KR20230029671A - 항-인간 nr1 항체 유도체 - Google Patents

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다쿠야 기토
마사시 마에다
다쿠마 미하라
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Abstract

본 발명은 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자를 치료하기 위한 신규 치료제를 제공하는 과제를 해결한다. 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자는 세포 표면에서 NMDAR의 내재화를 유도하는 병원성 항-인간 NR1 항체를 가진다. 그 결과, NMDAR 기능은 상기 환자의 뇌에서 약화된다. 본 발명자들은 본 발명에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체가 병원성 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 NR1에 결합하고 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR의 내재화를 억제함으로써, 항-NMDAR 뇌염에 대한 치료 효과를 나타냄을 발견하였다. 따라서, 본 발명은 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 이 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 이 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 발현 벡터, 이 발현 벡터에 의해 형질전환된 숙주 세포, 상기 항체의 제조 방법, 상기 항체를 포함하는 약학 조성물, 약학 조성물의 제조에 있어서 상기 항체의 용도, 및 상기 항체를 사용하여 항-NMDAR 뇌염을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

항-인간 NR1 항체 유도체
본 발명은 약학 조성물에서 활성 성분으로서 유용한 항-인간 NR1 항체 유도체에 관한 것이다.
신경 세포에 대한 자가항체와 질환 사이의 관계는 최근 명확해졌다. 신경 세포에 대한 자가항체는 항-뉴런 항체로서 지칭되며 자가면역 뇌염과 같은 신경 질환의 병인이 되는 것으로 시사되고 있다. 최근, 세포 표면 및 시냅스 항원에 대한 새로운 항-뉴런 항체가 잇따라 확인되고 있다. 이들 중 대다수는 신경 세포에서 발현되는 수용체 또는 채널, 또는 이들의 관련 분자에 대한 항체이다(Journal of Clinical and Experimental Medicine (IGAKU NO AYUMI), 2015, Vol. 25, No. 5, pp. 497-503 / Neuro-oncol. 2014., Vol. 16, pp. 771-778).
2007년, 달마우 연구진(Dalmau et al.)은 난소 기형종에 의해 복잡해진 독특한 임상 경과를 보이는 뇌염에서 환자의 혈액 및 척수액에 존재하는, 세포 표면 항원에 대한 자가항체가 NMDA(N-메틸-D-아스파르테이트) 수용체(이하, "NMDAR"로서 지칭됨)의 NR1(GluN1로서도 알려짐)에 대한 항체임을 발견하였고, 이 뇌염을 "항-NMDAR 뇌염"으로서 명명하였다. 자가면역 뇌염 중에서 항-NMDAR 뇌염은 가장 흔한 자가면역 뇌염 중 하나이고, 이의 임상 양상은 잘 정의되어 있다. 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자에서, 전형적으로 정신과적 증상이 먼저 발생하고, 기억력 손상, 언어능력 손상, 방향감각상실, 발작, 자율신경 증상, 중추 호흡저하 및 불수의 움직임을 포함하는 다양한 신경학적 증상이 뒤따른다. 항-NMDAR 뇌염의 발병기전은 빠르게 진행되고, 일부 경우 질환의 경과는 수개월 내지 1년 이상 지속되는 치료와 함께, 초기 증상의 발견 후 수주 이내에 집중적인 치료를 요구할 정도로 심각하다. 환자의 척수액에 있는 항-NR1 항체 역가는 이 질환의 경과를 반영한다. 항-NMDAR 뇌염은 어린이, 노인 및 남성에서는 드물게 발생하지만, 젊은 여성에서 더 흔하다. 상기 질환이 발생된 많은 여성들은 난소 기형종을 동반하는 것으로 보고되었다(Lancet Neurol., 2013, Vol. 12, pp. 157-165).
병리학적으로, IgG 침착 및 NMDAR 발현 감소가 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자의 뇌에서 관찰된 것으로 보고되어 있다(Acta Neuropathol., 2009, Vol. 118, pp. 737-743, 비특허문헌 1). 다른 한편으로, 환자의 뇌에서 세포독성 T 세포 또는 보체의 침착이 관찰되지 않았기 때문에(Acta Neuropathol., 2009, Vol. 118, pp. 737-743), NR1 항체 단독이 병리학적 형성에 영향을 미치는 것으로 추정된다. 시험관내 실험은 환자 유래의 NR1 항체가 NMDAR과 가교결합하여 NMDAR을 내재화함으로써, 시냅스후 막에서 NMDAR을 감소시킨다고 보고하였다(비특허문헌 1). 나아가, 항-NMDAR 뇌염의 증상은 NMDAR 길항제(케타민 및 펜사이클리딘)를 투여하였을 때 건강한 대상체에서 관찰된 증상과 유사하기 때문에, 환자에서의 NR1 항체에 의한 NMDAR의 내재화, 및 그에 따른 시냅스후 막에서의 NMDAR 클러스터 감소는 NMDAR의 기능적 감퇴를 유발하여, 항-NMDAR 뇌염 증상을 야기한다.
항-NMDAR 뇌염의 종양 관련 사례에서는 조기 종양 절제 및 면역요법이 권장된다. 면역요법으로서, 스테로이드 펄스 요법, 혈장 교환 및 면역글로불린 요법이 이용된다. 난치성 사례에서, 사이클로포스파마이드 펄스 요법 또는 항-CD20 항체인 리툭시맙이 투여된다. 그러나, 모든 환자가 질환의 심각한 장기적인 경과 때문에 좋은 예후를 갖는 것은 아니다. 완전한 또는 거의 완전한 회복은 75%에 불과한 반면, 25%는 심각한 장애를 갖게 되거나 사망하는 것으로 보고되었다(Lancet Neurol., 2008, Vol. 7, pp. 1091-1098).
항-NMDAR 뇌염에 대한 현재 치료는 병리학적 상태를 야기하는 자가항체를 특이적으로 제어하거나 제거하지 않는다.
NMDAR은 주로 중추신경계에서 발현되며 기억과 학습에 관여하는, 글루타메이트 수용체의 일종이다. NMDAR은 리간드인 글루탐산에 결합함으로써 나트륨, 칼륨 및 칼슘 이온과 같은 양이온이 투과될 수 있게 하는 이온 채널 커플링 수용체이다. NMDAR은 두 세트의 이종이량체인 NR1과 NR2로 구성된 4개의 서브유닛을 가진다. 4종의 NR2, 즉 NR2A, NR2B, NR2C 및 NR2D가 있다. NR2 서브유닛에는 글루탐산에 대한 결합 부위가 있다.
항-NR1 단일클론 항체로서, M68(비특허문헌 2), MAB363(비특허문헌 3), R1JHL(비특허문헌 4) 및 D65B8(비특허문헌 5)이 보고되어 있다. 또한, 인간 NR1의 N-말단 부위에 결합하고 t-PA와의 상호작용을 억제하는 단일클론 항체가 보고되어 있다(특허문헌 1). 또한, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 여러 항-NR1 단일클론 항체가 확인되어 있다(비특허문헌 6, 특허문헌 2). 단리된 항-NMDAR 뇌염 환자 유래의 항-NR1 항체는 시험관내에서 마우스 해마로부터 유래한 1차 뉴런에서 NMDAR 클러스터링을 감소시켰고 NMDAR 기능을 억제하였다(비특허문헌 6).
다른 한편으로, 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자에서 치료 효과를 보이는 항-인간 NR1 항체 또는 이의 유도체는 보고된 바 없다.
WO2014/187879 WO2017/029299
[Journal of Neuroscience, (J. Neurosci.)], (USA), 2010; 30(17): 5866-5875 [Science (Science)], (USA), 2016; 352 (6288): 982-986 [Journal of neurodegenerative diseases (J. Neurodegener. Dis.)], (UK), 2014; Article ID: 938530 [JCI Insight (JCI Insight)], (USA), 2019; 4(15): e127736 [Experimental Neurology (Exp. Neurol.)], (USA), 2017; 289: 31-45 [Brain (Brain)], (UK), 2016; 139(10): 2641-2652
본 발명은 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자를 치료하기 위한 신규 치료제를 제공하는 과제를 해결한다.
본 발명자들은 항-NMDAR 뇌염을 가진 환자를 치료하기 위한 신규 치료제를 제조하기 위해 많은 연구를 수행하였다. 먼저, 본 발명자들은 NMDAR에 대한 높은 결합 활성을 가진 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 항-인간 NR1 항체 클론의 서열 정보로부터 단일 아암(one-armed) 항-인간 NR1 항체를 제조하였고, 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체가 시험관내에서 인간 NMDAR에 결합할 때 환자 유래의 병원성 NR1 항체에 의해 야기된 인간 NMDAR의 세포 표면 발현 수준 및 기능을 회복시킴을 발견하였다(실시예 1 내지 4). 나아가, 본 발명자들은 이 발견을 기반으로, 병원성 NR1 항체보다 더 높은 결합 친화성을 나타내는 다수의 단일 아암 항-인간 NR1 항체도 제조하였고, 이 항체는 병원성 항-인간 NR1 항체에 의해 야기된 NMDAR의 세포 표면 발현 수준 및 기능을 유의미하게 회복시켰다(실시예 5 내지 10). 또한, 본 발명자들은 새로 수득된 단일 아암 항-인간 NR1 항체가 항-NMDAR 뇌염 동물 모델의 증상을 대조군 항체에 비해 유의미하게 개선함을 발견하였다(실시예 12). 이로써, 본 발명자들은 본 발명을 완성하였다.
본 발명에 따라, 예를 들어, 의학적 및 산업적으로 유용한 물질 또는 방법으로서 하기 발명이 제공된다:
[1]
하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[2]
[1]에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
(1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[3]
[1]에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[4]
[3]에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
(1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[5]
[1] 내지 [4] 중 어느 하나에 있어서, LALA 돌연변이(L234A 및 L235A)를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[6]
[1] 내지 [4] 중 어느 하나에 있어서, 놉스-인투-홀스(Knobs-into-holes) 돌연변이를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[7]
[1] 내지 [4] 중 어느 하나에 있어서, LALA 돌연변이(L234A 및 L235A) 및 놉스-인투-홀스 돌연변이를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[8]
[6] 또는 [7]에 있어서, 놉스-인투-홀스 돌연변이가 Fc 영역을 형성하는 하나의 Fc 폴리펩타이드 내의 T366W 돌연변이, 및 Fc 영역을 형성하는 또 다른 Fc 폴리펩타이드 내의 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[9]
[1] 내지 [8] 중 어느 하나에 있어서, 인간 항체 또는 인간화된 항체인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[10]
서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[11]
서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[12]
서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[13]
서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[14]
서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[15]
서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[16]
[1] 내지 [15] 중 어느 하나에 있어서, 번역후 변형된 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[17]
[16]에 있어서, 번역후 변형이 N-말단 중쇄 가변 영역의 피로글루타밀화 및/또는 C-말단 중쇄 라이신의 결실인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[18]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열;
(b) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열.
[19]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[20]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[21]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[22]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[23]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[24]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
(a) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
[25]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[26]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[27]
[25] 또는 [26]에 있어서, Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함하는 발현 벡터.
[28]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[29]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[30]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[31]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[32]
하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[33]
[29] 내지 [32] 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함하는 발현 벡터.
[34]
하기 (a) 내지 (f)에 기재된, 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(a) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(b) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(c) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(d) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(e) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
(f) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
[35]
하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) [1]의 (2) 내지 (5) 및 [2]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[36]
하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) [3]의 (2) 내지 (5) 및 [4]의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[37]
하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) [3]의 (1) 내지 (5) 및 [4]의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[38]
하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[39]
하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[40]
하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[41]
하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[42]
하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[43]
하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환된 숙주 세포:
(a) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) [15]의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[44]
단일 아암 항-인간 NR1 항체를 제조하는 방법으로서, [35] 내지 [43] 중 어느 하나의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 구성하는 폴리펩타이드를 발현시키는 단계를 포함하는 방법.
[45]
[1] 내지 [17] 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
[46]
[45]에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료용인 약학 조성물.
[47]
항-NMDAR 뇌염을 치료하는 방법으로서, [1] 내지 [17] 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
[48]
[1] 내지 [17] 중 어느 하나에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료에 사용하기 위한 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
[49]
항-NMDAR 뇌염의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에 있어서 [1] 내지 [17] 중 어느 하나의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 용도.
[50]
하기 (1) 내지 (4)로부터 선택된 1가 항-인간 NR1 항체 유도체:
(1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역뿐만 아니라, 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역도 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역뿐만 아니라, 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역도 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역뿐만 아니라, 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역도 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역뿐만 아니라, 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역도 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
[51]
하기 (1) 내지 (4)로부터 선택된 1가 항-인간 NR1 항체 유도체:
(1) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(2) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(3) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(4) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
[52]
서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
[53]
[50] 내지 [52] 중 어느 하나의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
[54]
[53]의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
[55]
[54]의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
[56]
1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 제조하는 방법으로서, [55]의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 구성하는 폴리펩타이드를 발현시키는 단계를 포함하는 방법.
[57]
[50] 내지 [52] 중 어느 하나의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
[58]
[57]에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료용인 약학 조성물.
[59]
항-NMDAR 뇌염을 치료하는 방법으로서, [50] 내지 [52] 중 어느 하나의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
[60]
[50] 내지 [52] 중 어느 하나에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료에 사용하기 위한 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
[61]
항-NMDAR 뇌염의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에 있어서 [50] 내지 [52] 중 어느 하나의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체의 용도.
본 발명의 1가 인간 NR1 항체 유도체는 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 NMDAR에 결합하여 NMDAR 내재화를 억제함으로써 치료제로서 사용될 수 있다.
도 1은 NMDAR 발현 HEK 세포에 대한 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102 및 P003-102로부터 유래한 단일 아암 항-인간 NR1 항체(ABN-5)의 결합 활성을 보여준다. 세로축은 결합 활성(ΔGeoMFI: 시험 항체가 첨가되었을 때 기하 평균 형광 강도와, 시험 항체가 첨가되지 않았을 때(형광 표지된 2차 항체만이 첨가됨) 기하 평균 형광 강도의 차이)을 표시하고, 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 2는 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102와 인간 NR1의 결합에 대한 실시예 5에서 단리된 신규 마우스 항-인간 NR1 항체의 억제 활성을 보여준다. 세로축은 바이오틴 표지된 P003-102와 인간 NR1 단백질의 결합에 대한 마우스 항-인간 NR1 항체의 억제 활성(억제율)을 표시한다. 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 3은 NMDAR 발현 HEK 세포에 대한 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 결합 활성을 보여준다. 세로축은 기하 평균 형광 강도(GeoMFI)를 표시하고 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 4는 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102에 대한 ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 억제 활성을 보여준다. 세로축은 인간 NR1 단백질에의 결합에 대한 바이오틴 표지된 P003-102의 억제 활성(억제율)을 표시하고, 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 5는 병원성 항-인간 NR1 항체 혼합물에 의해 야기된 세포 표면에서의 NMDAR 발현 수준에 있어서 ABN-2의 레스큐(rescue) 효과를 보여준다. 세로축은 NMDAR 발현 HEK 세포의 세포 표면에서의 NR1 발현율(%)을 표시하고, 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 6은 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102에 의해 야기된 NMDAR의 이온 채널 기능 감소에 대한 ABN-2의 레스큐 효과를 보여준다. 세로축은 NMDA 자극에 의해 야기된 칼슘 이온 유입을 표시하고 가로축은 항체 농도를 표시한다.
도 7은 항-NMDAR 뇌염 유사 증상이 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102의 연속적인 뇌실내 투여에 의해 유도된 일반적인 마모셋(이하, "마모셋"으로서 지칭됨)에 대한 ABN-2의 치료 효과를 보여준다. 0일째 날은 대조군 항체 투여군(P003-102 + 대조군 항체, n=3)과 ABN-2 투여군(P003-102 + ABN-2, n=9)에서 P003-102를 마모셋에게 투여하기 시작한 날이다. 대조군 항체 또는 ABN-2를 14일(14일째 날)부터 28일(28일째 날)까지 14일 동안 지속적으로 뇌실내로 투여하였다. 도 7의 좌측, 중앙 및 우측의 세로축은 각각 파킨슨병 통합 척도(UPDRS, Behav. Brain Res. 2008, Vol. 194, pp. 152-161)로부터 변형된 비정상 평가 척도(ARS)를 표시한다. 도 7의 좌측은 0일째 날 대조군 항체 투여군 및 ABN-2 투여군의 ARS를 보여주고, 도 7의 중앙은 14일째 날 대조군 항체 투여군 및 ABN-2 투여군의 ARS를 보여주고, 도 7의 우측은 28일째 날 대조군 항체 투여군 및 ABN-2 투여군의 ARS를 보여준다.
도 8은 항-NMDAR 뇌염 유사 증상이 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102의 지속적인 뇌실내 투여에 의해 유도된 일반적인 마모셋에 대한 ABN-2의 치료 효과를, ABN-2 투여군(P003-102 + ABN-2) 내의 각각의 개체에 대한 시간 경과에 따른 ARS 변화로서 보여준다.
도 9는 단일 아암 항체의 개략도를 보여준다.
다음은 본 발명의 상세한 설명이다.
항체(또는 면역글로불린) 분자는 다수의 유닛으로 구성된 당단백질이다. 다섯 클래스의 항체가 있다: IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE. 모든 클래스에 공통된, 항체 분자의 기본 구조는 50,000 내지 70,000의 분자량을 가진 2개의 중쇄 및 20,000 내지 30,000의 분자량을 가진 2개의 경쇄를 포함하는 Y자형의 4-쇄 구조이다. 중쇄는 통상적으로 약 440개의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 쇄로 구성되며 클래스에 따라 특징적인 구조를 갖고, 이들은 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE에 상응하는 Igγ, Igμ, Igα, Igδ 및 Igε으로서 지칭된다. 나아가, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 서브클래스를 갖고, 상응하는 중쇄는 각각 Igγ1, Igγ2, Igγ3 및 Igγ4로서 지칭된다. 경쇄는 통상적으로 약 220개의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 쇄로 구성되고, 두 가지 유형, 즉 각각 Igλ 및 Igκ로서 지칭되는 L형 및 K형이 알려져 있다. 두 종류의 경쇄는 임의의 유형의 중쇄와 쌍을 이룰 수 있다. 항체 분자의 기본 구조의 펩타이드 조성은 이황화 결합 및 비공유 결합에 의해 각각 연결된 2개의 동일한 중쇄와 2개의 동일한 경쇄로 구성되며, 항체 분자의 분자량은 150,000 내지 190,000이다.
중쇄에는 항체 분자의 쇄내 이황화 결합이 4개(Igμ 및 Igε의 경우 5개)가 있고 경쇄에는 2개가 있어, 100개 내지 110개의 아미노산 잔기마다 루프를 형성한다. 이들의 입체구조는 루프 사이에 유사하고 구조 유닛 또는 도메인으로서 지칭된다. 샘플이 동일한 동물 종의 동일한 클래스(서브클래스)로부터 유래할지라도, N-말단에 위치하는, 중쇄 및 경쇄 둘 다를 가진 도메인은 다양한 아미노산 서열을 갖고 가변 영역으로서 지칭된다. 중쇄 및 경쇄의 각각의 N-말단 도메인은 각각 "중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)"으로서 지칭된다. 가변 영역의 다운스트림에 있는 C-말단 도메인의 아미노산 서열은 클래스 또는 서브클래스마다 거의 불변하고 "불변 영역"으로서 지칭된다. 중쇄 불변 영역(CH)은 N-말단 측부터 3개의 도메인, 즉 CH1, CH2 및 CH3으로 더 나누어진다. 경쇄 불변 영역은 "CL"로서 지칭된다.
항체의 Y자형 구조에서, Y자형의 아래쪽 절반에서 세로 막대에 상응하는 부분은 "Fc(단편, 결정화 가능) 영역"으로서 지칭된다. Fc 영역은 2개의 "Fc 폴리펩타이드"로 구성된다. Fc 폴리펩타이드는 중쇄의 CH2 및 CH3 도메인으로 구성된다. 다른 한편으로, 항체의 Y자형 구조에서, Y자형 구조의 위쪽 절반에서 V자형 부분을 구성하는 대각선 막대에 상응하는 부분은 "Fab(단편, 항원 결합) 영역"으로서 지칭된다. Fab 영역은 중쇄의 VH 및 CH1 도메인 및 경쇄(VL 및 CL)로 구성된다. 항체는 2개의 Fab 영역으로 구성된 V자형의 끝 부분(항원 결합 부위)에서 항원에 결합한다. 중쇄의 Fab 영역과 Fc 영역은 힌지 영역으로서 지칭되는 영역에 의해 연결된다. 또한, 항체의 2개의 중쇄는 이황화 결합된다.
"항원 결합 부위"는 VH 및 VL로 구성되고, 항원에 대한 결합 특이성은 이 부위의 아미노산 서열에 의해 결정된다. 다른 한편으로, 보체 및 다양한 Fc 수용체 발현 세포에의 결합과 같은 생물학적 활성은 각각의 Ig 클래스의 불변 영역의 구조의 차이를 반영한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 가변성은 두 쇄에 존재하고 "상보성 결정 영역(CDR)"으로서 지칭되는 3개의 작은 초가변 영역으로 제한되는 것으로 이해되고, 아미노산 서열의 비교적 큰 변화를 가진다. 다른 한편으로, 가변 영역의 나머지 부분은 FR1 내지 FR4로 구성된 프레임워크 영역(FR)으로서 지칭되고, 아미노산 서열의 변화는 비교적 작다.
중쇄 및 경쇄 각각의 N-말단에는 약 5개 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 3개의 CDR이 "CDR1", "CDR2" 및 "CDR3"의 순서로 존재한다. 특히, 중쇄의 CDR은 항원에의 결합에 기여하는 것으로 알려져 있다. 또한, CDR1 내지 CDR3 중에서 CDR3의 기여가 가장 큰 것으로 알려져 있다.
본원에서 사용된 항체의 아미노산 잔기 번호는 카바트(Kabat) 넘버링 또는 EU 지수(Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed, 1991, NIH 공개 번호 91-3242)를 특정함으로써 그의 넘버링 체계에 따라 정의될 수 있다.
본원에서 "항체 유도체"는 항원 결합 활성을 가진, 전체 길이 면역글로불린 분자로부터 유래한 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 분자이다. 대표적인 항체 유도체는 단일 쇄 가변 영역 단편(scFv), Fab 단편, Fab' 단편 및 F(ab')2 단편을 포함한다. "scFv"는 링커에 의해 연결된 VH와 VL로 구성된 1가 항체 유도체이다. "Fab 단편"은 경쇄, 및 VH, CH1 도메인 및 힌지 영역의 일부를 포함하는 중쇄 단편으로 구성된 1가 항체 유도체이다. "F(ab')2 Fab' 단편"은 경쇄, 및 VH, CH1 도메인 및 힌지 영역의 일부를 포함하는 중쇄 단편으로 구성된 1가 항체 유도체이고, 힌지 영역의 이 일부는 중쇄 사이의 S-S 결합을 구성하는 시스테인 잔기를 포함한다. 용어 "1가"는 하나의 항원 결합 부위를 포함한다는 것을 의미한다.
"단일 아암 항체"도 항체 유도체의 일종이다. 본원에서, "단일 아암 항체"는 1개의 Fab 영역 및 1개의 Fc 영역을 포함하는 1가 항체 유도체이고, 이때 Fab 영역은 Fc 영역에서 2개의 Fc 폴리펩타이드 중 하나에 연결된다. Fab 영역과 1개의 Fc 폴리펩타이드는 힌지 영역 또는 펩타이드 링커를 통해 연결될 수 있다. 한 실시양태에서, 단일 아암 항체는 1개의 중쇄(VH, CH1 도메인, 힌지 영역, Fc 폴리펩타이드(CH2 도메인 및 CH3 도메인)), 1개의 경쇄(VL 및 CL) 및 Fc 폴리펩타이드를 포함한다(도 9). 한 실시양태에서, 단일 아암 항체는 1개의 중쇄, 1개의 경쇄 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항체이고, 이때 힌지 영역은 Fc 폴리펩타이드에 추가된다(도 9 - 좌측). 한 실시양태에서, 단일 아암 항체는 1개의 중쇄, 1개의 경쇄 및 Fc 폴리펩타이드로 구성된 단일 아암 항체이고, 이때 CH1 도메인은 힌지 영역을 통해 Fc 폴리펩타이드에 연결된다(도 9 - 중앙). 한 실시양태에서, 단일 아암 항체는 1개의 중쇄, 1개의 경쇄 및 Fc 폴리펩타이드로 구성된 단일 아암 항체이다(도 9 - 우측). 한 실시양태에서, 단일 아암 항체는 힌지 영역 부분에서 중쇄 사이의 S-S 결합에 의해 결합된 2개의 Fc 폴리펩타이드를 가질 수 있거나(도 9 - 좌측 및 중앙), 2개의 Fc 폴리펩타이드는 이들이 서로 결합될 수 있도록 Fc 폴리펩타이드 중 하나 또는 둘 다에서 변형된 잔기 또는 추가된 시스테인 잔기를 포함할 수 있다(도 9 - 우측).
본원에서 "항-인간 NR1 항체"는 인간 NR1에 결합하는 항체를 의미한다. 인간 NR1에 결합하는지 아니면 결합하지 않는지는 잘 알려진 결합 활성 측정 방법을 이용함으로써 확인될 수 있다. 결합 활성 측정 방법은 예를 들어, 효소 연결 면역흡착 어세이(ELISA)를 포함한다. ELISA가 이용되는 경우, 예를 들어, 진뱅크(GenBank) 수탁번호 # NP_015566.1로 표시된 아미노산 서열을 참조함으로써 제조될 수 있는 인간 NR1 단백질의 전체 길이 또는 부분 폴리펩타이드를 ELISA 플레이트에서 고체상화하고, 시험 항체를 첨가하여 반응시킨 후, 2차 항체, 예컨대, 호스라디쉬 퍼록시다제(HRP)와 같은 효소로 표지된 항-IgG 항체와 반응시킨다. 반응 후, 세척 작업 및 활성을 검출하기 위한 시약 등을 사용한 활성 측정을 수행하여 2차 항체의 결합을 확인함으로써, 시험 항체가 인간 NR1에 결합하는지 아니면 결합하지 않는지를 확인할 수 있게 된다. 구체적인 평가 방법으로서, 예를 들어, 하기 실시예 5에 기재된 방법을 이용할 수 있다.
본 발명의 항-인간 NR1 항체는, 항체가 인간 NR1에 결합하는 한, 항-인간 NR1 이외에 또 다른 동물로부터 유래한 NR1에 결합하는 항체(예를 들어, 항-원숭이 NR1)도 포함한다.
<본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체>
본원에서, "단일 아암 항-인간 NR1 항체"는 인간 NR1에 결합하는 단일 아암 항체이다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 하기 (6) 내지 (10)으로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다:
(6) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(7) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(8) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(9) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(10) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 하기 (6) 내지 (10)으로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다:
(6) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(7) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(8) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(9) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(10) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
Igγ, Igμ, Igα, Igδ 또는 Igε 불변 영역 중 임의의 불변 영역을, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 CH1 도메인 및 FC 폴리펩타이드의 기원이 되는 중쇄 불변 영역으로서 선택할 수 있다. 예를 들어, Igγ는 Igγ1, Igγ2, Igγ3 또는 Igγ4로부터 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 Igγ1 불변 영역으로부터 유래한 CH1 도메인 및 Fc 폴리펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 인간 Igγ1 불변 영역으로부터 유래한 CH1 도메인 및 Fc 폴리펩타이드를 포함한다.
Igλ 또는 Igκ 불변 영역 중 임의의 불변 영역을 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 CL로서 선택할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 Igκ 불변 영역인 CL을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 인간 Igκ 불변 영역인 CL을 포함한다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 불변 영역은 항체 의존적 세포독성 활성 또는 보체 의존적 세포독성 활성을 감소시키는 돌연변이를 가질 수 있다. L234A는 인간 Igγ1 불변 영역에서 EU 지수에 따라 아미노산 위치 234에서 류신이 알라닌으로 치환됨을 표시한다. L235A는 인간 Igγ1 불변 영역에서 EU 지수에 따라 아미노산 위치 235에서 류신이 알라닌으로 치환됨을 표시한다. L234A 및 L235A 아미노산 돌연변이(이하, "LALA 돌연변이"로서 지칭됨)를 가진 인간 Igγ1 불변 영역은 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 번호 121 내지 450의 아미노산 서열로 구성된 인간 Igγ1 불변 영역을 포함한다. 상기 돌연변이는 항체의 항체 의존적 세포독성 활성 및 보체 의존적 세포독성 활성을 감소시키는 것으로 알려져 있다(Mol. Immunol., 1992, Vol. 29, pp. 633-639/J. Immunol., 2000, Vol. 164, pp. 4178-4184). 또한, 마우스 항체에서 IgG1의 D265A 아미노산 돌연변이는 항체의 항체 의존적 세포독성 활성 및 보체 의존적 세포독성 활성을 감소시키는 것으로 알려져 있다(J. Immunol., 2008, Vol. 181, pp. 6664-6669/Nat. Med., 2000, Vol. 6, pp. 443-446). 항체 의존적 세포독성 활성 또는 보체 의존적 세포독성 활성이 감소된 항체의 효과를 마우스 모델에서 관찰하고자 하는 경우, LALA 돌연변이를 가진 인간 항체 대신에 D265A 아미노산 돌연변이를 가진 마우스 항체를 사용할 수 있다.
공지된 기법에 기반한 다른 돌연변이도 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 불변 영역 내로 도입할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 놉스-인투-홀스 기술에 기반한 돌연변이(이하, "놉스-인투-홀스 돌연변이"로서 지칭됨)를 가질 수 있다. 놉스-인투-홀스 기술은 중쇄들 중 한 중쇄의 CH3 영역에 존재하는 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄(놉)로 치환하고 중쇄들 중 다른 한 중쇄의 CH3 영역에 존재하는 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄(홀)로 치환하여, 놉이 홀 내에 위치하게 함으로써, 중쇄의 이종이량체화를 촉진하여 원하는 이종이량체화된 항체 분자를 효율적으로 수득하는 기술이다(Nature, 1994, Vol. 372, pp. 379-383/Nature Biotech., 1998, Vol. 16, pp. 677-681/J. Mol. Biol., 1997, Vol. 270, pp. 26-35/Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2013, Vol. 110, pp. E2987-E2996).
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 L234A 및 L235A 아미노산 돌연변이(LALA 돌연변이)를 가진 Fc 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 놉스-인투-홀스 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 L234A 및 L235A 아미노산 돌연변이(LALA 돌연변이) 및 놉스-인투-홀스 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 놉스-인투-홀스 돌연변이는 그의 Fc 영역을 형성하는 하나의 Fc 폴리펩타이드 내의 T366W 돌연변이, 및 그의 Fc 영역을 형성하는 다른 Fc 폴리펩타이드 내의 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이이다(WO1998/050431 참조).
본원에서 "인간 항체"는 인간 면역글로불린 아미노산 서열을 가진 항체를 지칭한다. 본원에서 "인간화된 항체"는 CDR 이외의 아미노산 잔기의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린 분자로부터 유래한 아미노산 잔기로 치환되어 있는 항체를 지칭한다. 인간화된 항체는 예를 들어, 미국 특허 제5225539호 및 미국 특허 제6180370호 등을 참조함으로써 제조될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 인간 항체 또는 인간화된 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다.
서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄는 LALA 돌연변이를 갖고, 이 돌연변이는 서열번호 22에서 아미노산 번호 237 및 238의 알라닌 잔기에 위치한다.
서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄는 놉스-인투-홀스 돌연변이(T366S, L368A 및 Y407V)를 갖고, 이 돌연변이는 서열번호 22에서 아미노산 번호 369의 세린 잔기, 아미노산 번호 371의 알라닌 잔기 및 아미노산 번호 410의 발린 잔기에 위치한다.
서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드는 LALA 돌연변이를 갖고, 이 돌연변이는 서열번호 42에서 아미노산 번호 9 및 10의 알라닌 잔기에 위치한다. 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드도 놉스-인투-홀스 돌연변이(T366W)를 갖고, 이 돌연변이는 아미노산 번호 141의 트립토판 잔기에 위치한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체이다.
서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄와 마찬가지로, 서열번호 26, 30, 34 및 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄도 LALA 돌연변이 및 놉스-인투-홀스 돌연변이(T366S, L368A 및 Y407V)를 가진다.
한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 수용체 세포 내재화를 억제한다.
본원에서, 두 항체가 동일한 항원 단백질에 "경쟁적으로" 결합한다는 것은 두 항체 각각이 결합하는 항원 단백질의 에피토프가 동일함을 의미하거나, 두 항체 각각이 결합하는 항원 단백질의 에피토프의 부분이 공통됨을 의미하거나, 이 항원 단백질의 에피토프에 결합하는 항체들 중 하나가 항원 단백질에서 다른 항체에 결합되는 에피토프 부분을 포함하는 항원 단백질의 3차원 구조를 변화시켜, 상기 다른 항체가 항원 단백질의 상기 에피토프 부분에 더 이상 결합할 수 없게 한다는 것을 의미한다.
예를 들어, 당분야에서 숙련된 자는 인간 NR1 폴리펩타이드로 마우스 또는 래트를 면역화함으로써 수득된 항체를 기반으로 제조된 다수의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 수득할 수 있다. 그 다음, 본원의 실시예 3 내지 5 등에 개시된 방법에 따라, 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체를 사용하여 스크리닝하고, 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDA 수용체 세포 내재화를 억제하는 항-인간 NR1 항체를 선택함으로써, 수득된 다수의 항-인간 NR 항체로부터 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 선택할 수 있다.
"서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체"는 예를 들어, 본원의 실시예 5에 기재된 ELISA 경쟁 어세이의 결과로서 확인된 ABN_1-1-175, ABN_1-178.3, ABN_3-385, ABN_3-502 및 이들의 유도체를 포함한다.
"서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 수용체 세포 내재화를 억제하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체"는 예를 들어, ABN_1-175, ABN_1-178, ABN_3-385, ABN_3-502, 또는 실시예 1에 기재된 P003-102의 항원 결합 부위를 포함하는 단일 아암 항체, 또는 보다 구체적으로, 본원의 실시예 2 또는 실시예 6에서 제조된 단일 아암 항-인간 NR1 항체 ABN-1 내지 ABN-5를 포함한다.
항체가 세포에서 발현될 때, 항체는 번역후 변형을 겪는 것으로 알려져 있다. 번역후 변형의 예는 카르복시펩티다제에 의한 중쇄 C-말단 라이신의 절단, 중쇄 및 경쇄 N-말단 글루타민 또는 글루탐산의 피로글루타밀화에 의한 피로글루탐산으로의 변형, 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 당화 등을 포함한다. 이러한 번역후 변형은 다양한 항체에서 일어나는 것으로 알려져 있다(J. Pharm. Sci., 2008, Vol. 97, pp. 2426-2447).
번역후 변형으로부터 생성된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 예는 중쇄 가변 영역의 N-말단 피로글루타밀화 및/또는 중쇄 C-말단 라이신의 결실을 겪은 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다. N-말단 피로글루타밀화 또는 C-말단 라이신 결실에 의한 이러한 번역후 변형은 항체의 활성에 영향을 미치지 않는 것으로 당분야에 공지되어 있다(Anal. Biochem., 2006, Vol. 348, pp. 24-39).
한 실시양태에서, 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 번역후 변형으로부터 생성된다.
한 실시양태에서, 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형, 즉 중쇄 가변 영역의 N-말단 피로글루타밀화 및/또는 중쇄 C-말단 라이신의 결실로부터 생성된다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 본원에 개시된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 VH 및 VL 서열 정보 등을 기반으로 당분야에 잘 알려져 있는 방법을 이용함으로써 당분야에서 숙련된 자에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는, 예를 들어, 하기 "본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법 및 이에 의해 제조된 단일 아암 항-인간 NR1 항체"에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있으나, 이로 제한되지 않는다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 필요에 따라 추가 정제 후 표준 방법에 의해 제제화되고 항-NMDAR 뇌염 등의 치료에 사용될 수 있다.
<본 발명의 폴리뉴클레오타이드>
본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이다:
(a) 하기 (a-1) 내지 (a-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(a-1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
(a-2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
(a-3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
(a-4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 하기 (b-1) 내지 (b-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(b-1) 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(b-2) 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(b-3) 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(b-4) 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이다:
(a) 하기 (a-1) 내지 (a-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(a-1) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역;
(a-2) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역;
(a-3) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역;
(a-4) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 하기 (b-1) 내지 (b-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(b-1) 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역;
(b-2) 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역;
(b-3) 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역;
(b-4) 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이다:
(a) 하기 (a-1) 내지 (a-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열:
(a-1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 및/또는
(b) 하기 (b-1) 내지 (b-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열:
(b-1) 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-2) 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-3) 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-4) 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 하기 (a-1) 내지 (a-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(a-1) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-2) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-3) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄;
(a-4) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 및/또는
(b) 하기 (b-1) 내지 (b-4)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열:
(b-1) 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-2) 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-3) 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄;
(b-4) 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열; 및/또는
(b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 25로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 27로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열; 및/또는
(b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 29로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 31로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열; 및/또는
(b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 33으로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 35로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열; 및/또는
(b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열.
서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 37로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 39로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 추가로 포함할 수 있고, 한 실시양태에서 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 하기 (a) 및/또는 (b) 및 (c)에 기재된 염기 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열;
(b) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열;
(c) 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열.
서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 21로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 서열번호 23으로 표시된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열 및/또는 이 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이고, 이때 상기 항체는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제한다.
본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 그의 염기 서열을 기반으로 당분야에 잘 알려져 있는 방법을 이용함으로써 당분야에서 숙련된 자에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 당분야에 알려져 있는 유전자 합성 방법을 이용함으로써 합성될 수 있다. 이용될 수 있는 이러한 유전자 합성 방법은 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있는 다양한 방법들, 예컨대, 국제 특허출원 공개 제WO90/07861호에 기재된 항체 유전자의 합성 방법을 포함한다.
<본 발명의 발현 벡터>
본 발명의 발현 벡터는 단일 아암 항-인간 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 단일 아암 항-인간 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 본 발명의 단일 아암 항-인간 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 나아가, 본 발명의 발현 벡터는 본 발명의 단일 아암 항-인간 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 본 발명의 단일 아암 항-인간 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 본 발명의 단일 아암 항-인간 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 본 발명의 발현 벡터는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 서열번호 42로 표시된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터이고, 이때 상기 항체는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 상기 항체의 경쇄 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터이고, 이때 상기 항체는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제한다.
본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 데 사용되는 발현 벡터는 다양한 종류의 숙주 세포, 예컨대, 진핵 세포(예를 들어, 동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포 및 효모) 및/또는 원핵 세포(예를 들어, 대장균)에서 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 중쇄에 결합하여 Fc 영역을 형성하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 발현시킬 수 있고 이들에 의해 코딩된 폴리펩타이드를 생성할 수 있는 발현 벡터를 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 이러한 발현 벡터는 예를 들어, 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터(예를 들어, 아데노바이러스 및 레트로바이러스) 등을 포함한다. 한 실시양태에서, pEE6.4 또는 pEE12.4(Lonza)를 발현 벡터로서 사용할 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 커플링된 프로모터를 포함할 수 있다. 동물 세포에서 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 발현시키기 위한 프로모터는 예를 들어, 바이러스 유래의 프로모터, 예컨대, CMV, RSV 및 SV40, 액틴 프로모터, EF(연장 인자) 1알파 프로모터, 열 충격 프로모터 등을 포함한다. 세균(예를 들어, 대장균)에서 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 발현시키기 위한 프로모터는 예를 들어, trp 프로모터, lac 프로모터, λPL 프로모터, tac 프로모터 등을 포함한다. 효모에서 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 발현시키기 위한 프로모터는 예를 들어, GAL 1 프로모터, GAL 10 프로모터, PH05 프로모터, PGK 프로모터, GAP 프로모터, ADH 프로모터 등을 포함한다.
동물 세포, 곤충 세포 또는 효모를 숙주 세포로서 사용할 때, 본 발명의 발현 벡터는 출발 코돈, 정지 코돈, 인핸서 서열, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체 또는 이의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 유전자의 5' 및 3' 비번역 영역, 분비 신호 서열, 스플라이스 연접부, 폴리아데닐화 부위 또는 복제 가능한 유닛 등을 포함할 수 있다. 대장균을 숙주 세포로서 사용할 때, 본 발명의 발현 벡터는 출발 코돈, 정지 코돈, 터미네이터 영역 및 복제 가능한 유닛을 포함할 수 있다. 본 발명의 발현 벡터는 목적에 따라 일반적으로 사용되는 선택 마커(예를 들어, 테트라사이클린 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자 및 디하이드로폴레이트-환원효소 유전자)를 포함할 수 있다.
<본 발명의 형질전환된 숙주 세포>
본 발명의 형질전환된 숙주 세포는 본 발명의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 포함한다. 본 발명의 형질전환된 숙주 세포는 하기 (1) 내지 (4)로 구성된 군으로부터 선택된 숙주 세포를 포함한다:
(1) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(2) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(3) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(4) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
본 발명의 형질전환된 숙주 세포는 또한 하기 (a) 내지 (d)로 구성된 군으로부터 선택된 숙주 세포도 포함한다:
(a) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(d) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
한 실시양태에서, 앞서 언급된 (a) 내지 (d)에서 숙주 세포에 포함된 발현 벡터는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 앞서 언급된 (a) 내지 (d)에서 숙주 세포는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 형질전환된 숙주 세포의 예는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(6) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(7) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(8) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 하기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(6) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(7) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(8) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 하기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄; 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄; 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄; 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄; 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄; 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄; 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(6) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(7) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(8) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(9) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(10) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들을 가진 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들을 가진 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들을 가진 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들을 가진 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터;
(m) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
한 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이며,
본 발명의 숙주 세포는 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터 또는 벡터들을 가진 형질전환된 숙주 세포이다:
(a) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(b) 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(c) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(d) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(e) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(f) 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(g) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(h) 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(i) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(j) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(k) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(l) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
(m) 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
형질전환된 숙주 세포는, 사용되는 발현 벡터와 호환 가능하고 발현 벡터 또는 벡터들로 형질전환될 수 있고 항체를 발현할 수 있는 한, 특별히 제한되지 않는다. 형질전환된 숙주 세포는 예를 들어, 다양한 세포들, 예컨대, 본 발명의 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 천연 세포 또는 인위적으로 확립된 세포(예를 들어, 동물 세포(예를 들어, CHOK1SV1 세포), 곤충 세포(예를 들어, Sf9), 세포(예를 들어, 대장균 등), 효모(사카로마이세스, 피키아 속 등) 등을 포함한다.
한 실시양태에서, CHOK1SV 세포, CHO-DG44 세포, HEK293 세포 및 NS0 세포 등과 같은 배양된 세포를 숙주 세포로서 사용할 수 있다.
숙주 세포를 형질전환시키는 방법은 인산칼슘법, 전기천공법 등을 포함한다.
<본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법 및 이에 의해 제조된 단일 아암 항-인간 NR1 항체>
단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법은 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 발현시키고 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 생성하는 방법을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법은 하기 (a) 내지 (e)로 구성된 군으로부터 선택된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 단일 아암 항-인간 NR1을 발현시키는 단계를 포함한다:
(a) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(d) 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(e) 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법은, 이 방법이 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 발현시키는 단계를 포함하는 한, 특별히 제한되지 않는다.
형질전환된 숙주 세포는 공지된 방법에 의해 배양될 수 있다. 배양 조건, 예를 들어, 온도, 배양 배지의 pH 및 배양 시간은 적절하게 선택된다. 숙주 세포가 동물 세포인 경우, 약 5% 내지 20%의 태아 소 혈청을 포함하는 MEM 배양 배지(Science, 1959, Vol.130, pp.432-437), DMEM 배양 배지(Virology, 1959, Vol.8, p.396), RPMI1640 배양 배지(J. Am. Med. Assoc., 1967, Vol.199, p.519), 199 배양 배지(Exp. Biol. Med., 1950, Vol.73, pp.1-8) 등과 같은 배지를 배양 배지로서 사용할 수 있다. 배양 배지의 pH는 예를 들어, 약 6 내지 8이고, 배양은 필요에 따라 통기시키고 교반 배양하면서 약 15시간 내지 336시간 동안 약 30℃ 내지 40℃에서 통상적으로 수행된다. 숙주 세포가 곤충 세포인 경우, 예를 들어, 태아 소 혈청을 포함하는 그레이스 배양 배지(Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1985, Vol.82, p.8404) 등과 같은 배지를 배양 배지로서 사용할 수 있다. 배양 배지의 pH는 예를 들어, 약 5 내지 8이고, 배양은 필요에 따라 통기시키고 교반 배양하면서 약 15시간 내지 100시간 동안 약 20℃ 내지 40℃에서 통상적으로 수행된다. 숙주 세포가 대장균 또는 효모인 경우, 예를 들어, 영양분 공급원을 포함하는 액체 배지가 배지로서 적합하다. 영양 배양 배지는 예를 들어, 형질전환된 숙주 세포의 생장에 필요한 탄소원, 무기 질소원 또는 유기 질소원을 포함한다. 탄소원은 예를 들어, 글루코스, 덱스트란, 가용성 전분 및 수크로스 등을 포함하는 반면, 무기 또는 유기 질소원은 예를 들어, 암모늄염, 질산염, 아미노산, 옥수수 침지액, 펩톤, 카세인, 육류 추출물, 대두박 및 감자 추출물 등을 포함한다. 상기 배지는 요구된 경우 다른 영양분(예를 들어, 무기 염(예를 들어, 염화칼슘, 인산이수소나트륨, 염화마그네슘) 및 비타민), 항생제(예를 들어, 테트라사이클린, 네오마이신, 암피실린, 카나마이신) 등을 포함할 수 있다. 배양 배지의 pH는 예를 들어, 약 5 내지 8이다. 숙주 세포가 대장균인 경우, 예를 들어, LB 배양 배지 및 M9 배양 배지(Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Vol.3, A2.2) 등을 배양 배지로서 사용할 수 있다. 배양은 필요에 따라 통기시키고 교반하면서 약 3시간 내지 24시간 동안 약 14℃ 내지 43℃에서 통상적으로 수행된다. 숙주 세포가 효모인 경우, 예를 들어, 부르크홀더(Burkholder) 최소 배지(Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1980, Vol.77, p.4505) 등을 배양 배지로서 사용할 수 있다.
배양은 필요에 따라 통기시키고 교반하면서 약 14시간 내지 144시간 동안 약 20℃ 내지 35℃에서 통상적으로 수행된다. 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 상기 배양에 의해 발현될 수 있다.
형질전환된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 발현시키는 단계 이외에, 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법은 형질전환된 숙주 세포로부터 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 회수하거나, 단리하거나 정제하는 단계도 포함할 수 있다.
단리 또는 정제 방법은 예를 들어, 용해도를 이용하는 방법, 예컨대, 염석 및 용매 침전법; 분자량 차이를 이용하는 방법, 예컨대, 투석, 한외여과 및 겔 여과; 전하를 이용하는 방법, 예컨대, 이온 교환 크로마토그래피 및 하이드록시아파타이트 크로마토그래피; 특이적 친화성을 이용하는 방법, 예컨대, 친화성 크로마토그래피; 소수성 차이를 이용하는 방법, 예컨대, 역상 고성능 액체 크로마토그래피; 및 등전점의 차이를 이용하는 방법, 예컨대, 등전점 전기영동 등을 포함한다. 한 실시양태에서, 배양 상청액에 축적된 항체는 다양한 종류의 크로마토그래피, 예를 들어, 단백질 A 컬럼 또는 단백질 G 컬럼을 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법에 있어서, 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 놉스-인투-홀스 돌연변이를, 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄의 CH3, 및 이 중쇄와 조합하여 Fc 영역을 형성하는 Fc 폴리펩타이드의 CH3 각각 내로 도입함으로써 효율적으로 수득될 수 있다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법에 의해 제조된 단일 아암 항-인간 NR1 항체도 포함한다.
<본 발명의 약학 조성물 등>
본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 조성물을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 당분야에서 통상적으로 사용되는 부형제, 즉 약학 부형제 또는 약학 담체 등을 사용하는 통상적으로 이용되는 방법에 의해 제조될 수 있다. 이 약학 조성물의 제형은 예를 들어, 주사제, 점적 주입제 등과 같은 비경구 제형을 포함하고, 약학 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여 등에 의해 투여될 수 있다. 약학 조성물을 제제화하는 데 있어서, 이 제형에 따라 부형제, 담체, 첨가제 등을 약학적으로 허용되는 범위 내에서 사용할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 여러 종류의 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 C-말단 라이신 결실 및 N-말단의 피로글루타밀화를 갖지 않는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 C-말단 라이신 결실 및 N-말단의 피로글루타밀화를 가진 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다:
(1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체; (2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체; (3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체; (4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체; (5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다:
(1) 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 번호 52 내지 58의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 번호 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 번호 51 내지 53의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 번호 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다:
(1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
(5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열로 구성된 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 세포 내재화를 억제하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체, 및/또는 이 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 번역후 변형으로부터 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다.
본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 용량은 질환의 상태, 환자의 연령 또는 사용되는 제형에 따라 상이하다. 예를 들어, 약 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량이 사용될 수 있다. 또한, 이러한 투약에 상응하는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 용량은 조절될 수 있고 제제화될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 항-NMDAR 뇌염에 대한 치료제로서 사용될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 치료용 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 약학 조성물을 포함한다. 뿐만 아니라, 본 발명은 치료 유효량의 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 투여하는 단계를 포함하는 항-NMDAR 뇌염의 치료 방법을 포함한다. 나아가, 본 발명은 항-NMDAR 뇌염의 치료제로서 사용되는 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 포함한다. 더욱이, 본 발명은 항-NMDAR 뇌염을 치료하기 위한 약학 조성물의 제조에 있어서 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 용도를 포함한다.
<본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체>
본 발명의 명세서에서, "1가 항-인간 NR1 항체 유도체"는 항-인간 NR1 항체로부터 유래한 인간 NR1에 대한 항원 결합 부위를 포함하는, 인간 NR1에 결합하는 1가 항체 유도체이다. 본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체는 예를 들어, 항-인간 NR1 항체로부터 유래한 scFc, Fab 단편, F(ab')2 단편 등을 포함한다.
본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체는 하기 (1) 내지 (4)로부터 선택된, 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체이다:
(1) 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 번호 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 8의 아미노산 번호 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(2) 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 번호 50 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 번호 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 12의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(3) 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(4) 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 번호 51 내지 66의 아미노산 서열로 구성된 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 번호 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34의 아미노산 서열로 구성된 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 번호 50 내지 56의 아미노산 서열로 구성된 CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 번호 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
한 실시양태에서, 본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체는 하기 (5) 내지 (8)로부터 선택된, 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체이다:
(5) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(6) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(7) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체;
(8) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체.
본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체는 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고 항-NMDA 수용체 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR 내재화를 억제하는 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 포함한다. 당분야에서 숙련된 자는 <본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체> 단락에 기재된 바와 같이 본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 수득할 수 있다.
본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체의 변형은 그의 생체내 안정성을 개선하기 위해 수행될 수 있다. 변형은 예를 들어, PEG화를 포함한다.
본 발명은 항체 유도체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 이 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 이 발현 벡터에 의해 형질전환된 숙주 세포, 상기 항체 유도체를 제조하는 방법, 상기 항체 유도체를 포함하는 약학 조성물, 약학 조성물의 제조에 있어서 상기 항체 유도체의 용도, 및 상기 항체 유도체로 항-NMDAR 뇌염 환자를 치료하는 방법을 추가로 포함한다.
본 발명의 추가 이해를 제공하기 위해 특정 실시예가 여기에 제공되나; 이 실시예는 본 발명을 제한하기 위해 제공되는 것이 아니라 예시 목적으로 제공된다.
실시예
달리 특정되지 않은 한, 잘 알려진 방법에 따라 하기 실시예에 기재된 단계를 수행할 수 있다. 또한, 달리 특정되지 않은 한, 시판되는 키트 또는 시약 등을 사용하는 실시예 부분의 경우에는 첨부된 프로토콜에 따라 실험을 수행한다.
(실시예 1: 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 항체의 수득)
특허문헌 2(이 문헌의 제1항 및 실시예의 설명 참조)에 기재된 서열 정보를 기반으로, 이 특허문헌에 기재된 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 단리된 항체와 동일한 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 가진 항-인간 NR1 단일클론 항체(003-109, 007-168, 007-169, 007-124, 007-142, 008-218, P003-102, 이하 "병원성 항-인간 NR1 항체"로서 지칭됨)를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 pcDNA3.4(Thermo Fisher Scientific)에 삽입하여 발현 벡터를 제조하였는데, 이때 상기 중쇄 폴리펩타이드는 병원성 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역 서열의 N-말단 부분에 추가된 신호 서열, 및 C-말단 부분에 추가된 CH1 서열, 힌지 서열 및 Fc 서열을 함유한다. 유사하게, 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 pcDNA3.4에 삽입하여 발현 벡터를 제조하였는데, 이때 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 경쇄 가변 영역 서열은 병원성 항-인간 NR1 항체의 N-말단 부분에 추가된 신호 서열, 및 C-말단 부분에 추가된 CH1 서열을 함유한다. 발현 벡터를 ExpiCHO-S 세포(Thermo Fisher Scientific, A29127)에 형질감염시켰고, 통상의 방법에 따라 항체를 수득하였다.
전술된 7개의 병원성 항-인간 NR1 항체의 결합 활성을 유세포분석 측정으로 평가하였다. 이 유세포분석 시험(Becton, Dickinson and Company, FACS Verse)을 NMDAR 발현 HEK 세포(후술됨)에서 수행한다(실시예 7에서 수행된 바와 동일함). 그 결과, 7개의 병원성 항-인간 NR1 항체들 모두가 NMDAR 발현 HEK 세포에서 높은 결합 활성을 보였다. P003-102(서열번호 2로 표시된 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변 영역을 가짐)는 NMDAR 발현 HEK 세포에서 가장 높은 결합 활성을 보였다(데이터는 나타내지 않음).
이 실시예에서 사용된 NMDAR 발현 HEK 세포는 인간 NMDAR(NR1/NR2B) 발현 HEK 세포주(Charles River Laboratories, CTN6121)이고, 달리 특정되지 않은 한, 10% FBS(GE Healthcare Life Sciences, SH30070.03), 50 유닛/㎖ 페니실린-스트렙토마이신(Penicillin-Streptomycin, Thermo Fisher Scientific, 15070063), 0.5 mg/㎖ 제네티신(Geneticin, Thermo Fisher Scientific, 10131027), 0.005 mg/㎖ 블라스티시딘(Blasticidin, InvivoGen, ant-bl-05) 및 0.1 mg/㎖ 제오신(Zeocin, Thermo Fisher Scientific, R25001) 함유 DMEM/F12(Thermo Fisher Scientific, 11320033)(이하, "NMDAR 발현 HEK 세포 배양 배지"로서 지칭됨)를 사용함으로써 50% CO2의 존재 하에 37℃에서 배양되었음을 주목한다.
(실시예 2: 단일 아암 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102의 NMDAR 결합 활성의 확인)
높은 안정성 및 NMDAR 발현 HEK 세포에 대한 최대 결합 활성을 보이는 P003-102로부터 유래한 1가 항-인간 NR1 항체 유도체를 제조하였다.
선행 특허문헌(WO1998/050431)의 설명을 기반으로, P003-102로부터 유래한 1가 항-인간 NR1 항체를 제조하였다. 구체적으로, P003-102의 중쇄의 불변 영역에서 놉스-인투-홀스 돌연변이(이하, "KIH 돌연변이"로서 지칭됨)를 가진 중쇄 폴리펩타이드(서열번호 22)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 21)가 pcDNA3.4에 삽입되어 있는 항체 중쇄 발현 벡터를 제조하였다. 앞서 언급된 KIH 돌연변이와 쌍을 이루는 KIH 돌연변이를 가진 FC 폴리펩타이드(서열번호 42)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 41)가 pcDNA3.4에 삽입되어 있는 FC 발현 벡터를 제조하였다. P003-102의 경쇄 폴리펩타이드(서열번호 24)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 23)가 pcDNA3.4에 삽입되어 있는 항체 경쇄 발현 벡터를 제조하였다. 통상의 방법에 따라, 3개의 벡터, 즉 항체 중쇄 발현 벡터, 항체 경쇄 발현 벡터 및 FC 발현 벡터를 ExpiCHO-S 세포 내로 형질감염시키고 이 세포에서 발현된 항체 분자를 정제함으로써, P003-102로부터 유래한 항원 결합 부위를 가진 1가 항체(단일 아암 항체)(이하, "ABN-5"로서 지칭됨)를 수득하였다.
실시예 1에 기재된 바와 같이, 인간 NMDAR에 대한 ABN-5의 결합 활성을 NMDAR 발현 HEK 세포에서 유세포분석 시험으로 평가하였다. 단일 아암 항체인 ABN-5는 2가 항체인 P003-102보다 약하지만 HEK 세포에서 발현된 NMDAR에 대한 결합 활성을 보였다(도 1). 뿐만 아니라, ABN-5는 다른 6개의 병원성 항-인간 NR1 항체보다 인간 NMDAR에 대한 더 높은 결합 활성을 보였다(데이터는 나타내지 않음).
(실시예 3: 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 세포 내로의 NMDAR의 내재화) 병원성 항-인간 NR1 항체는 세포 표면에서 NMDAR을 가교결합시켜 NMDAR의 내재화를 유도한다. 그 결과, 세포 표면에서의 NMDAR의 발현 수준은 감소되는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 1). 실시예 1에서 제조된 병원성 항-인간 NR1 항체도 HEK 세포의 세포 표면에서 NMDAR의 발현 수준을 감소시킨다.
NMDAR 발현 세포 배양 배지를 10% 투석된 FBS(Thermo Fisher Scientific, 26400-044), 50 유닛/㎖ 페니실린-스트렙토마이신, 2.0 ㎍/㎖ 테트라사이클린(Tetracycline, Sigma-Aldrich, T7660) 및 0.2 mM 메만틴(Memantine, Sigma-Aldrich, M9292) 함유 뉴로베이살(Neurobasal) 배양 배지(Thermo Fisher Scientific, 21103049)(이하, "유도 배지"로서 지칭됨)로 교환함으로써 NMDAR 발현 HEK 세포를 밤새 배양하였다. 병원성 항-인간 NR1 항체 007-142를 100 ㎍/㎖의 농도로 첨가하였다. 항체 첨가 24시간 후, 세포 표면에서의 NMDAR의 발현 수준을, FACS Verse를 이용한 유세포분석 측정으로 평가하였다. 정면 산란 광(FSC) 및 측면 산란 광(CCS) 신호의 2D 확장의 점도표로부터, 단일 세포에 이어 HEK 세포 또는 NMDAR 발현 HEK 세포에 상응하는 세포의 군을 게이팅으로 추출하였다. 추출된 세포 군의 5000개 세포당 기하 평균 형광 강도(GeoMFI)를 측정하여 평가에 사용하였다. 사내 항-KLH 항체(3G6)를 동일한 이소타입의 대조군 항체로서 사용하였다. 007-142는 배지에 첨가되었을 때 세포 표면에서의 NMDAR의 발현을 50% 미만으로 감소시켰다(데이터는 나타내지 않음).
(실시예 4: ABN-5를 미리 첨가함으로써 HEK 세포에서 발현된 NMDAR의 기능의 유지)
단일 아암 항체인 ABN-5가 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 세포 표면에서의 NMDAR 발현 수준 감소와 NMDAR의 기능저하를 레스큐할 수 있는지를 하기 두 가지 평가 방법으로 확인하였다.
먼저, NMDAR의 발현 수준에 대한 ABN-5의 억제 효과를 평가하였다. 연속 희석을 통해 상이한 농도의 ABN-5를, NMDAR 발현 HEK 세포의 배양 배지에 밤새 첨가하였다. 첨가 2시간 후, 병원성 인간 NR1 항체인 007-142를 100 ㎍/㎖ 농도로 배지에 첨가하였고, 007-142의 첨가 24시간 후 세포 표면에서의 NMDAR의 발현 수준을 유세포분석 측정 및 실시예 3으로 평가하였다. 007-142는 HEK 세포의 세포 표면에서의 NMDAR의 발현 수준을 50% 미만으로 감소시켰다. 그러나, 세포 표면에서 007-142에 의한 NMDAR의 발현 수준은 ABN-5에 의해 농도 의존적 방식으로 회복되었다(데이터는 나타내지 않음).
ABN-5가 P003-102 항체에 의한 NMDAR의 기능저하를 예방할 수 있는지를 평가하기 위해, NMDAR 발현 HEK 세포에서 칼슘 유입을 지표로서 사용하였다. 구체적으로, 연속 희석을 통해 상이한 농도의 ABN-5를 처리 전 밤새 배양된 NMDAR 발현 HEK 세포의 배양 배지에 첨가하였다. ABN-5를 15분 동안 첨가한 후, P003-102를 0.1 ㎍/㎖의 농도로 배양 배지에 첨가하였다. ABN-5를 6시간 동안 배양하였다. 배지를 제거한 후, 준비된 FLIPR 칼슘 6 어세이 키트(Molecular Device, R8190) 용액을 웰당 100 ㎕씩 ABN-5에 첨가하고 2시간 동안 배양하였다. 최종 농도가 30 μM인 NMDA(TOCRIS, 0114)를 사용하여 NMDAR을 자극하였다. FLIPR 칼슘 6 어세이 키트(Molecular Devices, R6133)를 사용하여 형광측정 영상화 플레이트 판독기(Molecular Devices, FLIPR TETRA)로 세포내 칼슘 농도를 측정하였다. 결과적으로, 배지에의 P003-102 항체 첨가는 NMDAR 발현 HEK 세포에서 NMDAR의 기능저하를 야기하고, 그 기능저하는 ABN-5에 의해 농도 의존적 방식으로 억제된다(데이터는 나타내지 않음).
상기 결과에 비추어 볼 때, 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 병원성 항-인간 NR1 항체 둘 다가 세포 표면 NMDAR에 결합한다. 그러나, 상기 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 병원성 항-인간 NR1 항체와 달리 NMDAR의 내재화를 유도하지 않는다. 또한, 상기 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 병원성 항-인간 NR1 항체에 길항적으로 작용하고, 세포 표면에서 NMDAR의 발현 수준을 유지함으로써 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR의 기능저하를 예방한다.
(실시예 5: 병원성 항-인간 NR1 항체 P003-102에 대해 길항적으로 인간 NR1에 결합하는 뮤린 항체의 단리)
먼저, P003-102와 경쟁적으로 인간 NR1에 강하게 결합하는 항-인간 NR1 항체를 단리하여, 인간 NMDAR에 대해 ABN-5보다 더 강한 결합 활성을 가진 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 생성하였다.
구체적으로, BALB/cAJc1 마우스 및 Jcl:BDF 마우스(둘 다 일본 CLEA로부터 구입됨)를 사용하여 인간 NR1에 대한 높은 결합 활성을 가진 뮤린 항체를 단리하였다. 통상의 방법에 따라, 면역 반응을 유도하는 아쥬번트와 함께 인간 NR1 단백질을 마우스에 주사하였다. 면역화에 사용된 인간 NR1 단백질은 하기 방법에 의해 제조되었다.
유전공학 기법으로 링커, HisTag 서열(His*8), AviTag 서열(Avidity) 및 정지 코돈을 코딩하는 염기 서열을, 인간 NR1의 세포외 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 43, 상응하는 아미노산 서열은 서열번호 44로 표시됨)의 3' 말단에 추가하고 pcDNA3.1(Thermo Fisher Scientific)에 삽입하여, 인간 NR1과 HisTag의 융합 단백질(이하, "인간 NR1-His 단백질"로서 지칭됨)의 발현 벡터를 생성하였다. 이 발현 벡터를 Expi293F 세포(Thermo Fisher Scientific, A14528)에 형질감염시켰다. 인간 NR1-His 단백질을 배양 상청액으로부터 정제하였다.
통상의 방법에 따라 정제된 인간 NR1-His 단백질과 아쥬번트를 마우스에 수회 주사한 후, 마우스 비장 또는 림프절로부터 림프구를 채취하였다.
알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 647 항체 표지부착 키트(Thermo Fisher Scientific, A20186)를 사용하여 인간 NR1-His 단백질을 형광 표지하였다. 선행 비특허문헌(BMC Biol., 2012, Vol.10, Art.No.80)의 설명을 기반으로, 마우스 림프구로부터 형광 표지된 인간 NR1-His 단백질에 결합된 B 세포를 세포 분류기(Becton Dickinson, FACSmelody)로 분류하였다. 상기 방법에 따라, 분류된 B 세포로부터 추출된 항체를 코딩하는 핵산을 클로닝하였고 인간 NR1에 결합하는 마우스 항체를 생성하는 데 사용하였다. 통상의 방법에 따라, 인간 NR1-His 단백질을 사용하고 ELISA 결합 어세이를 수행하여 제조된 마우스 항체의 NR1 결합 활성을 평가하였다(구체적인 조건은 이하에 기재된 ELISA 경쟁 어세이의 조건과 동일함). 그 결과, 인간 NR1에 대한 결합 활성이 P003-102 항체보다 더 높은 다수의 마우스 항체를 단리할 수 있었다(데이터는 나타내지 않음).
단리된 마우스 항체들 중 어느 항체가 P003-102에 대한 길항 활성을 갖는지를 확인하기 위해 ELISA 경쟁 어세이를 수행하였다. 구체적으로, 15 ㎕의 인간 NR1-His 단백질 용액(트리스 완충 식염수(이하, "TBS"로서 지칭됨) 중의 1 ㎍/㎖)을 384웰 플레이트(Thermo Fisher Scientific, 460372)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음, 인간 NR1-His 단백질 용액을 제거하고, 0.5% Tween-20을 포함하는 TBS(NIPPON GENE, 310-07375)("TBS-T"로서 지칭됨)로 세척하였다. 세척 후, 50 ㎕의 블록킹 원(Blocking One)(Nacalai Tesque, Inc., 03953-95)을 첨가하고 실온에서 1시간 이상 동안 인큐베이션하였다. 차단 용액을 제거하고 전술된 바와 같이 세척하였다. 100,000 ng/㎖ 내지 0.1 ng/㎖의 농도로 15 ㎕의 마우스 항-인간 NR1 항체(5% 블록킹 원을 함유하는 TBS-T) 또는 비교 항체(P003-102)를 각각의 웰에 첨가하고 실온에서 10분 내지 20분 동안 인큐베이션하였다.
바이오틴 표지부착 키트-NH2(DOJINDO 및 LK03)를 사용하여 P003-102를 바이오틴 표지하였다. 15 ㎕의 바이오틴 표지된 P003-102(희석 용액 중의 600 ng/㎖)를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 희석제를 사용하여 8,000배 희석한 HRP 표지된 스트렙타비딘(Funakoshi Co., Ltd., 21130)에 15 ㎕를 첨가하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 다중 표지된 플레이트 판독기(PerkinElmer, 2103 EnVision)에서 화학발광을 측정하는 데 사용되는 화학발광 검출 시약인 BM 화학발광 ELISA 기질(POD)(Roche Diagnotics 11 582 950 001)에 15 ㎕를 첨가한다. 억제율은 100,000 ng/㎖의 비교 항체의 측정 값인 100% 내지 0 ng/㎖의 측정 값인 0%이다. 억제율을 4-파라미터 로지스틱 곡선 피팅으로 분석하였다. 각각의 샘플의 억제율을 하기 계산식으로 계산하였다.
억제율(%) = (1-(샘플 측정 값 - 100% 측정 값)/(0% 측정 값 - 100% 측정 값))x100, 억제율에 대한 음의 값을 가진 샘플은 0%로서 간주된다.
바이오틴 표지된 P003-102에 대한 길항 활성을 가진 항-마우스 항-인간 NR1 단일클론 항체를 분석하였다. 항-마우스 항-인간 NR1 항체들 중에서 ABN_1-175, ABN_1-178.3, ABN_3-385 및 ABN_3-502는 P003-102에 대한 더 강한 길항 활성을 보였다. 특히, ABN_1-178.3 및 ABN_3-502는 P003-102에 대한 가장 강한 길항 활성을 가졌다(도 2).
(실시예 6: 본 발명의 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 제조 방법)
4개의 마우스 항-NR1 단일클론 항체(ABN_1-175, ABN_1-178.3, ABN_3-385, 및 ABN_3-502)가 P003-102에 대한 강한 길항 활성을 보였기 때문에, 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 제조하였다.
선행 비특허문헌(Front Biosci., 2008, Vol.13, pp.1619-1633)에 기재된 기법을 이용하여 ABN_1-175, ABN_1-178.3, ABN_3-385 또는 ABN_3-502의 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)의 아미노산 서열을 디자인하였다. VH 및 VL 내의 상보성 결정 영역(CDR) 아미노산의 이식 장소로서 주형 인간 항체를 기반으로 마우스 항체의 VH와 VL의 프레임워크 영역(FR)의 아미노산 서열과 매우 상동한 아미노산 서열을 가진 인간 항체 프레임워크 서열을, 잘 알려진 기법을 기반으로 인간 생식세포주의 프레임워크 데이터베이스로부터 다수 선택한다. 이 서열 정보를 이용하여, 하나의 마우스 항체로부터 다수의 인간화된 항체의 아미노산 서열을 디자인하였다. 실시예 5에서 수득된 아미노산 서열로부터, 카바트 데이터베이스("Sequences of Proteins of Immunological Interest", US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office)를 참조하여 CDR 서열을 결정하였다. 나아가, ABN-5(실시예 2)는 KIH 돌연변이체를 가진 불변 영역 서열과 조합함으로써 각각 제조된, 각각의 마우스로부터의 복수의 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 단일클론 항체이다. 이 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 단일클론 항체는 ABN_1-175, ABN_1-178.3, ABN_3-385 및 ABN_3-502 중 어느 하나를 인간화한 1개의 중쇄 폴리펩타이드와 1개의 경쇄 폴리펩타이드, 및 1개의 Fc 폴리펩타이드로 구성된 단일 아암 항체이다.
(실시예 7: 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 NMDAR 결합 활성의 측정)
제조된 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 단일클론 항체의 결합 활성을, NMDAR 발현 HEK 세포를 이용하여 유세포분석 시험으로 평가하였다.
NMDAR 발현 HEK 세포를 밤새 유도하고 회수하였다. 회수 후, 11개의 상이한 농도를 생성하기 위해 1.5 x 105개 세포수당 30 ㎍/㎖의 농도부터 연속적으로 3배 희석된 마우스 항체 유래의 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 ABN-5를 첨가하고 30분 동안 4℃에서 세포와 함께 인큐베이션하였다. 염색 후, 세포를 1,200 rpm에서 5분 동안 침전시키고 상청액을 제거하였다. 2% 투석된 FBS를 세포에 첨가한 후, 세포를 원심분리하고 침전시켰다. 상청액을 제거한 후, PE 표지된 항-인간 IgG 항체(Jackson ImmunoResearch Laboratories, 109-116-098)를 2% 투석된 FBS로 100배 희석하고 4℃에서 30분 동안 세포에 첨가하였다. 염색 후, 전술된 바와 같이 세포를 원심분리하고 침전시켰다. 상청액을 제거한 후, 세포를 2% 투석된 FBS에 현탁하고 2차 염색 후 단계를 반복하였다. 실시예 3에 기재된 바와 같이 유세포분석(FACS Verse)을 측정하였다. PE 형광 강도 값을 보이는 GeoMFI로부터 세포 표면 NMDAR과 결합하는 각각의 항체를, FlowJo(Becton Dickinson, Ver.10.0.8)를 이용하여 분석하였다.
결과는 실시예 6에서 제조된 다수의 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체가 P003-102 항체보다 더 큰 NMDAR에의 결합을 갖는다는 사실과 일치하였다. 예를 들어, 마우스 항체 ABN_1-178.3으로부터 유래한 3종의 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체(ABN_178-m1, ABN_178-m2, ABN_178-m3)는 ABN-5에 비해 NMDAR에의 매우 강한 결합을 가졌다(도 3).
각각 ABN-1, ABN-2(앞서 언급된 ABN_178-m3과 동일한 항체), ABN-3 및 ABN-4로서 명명된 기본 마우스 항-인간 NR1 항체 ABN_1-1-175, ABN_1-1-178.3, ABN_3-385 및 ABN_3-502로부터 대표적인 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 선택하였다. 실시예 2에 기재된 ABN-5 및 새로 제조된 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 VH, VL, 중쇄, 경쇄 및 Fc 폴리펩타이드의 아미노산 서열 및 염기 서열은 표 1에 표시되어 있다(표 1에서 중쇄, 경쇄, Fc 폴리펩타이드, 아미노산 서열 및 염기 서열은 각각 HC, LC, Fc, AA 및 NA로서 약칭됨).
Figure pct00001
서열번호 2로 표시된 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 2의 아미노산 번호 26 내지 34, 52 내지 58 및 97 내지 109의 아미노산 서열로 구성된다. 서열번호 4로 표시된 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 4의 아미노산 번호 26 내지 33, 51 내지 53 및 92 내지 100의 아미노산 서열로 구성된다.
서열번호 6으로 표시된 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 6의 아미노산 번호 31 내지 35, 50 내지 66 및 99 내지 110의 아미노산 서열로 구성된다. 서열번호 8로 표시된 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 8의 아미노산 번호 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 98의 아미노산 서열로 구성된다.
서열번호 10으로 표시된 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 10의 아미노산 번호 31 내지 35, 50 내지 66 및 99 내지 111의 아미노산 서열로 구성된다. 서열번호 12로 표시된 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 12의 아미노산 번호 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된다.
서열번호 14로 표시된 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 14의 아미노산 번호 31 내지 36, 51 내지 66 및 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된다. 서열번호 16으로 표시된 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 16의 아미노산 번호 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된다.
서열번호 18로 표시된 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 18의 아미노산 번호 31 내지 36, 51 내지 66 및 99 내지 108의 아미노산 서열로 구성된다. 서열번호 20으로 표시된 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 20의 아미노산 번호 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97의 아미노산 서열로 구성된다.
ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 인간 NMDAR에 대한 결합 활성을 평가하기 위해, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석을 수행하였다. 이 SPR 분석을 위해 Biacore T200(GE Healthcare)을 이용하였다.
인간 항체 포획 키트(GE Healthcare, BR-1008-39) 및 아민 커플링 키트(GE Healthcare, BR-1000-50)를 사용하여 항-인간 IgG(인간 항체 포획 키트)를 CM5 센서 칩(GE Healthcare, BR-1005-30)에 고정시켰다.
유동 채널 1번은 기준으로서 사용되었고, 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체는 이 유동 채널에 결합되지 않았다. HBS-EP+완충제(GE Healthcare, BR-1006-69)로 2, 5 및 10 ㎍/㎖ 농도의 인간화된 항-인간 NR1 항체를 제조하고 각각 50초 동안 10 ㎕/분의 유속으로 다른 스트림(2번, 3번 및 4번)에 첨가하고, 항체를 고화시켰다. 그 후, HBS-EP+완충제에 0.5 ㎍/㎖로 희석된 인간 NR1-His 단백질을 50 ㎕/분의 유속으로 2분 동안 첨가하였다. 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체와 인간화된 NR1-His 단백질의 결합을 측정하였다. HBS-EP+완충제를 5분 동안 50 ㎕/분의 유속으로 첨가한 후, 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체와 인간 NR1-His 단백질의 해리를 측정하였다. 1:1 결합 모델로 분석하고, 결합 속도 상수(ka)와 해리 속도 상수(kd)를 계산하고, kd를 ka로 나눔으로써 해리 상수(KD)를 계산하였다. 마지막으로, 인간화된 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 KD 값의 경우, 이 항체의 고체상 조건 하에 10 ㎍/㎖의 KD 값을 사용하였다.
SPR 분석의 결과로서, ABN-2, ABN-4 및 ABN-5 중에서 인간 NR1-His 단백질에 대한 가장 높은 결합 활성을 가진 ABN-2의 KD(M)는 6.92E-10이다. ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 인간 NR1-His 단백질에 대한 KD 값은 표 2에 제시되어 있다. ABN-2 및 ABN-4의 KD 값은 ABN-5의 KD 값보다 훨씬 더 작았다.
Figure pct00002
(실시예 8: P003-102에 대한 ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 경쟁적 결합 활성)
P003-102에 대해 인간 NR1에 대한 ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 경쟁적 결합 활성을 실시예 5와 유사한 방식으로 ELISA 경쟁 어세이로 측정하였다. 결과는 ABN-2가 NMDAR에의 결합에 있어서 ABN-4 및 ABN-5보다 P003에 대한 더 강한 길항 활성을 가짐을 암시한다(도 4).
(실시예 9: ABN-2, ABN-4 및 ABN-5의 첨가에 의한 NMDAR의 세포 표면 발현 수준의 회복)
병원성 항-인간 NR1 항체, 예컨대, P003-102 등에 의한 세포 표면 NMDAR의 내재화에 대한 ABN-2 및 ABN-5의 억제 효과(NMDAR 내재화의 억제)를 평가하기 위해, 유세포분석을 이용하여 NMDAR 내재화를 평가하였다.
NMDAR 내재화를 자극하기 위해 사용된 병원성 항-인간 NR1 항체 혼합물을, 유도 배양 배지를 사용하여 표 3에 표시된 농도로 제조하였다.
Figure pct00003
병원성 항-인간 NR1 항체 혼합물을 96웰 플레이트(IWAKI, 3860-096)에 웰당 20 ㎕씩 첨가하였다. NMDAR 발현 HEK 세포를 유도 배지에 2.5x106개 세포/㎖로 준비하고 웰당 60 ㎕를 시딩하고 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에 밤새 배양하였다. 웰당 20 ㎕의 연속 희석된 ABN-2 또는 ABN-5를 첨가하고 밤새 인큐베이션하였고, 연속 3배 희석하여 10개의 상이한 측정점을 생성하였다. 이어서, 회수된 세포를 ABN-2 처리군에서는 5.0 ㎍/㎖의 ABN-2로 처리하고 ABN-5 처리군에서는 5.0 ㎍/㎖의 P003-102로 처리하여 4℃에서 30분 동안 1차 염색하였다. 염색 후, 세포를 1,200 rpm에서 5분 동안 침전시켰다. 상청액을 제거하였고, 2% 투석된 FBS를 포함하는 D-PBS(-)를 세포에 첨가하였다. D-PBS를 첨가한 후, 세포를 원심분리하고 상청액을 제거하였다. 2% 투석된 FBS 포함 D-PBS(-)로 100배 희석시킨 PE 표지된 항-인간 IgG 항체를 사용하여 4℃에서 30분 동안 2차 염색을 수행하였다. 염색 후, 세포를 원심분리하고 상청액을 전술된 바와 같이 제거하였다. 세포를 2% 투석된 FBS 포함 D-PBS(-)에 현탁하였고, 2차 염색 후 단계를 반복하였다. FACA Verse를 이용한 유세포분석을 실시예 3에 기재된 바와 같이 측정하였다. 세포 표면에서의 NMDAR 발현 수준을, 유세포분석 소프트웨어 FlowJo를 이용하여 PE 형광 강도 값을 측정하는 GeoMFI로 분석하였다.
세포 표면의 NMDAR 발현 수준을 세포 표면 NR1 발현율로서 평가하였다. 세포 표면 NR1 발현율은 NMDAR 발현 HEK 세포의 PE 형광 강도를 지표로서 사용하였고, 병원성 항-인간 NR1 항체 혼합물을 사용하지 않는 조건 하에 ABN-2와 P003-102로 염색하였을 때 100% 값 및 이소타입 대조군 항체(3G6, 사내에서 제조된 항-KLH 항체)로 염색하였을 때 0% 값을 기준으로 상대적인 값을 계산하였다.
ABN-2 및 ABN-5를 사용하였을 때, 세포 표면 NR1 발현율은 도 5에 표시되어 있다. ABN-2는 세포 표면 NMDAR 발현 수준의 병원성 항-인간 NR1 항체 의존적 감소에 대해 ABN-5보다 훨씬 더 높은 회복 효과를 보였다. ABN-4도 ABN-2보다는 덜하지만 세포 표면 NMDAR 발현 수준의 병원성 항-인간 NR1 항체 의존적 감소에 대해 높은 회복 효과를 보였다(데이터는 나타내지 않음).
(실시예 10: ABN-2 및 ABN-4에 의한 NMDAR 기능 회복의 평가)
병원성 항체 P003-102에 의한 NMDAR의 기능저하에 대한 ABN-2 및 ABN-4의 효과를 평가하기 위해 세포 칼슘 농도를 측정하였다.
100 ㎕의 NMDAR 발현 HEK 세포를 폴리-D 라이신 코팅된 96웰 플레이트(Corning, 356640) 내의 어세이 배지(0.2 mM 메만틴, 10% FBS를 포함하는 뉴로베이살 배지)에 웰당 1.5x105개 세포로 시딩하였다. 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에 밤새 인큐베이션한 후, 상기 어세이 배지에 최종 농도 1 ㎍/㎖로 희석된 25 ㎕의 P003-102를 각각의 웰에 첨가하였다. 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에 15분 동안 인큐베이션한 후, 10 내지 0.01 ㎍/㎖의 최종 농도로 희석된 25 ㎕의 ABN-2를 각각의 웰에 첨가하였다. 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에 6시간 동안 인큐베이션한 후, 배지를 제거하였다. 100 ㎕의 준비된 FLIPR 칼슘 6 어세이 키트(Molecular Device, R8190) 용액을 각각의 웰에 첨가하고 실시예 4에 기재된 바와 같이 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에 2시간 동안 인큐베이션하였다. FLIPR TETRA를 이용하여 Ca2+ 유입을 측정하였다. Ca2+ 유입을 지표로서 사용하여 NMDAR의 기능을 평가하였다.
결과는 ABN-2가 P003-102에 의해 유도된 NMDAR의 기능저하에 대한 용량 의존적 억제 효과를 가짐을 암시한다(도 6). ABN-4 및 ABN-5를 사용하여 동일한 시험을 다시 수행하였다. ABN-4는 ABN-2보다 더 약한 억제 효과를 보였다(데이터는 나타내지 않음).
(실시예 11: 동물에서 시험하기 위한 P003-102 및 ABN-2의 제조)
실시예 12에서 사용된 P003-102 및 ABN-2를 제조하였다.
P003-102의 발현 벡터를 제조하였다. P003-102의 중쇄 발현을 위해, P003-102의 중쇄 가변 영역 서열(서열번호 2), CH1 서열, 힌지 서열 및 Fc 서열로 구성된 중쇄 폴리펩타이드(서열번호 46)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 45)를, 신호 서열(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS; 서열번호 49)을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 3' 측에 연결하고, 연결된 폴리뉴클레오타이드를 GS 벡터 pEE6.4(Lonza)에 삽입하였다. 또한, P003-102의 경쇄 발현을 위해, 경쇄 가변 영역 서열(서열번호 4) 및 CL 서열이 신호 서열(MSVPTQVLGLLLLWLTDARC; 서열번호 50)을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 3' 측에 추가되어 있는 폴리펩타이드(서열번호 48)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 47)를 연결하고, 연결된 폴리뉴클레오타이드를 GS 벡터 pEE12.4(Lonza)에 삽입하였다. 이 GS 벡터의 제한 효소 처리를 NotI-HF(New England Biolabs, R3189L) 및 PvuI-HF(New England Biolabs, R3150L)로 수행하였다. 이 제한 효소 처리 단편의 라이게이션을 DNA 라이게이션 키트(Ligation-Convenience Kit, NIPPON GENE, 319-05961)로 수행하였다. 중쇄 및 경쇄를 함유하는 두 유전자의 이중 GS 벡터(DGV)를 구축하였다. CHO-K1SV 세포(Lonza)에서 DGV의 형질감염을 수행하였고, P003-102를 발현하는 안정한 세포주를 제조하였다. 통상의 방법에 따라, 세포의 배양 상청액으로부터 P003-102를 정제하였다.
ABN-2의 중쇄 발현을 위해, ABN-2의 중쇄 가변 영역 서열(서열번호 10), CH1 서열, 힌지 서열 및 KIH 돌연변이를 가진 FC 서열이 신호 서열(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS; 서열번호 49)을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 3' 측에 추가되어 있는 중쇄 폴리펩타이드(서열번호 30)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 29)를 연결하고, 연결된 폴리뉴클레오타이드를 GS 벡터 pEE6.4에 삽입하였다. 또한, ABN-2의 경쇄 발현을 위해, 경쇄 가변 영역 서열(서열번호 12) 및 CL 서열이 신호 서열(MSVPTQVLGLLLLWLTDARC; 서열번호 50)을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 3' 측에 추가되어 있는 폴리펩타이드(서열번호 32)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 31)를 GS 벡터 pEE12.4에 삽입하였다. 이들 GS 벡터의 제한 효소 처리를 NotI-HF 및 PvuI-HF로 수행하였다. 이들 제한 효소 처리 단편의 라이게이션을 마이티 믹스(Mighty Mix)로 수행하였고, 중쇄 및 경쇄를 함유하는 두 유전자의 이중 GS 벡터(DGV)를 구축하였다. 또한, 중쇄 폴리펩타이드의 KIH 돌연변이와 쌍을 이루는 KIH 돌연변이가 추가되어 있는 FC 폴리펩타이드(서열번호 42)의 발현을 위해, 상기 FC 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 41)를, 신호 서열(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS; 서열번호 49)을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 3' 측에 연결하였고, 연결된 폴리뉴클레오타이드를 GS 벡터 pEE 12.4에 삽입하였다. DGV 및 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 두 종류의 pEE12.4 발현 벡터의 형질감염을 수행하였고, ABN-2를 발현하는 안정한 세포주를 제조하였다. 통상의 방법에 따라, 세포의 배양 상청액으로부터 ABN-2를 정제하였다.
(실시예 12: 항-NMDAR 뇌염 유사 마모셋 모델의 제조 및 마모셋 모델에 대한 ABN-2의 치료 효과의 평가)
일반적인 마모셋(이하, "마모셋"으로서 지칭됨)으로 항-NMDAR 뇌염 모델을 제조하였고, 이 모델에서 ABN-2의 치료 효과를 평가하였다. 실시예 11에 기재된 바와 같이 P003-102의 수동 면역화로 상기 모델을 제조하였다. P003-102의 주입을 수행하기 위해, 이소플루란 마취(Mylan Inc., 871119) 하에 인공호흡기(SHINANO, SN-480-7)를 이용하여 마모셋을 뇌 정위 장치(NARISHIGE, SR-6C-HT)에 고정시켰다. 캐뉼라(Plastics One(등록상표), 813220PSPCLC)를 뇌실 내의 표적에 위치시켰다(A/P: 3.5 mm, M/L: ±0.0 mm, 깊이: 6.95 mm(경막으로부터)). 캐뉼라가 위치된 표적에 대해, 마모셋 뇌 지도(Stereotaxic Atlas of the Marmoset Brain, NCBI Bookshelf ID:NBK55612)를 참고자료로서 사용하였다. 두 번째로, 뇌실 내의 캐뉼라와 미세주입 펌프(PRIMETECH, iPRECIO(등록상표) SMP-200)를 연결하였다. 상기 펌프는 행동 관찰에 영향을 미치지 않는 재킷 주머니(사내)에 설치되었다. 캐뉼라를 뇌실 내에 배치한 후 일주일 동안 PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, 045-29795)를 미세주입 펌프로부터 2 ㎕/시의 유속으로 유동시켰다. 그 후, 상기 펌프를 P003-102(5,000 ㎍/㎖)로 채워진 미세주입 펌프로 교환하고 P003-102를 2 ㎕/시(10 ㎍/시)의 유속으로 뇌실에 주입하였다. 이 시점을 투여 0일째 날로서 설정한다. P003-102의 단일 치료를 14일 동안 수행하였다. 이어서, 상기 펌프를 동량의 P003-102와 치료 항체(ABN-2)(각각 2,500 ㎍/㎖)의 혼합물로 채워진 미세주입 펌프로 교환하였다. 상기 두 종류의 항체를 14일 동안 4 ㎕/시(각각 10 ㎍/시)의 유속으로 뇌실에 주입하였다. 마모셋 치료군을 "ABN-2 투여군"(n=9)으로서 명명한다. 대조군 항체(사내 항-KLH 항체인 3G6)로 치료된 마모셋 군을 "대조군 항체 투여군"(n=3)으로서 명명한다. 하기 관찰을 수행하였다.
비정상적인 행동의 관찰 방법
P003-102를 뇌실에 투여하기 전(0일째 날), P003-102의 투여를 시작한지 14일째 날(14일째 날), 및 P003-102와 함께 ABN-2 또는 대조군 항체를 투여한지 14일째 날(28일째 날) 약 5분 동안 소정의 시간에 카메라로 영상을 녹화하였다. 개선된 파킨슨병 통합 평가 척도(UPDRS, Behav Brain Res., 2008, Vol.194, pp.152-161)인 비정상 평가 척도(Abnormal Rating Scale: ARS)의 마모셋 버전을 이용하여 영상을 기반으로 비정상적인 행동 점수를 평가하였다. 이 평가는 맹검 조건 하에 마모셋 행동을 관찰한 경험이 있는 사람에 의해 수행되었다. ARS는 정신과적 비정상 항목(집중력, 의욕, 공포/불안)과 움직임 손상 항목(수의 움직임의 속도, 움직임의 조화, 점핑의 존재 또는 부재, 상동 행동, 팔과 다리의 비정상)을 평가 지표로서 사용하여 최대 22점으로 점수화하는 방법이다.
ARS에 의한 비정상적인 행동의 평가: P003-102를 마모셋의 뇌실에 투여한 이후 ARS 값이 증가하였음이 인식되었다(데이터는 나타내지 않음). 0일째 날에 비해, 14일째 날에 ARS 값(비정상적인 행동의 표현)이 유의미하게 증가하였다(도 7의 중앙). ABN-2 투여군에서, 28일째 날에 ARS 값의 유의미한 감소가 관찰되었다. 반면, 대조군 항체 투여군은 28일째 날에도 높은 ARS 값을 보였다(도 7의 우측). 대조군 항체 투여군에 비해, ABN-2 투여군은 P003-102에 의해 유도된 비정상적인 행동의 유의미한 개선(ARS 값의 감소로 표시됨)을 보였다. 도 8은 0일째 날, 14일째 날 및 28일째 날에 ABN-2 투여군의 각각의 개별 마모셋의 ARS 추이를 보여준다.
본 발명의 1가 항-인간 NR1 항체 유도체는 항-NMDAR 뇌염의 치료에 유용할 것으로 기대된다. 나아가, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 발현 벡터, 형질전환된 숙주 세포 및 항체의 제조 방법은 항-인간 NR1 항체 유도체의 제조에 유용하다.
서열목록 프리 텍스트
"인공 서열"의 경우, 서열은 하기 서열목록의 숫자 표제 <223>으로 제공된다. 구체적으로, 서열목록에서 서열번호 1 및 3으로 표시된 서열은 ABN-5의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 코돈 최적화된 염기 서열이다. 서열번호 5 및 7로 표시된 염기 서열은 ABN-1의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩한다. 서열목록에서 서열번호 9 및 11로 표시된 염기 서열은 ABN-2의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩한다. 서열목록에서 서열번호 13 및 15로 표시된 염기 서열은 ABN-3의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩한다. 서열목록에서 서열번호 17 및 19로 표시된 염기 서열은 ABN-4의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩한다. 서열번호 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20으로 표시된 각각의 아미노산 서열은 각각 서열번호 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 또는 19로 표시된 염기 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다. 서열번호 21 및 23으로 표시된 염기 서열은 ABN-5의 중쇄 및 경쇄를 코딩한다. 서열번호 25 및 27로 표시된 염기 서열은 ABN-1의 중쇄 및 경쇄를 코딩한다. 서열번호 29 및 31로 표시된 염기 서열은 ABN-2의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 염기 서열이다. 서열번호 33 및 35로 표시된 염기 서열은 ABN-3의 중쇄 및 경쇄를 코딩한다. 서열번호 37 및 39로 표시된 염기 서열은 ABN-4의 중쇄 및 경쇄를 코딩한다. 서열번호 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 또는 40으로 표시된 아미노산 서열은 각각 서열번호 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37 또는 39로 표시된 염기 서열에 의해 코딩된 중쇄 또는 경쇄의 아미노산 서열이다. 서열번호 41로 표시된 염기 서열은 ABN-1-5의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하고 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열은 서열번호 41로 표시된 염기 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열이다. 서열번호 43으로 표시된 염기 서열은 실시예 5에서 인간 NR1-His 단백질의 제조에 사용된 인간 NR1의 세포외 도메인을 코딩한다. 서열번호 46으로 표시된 아미노산 서열은 서열번호 45로 표시된 염기 서열에 의해 코딩된 P003-102의 중쇄의 아미노산 서열이다. 서열번호 48로 표시된 아미노산 서열은 서열번호 47로 표시된 염기 서열에 의해 코딩된 P003-102의 경쇄의 아미노산 서열이다. 서열번호 49로 표시된 아미노산 서열은 실시예 11에서 사용된, P003-12 및 ABN-2의 중쇄뿐만 아니라 Fc 폴리펩타이드도 발현시키기 위한 신호 서열이다. 서열번호 50으로 표시된 아미노산 서열은 실시예 11에서 사용된, P003-12 및 ABN-2의 경쇄를 발현시키기 위한 신호 서열이다.
SEQUENCE LISTING <110> Astellas Pharma Inc. <120> anti-human NR1 antibody derivatives <130> A21009A00 <150> JP2020-092105 <151> 2020-05-27 <160> 50 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> codon optimized <220> <221> CDS <222> (1)..(360) <400> 1 cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc aag cct tct ggc 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 acc ctg tct ctg aca tgt gct gtg tcc ggc ggc tcc atc tcc tcc tct 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 aat tgg tgg tct tgg gtc cga cag cct cct ggc aaa gga ctg gaa tgg 144 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 atc ggc gag atc tac cac tcc ggc aac acc aac tac aac ccc agc ctg 192 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 aag tcc aga gtg acc gtg tcc gtg gac aag tcc aag aac cag ttc tcc 240 Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 ctg aag ctg acc tct gtg acc gct gcc gat acc gcc gtg tac tac tgt 288 Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gct aga gat gtg tct ggc gga gtg aat tgg ttc gat cct tgg ggc cag 336 Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 ggc aca ctg gtt acc gtg tcc tct 360 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 330 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gtg ctg 330 Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 4 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val 35 40 45 Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly 65 70 75 80 Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser 85 90 95 Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 5 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mouse antibody/ humanized <220> <221> CDS <222> (1)..(363) <400> 5 gaa gtt cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aag cct ggc gag 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 tcc ctg aag atc tcc tgc aaa ggc tcc ggc tac acc tac acc agc tac 96 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ser Tyr 20 25 30 tgg atg aac tgg gtc cga cag atg cct ggc aaa ggc ctg gaa tgg atg 144 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 ggc aga atc gac ccc tac gac tcc gag aca cac tac gac cag aaa ttc 192 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 aag gac caa gtg acc ctg agc gtg gac aag tcc atc tcc acc gct tac 240 Lys Asp Gln Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag tgg tcc tct ctg aag gcc tct gac acc gcc atg tac tac tgt 288 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 gct ggc ggc atc acc acc atc ctc ggc ggc tac ttt gat tac tgg ggc 336 Ala Gly Gly Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 cag ggc aca ctg gtc acc gtt tct tcc 363 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys 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Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tac tac acc tct cgg ctg cac tct ggc gtg ccc tct aga ttt tct ggc 192 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 tcc ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 gag gac ttc gcc acc tac tat tgc cag cag ggc aac acc ctg cct cca 288 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro 85 90 95 tac aca ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt 327 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 8 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 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Glu Gly Ala Met Glu Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mouse antibody/ humanized <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 11 gac ctg cag atg acc cag tct cct tcc agc ctg tct gcc tct gtg ggc 48 Asp Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 gac aga gtg acc atc aca tgc aag gcc agc cag gac gtg aac acc gcc 96 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 gtt gct tgg tat cag cag aag cct ggc aag gcc cct aag ctg ctg atc 144 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tac tgg gcc tcc acc aga cat acc ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag cac tac agc acc cct ttc 288 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aac aga gtg acc atc agc cgg gac acc tcc aag aac cag ttc tcc 240 Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gct gct gat acc gcc gtg tac tac tgc 288 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga gag gac tac gcc tcc tcc tcc ttt gat tac tgg ggc cag ggc 336 Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 acc ctg gtc acc gtt agt tct 357 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Ser Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 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tac tac tgc cag cac ttc tgg gac agc cct cca 288 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro 85 90 95 acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 324 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 20 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 21 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified antibody <220> <221> CDS <222> (1)..(1350) <400> 21 cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc 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cac ttc tgg gac agc cct cca 288 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro 85 90 95 acc ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt acg gtg gcc gct 336 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc 384 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa gcc 432 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc caa 480 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg tcc 528 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac 576 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 gct tgc gaa gtg acc cac cag 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agc cgg gac acc tcc aag aac cag ttc tcc 240 Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gct gct gat acc gcc gtg tac tac tgc 288 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga gag gac tac gcc tcc tcc tcc ttt gat tac tgg ggc cag ggc 336 Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 acc ctg gtc acc gtt agt tct gct agc acc aag gga ccc agc gtg ttc 384 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggc gga aca gct gct ctg 432 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg acc gtg tcc tgg 480 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 aac tct ggc gct ctg aca tct ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg ctg 528 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 cag tcc tcc ggc 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Ser Val Met His Glu Ala Leu His 195 200 205 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 220 <210> 43 <211> 1176 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> codon optimized <220> <221> CDS <222> (1)..(1176) <400> 43 atg tca acg atg agg ctc ctg acc ctt gct ctg ctg ttc agc tgc tca 48 Met Ser Thr Met Arg Leu Leu Thr Leu Ala Leu Leu Phe Ser Cys Ser 1 5 10 15 gtt gcc agg gct gct tgt gac ccc aaa atc gtg aac att ggc gcc gtg 96 Val Ala Arg Ala Ala Cys Asp Pro Lys Ile Val Asn Ile Gly Ala Val 20 25 30 ctg tct acc aga aag cac gag cag atg ttt agg gaa gcc gtg aac cag 144 Leu Ser Thr Arg Lys His Glu Gln Met Phe Arg Glu Ala Val Asn Gln 35 40 45 gca aac aag agg cat ggg tct tgg aaa att cag ctg aat gca acc tct 192 Ala Asn Lys Arg His Gly Ser Trp Lys Ile Gln Leu Asn Ala Thr Ser 50 55 60 gtg aca cac aag cca aat gcc att caa atg gca ctg tcc gtc tgc gag 240 Val Thr His Lys Pro Asn Ala Ile Gln Met Ala Leu Ser Val Cys Glu 65 70 75 80 gac ttg att agc agc cag gtt tac gcc ata ctc gtg agc cat cct ccc 288 Asp Leu Ile Ser Ser Gln Val Tyr Ala Ile Leu Val Ser His Pro Pro 85 90 95 acg ccc aat gac cac ttc act cca act cct gtt tcc tat acc gct ggc 336 Thr Pro Asn Asp His Phe Thr Pro Thr Pro Val Ser Tyr Thr Ala Gly 100 105 110 ttt tac cgg att cct gtc ttg ggc ctc acc aca aga atg agt atc tac 384 Phe Tyr Arg Ile Pro Val Leu Gly Leu Thr Thr Arg Met Ser Ile Tyr 115 120 125 agt gac aag agc ata cac ctg agt ttc ctc cgc act gtg cct ccc tat 432 Ser Asp Lys Ser Ile His Leu Ser Phe Leu Arg Thr Val Pro Pro Tyr 130 135 140 agt cac cag tcc tct gtg tgg ttc gaa atg atg agg gtc tac tcc tgg 480 Ser His Gln Ser Ser Val Trp Phe Glu Met Met Arg Val Tyr Ser Trp 145 150 155 160 aat cac atc att ctg ttg gtg tcc gat gac cac gaa gga cgt gca gcc 528 Asn His Ile Ile Leu Leu Val Ser Asp Asp His Glu Gly Arg Ala Ala 165 170 175 cag aaa agg ctg gaa act ctg ctc gaa gaa cga gag tca aaa gcg gaa 576 Gln Lys Arg Leu Glu Thr Leu Leu Glu Glu Arg Glu Ser Lys Ala Glu 180 185 190 aag gtg ctg caa ttc gac cca gga aca aag aac gtc act gcg ttg ctg 624 Lys Val Leu Gln Phe Asp Pro Gly Thr Lys Asn Val Thr Ala Leu Leu 195 200 205 atg gag gca aaa gag ctg gaa gca cgg gtg atc atc ctc agc gca tca 672 Met Glu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Arg Val Ile Ile Leu Ser Ala Ser 210 215 220 gag gac gat gcc gcc act gtg tat cga gct gct gcg atg ctg aat atg 720 Glu Asp Asp Ala Ala Thr Val Tyr Arg Ala Ala Ala Met Leu Asn Met 225 230 235 240 aca ggg tcc ggc tac gtc tgg ctt gtc ggc gag aga gag att agc ggt 768 Thr Gly Ser Gly Tyr Val Trp Leu Val Gly Glu Arg Glu Ile Ser Gly 245 250 255 aat gct ctg cgg tat gct ccc gat ggc atc ttg ggg ctt cag ctc atc 816 Asn Ala Leu Arg Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gln Leu Ile 260 265 270 aat ggc aag aac gaa agc gcc cat att tct gac gcc gtt ggg gta gta 864 Asn Gly Lys Asn Glu Ser Ala His Ile Ser Asp Ala Val Gly Val Val 275 280 285 gcc caa gca gtt cac gag ctg ctt gag aag gag aac ata acc gat cca 912 Ala Gln Ala Val His Glu Leu Leu Glu Lys Glu Asn Ile Thr Asp Pro 290 295 300 cct aga ggg tgt gtg ggg aac acc aac att tgg aaa aca gga ccg ctg 960 Pro Arg Gly Cys Val Gly Asn Thr Asn Ile Trp Lys Thr Gly Pro Leu 305 310 315 320 ttc aaa cga gtt ctg atg tct agc aag tat gct gat ggc gtg aca ggc 1008 Phe Lys Arg Val Leu Met Ser Ser Lys Tyr Ala Asp Gly Val Thr Gly 325 330 335 aga gtg gag ttc aac gag gat ggt gat cgg aaa ttt gct aac tac agc 1056 Arg Val Glu Phe Asn Glu Asp Gly Asp Arg Lys Phe Ala Asn Tyr Ser 340 345 350 att atg aat ctg caa aat cgc aaa ctg gta cag gtt ggg ata tac aat 1104 Ile Met Asn Leu Gln Asn Arg Lys Leu Val Gln Val Gly Ile Tyr Asn 355 360 365 gga acc cac gtg atc ccg aac gac cgg aag ata atc tgg cct gga ggc 1152 Gly Thr His Val Ile Pro Asn Asp Arg Lys Ile Ile Trp Pro Gly Gly 370 375 380 gaa acg gag aaa ccc cgc ggt tat 1176 Glu Thr Glu Lys Pro Arg Gly Tyr 385 390 <210> 44 <211> 392 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Met Ser Thr Met Arg Leu Leu Thr Leu Ala Leu Leu Phe Ser Cys Ser 1 5 10 15 Val Ala Arg Ala Ala Cys Asp Pro Lys Ile Val Asn Ile Gly Ala Val 20 25 30 Leu Ser Thr Arg Lys His Glu Gln Met Phe Arg Glu Ala Val Asn Gln 35 40 45 Ala Asn Lys Arg His Gly Ser Trp Lys Ile Gln Leu Asn Ala Thr Ser 50 55 60 Val Thr His Lys Pro Asn Ala Ile Gln Met Ala Leu Ser Val Cys Glu 65 70 75 80 Asp Leu Ile Ser Ser Gln Val Tyr Ala Ile Leu Val Ser His Pro Pro 85 90 95 Thr Pro Asn Asp His Phe Thr Pro Thr Pro Val Ser Tyr Thr Ala Gly 100 105 110 Phe Tyr Arg Ile Pro Val Leu Gly Leu Thr Thr Arg Met Ser Ile Tyr 115 120 125 Ser Asp Lys Ser Ile His Leu Ser Phe Leu Arg Thr Val Pro Pro Tyr 130 135 140 Ser His Gln Ser Ser Val Trp Phe Glu Met Met Arg Val Tyr Ser Trp 145 150 155 160 Asn His Ile Ile Leu Leu Val Ser Asp Asp His Glu Gly Arg Ala Ala 165 170 175 Gln Lys Arg Leu Glu Thr Leu Leu Glu Glu Arg Glu Ser Lys Ala Glu 180 185 190 Lys Val Leu Gln Phe Asp Pro Gly Thr Lys Asn Val Thr Ala Leu Leu 195 200 205 Met Glu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Arg Val Ile Ile Leu Ser Ala Ser 210 215 220 Glu Asp Asp Ala Ala Thr Val Tyr Arg Ala Ala Ala Met Leu Asn Met 225 230 235 240 Thr Gly Ser Gly Tyr Val Trp Leu Val Gly Glu Arg Glu Ile Ser Gly 245 250 255 Asn Ala Leu Arg Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gln Leu Ile 260 265 270 Asn Gly Lys Asn Glu Ser Ala His Ile Ser Asp Ala Val Gly Val Val 275 280 285 Ala Gln Ala Val His Glu Leu Leu Glu Lys Glu Asn Ile Thr Asp Pro 290 295 300 Pro Arg Gly Cys Val Gly Asn Thr Asn Ile Trp Lys Thr Gly Pro Leu 305 310 315 320 Phe Lys Arg Val Leu Met Ser Ser Lys Tyr Ala Asp Gly Val Thr Gly 325 330 335 Arg Val Glu Phe Asn Glu Asp Gly Asp Arg Lys Phe Ala Asn Tyr Ser 340 345 350 Ile Met Asn Leu Gln Asn Arg Lys Leu Val Gln Val Gly Ile Tyr Asn 355 360 365 Gly Thr His Val Ile Pro Asn Asp Arg Lys Ile Ile Trp Pro Gly Gly 370 375 380 Glu Thr Glu Lys Pro Arg Gly Tyr 385 390 <210> 45 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pathogenic anti-human NR1 antibody <220> <221> CDS <222> (1)..(1350) <400> 45 cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc aag cct tct ggc 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 acc ctg tct ctg aca tgt gct gtg tcc ggc ggc tcc atc tcc tcc tct 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 aat tgg tgg tct tgg gtc cga cag cct cct ggc aaa gga ctg gaa tgg 144 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 atc ggc gag atc tac cac tcc ggc aac acc aac tac aac ccc agc ctg 192 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 aag tcc aga gtg acc gtg tcc gtg gac aag tcc aag aac cag ttc tcc 240 Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 ctg aag ctg acc tct gtg acc gct gcc gat acc gcc gtg tac tac tgt 288 Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gct aga gat gtg tct ggc gga gtg aat tgg ttc gat cct tgg ggc cag 336 Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 ggc aca ctg gtt acc gtg tcc tct gct tct acc aag gga ccc tct gtg 384 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 ttc cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggt gga acc gct gct 432 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 ctg ggc tgc ctg gtc aag gat tac ttt cct gag cct gtg aca gtg tcc 480 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 tgg aac tct ggt gct ctg aca tcc ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg 528 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 ctg cag tcc tct ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg acc gtg cct 576 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 tct agc tct ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag 624 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc gac 672 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa ctg ctc ggc ggt 720 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 ccc tcc gtt ttc ctg ttt cca cct aag cct aag gac acc ctg atg atc 768 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 tct cgg acc cct gaa gtg aca tgc gtg gtg gtg gat gtg tcc cac gag 816 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 gat ccc gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac 864 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac aga 912 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc aaa 960 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa 1008 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 aag acc atc tcc aag gct aag ggc cag cct cgg gaa cct cag gtt tac 1056 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 aca ctg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg 1104 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 acc tgc ctc gtg aag ggc ttc tac cct tct gat atc gcc gtg gaa tgg 1152 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc cct cct gtg 1200 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg aca gtg gat 1248 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 aag tcc cgg tgg cag cag ggc aac gtg ttc tct tgt tct gtg atg cac 1296 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag agt ctg tct ctg tcc cct 1344 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 ggc aag 1350 Gly Lys 450 <210> 46 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 47 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pathogenic anti-human NR1 antibody <220> <221> CDS <222> (1)..(648) <400> 47 aac ttt atg ctg acc cag cct cac tcc gtg tcc gag tct cca ggc aag 48 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 acc gtg acc atc tcc tgt acc aga tcc tcc ggc tct atc gcc tcc aac 96 Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn 20 25 30 tac gtg cag tgg tat cag cag agg cct ggc tct gct cct acc acc gtg 144 Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val 35 40 45 atc tac gag gac aac cag agg cct tct ggc gtg ccc gat agg ttc tct 192 Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc atc gac tcc tct tcc aac tcc gcc tct ctg acc atc agc ggc 240 Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly 65 70 75 80 ctg aaa acc gag gac gag gcc gac tac tac tgc cag tcc tac gac tct 288 Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser 85 90 95 tcc acc gtg gtg ttt ggc ggc gga aca aag ctg aca gtg ctg ggc cag 336 Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 cct aag gcc aat cct acc gtg aca ctg ttc cct cca tcc tcc gag gaa 384 Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 ctg cag gct aac aag gct acc ctc gtg tgc ctg atc tcc gat ttt tac 432 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 cct ggc gct gtg acc gtg gct tgg aag gct gat gga tct cct gtg aag 480 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 gcc ggc gtg gaa acc acc aag cct agc aag cag tcc aac aac aaa tac 528 Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 gcc gcc tcc tcc tac ctg tct ctg acc cct gaa cag tgg aag tcc cac 576 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 cgg tcc tac tct tgc caa gtg acc cat gag ggc agc acc gtg gaa aag 624 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 aca gtg gcc cct acc gag tgc tct 648 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 48 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val 35 40 45 Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly 65 70 75 80 Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser 85 90 95 Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 49 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 49 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 50 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 50 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys 20

Claims (49)

  1. 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암(one-armed) 항-인간 NR1 항체:
    (1) 서열번호 2의 아미노산 26 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 52 내지 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 97 내지 109의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4의 아미노산 26 내지 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 51 내지 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 92 내지 100의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (2) 서열번호 6의 아미노산 31 내지 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 50 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 99 내지 110의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 89 내지 98의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (3) 서열번호 10의 아미노산 31 내지 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 50 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 99 내지 111의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (4) 서열번호 14의 아미노산 31 내지 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 51 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 99 내지 108의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (5) 서열번호 18의 아미노산 31 내지 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 51 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 99 내지 108의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  2. 제1항에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
    (1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  3. 제1항에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
    (1) 서열번호 2의 아미노산 26 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 2의 아미노산 52 내지 58의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 2의 아미노산 97 내지 109의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4의 아미노산 26 내지 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 4의 아미노산 51 내지 53의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 4의 아미노산 92 내지 100의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (2) 서열번호 6의 아미노산 31 내지 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 6의 아미노산 50 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 6의 아미노산 99 내지 110의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 8의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 8의 아미노산 89 내지 98의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (3) 서열번호 10의 아미노산 31 내지 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 50 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 99 내지 111의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 12의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 12의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (4) 서열번호 14의 아미노산 31 내지 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 51 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 99 내지 108의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 16의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 16의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (5) 서열번호 18의 아미노산 31 내지 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 18의 아미노산 51 내지 66의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 18의 아미노산 99 내지 108의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20의 아미노산 24 내지 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 20의 아미노산 50 내지 56의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 20의 아미노산 89 내지 97의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  4. 제3항에 있어서, 하기 (1) 내지 (5)로부터 선택된 단일 아암 항-인간 NR1 항체:
    (1) 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (2) 서열번호 6으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 8로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (3) 서열번호 10으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 12로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (4) 서열번호 14로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 16으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체;
    (5) 서열번호 18로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 서열번호 20으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 및 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, LALA 돌연변이(L234A 및 L235A)를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 놉스-인투-홀스(Knobs-into-holes) 돌연변이를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, LALA 돌연변이(L234A 및 L235A) 및 놉스-인투-홀스 돌연변이를 포함하는 Fc 영역을 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 놉스-인투-홀스 돌연변이가 Fc 영역을 형성하는 하나의 Fc 폴리펩타이드 내의 T366W 돌연변이, 및 Fc 영역을 형성하는 또 다른 Fc 폴리펩타이드 내의 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체 또는 인간화된 항체인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  10. 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  11. 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  12. 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  13. 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  14. 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 포함하는 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  15. 서열번호 2로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-인간 NR1 항체와 경쟁적으로 인간 NR1에 결합하고, 항-NMDAR 뇌염 환자로부터 유래한 병원성 항-인간 NR1 항체에 의한 NMDAR의 세포내 내재화를 억제하는, 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 번역후 변형에 의해 생성된 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  17. 제16항에 있어서, 번역후 변형이 중쇄의 N-말단에서의 피로글루타밀화 및/또는 중쇄의 C-말단에서의 라이신의 결실인 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  18. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  19. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  20. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  21. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  22. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  23. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  24. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드:
    (a) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드;
    (b) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  25. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  26. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함하는 발현 벡터.
  28. 하기 (a) 및/또는 (b)에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  29. 하기 (a) 및/또는 (b)에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  30. 하기 (a) 및/또는 (b)에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  31. 하기 (a) 및/또는 (b)에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  32. 하기 (a) 및/또는 (b)에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함하는 발현 벡터.
  34. 하기 (a) 내지 (f)에 따른 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터:
    (a) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (b) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (c) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (d) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (e) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터;
    (f) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  35. 하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 제1항의 (2) 내지 (5) 및 제2항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  36. 하기 (a) 내지 (d)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 제3항의 (2) 내지 (5) 및 제4항의 (2) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  37. 하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 제3항의 (1) 내지 (5) 및 제4항의 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  38. 하기 (a) 내지 (i)로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 서열번호 22로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 24로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  39. 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (j) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (k) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (l) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (m) 서열번호 26으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 28로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  40. 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (j) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (k) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (l) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (m) 서열번호 30으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 32로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  41. 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (j) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (k) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (l) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (m) 서열번호 34로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 36으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  42. 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (j) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (k) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (l) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (m) 서열번호 38로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 서열번호 40으로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 서열번호 42로 표시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  43. 하기 (a) 내지 (m)으로부터 선택된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
    (a) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (d) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (e) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (f) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (g) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (h) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (i) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (j) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (k) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (l) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (m) 제15항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터, 상기 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 항체의 Fc 폴리펩타이드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  44. 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 제조하는 방법으로서, 제35항 내지 제43항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포를 배양하여 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 구성하는 폴리펩타이드를 발현시키는 단계를 포함하는, 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 제조하는 방법.
  45. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료를 위한 약학 조성물인 약학 조성물.
  47. 항-NMDAR 뇌염을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체를 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 항-NMDAR 뇌염을 치료하는 방법.
  48. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-NMDAR 뇌염의 치료에 사용하기 위한 단일 아암 항-인간 NR1 항체.
  49. 항-NMDAR 뇌염의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에 있어서 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 단일 아암 항-인간 NR1 항체의 용도.
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