KR20220164478A - Il-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 예방 또는 치료 방법 - Google Patents

Il-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 예방 또는 치료 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20220164478A
KR20220164478A KR1020227031074A KR20227031074A KR20220164478A KR 20220164478 A KR20220164478 A KR 20220164478A KR 1020227031074 A KR1020227031074 A KR 1020227031074A KR 20227031074 A KR20227031074 A KR 20227031074A KR 20220164478 A KR20220164478 A KR 20220164478A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
virus
dimer
seq
failure
human
Prior art date
Application number
KR1020227031074A
Other languages
English (en)
Inventor
정 양
즈화 황
Original Assignee
이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디 filed Critical 이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디
Publication of KR20220164478A publication Critical patent/KR20220164478A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

바이러스-유발 기관 손상 또는 부전, 예컨대 바이러스 감염과 연관된 폐 손상 또는 부전, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS)의 예방 또는 치료에 있어서의 IL-22 이량체의 용도가 제공된다.

Description

IL-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 예방 또는 치료 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 2월 14일에 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/CN2020/075408 및 2020년 10월 13일에 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/CN2020/120662의 우선권을 주장하며, 이들의 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일로의 서열 목록의 제출
ASCII 텍스트 파일로의 하기 제출의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF) (파일명: 720622001842SEQLIST.TXT, 기록일: 2021년 2월 8일, 크기: 27 KB).
발명의 분야
본 발명은 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전, 예컨대 바이러스 감염과 연관된 폐 손상 또는 부전, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS)의 예방 또는 치료에 있어서의 IL-22 이량체의 용도에 관한 것이다.
인터류킨-22 (IL-22), 일명 IL-10 관련 T 세포-유래 유도성 인자 (IL-TIF)는 면역 세포의 몇몇 집단, 예컨대 활성화된 T 세포 (주로 CD4+ 세포, 특히 CD28 경로 활성화된 Th1 세포, Th17 세포, 및 Th22 세포 등), IL-2/IL-12 자극된 자연 킬러 세포 (NK 세포; Wolk et al., J. Immunology, 168:5379-5402, 2002), NK-T 세포, 호중구, 및 대식세포에 의해 발현되고 방출되는 당단백질이다. IL-22 mRNA의 발현은 원래 뮤린에서의 IL-9 자극된 T 세포 및 비만 세포, 뿐만 아니라 콘카나빌린 A (Con A) 자극된 비장 세포에서 확인되었다 (Dumoutier et al., J. Immunology, 164:1814-1819, 2000). 인간 IL-22 mRNA는 주로 항-CD3 항체 또는 Con A에 의한 자극시 말초 T 세포에서 발현된다. IL-22는 IL-10R2 및 IL-22R1 서브유닛으로 구성된 이종이량체성 세포 표면 수용체에 결합한다. IL-22R1은 IL-22에 특이적이고, 대부분 비-조혈 세포, 예컨대 간, 폐, 피부, 흉선, 췌장, 신장, 위장관, 활액 조직, 심장, 유방, 눈, 및 지방 조직의 상피 및 기질 세포 상에 발현된다.
병원성 바이러스 감염은 면역 보호에 필수적인 염증성 시토카인 반응을 초래할 수 있다. 그러나, 과대한 항바이러스 반응은 숙주에게 해로울 수 있으며, 감염된 기관 손상 또는 부전, 또는 심지어 사망을 초래한다. 급성 바이러스 감염은 감염된 대식세포에 의해 활성화된 급속하게 증식하는 T-세포 또는 NK 세포에 의해 야기되는, 다수의 염증성 매개자, 예컨대 시토카인, 산소 자유 라디칼, 및 응고 인자의 과도한 전신성 발현인 시토카인 폭풍을 초래할 수 있다. 예를 들어, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV) 및 범유행성 인플루엔자 (예를 들어, 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1), 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1))의 급속한 바이러스 복제는 호흡관의 표적 세포, 예컨대 폐포 상피 세포의 세포용해성 파괴를 발생시켜, 급성 폐 손상 (ALI) 또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 야기하는 급속하게 진행성인 호흡 부전을 초래한다. 일부 경우에, 다발성 기관 부전 (MOF)은 또한 염증유발성 시토카인, 예컨대 TFNα 및 IFNβ의 유의한 상승과 연관된 특색이다. 계속되는 2019년-2021년의 코로나바이러스 발생은 2019년의 신규한 코로나바이러스 (2019-nCov) 감염에 의해 야기되며, 이는 호흡기 감염 2019-nCoV 급성 호흡 질환을 초래한다. 세계 보건 기구 (WHO)는 공식적으로 상기 질환을 "코로나바이러스 질환 2019" (COVID-19)로, 및 바이러스를 "중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2" (SARS-CoV-2)로 명명하였다. SARS-CoV-2 감염은 호흡계의 손상 및/또는 부전을 발생시키며, SARS 및 중동 호흡기 증후군 (MERS) 환자에서 보여지는 특색을 닮은, 시토카인 폭풍 및 환자에서의 질병의 중증도의 강한 상관관계가 있는 것으로 보인다. 집중 치료실 (ICU)에 들어간 많은 환자, 특히 중증 질환을 갖는 환자들은 시토카인 폭풍에 의해 촉발된 기관 부전 (폐 뿐만 아니라 심장, 신장, 간 등)으로 사망한다.
다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS), 일명 다발성 기관 부전 (MOF), 전체 기관 부전 (TOF), 또는 다계통 기관 부전 (MSOF)은 항상성이 의학적 개입 없이 유지될 수 없도록 급성으로 병든 환자에서의 변경된 기관 기능이다. MODS는 통상적으로 감염, 손상 (사고, 수술), 관류저하, 및 대사과다증에 의해 촉발되는 비제어된 염증성 반응으로부터 초래된다. 비제어된 염증성 반응은 패혈증 또는 전신성 염증성 반응 증후군 (SIRS)을 초래할 수 있다. SIRS는 전신에 영향을 미치는 염증성 상태이다. 이는 전신성 염증, 기관 기능이상, 및 기관 부전과 관련된 몇몇 상태 중 하나이다. SIRS는 다양한 시토카인의 비정상적 조절이 있는 시토카인 폭풍의 하위세트이다. SIRS의 원인은 감염성 또는 비감염성일 수 있다. SIRS는 패혈증과 밀접하게 관련된다. SIRS가 감염으로 인한 것인 경우, 이는 패혈증으로 간주된다. SIRS의 비감염성 원인은 외상, 화상, 췌장염, 허혈, 및 출혈을 포함한다. 패혈증은 전신 염증성 상태를 특징으로 하는 심각한 의학적 상태이며, 패혈성 쇼크를 초래할 수 있다. SIRS 및 패혈증 둘 다는 중증 패혈증, 및 결국 MODS, 또는 사망으로 진행할 수 있다. MODS의 기저의 메커니즘은 아직 잘 이해되어 있지 않다.
현재, 확립된 기관 부전을 반전시킬 수 있는 작용제는 없다. 따라서, 요법은 지지적 치료에 제한된다. 기관 손상 또는 부전, 패혈증, 패혈성 쇼크, 및 MODS의 예방 및 치료는 응급 의학적 상태, 예컨대 교통 사고, 화상, 심장 마비, 및 중증 감염성 질환에 의해 야기된 손상에 중요하다. 유효한 약물의 개발은 긴급하게 필요하다.
본원에 언급된 모든 공보, 특허, 특허 출원, 및 공개된 특허 출원의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 한 측면에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전으로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 기능이상을 치료하거나 예방하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 시토카인 폭풍, 패혈증, SIRS)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 손상된 조직 또는 기관은 손상된 또는 기능이상적 내피 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 내피 글리코칼릭스 분해를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 내피 글리코칼릭스 분해를 예방하고/거나 감소시키는 것, 톨(Toll)-유사 수용체 4 (TLR4) 신호전달을 하향-조절하는 것, 및/또는 내피 글리코칼릭스를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 세포는 폐 내피 세포이다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, 급성 폐 손상 (ALI), SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 바이러스-유발 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS)이다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae), 필로비리다에(Filoviridae), 플라비비리다에(Flaviviridae), 코로나비리다에(Coronaviridae), 및 폭스비리다에(Poxviridae) 과 중 어느 하나의 바이러스에 의해 야기된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 인플루엔자 C 바이러스, 및 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 오르토믹소비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 또는 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체, 예컨대 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1) 또는 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1)이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 알파 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 뉴 헤이븐 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 베타 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 코로나바이러스 HKU1 (HCoV-HKU1), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 코로나비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV-2이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 에볼라 바이러스 (EBOV) 및 마르부르크 바이러스 (MARV)로부터 선택되는 필로비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 지카 바이러스 (ZIKV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 뎅기 바이러스 (DENV), 및 황열 바이러스 (YFV)로 이루어진 군으로부터 선택되는 플라비비리다에 바이러스이다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 유효량의 또 다른 치료제를 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 코르티코스테로이드, 항염증성 신호 전달 조정제, β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 항콜린제, 점액용해제, 항바이러스제, 항섬유화제, 고장성 염수, 항체, 백신, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 항바이러스제는 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라(Kaletra)®), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린, 우미페노비르, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b, 흡입을 통해), 파비피라비르, 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 렘데시비르이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제) 및 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해)이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 파비피라비르, 우미페노비르 (아르비돌(Arbidol)®), 테이코플라닌 유도체, 벤조-헤테로시클릭 아민 유도체, 피리미딘, 발록사비르 마르복실, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a, IFN-α2b, 흡입을 통해), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 또는 H5N1에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제) 및 IFN-α (예를 들어, IFN-α2a, IFN-α2b, 흡입을 통해)이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 또는 H5N1에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 항섬유화제는 닌테다닙, 피르페니돈, 및 N-아세틸시스테인 (NAC)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호(SEQ ID NO): 1-20 및 32 중 어느 하나, 예컨대 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30 (예를 들어, 약 6 내지 약 15)개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2 (예를 들어, 2, 3, 4)개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것, 예컨대 서열식별번호: 24의 서열을 포함한다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 예컨대 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 (예를 들어, 입 또는 코를 통해) 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로 투여된다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 10-일 치료 사이클의 제1일 및 제6일에 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 14-일 치료 사이클의 제1일 및 제8일에 투여된다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간)는 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)이다.
상기 기재된 임의의 방법에 따른 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
또한 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 임의의 IL-22 이량체를 포함하는 조성물, 키트, 및 제조품이 제공된다.
본 발명의 이들 및 다른 측면 및 이점은 후속하는 상세한 설명 및 첨부된 청구범위로부터 명백하게 될 것이다. 본원에 기재된 다양한 실시양태의 특성 중 하나, 일부, 또는 전부는 조합되어 본 발명의 다른 실시양태를 형성할 수 있음이 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명에 따른 예시적인 IL-22 이량체를 도시한다. 도면에서, "-"는 링커를 나타내고, "IL-22"로 표지된 계란-형상 물체는 IL-22 단량체를 나타낸다.
도 2A-2B는 본 발명에 따른 예시적인 IL-22 이량체를 도시한다. 도면에서, "-"는 아미노산 링커를 나타내고, "IL-22"로 표지된 계란-형상 물체는 IL-22 단량체를 나타낸다. 도 2A에 예시된 바와 같이, "C"로 표지된 계란-형상 물체는 담체 단백질을 나타내고, 여기서 IL-22는 담체 단백질의 N-말단에 배치된다. 도 2B에 예시된 바와 같이, "Fc"로 표지된 절반 계란-형상 물체는 이량체화 도메인으로서의 Fc 단편을 나타내며, 이는 이량체가 디술피드 결합(들)을 통한 2개의 Fc 단편의 커플링에 의해 형성됨을 제시한다.
도 3A-3B는 본 발명에 따른 예시적인 IL-22 이량체를 도시한다. 도면에서, "-"는 아미노산 링커를 나타내고, "IL-22"로 표지된 계란-형상 물체는 IL-22 단량체를 나타낸다. 도 3A에 예시된 바와 같이, "C"로 표지된 계란-형상 물체는 담체 단백질을 나타내고, 여기서 IL-22는 담체 단백질의 C-말단에 배치된다. 도 3B에 예시된 바와 같이, "Fc"로 표지된 절반 계란-형상 물체는 이량체화 도메인으로서의 Fc 단편을 나타내며, 이는 이량체가 디술피드 결합(들)을 통한 2개의 Fc 단편의 커플링에 의해 형성됨을 제시한다.
도 4는 시간 경과에 따른 처리 및 대조군 그룹에서의 H1N1 감염의 마우스 모델의 생존율을 도시한다.
도 5A-5C는 100x 배율 하의, H1N1 감염 후 제5일에 모델 대조군 그룹 (도 5A), 오셀타미비르 처리 그룹 (도 5B), 및 (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹 (도 5C)으로부터의 폐 조직의 H&E 염색을 도시한다.
도 6A-6C는 100x 배율 하의, H1N1 감염 후 제14일에 모델 대조군 그룹 (도 6A), 오셀타미비르 처리 그룹 (도 6B), 및 (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹 (도 6C)으로부터의 폐 조직의 H&E 염색을 도시한다.
도 7A는 대조군 HUVEC, LPS 노출된, LPS 및 F-652 노출된, 및 F-652 단독 노출된 것에서의 글리코칼릭스 염색 강도의 비교를 도시한다. 모든 4개의 그룹의 대표적인 영상이 제시된다. 도 7B는 HUVEC의 모든 4개의 그룹에서의 IL-22Ra1 상대 발현의 비교를 도시한다.
도 8A는 대조군 HUVEC 및 F-652 처리된 HUVEC에서의 인산화된 STAT3:총 STAT3 비의 비교 (좌측), 및 인산화된 STAT3 및 총 STAT3을 정량화하는 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 웨스턴 블롯 (우측)을 도시한다. 도 8B는 대조군, LPS 노출된, LPS 및 F-652 노출된, 및 F-652 단독 노출된 HUVEC에서의 매트릭스 메탈로프로테이나제-1 (MMP-1), MMP-2, MMP-9, 및 MMP-14 mRNA 수준의 상대 발현을 제시한다.
도 9는 대조군, LPS 노출된, LPS 및 F-652 노출된, 및 F-652 단독 노출된 HUVEC에서의 TIMP-1, TIMP-2, 엑소스토신-1, 및 엑소스토신-2 mRNA 수준의 상대 발현을 제시한다.
도 10은 대조군, LPS 노출된, LPS 및 F-652 노출된, 및 F-652 단독 노출된 HUVEC에서의 TLR4, MYD88, TIRAP, 및 IRAK4 mRNA 수준의 상대 발현을 제시한다.
도 11은 대조군, LPS 노출된, LPS 및 F-652 노출된, 및 F-652 단독 노출된 HUVEC에서의 TRAM, TRAF6, IRAK1, 및 TRIF mRNA 수준의 상대 발현을 제시한다.
도 12는 저-용량 LPS 손상을 갖는 마우스가 BAL 세포 카운트에서 제시된 바와 같이 F-652로 처리된 경우 폐 내로의 호중구 및 대식세포의 감소된 세포 유입을 가짐을 제시한다. 총 세포 카운트 및 림프구 카운트에서 보여지는 차이는 없었다.
도 13은 고-용량 LPS 손상을 갖는 마우스가 BAL 세포 카운트에서 제시된 바와 같이 F-652로 처리된 경우 폐 내로의 감소된 세포 유입을 가짐을 제시한다. F-652 처리된 마우스는 감소된 총 세포 카운트, 호중구 카운트, 림프구 카운트, 및 대식세포 카운트를 갖는다.
도 14는 고-용량 LPS 손상을 갖는 마우스가 BAL 염증성 매개자에서 제시된 바와 같이 F-652로 처리된 경우 폐에서의 감소된 염증을 가짐을 제시한다. F-652 처리된 마우스는 감소된 인터류킨-6, TNF-알파, G-CSF, 및 인터류킨-10을 갖는다.
도 15A-15C는 고-용량 LPS 손상을 갖는 마우스가 맹검된 검토자에 의해 등급화된 조직병리학 점수로 보여지는 바와 같이 F-652로 처리된 경우 폐에 대한 덜 중증 손상을 가짐을 제시한다 (도 15A). 폐 조직의 대표적인 영상은 F-652 처리된 (도 15B) 및 모의 동물 (도 15C)에 대해 제시된다.
도 16은 F-652 처리된 마우스가 모의 동물과 비교하여 폐포 모세혈관에서의 내피 글리코칼릭스의 개선된 보존을 가짐을 제시한다. 내피 글리코칼릭스 염색 강도는 저-용량 LPS 손상 후에 F-652 처리된 마우스에서의 폐포 모세혈관에서 증가되었다. 내피 글리코칼릭스 염색 강도는 고-용량 LPS 손상에서 F-652 처리된 마우스에 대해 상이하지 않았다.
도 17은 F-652 (인간 IL-22-Fc)로의 처리가 증가된 내인성 마우스 IL-22를 발생시킴을 제시한다. 외인성 인간 IL-22는 처리된 마우스의 BAL에서 검출되었으며, 이는 외인성 F-652가 폐에 도달하고 있음을 입증한다. 내인성 마우스 F-652는 고-용량 LPS 손상 후에 F-652 처리된 것에서 증가되지 않았다.
도 18A는 F-652로 사전-처리된 또는 F-652로 사후-처리된 서브게놈-N (sgm-N) RNA 카피에 의해 반영된 바와 같은 SARS-CoV-2 감염된 1차 인간 기관지 상피 (HBE) 세포에서의 바이러스 카피를 제시한다. SARS-CoV-2에 의해 감염되지 않은 HBE 세포, 또는 처리 없는 SARS-CoV-2 감염된 HBE 세포는 대조군으로서 역할을 하였다. F-652로의 사전-처리 및 사후-처리 둘 다는 F-652 처리 없는 그룹에 비해 sgm-N RNA 카피의 유의하게 더 낮은 카피를 나타내었다 (p<0.05, ANOVA, 터키(Tukey) 다중 비교 검정). 도 18B는 SARS-CoV-2 감염된 HBE 세포의 상이한 그룹에서 SARS-CoV-2 오픈 리딩 프레임 (ORF)에 맵핑하는 RNA-seq 리드의 %를 제시한다.
도 19A는 제0일 체중에 비해 어린 및 고령 마우스에서의 H1N1 감염 후 평균 체중을 제시한다. 도 19B는 H1N1 감염 후 어린 및 고령 마우스의 생존율을 제시한다. "****"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 20A 및 20C는 PBS 대조군 또는 F-652로 처리된, 제0일 체중에 비해 어린 (도 20A) 및 고령 (도 20C) 마우스에서의 H1N1 감염 후 평균 체중을 제시한다. 도 20B 및 20D는 PBS 대조군 또는 F-652로 처리된, H1N1 감염 후 어린 (도 20B) 및 고령 (도 20D) 마우스의 생존율을 제시한다.
도 21은 PBS 또는 F-652로 처리된 어린 및 노령 H1N1 감염된 마우스의 폐 조직으로부터의 폐 침윤 호중구 및 염증성 단핵구의 수를 제시한다. "***" 및 "**"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 22는 PBS 또는 F-652로 처리된 어린 및 노령 H1N1 감염된 마우스의 폐 조직에서의 실질 (병원성) CD8+ T 세포의 수를 제시한다. 좌측 패널은 총 CD8+ T 세포 수를 지시하고; 중간 패널은 CD69+를 발현하는 CD8+ T 세포를 지시하고; 우측 패널은 CD69+ 및 CD103+를 발현하는 CD8+ T 세포를 지시한다. "***" 및 "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 23은 헤마톡실린 및 에오신 (H&E), 마손 트리크롬(Masson's Trichrome), 시리우스 레드(Sirius Red), 또는 과요오드산-쉬프(Periodic acid-Schiff) (PAS)로 염색된 고령 H1N1-감염된 마우스의 폐로부터의 폐 조직학 영상 (40x 해상도)을 제시한다.
도 24는 마우스에서의 폐 기능을 연구하기 위한 예시적인 실험 설정을 제시한다.
도 25는 기도 동원 기동 전의 ("기준선" 패널) 및 후의 ("전체 용량" 패널) 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 어린 (상부 패널) 및 고령 (하부 패널) H1N1 감염된 마우스에서의 강제 진동 기술 (FOT)에 의해 측정된 조직 감쇠 (G)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 26A-26B는 F-652 또는 PBS 대조군으로 처리된 어린 (도 26A) 및 고령 (도 26B) H1N1-감염된 마우스에서의 % 조직 감쇠 (실질에서의 기도 저항)를 결정하는 정규화된 조직 감쇠 ("%ΔG"로서 반영된 용량 G/기준선 G)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 27은 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 H1N1-감염된 마우스에서의 기도 동원 기동 전의 ("기준선" 패널) 및 후의 ("기도 후" 패널) 플렉스벤트(flexiVent)® 상에서 FOT로 측정된 입력 임피던스 (상부 패널) 및 리액턴스 (하부 패널)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 28A-28B는 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 (도 28A) 및 어린 (도 28B) H1N1-감염된 마우스에서의 기도 동원 기동 전의 플렉스벤트® 상에서 FOT로 측정된 입력 임피던스 (Re Zrs)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 29A-29B는 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 (도 29A) 및 어린 (도 29B) H1N1-감염된 마우스에서의 기도 동원 기동 후의 플렉스벤트® 상에서 FOT로 측정된 입력 임피던스 (Re Zrs)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 30A-30B는 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 (도 30A) 및 어린 (도 30B) H1N1-감염된 마우스에 대한 % (용량 Re Zrs/기준선 Re Zrs)에 의해 반영된 바와 같은 각각의 진동수에서 정규화된 입력 임피던스 (Re Zrs)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 31A-31B는 기도 직경의 증가를 반영하는, 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 H1N1-감염된 마우스에서의 플렉스벤트® 상에서 FOT로 측정된 입력 임피던스 (Re Zrs; 도 31A) 및 각각의 진동수에서 정규화된 입력 임피던스 (% Re Zrs) (도 31B)를 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 32A-32C는 일회 호흡 동안 (도 32A), 기도 동원 후 (도 32B), 및 서로에 대해 정규화된 (도 32C) 압력-부피 (PV) 루프 기동으로부터의 F-652 또는 PBS 대조군으로 처리된 고령 마우스에서 결정된 정적 탄성 (Cst)을 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
도 33A-33B는 H1N1에 의해 감염되지 않은 ("나이브"), PBS 대조군으로 처리된, 또는 F-652로 처리된 어린 (도 33A) 및 고령 (도 33B) 마우스에서의 우측 폐엽으로부터의 히드록시프롤린 함량을 제시한다. "*"는 통계적 유의성을 지시한다.
본 발명은 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS, 사망)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 개체에서 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상 (예를 들어, 내피 기능이상, 내피 글리코칼릭스 (EGX) 분해, 시토카인 폭풍, MODS)의 악화를 예방하고/거나, 이를 정지시키고/거나, 개선시키고, 상기 개체 또는 상기 개체의 기관 또는 조직에 대한 손상을 예방하거나, 상기 바이러스 감염으로부터 발생하거나 그와 연관된 손상된 조직/기관 재생을 촉진시키고 (예를 들어, 내피 세포 및/또는 EGX를 재생시키고), 사망을 예방하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 어린 개체 (예를 들어, 약 20세 미만)에 비해 고령 개체 (예를 들어, 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 (예를 들어, 폐) 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는데 특히 유효하다.
계속되는 COVID-19는 호흡계의 손상 및/또는 부전을 야기하며, SARS 및 MERS 환자에서 보여지는 특색을 닮은, 시토카인 폭풍 및 환자에서의 질병의 중증도의 강한 상관관계까 있는 것으로 보인다. ICU에 들어간 많은 환자, 특히 중증 질환을 갖는 환자들은 시토카인 폭풍에 의해 촉발된 기관 부전 (폐, 뿐만 아니라 심장, 신장, 간 등)으로 사망한다. 그 외에도, 노령 개체는 유의하게 더 나쁜 결과를 갖는다. 부상하고 있는 증거는 COVID-19 생존자가 폐 섬유증의 발달로 인해 폐 기능의 지속적인 손상을 나타냄을 시사하였다 (YH. Xu et al. J Infect. 2020 Apr.;80(4):394-400; S. Zhou et al. AJR Am J Roentgenol. 2020 Jun.;214(6):1287-1294; M. Hosseiny et al. AJR Am J Roentgenol. 2020 May;214(5):1078-1082). SARS-CoV-2는 안지오텐신-전환 효소 2 (ACE2)에 결합하며, 이는 폐의 인간 상피 및 혈관 내피 세포에 풍부하게 존재한다. 내피 글리코칼릭스 (EGX)는 내피 세포의 관광내 표면을 덮고, 내피 침투성을 조절한다. EGX의 파괴는 위독한 COVID-19 환자에서 초기에 관찰된다. 내피 세포 기능이상 및 EGX 손상은 COVID-19의 주요 역할을 하는 것으로서 관련되었다 (K Stahl et al. Am J Respir Crit Care Med. 2020 Oct.;202(8):1178-1181; M. Ackermann et al. N Engl J Med. 2020 Jul.;383(2):120-128; M. Yamaoka-Tojo. Biomed J. 2020 Oct.;43(5): 399-413; A. Huertas et al. Eur Respir J. 2020 Jul.; 56(1): 2001634; J.N. Conde et al. mBio. 2020 Dec.;11(6):e03185-20).
IL-22는 대사성 질환, 지방간, 간염 (예를 들어, 바이러스성 간염, 알콜성 간염), MODS, 신경학적 장애, 췌장염, 이식편 대 숙주 질환 (GvHD), 괴사성 장결장염 (NEC), 및 염증성 장 질환 (IBD)을 치료하는데 있어서 일부 치료 효과를 입증하였다. 예를 들어, WO2017181143, US8956605, US10543169, US8945528, US9629898, US7696158, US7718604, US7666402, US9352024, US10786551, US20160271221, US20160287670, 및 ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02655510을 참조하며, 이들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. IL-22는 또한 폐 질환을 치료하는데 있어서 일부 치료 효과 또는 잠재적 효과를 입증하였다. 예를 들어, 문헌 [J.M. Felton et al. Thorax 2018;73:1081-1084]; [M. Pichavant et al. EBioMedicine 2 (2015) 1686-1696]; [P. Fang et al. Plos One (2014). 9(9): e107454]; [A. Broquet et al. Scientific Reports. (2017)7: 11010]; [S. Das et al. iScience (2020) 23:101256]; [S. Ivanov et al. Journal of Virology (2013) 87(12):6911-6924]; [R.N. Abood et al. Mucosal Immunol. (2019) 12(5):1231-1243]; [G. Trevejo-Nunez et al. J Immunol. (2016) 197(5):1877-1883]; [G. Trevejo-Nunez et al. Infection and Immunity (2019) 87(11):e00550-19]; [K.D. Hebert et al. Respiratory Research (2019) 20:184]; [K.D. Hebert et al. Mucosal Immunology (2020) 13:64-74]; [D.A. Pociask et al. The American Journal of Pathology, 182(4):1286-1296]을 참조하며, 이들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재된 IL-22 이량체는 i) 항바이러스 활성 (예를 들어, 바이러스 로드를 감소시키는 것), ii) 다수의 염증성 매개자의 과도한 전신성 발현, 염증성 매개자 (예를 들어, CCL4)의 하향-조절, 염증유발성 경로, 예컨대 TLR4 신호전달의 하향-조절에 의해 유인된 침윤된 염증성 세포 (예를 들어, 세포독성 T 세포 (CTL), 단핵구, 호중구, 대식세포, NK 세포)로부터의 조직 및/또는 기관 손상을 예방하는 항염증성 및 조직-보호 역할, iii) 내피-보호 역할 (예를 들어, EGX 쉐딩 및/또는 손상을 예방하거나 감소시키는 것; 내피 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; 내피 기능이상, 손상, 및/또는 사망을 예방하거나 감소시키는 것; 내피 세포 및/또는 내피 세포 표면 단백질 사이의 접착 연접을 보호하는 것, 예컨대 세포외 프로테이나제 (예를 들어, MMP) 발현을 하향-조절하는 것, 세포외 매트릭스 단백질 발현을 상향-조절하는 것; TLR4 신호전달을 하향-조절하는 것; 단백질 누출을 예방하거나 감소시키는 것), 및 iv) 콜라겐 침착을 감소시키거나 예방하는 것 등을 나타냄으로써, 바이러스-유발 기관 (예를 들어, 폐) 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증)을 예방하거나 치료하는데 유효할 수 있다. 본원에 기재된 IL-22 이량체는 또한 IL-22 단량체에 비해 훨씬 더 긴 생체내 반감기를 가지며, 이는 투여 빈도 및 환자 비용을 크게 감소시킬 수 있다. 또한, 본원에 기재된 IL-22 이량체는, 예를 들어, IV 투여를 통해 최소 유해 사건으로 또는 유해 사건 없이 안전하게 투여될 수 있다. 광범위하고 철저한 연구로, 본 발명자들은 놀랍게도 IL-22 이량체가 정맥내 투여를 위한 의약의 제조에 있어서 뛰어난 효과를 가짐을 밝혀내었다. 놀랍게도, IL-22 이량체, 구체적으로, IL-22-Fc 단량체성 서브유닛의 이량체성 복합체는 피하 투여와 비교하여 정맥내로 투여되는 경우 유의하게 더 낮은 독성을 나타냄이 밝혀졌다. 구체적으로, IL-22-Fc 단량체성 서브유닛의 이량체성 복합체가 약 2 μg/kg의 투여량으로 개체에게 피하로 투여되는 경우, 주사 부위의 지연된 유해 사건, 예컨대 건조한 피부, 홍반 및 화폐상 습진이 투약 후에 관찰되었다. 한편, 개체에게 정맥내로 투여된 IL-22-Fc 단량체성 서브유닛의 이량체성 복합체는 우수한 안전성 프로파일을 입증하였다. 약 2 μg/kg 또는 10 μg/kg의 용량에서 주사 부위 및 피부의 유해 사건은 관찰되지 않았다. 심지어 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg만큼 높은 용량에서, 단지 제한된 유해 사건, 예컨대 건조한 피부, 눈 소양증, 홍반성 발진이 관찰되었다. IL-22 이량체의 투여는 또한 인간에서 염증성 시토카인의 증가된 혈청 수준을 초래하지 않았다.
I. 정의
본 발명의 실시는, 구체적으로 반대로 지시되지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내의 바이러스학, 면역학, 미생물학, 분자 생물학 및 재조합 DNA 기술의 통상적인 방법을 채용할 것이며, 이들의 많은 것은 예시의 목적을 위해 하기 기재된다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology or Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York, N.Y. (2009)]; [Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1995]; [Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition, 2001)]; [Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)]; [DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I&II (D. Glover, ed.); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait, ed., 1984)]; [Nucleic Acid Hybridization (B. Hames & S. Higgins, eds., 1985)]; [Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins, eds., 1984)]; [Animal Cell Culture (R. Freshney, ed., 1986)]; [Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984)] 및 다른 유사 참고문헌을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "치료"는 임상 병리학의 과정 동안 치료되는 개체 또는 세포의 자연적 과정을 변경시키도록 디자인된 임상적 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질환 진행의 속도를 감소시키는 것, 질환 상태를 개선시키거나 완화시키는 것, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 개체는 감염성 바이러스의 증식을 감소시키는 것 (또는 파괴하는 것), 질환으로부터 초래되는 증상 (예를 들어, 호흡 부전, 폐 섬유증, 시토카인 폭풍, 내피 기능이상 또는 사망, EGX 분해)을 감소시키는 것, 질환을 앓고 있는 것들의 삶의 질을 증가시키는 것, 질환을 치료하는데 필요한 다른 의약의 용량을 감소시키는 것, 및/또는 개체의 생존을 연장시키는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS)과 연관된 하나 이상의 증상이 완화되거나 제거되는 경우, 성공적으로 "치료된다".
본원에 사용된 "유효량"은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는데 유효한 작용제 또는 약물의 양을 지칭한다. 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 경우, 작용제의 유효량은 바이러스 활성을 억제하고/거나 (즉, 일부 정도로 감소시키고, 바람직하게는 제거하고/거나); 상기 바이러스 병원체에 의해 유발된 염증 또는 시토카인 폭풍을 제어하고/거나 약화시키고/거나 억제하고/거나; 상기 바이러스 감염으로부터 발생하거나 그와 연관된, 상기 대상체 또는 상기 대상체의 기관 또는 조직에 대한 상기 바이러스 감염 또는 손상의 적어도 하나의 증상의 악화를 예방하고/거나, 이를 정지시키고/거나 개선시키고/거나; 감염된 및/또는 비-감염된 조직 및/또는 기관에서의 세포 괴사를 제어하고/거나, 감소시키고/거나 억제하고/거나; 감염된 또는 비-감염된 조직 및/또는 기관에서의 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, 세포독성 T 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤을 제어하고/거나, 개선시키고/거나 예방할 수 있다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 1종 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있으며, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께, 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 유효량으로 주어지는 것으로 간주될 수 있다.
본원에 사용된 "개체" 또는 "대상체"는 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류, 또는 영장류를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 유기체, 예컨대 포유동물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체를 포함함), 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 이들이 목적하는 생물학적 활성 또는 기능을 나타내는 한, 항체 단편을 커버한다. 본원에 사용된 용어 "이뮤노글로불린" (Ig) 및 "항체"는 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "불변 도메인"은 이뮤노글로불린의 다른 부분, 즉, 항원-결합 부위를 함유하는 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 이뮤노글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인 (집합적으로, CH) 및 경쇄의 CHL (또는 CL) 도메인을 함유한다.
본원에 사용된 용어 IgG "이소타입" 또는 "하위부류"는 그들의 불변 영역의 화학적 및 항원적 특징에 의해 정의되는 이뮤노글로불린의 임의의 하위부류를 의미한다. 이뮤노글로불린의 5가지 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 나누어질 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, γ, ε, γ, 및 μ로 지칭된다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류의 서브유닛 구조 및 3차원 배치는 널리 공지되어 있으며, 일반적으로 예를 들어, 문헌 [Abbas et al. Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000)]에 기재되어 있다.
본원에 사용된 "공유 결합"은 1개 이상의 전자를 공유하는 2개의 원자 사이의 안정한 결합을 지칭한다. 공유 결합의 예는 펩티드 결합 및 디술피드 결합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 사용된 "펩티드 결합"은 아미노산의 카르복실 기 및 인접한 아미노산의 아민 기 사이에 형성된 공유 결합을 지칭한다. 본원에 사용된 "디술피드 결합"은 2개의 황 원자 사이에 형성된 공유 결합, 예컨대 1개 이상의 디술피드 결합에 의한 2개의 Fc 단편의 조합을 지칭한다. 1개 이상의 디술피드 결합은 2개의 단편에서 티올 기를 연결함으로써 2개의 단편 사이에 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 디술피드 결합은 2개의 Fc 단편의 1개 이상의 시스테인 사이에 형성될 수 있다. 디술피드 결합은 2개의 티올 기의 산화에 의해 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 공유 연결은 공유 결합에 의해 직접적으로 연결된다. 일부 실시양태에서, 공유 연결은 펩티드 결합 또는 디술피드 결합에 의해 직접적으로 연결된다.
본원에 사용된 용어 "결합하다", "에 특이적으로 결합하다" 또는 "에 대해 특이적인"은 생물학적 분자를 포함하는 분자의 이종 집단의 존재 하에서 표적의 존재에 결정적인 측정가능하고 재현가능한 상호작용, 예컨대 표적 및 수용체 사이의 결합을 지칭한다. 예를 들어, 수용체 (예를 들어, IL-22R)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 리간드 (예를 들어, IL-22)는 그것이 다른 수용체에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 보다 급속하게, 및/또는 보다 큰 지속기간으로 이 수용체에 결합하는 리간드이다. 한 실시양태에서, 비관련된 수용체에의 리간드의 결합의 정도는, 예를 들어, 방사성면역검정 (RIA)에 의해 측정된 바와 같이 수용체에의 리간드의 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, 수용체에 특이적으로 결합하는 리간드는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 리간드는 상이한 종으로부터의 단백질 중에서 보존된 수용체의 결합 도메인에 특이적으로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만, 이를 요구하지는 않는다.
펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열에 관하여 본원에 사용된 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 및 "상동성"은 서열을 정렬하고 필요에 따라 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성한 후, 및 임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로서 간주하지 않고, 특이적 펩티드 또는 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하는 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 기술 내인 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™ (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 치환은 폴리펩티드에서의 한 아미노산의 또 다른 아미노산으로의 대체를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 치환은 표 A에 제시된다. 아미노산 치환은 관심의 항체, 및 목적하는 활성, 예를 들어, 보유된/개선된 표적 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝되는 생성물 내로 도입될 수 있다.
표 A. 아미노산 치환
Figure pct00001
아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹핑될 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe. 비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류에 대해 교환하는 것을 수반할 것이다.
본원에 사용된 폴리펩티드의 "C 말단"은 그의 아민 기를 공여하여 그의 인접한 아미노산 잔기의 카르복실 기와 펩티드 결합을 형성하는 폴리펩티드의 마지막 아미노산 잔기를 지칭한다. 본원에 사용된 폴리펩티드의 "N 말단"은 그의 카르복실 기를 공여하여 그의 인접한 아미노산 잔기의 아민 기와 펩티드 결합을 형성하는 폴리펩티드의 최초 아미노산을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 그것이 연결되는 또 다른 핵산을 복제할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동적으로 연결되는 핵산의 발현을 지정할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
용어 "세포"는 1차 대상 세포 및 그의 자손을 포함한다.
용어 "시토카인 폭풍", 일명 "시토카인 캐스케이드" 또는 "고시토카인혈증"은 다양한 시토카인 (예를 들어 INF-γ, IL-10, IL-6, CCL2 등)의 고도로 상승된 수준을 갖는, 전형적으로 시토카인 및 면역 세포 사이의 양성 피드백 루프로 이루어진 잠재적으로 치명적인 면역 반응이다.
본원에 기재된 본 발명의 실시양태는 "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진" 실시양태를 포함함이 이해된다.
본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 변동을 포함한다 (및 기재한다). 예를 들어, "약 X"에 관한 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
본원에 사용된 값 또는 파라미터가 "아닌"에 대한 언급은 일반적으로 값 또는 값 또는 파라미터 "이외의 것"을 의미하고 기재한다. 예를 들어, 방법이 유형 X의 질환을 치료하는데 사용되지 않는다는 것은 방법이 X 이외의 유형의 질환을 치료하는데 사용됨을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "약 X-Y"는 "약 X 내지 약 Y"와 동일한 의미를 갖는다.
본원에 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 맥락이 명백하게 달리 나타내지 않는 한, 복수 언급대상을 포함한다.
II. IL-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는 방법
본 발명은 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS, 사망)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS)으로부터 기관을 보호하는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 염증을 감소시키는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염 (예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2)으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염 (예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2)으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 기능이상을 치료하거나 예방하는 방법이며, 유효량 (예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg)의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 손상된 조직 또는 기관은 손상된 또는 기능이상적 내피 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 EGX 분해를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 EGX 분해를 예방하고/거나 감소시키는 것, TLR4 신호전달을 하향-조절하는 것, 및/또는 내피 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 세포는 폐 내피 세포이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 이를 필요로 하는 개체에서 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상의 악화를 예방하고/거나, 이를 정지시키고/거나 개선시키고/거나, 상기 개체 또는 상기 개체의 기관 또는 조직에 대한 손상을 예방하거나, 상기 바이러스 감염으로부터 발생하거나 그와 연관된 손상된 조직/기관 재생을 촉진시키고/거나, 사망을 예방한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 하기 중 하나 이상을 달성할 수 있다: (a) 생체내에서 아밀라제, 리파제, 트리글리세리드 (TG), 아스파르테이트 트랜스아미나제 (AST), 및/또는 알라닌 트랜스아미나제 (ALT)의 수준을 감소시키는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 감소시키는 것; (b) 생체내에서, 예컨대 바이러스 감염에 의해 유발된 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간) 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증)을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것; (c) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 세포 괴사, 예컨대 감염된 및/또는 비-감염된 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 괴사를 제어하고/거나, 감소시키고/거나, 억제하는 것 (예컨대 세포 괴사를 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 감소시키는 것); (d) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 조직 및/또는 기관 (감염된 또는 비-감염된)에서의 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, 세포독성 T 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것, 예컨대 염증성 세포 침윤을 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 감소시키는 것; (e) 감염된 또는 비-감염된 조직 및/또는 기관에서 염증, 전신성 염증, 및/또는 시토카인 폭풍을 제어하고/거나, 개선시키고/거나 예방하는 것, 예를 들어, 염증성 마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, C-반응성 단백질 (CRP), TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 혈청 아밀로이드 A1 (SAA1)의 수준을 변화시키는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 하향조절하는 것, 또는 염증유발성 경로, 예컨대 TLR4 신호전달을 하향-조절하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 하향조절하는 것); (f) 조직 및/또는 기관 재생을 촉진시키는 것, 예컨대 재생 마커, 예컨대 안지오포이에틴-2 (ANGPT2), FGF-b, 혈소판-유래 성장 인자 AA (PDGF-AA)의 수준을 변화시키는 것, 소도-유래 단백질 3 알파 (Reg3A), 및 PDGF-BB를 재생시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 상향조절하는 것); (g) 추가의 요법, 예컨대 항바이러스 약물에 의해 촉발된 유해 효과 (예를 들어, 손상)로부터 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)을 보호하는 것; (h) 호흡계 (예를 들어, 폐)와 연관된 바이러스 감염에 대한 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 점수를 감소시키는 것; (i) 패혈증, SIRS, 패혈성 쇼크, 및/또는 MODS를 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것; (j) 바이러스 감염과 연관된 사망률을 감소시키고/거나, 사망을 예방하는 것, 예컨대 사망률을 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 감소시키는 것; (k) 개체에서 급성 생리학 및 만성 건강 평가 II (APACHE II) 점수 또는 KNAUS 점수 (MODS에 대해)를 감소시키는 것; (l) 기관 기능 시험 점수 (예를 들어, 폐 기능 시험 점수)를 개선시키는 것; (m) 바이러스 감염과 연관된 대사성 질환, 지방간, 간염, 패혈증, MODS, 신경학적 장애, 및 췌장염을 치료하거나 예방하는 것; (n) 국립 알러지 및 감염성 질환 연구소 (NIAID) 8-포인트 순위 스케일에서의 포인트를 증가시키는 것 (예를 들어, 2-포인트 이상 증가); (o) 재원 기간을 감소시키는 것 (예를 들어, 재원의 적어도 약 임의의 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120, 180일, 또는 그 초과의 일을 감소시키는 것); (p) 살아 있는 및 호흡 부전 없는 날을 증가시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120, 180일, 또는 그 초과의 일을 증가시키는 것); (q) 중증/위독 질환으로의 진행을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 중증 진행을 감소시키거나 예방하는 것); (r) 임의의 새로운 감염의 발생을 제어하고/거나, 감소시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 새로운 감염을 감소시키거나 예방하는 것); (s) 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상, 손상, 또는 사망을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 내피 기능이상, 손상, 또는 사망을 감소시키거나 예방하는 것); (t) 예컨대 세포외 프로테이나제 (예를 들어, MMP) 발현을 하향-조절함 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 하향-조절함) 및/또는 세포외 매트릭스 단백질 발현 (예를 들어, 테나신 C (Tnc), 콜라겐, 유형 I, 알파 1 (COL1a1), 콜라겐, 유형 VI, 알파 3 (Col6a3), 및 콜라겐, 유형 I, 알파 2 (Col1a2))를 상향-조절함 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 상향-조절함)으로써, EGX, 내피 세포 표면 단백질, 및/또는 내피 세포 사이의 접착 연접의 손상 및/또는 분해를 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 감소시키거나 예방하는 것); (u) 단백질 누출을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 감소시키거나 예방하는 것); (v) EGX 및/또는 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포의 재생을 촉진시키는 것, 예컨대 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 기능적 EGX 및/또는 내피 세포를 증가시키는 것; (w) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과); 및 (x) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키거나 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과). 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 바이러스-유발 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 MODS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과 중 어느 하나의 바이러스에 의해 야기된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 인플루엔자 C 바이러스, 및 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 오르토믹소비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 또는 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체, 예컨대 H1N1 또는 H5N1이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 알파 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 뉴 헤이븐 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 베타 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 코로나바이러스 HKU1 (HCoV-HKU1), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 코로나비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 에볼라 바이러스 (EBOV) 및 마르부르크 바이러스 (MARV)로부터 선택되는 필로비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 지카 바이러스 (ZIKV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 뎅기 바이러스 (DENV), 및 황열 바이러스 (YFV)로 이루어진 군으로부터 선택되는 플라비비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 코르티코스테로이드, 항염증성 신호 전달 조정제, β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 항콜린제, 점액용해제, 항바이러스제, 항섬유화제, 고장성 염수, 항체, 백신, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 항바이러스제는 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a, IFN-α2b, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린, 우미페노비르 (아르비돌®), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b, 흡입을 통해), 파비피라비르, 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 렘데시비르이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제) 및 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해)이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 파비피라비르, 우미페노비르 (아르비돌®), 테이코플라닌 유도체, 벤조-헤테로시클릭 아민 유도체, 피리미딘, 발록사비르 마르복실, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 또는 H5N1에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제) 및 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해)이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 또는 H5N1에 의해 유발된다. 일부 실시양태에서, 항섬유화제는 닌테다닙, 피르페니돈, 및 N-아세틸시스테인 (NAC)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제와 동시에 또는 그에 후속하여 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 화학식 I: M1-L-M2를 포함하고; 여기서 M1은 제1 IL-22 단량체이고, M2는 제2 IL-22 단량체이고, L은 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체를 연결하고, 그 사이에 배치되는 연결 모이어티이다. 일부 실시양태에서, 연결 모이어티 L은 약 3 내지 약 50개의 아미노산 (예컨대 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나)을 포함하는 짧은 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 서열식별번호: 28을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 연결 모이어티 L은 화학식 II: -Z-Y-Z-의 폴리펩티드이고; 여기서 Y는 담체 단백질 (예를 들어, 알부민, 예컨대 인간 알부민, Fc 단편)이고; Z는 없거나, 약 1 내지 약 50개의 아미노산을 포함하는 짧은 펩티드 (예컨대 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나)이고; "-"는 화학 결합 또는 공유 결합 (예를 들어, 펩티드 결합)이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 10-일 치료 사이클의 제1일 및 제6일, 또는 14-일 치료 사이클의 제1일 및 제8일에 투여된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간)는 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)이다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS, 사망)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS, 사망)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS, 사망)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과 중 어느 하나에 속한다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, 또는 H5N1이다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 EGX 분해를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루(Tamiflu)®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨(Rebetol)®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), 및/또는 IFN-α)을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, SARS)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, SARS)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, MERS)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, MERS)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, COVID-19)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, COVID-19)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 폐 섬유증을 개선시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 폐 섬유증을 개선시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H1N1 돼지 독감)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H1N1 돼지 독감)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 폐 섬유증을 개선시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 폐 섬유증을 개선시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 또는 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H5N1 조류 독감)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H5N1 조류 독감)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 또는 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS)으로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS)으로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 괴사, 폐 손상 또는 부전, 예컨대 폐 섬유증, 폐렴, ALI, SARS, MERS, COVID-19, H1N1 돼지 독감, H5N1 조류 독감, 또는 ARDS, 패혈증, 패혈성 쇼크, MODS)으로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과 중 어느 하나에 속한다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, 또는 H5N1이다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 또는 MODS는 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 EGX 분해를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), 및/또는 IFN-α)을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, SARS)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, SARS)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, MERS)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, MERS)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, COVID-19)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, COVID-19)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H1N1 돼지 독감)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H1N1 돼지 독감)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸, 및/또는 EGX 분해/손상을 감소시키고/거나 예방하는 것; ii) 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것; iii) 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포) 침윤을 감소시키고/거나 예방하는 것; iv) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 v) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H5N1 조류 독감)으로부터 폐를 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 MODS로부터 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장)을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증, 폐렴, ALI, ARDS, H5N1 조류 독감)을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1-유발 MODS를 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과 중 어느 하나에 속한다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, 또는 H5N1이다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), 및/또는 IFN-α)을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염된 기관 (예를 들어, 폐)에서의 바이러스 로드를 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염된 기관 (예를 들어, 폐)에서의 바이러스 로드를 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염 (예를 들어, 폐 감염)을 예방하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염 (예를 들어, 폐 감염)을 예방하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 염증 (예를 들어, 바이러스 활성, 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤, 염증성 바이오마커, 시토카인 폭풍, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크)을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 시토카인 폭풍을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 염증성 바이오마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 APACHE II 점수 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것; 또는 ii) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키고/거나 예방하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함한다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과 중 어느 하나에 속한다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, 또는 H5N1이다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), 및/또는 IFN-α)을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 MERS-CoV 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H1N1 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 H5N1 감염으로 인한 손상된 폐의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 재생 바이오마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 ARDS 점수, APACHE II 점수, 및/또는 KNAUS 점수를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장) 기능 시험 점수를 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 포인트를 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 기능적 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포 및/또는 EGX를 재생시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 (예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, H5N1) 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 바이러스 (예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, H1N1, H5N1) 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 폐에서의 내피 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 (예를 들어, 서열식별번호: 21), 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편, 예컨대 서열식별번호: 22 또는 23을 포함하는 Fc 단편), 및 그 사이에 위치한 임의적 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10)를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체 (예를 들어, 인간, 예컨대 적어도 약 55세의 인간)에서 SARS-CoV-2 감염으로 인한 손상된 폐에서의 내피 기능이상을 치료하거나 예방하는 (예를 들어, EGX 손상/쉐딩/분해를 감소시키는) 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것 (예컨대 서열식별번호: 24)의 서열을 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg (예를 들어, 10 μg/kg, 30 μg/kg, 또는 45 μg/kg), 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 또 다른 치료제, 예컨대 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린 (레베톨®), 우미페노비르 (아르비돌®), 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), 및/또는 IFN-α (예를 들어, 흡입을 통해))을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, EGX 쉐딩은 증가된 유체 및 단백질 누출 및/또는 상피의 감소된 완전성과 연관된다. 일부 실시양태에서, 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상을 치료하거나 예방하는 것은 하기 중 하나 이상을 포함한다: i) EGX 분해, 쉐딩, 및/또는 손상을 예방하고/거나 감소시키는 것; ii) 염증유발성 경로, 예컨대 TLR4 신호전달을 하향-조절하는 것; iii) 기능적 내피 세포 및/또는 EGX의 재생을 촉진시키는 것; iv) 내피 세포 및/또는 내피 세포 표면 단백질 사이의 접착 연접을 보호하는 것, 예컨대 세포외 프로테이나제 (예를 들어, MMP) 발현을 하향-조절하는 것, 또는 세포외 매트릭스 단백질 발현 (예를 들어, 테나신 C (Tnc), 콜라겐, 유형 I, 알파 1 (COL1a1), 콜라겐, 유형 VI, 알파 3 (Col6a3), 및 콜라겐, 유형 I, 알파 2 (Col1a2))을 상향-조절하는 것; v) 유체 및/또는 단백질 누출을 예방하거나 감소시키는 것; vi) 염증성 세포 (예를 들어, CTL, 단핵구, 호중구, 대식세포, NK 세포) 침윤을 감소시키거나 예방하는 것; vii) EGX-의존성 장벽 기능을 복원하는 것; viii) EGX-의존성 세포-세포 통신을 회복시키는 것; ix) 염증성 마커 (예를 들어, IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, MCP1, 및 SAA1)를 하향-조절하는 것; 및 (x) 내인성 IL-22 생산을 유도하는 것. 일부 실시양태에서, 방법은 개체가 적어도 약 55세 (예를 들어, 적어도 약 임의의 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90세, 또는 그 초과)인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함한다.
치료되는 개체는 임의의 동물, 예컨대 조류 또는 포유동물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료되는 개체는 가축 동물 (예를 들어, 소, 양, 염소, 당나귀, 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 고양이, 개, 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스, 래트, 거빌, 및 햄스터)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물이다. 일부 실시양태에서, 개체는 원숭이 (예를 들어, 시노몰구스(Cynomolgus) 원숭이)이다. 일부 실시양태에서, 개체는 뮤린이다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 치료되는 개체 (예를 들어, 인간)는 약 5세 이하, 약 10세 이하, 약 16세 이하, 약 18세 이하, 약 20세 이하, 약 25세 이하, 약 35세 이하, 약 45세 이하, 약 55세 이하, 약 65세 이하, 약 75세 이하, 또는 약 85세 이하이다. 일부 실시양태에서, 치료되는 개체는 약 5세 이상, 약 10세 이상, 약 16세 이상, 약 18세 이상, 약 20세 이상, 약 25세 이상, 약 35세 이상, 약 45세 이상, 약 55세 이상, 약 60세 이상, 약 65세 이상, 약 70세 이상, 약 75세 이상, 약 80세 이상, 약 85세 이상, 또는 약 90세 이상이다. 일부 실시양태에서, 치료되는 개체는 약 1 내지 약 90, 약 5 내지 약 85, 약 10 내지 약 80, 약 15 내지 약 75, 또는 약 18 내지 약 70세이다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체로 투여되는 개체는 주사 부위 반응을 나타내지 않는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체로 투여되는 개체는 하나 이상의 유해 사건, 예컨대 건조한 피부, 홍반, 또는 화폐상 습진, 및/또는 다른 안전성 평가 지수, 예컨대 신체 검사, 실험실 시험, 체중, 활력 징후, 심전도, 및 복부 초음파 등의 유의한 비정상을 나타내지 않는다.
바이러스-유발 기관 손상 또는 부전
본 개시내용에 따른 방법, 조성물, 조합물, 및 키트는 다수의 바이러스에 의한 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 치료를 제공한다. 본원에 기재된 바이러스-유발 조직/기관 손상 또는 부전은 임의의 바이러스 또는 바이러스의 조합, 예컨대 확인된 및 비확인된 속, 종, 하위유형, 균주, 및 그의 재편성체를 포함하는 오르토믹소비리다에, 필로비리다에, 플라비비리다에, 코로나비리다에, 및 폭스비리다에 과, 또는 이들의 임의의 조합 중 어느 하나의 바이러스에 의한 감염과 연관될 수 있다.
바이러스-유발 손상 또는 부전은 개체의 임의의 조직, 기관, 또는 계에서 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 호흡계 (예를 들어, 인두, 후두, 기관, 기관지, 폐 및 횡격막), 순환계 (예를 들어, 폐, 심장, 혈관), 근육계 (예를 들어, 근육), 외피계 (예를 들어, 피부, 모발, 손발톱), 소화계 (예를 들어, 식도, 위, 간, 담낭, 췌장, 장, 결장, 직장), 생식계 (예를 들어, 난소, 나팔관, 자궁, 음문, 질, 고환, 수정관, 정낭, 전립선, 음경), 내분비계 (예를 들어, 시상하부, 뇌하수체, 송과체 또는 송과선, 갑상선, 부갑상선, 부신), 배설계 (예를 들어, 신장, 요관, 방광, 요도), 골격계 (예를 들어, 골, 연골, 인대, 힘줄), 림프계 (예를 들어, 림프절, 편도선, 아데노이드, 흉선, 비장), 또는 신경계 (예를 들어, 뇌, 척수, 신경)에서의 손상 또는 부전이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 바이러스 감염된 조직 또는 기관에서의 손상 또는 부전이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 호흡기 바이러스 감염은 호흡관 (예를 들어, 폐)에 대한 손상 또는 부전을 야기한다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 바이러스-감염된 조직, 기관, 및/또는 계로부터 상이한 부위에서의 손상 또는 부전이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 호흡기 바이러스 감염은 심장, 신장, 간, 뇌, 또는 위장관에 대한 손상 또는 부전을 야기한다. 예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, 및 새롭게 확인된 SARS-CoV-2는 호흡관 (예를 들어, 폐)에 대한 손상 및/또는 부전을 야기하여, 폐렴 (예를 들어, 경도 폐렴, 중증 폐렴, 급성 폐렴), 숨참, 호흡 곤란, 폐 섬유증, 또는 ARDS를 초래할 뿐만 아니라, 많은 경우에 이들은 또한 비-호흡기 조직/기관, 예컨대 심장, 신장, 및 간에 대한 손상 및/또는 부전, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 MODS를 야기한다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 IL-22 수용체를 발현하는 조직/기관, 예컨대 간, 폐, 피부, 흉선, 췌장, 신장, 위장관, 활액 조직, 심장, 유방, 눈, 및 지방 조직의 상피 및 기질 세포에서의 손상 또는 부전이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 1개 초과의 조직/기관에서의 손상 또는 부전이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 내피 세포를 포함하는 조직/기관에서의 손상 또는 부전이다. 일부 실시양태에서, 손상된 조직 또는 기관은 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 세포는 폐 내피 세포이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 심장 손상 또는 부전, 예컨대 심근 경색; 울혈성 심장 부전 (CHF); 심근 부전; 심근 비대; 허혈성 심근병증; 수축기 심장 부전; 확장기 심장 부전; 뇌졸중; 혈전성 뇌졸중; 동심성 LV 비대, 심근염; 심근병증; 비대성 심근병증; 심근염; 보상부전 심장 부전; 허혈성 심근 질환; 선천성 심장 질환; 협심증; 심근 경색 후 심장 재형성 또는 심실 재형성의 예방; 허혈 및 허혈후 사건 (예를 들어 심근 경색)에서의 허혈-재관류 손상; 승모판 역류; 고혈압; 저혈압; 재협착; 섬유증; 혈전증; 혈소판 응집; 또는 임의의 심혈관 질환 및 바이러스 감염과 연관된 그들의 합병증이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 섬유증성 상태이다. 일부 실시양태에서, 상기 섬유증성 상태는 심내막심근 및 심장 섬유증을 포함하나 이에 제한되지는 않는 염증 또는 허혈-재관류 손상 후 조직 재형성을 수반하는 섬유증성 상태; 종격 섬유증; 특발증 폐 섬유증; 폐 섬유증; 후복막 섬유증; 비장의 섬유증; 췌장의 섬유증; 알콜 및 비-알콜 관련 간 섬유증 (경화증) (바이러스 감염, 예컨대 HAV, HBV 및 HCV를 포함함); 섬유종증; 육아종성 폐 질환; 경색 후 사구체신염 심근 흉터형성; 자궁내막 섬유증 및 자궁내막증; 상처 치유로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 증가된 콜라겐 침착을 포함한다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 내피 기능이상, 손상, 또는 사멸과 연관된다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 내피-의존성 혈관확장의 손상, 증가된 내피 침투성, 및 내피 글리코칼릭스 (EGX) 분해, 쉐딩, 또는 손상 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 내피 기능이상은 EGX의 증가된 쉐딩 또는 분해를 포함한다. 일부 실시양태에서, EGX 쉐딩은 증가된 유체 및 단백질 누출 및/또는 상피의 감소된 완전성과 연관된다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 대상체의 질환에 걸린 조직 또는 기관에서의 내피 기능이상과 연관된다. 일부 실시양태에서, 질환에 걸린 조직은 폐이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 내피 기능이상 질환, 예컨대 심혈관 질환, 높은 혈압, 죽상동맥경화증, 혈전증, 심근 경색, 심장 부전, 신장 질환, 다대사 증후군, 발기 기능이상; 혈관염; 및 중추 신경계 (CNS)의 질환이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 피부 또는 조직 손상, 예컨대 병변, 상처 치유이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 신장 질환; 방광 장애; 생식계의 장애; 부인과 장애; 요로 장애; 실금; 남성 (정자형성, 정자 운동성), 및 여성 생식계의 장애; 성 기능이상; 발기 기능이상; 배아형성; 및 임신과 연관된 상태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 비뇨생식기 장애 또는 생식-비뇨기 장애이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 골 질환, 예컨대 골다공증; 골관절염; 골화석증; 골 불일치; 골육종이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 환자에서의 기관 및 조직에서의 허혈 및 허혈후 사건과 연관된 허혈-재관류 손상, 예컨대 혈전성 뇌졸중; 심근 경색; 협심증; 색전성 혈관 폐색; 말초 혈관 부전; 내장 동맥 폐색; 혈전 또는 색전에 의한 동맥 폐색, 비-폐색성 과정에 의한, 예컨대 낮은 장간막 흐름 또는 패혈증 후 동맥 폐색; 장간막 동맥 폐색; 장간막 정맥 폐색; 장간막 미세순환에 대한 허혈-재관류 손상; 허혈성 급성 신장 부전; 뇌 조직에 대한 허혈-재관류 손상; 장 중첩증; 혈역학적 쇼크; 조직 기능이상; 기관 부전; 재협착; 죽상동맥경화증; 혈전증; 혈소판 응집이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 이러한 감염, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스 I (HIV-1) 또는 HIV-2에 의해 야기되는 바이러스 감염, 후천성 면역 결핍증 (AIDS), 웨스트 나일 뇌염 바이러스, 코로나바이러스 (예를 들어, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2), 리노바이러스, 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, H1N1, H5N1), 뎅기 바이러스, HCV, HBV, HAV, 출혈열; 온톨로지 감염; 패혈증 및 부비동염과 연관된 염증성 상태이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 염증성 장애, 예컨대 위염, 통풍, 통풍성 관절염, 관절염, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 궤양, 만성 기관지염, 천식, 알러지, 급성 폐 손상, 폐 염증, 기도 과민-반응성, 혈관염, 패혈성 쇼크, 및 건선, 아토피성 피부염, 습진을 포함하나 이에 제한되지는 않는 염증성 피부 장애이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 신장 손상 또는 부전, 예컨대 당뇨병성 신장병증; 사구체경화증; 신장병증; 신장 손상; 피부경화증 신발증 및 만성 신장 부전이다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 조직/기관 손상 또는 부전의 증상은 임의의 바이러스 감염 증상, 예컨대 열 (>38℃의 온도), 기침, 숨참, 호흡 곤란, 폐 섬유증, 폐렴, 급성 폐 손상 (ALI), 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS), 전신성 염증성 반응 증후군 (SIRS), 시토카인 폭풍, 지카 열 (뎅기-유사 열) 저혈압, 빈맥, 호흡곤란, 허혈, 과소 조직 관류 (특히 주요 기관을 포함함), 비제어가능한 출혈, 다계통 기관 부전 (주로 저산소증, 조직 산증에 의해 야기됨), 중증 대사 조절이상 중 하나 이상일 수 있다. 특정 실시양태에서 바이러스 감염과 연관된 증상 또는 손상은 열, 예를 들어 지카 열, 웨스트 나일 열, 뎅기 열 또는 황열 중 어느 하나이고, 여기서 열은 통상적으로 두통, 구토, 피부 발진, 근육 및 관절 통증, 및 특징적인 피부 발진, 및 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 다른 효과 중 적어도 하나를 수반한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전과 연관된 증상 중 하나 이상을 제어하고/거나, 개선시키고/거나 예방할 수 있다. 본 개시내용에 따른 치료는 일부 실시양태에서 치료되는 대상체의 사망을 예방할 수 있다.
일부 실시양태에서, 생물학적 샘플 (예를 들어, 가래/타액, 혈액, 소변, 대변, 뇌척수액, 또는 신체 폐기물)에서의 유전자 생성물 (예를 들어, 바이오마커)의 발현 수준은 특히 바이러스 감염, 염증, 시토카인 폭풍, 기관 손상, 기관 부전, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 MODS의 존재 및/또는 중증도를 지시한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플 (예를 들어, 가래/타액, 혈액, 소변, 대변, 뇌척수액, 또는 신체 폐기물)에서의 유전자 생성물 (예를 들어, 바이오마커)의 발현 수준은 본원에 기재된 방법의 치료 효과를 지시하며, 예를 들어, 염증성 시토카인의 감소 및/또는 재생 마커의 증가는 유효한 치료를 지시한다. 상기 혈액 샘플은 바람직하게는 전혈, 혈소판, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 및/또는 연막을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 샘플은 전혈 샘플이다. 유전자의 발현 생성물은 예를 들어 핵산 분자 및/또는 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유전자 생성물은 바이러스 유전 정보, 예컨대 바이러스 DNA, 바이러스 RNA, 또는 바이러스 단백질 (예를 들어, 외피 단백질)을 나타낸다. 바람직하게는, 상기 생성물은 상기 개체의 상기 샘플로부터 단리된다.
본 발명에 따른 발현 생성물의 분석은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 수행될 수 있다. 단백질 수준은 예를 들어 항체-기반 결합 검정을 사용하여 측정된다. 효소 표지된, 방사능 표지된 또는 형광 표지된 항체는 예를 들어 단백질의 검출 및 정량화에 사용된다. 예를 들어 적합한 검정은 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA), 방사성-면역 검정 (RIA), 웨스턴 블롯 검정 및 면역조직화학적 염색 검정을 포함한다. 대안적으로, 다수의 단백질의 발현 수준을 동시에 결정하기 위해 단백질 어레이, 예컨대 항체-어레이가 예를 들어 사용된다.
일부 실시양태에서, DNA (예를 들어, 바이러스 DNA)의 존재 또는 수준이 시험된다. DNA 검출 및/또는 측정을 위한 임의의 실험실 기술, 예컨대 PCR, qPCR, DNA-seq, DNA 어레이, 또는 DNA 프로브가 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 발현 생성물은 RNA, 예컨대 총 RNA 또는 mRNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, RNA (예를 들어, 바이러스 RNA)의 존재 또는 수준이 시험된다. RNA 분자의 수명은 단백질의 수명보다 더 짧다. 따라서 RNA 수준은 샘플 제조시에 개체의 상태를 보다 대표하며, 따라서 바이러스 감염을 앓고 있는 개체에서 염증, 시토카인 폭풍, 기관 손상, 기관 부전, SIRS, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 MODS의 존재 및/또는 중증도를 결정하는데 보다 적합하다. 더욱이, RNA 발현 수준을 결정하는 것은 단백질 수준을 결정하는 것보다 덜 수고롭다. 예를 들어, 단백질 칩보다 개발 및 프로세싱하기가 더 용이한 올리고뉴클레오티드 어레이가 사용된다. 일부 실시양태에서, RT-PCT, qRT-PCR, RNA-seq, RNA 프로브, 또는 노던 블롯은 상기 RNA 생성물을 검출하고/거나 측정하는데 사용된다.
바이러스-유발 기관 손상 또는 부전, 또는 본원에 기재된 방법의 치료 효과는 또한 상기 기관에 대한 확립된 기능 시험, 기관 부위의 의학적 영상화 (예를 들어, CT 영상화, MRI), 이러한 기관의 생검, 또는 조직병리학 연구에 의해 결정될 수 있다. 정상 범위로의 기능 시험 점수 또는 상기 기관의 병리학의 개선은 유효한 치료를 지시할 수 있다.
또한 가능한 지표 및 측정에 대해서는 본원의 실시예를 참조한다.
폐 손상 또는 부전
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 손상 또는 부전은 호흡계 손상 또는 부전, 예컨대 폐 손상 또는 부전, 예를 들어, 천식, 급성 폐 손상 (ALI), 기관지 질환, 폐 질환, 폐렴 (예를 들어, 경도 폐렴, 중증 폐렴), 급성 폐렴, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), SARS, MERS, 코로나바이러스 질환 2019 (COVID-19), 섬유증 관련 천식, 낭성 섬유증, 폐 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 MERS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 COVID-19이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 돼지 독감이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H5N1 조류 독감이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 호흡계 손상 또는 부전은 내피 기능이상/손상/사멸, 및/또는 EGX 쉐딩/손상을 특징으로 한다. 임의의 적합한 방법, 예를 들어, WGA 및 4',6-디아미디노-2-페닐인돌로의 염색, 이어서 현미경검사 방법을 사용한 영상화는 EGX를 측정하는데 사용될 수 있다. 또한 예시적인 방법에 대해서는 실시예 3 및 4를 참조한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 상부 또는 하부 호흡관의 바이러스 감염의 염증성 효과를 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 특히, 본원에 기재된 방법은 급성 폐 손상 또는 급성 호흡 곤란 증후군을 포함하는 바이러스 감염에 의해 야기되는 호흡 부전을 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 또한 다-기관 부전 또는 MODS를 포함하는 바이러스 감염에 의해 야기되는 호흡 부전의 후유증을 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전은 폐 섬유증, 폐렴, ALI, 또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)이다. 급성 폐 손상 (ALI)의 가장 중증 형태인 ARDS는 높은 사망률 (30-60%)을 갖는 파괴적인 임상적 증후군이다. ARDS는 폐에서의 널리 퍼진 염증의 급속한 발생을 특징으로 하는 호흡 부전의 유형이다. 증상은 숨참, 빠른 호흡, 및 비정상적 환기로 인한 혈액에서의 낮은 산소 수준을 포함할 수 있다. 다른 통상적인 증상은 근육 피로 및 일반적 쇠약, 낮은 혈압, 건조한 마른 기침, 및 열을 포함한다.
글리코칼릭스의 분해는 ARDS에서 발생하는 유체 및 단백질 누출과 연루되었고, 폐 손상 후의 글리코칼릭스의 보호는 ARDS 동안 폐에서 보여지는 변화를 완화시킨다 (Murphy, L.S., et al., "Endothelial glycocalyx degradation is more severe in patients with non-pulmonary sepsis compared to pulmonary sepsis and associates with risk of ARDS and other organ dysfunction." Annals of Intensive Care, 2017. 7(1): p. 1-9; Kong, G., et al., "Astilbin alleviates LPS-induced ARDS by suppressing MAPK signaling pathway and protecting pulmonary endothelial glycocalyx." Int Immunopharmacol, 2016. 36: p. 51-58; Wang, L., et al., "Ulinastatin attenuates pulmonary endothelial glycocalyx damage and inhibits endothelial heparanase activity in LPS-induced ARDS." Biochem Biophys Res Commun, 2016. 478(2): p. 669-75).
폐 기능 시험 (PFT)은 폐 손상 또는 부전의 존재 및/또는 중증도를 결정하거나, 치료의 치료 효능을 결정하는데 사용될 수 있다. PFT는 폐가 얼마나 잘 작동하고 있는지를 나타내는 비침습적 시험이다. 시험은 폐 부피, 용량, 유속, 및 기체 교환을 측정한다. 폐활량측정은 폐 부피, 또는 기도에 영향을 미치는 질환, 예컨대 COPD 또는 천식에 대해 스크리닝하는데 사용된다. 폐 부피 시험은 폐활량측정보다 더 정확한 또 다른 시험이며, 정상 호흡의 종료시에 잔류하는 공기를 포함하는 폐에서의 공기의 부피를 측정한다. 확산 용량 시험은 산소가 혈류로 얼마나 용이하게 들어가는지를 측정한다. 일부 실시양태에서, 치료 효과는 일회 호흡량 (VT), 분당 호흡량 (MV), 폐활량 (VC), 기능적 잔류 용량 (FRC), 잔류 부피, 총 폐 용량, 강제 폐활량 (FVC), 강제 호기 부피 (FEV), 강제 호기 유동 (FEF), 및 피크 호기 유속 (PEFR) 중 하나 이상을 측정하는 PFT에 의해 결정될 수 있다. 기능불량 범위로부터 표준/건강한 범위로의 이러한 PFT 지표 중 하나 이상의 개선은 본원에 기재된 방법의 치료 효과를 지시할 수 있다.
폐 기능적 연구는 일회 호흡 상태 하에서 수행될 수 있다 (Goplen et al. J Allergy Clin Immunol. 2009; 123(4): 925-32.e11). 다양한 동요는 폐쇄된 기도를 동원하는 깊은 팽창 전에 및 후에 수행될 수 있다. 이들 측정은 팽창 전 데이터를 비교하여 플렉스벤트® (사이렉(Scireq)) 컴퓨터 제어된 피스톤 호흡기 상에서 단일 구획, 일정 위상, 및 압력 부피 루프에 대한 기준선 vs. 폐 용량 폐 생리학을 결정할 수 있다. 몇몇 파라미터, 예컨대 입력 임피던스 (Zrs), 저항 (R), 탄성 (C), 조직 제동 (G) 등은 폐 기능을 반영하기 위해 측정될 수 있다. 또한 예를 들어 실시예 7을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 (예를 들어, 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는, 또는 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전으로부터 폐를 보호하는)은 폐 기능을 개선시키며, 이는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: i) 폐 실질의 기준선 기능을 개선시키는 것; ii) 예를 들어, 소기도에서 기류에 대한 저항을 감소시키는 것; iii) 폐포 사용을 개선시키는 것; iv) 기도 붕괴를 예방하는 것; 및 v) 탄성을 증가시키는 것 (폐 강직을 감소시키는 것).
바이러스-유발 폐 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는, 또는 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전으로부터 폐를 보호하는 IL-22 이량체의 효과는 NIAID 8-포인트 순위 스케일를 사용하여 측정될 수 있다: 1. 사망; 2. 침습적 기계적 환기 또는 체외 막 산소공급으로 입원; 3. 비-침습적 환기 또는 고-유동 산소 장치로 입원; 4. 보충적 산소를 요구하는 입원; 5. 보충 산소를 요구하지 않는 입원 - 계속되는 의학적 치료를 요구함 (COVID-19 관련 또는 다른 것); 6. 보충적 산소를 요구하지 않는 입원 - 더 이상 계속되는 의학적 치료를 요구하지 않음; 7. 입원하지 않음, 활동에 대한 제한 및/또는 가정 산소를 요구함; 및 8. 입원하지 않음, 활동에 대한 제한 없음. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 NIAID 스케일에서 적어도 1-포인트 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 또는 그 초과의 포인트)를 증가시킨다. 또한 실시예 5를 참조한다.
바이러스-유발 폐 손상 또는 부전, 또는 본원에 기재된 방법의 치료 효과는 또한 흉부의 의학적 영상화 (예를 들어, CT 영상화, MRI), 폐 생검, 및 폐 조직병리학 점수에 의해 결정될 수 있다 (가능한 측정에 대해서는 실시예 1, 4, 및 7 참조). 조직학 연구는 임의의 공지된 방법으로 수행될 수 있다. 바이러스-감염된 개체로부터의 파라핀-포매된 폐는 슬라이스되고, 염료, 예컨대 헤마톡실린 및 에오신 (H&E), 마손 트리크롬, 시리우스 레드, 과요오드산-쉬프 (PAS) 등으로 염색될 수 있다. 예를 들어, SARS-CoV-2 감염의 환자로부터의 CT 영상화는 종종 양쪽 폐 실질 간유리 및 경화성 폐 혼탁을 나타내며, 때때로 둥근 형태 및 말초 폐 분포를 갖는다. 질환의 경도 또는 중등도 진행은 폐 혼탁의 정도 및 밀도를 증가시킴으로써 나타난다.
바이러스-감염된 조직 또는 기관에서의 바이러스 로드는 세포 용해물로부터 총 RNA를 추출하고, 서브게놈-N (sgm-N) RNA 표준 검정 (서브게놈 RNA는 바이러스 접종물 뿐만 아니라 새로운 바이러스 RNA를 측정함), 또는 RNA-seq (예를 들어, 바이러스 ORF당 리드 카운트를 결정함)로 처리함으로써 조사될 수 있다. 또한 예를 들어 실시예 6을 참조한다.
호흡관의 바이러스 감염의 염증성 효과의 감소는 또한 이러한 바이러스 감염을 앓고 있는 대상체에서 염증성 시토카인 (예를 들어, CXCL2, IL-1β, 및/또는 IL-6) 및/또는 염증성 세포 (예를 들어, CTL, NK 세포, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 감소에 의해 평가될 수 있다. 시토카인 수준 및 염증성 세포 수준은, 예를 들어, 대상체로부터의 기관지폐포 세척 (BAL) 유체에서 평가될 수 있다. 염증성 세포 침윤은 또한 면역형광 염색에 의해 조사될 수 있고, 이어서 폐 조직은 수거되고, 소화되고, FACS 분류로 처리될 수 있다. 또한 예를 들어 실시예 7을 참조한다.
다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS)
다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS), 일명 다발성 기관 부전 (MOF), 총 기관 부전 (TOF), 또는 다계통 기관 부전 (MSOF)은 항상성이 의학적 개입 없이 유지될 수 없도록 급성으로 병든 환자에서의 변경된 기관 기능이다. MODS는 일반적으로 적어도 2개의 기관계에서의 부전의 존재로서 정의된다. MODS는 통상적으로 감염, 손상 (사고, 수술), 관류저하, 및 대사과다증에 의해 촉발되는 비제어된 염증성 반응으로부터 초래된다. 비제어된 염증성 반응은 패혈증 또는 전신성 염증성 반응 증후군 (SIRS)을 초래할 수 있다. SIRS는 전신에 영향을 미치는 염증성 상태이다. 이는 전신성 염증, 기관 기능이상, 및 기관 부전과 관련된 몇몇 상태 중 하나이다. SIRS는 다양한 시토카인의 비정상적 조절이 있는 시토카인 폭풍의 하위세트이다. SIRS의 원인은 감염성 또는 비감염성일 수 있다. SIRS는 패혈증과 밀접하게 관련된다. SIRS가 감염으로 인한 것인 경우, 이는 패혈증으로 간주된다. SIRS의 비감염성 원인은 외상, 화상, 췌장염, 허혈, 및 출혈을 포함한다. 패혈증은 전신 염증성 상태를 특징으로 하는 심각한 의학적 상태이며, 패혈성 쇼크를 초래할 수 있다. SIRS 및 패혈증 둘 다는 중증 패혈증, 및 결국 MODS, 또는 사망으로 진행할 수 있다. MODS의 기저의 메커니즘은 잘 이해되어 있지 않다. 생존의 기회는 일반적으로 MODS에 관여된 기관의 수가 증가함에 따라 감소한다. 부전 기관계의 예는 호흡계 (예를 들어, 폐)의 부전, 간, 신장 또는 위장 기능의 부전 및 순환 부전이다.
MODS의 치료는 예를 들어 감염의 치료, 개별적인 부전 기관에 대한 영양적 지지 및 인공적 지지, 예컨대 투석 및 조직 관류 또는 산소공급을 포함하는 비-특이적이고 주로 지지적이다. 이뮤노글로불린 또는 IFNγ로의 치료를 포함하는 몇몇 면역조정성 개입이 시험되었으며, 낮은 성공률을 갖는다.
환자에서 MODS의 발달은 분류 시스템, 예컨대 다계통 기관 부전에 대한 KNAUS 기준에 의해 현재 확립되어 있으며 (Knaus, WA et al. Ann. Surg. 1985; 202:685-293), 이는 생리학적 측정, 예컨대 호흡 빈도, 심장 속도 및 동맥 압력, 소변 부피, 혈청 크레아티닌, 및 1 내지 10의 스케일로 점수를 발생시키는 환자 설문지를 수반한다. 5 이상의 KNAUS 점수는 MODS의 존재를 지시한다. KNAUS 점수는 MODS를 발달시킬 위험이 있는 환자에 대해 매일 결정된다. 현재 MODS의 최초 징후가 분명하게 되기 전에 MODS를 발달시킬 위험의 평가를 가능하게 하는 방법은 이용가능하지 않다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 KNAUS 점수를 감소시킬 수 있으며, 이는 유효한 치료를 지시한다.
오르토믹소비리다에
오르토믹소비리다에는 RNA 바이러스의 과이다. 이는 7개의 속을 포함한다: 인플루엔자바이러스(Influenzavirus) A, 인플루엔자바이러스 B, 인플루엔자바이러스 C, 인플루엔자바이러스 D, 이사바이러스(Isavirus), 토고토바이러스(Thogotovirus), 및 콰란자바이러스(Quaranjavirus). 최초 4개의 속은 조류 (즉, 조류 인플루엔자), 인간, 및 다른 포유동물을 포함하는 척추동물에서 인플루엔자를 야기하는 바이러스를 함유한다. 이사바이러스는 연어를 감염시킨다. 토고토바이러스는 아르보바이러스이며, 척추동물 및 무척추동물, 예컨대 진드기 및 모기를 감염시킨다. 인플루엔자 바이러스의 4개의 속 중에서, 인플루엔자바이러스 A는 인간, 다른 포유동물, 및 조류를 감염시키며, 모든 독감 범유행을 야기하고; 인플루엔자바이러스 B는 인간 및 물개를 감염시키고; 인플루엔자바이러스 C는 인간, 돼지, 및 개를 감염시키고; 인플루엔자바이러스 D는 돼지 및 소를 감염시킨다.
인플루엔자 A 및 B 바이러스 입자는 8개의 선형 절편으로 나누어진 음성 센스, 단일-가닥 RNA의 게놈을 함유한다. 2가지 상이한 인플루엔자 바이러스로의 단일 숙주의 공동-감염은 각각의 모 바이러스로부터 유래된 게놈 절편의 새로운 조합을 갖는 재편성체 자손 바이러스의 생성을 발생시킬 수 있다.
인플루엔자 A 바이러스는 3가지 인플루엔자 유형 중에서 가장 감염성인 인간 병원체이며, 가장 중증 질환을 야기할 수 있다. 이들은 바이러스 표면 단백질 헤마글루티닌 (HA 또는 H) 및 뉴라미니다제 (NA 또는 N)에 기반하여 추가로 분류된다. 인플루엔자 A 바이러스의 16가지 H 하위유형 (또는 혈청형) 및 9가지 N 하위유형이 확인되었다. 인플루엔자 A 바이러스의 하위유형은 그들의 HA 및 NA 표면 단백질에 따라 명명된다. 예를 들어, "H7N2 바이러스"는 HA 7 단백질 및 NA 2 단백질을 갖는 인플루엔자 A 하위유형을 지칭하는 등이다. 인간에서 확인된 혈청형은 2009년에 "돼지 독감"을 야기한 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1); "아시아 독감"을 야기한 H2N2; "홍콩 독감"을 야기한 H3N2; 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1) (범유행성 위협이며 조류 인플루엔자 또는 "조류 독감"을 야기함); H7N7 (비통상적인 인수공통 잠재성을 가짐); H1N2 (인간 및 돼지에서 풍토병성임); H9N2; H7N2; H7N3; 및 H10N7을 포함한다.
H1N1에 의해 야기된 2009년의 독감 범유행 (돼지 독감)은 미국에서 처음 나타났다. 열; 기침, 인후염, 젖은 눈, 신체 통증, 숨참, 두통, 체중 감소, 오한, 재채기, 콧물, 기침, 현기증, 복통, 식욕 부진 및 피로를 포함하는 인간에서의 증상은 일반적으로 인플루엔자의 및 인플루엔자-유사 질병의 그것들과 유사하다. 설사 및 구토는 또한 환자에서 나타난다. 사망의 다수의 원인 중에서, 예컨대 폐렴 (패혈증을 초래함), 고열 (신경학적 문제를 초래함), 탈수 (과도한 구토 및 설사로부터), 전해질 불균형, 및 신장 부전, 호흡 부전은 사망의 가장 통상적인 원인이다. 어린 아동 및 노인은 가장 영향을 받는다. 치명적 H1N1 인플루엔자의 1차 폐 병리학은 괴사성 폐포염 및 치밀 호중구 침윤을 특징으로 한다.
A 바이러스의 모든 공지된 하위유형은 조류에서 발견될 수 있다. H5N1에 의해 야기되는 조류 인플루엔자 또는 "조류 독감"은 수백만의 가금류를 죽였다. 사람-대 사람 전파가 또한 적응될 수 있음이 제시되어 있다. 호흡 및 다-기관 부전으로 인한 사망률은 대략 60%이다. 조류 바이러스로의 인간 감염의 증상은 전형적인 독감-유사 증상 (열, 기침, 인후염 및 근육통)으로부터 눈 감염, 폐렴, 중증 호흡기 질환 (예컨대 급성 호흡 곤란), 및 다른 중증 및 생명을 위협하는 합병증까지의 범위였다. 조류 독감의 증상은 어느 바이러스가 감염을 야기하였는지에 의존할 수 있다. 각각의 조류 인플루엔자 A 바이러스 H5, H7, 및 H9는 이론적으로 9가지 뉴라미니다제 표면 단백질 중 어느 하나와 동반될 수 있으며; 따라서, 각각의 하위유형의 잠재적으로 9가지 상이한 형태 (예를 들어, H5N1 내지 H5N9)가 있다. H5 감염은 인간에서 문서화되었으며, 때때로 중증 질병 및 사망을 야기한다. 인간에서의 H7 감염은 드물지만, 감염된 조류와 직접 접촉한 사람들 중에서 발생할 수 있다. 인간에서의 조류 독감 감염의 대부분의 사례는 감염된 가금류 또는 오염된 표면과의 접촉으로부터 초래되었다고 믿어진다. 조류 독감으로부터의 위험은 일반적으로 대부분의 사람에 대해 낮은데, 이는 바이러스가 주로 조류 중에서 발생하고 통상적으로 인간을 감염시키지 않기 때문이다. 그러나, 아시아 및 유럽에서 가금류 중에서의 조류 인플루엔자 A (H5N1)의 발생은 인간 감염 및 사망을 야기한 조류 독감 발생의 예이다. 일부 실시양태에서, 바이러스 병원체는 조류 인플루엔자 바이러스 유형 A 바이러스, 또는 그의 임의의 하위유형 및 재편성체이다. 일부 실시양태에서, 조류 인플루엔자 유형 A 바이러스는 하위유형 H5, H7 또는 H9의 헤마글루티닌 성분을 갖는다.
재편성 및 새로운 인플루엔자 하위유형 형성 인플루엔자 A 바이러스는 오리, 닭, 돼지, 고래, 말, 및 물개를 포함하는 많은 상이한 동물에서 발견된다. 그러나, 인플루엔자 A 바이러스의 특정 하위유형은 인플루엔자 A의 모든 하위유형에 대한 숙주인 조류를 제외하고는 특정 종에 특이적이다. 한 종에서 통상적으로 나타나는 인플루엔자 A 바이러스는 또 다른 종에서 교차하고 질병을 야기할 수 있다. 예를 들어, H5N1 조류 인플루엔자는 인간 집단에서 조류 독감의 발생에 대해 원인이었던 반면, H7N7, H9N2 및 H7N2 하위유형은 또한 종 장벽에 걸친 전파 및 인간에서의 결과적인 감염과 연관되었다. 조류 인플루엔자 바이러스는 2가지 주요한 방식으로 인간에게 전파될 수 있다; (a) 감염된 조류로부터 또는 조류 인플루엔자 바이러스로 오염된 물질로부터 직접적으로, (b) 중간 숙주, 예컨대 돼지를 통해.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 인플루엔자 C 바이러스, 및 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 오르토믹소비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 또는 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1) 또는 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1)이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H1N1 돼지 독감이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 H5N1 조류 독감이다.
필로비리다에
일부 실시양태에서, 바이러스 병원체는 또한 본원에서 "필로바이러스"로 지칭되는 필로비리다에 과에 속하는 바이러스일 수 있다. 이들은 전형적으로 영장류를 감염시키는 일반적으로 단일-가닥 음성 센스 RNA 바이러스이다. 필로바이러스는 사실상 모든 세포 유형에서 증식할 수 있다. 필로바이러스 게놈은 4가지 비리온 구조적 단백질 (VP30, VP35, 핵단백질, 및 폴리머라제 단백질 (L-pol)) 및 3가지 막-연관된 단백질 (VP40, 당단백질 (GP), 및 VP24)을 코딩하는 7개의 유전자를 포함한다. 필로바이러스는 높은 수준의 치명성을 갖는 출혈열을 야기한다. 이들은 필로비리다에 과 내의 2개의 속: 에볼라 바이러스 (EBOV) 및 마르부르크 바이러스 (MARV)로 분류되며, 둘 다는 인간 및 비인간 영장류에서 고도로 병원성이며, 최대 90%의 사례 치명성 수준을 갖는다. 에볼라 바이러스 종 레스톤(Reston) (REBOV)은 원숭이에서 병원성이지만, 인간 또는 유인원에서는 질환을 야기하지 않는다. 필로바이러스 감염에서의 치명적 결과는 순환 T 세포의 수의 초기 감소, 특이적 체액성 면역을 발달시키는데 실패, 및 염증유발성 시토카인의 방출과 연관된다. 보다 구체적으로, 이들 바이러스는 전신성 출혈, 다-기관 부전 및 대부분의 경우 사망을 특징으로 하는 인간 질환의 산발적 유행병을 야기한다. 질병의 발병은 돌발적이며, 초기 증상은 인플루엔자-유사 증후군의 그것들을 닮았다. 열, 두통, 전신 권태, 근육통, 관절 통증, 및 인후염은 통상적으로 설사 및 복통이 이어진다. 일시적인 홍역모양 피부 발진, 이어서 벗겨짐은 종종 질병의 제1 주의 종료시에 나타난다. 다른 신체적 결과는 빈번히 삼출성인 인두염, 및 가끔씩 결막염, 황달, 및 부종을 포함한다. 질병의 3일차 후, 출혈성 징후는 통상적이며, 위장관의 임의의 부분으로부터 및 다수의 다른 부위로부터 발생할 수 있는 점상출혈 뿐만 아니라 프랑크 출혈을 포함한다. 질환이 진행함에 따라, 환자는 중증 다초점성 괴사 및 패혈성 쇼크를 닮은 증후군을 발달시킨다. 또한, 응고 인자의 소비와 결합된 섬유소용해 시스템의 활성화는 응고 인자의 고갈 및 혈소판 막 당단백질의 분해를 발생시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바이러스는 에볼라 바이러스 (EBOV) 및 마르부르크 바이러스 (MARV)로부터 선택되는 필로비리다에 바이러스이다.
플라비비리다에
일부 실시양태에서, 바이러스 병원체는 또한 본원에서 "플라비바이러스", 즉, ssRNA(+) 바이러스의 군으로 지칭되는 플라비비리다에 과에 속하는 바이러스일 수 있다. 인간 및 다른 포유동물은 자연 숙주로서 역할을 한다. 플라비비리다에 과는 통상적으로 모기-보유된 플라비바이러스(Flavivirus) 속 (유형 종 황열 바이러스 (YFV), 다른 것들은 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 뎅기 바이러스 (DENV), 및 지카 바이러스 (ZIKV)를 포함함), 헤파시바이러스(Hepacivirus) 속 (유형 종 헤파시바이러스 C (C형 간염 바이러스), 또한 헤파시바이러스 B (GB 바이러스 B)를 포함함), 페기바이러스(Pegivirus) 속 (페기바이러스 A (GB 바이러스 A), 페기바이러스 C (GB 바이러스 C), 및 페기바이러스 B (GB 바이러스 D)를 포함함), 및 비-인간 포유동물을 감염시키는 페스티바이러스(Pestivirus) 속 (유형 종 페스티바이러스 A (소 바이러스성 설사 바이러스 1), 다른 것들은 페스티바이러스 C (고전적 돼지 열 바이러스, 이전에 돼지 콜레라 바이러스)를 포함함)을 포함하는 4개의 속을 갖는다. 이 과는 또한 다수의 비분류된 종을 갖는다.
WNV는 웨스트 나일 열을 야기하며, 이는 열, 두통, 구토, 또는 발진에 의해 나타날 수 있다. 뇌염 또는 수막염은 다소 드물다. 회복은 수 주 내지 수 개월이 걸릴 수 있다.
DENV는 고열, 두통, 구토, 근육 및 관절 통증, 및 특징적인 피부 발진을 포함할 수 있는, 전형적으로 감염 후 3 내지 14일에 시작하는 증상을 갖는 뎅기 열 (DF)에 대한 원인이다. 회복은 일반적으로 2 내지 7일이 걸린다. 사례의 작은 비율로, 질환은 생명을 위협하는 뎅기 출혈열로 발달하여, 출혈, 낮은 수준의 혈액 혈소판 및 혈액 혈장 누출, 또는 위험하게 낮은 혈압이 발생하는 뎅기 쇼크 증후군을 발생시킨다.
YFV는 전형적으로 짧은 지속기간의 바이러스 질환인 황열을 야기한다. 대부분의 경우에, 증상은 열, 오한, 식욕 부진, 오심, 특히 등에서의 근육 통증, 및 두통을 포함한다. 증상은 전형적으로 5일 내에 개선된다. 약 15%의 사람들에서, 개선의 일 내에 열이 다시 나고, 복통이 발생하며, 간 손상이 시작되어 황색 피부를 야기한다. 이것이 발생하는 경우, 출혈 및 신장 문제의 위험이 또한 증가된다.
ZIKV는 최대 10일의 인큐베이션 시간을 갖는 자기-제한, 뎅기 열 (DF)-유사 질환을 야기한다. 징후 및 증상은 관절통 및 두통, 및 덜 자주 부종, 인후염, 및 구토를 수반하는 다소 낮은-등급 열, 근육통 및 반구진성 발진으로 이루어진다. 2007년 및 2013년에 ZIKV 발생, 및 2016년에 브라질로의 그의 도입 후의 유행병이 있었으며, 모두는 ZIKV의 아시아 유전자형에 기인한다. DF와 대조적으로, 급성 지카 열 (ZF)은 덜 중증이다. 연구는 다기능적 T 세포 활성화 (Th1, Th2, Th9 및 Th17 반응)가 각각의 시토카인 수준 (IL-2, IL-3, IL-13, IL-9 및 IL-17)의 증가, 이어서 회복 상의 감소를 특징으로 하는 지카 열의 급성 상 동안 나타났음을 제시하였다. ZIKV 감염은 길랑-바레 증후군과 연관된다 (Tappe et al., Med Microbiol Immunol. 2016; 205:269-273). 임신에서, 질환은 모태로부터 자궁 내의 태아로 확산되며, 아기에서 다수의 문제, 가장 특히 소두증, 뿐만 아니라 눈 비정상 및 태아 수종을 야기할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바이러스는 지카 바이러스 (ZIKV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 뎅기 바이러스 (DENV), 및 황열 바이러스 (YFV)로 이루어진 군으로부터 선택되는 플라비비리다에 바이러스이다.
코로나비리다에
일부 실시양태에서, 바이러스 병원체는 코로나비리다에 과 구성원이다. 코로나비리다에 바이러스는 외피화된, 양성-센스, 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 입자는 종종 큰, 곤봉- 또는 꽃잎-형상 표면 돌기 ("페플로머" 또는 "스파이크")를 가지며, 이는 구형 입자의 전자 현미경사진에서 태양 코로나와 유사한 영상을 생성한다. 코로나비리다에 과는 2개의 아과, 5개의 속, 23개의 아속 및 약 40개의 종으로 체계화된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바이러스는 알파 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 뉴 헤이븐 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 베타 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 코로나바이러스 HKU1 (HCoV-HKU1), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 코로나비리다에 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV 감염과 연관된다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 MERS-CoV 감염과 연관된다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 MERS이다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 SARS-CoV-2 감염과 연관된다. 일부 실시양태에서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전은 COVID-19이다.
일부 실시양태에서, 코로나비리다에 바이러스는 인수공통 기원의 바이러스성 호흡기 질환을 야기하는 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS) 코로나바이러스 (SARS-CoV)이다 (2002년-2003년에 발생, 남부 중국에서 결국 8,098건의 사례를 야기함, 37개의 국가에서 보고된 774건의 사망을 초래함). 초기 증상은 독감-유사이며, 열, 근육 통증, 무기력 증상, 기침, 인후염, 및 다른 비특이적 증상을 포함할 수 있다. 모든 환자에 공통적인 유일한 증상은 38℃ (100℉) 초과의 열인 것으로 보인다. SARS는 결국 숨참 및/또는 폐렴 - 직접적 바이러스성 폐렴 또는 2차 박테리아성 폐렴을 초래할 수 있다. SARS에 대한 평균 인큐베이션 기간은 4-6일이지만, 드물게 이는 1일만큼 짧거나 14일만큼 길 수 있다. 2004년 이래로 발생은 없었다. 백신은 이용가능하지 않다. SARS와 연관된 사망은 급성 폐 손상 (ALI) 또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 야기하는 급속하게 진행성인 호흡 부전과 관련된다. 일부 경우에, 다-기관 부전은 또한 특색이다. 초기에는 SARS와 연관된 호흡 부전이 호흡관의 표적 세포, 예컨대 폐포 상피 세포의 세포용해적 파괴를 초래하는 급속한 바이러스 복제로 인한 것이거나, 호흡계로부터 먼 조직 및 기관, 예컨대 중추 신경계로의 바이러스의 탈출로 인한 것이라고 가정되었다. 그러나, 보다 많은 증거는 호흡 부전의 발달이 높은 바이러스 역가와 연관되지 않음을 제시하였다. 조사자들은 대신 호흡 부전이 소위 "시토카인 폭풍"을 촉발시키는 선천 면역계의 부적절한 자극을 초래하는 염증유발성 시토카인, 예컨대 TFNα 및 IFNβ의 유의한 상승과 연관됨을 밝혀내었다. 시토카인 폭풍 및 질병의 중증도 사이의 상관관계는 SARS 환자에서 밝혀졌다.
일부 실시양태에서, 코로나비리다에 바이러스는 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV)이다. MERS-CoV는 사우디 아라비아에서 2012년에 보고된 베타코로나바이러스이며, WHO에 의해 "세계 보건에 대한 위협"으로서 확인되었다. 이는 감염된 개체에서 중증 호흡 곤란 및 잠재적으로 신장 부전을 야기하는 고도로 병원성 호흡기 바이러스이다. MERS로 보고된 매 10명의 환자 중에서 약 3 또는 4명은 사망하였다. 증상은 열, 기침, 설사 및 숨참을 포함한다. MERS를 갖는 많은 사람들에 대해, 보다 중증 합병증, 예컨대 폐렴 (중증 폐렴은 ARDS를 초래할 수 있음), 패혈성 쇼크, 및 기관 (예를 들어, 신장) 부전이 이어진다. 파종성 혈관내 응고 (DIC), 및 심장막염은 또한 보고되었다. SARS와 유사하게, 시토카인 폭풍 및 질병의 중증도 사이의 상관관계는 MERS 환자에서 밝혀졌다.
코로나비리다에 과의 가장 새로운 추가는 2019년의 신규한 코로나바이러스 (2019-nCoV)이며, 이는 지금까지 MERS- 및 SARS-코로나바이러스 구성원보다 더 낮은 사망률을 나타내었다. WHO는 공식적으로 2019-nCoV를 "중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2" (SARS-CoV-2)로 지정하였다. SARS-CoV-2는 WHO에 의해 세계적 보건 비상사태로서 지정된 급성 호흡기 질환 ("코로나바이러스 질환 2019", COVID-19)의 2019년-2021년 발생을 야기하였다. SARS-CoV-2의 유전자 서열은 SARS-CoV (79.5%) 및 박쥐 코로나바이러스 (96%)와 유사하다. 바이러스는 주로 밀접 접촉, 특히 기침 및 재채기로부터의 호흡기 액적을 통해 확산된다. SARS-CoV-2에 대한 평균 인큐베이션 기간은 약 14일이다. 확인된 SARS-CoV-2 감염에 대해, 보고된 질병은 증상이 거의 없거나 없는 사람들로부터 중증 질병 및 사망하는 사람들까지 범위였다. 증상은 열, 기침, 인후염, 비충혈, 권태, 두통, 근육 통증, 권태, 숨참, 폐 섬유증, 경도 폐렴, 중증 폐렴, 급성 폐렴, ALI, ARDS, 패혈증 (기관 기능이상), 또는 패혈성 쇼크를 포함한다. 기관 기능이상의 징후는 변경된 정신 상태, 곤란하거나 빠른 호흡, 낮은 산소 포화도, 감소된 소변 배출량, 빠른 심장 속도, 약한 맥박, 차가운 손발 또는 낮은 혈압, 피부 반점형성, 또는 응고병증, 저혈소판증, 산증, 높은 락테이트 또는 고빌리루빈혈증의 실험실 증거를 포함한다. 노령 개체는 유의하게 더 나쁜 결과를 갖는다. 소수의 백신이 막 이용가능하게 되었지만, 제한적이다. 과학자들은 ICU에 들어간 SARS-CoV-2 환자, 특히 중증 질환을 갖는 환자들이 그렇지 않은 환자들에 비해 염증성 시토카인의 유의하게 더 높은 수준을 나타내었음을 주목하였다. 시토카인 폭풍 및 질병의 중증도 사이의 이러한 상관관계는 SARS 및 MERS 환자에서 이전에 관찰되었다. 이 "시토카인 폭풍"은 과도한, 비제어된 전신성 염증을 촉발하여, 폐렴, ARDS, 호흡 부전, 쇼크, 기관 부전, 2차 박테리아성 폐렴, 및 잠재적으로 사망을 초래할 수 있다.
폭스비리다에
일부 실시양태에서, 바이러스 병원체는 폭스비리다에 과에 속하는 바이러스일 수 있다. 폭스비리다에 바이러스는 이중-가닥 DNA 게놈을 가지며, 일반적으로 외피화된다. 인간, 척추동물, 및 절지동물은 자연 숙주로서 역할을 한다. 이 과와 연관된 질환은 천연두를 포함한다. 현재 2개의 아과로 나누어진 28개의 속 중에서 나누어진 69개의 종이 있다. 인간에 대해 감염성인 4개의 속은 오르토폭스바이러스, 파라폭스바이러스, 야타폭스바이러스, 및 몰루시폭스바이러스이다. 오르토폭스 바이러스는 천연두 바이러스 (바리올라), 백시니아 바이러스, 카우폭스 바이러스, 및 원숭이폭스 바이러스를 포함한다. 파라폭스 바이러스는 오르프 바이러스, 슈도카우폭스, 및 소 구진성 구내염 바이러스를 포함한다. 야타폭스 바이러스는 타나폭스 바이러스 및 야바 원숭이 종양 바이러스를 포함한다. 몰루시폭스 바이러스는 전염성 연종 바이러스 (MCV)를 포함한다. 원형적 폭스바이러스는 천연두의 박멸에 있어서 그의 역할에 대해 공지된 백시니아 바이러스이다.
천연두는 감염성 질환이었다. WHO는 1980년에 상기 질환의 세계적 박멸을 공인하였다. 사망의 위험은 약 30%였으며, 아기들 중에서 보다 높은 비율을 갖는다. 악성 및 출혈성 형태는 통상적으로 치명적이었다. 생존한 것들은 종종 그들의 피부의 광범위한 흉터형성을 가졌으며, 일부는 눈이 멀었다. 천연두의 증상은 열, 구토, 근육 통증, 오심, 입에서의 상처의 형성 및 피부 발진을 포함하였다.
IL-22 이량체
본원에 사용된 용어 "IL-22 이량체"는 IL-22 단백질의 2개의 유닛, 또는 본원에 기재된 임의의 IL-22 단량체의 2개의 유닛을 포함하는 단백질을 지칭한다. 한 예로, IL-22 이량체는 서로에 직접적으로 연결된, 또는 연결 모이어티, 예컨대 펩티드 링커, 화학 결합, 공유 결합, 또는 폴리펩티드 (예를 들어, 담체 단백질, 이량체화 도메인)를 통해 함께 연결된 2개의 IL-22 단량체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 동일한 IL-22 단량체를 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 상이한 IL-22 단량체를 포함한다. 본 발명에서 용도를 발견할 수 있는 IL-22 이량체의 추가의 예는 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 US8945528에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 인간 IL-22 분자를 포함하고 제네론 (상하이) 코포레이션, 엘티디.(Generon (Shanghai) Corporation Ltd.) (현재 이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디(Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd))에 의해 생산된 무혈청 배양에서의 형질전환된 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 생산된 재조합 IL-22 이량체화된 단백질이다. IL-22 이량체는, 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 정보를 포함하는 미국 특허 US8945528에 기재되어 있다. 본원에 사용된 IL-22 이량체 형성 폴리펩티드는 다양한 공급원으로부터, 예컨대 인간 조직 유형으로부터 또는 또 다른 공급원으로부터 단리되거나, 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 이뮤노글로불린 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)의 Fc 단편, 또는 알부민 (예를 들어, 인간 알부민)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 담체 단백질을 포함한다. IL-22 단량체는 담체 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 국재화될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 담체 단백질을 포함하지 않는다. 도 1-3B는 본 발명의 IL-22 이량체의 대표적인 구조를 예시한다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 화학식 I: M1-L-M2를 포함하고; 여기서 M1은 제1 IL-22 단량체이고, M2는 제2 IL-22 단량체이고, L은 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체를 연결하고 그 사이에 배치된 연결 모이어티이다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 상이하다.
일부 실시양태에서, 연결 모이어티 L은 약 3 내지 약 50개의 아미노산을 포함하는 짧은 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, L은 링커 (예를 들어, 펩티드 링커), 예컨대 본원에 기재된 임의의 링커이다. 일부 실시양태에서, L은 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함하는 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진) 펩티드 링커이다. 일부 실시양태에서, L은 약 3 내지 약 50개의 아미노산 길이의 펩티드 링커이다. 일부 실시양태에서, L은 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이의 펩티드 링커이다. 일부 실시양태에서, L은 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함하는 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진) 펩티드 링커이다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 상이하다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 서열식별번호: 28의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 예시적인 IL-22 이량체에 대해서는 도 1을 참조한다.
일부 실시양태에서, 연결 모이어티 L은 화학식 II: -Z-Y-Z-의 폴리펩티드이고; 여기서 Y는 담체 단백질이고; Z는 없거나, 약 1 내지 약 50개의 아미노산을 포함하는 짧은 펩티드이고; "-"는 화학 결합 또는 공유 결합이다. 일부 실시양태에서, "-"는 펩티드 결합이다. 일부 실시양태에서, Z는 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, Z는 약 1 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, Z는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, Z는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, Z는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 약 2개 (예컨대 2, 3, 4개, 또는 그 초과)의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 IL-22 단량체에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 IL-22 단량체에 대해 C-말단이다. 일부 실시양태에서, 둘 다의 IL-22 단량체는 담체 단백질에 대해 N-말단이다. 예로서 도 2A를 참조한다. 일부 실시양태에서, 둘 다의 IL-22 단량체는 담체 단백질에 대해 C-말단이다. 예로서 도 3A를 참조한다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 알부민 (예를 들어, 인간 알부민) 또는 이뮤노글로불린 (예컨대 IgG, 예를 들어, 인간 IgG)의 Fc 단편이다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 1개 이상의 디술피드 결합을 통한 2개의 이량체화 도메인 (예를 들어, 2개의 Fc 단편)의 연결에 의해 형성된다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 상이하다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결된다. 따라서 일부 실시양태에서, IL-22는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체, 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편), 및 임의로 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 연결하는 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)은 분자간 디술피드 결합 (예를 들어, 2, 3, 4개, 또는 그 초과의 디술피드 결합)을 형성할 수 있는 적어도 2개 (예컨대 2, 3, 4개, 또는 그 초과)의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 인간 이뮤노글로불린 (예컨대 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 단편을 포함하고, 임의적 링커는 IL-22 단량체 및 Fc 단편을 연결하는 펩티드 링커이고, IL-22 이량체는 1개 이상의 디술피드 결합(들)을 통한 2개의 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)의 연결에 의해 형성된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 N-말단이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인에 대해 C-말단이다. 따라서 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 제1 단량체성 서브유닛은 N'에서 C'로 제1 IL-22 단량체, 제1 임의적 링커, 제1 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)을 포함하고; 여기서 제2 단량체성 서브유닛은 N'에서 C'로 제2 IL-22 단량체, 제2 임의적 링커, 제2 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)을 포함하고; 여기서 제1 단량체성 서브유닛 및 제2 단량체성 서브유닛은 각각의 이량체화 도메인의 2개 이상 (예컨대 2, 3, 4개, 또는 그 초과)의 시스테인에 의해 형성된 분자간 디술피드 결합 (예를 들어, 2, 3, 4개, 또는 그 초과의 디술피드 결합)을 통해 연결된다. 예로서 도 2B를 참조한다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 제1 단량체성 서브유닛은 N'에서 C'로 제1 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편), 제1 임의적 링커, 제1 IL-22 단량체를 포함하고; 여기서 제2 단량체성 서브유닛은 N'에서 C'로 제2 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편), 제2 임의적 링커, 제2 IL-22 단량체를 포함하고; 여기서 제1 단량체성 서브유닛 및 제2 단량체성 서브유닛은 각각의 이량체화 도메인의 2개 이상 (예컨대 2, 3, 4개, 또는 그 초과)의 시스테인에 의해 형성된 분자간 디술피드 결합 (예를 들어, 2, 3, 4개, 또는 그 초과의 디술피드 결합)을 통해 연결된다. 예로서 도 3B를 참조한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 임의적 링커는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 임의적 링커는 상이하다. 일부 실시양태에서, 2개의 단량체성 서브유닛 중 하나는 링커를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 어느 단량체성 서브유닛도 링커를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 둘 다의 단량체성 서브유닛은 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 제2 IL-22 단량체는 상이하다. 일부 실시양태에서, 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인은 동일하다 (예를 들어, 둘 다는 IgG2 Fc이다). 일부 실시양태에서, 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인은 상이하다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 류신 지퍼를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4의 Fc 단편)의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 IgG2, 예컨대 인간 IgG2로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 링커는 약 1 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 1 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다).
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인의 N-말단에 융합된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 이량체화 도메인의 C-말단에 융합된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체 및 이량체화 도메인은 임의적 펩티드 링커 (예를 들어, 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이의 펩티드 링커, 예컨대 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함하는 링커)를 통해 연결된다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 류신 지퍼를 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 IL-22 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 IL-22 단량체 및 이뮤노글로불린 Fc 단편 ("Fc 단편")의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 Fc 단편의 N-말단에 융합된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 Fc 단편의 C-말단에 융합된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체 및 Fc 단편은 임의적 펩티드 링커 (예컨대 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이의 펩티드 링커, 예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함하는 링커)를 통해 연결된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, Fc 단편은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 N-말단에서 말단절단되며, 예를 들어, 완전한 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 최초 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산을 결여한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 유형 IgG2의 것이다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 유형 IgG4의 것이다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 23의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다).
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 여기서 각각의 단량체성 서브유닛은 서열식별번호: 24-27 중 어느 것의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다).
예시적인 IL-22 이량체의 아미노산 서열은 서열식별번호: 28에 제시되고, 여기서 아미노산 잔기 1-146은 제1 IL-22 단량체를 나타내고, 아미노산 잔기 147-162는 링커를 나타내고, 아미노산 잔기 163-308은 제2 IL-22 단량체를 나타낸다. 예로서 도 1을 참조한다.
예시적인 IL-22 이량체를 형성하는데 사용된 IL-22 단량체, 링커, 및 Fc 단편을 포함하는 예시적인 단량체성 서브유닛의 아미노산 서열은 서열식별번호: 24에 제시되고, 여기서 아미노산 잔기 1-146은 IL-22 단량체를 나타내고, 아미노산 잔기 147-162는 링커를 나타내고, 아미노산 잔기 163-385는 인간 IgG2의 Fc 단편을 나타낸다. IL-22 이량체는 Fc 단편의 커플링을 통해 2개의 단량체성 서브유닛에 의해 형성된다. 예로서 도 2B를 참조한다.
예시적인 IL-22 이량체를 형성하는데 사용된 IL-22 단량체, 링커, 및 Fc 단편을 포함하는 예시적인 단량체성 서브유닛의 아미노산 서열은 서열식별번호: 26에 제시되고, 여기서 아미노산 잔기 1-146은 IL-22 단량체를 나타내고, 아미노산 잔기 147-152는 링커를 나타내고, 아미노산 잔기 153-375는 인간 IgG2의 Fc 단편을 나타낸다. IL-22 이량체는 Fc 단편의 커플링을 통해 2개의 단량체성 서브유닛에 의해 형성된다. 예로서 도 2B를 참조한다.
예시적인 IL-22 이량체를 형성하는데 사용된 IL-22 단량체, 링커, 및 Fc 단편을 포함하는 예시적인 단량체성 서브유닛의 아미노산 서열은 서열식별번호: 25에 제시되고, 여기서 아미노산 잔기 1-223은 인간 IgG2의 Fc 단편을 나타내고, 아미노산 잔기 224-239는 링커를 나타내고, 아미노산 잔기 240-385는 IL-22 단량체를 나타낸다. IL-22 이량체는 Fc 단편의 커플링을 통해 2개의 단량체성 서브유닛에 의해 형성된다. 예로서 도 3B를 참조한다.
예시적인 IL-22 이량체를 형성하는데 사용된 IL-22 단량체, 링커, 및 Fc 단편을 포함하는 예시적인 단량체성 서브유닛의 아미노산 서열은 서열식별번호: 27에 제시되고, 여기서 아미노산 잔기 1-223은 인간 IgG2의 Fc 단편을 나타내고, 아미노산 잔기 224-229는 링커를 나타내고, 아미노산 잔기 230-375는 IL-22 단량체를 나타낸다. IL-22 이량체는 Fc 단편의 커플링을 통해 2개의 단량체성 서브유닛에 의해 형성된다. 예로서 도 3B를 참조한다.
일부 실시양태에서, IL-22 단량체 및/또는 IL-22 이량체의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 아미노산 서열은 IL-22 이량체 (또는 그의 단량체성 서브유닛)의 N-말단 또는 C-말단에 첨가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 부가된 아미노산 서열은 발현 (예를 들어 신호 펩티드, 예컨대 서열식별번호: 30), 정제 (예를 들어, 6xHis 서열, 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae) α-메이팅 인자 분비 신호 리더 (Glu-Lys-Arg; 서열식별번호: 33)의 절단 부위), 또는 IL-22 이량체의 생물학적 활성의 증진에 유익하다.
본 발명은 그들의 특성에 유의하게 영향을 미치지 않는 기능적으로 등가의 변형을 포함하는 본원에 기재된 폴리펩티드에 대한 변형 및 증진된 또는 감소된 활성을 갖는 변이체를 포괄한다. 폴리펩티드의 변형은 관련 기술분야에서 통상적인 실시이며, 본원에서 상세하게 설명될 필요가 없다. 변형된 폴리펩티드의 예는 아미노산 잔기의 보존적 치환, 기능적 활성을 유의하게 유해하게 변화시키지 않는 아미노산의 1개 이상의 결실 또는 부가, 기능적 활성을 유의하게 유해하게 변화시키지 않는 비-보존적 돌연변이를 갖는 폴리펩티드, 또는 화학적 유사체의 사용을 포함한다.
아미노산 서열 삽입은 길이로 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드의 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합물, 뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기 또는 에피토프 태그를 포함한다. IL-22 단량체성 서브유닛의 다른 삽입적 변이체는 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에의 융합물, 또는 IL-22 이량체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드를 포함한다.
20개의 아미노산은 단백질에서 통상적으로 발견된다. 그들 아미노산은 그들의 측쇄의 화학적 특성에 기반하여 9개의 부류 또는 그룹으로 그룹핑될 수 있다. 한 아미노산 잔기의 동일한 부류 또는 그룹 내의 또 다른 것에 대한 치환은 본원에서 "보존적" 치환으로 지칭된다. 보존적 아미노산 치환은 단백질의 형태 또는 기능을 유의하게 변경시키지 않으면서 단백질에 빈번히 이루어질 수 있다. 대조적으로, 비-보존적 아미노산 치환은 단백질의 형태 및 기능을 파괴하는 경향이 있다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에서 정의되었다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 표 B를 참조한다.
표 B. 아미노산 분류의 예
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 보존적 아미노산 치환은 임의의 글리신 (G), 알라닌 (A), 이소류신 (I), 발린 (V), 및 류신 (L)을 이들 지방족 아미노산 중 임의의 다른 것에 대해; 세린 (S)을 트레오닌 (T)에 대해 (및 그 역도 마찬가지임); 아스파르트산 (D)을 글루탐산 (E)에 대해 (및 그 역도 마찬가지임); 글루타민 (Q)을 아스파라긴 (N)에 대해 (및 그 역도 마찬가지임); 리신 (K)을 아르기닌 (R)에 대해 (및 그 역도 마찬가지임); 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y) 및 트립토판 (W)을 이들 방향족 아미노산 중 임의의 다른 것에 대해; 및 메티오닌 (M)을 시스테인 (C)에 대해 (및 그 역도 마찬가지임) 치환하는 것을 포함한다. 다른 치환은 또한 특정 아미노산의 환경 및 단백질의 3차원 구조에 있어서의 그의 역할에 따라 보존적인 것으로 간주될 수 있다. 예를 들어, 글리신 (G) 및 알라닌 (A)은 알라닌 (A) 및 발린 (V)이 그러할 수 있듯이 빈번히 상호교환가능할 수 있다. 상대적으로 소수성인 메티오닌 (M)은 류신 및 이소류신과, 및 때때로 발린과 빈번히 상호교환될 수 있다. 리신 (K) 및 아르기닌 (R)은 아미노산 잔기의 유의한 특색이 그의 전하이고, 이들 2개의 아미노산 잔기의 상이한 pK가 유의하지 않은 위치에서 빈번히 상호교환가능하다. 추가의 다른 변화는 특정 환경에서 "보존적"인 것으로 간주될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Biochemistry at pp. 13-15, 2nd ed. Lubert Stryer ed. (Stanford University)]; [Henikoff et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA (1992) 89:10915-10919]; [Lei et al., J. Biol. Chem. (1995) 270(20):11882-11886] 참조).
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체는 시험관내 세포 증식 검정에서 약 20 ng/mL 이상 (예를 들어 약 임의의 100 ng/mL, 200 ng/mL, 300 ng/mL, 400 ng/mL, 또는 그 초과 이상을 포함함)의 EC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 시험관내 세포 증식 검정에서 야생형 IL-22 단량체 (예를 들어 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 IL-22 단량체)의 그것의 적어도 약 5x (예를 들어 적어도 약 10x, 30x, 50x, 100x, 150x, 300x, 400x, 500x, 600x, 1000x 또는 그 초과를 포함함)인 EC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 시험관내 STAT3 자극 검정에서 약 10 ng/mL 이상 (예를 들어 약 임의의 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL, 300 ng/mL, 400 ng/mL, 또는 그 초과 이상을 포함함)의 EC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 시험관내 STAT3 자극 검정에서 야생형 IL-22 단량체 (예를 들어 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 IL-22 단량체)의 그것의 적어도 약 10x (예를 들어 적어도 약 50x, 100x, 200x, 300x, 400x, 500x, 600x, 700x, 800x, 900x, 1000x, 1500x, 또는 그 초과를 포함함)인 EC50을 갖는다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 IL-22의 그것보다 유의하게 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 약 임의의 15, 30, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 또는 350시간의 혈청 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 용량은 약 2 μg/kg인 반면, 혈청 반감기는 적어도 약 임의의 15, 30, 50, 100, 150, 또는 200시간이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 용량은 약 10 μg/kg인 반면, 혈청 반감기는 적어도 약 임의의 50, 100, 150, 또는 200시간이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 용량은 약 30 μg/kg인 반면, 혈청 반감기는 적어도 약 임의의 100, 150, 200, 또는 250시간이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 용량은 약 45 μg/kg인 반면, 혈청 반감기는 적어도 약 임의의 100, 150, 200, 250, 300, 또는 350시간이다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 IL-22의 생물학적 활성을 보유하고, 제1 및/또는 제2 IL-22 단량체의 그것에 비해 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 혈청 반감기는 제1 및/또는 제2 IL-22 단량체의 그것보다 적어도 약 임의의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10배 더 길다.
IL-22 단량체
인터류킨-22 (IL-22), 일명 IL-10 관련 T 세포-유래 유도성 인자 (IL-TIF)는 α-나선 시토카인이다. 이는 세포성 염증성 반응을 매개하는 IL-10 패밀리 또는 IL-10 슈퍼패밀리 (IL-19, IL-20, IL-24, 및 IL-26을 포함함)로 지칭되는 시토카인의 그룹에 속한다. IL-22는 면역 세포의 몇몇 집단, 예컨대 활성화된 T 세포 (주로 CD4+ 세포, 특히 CD28 경로 활성화된 Th1 세포, Th17 세포, 및 Th22 세포 등), IL-2/IL-12 자극된 자연 킬러 세포 (NK 세포; Wolk et al., J. Immunology, 168:5379-5402, 2002), NK-T 세포, 호중구, 및 대식세포에 의해 생산된다. 인간 IL-22 mRNA는 주로 항-CD3 항체 또는 콘카나빌린 A (Con A)에 의한 자극시 말초 T 세포에서 발현된다. IL-22는 또한 지질다당류 (LPS) 자극시 IL-22 발현의 증가가 측정될 수 있는 장, 간, 위, 신장, 폐, 심장, 흉선, 및 비장을 포함하는 다수의 기관 및 조직에서 발현될 수 있다 (Dumoutier et al., PNAS. 2000). IL-22는 IL-10R2 및 IL-22R1 서브유닛으로 구성된 이종이량체성 세포 표면 수용체에 결합한다. IL-22R1은 IL-22에 특이적이며, 대부분 비-조혈 세포, 예컨대 간, 폐, 피부, 흉선, 췌장, 신장, 위장관, 활액 조직, 심장, 유방, 눈, 및 지방 조직의 상피 및 기질 세포 상에 발현된다. IL-22R1/IL-10R2 수용체 이종이량체에의 IL-22의 결합은 세포내 키나제 (JAK1, Tyk2, 및 MAP 키나제) 및 전사 인자, 특히 STAT3을 활성화시킨다.
천연 인간 IL-22 전구체 폴리펩티드는 179개의 아미노산 잔기 (서열식별번호: 31)로 이루어지는 반면, 성숙 폴리펩티드는 146개의 아미노산 잔기 (서열식별번호: 21)로 이루어진다. 인간 IL-22 신호 펩티드는 서열식별번호: 30의 서열을 포함한다. 듀마우티어(Dumoutier) 등은 마우스 및 인간의 클로닝된 IL-22 DNA 서열을 최초로 보고하였다 (Dumoutier et al., Genes Immun. 2000; 미국 특허 번호 6,359,117, 및 미국 특허 번호 6,274,710). 예시적인 IL-22 폴리펩티드 서열은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 번호 US2003/0100076, 미국 특허 번호 7,226,591, 및 미국 특허 번호 6,359,117에 기재되어 있다.
용어 "IL-22 폴리펩티드", "IL-22", "IL-22 분자", 및 "IL-22 단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본원에 사용된 용어 "IL-22 단량체"는 IL-22 단백질의 하나의 유닛을 지칭한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 전장 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 전장 IL-22의 대부분 또는 전체 생물학적 활성을 생성할 수 있는 IL-22 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 전구체 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 성숙 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 야생형 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 돌연변이체 또는 변이체 IL-22, 예컨대 야생형 IL-22의 대부분 또는 전체 생물학적 활성을 생성할 수 있는 돌연변이체 또는 변이체 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 변형된 IL-22, 예컨대 페길화 IL-22 및 공유 변형된 IL-22 단백질이다. 본원에 기재된 IL-22 단량체는 다양한 공급원으로부터, 예컨대 인간 조직 유형으로부터 또는 또 다른 공급원으로부터 단리되거나, 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조된 IL-22일 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 재조합 IL-22이다. 본원에 기재된 IL-22 단량체는 임의의 유기체, 예컨대 가축 동물 (예를 들어, 소, 양, 염소, 고양이, 개, 당나귀, 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스, 래트, 거빌, 및 햄스터)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물로부터 유래된 IL-22일 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 인간 IL-22 (hIL-22), 예컨대 재조합 인간 IL-22 (rhIL-22)이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 뮤린 IL-22 (mIL-22), 예컨대 재조합 뮤린 IL-22 (rmIL-22)이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 성숙 인간 IL-22이다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 IL-22 단백질의 N-말단에 신호 펩티드, 예컨대 서열식별번호: 30의 서열을 포함하는 신호 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 서열식별번호: 31의 서열을 포함하는 전구체 인간 IL-22이다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체를 형성하는 2개의 IL-22 단량체는 동일하다 (예를 들어, 둘 다는 서열식별번호: 21의 서열을 포함한다). 일부 실시양태에서, IL-22 이량체를 형성하는 2개의 IL-22 단량체는 상이하며, 예를 들어, 하나의 IL-22 단량체는 야생형 인간 IL-22이고, 하나의 IL-22 단량체는 돌연변이된 인간 IL-22이다.
담체 단백질 및 이량체화 도메인
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2개의 IL-22 단량체 및 담체 단백질을 포함한다. 본원에 기재된 담체 단백질은 이뮤노글로불린 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)의 Fc 단편, 또는 알부민 (예를 들어, 인간 혈청 알부민)을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 2개의 IL-22 단량체를 연결하여 IL-22 이량체를 형성하는데 적합한 임의의 단백질일 수 있다. 담체 단백질이 (예를 들어, 디술피드 결합, 펩티드 연결, 또는 화학 연결을 통한) 2개의 단백질 서브유닛의 연결에 의해 형성되는 경우, 각각의 단백질 서브유닛은 이량체화 도메인으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 1개 이상의 디술피드 결합을 통한 2개의 이량체화 도메인 (예를 들어, IgG의 2개의 Fc 단편)의 연결에 의해 형성된다. 일부 실시양태에서, 담체 단백질을 형성하는 2개의 이량체화 도메인은 동일하다 (예를 들어, 2개의 IgG2 Fc 단편). 일부 실시양태에서, 담체 단백질을 형성하는 2개의 이량체화 도메인은 상이하다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 담체 단백질은 1개 이상의 디술피드 결합을 통한 제1 Fc 단편 및 제2 상이한 Fc 단편의 연결에 의해 형성된다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편)은 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2개의 이량체화 도메인 (예를 들어, Fc 단편) 사이에 약 2 내지 약 4개의 디술피드 결합이 있다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 류신 지퍼를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 임의의 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 및 그의 하위유형의 Fc 단편으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 인간 IgG2의 Fc 단편으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 인간 IgG4의 Fc 단편으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 야생형 Fc 단편이다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 이펙터 기능을 감소시키거나 없애는, 예를 들어 감소된 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 또는 FcγR에의 감소된 결합인 1개 이상의 돌연변이, 예컨대 Fc 단편에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 P107S 돌연변이를 포함하는 IgG2 Fc 단편이다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 전장 Fc 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 이량체화 동안 디술피드 결합 쌍형성 오류를 감소시키기 위해 N-말단 말단절단된 Fc 단편, 예컨대 더 적은 N-말단 시스테인을 갖는 말단절단된 Fc 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 N-말단에서 말단절단되며, 예를 들어, 완전한 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 최초 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산을 결여한다. 일부 실시양태에서, 이량체화 도메인은 N-말단 "ERKCC" 서열 (서열식별번호: 29)이 제거된 IgG2 Fc 단편이다. 일부 실시양태에서, Fc 단편은 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다).
링커
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 임의적 링커 (예를 들어, 펩티드 링커, 비-펩티드 링커)를 통해 서로에 연결된 2개의 IL-22 단량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체는 임의적 링커 (예를 들어, 펩티드 링커, 비-펩티드 링커)를 통해 담체 단백질 (예를 들어, 알부민, 또는 이량체화 도메인, 예컨대 Fc 단편)에 연결된다. 일부 실시양태에서, 둘 다의 IL-22 단량체는 링커를 통해 담체 단백질에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체는 링커를 통해 담체 단백질에 연결되고, 제2 IL-22 단량체는 링커 없이 담체 단백질에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 담체 단백질 (또는 제1 이량체화 도메인)을 연결하는 제1 링커 및 제2 IL-22 단량체 및 담체 단백질 (또는 제2 이량체화 도메인)을 연결하는 제2 링커는 동일하다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체 및 담체 단백질 (또는 제1 이량체화 도메인)을 연결하는 제1 링커 및 제2 IL-22 단량체 및 담체 단백질 (또는 제2 이량체화 도메인)을 연결하는 제2 링커는 상이하다. 일바적으로, 링커는 2개의 IL-22 단량체의 배치에 의해 형성되는 적절한 폴드 및 형태에 영향을 미치거나 유의하게 영향을 미치지 않는다.
링커는 임의의 길이의 펩티드 링커일 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 약 1개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 15개의 아미노산 길이, 약 3개의 아미노산 내지 약 12개의 아미노산 길이, 약 4개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산 길이, 약 5개의 아미노산 내지 약 9개의 아미노산 길이, 약 6개의 아미노산 내지 약 8개의 아미노산 길이, 약 1개의 아미노산 내지 약 20개의 아미노산 길이, 약 21개의 아미노산 내지 약 30개의 아미노산 길이, 약 1개의 아미노산 내지 약 30개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 20개의 아미노산 길이, 약 10개의 아미노산 내지 약 30개의 아미노산 길이, 약 3개의 아미노산 내지 약 50개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 19개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 18개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 17개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 16개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 14개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 13개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 12개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 11개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 9개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 8개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 7개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 6개의 아미노산 길이, 약 2개의 아미노산 내지 약 5개의 아미노산 길이, 또는 약 6개의 아미노산 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 약 임의의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 약 임의의 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 약 임의의 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50개의 아미노산 길이이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 링커는 약 1 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 6개의 아미노산 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 약 16개의 아미노산 길이이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 링커의 N-말단은 IL-22 단량체의 C-말단에 공유 연결되고, 펩티드 링커의 C-말단은 담체 단백질 (또는 이량체화 도메인의 N-말단)에 공유 연결된다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커의 C-말단은 IL-22 단량체의 N-말단에 공유 연결되고, 펩티드 링커의 N-말단은 담체 단백질 (또는 이량체화 도메인의 C-말단)에 공유 연결된다.
펩티드 링커는 천연 발생 서열 또는 비-천연 발생 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 중쇄 단독 항체의 힌지 영역으로부터 유래된 서열은 링커로서 사용될 수 있다. 예를 들어, WO1996/34103을 참조한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 힌지이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 돌연변이된 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 힌지이다. 일부 실시양태에서, 링커는 유연성 링커이다. 예시적인 유연성 링커는 글리신 중합체 (G)n (서열식별번호: 6), 글리신-세린 중합체 (예를 들어, (GS)n (서열식별번호: 7), (GSGGS)n (서열식별번호: 8), (GGGS)n (서열식별번호: 9), 또는 (GGGGS)n (서열식별번호: 11)을 포함함, 여기서 n은 적어도 1의 정수임), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 유연성 링커를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 글리신 및 글리신-세린 중합체는 상대적으로 비구조화되며, 따라서 성분 사이의 중성 결박제로서 역할을 할 수 있다. 글리신은 심지어 알라닌보다 유의하게 더 많은 파이-프사이 공간에 접근하며, 보다 긴 측쇄를 갖는 잔기보다 훨씬 덜 제한된다 (문헌 [Scheraga, Rev. Computational Chem. 11 173-142 (1992)] 참조). 예시적인 유연성 링커는 Gly-Gly (서열식별번호: 12), Gly-Gly-Ser-Gly (서열식별번호: 13), Gly-Gly-Ser-Gly-Gly (서열식별번호: 14), Gly-Ser-Gly-Ser-Gly (서열식별번호: 15), Gly-Ser-Gly-Gly-Gly (서열식별번호: 16), Gly-Gly-Gly-Ser-Gly (서열식별번호: 17), Gly-Ser-Ser-Ser-Gly (서열식별번호: 18), Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Ser (서열식별번호: 2), Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (서열식별번호: 3), Gly-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly- Ala-Gly-Gly-Gly-Gly (서열식별번호: 4), Gly-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly (서열식별번호: 5), GGGGSGGGGSGGGGS (서열식별번호: 19), GGGGS (서열식별번호: 20) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 링커는 ASTKGP (서열식별번호: 10)의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 일부 실시양태에서, 링커는 GSGGGSGGGGSGGGGS (서열식별번호: 1)의 서열을 포함한다 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다). 통상의 기술자는 IL-22 이량체의 디자인이, 링커가 유연성 링커 부분 뿐만 아니라 덜 유연성 구조를 부여하여 목적하는 IL-22 이량체 구조 및 기능을 제공하는 1개 이상의 부분을 포함할 수 있도록, 전부 또는 부분적으로 유연성인 링커를 포함할 수 있음을 인식할 것이다.
일부 실시양태에서, IL-22 단량체 및 담체 단백질 (예를 들어, 이량체화 도메인) 사이의 링커는 안정한 링커 (프로테아제, 특히 MMP에 의해 절단되지 않음)이다.
일부 실시양태에서, 링커는 임의의 (a) 약 3 내지 약 16개의 소수성 아미노산 잔기 Gly 또는 Pro, 예컨대 Gly-Pro-Gly-Pro-Gly-Pro (서열식별번호: 32)를 포함하는 (또는 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진) 아미노산 서열; (b) 다중 클로닝 부위 (MCS), 통상적으로 약 5 내지 약 20개의 아미노산 잔기의 길이, 또는 약 10 내지 약 20개의 아미노산 잔기의 길이에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (c) IL-22 단량체 이외의 폴리펩티드의 아미노산 서열, 예컨대 IgG 또는 알부민의 아미노산 서열; 및 (d) (a), (b), 및 (c)의 임의의 조합을 포함하는 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 링커 중 어느 하나 또는 전부는 성분 또는 단편이 그들의 각각의 활성, 즉, IL-22 수용체에의 결합, FcR에의 결합, 또는 ADCC를 보유하는 한, 2개의 IL-22 단량체 또는 IL-22 단량체 및 담체 단백질 (또는 이량체화 도메인)에 결합할 임의의 화학 반응에 의해 달성될 수 있다. 이 연결은 많은 화학적 메커니즘, 예를 들어 공유 결합, 친화도 결합, 개재, 배위 결합 및 복합체화를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합은 공유 결합이다. 공유 결합은 기존의 측쇄의 직접적 축합에 의해 또는 외부 가교 분자의 혼입에 의해 달성될 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결제는 단백질 분자, 예컨대 Fc 단편을 본 발명의 IL-22 단량체에커플링시키는데 유용하다. 예를 들어, 대표적인 커플링제는 유기 화합물, 예컨대 티오에스테르, 카르보디이미드, 숙신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민을 포함할 수 있다. 이 목록은 관련 기술분야에 공지된 다양한 부류의 커플링제의 철저한 것인 것으로 의도되지 않으며, 오히려, 보다 통상적인 커플링제의 예시이다 (문헌 [Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)]; [Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982)]; 및 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)] 참조).
본 출원에 적용될 수 있는 링커는 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, MBS (M-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르)의 사용을 기재하는 문헌 [Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)] 참조). 일부 실시양태에서, 본원에 사용되는 비-펩티드 링커는 (i) EDC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드; (ii) SMPT (4-숙신이미딜옥시카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)-톨루엔 (피어스 켐. 캄파니(Pierce Chem. Co.), Cat. (21558G); (iii) SPDP (숙신이미딜-6 [3-(2-피리딜디티오) 프로피온아미도] 헥사노에이트 (피어스 켐. 캄파니, Cat #21651G); (iv) 술포-LC-SPDP (술포숙신이미딜 6 [3-(2-피리딜디티오)-프로피온아미드] 헥사노에이트 (피어스 켐. 캄파니 Cat. #2165-G); 및 (v) EDC에 접합된 술포-NHS (N-히드록시술포-숙신이미드: 피어스 켐. 캄파니, Cat. #24510)를 포함한다.
상기 기재된 링커는 상이한 속성을 갖고, 따라서 상이한 물리-화학적 특성을 갖는 IL-22 이량체를 초래하는 성분을 함유할 수 있다. 예를 들어, 알킬 카르복실레이트의 술포-NHS 에스테르는 방향족 카르복실레이트의 술포-NHS 에스테르보다 더 안정하다. NHS-에스테르 함유 링커는 술포-NHS 에스테르보다 덜 가용성이다. 또한, 링커 SMPT는 입체 장해된 디술피드 결합을 함유하며, 증가된 안정성을 갖는 융합 단백질을 형성할 수 있다. 디술피드 연결은 일반적으로 다른 연결보다 덜 안정한데, 이는 디술피드 연결이 시험관내에서 절단되어, 이용가능한 더 적은 융합 단백질을 발생시키기 때문이다. 술포-NHS는 특히 카르보디이미드 커플링의 안정성을 증진시킬 수 있다. 카르보드이미드 커플링 (예컨대 EDC)은 술포-NHS와 함께 사용되는 경우, 카르보드이미드 커플링 반응 단독보다 가수분해에 더 저항성인 에스테르를 형성한다.
다른 링커 고려사항은 생성된 IL-22 이량체의 물리적 또는 약동학적 특성, 예컨대 용해도, 친지질성, 친수성, 소수성, 안정성 (다소 안정한 뿐만 아니라 계획된 분해), 강성, 유연성, 면역원성, IL-22/IL-22 수용체 결합의 조정, 미셀 또는 리포솜 내로 혼입되는 능력 등에 대한 효과를 포함한다.
생물학적 활성
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체의 생물학적 활성은 (a) 생체내에서 아밀라제, 리파제, TG, AST, 및/또는 ALT의 수준을 감소시키는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 감소시키는 것; (b) 생체내에서 예컨대 바이러스 감염에 의해 유발된 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간) 손상 또는 부전 (예를 들어, 폐 섬유증)을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것; (c) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 세포 괴사, 예컨대 감염된 및/또는 비-감염된 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)에서의 괴사를 제어하고/거나, 감소시키고/거나, 억제하는 것 (예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 세포 괴사를 감소시키는 것); (d) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 조직 및/또는 기관 (감염된 또는 비-감염된)에서의 염증성 세포 (예를 들어, NK 세포, CTL, 호중구, 단핵구, 대식세포)의 침윤을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 염증성 세포 침윤을 감소시키는 것; (e) 감염된 또는 비-감염된 조직 및/또는 기관에서 염증, 전신성 염증, 및/또는 시토카인 폭풍을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것, 예를 들어, 염증성 마커, 예컨대 IL-6, IL-8, IL-10, IL1B, IL-12, IL-15, IL-17, CCL2, IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, CCL4, M-CSF, MCP-1, GCSF, MIP1A, CRP, TNFα, TNFβ, IFNγ, IP10, 및 MCP1의 혈청 수준을 변화시키는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 하향조절하는 것, 또는 염증유발성 경로, 예컨대 TLR4 신호전달을 하향-조절하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 하향조절하는 것); (f) 조직 및/또는 기관 재생을 촉진시키는 것, 예컨대 재생 마커, 예컨대 ANGPT2, FGF-b, PDGF-AA, Reg3A, 및 PDGF-BB를 상향조절하는 것 (예를 들어, 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 상향조절하는 것); (g) 추가의 요법, 예컨대 항바이러스 약물에 의해 촉발된 유해 효과 (예를 들어, 손상)로부터 조직 및/또는 기관 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간)을 보호하는 것; (h) 호흡계 (예를 들어, 폐)와 연관된 바이러스 감염에 대한 ARDS 점수를 감소시키는 것; (i) 패혈증, SIRS, 패혈성 쇼크, 및/또는 MODS를 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것; (j) 바이러스 감염과 연관된 사망률을 감소시키고/거나, 사망을 예방하는 것, 예컨대 적어도 약 10% (예를 들어 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%를 포함함) 사망률을 감소시키는 것; (k) 개체에서 급성 생리학 및 만성 건강 평가 II (APACHE II) 점수 또는 KNAUS 점수 (MODS에 대해)를 감소시키는 것; (l) 기관 기능 시험 점수 (예를 들어, 폐 기능 시험 점수)를 개선시키는 것; (m) 바이러스 감염과 연관된 대사성 질환, 지방간, 간염, 패혈증, MODS, 신경학적 장애, 및 췌장염을 치료하거나 예방하는 것; (n) NIAID 8-포인트 순위 스케일에서 포인트를 증가시키는 것 (예를 들어, 2-포인트 이상 증가); (o) 재원 기간을 감소시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120, 180일, 또는 그 초과의 일의 재원을 감소시키는 것); (p) 살아 있는 및 호흡 부전 없는 날을 증가시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120, 180일, 또는 그 초과의 일을 증가시키는 것); (q) 중증/위독 질환으로의 진행을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 중증 진행을 감소시키거나 예방하는 것); (r) 임의의 새로운 감염의 발생을 제어하고/거나, 감소시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 새로운 감염을 감소시키거나 예방하는 것); (s) 내피 (예를 들어, 폐 내피) 기능이상, 손상, 또는 사멸을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 내피 기능이상, 손상, 또는 사멸을 감소시키거나 예방하는 것); (t) 예컨대 세포외 프로테이나제 (예를 들어, MMP) 발현을 하향-조절함 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 하향-조절함) 및/또는 세포외 매트릭스 단백질 발현 (예를 들어, Tnc, 콜라겐, 유형 I, COL1a1, 콜라겐, 유형 VI, Col6a3, 및 콜라겐, 유형 I, Col1a2)을 상향-조절함 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 상향-조절함)으로써, EGX, 내피 세포 표면 단백질, 및/또는 내피 세포 사이의 접착 연접의 손상 및/또는 분해를 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 감소시키거나 예방하는 것); (u) 단백질 누출을 제어하고/거나, 개선시키고/거나, 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과 감소시키거나 예방하는 것); (v) EGX 및/또는 내피 (예를 들어, 폐 내피) 세포의 재생을 촉진시키는 것, 예컨대 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과의 기능적 EGX 및/또는 내피 세포를 증가시키는 것; (w) 감염된 조직 및/또는 기관에서의 바이러스 로드를 감소시키는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과); 및 (x) 기관 (예를 들어, 폐) 콜라겐 침착을 감소시키거나 예방하는 것 (예를 들어, 적어도 약 임의의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과) 중 하나 이상으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 상기 바이러스 감염의 IL-22 이량체 치료는 상기 바이러스 병원체에 의해 유발된 시토카인 폭풍을 제어하고/거나, 약화시키고/거나, 억제한다. 일부 실시양태에서, 상기 치료는 상기 바이러스 감염, 또는 상기 바이러스 감염으로부터 발생하거나 그와 연관된 상기 대상체 또는 상기 대상체의 기관 또는 조직에 대한 손상의 적어도 하나의 증상의 악화를 예방하고/거나, 이를 정지시키고/거나, 개선시킨다. 상기 바이러스 감염으로부터 발생하거나 그와 연관된 증상 또는 손상은 위장 증상, 예컨대 설사, 열 (예를 들어, >38℃의 체온), 신장 부전, 심장 부전, 간 부전, 호흡기 증상, 예컨대 기침, 폐 섬유증, 폐렴, 숨참, 호흡 곤란, 호흡 부전, 쇼크, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 전신성 염증성 반응 증후군 (SIRS), 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS), 저혈압, 빈맥, 호흡곤란, 허혈, 과소 조직 관류 (특히 주요 기관, 예컨대 심장, 간, 폐, 신장을 포함함), 비제어가능한 출혈, 다계통 기관 부전 (주로 저산소증 또는 조직 산증으로 인한) 또는 중증 대사 조절이상일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체 치료는 상기 바이러스-감염된 대상체의 사망을 예방한다.
IL-22 이량체의 투여량 레지멘 및 투여의 경로
본원에 기재된 IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)는 바이러스-감염된 대상체에서 질환 또는 장애 (예를 들어, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전)를 치료하는, 예컨대 목적하는 치료 효과 또는 본원에 기재된 생물학적 기능 중 하나 이상을 달성하는 유효량으로 투여된다.
본원에 기재된 IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)의 적합한 투여량은 예를 들어 약 2 μg/kg 내지 약 100 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg, 약 5 μg/kg 내지 약 50 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 30 μg/kg, 약 30 내지 약 45 μg/kg, 또는 약 30 내지 약 40 μg/kg을 포함하는, 예를 들어, 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 (예를 들어, 정맥내로) 적어도 약 임의의 0.01 μg/kg, 0.05 μg/kg, 0.1 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 2 μg/kg, 5 μg/kg, 10 μg/kg, 15 μg/kg, 20 μg/kg, 25 μg/kg , 30 μg/kg, 40 μg/kg, 45 μg/kg, 50 μg/kg, 60 μg/kg, 70 μg/kg, 80 μg/kg, 90 μg/kg, 100 μg/kg, 150 μg/kg, 200 μg/kg, 250 μg/kg, 300 μg/kg, 400 μg/kg, 500 μg/kg, 600 μg/kg, 700 μg/kg, 800 μg/kg, 900 μg/kg, 또는 1 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 (예를 들어, 정맥내로) 약 임의의 0.01 μg/kg, 0.05 μg/kg, 0.1 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 2 μg/kg, 5 μg/kg, 10 μg/kg, 15 μg/kg, 20 μg/kg, 25 μg/kg, 30 μg/kg, 40 μg/kg, 45 μg/kg, 50 μg/kg, 60 μg/kg, 70 μg/kg, 80 μg/kg, 90 μg/kg, 100 μg/kg, 150 μg/kg, 200 μg/kg, 250 μg/kg, 300 μg/kg, 400 μg/kg, 500 μg/kg, 600 μg/kg, 700 μg/kg, 800 μg/kg, 900 μg/kg, 또는 1 mg/kg 이하의 용량으로 투여된다. 본원에 기재된 용량은 시노몰구스 원숭이에 대해 적합한 용량, 그의 마우스 등가 용량, 그의 인간 등가 용량, 또는 개체의 특이적 종에 대한 등가 용량을 지칭할 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로 적어도 약 임의의 10 μg/kg, 20 μg/kg, 30 μg/kg, 40 μg/kg, 45 μg/kg, 또는 50 μg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로 약 임의의 10 μg/kg, 20 μg/kg, 30 μg/kg, 40 μg/kg, 45 μg/kg, 또는 50 μg/kg 이하의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 유효량은 약 10 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 15 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 20 μg/kg 내지 약 25 μg/kg, 약 25 μg/kg 내지 약 30 μg/kg, 또는 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 예를 들어 약 30 μg/kg 내지 약 35 μg/kg을 포함하는 약 20 μg/kg 내지 약 40 μg/kg으로 투여된다.
IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)의 유효량은 단일 용량으로 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 다중 용량으로의 IL-22 이량체의 투여를 포함하는 방법에 대해, 예시적인 투약 빈도는 매일, 휴식 없이 매일, 매주, 휴식 없이 매주, 3주 중 2주 동안 매주, 4주 중 3주 동안 매주, 3주마다 1회, 2주마다 1회, 매월, 6개월마다, 매년 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 약 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 6주마다 1회, 또는 8주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주에 약 임의의 1x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 또는 7x (즉, 매일) 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 약 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7년마다 1회 이하 투여된다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 임의의 3년, 2년, 12개월, 11개월, 10개월, 9개월, 8개월, 7개월, 6개월, 5개월, 4개월, 3개월, 2개월, 1개월, 4주, 3주, 2주, 1주, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일, 또는 1일 미만이다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 임의의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 2년, 또는 3년 초과이다. 일부 실시양태에서, 투약 스케줄에서 휴식은 없다.
IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)의 투여는 연장된 기간, 예컨대 1일 내지 약 1주, 약 1주 내지 약 1개월, 약 1개월 내지 약 1년, 약 1년 내지 약 수 년에 걸쳐 연장될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 임의의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 또는 그 초과의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)는 매주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)는 매주 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 24주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12개월마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 단지 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 매주 1회, 매월 1회, 2개월마다 1회, 또는 6개월마다 1회 이하로 빈번하게 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 적어도 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 10-일 치료 사이클의 제1일 및 제6일에 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 14-일 치료 사이클의 제1일 및 제8일에 투여된다.
본원에 기재된 IL-22 이량체 (또는 그의 제약 조성물)는 국소 또는 전신성 치료가 바람직한지 여부 및 치료되는 영역에 따라, 예를 들어 전신성 또는 국소화된 투여를 포함하는, 바이러스-유발 장애 (예를 들어, 폐, 심장, 신장, 간의 손상 또는 부전, 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 MODS)의 특이적 유형을 치료하는데 적합한 다양한 투여의 방식을 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 비경구로 (예를 들어 주사에 의해, 피하로, 복강내로, 정맥내로, 또는 근육내로, 또는 조직의 간질 공간에 전달됨) 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 정맥내로, 예컨대 IV 푸쉬, IV 주입, 또는 연속적 IV 주입을 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 국소로, 예컨대 폐내로 또는 심장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 흡입 또는 통기를 통해, 예컨대 입 또는 코를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 비내로, 흡입에 의해, 예를 들어, 계량된-용량 흡입기, 네뷸라이저, 건조 분말 흡입기, 또는 비내 흡입기를 사용하여 전달된다. 일부 실시양태에서, 투여는 또한 국소적 (안구 및 질 및 직장 전달을 포함하는 점막으로)일 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 병변 내로 투여된다. 다른 투여의 방식은 경구 및 폐 투여, 좌제, 및 경피 또는 경피부 적용, 바늘, 및 하이포스프레이를 포함한다.
제약 조성물, 단위 투여량, 제조품, 및 키트
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 본원에 기재된 임의의 IL-22 이량체, 및 임의로 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물로 제제화된다.
제약 조성물은 예를 들어 전신성 또는 국소화된 투여를 포함하는 본원에 기재된 다양한 투여의 방식에 적합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 정맥내 투여를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 피하 투여를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 예컨대 폐, 심장, 신장, 간 등으로의 국소 투여를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 예컨대 네뷸라이저에 의해서를 포함하는 입 또는 코를 통한 (예를 들어, 분말 또는 에어로졸) 흡입 또는 통기를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 국소 투여를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구 또는 폐 투여, 좌제, 및 경피 또는 경피부 적용, 바늘, 및 하이포스프레이를 위해 제제화된다.
본원에 사용된 "담체"는 채용되는 투여량 및 농도에서 그에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제를 포함한다. 종종 생리학상 허용되는 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 채용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레솔); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 카운터-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어 Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 예를 들어 약 5.0 내지 약 8.0, 약 6.5 내지 약 7.5, 또는 약 6.5 내지 약 7.0 중 어느 하나의 pH 범위를 포함하는 약 4.5 내지 약 9.0의 범위의 pH를 갖도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 또한 적합한 긴장성 변형제, 예컨대 글리세롤의 첨가에 의해 혈액과 등장성이도록 만들어질 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 제약 조성물은 일반적으로 멸균, 실질적으로 등장성, 및 미국 식품 의약국의 모든 우수 제조 관행 (GMP) 규제와 충분히 순응성으로서 제제화된다. 멸균성은 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 병원체가 없다. 주사를 위해, 제약 조성물은 예를 들어 생리학상 혼화성 완충제, 예컨대 행크 용액 또는 링거 용액 중 액체 용액의 형태일 수 있다. 또한, 제약 조성물은 고체 형태이고 사용 직전에 재-용해되거나 현탁될 수 있다. 동결건조된 조성물은 또한 포함된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 정맥내로, 복강내로, 또는 유리체내로 주사에 적응된 제약 조성물로서 통상적인 절차에 따라 제제화된다. 전형적으로, 주사를 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충제 중 용액이다. 필요에 따라, 조성물은 또한 가용화제 및 주사의 부위에서의 통증을 완화시키는 국소 마취제, 예컨대 리그노카인을 포함할 수 있다. 일반적으로, 성분은 예를 들어 밀폐적으로 밀봉된 용기, 예컨대 활성제의 양을 지시하는 앰풀 또는 사세 중 건조 동결건조된 분말 또는 물 무함유 농축물로서 별개로 공급되거나 단위 투여 형태에서 함께 혼합된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 제약 등급수 또는 염수를 함유하는 주입 보틀로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰풀은 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 제공될 수 있다.
폐내 또는 비내 투여에 적합한 제제는 예를 들어 비내 통과를 통한 급속한 흡입에 의해 또는 폐포 낭에 도달하도록 입을 통한 흡입에 의해 투여되는 0.1 내지 500 마이크로미터, 예컨대 0.5, 1, 30, 35 등의 범위의 입도를 갖는다. 적합한 제제는 IL-22 이량체의 수성 또는 오일성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제제는 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 인간에의 투여에 적합하다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 설치류 (예를 들어, 마우스, 래트) 또는 비-인간 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이)에의 투여에 적합하다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 단일-사용 바이알, 예컨대 단일-사용 밀봉된 바이알에 함유된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 다중-사용 바이알에 함유된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 용기에 벌크로 함유된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 냉동보존된다.
또한 본원에 기재된 IL-22 이량체, 또는 그의 조성물 (예컨대 제약 조성물)의 단위 투여 형태가 제공된다. 용어 "단위 투여 형태"는 개체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 적합한 제약 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께, 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 물질을 함유한다. 이들 단위 투여 형태는 단일 또는 다중 단위 투여량으로 적합한 패키징에 저장될 수 있고, 또한 추가로 멸균되고 밀봉될 수 있다.
본 출원은 적합한 패키징에 본원에 기재된 IL-22 이량체 조성물 (또는 그의 제약 조성물)을 포함하는 제조품을 추가로 제공한다. 본원에 기재된 IL-22 이량체 조성물 (예컨대 제약 조성물)을 위한 적합한 패키징은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 바이알 (예컨대 밀봉된 바이알), 용기, 앰풀, 보틀, IV 백, 자, 흡입기, 유연성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일러(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 이들 제조품은 추가로 멸균되고/거나 밀봉될 수 있다.
본 출원은 또한 본원에 기재된 IL-22 이량체 조성물 (예컨대 제약 조성물)을 포함하고, 조성물을 사용하는 방법, 예컨대 본원에 기재된 용도에 대한 지시서(들)를 추가로 포함할 수 있는 키트를 제공한다. 본원에 기재된 키트는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 본원에 기재된 임의의 방법을 수행하기 위한 지시서를 갖는 패키지 삽입물을 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, IL-22 이량체, 및 IL-22 이량체를 정맥내로, 예를 들어 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg (예컨대 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg)의 투여량으로 투여하기 위한 지시서를 포함하는 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 정맥내 또는 폐내 투여를 위한 또는 흡입 또는 통기를 위한 단위 투여 형태이며, 여기서 단위 투여 형태는 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg (예컨대 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg)의 투여량으로의 IL-22 이량체의 투여를 허용할 IL-22 이량체의 유효량을 포함하는 것인 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 실시양태에서, 정맥내 또는 폐내 투여를 위한 또는 흡입 또는 통기를 위한 IL-22 이량체를 포함하는 의약이며, 여기서 의약은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg (예컨대 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg)의 투여량으로 IL-22 이량체의 투여를 허용할 IL-22 이량체의 유효량을 포함하는 것인 의약이 제공된다. 일부 실시양태에서, 질환을 치료하기 위한 (예를 들어, 기관 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하기 위한) 의약의 제조를 위한 IL-22 이량체의 용도이며, 여기서 의약은 정맥내 또는 폐내 투여에 또는 흡입 또는 통기에 적합하고, 여기서 의약은 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg (예컨대 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg)의 투여량으로의 IL-22의 투여를 허용할 IL-22 이량체의 유효량을 포함하는 것인 용도가 제공된다.
조합 요법
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체는 제2 요법 (예를 들어, 수술, 제2 치료제)과 조합으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 이량체는 유효량의 또 다른 치료제와 조합으로 투여된다.
바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 치료를 위해, 다른 치료제는 바이러스에 대해, 예컨대 기관 손상 또는 부전을 야기하는 특정 병원성 바이러스에 대해 활성일 수 있다. 호흡기 감염, 손상, 또는 부전을 위해, 호흡기 증상 및 감염의 후유증을 치료하는데 사용되는 추가의 활성 치료제는 예컨대 경구로 또는 직접적 흡입에 의해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 기관지확장제 및 코르티코스테로이드는 조합 요법에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 코르티코스테로이드, 항염증성 신호 전달 조정제, β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 항콜린제, 점액용해제, 항바이러스제, 항섬유화제, 고장성 염수, 항체, 백신, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
1950년에 천식 요법으로서 최초로 도입된 글루코코르티코이드 (Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950)는 이 질환에 대한 가장 강력하고 지속적으로 유효한 요법으로 남아 있지만, 그들의 작용의 메커니즘은 아직 충분히 이해되어 있지 않다 (Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985). 불해하게도, 경구 글루코코르티코이드 요법은 현저한 비바람직한 부작용, 예컨대 몸통 비만, 고혈압, 녹내장, 글루코스 불내성, 백내장 형성의 가속화, 골 미네랄 소실, 및 생리학적 효과와 연관되며, 이들 모두는 장기 치료제로서의 그들의 사용을 제한한다 (Goodman and Gilman, 10th edition, 2001). 전신성 부작용에 대한 해법은 스테로이드 약물을 염증의 부위에 직접적으로 전달하는 것이다. 흡입된 코르티코스테로이드 (ICS)는 경구 스테로이드의 중증 유해 효과를 완화시키기 위해 개발되었다. 본원에 기재된 IL-22 이량체와 조합으로 사용될 수 있는 코르티코스테로이드의 비-제한적 예는 덱사메타손, 덱사메타손 나트륨 포스페이트, 플루오로메톨론, 플루오로메톨론 아세테이트, 로테프레드놀, 로테프레드놀 에타보네이트, 히드로코르티손, 프레드니솔론, 플루드로코르티손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 베타메타손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 메틸프레드니솔론, 플루오시놀론, 플루오시놀론 아세토니드, 플루니솔리드, 플루오코르틴-21-부틸레이트, 플루메타손, 플루메타손 피발레이트, 부데소니드, 할로베타솔 프로피오네이트, 모메타손 푸로에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 시클레소니드; 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
항염증성 캐스케이드 메커니즘을 통해 작용하는 다른 항염증제는 또한 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전 (예를 들어, 바이러스성 호흡기 감염)의 치료를 위한 본원에 기재된 IL-22 이량체와 조합으로의 추가의 치료제로서 유용하다. 포스포디에스테라제 억제제 (예르 들어 PDE-4, PDE-5, 또는 PDE-7 특이적), 전사 인자 억제제 (예를 들어 IKK 억제를 통해 NFκB를 차단함), 또는 키나제 억제제 (예를 들어 P38 MAP, JNK, PI3K, EGFR 또는 Syk를 차단함)와 같은 "항염증성 신호 전달 조정제" (본원에서 AISTM으로 지칭됨)를 적용하는 것은 염증을 끄는 타당한 접근법인데, 이는 이들 소분자가 제한된 수의 통상적인 세포내 경로 - 항염증성 치료 개입을 위한 중요한 포인트인 신호 전달 경로를 표적화하기 때문이다 (문헌 [P. J. Barnes, 2006]에 의한 검토 참조). 이들 비-제한적 추가의 치료제는 아칼라브루티닙 (클라?스(Calquence)®); 바리시티닙 (올루미안트(Olumiant)®); 룩솔리티닙 (자카피(Jakafi)®); 토파시티닙 (젤리안즈(Xeljanz)®); 5-(2,4-디플루오로-페녹시)-1-이소부틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (2-디메틸아미노-에틸)-아미드 (P38 Map 키나제 억제제 ARRY-797); 3-시클로프로필메톡시-N-(3,5-디클로로-피리딘-4-일)-4-디플루오로메톡시-벤즈아미드 (PDE-4 억제제 로플루밀라스트(Roflumilast)); 4-[2-(3-시클로펜틸옥시-4-메톡시페닐)-2-페닐-에틸]-피리딘 (PDE-4 억제제 CDP-840); N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노]-1-디벤조푸란카르복스아미드 (PDE-4 억제제 오글레밀라스트(Oglemilast)); N-(3,5-디클로로-피리딘-4-일)-2-[1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-인돌-3-일]-2-옥소-아세트아미드 (PDE-4 억제제 AWD 12-281); 8-메톡시-2-트리플루오로메틸-퀴놀린-5-카르복실산 (3,5-디클로로-1-옥시-피리딘-4-일)-아미드 (PDE-4 억제제 Sch 351591); 4-[5-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄술피닐-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-피리딘 (P38 억제제 SB-203850); 4-[4-(4-플루오로-페닐)-1-(3-페닐-프로필)-5-피리딘-4-일-1H-이미다졸-2-일]-부트-3-인-1-올 (P38 억제제 RWJ-67657); 4-시아노-4-(3-시클로펜틸옥시-4-메톡시-페닐)-시클로헥산카르복실산 2-디에틸 아미노-에틸 에스테르 (실로밀라스트(Cilomilast)의 2-디에틸-에틸 에스테르 프로드러그, PDE-4 억제제); (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-4-일]-아민 (게피티닙(Gefitinib), EGFR 억제제); 및 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드 (이마티닙(Imatinib), EGFR 억제제)를 포함한다.
IL-22 이량체와의 흡입된 β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 예컨대 포르모테롤, 알부테롤 또는 살메테롤을 포함하는 조합은 또한 적합하지만, 호흡기 바이러스 감염의 치료에 유용한 비-제한적 조합이다.
ICS와의 흡입된 β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 예컨대 포르모테롤 또는 살메테롤의 조합은 또한 기관지수축 및 염증 둘 다를 치료하는데 사용된다 (각각 심비코르트(Symbicort)® 및 아드바이르(Advair)®). IL-22 이량체와 함께 이들 ICS 및 β2-아드레날린수용체 효능제 조합을 포함하는 조합은 또한 적합하지만, 호흡기 바이러스 감염의 치료에 유용한 비-제한적 조합이다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 중추 및 말초 신경계에서의 시냅스에서 신경전달물질 아세틸콜린의 작용을 차단하는 항콜린제이다. 치료제는 신경 세포에서의 그의 수용체에의 신경전달물질 아세틸콜린의 결합을 선택적으로 차단하며, 따라서 위장관, 요로, 폐, 및 신체의 많은 다른 부분에 존재하는 평활근의 불수의적 운동을 담당하는 부교감신경 신경 자극을 억제한다. 항콜린제는 중추 및 말초 신경계에서의 그들의 특이적 표적에 따라 3가지 카테고리로 나누어진다: 항무스카린제, 신경절 차단제, 및 신경근육 차단제. 항콜린성 약물은 현기증, 추체외로 증상, 위장 장애 (예를 들어, 위궤양, 설사, 유문연축, 게실염, 궤양성 결장염, 오심, 및 구토), 비뇨생식기 장애 (예를 들어, 방광염, 요도염, 및 전립선염), 불면증, 호흡기 장애 (예를 들어, 천식, 만성 기관지염, 및 만성 폐쇄성 폐 질환 [COPD]), 및 과민성 미주 신경으로 인한 동성 서맥을 포함하는 다양한 상태를 치료하는데 사용된다. 항콜린제의 비-제한적 예는 아트로핀 (아트로펜(Atropen)), 벨라돈나 알칼로이드, 벤즈트로핀 메실레이트 (코겐틴(Cogentin)®), 클리디니움, 시클로펜톨레이트 (시클로길(Cyclogyl)), 다리페나신 (에나블렉스(Enablex)), 디실로민, 페소테로딘 (토비아즈(Toviaz)®), 플라복세이트 (우리스파스(Urispas)®), 글리코피롤레이트, 호마트로핀 히드로브로마이드, 히오스시아민 (레브시넥스(Levsinex)), 이프라트로피움 (아트로벤트(Atrovent)®), 오르페나드린, 옥시부티닌 (디트로판(Ditropan) XL®), 프로판텔린 (프로-반틴(Pro-banthine)®), 스코폴라민, 메트스코폴라민, 솔리페나신 (베시케어(VESIcare)®), 티오트로피움 (스피리바(Spiriva)®), 톨테로딘 (데트롤(Detrol)®), 트리헥시페니딜, 및 트로스피움을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 점액용해제이다. 점액용해제는 폐, 기관지, 및 기관을 포함하는 상부 및 하부 기도로부터의 점막의 청소를 보조할 수 있다. 점액활성 약물은 거담제, 점액용해제, 점액조절제, 및 점액활성제를 포함한다. 이들 의약은 점액의 과다분비 또는 농화에 의해 복잡화된 호흡기 질환의 치료에 사용된다. 점액용해제의 비-제한적 예는 아세틸시스테인 (뮤코미스트(Mucomyst), Acys-5), 암브록솔, 브롬헥신, 카르보시스테인, 에르도스테인, 메시스테인, 및 도르나스 알파를 포함한다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 항바이러스제이다. 대부분의 항바이러스제는 특이적 바이러스 감염에 사용되는 반면, 광범위-스펙트럼 항바이러스제는 폭넓은 범위의 바이러스에 대해 유효하다. 대부분의 항생제와는 달리, 항바이러스 약물은 그들의 표적 병원체를 파괴하지 않으며; 대신 이들은 그들의 발달을 억제한다. 항바이러스 약물은 아다만탄 항바이러제, 항바이러스 부스터, 항바이러스 조합물, 항바이러스 인터페론, 케모카인 수용체 길항제, 인테그라제 가닥 전달 억제제, 다양한 항바이러스제, 뉴라미니다제 억제제, NNRTI, NS5A 억제제, 뉴클레오시드 리버스 트랜스크립타제 억제제 (NRTI), 프로테아제 억제제, 및 퓨린 뉴클레오시드를 포함할 수 있다. 대부분의 현재 이용가능한 항바이러스 약물은 HIV, 포진 바이러스, B 및 C형 간염 바이러스, 및 인플루엔자 A 및 B 바이러스를 다루는 것을 돕도록 디자인된다.
항바이러스제는 발라시클로비르, 아시클로비르, 팜시클로비르, 프리텔리비르, 펜시클로비르, 간시클로비르, 발간시클로비르, 시도포비르, 포스카르네트, 다루나비르, 글리시르히즈산, 글루타민, FV-100, ASP2151, me-609, ASP2151, 국소 VDO, PEG-제제 (데비렉스 아게(Devirex AG)), 비다라빈, 시도포비르, 크로펠레머 (SP-303T), EPB-348, CMXOOl, V212, NB-001, 스쿠아르산, 이온성 아연, 소리부딘 (ARYS-01), 트리플루리딘, 882C87, 메를린 (에탄올 및 글리콜산 혼합물), 비타민 C, AIC316, 사라세니아 푸르푸레아(sarracenia purpurea)를 갖는 베르사베이스 겔, UB-621, 리신, 에독수딘, 브리부딘, 시타라빈, 도코사놀, 트로만타딘, 레시퀴모드 (R-848), 이미퀴모드, 레시퀴모드, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 알라펜아미드 푸마레이트, GSK208141 (gD2t, 모노포스포릴 지질 A의 GSK 당단백질 D (gD)-알룸(Alum)/3-데아실화 형태), 대상 포진 GSK 1437173A, gD2-AS04, 하브릭스(Havrix)™, gD-알룸, 조스타박스(Zostavax)/대상포진 백신 (V211, V212, V210), HSV529, HerpV (AG-707 rh-Hsc70 다가 펩티드 복합체), VCL-HBOl, VCL-HMOl, pPJV7630, GEN-003, SPL7013 겔 (비바겔(VivaGel)™), GSK324332A, GSK1492903A, 바리지그(VariZIG)™, 및 바리박스(Varivax), 마라비로크, 엔푸비르티드, 비크리비로크, 세니크리비로크, 르발리주맙, 포스템사비르 (BMS-663068), 이발리주맙 (TMB-355, TNX-355), PRO 140, bl2 항체, DCM205, DARPins, 카프린 항체, 밤라니비맙 (LY-CoV555), VIR-576, 엔플리비르티드 (T-20), AMD11070, PR0542, SCH-C, T-1249, 시아노비린, 그리피트센, 렉틴, 펜타푸시드, 돌루테그라비르, 엘비테그라비르, 랄테그라비르, 글로보이드난 A, MK-2048, BI224436, 카보테그라비르, GSK 1265744, GSK-572, MK-0518, 아바카비르, 디다노신, 엠트릭타빈, 라미부딘, 스타부딘, 테노포비르, 테노포비르 디소포록실 푸마레이트, 지도부딘, 아프리시타빈, 스탐피딘, 엘부시타빈, 라시비르, 암독소비르, 스타부딘, 잘시타빈, 페스티나비르, 디데옥시시티딘 ddC, 아지도티미딘, 테노포비르 알라펜아미드 푸마레이트, 엔테카비르, 델라비르딘, 에파비렌즈, 에트라비린 (TMC-125), 네비라핀, 릴피비린, 도라비린, 칼라놀리드(Calanolide) A, 카프라비린, 에피비르, 아데포비르, 다피비린, 레르시비린, 알로부딘, 엘부시타빈, TMC-278, DPC-083, 암독소비르, (-)- 베타-D-2,6-디아미노-퓨린 디옥솔란, MIV-210 (FLG), DFC (덱셀부시타빈), 디옥솔란 티미딘, L697639, 아테비르딘 (U87201E), MIV-150, GSK-695634, GSK-678248, TMC-278, KP1461, KP-1212, 로데노신 (FddA), 5-[(3,5-디클로로페닐)티오]-4-이소프로필-l-(4-피리딜메틸)이미다졸-2-메탄올 카르밤산, (-)-I2-D-2,6-디아미노퓨린 디옥솔란, AVX-754, BCH-13520, BMS-56190 ((4S)-6-클로로-4-[(lE)-시클로프로필에테닐]-3,-4-디히드로-4-트리플루오로메틸-2 (lH)-퀴나졸리논), TMC-120, L697639, 아타자나비르, 다루나비르, 코비시스타트, 갈리데시비르, 디술피람, ASC09F (HIV 프로테아제 억제제), 나파모스타트, 겜시타빈 히드로클로라이드, 아모디아퀸, 메플로퀸, 로페라미드, 레스베라트롤, 클로로퀸, 니타족사니드, 시클로스포린 A, 알리스포리비르, 다사티닙, 셀루메티닙, 트라메티닙, 라파마이신, 사라카티닙, 클로르프로마진, 트리플루프로마진, 플루페나진, 티에틸페라진, 프로메타진, 테이코플라닌 유도체, 미코페놀산, 실베스트롤, 회복기 혈장, 발록사비르 마르복실, 포삼프레나비르, 이디나비르, 넬피나비르, 리토나비르, 사퀴나비르, 티프라나비르, 로피나비르, 암프레나비르, 텔리나비르 (SC-52151), 드록시나비르, 엠트리바, 인비라제, 아게네라제, TMC-126, 모제나비르 (DMP-450), JE-2147 (AG1776), L-756423, KNI-272, DPC-681, DPC-684, BMS 186318, 드록시나비르 (SC- 55389a), DMP-323, KNI-227, l-[(2-히드록시에톡시)메틸]-6-(페닐티오)-티민, AG-1859, RO-033-4649, R-944, DMP-850, DMP-851, 브레카나비르 (GW640385), 노녹시놀-9, 나트륨 도데실 술페이트, 사비(Savvy) (1.0% C31G), 버퍼겔(BufferGel)®, 카라기난, 비바겔®, PRO-2000, 일명 PRO 2000/5, 나프탈렌 2-술포네이트 중합체, 또는 폴리나프탈렌 술포네이트, 암포테리신 B, 술파메톡사졸, 트리메토프림, 클라리트로마이신, 다우노루비신, 플루코나졸, 독소루비신, 아니둘라푼긴, 면역 글로불린, 감마 글로불린, 드로나비놀, 메게스트롤 아세테이트, 아토바쿠온, 리파부틴, 펜타미딘, 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트, 류코보린, 알리트레티노인 겔, 에리트로포이에틴, 칼슘 히드록실아파타이트, 폴리-L-락트산, 소마트로핀 rDNA, 이트라코나졸, 파클리탁셀, 보리코나졸, 시도포비르, 포미비르센, 아지트로마이신, 룩솔리티닙, 토실리주맙 (악템라(Actemra)®), 사릴루맙 (케브자라(Kevzara)®), 베비리마트, TRIM5 알파, Tat 길항제, 트리코산틴, 압자임, 칼라놀리드 A, 세라게닌, 시아노비린-N, 디아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트 (EGCG), 포스카르네트, 그리피트신, 히드록시카르브아미드, 밀테포신, 포맨토 억제제, 시토비린, 셀리시클립, 상승작용적 증진제, tre 리콤비나제, 아연 핑거 단백질 전사 인자, KP-1461, BIT225, 아플라비로크, 아테비르딘, 브레카나비르, 카프라비린, 덱셀부시타빈, 에미비린, 레르시비린, 로데노신, 로비리드, 포미비르센, 글리시르히즈산 (항염증성, l l베타-히드록시스테로이드 데히드로게나제를 억제함), 아연 염, 셀룰로스 술페이트, 시클로덱스트린, 덱스트린-2-술페이트, NCP7 억제제, AMD-3100, BMS-806, BMS-793, C31G, 카라기난, CD4-IgG2, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, mAb 2G12, mAb bl2, 머크(Merck) 167, 식물 레시틴, 폴리 나프탈렌 술페이트, 폴리 술포-스티렌, PRO2000, PSC- 란테스(Rantes), SCH-C, SCH-D, T-20, TMC-125, UC-781, UK-427, UK-857, 카라가드(Carraguard) (PC-515), 브린시도포비르 (CMXOOl), 지도부딘, 바이러스-특이적 세포독성 T 세포, 이독수리딘, 포도필로톡신, 리팜피신, 메티사존, 인터페론 알파 2b (인트론(Intron)-A), 페그인터페론 알파-2a, 리바비린 (코페구스(Copegus), 레베톨®, 비라졸(Virazole)), 모록시딘, 플레코나릴, BCX4430, 타리바비린 (비라미딘, ICN 3142), 파비피라비르 (아비간(Avigan)®), 린타톨리모드, 이바시타빈, (5-아이오도-2'-데옥시시티딘), 메티사존 (메티사존), 암플리겐, 아트리플라(Atripla)®, 콤비비르, 이뮤노비르, 넥사비르, 트리지비르, 트루바다, 라르니부딘, 디데옥시아데노신, 플록수리딘, 이도주리딘, 이노신 프라노벡스, 2'-데옥시-5-(메틸아미노)우리딘, 디곡신, 이미퀴모드, 인터페론 유형 III, 인터페론 유형 II, 인터페론 유형 I, 티 트리 오일, 글리시르히즈산, 피알우리딘, 텔비부딘, 아데포비르, 에테카비르, 라르니부딘, 클레부딘, 아수나프레비르, 보세프레비르, 팔다프레비르, 그라조프레비르, 파리타프레비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), 텔라프레비르, 시메프레비르, 소포스부비르, ACH-3102, 다클라타스비르, 델레오부비르, 엘바스비르, 레디파스비르, MK-3682, MK-8408, 사마타스비르, 옴비타스비르, 엔테카비르, 엘더베리 삼부쿠스(elderberry sambucus), 우미페노비르, 아만타딘, 리만타딘, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 라니나미비르, 피롤 폴리아미드, 또는 이들의 염, 용매화물, 및/또는 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 항바이러스제는 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®), IFN (예를 들어, IFN-α, 예컨대 IFN-α2a 또는 IFN-α2b, IFN-β, IFN-γ), 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르 (타미플루®), 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르 (아비간®), 라니나미비르, 리바비린 (코페구스, 레베톨®, 비라졸), 우미페노비르 (아르비돌®), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 문헌 [Li and Clercq ("Therapeutic options for the 2019 novel coronavirus (2019-nCoV)", Nature Reviews Drug Discovery, February 10, 2020; 보충적 표 1을 포함함)]에 기재된 임의의 치료제는 임의의 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV (예를 들어, SARS), MERS-CoV (예를 들어, MERS), SARS-CoV-2 (예를 들어, COVID-19), H1N1 (예를 들어, H1N1 돼지 독감), 또는 H5N1 (예를 들어, H5N1 조류 독감)에 의한 감염과 연관된 기관 손상 또는 부전을 치료하기 위한 IL-22 이량체와 조합으로의 본원에 기재된 또 다른 치료제로서 사용될 수 있다. 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 렘데시비르 (베클루리(Veklury)®), 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 회복기 혈장, 밤라니비맙 (LY-CoV555), LY-CoV016, 카시리비맙 및 임데비맙 (REGN-COV2), AZD7442, VIR-7831, BRII-196, BRII-198, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), IFN-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b, 흡입을 통해), 파비피라비르, 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®) 및 IFN-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b, 흡입을 통해)이다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 렘데시비르 (베클루리®)이다.
일부 실시양태에서, H1N1 또는 H5N1 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 파비피라비르, 우미페노비르 (아르비돌®), 테이코플라닌 유도체, 벤조-헤테로시클릭 아민 유도체, 피리미딘, 발록사비르 마르복실, 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®, 예를 들어, 정제), INF-α (예를 들어, IFN-α2a, IFN-α2b, 흡입을 통해), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, H1N1 또는 H5N1 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 로피나비르/리토나비르 (칼레트라®) 및 INF-α (예를 들어, IFN-α2a 또는 IFN-α2b, 흡입을 통해)이다. 일부 실시양태에서, H1N1 또는 H5N1 감염과 연관된 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는 경우, 다른 치료제는 오셀타미비르이다.
렘데시비르 (GS-5734 또는 베클루리®)는 에볼라 바이러스 질환 (1상, NCT03719586) 및 마르부르크 바이러스 감염을 위한 치료로서 길리어드 사이언시스(Gilead Sciences)에 의해 개발된 신규한 뉴클레오티드 유사체 프로드러그 (아데닌 유도체의 포스포르아미데이트 프로드러그)인 항바이러스 약물이다. 그의 보고된 작용의 메커니즘은 RNA 의존성 RNA 폴리머라제 (RdRp)를 표적화하고, 비-절대성 쇄를 종결시키는 것이다. 이는 또한 보다 멀게 관련된 단일 가닥 RNA 바이러스, 예컨대 호흡기 세포융합 바이러스, 주닌 바이러스, 라사 열 바이러스, 니파 바이러스, 헨드라 바이러스, 및 코로나바이러스 (MERS 및 SARS 바이러스를 포함함)에 대한 항바이러스 활성을 나타내었다. 최근, 렘데시비르는 소수의 중국 환자에서 SARS-CoV-2에 대한 일부 상당히 양호한 항바이러스 활성을 입증하였다. 렘데시비르는 이전에 COVID-19를 치료하기 위한 3상 하에 있었으며 (NCT04252664, NCT04257656), 현재 COVID-19에 대해 입원을 요구하는 환자의 치료를 위한 FDA에 의해 승인된 최초의 및 유일한 항바이러스제이다.
파비피라비르 (T-705 또는 아비간®)는 일본에서 인플루엔자를 치료하기 위해 승인된 구아닌 유사체이다. 이는 RNA 바이러스, 예컨대 인플루엔자, 에볼라, 황열, 치쿤군야, 노로바이러스, 및 엔테로바이러스의 RdRp를 유효하게 억제할 수 있다. 이는 현재 발록사비르 마르복실 (ChiCTR2000029544)과 조합으로 또는 IFN-α(ChiCTR2000029600)와 조합으로 COVID-19를 치료하기 위한 무작위 시험 하에 있다.
리바비린은 HCV 및 RSV 감염을 치료하기 위해 승인된 구아닌 유도체이다. 그의 약물 표적은 RdRp이며, 그의 보고된 메커니즘은 바이러스 RNA 합성 및 mRNA 캡핑을 억제하는 것이다. 리바비린은 현재 페길화 인터페론과 조합으로 COVID-19를 치료하기 위한 무작위 임상 시험 (ChiCTR2000029387), 및 SARS에 대한 무작위 임상 시험 (NCT00578825) 하에 있다. 리바비린은 SARS, MERS, 및 COVID-19를 치료할 것으로 예상된다.
갈리데시비르 (BCX4430)는 RdRp를 표적화하는 아데노신 유사체이다. 그의 보고된 메커니즘은 비절대성 RNA 쇄를 종결시킴으로써 바이러스 RNA 폴리머라제 기능을 억제하는 것이다. 갈리데시비르는 현재 마르부르크 바이러스를 치료하기 위한 1상 (NCT03800173), 및 황열을 치료하기 위한 I상 (NCT03891420) 하에 있다. 갈리데시비르는 광범위-스펙트럼 항바이러스제 (예를 들어 SARS-CoV, MERS-CoV, IAV)일 것으로 예상된다.
디술피람은 만성 알콜 의존성에 대해 승인된 프로테아제 억제제이다. 이는 세포 실험에서 MERS-CoV 및 SARS-CoV의 파파인-유사 프로테아제 (PLpro)를 억제하는 것으로 보고되었다.
로피나비르는 HIV 감염을 치료하기 위해 승인된 프로테아제 억제제이다. 이는 현재 COVID-19를 치료하기 위한 3상 시험 (NCT04252274, NCT04251871, NCT04255017, ChiCTR2000029539), 및 MERS에 대한 2/3상 시험 (NCT02845843) 하에 있다. 그의 보고된 작용의 메커니즘은 3CLpro를 억제하는 것이다. 이는 MERS-CoV, SARS-CoV, SARS-CoV-2, HCoV-229E, 및 HPV에 의한 감염을 치료할 것으로 예상된다.
리토나비르는 HIV 감염을 치료하기 위해 승인된 프로테아제 억제제이다. 이는 현재 COVID-19를 치료하기 위한 3상 시험 (NCT04251871, NCT04255017, NCT04261270), 및 MERS에 대한 2/3상 시험 (NCT02845843) 하에 있다. 그의 보고된 작용의 메커니즘은 3CLpro를 억제하는 것이다. 이는 MERS-CoV 및 SARS-CoV-2에 의한 감염을 치료할 것으로 예상된다.
로피나비르/리토나비르 (LPV/r; 칼레트라®)는 HIV/AIDS를 치료하고 예방하기 위한 고정 용량 조합 의약이다. 이는 로피나비르를 저용량의 리토나비르와 조합한다. 통상적인 부작용은 설사, 구토, 피로감, 두통, 및 근육 통증을 포함한다. 중증 부작용은 췌장염, 간 문제, 및 고혈당을 포함할 수 있다. 투여 경로는 정제, 캡슐, 또는 입으로 취해지는 용액을 포함할 수 있다.
그리피트신은 홍조류-유래 렉틴이며, 현재 HIV 전파의 예방을 위한 1상 시험 (NCT02875119 및 NCT04032717) 하에 있다. 그의 보고된 작용의 메커니즘은 SARS-CoV 스파이크 당단백질에 결합하고 바이러스 진입을 억제하는 것이다. 이는 SARS-CoV 감염을 치료할 것으로 예상된다.
인터페론 (IFN)은 바이러스 감염에 반응하여 숙주 세포에 의해 생산되는 신호전달 분자의 그룹이다. IFN은 시토카인에 속한다. IFN은 바이러스 감염으로부터 세포를 보호하고, 면역 세포 (예를 들어, NK 세포, 대식세포)를 활성화시키고, 항원 제시를 상향-조절함으로써 (주요 조직적합성 복합체 (MHC) 항원의 발현을 증가시킴으로써) 숙주 방어를 증가시킬 수 있다. IFN의 3가지 부류가 있다: 유형 I IFN, 유형 II IFN, 및 유형 III IFN. 일부 IFN은 전이성 신세포 암종 (IFN-α2a), 흑색종 (IFN-α2b), 다발성 경화증 (IFNβ1a, IFNβ1b), 및 만성 육아종성 질환 (IFN-γ)에 대해 승인되었다. IFNα는 유형 I IFN에 속한다. 이는 주로 형질세포양 수지상 세포 (pDC)에 의해 생산되며, 바이러스 감염에 대한 선천 면역에 관여한다. 이는 감염된 환자에서 선천 항바이러스 반응을 자극시킴으로써, SARS-CoV, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV-2 감염을 치료할 것으로 예상된다.
오셀타미비르 (타미플루®)는 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B (독감)를 치료하고 예방하는데 사용되는 항바이러스제이다. 일부 H1N1 및 H5N1 환자는 오셀타미비르 치료에 저항성인 것으로 밝혀졌다. 자나미비르 (렐렌자(Relenza)®)는 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B (독감)를 치료하고 예방하는데 사용되는 항바이러스제 (뉴라미니다제 억제제)이다. 이는 2009년에 H1N1을 치료하는데 사용되었다. 페라미비르 (라피밥(Rapivab)®)는 인플루엔자를 치료하고 예방하는데 사용되는 항바이러스제 (뉴라미니다제 억제제)이다. 일부 H1N1 환자는 H275Y NA 돌연변이로 인해 매우 감소된 페라미비르 억제를 가졌다.
클로로퀸은 말라리아 및 특정 아메바 감염을 치료하기 위한 승인된 면역 조정제이다. 이는 세포내 트래피킹 및 바이러스 융합 사건을 파괴하는 것으로 보이는 리소좀향성 염기인 것으로 보고되어 있다. 이는 현재 COVID-19에 대한 개방-표지 시험 (ChiCTR2000029609) 하에 있다. 이는 SARS-CoV, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV-2 감염을 치료할 것으로 예상된다. 니타족사니드는 설사 치료에 대해 승인되었다. 그의 보고된 작용의 메커니즘은 숙주 선천 면역 방능을 유도하여 인터페론을 생산하는 것이다. 이는 광범위-스펙트럼 항바이러스제 (예를 들어, 코로나바이러스, 예컨대 SARS-CoV-2)일 것으로 예상된다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 항섬유화제이다. 일부 실시양태에서, 항섬유화제는 닌테다닙, 피르페니돈, 및 N-아세틸시스테인 (NAC)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 항체, 예컨대 바이러스에 결합하고 이들을 파괴하는 것을 돕는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 밤라니비맙 (LY-CoV555), LY-CoV016, 카시리비맙 및 임데비맙 (REGN-COV2), AZD7442, VIR-7831, BRII-196, BRII-198, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 밤라니비맙은 인간 세포에 진입하고 이를 감염시키는 것으로부터 SARS-CoV-2를 차단하도록 디자인되었다. 2020년 11월 9일에, FDA는 입원의 높은 위험이 있는 12세 이상의 환자에서 경도 또는 중등도 COVID-19를 치료하기 위해 밤라니비맙에 대한 EUA를 발표하였다. REGN-COV2는 카시리비맙 및 임데비맙으로 제조된 항체 칵테일이다. 2020년 11월 21일에, FDA는 입원의 높은 위험이 있는 12세 이상의 환자에서 경도 또는 중등도 COVID-19를 치료하기 위해 함께 사용되는 카시리비맙 및 임데비맙에 대한 EUA를 발표하였다. 보다 많은 데이터는 수집되고 있다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제는 백신이다. 일부 실시양태에서, 백신은 COVID-19 백신이다. 일부 실시양태에서, 백신은 RNA 백신, 예컨대 토지나메란 (코미르나티(Comirnaty)®; 화이자-바이오엔테크(Pfizer-BioNTech) 백신) 및 mRNA-1273 (CX-024414; 모더나(Moderna) 백신); 통상적인 불활성화된 백신, 예컨대 BBIBP-CorV (시노팜(Sinopharm)으로부터), BBV152 (바라트 바이오테크(Bharat Biotech)로부터), 코로나백(CoronaVac) (시노백(Sinovac)으로부터), 및 WIBP (시노팜으로부터); 바이러스 벡터 백신, 예컨대 스푸트닉(Sputnik) V (가말레야 리서치 인스티튜트(Gamaleya Research Institute)로부터), AZD1222 (옥스포드-아스트라제네카(Oxford-AstraZeneca) 백신), 및 Ad5-nCoV (칸시노 바이올로직스(CanSino Biologics)로부터); 및 펩티드 백신, 예컨대 에피백코로나(EpiVacCorona) (벡터 인스티튜트(Vector Institute)로부터)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 제2 요법은 특이적 기관 기능이상, 예컨대 심장, 신장, 간, 폐 등에서의 기능이상 또는 부전에 대한 임의의 현행 치료를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 산소 마스크, 벤틸레이터를 사용한 기계적 산소공급, 또는 가장 중증의 경우, 환자의 혈액을 신체 외부로 순환시키고, 산소를 그에 인공적으로 첨가하는 것을 수반하는 체외 막 산소공급 (ECMO)을 사용하여 환자의 산소 수준을 증가시키는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는 호흡 부전을 위한 임의의 현행 치료를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 심장 재동기화 요법 (CRT) 또는 양심실 페이싱, 심실 보조 장치 (VAD), 및 심장율동전환기-제세동기를 포함하나 이에 제한되지는 않는 울혈성 심장 부전을 위한 임의의 현행 치료를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 신장 부전의 임의의 현행 치료, 예컨대 투석을 포함할 수 있다.
본 발명의 임의의 IL-22 이량체를 환자에의 동시 또는 순차적 투여를 위한 단일 투여 형태로 1종 이상의 추가의 활성 치료제와 조합하는 것이 가능하다. 조합 요법은 동시 또는 순차적 레지멘으로서 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 조합은 2개 이상의 투여로 투여될 수 있다.
본원에 기재된 IL-22 이량체와 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 공동-투여는 일반적으로 치료 유효량의 IL-22 이량체 및 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법의 유효성)가 환자의 신체에 둘 다 존재하도록, IL-22 이량체 및 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 동시 또는 순차적 투여를 지칭한다.
공동-투여는 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 단위 투여량의 투여 전 또는 후에 본원에 기재된 IL-22 이량체의 단위 투여량의 투여, 예를 들어, 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 투여의 수 초, 수 분, 또는 수 시간 내에 IL-22 이량체의 투여를 포함한다. 예를 들어, IL-22 이량체의 단위 용량이 먼저 투여되고, 수 초 또는 수 분 내에 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 단위 용량의 투여가 이어질 수 있다. 대안적으로, 1종 이상의 다른 치료제 (또는 제2 요법)의 단위 용량이 먼저 투여되고, 수 초 또는 수 분 내에 IL-22 이량체의 단위 용량의 투여가 이어질 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 IL-22 이량체의 단위 용량을 먼저 투여하고, 수 시간 (예를 들어, 1-12시간)의 기간 후, 1종 이상의 다른 활성 치료제의 단위 용량의 투여가 이어지는 것이 바람직할 수 있다. 다른 경우에, 1종 이상의 다른 활성 치료제 (또는 제2 요법)의 단위 용량을 먼저 투여하고, 수 시간 (예를 들어, 1-12시간)의 기간 후, 본 발명의 IL-22 이량체의 단위 용량의 투여가 이어지는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제 또는 제2 요법의 투여 전에, 또는 그에 후속하여, 예컨대 다른 치료제 또는 제2 요법의 투여 전에, 또는 그에 후속하여 약 임의의 5분, 10분, 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 또는 그 초과에 투여된다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제 또는 제2 요법과 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제 또는 제2 요법에 후속하여 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 다른 치료제 또는 제2 요법 전에 투여된다.
조합 요법은 "상승작용" 및 "상승작용적", 즉, 함께 사용되는 활성 성분이 작용제 (또는 요법)를 별개로 사용하는 것으로부터 초래되는 효과의 합계보다 더 큰 경우 달성되는 효과를 제공할 수 있다. 상승작용적 효과는 활성 성분이 (1) 공동-제제화되고, 조합된 제제에서 동시에 투여되거나 전달되거나; (2) 별개의 제제로서 교대로 또는 병행하여 전달되는 경우; 또는 (3) 일부 다른 레지멘에 의해 이루어질 수 있다. 교대 요법으로 전달되는 경우, 상승작용적 효과는 작용제 (또는 요법)가 순차적으로, 예를 들어 별개의 정제, 환제 또는 캡슐로, 또는 별개의 시린지에서 상이한 주사에 의해 투여되거나 전달되는 경우 달성될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안, 각각의 활성 성분의 유효 투여량은 순차적으로, 즉, 일련적으로 투여되는 반면, 조합 요법에서, 2종 이상의 활성 성분의 유효 투여량은 함께 투여된다. 상승작용적 항바이러스 효과는 조합의 개별적 작용제의 예측된 순수하게 상가적 효과보다 더 큰 항바이러스 효과를 나타낸다.
III. 제조 방법
본원에 기재된 IL-22 이량체는 관련 기술분야의 임의의 공지된 단백질 발현 및 정제 방법, 예컨대 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. IL-22 이량체를 코딩하는 DNA 서열은 완전히 합성될 수 있다. 이러한 서열을 얻은 후, 이를 적합한 발현 벡터 내로 클로닝하고, 이어서 적합한 숙주 세포 내로 형질감염시킨다. 형질감염된 숙주 세포를 배양하고, 상청액을 수거하고, 정제하여 본 발명의 IL-22 이량체를 얻는다.
일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 또는 IL-22 이량체를 코딩하는 단리된 핵산 (예를 들어, 도 1)은 공지된 기술을 사용하여 제한 부위에서 벡터, 예컨대 발현 벡터, 바이러스 벡터, 또는 클로닝 벡터 내로 삽입된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 (또는 IL-22 이량체)을 코딩하는 단일 뉴클레오티드 서열은 클로닝 또는 발현 벡터 내로 삽입된다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 담체 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 뉴클레오티드 서열이 단백질로서 발현되는 경우, 연속적 폴리펩티드가 형성되도록 하는 방식으로 클로닝 또는 발현 벡터 내로 별개로 삽입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 이량체화 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 IL-22 단량체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 뉴클레오티드 서열이 단백질로서 발현되는 경우, 연속적 폴리펩티드가 형성되도록 하는 방식으로 클로닝 또는 발현 벡터 내로 별개로 삽입될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 (또는 IL-22 이량체)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 His-태그, FLAG-태그, SUMO-태그, GST-태그, 항체-태그, 또는 MBP-태그를 포함하나 이에 제한되지는 않는 친화도 또는 확인 태그를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 융합될 수 있다. 신호 서열은 발현된 폴리펩티드가 숙주 세포의 외부로 수송되는 것을 허용하도록 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산은 폴리펩티드의 N-말단에서 발현되는 신호 펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함한다.
핵산의 발현을 위해, 벡터는 숙주 세포 내에서 핵산의 발현을 허용하는 공지된 기술을 사용하여 숙주 세포 (예를 들어, 진핵생물 또는 원핵생물 세포) 내로 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체 또는 IL-22 단량체성 서브유닛은 시험관내에서 발현될 수 있다. 발현 벡터는 제한 없이, 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택가능한 마커, 및 신호 서열을 포함하는 발현을 제어하기 위한 다양한 요소를 함유할 수 있다. 이들 요소는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 적절한 바와 같이 선택될 수 있다. 예를 들어, 프로모터 서열은 벡터에서 폴리뉴클레오티드의 전사를 촉진시키도록 선택될 수 있다. 적합한 프로모터 서열은 제한 없이, T7 프로모터, T3 프로모터, SP6 프로모터, 베타-액틴 프로모터, EF1a 프로모터, CMV 프로모터, 및 SV40 프로모터를 포함한다. 인핸서 서열은 핵산의 전사를 증진시키도록 선택될 수 있다. 선택가능한 마커는 그렇지 않은 것들로부터 벡터로 삽입된 숙주 세포의 선택을 허용하도록 선택될 수 있으며, 예를 들어, 선택가능한 마커는 항생제 저항성을 부여하는 유전자일 수 있다.
벡터를 함유하는 숙주 세포는 단리된 핵산의 발현 및 클로닝에 유용할 수 있다. 발현 숙주 세포는 IL-22 이량체를 발현할 수 있는 임의의 세포일 수 있다. 적합한 숙주 세포는 제한 없이, 원핵생물 세포, 진균 세포, 효모 세포, 또는 고등 진핵생물 세포, 예컨대 포유동물 세포를 포함할 수 있다. 적합한 원핵생물 발현 숙주 세포는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 에르위니아(Erwinia), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 시겔라(Shigella), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실루스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 슈도모나스(Pseudomonas), 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 진핵생물 세포, 예컨대 진균 또는 효모, 예를 들어, 사카로미세스(Saccharomyces), 쉬조사카로미세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로미세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 클루이베로미세스 프라길리스(Kluyveromyces fragilis), 클루이베로미세스 왈티이(Kluyveromyces waltii), 클루이베로미세스 드로소필라룸(Kluyveromyces drosophilarum), 클루이베로미세스 써모톨레란스(Kluyveromyces thermotolerans), 클루이베로미세스 마르크시아누스(Kluyveromyces marxianus), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa), 쉬와니오미세스(Schwanniomyces), 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium), 시네코코쿠스(Synechococcus) 및 아스페르길루스(Aspergillus) (그러나 이에 제한되지는 않음)는 또한 IL-22 단량체성 서브유닛의 발현에 적합할 수 있다. 식물 또는 조류 세포, 예컨대 클라미도모나스(Chlamydomonas)는 또한 IL-22 단량체성 서브유닛의 발현에 적합할 수 있다. 다세포 유기체로부터 유래된 진핵생물 세포, 예를 들어, 무척추동물 세포, 예컨대 드로소필라(Drosophila) S2 및 스포도프테라(Spodoptera) Sf9, 또는 포유동물 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, COS 세포, 인간 배아 신장 세포 (예컨대 HEK293 세포), 뮤린 고환 영양막 세포, 인간 폐 세포, 및 뮤린 유방암 세포 (그러나 이에 제한되지는 않음)는 또한 IL-22 단량체성 서브유닛의 발현에 적합할 수 있다. 고등 진핵생물 세포, 특히, 다세포 유기체로부터 유래된 것들은 글리코실화된 폴리펩티드의 발현에 사용될 수 있다. 적합한 고등 진핵생물 세포는 제한 없이, 무척추동물 세포 및 곤충 세포, 및 척추동물 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 또는 IL-22 이량체를 발현시키는데 사용되는 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포이다.
벡터는 DEAE-덱스트란 매개 전달, 인산칼슘 침전물 방법, 양이온성 지질 매개 전달, 리포솜 매개 형질감염, 전기천공, 미세투사물 포격, 수용체-매개 유전자 전달, 폴리리신, 히스톤, 키토산, 및 펩티드에 의해 매개된 전달을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 숙주 세포에 도입될 수 있다. 관심의 벡터의 발현을 위한 세포의 형질감염 및 형질전환을 위한 표준 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 제1 폴리펩티드 (예를 들어 제1 IL-22 단량체성 서브유닛)를 코딩하는 제1 벡터 및 제2 폴리펩티드 (예를 들어 제2 IL-22 단량체성 서브유닛)를 코딩하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 제1 폴리펩티드 (예를 들어 제1 IL-22 단량체성 서브유닛) 및 제2 폴리펩티드 (예를 들어 제2 IL-22 단량체성 서브유닛)를 코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 단일 벡터를 포함한다.
IL-22 단량체성 서브유닛 (또는 IL-22 이량체) 클로닝 플라스미드를 숙주 세포 내로 형질전환시키거나 형질감염시킨 후, 벡터를 함유하는 숙주 세포를 배앙하고, IL-22 단량체성 서브유닛 (또는 IL-22 이량체)을 세포 배양물로부터 회수한다. 단리된 숙주 세포를 벡터에 삽입된 단리된 핵산의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양한다. 폴리뉴클레오티드의 발현을 위한 적합한 조건은 제한 없이, 적합한 배지, 배양 배지 중의 숙주 세포의 적합한 밀도, 필요한 영양분의 존재, 보충적 인자의 존재, 적합한 온도 및 습도, 및 미생물 오염물의 부재를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 통상적인 영양 배지 상에서 성장될 수 있고, 필요에 따라 단백질 발현이 유도될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 (또는 IL-22 이량체)의 발현은 유인책을 요구하지 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 발현의 목적을 위해 적절한 바와 같은 적합한 조건을 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, 숙주 세포에서 발현되는 폴리펩티드 (예를 들어 IL-22 단량체성 서브유닛)는 이량체를 형성하고 따라서 본원에 기재된 IL-22 이량체를 생산할 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포에서 발현되는 폴리펩티드는 동종이량체인 폴리펩티드 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 제1 폴리펩티드 (예를 들어 제1 IL-22 단량체성 서브유닛) 및 제2 폴리펩티드 (예를 들어 제2 IL-22 단량체성 서브유닛)를 발현하고, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 이종이량체 (예를 들어, 이종이량체성 IL-22 이량체)인 폴리펩티드 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛은 예컨대 산화 화합물 (예컨대 과산화수소 또는 촉매 금속), UV 광, 또는 화학적 가교제 (예컨대 포름알데히드, 1,6-비스말레이미도헥산, 1,3-디브로모-2-프로판올, 비스(2-클로로에틸)술피드, 또는 글루타르알데히드)를 공급함으로써 추가의 유인책을 요구할 것이다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체의 형성은 유인책을 요구하지 않는다.
일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 숙주 세포 내부에서 형성될 수 있다. 예를 들어, 이량체는 관련 효소 및/또는 보조인자의 보조로 숙주 세포 내부에서 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 이량체는 세포로부터 분비될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛은 숙주 세포로부터 분비되고 숙주 세포 외부에서 IL-22 이량체를 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛은 별개로 발현되고, 적합한 조건 하에서 이량체화를 허용하여 IL-22 이량체를 형성할 수 있다. 예를 들어, 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛은 적합한 완충제에서 조합되고, 적절한 상호작용, 예컨대 소수성 상호작용을 통해 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛이 이량체화하는 것을 허용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛은 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛의 이량체화를 촉진시킬 수 있는 효소 및/또는 보조인자를 함유하는 적합한 완충제에서 조합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 IL-22 단량체성 서브유닛 및 제2 IL-22 단량체성 서브유닛은 적합한 비히클에서 조합되고, 적합한 시약 및/또는 촉매의 존재 하에서 이들이 서로와 반응하는 것을 허용할 수 있다.
발현된 IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체는 임의의 적합한 방법을 사용하여 수집될 수 있다. IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체는 세포내로, 주변세포질 공간에서 발현되거나 세포의 외부에서 배지 내로 분비될 수 있다. IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체가 세포내로 발현되는 경우, IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체를 함유하는 숙주 세포는 용해될 수 있고, IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체는 원심분리 또는 한외여과에 의해 원하지 않는 데브리스를 제거함으로써 용해물로부터 단리될 수 있다. IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체가 이. 콜라이의 주변세포질 공간 내로 분비되는 경우, 세포 페이스트는 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF)와 같은 작용제의 존재 하에서 약 30분 동안 해동될 수 있고, 세포 데브리스는 원심분리에 의해 제거될 수 있다 (Carter et al., BioTechnology 10:163-167 (1992)). IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체가 배지 내로 분비되는 경우, 세포 배양물의 상청액은 수집되고, 상업적으로 입수가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, 아민콘(Amincon) 또는 밀리포어(Millipore) 펠리콘(Pellicon) 한외여과 유닛을 사용하여 농축될 수 있다. 프로테아제 억제제 및/또는 항생제는 단백질 분해 및/또는 오염된 미생물의 성장을 억제하기 위해 수집 및 농축 단계에 포함될 수 있다.
발현된 IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체는 적합한 방법, 예컨대 제한 없이, 친화도 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 이온-교환 칼럼 상의 이온 교환 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 세파로스 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예컨대 폴리아스파르트산 칼럼) 상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 암모늄 술페이트 침전에 의해 추가로 정제될 수 있다 (검토를 위해서는, 문헌 [Bonner, P. L., Protein purification, published by Taylor & Francis. 2007]; [Janson, J. C., et al., Protein purification: principles, high resolution methods and applications, published by Wiley-VCH, 1998] 참조). 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체는 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 바이러스 불활성화, 바이러스 여과, 혼합-모드 크로마토그래피, 역상 HPLC, 크기-배제 크로마토그래피, 접선 유동 여과, 침전, 또는 초원심분리를 사용하여 정제될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛 및/또는 IL-22 이량체를 정제하기 위해 융합된 친화도 태그는 제거될 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체는 친화도 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단백질 A 크로마토그래피 또는 단백질 A/G (단백질 A 및 단백질 G의 융합 단백질) 크로마토그래피는 항체 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인으로부터 유래된 성분을 포함하는 IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체의 정제에 유용할 수 있다 (Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)); Zettlit, K. A., Antibody Engineering, Part V, 531-535, 2010). 일부 실시양태에서, 단백질 G 크로마토그래피는 IgG γ3 중쇄를 포함하는 IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체의 정제에 유용할 수 있다 (Guss et al., EMBO J. 5:1567 1575 (1986)). 일부 실시양태에서, 단백질 L 크로마토그래피는 κ 경쇄를 포함하는 IL-22 단량체성 서브유닛(들) 및/또는 IL-22 이량체의 정제에 유용할 수 있다 (Sudhir, P., Antigen engineering protocols, Chapter 26, published by Humana Press, 1995; Nilson, B. H. K. at al, J. Biol. Chem., 267, 2234-2239 (1992)). 친화도 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 자주 아가로스이지만, 다른 매트릭스는 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예컨대 제어된 기공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐) 벤젠은 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 프로세싱 시간을 허용한다. IL-22 단량체성 서브유닛 또는 IL-22 이량체가 추가의 CH3 도메인을 포함하는 경우, 베이커본드(Bakerbond) ABX 수지 (티. 제이. 베이커(J. T. Baker), 미국 뉴저지주 필립스버그)는 정제에 유용하다.
IL-22 이량체의 예시적인 제조 방법은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 2011년 8월 30일에 제네론 (상하이) 코포레이션, 엘티디. (현재 이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디)에 의해 출원된 특허 출원 PCT/CN2011/079124에 참조될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 순수하게 예시하는 것으로 의도되며, 따라서 본 발명을 어떠한 식으로도 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 하기 실시예 및 상세한 설명은 예시로 제공되며, 제한으로 제공되지 않는다. 실험 방법의 상세사항이 기재되지 않은 실시양태에 대해, 이러한 방법은 통상적인 조건, 예컨대 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)]에 기재된 것들에 따라, 또는 제조업체에 의해 제안된 바와 같이 수행된다.
실시예 1. H1N1 감염의 마우스 모델에 대한 항바이러스제와 조합으로의 재조합 IL-22 이량체 (F-652)의 치료 효과의 연구
방법
F-652는 각각 서열식별번호: 24에 제시된 서열을 포함하는 2개의 단량체성 서브유닛으로 이루어진 재조합 IL-22 이량체이다.
암컷 BALB/c 마우스 (5-6주령, 중량 범위 15-18 g)를 모델 대조군 그룹, 오셀타미비르 처리 그룹, 및 (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹으로 지정된 3개의 그룹 (각각 14마리의 마우스)으로 무작위화하였다.
모든 동물을 제0일에 마우스당 1 x LD50, 즉, 104TCID50의 용량으로 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 ("H1N1"; 균주 A/캘리포니아/07/2009) 점비액으로 챌린지하였다. 시험 약물 또는 위약을 바이러스 챌린지 후 2시간으로부터 시작하여 투여하였다. 오셀타미비르 처리 그룹에 대해, 동물을 연속적 5일 동안 매일 1회 30 mg/kg의 용량으로 오셀타미비르 (타미플루®, 로슈(Roche))로 위내로 투여하였다. (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹에 대해, 동물을 연속적 5일 동안 매일 1회 30 mg/kg의 용량으로 오셀타미비르 (타미플루®, 로슈)로 위내로 투여하고, 총 6개의 용량에 대해 2일마다 30 μg/kg의 용량으로 F-652 (0.05% 트윈 80을 함유하는 PBS 용액 중)로 정맥내로 주사하였다. 모델 대조군 그룹을 동등한 부피의 비히클로 정맥내로 주사하였다.
동물 생존율 및 임상적 징후를 매일 모니터링하고 기록하였다. 제5일에, 각각의 그룹으로부터 6마리의 마우스를 선택하고, 안락사시키고, 폐 조직을 수집하였다. 그 중, 3개의 폐 조직을 고정시키고, 헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 염색을 수행하였다. 폐 세포 상의 변화를 관찰하고, 병리학적 점수를 얻었다. 다른 3개의 폐 조직을 바이러스 역가에 대해 조사하였다. 연구의 종료시 (제14일), 모든 마우스를 안락사시켰다. 폐 조직을 수집하고, 고정시키고, H&E 염색을 수행하였다. 폐 세포 상의 변화를 관찰하고, 병리학적 점수를 얻었다.
결과
연구의 종료시, 모델 대조군 그룹에서의 마우스의 생존율은 50% (4/8)이고, 오셀타미비르 처리 그룹에서의 마우스의 생존율은 62.5% (5/8)였다. (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹에서의 마우스의 생존율은 오셀타미비르 처리 그룹 및 모델 대조군 그룹의 그것들보다 더 높은 75% (6/8)였다. 도 4를 참조한다.
바이러스 채린지 후 제5일에, 모델 대조군 그룹에서의 평균 바이러스 역가는 log10 3.61TCID50이고, 오셀타미비르 처리 그룹에서의 평균 바이러스 역가는 log10 2.50TCID50이고, (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹에서의 평균 바이러스 역가는 log10 2.56TCID50이었다. 오셀타미비르 처리 그룹 및 (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹에서의 평균 바이러스 역가는 둘 다 모델 대조군 그룹의 그것보다 더 낮았다.
약물 투여 후 제5일에, 오셀타미비르 처리 그룹의 총 병리학적 점수의 평균은 모델 대조군 그룹의 그것에 비해 특정 감소를 나타내었다. (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹의 총 병리학적 점수의 평균은 오셀타미비르 처리 그룹의 그것 (10.67 ± 3.51)보다 더 낮은 9.00 ± 2.00이었다. 표 1을 참조한다.
표 1. 바이러스 챌린지 후 제5일에 폐 조직병리학적 점수
Figure pct00003
연구의 종료시 (제14일), 오셀타미비르 처리 그룹의 총 병리학적 점수의 평균은 모델 대조군 그룹의 그것에 비해 특정 감소를 나타내었다. (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹의 총 병리학적 점수의 평균은 오셀타미비르 처리 그룹의 그것 (15.40 ±1.95)보다 더 낮은 14.67 ± 1.63이었다. 표 2를 참조한다.
표 2. 바이러스 챌린지 후 제14일에 폐 조직병리학적 점수
Figure pct00004
제5일 (도 5A-5C) 및 제14일 (도 6A-6C)에 폐 조직의 조직병리학적 평가 및 형태학적 변화는 폐 손상이 모델 대조군 그룹 (도 5A 및 6A)의 그것과 비교하여 오셀타미비르 처리 그룹 (도 5B 및 6B)에서 감소되었음을 제시하였다. 폐 손상의 정도는 (F-652 + 오셀타미비르) 처리 그룹에서 추가로 감소되었다 (도 5C 및 6C).
이들 결과는 오셀타미비르 처리 단독이 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, H1N1) 감염의 마우스 모델에서 사망률, 바이러스 역가, 및 폐 병리학적 손상을 감소시킬 수 있었음을 제시하였다. 오셀타미비르 처리와 조합으로 F-652의 추가의 정맥내 투여는 오셀타미비르 단일 요법에 비해 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, H1N1) 감염의 마우스 모델에서 추가로 사망률을 감소시키고 폐 손상을 개선시킬 수 있었다. 따라서, 결과는 오셀타미비르 및 F-652의 조합 요법이 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, H1N1) 감염에 의해 유발된 사망률 및 폐 손상을 감소시키고, 폐 조직 복구를 촉진시킬 수 있었음을 입증하였다.
실시예 2. 통상적인 항바이러스 레지멘과 조합으로, SARS-CoV-2 감염으로 인한 중증 COVID-19 (예를 들어, 중증 폐렴)를 치료하는데 있어서의 재조합 IL-22 이량체 (F-652)의 무작위화 대조 연구
연구 설명
이는 SARS-CoV-2 감염으로 인한 중증 COVID-19 (예를 들어, 중증 폐렴)를 갖는 환자에서 통상적인 항바이러스 레지멘과 조합으로 F-652 (재조합 인간 IL-22 IgG2-Fc)의 안전성 및 효능을 조사하기 위한 무작위화 대조 연구이다. 중증 폐렴을 갖는 환자에서 간, 신장 및 다른 기관 기능에 대한 F-652의 효과를 평가한다. 이 환자 집단에서의 F-652의 치료 바이오마커를 또한 조사한다. F-652는 각각 서열식별번호: 24에 제시된 서열을 포함하는 2개의 단량체성 서브유닛으로 이루어진 재조합 IL-22 이량체이다.
연구 디자인: 통상적인 항바이러스 레지멘과 조합으로 임상시험용 약물, 및 통상적인 항바이러스 레지멘과 조합으로 위약 사이의 다기관, 대조, 단일-맹검.
부문: SARS-CoV-2 감염으로 인한 중증 COVID-19 (예를 들어, 중증 폐렴)를 갖는 환자를 모집하고, 실험 그룹 (F-652 + 통상적인 항바이러스 레지멘) 및 대조군 그룹 (위약 + 통상적인 항바이러스 레지멘)으로 1:1의 비로 무작위로 할당한다. 환자를 통상적인 항바이러스 레지멘 (로피나비르/리토나비르 (칼레트라®) 정제 + IFN-α 흡입)에 추가로, 무작위화 후 제1일에 정맥내 주입에 의해 30 μg/kg F-652 (실험 그룹) 또는 위약 (대조군 그룹) 중 어느 하나로, 및 무작위화 후 제8일 및 제15일에 정맥내 주입에 의해 30 μg/kg F-652 (실험 그룹) 또는 위약 (대조군 그룹) 중 어느 하나로 투여한다.
연구 과정: 폐 기능 개선 평가 (임상적 증상 및 CIPS 점수), 간 기능 평가 (MELD, 릴(LILLE) 점수), 급성 생리학 및 만성 건강 평가 (APACHE II 점수) 및 급성 신장 손상 평가 (AKI의 RIFLE 분류)를 환자 스크리닝시, 제7일, 제14일 및 제21일에 측정한다. 조사자는 환자가 제14일 또는 제21일 지수에서 실험실 시험 지표 (예를 들어, SARS-CoV-2 핵산이 음성으로 시험되는지 여부), 폐 기능의 개선, 및 다양한 임상적 지표에 기반하여 병원으로부터 퇴원할 수 있는지 여부를 결정한다. 입원이 여전히 요구되는 경우, 연장된 기간이 기록될 것이다. 마지막 방문은 무작위화 후 제30일에 완결된다. 임상적 예후 및 결과를 무작위화 후 제90일에 전화 인터뷰에 의해 평가한다.
추가의 임상적 지표는 호흡률의 기준선으로부터의 변화; 맥박수의 기준선으로부터의 변화; 수축기 혈압의 기준선으로부터의 변화; 확장기 혈압의 기준선으로부터의 변화; 체온의 기준선으로부터의 변화; 산소 포화도의 기준선으로부터의 변화; 심전도 (ECG)에 의해 측정된 바와 같은 RR, QRS, PR, QT, 및 QTcF 간격의 기준선으로부터의 변화; 심전도 (ECG)에 의해 측정된 바와 같은 심박동수의 기준선으로부터의 변화; 및 혈액학 파라미터에서 임상적 실험실 시험 비정상을 갖는 참가자의 수를 포함할 수 있다.
C-반응성 단백질 (CRP), 혈청 아밀로이드 A (SAA), TNF, IL-2, IL-6, IL-10, 재생 소도-유래 단백질 3 알파 (Reg3A), FIB, 및 EGFR의 혈청 수준의 변화를 또한 측정한다.
효능 목적
1차 효능 종점: 제7일, 제14일 및 제21일에 임상적 회복 시간 (치료의 시작으로부터 발열까지, 호흡률, 정상 수준으로 회복하는 손가락 산소 포화도 및 적어도 72시간 동안의 기침 완화); 폐 기능의 개선 (CPIS 점수).
2차 효능 종점: 제7일, 제14일 및 제21일에 간 기능의 개선 (MELD, 릴 점수); 30-일 생존율; 30-일 환자 개선율; 치료 및 관찰을 위해 ICU로 이송된 환자의 수; ICU 체류 동안 입원 기간; 환자의 총 재원; 제7일, 제14일 및 제21일에 급성 신장 손상의 평가; 제7일, 제14일 및 제21일에 급성 생리학적 및 만성 건강 평가; 기관 부전의 사례의 수 및 비율; 공동-감염 사례의 수 및 비율; 응고 기능, 총 빌리루빈, 혈청 크레아티닌, 크레아티닌 청소율 등의 개선; CTCAE 5.0에 따른 등급 II 초과의 위장 유해 사건의 감소. 추가의 2차 결과 척도는 24시간 동안 유지된 ≤2의 국가 조기 경고 점수 2 (NEWS2)로서 정의된 임상적 개선까지의 시간; 임상적 상태의 7-카테고리 순위 스케일에 대한 기준선에 비해 적어도 2개의 카테고리의 개선까지의 시간 (기간: 기준선으로부터 60일까지)을 포함할 수 있다.
안전성 목적
1차 안전성 종점: 발생, 유형, 임상시험용 약물에 대한 관련성, 및 중증도를 포함하는 유해 사건.
2차 안전성 종점: 신체 검사 및 활력 징후의 변화; 실험실 검사 및 12-유도 심전도 (ECG)의 변화, 예를 들어 ECG에 의해 측정된 바와 같은 RR, QRS, PR, QT, 및 QTcF 간격의 기준선으로부터의 변화.
탐색적 바이오마커 척도: CRP, 혈청 아밀로이드 A (SAA), TNF, IL-2, IL-6, IL-10, Reg3A, FIB 및 EGFR의 혈청 수준의 변화. 추가의 바이오마커 척도는 기준선에서 항-약물 항체 (ADA)의 유행 및 연구 동안 ADA의 발생을 포함할 수 있다.
실시예 3. 내피 기능이상에 대한 재조합 IL-22 이량체 (F-652)의 치료 효과의 연구
본 실시예에서 F-652가 내피 기능이상을 감소시키고, 지질다당류 (LPS) 손상의 맥락에서 내피 글리코칼릭스 ("EGX"; 내피를 관광내로 커버하여, 내피 침투성을 조절하는 막-결합된 프로테오글리칸 및 당단백질의 망상체)을 보호함을 입증하는 결과가 제공된다. 또한, F-652의 보호 효과가 내피 세포에서의 TLR4 경로의 하향조절에 의해 매개됨을 시사하는 결과가 제공된다. TLR4 경로는 바이러스 감염 뿐만 아니라 LPS 손상의 맥락에서 활성화된다. (Olejnik, J., Hume, A. J., & Muehlberger, E. (2018). "Toll-like receptor 4 in acute viral infection: Too much of a good thing." PLoS pathogens, 14(12), e1007390). 따라서, 본원에서 제공된 결과는 개체에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는데 있어서 IL-22 치료의 역할을 지지한다 (Minako Yamaoka-Tojo. "Endothelial glycocalyx damage as a systemic inflammatory microvascular endotheliopathy in COVID-19," Biomed J. 2020; 43(5): 399-413).
방법
HUVEC 배양
인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)으로부터 구입하였다. 세포를 초기에 5% CO2 분위기를 갖는 37℃에서의 세포 배양 인큐베이터에서 저 혈청 성장 보충물 (LSGS) 및 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 M200 배지를 사용하여 2% 젤라틴-코팅된 10-cm 플라스틱 디쉬에서 성장시켰다. 세포를 80% 전면생장률에 도달한 후 행크 균형 염 용액 (HBSS) 중 0.25% 트립신에서의 소화에 의해 계대하였다. 세포를 계대 1-3 사이에 실험에 사용하였다. 글리코칼릭스 정량화를 위해, HUVEC를 대략 80%의 전면생장률에서, 2% 젤라틴으로 코팅된 48-웰 플라스틱 세포 배양 플레이트에 플레이팅하였다. M200 + LSGS + 페니실린/스트렙토마이신을 1% 소 혈청 알부민 (BSA)으로 보충하여 글리코칼릭스 성장을 지지하였다. 세포를 24시간 동안 배양하여 글리코칼릭스 발달을 허용한 후, LPS 노출시켰다.
실험 디자인
EGX에 대한 F-652의 효과를 조사하기 위해, 배양된 HUVEC를 비처리된 배지, 1 μg/mL의 LPS, 1 μg/mL의 LPS 및 0.375 μg/mL의 F-652, 또는 0.375 μg/mL의 F-652 단독 중 어느 하나에 총 24시간 동안 노출시켰다.
글리코칼릭스 정량화
F-652와 함께 또는 없이 LPS 노출의 완결 후, HUVEC를 배양 배지에 직접적으로 농축된 포름알데히드 용액의 첨가에 의해 고정시켜 3.5%의 최종 포름알데히드 농도를 얻었다. 10분의 고정 후, 세포를 1% BSA로 보충된 포스페이트-완충 염수 (PBS)로 세척하였다. 이어서 세포를 어둠에서 실온에서 20분 동안 1% BSA를 갖는 PBS 중 23 μg/mL WGA 및 23 μg/mL 4',6-디아미디노-2-페닐인돌로 염색하였다. 비-표면 층 염색으로의 결과를 교란시키는 세포질 내로 WGA가 침투되지 않음을 보장하기 위해 염색을 이 짧은 기간 동안 수행하였다. 이어서 세포를 PBS 중 1% BSA로 2회 세척하고, 플루오로-겔(Fluoro-Gel) 실장 배지 (일렉트론 마이크로스코피 사이언시스(Electron Microscopy Sciences))로 커버하였다. 글리코칼릭스 및 핵 (4',6-디아미디노-2-페닐인돌)을 동일한 조건 하에서 EVOS 형광 현미경 상에서 영상화하였다. 영상당 대략 100개의 세포를 갖는 3개의 영상을 각각의 조건에 대해 취하였다. 이미지제이(ImageJ) 소프트웨어를 사용하여 각각의 생존 세포의 핵을 오버레이하는 글리코칼릭스 형광 강도를 정량화하였다.
면역형광을 사용하는 IL-22Ra1 수용체의 측정
HUVEC를 PBS 중 3.5% 포름알데히드에서 10분 동안 고정시켰다. 이어서 세포를 PBS 중 1% BSA에서 1시간 동안 차단하였다. 이어서 세포를 PBS 중 1% BSA에 1:100 희석된 IL-22Ra1 (인비트로젠(Invitrogen), 미국 캘리포니아주 칼스배드)에 대한 1차 항체에서 밤새 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 세포를 0.1 μg/ml의 4,6 디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI) (시그마(Sigma))과 함께 PBS 중 1% BSA에 1:500 희석된 2차 항체, 염소 항-마우스 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 (1:500; 인비트로젠, A28175)과 1시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 PBS에서 3회 세척하였다. 이어서 세포를 플루오로 겔 실장 배지로 커버 슬립하고, EVOS 형광 현미경 상에서 영상화하였다. 형광 강도를 이미지제이를 사용하여 정량화하였다.
총 STAT3 및 인산화된 STAT3에 대한 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 웨스턴 블롯
HUVEC를 용해 완충제 (50 mM 트리스(Tris)-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 M EDTA, 1% 트리톤(Triton) X-100, 및 홀트(Halt)™ 프로테아제 억제제 칵테일)에 용해시켰다. 단백질을 바이오-래드(Bio-Rad) 단백질 정량화 검정 (바이오-래드 래버러토리스(Bio-Rad Laboratories))을 사용하여 정량화하고, 20-50 μg의 단백질을 100 V에서 4-12% 구배 아크릴아미드 겔 실행 상의 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 분리하였다. 이어서 단백질을 30 V에서 2시간 동안 0.45 μm PVDF 막에 옮겼다. 막을 트리스 완충 염수 (TBS: 137 mM NaCl, 20 mM 트리스 베이스(Tris Base)), 0.1% 트윈 20, 및 5% 소 혈청 알부민 (차단 용액)에서 1시간 동안 차단하고, 이어서 TBS, 0.1% 트윈 20, 및 3% BSA에 희석된 1차 항체와 밤새 인큐베이션하고, 1:5,000으로 희석된 서양고추냉이 퍼옥시다제-접합된 2차 항체와 1시간 인큐베이션하였다. 신호 전달제 및 전사의 활성화제 3 (STAT3)에 대해 사용된 1차 항체는 토끼 모노클로날 항체 #30835S (셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology))이고, 인산화된 STAT3 (p-STAT3)에 대한 1차 항체는 토끼 모노클로날 항체 #9145 (셀 시그널링 테크놀로지)였다. 면역반응성 단백질을 바이오-래드 케미독(ChemiDoc)™ MP 이미징 시스템(Imaging System) 상에서 영상화된 ECL (지이 헬스케어(GE Healthcare))을 사용하여 검출하였다.
실시간 정량적 역전사 PCR
RNA를 트리졸(Trizol) (인비트로젠)로 단리하고, 리버스 트랜스크립타제 (상표명 이스크립트(ISCRIPT)® RT 슈퍼믹스 하에 판매되는 리버스 트랜스크립타제 믹스, 바이오-래드)에 대한 주형으로서 사용하였다. mRNA를 시아닌 핵산 염료 IQ SYBR® 그린 슈퍼믹스 (바이오-래드)로의 실시간 PCR에 의해 정량화하고, 내부 대조군 유전자로서 PPIA mRNA에 대해 정규화하였다. 발현의 상대 변화를 이전의 연구에서 확립된 바와 같은 ΔΔCt 방법을 사용하여 계산하였다. (Livak KJ, Schmittgen TD. "Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method." Methods. 2001;25(4):402-8).
통계적 분석
글리코칼릭스 염색 강도 및 RNA 수준을 평균 ± 표준 오차로서 제시하고, 그룹 사이의 차이를 스튜던트(Student) t 검정에 의해 분석하였다. 0.05 미만의 p-값을 모든 검정에 대해 유의한 것으로 간주하였다.
결과
글리코칼릭스 쉐딩
글리코칼릭스 강도의 비교는 도 7A에 제시된다. 대조군과 비교할 경우, LPS 노출은 글리코칼릭스 분해를 초래하였다 (6.09 [대조군] vs. 5.10 [LPS] 임의 단위 [AU], p=0.01). 그러나, LPS 및 F-652에의 노출은 대조군과 비교하여 글리코칼릭스 분해를 발생시키지 않았다 (6.09 [대조군] vs. 5.86 [LPS+F-652] AU, p=0.28). F-652 단독에의 HUVEC 노출은 대조군에 비해 글리코칼릭스 쉐딩을 발생시켰다 (6.09 [대조군] vs. 5.08 [F-652] AU, p=0.01). 글리코칼릭스 쉐딩은 F-652와의 LPS에 비해 LPS 단독에 노출된 HUVEC에서 더 나빴다 (5.10 [LPS] vs. 5.86[LPS+F-652] AU, p=0.001). 형광 현미경검사의 대표적인 영상은 도 7A에서 모든 4개의 그룹에 대해 제시된다.
IL-22Ra1 수용체 및 STAT3 신호전달
인터류킨 22 수용체, 알파 1 (IL-22Ra1)은 IL-22 수용체의 2개의 서브유닛 중 하나이다. 도 7B에 제시된 바와 같이, LPS (p=0.15) 또는 F-652 (p=0.25) 단독에의 노출은 대조군에 비해 IL-22Ra1 수용체 발현의 차이를 발생시키지 않았다. LPS 및 F-652에의 노출은 IL-22Ra1 수용체의 감소를 발생시켰다 (1.00 [대조군] vs. 0.69 상대 발현 [RE], p=0.001). IL-22Ra1 수용체 상대 발현은 LPS 및 F-652 노출을 갖는 HUVEC에 비해 LPS 단독 노출을 갖는 HUVEC에서 유의하게 상이하지 않았다 (p=0.10).
도 8A는 F-652 단독에 노출된 HUVEC에 비해 대조군 HUVEC에서의 인산화된 STAT3 대 총 STAT3의 비를 제시한다. F-652 처리된 것에서의 인산화된 STAT3 대 총 STAT3의 비는 대조군과 비교하여 F-652 처리된 HUVEC에서 유의하게 더 높다 (p=0.01). 인산화된 STAT3 및 총 STAT3을 정량화하는 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 웨스턴 블롯의 대표적인 영상은 도 8A의 우측 패널에 제시된다.
메탈로프로테이나제
매트릭스 메탈로프로테이나제 (MMP)는 면역 반응에서 중요한 역할을 갖는다. 활성 MMP는 면역 기재를 변형시키고 막횡단 수용체를 절단함으로써, 세포-세포 통신 및 세포내 신호전달에 영향을 미친다. MMP는 내피 세포 표면 단백질, 예컨대 신데칸을 파괴하여, EGX의 교란을 발생시킬 수 있다.
LPS (p=0.23) 또는 LPS 및 F-652 (p=0.18)로의 HUVEC의 처리는 대조군에 비해 매트릭스 메탈로프로테이나제-1 (MMP-1)의 발현을 유의하게 변화시키지 않았다. LPS에 노출된 HUVEC는 대조군과 비교하여 MMP-2 (p=0.053) 및 MMP-14 (p=0.04)의 더 높은 수준을 가진 반면; LPS 및 F-652에의 HUVEC의 노출은 대조군과 비교하여 MMP-2 (p=0.12) 및 MMP-14 (p=0.29)의 더 낮은 상대 발현을 발생시켰다. LPS (p=0.22) 또는 LPS 및 F-652 (p=0.40)로의 HUVEC의 처리는 대조군과 비교하여 MMP-9의 발현을 변화시키지 않았다. F-652 단독으로의 처리는 임의의 매트릭스 메탈로프로테이나제의 수준을 변화시키지 않았다. 도 8B를 참조한다.
MMP-7 수준은 LPS (1.11 [대조군] vs. 2.99 RE, p=0.06), LPS 및 F-652 (1.11 [대조군] vs. 1.53 RE, p=0.15), 또는 F-652 단독 (1.11 [대조군] vs. 1.23 RE, p=0.38)으로 처리된 경우 대조군에 비해 변화하지 않았다. MMP-9 상대 발현은 LPS 노출된 HUVEC를 LPS 및 F-652 노출된 HUVEC와 비교할 경우 상이하지 않았다 (2.99 vs. 1.53 RE, p=0.09). 또한, A 디스인테그린 및 메탈로프로테이나제 (ADAM) 도메인 17 (ADAM17) 수준은 LPS (1.09 [대조군] vs. 2.42 RE, p=0.06), LPS 및 F-652 (1.09 [대조군] vs. 1.22 RE, p=0.31), 또는 F-652 단독 (1.09 [대조군] vs. 1.14 RE, p=0.42)으로 처리된 경우 대조군에 비해 변화하지 않았다. ADAM17 상대 발현은 LPS 노출된 HUVEC를 LPS 및 F-652 노출된 HUVEC와 비교할 경우 유의하게 상이하지 않았다 (2.42 vs. 1.22 RE, p=0.054).
프로-글리코칼릭스 작용제
MMP의 억제는 메탈로프로테이나제의 조직 억제제 (TIMP)의 부류에 의해 자 연적으로 일어난다. 메탈로프로테이나제의 조직 억제제-1 (TIMP1)은 다양한 HUVEC 노출 그룹 중에서 상이하지 않았다. LPS 노출 단독과 비교할 경우, TIMP2 수준은 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC에서 더 낮았다 (1.49 vs. 0.82 RE, p=0.04). TIMP2에 대한 모든 다른 비교는 유의하게 상이하지 않았다 (LPS vs. 대조군; LPS+F-652 vs. 대조군; 또는 F-652 vs. 대조군). 엑소스토신-1은 EGX 재구성에 관여한다. 엑소스토신-1 (1.49 vs. 0.82 RE, p=0.04) 및 엑소스토신-2 (1.88 vs. 0.99 RE, p=0.01) 수준은 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC와 비교하여 LPS 단독 노출된 HUVEC에서 유의하게 더 높았다. 엑소스토신-2 수준은 대조군과 비교하여 LPS 단독 노출된 HUVEC에서 유의하게 더 높았다(1.88 vs. 1.08 RE, p=0.02). 도 9를 참조한다.
혈관 내피 카드헤린 수준
혈관 내피 카드헤린 (VE-CAD)은 내피 세포 사이의 접착 연접의 주요 성분인 막 단백질이다. 이는 혈관 완전성, 내피 침투성, 및 혈관신생을 조절하는데 중요하다. 염증성 과정 동안, VE-CAD는 순환 내로 쉐딩된다 (sVE-CAD). VE-CAD RNA 수준은 대조군과 비교하여 LPS 단독 노출된 HUVEC에서 더 높았다 (1.96 vs. 1.06 RE, p=0.048). LPS 단독 처리된 HUVEC는 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC보다 유의하게 더 높은 VE-CAD RNA 수준을 가졌다 (1.96 vs. 0.81 RE, p=0.02). LPS 및 F-652 공동-노출된 (1.06 [대조군] vs. 0.81 RE, p=0.18) 및 F-652 단독 노출된 (1.06 [대조군] vs. 1.01 RE, p=0.41) HUVEC에서의 VE-CAD는 대조군보다 유의하게 상이하지 않았다.
톨-유사 수용체 4 신호전달 경로
톨-유사 수용체 4 (TLR4)는 박테리아 LPS를 인식한다. 골수 분화된 1차 반응 88 (MyD88)은 TLR4에 의해 이용되고, 염증성 시토카인 유전자의 유도를 위해 NF-κB 및 MAPK를 활성화시킨다. 톨-인터류킨-1 수용체 도메인 함유 어댑터 단백질 (TIRAP)은 MyD88을 TLR4에 동원하는 분류 어댑터이다. MyD88은 인터류킨-1 수용체 연관 키나제 1 (IRAK-1), IRAK-4, 및 이어서 TNF 수용체-연관 인자 6 (TRAF6)을 동원하여, 원형적 염증성 전사 인자 NF-κB의 핵 전위를 발생시킨다. TIR 도메인-함유 어댑터 단백질 유도 IFNβ (TRIF)는 MyD88-독립적 경로를 매개하여 유형 I IFN 생산을 조절하는 전사 인자 인터페론 조절 인자 3의 TLR4-매개 활성화를 초래한다. TRIF-관련 어댑터 분자 (TRAM)는 TLR4를 TRIF와 가교시키도록 특이적으로 작용한다. 문헌 [B. Verstak et al. (J Biol Chem. 2009; 284(36): 24192-24203)]을 참조한다.
TLR4 mRNA는 모든 비교에서 유의하게 상이하지 않았다 (도 10). MYD88 RNA 발현은 LPS 단독 노출된 HUVEC와 비교하여 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC에서 더 낮았다 (0.72 vs. 1.48 RE, p=0.03). MYD88의 모든 다른 비교 (LPS vs. 대조군; LPS+F-652 vs. 대조군; 또는 F-652 vs. 대조군)는 유의하게 상이하지 않았다. 유사하게, TIRAP mRNA 발현은 LPS 단독 노출된 HUVEC와 비교하여 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC에서 더 낮았지만 (0.82 vs. 1.92 RE, p=0.04), 모든 다른 비교에서는 유의하게 상이하지 않았다. 또한, IRAK4 mRNA 발현은 LPS 단독 노출된 HUVEC와 비교하여 LPS 및 F-652 공동-노출된 HUVEC에서 더 낮았지만 (0.86 vs. 1.51 RE, p=0.02), 모든 다른 비교에서는 유의하게 상이하지 않았다. 도 10을 참조한다. TRAM, TRAF6, IRAK1, 및 TRIF의 수준은 도 11에 제시된 바와 같이 모든 그룹 비교에서 유의하게 상이하지 않았다.
논의
내피 기능이상 및 글리코칼릭스 쉐딩은 바이러스, 예컨대 코로나바이러스에 의해 야기된 바이러스-유발 손상의 주목할 만한 후유증이다 (Okada, H, Yoshida, S, Hara, A, Ogura, S, Tomita, H. "Vascular endothelial injury exacerbates coronavirus disease 2019: The role of endothelial glycocalyx protection." Microcirculation. 2020; 00:e12654). 내피 글리코칼릭스 (EGX)는 쉐다제, 예컨대 메탈로프로테이나제, 헤파라나제, 및 히알루로니다제를 포함하는 몇몇 염증성 메커니즘을 통해 분해될 수 있다. 이는 혈관 과다-침투성, 미세혈관 혈전증, 및 증진된 백혈구 부착에 기여한다. 본 실시예에서, 본 발명자들은 F-652가 LPS 손상 후 EGX의 쉐딩에 대해 보호함을 입증하는 결과를 제공한다. 추가로, 본 발명자들은 F-652가 TLR4 신호전달 경로의 하향조절을 통해 EGX 쉐딩을 감소시킬 수 있음을 입증하는 결과를 제공한다. 이들 결과는 개체에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 치료하는데 있어서 F-652의 치료 역할을 지지한다.
F-652가 EGX에 대한 보호 효과를 가짐을 제시하는 결과가 본원에서 제공된다. 흥미롭게도, F-652 단독으로 EGX를 처리하는 것은 EGX 쉐딩을 초래하였지만, 내피 손상 (LPS 처리)의 맥락에서, F-652는 대조군에 관하여 EGX 층을 보존하였다 (도 7A).
MMP는 다양한 모델 급성 폐 손상 및 급성 호흡 곤란 증후군 (ALI/ARDS)에서 상향조절된다. 또한, MMP는 EGX의 분해에 있어서 핵심적 역할을 한다. 본 발명자들은 F-652가 그렇지 않다면 내피 기능이상을 유발할 LPS로 처리된 세포에서 MMP-2 및 MMP-14의 발현의 통계적으로 유의한 감소를 발생시켰음을 밝혀내었다. 결과는 또한 F-652가 그렇지 않다면 내피 기능이상을 유발할 LPS로 처리된 세포에서 MMP-1 및 MMP-9의 발현을 감소시킬 수 있음을 시사하지만, 이 감소의 유의성을 확인하기 위해 추가의 실험이 요구된다 (도 8B).
LPS와의 F-652 공동-노출은 TLR4 발현을 감소시키지 않은 반면, 이는 이 염증유발성 경로의 다수의 매개자를 하향-조절하였다. MYD88, TIRAP, 및 IRAK4는 LPS 및 F-652의 존재 하에서 감소된 TLR4 경로에서 모든 핵심적 매개자이다. 이들 결과는 IL-22가 TLR4 매개자의 발현을 감소시킬 수 있다는 증거를 제공한다. 이 경로의 하향-조절은 본 연구에서 관찰된 MMP-2 및 MMP-9의 감소를 설명할 수 있다. 더욱이, 이 발견은 F-652가 중증 감염에서 신규한 치료제일 잠재성을 강조한다.
결론적으로, 본 연구는 F-652 단독이 EGX 분해를 유발하지만, 손상 (예를 들어 LPS 손상)의 존재 하에서, F-652는 EGX 분해를 완화시킴을 입증한다. IL-22Ra1 수용체는 내피 세포 상에 존재하며, 인산화된-STAT3 경로를 통해 신호전달한다. EGX에 대한 F-652의 보호 효과는 메탈로프로테이나제의 감소 및 TLR4 경로의 하향-조절을 통해 매개되는 것으로 보인다. 이들 발견은 중증 바이러스 감염 (예를 들어, 코로나바이러스 감염) 또는 패혈증에서 발생하는 내피병증에서 F-652의 잠재적 치료 효과를 시사한다.
실시예 4. 급성 폐 손상의 마우스 모델에서의 내피 기능이상에 대한 재조합 IL-22 이량체 (F-652)의 치료 효과의 연구
본 실시예에서 F-652가 ARDS의 전임상 모델에서, 예컨대 바이러스 감염에서 치료 유익을 가질 수 있다는 개념의 입증을 확립하는 결과가 제공된다.
방법
급성 폐 손상 및 F-652 처리
툴란 유니버시티(Tulane University), 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)로부터의 승인 (프로토콜 ID 607) 후, 동등한 수의 수컷 및 암컷, 6-8주령 C57BL/6 마우스 (찰스 리버 래버러토리스(Charles River Laboratories), 미국 매사추세츠주 캠브리지)를 기관내 투여된 LPS를 통해 급성 폐 손상 (ALI)을 제공하였다. 이소플루란을 사용하여 적절한 깊이의 마취를 얻은 후, 고-용량 LPS 그룹 (HDG)은 기관내로 투여된 100 μg의 LPS를 받았다. LPS 투여 후 대략 30분에, 4 μg의 F-652를 꼬리 정맥 주사를 통해 투여하고 (n=11), 이어서 포스페이트-완충 염수 (PBS)로 모의 주사를 받은 동물 (n=8)과 비교하였다. 저-용량 LPS 그룹 (LDG)에서, 33.3 μg의 LPS를 기관내로 투여하였다. F-652를 다시 30분에서 투여하고 (n=9), 모의 주사된 동물 (n=9)과 비교하였다. 인터류킨-22:Fc (F-652) 단백질은 분자의 반감기를 연장시키는 인간 이뮤노글로불린 G2의 Fc 부분에 연결된 2개의 인간 IL-22 분자를 갖는 재조합 융합 단백질 (F-652) (이바이브 바이오테크, 중국 상하이)이다.
폐 손상의 평가
안락사 및 기관지폐포 세척 (BAL)을 손상 후 제4일에 수행하였다. 흡입된 이소플루란으로 적절한 수준의 마취를 얻은 후, 기관을 26 게이지 바늘을 사용하여 캐뉼러 삽입하고, BAL을 1 mL의 PBS를 사용한 3회의 연속적 세척으로 수행하였다. 다음으로, 좌하엽의 작은 절편을 제거하고, RNA 단리를 위해 저장하였다. 마지막으로, 1 cc의 4% 파라포름알데히드를 고정을 위해 폐에 주사하였다.
이어서 BAL 유체를 500x 중력에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포를 원심분리 후 BAL로부터 얻고, 세포 카운트를 수행하였다. 이어서 세포를 유리 슬라이드에 고정시키고, 라이트(Wright) 염색으로 염색하였다. BAL 상청액에서 단백질을 정량화하기 위해, 브래드포드(Bradford) 단백질 검정 (바이오-래드 래버러토리스)을 수행하였다. 단백질을 BMG 랩테크(BMG Labtech) 플루오스타 옵티마(FLUOstar Optima) 플레이트 판독기 상에서 595 nm에서 흡광도를 측정함으로써 정량화하였다. 또한, BAL 상청액을 밀리플렉스(Milliplex) 마우스 시토카인/케모카인 자기 비드 패널 (밀리포어 시그마(Millipore Sigma))을 사용하여 염증유발성 시토카인을 측정하는데 사용하였다. 측정된 32가지 시토카인은 에오탁신, 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF), 과립구-단핵구 콜로니-자극 인자 (GM-CSF), 인터페론-γ (IFN-γ), 인터류킨-1α (IL-1α), IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12 (p40 절편), IL-12 (p70 절편), IL-13, IL-15, IL-17, 인터페론-γ 유도된 단백질 10 (IP-10), 각질세포 화학유인물질 (KC), 백혈병 억제 인자 (LIF), 지질다당류-유도된 CXC 케모카인 (LIX), 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 대식세포 콜로니-자극 인자 (M-CSF), 감마-인터페론에 의해 유도된 모노카인 (MIG), MIP-1α, 대식세포 염증성 단백질-1β/CCL4 (MIP-1β), MIP-2, 활성화시 조절되고, 정상 T-세포 발현되고, 아마도 분비됨 (RANTES), 종양 괴사 인자-α (TNF-α), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)를 포함하였다. 인간 IL-22를 IL-22 인간 ELISA 키트 (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific))를 사용하여 측정하였다. 마우스 IL-22를 IL-22 마우스/래트 콴티킨(Quantikine) ELISA 키트 (알앤디 시스템스(R&D Systems))를 사용하여 측정하였다.
조직병리학적 평가
희생 직후, 우하엽으로부터의 폐 조직을 4% 파라포름알데히드에서 고정시키고, 섹션으로 커팅하였다. 섹션을 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색하였다. LPS에 의해 유발된 폐 손상을 맹검된 검토자에 의해 0-4의 범위의 수치 점수화 스케일로 평가하였다. 섹션에서의 폐 손상의 영역을 내막 비후의 정도, 폐포염, 및 폐포 공간에서의 단백질성 물질의 존재에 대해 점수화하였다. 대표적인 영상을 취하였다.
내피 글리코칼릭스 측정
파라포름알데히드-고정된 폐 절편을 최적 커팅 온도 (O.C.T) 화합물 (사쿠라(Sakura))에서 순간-동결시키고, 저온유지장치 상에서 섹션화하였다. 이어서 섹션을 1% BSA로 보충된 PBS로 차단하였다. 이어서 조직을 1% BSA를 갖는 PBS 중 23 μg/mL WGA 및 23 μg/mL 4',6-디아미디노-2-페닐인돌로 어둠에서 실온에서 1시간 동안 염색하였다. 이어서 섹션을 PBS로 3회 세척하고, 플루오로-겔 실장 배지 (일렉트론 마이크로스코피 사이언시스)로 커버하였다. 글리코칼릭스 및 핵 (4',6-디아미디노-2-페닐인돌)을 동일한 조건 하에서 올림푸스(Olympus) BX51 형광 현미경 상에서 영상화하였다. 이미지제이 소프트웨어를 사용하여 조건당 3마리의 마우스로부터 최소 관심의 20개의 영역으로부터 폐포 모세혈관에서의 글리코칼릭스 형광 강도를 정량화하였다.
면역형광 염색
폐 조직을 PBS 중 4% 파라포름알데히드에서 밤새 고정시켰다. 파라포름알데히드-고정된 폐 절편을 최적 커팅 온도 (O.C.T.) 화합물 (사쿠라)에서 순간-동결시키고, 저온유지장치 상에서 섹션화하였다. 이어서 조직을 PBS 중 1% BSA에서 1시간 동안 차단하였다. 이어서 조직을 PBS 중 1% BSA에 1:100 희석된 IL-22Ra1에 대한 1차 항체 (인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드) 및 E-카드헤린 (시그마)에서 밤새 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 세포를 0.1 μg/ml의 4,6 디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI) (시그마)과 함께 PBS 중 1% BSA에 희석된 2차 항체, 염소 항-마우스 알렉사 플루오르 488 (1:500; 인비트로젠, A28175) 및 염소 항-토끼 알렉사 플루오르 555 (1:500, 인비트로젠, A27039)와 1시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 PBS에서 3회 세척하였다. 이어서 세포를 플루오로 겔 실장 배지로 커버 슬립하고, 올림푸스 BX51 형광 현미경 상에서 영상화하였다. 형광 강도를 이미지제이를 사용하여 정량화하였다.
RNA-seq
폐 조직을 트리졸 완충제 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))에서 균질화하고, 총 RNA 추출을 트리졸 제조업체의 지시서에 따라 수행하였다. 총 RNA를 사용하여 RNA 시퀀싱 (RNA-seq)을 수행하였다. RNA 양 및 품질을 나노드롭(NanoDrop) 및 애질런트(Agilent) 4150 테이프스테이션(TapeStation) 시스템을 갖는 애질런트 RNA 스크린테이프(ScreenTape)를 사용하여 평가하였다. SMART-Seq 가닥 총 RNA 샘플 프렙 키트 (타카라 바이오 유에스에이, 인크.(Takara Bio USA, Inc.))를 사용자 매뉴얼에 명시된 바와 같이 라이브러리 제조에 사용하고, 이어서 애질런트 4150 테이프스테이션 시스템으로 애질런트 DNA 1000 키트 확인 및 큐빗(Qubit) 2.0 형광계에 의한 정량화를 수행하였다. cDNA 라이브러리를 최종 농도 1.2 pM에서 풀링하였다. 클러스터 생성 및 1 x 75 bp 단일 리드 단일-지수 시퀀싱을 일루미나(Illumina) 넥스트섹(NextSeq) 550 상에서 하이-아웃풋(High-Output) 키트 v2.5 (75 사이클)에 의해 수행하였다. 미가공 리드를 프로세싱하고 맵핑하였다. 경로 분석을 애드바이타 바이오인포매틱스(Advaita Bioinformatics) 게노믹스 워크벤치(Genomics Workbench)를 사용하여 수행하였다.
통계적 분석
값을 평균 ± 표준 오차로서 제시하고, 그룹 사이의 차이를 스튜던트 t 검정에 의해 분석하였다. 0.05 미만의 p-값을 모든 검정에 대해 유의한 것으로 간주하였다.
결과
BAL에서 측정된 세포 카운트
고용량 손상 동물에서의 염증성 세포 유입의 정도를 조사하기 위해, 본 발명자들은 F-652 처리된 동물 및 모의 동물 사이의 세포 카운트를 비교하였다. 저-용량 LPS 손상된 동물에 대한 세포 카운트는 도 12에 제시된다. 총 세포 카운트는 모의 동물과 비교할 경우 F-652 처리된 동물에서 유의하게 상이하지 않았다 (364,444 vs. 433,889개의 세포, p=0.18). 호중구 카운트는 모의 동물에 비해 F-652 처리된 동물에서 유의하게 더 낮았다 (1,653 vs. 6,869개의 세포, p=0.04). 림프구 카운트는 F-652 처리된 동물 및 모의 동물에서 유의하게 상이하지 않았지만 (1,864 vs. 6,556개의 세포, p=0.14), 대식세포 카운트는 F-652 처리된 동물에서 유의하게 더 낮았다 (290,611개 vs. 429,262개의 세포, p=0.04). 도 12를 참조한다.
고-용량 LPS 손상에 대한 세포 카운트의 비교는 도 13에 제시된다. F-652로 처리된 마우스는 모의 동물에 비해 유의하게 더 낮은 총 세포 카운트 (5.40 x 105 vs. 3.15 x 106개의 세포, p=0.002), 유의하게 더 낮은 호중구 카운트 (3.69 x 104 vs. 8.99 x 105개의 세포, p=0.04), 유의하게 더 낮은 림프구 카운트 (2,163 vs. 213,225개의 세포, p=0.01), 및 유의하게 더 낮은 대식세포 카운트 (1.21 x 105 vs. 2.72 x 106개의 세포, p=0.03)를 가졌다.
BAL 염증성 매개자
F-652 처리 후 폐에서의 염증의 정도를 조사하기 위해, 본 발명자들은 처리된 및 비처리된 모의 동물의 BAL 유체에서 염증성 매개자를 비교하였다. 저-용량 LPS 손상을 갖는 마우스의 BAL에서 측정된 모든 염증성 매개자의 비교는 표 3에 제시된다. F-652 처리된 것을 모의 동물과 비교할 경우 임의의 측정된 염증성 매개자의 양의 유의한 차이는 없었다.
고-용량 LPS 손상된 동물에서의 염증성 매개자는 도 14에 제시된다. IL-6 (110.6 vs. 527.1 pg/mL, p=0.04), TNF-α (5.87 vs. 25.41 pg/mL, p=0.04), 및 G-CSF (95.14 vs. 659.6, p=0.01) 수준은 모의 대조군에 비해 F-652 처리된 동물의 BAL 유체에서 모두 유의하게 더 낮았다. BAL 유체에서의 인터류킨-10 수준은 모의 동물에 비해 F-652 처리된 동물에서 유의하게 더 높았다 (22.10 vs. 4.05 pg/mL, p=0.03). 다중화 검정에서 측정된 모든 다른 시토카인의 요약은 표 4에 제시된다. IL-1α, IL-2, IL-5, IL-9, IL-12, IL-15, 및 M-CSF는 모의 동물에 비해 F-652 처리된 동물에서 유의하게 더 낮은 수준을 갖는 것으로 밝혀졌다.
단백질 누출 및 조직병리학 점수
폐 누출 및 폐 손상의 정도를 조사하기 위해, 본 발명자들은 BAL 단백질 수준을 측정하고, 조직병리학 점수를 비교하였다. 저-용량 LPS 손상 후, F-652를 받은 동물에서의 BAL 단백질은 모의 동물보다 유의하게 더 낮았다 (0.15 vs. 0.25 μg/μL, p=0.03). 저용량 LPS 손상을 갖는 동물 중에서의 조직병리학 점수의 비교는 F-652 처리된 및 모의 동물 사이에 임의의 차이를 나타내지 않았다.
고-용량 LPS 손상 후, F-652를 받은 동물에서의 BAL 단백질은 모의 동물에 비해 상이하지 않았다 (0.55 vs. 0.38 μg/μL, p=0.18). 고-용량 LPS 손상된 동물의 조직병리학 점수의 비교 (도 15A)는 F-652 처리된 동물이 유의하게 덜 중증인 손상 점수를 가졌음을 제시하였다 (1.0 vs. 2.0, p=0.03). F-652 처리된 및 모의 동물의 대표적인 조직병리학적 영상은 각각 도 15B 및 도 15C에 제시된다.
글리코칼릭스 분해
F-652가 폐포 모세혈관의 내피에서 글리코칼릭스 층을 유지하는 것을 돕는지를 결정하기 위해, 내피 글리코칼릭스 강도를 도 16에 보여진 바와 같이 측정하였다. 저용량 LPS 손상 그룹에서, F-652는 LPS 손상 후 글리코칼릭스의 유의하게 더 큰 강도를 발생시켰다 (80.0 vs. 63.7 임의 단위, p<0.001). 글리코칼릭스 염색의 영상은 도 16에 제시된다. 고용량 LPS 손상 그룹에서, F-652 처리된 것을 모의 동물과 비교할 경우 글리코칼릭스 강도의 유의한 차이가 없었다 (p=0.07).
외인성 vs. 내인성 IL-22
폐에 대한 효과가 외인성 F-652 또는 내인성 IL-22에 기인하였는지를 결정하기 위해, 인간 및 마우스 IL-22를 고용량 및 저용량 LPS 손상된 동물 둘 다의 BAL에서 측정하였다. 도 17에 제시된 바와 같이, 저-용량 LPS (6.56 vs. 0.40 pg/mL, p=0.02) 및 고-용량 LPS (27.41 vs. 비-검출가능한 pg/mL, p=0.001) 손상된 동물 둘 다에서 F-652 처리된 동물에서 인간 IL-22의 유의하게 더 높은 수준이 있었다. 저-용량 LPS 손상 그룹에서의 내인성 마우스 IL-22 수준은 F-652 처리된 동물에서 더 높았다 (1.22 vs. 비-검출가능한 pg/mL, p=0.04). 그러나, 내인성 IL-22는 모의 동물에 비해 F-652로 처리된 고-용량 LPS 손상 동물에서 상이하지 않았다 (19.57 vs. 17.02 pg/mL, p=0.40). 도 17을 참조한다.
RNA-seq 분석
유전자 발현의 경로 분석은 시토카인-시토카인 수용체 경로가 고-용량 LPS 손상 후 F-652 처리된 동물에서 유의하게 상이하였음을 제시하였다. F-652 처리는 대식세포 염증성 단백질-1β (CCL4) 발현의 감소를 발생시켰다 (p=0.01). 세포외 매트릭스-수용체 상호작용에 대한 차등적으로 발현된 경로 유전자는 또한 그룹 사이에 상이하였다. 테나신 C (Tnc), 콜라겐, 유형 I, 알파 1 (COL1a1), 콜라겐, 유형 VI, 알파 3 (Col6a3), 및 콜라겐, 유형 I, 알파 2 (Col1a2) 발현은 F-652 처리로 증가되었다 (p=0.003).
표 3. 저용량 LPS로의 급성 폐 손상 후의 F-652 처리된 및 모의 동물의 비교
Figure pct00005
표 4. 고용량 LPS로의 급성 폐 손상 후의 F-652 처리된 및 모의 동물의 비교
Figure pct00006
논의
본 실시예에서, 본 발명자들은 F-652 처리가 ALI/ARDS의 마우스 모델에서 더 적은 면역 세포 유입 (도 13)에 의해 입증된 바와 같이 폐에서 감소된 염증을 초래하였음을 입증하는 결과를 제공한다. F-652는 인터류킨-6 및 TNF-α를 포함하는 폐에서의 염증성 시토카인의 발현을 감소시켰다. 이들 염증성 매개자 둘 다는 LPS 손상 후 F-652 처리된 마우스에서 감소되는 것으로 밝혀졌다 (도 14). 본 발명자들의 발견은 인플루엔자 손상 후 프로-IL-22 유전자 환경에 대한 마우스의 BAL에서의 감소된 총 세포 카운트, 호중구, 림프구, 및 대식세포를 제시한 이전의 연구와 일치한다.
또한 본 실시예에서 F-652로의 처리가 저-용량 LPS 손상 후 단백질 누출을 감소시키고, 내피 글리코칼릭스 (EGX)를 유지하는 것을 도왔음을 입증하는 결과가 제공된다 (도 16). 글리코칼릭스의 분해는 ARDS에서 발생하는 유체 및 단백질 누출에 연루되었고, 폐 손상 후의 글리코칼릭스의 보호는 ARDS 동안 폐에서 보여지는 변화를 완화시킨다 (Murphy, L.S., et al., "Endothelial glycocalyx degradation is more severe in patients with non-pulmonary sepsis compared to pulmonary sepsis and associates with risk of ARDS and other organ dysfunction." Annals of Intensive Care, 2017. 7(1): p. 1-9; Kong, G., et al., "Astilbin alleviates LPS-induced ARDS by suppressing MAPK signaling pathway and protecting pulmonary endothelial glycocalyx." Int Immunopharmacol, 2016. 36: p. 51-58; Wang, L., et al., "Ulinastatin attenuates pulmonary endothelial glycocalyx damage and inhibits endothelial heparanase activity in LPS-induced ARDS." Biochem Biophys Res Commun, 2016. 478(2): p. 669-75). 글리코칼릭스의 보존은 상기 실시예 3에서 입증된 바와 같이, 메탈로프로테이나제 또는 헤파리나제의 억제에 의해 또는 당단백질 층의 생합성의 유도에 의해 일어날 수 있다.
RNA-seq는 CCL4의 감소된 발현을 입증하였다. 이는 F-652로 처리된 고-용량 LPS 손상된 마우스에 대한 BAL에서의 감소된 CCL4로 확인되었다. CCL4는 강한 염증성 및 화학주성 효과를 가지며, F-652 처리로 보여진 항염증성 효과는 부분적으로 그의 감소된 CCL4 발현에 기인할 수 있다. RNA-seq는 또한 테나신 C (Tnc), 콜라겐, 유형 I, 알파 1 (COL1a1), 콜라겐, 유형 VI, 알파 3 (Col6a3), 및 콜라겐, 유형 I, 알파 2 (Col1a2) 발현을 포함하는 몇몇 세포외 매트릭스-수용체 상호작용의 증가된 발현을 입증하였다. 콜라겐, 유형 I, 알파 1 및 유형 I, 알파 2는 급성 폐 손상 후 폐의 복구 과정에서 중요한 세포외 매트릭스 성분이다 (de Souza Xavier Costa, N., et al., "Early and late pulmonary effects of nebulized LPS in mice: An acute lung injury model." PLoS One, 2017. 12(9): p. e0185474). F-652 처리된 동물에서 보여진 염증성 매개자의 감소의 존재 하에서의 이들 유전자 생성물의 유행은 손상된 폐가 염증성 단계로부터 회복 단계로 이동하였음을 시사한다.
결론적으로, F-652는 ALI의 전임상 모델에서 감소된 염증 (도 13) 및 단백질 누출을 초래한다. F-652는 EGX를 보존하고 (도 16), 증가된 내인성 IL-22 생산을 초래한다 (도 17). 이들 발견은 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전 (예를 들어, ALI/ARDS)에서 F-652의 잠재적 치료 효과를 시사한다.
실시예 5. 중등도 내지 중증 COVID-19를 갖는 환자에서 F-652의 효능 및 안전성을 평가하기 위한 무작위, 이중-맹검, 위약-대조, 용량-증량, 다기관 연구
연구 설명
본 연구의 1차 목적은 중등도 내지 중증 증상을 갖는 입원한 확인된 COVID-19 성인 환자에서 정맥내로 (IV) 투여되는 경우 F-652의 안전성 및 효능을 평가하는 것이다. 2차 목적은 중등도 내지 중증 증상을 갖는 입원한 확인된 COVID-19 성인 환자에서 IV 투여되는 경우 F-652의 약역학 (PD)을 평가하는 것이다.
연구 디자인 및 지속기간
이는 PCR에 의해 확인된 COVID-19 진단을 갖는 18세 이상의 환자에서 F-652 치료 대 위약의 개입적, 다기관, 2-부문, 평행-그룹, 무작위, 이중-맹검, 위약-대조, 용량-증량, 안전성 및 효능 연구이다. 적격인 환자는 입원 및 양성 COVID-19 검사 후 5일 내에 중등도 내지 중증 COVID-19 증상을 가질 것이다.
연구는 4개의 코호트를 포함하도록 계획되며, 등록된 환자는 하기와 같이 F-652 또는 위약에 대해 스크리닝 후 제1일에 맹검된 방식으로 1:1 무작위화된다:
코호트 1 (센티넬 코호트): 4명의 환자는 30 μg/kg F-652 또는 위약 중 어느 하나를 받을 것이다. 2명의 환자는 F-652를 받을 것이고, 2명의 환자는 위약을 받을 것이다. 센티넬 투약의 완결시 (마지막 환자 마지막 용량 후 7일), 데이터 모니터링 위원회 (DMC)는 센티넬 환자의 안전성 및 내약성 데이터를 평가하고, 코호트 2에서의 이 투약 그룹에서 나머지 환자에게 투약하는 것이 허용가능한지를 결정할 것이다.
코호트 2: 14명의 환자는 30 μg/kg F-652 또는 위약 중 어느 하나를 받을 것이다. 7명의 환자는 F-652를 받을 것이고, 7명의 환자는 위약을 받을 것이다. 코호트 2의 완결시, DMC는 모든 이용가능한 안전성 데이터를 모으고 검토하여 연구가 다음 용량 수준으로 진행할 수 있는지를 결정할 것이다.
코호트 3 (센티넬 코호트): 4명의 환자는 45 μg/kg F-652 또는 위약 중 어느 하나를 받을 것이다. 2명의 환자는 F-652를 받을 것이고, 2명의 환자는 위약을 받을 것이다. 센티넬 투약의 완결시 (마지막 환자 마지막 용량 후 7일), DMC는 센티넬 환자의 안전성 및 내약성 데이터를 평가하고, 코호트 4에서의 이 투여 그룹에서 나머지 환자에게 투약하는 것이 허용가능한지를 결정할 것이다.
코호트 4: 16명의 환자는 45 μg/kg F-652 또는 위약 중 어느 하나를 받을 것이다. 8명의 환자는 F-652를 받을 것이고, 8명의 환자는 위약을 받을 것이다.
치료는 무작위화 후 제1일에 시작할 것이다. 활성 약물로 할당된 환자는 F-652의 총 2개의 용량 (제1일에 1개의 IV 주입 및 제8일에 1개의 IV 주입)을 받을 것이다. 위약으로 할당된 환자는 제1일 및 제8일에 위약 비히클의 동일한 IV 주입을 받을 것이다. 모든 환자는 치료의 표준으로서 이용가능한 지원적 및 항바이러스 요법을 받을 것이다. 효능은 제15일 및 제29일에 평가될 것이다. 환자는 제60일까지 안전성에 대해 추적될 것이다.
투여 형태 및 투여의 경로
F-652는 인간 IL-22 및 인간 이뮤노글로불린 G2 Fc 단편으로 이루어진 재조합 융합 단백질이다. F-652는 중국 햄스터 난소 세포에서 생산되며, N-말단에 2개의 IL-22 분자 (재조합 인간 IL-22 이량체)를 갖는 이뮤노글로불린-유사 구조를 갖는다. F-652는 환자의 가장 최근 중량에 기반하여, 제1일 및 제8일에 30 μg/kg 또는 45 μg/kg의 용량으로 IV 투여될 것이다. 위약 비히클은 연구 약물과 외관상 동일할 것이고, 제1일 및 제8일에 IV 투여될 것이다.
효능 종점
Figure pct00007
1차 효능 종점
1차 효능 종점은 기준선으로부터 제29일까지 국립 알러지 및 감염성 질환 연구소 (NIAID) 8-포인트 순위 스케일의 2-포인트 이상의 증가를 갖는 환자의 비율이다.
NIAID 8-포인트 순위 스케일은 하기 등급을 포함한다: 1. 사망; 2. 침습적 기계적 환기 또는 체외 막 산소공급으로 입원; 3. 비-침습적 환기 또는 고-유동 산소 장치로 입원; 4. 보충적 산소를 요구하는 입원; 5. 보충 산소를 요구하지 않는 입원 - 계속되는 의학적 치료를 요구함 (COVID-19 관련 또는 다른 것); 6. 보충적 산소를 요구하지 않는 입원 - 더 이상 계속되는 의학적 치료를 요구하지 않음; 7. 입원하지 않음, 활동에 대한 제한 및/또는 가정 산소를 요구함; 및 8. 입원하지 않음, 활동에 대한 제한 없음.
Figure pct00008
2차 효능 종점
계층적 순서로 열거된 2차 효능 종점은 하기를 포함한다: (a) 제1 투약 (제1일)로부터 재원 기간 및 제15일 및 제29일까지 회복되고 병원으로부터 퇴원한 환자의 백분율; (b) 제15일 및 제29일까지 사망률; (c) 기준선으로부터 제15일까지 NIAID 8-포인트 순위 스케일의 ≥2-포인트 증가를 갖는 환자의 비율; (d) 제15일 및 제29일까지 살아 있고 호흡 부전 없는 날; (e) 제15일까지 중증/위독 질환으로 진행된 환자의 백분율; 및 (f) 제29일까지 연구 동안 임의의 새로운 감염의 발생.
안전성 종점
안전성 종점은 하기를 포함한다: (a) 모두는 치료-응급 유해 사건 (TEAE) 및 심각한 유해 사건 (SAE)을 야기함; (b) 임상적 증상 및 비정상적 활력 징후, 비정상적 실험실 시험 (예를 들어, 완전 혈액 카운트, 혈청 화학, 통상적인 소변검사, 및 응고 기능), 및 12-유도 심전도 (ECG)의 스크리닝 (기준선)으로부터의 변화; 및 (c) 조사자의 판단에 기반한 F-652 치료와의 임의의 관찰된 유해 사건 (AE)의 관계.
탐색적 종점
탐색적 종점은 하기를 포함한다: (a) 무작위화로부터 음성 SARS-CoV-2 PCR 검사까지의 시간; 및 (b) 혈청 아밀로이드 A (SAA), C-반응성 단백질 (CRP), 재생 소도-유래 3 (Reg3), IL-6, IL-17, TNF-α, 페리틴, 및 트로포닌-I을 포함하는 PD 파라미터의 변화.
실시예 6. 1차 인간 기관지 상피 세포에서의 COVID-19에 대한 F-652의 치료 효과의 연구
본 실시예에서 F-652 (IL-22-Fc 융합 단백질)가 1차 인간 기관지 상피 (HBE) 세포에서 SARS-CoV-2 감염을 경감시킴을 입증하는 결과가 제공된다.
1차 HBE 세포를 24-웰 트랜스웰 플레이트에서 기액 계면에서 배양하였다. 이들을 SARS-CoV-2 감염 전에 F-652로 사전-처리하거나, SARS-CoV-2 감염 후에 F-652로 사후-처리하였다. 사전-처리 조건에 대해, 300 μL 배지 중 100 ng/mL F-652를 18시간 동안 37℃, 5% CO2에서 밤새 배양된 HBE 세포에 첨가하였다. 사후-처리 조건에 대해, 300 μL 배지 중 100 ng/mL의 F-652를 바이러스 감염 후 일에 기저측으로 첨가하였다. 감염 후 F-652 처리 없고, 비-감염된 HBE 세포는 대조군으로서 역할을 하였다. 20 μL의 바이러스 스톡 [105 pfu] (0.1의 MOI; 또는 웰당 100,000 pfu)을 배양된 HBE 세포의 정단 표면에 첨가함으로써 HBE 세포의 SARS-CoV-2 감염을 수행하였다. 플레이트를 2시간 동안 인큐베이션하여 37℃, 5% CO2에서 바이러스 부착을 허용하고, 이어서 바이러스 현탁액을 각각의 웰로부터 제거하였다. 챌린지 후 48시간에, HBE 세포를 새로운 24-웰 트랜스웰 플레이트 내로 옮기고, 세포를 다이렉트-졸(Direct-zol)™ RNA 키트 지시서에 따라 웰당 300 μL 트리졸에 용해시킴으로써 총 RNA를 수거하였다. 서브게놈 RNA가 바이러스 접종물 뿐만 아니라 새로운 바이러스 RNA를 측정하기 때문에, 바이러스 로드를 서브게놈-N (sgm-N) RNA 표준물로 검정하였다. RNA-seq를 또한 수행하고, 이어서 리드를 맵핑하여 SARS-CoV-2 오픈 리딩 프레임 (ORF)당 리드 카운트를 결정하였다.
서브게놈 RNA에 의해 검정된 바와 같이, F-652로의 사전-처리 및 사후-처리 둘 다는 F-652 처리 없는 그룹에 비해 sgm-N RNA 카피의 유의하게 더 낮은 카피를 나타내었으며 (p<0.05, ANOVA, 터키 다중 비교 검정; 도 18A), 이는 또한 F-652 처리 없는 그룹에 비해 SARS-CoV-2 게놈에 대한 RNA-seq 리드의 감소된 맵핑과 일치하였다 (도 18B). 이들 결과는 COVID-19에 대한 F-652의 예방 및 치료 효과 둘 다를 입증한다.
실시예 7. 연령-관련 바이러스 폐렴에서의 F-652의 치료 효과의 연구
본 실시예에서 F-652 (IL-22-Fc 융합 단백질)가 고령 숙주에서 바이러스성 (예를 들어, H1N1 인플루엔자) 폐렴을 치료하고 바이러스 감염에 의해 유발된 만성 폐 섬유증을 개선시키는데 특히 유효함을 입증하는 결과가 제공된다.
연구는 대다수의 중증 COVID-19 사례가 노인 집단에서 발생함을 제시하였다 (A. Remuzzi and G. Remuzzi Lancet, 2020, VOL. 395, Issue 10231, P1225-1228). 최근의 증거는 COVID-19 생존자가 폐 섬유증의 발달로 인한 폐 기능의 지속적인 손상을 나타냄을 시사하였다 (YH. Xu et al. J Infect. 2020;80(4):394-400; S. Zhou et al. AJR Am J Roentgenol. 2020;214(6):1287-1294; M. Hosseiny et al. AJR Am J Roentgenol. 2020;214(5):1078-1082). 폐 섬유증은 또한 SARS-CoV-2의 2가지 밀접하게 관련된 코로나바이러스인 SARS-CoV 또는 MERS-CoV의 감염으로부터 회복된 실질적인 수의 환자에서 문서화되었다 (K.S. Chan et al. Respirology. 2003;8 Suppl(Suppl 1):S36-40; G. E. Antonio et al. Radiology. 2003;228(3):810-815). COVID-19로부터 회복된 다수의 개체가 만성 폐 섬유증을 발달시킬 것으로 추정된다. 그러나, 임의의 바이러스성 폐렴, 특히 COVID-19 후 폐 섬유증 발달을 감속시키고/거나 반전시키는데 이용가능한 예방적 수단 또는 치료적 개입은 없다.
인플루엔자 폐렴은 지속적인 폐 콜라겐 침착을 초래하는 것으로 공지되어 있으며 (섬유증의 반영; Z. Wang et al. Sci Immunol. 2019;4(36):eaaw1217; S. Huang et al. PLoS One. 2019;14(10):e0223430), 본원에서 COVID-19 치료에 대한 통찰을 제공하는 바이러스성 폐렴 후 폐 섬유증의 예시적인 질환 모델로서 사용되었다.
연구 디자인
고령 (잭슨 래버러토리로부터의 18-19월령 C57BL/6 마우스) 및 어린 마우스 (2월령 C57BL/6J)를 제0일에 H1N1 인플루엔자 (A/PR8 균주)로 감염시켰다. 이들을 바이러스 감염 후 제21일에 격일로 칭량하였다. 감염 후 제0일-제21일 동안 제0일 체중의 <10% 감소한 모든 동물을 추가의 연구로부터 배제하고, 나머지 동물을 칭량하여 어린 및 노령 그룹에 대해 별개로 평균 중량을 얻었다. 도 19A-19B에서 볼 수 있는 바와 같이, 이 H1N1 인플루엔자 감염 모델은 이환율 및 사망률 둘 다의 관점에서 중증 연령-관련 모델이었으며, 여기서 고령의 감염된 마우스는 어린 감염된 마우스에 비해 더 많은 체중 감소 및 유의하게 더 많은 사망 발생을 경험하였다.
감염 후 제21일에, 61마리의 고령 마우스 및 40마리의 어린 마우스를 4개의 그룹으로 무작위화하였다: (i) 꼬리 정맥 상에 정맥내로 200 μL PBS로 처리된 어린 감염된 마우스; (ii) 꼬리 정맥 상에 정맥내로 200 μL 중 200 μg/kg F-652로 처리된 어린 감염된 마우스; (iii) 꼬리 정맥 상에 정맥내로 200 μL PBS로 처리된 고령의 감염된 마우스; 및 (iv) 꼬리 정맥 상에 정맥내로 200 μL 중 200 μg/kg F-652로 처리된 고령의 감염된 마우스. PBS 또는 F-652의 주사 후 1주에, 고령 동물의 꼬리는 정맥내 주사로부터 회복되지 않았으며, 따라서 나머지 처리는 복강내 주사였다 (용량/부피는 변화되지 않음). 4개의 연구 그룹은 바이러스 감염 후 제21일에 시작하여, 3주 동안 PBS 또는 F-652 주사를 받았다 (1 처리/주/마우스). 유사한 세트의 실험을 연령- 및 치료 매칭된 코호트 (4개의 그룹)에 대해 수행하였지만, 6주 동안 PBS 또는 F-652로 처리하였다 (1 처리/주/마우스) (이하 "6-주 처리 그룹"으로 지칭됨; 데이터는 제시되지 않음). 달리 지시되지 않는 한, 본 실시예에서 제시된 모든 데이터는 3-주 처리 데이터이다.
감염 후 제62일-제65일에 종점에서, 동물을 항-CD45 항체로 정맥내로 주사하여 유동 세포계측법에 의해 순환 백혈구 (CD45+) 및 폐 실질 세포 사이를 구별한 후, 폐 기능, 폐 조직병리학, 폐 면역 프로파일, 및 폐 콜라겐 함량을 측정하였다.
폐 기능을 문헌 [Goplen et al. (J Allergy Clin Immunol. 2009; 123(4): 925-32.e11)]에 상세히 설명된 일회 호흡 조건 하에서 측정하였다. 다양한 동요를 폐쇄된 기도를 동원하는 깊은 팽창 전 및 후에 수행하였다. 이들 측정을 팽창 전 데이터와 비교하여 플렉스벤트® (사이렉) 컴퓨터 제어된 피스톤 호흡기 상에서 단일 구획, 일정 위상, 및 압력 부피 루프에 대한 기준선 vs. 폐 용량 폐 생리학을 결정하였다. 예시적인 실험 설정에 대해서는 도 24를 참조한다.
종점 전의 치료 결과
처리 전에, 어린 마우스는 바이러스 감염으로 쓰러지지 않은 반면 (도 19B 및 20B), 고령 마우스의 ~25%는 IACUC 컷오프를 충족시키거나 제0일 체중의 >30% 감소 전에 죽은 것으로 밝혀졌다. 치료 상 동안, 어린 그룹에서 마우스는 감소되지 않았지만 (도 20B), 고령 F-652 처리 그룹에서 감염 후 제21일-제64일에 3마리의 마우스가 감소되었고 (도 20D; 2마리의 마우스는 고령 F-652 6-주 처리 그룹에서 감소되었음, 데이터는 제시되지 않음), PBS 처리된 마우스는 감소되지 않았다 (ANOVA p>0.05). 동일한 기간 동안, 어린 (도 20A) 또는 고령 (도 20C) 마우스에서 PBS 및 F-652 처리 그룹 사이에 중량의 주목할 만한 차이는 발생하지 않았다. 이들 결과는 F-652 처리가 H1N1로 감염된 어린 또는 고령 마우스에서 체중 또는 생존에 대한 유해 효과를 갖지 않거나 거의 갖지 않았음을 입증하였다.
종점 결과
유동 세포계측법
희생 전에, 순환 백혈구를 항-CD45 항체로 정맥내로 표지하였다. 모든 동물을 연령- 및 치료-매칭된 코호트 (4개의 그룹)에서 감염 후 제62일-제65일에 희생시켰다. 폐 조직을 수거하였다. 조합된 우측 폐엽에서의 조직-침윤 골수 세포 수를 각각의 그룹으로부터 연구하였다. 폐 조직 소화 후, 다중-파라미터 FACS를 사용하여 순환 백혈구 (CD45+)를 폐 실질 세포로부터 분리하고, 조직-침윤 호중구 (CD11bHi Ly6GHi) 또는 염증성 단핵구 (CD11bHi Ly6CHi), 및 조직-침윤 CD8+ T 세포 사이를 구별하였다.
도 21로부터 볼 수 있는 바와 같이, 폐 침윤 호중구 및 염증성 단핵구 둘 다는 (PBS 대조군에 비해) F-652 처리된 고령 마우스에서 유의하게 감소하였다. 6-주 F-652 처리는 3-주 F-652 처리 고령 그룹에 비해, 고령 마우스에서 폐 침윤 호중구 및 염증성 단핵구의 훨씬 더 많은 감소를 발생시켰다 (데이터는 제시되지 않음). 그러나, 3주 (도 21) 또는 6주 (데이터는 제시되지 않음) 동안 처리된 폐 침윤 호중구 또는 염증성 단핵구에 대해 어린 마우스에서 PBS 및 F-652 처리 사이에 유의한 차이는 관찰되지 않았다.
유사하게, 고령 동물에서 보호적이지 않지만 병원성인 것으로 밝혀진 인플루엔자 특이적 CD8+ T 세포는 PBS 대조군에 비해 F-652 처리된 고령 마우스에서 유의하게 감소하였지만; CD8_ T 세포의 총 수에 대해서는 어린 마우스에서 유의한 차이가 관찰되지 않았다 (도 22 "총 CD8+" 참조). 이 패턴은 침윤 호중구 및 단핵구에 대해 보여진 것과 일치하였다. CD69+ 또는 CD69+/CD103+를 발현하는 CD8+ T 세포는 어린 및 고령 숙주 둘 다에서 PBS 대조군에 비해 F-652 처리 그룹에서 유의하게 감소하였다.
이들 결과는 i) F-652 처리가 고령 H1N1 숙주의 폐에서 악화된 단핵구 및 호중구 침윤을 유의하게 약화시키고; ii) F-652 처리가 어린 및 고령 H1N1 숙주 둘 다에서, 그러나 특히 CD8+ T 세포가 병원성인 것으로 나타난 고령 숙주에서 거주자-유사 CD8+ T 세포를 유의하게 약화시킴을 입증한다.
폐 기능
폐 기능 연구를 감염 후 제63일-제67일에 마우스에 대해 수행하였다. 도 24로부터 볼 수 있는 바와 같이, 기관절개술을 19G 캐눌라로 수행하고, Y-튜빙을 통해 플렉스벤트®에 연결하였다. 컴퓨터 제어된 피스톤은 시간 경과에 따라 공기의 미리-결정된 부피 및 진동수를 전달하였다. 기압을 폐로 가기 전 및 폐로부터 나온 후에 측정하고, 압력-부피 데이터를 다양한 폐 모델에 적합시켰다. 플렉스벤트®를 사용하여 전체 호흡계를 측정하고, 구획 분석을 수행하고, 기준선 및 총 용량 측정 둘 다를 취하였다.
광대역 강제 진동 기동 (일명 저-진동수 강제 진동 기술 (FOT))에서, 대상체의 호흡 빈도 미만 및 초과 둘 다의 폭넓은 범위의 진동수를 함유하는 신호에 대한 대상체의 반응을 측정한다. 결과인 호흡계 입력 임피던스 (Zrs)는 현재 이용가능한 호흡 기구의 가장 상세한 평가이다. 입력 임피던스는 일정 위상 모델 (CPM)을 사용하여 추가로 분석되어, 기도 및 조직 기구 사이의 파라미터적 차이를 얻을 수 있으며, 이는 질환이 어떻게 폐에 영향을 미치는지에 대한 통찰을 제공한다. 입력 임피던스 (Zrs)는 진동수의 함수로서 저항, 탄성 및 이너턴스의 조합된 효과이다. 저항 (R; 동적 저항)은 폐에서의 수축의 수준을 정량적으로 평가한다. 탄성 (C; 일명 동적 탄성)은 호흡계가 연장될 수 있는 용이성을 기재한다. 무손상 흉부 벽을 갖는 대상체에서, 이는 호흡계가 폐에서 및 폐로부터 공기를 이동시키기 위해 일회 호흡 동안 극복할 필요가 있는 전체 탄성 특성의 특징규명을 제공한다. 조직 제동 (G)은 조직 저항과 밀접하게 관련된 CPM의 파라이터이며, 페포에서의 에너지 소멸을 반영한다.
조직 감쇠 (G)를 기도 동원 기동 전에 ("기준선" 패널) 및 후에 ("전체 용량" 패널) 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 어린 (도 25 상부 패널) 및 고령 (도 25 하부 패널) 마우스에서 FOT에 의해 측정하였다. 이어서 이들 측정을 정규화하여 ("%ΔG"로서 반영된 용량 G/기준선 G) % 조직 감쇠 (실질에서의 기도 저항)를 결정하였으며, 도 26A-26B를 참조한다. 도 25-26B로부터 볼 수 있는 바와 같이, F-652 처리는 기준선/일회 호흡 동안 고령 H1N1 감염된 마우스에서 소기도에서의 더 적은 저항을 초래하였다. 이들 데이터는 F-652가 고령 마우스에서 H1N1 감염 후 기류에 대한 저항을 감소시킴으로써 폐 실질의 기준선 기능을 개선시키지만, 어린 마우스에서는 그렇지 않음을 입증한다.
입력 임피던스 (Re Zrs) 및 리액턴스 (Im Zrs; 도 27 하부 패널)를 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 어린 (도 27, 28A, 29A) 또는 고령 (도 27, 28B, 29B) 마우스에서 기도 동원 기동 전에 ("기준선") 및 후에 ("기도 후") 플렉스벤트® 상에서 FOT로 측정하였다. 이어서 입력 임피던스 (Re Zrs) 데이터를 처리된 (F-652) 또는 처리되지 않은 (PBS) 고령 (도 30A) 및 어린 (도 30B) 마우스에 대해 % Re Zrs (용량 Re Zrs/기준선 Re Zrs)에 의해 반영된 바와 같이, 각각의 진동수에서 정규화하였다. 이들 데이터는 i) F-652 처리가 고령 마우스에서 소기도에서의 기준선 저항을 유의하게 개선시키지만 (기준선 기류 저항을 저하시키지만), 어린 마우스에서는 그렇지 않고; ii) F-652 처리가 이용가능한 폐 부피의 최대화 후 임피던스에 대한 효과를 갖지 않음을 입증한다 (도 29A-29B).
도 25-30B로부터 볼 수 있는 바와 같이, 기류에 대한 저항에 대한 대기도 및 소기도 측정을 분리하는 일정 위상 모델 (CPM)은 3-주 처리 그룹에서 고령 (도 25, 도 26B, 도 27, 도 28A, 도 30A에서 "고령 기준선" 패널 참조) F-652 처리 그룹이 기준선에서 소기도에서의 감소된 저항을 나타내었지만, 어린 그룹에서는 그렇지 않았음 (도 25, 26A, 26B, 및 28A-30B에서 노령 vs. 어린 그룹 참조)을 지시하였으며 (도 27에서 "기준선 임피던스" 및 "기도 후 임피던스" 패널을 비교), 이는 고령 F-652 처리된 마우스가 매칭된 PBS 대조군보다 더 높은 백분율의 그들의 소기도를 사용하였음을 지시한다. 이 패턴 차이는 6-주 처리 그룹에서는 보이지 않았다.
호흡계의 FOT (입력 임피던스 측정)에 의해 탐색된 CPM의 깊이 분석에서 보다 많은 것은 기준선 (일회 호흡)에서의 고령의 3주 처리 그룹에서 폐 기능의 개선이 가장 작은 직경 기도의 차이의 결과였음을 제시하였으며, 이는 가장 가능성 있게는 폐포 사용의 개선을 지시한다. 도 31A-31B "*" 지시된 부분을 참조하며, 이는 F-652 처리가 고령 동물에서 소기도에서의 기준선 기류 저항을 저하시킴을 지시한다.
모든 이들 데이터는 F-652가 일회 호흡 (기준선) 동안 소기도의 연령-관련 기능이상을 개선시키며, 이는 기도 붕괴를 예방하고 탄성을 증가시킬 수 있음을 입증한다.
압력-부피 (PV) 루프는 호흡계의 준-정적 기계적 특성을 포획한다. Cst (준-정적 탄성)는 PV 곡선으로부터 추출되는 고전적인 파라미터이다. 폐쇄된-흉부 조건 하에서 측정되는 경우, 이는 휴식시의 호흡계 (즉, 폐+흉부 벽)의 고유 탄성 특성을 반영한다. 정적 탄성을 일회 호흡 동안 (도 32A), 기도 동원 후 (도 32B) PV 루프 기동으로부터 F-652로 처리된 고령 마우스 또는 PBS 대조군에서 결정하고, 서로에 대해 정규화하였다 (도 32C). 도 32A-32C로부터 볼 수 있는 바와 같이, PV 루프는 PBS 대조군에 비해 고령 F-652 처리 그룹에서 증가된 정적 탄성을 지시하였다. 이들 데이터는 F-652 처리가 폐의 강직을 감소시키며 (탄성을 증가시키며), 이는 기준선에서의 개선된 호흡을 지시하고, 폐 탄성 및 강성을 지배하는 물리적 특성이 F-652 처리에 의해 변화됨을 입증한다.
우측 폐엽을 분쇄하고, 상이한 그룹으로부터 균질성까지 혼합하였다. 30-40 mg 샘플을 각각의 폐 제조물로부터 취하고, 콜라겐의 주요 성분인 히드록시프롤린 함량에 대해 결정하였다. 도 33A-33B로부터 볼 수 있는 바와 같이, F-652 처리는 히드록시프롤린 함량을 고령 및 어린 H1N1-감염된 마우스 둘 다에서 PBS 대조군에 비해 비-감염된 폐 조직 ("나이브")으로부터 유사한 수준으로 유의하게 감소시켰으며, 이는 F-652 처리가 H1N1-유발 콜라겐 침착을 저하시킬 수 있음을 지시한다. 이들 데이터는 PV 루프 연구로부터 보여진 증가된 정적 탄성과 일치하는 F-652 처리로부터의 폐렴 후 섬유증의 가능성 있는 개선 (섬유증을 감소시킴)을 입증한다.
F-652 처리 후의 개선된 폐 기능은 가능성 있게는 i) 감소된 콜라겐 함량 및/또는 증가된 엘라스틴 함량; ii) 증가된 유형 I/II 폐포세포 (폐포의 표면 상피 세포) 생성; 및 iii) 증가된 계면활성제 중 하나 이상에 기인하였다.
조직학
고령 H1N1-감염된 마우스로부터의 파라핀-포매된 폐를 슬라이스하고, 헤마톡실린 및 에오신 (H&E), 마손 트리크롬, 시리우스 레드, 또는 과요오드산-쉬프 (PAS)로 염색하고, 이어서 영상을 40x 해상도로 아페리오(Aperio) 스캐너 상에서 취하였다. 비-감염된 건강한 폐 조직은 음성 대조군으로서 역할을 하였다. H&E 염색에서, 헤마톡실린은 세포 핵을 청색으로 염색하고, 에오신은 세포외 매트릭스 및 세포질을 분홍색으로 염색한다. 마손 트리크롬은 콜라겐을 청색 또는 녹색으로 염색한다. 콜라겐 섬유는 시리우스 레드 염색에서 적색으로 염색된다. PAS 염색은 글리코겐, 당단백질, 또는 당지질에 대해 자주색-마젠타 색상을 생성한다.
도 23으로부터 볼 수 있는 바와 같이, F-652 처리는 고령 숙주에서 많은 H1N1-유발 병리학을 개선시킨다. 폐 조직학은 폐 기능 및 FACS 데이터와 크게 매칭되며, 이는 F-652 처리로부터 크게 이익을 얻은 한 그룹이 3주 동안 처리된 고령 그룹이었음을 지시한다. FACS에 의해 보여진 호중구 및 단핵구 침윤 및 CD8+ T 세포의 결여는 개선된 폐 기능과 양호하게 상관되는 이들 조직학적 샘플에서 명백하게 볼 수 있다.
폐 손상 복구
케라틴 5 (KRT5)는 케라틴 14와 이량체화하여 기저 상피 세포의 세포골격을 구성하는 중간체 필라멘트를 형성한다. 폐에서의 KRT5+ 세포는 폐포세포로 완전히 분화되지 않은 줄기 세포를 지시한다. 항-CD8 및 항-KRT5 항체를 갖는 고령 마우스로부터 수거된 폐의 면역형광 염색은 PBS 대조군에 비해 F-652 처리된 폐에서의 CD8+ 세포 및 KRT5+ 세포의 감소의 명백한 경향을 제시하였다 (데이터는 제시되지 않음). 이들 결과는 증가된 폐 기능 및 감소된 면역 세포 침윤물을 나타낸 F-652로 처리된 고령 숙주에서 바이러스성 폐렴 후 폐 복구의 개선을 지시한다.
요약하면, 이들 데이터는 F-652가 폐 섬유증을 개선시키고, 폐 복구를 개선시키고, 면역 세포 침윤을 감소시킴으로써와 같이, 고령 숙주에서 인플루엔자 (예를 들어, H1N1)-유발 폐렴을 치료하고 폐 기능을 개선시키는데 특히 유효함을 입증한다. 이는 주로 고령 집단에서 발생하는 COVID-19 폐렴에 의해 야기된 만성 폐 섬유증의 치료에 있어서의 F-562의 치료 효과에 빛을 비춘다. 잭슨 래버러토리로부터의 문헌 [C. Hagan, Nov. 2017, Blog Post]에서 마우스 vs. 인간 연령을 참조한다.
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
SEQUENCE LISTING <110> Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd <120> Methods for Prevention or Treatment of Virus-Induced Organ Injury or Failure with IL- 22 Dimer <130> 72062-20018.42 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> PCT/CN2020/120662 <151> 2020-10-13 <150> PCT/CN2020/075408 <151> 2020-02-14 <160> 33 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Gly Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Gly Arg Ala Gly Gly Gly 1 5 <210> 6 <211> 1 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Can be present in repeats of any integer <400> 6 Gly 1 <210> 7 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> (1)..(2) <223> Can be present in repeats of any integer <400> 7 Gly Ser 1 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> (1)..(4) <223> Can be present in repeats of any integer <400> 8 Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> (1)..(4) <223> Can be present in repeats of any integer <400> 9 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> (1)..(5) <223> Can be present in repeats of any integer <400> 11 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 12 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Gly Gly 1 <210> 13 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 13 Gly Gly Ser Gly 1 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Gly Ser Gly Gly Gly 1 5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Gly Ser Ser Ser Gly 1 5 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 21 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile 145 <210> 22 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 1 5 10 15 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 20 25 30 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 35 40 45 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 50 55 60 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 85 90 95 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile 100 105 110 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 115 120 125 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 130 135 140 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 145 150 155 160 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 165 170 175 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 180 185 190 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 195 200 205 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 220 <210> 23 <211> 228 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 65 70 75 80 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 100 105 110 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val 145 150 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 24 <211> 385 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 145 150 155 160 Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 165 170 175 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 180 185 190 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 195 200 205 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 210 215 220 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 225 230 235 240 Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 245 250 255 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys 260 265 270 Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 275 280 285 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 290 295 300 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 305 310 315 320 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 325 330 335 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 340 345 350 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 355 360 365 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 370 375 380 Lys 385 <210> 25 <211> 385 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 1 5 10 15 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 20 25 30 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 35 40 45 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 50 55 60 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 85 90 95 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile 100 105 110 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 115 120 125 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 130 135 140 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 145 150 155 160 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 165 170 175 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 180 185 190 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 195 200 205 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala 225 230 235 240 Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln Pro 245 250 255 Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu Ala 260 265 270 Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His Gly 275 280 285 Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn Phe 290 295 300 Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro Tyr 305 310 315 320 Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu Ser 325 330 335 Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val Gln 340 345 350 Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile Lys 355 360 365 Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala Cys 370 375 380 Ile 385 <210> 26 <211> 375 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Ala Ser Thr Lys Gly Pro Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 145 150 155 160 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 165 170 175 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 180 185 190 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 195 200 205 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 210 215 220 Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp 225 230 235 240 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 245 250 255 Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg 260 265 270 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 275 280 285 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 290 295 300 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 305 310 315 320 Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 325 330 335 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 340 345 350 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 355 360 365 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 27 <211> 375 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 1 5 10 15 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 20 25 30 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 35 40 45 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 50 55 60 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 85 90 95 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile 100 105 110 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 115 120 125 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 130 135 140 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 145 150 155 160 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 165 170 175 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 180 185 190 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 195 200 205 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ala 210 215 220 Ser Thr Lys Gly Pro Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys 225 230 235 240 Ser Asn Phe Gln Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala 245 250 255 Lys Glu Ala Ser Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly 260 265 270 Glu Lys Leu Phe His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met 275 280 285 Lys Gln Val Leu Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser 290 295 300 Asp Arg Phe Gln Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg 305 310 315 320 Leu Ser Asn Arg Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His 325 330 335 Ile Gln Arg Asn Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly 340 345 350 Glu Ser Gly Glu Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met 355 360 365 Ser Leu Arg Asn Ala Cys Ile 370 375 <210> 28 <211> 308 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 145 150 155 160 Gly Ser Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe 165 170 175 Gln Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala 180 185 190 Ser Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu 195 200 205 Phe His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val 210 215 220 Leu Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe 225 230 235 240 Gln Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn 245 250 255 Arg Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg 260 265 270 Asn Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly 275 280 285 Glu Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg 290 295 300 Asn Ala Cys Ile 305 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Glu Arg Lys Cys Cys 1 5 <210> 30 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu 1 5 10 15 Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala 20 25 30 Ala <210> 31 <211> 179 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu 1 5 10 15 Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala 20 25 30 Ala Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln 35 40 45 Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser 50 55 60 Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe 65 70 75 80 His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu 85 90 95 Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln 100 105 110 Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg 115 120 125 Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn 130 135 140 Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu 145 150 155 160 Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn 165 170 175 Ala Cys Ile <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Gly Pro Gly Pro Gly Pro 1 5 <210> 33 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 Glu Lys Arg 1

Claims (50)

  1. 개체에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전을 예방하거나 치료하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 바이러스-유발 폐 손상 또는 부전이 폐 섬유증, 폐렴, 급성 폐 손상 (ALI), 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS), 코로나바이러스 질환 2019 (COVID-19), 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1) 돼지 독감, 또는 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1) 조류 독감인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 바이러스-유발 패혈증, 패혈성 쇼크, 또는 다발성 기관 기능이상 증후군 (MODS)인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae), 필로비리다에(Filoviridae), 플라비비리다에(Flaviviridae), 코로나비리다에(Coronaviridae), 및 폭스비리다에(Poxviridae) 과 중 어느 하나의 바이러스에 의해 야기되는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 바이러스가 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 인플루엔자 C 바이러스, 및 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 오르토믹소비리다에 바이러스인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 바이러스가 인플루엔자 A 바이러스 또는 그의 임의의 하위유형 또는 재편성체인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 바이러스가 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H1N1 (H1N1) 또는 인플루엔자 A 바이러스 하위유형 H5N1 (H5N1)인 방법.
  9. 제5항에 있어서, 바이러스가 알파 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), 뉴 헤이븐 코로나바이러스 NL63 (HCoV-NL63), 베타 코로나바이러스 OC43 (HCoV-OC43), 코로나바이러스 HKU1 (HCoV-HKU1), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 코로나비리다에 바이러스인 방법.
  10. 제5항에 있어서, 바이러스가 에볼라 바이러스 (EBOV) 및 마르부르크 바이러스 (MARV)로부터 선택되는 필로비리다에 바이러스인 방법.
  11. 제5항에 있어서, 바이러스가 지카 바이러스 (ZIKV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 뎅기 바이러스 (DENV), 및 황열 바이러스 (YFV)로 이루어진 군으로부터 선택되는 플라비비리다에 바이러스인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 유효량의 또 다른 치료제를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 다른 치료제가 코르티코스테로이드, 항염증성 신호 전달 조정제, β2-아드레날린수용체 효능제 기관지확장제, 항콜린제, 점액용해제, 항바이러스제, 항섬유화제, 고장성 염수, 항체, 백신, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 항바이러스제가 렘데시비르, 로피나비르/리토나비르, IFN-α, 로피나비르, 리토나비르, 펜시클로비르, 갈리데시비르, 디술피람, 다루나비르, 코비시스타트, ASC09F, 디술피람, 나파모스타트, 그리피트신, 알리스포리비르, 클로로퀸, 니타족사니드, 발록사비르 마르복실, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 아만타딘, 리만타딘, 파비피라비르, 라니나미비르, 리바비린, 우미페노비르, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 다른 치료제가 렘데시비르, 또는 로피나비르/리토나비르 및 IFNα이고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 SARS-CoV-2에 의해 유발되는 것인 방법.
  16. 제14항에 있어서, 다른 치료제가 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 로피나비르/리토나비르, IFNα, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 H1N1 또는 H5N1에 의해 유발되는 것인 방법.
  17. 제13항에 있어서, 항섬유화제가 닌테다닙, 피르페니돈, 및 N-아세틸시스테인 (NAC)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체가 다른 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  19. 개체에서 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전으로부터 기관을 보호하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전이 내피 세포 손상, 기능이상, 또는 사멸을 포함하는 것인 방법.
  21. 개체에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관의 재생을 촉진시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 손상된 조직 또는 기관이 손상된 또는 기능이상적 내피 세포를 포함하는 것인 방법.
  23. 제20항 또는 제22항에 있어서, 내피 기능이상이 내피 글리코칼릭스 분해를 포함하는 것인 방법.
  24. 개체에서 바이러스 감염으로 인한 손상된 조직 또는 기관에서의 내피 기능이상을 치료하거나 예방하는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  25. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 내피 글리코칼릭스 분해를 예방하고/거나 감소시키는 것, 톨-유사 수용체 4 (TLR4) 신호전달을 하향-조절하는 것, 및/또는 내피 글리코칼릭스를 재생시키는 것을 포함하는 것인 방법.
  26. 제20항 및 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 내피 세포가 폐 내피 세포인 방법.
  27. 개체에서 바이러스 감염으로 인한 염증을 감소시키는 방법이며, 유효량의 IL-22 이량체를 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체가 2개의 단량체성 서브유닛을 포함하고, 각각의 단량체성 서브유닛이 IL-22 단량체 및 이량체화 도메인을 포함하는 것인 방법.
  29. 제28항에 있어서, IL-22 단량체가 임의적 링커를 통해 이량체화 도메인에 연결되는 것인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 링커가 서열식별번호: 1-20 및 32 중 어느 하나의 서열을 포함하는 것인 방법.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 링커가 약 6 내지 약 30개의 아미노산 길이인 방법.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 서열식별번호: 1 또는 10의 서열을 포함하는 것인 방법.
  33. 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 이량체화 도메인이 분자간 디술피드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2개의 시스테인을 포함하는 것인 방법.
  34. 제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 이량체화 도메인이 Fc 단편의 적어도 일부분을 포함하는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, Fc 단편이 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 것인 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, Fc 단편이 서열식별번호: 22 또는 23의 서열을 포함하는 것인 방법.
  37. 제28항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 단량체가 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 것인 방법.
  38. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 단량체가 이량체화 도메인에 대해 N-말단인 방법.
  39. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 단량체가 이량체화 도메인에 대해 C-말단인 방법.
  40. 제28항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 단량체성 서브유닛이 서열식별번호: 24-27 중 어느 것의 서열을 포함하는 것인 방법.
  41. 제28항 내지 제38항 및 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 단량체성 서브유닛이 서열식별번호: 24의 서열을 포함하는 것인 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체의 유효량이 약 2 μg/kg 내지 약 200 μg/kg인 방법.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체의 유효량이 약 5 μg/kg 내지 약 80 μg/kg인 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체의 유효량이 약 10 μg/kg 내지 약 45 μg/kg인 방법.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체의 유효량이 약 30 μg/kg 내지 약 45 μg/kg인 방법.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체가 정맥내로, 폐내로, 또는 흡입 또는 통기를 통해 투여되는 것인 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체가 적어도 1주 1회 투여되는 것인 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 이량체가 10-일 치료 사이클의 제1일 및 제6일, 또는 14-일 치료 사이클의 제1일 및 제8일에 투여되는 것인 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 적어도 약 55세인 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 적어도 약 55세인 것에 기반하여 개체를 선택하는 것을 추가로 포함하는 방법.
KR1020227031074A 2020-02-14 2021-02-10 Il-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 예방 또는 치료 방법 KR20220164478A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2020075408 2020-02-14
CNPCT/CN2020/075408 2020-02-14
CN2020120662 2020-10-13
CNPCT/CN2020/120662 2020-10-13
PCT/CN2021/076519 WO2021160163A1 (en) 2020-02-14 2021-02-10 Methods for prevention or treatment of virus-induced organ injury or failure with il-22 dimer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220164478A true KR20220164478A (ko) 2022-12-13

Family

ID=77291386

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227031074A KR20220164478A (ko) 2020-02-14 2021-02-10 Il-22 이량체를 사용하는 바이러스-유발 기관 손상 또는 부전의 예방 또는 치료 방법

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230079150A1 (ko)
EP (1) EP4103219A4 (ko)
JP (1) JP2023513227A (ko)
KR (1) KR20220164478A (ko)
CN (1) CN116670161A (ko)
AU (1) AU2021218929A1 (ko)
BR (1) BR112022016117A2 (ko)
CA (1) CA3166132A1 (ko)
IL (1) IL295486A (ko)
WO (1) WO2021160163A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
WO2017181143A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis
AU2022422584A1 (en) * 2021-12-23 2024-05-30 Subintro Limited Novel antiviral compositions comprising oleic acid
WO2024073007A2 (en) * 2022-09-28 2024-04-04 Napo Pharmaceuticals, Inc. Lyophilized formulation of crofelemer and methods of treatment using the same
US11918505B1 (en) * 2023-09-24 2024-03-05 Baseem Najjar Penis enlargement device

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102380091A (zh) * 2010-08-31 2012-03-21 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗病毒性肝炎中的应用
CN103182072B (zh) * 2011-12-27 2017-05-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素‑22在治疗和预防神经损伤疾病或神经退行性疾病中的用途
US20150246095A1 (en) * 2012-10-03 2015-09-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the prophylactic treatment of bacterial superinfections post-influenza
EP3013357A1 (en) * 2013-06-28 2016-05-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease
CN104623637A (zh) * 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
WO2019165140A1 (en) * 2018-02-21 2019-08-29 Genentech, Inc. DOSING FOR TREATMENT WITH IL-22 Fc FUSION PROTEINS
WO2021207662A1 (en) * 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021160163A1 (en) 2021-08-19
BR112022016117A2 (pt) 2022-10-25
JP2023513227A (ja) 2023-03-30
AU2021218929A1 (en) 2022-08-25
EP4103219A4 (en) 2024-03-27
CN116670161A (zh) 2023-08-29
EP4103219A1 (en) 2022-12-21
IL295486A (en) 2022-10-01
CA3166132A1 (en) 2021-08-19
US20230079150A1 (en) 2023-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230079150A1 (en) Methods for prevention or treatment of virus-induced organ injury or failure with il-22 dimer
Poduri et al. Drugs targeting various stages of the SARS-CoV-2 life cycle: Exploring promising drugs for the treatment of Covid-19
Bonam et al. Potential immuno-nanomedicine strategies to fight COVID-19 like pulmonary infections
Channappanavar et al. Dysregulated type I interferon and inflammatory monocyte-macrophage responses cause lethal pneumonia in SARS-CoV-infected mice
Das et al. An overview of key potential therapeutic strategies for combat in the COVID-19 battle
JP2023515603A (ja) 可溶性ａｃｅ２及び融合タンパク質、並びにその適用
US20230147602A1 (en) Ribonucleases for treating viral infections
Ohadian Moghadam A review on currently available potential therapeutic options for COVID-19
Tavares et al. ACKR2 contributes to pulmonary dysfunction by shaping CCL5: CCR5-dependent recruitment of lymphocytes during influenza A infection in mice
CN111163792A (zh) 用于治疗病毒感染的肽
Bayat et al. An overview of some potential immunotherapeutic options against COVID-19
EP3884957A1 (en) Methods for treatment of virus and methods for screening of anti-virus reagent using organoids
US9872895B2 (en) TLR5 ligands, therapeutic methods, and compositions related thereto
US20180153901A1 (en) Reversal of latency of retroviruses with a galectin protein
EP2683369B1 (en) Multiantivirus compound, composition and method for treatment of virus diseases
Qamar et al. Therapeutic Modalities for Sar s-Cov-2 (Covid-19): Current Status and Role of Protease Inhibitors to Block Viral Entry Into Host Cells.
Michalski et al. Review of studies on SARS-CoV-2 infection inhibitors
US20230355725A1 (en) Neil2 protein therapy for treatment of viral infection
Chatterjee et al. A review on the SARS-CoV-2 mediated global pandemic: proximal origin, pathogenicity and therapeutic approaches
US11517611B2 (en) Methods of treating viral infection with a composition comprising IL-18 and IL-22
Chatterjee et al. A review on SARS-CoV2 drug regimens inferring plausible mechanisms to impede the viral propagation and cytokine storm
JP2023535710A (ja) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染患者におけるアウトカムを改善するための吸入インターフェロン－ベータ
Cook Host Determinants of Protection and Pathogenesis during Chikungunya Virus Infection
Eriksson Herpes simplex virus type 1 infection in the central nervous system-Experimental and clinical studies
Shane Development of Anti-viral CD8 T Cell Memory in the Respiratory Environment