KR20220170290A

KR20220170290A - 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물

Info

Publication number: KR20220170290A
Application number: KR1020210081139A
Authority: KR
Inventors: 전병조; 문정미; 조용수; 구연종; 민예린; 박효선; 박광현
Original assignee: 전남대학교산학협력단; 남부대학교산학협력단
Priority date: 2021-06-22
Filing date: 2021-06-22
Publication date: 2022-12-29

Abstract

본 발명은 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 항사독 조성물을 이용하여 한국형 살무사과 사독에 따른 효과적인 치료가 가능하다.

Description

한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물 {Composition of anti-venom of the Korean salmosa species' venom}

본 발명은 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물에 관한 것이다.

현재 한국 내에 서식하고 있는 독사로 규정되어 있는 살무사과 뱀은 살무사 (Gloydius brevicaudus), 까치살무사 (Gloydius intermedius) 및 쇠살무사 (Gloydius ussuriensis)와 세계보건기구 (WHO)에서 인정하는 유혈목이를 들 수 있다.

뱀물림 (사교상, snake bite envenomation) 사고는 독성분을 보유한 뱀이 치아를 통해 사람의 피부, 근육, 혈관 등으로 독액을 주입하여 다양한 중독 증상을 보이며, 사독(snake venom)은 종(species)에 따라 성분과 독력, 인체에 미치는 영향 등이 다른 것으로 보고되고 있으나, 최근 국내 발표된 문헌에 근거했을 때 시판되고 있는 수동면역 기반 살무사 (Gloydius brevicaudus)로 만든 항사독소의 경우 환자에게 추가 투여 비율이 높고 중증도도 지속적으로 증가하는 것 (Kang 등, Clin Exp Emerg Med 2016; 3(1): 34-40) 을 볼 때 한국형 살무사과 사독을 해독하는데 중요한 요소가 있는 것으로 판단되고 있었다.

따라서 한국 내 서식하는 살무사과에 해당하는 살무사 3종 살무사(Gloydius brevicaudus), 까치살무사(Gloydius intermedius) 및 쇠살무사(Gloydius ussuriensis))의 사독에 대한 항사독 조성물에 대한 필요성이 대두되었다.

한국등록특허 제 0350906 호

본 발명은 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

1. 살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,

혈청에 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

2. 위 1에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 혈청은 불활성화한 살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

3. 위 1에 있어서, 메탈로프로테아제 억제제를 더 포함하는. 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

4. 까치살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,

혈청에 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

5. 위 4에 있어서, 상기 혈청은 불활성화한 까치살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

6. 쇠살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,

혈청에 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

7. 위 6에 있어서, 상기 혈청은 불활성화한 쇠살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

8. 위 6에 있어서, 메탈로프로테아제 억제제를 더 포함하는. 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.

본 발명의 항사독 조성물을 이용하여 한국형 살무사과 사독에 따른 효과적인 치료가 가능하다.

도 1은 한국 내에 서식하는 살무사, 까치살무사, 쇠살무사의 사독과 표준사독을 전기 영동한 결과이다.
도 2는 한국에 서식하는 살무사 3종에서 획득한 각 사독에 대한 쥐 항체의 단백질체 인식 특성을 비교한 결과이다.
도 3은 까치살무사 사독에 대한 살무사 항사독소와 까치살무사 항사독소 투여시 쥐의 중증도 진행 차이를 비교한 결과이다. * P<0.05 and **<P0.01 vs normal group; #P<0.05 vs Gi or Gi+anti-Gb antisera group (5 h)
도 4는 까치살무사 사독에 대한 살무사 항사독소와 까치살무사 항사독소 투여시의 쥐의 24시간 치사율 개선에 미치는 영향을 비교한 결과이다.
도 5 은 까치살무사 사독에 대한 표준항사독소 또는 까치살무사 항사독소와 투여시의 치사율 저감 약효 평가 결과이다.
도 6은 Matrix metalloprotease (MMPs) 에 대해 선택적인 저해 특성을 갖는 화합물중 독시사이클린 (Doxycycline, CAS ID: 564-25-0, MW: 444.4 g/mol, 시그마알드리치, 미국) (Doxy)에 의한 한국형 살무사 3종 유래 사독에 의한 마우스 피하 출혈에 대한 개선 효과를 확인함으로서 까치 살무사는 다른 한국형 살무사 (살무사, 쇠살무사)와 다른 독력기전을 가짐을 증명한 결과물이다. (A) Saline, (B) Saline+Doxy, (C) 살무사 사독, (D) 살무사 사독 + Doxy, (E) 까치살무사 사독, (F) 까치살무사 사독 + Doxy, (G) 쇠살무사 사독, (H) 쇠살무사 사독 + Doxy.

이하 본 발명을 상세히 설명한다. 특별한 정의가 없는 한 본 명세서의 모든 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 기술자가 이해하는 당해 용어의 일반적인 의미와 동일하고 만약 본 명세서에 사용된 용어의 의미와 충돌하는 경우에는 본 명세서에 사용된 의미를 따른다.

본 발명은 살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고, 혈청에 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 상기 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물은 한국형 살무사과에 해당하는 뱀의 사독에 항사독 효과를 가질 수 있으며, 이에 따라 한국형 살무사과 뱀의 사교상 환자의 치료에 사용될 수 있다.

본 명세서에서 살무사과(Crotalinae)란 오스트레일리아를 제외한 전세계에 널리 분포하는 맹독성 독사를 포함하는 분류학상 과를 말한다.

본 명세서에서 한국형 살무사과는 상기 살무사과 중 분류학상 종으로 분류되는 살무사 (Gloydius brevicaudus), 까치살무사 (Gloydius intermedius), 쇠살무사 (Gloydius ussuriensis)를 포함하는 분류학상 과를 말한다.

본 명세서에서 살무사(Gloydius brevicaudus)는 뱀목 살무사과의 맹독성 파충류를 말한다. 몸 길이는 40 내지 60cm이다. 다 자란 것의 몸은 비교적 짧고 굵은 편이며, 머리는 화살촉 모양에 넓고 꼬리는 짧다. 등쪽은 연한 갈색 또는 회색 바탕에 U자를 거꾸로 쓴 모양의 갈색 무늬가 뚜렷하다. 무늬는 등의 가운데 선을 기준으로 하여 좌우로 쌍을 이루고 서로 붙거나 떨어져 있다. 배쪽은 검정색이거나 이에 가깝고 옆면은 색깔이 연하다. 볼에는 흰색 테두리가 쳐진 짙은 갈색 줄무늬가 입술에서 입아귀까지 이어지며, 볼의 홈은 뚜렷하지 않다. 혀는 검정색이고 꼬리 끝은 연한 노란색이다. 몸 중앙의 비늘줄은 21줄이고, 몸 앞부분의 비늘에는 용골이 없으나 뒷부분의 것은 모두 용골이다. 각 비늘에 1쌍의 작은 비늘구멍이 있는 점이 다른 살무사류와 다르다.

본 명세서에서 사독(Snake venom)이란 독사의 독샘에서 나오는 독을 말한다. 사독의 효과는 교상을 입은 대상의 신체에서 다양한 형태로 나타날 수 있다. 예를 들면, 대상체에서 신경기능을 해칠 수 있고, 대상체에서 모세혈관의 벽을 파괴하여 출혈시키고 적혈구를 파괴해서 용혈작용을 일으킬 수 있으며, 혈액을 응고시키는 등의 형태로 나타날 수 있다.

본 발명에서 사독은 살모사 독일 수 있으며, 상기 살모사 독은 크로탈로톡신(crotalotoxin)이라고도 하며, 혈관벽에 작용해서 출혈을 시키는 한편 독 속에 들어 있는 레시티나아제 A라는 효소에 의해 혈청 속에 있는 레시틴을 분해하고 용혈성이 강한 리조레시틴을 발생시켜 적혈구를 파괴할 수 있다.

본 발명에서 한국형 살무사과 3종의 사독은 서로 다른 단백질 또는 펩타이드를 포함할 수 있다. 따라서 상기 단백질 또는 펩타이드에 따라 항사독소로 이용될 수 있는 항혈청이 달라질 수 있으며, 상기 항사독소는 단백질 또는 펩타이드에 특이적인 항체를 포함할 수 있다.

본 발명에서 상기 혈청은 동물로부터 수득된 시료에서 얻을 수 있다. 상기 시료는 상기 피검체로부터 수득된 것이라면 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 시료는 피검체로부터 수득된 혈액, 타액, 땀 또는 소변 등 일 수 있다.

본 발명에서 상기 혈청은 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드를 포함할 수 있다.

본 발명에서 상기 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드는 한국형 살무사과 뱀 중 살무사 독 특이적 펩타이드일 수 있다. 상기 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드 서열을 포함하는 사독은 살무사 독일 수 있다. 예를 들어, 상기 살무사 독은 서열번호 1 내지 서열번호 21의 펩타이드 서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열을 포함하는 펩타이드도 포함할 수 있다.

본 발명 조성물은 혈청에 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용일 수 있다. 서열번호 1 내지 21은 살무사 독에 특이적으로 존재하는 펩타이드이다.

본 명세서에서 "교상"이란 짐승, 뱀, 독벌레 등 동물에게 물린 것. 또는 물려서 생긴 상처를 말한다. "사교상"이란 뱀에 의한 교상을 말한다.

본 발명에서 상기 혈청은 불활성화한 살무사 독을 면역항원보강제 (immunological adjuvant)와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것일 수 있다.

본 발명에서 상기 불활성화한 살무사 독은 사독 내에 포함된 단백질 또는 펩타이드가 변성되어 독성이 감소 또는 제거된 사독일 수 있다. 예를 들어, 상기 불활성화는 화학적 또는 물리적인 방법에 의한 것일 수 있다. 구체적으로, 열에 의한 불활성화 일 수 있다.

본 발명에서 상기 면역항원보강제는 면역반응의 조절 (강화, 억제) 활성을 하는 물질을 말하며, 항원의 투여 형태에 대한 방법과 면역담당세포에 작용하여 항원특이적 또는 비특이적으로 면역응답을 증강 또는 억제시킬 수 있다.

본 발명에서 상기 면역항원보강제는 면역반응을 조절할 수 있는 물질이라면 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 균체성분, 그람음성균의 내독소, 합성화합물, 생체성분유래의 단백질 또는 펩타이드성 물질일 수 있다. 더욱 구체적으로, BCG, Propionibacterium acnes 등의 균체, 세포벽, 트레할로오스다이마이코레트(TDM), 리포다당체(LPS)나 리피드A 분획, β-글루칸(다당체), N-아세틸뮤라밀디펩티드(MDP), 베스타틴, 레바미졸, 흉선호르몬, 흉선인자, 타프트신 등일 수 있다.

본 발명에서 동물에 상기 불활성화한 살무사 독과 면역항원보강제를 함께 주입하여, 상기 동물의 체내에서 상기 살무사 독에 특이적인 항사독소를 형성하도록 할 수 있다.

본 발명 조성물은 메탈로프로테아제 억제제를 더 포함할 수 있다. 이는 예를 들면 독시사이클린일 수 있다.

또한, 본 발명은 까치살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고, 상기 혈청에 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 까치살무사(Gloydius intermedius)는 뱀목 살모사과의 맹독성 파충류로, 칠점사라고도 한다. 길이는 50 내지 65cm, 무게는 200 내지 600g로서 한국에 사는 살모사류 가운데 가장 크고 굵다. 머리는 삼각형이며 정수리에 화살모양의 흰 무늬가 있고,　눈과 콧구멍 사이에 홈이 패어 있다. 눈동자는 세로로 선 타원형이고 위턱에 송곳니처럼 생긴 독아가 나 있다. 몸 빛깔은 잿빛을 띤 노란색이며 검은 가로줄무늬가 있고, 배에는 검은 바탕에 흰 대리석무늬가 있다. 몸통 비늘에는 용골돌기가 뚜렷하고 꼬리의 배쪽은 1줄의 비늘로 덮여 있다. 출혈독과 신경독을 함께 가지고 있으며 한국에 사는 살무사과의 뱀 가운데 가장 독성이 강하다.

본 발명에서 상기 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드는 한국형 살무사과 뱀 중 까치살무사 독 특이적 펩타이드일 수 있다. 상기 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드 서열을 포함하는 사독은 까치살무사 독일 수 있다. 예를 들어, 상기 까치살무사 독은 서열번호 22 내지 서열번호 39의 펩타이드 서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열을 포함하는 펩타이드도 포함할 수 있다.

본 발명 조성물은 혈청에 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용일 수 있다. 서열번호 22 내지 39는 까치살무사 독에 특이적으로 존재하는 펩타이드이다.

본 발명에서 상기 혈청은 불활성화한 까치살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것일 수 있다.

본 발명에서 상기 불활성화한 까치살무사 독은 사독 내에 포함된 단백질 또는 펩타이드가 변성되어 독성이 감소 또는 제거된 사독일 수 있다. 예를 들어, 상기 불활성화는 화학적 또는 물리적인 방법에 의한 것일 수 있다. 구체적으로, 열에 의한 불활성화 일 수 있다.

본 발명에서 동물에 상기 불활성화한 까치살무사 독과 면역항원보강제를 함께 주입하여, 상기 동물의 체내에서 상기 까치살무사 독에 특이적인 항사독소를 형성하도록 할 수 있다.

기타 세부적인 사항은 혈청에 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용 조성물에 관한 내용과 같다.

또한, 본 발명은 쇠살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고, 상기 혈청에서 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 쇠살무사(Gloydius ussuriensis)는 뱀목 살무사과에 속하는 맹독성 파충류이다. 몸길이는 61 내지 62.5cm이다. 살무사에 비해 몸이 작고 가늘며, 머리의 너비가 좁고 꼬리는 비교적 길다. 등에는 짙은 회색 또는 짙은 갈색 바탕에 가장자리가 진한 직사각형 무늬가 2개의 비늘줄에 걸쳐 펴져 있다. 볼에는 가는 흰 테두리가 쳐진 갈색 줄무늬가 있다. 혀는 분홍색, 꼬리 끝은 짙은 색이다. 머리 양쪽 옆면에 패인 홈이 뚜렷하지 않고, 등의 뒤쪽 비늘에는 모두 용골이 있다. 주로 물가의 풀밭이나 낮은 언덕에서 살며 난태생이다.

본 발명에서 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드는 한국형 살무사과 뱀 중 쇠살무사 독 특이적 펩타이드일 수 있다. 상기 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드를 서열을 포함하는 사독은 쇠살무사 독일 수 있다. 예를 들어, 상기 쇠살무사 독은 서열번호 40 내지 서열번호 57의 펩타이드 서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열을 포함하는 펩타이드도 포함할 수 있다.

본 발명 조성물은 혈청에 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용일 수 있다. 서열번호 40 내지 57은 쇠살무사 독에 특이적으로 존재하는 펩타이드이다.

본 발명에서 상기 혈청은 불활성화한 쇠살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것일 수 있다.

본 발명에서 상기 불활성화한 쇠살무사 독은 사독 내에 포함된 단백질 또는 펩타이드가 변성되어 독성이 감소 또는 제거된 사독일 수 있다. 예를 들어, 상기 불활성화는 화학적 또는 물리적인 방법에 의한 것일 수 있다. 구체적으로, 열에 의한 불활성화 일 수 있다.

본 발명에서 동물에 상기 불활성화한 쇠살무사 독과 면역항원보강제를 함께 주입하여, 상기 동물의 체내에서 상기 쇠살무사 독에 특이적인 항사독소를 형성하도록 할 수 있다.

본 발명에서 상기 동물은 인간을 포함한 쥐, 래트(rat), 생쥐, 가축 등의 모든 동물일 수 있다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

본 발명에서 상기 항사독 조성물은 상기 펩타이드 중 적어도 하나에 결합하는 물질을 포함할 수 있다. 상기 펩타이드에 결합하는 물질은 펩타이드의 표면 또는 내부에 결합할 수 있는 물질이라면 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 물질은 항체일 수 있다.

본 발명에서 상기 물질은 펩타이드의 아미노산 서열 중 일부에 결합하거나 펩타이드의 2차원 이상의 입체적인 구조상 일부에 결합할 수 있다.

상기 결합은 물리적 또는 화학적 결합일 수 있다. 예를 들어, 공유 결합 또는 정전기적 결합일 수 있다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.

실시예

실시예 1. 한국에서 서식하는 살무사 3종에서의 사독 및 표준사독의 획득

한국에 서식하고 있으며 뱀물림 (교상)으로 인한 독성증상을 유발하는 3종의 살무사 계열의 뱀종인 살무사, 까치살무사, 쇠살무사의 사독을 구별하여 채취하였다.

보호 장구를 착용하고 뱀의 머리 부분을 손으로 속박하여 구개부를 개방시키고 치아를 노출시킨다. 그 후, 멸균된 1회용 플라스틱 용기에 치아 끝을 마찰시켜 사독이 분출되도록 유도하였고 이를 회수하였다. 획득한 사독은 소량씩 분주하여 -80

에 즉시 냉동 보관하였고, 사용직전에 해동하여 단백질 농도 등을 측정하였다.

표준사독은 식품의약품 안전처에서 생물의약품 국가표준품 사독 2차 (Snake Venom 2nd 코드번호: MFDS-B-17-002)을 유상 분양받아 사용하였다. 표준사독에는 안정제로서 인 유래 알부민 및 자당을 포함하고 있다.

실시예 2. 사독에 대한 항사독소 (항체) 제작

한국에 서식하고 있는 3종의 살무사로부터 획득한 사독은 사용 직전에 해동하여 멸균된 10% glycerol-phosphate buffered saline (10% glycerol-PBS, pH 7.4)에 적정 비율로 희석하였다. 6주령 웅성마우스 (C57BL/6) 에 complete adjuvant (Sigma-Aldrich, 미국) 와 에멀전화한 열처리 불활성화 사독 혼합물을 동물 1마리당 100μg 의 용량으로 5개 이상의 접종점에 피하주사하였다. 이후 4주가 경과한 후, 매 2주간격으로 incomplete adjuvant 에 에멀전화한 열처리 불활성화 사독 100μg씩 동일한 방법으로 3회 추가 접종하였다. 최종 접종으로부터 2주가 경과한 후에 동물을 에테르로 마취시키고 복부를 절개하여 노출된 간대정맥에서 항응고제를 사용하지 않고 전량 채혈하였다. 적정 응고과정을 거친 후 채혈 혈액으로부터 분리한 혈청은 소분하여 -80℃에 냉동 보관하였고 사용직전에 해동하여 사용하였다. 항체를 포함한 혈청 단백질의 바이오틴 결합은 Pierce 사 (미국) 또는 Sigma-Aldrich 사 (미국)에서 구입한 n-hydroxysuccinamide biotin system 을 이용하여 공급자의 매뉴얼에 따라 실시하였다.

실시예 3. 표준 항사독소 및 종 특이적 항사독소를 이용한 교차 웨스턴블로팅

표준 항사독소는 한국백신에서 판매하는 코박스주(한국백신, 대한민국)를 연구 목적으로 획득하여 사용하였다. 해당 주사제에 포함된 항체는 말로부터 유래된 Fab 부분으로서 PBS로 용해시킨후 단백질 농도를 측정한 후 native electrophoresis를 통해 확인 하였다. IgG를 기준으로 분자량 비율 (IgG: Fab = 120 : 50)을 고려하여 희석배율을 결정하였다.

Bio-rad (미국) 또는 Hoefer 사 (미국)에서 공급받은 전기영동 시스템을 활용하여 sodium dodesyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)를 실시하였다. 분자량 별로 전개된 젤에 위치한 단백질 분포체는 Polyvinylidene fluoride (PVDF) 멤브레인에 transfer 하였고 코박스 또는 뱀 종 특이적 바이오틴 결합 항체를 활용하여 면역 블롯팅을 실시하였다. 면역학적으로 선택적인 신호의 검출을 위해 streptavidin-horseradish peroxidase (HRP)를 반응시키고 Clarity and Clarity Max Western ECL Substrates (Bio-rad, 미국)을 활용하여 LAS-500 mini (GE healthcare, 미국)으로 이미지를 획득하였다 (도 2 참조). 또한 동시에 병렬로 전개한 SDS-PAGE gel 은 Coomassie brilliant blue R-250 염색을 실시하여 단백질 분자량 분포를 비교하였다. (도 1 참조)

실시예 4. 까치살무사 사독을 투여한 동물모델에서 중증도 진행 억제효과 평가

까치살무사 사독 200 μg (50 μl in PBS)을 항살무사 항혈청 또는 까치살무사 항사독소혈청 (50 μl) 과 혼합하여 실온에서 20분간 방치하고, 8주령 웅성 C57BL/6에 대퇴부 근육주사 (100μl) 하였다. 주사가 완료된 시점으로부터 시간별로 중증도의 평가는 (강 등, 대한응급의학회지 27(3), 272-279) 및 Dart 등 (Ann Emerg Med. 1996 Mar;27(3):321-6) 에서 제시한 인체 대상 기준을 바탕으로 0에서 5까지의 score를 적용하여 평가하였다. 0: 정상과 동일한 움직임; 1, 기본활동은 적으나 자극에 대하여 정상적으로 반응하고 정상적으로 움직임; 2. 기본활동이 적고 자극에 대해서 반응하며 비교적 원활하게 움직임; 3. 기본활동이 없고 자극에 대해 반응하며 소극적인 회피 움직임만 보임; 4. 기본활동이 없고 자극에 대해 반응하지 않고 움직이지 않음; 5. 호흡과 심장박동이 없고 사망한 상태. (도 3 참조)

실시예 5. 까치살무사 사독 주입을 항-살무사 혈청 또는 항-까치살무사 혈청과 혼합 투여시의 치사가 감소 약효 평가

(1) 마우스 정상군, 까치살무사 사독 근육 주사군, 까치살무사 사독 + 항-살무사 혈철 근육 주사군, 까치살무사 사독 + 항-까치살무사 혈청 근육 주사군의 중등도 개선 평가를 수행하였다 (김 등, 2018, 살무사 독소 중화항체(항독소) 국가표준품 확립, 식품의약품안전처). 그 결과, 까치살무사 사독 + 항-까치살무사 혈청 근육 주사군의 중등도가 항-살무사 혈청 투여군 대비 개선되어, 해당 살무사 사독에 맞는 혈청이 투여되어야 함을 확인하였다(도 4).

(2) 상기 투여로부터 24시간이 경과한후 생존 동물 수를 센 “치사가”를 평가한 결과는 normal 0%, Gi 83.3%, Gi+항-살무사혈청 66.7%, Gi+항-까치살무사혈청 16.7% (n=3 per group, duplicate)였다(도 4 참조).

실시예 6. 까치살무사 사독을 투여한 동물모델에서 표준 항사독제와 비교하여 까치살무사 항사독소혈청 특이적 생존율 유지효과 평가

까치살무사 사독 90.1μg/mice를 PBS에 희석하여 6주령 웅성 C57BL/6에 복강주사 (100μl) 하였다. 10분이 경과한 뒤 코박스 (표준 항사독제) 또는 까치살무사 항사독소혈청 희석액 (100μl)을 꼬리 정맥에 투여하였다. 생존율은 Kaplan-Meier 생존분석을 통해 평가하였다 (도 5 참조).

실시예 7. 살무사 및 쇠살무사로 인해 유도된 metalloproteinase 에 의한 피하출혈에 선택적 억제제 효능과 까치살무사와의 비교

Metallopretease 억제제로 마우스 대퇴근육부에 주사된 한국형 살무사 3종에 의한 피하 출혈 증상을 개선하는지를 판단하기 위하여 상용화된 제모제를 이용하여 털을 제거하였다. 잔여 물질의 제거를 위해 흐르는 물로 5초 이상 세척하고 자연건조시켰다. 그 후, 사독 (10 μl) 또는 동일 부피의 생리식염수를 단독투여 (피내주사) 한 군과 (도 6 A, C, E, G), 사독과 metalloprotease 억제제인 독시사이클린을 혼합하여 피내 주사한 군에서 (도 6 B, D, F, H) 3시간 후 병변을 관찰하였다.

그 결과는 도 6과 같으며, 독시사이클린 또는 생리식염수 단독투여군은 어떠한 병변도 보이지 않았다. 이에 반해, 살무사 사독 및 쇠살무사 사독 단독 투여군은 피하 출혈이 관찰되었고(도 6C, G), 독시사이클린과 혼합하여 투여한 군에서는 그 발증이 유의하게 감소하는 것을 확인하였다(도 6 D, H). 또한 까치살무사 사독 단독 투여군은 피하 출혈이 전혀 관찰되지 않았는데 이는 까치살무사 사독에는 metalloprotease 함량이 매우 낮으며 독력을 갖는 다른 특성의 단백질의 구성비가 높은 것으로 판단된다. 따라서 대한민국내 뱀교상 환자가 병원 내원시 한국형 살무사에 대한 선택적인 항사독소의 사용은 매우 중요하다.

실시예 8. 액체크로마토그래피 - 미세단백질체질량분석 (LC-Ms/Ms analysis)

분리된 한국에 서식하는 3종의 살무사로부터 획득한 사독을 2차원 전기영동 분석 (2-dimensinal electrophoresis, 2-DE)을 통해 단백질체 분포 특성을 확인하였다. 사독 내에 분포하는 단백질체의 확인은 Coomassie blue G-250 염색을 통해 실시하였고, 육안으로 유의하게 확인이 가능한 spots을 정확히 취하여 분석에 사용하였다.

육안으로 확인되는 염색된 spots 의 단백질 동정을 위해 액체크로마토그래피-미세단백질체질량분석 (LC-Ms/Ms)을 실시하였다. 시료는 한국기초과학연구원 (대전, 대한민국) 또는 세계김치연구소 (광주, 대한민국)에 유상으로 분석서비스를 요청하여 분석하였다.

컬럼상에 고정된 단백질 단편으로부터 용리된 단백질로부터 LC-Ms/Ms에 의해 관찰된 펩티드 패턴을 피크로 도시하였고, 펩티드 서열은 탐색 엔진 마스코트(Mascot)를 이용하여 동정하였다.

그 결과 얻어진 일치도가 높은 단백질의 종류를 열거하였다 (표 1 참조).

Species	ID in gel	Venom protein name	ID
G. blomhoffii	Gb1	Metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106001
		catrocollastatinprecursor [Crotalusatrox]	gi\|710354
		keratin, type II cytoskeletal-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567295
	Gb2	L-Amino acid oxidase (M-LAO) [Gloydiusblomhoffii]	gi\|15887054
		metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106001
		L-amino acid oxidase, partial [Crotalusdurissuscumanensis]	gi\|426205815
	Gb3	Plasminogen activator precursor [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102926
		Chain A, Triflin	gi\|71041900
		keratin, type II cytoskeletal 6C-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567300
	Gb4	Plasminogen activator precursor [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102927
		Serine proteinase 2a [Agkistrodoncontortrixcontortrix]	gi\|1180525205
		Keratin, type I cytoskeletal 19 [Crotalusadamanteus]	gi\|387016580
	Gb5	metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106007
		metalloproteinase precursor [Gloydiushalys]	gi\|92087833
		keratin, type II cytoskeletal 6A-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002608303
	Gb6	metalloprotease [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|14794943
		keratin, type II cytoskeletal 6A-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002608303
		Keratin, type II cytoskeletal cochleal-like [Crotalusadamanteus]	gi\|387016582
	Gb7	metalloproteinase, partial [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|14794943
		keratin, type I cytoskeletal 19-like isoform X1 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002572370
		unnamed protein product [Agkistrodon piscivorus]	gi\|19701420
	Gb8	Phospholipase A2, partial [Gloydiushalys]	gi\|2460033
		phospholipase A2 [Trimeresurusalbolabris]	gi\|584481280
		histone-lysine N-methyltransferasePRDM9-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002590585
	Gb9	Fibrinogen clotting inhibitor A chain [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4337050
		Phospholipase A2, Chain R	gi\|230255
		histone-lysine N-methyltransferase PRDM9-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002590585
	Gb10	Snaclec rhodocetin subunit alpha	gi\|3287903
		putative homeodomain transcription factor 2 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002607626
		histone-lysine N-methyltransferase PRDM9-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002590585
G. intermedius	Gi1	Serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215
		snake venom serine protease 3-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002585669
		DNA replication licensing factor mcm5-like [Crotalushorridus]	gi\|743538514
	Gi2	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215
		snake venom serine protease 3-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002585669
		Keratin, type I cytoskeletal 19 [Crotalusadamanteus]	gi\|387016580
	Gi3	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215
		snake venom serine protease 3-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002585669
		Keratin, type I cytoskeletal 19 [Crotalusadamanteus]	gi\|387016580
	Gi4	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215
		snake venom serine protease 3-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002585669
		serine proteinase 3 [Crotalusadamanteus]	gi\|338855336
	Gi5	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215
		snake venom serine protease 3-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002585669
		histone-lysine N-methyltransferase PRDM9-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002590585
	Gi6	Cystein-rich seceretoryprotein Da-CRPa[Deinagkistrodonacutus]	gi\|190195337
		Serine proteinase 13g [Agkistrodon piscivorus]	gi\|1041577257
		venom plasminogen activator precursor [Trimeresurusstejnegeri]	gi\|885976
	Gi7	Serine protease 13g [Agkistrodon piscivorus]	gi\|1041577257
		plasminogen activator precursor [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102926
		serine protease [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102924
	Gi8	Thrombin-like enzyme defibraseb, partial [Gloydiussaxatilis]	gi\|31322299
		serine proteinase 3 precursor [Protobothropsjerdonii]	gi\|9988783
		serine endopeptidase [Crotalusatrox]	gi\|1333445278
	Gi9	vascular endothelial growth factor precursor [Bothropsinsularis]	gi\|15072460
		acidic phospholipase A2, partial [Gloydiusshedaoensis]	gi\|38146948
		keratin, type II cytoskeletal-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567295
	Gi10	Phospholipase A2, Chain R	gi\|230255
		phospholipase A2 [Ovophismonticola]	gi\|347516490
		histone-lysine N-methyltransferase PRDM9-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002590585
G. ussuriensis	Gu1	vascular apoptosis-inducing protein 2A [Crotalusatrox]	gi\|144905068
		keratin, type II cytoskeletal 6A-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002608303
		Keratin, type I cytoskeletal 18-like protein [Crotalushorridus]	gi\|521757830
	Gu2	keratin, type I cytoskeletal 19-like isoform X1 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002572370
		keratin, type II cytoskeletal-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567295
		protein FAM126B [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002594742
	Gu3	Keratin, type II cytoskeletal cochleal-like [Crotalusadamanteus]	gi\|387016582
		metalloproteinase-disintegrin-like protein [Agkistrodon contortrix laticinctus]	gi\|2231613
		Snake venom metalloproteinase basparin-A; Short=SVMP	gi\|50400289
	Gu4	metalloproteinase-disintegrin-like protein [Agkistrodon contortrix laticinctus]	gi\|2231613
		berythractivase[Bothropserythromelas]	gi\|17865171
		Keratin, type II cytoskeletal cochleal-like [Crotalusadamanteus]	gi\|387016582
	Gu5	metalloproteinase-disintegrin-like protein [Agkistrodon contortrix laticinctus]	gi\|2231613
		Snake venom metalloproteinase basparin-A; Short=SVMP	gi\|50400289
		disintegrin[Lachesis mutus]	gi\|262955
	Gu6	metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106007
		metalloproteinase precursor [Gloydiushalys]	gi\|92087833
		keratin, type I cytoskeletal 19-like isoform X1 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002572370
	Gu7	cysteine-rich seceretoryprotein Bs-CRP [Bothriechisschlegelii]	gi\|190195305
		metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106007
		metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106005
	Gu8	phospholipase A2, partial [Gloydiushalys]	gi\|2460033
		Acidic phospholipase A2; Short=svPLA2	gi\|76363284
		serine/threonine-protein kinase 3 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567362
	Gu9	Neutral phospholipase A2 agkistrodotoxin	gi\|129437
		N6a basic phospholipase A2 [Sistrurustergeminus]	gi\|38230129
		Myotubularin-related protein 1-like protein [Crotalushorridus]	gi\|521756789
	Gu10	Neutral phospholipase A2 agkistrodotoxin	gi\|129437
		N6a basic phospholipase A2 [Sistrurustergeminus]	gi\|38230129
		keratin, type II cytoskeletal-like [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002567295

한국형 살무사 속의 뱀 중 살무사(Gloydius brevicaudus) 와 쇠살무사(Gloydius ussuriensis) 종에서는 metalloprotease 계열의 단백질이 높은 일치도를 갖는 것으로 확인되었으며, 까치살무사(Gloydius saxatilis) 종에서는 serine protease 계열의 단백질이 높은 일치도를 갖는 것으로 확인되었으며, 상기 Mass spectroscopy 상 유의한 피크를 선별하여 확인된 아미노산 서열 분석하였다 (표 2 참조).

Species	ID in gel	Venom protein name	ID	Unique peptides identified
1G. blomhoffii	Gb1	Metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106001	FVELVLVADKGMVTK(U)* (서열번호 1) TRMYELANNLNDIYR(U)* (서열번호 2) KKHDNAQLLTAIDFNGPTIGYAYIASMCHPK(U)* (서열번호 3) YMYIHVALVGVEIWSDGDKITVTPNVDDTLSSFAEWR(U)* (서열번호 4) MFYSNEDEHKGMVLPGTK
	Gb2	L-Amino acid oxidase (M-LAO) [Gloydiusblomhoffii]	gi\|15887054	DVNRASEQ(U)* (서열번호 5) VTVVYQTPAK(U)* (서열번호 6) YPVKPSEEGK(U)* (서열번호 7) AARDVNRASEQ(U)* (서열번호 8) SAGQLYEESLGK(U)* (서열번호 9)
	Gb3	Plasminogen activator precursor [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102926	VFDHLDWIK(U) KILNEDEQTR(U) NFQMLFGVHSK(U) (서열번호 10) ILNEDEQTRDPK(U) (서열번호 11) DDEKDKDIMLIR(U) (서열번호 12)
	Gb4	Plasminogen activator precursor[Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4102927	VFDHLDWIK(U) KILNEDEQTRDPKEK(U) (서열번호 13) NFQMLFGVHSK (서열번호 10) DDEKDKDIMLIR (서열번호 12)
	Gb5	metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106007	ETDLLNR(U)* YIELVVVADHGMFTK(U)* YDSNLDTIR(U)*
	Gb6	metalloprotease [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|14794943	ERDLLHR(U)* (서열번호 14) YNGDSDKIR(U)* (서열번호 15) GSTGVVQDHSTINLR(U)* (서열번호 16) YIELVIVADHGMFTK(U)* (서열번호 17) IHHDNAMLLTAIDFDGPTIGLAYVGTMCKPK(U)* (서열번호 18) QMVNTVDEIYSYMYIDVALAGLEIWSNEDLINVQPAAPHTLDSFGK(U)* (서열번호 19)
	Gb7	metalloproteinase, partial [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|14794943	ERDLLHR(U)* (서열번호 14) YNGDSDKIR(U)* (서열번호 15) GSTGVVQDHSTINLR(U)* (서열번호 16) YIELVIVADHGMFTK(U)* (서열번호 17) IHHDNAMLLTAIDFDGPTIGLAYVGTMCKPK(U)* (서열번호 18)
	Gb8	Phospholipase A2, partial [Gloydiushalys]	gi\|2460033	SLLQFETLIMKVAKK(U) DNLNTYNDKKYWAFGAK
	Gb9	Fibrinogen clotting inhibitor A chain [Gloydiusbrevicaudus]	gi\|4337050	MTWEDAER(U) (서열번호 19) IETSFPHVWIGLR(U) (서열번호 20)
	Gb10	Snaclecrhodocetinsubunit alpha	gi\|3287903	TWEEAER(U)* (서열번호 21)
G. intermedius	Gi1	Serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215	KVPNEDEQKR(U)* (서열번호 22) FLVALYHSR(U)* (서열번호 23) VFDHLDWIK(U) VPYPEFGLPATSR(U)* (서열번호 24)
	Gi2	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215	LGMHSKK(U)* (서열번호25) KVPNEDEQKR(U)* (서열번호 22) FLVALYHSR(U)* (서열번호 23) VFDHLDWIK(U) SIIAGNTDVSCPP(U) (서열번호 26) VPYPEFGLPATSR(U)* (서열번호 24)
	Gi3	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215	LGMHSKK(U)* (서열번호 25)KVPNEDEQKR(U)* (서열번호 22) FLVALYHSR(U)* (서열번호 23) VFDHLDWIK(U) VPYPEFGLPATSR(U)* (서열번호 24)
	Gi4	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215	LGMHSKK(U)* (서열번호 25)KVPNEDEQKR(U)* (서열번호 22) VFDHLDWIK(U) SIIAGNTDVSCPP(U) (서열번호 26) VPYPEFGLPATSR(U)* (서열번호 24)
	Gi5	serine protease 1 [Gloydiusintermedius]	gi\|1240181215	KVPNEDEQKR(U)* (서열번호 22)VFDHLDWIK(U) SIIAGNTDVSCPP(U) (서열번호 26) VPYPEFGLPATSR(U)* (서열번호 24)
	Gi6	Cystein-rich seceretoryprotein Da-CRPa[Deinagkistrodonacutus]	gi\|190195337	SVDFDSESPR(U)* (서열번호 27) CIEEHSSRDSR(U) (서열번호 28) RSVNPTASNMLK* (서열번호 29) MEWYPEAAANAER* (서열번호 30) KPEIQNEIVDLHNSLRR* (서열번호 31)
	Gi7	Serine protease 13g [Agkistrodon piscivorus]	gi\|1041577257	KILNEDEQTRNPKEK(U)* (서열번호 32) DKDIMLIR*
	Gi8	Thrombin-like enzyme defibraseb, partial [Gloydiussaxatilis]	gi\|31322299	KVLNEDEQTRNPKEK(U)* (서열번호 33) KNDEVLDKDIMLIK(U)* (서열번호 34) VSNSEHIVPLSLPSSPPSVGSVCHIMGWGSITPIK(U)* (서열번호 35) LGVHSKK* (서열번호 36)
	Gi9	vascular endothelial growth factor precursor [Bothropsinsularis]	gi\|15072460	SVGREIMR(U)* (서열번호 37) RNPEEGEPR(U)* (서열번호 38)
	Gi10	Phospholipase A2, Chain R	gi\|230255	SLVQFETLIMK(U)* (서열번호 39)
G. ussuriensis	Gu1	vascular apoptosis-inducing protein 2A [Crotalusatrox]	gi\|144905068	NNGDLDKIK(U) (서열번호 40) KTDLLTRK(U) (서열번호 41) MYELANTVNDIYR(U) (서열번호 42) MFYSNEDEHKGMVLPGTK(U)
	Gu2	keratin, type I cytoskeletal 19-like isoform X1 [Protobothropsmucrosquamatus]	gi\|1002572370	LAADDFR(U) (서열번호 43) VTMQNLNDR(U) (서열번호 44)
	Gu3	Keratin, type II cytoskeletal cochleal-like [Crotalusadamanteus]	gi\|387016582	NLDLDSIIAEVK(U)* (서열번호 45) FLEQQNK* (서열번호 46)
	Gu4	metalloproteinase-disintegrin-like protein [Agkistrodoncontortrixlaticinctus]	gi\|2231613	ATDLLKRK(U)* (서열번호 47)
	Gu5	metalloproteinase-disintegrin-like protein [Agkistrodoncontortrixlaticinctus]	gi\|2231613	ATDLLKR(U) (서열번호 48)
	Gu6	metalloprotease [Gloydiushalys]	gi\|4106007	YIELVVVADHGMFTKYDSNLDTIR(U)* (서열번호 49) ETDLLNR* TWVHELVNSINEFYR* (서열번호 50)
	Gu7	cysteine-rich seceretoryprotein Bs-CRP [Bothriechisschlegelii]	gi\|190195305	DSRVIEGIK(U) (서열번호 51) RSVNPTASNMLK* MEWYPEAAANAER* KPEIQNEIVDLHNSLRR*
	Gu8	phospholipase A2, partial [Gloydiushalys]	gi\|2460033	SLLQFETLIMKVAKK(U) DNLNTYNDKKYWAFGAK
	Gu9	Neutral phospholipase A2 agkistrodotoxin	gi\|129437	NLLQFNK(U)* (서열번호 52) MIKEETGK(U)* (서열번호 53) SDIYSYSLK(U) (서열번호 54) RNLDTYNNGYMFYR(U) (서열번호 55)
	Gu10	Neutral phospholipase A2 agkistrodotoxin	gi\|129437	NLLQFNKMIK(U)* (서열번호 56) MIKEETGK(U)* (서열번호 53) SDIYSYSLK(U) (서열번호 54) RNLDTYNNGYMFYRDSK(U) (서열번호 57)
(U) 표시는 타겟 단백질에서 발견된 특이적 펩타이드(unique peptides)를 나타낸다. * 표시는 샘(gland) mRNA 시퀀싱에서 번역 된 가상의 단백질 라이브러리에서 발견 된 펩티드를 나타낸다.

실시예 9. mRNA 염기서열을 분석

세 한국형 독사의 사독소 단백질을 코딩할 수 있는 유전자의 염기서열을 분석하기 위하여 사독소가 생산되는 기관으로 추측되는 gland 부위에서 mRNA를 분리하여 next generation sequencing 방법으로 전체 mRNA 염기서열을 분석하였다.

분석된 염기서열 정보를 바탕으로 프라이머를 제작하고 역전사 효소를 이용하여 cDNA를 합성 및 증폭하였다. 증폭된 cDNA는 pGEM-T easy vector에 클로닝하였고 전체 염기서열을 확인하였으며 해당 유전자에서 발현될 단백질 아미노산 서열을 분석하였다. 클로닝된 유전자들은 앞서 2D-gel/MS 분석에서 얻어진 각 단백질들이 포함하는 고유한 펩타이드 서열을 포함하고 있음을 확인하였다 (표 3 참조, 볼드 및 밑줄).

	DNA and deduced protein sequences
Gb2	MSANVQVMFSLLFLAALGSCANDRNPLEECFRETDYEEFLEIARNGLKATSNPKHVVVVGAGMSGLSAAYVLSGAGHQVTVLEASERAGGRVRTYRNDKEDWYANLGPMRLPEKHRIVREYIRKFGLQLNEFSQENDNAWYFIKNIRKRVGEVKKDPGVLK YPVKPSEEGKSAGQLYEESLGK VVEELKRTNCSYILNKYDTYSTKEYLLKEGNLSPGAVDMIGDLMNEDSGYYVSFPESLRHDDIFAYEKRFDEIVGGMDKLPTSMYRAIEEKVHLNAQVIKIQKNAEK VTVVYQTPAK EMASVTADYVIVCTTSRATRRIKFEPPLPPKKAHALRSVHYRSGTKIFLTCTKKFWEDEGIHGGKSTTDLPSRFIYYPNHNFTSGVGVIIAYGIGDDANFFQALDFKDCADIVINDLSLIHQLPREEIQTFCYPSMIQKWSLDKYAMGGITTFTPYQFQHFSESLTASVDRIYFAGEHTAEAHGWIDSTIKSGLR AARDVNRASEQ * (서열번호58)
	ATGTCAGCAAATGTTCAGGTTATGTTCTCACTGCTGTTCTTGGCTGCCTTGGGAAGCTGTGCAAATGACAGAAACCCCCTAGAGGAATGCTTCCGAGAAACTGACTATGAAGAATTTCTAGAGATCGCCAGAAATGGTCTGAAAGCGACATCAAACCCAAAACATGTTGTGGTTGTAGGTGCAGGAATGTCTGGGCTTAGTGCAGCCTATGTTCTTTCAGGGGCTGGACATCAGGTGACAGTTCTTGAAGCCAGTGAACGTGCGGGAGGACGAGTGAGGACTTATCGAAATGACAAAGAAGACTGGTATGCCAATCTCGGGCCCATGCGTTTACCTGAGAAACACAGGATTGTCCGGGAATATATCAGAAAGTTTGGTCTGCAGTTGAATGAATTTTCTCAGGAAAATGACAATGCCTGGTATTTTATCAAAAACATCAGGAAGAGAGTAGGGGAAGTCAAGAAAGACCCTGGCGTCTTGAAATATCCCGTGAAGCCTTCAGAAGAAGGCAAAAGTGCTGGACAGCTATATGAAGAGTCCCTCGGAAAGGTTGTAGAAGAATTAAAAAGGACTAACTGCAGCTACATACTAAATAAATATGACACCTACTCAACGAAGGAGTATCTACTTAAAGAAGGAAATCTGAGTCCTGGAGCTGTAGATATGATTGGAGACTTAATGAATGAAGATTCTGGCTATTATGTGTCTTTTCCTGAAAGCCTGAGACATGATGATATCTTTGCTTATGAAAAAAGATTTGATGAAATTGTTGGTGGAATGGATAAGTTGCCTACATCCATGTATCGAGCCATTGAGGAAAAGGTGCATTTGAATGCCCAAGTAATCAAGATACAGAAGAATGCCGAGAAAGTCACAGTGGTATATCAAACCCCAGCAAAGGAGATGGCATCTGTGACAGCTGATTATGTCATTGTGTGCACTACATCAAGGGCCACCCGTCGCATCAAGTTTGAACCACCCCTTCCGCCAAAGAAAGCGCATGCTTTGCGGTCTGTCCACTACAGAAGTGGCACCAAGATCTTCCTCACTTGCACTAAGAAATTTTGGGAGGATGAAGGCATTCATGGTGGGAAGTCCACAACTGATCTTCCATCCCGATTCATCTACTACCCTAACCATAACTTTACTAGTGGAGTTGGGGTTATTATAGCCTATGGCATTGGTGATGATGCCAATTTCTTTCAAGCTCTTGATTTCAAGGACTGTGCTGATATTGTCATTAATGACCTTTCATTGATCCATCAGCTGCCTAGGGAAGAGATCCAGACCTTCTGTTATCCCTCAATGATTCAAAAATGGAGCCTGGATAAGTATGCTATGGGTGGTATAACCACCTTCACTCCCTACCAGTTTCAACATTTTAGTGAATCGCTCACTGCATCTGTAGACAGAATCTATTTTGCAGGGGAGCATACGGCCGAAGCTCATGGTTGGATTGACAGCACAATTAAGTCAGGGCTGAGAGCAGCAAGAGATGTGAATCGTGCTTCTGAGCAATGA (서열번호59)
Gb3	MIVFIVLPILAAVLQQSSG NVDFDSESPR KPEIQNEIVDLHNSLRRSVNPTASNMLKMEWYPEAAANAEHWAYRCIEDHSSRDSRVLEGIKCGENIYMSSIPMKWTDIIHIWHDEYKNFKYGIGADPPNAVIGHFTQIVWYKSYRAGCAAAYCPSSEYSYFYVCQYCPAGNMRGKTATPYTSGPPCGDCPSACDNGLCTNPCTQEDLFTNCNSLVQQSSCQDNYIKTNCPASCFCHNEIK* (서열번호60)
	ATGATTGTCTTCATTGTCTTGCCAATTCTTGCTGCAGTGCTGCAACAGTCTTCTGGAAATGTTGATTTTGATTCTGAGTCACCCAGGAAACCAGAAATACAAAACGAGATTGTTGACTTGCACAATTCTTTAAGGAGATCTGTGAATCCAACTGCTAGCAACATGCTAAAAATGGAATGGTATCCTGAAGCTGCTGCTAATGCAGAACATTGGGCGTACAGATGTATTGAGGATCACAGTTCACGCGATTCAAGAGTTCTTGAAGGAATAAAATGTGGTGAAAATATATATATGTCATCTATTCCTATGAAATGGACTGACATTATTCACATTTGGCATGATGAATACAAAAATTTCAAGTATGGCATTGGAGCAGACCCACCAAATGCTGTTATTGGCCATTTCACTCAGATAGTTTGGTACAAAAGTTACCGTGCTGGTTGTGCTGCTGCCTATTGTCCTTCATCGGAATACAGCTACTTCTATGTTTGTCAGTACTGCCCAGCAGGAAACATGAGAGGTAAAACTGCTACTCCATATACATCAGGGCCACCTTGTGGGGATTGTCCTTCGGCTTGTGACAATGGACTATGCACAAATCCTTGCACACAAGAAGATCTGTTCACGAACTGCAATAGCTTGGTCCAACAAAGTAGCTGCCAGGATAATTATATAAAGACAAATTGCCCTGCTTCTTGCTTCTGCCACAATGAAATAAAATAG (서열번호61)
Gi6	MIVFIVLPILAAVLQQSSG SVDFDSESPRKPEIQNEIVDLHNSLRRSVNPTASNMLKMEWYPEAAANAER WAYRCIEDHSSRDSRVLEGIKCGENIYMSTIPMKWTDIIHAWHDEYKNFKYGIGADPPNAVIGHYTQIVWYKSYRAGCAAAYCPSSEYSYFYVCQYCPAGNIRGKTATPYTSGPPCGDCPSACDNGLCTNPCTQEDVYTNCNSMVQQSSCQDNYIKTNCPASCFCHNEIK* (서열번호62)
	ATGATTGTCTTCATTGTCTTGCCAATTCTTGCTGCAGTGCTGCAACAGTCTTCTGGAAGTGTTGATTTTGATTCTGAGTCACCCAGGAAACCAGAAATACAAAACGAGATTGTTGACTTGCACAATTCTTTAAGGAGATCTGTGAATCCAACTGCTAGCAACATGCTAAAAATGGAATGGTATCCTGAAGCTGCTGCTAATGCAGAACGTTGGGCGTACAGATGTATTGAGGATCACAGTTCACGCGATTCAAGAGTTCTTGAAGGAATAAAATGTGGTGAAAATATATATATGTCAACTATTCCTATGAAATGGACTGACATTATTCACGCTTGGCATGATGAATACAAAAATTTCAAGTATGGCATTGGAGCAGACCCACCAAATGCTGTTATTGGCCATTACACTCAGATAGTTTGGTACAAAAGTTACCGTGCTGGTTGTGCTGCTGCCTATTGTCCTTCATCGGAATACAGCTACTTCTATGTTTGTCAGTACTGCCCAGCAGGAAACATCAGAGGTAAAACTGCTACTCCATATACATCAGGGCCACCTTGTGGGGATTGTCCTTCGGCTTGTGACAATGGACTATGCACAAATCCTTGCACACAAGAAGATGTGTACACGAACTGCAATAGCATGGTCCAACAAAGTAGCTGCCAGGATAATTATATAAAGACAAATTGCCCTGCTTCTTGCTTCTGCCACAATGAAATAAAATAG (서열번호63)
Gu3	MSQLTSFSSRSATAPSNFSQVRISSVSSSRGIRGSGSFRKPGAFASTSLYNLGSSSRRIASSFPVSPSLGYGGGIQEVTINQNLLSPLNLEIDPTIQKVRKEEKEQIKVLNNKFASFIDKVR FLEQQNK MLETKWNILQQQKTSTRNNTAPVFDAYINNLRRQLDSLQNDKGRLEGELKNMQDLVEDFKNKYEDEINKRTTAENDFVVLKKDVDASYMNKVELEARVDGLTDEINFLRALYEAELAELQNQVSDTSVILQMDNNR NLDLDSIIAEVK AQYEEIANKSRKEAESWYQSKFEALQATAGKHGDDLRSTRNEIAEINRLILRLQAEIDHVKNQRVKLEDAIAEAEERGTLAVKDAKAKLEELEVAMNKAKQEMALQLREYHELMNVKLALDIEIATYRKLLEGEESRLSGDGAGSVSMTLVSSGGGSGGGAYSSGSGLGYGGGFTLGSGMGSGALGFTSGVGSGSLKSTYSVTSTSRRSMRN* (서열번호64)
	ATGTCGCAGCTGACTTCATTCAGTTCTCGTTCAGCAACTGCCCCTTCTAACTTTTCCCAAGTCCGGATCAGCTCTGTTTCTTCATCGCGTGGAATCAGAGGGAGTGGAAGTTTTAGGAAGCCAGGTGCCTTTGCTAGCACCAGTTTGTATAACTTGGGCTCCAGCAGCAGGAGGATTGCCTCGTCTTTCCCTGTCTCACCTTCGCTTGGATATGGCGGTGGTATTCAAGAAGTCACTATTAATCAGAATCTCTTGTCCCCACTCAACCTGGAAATTGACCCAACCATCCAGAAGGTGCGCAAGGAGGAGAAGGAGCAGATTAAGGTCCTCAACAACAAATTTGCATCCTTCATTGACAAGGTCCGATTCCTTGAGCAGCAAAATAAAATGCTGGAGACCAAATGGAACATCTTACAGCAGCAAAAGACCAGCACTCGGAACAACACTGCACCCGTCTTTGACGCGTACATTAACAACCTGCGGAGACAGCTAGACAGCTTGCAGAATGACAAGGGACGGCTGGAAGGAGAACTGAAGAACATGCAGGATCTTGTTGAGGATTTTAAGAACAAGTATGAAGATGAAATCAACAAGCGCACCACTGCAGAGAATGATTTTGTTGTGCTCAAAAAAGATGTTGATGCTTCCTACATGAATAAGGTGGAGCTGGAAGCCAGAGTGGATGGGCTGACAGATGAAATAAATTTCCTGAGAGCGCTTTATGAAGCAGAACTGGCTGAATTGCAGAACCAGGTCTCTGATACATCTGTTATCCTCCAAATGGACAACAATCGGAATCTGGACTTGGACAGTATCATTGCTGAGGTCAAAGCTCAGTATGAGGAGATTGCTAATAAGAGCAGGAAGGAGGCAGAAAGCTGGTACCAAAGCAAGTTTGAGGCCTTGCAAGCCACTGCTGGAAAGCATGGAGATGACCTGCGGAGCACAAGGAATGAGATTGCAGAGATTAATCGCCTAATATTGAGGCTGCAAGCTGAGATTGACCATGTGAAAAACCAGCGTGTCAAGCTTGAAGATGCCATTGCTGAAGCAGAAGAACGCGGTACGTTGGCTGTCAAAGATGCCAAGGCGAAACTAGAGGAGCTGGAGGTGGCCATGAACAAAGCTAAGCAAGAGATGGCCCTCCAGCTGCGTGAATATCACGAGCTGATGAATGTCAAGCTGGCTCTGGATATTGAGATTGCTACTTACAGAAAGCTGCTGGAAGGAGAAGAGAGCAGATTGTCTGGAGACGGAGCTGGTTCTGTAAGCATGACCCTGGTCAGCTCCGGTGGTGGTAGTGGTGGTGGTGCATACAGCAGCGGAAGTGGTCTTGGCTATGGTGGAGGATTTACTCTGGGAAGTGGAATGGGCAGCGGAGCCCTCGGTTTCACCTCTGGAGTTGGCTCAGGCAGCCTGAAATCGACATACAGTGTGACAAGCACATCCAGGAGAAGCATGAGAAATTGAG (서열번호65)
Gu8	MRTLWIMAVLLLGVEGSLIQFETLIMKVAKKSGMFWYNNYGCYCGWGGQ GRPQDATDR CCFVHDCCYGKVTGCDPKMDVYSFSEENGDIVCGGDDPCKKEICECDRAAAICFR DNLNTYNDKKYWAFGAK NCPQEESEPC* (서열번호66)
	ATGAGGACTCTCTGGATAATGGCCGTGTTGCTGCTGGGCGTCGAGGGGAGCCTGATTCAATTTGAGACCCTGATCATGAAAGTGGCGAAGAAAAGTGGTATGTTTTGGTACAACAATTATGGATGCTACTGCGGCTGGGGGGGCCAAGGCCGGCCACAGGACGCCACTGACCGCTGCTGCTTTGTGCATGACTGCTGTTACGGAAAAGTGACCGGCTGTGACCCCAAAATGGACGTCTATTCCTTCAGCGAGGAGAACGGGGATATTGTCTGCGGAGGGGACGACCCGTGCAAGAAGGAGATTTGTGAGTGCGATAGGGCCGCGGCAATCTGCTTCCGAGACAATCTGAACACATACAATGACAAAAAATATTGGGCGTTCGGGGCCAAAAATTGCCCGCAGGAGGAGTCAGAGCCATGTTAA (서열번호67)
Gu9	MRTLWIMAVLLLGVEG NLLQFNKMIKEETGK NAIPFYAFYGCYCGWGGQGKPKDGTDRCCFVHDCCYGRLPNCNTK WDIYSYSLK DGYITCGKGTWCEEQICECDRVAAECFRRNLNTYNNGYMFYRDSKCTETSEEC* (서열번호68)
	ATGAGGACTCTCTGGATAATGGCCGTGTTGCTGCTGGGCGTCGAGGGGAACCTGCTGCAATTCAACAAGATGATCAAGGAAGAGACGGGGAAAAACGCTATTCCCTTCTATGCCTTTTACGGCTGCTACTGTGGCTGGGGGGGCCAAGGCAAGCCAAAGGACGGCACAGACCGCTGCTGCTTTGTGCACGACTGCTGTTACGGAAGACTGCCCAACTGCAACACCAAATGGGACATCTATTCCTACAGCTTGAAGGATGGGTATATCACCTGCGGAAAGGGCACCTGGTGCGAGGAACAGATTTGTGAGTGCGACAGGGTCGCGGCAGAATGCTTCAGAAGGAATCTGAACACGTACAATAATGGATATATGTTTTACCGGGACTCAAAATGCACGGAGACTTCAGAGGAATGCTAA (서열번호69)

전체 염기서열을 Blast 검색했을 때, 기존에 알려진 유전자와 높은 유사성을 나타내었으나 완전히 일치하는 유전자는 발견되지 않았다 (표 4 참조).

		Venom protein name	Per. Ident	Accession
G. blomhoffii	Gb2	M-LAO [Agkistrodon blomhoffi]	99.40%	AB072392.1
	Gb3	Ablomin [Agkistrodon blomhoffi]	99.03%	AF384218.1
	Gb9	Acidic phospholipase A2 isoform b [Gloydius strauchi]	98.32%	MF410701.1
G. intermedius	Gi1	Venom plasminogen activator precursor 1 [Gloydius intermedius]	99.22%	KY129939.1
	Gi6	Ablomin [Agkistrodon blomhoffi]	98.34%	AF384218.1
	Gi9	Acidic phospholipase A2 isoform b [Gloydius intermedius]	99.05%	KJ654338.1
G. ussuriensis	Gu3	Keratin, type II cytoskeletal cochleal [Protobothrops mucrosquamatus]	96.67%	XM_015821914.1
	Gu8	Acidic phospholipase A2 isoform a [Gloydius strauchi]	92.43%	MF410700.1
	Gu9	Basic phospholipase A2 [Gloydius intermedius]	94.26%	KJ654336.1

<110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY HOSPITAL <120> Composition of anti-venom of the Korean salmosa species' venom <130> 21P06018 <160> 75 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 1 Phe Val Glu Leu Val Leu Val Ala Asp Lys Gly Met Val Thr Lys 1 5 10 15 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 2 Thr Arg Met Tyr Glu Leu Ala Asn Asn Leu Asn Asp Ile Tyr Arg 1 5 10 15 <210> 3 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 3 Lys Lys His Asp Asn Ala Gln Leu Leu Thr Ala Ile Asp Phe Asn Gly 1 5 10 15 Pro Thr Ile Gly Tyr Ala Tyr Ile Ala Ser Met Cys His Pro Lys 20 25 30 <210> 4 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 4 Tyr Met Tyr Ile His Val Ala Leu Val Gly Val Glu Ile Trp Ser Asp 1 5 10 15 Gly Asp Lys Ile Thr Val Thr Pro Asn Val Asp Asp Thr Leu Ser Ser 20 25 30 Phe Ala Glu Trp Arg 35 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 5 Asp Val Asn Arg Ala Ser Glu Gln 1 5 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 6 Val Thr Val Val Tyr Gln Thr Pro Ala Lys 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 7 Tyr Pro Val Lys Pro Ser Glu Glu Gly Lys 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 8 Ala Ala Arg Asp Val Asn Arg Ala Ser Glu Gln 1 5 10 <210> 9 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 9 Ser Ala Gly Gln Leu Tyr Glu Glu Ser Leu Gly Lys 1 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 10 Asn Phe Gln Met Leu Phe Gly Val His Ser Lys 1 5 10 <210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 11 Ile Leu Asn Glu Asp Glu Gln Thr Arg Asp Pro Lys 1 5 10 <210> 12 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 12 Asp Asp Glu Lys Asp Lys Asp Ile Met Leu Ile Arg 1 5 10 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 13 Lys Ile Leu Asn Glu Asp Glu Gln Thr Arg Asp Pro Lys Glu Lys 1 5 10 15 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 14 Glu Arg Asp Leu Leu His Arg 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 15 Tyr Asn Gly Asp Ser Asp Lys Ile Arg 1 5 <210> 16 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 16 Gly Ser Thr Gly Val Val Gln Asp His Ser Thr Ile Asn Leu Arg 1 5 10 15 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 17 Tyr Ile Glu Leu Val Ile Val Ala Asp His Gly Met Phe Thr Lys 1 5 10 15 <210> 18 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 18 Ile His His Asp Asn Ala Met Leu Leu Thr Ala Ile Asp Phe Asp Gly 1 5 10 15 Pro Thr Ile Gly Leu Ala Tyr Val Gly Thr Met Cys Lys Pro Lys 20 25 30 <210> 19 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 19 Gln Met Val Asn Thr Val Asp Glu Ile Tyr Ser Tyr Met Tyr Ile Asp 1 5 10 15 Val Ala Leu Ala Gly Leu Glu Ile Trp Ser Asn Glu Asp Leu Ile Asn 20 25 30 Val Gln Pro Ala Ala Pro His Thr Leu Asp Ser Phe Gly Lys 35 40 45 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 20 Ile Glu Thr Ser Phe Pro His Val Trp Ile Gly Leu Arg 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 21 Thr Trp Glu Glu Ala Glu Arg 1 5 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 22 Lys Val Pro Asn Glu Asp Glu Gln Lys Arg 1 5 10 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 23 Phe Leu Val Ala Leu Tyr His Ser Arg 1 5 <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 24 Val Pro Tyr Pro Glu Phe Gly Leu Pro Ala Thr Ser Arg 1 5 10 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 25 Leu Gly Met His Ser Lys Lys 1 5 <210> 26 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 26 Ser Ile Ile Ala Gly Asn Thr Asp Val Ser Cys Pro Pro 1 5 10 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 27 Ser Val Asp Phe Asp Ser Glu Ser Pro Arg 1 5 10 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 28 Cys Ile Glu Glu His Ser Ser Arg Asp Ser Arg 1 5 10 <210> 29 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 29 Arg Ser Val Asn Pro Thr Ala Ser Asn Met Leu Lys 1 5 10 <210> 30 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 30 Met Glu Trp Tyr Pro Glu Ala Ala Ala Asn Ala Glu Arg 1 5 10 <210> 31 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 31 Lys Pro Glu Ile Gln Asn Glu Ile Val Asp Leu His Asn Ser Leu Arg 1 5 10 15 Arg <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 32 Lys Ile Leu Asn Glu Asp Glu Gln Thr Arg Asn Pro Lys Glu Lys 1 5 10 15 <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 33 Lys Val Leu Asn Glu Asp Glu Gln Thr Arg Asn Pro Lys Glu Lys 1 5 10 15 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 34 Lys Asn Asp Glu Val Leu Asp Lys Asp Ile Met Leu Ile Lys 1 5 10 <210> 35 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 35 Val Ser Asn Ser Glu His Ile Val Pro Leu Ser Leu Pro Ser Ser Pro 1 5 10 15 Pro Ser Val Gly Ser Val Cys His Ile Met Gly Trp Gly Ser Ile Thr 20 25 30 Pro Ile Lys 35 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 36 Leu Gly Val His Ser Lys Lys 1 5 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 37 Asp Asn Ile Asp Thr Tyr Asp Asn Lys Tyr Trp Phe Phe Pro Ala Lys 1 5 10 15 <210> 38 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 38 Ser Leu Val Gln Phe Glu Thr Leu Ile Met Lys Ile Ala Gly Arg 1 5 10 15 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 39 Ser Val Gly Arg Glu Ile Met Arg 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 40 Arg Asn Pro Glu Glu Gly Glu Pro Arg 1 5 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 41 Ser Leu Val Gln Phe Glu Thr Leu Ile Met Lys 1 5 10 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 42 Asn Asn Gly Asp Leu Asp Lys Ile Lys 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 43 Lys Thr Asp Leu Leu Thr Arg Lys 1 5 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 44 Met Tyr Glu Leu Ala Asn Thr Val Asn Asp Ile Tyr Arg 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 45 Leu Ala Ala Asp Asp Phe Arg 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 46 Val Thr Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg 1 5 <210> 47 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 47 Asn Leu Asp Leu Asp Ser Ile Ile Ala Glu Val Lys 1 5 10 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 48 Phe Leu Glu Gln Gln Asn Lys 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 49 Ala Thr Asp Leu Leu Lys Arg Lys 1 5 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 50 Ala Thr Asp Leu Leu Lys Arg 1 5 <210> 51 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 51 Tyr Ile Glu Leu Val Val Val Ala Asp His Gly Met Phe Thr Lys Tyr 1 5 10 15 Asp Ser Asn Leu Asp Thr Ile Arg 20 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 52 Thr Trp Val His Glu Leu Val Asn Ser Ile Asn Glu Phe Tyr Arg 1 5 10 15 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 53 Asp Ser Arg Val Ile Glu Gly Ile Lys 1 5 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 54 Asn Leu Leu Gln Phe Asn Lys 1 5 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 55 Met Ile Lys Glu Glu Thr Gly Lys 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 56 Ser Asp Ile Tyr Ser Tyr Ser Leu Lys 1 5 <210> 57 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 57 Arg Asn Leu Asp Thr Tyr Asn Asn Gly Tyr Met Phe Tyr Arg 1 5 10 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 58 Asn Leu Leu Gln Phe Asn Lys Met Ile Lys 1 5 10 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 59 Arg Asn Leu Asp Thr Tyr Asn Asn Gly Tyr Met Phe Tyr Arg Asp Ser 1 5 10 15 Lys <210> 60 <211> 506 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 60 Met Ser Ala Asn Val Gln Val Met Phe Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ala 1 5 10 15 Leu Gly Ser Cys Ala Asn Asp Arg Asn Pro Leu Glu Glu Cys Phe Arg 20 25 30 Glu Thr Asp Tyr Glu Glu Phe Leu Glu Ile Ala Arg Asn Gly Leu Lys 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Pro Lys His Val Val Val Val Gly Ala Gly Met Ser 50 55 60 Gly Leu Ser Ala Ala Tyr Val Leu Ser Gly Ala Gly His Gln Val Thr 65 70 75 80 Val Leu Glu Ala Ser Glu Arg Ala Gly Gly Arg Val Arg Thr Tyr Arg 85 90 95 Asn Asp Lys Glu Asp Trp 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tag 723 <210> 64 <211> 138 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 64 Met Arg Thr Leu Trp Ile Met Ala Val Leu Leu Leu Gly Val Glu Gly 1 5 10 15 Ser Leu Val Gln Phe Glu Thr Leu Ile Met Lys Ile Ala Gly Arg Ser 20 25 30 Gly Ile Trp Tyr Tyr Gly Ser Tyr Gly Cys Tyr Cys Gly Ala Gly Gly 35 40 45 Gln Gly Arg Pro Gln Asp Ala Ser Asp Arg Cys Cys Phe Val His Asp 50 55 60 Cys Cys Tyr Gly Lys Val Thr Gly Cys Asn Pro Lys Met Asp Val Tyr 65 70 75 80 Thr Tyr Thr Glu Glu Asn Gly Ala Ile Val Cys Gly Gly Asp Asp Pro 85 90 95 Cys Lys Lys Glu Val Cys Glu Cys Asp Arg Ala Ala Ala Ile Cys Phe 100 105 110 Arg Asp Asn Ile Asp Thr Tyr Asp Asn Lys Tyr Trp Phe Phe Pro Ala 115 120 125 Lys Asn Cys Gln Glu Glu Ser Glu Pro Cys 130 135 <210> 65 <211> 417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 65 atgaggactc tctggataat ggccgtgttg ctgctgggcg tcgaggggag cctggtgcaa 60 tttgagacgc tgatcatgaa aattgcgggg agaagcggta tttggtacta cggctcttac 120 ggatgctact 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tatgtcaact 300 attcctatga aatggactga cattattcac gcttggcatg atgaatacaa aaatttcaag 360 tatggcattg gagcagaccc accaaatgct gttattggcc attacactca gatagtttgg 420 tacaaaagtt accgtgctgg ttgtgctgct gcctattgtc cttcatcgga atacagctac 480 ttctatgttt gtcagtactg cccagcagga aacatcagag gtaaaactgc tactccatat 540 acatcagggc caccttgtgg ggattgtcct tcggcttgtg acaatggact atgcacaaat 600 ccttgcacac aagaagatgt gtacacgaac tgcaatagca tggtccaaca aagtagctgc 660 caggataatt atataaagac aaattgccct gcttcttgct tctgccacaa tgaaataaaa 720 tag 723 <210> 68 <211> 139 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificail sequence <400> 68 Met Arg Thr Leu Trp Ile Met Ala Val Leu Leu Leu Gly Val Glu Gly 1 5 10 15 Ser Leu Val Gln Phe Glu Thr Leu Ile Met Lys Ile Ala Gly Arg Ser 20 25 30 Gly Ile Trp Tyr Tyr Gly Ser Tyr Gly Cys Tyr Cys Gly Ala Gly Gly 35 40 45 Gln Gly Arg Pro Gln Asp Ala Ser Asp Arg Cys Cys Phe Val His Asp 50 55 60 Cys Cys Tyr Gly Lys Val Thr Gly Cys Asp Pro Lys Met Asp Val Tyr 65 70 75 80 Thr Tyr Thr Glu Glu 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Claims

살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,
혈청에 서열번호 1 내지 21 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 혈청은 불활성화한 살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
청구항 1에 있어서, 메탈로프로테아제 억제제를 더 포함하는. 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
까치살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,
혈청에 서열번호 22 내지 39 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
청구항 4에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 혈청은 불활성화한 까치살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
쇠살무사 독을 주입한 동물로부터 얻어진 혈청을 포함하고,
혈청에 서열번호 40 내지 57 중 적어도 하나의 펩타이드가 존재하는 교상 환자의 항사독용인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
청구항 6에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 혈청은 불활성화한 쇠살무사 독을 면역항원보강제와 함께 주입한 동물로부터 얻어진 것인, 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.
청구항 6에 있어서, 메탈로프로테아제 억제제를 더 포함하는. 한국형 살무사과 사독의 항사독 조성물.