,Q,S,V
11 E,N,Q,T D,E,N,S,T
12 C,E,F,H,K,R,S,T,W,Y A,C,E,F,G,I,N,Q,R,S,T,V,W,Y
13 I E,I,T,V,Y
14 G,K,Q K
15 N,Q,R G,R
16 T,Y A,S,T
17 G C,G
18 A,D,H,N,R,S,Y C,D,S,Y
19 E,H,L,N,P,T A,C,E,F,G,I,P,Q,V
20 A,D,E,F,H,Q,R,T,V,W A,C,I,L,Q,R,T,V
21 C C
22 A,K,Q,S,V K,T
23 D,F,G,K,L,S C,K,T,V,Y
24 L I,L
25 L L
26 A,K,S,T G,H,K,Y
27 A,D A,Q
28 L L
29 Q Q
30 E C,E
31 A A
32 V V
33 A,K K,R
34 A,E,H,I,K,S,W,Y H,I,K,Q,S
35 H,N N
36 D D
37 E,G,M,Q,T A,E,H,M,N,Q,T,V
38 F,I,K,M,N,Q,R A,C,G,K,Q,W,Y
39 A,I,L A,L
40 V V
41 K,M H,I,K
42 E,I,N C,E,T
43 I,L H,L,Y
44 A A
45 D,F,I,K,L,S,V,W,Y A,C,F,K,S,V,Y
46 K,S,V C,H,I,K,L,Q,R,S,T,V,Y
47 A,G A
48 G,T A,C,F,I,L,M,S,T,Y
49 K C,D,F,G,I,K,R
50 I,W,Y C,M,Y
51 C C
52 L,Q,R,S,Y C,I,M,R
53 A,F,I,K,L,M,N,Q,S,V,W,Y C,F,I,K,L,S,T,V,W
다른 구현예에서, X3는 존재하며, 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함한다. 이러한 구현예에서, X2는 생략될 수 있거나, 또는 아미노산 링커를 포함할 수 있다. 추가적인 구현예에서, X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함한다. 이들 구현예에서, X3 도메인은 존재하며, 본 발명의 폴리펩타이드와 hIL-23R 간의 추가적인 결합 접촉을 제공한다 (도 8-10 참조). 이들 추가적인 결합 접촉이 hIL-23R에 결합하는데 필수적인 것은 아니지만, 상호작용 표면을 연장함으로써 친화성 및 결합 특이성을 증가시킬 수 있다. 이들 구현예에서, X3 및 X5는 바로 인접할 수 있거나, 또는 아미노산 링커 X4를 경유해 연결될 수 있다. 링커는 임의의 적절한 길이 및 아미노산 조성의 링커일 수 있다.
일 구현예에서, X1은 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, X2는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-18의 아미노산 서열을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X5는 존재하며, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함한다. 이러한 구현예에서, X5는 결합-적격 입체구조로 폴리펩타이드가 안정화되는 것을 보조하며, 따라서 hIL-23R과 직접적으로 상호작용하는 것은 아니지만 결합을 강화할 수 있다.
일 구현예에서, X3 및 X5가 둘다 폴리펩타이드에 존재한다. 이러한 구현예에서, X3 및 X5는 바로 인접할 수 있거나 또는 아미노산 링커 X4를 경유해 연결될 수 있다. 링커는 임의의 적절한 길이 및 아미노산 조성의 링커일 수 있다. 다른 구현예에서, X3, X4 및 X5가 모두 폴리펩타이드에 존재한다. 추가적인 구현예에서, X2, X3, X4 및 X5가 모두 폴리펩타이드에 존재한다.
다른 구현예에서, X5는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, X4가 존재하며, 아미노산 링커를 포함한다. 추가의 구현예에서, X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, X3는 존재하며,
(a) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열 (표 6-7)을 포함하고;
(b) X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, X3는 존재하며,
(a) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열 (표 6-7)을 포함하고;
(b) X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X5는 존재하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, X1은 α 나선을 포함한다. 다른 구현예에서, X3는 존재하는 경우 α 나선을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X5는 존재하는 경우 α 나선을 포함한다. 다른 구현예에서, X1, X3 및 X5가 모두 존재하고, 각각은 α 나선을 포함한다.
다른 구현예에서, X2 및 X4가 존재하고, 각각이 아미노산 2개 길이이다. 추가적인 구현예에서, X2 및 X4에서 2번째 아미노산은 D이다. 다른 구현예에서, 각각의 X1, X2, X3, X4 및 X5가 존재하며,
X1은 서열번호 110-180 중 임의 서열에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X2는 서열번호 110-180 중 임의 서열에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X3는 서열번호 110-164 및 166-180 중 임의 서열에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X4는 서열번호 110-164 및 172-180 중 임의 서열에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X5는 서열번호 110-164 및 173-180 중 임의 서열에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구현예들에서, 각각의 X1, X3 및 X5는 서열번호 110-180 중 하나에 존재하는 해당 도메인의 아미노산 서열에 대해 각각 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 다른 구현예에서, 각각의 X1, X3 및 X5는 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 동일한 아미노산 서열에 존재하는 해당 도메인의 아미노산 서열에 대해 각각 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
X2 및 X4 도메인은 밑줄 및 진하게 표시되고; X1, X3 및 X5 도메인은 X2 및 X4에 의해 이격되어 있다 (즉, 식 X1-X2-X3-X4-X5). 모든 구현예들에서, C-말단 아미노산들 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 더 많은 수가 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으므로, 동일성 % 고려시, 서열번호 110-180 중 어느 하나의 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있다. 다양한 다른 구현예들에서, 폴리펩타이드는 하기 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다:
· 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열;
· 서열번호 110-164 및 166-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2 도메인 조합의 아미노산 서열;
· 서열번호 110-164 및 166-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2-X3 도메인 조합의 아미노산 서열; 또는
· 서열번호 110-164 및 173-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2-X3-X4 도메인 조합의 아미노산 서열.
>23R_B
NLWQIFYQLSTILKRTGDPTAKKLLKALAEALKKGDEKALKELAKKATKYIRS (서열번호 110)
23R_B에 기반한 농화된 조합 변이체들 (B##)
>B01
NLWMIFYLLNTIIKRT GD PTAKKLLKALQEALKK YD EKAIKELAKKAMKYIRS (서열번호 111)
>B02
NLWQIFYILNTIIKRT GD PTAKKLKKALREATKK GD EKAMKELAKKAMKYIRS (서열번호 112)
>B03
NLWQIFYILNTIHKRT GD PTAKKLPKALREAMKK GD EKAMKELAKKALKYIRS (서열번호 113)
>B04
NLWQIFYLLNTIIKRT GD PTAKKLKKALREALKK GD EKAVKELAKKAMKYIRS (서열번호 114)
>B05
NLWMIFYLLNTIFKRT GD PTAKKLKKALNEAMKK GD EKAMKELAKKATKYIRS (서열번호 115)
>B06
NLWVIFYLLNTIHKRT GD PTAKKLIKALDEAMKK GD EKATKELAKKALKYIRS (서열번호 116)
>B07
NLWQIFYMLNTIFKRT GD PTAKKLLKALREATKK GD EKAMKELAKKATKYIRS (서열번호 117)
>B08
NLWQIFYVLNTIYKRT GD PTAKKLNKALREALKK HD EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 118)
>B09
NLWQIFYVLNTIYKRT GD PTAKKLPKALREALKK ND EKATKELAKKAMKYIRS (서열번호 119)
>B10
NLWVIFYVLNTIIKRT GD PTAKKLVKALQEAMKK WD EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 120)
>B11
NLWIIFYQLNTIIKRT GD PTAKKLIKALQEANKK WD EKALKELAKKATKYIRS (서열번호 121)
>B12
NLWQIFYVLNTIYKRT GD PTAKKLPKALREAMKK ND EKAIKELAKKAMKYIRS (서열번호 122)
이황화물 -안정화된 조합 변이체
>B04dslf01
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALREALKK GD EKAVKELAKKAMKYIRS (서열번호 123)
>B04dslf02
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAMKYIRS (서열번호 124)
>B08dslf01
NLWQIFYVLNTIYKRT GD PTAKKLNKALRECLKK HD EKACKELAKKATKYIRS (서열번호 125)
>B08dslf02
NLWQIFYVCNTIYKRT GD PTAKKLCKALREALKK HD EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 126)
>B08dslf03
NLWQIFYVCNTIYKRT GD PTAKKLCKALRECLKK HD EKACKELAKKATKYIRS (서열번호 127)
>B11dslf01
NLWICFYQLNTIIKRT GD PTAKKLIKALQEANKK WD EKALKELAKKCTKYIRS (서열번호 128)
>B11dslf02
NLWICFYQLNTIIKRT GD PTAKKLIKALQECNKK WD EKACKELAKKCTKYIRS (서열번호 129)
안정성 및 인간 IL-23R 친화성에 대해 농화된 SSM 데이터로부터 수동 선별된 변이체들
>B04dslf02_N1D
DLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAMKYIRS (서열번호 130)
>B04dslf02_Q4I
NLWIIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAMKYIRS (서열번호 131)
>B04dslf02_Q4V
NLWVIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAMKYIRS (서열번호 132)
>B04dslf02_K45Y
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAYKAMKYIRS (서열번호 133)
>B04dslf02_N1D_Q4I_K45Y
DLWIIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAYKAMKYIRS (서열번호 134)
마우스 ("m" 접두어) 및 랫 ("r" 접두어) IL-23R에의 결합성에 대해 농화된 조합 변이체들
>mB01
NLWQIFYMLVTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK YD EKAVKELAKKALKYIRS (서열번호 135)
>mB02
NLWQIFYLLSTIWKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK ND EKATKELAKKALKYIRS (서열번호 136)
>mB03
NLWQIFYMLNTIIKRT GD PTAKKLLKALQEATKK WD EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 137)
>mB04
NLWVIFYQLVTIWKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK ND EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 138)
>mB05
NLWQIFYMLVTIIKRT GD PTAKKLLKALQEANKK WD EKATKELAKKAMKYIRS (서열번호 139)
>mB06
NLWQIFYLLQTILKRT GD PTAKKLLKALAEAVKK WD EKAVKELAKKATKYIRS (서열번호 140)
>mB07
NLWQIFYLLSTIWKRT GD PTAKKLLKALNEALKK HD EKAVKELAKKALKYIRS (서열번호 141)
>mB08
NLWQIFYVLLTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK YD EKALKELAKKAMKYIRS (서열번호 142)
>mB09
NLWQIFYQLLTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK ND EKAVKELAKKATKYIRS (서열번호 143)
>mB10
NLWQIFYILVTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK YD EKATKELAKKALKYIRS (서열번호 144)
>mB11
NLWQIFYVLSTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK ND EKALKELAKKAMKYIRS (서열번호 145)
>mB12
NLWQIFYVLVTINKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK GD EKAVKELAKKATKYIRS (서열번호 146)
>mB13
NLWQIFYVLVTIIKRT GD PTAKKLLKALQEAVKK GD EKATKELAKKALKYIRS (서열번호 147)
>mB14
NLWQIFYMLSTIIKRT GD PTAKKLLKALQEATKK WD EKATKELAKKATKYIRS (서열번호 148)
>mB15
NLWQIFYMLSTIIKRT GD PTAKKLMKALQEATKK WD EKATKELAKKAMKYIRS (서열번호 149)
마우스 ("m" 접두어) 및 랫 ("r" 접두어) IL-23R에의 결합성에 대해 농화된 이황화물-안정화된 조합 변이체들
>mB09dslf01
NLWQIFYCLLTCIKRT GD PTCKKLLKALQEAVKK ND EKAVKELAKKATKYCRS (서열번호 150)
>mB11dslf01
NLWQIFYVLSTCIKRT GD PTCKKLLKALQECVKK ND EKCLKELAKKAMKYIRS (서열번호 151)
>mB14dslf01
NLWQIFYCLSTIIKRT GD PTAKKLLKALQEATKK WD EKATKELAKKATKYCRS (서열번호 152)
SIF 안정성 및 인간 IL-23R 친화성에 대해 농화된 B04dslf02에 기반한 조합 변이체들
>B0402SA
ELWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLIKALRECLKK GD MKACDELAKKAVKYIMS (서열번호 153)
>B0402SB
QLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLIKALRECLKK GD AKACDELAKKAVKYIMS (서열번호 154)
>B0402SC
QLWQIFYLLNTCIKRT CD PTCKKLKKALRECLKK GD AKACDELADKAVKYIMS (서열번호 155)
>B0402SD
PLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLIKALRECLKK GD PKACAELADKAMKYIMS (서열번호 156)
>B0402SE
QLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD AKACKEAADKAVKYIMS (서열번호 157)
>B0402SF
ELWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLIKALRECLKK GD AKACSELADKAMKYIMS (서열번호 158)
>B0402SG
ELWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLIKALRECLKK GD PKACAELAKKAMKYIMS (서열번호 159)
>B0402IA
PLWQVFYLLNTCIKRT GD PTCKKLAKALRECLKP GD VKACKEVADKAMDYIRS (서열번호 160)
>B0402IB
PLWQVFYLLNTCIKRT GD PTCKKLAKALRECLKK GD LKACNELADKAVKYINS (서열번호 161)
>B0402IC
PLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKVLSKALRECLKK GD VKACSELASKAEKYINS (서열번호 162)
>B0402ID
ELWQVFYLLNTCIKRT CD PTCKKLAKALRECLKK GD LKACKEDAYKALDYIRS (서열번호 163)
>B0402IE
NLWYIFYLLNTCIKRT CD PTCKVLAKALRECLKK GD LKACSELADKAVDYIRS (서열번호 164)
B04dslf02에 기반한 말단 절단체 (truncation)의 예. 1차 또는 2차 라운드에서 친화성 단독 또는 친화성 및 안정성에 대해 선별한 후 농화되는 말단 절단된 서열들 모두 허용가능한 것으로 간주한다.
>B04dslf02_trunc01
NLWQIFYLLNTCIKRTG (서열번호 165)
>B04dslf02_trunc02
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTC (서열번호 166)
>B04dslf02_trunc03
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCK (서열번호 167)
>B04dslf02_trunc04
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLK (서열번호 168)
>B04dslf02_trunc05
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKAL (서열번호 169)
>B04dslf02_trunc06
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECL (서열번호 170)
>B04dslf02_trunc07
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLK (서열번호 171)
>B04dslf02_trunc08
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD (서열번호 172)
>B04dslf02_trunc09
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD E (서열번호 173)
>B04dslf02_trunc10
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKAC (서열번호 174)
>B04dslf02_trunc11
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACK (서열번호 175)
>B04dslf02_trunc12
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKE (서열번호 176)
>B04dslf02_trunc13
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELA (서열번호 177)
>B04dslf02_trunc14
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAK (서열번호 178)
>B04dslf02_trunc15
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAM (서열번호 179)
>B04dslf02_trunc16
NLWQIFYLLNTCIKRT GD PTCKKLKKALRECLKK GD EKACKELAKKAMKYI (서열번호 180)
일 구현예에서, 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대한 치환의 예는 표 4-7에 제공된다.
일 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
제3 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 특이적인 폴리펩타이드의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69, 74 및 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 서열번호 69, 74 및 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
제4 측면에서, 본 발명은 서열번호 181-228로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드를 제공한다. 모든 구현예들에서, N-말단 및/또는 C-말단 아미노산들 중 1개, 2개, 3개 또는 그보다 많은 수가 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으므로, 동일성 % 고려시, 이는 서열번호 181-228 중 어느 하나의 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있다.
>23R_mini_01
CERKEWMERLGHNWMWFYVMNTC (서열번호 181)
>23R_mini_02
CEALEWFERVGKTWMWFYLLNTC (서열번호 182)
>23R_mini_03
CETLEWMKRQGDNWMWFYMMNYC (서열번호 183)
>23R_mini_04
CEEAEKIRRRAQTWEEFYRANQIC (서열번호 184)
>23R_mini_05
CERAHEWAKRVGGWEAFYMANKLC (서열번호 185)
>23R_mini_06
CERAEEERRRARTWEDFYKANKLC (서열번호 186)
>23R_mini_07
CEEARELIRNANGWKDVWKAWKYC (서열번호 187)
>23R_mini_08
ASPELKETCERLERLGMERWLILWCKQRAEEG (서열번호 188)
>23R_mini_09
PDPNRCEDYKRRLHLRWAVLWYCRRF (서열번호 189)
>23R_mini_10
FCITCNNQTFCAEWRWAAWYMCQKAR (서열번호 190)
>23R_mini_11
CRVCDNNFCVDAQWCWAAFYLLQKYK (서열번호 191)
>23R_mini_12
CRVCRNNFCVDAQWCWAAFYMLQKYN (서열번호 192)
>23R_mini_13
CKVKCGPVEFQAQMNWMCFYWRWRYC (서열번호 193)
>23R_mini_14
CRVCMNNFCVDAQMCWMAFYLLNKYN (서열번호 194)
>23R_mini_15
CRVCLNNFCVDAQMCWMAWYLLTKYR (서열번호 195)
>23R_mini_16
FCITCGNETFCSEWRWEAFYLCQKAR (서열번호 196)
>23R_mini_17
CKVKCGPVEFQATARWMCFYWWWKYC (서열번호 197)
>23R_mini_18
FCITCNNQTFCAEWRWMAWYLCWRAR (서열번호 198)
>23R_mini_14_C1
CRVCMNNMCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 199)
>23R_mini_14_C2
CRVCKNNFCVDAQECWMAYYLLNQYT (서열번호 200)
>23R_mini_14_C3
CRVCKNGFCVDAQECWMAYYLLNQYT (서열번호 201)
>23R_mini_14_C4
CRVCKNGFCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 202)
>23R_mini_14_C5
CRVCKNKFCVDAVACWMAYYLLNQYT (서열번호 203)
>23R_mini_14_C6
CRVCRNNMCVDARECWMAYYLLNQYT (서열번호 204)
>23R_mini_14_C7
CRVCRNGFCVDAQECWMAYYLLNQYT (서열번호 205)
>23R_mini_14_C8
CRVCRNGFCVDAQECWMAYYLLNQYT (서열번호 206)
>23R_mini_14_C9
CRVCRNNFCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 207)
>23R_mini_14_C10
CRVCRNNFCVDAVECWMAYYLLNQYT (서열번호 208)
>23R_mini_14_C11
CRVCMNGMCVDAQECWMAYYLLNQYN (서열번호 209)
>23R_mini_14_C12
CRVCMNGMCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 210)
>23R_mini_14_C13
CRVCMNGMCVDARECWMAYYLLNQYT (서열번호 211)
>23R_mini_14_C14
CRVCMNGMCVDAVECWMAYYLLNQYT (서열번호 212)
>23R_mini_14_C15
CRVCMNGFCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 213)
>23R_mini_14_C16
CRVCMNGFCVDARECWMAYYLLNQYN (서열번호 214)
>23R_mini_14_C17
CRVCMNGFCVDAVECWMAYYLLNQYT (서열번호 215)
>23R_mini_14_C18
CRVCMNQMCVDAQECWMAYYLLNQYT (서열번호 216)
>23R_mini_17_C1
CKVKCGGVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 217)
>23R_mini_17_C2
CKVKCGGVEFEATERWMCFYWFNKYC (서열번호 218)
>23R_mini_17_C3
CKVKCGGVEFEATERWMCFYWLWKYC (서열번호 219)
>23R_mini_17_C4
CKVKCGSVEFEATERWMCYYWAWKYC (서열번호 220)
>23R_mini_17_C5
CKVKCGSVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 221)
>23R_mini_17_C6
CKVKCGSVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 222)
>23R_mini_17_C7
CKVKCGSVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 223)
>23R_mini_17_C8
CKVKCGSVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 224)
>23R_mini_17_C9
CKVKCGPVEFEATERWMCYYWLWKYC (서열번호 225)
>23R_mini_17_C10
CKVKCGPVEFEATERWMCFYWLWKYC (서열번호 226)
>23R_mini_17_C11
CKVKCGPVEFEATERWMCFYWYNKYC (서열번호 227)
>23R_mini_17_C12
CKLKCGGVEFEATERWMCYYWWNKYC (서열번호 228)
후술한 실시예에 기술된 바와 같이, 제4 측면에 따른 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드는, 시스테인 잔기 2개가 분자내 이황화 결합을 형성하기에 적합한 기하 구조로 상대적으로 위치될 수 있는, 3차원 구조 요소를 가진다. 따라서, 일 구현예에서, 제4 측면에 따른 폴리펩타이드는 폴리펩타이드 내 시스테인 잔기 2개 간의 이황화 결합을 포함한다.
일 구현예에서, 서열번호 194 및 199-216으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 허용가능한 치환은 표 8에 제시되며, 서열번호 197 및 217-228로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 허용가능한 치환은 표 9에 제시된다. 표 8-9는 각각 2개의 칸을 포함한다. 각 표에서, 좌측 칸은 (모의 장액 [SIF]로 전처리하지 않음) hIL-23R에의 고-친화성 결합과 관련하여 돌연변이 분석에 기반하여 본 발명의 폴리펩타이드에 허용가능한 잔기를 제시한 것이고, 우측 칸은 (SIF로 전처리함) 안정성 및 hIL-23R에의 고-친화성 결합과 관련하여 돌연변이 분석에 기반하여 본 발명의 폴리펩타이드에 허용가능한 잔기를 제시한 것이다. 허용가능한 잔기는 대규모 돌연변이 분석을 토대로 결정하였으며; 후술한 실시예를 참조한다.
표 8. (1) 모의 장액으로 전처리하지 않거나 또는 (2) 전처리한 (SIF; 각각 도 11A 및 11B 참조), 유도 진화 중에 결정된 hIL-23R 결합성과 관련하여 단일 돌연변이 적합도에 기반한, 구조체 23R_mini_14의 위치별 허용가능한 잔기. 나이브 풀을 기준으로 1차 선별에서 적어도 2배 농화된 돌연변이들 모두 허용가능한 것으로 간주한다.
서열 위치 허용가능한 잔기 : hIL -23R에의 결합, SIF로 전처리 하지 않음 (서열번호 84) 허용가능한 잔기 : hIL -23R에의 결합, SIF로 전처리함 (서열번호 85)
1 C C
2 A,C,E,F,G,H,I,K,LM,N,Q,R,S,T,V,W,Y R,T
3 A,E,G,I,K,Q,R,S,T,V I,K,V
4 C C
5 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,,V,W,Y
6 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,G,H,K,L,M,N,Q,R,S,T,W,Y
7 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,,S,T,W,Y
8 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,F,H,I,K,L,M,R,T,V,WY
9 C C
10 A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y C,I,V
11 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,Y
12 A,E,G,H,M,N,Q,S,T A,M
13 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y
14 A,C,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,H,K,L,M,Q,R,S,T,W,Y
15 C C
16 W W
17 A,E,H,I,K,L,M,Q,V,Y E,M,Q
18 A,C,G,S A,C,G
19 D,F,H,N,Q,W,Y F,W,Y
20 F,W,Y W,Y
21 A,C,E,F,H,I,K,L,M,Q,S,T,V,W,Y C,I,L,M
22 A,C,F,H,I,L,M,Q,T,V,W,Y I,L,M,W
23 A,C,D,G,H,K,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,N,S
24 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
25 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,F,H,I,L,M,Q,V,W,Y
26 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
표 9. (1) 모의 장액으로 전처리하지 않거나 또는 (2) 전처리한 (SIF; 각각 도 11A 및 11B 참조), 유도 진화 중에 결정된 hIL-23R 결합과 관련하여 단일 돌연변이 적합도에 기반한, 구조체 23R_mini_17의 위치별 허용가능한 잔기. 나이브 풀을 기준으로 1차 선별에서 적어도 2배 농화된 돌연변이들 모두 허용가능한 것으로 간주한다.
서열 위치 허용가능한 잔기 : hIL -23R에의 결합, SIF로 전처리 하지 않음 (서열번호 86) 허용가능한 잔기 : hIL -23R에의 결합, SIF로 전처리함 (서열번호 87)
1 C,Y C
2 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
3 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,I,L,T,V
4 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
5 C,V C
6 A,D,E,G,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,W,Y G
7 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y
8 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
9 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,E,H,I,L,M,N,Q,S,T,V,Y
10 A,F,I,K,L,M,R,V,W,Y F
11 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
12 A,F,G,L,M,S,W,Y A,F,G
13 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y A,D,E,G,H,K,N,P,Q,R,S,T,V,Y
14 A,C,D,E,F,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,V,W,Y A,D,E,H,K,M,Q,S,Y
15 A,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W,Y H,K,L,M,N,Q,R
16 W W
17 E,H,I,K,M,Q M,Q
18 C C
19 D,E,F,H,I,M,V,W,Y F,V,W,Y
20 F,W,Y W,Y
21 A,F,H,I,L,Q,T,V,W,Y F,I,V,W,Y
22 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y
23 A,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,H,M,N,Q,R,S,T,W,Y
24 A,C,D,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y A,K,L,M,Q,R,S,Y
25 A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W,Y C,E,F,H,M,N,Q,S,T,V,W,Y
26 C,G,H,S,T C
다른 구현예에서, hIL-23R 결합성 폴리펩타이는 서열번호 84-87로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
전술한 측면들 각각에 대한 일 구현예에서, 참조 펩타이드 도메인을 기준으로 한 아미노산 치환은 보존적인 아미노산 치환이다. 본 발명에 사용된 바와 같이, "보존적인 아미노산 치환"은 소정의 아미노산이 물리화학적 특징이 유사한 한 잔기로 치환될 수 있는 것을 의미하며, 예를 들어 지방족 잔기 하나가 다른 잔기로 치환되는 경우 (예, Ile, Val, Leu 또는 Ala의 다른 잔기로의 치환), 또는 극성 잔기 하나가 다른 잔기로 치환되는 경우 (예, Lys와 Arg 간의 치환; Glu과 Asp 간의 치환; 또는 Gln과 Asn 간의 치환)을 의미한다. 그 외 이러한 보존적인 치환, 예를 들어, 유사한 소수성 특징을 가진 전체 영역의 치환 역시 알려져 있다. 보존적인 아미노산 치환을 포함하는 폴리펩타이드는 요망하는 활성, 예를 들어 항원-결합 활성 및 천연 또는 참조 폴리펩타이드의 특이성의 유지를 검증하기 위해 본원에 기술된 분석들 중 어느 하나로 검사할 수 있다. 아미노산은 그 측쇄의 특성 유사성에 따라 군으로 분류할 수 있다 (A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)): (1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 비-하전된 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His (H). 대안적으로, 자연 생성 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 따라 군으로 분류할 수 있다: (1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 체인 배향성에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe. 비-보존적인 치환은 이들 유형들 중 하나에 속하는 것을 다른 유형의 것으로 교체하는 경우를 수반할 것이다. 구체적인 보존적인 치환으로는, 예를 들어; Ala에서 Gly 또는 Ser으로의 치환; Arg에서 Lys으로의 치환; Asn에서 Gln 또는 H으로의 치환; Asp에서 Glu으로의 치환; Cys에서 Ser으로의 치환; Gln에서 Asn으로의 치환; Glu에서 Asp로의 치환; Gly에서 Ala 또는 Pro으로의 치환; His에서 Asn 또는 Gln으로의 치환; Ile에서 Leu 또는 Val으로의 치환; Leu에서 Ile 또는 Val으로의 치환; Lys에서 Arg, Gln 또는 Glu으로의 치환; Met에서 Leu, Tyr 또는 Ile으로의 치환; Phe에서 Met, Leu 또는 Tyr으로의 치환; Ser에서 Thr으로의 치환; Thr에서 Ser으로의 치환; Trp에서 Tyr으로의 치환; Tyr에서 Trp으로의 치환; 및/또는 Phe에서 Val, Ile 또는 Leu으로의 치환을 포함한다.
전술한 측면들 중 임의 측면에 대한 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에 부가되는 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함한다. 임의의 적절한 기능성 도메인(들)은, 비-제한적으로, (혈청 반감기를 개선하기 위해) 알부민, 수용체 표적화 도메인, 형광 단백질과 같은 분자 프로브, 태그 (비-제한적으로, 폴리히스티딘 태그 등) 등의 의도한 목적에 적합한 바에 따라 부가될 수 있다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 C-말단에 부가된 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함한다.
본원의 임의 구현예에 대한 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 표적화 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 표적화 도메인은 존재하는 경우 제1 폴리펩타이드, 제2 폴리펩타이드 및/또는 폴리펩타이드에 공유적인 방식으로 또는 비-공유적인 방식으로 결합될 수 있다. 표적화 도메인이 비-공유적으로 결합되는 구현예에서, 이러한 비-공유 결합에 적합한 임의 수단을, 비-제한적으로 스트렙타비딘-바이오틴 링커 등을 이용할 수 있다. 다른 구현예에서, 표적화 도메인은 존재하는 경우 폴리펩타이드와의 번역 융합체이다. 이러한 구현예에서, 폴리펩타이드와 표적화 도메인은 서로 번역 융합체로 직접 연결되거나, 또는 의도한 목적에 적합한 폴리펩타이드 링커를 통해 연결될 수 있다.
표적화 도메인은 대상 표적에 결합하는 폴리펩타이드 도메인 또는 소분자이다. 비-제한적인 일 구현예에서, 표적화 도메인은 세포 표면 단백질에 결합하며; 이러한 구현예에서, 그 세포는 적절한 표적화 도메인에 의해 결합될 수 있는 표면 단백질을 가진 임의의 대상 세포 타입일 수 있다. 일 구현예에서, 세포 표면 단백질은 장 상피 세포, 연골 세포 또는 각질 형성 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포의 표면에 존재한다. 다른 구현예에서, 표적화 도메인은 세포외 매트릭스 (ECM)의 구성성분에 결합하며; 이러한 구현예에서, ECM 구성성분은 콜라겐, 엘라스틴 또는 히알루론산으로 구성될 수 있다.
추가적인 구현예에서, 폴리펩타이드는 hIL-23R 길항제이다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 IL-12에 검출가능한 수준으로 결합하지 않거나, 또는 IL-12에 매우 낮은 친화성으로 결합한다.
제5 측면에서, 본 발명은 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질을 제공하며, 여기서 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 융합 단백질로 존재하는 것은 아니며,
(a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분은 본 발명의 제1 측면의 임의 구현예에 따라 정의되는 도메인 X3 및 X5를 포함하고;
(b) X3 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X5 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하며;
제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질인 것은 아니고, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드이 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성한다.
본원에 기술된 바와 같이, 이들 구현예에서, X5 도메인은 hIL-23R에 결합하는데 충분하며 1차 결합 계면을 포함하는데 반해, X3 도메인은 hIL-23R에 결합하는데 필수적이진 않지만 추가적인 결합 접촉을 제공하고, 상호작용 표면을 연장함으로써 친화성과 결합 특이성을 높일 수 있다. 본 발명의 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질은 따라서 최대 hIL-23R 결합 활성의 조건부 구현을 제공한다.
본 발명의 제1 측면에 따른 모든 구현예들 및 구현예들의 조합이 이러한 제5 측면에서 이용될 수 있다. 일 구현예에서, X5는 아미노산 12 내지 20개 길이의 α-나선 폴리펩타이드 도메인을 포함하며, X5는 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호 1 또는 서열번호 2에서 잔기 40-47의 아미노산 서열 (표 1 참조);
- 서열번호 3-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열 (표 2-3 참조); 또는
- 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열.
다른 구현예에서, X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하며, X3는 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열; 또는
- 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열.
추가적인 구현예들에서:
(A) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하고 (표 3 참조); 및 X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나 (표 3 참조); 또는
(B) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하고 (표 3 참조); 및
(b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함한다 (표 3 참조).
다른 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분은 본원의 제1 측면에 따른 임의 구현예의 X1 및 X2 도메인을 포함한다.
추가적인 구현예에서, X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하되, X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 X1은 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, X5, X3 및 X1은 존재하는 경우 각각 α-나선 도메인이다. 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질에 대한 추가적인 구현예에서:
X1은, 존재하는 경우, 서열번호 10-74 중 어느 하나, 특히 서열번호 69 또는 74에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X2는, 존재하는 경우, 서열번호 10-74 중 어느 하나, 특히 서열번호 69 또는 74에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X3는 서열번호 10-74 중 어느 하나, 특히 서열번호 69 또는 74에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,;96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X5는 서열번호 10-74 중 어느 하나, 특히 서열번호 69 또는 74에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 비-공유적으로 결합한다. 다른 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 수용체를 통해 서로 간접적으로 결합한다.
제6 측면에서, 본 발명은 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질을 제공하며, 여기서 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 융합 단백질로 존재하는 것은 아니며,
(a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분은 본원의 제2 측면에 대한 임의 구현예 또는 구현예들 조합에 따라 정의되는 도메인 X1 및 X3를 포함하고;
(b) X1 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X3 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고;
제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질인 것은 아니며, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드가 비-공유적으로 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성한다.
본원에 기술된 바와 같이, 이들 구현예에서, X1 도메인은 hIL-23R에 결합하는데 충분하고 1차 결합 계면을 포함하는데 반해, X3 도메인은 hIL-23R에 결합하는데 필수적이지 않은 추가적인 결합 접촉을 제공하고 상호작용 표면을 연장하여 친화성과 결합 특이성을 높일 수 있다. 본 발명의 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질은 따라서 최대 hIL-23R 결합 활성의 조건부 구현을 제공한다.
일 구현예에서, X1은 α-나선 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하되, X1은 하기 아미노산 서열을 포함한다:
- 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열 (표 5-7 참조); 또는
- 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열.
다른 구현예에서, X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하되, X3는 하기 아미노산 서열을 포함한다:
- 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열; 또는
- 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열.
추가적인 구현예들에서,
(A) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하고 (표 6-7), X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(B) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하고 (표 6-7); 및 X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예들에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분은 본원의 제2 측면에 따른 임의 구현예 또는 구현예들 조합에 따른 X4 및 X5 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, X5는 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열, 또는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, X1, X3 및 X5는 존재하는 경우 각각 α-나선 도메인이다.
다양한 추가적인 구현예들에서,
X1은 서열번호 110-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X3는 서열번호 110-164 및 166-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X4는 존재하는 경우 서열번호 110-164 및 172-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X5는 서열번호 110-164 및 173-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 비-공유적으로 결합한다. 다른 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분은 수용체를 통해 상호 간접적으로 결합한다.
제7 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제1 측면에 따른 임의 구현예에서 본원에 정의되는 바와 같은 X3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 본원의 제1 측면에 따른 임의 구현예에서 정의되는 X5 도메인은 포함하지 않는다.
이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는, 예를 들어, 본 발명의 제5 측면에 따른 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질을 제작하는데, 이용할 수 있다. 다양한 구현예들에서, X3 도메인은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예들에서, X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나 (표 3 참조); 또는 X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함한다 (표 3 참조).
추가적인 구현예에서, 폴리펩타이드는 본 발명의 제1 측면의 임의 구현예에 따른 X1 및 X2 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 X1은 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X3 및 X1 (존재하는 경우)은 각각 α-나선 도메인이다.
일 구현예에서,
X1은, 존재하는 경우, 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X2는, 존재하는 경우, 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X3는 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
제8 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제2 측면에 대한 임의 구현예에서 본원에 정의된 바와 같은 X3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 폴리펩타이드는 본 발명에 제2 측면에 대한 임의 구현예에서 정의되는 X1 도메인은 포함하지 않는다. 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는, 예를 들어 본원의 제6 측면에 따른 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질을 제작하는데 이용할 수 있다. 일 구현예에서, X3 도메인은 아미노산 12-20개 길이이고, X3는 하기 아미노산 서열을 포함한다:
- 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열; 또는
- 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열.
다른 구현예에서, X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함한다. 추가적인 구현예에서, 폴리펩타이드는 본원의 제2 측면에 대한 임의 구현예에 따른 X4 및 X5 도메인을 포함한다. 다양한 구현예들에서, X5는 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열 또는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함한다. 추가적인 구현예에서, X3 및 X5 (존재하는 경우)는 각각 α-나선 도메인이다.
일 구현예에서:
X5는, 존재하는 경우, 서열번호 110-180 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
X4는, 존재하는 경우, 서열번호 110-180 중 어느 하나에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
X3는 서열번호 110-180 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 제7 또는 제8 측면에 따른 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에 부가된 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 임의의 적절한 기능성 도메인(들)은, 비-제한적으로, (혈청 반감기를 개선하기 위해) 알부민, 표적화 도메인, 수용체 표적화 도메인, 형광 단백질과 같은 분자 프로브, 검출 또는 정제를 보조하기 위한 폴리펩타이드 서열 (비-제한적으로, 폴리히스티딘 태그 등), 다양한 유기체들 (비-제한적으로, 에스케리키아 콜라이 (Escherichia coli), 바실러스 섭틸리스 (Bacillus subtilis), 사카로마이세스 세레비지애 (saccharomyces cerevisiae), 클루베로마이세스 락티스 (Kluyveromyces lactis), 스피룰리나 (spirulina) 또는 포유류 시스템)에서 분비 또는 발현 강화를 달성하기 위한 N-말단 폴리펩타이드 서열 등의 의도한 목적에 적합한 경우에 따라 부가될 수 있다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 C-말단에 부가된 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함한다.
추가적인 구현예에서, 본원의 임의 구현예 또는 측면에 따른 제1 폴리펩타이드, 제2 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드는 표적화 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 폴리펩타이드는 대상 표적에 대한 것일 수 있다. 표적화 도메인은 제1 폴리펩타이드, 제2 폴리펩타이드, 및/또는 폴리펩타이드에 공유 또는 비-공유 결합할 수 있다. 표적화 도메인이 비-공유 결합된 구현예에서, 이러한 비-공유 결합에 적합한 임의의 수단, 비-제한적으로, 스트렙타비딘-바이오틴 링커를 이용할 수 있다.
다른 구현예에서, 표적화 도메인은, 존재하는 경우, 폴리펩타이드, 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드와의 번역 융합체이다. 이러한 구현예에서, 폴리펩타이드와 표적화 도메인은 상호 번역 융합체로 직접 연결되거나, 또는 의도한 목적에 적합한 폴리펩타이드 링커를 통해 연결될 수 있다.
표적화 도메인은 대상 표적에 결합하는 폴리펩타이드 도메인 또는 소분자이다. 비-제한적인 일 구현예에서, 표적화 도메인은 세포 표면 단백질에 결합하며; 이러한 구현예에서, 세포는 적절한 표적화 도메인에 의해 결합될 수 있는 표면 단백질을 가진 임의의 대상 세포 타입일 수 있다. 일 구현예에서, 세포 표면 단백질은 장 상피 세포, 연골 세포 또는 각질 형성 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포의 표면에 존재한다.
다른 구현예에서, 표적화 도메인은 세포외 매트릭스 (ECM)의 구성성분에 결합하고; 이러한 구현예에서, ECM 구성성분은 콜라겐, 엘라스틴 또는 히알루론산으로 구성될 수 있다.
본 발명에 대한 모든 구현예들에서, 표적화 도메인은 대상 표적에 결합하는 임의의 적합한 폴리펩타이드일 수 있으며, 본 발명의 폴리펩타이드에 통합될 수 있다. 비-제한적인 구현예에서, 표적화 도메인은 scFv, F(ab), F(ab')2, B 세포 수용체 (BCR), DARPin, 어피바디 (affibody), 모노바디 (monobody), 나노바디, 다이아바디 (diabody), 항체 (단일 특이성 또는 이중 특이성 항체); 세포-표적화 올리고펩타이드, 예를 들어 비-제한적으로, RGD 인테그린-결합성 펩타이드, 드 노보 설계한 결합제, 앱타머, 이환식 펩타이드, 코노톡신 (conotoxin), 엽산과 같은 소분자 및 세포 표면에 결합하는 바이러스를 포함할 수 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제5 및 제6 측면에 대한 임의 구현예에 따른 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질에 대한 일 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분은 표적화 도메인을 추가로 포함하거나, 및/또는 제2 폴리펩타이드 구성성분은 제2 표적화 도메인을 추가로 포함한다. 제1 표적화 도메인과 제2 표적화 도메인은 의도한 용도에 적합한 것으로 간주되는 경우에 따라 서로 동일하거나 또는 서로 다를 수 있다.
일 구현예에서, 제1 폴리펩타이드 구성성분은 제1 표적화 도메인을 추가로 포함하고, 제2 폴리펩타이드 구성성분은 제2 표적화 도메인을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 제1 표적화 도메인은 존재하는 경우 제1 폴리펩타이드와의 번역 융합체이고, 제2 표적화 도메인은 존재하는 경우 제2 폴리펩타이드와의 번역 융합체이다. 일 구현예에서, 제1 표적화 도메인 및/또는 제2 표적화 도메인은 각각 세포 표면 단백질에 결합한다.
일 구현예에서, 본원에 기술된 측면, 구현예 또는 구현예들의 조합 중 어느 하나에 따른 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드 또는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질은 생물층 간섭측정 표면 플라스몬 공명에 의해 측정한 바에 따르면 50 nm, 25 nm, 10 nm, 5 nm, 1 nm, 0.75 nm, 0.5 nm, 0.25 nm, 0.1 nm 또는 그 미만의 결합 친화성으로 hIL-23R에 결합한다. 일 구현예에서, 측정 조건은 후술한 실시예에 상세히 기술되어 있다.
제9 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 구성성분을 2 카피 이상으로 포함하는 다량체를 제공한다. 본 발명의 다량체는 언급된 구성성분을 2 카피, 3 카피, 4 카피, 5 카피, 6 카피, 7 카피, 8 카피, 9 카피, 10 카피 또는 그 이상으로 포함한다. 일부 구현예에서, 다량체는 언급된 동일한 구성성분 2 카피 이상으로 된 번역 융합체를 포함할 수 있으며, 이는 보편적인 가요성 링커 (generic flexible linker)와 같은 선택적인 아미노산 링커에 의해 이격될 수 있다. 다른 구현예들에서, 다량체는 2 이상의 서로 다른 언급된 구성성분들로 된 번역 융합체를 포함할 수 있다. 다른 구현예들에서, 2 이상의 언급된 구성성분들은 그 표면에 언급된 구성성분들을 제시하는 스캐폴드 상에 존재할 수 있다. 임의의 적절한 스캐폴드가, 비-제한적으로, 바이러스-유사 입자 또는 합성 나노카고 등의 2 이상의 상호작용성 서브유닛, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 등의 합성 폴리머, 비드 등을 가진 천연 또는 합성 다량체화 폴리펩타이드 스캐폴드가 이용될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 유전자 암호화될 수 있는 본 발명에 따른 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드 구성성분을 암호화하는 단리된 핵산 등의 핵산을 제공한다. 단리된 핵산 서열은 RNA 또는 DNA를 포함할 수 있다. 이러한 단리된 핵산 서열은, 비-제한적으로, 폴리 A 서열, 변형된 Kozak 서열 및 에피토프 태그 암호화 서열, 유출 신호 암호화 서열, 분비 신호 암호화 서열, 핵 위치화 신호를 암호화하는 서열 및 원형질막 위치화 신호를 암호화하는 서열 등의, 암호화된 단백질의 발현 및/또는 정제를 촉진하는데 유용한 부가적인 서열을 포함할 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자라면, 본 발명의 교시 내용에 기반하여, 어떤 핵산 서열이 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화할 것인지 자명할 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 적절한 조절 서열에 작동가능하게 연결된 본 발명의 임의 측면에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. "발현 벡터"는 유전자 산물의 발현을 구현할 수 있는 임의의 조절 서열에 핵산 암호화 영역 또는 유전자가 작동가능하게 연결된 벡터를 포함한다. 본 발명의 핵산 서열에 작동가능하게 연결되는 "조절 서열"은 핵산 분자의 발현을 구현할 수 있는 핵산 서열이다. 조절 서열은 발현을 지시하는 기능을 수행하는 한 핵산 서열과 인접해야 하는 것은 아니다. 따라서, 예를 들어, 프로모터 서열과 핵산 서열 사이에 전사되지만 번역되진 않는 개입 서열들이 존재할 수 있으며, 프로모터 서열은 여전히 암호화 서열에 "작동가능하게 연결된" 것으로 간주할 수 있다. 다른 이러한 조절 서열로는, 비-제한적으로, 폴리아데닐화 신호, 종결 신호 및 리보솜 결합부를 포함한다. 이러한 발현 벡터는, 비-제한적으로, 플라스미드 및 바이러스-기반의 발현 벡터를 포함한다. 포유류 시스템에서 개시된 핵산 서열의 발현을 인가하기 위해 사용되는 조절 서열은 (비-제한적으로, CMV, SV40, RSV, 액틴, EF 등의 다양한 임의의 프로모터에 의해 구동되는) 구성적 또는 (비-제한적으로, 테트라사이클린, 엑다이손 (ecdysone), 스테로이드-응답성 등의 다수의 임의의 유도성 프로모터에 의해 구동되는) 유도성일 수 있다. 발현 벡터는 숙주 유기체에서 에피솜으로서 또는 숙주 염색에 DNA에 통합됨으로써 복제가능하여야 한다. 다양한 구현예들에서, 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스-기반의 벡터 (비-제한적으로, 레트로바이러스 벡터 또는 종양살상 바이러스) 또는 그외 임의의 적합한 발현 벡터를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 발현 벡터는 치료학적 이점을 위해 폴리펩타이드를 생체내 발현시키기 위해 본 발명의 방법으로 투여할 수 있다. 비-제한적인 구현예에서, 발현 벡터를 이용해 세포를 치료학적 표적으로 형질감염 또는 형질도입 (비-제한적으로, CAR-T 세포 또는 종양 세포)함으로써, 본원에 기술된 치료학적 방법을 구현할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 발현 벡터, 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 다량체 및/또는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공하며, 여기서 숙주 세포는 원핵생물이거나 또는 진핵생물일 수 있다. 세포는, 비-제한적으로 박테리아 형질감염, 인산칼슘 공-침강, 전기천공 또는 리포좀 매개-형질감염, DEAE 덱스트란 매개-형질감염, 다가양이온성 매개-형질감염 또는 바이러스 매개 형질감염 등의 기법을 이용해 본 발명의 발현 벡터를 통합하도록 일시적으로 또는 안정적으로 조작될 수 있다 (예를 들어, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press); Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2 nd Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY) 참조). 본 발명에 따른 폴리펩타이드를 생산하는 방법은 본 발명의 추가적인 일부이다. 본 방법은 (a) 본 발명의 이러한 측면에 따른 숙주를 폴리펩타이드의 발현에 유리한 조건에서 배양하는 단계, 및 (b) 선택적으로, 발현된 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함한다. 발현된 폴리펩타이드는 세포 유리 추출물로부터 회수할 수 있지만, 바람직하게는 배양물 배지로부터 회수한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터 또는 세포, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학적 조성물은 예를 들어 본원에 기술된 방법으로 이용할 수 있다. 약학적 조성물은 (a) 동결보호제; (b) 계면활성제; (c) 증량제; (d) 긴장도 조정제; (e) 안정화제; (f) 보존제, 및/또는 (g) 완충제를 더 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물 내 완충제는 트리스 완충제, 히스티딘 완충제, 포스페이트 완충제, 사이트레이트 완충제 또는 아세테이트 완충제이다. 또한, 약학적 조성물은 동결보호제, 예를 들어 슈크로스, 소르비톨 또는 트레할로스를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 보존제, 예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄, 클로로헥시딘, 페놀, m-크레졸, 벤질 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로부탄올, o-크레졸, p-크레졸, 클로로크레졸, 페닐머큐릭 나이트레이트, 티메로살, 벤조산 및 이들의 다양한 혼합물을 함유한다. 다른 구현예들에서, 약학적 조성물은 글리신과 같은 증량제를 함유한다. 또 다른 구현예에서, 약학적 조성물은 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-40, 폴리소르베이트-60, 폴리소르베이트-65, 폴리소르베이트-80, 폴리소르베이트-85, 폴록사머-188, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레이트, 소르비탄 트리라우레이트, 소르비탄 트리스테아레이트, 소르비탄 트리올레이트, 또는 이들의 조합을 함유한다. 또한, 약학적 조성물은 긴장도 조정제, 예를 들어, 제형을 인간 혈액과 실질적으로 등장성 또는 삼투 등장성 (isoosmotic)으로 만드는 화합물을 함유할 수 있다. 예시적인 긴장도 조정제로는 슈크로스, 소르비톨, 글리신, 메티오닌, 만니톨, 덱스트로스, 이노시톨, 소듐 클로라이드, 아르기닌 및 아르기닌 하이드로클로라이드 등이 있다. 다른 구현예들에서, 약학적 조성물은, 추가적으로, 안정화제, 예를 들어, 대상 단백질과의 조합시, 동결건조된 형태 또는 액체 형태에서 대상 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 실질적으로 낮추거나 또는 방지하는, 분자를 함유한다. 예시적인 안정화제로는 슈크로스, 소르비톨, 글리신, 이노시톨, 소듐 클로라이드, 메티오닌, 아르기닌 및 아르기닌 하이드로클로라이드 등이 있다.
본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터 또는 세포는 약학적 조성물에서 단독 활성 물질일 수 있거나, 또는 조성물은 의도한 용도에 적합한 하나 이상의 다른 활성 물질을 추가로 포함할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터, 세포 또는 약학적 조성물을 장애를 치료하는데 유효한 함량으로 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환 (IBD) (비-제한적으로, 크론 질환 및 궤양성 대장염 등), 건선, 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 골관절염, 축성 및 말초 척추관절염, 강직성 척추염, 부착부위염 및 건염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에 사용된 바와 같이, "치료한다" 또는 "치료하는"은 (1) 장애의 중증도 저하; (b) 치료 중인 장애(들)의 특징적인 증상의 발생 제한 또는 방지; (c) 치료 중인 장애(들)의 특징적인 증상의 악화 저해; (d) 이전에 장애(들)에 걸린 적 있는 환자에서 장애(들)의 재발 제한 또는 방지; 및 (e) 장애(들)에 대한 증상을 이전에 경험한 환자에서 증상의 재발 방지 또는 방지 중 하나 이상을 달성하는 것을 의미한다.
개체는 관련 장애를 앓고 있는 임의의 개체일 수 있다. 일 구현예에서, 개체는 포유류이며, 비-제한적으로, 인간, 개, 고양이, 말, 소 등을 포함한다.
실시예
본 발명자들은 IBD에 대한 새로운 경구, 장-제한적인 치료 방식을 나타내는 IL-23 수용체 (IL-23R)를 표적으로 하는 컴퓨터를 이용해 설계된 매우 안정적인 펩타이드를 개발하였다.
본 발명에서, IL-23R 길항제를 설계하기 위해, 본 발명자들은 IL-23 사이토카인으로부터 유래한 천연 핫스팟과 컴퓨터 계산으로 결정된 추가적인 핫스팟을 매우 안정적인 드 노보 설계한 미니단백질 스캐폴드에 삽입하였다. 본 발명자들은 장액을 모방하는 조건에서 단백질 분해 안정성 및 친화성을 추가로 강화하기 위해 효모 표면 디스플레이 (YSD)에 의한 유도 진화를 이용하였다. IL-23-매개 세포 신호전달에 대한 저해를 검증하기 위해, IL-23R에 대한 안정성 및 친화성이 가장 높은 저해제를 시험관내 검사하였다.
결과
컴퓨터를 이용한 설계는 IL-23R에 대한 낮은 나노몰 저해제를 입수한다
IL-23은 IL-23에 고유한 p19 서브유닛과 IL-12와 공유되는 p40 서브유닛으로 구성된 이형이량체 사이토카인이다. IL-23 수용체는 마찬가지로 고유한 서브유닛 IL-23R과 공유되는 서브유닛인 IL-12RB1을 포함하는 이형이량체이다. IL-12와 IL-23은 사이토카인과 수용체의 서브유닛을 공유하고 있지만, 염증 및 면역에서 고유한 역할을 담당한다. IL-12는 Th1 세포의 분화를 촉진하여 IFNg의 생산을 자극하는 반면, IL-23은 Th17 세포의 분화 및 유지를 촉진하고 IL-17의 생산을 자극한다. 최근 연구에서, IL-23은 병원성 자가염증을 유발하는 반면 IL-12는 그렇지 않은 것으로 확인되었으며, IL-23의 고유한 p19 서브유닛을 표적으로 하는 항체가 IL-12/23에 공유된 p40 서브유닛을 표적으로 하는 STELARA®보다 자가염증 질환을 치료하는데 더 효과적이고 안전한 것으로 실제 입증되어 있다.
IL-23R (PDB 5MZV)와의 복합체에서 IL-23 이형이량체의 결정 구조는 IL-23R의 소수성 표면과 상호작용하는 4-나선 번들 p19 서브유닛의 사이트 III를 보여준다. p19와 경쟁하는 IL-23R 저해제를 설계하는 제1 단계로서, 설계에 삽입하기 위한 핫스팟으로서 p19 잔기 W156을 선택하였다 (도 1A). 전형적인 단백질-단백질 상호작용시 비노출 표면적 (buried surface area)이 >1,000 A2이므로, 회전체 상호작용 필드 (RIF), 즉 네이티브 핫스팟을 보완하고 상호작용 표면을 연장하기 위해 IL-23R 표면 잔기와 유리하게 상호작용하는 노출 잔기 (disembodied residue)를 컴퓨터를 이용해 생성하였다 (도 1B). 다음으로, 다양한 토폴로지와 실험적으로 검증된 안정성을 가진 드 노보 설계한 미니단백질 수천개를, 네이티브 Trp 핫스팟 및 부가적인 드 노보 핫스팟을 통합시켜, IL-23R 표면에 도킹하였다 (도 1C). 그런 후, 입력값으로서 각 도킹된 구성을 이용해, RosettaTM 분자 모델링 슈이트로 IL-23R 계면 내 스캐폴드 잔기를 고-친화성 결합에 우호적인 측쇄로 돌연변이화 하였다 (도 1D). 네이티브 핫스팟과 드 노보 핫스팟, 스캐폴드 소수성 코어 내 스캐폴드 잔기, 그리고 IL-23R 계면으로부터 멀리 떨어진 스캐폴드 잔기에는 돌연변이 허용하지 않았다. 수득한 설계 저해제 후보 물질들은 컴퓨테이셔널 메트릭스 (computational metrics)에서 높은 결합 친화성 및 저해제 단량체 안정성 예측을 염두하여 필터링하고, 우수한 15,000종에 대해 이를 암호화하는 유전자를 상업적으로 합성한 다음 표면 디스플레이를 위해 효모에 형질전환하였다. 형광-활성화된 세포 분류 (FACS)를 연속적으로 수회 수행하여 표지된 재조합 인간 IL-23R (hIL-23R) 결합에 대하여 효모를 선별하였다. 나이브 풀과 분류한 풀을 차세대 서열분석 (NGS)으로 분석하고, 상대적인 농화 또는 고갈에 따라 설계들의 순위를 매겼다. 가장 농화된 설계 서열은 표 10에서 확인할 수 있다.
표 10. 농화된 컴퓨터를 이용해 설계한 서열들
>23R_A
MESEKYLRELVKKYYEGKLSVQEAVEEVRKYARKKGLEAWMLTWMFMELVKRYI (서열번호 75)
>23R_B
NLWQIFYQLSTILKRTGDPTAKKLLKALAEALKKGDEKALKELAKKATKYIRS (서열번호 76)
>23R_C
PEELRRRVEHFLRQGVERWMVMWMLIQQGFDNKEVWKVLQEVL (서열번호 77)
>23R_D
ELWFLMALVIAACLWAWKASNVEEAEEALWWALVMAREANMRQLEEFVKRMREEVRRHL (서열번호 78)
>23R_E
DVVVLLGLVIVIPERWRLWLIVVIAARVMGLRVEVHGHVIIVI (서열번호 79)
>23R_F
TVVIINGVPFWFEFLWELFIFALLMALALGLKIEFHGELIEVK (서열번호 80)
>23R_G
TPARELVRELVALALLIAVLRNDIVRLTLDVQGFKITVDVDAHWEAFVRILLLAEILVLEWLKG (서열번호 81)
>23R_H
DWRELMLVWMALWWIWWAFLAGVPLIVEVVVNGLHFRVIVDRDPTTNKRALDIMLWVWEWLATL (서열번호 82)
>23R_I
GRWELLVLAYLALLLGAAEAVWRLLELAKKLGDEMAFRWILELWERAL (서열번호 83)
설계 2종, 23R_A (서열번호 10) 및 23R_B (서열번호 110)가 최종 선별 풀에서 강하게 농화되었으며, 이를 생화학적으로 추가로 특정하기 위해 선택하였다. 이들 2종은, IL-23R 잔기 D118이 p19의 αD 나선과 유사하게 Trp 핫스팟의 유리 백본 아민과 나선-캡핑 수소 결합을 형성하도록 나선의 N-말단에 네이티브 Trp 핫스팟이 병합된, 3-나선 번들 (각각 잔기 54개 및 53개)이다 (도 1D). 이들 2종에서, 가운데 결합 나선은 p19에 비해 부가적인 드 노보 핫스팟에 의해 매개되는 hIL-23R과 더 넓은 상호작용 표면을 가진다. 다른 나선 2개는 가운데 결합 나선을 안정시키고, hIL-23R과 추가적인 접촉을 형성한다. 설계 2종은 E. coli에서 발현시키고, (6-히스티딘 태그를 이용한) 고정된 금속 친화성 크로마토그래피로 정제하고, 추가적으로 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생물층 간섭측정으로 결합을 적정한 결과, 23R_A 및 23R_B는 hIL-23R에 각각 친화성 26±1 nM 및 70±50 nM으로 결합하였다 (도 2A, E). 이들 디자인 2종은 원이색법 (CD)에 의해 고온 및 화학 변성제 고농도에서 매우 안정적인 것으로 입증되었다 (도 2B).
시험관내 진화의 초기 라운드에서 친화성이 낮은 pM까지 1000배 강화된다.
본 발명자들은 컴퓨터를 이용한 설계만으로도 낮은 나노몰의 친화성을 성공적으로 달성하였지만, 더 높은 친화성은 수용체에 1.7 nM에서 결합하는 IL-23 사이토카인과의 경쟁을 개선할 것이다. 이에 23R_A 및 23R_B를 더 높은 hIL-23R 친화성으로 진화하기 위해, 심층 돌연변이 스캐닝을 수행하였다. 오리지널 설계에 기초하여, 각각의 가능성 있는 단일-위치 돌연변이를 나타내는 부위 포화 돌연변이 유발 (SSM) 라이브러리를 표면 디스플레이를 위해 효모에 형질전환하고, hIL-23R 결합에 대해 FACS에 의해 2회 선별하였다. SSM 나이브 풀 및 분류한 풀에 대한 NGS로 각 돌연변이에 대한 결합 적합성을 계산할 수 있었다. 서열 적합도 지형도는 도 8A (23R_A) 및 8B (23R_B)에서 볼 수 있다. 서열 적합도 지형도는, 설계 모형에서 IL-23R과 상호작용하는 위치들이 비-상호작용 위치들보다 엔트로피가 더 높고 네이티브 Trp 핫스팟 (23R_A의 경우 W40, 23R_B의 경우 W3)이 고도로 보존되어 있어, 설계한 결합 방식을 검증해주었다.
친화성을 추가로 강화하기 위해, 이전에 조합 라이브러리에서 결합을 강화하는 것으로 알려진 돌연변이를 통합하였으며, 이는 6회 라운드로 수렴하기 위해 hIL-23R 결합을 분류한 것이었다. 최종 선택 풀을 고체 배지에 도말하고, 각 클론을 서열분석하였다. 최종 선택한 풀에서 확인된 고유한 조합 변이체 26종 (서열번호 11-24 및 111-122)을 E. coli에서 발현시키고, 생물리학적으로 추가로 특정하기 위해 선별하였다.
변이체들을 먼저 상대적인 결합성에 대해 생물층 간섭법 (BLI)으로 스크리닝하였다. hIL-23R을 BLI 센서 팁에 고정하고, 일정한 농도 (50 nM)에서 용액 중의 각 변이체에 대해 결합을 측정함으로써 변이체의 상대적인 성능을 정성적으로 결정하였다. 성능이 우수한 변이체의 경우, 결합 상수 (kon 및 koff를 포함한 KD)를 BLI 적정 실험으로 트리플리케이트로 정량적으로 결정하였다. 최상의 조합 변이체들은 IL-23R에 대해 50-400 pM 친화성으로 결합하였으며, 즉 컴퓨터 설계에 비해 약 500배 개선되었으며 (도 2C), 열 및 화학적 변성제에 대해 우수한 내성을 유지하였다 (도 2D).
고온에 대한 내성은 제조 및 보관에 중요하고, 화학적 변성제에 대한 내성은 전체 안정성을 대표하므로, 임의의 경구 장-제한성 IL-23R 저해제는 바람직하게는 높은 산도 및 생리학적 프로테아제 등의 위장관의 혹독한 환경에서도 살아남아 작용 부위까지 온전하게 도달할 것이다. 이에, 경구 투여 타당성을 확인하기 위해, 프로테아제 펩신을 포함하는 모의 위액 (SGF) pH2과 프로테아제 트립신 및 키모트립신을 포함하는 모의 장애 (SIF) pH6.5에서 설계한 IL-23R 저해제의 안정성을 직접 평가하였다. 단백질 분해는 최대 24시간 경과시 SDS PAGE에 의해 정성적으로 평가하였다. 친화성이 가장 높은 조합 변이체는 SGF에서 t1/ 2 약 45분으로 생존하였고, SIF에서는 t1/2 15분 미만으로 생존하였다 (도 3).
컴퓨터 계산으로 설계한 이황화물 가교 및 시험관내 진화는 단백질 분해 및 열 안정성을 강화한다
단백질 분해 안정성을 개선하기 위해, 분자간 이황화물(들)(서열번호 25-32 및123-129)로 가교된 저해제 변이체를 컴퓨터 계산으로 설계하였다. 최종 풀에서 서열분석한 조합 변이체 모두 이황화물을 최대 2개 가진 것으로 모델링 되었으며, 이황화물 기하구조에 대해 필터링하였다. 최상의 설계들은 E. coli에서 발현시키고, BLI에 의해 결합을, 그리고 SGF 및 SIF 소화 및 CD에 의해 안정성을 스크리닝하였다. 이황화물-가교된 변이체들은 대체로 hIL-23R에 대해 KD 130-460 pM의 높은 친화성을 유지하였으며 (도 2E), 가장 안정적인 것은 SGF t1/2 >24시간, SIF t1/ 2 약 1시간으로 유의한 안정성 개선 역시 관찰되었으며, 열 및 화학적 변성에 대한 내성 역시 향상되었다 (도 3).
저해제 서열을 SIF 안정성에 대해 추가로 최적화하기 위해, YSD를 이용한 시험관내 진화를 수행하였다. 가장 안정적인 이황화물-가교된 변이체에 기반하여 SSM 라이브러리를 제작하였다. 효모 라이브러리를 먼저 SIR에서 30℃에서 인큐베이션한 다음 잘 헹군 후 표지된 hIL-23R과 함께 인큐베이션하였으며, 최고 결합 신호 (상위 1-5%)를 나타낸 세포를 FACS에 의해 수집하였다. 각 라이브러리에 대해 선별 라운드를 2회 수행하였으며, SIF 인큐베이션 시간 및/또는 프로테아제 농도는 제1 라운드 대비 제2 라운드에서 증가시켰다. 이전 실험에서와는 달리, Myc 태그가 절단되어 효모 표면에 결합-적격 저해제를 남길 수 있으므로, C-말단 Myc 태그를 통해 평가하는 저해제 발현에 대해서는 분류하지 않았다. 실제, 여러 라이브러리에서, 대규모 Myc-음성, 결합-양성 세포 집단이 관찰되었다. 동시에, SIF에서 예비 인큐베이션하지 않고 hIL-23R 결합에 대해서만 선별 라운드를 2회 수행하였다. NGS 분석을 통해 친화성 및 안정성을 강화하는 돌연변이를 동정하였으며 (도 9 및 10), 선택한 돌연변이 몇몇을 E. coli에서 발현시켜 특정화하였다 (서열번호 63-69 및 130-134). 또한, NGS 분석 결과, B04dslf02는 첫번째 나선을 지나 다수의 여러 위치들에서 절단될 수 있으며, hIL-23R 결합력을 유지하는 것으로 입증되었다 (서열번호 165-180). 가장 우수한 돌연변이를 조합 라이브러리에 포함시켰으며, 상기와 같이 5-7회 분류한 다음 개별 클론을 서열분석하였다. 최종 분류에 남아있는 변이체를 E. coli에서 발현시켜, 특정화하였다 (서열번호 70-74 및 153-164).
유도 진화는 모 설계 rA11dslf02 및 B04dslf02의 SIF 내성을 현저하게 개선하였다 (도 4). 모의 장액에 대해 발표된 수종의 포뮬레이션들은 다양한 단백질 분해 활성을 보이며, 인간 장액의 프로테아제 활성은 충분히 연구되어 있지 않다. 따라서, SIF 안정성에 대한 벤치마크로서, 본 발명자들은 본 발명의 설계를 현재 크론 질환에 대해 2상 임상 시험 중인 TNFa의 경구 장-제한성 나노바디 저해제인 V565-38F와, 24시간 동안 분자를 분해하기에 충분한 효소 농도를 가진 SIF에서 직접 비교하였다. V565-38F와 비슷하거나 또는 더 우수한 단백질 분해 안정성을 가진 설계 변이체들은 경구 요법을 가능하게 할 정도로 충분히 안정적일 가능성이 있다. SIF 안정성 강화를 위해 선택한 돌연변이는 SIF t1/2가 rA11dslf02 60분에서 4-24시간 (변이체 rA11dslf02_M1P_R8Q_K35W [서열번호 69])으로, SIF t1/2가 B04dslf02 5-15분에서 30-60분 (변이체 B04dslf02IB [서열번호 161])으로 실제 개선되었다. 경구 나노바디 V565-38F와 비교한 경우, rA11dslf02_M1P_R8Q_K35W는 SIF에서와 마찬가지로 안정적이고, SGF에서는 훨씬 더 안정적이었는데; 이러한 결과는 V565-38F에 대해 보고된 SGF 및 SIF 안정성과 일치하였다. 이들 진화 변이체 2종은 SGF에서 t1/2 4-24시간으로 높은 내성을 유지하였다. 표면 플라스몬 공명 (SPR)으로 hIL-23R에 대한 결합 친화성을 측정하였으며; rA11dslf02_M1P_R8Q_K35W의 KD는 75 pM, B04dslf02IB의 KD는 <1 pM이었다 (해리 속도가 매우 느려 장치로 정확하게 측정할 수 없었음).
병행하여, 랫 및 마우스 IL-23R (rIL-23R, mIL-23R)에 대한 결합 친화성이 강화된 저해제를 제작하였다. 가장 우수한 인간 IL-23R 저해제는 인간 및 랫 IL-23R에 비슷한 친화성으로 시험관내 결합하는 반면, 마우스 상동체에 대해서는 미미한 수준으로 결합하였다. 이는 인간 및 랫 IL-23R에는 결합하지만 마우스 IL-23R (mIL-23R)에는 결합하지 않는, PTG 화합물 C와 일치하였다. 경구 투여하는 IL-23R 저해제가 대장염을 치료할 수 있다는 개념의 증거로서, 본 발명자들은 랫 및 마우스 대장염 모델에서 설계한 저해제를 관련 대조군과 비교하고자 계획하였다. 공교롭게도, 화학적으로 유발한 대장염 모델 (TNBS, DSS)만 랫에서 쉽게 이용가능하였으며; 이들 모델은 실험에서 그리고 실험들 간에 변동성이 큰 경향이 있었다. 마우스 IL-23R을 강하게 차단하는 저해제의 구축으로, 랫이 아닌 마우스에서만 쉽게 이용가능한 자가반응성 T 세포 전달 및 Mdr1a KO 모델과 같은, IL-23에 대한 의존성이 입증된 보다 일관적이고 생리학적으로 관련있는 질환 모델에 접근할 수 있다. 이에, 랫 및 마우스 실험을 위한 가장 강력한 분자를 제작하기 위해, 기존 hIL-23R-표적화 라이브러리에서 rIL-23R 및 mIL-23R 결합성이 강화된 변이체를 스크리닝하였다. 최상의 조합 변이체 (서열번호 33-46, 135-149)는 세포내 이황화 결합(들)을 가지도록 컴퓨터 계산에 의해 변형하였다 (서열번호 47-62, 150-152). 히트 (hit)는 전술한 바와 같이 rIL-23R, hIL-23R 또는 mIL-23R에 대한 친화성 및 안정성에 대해 유도 진화에 의해 추가로 최적화하였다 (도 10). 안정성 및 mIL-23R 친화성에 대한 최적화 후 최상의 mIL-23R 저해제, mB09dslf01-T48I는 SGF 및 3x SIF 둘다에서 안정적이었으며, t1/2 값이 24시간보다 길었다 (도 4).
C-말단 친화성 태그는 B04dslf02IB의 단백질 분해 안정성을 강화한다
만성 질환을 치료하는 경구 투여 요법에서는 제품의 저렴한 비용이 매우 중요하다. 이에, 본 발명자들은 설계한 IL-23R 저해제의 N-말단 및 C-말단 중 어느 하나 또는 양쪽에 다양한 펩타이드 태그를 포함시켜, 다양한 유전자 및 단백질 서열들의 E. coli 발현 역가 개선을 검사하였다. N-말단 6-히스티딘 태그는 그렇지 않았지만 C-말단 6-히스티딘 태그 부가는 B04dslf02IB의 단백질 분해 안정성을 크게 강화하였으며, 효력에는 영향이 없었다 (도 5).
53- 잔기 저해제들은 조직 침투를 개선하도록 컴퓨터 계산에 의해 최소화될 수 있다
여러가지 생물물리학적 특징이 장 투과성, 특히 분자량에 영향을 미친다. 만일 저해제의 크기를 추가로 줄인다면 염증이 있는, 아마도 심지어 건강한 장 조직에서 보다 나은 조직 침투를 달성할 수 있다. 이를 위해, 분자량 0.8 내지 4 kDa에 해당하는 잔기 7-32개로 이루어진 hIL-23R 저해제를 컴퓨터 계산에 의해 설계하였다. 가이드로서 53-잔기, 고-친화성 조합 변이체의 모델로부터 착수하여, 여러가지 설계 방식을 이용하였다 (도 6): (i) 네이티브 Trp와 하나 이상의 드 노보 핫스팟이 포함된 1차 결합 나선으로부터 6 내지 14-잔기 모티프를 단리한 다음 MotifGraftTM 프로토콜을 사용해 이 모티프를 구조적으로 검증된 26 내지 32-잔기 스캐폴드에 임의의 수용 위치에 배치하고, (ii) (i)에서와 유사한 11-잔기 나선 모티프에서 착수하여, N-말단 시스테인과 C-말단 시스테인 간의 이황화물에 의해 가교된 나선 2개를 가진, 모티프에 역평행한 제2 드 노보 나선을 구축하고, (iii) 유도 진화 중에 보존된 드 노보 핫스팟과 네이티브 Trp 핫스팟을 단리하고, 추가적으로 새로운 드 노보 핫스팟을 생성한 다음, 추가적으로 N-말단 시스테인과 C-말단 시스테인 간의 이황화물에 의해 가교된 컴퓨터 계산에 의해 제작한 7 내지 13-잔기 펩타이드에 도킹하였다. 결합 계면을 설계하고, 저해제 후보 물질을 전술한 바와 같이 필터링하였으며, 최상의 후보 물질에 대한 유전자를 합성하여 hIL-23R 결합에 대해 FACS에 의해 스크리닝하기 위해 효모에 형질전환하였다. 최종 FACS에서 가장 농화된 설계들은 서열번호 181-198에 열거된다. 최종 FACS 분류에서 가장 농화된 설계 (23R_mini_14 및 23R_mini_17)를 기반으로 하여, 전술한 바와 같이 SSM 라이브러리를 구축하고, SIF 및 표지된 hIL-23R에서의 순차적인 인큐베이션에 의해 안정성 및 친화성을 스크리닝하였다 (도 11). 조합 라이브러리는 상기와 같이 제작하였으며, 마찬가지로 분류하였다. hIL-23R 친화성 및 안정성에 대해 가장 농화된 최상의 23R_mini_14 및 23R_mini_17을 기반으로 하는 조합 변이체는 서열번호 199-228에 열거한다. hIL-23R 결합에 대한 단일 돌연변이 적합성에 기초하여, 구조체 23R_mini_14 및 23R_mini_17의 위치별 허용가능한 잔기를 (1) 모의 장액으로 전처리하지 않거나 또는 (2) 전처리하여, 유도 진화 중에 결정하였다 (SIF; 각각 도 11A 및 11B 참조). 1차 선별에서 나이브 풀 대비 적어도 2배 농화된 돌연변이들은 모두 허용가능한 것으로 간주하였으며, 각각 표 8 및 9에 제시하였다.
설계한 저해제는 IL-23-매개 세포 신호전달을 시험관내 차단한다
다음으로, IL-23-매개 세포 신호전달을 차단하는 IL-23R 저해제의 능력을 조사하였다. 루시퍼라제 발현이 하류에 연결된 IL-23R을 발현하는 리포터 세포에 저해제 또는 대조군을 전처리한 다음 일정한 농도의 인간 IL-23 사이토카인으로 자극하였다. 선형 회귀를 이용해 용량 반응을 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. 본 발명의 저해제를 본 분석에서 PTG 화합물 C와 직접 비교하였으며, 16 내지 480배 높은 효력이 입증되었다 (도 7).
고찰
본 발명에서, 본 발명자들은 IBD에 대한 경구 장-제한성 요법으로서 매우 강력한 IL-23R 저해제에 대한 드 노보 설계와 시험관내 최적화를 기술한다. 본 발명의 저해제는 hIL-23R에 피코몰 친화성으로 결합하여, PTG 화합물 C에 비해 IL-23-매개 세포 신호전달을 훨씬 강력하게 저해하였다. 본 발명의 저해제는 높은 열, 화학적 변성, 산 및 생리학적 프로테아제에 내성을 나타내며, 이는 표적 약물 제형을 이용해 경구 투여 후 염증이 발생한 장까지 온전하게 수송할 수 있음을 의미한다.
재료 및 방법
hIL -23R을 표적으로 하는 저해제에 대한 컴퓨터 계산에 의한 설계
본 발명자들은 설계의 출발점으로서 IL-23p19 및 IL-23p40 (PDB 5MZV)과 복합체를 형성한 인간 IL-23R의 결정 구조를 이용하였다. IL-23-특이적인 수용체 서브유닛으로서 IL-23R에 결합하여, IL-23-특이적인 사이토카인 서브유닛으로서 IL-23p19와의 상호작용을 저해하고자 하였다. 결정 구조로부터, 먼저 IL-23R 및 p19 네이티브 핫스팟 L56, W156, L160 및 L161을 단리하였다. 네이티브 핫스팟을 보완하기 위해, 선택한 IL-23R 잔기에 대해 하기 등의 대상 표면 근처에서 드 노보 핫스팟의 회전체 상호작용 필드 (RIF)를 구축하였다:
G24, I25, T26, N27, I28, N29, C30, S31, G32, H33, I34, V36, T40, I50, A54, A55, I56, K57, N58, C59, Q60, P61, K63, L64, H65, F66, Y67, K68, N69, G70, I71, K72, P95, H96, A97, S98, M99, Y100, C101, T102, A103, E104, C105, P106, K107, H108, F109, Q110, E111, T112, L113, I114, C115, G116, K117, D118, I119, S120.
측쇄 원자가 소정의 IL-23R 표면 잔기와 우호적인 극성 및 무극성 상호작용을 형성하도록 RIF 잔기 (노출 아미노산 측쇄)를 생성하였다.
동시에, 스캐폴드 단백질 12,345종 (실험적으로 검증된 안정성을 가진 불활성의 드 노보 설계한 단백질)을 PatchDock를 이용해 설계한 IL-23R 상호작용 표면에 대략적으로 배치하였다. RIF 구축 및 초기 스캐폴드 배치를 수행한 후, 네이티브 핫스팟 (선호 순서: W156, L161, L56, L160)의 백본 원소를 각 스캐폴드 단백질의 적절한 백본 원소와 매칭시켜 스캐폴드 위치에서 기존 아미노산을 치환하도록, 스캐폴드를 IL-23R 상호작용 표면에 높은 해상도로 도킹하였다. 이전에 컴퓨터를 이용해 최저 단량체 자유 에너지에 대해 최적화한 기타 스캐폴드 잔기들은 모두 유지하였다. 이 단계로 도킹된 구성 130,343개가 구축되었다.
각 도킹된 구조를 입력값으로 RosettaTM 설계 프로토콜에 입력하여, IL-23R 계면에서 추가적인 스캐폴드 잔기를 대상으로 고-친화성 결합에 대해 최적화하였다. IL-23R 표면 8 Å 이내의 스캐폴드 잔기들에만 돌연변이를 허용하였다. 8 Å 보다 먼 표면에 위치한 스캐폴드 측쇄에는 돌연변이를 허용하지 않았으며, 회전체 입체구조의 최적화만 허용하였다. 스캐폴드의 8 Å 이내에 위치한 IL-23R 잔기들은 회전체 입체구조 최적화를 허용하였다. 8 Å보다 멀리 위치한 모든 IL-23R 및 스캐폴드 백본 원소, 전체 스캐폴드 단량체 코어 측쇄 및 IL-23R 측쇄에는 이동 허용하지 않았다.
설계한 IL-23R:저해제 복합체들을, 비-제한적으로 저해제 단량체 자유 에너지, 결합 에너지, IL-23R 표면에서 저해제의 형태 상보성, 계면에서 비노출 무극성 표면적 및 비노출 비-충족 극성 원자 등의, 고-친화성 결합 예측을 염두하면서 메트릭스에서 필터링하였다.
효모 라이브러리 제조, 선별 및 분석
DNA 준비
초기 설계 라이브러리를 암호화하는 DNA를 상업적으로 합성하였다 (Agilent). 부위 포화 돌연변이 유발 (SSM) 라이브러리를 위해, 일부 경우에, 전장 유전자를 상업적으로 합성하고 (Agilent), 다른 경우에는 기존에 기술된 바와 같이 커스텀 프라이머 (Integrated DNA Technologies)를 이용한 중첩 PCR로 라이브러리를 제작하였다.25 조합 라이브러리는 커스텀 올리고로부터 유전자 조립에 의해 제작하였으며; 올리고는 포함된 모든 돌연변이를 개별적으로 나타내거나 또는 2 이상의 원하는 돌연변이를 암호화하는 축중 코돈으로서 설계하였다. 올리고 중첩 영역은 최소 12 bp 길이이며, 최소 용융 온도는 40℃로, 효율적인 유전자 조립이 가능하였다.
초기 설계 라이브러리, SSM 라이브러리 및 조합 라이브러리 등의 모든 효모 라이브러리는, 효모 발현 및 Aga2p에의 융합에 의한 표면 디스플레이를 위해 플라스미드 백본 (pETCON)과 상동적인 재조합을 달성할 수 있도록 >20 bp오버행으로 제작하였다.26 친화성-성숙화를 위한 초기 SSM 라이브러리 및 조합 라이브러리의 경우에는, 발표된 pETCON3 벡터를 이용하였다. 모의 장액 (SIF)에서 안정성 강화를 목표로 제작한 SSM 라이브러리 및 조합 라이브러리의 경우, Aga2p 및 Myc-태그의 단백질 분해 안정성을 강화하도록 최적화된 pETCON 변이체를 이용하였다.
형광-활성화된 세포 분류 ( FACS )
효모 균주 EBY100에 각 라이브러리 및 벡터를 전기천공에 의해 형질전환하고, 효모 균주 (-ura) 및 형질전환 플라스미드 (-trp)에 대한 최소 선별 배지에서 배양하였다.27 2% 갈락토스를 첨가하여 발현을 유도하였다. 항-Myc-FITC (Immunology Consultants Laboratory) 접합체를 이용해 표면 발현을 검출하고, 바이오틴화된 IL-23R에 대한 결합을 스트렙타비딘-PE (Invitrogen)로 검출하였다.
초기 설계 라이브러리와, 친화성-성숙에서만 의도되는 SSM 및 조합 라이브러리 (안정화 강화하기 전)를 다음과 같이 선별하기 위해 제조하였다: 16-24시간 유도한 후, 효모를 스핀 다운시켜 PBS + 1% FBS (PBSF)로 헹구고, 소정의 농도의 바이오틴화된 표적과 함께 30-60분간 인큐베이션하였다. 그런 후, 효모를 PBSF로 헹구고 염색 용액 (1:100, 각 항-Myc-FITC 및 스트렙타비딘-PE)과 함께 2-5분 인큐베이션한 다음 FACS에 의한 분석 및 선별을 위해 재현탁하였다. FACS 연속 게이트는 다음과 같이 설정하였다: (1) 효소 세포를 선별하는, 세포 입상 (cell granularity) 및 크기 (BSC vs. FSC); (2) 싱글렛을 선별하는, 세포 형태 (FSC-높이 vs. FSC-폭); (3) Myc-태그 이용에 의해 발현체 (expressor)를 선별하는, 발현 (FITC 형광 히스토그램); 및 (4) 전체 집단에서 상위 1-5%를 선별하는, 결합 신호 (PE vs. FITC).
SIF SSM 및 조합 라이브러리는 다음과 같이 제조하였다: 16-24시간 유도한 후, 효모를 스핀 다운하여 PBSF로 헹군 다음 SIF (레시피는 하기 참조)에 OD 2.0으로 재현탁하여 30℃에서 교반하면서 30-90분간 언급된 바와 같이 인큐베이션하였다. SIF 소화 후, 세포를 스핀 다운하고, 완전히 헹궈 프로테아제를 제거하도록 각 시점에 상층액을 수동으로 흡인하면서 PBSF 800 ㎕로 4번 헹구었다. 그런 후, SIF-처리 세포에 전술한 바와 같이 표적 단백질을 처리하였다. FACS 게이트를 마찬가지로 설정하였으며, 단 풀의 거의 대부분이 Myc-태그가 절단되어 세포 표면에 결합-적격 설계 변이체만 잔류함을 의미하는 Myc-음성, 결합 (PE)-양성 세포인 것으로 확인된 바, 게이트 3 (발현체)는 제외하였다.
일반적으로, 설계 및 조합 라이브러리를 4-6회 연속 라운드로 수렴 분류하고, SSM 라이브러리는 2회 연속 라운드로 분류한 후 심층 서열분석하였다. 표적 단백질 (인간, 랫 또는 마우스 IL-23R)의 농도는, 최고 친화성 변이체를 효과적으로 분리하기 위해 분류 라운드 진행에 따라 감소시켰다. SIF SSM 및 조합 라이브러리의 경우, SIF 중의 프로테아제 농도 및 소화 기간을 연속 라운드에 따라 증가시켰으며, 표적 농도는 감소시켰다.
심층 돌연변이 스캐닝
SSM 나이브 풀 및 분류한 풀로부터, DNA를 다음과 같이 준비하여 서열분석하였다: 효모는 125 U/ml 자이몰라제를 37℃에서 5시간 동안 처리해 세포용해시키고, DNA를 회수하였다 (ZymoprepTM 키트, Zymo Research 사). 게놈 DNA를 2 U/㎕ 엑소뉴클레아제 I 및 0.25 U/㎕ Lambda 엑소뉴클레아제 (New England Biolabs)로 90분간 30℃에서 절단 처리하고, QIAquickTM 키트 (Qiagen)를 사용해 플라스미드 DNA를 정제하였다. DNA는 MiSeqTM 서열분석기 (Illumina)로 심층 서열분석하였다: 유전자는 플라스미드 내 외측 영역에 어닐링되는 프라이머를 이용해 PCR 증폭시킨 후, Illumina 플로우 셀 올리고뉴클레오티드 및 6 bp 시료 식별 서열 또는 바코드에 어닐링하기 위한 측면 서열을 부가하기 위한 2차 PCR 라운드를 수행하였다. PCR 라운드는 각각 충실도가 높은 PhusionTM 중합효소를 이용한 12 사이클이었다. 바코드를 MiSeqTM 서열분석기에서 300-사이클 또는 600-사이클 시약 키트 (Illumina)를 이용해 판독하고, Enrich (Fowler et al., 2011)로부터 개정된 스크립트로 서열을 분석하였다.
단백질 발현 및 정제
설계한 모든 단백질과 V565-38F를 T7 프로모터로부터 발현시키기 위해 pET29b 플라스미드에 NdeI 및 XhoI 절단 부위 사이에 클로닝하고 하류에 친화성 크로마토그래피를 위한 C-말단 6-히스티딘 태그를 병합하여, 발현시켰다. 구축한 플라스미드를 E. coli에 형질전환하였다: 초기 컴퓨터 계산 설계 및 친화성-성숙화된 조합 변이체의 경우 균주 BL21*(DE3)(Invitrogen), 또는 이황화물을 함유한 모든 구조체의 경우 균주 Shuffle T7 (New England Biolabs). E. coli를 테리픽 브로스 II 배지 (MP Biomedicals)에서 37℃ (BL21) 또는 30℃ (Shuffle T7)에서 OD600까지 배양한 다음, IPTG를 0.5 mM로 첨가하여 배양 온도 또는 18℃에서 밤새 발현 유도하였다. 세포를 회수하여 초음파 처리에 의해 세포용해한 다음 원심분리하여 청징 처리하였다. 청징 처리한 세포용해물을 NiNTA 수지와 30분간 교반하면서 인큐베이션하여, 6-히스티딘 태그를 통해 재조합 단백질을 결합시켰으며, 그 후 이를 중력 컬럼 (Biorad)에 적용하고, 세척 및 용출한 다음 농축한 다음 겔 여과 크로마토그래피 (AKTA Pure, Cytiva; SuperdexTM 75 increase 및 SuperdexTM S200 increase columns, GE Life Sciences)에 의해 추가로 정제하였다.
C-말단 avi 및 his 태그 (각각 효소적 바이오틴화 및 친화성 크로마토그래피)를 가진 커스텀 인간 IL-23R 구조체를 안정적인 곤충 세포주로부터 발현시켜 상업적으로 생산하였다. hIL-23R에 재조합 BirA 효소 (Avidity)를 이용한 효소적으로 바이오틴화하였다. 유사한 랫 IL-23R 구조체도 Expi293 세포에서 일시적으로 발현시켜 생산하였으며, 효소적으로 바이오틴화하였다. 시판 마우스 IL-23R-Fc 융합체 (R&D)는 EZ-Link NHS-LC-Biotin (Thermo Fisher)을 이용해 유리 아민을 통해 화학적으로 바이오틴화하였다.
원이색법
CD 스펙트럼은 J-1500 원이색성 분광기 (JASCO)로 기록하였다. 0-6 M의 구아니디늄 하이드로클로라이드를 첨가하여 MgCl2 및 NaCl 프리 DPBS (Life Technologies) 중에 단백질을 40 μM에서 분석하고, 25℃에서 데이터를 수집하였다. 온도 용융을 위해, 40 μM 단백질을 약 1.5시간에 걸쳐 25℃에서 95℃까지 가열하였다.
생물층 간섭측정
결합 친화성에 대한 정성적 및 정량적 평가를 생물층 간섭측정으로 수행하였다 (ForteBio OctetTM RED96 및 부속 분석 소프트웨어). 효소적으로 바이오틴화된 표적 단백질 (30 nM)을 스트렙타비딘-코팅된 센서 팁에 고정한 다음 다음과 같은 물질이 수용된 웰에 순차적으로 침지하였다: 완충제 단독 (베이스라인), 용액 중의 저해제 (결합) 및 완충제 단독 (해리). 속도 상수를 1:1 결합 모델에 대한 수학적 피팅을 통해 결정하였다.
단백질 분해 안정성 평가
모의 장액 (SIF)은 프로테아제 트립신 및 키모트립신을 각각 30 ㎍/mL로 첨가하여 Jantratid et al. (FaSSIFv2로 지칭)에서 권고된 바와 같이 준비하였다.18 이 조성물은 본문에서 "1x SIF"로 언급하였다. 일부 경우에는, 설계한 단백질 (순수한 재조합 단백질 또는 전술한 효모 라이브러리) 또는 비교 물질 V565-38F는, 최대 기간 (SDS PAGE 실험의 경우 24시간, 유세포 실험의 경우 90분) 동안 최소의 분해가 검출되어, 안정적이었다. 이에, 절단율을 높이기 위해 트립신 및 키모트립신의 농도를 증가시켰으며; 이 용액은 "#x SIF"로 나타내었으며, 예를 들어 "2x SIF"는 트립신 및 키모트립신의 농도 2배 증가 (60 ㎍/mL)를 의미한다. 모의 위액은 다음과 같이 준비하였다: 수 중의 600 ㎍/mL 펩신 및 34.2 mM NaCl, pH 2로 적정하기 위해 HCl 첨가.
단백질 분해 안정성을 정성적으로 평가하기 위해, 순수한 재조합 단백질을 37℃에서 24시간 동안 절단 처리하고, SDS PAGE에 의해 단백질 분해 절단을 평가하였다. 재조합 단백질은 농축된 원액 용액으로부터 원액 SGF 및 SIF 용액에 최종 농도 0.1 mg/mL로 첨가하였다. 0분, 5분, 15분, 30분, 60분, 4시간 및 24시간 경과시 채취하였으며; 각 시점에 시료를 취하여 즉시 로딩 염료와 혼합하고 95℃에서 5분간 끓여 프로테아제 활성을 중단시켰다. 시점 당 (초기 절단 농도 0.1 mg/mL에 기반하여) 단백질 5 ㎍을 16% 트리스-트리신 폴리아크릴아미드 겔에서 전개하였다.
IL-23-매개 세포 신호전달 분석
IL-23R의 하류에 루시퍼라제를 발현하는 시판 IL-23 리포터 세포 (Promega IL-23 Bioassay)를 이용해 IL-23-매개 세포 신호전달에 대한 저해를 평가하였다. 세포를 발광 판독에 적합한, 조직 배양물이 처리된 96웰 백색 플레이트의 내측 웰에 접종하였다. 세포는 각 저해제 연속 희석물과 함께 30분간 예비 인큐베이션한 다음 재조합 인간 IL-23 사이토카인을 이전 실험에서 결정된 EC80 자극 농도 (8 ng/mL; R&D 1290-IL)로 처리하였다. 인간 IL-23과 6시간 인큐베이션한 다음 루시퍼라제 기질을 첨가하여, 발광을 판독하였다. 저해제 반응을 저해제 농도에 따른 최대 IL-23 자극 (저해제 비첨가)에 대한 %로 도표를 작성하였으며, 비-선형 회귀로 용량 반응을 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다.
SEQUENCE LISTING <110> University of Washington <120> Human IL23 receptor binding polypeptides <130> 20-814-WO <150> 63/045381 <151> 2020-06-29 <160> 228 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is A,D,E,G,H,I,P, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,C,D,E,G,I,L,M,N,P,Q,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is C,F,H,I,K,L,M,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is A,C,I,L,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is A,D,E,F,G,H,I,K,L,M,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,C,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,E,F,H,L,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, OR W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,F,H,K,L,M,Q,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X isA,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,D,E,F,G,K,M,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,C,F,G,I,K,L,M,N,P,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,D,E,I,K,L,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,E,I,K,M,N,P,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,C,G, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is I,L,M, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is A,E,G,H,I,K,M,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A,C,D,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> X is A,C,I,L,N, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is A,Q,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is H,I,K,L,M,N,P, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is C,F,H,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is F,H,K,L,M,N,R,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,G,H,K,P,Q,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D,G,H,K,N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is E,P, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,G,I,L,M,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is F,I,K,M,P,Q,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is F,L, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is F,G,I,L,M,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is F,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,L,M,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is E,G,N,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is C,D,E,F,H,I,L,N,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is I,K,N,R, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is D,E,K,N,P, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,D,E,G,H,K,L,N,P,Q,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is A,D,E,G,H,K,M,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or W <400> 1 Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 2 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,C,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,C,D,E,G,K,N,P,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,E,G,I,K,L,M,N,P, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is L or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is C,D,E,F,I,L,M, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is L,M, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is C,I,K, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is C,D,H, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is V or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,M,N,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,C,D,E,G,H,L,M,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is C,G,H,K,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,C,F,K,N,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is C,F,I,L,M,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,D,L,M,N,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H,I,K,Q,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is C,E,F,H,I,K,L,P,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is C,D,E,F,G,H,K,M,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,D, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is M or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is E,F,G,H,L,M,R,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is C,D,E,H,M,N,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> X is C, I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is G,H,Q,R, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C,D,E,F,I,K,L,M,N,Q,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A,D,H, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is C,G,H,N,P, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is C,E,G,I,L,Q,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,G,I,M,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is I,K,L,M,Q, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is Q or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is C,E,F,H,L,M,Q,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is A,F,I,K,L,M,Q,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is T or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is A,D,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,G,N,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is C,D,I,M,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> X is A,E,I,K,N,P,Q, or V <400> 2 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Met Xaa 35 40 45 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 3 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,C,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is A,C,D,E,G,H,I,P, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,C,D,E,G,I,L,N,P,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is A,C,I,L,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is C,E,G,H,I,L,M,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,C,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is C,E,F,H,L,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,F,G,H,K,L,Q,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,C,D,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is K or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,E,H,N,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,C,D,E,G,M,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is C,F,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,C,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,D,E,I,K,L,M,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H,I,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,C,E,I,K,N,P,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,C,G, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is E,F,G,L,M,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A,C,D,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> X is A,C,I,N, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C,E,H,I,K,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is F,H,I,K,L,M,N,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is G or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,C,E,F,H,L,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is E or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is F,I,K,L,M,Q,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I, T or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I, T or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,L,M,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is E,F,G,I,K,L,M,N,Q,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is C,D,H,L, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is I,K,N,R, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is A,K,N,Q,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,D,E,G,H,K,L,N,P,Q,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is A,C,D,E,G,H,K,M,N,P,Q,R,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or W <400> 3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Met Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 4 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,C,D,E,G,H,I,K,M,N,P,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,C,D,E,G,P, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,E,G,I,K,M,N,P, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is L or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is C,E,L, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is L,M, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is C or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,H,I,K,M,N,Q,R,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,E,H,N,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,C,D,E,G,M,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is G, H or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,C,K,N,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is C,F,I,L,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,L,M,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H, I or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is C,E,I,K,P,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is C,D,E,F,G,H,K,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is E,F,G,L,M,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is C,D,E,H,M,N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> X is C or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q, R or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C,E,K,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is C,F,I,L,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is F,H,I,L,N,Q,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,Q,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,S,T,V,W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is G or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is C or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is I,K,L,M,Q, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is C,E,F,H,L,M,Q,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is F,I,K,L,M,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is A,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,G,N,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is C or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> X is I,N,P, or V <400> 4 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Ala Trp Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Phe Met Xaa 35 40 45 Cys Val Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 5 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is D,E,F,H,I,M,N,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is D or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is K or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is E,F,K,L,N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is A,D,E,F,I, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is D,E,I,K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is E,H,K,N, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is F,K,M,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,E,F,G,H,L,N,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is E,F,G,K,M, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is A,G, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is G,K,L,Q,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is L or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,E,Q,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is K,P,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is E or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is E, I or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is K,P,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,C,D,G,H,K,M,N,Q,R, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is G,H, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is F, V, W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is E or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is C,D,F,H,I,L,N,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is E or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is N, P or R <400> 5 Xaa Xaa Pro Glu Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Val Glu Xaa Ile Xaa Lys Tyr Ala 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Ala Trp Lys Leu Val Trp Xaa Phe Met Xaa 35 40 45 Xaa Val Xaa Xaa Asp Ile 50 <210> 6 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is C,D,E,G,H,I,K,M,N,P,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,E,P, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,I,K,M,N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,G,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is C,E,L, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is L,M, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is C or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,H,I,K,M,N,Q,R,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,E,H,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,C,D,E,G,M,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is G,H, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,C,K,N,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is C,F,I,L,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,L,M,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is H,I, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is C,E,I,K,P,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is C,D,E,F,G,H,K,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is E,F,G,L,M,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is C,D,E,H,M,N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C,E,K,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is F,H,I,L,N,Q,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,Q,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is A,E,K,M,N,Q,T, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is G or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is C or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is K,M, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is C,F,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is F,I,K,L,M,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is A,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,N,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is C or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> X is I,N,P, or V <400> 6 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Val Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Tyr Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Ala Trp Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Phe Met Xaa 35 40 45 Cys Val Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 7 <400> 7 000 <210> 8 <400> 8 000 <210> 9 <400> 9 000 <210> 10 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Met Glu Ser Glu Lys Tyr Leu Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Lys Leu Ser Val Gln Glu Ala Val Glu Glu Val Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Met Leu Thr Trp Met Phe Met Glu 35 40 45 Leu Val Lys Arg Tyr Ile 50 <210> 11 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 Met Glu Pro Glu Lys Tyr Leu Arg Glu Lys Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Val Trp Tyr Phe Met Glu 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 12 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Leu Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Gln Lys Leu Ser His Gln Glu Ala Val Glu Ile Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Val Trp Ala Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 13 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Val Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Ile Trp Ala Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 14 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Val Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Lys Leu Ser His Pro Glu Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Val Trp Ala Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 15 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Val Arg Glu Gln Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Ile Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Ile Trp Ala Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 16 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Met Glu Pro Glu Lys Tyr Val Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Met Leu Val Trp His Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 17 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Leu Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Ile Ile Arg Lys Tyr Ala 20 25 30 Arg Lys Lys Gly Leu Glu Ala Trp Lys Leu Val Trp Ala Phe Met Gln 35 40 45 Leu Val Lys Arg Asp Ile 50 <210> 18 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Met Glu Glu Glu Lys Tyr Val Arg Glu Leu Val Lys Lys Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Ser Gln Pro Glu Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Tyr Ala 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<220> <223> Synthetic <400> 82 Asp Trp Arg Glu Leu Met Leu Val Trp Met Ala Leu Trp Trp Ile Trp 1 5 10 15 Trp Ala Phe Leu Ala Gly Val Pro Leu Ile Val Glu Val Val Val Asn 20 25 30 Gly Leu His Phe Arg Val Ile Val Asp Arg Asp Pro Thr Thr Asn Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Asp Ile Met Leu Trp Val Trp Glu Trp Leu Ala Thr Leu 50 55 60 <210> 83 <211> 48 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 83 Gly Arg Trp Glu Leu Leu Val Leu Ala Tyr Leu Ala Leu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Ala Ala Glu Ala Val Trp Arg Leu Leu Glu Leu Ala Lys Lys Leu Gly 20 25 30 Asp Glu Met Ala Phe Arg Trp Ile Leu Glu Leu Trp Glu Arg Ala Leu 35 40 45 <210> 84 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,LM,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,E,G,I,K,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(7) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,E,G,H,M,N,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is A,E,H,I,K,L,M,Q,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,C,G, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is D,F,H,N,Q,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is F,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,Q,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,C,F,H,I,L,M,Q,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,C,D,G,H,K,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(26) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <400> 84 Cys Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Trp 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 85 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is R or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is I, K or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is A,C,D,E,G,H,K,L,M,N,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,F,H,I,K,L,M,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is C, I, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,D,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,C,D,E,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,C,E,F,H,K,L,M,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is E, M or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A, C or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is F, W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is C,I,L, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is I,L,M, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,N, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is A,C,F,H,I,L,M,Q,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <400> 85 Cys Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Trp 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 86 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is C or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is C or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is A,D,E,G,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,F,I,K,L,M,R,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,F,G,L,M,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,C,D,E,F,H,K,L,M,N,P,Q,R,S,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is E,H,I,K,M, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is D,E,F,H,I,M,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is F, W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A,F,H,I,L,Q,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,C,D,E,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is C,G,H,S, or T <400> 86 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp 1 5 10 15 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 87 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is A,C,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X is A,I,L,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is A,C,D,E,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X is A,E,H,I,L,M,N,Q,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,F, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,D,E,G,H,K,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,D,E,H,K,M,Q,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is H,K,L,M,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is M or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is F,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is F,I,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,H,M,N,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is A,K,L,M,Q,R,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is C,E,F,H,M,N,Q,S,T,V,W, or Y <400> 87 Cys Xaa Xaa Xaa Cys Gly Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp 1 5 10 15 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 20 25 <210> 88 <400> 88 000 <210> 89 <400> 89 000 <210> 90 <400> 90 000 <210> 91 <400> 91 000 <210> 92 <400> 92 000 <210> 93 <400> 93 000 <210> 94 <400> 94 000 <210> 95 <400> 95 000 <210> 96 <400> 96 000 <210> 97 <400> 97 000 <210> 98 <400> 98 000 <210> 99 <400> 99 000 <210> 100 <400> 100 000 <210> 101 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,D,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L,M,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is I,K,M,P,Q,R,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,F,H,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is C,E,F,I,K,L,M,Q,R,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,D,K,L,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,E,F,H,N,Q,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,D,G,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is N,Q,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is F,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,D,F,H,K,L,M,N,Q,R,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,E,G,H,I,K,L,N,P,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,D,E,F,H,I,K,M,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,K,Q,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is D,F,G,K,L,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is L,M,Q,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is A,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is A,K,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is A,G,K,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is A,D,E,H,I,K,L,M,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A,C,H,I,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A,K,L,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,E,H,I,K,L,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is F,G,H,I,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D,E,G,P,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,F,I,K,M,N,P,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,E,F,H,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> X is A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is A,H,I,K,M,N,Q,R,S, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is A,D,E,F,G,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is C,I,L,M,N, or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,D,E,F,G,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is K,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A,C,E,G,I,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is A,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is A,D,E,F,I,K,L,N,Q,R,S,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is H,I,K,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is C,I,L,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is A,D,F,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <400> 101 Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 102 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is D,E,G,H,N,P, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is A,E,I,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is C, I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is C,E,F,H,L,N,or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is D,L,N,Q,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,D,E,N,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,E,F,G,I,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is E,I,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,D,G,H,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,D,E,G,K,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A, S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is C or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is C,D,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,C,E,F,G,I,P,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,D,E,H,I,K,L,N,Q,R,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is C or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is G,H,I,K,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,C,I,K,L,N,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is F, I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is G,I,K,L,M,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is F,G,H,I,K,M,N,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A,D,E,I,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q, R or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C,D,E,M,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is C,D,L,N, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A,D,G,H,I,K,L,M,N,Q,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,D,E,F,G,H,I,K,M,N,Q,R,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is F,G,N,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D, E or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,E,H,L,M,N,Q,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,C,D,E,G,I,K,N,P,Q,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,D,E,H,I,K,L,N,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> X is C, L or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,N,S, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is C, E or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is A,F,H,L,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is A, E or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,C,D,E,F,I,K,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is C,D,E,H,I,K,L,M,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A, C or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is A,C,D,E,F,H,I,L,M,N,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is C,D,F,G,I,K,L,N,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is M, C or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is I, C or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,C,G,I,M,N,Q,R,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is C,D,E,F,G,H,I,K,L,S,T,V, or W <400> 102 Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 103 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L,M,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is I,K,M,P,Q,R,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is A,C,F,H,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is C,I,K,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,K,N,Q,R,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,E,F,H,Q,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,N,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,D,G,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is R or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is F,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,D,F,K,L,M,N,Q,R,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,G,H,I,K,N,P,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,F,H,I,K,M,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is L,M,Q,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is A,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is A,G,K,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is A,D,E,H,I,K,L,M,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A,C,H,I,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A,K,L,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is K,L,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is F,G,H,I,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D,E,G,P,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,K, or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,E,F,H,I,K,L,M,N,P,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> X is A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is A,H,I,K,N,Q,R,S, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is A,D,E,F,G,H,I,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is C,L,M,N, or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is A,E,F,H,I,K,M,N,P,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,D,E,G,I,K,L,M,N,Q,R,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is K,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A,C,E,I,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is A,D,E,F,G,H,K,L,M,N,P,Q,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is A,D,E,F,I,K,L,N,Q,R,S,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is H,K,R, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is I,L,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,D,E,G,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is D,F,G,H,L,M,Q,R,S,T,V, or Y <400> 103 Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 <210> 104 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is D,H,N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is A,E,I,L,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is C,I, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is E,F,H,L,N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,E,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is C or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is A,D,G,H,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is A,D,G,H,K,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is A,C,D,E,G,K,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is G or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,D,E,H,K,N, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is G,H,I,K, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,C,I,K,L,N,R,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is F or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is G,I,K,M,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is F,I,K,M,N,T, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A,D,E,I,M, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is Q,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is D,E,M,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is C,D,L, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A,D,G,H,I,K,L,M,N,Q,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,D,E,F,G,H,K,M,N,Q,R,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is F,G,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D,E, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is E or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,D,E,I,K,N,P,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,D,E,H,I,K,N,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> X is C or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is A,C,D,F,G,H,I,K,L,M,N,S, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is A,F,L, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is A,E, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,C,D,E,F,I,K,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is C,D,E,K,L,M,R, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A,C, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is D,E,H,I,M,N,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is D,G,I,K,L,N,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is A,G,N,Q,R,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is D,E,G,H,I,S, or T <400> 104 Xaa Leu Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Asn Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Thr 1 5 10 15 Gly Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa 50 <210> 105 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,E,H,K,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L,R,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is K,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is H,I,K,P,Q, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is I,L,M, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is A,E,H,Q,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,F,H,I,K,L,N,Q,R,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is I,M,Q,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is D or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,I,K,N,P,R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is H,K,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is L, S or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is I, K or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A,C,E,F,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is A,I,L,M,N,Q,R,S,T,or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is K,L, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is K,L, R, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is G,H,R, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> X is D or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,E,N,P,Q,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,K, or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> X is A,C,E,H,I,K,L,M,N,Q,R,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is A,H,K,N,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is L or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> X is A,E,H,K,N,Q,R,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is D,E,K,M,N,Q,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is L, M or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is A, K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is H,K,R, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> X is I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is H, S or T <400> 105 Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Phe Tyr Xaa Leu Asn Xaa Xaa Xaa Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Lys Xaa Xaa Lys Ala Leu Arg Glu Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Arg Xaa 50 <210> 106 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is D or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is A,I,M,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is I or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is E, F or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is K or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is E or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is G or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A, E or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is G, H or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is A,C,I,K, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is G,K,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is F,I,K,M,N, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> X is R or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is D or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> X is A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> X is L or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is I, K or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is G or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is E or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is K or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is C,D,K,N, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is A,L, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is C,D,F,K,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is C,K, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A,C, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is E or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is I,K,L, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is G,R, or W <400> 106 Xaa Leu Trp Xaa Xaa Phe Tyr Xaa Leu Asn Thr Cys Ile Xaa Xaa Thr 1 5 10 15 Gly Asp Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ala Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Lys Xaa Asp Xaa Xaa Ala Cys Xaa Glu Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Tyr Ile Xaa Ser 50 <210> 107 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is A,D,E,H,N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L,M, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X is W or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X is C,E,F,I,L,Q,R,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is A,D,L,N,Q,S,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is E,N,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is C,E,F,H,K,R,S,T,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is G,K, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is T or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is A,D,H,N,R,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is E,H,L,N,P, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,D,E,F,H,Q,R,T,V, or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is A,K,Q,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is D,F,G,K,L, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is A,K,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is A or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is A,E,H,I,K,S,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> X is H or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is E,G,M,Q, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is F,I,K,M,N,Q, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A,I, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is K or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is E,I, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is D,F,I,K,L,S,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is K,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> X is A or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is T or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is I,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is L,Q,R,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is A,F,I,K,L,M,N,Q,S,V,W, or Y <400> 107 Xaa Xaa Trp Gln Ile Phe Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Gln Glu Ala Val 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Lys Xaa Cys Xaa Xaa 50 <210> 108 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is D,E,G,H,N, or P <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X is L or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X is D,L,N,Q,S, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X is D,E,N,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X is A,C,E,F,G,I,N,Q,R,S,T,V,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X is E,I,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is G or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X is A,S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X is G or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X is C,D,S, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is A,C,E,F,G,I,P,Q, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X is A,C,I,L,Q,R,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X is K or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X is C,K,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> X is I or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X is G,H,K, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X is A or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> X is C or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> X is K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> X is H,I,K,Q, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> X is A,E,H,M,N,Q,T, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> X is A,C,G,K,Q,W, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> X is A or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> X is H,I, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> X is C, E, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> X is H, L, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> X is A,C,F,K,S,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> X is C,H,I,K,L,Q,R,S,T,V, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> X is A,C,F,I,L,M,S,T, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> X is C,D,F,G,I,K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> X is C,M, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> X is C,I,M, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> X is C,F,I,K,L,S,T,V, or W <400> 108 Xaa Xaa Trp Gln Ile Phe Tyr Cys Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Gln Xaa Ala Val 20 25 30 Xaa Xaa Asn Asp Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Ala Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa 50 <210> 109 <400> 109 000 <210> 110 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Gln Leu Ser Thr Ile Leu Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Leu Lys Ala Leu Ala Glu Ala Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Leu Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Thr 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 111 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 Asn Leu Trp Met Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Ile Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Leu Lys Ala Leu Gln Glu Ala Leu 20 25 30 Lys Lys Tyr Asp Glu Lys Ala Ile Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 112 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Ile Leu Asn Thr Ile Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Ala Thr 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Met Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 113 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Ile Leu Asn Thr Ile His Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Pro Lys Ala Leu Arg Glu Ala Met 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Met Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Leu 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 114 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Ile Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Ala Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Val Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 115 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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<400> 118 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Val Leu Asn Thr Ile Tyr Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Asn Lys Ala Leu Arg Glu Ala Leu 20 25 30 Lys Lys His Asp Glu Lys Ala Thr Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Thr 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 119 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 119 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Val Leu Asn Thr Ile Tyr Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Pro Lys Ala Leu Arg Glu Ala Leu 20 25 30 Lys Lys Asn Asp Glu Lys Ala Thr Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 120 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 120 Asn Leu Trp Val Ile Phe Tyr Val Leu Asn Thr Ile Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Ala Lys Lys Leu Val Lys Ala Leu Gln Glu Ala Met 20 25 30 Lys Lys Trp Asp Glu Lys Ala Thr Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Thr 35 40 45 Lys Tyr Ile Arg Ser 50 <210> 121 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 121 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<210> 168 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 168 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys 20 25 <210> 169 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 169 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu 20 25 <210> 170 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 170 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 <210> 171 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 171 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys <210> 172 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 172 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp 35 <210> 173 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 173 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu 35 <210> 174 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 174 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys 35 40 <210> 175 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 175 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys 35 40 <210> 176 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 176 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys Glu 35 40 <210> 177 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 177 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys Glu Leu Ala 35 40 <210> 178 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 178 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys Glu Leu Ala Lys 35 40 45 <210> 179 <211> 48 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 179 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 <210> 180 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 180 Asn Leu Trp Gln Ile Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys Ile Lys Arg Thr 1 5 10 15 Gly Asp Pro Thr Cys Lys Lys Leu Lys Lys Ala Leu Arg Glu Cys Leu 20 25 30 Lys Lys Gly Asp Glu Lys Ala Cys Lys Glu Leu Ala Lys Lys Ala Met 35 40 45 Lys Tyr Ile 50 <210> 181 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 181 Cys Glu Arg Lys Glu Trp Met Glu Arg Leu Gly His Asn Trp Met Trp 1 5 10 15 Phe Tyr Val Met Asn Thr Cys 20 <210> 182 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 182 Cys Glu Ala Leu Glu Trp Phe Glu Arg Val Gly Lys Thr Trp Met Trp 1 5 10 15 Phe Tyr Leu Leu Asn Thr Cys 20 <210> 183 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 183 Cys Glu Thr Leu Glu Trp Met Lys Arg Gln Gly Asp Asn Trp Met Trp 1 5 10 15 Phe Tyr Met Met Asn Tyr Cys 20 <210> 184 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 184 Cys Glu Glu Ala Glu Lys Ile Arg Arg Arg Ala Gln Thr Trp Glu Glu 1 5 10 15 Phe Tyr Arg Ala Asn Gln Ile Cys 20 <210> 185 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 185 Cys Glu Arg Ala His Glu Trp Ala Lys Arg Val Gly Gly Trp Glu Ala 1 5 10 15 Phe Tyr Met Ala Asn Lys Leu Cys 20 <210> 186 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 186 Cys Glu Arg Ala Glu Glu Glu Arg Arg Arg Ala Arg Thr Trp Glu Asp 1 5 10 15 Phe Tyr Lys Ala Asn Lys Leu Cys 20 <210> 187 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 187 Cys Glu Glu Ala Arg Glu Leu Ile Arg Asn Ala Asn Gly Trp Lys Asp 1 5 10 15 Val Trp Lys Ala Trp Lys Tyr Cys 20 <210> 188 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 188 Ala Ser Pro Glu Leu Lys Glu Thr Cys Glu Arg Leu Glu Arg Leu Gly 1 5 10 15 Met Glu Arg Trp Leu Ile Leu Trp 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Ile Thr Cys Asn Asn Gln Thr Phe Cys Ala Glu Trp Arg Trp 1 5 10 15 Met Ala Trp Tyr Leu Cys Trp Arg Ala Arg 20 25 <210> 199 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 199 Cys Arg Val Cys Met Asn Asn Met Cys Val Asp Ala Arg Glu Cys Trp 1 5 10 15 Met Ala Tyr Tyr Leu Leu Asn Gln Tyr Asn 20 25 <210> 200 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 200 Cys Arg Val Cys Lys Asn Asn Phe Cys Val Asp Ala Gln Glu Cys Trp 1 5 10 15 Met Ala Tyr Tyr Leu Leu Asn Gln Tyr Thr 20 25 <210> 201 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 201 Cys Arg Val Cys Lys Asn Gly Phe Cys Val Asp Ala Gln Glu Cys Trp 1 5 10 15 Met Ala Tyr Tyr Leu Leu Asn Gln Tyr Thr 20 25 <210> 202 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 202 Cys Arg Val Cys Lys Asn Gly Phe Cys Val Asp Ala Arg Glu Cys Trp 1 5 10 15 Met Ala Tyr Tyr Leu Leu Asn Gln Tyr Asn 20 25 <210> 203 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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Lys Val Lys Cys Gly Pro Val Glu Phe Glu Ala Thr Glu Arg Trp 1 5 10 15 Met Cys Phe Tyr Trp Tyr Asn Lys Tyr Cys 20 25 <210> 228 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 228 Cys Lys Leu Lys Cys Gly Gly Val Glu Phe Glu Ala Thr Glu Arg Trp 1 5 10 15 Met Cys Tyr Tyr Trp Trp Asn Lys Tyr Cys 20 25

Claims (118)

  1. 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 인간 IL-23R (hIL-23R) 결합성 폴리펩타이드로서, X1, X2, X3 및 X4는 선택적이고, X5는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 X5는 서열번호 3-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 X3는 존재하며, X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X4는 생략되거나 또는 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  4. 제3항에 있어서, 상기 X4는 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  7. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X4는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 36-38의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1은 존재하며, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  11. 제10항에 있어서, 상기 X2는 존재하고, X2는 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  12. 제11항에 있어서, 상기 X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 존재하고,
    (a) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하고; 및
    (b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 존재하고,
    (a) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하고; 및
    (b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 X1은 존재하되, X1은 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 X1, X2, X3, X4 및 X5가 존재하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 선택적으로 N-말단 아미노산 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그보다 많은 수의 아미노산이 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으며, 따라서 동일성 % 고려시 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5는 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 존재하는 경우 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1은 존재하는 경우 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1, X3 및 X5가 모두 존재하고, 각각 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에서, 바람직하게는 C-말단에서 부가되는 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X2 및 X4가 존재하고, X2는 아미노산 4개 길이이고, X4는 아미노산 3개 길이인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  24. 제1항 또는 제16항 또는 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 X1, X2, X3, X4 및 X5가 존재하고,
    X1은 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X2는 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 75% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X3는 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X4는 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 33%, 66% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
    X5는 서열번호 10-74 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 선택적으로, N-말단 아미노산 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그보다 많은 수의 아미노산이 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으며, 따라서 동일성 % 고려시 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드:
    - 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열;
    - 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열;
    - 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X3-X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열; 또는
    - 서열번호 10-74로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 서열번호 69 및 74로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X2-X3-X4-X5 도메인 조합의 아미노산 서열.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 도메인을 추가로 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 hIL-23R 길항제인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  29. 일반식 X1-X2-X3-X4-X5의 폴리펩타이드를 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드로서, X2, X3, X4 및 X5는 선택적이고, X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X1은 서열번호 101 또는 서열번호 102의 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  30. 제29항에 있어서, 상기 X1은 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 X3는 존재하며 X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X2는 생략되거나 또는 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  32. 제31항에 있어서, 상기 X2는 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 가진 폴리펩타이드를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1은 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  36. 제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X2는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-18의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  37. 제29항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5는 존재하고, 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  38. 제29항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  39. 제38항에 있어서, 상기 X4가 존재하며 X4가 아미노산 링커를 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  40. 제39항에 있어서, 상기 X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  41. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 존재하고,
    (a) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열을 포함하고 (표 6-7);
    (b) X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  42. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 존재하고,
    (a) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열 (표 6-7)을 포함하고;
    (b) X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 상기 X5는 존재하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  44. 제29항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, X1, X2, X3, X4 및 X5가 각각 존재하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  45. 제29항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 선택적으로 C-말단 아미노산 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그보다 많은 수의 아미노산이 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으며, 따라서 동일성 % 고려시 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  46. 제29항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1이 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  47. 제29항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3가 존재하는 경우 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  48. 제29항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5가 존재하는 경우 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  49. 제29항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1, X3 및 X5가 모두 존재하고, 각각 α 나선을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  50. 제29항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에, 바람직하게는 C-말단에 부가되는 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  51. 제29항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X2 및 X4가 존재하고, 각각 아미노산 2개 길이인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  52. 제51항에 있어서, 상기 X2 및 X4에서 2번째 아미노산이 D인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  53. 제29항 내지 제44항 또는 제46항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 X1, X2, X3, X4 및 X5가 존재하고,
    X1은 서열번호 110-180 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X2는 서열번호 110-164, 166-180 중 어느 하나에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X3는 서열번호 110-164, 172-180 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X4는 서열번호 110-164, 172-180 중 어느 하나에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
    X5는 서열번호 110-164, 173-180 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  54. 제29항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  55. 제29항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 하기 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드:
    - 서열번호 110-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열;
    - 서열번호 110-164 및 166-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2 도메인 조합의 아미노산 서열;
    - 서열번호 110-164 및 166-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2-X3 도메인 조합의 아미노산 서열; 또는
    - 서열번호 110-164 및 173-180으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드에 존재하는 X1-X2-X3-X4 도메인 조합의 아미노산 서열.
  56. 제29항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 도메인을 추가로 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  57. 제29항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 hIL-23R 길항제인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  58. 본 발명에 개시된 폴리펩타이드의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  59. 제59항에 있어서, 서열번호 69, 74 및 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  60. 제58항 또는 제59항에 있어서, 서열번호 69, 74 및 160-163으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  61. 서열번호 84-87 및 181-228로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; N-말단 및/또는 C-말단 아미노산 1개, 2개, 3개 또는 더 많은 수가 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있으며, 따라서 동일성 % 고려시 참조 폴리펩타이드로부터 결손될 수 있는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  62. 제61항에 있어서, 폴리펩타이드의 시스테인 잔기 2개 간의 이황화 결합을 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  63. 제17항, 제45항, 제61항 및 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 기준 아미노산에 대한 아미노산 변화가 보존적인 치환인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  64. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 도메인을 추가로 포함하는, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  65. 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 hIL-23R 길항제인, hIL-23R 결합성 폴리펩타이드.
  66. 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질로서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 융합 단백질로 존재하는 것은 아니며,
    (a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따라 정의되는 X3 및 X5 도메인을 포함하고;
    (b) X3 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X5 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고;
    제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질인 것은 아니고, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드가 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  67. 제66항에 있어서, 상기 X5는 아미노산 12 내지 20개 길이의 α-나선 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는
    - 서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열;
    - 서열번호 3-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열; 또는
    - 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  68. 제66항 또는 제67항에 있어서, 상기 X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X3는
    - 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열; 또는
    - 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  69. 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    (A) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 40-47의 아미노산 서열을 포함하고; 및 X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (B) X5는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 39-54의 아미노산 서열을 포함하고; 및
    (b) X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  70. 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분이 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 X1 및 X2 도메인을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  71. 제70항에 있어서, 상기 X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 X1이 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서, 상기 X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  73. 제66항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X5, X3 및 X1이 존재하는 경우 각각 α-나선 도메인인, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  74. 제66항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
    X1은 존재하는 경우 서열번호 10-74, 특히 서열번호 69 또는 74 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X2는 존재하는 경우 서열번호 10-74, 특히 서열번호 69 또는 74 중 어느 하나에 존재하는 X2 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X3는 서열번호 10-74, 특히 서열번호 69 또는 74 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
    X5는 서열번호 10-74, 특히 서열번호 69 또는 74 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  75. 제66항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 비-공유 연결된, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  76. 제66항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 수용체를 통해 서로 간접적으로 결합된, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  77. 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분을 포함하는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질로서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 융합 단백질로 존재하지 않으며,
    (a) 전체적으로, 제1 폴리펩타이드 구성성분 및 제2 폴리펩타이드 구성성분이 제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에 따라 정의되는 도메인 X1 및 X3를 포함하고;
    (b) X1 도메인은 제1 폴리펩타이드 구성성분에 존재하고, X3 도메인은 제2 폴리펩타이드 구성성분에 존재하며;
    제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 각각 개별적으로 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질인 것은 아니고, 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드가 비-공유적으로 상호작용하여 최대 활성의 hIL-23R 결합성 단백질을 형성하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  78. 제77항에 있어서, 상기 X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 α-나선 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X1은
    - 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열 (표 5-7); 또는
    - 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  79. 제77항 또는 제78항에 있어서, 상기 X3는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X3는
    - 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열; 또는
    - 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  80. 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서,
    (A) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-10의 아미노산 서열 (표 6-7)을 포함하고, X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (B) X1은 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열 (표 6-7)을 포함하고; 및 X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  81. 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분이 제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에 따른 X4 및 X5 도메인을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  82. 제81항에 있어서, 상기 X5는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열 또는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  83. 제81항 또는 제82항에 있어서, 상기 X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  84. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X1, X3 및 X5가 존재하는 경우 각각 α-나선 도메인인, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  85. 제77항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    X1은 서열번호 110-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X1 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X3는 서열번호 110-164 및 166-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X3 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고;
    X4는 존재하는 경우 서열번호 110-164 및 172-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X4 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 및
    X5는 서열번호 110-164 및 173-180, 특히 서열번호 160-163 중 어느 하나에 존재하는 X5 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  86. 제77항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 비-공유 연결된, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  87. 제77항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분과 제2 폴리펩타이드 구성성분이 수용체를 통해 서로 간접적으로 결합된, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  88. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에서 정의되는 X3 도메인을 포함하고, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에서 정의되는 X5 도메인은 포함하지 않는, 폴리펩타이드.
  89. 제88항에 있어서, 상기 X3 도메인이 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  90. 제88항 또는 제89항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 22-33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 상기 X3는 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 21-35의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  91. 제88항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에서 정의되는 X1 및 X2 도메인을 포함하는, 폴리펩타이드.
  92. 제91항에 있어서, 상기 X1은 아미노산 12 내지 20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X1은 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 X1은 서열번호 5-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 1-16의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  93. 제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 X2는 서열번호 1-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 17-20의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  94. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 및 X1 (존재하는 경우)이 각각 α-나선 도메인인, 폴리펩타이드.
  95. 제88항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 X1은 존재하는 경우 제17항에 따라 언급된 서열에서의 X1 도메인의 아미노산 서열을 포함하고;
    상기 X2는 존재하는 경우 제17항에 따라 언급된 서열에서의 X2 도메인의 아미노산 서열을 포함하고; 및
    상기 X3는 제17항에 따라 언급된 서열에서의 X3 도메인의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  96. 제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에서 정의되는 X3 도메인을 포함하고, 제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에서 정의되는 X1 도메인은 포함하지 않는, 폴리펩타이드.
  97. 제96항에 있어서, 상기 X3 도메인이 아미노산 12-20개 길이이고, X3는
    - 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
    - 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  98. 제96항 또는 제97항에 있어서, 상기 X3는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 25-33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 서열번호 103-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 19-34의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  99. 제96항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에 따른 X4 및 X5 도메인을 포함하는, 폴리펩타이드.
  100. 제99항에 있어서, 상기 X5는 아미노산 12-20개 길이의 폴리펩타이드 도메인을 포함하고, X5는 서열번호 105-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 27-53의 아미노산 서열 또는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 37-53의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  101. 제99항 또는 제100항에 있어서, 상기 X4는 서열번호 101-108로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에서 잔기 35-36의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  102. 제96항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X3는 및 X5 (존재하는 경우)가 각각 α-나선 도메인인, 폴리펩타이드.
  103. 제96항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 X5는 존재하는 경우 제117항에 언급된 서열에서의 X5 도메인의 아미노산 서열을 포함하고;
    상기 X4는 존재하는 경우 제117항에 언급된 서열에서의 X4 도메인의 아미노산 서열을 포함하고; 및
    상기 X3는 제117항에 언급된 서열에서의 X3 도메인의 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드.
  104. 제77항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에서 부가되는 하나 이상의 부가적인 기능성 도메인을 추가로 포함하는, 폴리펩타이드.
  105. 제77항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 도메인을 추가로 포함하는, 폴리펩타이드.
  106. 제66항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분이 제1 표적화 도메인을 추가로 포함하거나, 또는 상기 제2 폴리펩타이드 구성성분이 제2 표적화 도메인을 추가로 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  107. 제66항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 구성성분이 제1 표적화 도메인을 추가로 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드 구성성분이 제2 표적화 도메인을 추가로 포함하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 상기 제1 표적화 도메인이 존재하는 경우 제1 폴리펩타이드와의 번역 융합체이고, 상기 제2 표적화 도메인이 존재하는 경우 제2 폴리펩타이드와의 번역 융합체인, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  109. 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인과 제2 표적화 도메인이 둘다 존재하고, 상기 표적화 도메인과 제2 표적화 도메인이 서로 동일한, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  110. 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인과 제2 표적화 도메인이 둘다 존재하고, 상기 표적화 도메인과 제2 표적화 도메인이 서로 다른, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  111. 제106항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인 및/또는 제2 표적화 도메인이 각각 세포 표면 단백질에 결합하는, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  112. 본 발명에서 개시된 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 IL-23R 결합성 폴리펩타이드 또는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질로서, 상기 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드 또는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질이 생물층 간섭측정 또는 표면 플라스몬 공명에 따른 측정시 결합 친화성 50 나노몰 (nM), 25 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.75 nM, 0.5 nM, 0.25 nM, 0.1 nM 또는 그 미만으로 hIL-23R에 결합하는, IL-23R 결합성 폴리펩타이드 또는 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질.
  113. 본 발명에서 개시된 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 hIL-23R 결합성 폴리펩타이드, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 구성성분을 2 카피 이상으로 포함하는 다량체.
  114. 임의 청구항에 따른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 구성성분을 암호화하는 핵산.
  115. 적절한 조절 인자에 작동가능하게 연결된 제114항에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  116. 임의 청구항에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 다량체, 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 세포.
  117. 하기 성분을 포함하는, 약학적 조성물:
    (a) 본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터 또는 세포; 및
    (b) 약제학적으로 허용가능한 담체.
  118. 본 발명의 임의 구현예 또는 구현예들의 조합에 따른 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 구성성분, 조건부로 최대 활성인 hIL-23R 결합성 단백질, 핵산, 발현 벡터, 세포 또는 약학적 조성물을 장애를 치료하는데 유효한 양으로 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환 (IBD) (크론 질환 및 궤양성 대장염을 포함하나 이들로 제한되지 않음), 건선, 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 골관절염, 축성 및 말초 척추관절염, 강직성 척추염, 부착부위염 및 건염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 장애를 치료하는 방법.
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