KR20220155589A - Il-18을 분비하는 gpc3 car-t 세포 및 이의 제조 및 사용 방법 - Google Patents

Il-18을 분비하는 gpc3 car-t 세포 및 이의 제조 및 사용 방법 Download PDF

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병 에스. 권
김광희
정지원
장영균
이보림
이정윤
이승현
임선우
최진경
손현태
이혜미
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주식회사 유틸렉스
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Abstract

키메라 수용체를 포함하는 GPC3에 대한 CAR-T 조성물, 및 GPC3에 대한 조작된 면역 세포가 본원에 제공된다. 본 개시내용은 또한 선택적으로 IL-18의 발현과 조합하여 GPC3 항원 결합 분자 및 조작된 면역 세포를 사용하는 벡터, 조성물 및 치료 방법을 제공한다. 본원에 제공된 GPC3 CAR 조성물은 특정 암의 치료에 사용될 수 있다.

Description

IL-18을 분비하는 GPC3 CAR-T 세포 및 이의 제조 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 18일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/991,497; 2020년 4월 3일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 63/004,912; 및 2020년 6월 24일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 63/043,401에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
배경
암은 여전히 전 세계 주요 사망 원인 중 하나이다. 최근 통계에 따르면 세계 인구의 13%가 암으로 사망하는 것으로 보고되고 있다. 국제 암 연구 기관(IARC)의 추정에 따르면, 2012년에 전 세계적으로 1,410만 건의 새로운 암 사례 및 820만 건의 암 사망이 발생하였다. 2030년까지, 인구 증가와 고령화 및 흡연, 건강에 해로운 식습관 및 신체 활동 부족과 같은 위험 요인에 대한 노출로 인해 전 세계적으로 새로운 암 사례가 2,170만 건으로 늘어나고, 1,300만 건의 암 사망이 발생할 것으로 예상된다. 추가로, 암 치료에 따른 통증 및 의료 비용은 암 환자 및 그의 가족 둘 모두의 삶의 질을 저하시킨다.
키메라 항원 수용체로 조작된 T 세포(CAR-T)는 암과 같은 질환을 치료하기 위한 큰 치료학적 잠재력을 가지고 있다. CAR-T 치료제는 T 세포에 강력한 표적 친화도 및 신호전달 기능을 부여한다. 그러나, CAR-T 요법의 인상적인 효능은 종종 사이토카인 방출 증후군(CRS)과 같은 심각한 부작용을 동반한다. 따라서 감소된 부작용을 갖는 CAR-T 치료제 및 전략을 개발할 필요성이 여전히 충족되지 않고 있다.
요약
키메라 항원 수용체(CAR) 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함하는 외인성 핵산을 포함하는 면역 세포가 본원에 제공되며, 여기서 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 및 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 VL CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 VH CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 여기서 VL CDR 1, 2 및 3은 서열번호: 1, 2 및 3을 포함하고, VH CDR 1, 2 및 3은 서열번호: 4, 5 및 6을 포함한다.
일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 96% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 96% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인터루킨-18은 인간 인터루킨-18이다. 일부 실시양태에서, 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 96% 동일한 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인터루킨-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열이다. 일부 실시양태에서, 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 외인성 핵산은 인터루킨-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 구성적 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 NFAT 프로모터이다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 인간화된다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 인간이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 scFv이다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1,Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨(Toll) 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터 선택되는 막횡단 도메인이다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD8알파로부터의 막횡단 도메인이다.
일부 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 및 CD3제타로부터의 것이다.
일부 실시양태에서, 면역 세포는 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 인간 면역 세포는 자가 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 인간 면역 세포는 동종이계 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 NK 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 외인성 핵산에 의해 암호화되는 IL-18을 분비한다.
본원에 기재된 임의의 면역 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
글리피칸-3-연관 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 이 방법은 본원에 기재된 임의의 면역 세포 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
도 1은 IL-18을 공동-발현하는 GPC3 CAR 렌티바이러스 플라스미드의 구조를 나타낸다.
도 2는 pELPS-huGC33-P2A-IL18 클로닝 후의 효소 맵핑 결과를 나타낸다.
도 3은 pELPS-huGC33-NFAT-IL18 및 pELPS-huGC33-polyA-IL18-NFAT 클로닝 후의 효소 맵핑 결과를 나타낸다.
도 4a는 미처리 PBMC 세포, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18, 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 총 배수 확장을 비교하여 세포 성장을 나타내는 그래프이다.
도 4b는 세포 배양 7일차, 9일차, 11일차, 및 14일차의 시험관내 미처리 PBMC 세포, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18, 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 배수 확장을 비교하는 막대 그래프 세트이다.
도 4c는 세포 배양 7일차, 9일차, 11일차, 및 14일차의 시험관내 미처리 PBMC 세포, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18, 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 세포 생존율을 비교하는 막대 그래프 세트이다.
도 4d는 시험관내 미처리 PBMC 세포, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포를 사용한 루시퍼라제-기반 세포독성 검정의 결과를 나타내며, 여기서 이펙터(E) : 표적(T) 세포 비율(E:T)은 10:1, 3:1, 1:1 또는 0.3:1일 수 있다. 결과는 상이한 CAR-T 세포 군이 유사한 시험관내 사멸 활성을 나타냄을 나타낸다.
도 4e는 7일차의 CAR 발현에 대한 huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18로 형질도입된 T 세포의 FACS 분석을 나타낸다.
도 4f는 9일차의 CAR 발현에 대한 huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18로 형질도입된 T 세포의 FACS 분석을 나타낸다.
도 4g는 11일차의 CAR 발현에 대한 huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18로 형질도입된 T 세포의 FACS 분석을 나타낸다.
도 4h는 14일차의 CAR 발현에 대한 huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18로 형질도입된 T 세포의 FACS 분석을 나타낸다.
도 5a는 huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사 후 동물 모델에서 종양 성장을 나타내는 그래프 세트이다.
도 5b는 huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사 후 동물의 혈액 내 CAR-T 세포 백분율의 변화를 나타내는 그래프 세트이다. 결과는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18을 주사 받은 마우스 군이 혈액 내 CAR-T 세포 수준의 가장 높은 증가를 나타냄을 나타낸다.
도 6은 GPC3 VHVL NFAT IL-18 CAR-T 세포 주사의 주사 후 14일의 기간 동안 동물의 혈액 내 IL-18 농도 변화를 나타낸다. 상단 패널은 각 군에 대한 결과를 나타내고 하단 패널은 주사를 받은 각 동물에 대한 결과를 나타낸다. 결과는 혈청 내 IL-18의 농도가 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사를 받은 마우스에서만 약 20pg/mL에 도달했음을 나타낸다.
도 7a는 12일의 세포 배양 기간에 걸쳐 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 각 군의 세포에 대한 배수 확장을 측정함으로써 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 시험관내 세포 성장을 비교하는 그래프이다. huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 군은 12일에 714.0배의 가장 큰 배수 확장을 나타냈다. huGC33-VHVL-IL18-NFAT 및 huGC33-VHVL 군은 12일에 600배 바로 미만의 유사한 확장을 나타냈다. 미처리 PBMC 세포 군은 대략 490배의 총 배수 확장을 보여주었다. CD19-CAR-T 세포 군은 12일에 대략 338 배수 확장을 나타냈다.
도 7b는 5일차, 7일차, 9일차, 및 12일차의 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포에 대한 배수 확장을 비교하는 막대 그래프 세트이다. 결과는 CAR-T 세포의 각 군의 세포 성장에 유의한 차이가 없음을 나타낸다.
도 7c는 5일차, 7일차, 9일차, 및 12일차의 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 각 군의 세포 생존율을 비교하는 막대 그래프 세트이다. 결과는 CAR-T 세포의 각 군의 세포 생존율에서 유의한 차이가 없음을 나타낸다.
도 7d는 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포를 사용한 LDH-기반 세포독성 검정을 나타내며, 여기서 이펙터(E) : 표적(T) 세포 비율(E:T)은 10:1, 3:1, 1:1 또는 0.3:1일 수 있다. 결과는 huGC33 VHVL, huGC33 VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포가 유사한 시험관내 사멸 활성을 나타내는 반면, 미처리 PBMC 세포 및 CD19 CAR-T 세포는 유의한 시험관내 사멸 활성을 나타내지 않았음을 나타낸다.
도 7e는 7일차의 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 FACS 분석 결과를 나타낸다.
도 7f는 9일차의 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 FACS 분석 결과를 나타낸다.
도 7g는 12일차의 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포의 FACS 분석 결과를 나타낸다.
도 7h는 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포를 사용한 IL18 농도를 나타낸다.
도 8a는 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포 주사 후 동물 모델에서 종양 성장을 나타내는 그래프 세트이다. 25만개의 세포에서 huGC33-VHVL-NFAT-IL18의 투여는 테스트된 5마리의 마우스 모두에서 종양 크기를 억제하였다.
도 8b는 미처리 PBMC 세포, CD19 CAR-T, huGC33 VHVL, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포 주사 후 동물의 혈액 내 CAR-T 세포 백분율 변화를 나타내는 그래프 세트이다. huGC33-VHVL-NFAT-IL18 25만개의 세포의 투여는 종양 성장 시간 동안 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 증식 및 종양 억제 이후 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 감소를 나타낸다.
도 9a는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포 주사 후 동물 모델에서 종양 성장을 나타내는 그래프 세트이다. huGC33-VHVL-NFAT-IL18 25만개의 세포의 투여는 테스트된 3마리의 마우스 모두에서 종양 크기를 억제하였다.
도 9b는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포 주사 후 동물의 혈액 내 CAR-T 세포 백분율의 변화를 나타내는 그래프 세트이다. huGC33-VHVL-NFAT-IL18 25만개의 세포의 투여는 종양 성장 시간 동안 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 증식 및 종양 억제 이후 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포의 감소를 나타낸다.
도 10a는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 주사 후, GPC3 양성 세포주 PLC/PRF/5-GL을 사용한 동물에서 종양 성장을 나타내는 그래프이다. PLC/PRF/5-GL 세포에서 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 100만 세포의 투여는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 투여 후 적어도 28일 후에 종양 크기를 억제하였다.
도 10b는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 주사 후, GPC3 음성 세포주 SK-HEP-1을 사용한 동물에서 종양 성장을 나타내는 그래프이다. SK-Hep-1 세포에서 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 100만 세포의 투여는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 투여 후 적어도 21일 후에 종양 크기를 억제하지 않았다.
본 개시내용은 GPC3 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR-T) 및 IL-18 암호화 서열로 조작된 T 세포 뿐만 아니라 이를 제조하고 사용하는 방법을 기재한다.
정의:
약 : 용어 “약”은 본원에서 값과 관련하여 사용되는 경우, 참조된 값과 관련하여 유사한 값을 지칭한다. 일반적으로, 문맥에 익숙한 당업자는 그 문맥에서 "약"에 의해 포괄되는 적절한 정도의 편차를 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 용어 "약"은 참조된 값의 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 그 미만 이내의 값의 범위를 포괄할 수 있다.
투여 : 본원에 사용된 용어 "투여"는 전형적으로 조성물이거나 또는 조성물에 포함된 작용제의 전달을 달성하기 위해 조성물을 대상체 또는 시스템에 투여하는 것을 지칭한다. 당업자는 적절한 맥락에서 대상체, 예를 들어 인간에게 투여하기 위해 활용될 수 있는 다양한 경로를 알고 있을 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 투여는 안구, 경구, 비경구, 국소 등일 수 있다. 일부 특정 실시양태에서, 투여는 기관지(예를 들어, 기관지 점적주입에 의함), 협측, 피부(예를 들어, 진피에 대한 국소, 피내(intradermal), 피내(interdermal), 경피 등 중 하나 이상일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있음), 장내(enteral), 동맥내, 피내, 위내, 골수강내, 근육내, 비강내, 복강내, 척추강내, 정맥내, 심실내(intraventricular), 특정 기관 내(예를 들어, 간내), 점막, 비강, 경구, 직장, 피하, 설하, 국소, 기관(tracheal)(예를 들어, 기관내 점적주입에 의함), 질, 유리질(vitreal) 등일 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 단지 단일 용량만을 수반할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 고정된 수의 용량의 적용을 수반할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 간헐적(예를 들어, 시간 간격을 두고 분리된 복수의 용량) 및/또는 주기적(예를 들어, 공통 기간 간격으로 분리된 개별 용량) 투약인 투약을 수반할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 적어도 선택된 기간 동안 연속 투약(예를 들어, 관류)을 수반할 수 있다.
친화도 : 당업계에 공지된 바와 같이, "친화도"는 특정 리간드가 이의 파트너와 결합하는 견고성의 척도이다. 친화도는 상이한 방법으로 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 친화도는 정량적 검정에 의해 측정된다. 일부 이러한 실시양태에서, 결합 파트너 농도는 생리학적 조건을 모방하기 위해 리간드 농도를 초과하도록 고정될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 일부 실시양태에서, 결합 파트너 농도 및/또는 리간드 농도가 다양할 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 친화도는 비교 가능한 조건(예를 들어, 농도)에서 참조와 비교될 수 있다.
항체 작용제 : 본원에 사용된 용어 "항체 작용제"는 특정 항원에 특이적으로 결합하는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 이 용어는 특이적 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린 구조적 요소를 포함하는 임의의 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 복합체를 포괄한다. 예시적인 항체 작용제는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 및 이의 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 당업계에 공지된 바와 같이 인간화, 영장류화, 키메라 등인 하나 이상의 서열 요소를 포함할 수 있다. 많은 실시양태에서, 용어 "항체 작용제"는 대안적 제시에서 항체 구조적 및 기능적 특성을 활용하기 위한 당업계에 공지되었거나 발달된 작제물(construct) 또는 포맷 중 하나 이상을 지칭하기 위해 사용된다. 예를 들어, 실시양태에서, 본 발명에 따라 활용되는 항체 작용제는 무손상 IgA, IgG, IgE 또는 IgM 항체; 이중특이적 또는 다중특이적 항체(예를 들어 Zybodies® 등); 항체 단편, 예컨대 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fd' 단편, Fd 단편, 및 단리된 CDR 또는 이의 세트; 단일 쇄 Fv; 폴리펩티드-Fc 융합물; 단일 도메인 항체(예를 들어, 샤크(shark) 단일 도메인 항체, 예컨대 IgNAR 또는 이의 단편); 카멜로이드 항체; 차폐(masked) 항체(예를 들어, Probodies®); 소형 모듈 면역약제("SMIPsTM"); 단일 쇄 또는 탠덤 디아바디(TandAb®); VHHs; Anticalins®; Nanobodies® 미니바디; BiTE®; 안키린 반복 단백질 또는 DARPINs®; Avimers®; DARTs; TCR-유사 항체;, Adnectins®; Affilins®; Trans-bodies®; Affibodies®; TrimerX®; MicroProteins; Fynomers®, Centyrins®; 및 KALBITOR®로부터 선택되지만 이에 제한되지 않는 포맷으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 자연적으로 생산되는 경우 가질 수 있는 공유 변형(covalent modification)(예를 들어, 글리칸의 부착)이 결여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 공유 변형(예를 들어, 글리칸, 페이로드[예를 들어, 검출가능한 모이어티, 치료학적 모이어티, 촉매 모이어티 등]의 부착, 또는 기타 펜던트 기[예를 들어, 폴리-에틸렌 글리콜 등]을 함유할 수 있다. 많은 실시양태에서, 항체 작용제는 이의 아미노산 서열이 당업자에 의해 상보성 결정 영역(CDR)으로서 인식되는 하나 이상의 구조적 요소를 포함하는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함하고; 일부 실시양태에서 항체 작용제는 이의 아미노산 서열이 참조 항체에서 발견되는 것과 실질적으로 동일한 적어도 하나의 CDR(예를 들어, 적어도 하나의 중쇄 CDR 및/또는 적어도 하나의 경쇄 CDR)을 포함하는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은 서열에 있어서 동일하거나 참조 CDR과의 비교 시 1-5개 사이의 아미노산 치환을 함유한다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은 참조 CDR과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 나타낸다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은 참조 CDR과 적어도 96%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 나타낸다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은, 포함된 CDR 내의 적어도 하나의 아미노산이 참조 CDR과의 비교 시 결실, 부가 또는 치환되지만, 상기 포함된 CDR이 참조 CDR의 것과 그 외에는 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은, 포함된 CDR 내의 1-5개의 아미노산이 참조 CDR과의 비교 시 결실, 부가 또는 치환되지만, 상기 포함된 CDR이 참조 CDR의 것과 그외에는 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은, 포함된 CDR 내의 적어도 하나의 아미노산이 참조 CDR과의 비교 시 치환되지만, 상기 포함된 CDR이 참조 CDR의 것과 그 외에는 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 포함된 CDR은, 포함된 CDR 내의 1-5개의 아미노산이 참조 CDR과의 비교 시 결실, 부가 또는 치환되지만, 상기 포함된 CDR이 참조 CDR의 것과 그 외에는 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 이의 아미노산 서열이 당업자에 의해 면역글로불린 가변 도메인으로서 인식되는 구조적 요소를 포함하는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 면역글로불린-결합 도메인과 상동성이거나 또는 대체로 상동성인 결합 도메인을 갖는 폴리펩티드 단백질이다. 일부 실시양태에서, 항체 작용제는 적어도 키메라 항원 수용체(CAR)의 부분(portion)이거나 또는 이를 포함한다.
항원 : 본원에 사용된 용어 "항원"은 항체 작용제에 결합하는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항원은 항체 작용제에 결합하고, 유기체에서 특정 생리학적 반응을 유도할 수 있거나 유도하지 않을 수 있다. 일반적으로, 항원은 임의의 화학적 엔티티(chemical entity), 예컨대, 예를 들어 소분자, 핵산, 폴리펩티드, 탄수화물, 지질, 중합체(생물제제 중합체(biologic polymer)[예를 들어, 핵산 및/또는 아미노산 중합체] 및 생물제제 중합체 이외의 중합체[예를 들어, 핵산 또는 아미노산 중합체 이외의 중합체] 포함) 등일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 글리칸이거나 또는 이를 포함한다. 당업자는 일반적으로, 항원이 단리된 또는 순수한 형태로 제공될 수 있거나, 또는 대안적으로 조질 형태(예를 들어, 다른 재료와 함께, 예를 들어 추출물, 예컨대 세포성 추출물로 또는 항원-함유 공급원의 다른 상대적 조질의 조제물로)로 제공될 수 있음을 이해할 것이다. 일부 특정 실시양태에서, 항원은 세포성 환경(cellular context)에 존재한다(예를 들어, 항원은 세포의 표면 상에 발현되거나 또는 세포에서 발현됨). 일부 실시양태에서, 항원은 재조합 항원이다.
항원 결합 도메인 : 본원에 사용된 바와 같이, 표적 모이어티 또는 엔티티에 특이적으로 결합하는 항체 작용제 또는 이의 부분을 지칭한다. 전형적으로, 항원 결합 도메인과 이의 표적 사이의 상호작용은 비공유적이다. 일부 실시양태에서, 표적 모이어티 또는 엔티티는, 예를 들어 탄수화물, 지질, 핵산, 금속, 폴리펩티드 또는 소분자를 포함하는 임의의 화학적 클래스의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 폴리펩티드(또는 이의 복합체)일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 융합 폴리펩티드의 일부이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 키메라 항원 수용체(CAR)의 일부이다.
연관된 : 하나의 존재, 수준 및/또는 형태가 다른 것의 그것과 상관되는 경우, 두 이벤트 또는 엔티티는 용어가 본원에서 사용된 바와 같이 서로 "연관"된다. 예를 들어, 특정 엔티티(예를 들어, 폴리펩티드, 유전적 특징(signature), 대사 산물, 미생물 등)는 이의 존재, 수준 및/또는 형태가 질환, 장애 또는 병태(예를 들어, 관련 집단 전반에 걸친)의 발병률 및/또는 이에 대한 민감성과 상관이 있는 경우에, 특정 질환, 장애 또는 병태와 연관되는 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 엔티티는 이들이 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 경우에 서로 물리적으로 “연관”되어, 서로 물리적으로 근접해 있고/있거나 물리적 근접을 유지하고 있다. 일부 실시양태에서, 서로 물리적으로 연관된 2개 이상의 엔티티는 서로 공유적으로 연결되고; 일부 실시양태에서, 서로 물리적으로 연관된 2개 이상의 엔티티는 서로 공유적으로 연결되지 않지만, 예를 들어 수소 결합, 반 데르 발스 상호작용, 소수성 상호작용, 자기성, 및 이의 조합에 의해 비공유적으로 연관된다.
결합 : 본원에 사용된 용어 "결합"은 전형적으로 2개 이상의 엔티티 사이 또는 2개 이상의 엔티티 중에서 비공유적 연관을 지칭하는 것으로 이해될 것이다. "직접적인" 결합은 엔티티 또는 모이어티 사이의 물리적 접촉을 수반하고; 간접적인 결합은 하나 이상의 중간 엔티티와의 물리적 접촉을 통한 물리적 상호작용을 수반한다. 2개 이상의 엔티티 사이의 결합은 전형적으로, 상호작용 엔티티 또는 모이어티가 단리되어 연구되거나 또는 보다 복잡한 시스템의 맥락에서(예를 들어, 담체 엔티티와 공유적으로 또는 다른 방식으로 연관되어 있는 동안 및/또는 생물학적 시스템 또는 세포에서) 연구되는 경우를 포함하여, 다양한 상황 중 임의의 것에서 평가할 수 있다.
암 : 용어 "암", "악성 종양", "신생물", "종양" 및 "암종"은 상대적으로 비정상적, 비제어적 및/또는 자율적 성장을 나타내므로, 세포 증식의 유의한 제어 상실을 특징으로 하는 비정상적인 성장 표현형을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 일부 실시양태에서, 종양은 전암성(예를 들어, 양성), 악성, 전-전이성, 전이성 및/또는 비-전이성인 세포일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 본 개시내용은 이의 교시가 특별하게 관련될 수 있는 특정 암을 구체적으로 확인한다. 일부 실시양태에서, 관련 암은 고형 종양을 특징으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 관련 암은 혈액학적 종양을 특징으로 할 수 있다. 일반적으로, 당업계에 공지된 상이한 유형의 암의 예는, 예를 들어 백혈병, 림프종(호지킨 및 비-호지킨), 골수종 및 골수 증식성 장애를 포함하는 조혈암; 육종, 흑색종, 선종, 고형 조직의 암종, 구강, 인후, 후두 및 폐의 편평 세포 암종, 간암, 비뇨 생식기암, 예컨대 전립선암, 자궁경부암, 방광암, 자궁암 및 자궁내막암, 및 신세포 암종, 골암, 췌장암, 피부암, 피부(cutaneous) 또는 안구내 흑색종, 내분비계의 암, 갑상선암, 부갑상선암, 두경부암, 유방암, 위장암 및 신경계 암, 양성 병변, 예컨대 유두종 등을 포함한다.
CDR : 본원에 사용된 바와 같이, 항체 작용제의 가변 영역 내의 상보성 결정 영역을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 각각에는 3개의 CDR이 있으며, 이는 각각의 가변 영역에 대해 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지명된다. "CDR의 세트" 또는 "CDR 세트"는 항원에 결합할 수 있는 단일 가변 영역 또는 항원에 결합할 수 있는 동족 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 CDR에서 발생하는 3개 또는 6개의 CDR 군을 지칭한다. CDR 경계를 정의하기 위한 특정 시스템(예를 들어, Kabat, Chothia 등)이 당업계에 확립되었으며; 당업자는 이러한 시스템 사이 및 이러한 시스템 중의 차이를 인식하고 청구된 발명을 이해하고 실시하는 데 필요한 정도로 CDR 경계를 이해할 수 있다.
화학요법제 : 본원에서 사용된 용어 "화학요법제"는 하나 이상의 세포자멸사유도성, 세포증식억제성 및/또는 세포독성 작용제, 예를 들어 바람직하지 않은 세포 증식과 연관된 하나 이상의 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 데 활용 및/또는 권장되는 작용제를 구체적으로 포함하는 것을 지칭하는 당업계에서 이해된 의미를 지칭한다. 많은 실시양태에서, 화학요법제는 암의 치료에 유용하다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 하나 이상의 알킬화제, 하나 이상의 안트라사이클린, 하나 이상의 세포골격 파괴제(예를 들어, 미세소관 표적화제, 예컨대 탁산, 메이탄신 및 이의 유사체), 하나 이상의 에포틸론, 하나 이상의 히스톤 데아세틸라제 억제제 HDAC), 하나 이상의 토포이소머라제 억제제(예를 들어, 토포이소머라제 I 및/또는 토포이소머라제 II의 억제제), 하나 이상의 키나제 억제제, 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체 또는 뉴클레오티드 전구체 유사체, 하나 이상의 펩티드 항생제, 하나 이상의 백금-기반 작용제, 하나 이상의 레티노이드, 하나 이상의 빈카 알칼로이드, 및/또는 하나 이상의 다음 중 하나 이상의 유사체(즉, 관련 항증식 활성을 공유하는 것)일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 일부 특정 실시양태에서, 화학요법제는 액티노마이신, 올-트랜스 레티노산, 아우리스타틴, 아자시티딘, 아자티오프린, 블레오마이신, 보르테조밉, 카르보플라틴, 카페시타빈, 시스플라틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 커큐민, 시타라빈, 다우노루비신, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 에피루비신, 에포틸론, 에토포시드, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 이마티닙, 이리노테칸, 메이탄신 및/또는 이의 유사체(예를 들어, DM1) 메클로레타민, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 마이탄시노이드, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페메트렉세드, 테니포사이드, 티오구아닌, 토포테칸, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 및 이의 조합 중 하나 이상일 수 있거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 항체-약물 접합체의 맥락에서 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 hLL1-독소루비신, hRS7-SN-38, hMN-14-SN-38, hLL2-SN-38, hA20-SN-38, hPAM4-SN-38, hLL1-SN-38, hRS7-Pro-2-P-Dox, hMN-14-Pro-2-P-Dox, hLL2-Pro-2-P-Dox, hA20-Pro-2-P-Dox, hPAM4-Pro-2-P-Dox, hLL1-Pro-2-P-Dox, P4/D10-독소루비신, 겜투주맙 오조가미신, 브렌툭시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 글렘바투모맙 베도틴, SAR3419, SAR566658, BIIB015, BT062, SGN-75, SGN-CD19A, AMG-172, AMG-595, BAY-94-9343, ASG-5ME, ASG-22ME, ASG-16M8F, MDX-1203, MLN-0264, 항-PSMA ADC, RG-7450, RG-7458, RG-7593, RG-7596, RG-7598, RG-7599, RG-7600, RG-7636, ABT-414, IMGN-853, IMGN-529, 보르세투주맙 마포도틴, 및 로르보투주맙 메르탄신으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체-약물 접합체에서 발견된 것이다.
조작된 : 일반적으로, 용어 "조작된(engineered)"은 사람의 손에 의해 조작된(manipulated) 측면을 지칭한다. 예를 들어, 폴리펩티드 서열이 사람의 손에 의해 조작된 경우, 폴리펩티드는 "조작된" 것으로 간주된다. 예를 들어, 본 발명의 일부 실시양태에서, 조작된 폴리펩티드는 사람의 손에 의해 참조 폴리펩티드 서열 내로 도입된 하나 이상의 아미노산 돌연변이, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조작된 폴리펩티드는 사람의 손에 의해 하나 이상의 추가적인 폴리펩티드에 융합(즉, 공유적으로 연결)되어 생체내에서 자연적으로 발생하지 않는 융합 폴리펩티드를 형성하는 폴리펩티드를 포함한다. 유사하게, 세포 또는 유기체는 이의 유전적 정보가 변경되도록 조작된 경우(예를 들어, 이전에 존재하지 않은 새로운 유전적 재료가, 예를 들어 형질전환, 교배, 체세포 혼성화, 형질감염, 형질도입 또는 다른 메커니즘에 의해 도입되었거나, 또는 이전에 존재하는 유전적 재료가, 예를 들어 치환 또는 결실 돌연변이에 의해 또는 교배 프로토콜에 의해 변경 또는 제거됨)에 "조작된" 것으로 간주된다. 일반적인 관행이고 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 조작된 폴리펩티드 또는 세포의 유도체 및/또는 자손은 전형적으로, 실제 조작이 이전 엔티티 상에서 수행되는 경우라도 여전히 "조작된" 것으로 지칭된다.
시험관내 : 본원에 사용된 용어 "시험관내"는 다세포 유기체 내에서가 아닌 인공 환경, 예를 들어 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양물 등에서 발생하는 이벤트를 지칭한다.
생체내 : 본원에 사용된 바와 같이, 인간 및 비-인간 동물과 같은 다세포 유기체 내에서 발생하는 이벤트를 지칭한다. 세포-기반 시스템과 관련하여, 용어는 (예를 들어, 시험관내 시스템과는 대조적으로) 살아있는 세포 내에서 발생하는 이벤트를 지칭하기 위해 사용될 수 있다.
단리된 : 본원에 사용된 바와 같이, (1) 초기에 생산되었을 때(자연 및/또는 실험 환경에서) 이와 연관된 성분 중 적어도 일부로부터 분리되었고/되었거나 (2) 사람의 손에 의해 설계, 생산, 제조 및/또는 제작된 물질 및/또는 엔티티를 지칭한다. 단리된 물질 및/또는 엔티티는, 이의 초기에 연관된 다른 성분 중 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과로부터 분리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 작용제는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과하여 순수하다. 본원에 사용된 바와 같이, 물질에 다른 성분이 실질적으로 없는 경우, 물질은 "순수"하다. 일부 실시양태에서, 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 물질은 특정 다른 성분, 예컨대, 예를 들어 하나 이상의 담체 또는 부형제(예를 들어, 완충제, 용매, 물 등)와 조합된 후에도 여전히 "단리된" 또는 심지어 "순수한" 것으로 간주될 수 있으며; 이러한 실시양태에서, 상기 물질의 퍼센트 단리 또는 순도는 이러한 담체 또는 부형제를 포함하지 않고 계산된다. 하나의 예를 제공하기 위해, 일부 실시양태에서, 자연에서 발생하는 생물학적 중합체, 예컨대 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드는 a) 이의 기원 또는 유도화 공급원에 의해, 자연에서 이의 천연 상태로 동반되는 성분들 중 일부 또는 전부와 연관되지 않는 경우; b) 자연에서 그것을 생산하는 종으로부터 동일한 종의 다른 폴리펩티드 또는 핵산이 실질적으로 없는 경우; c) 자연에서 그것을 생산하는 종이 아닌 세포 또는 다른 발현 시스템의 성분에 의해 발현되거나 또는 그렇지 않으면 그러한 성분과 연관 경우에, "단리된" 것으로 간주된다. 따라서, 예를 들어, 일부 실시양태에서, 화학적으로 합성되거나 또는 자연에서 그것을 생산하는 것과 상이한 세포 시스템에서 합성되는 폴리펩티드는 "단리된" 폴리펩티드로 간주된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 일부 실시양태에서, 하나 이상의 정제 기술을 거친 폴리펩티드는 a) 자연에서 그것과 연관된 다른 성분; 및/또는 (b) 초기에 생산될 때 그것과 연관된 다른 성분으로부터 분리된 정도까지 "단리된" 폴리펩티드로 간주될 수 있다.
작동가능하게 연결된 : 본원에 사용된 바와 같이, 여기서 기재된 성분이 의도된 방식으로 기능하도록 허용하는 관계에 있는 근접위치(juxtaposition)를 지칭한다. 기능적 요소에 "작동가능하게 연결된" 제어 요소는, 이러한 기능적 요소의 발현 및/또는 활성이 상기 제어 요소와 화합성인 조건 하에서 달성되는 방식으로 연관된다. 일부 실시양태에서, "작동가능하게 연결된" 제어 요소는 관심 코딩 요소와 인접하고(예를 들어, 공유적으로 연결됨); 일부 실시양태에서, 제어 요소는 관심 기능적 요소와 트랜스로 작용하거나 또는 기능적 요소로부터 달리 작용한다.
약제학적 조성물 : 본원에 사용된 용어 "약제학적 조성물"은 활성제가 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화되는 조성물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 인간 또는 동물 대상체에게 투여하기 적합하다. 일부 실시양태에서, 활성제는 관련 집단에 투여될 때 미리 결정된 치료 효과를 달성할 수 있는 통계적으로 유의한 확률을 나타내는 치료 레지멘으로 투여하기에 적절한 단위 용량으로 존재한다.
폴리펩티드 : 본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 일반적으로, 당업계에 인식된 적어도 3개의 아미노산의 중합체를 의미한다. 당업자는 용어 "폴리펩티드"가 본원에 인용된 완전한 서열을 갖는 폴리펩티드를 포괄하는 것 뿐만 아니라 이러한 완전한 폴리펩티드의 기능적 단편(즉, 적어도 하나의 활성을 보유하는 단편)을 나타내는 폴리펩티드를 포괄하는 것으로 충분히 일반적이라는 것을 이해할 것이다. 더욱이, 당업자는 단백질 서열이 일반적으로 활성을 파괴하지 않으면서 일부 치환을 허용한다는 것을 이해한다. 따라서, 활성을 유지하고, 전체 서열 동일성을 적어도 약 30-40%, 종종 약 50%, 60%, 70%, 또는 80% 초과하여 공유하고, 일반적으로 하나 이상의 고도로 보존된 영역에 훨씬 더 높은 동일성 중 종종 90% 또는 심지어 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 적어도 하나의 영역을 추가로 포함하고, 일반적으로 동일한 클래스의 또 다른 폴리펩티드와 함께 적어도 3-4개 및 종종 최대 20개 또는 그 이상의 아미노산을 포괄하는 임의의 폴리펩티드가 본원에 사용된 바와 같은 관련 용어 "폴리펩티드" 내에 포괄된다. 폴리펩티드는 L-아미노산, D-아미노산, 또는 둘 모두를 함유할 수 있고, 당업계에 공지된 다양한 아미노산 변형 또는 유사체의 임의의 것을 함유할 수 있다. 유용한 변형은, 예를 들어, 말단 아세틸화, 아미드화, 메틸화 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 자연 아미노산, 비-자연 아미노산, 합성 아미노산, 및 이의 조합을 포함할 수 있다. 용어 "펩티드"는 일반적으로 약 100개 미만의 아미노산, 약 50개 미만의 아미노산, 20개 미만의 아미노산, 또는 10개 미만의 아미노산 길이를 갖는 폴리펩티드를 지칭하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 단백질은 항체 작용제, 항체 단편, 이의 생물학적 활성 부분, 및/또는 이의 특징적인 부분이다.
예방하다 또는 예방 : 본원에 사용된 바와 같이, 질환, 장애 및/또는 병태의 발생과 연계해서 사용되는 경우, 질환, 장애 및/또는 병태의 발달 위험 감소 및/또는 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 특징 또는 증상의 발병 및/또는 중증도를 지연시키는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상의 발달, 빈도 및/또는 강도에 있어서의 통계적으로 유의한 감소가 질환, 장애 또는 병태에 민감한 집단에서 관찰되는 경우, 작용제가 특정 질환, 장애 또는 병태를 "예방"하는 것으로 간주되도록 집단에 기반하여 예방이 평가된다.
재조합 : 본원에 사용된 바와 같이, 재조합 수단에 의해 설계, 조작, 제조, 발현, 생성, 제작 및/또는 단리된 폴리펩티드, 예컨대 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 폴리펩티드; 재조합의 조합 인간 폴리펩티드 라이브러리로부터 단리된 폴리펩티드; 폴리펩티드 또는 이의 하나 이상의 성분(들), 부분(들), 요소(들), 또는 도메인(들)을 암호화하고/하거나 이의 발현을 지시하는 유전자 또는 유전자들, 또는 유전자 성분에 대해 트랜스제닉이거나 또는 이들 유전자 또는 유전자들, 유전자 성분을 발현하도록 달리 조작시킨 동물(예를 들어, 마우스, 토끼, 양, 어류 등)로부터 단리된 폴리펩티드; 및/또는 선택된 핵산 서열 요소를 서로 스플라이싱(splicing) 또는 라이게이션(ligating)하고/하거나, 선택된 서열 요소를 화학적으로 합성하고/하거나, 폴리펩티드 또는 이의 하나 이상의 성분(들), 부분(들), 요소(들) 또는 도메인(들)을 암호화하고/하고나 이들의 발현을 지시하는 핵산을 달리 생성하는 것을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 폴리펩티드를 지칭하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, 이러한 선택된 서열 요소 중 하나 이상은 자연에서 발견된다. 일부 실시양태에서, 이러한 선택된 서열 요소 중 하나 이상이 인 실리코(in silico) 설계된다. 일부 실시양태에서, 이러한 선택된 서열 요소 중 하나 이상이, 예를 들어, 자연 또는 합성 공급원으로부터, 예컨대, 예를 들어 관심 공급원 유기체(예를 들어, 인간, 마우스 등)의 생식세포 계열에서 공지된 서열 요소의 돌연변이 유발(예를 들어, 생체내 또는 시험관내)로부터 비롯된다.
특이적 결합 : 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "특이적 결합"은 결합이 발생할 환경에서 가능한 결합 파트너를 구별하는 능력을 지칭한다. 다른 잠재적인 표적이 존재할 때 하나의 특정 표적과 상호작용하는 결합제는 그것이 상호작용하는 표적에 "특이적으로 결합"한다고 한다. 일부 실시양태에서, 특이적 결합은 결합제와 이의 파트너 사이의 연관 정도를 검출하거나 결정함으로써 평가되고; 일부 실시양태에서, 특이적 결합은 결합제-파트너 복합체의 해리 정도를 검출하거나 결정함으로써 평가되며; 일부 실시양태에서, 특이적 결합은 이의 파트너와 또 다른 엔티티 사이의 대안적 상호작용을 놓고 경쟁할 수 있는 결합제의 능력을 검출하거나 결정함으로써 평가된다. 일부 실시양태에서, 특이적 결합은 농도 범위에 걸쳐 이러한 검출 또는 결정을 수행함으로써 평가된다.
대상체 : 본원에 사용된 용어 "대상체"는 유기체, 전형적으로 포유동물(예를 들어, 인간, 일부 실시양태에서는 태아기 인간 형태를 포함함)을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 관련 질환, 장애 또는 병태를 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 질환, 장애 또는 병태에 민감하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 대상체는 질환, 장애 또는 병태의 임의의 증상 또는 특징을 나타내지 않는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 질환, 장애 또는 병태에 대한 민감성 또는 위험 중 하나 이상의 특징적인 특성을 갖는 사람이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 환자이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 이에 대한 진단 및/또는 요법을 투여받고/받았거나 투여받은 적이 있는 개체이다.
치료제 : 본원에 사용된 구절 "치료제"는 일반적으로 유기체에게 투여될 때 원하는 약리학적 효과를 유도하는 임의의 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 작용제가 적절한 집단 전반에 걸쳐 통계적으로 유의한 효과를 나타내는 경우, 이러한 작용제는 치료제인 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 적절한 집단은 모델 유기체 집단일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적절한 집단은 다양한 기준, 예컨대 특정 연령 군, 성별, 유전적 배경, 기존 임상 병태 등에 의해 정의될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 질환, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특성을 경감, 완화, 구제(relieve), 억제, 예방, 발병의 지연, 중증도 감소 및/또는 발병률 감소시키기 위해 사용될 수 있는 물질이다. 일부 실시양태에서, "치료제"는 인간에게 투여하기 위해 시판될 수 있기 전에 정부 기관에 의해 승인을 받았거나 또는 승인을 받아야 하는 작용제이다. 일부 실시양태에서, "치료제"는 인간에게 투여하기 위해 의학적 처방이 필요한 작용제이다.
치료학적 유효량 : 본원에 사용된 용어 "치료학적 유효량"은 치료 투약 레지멘에 따라 질환, 장애 및/또는 병태를 앓고 있거나 이에 민감한 집단에 투여될 때, 질환, 장애 및/또는 병태를 치료하기에 충분한 양을 의미한다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량은 질환, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상의 발병률 및/또는 중증도를 감소시키고/시키거나, 이의 하나 이상의 특징을 안정화시키고/시키거나, 이의 발병을 지연시키는 것이다. 당업자는 용어 "치료학적 유효량"이 실제로 특정 개체에게서 성공적인 치료가 달성될 것을 요구하지는 않는다는 것을 이해할 것이다. 오히려, 치료학적 유효량은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 유의한 수의 대상체에서 특정 원하는 약리학적 반응을 제공하는 양일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 용어 "치료학적 유효량"은 본 발명의 요법의 맥락에서 치료를 필요로 하는 개체에게 투여될 때, 상기 개체에서 발생하는 암 지지 프로세스를 차단, 안정화, 약화 또는 역전시키거나 상기 개체에서 암 억제 프로세스를 향상 또는 증가시킬 양을 지칭한다. 암 치료의 맥락에서, "치료학적 유효량"은 암이 있는 것으로 진단된 개체에게 투여될 때, 이러한 개체에서 암의 추가 발달을 예방, 안정화, 억제 또는 감소시킬 양이다. 본원에 기재된 조성물의 특히 바람직한 "치료학적 유효량"은 악성 종양, 예컨대 췌장 암종의 발달을 역전시키거나(치료학적 치료에서) 또는 악성 종양의 완화를 달성하거나 또는 이를 연장시키는 것을 도와준다. 개체에서 암을 치료하기 위해 이의 개체에게 투여되는 치료학적 유효량은 완화를 촉진하거나 전이를 억제하기 위해 투여되는 치료학적 유효량과 동일하거나 상이할 수 있다. 대부분의 암 요법에서와 같이, 본원에 기재된 치료 방법은 암에 대한 "치유"로 해석되거나, 이에 제한되거나, 달리 제한되지 않으며; 오히려, 이의 치료 방법은 암을 "치료"하기 위해, 즉, 암을 갖는 개체의 건강에 바람직하거나 유익한 변화를 초래하기 위해 본원에 기재된 조성물을 사용하는 것에 관한 것이다. 이러한 이점은 종양학 분야의 숙련된 의료 제공자에 의해 인식되며 환자 병태의 안정화, 종양 크기의 감소(종양 퇴행), 생체 기능의 개선(예를 들어, 암성 조직 또는 기관의 개선된 기능), 추가 전이의 감소 또는 억제, 기회 감염의 감소, 생존율 증가, 통증 감소, 운동 기능 개선, 인지 기능 개선, 에너지 느낌(feeling of energy) 개선(활력, 감소된 불쾌감), 웰빙 느낌 개선, 정상적인 식욕의 회복, 건강한 체중 증가의 회복 및 이의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 개체에서 특정 종양의 퇴행(예를 들어, 본원에 기재된 치료의 결과로서)은 또한 췌장 선암종과 같은 종양의 부위로부터 암세포 샘플을 채취하고(예를 들어, 치료 과정에 걸쳐 수행됨), 암 세포의 상태를 모니터링하기 위해 암세포의 대사수준 및 신호전달 마커에 관하여 암 세포를 테스트하여 분자 수준에서 암 세포가 덜 악성 표현형으로 퇴행하는 것을 검증함으로써 평가될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법을 이용하여 유도된 종양 퇴행은 상기 논의된 신생혈관형성 유도(pro-angiogenic) 마커 중 임의의 것의 감소, 본원에 기재된 항-신생혈관형성 마커의 증가, 암으로 진단된 개체에서 비정상적인 활성을 나타내는 대사 경로, 세포간 신호전달 경로, 세포내 신호전달 경로의 정상화(즉, 암을 앓지 않는 정상 개체에서 발견된 상태로의 변경)을 발견함으로써 표시될 수 있다. 당업자는 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량은 단일 용량으로 제형화 및/또는 투여될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량은 복수개의 용량으로, 예를 들어, 투약 레지멘의 일부로서 제형화 및/또는 투여될 수 있다.
변이체 : 분자, 예를 들어 핵산, 단백질 또는 소분자의 맥락에서 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변이체"는 참조 분자와 유의한 구조적 동일성을 나타내지만, 예를 들어, 참조 엔티티와의 비교 시 하나 이상의 화학적 모이어티의 존재 또는 부재 또는 수준에 있어서 참조 분자와 구조적으로 상이한 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변이체는 또한 그의 참조 분자와 기능적으로 상이하다. 일반적으로 특정 분자가 참조 분자의 "변이체"인 것으로 적절하게 간주되는지의 여부는 참조 분자와의 구조적 동일성 정도에 근거한다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 임의의 생물학적 또는 화학적 참조 분자는 특정 특징적인 구조적 요소를 갖는다. 정의에 따르면, 변이체는 하나 이상의 이러한 특징적인 구조적 요소를 공유하지만 참조 분자와는 적어도 하나의 측면에서 상이한 별개의 분자이다. 몇 가지 예를 들자면, 폴리펩티드는 선형 또는 3차원 공간에서 서로에 대해 지정된 위치를 갖고/갖고 있거나 특정 구조적 모티프 및/또는 생물학적 기능에 기여하는 복수개의 아미노산으로 구성된 특징적인 서열 요소를 가질 수 있고; 핵산은 선형 또는 3차원 공간에서 서로에 대해 지정된 위치를 갖는 복수개의 뉴클레오티드 잔기로 구성된 특징적인 서열 요소를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드 또는 핵산은 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 하나 이상의 차이의 결과로서 참조 폴리펩티드 또는 핵산과 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드 또는 핵산은 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 99%인 참조 폴리펩티드 또는 핵산과의 전체 서열 동일성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드 또는 핵산은 참조 폴리펩티드 또는 핵산과 적어도 하나의 특징적인 서열 요소를 공유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 참조 폴리펩티드 또는 핵산은 하나 이상의 생물학적 활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드 또는 핵산은 참조 폴리펩티드 또는 핵산의 생물학적 활성 중 하나 이상을 공유한다.
벡터 : 본원에 사용된 바와 같이, 이와 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가 DNA 절편이 라이게이션될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가 DNA 절편이 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피좀 포유동물 벡터)에서 자율 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어, 비-에피좀 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입될 때, 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다. 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 및 조직 배양 및 형질전환을 위한 표준 기술이 사용될 수 있다(예를 들어, 전기천공, 리포펙션). 효소 반응 및 정제 기술은 제조업체의 사양에 따라 또는 당업계에서 일반적으로 달성되거나 또는 본원에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 전술한 기술 및 절차는 일반적으로 당업계에 널리 공지된 통상적인 방법에 따라서 그리고 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들어, Sambrook 등., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)을 참조하며, 이는 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
조작된 면역 세포
본원에 사용된 "면역 세포"는 림프구(예를 들어, T 세포, B 세포 및 NK 세포), 호중구, 및 단핵구/대식세포로 분류될 수 있는 면역계의 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 NK 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 조작된 면역 세포이며, 이는 면역 세포가 비-자연적으로 발생하는 단백질(예를 들어, 키메라 항원 수용체)을 발현하거나 외인성 핵산을 포함하도록 유전적으로 변형되었음을 의미한다.
면역 세포(예를 들어, T 세포)는 하나 이상의 방식으로 변형될 수 있다. 면역 세포(예를 들어, T 세포)는 하나 이상의 유형의 세포 표면 상에 존재하는 항원에 대한 수용체인 적어도 하나의 비-자연 분자를 발현할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 자연에서 발견되지 않는 적어도 하나의 합성 분자를 포함하거나 발현하도록 조작되기 때문에 자연에서 발견되지 않는 면역 세포(예를 들어, T 세포)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 면역 세포(예를 들어, T 세포)는 글리피칸-3(GPC3)과 같은 특정 종양 항원을 표적화하는 CAR을 포함하는 적어도 하나의 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된다. 특정 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 예를 들어 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, Treg 세포, Th1 T 세포, Th2 T 세포, Th17 T 세포, 비특이적 T 세포, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 조합을 포함하는 T 세포의 집단일 수 있다. 키메라 항원 수용체(CAR T 세포)로 조작된 면역 세포(예를 들어, T 세포)는 암 치료에 대한 큰 치료 잠재력을 가지고 있다. CAR을 사용하면, 수용체가 항원을 인식하도록 프로그래밍될 수 있으며, 결합되는 경우 면역 세포를 활성화하여 해당 항원을 발현하는 세포를 사멸시킨다. 따라서, 종양 세포 상에서 발현되는 항원에 대한 CAR(들)을 발현하는 면역 세포는 종양 세포를 표적화하고 사멸시킬 수 있다. 예를 들어, 혈액학적 암에 대한 CD19-표적 CAR-형질도입 T 세포(CD19-CAR T 세포)의 최근 임상 시험은 CAR T 기술의 강력한 효과를 나타내었다. (Kochenderfer, J. N. 등. (2010) Blood 116: 4099-4102; Porter, D. L., 등. (2011) N. Engl. J. Med. 365: 725-733; Grupp, S. A. 등. (2013) N. Engl. J. Med. 368: 1509-1518, Kochenderfer, J. N. 등. (2015) J. Clin. Oncol. 33: 540-549, Brown, C. E. 등. (2016) N. Engl. J. Med. 375: 2561-2569). CAR T의 임상적 성공은 CAR의 융합 구조에 적어도 부분적으로 기인하며, 이는 높은 친화도 항원 결합 도메인을 다수의 신호전달 도메인과 인위적으로 조합함으로써 이루어진다 (Maus, M. V. 등. (2014) Blood 123: 2625-2635, van der Stegen, S. J. 등. (2015) Nat. Rev. Drug Discov. 14: 499-509).
CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 종양-연관 항원을 인식할 수 있는 단일 쇄 가변 단편(scFv)을 포함하고, 막횡단 도메인은 CD8 및 CD28과 같은 분자로부터의 막횡단 도메인을 사용하고, 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(예를 들어, CD3ζ) 및 공동자극 신호전달 분자(예를 들어, CD28, CD137 및 CD137(4-1BB))의 세포내 신호전달 도메인을 사용한다.
본원에서 사용된 “단일 쇄 가변 단편, scFv”는 링커에 의해 연결된 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 재조합 단백질로 정의되는 항체의 단편을 지칭하며, 이는 두 도메인을 연관시켜 항원 결합 부위를 형성한다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로부터 선택된 단백질로부터의 막횡단 도메인이다.
일부 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로부터 선택된 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 키메라 수용체의 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 신호전달 도메인에 이어 5개의 아미노산 서열을 포함하며, 이는 키메라 수용체의 맥락에서 유용한 임의의 다른 원하는 세포외, 막횡단 및/또는 세포내 도메인(들)과 추가로 조합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 신호전달 도메인에 이은 5개의 아미노산 서열은 euBBz로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 추가 항원 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가 항원 결합 도메인은 scFv이다.
면역 세포(예를 들어, T 세포)는 당업계에 공지된 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 면역(예를 들어, T) 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내에서 분화될 수 있거나, 면역(예를 들어, T) 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직 또는 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, 면역(예를 들어, T) 세포는 당업계에서 이용가능한 하나 이상의 면역 세포주로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 FICOLLTM 분리 및/또는 성분채집술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액으로부터 수득될 수 있다. T 세포 요법을 위해 T 세포를 단리하는 추가 방법은 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있다. 다른 비제한적인 예는 국제 출원 번호 PCT/US2015/014520(WO2015/120096으로 공개됨) 및 국제 출원 번호 PCT/US2016/057983(W02017/070395로 공개됨)에서 찾을 수 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 면역 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 치료 방법에 사용하기 위한 T 세포는 동계(syngeneic)(공여자 및 수용자는 상이하지만 일란성 쌍둥이임)이다. 일부 실시양태에서, 치료 방법에 사용하기 위한 T 세포는 수용 대상체와 동종이계(동일한 종이지만 상이한 공여자로부터)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 자가 줄기 세포(자가 줄기 세포 요법 또는 ASCT용)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 비-자가 T-세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 건강한 공여자로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 암 또는 종양으로 고통받고 있는 환자로부터 수득된다.
T 세포는, 예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR-T 세포는 세포외 단일 쇄 가변 단편(scFv)을 발현하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 공동자극 도메인이 별도의 폴리펩티드 쇄로서 발현되도록 조작된다. 예시적인 CAR-T 세포 요법 및 작제물은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309, 및 2014/0050708에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
GPC3
글리피칸-3(GPC3)는 인간의 GPC3 유전자에 의해 암호화되는 세포 표면 단백질이며, 신생물성 간세포의 높은 빈도로 재발현되는 종양태아성 항원이다. GPC3는 태아 간에서 높게 발현되고 정상적인 성인 간 조직에서는 발현되지 않지만, 이의 발현은 간세포 암종에서 재활성화되고, 간암 초기 단계에서 GPC3 발현의 검출률이 상대적으로 높고 간암의 발달과 함께 증가하는 간암의 발달과 밀접한 연관이 있다. 추가로, GPC3는 흑색종, 난소 투명 세포 암종, 난황낭 종양, 신경모세포종 및 기타 종양과 같은 종양에서도 발현된다. 간세포 암종, 흑색종 및 기타 종양에서 특히 높은 발현을 고려할 때, GPC3는 유용한 면역조직화학 진단 테스트 및 잠재적인 바이오마커로 부상하였다.
GPC3는 기관형성의 세포 부착에서 세포외 기질로서 또는 세포 성장 인자의 수용체로서 기능하는 프로테오글리칸 패밀리의 구성원이다. GPC3의 단백질 코어는 2개의 서브유닛 및 N-말단 서브유닛 및 C-말단 서브유닛을 포함한다. 글리코실 포스파티딜이노시톨(GPI) 앵커는 GPC3의 카르복실(C)-말단 측에 위치한 위치(560)의 세린에 첨가된다. GPI 앵커는 세포막 지질에 대한 공유 결합을 통해 세포 표면 상에 GPC3을 국부화시키는 역할을 한다. 또한, GPC3의 위치(495)의 세린 및 위치(509)의 세린은 헤파란 설페이트 쇄(HS 쇄)로 변형되어 있으며, 여기서 HS 쇄는 Wnt 신호, FGF 신호 및 BMP 신호 전달 경로와 같은 복수의 성장 신호 전달 경로를 조절하는 것으로 공지되어 있다. 수반된 성장 신호 전달 경로는 암의 유형에 따라 상이한 것으로 공지되어 있다. 예를 들어, 간세포 암종(HCC)에서 세포는 Wnt 신호 경로의 자극에 의해 성장한다.
GPC3 CAR
본 개시내용은 적어도 부분적으로 GPC3 CAR 폴리펩티드를 제공한다. 본원에 사용된 "키메라 항원 수용체(CAR)"는 자연에 존재하지 않는 수용체를 지칭하고 특정 항원에 대한 특이성을 갖는 면역 이펙터 세포를 제공할 수 있다. 일반적으로, CAR은 모노클로날 항체 작용제의 특이성을 T 세포에 전달하기 위해 사용되는 수용체를 지칭한다. 일반적으로, CAR은 세포외 결합 도메인(엑토도메인), 막횡단 도메인 및 세포내 신호전달 도메인(엔도도메인)을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR의 세포외 결합 도메인은 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 항체 작용제이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 GPC3에 특이적으로 결합하는 항체 작용제이거나 또는 이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체(CAR) 폴리펩티드는 i) 서열번호: 1을 포함하는 경쇄 CDR1; 서열번호: 2를 포함하는 경쇄 CDR2; 및 서열번호: 3을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 서열번호: 4를 포함하는 중쇄 CDR1; 서열번호: 5를 포함하는 중쇄 CDR2; 및 서열번호: 6을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; ii) 막횡단 도메인; 및 iii) 항원이 항체 작용제에 결합하는 경우 T 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
[표 1]
Figure pct00001
일부 실시양태에서, CAR 폴리펩티드는 i) 서열번호: 10과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호: 8과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; ii) 막횡단 도메인; 및 iii) 항원이 항체 작용제에 결합하는 경우 T 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CAR 폴리펩티드는 i) 서열번호: 10을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호: 8을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; ii) 막횡단 도메인; 및 iii) 항원이 항체 작용제에 결합하는 경우 T 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00002
IL-18
인터루킨-18(IL-18)은 T 세포에서 인터페론-γ(IFN-γ) 발현 유도제로 특징지어지며 임상 시험에서 심각한 용량 제한 독성을 유도하지 않으면서 림프구 및 단핵구를 활성화하는 것으로 나타났다. IL-18은 인간의 IL18 유전자에 의해 암호화되는 전염증성 사이토카인이다. 또한, IL-18은 인터페론-γ를 유도하는 능력 외에도 다양한 기능을 갖는 것으로 공지되어 있다. IL-18은 NF-κB의 활성화, Fas 리간드의 발현, CC 및 CXC 케모카인 둘 모두의 유도, 및 적격 인간 면역결핍 바이러스(competent human immunodeficiency)의 증가된 생산과 같은 기능을 갖는다. T 세포 및 대식세포에서 IL-18이 인터페론-γ 생산을 유도하는 능력으로 인해, 이는 Th1-형 면역반응에서 중요한 역할을 하며 선천성 면역(congenital immunity) 및 후천성 면역(acquired immunity) 둘 모두에 관여한다. IL-18은 구조 및 기능 면 둘 모두에서 IL-1 패밀리와 관련이 있다.
일부 실시양태에서, IL-18 분비 CAR-T 세포는 혈액학적 및 고형 악성 종양의 마우스 모델에서 향상된 CAR-T 세포 생체내 확장 및 유의하게 증가된 장기 생존을 나타낸다. 일부 실시양태에서, IL-18 분비 CAR-T 세포는 효과적인 내인성 항종양 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, GPC3 CAR-T 세포는 IL-18을 공동-발현할 수 있고, 이에 의해 CAR-T 세포의 확장을 향상시키고 항종양 면역 반응의 효과를 증가시킨다.
서열번호: 11 - 인간 인터루킨-18
TACTTTGGCAAGCTTGAATCTAAATTATCAGTCATAAGAAATTTGAATGACCAAGTTCTCTTCATTGACCAAGGAAATCGGCCTCTATTTGAAGATATGACTGATTCTGACTGTAGAGATAATGCACCCCGGACCATATTTATTATAAGTATGTATAAAGATAGCCAGCCTAGAGGTATGGCTGTAACTATCTCTGTGAAGTGTGAGAAAATTTCAACTCTCTCCTGTGAGAACAAAATTATTTCCTTTAAGGAAATGAATCCTCCTGATAACATCAAGGATACAAAAAGTGACATCATATTCTTTCAGAGAAGTGTCCCAGGACATGATAATAAGATGCAATTTGAATCTTCATCATACGAAGGATACTTTCTAGCTTGTGAAAAAGAGAGAGACCTTTTTAAACTCATTTTGAAAAAAGAGGATGAATTGGGGGATAGATCTATAATGTTCACTGTTCAAAACGAAGACTAG
서열번호: 12 - 인간 인터루킨-18(역상보체)
CTAGTCTTCGTTTTGAACAGTGAACATTATAGATCTATCCCCCAATTCATCCTCTTTTTTCAAAATGAGTTTAAAAAGGTCTCTCTCTTTTTCACAAGCTAGAAAGTATCCTTCGTATGATGAAGATTCAAATTGCATCTTATTATCATGTCCTGGGACACTTCTCTGAAAGAATATGATGTCACTTTTTGTATCCTTGATGTTATCAGGAGGATTCATTTCCTTAAAGGAAATAATTTTGTTCTCACAGGAGAGAGTTGAAATTTTCTCACACTTCACAGAGATAGTTACAGCCATACCTCTAGGCTGGCTATCTTTATACATACTTATAATAAATATGGTCCGGGGTGCATTATCTCTACAGTCAGAATCAGTCATATCTTCAAATAGAGGCCGATTTCCTTGGTCAATGAAGAGAACTTGGTCATTCAAATTTCTTATGACTGATAATTTAGATTCAAGCTTGCCAAAGTA
서열번호: 13 - 인터루킨-2 분비 신호 서열
ATGTACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTTGTCACAAACAGT
서열번호: 14 - 인터루킨-2 분비 신호 서열(역상보체)
ACTGTTTGTGACAAGTGCAAGACTTAGTGCAATGCAAGACAGGAGTTGCATCCTGTACAT
핵산
본원에 사용된 "핵산"은 뉴클레오티드의 중합체를 포함하는 임의의 화합물 및/또는 물질을 포함하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드의 중합체는 폴리뉴클레오티드로 지칭된다. 예시적인 핵산 또는 폴리뉴클레오티드는 리보핵산(RNA) 및/또는 데옥시리보핵산(DNA)을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. GPC3 CAR을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산이 본원에 제공되며, 여기서 GPC3 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 GPC3 CAR을 암호화하는 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 당업계에 공지된 방법에 의해 발현 벡터 또는 바이러스 벡터 내에 삽입될 수 있고, 핵산 분자는 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 발현 벡터의 비제한적인 예는 플라스미드 벡터, 트랜스포존 벡터, 코스미드 벡터 및 바이러스 벡터(예를 들어, 임의의 아데노바이러스 벡터(AV), 사이토메갈로바이러스(CMV) 벡터, 원숭이(simian) 바이러스(SV40) 벡터, 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터, 렌티바이러스 벡터 및 레트로바이러스 벡터)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 발현 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 GPC3 CAR을 암호화하는 영역 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, GPC3 CAR 폴리펩티드는 i) 서열번호: 9와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된 경쇄 가변 도메인 및 서열번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; ii) 막횡단 도메인; 및 iii) 항원이 항체 작용제에 결합하는 경우 T 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CAR 폴리펩티드는 i) 서열번호: 9를 포함하는 핵산에 의해 암호화된 경쇄 가변 도메인 및 서열번호: 7을 포함하는 핵산에 의해 암호화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; ii) 막횡단 도메인; 및 iii) 항원이 항체 작용제에 결합하는 경우 T 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-18은 인간 인터루킨-18이다. 일부 실시양태에서, IL-18은 인간화된 IL-18이다. 일부 실시양태에서, IL-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 일부 실시양태에서, IL-18은 서열번호: 11 또는 12를 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
일부 실시양태에서, IL-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함한다. 본원에 사용된 "분비 신호 서열"은 분비 경로로 향하는 대부분의 새로 합성된 단백질의 N-말단에 존재하는 짧은 펩티드(예를 들어, 16-30개 아미노산)를 지칭한다. 이러한 단백질은 세포 소기관(cell organelle)(예를 들어, 소포체, 골지체 또는 엔도좀) 내부에 존재하거나, 세포에서 분비되거나, 대부분의 세포막에 삽입되는 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열이다. 일부 실시양태에서, 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 IL-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하고, 여기서 프로모터는 CAR을 암호화하는 서열과 인터루킨-18을 암호화하는 서열 사이에 배치된다. 본원에 사용된 "프로모터"는 특정 유전자의 전사 개시를 유도하는 DNA 영역을 지칭한다. 프로모터는 유전자의 전사 시작 부위 근처, DNA 상류(예를 들어, 센스 가닥의 5' 영역에 향하여)에 위치한다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 약 100-1000 염기쌍 길이이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 구성적 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 NFAT 프로모터이다.
일부 실시양태에서, 핵산 작제물은 자가-절단 단백질을 암호화하는 서열을 추가로 포함하고, 여기서 서열은 CAR을 암호화하는 서열과 IL-18을 암호화하는 서열 사이에 배치된다. 일부 실시양태에서, 자가-절단 단백질 서열은 P2 자가-절단 단백질 서열이다.
렌티바이러스 벡터는 렌티바이러스로부터 유래된다. 렌티바이러스 벡터는 레트로바이러스의 서브클래스인 단일-가닥 RNA 렌티바이러스를 기반으로 한다. 이는 중간 범위의 클로닝 능력의 장점을 안정적인 유전자 발현과 조합하여 뉴런을 포함하는 분열 및 비-분열 세포를 형질도입할 수 있다. 감염 시, 렌티바이러스 게놈은 이식유전자를 숙주 게놈 내에 통합하고 장기간 유전자 발현을 촉진한다. HIV-기반 벡터와 같은 렌티바이러스 벡터는 유전자 전달에 사용되는 레트로바이러스 벡터의 예시이다. 다른 레트로바이러스와 달리, HIV-기반 벡터는 패신저 유전자를 비-분열 세포에 포함하는 것으로 공지되어 있으며, 따라서 지속적인 형태의 질환을 치료하는 데 사용할 수 있다.
클로닝 및/또는 발현의 기능을 최적화하거나, 폴리뉴클레오티드의 단리를 보조하거나, 또는 폴리뉴클레오티드의 세포 내로의 도입을 개선하기 위해 추가적인 서열이 이러한 클로닝 및/또는 발현 서열에 첨가될 수 있다. 클로닝 벡터, 발현 벡터, 어댑터 및 링커의 용도는 당업계에 널리 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 핵산 분자는 적절한 세포 내로 도입되는 경우 본 개시내용의 GPC3 CAR을 발현할 수 있는 벡터 내로 삽입된다. 일부 실시양태에서, 적절한 세포는 T 세포이다.
IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포의 생산
IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 면역 세포를 생산하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, CAR이 도입된 면역 세포는 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 자가 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 동종이계 인간 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 CD4+ T 세포(헬퍼 T 세포, TH 세포), CD8+ T 세포(세포독성 T 세포, CTL), 메모리 T 세포, 조절 T 세포(Treg 세포), 세포자멸사 T 세포이지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 NK 세포이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 (i) GPC3 항원 결합 도메인을 포함하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 서열 및 인터루킨-18(IL-18)을 암호화하는 서열, 또는 (ii) GPC3 항원 결합 도메인을 포함하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및 IL-18을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 면역 세포 내로 도입하는 단계를 포함하는 조작된 면역 세포를 생산하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 조작된 면역 세포를 생산하는 방법은 조작된 면역 세포를 시험관내에서 적어도 2일, 5일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 동안 배양하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체의 T 세포에 대한 GPC3 항원 결합 도메인의 결합 분석을 제공 또는 수득하는 단계; 및 결합이 역치 값 미만인 경우, GPC3 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 발현하도록 대상체의 면역 세포를 조작하는 단계를 포함하고, 여기서 CAR은 IL-18을 추가로 발현하는 본 개시내용의 자가 조작된 면역 세포를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 자가 조작된 면역 세포를 생산하는 방법(예를 들어, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포)은 자가 조작된 면역 세포를 시험관내에서 적어도 2일, 5일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 동안 배양하는 단계를 추가로 포함한다.
면역 세포에서 CAR을 발현시키기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 본 개시내용의 맥락에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 당업계에 공지된 다양한 발현을 위한 핵산 벡터, 예컨대 선형 폴리뉴클레오티드, 이온성 또는 양친매성 화합물이 결합된 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 또는 바이러스 벡터가 있지만, 본 개시내용은 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 면역 세포에서 CAR의 발현을 위한 벡터는 자율 복제 플라스미드 또는 바이러스 또는 이의 유도체일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 레트로바이러스 벡터인 렌티바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 비-플라스미드 및 비-바이러스 화합물, 예컨대, 예를 들어, 리포좀이다.
본 개시내용은 본원에 기재된 방법에 의해 생성된 IL-18을 공동-발현하는 GPC3 CAR-T 세포가 (예를 들어, 암의 치료를 위해) 치료학적으로 유용할 수 있다는 인식을 포괄한다.
치료학적 적용
글리피칸-3-연관 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 방법은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 면역 세포를 포함하거나 전달하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
"글리피칸-3-연관 암"은 표면 상에 존재하는 글리피칸-3을 갖는 암세포를 특징으로 하는 암이다. 막-결합 헤파란 설페이트 프로테오글리칸인 GPC3는 간세포 암종의 대략 70% 내지 80%에서 과발현되지만 건강한 조직에서는 일반적으로 발현되지 않는다. 또한, GPC3 과발현은 여러 종양, 특히 간세포 암종, 간모세포종, 생식세포 종양(예를 들어, 난황낭 종양, 융모막암종), 윌름스 종양, 위 암종, 비소형 폐암 및 갑상선암에서 발견된다.
인터루킨-18(IL-18)은 선천성 및 후천성 면역 반응을 향상시키는 사이토카인이며, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포(DC), 호중구, 자연 살해(NK) 세포, T 세포, 및 B 세포와 같은 활성화된 면역 세포에 의해 생산된다. 다양한 유형의 암이 IL-18을 생산하고, IL-18은 세포 이동, 침범 및 증식을 유도하여 전이 및 종양 성장을 증가시킨다. IL-18 전사 수준은 자궁경부 편평상피 세포 암종 및 자궁경부내 선암종, 결장 선암종, 교모세포종, 콩팥 신장 유두 세포 암종(kidney renal papillary cell carcinoma), 급성 골수성 백혈병, 췌장 선암종, 유방암, 뇌암, 및 췌장암을 포함하지만 이에 제한되지 않는 대부분의 암 유형에서 증가하는 것으로 공지되어 있다.
암은 신체의 비정상적인 세포가 제어되지 않는 성장을 특징으로 하는 광범위한 질환 군을 지칭할 수 있다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 주변 조직을 침범하는 악성 종양의 형성을 초래하고 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있다. 암 또는 암 조직은 종양을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 방법에 의한 치료에 적합한 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 자궁내막암, 식도암, 나팔관암, 담낭암, 위장관암, 두경부암, 혈액학적 암, 후두암, 간암, 폐암, 림프종, 흑색종, 중피종, 난소암, 원발성 복막암, 침샘암, 육종, 위암, 갑상선암, 췌장암 및 전립선암을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법에 의한 치료를 위한 암은 암종, 림프종(예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 암은 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐선암종, 폐의 편평 세포 암종, 복막암, 간세포 암종, 위암, 췌장암, 신경교종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포 암종, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 백혈병 및 기타 림프증식성 장애, 및 다양한 유형의 두경부암을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 배아 종양(윌림스 종양, 간모세포종, 막대모양 종양(rhabdoid), 신경모세포종), 생식세포 종양(난황낭 종양, 미성숙 기형종, 배아 암종), 암종(간세포암종 및 폐 편평 세포 암종), 육종(악성 막대모양 종양 및 RMS) 또는 악성 흑색종일 수 있다. 일부 실시양태에서, 글리피칸-3-연관 암은 간암이다.
면역 세포(예를 들어, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포)는 이를 필요로 하는 환자에게 치료학적 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료학적 유효량의 면역 세포(예를 들어, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포)는 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 T 세포는 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포, 약 108개의 세포, 약 109개의 세포, 또는 약 1010개의 세포이다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 T 세포는 약 0.1×106 내지 약 2×1010개의 T 세포이다(예를 들어, 약 0.1×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 0.2×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 0.4×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 0.6×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 0.8×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 1.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 2.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 3.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 4.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 5.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 6.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 7.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 8.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 9.0×106 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 1.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 2.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 3.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 4.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 5.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 6.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 7.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 8.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 9.0×107 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 1.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 2.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 3.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 4.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 5.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 6.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 7.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 8.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 9.0×108 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 1.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 2.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 3.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 4.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 5.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 6.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 7.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 8.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 약 9.0×109 및 약 2×1010개의 T 세포, 또는 약 1.0×1010 및 약 2×1010개의 T 세포. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 T 세포는 약 0.4×108, 약 0.5×108, 약 0.6×108, 약 0.7×108, 약 0.8×108, 약 0.9×108, 약 1.0×108, 약 1.1×108, 약 1.2×108, 약 1.3×108, 약 1.4×108, 약 1.5×108, 약 1.6×108, 약 1.7×108, 약 1.8×108, 약 1.9×108, 또는 약 2.0×108개의 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포는 약 2×106개 세포/kg, 약 3×106개 세포/kg, 약 4×106개 세포/kg, 약 5×106개 세포/kg, 약 6×106개 세포/kg, 약 7×106개 세포/kg, 약 8×106개 세포/kg, 약 9×106개 세포/kg, 약 1×107 세포/kg, 약 2×107개 세포/kg, 약 3×107개 세포/kg, 약 4×107개 세포/kg, 약 5×107개 세포/kg, 약 6×107개 세포/kg, 약 7×107개 세포/kg, 약 8×107개 세포/kg, 또는 약 9×107개 세포/kg이다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 면역 세포(예를 들어, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR-T 세포)는 약 1×1010개 T 세포의 최대 용량까지인 체중 kg당 약 1×106 내지 약 2×106개의 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 치료학적 유효량의 T 세포는 약 1×1010개 T 세포의 최대 용량까지인 체중 kg당 약 1×106 또는 약 2×106개의 T 세포이다.
세포의 수는 그 안에 포함된 세포의 유형과 마찬가지로 조성물이 의도되는 궁극적인 용도에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포의 집단은 이러한 세포의 10% 초과, 15% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 35% 초과, 40% 초과, 45% 초과, 50% 초과, 55% 초과, 60% 초과, 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 또는 90% 초과를 함유할 것이다. 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포의 집단은 이러한 T 세포의 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 15%, 약 15% 내지 약 90%, 약 15% 내지 약 80%, 약 15% 내지 약 70%, 약 15% 내지 약 60%, 약 15% 내지 약 50%, 약 15% 내지 약 40%, 약 15% 내지 약 30%, 약 15% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30 % 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 40% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40 % 내지 약 50%, 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 또는 약 80% 내지 약 90%를 함유할 것이다. 일부 실시양태에서, 투여용 T 세포의 집단은 리터 이하의 부피로 존재한다. 일부 실시양태에서, 투여용 T 세포는 500 ml 미만, 250 ml 미만, 또는 100 ml 이하의 부피로 존재한다. 일부 실시양태에서, 원하는 T 세포의 밀도는 전형적으로 106개 세포/ml 초과이고 일반적으로 107개 세포/ml 초과, 일반적으로 108개 세포/ml 이상이다. 임상적으로 관련된 면역 세포 수는 누적적으로 107개의 세포, 108개의 세포, 109개의 세포, 1010개의 세포, 1011개의 세포 또는 1012개의 세포와 동일하거나 이를 초과하는 다중 주입으로 나눌 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물은 환자에게 비경구적으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물은 1회 또는 다중 투여로 환자에게 비경구적으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물은 매일 1회, 2 내지 7일마다 1회, 매주 1회, 2주마다 1회, 매월 1회, 3개월마다 1회, 또는 6개월마다 1회 환자에게 비경구적으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 이 방법은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 이 방법은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암이 있거나 암이 발달할 위험이 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포를 포함하거나 전달하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암이 있거나 암이 발달할 위험이 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물 및 방법을 사용한 치료에 적합한 질환은 암 또는 악성종양 또는 전암성 병태와 같은 증식성 질환으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 질환은 GPC3의 발현과 연관된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물 및 방법을 사용한 치료에 적합한 질환은 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 GPC3 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 대상체의 비-암 세포에 비해 증가된 GPC3 항원의 발현을 갖는다. 일부 실시양태에서, GPC3 발현 수준은 암을 갖는 대상체에서 증가할 수 있다. 일부 실시양태에서, GPC3 발현 수준은 건강한 대상체에서 검출 불가능할 수 있다.
약제학적 조성물
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 T 세포는 자가 T 세포이다. 본 개시내용의 조성물은 본원에 개시된 방법에 의해 수득된 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 완충제, 희석제, 가용화제, 유화제, 보존제, 보조제, 부형제, 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 원하는 경우, 조성물은 또한 하나 이상의 추가 치료학적 활성 물질을 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 T 세포는 먼저, 이들의 배양 배지로부터 세포를 수확한 후, 투여에 적합한 배지 및 용기 시스템("약제학적으로 허용되는" 담체)에서 치료 유효량(treatment-effective amount)으로 세포를 세척 및 농축시킴으로써 제형화된다. 적합한 주입 매질은 임의의 등장성 매질 제형일 수 있으며, 전형적으로 생리 식염수, 노르모솔(Normosol) R(Abbott) 또는 플라스마-라이트 A(Baxter)일 수 있지만, 또한 수중 5% 덱스트로스 또는 링거 락테이트가 활용될 수 있다. 주입 매질에 인간 혈청 알부민이 보충될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물은 비경구 투여용으로 제형화된다. 예를 들어, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 멸균 주사 형태(예를 들어, 피하 주사, 간 동맥 주입 또는 정맥내 주입에 적합한 형태)로 제공될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사에 적합한 액체 투여 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 선택적으로 진공 하에서 분말(예를 들어, 동결 건조 및/또는 멸균됨)로서 제공되며, 이는 주사 전에 수성 희석제(예를 들어, 물, 완충제, 염 용액 등)로 재구성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 물, 염화나트륨 용액, 아세트산 나트륨 용액, 벤질 알콜 용액, 인산염 완충 식염수 등에 희석 및/또는 재구성된다. 일부 실시양태에서, 분말은 수성 희석제와 함께 부드럽게 혼합되어야 한다(예를 들어, 진탕시키지 않아야 함).
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 T 세포는 약제학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 제형화된다. 이러한 비히클의 예는 물, 식염수, 링거 용액, 덱스트로스 용액 및 1-10% 인간 혈청 알부민이다. 리포좀 및 비수성 비히클, 예컨대 고정유 또한 사용할 수 있다. 비히클 또는 동결건조 분말은 등장성(예를 들어, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성(예를 들어, 완충제 및 보존제)을 유지하는 첨가제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제형은 공지된 또는 적합한 기술에 의해 멸균된다. 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이는 본원에 사용된 바와 같이 원하는 특정 투여 형태에 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 희석제 또는 기타 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보조제, 계면 활성제, 등장제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 고형 결합제, 윤활제 등을 포함한다. Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro(Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006)는 약제학적 조성물의 제형화에 사용되는 다양한 부형제 및 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시하고 있다. 임의의 통상적인 부형제 매질이 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과를 생산하거나 또는 다른 방식으로 약제학적 조성물의 임의의 다른 성분(들)과 유해한 방식으로 상호작용하는 것과 같은, 물질 또는 이의 유도체와 비-화합성인 경우를 제외하고는, 이의 용도가 본 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 고려된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 T 세포의 집단을 포함하는 조성물은 안정적으로 제형화된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 T 세포의 집단의 안정한 제형은 식염수 또는 선택된 염을 갖는 인산염 완충제 뿐만 아니라 보존제를 함유하는 보존된 용액 및 제형을 포함할 수 있고, 또한 약제학적 또는 수의학적 용도에 적합한 다용도 보존 제형을 포함할 수 있다. 보존된 제형은 적어도 하나의 공지된 보존제를 함유하거나 또는 수성 희석제 중의 적어도 하나의 페놀, m-크레졸, p크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알콜, 질산페닐수은, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 염화마그네슘(예를 들어, 6수화물), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 염화벤즈알코늄, 염화벤제토늄, 데히드로초산나트륨 및 티메로살 또는 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택적으로 선택되는 것을 함유한다. 임의의 적합한 농축물 또는 혼합물은 당업계에 공지된 바와 같이, 예컨대 0.001-5%, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값, 예컨대, 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값이지만 이에 제한되지 않는 것으로 사용될 수 있다. 비제한적 예는 보존제 없음, 0.1-2% m-크레졸(예를 들어, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1-3% 벤질 알콜(예를 들어, 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001-0.5% 티메로살(예를 들어, 0.005, 0.01), 0.001-2.0% 페놀(예를 들어, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% 알킬파라벤(들)(예를 들어, 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) 등을 포함한다.
일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 냉장 및/또는 동결될 수 있는 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 냉장 및/또는 동결될 수 없는 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 재구성된 용액 및/또는 액체 투여 형태는 재구성 후 특정 기간 동안 (예를 들어, 2시간, 12시간, 24시간, 2일, 5일, 7일, 10일, 2주, 1개월, 2개월, 또는 그 초과 동안) 저장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 명시된 시간보다 더 장시간 항체 작용제를 포함하는 조성물을 저장하면, 항체 작용제의 분해가 초래된다. 액체 투여 형태 및/또는 재구성된 용액은 투여 전에 입자상 물질(particulate matter) 및/또는 변색을 포함할 수 있다. 변색 또는 혼탁한 경우 및/또는 여과 후에 입자상 물질이 남아 있는 경우에는 용액을 사용해서는 안된다. 약제학적 작용제의 제형화 및/또는 제작에 대한 일반적인 고려 사항은, 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005에서 찾을 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물은 저장 또는 투여용 용기, 예를 들어, 바이알, 시린지(예를 들어, IV 시린지), 또는 백(예를 들어, IV 백)에 포함될 수 있다. 본 개시내용에 따르는 약제학적 조성물은 단일 단위 용량으로서, 및/또는 복수개의 단일 단위 용량으로서 대량으로 제조, 패키징 및/또는 판매될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "단위 용량"은 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 개별 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로, 대상체에게 투여될 활성 성분의 투여량 및/또는 이러한 투여량의 편리한 분획, 예컨대, 예를 들어, 이러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.
키트
본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산으로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 키트를 추가로 제공한다. 키트는, 예를 들어, 치료 방법, 진단 방법, 세포 증식 및/또는 단리 방법 등을 포함하는 임의의 적용가능한 방법으로 사용될 수 있다. 선택적으로, 이러한 용기(들)와 연관된 것은 약제학적 또는 생물학적 생성물의 제작, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 통지서일 수 있으며, 이러한 통지서는 (a) 인간 투여를 위한 제작, 사용 또는 판매에 관한 기관의 승인을 반영하거나, (b) 사용 지침을 반영하거나, 또는 둘 모두를 반영한다.
일부 실시양태에서, 키트는 (예를 들어, IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산의 검출을 검출하기 위한 하나 이상의 시약을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산을 검출가능한 형태(예를 들어, 검출가능한 모이어티 또는 엔티티와 공유적으로 연관됨)로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 하나 이상의 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산은 대상체의 치료를 위해 사용되는 키트에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 암호화하는 핵산은 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR을 발현하는 자가 T 세포를 제조하기 위해 사용되는 키트에 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 GPC3 CAR 항체 작용제를 제공할 수 있으며, 각각은 CAR 작제물로 클로닝하는데 적합하다. 일부 실시양태에서, 키트는 대상체로부터 확인 또는 단리된 T 세포 또는 GPC3에 대한 GPC3 항체 작용제 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR T 세포의 결합 친화도를 검정하기 위한 다른 시약을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 대상체의 T 세포에 대한 항체 작용제 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR 및/또는 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR T 세포의 기능적 결합력을 검정하기 위한 다른 시약을 제공할 수 있다.
다수의 실시양태가 기재되었다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범주를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음이 이해되어야할 것이다.
예시적인 실시양태:
실시양태 1. 면역 세포로서, 키메라 항원 수용체(CAR); 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함하는 외인성 핵산을 포함하고, 여기서 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 상기 인터루킨-18은 인간 인터루킨-18인 면역 세포이다.
실시양태 3. 실시양태 2에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 4. 실시양태 3에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 5. 실시양태 4에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 6. 실시양태 1-5 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인터루킨-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 7. 실시양태 6에 있어서, 상기 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열인 면역 세포이다.
실시양태 8. 실시양태 7에 있어서, 상기 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 9. 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 외인성 핵산은 인터루킨-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 10. 실시양태 9에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 11. 실시양태 9에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 12. 실시양태 9에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 13. 실시양태 1-12 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 외인성 핵산은 CAR을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 14. 실시양태 13에 있어서, 상기 외인성 핵산은 CAR을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 15. 실시양태 14에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 16. 실시양태 14에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 17. 실시양태 14에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 면역 세포이다.
실시양태 18. 실시양태 1-17 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 단일 폴리펩티드인 면역 세포이다.
실시양태 19. 실시양태 1-17 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 2개의 폴리펩티드로 구성되는 면역 세포이다.
실시양태 20. 실시양태 1-19 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열번호: 2를 포함하는 CDR2 및 서열번호: 3을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 서열번호: 4를 포함하는 CDR1, 서열번호: 5를 포함하는 CDR2, 및 서열번호: 6을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 21. 실시양태 20에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 22. 실시양태 21에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 23. 실시양태 22에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 24. 실시양태 20-23 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 25. 실시양태 24에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 26. 실시양태 25에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 27. 실시양태 1-26 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간화된 면역 세포이다.
실시양태 28. 실시양태 1-26 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간인 면역 세포이다.
실시양태 29. 실시양태 1-28 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 scFv인 면역 세포이다.
실시양태 30. 실시양태 1-29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1,Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터 선택되는 막횡단 도메인인 면역 세포이다.
실시양태 31. 실시양태 30에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 CD8알파로부터의 막횡단 도메인인 면역 세포이다.
실시양태 32. 실시양태 1-31 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 33. 실시양태 32에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 및 CD3제타로부터의 면역 세포이다.
실시양태 34. 실시양태 1-33 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 추가 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 면역 세포이다.
실시양태 35. 실시양태 34에 있어서, 상기 추가 항원 결합 도메인은 scFv인 면역 세포이다.
실시양태 36. 실시양태 1-35 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 면역 세포는 인간 면역 세포인 면역 세포이다.
실시양태 37. 실시양태 36에 있어서, 상기 인간 면역 세포는 자가 인간 면역 세포인 면역 세포이다.
실시양태 38. 실시양태 36에 있어서, 상기 인간 면역 세포는 동종이계 인간 면역 세포인 면역 세포이다.
실시양태 39. 실시양태 1-38 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 면역 세포는 T 세포인 면역 세포이다.
실시양태 40. 실시양태 1-38 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 면역 세포는 NK 세포인 면역 세포이다.
실시양태 41. 실시양태 1-40 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 면역 세포는 외인성 핵산에 의해 암호화된 IL-18을 분비하는 면역 세포이다.
실시양태 42. 실시양태 1-41 중 어느 한 실시양태의 면역 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.
실시양태 43. 실시양태 42의 약제학적 조성물을 포함하는 키트이다.
실시양태 44. 글리피칸-3-연관 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 실시양태 1-41 중 어느 한 실시양태의 면역 세포 또는 실시양태 42의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이다.
실시양태 45. 핵산으로서, 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 서열; 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함하고, 상기 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 핵산이다.
실시양태 46. 실시양태 45에 있어서, 상기 인터루킨-18은 인간 인터루킨-18인 핵산이다.
실시양태 47. 실시양태 46에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 48. 실시양태 47에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 49. 실시양태 48에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 50. 실시양태 45-49 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인터루킨-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는 핵산이다.
실시양태 51. 실시양태 50에 있어서, 상기 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열인 핵산이다.
실시양태 52. 실시양태 51에 있어서, 상기 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 53. 실시양태 45-52 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 핵산은 인터루킨-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하고, 상기 프로모터는 CAR을 암호화하는 서열 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열 사이에 배치되는 핵산이다.
실시양태 54. 실시양태 53에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 핵산이다.
실시양태 55. 실시양태 53에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 핵산이다.
실시양태 56. 실시양태 53에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 핵산이다.
실시양태 57. 실시양태 45-52 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 핵산은 CAR을 암호화하는 서열 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열 사이에 배치된 자가-절단 단백질 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는 핵산이다.
실시양태 58. 실시양태 57에 있어서, 상기 자가-절단 단백질 서열은 P2 자가-절단 단백질 서열인 핵산이다.
실시양태 59. 실시양태 45-58 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 핵산은 CAR을 암호화하는 서열 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열 사이에 배치된 poly(A) 서열을 추가로 포함하는 핵산이다.
실시양태 60. 실시양태 45-59 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 핵산은 CAR을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 핵산이다.
실시양태 61. 실시양태 60에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 핵산이다.
실시양태 62. 실시양태 60에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 핵산이다.
실시양태 63. 실시양태 60에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 핵산이다.
실시양태 64. 실시양태 45-63 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 단일 폴리펩티드인 핵산이다.
실시양태 65. 실시양태 45-63 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 2개의 폴리펩티드로 구성된 핵산이다.
실시양태 66. 실시양태 45-65 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열번호: 2를 포함하는 CDR2 및 서열번호: 3을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 서열번호: 4를 포함하는 CDR1, 서열번호: 5를 포함하는 CDR2, 및 서열번호: 6을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 핵산이다.
실시양태 67. 실시양태 66에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 68. 실시양태 67에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 69. 실시양태 68에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 70. 실시양태 66-69 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 71. 실시양태 70에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 72. 실시양태 71에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산이다.
실시양태 73. 실시양태 45-72 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간화된 핵산이다.
실시양태 74. 실시양태 45-72 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간인 핵산이다.
실시양태 75. 실시양태 45-74 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 scFv인 핵산이다.
실시양태 76. 실시양태 45-75 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1,Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터 선택되는 막횡단 도메인인 핵산이다.
실시양태 77. 실시양태 76에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 CD8알파로부터의 막횡단 도메인인 핵산이다.
실시양태 78. 실시양태 45-77 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 핵산이다.
실시양태 79. 실시양태 78에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 및 CD3제타로부터의 핵산이다.
실시양태 80. 실시양태 45-79 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 추가 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 핵산이다.
실시양태 81. 실시양태 80에 있어서, 상기 추가 항원 결합 도메인은 scFv인 핵산이다.
실시양태 82. 실시양태 45-81 중 어느 한 실시양태의 핵산을 포함하는 벡터이다.
실시양태 83. 실시양태 82에 있어서, 상기 벡터는 바이러스 벡터인 벡터이다.
실시양태 84. 실시양태 83에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터인 벡터이다.
실시양태 85. 조작된 면역 세포를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 실시양태 45-81 중 어느 한 실시양태의 핵산 또는 실시양태 82-84 중 어느 한 실시양태의 벡터를 면역 세포 내로 도입함으로써, 조작된 면역 세포를 생산하는 단계를 포함하는 방법이다.
실시양태 86. 실시양태 85에 있어서, 도입 단계 후에 조작된 면역 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 87. 실시양태 85 또는 86에 있어서, 상기 면역 세포는 T 세포인 방법이다.
실시양태 88. 실시양태 85 또는 86에 있어서, 상기 면역 세포는 NK 세포인 방법이다.
실시양태 89. 실시양태 85-88 중 어느 한 실시양태에 있어서, 도입 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 90. 실시양태 89에 있어서, 상기 방법은 조작된 면역 세포를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 91. 실시양태 89 또는 90에 있어서, 상기 대상체는 글리피칸-3-연관 암을 갖는 것으로 진단 또는 확인된 방법이다.
실시양태 92. 실시양태 85-89 중 어느 한 실시양태의 방법에 의해 생산된 조작된 면역 세포이다.
실시양태 93. 실시양태 92의 조작된 면역 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.
실시양태 94. 대상체에서 항-글리피칸-3-연관 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 실시양태 92의 조작된 면역 세포 또는 실시양태 93의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이다.
실시양태 95. 핵산 쌍으로서, 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 서열을 포함하는 제1 핵산; 및 인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하고, 상기 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 96. 실시양태 95에 있어서, 상기 인터루킨-18은 인간 인터루킨-18인 핵산 쌍이다.
실시양태 97. 실시양태 96에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 98. 실시양태 97에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 99. 실시양태 98에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 100. 실시양태 95-99 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인터루킨-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 101. 실시양태 100에 있어서, 상기 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열인 핵산 쌍이다.
실시양태 102. 실시양태 101에 있어서, 상기 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 103. 실시양태 95-102 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 제2 핵산은 인터루킨-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 104. 실시양태 103에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 105. 실시양태 103에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 106. 실시양태 103에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 107. 실시양태 95-106 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 핵산은 poly(A) 서열을 추가로 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 108. 실시양태 95-107 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 제1 핵산은 CAR을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 109. 실시양태 108에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 110. 실시양태 108에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 111. 실시양태 108에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인 핵산 쌍이다.
실시양태 112. 실시양태 95-111 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 단일 폴리펩티드인 핵산 쌍이다.
실시양태 113. 실시양태 95-111 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 CAR은 2개의 폴리펩티드로 구성된 핵산 쌍이다.
실시양태 114. 실시양태 95-113 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열번호: 2를 포함하는 CDR2 및 서열번호: 3을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 서열번호: 4를 포함하는 CDR1, 서열번호: 5를 포함하는 CDR2, 및 서열번호: 6을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 115. 실시양태 114에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 116. 실시양태 115에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 117. 실시양태 116에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 118. 실시양태 114-117 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 119. 실시양태 118에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 120. 실시양태 119에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 121. 실시양태 95-120 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간화된 핵산 쌍이다.
실시양태 122. 실시양태 95-120 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간인 핵산 쌍이다.
실시양태 123. 실시양태 95-122 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 scFv인 핵산 쌍이다.
실시양태 124. 실시양태 95-123 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1,Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터 선택되는 막횡단 도메인인 핵산 쌍이다.
실시양태 125. 실시양태 124에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 CD8알파로부터의 막횡단 도메인인 핵산 쌍이다.
실시양태 126. 실시양태 95-125 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 127. 실시양태 126에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 및 CD3제타로부터의 핵산 쌍이다.
실시양태 128. 실시양태 95-127 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 추가 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 핵산 쌍이다.
실시양태 129. 실시양태 128에 있어서, 상기 추가 항원 결합 도메인은 scFv인 핵산 쌍이다.
실시양태 130. 실시양태 95-129 중 어느 한 실시양태의 핵산 쌍을 함께 포함하는 벡터 쌍이다.
실시양태 131. 실시양태 130에 있어서, 상기 벡터 쌍은 바이러스 벡터 쌍인 벡터 쌍이다.
실시양태 132. 실시양태 131에 있어서, 상기 바이러스 벡터 쌍은 렌티바이러스 벡터 쌍인 벡터 쌍이다.
실시양태 133. 조작된 면역 세포를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 실시양태 95-129 중 어느 한 실시양태의 핵산 쌍 또는 실시양태 130-132 중 어느 한 실시양태의 벡터 쌍을 면역 세포 내로 도입함으로써, 조작된 면역 세포를 생산하는 방법이다.
실시양태 134. 실시양태 133에 있어서, 도입 단계 후에 조작된 면역 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 135. 실시양태 133 또는 134에 있어서, 상기 면역 세포는 T 세포인 방법이다.
실시양태 136. 실시양태 133 또는 134에 있어서, 상기 면역 세포는 NK 세포인 방법이다.
실시양태 137. 실시양태 133-136 중 어느 한 실시양태에 있어서, 도입 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 138. 실시양태 137에 있어서, 상기 방법은 조작된 면역 세포를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다.
실시양태 139. 실시양태 137 또는 138에 있어서, 상기 대상체는 글리피칸-3-연관 암을 갖는 것으로 진단 또는 확인된 방법이다.
실시양태 140. 실시양태 133-137 중 어느 한 실시양태의 방법에 의해 생산된 조작된 면역 세포이다.
실시양태 141. 실시양태 140의 조작된 면역 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.
실시양태 142. 대상체에서 항-글리피칸-3-연관 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 실시양태 140의 조작된 면역 세포 또는 실시양태 141의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이다.
실시양태 143. 실시양태 44, 94, 및 142 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 글리피칸-3-연관 암은 간암인 방법이다.
실시양태 144. 실시양태 44, 94, 142 및 143 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대상체는 이온화 방사선, 화학요법제, 치료학적 항체, 및 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 항암 요법을 이전에 투여받은 것인 방법이다.
실시양태 145. 실시양태 44, 94, 142, 및 143 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대상체는 이온화 방사선, 화학요법제, 치료학적 항체 및 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 항암 요법을 추가로 투여받는 것인 방법이다.
실시양태 146. 실시양태 44, 94, 및 142-145 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대상체는 글리피칸-3-연관 암을 갖는 것으로 확인 또는 진단된 방법이다.
실시예
본 개시내용은 청구범위에 기재된 개시내용의 범주를 제한하지 않는 다음 실시예에서 추가로 설명된다.
실시예 1 - 렌티바이러스 전송 플라스미드
인간화된 항-GPC3 항체(클론: GC33) 작용제의 단일 쇄 가변 단편(scFv) 형태를 암호화하는 DNA 작제물은 IDT 벡터를 사용하고 VL 및 VH 영역을 연결하여 생성되었으며, 여기서 서열은 당업계에 공지된 표준 DNA 클로닝 기술을 사용하여 VH-VL 배향 또는 VL-VH 배향을 포함하도록 설계된다. 본원에서 사용된 렌티바이러스 전송 플라스미드는 표 3에, 그리고 huGC33 VH-VL에 대한 핵산 서열은 표 4에 나타내었다.
IL-18을 발현하는 GPC3 CAR은 P2A 자가-절단 펩티드를 사용하여 생산하거나, 활성화된 T 세포의 핵 인자(NFAT)-IL-2 최소 프로모터를 사용하여 활성화된 T 세포에서만 IL-18을 발현시켰다(도 1). IL-18을 발현하는 GPC3 CAR의 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 신호전달 도메인에 이어 5개의 아미노산 서열을 포함한다. NFAT-IL-2 최소 프로모터의 경우, pGL3-NFAT 루시퍼라제의 서열이 사용되었으며, 여기서 NFAT-IL-2 최소 프로모터-IL-18 및 polyA-IL-18-NFAT-IL-2 최소 프로모터에 대한 서열 정보는 표 5에 나타내었다.
표 3.
Figure pct00003
표 4.
Figure pct00004
표 5.
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
서열번호: 16 - 추가 5개의 아미노산
CGTTTCTCTGTTGTT
서열번호: 17 - 4-1BB 세포내 도메인
AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG
서열번호: 18 - 5개의 추가 아미노산을 갖는 4-1BB 세포내 도메인(euBBz)
CGTTTCTCTGTTGTTAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG
서열번호: 19 - CD3-제타
AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA
서열번호: 20 - P2A
GGC AGC GGC GCC ACA AAC TTC TCT CTG CTA AAG CAA GCA GGT GAT GTT GAA GAA AAC CCC GGG CCT
서열번호: 21 - NFAT
ACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCACGCCTTCTGTATGAAACAGTTTTTCCTCCTCGAGGACATTTTGACACCCCCATAATATTTTTCCAGAATTAACAGTATAAATTGCATCTCTTGTTCAAGAGTTCCCTATCACTCTCTTTAATCACTACTCACAGTAACCTCAACTCCTGC
서열번호: 22 - poly A
CAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATGGCTGATTATGATC
렌티바이러스 벡터 작제물인 pELPS4-huGC33-euBBz를 EcoRV 및 SalI로 분해시키고, pELPS4 huGC33 HL-P2A-IL18을 벡터 작제물에 삽입하였다. 또한, pELPS4-huGC33-euBBz의 SalI로 작제물을 선형화한 후 렌티바이러스 벡터 작제물 pELPS4-huGC33-euBBz-NFAT-IL18 및 pELPS4-huGC33-euBBz-polyA-IL18-NFAT에 대해 주입 클로닝을 수행하였으며, 여기서 DNA 단편 정제 결과를 도 2 및 3에 나타내었다. 렌티바이러스에 대해 형질도입 단위(TU/mL)를 측정하고 표 6에 나타내었다.
표 6.
Figure pct00009
실시예 2 - 시험관내 huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18
말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 1L OpTmizerTM T-세포 확장 기초 배지, 25mL OpTmizerTM T-세포 확장 보충제, 50mL CTSTM 면역 세포 SR, 10mL Pen-Strep(10,000U/mL) 및 10mL CTSTM GlutaMAXTM-I 보충제를 포함하는 세포 배양 배지에서 배양하였으며, 여기서 세포 밀도는 1 × 106개 세포/mL로 조정되었고 IL-2(400IU/mL)는 CO2 5% 및 37℃의 인큐베이터에서 배양하는 동안 첨가되었다.
그런 다음 PBMC를 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였고 세포 성장 및 확장을 세포 배양 7일차부터 14일차까지 측정하였다. 그런 다음 세포를 14일차에 수확하고 추가 분석에 사용하였다.
huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 작제물을 시험관내에서 비교하였고, 여기서 세포 배양 14일차에 각 군의 CAR-T 세포에 대한 세포 성장을 총 배수 확장을 통해 비교하였다(도 4a). 7일차부터 14일차까지의 세포 확장 및 세포 생존율을 비교하였고, huGC33-VHVL-P2A-IL18 CAR-T 세포를 제외하고 거의 모든 조건에서 90% 초과의 CAR-T 세포 생존율을 나타내었으며, 이는 7일차, 9일차 및 11일차에 90% 미만의 세포 생존율을 나타내었다(도 4b-4c). CAR-T 세포를 이펙터 세포로 사용하는 동안 표적 세포를 수확하기 위해 GPC3 양성 세포주를 사용하여 루시퍼라제 기반 세포독성을 측정하였다. 세포를 96-웰 백색 폴리스티렌 마이크로플레이트에서 (이펙터 (E) : 표적 (T)) = 10:1의 E:T 비율로 인큐베이션한 다음, Bright-GloTM 루시퍼라제 검정 시약과 함께 5분 동안 인큐베이션하였고, 발광계를 사용하여 세포독성을 측정 및 정량화하였다. 결과는 시험관내 사멸 활성이 모든 군의 CAR-T 세포에서 유사함을 나타낸다(도 4d). 추가로, CAR 발현을 유세포분석을 사용하여 세포 배양 7일차, 9일차, 11일차 및 14일차에 분석하였다(도 4e-4h).
실시예 3 - 생체내 huGC33-VHVL-P2A-IL18 및 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포
인간 간세포 암종 세포주인 Huh-7-GL, PLC/PRF/5-GL(GPC3 양성 세포주) 및 SK-Hep-1(GPC3 음성 세포주)의 암세포를 NSG 마우스(2 × 106개 세포/헤드)에 주사하고 일정 기간 동안 간 종양의 성장을 관찰하였다. 동물을 각 동물에서 측정된 종양 크기에 따라 군으로 나누었다(표 7-10).
표 7.
Figure pct00010
NSG 마우스(2 × 106개 세포/헤드)에 Huh-7-GL 세포를 주사하고 종양 성장 후 huGC33-VHVL-P2A-IL18 CAR-T 세포 및 huGC3-VHVL-NFAT-IL-18 CAR-T 세포를 주사하였다. 어떠한 주사도 받지 않은 대조군의 모든 마우스(미처리군)는 주사 후 28일 이내에 사망하였고, huGC33 VHVL 군의 1마리의 마우스만이 주사 후 5주차에 사망하였고, huGC33-VHVL-P2A-IL18 군의 3마리의 마우스가 사망한 반면, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사를 받은 군의 모든 마우스는 주사 후 적어도 15주 동안 생존하였다(도 5a).
GPC3 CAR-T 세포 주사 후 15주 동안 관찰한 결과, huGC33-VHVL-NFAT-IL18을 주사 받은 마우스 군이 혈액 내 CAR-T 세포 수준의 가장 높은 증가를 나타냄을 나타낸다(도 5b).
GPC3 CAR-T 세포 주사 후 14일차에, ELISA 분석을 사용하여 혈청 내 IL-18을 분석하기 위해 마우스로부터 혈청을 수집하였다. 결과는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사를 받은 마우스에서만 혈청 내 IL-18 농도가 약 20pg/mL에 도달하는 것을 나타낸다(도 6).
실시예 4 - 시험관내 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT
huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 작제물을 시험관내에서 비교하였고, 여기서 총 배수 확장은 세포 배양 12일차에 각각의 CAR-T 세포에 대한 세포 성장을 비교한다(도 7a). 5일차부터 12일차까지의 세포 확장 및 세포 생존율을 비교하였으며, 12일차에 모든 CAR-T 세포에 대해 90% 초과의 생존율을 나타낸다(도 7b-7c). CAR-T 세포를 이펙터 세포로 사용하는 동안 표적 세포를 수확하기 위해 GPC3 양성 세포주를 사용하여 LDH 기반 세포독성을 측정하였다. 세포를 96-웰 U 바닥 플레이트에서 (이펙터(E) : 표적(T)) = 10:1의 E:T 비율로 인큐베이션하였고, 그런 다음 Cyto Tox96 시약으로 30분 동안 인큐베이션하였으며, 490nm 파장에서 마이크로플레이트 리더를 사용하여 세포독성을 측정 및 정량화(도 7d)하고 7일차, 9일차 및 12일차에 유세포 분석기를 사용하여 CAR 발현을 분석하였다(도 7e-7g). 추가로, ELISA를 사용하여 IL-18 농도를 분석하였다. 결과는 huGC33 VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포가 가장 높은 IL-18 발현을 나타냄을 나타낸다(도 7h).
실시예 5 - 생체내 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포
Huh-7-GL 세포를 NSG 마우스(2 x 106개 세포/헤드)에 주사하고 종양의 크기가 약 330mm3(표 8) 또는 약 1100mm3(표 9)에 도달하면, 치료를 받지 않거나, 25만개의 세포의 CD19 CAR-T 세포, 25만개의 세포의 huGC33 VHVL, 10만개의 세포의 huGC33 VHVL-NFAT-IL18, 25만개의 세포의 huGC33 VHVL-NFAT-IL18, 10만개의 세포의 huGC33 VHVL-IL18-NFAT, 또는 25만개의 세포의 huGC33 VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포를 받지 않는 군으로 나누었다. 이어서, huGC33-VHVL-NFAT-IL18 및 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포를 각각의 마우스 군에 주사하였다.
표 8.
Figure pct00011
표 9.
Figure pct00012
결과는 종양 크기가 약 330mm3에 도달한 마우스, 미처리 마우스 및 CD19 CAR-T 세포를 주사한 마우스 군 모두 주사 후 24일 이내에 사망했음을 나타낸다. 10만개의 세포의 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포 주사를 받은 군의 2마리의 마우스만이 주사 후 49일차에 사망한 반면, 25만개의 세포의 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포를 주사 받은 군의 3마리의 마우스는 종양 크기가 약간 감소(decrease)하였지만 종양의 재성장으로 인해 사망하였음을 나타낸다. 10만개의 huGC33-VHVL-IL18-NFAT CAR-T 세포 주사를 받은 군의 결과는 주사가 종양 크기 감소(reducing) 효과를 나타내지 않음을 나타낸다.(도 8a). GPC3 CAR-T 세포 주사 후 6주 동안 관찰한 결과, 종양 크기가 감소된 마우스만이 혈액 내 CAR-T 세포 수준의 증가를 나타낸 다음 종양 크기가 감소된 후 감소하는 것으로 나타났다(도 8b).
종양 크기가 약 1100mm3에 도달한 마우스 군의 경우, huGC33-VHVL-NFAT-IL18을 받은 마우스만이 주사 후 49일차까지 종양 크기의 감소를 보인 반면, 다른 군의 모든 마우스는 주사 후 24일 이내에 사망하였다(도 9a). 혈액 내 CAR-T 세포 수준은 종양 크기가 약 330 mm3에 도달한 마우스 군보다 약간 낮은 것으로 나타났다(도 9b).
실시예 6 - PLC/PRF/5-GL 및 SK-Hep-1 세포주를 갖는 생체내 huGC33 VHVL-NFAT-IL18
낮은 GPC3 발현을 나타내는 PLC/PRF/5-GL 세포주의 암세포를 NSG 마우스(2 x 106개 세포/헤드)에 주사하고 일정 기간 동안 간 종양의 성장을 관찰하였다. 결과는 huGC33 VHVL-NFAT-IL18을 주사 받은 군이 주사 후 21일 이내에 사망한 미처리 및 CD19 군의 모든 마우스에 비해 종양 크기의 감소를 나타냄으로써, huGC33 VHVL-NFAT-IL18 CAR T 세포가 GPC3 양성 암 세포에서 종양 크기를 효과적으로 감소시킴을 나타낸다(도 10a).
huGC33 VHVL-NFAT-IL18 CAR T 세포를 GPC3 음성 세포주인 SK-Hep-1-GL 암세포에 주사하였을 때, 어떠한 마우스도 종양 크기의 임의의 감소를 나타내지 않았으며 모든 마우스는 주사 후 21일 이내에 사망하였다. 이는 본원에 사용된 IL-18을 발현하는 GPC3 CAR이 종양 세포를 발현하는 GPC3에 특이적임을 나타낸다.(도 10b).
표 10.
Figure pct00013
이러한 결과는 huGC33-VHVL-NFAT-IL18 CAR-T 세포가 더 높은 생존율을 나타내면서 혈청 내 CAR-T 세포의 유효 농도를 유지하는데 효과적임을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> Eutilex Co., Ltd. <120> GPC3 CAR- T CELLS SECRETING IL-18 AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME <130> 47683-0041WO1 <150> 62/991,497 <151> 2020-03-18 <150> 63/004,912 <151> 2020-04-03 <150> 63/043,401 <151> 2020-06-24 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain CDR1 <400> 1 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain CDR2 <400> 2 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain CDR3 <400> 3 Ser Gln Asn Thr His Val Pro Pro Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 4 Asp Tyr Glu Met His 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 5 Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 6 Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr 1 5 <210> 7 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable region <400> 7 caagtgcaac tcgtacaatc aggtgctgaa gtcaaaaagc cgggagcctc tgttaaagtg 60 tcctgtaaag ccagcggcta cacctttacc gattatgaga tgcactgggt tcggcaggct 120 ccgggccaag gtctcgagtg gatcggggct cttgacccaa agacgggcga cacggcttat 180 tcacaaaaat tcaaaggtag ggctactctg actgccgata agtccaccag caccgcgtat 240 atggagctct ctagcttgcg aagcgaggac acggcggtgt actattgcac acgcttctat 300 agttacacat attggggtca aggcacgctt gtgaccgtgt ctagc 345 <210> 8 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable region <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable region <400> 9 gacgtcgtta tgacacagag tcccctctcc ttgccggtga ccctgggtca gcctgcgtcc 60 atctcttgca gatcctccca gtctctggta cactccaacg gcaacacata cttgcactgg 120 taccaacaaa gacctggtca gtcaccgcga cttctcatat ataaagtttc caataggttc 180 agtggagtgc cagacaggtt cagtggttca ggatcaggca ctgatttcac gcttaaaatc 240 agtcgggttg aggcggagga cgtaggagtt tactattgca gccagaatac gcacgtgccg 300 cctacttttg gctctggaac caagttggaa ataaag 336 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain variable region <400> 10 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Asn 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 11 <211> 474 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 tactttggca agcttgaatc taaattatca gtcataagaa atttgaatga ccaagttctc 60 ttcattgacc aaggaaatcg gcctctattt gaagatatga ctgattctga ctgtagagat 120 aatgcacccc ggaccatatt tattataagt atgtataaag atagccagcc tagaggtatg 180 gctgtaacta tctctgtgaa gtgtgagaaa atttcaactc tctcctgtga gaacaaaatt 240 atttccttta aggaaatgaa tcctcctgat aacatcaagg atacaaaaag tgacatcata 300 ttctttcaga gaagtgtccc aggacatgat aataagatgc aatttgaatc ttcatcatac 360 gaaggatact ttctagcttg tgaaaaagag agagaccttt ttaaactcat tttgaaaaaa 420 gaggatgaat tgggggatag atctataatg ttcactgttc aaaacgaaga ctag 474 <210> 12 <211> 474 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 ctagtcttcg ttttgaacag tgaacattat agatctatcc cccaattcat cctctttttt 60 caaaatgagt ttaaaaaggt ctctctcttt ttcacaagct agaaagtatc cttcgtatga 120 tgaagattca aattgcatct tattatcatg tcctgggaca cttctctgaa agaatatgat 180 gtcacttttt gtatccttga tgttatcagg aggattcatt tccttaaagg aaataatttt 240 gttctcacag gagagagttg aaattttctc acacttcaca gagatagtta cagccatacc 300 tctaggctgg ctatctttat acatacttat aataaatatg gtccggggtg cattatctct 360 acagtcagaa tcagtcatat cttcaaatag aggccgattt ccttggtcaa tgaagagaac 420 ttggtcattc aaatttctta tgactgataa tttagattca agcttgccaa agta 474 <210> 13 <211> 60 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 atgtacagga tgcaactcct gtcttgcatt gcactaagtc ttgcacttgt cacaaacagt 60 <210> 14 <211> 60 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 actgtttgtg acaagtgcaa gacttagtgc aatgcaagac aggagttgca tcctgtacat 60 <210> 15 <211> 726 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> huGC33 VHVL <400> 15 caagtgcaac tcgtacaatc aggtgctgaa gtcaaaaagc cgggagcctc tgttaaagtg 60 tcctgtaaag ccagcggcta cacctttacc gattatgaga tgcactgggt tcggcaggct 120 ccgggccaag gtctggagtg gatcggggct cttgacccaa agacgggcga cacggcttat 180 tcacaaaaat tcaaaggtag ggctactctg actgccgata agtccaccag caccgcgtat 240 atggagctct ctagcttgcg aagcgaggac acggcggtgt actattgcac acgcttctat 300 agttacacat attggggtca aggcacgctt gtgaccgtgt ctagcggtgg cggcggaagt 360 ggtggtggtg gttctggggg cgggggttcc gacgtcgtta tgacacagag tcccctctcc 420 ttgccggtga ccctgggtca gcctgcgtcc atctcttgca gatcctccca gtctctggta 480 cactccaacg gcaacacata cttgcactgg taccaacaaa gacctggtca gtcaccgcga 540 cttctcatat ataaagtttc caataggttc agtggagtgc cagacaggtt cagtggttca 600 ggatcaggca ctgatttcac gcttaaaatc agtcgggttg aggcggagga cgtaggagtt 660 tactattgca gccagaatac gcacgtgccg cctacttttg gctctggaac caagttggaa 720 ataaag 726 <210> 16 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> additional 5 amino acids <400> 16 cgtttctctg ttgtt 15 <210> 17 <211> 126 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 4-1BB intracellular domain <400> 17 aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60 actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120 gaactg 126 <210> 18 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 4-1BB intracellular domain with five additional amino acids (euBBz) <400> 18 cgtttctctg ttgttaaacg gggcagaaag aaactcctgt atatattcaa acaaccattt 60 atgagaccag tacaaactac tcaagaggaa gatggctgta gctgccgatt tccagaagaa 120 gaagaaggag gatgtgaact g 141 <210> 19 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> CD3-zeta <400> 19 agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60 tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120 cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180 gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240 cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300 tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339 <210> 20 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> P2A <400> 20 ggcagcggcg ccacaaactt ctctctgcta aagcaagcag gtgatgttga agaaaacccc 60 gggcct 66 <210> 21 <211> 301 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> NFAT <400> 21 acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc 60 acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc 120 acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc acgccttctg tatgaaacag tttttcctcc 180 tcgaggacat tttgacaccc ccataatatt tttccagaat taacagtata aattgcatct 240 cttgttcaag agttccctat cactctcttt aatcactact cacagtaacc tcaactcctg 300 c 301 <210> 22 <211> 237 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> poly A <400> 22 cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa 60 aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca 120 ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt 180 gggaggtttt ttaaagcaag taaaacctct acaaatgtgg tatggctgat tatgatc 237

Claims (34)

  1. 면역 세포로서,
    키메라 항원 수용체(CAR); 및
    인터루킨-18을 암호화하는 서열을 포함하는 외인성 핵산을 포함하고,
    상기 CAR은 글리피칸-3(GPC3)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 및 막횡단 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고,
    상기 세포외 항원 결합 도메인은 VL CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 VH CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하되,
    a. 상기 VL CDR 1, 2 및 3은 서열번호: 1, 2 및 3을 포함하고;
    b. 상기 VH CDR 1, 2 및 3은 서열번호: 4, 5 및 6을 포함하는,
    면역 세포.
  2. 제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  3. 제2항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  4. 제3항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호: 10과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  6. 제5항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  7. 제6항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호: 8과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터루킨-18은 인간 인터루킨-18인, 면역 세포.
  9. 제8항에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  10. 제9항에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  11. 제10항에 있어서, 상기 인간 인터루킨-18은 서열번호: 11 또는 12와 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터루킨-18을 암호화하는 서열은 분비 신호 서열을 암호화하는 서열을 추가로 포함하는, 면역 세포.
  13. 제12항에 있어서, 상기 분비 신호 서열은 인터루킨-2 분비 신호 서열인, 면역 세포.
  14. 제13항에 있어서, 상기 인터루킨-2 분비 신호 서열은 서열번호: 13 또는 14의 서열을 포함하는, 면역 세포.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 외인성 핵산은 인터루킨-18을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는, 면역 세포.
  16. 제15항에 있어서, 상기 프로모터는 구성적 프로모터인, 면역 세포.
  17. 제15항에 있어서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터인, 면역 세포.
  18. 제15항에 있어서, 상기 프로모터는 NFAT 프로모터인, 면역 세포.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간화된 것인, 면역 세포.
  20. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 인간인, 면역 세포.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 scFv인, 면역 세포.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3 입실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10,DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1,Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM,ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨(Toll) 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터 선택되는 막횡단 도메인인, 면역 세포.
  23. 제22항에 있어서, 상기 막횡단 도메인은 CD8알파로부터의 막횡단 도메인인, 면역 세포.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3델타, CD3입실론, CD3감마, CD3제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8,CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1), SLAMF4(CD244), SLAMF6(NTB-A), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 및 VLA-6 또는 임의의 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질로부터의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 면역 세포.
  25. 제24항에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB 및 CD3제타로부터의 것인, 면역 세포.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 인간 면역 세포인, 면역 세포.
  27. 제26항에 있어서, 상기 인간 면역 세포는 자가 인간 면역 세포인, 면역 세포.
  28. 제26항에 있어서, 상기 인간 면역 세포는 동종이계 인간 면역 세포인, 면역 세포.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 T 세포인, 면역 세포.
  30. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 NK 세포인, 면역 세포.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 외인성 핵산에 의해 암호화되는 IL-18을 분비하는, 면역 세포.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 면역 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  33. 제32항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트.
  34. 글리피칸-3-연관 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제32항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
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