KR20230029764A - 자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230029764A
KR20230029764A KR1020237000364A KR20237000364A KR20230029764A KR 20230029764 A KR20230029764 A KR 20230029764A KR 1020237000364 A KR1020237000364 A KR 1020237000364A KR 20237000364 A KR20237000364 A KR 20237000364A KR 20230029764 A KR20230029764 A KR 20230029764A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
gly val
ala ala
fractomer
val pro
pro gly
Prior art date
Application number
KR1020237000364A
Other languages
English (en)
Inventor
스테판 로버츠
애슈토쉬 칠코티
브루스 클리츠먼
스콧 홀렌벡
Original Assignee
듀크 유니버시티
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 듀크 유니버시티 filed Critical 듀크 유니버시티
Publication of KR20230029764A publication Critical patent/KR20230029764A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/22—Lipids, fatty acids, e.g. prostaglandins, oils, fats, waxes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/04—Materials or treatment for tissue regeneration for mammary reconstruction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

본원에서 기술되는 것은 자가 지방 조직 이식을 위한 조성물 및 방법이다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머(Fractomer)), 또는 "프랙토머"와 대상체로부터의 지방 조직을 포함한다. 일 측면에서, 상기 프랙토머는 [(GXGVP)n-α-나선]m의 일반 구조를 가지며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있고, α-나선은 약 5 내지 50개의 알라닌 잔기를 가지는 임의의 폴리알라닌 기재 α-나선이다. 또 다른 측면에서, 상기 프랙토머는 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m의 구조를 가지며; 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수이다.

Description

자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법
[관련 출원의 상호-참조]
본 출원은 2020년 6월 5일자 U.S. 특허 가출원 제63/035,173호에 대하여 우선권을 주장하며, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
[연방 후원 연구]
본 발명은 국립보건원(National Institutes of Health)에 의해 교부되는 교부금 제1R41CA244110-01A1호하의 정부 후원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에서 소정의 권리를 가진다.
[참조 서열 목록]
37 C.F.R. § 1.821(c)에 따른 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태와 함께 본 출원을 출원한다. EFS에 의해 제출된 문서 파일 "028193-9366-WO01_sequence_listing_2-JUN-2021_ST25.txt,"는 2021년 6월 2일에 생성된 것으로, 23개의 서열을 포함하고 있고, 37.4 킬로바이트의 파일 크기를 가지며, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
[기술 분야]
본원에서 기술되는 것은 자가 지방 조직 이식을 위한 조성물 및 방법이다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머(Fractomer)), 또는 "프랙토머"와 대상체로부터의 지방 조직을 포함한다. 일 측면에서, 상기 프랙토머는 [(GXGVP)n-α-나선]m의 일반 구조를 가지며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있고, α-나선은 약 5 내지 50개의 알라닌 잔기를 가지는 임의의 폴리알라닌 기재 α-나선이다. 또 다른 측면에서, 상기 프랙토머는 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m의 구조를 가지며; 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수이다.
자가 지방 이식은 매년 재건 성형 수술을 받는 거의 6백만명의 미국인에서 윤곽 불규칙성 및 부피(volume) 결핍을 치료하기 위한 귀중한 선택사항이다. 그의 영속성 및 고유한 생체적합성으로 인하여 선호되기는 하지만, 지방 이식편 - 특히 유방절제술-후 환자에서 사용되는 것들과 같은 대형 부피 이식편 -은 수확되는 조직의 불충분한 가용 부피로 인하여 일상적으로 많은 수술을 필요로 한다. 이에 따라, 조직 이식편과 관련한 새로운 혁신에 대한 필요성이 존재한다.
[발명의 개요]
본원에서 기술되는 일 실시양태는 하기를 포함하는 조직 매트릭스 조성물이다: 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머); 및 지방 조직. 일 측면에서, 상기 프랙토머는 하기를 포함한다: 복수의 불규칙 도메인; 및 복수의 구조화된 도메인. 또 다른 측면에서, 상기 불규칙 도메인은 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)을 포함하며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, n은 1 이상의 정수이며; 상기 구조화된 도메인은 폴리알라닌 도메인을 포함한다. 또 다른 측면에서, 불규칙 도메인은 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 X는 Val (서열식별번호: 3), 또는 Ala (서열식별번호: 4), 또는 Ala와 Val의 혼합물이고, n은 1 내지 50의 정수이다. 또 다른 측면에서, X는 10:1 내지 1:10 (Ala:Val) 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다. 또 다른 측면에서, X는 1:1 (서열식별번호: 5) 또는 1:4 (서열식별번호: 6) 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다. 또 다른 측면에서, 상기 폴리알라닌 도메인은 (Ala)m을 포함하며, 여기서 m은 5 내지 50의 정수이다. 또 다른 측면에서, 폴리알라닌 도메인은 하기 중 1종 이상을 포함한다: (A)25 (서열식별번호: 7); K(A)25K (서열식별번호: 8); D(A)25K (서열식별번호: 9); GD(A25)K (서열식별번호: 10); 또는 GK(A25)K (서열식별번호: 11). 또 다른 측면에서, 상기 폴리펩티드는 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m을 포함하며; 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수이다 ([(서열식별번호: 2)n-(서열식별번호: 10 또는 11)]m). 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 하기 중 1종 이상을 포함한다: M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12); M[(GVGVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 13); M[(GVGVP)15-GK(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 14); M[(GVGVP)15-GK(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 15); M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 16); M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 17); M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18); 또는 M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 19). 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 하기 중 1종 이상을 포함한다: M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12); 또는 M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18). 또 다른 측면에서, 프랙토머는 가열 전이 온도(transition temperature of heating) (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도(transition temperature of cooling) (Tt -냉각)를 가진다. 또 다른 측면에서, 상기 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)는 농도-비의존성이다. 또 다른 측면에서, 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)는 약 10 ℃ 내지 약 45 ℃ 범위이다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 Tt -가열 초과에서는 고체 응집물을 형성한다. 또 다른 측면에서, 상기 고체 응집물은 Tt -냉각 미만으로 냉각되는 경우 재가용화된다. 또 다른 측면에서, 고체 응집물은 안정한 3-차원 매트릭스이다. 또 다른 측면에서, 고체 응집물은 복수의 미세세공을 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 복수의 미세세공은 크기가 약 1 μm 내지 약 150 μm 범위이다. 조항 1의 상기 조성물은 약 200 μM 내지 약 2 mM 사이의 프랙토머를 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 지방 조직은 지방흡인물(lipoaspirate)을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 부피 기준 약 10 % 내지 약 90 % 범위의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 부피 기준 약 25 % 내지 약 75 % 범위의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 약 50 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 약 1:9 내지 약 9:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 약 1:3 내지 약 3:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 약 1:1 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 조성물은 성형가능한 액체 또는 반고체이다. 또 다른 측면에서, 조성물은 주입가능하거나 이식가능하다. 또 다른 측면에서, 조성물은 2- 또는 3-차원 형상(shape), 영역(area) 또는 부피(volume)로 성형가능하거나 몰딩가능하다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 한다.
본원에서 기술되는 또 다른 실시양태는 본원에서 기술되는 바와 같은 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머); 및 지방 조직을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 대상체에게 투여함으로써 자가 지방 이식편이 대상체에서 증강되도록 하는 것을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법이다.
본원에서 기술되는 또 다른 실시양태는 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직을 대상체에게 공동-투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법이다. 일 측면에서, 상기 지방 조직은 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 프랙토머 및 지방 조직은 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 및 지방 조직은 순차적으로 투여되며, 프랙토머가 지방 조직의 투여 전에 투여된다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 및 지방 조직은 순차적으로 투여되며, 지방 조직이 프랙토머의 투여 전에 투여된다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 및 지방 조직은 시험관 내에서 조합되어, 2- 또는 3-차원 형상, 영역 또는 부피로 성형되거나 몰딩되고, 대상체에게 제자리 이식된다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 및 지방 조직은 투여 전에는 성형가능한 액체, 반고체 또는 몰딩된 반고체이며, 투여 후에는 고체 응집물을 형성한다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 및 지방 조직은 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 대상체에게 공동-투여되며, 대상체 체온에의 노출 후 프랙토머 및 지방 조직은 고체를 형성한다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 한다.
본원에서 기술되는 또 다른 실시양태는 (a) 대상체로부터 지방 조직을 수득하는 것; 및 (b) 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머)를 단계 (a)의 지방 조직과 조합하여 혼합물을 형성시키는 것을 포함하는 자가 지방 이식편 조성물의 제조 방법이다. 또 다른 측면에서, 상기 방법은 추가로 (c) 혼합물을 형상, 영역 또는 부피로 성형하는 것을 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 방법은 추가로 (d) 주입 또는 이식에 의해 대상체에게 혼합물을 공동-투여하는 것을 포함한다. 일 측면에서, 혼합물은 프랙토머의 Tt -가열을 초과하는 온도에서 고체 응집물을 형성한다.
본원에서 기술되는 또 다른 실시양태는 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머), 및 조합을 위한 용기, 특정 부피 차원을 위한 몰드, 또는 지방 조직 흡인 및/또는 투여를 위한 수단 중 1종 이상을 포함하는 키트이다.
본원에서 기술되는 또 다른 실시양태는 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직의, 자가 지방 이식을 필요로 하는 대상체에서의 자가 지방 이식을 위한 용도이다.
특허 또는 출원파일은 컬러로 작성된 적어도 하나의 도면을 포함한다. 컬러 도면(들)을 동반하는 이와 같은 특허 또는 특허 출원 공개의 사본은 요청 및 필요 요금의 지불시 사무국에 의해 제공될 것이다.
도 1은 재-주입을 위하여 재조합의 부분적으로 규칙적인 펩티드 또는 "프랙토머" (매트릭스)를 수확된 지방 (지방흡인물)과 조합하는 제안되는 방법을 보여준다. 수확된 지방흡인물은 프랙토머 용액과 조합 및 혼합되며, 혼합물은 대상체의 결핍 영역에 주입된다. 체온은 포획된 지방흡인물을 포함하는 프랙토머 스캐폴드 형성을 개시하여, 이식편을 안정화한다.
도 2는 지방 대 지방흡인물의 구조적 차이의 예를 보여준다. 지방흡인 및 처리 후, 지방은 그의 고체-유사 특성을 상실하며, 형상 또는 부피를 유지하기 위한 기계적 완전성을 가지지 않는다.
도 3a-b는 프랙토머 (서열식별번호: 12)가 열 반응성이어서, 가열될 경우 다공성 네트워크를 형성한다는 것을 보여준다. 도 3a는 조정가능한 임계 온도 (예컨대 20 ℃ 내지 37 ℃ 사이)에서 프랙토머가 다공성 고체 네트워크로의 상 분리를 겪는다는 것을 보여준다 (좌측 및 중간 패널). 3-차원 재구성 공초점 이미지는 프랙토머가 가열되었을 때의 복잡한 엘라스틴-유형 네트워크를 보여준다 (우측 패널). 도 3b는 5 질량% 프랙토머 용액 중 녹색 형광 단백질 (GFP)의 첨가가 통상적인 (예컨대 히알루론산) 히드로겔에 비해 다공성이 더 큰 영양소 유동을 가능하게 함을 표시한다는 것을 보여준다.
도 4a-b는 프랙토머 (서열식별번호: 12) 전이 온도 및 단백질 분해에 대한 저장의 효과를 보여준다. 도 4a는 동결건조 및 -20 ℃에서의 1, 2, 5 및 6 개월 저장 후의 재현탁된 프랙토머의 광학 밀도 (OD) 측정치들을 보여준다. 어떠한 시점에서도 프랙토머 전이 온도의 변화는 관찰되지 않았다. 도 4b는 동결건조 및 -20 ℃에서의 1, 5 및 6 개월 저장 후의 재현탁된 프랙토머의 SDS-PAGE 분석을 보여준다. 어떠한 시점에서도 프랙토머 단백질 농도의 변화 또는 분해의 표시는 관찰되지 않았다.
도 5a-c는 프랙토머가 건강한 지방세포를 봉입하여 형상 및 프로젝션(projection)을 향상시킬 수 있다는 것을 보여준다. 도 5a는 지방흡인물 단독 (상부 패널), 50 부피%의 지방흡인물:프랙토머 용액 (서열식별번호: 12) (250 μM) (중간 패널), 및 50 부피%의 지방흡인물:프랙토머 용액 (서열식별번호: 12) (750 μM) (저부 패널)인 혼합물들의 공초점 현미경법 분석을 보여준다. 1:1의 비로 상이한 프랙토머 농도 (저 = 250 μM, 고 = 750 μM)와 혼합되고 LipidTOX (적색, 프랙토머도 염색함) 및 DAPI (청색)를 사용하여 염색된 지방흡인물은 대형 지방 세포 영역을 함께 유지하는 개별 지방세포 세포들 주변에서의 프랙토머의 존재를 표시한다. 도 5b는 지방 단독의 조직학적 H&E 염색 분석을 보여주며, 도 5c는 프랙토머 (서열식별번호: 18) (250 μM)와 혼합된 지방흡인물의 조직학적 H&E 염색 분석을 보여준다. 도 5c에서, 프랙토머는 더 농축된 지방 세포의 영역들 사이에 점재되어 있음을 볼 수 있다.
도 6a-d는 프랙토머 단독 및 지방 + 프랙토머를 사용하여 3D 몰드를 생성시키는 예시적인 방법 및 분석을 보여준다. 도 6a는 3D 인쇄된 몰드에 주입되고 프랙토머가 응집되도록 하기 위하여 37 ℃에 배치된 지방:프랙토머 (서열식별번호: 12) 혼합물의 예시를 보여준다. 도 6b는 저 (500 μM, 좌측 패널), 중간 (750 μM, 중간 패널) 및 고 (2 mM, 우측 패널) 농도 프랙토머 단독 (서열식별번호: 12)의 예시적인 몰딩 형상을 나타내는 것으로, 증가된 프랙토머 농도에 의한 증가된 형상 보존을 표시한다. 도 6c는 지방 (인간 지방흡인물) + 프랙토머 용액 (서열식별번호: 12) 혼합물의 생체외 몰드를 보여준다. 상이한 비에서의 지방흡인물의 프랙토머 용액 (750 μM)과의 혼합물들은 증가된 프랙토머:지방흡인물 비가 지방 단독에 비해 몰드의 형상 및 프로젝션 유지를 상당히 증가시킨다는 것을 입증한다. 도 6d는 3D 인쇄된 몰드에 주입된 후 프랙토머가 응집되도록 하기 위하여 37 ℃에 배치된 돼지 지방 단독과 돼지 지방 + 프랙토머 용액 (서열식별번호: 18) 혼합물 사이의 비교를 보여준다. 돼지 지방흡인물의 프랙토머와의 혼합물은 돼지 지방 단독에 비해 몰드로부터의 방출 후 형상 유지를 향상시키는 것으로 밝혀졌다.
도 7은 프랙토머의 형상이 주입시 조절될 수 있다는 것을 보여준다. 구체 (좌측 컬럼), 분산된 점들 (중간 컬럼) 및 신장된 막대 (우측 컬럼)의 상이한 3종 형상 패턴으로 적외선 표지된 프랙토머 (서열식별번호: 12)를 마우스의 옆구리 뒤쪽에 주입하였다. 주입 1개월 (상부 패널) 및 4개월 (저부 패널) 후의 IVIS 스펙트럼 이미지화는 3종 전체 주입 형상 패턴에서 형상 보존을 표시하였다.
도 8a-c는 프랙토머 (서열식별번호: 12) 단백질 안정성 및 분해가 농도를 사용하여 조절가능하다는 것을 보여준다. 도 8a는 상이한 프랙토머 용액 농도 (저 = 250 μM, 중간 = 750 μM, 고 = 1500 μM)에서의 BL/6 마우스의 주입 6개월 후의 표지된 프랙토머의 표준화된 형광 강도를 보여준다. 도 8b는 6개월의 기간에 걸친 상이한 프랙토머 농도의 제제 (저 = 250 μM, 중간 = 750 μM, 고 = 1500 μM)가 주입된 BL/6 마우스의 예시적인 형광 분광법 이미지를 보여준다. 높은 프랙토머 농도를 가지는 제제의 주입은 제자리에서 6-개월 시점까지 지속되는 것으로 밝혀졌다 (저부 행 패널). 도 8c는 주입-후의 장기 프랙토머 재흡수 프로파일을 보여준다. 저 (250 μM), 중간 (750 μM) 및 고 (1500 μM) 농도의 프랙토머 주입에 대하여 표준화된 형광 강도 (좌측 축) 및 부피 (우측 축)를 측정하였다. 저농도의 프랙토머를 포함하는 제제의 주입은 수개월 후 완전히 재흡수되는 것으로 보인 반면, 중간 및 고농도의 프랙토머를 포함하는 제제의 주입은 형광 및 부피 모두에 있어서 장기 지속성을 나타내었다.
도 9a-f는 프랙토머 (서열식별번호: 12)가 지방 부피 유지를 향상시킨다는 것을 보여준다. 도 9a는 nu/nu 마우스에의 주입용으로 실험 군에서 사용된 예시적인 지방:프랙토머 용액 (250 μM) 비의 예시를 보여준다. 도 9b는 nu/nu 마우스에의 주입 후 시간 경과에 따른 부피 유지에 대한 지방:프랙토머 비의 효과를 보여준다. 1-주 시간 기간에 걸친 부피 분포는 프랙토머 사용시의 증가된 부피 유지를 나타낸다. 도 9c는 각 지방:프랙토머 용액 (매트릭스) 혼합물 비에서의 1주 부피 분포의 스냅사진을 보여준다. 도 9d는 상이한 지방:프랙토머 혼합물에서의 주입 6주 후의 표준화된 부피를 보여준다. 안정화 프랙토머 매트릭스의 포함 없이 감소된 지방의 양 (50 부피%의 지방)이 사용된 경우, 부피 유지는 상당히 더 낮았다. 도 9e는 3-개월 시간 기간에 걸친 지방 단독 및 50 부피%의 지방 + 프랙토머 용액 (750 μM) 주입의 부피 유지를 보여준다. 프랙토머는 이와 같은 긴 시간 기간에 걸쳐 지방 부피 유지를 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 도 9f는 지방 단독의 주입과 지방 + 프랙토머 (750 μM)의 주입 사이에서의 이식된 지방의 유효 부피를 보여준다. mL 당 주입된 지방은 더 높은 농도의 프랙토머 제제 (750 μM)가 지방 단독 이식편 유효 부피의 3배라는 것이 밝혀졌다.
도 10a-c는 지방 단독으로 구성되는 이식편에 비해 프랙토머 (서열식별번호: 12)로 제조되는 지방 이식편 내에서 혈관구조 공급이 높다는 것을 보여준다. 도 10a는 지방 단독 이식편 (상부 패널) 대 1:1 비의 지방:프랙토머 용액 (250 μM) 이식편 (저부 패널)의 조직학적 분석을 보여주며, 프랙토머의 지속성 및 지방세포 군들 사이의 지지성 프랙토머 부문에서의 혈관구조 (CD31+) 부문 (작은 화살표)의 고도 분포를 표시한다. 도 10b는 지방 단독과 1:1 지방:프랙토머 용액 (250 μM) 혼합물 사이에서의 주입 1-개월 후의 지방 분포의 조직학적 비교를 보여준다. 지방 + 프랙토머 실험 군에서 50 부피% 적은 지방이 사용되었음에도 불구하고 2종의 상이한 이식편 군 사이에서 세포 조성의 차이는 관찰되지 않았다. 도 10c는 30일에서의 지방흡인물과 프랙토머 용액 (250 μM)의 1:1 혼합물의 확대 사진을 보여준다. 실선 화살표는 잔류 프랙토머의 증거를 가리키며, 점선 화살표는 이식편 내에서의 새로 형성된 혈관 공급을 나타낸다.
도 11a-b는 지방 단독이 주입된 마우스에서는 낭이 형성되는 반면 지방 + 프랙토머 (서열식별번호: 12)의 혼합물이 주입된 마우스에서는 낭 형성이 관찰되지 않는다는 것을 보여준다. 도 11a는 3-개월 시간 기간에 걸친 지방 단독이 주입된 마우스에서의 낭 형성을 보여준다. 지방 단독 또는 지방흡인물과 프랙토머 용액 (750 μM)의 1:1 혼합물을 포함하는 이식편의 초음파를 3개월에 걸쳐 포착하였다. 화살표는 지방 단독 군에서의 대형 오일 낭의 발생을 나타낸다 (상부 행, 중심-우측 및 최-우측 패널). 지방 단독이 주입된 마우스 중 50 % 초과가 낭을 발생시킨 반면, 지방 + 프랙토머의 혼합물이 주입된 마우스는 0 %가 낭을 형성하였다. 도 11b는 주입 3개월 후의 마우스에서의 지방 단독 및 1:1 지방:프랙토머 용액 (750 μM) 이식편에서의 세포 조성의 대표적인 조직학적 비교를 보여준다. 지방 단독 군은 낭 형성의 완전한 증거를 나타낸 반면, 지방:프랙토머 군에서는 낭 형성이 관찰되지 않았다. 프랙토머가 지방세포를 지지하는 것을 볼 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어들은 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, 본원에서 기술되는 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 연계되어, 및 그의 기술에서 사용되는 임의의 용어체계는 관련 기술분야에 잘 알려져 있으며, 거기에서 통상적으로 사용되는 것이다. 충돌하는 경우, 정의를 포함한 본 개시가 우선하게 된다. 예시적인 방법 및 재료들을 하기하기는 하지만, 본원에서 기술되는 실시양태 및 측면들의 실시 또는 시험시에는 본원에서 기술되는 것들과 유사하거나 등가인 방법 및 재료들이 사용될 수 있다.
본원에서 사용될 때, "아미노산", "뉴클레오티드", "폴리뉴클레오티드", "벡터", "폴리펩티드" 및 "단백질"이라는 용어들은 관련 기술분야 통상의 생화학자에 의해 이해되게 되는 것과 같은 그의 통상적인 의미를 가진다. 본원에서는 표준 단문자 뉴클레오티드 (A, C, G, T, U) 및 표준 단문자 아미노산 (A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W 또는 Y)이 사용된다.
본원에서 사용될 때, "포함하다", "포함하는", "함유하다", "함유하는", "가지는" 등과 같은 용어들은 "포함하는 것"을 의미한다. 본 개시내용은 또한 명시적으로 제시되어 있는지 여부에 관계없이 본원에서 제시되는 실시양태 또는 요소들을 "포함하는", "그것으로 이루어진", "본질적으로 그것으로 이루어진" 다른 실시양태를 고려한다.
본원에서 사용될 때, 개시내용의 문맥 (특히 청구범위의 문맥)에서 사용되는 "하나"라는 용어 및 유사 용어들은 본원에서 달리 표시되거나 문맥상 분명하게 부정되지 않는 한 단수 및 복수 모두를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 또한, "하나"는 달리 상술되지 않는 한 "하나 이상"을 의미한다.
본원에서 사용될 때, "또는"이라는 용어는 접속사 또는 이접접속사일 수 있다.
본원에서 사용될 때, "실질적으로"라는 용어는 크거나 상당한 정도이나 완전히는 아닌 것을 의미한다.
본원에서 사용될 때, 1종 이상의 해당 값에 적용되는 경우의 "약" 또는 "대략"이라는 용어들은 언급되는 참조 값과 유사하거나, 또는 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 결정되었을 때의 측정 시스템의 한계와 같이 부분적으로 그 값이 어떻게 측정 또는 결정되는지에 따라 달라지게 되는 특정 값의 허용되는 오차 범위 이내인 값을 지칭한다. 일 측면에서, "약"이라는 용어는 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 값의 ±10 %까지의 변화 이내인 정수 및 분수 구성요소 모두를 포함한 임의의 값을 지칭한다. 대안적으로, "약"은 관련 기술분야에서의 실시 당 3 이상 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, 예컨대 생물학적 시스템 또는 과정과 관련되는 경우, "약"이라는 용어는 값의 한 자릿수 이내, 일부 실시양태에서는 값의 5-배 이내, 일부 실시양태에서는 값의 2-배 이내를 의미할 수 있다. 본원에서 사용될 때, "~"라는 기호는 "약" 또는 "대략"을 의미한다.
본원에서 개시되는 모든 범위는 개별 값으로서의 양 단부 점은 물론, 그 범위 이내로 명기되는 모든 정수 및 분수를 포함한다. 예를 들어, 0.1-2.0의 범위는 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 . . . 2.0을 포함한다. 단부 점이 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 경우, 명기되는 범위는 단부 점을 포함하여 범위 이내이거나 3 이상 표준 편차 이내인 임의 값의 ±10 %까지 변화만큼 확장된다.
본원에서 사용될 때, "활성 성분" 또는 "활성 제약 성분"이라는 용어들은 종종 유익한 약학적 효과를 제공하는 제약 작용제, 활성 성분, 화합물, 또는 물질, 조성물, 또는 이들의 혼합물을 지칭한다.
본원에서 사용될 때, "대조" 또는 "참조"라는 용어들은 본원에서 호환가능하게 사용된다. "참조" 또는 "대조" 수준은 측정되는 결과를 대비하여 평가하는 기준선 또는 기준으로 사용되는 사전결정된 값 또는 범위일 수 있다. "대조"는 대조 실험 또는 대조 세포도 지칭한다.
본원에서 사용될 때, "투여분"이라는 용어는 적어도 1회 이상의 투여에 의해 치료 효과를 개시하거나 산출하기에 충분한 양을 함유하는, 세포를 포함한 임의 형태의 활성 성분 제제 또는 조성물을 나타낸다. "제제" 및 "조성물"은 본원에서 호환가능하게 사용된다.
본원에서 사용될 때, "예방"이라는 용어는 실질적으로 상당한 정도 또는 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 검출가능한 정도 중 어느 하나까지 장애의 진행을 방지하거나 감소시키는 것을 지칭한다.
본원에서 사용될 때, "유효량" 또는 "치료 유효량"이라는 용어들은 경험하고 있거나 대상체가 걸리기 쉬운 질환 또는 이상의 증상들 중 1종 이상을 어느 정도까지 예방하거나, 치료하거나, 개선하게 되는, 대상체에게 투여되는 작용제, 조성물 또는 세포(들)의 실질적으로 비-독성이나 충분한 양을 지칭한다. 결과는 질환 징후, 증상 또는 원인의 감소 또는 경감, 또는 임의의 다른 원하는 생물학적 시스템의 변경일 수 있다. 유효량은 비제한적으로 대상체의 연령, 크기, 유형 또는 질환 정도, 질환 단계, 투여 경로, 사용되는 보충 치료법의 유형 또는 정도, 진행중인 질환 과정, 및 원하는 치료 유형을 포함한 각 대상체의 개별적인 인자들을 기준으로 할 수 있다.
본원에서 사용될 때, "대상체"라는 용어는 동물을 지칭한다. 통상적으로, 대상체는 포유동물이다. 대상체는 영장류 (예컨대 인간, 남성 또는 여성; 유아, 청소년 또는 성인), 비-인간 영장류, 래트, 마우스, 토끼, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 어류, 조류 등을 지칭하기도 한다. 일 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 일 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에서 사용될 때, 해당 대상체가 해당 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로, 또는 삶의 질에 있어서 이익을 얻게 되는 경우, 대상체는 "치료를 필요로 하는" 것이다. 특히 방지 또는 예방 치료의 경우, 치료를 필요로 하는 대상체가 반드시 증상을 나타내는 것은 아니다.
본원에서 사용될 때, "치료", "치료법" 및/또는 "치료 요법"은 환자에 의해 발현되거나 환자가 감수성일 수 있는 질환, 장애 또는 생리학적 이상에 반응하여 이루어진 임상 개재를 지칭한다. 치료의 목표에는 증상의 경감 또는 방지, 질환, 장애 또는 이상의 진행 또는 악화 지연 또는 중지, 및/또는 질환, 장애 또는 이상의 경감이 포함된다. 일부 실시양태에서, 상기 질환, 장애 또는 이상은 자가 지방 이식편의 증강을 필요로 한다. 적합한 치료/이상에는 근치 유방절제술-후 및 종괴절제술-후 유방 재구성, 화장용 증강, 안면 재구성/이식, 코성형술은 물론, 자가 지방 전달의 사용을 필요로 하는 기타 치료들, 예컨대 발 지방 패드 위축, 손 재구성, 패리-롬버그(Parry-Romberg) 증후군 및 두개안면 외상 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에서 사용될 때, "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"이라는 용어들은 주어진 생물학적 과정, 이상, 증상, 장애 또는 질환의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 상당한 감소를 지칭한다.
본원에서 사용될 때, "치료" 또는 "치료하는"은 장애 또는 질환을 포함한 생물학적 과정 진행의 예방, 그것을 방지하는 것, 억압하는 것, 억누르는 것, 반전시키는 것, 경감하는 것, 개선하는 것 또는 억제하는 것, 또는 질환을 완전히 제거하는 것을 지칭한다. 치료는 급성이거나 만성인 방식 중 어느 하나로 수행될 수 있다. "치료"라는 용어는 질환에 시달리기 전에 질환의 중증도 또는 그와 같은 질환과 연관되어 있는 증상을 감소시키는 것도 지칭한다. 질환, 장애, 또는 이들의 증상을 "억제하는 것" 또는 "개선하는 것"은 그와 같은 질환, 장애, 또는 그의 증상의 임상 출현 후 대상체에게 본원에서 기술되는 세포, 조성물 또는 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 질환, 장애, 또는 그의 증상 "~의 예방" 또는 그것을 "방지하는 것"은 질환, 장애 또는 그의 증상의 발병 전에 대상체에게 본원에서 기술되는 세포, 조성물 또는 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 질환 또는 장애를 "억제하는 것"은 질환 또는 그의 장애의 유도 후, 그러나 그의 임상 출현 또는 그의 증상 발현 전에 대상체에게 본원에서 기술되는 세포, 조성물 또는 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
본원에서 사용될 때의 "아미노산"은 자연 발생 및 비-자연 합성 아미노산은 물론, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체도 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 것들이다. 아미노산은 본원에서 그의 통상적으로 알려져 있는 3-문자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명법 위원회(Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 권장되는 1-문자 기호 중 어느 하나로 지칭될 수 있다. 아미노산은 측쇄 및 폴리펩티드 골격 부분을 포함한다.
"발현 벡터"라는 용어는 원하는 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 삽입되거나 도입될 수 있는 관련 기술분야에 알려져 있는 플라스미드, 바이러스 또는 또 다른 매체를 표시한다.
"숙주 세포"라는 용어는 핵산 구성체 또는 발현 벡터를 사용한 형질전환, 형질감염, 형질도입, 접합 등에 대하여 감수성인 세포이다.
숙주 세포는 식물, 세균, 효모, 진균, 곤충, 동물 등으로부터 유래할 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 에셰리키아 콜리(Escherichia coli)를 포함한다.
"대조", "참조 수준" 및 "참조"라는 용어들은 본원에서 호환가능하게 사용된다. 참조 수준은 측정되는 결과를 대비하여 평가하는 기준으로 사용되는 사전결정된 값 또는 범위일 수 있다. 본원에서 사용될 때의 "대조 군"은 대조 대상체들의 군을 지칭한다. 사전결정되는 수준은 대조 군으로부터의 컷오프(cutoff) 값일 수 있다. 사전결정되는 수준은 대조 군으로부터의 평균일 수 있다. 컷오프 값 (또는 사전결정된 컷오프 값)은 적응 지수 모델(Adaptive index Model) (AIM) 방법론에 의해 결정될 수 있다. 컷오프 값 (또는 사전결정된 컷오프 값)은 환자 군의 생물학적 샘플로부터의 수용자 작용 곡선(receiver operating curve) (ROC) 분석에 의해 결정될 수 있다. 생물학 관련 기술분야에 일반적으로 알려져 있는 바와 같이, ROC 분석은 한 가지 조건을 또 다른 것으로부터 구별하는 시험의 능력 측정, 예를 들면 CRC를 가지는 환자를 식별하는 데에 있어서의 각 마커의 성능을 측정하는 것이다. 대안적으로, 컷오프 값은 환자 군 생물학적 샘플의 사분율 분석에 의해 결정될 수도 있다. 예를 들면, 컷오프 값은 제25-제75 백분위수 범위의 임의 값에 상응하는 값, 바람직하게는 제25 백분위수, 제50 백분위수 또는 제75 백분위수, 더욱 바람직하게는 제75 백분위수에 상응하는 값을 선택하는 것에 의해 결정될 수 있다. 그와 같은 통계 분석은 관련 기술분야에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있으며, 임의 수의 시중에서 구입가능한 소프트웨어 패키지를 통하여 실행될 수 있다. 표적 또는 단백질 활성의 건강하거나 정상적인 수준 또는 범위는 표준 실시에 따라 정의될 수 있다.
대조는 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머)가 없는 작용제 또는 세포일 수 있다. 대조는 본원에서 상술되는 바와 같은 프랙토머와 다른 폴리펩티드 또는 중합체를 동반하거나 그와 접합되거나 거기에 봉입되는 분자 또는 분자 포함 샘플일 수 있다. 대조는 질환 상태가 알려져 있는 대상체, 또는 그로부터의 샘플일 수 있다. 상기 대상체 또는 그로부터의 샘플은 건강하거나, 질환상태이거나, 치료 전의 질환상태이거나, 치료 중인 질환상태이거나, 또는 치료 후의 질환상태이거나, 또는 이들의 조합일 수 있다. 대조는 예를 들면 작용제, 세포 단독 또는 그 자체를 포함할 수 있다.
본원에서 사용될 때의 "폴리뉴클레오티드"는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있거나, 또는 이중 가닥 및 단일 가닥 서열 둘 다의 일부씩을 함유할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 핵산, 자연 또는 합성 DNA, 게놈 DNA, cDNA, RNA 또는 혼성체일 수 있으며, 이 경우 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보- 및 리보-뉴클레오티드의 조합, 및 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 크산틴, 히포크산틴, 이소시토신 및 이소구아닌을 포함한 염기들의 조합을 함유할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 화학 합성법 또는 재조합법에 의해 수득될 수 있다.
"펩티드" 또는 "폴리펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결된 2개 이상 아미노산의 연결 서열이다. 폴리펩티드는 자연, 합성, 또는 자연과 합성의 변형 또는 조합일 수 있다. 펩티드 및 폴리펩티드에는 결합 단백질, 수용체 및 항체와 같은 단백질들이 포함된다. "폴리펩티드", "단백질" 및 "펩티드"라는 용어들은 본원에서 호환가능하게 사용된다. "일차 구조"는 특정 펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다. "이차 구조"는 국소적으로 규칙적인 폴리펩티드 내 3-차원 구조를 지칭한다. 이러한 구조는 보통 도메인, 예컨대 효소 도메인, 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 세공 도메인 및 세포질 톨(tall) 도메인으로 알려져 있다. "도메인"은 폴리펩티드의 소형 단위를 형성하며 통상적으로 15 내지 350개 아미노산 길이인 폴리펩티드의 부분이다. 대표적인 도메인에는 효소 활성 또는 리간드 결합 활성을 가지는 도메인이 포함된다. 통상적인 도메인은 베타-시트 및 알파-나선의 신장체와 같이 더 적은 조직화 부문으로 구성된다. "삼차 구조"는 폴리펩티드 단량체의 완전한 3-차원 구조를 지칭한다. "사차 구조"는 개별 삼차 단위들의 비공유 결합에 의해 형성되는 3-차원 구조를 지칭한다. "모티프"는 폴리펩티드 서열의 일부로서, 적어도 2개의 아미노산을 포함한다. 모티프는 길이가 2 내지 20개, 2 내지 15개, 또는 2 내지 10개 아미노산일 수 있으며, 일부 실시양태에서 모티프는 3, 4, 5, 6 또는 7개의 순차적인 아미노산들을 포함한다. 도메인은 유사하거나 서로 다를 수 있는 일련의 모티프들로 구성될 수 있다.
예컨대 세포, 또는 핵산, 단백질, 또는 벡터에 대한 언급과 함께 사용될 때의 "재조합"은 그 세포, 핵산, 단백질, 또는 벡터가 이종유래 핵산 또는 단백질의 도입, 또는 자연 핵산 또는 단백질의 변경에 의해 변형되어 있다는 것, 또는 세포가 그렇게 변형된 세포로부터 유래한다는 것을 표시한다. 이에 따라, 예를 들어 재조합 세포는 그 세포의 자연상 (비-재조합) 형태 내에서는 발견되지 않는 유전자를 발현하거나, 또는 달리 비정상적으로 발현되거나, 과소발현되거나, 또는 전혀 발현되지 않는 자연 유전자를 발현한다.
본원에서 사용될 때의 "샘플" 또는 "시험 샘플"은 표적의 존재 및/또는 농도가 검출되거나 결정될 수 있는 임의의 샘플, 또는 본원에서 기술되는 바와 같은 작용제, 세포, 또는 프랙토머를 포함하는 임의의 샘플을 의미할 수 있다. 샘플에는 액체, 용액, 에멀션 또는 현탁액이 포함될 수 있다. 샘플에는 의료 샘플이 포함될 수 있다. 샘플에는 임의의 생물학적 유체 또는 조직, 예컨대 혈액, 전혈, 혈장 및 혈청과 같은 혈액 분획, 근육, 간질액, 땀, 타액, 소변, 눈물, 윤활액, 골수, 뇌척수액, 비 분비물, 가래, 양수, 기관지폐포 세척액, 위 세척액, 구토물, 분변 물질, 폐 조직, 말초 혈액 단핵 세포, 총 백혈구, 림프 결절 세포, 비장 세포, 편도 세포, 암 세포, 종양 세포, 담즙, 소화액, 피부 또는 이들의 조합이 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 샘플은 분취량을 포함한다. 다른 실시양태에서, 샘플은 생물학적 유체를 포함한다. 샘플은 관련 기술분야에 알려져 있는 임의의 수단에 의해 수득될 수 있다. 샘플은 환자로부터 수득된 대로 바로 사용될 수 있거나, 또는 본원에서 논의되는 바와 같은 소정의 방식으로, 아니면 관련 기술분야에 알려져 있는 바와 같이 샘플의 특징을 변형시키기 위하여 예컨대 여과, 증류, 추출, 농축, 원심분리, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등에 의해 예비-처리될 수 있다.
"실질적으로 동일한"은 첫 번째와 두 번째 아미노산 서열이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100개 아미노산의 영역에 걸쳐 적어도 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 %라는 것을 의미할 수 있다.
폴리뉴클레오티드와 관련하여 본원에서 사용될 때의 "변이체"는 (i) 참조 뉴클레오티드 서열의 일부 또는 단편; (ii) 참조 뉴클레오티드 서열 또는 그의 일부의 상보체; (iii) 참조 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보체와 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드; 또는 (iv) 참조 폴리뉴클레오티드, 그의 상보체, 또는 이들과 실질적으로 동일한 서열과 엄격 조건하에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
"변이체"는 또한 아미노산의 삽입, 결실 또는 보존성 치환에 의해 아미노산 서열이 다르지만 적어도 1종의 생물학적 활성은 유지하는 펩티드 또는 폴리펩티드로 정의될 수 있다. "생물학적 활성"의 대표적인 예에는 특정 항체 또는 폴리펩티드에 의해 결합되거나 면역 반응을 촉진하는 능력이 포함된다. 변이체는 실질적으로 동일한 서열을 의미할 수 있다. 변이체는 그의 기능성 단편을 의미할 수 있다. 변이체는 폴리펩티드의 복수의 복제본을 의미할 수도 있다. 복수의 복제본은 일렬로 존재하거나, 링커에 의해 분리되어 있을 수 있다. 변이체는 적어도 1종의 생물학적 활성을 유지하는 아미노산 서열을 가지는 참조 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 의미할 수도 있다. 관련 기술분야에서, 아미노산의 보존성 치환, 즉 유사한 특성 (예컨대 하전 영역의 친수성, 정도 또는 분포)의 다른 아미노산을 사용하여 아미노산을 대체하는 것은 통상적으로 미미한 변화를 수반하는 것으로 인식되어 있다. 이러한 미미한 변화는 부분적으로 아미노산의 히드로패틱 지수(hydropathic index)를 고려하는 것에 의해 식별될 수 있다. 문헌 [Kyte et al., J. Mol , Biol . 157: 105-132 (1982)]을 참조한다. 아미노산의 히드로패틱 지수는 그의 소수성 및 전하에 대한 고려를 기준으로 한다. 유사한 히드로패틱 지수의 아미노산들은 치환되어 단백질 기능을 계속 유지할 수 있는 것으로 관련 기술분야에 알려져 있다. 일 측면에서는, ±2의 히드로패틱 지수를 가지는 아미노산들이 치환된다. 아미노산의 소수성 역시 생물학적 기능을 유지하는 폴리펩티드로 이어지게 되는 치환을 밝히는 데에 사용될 수 있다. 전체적으로 본원에 참조로 포함되는 U.S. 특허 제4,554,101호에 논의되어 있는 바와 같이, 폴리펩티드 맥락에서의 아미노산의 친수성의 고려는 항원성 및 면역원성과 충분하게 상관되는 것으로 보고되어 있는 유용한 수단인 그 폴리펩티드의 최고 국소 평균 친수성의 계산을 가능하게 한다. 관련 기술분야에 이해되어 있는 바와 같이, 유사한 친수성 값을 가지는 아미노산들의 치환은 생물학적 활성, 예를 들면 면역원성을 유지하는 폴리펩티드로 이어질 수 있다. 치환은 서로 ±2 이내의 친수성 값을 가지는 아미노산들을 사용하여 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성 값 둘 다는 그 아미노산의 특정 측쇄에 의해 영향을 받는다. 그와 같은 관찰에 부합하여, 생물학적 기능과 양립하는 아미노산 치환은 소수성, 친수성, 전하, 크기 및 기타 특성들에 의해 밝혀지는 바와 같은 아미노산, 특히 해당 아미노산들의 측쇄들의 상대적 유사성에 따라 달라지는 것으로 이해된다.
변이체는 전체 유전자 서열 또는 그의 단편의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드 서열일 수 있다. 폴리뉴클레오티드 서열은 유전자 서열 또는 그의 단편의 전체 길이에 걸쳐 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 88 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 또는 100 % 동일할 수 있다. 변이체는 아미노산 서열 또는 그의 단편의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 동일한 아미노산 서열일 수 있다. 아미노산 서열은 아미노산 서열 또는 그의 단편의 전체 길이에 걸쳐 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 88 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 또는 100 % 동일할 수 있다.
본원에서 사용될 때, "증강된"은 자가 지방 조직 또는 지방 이식편의 부피, 형상, 생존의 향상, 향상된 혈액 공급 및 괴사 감소를 지칭한다. 일 측면에서, 자가 지방 조직 또는 지방 이식편은 지방 이식편의 부피 및 형상의 보존, 향상된 혈관화, 강화된 생존 및 괴사 감소를 포함하여 지방 이식편의 강화된 장기 유지 및 생존으로 이어지는 프랙토머와의 지방 조직의 조합에 의해 증강된다.
본원에서 사용될 때, "동시에 투여되는"은 지방 조직 또는 지방흡인물과의 프랙토머의 조합, 프랙토머의 Tt - 가열 점 미만에서 혼합하는 것, 대상체에 상기 조합을 투여하는 것, 및 이후 프랙토머의 Tt -가열 점 초과로의 대상체 신체로부터의 가열시 제자리에서 프랙토머가 지방흡인물을 둘러싸 봉입하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용될 때, "공동-투여되는"은 프랙토머 및 지방 조직 또는 지방흡인물의 투여를 지칭한다. 공동-투여는 "동시 투여" (본원에서 - 투여 전의 프랙토머와 지방 조직의 조합 -으로 기술되는 바와 같음) 또는 "순차 투여"일 수 있다. 본원에서 사용될 때, "순차 투여"는 프랙토머 또는 지방 조직 중 어느 하나가 먼저 투여된 후 각각 지방 조직 또는 프랙토머 중 어느 하나의 투여가 이어지는 투여를 지칭한다. 순차 투여에서, 프랙토머와 지방 조직의 조합은 투여 후 제자리에서 이루어진다.
본원에서 사용될 때, "성형가능한"은 다양한 2- 또는 3-차원의 형상, 영역 또는 부피로 성형되거나 몰딩되는 프랙토머 및 지방 조직 조성물의 능력, 및 연장된 시간 기간에 걸쳐 그와 같은 형상, 영역 또는 부피를 유지하는 능력을 지칭한다. 구체적인 예시적 형상 또는 부피에는 유방, 둔부, 손, 무릎, 피부 또는 피부 이식편 아래에 배치하기 위한 2-차원 층, 또는 대상체의 신체에 존재하는 다른 불규칙적이거나 불명확한 형상 또는 부피가 포함된다.
조성물
본원에서 기술되는 일 실시양태는 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 또는 "프랙토머" 및 지방 조직을 포함하거나, 그것으로 이루어지거나, 또는 본질적으로 그것으로 이루어진, 자가 지방 이식편을 증강하기 위한 주입가능 조직 매트릭스 조성물이다. 일부 실시양태에서, 상기 지방 조직은 지방흡인물을 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 명기되는 범위 내의 모든 정수를 포함하여 약 10-90 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 명기되는 범위 내의 모든 정수를 포함하여 약 25-90 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 25 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 35 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 45 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 50 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 60 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 70 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 80 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 90 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 상기 지방 또는 지방흡인물 부피는 특정 농도의 프랙토머 용액과 조합되어, 본원에서 기술되는 바와 같은 다양한 지방:프랙토머 비를 제공한다. 예로서, 100 μL의 프랙토머 용액과 조합되는 900 μL의 지방 또는 지방흡인물은 부피 기준 9:1 비 또는 부피 기준 90 % 지방이 되게 된다.
본원에서 사용될 때의 "프랙토머"라는 용어는 열적으로 반응성이어서 그것이 액체로서 주입되는 것을 가능하게 하나 체온에서 빠르게 다공성의 고체 네트워크를 형성하는 자연상 엘라스틴을 모방하도록 설계되는 재조합 인공 단백질의 클래스를 지칭한다. 예시적인 프랙토머에 대해서는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO 2019006374 A1호에 기술되어 있다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (POP)를 포함한다. 각 POP는 복수의 불규칙 도메인 및 복수의 구조화된 도메인을 포함할 수 있다. POP는 용해도를 변화시키는 것에 의한 상 전이 거동, 및 온도에 따른 응집물 용해/형성을 나타낼 수 있다.
프랙토머는 완전한 α-나선을 형성하며, 통상적으로 (GXGVP)n 펜타펩티드 모티프 (~30-50 kDa) (서열식별번호: 1) 반복체 총 80-120개로 구성되고 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 표준 아미노산인 비구조화 엘라스틴-유사 폴리펩티드 (ELP)에 주기적으로 삽입되어 있는 올리고알라닌 아미노산 (5 내지 500개이나, 통상적으로는 A25)의 구조화된 도메인으로 구성된다. 일 측면에서, 상기 비구조화 폴리펩티드 또는 "불규칙 도메인"은 (GXGVP)n 모티프 (서열식별번호: 2)이며, 여기서 X는 Val (서열식별번호: 3), 또는 Ala (서열식별번호: 4), 또는 Ala와 Val의 혼합물이고, n은 1 내지 50의 정수이다. 일 측면에서, X는 10:1 내지 1:10 (Ala:Val) 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다. 또 다른 측면에서, X는 1:1 (서열식별번호: 5) 또는 1:4 (서열식별번호: 6) 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다. 프랙토머는 프랙토머를 코딩하는 플라스미드-기원 유전자의 과발현에 의해 이. 콜리에서 재조합으로 합성된다.
프랙토머는 통상적인 히드로겔(hydrogel)에 비해 몇 가지 장점을 가진다. 피하 주입시 오로지 α-나선 (Ala)25 도메인들 사이의 소수성 상호작용을 통하여 자발적으로 가교결합하는 프랙토머의 능력은 상당하다. 화학적 가교결합 기술 - 엘라스틴-유사 폴리펩티드 (ELP) 또는 다른 합성 중합체를 히드로겔에 가교결합시키는 데에 필요함 - 대부분은 상당한 단점을 가지고 있다. 소형 분자 가교결합제는 종종 독성일 수 있으며, 제자리 주입된 중합체 용액의 화학적 또는 효소적 가교결합의 동역학을 조절하는 것은 어렵다. 또한, 대부분의 히드로겔은 비다공성인 것, 또는 생체내 재료 통합에 필요한 다공성을 도입하는 데에 세공원(porogen) 또는 주형법(templating method)의 사용을 필요로 하는 것 중 어느 하나이다. 이러한 재료들은 차후에 원하는 부위에 이식되어야 한다. 이러한 장애들이 극복될 수 있기는 하지만, 단순한 체열 작용하에서의 기계적으로 안정한 다공성 네트워크의 물리적 가교결합 및 자발적 형성의 단순성은 다른 주입가능 재료들에 비교한 지방 이식에서의 프랙토머 사용의 전례없는 장점이 된다.
프랙토머의 상기 불규칙 도메인 및 구조화된 도메인은 어떠한 수의 가능한 방식으로도 배열될 수 있는데, 일부 실시양태에서는 하나 이상의 불규칙 도메인이 프랙토머 중 적어도 2개의 인접 구조화된 도메인들 사이에 배치된다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 일렬로 반복되는 복수의 구조화된 도메인 및 일렬로 반복되는 복수의 불규칙 도메인을 포함하며, 일부 실시양태에서는 일렬로 반복되는 복수의 구조화된 도메인이 일렬로 반복되는 복수의 불규칙 도메인의 C-말단에 배치되고, 일부 실시양태에서는 일렬로 반복되는 복수의 구조화된 도메인이 일렬로 반복되는 복수의 불규칙 도메인의 N-말단에 배치된다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 [불규칙 도메인]q-[구조화된 도메인]r[불규칙 도메인]s-[구조화된 도메인]t로 배열되며, 여기서 q, r, s 및 t는 독립적으로 0 내지 100, 예컨대 1 내지 100, 2 내지 100, 1 내지 50 또는 2 내지 50의 정수이다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 [불규칙 도메인]q-[구조화된 도메인]r로 배열되며, 여기서 q 및 r은 독립적으로 1 내지 100의 정수이다. 일부 실시양태에서, q, r, s, 및 t는 독립적으로 0 내지 10, 0 내지 20, 0 내지 30, 0 내지 40, 0 내지 50, 0 내지 60, 0 내지 70, 0 내지 80, 0 내지 90, 0 내지 100, 1 내지 10, 1 내지 20, 1 내지 30, 1 내지 40, 1 내지 150, 1 내지 60, 1 내지 70, 1 내지 80, 1 내지 90, 또는 1 내지 100의 정수이다.
프랙토머는 복수의 불규칙 도메인을 포함할 수 있다. 불규칙 도메인은 CD에 의해 관찰하였을 때 이차 구조를 최소한으로 가지거나 가지지 않으며 상 전이 거동을 가지는 임의의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 불규칙 도메인은 반복 아미노산, 비-반복 아미노산 또는 이들의 조합의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 프랙토머 중 약 20 % 내지 약 99 %, 예컨대 약 25 % 내지 약 97 %, 약 35 % 내지 약 95 %, 또는 약 50 % 내지 약 94 %는 불규칙 도메인을 포함한다. 프랙토머 중 적어도 약 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 또는 95 %는 불규칙 도메인을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 불규칙 도메인은 (GXGVP)n (서열식별번호: 1)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 X는 임의의 아미노산이고, n은 1 이상의 정수이다. 일부 실시양태에서, m은 1 내지 500의 정수이다. 일부 실시양태에서, m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 또는 500 이상, 이하, 또는 정확히 그것이다. 일부 실시양태에서, m은 500 미만, 400 미만, 300 미만, 200 미만 또는 100 미만일 수 있다. 일부 실시양태에서, m은 1 내지 500, 1 내지 400, 1 내지 300, 1 내지 200, 또는 60 내지 180이다. 일부 실시양태에서, m은 60, 120 또는 180이다. 일부 실시양태에서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다. 일부 실시양태에서, X는 Val 또는 Ala, 또는 Ala와 Val의 교호 반복이다. 일부 실시양태에서, X는 Val이다. 일부 실시양태에서, X는 Ala이다. 일부 실시양태에서, X는 Ala와 Val의 교호 반복이다. 일부 실시양태에서, X는 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다. 일부 실시양태에서, X는 1:1 또는 1:4 비의 Ala와 Val의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, X는 10:1 내지 1:10 (Ala:Val), 예컨대 5:1 내지 1:5, 또는 1:1 내지 1:4 비의 Ala와 Val의 교호 반복이다.
구조화된 도메인
프랙토머는 복수의 구조화된 도메인을 포함할 수 있다. 구조화된 도메인은 예를 들면 알파 나선과 같은 CD에 의해 관찰하였을 때의 이차 구조를 가질 수 있다. 구조화된 도메인은 폴리프롤린 도메인 및 폴리알라닌 도메인 중 적어도 1종을 포함할 수 있으며, 일부 실시양태에서 프랙토머는 교호하는 불규칙 도메인 및 구조화된 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 구조화된 도메인은 폴리알라닌 도메인만을 포함한다. 일부 실시양태에서, 구조화된 도메인은 폴리프롤린 도메인만을 포함한다.
일부 실시양태에서, 프랙토머 중 약 4 % 내지 약 75 %, 예컨대 약 5 % 내지 약 70 %, 약 6 % 내지 약 60 %, 또는 약 7 % 내지 약 50 %는 구조화된 도메인을 포함한다. 프랙토머 중 적어도 약 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 또는 95 %는 구조화된 도메인을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 구조화된 도메인은 폴리알라닌 도메인을 포함한다. 각 폴리알라닌 도메인은 적어도 5개의 알라닌 잔기를 포함할 수 있다. 각 폴리알라닌 도메인은 알파-나선 입체형태의 아미노산 적어도 약 60 %를 가질 수 있다. 일 측면에서, 구조화된 도메인은 폴리알라닌 도메인 (Ala)m을 포함하며, 여기서 m은 5 내지 500의 정수이다. 또 다른 측면에서, 폴리알라닌 도메인은 하기 중 1종 이상을 포함한다: (A)25 (서열식별번호: 7); K(A)25K (서열식별번호: 8); D(A)25K (서열식별번호: 9); GD(A25)K (서열식별번호: 10); 또는 GK(A25)K (서열식별번호: 11).
일 실시양태에서, 프랙토머는 m, n 및 p가 독립적으로 1 내지 15의 정수이며 B, X 및 Z가 독립적으로 임의의 아미노산인 PG, P(X)nG (서열식별번호: 20), 및 (B)mP(X)nG(Z)p (서열식별번호: 21) 또는 이들의 조합에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 PG 모티프를 각각 포함하는 복수의 불규칙 도메인; 및 각 폴리알라닌 도메인이 적어도 5개의 알라닌 잔기를 포함하며 α-나선 입체형태의 아미노산 적어도 약 50 %를 가지는 폴리알라닌 도메인을 각각 포함하는 복수의 구조화된 도메인을 포함하며; 상 전이 거동을 나타낸다. 일 측면에서, 적어도 하나의 불규칙 도메인은 (GXGVP)n (서열식별번호: 1)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, n은 1 이상의 정수이다. 또 다른 측면에서, 각 폴리알라닌 도메인의 아미노산 중 적어도 약 60 %는 α-나선 입체형태로 존재한다. 또 다른 측면에서, 각 폴리알라닌 도메인은 [Bp(A)qZr]n (서열식별번호: 22) 또는 [(BAs)tZr]n (서열식별번호: 23)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 B는 Lys, Arg, Asp 또는 Glu이고; A는 Ala이며; Z는 Lys, Arg, Asp 또는 Glu이고; n은 1 내지 50의 정수이며; p는 0 내지 2의 정수이고; q는 1 내지 50의 정수이며; r은 0 내지 2의 정수이고; s는 1 내지 5의 정수이며; 및 t는 1 내지 50의 정수이다. 또 다른 측면에서, 구조화된 도메인은 (A)25 (서열식별번호: 7); K(A)25K (서열식별번호: 8); D(A)25K (서열식별번호: 9); GD(A25)K (서열식별번호: 10); 또는 GK(A25)K (서열식별번호: 11) 중 1종 이상을 포함한다. 또 다른 측면에서, 프랙토머 중 약 4 % 내지 약 75 %는 구조화된 도메인으로 구성된다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 하위 임계 용해 온도(lower critical solution temperature) (LCST) 미만에서 가용성이다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)를 가지며, 여기서 가열 전이 온도 (Tt -가열)와 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)는 동일하거나, 또는 가열 전이 온도 (Tt-가열)가 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)에 비해 더 높다.
또 다른 실시양태에서, 프랙토머는 복수의 불규칙 도메인; 및 복수의 구조화된 도메인을 포함한다. 일 측면에서, 프랙토머는 [(GXGVP)n-α-나선]m의 일반 구조를 가지며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있고, α-나선은 약 5 내지 50개의 알라닌 잔기를 가지는 임의의 폴리알라닌 기반 α-나선이다. 또 다른 측면에서, 프랙토머는 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m의 구조를 가지며, 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수이다 (예컨대 [(서열식별번호: 2)n-(서열식별번호: 10 또는 11)]m). 또 다른 측면에서, 프랙토머는 하기 구조들 중 1종 이상을 포함한다:
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12);
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 13);
M[(GVGVP)15-GK(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 14);
M[(GVGVP)15-GK(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 15);
M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 16);
M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 17);
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18); 또는
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 19).
일 측면에서, 프랙토머는 하기의 구조를 포함한다:
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12); 또는
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18).
본원에서 기술되는 바와 같은 예시적인 서열, 서열 모티프 및 프랙토머 구성체를 하기 표 1에 나타내었다.
<표 1>
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
프랙토머는 UV 가교결합성 아미노산 유도체와 같이 자연 발생이 아닌 아미노산 유도체를 포함할 수도 있다. 상기 비-자연 아미노산 유도체는 서로 다른 프랙토머들 사이 및 동일 프랙토머 내에 공유 가교결합을 도입하는 데에 사용될 수 있다. 예를 들면, UV 가교결합성 아미노산 유도체를 포함하는 프랙토머는 UV 광에 노출될 수 있으며, 이는 아미노산 유도체와 또 다른 프랙토머의 아미노산 측쇄 사이에, 또는 동일 프랙토머 (아미노산 유도체를 가짐)의 아미노산 측쇄와 공유 가교결합이 형성되는 것으로 이어질 수 있다. 상기 UV 가교결합성 아미노산 유도체는 아지드 기에 의해 관능화된 임의의 아미노산일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 아미노산 유도체는 파라-아지도페닐알라닌이다.
UV 가교결합성 아미노산 유도체는 상이한 온도에서 전이하는 프랙토머의 능력에 영향을 주지 않으면서 가변적인 양으로 포함될 수 있다. 예를 들면, UV 가교결합성 아미노산 유도체는 약 0.1 % 내지 약 20 % (프랙토머 중), 예컨대 약 0.5 % 내지 약 15 %, 또는 약 1 % 내지 약 10 % (프랙토머 중)로 프랙토머 내에 포함될 수 있다.
프랙토머는 온도에 따른 용해도 및 응집물 형성을 변화시키는 것에 의해 상 전이 거동을 나타낼 수 있다. 프랙토머의 상 전이 거동은 프랙토머 불규칙 도메인의 상 전이 거동으로부터 유래할 수 있다. "상 전이" 또는 "전이"는 특정 온도에서 급격하게 발생하는 폴리펩티드의 응집을 지칭할 수 있다. 상 전이는 가역적일 수 있지만, 구체적인 용해 온도는 구체적인 응집 온도와 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, 프랙토머는 하위 임계 용해 온도 (LCST) 미만에서 가용성이다. LCST는 폴리펩티드가 혼화성인 것 미만의 온도이다.
전이 온도 (Tt)는 프랙토머가 일 상태에서 또 다른 것으로 변화하는 온도이다. 상태에는 예를 들면 가용성 폴리펩티드, 젤, 및 가변적인 크기 및 차원의 응집물이 포함될 수 있다. 프랙토머는 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 가열 전이 온도 (Tt -가열)는 농도-의존성이다. 일부 실시양태에서, 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)는 농도-비의존성이다. Tt -가열은 일차적으로 불규칙 도메인에 의해 결정될 수 있다. Tt -냉각은 일차적으로 구조화된 도메인에 의해 결정될 수 있다.
전이 온도 (LCST 또는 Tt) 미만에서, 프랙토머는 고도로 가용성일 수 있다. 전이 온도를 초과하여 가열시, 프랙토머는 소수성으로 붕괴하여 응집함으로써, 분리된 상을 형성할 수 있다.
프랙토머는 다양한 온도에서 상 전이를 할 수 있다. 프랙토머는 약 0 ℃ 내지 약 100 ℃, 약 10 ℃ 내지 약 50 ℃, 또는 약 20 ℃ 내지 약 42 ℃의 전이 온도 (Tt)를 가질 수 있다. 가열 전이 온도 (Tt -가열)와 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)는 동일할 수 있다. 본원에서 사용될 때, 온도가 서로 2.0 ℃, 1.0 ℃, 0.5 ℃ 또는 0.1 ℃ 이내인 경우, 온도는 "동일"할 수 있다. 일부 실시양태에서, 가열 전이 온도 (Tt -가열)는 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)를 초과한다. 프랙토머가 Tt -냉각을 초과하는 Tt -가열을 가지는 실시양태에서, 2종 전이 온도 사이의 차이는 히스테레시스(hysteresis)로 지칭될 수 있는데, 일부 실시양태에서 프랙토머는 약 5 ℃ 내지 약 70 ℃, 예컨대 약 5 ℃ 내지 약 60 ℃ 또는 약 10 ℃ 내지 약 50 ℃의 히스테레시스를 가진다.
프랙토머의 상 전이 거동은 프랙토머의 가역적 상 전이 거동을 사용하여 가용성 및 불용성 상을 통해 용액을 순환시킴으로써 오염물을 제거하는 "역 전이 순환(inverse transition cycling)"으로 지칭되는 방법에 따른 프랙토머의 정제에 이용될 수 있다. 상 전이는 예를 들면 암모늄 술페이트 또는 소듐 클로라이드와 같은 코스모트로픽 염(kosmotropic salt)을 사용하여 촉발될 수도 있다. 상기 코스모트로픽 염은 프랙토머를 포함하는 용액에 첨가될 수 있는데, 프랙토머가 응집물을 형성하거나 용액으로부터 침전될 때까지 코스모트로픽 염이 첨가된다. 응집물은 원심분리에 의해 펠렛화된 후 제2의 용액 또는 완충제에 재현탁될 수 있다. 프랙토머의 응집물은 일단 그의 Tt 미만으로 냉각되고 나면, 또는 코스모트로픽 염이 용액으로부터 제거되는 경우, 용액 중에 재-가용화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 어떠한 크로마토그래피 정제도 없이 정제된다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 재조합으로 생성된 후, 예를 들면 이. 콜리와 같은 세균 배양물로부터 정제된다.
일부 실시양태에서, 프랙토머는 온도가 Tt -가열을 초과할 때 응집물을 형성할 수 있다. 상기 응집물은 Tt -냉각 미만의 온도 아래로 냉각될 경우 재가용화될 수 있다.
복수의 프랙토머에 의해 형성되는 응집물은 프랙토머의 구조로부터 야기될 수 있는 유리한 특성들을 가질 수 있다. 예를 들면, 응집물은 물리적 비-공유 가교결합을 가질 수 있다. 이러한 물리적 비-공유 가교결합은 서로 상호작용하는 구조화된 도메인(들)의 나선 번들링(helical bundling)으로부터 야기될 수 있다. 응집물은 물리적 비-공유 가교결합에 더하여 공유 가교결합 (예컨대 화학적 가교결합)을 가질 수도 있다. 공유 가교결합은 그의 다공성 구조를 변경시키지 않으면서 그의 기계적 안정성을 증가시키기 위하여 응집물에 포함될 수 있는데, 일부 실시양태에서 응집물은 복수의 프랙토머로부터 형성될 수 있으며, 이후 (응집물의 형성 후에) 공유 가교결합에 의해 추가로 안정화될 수 있다. 공유 가교결합은 본원에서 기술되는 바와 같은 아지드 관능성을 가지는 UV 가교결합성 아미노산 유도체를 통하여 도입될 수 있다. 응집물에 도입될 수 있는 가교결합의 다른 예로 소형 분자 가교결합 및 시스테인 디술피드 가교가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 화학적 소형 분자 가교결합의 예는 프랙토머 내의 리신들을 가교결합시킬 수 있는 테트라키스(히드록시메틸)포스포늄 클로라이드 (TMPC)이다.
또한, 복수의 프랙토머에 의해 형성되는 응집물은 액체-유사 코아세르베이트(coacervate) 구조로부터 그것을 구별하는 고체-유사 특성을 가질 수 있다. 예를 들면, 응집물은 그의 G"보다 2× 더 크거나, 5× 더 크거나, 10× 더 크거나, 15× 더 크거나, 20× 더 크거나, 25× 더 크거나, 30× 더 크거나, 35× 더 크거나, 50× 더 크거나, 또는 100× 더 큰 G'를 가지는 것과 같이 그의 손실 모듈러스 (G")보다 더 큰 저장 모듈러스 (C)를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 응집물은 그의 G"보다 10× 더 내지 50× 더, 또는 20× 더 내지 35× 더 큰 것과 같이 그의 G"보다 2× 더 내지 100× 더 큰 G'를 가진다.
복수의 프랙토머로부터 형성되는 응집물은 다양한 크기 및 차원의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 응집물은 안정한 3-차원 매트릭스이다. 일부 실시양태에서, 응집물은 프랙탈(fractal)-유사형이며, 일부 실시양태에서 응집물은 젤-유사형이고, 일부 실시양태에서 응집물은 공극 부피를 가지는 다공성, 예컨대 응집물의 비단백질 풍부 상이다. 일부 실시양태에서, 상기 공극 부피는 조정가능하다. 예를 들면, 응집물은 약 60 % 내지 약 90 % (응집물 부피 중)의 공극 부피를 가질 수 있으며, 또한 응집물은 약 1 μm 내지 약 100 μm, 예컨대 약 1 μm 내지 약 10 μm, 약 3 μm 내지 약 5 μm, 약 25 μm 내지 약 60 μm, 약 30 μm 내지 약 50 μm, 또는 약 3 μm 내지 약 50 μm의 직경을 가지는 세공을 포함할 수 있다.
역시 제공되는 것은 본원에서 기술되는 프랙토머를 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 벡터가 본원에서 상술되는 프랙토머를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 폴리펩티드의 발현을 달성하기 위해서는, 전사를 유도하는 프로모터, 전사/번역 종결인자, 및 단백질을 코딩하는 핵산의 경우 번역 개시를 위한 리보솜 결합 부위를 함유하는 발현 벡터에 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 하위클로닝할 수 있다. 벡터의 예로는 pET24가 있다. 적합한 세균 프로모터에 대해서는 관련 기술분야에 잘 알려져 있다. 역시 제공되는 것은 본원에서 기술되는 바와 같은 프랙토머를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 사용하여 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포이다. 단백질을 발현시키기 위한 세균 발현 시스템은 예를 들면 이. 콜리 (E. coil), 바실루스 (Bacillus) 종 및 살모넬 라(Salmonella)로서 구입가능하다. 문헌 [Paiva et al., Gene 22: 229-235 (1983)]; [Mosbach et al., Nature 302: 543-545 (1983)]을 참조한다. 그와 같은 발현 시스템들의 키트가 시중에서 구입가능하다. 포유동물 세포, 효모 및 곤충 세포를 위한 진핵 발현 시스템들이 관련 기술분야에 잘 알려져 있으며, 역시 시중에서 구입가능하다. 본 발명에서는, 레트로바이러스 발현 시스템이 사용될 수 있다.
프랙토머는 관련 기술분야 통상의 기술자에 따라 숙주 세포에서 재조합으로 발현될 수 있다. 프랙토머는 관련 기술분야 통상의 기술자에게 알려져 있는 임의의 수단에 의해 정제될 수 있다. 예를 들면, 프랙토머는 크로마토그래피, 예컨대 액체 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 또는 친화성 크로마토그래피, 또는 이들의 조합를 사용하여 정제될 수 있는데, 일부 실시양태에서는 크로마토그래피 없이 프랙토머가 정제되며, 일부 실시양태에서는 역 전이 순환을 사용하여 프랙토머가 정제된다.
다른 실시양태에서, 본 개시내용은 추가로 본원에서 복수의 프랙토머를 포함하는 스캐폴드(scaffold)를 제공한다. 폴리펩티드가 응집물을 형성하도록, 상기 스캐폴드는 프랙토머의 전이 온도를 초과하는 온도에서 형성될 수 있다. 스캐폴드는 주입가능할 수 있다.
일 실시양태에 따라 추가로 제공되는 것은 세포성 스캐폴드이다. 세포성 스캐폴드는 스캐폴드 및 복수의 세포를 포함한다. 상기 세포에는 다양한 유형이 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 줄기 세포, 세균 세포, 또는 인간 조직 세포, 또는 이들의 조합을 포함한다.
스캐폴드는 낮은 면역원성 또는 낮은 항원성 또는 이들 둘 다를 가질 수 있다. 스캐폴드는 세포 성장, 세포 동원 및 세포 분화, 또는 이들의 조합 중 적어도 1종을 촉진할 수 있다. 스캐폴드 또는 세포성 스캐폴드는 세포 이식, 조직 재생, 세포 배양, 및 세포-기반 시험관 내 검정에 적합할 수 있다. 또한, 스캐폴드 및/또는 세포성 스캐폴드는 혈관구조의 형성, 상처 치유 또는 이들의 조합을 촉진할 수 있다.
일 실시양태에 따라 추가로 제공되는 것은 약물 전달 조성물이다. 상기 약물 전달 조성물은 Tt -가열 초과에서 응집물로 자가-조립되는 본원에서 상술되는 바와 같은 복수의 프랙토머, 및 응집물 내에 봉입되는 작용제를 포함할 수 있다. 상기 작용제는 치료제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 소형 분자, 뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드, 단백질, 폴리펩티드, 탄수화물, 지질 및 이들의 조합에서 선택된다. 일부 실시양태에서, 작용제는 지방 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 지방 조직은 지방흡인물을 포함한다. 일 실시양태에서, 약물 전달 조성물은 명기되는 범위 내의 모든 정수를 포함하여 약 10-90 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 명기되는 범위 내의 모든 정수를 포함하여 약 25-90 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 25 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 35 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 45 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 50 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 60 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 70 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 80 부피%의 지방흡인물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 90 부피%의 지방흡인물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 상기에서 상술된 바와 같은 프랙토머 및 또는 약물 전달 조성물은 제약 관련 기술분야 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 표준 기술에 따라 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 이에 따라, 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 캐리어, 부형제 또는 활성 제약 성분 (API)와 함께 프랙토머 또는 그의 응집물, 및/또는 프랙토머 또는 그의 응집물과 유효량의 지방 조직 (예컨대 지방흡인물)을 포함할 수 있다. 조성물은 대상체에의 투여용으로 제조될 수 있다. 그와 같은 조성물은 투약분 중으로, 및 특정 대상체의 연령, 성별, 체중 및 이상, 및 투여 경로와 같은 인자들을 고려하여 의학 관련 기술분야 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 기술에 의해 투여될 수 있다.
조성물은 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있다. 예방적 투여에서, 그것은 반응을 유도하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 치료 적용분야에서, 그것은 치료 효과를 도출하기에 충분한 양으로 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 이를 달성하는 데에 적정한 양은 "치료 유효 투여량"으로 정의된다. 이와 같은 용도에 효과적인 양은 예컨대 투여되는 프랙토머 요법의 구체적인 조성, 투여 양식, 질환의 단계 및 중증도, 환자의 일반적인 건강 상태, 및 처방 의사의 판단에 따라 달라지게 되는데, 일부 실시양태에서 프랙토머는 작용제, 세포, 지방 조직 (예컨대 지방흡인물) 또는 이들의 조합과 공동-투여될 수 있다.
본원에서 제공되는 조성물은 모두의 내용이 전체적으로 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Donnelly et al., Ann. Rev. Immunol . 15: 617-648 (1997)]; 펠그너(FeLgner) 등의 U.S. 특허 제5,580,859호; 페이그너(Feigner)의 U.S. 특허 제5,703,055호; 및 카슨(Carson) 등의 U.S. 특허 제5,679,647호에 기술되어 있는 바와 같이 관련 기술분야에 잘 알려져 있는 방법에 의해 투여될 수 있다. 프랙토머는 예를 들면 백신 건(gun)을 사용하여 개체에게 투여될 수 있는 입자 또는 비드에 복합체화될 수 있다. 관련 기술분야 통상의 기술자라면 생리학적으로 허용되는 화합물을 포함하는 제약상 허용되는 캐리어의 선택이 예를 들면 투여 경로에 따라 달라진다는 것을 알고 있을 것이다.
조성물은 다양한 경로를 통하여 전달될 수 있다. 통상적인 전달 경로에는 비경구 투여, 예컨대 피내, 근육내 또는 피하 전달이 포함된다. 다른 경로로는 경구 투여, 비내, 질내, 경피, 정맥내, 동맥내, 종양내, 복막내 및 표피 경로가 포함된다. 일부 실시양태에서, 프랙토머는 정맥내로, 동맥내로 또는 복막내로 대상체에게 투여된다.
방법
본원에서 제공되는 조성물은 수많은 방법에서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 일 측면은 본원에서 제공되는 바와 같은 조성물 치료 유효량을 대상체에게 투여함으로써 자가 지방 이식편이 대상체에서 증강되도록 하는 것을 포함하거나, 그것으로 이루어지거나, 또는 본질적으로 그것으로 이루어진, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법을 제공한다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 치료 유효량의 본원에서 제공되는 바와 같은 프랙토머 및 치료 유효량의 지방 조직을 대상체에게 공동-투여하는 것을 포함하거나, 포함하거나, 그것으로 이루어지거나, 또는 본질적으로 그것으로 이루어진, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 지방 조직은 지방흡인물을 포함한다. 일 실시양태에서, 프랙토머 및 지방 조직은 동시에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 프랙토머는 지방 조직 전에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 프랙토머는 지방 조직 후에 투여된다.
관련 기술분야 통상의 기술자라면, 임의 실시양태 또는 그의 측면의 영역에서 벗어나지 않고도 본원에서 기술되는 조성물, 제제, 방법, 공정 및 적용분야에 대한 적합한 변형 및 적합화가 이루어질 수 있다는 것을 알고 있을 것이다. 제공되는 조성물 및 방법은 예시적인 것으로, 명기되는 실시양태들 중 어느 것의 영역을 제한하고자 하는 것이 아니다. 본원에서 개시되는 다양한 실시양태, 측면 및 선택사항들 모두는 어떠한 변이 또는 반복으로도 조합될 수 있다. 본원에서 기술되는 조성물, 제제, 방법 및 공정의 영역은 본원에서 기술되는 실시양태, 측면, 선택사항, 예 및 선호도의 모든 실제적이거나 잠재적인 조합을 포함한다. 본원에서 기술되는 예시적인 조성물 및 제제는 임의의 성분을 생략하거나, 본원에서 개시되는 임의의 성분을 대체하거나, 또는 본원의 다른 어딘가에서 개시되는 임의의 성분을 포함할 수 있다. 본원에서 개시되는 조성물 또는 제제들 중 어느 것의 임의 성분의 질량 대 제제 중 임의의 다른 성분의 질량 또는 제제 중 다른 성분들의 총 질량의 비는 그들이 명시적으로 개시되는 것처럼 의거 개시된다. 참조로 포함되는 특허 또는 공개들 중 어느 것에서의 임의 용어의 의미가 본 개시내용에서 사용되는 용어의 의미와 충돌하는 경우, 본 개시내용의 용어 또는 구의 의미가 우선한다. 또한, 전기 논의는 단순히 예시적인 실시양태들을 개시하여 기술한 것이다. 본원에서 인용되는 모든 특허 및 공개들은 그들의 구체적인 교시에 있어서 본원에 참조로 포함된다.
본원에서 기술되는 발명의 다양한 실시양태 및 측면들을 하기의 조항들로 요약하였다:
조항 1. 하기를 포함하는 조직 매트릭스 조성물:
재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머); 및
지방 조직.
조항 2. 프랙토머가 하기를 포함하는 조항 1의 조성물:
복수의 불규칙 도메인; 및
복수의 구조화된 도메인.
조항 3. 불규칙 도메인이 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호: 1)을 포함하며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, n은 1 이상의 정수이며;
구조화된 도메인이 폴리알라닌 도메인을 포함하는
조항 2의 조성물.
조항 4. 불규칙 도메인이 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 X는 Val (서열식별번호: 3), 또는 Ala (서열식별번호: 4), 또는 Ala와 Val의 혼합물이고, n은 1 내지 50의 정수인 조항 2의 조성물.
조항 5. X가 10:1 내지 1:10 (Ala:Val) 비의 Ala와 Val의 교호 반복인 조항 4의 조성물.
조항 6. X가 1:1 (서열식별번호: 5) 또는 1:4 (서열식별번호: 6) 비의 Ala와 Val의 교호 반복인 조항 5의 조성물.
조항 7. 폴리알라닌 도메인이 (Ala)m을 포함하며, 여기서 m은 5 내지 50의 정수인 조항 3의 조성물.
조항 8. 폴리알라닌 도메인이 하기 중 1종 이상을 포함하는 조항 3의 조성물:
(A)25 (서열식별번호: 7);
K(A)25K (서열식별번호: 8);
D(A)25K (서열식별번호: 9);
GD(A25)K (서열식별번호: 10); 또는
GK(A25)K (서열식별번호: 11).
조항 9. 폴리펩티드가 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m을 포함하며; 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수인 ([(서열식별번호: 2)n-(서열식별번호: 10 또는 11)]m) 조항 3의 조성물.
조항 10. 폴리펩티드가 하기 중 1종 이상을 포함하는 조항 3의 조성물:
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12);
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 13);
M[(GVGVP)15-GK(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 14);
M[(GVGVP)15-GK(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 15);
M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 16);
M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 17);
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18); 또는
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 19).
조항 11. 폴리펩티드가 하기 중 1종 이상을 포함하는 조항 3의 조성물:
M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12); 또는
M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18).
조항 12. 프랙토머가 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)를 가지는 청구항 1-11 중 어느 하나의 조성물.
조항 13. 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)가 농도-비의존성인 조항 12의 조성물.
조항 14. 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)가 약 10 ℃ 내지 약 45 ℃ 범위인 조항 12의 조성물.
조항 15. 프랙토머가 Tt -가열 초과에서 고체 응집물을 형성하는 청구항 12-14 중 어느 하나의 조성물.
조항 16. 고체 응집물이 Tt -냉각 미만으로 냉각되는 경우 재가용화되는 조항 15의 조성물.
조항 17. 고체 응집물이 안정한 3-차원 매트릭스인 조항 15의 조성물.
조항 18. 고체 응집물이 복수의 미세세공을 포함하는 조항 15의 조성물.
조항 19. 복수의 미세세공이 크기가 약 1 μm 내지 약 150 μm 범위인 조항 18의 조성물.
조항 20. 약 200 μM 내지 약 2 mM 사이의 프랙토머를 포함하는 조항 1의 조성물.
조항 21. 지방 조직이 지방흡인물을 포함하는 조항 1의 조성물.
조항 22. 부피 기준 약 10 % 내지 약 90 % 범위의 지방흡인물을 포함하는 조항 21의 조성물.
조항 23. 부피 기준 약 25 % 내지 약 75 % 범위의 지방흡인물을 포함하는 조항 21 또는 22의 조성물.
조항 24. 부피 기준 약 50 %의 지방흡인물을 포함하는 청구항 22-23 중 어느 하나의 조성물.
조항 25. 약 1:9 내지 약 9:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조항 21의 조성물.
조항 26. 약 1:3 내지 약 3:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조항 21의 조성물.
조항 27. 약 1:1 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조항 21의 조성물.
조항 28. 성형가능한 액체 또는 반고체인 조항 1의 조성물.
조항 29. 주입가능하거나 이식가능한 조항 1의 조성물.
조항 30. 2- 또는 3-차원 형상, 영역 또는 부피로 성형가능하거나 몰딩가능한 조항 1의 조성물.
조항 31. 프랙토머가 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 하는 조항 1의 조성물.
조항 32. 치료 유효량의 조항 1의 조성물을 대상체에게 투여함으로써 자가 지방 이식편이 대상체에서 증강되도록 하는 것
을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법.
조항 33. 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직을 대상체에게 공동-투여하는 것
을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법.
조항 34. 지방 조직이 지방흡인물을 포함하는 조항 33의 방법.
조항 35. 프랙토머 및 지방 조직이 동시에 또는 순차적으로 투여되는 조항 33의 방법.
조항 36. 프랙토머 및 지방 조직이 순차적으로 투여되며, 프랙토머가 지방 조직의 투여 전에 투여되는 조항 35의 방법.
조항 37. 프랙토머 및 지방 조직이 순차적으로 투여되며, 지방 조직이 프랙토머의 투여 전에 투여되는 조항 35의 방법.
조항 38. 프랙토머 및 지방 조직이 시험관 내에서 조합되어, 2- 또는 3-차원 형상, 영역 또는 부피로 성형되거나 몰딩되고, 대상체에게 제자리 이식되는 조항 35의 방법.
조항 39. 프랙토머 및 지방 조직이 투여 전에는 성형가능한 액체, 반고체 또는 몰딩된 반고체이며, 투여 후에는 고체 응집물을 형성하는 조항 33의 방법.
조항 40. 프랙토머 및 지방 조직이 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 대상체에게 공동-투여되며, 대상체 체온에의 노출 후 프랙토머 및 지방 조직이 고체를 형성하는 조항 39의 방법.
조항 41. 프랙토머가 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 하는 조항 33의 방법.
조항 42. (a) 대상체로부터 지방 조직을 수득하는 것; 및
(b) 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머)를 단계 (a)의 지방 조직과 조합하여 혼합물을 형성시키는 것
을 포함하는 자가 지방 이식편 조성물의 제조 방법.
조항 43. (c) 혼합물을 형상, 영역 또는 부피로 성형하는 것
을 추가로 포함하는 조항 44의 방법.
조항 44. (d) 주입 또는 이식에 의해 대상체에게 혼합물을 공동-투여하는 것
을 추가로 포함하는 조항 42 또는 43의 방법.
조항 45. 혼합물이 프랙토머의 Tt -가열을 초과하는 온도에서 고체 응집물을 형성하는 조항 44의 방법.
조항 46. 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머), 및 조합을 위한 용기, 특정 부피 차원을 위한 몰드, 또는 지방 조직 흡인 및/또는 투여를 위한 수단 중 1종 이상을 포함하는 키트.
조항 47. 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직의, 자가 지방 이식을 필요로 하는 대상체에서의 자가 지방 이식을 위한 용도.
[ 실시예 ]
실시예 1
지방 조직 (지방)과의 프랙토머의 혼합 방법
지방 이식은 지방흡인을 사용하여 환자 신체의 일 부분으로부터 지방 조직을 제거한 후, 동일 절차 동안 재구성 또는 화장용 강화를 위하여 새로운 영역에 그 재료를 주입하는 임상 과정이다. 지방흡인된 지방은 과량의 혈액, 오일 및 비-지방 조직을 제거하기 위하여 처리되며, 처리된 조직 (지방흡인물로 지칭됨)은 환자 (또 다른 신체 영역)에의 역주입을 위하여 주사기에 수집된다.
정제된 지방흡인물은 재구성될 영역에의 주입을 위하여 액체 프랙토머와 조합될 수 있다. 도 1은 안정화된 지방 이식편의 재-주입을 위하여 프랙토머를 수확된 지방과 조합하는 제안 방법을 보여준다. 수확된 지방흡인물은 프랙토머 매트릭스 용액과 혼합되며, 지방흡인물:프랙토머 혼합물은 이후 환자의 결핍 영역에 주입된다. 증가된 체온은 프랙토머가 고체 스캐폴드 구조를 형성하도록 하며, 이는 이식편 안정화로 이어진다. 정제된 지방흡인물은 가열된 생체외 몰드에서 액체 프랙토머와 조합될 수도 있는데, 이 경우 프랙토머는 가열될 때 응집되어 몰딩되는 지방 형상을 안정화하며, 이후 원하는 환자의 영역에 이식될 수 있다.
도 2는 처리되지 않은 지방과 처리된 지방흡인물 사이의 구조적 차이를 도시한다. 지방흡인 및 처리 후, 지방은 그의 고체-유사 특성을 상실하며, 형상 또는 부피를 유지하기 위한 기계적 완전성을 가지지 않는다. 지방흡인물을 프랙토머와 혼합하는 것에 의해, 구조적 및 기계적 완전성이 강화됨으로써 지방 이식편의 형상 유지 및 부피 유지를 도울 수 있다.
프랙토머 (서열식별번호: 12)는 열 반응성이어서, 가열될 경우 고체인 다공성 엘라스틴-유사 네트워크를 형성한다 (도 3a). 프랙토머는 액체로서, 실온에서는 주입가능하지만, 체온에서는 응집되어 고체 다공성 네트워크를 형성하는데, 여기서 더 높은 온도는 포획된 지방흡인물을 포함하는 프랙토머 스캐폴드 형성을 개시한다. 프랙토머가 고체 다공성 네트워크로의 상 전이를 겪는 임계 온도는 조정가능하다. 프랙토머의 조성 및 분절 조직화를 조정하는 것에 의해, 높은 표면 대 부피 비 및 자연 엘라스틴과 유사한 프랙탈 차원을 가지는 기계적으로 안정한 네트워크를 설계하는 것이 가능하다. 프랙토머 (서열식별번호: 12)의 다공성 네트워크는 더 높은 온도에서는 통상적인 히드로겔에 비해 더 큰 영양소 유동도 가능하게 한다 (도 3b).
실시예 2
프랙토머는 몇 가지 저장 조건에서 자가-안정성임
프랙토머의 저장 수명을 평가하기 위하여, 고-순도 프랙토머 (서열식별번호: 12)의 적어도 3개 배치 (반복 보장)를 분취량으로 분석하고, 하기 3종의 상이한 조건하에 저장하였다: (1) 동결건조하여, 실온에서 저장, (2) 동결건조하여, -20 ℃에서 저장, (3) PBS 중에 재현탁하여, -20 ℃에서 저장. 6개월까지의 주기적인 시점에, UV 분광광도측정법 광학 밀도 및 SDS-PAGE를 사용하여 단백질 분해의 발생을 평가하였다 (도 4a-b). 프랙토머 단백질은 고도로 불규칙성이며 그에 따라 항상 기능상 변성되기 때문에, 대부분의 단백질에 비해 그것이 상당히 감축된 저장 요건을 가진다. 동결건조되고 -20 ℃에서 저장된 프랙토머 샘플은 시간 경과에 따른 정확한 Tt -가열 또는 Tt -냉각 상 전이의 이동을 나타내지 않았으며 (도 4a), 다른 두 가지 조건하에서 저장된 샘플도 유사한 결과를 나타내었다. 또한, 어떠한 시점에서도 SDS-PAGE에서 표적 프랙토머 단백질 밴드의 상실 또는 이동은 관찰되지 않았으며, 감축/분해 생성물, 불순물 또는 다른 추가적인 밴드는 관찰되지 않았다 (도 4b).
실시예 3
프랙토머는 건강한 지방세포를 봉입하여 형상 및 프로젝션을 개선할 수 있음
폐기된 인간 지방흡인물을 상이한 프랙토머 농도와 혼합하고, 공초점 현미경법 및 조직학을 사용하여 분석하였다 (도 5a-c). 모든 경우에서, 지방흡인물은 >90 %의 지방흡인 캐뉼러를 통과하기에 충분하게 작은 단편인 50-500개 세포의 군으로 군집화된 대형 지방세포로 구성되었다. 250 μM 내지 1 mM 범위의 프랙토머 농도를 1:1 비로 실온에서 지방흡인물과 혼합한 다음, 30분 동안 37 ℃로 인큐베이터에 배치한 후, (a) 공초점 현미경법을 사용하여 염색 및 이미지화하는 것, 또는 (b) 10 % 포르말린 중에서 밤새 고정한 후 이어서 파라핀 매립하고, 조직학적 분석용으로 H&E 염색하는 것 중 어느 하나였다.
도 5a는 지방흡인물:프랙토머 (서열식별번호: 12) 혼합물의 공초점 현미경법 분석을 보여준다. 지방흡인물을 1:1의 비로 상이한 프랙토머 농도 (저 = 250 μM, 고 = 750 μM)와 혼합한 후, LipidTOX (적색, 프랙토머도 염색함) 및 DAPI (청색)를 사용하여 염색하였다. 이미지화는 지방세포 구조 또는 생존율에 변화가 없음을 밝혔다. 개별 지방세포들 사이의 작은 간극에서 프랙토머가 관찰되기는 하였지만, 프랙토머는 일차적으로 지방세포 군집을 함께 유지하는 고도로 다공성인 "접착제" 유형으로 기능한다.
도 5b-c는 지방흡인물:프랙토머 (서열식별번호: 18)의 1:1 비 혼합물과 비교한 지방 단독의 조직학적 분석을 보여준다. 지방흡인물 단독 및 프랙토머 (250 μM)와 혼합된 지방흡인물을 고정하고, H&E를 사용하여 염색하였다. 프랙토머는 더 농축된 지방 세포의 영역들 사이에 점재되어 있음을 볼 수 있다.
실시예 4
프랙토머 단독 및 지방+프랙토머를 사용한 3D 모델 생성
3D 프린팅된 반구 몰드를 사용하여, 지방과 공동-주입되었을 때 형상 및 프로젝션을 유지하는 프랙토머의 능력도 평가하였다. 프랙토머 (서열식별번호: 12)를 액체 상태로 몰드에 주입하고, 37 ℃에서 5분 동안 응집시킨 후, 몰드로부터 제거하였다 (도 6a). 200 μM 내지 2 mM 범위의 농도로 프랙토머 단독 (서열식별번호: 12)을 사용한 경우, 형상을 유지하는 데에 ~500 μM의 최소 농도를 사용하여 설계되는 프로젝션 유지가 필요하였다 (도 6b). 도 6b는 저 (500 μM), 중간 (750 μM) 및 고 (2 mM) 농도로 프랙토머 단독을 몰딩하는 것이 농도 증가에 따른 증가된 형상 보존을 나타낸다는 것을 입증하고 있다. 지방 형상 안정성에 대한 그의 효과를 확인하기 위하여, 프랙토머 용액 (750 μM) (서열식별번호: 12)을 다양한 비로 인간 지방흡인물과 추가로 혼합하였다 (도 6c). 프랙토머는 단독으로는 단순하게 오일계 액체로 거동하는 지방흡인물의 형상 보존을 상당히 향상시킬 수 있었다 (도 6c). 프랙토머 용액 (750 μM) (서열식별번호: 18)을 3D 인쇄된 몰드 중에서 1:1 비로 지방흡인된 돼지 지방과 혼합한 후 37 ℃에 배치하여 프랙토머가 응집되도록 하였을 때, 동일한 결과가 관찰되었다 (도 6d). 이러한 결과는 지방이 프랙토머와 혼합되었을 때의 놀랍고도 예상치 못한 보완적인 기계적 상호작용을 시사한다.
전체적으로, 프랙토머와의 지방흡인물의 혼합물은 몰드로부터의 방출 후의 형상 유지를 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 가장 놀랍고도 예상치 못한 발견은 지방 + 프랙토머 혼합물의 성형성이었다. 형성 후에도, 봉입된 지방은 구조적 완전성의 손실 없이 몰딩, 성형, 절단 및 일반적으로 조작될 수 있었다. 원하는 형상으로 생체 내에서 이와 같은 재료를 조작하는 능력은 환자의 결함을 충전하고 재건하기 위하여 지방흡인물을 사용하는 외과의사에게 전례없는 양의 제어력을 제공한다.
실시예 5
프랙토머의 형상은 주입시 조절될 수 있음
프랙토머 주입물의 형상은 주입 패턴을 바탕으로 조절될 수도 있다. 형광 표지된 프랙토머 용액 (750 μM) (서열식별번호: 12)을 3종의 상이한 형상 패턴으로 마우스의 옆구리 뒤쪽에 주입하고, 주입 1개월 및 4개월 후에 IVIS 스펙트럼 이미지화를 사용하여 형상을 모니터링하였다. 3종 전체 형상 - 구체, 신장된 막대 및 분산된 점들 -에서, 주입물은 주입물 수명 내내 그의 원하는 형상을 유지하였다 (도 7).
실시예 6
프랙토머는 장기 안정성을 나타내며, 분해가 농도에 따라 조절가능함
지방 이식을 증강하는 데에 사용될 경우, 프랙토머는 지방 증식에 부합하는 일정상에서 분해 및 재흡수됨으로써 비-독성 아미노산으로 그것이 분해될 때 프랙토머 부피를 지방 세포가 대체하는 것을 가능하게 하도록 설계되어야 한다. 궁극적으로 완전히 환자 자신의 조직으로 구성되는 조직 이식편으로 귀결되는 조절 분해는 외래 신체 반응의 장기적인 위험성을 방지하는데, 프랙토머가 영구 이식물인 것으로 예정되지 않기 때문이다.
프랙토머의 장기 안정성을 평가하기 위하여, 근 적외선 염료를 사용하여 프랙토머 (서열식별번호: 12)의 상이한 제제들을 형광 표지하고, BL/6 면역적격 마우스에 주입하였다. BL/6 마우스의 사용은 면역-조절 분해가 존재할 경우 포착되게 되는 것을 보장하였다. 이후, IVIS 스펙트럼 생체내 이미지화를 사용하여 10개월에 걸쳐 프랙토머 단백질의 분해 속도 및 생체내 안정성을 추적하였다. 6개월에서의 형광 보유의 스냅사진은 프랙토머 분해가 농도 (저 = 250 μM, 중간 = 750 μM, 고 = 1500 μM)에 의해 조절될 수 있음을 나타내었는데, 형광 강도가 저농도에 비해 중간 및 고농도의 프랙토머에서 상당히 더 높았기 때문이다 (도 8a). 상이한 프랙토머 농도의 제제들을 사용하여 주입된 BL/6 마우스에서의 대표적인 형광 분광법 이미지를 도 8b에 나타내었다.
저농도 프랙토머 (250 μM) 제제의 사용은 3개월까지 계속하여 재흡수되었다 (도 8c). 형광 스캔에서는 프랙토머의 존재가 분명하였던 반면, 시각적이거나 촉지가능한 부피는 분명하지 않았다 (도 8c). 프랙토머의 중간 (750 μM) 및 고 (1500 μM) 농도 제제는 더욱 안정해서 더 긴 생체내 영속성을 가지는 것으로 나타났다 (도 8c).
실시예 7
프랙토머는 지방 생존능력 및 부피 유지를 향상시킴
프랙토머 (서열식별번호: 12)의 저농도 (250 μM) 용액을 사용하여, 먼저 지방:프랙토머 비를 스크리닝함으로써, 이식편 중 지방을 감소시키는 효과를 확인하였다. 지방 단독 (100 % 지방), 90 부피%의 지방 + 프랙토머 용액, 75 부피%의 지방 + 프랙토머 용액, 50 부피%의 지방 + 프랙토머 용액 r, 및 50 부피%의 지방 + PBS 대조인 주입 혼합물들을 nu/nu 마우스 주에서 6주에 걸쳐 평가하였다. nu/nu 마우스는 인간 지방 조직의 거부를 방지하기 위하여 선택하였다. nu/nu 마우스에의 주입용으로 실험 군에서 사용된 상이한 지방:프랙토머 용액 (250 μM) 혼합물들의 예시적인 그림을 도 9a에 나타내었다.
주입 후, 최고 부피 손실은 50 부피%의 지방 + PBS 대조 군에서 처음 24시간 이내에 관찰되었다 (도 9b). 이는 작업실에서의 지방 정제 과정 동안 제거되지 않은 지방 혼합물 중 잔류 오일의 존재로 인한 것일 가능성이 있었는데, 임상에서는 일반적인 것이다. 상이한 비의 프랙토머 매트릭스와 혼합된 경우, 지방 이식편들은 1주에 걸쳐 부피 유지의 향상을 나타내었다 (도 9b-c). 주입 6주 후, 지방 단독으로서의 동일한 최종 부피를 달성하는 데에 적어도 50 % 적은 지방 조직이 사용될 수 있었다 (도 9d). 안정화 프랙토머 매트릭스의 포함 없이 감소된 지방의 양 (50 부피%의 지방)이 사용된 경우, 부피 유지가 상당히 더 낮았다 (도 9d).
지방 부피 유지 향상을 더 조사하기 위하여, 더 높은 농도 (750 μM)의 프랙토머를 사용하고, 관찰 시간을 연장하였다 (도 9e). 50 부피%의 지방 + 프랙토머 용액의 주입을 3개월에 걸쳐 지방 단독 주입과 비교하였는데, 그 시점에는 지방 단독 대조 군에서의 유해한 낭(cyst) 형성으로 인하여 실험이 중단되었다. 이와 같이 더 높은 농도의 프랙토머 제제 사용은 더 고도의 부피 유지를 나타내었다 (도 9e). 주입된 최초 지방의 양에 대하여 표준화할 경우, 3개월에서의 이식된 지방의 유효 부피는 지방을 프랙토머와 조합하는 것에 의해 3배가 되었다 (도 9f).
이식물의 조직학적 분석은 지방 단독으로 구성되는 이식편에 비해 프랙토머 (250 μM)로 제조되는 지방 이식편 내에서 혈관구조 공급이 높다는 것을 밝혔다 (도 10a). 지방세포 군들 사이의 지지성 프랙토머 부문에서 CD31+ 혈관구조 마커의 높은 분포가 관찰되었다 (도 10a, 작은 적색 화살표). CD31+ 염색은 이식편의 생존 지방세포 군 및 프랙토머-풍부 부문 모두에서의 높은 혈관 형성 분포를 밝힘으로써, 프랙토머가 이식된 지방의 생존을 향상시킬 수 있을 가능성이 있다는 것을 시사하였다.
지방 단독과 1:1 지방:프랙토머 (250 μM) 혼합물 사이에서의 주입 1-개월 후의 지방 분포의 조직학적 비교는 지방 + 프랙토머 실험 군에서 50 부피% 적은 지방이 사용되었음에도 불구하고 이식편 세포 조성에 있어서 차이가 없음을 표시하였다 (도 10b). 이는 지방:프랙토머 이식편의 우수한 도입을 표시하며, 지방 증식이 프랙토머 매트릭스 내에서 높은 수준으로 발생할 가능성이 있다는 것을 시사한다. 또한, 만성 염증의 표시가 되는 외래 신체 반응 없이 주입 30일 후에 잔류 프랙토머의 증거가 관찰되었다 (도 10c). 시험관 내 혼합물로부터의 조직학적 결과와 유사하게, 새로운 ECM, 세포 침윤물 및 혈관화가 형성될 시간이 주어지기는 하지만, 프랙토머는 지방세포 군들 사이의 부피를 유지하는 일종의 단백질 "접착제"로서 지속되는 것으로 보인다.
실시예 8
지방 단독 주입에서의 낭 형성 및 괴사가 지방 + 프랙토머 혼합물에서는 관찰되지 않음
지방 조직의 유효 부피를 증가시키는 것이 프랙토머를 사용할 때의 성공의 핵심 측정기준이기는 하지만, 그 증가되는 지방 부피의 정확한 생물학적 조성도 동일하게 중요하다. 예를 들어, 낭 형성, 석회화 및 괴사의 방지는 건강한 지방 조직의 발생에 중요하다. 초음파, 조직학 및 마이크로-CT의 조합을 사용하여, 건강한 지방 형성에서의 이러한 이상들의 증거를 스크리닝하였다. 지방 단독, 또는 지방흡인물과 프랙토머 용액 (750 μM) (서열식별번호: 12)의 1:1 혼합물이 주입된 마우스에서 3개월에 걸쳐 지방 이식편의 초음파를 포착하였다 (도 11a). 지방 단독 군의 이식편에서는 주입 1개월 및 3개월 후에 지방 괴사의 핵심 마커인 대형 오일 낭의 형성이 관찰된 반면 (도 11a, 상부 행 패널, 백색 화살표), 지방 + 프랙토머 용액이 주입된 임의의 마우스에서는 낭 형성이 관찰되지 않았다 (도 11a, 저부 행 패널). 이러한 낭은 지방 단독이 주입된 마우스 중 >50 %에서 1개월까지 관찰되었다. 또한, 이러한 낭은 3개월의 시간-경과 내내 부피가 확장된다는 것이 밝혀졌으며, 몇몇 마우스에서는, 낭이 전체 주입물의 부피를 지배하였다. 또한, 3개월에서의 지방 단독과 1:1 지방:프랙토머 용액 (750 μM) 이식편의 세포 조성의 조직학적 비교는 지방 단독 군에서의 대형 오일 낭 형성의 완전한 증거를 나타내었다 (도 11b, 좌측 패널). 그러나, 조직학적 분석에 의해서는 임의의 프랙토머 이식편에서 낭 형성이 관찰되지 않았다 (도 11b, 우측 패널). 특히, 더 높은 농도의 프랙토머 용액 (750 μM)은 3개월에서의 더 높은 프랙토머의 유지로 이어졌으며, 프랙토머가 지방세포를 지지하는 것을 볼 수 있었다. 이러한 결과는 더 높은 농도의 프랙토머를 사용한 재흡수 연구로부터의 데이터와 일치한다.
지방 단독 군에서의 낭의 형성은 인간에서의 지방 괴사의 임상 관찰과 일치한다. 50 부피%의 지방 + 프랙토머 용액의 주입물은 지방세포와 잔류 프랙토머의 비균질 혼합물로서, 대조 CT하에서의 분명한 혈관화 징후를 가진다 (지방 단독에서는 보이지 않음). 또한, 지방 + 프랙토머 이식편에는 마우스에서 작은 반점이 있는 백색 표시로 보이게 되는 관찰되는 석회화가 존재하지 않았다. 프랙토머가 있는 이식편의 향상된 건강은 적은 최초 대사 요구량을 필요로 하는 사용되는 지방 조직의 감소된 양에 기인할 가능성이 있을 수 있다. 또한, 프랙토머의 다공성 특성 및 빠른 혈관화는 지방세포 생존 및 성장을 위한 영양소를 빠르게 제공할 수 있다.
실시예 9
자가 지방 이식의 돼지 모델에서의 프랙토머
설치류 모델이 핵심 변수의 최적화에는 충분하지만, 소형 동물은 적은 피하 지방 조직을 보유하며, 그의 연조직 구조가 해부학적으로 인간과 다르다. 또한, 누드 마우스가 면역결핍이며 인간 세포를 허용할 수 있기는 하지만, 인간 지방의 사용은 신체 반응 및 가용한 주입물 부피 모두에서 자가 이식으로부터의 중요한 변화를 나타낸다. 이에 따라, 미니피그(minipig) 모델에서의 장기 프랙토머 강화 지방 이식을 추가로 평가할 것이다. 이와 같은 제안 실험은 승인된 자가 지방 이식 돼지 모델에서 프랙토머가 부피를 확장하고 임상 적격 부피로 건강한 지방 조직을 생성시킬 수 있다는 것을 입증할 것이다.
미니피그는 마취될 것이며, 척추에 3-4 cm 인접하여 등 위쪽에 작은 중간선 절개부가 생성될 것이다. 4 mm 캐뉼러를 사용하는 전력 보조 지방흡인을 사용하여 피하 지방 축적부위가 흡인될 것이다. 목표는 대략 50 cm3의 지방 조직을 수확하는 것이다. 필요할 경우, 옆구리 뒤쪽 부근에서의 지방흡인을 가능하게 하기 위하여 추가적인 절개부가 생성되게 된다. 지방은 세척된 후, 이식을 위하여 인간 지방을 준비하는 데에 사용되는 리보블(Revovle)™ 시스템을 사용하여 처리될 것이다. 다음에, 지방흡인물은 유방 재건 형상 및 소형 종괴절제술을 위한 수술 교정에 임상용으로 사용될 가능성이 있게 되는 각각 ~25 cm3 부피의 상이한 하기 4종 주입 제제 혼합물로 분할될 것이다: 100 부피%의 지방흡인물 (지방 단독), 50 부피%의 지방흡인물 + 프랙토머 용액, 25 부피%의 지방흡인물 + 프랙토머 용액, 또는 프랙토머 단독. 각 25 cm3 혼합물은 포유동물 지방의 고유 부위에 주입될 것이다. 이들 군은 비-유방 적용분야에서의 프랙토머의 용도를 모방하여 돼지 옆구리를 따라 ~3 mL 주입으로 2반복될 것이다. 이와 같은 임무의 중요한 구성요소는 기존 수술 기술과의 상용성을 보장하는 유형의 최종 생성물 전달 기술에 대한 이해를 가능하게 하는 임상-모방 환경에서의 프랙토머의 "사용-용이성(ease-of-use)" 분석이 될 것이다. 이후, 돼지는 회수되어, 수용된 후, 모니터링된다.
목표는 프랙토머에 의해 안정화된 지방 이식편의 부피 유지 및 그 부피의 세포 건강/조성을 확인하는 것이다. 자가 지방 이식편의 임상 지방 부피 유지는 이식 기술에 따라 6개월에 30-60 % 사이인 것으로 보고되어 있으며, 미니피그 모델에서도 유사한 유지가 관찰된 바 있다. 프랙토머와 조합된 지방의 부피는 최초 주입물의 지속적인 생존율은 물론, 주입된 지방 세포의 증식 또는 비대를 통하여 장기간 유지될 것이다. 이는 합리적인 예상으로서, 지방이 프랙토머 매트릭스로 희석되는 경우 주입물의 단위 부피 당 산소 및 기타 영양소의 소비가 순수 지방에 비해 더 낮을 것이기 때문이다. 단위 부피 당 더 낮은 소비는 주입된 지방 세포에 필요한 영양 물질이 확산에 의해 적정하게 전달되게 될 가능성을 증가시키게 된다. 이러한 결과는 3D 초음파 및 주기적인 생검의 조합을 사용하여 평가되게 된다. 이미지화는 이식편에 의한 낭 형성 가능성의 확인을 가능하게 할 것이다. 10, 60 및 180일차에, 조직은 세포 조성, 섬유증, 신생혈관증식, 괴사 및 만성 염증의 조직학적 조사를 위해 바늘 생검 (또는 180일차의 전체 절제)을 사용하여 추출될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> DUKE UNIVERSITY ROBERTS, Stefan CHILKOTI, Ashutosh KLITZMAN, Bruce HOLLENBECK, Scott <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR AUGMENTING AUTOLOGOUS FAT GRAFTS <130> 028193-9366-WO01 <150> US 63/035,173 <151> 2020-06-05 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Sequence can be repeated 1 or more times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid except proline <400> 1 Gly Xaa Gly Val Pro 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Sequence can be repeated 1 or more times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Ala or Val <400> 2 Gly Xaa Gly Val Pro 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Sequence can be repeated 1 or more times <400> 3 Gly Ala Gly Val Pro 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Sequence can be repeated 1 or more times <400> 4 Gly Val Gly Val Pro 1 5 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(10) <223> G[A1:V1]GVP = GAVGP GVGVP; repeats shown; Ala in first repeat; Val in second repeat; this motif can be repeated 1 or more times <400> 5 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 1 5 10 <210> 6 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(25) <223> G[V4:A1]GVP = GVGVP GVGVP GVGVP GVGVP GAGVP; 5 repeats shown; Val in the first 4 repeats and Ala in the 5th repeat; this motif can be repeated 1 or more times <400> 6 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 1 5 10 15 Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 20 25 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Lys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys 20 25 <210> 9 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys 20 25 <210> 10 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys 20 25 <210> 11 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 Gly Lys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys 20 25 <210> 12 <211> 622 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Met Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 35 40 45 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 115 120 125 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 165 170 175 Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly 195 200 205 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 245 250 255 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 305 310 315 320 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 325 330 335 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 370 375 380 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 385 390 395 400 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly 405 410 415 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 420 425 430 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 435 440 445 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 450 455 460 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 465 470 475 480 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala 485 490 495 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 500 505 510 Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 515 520 525 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 530 535 540 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 545 550 555 560 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 565 570 575 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 580 585 590 Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 595 600 605 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 610 615 620 <210> 13 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 Met Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 35 40 45 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 115 120 125 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 165 170 175 Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly 195 200 205 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 245 250 255 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 305 310 315 320 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 325 330 335 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 370 375 380 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 385 390 395 400 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 405 410 415 <210> 14 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Met Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 35 40 45 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Ala Ala 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 115 120 125 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 165 170 175 Gly Val Pro Gly Lys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly 195 200 205 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 245 250 255 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 305 310 315 320 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 325 330 335 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 370 375 380 Pro Gly Lys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 385 390 395 400 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 405 410 415 <210> 15 <211> 652 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 Met Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 35 40 45 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 65 70 75 80 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 115 120 125 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 165 170 175 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 195 200 205 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 245 250 255 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 275 280 285 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 305 310 315 320 Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 325 330 335 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 370 375 380 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 385 390 395 400 Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 405 410 415 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 420 425 430 Lys Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 435 440 445 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 450 455 460 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 465 470 475 480 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 485 490 495 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 500 505 510 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 515 520 525 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly 530 535 540 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 545 550 555 560 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 565 570 575 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 580 585 590 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 595 600 605 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala 610 615 620 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 625 630 635 640 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 645 650 <210> 16 <211> 436 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Met Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 35 40 45 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 65 70 75 80 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 115 120 125 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 165 170 175 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 195 200 205 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 245 250 255 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 275 280 285 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 305 310 315 320 Ala Ala Ala Ala Lys Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 325 330 335 Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val 370 375 380 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro 385 390 395 400 Gly Val Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 405 410 415 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 420 425 430 Lys Gly Trp Pro 435 <210> 17 <211> 622 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 Met Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala 35 40 45 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 115 120 125 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala 165 170 175 Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly 195 200 205 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 245 250 255 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 305 310 315 320 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly 325 330 335 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 370 375 380 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 385 390 395 400 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly 405 410 415 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 420 425 430 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 435 440 445 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly 450 455 460 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 465 470 475 480 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala 485 490 495 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 500 505 510 Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 515 520 525 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly 530 535 540 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 545 550 555 560 Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 565 570 575 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly 580 585 590 Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 595 600 605 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 610 615 620 <210> 18 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Met Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 1 5 10 15 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 20 25 30 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala 35 40 45 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 100 105 110 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 115 120 125 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 130 135 140 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 145 150 155 160 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala 165 170 175 Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 180 185 190 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly 195 200 205 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 210 215 220 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 225 230 235 240 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 245 250 255 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 260 265 270 Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 305 310 315 320 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly 325 330 335 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 340 345 350 Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 355 360 365 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val 370 375 380 Pro Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 385 390 395 400 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Gly Trp Pro 405 410 415 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(16) <223> Xaa is any amino acid amd any one or all of amino acids 3-16 can be either present or absent <400> 19 Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly <210> 20 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(15) <223> Asx 2-15 can either be present or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(31) <223> any amino acid independent of Glx at positions 32-47; and where any one or all amino acids 18-31 can be either present or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(47) <223> Glx 32-47 are independent of Xaa at positions 17-31; and where any one or all Glx 33-47 can be either present or absent <400> 20 Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Asx Pro 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly 20 25 30 Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx Glx 35 40 45 <210> 21 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(2) <223> Any or all Asx at positions 1-2 can be either present or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(54) <223> Motif may repeat 1-50 times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(52) <223> Any one or all Ala at positions 4-52 can be either present or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(54) <223> Any or all Glx at positions 53-54 can be either present or absent <400> 21 Asx Asx Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 35 40 45 Ala Ala Ala Ala Glx Glx 50 <210> 22 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Asx can be either Lys, Arg, Asp, or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(2) <223> Motif can repeat from 1-50 times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(3) <223> Motif can repeat from 1-50 times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Ala can repeat 1-5 times <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Glx can be Lys, Arg, Asp, or Glu, and can repeat 0-2 times <400> 22 Asx Ala Glx 1

Claims (47)

  1. 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머); 및
    지방 조직
    을 포함하는 조직 매트릭스 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 프랙토머가 하기를 포함하는 것인 조성물:
    복수의 불규칙 도메인; 및
    복수의 구조화된 도메인.
  3. 제2항에 있어서,
    불규칙 도메인이 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호: 1)을 포함하며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, n은 1 이상의 정수이며;
    구조화된 도메인이 폴리알라닌 도메인을 포함하는 것인
    조성물.
  4. 제2항에 있어서, 불규칙 도메인이 복수의 아미노산 서열 (GXGVP)n (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 X는 Val (서열식별번호: 3), 또는 Ala (서열식별번호: 4), 또는 Ala와 Val의 혼합물이고, n은 1 내지 50의 정수인 조성물.
  5. 제4항에 있어서, X가 10:1 내지 1:10 (Ala:Val) 비의 Ala와 Val의 교호 반복인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, X가 1:1 (서열식별번호: 5) 또는 1:4 (서열식별번호: 6) 비의 Ala와 Val의 교호 반복인 조성물.
  7. 제3항에 있어서, 폴리알라닌 도메인이 (Ala)m을 포함하며, 여기서 m은 5 내지 50의 정수인 조성물.
  8. 제3항에 있어서, 폴리알라닌 도메인이 하기 중 1종 이상을 포함하는 것인 조성물:
    (A)25 (서열식별번호: 7);
    K(A)25K (서열식별번호: 8);
    D(A)25K (서열식별번호: 9);
    GD(A25)K (서열식별번호: 10); 또는
    GK(A25)K (서열식별번호: 11).
  9. 제3항에 있어서, 폴리펩티드가 [(GXGVP)n-GX1(A)25X1]m을 포함하며; 여기서 X는 A 또는 V이고; X1은 K 또는 D이며; n은 10 내지 20의 정수이고; m은 4 내지 8의 정수인 ([(서열식별번호: 2)n-(서열식별번호: 10 또는 11)]m) 조성물.
  10. 제3항에 있어서, 폴리펩티드가 하기 중 1종 이상을 포함하는 것인 조성물:
    M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12);
    M[(GVGVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 13);
    M[(GVGVP)15-GK(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 14);
    M[(GVGVP)15-GK(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 15);
    M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 16);
    M[(G[A1:V1]GVP)16-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 17);
    M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18); 또는
    M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]4-GWP (서열식별번호: 19).
  11. 제3항에 있어서, 폴리펩티드가 하기 중 1종 이상을 포함하는 것인 조성물:
    M[(GVGVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 12); 또는
    M[(G[V4:A1]GVP)15-GD(A25)K]6-GWP (서열식별번호: 18).
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 프랙토머가 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt-냉각)를 가지는 것인 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)가 농도-비의존성인 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 가열 전이 온도 (Tt -가열) 및 냉각 전이 온도 (Tt -냉각)가 약 10 ℃ 내지 약 45 ℃ 범위인 조성물.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 프랙토머가 Tt -가열 초과에서 고체 응집물을 형성하는 것인 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 고체 응집물이 Tt -냉각 미만으로 냉각되는 경우 재가용화되는 것인 조성물.
  17. 제15항에 있어서, 고체 응집물이 안정한 3-차원 매트릭스인 조성물.
  18. 제15항에 있어서, 고체 응집물이 복수의 미세세공을 포함하는 것인 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 복수의 미세세공이 크기가 약 1 μm 내지 약 150 μm 범위인 조성물.
  20. 제1항에 있어서, 약 200 μM 내지 약 2 mM 사이의 프랙토머를 포함하는 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 지방 조직이 지방흡인물을 포함하는 것인 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 부피 기준 약 10 % 내지 약 90 % 범위의 지방흡인물을 포함하는 조성물.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 부피 기준 약 25 % 내지 약 75 % 범위의 지방흡인물을 포함하는 조성물.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 부피 기준 약 50 %의 지방흡인물을 포함하는 조성물.
  25. 제21항에 있어서, 약 1:9 내지 약 9:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조성물.
  26. 제21항에 있어서, 약 1:3 내지 약 3:1 범위 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조성물.
  27. 제21항에 있어서, 약 1:1 비의 프랙토머와 지방흡인물의 혼합물을 포함하는 조성물.
  28. 제1항에 있어서, 성형가능한 액체 또는 반고체인 조성물.
  29. 제1항에 있어서, 주입가능하거나 이식가능한 조성물.
  30. 제1항에 있어서, 2- 또는 3-차원 형상, 영역 또는 부피로 성형가능하거나 몰딩가능한 조성물.
  31. 제1항에 있어서, 프랙토머가 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 하는 것인 조성물.
  32. 치료 유효량의 제1항에 따른 조성물을 대상체에게 투여함으로써 자가 지방 이식편이 대상체에서 증강되도록 하는 것
    을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법.
  33. 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직을 대상체에게 공동-투여하는 것
    을 포함하는, 대상체에서의 자가 지방 이식편의 증강 방법.
  34. 제33항에 있어서, 지방 조직이 지방흡인물을 포함하는 것인 방법.
  35. 제33항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 순차적으로 투여되며, 프랙토머가 지방 조직의 투여 전에 투여되는 것인 방법.
  37. 제35항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 순차적으로 투여되며, 지방 조직이 프랙토머의 투여 전에 투여되는 것인 방법.
  38. 제35항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 시험관 내에서 조합되어, 2- 또는 3-차원 형상, 영역 또는 부피로 성형되거나 몰딩되고, 대상체에게 제자리 이식되는 것인 방법.
  39. 제33항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 투여 전에는 성형가능한 액체, 반고체 또는 몰딩된 반고체이며, 투여 후에는 고체 응집물을 형성하는 것인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 프랙토머 및 지방 조직이 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 대상체에게 공동-투여되며, 대상체 체온에의 노출 후 프랙토머 및 지방 조직이 고체를 형성하는 것인 방법.
  41. 제33항에 있어서, 프랙토머가 지방 조직의 세포 침윤 및 혈관화를 가능하게 하는 것인 방법.
  42. (a) 대상체로부터 지방 조직을 수득하는 것; 및
    (b) 프랙토머의 Tt -가열 미만에서 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머)를 단계 (a)의 지방 조직과 조합하여 혼합물을 형성시키는 것
    을 포함하는 자가 지방 이식편 조성물의 제조 방법.
  43. 제44항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는 방법:
    (c) 혼합물을 형상, 영역 또는 부피로 성형하는 것.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는 방법:
    (d) 주입 또는 이식에 의해 대상체에게 혼합물을 공동-투여하는 것.
  45. 제44항에 있어서, 혼합물이 프랙토머의 Tt -가열을 초과하는 온도에서 고체 응집물을 형성하는 것인 방법.
  46. 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머), 및 조합을 위한 용기, 특정 부피 차원을 위한 몰드, 또는 지방 조직 흡인 및/또는 투여를 위한 수단 중 1종 이상을 포함하는 키트.
  47. 치료 유효량의 재조합의 부분적으로 규칙적인 폴리펩티드 (프랙토머) 및 치료 유효량의 지방 조직의, 자가 지방 이식을 필요로 하는 대상체에서의 자가 지방 이식을 위한 용도.
KR1020237000364A 2020-06-05 2021-06-04 자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법 KR20230029764A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063035173P 2020-06-05 2020-06-05
US63/035,173 2020-06-05
PCT/US2021/035823 WO2021247952A2 (en) 2020-06-05 2021-06-04 Compositions and methods for augmenting autologous fat grafts

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230029764A true KR20230029764A (ko) 2023-03-03

Family

ID=78831736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237000364A KR20230029764A (ko) 2020-06-05 2021-06-04 자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20230233738A1 (ko)
EP (1) EP4138863A2 (ko)
JP (1) JP2023529610A (ko)
KR (1) KR20230029764A (ko)
CN (1) CN115916222A (ko)
AU (1) AU2021283961A1 (ko)
BR (1) BR112022024667A2 (ko)
CA (1) CA3184457A1 (ko)
WO (1) WO2021247952A2 (ko)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5019511B2 (ja) * 2003-09-17 2012-09-05 サイトリ セラピューティクス インコーポレイテッド 抹消血管疾患およびそれに関連する障害の治療において新生細胞を利用する方法
WO2013106715A1 (en) * 2012-01-13 2013-07-18 Allergan, Inc. Crosslinked hyaluronic acid-collagen gels for improving tissue graft viability and soft tissue augmentation

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021247952A3 (en) 2022-01-06
BR112022024667A2 (pt) 2022-12-27
CA3184457A1 (en) 2021-12-09
EP4138863A2 (en) 2023-03-01
AU2021283961A1 (en) 2023-01-19
CN115916222A (zh) 2023-04-04
WO2021247952A2 (en) 2021-12-09
JP2023529610A (ja) 2023-07-11
US20230233738A1 (en) 2023-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10493134B2 (en) Compositions comprising collagen and PRP for tissue regeneration
CN100350971C (zh) 用凝血酶肽衍生物刺激骨生长
EP4049671A1 (en) Purified amphiphilic peptide compositions and uses thereof
EP3419678B1 (en) Trizonal membranes for periosteum regeneration
EP3568143B1 (en) Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles and their medical use
TW200800250A (en) Protein formulation for promoting hard tissue formation
CN1458974A (zh) 用非蛋白质水解激活的凝血酶受体的激动剂刺激软骨生长
US20220016206A1 (en) Isoform nell-1 peptide
KR102066392B1 (ko) 골 이식용 복합체 제조방법 및 이에 의해 제조된 골 이식용 복합체
CN113563452A (zh) 一种生物活性肽及其与脂肪干细胞外泌体在皮肤增殖修复中的应用
KR101910504B1 (ko) 화상 및 피부 결손 치료용 드레싱제 및 이의 제조방법
KR20230029764A (ko) 자가 지방 이식편을 증강하기 위한 조성물 및 방법
Kim et al. Extracellular calcium-binding peptide-modified ceramics stimulate regeneration of calvarial bone defects
KR20170098844A (ko) Lgr4, lgr5 및 lgr6 발현 상피 줄기 세포를 사용한 조직 응용에서의 최소 극성화 기능 세포 미소응집체 유닛의 개발 및 사용 방법
CN1622826A (zh) 用凝血酶肽衍生物刺激骨生长和软骨形成
US20170296711A1 (en) Immunomodulatory materials for implantable medical devices
EP3505529A1 (en) Peptide for promoting osteoanagenesis or osteogenesis and use of same
CN109692344B (zh) 一种含rH-BMP2骨修复材料及其制备方法和应用
RU2614665C1 (ru) Способ стимуляции репаративного ангиогенеза и регенерации соединительной ткани, при её повреждении, методом генной терапии с использованием видоспецифичных генов белковых факторов vegf и fgf2, в ветеринарии, и генетическая конструкция для реализации заявленного способа
KR20230059409A (ko) Egf 유래 신규 펩타이드 및 이의 용도
WO2020156390A1 (zh) 干细胞发生器产生的干细胞用于治疗造血损伤
TWI707874B (zh) 重組多肽及其組成物及方法
ES2625654T3 (es) Un método de producción de componentes nativos, tales como factores de crecimiento o proteínas de la matriz extracelular, mediante cultivo celular de muestras de tejido para la reparación de tejido
DK3031466T3 (en) PURIFIED AMFIFILE PEPTIME COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF
JP2022511160A (ja) 複数の電界紡糸繊維からなる綿形状の構造を有する骨再生用材料