KR20220139969A - 재조합 핵산 작제물 및 이의 용도 - Google Patents

재조합 핵산 작제물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20220139969A
KR20220139969A KR1020227031424A KR20227031424A KR20220139969A KR 20220139969 A KR20220139969 A KR 20220139969A KR 1020227031424 A KR1020227031424 A KR 1020227031424A KR 20227031424 A KR20227031424 A KR 20227031424A KR 20220139969 A KR20220139969 A KR 20220139969A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
utr
derivative
gene encoding
nucleotide identity
nucleic acid
Prior art date
Application number
KR1020227031424A
Other languages
English (en)
Inventor
외르그 카우푸만
올리버 케일
다니엘 톤데라
Original Assignee
판테르나 테라퓨틱스 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from EP20156987.8A external-priority patent/EP3865579A1/en
Application filed by 판테르나 테라퓨틱스 게엠베하 filed Critical 판테르나 테라퓨틱스 게엠베하
Publication of KR20220139969A publication Critical patent/KR20220139969A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
    • C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 5'-> 3' 방향으로
- 5' UTR,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' UTR
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 관한 것으로서,
여기서 5' UTR은 MCP-1 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, RPL12s.c. 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, Ang-2 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, HSP70 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, H3.3. 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 갈렉틴(Galectin)-9 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, GADD34 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, EDN1 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, HSP70m5 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, E-셀렉틴(selectin) 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, ICAM-1 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, IL-6 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR 및 vWF 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR로 구성된 군으로부터 선택되며,
여기서 3' UTR은 vWF 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, MCP-1 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, RPL12s.c. 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, HSP70 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, H3.3. 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, GADD34 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, EDN1 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 IL-6 또는 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR로 구성된 군으로부터 선택되며,
여기서, 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키는 데 효과적이거나 세포 내 또는 세포에 치료 효과를 발휘하는 데 효과적이며,
여기서, 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자를 암호화하는 야생형 mRNA와 상이하다.

Description

재조합 핵산 작제물 및 이의 용도
본 발명은 재조합 핵산 작제물, 재조합 핵산 작제물을 포함하는 벡터, 바람직하게는 발현 벡터, 재조합 핵산 작제물 및/또는 벡터를 포함하는 세포, 재조합 핵산 작제물을 포함하는 전달 비히클, 재조합 핵산 작제물을 포함하는 약제학적 조성물, 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 재조합 핵산 작제물, 세포의 세포기능을 회복시키는 방법에 사용하기 위한 재조합 핵산 작제물, 질환의 치료 및/또는 예방 방법 및 세포의 세포기능을 회복시키는 방법에 관한 것이다.
핵산 분자는 생물학적 시스템에서 다양한 목적을 수행한다. 여러 가지 목적 중 하나는 유전 정보를 저장하는 것이고, 또 다른 하나는 유전 정보를 데옥시리보핵산에서 리보솜으로 전달하여 이러한 유전 정보를 아미노산 서열로 번역하는 것이다. 후자의 단계는 메신저 리보핵산(mRNA)의 사용을 포함한다.
mRNA는 진핵 세포에서 매우 기본적인 디자인을 보여주며, 전형적으로 5'-> 3' 방향으로 캡(Cap) 구조, 5' 비번역 영역(5' UTR), 전형적으로 정지 코돈으로 종결하는 암호화 서열(CDS)에 부착된 AUG 코돈으로 시작하는 암호화 서열, 3' 비번역 영역(3' UTR) 및 폴리-A-테일을 포함한다.
mRNA 기반 요법은 생명공학의 시작부터 치료제로 제안되었다. 원칙적으로, 투여된 mRNA 서열은 세포가 단백질을 만들도록 할 수 있으며, 이는 차례로 질환을 직접 치료하거나 백신으로 기능할 수 있고; 보다 간접적으로 단백질은 경로가 억제되거나 자극되어 질환을 치료하거나 개선하는 방식으로 경로 요소를 방해할 수 있다.
본 발명의 근본적인 문제는 재조합 핵산 작제물, 바람직하게는 mRNA의 제공이며, 이에 의해 이러한 재조합 핵산 작제물은 재조합 핵산 작제물의 암호화 서열을 높게 발현시킨다.
본 발명의 근본적인 또 다른 문제는 재조합 핵산 작제물, 바람직하게는 mRNA의 제공이며, 이에 의해 이러한 재조합 핵산 작제물은 내피 세포에서 재조합 핵산 작제물의 암호화 서열을 발현시킨다.
본 발명의 근본적인 이러한 문제 및 기타 문제는 첨부된 독립 청구항의 주제에 의해 해결되며; 바람직한 실시형태는 첨부된 종속항으로부터 취해질 수 있다.
추가로 그리고 보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제1 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제1 양태에서 5'-> 3' 방향으로
- 5' UTR,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' UTR
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 의해 해결되며,
여기서 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴(Galectin)-9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 GADD34 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 EDN1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70m5 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 E-셀렉틴(selectin) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ICAM-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되며;
여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 GADD34 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 EDN1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되며;
여기서, 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키는 데 효과적이거나 세포 내 또는 세포에 치료 효과를 발휘하는 데 효과적이며,
여기서, 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 돌연변이 이펙터 분자는 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고,
여기서, 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자를 암호화하는 야생형 mRNA와 상이하다.
제1 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제2 실시형태에서, 재조합 작제물의 5' UTR 및 3' UTR은 상이한 기원을 갖고, 바람직하게는 상이한 내인성 종으로부터 유래한다.
제1 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제3 실시형태에서, 재조합 작제물의 5' UTR 및 3' UTR은 동일한 기원을 갖고, 바람직하게는 동일한 내인성 유전자 종으로부터 유래한다.
제1 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제4 실시형태에서,
a) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나;
b) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
c) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나, 또는
d) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제1 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제5 실시형태에서,
a) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
b) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
c) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
또는
d) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제6 실시형태에서, 작제물은
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물, 및
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물
을 포함하는 군으로부터 선택되는 작제물이다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제7 실시형태에서, 작제물은 바람직하게는 재조합 핵산 작제물의 3' 말단에 폴리-A-테일을 포함한다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제8 실시형태에서, 작제물은 바람직하게는 재조합 핵산 작제물의 5' 말단에 캡 구조를 포함한다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및 제8 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제9 실시형태에서, 작제물은 바람직하게는 재조합 핵산 작제물의 5' 말단에 IRES(내부 리보솜 진입 부위) 서열을 포함한다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8 및 제9 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제10 실시형태에서, 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 바람직하게는 신호 펩타이드는 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열과 인-프레임(in-frame)이고, 5' UTR과 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역 사이에 배열된다.
제1 양태의 제10 실시형태 중의 한 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제11 실시형태에서, 신호 펩타이드는 이펙터 분자의 분비를 허용한다.
제1 양태의 제10 및 제11 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제12 실시형태에서, 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제13 실시형태에서, 세포 기능이 회복된 세포 및/또는 내부 또는 상부에서 치료 효과가 발휘되는 세포는 내피 세포, 바람직하게는 혈관 내피 세포이고, 보다 바람직하게는 혈관 내피 세포는 미세혈관 내피 세포이다.
제1 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12 및 제13 실시형태 중 하나의 실시형태이기도 한, 제1 양태의 제14 실시형태에서, 세포 기능은 내피 세포의 항-투과도 효과, 항-혈관 누출 효과, 내피 세포의 항-세포자멸사 효과 또는 내피 세포의 항-염증 효과, 또는 항-스트레스 반응 효과를 갖는 이펙터 분자에 의해 회복될 수 있는 기능이며, 바람직하게는 상기 효과는 Tie-2 신호전달 경로, VEGF-수용체 경로, NOTCH 신호전달 경로, PI3-키나제 경로, eNOS 신호전달 경로, 시르투인(sirtuin)-의존성 대사 및 에너지 항상성 경로, 산화 스트레스 경로, 전단 응력 반응 경로, ET-1 신호 변환 경로, NO-매개 신호 변환 경로, 및 기계화학적 변환 경로와 연결되거나, 이와 관련된다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제2 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제2 양태에서, 5'-> 3' 방향으로
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 의해 해결되며,
여기서 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키는 데 효과적이며, 여기서 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 돌연변이 이펙터 분자는 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 이펙터 분자는 내피 세포에 의해 발현된다. 한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 세포 기능의 회복은 각각 세포의 사멸, 보다 바람직하게는 종양 내피 세포 및/또는 종양 세포의 사멸을 포함하고; 또 다른 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 세포 기능의 회복은 각각 신생혈관형성, 보다 바람직하게는 혈관 질환의 경우 신생혈관형성을 포함한다.
제2 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제2 실시형태에서, 질환의 치료 및/또는 예방은 세포의 세포 기능 회복을 포함한다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제3 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제3 양태에서, 5'-> 3' 방향으로
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 의해 해결되며,
여기서 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키는 데 효과적이며, 여기서 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 돌연변이 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키기 위한 방법에 사용하기 위한 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 이펙터 분자는 내피 세포에 의해 발현된다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제4 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제4 양태에서, 5'-> 3' 방향으로
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 의해 해결되며,
여기서 이펙터 분자는 세포 내부 또는 상부에서 치료 효과를 발휘하는 데 효과적이며, 여기서 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 돌연변이 이펙터 분자는 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 이펙터 분자는 내피 세포에 의해 발현된다.
제4 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제2 실시형태에서, 질환의 치료 및/또는 예방은 세포의 세포 기능 회복을 포함한다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제5 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제5 양태에서, 5'-> 3' 방향으로
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역
을 포함하는 재조합 핵산 작제물에 의해 해결되며,
여기서 이펙터 분자는 세포 내부 또는 상부에서 치료 효과를 발휘하는 데 효과적이며, 여기서 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 돌연변이 이펙터 분자는 세포의 세포기능을 회복시키는 방법에 사용하기 위한 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고, 여기서 이펙터 분자는 내피 세포에 의해 발현된다.
제2 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제3 실시형태에서, 제3 양태의 제1 실시형태의 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제2 실시형태에서, 제4 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제3 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1 실시형태의 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제2 실시형태에서, 이펙터 분자는 내피 세포에 의한 방법에서 발현된다.
제2 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제4 실시형태에서, 제3 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제3 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제4 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제3 실시형태에서, 내피 세포는 혈관 내피 세포이고, 바람직하게는 혈관 내피 세포는 미세혈관 내피 세포이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3 및 제4 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제5 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제4 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3 및 제4 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제5 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제4 실시형태에서, 내피 세포는 비-분열 내피 세포, 비-증식 내피 세포 또는 휴지(resting) 내피 세포이다. 이의 실시형태에서, 및 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 내피는 혈관 내피 세포, 림프 내피 세포, 내피 줄기 세포(ESC) 또는 내피 전구 세포(EPC)이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제6 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3 및 제4 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제5 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제6 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3 및 제4 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제5 실시형태에서, 내피 세포는 노화 내피 세포이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제7 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제6 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제7 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제6 실시형태에서, 내피 세포는 노화 및/또는 보여지는 스트레스-관련 결함에 의해 손상된다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제8 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제7 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제8 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제7 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 캡 구조, IRES 서열, 추가의 개시 코돈 제공 서열, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 및 신호 폴리-A-테일을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나의 요소를 추가로 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및 제8 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제9 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제8 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및 제8 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제9 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제8 실시형태에서,
여기서 재조합 핵산 작제물은 5'-> 3' 방향으로
a) - 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
b) - 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
c) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
d) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
e) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
f) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
g) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
h) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
i) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
j) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
k) - 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
l) - 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
m) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
- 캡 구조
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
o) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
p) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
- 3' 비-번역 영역;
q) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
r) - 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일;
s) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일; 및
t) - IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일
을 포함하는 군으로부터 선택되는 작제물이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8 및 제9 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제10 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및 제8 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제9 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8 및 제9 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제10 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및 제8 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제9 실시형태에서, 재조합 핵산은 5' -> 3' 방향으로
- 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일
을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 및 제10 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제11 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8 및 제9 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제10 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 및 제10 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제11 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8 및 제9 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제10 실시형태에서, 재조합 핵산은 5' -> 3' 방향으로
- IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일
을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10 및 제11 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제12 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 및 제10 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제11 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10 및 제11 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제12 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 및 제10 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제11 실시형태에서, 재조합 핵산은 5' -> 3' 방향으로
- 캡 구조,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일
을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제13 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10 및 제11 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제12 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제13 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10 및 제11 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제12 실시형태에서, 재조합 핵산은 5' -> 3' 방향으로
- IRES 서열,
- 5' 비-번역 영역,
- 추가의 개시 코돈 제공 서열,
- 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열,
- 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역,
- 3' 비-번역 영역, 및
- 폴리-A-테일
을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12 및 제13 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제14 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제13 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12 및 제13 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제14 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제13 실시형태에서, 추가의 개시 코돈 제공 서열은 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역과 인-프레임이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 및 제14 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제15 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12 및 제13 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제14 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 및 제14 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제15 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12 및 제13 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제14 실시형태에서, 5' 비-번역 영역은 5' UTR이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제16 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 및 제14 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제15 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제16 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 및 제14 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제15 실시형태에서, 5' 비-번역 영역은 진핵 유기체, 바람직하게는 포유동물 유기체, 보다 바람직하게는 인간, 비인간 영장류, 예컨대 사이노몰구스, 침팬지 레서스 원숭이, 래트 및 마우스를 포함하는 군으로부터 선택되는 포유동물 유기체로부터의 것이다. 대안적인 실시형태에서, 5' 비-번역 영역은 바이러스 유전자로부터의 것이고, 바람직하게는 바이러스는 진핵 유기체를 감염시킬 수 있는 바이러스이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15 및 제16 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제17 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제16 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15 및 제16 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제17 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제16 실시형태에서, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴-9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16 및 제17 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제18 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15 및 제16 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제17 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16 및 제17 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제18 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15, 제16 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제17 실시형태에서, 3' 비-번역 영역은 3'-UTR이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17 및 제18 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제19 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16 및 제17 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제18 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17 및 제18 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제19 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14 및 제15, 제16, 제17 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제18 실시형태에서, 3' 비-번역 영역은 진핵 유기체, 바람직하게는 포유동물 유기체, 보다 바람직하게는 인간, 비인간 영장류, 예컨대 사이노몰구스, 침팬지 레서스 원숭이, 래트 및 마우스를 포함하는 군으로부터 선택되는 포유동물 유기체로부터의 것이다. 대안적인 실시형태에서, 5' 비-번역 영역은 바이러스 유전자로부터의 것이고, 바람직하게는 바이러스는 진핵 유기체를 감염시킬 수 있는 바이러스이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18 및 제19 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제20 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17 및 제18 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제19 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18 및 제19 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제20 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17 및 제18 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제19 실시형태에서, 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18 및, 제19 및 제20 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제21 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18 및 제19 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제20 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19 및 제20 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제21 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18 및 제19 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제20 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물의 5' UTR 및 3' UTR은 상이한 기원을 갖고, 바람직하게는 상이한 종으로부터 유래한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20 및 제21 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제22 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19 및 제20 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제21 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20 및 제21 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제22 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19 및 제20 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제21 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물의 5' UTR 및 3' UTR은 동일한 기원을 갖고, 바람직하게는 동일한 종으로부터 유래한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21 및 제22 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제23 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20 및 제21 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제22 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19 및 제20, 제21 및 제22 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제23 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20 및 제21 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제22 실시형태에서,
a) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
b) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
c) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나, 또는
d) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22 및 제23 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제24 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21 및 제22 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제23 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22 및 제23 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제24 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21 및 제22 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제23 실시형태에서,
a) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되고,
b) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되고,
c) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
d) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택된다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23 및 제24 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제25 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22 및 제23 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제24 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23 및 제24 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제25 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22 및 제23 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제24 실시형태에서, 작제물은
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물, 또는
5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물
을 포함하는 군으로부터 선택되는 작제물이다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24 및 제25 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제26 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23 및 제24 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제25 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24 및 제25 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제26 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23 및 제24 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제25 실시형태에서, 작제물은 폴리-A-테일을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25 및 제26 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제27 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24 및 제25 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제26 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25 및 제26 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제27 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24 및 제25 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제26 실시형태에서, 작제물은 캡 구조를 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26 및 제27 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제28 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25 및 제26 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제27 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26 및 제27 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제28 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25 및 제26 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제27 실시형태에서, 작제물은 하나 이상의 IRES(내부 리보솜 진입 부위) 서열을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, IRES 서열은 캡 구조를 대체하였다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27 및 제28 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제29 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26 및 제27 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제28 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27 및 제28 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제29 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26 및 제27 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제28 실시형태에서, 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28 및 제29 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제30 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27 및 제28 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제29 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28 및 제29 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제30 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27 및 제28 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제29 실시형태에서, 신호 펩타이드는 이펙터 분자의 분비를 허용한다.
제2 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28, 제29 및 제30 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제2 양태의 제31 실시형태에서, 제3 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28 및 제29 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제3 양태의 제30 실시형태에서, 제4 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28, 제29 및 제30 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제4 양태의 제31 실시형태에서, 및 제5 양태의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 제14, 제15, 제16, 제17, 제18, 제19, 제20, 제21, 제22, 제23, 제24, 제25, 제26, 제27, 제28 및 제29 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제5 양태의 제30 실시형태에서, 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 세포 기능이 회복된 세포 및/또는 내부 또는 상부에서 치료 효과가 발휘되는 세포는 내피 세포, 바람직하게는 혈관 내피 세포이고, 보다 바람직하게는 혈관 내피 세포는 미세혈관 내피 세포이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 내피 세포는 비-분열 내피 세포, 비-증식 내피 세포 또는 휴지 내피 세포이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 내피 세포는 염증 자극에 의해 자극된 내피 세포이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 내피 세포는 노화 내피 세포이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 내피 세포는 노화 및/또는 보여지는 스트레스-관련 결함에 의해 손상된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 세포 기능은 내피 세포의 항-투과도 효과, 항-혈관 누출 효과, 내피 세포의 항-세포자멸사 효과 또는 내피 세포의 항-염증 효과 또는 항-스트레스 반응 효과를 갖는 이펙터 분자에 의해 회복될 수 있는 것이다. 그의 실시형태에서, 이펙터 분자는 혈관 생존을 자극하고, 퇴행을 억제하고, 세포자멸사를 억제하고, 이동을 자극하고, 리모델링을 자극하고, 혈관신생을 자극하고, 관 형성/침습을 자극하고, 증식을 자극하고, 백혈구 부착을 억제하고, 부착 분자 발현을 억제하고, 조직 인자 발현을 억제하고, NFKappaB 활성을 억제하거나, 또는 단층 무결성을 촉진한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 효과가 Tie-2 신호전달 경로, VEGF-수용체 경로, NOTCH 신호전달 경로, PI3-키나제 경로, eNOS 신호전달 경로, 시르투인-의존성 대사 및 에너지 항상성 경로, 산화 스트레스 경로, 전단 응력 반응 경로, ET-1 신호 변환 경로, NO-매개 신호 변환 경로, 및 기계화학적 변환 경로와 연결되거나, 이와 관련되며, 바람직하게는 경로는 Ang/Tie-2 신호전달 경로, VEGF/VEGF 수용체 경로 및 Notch/Notch 리간드 경로를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 경로의 요소이며, 여기서 경로는 Tie-2 신호전달 경로, VEGF-수용체 경로, NOTCH 신호전달 경로, PI3-키나제 경로, eNOS 신호전달 경로, 시르투인-의존성 대사 및 에너지 항상성 경로, 산화 스트레스 경로, 전단 응력 반응 경로 ET-1 신호 변환 경로, NO-매개 신호 변환 경로, 및 기계화학적 변환 경로를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 Ang-1, Ang-4, COMP-Ang-1, hCOMP-Ang-1, COMP-Ang-1, COMP-ANG-2, Tie-2 수용체, Tie-1 수용체, PI3-키나제, 바람직하게는 구성적 활성 PI3-키나제, 과활성 Tie-2 수용체(예를 들어 R849W), VE-카드헤린, GRB2, GRB7, GRB14, GRB7, IQGAP1, RAC1, RAP1, DOK2, ABIN1 및 ABIN2, KLF2(Krueppel-유사 인자 2), 알파5 베타1 인테그린, CD73, Akt 1, Akt 2 및 Akt 3을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 세포 기능은 혈관 누출이고, 바람직하게는, 경로는 Tie-2 경로이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 VEGF, VEGF-A, VEGF-B, PDGF, bFGF, 시르투인(Sirtuin), eNOS, RAS 및 c-MYC를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 혈관 재생을 회복시키거나, 혈관 재생, 바람직하게는 혈관 내피 혈관 재생을 제공한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 세포 기능이 회복된 세포 및/또는 내부 또는 상부에서 치료 효과가 발휘되는 세포는 비-내피 세포이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 비-내피 세포는 상피 세포, 폐포 대식세포, 폐포 I형 세포, 폐포 II형 세포, 폐포 대식세포, 폐세포, 폐 상피 세포, 조혈 세포, 골수 세포, 골 세포, 줄기 세포, 중간엽 세포, 신경 세포, 아교 세포, 뉴런 세포, 성상세포, 말초 신경계 세포, 심장 세포, 지방세포, 혈관 평활근 세포, 심근세포, 골격근 세포, 베타 세포, 뇌하수체 세포, 활액 내막 세포, 난소 세포, 고환 세포, B 세포, T 세포, 망상적혈구, 백혈구, 과립구, 대식세포, 호중구, 항원 제시 세포(수지상 세포), 섬유아세포, 간세포, 종양 세포 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 종양 사멸 리간드, 조혈 및 혈액 응고에 관여하는 인자, 줄기 세포 인자, 성장 인자 및 사이토카인을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 종양 사멸 리간드는 IL-12, 사멸 리간드 단백질의 TNF 유전자 슈퍼패밀리의 구성원, 예컨대 Apo2L/TRAIL, IL-13, IL-10, IL-8, IL-2, 인터페론 베타, 분비된 곱슬머리-관련 단백질(SFRP: secreted frizzled-related protein) 1, SFRP 2, SFRP 3, SFRP 4 및 SFRP5를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 조혈 및 혈액 응고에 관여하는 인자는 에리트로포이에틴, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX 및 헤파란-N-설파타제를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 줄기 세포 인자는 Oct4, Sox2, Klf4 및 c-Myc를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 성장 인자 및 사이토카인은 아드레노메둘린, 안지오포이에틴 패밀리, 자가분비 운동성 인자, 골 형태형성 단백질, 섬모 신경영양 인자(CNTF), 백혈병 억제 인자(LIF), 인터루킨-6(IL-6), 대식세포 콜로니-자극 인자(m-CSF), 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF), 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 표피 성장 인자(EGF), 에프린, 에리트로포이에틴(EPO), 섬유아세포 성장 인자 패밀리(FGF1-23), 소마토트로핀, 리간드의 GDNF 패밀리(예컨대 신경교 세포주-유래 신경영양 인자(GDNF), 뉴르투린, 페르세핀 및 아르테민), 성장 분화 인자-9(GDF9), 간세포 성장 인자(HGF), 간암-유래 성장 인자(HDGF), 인슐린, 인슐린-유사 성장 인자-1 및 -2(IGF-1; IGF-2), 각질세포 성장 인자(KGF), 이동-자극 인자(MSF), 간세포 성장 인자-유사 단백질(HGFLP)로도 알려져 있는, 대식세포-자극 단백질(MSP), 미오스타틴(GDF-8), 뉴레귤린 1-4(NRG1-4), 뉴로트로핀(뇌-유래 신경영양 인자(BDNF), 신경 성장 인자(NGF), 뉴로트로핀-3(NT-3), 뉴로트로핀-4(NT-4)), 태반 성장 인자(PGF), 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 신장효소(RNLS) - 항-세포자멸사 생존 인자, T-세포 성장 인자(TCGF), 트롬보포이에틴(TPO), 형질전환 성장 인자 알파(TGF-α), 형질전환 성장 인자 베타(TGF-β), 종양 괴사 인자-알파(TNF-α), 혈관 내피 성장 인자 패밀리(VEGF), Wnt 신호전달 경로 신호전달 당단백질(WNT1, WNT2, WNT2B, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16), 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF), 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 인터페론-알파, 인터페론-베타, 인터루킨 2(IL-2), 인터루킨 11(IL-11), 인터페론-감마, IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23,IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-35 및 IL-36을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환은 혈관 누출, 바람직하게는 혈관 내피 세포의 누출, 보다 바람직하게는 미세혈관 내피 세포의 누출을 특징으로 하거나, 이에 의해 유발된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환을 앓고 있는 대상체는 폐에 염증을 나타낸다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환이 폐렴, 패혈증 및 외상을 포함하는 군으로부터 선택되는 질환.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환을 앓고 있는 대상체는 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)을 나타낸다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환은 폐렴, 바람직하게는 중증 지역사회-획득 폐렴(sCAP), 지역사회 획득 폐렴(CAP), 병원-획득 폐렴(HAP)을 포함하는 군으로부터 선택되는 폐렴이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환은 폐 손상을 특징으로 하거나 이를 나타낸다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 폐 손상은 즉각적인 폐 손상이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 즉각적인 폐 손상은 독성 가스의 흡입, 독성 폐 부종, 바이러스 또는 박테리아에 의한 폐 감염, 위 내용물의 흡인, 민물 흡인, 염수 흡인, 폐 타박상, 지방 색전증, 양수 색전증 및 고압 산소 흡입으로 인한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 폐 손상은 간접적인 폐 손상이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 간접적인 폐 손상은 패혈증, 균혈증, 내독소혈증, 중증 외상, 쇼크를 포함한 다발성 외상, 화상, 췌장염, 열대 말라리아, 약물 및 면역억제, 만성 알코올 남용, 만성 폐질환, 혈청의 낮은 pH로 인한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 질환 또는 효과는 혈관 재생 또는 수명이고, 여기서 바람직하게는 이펙터 분자는 VEGF, VEGF-A, VEGF-B, PDGF, bFGF, 시르투인(Sirt 1), PPAR-감마, AMPK, eNOS, RAS, c-MYC, FOXO3, PI3 키나제 *, Akt, Akt*(*는 키나제의 과활성 및 구성적으로 활성인 유도체를 생성하기 위한 단백질의 융합 또는 절단된 버전을 나타냄), 아데노신 A1 수용체, 아데노신 A2A 수용체, 아데노신 A2B 수용체, 텔로머라제, 야마나카 인자(즉, Oct4, sox2, klf4, c-My)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 바람직하게는 정상, 즉 비-질환 내피를 보호하는, 항세포자멸사 인자이며, 여기서 항세포자멸사 인자는 바람직하게는 PTEN, 서바이빈, IAP, cIAP2 및 XIAP, 뉴로글로빈(사이토크롬 c 결합), 프로서바이벌 단백질 Bcl-2, Bcl-xl, Bcl-w, mcl-1 A1, NR-13, BHRF1, LMW5-HL, ORF16, KS-Bcl-2, E1b-19K 및 P53을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 바람직하게는 종양 내피를 표적화하는, 세포자멸사 인자이고, 여기서 세포자멸사 인자는 바람직하게는 PTEN, 서바이빈, IAP, cIAP2 및 XIAP, 뉴로글로빈(사이토크롬 c 결합), 프로서바이벌 단백질 Bcl-2, Bcl-xl, Bcl-w, mcl-1 A1, NR-13, BHRF1, LMW5-HL, ORF16, KS-BCl-2, E1b-19K, P53을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 종양 사멸 리간드이고, 바람직하게는 종양 사멸 리간드는 세포자멸사 또는 항-혈관형성이고, 보다 바람직하게는 종양 사멸 리간드는 사멸 리간드 단백질의 TNF 유전자 슈퍼패밀리의 구성원, 예컨대 TNF-알파, Fas-L, Apo2L/TRAIL, IL-12, IL-13, IL-10, IL-8, IL-2, 분비된 곱슬머리-관련 단백질(SFRP) 패밀리(SFRP1, 2, 3, 4, 5), ELTD1, TGF-ß, TNF-a, IL-6, PTEN, p53 및 세포자멸사유발성 기능(proapoptotic function)을 갖는 기타 종양 억제 유전자, 트롬보스폰딘 C, TIMP-1, TIMP-2, 인터페론-알파, 인터페론-베타, 인터페론-감마, Ang-1 및 Tie-2 효능작용 기능(agonistic function)을 갖는 유도체, 사이토크롬 c, BH3-전용 단백질, 세포자멸사유발성 Bcl-2 단백질 Bad, Bid, Bax, Bak 및 Bim, Apaf1, 프로카스파제-8, -9 -10, 카스파제 2, 3, 6, 7, 8, 9 및 10을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 항염증성이고, 바람직하게는 이펙터 분자는 돌연변이된 인산화 부위를 갖는 IkappaB 및 유도체, PI3 키나제 및 Akt 키나제 및 과활성 형태를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 혈액 응고 및/또는 조혈에 활성이고, 바람직하게는 이펙터 분자는 에리트로포이에틴, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX 및 헤파란-N-설파타제를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 유전자 편집 뉴클레아제, 예컨대 Cas9이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 분비 단백질이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 자가분비 인자로서 효과적이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자는 측분비 인자로서 효과적이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 리보뉴클레오타이드를 포함하고, 바람직하게는 이들로 구성된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함하고, 바람직하게는 이들로 구성된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 리보뉴클레오타이드 및 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함하고, 바람직하게는 이들로 구성된다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제6 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제6 양태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제1 양태의 재조합 핵산 작제물, 및/또는 그의, 바람직하게는 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 임의의 실시형태를 포함하는 각각의 임의의 양태와 관련하여 기재된 바와 같은 재조합 핵산 작제물을 포함하는 벡터에 의해 해결된다.
제6 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제6 양태의 제2 실시형태에서, 벡터는 발현 벡터이다.
제6 양태의 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제6 양태의 제3 실시형태에서, 벡터는 세포, 바람직하게는 내피 세포에서 재조합 핵산 작제물의 발현을 허용하고, 보다 바람직하게는 벡터는 플라스미드 또는 바이러스이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제7 양태의 제1 실시형태이기도 한, 제7 양태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물, 및/또는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제6 양태에 따른 벡터를 포함하는 세포에 의해 해결된다.
제7 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제7 양태의 제2 실시형태에서, 세포는 내피 세포 또는 중간엽 줄기 세포이다.
제7 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제7 양태의 제3 실시형태에서, 세포는 재조합 세포이다.
제7 양태의 제1, 제2 및 제3 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제7 양태의 제4 실시형태에서, 세포는 단리된 세포이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제8 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제8 양태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물을 포함하는 전달 비히클에 의해 해결되며, 여기서 전달 비히클은 양이온성 지질 전달 입자이다.
제8 양태의 제1 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제8 양태의 제2 실시형태에서, 입자는 나노입자이다.
제8 양태의 제1 및 제2 실시형태 중 한 실시형태이기도 한, 제8 양태의 제3 실시형태에서, 나노입자의 평균 크기는 약 30 nm 내지 약 200 nm, 바람직하게는 약 30 nm 내지 약 140 nm이고, 보다 바람직하게는 약 30 nm 내지 약 60 nm이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 제9 양태의 제1 실시형태이기도 한 제9 양태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제6 양태에 따른 벡터, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제7 양태에 따른 세포, 및/또는 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제8 양태에 따른 전달 비히클을 포함하는 조성물에 의해 해결된다. 바람직한 실시형태에서, 조성물은 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 또한 제10 양태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제6 양태에 따른 벡터, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제7 양태에 따른 세포, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제7 양태에 따른 세포, 및/또는 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제8 양태에 따른 전달 비히클의 약제의 제조에 있어서의 용도에 의해 해결된다. 그의 실시형태에서, 약제는 질환, 바람직하게는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태와 관련하여 본원에 기재된 질환의 치료를 위한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 또한 제11 양태에서 대상체, 바람직하게는 인간 대상체를 치료하는 방법에 의해 해결되며, 여기서 방법은 치료적 유효량의 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제6 양태에 따른 벡터, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제7 양태에 따른 세포, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제8 양태에 따른 전달 비히클, 및/또는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제9 양태에 따른 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함한다. 그의 실시형태에서, 상기 방법은 질환, 바람직하게는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태와 관련하여 본원에 기재된 질환의 치료를 위한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 근본적인 문제는 또한 제12 양태에서, 대상체, 바람직하게는 인간 대상체에게 백신접종하는 방법에 의해 해결되며, 상기 방법은 대상체에서 면역 반응, 바람직하게는 원하는 면역 반응을 유도하기에 유효한 양의, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태에 따른 재조합 핵산 작제물, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제6 양태에 따른 벡터, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제7 양태에 따른 세포, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제8 양태에 따른 전달 비히클, 및/또는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제9 양태에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 그의 실시형태에서, 방법은 질환, 바람직하게는 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제2, 제3, 제4 및 제5 양태와 관련하여 본원에 기재된 질환의 치료를 위한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 이펙터 분자는 이러한 면역 반응을 유도할 수 있거나 유도하기에 적합한 것이다.
본 발명에 따르면, 제2, 제3, 제4 및 제5 양태의 임의의 실시형태는 또한, 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제1 양태의 실시형태이다.
본 발명에 따르면, 제1 양태의 임의의 실시형태는 또한, 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제2, 제3, 제4 및 제5 실시형태 중 한 실시형태이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 이종성 작제물, 이종성 핵산 작제물, 재조합 작제물 또는 재조합 핵산 작제물은 야생형 생물학적 시스템, 예컨대 바이러스, 세포, 조직, 기관 또는 유기체에 존재하지 않는 작제물, 바람직하게는 핵산 작제물이다. 보다 바람직하게는, 이종성 작제물, 이종성 핵산 작제물, 재조합 작제물 또는 재조합 핵산 작제물은 하나이며, 여기서 작제물에 함유된 적어도 하나의 요소는 이펙터에 대한 암호화 영역과 조합되지 않으며, 여기서, 상기 요소는 5' 비-번역 영역, 3' 비-번역 영역, 캡 구조, 신호 서열 및 폴리-A-테일로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 5' 비-번역 영역은 5' UTR이고, 3' 비-번역 영역은 3' UTR이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 질환의 치료 방법 또는 치료 및/또는 예방 방법은 요법(therapy)이다.
본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역은 내피 세포에 의해 발현된다. 그의 바람직한 실시형태에서, 이펙터 분자를 발현하는 내피 세포는 기능이 손상된 내피 세포이다. 대안적인 바람직한 실시형태에서, 이펙터 분자를 발현하는 내피 세포는 기능이 손상되지 않은 내피 세포이고; 이러한 경우에, 이펙터 분자는 내피 세포를 생성하는 이펙터 분자에 의해 내보내지거나 분비되고 임의의 다른 세포, 전형적으로 임의의 다른 내피 세포에 그의 효과를 발휘하여, 이에 의해 이러한 다른 세포는 기능이 손상된 세포이다. 바람직한 실시형태에서, 세포의 손상된 기능은 다양한 양태에서 본 발명에 따라 회복될 그러한 세포의 기능이다.
본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 모(parent) 서열과 동일한 기능을 나타내는 서열의 유도체로서; 바람직하게는 모 서열은 야생형 서열이다. 바람직한 실시형태에서, 유도체 서열 및 모 경우의 서열은 적어도 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는다. 유도체가 모 서열의 절단된 버전이라는 것은 본 발명에 속한다. 이러한 절단은 5' 말단, 3' 말단 또는 5' 말단과 3' 말단 모두에 존재할 수 있다. 동일성 측면에서 모 서열에 대한 참조가 이루어진 경우, 그러한 동일성은 참조 서열로서 작용하는 모 서열의 서열과 함께 유도체 및 모 서열 모두에 의해 공유되는 후속 뉴클레오타이드의 스트레치(stretch)를 지칭한다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역은 상기 이펙터 분자로 암호화하는 핵산 서열을 포함하거나, 이로 구성된다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 5' 비-번역 영역은 5' 비-번역 서열이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 3' 비-번역 영역은 5' 비-번역 서열이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 본 발명의 재조합 핵산 작제물에 포함된 요소 중 어느 하나의 소스 표시는 뉴클레오타이드 서열의 대체물 또는 대안적인 설명으로 이해되어야 한다. 이러한 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 각각의 야생형 서열 중 하나, 보다 바람직하게는 각각의 인간 야생형 서열 중 하나이다. 인간이 아닌 다른 종이 그러한 야생형 서열을 제공할 수 있고; 본 발명의 한 실시형태에서 인간 이외의 다른 종에 대한 이러한 야생형 서열은 본 발명의 실시에 사용될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 또한 이러한 야생형 서열은 GenBank와 같은 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스로부터 취해질 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 야생형 서열은 전형적으로 시퀀싱 오류를 교정하기 위해 시간이 지남에 따라 변경될 수 있다. 본 발명의 한 실시형태에서, 서열은 본 출원의 출원일에 GenBank와 같은 상기 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스에 기술된 것이다. 다양한 각각의 야생형 서열이 존재하는 한, 각각의 그리고 임의의 이러한 야생형 서열은 본 발명에 포함되어야 한다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 야생형 서열이 있고 하나 이상의 야생형 서열이 상이한 지리적으로 정의된 그룹의 사람들 및/또는 상이한 유전적으로 정의된 그룹의 사람들과 같은 상이한 그룹의 사람들에 의해 제공되는 경우, 상기 상이한 그룹의 사람들 중 가장 포괄적인 그룹에서 우세한 야생형 서열이 야생형 서열로 간주될 수 있다.
본 발명의 실시형태에서, 그리고 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 유도체가 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는다는 것을 나타내는 유전자의 5' UTR의 유도체에 대하여 참조하는 경우, 동일성은 유전자의 5' UTR을 참조하거나, 이에 대한 동일성이다.
본 발명의 실시형태에서, 그리고 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 유도체가 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는다는 것을 나타내는 유전자의 3' UTR의 유도체에 대하여 참조하는 경우, 동일성은 유전자의 3' UTR을 참조하거나, 이에 대한 동일성이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 신호 펩타이드는 폴리펩타이드 또는 신호 펩타이드에 융합되거나 부착된 단백질의 세포외 공간으로의 전달 또는 분비를 직접 또는 간접적으로 매개하는 펩타이드이며, 따라서, 바람직하게는, 신호 서열은 각각 폴리펩타이드 및 단백질로부터 제거된다.
본 발명의 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 도면들에 개시된 재조합 핵산 작제물, 보다 구체적으로 도 40(PAN29), 도 90(PAN58), 도 86(PAN54), 도 67(PAN50), 도 45(PAN34), 도 44(PAN33), 도 39(PAN28), 도 37(PAN12), 도 88(PAN56)에 개시된 재조합 핵산 작제물이다.
본 발명의 실시형태에서, 그리고 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 유인물질(decoy)은 리간드에 결합하고 신호전달 활성을 중화시키는 mRNA 암호화된 단백질이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 폴리-A-테일은 서로 공유적으로 부착된 복수의 A를 포함하거나 이로 구성된 뉴클레오타이드 서열이며, 이에 의해 이러한 공유 연결은 바람직하게는 포스포디에스테르 연결이다. 그의 실시형태에서, 폴리-A-테일은 약 20 내지 약 240개의 A(즉 아데노신 포스페이트) 뉴클레오타이드, 바람직하게는 약 60 내지 120개의 A, 보다 바람직하게는 약 100 내지 140개의 A 및 가장 바람직하게는 약 120개의 A를 포함한다.
폴리 A 테일은 천연 메신저 및 합성 센스 RNA를 안정화시키는 것으로 생각된다. 따라서, 한 실시형태에서, 긴 폴리 A 테일이 mRNA 분자에 추가되어, RNA를 보다 안정하게 할 수 있다. 폴리 A 테일은 다양한 당 분야의 인식된 기술들을 사용하여 추가될 수 있다. 예를 들어, 긴 폴리 A 테일은 폴리 A 폴리머라제를 사용하여 합성 또는 시험관 내 전사된 RNA에 추가될 수 있다(문헌[Yokoe, et al. Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256]). 전사 벡터는 또한 긴 폴리 A 테일을 암호화할 수 있다. 또한, 폴리 A 테일은 PCR 생성물에서의 직접 전사에 의해 추가될 수 있다. 폴리 A는 또한 RNA 리가제로 센스 RNA의 3' 말단에 결찰될 수 있다(예를 들어, 문헌[Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis(Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1991 edition)] 참조). 한 실시형태에서, 폴리 A 테일의 길이는 적어도 약 90, 200, 300, 400개, 적어도 500개 뉴클레오타이드이다. 한 실시형태에서, 폴리 A 테일의 길이는 본 발명의 변형된 센스 mRNA 분자의 안정성 및 이에 따른 단백질의 전사를 제어하도록 조정된다. 예를 들어, 폴리 A 테일의 길이가 센스 mRNA 분자의 반감기에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 뉴클레아제에 대한 mRNA의 저항성 수준을 수정하여 세포내 단백질 발현의 시간 경과를 제어하도록 폴리 A 테일의 길이가 조정될 수 있다. 한 실시형태에서, 안정화된 핵산 분자는 (예를 들어, 뉴클레아제에 의한) 생체 내 분해에 대해 충분히 저항성이어서, 전달 비히클 없이 표적 세포에 전달될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 핵산 분자는 이중-가닥 RNA 오염물을 제거하고 선천성 면역계 활성화를 감소시키기 위해 HPLC에 의해 정제될 수 있다(예를 들어 문헌[Kariko et al., Nucleic Acids Res. 2011 Nov; 39(21):e142] 참조).
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 캡 구조는 당업자에게 알려져 있는 캡 구조를 형성하는 뉴클레오타이드 서열이다. 진핵 세포에서, 캡-구조는 m7G(5')ppp(5')G 5'-5'-트리포스페이트 연결 구조로 구성된다. mRNA의 5'-말단에 있는 처음 2개의 리보스 당은 캡-1(2개의 리보스 당 중 첫 번째가 메틸화된 경우) 및 캡-2 구조(2개의 리보스 당 중 두 번째가 메틸화된 경우)로 알려진 2'-위치에서 메틸화될 수 있다. 캡-구조는 메틸 공여체로서 캡핑과 2'-O-메틸트랜스퍼라제 효소 및 S-아데노실메티오닌(SAM)을 사용하여 mRNA 전사 동안 또는 전사 후 통합될 수 있다. 또한, 면역 자극성 5'-포스페이트를 제거하기 위해 포스파타제 처리가 사용될 수 있다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 기능 획득 돌연변이는 변경된 유전자 생성물이 새로운 분자 기능 또는 유전자 발현의 새로운 패턴을 갖는 돌연변이 유형이다. 기능 획득 돌연변이는 거의 항상 우성 또는 반-우성이다. 이에 따라, 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자는 새로운 분자 기능 또는 새로운 발현 패턴을 갖는 이펙터 분자이다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 고차형 돌연변이는 변경된 유전자 생성물이 증가된 수준의 활성을 갖는 돌연변이 유형이다. 이에 따라, 고차형 돌연변이 이펙터 분자는 증가된 수준의 활성을 갖는 이펙터 분자 또는 증가된 수준으로 발현되는 이펙터 분자이다. 바람직하게는, 이러한 발현 수준의 증가는 돌연변이 이펙터 분자를 암호화하는 mRNA에 의해 야기된다.
고차형 돌연변이는 예를 들어, 문헌[Muller, H. J. 1932. "Further studies on the nature and causes of gene mutations." Proceedings of the 6th International Congress of Genetics, pp. 213-255]에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, 용어들 우성은 주어진 형질과 관련하여 또 다른 대립유전자(일반적으로 표준 야생형 대립유전자)를 참고하여 특정 대립유전자의 표현형 효과에 적용된다. A/A 동형접합체 및 A/a 이형접합체가 표현형으로 동일하고 a/a 동형접합체와 상이한 경우, 대립유전자 "A"는 대립유전자 "a"에 대해 우성이라고 한다.
한 실시형태에서, 그리고 본원에 바람직하게 사용되는 바와 같이, A/A 동형접합체가 돌연변이 표현형을 갖고, A/a 이형접합체가 덜 심각한 표현형을 갖는 반면, a/a 동형접합체가 야생형인 경우, 대립유전자 "A"는 대립유전자 "a"에 대해 반-우성(semi-dominant)이라고 한다.
인간 게놈 전반에 걸친 분석에서 확인된 이러한 우성 돌연변이는 mRNA 안정화 표현형(예를 들어, 마이크로RNA 결합 부위의 기능적 결실), 단백질 안정화 표현형(예를 들어, PEST 서열의 돌연변이), 억제 도메인의 감쇠 및 억제제에 대한 결합 부위 간섭을 갖는 표현형, 키나제 도메인, G-커플링된 단백질 수용체 도메인, 리간드 결합 및 이량체화 도메인과 같은 촉매 도메인의 구성적으로 활성화를 갖는 표현형과 같은 상이한 생물학적 결과를 갖는 군으로부터 선택될 수 있다는 것이 당업자에 의해 인지되고 인식될 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 그리고 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 비-돌연변이 이펙터 분자는 이펙터 분자의 야생형 형태이다. 바람직한 실시형태에서, 이펙터 분자의 야생형 형태는 인간의 이펙터 분자의 야생형 형태이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 아미노산 서열을 포함하고, 비-돌연변이 이펙터 분자는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 돌연변이 이펙터 분자는 비-돌연변이 이펙터 분자와 비교하여, 돌연변이 이펙터 분자가 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자라는 조건 하에, 아미노산 서열 수준 및/또는 mRNA 수준의 뉴클레오타이드 서열 수준의 비-돌연변이 이펙터 분자와 상이하다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 하나 이상의 아미노산 돌연변이에 의해 비-돌연변이 분자와 상이하며; 바람직하게는, 아미노산 돌연변이는 돌연변이 유형이고, 여기서 돌연변이 유형은 아미노산 치환, 아미노산 결실 및 아미노산 삽입을 포함하는 군으로부터 선택된다. 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 비-돌연변이 이펙터 분자에 의해 정의된 1개의 아미노산 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 1개의 아미노산 위치에서의 돌연변이는 하나의 돌연변이 유형을 포함하고; 대안적으로, 1개의 아미노산 위치에서의 돌연변이는 하나 이상의 돌연변이 유형을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 추가 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 비-돌연변이 이펙터 분자에 의해 정의된 2개 이상의 아미노산 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 각각의 및 임의의 2개 이상의 아미노산 위치에서, 돌연변이는 2개 이상의 아미노산 위치 중 임의의 다른 위치로부터 개별적으로 및 독립적으로, 하나의 돌연변이 유형을 포함하고; 대안적으로, 2개 이상의 아미노산 위치에서의 돌연변이는 2개 이상의 아미노산 위치 중 임의의 다른 위치로부터 개별적으로 및 독립적으로, 하나 이상의 돌연변이 유형을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 추가 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 이펙터 분자의 절단된 버전으로 유도하는 추가의 정지부를 포함한다. 이의 바람직한 실시형태에서, 이러한 추가의 정지 코돈은 억제제 도메인, 예컨대, 예를 들어, 말단 억제 도메인 및 C-말단 억제 도메인의 결실을 초래한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 Tie-2 경로, PI3 키나제 경로, Akt 경로, mTor 경로, MAPK(미토겐 활성화 단백질 키나제) 경로, RAS 경로 및 TCA(트리카르복실산) 사이클의 돌연변이 이펙터 분자이다. 이펙터 분자로서 이러한 종류의 돌연변이 이펙터 분자를 포함하는 본 발명에 따른 재조합 핵산 작제물은 혈관 누출 및 이러한 혈관 누출과 함께 진행되거나 이에 의해 야기되는 임의의 질환의 치료에 특히 효과적이다. 재조합 핵산 작제물에 사용하기에 특히 바람직한 돌연변이 이펙터 분자는 혈관 기형을 유발하거나 초래하는 분자이며; 바람직하게는, 혈관 기형은 정맥, 림프관, 정맥과 림프관 모두, 또는 동맥과 정맥 모두의 선천적 혈관 기형을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 바람직한 실시형태에서, Tie-2 경로, PI3 키나제 경로, Akt 경로 또는 mTor 경로의 이러한 돌연변이 이펙터 분자는 재조합 핵산 작제물 PAN29, PAN54 또는 PAN58에 이펙터 분자로서 함유되며, 작제물 PAN29, PAN54 또는 PAN58의 경우 이펙터 분자로서 나노 루시퍼라제를 대체한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, Tie-2 경로의, PI3 키나제 경로의, Akt 경로의, 또는 mTor 경로의 이러한 돌연변이 이펙터 분자를 포함하는 재조합 핵산 작제물은 질환의 치료, 바람직하게는 급성 호흡 곤란 증후군의 치료에 사용하기 위한 것이다. 돌연변이 이펙터 분자로 인해, Tie-2 경로가 활성화되어, 무엇보다도 활성화 리간드 안지오포에틴-1을 발현하고, 그 결과 혈관 누출을 감소시킨다. Tie-2 경로의 이펙터 분자는 Tie-2, AKT, FOXO1, ABIN2, IQGAP1, RAP1, RAC1 및 VE-카드헤린이고, PI3 키나제 경로의 이펙터 분자는 PIK3CA, PDK1, AKT, XIAP, eNOS, RAC, RAS ERK 및 S6K이고, Akt 경로의 이펙터 분자는 Akt1, eNOS, IKK, MEJ1/2, ERK 및 AP1이고, mTor 경로의 이펙터 분자는 mTor, SGK1, PKCα, Akt, HIF-1, S6K, eIF4G, Lipin 1, SKAR, PGC-1α, PPARη, PPARα, SREBP-1 및 TFEB이고, MAPK 경로의 이펙터 분자는 GNA11 및 GNAQ이고, RAS 경로의 이펙터 분자는 KRAS 및 NRAS이고, TCA 사이클의 이펙터 분자는 IDH1이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 Tie-2 돌연변이체(R849W)와 상이하다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 과활성 및/또는 구성적으로 활성인 PI3 키나제의 융합 또는 절단된 버전과 상이하다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 과활성 및/또는 구성적으로 활성인 Akt의 융합 또는 절단된 버전과 상이하다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 구성적으로 발현된 Tie-2 수용체, 바람직하게는 구성적으로 발현된 인간 Tie-2 수용체이다. 이 실시형태를 사용하면 바람직하게는 상기 Tie-2 수용체 예컨대, 예를 들어 Ang-1에 대한 높은 농도의 활성화 리간드가 필요 없이, 혈관 장벽 기능을 회복할 수 있다. 본 실시형태의 재조합 핵산 작제물은 염증이 있는 내피에 사용하기에 특히 적합하며, 염증이 있는 내피, 바람직하게는 Tie-2 리간드의 감소되거나 하향-조절된 발현을 나타내는 염증이 있는 내피를 포함하거나 이에 따라 진행되거나 이에 의해 유발되는 임의의 질환, 예컨대 SEPSIS, 급성 호흡 곤란 증후군, 혈관-누출-증후군, 뇌 말라리아 증후군, 말라리아, 급성 췌장염, 클락슨병, 뎅기열 바이러스 감염, 누출 관련 감염에 사용하기에 적합하다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 야생형 Tie-2 수용체이고, 여기서 이러한 야생형 Tie-2 수용체를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 Ang-1에 대한 암호화 영역을 추가로 포함하거나, 이러한 야생형 Tie-2 수용체를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자로서 Ang-1을 암호화하는 재조합 핵산 작제물과 함께 사용되거나, 함께 사용되기 위한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 Tie-2이고, 여기서 돌연변이 인간 Tie-2는 A925S, K1100N, L914F, R915L, R915H, R915C, R918C, R918L, R918G, R918H, T1105N, T1106P, V919L, Y897N, Y897C, Y897H, Y897F 및 Y897S를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 Tie-2는 L914F, R915L, R915C, T1105N, T 1106P, Y897H 및 Y897F를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF, von Willebrand factor) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR 및 돌연변이 인간 Tie-2를 암호화하는 암호화 영역을 포함하며, 여기서 돌연변이 인간 Tie-2는 A925S, K1100N, L914F, R915L, R915H, R915C, R918C, R918L, R918G, R918H, T1105N, T1106P, V919L, Y897N, Y897C, Y897H, Y897F 및 Y897S를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이, 바람직하게는 L914F, R915L, R915C, T1105N, T 1106P, Y897H 및 Y897F를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 보다 바람직하게는 돌연변이 인간 Tie-2는 돌연변이 L914F를 포함하고, 돌연변이 인간 Tie-2는 돌연변이 R849W 및 L914F를 포함하고, 돌연변이 인간 Tie-2는 돌연변이 Y897F 및 R915L을 포함하거나, 또는 돌연변이 인간 Tie-2는 돌연변이 T1105N 및 T1106P를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 L914F를 포함하는 돌연변이 인간 Tie-2를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN62)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 128을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 R849W 및 L914F를 포함하는 돌연변이 인간 Tie-2를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN63)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 129를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 Y897F 및 R915L을 포함하는 돌연변이 인간 Tie-2를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN64)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 130을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 Y897F R915L T1105N T1106P를 포함하는 돌연변이 인간 Tie-2를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN65)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 131을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 PIK3CA(예를 들어, 문헌[Tan FH et al.; Cells. 2019 Apr 9;8(4)] 참조)이고, 돌연변이 인간 PIK3CA는 H1047R, E545K 및 E542K로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 돌연변이 인간 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 돌연변이 인간 PIK3CA는 H1047R, E545K 및 E542K를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 E542K를 포함하는 돌연변이 인간 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN67)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 134를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 E545K를 포함하는 돌연변이 인간 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN68)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 135를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 H1047R을 포함하는 돌연변이 인간 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 핵산 작제물(PAN69)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 136을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 PIK3CA이고, 여기서 돌연변이 인간 PIK3CA는 R88Q, N345K, C420R, E542K, E545A, E545D, E545G, E545K, Q546E, Q546K, Q546L, Q546R, M1043I, H1047L, H1047R, H1047Y 및 G1049R로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 돌연변이 인간 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 여기서 돌연변이 인간 PIK3CA는 R88Q, N345K, C420R, E542K, E545A, E545D, E545G, E545K, Q546E, Q546K, Q546L, Q546R, M1043I, H1047L, H1047R, H1047Y 및 G1049R을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 Akt1이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 Akt1은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서 돌연변이는 바람직하게는 E17K이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 돌연변이 인간 Akt1을 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 여기서 돌연변이 인간 Akt1은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는 돌연변이는 E17K이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 GNA11이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 GNA11은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서 돌연변이는 바람직하게는 Q209H, R183C 및 Q209L을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 돌연변이 인간 GNA11을 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 여기서 돌연변이 인간 GNA11은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는, 돌연변이는 돌연변이 Q209H, R183C 및 Q209L을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNA11 Q 209H를 포함하는 돌연변이 인간 GNA11을 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNA11 R183C를 포함하는 돌연변이 인간 GNA11을 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNA11 Q209L을 포함하는 돌연변이 인간 GNA11을 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 GNAQ이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 GNAQ는 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 돌연변이는 바람직하게는, Q209H, R183Q 및 Q209L을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 돌연변이 인간 GNAQ를 암호화하는 암호화 영역을 포함하며, 여기서 바람직하게는, 돌연변이는 돌연변이 Q209H, R183Q 및 Q209L을 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNAQ Q 209H를 포함하는 돌연변이 인간 GNAQ를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNAQ R183Q를 포함하는 돌연변이 인간 GNAQ를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 GNAQ Q209L을 포함하는 돌연변이 인간 GNAQ를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 KRAS이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 KRAS는 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서 돌연변이는 바람직하게는 Q22K, G12A, A146T, G13C 및 G12D를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함하며, 바람직하게는, 돌연변이는 돌연변이 Q22K, G12A, A146T, G13C 및 G12D를 포함하는 군으로부터 선택된다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 KRAS Q22K를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 KRAS G12A를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 KRAS A146T를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 KRAS G13C를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 KRAS G12D를 포함하는 돌연변이 인간 KRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 NRAS이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 NRAS는 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서 돌연변이는 바람직하게는 돌연변이 NRAS Q61R이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR 및 돌연변이 인간 NRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 여기서 돌연변이 인간 NRAS는 하나 이상의 돌연변이를 포함하며, 바람직하게는, 돌연변이는 NRAS Q61R이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 NRAS Q61R를 포함하는 돌연변이 인간 NRAS를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인간 IDH1이다. 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 인간 IDH1은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 여기서 돌연변이는 바람직하게는 돌연변이 IDH1 R132C이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR 및 돌연변이 인간 IDH1을 암호화하는 암호화 영역을 포함하며, 여기서 돌연변이 인간 IDH1은 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는, 돌연변이는 IDH1 R132C이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 IDH1 R132C를 포함하는 돌연변이 인간 IDH1을 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 본원에 개시된 돌연변이 PIK3CA이며, 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 본원에 개시된 돌연변이 GNAQ에 대한 암호화 영역을 추가로 포함하거나, 여기서 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자로서 본원에 개시된 돌연변이 GNAQ를 암호화하는 재조합 핵산 작제물과 함께 사용되거나, 함께 사용하기 위한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 본원에 개시된 돌연변이 PIK3CA이고, 여기서 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 본원에 개시된 돌연변이 GNA11에 대한 암호화 영역을 추가로 포함하거나, 여기서 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자로서 본원에 개시된 돌연변이 GNA11을 암호화하는 재조합 핵산 작제물과 함께 사용되거나, 함께 사용하기 위한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 본원에 개시된 돌연변이 PIK3CA이고, 여기서 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 본원에 개시된 돌연변이 IDH1에 대한 암호화 영역을 추가로 포함하거나, 여기서 이러한 돌연변이 PIK3CA를 암호화하는 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자로서 본원에 개시된 돌연변이 IDH1을 암호화하는 재조합 핵산 작제물과 함께 사용되거나, 함께 사용하기 위한 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 myrP110*으로서 지칭되는 돌연변이 인간 PI 3-키나제이다. 간단히 말해서, myrP110*은 미리스틸화 신호를 전달하는 구성적으로 활성인 PI 3-키나제 분자 p110*을 기반으로 한다. P110*은 가요성 힌지 영역을 사용하여, p110의 N-말단에 있는 그의 결합 부위에 p85의 iSH2 영역이 공유적으로 연결된 키메라 단백질이다. 미리스틸화 서열은 분자의 N-말단에 있다.(예를 들어 문헌["Constitutively active Phosphatidylinositol 3-Kinase And Uses Thereof." Klippel et al. (1995)]; 미국 특허 제6,043,062호; 및 문헌["Membrane Localization of Phosphatidylinositol 3-Kinase Is Sufficient To Activate Multiple Signal-Transducing Kinase Pathways.", Klippel et al. (1996); Molecular and Cellular Biology; Vol. 16, No.8, p4117-4127] 참조).
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, 바람직하게는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 폰 빌레브란트 인자(vWF) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR, 바람직하게는 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 3' UTR, 및 myrP110*을 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 (바람직하게는 서열번호 20의) MCP-1을 암호화하는 유전자에 대한 5' UTR, (바람직하게는 서열번호 37의) 폰 빌레브란트 인자(vWF)를 암호화하는 유전자에 대한 3' UTR 및 돌연변이 인간 myrP110*을 암호화하는 암호화 영역을 포함하고, 재조합 작제물(PAN70)의 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 151을 포함한다.
본원에 사용된 용어가 바람직하게는 다음과 같은 의미를 갖는다는 것이 당업자에 의해 인지되고 인식될 것이다:
Tie-2: Ig 및 EGF 상동성 도메인-2 또는 티로신-단백질 키나제 수용체 Tie-2를 갖는 티로신 키나제
PIK3CA: 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나제 촉매 서브유닛 알파
Akt: 단백질 키나제 B(PKB
GNA11: G 단백질 서브유닛 알파 11
GNAQ: G 단백질 서브유닛 알파 q
KRAS: Kirsten RAt 육종 바이러스
NRAS: 신경모세포종 RAS 바이러스 종양유전자 동족체
HRAS: Harvey 뮤린 육종 바이러스 종양유전자
IDH1: 이소시트랏(isocitrat)-탈수소효소 1
myrP110*: 촉매 서브유닛 p110알파의 미리스토일화된 형태
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 EGFR 유전자의 돌연변이체이다(예를 들어, 문헌[Lynch TJ et al. N Engl J Med. 2004 May 20;350(21):2129-39. Epub 2004 Apr 29] 참조).
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 STAT3 및 STAT1의 돌연변이체이다(예를 들어 문헌[Fabre A et al.; J Allergy Clin Immunol Pract. 2019 Feb 27] 참조).
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 KRAS, HRAS, NRAS의 돌연변이체이다(예를 들어 문헌[Ten Broek RW; Genes Chromosomes Cancer. 2019 Jan 24. doi: 10.1002/gcc.22739]. [Epub ahead of print] 참조).
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 BRAF, KRAS, PIK3C, c-KIT, ABL, IDH1, IDH2 및 JAK2의 돌연변이체이다(예를 들어, 문헌[Musaffe Tuna and Christopher I. Amos, "Activating Mutations and Targeted Therapy in Cancer" 2012 Oct 12. doi: 10.5772/48701] 참조.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 G-단백질-결합된 수용체 유전자의 돌연변이체이다(예를 들어, 문헌[Fukami M et al. "Gain-of-function mutations in G-protein-coupled receptor genes associated with human endocrine disorders" Clin Endocrinol(Oxf). 2018 Mar; 88(3):351-359]. doi: 0.1111/cen.13496. Epub 2017 Nov 7. Review 참조)
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 수용체 티로신 키나제(RTK)의 돌연변이체이다(예를 들어, 문헌[Du Z and Lovly CM; Mol Cancer. 2018 Feb 19;17(1)] 참조). 한 실시형태에서, 수용체 티로신 키나제는 발암적으로 활성화된다. 대안적인 실시형태에서, 돌연변이는 RTK의 세포외 도메인(ECD), 막관통 도메인(TMD) 또는 막접합 도메인(JMD)에 있는 돌연변이이다. EGFR ECD 내의 3개의 미스센스 돌연변이(P596L, G598 V, 및 A289V)는 EGFR 단백질의 증가된 발현과 관련된 교모세포종(GBM)에서 이전에 보고되었다. 또 다른 실시형태에서, 돌연변이는 갑상선암의 RET(수용체-티로신키나제 Ret) 및 위장관 기질 종양(GIST)의 KIT(티로신 키나제 KIT)와 같은 다른 RTK의 ECD내 돌연변이이다. TMD 내의 HER2 G660D 및 V659E 돌연변이는 비-소세포 폐암(NSCLC)에서 드라이버 돌연변이로 작용한다. HER2 V659 돌연변이는 또한, Li-Fraumeni 증후군 환자에서도 발견된다. 이러한 돌연변이는 적절한 수용체 이량체화에 필수적인 HER2 TMD 내의 특정 단백질-단백질 및 단백질-지질 상호작용을 방해한다. 이들 2개의 TMD 돌연변이는 야생형 HER2보다 더 낮은 단백질 회전율을 나타내는 것으로 나타났다. 마지막으로, JMD 내의 돌연변이는 자가억제성 막접합 상호작용을 방출하고, 후속해서 이러한 RTK들, 예컨대 GIST 내의 KIT V560G 및 PDGFRA V561D 돌연변이를 과활성화시킨다. 이에 비추어, RTK의 ECD, TMD 및 JM 내의 돌연변이는 TKD 내의 돌연변이와 비교하여 대안적인 활성화 메카니즘을 채택한다는 것이 인지되고 인식될 것이다.
명확성을 위해, 본원에 사용된 바와 같이, 이펙터 분자와 같은 단백질의 돌연변이가 본원에 표시된 경우, 아미노산 잔기는 각각의 인간 야생형 단백질의 아미노산 잔기를 지칭하고, 이에 상응하는 현장의 일반적인 관행에서 왼쪽의 아미노산은 야생형 단백질에 존재하는 아미노산 잔기를 나타내고 오른쪽 아미노산은 돌연변이 단백질에 존재하는 아미노산 잔기를 나타낸다. 예를 들어, Tie-2 R849W는 바람직하게는 본원에 개시된, Tie-2의 인간 야생형에 기초한 돌연변이이며, 여기서 야생형 서열의 아미노산 잔기 R은 돌연변이 Tie-2에서 아미노산 잔기 W로 대체된다.
또한 명확성을 위해, 재조합 핵산 작제물의 뉴클레오타이드 서열이 DNA 서열로 표시되는 정도까지, 뉴클레오타이드가 (데옥시리보뉴클레오타이드가 아닌) 리보뉴클레오타이드인 실시형태에서 재조합 핵산 작제물이 존재하는 경우 임의의 T는 U가 될 것이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 종양유전자의 돌연변이체이다. 바람직하게는, 돌연변이 이펙터 분자는 구성적 활성 성장 인자, 구성적 활성 수용체 또는 세포 증식에 영향을 미치는 발암성 돌연변이를 사용한다(예를 들어, 문헌[Lodish H, Berk A, Zipursky SL, et al.; Molecular Cell Biology; New York: W. H. Freeman; 2000] 참조).
대부분의 종양은 하나 이상의 세포내 신호-전달 단백질의 구성적으로 활성인 형태를 발현하여, 정상 성장 인자의 부재 하에 성장-촉진 신호전달을 야기한다. 암은 돌연변이 형태의 성장 인자, 성장 인자 수용체, 신호-전달 단백질, 전사 인자, 프로- 또는 항-세포자멸사 단백질, 및 DNA 복구 단백질의 발현으로 인해 초래될 수 있다. 이러한 부류에서 단백질의 구조 또는 발현을 변화시키는 돌연변이는 일반적으로 우세하게 활성인 종양유전자를 발생시켜 돌연변이 세포가 종양 세포가 될 확률을 크게 증가시킨다. 성장-인자 수용체를 활성화하는 바이러스-암호화 단백질도 또한 암을 유발할 수 있다.
이러한 발암성 단백질 발현은 지속적인 단백질 발현이 가능하도록 하는 유전적 변화로 인해 본질적으로 영구적이다. 본 발명 및 본 발명의 재조합 핵산 작제물의 실행에서 이러한 돌연변이의 사용은 영구적인 발암성 형질전환을 거의 불가능하게 만드는 이러한 성장-관련 단백질의 발암성 활성의 매우 일시적인 특성으로 인해 가능하다.
종양유전자는 성장 인자를 암호화하는 유전자로부터 거의 발생하지 않는다. 사실, 자연 발생 성장-인자 종양유전자인 시스(sis)만이 발견되었다. PDGF의 한 유형을 암호화하는 시스 종양유전자는 PDGF 수용체를 정상적으로 발현하는 세포의 증식을 비정상적으로 자가자극할 수 있다. 정상적인 리간드가 없을 때 성장 신호를 전달하는, 구성적으로 활성인 수용체의 생성을 유도하는 여러 유형의 돌연변이가 확인되었다. 어떤 경우에는 점 돌연변이가 정상적인 수용체-티로신-키나제를 리간드 없이 이량체화하고 활성화되는 것으로 변경한다. 예를 들어, 단일 점 돌연변이는 정상 Her2 수용체를 특정 마우스 암에서 발견되는 Neu 종양단백질로 전환한다. Her2 수용체의 막관통 영역에서 단일 아미노산을 (발린에서 글루타민으로) 변경하는 돌연변이는 정상 EGF-관련 리간드가 없는 상태에서 2개의 수용체 단백질의 이량체화를 유발하여, 단백질을 키나제로서 구성적으로 활성으로 만든다. 이때문에, 이러한 돌연변이 Her2 수용체는 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
EGF 수용체에서 세포외 리간드 결합 도메인의 손실을 유발하는 결실은 알려지지 않은 이유로 단백질 키나제, ErbB의 구성적 활성화를 유도한다. 이 때문에, 이러한 돌연변이 ErbB는 이의 임의의 실시형태를 포함하는 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다. ErbB는 실제로 즉 상피 성장 인자 수용체(EGFR)라고도 하는 ErbB-1, 인간에서 HER2, 그리고 설치류에서 neu라고도 하는 ErbB-2, HER3이라고도 하는 ErbB-3, 및 HER4라고도 하는 ErbB-4로 구성된 단백질 패밀리임을 당업자라면 이해하고 인식할 것이다. v-ErbB는 EGFR과 상동이지만, 리간드 결합 엑토도메인 내에 서열이 없다.
유사하게, 다발성 내분비 신생물 2형이라고 하는 인간 종양은 세포외 도메인의 점 돌연변이로부터 발생하는 구성적으로 활성인 이량체 GDNF(교세포-유래 신경영양 인자) 수용체를 발현하는 것으로 밝혀졌다. 다른 경우에, 많은 세포외 리간드-결합 도메인의 결실은 구성적으로 활성인 종양단백질 수용체를 생성한다. 이 때문에, 이러한 돌연변이 GDNF 수용체는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
다수의 종양유전자는 암호화된 단백질이 수용체에서 세포 표적으로 신호를 전달하는 것을 돕는 단백질인 세포내 변환물질로 작용하는 원발암유전자로부터 유래된다. 이 부류에는 인지된 최초의 비-바이러스성 종양유전자인 ras 종양유전자가 있다. 예를 들어 많은 신호전달 경로의 핵심 전달 단백질인 Ras의 단일 점 돌연변이는 GTPase 활성을 감소시켜 활성화된 상태로 유지한다. ras 원발암유전자가 종양유전자가 되는 통상적인 돌연변이 중 하나는 서열의 12번 위치에 있는 글리신을 임의의 아미노산으로 대체하는 단백질의 단 한 번의 변화를 일으킨다. 이러한 단순한 돌연변이는 단백질의 GTPase 활성을 감소시켜, GTP 가수분해를 정상적이고 통제된 Ras 기능의 유지와 연결한다. 발암성 변화는 Ras의 3차원 구조에 약간의 변화를 일으킬 뿐이지만, 이것은 정상 단백질을 종양단백질로 변화시키기에 충분하다. 구성적으로 활성인 Ras 종양단백질은 방광, 결장, 유방, 피부 및 폐 암종, 신경모세포종 및 백혈병을 비롯한 많은 유형의 인간 종양에서 발현된다. Ras 단백질은 파르네실기(farnesyl group)라고 하는 특정 유형의 공유 부착된 지방산에 의해 세포 원형질막의 안쪽에 고정되어 있으며, 이 부착은 정상 또는 발암성 Ras 단백질이 신호 변환물질로 기능하는 데 필수적이다. 이 때문에, 이러한 돌연변이 Ras는 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
RTK-Ras - MAP 키나제 경로의 다른 성분을 암호화하는 종양유전자도 확인되었다. 특정 형질전환 마우스 레트로바이러스에서 발견되는 한 가지 예는 Ras 및 MAP 키나제 사이의 경로에 있는 구성적으로 활성화된 Raf 세린/트레오닌 키나제를 암호화한다. 또 다른 하나는 조류 육종 바이러스에서 발견되는 crk 종양 유전자이며, 이는 과발현될때 특정 종양을 유발한다. 생화학적 활성이 알려져 있지 않은 Crk 단백질은 SH2 도메인 1개와 SH3 도메인 2개를 함유하며, RTK와 Ras 사이에서도 기능하는 GRB2 어댑터 단백질과 유사하다. GRB2 및 기타 어댑터 단백질내 SH2 및 SH3 도메인은 정상적으로 세포 이벤트에 대한 신호전달 단위 역할을 하는 특정 단백질 응집체의 형성을 매개한다. 그러나, Crk의 과발현은 암 세포의 성장 및 전이 능력을 부적절하게 신호하는 단백질 응집체의 형성으로 이어진다. 이 때문에, 이러한 돌연변이 Raf 세린/트레오닌 키나제 및 이러한 돌연변이 Crk 단백질은 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
일부는 인간 종양에서 초기에 확인되고 다른 일부는 형질전환 레트로바이러스에서 확인된, 몇몇 종양유전자는 비수용체 단백질-티로신 키나제를 암호화한다. 이들 중 하나는 bcr 유전자(기능은 알려져 있지 않지만 N-말단 세그먼트가 여러 bcr 폴리펩타이드를 함께 연결하는 코일형 코일 도메인을 형성함)의 일부와 정상 기질이 알려지지 않은 단백질-티로신 키나제를 암호화하는 c-abl 유전자의 일부가 융합되는 염색체 전위에 의해 생성된다. 생성된 Bcr-Abl 종양유전자로부터 발현된 키메라 폴리펩타이드는 구성적 Abl 키나제 활성을 나타내는 사량체를 형성한다. Abl이 일반적으로 핵에 국한되어 있지만, Bcr 세그먼트를 추가하면 Bcr-Abl 종양단백질이 세포질에 국한된다. Abl SH2 및 SH3 도메인을 통해 Bcr-Abl은 많은 세포내 신호-전달 단백질에 결합한 다음 Abl이 정상적으로 활성화하지 않는 단백질을 인산화한다. 결과적으로, JAK2 단백질-티로신 키나제, Stat5 전사 인자, 및 PI-3 키나제를 포함한 이러한 신호전달 단백질은 성장 인자가 없을 때 활성화된다. 이 때문에, 이러한 종양유전자및 돌연변이 종양유전자는 각각 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
구성적으로 활성인 세포질 단백질-티로신 키나제를 암호화하는 또 다른 종양유전자는 src이다. 이전에 언급된 바와 같이, Rous 육종 레트로바이러스로부터의 v-src는 발견된 최초의 종양유전자였다. Src 활성의 조절과 c-src 원발암유전자가 종양유전자로 되는 변경은 알려져 있다. 정상적인 Src 키나제(c-Src)는 SH2, SH3, 및 단백질-티로신 키나제 도메인을 포함한다. 이 60-kDa 단백질의 키나제 활성은 일반적으로 C-말단에서 6개 잔기인 위치 527에서의 티로신 잔기의 인산화에 의해 비활성화된다. 특정 포스파타제 효소에 의한 포스포티로신 527의 가수분해는 일반적으로 c-Src를 활성화한다. 티로신 527은 구성적 키나제 활성을 갖는 Src 종양단백질에서 종종 누락되거나 변경되며, 즉 포스파타제에 의한 활성화가 필요하지 않다. Rous 육종 바이러스에서, 예를 들어, src 유전자는 c-Src의 C-말단 18개 아미노산을 제거하는 결실을 겪었으며; 결과적으로, v-Src 키나제는 구성적으로 활성이다. 비정상적인 Src 종양단백질에 의해 표적 단백질이 인산화되면 많은 유형의 세포가 비정상적으로 증식하게 된다. 이 때문에, 이러한 비정상 또는 돌연변이 Src 종양단백질은 각각, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자를 구성한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태 중 한 실시형태에서, 따라서 더 많은 세포 성장이 유익한 경우, 예를 들어 상처 치유, 뇌졸중, 심부전, 근육 및 뼈 재생, 연골 재생, 장기 이식, 줄기 세포 성장 유도와 같은 적응증에서 손상된 조직의 재생과 관련된 적응증에서 질환의 임의의 상태가 해결될 수 있다. 보다 바람직하게는, 이러한 목적으로 사용되는 재조합 핵산 작제물의 이펙터 분자는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태 중 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 보다 구체적으로 고차형인 돌연변이 이펙터 분자이다. 고차형인 이러한 돌연변이 이펙터 분자는 세포의 과도한 증식에 의한 발암성 형질전환을 방지하고 암, 죽상동맥경화증, 혈관 기형, 류마티스 관절염, 건선, 간 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 경피증 및 간경화를 포함한 통제되지 않는 증식과 관련된 여러 질환의 유도를 방지하기 위해 본 발명의 재조합 핵산 작제물에 의해 일시적으로 발현된다는 것이 당업자에 의해 인식되고 인정될 것이다. 다른 한편으로, 고차형인 이러한 돌연변이 이펙터 분자는 임의의 재생 치료에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 재생 치료는 심부전, 혈관 질환, 뇌졸중, 섬유증을 포함하는 폐 질환, 관절염, 화상, 상처 치유 및 피부 장애, 크론병, 소아 신경 질환, 척수 손상, 알츠하이머, 파킨슨병, 노인의 노쇠함 치료를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 재조합 핵산 작제물에 함유된 이러한 종류의 돌연변이 이펙터 분자에 의해 치료될 수 있는 기타 병태 및 질환은 조직 손상 후 증가된 재생 잠재력이 잠재적인 적용 분야인 임의의 질환을 포함한다. 인간은 손상에 대한 반응으로 발생하는 회복 재생 능력이 제한적이다. 인간에서 가장 많이 연구된 재생 반응 중 하나는 간 손상 후 간의 비대이다. 심장 근육세포 재생은 정상적인 성인에서 발생하며, 경색과 같은 급성 심장 손상 후 성인에서 더 높은 비율로 발생하는 것으로 밝혀졌다. 경색 후 성인 심근에서도 증식은 손상 부위 주변 근세포의 약 1%에서만 발견되며, 이는 심장 근육의 기능을 회복시키기에 충분하지 않다. 그러나, 이것은 심근 세포의 재생, 결과적으로 심근의 재생이 유도될 수 있음을 의미하기 때문에 재생 의학의 중요한 표적이다. 염증이나 심장병과 같이 면역계와 관련된 조직에 만성 또는 급성 손상이 있는 경우, 신체는 스스로 복구할 수 있는 능력을 잃는다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태의 바람직한 실시형태에서, 돌연변이 이펙터 분자는 PLCG2의 기능적 고차형 돌연변이인, 포스포리파제 C-감마(PLCG2)이다. 바람직한 돌연변이 PLCG2는 PLCG2 P522R이다(예를 들어, 문헌[Magno L et al., Alzheimers Res Ther. 2019 Feb 2;11(1):16] 참조). 이펙터 분자로서 이러한 돌연변이 PLCG2 및 PLCG2 P22R을 포함하는 본 발명의 재조합 핵산 작제물은 특히, 알츠하이머 병의 치료에 유용하다(Magno L et al., 상동).
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11 및 제12 양태 중 한 실시형태에서, 이펙터 분자는 돌연변이 인자 IX, 보다 구체적으로 고차형인 돌연변이 인자 IX이다(문헌[VandenDriessche T and Chual MK; Molecular Therapy, Vol. 26, No. 1, January 2018, p. 18 ff]). 보다 바람직하게는, 돌연변이 이펙터 분자는 인자 IX R338L)이다. 이펙터 분자로서 이러한 돌연변이 인자 IX 및 인자 IX R338L을 포함하는 본 발명의 재조합 핵산 작제물은 특히, 혈우병의 치료에 유용하다(VandenDriessche T and Chual MK; 상동).
각각의 및 임의의 양태에 따른 재조합 핵산 작제물의 바람직한 실시형태에서, 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 재조합 핵산 작제물은 mRNA이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, MCP-1을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, MCP-1을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, RPL12s.c.를 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 24의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, RPL12s.c.를 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 25의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-2를 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 26의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-2를 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 29의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, HSP70을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 38 또는 40의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, HSP70을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 39 또는 43의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, H3.3.을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 44의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, H3.3.을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 45의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 갈렉틴-9(LHALS9)을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 46의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 갈렉틴-9(LHALS9)을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 47의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, IL-6을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 30의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, IL-6을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 33의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, vWF를 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 34의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, vWF를 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-1을 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 83의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-1을 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 88의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-4를 암호화하는 유전자의 5' UTR은 서열번호 89의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, Ang-4를 암호화하는 유전자의 3' UTR은 서열번호 94의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 작제물 PAN57의 5' UTR은 서열번호 120의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 작제물 PAN57의 3' UTR은 서열번호 121의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 본원에 개시된 각각의 및 임의의 특정 작제물에서 실현되는 5' UTR과 3' UTR의 다양한 조합은 임의의 다른 구성요소와 상관없이, 특히 본 발명의 재조합 핵산 작제물에 함유된 임의의 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역과 상관없이, 재조합 핵산 작제물에서 실현될 수 있는 5' UTR과 3' UTR의 조합이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에서, 그리고 본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 내인성 유전자는 본원에 기재된 임의의 세포에 함유된 유전자이다. 이에 따라, 5' UTR 및 3' UTR이 상이한 내인성 유전자로부터 유래된, 재조합 핵산 작제물은 세포의 제1 유전자로부터의 5' UTR 및 세포의 제2 유전자로부터의 3' UTR을 포함하며, 예를 들어 5' UTR은 MCP-1 또는 Ang-2를 암호화하는 유전자로부터 유래되고, 3' UTR은 vWF를 암호화하는 유전자로부터 유래된다. 상기 세포는 동일한 세포 또는 상이한 세포일 수 있고/있거나 상기 세포는 동일한 종류의 세포 또는 상이한 종류의 세포일 수 있다. 바람직하게는, 세포는 인간 기원이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 각각의 및 임의의 양태의 실시형태에 따른 재조합 핵산 작제물의 바람직한 실시형태에서, 재조합 핵산 작제물은 재조합 핵산 분자이다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 각각의 및 임의의 양태에 의해 정의된 본 발명 내에서, 재조합 핵산 분자를 형성하는 뉴클레오타이드가 변형될 수 있다. 적합한 변형은 코돈이 동일한 아미노산을 암호화하지만 핵산의 야생형 버전에서 발견되는 코돈보다 더 안정하도록 코돈의 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변경을 포함한다. 예를 들어, RNA의 안정성과 더 많은 수의 시티딘(C') 및/또는 우리딘(U') 잔기 사이의 역 관계가 입증되었으며, C와 U 잔기가 없는 RNA는 대부분의 RNase에 안정적인 것으로 밝혀졌다(문헌[Heidenreich, et al. J Biol Chem 269, 2131-8(1994)]). 일부 실시형태에서, mRNA 서열에서 C 및/또는 U 잔기의 수가 감소된다. 또 다른 실시형태에서, C 및/또는 U 잔기의 수는 특정 아미노산을 암호화하는 하나의 코돈을 동일하거나 관련된 아미노산을 암호화하는 또 다른 코돈으로 치환함으로써 감소된다. 본 발명의 mRNA 핵산에 대한 고려된 변형은 또한 슈도우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 5-메톡시우리딘 및 5'-메틸시티딘의 혼입을 포함한다. 이러한 변형된 뉴클레오타이드를 재조합 핵산 작제물, 바람직하게는 본 발명의 mRNA에 혼입함으로써 생체 내 면역원성을 감소시킬 뿐만 아니라 안정성 및 번역 능력을 향상시킬 수 있다. (예를 들어, 문헌[Kariko, K., et al., Molecular Therapy 16(11): 1833-1840(2008)] 참조). 특히 재조합 핵산 작제물의 개별 뉴클레오타이드 수준에서 본 발명의 재조합 핵산 작제물에 대한 치환 및 변형은 당업자에게 용이하게 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다.
서열에서 C 및 U 잔기의 수를 감소시키는 데 대한 제약은 비번역 영역에 비해 mRNA의 암호화 영역 내에서 더 클 가능성이 높다(즉, 원하는 아미노산 서열을 암호화하는 메시지의 능력을 여전히 유지하면서 메시지에 존재하는 모든 C 잔기 및 U 잔기를 제거하는 것이 가능하지 않을 것이다.). 그러나 유전 암호의 축퇴성(degeneracy)은 동일한 암호화 능력을 유지하면서 서열에 존재하는 C 및/또는 U 잔기의 수를 감소시킬 수 있는 기회를 제시한다(즉, 어떤 아미노산이 코돈에 의해 암호화되는지에 따라, RNA 서열의 변형을 위한 몇 가지 다른 가능성이 있을 수 있음). 예를 들어, Gly의 코돈은 GGU 또는 GGC 대신 GGA 또는 GGG로 변경될 수 있다.
용어 변형은 또한 예를 들어 비-뉴클레오타이드 연결 또는 변형된 뉴클레오타이드를 본 발명의 핵산 서열에 통합하는 것을 포함한다(예를 들어, 기능적 단백질 또는 효소를 암호화하는 mRNA 분자의 3' 말단 및 5' 말단 중 하나 또는 둘 모두에 대한 변형). 이러한 변형에는 핵산 서열에 염기의 추가(예를 들어, 폴리 A 테일 또는 더 긴 폴리 A 테일 포함), 3' UTR 또는 5' UTR의 변경, 핵산을 제제(예를 들어, 단백질 또는 상보적 핵산 분자)와 복합화하는 것, 및 (예를 들어, 이차 구조를 형성하는) 핵산 분자의 구조를 변화시키는 요소의 포함이 포함된다.
제8 양태에 따른 전달 비히클은 바람직하게는 본 발명에 따른 재조합 핵산 작제물과 조합하여 전체 양이온성-지질-핵산 입자(cLNP)를 생성하는 하나 이상의 적합한 지질(예를 들어, 리포솜)의 조성물을 기반으로 한다. 이러한 cLNP는 핵산, 특히 mRNA를 포유동물 혈관계의 내피 세포로 기능적으로 전달하는 데 사용할 수 있다.
양쪽이온성 인지질, 콜레스테롤 및 PEG화 지질과 같은 다른 지질 성분과 조합된 양이온성 지질과의, 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 핵산의 복합체화에 의해 형성된 지질-핵산 나노입자(LNP)는 이미 혈장에서 RNA의 분해를 차단하고 RNA의 기능적 세포 흡수를 촉진하는 데 사용되었다.
그러나, 치료 맥락에서, 특히 비경구 치료 용도의 관점에서, 제타-전위를 특징으로 하는 지질-핵산 나노입자의 전체 전하가 나노입자의 기관 분포를 지시하는 데 필수적이다. 당업자는 전체적으로 중성으로 하전된 LNP가 거의 독점적으로 세망내피계의 기관, 특히 간 및 비장에 의해 흡수된다는 것을 이해할 것이다. 다른 한편으로, 전체적으로 양으로 하전된 지질 나노입자가 포유동물 혈관구조의 세포 내로 약제학적 페이로드를 기능적으로 전달하는데 특히 유용하다는 것도 당업자에게 알려져 있다.
당업자는 또한 유리 핵산, 특히 mRNA가 정맥내로 적용되는 경우 면역 자극성이 있음을 인식할 것이다.
따라서, 비경구 치료 적용의 관점에서, 바람직하지 않은 면역원성 부반응을 방지하기 위해 지질 나노입자 내부의 핵산의 완벽하고 안정적인 복합체화가 필수적일 것이다. 또한, 지질-핵산 나노입자의 크기가 입자의 세망내피 청소를 억제하는데 결정적인 역할을 한다는 것도 당업자에게 알려져 있다.
엇갈린 헤링본 마이크로믹서(SHM: staggered herringbone micromixer) 장치를 기반으로 하는 미세유체 혼합 공정을 사용하여 매우 강력한 한계 크기의 siRNA LNP(약 30 nm 평균 입자 크기)를 제조할 수 있다는 것이 최근에 설명되었다(문헌[Belliveau et al.; Molecular Therapy-Nucleic Acids (2012) 1(8)]).
나노리터 규모의 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 핵산과 지질의 밀리초 혼합으로 인해, 생성된 입자는 조밀한 고체 입자 코어 내부에 핵산이 매우 촘촘하게 패키징된 것을 특징으로 한다. 반대로, 당업자는 T-형 커넥터를 사용하는 거대유체 혼합 공정이 일반적으로 더 불균질한 다중층 형태를 갖는 더 큰 나노입자를 생성한다는 것을 이해할 것이다.
한 실시형태에서, 본 발명은 상기 본 발명의 재조합 핵산 작제물, 특히 mRNA를 포유동물 혈관계의 세포, 특히 폐 혈관계의 내피 세포 내로 기능적 전달하기 위해 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 핵산을 포함하는 신규한 양으로 하전된 지질-핵산 나노입자를 제공한다.
이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 다양한 양태들의 한 실시형태에서, β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드, L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드, DOTAP(N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 메틸-클로라이드), DOTMA(1,2-디-O-옥타데세닐-3-트리메틸암모늄 프로판(염화물 염)) 또는 DC-콜레스테롤을 포함하는 군으로부터 선택된 양이온성 지질은 중성 지질과 결합되고, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 변형을 갖는 지질 성분을 추가로 보호한다. 중성 지질은 디피타노일-PE(1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민), DOPE(1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민), DLPE(1,2-라우로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민), DMPE, POPE, DSPE 또는, 콜레스테롤 및 스티그마스테롤을 포함하는 군으로부터 선택되는 비하전 스테롤 지질을 포함하는 군으로부터 선택되는 양쪽이온성 인지질일 수 있다. PEG화된 지질 성분은 메톡시PEG-DSPE, 메톡시PEG-DLG, 메톡시PEG-DMG, 메톡시PEG-DPG, 메톡시PEG-DSG, 메톡시PEG-c-DMA, 메톡시PEG-C8-세라마이드, 메톡시PEG-C16-세라마이드를 포함하는 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, PEG-쇄의 사슬 길이는 750 Da 내지 5000 Da 범위, 바람직하게는 1500 Da 내지 3000 Da 범위의 분자량에 해당한다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 지질 혼합물 중 지질의 몰비율은 20~80 mol% 양이온성 지질, 10~70 mol% 중성 지질 및 1~10 mol% PEG화된 지질의 범위, 바람직하게는 35~65 mol% 양이온성 지질, 35~65 mol% 중성 지질 및 1~5 mol% PEG화된 지질의 범위이다(전체 지질 함량은 100%로 설정됨).
바람직한 실시형태에서, 양이온성 지질은 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 또는 L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드이고, 중성 지질은 인지질 디피타노일-PE이고, PEG화된 지질은 메톡시PEG2000-DSPE이다. 몰비율은 50 mol% 양이온성 지질, 49 mol% 디피타노일-PE 및 1 mol% mPEG2000-DSPE(1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000](나트륨 염))이다.
또 다른 실시형태에서, 상기 언급된 지질의 혼합물은 에탄올, 아세톤, 1-부탄올, 2-부탄올, tert.-부탄올, 3-메틸-1-부탄올, 2-메틸-1-프로판올, 1-프로판올, 2-프로판올, 디메틸설폭사이드를 포함하는 군으로부터, 바람직하게는 에탄올, tert.-부탄올 및 1-부탄올을 포함하는 군으로부터 선택되는 수 혼화성 용매에 용해된다.
용해된 지질 혼합물은 후속적으로 수성 용매에서 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 핵산의 용해로 빠르게 혼합되어, 지질-핵산 나노입자(LNP)가 형성된다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 혼합은 미세유체 혼합 장치를 사용하여, 특히 엇갈린 헤링본형 혼합 챔버, 예를 들어 NanoAssemblr™(Precision NanoSystems Inc.; Vancouver, Canada) 장치를 사용하여 수행된다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 핵산 핵산에 대한 총 지질의 질량비는 5 내지 60의 범위, 바람직하게는 15 내지 40의 범위이고, 핵산 수용액 대 유기 총 지질 용액의 부피 혼합비는 1:1 내지 6:1 범위, 바람직하게는 2:1 내지 4:1 범위이다. 용액의 혼합 유속은 5 ml/분 내지 25 ml/분의 범위, 바람직하게는 10 ml/분 내지 20 ml/분의 범위이다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 생성된 혼합물의 유기 용매는 투석에 의해 또는 한외여과막을 사용한 접선 유동 여과에 의해 혼합 단계 후에 제거되며, 이에 의해 한외여과막은 중공사막 또는 평면-스크린 막일 수 있다. 한외여과막의 공극 크기는 1500 Da 내지 500.000 Da 범위, 바람직하게는 1500 Da 내지 100.000 Da 범위, 더욱 더 바람직하게는 1500 Da 내지 30.000 Da 범위의 분자량 컷오프에 해당한다. 접선 유동 여과 단계 내에서 LNP를 원하는 농도로 농축하는 것도 가능하다.
생성된 LNP의 평균 입자 크기는 동적 광산란(DLS) 기술을 사용하여 측정될 수 있으며, 바람직하게는 15 nm 내지 400 nm 범위, 보다 바람직하게는 25 nm 내지 200 nm 범위, 더욱 더 바람직하게는 입자는 25 nm 내지 100 nm 범위의 크기를 갖는다. LNP의 전체 입자 전하는 포지티브이고 입자의 제타-전위는 바람직하게는 +5 mV 내지 +60 mV 범위, 보다 바람직하게는 +25 mV 내지 +60 mV 범위이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 전달 비히클은 리포솜 전달 비히클, 예를 들어, 지질 나노입자 또는 리피도이드 나노입자이다. 한 실시형태에서, 전달 비히클은 본 발명의 재조합 핵산 작제물의 표적 세포로의 전달을 최적화하도록 선택 및/또는 제조될 수 있다. 예를 들어, 표적 세포가 내피 세포인 경우, 전달 비히클의 특성(예를 들어, 크기, 전하 및/또는 pH)은 이러한 전달 비히클을 표적 세포에 효과적으로 전달하고, 면역 제거를 감소시키고/시키거나 표적 세포 내 보유를 촉진하도록 최적화될 수 있다. 대안적으로, 표적 세포가 중추 신경계에 있는 경우(예를 들어, 신경퇴행성 질환의 치료를 위해 투여된 본 발명의 재조합 핵산 작제물과 같은 mRNA가 뇌 또는 척추 조직을 특이적으로 표적화할 수 있음), 전달 비히클의 선택 및 제조는 반드시 혈뇌 장벽의 침투 및 유지 및/또는 이러한 전달 비히클을 표적 세포에 직접 전달하는 대체 수단의 사용을 고려한다. 한 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 외인성 mRNA의 전달을 용이하게 하는 제제(예를 들어, 혈뇌 장벽의 투과성을 파괴하거나 개선하여 외인성 mRNA의 표적 세포로의 전달을 향상시키는 제제)와 조합될 수 있다.
리포솜(예를 들어, 리포솜 지질 나노입자)은 생체 내 진단 또는 치료 화합물의 전달 비히클로서의 사용에 특히 적합한 것으로 알려져 있으며(문헌[Lasic, Trends Biotechnol, 16: 307-321, 1998; Drummond et al, Pharmacol. Rev., 51: 691-743, 1999]), 일반적으로 하나 이상의 이중층의 막에 의해 외부 매질로부터 격리된 내부 물 공간을 갖는 미세한 소포를 특징으로 한다. 리포솜의 이중층 막은 전형적으로 공간적으로 분리된 친수성 및 소수성 도메인을 포함하는 합성 또는 천연 기원의 지질과 같은 양친매성 분자에 의해 형성된다(문헌[Lasic, Trends Biotechnol, 16: 307-321, 1998]). 리포솜의 이중층 막은 또한 양친매성 중합체 및 계면활성제(예를 들어, 폴리머로솜, 니오솜 등)에 의해 형성될 수 있다. 이러한 리포솜은 또한 본 발명의 재조합 핵산 작제물을 포함하는 본 발명의 전달 비히클에서 지질 모이어티로서 사용될 수 있다.
본 발명의 특정 양태와 관련하여 개시된 바와 같은 재조합 핵산 작제물과 관련된 임의의 특징은 동등하게 이의 임의의 실시형태를 포함하는, 본 발명의 각각의 및 임의의 다른 양태의 재조합 핵산 작제물의 실시형태임을 인지해야 한다. 보다 구체적으로, 제1 양태와 관련하여 개시된 재조합 핵산 작제물의 임의의 실시형태는 또한 제2, 제3 및 제4 양태의 재조합 핵산 작제물의 실시형태이고; 유사하게, 제2, 제3 및 제4 양태와 관련하여 개시된 재조합 핵산 작제물의 임의의 실시형태는 또한 제1 양태의 재조합 핵산 작제물의 실시형태이다.
일반적으로 암호화 영역에 인접하는 UTR은 암호화 영역을 간섭하지 않으며, 보다 구체적으로 UTR은 원칙적으로 암호화 영역의 발현을 간섭하지 않으면서 교환될 수 있다는 것이 알려져 있다(예를 들어 WO 2017/100551 A1; 문헌[Trepotec et al., Tissue Engineering Part A, Vol 25 No. 1-2 p. 69-79(Jan 2019)] 참조).
임의의 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 본 발명자들은 놀랍게도 본 발명의 재조합 핵산 분자, 및 보다 구체적으로는 기능 획득 돌연변이 또는 고차형 돌연변이를 갖는 돌연변이 이펙터 분자가 이펙터 분자의 단백질 발현 수준을 증가시키고, 이펙터 분자의 발현 지속시간을 증가시키고/시키거나 이펙터 분자의 기능적 활성을 증가시키기에 적합한 것으로 밝혀졌다. 돌연변이 이펙터 분자의 사용은 비-돌연변이 이펙터 분자와 비교하여 더 나은 치료 효능을 가져온다. 바람직하게, 기능 획득 돌연변이는 비-돌연변이 이펙터 분자의 산발적인 체세포 돌연변이로부터, 또는 원하는 표현형을 유발하는 비-돌연변이 이펙터 분자의 유전된 생식계열 돌연변이로부터 일상적인 측정에 의해 유도될 수 있다. 바람직하게는, 돌연변이 이펙터 분자는 인간 유전 연구에 의해 검증된 것이다.
본 발명의 재조합 핵산 작제물로부터 이펙터 분자의 일시적인, 즉 시기적절한 제한된 발현으로 인해, 돌연변이 이펙터 분자내 이펙터 분자가 특히 잠재적으로 병원성을 가짐에도 불구하고, 병리학적 표현형이 유발되지 않을 것이다. 오히려, 일시적인 활성 증가는 더 나은 치료 반응을 제공하고/하거나 더 적은 빈도의 투여를 필요로 할 것이다.
본 발명은 본 발명의 추가 특징, 실시형태 및 이점이 취해질 수 있는 다음의 도면 및 실시예 형태에 의해 추가로 예시된다.
도 1은 통상적인 mRNA 분자 구조의 개략도이다.
도 2는 오픈 리딩 프레임이 나노-루시퍼라제, 즉 PAN02, PAN05, PAN07, PAN08, PAN09, PAN10, PAN11, PAN12, 13, PAN28, PAN29, PAN30, PAN31, PAN32, PAN33, PAN34, PAN35, PAN36, PAN37, PAN38, PAN39, PAN40, PAN41, PAN42, PAN43, PAN44, PAN45, PAN46, PAN47, PAN48 및 PAN49 중 하나인 암호화 서열을 갖는 mRNA 작제물의 선택된 예의 개략도이다.
도 3은 작제물 PAN11을 함유하는 플라스미드 pcDNA3.1(-)의 제한 맵이다.
도 4는 도 3의 플라스미드 pdDNA3.1(-)의 제한 분해 맵이다.
도 5는 BamHI 제한 시 작제물 PAN28("28"), PAN13("13"), PAN12("12"), PAN11("11"), PAN10("10"), PAN09("09"), PAN08("08"), PAN07("07") 및 PAN05("05")를 함유하는 pcDNA3.1(-) 플라스미드의 비-선형화(절단되지 않은, 초나선형, 오른쪽 레인) 및 선형화 생성물(왼쪽 레인)을 나타내는 EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔이다.
도 6은 120 nt의 폴리-A-테일 첨가에 대한 폴리-A-테일링 PCR의 PCR 생성물을 보여주는, EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔을 나타낸다.
도 7a는 표시된 유전자의 5' UTR에 사용된 5' 프라이머를 나타내며; 제1 컬럼은 그러한 프라이머가 사용되는 작제물과 관련하여 나타내고, 제2 컬럼은 5' UTR의 기원을 나타내며, 제3 컬럼은 프라이머가 뉴클레오타이드 서열에 혼성화하는 위치를 나타낸다.
도 7b는 표시된 유전자의 3' UTR에 사용된 3' 프라이머를 나타내며; 제1 컬럼은 그러한 프라이머가 사용되는 작제물과 관련하여 나타내고, 제2 컬럼은 3' UTR의 기원을 나타내며, 제3 컬럼은 프라이머가 뉴클레오타이드 서열에 혼성화하는 위치를 나타낸다.
도 8은 다양한 작제물의 시험관 내 mRNA 전사체를 보여주는, EtBr 염색 후 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다.
도 9는 생산하는 녹색 형광 단백질의 상업적으로 강화된 mRNA 버전(TriLINK Biotechnology)의 0.5 μg(왼쪽) 및 0.1 μg(오른쪽)으로 형질감염된 HeLa 세포의 형질감염 24시간 후 형광 현미경 사진이다.
도 10은 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다.
도 11은 형질감염 후 6시간 후(왼쪽 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPMEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다.
도 12는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HUVEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다.
도 13은 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HUVEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HUVEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다.
도 14는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HeLa 세포에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다.
도 15a는 호모 사피엔스 C-C 모티프 케모카인 리간드 2(CCL2)(GenBank 항목 NM_002982.3)로도 지칭되는 인간 MCP-1 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 15b는 인간 MCP-1의 신호 펩타이드 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 15c는 인간 MCP-1 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 16a는 RPL12s.c.(GenBank 항목 XM_021987044.1)로도 지칭되는 스피나시아 올레라세아(Spinacia oleracea)의 50S 리보솜 단백질 L12, 엽록체(LOC110782793)의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 16b는 스피나시아 올레라세아(Spinacia oleracea)의 50S 리보솜 단백질 L12, 엽록체(LOC110782793)의 mRNA로부터의 3' UTR을 나타낸다.
도 17a는 ANGPT2 또는 Ang-2, 전사체 변이체 1(GenBank 항목 NM_001147.2)로도 지칭되는 인간 안지오포이에틴 2의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 17b는 인간 Ang-2의 mRNA의 신호 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 17c는 인간 Ang-2의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 18a는 인간 인터루킨 6(IL-6), 전사체 변이체 1(GenBank 항목 NM_000600.4)의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 18b는 인간 IL-6의 mRNA의 신호 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 18c는 인간 IL-6 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 19a는 인간 폰 빌레브란트 인자(vWF)(GenBank 항목 NM_000552.4)의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 19b는 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 mRNA의 신호 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 19c는 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 20a는 HSPA1A(GenBank 항목 NM_005345.5)로도 지칭되는 인간 열 충격 단백질 패밀리 A(Hsp70) 구성원 1A의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 20b는 인간 HSPA1A의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 21a는 HSPA5(GenBank 항목 NM_005347.4)로도 지칭되는 인간 열 충격 단백질 패밀리 A(Hsp70) 구성원 5의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 21b는 인간 HSPA5의 mRNA의 신호 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 21b는 인간 HSPA5의 mRNA의 신호 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 21c는 인간 HSPA1A의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 22a는 H3.3,(GenBank 항목 NM_002107.4)으로도 지칭되는 인간 H3 히스톤 패밀리 구성원 3A(H3F3A)의 mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 22b는 인간 H3.3의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 23a는 인간 갈렉틴-9(LGALS9), 전사체 변이체 1(GenBank 항목 NM_009587.2) mRNA의 5' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 23b는 인간 갈렉틴-9의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 24는 재조합 핵산 작제물 PAN01의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 25는 재조합 핵산 작제물 PAN03의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 26은 재조합 핵산 작제물 PAN04의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 27은 재조합 핵산 작제물 PAN06의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 28은 재조합 핵산 작제물 PAN36의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 29는 재조합 핵산 작제물 PAN37의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 30은 재조합 핵산 작제물 PAN02의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 31은 재조합 핵산 작제물 PAN05의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 32는 재조합 핵산 작제물 PAN07의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 33은 재조합 핵산 작제물 PAN08의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 34는 재조합 핵산 작제물 PAN09의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 35는 재조합 핵산 작제물 PAN10의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 36은 재조합 핵산 작제물 PAN11의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 37은 재조합 핵산 작제물 PAN12의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 38은 재조합 핵산 작제물 PAN13의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 39는 재조합 핵산 작제물 PAN28의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 40은 재조합 핵산 작제물 PAN29의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 41은 재조합 핵산 작제물 PAN30의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 42는 재조합 핵산 작제물 PAN31의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 43은 재조합 핵산 작제물 PAN32의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 44는 재조합 핵산 작제물 PAN33의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 45는 재조합 핵산 작제물 PAN34의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 46은 재조합 핵산 작제물 PAN35의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 47은 재조합 핵산 작제물 PAN38의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 48은 재조합 핵산 작제물 PAN39의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 49는 재조합 핵산 작제물 PAN40의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 50은 재조합 핵산 작제물 PAN41의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 51은 재조합 핵산 작제물 PAN42의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 52는 재조합 핵산 작제물 PAN43의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 53은 재조합 핵산 작제물 PAN44의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 54는 재조합 핵산 작제물 PAN45의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 55는 재조합 핵산 작제물 PAN46의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 56은 재조합 핵산 작제물 PAN47의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 57은 재조합 핵산 작제물 PAN48의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 58은 재조합 핵산 작제물 PAN49의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 59a는 ANGPT1 또는 Ang-1로도 지칭되는, 인간 안지오포이에틴 1, 전사체 변이체 1, GenBank 항목 NM_001146.4의 mRNA의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 59b는 인간 Ang-1의 mRNA의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 59c는 인간 Ang-1의 mRNA의 성숙한 펩타이드의 암호화 서열(CDS)을 나타낸다.
도 59d는 인간 Ang-1의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 60a는 ANGPT4 또는 Ang-4로도 지칭되는, 인간 안지오포이에틴 4, 전사체 변이체 1, GenBank 항목 NM_015985.3의 mRNA의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 60b는 인간 Ang-4의 mRNA의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 둘 다를 나타낸다.
도 60c는 인간 Ang-4의 mRNA의 성숙한 펩타이드의 암호화 서열(CDS)을 나타낸다.
도 60d는 인간 Ang-4의 mRNA의 3' UTR 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 61은 합성 작제물인 COMP-Ang1을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 62는 합성 작제물인 hCOMP-Ang1을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 63은 합성 작제물인 CMP-Ang1을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 64는 합성 작제물인 COMP-Ang2을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 65는 Tie-2로도 지칭되는, 인간 TEK 수용체 티로신 키나제(TEK), 전사체 변이체 1, GenBank 항목의 mRNA의 암호화 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 66은 R849W 돌연변이를 갖는 TIE*로도 지칭되는, 인간 돌연변이 TEK 수용체 티로신 키나제(TEK)의 mRNA의 암호화 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 67은 재조합 핵산 작제물 PAN50의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 68은 재조합 핵산 작제물 PAN51의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 69는 재조합 핵산 작제물 PAN52의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 70은 재조합 핵산 작제물 PAN53의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 71a는 다양한 작제물의 테일-PCR 생성물을 보여주는 EtBr 염색 후 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다.
도 71b는 다양한 작제물의 시험관 내 mRNA 전사체를 보여주는 EtBr 염색 후 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다.
도 72는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 73은 형질감염 후 6시간 후(왼쪽 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPMEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 74a(왼쪽)는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 6시간 후(중간 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC(GFP mRNA, PAN12 mRNA 및 PAN12* mRNA로 형질감염됨)에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. PAN12*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 74b(오른쪽)는 형질감염 후 6시간 후(왼쪽 컬럼) 및 24시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC(GFP mRNA, PAN12 mRNA 및 PAN12* mRNA로 형질감염됨)에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. PAN12*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 75는 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 76은 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPMEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 77a(왼쪽)는 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC(GFP mRNA, PAN12 mRNA 및 PAN12* mRNA로 형질감염됨)에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. PAN12*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 77b(오른쪽)는 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC(GFP mRNA, PAN12 mRNA 및 PAN12* mRNA로 형질감염됨)에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. PAN12*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 78은 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPAEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 79는 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPAEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPAEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 80은 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HeLa 세포에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 81은 형질감염 후 1시간, 2시간, 4시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HeLA 세포에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HeLA 세포의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다.
도 82는 형질감염 후 2시간, 4시간, 6시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 작제물 PAN12*, PAN28*, PAN29*, PAN34*, PAN50* 및 PAN51*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 83은 형질감염 후 2시간, 4시간, 6시간 및 24시간 후(왼쪽에서 오른쪽으로, 1시간 결과가 가장 왼쪽에 표시되고 24시간 결과가 가장 오른쪽에 표시됨), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPMEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 작제물 PAN12*, PAN28*, PAN29*, PAN34*, PAN50* 및 PAN51*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체된다.
도 84는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 4시간 후(중간 컬럼) 및 6시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 작제물 PAN02*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체되고; 작제물 PAN51 w/o CAP에서 mRNA 서열은 작제물 PAN51 중 하나이지만, 임의의 5'-캡핑 구조가 없다.
도 85는 형질감염 후 2시간 후(왼쪽 컬럼), 4시간 후(중간 컬럼) 및 6시간 후(오른쪽 컬럼), 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서, 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, HPMEC의 전체 세포 용해물에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 작제물 PAN02*에서는 100%의 우리딘과 100% 시티딘 뉴클레오타이드가 각각 슈도-우리딘과 5-메틸-시티딘으로 대체되고; 작제물 PAN51 w/o CAP에서 mRNA 서열은 작제물 PAN51 중 하나이지만, 임의의 5'-캡핑 구조가 없다.
도 86은 재조합 핵산 작제물 PAN54의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 87은 재조합 핵산 작제물 PAN55의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 88은 재조합 핵산 작제물 PAN56의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 89는 재조합 핵산 작제물 PAN57의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 90은 재조합 핵산 작제물 PAN58의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 91은 재조합 핵산 작제물 PAN59의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 92는 4시간 후(왼쪽 컬럼) 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HPMEC에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 추가 4-시간 루시퍼라제 활성 값은 세포를 세척하고 새로운 배지로 세포를 보충한 후, 형질감염 후 24시간 후(중간 컬럼) 및 48시간 후(오른쪽 컬럼)에 평가된다.
도 93은 3시간 후(왼쪽 컬럼) 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HEK293 세포에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해, 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 나타내는 막대 다이어그램이다. 추가 3-시간 루시퍼라제 활성 값은 세포를 세척하고 새로운 배지로 세포를 보충한 후, 형질감염 후 24시간 후(오른쪽 컬럼)에 평가된다.
인간 배아 신장 293 세포주(HEK293)는 EMEM(EBSS) + 2 mM 글루타민 + 1% 비-필수 아미노산(NEAA) + 10% FCS 배양 배지에서 성장된다. 하위배양 루틴은 하위-합류 배양액(70~80%)을 1:2 내지 1:6으로 분할하는 것, 즉 0.25% 트립신 또는 트립신/EDTA; 5% CO2; 37℃을 사용하여 2~5×10,000세포/cm2에서 씨딩하는 것이다. mRNA 형질감염은 제조사 프로토콜에 따라 리포펙타민™ 메신저MAX™ 형질감염 시약(Invitrogen™)으로 수행된다.
도 94는 3시간 후(왼쪽 컬럼) 루시퍼라제가 이펙터 분자로 사용되는 HeLa 세포에서 표시된 재조합 핵산 작제물에 의해 배지에서 루시퍼라제의 RLU(상대 광 단위)로 표시된 루시퍼라제의 발현을 보여주는 막대 다이어그램이다. 추가 3-시간 루시퍼라제 활성 값은 세포를 세척하고 새로운 배지로 세포를 보충한 후, 형질감염 후 24시간 후(오른쪽 컬럼)에 평가된다.
도 95는 재조합 핵산 작제물 PAN60의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 96은 재조합 핵산 작제물 PAN61의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 97은 재조합 핵산 작제물 PAN66의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 98은 표시된 PAN mRNA 작제물로 형질감염된 HPMEC 세포로부터의 단백질 용해물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다. 세포를 1 μg의 mRNA로 형질감염시키고 6시간 후에 수확하였다. 전체 세포 용해물을 SDS-PAGE로 분리하고 항-Ang1 항체를 사용한 면역블롯으로 분석하였다. M, 마커; UT, 미처리 세포, rec. Ang1, 재조합 hAng1.
도 99는 시험관 내 전사 후 mRNA의 아가로스 겔을 나타낸다. 2 μg의 표시된 mRNA를 아가로스 겔 전기영동으로 분리하고, 에티듐 브로마이드 염색 및 UV 조명으로 시각화하였다.
도 100은 a) PAN57의 5'UTR; b) PAN57의 3'UTR; c) PAN57을 위한 5'PCR-프라이머; d) PAN57을 위한 3'PCR-프라이머; 및 e) PAN55, PAN56을 위한 5'PCR-프라이머의 서열을 나타낸다.
도 101은 재조합 핵산 작제물 PAN60, PAN61, PAN62, PAN63, PAN64 및 PAN65의 기본 구조 및 길이를 나타낸다.
도 102는 재조합 핵산 작제물 PAN66, PAN67, PAN68, 및 PAN69의 기본 구조 및 길이를 나타낸다.
도 103은 재조합 핵산 작제물 PAN77의 기본 구조, 길이 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 104는 재조합 핵산 작제물 PAN78의 기본 구조, 길이 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 105는 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN70의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 106은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN61의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 107은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN62의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 108은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN63의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 109는 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN64의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 110은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN65의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 111은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN67의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 112는 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN68의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 113은 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및, 뉴클레오타이드 서열 및 작제물 PAN69의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 114는 인간 야생형 Tie-2의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 115는 인간 야생형 PIK3CA의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 116은 인간 야생형 Akt1의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 117은 인간 야생형 mTOR의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 118은 인간 야생형 GNA11의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 119는 인간 야생형 GNAQ의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 120은 인간 야생형 KRAS의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 121은 인간 야생형 NRAS의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 122는 인간 야생형 IDH1의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다.
도 123은 폴리-A-테일링 PCR의 PCR 생성물을 보여주는 EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔을 나타낸다.
도 124 및 125는 Tie-2 mRNA 또는 Tie-2 돌연변이 mRNA로 형질감염된 Hela 세포로부터의 세포 용해물의 면역블롯 분석 결과를 나타낸다.
도 126은 판독으로서 전체 전장 Tie-2(Tie-2의 N-말단을 표적화하는 항-Tie-2 항체에 의해 검출됨), 자가인산화된 전장 Tie-2(항-포스포-Tie-2 항체 pY992 Tie-2에 의해 검출됨), 전체 Akt(항-Akt 항체에 의해 검출됨) 및 인산화된 Akt(항-포스포-Akt 항체 pS473Akt에 의해 검출됨)를 사용하여 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC) 내 Tie-2 경로 활성화 시 전장 야생형 Tie-2(작제물 PAN60) 또는 돌연변이 전장 Tie-2 작제물(작제물 PAN61, PAN62 및 PAN63)을 암호화하는 mRNA의 효과에 대한 면역블롯 분석 결과를 나타낸다.
도 127은 판독으로서 전체 전장 Tie-2(Tie-2의 N-말단을 표적화하는 항-Tie-2 항체에 의해 검출됨), 인산화된 전장 Tie-2(항-포스포-Tie-2 항체 pY992 Tie-2에 의해 검출됨) 전체 절단된 Tie-2(Tie-2의 C-말단을 표적화하는 항-Tie-2 항체에 의해 검출됨), 인산화된 절단된 Tie-2(항-포스포-Tie-2 항체 pY992 Tie-2에 의해 검출됨) 전체 Akt(항-Akt 항체에 의해 검출됨) 및 인산화된 Akt(항-포스포-Akt 항체 pS473Akt에 의해 검출됨)를 사용하여 Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC) 내 Tie-2 경로 활성화 시 Nluc, Ang1, 고차형 전장 Tie-2(작제물 PAN63), 및 이종성 N-말단 도메인(작제물 PAN77 및 작제물 PAN78)을 갖는 절단된 고차형 Tie-2 변이체를 암호화하는 mRNA의 시간 경과에 따른 효과의 면역블롯 분석 결과를 나타낸다. 전체 Akt 및 인산화된 Akt를 사용하여 다운스트림 Tie-2-경로 활성화를 평가하였다. Nluc(PAN29)를 암호화하는 mRNA를 관련 없는 대조군 단백질로 사용하는 반면, Ang1을 암호화하는 mRNA를 내인성 Tie-2-수용체 효능제의 발현을 위해, 그리고 내인성 Ang1 매개된 Tie-2-수용체 활성화를 평가하는데 사용하였다.
도 128은 Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC) 내에서 관련 없는 대조군으로서 Nluc(PAN50)를 암호화하는 mRNA 및 이종성 N-말단 도메인(작제물 PAN77 및 PAN78)을 갖는 절단된, 고차형 Tie-2 변이체의 용량-의존적 발현의 면역블롯 분석 결과를 나타낸다. N-말단-특이적 항체는 전장 전체 Tie-2의 양을 평가하는데 사용된 반면, C-말단-특이적 항체는 전체 절단된 Tie-2 변이체의 양을 평가하는데 사용되었다. 인산화된 절단된 Tie-2 변이체의 양은 pY992, pY1102 및 pS1119-특이적 항체를 사용하여 평가되었다. 동시에, 다운스트림 Tie-2-경로 활성화는 Akt-특이적(Akt) 및 인산화된-Akt-특이적(pS473Akt) 항체들을 사용하여 평가되었다.
도 129는 Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC) 내에서 관련 없는 대조군으로서 Nluc(PAN50)를 암호화하는 mRNA 및 이종성 N-말단 도메인(작제물 PAN77 및 PAN78)을 갖는 절단된, 고차형 Tie-2 변이체의 용량-의존적 발현의 면역블롯 분석 결과를 나타낸다. 다운스트림 Tie-2-경로 활성화는 Akt-특이적(Akt) 및 포스포-Akt-특이적(pS473Akt) 항체를 사용하여 평가되었다. 또한, FOXO1-특이적 항체는 전체 FOXO1의 양을 평가하는데 사용되고, 포스포-FOXO1-특이적 항체 pT24-FOXO1 및 pS256-FOXO1은 FOXO1-인산화 상태를 평가하는데 사용되었다.
도 130은 재조합 핵산 작제물 PAN 82의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 131은 재조합 핵산 작제물 PAN 83의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 132는 재조합 핵산 작제물 PAN 84의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 133은 재조합 핵산 작제물 PAN 85의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 134는 재조합 핵산 작제물 PAN 86의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 135는 재조합 핵산 작제물 PAN 87의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 136은 재조합 핵산 작제물 PAN 88의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 137은 Scr-키나제의 미리스틸화 신호를 위한 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 138은 GGH 링커에 대한 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 139는 PAN77 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 140은 GGISGGGGGI-링커의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 141은 PAN78 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 142는 PAN82 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 143은 PAN83 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 144는 PAN84 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 145는 PAN85 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 146은 PAN86 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 147은 PAN87 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 148은 PAN88 내 이펙터 분자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
도 1은 통상적인 mRNA 분자 구조의 개략도이다. 포유동물 mRNA를 포함하는 진핵생물은 캡 영역, 5' 비번역 영역(UTR), 최적의 번역 개시를 위한 컨센서스 Kozak 서열로 시작하는 오픈 리딩 프레임(ORF)을 갖고 분비 단백질의 경우 신호 펩타이드 리더 서열이 뒤따르는 암호화 서열(CDS), 3' UTR 및 3' 말단의 폴리 A-테일(>120 nt)로 구성된다.
도 2는 오픈 리딩 프레임이 나노-루시퍼라제 중 하나인 암호화 서열을 갖는 mRNA 작제물에 대해 선택된 예의 개략도이다. 본 발명 내에서 각각의 및 임의의 표시된 mRNA 작제물에 대해 나노-루시퍼라제에 대한 오픈 리딩 프레임을 갖는 서열을 포함하는 암호화 영역이 이펙터 분자를 암호화하는 서열을 포함하는 암호화 영역, 특히 본원에 개시된 이펙터 분자를 암호화하는 서열을 포함하는 암호화 영역에 의해 대체될 수 있으며; 그의 바람직한 실시형태에서, 이펙터 분자는 Ang1 또는 COMP-Ang1이다. 본 발명에 따르면, 재조합 핵산 작제물은 하기와 같이 설계된다:
재조합 핵산 작제물 PAN02는 5' 비-번역 영역으로서 Ang1의 5' UTR을 포함하고, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하며, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역을, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 Ang1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN05는 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN07은 5' 비-번역 영역으로서 갈렉틴-9의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN08은 5' 비-번역 영역으로서 Hsp70의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 HSP70의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN09는 5' 비-번역 영역으로서 H3.3의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 H3.3의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN10은 5' 비-번역 영역으로서 RPL12s.c.의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 RPL12s.c.의 3' UTR을 포함한다. 이러한 작제물은 인-프레임에서 나노-루시페라제에 대한 암호화 영역의 시작 코돈 앞에 있는 또 다른 시작 코돈을 추가로 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN11은 5' 비-번역 영역으로서 GADD34의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 GADD34의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN12는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN13은 5' 비-번역 영역으로서 EDN1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 EDN1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 EDN1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN28은 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN29는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN30은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 HSP70의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN31은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN32는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN33은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR을 포함하고, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열이 없고, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN34는 5' 비-번역 영역으로서 Hsp70의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN35는 5' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.(시금치 엽록체)의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN36은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN37은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 hCOMP-Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN38은 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN39는 5' 비-번역 영역으로서 Ang2*의 5' UTR(업스트림 ATG가 결실된 Ang2 5'-UTR), 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN40은 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 가우시아(Gaussia) 루시퍼라제의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN41은 5' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 번역 시작을 위한 추가 업스트림 ATG를 갖는 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 3' UTR을 포함한다. 이러한 작제물은 인-프레임에서 나노-루시페라제에 대한 암호화 영역의 시작 코돈 앞에 있는 또 다른 시작 코돈을 추가로 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN42는 5' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN43은 5' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 RPL12 s.c.의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN44는 5' 비-번역 영역으로서 Hsp70의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 Hsp70의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN45는 5' 비-번역 영역으로서 Hsp70m5의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN46은 5' 비-번역 영역으로서 E-셀렉틴의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN47은 5' 비-번역 영역으로서 ICAM1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN48은 5' 비-번역 영역으로서 IL-6의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 IL-6의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN49는 5' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함한다.
도 3은 본 발명의 예시적인 재조합 핵산 작제물의 발현을 위한 플라스미드에 대한 예시적인 예로서 사용된 플라스미드 pcDNA3.1(-)의 제한 맵을 나타내며, 여기서 그러한 예시적인 재조합 핵산 작제물은 작제물 PAN 11이고; 제한 부위 XhoI/HindIII가 도시된다.
도 4는 도 3의 pcDNA3.1-플라스미드를 발현하는 PAN11의 제한 소화 맵을 나타내며; 삽입물은 조작된 5' 및 3' UTR, 신호 서열 및 나노-루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역을 갖는 PAN11 서열을 나타낸다.
도 5는 작제물 PAN28("28"), PAN13("13"), PAN12("12"), PAN11("11"), PAN10("10"), PAN09("09"), PAN08("08"), PAN07("07") 및 PAN05("05")의 BamHI 제한 시 pcDNA3.1(-) 플라스미드의 비선형화(절단되지 않은, 초나선형, 오른쪽 레인) 및 선형화 생성물(왼쪽 레인)을 나타내는 EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔이다.
도 6은 상이한 재조합 핵산 작제물에 인접하는 120nt 길이의 폴리-T 3' 프라이머에 의한 120nt의 폴리-A 테일의 첨가에 대한 폴리-A 테일링 PCR의 PCR 생성물을 보여주는, EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔을 나타낸다. 맨 위에는 표시된 재조합 핵산 작제물에 대한 최적화된 PCR 조건이 있다. 예를 들어, Pan02의 경우 조건은 다음과 같다: 94℃에서 2분 동안 변성. 96℃에서 30초, 55℃에서 15초, 및 72℃에서 4분의 33회 사이클. 72℃에서 8분간 최종 연장.
도 8은 작제물 PAN28("28"), PAN13("13"), PAN12("12"), PAN11("11"), PAN10("10"), PAN09("09"), PAN08("08"), PAN07("07") 및 PAN05("05")의 시험관 내 전사된 mRNA를 보여주는 EtBr로 염색된 1% 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다. M: 높은 범위의 RiboRuler RNA 래더(ladder)를 갖는 레인이다. 본 도 8로부터, 전사된 mRNA가 온전하였으며, 보다 구체적으로 분해되지 않았음을 알 수 있다.
도 24는 재조합 핵산 작제물 PAN01의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. PAN1은 5' 비-번역 영역으로서 Ang1의 5' UTR을, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Ang1을 암호화하는 암호화 영역을, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 Ang1의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 한 실시형태이다.
도 25는 재조합 핵산 작제물 PAN03의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. PAN3은 5' 비-번역 영역으로서 Ang1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 COMP-Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 Ang1의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 한 실시형태이다.
도 26은 재조합 핵산 작제물 PAN04의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. PAN4는 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 한 실시형태이다.
도 27은 재조합 핵산 작제물 PAN06의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. PAN06은 5' 비-번역 영역으로서 Ang2의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 Ang2의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 COMP-Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 한 실시형태이다.
도 28은 재조합 핵산 작제물 PAN36의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. PAN36은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 한 실시형태이다.
도 67은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN50을 나타낸다.
도 68은 5' 비-번역 영역으로서 HSP70의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 IL-6의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노 루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN51을 나타낸다.
도 69는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN52를 나타낸다.
도 70은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR을, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 hCOMP-Ang1을 암호화하는 암호화 영역을, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN53을 나타낸다.
도 71a는 작제물 PAN35("35"), PA34("34"), PAN33("33"), PAN32("32"), PAN31("31"), PAN30("30"), PAN29("29") 및 PAN12("12")의 테일-PCR 생성물을 보여주는 EtBr로 염색된 1% 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다. M: 높은 범위의 RiboRuler RNA 래더를 갖는 레인이다. 본 도 71a로부터, 전사된 mRNA가 온전하였으며, 보다 구체적으로, 분해되지 않았음을 알 수 있다.
도 71b는 작제물 PAN35("35"), PA34("34"), PAN33("33"), PAN32("32"), PAN31("31"), PAN30("30"), PAN29("29") 및 PAN12("12")의 시험관 내 mRNA 전사체를 보여주는 EtBr로 염색된 1% 비-변성 아가로스 겔의 이미지이다. M: 높은 범위의 RiboRuler RNA 래더를 갖는 레인이다. 본 도 71b로부터, 전사된 mRNA가 온전하였으며, 보다 구체적으로, 분해되지 않았음을 알 수 있다.
도 86은 5' 비-번역 영역으로서 RPL12s.c.의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노-루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN54를 나타낸다.
도 87은 5' 비-번역 영역으로서 vWF의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노-루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN55를 나타낸다.
도 88은 5' 비-번역 영역으로서 vWF의 5' UTR을, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 vWF의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노-루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역을, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN56을 나타낸다.
도 89는 5' 비-번역 영역으로서 문헌[Jiang, Lei et al. (2018). Systemic messenger RNA as an etiological treatment for acute intermittent porphyria. Nature Medicine. 24, 1899-2909 (2018)]에 기재된 합성 핵산 서열, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노-루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 문헌[Jiang, Lei et al. (2018). Systemic messenger RNA as an etiological treatment for acute intermittent porphyria. Nature Medicine. 24; 1899-1909 (2018)]에 기재된 핵산 서열의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN57을 나타낸다. 5' 및 3' 서열은 밑줄이 그어져 있고, 볼드체로 표시되어 있다.
도 90은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 나노-루시퍼라제(NLuc)를 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN58을 나타낸다. 또한, PAN58은 시작 AUG의 6개 염기 업스트림에서 컨센서스 Kozak 서열(GCCACC)를 포함한다.
도 91은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로서 MCP-1의 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 CMP-Ang1을 암호화하는 암호화 영역, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN59를 나타낸다.
도 95는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 야생형(wt) Tie-2를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN60을 나타낸다.
도 96은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Tie-2 돌연변이 R849W를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN61을 나타낸다.
도 97은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서, GenBank에 따라 각각의 참조번호가 006218.4.인, 호모 사피엔스 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나제 촉매 서브유닛 알파(PIK3CA)인, 야생형 PIK3CA를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 폰 빌레브란트 인자(vWF)의 3' UTR을 포함하는 본 발명의 mRNA의 또 다른 실시형태인, 재조합 핵산 작제물 PAN66을 나타낸다.
도 101은 재조합 핵산 작제물 PAN60, PAN61, PAN62, PAN63, PAN64 및 PAN65의 기본 구조 및 길이를 나타낸다.
재조합 핵산 작제물 PAN60은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR을, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 Tie-2의 야생형을 암호화하는 암호화 영역을, 그리고 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN61은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2 Tie-2 R849W를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN62는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2 Tie-2 L914R을 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN63은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2 Tie-2 R849W L914F를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN64는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2 Tie-2 Y897F R915L을 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN65는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2 Tie-2 Y897F R915L T1105N T1106P를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
도 102는 재조합 핵산 작제물 PAN66, PAN67, PAN68, 및 PAN69의 기본 구조 및 길이를 나타낸다.
재조합 핵산 작제물 PAN66은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 PIK3CA의 야생형을 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN67은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 PIK3CA PIK3CA E542K를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN68은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 PIK3CA PIK3CA E545K를 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
재조합 핵산 작제물 PAN69는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 PIK3CA PIK3CA H1047R을 암호화하는 암호화 영역, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
도 103은 재조합 핵산 작제물 PAN77의 기본 구조 및 길이를 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN77은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함하며, 여기서 상기 돌연변이 Tie-2는 짧은 GGH-링커(서열번호 162)를 통해 R849W_L914F 이중 돌연변이를 포함하는 Tie-2의 C-말단 세포내(세포질) 키나제 도메인(Tie-2의 아미노산 770~1124; UniProtKB - Q02763; NCBI Refseq NP_000450.2)에 융합된 Src 키나제의 N-말단 미리스틸화 신호(MGSSKSKPKDPSQR(서열번호 161))를 포함하는 Tie-2의 절단된 형태이며, 바람직하게는 Tie-2의 절단된 형태는 서열번호 163의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
도 104는 재조합 핵산 작제물 PAN78의 기본 구조 및 길이를 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN78은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 Tie-2를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함하며, 여기서 상기 돌연변이 Tie-2는 인간 COMP(연골 올리고머 기질 단백질의 아미노산 29~73; UniProtKB P49747(NCBI Refseq: NP_000086.2; NM_000095.3))의 N-말단 코일된-코일(다량체화) 도메인이 GGISGGGGGI-링커(서열번호 164)를 통해 R849W_L914F 이중 돌연변이를 포함하는 Tie-2(Tie-2의 아미노산 749~1124; UniProtKB - Q02763; NCBI Refseq NP_000450.2)의 C-말단 막관통 및 세포내 키나제 도메인에 융합된 COMP-Tie-2 융합이며, 바람직하게는 Tie-2의 절단된 형태는 서열번호 165의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 전체 작제물은 1579 nt를 포함한다.
도 105는 재조합 핵산의 기본 구조, 길이 및 작제물 PAN70의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN70은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 myrP110*를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다.
도 130은 재조합 핵산 작제물 PAN 82의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN82는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 myrTie-2 wt(서열번호 166), 즉 세포질 Tie-2 키나제 도메인에 야생형 아미노산 서열을 갖는 PAN77의 야생형-동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1333 nt를 포함한다.
도 131은 재조합 핵산 작제물 PAN 83의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN83은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 myrTie-2(Y897F R915L T1105N T1106)(서열번호 167), 즉 세포질 Tie-2 키나제 도메인에 R849W_L914F 교환 대신에 아미노산 교환 Y897F, R915L, T1105N, T1106을 갖는 PAN77의 동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1333 nt를 포함한다.
도 132는 재조합 핵산 작제물 PAN 84의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN84는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 야생형 COMP-Tie-2(서열번호 168), 즉 Tie-2 키나제 도메인에 야생형 아미노산 서열을 갖는 PAN78의 야생형-동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1579 nt를 포함한다.
도 133은 재조합 핵산 작제물 PAN 85의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN85는 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 COMP-Tie-2(Y897F R915L T1105N T1106)(서열번호 169), 즉 세포질 Tie-2 키나제 도메인에 R849W_L914F 교환 대신에 아미노산 교환 Y897F, R915L, T1105N, T1106을 갖는 PAN78의 동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1579 nt를 포함한다.
도 134는 재조합 핵산 작제물 PAN 86의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN86은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 R849W 및 L914F 아미노산 교환을 수반하는 Tie-2(인간 Tie-2의 아미노산 749-1124; UniProtKB Q02763; NCBI Refseq NP_000450.2)의 막관통 및 세포내 도메인인, Tie-2 TM_IC(R849W L914F)(서열번호 170)를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1579 nt를 포함한다.
도 135는 재조합 핵산 작제물 PAN 87의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN87은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 myrTie-2(T1105N T1106P)(서열번호 171), 즉 세포질 Tie-2 키나제 도메인에서 R849W_L914F 교환 대신에 아미노산 교환 T1105N T1106P를 갖는 PAN77의 동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1333 nt를 포함한다.
도 136은 재조합 핵산 작제물 PAN 88의 기본 구조 및 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물 PAN88은 5' 비-번역 영역으로서 MCP-1의 5' UTR, 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역으로서 돌연변이 COMP-Tie-2(T1105N 및 T1106)(서열번호 172), 즉 세포질 Tie-2 키나제 도메인에서 R849W_L914F 교환 대신에 아미노산 교환 T1105N 및 T1106을 갖는 PAN78의 동족체를 암호화하는 서열, 및 3' 비-번역 영역으로서 vWF의 3' UTR을 포함한다. 전체 작제물은 1579 nt를 포함한다.
서열 목록의 서열번호는 표 1에 요약되어 있는 바와 같이, 본 개시내용과 관련된다.
[표 1]
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
실시예 1: 재료 및 방법
유전자 합성 및 클로닝에 의한 플라스미드 주형 생성
상이한 신호 펩타이드를 갖는 Nluc 리포터 단백질, Ang-1 단백질 및 이의 유도체(예를 들어, COMP-Ang-1, CMP-Ang-1)를 암호화하는 서열을 상이한 이종성 5' 및 3' UTR에 의해 플랭킹하고, BioCat(Heidelberg)에 의한 유전자 합성에 의해 설계 및 생성시키고, pcDNA3.1-(Thermo Fisher)로 클로닝(Xho1―BamHI)하였다.
다양한 이종성 5' 및 3' UTR이 플랭킹된 암호화 영역에서 wt Tie-2를 암호화하는 서열 및 특정 Tie-2 돌연변이를 갖는 서열을 설계하고(도 95 및 96 참조), BioCat(Heidelberg)에 의한 유전자 합성에 의해 생성시키고, pcDNA3.1-(Thermo Fisher)로 클로닝(Xho1―BamHI)하였다.
폴리아데닐화 mRNA를 생성하기 위한 PCR 생성물로부터의 시험관 내 전사
시험관 내 전사는 상응하는 프로모터 서열(T7, T3, SP6) 및 전사될 유전자를 함유하는 선형 DNA 주형으로부터 RNA 폴리머라제에 의한 RNA 전사체의 합성이다. 전형적인 전사 반응은 주형 DNA, RNA 폴리머라제, 리보뉴클레오타이드 트리포스페이트, RNase 억제제 및 Mg2+ 이온을 함유하는 완충액으로 구성된다. 선형화된 플라스미드 DNA, PCR 생성물 및 합성 DNA 올리고뉴클레오타이드는 전사될 유전자의 업스트림에 T7 프로모터 서열을 갖는한, 전사를 위한 주형으로 사용될 수 있다. 폴리-(A) 테일을 갖는 DNA 주형을 생성하기 위해, T7 RNA 폴리머라제 서열을 함유하는 5' 프라이머 및 120 nt 폴리-T 서열을 갖는 3' 프라이머를 사용하는 테일-PCR을 합성하고 정제하였다(BioSpring, Frankfurt).
시험관 내 전사를 위한 선형 DNA 주형은 선형화된 플라스미드로부터 PCR에 의해 생성되었다. 벡터 백본에서 3-말단을 1회 절단하는 BamHI로 플라스미드를 소화시켜 폴리-(A) 테일 PCR의 주형으로 사용할 수 있는 선형화된 벡터를 생성하였다. 5 μg 플라스미드를 50 μl 및 1x HF 완충액에서 5U BamHI 제한 효소로 37℃에서 2시간 동안 소화시켰다. 소화된 혼합물의 작은 분취량을 겔 전기영동으로 분석하여 플라스미드의 완전한 소화를 확인하였다(예를 들어, 작제물 PAN28("28"), PAN13("13"), PAN12("12"), PAN11("11"), PAN10("10"), PAN09("09"), PAN08("08"), PAN07("07") 및 PAN05("05")에 대해 도 5 참조). 제한 효소를 80℃에서 20분 동안 인큐베이션함으로써 열-불활성화시키고, 소화된 플라스미드를 제조사의 프로토콜(NucleoSpin Gel and PCR clean-up, Macherey-Nagel)에 따라 PCR 정제 컬럼으로 정제한다. 선형화된 플라스미드는 -20℃에서 몇 개월 동안 저장할 수 있으며, PCR 주형 생성에 사용될 수 있다. 선형화의 목적은 IVT 반응 동안 잠재적으로 런-온(run-on) 전사체를 생성할 수 있는 원형 주형을 제거하는 것이었다.
PCR에 의한 폴리-(A) 테일의 추가는 제조사의 프로토콜에 따라 Hot Start HiFidelity 폴리머라제(Qiagen) 또는 Taq DNA 폴리머라제(Roche)를 사용하여 수행하였다. 이를 위해, T7 프로모터 서열 및 3' 폴리 A 테일 서열(120 nt)을 함유하는 어댑터 프라이머를 사용하여 선형 DNA-주형을 증폭시켰다. 각각의 어댑터 프라이머는 번역 및 전사에 필요한 조절 서열을 관심 유전자에 융합시킨 중첩 서열을 가졌다(예를 들어, 도 7a 및 7b 참조). 전형적인 50 μl의 PCR 반응물에는 200 μM(각각의) dNTP, 각 프라이머에 대해 0,5 μM, 50 ng 선형화된 플라스미드 DNA, 1x PCR 반응 완충액(1,5 mM MgCl2) 및 반응 당 1,25 U Taq DNA 폴리머라제(5 U/μl의 0,25 μl)의 최종 농도가 함유되어 있다. 특이적 PCR 사이클 프로그램 또는 열 프로파일은 프라이머 쌍의 Tm, PCR 생성물의 예상 길이 및 사용된 열 순환기에 따라 조정되었다. PCR 생성물의 품질은 겔 전기영동으로 분취량을 분석하여 확인하고, 반응물은 상용 PCR 정제 키트((NucleoSpin Gel and PCR clean-up, Macherey-Nagel)로 정제한다.
시험관 내 전사 반응
RNA에 5' 말단 캡 구조를 첨가하는 것은 진핵생물에서 중요한 과정이다. 이는 RNA 안정성, 효율적인 번역, 핵 수송 및 스플라이싱에 필수적이다. 이 과정은 RNA의 5' 트리포스페이트 말단에 7-메틸구아노신 캡을 추가하는 것을 포함했다. RNA 캡핑은 캡핑 효소를 사용하여 전사 후 수행하거나 ARCA(Jena Bioscience) 또는 CleanCap(Trilink Biotechnologies) 또는 EZ-Cap(ApexBio)과 같은 캡 유사체를 사용하여 동시 전사적으로 수행할 수 있다. 효소적 방법에서 mRNA는 제조사의 프로토콜에 따라 백시니아 바이러스 mRNA 캡핑 효소(NEB)를 사용하여 캡핑될 수 있다. 효소는 GTP 및 S-아데노실 메티오닌을 공여체로 사용하여 RNA의 5' 말단에 7-메틸구아노신 캡을 추가한다(캡-0 구조). 두 방법 모두 형질감염 또는 기타 용도에 적합한 기능적으로 활성인 캡핑된 RNA를 생성한다. 또한, 2'-O-메틸트랜스퍼라제는 캡-1 및 캡-2 구조를 도입하는데 사용될 수 있다.
하기 기술된 실시예에서, T7 고수율 전사 키트(Thermo Scientific)는 캡 유사체를 동시 전사적으로 사용하여, 캡핑된 RNA 전사체(PAN 01~88)를 합성하는데 사용될 수 있다.
전사 반응을 위한 DNA 주형은 선형화된 플라스미드 또는 PCR 생성물이었다. 캡핑된 RNA의 경우, 실온에서의 반응을 하기 순서로 설정하였다:
Figure pct00007
1 μg의 DNA를 첨가하고, 뉴클레아제 비함유 물을 첨가하여 총 반응 부피를 20 μl로 수득하였다. 첨가되는 물의 양은 주형 DNA의 농도에 따라 다양하였다. 반응물은 볼텍싱에 의해 잘 혼합되었고 건조 공기 인큐베이터에서 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 다음과 같이 정제를 진행하기 전에 전사 반응을 DNase I로 처리하여 DNA 주형을 제거하였다:
1. 70 μl의 뉴클레아제 비함유 물을 전사 반응에 첨가한 후 10 μl의 DNase I 반응 완충액을 첨가하였다.
2. 2 μl의 DNase I을 반응에 첨가하였다.
3. 반응물을 37℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다.
캡핑된 mRNA의 컬럼 정제
1. 캡핑된 RNA는 제조업체의 지침에 따라 MEGAclearKit(ThermoFisher, Waltham, MA, USA)(다른 공급업체의 유사한 RNA 정제 키트를 사용할 수 있음)를 사용하여 정제되었다.
2. NanoDrop 분광광도계를 사용하여 RNA를 정량화하였다.
3. 제조업체의 지침에 따라, Agilent RNA 6000 나노 키트 및 Agilent 2100 생물분석기를 사용하여, 기본(native) 1% 아가로스 겔 전기영동 및 에티듐 브로마이드 염색을 사용하여 RNA 샘플 품질을 평가하였다(도 8 참조).
HeLa 세포, HEK293 세포, HPMEC 세포, HPAEC 세포 및 HUVEC 세포의 mRNA 형질감염
HeLa 세포를 DMEM 완전 배지에서 성장시켰다. 인간 배아 신장 293 세포주(HEK293)는 EMEM(EBSS) + 2 mM 글루타민 + 1% 비필수 아미노산(NEAA) + 10% FCS 배양 배지에서 성장시킨다.
인간 배아 신장 293 세포주(HEK293)는 EMEM(EBSS) + 2 mM 글루타민 + 1% 비필수 아미노산(NEAA) + 10% FCS 배양 배지에서 성장시킨다. 하위배양 루틴은 하위-합류 배양(70~80%) 1:2에서 1:6으로 분할하는 것, 즉 0.25% 트립신 또는 트립신/EDTA; 5% CO2; 37℃를 사용하여 2~5×10,000 세포/cm2 를 씨딩하는 것이다. mRNA 형질감염은 제조사 프로토콜에 따라 리포펙타민™ 메신저MAX™ 형질감염 시약(Invitrogen™)으로 수행한다.
1차 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC) 및, 인간 폐 동맥으로부터 단리된 1차 인간 폐 동맥 내피 세포(HPAEC)가 인간 폐 질환 연구에 가장 적합하고, 단일 공여체로부터의 폐로부터 단리된다. 폐 조직은 혈액과 림프 모세관을 포함하기 때문에, HPMEC는 혈액 및 림프 미세혈관 내피 세포를 포함한다.
HPMEC의 세포 유형은 면역형광 염색에 의해 특징화된다. 그들은 CD31 및 폰 빌레브란트 인자에 대해 양성으로 염색되고, 평활근 알파-액틴에 대해 음성으로 염색된다.
HUVEC, HPAEC 및 HPMEC 세포는 각각 Promocell(Heidelberg, Germany)에서 권장되는 내피 세포 성장 배지에서 성장시켰다. 내피 세포 성장 배지는 태아 송아지 혈청(0.05 ml/ml), 내피 세포 성장 보충제(소 시상하부 추출물; 0.004 ml/ml), 헤파린 90 μg/ml 및 하이드로코르티손 1 μg/ml가 보충된 기초 배지이다. HUVEC, HPAEC 및 HPMEC 세포를 사용한 실험은 계대 번호가 8 미만인 세포에서 수행한다.
RNA 형질감염 및 더 많은 mRNA 형질감염은 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 수행되었다. 24-웰 플레이트 포맷의 mRNA 형질감염을 위해, 1x105 세포/웰을 형질감염 직전 70~90 컨플루언스에 도달하도록 형질감염 24시간 전에 씨딩하였다. 하나의 단일 웰에 대해, 1.5 μl의 리포펙타민 메신저MAX 시약을 25 μl의 OptMEM(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)에 첨가하고, 볼텍싱하고, 실온에서 10분간 인큐베이션하였다. 두번째 웰에서 500 ng 또는 1 μg의 mRNA를 25 μl의 OptiMEM에 첨가하고, 볼텍싱하였다. 인큐베이션 후, 희석된 mRNA를 희석된 리포펙타민에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고, Hela 및 HEK293용 완전 배지 0,5 ml의 존재 하에 세포에 적가하였다. HUVEC, HPAEC 및 HPMEC의 경우, 내피 세포 성장 배지를 교체하고 세포를 OptiMEM으로 세척한 다음, 리포펙타민 메신저MAxX mRNA 복합 용액을 37℃로 예열된 0,5 ml OptiMEM과 함께 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, OptiMEM 배지를 완전한 내피 세포 성장 배지(Promocell, Heidelberg Germany)로 교체하였다.
형질감염된 세포 또는 혈청으로부터의 세포 용해물을 지시된 시점에서 분석하였다. 대안적으로, 중성 및 PEG화 공지질과 조합된 양이온성 지질 L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드 또는 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드에 기반한 mRNA-LNP를 시험관 내 형질감염에 사용하였다. 공지질은 디피타노일-PE이고, PEG화된 지질은 메톡시PEG2000-DSPE이다.
숙주 세포로의 mRNA의 성공적인 도입은 다양한 공지된 방법, 예컨대 형광 마커, 예컨대 녹색 형광 단백질(GFP), 예컨대 리포터 효소(예를 들어 루시퍼라제 유도체)를 사용하여 모니터링하였다. 대안적으로, 변형된 mRNA의 형질감염은 또한 예를 들어 웨스턴 블롯팅 또는 면역세포화학 또는 ELISA에 의해 표적 폴리펩타이드의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정될 수 있다.
5-메틸시티딘 및/또는 슈도우리딘(또는 5-메톡시우리딘 또는 N1-메틸슈도우리딘)을 갖는 완전히 변형된 mRNA는 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 HUVEC 또는 HPMEC(인간 폐 미세혈관 내피 세포, Promocell, Heidelberg)로 형질감염되었다. 세포 용해물을 수확하고 형질감염 후 ELISA(또는 다른 시점(30'', 1시간, 2시간, 4시간, 6시간)에서의 면역블롯 분석(웨스턴)에 의해 실행하여 단백질 발현을 측정하였다.
나노-Luc 루시퍼라제 활성 리포터 측정
리포터 분석 기술 매뉴얼 Nano-Glo 루시퍼라제 분석 시스템(Promega)에 따라 조직 배양 상청액의 샘플을 분석함으로써 분비된 버전에 대해 Nano-Glo-루시퍼라제 발현(Promega)의 시간의존적 정량적 검출을 수행하였다. 간단히 말해서, 5~20 μl의 혈청 또는 용해물을 100 μl의 H2O 최종 부피로 희석하고, 동일한 부피의 재구성된 Nano-Glo 루시퍼라제 분석 시약을 96웰 GloMax 96 마이크로플레이트에서 조합하였다. 실온에서 적어도 3분 인큐베이션한 후, 적절한 발광계에서 발광을 측정하였다.
Tie-2 및 유도체의 면역블롯 검출
Tie-2 및 유도체의 면역블롯 검출을 위해, 실행 보조제로서 MOPS-완충액(모두 Life Technologies, Grand Island, NY)에 의한 4~12% 아크릴아미드 구배 및 1.5 mm 즉시 사용 가능한 Bis-Tris 겔을 사용한 NuPage SDS-PAGE 시스템(챔버 및 전원 공급 장치)에 단백질 용해물을 로드한다. 각 용해물 샘플은 40 μl의 최종 부피로 준비된다. 이 샘플에는 가변 부피의 25 μg 단백질 용해물, 최대 26 μl의 부피를 구성하는 RIPA 완충액, 4 μl의 l0x 환원제 및 l0 μl의 4x SDS 로딩 완충액(둘 모두 Life Technologies, Grand Island, NY)이 함유되어 있다. 샘플을 95℃에서 5분 동안 가열하고 겔에 로드한다. 표준 설정은 제조업체에서 선택하며, 200 V, 120 mA 및 최대 25 W이다. 실행 시간은 60분이지만 겔의 하단에 도달하는 실행 염료보다 길지 않다.
실행이 종료된 후, 플라스틱 케이스가 균열되고, 봉입된 겔을 즉시 사용가능한 니트로셀룰로스 멤브레인 키트 및 전원 공급 장치(iBLOT; LifeTechnologies, Grand Island, NY)로 옮겼다. 기본 설정을 사용하여, 단백질 용해물은 높은 암페어 전기에 의해 겔에서 멤브레인으로 전달된다.
전달 후, 멤브레인을 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA에서 인큐베이션한 다음, 추가로 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA + 0.1% Tween에서 인큐베이션한다. 인간 Tie-2 단백질에 대한 1차 항체 또는 포스포-특이적 항체들(P-Tie-2, P-Akt, 하기 참조)을 실온에서 3시간 동안 IX TBS 용액 중 3 ml의 5% BSA에 적용하여 1:500에서 1:2000로 희석하고, 오비탈 셰이커에서 부드럽게 교반한다. 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척하였다. 2차 항체(염소 항-토끼 HRP 접합체; Abeam, Cambridge, MA)를 홀스래디쉬 퍼옥시다제에 접합하고, 1차 항체 항체들에 결합한다. 2차 항체를 IX TBS 중 5% BSA에서 1:1000에서 1:5000로 희석하고, 실온에서 3시간 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 시간이 끝나면 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척한다. 멤브레인은 지시에 따라 5 ml의 Pierce WestPico 화학발광 기질(Thermo Fisher, Rockford, IL)에서 전개된다.
실시예 2: HPMEC, HUVEC, HPAEC 및 HeLa 세포에서 재조합 핵산 작제물을 발현하는 루시퍼라제, Ang-1 또는 Ang-1-유도체의 발현
HeLa, HUVEC, HPAEC 및 HPMEC 세포의 mRNA 형질감염
1차 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)는 인간 폐 질환 연구에 가장 적합하며, 단일 공여체로부터의 폐로부터 단리된다. 폐 조직은 혈액과 림프 모세관을 포함하기 때문에, HPMEC는 혈액 및 림프 미세혈관 내피 세포를 포함한다.　세포는 면역형광 염색에 의해 일상적으로 분석되고: 이들은 CD31 및 폰 빌레브란트 인자에 대해 양성으로 염색되고, 평활근 알파-액틴에 대해 음성으로 염색된다. HeLa 세포, HUVEC, HPMEC 및 HPAEC(인간 폐 동맥 내피 세포) 세포는 각각 DMEM 완전 배지 또는 내피 세포 성장 배지(Promocell, Heidelberg Germany, CatNo.: C-22020)에서 성장시켰다. 내피 세포 성장 배지는 태아 송아지 혈청(0.05 ml/ml), 내피 세포 성장 보충제(소 시상하부 추출물; 0.004 ml/ml), 헤파린 90 μg/ml 및 하이드로코르티손 1 μg/ml가 보충된 기초 배지이다. HUVEC 및 HPMEC 세포를 사용한 실험은 계대 번호가 8 미만인 세포에서 수행되었다.
mRNA 형질감염은 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 수행되었다. 24-웰 플레이트 포맷의 mRNA 형질감염을 위해, 1x105 세포/웰을 형질감염 직전 70~90 컨플루언스에 도달하도록 형질감염 24시간 전에 씨딩하였다. 하나의 단일 웰에 대해, 1.5 μl의 리포펙타민 메신저MAX 시약을 25 μl의 OptiMEM에 첨가하고, 볼텍싱하고, 실온에서 10분간 인큐베이션하였다. 두번째 웰에서 500 ng 또는 1 μg mRNA를 25 μl OptiMEM에 첨가하고, 볼텍싱하였다. 인큐베이션 후, 희석된 mRNA를 희석된 리포펙타민에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고 Hela용 DMEM 완전 배지 0.5 ml의 존재 하에 세포에 적가하였다. HUVEC, HPMEC 및 HPAEC의 경우, 내피 세포 성장 배지를 교체하고 세포를 OptiMEM으로 세척한 다음, 리포펙타민 메신저MAX mRNA 복합 용액을 37℃로 예열된 0,5 ml의 OptiMEM과 함께 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, OptiMEM 배지를 완전한 내피 세포 성장 배지(Promocell, Heidelberg Germany)로 교체하고, 형질감염된 세포 또는 혈청을 지시된 시점에서 분석하였다. 대안적으로, 중성 및 PEG화 공지질과 조합된 양이온성 지질 L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드 또는 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드에 기반한 mRNA-LNP를 시험관 내 형질감염에 사용하였다.
숙주 세포로의 mRNA의 성공적인 도입은 다양한 공지된 방법, 예컨대 형광 마커, 예컨대 녹색 형광 단백질(GFP), 예컨대 리포터 효소(예를 들어 루시퍼라제 유도체)를 사용하여 모니터링할 수 있거나, 변형된 mRNA의 형질감염은 또한 예를 들어 웨스턴 블롯팅 또는 면역세포화학 또는 ELISA에 의해 표적 폴리펩타이드의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정될 수 있다.
나노-Luc 루시퍼라제 활성 리포터 측정
리포터 분석 기술 매뉴얼 Nano-Glo 루시퍼라제 분석 시스템(Promega)에 따라 조직 배양 상청액으로부터의 샘플을 분석함으로써 분비된 버전에 대해 Nano-Glo-루시퍼라제 발현(Promega)의 시간 의존적 정량적 검출을 수행하였다. 간단히 말해서, 5~20 μl의 혈청 또는 용해물을 100 μl의 H2O 최종 부피로 희석하고 동일한 부피의 재구성된 Nano-Glo 루시퍼라제 분석 시약을 96 웰 GloMax 96 마이크로플레이트에서 조합하였다. 실온에서 적어도 3분 인큐베이션한 후, 발광을 적절한 발광계에서 측정할 수 있다.
세포 용해물 및 상청액에서 Ang-1, COM-Ang-1, CMP-Ang-1 단백질의 검출
분비된 Ang-1 및 분비된 COMP-Ang-1 또는 COMP-Ang-2 발현의 시간 의존적 정량적 검출은 기술 매뉴얼에 따라 ELISA(인간 안지오포이에틴-1 Quantikine ELISA 키트(R&D systems, Minneapolis, MN, USA) 또는 웨스턴 블롯에 의해 상청액 조직 배양으로부터의 샘플을 분석함으로써 수행된다.
리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여, 서열에 도시되어 있지 않은 대략 120개 뉴클레오타이드의 폴리A 테일; 5' 캡,) 5-메틸시티딘 및 슈도우리딘(COMP-Ang-1, 5mC/pU)으로 완전히 변형된, 5-메틸시티딘 및 Nl-메틸-슈도우리딘(COMP-Ang-1,5 mC/NlmpU)으로 완전히 변형되거나 변형되지 않은(COMP-Ang-, unmod) 500 ng의 COMP-Ang-1(서열번호 108에 도시된 mRNA 서열)을 HUVEC 또는 HPMEC(인간 폐 미세혈관 내피 세포, Promocell, Heidelberg)로 형질감염시킨다. 상청액을 수확하고 형질감염 4시간 후에 ELISA에 의해 실행하여 단백질 발현 및 사이토카인 유도를 측정한다.
Ang-1 및 유도체의 면역블롯 검출을 위해, 실행 보조제로서 MOPS-완충액(모두 Life Technologies, Grand Island, NY)에 의한 4~12% 아크릴아미드 구배 및 1.5 mm 즉시 사용 가능한 Bis-Tris 겔을 사용한 NuPage SDS-PAGE 시스템(챔버 및 전원 공급 장치)에 단백질 용해물을 로드하였다. 각 용해물 샘플은 40 μl의 최종 부피로 준비된다. 이 샘플에는 가변 부피의 25 μg 단백질 용해물, 최대 26 μl의 부피를 구성하는 RIPA 완충액, 4 μl의 l0x 환원제 및 l0 μl 4x SDS 로딩 완충액(둘 모두 Life Technologies, Grand Island, NY)이 함유되어 있다. 샘플을 95℃에서 5분 동안 가열하고 겔에 로드하였다. 표준 설정은 제조업체에서 선택하며, 200 V, 120 mA 및 최대 25 W이다. 실행 시간은 60분이지만 겔의 하단에 도달하는 실행 염료보다 길지 않다.
실행이 종료된 후, 플라스틱 케이스가 균열되고, 봉입된 겔을 즉시 사용가능한 니트로셀룰로스 멤브레인 키트 및 전원 공급 장치(iBLOT; LifeTechnologies, Grand Island, NY)로 옮겼다. 기본 설정을 사용하여, 단백질 용해물은 높은 암페어 전기에 의해 겔에서 멤브레인으로 전달된다.
전달 후, 멤브레인을 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA에서 인큐베이션한 다음, 추가로 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA + 0.1% Tween에서 인큐베이션한다. 인간 Ang-1 단백질에 대한 1차 항체(Ang-1 ab183701 Abcam, Cambridge, UK)를 4℃에서 하룻밤동안 1:5000 희석으로 IX TBS 용액 중 3 ml의 5% BSA에 적용하여 오비탈 셰이커에서 부드럽게 교반한다. 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척하였다. 2차 항체(염소 항-토끼 HRP 접합체; Abeam, Cambridge, MA)를 홀스래디쉬 퍼옥시다제에 접합하고, 1차 항체 항체들에 결합한다. 2차 항체를 IX TBS 중 5% BSA에서 1:1000으로 희석하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 시간이 끝나면 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척한다. 멤브레인은 지시에 따라 5 ml Pierce WestPico 화학발광 기질(Thermo Fisher, Rockford, IL)에서 전개된다.
웨스턴 블롯은 인간 Ang-1의 경우 70 kd, 그리고 COMP-Ang-1 및 CMP-Ang1의 경우 37kDa의 예상 크기 정도의 단백질을 검출한다. 참고로, 재조합 인간 Ang-1 단백질은 R&D Systems(biotechne)에서 구입하였다.
결과
도 10 내지 14, 72 내지 85 및 92 내지 94에 제시된 단백질 발현 데이터는 암호화 영역에 인접하는 상이한 조절 뉴클레오타이드 서열의 조합이 단백질 발현 수준을 유의하게 변화시킬 수 있음을 강조한다. 이러한 변화는 예시된 바와 같이 100%의 우리딘 및 100% 시티딘 뉴클레오타이드를 슈도-우리딘 및 5-메틸-시티딘으로 대체함으로써 작제물을 형성하는 뉴클레오타이드의 변형에 의해 추가로 영향을 받는다(작제물은 도 74 및 도 77 내지 85에서 "*"로 표시됨). 변화는 특정 세포 유형뿐만 아니라 다른 세포 유형에 걸쳐 관찰된다. 예를 들어, PAN02(야생형 Ang-1 mRNA)는 모든 세포주에서 가장 낮은 루시퍼라제 활성을 나타낸다(도 10~14). 다른 모든 작제물은 모든 세포 유형에서 향상된 단백질 발현을 보여준다. 따라서, 다른 유전자의 조절 서열을 사용하는 접근법은 단백질 발현 활성을 증가시킬 수 있다. 이때문에, 내인성 Ang-1 서열을 대체하는 것이 리포터의 단백질 발현에 우수한 효과를 나타냈다.
주목할 가치가 있는 것은 동일한 조절 서열이 다른 세포 유형에서 뚜렷한 단백질 발현 활성을 나타냈다는 것이다(도 75 내지 81). 이러한 데이터는 특정 조절 서열의 사용이 맥락에서 문맥-특이적, 즉 세포-유형 특이적 세포 환경에서의 단백질 발현의 활성에 영향을 미칠 수 있다는 본 발명자들의 접근을 추가로 뒷받침한다.
또한, 본 발명자들은 본 발명의 데이터가 다른 양태, 즉 분비와 관련되어 있음을 보여주었다. 예를 들어, 작제물 PAN12에 사용된 조절 서열은 전체 세포 용해물뿐만 아니라 배지(상청액)에서도 세포-유형 특이적(HPMEC) 발현을 나타낸다(도 10~14). 이는 이들 서열이 단백질 발현(번역) 뿐만 아니라 분비에도 최적임을 나타낸다. 대조적으로, 작제물 PAN28은 모든 세포 유형에서 다소 동등하게 발현을 나타낸다. 작제물 PAN29(및 PAN58)에 사용된 조절 서열, 즉 vWF의 3'-UTR과 조합된 MCP-1의 5'-UTR 및 신호 펩타이드 서열은 인간(미세혈관) 폐 내피 세포에서 고효율 단백질 발현에 특히 유용한 것으로 밝혀졌다(예를 들어, 도 72 및 75 참조). 작제물 PAN54에 사용된 조절 서열, 즉 시금치 엽록체 RPL12의 5'-UTR, MCP-1의 신호 펩타이드 서열 및 vWF의 3'-UTR은 도 92에 도시된 바와 같이 단백질 발현 및 분비에 동등하게 효율적인 것으로 밝혀졌다.
도 98에 도시된 바와 같이, PAN29의 조절 서열은 또한 1차 인간 폐 미세내피 세포(HPMEC)에서의 발현을 지시하는데 있어서 3개의 상이한 ORF, 즉 PAN52의 wt Ang-1; PAN53의 hCOMP-Ang-1 및 PAN59의 CMP-Ang-1을 사용하여 기능한다. 대조적으로, 인간 Ang-1(PAN01)의 내인성 5'- 및 3'-UTR을 포함하는 mRNA 작제물은 번역되지 않는다(도 98). 도 99는 4개의 mRNA 작제물 모두가 유사한 품질(완전성 및 순도)을 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 3: 야생형 Tie-2(PAN60) 또는 활성화 Tie-2 돌연변이(예를 들어 R849W(PAN61))를 암호화하는 변형된 mRNA의 형질감염 후 Tie-2 경로 활성화
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA는 상기 실시예 1에서 이전에 기재된 바와 같이 PCR 주형의 시험관 내 전사에 의해 생성된다. 활성화 Tie-2 돌연변이(예를 들어, R849W)를 암호화하는 이 mRNA의 다른 농도는 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific.)를 사용하여 야생형 Tie-2를 암호화하는 mRNA 옆에 다른 세포주(HeLa, HUVEC 또는 HPMEC 또는 HPAEC와 같은 1차 내피 세포)에서 형질감염된다. 정성적 웨스턴 블롯을 위해 mRNA(1~24시간)의 형질감염 후 다양한 시점에서 세포 용해물을 항-포스포티로신 항체(R&D 시스템)로 프로브하여 Tie-2 인산화(pTyr, 140 kD)를 평가한다. 블롯을 스트라이핑하고 항-Tie-2 항체(R&D 시스템)로 재-프로브하여 총 Tie-2를 검출한다. 정량적 측정을 위해 제조사(예를 들어, R&D systems으로부터의 ELISA-키트) 프로토콜에 따라, 인간 Tie-2 DuoSet ELISA 키트 또는 인간-포스포-Tie-2 DuoSet IC ELISA를 사용하여 인간 Tie-2 또는 포스포-Tie-2를 측정하는 두 가지 다른 ELISA를 수행한다.
mRNA를 암호화하는 Tie-2 돌연변이(PAN61, R849W)의 형질감염은 야생형 Tie-2 mRNA를 암호화하는 mRNA로 형질감염된 세포로부터 유래된 세포 용해물과 비교하여, 또는 형질감염되지 않은 세포와 비교하여, 포스포-Tie-2의 존재를 증가시킨다. Tie-2 인산화의 이러한 증가는 재조합 인간 Ang-1 리간드와의 공동 자극의 존재 또는 부재 하에 관찰되며, 상이한 세포주에서 관찰될 수 있다. Tie-2 신호전달 경로의 활성화를 확인하고 Tie-2(R849W) 유도체를 발현함으로써 생물학적 관련 기능적 다운스트림 신호 전달을 입증하기 위해, Akt의 인산화가 시간 경과 실험에서 입증된다. 이들 실험은 Tie-2 활성화 돌연변이(R849W)를 암호화하는 mRNA가 wt Tie-2 암호화 mRNA보다 Tie-2 신호전달 경로를 활성화하는 데 기능적이고 더 강하다는 것을 나타낸다. 경로의 이러한 과활성화는 인간 내피 및/또는 비-내피 세포에서 Tie-2 리간드(예를 들어 Ang-1)의 부재 또는 존재 하에 입증될 수 있다.
실시예 4: 정맥내 투여에 의한 생체 내 적용을 위한 양이온성 LNP에서의 mRNA 제형
생체 내 실험을 위해 mRNA-LNP는 양이온성 지질로서 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드를 사용하는 제형화 과정에서 제조된다. 대안적으로, 양이온성 지질 L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드를 동일한 절차에서 사용하여 mRNA-LNP를 제조할 수 있다.
mRNA-LNP 제형은 siRNA에 대해 기재된 방법의 변형된 절차를 사용하여 제조된다(문헌[Chen, S., Tam, Y.Y., Lin, P.J., Sung, M.M., Tam, Y.K., and Cullis, P.R. (2016), Influence of particle size on the in vivo potency of lipid nanoparticle formulations of siRNA. J. Control. Release 235, 236-244.] & (ii) 미국 특허 출원 제20170121712호).
간략하게, 지질은 적절한 몰비율로 에탄올에 용해된다(예를 들어 50:49:1 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드: DPyPE: mPEG2000-DSPE). 지질 혼합물은 미세유체 믹서(NanoAssemblr®; Precision Nanosystems, Vancouver, BC) 및 18 ml/분의 유속을 사용하여 2:1(수성:에탄올)의 부피비로 mRNA의 등장성 수크로스 용액과 조합한다. 유사하게, LNP 제형은 시트레이트 또는 아세테이트 완충 mRNA 용액(pH 3~4)과 3:1(v/v; 수성:에탄올)의 약간 다른 혼합 비율 및 12 ml/분의 유속을 사용하여 얻을 수 있다.
혼합 과정 후, 4℃에서 적어도 18시간 동안 3.5K MWCO Slide-A-Lyzer 투석 카세트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 10 mM HEPES 또는 TRIS 완충 등장성 수크로스 용액에 대해 제형을 투석한다. 수크로스 대신, 트레할로스 또는 글루코스와 같은 다른 당을 제형화 과정에서 동등하게 사용할 수 있다.
후속적으로, 제형을 입자 크기(Zetasizer 나노 ZS 기기(Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK), RNA 캡슐화(제조업체(Thermo Fisher Scientific)의 프로토콜에 따른 Quant-iT RiboGreen RNA 분석 키트), 및 내독소에 대해 시험하고, 크기가 30~100 nm이고 제타-전위가 25 mV 초과이고, 90% 초과의 mRNA 캡슐화와 1 EU/ml 미만의 내독소를 나타내는 것으로 밝혀졌다.
mRNA-LNP 제형은 추가 시험관 내 또는 생체 내로 사용될 때까지 약 0.3 μg/μl의 RNA 및 약 0.03~0.05(wt/wt)의 총 지질 비율에 대한 RNA의 농도로 -80℃에서 저장된다.
실시예 5: 재료 및 방법 - 2
유전자 합성 및 클로닝에 의한 플라스미드 주형 생성
상이한 이종성 5' 및 3' UTR이 인접한 암호화 영역에서 wt Tie-2를 암호화하는 서열 및 특정 Tie-2 돌연변이를 갖는 서열을 BioCat(Heidelberg)에 의한 유전자 합성에 의해 설계 및 생산하고, pcDNA3.1-(Thermo Fisher)로 클로닝(Xho1-BamHI)하였다.
폴리아데닐화 mRNA를 생성하기 위한 PCR 생성물로부터의 시험관 내 전사
시험관 내 전사는 상응하는 프로모터 서열(T7, T3, SP6) 및 전사될 유전자를 함유하는 선형 DNA 주형으로부터 RNA 폴리머라제에 의한 RNA 전사체의 합성이다. 전형적인 전사 반응은 주형 DNA, RNA 폴리머라제, 리보뉴클레오타이드 트리포스페이트, RNase 억제제 및 Mg2+ 이온을 함유하는 완충액으로 구성된다. 선형화된 플라스미드 DNA, PCR 생성물 및 합성 DNA 올리고뉴클레오타이드는 전사될 유전자의 업스트림에 T7 프로모터 서열을 갖는 한, 전사를 위한 주형으로 사용될 수 있다. 폴리-(A) 테일을 갖는 DNA 주형을 생성하기 위해, T7 RNA 폴리머라제 서열을 포함하는 5' 프라이머와 120 nt 폴리 T 서열을 갖는 3' 프라이머를 사용하는 테일-PCR을 합성하고 정제한다(BioSpring, Frankfurt).
시험관 내 전사를 위한 선형 DNA 주형은 선형화된 플라스미드로부터 PCR에 의해 생성된다. 벡터 백본에서 3-말단을 한 번 절단하는 BamHI로 플라스미드를 소화시켜, 폴리-(A) 테일 PCR을 위한 주형으로 사용할 수 있는 선형화된 벡터를 생성한다. 5 μg의 플라스미드를 50 μl 및 1x HF 완충액에서 5U BamHI 제한 효소로 37℃에서 2시간 동안 소화시킨다. 소화된 혼합물의 작은 분취량을 겔 전기영동으로 분석하여 플라스미드의 완전한 소화를 확인한다. 제한 효소를 80℃에서 20분 동안 인큐베이션함으로써 열-불활성화시키고, 소화된 플라스미드를 제조사의 프로토콜(NucleoSpin Gel and PCR clean-up, Macherey-Nagel)에 따라 PCR 정제 컬럼으로 정제한다. 선형화된 플라스미드는 -20℃에서 몇 개월 동안 저장할 수 있으며, PCR 주형 생성에 사용될 수 있다. 선형화의 목적은 IVT 반응 동안 잠재적으로 런-온 전사체를 생성할 수 있는 원형 주형을 제거하는 것이다.
PCR에 의한 폴리-(A) 테일의 추가는 제조사의 프로토콜에 따라 Hot Start HiFidelity 폴리머라제(Qiagen) 또는 Taq DNA 폴리머라제(Roche)를 사용하여 수행하였다. 이를 위해, T7 프로모터 서열 및 3' 폴리 A 테일 서열(120 nt)을 함유하는 어댑터 프라이머를 사용하여 선형 DNA-주형을 증폭시켰다. 각각의 어댑터 프라이머는 번역 및 전사에 필요한 조절 서열을 관심 유전자에 융합시킨 중첩 서열을 가졌다(예를 들어, 도 7a 및 7b 참조). 전형적인 50 μl의 PCR 반응물에는 200 μM(각각의) dNTP, 각 프라이머에 대해 0,5 μM, 50 ng 선형화된 플라스미드 DNA, 1x PCR 반응 완충액(1,5 mM MgCl2) 및 반응 당 1,25 U Taq DNA 폴리머라제(5 U/μl의 0,25 μl)의 최종 농도가 함유되어 있다. 특이적 PCR 사이클 프로그램 또는 열 프로파일은 프라이머 쌍의 Tm, PCR 생성물의 예상 길이 및 사용된 열 순환기에 따라 조정되었다. PCR 생성물의 품질은 겔 전기영동으로 분취량을 분석하여 확인하고, 반응물은 상용 PCR 정제 키트((NucleoSpin Gel and PCR clean-up, Macherey-Nagel)로 정제한다.
시험관 내 전사 반응
RNA에 5' 말단 캡 구조를 첨가하는 것은 진핵생물에서 중요한 과정이다. 이는 RNA 안정성, 효율적인 번역, 핵 수송 및 스플라이싱에 필수적이다. 이 과정은 RNA의 5' 트리포스페이트 말단에 7-메틸구아노신 캡을 추가하는 것을 포함한다. RNA 캡핑은 캡핑 효소를 사용하여 전사 후 수행하거나 ARCA(Jena Bioscience)와 같은 캡 유사체를 사용하여 동시 전사적으로 수행할 수 있다. 효소적 방법에서, mRNA는 백시니아 바이러스 캡핑 효소12,13를 사용하여 캡핑될 수 있다. 효소는 GTP 및 S-아데노실 메티오닌을 공여체로 사용하여 RNA의 5' 말단에 7-메틸구아노신 캡을 추가한다(캡-0 구조). 두 방법 모두 형질감염 또는 기타 용도에 적합한 기능적으로 활성인 캡핑된 RNA를 생성한다.
하기 기술된 실시예 6에서, T7 고수율 전사 키트(Thermo Scientific)는 캡 유사체를 동시 전사적으로 사용하여, 캡핑된 RNA 전사체(PAN 01-88)를 합성하는데 사용될 수 있다.
전사 반응을 위한 DNA 주형은 선형화된 플라스미드 또는 PCR 생성물이다. 캡핑된 RNA의 경우, 실온에서의 반응을 하기 순서로 설정한다:
Figure pct00008
1 μg의 DNA를 첨가하고, 뉴클레아제 비함유 물을 첨가하여 총 반응 부피를 20 μl로 수득한다. 첨가되는 물의 양은 주형 DNA의 농도에 따라 다양할 것이다. 반응물은 볼텍싱에 의해 잘 혼합되었고 건조 공기 인큐베이터에서 2시간 동안 37℃에서 반응물을 인큐베이션하였다. 정제를 진행하기 전에 전사 반응을 DNase I로 처리하여 DNA 주형을 제거하였다.
1. 70 μl의 뉴클레아제 비함유 물을 전사 반응에 첨가한 후 10 μl의 DNase I 반응 완충액을 첨가하였다.
2. 2 μl의 DNase I을 반응에 첨가하였다.
3. 37℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다.
캡핑된 mRNA의 컬럼 정제
1. 캡핑된 RNA를 제조업체의 지침에 따라 MEGAclearKit(ThermoFisher, Waltham, MA, USA)(임의의 스핀 걸럼 기반 RNA 정제 키트를 사용할 수 있음)를 사용하여 정제한다.
2. NanoDrop 분광광도계를 사용하여 RNA를 정량화한다.
3. 제조업체의 지침에 따라, Agilent RNA 6000 나노 키트 및 Agilent 2100 생물분석기를 사용하여, 또는 기본 1% 아가로스 겔 전기영동 및 에티듐 브로마이드 염색을 사용하여 RNA 샘플 품질을 평가한다.
HeLa, HEK293, HUVEC 및 HPMEC 세포의 mRNA 형질감염
1차 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)는 인간 폐 질환 연구에 가장 적합하며, 단일 공여체로부터의 폐로부터 단리된다. 폐 조직은 혈액과 림프 모세관을 포함하기 때문에, HPMEC는 혈액 및 림프 미세혈관 내피 세포를 포함한다.　세포는 면역형광 염색에 의해 일상적으로 분석되고: 이들은 CD31 및 폰 빌레브란트 인자에 대해 양성으로 염색되고, 평활근 알파-액틴에 대해 음성으로 염색된다. HHeLa 세포, HUVEC, HPMEC 세포는 각각 DMEM 완전 배지 또는 내피 세포 성장 배지(Promocell, Heidelberg Germany, CatNo.: C-22020)에서 성장시켰다. 내피 세포 성장 배지는 태아 송아지 혈청(0.05 ml/ml), 내피 세포 성장 보충제(소 시상하부 추출물; 0.004 ml/ml), 헤파린 90 μg/ml 및 하이드로코르티손 1 μg/ml가 보충된 기초 배지이다. HUVEC 및 HPMEC 세포를 사용한 실험은 계대 번호가 8 미만인 세포에서 수행한다.
mRNA 형질감염은 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 수행한다. 24-웰 플레이트 포맷의 mRNA 형질감염을 위해, 1x105 세포/웰을 형질감염 직전 70~90 컨플루언스에 도달하도록 형질감염 24시간 전에 씨딩하였다. 하나의 단일 웰에 대해, 1.5 μl의 리포펙타민 메신저MAX 시약을 25 μl의 OptiMEM에 첨가하고, 볼텍싱하고, 실온에서 10분간 인큐베이션한다. 두번째 웰에서 500 ng 또는 1 μg의 mRNA를 25 μl의 OptiMEM에 첨가하고, 볼텍싱한다. 인큐베이션 후, 희석된 mRNA를 희석된 리포펙타민에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고 Hela용 DMEM 완전 배지 0.5 ml의 존재 하에 세포에 적가한다. HUVEC 및 HPMEC의 경우, 내피 세포 성장 배지를 교체하고 세포를 OptiMEM으로 세척한 다음, 리포펙타민 메신저MAX mRNA 복합 용액을 37℃로 예열된 0,5 ml의 OptiMEM과 함께 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, OptiMEM 배지를 완전한 내피 세포 성장 배지(Promocell, Heidelberg Germany)로 교체하고, 형질감염된 세포 또는 혈청을 지시된 시점에서 분석하였다. 대안적으로, 중성 및 PEG화 공지질과 조합된 양이온성 지질 L-아르기닐-β-알라닌-N-팔미틸-N-올레일-아미드 또는 β-(L-아르기닐)-L-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드에 기반한 mRNA-LNP를 시험관 내 형질감염에 사용할 수 있다.
숙주 세포로의 mRNA의 성공적인 도입은 다양한 공지된 방법, 예컨대 또한 예를 들어 웨스턴 블롯팅 또는 면역세포화학 또는 ELISA에 의해 표적 폴리펩타이드의 단백질 발현 수준을 측정하는 방법을 사용하여 모니터링될 수 있다.
5-메틸시토신 및/또는 슈도우리딘(또는 5-메톡시우리딘)을 갖는 완전히 변형된 mRNA는 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 HUVEC 또는 HPMEC(인간 폐 미세혈관 내피 세포, Promocell, Heidelberg)로 형질감염된다. 세포 용해물을 수확하고 형질감염 후 다른 시점(30'', 1시간, 2시간, 4시간, 6시간)에서의 ELISA에 의해 실행하여 단백질 발현을 측정하였다.
Tie-2 및 유도체의 면역블롯 검출을 위해, 실행 보조제로서 MOPS-완충액(모두 Life Technologies, Grand Island, NY)에 의한 4~12% 아크릴아미드 구배 및 1.5 mm 즉시 사용 가능한 Bis-Tris 겔을 사용한 NuPage SDS-PAGE 시스템(챔버 및 전원 공급 장치)에 단백질 용해물을 로드하였다. 각 용해물 샘플은 40 μl 최종 부피로 준비하였다. 이 샘플에는 가변 부피의 25 μg의 단백질 용해물, 최대 26 μl의 부피를 구성하는 RIPA 완충액, 4 μl의 l0x 환원제 및 l0 μl 4x SDS 로딩 완충액(둘 모두 Life Technologies, Grand Island, NY)이 함유되었다. 샘플을 95℃에서 5분 동안 가열하고 겔에 로드하였다. 표준 설정은 제조업체에서 선택하였으며, 200 V, 120 mA 및 최대 25 W이다. 실행 시간은 60분이었지만, 겔의 하단에 도달하는 실행 염료보다 길지 않다.
실행이 종료된 후, 플라스틱 케이스가 균열되고, 봉입된 겔을 즉시 사용가능한 니트로셀룰로스 멤브레인 키트 및 전원 공급 장치(iBLOT; LifeTechnologies, Grand Island, NY)로 옮겼다. 기본 설정을 사용하여, 단백질 용해물은 높은 암페어 전기에 의해 겔에서 멤브레인으로 전달되었다.
전달 후, 멤브레인을 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA에서 인큐베이션한 다음, 추가로 15분 동안 IX TBS 중 5% BSA + 0.1% Tween에서 인큐베이션한다. 인간 Tie-2 단백질에 대한 1차 항체 또는 포스포-특이적 항체들(P-TIE2, P-AKT, 하기 참조)을 실온에서 3시간동안 1:500 내지 1:2000 희석으로 IX TBS 용액 중 3 ml의 5% BSA에 적용하여 오비탈 셰이커에서 부드럽게 교반한다. 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척한다. 2차 항체(염소 항-토끼 HRP 접합체; Abeam, Cambridge, MA)를 홀스래디쉬 퍼옥시다제에 접합하고, 1차 항체 항체들에 결합하였다. 2차 항체를 IX TBS 중 5% BSA에서 1:1000에서 1:5000으로 희석하고, 실온에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 시간이 끝나면 멤브레인을 부드럽게 교반하면서 매회 5분씩 IX TBS/0.1% Tween으로 3회 세척하였다. 멤브레인은 지시에 따라 5 ml의 Pierce WestPico 화학발광 기질(Thermo Fisher, Rockford, IL)에서 전개되었다.
실시예 6: 야생형 Tie-2(PAN60) 또는 활성화 Tie-2 돌연변이(PAN61-65)를 암호화하는 변형된 mRNA의 형질감염 후 Tie-2 경로 활성화
Tie-2 wt 또는 활성화 Tie-2 점 돌연변이를 암호화하는 상이한 mRNA 작제물은 시험관 내 전사에 의해 제조되고 1차 미세혈관 내피 세포를 포함하는 포유동물 세포 내로 형질감염된다. Tie-2 발현 및 Tie-2 인산화 상태를 분석하여 발현 및 활성화를 입증한다. Tie-2 활성화의 예는 예를 들어, 증가된 포스포-Tie-2, 포스포-Akt 또는 다운스트림 이펙터 단백질 발현, 예컨대 VE-카드헤린이다.
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA는 상기 실시예 5에서 이전에 기재된 바와 같이 PCR 주형의 시험관 내 전사에 의해 생성된다. 활성화 Tie-2 돌연변이를 암호화하는 이 mRNA의 다른 농도는 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific.)를 사용하여 야생형 Tie-2를 암호화하는 mRNA 옆에 다른 세포주(HeLa, HUVEC 또는 HPMEC와 같은 1차 내피 세포)에서 형질감염된다. 정성적 웨스턴 블롯을 위해 mRNA(1~24시간)의 형질감염 후 다양한 시점에서 세포 용해물을 항-포스포티로신 항체로 프로브하여 Tie-2 인산화(pY992 Tie-2, RnD Systems, Minneapolis, MN; Bio-Techne), 140 kD,)를 평가한다. 블롯을 스트라이핑하고 항-Tie-2 항체로 재-프로브하여 총 Tie-2를 검출한다.
결과
흥미롭게도, mRNA를 암호화하는 Tie-2 돌연변이(R849W)의 형질감염은 야생형 Tie-2 mRNA를 암호화하는 mRNA로 형질감염된 세포로부터 유래된 세포 용해물과 비교하여, 또는 형질감염되지 않은 세포와 비교하여, 포스포-Tie-2의 존재를 증가시킨다. Tie-2 인산화의 이러한 증가는 재조합 인간 Ang-1 리간드와의 공동 자극의 존재 또는 부재 하에 관찰되며, 상이한 세포주에서 관찰될 수 있다. Tie-2 신호전달 경로의 활성화를 확인하고 Tie-2 돌연변이 유도체를 발현함으로써 생물학적 관련 기능적 다운스트림 신호 전달을 입증하기 위해, Akt의 인산화가 시간 경과 실험에서 입증된다. 이들 실험은 Tie-2 활성화 돌연변이를 암호화하는 mRNA가 wt Tie-2 암호화 mRNA보다 Tie-2 신호전달 경로를 활성화하는 데 기능적이고 더 강하다는 것을 나타낸다. 경로의 이러한 과활성화는 인간 내피 및/또는 비-내피 세포에서 Tie-2 효능제(예를 들어 Ang-1)의 부재 또는 존재 하에 입증될 수 있다.
보다 구체적으로, 도 123은 120 nt의 Poly-A 테일 및 이들 주형으로부터 유래된 mRNA의 첨가에 대한 폴리-A 테일링 PCR의 PCR 생성물을 보여주는 EtBr로 염색된 1% 아가로스 겔을 나타낸다. 상단 패널은 TIE2 wt를 암호화하는 표시된 작제물(PAN 60의, 또는 TIE2 R849W를 암호화하는 돌연변이된 작제물 PAN 61, TIE2 L914F를 암호화하는 PAN 62, TIE2 R849W L914F를 암호화하는 PAN 63, Y897F R915L을 암호화하는 PAN 64 및 TIE2 Y897F R915L T1105N T1106P를 암호화하는 PAN 65에 대한 PCR 생성된 DNA 주형의 품질 제어를 나타낸다. 하단 패널은 표시된 작제물의 IVT 생성된 mRNA의 품질 관리를 나타낸다. 1 μg의 DNA 또는 mRNA를 EtBr을 함유하는 비-변성 1% 아가로스 겔에 로딩하고, 120 V에서 30분 동안 전기영동을 수행하고, 핵산을 UV 광 하에서 가시화하였다.
또한, 도 124 및 125에 도시된 면역블롯에 표시된 바와 같이, 작제물 PAN62, PAN63 및 PAN64는 Ang-1의 부재 하에 Tie-2 수용체의 인산화에 의해 표시되는 구성적 Tie-2 활성화를 나타낸다. 상단 패널은 다른 작제물의 mRNA 형질감염 7시간 후 HeLa 세포 용해물의 면역블롯이다. PAN 51은 음성 대조군 역할을 한다. 하단 패널은 표시된 mRNA 작제물로 24시간 동안 형질감염되고 15분 또는 30분 동안 재조합 ANG-1로 자극된 HeLa 세포 용해물에 대한 면역블롯이다. wt(PAN60)와 비교하여 Tie-2 단백질 수준의 감소는 구성적 활성 돌연변이체의 증가된 Tie-2 활성화 후에 Tie-2 수용체 자체의 증가된 내재화 및 분해의 결과이다. 두 실험 모두 작제물 PAN62, PAN63 및 PAN64에서 유래된 mRNA를 사용하여 Tie-2 효능제의 부재 하에 Tie-2 인산화를 나타낸다.
실시예 7: 전장 야생형 Tie-2(PAN60) 또는 돌연변이된 전장 Tie-2 작제물(PAN61~63)을 암호화하는 mRNA에 의한 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)의 형질감염 후 Tie-2 경로 활성화
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA 및 야생형(wt) Tie-2(PAN60) 또는 활성화 Tie-2 돌연변이(PAN61~63)에 대한 암호화 서열을 Tie-2-양성 HPMEC에서 형질감염시켰다. 이어서, Tie-2 발현 및 인산화 및 다운스트림 신호전달 활성화를 웨스턴 블롯 분석으로 분석하였다.
따라서, 세포는 6웰 플레이트에서 90% 컨플루언시에서 성장하였다. 1%-혈청 ECM(내피 세포 배지, Promocell, Heidelberg, Germany)에서 24시간 동안 세포를 기아시킨 후, 세포를 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 2 μg의 각각의 mRNA(PAN61~63)로 무혈청 ECM에서 형질감염시켰다. mRNA PAN51을 암호화하는 Nluc를 대조군으로 사용하였다. 3시간 후, 무혈청 ECM 배지를 1%-혈청 ECM으로 대체하였다. mRNA 형질감염 9시간 후, 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, RIPA 완충액에 용해시키고, 단백질 용해물을 SDS-PAGE를 사용하여 분리하고, 단백질 수준을 항-포스포-Tie-2 항체(pY992 Tie-2, RnD Systems, Minneapolis, MN; Bio-Techne), 항-포스포-Akt 항체(pS473 Akt, Cell Signaling Technology, Danvers, MA), 항-Tie-2(Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 및 항-Akt 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MA)를 사용한 면역블롯 분석으로 평가하였다.
결과는 도 126에 도시되어 있다. 야생형 Tie-2(PAN60) 및 TIE 2_R849W 돌연변이(PAN61)를 암호화하는 mRNA의 경우, Tie-2 자가인산화는 거의 검출 가능하지 않았다. 그러나, Tie-2_L914F 돌연변이(PAN62)를 암호화하는 mRNA로 형질감염된 세포는 중간 정도의 리간드-(Ang-1)-비의존적 자가인산화를 보였다. 놀랍게도, 이중-돌연변이 변이체 Tie-2-R849W_L914F(PAN63)를 암호화하는 mRNA로 형질감염된 세포는 매우 강한 Tie-2 자가인산화를 나타냈다. PAN63에 대한 현저하게 강한 리간드-독립적 Tie-2 경로 활성화는 강력한 다운스트림 포스포-Akt 신호에 의해 더욱 확증되었다. 이러한 데이터는 PAN63이 구성적 활성 Tie-2 유도체의 발현에 적합한 mRNA 작제물이고 내인성 Tie-2 단백질 발현이 하향 조절된 조건하에서도 내피 세포에서 치료적 Tie-2 활성화에 사용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 8: Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)에서 이종성 N-말단 도메인(PAN77, PAN78)을 갖는, 고차형 전장 Tie-2(PAN63) 또는 고차형 절단된 Tie-2 변이체를 암호화하는 mRNA의 시간-의존적 발현
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA 및 고차형(R849W_L914F 이중 돌연변이) 전장 Tie-2(PAN63;) 또는 고차형(R849W_L914F 이중 돌연변이) 절단된 Tie-2 돌연변이(PAN77, PAN78)에 대한 암호화 서열을 Tie-2-양성 HPMEC에서 형질감염시켰다. 음성 대조군으로 mRNA를 암호화하는 Nluc를 사용하고, 반면 양성 대조군으로 Ang1 리간드를 사용하였다.
이종성 N-말단 도메인을 갖는 신규한 절단된 고차형 Tie-2 변이체를 다음과 같이 설계하였다: PAN77의 경우, Src 키나제의 N-말단 미리스틸화 신호(MGSSKSKPKDPSQR)를 짧은 GGH-링커를 통해 Tie-2 R849W_L914F 이중 돌연변이를 포함하는 Tie-2의 C-말단 세포내 키나제 도메인(KD)(Tie-2의 아미노산 770~1124; UniProtKB - Q02763)에 융합시켰다. PAN78의 경우, 인간 COMP의 N-말단 코일링된-코일(다량체화) 도메인(연골 올리고머 기질 단백질의 아미노산 29~73; UniProtKB P49747(Refseq: NP_000086.2; NM_000095.3))을 GGISGGGGGI-링커를 통해 Tie-2 R849W_L914F 이중 돌연변이를 포함하는 Tie-2의 C-말단 막관통 및 키나제 도메인(Tie-2의 아미노산 749~1124; UniProtKB - Q02763)에 융합시켰다. 따라서, 융합 단백질은 각각 myrTie-2(PAN77에 의해 암호화됨) 또는 COMP-Tie-2로 명명되었다
HPMEC로의 형질감염 후 Tie-2 발현 및 인산화 뿐만 아니라 다운스트림 신호전달 활성화를 웨스턴 블롯 분석에 의해 분석하였다.
형질감염을 위해, 세포를 6웰 플레이트에서 90% 컨플루언시에서 성장시켰다. 1%-혈청 ECM(내피 세포 배지, Promocell, Heidelberg, Germany)에서 24시간 동안 세포를 기아시킨 후, 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 세포를 2 μg의 각각의 mRNA를 갖는 무혈청 ECM에서 형질감염시켰다. 3시간 후, 무혈청 ECM 배지를 1%-혈청 ECM으로 교체하였다. mRNA 형질감염 2, 4, 6 및 8시간 후, 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, RIPA 완충액에 용해시키고, SDS-PAGE를 사용하여 단백질 용해물을 분리하고, 항-포스포-Tie-2 항체(pY992 Tie-2, RnD Systems, Minneapolis, MN; Bio-Techne), 항-포스포-Akt 항체(pS473 Akt, 세포 Signaling Technology, Danvers, MA), N-말단 항-Tie-2(ab33, MerckMillipore, Darmstadt, Germany), C-말단 항-Tie-2 항체(SAB4502942, MerckMillipore, Darmstadt, Germany), 및 항-Akt 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MA)를 사용한 면역블롯 분석으로 단백질 수준을 평가하였다.
결과를 도 127에 나타낸다. 고차형 전장 Tie-2(PAN63)를 암호화하는 mRNA로 형질감염시킨 후 6 및 8시간 후, 세포는 Ang-1 리간드 매개된 Tie-2 활성화보다 유의하게 더 강한 강한 Tie-2 자가-인산화를 나타냈다. 동시에, 다운스트림 Tie-2 경로 활성화는 증가된 Akt 인산화에 의해 나타났다.
놀랍게도, PAN63의 이미 높은 자가-인산화 활성과 비교하여, 이종성 N-말단 도메인(PAN77, PAN78)을 갖는 절단된 고차형 Tie-2 변이체를 암호화하는 mRNA로 형질감염된 세포는 Tie-2 인산화뿐만 아니라 다운스트림 Akt 활성화를 크게 증가시킨 것으로 나타났다.
훨씬 더 놀랍게도, Tie-2 인산화 및 다운스트림 경로 활성화는 PAN63 의 6~8시간과 비교하여 mRNA 형질감염 2시간 후에 이미 존재하였다.
실시예 9: Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)에서 이종성 N-말단 도메인(PAN77, PAN78)을 갖는, 고차형 전장 Tie-2(PAN63) 또는 고차형 절단된 Tie-2 변이체를 암호화하는 mRNA의 용량-의존적 발현
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA 및 고차형(R849W_L914F 이중 돌연변이) 전장 Tie-2(PAN63;) 또는 고차형(R849W_L914F 이중 돌연변이) 절단된 Tie-2 돌연변이(PAN77, PAN78)에 대한 암호화 서열을 Tie-2-양성 HPMEC에서 형질감염시켰다. 음성 대조군으로 mRNA(PAN50)를 암호화하는 Nluc를 사용하였다.
이종성 N-말단 도메인을 갖는 절단된 고차형 Tie-2 변이체를 실시예 8에 요약한 바와 같이 설계하였다.
형질감염을 위해, 세포를 6웰 플레이트에서 90% 컨플루언시에서 성장시켰다. 1%-혈청 ECM(내피 세포 배지, Promocell, Heidelberg, Germany)에서 24시간 동안 세포를 기아시킨 후, 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 세포를 2, 1, 0.5, 0.25 μg/웰의 각각의 mRNA를 갖는 무혈청 ECM에서 형질감염시켰다. 3시간 후, 무혈청 ECM 배지를 1%-혈청 ECM으로 교체하였다. mRNA 형질감염 8시간 후, 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, RIPA 완충액에 용해시키고, SDS-PAGE를 사용하여 단백질 용해물을 분리하고, 항-포스포 Y992 항체(RnD Systems, Minneapolis, MN; Bio-Techne) 및 항-포스포 Y1102 Tie-2 항체(RnD Systems, Minneapolis, MN; Bio-Techne), 항-포스포 S1119 Tie-2 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MA), 항-포스포 pS473 Akt 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MA), N-말단 항-Tie-2(ab33, MerckMillipore, Darmstadt, Germany), C-말단 항-Tie-2 항체(SAB4502942, MerckMillipore, Darmstadt, Germany), 및 항-Akt 항체(Cell Signaling Technology, Danvers, MA)를 사용한 면역블롯 분석으로 단백질 수준을 평가하였다.
결과를 도 128에 나타낸다. 형질감염 8시간 후에 고차형 절단된 Tie-2 변이체(PAN77, PAN78)를 암호화하는 mRNA의 분명한 용량 의존적 발현을 검출할 수 있었다. 또한, PAN77 뿐만 아니라 PAN78은 pY992 Tie-2 항체로 평가된 바와 같이, 매우 강한 Tie-2 인산화를 나타냈다. 이러한 매우 높은 활성으로 인해, 낮은 특이성으로 항체 pY1102 Tie-2 및 pS1119 Tie-2를 사용하여 상이한 Tie-2 세그먼트에서 인산화가 검출될 수 있다.
동시에, Akt의 인산화에 의해 평가된 바와 같이 PAN77 및 PAN78에 대해 용량 의존적 Tie-2 경로 다운스트림 신호전달 활성이 명백하였다.
실시예 10: Tie-2-양성 인간 폐 미세혈관 내피 세포(HPMEC)에서 이종성 N-말단 도메인(PAN77, PAN78)을 갖는 고차형 절단된 Tie-2 변이체의 발현 후 Tie-2 수용체 경로 활성화 및 다운스트림 신호전달 분석
이종성 5' 및 3' UTR을 함유하는 변형된 mRNA 및 이종성 N-말단 도메인(PAN77, PAN78)을 갖는 고차형(R849W_L914F 이중 돌연변이) 절단된 TIE-2 돌연변이에 대한 암호화 서열을 Tie-2-양성 HPMEC에서 형질감염시켰다. 음성 대조군으로 mRNA(PAN50)를 암호화하는 Nluc를 사용하였다. 절단된 고차형 Tie-2 변이체를 실시예 8에 요약한 바와 같이 설계하였다. 형질감염을 위해, 세포를 6웰 플레이트에서 90% 컨플루언시에서 성장시켰다. 1%-혈청 ECM(내피 세포 배지, Promocell, Heidelberg, Germany)에서 24시간 동안 세포를 기아시킨 후, 리포펙타민 메신저MAX(Invitrogen, Carlsbad, CA; Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 세포를 2, 1, 0.5, 0.25 μg/웰의 각각의 mRNA를 갖는 무혈청 ECM에서 형질감염시켰다. A3시간 후, 무혈청 ECM 배지를 1%-혈청 ECM으로 교체하였다. mRNA 형질감염 8시간 후, 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, RIPA 완충액에 용해시키고, BisTRIS-PAGE를 사용하여 단백질 용해물을 분리하고, 항-Akt(Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 및 항-FOXO1(Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 항체 또는 항-포스포-Akt(pS473 Akt, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 및 항-포스포-FOXO1(pT24 FOXO1, Cell Signaling Technology, Danvers, MA; pS256 FOXO1, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) 항체를 사용한 면역블롯 분석으로 단백질 수준을 평가하였다.
면역블롯 결과를 도 129에 나타낸다. mRNA PAN77(myrTie-2를 암호화함) 및 PAN78(COMP-Tie-2를 암호화함)로 세포를 형질감염시킨지 8시간 후에 포스포-Akt 및 다운스트림 포스포-FOXO1에서 용량 의존적 강한 증가가 검출될 수 있었으며, 이는 Tie-2 수용체 경로 활성화를 반영한다.
명세서, 특허청구범위 및/또는 도면에 개시된 본 발명의 특징은 개별적으로 그리고 이들의 임의의 조합으로 본 발명을 다양한 형태로 실현하기 위한 재료일 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Pantherna Therapeutics GmbH <120> Recombniant nucleic acid construct and use thereof <130> P 10052 PCT <150> EP 20 000 064.4 <151> 2020-02-11 <150> EP 20 156 987.8 <151> 2020-02-12 <150> EP 21 156 423.2 <151> 2021-02-10 <160> 172 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 taatacgact cactataggg ccctaagcca tcagcaat 38 <210> 2 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 taatacgact cactatagga aagtgattga ttcggata 38 <210> 3 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 taatacgact cactataggt ccccattgaa taacagcc 38 <210> 4 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 taatacgact cactatagga taaaagccca ggggcaag 38 <210> 5 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 taatacgact cactataggg tcagccatct ttcaattg 38 <210> 6 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 taatacgact cactataggc atatcttcat tcttcact 38 <210> 7 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 taatacgact cactatagga taaaagccta gtggccat 38 <210> 8 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 taatacgact cactataggg aggaaccgag aggctgag 38 <210> 9 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 taatacgact cactataggg gagctgttta cccccact 38 <210> 10 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 taatacgact cactatagga aagtgattga ttcggata 38 <210> 11 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 gccttttgca agataagag 139 <210> 12 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 gccttttgca agataagag 139 <210> 13 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 gaattttaaa gtttattta 139 <210> 14 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 atagtttaat gtattttaa 139 <210> 15 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 ttaactacat ctaaaccca 139 <210> 16 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 tcgctacaaa tcaaaaggc 139 <210> 17 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 tgtacaaaaa tatatttat 139 <210> 18 <211> 144 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 tttacagtaa ggaaaaaaat attt 144 <210> 19 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 gccttttgca agataagag 139 <210> 20 <211> 73 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(73) <400> 20 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agc 73 <210> 21 <211> 69 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(69) <400> 21 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgct 69 <210> 22 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(23) <400> 22 Met Lys Val Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Ala Thr 1 5 10 15 Phe Ile Pro Gln Gly Leu Ala 20 <210> 23 <211> 373 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(373) <400> 23 acactcactc cacaacccaa gaatctgcag ctaacttatt ttcccctagc tttccccaga 60 caccctgttt tattttatta taatgaattt tgtttgttga tgtgaaacat tatgccttaa 120 gtaatgttaa ttcttattta agttattgat gttttaagtt tatctttcat ggtactagtg 180 ttttttagat acagagactt ggggaaattg cttttcctct tgaaccacag ttctacccct 240 gggatgtttt gagggtcttt gcaagaatca ttaatacaaa gaattttttt taacattcca 300 atgcattgct aaaatattat tgtggaaatg aatattttgt aactattaca ccaaataaat 360 atatttttgt aca 373 <210> 24 <211> 94 <212> DNA <213> Spinacia oleracea <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(94) <400> 24 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aaca 94 <210> 25 <211> 148 <212> DNA <213> Spinacia oleracea <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(148) <400> 25 ttttgagtaa ttttcaattt tgtttttgtt tttgtttttg ttgttgggag ttgttgtaat 60 ttggtaaatg ttggggtcac taaaatcttt tgttgcaatt ttagcacctt tttattagat 120 atataaaatt gggtttagat gtagttaa 148 <210> 26 <211> 329 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(329) <400> 26 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaaga 329 <210> 27 <211> 54 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(54) <400> 27 atgtggcaga ttgttttctt tactctgagc tgtgatcttg tcttggccgc agcc 54 <210> 28 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(18) <400> 28 Met Trp Gln Ile Val Phe Phe Thr Leu Ser Cys Asp Leu Val Leu Ala 1 5 10 15 Ala Ala <210> 29 <211> 3450 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(3450) <400> 29 acatcccagt ccacctgagg aactgtctcg aactattttc aaagacttaa gcccagtgca 60 ctgaaagtca cggctgcgca ctgtgtcctc ttccaccaca gagggcgtgt gctcggtgct 120 gacgggaccc acatgctcca gattagagcc tgtaaacttt atcacttaaa cttgcatcac 180 ttaacggacc aaagcaagac cctaaacatc cataattgtg attagacaga acacctatgc 240 aaagatgaac ccgaggctga gaatcagact gacagtttac agacgctgct gtcacaacca 300 agaatgttat gtgcaagttt atcagtaaat aactggaaaa cagaacactt atgttataca 360 atacagatca tcttggaact gcattcttct gagcactgtt tatacactgt gtaaataccc 420 atatgtcctg aattcaccat cactatcaca attaaaagga agaaaaaaac tctctaagcc 480 ataaaaagac atattcaggg atattctgag aaggggttac tagaagttta atatttggaa 540 aaacagttag tgcattttta ctccatctct taggtgcttt aaatttttat ttcaaaaaca 600 gcgtatttac atttatgttg acagcttagt tataagttaa tgctcaaata cgtatttcaa 660 atttatatgg tagaaacttc cagaatctct gaaattatca acagaaacgt gccattttag 720 tttatatgca gaccgtacta tttttttctg cctgattgtt aaatatgaag gtatttttag 780 taattaaata taacttatta ggggatatgc ctatgtttaa cttttatgat aatatttaca 840 attttataat ttgtttccaa aagacctaat tgtgccttgt gataaggaaa cttcttactt 900 ttaatgatga ggaaaattat acatttcatt ctatgacaaa gaaactttac tatcttctca 960 ctattctaaa acagaggtct gttttctttc ctagtaagat atatttttat agaactagac 1020 tacaatttaa tttctggttg agaaaagcct tctatttaag aaatttacaa agctatatgt 1080 ctcaagattc acccttaaat ttacttaagg aaaaaaataa ttgacactag taagtttttt 1140 tatgtcaatc agcaaactga aaaaaaaaaa agggtttcaa agtgcaaaaa caaaatctga 1200 tgttcataat atatttaaat atttaccaaa aatttgagaa cacagggctg ggcgcagtgg 1260 ctcacaccta taatcccagt acattggtag gcaaggtggg cagatcacct gaggtcagga 1320 gttcaagacc agcctggaca acatggtgaa accctgtctc tactaaataa tacaaaaatt 1380 agccaggcgt gctggcgggc acctgtaatc ccagctactc gggaggctga ggcagggaga 1440 attgcttgca ccagggaggt agaggttgca gtgagccaag atcgcaccac tgcactccag 1500 ccggggcaac agagcaagac tccatctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaagaa agaaaagaaa 1560 atttgagaac acagctttat actcgggact acaaaaccat aaactcctgg agttttaact 1620 ccttttgaaa ttttcatagt acaattaata ctaatgaaca tttgtgtaaa gctttataat 1680 ttaaaggcaa tttctcatat attcttttct gaatcatttg caaggaagtt cagagtccag 1740 tctgtaacta gcatctacta tatgtctgtc ttcaccttac agtgttctac cattattttt 1800 tctttattcc atttcaaaat ctaatttatt ttaccccaac ttctccccac cacttgacgt 1860 agttttagaa cacacaggtg ttgctacata tttggagtca atgatggact ctggcaaagt 1920 caaggctctg ttttatttcc accaaggtgc acttttccaa caactattta actagttaag 1980 aacctcccta tcttagaact gtatctactt tatatttaag aaggttttat gaattcaaca 2040 acggtatcat ggccttgtat caagttgaaa aacaactgaa aataagaaaa tttcacagcc 2100 tcgaaagaca acaacaagtt tctaggatat ctcaatgaca agagtgatgg atacttaggt 2160 agggaaacgc taatgcagga aaaactggca acaacacaat ttatatcaat tctctttgta 2220 ggcaggtgat aaaaaattca aggacaaatc tcattatgtc attgtgcatc atatataatc 2280 tcttatgagc gagaatgggg ggaatttgtg tttttacttt acacttcaat tccttacacg 2340 gtatttcaaa caaacagttt tgctgagagg agcttttgtc tctccttaag aaaatgttta 2400 taaagctgaa aggaaatcaa acagtaatct taaaaatgaa aacaaaacaa cccaacaacc 2460 tagataacta cagtgatcag ggagcacagt tcaactcctt gttatgtttt agtcatatgg 2520 cctactcaaa cagctaaata acaacaccag tggcagataa aaatcaccat ttatctttca 2580 gctattaatc ttttgaatga ataaactgtg acaaacaaat taacattttt gaacatgaaa 2640 ggcaacttct gcacaatcct gtatccaagc aaactttaaa ttatccactt aattattact 2700 taatcttaaa aaaaattaga acccagaact tttcaatgaa gcatttgaaa gttgaagtgg 2760 aatttaggaa agccataaaa atataaatac tgttatcaca gcaccagcaa gccataatct 2820 ttatacctat cagttctatt tctattaaca gtaaaaacat taagcaagat ataagactac 2880 ctgcccaaga attcagtctt ttttcatttt tgtttttctc agttctgagg atgttaatcg 2940 tcaaattttc tttggactgc attcctcact actttttgca caatggtctc acgttctcac 3000 atttgttctc gcgaataaat tgataaaagg tgttaagttc tgtgaatgtc tttttaatta 3060 tgggcataat tgtgcttgac tggataaaaa cttaagtcca cccttatgtt tataataatt 3120 tcttgagaac agcaaactgc atttaccatc gtaaaacaac atctgactta cgggagctgc 3180 agggaagtgg tgagacagtt cgaacggctc ctcagaaatc cagtgaccca attctaaaga 3240 ccatagcacc tgcaagtgac acaacaagca gatttattat acatttatta gccttagcag 3300 gcaataaacc aagaatcact ttgaagacac agcaaaaagt gatacactcc gcagatctga 3360 aatagatgtg ttctcagaca acaaagtccc ttcagaatct tcatgttgca taaatgttat 3420 gaatattaat aaaaagttga ttgagaaaaa 3450 <210> 30 <211> 121 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(121) <400> 30 gtctcaatat tagagtctca acccccaata aatataggac tggagatgtc tgaggctcat 60 tctgccctcg agcccaccgg gaacgaaaga gaagctctat ctcccctcca ggagcccagc 120 t 121 <210> 31 <211> 87 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(87) <400> 31 atgaactcct tctccacaag cgccttcggt ccagttgcct tctccctggg gctgctcctg 60 gtgttgcctg ctgccttccc tgcccca 87 <210> 32 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(29) <400> 32 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro 20 25 <210> 33 <211> 429 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(429) <400> 33 catgggcacc tcagattgtt gttgttaatg ggcattcctt cttctggtca gaaacctgtc 60 cactgggcac agaacttatg ttgttctcta tggagaacta aaagtatgag cgttaggaca 120 ctattttaat tatttttaat ttattaatat ttaaatatgt gaagctgagt taatttatgt 180 aagtcatatt tatattttta agaagtacca cttgaaacat tttatgtatt agttttgaaa 240 taataatgga aagtggctat gcagtttgaa tatcctttgt ttcagagcca gatcatttct 300 tggaaagtgt aggcttacct caaataaatg gctaacttat acatattttt aaagaaatat 360 ttatattgta tttatataat gtataaatgg tttttatacc aataaatggc attttaaaaa 420 attcagcaa 429 <210> 34 <211> 255 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(255) <400> 34 gtggcagctc acagctattg tggtgggaaa gggagggtgg ttggtggatg tcacagcttg 60 ggctttatct cccccagcag tggggactcc acagcccctg ggctacataa cagcaagaca 120 gtccggagct gtagcagacc tgattgagcc tttgcagcag ctgagagcat ggcctagggt 180 gggcggcacc attgtccagc agctgagttt cccagggacc ttggagatag ccgcagccct 240 catttgcagg ggaag 255 <210> 35 <211> 66 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(66) <400> 35 atgattcctg ccagatttgc cggggtgctg cttgctctgg ccctcatttt gccagggacc 60 ctttgt 66 <210> 36 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(22) <400> 36 Met Ile Pro Ala Arg Phe Ala Gly Val Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile 1 5 10 15 Leu Pro Gly Thr Leu Cys 20 <210> 37 <211> 141 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(141) <400> 37 ggctgctgca gctgcatggg tgcctgctgc tgcctgcctt ggcctgatgg ccaggccaga 60 gtgctgccag tcctctgcat gttctgctct tgtgcccttc tgagcccaca ataaaggctg 120 agctcttatc ttgcaaaagg c 141 <210> 38 <211> 243 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(243) <400> 38 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt 60 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc 120 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcgg 180 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc 240 ggc 243 <210> 39 <211> 258 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(258) <400> 39 gggcctttcc aagattgctg tttttgtttt ggagcttcaa gactttgcat ttcctagtat 60 ttctgtttgt cagttctcaa tttcctgtgt ttgcaatgtt gaaatttttt ggtgaagtac 120 tgaacttgct ttttttccgg tttctacatg cagagatgaa tttatactgc catcttacga 180 ctatttcttc tttttaatac acttaactca ggccattttt taagttggtt acttcaaagt 240 aaataaactt taaaattc 258 <210> 40 <211> 261 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(261) <400> 40 gggctggggg agggtatata agccgagtag gcgacggtga ggtcgacgcc ggccaagaca 60 gcacagacag attgacctat tggggtgttt cgcgagtgtg agagggaagc gccgcggcct 120 gtatttctag acctgccctt cgcctggttc gtggcgcctt gtgaccccgg gcccctgccg 180 cctgcaagtc ggaaattgcg ctgtgctcct gtgctacggc ctgtggctgg actgcctgct 240 gctgcccaac tggctggcaa g 261 <210> 41 <211> 54 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(54) <400> 41 atgaagctct ccctggtggc cgcgatgctg ctgctgctca gcgcggcgcg ggcc 54 <210> 42 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(18) <400> 42 Met Lys Leu Ser Leu Val Ala Ala Met Leu Leu Leu Leu Ser Ala Ala 1 5 10 15 Arg Ala <210> 43 <211> 1744 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(1744) <400> 43 acactgatct gctagtgctg taatattgta aatactggac tcaggaactt ttgttaggaa 60 aaaattgaaa gaacttaagt ctcgaatgta attggaatct tcacctcaga gtggagttga 120 aactgctata gcctaagcgg ctgtttactg cttttcatta gcagttgctc acatgtcttt 180 gggtgggggg gagaagaaga attggccatc ttaaaaagcg ggtaaaaaac ctgggttagg 240 gtgtgtgttc accttcaaaa tgttctattt aacaactggg tcatgtgcat ctggtgtagg 300 aagttttttc taccataagt gacaccaata aatgtttgtt atttacactg gtctaatgtt 360 tgtgagaagc ttctaattag atcaattact tattttagga aatttaagac tagatactcg 420 tgtgtggggt gaggggaggg agtatttggt atgttgggat aaggaaacac ttctatttaa 480 tgcttccagg gatttttttt ttttttttta accctcctgg gcccaagtga tccttccacc 540 tcagtctccc agctaattga gaccacaggc ttgttaccac catgctcggc ttttgcatta 600 atctaagaaa aggggagaga agttaatcca catctttact caggcaaggg gcatttcaca 660 gtgcccaaga gtggggtttt cttgaacata cttggtttcc tatttcccct tatctttcta 720 aaactgcctt tctggtggct ttttttaaaa ttattactaa tgatgctttt atagctgctt 780 ggattctctg agaaatgatg gggagtgagt gatcactggt attaacttta tacacttgga 840 tttcatttgt aactttagga tgtaaaggta tattgtgaac cctagctgtg tcagaatctc 900 catccctgaa atttctcatt agtggtactg gggtgggatc ttggatggtg acattgaaac 960 tacactaaat cccctcacta tgaatgggtt gttaaaggca atggtttgtg tcaaaactgg 1020 tttaggatta cttagattgt gttcctgaag aaaagagtcc aggtaaatgg tatgatcaat 1080 aaaggacagg ctggtgctaa cataaaatcc aatattgtaa tcctagcact ttgggaggcc 1140 aaggcgggtg gatcacaagg tcaagagata gagaccatct ttgccaacat ggtgaaactc 1200 catctctact gaaaatacaa aaattagctg ggcgtggtag tgcaagctga aggctgaggc 1260 aggagaatca ctcgaacccg ggaggcagag gttgcagtga gccgagatca caccactgta 1320 ctccagcccg gcactccagc ctggcgacaa gagtgagact ccacctcaaa aaaaaaaaaa 1380 agaatccaat actgcccaag gataggtatt ttatagatgg gcaactggct gaaaggttaa 1440 ttctctaggg ctagtagaac tggatcccaa caccaaactc ttaattagac ctaggcctca 1500 gctgcactgc ccgaaaagca tttgggcaga ccctgagcag aatactggtc tcaggccaag 1560 cccaatacag ccattaaaga tgacctacag tgctgtgtac cctggggcaa tagggttaaa 1620 tggtagttag caactagggc tagtcttccc ttacctcaaa ggctctcact accgtggacc 1680 acctagtctg taactctttc tgaggagctg ttactgaata ttaaaaagat agacttcaac 1740 tatg 1744 <210> 44 <211> 128 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(128) <400> 44 gtcagccatc tttcaattgt gttcgcagcc gccgccgcgc cgccgtcgct ctccaacgcc 60 agcgccgcct ctcgctcgcc gagctccagc cgaaggagaa ggggggtaag taaggaggtc 120 tctgtacc 128 <210> 45 <211> 521 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(521) <400> 45 gaatccacta tgatgggaaa catttcattc tcaaaaaaaa aaaaaaaaat ttctcttctt 60 cctgttattg gtagttctga acgttagata ttttttttcc atggggtcaa aaggtaccta 120 agtatatgat tgcgagtgga aaaatagggg acagaaatca ggtattggca gtttttccat 180 tttcatttgt gtgtgaattt ttaatataaa tgcggagacg taaagcatta atgcaagtta 240 aaatgtttca gtgaacaagt ttcagcggtt caactttata ataattataa ataaacctgt 300 taaatttttc tggacaatgc cagcatttgg atttttttaa aacaagtaaa tttcttattg 360 atggcaacta aatggtgttt gtagcatttt tatcatacag tagattccat ccattcacta 420 tacttttcta actgagttgt cctacatgca agtacatgtt tttaatgttg tctgtcttct 480 gtgctgttcc tgtaagtttg ctattaaaat acattaaact a 521 <210> 46 <211> 118 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(118) <400> 46 tccccattga ataacagcca agttgctttg gtttctattt ctttgttaag tcgttccctc 60 tacaaaggac ttcctagtgg gtgtgaaagg cagcggtggc cacagaggcg gcggagag 118 <210> 47 <211> 578 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(578) <400> 47 gcggcttcct ggccctgggg ccgggggctg gggtgtgggg cagtctgggt cctctcatca 60 tccccacttc ccaggcccag cctttccaac cctgcctggg atctgggctt taatgcagag 120 gccatgtcct tgtctggtcc tgcttctggc tacagccacc ctggaacgga gaaggcagct 180 gacggggatt gccttcctca gccgcagcag cacctggggc tccagctgct ggaatcctac 240 catcccagga ggcaggcaca gccagggaga ggggaggagt gggcagtgaa gatgaagccc 300 catgctcagt cccctcccat cccccacgca gctccacccc agtcccaagc caccagctgt 360 ctgctcctgg tgggaggtgg cctcctcagc ccctcctctc tgacctttaa cctcactctc 420 accttgcacc gtgcaccaac ccttcacccc tcctggaaag caggcctgat ggcttcccac 480 tggcctccac cacctgacca gagtgttctc ttcagaggac tggctccttt cccagtgtcc 540 ttaaaataaa gaaatgaaaa tgcttgttgg cacattca 578 <210> 48 <211> 4367 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 gccctaagcc atcagcaatc cttagtatag gggcacactc atgcattcct gtcaagtcat 60 cttgtgaaag gctgcctgct tccagcttgg cttggatgtg caaccttaat aaaactcact 120 gaggtctggg agaaaatagc agatctgcag cagatagggt agaggaaagg gtctagaata 180 tgtacacgca gctgactcag gcaggctcca tgctgaacgg tcacacagag aggaaacaat 240 aaatctcagc tactatgcaa taaatatctc aagttttaac gaagaaaaac atcattgcag 300 tgaaataaaa aattttaaaa ttttagaaca aagctaacaa atggctagtt ttctatgatt 360 cttcttcaaa cgctttcttt gagggggaaa gagtcaaaca aacaagcagt tttacctgaa 420 ataaagaact agttttagag gtcagaagaa aggagcaagt tttgcgagag gcacggaagg 480 agtgtgctgg cagtacaatg acagttttcc tttcctttgc tttcctcgct gccattctga 540 ctcacatagg gtgcagcaat cagcgccgaa gtccagaaaa cagtgggaga agatataacc 600 ggattcaaca tgggcaatgt gcctacactt tcattcttcc agaacacgat ggcaactgtc 660 gtgagagtac gacagaccag tacaacacaa acgctctgca gagagatgct ccacacgtgg 720 aaccggattt ctcttcccag aaacttcaac atctggaaca tgtgatggaa aattatactc 780 agtggctgca aaaacttgag aattacattg tggaaaacat gaagtcggag atggcccaga 840 tacagcagaa tgcagttcag aaccacacgg ctaccatgct ggagatagga accagcctcc 900 tctctcagac tgcagagcag accagaaagc tgacagatgt tgagacccag gtactaaatc 960 aaacttctcg acttgagata cagctgctgg agaattcatt atccacctac aagctagaga 1020 agcaacttct tcaacagaca aatgaaatct tgaagatcca tgaaaaaaac agtttattag 1080 aacataaaat cttagaaatg gaaggaaaac acaaggaaga gttggacacc ttaaaggaag 1140 agaaagagaa ccttcaaggc ttggttactc gtcaaacata tataatccag gagctggaaa 1200 agcaattaaa cagagctacc accaacaaca gtgtccttca gaagcagcaa ctggagctga 1260 tggacacagt ccacaacctt gtcaatcttt gcactaaaga aggtgtttta ctaaagggag 1320 gaaaaagaga ggaagagaaa ccatttagag actgtgcaga tgtatatcaa gctggtttta 1380 ataaaagtgg aatctacact atttatatta ataatatgcc agaacccaaa aaggtgtttt 1440 gcaatatgga tgtcaatggg ggaggttgga ctgtaataca acatcgtgaa gatggaagtc 1500 tagatttcca aagaggctgg aaggaatata aaatgggttt tggaaatccc tccggtgaat 1560 attggctggg gaatgagttt atttttgcca ttaccagtca gaggcagtac atgctaagaa 1620 ttgagttaat ggactgggaa gggaaccgag cctattcaca gtatgacaga ttccacatag 1680 gaaatgaaaa gcaaaactat aggttgtatt taaaaggtca cactgggaca gcaggaaaac 1740 agagcagcct gatcttacac ggtgctgatt tcagcactaa agatgctgat aatgacaact 1800 gtatgtgcaa atgtgccctc atgttaacag gaggatggtg gtttgatgct tgtggcccct 1860 ccaatctaaa tggaatgttc tatactgcgg gacaaaacca tggaaaactg aatgggataa 1920 agtggcacta cttcaaaggg cccagttact ccttacgttc cacaactatg atgattcgac 1980 ctttagattt ttgaaagcgc aatgtcagaa gcgattatga aagcaacaaa gaaatccgga 2040 gaagctgcca ggtgagaaac tgtttgaaaa cttcagaagc aaacaatatt gtctcccttc 2100 cagcaataag tggtagttat gtgaagtcac caaggttctt gaccgtgaat ctggagccgt 2160 ttgagttcac aagagtctct acttggggtg acagtgctca cgtggctcga ctatagaaaa 2220 ctccactgac tgtcgggctt taaaaaggga agaaactgct gagcttgctg tgcttcaaac 2280 tactactgga ccttattttg gaactatggt agccagatga taaatatggt taatttcatg 2340 taaaacagaa aaaaagagtg aaaaagagaa tatacatgaa gaatagaaac aagcctgcca 2400 taatcctttg gaaaagatgt attataccag tgaaaaggtg ttatatctat gcaaacctac 2460 taacaaatta tactgttgca caattttgat aaaaatttag aacagcattg tcctctgagt 2520 tggttaaatg ttaatggatt tcagaagcct aattccagta tcatacttac tagttgattt 2580 ctgcttaccc atcttcaaat gaaaattcca tttttgtaag ccataatgaa ctgtagtaca 2640 tggacaataa gtgtgtggta gaaacaaact ccattactct gatttttgat acagttttca 2700 gaaaaagaaa tgaacataat caagtaagga tgtatgtggt gaaaacttac cacccccata 2760 ctatggtttt catttactct aaaaactgat tgaatgatat ataaatatat ttatagcctg 2820 agtaaagtta aaagaatgta aaatatatca tcaagttctt aaaataatat acatgcattt 2880 aatatttcct ttgatattat acaggaaagc aatattttgg agtatgttaa gttgaagtaa 2940 aagcaagtac tctggagcag ttcattttac agtatctact tgcatgtgta tacatacatg 3000 taacttcatt attttaaaaa tatttttaga actccaatac tcaccctgtt atgtcttgct 3060 aatttaaatt ttgctaatta actgaaacat gcttaccaga ttcacactgt tccagtgtct 3120 ataaaagaaa cactttgaag tctataaaaa ataaaataat tataaatatc attgtacata 3180 gcatgtttat atctgcaaaa aacctaatag ctaattaatc tggaatatgc aacattgtcc 3240 ttaattgatg caaataacac aaatgctcaa agaaatctac tatatccctt aatgaaatac 3300 atcattcttc atatatttct ccttcagtcc attcccttag gcaattttta atttttaaaa 3360 attattatca ggggagaaaa attggcaaaa ctattatatg taagggaaat atatacaaaa 3420 agaaaattaa tcatagtcac ctgactaaga aattctgact gctagttgcc ataaataact 3480 caatggaaat attcctatgg gataatgtat tttaagtgaa tttttggggt gcttgaagtt 3540 actgcattat tttatcaaga agtcttctct gcctgtaagt gtccaaggtt atgacagtaa 3600 acagttttta ttaaaacatg agtcactatg ggatgagaaa attgaaataa agctactggg 3660 cctcctctca taaaagagac agttgttggc aaggtagcaa taccagtttc aaacttggtg 3720 acttgatcca ctatgcctta atggtttcct ccatttgaga aaataaagct attcacattg 3780 ttaagaaaaa tactttttaa agtttaccat caagtctttt ttatatttat gtgtctgtat 3840 tctacccctt tttgccttac aagtgatatt tgcaggtatt ataccatttt tctattcttg 3900 gtggcttctt catagcaggt aagcctctcc ttctaaaaac ttctcaactg ttttcattta 3960 agggaaagaa aatgagtatt ttgtcctttt gtgttcctac agacactttc ttaaaccagt 4020 ttttggataa agaatactat ttccaaactc atattacaaa aacaaaataa aataataaaa 4080 aaagaaagca tgatatttac tgttttgttg tctgggtttg agaaatgaaa tattgtttcc 4140 aattatttat aataaatcag tataaaatgt tttatgattg ttatgtgtat tatgtaatac 4200 gtacatgttt atggcaattt aacatgtgta ttcttttaat tgtttcagaa taggataatt 4260 aggtattcga attttgtctt taaaattcat gtggtttcta tgcaaagttc ttcatatcat 4320 cacaacatta tttgatttaa ataaaattga aagtaatatt tgtgcaa 4367 <210> 49 <211> 3782 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 gccctaagcc atcagcaatc cttagtatag gggcacactc atgcattcct gtcaagtcat 60 cttgtgaaag gctgcctgct tccagcttgg cttggatgtg caaccttaat aaaactcact 120 gaggtctggg agaaaatagc agatctgcag cagatagggt agaggaaagg gtctagaata 180 tgtacacgca gctgactcag gcaggctcca tgctgaacgg tcacacagag aggaaacaat 240 aaatctcagc tactatgcaa taaatatctc aagttttaac gaagaaaaac atcattgcag 300 tgaaataaaa aattttaaaa ttttagaaca aagctaacaa atggctagtt ttctatgatt 360 cttcttcaaa cgctttcttt gagggggaaa gagtcaaaca aacaagcagt tttacctgaa 420 ataaagaact agttttagag gtcagaagaa aggagcaagt tttgcgagag gcacggaagg 480 agtgtgctgg cagtacaatg acagttttcc tttcctttgc tttcctcgct gccattctga 540 ctgggatctt agacctagcc ccacagatgc ttcgagaact ccaggagact aatgcggcgc 600 tgcaagacgt gagagagctc ttgcgacagc aggtcaagga gatcaccttc ctgaagaata 660 cggtgatgga atgtgacgct tgcggaggct cccttgtcaa tctttgcact aaagaaggtg 720 ttttactaaa gggaggaaaa agagaggaag agaaaccatt tagagactgt gcagatgtat 780 atcaagctgg ttttaataaa agtggaatct acactattta tattaataat atgccagaac 840 ccaaaaaggt gttttgcaat atggatgtca atgggggagg ttggactgta atacaacatc 900 gtgaagatgg aagtctagat ttccaaagag gctggaagga atataaaatg ggttttggaa 960 atccctccgg tgaatattgg ctggggaatg agtttatttt tgccattacc agtcagaggc 1020 agtacatgct aagaattgag ttaatggact gggaagggaa ccgagcctat tcacagtatg 1080 acagattcca cataggaaat gaaaagcaaa actataggtt gtatttaaaa ggtcacactg 1140 ggacagcagg aaaacagagc agcctgatct tacacggtgc tgatttcagc actaaagatg 1200 ctgataatga caactgtatg tgcaaatgtg ccctcatgtt aacaggagga tggtggtttg 1260 atgcttgtgg cccctccaat ctaaatggaa tgttctatac tgcgggacaa aaccatggaa 1320 aactgaatgg gataaagtgg cactacttca aagggcccag ttactcctta cgttccacaa 1380 ctatgatgat tcgaccttta gatttttgaa agcgcaatgt cagaagcgat tatgaaagca 1440 acaaagaaat ccggagaagc tgccaggtga gaaactgttt gaaaacttca gaagcaaaca 1500 atattgtctc ccttccagca ataagtggta gttatgtgaa gtcaccaagg ttcttgaccg 1560 tgaatctgga gccgtttgag ttcacaagag tctctacttg gggtgacagt gctcacgtgg 1620 ctcgactata gaaaactcca ctgactgtcg ggctttaaaa agggaagaaa ctgctgagct 1680 tgctgtgctt caaactacta ctggacctta ttttggaact atggtagcca gatgataaat 1740 atggttaatt tcatgtaaaa cagaaaaaaa gagtgaaaaa gagaatatac atgaagaata 1800 gaaacaagcc tgccataatc ctttggaaaa gatgtattat accagtgaaa aggtgttata 1860 tctatgcaaa cctactaaca aattatactg ttgcacaatt ttgataaaaa tttagaacag 1920 cattgtcctc tgagttggtt aaatgttaat ggatttcaga agcctaattc cagtatcata 1980 cttactagtt gatttctgct tacccatctt caaatgaaaa ttccattttt gtaagccata 2040 atgaactgta gtacatggac aataagtgtg tggtagaaac aaactccatt actctgattt 2100 ttgatacagt tttcagaaaa agaaatgaac ataatcaagt aaggatgtat gtggtgaaaa 2160 cttaccaccc ccatactatg gttttcattt actctaaaaa ctgattgaat gatatataaa 2220 tatatttata gcctgagtaa agttaaaaga atgtaaaata tatcatcaag ttcttaaaat 2280 aatatacatg catttaatat ttcctttgat attatacagg aaagcaatat tttggagtat 2340 gttaagttga agtaaaagca agtactctgg agcagttcat tttacagtat ctacttgcat 2400 gtgtatacat acatgtaact tcattatttt aaaaatattt ttagaactcc aatactcacc 2460 ctgttatgtc ttgctaattt aaattttgct aattaactga aacatgctta ccagattcac 2520 actgttccag tgtctataaa agaaacactt tgaagtctat aaaaaataaa ataattataa 2580 atatcattgt acatagcatg tttatatctg caaaaaacct aatagctaat taatctggaa 2640 tatgcaacat tgtccttaat tgatgcaaat aacacaaatg ctcaaagaaa tctactatat 2700 cccttaatga aatacatcat tcttcatata tttctccttc agtccattcc cttaggcaat 2760 ttttaatttt taaaaattat tatcagggga gaaaaattgg caaaactatt atatgtaagg 2820 gaaatatata caaaaagaaa attaatcata gtcacctgac taagaaattc tgactgctag 2880 ttgccataaa taactcaatg gaaatattcc tatgggataa tgtattttaa gtgaattttt 2940 ggggtgcttg aagttactgc attattttat caagaagtct tctctgcctg taagtgtcca 3000 aggttatgac agtaaacagt ttttattaaa acatgagtca ctatgggatg agaaaattga 3060 aataaagcta ctgggcctcc tctcataaaa gagacagttg ttggcaaggt agcaatacca 3120 gtttcaaact tggtgacttg atccactatg ccttaatggt ttcctccatt tgagaaaata 3180 aagctattca cattgttaag aaaaatactt tttaaagttt accatcaagt cttttttata 3240 tttatgtgtc tgtattctac ccctttttgc cttacaagtg atatttgcag gtattatacc 3300 atttttctat tcttggtggc ttcttcatag caggtaagcc tctccttcta aaaacttctc 3360 aactgttttc atttaaggga aagaaaatga gtattttgtc cttttgtgtt cctacagaca 3420 ctttcttaaa ccagtttttg gataaagaat actatttcca aactcatatt acaaaaacaa 3480 aataaaataa taaaaaaaga aagcatgata tttactgttt tgttgtctgg gtttgagaaa 3540 tgaaatattg tttccaatta tttataataa atcagtataa aatgttttat gattgttatg 3600 tgtattatgt aatacgtaca tgtttatggc aatttaacat gtgtattctt ttaattgttt 3660 cagaatagga taattaggta ttcgaatttt gtctttaaaa ttcatgtggt ttctatgcaa 3720 agttcttcat atcatcacaa cattatttga tttaaataaa attgaaagta atatttgtgc 3780 aa 3782 <210> 50 <211> 1976 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgtggcagat tgttttcttt actctgagct 360 gtgatcttgt cttggccgca gcccacatag ggtgcagcaa tcagcgccga agtccagaaa 420 acagtgggag aagatataac cggattcaac atgggcaatg tgcctacact ttcattcttc 480 cagaacacga tggcaactgt cgtgagagta cgacagacca gtacaacaca aacgctctgc 540 agagagatgc tccacacgtg gaaccggatt tctcttccca gaaacttcaa catctggaac 600 atgtgatgga aaattatact cagtggctgc aaaaacttga gaattacatt gtggaaaaca 660 tgaagtcgga gatggcccag atacagcaga atgcagttca gaaccacacg gctaccatgc 720 tggagatagg aaccagcctc ctctctcaga ctgcagagca gaccagaaag ctgacagatg 780 ttgagaccca ggtactaaat caaacttctc gacttgagat acagctgctg gagaattcat 840 tatccaccta caagctagag aagcaacttc ttcaacagac aaatgaaatc ttgaagatcc 900 atgaaaaaaa cagtttatta gaacataaaa tcttagaaat ggaaggaaaa cacaaggaag 960 agttggacac cttaaaggaa gagaaagaga accttcaagg cttggttact cgtcaaacat 1020 atataatcca ggagctggaa aagcaattaa acagagctac caccaacaac agtgtccttc 1080 agaagcagca actggagctg atggacacag tccacaacct tgtcaatctt tgcactaaag 1140 aaggtgtttt actaaaggga ggaaaaagag aggaagagaa accatttaga gactgtgcag 1200 atgtatatca agctggtttt aataaaagtg gaatctacac tatttatatt aataatatgc 1260 cagaacccaa aaaggtgttt tgcaatatgg atgtcaatgg gggaggttgg actgtaatac 1320 aacatcgtga agatggaagt ctagatttcc aaagaggctg gaaggaatat aaaatgggtt 1380 ttggaaatcc ctccggtgaa tattggctgg ggaatgagtt tatttttgcc attaccagtc 1440 agaggcagta catgctaaga attgagttaa tggactggga agggaaccga gcctattcac 1500 agtatgacag attccacata ggaaatgaaa agcaaaacta taggttgtat ttaaaaggtc 1560 acactgggac agcaggaaaa cagagcagcc tgatcttaca cggtgctgat ttcagcacta 1620 aagatgctga taatgacaac tgtatgtgca aatgtgccct catgttaaca ggaggatggt 1680 ggtttgatgc ttgtggcccc tccaatctaa atggaatgtt ctatactgcg ggacaaaacc 1740 atggaaaact gaatgggata aagtggcact acttcaaagg gcccagttac tccttacgtt 1800 ccacaactat gatgattcga cctttagatt tttgaggctg ctgcagctgc atgggtgcct 1860 gctgctgcct gccttggcct gatggccagg ccagagtgct gccagtcctc tgcatgttct 1920 gctcttgtgc ccttctgagc ccacaataaa ggctgagctc ttatcttgca aaaggc 1976 <210> 51 <211> 1391 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgtggcagat tgttttcttt actctgagct 360 gtgatcttgt cttggccgca gccgggatct tagacctagc cccacagatg cttcgagaac 420 tccaggagac taatgcggcg ctgcaagacg tgagagagct cttgcgacag caggtcaagg 480 agatcacctt cctgaagaat acggtgatgg aatgtgacgc ttgcggaggc tcccttgtca 540 atctttgcac taaagaaggt gttttactaa agggaggaaa aagagaggaa gagaaaccat 600 ttagagactg tgcagatgta tatcaagctg gttttaataa aagtggaatc tacactattt 660 atattaataa tatgccagaa cccaaaaagg tgttttgcaa tatggatgtc aatgggggag 720 gttggactgt aatacaacat cgtgaagatg gaagtctaga tttccaaaga ggctggaagg 780 aatataaaat gggttttgga aatccctccg gtgaatattg gctggggaat gagtttattt 840 ttgccattac cagtcagagg cagtacatgc taagaattga gttaatggac tgggaaggga 900 accgagccta ttcacagtat gacagattcc acataggaaa tgaaaagcaa aactataggt 960 tgtatttaaa aggtcacact gggacagcag gaaaacagag cagcctgatc ttacacggtg 1020 ctgatttcag cactaaagat gctgataatg acaactgtat gtgcaaatgt gccctcatgt 1080 taacaggagg atggtggttt gatgcttgtg gcccctccaa tctaaatgga atgttctata 1140 ctgcgggaca aaaccatgga aaactgaatg ggataaagtg gcactacttc aaagggccca 1200 gttactcctt acgttccaca actatgatga ttcgaccttt agatttttga ggctgctgca 1260 gctgcatggg tgcctgctgc tgcctgcctt ggcctgatgg ccaggccaga gtgctgccag 1320 tcctctgcat gttctgctct tgtgcccttc tgagcccaca ataaaggctg agctcttatc 1380 ttgcaaaagg c 1391 <210> 52 <211> 1967 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctcacatagg gtgcagcaat cagcgccgaa gtccagaaaa 180 cagtgggaga agatataacc ggattcaaca tgggcaatgt gcctacactt tcattcttcc 240 agaacacgat ggcaactgtc gtgagagtac gacagaccag tacaacacaa acgctctgca 300 gagagatgct ccacacgtgg aaccggattt ctcttcccag aaacttcaac atctggaaca 360 tgtgatggaa aattatactc agtggctgca aaaacttgag aattacattg tggaaaacat 420 gaagtcggag atggcccaga tacagcagaa tgcagttcag aaccacacgg ctaccatgct 480 ggagatagga accagcctcc tctctcagac tgcagagcag accagaaagc tgacagatgt 540 tgagacccag gtactaaatc aaacttctcg acttgagata cagctgctgg agaattcatt 600 atccacctac aagctagaga agcaacttct tcaacagaca aatgaaatct tgaagatcca 660 tgaaaaaaac agtttattag aacataaaat cttagaaatg gaaggaaaac acaaggaaga 720 gttggacacc ttaaaggaag agaaagagaa ccttcaaggc ttggttactc gtcaaacata 780 tataatccag gagctggaaa agcaattaaa cagagctacc accaacaaca gtgtccttca 840 gaagcagcaa ctggagctga tggacacagt ccacaacctt gtcaatcttt gcactaaaga 900 aggtgtttta ctaaagggag gaaaaagaga ggaagagaaa ccatttagag actgtgcaga 960 tgtatatcaa gctggtttta ataaaagtgg aatctacact atttatatta ataatatgcc 1020 agaacccaaa aaggtgtttt gcaatatgga tgtcaatggg ggaggttgga ctgtaataca 1080 acatcgtgaa gatggaagtc tagatttcca aagaggctgg aaggaatata aaatgggttt 1140 tggaaatccc tccggtgaat attggctggg gaatgagttt atttttgcca ttaccagtca 1200 gaggcagtac atgctaagaa ttgagttaat ggactgggaa gggaaccgag cctattcaca 1260 gtatgacaga ttccacatag gaaatgaaaa gcaaaactat aggttgtatt taaaaggtca 1320 cactgggaca gcaggaaaac agagcagcct gatcttacac ggtgctgatt tcagcactaa 1380 agatgctgat aatgacaact gtatgtgcaa atgtgccctc atgttaacag gaggatggtg 1440 gtttgatgct tgtggcccct ccaatctaaa tggaatgttc tatactgcgg gacaaaacca 1500 tggaaaactg aatgggataa agtggcacta cttcaaaggg cccagttact ccttacgttc 1560 cacaactatg atgattcgac ctttagattt ttgaacactc actccacaac ccaagaatct 1620 gcagctaact tattttcccc tagctttccc cagacaccct gttttatttt attataatga 1680 attttgtttg ttgatgtgaa acattatgcc ttaagtaatg ttaattctta tttaagttat 1740 tgatgtttta agtttatctt tcatggtact agtgtttttt agatacagag acttggggaa 1800 attgcttttc ctcttgaacc acagttctac ccctgggatg ttttgagggt ctttgcaaga 1860 atcattaata caaagaattt tttttaacat tccaatgcat tgctaaaata ttattgtgga 1920 aatgaatatt ttgtaactat tacaccaaat aaatatattt ttgtaca 1967 <210> 53 <211> 1382 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgggatctt agacttgggc ccgcagatgc ttcgggaact 180 gcaggaaacc aacgcggcgc tgcaggacgt gcgggagctg ctgcggcagc aggtcaggga 240 gatcacgttc ctgaaaaaca cggtgatgga gtgtgacgcg tgcggaggct cccttgtcaa 300 tctttgcact aaagaaggtg ttttactaaa gggaggaaaa agagaggaag agaaaccatt 360 tagagactgt gcagatgtat atcaagctgg ttttaataaa agtggaatct acactattta 420 tattaataat atgccagaac ccaaaaaggt gttttgcaat atggatgtca atgggggagg 480 ttggactgta atacaacatc gtgaagatgg aagtctagat ttccaaagag gctggaagga 540 atataaaatg ggttttggaa atccctccgg tgaatattgg ctggggaatg agtttatttt 600 tgccattacc agtcagaggc agtacatgct aagaattgag ttaatggact gggaagggaa 660 ccgagcctat tcacagtatg acagattcca cataggaaat gaaaagcaaa actataggtt 720 gtatttaaaa ggtcacactg ggacagcagg aaaacagagc agcctgatct tacacggtgc 780 tgatttcagc actaaagatg ctgataatga caactgtatg tgcaaatgtg ccctcatgtt 840 aacaggagga tggtggtttg atgcttgtgg cccctccaat ctaaatggaa tgttctatac 900 tgcgggacaa aaccatggaa aactgaatgg gataaagtgg cactacttca aagggcccag 960 ttactcctta cgttccacaa ctatgatgat tcgaccttta gatttttgaa cactcactcc 1020 acaacccaag aatctgcagc taacttattt tcccctagct ttccccagac accctgtttt 1080 attttattat aatgaatttt gtttgttgat gtgaaacatt atgccttaag taatgttaat 1140 tcttatttaa gttattgatg ttttaagttt atctttcatg gtactagtgt tttttagata 1200 cagagacttg gggaaattgc ttttcctctt gaaccacagt tctacccctg ggatgttttg 1260 agggtctttg caagaatcat taatacaaag aatttttttt aacattccaa tgcattgcta 1320 aaatattatt gtggaaatga atattttgta actattacac caaataaata tatttttgta 1380 ca 1382 <210> 54 <211> 3428 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 gccctaagcc atcagcaatc cttagtatag gggcacactc atgcattcct gtcaagtcat 60 cttgtgaaag gctgcctgct tccagcttgg cttggatgtg caaccttaat aaaactcact 120 gaggtctggg agaaaatagc agatctgcag cagatagggt agaggaaagg gtctagaata 180 tgtacacgca gctgactcag gcaggctcca tgctgaacgg tcacacagag aggaaacaat 240 aaatctcagc tactatgcaa taaatatctc aagttttaac gaagaaaaac atcattgcag 300 tgaaataaaa aattttaaaa ttttagaaca aagctaacaa atggctagtt ttctatgatt 360 cttcttcaaa cgctttcttt gagggggaaa gagtcaaaca aacaagcagt tttacctgaa 420 ataaagaact agttttagag gtcagaagaa aggagcaagt tttgcgagag gcacggaagg 480 agtgtgctgg cagtacaatg acagttttcc tttcctttgc tttcctcgct gccattctga 540 ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca gacagccggc tacaacctgg 600 accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg gtgtccgtaa 660 ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct gaagatcgac atccatgtca 720 tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg 780 tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct gcactatggc acactggtaa 840 tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg 900 tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg 960 acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg agtaaccatc aacggagtga 1020 ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaaagcg caatgtcaga agcgattatg 1080 aaagcaacaa agaaatccgg agaagctgcc aggtgagaaa ctgtttgaaa acttcagaag 1140 caaacaatat tgtctccctt ccagcaataa gtggtagtta tgtgaagtca ccaaggttct 1200 tgaccgtgaa tctggagccg tttgagttca caagagtctc tacttggggt gacagtgctc 1260 acgtggctcg actatagaaa actccactga ctgtcgggct ttaaaaaggg aagaaactgc 1320 tgagcttgct gtgcttcaaa ctactactgg accttatttt ggaactatgg tagccagatg 1380 ataaatatgg ttaatttcat gtaaaacaga aaaaaagagt gaaaaagaga atatacatga 1440 agaatagaaa caagcctgcc ataatccttt ggaaaagatg tattatacca gtgaaaaggt 1500 gttatatcta tgcaaaccta ctaacaaatt atactgttgc acaattttga taaaaattta 1560 gaacagcatt gtcctctgag ttggttaaat gttaatggat ttcagaagcc taattccagt 1620 atcatactta ctagttgatt tctgcttacc catcttcaaa tgaaaattcc atttttgtaa 1680 gccataatga actgtagtac atggacaata agtgtgtggt agaaacaaac tccattactc 1740 tgatttttga tacagttttc agaaaaagaa atgaacataa tcaagtaagg atgtatgtgg 1800 tgaaaactta ccacccccat actatggttt tcatttactc taaaaactga ttgaatgata 1860 tataaatata tttatagcct gagtaaagtt aaaagaatgt aaaatatatc atcaagttct 1920 taaaataata tacatgcatt taatatttcc tttgatatta tacaggaaag caatattttg 1980 gagtatgtta agttgaagta aaagcaagta ctctggagca gttcatttta cagtatctac 2040 ttgcatgtgt atacatacat gtaacttcat tattttaaaa atatttttag aactccaata 2100 ctcaccctgt tatgtcttgc taatttaaat tttgctaatt aactgaaaca tgcttaccag 2160 attcacactg ttccagtgtc tataaaagaa acactttgaa gtctataaaa aataaaataa 2220 ttataaatat cattgtacat agcatgttta tatctgcaaa aaacctaata gctaattaat 2280 ctggaatatg caacattgtc cttaattgat gcaaataaca caaatgctca aagaaatcta 2340 ctatatccct taatgaaata catcattctt catatatttc tccttcagtc cattccctta 2400 ggcaattttt aatttttaaa aattattatc aggggagaaa aattggcaaa actattatat 2460 gtaagggaaa tatatacaaa aagaaaatta atcatagtca cctgactaag aaattctgac 2520 tgctagttgc cataaataac tcaatggaaa tattcctatg ggataatgta ttttaagtga 2580 atttttgggg tgcttgaagt tactgcatta ttttatcaag aagtcttctc tgcctgtaag 2640 tgtccaaggt tatgacagta aacagttttt attaaaacat gagtcactat gggatgagaa 2700 aattgaaata aagctactgg gcctcctctc ataaaagaga cagttgttgg caaggtagca 2760 ataccagttt caaacttggt gacttgatcc actatgcctt aatggtttcc tccatttgag 2820 aaaataaagc tattcacatt gttaagaaaa atacttttta aagtttacca tcaagtcttt 2880 tttatattta tgtgtctgta ttctacccct ttttgcctta caagtgatat ttgcaggtat 2940 tataccattt ttctattctt ggtggcttct tcatagcagg taagcctctc cttctaaaaa 3000 cttctcaact gttttcattt aagggaaaga aaatgagtat tttgtccttt tgtgttccta 3060 cagacacttt cttaaaccag tttttggata aagaatacta tttccaaact catattacaa 3120 aaacaaaata aaataataaa aaaagaaagc atgatattta ctgttttgtt gtctgggttt 3180 gagaaatgaa atattgtttc caattattta taataaatca gtataaaatg ttttatgatt 3240 gttatgtgta ttatgtaata cgtacatgtt tatggcaatt taacatgtgt attcttttaa 3300 ttgtttcaga ataggataat taggtattcg aattttgtct ttaaaattca tgtggtttct 3360 atgcaaagtt cttcatatca tcacaacatt atttgattta aataaaattg aaagtaatat 3420 ttgtgcaa 3428 <210> 55 <211> 1037 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgtggcagat tgttttcttt actctgagct 360 gtgatcttgt cttggccgca gccgtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac 420 agacagccgg ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc 480 agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc 540 tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc 600 agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc 660 tgcactatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac 720 ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt 780 ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc 840 gagtaaccat caacggagtg accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgtaaggct 900 gctgcagctg catgggtgcc tgctgctgcc tgccttggcc tgatggccag gccagagtgc 960 tgccagtcct ctgcatgttc tgctcttgtg cccttctgag cccacaataa aggctgagct 1020 cttatcttgc aaaaggc 1037 <210> 56 <211> 826 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 tccccattga ataacagcca agttgctttg gtttctattt ctttgttaag tcgttccctc 60 tacaaaggac ttcctagtgg gtgtgaaagg cagcggtggc cacagaggcg gcggagagat 120 gtggcagatt gttttcttta ctctgagctg tgatcttgtc ttggccgcag ccgtcttcac 180 actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca gacagccggc tacaacctgg accaagtcct 240 tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca 300 aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta 360 tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc 420 tgtggatgat catcacttta aggtgatcct gcactatggc acactggtaa tcgacggggt 480 tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg 540 caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct 600 gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg agtaaccatc aacggagtga ccggctggcg 660 gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaggctg ctgcagctgc atgggtgcct gctgctgcct 720 gccttggcct gatggccagg ccagagtgct gccagtcctc tgcatgttct gctcttgtgc 780 ccttctgagc ccacaataaa ggctgagctc ttatcttgca aaaggc 826 <210> 57 <211> 1068 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt 60 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc 120 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcga 180 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc 240 ggcatgtggc agattgtttt ctttactctg agctgtgatc ttgtcttggc cgcagccgtc 300 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 360 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 420 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 480 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 540 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 600 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 660 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 720 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc 780 tggcggctgt gcgaacgcat tctggcgtaa gggcctttcc aagattgctg tttttgtttt 840 ggagcttcaa gactttgcat ttcctagtat ttctgtttgt cagttctcaa tttcctgtgt 900 ttgcaatgtt gaaatttttt ggtgaagtac tgaacttgct ttttttccgg tttctacatg 960 cagagatgaa tttatactgc catcttacga ctatttcttc tttttaatac acttaactca 1020 ggccattttt taagttggtt acttcaaagt aaataaactt taaaattc 1068 <210> 58 <211> 1217 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 gtcagccatc tttcaattgt gttcgcagcc gccgccgcgc cgccgtcgct ctccaacgcc 60 agcgccgcct ctcgctcgcc gagctccagc cgaaggagaa ggggggtaag taaggaggtc 120 tctgtaccat gtggcagatt gttttcttta ctctgagctg tgatcttgtc ttggccgcag 180 ccgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca gacagccggc tacaacctgg 240 accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg gtgtccgtaa 300 ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct gaagatcgac atccatgtca 360 tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg 420 tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct gcactatggc acactggtaa 480 tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg 540 tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg 600 acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg agtaaccatc aacggagtga 660 ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaagaatc cactatgatg ggaaacattt 720 cattctcaaa aaaaaaaaaa aaaatttctc ttcttcctgt tattggtagt tctgaacgtt 780 agatattttt tttccatggg gtcaaaaggt acctaagtat atgattgcga gtggaaaaat 840 aggggacaga aatcaggtat tggcagtttt tccattttca tttgtgtgtg aatttttaat 900 ataaatgcgg agacgtaaag cattaatgca agttaaaatg tttcagtgaa caagtttcag 960 cggttcaact ttataataat tataaataaa cctgttaaat ttttctggac aatgccagca 1020 tttggatttt tttaaaacaa gtaaatttct tattgatggc aactaaatgg tgtttgtagc 1080 atttttatca tacagtagat tccatccatt cactatactt ttctaactga gttgtcctac 1140 atgcaagtac atgtttttaa tgttgtctgt cttctgtgct gttcctgtaa gtttgctatt 1200 aaaatacatt aaactat 1217 <210> 59 <211> 827 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatggca gcaactacaa caatggcaca 120 gattgttttc tttactctga gctgtgatct tgtcttggcc gcagccgtct tcacactcga 180 agatttcgtt ggggactggc gacagacagc cggctacaac ctggaccaag tccttgaaca 240 gggaggtgtg tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc gtaactccga tccaaaggat 300 tgtcctgagc ggtgaaaatg ggctgaagat cgacatccat gtcatcatcc cgtatgaagg 360 tctgagcggc gaccaaatgg gccagatcga aaaaattttt aaggtggtgt accctgtgga 420 tgatcatcac tttaaggtga tcctgcacta tggcacactg gtaatcgacg gggttacgcc 480 gaacatgatc gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa 540 gatcactgta acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa 600 ccccgacggc tccctgctgt tccgagtaac catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg 660 cgaacgcatt ctggcgtaat tttgagtaat tttcaatttt gtttttgttt ttgtttttgt 720 tgttgggagt tgttgtaatt tggtaaatgt tggggtcact aaaatctttt gttgcaattt 780 tagcaccttt ttattagata tataaaattg ggtttagatg tagttaa 827 <210> 60 <211> 925 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 ataaaagcct agtggccatt gtgttcgttg ctcttatcgg ttcccatccc agttgttgat 60 cttatgcaag acgctgcacg accccgcgcc cgcttgtcgc cacggcactt gaggcagccg 120 gagatactct gagttactcg gagcccgacg cctgagggtg agatgaacgc gctggcctcc 180 ctaaccgtcc ggacctgtga tcgcttctgg cagaccgaac cggcgctcct gcccccgggg 240 tgacgcgcag ctcccagccg cccagacaca tgtggcagat tgttttcttt actctgagct 300 gtgatcttgt cttggccgca gccgtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac 360 agacagccgg ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc 420 agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc 480 tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc 540 agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc 600 tgcactatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac 660 ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt 720 ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc 780 gagtaaccat caacggagtg accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgtaagacc 840 aactggtttg cctataattt attaactatt tattttttct aagtgtgggt ttatataagg 900 aataaagcct tttgatttgt agcga 925 <210> 61 <211> 1028 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca 180 gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca 240 gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct 300 gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca 360 gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct 420 gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg 480 gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg 540 gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg 600 agtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaacact 660 cactccacaa cccaagaatc tgcagctaac ttattttccc ctagctttcc ccagacaccc 720 tgttttattt tattataatg aattttgttt gttgatgtga aacattatgc cttaagtaat 780 gttaattctt atttaagtta ttgatgtttt aagtttatct ttcatggtac tagtgttttt 840 tagatacaga gacttgggga aattgctttt cctcttgaac cacagttcta cccctgggat 900 gttttgaggg tctttgcaag aatcattaat acaaagaatt ttttttaaca ttccaatgca 960 ttgctaaaat attattgtgg aaatgaatat tttgtaacta ttacaccaaa taaatatatt 1020 tttgtaca 1028 <210> 62 <211> 2027 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 ggagctgttt acccccactc taataggggt tcaatataaa aagccggcag agagctgtcc 60 aagtcagacg cgcctctgca tctgcgccag gcgaacgggt cctgcgcctc ctgcagtccc 120 agctctccac cgccgcgtgc gcctgcagac gctccgctcg ctgccttctc tcctggcagg 180 cgctgccttt tctccccgtt aaaagggcac ttgggctgaa ggatcgcttt gagatctgag 240 gaacccgcag cgctttgagg gacctgaagc tgtttttctt cgttttcctt tgggttcagt 300 ttgaacggga ggtttttgat cccttttttt cagaatggat tatttgctca tgattttctc 360 tctgctgttt gtggcttgcc aaggagtctt cacactcgaa gatttcgttg gggactggcg 420 acagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgaacag ggaggtgtgt ccagtttgtt 480 tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt gtcctgagcg gtgaaaatgg 540 gctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg accaaatggg 600 ccagatcgaa aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat 660 cctgcactat ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg 720 acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa cagggaccct 780 gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt 840 ccgagtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc gaacgcattc tggcgtaaca 900 gaccttcggg gcctgtctga agccatagcc tccacggaga gccctgtggc cgactctgca 960 ctctccaccc tggctgggat cagagcagga gcatcctctg ctggttcctg actggcaaag 1020 gaccagcgtc ctcgttcaaa acattccaag aaaggttaag gagttccccc aaccatcttc 1080 actggcttcc atcagtggta actgctttgg tctcttcttt catctgggga tgacaatgga 1140 cctctcagca gaaacacaca gtcacattcg aattcgggtg gcatcctccg gagagagaga 1200 gaggaaggag attccacaca ggggtggagt ttctgacgaa ggtcctaagg gagtgtttgt 1260 gtctgactca ggcgcctggc acatttcagg gagaaactcc aaagtccaca caaagatttt 1320 ctaaggaatg cacaaattga aaacacactc aaaagacaaa catgcaagta aagaaaaaaa 1380 aaagaaagac ttttgtttaa atttgtaaaa tgcaaaactg aatgaaactg ttactaccat 1440 aaatcaggat atgtttcatg aatatgagtc tacctcacct atattgcact ctggcagaag 1500 tatttcccac atttaattat tgcctcccca aactcttccc acccctgctg ccccttcctc 1560 catcccccat actaaatcct agcctcgtag aagtctggtc taatgtgtca gcagtagata 1620 taatattttc atggtaatct actagctctg atccataaga aaaaaaagat cattaaatca 1680 ggagattccc tgtccttgat ttttggagac acaatggtat agggttgttt atgaaatata 1740 ttgaaaagta agtgtttgtt acgctttaaa gcagtaaaat tattttcctt tatataaccg 1800 gctaatgaaa gaggttggat tgaattttga tgtacttatt tttttataga tatttatatt 1860 caaacaattt attccttata tttaccatgt taaatatctg tttgggcagg ccatattggt 1920 ctatgtattt ttaaaatatg tatttctaaa tgaaattgag aacatgcttt gttttgcctg 1980 tcaaggtaat gactttagaa aataaatatt tttttcctta ctgtaaa 2027 <210> 63 <211> 1070 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgaactcctt ctccacaagc gccttcggtc 360 cagttgcctt ctccctgggc ctgctcctgg tgttgcctgc tgccttccct gccccagtct 420 tcacactcga agatttcgtt ggggactggc gacagacagc cggctacaac ctggaccaag 480 tccttgaaca gggaggtgtg tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc gtaactccga 540 tccaaaggat tgtcctgagc ggtgaaaatg ggctgaagat cgacatccat gtcatcatcc 600 cgtatgaagg tctgagcggc gaccaaatgg gccagatcga aaaaattttt aaggtggtgt 660 accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga tcctgcacta tggcacactg gtaatcgacg 720 gggttacgcc gaacatgatc gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg 780 acggcaaaaa gatcactgta acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc 840 gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt tccgagtaac catcaacgga gtgaccggct 900 ggcggctgtg cgaacgcatt ctggcgtaag gctgctgcag ctgcatgggt gcctgctgct 960 gcctgccttg gcctgatggc caggccagag tgctgccagt cctctgcatg ttctgctctt 1020 gtgcccttct gagcccacaa taaaggctga gctcttatct tgcaaaaggc 1070 <210> 64 <211> 796 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca 180 gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca 240 gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct 300 gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca 360 gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct 420 gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg 480 gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg 540 gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg 600 agtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaggctg 660 ctgcagctgc atgggtgcct gctgctgcct gccttggcct gatggccagg ccagagtgct 720 gccagtcctc tgcatgttct gctcttgtgc ccttctgagc ccacaataaa ggctgagctc 780 ttatcttgca aaaggc 796 <210> 65 <211> 913 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca 180 gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca 240 gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct 300 gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca 360 gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct 420 gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg 480 gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg 540 gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg 600 agtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaagggcc 660 tttccaagat tgctgttttt gttttggagc ttcaagactt tgcatttcct agtatttctg 720 tttgtcagtt ctcaatttcc tgtgtttgca atgttgaaat tttttggtga agtactgaac 780 ttgctttttt tccggtttct acatgcagag atgaatttat actgccatct tacgactatt 840 tcttcttttt aatacactta actcaggcca ttttttaagt tggttacttc aaagtaaata 900 aactttaaaa ttc 913 <210> 66 <211> 1046 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaact ccttctccac aagcgccttc ggtccagttg ccttctccct 120 gggcctgctc ctggtgttgc ctgctgcctt ccctgcccca gtcttcacac tcgaagattt 180 cgttggggac tggcgacaga cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg 240 tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct 300 gagcggtgaa aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag 360 cggcgaccaa atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca 420 tcactttaag gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat 480 gatcgactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac 540 tgtaacaggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga 600 cggctccctg ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg 660 cattctggcg taaacactca ctccacaacc caagaatctg cagctaactt attttcccct 720 agctttcccc agacaccctg ttttatttta ttataatgaa ttttgtttgt tgatgtgaaa 780 cattatgcct taagtaatgt taattcttat ttaagttatt gatgttttaa gtttatcttt 840 catggtacta gtgtttttta gatacagaga cttggggaaa ttgcttttcc tcttgaacca 900 cagttctacc cctgggatgt tttgagggtc tttgcaagaa tcattaatac aaagaatttt 960 ttttaacatt ccaatgcatt gctaaaatat tattgtggaa atgaatattt tgtaactatt 1020 acaccaaata aatatatttt tgtaca 1046 <210> 67 <211> 1013 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgtggc agattgtttt ctttactctg agctgtgatc ttgtcttggc 120 cgcagccgtc ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa 180 cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc 240 cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca 300 tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt 360 taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact 420 ggtaatcgac ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat 480 cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat 540 tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg 600 agtgaccggc tggcggctgt gcgaacgcat tctggcgtaa acactcactc cacaacccaa 660 gaatctgcag ctaacttatt ttcccctagc tttccccaga caccctgttt tattttatta 720 taatgaattt tgtttgttga tgtgaaacat tatgccttaa gtaatgttaa ttcttattta 780 agttattgat gttttaagtt tatctttcat ggtactagtg ttttttagat acagagactt 840 ggggaaattg cttttcctct tgaaccacag ttctacccct gggatgtttt gagggtcttt 900 gcaagaatca ttaatacaaa gaattttttt taacattcca atgcattgct aaaatattat 960 tgtggaaatg aatattttgt aactattaca ccaaataaat atatttttgt aca 1013 <210> 68 <211> 962 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggtct tcacactcga agatttcgtt ggggactggc gacagacagc 120 cggctacaac ctggaccaag tccttgaaca gggaggtgtg tccagtttgt ttcagaatct 180 cggggtgtcc gtaactccga tccaaaggat tgtcctgagc ggtgaaaatg ggctgaagat 240 cgacatccat gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcggc gaccaaatgg gccagatcga 300 aaaaattttt aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga tcctgcacta 360 tggcacactg gtaatcgacg gggttacgcc gaacatgatc gactatttcg gacggccgta 420 tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta acagggaccc tgtggaacgg 480 caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt tccgagtaac 540 catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg cgaacgcatt ctggcgtaaa cactcactcc 600 acaacccaag aatctgcagc taacttattt tcccctagct ttccccagac accctgtttt 660 attttattat aatgaatttt gtttgttgat gtgaaacatt atgccttaag taatgttaat 720 tcttatttaa gttattgatg ttttaagttt atctttcatg gtactagtgt tttttagata 780 cagagacttg gggaaattgc ttttcctctt gaaccacagt tctacccctg ggatgttttg 840 agggtctttg caagaatcat taatacaaag aatttttttt aacattccaa tgcattgcta 900 aaatattatt gtggaaatga atattttgta actattacac caaataaata tatttttgta 960 ca 962 <210> 69 <211> 1198 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 69 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt 60 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc 120 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcga 180 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc 240 ggcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac cttcattccc 300 caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca gacagccggc 360 tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg 420 gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct gaagatcgac 480 atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca gatcgaaaaa 540 atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct gcactatggc 600 acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa 660 ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac 720 aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg agtaaccatc 780 aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaacact cactccacaa 840 cccaagaatc tgcagctaac ttattttccc ctagctttcc ccagacaccc tgttttattt 900 tattataatg aattttgttt gttgatgtga aacattatgc cttaagtaat gttaattctt 960 atttaagtta ttgatgtttt aagtttatct ttcatggtac tagtgttttt tagatacaga 1020 gacttgggga aattgctttt cctcttgaac cacagttcta cccctgggat gttttgaggg 1080 tctttgcaag aatcattaat acaaagaatt ttttttaaca ttccaatgca ttgctaaaat 1140 attattgtgg aaatgaatat tttgtaacta ttacaccaaa taaatatatt tttgtaca 1198 <210> 70 <211> 1067 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 70 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatggca gcaactacaa caatgaaagt 120 ctctgccgcc cttctgtgcc tgctgctcat agcagccacc ttcattcccc aagggctcgc 180 tgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag acagccggct acaacctgga 240 ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag aatctcgggg tgtccgtaac 300 tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg aagatcgaca tccatgtcat 360 catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt 420 ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg cactatggca cactggtaat 480 cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt 540 gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga 600 cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga gtaaccatca acggagtgac 660 cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaaacactc actccacaac ccaagaatct 720 gcagctaact tattttcccc tagctttccc cagacaccct gttttatttt attataatga 780 attttgtttg ttgatgtgaa acattatgcc ttaagtaatg ttaattctta tttaagttat 840 tgatgtttta agtttatctt tcatggtact agtgtttttt agatacagag acttggggaa 900 attgcttttc ctcttgaacc acagttctac ccctgggatg ttttgagggt ctttgcaaga 960 atcattaata caaagaattt tttttaacat tccaatgcat tgctaaaata ttattgtgga 1020 aatgaatatt ttgtaactat tacaccaaat aaatatattt ttgtaca 1067 <210> 71 <211> 1052 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 71 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgaaagtctc tgccgccctt ctgtgcctgc 360 tgctcatagc agccaccttc attccccaag ggctcgctgt cttcacactc gaagatttcg 420 ttggggactg gcgacagaca gccggctaca acctggacca agtccttgaa cagggaggtg 480 tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtcctga 540 gcggtgaaaa tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg 600 gcgaccaaat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc 660 actttaaggt gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga 720 tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg 780 taacagggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg 840 gctccctgct gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgaacgca 900 ttctggcgta aggctgctgc agctgcatgg gtgcctgctg ctgcctgcct tggcctgatg 960 gccaggccag agtgctgcca gtcctctgca tgttctgctc ttgtgccctt ctgagcccac 1020 aataaaggct gagctcttat cttgcaaaag gc 1052 <210> 72 <211> 1064 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg ccctggagag aacacagcag taaaaaccag gtttgctact 180 ggaaaaagag gaaagagaag actttcattg acggacccag ccgcagcgta gcagccctgc 240 gttttagacg gcagcagctc gggactctgg acgtgtgttt gccctcaagt ttgctaagct 300 gctggtttat tactgaagaa agaatgaact ccttctccac aagcgccttc ggtccagttg 360 ccttctccct gggcctgctc ctggtgttgc ctgctgcctt ccctgcccca gtcttcacac 420 tcgaagattt cgttggggac tggcgacaga cagccggcta caacctggac caagtccttg 480 aacagggagg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa 540 ggattgtcct gagcggtgaa aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg 600 aaggtctgag cggcgaccaa atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg 660 tggatgatca tcactttaag gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta 720 cgccgaacat gatcgactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca 780 aaaagatcac tgtaacaggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga 840 tcaaccccga cggctccctg ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc 900 tgtgcgaacg cattctggcg taaggctgct gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc 960 cttggcctga tggccaggcc agagtgctgc cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc 1020 ttctgagccc acaataaagg ctgagctctt atcttgcaaa aggc 1064 <210> 73 <211> 1034 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 73 aaagtgattg attcggatac tgacactgta ggatctgggg agagaggaac aaaggaccgt 60 gaaagctgct ctgtaaaagc tgacacagcc ctcccaagtg agcaggactg ttcttcccac 120 tgcaatctga cagtttactg catgcctgga gagaacacag cagtaaaaac caggtttgct 180 actggaaaaa gaggaaagag aagactttca ttgacggacc cagccatggc agcgtagcag 240 ccctgcgttt tagacggcag cagctcggga ctctggacgt gtgtttgccc tcaagtttgc 300 taagctgctg gtttattact gaagaaagaa tgggagtgaa agttcttttt gcccttattt 360 gtattgctgt ggccgaggcc gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac tggcgacaga 420 cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt ttgtttcaga 480 atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa aatgggctga 540 agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa atgggccaga 600 tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgatcctgc 660 actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat ttcggacggc 720 cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg accctgtgga 780 acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg ctgttccgag 840 taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggcg taaggctgct 900 gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga tggccaggcc agagtgctgc 960 cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc acaataaagg ctgagctctt 1020 atcttgcaaa aggc 1034 <210> 74 <211> 842 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 74 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatggca gcaactacaa caatgaaagt 120 ctctgccgcc cttctgtgcc tgctgctcat agcagccacc ttcattcccc aagggctcgc 180 tgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag acagccggct acaacctgga 240 ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag aatctcgggg tgtccgtaac 300 tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg aagatcgaca tccatgtcat 360 catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt 420 ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg cactatggca cactggtaat 480 cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt 540 gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga 600 cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga gtaaccatca acggagtgac 660 cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaattttga gtaattttca attttgtttt 720 tgtttttgtt tttgttgttg ggagttgttg taatttggta aatgttgggg tcactaaaat 780 cttttgttgc aattttagca cctttttatt agatatataa aattgggttt agatgtagtt 840 aa 842 <210> 75 <211> 824 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 75 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatgaaa gtctctgccg cccttctgtg 120 cctgctgctc atagcagcca ccttcattcc ccaagggctc gctgtcttca cactcgaaga 180 tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg 240 aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt 300 cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct 360 gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga 420 tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa 480 catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat 540 cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc 600 cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg accggctggc ggctgtgcga 660 acgcattctg gcgtaatttt gagtaatttt caattttgtt tttgtttttg tttttgttgt 720 tgggagttgt tgtaatttgg taaatgttgg ggtcactaaa atcttttgtt gcaattttag 780 caccttttta ttagatatat aaaattgggt ttagatgtag ttaa 824 <210> 76 <211> 809 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 76 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatgtgg cagattgttt tctttactct 120 gagctgtgat cttgtcttgg ccgcagccgt cttcacactc gaagatttcg ttggggactg 180 gcgacagaca gccggctaca acctggacca agtccttgaa cagggaggtg tgtccagttt 240 gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtcctga gcggtgaaaa 300 tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg gcgaccaaat 360 gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt 420 gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt 480 cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taacagggac 540 cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct 600 gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgaacgca ttctggcgta 660 attttgagta attttcaatt ttgtttttgt ttttgttttt gttgttggga gttgttgtaa 720 tttggtaaat gttggggtca ctaaaatctt ttgttgcaat tttagcacct ttttattaga 780 tatataaaat tgggtttaga tgtagttaa 809 <210> 77 <211> 1083 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 77 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt 60 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc 120 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcga 180 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc 240 ggcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac cttcattccc 300 caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca gacagccggc 360 tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg 420 gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct gaagatcgac 480 atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca gatcgaaaaa 540 atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct gcactatggc 600 acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa 660 ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac 720 aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg agtaaccatc 780 aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaagggcc tttccaagat 840 tgctgttttt gttttggagc ttcaagactt tgcatttcct agtatttctg tttgtcagtt 900 ctcaatttcc tgtgtttgca atgttgaaat tttttggtga agtactgaac ttgctttttt 960 tccggtttct acatgcagag atgaatttat actgccatct tacgactatt tcttcttttt 1020 aatacactta actcaggcca ttttttaagt tggttacttc aaagtaaata aactttaaaa 1080 ttc 1083 <210> 78 <211> 984 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 78 gggctggggg agggtatata agccgagtag gcgacggtga ggtcgacgcc ggccaagaca 60 gcacagacag attgacctat tggggtgttt cgcgagtgtg agagggaagc gccgcggcct 120 gtatttctag acctgccctt cgcctggttc gtggcgcctt gtgaccccgg gcccctgccg 180 cctgcaagtc ggaaattgcg ctgtgctcct gtgctacggc ctgtggctgg actgcctgct 240 gctgcccaac tggctggcaa gatgaaagtc tctgccgccc ttctgtgcct gctgctcata 300 gcagccacct tcattcccca agggctcgct gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac 360 tggcgacaga cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt 420 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 480 aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa 540 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 600 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 660 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 720 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 780 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggcg 840 taaggctgct gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga tggccaggcc 900 agagtgctgc cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc acaataaagg 960 ctgagctctt atcttgcaaa aggc 984 <210> 79 <211> 898 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 79 agctgttctt ggctgacttc acatcaaaac tcctatactg acctgagaca gaggcagcag 60 tgatacccac ctgagagatc ctgtgtttga acaactgctt cccaaaacgg aaagtatttc 120 aagcctaaac ctttgggtga aaagaactct tgaagtcatg aactccttct ccacaagcgc 180 cttcggtcca gttgccttct ccctgggcct gctcctggtg ttgcctgctg ccttccctgc 240 cccagtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactggcga cagacagccg gctacaacct 300 ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt 360 aactccgatc caaaggattg tcctgagcgg tgaaaatggg ctgaagatcg acatccatgt 420 catcatcccg tatgaaggtc tgagcggcga ccaaatgggc cagatcgaaa aaatttttaa 480 ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc ctgcactatg gcacactggt 540 aatcgacggg gttacgccga acatgatcga ctatttcgga cggccgtatg aaggcatcgc 600 cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg tggaacggca acaaaattat 660 cgacgagcgc ctgatcaacc ccgacggctc cctgctgttc cgagtaacca tcaacggagt 720 gaccggctgg cggctgtgcg aacgcattct ggcgtaaggc tgctgcagct gcatgggtgc 780 ctgctgctgc ctgccttggc ctgatggcca ggccagagtg ctgccagtcc tctgcatgtt 840 ctgctcttgt gcccttctga gcccacaata aaggctgagc tcttatcttg caaaaggc 898 <210> 80 <211> 1060 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 80 caagcttagc ctggccggga aacgggaggc gtggaggccg ggagcagccc ccggggtcat 60 cgccctgcca ccgccgcccg attgctttag cttggaaatt ccggagctga agcggccagc 120 gagggaggat gaccctctcg gcccgggcac cctgtcagtc cggaaataac tgcagcattt 180 gttccggagg ggaaggcgcg aggtttccgg gaaagcagca ccgccccttg gcccccaggt 240 ggctagcgct ataaaggatc acgcgcccca gtcgacgctg agctcctctg ctactcagag 300 ttgcaacctc agcctcgcta tgaactcctt ctccacaagc gccttcggtc cagttgcctt 360 ctccctgggc ctgctcctgg tgttgcctgc tgccttccct gccccagtct tcacactcga 420 agatttcgtt ggggactggc gacagacagc cggctacaac ctggaccaag tccttgaaca 480 gggaggtgtg tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc gtaactccga tccaaaggat 540 tgtcctgagc ggtgaaaatg ggctgaagat cgacatccat gtcatcatcc cgtatgaagg 600 tctgagcggc gaccaaatgg gccagatcga aaaaattttt aaggtggtgt accctgtgga 660 tgatcatcac tttaaggtga tcctgcacta tggcacactg gtaatcgacg gggttacgcc 720 gaacatgatc gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa 780 gatcactgta acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa 840 ccccgacggc tccctgctgt tccgagtaac catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg 900 cgaacgcatt ctggcgtaag gctgctgcag ctgcatgggt gcctgctgct gcctgccttg 960 gcctgatggc caggccagag tgctgccagt cctctgcatg ttctgctctt gtgcccttct 1020 gagcccacaa taaaggctga gctcttatct tgcaaaaggc 1060 <210> 81 <211> 1150 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 81 gtctcaatat tagagtctca acccccaata aatataggac tggagatgtc tgaggctcat 60 tctgccctgg agcccaccgg gaacgaaaga gaagctctat ctcccctcca ggagcccagc 120 tatgaactcc ttctccacaa gcgccttcgg tccagttgcc ttctccctgg ggctgctcct 180 ggtgttgcct gctgccttcc ctgccccagt cttcacactc gaagatttcg ttggggactg 240 gcgacagaca gccggctaca acctggacca agtccttgaa cagggaggtg tgtccagttt 300 gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtcctga gcggtgaaaa 360 tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg gcgaccaaat 420 gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt 480 gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt 540 cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taacagggac 600 cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct 660 gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgaacgca ttctggcgta 720 acatgggcac ctcagattgt tgttgttaat gggcattcct tcttctggtc agaaacctgt 780 ccactgggca cagaacttat gttgttctct atggagaact aaaagtatga gcgttaggac 840 actattttaa ttatttttaa tttattaata tttaaatatg tgaagctgag ttaatttatg 900 taagtcatat ttatattttt aagaagtacc acttgaaaca ttttatgtat tagttttgaa 960 ataataatgg aaagtggcta tgcagtttga atatcctttg tttcagagcc agatcatttc 1020 ttggaaagtg taggcttacc tcaaataaat ggctaactta tacatatttt taaagaaata 1080 tttatattgt atttatataa tgtataaatg gtttttatac caataaatgg cattttaaaa 1140 aattcagcaa 1150 <210> 82 <211> 975 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 82 gtggcagctc acagctattg tggtgggaaa gggagggtgg ttggtggatg tcacagcttg 60 ggctttatct cccccagcag tggggactcc acagcccctg ggctacataa cagcaagaca 120 gtccggagct gtagcagacc tgattgagcc tttgcagcag ctgagagcat ggcctagggt 180 gggcggcacc attgtccagc agctgagttt cccagggacc ttggagatag ccgcagccct 240 catttgcagg ggaagatgat tcctgccaga tttgccgggg tgctgcttgc tctggccctc 300 attttgccag ggaccctttg tgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag 360 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag 420 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg 480 aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag 540 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg 600 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg 660 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg 720 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga 780 gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaaggctgc 840 tgcagctgca tgggtgcctg ctgctgcctg ccttggcctg atggccaggc cagagtgctg 900 ccagtcctct gcatgttctg ctcttgtgcc cttctgagcc cacaataaag gctgagctct 960 tatcttgcaa aaggc 975 <210> 83 <211> 497 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(497) <400> 83 gccctaagcc atcagcaatc cttagtatag gggcacactc atgcattcct gtcaagtcat 60 cttgtgaaag gctgcctgct tccagcttgg cttggatgtg caaccttaat aaaactcact 120 gaggtctggg agaaaatagc agatctgcag cagatagggt agaggaaagg gtctagaata 180 tgtacacgca gctgactcag gcaggctcca tgctgaacgg tcacacagag aggaaacaat 240 aaatctcagc tactatgcaa taaatatctc aagttttaac gaagaaaaac atcattgcag 300 tgaaataaaa aattttaaaa ttttagaaca aagctaacaa atggctagtt ttctatgatt 360 cttcttcaaa cgctttcttt gagggggaaa gagtcaaaca aacaagcagt tttacctgaa 420 ataaagaact agttttagag gtcagaagaa aggagcaagt tttgcgagag gcacggaagg 480 agtgtgctgg cagtaca 497 <210> 84 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(45) <400> 84 atgacagttt tcctttcctt tgctttcctc gctgccattc tgact 45 <210> 85 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(15) <400> 85 Met Thr Val Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu Thr 1 5 10 15 <210> 86 <211> 1452 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1452) <400> 86 cac ata ggg tgc agc aat cag cgc cga agt cca gaa aac agt ggg aga 48 His Ile Gly Cys Ser Asn Gln Arg Arg Ser Pro Glu Asn Ser Gly Arg 1 5 10 15 aga tat aac cgg att caa cat ggg caa tgt gcc tac act ttc att ctt 96 Arg Tyr Asn Arg Ile Gln His Gly Gln Cys Ala Tyr Thr Phe Ile Leu 20 25 30 cca gaa cac gat ggc aac tgt cgt gag agt acg aca gac cag tac aac 144 Pro Glu His Asp Gly Asn Cys Arg Glu Ser Thr Thr Asp Gln Tyr Asn 35 40 45 aca aac gct ctg cag aga gat gct cca cac gtg gaa ccg gat ttc tct 192 Thr Asn Ala Leu Gln Arg Asp Ala Pro His Val Glu Pro Asp Phe Ser 50 55 60 tcc cag aaa ctt caa cat ctg gaa cat gtg atg gaa aat tat act cag 240 Ser Gln Lys Leu Gln His Leu Glu His Val Met Glu Asn Tyr Thr Gln 65 70 75 80 tgg ctg caa aaa ctt gag aat tac att gtg gaa aac atg aag tcg gag 288 Trp Leu Gln Lys Leu Glu Asn Tyr Ile Val Glu Asn Met Lys Ser Glu 85 90 95 atg gcc cag ata cag cag aat gca gtt cag aac cac acg gct acc atg 336 Met Ala Gln Ile Gln Gln Asn Ala Val Gln Asn His Thr Ala Thr Met 100 105 110 ctg gag ata gga acc agc ctc ctc tct cag act gca gag cag acc aga 384 Leu Glu Ile Gly Thr Ser Leu Leu Ser Gln Thr Ala Glu Gln Thr Arg 115 120 125 aag ctg aca gat gtt gag acc cag gta cta aat caa act tct cga ctt 432 Lys Leu Thr Asp Val Glu Thr Gln Val Leu Asn Gln Thr Ser Arg Leu 130 135 140 gag ata cag ctg ctg gag aat tca tta tcc acc tac aag cta gag aag 480 Glu Ile Gln Leu Leu Glu Asn Ser Leu Ser Thr Tyr Lys Leu Glu Lys 145 150 155 160 caa ctt ctt caa cag aca aat gaa atc ttg aag atc cat gaa aaa aac 528 Gln Leu Leu Gln Gln Thr Asn Glu Ile Leu Lys Ile His Glu Lys Asn 165 170 175 agt tta tta gaa cat aaa atc tta gaa atg gaa gga aaa cac aag gaa 576 Ser Leu Leu Glu His Lys Ile Leu Glu Met Glu Gly Lys His Lys Glu 180 185 190 gag ttg gac acc tta aag gaa gag aaa gag aac ctt caa ggc ttg gtt 624 Glu Leu Asp Thr Leu Lys Glu Glu Lys Glu Asn Leu Gln Gly Leu Val 195 200 205 act cgt caa aca tat ata atc cag gag ctg gaa aag caa tta aac aga 672 Thr Arg Gln Thr Tyr Ile Ile Gln Glu Leu Glu Lys Gln Leu Asn Arg 210 215 220 gct acc acc aac aac agt gtc ctt cag aag cag caa ctg gag ctg atg 720 Ala Thr Thr Asn Asn Ser Val Leu Gln Lys Gln Gln Leu Glu Leu Met 225 230 235 240 gac aca gtc cac aac ctt gtc aat ctt tgc act aaa gaa ggt gtt tta 768 Asp Thr Val His Asn Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu 245 250 255 cta aag gga gga aaa aga gag gaa gag aaa cca ttt aga gac tgt gca 816 Leu Lys Gly Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala 260 265 270 gat gta tat caa gct ggt ttt aat aaa agt gga atc tac act att tat 864 Asp Val Tyr Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr 275 280 285 att aat aat atg cca gaa ccc aaa aag gtg ttt tgc aat atg gat gtc 912 Ile Asn Asn Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val 290 295 300 aat ggg gga ggt tgg act gta ata caa cat cgt gaa gat gga agt cta 960 Asn Gly Gly Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu 305 310 315 320 gat ttc caa aga ggc tgg aag gaa tat aaa atg ggt ttt gga aat ccc 1008 Asp Phe Gln Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro 325 330 335 tcc ggt gaa tat tgg ctg ggg aat gag ttt att ttt gcc att acc agt 1056 Ser Gly Glu Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser 340 345 350 cag agg cag tac atg cta aga att gag tta atg gac tgg gaa ggg aac 1104 Gln Arg Gln Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn 355 360 365 cga gcc tat tca cag tat gac aga ttc cac ata gga aat gaa aag caa 1152 Arg Ala Tyr Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln 370 375 380 aac tat agg ttg tat tta aaa ggt cac act ggg aca gca gga aaa cag 1200 Asn Tyr Arg Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln 385 390 395 400 agc agc ctg atc tta cac ggt gct gat ttc agc act aaa gat gct gat 1248 Ser Ser Leu Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp 405 410 415 aat gac aac tgt atg tgc aaa tgt gcc ctc atg tta aca gga gga tgg 1296 Asn Asp Asn Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp 420 425 430 tgg ttt gat gct tgt ggc ccc tcc aat cta aat gga atg ttc tat act 1344 Trp Phe Asp Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr 435 440 445 gcg gga caa aac cat gga aaa ctg aat ggg ata aag tgg cac tac ttc 1392 Ala Gly Gln Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe 450 455 460 aaa ggg ccc agt tac tcc tta cgt tcc aca act atg atg att cga cct 1440 Lys Gly Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro 465 470 475 480 tta gat ttt tga 1452 Leu Asp Phe <210> 87 <211> 483 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 His Ile Gly Cys Ser Asn Gln Arg Arg Ser Pro Glu Asn Ser Gly Arg 1 5 10 15 Arg Tyr Asn Arg Ile Gln His Gly Gln Cys Ala Tyr Thr Phe Ile Leu 20 25 30 Pro Glu His Asp Gly Asn Cys Arg Glu Ser Thr Thr Asp Gln Tyr Asn 35 40 45 Thr Asn Ala Leu Gln Arg Asp Ala Pro His Val Glu Pro Asp Phe Ser 50 55 60 Ser Gln Lys Leu Gln His Leu Glu His Val Met Glu Asn Tyr Thr Gln 65 70 75 80 Trp Leu Gln Lys Leu Glu Asn Tyr Ile Val Glu Asn Met Lys Ser Glu 85 90 95 Met Ala Gln Ile Gln Gln Asn Ala Val Gln Asn His Thr Ala Thr Met 100 105 110 Leu Glu Ile Gly Thr Ser Leu Leu Ser Gln Thr Ala Glu Gln Thr Arg 115 120 125 Lys Leu Thr Asp Val Glu Thr Gln Val Leu Asn Gln Thr Ser Arg Leu 130 135 140 Glu Ile Gln Leu Leu Glu Asn Ser Leu Ser Thr Tyr Lys Leu Glu Lys 145 150 155 160 Gln Leu Leu Gln Gln Thr Asn Glu Ile Leu Lys Ile His Glu Lys Asn 165 170 175 Ser Leu Leu Glu His Lys Ile Leu Glu Met Glu Gly Lys His Lys Glu 180 185 190 Glu Leu Asp Thr Leu Lys Glu Glu Lys Glu Asn Leu Gln Gly Leu Val 195 200 205 Thr Arg Gln Thr Tyr Ile Ile Gln Glu Leu Glu Lys Gln Leu Asn Arg 210 215 220 Ala Thr Thr Asn Asn Ser Val Leu Gln Lys Gln Gln Leu Glu Leu Met 225 230 235 240 Asp Thr Val His Asn Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu 245 250 255 Leu Lys Gly Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala 260 265 270 Asp Val Tyr Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr 275 280 285 Ile Asn Asn Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val 290 295 300 Asn Gly Gly Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu 305 310 315 320 Asp Phe Gln Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro 325 330 335 Ser Gly Glu Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser 340 345 350 Gln Arg Gln Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn 355 360 365 Arg Ala Tyr Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln 370 375 380 Asn Tyr Arg Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln 385 390 395 400 Ser Ser Leu Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp 405 410 415 Asn Asp Asn Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp 420 425 430 Trp Phe Asp Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr 435 440 445 Ala Gly Gln Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe 450 455 460 Lys Gly Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro 465 470 475 480 Leu Asp Phe <210> 88 <211> 2373 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(2373) <400> 88 aagcgcaatg tcagaagcga ttatgaaagc aacaaagaaa tccggagaag ctgccaggtg 60 agaaactgtt tgaaaacttc agaagcaaac aatattgtct cccttccagc aataagtggt 120 agttatgtga agtcaccaag gttcttgacc gtgaatctgg agccgtttga gttcacaaga 180 gtctctactt ggggtgacag tgctcacgtg gctcgactat agaaaactcc actgactgtc 240 gggctttaaa aagggaagaa actgctgagc ttgctgtgct tcaaactact actggacctt 300 attttggaac tatggtagcc agatgataaa tatggttaat ttcatgtaaa acagaaaaaa 360 agagtgaaaa agagaatata catgaagaat agaaacaagc ctgccataat cctttggaaa 420 agatgtatta taccagtgaa aaggtgttat atctatgcaa acctactaac aaattatact 480 gttgcacaat tttgataaaa atttagaaca gcattgtcct ctgagttggt taaatgttaa 540 tggatttcag aagcctaatt ccagtatcat acttactagt tgatttctgc ttacccatct 600 tcaaatgaaa attccatttt tgtaagccat aatgaactgt agtacatgga caataagtgt 660 gtggtagaaa caaactccat tactctgatt tttgatacag ttttcagaaa aagaaatgaa 720 cataatcaag taaggatgta tgtggtgaaa acttaccacc cccatactat ggttttcatt 780 tactctaaaa actgattgaa tgatatataa atatatttat agcctgagta aagttaaaag 840 aatgtaaaat atatcatcaa gttcttaaaa taatatacat gcatttaata tttcctttga 900 tattatacag gaaagcaata ttttggagta tgttaagttg aagtaaaagc aagtactctg 960 gagcagttca ttttacagta tctacttgca tgtgtataca tacatgtaac ttcattattt 1020 taaaaatatt tttagaactc caatactcac cctgttatgt cttgctaatt taaattttgc 1080 taattaactg aaacatgctt accagattca cactgttcca gtgtctataa aagaaacact 1140 ttgaagtcta taaaaaataa aataattata aatatcattg tacatagcat gtttatatct 1200 gcaaaaaacc taatagctaa ttaatctgga atatgcaaca ttgtccttaa ttgatgcaaa 1260 taacacaaat gctcaaagaa atctactata tcccttaatg aaatacatca ttcttcatat 1320 atttctcctt cagtccattc ccttaggcaa tttttaattt ttaaaaatta ttatcagggg 1380 agaaaaattg gcaaaactat tatatgtaag ggaaatatat acaaaaagaa aattaatcat 1440 agtcacctga ctaagaaatt ctgactgcta gttgccataa ataactcaat ggaaatattc 1500 ctatgggata atgtatttta agtgaatttt tggggtgctt gaagttactg cattatttta 1560 tcaagaagtc ttctctgcct gtaagtgtcc aaggttatga cagtaaacag tttttattaa 1620 aacatgagtc actatgggat gagaaaattg aaataaagct actgggcctc ctctcataaa 1680 agagacagtt gttggcaagg tagcaatacc agtttcaaac ttggtgactt gatccactat 1740 gccttaatgg tttcctccat ttgagaaaat aaagctattc acattgttaa gaaaaatact 1800 ttttaaagtt taccatcaag tcttttttat atttatgtgt ctgtattcta cccctttttg 1860 ccttacaagt gatatttgca ggtattatac catttttcta ttcttggtgg cttcttcata 1920 gcaggtaagc ctctccttct aaaaacttct caactgtttt catttaaggg aaagaaaatg 1980 agtattttgt ccttttgtgt tcctacagac actttcttaa accagttttt ggataaagaa 2040 tactatttcc aaactcatat tacaaaaaca aaataaaata ataaaaaaag aaagcatgat 2100 atttactgtt ttgttgtctg ggtttgagaa atgaaatatt gtttccaatt atttataata 2160 aatcagtata aaatgtttta tgattgttat gtgtattatg taatacgtac atgtttatgg 2220 caatttaaca tgtgtattct tttaattgtt tcagaatagg ataattaggt attcgaattt 2280 tgtctttaaa attcatgtgg tttctatgca aagttcttca tatcatcaca acattatttg 2340 atttaaataa aattgaaagt aatatttgtg caa 2373 <210> 89 <211> 120 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 5'UTR <222> (1)..(120) <400> 89 agacagaggt ttgtagctgc agctgcaggc aagcctggcc actgttggct gcagcaggac 60 atcccaggca cagcccctag ggctctgagc agacatccct cgccattgac acatcttcag 120 <210> 90 <211> 66 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(66) <400> 90 atgctctccc agctagccat gctgcagggc agcctcctcc ttgtggttgc caccatgtct 60 gtggct 66 <210> 91 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(22) <400> 91 Met Leu Ser Gln Leu Ala Met Leu Gln Gly Ser Leu Leu Leu Val Val 1 5 10 15 Ala Thr Met Ser Val Ala 20 <210> 92 <211> 1446 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1446) <400> 92 caa cag aca agg cag gag gcg gat agg ggc tgc gag aca ctt gta gtc 48 Gln Gln Thr Arg Gln Glu Ala Asp Arg Gly Cys Glu Thr Leu Val Val 1 5 10 15 cag cac ggc cac tgt agc tac acc ttc ttg ctg ccc aag tct gag ccc 96 Gln His Gly His Cys Ser Tyr Thr Phe Leu Leu Pro Lys Ser Glu Pro 20 25 30 tgc cct ccg ggg cct gag gtc tcc agg gac tcc aac acc ctc cag aga 144 Cys Pro Pro Gly Pro Glu Val Ser Arg Asp Ser Asn Thr Leu Gln Arg 35 40 45 gaa tca ctg gcc aac cca ctg cac ctg ggg aag ttg ccc acc cag cag 192 Glu Ser Leu Ala Asn Pro Leu His Leu Gly Lys Leu Pro Thr Gln Gln 50 55 60 gtg aaa cag ctg gag cag gca ctg cag aac aac acg cag tgg ctg aag 240 Val Lys Gln Leu Glu Gln Ala Leu Gln Asn Asn Thr Gln Trp Leu Lys 65 70 75 80 aag cta gag agg gcc atc aag acg atc ttg agg tcg aag ctg gag cag 288 Lys Leu Glu Arg Ala Ile Lys Thr Ile Leu Arg Ser Lys Leu Glu Gln 85 90 95 gtc cag cag caa atg gcc cag aat cag acg gcc ccc atg cta gag ctg 336 Val Gln Gln Gln Met Ala Gln Asn Gln Thr Ala Pro Met Leu Glu Leu 100 105 110 ggc acc agc ctc ctg aac cag acc act gcc cag atc cgc aag ctg acc 384 Gly Thr Ser Leu Leu Asn Gln Thr Thr Ala Gln Ile Arg Lys Leu Thr 115 120 125 gac atg gag gct cag ctc ctg aac cag aca tca aga atg gat gcc cag 432 Asp Met Glu Ala Gln Leu Leu Asn Gln Thr Ser Arg Met Asp Ala Gln 130 135 140 atg cca gag acc ttt ctg tcc acc aac aag ctg gag aac cag ctg ctg 480 Met Pro Glu Thr Phe Leu Ser Thr Asn Lys Leu Glu Asn Gln Leu Leu 145 150 155 160 cta cag agg cag aag ctc cag cag ctt cag ggc caa aac agc gcg ctc 528 Leu Gln Arg Gln Lys Leu Gln Gln Leu Gln Gly Gln Asn Ser Ala Leu 165 170 175 gag aag cgg ttg cag gcc ctg gag acc aag cag cag gag gag ctg gcc 576 Glu Lys Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr Lys Gln Gln Glu Glu Leu Ala 180 185 190 agc atc ctc agc aag aag gcg aag ctg ctg aac acg ctg agc cgc cag 624 Ser Ile Leu Ser Lys Lys Ala Lys Leu Leu Asn Thr Leu Ser Arg Gln 195 200 205 agc gcc gcc ctc acc aac atc gag cgc ggc ctg cgc ggt gtc agg cac 672 Ser Ala Ala Leu Thr Asn Ile Glu Arg Gly Leu Arg Gly Val Arg His 210 215 220 aac tcc agc ctc ctg cag gac cag cag cac agc ctg cgc cag ctg ctg 720 Asn Ser Ser Leu Leu Gln Asp Gln Gln His Ser Leu Arg Gln Leu Leu 225 230 235 240 gtg ttg ttg cgg cac ctg gtg caa gaa agg gct aac gcc tcg gcc ccg 768 Val Leu Leu Arg His Leu Val Gln Glu Arg Ala Asn Ala Ser Ala Pro 245 250 255 gcc ttc ata atg gca ggt gag cag gtg ttc cag gac tgt gca gag atc 816 Ala Phe Ile Met Ala Gly Glu Gln Val Phe Gln Asp Cys Ala Glu Ile 260 265 270 cag cgc tct ggg gcc agt gcc agt ggt gtc tac acc atc cag gtg tcc 864 Gln Arg Ser Gly Ala Ser Ala Ser Gly Val Tyr Thr Ile Gln Val Ser 275 280 285 aat gca acg aag ccc agg aag gtg ttc tgt gac ctg cag agc agt gga 912 Asn Ala Thr Lys Pro Arg Lys Val Phe Cys Asp Leu Gln Ser Ser Gly 290 295 300 ggc agg tgg acc ctc atc cag cgc cgt gag aat ggc acc gtg aat ttt 960 Gly Arg Trp Thr Leu Ile Gln Arg Arg Glu Asn Gly Thr Val Asn Phe 305 310 315 320 cag cgg aac tgg aag gat tac aaa cag ggc ttc gga gac cca gct ggg 1008 Gln Arg Asn Trp Lys Asp Tyr Lys Gln Gly Phe Gly Asp Pro Ala Gly 325 330 335 gag cac tgg ctg ggc aat gaa gtg gtg cac cag ctc acc aga agg gca 1056 Glu His Trp Leu Gly Asn Glu Val Val His Gln Leu Thr Arg Arg Ala 340 345 350 gcc tac tct ctg cgt gtg gag ctg caa gac tgg gaa ggc cac gag gcc 1104 Ala Tyr Ser Leu Arg Val Glu Leu Gln Asp Trp Glu Gly His Glu Ala 355 360 365 tat gcc cag tac gaa cat ttc cac ctg ggc agt gag aac cag cta tac 1152 Tyr Ala Gln Tyr Glu His Phe His Leu Gly Ser Glu Asn Gln Leu Tyr 370 375 380 agg ctt tct gtg gtc ggg tac agc ggc tca gca ggg cgc cag agc agc 1200 Arg Leu Ser Val Val Gly Tyr Ser Gly Ser Ala Gly Arg Gln Ser Ser 385 390 395 400 ctg gtc ctg cag aac acc agc ttt agc acc ctt gac tca gac aac gac 1248 Leu Val Leu Gln Asn Thr Ser Phe Ser Thr Leu Asp Ser Asp Asn Asp 405 410 415 cac tgt ctc tgc aag tgt gcc caa gtg atg tct gga ggg tgg tgg ttt 1296 His Cys Leu Cys Lys Cys Ala Gln Val Met Ser Gly Gly Trp Trp Phe 420 425 430 gac gcc tgt ggc ctg tca aac ctc aac ggc gtc tac tac cac gct ccc 1344 Asp Ala Cys Gly Leu Ser Asn Leu Asn Gly Val Tyr Tyr His Ala Pro 435 440 445 gac aac aag tac aag atg gac ggc atc cgc tgg cac tac ttc aag ggc 1392 Asp Asn Lys Tyr Lys Met Asp Gly Ile Arg Trp His Tyr Phe Lys Gly 450 455 460 ccc agc tac tca ctg cgt gcc tct cgc atg atg ata cgg cct ttg gac 1440 Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ala Ser Arg Met Met Ile Arg Pro Leu Asp 465 470 475 480 atc taa 1446 Ile <210> 93 <211> 481 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Gln Gln Thr Arg Gln Glu Ala Asp Arg Gly Cys Glu Thr Leu Val Val 1 5 10 15 Gln His Gly His Cys Ser Tyr Thr Phe Leu Leu Pro Lys Ser Glu Pro 20 25 30 Cys Pro Pro Gly Pro Glu Val Ser Arg Asp Ser Asn Thr Leu Gln Arg 35 40 45 Glu Ser Leu Ala Asn Pro Leu His Leu Gly Lys Leu Pro Thr Gln Gln 50 55 60 Val Lys Gln Leu Glu Gln Ala Leu Gln Asn Asn Thr Gln Trp Leu Lys 65 70 75 80 Lys Leu Glu Arg Ala Ile Lys Thr Ile Leu Arg Ser Lys Leu Glu Gln 85 90 95 Val Gln Gln Gln Met Ala Gln Asn Gln Thr Ala Pro Met Leu Glu Leu 100 105 110 Gly Thr Ser Leu Leu Asn Gln Thr Thr Ala Gln Ile Arg Lys Leu Thr 115 120 125 Asp Met Glu Ala Gln Leu Leu Asn Gln Thr Ser Arg Met Asp Ala Gln 130 135 140 Met Pro Glu Thr Phe Leu Ser Thr Asn Lys Leu Glu Asn Gln Leu Leu 145 150 155 160 Leu Gln Arg Gln Lys Leu Gln Gln Leu Gln Gly Gln Asn Ser Ala Leu 165 170 175 Glu Lys Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr Lys Gln Gln Glu Glu Leu Ala 180 185 190 Ser Ile Leu Ser Lys Lys Ala Lys Leu Leu Asn Thr Leu Ser Arg Gln 195 200 205 Ser Ala Ala Leu Thr Asn Ile Glu Arg Gly Leu Arg Gly Val Arg His 210 215 220 Asn Ser Ser Leu Leu Gln Asp Gln Gln His Ser Leu Arg Gln Leu Leu 225 230 235 240 Val Leu Leu Arg His Leu Val Gln Glu Arg Ala Asn Ala Ser Ala Pro 245 250 255 Ala Phe Ile Met Ala Gly Glu Gln Val Phe Gln Asp Cys Ala Glu Ile 260 265 270 Gln Arg Ser Gly Ala Ser Ala Ser Gly Val Tyr Thr Ile Gln Val Ser 275 280 285 Asn Ala Thr Lys Pro Arg Lys Val Phe Cys Asp Leu Gln Ser Ser Gly 290 295 300 Gly Arg Trp Thr Leu Ile Gln Arg Arg Glu Asn Gly Thr Val Asn Phe 305 310 315 320 Gln Arg Asn Trp Lys Asp Tyr Lys Gln Gly Phe Gly Asp Pro Ala Gly 325 330 335 Glu His Trp Leu Gly Asn Glu Val Val His Gln Leu Thr Arg Arg Ala 340 345 350 Ala Tyr Ser Leu Arg Val Glu Leu Gln Asp Trp Glu Gly His Glu Ala 355 360 365 Tyr Ala Gln Tyr Glu His Phe His Leu Gly Ser Glu Asn Gln Leu Tyr 370 375 380 Arg Leu Ser Val Val Gly Tyr Ser Gly Ser Ala Gly Arg Gln Ser Ser 385 390 395 400 Leu Val Leu Gln Asn Thr Ser Phe Ser Thr Leu Asp Ser Asp Asn Asp 405 410 415 His Cys Leu Cys Lys Cys Ala Gln Val Met Ser Gly Gly Trp Trp Phe 420 425 430 Asp Ala Cys Gly Leu Ser Asn Leu Asn Gly Val Tyr Tyr His Ala Pro 435 440 445 Asp Asn Lys Tyr Lys Met Asp Gly Ile Arg Trp His Tyr Phe Lys Gly 450 455 460 Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ala Ser Arg Met Met Ile Arg Pro Leu Asp 465 470 475 480 Ile <210> 94 <211> 3061 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> 3'UTR <222> (1)..(3061) <400> 94 cgagcagctg tgccagaggc tggaccacac aggagaagct cggacttggc actcctggac 60 aacctggacc cagatgcaag acactgtgcc accgccttcc ctgacaccct gggcttcctg 120 agccagccct ccttgaccca gaagtccaga agggtcatct gccccccaac tcccctccgt 180 ctgtgacatg gagggtgttc ggggcccatc cctctgatgt agtcctcgcc cctcttctct 240 ccctccccct tcaggggctc cctgcctgag ggtcacagta ccttgaatgg gctgagaaca 300 gaccaaactt gattcccatg accaatggtg gggttgcagg caggtgggaa tgtatttgca 360 catcggaagc tgcccagatg gcccaggttc tctcccttgg attggcaaga aggccatctc 420 ccattctaag ctcctgttcc aagattttct agtcttgaga tgtccttgaa ctttcttttc 480 aagtctgaag gggctgcatc caccccttag tgggtgggtt aatcattatt tccccttcac 540 acttcaccac ttctaggttc taatgaccct agatctcagg gtctttagac ttcaccactt 600 ctaggcttta ccacttcacc acttctaggc tccaatgttt ggagctcagg gtctttagga 660 gacccaaaag gacatgctcc ttcacctcca gcatgtccta gaggatgtgt cacagggaat 720 aactatggct tgtctctaaa agtacctatg agcaatgaga aaaggaaaca gcaggttaag 780 tcaaagtgaa caggcactct tcactgcagg actgatcaga gcctttaata tggccaagtg 840 ccttgtgact acccatgaag gggctagagt gggcagcttt ctccaaattt acttatttga 900 aaatgggctc ggtttgtccc agagcatctc acaggactgt agatgctctt ggacaaagct 960 agtgctcccc tggcataagg aggagcccta cgaccccatc cccaccccag ctatactcac 1020 cctttttggc tacaagggcc acagtgacag cctcaaacaa cctctaaaaa caactggaaa 1080 taacctttca gttaaaacag ataccatccc tgaagaaggg tctagaacta ggtccctgtc 1140 tgtgttatag gctcatgtcc tccaaggctc cttcaagtcc caggaagctg atctctacct 1200 gggtggcttc ccttaggact ccctgtaacc tcaactcccc caggctcaat tacagggact 1260 gttaggcagg acatctgtct ccaagtccag atcctctctg cctccaagcc ctaaccccta 1320 gcctccctcc cttccccatc cagcagtgat gctgcctctg tggtggtagg tggggagctg 1380 caggggagga gataaggcct ctgcctgagt ttgggagacc agggccctca tagcttcttt 1440 cagaggatgg agtcagaaag gatccacagc tactctgtca cctgccccca tcactgtgtc 1500 atgctgtctg ccctgttgtc atcagccaac acccaggcat agccaggagc ccacctgccc 1560 taccgccagg atacacctct gtcctcagaa ggttttctcc tggatgagac tgagccaatg 1620 ggaatgggac cccttcatcc ccctggctcg ccccagccct gagtcccact ctcagccgat 1680 ccctgagtaa acccagcaca gactgacttt gatctcattc ctgggaatta gcactcttcc 1740 ccttcaagac tcaaaggaca tggttgctaa tggtggcatt tcaggcatga tgggaaatct 1800 ttaggggcag attgctgccc agagagctca aatcgcctta agcagcattt gcccagcaga 1860 cctttattta gcctctactg tgtgcagtgt ggtgtggtgg gcagggcttt ggagtcggac 1920 aaacctgctc cagctctgac actttggtcc agtggctcag cctctcaagg caccagttat 1980 cttcacatca tcaaagcctc agttttccca tctgtaaaat ggagatgata atattccttc 2040 ctggctgggc tatggcaagg aggaaatgag accatgtatg tcatcttctt aatagagcct 2100 ggcatgaagc aggtgcctaa taaatgtttg tcctcaaaga ggagaatggg gtgaggaagg 2160 cattccccag cacatgccgc cccttctcct gcactcaggt gaggaaaagg cattttattt 2220 ttgtatccac atcatttatt tttctattgt agtttctagg ctgactgcaa gctagagagg 2280 agacagggca aagctgtgag gcccagggac agaactcctc tgggtgggtt gaaggcccaa 2340 gtccctctct actcccattt tataaggggg caggaagctg atttgagtta tcctcagaca 2400 cctgttcttt atgtaatttt attttatttt tttgagacag agtctcactc tgtcacccag 2460 gctggagtgc agtggcatga tctcagatca ctgcaatctc tgcctcctgg ttcaagtgat 2520 tctcctacct cagcctcctg agtaatggga ttacagacgc ctaccaccac gcccggaaaa 2580 cttttgtatt tttagtagaa acgggttttc accatgttgg ccaggctggt ctcaaactcc 2640 tggcctcatg tgatccacct gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca ggcatgagcc 2700 accataccca gcctcagaca cctgttctta aatattcatc cttctttctt accttccttc 2760 ctcttccatg ccaggactca ggtataaggg atagaaattc tagccctaag gaataaattg 2820 actcacataa ctggaaagtc taagggtaaa ggcaagtgag gttagatcca gaggctcaaa 2880 tgatgtcagc tccacctctc agcccctcca tctgccccgt tgacttcatt ctcagccagg 2940 atctttcctc acaagaaggc tctggcagcc ccaggctcat gtcctcccag ctcagcatcc 3000 ctgacccggg gagctccctc gtctccatga ttccagtaaa ggaatgattt tctgcagcca 3060 g 3061 <210> 95 <211> 867 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> CDS <222> (1)..(867) <400> 95 ggg atc tta gac cta gcc cca cag atg ctt cga gaa ctc cag gag act 48 Gly Ile Leu Asp Leu Ala Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr 1 5 10 15 aat gcg gcg ctg caa gac gtg aga gag ctc ttg cga cag cag gtc aag 96 Asn Ala Ala Leu Gln Asp Val Arg Glu Leu Leu Arg Gln Gln Val Lys 20 25 30 gag atc acc ttc ctg aag aat acg gtg atg gaa tgt gac gct tgc gga 144 Glu Ile Thr Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly 35 40 45 ggc tcc ctt gtc aat ctt tgc act aaa gaa ggt gtt tta cta aag gga 192 Gly Ser Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu Lys Gly 50 55 60 gga aaa aga gag gaa gag aaa cca ttt aga gac tgt gca gat gta tat 240 Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp Val Tyr 65 70 75 80 caa gct ggt ttt aat aaa agt gga atc tac act att tat att aat aat 288 Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile Asn Asn 85 90 95 atg cca gaa ccc aaa aag gtg ttt tgc aat atg gat gtc aat ggg gga 336 Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn Gly Gly 100 105 110 ggt tgg act gta ata caa cat cgt gaa gat gga agt cta gat ttc caa 384 Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp Phe Gln 115 120 125 aga ggc tgg aag gaa tat aaa atg ggt ttt gga aat ccc tcc ggt gaa 432 Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser Gly Glu 130 135 140 tat tgg ctg ggg aat gag ttt att ttt gcc att acc agt cag agg cag 480 Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln Arg Gln 145 150 155 160 tac atg cta aga att gag tta atg gac tgg gaa ggg aac cga gcc tat 528 Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg Ala Tyr 165 170 175 tca cag tat gac aga ttc cac ata gga aat gaa aag caa aac tat agg 576 Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn Tyr Arg 180 185 190 ttg tat tta aaa ggt cac act ggg aca gca gga aaa cag agc agc ctg 624 Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser Ser Leu 195 200 205 atc tta cac ggt gct gat ttc agc act aaa gat gct gat aat gac aac 672 Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp Asn Asp Asn 210 215 220 tgt atg tgc aaa tgt gcc ctc atg tta aca gga gga tgg tgg ttt gat 720 Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp Trp Phe Asp 225 230 235 240 gct tgt ggc ccc tcc aat cta aat gga atg ttc tat act gcg gga caa 768 Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr Ala Gly Gln 245 250 255 aac cat gga aaa ctg aat ggg ata aag tgg cac tac ttc aaa ggg ccc 816 Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe Lys Gly Pro 260 265 270 agt tac tcc tta cgt tcc aca act atg atg att cga cct tta gat ttt 864 Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro Leu Asp Phe 275 280 285 tga 867 <210> 96 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 96 Gly Ile Leu Asp Leu Ala Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr 1 5 10 15 Asn Ala Ala Leu Gln Asp Val Arg Glu Leu Leu Arg Gln Gln Val Lys 20 25 30 Glu Ile Thr Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly 35 40 45 Gly Ser Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu Lys Gly 50 55 60 Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp Val Tyr 65 70 75 80 Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile Asn Asn 85 90 95 Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn Gly Gly 100 105 110 Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp Phe Gln 115 120 125 Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser Gly Glu 130 135 140 Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln Arg Gln 145 150 155 160 Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg Ala Tyr 165 170 175 Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn Tyr Arg 180 185 190 Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser Ser Leu 195 200 205 Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp Asn Asp Asn 210 215 220 Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp Trp Phe Asp 225 230 235 240 Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr Ala Gly Gln 245 250 255 Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe Lys Gly Pro 260 265 270 Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro Leu Asp Phe 275 280 285 <210> 97 <211> 867 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> CDS <222> (1)..(867) <400> 97 ggg atc tta gac ttg ggc ccg cag atg ctt cgg gaa ctg cag gaa acc 48 Gly Ile Leu Asp Leu Gly Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr 1 5 10 15 aac gcg gcg ctg cag gac gtg cgg gag ctg ctg cgg cag cag gtc agg 96 Asn Ala Ala Leu Gln Asp Val Arg Glu Leu Leu Arg Gln Gln Val Arg 20 25 30 gag atc acg ttc ctg aaa aac acg gtg atg gag tgt gac gcg tgc gga 144 Glu Ile Thr Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly 35 40 45 ggc tcc ctt gtc aat ctt tgc act aaa gaa ggt gtt tta cta aag gga 192 Gly Ser Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu Lys Gly 50 55 60 gga aaa aga gag gaa gag aaa cca ttt aga gac tgt gca gat gta tat 240 Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp Val Tyr 65 70 75 80 caa gct ggt ttt aat aaa agt gga atc tac act att tat att aat aat 288 Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile Asn Asn 85 90 95 atg cca gaa ccc aaa aag gtg ttt tgc aat atg gat gtc aat ggg gga 336 Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn Gly Gly 100 105 110 ggt tgg act gta ata caa cat cgt gaa gat gga agt cta gat ttc caa 384 Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp Phe Gln 115 120 125 aga ggc tgg aag gaa tat aaa atg ggt ttt gga aat ccc tcc ggt gaa 432 Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser Gly Glu 130 135 140 tat tgg ctg ggg aat gag ttt att ttt gcc att acc agt cag agg cag 480 Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln Arg Gln 145 150 155 160 tac atg cta aga att gag tta atg gac tgg gaa ggg aac cga gcc tat 528 Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg Ala Tyr 165 170 175 tca cag tat gac aga ttc cac ata gga aat gaa aag caa aac tat agg 576 Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn Tyr Arg 180 185 190 ttg tat tta aaa ggt cac act ggg aca gca gga aaa cag agc agc ctg 624 Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser Ser Leu 195 200 205 atc tta cac ggt gct gat ttc agc act aaa gat gct gat aat gac aac 672 Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp Asn Asp Asn 210 215 220 tgt atg tgc aaa tgt gcc ctc atg tta aca gga gga tgg tgg ttt gat 720 Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp Trp Phe Asp 225 230 235 240 gct tgt ggc ccc tcc aat cta aat gga atg ttc tat act gcg gga caa 768 Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr Ala Gly Gln 245 250 255 aac cat gga aaa ctg aat ggg ata aag tgg cac tac ttc aaa ggg ccc 816 Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe Lys Gly Pro 260 265 270 agt tac tcc tta cgt tcc aca act atg atg att cga cct tta gat ttt 864 Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro Leu Asp Phe 275 280 285 tga 867 <210> 98 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 98 Gly Ile Leu Asp Leu Gly Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr 1 5 10 15 Asn Ala Ala Leu Gln Asp Val Arg Glu Leu Leu Arg Gln Gln Val Arg 20 25 30 Glu Ile Thr Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly 35 40 45 Gly Ser Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu Lys Gly 50 55 60 Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp Val Tyr 65 70 75 80 Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile Asn Asn 85 90 95 Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn Gly Gly 100 105 110 Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp Phe Gln 115 120 125 Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser Gly Glu 130 135 140 Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln Arg Gln 145 150 155 160 Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg Ala Tyr 165 170 175 Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn Tyr Arg 180 185 190 Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser Ser Leu 195 200 205 Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp Asn Asp Asn 210 215 220 Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp Trp Phe Asp 225 230 235 240 Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr Ala Gly Gln 245 250 255 Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe Lys Gly Pro 260 265 270 Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro Leu Asp Phe 275 280 285 <210> 99 <211> 861 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 99 gggatcttag aggaagaccc ggccgcctgc gagtccctgg tgaaattcca agccaaagtg 60 gaggggctgc tgcaggccct gaccaggaaa ctggaagctg tgagtaagcg gctggccatc 120 ctggagaaca cagttgtcgg atcccttgtc aatcttgcca ctaaagaagg tgttttacta 180 aagggaggaa aaagagagga agagaaacca tttagagact gtgcagatgt atatcaagct 240 ggttttaata aaagtggaat ctacactatt tatattaata atatgccaga acccaaaaag 300 gtgttttgca atatggatgt caatggggga ggttggactg taatacaaca tcgtgaagat 360 ggaagtctag atttccaaag aggctggaag gaatataaaa tgggttttgg aaatccctcc 420 ggtgaatatt ggctggggaa tgagtttatt tttgccatta ccagtcagag gcagtacatg 480 ctaagaattg agttaatgga ctgggaaggg aaccgagcct attcacagta tgacagattc 540 cacataggaa atgaaaagca aaactatagg ttgtatttaa aaggtcacac tgggacagca 600 ggaaaacaga gcagcctgat cttacacggt gctgatttca gcactaaaga tgctgataat 660 gacaactgta tgtgcaaatg tgccctcatg ttaacaggag gatggtggtt tgatgcttgt 720 ggcccctcca atctaaatgg aatgttctat actgcgggac aaaaccatgg aaaactgaat 780 gggataaagt ggcactactt caaagggccc agttactcct tacgttccac aactatgatg 840 attcgacctt tagatttttg a 861 <210> 100 <211> 870 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 100 gggatcttag acctagcccc acagatgctt cgagaactcc aggagactaa tgcggcgctg 60 caagacgtga gagagctctt gcgacagcag gtcaaggaga tcaccttcct gaagaatacg 120 gtgatggaat gtgacgcttg cggaggctcc ttactgacta tgatgtccac atcaaactca 180 gctaaggacc ccactgttgc taaagaagaa caaatcagct tcagagactg tgctgaagta 240 ttcaaatcag gacacaccac gaatggcatc tacacgttaa cattccctaa ttctacagaa 300 gagatcaagg cctactgtga catggaagct ggaggaggcg ggtggacaat tattcagcga 360 cgtgaggatg gcagcgttga ttttcagagg acttggaaag aatataaagt gggatttggt 420 aacccttcag gagaatattg gctgggaaat gagtttgttt cgcaactgac taatcagcaa 480 cgctatgtgc ttaaaataca ccttaaagac tgggaaggga atgaggctta ctcattgtat 540 gaacatttct atctctcaag tgaagaactc aattatagga ttcaccttaa aggacttaca 600 gggacagccg gcaaaataag cagcatcagc caaccaggaa atgattttag cacaaaggat 660 ggagacaacg acaaatgtat ttgcaaatgt tcacaaatgc taacaggagg ctggtggttt 720 gatgcatgtg gtccttccaa cttgaacgga atgtactatc cacagaggca gaacacaaat 780 aagttcaacg gcattaaatg gtactactgg aaaggctcag gctattcgct caaggccaca 840 accatgatga tccgaccagc agatttctaa 870 <210> 101 <211> 3375 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(3375) <400> 101 atg gac tct tta gcc agc tta gtt ctc tgt gga gtc agc ttg ctc ctt 48 Met Asp Ser Leu Ala Ser Leu Val Leu Cys Gly Val Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 tct gga act gtg gaa ggt gcc atg gac ttg atc ttg atc aat tcc cta 96 Ser Gly Thr Val Glu Gly Ala Met Asp Leu Ile Leu Ile Asn Ser Leu 20 25 30 cct ctt gta tct gat gct gaa aca tct ctc acc tgc att gcc tct ggg 144 Pro Leu Val Ser Asp Ala Glu Thr Ser Leu Thr Cys Ile Ala Ser Gly 35 40 45 tgg cgc ccc cat gag ccc atc acc ata gga agg gac ttt gaa gcc tta 192 Trp Arg Pro His Glu Pro Ile Thr Ile Gly Arg Asp Phe Glu Ala Leu 50 55 60 atg aac cag cac cag gat ccg ctg gaa gtt act caa gat gtg acc aga 240 Met Asn Gln His Gln Asp Pro Leu Glu Val Thr Gln Asp Val Thr Arg 65 70 75 80 gaa tgg gct aaa aaa gtt gtt tgg aag aga gaa aag gct agt aag atc 288 Glu Trp Ala Lys Lys Val Val Trp Lys Arg Glu Lys Ala Ser Lys Ile 85 90 95 aat ggt gct tat ttc tgt gaa ggg cga gtt cga gga gag gca atc agg 336 Asn Gly Ala Tyr Phe Cys Glu Gly Arg Val Arg Gly Glu Ala Ile Arg 100 105 110 ata cga acc atg aag atg cgt caa caa gct tcc ttc cta cca gct act 384 Ile Arg Thr Met Lys Met Arg Gln Gln Ala Ser Phe Leu Pro Ala Thr 115 120 125 tta act atg act gtg gac aag gga gat aac gtg aac ata tct ttc aaa 432 Leu Thr Met Thr Val Asp Lys Gly Asp Asn Val Asn Ile Ser Phe Lys 130 135 140 aag gta ttg att aaa gaa gaa gat gca gtg att tac aaa aat ggt tcc 480 Lys Val Leu Ile Lys Glu Glu Asp Ala Val Ile Tyr Lys Asn Gly Ser 145 150 155 160 ttc atc cat tca gtg ccc cgg cat gaa gta cct gat att cta gaa gta 528 Phe Ile His Ser Val Pro Arg His Glu Val Pro Asp Ile Leu Glu Val 165 170 175 cac ctg cct cat gct cag ccc cag gat gct gga gtg tac tcg gcc agg 576 His Leu Pro His Ala Gln Pro Gln Asp Ala Gly Val Tyr Ser Ala Arg 180 185 190 tat ata gga gga aac ctc ttc acc tcg gcc ttc acc agg ctg ata gtc 624 Tyr Ile Gly Gly Asn Leu Phe Thr Ser Ala Phe Thr Arg Leu Ile Val 195 200 205 cgg aga tgt gaa gcc cag aag tgg gga cct gaa tgc aac cat ctc tgt 672 Arg Arg Cys Glu Ala Gln Lys Trp Gly Pro Glu Cys Asn His Leu Cys 210 215 220 act gct tgt atg aac aat ggt gtc tgc cat gaa gat act gga gaa tgc 720 Thr Ala Cys Met Asn Asn Gly Val Cys His Glu Asp Thr Gly Glu Cys 225 230 235 240 att tgc cct cct ggg ttt atg gga agg acg tgt gag aag gct tgt gaa 768 Ile Cys Pro Pro Gly Phe Met Gly Arg Thr Cys Glu Lys Ala Cys Glu 245 250 255 ctg cac acg ttt ggc aga act tgt aaa gaa agg tgc agt gga caa gag 816 Leu His Thr Phe Gly Arg Thr Cys Lys Glu Arg Cys Ser Gly Gln Glu 260 265 270 gga tgc aag tct tat gtg ttc tgt ctc cct gac ccc tat ggg tgt tcc 864 Gly Cys Lys Ser Tyr Val Phe Cys Leu Pro Asp Pro Tyr Gly Cys Ser 275 280 285 tgt gcc aca ggc tgg aag ggt ctg cag tgc aat gaa gca tgc cac cct 912 Cys Ala Thr Gly Trp Lys Gly Leu Gln Cys Asn Glu Ala Cys His Pro 290 295 300 ggt ttt tac ggg cca gat tgt aag ctt agg tgc agc tgc aac aat ggg 960 Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Lys Leu Arg Cys Ser Cys Asn Asn Gly 305 310 315 320 gag atg tgt gat cgc ttc caa gga tgt ctc tgc tct cca gga tgg cag 1008 Glu Met Cys Asp Arg Phe Gln Gly Cys Leu Cys Ser Pro Gly Trp Gln 325 330 335 ggg ctc cag tgt gag aga gaa ggc ata ccg agg atg acc cca aag ata 1056 Gly Leu Gln Cys Glu Arg Glu Gly Ile Pro Arg Met Thr Pro Lys Ile 340 345 350 gtg gat ttg cca gat cat ata gaa gta aac agt ggt aaa ttt aat ccc 1104 Val Asp Leu Pro Asp His Ile Glu Val Asn Ser Gly Lys Phe Asn Pro 355 360 365 att tgc aaa gct tct ggc tgg ccg cta cct act aat gaa gaa atg acc 1152 Ile Cys Lys Ala Ser Gly Trp Pro Leu Pro Thr Asn Glu Glu Met Thr 370 375 380 ctg gtg aag ccg gat ggg aca gtg ctc cat cca aaa gac ttt aac cat 1200 Leu Val Lys Pro Asp Gly Thr Val Leu His Pro Lys Asp Phe Asn His 385 390 395 400 acg gat cat ttc tca gta gcc ata ttc acc atc cac cgg atc ctc ccc 1248 Thr Asp His Phe Ser Val Ala Ile Phe Thr Ile His Arg Ile Leu Pro 405 410 415 cct gac tca gga gtt tgg gtc tgc agt gtg aac aca gtg gct ggg atg 1296 Pro Asp Ser Gly Val Trp Val Cys Ser Val Asn Thr Val Ala Gly Met 420 425 430 gtg gaa aag ccc ttc aac att tct gtt aaa gtt ctt cca aag ccc ctg 1344 Val Glu Lys Pro Phe Asn Ile Ser Val Lys Val Leu Pro Lys Pro Leu 435 440 445 aat gcc cca aac gtg att gac act gga cat aac ttt gct gtc atc aac 1392 Asn Ala Pro Asn Val Ile Asp Thr Gly His Asn Phe Ala Val Ile Asn 450 455 460 atc agc tct gag cct tac ttt ggg gat gga cca atc aaa tcc aag aag 1440 Ile Ser Ser Glu Pro Tyr Phe Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480 ctt cta tac aaa ccc gtt aat cac tat gag gct tgg caa cat att caa 1488 Leu Leu Tyr Lys Pro Val Asn His Tyr Glu Ala Trp Gln His Ile Gln 485 490 495 gtg aca aat gag att gtt aca ctc aac tat ttg gaa cct cgg aca gaa 1536 Val Thr Asn Glu Ile Val Thr Leu Asn Tyr Leu Glu Pro Arg Thr Glu 500 505 510 tat gaa ctc tgt gtg caa ctg gtc cgt cgt gga gag ggt ggg gaa ggg 1584 Tyr Glu Leu Cys Val Gln Leu Val Arg Arg Gly Glu Gly Gly Glu Gly 515 520 525 cat cct gga cct gtg aga cgc ttc aca aca gct tct atc gga ctc cct 1632 His Pro Gly Pro Val Arg Arg Phe Thr Thr Ala Ser Ile Gly Leu Pro 530 535 540 cct cca aga ggt cta aat ctc ctg cct aaa agt cag acc act cta aat 1680 Pro Pro Arg Gly Leu Asn Leu Leu Pro Lys Ser Gln Thr Thr Leu Asn 545 550 555 560 ttg acc tgg caa cca ata ttt cca agc tcg gaa gat gac ttt tat gtt 1728 Leu Thr Trp Gln Pro Ile Phe Pro Ser Ser Glu Asp Asp Phe Tyr Val 565 570 575 gaa gtg gag aga agg tct gtg caa aaa agt gat cag cag aat att aaa 1776 Glu Val Glu Arg Arg Ser Val Gln Lys Ser Asp Gln Gln Asn Ile Lys 580 585 590 gtt cca ggc aac ttg act tcg gtg cta ctt aac aac tta cat ccc agg 1824 Val Pro Gly Asn Leu Thr Ser Val Leu Leu Asn Asn Leu His Pro Arg 595 600 605 gag cag tac gtg gtc cga gct aga gtc aac acc aag gcc cag ggg gaa 1872 Glu Gln Tyr Val Val Arg Ala Arg Val Asn Thr Lys Ala Gln Gly Glu 610 615 620 tgg agt gaa gat ctc act gct tgg acc ctt agt gac att ctt cct cct 1920 Trp Ser Glu Asp Leu Thr Ala Trp Thr Leu Ser Asp Ile Leu Pro Pro 625 630 635 640 caa cca gaa aac atc aag att tcc aac att aca cac tcc tca gct gtg 1968 Gln Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ser Asn Ile Thr His Ser Ser Ala Val 645 650 655 att tct tgg aca ata ttg gat ggc tat tct att tct tct att act atc 2016 Ile Ser Trp Thr Ile Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Ile Thr Ile 660 665 670 cgt tac aag gtt caa ggc aag aat gaa gac cag cac gtt gat gtg aag 2064 Arg Tyr Lys Val Gln Gly Lys Asn Glu Asp Gln His Val Asp Val Lys 675 680 685 ata aag aat gcc acc atc act cag tat cag ctc aag ggc cta gag cct 2112 Ile Lys Asn Ala Thr Ile Thr Gln Tyr Gln Leu Lys Gly Leu Glu Pro 690 695 700 gaa aca gca tac cag gtg gac att ttt gca gag aac aac ata ggg tca 2160 Glu Thr Ala Tyr Gln Val Asp Ile Phe Ala Glu Asn Asn Ile Gly Ser 705 710 715 720 agc aac cca gcc ttt tct cat gaa ctg gtg acc ctc cca gaa tct caa 2208 Ser Asn Pro Ala Phe Ser His Glu Leu Val Thr Leu Pro Glu Ser Gln 725 730 735 gca cca gcg gac ctc gga ggg ggg aag atg ctg ctt ata gcc atc ctt 2256 Ala Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Lys Met Leu Leu Ile Ala Ile Leu 740 745 750 ggc tct gct gga atg acc tgc ctg act gtg ctg ttg gcc ttt ctg atc 2304 Gly Ser Ala Gly Met Thr Cys Leu Thr Val Leu Leu Ala Phe Leu Ile 755 760 765 ata ttg caa ttg aag agg gca aat gtg caa agg aga atg gcc caa gcc 2352 Ile Leu Gln Leu Lys Arg Ala Asn Val Gln Arg Arg Met Ala Gln Ala 770 775 780 ttc caa aac gtg agg gaa gaa cca gct gtg cag ttc aac tca ggg act 2400 Phe Gln Asn Val Arg Glu Glu Pro Ala Val Gln Phe Asn Ser Gly Thr 785 790 795 800 ctg gcc cta aac agg aag gtc aaa aac aac cca gat cct aca att tat 2448 Leu Ala Leu Asn Arg Lys Val Lys Asn Asn Pro Asp Pro Thr Ile Tyr 805 810 815 cca gtg ctt gac tgg aat gac atc aaa ttt caa gat gtg att ggg gag 2496 Pro Val Leu Asp Trp Asn Asp Ile Lys Phe Gln Asp Val Ile Gly Glu 820 825 830 ggc aat ttt ggc caa gtt ctt aag gcg cgc atc aag aag gat ggg tta 2544 Gly Asn Phe Gly Gln Val Leu Lys Ala Arg Ile Lys Lys Asp Gly Leu 835 840 845 cgg atg gat gct gcc atc aaa aga atg aaa gaa tat gcc tcc aaa gat 2592 Arg Met Asp Ala Ala Ile Lys Arg Met Lys Glu Tyr Ala Ser Lys Asp 850 855 860 gat cac agg gac ttt gca gga gaa ctg gaa gtt ctt tgt aaa ctt gga 2640 Asp His Arg Asp Phe Ala Gly Glu Leu Glu Val Leu Cys Lys Leu Gly 865 870 875 880 cac cat cca aac atc atc aat ctc tta gga gca tgt gaa cat cga ggc 2688 His His Pro Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Glu His Arg Gly 885 890 895 tac ttg tac ctg gcc att gag tac gcg ccc cat gga aac ctt ctg gac 2736 Tyr Leu Tyr Leu Ala Ile Glu Tyr Ala Pro His Gly Asn Leu Leu Asp 900 905 910 ttc ctt cgc aag agc cgt gtg ctg gag acg gac cca gca ttt gcc att 2784 Phe Leu Arg Lys Ser Arg Val Leu Glu Thr Asp Pro Ala Phe Ala Ile 915 920 925 gcc aat agc acc gcg tcc aca ctg tcc tcc cag cag ctc ctt cac ttc 2832 Ala Asn Ser Thr Ala Ser Thr Leu Ser Ser Gln Gln Leu Leu His Phe 930 935 940 gct gcc gac gtg gcc cgg ggc atg gac tac ttg agc caa aaa cag ttt 2880 Ala Ala Asp Val Ala Arg Gly Met Asp Tyr Leu Ser Gln Lys Gln Phe 945 950 955 960 atc cac agg gat ctg gct gcc aga aac att tta gtt ggt gaa aac tat 2928 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Gly Glu Asn Tyr 965 970 975 gtg gca aaa ata gca gat ttt gga ttg tcc cga ggt caa gag gtg tat 2976 Val Ala Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Arg Gly Gln Glu Val Tyr 980 985 990 gtg aaa aag aca atg gga agg ctc cca gtg cgc tgg atg gcc atc gag 3024 Val Lys Lys Thr Met Gly Arg Leu Pro Val Arg Trp Met Ala Ile Glu 995 1000 1005 tca ctg aat tac agt gtg tac aca acc aac agt gat gta tgg tcc 3069 Ser Leu Asn Tyr Ser Val Tyr Thr Thr Asn Ser Asp Val Trp Ser 1010 1015 1020 tat ggt gtg tta cta tgg gag att gtt agc tta gga ggc aca ccc 3114 Tyr Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Val Ser Leu Gly Gly Thr Pro 1025 1030 1035 tac tgc ggg atg act tgt gca gaa ctc tac gag aag ctg ccc cag 3159 Tyr Cys Gly Met Thr Cys Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Pro Gln 1040 1045 1050 ggc tac aga ctg gag aag ccc ctg aac tgt gat gat gag gtg tat 3204 Gly Tyr Arg Leu Glu Lys Pro Leu Asn Cys Asp Asp Glu Val Tyr 1055 1060 1065 gat cta atg aga caa tgc tgg cgg gag aag cct tat gag agg cca 3249 Asp Leu Met Arg Gln Cys Trp Arg Glu Lys Pro Tyr Glu Arg Pro 1070 1075 1080 tca ttt gcc cag ata ttg gtg tcc tta aac aga atg tta gag gag 3294 Ser Phe Ala Gln Ile Leu Val Ser Leu Asn Arg Met Leu Glu Glu 1085 1090 1095 cga aag acc tac gtg aat acc acg ctt tat gag aag ttt act tat 3339 Arg Lys Thr Tyr Val Asn Thr Thr Leu Tyr Glu Lys Phe Thr Tyr 1100 1105 1110 gca gga att gac tgt tct gct gaa gaa gcg gcc tag 3375 Ala Gly Ile Asp Cys Ser Ala Glu Glu Ala Ala 1115 1120 <210> 102 <211> 1124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Met Asp Ser Leu Ala Ser Leu Val Leu Cys Gly Val Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Gly Thr Val Glu Gly Ala Met Asp Leu Ile Leu Ile Asn Ser Leu 20 25 30 Pro Leu Val Ser Asp Ala Glu Thr Ser Leu Thr Cys Ile Ala Ser Gly 35 40 45 Trp Arg Pro His Glu Pro Ile Thr Ile Gly Arg Asp Phe Glu Ala Leu 50 55 60 Met Asn Gln His Gln Asp Pro Leu Glu Val Thr Gln Asp Val Thr Arg 65 70 75 80 Glu Trp Ala Lys Lys Val Val Trp Lys Arg Glu Lys Ala Ser Lys Ile 85 90 95 Asn Gly Ala Tyr Phe Cys Glu Gly Arg Val Arg Gly Glu Ala Ile Arg 100 105 110 Ile Arg Thr Met Lys Met Arg Gln Gln Ala Ser Phe Leu Pro Ala Thr 115 120 125 Leu Thr Met Thr Val Asp Lys Gly Asp Asn Val Asn Ile Ser Phe Lys 130 135 140 Lys Val Leu Ile Lys Glu Glu Asp Ala Val Ile Tyr Lys Asn Gly Ser 145 150 155 160 Phe Ile His Ser Val Pro Arg His Glu Val Pro Asp Ile Leu Glu Val 165 170 175 His Leu Pro His Ala Gln Pro Gln Asp Ala Gly Val Tyr Ser Ala Arg 180 185 190 Tyr Ile Gly Gly Asn Leu Phe Thr Ser Ala Phe Thr Arg Leu Ile Val 195 200 205 Arg Arg Cys Glu Ala Gln Lys Trp Gly Pro Glu Cys Asn His Leu Cys 210 215 220 Thr Ala Cys Met Asn Asn Gly Val Cys His Glu Asp Thr Gly Glu Cys 225 230 235 240 Ile Cys Pro Pro Gly Phe Met Gly Arg Thr Cys Glu Lys Ala Cys Glu 245 250 255 Leu His Thr Phe Gly Arg Thr Cys Lys Glu Arg Cys Ser Gly Gln Glu 260 265 270 Gly Cys Lys Ser Tyr Val Phe Cys Leu Pro Asp Pro Tyr Gly Cys Ser 275 280 285 Cys Ala Thr Gly Trp Lys Gly Leu Gln Cys Asn Glu Ala Cys His Pro 290 295 300 Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Lys Leu Arg Cys Ser Cys Asn Asn Gly 305 310 315 320 Glu Met Cys Asp Arg Phe Gln Gly Cys Leu Cys Ser Pro Gly Trp Gln 325 330 335 Gly Leu Gln Cys Glu Arg Glu Gly Ile Pro Arg Met Thr Pro Lys Ile 340 345 350 Val Asp Leu Pro Asp His Ile Glu Val Asn Ser Gly Lys Phe Asn Pro 355 360 365 Ile Cys Lys Ala Ser Gly Trp Pro Leu Pro Thr Asn Glu Glu Met Thr 370 375 380 Leu Val Lys Pro Asp Gly Thr Val Leu His Pro Lys Asp Phe Asn His 385 390 395 400 Thr Asp His Phe Ser Val Ala Ile Phe Thr Ile His Arg Ile Leu Pro 405 410 415 Pro Asp Ser Gly Val Trp Val Cys Ser Val Asn Thr Val Ala Gly Met 420 425 430 Val Glu Lys Pro Phe Asn Ile Ser Val Lys Val Leu Pro Lys Pro Leu 435 440 445 Asn Ala Pro Asn Val Ile Asp Thr Gly His Asn Phe Ala Val Ile Asn 450 455 460 Ile Ser Ser Glu Pro Tyr Phe Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480 Leu Leu Tyr Lys Pro Val Asn His Tyr Glu Ala Trp Gln His Ile Gln 485 490 495 Val Thr Asn Glu Ile Val Thr Leu Asn Tyr Leu Glu Pro Arg Thr Glu 500 505 510 Tyr Glu Leu Cys Val Gln Leu Val Arg Arg Gly Glu Gly Gly Glu Gly 515 520 525 His Pro Gly Pro Val Arg Arg Phe Thr Thr Ala Ser Ile Gly Leu Pro 530 535 540 Pro Pro Arg Gly Leu Asn Leu Leu Pro Lys Ser Gln Thr Thr Leu Asn 545 550 555 560 Leu Thr Trp Gln Pro Ile Phe Pro Ser Ser Glu Asp Asp Phe Tyr Val 565 570 575 Glu Val Glu Arg Arg Ser Val Gln Lys Ser Asp Gln Gln Asn Ile Lys 580 585 590 Val Pro Gly Asn Leu Thr Ser Val Leu Leu Asn Asn Leu His Pro Arg 595 600 605 Glu Gln Tyr Val Val Arg Ala Arg Val Asn Thr Lys Ala Gln Gly Glu 610 615 620 Trp Ser Glu Asp Leu Thr Ala Trp Thr Leu Ser Asp Ile Leu Pro Pro 625 630 635 640 Gln Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ser Asn Ile Thr His Ser Ser Ala Val 645 650 655 Ile Ser Trp Thr Ile Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Ile Thr Ile 660 665 670 Arg Tyr Lys Val Gln Gly Lys Asn Glu Asp Gln His Val Asp Val Lys 675 680 685 Ile Lys Asn Ala Thr Ile Thr Gln Tyr Gln Leu Lys Gly Leu Glu Pro 690 695 700 Glu Thr Ala Tyr Gln Val Asp Ile Phe Ala Glu Asn Asn Ile Gly Ser 705 710 715 720 Ser Asn Pro Ala Phe Ser His Glu Leu Val Thr Leu Pro Glu Ser Gln 725 730 735 Ala Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Lys Met Leu Leu Ile Ala Ile Leu 740 745 750 Gly Ser Ala Gly Met Thr Cys Leu Thr Val Leu Leu Ala Phe Leu Ile 755 760 765 Ile Leu Gln Leu Lys Arg Ala Asn Val Gln Arg Arg Met Ala Gln Ala 770 775 780 Phe Gln Asn Val Arg Glu Glu Pro Ala Val Gln Phe Asn Ser Gly Thr 785 790 795 800 Leu Ala Leu Asn Arg Lys Val Lys Asn Asn Pro Asp Pro Thr Ile Tyr 805 810 815 Pro Val Leu Asp Trp Asn Asp Ile Lys Phe Gln Asp Val Ile Gly Glu 820 825 830 Gly Asn Phe Gly Gln Val Leu Lys Ala Arg Ile Lys Lys Asp Gly Leu 835 840 845 Arg Met Asp Ala Ala Ile Lys Arg Met Lys Glu Tyr Ala Ser Lys Asp 850 855 860 Asp His Arg Asp Phe Ala Gly Glu Leu Glu Val Leu Cys Lys Leu Gly 865 870 875 880 His His Pro Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Glu His Arg Gly 885 890 895 Tyr Leu Tyr Leu Ala Ile Glu Tyr Ala Pro His Gly Asn Leu Leu Asp 900 905 910 Phe Leu Arg Lys Ser Arg Val Leu Glu Thr Asp Pro Ala Phe Ala Ile 915 920 925 Ala Asn Ser Thr Ala Ser Thr Leu Ser Ser Gln Gln Leu Leu His Phe 930 935 940 Ala Ala Asp Val Ala Arg Gly Met Asp Tyr Leu Ser Gln Lys Gln Phe 945 950 955 960 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Gly Glu Asn Tyr 965 970 975 Val Ala Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Arg Gly Gln Glu Val Tyr 980 985 990 Val Lys Lys Thr Met Gly Arg Leu Pro Val Arg Trp Met Ala Ile Glu 995 1000 1005 Ser Leu Asn Tyr Ser Val Tyr Thr Thr Asn Ser Asp Val Trp Ser 1010 1015 1020 Tyr Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Val Ser Leu Gly Gly Thr Pro 1025 1030 1035 Tyr Cys Gly Met Thr Cys Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Pro Gln 1040 1045 1050 Gly Tyr Arg Leu Glu Lys Pro Leu Asn Cys Asp Asp Glu Val Tyr 1055 1060 1065 Asp Leu Met Arg Gln Cys Trp Arg Glu Lys Pro Tyr Glu Arg Pro 1070 1075 1080 Ser Phe Ala Gln Ile Leu Val Ser Leu Asn Arg Met Leu Glu Glu 1085 1090 1095 Arg Lys Thr Tyr Val Asn Thr Thr Leu Tyr Glu Lys Phe Thr Tyr 1100 1105 1110 Ala Gly Ile Asp Cys Ser Ala Glu Glu Ala Ala 1115 1120 <210> 103 <211> 3375 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(3375) <400> 103 atg gac tct tta gcc agc tta gtt ctc tgt gga gtc agc ttg ctc ctt 48 Met Asp Ser Leu Ala Ser Leu Val Leu Cys Gly Val Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 tct gga act gtg gaa ggt gcc atg gac ttg atc ttg atc aat tcc cta 96 Ser Gly Thr Val Glu Gly Ala Met Asp Leu Ile Leu Ile Asn Ser Leu 20 25 30 cct ctt gta tct gat gct gaa aca tct ctc acc tgc att gcc tct ggg 144 Pro Leu Val Ser Asp Ala Glu Thr Ser Leu Thr Cys Ile Ala Ser Gly 35 40 45 tgg cgc ccc cat gag ccc atc acc ata gga agg gac ttt gaa gcc tta 192 Trp Arg Pro His Glu Pro Ile Thr Ile Gly Arg Asp Phe Glu Ala Leu 50 55 60 atg aac cag cac cag gat ccg ctg gaa gtt act caa gat gtg acc aga 240 Met Asn Gln His Gln Asp Pro Leu Glu Val Thr Gln Asp Val Thr Arg 65 70 75 80 gaa tgg gct aaa aaa gtt gtt tgg aag aga gaa aag gct agt aag atc 288 Glu Trp Ala Lys Lys Val Val Trp Lys Arg Glu Lys Ala Ser Lys Ile 85 90 95 aat ggt gct tat ttc tgt gaa ggg cga gtt cga gga gag gca atc agg 336 Asn Gly Ala Tyr Phe Cys Glu Gly Arg Val Arg Gly Glu Ala Ile Arg 100 105 110 ata cga acc atg aag atg cgt caa caa gct tcc ttc cta cca gct act 384 Ile Arg Thr Met Lys Met Arg Gln Gln Ala Ser Phe Leu Pro Ala Thr 115 120 125 tta act atg act gtg gac aag gga gat aac gtg aac ata tct ttc aaa 432 Leu Thr Met Thr Val Asp Lys Gly Asp Asn Val Asn Ile Ser Phe Lys 130 135 140 aag gta ttg att aaa gaa gaa gat gca gtg att tac aaa aat ggt tcc 480 Lys Val Leu Ile Lys Glu Glu Asp Ala Val Ile Tyr Lys Asn Gly Ser 145 150 155 160 ttc atc cat tca gtg ccc cgg cat gaa gta cct gat att cta gaa gta 528 Phe Ile His Ser Val Pro Arg His Glu Val Pro Asp Ile Leu Glu Val 165 170 175 cac ctg cct cat gct cag ccc cag gat gct gga gtg tac tcg gcc agg 576 His Leu Pro His Ala Gln Pro Gln Asp Ala Gly Val Tyr Ser Ala Arg 180 185 190 tat ata gga gga aac ctc ttc acc tcg gcc ttc acc agg ctg ata gtc 624 Tyr Ile Gly Gly Asn Leu Phe Thr Ser Ala Phe Thr Arg Leu Ile Val 195 200 205 cgg aga tgt gaa gcc cag aag tgg gga cct gaa tgc aac cat ctc tgt 672 Arg Arg Cys Glu Ala Gln Lys Trp Gly Pro Glu Cys Asn His Leu Cys 210 215 220 act gct tgt atg aac aat ggt gtc tgc cat gaa gat act gga gaa tgc 720 Thr Ala Cys Met Asn Asn Gly Val Cys His Glu Asp Thr Gly Glu Cys 225 230 235 240 att tgc cct cct ggg ttt atg gga agg acg tgt gag aag gct tgt gaa 768 Ile Cys Pro Pro Gly Phe Met Gly Arg Thr Cys Glu Lys Ala Cys Glu 245 250 255 ctg cac acg ttt ggc aga act tgt aaa gaa agg tgc agt gga caa gag 816 Leu His Thr Phe Gly Arg Thr Cys Lys Glu Arg Cys Ser Gly Gln Glu 260 265 270 gga tgc aag tct tat gtg ttc tgt ctc cct gac ccc tat ggg tgt tcc 864 Gly Cys Lys Ser Tyr Val Phe Cys Leu Pro Asp Pro Tyr Gly Cys Ser 275 280 285 tgt gcc aca ggc tgg aag ggt ctg cag tgc aat gaa gca tgc cac cct 912 Cys Ala Thr Gly Trp Lys Gly Leu Gln Cys Asn Glu Ala Cys His Pro 290 295 300 ggt ttt tac ggg cca gat tgt aag ctt agg tgc agc tgc aac aat ggg 960 Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Lys Leu Arg Cys Ser Cys Asn Asn Gly 305 310 315 320 gag atg tgt gat cgc ttc caa gga tgt ctc tgc tct cca gga tgg cag 1008 Glu Met Cys Asp Arg Phe Gln Gly Cys Leu Cys Ser Pro Gly Trp Gln 325 330 335 ggg ctc cag tgt gag aga gaa ggc ata ccg agg atg acc cca aag ata 1056 Gly Leu Gln Cys Glu Arg Glu Gly Ile Pro Arg Met Thr Pro Lys Ile 340 345 350 gtg gat ttg cca gat cat ata gaa gta aac agt ggt aaa ttt aat ccc 1104 Val Asp Leu Pro Asp His Ile Glu Val Asn Ser Gly Lys Phe Asn Pro 355 360 365 att tgc aaa gct tct ggc tgg ccg cta cct act aat gaa gaa atg acc 1152 Ile Cys Lys Ala Ser Gly Trp Pro Leu Pro Thr Asn Glu Glu Met Thr 370 375 380 ctg gtg aag ccg gat ggg aca gtg ctc cat cca aaa gac ttt aac cat 1200 Leu Val Lys Pro Asp Gly Thr Val Leu His Pro Lys Asp Phe Asn His 385 390 395 400 acg gat cat ttc tca gta gcc ata ttc acc atc cac cgg atc ctc ccc 1248 Thr Asp His Phe Ser Val Ala Ile Phe Thr Ile His Arg Ile Leu Pro 405 410 415 cct gac tca gga gtt tgg gtc tgc agt gtg aac aca gtg gct ggg atg 1296 Pro Asp Ser Gly Val Trp Val Cys Ser Val Asn Thr Val Ala Gly Met 420 425 430 gtg gaa aag ccc ttc aac att tct gtt aaa gtt ctt cca aag ccc ctg 1344 Val Glu Lys Pro Phe Asn Ile Ser Val Lys Val Leu Pro Lys Pro Leu 435 440 445 aat gcc cca aac gtg att gac act gga cat aac ttt gct gtc atc aac 1392 Asn Ala Pro Asn Val Ile Asp Thr Gly His Asn Phe Ala Val Ile Asn 450 455 460 atc agc tct gag cct tac ttt ggg gat gga cca atc aaa tcc aag aag 1440 Ile Ser Ser Glu Pro Tyr Phe Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480 ctt cta tac aaa ccc gtt aat cac tat gag gct tgg caa cat att caa 1488 Leu Leu Tyr Lys Pro Val Asn His Tyr Glu Ala Trp Gln His Ile Gln 485 490 495 gtg aca aat gag att gtt aca ctc aac tat ttg gaa cct cgg aca gaa 1536 Val Thr Asn Glu Ile Val Thr Leu Asn Tyr Leu Glu Pro Arg Thr Glu 500 505 510 tat gaa ctc tgt gtg caa ctg gtc cgt cgt gga gag ggt ggg gaa ggg 1584 Tyr Glu Leu Cys Val Gln Leu Val Arg Arg Gly Glu Gly Gly Glu Gly 515 520 525 cat cct gga cct gtg aga cgc ttc aca aca gct tct atc gga ctc cct 1632 His Pro Gly Pro Val Arg Arg Phe Thr Thr Ala Ser Ile Gly Leu Pro 530 535 540 cct cca aga ggt cta aat ctc ctg cct aaa agt cag acc act cta aat 1680 Pro Pro Arg Gly Leu Asn Leu Leu Pro Lys Ser Gln Thr Thr Leu Asn 545 550 555 560 ttg acc tgg caa cca ata ttt cca agc tcg gaa gat gac ttt tat gtt 1728 Leu Thr Trp Gln Pro Ile Phe Pro Ser Ser Glu Asp Asp Phe Tyr Val 565 570 575 gaa gtg gag aga agg tct gtg caa aaa agt gat cag cag aat att aaa 1776 Glu Val Glu Arg Arg Ser Val Gln Lys Ser Asp Gln Gln Asn Ile Lys 580 585 590 gtt cca ggc aac ttg act tcg gtg cta ctt aac aac tta cat ccc agg 1824 Val Pro Gly Asn Leu Thr Ser Val Leu Leu Asn Asn Leu His Pro Arg 595 600 605 gag cag tac gtg gtc cga gct aga gtc aac acc aag gcc cag ggg gaa 1872 Glu Gln Tyr Val Val Arg Ala Arg Val Asn Thr Lys Ala Gln Gly Glu 610 615 620 tgg agt gaa gat ctc act gct tgg acc ctt agt gac att ctt cct cct 1920 Trp Ser Glu Asp Leu Thr Ala Trp Thr Leu Ser Asp Ile Leu Pro Pro 625 630 635 640 caa cca gaa aac atc aag att tcc aac att aca cac tcc tca gct gtg 1968 Gln Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ser Asn Ile Thr His Ser Ser Ala Val 645 650 655 att tct tgg aca ata ttg gat ggc tat tct att tct tct att act atc 2016 Ile Ser Trp Thr Ile Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Ile Thr Ile 660 665 670 cgt tac aag gtt caa ggc aag aat gaa gac cag cac gtt gat gtg aag 2064 Arg Tyr Lys Val Gln Gly Lys Asn Glu Asp Gln His Val Asp Val Lys 675 680 685 ata aag aat gcc acc atc act cag tat cag ctc aag ggc cta gag cct 2112 Ile Lys Asn Ala Thr Ile Thr Gln Tyr Gln Leu Lys Gly Leu Glu Pro 690 695 700 gaa aca gca tac cag gtg gac att ttt gca gag aac aac ata ggg tca 2160 Glu Thr Ala Tyr Gln Val Asp Ile Phe Ala Glu Asn Asn Ile Gly Ser 705 710 715 720 agc aac cca gcc ttt tct cat gaa ctg gtg acc ctc cca gaa tct caa 2208 Ser Asn Pro Ala Phe Ser His Glu Leu Val Thr Leu Pro Glu Ser Gln 725 730 735 gca cca gcg gac ctc gga ggg ggg aag atg ctg ctt ata gcc atc ctt 2256 Ala Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Lys Met Leu Leu Ile Ala Ile Leu 740 745 750 ggc tct gct gga atg acc tgc ctg act gtg ctg ttg gcc ttt ctg atc 2304 Gly Ser Ala Gly Met Thr Cys Leu Thr Val Leu Leu Ala Phe Leu Ile 755 760 765 ata ttg caa ttg aag agg gca aat gtg caa agg aga atg gcc caa gcc 2352 Ile Leu Gln Leu Lys Arg Ala Asn Val Gln Arg Arg Met Ala Gln Ala 770 775 780 ttc caa aac gtg agg gaa gaa cca gct gtg cag ttc aac tca ggg act 2400 Phe Gln Asn Val Arg Glu Glu Pro Ala Val Gln Phe Asn Ser Gly Thr 785 790 795 800 ctg gcc cta aac agg aag gtc aaa aac aac cca gat cct aca att tat 2448 Leu Ala Leu Asn Arg Lys Val Lys Asn Asn Pro Asp Pro Thr Ile Tyr 805 810 815 cca gtg ctt gac tgg aat gac atc aaa ttt caa gat gtg att ggg gag 2496 Pro Val Leu Asp Trp Asn Asp Ile Lys Phe Gln Asp Val Ile Gly Glu 820 825 830 ggc aat ttt ggc caa gtt ctt aag gcg cgc atc aag aag gat ggg tta 2544 Gly Asn Phe Gly Gln Val Leu Lys Ala Arg Ile Lys Lys Asp Gly Leu 835 840 845 tgg atg gat gct gcc atc aaa aga atg aaa gaa tat gcc tcc aaa gat 2592 Trp Met Asp Ala Ala Ile Lys Arg Met Lys Glu Tyr Ala Ser Lys Asp 850 855 860 gat cac agg gac ttt gca gga gaa ctg gaa gtt ctt tgt aaa ctt gga 2640 Asp His Arg Asp Phe Ala Gly Glu Leu Glu Val Leu Cys Lys Leu Gly 865 870 875 880 cac cat cca aac atc atc aat ctc tta gga gca tgt gaa cat cga ggc 2688 His His Pro Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Glu His Arg Gly 885 890 895 tac ttg tac ctg gcc att gag tac gcg ccc cat gga aac ctt ctg gac 2736 Tyr Leu Tyr Leu Ala Ile Glu Tyr Ala Pro His Gly Asn Leu Leu Asp 900 905 910 ttc ctt cgc aag agc cgt gtg ctg gag acg gac cca gca ttt gcc att 2784 Phe Leu Arg Lys Ser Arg Val Leu Glu Thr Asp Pro Ala Phe Ala Ile 915 920 925 gcc aat agc acc gcg tcc aca ctg tcc tcc cag cag ctc ctt cac ttc 2832 Ala Asn Ser Thr Ala Ser Thr Leu Ser Ser Gln Gln Leu Leu His Phe 930 935 940 gct gcc gac gtg gcc cgg ggc atg gac tac ttg agc caa aaa cag ttt 2880 Ala Ala Asp Val Ala Arg Gly Met Asp Tyr Leu Ser Gln Lys Gln Phe 945 950 955 960 atc cac agg gat ctg gct gcc aga aac att tta gtt ggt gaa aac tat 2928 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Gly Glu Asn Tyr 965 970 975 gtg gca aaa ata gca gat ttt gga ttg tcc cga ggt caa gag gtg tat 2976 Val Ala Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Arg Gly Gln Glu Val Tyr 980 985 990 gtg aaa aag aca atg gga agg ctc cca gtg cgc tgg atg gcc atc gag 3024 Val Lys Lys Thr Met Gly Arg Leu Pro Val Arg Trp Met Ala Ile Glu 995 1000 1005 tca ctg aat tac agt gtg tac aca acc aac agt gat gta tgg tcc 3069 Ser Leu Asn Tyr Ser Val Tyr Thr Thr Asn Ser Asp Val Trp Ser 1010 1015 1020 tat ggt gtg tta cta tgg gag att gtt agc tta gga ggc aca ccc 3114 Tyr Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Val Ser Leu Gly Gly Thr Pro 1025 1030 1035 tac tgc ggg atg act tgt gca gaa ctc tac gag aag ctg ccc cag 3159 Tyr Cys Gly Met Thr Cys Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Pro Gln 1040 1045 1050 ggc tac aga ctg gag aag ccc ctg aac tgt gat gat gag gtg tat 3204 Gly Tyr Arg Leu Glu Lys Pro Leu Asn Cys Asp Asp Glu Val Tyr 1055 1060 1065 gat cta atg aga caa tgc tgg cgg gag aag cct tat gag agg cca 3249 Asp Leu Met Arg Gln Cys Trp Arg Glu Lys Pro Tyr Glu Arg Pro 1070 1075 1080 tca ttt gcc cag ata ttg gtg tcc tta aac aga atg tta gag gag 3294 Ser Phe Ala Gln Ile Leu Val Ser Leu Asn Arg Met Leu Glu Glu 1085 1090 1095 cga aag acc tac gtg aat acc acg ctt tat gag aag ttt act tat 3339 Arg Lys Thr Tyr Val Asn Thr Thr Leu Tyr Glu Lys Phe Thr Tyr 1100 1105 1110 gca gga att gac tgt tct gct gaa gaa gcg gcc tag 3375 Ala Gly Ile Asp Cys Ser Ala Glu Glu Ala Ala 1115 1120 <210> 104 <211> 1124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Met Asp Ser Leu Ala Ser Leu Val Leu Cys Gly Val Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Gly Thr Val Glu Gly Ala Met Asp Leu Ile Leu Ile Asn Ser Leu 20 25 30 Pro Leu Val Ser Asp Ala Glu Thr Ser Leu Thr Cys Ile Ala Ser Gly 35 40 45 Trp Arg Pro His Glu Pro Ile Thr Ile Gly Arg Asp Phe Glu Ala Leu 50 55 60 Met Asn Gln His Gln Asp Pro Leu Glu Val Thr Gln Asp Val Thr Arg 65 70 75 80 Glu Trp Ala Lys Lys Val Val Trp Lys Arg Glu Lys Ala Ser Lys Ile 85 90 95 Asn Gly Ala Tyr Phe Cys Glu Gly Arg Val Arg Gly Glu Ala Ile Arg 100 105 110 Ile Arg Thr Met Lys Met Arg Gln Gln Ala Ser Phe Leu Pro Ala Thr 115 120 125 Leu Thr Met Thr Val Asp Lys Gly Asp Asn Val Asn Ile Ser Phe Lys 130 135 140 Lys Val Leu Ile Lys Glu Glu Asp Ala Val Ile Tyr Lys Asn Gly Ser 145 150 155 160 Phe Ile His Ser Val Pro Arg His Glu Val Pro Asp Ile Leu Glu Val 165 170 175 His Leu Pro His Ala Gln Pro Gln Asp Ala Gly Val Tyr Ser Ala Arg 180 185 190 Tyr Ile Gly Gly Asn Leu Phe Thr Ser Ala Phe Thr Arg Leu Ile Val 195 200 205 Arg Arg Cys Glu Ala Gln Lys Trp Gly Pro Glu Cys Asn His Leu Cys 210 215 220 Thr Ala Cys Met Asn Asn Gly Val Cys His Glu Asp Thr Gly Glu Cys 225 230 235 240 Ile Cys Pro Pro Gly Phe Met Gly Arg Thr Cys Glu Lys Ala Cys Glu 245 250 255 Leu His Thr Phe Gly Arg Thr Cys Lys Glu Arg Cys Ser Gly Gln Glu 260 265 270 Gly Cys Lys Ser Tyr Val Phe Cys Leu Pro Asp Pro Tyr Gly Cys Ser 275 280 285 Cys Ala Thr Gly Trp Lys Gly Leu Gln Cys Asn Glu Ala Cys His Pro 290 295 300 Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Lys Leu Arg Cys Ser Cys Asn Asn Gly 305 310 315 320 Glu Met Cys Asp Arg Phe Gln Gly Cys Leu Cys Ser Pro Gly Trp Gln 325 330 335 Gly Leu Gln Cys Glu Arg Glu Gly Ile Pro Arg Met Thr Pro Lys Ile 340 345 350 Val Asp Leu Pro Asp His Ile Glu Val Asn Ser Gly Lys Phe Asn Pro 355 360 365 Ile Cys Lys Ala Ser Gly Trp Pro Leu Pro Thr Asn Glu Glu Met Thr 370 375 380 Leu Val Lys Pro Asp Gly Thr Val Leu His Pro Lys Asp Phe Asn His 385 390 395 400 Thr Asp His Phe Ser Val Ala Ile Phe Thr Ile His Arg Ile Leu Pro 405 410 415 Pro Asp Ser Gly Val Trp Val Cys Ser Val Asn Thr Val Ala Gly Met 420 425 430 Val Glu Lys Pro Phe Asn Ile Ser Val Lys Val Leu Pro Lys Pro Leu 435 440 445 Asn Ala Pro Asn Val Ile Asp Thr Gly His Asn Phe Ala Val Ile Asn 450 455 460 Ile Ser Ser Glu Pro Tyr Phe Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480 Leu Leu Tyr Lys Pro Val Asn His Tyr Glu Ala Trp Gln His Ile Gln 485 490 495 Val Thr Asn Glu Ile Val Thr Leu Asn Tyr Leu Glu Pro Arg Thr Glu 500 505 510 Tyr Glu Leu Cys Val Gln Leu Val Arg Arg Gly Glu Gly Gly Glu Gly 515 520 525 His Pro Gly Pro Val Arg Arg Phe Thr Thr Ala Ser Ile Gly Leu Pro 530 535 540 Pro Pro Arg Gly Leu Asn Leu Leu Pro Lys Ser Gln Thr Thr Leu Asn 545 550 555 560 Leu Thr Trp Gln Pro Ile Phe Pro Ser Ser Glu Asp Asp Phe Tyr Val 565 570 575 Glu Val Glu Arg Arg Ser Val Gln Lys Ser Asp Gln Gln Asn Ile Lys 580 585 590 Val Pro Gly Asn Leu Thr Ser Val Leu Leu Asn Asn Leu His Pro Arg 595 600 605 Glu Gln Tyr Val Val Arg Ala Arg Val Asn Thr Lys Ala Gln Gly Glu 610 615 620 Trp Ser Glu Asp Leu Thr Ala Trp Thr Leu Ser Asp Ile Leu Pro Pro 625 630 635 640 Gln Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ser Asn Ile Thr His Ser Ser Ala Val 645 650 655 Ile Ser Trp Thr Ile Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Ile Thr Ile 660 665 670 Arg Tyr Lys Val Gln Gly Lys Asn Glu Asp Gln His Val Asp Val Lys 675 680 685 Ile Lys Asn Ala Thr Ile Thr Gln Tyr Gln Leu Lys Gly Leu Glu Pro 690 695 700 Glu Thr Ala Tyr Gln Val Asp Ile Phe Ala Glu Asn Asn Ile Gly Ser 705 710 715 720 Ser Asn Pro Ala Phe Ser His Glu Leu Val Thr Leu Pro Glu Ser Gln 725 730 735 Ala Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Lys Met Leu Leu Ile Ala Ile Leu 740 745 750 Gly Ser Ala Gly Met Thr Cys Leu Thr Val Leu Leu Ala Phe Leu Ile 755 760 765 Ile Leu Gln Leu Lys Arg Ala Asn Val Gln Arg Arg Met Ala Gln Ala 770 775 780 Phe Gln Asn Val Arg Glu Glu Pro Ala Val Gln Phe Asn Ser Gly Thr 785 790 795 800 Leu Ala Leu Asn Arg Lys Val Lys Asn Asn Pro Asp Pro Thr Ile Tyr 805 810 815 Pro Val Leu Asp Trp Asn Asp Ile Lys Phe Gln Asp Val Ile Gly Glu 820 825 830 Gly Asn Phe Gly Gln Val Leu Lys Ala Arg Ile Lys Lys Asp Gly Leu 835 840 845 Trp Met Asp Ala Ala Ile Lys Arg Met Lys Glu Tyr Ala Ser Lys Asp 850 855 860 Asp His Arg Asp Phe Ala Gly Glu Leu Glu Val Leu Cys Lys Leu Gly 865 870 875 880 His His Pro Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Glu His Arg Gly 885 890 895 Tyr Leu Tyr Leu Ala Ile Glu Tyr Ala Pro His Gly Asn Leu Leu Asp 900 905 910 Phe Leu Arg Lys Ser Arg Val Leu Glu Thr Asp Pro Ala Phe Ala Ile 915 920 925 Ala Asn Ser Thr Ala Ser Thr Leu Ser Ser Gln Gln Leu Leu His Phe 930 935 940 Ala Ala Asp Val Ala Arg Gly Met Asp Tyr Leu Ser Gln Lys Gln Phe 945 950 955 960 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Gly Glu Asn Tyr 965 970 975 Val Ala Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Arg Gly Gln Glu Val Tyr 980 985 990 Val Lys Lys Thr Met Gly Arg Leu Pro Val Arg Trp Met Ala Ile Glu 995 1000 1005 Ser Leu Asn Tyr Ser Val Tyr Thr Thr Asn Ser Asp Val Trp Ser 1010 1015 1020 Tyr Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Val Ser Leu Gly Gly Thr Pro 1025 1030 1035 Tyr Cys Gly Met Thr Cys Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Pro Gln 1040 1045 1050 Gly Tyr Arg Leu Glu Lys Pro Leu Asn Cys Asp Asp Glu Val Tyr 1055 1060 1065 Asp Leu Met Arg Gln Cys Trp Arg Glu Lys Pro Tyr Glu Arg Pro 1070 1075 1080 Ser Phe Ala Gln Ile Leu Val Ser Leu Asn Arg Met Leu Glu Glu 1085 1090 1095 Arg Lys Thr Tyr Val Asn Thr Thr Leu Tyr Glu Lys Phe Thr Tyr 1100 1105 1110 Ala Gly Ile Asp Cys Ser Ala Glu Glu Ala Ala 1115 1120 <210> 105 <211> 814 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 105 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaact ccttctccac aagcgccttc ggtccagttg ccttctccct 120 gggcctgctc ctggtgttgc ctgctgcctt ccctgcccca gtcttcacac tcgaagattt 180 cgttggggac tggcgacaga cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg 240 tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct 300 gagcggtgaa aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag 360 cggcgaccaa atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca 420 tcactttaag gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat 480 gatcgactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac 540 tgtaacaggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga 600 cggctccctg ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg 660 cattctggcg taaggctgct gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga 720 tggccaggcc agagtgctgc cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc 780 acaataaagg ctgagctctt atcttgcaaa aggc 814 <210> 106 <211> 984 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 106 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt 60 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc 120 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcga 180 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc 240 ggcatgaact ccttctccac aagcgccttc ggtccagttg ccttctccct gggcctgctc 300 ctggtgttgc ctgctgcctt ccctgcccca gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac 360 tggcgacaga cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt 420 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 480 aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa 540 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 600 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 660 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 720 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 780 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggcg 840 taaggctgct gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga tggccaggcc 900 agagtgctgc cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc acaataaagg 960 ctgagctctt atcttgcaaa aggc 984 <210> 107 <211> 1735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 107 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctcacatagg gtgcagcaat cagcgccgaa gtccagaaaa 180 cagtgggaga agatataacc ggattcaaca tgggcaatgt gcctacactt tcattcttcc 240 agaacacgat ggcaactgtc gtgagagtac gacagaccag tacaacacaa acgctctgca 300 gagagatgct ccacacgtgg aaccggattt ctcttcccag aaacttcaac atctggaaca 360 tgtgatggaa aattatactc agtggctgca aaaacttgag aattacattg tggaaaacat 420 gaagtcggag atggcccaga tacagcagaa tgcagttcag aaccacacgg ctaccatgct 480 ggagatagga accagcctcc tctctcagac tgcagagcag accagaaagc tgacagatgt 540 tgagacccag gtactaaatc aaacttctcg acttgagata cagctgctgg agaattcatt 600 atccacctac aagctagaga agcaacttct tcaacagaca aatgaaatct tgaagatcca 660 tgaaaaaaac agtttattag aacataaaat cttagaaatg gaaggaaaac acaaggaaga 720 gttggacacc ttaaaggaag agaaagagaa ccttcaaggc ttggttactc gtcaaacata 780 tataatccag gagctggaaa agcaattaaa cagagctacc accaacaaca gtgtccttca 840 gaagcagcaa ctggagctga tggacacagt ccacaacctt gtcaatcttt gcactaaaga 900 aggtgtttta ctaaagggag gaaaaagaga ggaagagaaa ccatttagag actgtgcaga 960 tgtatatcaa gctggtttta ataaaagtgg aatctacact atttatatta ataatatgcc 1020 agaacccaaa aaggtgtttt gcaatatgga tgtcaatggg ggaggttgga ctgtaataca 1080 acatcgtgaa gatggaagtc tagatttcca aagaggctgg aaggaatata aaatgggttt 1140 tggaaatccc tccggtgaat attggctggg gaatgagttt atttttgcca ttaccagtca 1200 gaggcagtac atgctaagaa ttgagttaat ggactgggaa gggaaccgag cctattcaca 1260 gtatgacaga ttccacatag gaaatgaaaa gcaaaactat aggttgtatt taaaaggtca 1320 cactgggaca gcaggaaaac agagcagcct gatcttacac ggtgctgatt tcagcactaa 1380 agatgctgat aatgacaact gtatgtgcaa atgtgccctc atgttaacag gaggatggtg 1440 gtttgatgct tgtggcccct ccaatctaaa tggaatgttc tatactgcgg gacaaaacca 1500 tggaaaactg aatgggataa agtggcacta cttcaaaggg cccagttact ccttacgttc 1560 cacaactatg atgattcgac ctttagattt ttgaggctgc tgcagctgca tgggtgcctg 1620 ctgctgcctg ccttggcctg atggccaggc cagagtgctg ccagtcctct gcatgttctg 1680 ctcttgtgcc cttctgagcc cacaataaag gctgagctct tatcttgcaa aaggc 1735 <210> 108 <211> 1150 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 108 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgggatctt agacttgggc ccgcagatgc ttcgggaact 180 gcaggaaacc aacgcggcgc tgcaggacgt gcgggagctg ctgcggcagc aggtcaggga 240 gatcacgttc ctgaaaaaca cggtgatgga gtgtgacgcg tgcggaggct cccttgtcaa 300 tctttgcact aaagaaggtg ttttactaaa gggaggaaaa agagaggaag agaaaccatt 360 tagagactgt gcagatgtat atcaagctgg ttttaataaa agtggaatct acactattta 420 tattaataat atgccagaac ccaaaaaggt gttttgcaat atggatgtca atgggggagg 480 ttggactgta atacaacatc gtgaagatgg aagtctagat ttccaaagag gctggaagga 540 atataaaatg ggttttggaa atccctccgg tgaatattgg ctggggaatg agtttatttt 600 tgccattacc agtcagaggc agtacatgct aagaattgag ttaatggact gggaagggaa 660 ccgagcctat tcacagtatg acagattcca cataggaaat gaaaagcaaa actataggtt 720 gtatttaaaa ggtcacactg ggacagcagg aaaacagagc agcctgatct tacacggtgc 780 tgatttcagc actaaagatg ctgataatga caactgtatg tgcaaatgtg ccctcatgtt 840 aacaggagga tggtggtttg atgcttgtgg cccctccaat ctaaatggaa tgttctatac 900 tgcgggacaa aaccatggaa aactgaatgg gataaagtgg cactacttca aagggcccag 960 ttactcctta cgttccacaa ctatgatgat tcgaccttta gatttttgag gctgctgcag 1020 ctgcatgggt gcctgctgct gcctgccttg gcctgatggc caggccagag tgctgccagt 1080 cctctgcatg ttctgctctt gtgcccttct gagcccacaa taaaggctga gctcttatct 1140 tgcaaaaggc 1150 <210> 109 <211> 817 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 109 catatcttca ttcttcactc tttccccccc cccccttatc ctcctatcta atcctctcat 60 ctctctcctc ctcttcctcc aacaacaact aacaatgaaa gtctctgccg cccttctgtg 120 cctgctgctc atagcagcca ccttcattcc ccaagggctc gctgtcttca cactcgaaga 180 tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg 240 aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt 300 cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct 360 gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga 420 tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa 480 catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat 540 cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc 600 cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg accggctggc ggctgtgcga 660 acgcattctg gcgtaaggct gctgcagctg catgggtgcc tgctgctgcc tgccttggcc 720 tgatggccag gccagagtgc tgccagtcct ctgcatgttc tgctcttgtg cccttctgag 780 cccacaataa aggctgagct cttatcttgc aaaaggc 817 <210> 110 <211> 978 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 gtggcagctc acagctattg tggtgggaaa gggagggtgg ttggtggatg tcacagcttg 60 ggctttatct cccccagcag tggggactcc acagcccctg ggctacataa cagcaagaca 120 gtccggagct gtagcagacc tgattgagcc tttgcagcag ctgagagcat ggcctagggt 180 gggcggcacc attgtccagc agctgagttt cccagggacc ttggagatag ccgcagccct 240 catttgcagg ggaagatgaa agtctctgcc gcccttctgt gcctgctgct catagcagcc 300 accttcattc cccaagggct cgctgtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactggcga 360 cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgttt 420 cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc caaaggattg tcctgagcgg tgaaaatggg 480 ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcggcga ccaaatgggc 540 cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 600 ctgcactatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgatcga ctatttcgga 660 cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 720 tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaacc ccgacggctc cctgctgttc 780 cgagtaacca tcaacggagt gaccggctgg cggctgtgcg aacgcattct ggcgtaaggc 840 tgctgcagct gcatgggtgc ctgctgctgc ctgccttggc ctgatggcca ggccagagtg 900 ctgccagtcc tctgcatgtt ctgctcttgt gcccttctga gcccacaata aaggctgagc 960 tcttatcttg caaaaggc 978 <210> 111 <211> 975 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 gtggcagctc acagctattg tggtgggaaa gggagggtgg ttggtggatg tcacagcttg 60 ggctttatct cccccagcag tggggactcc acagcccctg ggctacataa cagcaagaca 120 gtccggagct gtagcagacc tgattgagcc tttgcagcag ctgagagcat ggcctagggt 180 gggcggcacc attgtccagc agctgagttt cccagggacc ttggagatag ccgcagccct 240 catttgcagg ggaagatgat tcctgccaga tttgccgggg tgctgcttgc tctggccctc 300 attttgccag ggaccctttg tgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag 360 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag 420 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg 480 aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag 540 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg 600 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg 660 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg 720 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga 780 gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaaggctgc 840 tgcagctgca tgggtgcctg ctgctgcctg ccttggcctg atggccaggc cagagtgctg 900 ccagtcctct gcatgttctg ctcttgtgcc cttctgagcc cacaataaag gctgagctct 960 tatcttgcaa aaggc 975 <210> 112 <211> 778 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag accccggcgc cgccaccatg 60 aaagtctctg ccgcccttct gtgcctgctg ctcatagcag ccaccttcat tccccaaggg 120 ctcgctgtct tcacactcga agatttcgtt ggggactggc gacagacagc cggctacaac 180 ctggaccaag tccttgaaca gggaggtgtg tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc 240 gtaactccga tccaaaggat tgtcctgagc ggtgaaaatg ggctgaagat cgacatccat 300 gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcggc gaccaaatgg gccagatcga aaaaattttt 360 aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga tcctgcacta tggcacactg 420 gtaatcgacg gggttacgcc gaacatgatc gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc 480 gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt 540 atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt tccgagtaac catcaacgga 600 gtgaccggct ggcggctgtg cgaacgcatt ctggcgtaat aataggctgg agcctcggtg 660 gcctagcttc ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac 720 cccctccata aagtaggaaa cactacagtg gtctttgaat aaagtctgag tgggcggc 778 <210> 113 <211> 796 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgccgcc accatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgtcttcac actcgaagat ttcgttgggg actggcgaca 180 gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga ggtgtgtcca gtttgtttca 240 gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc ctgagcggtg aaaatgggct 300 gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg agcggcgacc aaatgggcca 360 gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgatcct 420 gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg 480 gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaacag ggaccctgtg 540 gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc gacggctccc tgctgttccg 600 agtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgaa cgcattctgg cgtaaggctg 660 ctgcagctgc atgggtgcct gctgctgcct gccttggcct gatggccagg ccagagtgct 720 gccagtcctc tgcatgttct gctcttgtgc ccttctgagc ccacaataaa ggctgagctc 780 ttatcttgca aaaggc 796 <210> 114 <211> 1144 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgggatctt agaggaagac ccggccgcct gcgagtccct 180 ggtgaaattc caagccaaag tggaggggct gctgcaggcc ctgaccagga aactggaagc 240 tgtgagtaag cggctggcca tcctggagaa cacagttgtc ggctcccttg tcaatcttgc 300 cactaaagaa ggtgttttac taaagggagg aaaaagagag gaagagaaac catttagaga 360 ctgtgcagat gtatatcaag ctggttttaa taaaagtgga atctacacta tttatattaa 420 taatatgcca gaacccaaaa aggtgttttg caatatggat gtcaatgggg gaggttggac 480 tgtaatacaa catcgtgaag atggaagtct agatttccaa agaggctgga aggaatataa 540 aatgggtttt ggaaatccct ccggtgaata ttggctgggg aatgagttta tttttgccat 600 taccagtcag aggcagtaca tgctaagaat tgagttaatg gactgggaag ggaaccgagc 660 ctattcacag tatgacagat tccacatagg aaatgaaaag caaaactata ggttgtattt 720 aaaaggtcac actgggacag caggaaaaca gagcagcctg atcttacacg gtgctgattt 780 cagcactaaa gatgctgata atgacaactg tatgtgcaaa tgtgccctca tgttaacagg 840 aggatggtgg tttgatgctt gtggcccctc caatctaaat ggaatgttct atactgcggg 900 acaaaaccat ggaaaactga atgggataaa gtggcactac ttcaaagggc ccagttactc 960 cttacgttcc acaactatga tgattcgacc tttagatttt tgaggctgct gcagctgcat 1020 gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga tggccaggcc agagtgctgc cagtcctctg 1080 catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc acaataaagg ctgagctctt atcttgcaaa 1140 aggc 1144 <210> 115 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 115 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tccttcgcaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataccac gctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 116 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 116 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttatgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tccttcgcaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataccac gctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 117 <211> 3207 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(3207) <400> 117 atg cct cca cga cca tca tca ggt gaa ctg tgg ggc atc cac ttg atg 48 Met Pro Pro Arg Pro Ser Ser Gly Glu Leu Trp Gly Ile His Leu Met 1 5 10 15 ccc cca aga atc cta gta gaa tgt tta cta cca aat gga atg ata gtg 96 Pro Pro Arg Ile Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro Asn Gly Met Ile Val 20 25 30 act tta gaa tgc ctc cgt gag gct aca tta ata acc ata aag cat gaa 144 Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile Thr Ile Lys His Glu 35 40 45 cta ttt aaa gaa gca aga aaa tac ccc ctc cat caa ctt ctt caa gat 192 Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His Gln Leu Leu Gln Asp 50 55 60 gaa tct tct tac att ttc gta agt gtt act caa gaa gca gaa agg gaa 240 Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln Glu Ala Glu Arg Glu 65 70 75 80 gaa ttt ttt gat gaa aca aga cga ctt tgt gac ctt cgg ctt ttt caa 288 Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp Leu Arg Leu Phe Gln 85 90 95 ccc ttt tta aaa gta att gaa cca gta ggc aac cgt gaa gaa aag atc 336 Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn Arg Glu Glu Lys Ile 100 105 110 ctc aat cga gaa att ggt ttt gct atc ggc atg cca gtg tgt gaa ttt 384 Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met Pro Val Cys Glu Phe 115 120 125 gat atg gtt aaa gat cca gaa gta cag gac ttc cga aga aat att ctg 432 Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe Arg Arg Asn Ile Leu 130 135 140 aac gtt tgt aaa gaa gct gtg gat ctt agg gac ctc aat tca cct cat 480 Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp Leu Asn Ser Pro His 145 150 155 160 agt aga gca atg tat gtc tat cct cca aat gta gaa tct tca cca gaa 528 Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val Glu Ser Ser Pro Glu 165 170 175 ttg cca aag cac ata tat aat aaa tta gat aaa ggg caa ata ata gtg 576 Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys Gly Gln Ile Ile Val 180 185 190 gtg atc tgg gta ata gtt tct cca aat aat gac aag cag aag tat act 624 Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp Lys Gln Lys Tyr Thr 195 200 205 ctg aaa atc aac cat gac tgt gta cca gaa caa gta att gct gaa gca 672 Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln Val Ile Ala Glu Ala 210 215 220 atc agg aaa aaa act cga agt atg ttg cta tcc tct gaa caa cta aaa 720 Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser Ser Glu Gln Leu Lys 225 230 235 240 ctc tgt gtt tta gaa tat cag ggc aag tat att tta aaa gtg tgt gga 768 Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile Leu Lys Val Cys Gly 245 250 255 tgt gat gaa tac ttc cta gaa aaa tat cct ctg agt cag tat aag tat 816 Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu Ser Gln Tyr Lys Tyr 260 265 270 ata aga agc tgt ata atg ctt ggg agg atg ccc aat ttg atg ttg atg 864 Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro Asn Leu Met Leu Met 275 280 285 gct aaa gaa agc ctt tat tct caa ctg cca atg gac tgt ttt aca atg 912 Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met Asp Cys Phe Thr Met 290 295 300 cca tct tat tcc aga cgc att tcc aca gct aca cca tat atg aat gga 960 Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr Pro Tyr Met Asn Gly 305 310 315 320 gaa aca tct aca aaa tcc ctt tgg gtt ata aat agt gca ctc aga ata 1008 Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn Ser Ala Leu Arg Ile 325 330 335 aaa att ctt tgt gca acc tac gtg aat gta aat att cga gac att gat 1056 Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn Ile Arg Asp Ile Asp 340 345 350 aag atc tat gtt cga aca ggt atc tac cat gga gga gaa ccc tta tgt 1104 Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly Gly Glu Pro Leu Cys 355 360 365 gac aat gtg aac act caa aga gta cct tgt tcc aat ccc agg tgg aat 1152 Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser Asn Pro Arg Trp Asn 370 375 380 gaa tgg ctg aat tat gat ata tac att cct gat ctt cct cgt gct gct 1200 Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp Leu Pro Arg Ala Ala 385 390 395 400 cga ctt tgc ctt tcc att tgc tct gtt aaa ggc cga aag ggt gct aaa 1248 Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly Arg Lys Gly Ala Lys 405 410 415 gag gaa cac tgt cca ttg gca tgg gga aat ata aac ttg ttt gat tac 1296 Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile Asn Leu Phe Asp Tyr 420 425 430 aca gac act cta gta tct gga aaa atg gct ttg aat ctt tgg cca gta 1344 Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu Asn Leu Trp Pro Val 435 440 445 cct cat gga tta gaa gat ttg ctg aac cct att ggt gtt act gga tca 1392 Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile Gly Val Thr Gly Ser 450 455 460 aat cca aat aaa gaa act cca tgc tta gag ttg gag ttt gac tgg ttc 1440 Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu Glu Phe Asp Trp Phe 465 470 475 480 agc agt gtg gta aag ttc cca gat atg tca gtg att gaa gag cat gcc 1488 Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val Ile Glu Glu His Ala 485 490 495 aat tgg tct gta tcc cga gaa gca gga ttt agc tat tcc cac gca gga 1536 Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser Tyr Ser His Ala Gly 500 505 510 ctg agt aac aga cta gct aga gac aat gaa tta agg gaa aat gac aaa 1584 Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu Arg Glu Asn Asp Lys 515 520 525 gaa cag ctc aaa gca att tct aca cga gat cct ctc tct gaa atc act 1632 Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro Leu Ser Glu Ile Thr 530 535 540 gag cag gag aaa gat ttt cta tgg agt cac aga cac tat tgt gta act 1680 Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg His Tyr Cys Val Thr 545 550 555 560 atc ccc gaa att cta ccc aaa ttg ctt ctg tct gtt aaa tgg aat tct 1728 Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser Val Lys Trp Asn Ser 565 570 575 aga gat gaa gta gcc cag atg tat tgc ttg gta aaa gat tgg cct cca 1776 Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val Lys Asp Trp Pro Pro 580 585 590 atc aaa cct gaa cag gct atg gaa ctt ctg gac tgt aat tac cca gat 1824 Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp Cys Asn Tyr Pro Asp 595 600 605 cct atg gtt cga ggt ttt gct gtt cgg tgc ttg gaa aaa tat tta aca 1872 Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu Glu Lys Tyr Leu Thr 610 615 620 gat gac aaa ctt tct cag tat tta att cag cta gta cag gtc cta aaa 1920 Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu Val Gln Val Leu Lys 625 630 635 640 tat gaa caa tat ttg gat aac ttg ctt gtg aga ttt tta ctg aag aaa 1968 Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg Phe Leu Leu Lys Lys 645 650 655 gca ttg act aat caa agg att ggg cac ttt ttc ttt tgg cat tta aaa 2016 Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe Phe Trp His Leu Lys 660 665 670 tct gag atg cac aat aaa aca gtt agc cag agg ttt ggc ctg ctt ttg 2064 Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg Phe Gly Leu Leu Leu 675 680 685 gag tcc tat tgt cgt gca tgt ggg atg tat ttg aag cac ctg aat agg 2112 Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu Lys His Leu Asn Arg 690 695 700 caa gtc gag gca atg gaa aag ctc att aac tta act gac att ctc aaa 2160 Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu Thr Asp Ile Leu Lys 705 710 715 720 cag gag aag aag gat gaa aca caa aag gta cag atg aag ttt tta gtt 2208 Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln Met Lys Phe Leu Val 725 730 735 gag caa atg agg cga cca gat ttc atg gat gct cta cag ggc ttt ctg 2256 Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala Leu Gln Gly Phe Leu 740 745 750 tct cct cta aac cct gct cat caa cta gga aac ctc agg ctt gaa gag 2304 Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn Leu Arg Leu Glu Glu 755 760 765 tgt cga att atg tcc tct gca aaa agg cca ctg tgg ttg aat tgg gag 2352 Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu Trp Leu Asn Trp Glu 770 775 780 aac cca gac atc atg tca gag tta ctg ttt cag aac aat gag atc atc 2400 Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln Asn Asn Glu Ile Ile 785 790 795 800 ttt aaa aat ggg gat gat tta cgg caa gat atg cta aca ctt caa att 2448 Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Ile 805 810 815 att cgt att atg gaa aat atc tgg caa aat caa ggt ctt gat ctt cga 2496 Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln Gly Leu Asp Leu Arg 820 825 830 atg tta cct tat ggt tgt ctg tca atc ggt gac tgt gtg gga ctt att 2544 Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp Cys Val Gly Leu Ile 835 840 845 gag gtg gtg cga aat tct cac act att atg caa att cag tgc aaa ggc 2592 Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln Ile Gln Cys Lys Gly 850 855 860 ggc ttg aaa ggt gca ctg cag ttc aac agc cac aca cta cat cag tgg 2640 Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His Thr Leu His Gln Trp 865 870 875 880 ctc aaa gac aag aac aaa gga gaa ata tat gat gca gcc att gac ctg 2688 Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp Ala Ala Ile Asp Leu 885 890 895 ttt aca cgt tca tgt gct gga tac tgt gta gct acc ttc att ttg gga 2736 Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Phe Ile Leu Gly 900 905 910 att gga gat cgt cac aat agt aac atc atg gtg aaa gac gat gga caa 2784 Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met Val Lys Asp Asp Gly Gln 915 920 925 ctg ttt cat ata gat ttt gga cac ttt ttg gat cac aag aag aaa aaa 2832 Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Asp His Lys Lys Lys Lys 930 935 940 ttt ggt tat aaa cga gaa cgt gtg cca ttt gtt ttg aca cag gat ttc 2880 Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe 945 950 955 960 tta ata gtg att agt aaa gga gcc caa gaa tgc aca aag aca aga gaa 2928 Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu 965 970 975 ttt gag agg ttt cag gag atg tgt tac aag gct tat cta gct att cga 2976 Phe Glu Arg Phe Gln Glu Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg 980 985 990 cag cat gcc aat ctc ttc ata aat ctt ttc tca atg atg ctt ggc tct 3024 Gln His Ala Asn Leu Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser 995 1000 1005 gga atg cca gaa cta caa tct ttt gat gac att gca tac att cga 3069 Gly Met Pro Glu Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg 1010 1015 1020 aag acc cta gcc tta gat aaa act gag caa gag gct ttg gag tat 3114 Lys Thr Leu Ala Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr 1025 1030 1035 ttc atg aaa caa atg aat gat gca cat cat ggt ggc tgg aca aca 3159 Phe Met Lys Gln Met Asn Asp Ala His His Gly Gly Trp Thr Thr 1040 1045 1050 aaa atg gat tgg atc ttc cac aca att aaa cag cat gca ttg aac 3204 Lys Met Asp Trp Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn 1055 1060 1065 tga 3207 <210> 118 <211> 1068 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118 Met Pro Pro Arg Pro Ser Ser Gly Glu Leu Trp Gly Ile His Leu Met 1 5 10 15 Pro Pro Arg Ile Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro Asn Gly Met Ile Val 20 25 30 Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile Thr Ile Lys His Glu 35 40 45 Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His Gln Leu Leu Gln Asp 50 55 60 Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln Glu Ala Glu Arg Glu 65 70 75 80 Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp Leu Arg Leu Phe Gln 85 90 95 Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn Arg Glu Glu Lys Ile 100 105 110 Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met Pro Val Cys Glu Phe 115 120 125 Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe Arg Arg Asn Ile Leu 130 135 140 Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp Leu Asn Ser Pro His 145 150 155 160 Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val Glu Ser Ser Pro Glu 165 170 175 Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys Gly Gln Ile Ile Val 180 185 190 Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp Lys Gln Lys Tyr Thr 195 200 205 Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln Val Ile Ala Glu Ala 210 215 220 Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser Ser Glu Gln Leu Lys 225 230 235 240 Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile Leu Lys Val Cys Gly 245 250 255 Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu Ser Gln Tyr Lys Tyr 260 265 270 Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro Asn Leu Met Leu Met 275 280 285 Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met Asp Cys Phe Thr Met 290 295 300 Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr Pro Tyr Met Asn Gly 305 310 315 320 Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn Ser Ala Leu Arg Ile 325 330 335 Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn Ile Arg Asp Ile Asp 340 345 350 Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly Gly Glu Pro Leu Cys 355 360 365 Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser Asn Pro Arg Trp Asn 370 375 380 Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp Leu Pro Arg Ala Ala 385 390 395 400 Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly Arg Lys Gly Ala Lys 405 410 415 Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile Asn Leu Phe Asp Tyr 420 425 430 Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu Asn Leu Trp Pro Val 435 440 445 Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile Gly Val Thr Gly Ser 450 455 460 Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu Glu Phe Asp Trp Phe 465 470 475 480 Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val Ile Glu Glu His Ala 485 490 495 Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser Tyr Ser His Ala Gly 500 505 510 Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu Arg Glu Asn Asp Lys 515 520 525 Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro Leu Ser Glu Ile Thr 530 535 540 Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg His Tyr Cys Val Thr 545 550 555 560 Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser Val Lys Trp Asn Ser 565 570 575 Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val Lys Asp Trp Pro Pro 580 585 590 Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp Cys Asn Tyr Pro Asp 595 600 605 Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu Glu Lys Tyr Leu Thr 610 615 620 Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu Val Gln Val Leu Lys 625 630 635 640 Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg Phe Leu Leu Lys Lys 645 650 655 Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe Phe Trp His Leu Lys 660 665 670 Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg Phe Gly Leu Leu Leu 675 680 685 Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu Lys His Leu Asn Arg 690 695 700 Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu Thr Asp Ile Leu Lys 705 710 715 720 Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln Met Lys Phe Leu Val 725 730 735 Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala Leu Gln Gly Phe Leu 740 745 750 Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn Leu Arg Leu Glu Glu 755 760 765 Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu Trp Leu Asn Trp Glu 770 775 780 Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln Asn Asn Glu Ile Ile 785 790 795 800 Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Ile 805 810 815 Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln Gly Leu Asp Leu Arg 820 825 830 Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp Cys Val Gly Leu Ile 835 840 845 Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln Ile Gln Cys Lys Gly 850 855 860 Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His Thr Leu His Gln Trp 865 870 875 880 Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp Ala Ala Ile Asp Leu 885 890 895 Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Phe Ile Leu Gly 900 905 910 Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met Val Lys Asp Asp Gly Gln 915 920 925 Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Asp His Lys Lys Lys Lys 930 935 940 Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe 945 950 955 960 Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu 965 970 975 Phe Glu Arg Phe Gln Glu Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg 980 985 990 Gln His Ala Asn Leu Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser 995 1000 1005 Gly Met Pro Glu Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg 1010 1015 1020 Lys Thr Leu Ala Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr 1025 1030 1035 Phe Met Lys Gln Met Asn Asp Ala His His Gly Gly Trp Thr Thr 1040 1045 1050 Lys Met Asp Trp Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn 1055 1060 1065 <210> 119 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 119 gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac tggcgacaga cagccggcta caacctggac 60 caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact 120 ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc 180 atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg 240 gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgatcctgc actatggcac actggtaatc 300 gacggggtta cgccgaacat gatcgactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg 360 ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac 420 gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc 480 ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggcg taa 513 <210> 120 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 120 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag accccggcgc cgccacc 57 <210> 121 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 121 taataggctg gagcctcggt ggcctagctt cttgcccctt gggcctcccc ccagcccctc 60 ctccccttcc tgcacccgta ccccctccat aaagtaggaa acactacagt ggtctttgaa 120 taaagtctga gtgggcggc 139 <210> 122 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 122 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 ttgcacaaat attactttc 139 <210> 123 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 123 taatacgact cactataggg aaataagaga gaaaagaa 38 <210> 124 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 124 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60 tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120 gccgcccact cagacttta 139 <210> 125 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 125 taatacgact cactataggg tggcagctca cagctatt 38 <210> 126 <211> 4683 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Tie-2, wild type <400> 126 ctctgcccct acagcagcag caaaagcagc agcagaagca acagcaacag ataagtgttt 60 tgatgaattg cgagatggat agggcttgag tgcccccagc cctgctgata ccaaatgcct 120 ttaagataca gcctttccca tcctaatcta caaaggaaac aggaaaaagg aacttaaaac 180 tccctgtgct cagacagaaa tgagactgtt acagcctgct tctgtgctgt tccttcttgc 240 ctctaacttg taaacaagac gtagtaggac gatgctaatg gaaagtcaca aaccgctggg 300 tttttgaaag gatccttggg acctcatgca catttgtgga aactggatgg agagatttgg 360 ggaagcatgg actctttagc cagcttagtt ctctgtggag tcagcttgct cctttctgga 420 actgtggaag gtgccatgga cttgatcttg atcaattccc tacctcttgt atctgatgct 480 gaaacatctc tcacctgcat tgcctctggg tggcgccccc atgagcccat caccatagga 540 agggactttg aagccttaat gaaccagcac caggatccgc tggaagttac tcaagatgtg 600 accagagaat gggctaaaaa agttgtttgg aagagagaaa aggctagtaa gatcaatggt 660 gcttatttct gtgaagggcg agttcgagga gaggcaatca ggatacgaac catgaagatg 720 cgtcaacaag cttccttcct accagctact ttaactatga ctgtggacaa gggagataac 780 gtgaacatat ctttcaaaaa ggtattgatt aaagaagaag atgcagtgat ttacaaaaat 840 ggttccttca tccattcagt gccccggcat gaagtacctg atattctaga agtacacctg 900 cctcatgctc agccccagga tgctggagtg tactcggcca ggtatatagg aggaaacctc 960 ttcacctcgg ccttcaccag gctgatagtc cggagatgtg aagcccagaa gtggggacct 1020 gaatgcaacc atctctgtac tgcttgtatg aacaatggtg tctgccatga agatactgga 1080 gaatgcattt gccctcctgg gtttatggga aggacgtgtg agaaggcttg tgaactgcac 1140 acgtttggca gaacttgtaa agaaaggtgc agtggacaag agggatgcaa gtcttatgtg 1200 ttctgtctcc ctgaccccta tgggtgttcc tgtgccacag gctggaaggg tctgcagtgc 1260 aatgaagcat gccaccctgg tttttacggg ccagattgta agcttaggtg cagctgcaac 1320 aatggggaga tgtgtgatcg cttccaagga tgtctctgct ctccaggatg gcaggggctc 1380 cagtgtgaga gagaaggcat acagaggatg accccaaaga tagtggattt gccagatcat 1440 atagaagtaa acagtggtaa atttaatccc atttgcaaag cttctggctg gccgctacct 1500 actaatgaag aaatgaccct ggtgaagccg gatgggacag tgctccatcc aaaagacttt 1560 aaccatacgg atcatttctc agtagccata ttcaccatcc accggatcct cccccctgac 1620 tcaggagttt gggtctgcag tgtgaacaca gtggctggga tggtggaaaa gcccttcaac 1680 atttctgtta aagttcttcc aaagcccctg aatgccccaa acgtgattga cactggacat 1740 aactttgctg tcatcaacat cagctctgag ccttactttg gggatggacc aatcaaatcc 1800 aagaagcttc tatacaaacc cgttaatcac tatgaggctt ggcaacatat tcaagtgaca 1860 aatgagattg ttacactcaa ctatttggaa cctcggacag aatatgaact ctgtgtgcaa 1920 ctggtccgtc gtggagaggg tggggaaggg catcctggac ctgtgagacg cttcacaaca 1980 gcttctatcg gactccctcc tccaagaggt ctaaatctcc tgcctaaaag tcagaccact 2040 ctaaatttga cctggcaacc aatatttcca agctcggaag atgactttta tgttgaagtg 2100 gagagaaggt ctgtgcaaaa aagtgatcag cagaatatta aagttccagg caacttgact 2160 tcggtgctac ttaacaactt acatcccagg gagcagtacg tggtccgagc tagagtcaac 2220 accaaggccc agggggaatg gagtgaagat ctcactgctt ggacccttag tgacattctt 2280 cctcctcaac cagaaaacat caagatttcc aacattacac actcctcagc tgtgatttct 2340 tggacaatat tggatggcta ttctatttct tctattacta tccgttacaa ggttcaaggc 2400 aagaatgaag accagcacgt tgatgtgaag ataaagaatg ccaccatcac tcagtatcag 2460 ctcaagggcc tagagcctga aacagcatac caggtggaca tttttgcaga gaacaacata 2520 gggtcaagca acccagcctt ttctcatgaa ctggtgaccc tcccagaatc tcaagcacca 2580 gcggacctcg gaggggggaa gatgctgctt atagccatcc ttggctctgc tggaatgacc 2640 tgcctgactg tgctgttggc ctttctgatc atattgcaat tgaagagggc aaatgtgcaa 2700 aggagaatgg cccaagcctt ccaaaacgtg agggaagaac cagctgtgca gttcaactca 2760 gggactctgg ccctaaacag gaaggtcaaa aacaacccag atcctacaat ttatccagtg 2820 cttgactgga atgacatcaa atttcaagat gtgattgggg agggcaattt tggccaagtt 2880 cttaaggcgc gcatcaagaa ggatgggtta cggatggatg ctgccatcaa aagaatgaaa 2940 gaatatgcct ccaaagatga tcacagggac tttgcaggag aactggaagt tctttgtaaa 3000 cttggacacc atccaaacat catcaatctc ttaggagcat gtgaacatcg aggctacttg 3060 tacctggcca ttgagtacgc gccccatgga aaccttctgg acttccttcg caagagccgt 3120 gtgctggaga cggacccagc atttgccatt gccaatagca ccgcgtccac actgtcctcc 3180 cagcagctcc ttcacttcgc tgccgacgtg gcccggggca tggactactt gagccaaaaa 3240 cagtttatcc acagggatct ggctgccaga aacattttag ttggtgaaaa ctatgtggca 3300 aaaatagcag attttggatt gtcccgaggt caagaggtgt atgtgaaaaa gacaatggga 3360 aggctcccag tgcgctggat ggccatcgag tcactgaatt acagtgtgta cacaaccaac 3420 agtgatgtat ggtcctatgg tgtgttacta tgggagattg ttagcttagg aggcacaccc 3480 tactgcggga tgacttgtgc agaactctac gagaagctgc cccagggcta cagactggag 3540 aagcccctga actgtgatga tgaggtgtat gatctaatga gacaatgctg gcgggagaag 3600 ccttatgaga ggccatcatt tgcccagata ttggtgtcct taaacagaat gttagaggag 3660 cgaaagacct acgtgaatac cacgctttat gagaagttta cttatgcagg aattgactgt 3720 tctgctgaag aagcggccta ggacagaaca tctgtatacc ctctgtttcc ctttcactgg 3780 catgggagac ccttgacacc tgctgagaaa acatgcctct gccaaaggat gtgatatata 3840 agtgtacata tgtgctgtac acctgggacc ttcaccactg tagatcccat gcatggatct 3900 atgtagtatg ctctgactct aataggactg tatatactgt tttaagaatg ggctgaaatc 3960 agaatgcctg tttgtggttt catatgcaat aatatatttt tttaaaaatg tggacttcat 4020 aggaaggcgt gagtacaatt agtataatgc ataactcatt gttgtcctag atattttgat 4080 atttaccttt atgttgaatg ctattaaatg ttttcctgtg tcaaagtaaa atattgttaa 4140 taaacctaac aatgaccctg atagtacagg ttaagtgaga gaactatatg aattctaaca 4200 agtcataggt taatatttaa gacactgaaa aatctaagtg atataaatca gattcttctc 4260 tctcaatttt atccctcacc tgtagcagcc agtcccgttt catttagtca tgtgaccact 4320 ctgtcttgtg tttccacagc ctgcaagtca gtccaggatg ctaacatcta aaaatagact 4380 taaatctcat tgcttacaag cctaagaatc tttagagaag tatacataag tttaggataa 4440 aataatggga ttttcttttc ttttctctgg taatattgac ttgtatattt taagaaataa 4500 cagaaagcct gggtgacatt tgggagacat gtgacattta tatattgaat taatatccct 4560 acatgtattg cacattgtaa aaagttttag ttttgatgag ttgtgagttt accttgtata 4620 ctgtaggcac actttgcact gatatatcat gagtgaataa atgtcttgcc tactcacgtc 4680 tca 4683 <210> 127 <211> 1124 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Tie-2, wild type <400> 127 Met Asp Ser Leu Ala Ser Leu Val Leu Cys Gly Val Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Gly Thr Val Glu Gly Ala Met Asp Leu Ile Leu Ile Asn Ser Leu 20 25 30 Pro Leu Val Ser Asp Ala Glu Thr Ser Leu Thr Cys Ile Ala Ser Gly 35 40 45 Trp Arg Pro His Glu Pro Ile Thr Ile Gly Arg Asp Phe Glu Ala Leu 50 55 60 Met Asn Gln His Gln Asp Pro Leu Glu Val Thr Gln Asp Val Thr Arg 65 70 75 80 Glu Trp Ala Lys Lys Val Val Trp Lys Arg Glu Lys Ala Ser Lys Ile 85 90 95 Asn Gly Ala Tyr Phe Cys Glu Gly Arg Val Arg Gly Glu Ala Ile Arg 100 105 110 Ile Arg Thr Met Lys Met Arg Gln Gln Ala Ser Phe Leu Pro Ala Thr 115 120 125 Leu Thr Met Thr Val Asp Lys Gly Asp Asn Val Asn Ile Ser Phe Lys 130 135 140 Lys Val Leu Ile Lys Glu Glu Asp Ala Val Ile Tyr Lys Asn Gly Ser 145 150 155 160 Phe Ile His Ser Val Pro Arg His Glu Val Pro Asp Ile Leu Glu Val 165 170 175 His Leu Pro His Ala Gln Pro Gln Asp Ala Gly Val Tyr Ser Ala Arg 180 185 190 Tyr Ile Gly Gly Asn Leu Phe Thr Ser Ala Phe Thr Arg Leu Ile Val 195 200 205 Arg Arg Cys Glu Ala Gln Lys Trp Gly Pro Glu Cys Asn His Leu Cys 210 215 220 Thr Ala Cys Met Asn Asn Gly Val Cys His Glu Asp Thr Gly Glu Cys 225 230 235 240 Ile Cys Pro Pro Gly Phe Met Gly Arg Thr Cys Glu Lys Ala Cys Glu 245 250 255 Leu His Thr Phe Gly Arg Thr Cys Lys Glu Arg Cys Ser Gly Gln Glu 260 265 270 Gly Cys Lys Ser Tyr Val Phe Cys Leu Pro Asp Pro Tyr Gly Cys Ser 275 280 285 Cys Ala Thr Gly Trp Lys Gly Leu Gln Cys Asn Glu Ala Cys His Pro 290 295 300 Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Lys Leu Arg Cys Ser Cys Asn Asn Gly 305 310 315 320 Glu Met Cys Asp Arg Phe Gln Gly Cys Leu Cys Ser Pro Gly Trp Gln 325 330 335 Gly Leu Gln Cys Glu Arg Glu Gly Ile Gln Arg Met Thr Pro Lys Ile 340 345 350 Val Asp Leu Pro Asp His Ile Glu Val Asn Ser Gly Lys Phe Asn Pro 355 360 365 Ile Cys Lys Ala Ser Gly Trp Pro Leu Pro Thr Asn Glu Glu Met Thr 370 375 380 Leu Val Lys Pro Asp Gly Thr Val Leu His Pro Lys Asp Phe Asn His 385 390 395 400 Thr Asp His Phe Ser Val Ala Ile Phe Thr Ile His Arg Ile Leu Pro 405 410 415 Pro Asp Ser Gly Val Trp Val Cys Ser Val Asn Thr Val Ala Gly Met 420 425 430 Val Glu Lys Pro Phe Asn Ile Ser Val Lys Val Leu Pro Lys Pro Leu 435 440 445 Asn Ala Pro Asn Val Ile Asp Thr Gly His Asn Phe Ala Val Ile Asn 450 455 460 Ile Ser Ser Glu Pro Tyr Phe Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480 Leu Leu Tyr Lys Pro Val Asn His Tyr Glu Ala Trp Gln His Ile Gln 485 490 495 Val Thr Asn Glu Ile Val Thr Leu Asn Tyr Leu Glu Pro Arg Thr Glu 500 505 510 Tyr Glu Leu Cys Val Gln Leu Val Arg Arg Gly Glu Gly Gly Glu Gly 515 520 525 His Pro Gly Pro Val Arg Arg Phe Thr Thr Ala Ser Ile Gly Leu Pro 530 535 540 Pro Pro Arg Gly Leu Asn Leu Leu Pro Lys Ser Gln Thr Thr Leu Asn 545 550 555 560 Leu Thr Trp Gln Pro Ile Phe Pro Ser Ser Glu Asp Asp Phe Tyr Val 565 570 575 Glu Val Glu Arg Arg Ser Val Gln Lys Ser Asp Gln Gln Asn Ile Lys 580 585 590 Val Pro Gly Asn Leu Thr Ser Val Leu Leu Asn Asn Leu His Pro Arg 595 600 605 Glu Gln Tyr Val Val Arg Ala Arg Val Asn Thr Lys Ala Gln Gly Glu 610 615 620 Trp Ser Glu Asp Leu Thr Ala Trp Thr Leu Ser Asp Ile Leu Pro Pro 625 630 635 640 Gln Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ser Asn Ile Thr His Ser Ser Ala Val 645 650 655 Ile Ser Trp Thr Ile Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Ile Thr Ile 660 665 670 Arg Tyr Lys Val Gln Gly Lys Asn Glu Asp Gln His Val Asp Val Lys 675 680 685 Ile Lys Asn Ala Thr Ile Thr Gln Tyr Gln Leu Lys Gly Leu Glu Pro 690 695 700 Glu Thr Ala Tyr Gln Val Asp Ile Phe Ala Glu Asn Asn Ile Gly Ser 705 710 715 720 Ser Asn Pro Ala Phe Ser His Glu Leu Val Thr Leu Pro Glu Ser Gln 725 730 735 Ala Pro Ala Asp Leu Gly Gly Gly Lys Met Leu Leu Ile Ala Ile Leu 740 745 750 Gly Ser Ala Gly Met Thr Cys Leu Thr Val Leu Leu Ala Phe Leu Ile 755 760 765 Ile Leu Gln Leu Lys Arg Ala Asn Val Gln Arg Arg Met Ala Gln Ala 770 775 780 Phe Gln Asn Val Arg Glu Glu Pro Ala Val Gln Phe Asn Ser Gly Thr 785 790 795 800 Leu Ala Leu Asn Arg Lys Val Lys Asn Asn Pro Asp Pro Thr Ile Tyr 805 810 815 Pro Val Leu Asp Trp Asn Asp Ile Lys Phe Gln Asp Val Ile Gly Glu 820 825 830 Gly Asn Phe Gly Gln Val Leu Lys Ala Arg Ile Lys Lys Asp Gly Leu 835 840 845 Arg Met Asp Ala Ala Ile Lys Arg Met Lys Glu Tyr Ala Ser Lys Asp 850 855 860 Asp His Arg Asp Phe Ala Gly Glu Leu Glu Val Leu Cys Lys Leu Gly 865 870 875 880 His His Pro Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Glu His Arg Gly 885 890 895 Tyr Leu Tyr Leu Ala Ile Glu Tyr Ala Pro His Gly Asn Leu Leu Asp 900 905 910 Phe Leu Arg Lys Ser Arg Val Leu Glu Thr Asp Pro Ala Phe Ala Ile 915 920 925 Ala Asn Ser Thr Ala Ser Thr Leu Ser Ser Gln Gln Leu Leu His Phe 930 935 940 Ala Ala Asp Val Ala Arg Gly Met Asp Tyr Leu Ser Gln Lys Gln Phe 945 950 955 960 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Gly Glu Asn Tyr 965 970 975 Val Ala Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Arg Gly Gln Glu Val Tyr 980 985 990 Val Lys Lys Thr Met Gly Arg Leu Pro Val Arg Trp Met Ala Ile Glu 995 1000 1005 Ser Leu Asn Tyr Ser Val Tyr Thr Thr Asn Ser Asp Val Trp Ser 1010 1015 1020 Tyr Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Val Ser Leu Gly Gly Thr Pro 1025 1030 1035 Tyr Cys Gly Met Thr Cys Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Pro Gln 1040 1045 1050 Gly Tyr Arg Leu Glu Lys Pro Leu Asn Cys Asp Asp Glu Val Tyr 1055 1060 1065 Asp Leu Met Arg Gln Cys Trp Arg Glu Lys Pro Tyr Glu Arg Pro 1070 1075 1080 Ser Phe Ala Gln Ile Leu Val Ser Leu Asn Arg Met Leu Glu Glu 1085 1090 1095 Arg Lys Thr Tyr Val Asn Thr Thr Leu Tyr Glu Lys Phe Thr Tyr 1100 1105 1110 Ala Gly Ile Asp Cys Ser Ala Glu Glu Ala Ala 1115 1120 <210> 128 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN62 <400> 128 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tcttccgcaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataccac gctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 129 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN63 <400> 129 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttatgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tcttccgcaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataccac gctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 130 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN64 <400> 130 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 cttcttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tccttctgaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataccac gctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 131 <211> 3589 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN65 <400> 131 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatggact ctttagccag cttagttctc tgtggagtca gcttgctcct 120 ttctggaact gtggaaggtg ccatggactt gatcttgatc aattccctac ctcttgtatc 180 tgatgctgaa acatctctca cctgcattgc ctctgggtgg cgcccccatg agcccatcac 240 cataggaagg gactttgaag ccttaatgaa ccagcaccag gacccgctgg aagttactca 300 agatgtgacc agagaatggg ctaaaaaagt tgtttggaag agagaaaagg ctagtaagat 360 caatggtgct tatttctgtg aagggcgagt tcgaggagag gcaatcagga tacgaaccat 420 gaagatgcgt caacaagctt ccttcctacc agctacttta actatgactg tggacaaggg 480 agataacgtg aacatatctt tcaaaaaggt attgattaaa gaagaagatg cagtgattta 540 caaaaatggt tccttcatcc attcagtgcc ccggcatgaa gtacctgata ttctagaagt 600 acacctgcct catgctcagc cccaggatgc tggagtgtac tcggccaggt atataggagg 660 aaacctcttc acctcggcct tcaccaggct gatagtccgg agatgtgaag cccagaagtg 720 gggacctgaa tgcaaccatc tctgtactgc ttgtatgaac aatggtgtct gccatgaaga 780 tactggagaa tgcatttgcc ctcctgggtt tatgggaagg acgtgtgaga aggcttgtga 840 actgcacacg tttggcagaa cttgtaaaga aaggtgcagt ggacaagagg gatgcaagtc 900 ttatgtgttc tgtctccctg acccctatgg gtgttcctgt gccacaggct ggaagggtct 960 gcagtgcaat gaagcatgcc accctggttt ttacgggcca gattgtaagc ttaggtgcag 1020 ctgcaacaat ggggagatgt gtgatcgctt ccaaggatgt ctctgctctc caggatggca 1080 ggggctccag tgtgagagag aaggcatacc gaggatgacc ccaaagatag tggatttgcc 1140 agatcatata gaagtaaaca gtggtaaatt taatcccatt tgcaaagctt ctggctggcc 1200 gctacctact aatgaagaaa tgaccctggt gaagccggat gggacagtgc tccatccaaa 1260 agactttaac catacggatc atttctcagt agccatattc accatccaca gaatcctccc 1320 ccctgactca ggagtttggg tctgcagtgt gaacacagtg gctgggatgg tggaaaagcc 1380 cttcaacatt tctgttaaag ttcttccaaa gcccctgaat gccccaaacg tgattgacac 1440 tggacataac tttgctgtca tcaacatcag ctctgagcct tactttgggg atggaccaat 1500 caaatccaag aagcttctat acaaacccgt taatcactat gaggcttggc aacatattca 1560 agtgacaaat gagattgtta cactcaacta tttggaacct cggacagaat atgaactctg 1620 tgtgcaactg gtccgtcgtg gagagggtgg ggaagggcat cctggacctg tgagacgctt 1680 cacaacagct tctatcggac tccctcctcc aagaggtcta aatctcctgc ctaaaagtca 1740 gaccactcta aatttgacct ggcaaccaat atttccaagc tcggaagatg acttttatgt 1800 tgaagtggag agaaggtctg tgcaaaaaag tgatcagcag aatattaaag ttccaggcaa 1860 cttgacttcg gtgctactta acaacttaca tcccagggag cagtacgtgg tccgagctag 1920 agtcaacacc aaggcccagg gggaatggag tgaagatctc actgcttgga cccttagtga 1980 cattcttcct cctcaaccag aaaacatcaa gatttccaac attacacact cctcagctgt 2040 gatttcttgg acaatattgg atggctattc tatttcttct attactatcc gttacaaggt 2100 tcaaggcaag aatgaagacc agcacgttga tgtgaagata aagaatgcca ccatcactca 2160 gtatcagctc aagggcctag agcctgaaac agcataccag gtggacattt ttgcagagaa 2220 caacataggg tcaagcaacc cagccttttc tcatgaactg gtgaccctcc cagaatctca 2280 agcaccagcg gacctcggag gggggaagat gctgcttata gccatccttg gctctgctgg 2340 aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa 2400 tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt 2460 caactcaggg actctggccc taaacaggaa ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta 2520 tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg 2580 ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag 2640 aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca cagggacttt gcaggagaac tggaagttct 2700 ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg 2760 cttcttgtac ctggccattg agtacgcgcc ccatggaaac cttctggact tccttctgaa 2820 gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact 2880 gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag 2940 ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta 3000 tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac 3060 aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac 3120 aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt gttactatgg gagattgtta gcttaggagg 3180 cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga actctacgag aagctgcccc agggctacag 3240 actggagaag cccctgaact gtgatgatga ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg 3300 ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt 3360 agaggagcga aagacctacg tgaataaccc cctttatgag aagtttactt atgcaggaat 3420 tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg 3480 cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg 3540 tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag ctcttatctt gcaaaaggc 3589 <210> 132 <211> 9259 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9259) <223> PIK3CA, wild type <400> 132 agttccggtg ccgccgctgc ggccgctgag gtgtcgggct gctgctgccg cggccgctgg 60 gactggggct ggggccgccg gcgaggcagg gctcgggccc ggccgggcag ctccggagcg 120 gcgggggaga ggggccggga ggcgggggcc gtgccgcccg ctctcctctc cctcggcgcc 180 gccgccgccg cccgcggggc tgggacccga tgcggttaga gccgcggagc ctggaagagc 240 cccgagcgtt tctgctttgg gacaaccata catctaattc cttaaagtag ttttatatgt 300 aaaacttgca aagaatcaga acaatgcctc cacgaccatc atcaggtgaa ctgtggggca 360 tccacttgat gcccccaaga atcctagtag aatgtttact accaaatgga atgatagtga 420 ctttagaatg cctccgtgag gctacattaa taaccataaa gcatgaacta tttaaagaag 480 caagaaaata ccccctccat caacttcttc aagatgaatc ttcttacatt ttcgtaagtg 540 ttactcaaga agcagaaagg gaagaatttt ttgatgaaac aagacgactt tgtgaccttc 600 ggctttttca acccttttta aaagtaattg aaccagtagg caaccgtgaa gaaaagatcc 660 tcaatcgaga aattggtttt gctatcggca tgccagtgtg tgaatttgat atggttaaag 720 atccagaagt acaggacttc cgaagaaata ttctgaacgt ttgtaaagaa gctgtggatc 780 ttagggacct caattcacct catagtagag caatgtatgt ctatcctcca aatgtagaat 840 cttcaccaga attgccaaag cacatatata ataaattaga taaagggcaa ataatagtgg 900 tgatctgggt aatagtttct ccaaataatg acaagcagaa gtatactctg aaaatcaacc 960 atgactgtgt accagaacaa gtaattgctg aagcaatcag gaaaaaaact cgaagtatgt 1020 tgctatcctc tgaacaacta aaactctgtg ttttagaata tcagggcaag tatattttaa 1080 aagtgtgtgg atgtgatgaa tacttcctag aaaaatatcc tctgagtcag tataagtata 1140 taagaagctg tataatgctt gggaggatgc ccaatttgat gttgatggct aaagaaagcc 1200 tttattctca actgccaatg gactgtttta caatgccatc ttattccaga cgcatttcca 1260 cagctacacc atatatgaat ggagaaacat ctacaaaatc cctttgggtt ataaatagtg 1320 cactcagaat aaaaattctt tgtgcaacct acgtgaatgt aaatattcga gacattgata 1380 agatctatgt tcgaacaggt atctaccatg gaggagaacc cttatgtgac aatgtgaaca 1440 ctcaaagagt accttgttcc aatcccaggt ggaatgaatg gctgaattat gatatataca 1500 ttcctgatct tcctcgtgct gctcgacttt gcctttccat ttgctctgtt aaaggccgaa 1560 agggtgctaa agaggaacac tgtccattgg catggggaaa tataaacttg tttgattaca 1620 cagacactct agtatctgga aaaatggctt tgaatctttg gccagtacct catggattag 1680 aagatttgct gaaccctatt ggtgttactg gatcaaatcc aaataaagaa actccatgct 1740 tagagttgga gtttgactgg ttcagcagtg tggtaaagtt cccagatatg tcagtgattg 1800 aagagcatgc caattggtct gtatcccgag aagcaggatt tagctattcc cacgcaggac 1860 tgagtaacag actagctaga gacaatgaat taagggaaaa tgacaaagaa cagctcaaag 1920 caatttctac acgagatcct ctctctgaaa tcactgagca ggagaaagat tttctatgga 1980 gtcacagaca ctattgtgta actatccccg aaattctacc caaattgctt ctgtctgtta 2040 aatggaattc tagagatgaa gtagcccaga tgtattgctt ggtaaaagat tggcctccaa 2100 tcaaacctga acaggctatg gaacttctgg actgtaatta cccagatcct atggttcgag 2160 gttttgctgt tcggtgcttg gaaaaatatt taacagatga caaactttct cagtatttaa 2220 ttcagctagt acaggtccta aaatatgaac aatatttgga taacttgctt gtgagatttt 2280 tactgaagaa agcattgact aatcaaagga ttgggcactt tttcttttgg catttaaaat 2340 ctgagatgca caataaaaca gttagccaga ggtttggcct gcttttggag tcctattgtc 2400 gtgcatgtgg gatgtatttg aagcacctga ataggcaagt cgaggcaatg gaaaagctca 2460 ttaacttaac tgacattctc aaacaggaga agaaggatga aacacaaaag gtacagatga 2520 agtttttagt tgagcaaatg aggcgaccag atttcatgga tgctctacag ggctttctgt 2580 ctcctctaaa ccctgctcat caactaggaa acctcaggct tgaagagtgt cgaattatgt 2640 cctctgcaaa aaggccactg tggttgaatt gggagaaccc agacatcatg tcagagttac 2700 tgtttcagaa caatgagatc atctttaaaa atggggatga tttacggcaa gatatgctaa 2760 cacttcaaat tattcgtatt atggaaaata tctggcaaaa tcaaggtctt gatcttcgaa 2820 tgttacctta tggttgtctg tcaatcggtg actgtgtggg acttattgag gtggtgcgaa 2880 attctcacac tattatgcaa attcagtgca aaggcggctt gaaaggtgca ctgcagttca 2940 acagccacac actacatcag tggctcaaag acaagaacaa aggagaaata tatgatgcag 3000 ccattgacct gtttacacgt tcatgtgctg gatactgtgt agctaccttc attttgggaa 3060 ttggagatcg tcacaatagt aacatcatgg tgaaagacga tggacaactg tttcatatag 3120 attttggaca ctttttggat cacaagaaga aaaaatttgg ttataaacga gaacgtgtgc 3180 catttgtttt gacacaggat ttcttaatag tgattagtaa aggagcccaa gaatgcacaa 3240 agacaagaga atttgagagg tttcaggaga tgtgttacaa ggcttatcta gctattcgac 3300 agcatgccaa tctcttcata aatcttttct caatgatgct tggctctgga atgccagaac 3360 tacaatcttt tgatgacatt gcatacattc gaaagaccct agccttagat aaaactgagc 3420 aagaggcttt ggagtatttc atgaaacaaa tgaatgatgc acatcatggt ggctggacaa 3480 caaaaatgga ttggatcttc cacacaatta aacagcatgc attgaactga aaagataact 3540 gagaaaatga aagctcactc tggattccac actgcactgt taataactct cagcaggcaa 3600 agaccgattg cataggaatt gcacaatcca tgaacagcat tagaatttac agcaagaaca 3660 gaaataaaat actatataat ttaaataatg taaacgcaaa cagggtttga tagcacttaa 3720 actagttcat ttcaaaatta agctttagaa taatgcgcaa tttcatgtta tgccttaagt 3780 ccaaaaaggt aaactttgaa gattgtttgt atcttttttt aaaaaacaaa acaaaacaaa 3840 aatccccaaa atatatagaa atgatggaga aggaaaaagt gatggttttt tttgtcttgc 3900 aaatgttcta tgttttgaaa tgtggacaca acaaaggctg ttattgcatt aggtgtaagt 3960 aaactggagt ttatgttaaa ttacattgat tggaaaagaa tgaaaatttc ttatttttcc 4020 attgctgttc aatttatagt ttgaagtggg tttttgactg cttgtttaat gaagaaaaat 4080 gcttggggtg gaagggactc ttgagatttc accagagact ttttcttttt aataaatcaa 4140 accttttgat gatttgaggt tttatctgca gttttggaag cagtcacaaa tgagacctgt 4200 tataaggtgg tatttttttt tttcttctgg acagtattta aaggatctta ttcttatttc 4260 ccagggaaat tctgggctcc cacaaagtaa aaaaaaaaaa aaatcataga aaaagaatga 4320 gcaggaatag ttcttattcc agaattgtac agtattcacc ttaagttgat tttttttctc 4380 cttctgcaat tgaactgaat acatttttca tgcatgtttt ccagaaaata gaagtattaa 4440 tgttattaaa aagattattt tttttattaa aggctattta tattatagaa actatcatta 4500 atatatattc tttatttaca tgatctgtcc catagtcatg cattgttttg caccccaaat 4560 tttttattgt tcatagcagc atggtcagct ttcttcttga tctatagatg aggctcaggc 4620 actatcccat ttataccaat aaccagtgta taactactta aggaaaacat aaaaacttca 4680 tcttctttcc ttttatttct tatgtgaatc tcccgtcttc cattctcttt tataattgag 4740 aatgtctcaa tcatatgaaa ttagttacca gaattaacac aatttagact atcttcctga 4800 ttccttaaac ccctttactg aagtatactc atgaataata ctttaaaata tgggggaata 4860 gaaaccatga actttttacc tttttaaact atttatccat atctccaaag tagaacatta 4920 aaccatttta agatatgtct cattcccaag tagtcagagc tcactctcca actttattaa 4980 atactatttg agcacaggac acattcttaa acattttgaa aaacattaac ccaagatgta 5040 gaggctactg ctagtcgtca ttctagaatc tgatatttta ctctgtattt gaaatgaatg 5100 attaatgtcc taggaaatta gctttagcag atgtccaggt gccacatcaa aaaagtgcaa 5160 taattattga cagtttttta gattaggcat attattggaa aacaacttta taaagagtga 5220 acattgtata ctctagtaaa acagcatcac tttaaaaata ttcatttatg aaatctgtta 5280 cctatagttg aagtcttgag tagtgaacaa gggactctaa taccaatact cttaatatct 5340 ggctatttta gatcccttaa agggcataat tattggaaat ttaggtattt cactaaagca 5400 tgtatataat attgccaaca agaaaagtaa atttgaagat taagggaact tacttctgca 5460 aactgtcttg cgatagttaa gcagaattta aactctgttt taagcaggaa accagaaaga 5520 ttattttgca gttgtagaag atttcataac ttattaaaac ttattaacat tttgtgttgt 5580 ttagatatag gcagttgata catactaaca tcccagcctt ttcaatatca gggttaaatt 5640 ataggaaaac tcagtaaaat ggtacaaatc tgaaagtttg atggtagaaa ctgaagattt 5700 aacagagaac tgtgttttac ccgagtgcca aaaatgctgt gagcctcctt gcacaaaatt 5760 tataccactt ttgcattttt atctatcagt ccagatagtt gtctcccctc cttctcccag 5820 gacctctcca ccattaaaat gcacaaacca catggccgat ttcaccattt acatttattt 5880 tcaaaagtta ctacaaccaa attaattcta ttagaagaaa tgtagacaaa ttctataaag 5940 actatagatt gtgacctaag aaagaaatga ggcaaagaac caaacattga attaaatgct 6000 acatgggtga ctaagatctg tttcaagtca gtgataatat agccacttct gggtacttca 6060 gtatcagaga tcagttctcg tggtttagac agttcctatc tatagctgac tatccttgtc 6120 cttgaatatg gtgtaactga ctattggctc tacagtttta ttgggccact taagaaatat 6180 ttccttgaat aattattttg agaaaaagtc taaaagtaat aaaaataatt ttaaacacac 6240 tgtagtaaga aatgactgtt ggaaaattat gctttcactt tctaccatat tctcagctat 6300 acaaaaccat ttattttgaa gatttttaga ctactgttaa tttgaaatct gttactctta 6360 ttgtggaatt tgttttttta aaaaagatgt ttctaattgg atttttaaaa gaagaatgga 6420 atttggttgc tattttacaa tagaacctaa gctttttgtg gttcttagtg tcctatgtaa 6480 aacttagtgt caaagtaatc aactttgaga ttttcccttc tattctgctt tatattaaaa 6540 gcccattaga aaatgggaac ctggtgaata tataatgaat tgtaaaatat tttaatgtgt 6600 aactttttca actgtgaaac tgacttgatt ttttgatgaa aacagctgct gataaagtat 6660 tttgtgtaaa gtgtagttct tattaatcag gaaaatgatg acttgattag actgtatatg 6720 ccctcttgga ttttatttta aatggattgg tgactttcac ataggtaaaa cacagtccat 6780 ctgtattctt ttttccatca aaaatcgagt gatttggaat tataaaaaaa ttgtgagcag 6840 cctatttgaa aggcatcatg gaaatttcac agcacaataa cacggatttg ttttttctta 6900 atgatgtaaa tccgtttaat tcatactttg atcaatagcc catgcttgcc aactctgaag 6960 aaatttaatt tccagcagta ttttaaagct agcctgttaa ctttttctga atatttaaag 7020 ttcctctttt ttctatgtct gcacaaactg cagacctggg ctggacccac atactcaaga 7080 gtccacctta agaaattatt ttgatgtcca agacatcact aaaatattta agtttaaaga 7140 taatatgtgg tgttaataga ttgtggtgct tttactattt aaagacaact ttcatacttc 7200 agatgttttt gagaagaggg gaatgtgagg ggagggggca gaacagggag gagttgtttg 7260 aatgaattac attctttata tccatcctgc tcatttgggg catgtcttta agagaaggct 7320 gaaagttgtg agagtatatt gtataccgta agagaatcaa ctcttcatca tggatgggat 7380 tgtgaaggct gaactataaa attcagcatt gacagcatcc tcaattaata attcttggtg 7440 acagaataat acagctgggc tgttttttaa aatataaaca ataccatttt taattattac 7500 attaaaaatt gtaaatatat ctatgtgcca tggcctggga agcctgcttt cttttttcat 7560 aaaaattatt tttactgtat gaaaagatca tggggtttag ctcaaaatat ctgtggtcct 7620 gataaaattg gattggtaac tctacctcag aaggaaaatg ggaaaaaaaa atagatgagt 7680 cacaattcaa tacttcaagc tcagaaactg tgcagatcac tgaattttag atttataaag 7740 tcagagttgg catgccttgt ttttaatgat atggaagacc ttaagaaaaa aacttggctg 7800 aagtttaatc gttggtccag ccatttgaaa aaggcaatag tttgaggagg ttcccgaatt 7860 cggcatttga aattcatttt gttctctctt cttcattatt agtgcatttg gtgtgtgtat 7920 acttgcacac aattctgttt gtgtacacac tgcttgctta gccctagtca agaggcatct 7980 tttataaaag gtgtaaagaa atatcaaggt tctaaaattc ggaagagttt agaatttatt 8040 aggagtttcc caagttggga tgttagtctt taaataaact tcatgcacct attccactta 8100 aggttttgca cctccttttt attagtgcag tgccatttct tctgcttgat tttaggtatg 8160 ttaatattcc agccttgcta gttagcataa agtgacaggt gtgagccatg aggaaatttt 8220 ctgacttaat ttgtacacaa ctacatataa gagttttagt ggaggaaaaa aattagtccc 8280 ttgtgcgtat acagtagtta ggtaaatgat ttttctacca acagtatact ccattcctca 8340 tgtaggtaag tacagaaaag gtttttaaat gtattttttt agccagttaa agtctatgaa 8400 tctatctgca accttattta atctgtcact ataataattt tgtggttatg ctaagaacca 8460 tgtatacttt taggtattct tatttttgtc aatttttcta ggttggcaag gaggcagaaa 8520 accttcattg tttcatatta aaatataatt agactaaact taattctagt atgaatttcc 8580 aaaatcatta tctatttatt tcatttttat ttaattttgt ttttatttca tttttaaaag 8640 tcccttgttc aatttaactt atgttcctaa gagaggttgg agaacttggc cttcatctga 8700 tttcaaaaat gttttgagtt tcaaatgaag ttaatggttt cagtgtgatt cagtcctcag 8760 acctaattgg gttgaataaa atctaaaaga atataccctt ttggagcata acattttaat 8820 accttgggga atgtggcact accaaaagaa gactactaac acgtcagatg ttcacctgga 8880 agctttatca agaaattcga accacccttt tggccccatt aattgtagca agtttatttc 8940 tctatatttt gtcattcagt gaattgaagt cctgtggtat actgcattca ttagaagaaa 9000 aacgttttta atgtcctttt aatgatggcc cagaaagcat ttgacacagc aagatgcatg 9060 tgttactata ttgagaatat agaataataa cagtatcact aaatttaaga cctcttccca 9120 gtcttgctgt tcctagcaag aagtttggcc tgtgactgca cttactgttt atgctcatca 9180 gaaactgtca atgtctgctt ttctttaact ctgcagtctg taacatcacg ctgtttatta 9240 aaaaaaaaaa gaaaaatta 9259 <210> 133 <211> 1068 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> PIK3CA, wild type <400> 133 Met Pro Pro Arg Pro Ser Ser Gly Glu Leu Trp Gly Ile His Leu Met 1 5 10 15 Pro Pro Arg Ile Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro Asn Gly Met Ile Val 20 25 30 Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile Thr Ile Lys His Glu 35 40 45 Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His Gln Leu Leu Gln Asp 50 55 60 Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln Glu Ala Glu Arg Glu 65 70 75 80 Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp Leu Arg Leu Phe Gln 85 90 95 Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn Arg Glu Glu Lys Ile 100 105 110 Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met Pro Val Cys Glu Phe 115 120 125 Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe Arg Arg Asn Ile Leu 130 135 140 Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp Leu Asn Ser Pro His 145 150 155 160 Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val Glu Ser Ser Pro Glu 165 170 175 Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys Gly Gln Ile Ile Val 180 185 190 Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp Lys Gln Lys Tyr Thr 195 200 205 Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln Val Ile Ala Glu Ala 210 215 220 Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser Ser Glu Gln Leu Lys 225 230 235 240 Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile Leu Lys Val Cys Gly 245 250 255 Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu Ser Gln Tyr Lys Tyr 260 265 270 Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro Asn Leu Met Leu Met 275 280 285 Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met Asp Cys Phe Thr Met 290 295 300 Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr Pro Tyr Met Asn Gly 305 310 315 320 Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn Ser Ala Leu Arg Ile 325 330 335 Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn Ile Arg Asp Ile Asp 340 345 350 Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly Gly Glu Pro Leu Cys 355 360 365 Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser Asn Pro Arg Trp Asn 370 375 380 Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp Leu Pro Arg Ala Ala 385 390 395 400 Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly Arg Lys Gly Ala Lys 405 410 415 Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile Asn Leu Phe Asp Tyr 420 425 430 Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu Asn Leu Trp Pro Val 435 440 445 Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile Gly Val Thr Gly Ser 450 455 460 Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu Glu Phe Asp Trp Phe 465 470 475 480 Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val Ile Glu Glu His Ala 485 490 495 Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser Tyr Ser His Ala Gly 500 505 510 Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu Arg Glu Asn Asp Lys 515 520 525 Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro Leu Ser Glu Ile Thr 530 535 540 Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg His Tyr Cys Val Thr 545 550 555 560 Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser Val Lys Trp Asn Ser 565 570 575 Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val Lys Asp Trp Pro Pro 580 585 590 Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp Cys Asn Tyr Pro Asp 595 600 605 Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu Glu Lys Tyr Leu Thr 610 615 620 Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu Val Gln Val Leu Lys 625 630 635 640 Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg Phe Leu Leu Lys Lys 645 650 655 Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe Phe Trp His Leu Lys 660 665 670 Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg Phe Gly Leu Leu Leu 675 680 685 Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu Lys His Leu Asn Arg 690 695 700 Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu Thr Asp Ile Leu Lys 705 710 715 720 Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln Met Lys Phe Leu Val 725 730 735 Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala Leu Gln Gly Phe Leu 740 745 750 Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn Leu Arg Leu Glu Glu 755 760 765 Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu Trp Leu Asn Trp Glu 770 775 780 Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln Asn Asn Glu Ile Ile 785 790 795 800 Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Ile 805 810 815 Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln Gly Leu Asp Leu Arg 820 825 830 Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp Cys Val Gly Leu Ile 835 840 845 Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln Ile Gln Cys Lys Gly 850 855 860 Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His Thr Leu His Gln Trp 865 870 875 880 Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp Ala Ala Ile Asp Leu 885 890 895 Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Phe Ile Leu Gly 900 905 910 Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met Val Lys Asp Asp Gly Gln 915 920 925 Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Asp His Lys Lys Lys Lys 930 935 940 Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe 945 950 955 960 Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu 965 970 975 Phe Glu Arg Phe Gln Glu Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg 980 985 990 Gln His Ala Asn Leu Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser 995 1000 1005 Gly Met Pro Glu Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg 1010 1015 1020 Lys Thr Leu Ala Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr 1025 1030 1035 Phe Met Lys Gln Met Asn Asp Ala His His Gly Gly Trp Thr Thr 1040 1045 1050 Lys Met Asp Trp Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn 1055 1060 1065 <210> 134 <211> 3421 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN67 <400> 134 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgcctc cacgaccatc atcaggtgaa ctgtggggca tccacttgat 120 gcccccaaga atcctagtag aatgtttact accaaatgga atgatagtga ctttagaatg 180 cctccgtgag gctacattaa taaccataaa gcatgaacta tttaaagaag caagaaaata 240 ccccctccat caacttcttc aagatgaatc ttcttacatt ttcgtaagtg ttactcaaga 300 agcagaaagg gaagaatttt ttgatgaaac aagacgactt tgtgaccttc ggctttttca 360 acccttttta aaagtaattg aaccagtagg caaccgtgaa gaaaagatcc tcaatcgaga 420 aattggtttt gctatcggca tgccagtgtg tgaatttgat atggttaaag atccagaagt 480 acaggacttc cgaagaaata ttctgaacgt ttgtaaagaa gctgtggatc ttagggacct 540 caattcacct catagtagag caatgtatgt ctatcctcca aatgtagaat cttcaccaga 600 attgccaaag cacatatata ataaattaga taaagggcaa ataatagtgg tgatctgggt 660 aatagtttct ccaaataatg acaagcagaa gtatactctg aaaatcaacc atgactgtgt 720 accagaacaa gtaattgctg aagcaatcag gaaaaaaact cgaagtatgt tgctatcctc 780 tgaacaacta aaactctgtg ttttagaata tcagggcaag tatattttaa aagtgtgtgg 840 atgtgatgaa tacttcctag aaaaatatcc tctgagtcag tataagtata taagaagctg 900 tataatgctt gggaggatgc ccaatttgat gttgatggct aaagaaagcc tttattctca 960 actgccaatg gactgtttta caatgccatc ttattccaga cgcatttcca cagctacacc 1020 atatatgaat ggagaaacat ctacaaaatc cctttgggtt ataaatagtg cactcagaat 1080 aaaaattctt tgtgcaacct acgtgaatgt aaatattcga gacattgata agatctatgt 1140 tcgaacaggt atctaccatg gaggagaacc cttatgtgac aatgtgaaca ctcaaagagt 1200 accttgttcc aatcccaggt ggaatgaatg gctgaattat gatatataca ttcctgatct 1260 tcctcgtgct gctcgacttt gcctttccat ttgctctgtt aaaggccgaa agggtgctaa 1320 agaggaacac tgtccattgg catggggaaa tataaacttg tttgattaca cagacactct 1380 agtatctgga aaaatggctt tgaatctttg gccagtacct catggattag aagatttgct 1440 gaaccctatt ggtgttactg gatcaaatcc aaataaagaa actccatgct tagagttgga 1500 gtttgactgg ttcagcagtg tggtaaagtt cccagatatg tcagtgattg aagagcatgc 1560 caattggtct gtatcccgag aagcaggatt tagctattcc cacgcaggac tgagtaacag 1620 actagctaga gacaatgaat taagggaaaa tgacaaagaa cagctcaaag caatttctac 1680 acgagatcct ctctctaaaa tcactgagca ggagaaagat tttctatgga gtcacagaca 1740 ctattgtgta actatccccg aaattctacc caaattgctt ctgtctgtta aatggaattc 1800 tagagatgaa gtagcccaga tgtattgctt ggtaaaagat tggcctccaa tcaaacctga 1860 acaggctatg gaacttctgg actgtaatta cccagatcct atggttcgag gttttgctgt 1920 tcggtgcttg gaaaaatatt taacagatga caaactttct cagtatttaa ttcagctagt 1980 acaggtccta aaatatgaac aatatttgga taacttgctt gtgagatttt tactgaagaa 2040 agcattgact aatcaaagga ttgggcactt tttcttttgg catttaaaat ctgagatgca 2100 caataaaaca gttagccaga ggtttggcct gcttttggag tcctattgtc gtgcatgtgg 2160 gatgtatttg aagcacctga ataggcaagt cgaggcaatg gaaaagctca ttaacttaac 2220 tgacattctc aaacaggaga agaaggatga aacacaaaag gtacagatga agtttttagt 2280 tgagcaaatg aggcgaccag atttcatgga tgctctacag ggctttctgt ctcctctaaa 2340 ccctgctcat caactaggaa acctcaggct tgaagagtgt cgaattatgt cctctgcaaa 2400 aaggccactg tggttgaatt gggagaaccc agacatcatg tcagagttac tgtttcagaa 2460 caatgagatc atctttaaaa atggggatga tttacggcaa gatatgctaa cacttcaaat 2520 tattcgtatt atggaaaata tctggcaaaa tcaaggtctt gatcttcgaa tgttacctta 2580 tggttgtctg tcaatcggtg actgtgtggg acttattgag gtggtgcgaa attctcacac 2640 tattatgcaa attcagtgca aaggcggctt gaaaggtgca ctgcagttca acagccacac 2700 actacatcag tggctcaaag acaagaacaa aggagaaata tatgatgcag ccattgacct 2760 gtttacacgt tcatgtgctg gatactgtgt agctaccttc attttgggaa ttggagatcg 2820 tcacaatagt aacatcatgg tgaaagacga tggacaactg tttcatatag attttggaca 2880 ctttttggat cacaagaaga aaaaatttgg ttataaacga gaacgtgtgc catttgtttt 2940 gacacaggat ttcttaatag tgattagtaa aggagcccaa gaatgcacaa agacaagaga 3000 atttgagagg tttcaggaga tgtgttacaa ggcttatcta gctattcgac agcatgccaa 3060 tctcttcata aatcttttct caatgatgct tggctctgga atgccagaac tacaatcttt 3120 tgatgacatt gcatacattc gaaagaccct agccttagat aaaactgagc aagaggcttt 3180 ggagtatttc atgaaacaaa tgaatgatgc acatcatggt ggctggacaa caaaaatgga 3240 ttggatcttc cacacaatta aacagcatgc attgaactga ggctgctgca gctgcatggg 3300 tgcctgctgc tgcctgcctt ggcctgatgg ccaggccaga gtgctgccag tcctctgcat 3360 gttctgctct tgtgcccttc tgagcccaca ataaaggctg agctcttatc ttgcaaaagg 3420 c 3421 <210> 135 <211> 3421 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN68 <400> 135 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgcctc cacgaccatc atcaggtgaa ctgtggggca tccacttgat 120 gcccccaaga atcctagtag aatgtttact accaaatgga atgatagtga ctttagaatg 180 cctccgtgag gctacattaa taaccataaa gcatgaacta tttaaagaag caagaaaata 240 ccccctccat caacttcttc aagatgaatc ttcttacatt ttcgtaagtg ttactcaaga 300 agcagaaagg gaagaatttt ttgatgaaac aagacgactt tgtgaccttc ggctttttca 360 acccttttta aaagtaattg aaccagtagg caaccgtgaa gaaaagatcc tcaatcgaga 420 aattggtttt gctatcggca tgccagtgtg tgaatttgat atggttaaag atccagaagt 480 acaggacttc cgaagaaata ttctgaacgt ttgtaaagaa gctgtggatc ttagggacct 540 caattcacct catagtagag caatgtatgt ctatcctcca aatgtagaat cttcaccaga 600 attgccaaag cacatatata ataaattaga taaagggcaa ataatagtgg tgatctgggt 660 aatagtttct ccaaataatg acaagcagaa gtatactctg aaaatcaacc atgactgtgt 720 accagaacaa gtaattgctg aagcaatcag gaaaaaaact cgaagtatgt tgctatcctc 780 tgaacaacta aaactctgtg ttttagaata tcagggcaag tatattttaa aagtgtgtgg 840 atgtgatgaa tacttcctag aaaaatatcc tctgagtcag tataagtata taagaagctg 900 tataatgctt gggaggatgc ccaatttgat gttgatggct aaagaaagcc tttattctca 960 actgccaatg gactgtttta caatgccatc ttattccaga cgcatttcca cagctacacc 1020 atatatgaat ggagaaacat ctacaaaatc cctttgggtt ataaatagtg cactcagaat 1080 aaaaattctt tgtgcaacct acgtgaatgt aaatattcga gacattgata agatctatgt 1140 tcgaacaggt atctaccatg gaggagaacc cttatgtgac aatgtgaaca ctcaaagagt 1200 accttgttcc aatcccaggt ggaatgaatg gctgaattat gatatataca ttcctgatct 1260 tcctcgtgct gctcgacttt gcctttccat ttgctctgtt aaaggccgaa agggtgctaa 1320 agaggaacac tgtccattgg catggggaaa tataaacttg tttgattaca cagacactct 1380 agtatctgga aaaatggctt tgaatctttg gccagtacct catggattag aagatttgct 1440 gaaccctatt ggtgttactg gatcaaatcc aaataaagaa actccatgct tagagttgga 1500 gtttgactgg ttcagcagtg tggtaaagtt cccagatatg tcagtgattg aagagcatgc 1560 caattggtct gtatcccgag aagcaggatt tagctattcc cacgcaggac tgagtaacag 1620 actagctaga gacaatgaat taagggaaaa tgacaaagaa cagctcaaag caatttctac 1680 acgagatcct ctctctgaaa tcactaagca ggagaaagat tttctatgga gtcacagaca 1740 ctattgtgta actatccccg aaattctacc caaattgctt ctgtctgtta aatggaattc 1800 tagagatgaa gtagcccaga tgtattgctt ggtaaaagat tggcctccaa tcaaacctga 1860 acaggctatg gaacttctgg actgtaatta cccagatcct atggttcgag gttttgctgt 1920 tcggtgcttg gaaaaatatt taacagatga caaactttct cagtatttaa ttcagctagt 1980 acaggtccta aaatatgaac aatatttgga taacttgctt gtgagatttt tactgaagaa 2040 agcattgact aatcaaagga ttgggcactt tttcttttgg catttaaaat ctgagatgca 2100 caataaaaca gttagccaga ggtttggcct gcttttggag tcctattgtc gtgcatgtgg 2160 gatgtatttg aagcacctga ataggcaagt cgaggcaatg gaaaagctca ttaacttaac 2220 tgacattctc aaacaggaga agaaggatga aacacaaaag gtacagatga agtttttagt 2280 tgagcaaatg aggcgaccag atttcatgga tgctctacag ggctttctgt ctcctctaaa 2340 ccctgctcat caactaggaa acctcaggct tgaagagtgt cgaattatgt cctctgcaaa 2400 aaggccactg tggttgaatt gggagaaccc agacatcatg tcagagttac tgtttcagaa 2460 caatgagatc atctttaaaa atggggatga tttacggcaa gatatgctaa cacttcaaat 2520 tattcgtatt atggaaaata tctggcaaaa tcaaggtctt gatcttcgaa tgttacctta 2580 tggttgtctg tcaatcggtg actgtgtggg acttattgag gtggtgcgaa attctcacac 2640 tattatgcaa attcagtgca aaggcggctt gaaaggtgca ctgcagttca acagccacac 2700 actacatcag tggctcaaag acaagaacaa aggagaaata tatgatgcag ccattgacct 2760 gtttacacgt tcatgtgctg gatactgtgt agctaccttc attttgggaa ttggagatcg 2820 tcacaatagt aacatcatgg tgaaagacga tggacaactg tttcatatag attttggaca 2880 ctttttggat cacaagaaga aaaaatttgg ttataaacga gaacgtgtgc catttgtttt 2940 gacacaggat ttcttaatag tgattagtaa aggagcccaa gaatgcacaa agacaagaga 3000 atttgagagg tttcaggaga tgtgttacaa ggcttatcta gctattcgac agcatgccaa 3060 tctcttcata aatcttttct caatgatgct tggctctgga atgccagaac tacaatcttt 3120 tgatgacatt gcatacattc gaaagaccct agccttagat aaaactgagc aagaggcttt 3180 ggagtatttc atgaaacaaa tgaatgatgc acatcatggt ggctggacaa caaaaatgga 3240 ttggatcttc cacacaatta aacagcatgc attgaactga ggctgctgca gctgcatggg 3300 tgcctgctgc tgcctgcctt ggcctgatgg ccaggccaga gtgctgccag tcctctgcat 3360 gttctgctct tgtgcccttc tgagcccaca ataaaggctg agctcttatc ttgcaaaagg 3420 c 3421 <210> 136 <211> 3421 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <223> PAN69 <400> 136 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgcctc cacgaccatc atcaggtgaa ctgtggggca tccacttgat 120 gcccccaaga atcctagtag aatgtttact accaaatgga atgatagtga ctttagaatg 180 cctccgtgag gctacattaa taaccataaa gcatgaacta tttaaagaag caagaaaata 240 ccccctccat caacttcttc aagatgaatc ttcttacatt ttcgtaagtg ttactcaaga 300 agcagaaagg gaagaatttt ttgatgaaac aagacgactt tgtgaccttc ggctttttca 360 acccttttta aaagtaattg aaccagtagg caaccgtgaa gaaaagatcc tcaatcgaga 420 aattggtttt gctatcggca tgccagtgtg tgaatttgat atggttaaag atccagaagt 480 acaggacttc cgaagaaata ttctgaacgt ttgtaaagaa gctgtggatc ttagggacct 540 caattcacct catagtagag caatgtatgt ctatcctcca aatgtagaat cttcaccaga 600 attgccaaag cacatatata ataaattaga taaagggcaa ataatagtgg tgatctgggt 660 aatagtttct ccaaataatg acaagcagaa gtatactctg aaaatcaacc atgactgtgt 720 accagaacaa gtaattgctg aagcaatcag gaaaaaaact cgaagtatgt tgctatcctc 780 tgaacaacta aaactctgtg ttttagaata tcagggcaag tatattttaa aagtgtgtgg 840 atgtgatgaa tacttcctag aaaaatatcc tctgagtcag tataagtata taagaagctg 900 tataatgctt gggaggatgc ccaatttgat gttgatggct aaagaaagcc tttattctca 960 actgccaatg gactgtttta caatgccatc ttattccaga cgcatttcca cagctacacc 1020 atatatgaat ggagaaacat ctacaaaatc cctttgggtt ataaatagtg cactcagaat 1080 aaaaattctt tgtgcaacct acgtgaatgt aaatattcga gacattgata agatctatgt 1140 tcgaacaggt atctaccatg gaggagaacc cttatgtgac aatgtgaaca ctcaaagagt 1200 accttgttcc aatcccaggt ggaatgaatg gctgaattat gatatataca ttcctgatct 1260 tcctcgtgct gctcgacttt gcctttccat ttgctctgtt aaaggccgaa agggtgctaa 1320 agaggaacac tgtccattgg catggggaaa tataaacttg tttgattaca cagacactct 1380 agtatctgga aaaatggctt tgaatctttg gccagtacct catggattag aagatttgct 1440 gaaccctatt ggtgttactg gatcaaatcc aaataaagaa actccatgct tagagttgga 1500 gtttgactgg ttcagcagtg tggtaaagtt cccagatatg tcagtgattg aagagcatgc 1560 caattggtct gtatcccgag aagcaggatt tagctattcc cacgcaggac tgagtaacag 1620 actagctaga gacaatgaat taagggaaaa tgacaaagaa cagctcaaag caatttctac 1680 acgagatcct ctctctgaaa tcactgagca ggagaaagat tttctatgga gtcacagaca 1740 ctattgtgta actatccccg aaattctacc caaattgctt ctgtctgtta aatggaattc 1800 tagagatgaa gtagcccaga tgtattgctt ggtaaaagat tggcctccaa tcaaacctga 1860 acaggctatg gaacttctgg actgtaatta cccagatcct atggttcgag gttttgctgt 1920 tcggtgcttg gaaaaatatt taacagatga caaactttct cagtatttaa ttcagctagt 1980 acaggtccta aaatatgaac aatatttgga taacttgctt gtgagatttt tactgaagaa 2040 agcattgact aatcaaagga ttgggcactt tttcttttgg catttaaaat ctgagatgca 2100 caataaaaca gttagccaga ggtttggcct gcttttggag tcctattgtc gtgcatgtgg 2160 gatgtatttg aagcacctga ataggcaagt cgaggcaatg gaaaagctca ttaacttaac 2220 tgacattctc aaacaggaga agaaggatga aacacaaaag gtacagatga agtttttagt 2280 tgagcaaatg aggcgaccag atttcatgga tgctctacag ggctttctgt ctcctctaaa 2340 ccctgctcat caactaggaa acctcaggct tgaagagtgt cgaattatgt cctctgcaaa 2400 aaggccactg tggttgaatt gggagaaccc agacatcatg tcagagttac tgtttcagaa 2460 caatgagatc atctttaaaa atggggatga tttacggcaa gatatgctaa cacttcaaat 2520 tattcgtatt atggaaaata tctggcaaaa tcaaggtctt gatcttcgaa tgttacctta 2580 tggttgtctg tcaatcggtg actgtgtggg acttattgag gtggtgcgaa attctcacac 2640 tattatgcaa attcagtgca aaggcggctt gaaaggtgca ctgcagttca acagccacac 2700 actacatcag tggctcaaag acaagaacaa aggagaaata tatgatgcag ccattgacct 2760 gtttacacgt tcatgtgctg gatactgtgt agctaccttc attttgggaa ttggagatcg 2820 tcacaatagt aacatcatgg tgaaagacga tggacaactg tttcatatag attttggaca 2880 ctttttggat cacaagaaga aaaaatttgg ttataaacga gaacgtgtgc catttgtttt 2940 gacacaggat ttcttaatag tgattagtaa aggagcccaa gaatgcacaa agacaagaga 3000 atttgagagg tttcaggaga tgtgttacaa ggcttatcta gctattcgac agcatgccaa 3060 tctcttcata aatcttttct caatgatgct tggctctgga atgccagaac tacaatcttt 3120 tgatgacatt gcatacattc gaaagaccct agccttagat aaaactgagc aagaggcttt 3180 ggagtatttc atgaaacaaa tgaatgatgc acggcatggt ggctggacaa caaaaatgga 3240 ttggatcttc cacacaatta aacagcatgc attgaactga ggctgctgca gctgcatggg 3300 tgcctgctgc tgcctgcctt ggcctgatgg ccaggccaga gtgctgccag tcctctgcat 3360 gttctgctct tgtgcccttc tgagcccaca ataaaggctg agctcttatc ttgcaaaagg 3420 c 3421 <210> 137 <211> 2987 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Akt1, wild type <400> 137 taattatggg tctgtaacca ccctggactg ggtgctcctc actgacggac ttgtctgaac 60 ctctctttgt ctccagcgcc cagcactggg cctggcaaaa cctgagacgc ccggtacatg 120 ttggccaaat gaatgaacca gattcagacc ggcaggggcg ctgtggttta ggaggggcct 180 ggggtttctc ccaggaggtt tttgggcttg cgctggaggg ctctggactc ccgtttgcgc 240 cagtggcctg catcctggtc ctgtcttcct catgtttgaa tttctttgct ttcctagtct 300 ggggagcagg gaggagccct gtgccctgtc ccaggatcca tgggtaggaa caccatggac 360 agggagagca aacggggcca tctgtcacca ggggcttagg gaaggccgag ccagcctggg 420 tcaaagaagt caaaggggct gcctggagga ggcagcctgt cagctggtgc atcagaggct 480 gtggccaggc cagctgggct cggggagcgc cagcctgaga ggagcgcgtg agcgtcgcgg 540 gagcctcggg caccatgagc gacgtggcta ttgtgaagga gggttggctg cacaaacgag 600 gggagtacat caagacctgg cggccacgct acttcctcct caagaatgat ggcaccttca 660 ttggctacaa ggagcggccg caggatgtgg accaacgtga ggctcccctc aacaacttct 720 ctgtggcgca gtgccagctg atgaagacgg agcggccccg gcccaacacc ttcatcatcc 780 gctgcctgca gtggaccact gtcatcgaac gcaccttcca tgtggagact cctgaggagc 840 gggaggagtg gacaaccgcc atccagactg tggctgacgg cctcaagaag caggaggagg 900 aggagatgga cttccggtcg ggctcaccca gtgacaactc aggggctgaa gagatggagg 960 tgtccctggc caagcccaag caccgcgtga ccatgaacga gtttgagtac ctgaagctgc 1020 tgggcaaggg cactttcggc aaggtgatcc tggtgaagga gaaggccaca ggccgctact 1080 acgccatgaa gatcctcaag aaggaagtca tcgtggccaa ggacgaggtg gcccacacac 1140 tcaccgagaa ccgcgtcctg cagaactcca ggcacccctt cctcacagcc ctgaagtact 1200 ctttccagac ccacgaccgc ctctgctttg tcatggagta cgccaacggg ggcgagctgt 1260 tcttccacct gtcccgggag cgtgtgttct ccgaggaccg ggcccgcttc tatggcgctg 1320 agattgtgtc agccctggac tacctgcact cggagaagaa cgtggtgtac cgggacctca 1380 agctggagaa cctcatgctg gacaaggacg ggcacattaa gatcacagac ttcgggctgt 1440 gcaaggaggg gatcaaggac ggtgccacca tgaagacctt ttgcggcaca cctgagtacc 1500 tggcccccga ggtgctggag gacaatgact acggccgtgc agtggactgg tgggggctgg 1560 gcgtggtcat gtacgagatg atgtgcggtc gcctgccctt ctacaaccag gaccatgaga 1620 agctttttga gctcatcctc atggaggaga tccgcttccc gcgcacgctt ggtcccgagg 1680 ccaagtcctt gctttcaggg ctgctcaaga aggaccccaa gcagaggctt ggcgggggct 1740 ccgaggacgc caaggagatc atgcagcatc gcttctttgc cggtatcgtg tggcagcacg 1800 tgtacgagaa gaagctcagc ccacccttca agccccaggt cacgtcggag actgacacca 1860 ggtattttga tgaggagttc acggcccaga tgatcaccat cacaccacct gaccaagatg 1920 acagcatgga gtgtgtggac agcgagcgca ggccccactt cccccagttc tcctactcgg 1980 ccagcggcac ggcctgaggc ggcggtggac tgcgctggac gatagcttgg agggatggag 2040 aggcggcctc gtgccatgat ctgtatttaa tggtttttat ttctcgggtg catttgagag 2100 aagccacgct gtcctctcga gcccagatgg aaagacgttt ttgtgctgtg ggcagcaccc 2160 tcccccgcag cggggtaggg aagaaaacta tcctgcgggt tttaatttat ttcatccagt 2220 ttgttctccg ggtgtggcct cagccctcag aacaatccga ttcacgtagg gaaatgttaa 2280 ggacttctgc agctatgcgc aatgtggcat tggggggccg ggcaggtcct gcccatgtgt 2340 cccctcactc tgtcagccag ccgccctggg ctgtctgtca ccagctatct gtcatctctc 2400 tggggccctg ggcctcagtt caacctggtg gcaccagatg caacctcact atggtatgct 2460 ggccagcacc ctctcctggg ggtggcaggc acacagcagc cccccagcac taaggccgtg 2520 tctctgagga cgtcatcgga ggctgggccc ctgggatggg accagggatg ggggatgggc 2580 cagggtttac ccagtgggac agaggagcaa ggtttaaatt tgttattgtg tattatgttg 2640 ttcaaatgca ttttgggggt ttttaatctt tgtgacagga aagccctccc ccttcccctt 2700 ctgtgtcaca gttcttggtg actgtcccac cgggagcctc cccctcagat gatctctcca 2760 cggtagcact tgaccttttc gacgcttaac ctttccgctg tcgccccagg ccctccctga 2820 ctccctgtgg gggtggccat ccctgggccc ctccacgcct cctggccaga cgctgccgct 2880 gccgctgcac cacggcgttt ttttacaaca ttcaacttta gtatttttac tattataata 2940 taatatggaa ccttccctcc aaattcttca ataaaagttg cttttca 2987 <210> 138 <211> 480 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Akt1, wild type <400> 138 Met Ser Asp Val Ala Ile Val Lys Glu Gly Trp Leu His Lys Arg Gly 1 5 10 15 Glu Tyr Ile Lys Thr Trp Arg Pro Arg Tyr Phe Leu Leu Lys Asn Asp 20 25 30 Gly Thr Phe Ile Gly Tyr Lys Glu Arg Pro Gln Asp Val Asp Gln Arg 35 40 45 Glu Ala Pro Leu Asn Asn Phe Ser Val Ala Gln Cys Gln Leu Met Lys 50 55 60 Thr Glu Arg Pro Arg Pro Asn Thr Phe Ile Ile Arg Cys Leu Gln Trp 65 70 75 80 Thr Thr Val Ile Glu Arg Thr Phe His Val Glu Thr Pro Glu Glu Arg 85 90 95 Glu Glu Trp Thr Thr Ala Ile Gln Thr Val Ala Asp Gly Leu Lys Lys 100 105 110 Gln Glu Glu Glu Glu Met Asp Phe Arg Ser Gly Ser Pro Ser Asp Asn 115 120 125 Ser Gly Ala Glu Glu Met Glu Val Ser Leu Ala Lys Pro Lys His Arg 130 135 140 Val Thr Met Asn Glu Phe Glu Tyr Leu Lys Leu Leu Gly Lys Gly Thr 145 150 155 160 Phe Gly Lys Val Ile Leu Val Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Tyr Tyr 165 170 175 Ala Met Lys Ile Leu Lys Lys Glu Val Ile Val Ala Lys Asp Glu Val 180 185 190 Ala His Thr Leu Thr Glu Asn Arg Val Leu Gln Asn Ser Arg His Pro 195 200 205 Phe Leu Thr Ala Leu Lys Tyr Ser Phe Gln Thr His Asp Arg Leu Cys 210 215 220 Phe Val Met Glu Tyr Ala Asn Gly Gly Glu Leu Phe Phe His Leu Ser 225 230 235 240 Arg Glu Arg Val Phe Ser Glu Asp Arg Ala Arg Phe Tyr Gly Ala Glu 245 250 255 Ile Val Ser Ala Leu Asp Tyr Leu His Ser Glu Lys Asn Val Val Tyr 260 265 270 Arg Asp Leu Lys Leu Glu Asn Leu Met Leu Asp Lys Asp Gly His Ile 275 280 285 Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Cys Lys Glu Gly Ile Lys Asp Gly Ala 290 295 300 Thr Met Lys Thr Phe Cys Gly Thr Pro Glu Tyr Leu Ala Pro Glu Val 305 310 315 320 Leu Glu Asp Asn Asp Tyr Gly Arg Ala Val Asp Trp Trp Gly Leu Gly 325 330 335 Val Val Met Tyr Glu Met Met Cys Gly Arg Leu Pro Phe Tyr Asn Gln 340 345 350 Asp His Glu Lys Leu Phe Glu Leu Ile Leu Met Glu Glu Ile Arg Phe 355 360 365 Pro Arg Thr Leu Gly Pro Glu Ala Lys Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu 370 375 380 Lys Lys Asp Pro Lys Gln Arg Leu Gly Gly Gly Ser Glu Asp Ala Lys 385 390 395 400 Glu Ile Met Gln His Arg Phe Phe Ala Gly Ile Val Trp Gln His Val 405 410 415 Tyr Glu Lys Lys Leu Ser Pro Pro Phe Lys Pro Gln Val Thr Ser Glu 420 425 430 Thr Asp Thr Arg Tyr Phe Asp Glu Glu Phe Thr Ala Gln Met Ile Thr 435 440 445 Ile Thr Pro Pro Asp Gln Asp Asp Ser Met Glu Cys Val Asp Ser Glu 450 455 460 Arg Arg Pro His Phe Pro Gln Phe Ser Tyr Ser Ala Ser Gly Thr Ala 465 470 475 480 <210> 139 <211> 8721 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> mTor, wild type <400> 139 gctcccggct tagaggacag cggggaaggc gggcggtggg gcagggggcc tgaagcggcg 60 gtaccggtgc tggcggcggc agctgaggcc ttggccgaag ccgcgcgaac ctcagggcaa 120 gatgcttgga accggacctg ccgccgccac caccgctgcc accacatcta gcaatgtgag 180 cgtcctgcag cagtttgcca gtggcctaaa gagccggaat gaggaaacca gggccaaagc 240 cgccaaggag ctccagcact atgtcaccat ggaactccga gagatgagtc aagaggagtc 300 tactcgcttc tatgaccaac tgaaccatca catttttgaa ttggtttcca gctcagatgc 360 caatgagagg aaaggtggca tcttggccat agctagcctc ataggagtgg aaggtgggaa 420 tgccacccga attggcagat ttgccaacta tcttcggaac ctcctcccct ccaatgaccc 480 agttgtcatg gaaatggcat ccaaggccat tggccgtctt gccatggcag gggacacttt 540 taccgctgag tacgtggaat ttgaggtgaa gcgagccctg gaatggctgg gtgctgaccg 600 caatgagggc cggagacatg cagctgtcct ggttctccgt gagctggcca tcagcgtccc 660 taccttcttc ttccagcaag tgcaaccctt ctttgacaac atttttgtgg ccgtgtggga 720 ccccaaacag gccatccgtg agggagctgt agccgccctt cgtgcctgtc tgattctcac 780 aacccagcgt gagccgaagg agatgcagaa gcctcagtgg tacaggcaca catttgaaga 840 agcagagaag ggatttgatg agaccttggc caaagagaag ggcatgaatc gggatgatcg 900 gatccatgga gccttgttga tccttaacga gctggtccga atcagcagca tggagggaga 960 gcgtctgaga gaagaaatgg aagaaatcac acagcagcag ctggtacacg acaagtactg 1020 caaagatctc atgggcttcg gaacaaaacc tcgtcacatt acccccttca ccagtttcca 1080 ggctgtacag ccccagcagt caaatgcctt ggtggggctg ctggggtaca gctctcacca 1140 aggcctcatg ggatttggga cctcccccag tccagctaag tccaccctgg tggagagccg 1200 gtgttgcaga gacttgatgg aggagaaatt tgatcaggtg tgccagtggg tgctgaaatg 1260 caggaatagc aagaactcgc tgatccaaat gacaatcctt aatttgttgc cccgcttggc 1320 tgcattccga ccttctgcct tcacagatac ccagtatctc caagatacca tgaaccatgt 1380 cctaagctgt gtcaagaagg agaaggaacg tacagcggcc ttccaagccc tggggctact 1440 ttctgtggct gtgaggtctg agtttaaggt ctatttgcct cgcgtgctgg acatcatccg 1500 agcggccctg cccccaaagg acttcgccca taagaggcag aaggcaatgc aggtggatgc 1560 cacagtcttc acttgcatca gcatgctggc tcgagcaatg gggccaggca tccagcagga 1620 tatcaaggag ctgctggagc ccatgctggc agtgggacta agccctgccc tcactgcagt 1680 gctctacgac ctgagccgtc agattccaca gctaaagaag gacattcaag atgggctact 1740 gaaaatgctg tccctggtcc ttatgcacaa accccttcgc cacccaggca tgcccaaggg 1800 cctggcccat cagctggcct ctcctggcct cacgaccctc cctgaggcca gcgatgtggg 1860 cagcatcact cttgccctcc gaacgcttgg cagctttgaa tttgaaggcc actctctgac 1920 ccaatttgtt cgccactgtg cggatcattt cctgaacagt gagcacaagg agatccgcat 1980 ggaggctgcc cgcacctgct cccgcctgct cacaccctcc atccacctca tcagtggcca 2040 tgctcatgtg gttagccaga ccgcagtgca agtggtggca gatgtgctta gcaaactgct 2100 cgtagttggg ataacagatc ctgaccctga cattcgctac tgtgtcttgg cgtccctgga 2160 cgagcgcttt gatgcacacc tggcccaggc ggagaacttg caggccttgt ttgtggctct 2220 gaatgaccag gtgtttgaga tccgggagct ggccatctgc actgtgggcc gactcagtag 2280 catgaaccct gcctttgtca tgcctttcct gcgcaagatg ctcatccaga ttttgacaga 2340 gttggagcac agtgggattg gaagaatcaa agagcagagt gcccgcatgc tggggcacct 2400 ggtctccaat gccccccgac tcatccgccc ctacatggag cctattctga aggcattaat 2460 tttgaaactg aaagatccag accctgatcc aaacccaggt gtgatcaata atgtcctggc 2520 aacaatagga gaattggcac aggttagtgg cctggaaatg aggaaatggg ttgatgaact 2580 ttttattatc atcatggaca tgctccagga ttcctctttg ttggccaaaa ggcaggtggc 2640 tctgtggacc ctgggacagt tggtggccag cactggctat gtagtagagc cctacaggaa 2700 gtaccctact ttgcttgagg tgctactgaa ttttctgaag actgagcaga accagggtac 2760 acgcagagag gccatccgtg tgttagggct tttaggggct ttggatcctt acaagcacaa 2820 agtgaacatt ggcatgatag accagtcccg ggatgcctct gctgtcagcc tgtcagaatc 2880 caagtcaagt caggattcct ctgactatag cactagtgaa atgctggtca acatgggaaa 2940 cttgcctctg gatgagttct acccagctgt gtccatggtg gccctgatgc ggatcttccg 3000 agaccagtca ctctctcatc atcacaccat ggttgtccag gccatcacct tcatcttcaa 3060 gtccctggga ctcaaatgtg tgcagttcct gccccaggtc atgcccacgt tccttaacgt 3120 cattcgagtc tgtgatgggg ccatccggga atttttgttc cagcagctgg gaatgttggt 3180 gtcctttgtg aagagccaca tcagacctta tatggatgaa atagtcaccc tcatgagaga 3240 attctgggtc atgaacacct caattcagag cacgatcatt cttctcattg agcaaattgt 3300 ggtagctctt gggggtgaat ttaagctcta cctgccccag ctgatcccac acatgctgcg 3360 tgtcttcatg catgacaaca gcccaggccg cattgtctct atcaagttac tggctgcaat 3420 ccagctgttt ggcgccaacc tggatgacta cctgcattta ctgctgcctc ctattgttaa 3480 gttgtttgat gcccctgaag ctccactgcc atctcgaaag gcagcgctag agactgtgga 3540 ccgcctgacg gagtccctgg atttcactga ctatgcctcc cggatcattc accctattgt 3600 tcgaacactg gaccagagcc cagaactgcg ctccacagcc atggacacgc tgtcttcact 3660 tgtttttcag ctggggaaga agtaccaaat tttcattcca atggtgaata aagttctggt 3720 gcgacaccga atcaatcatc agcgctatga tgtgctcatc tgcagaattg tcaagggata 3780 cacacttgct gatgaagagg aggatccttt gatttaccag catcggatgc ttaggagtgg 3840 ccaaggggat gcattggcta gtggaccagt ggaaacagga cccatgaaga aactgcacgt 3900 cagcaccatc aacctccaaa aggcctgggg cgctgccagg agggtctcca aagatgactg 3960 gctggaatgg ctgagacggc tgagcctgga gctgctgaag gactcatcat cgccctccct 4020 gcgctcctgc tgggccctgg cacaggccta caacccgatg gccagggatc tcttcaatgc 4080 tgcatttgtg tcctgctggt ctgaactgaa tgaagatcaa caggatgagc tcatcagaag 4140 catcgagttg gccctcacct cacaagacat cgctgaagtc acacagaccc tcttaaactt 4200 ggctgaattc atggaacaca gtgacaaggg ccccctgcca ctgagagatg acaatggcat 4260 tgttctgctg ggtgagagag ctgccaagtg ccgagcatat gccaaagcac tacactacaa 4320 agaactggag ttccagaaag gccccacccc tgccattcta gaatctctca tcagcattaa 4380 taataagcta cagcagccgg aggcagcggc cggagtgtta gaatatgcca tgaaacactt 4440 tggagagctg gagatccagg ctacctggta tgagaaactg cacgagtggg aggatgccct 4500 tgtggcctat gacaagaaaa tggacaccaa caaggacgac ccagagctga tgctgggccg 4560 catgcgctgc ctcgaggcct tgggggaatg gggtcaactc caccagcagt gctgtgaaaa 4620 gtggaccctg gttaatgatg agacccaagc caagatggcc cggatggctg ctgcagctgc 4680 atggggttta ggtcagtggg acagcatgga agaatacacc tgtatgatcc ctcgggacac 4740 ccatgatggg gcattttata gagctgtgct ggcactgcat caggacctct tctccttggc 4800 acaacagtgc attgacaagg ccagggacct gctggatgct gaattaactg cgatggcagg 4860 agagagttac agtcgggcat atggggccat ggtttcttgc cacatgctgt ccgagctgga 4920 ggaggttatc cagtacaaac ttgtccccga gcgacgagag atcatccgcc agatctggtg 4980 ggagagactg cagggctgcc agcgtatcgt agaggactgg cagaaaatcc ttatggtgcg 5040 gtcccttgtg gtcagccctc atgaagacat gagaacctgg ctcaagtatg caagcctgtg 5100 cggcaagagt ggcaggctgg ctcttgctca taaaacttta gtgttgctcc tgggagttga 5160 tccgtctcgg caacttgacc atcctctgcc aacagttcac cctcaggtga cctatgccta 5220 catgaaaaac atgtggaaga gtgcccgcaa gatcgatgcc ttccagcaca tgcagcattt 5280 tgtccagacc atgcagcaac aggcccagca tgccatcgct actgaggacc agcagcataa 5340 gcaggaactg cacaagctca tggcccgatg cttcctgaaa cttggagagt ggcagctgaa 5400 tctacagggc atcaatgaga gcacaatccc caaagtgctg cagtactaca gcgccgccac 5460 agagcacgac cgcagctggt acaaggcctg gcatgcgtgg gcagtgatga acttcgaagc 5520 tgtgctacac tacaaacatc agaaccaagc ccgcgatgag aagaagaaac tgcgtcatgc 5580 cagcggggcc aacatcacca acgccaccac tgccgccacc acggccgcca ctgccaccac 5640 cactgccagc accgagggca gcaacagtga gagcgaggcc gagagcaccg agaacagccc 5700 caccccatcg ccgctgcaga agaaggtcac tgaggatctg tccaaaaccc tcctgatgta 5760 cacggtgcct gccgtccagg gcttcttccg ttccatctcc ttgtcacgag gcaacaacct 5820 ccaggataca ctcagagttc tcaccttatg gtttgattat ggtcactggc cagatgtcaa 5880 tgaggcctta gtggaggggg tgaaagccat ccagattgat acctggctac aggttatacc 5940 tcagctcatt gcaagaattg atacgcccag acccttggtg ggacgtctca ttcaccagct 6000 tctcacagac attggtcggt accaccccca ggccctcatc tacccactga cagtggcttc 6060 taagtctacc acgacagccc ggcacaatgc agccaacaag attctgaaga acatgtgtga 6120 gcacagcaac accctggtcc agcaggccat gatggtgagc gaggagctga tccgagtggc 6180 catcctctgg catgagatgt ggcatgaagg cctggaagag gcatctcgtt tgtactttgg 6240 ggaaaggaac gtgaaaggca tgtttgaggt gctggagccc ttgcatgcta tgatggaacg 6300 gggcccccag actctgaagg aaacatcctt taatcaggcc tatggtcgag atttaatgga 6360 ggcccaagag tggtgcagga agtacatgaa atcagggaat gtcaaggacc tcacccaagc 6420 ctgggacctc tattatcatg tgttccgacg aatctcaaag cagctgcctc agctcacatc 6480 cttagagctg caatatgttt ccccaaaact tctgatgtgc cgggaccttg aattggctgt 6540 gccaggaaca tatgacccca accagccaat cattcgcatt cagtccatag caccgtcttt 6600 gcaagtcatc acatccaagc agaggccccg gaaattgaca cttatgggca gcaacggaca 6660 tgagtttgtt ttccttctaa aaggccatga agatctgcgc caggatgagc gtgtgatgca 6720 gctcttcggc ctggttaaca cccttctggc caatgaccca acatctcttc ggaaaaacct 6780 cagcatccag agatacgctg tcatcccttt atcgaccaac tcgggcctca ttggctgggt 6840 tccccactgt gacacactgc acgccctcat ccgggactac agggagaaga agaagatcct 6900 tctcaacatc gagcatcgca tcatgttgcg gatggctccg gactatgacc acttgactct 6960 gatgcagaag gtggaggtgt ttgagcatgc cgtcaataat acagctgggg acgacctggc 7020 caagctgctg tggctgaaaa gccccagctc cgaggtgtgg tttgaccgaa gaaccaatta 7080 tacccgttct ttagcggtca tgtcaatggt tgggtatatt ttaggcctgg gagatagaca 7140 cccatccaac ctgatgctgg accgtctgag tgggaagatc ctgcacattg actttgggga 7200 ctgctttgag gttgctatga cccgagagaa gtttccagag aagattccat ttagactaac 7260 aagaatgttg accaatgcta tggaggttac aggcctggat ggcaactaca gaatcacatg 7320 ccacacagtg atggaggtgc tgcgagagca caaggacagt gtcatggccg tgctggaagc 7380 ctttgtctat gaccccttgc tgaactggag gctgatggac acaaatacca aaggcaacaa 7440 gcgatcccga acgaggacgg attcctactc tgctggccag tcagtcgaaa ttttggacgg 7500 tgtggaactt ggagagccag cccataagaa aacggggacc acagtgccag aatctattca 7560 ttctttcatt ggagacggtt tggtgaaacc agaggcccta aataagaaag ctatccagat 7620 tattaacagg gttcgagata agctcactgg tcgggacttc tctcatgatg acactttgga 7680 tgttccaacg caagttgagc tgctcatcaa acaagcgaca tcccatgaaa acctctgcca 7740 gtgctatatt ggctggtgcc ctttctggta actggaggcc cagatgtgcc catcacgttt 7800 tttctgaggc ttttgtactt tagtaaatgc ttccactaaa ctgaaaccat ggtgagaaag 7860 tttgactttg ttaaatattt tgaaatgtaa atgaaaagaa ctactgtata ttaaaagttg 7920 gtttgaacca actttctagc tgctgttgaa gaatatattg tcagaaacac aaggcttgat 7980 ttggttccca ggacagtgaa acatagtaat accacgtaaa tcaagccatt cattttgggg 8040 aacagaagat ccataacttt agaaatacgg gttttgactt aactcacaag agaactcatc 8100 ataagtactt gctgatggaa gaatgaccta gttgctcctc tcaacatggg tacagcaaac 8160 tcagcacagc caagaagcct caggtcgtgg agaacatgga ttaggatcct agactgtaaa 8220 gacacagaag atgctgacct cacccctgcc acctatccca agacctcact ggtctgtgga 8280 cagcagcaga aatgtttgca agataggcca aaatgagtac aaaaggtctg tcttccatca 8340 gacccagtga tgctgcgact cacacgcttc aattcaagac ctgaccgcta gtagggaggt 8400 ttattcagat cgctggcagc ctcggctgag cagatgcaca gaggggatca ctgtgcagtg 8460 ggaccaccct cactggcctt ctgcagcagg gttctgggat gttttcagtg gtcaaaatac 8520 tctgtttaga gcaagggctc agaaaacaga aatactgtca tggaggtgct gaacacaggg 8580 aaggtctggt acatattgga aattatgagc agaacaaata ctcaactaaa tgcacaaagt 8640 ataaagtgta gccatgtcta gacaccatgt tgtatcagaa taatttttgt gccaataaat 8700 gacatcagaa ttttaaacat a 8721 <210> 140 <211> 2549 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> mTor, wild type <400> 140 Met Leu Gly Thr Gly Pro Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Thr Ser 1 5 10 15 Ser Asn Val Ser Val Leu Gln Gln Phe Ala Ser Gly Leu Lys Ser Arg 20 25 30 Asn Glu Glu Thr Arg Ala Lys Ala Ala Lys Glu Leu Gln His Tyr Val 35 40 45 Thr Met Glu Leu Arg Glu Met Ser Gln Glu Glu Ser Thr Arg Phe Tyr 50 55 60 Asp Gln Leu Asn His His Ile Phe Glu Leu Val Ser Ser Ser Asp Ala 65 70 75 80 Asn Glu Arg Lys Gly Gly Ile Leu Ala Ile Ala Ser Leu Ile Gly Val 85 90 95 Glu Gly Gly Asn Ala Thr Arg Ile Gly Arg Phe Ala Asn Tyr Leu Arg 100 105 110 Asn Leu Leu Pro Ser Asn Asp Pro Val Val Met Glu Met Ala Ser Lys 115 120 125 Ala Ile Gly Arg Leu Ala Met Ala Gly Asp Thr Phe Thr Ala Glu Tyr 130 135 140 Val Glu Phe Glu Val Lys Arg Ala Leu Glu Trp Leu Gly Ala Asp Arg 145 150 155 160 Asn Glu Gly Arg Arg His Ala Ala Val Leu Val Leu Arg Glu Leu Ala 165 170 175 Ile Ser Val Pro Thr Phe Phe Phe Gln Gln Val Gln Pro Phe Phe Asp 180 185 190 Asn Ile Phe Val Ala Val Trp Asp Pro Lys Gln Ala Ile Arg Glu Gly 195 200 205 Ala Val Ala Ala Leu Arg Ala Cys Leu Ile Leu Thr Thr Gln Arg Glu 210 215 220 Pro Lys Glu Met Gln Lys Pro Gln Trp Tyr Arg His Thr Phe Glu Glu 225 230 235 240 Ala Glu Lys Gly Phe Asp Glu Thr Leu Ala Lys Glu Lys Gly Met Asn 245 250 255 Arg Asp Asp Arg Ile His Gly Ala Leu Leu Ile Leu Asn Glu Leu Val 260 265 270 Arg Ile Ser Ser Met Glu Gly Glu Arg Leu Arg Glu Glu Met Glu Glu 275 280 285 Ile Thr Gln Gln Gln Leu Val His Asp Lys Tyr Cys Lys Asp Leu Met 290 295 300 Gly Phe Gly Thr Lys Pro Arg His Ile Thr Pro Phe Thr Ser Phe Gln 305 310 315 320 Ala Val Gln Pro Gln Gln Ser Asn Ala Leu Val Gly Leu Leu Gly Tyr 325 330 335 Ser Ser His Gln Gly Leu Met Gly Phe Gly Thr Ser Pro Ser Pro Ala 340 345 350 Lys Ser Thr Leu Val Glu Ser Arg Cys Cys Arg Asp Leu Met Glu Glu 355 360 365 Lys Phe Asp Gln Val Cys Gln Trp Val Leu Lys Cys Arg Asn Ser Lys 370 375 380 Asn Ser Leu Ile Gln Met Thr Ile Leu Asn Leu Leu Pro Arg Leu Ala 385 390 395 400 Ala Phe Arg Pro Ser Ala Phe Thr Asp Thr Gln Tyr Leu Gln Asp Thr 405 410 415 Met Asn His Val Leu Ser Cys Val Lys Lys Glu Lys Glu Arg Thr Ala 420 425 430 Ala Phe Gln Ala Leu Gly Leu Leu Ser Val Ala Val Arg Ser Glu Phe 435 440 445 Lys Val Tyr Leu Pro Arg Val Leu Asp Ile Ile Arg Ala Ala Leu Pro 450 455 460 Pro Lys Asp Phe Ala His Lys Arg Gln Lys Ala Met Gln Val Asp Ala 465 470 475 480 Thr Val Phe Thr Cys Ile Ser Met Leu Ala Arg Ala Met Gly Pro Gly 485 490 495 Ile Gln Gln Asp Ile Lys Glu Leu Leu Glu Pro Met Leu Ala Val Gly 500 505 510 Leu Ser Pro Ala Leu Thr Ala Val Leu Tyr Asp Leu Ser Arg Gln Ile 515 520 525 Pro Gln Leu Lys Lys Asp Ile Gln Asp Gly Leu Leu Lys Met Leu Ser 530 535 540 Leu Val Leu Met His Lys Pro Leu Arg His Pro Gly Met Pro Lys Gly 545 550 555 560 Leu Ala His Gln Leu Ala Ser Pro Gly Leu Thr Thr Leu Pro Glu Ala 565 570 575 Ser Asp Val Gly Ser Ile Thr Leu Ala Leu Arg Thr Leu Gly Ser Phe 580 585 590 Glu Phe Glu Gly His Ser Leu Thr Gln Phe Val Arg His Cys Ala Asp 595 600 605 His Phe Leu Asn Ser Glu His Lys Glu Ile Arg Met Glu Ala Ala Arg 610 615 620 Thr Cys Ser Arg Leu Leu Thr Pro Ser Ile His Leu Ile Ser Gly His 625 630 635 640 Ala His Val Val Ser Gln Thr Ala Val Gln Val Val Ala Asp Val Leu 645 650 655 Ser Lys Leu Leu Val Val Gly Ile Thr Asp Pro Asp Pro Asp Ile Arg 660 665 670 Tyr Cys Val Leu Ala Ser Leu Asp Glu Arg Phe Asp Ala His Leu Ala 675 680 685 Gln Ala Glu Asn Leu Gln Ala Leu Phe Val Ala Leu Asn Asp Gln Val 690 695 700 Phe Glu Ile Arg Glu Leu Ala Ile Cys Thr Val Gly Arg Leu Ser Ser 705 710 715 720 Met Asn Pro Ala Phe Val Met Pro Phe Leu Arg Lys Met Leu Ile Gln 725 730 735 Ile Leu Thr Glu Leu Glu His Ser Gly Ile Gly Arg Ile Lys Glu Gln 740 745 750 Ser Ala Arg Met Leu Gly His Leu Val Ser Asn Ala Pro Arg Leu Ile 755 760 765 Arg Pro Tyr Met Glu Pro Ile Leu Lys Ala Leu Ile Leu Lys Leu Lys 770 775 780 Asp Pro Asp Pro Asp Pro Asn Pro Gly Val Ile Asn Asn Val Leu Ala 785 790 795 800 Thr Ile Gly Glu Leu Ala Gln Val Ser Gly Leu Glu Met Arg Lys Trp 805 810 815 Val Asp Glu Leu Phe Ile Ile Ile Met Asp Met Leu Gln Asp Ser Ser 820 825 830 Leu Leu Ala Lys Arg Gln Val Ala Leu Trp Thr Leu Gly Gln Leu Val 835 840 845 Ala Ser Thr Gly Tyr Val Val Glu Pro Tyr Arg Lys Tyr Pro Thr Leu 850 855 860 Leu Glu Val Leu Leu Asn Phe Leu Lys Thr Glu Gln Asn Gln Gly Thr 865 870 875 880 Arg Arg Glu Ala Ile Arg Val Leu Gly Leu Leu Gly Ala Leu Asp Pro 885 890 895 Tyr Lys His Lys Val Asn Ile Gly Met Ile Asp Gln Ser Arg Asp Ala 900 905 910 Ser Ala Val Ser Leu Ser Glu Ser Lys Ser Ser Gln Asp Ser Ser Asp 915 920 925 Tyr Ser Thr Ser Glu Met Leu Val Asn Met Gly Asn Leu Pro Leu Asp 930 935 940 Glu Phe Tyr Pro Ala Val Ser Met Val Ala Leu Met Arg Ile Phe Arg 945 950 955 960 Asp Gln Ser Leu Ser His His His Thr Met Val Val Gln Ala Ile Thr 965 970 975 Phe Ile Phe Lys Ser Leu Gly Leu Lys Cys Val Gln Phe Leu Pro Gln 980 985 990 Val Met Pro Thr Phe Leu Asn Val Ile Arg Val Cys Asp Gly Ala Ile 995 1000 1005 Arg Glu Phe Leu Phe Gln Gln Leu Gly Met Leu Val Ser Phe Val 1010 1015 1020 Lys Ser His Ile Arg Pro Tyr Met Asp Glu Ile Val Thr Leu Met 1025 1030 1035 Arg Glu Phe Trp Val Met Asn Thr Ser Ile Gln Ser Thr Ile Ile 1040 1045 1050 Leu Leu Ile Glu Gln Ile Val Val Ala Leu Gly Gly Glu Phe Lys 1055 1060 1065 Leu Tyr Leu Pro Gln Leu Ile Pro His Met Leu Arg Val Phe Met 1070 1075 1080 His Asp Asn Ser Pro Gly Arg Ile Val Ser Ile Lys Leu Leu Ala 1085 1090 1095 Ala Ile Gln Leu Phe Gly Ala Asn Leu Asp Asp Tyr Leu His Leu 1100 1105 1110 Leu Leu Pro Pro Ile Val Lys Leu Phe Asp Ala Pro Glu Ala Pro 1115 1120 1125 Leu Pro Ser Arg Lys Ala Ala Leu Glu Thr Val Asp Arg Leu Thr 1130 1135 1140 Glu Ser Leu Asp Phe Thr Asp Tyr Ala Ser Arg Ile Ile His Pro 1145 1150 1155 Ile Val Arg Thr Leu Asp Gln Ser Pro Glu Leu Arg Ser Thr Ala 1160 1165 1170 Met Asp Thr Leu Ser Ser Leu Val Phe Gln Leu Gly Lys Lys Tyr 1175 1180 1185 Gln Ile Phe Ile Pro Met Val Asn Lys Val Leu Val Arg His Arg 1190 1195 1200 Ile Asn His Gln Arg Tyr Asp Val Leu Ile Cys Arg Ile Val Lys 1205 1210 1215 Gly Tyr Thr Leu Ala Asp Glu Glu Glu Asp Pro Leu Ile Tyr Gln 1220 1225 1230 His Arg Met Leu Arg Ser Gly Gln Gly Asp Ala Leu Ala Ser Gly 1235 1240 1245 Pro Val Glu Thr Gly Pro Met Lys Lys Leu His Val Ser Thr Ile 1250 1255 1260 Asn Leu Gln Lys Ala Trp Gly Ala Ala Arg Arg Val Ser Lys Asp 1265 1270 1275 Asp Trp Leu Glu Trp Leu Arg Arg Leu Ser Leu Glu Leu Leu Lys 1280 1285 1290 Asp Ser Ser Ser Pro Ser Leu Arg Ser Cys Trp Ala Leu Ala Gln 1295 1300 1305 Ala Tyr Asn Pro Met Ala Arg Asp Leu Phe Asn Ala Ala Phe Val 1310 1315 1320 Ser Cys Trp Ser Glu Leu Asn Glu Asp Gln Gln Asp Glu Leu Ile 1325 1330 1335 Arg Ser Ile Glu Leu Ala Leu Thr Ser Gln Asp Ile Ala Glu Val 1340 1345 1350 Thr Gln Thr Leu Leu Asn Leu Ala Glu Phe Met Glu His Ser Asp 1355 1360 1365 Lys Gly Pro Leu Pro Leu Arg Asp Asp Asn Gly Ile Val Leu Leu 1370 1375 1380 Gly Glu Arg Ala Ala Lys Cys Arg Ala Tyr Ala Lys Ala Leu His 1385 1390 1395 Tyr Lys Glu Leu Glu Phe Gln Lys Gly Pro Thr Pro Ala Ile Leu 1400 1405 1410 Glu Ser Leu Ile Ser Ile Asn Asn Lys Leu Gln Gln Pro Glu Ala 1415 1420 1425 Ala Ala Gly Val Leu Glu Tyr Ala Met Lys His Phe Gly Glu Leu 1430 1435 1440 Glu Ile Gln Ala Thr Trp Tyr Glu Lys Leu His Glu Trp Glu Asp 1445 1450 1455 Ala Leu Val Ala Tyr Asp Lys Lys Met Asp Thr Asn Lys Asp Asp 1460 1465 1470 Pro Glu Leu Met Leu Gly Arg Met Arg Cys Leu Glu Ala Leu Gly 1475 1480 1485 Glu Trp Gly Gln Leu His Gln Gln Cys Cys Glu Lys Trp Thr Leu 1490 1495 1500 Val Asn Asp Glu Thr Gln Ala Lys Met Ala Arg Met Ala Ala Ala 1505 1510 1515 Ala Ala Trp Gly Leu Gly Gln Trp Asp Ser Met Glu Glu Tyr Thr 1520 1525 1530 Cys Met Ile Pro Arg Asp Thr His Asp Gly Ala Phe Tyr Arg Ala 1535 1540 1545 Val Leu Ala Leu His Gln Asp Leu Phe Ser Leu Ala Gln Gln Cys 1550 1555 1560 Ile Asp Lys Ala Arg Asp Leu Leu Asp Ala Glu Leu Thr Ala Met 1565 1570 1575 Ala Gly Glu Ser Tyr Ser Arg Ala Tyr Gly Ala Met Val Ser Cys 1580 1585 1590 His Met Leu Ser Glu Leu Glu Glu Val Ile Gln Tyr Lys Leu Val 1595 1600 1605 Pro Glu Arg Arg Glu Ile Ile Arg Gln Ile Trp Trp Glu Arg Leu 1610 1615 1620 Gln Gly Cys Gln Arg Ile Val Glu Asp Trp Gln Lys Ile Leu Met 1625 1630 1635 Val Arg Ser Leu Val Val Ser Pro His Glu Asp Met Arg Thr Trp 1640 1645 1650 Leu Lys Tyr Ala Ser Leu Cys Gly Lys Ser Gly Arg Leu Ala Leu 1655 1660 1665 Ala His Lys Thr Leu Val Leu Leu Leu Gly Val Asp Pro Ser Arg 1670 1675 1680 Gln Leu Asp His Pro Leu Pro Thr Val His Pro Gln Val Thr Tyr 1685 1690 1695 Ala Tyr Met Lys Asn Met Trp Lys Ser Ala Arg Lys Ile Asp Ala 1700 1705 1710 Phe Gln His Met Gln His Phe Val Gln Thr Met Gln Gln Gln Ala 1715 1720 1725 Gln His Ala Ile Ala Thr Glu Asp Gln Gln His Lys Gln Glu Leu 1730 1735 1740 His Lys Leu Met Ala Arg Cys Phe Leu Lys Leu Gly Glu Trp Gln 1745 1750 1755 Leu Asn Leu Gln Gly Ile Asn Glu Ser Thr Ile Pro Lys Val Leu 1760 1765 1770 Gln Tyr Tyr Ser Ala Ala Thr Glu His Asp Arg Ser Trp Tyr Lys 1775 1780 1785 Ala Trp His Ala Trp Ala Val Met Asn Phe Glu Ala Val Leu His 1790 1795 1800 Tyr Lys His Gln Asn Gln Ala Arg Asp Glu Lys Lys Lys Leu Arg 1805 1810 1815 His Ala Ser Gly Ala Asn Ile Thr Asn Ala Thr Thr Ala Ala Thr 1820 1825 1830 Thr Ala Ala Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ser Thr Glu Gly Ser Asn 1835 1840 1845 Ser Glu Ser Glu Ala Glu Ser Thr Glu Asn Ser Pro Thr Pro Ser 1850 1855 1860 Pro Leu Gln Lys Lys Val Thr Glu Asp Leu Ser Lys Thr Leu Leu 1865 1870 1875 Met Tyr Thr Val Pro Ala Val Gln Gly Phe Phe Arg Ser Ile Ser 1880 1885 1890 Leu Ser Arg Gly Asn Asn Leu Gln Asp Thr Leu Arg Val Leu Thr 1895 1900 1905 Leu Trp Phe Asp Tyr Gly His Trp Pro Asp Val Asn Glu Ala Leu 1910 1915 1920 Val Glu Gly Val Lys Ala Ile Gln Ile Asp Thr Trp Leu Gln Val 1925 1930 1935 Ile Pro Gln Leu Ile Ala Arg Ile Asp Thr Pro Arg Pro Leu Val 1940 1945 1950 Gly Arg Leu Ile His Gln Leu Leu Thr Asp Ile Gly Arg Tyr His 1955 1960 1965 Pro Gln Ala Leu Ile Tyr Pro Leu Thr Val Ala Ser Lys Ser Thr 1970 1975 1980 Thr Thr Ala Arg His Asn Ala Ala Asn Lys Ile Leu Lys Asn Met 1985 1990 1995 Cys Glu His Ser Asn Thr Leu Val Gln Gln Ala Met Met Val Ser 2000 2005 2010 Glu Glu Leu Ile Arg Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His 2015 2020 2025 Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn 2030 2035 2040 Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met 2045 2050 2055 Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala 2060 2065 2070 Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr 2075 2080 2085 Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu 2090 2095 2100 Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Lys Gln Leu Pro Gln Leu 2105 2110 2115 Thr Ser Leu Glu Leu Gln Tyr Val Ser Pro Lys Leu Leu Met Cys 2120 2125 2130 Arg Asp Leu Glu Leu Ala Val Pro Gly Thr Tyr Asp Pro Asn Gln 2135 2140 2145 Pro Ile Ile Arg Ile Gln Ser Ile Ala Pro Ser Leu Gln Val Ile 2150 2155 2160 Thr Ser Lys Gln Arg Pro Arg Lys Leu Thr Leu Met Gly Ser Asn 2165 2170 2175 Gly His Glu Phe Val Phe Leu Leu Lys Gly His Glu Asp Leu Arg 2180 2185 2190 Gln Asp Glu Arg Val Met Gln Leu Phe Gly Leu Val Asn Thr Leu 2195 2200 2205 Leu Ala Asn Asp Pro Thr Ser Leu Arg Lys Asn Leu Ser Ile Gln 2210 2215 2220 Arg Tyr Ala Val Ile Pro Leu Ser Thr Asn Ser Gly Leu Ile Gly 2225 2230 2235 Trp Val Pro His Cys Asp Thr Leu His Ala Leu Ile Arg Asp Tyr 2240 2245 2250 Arg Glu Lys Lys Lys Ile Leu Leu Asn Ile Glu His Arg Ile Met 2255 2260 2265 Leu Arg Met Ala Pro Asp Tyr Asp His Leu Thr Leu Met Gln Lys 2270 2275 2280 Val Glu Val Phe Glu His Ala Val Asn Asn Thr Ala Gly Asp Asp 2285 2290 2295 Leu Ala Lys Leu Leu Trp Leu Lys Ser Pro Ser Ser Glu Val Trp 2300 2305 2310 Phe Asp Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Arg Ser Leu Ala Val Met Ser 2315 2320 2325 Met Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Gly Asp Arg His Pro Ser Asn 2330 2335 2340 Leu Met Leu Asp Arg Leu Ser Gly Lys Ile Leu His Ile Asp Phe 2345 2350 2355 Gly Asp Cys Phe Glu Val Ala Met Thr Arg Glu Lys Phe Pro Glu 2360 2365 2370 Lys Ile Pro Phe Arg Leu Thr Arg Met Leu Thr Asn Ala Met Glu 2375 2380 2385 Val Thr Gly Leu Asp Gly Asn Tyr Arg Ile Thr Cys His Thr Val 2390 2395 2400 Met Glu Val Leu Arg Glu His Lys Asp Ser Val Met Ala Val Leu 2405 2410 2415 Glu Ala Phe Val Tyr Asp Pro Leu Leu Asn Trp Arg Leu Met Asp 2420 2425 2430 Thr Asn Thr Lys Gly Asn Lys Arg Ser Arg Thr Arg Thr Asp Ser 2435 2440 2445 Tyr Ser Ala Gly Gln Ser Val Glu Ile Leu Asp Gly Val Glu Leu 2450 2455 2460 Gly Glu Pro Ala His Lys Lys Thr Gly Thr Thr Val Pro Glu Ser 2465 2470 2475 Ile His Ser Phe Ile Gly Asp Gly Leu Val Lys Pro Glu Ala Leu 2480 2485 2490 Asn Lys Lys Ala Ile Gln Ile Ile Asn Arg Val Arg Asp Lys Leu 2495 2500 2505 Thr Gly Arg Asp Phe Ser His Asp Asp Thr Leu Asp Val Pro Thr 2510 2515 2520 Gln Val Glu Leu Leu Ile Lys Gln Ala Thr Ser His Glu Asn Leu 2525 2530 2535 Cys Gln Cys Tyr Ile Gly Trp Cys Pro Phe Trp 2540 2545 <210> 141 <211> 4190 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> GNA11 <400> 141 aggttgtccg gcgctgtcgc tcggttgcgg cggctgcggt tggcggtggc tgcggcggcg 60 gcgcgggctg agtgcggccg cgcgggagtc cgcggctggc gcggcccgag cggggacccg 120 gcggctcgcc aggcggcggc cgaggcgggg cgggccggcc cggggccgag ggccggtggc 180 cgaggccgga gggccgcggc gggcggcggc cgaggcggct ccggccaggg ccgggccggg 240 ggccgggggg cggcggcggg caggcggccg cgtcggccgg ggccgggacg atgactctgg 300 agtccatgat ggcgtgttgc ctgagcgatg aggtgaagga gtccaagcgg atcaacgccg 360 agatcgagaa gcagctgcgg cgggacaagc gcgacgcccg gcgcgagctc aagctgctgc 420 tgctcggcac gggcgagagc gggaagagca cgttcatcaa gcagatgcgc atcatccacg 480 gcgccggcta ctcggaggag gacaagcgcg gcttcaccaa gctcgtctac cagaacatct 540 tcaccgccat gcaggccatg atccgggcca tggagacgct caagatcctc tacaagtacg 600 agcagaacaa ggccaatgcg ctcctgatcc gggaggtgga cgtggagaag gtgaccacct 660 tcgagcatca gtacgtcagt gccatcaaga ccctgtggga ggacccgggc atccaggaat 720 gctacgaccg caggcgcgag taccagctct ccgactctgc caagtactac ctgaccgacg 780 ttgaccgcat cgccaccttg ggctacctgc ccacccagca ggacgtgctg cgggtccgcg 840 tgcccaccac cggcatcatc gagtaccctt tcgacctgga gaacatcatc ttccggatgg 900 tggatgtggg gggccagcgg tcggagcgga ggaagtggat ccactgcttt gagaacgtga 960 catccatcat gtttctcgtc gccctcagcg aatacgacca agtcctggtg gagtcggaca 1020 acgagaaccg gatggaggag agcaaagccc tgttccggac catcatcacc tacccctggt 1080 tccagaactc ctccgtcatc ctcttcctca acaagaagga cctgctggag gacaagatcc 1140 tgtactcgca cctggtggac tacttccccg agttcgatgg tccccagcgg gacgcccagg 1200 cggcgcggga gttcatcctg aagatgttcg tggacctgaa ccccgacagc gacaagatca 1260 tctactcaca cttcacgtgt gccaccgaca cggagaacat ccgcttcgtg ttcgcggccg 1320 tgaaggacac catcctgcag ctcaacctca aggagtacaa cctggtctga gcgcccaggc 1380 ccagggagac gggatggaga cacggggcag gaccttcctt ccacggagcc tgcggctgcc 1440 gggcgggtgg cgctgccgag tccgggccgg ggcctctgcc cgcgggagga gatttttttt 1500 tttcatattt ttaacaaatg gtttttattt cacagttatc aggggatgta catctctccc 1560 tccgtacact tcgcgcacct tctcaccttt tgtcaacggc aaaggcagcc tttttctggc 1620 cttgacttat ggctcgcttt tttctaaaaa aaaaaaaaaa agaaagaaag aaaaaaagca 1680 acgaaacata aaacacacaa gcgccccgtg cccccagtga ctctgggcct cacagagccc 1740 ccgccagcca gcatggggcc ccgccctgca gccagtcacg cgcccccaca ccgcagcccc 1800 ccgtggctgt ccttccaacc ccacgtgctt tttctttctc ctgcccgctt cttttcttca 1860 tcacaaaagg cgtggagact cggagacgga cgtttttccc cttttttaag ttattgacgc 1920 ccagcgcgcc tcgcctcttc acccatcaac gctgtgcttt gcccactgga ctcctgaaga 1980 gggggtgggg ggctccctcg gtcgcccacc ctgggaagtg cctaaccttt tattttattt 2040 tatttttttg aggaaaaaga acgcctgact cacaggttga agaaacaccc tgggccctct 2100 ctcatggccg ggttccccgt ccctctgcag aggctgggaa gggtccccgg gctggagcca 2160 cgggggcttc tctgggctgt gcctccgggg ccaacactgg ctgcttgggg ctgcccgggg 2220 actccagagg gctgcacggc caccctgccc tggctagagc gcaccccacc ggagcccacg 2280 tgggctgggc ggctggaggg atggtccccc ggtgacactg ggagaaaggc cacttggatg 2340 ggggcgtttc tgttttgttc cgctttgtga tgtcaccaat ttggaaacag cgagggtggg 2400 tggggacttt tacagaatat tctcaggtgt gtacccgaga ggcagagaga gggacgtggc 2460 cggcagctct gtgcgtggcc ttgtcccaag cacttgcgcc cgcccccgag cgccgccccc 2520 ggggagcggg aagccagcac tcgcactttg gccaggggcg cgtggaaggt ggtggcaggc 2580 accggcctgg gcagcttcca ggcctggctg gccacgacca cggcccgagg gggagcccgc 2640 caggccacgc cgcactgagc cacagccccg ggggccgcct cccggggccc cttgaggcac 2700 tgaggcaccg agactggttc tccccgagag actcggaagg tggggaacga ggggactgtg 2760 tttggggagg tggctttttc gtctgctgtt gactgaacac tacagcgccc tgtggttccg 2820 ggcttcgcac agctgtccca gggatggatc gcctgtgctg ccttcgcccg ccgccacacc 2880 gggaccctgc acggctgctt ctggcctcga cagatgacaa aagaaacagc cccaaaatac 2940 gaccactcca accagcagtt cccgcctgcc tgcccgccac tgtcaggcct gccctggcct 3000 cctcgtccgc agggctgtct gctggcttct gggggcagaa gagcggggag ccccgtggaa 3060 gggtcagggg agaccaggtc agggcagcta catttctggt gatcagcccc atggggagac 3120 ggggctggcg ggataccccc cccccggctt ccccacacca cttctgtctc acccggaagc 3180 gtcctttttt tgtgccaggt gtctacctaa gagggttggt gccagaagcc ccccatggcg 3240 agtgctgggg cccggcggtg ccctggggga gcagatgggg ccacccctgg cagggccgct 3300 acaacctttt ccagcagcgg agccctctgg ggggcctgtg cttgtggcat ctctgagggc 3360 ctagattgca caaggtgacc tggccgtggc ctgagggtgg agtcgcccag cacgcaggcc 3420 ggggcgctgc ggggctaagt attaggcctt cccagggagg gggcgtgcca agcatcccag 3480 agccgggctg ggaccgccaa aacgtcgtgg cctggatcct ctgggtctga gtgcctgatc 3540 ccctgccccc caaaaaagca gaggtaggtg ttgcaggccc agggcagggg tgcctgcccc 3600 aggagagtcc caggcagtgg ttctcgtgcc agtggcaccc aggggcaagg acagccaacc 3660 cccacccttg ccacgtgtgg ggccacgtgg gcatgtgggg tgtgtgtttt taccttggtg 3720 aatctcacct gccaacgatt tctcgtgagt gccgaccacc ttctccgacc atgttacgcc 3780 cgggcggcag cagcccccgg ccactgcaaa cccatgccct gggtcccccg gctcccccag 3840 ggaggcatcc ccgtgccaat gtcccccagt ggtggcagca gatcctgtgg ccggcctggc 3900 ggacgggacc cagtgatact tgtatattac acagtcctga tttcagacaa tttcaacctt 3960 aatctattta aaaaagaata ttctatacaa gctgttttta agccttttac catttgaaat 4020 gcatgtgttg tgcgcgttgg ggatgggagg aggggctgag gagcggctca gtgtcacctc 4080 ccacagccac cggccctgac ccttaatcca gacaccgatg gaagtcgact tttcatatct 4140 ttctcctgaa atgaactctg ttttaaattg gaataaattt tgttcctaaa 4190 <210> 142 <211> 359 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> GNA11, wild type <400> 142 Met Thr Leu Glu Ser Met Met Ala Cys Cys Leu Ser Asp Glu Val Lys 1 5 10 15 Glu Ser Lys Arg Ile Asn Ala Glu Ile Glu Lys Gln Leu Arg Arg Asp 20 25 30 Lys Arg Asp Ala Arg Arg Glu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Gly Thr Gly 35 40 45 Glu Ser Gly Lys Ser Thr Phe Ile Lys Gln Met Arg Ile Ile His Gly 50 55 60 Ala Gly Tyr Ser Glu Glu Asp Lys Arg Gly Phe Thr Lys Leu Val Tyr 65 70 75 80 Gln Asn Ile Phe Thr Ala Met Gln Ala Met Ile Arg Ala Met Glu Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Leu Tyr Lys Tyr Glu Gln Asn Lys Ala Asn Ala Leu Leu 100 105 110 Ile Arg Glu Val Asp Val Glu Lys Val Thr Thr Phe Glu His Gln Tyr 115 120 125 Val Ser Ala Ile Lys Thr Leu Trp Glu Asp Pro Gly Ile Gln Glu Cys 130 135 140 Tyr Asp Arg Arg Arg Glu Tyr Gln Leu Ser Asp Ser Ala Lys Tyr Tyr 145 150 155 160 Leu Thr Asp Val Asp Arg Ile Ala Thr Leu Gly Tyr Leu Pro Thr Gln 165 170 175 Gln Asp Val Leu Arg Val Arg Val Pro Thr Thr Gly Ile Ile Glu Tyr 180 185 190 Pro Phe Asp Leu Glu Asn Ile Ile Phe Arg Met Val Asp Val Gly Gly 195 200 205 Gln Arg Ser Glu Arg Arg Lys Trp Ile His Cys Phe Glu Asn Val Thr 210 215 220 Ser Ile Met Phe Leu Val Ala Leu Ser Glu Tyr Asp Gln Val Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Asp Asn Glu Asn Arg Met Glu Glu Ser Lys Ala Leu Phe Arg 245 250 255 Thr Ile Ile Thr Tyr Pro Trp Phe Gln Asn Ser Ser Val Ile Leu Phe 260 265 270 Leu Asn Lys Lys Asp Leu Leu Glu Asp Lys Ile Leu Tyr Ser His Leu 275 280 285 Val Asp Tyr Phe Pro Glu Phe Asp Gly Pro Gln Arg Asp Ala Gln Ala 290 295 300 Ala Arg Glu Phe Ile Leu Lys Met Phe Val Asp Leu Asn Pro Asp Ser 305 310 315 320 Asp Lys Ile Ile Tyr Ser His Phe Thr Cys Ala Thr Asp Thr Glu Asn 325 330 335 Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn 340 345 350 Leu Lys Glu Tyr Asn Leu Val 355 <210> 143 <211> 6870 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> GNAQ, wild type <400> 143 gttgccgggc gggacgggaa ccgggtctgc gcgcgagccg ggcggtgggc gcggacaggg 60 ccgagggcgc ccgggagccg tgtcaggcgg cggcgaggag cgggcgcgcc gggcgcgggg 120 agccgtcggc ggccgctcgc tgcggggaca ccccggtgaa tgagctctcg ccgccaggcg 180 cacggcgtag gggagcctcg caggcggcgg cggcggcggc ggctcggggg gcgaggcggg 240 ccgcctgttc ccggggaagg aggcgcgggc gtctgagcga ggccgggcgc ggcggccttc 300 tctcacgcgc cccccgagcc agcgcccgcc tcccgcgccc gcctctcttc tcccgtcggc 360 ccagactatc cgctcccacc gcgcccccgg cccacctggt ggccccggcc ctggccgccg 420 cccccgcggc ggttcccgga gctcgtcccg gacgcgcgcc cgggcggcgg gggctcggcg 480 gccaccgctg cctcggggga gcgagggcgg gagggtgtgt gtgcgcgctg tgagcagggg 540 gtgccggcgg ggctgcagcg gaggcacttt ggaagaatga ctctggagtc catcatggcg 600 tgctgcctga gcgaggaggc caaggaagcc cggcggatca acgacgagat cgagcggcag 660 ctccgcaggg acaagcggga cgcccgccgg gagctcaagc tgctgctgct cgggacagga 720 gagagtggca agagtacgtt tatcaagcag atgagaatca tccatgggtc aggatactct 780 gatgaagata aaaggggctt caccaagctg gtgtatcaga acatcttcac ggccatgcag 840 gccatgatca gagccatgga cacactcaag atcccataca agtatgagca caataaggct 900 catgcacaat tagttcgaga agttgatgtg gagaaggtgt ctgcttttga gaatccatat 960 gtagatgcaa taaagagttt atggaatgat cctggaatcc aggaatgcta tgatagacga 1020 cgagaatatc aattatctga ctctaccaaa tactatctta atgacttgga ccgcgtagct 1080 gaccctgcct acctgcctac gcaacaagat gtgcttagag ttcgagtccc caccacaggg 1140 atcatcgaat acccctttga cttacaaagt gtcattttca gaatggtcga tgtagggggc 1200 caaaggtcag agagaagaaa atggatacac tgctttgaaa atgtcacctc tatcatgttt 1260 ctagtagcgc ttagtgaata tgatcaagtt ctcgtggagt cagacaatga gaaccgaatg 1320 gaggaaagca aggctctctt tagaacaatt atcacatacc cctggttcca gaactcctcg 1380 gttattctgt tcttaaacaa gaaagatctt ctagaggaga aaatcatgta ttcccatcta 1440 gtcgactact tcccagaata tgatggaccc cagagagatg cccaggcagc ccgagaattc 1500 attctgaaga tgttcgtgga cctgaaccca gacagtgaca aaattatcta ctcccacttc 1560 acgtgcgcca cagacaccga gaatatccgc tttgtctttg ctgccgtcaa ggacaccatc 1620 ctccagttga acctgaagga gtacaatctg gtctaattgt gcctcctaga cacccgccct 1680 gcccttccct ggtgggctat tgaagataca caagagggac tgtatttctg tggaaaacaa 1740 tttgcataat actaatttat tgccgtcctg gactctgtgt gagcgtgtcc acagagtttg 1800 tagtaaatat tatgatttta tttaaactat tcagaggaaa aacagaggat gctgaagtac 1860 agtcccagca catttcctct ctatcttttt tttaggcaaa accttgtgac tcagtgtatt 1920 ttaaattctc agtcatgcac tcacaaagat aagacttgtt tctttctgtc tctctctctt 1980 tttcttttct atggagcaaa acaaagctga tttccctttt ttcttccccc gctaattcat 2040 acctccctcc tgatgttttt cccaggttac aatggccttt atcctagttc cattcttggt 2100 caagtttttc tctcaaatga tacagtcagg acacatcgtt cgatttaagc catcatcagc 2160 ttaatttaag tttgtagttt ttgctgaagg attatatgta ttaatactta cggttttaaa 2220 tgtgttgctt tggatacaca catagtttct tttttaatag aatatactgt cttgtctcac 2280 tttggactgg gacagtggat gcccatctaa aagttaagtg tcatttcttt tagatgttta 2340 ccttcagcca tagcttgatt gctcagagaa atatgcagaa ggcaggatca aagacacaca 2400 ggagtccttt cttttgaaat gccacgtgcc attgtctttc ctcccttctt tgcttctttt 2460 tcttaccctc tctttcaatt gcagatgcca aaaaagatgc caacagacac tacattaccc 2520 taatggctgc tacccagaac ctttttatag gttgttctta atttttttgt tgttgttgtt 2580 caagcttttc ctttcttttt tttcttggtg tttgggccac gattttaaaa tgacttttat 2640 tatgggtatg tgttgccaaa gctggctttt tgtcaaataa aatgaatacg aacttaaaaa 2700 ataaaagctg gtatcttaaa atgtaagaga gtaagactgt gaagcctaaa atgactggct 2760 gagaatgaac cagaaatgcc atttgccaaa cagttgtaac tagaaatttg attctcacgg 2820 tccattcttt tctttgtcct taagatgaca ttgttagtgt tcacgtccca tgttcagtgt 2880 ccaaaccggc aatgtaaaaa gtatcctgtg tggtttaaca ggaaatctgt ttatgtctct 2940 ttatttgaaa ccagttttac tctcagtggt tctttaagtt caatgaagtc tgccaggaac 3000 attggttggt agtattattc cgacaccttt aatttccaaa atctgaagtt cctgctagtt 3060 taccaccttc atgatcttct tgaactggta actgattagg ttgaacttat ggaagatttg 3120 tggacttaac tcaaaagtaa cctctcagtg ttctatagaa catgtatttg tgtaactgaa 3180 cctaccagga gaaatgtttg gaattctata tgtgcaattt ttcaacaaat gcaaaaaaaa 3240 tacagcacat gtattgacaa gcttctgtca agcagcttga gttgaaattt gatttaagaa 3300 aataaatcat gattgttcaa agctgctggg acgttagaat taggccatga tactggtctc 3360 attttaacta cagtggtatt tggcactagt gtaaacttcc atataaatca ctcttttgga 3420 acaacaaagg gggagggaga aaaatcacgg cctgttaaat gagtaccaaa gccgcccaac 3480 agtaatgaga tgttctcatc cttgattctc ccagcctcaa acaacacagc ttactttttt 3540 tttcccttgc tcagaaagta cctgtaattt aacaaacaga ctgcctgtag gtatagtgca 3600 attacaaatg ctctaatcat tgtacataca tctctcttga tattgcagca tccatactgg 3660 ctttgtaatc attaattttt tggcagattg aatgtgctgt attgatatgt atctatgtaa 3720 ttgtattgta tgtctatagc taattcacgt tttgaataat gttattttat ttactttttt 3780 aagagaggag aatgtaaatt tgtcagttta tttctgacta gggatatttt ctttccattt 3840 agaaaagaag aaaaaaaaaa aaccttactg tcatacagag cggtactagc gtcgtgctgt 3900 ataaaatcat ttgcacattc ctgagtagag gtatactgat tataagaccc aaaggtaatt 3960 tcatagcaaa atacataaaa tcagtcggag cttttataca aacatggaaa ccaactttgt 4020 agaacttttg ccatttgatc taggattgga atatgagctt ttatacaatt catattctta 4080 tttggcaaat gcacagttta gtattacctc tctgatggcc tttactagaa aggcagtttt 4140 agaagctatt gtgatccact aaggaaatgt tttaacagct agagaccact gcttgcctga 4200 aagggcgttc ttaaatttgg tgcagcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aattaaacaa 4260 caacatttga aggcctacag tgtgtataga gaaaacctca tcacaagatc ataagtgtta 4320 cagttttagg gaatcaagat attctattta atagagctat agtaaatgta gtcaattaaa 4380 cctgatctca aagcttgaag aagctgagca aaacagggaa agattgttat atttgtcttt 4440 atgaaattgg gatggaattt gctatgcaga attgaggttt gtggcttcgc tgttcctgta 4500 gggtgcatga caagatccct tctcttgaga aaggaaaaaa ttgatcaccc tagcagcagt 4560 gatgcataga aacctaattt tagccacacc agtcaatcga agctaaagga ttttcttttt 4620 tgtttcttcg gggttttatt gaaggggcta ggggcgggac gggattcttt tcagttttgt 4680 ataaaaacaa agtttactca tgctttatat tatattgtga ttgcaagcgt tataagcgtg 4740 tgccactggc ctcctattgt tgatgcttag gtaatggagg cctgtggtga gttttatggt 4800 gacttgggca tgtcttattc aaaaacaaaa acataaaaca cagaaacctt tcttcagcat 4860 accaaggcaa gcagccattt catgactcac ttaacacatt gcagtgtacc agtttacaga 4920 tgatttttcc ctttttgcgt gacatggcag ttctaacccc cagagaattc cttatttgta 4980 aattggaagt ttctactatg ccttacagag cttaaattca gaagtttgtg cctcatatct 5040 gaaacaaagg gaaataacac acccattcaa aagtaaataa atctcctaga agtttttgtt 5100 tttaacattt ccatataaag agctctgttg aatgtcatga atagactgga aaaaaaaatt 5160 ttaagaacct gcatatgttg tttactagca gatgacaact acaaaaggaa tctgaagaac 5220 acgtaaaact tgtatttttt tttttttggt agattaacta gcaggcctat tttaaaaagg 5280 taattcagct aaagggcaat ttactttttt gtacttcaga ctatcttgat tgtcaaagtg 5340 tacgaactgt aattttaaaa tttatactgc cacatgattg taaattttag ttgtcttaag 5400 ttaggaattg gtgaaaagct atttatgctg gatttgggtc aaaatgactt atttgcaaaa 5460 aaataaataa tgggaagaaa gggctgtata atgaaatact gcaagactca catattggtt 5520 ggaaatttcc ctcaaatcac ctaccgatta cccttgattt ccctttgttt tcagtttctc 5580 aaaacgaatg aaatgaaata tagcagaatg ttaacccata taaaaataaa gtgtacccaa 5640 atattgtaat gtatattgct gctcttcttc aaattaaata agggtttaaa accacttaat 5700 tggtaatcaa catctcaatt gatacaaata aggtgtgctt ggtatacatt aatattttct 5760 tccaaagata tatctttggt tagaaacaca aaaaaataaa actagtaata ttgtatgttt 5820 atctatctct acatatttcc agcatatgta gcgttaatag atctgtcctg gtaactgtgt 5880 ctttgggatt tcattttggt tccatcaaat taggaaaaga aatggcttag ttgtatatga 5940 ttagctagag atttttggag ccagacacct gctgtttagt agataactta gtacagaccc 6000 taaacttgtc atttgttttt ctcacagaat agccatttcc tgctgtcttc ccaatgatca 6060 ctgccctttc aataacactc ttgcctctag aatcatatgt tcaaagtatg aatacacacc 6120 tagcacatag taggtgctca aatattaatt tcctccttgc cttccttatc taccctgtgt 6180 cctccatttc cccgtatgat tccaacccaa tatagcaaat gacatttaca tgttatgaaa 6240 acatctattg ggtaaaatca gatcttggat aaagaaattc tgacttttat ataagctttt 6300 ggtagacaga aaaaacagaa aggtattcgt tggtagaaca tttttaagtt caggaaagaa 6360 agctggaata atactacgta actttgtcca ggttactttg actgaaacac gtttttggtg 6420 gatttctttt cctcaaagaa ctctctaaat gcaactcctt gctggattcc tcacccatca 6480 tcctgttgga aacccttact agacctatgt atttagggag ttttgtcaga aaacattttt 6540 aacttgcagt atttaaaaga atatttactg ttcctaaaat gtcattcaaa tgcatgtact 6600 gtctattgtt tggggatggg aactagtttt gcaaaaaaca cctaatgttg tataataatg 6660 ccccaatgat cttgctggtt aaaaatacag tatttttggc cataattttg tactatagta 6720 ttcttcattg ttgagttttg cttccattaa agttgcccga gcccctctca gaatgttttg 6780 tattagtagg agtactgaaa tacatctttc cttccttaac acaccttgtg catattgcat 6840 tttccaaaat aaacaagttt aatggtttca 6870 <210> 144 <211> 359 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> GNAQ <400> 144 Met Thr Leu Glu Ser Ile Met Ala Cys Cys Leu Ser Glu Glu Ala Lys 1 5 10 15 Glu Ala Arg Arg Ile Asn Asp Glu Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Asp 20 25 30 Lys Arg Asp Ala Arg Arg Glu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Gly Thr Gly 35 40 45 Glu Ser Gly Lys Ser Thr Phe Ile Lys Gln Met Arg Ile Ile His Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Ser Asp Glu Asp Lys Arg Gly Phe Thr Lys Leu Val Tyr 65 70 75 80 Gln Asn Ile Phe Thr Ala Met Gln Ala Met Ile Arg Ala Met Asp Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Pro Tyr Lys Tyr Glu His Asn Lys Ala His Ala Gln Leu 100 105 110 Val Arg Glu Val Asp Val Glu Lys Val Ser Ala Phe Glu Asn Pro Tyr 115 120 125 Val Asp Ala Ile Lys Ser Leu Trp Asn Asp Pro Gly Ile Gln Glu Cys 130 135 140 Tyr Asp Arg Arg Arg Glu Tyr Gln Leu Ser Asp Ser Thr Lys Tyr Tyr 145 150 155 160 Leu Asn Asp Leu Asp Arg Val Ala Asp Pro Ala Tyr Leu Pro Thr Gln 165 170 175 Gln Asp Val Leu Arg Val Arg Val Pro Thr Thr Gly Ile Ile Glu Tyr 180 185 190 Pro Phe Asp Leu Gln Ser Val Ile Phe Arg Met Val Asp Val Gly Gly 195 200 205 Gln Arg Ser Glu Arg Arg Lys Trp Ile His Cys Phe Glu Asn Val Thr 210 215 220 Ser Ile Met Phe Leu Val Ala Leu Ser Glu Tyr Asp Gln Val Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Asp Asn Glu Asn Arg Met Glu Glu Ser Lys Ala Leu Phe Arg 245 250 255 Thr Ile Ile Thr Tyr Pro Trp Phe Gln Asn Ser Ser Val Ile Leu Phe 260 265 270 Leu Asn Lys Lys Asp Leu Leu Glu Glu Lys Ile Met Tyr Ser His Leu 275 280 285 Val Asp Tyr Phe Pro Glu Tyr Asp Gly Pro Gln Arg Asp Ala Gln Ala 290 295 300 Ala Arg Glu Phe Ile Leu Lys Met Phe Val Asp Leu Asn Pro Asp Ser 305 310 315 320 Asp Lys Ile Ile Tyr Ser His Phe Thr Cys Ala Thr Asp Thr Glu Asn 325 330 335 Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn 340 345 350 Leu Lys Glu Tyr Asn Leu Val 355 <210> 145 <211> 5430 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> KRAS, wild type <400> 145 ctaggcggcg gccgcggcgg cggaggcagc agcggcggcg gcagtggcgg cggcgaaggt 60 ggcggcggct cggccagtac tcccggcccc cgccatttcg gactgggagc gagcgcggcg 120 caggcactga aggcggcggc ggggccagag gctcagcggc tcccaggtgc gggagagagg 180 cctgctgaaa atgactgaat ataaacttgt ggtagttgga gctggtggcg taggcaagag 240 tgccttgacg atacagctaa ttcagaatca ttttgtggac gaatatgatc caacaataga 300 ggattcctac aggaagcaag tagtaattga tggagaaacc tgtctcttgg atattctcga 360 cacagcaggt caagaggagt acagtgcaat gagggaccag tacatgagga ctggggaggg 420 ctttctttgt gtatttgcca taaataatac taaatcattt gaagatattc accattatag 480 agaacaaatt aaaagagtta aggactctga agatgtacct atggtcctag taggaaataa 540 atgtgatttg ccttctagaa cagtagacac aaaacaggct caggacttag caagaagtta 600 tggaattcct tttattgaaa catcagcaaa gacaagacag agagtggagg atgcttttta 660 tacattggtg agagagatcc gacaatacag attgaaaaaa atcagcaaag aagaaaagac 720 tcctggctgt gtgaaaatta aaaaatgcat tataatgtaa tctgggtgtt gatgatgcct 780 tctatacatt agttcgagaa attcgaaaac ataaagaaaa gatgagcaaa gatggtaaaa 840 agaagaaaaa gaagtcaaag acaaagtgtg taattatgta aatacaattt gtactttttt 900 cttaaggcat actagtacaa gtggtaattt ttgtacatta cactaaatta ttagcatttg 960 ttttagcatt acctaatttt tttcctgctc catgcagact gttagctttt accttaaatg 1020 cttattttaa aatgacagtg gaagtttttt tttcctctaa gtgccagtat tcccagagtt 1080 ttggtttttg aactagcaat gcctgtgaaa aagaaactga atacctaaga tttctgtctt 1140 ggggcttttg gtgcatgcag ttgattactt cttatttttc ttaccaattg tgaatgttgg 1200 tgtgaaacaa attaatgaag cttttgaatc atccctattc tgtgttttat ctagtcacat 1260 aaatggatta attactaatt tcagttgaga ccttctaatt ggtttttact gaaacattga 1320 gggaacacaa atttatgggc ttcctgatga tgattcttct aggcatcatg tcctatagtt 1380 tgtcatccct gatgaatgta aagttacact gttcacaaag gttttgtctc ctttccactg 1440 ctattagtca tggtcactct ccccaaaata ttatattttt tctataaaaa gaaaaaaatg 1500 gaaaaaaatt acaaggcaat ggaaactatt ataaggccat ttccttttca cattagataa 1560 attactataa agactcctaa tagcttttcc tgttaaggca gacccagtat gaaatgggga 1620 ttattatagc aaccattttg gggctatatt tacatgctac taaattttta taataattga 1680 aaagatttta acaagtataa aaaattctca taggaattaa atgtagtctc cctgtgtcag 1740 actgctcttt catagtataa ctttaaatct tttcttcaac ttgagtcttt gaagatagtt 1800 ttaattctgc ttgtgacatt aaaagattat ttgggccagt tatagcttat taggtgttga 1860 agagaccaag gttgcaaggc caggccctgt gtgaaccttt gagctttcat agagagtttc 1920 acagcatgga ctgtgtcccc acggtcatcc agtgttgtca tgcattggtt agtcaaaatg 1980 gggagggact agggcagttt ggatagctca acaagataca atctcactct gtggtggtcc 2040 tgctgacaaa tcaagagcat tgcttttgtt tcttaagaaa acaaactctt ttttaaaaat 2100 tacttttaaa tattaactca aaagttgaga ttttggggtg gtggtgtgcc aagacattaa 2160 tttttttttt aaacaatgaa gtgaaaaagt tttacaatct ctaggtttgg ctagttctct 2220 taacactggt taaattaaca ttgcataaac acttttcaag tctgatccat atttaataat 2280 gctttaaaat aaaaataaaa acaatccttt tgataaattt aaaatgttac ttattttaaa 2340 ataaatgaag tgagatggca tggtgaggtg aaagtatcac tggactagga agaaggtgac 2400 ttaggttcta gataggtgtc ttttaggact ctgattttga ggacatcact tactatccat 2460 ttcttcatgt taaaagaagt catctcaaac tcttagtttt ttttttttac aactatgtaa 2520 tttatattcc atttacataa ggatacactt atttgtcaag ctcagcacaa tctgtaaatt 2580 tttaacctat gttacaccat cttcagtgcc agtcttgggc aaaattgtgc aagaggtgaa 2640 gtttatattt gaatatccat tctcgtttta ggactcttct tccatattag tgtcatcttg 2700 cctccctacc ttccacatgc cccatgactt gatgcagttt taatacttgt aattccccta 2760 accataagat ttactgctgc tgtggatatc tccatgaagt tttcccactg agtcacatca 2820 gaaatgccct acatcttatt tcctcagggc tcaagagaat ctgacagata ccataaaggg 2880 atttgaccta atcactaatt ttcaggtggt ggctgatgct ttgaacatct ctttgctgcc 2940 caatccatta gcgacagtag gatttttcaa acctggtatg aatagacaga accctatcca 3000 gtggaaggag aatttaataa agatagtgct gaaagaattc cttaggtaat ctataactag 3060 gactactcct ggtaacagta atacattcca ttgttttagt aaccagaaat cttcatgcaa 3120 tgaaaaatac tttaattcat gaagcttact tttttttttt ggtgtcagag tctcgctctt 3180 gtcacccagg ctggaatgca gtggcgccat ctcagctcac tgcaacctcc atctcccagg 3240 ttcaagcgat tctcgtgcct cggcctcctg agtagctggg attacaggcg tgtgccacta 3300 cactcaacta atttttgtat ttttaggaga gacggggttt caccctgttg gccaggctgg 3360 tctcgaactc ctgacctcaa gtgattcacc caccttggcc tcataaacct gttttgcaga 3420 actcatttat tcagcaaata tttattgagt gcctaccaga tgccagtcac cacacaaggc 3480 actgggtata tggtatcccc aaacaagaga cataatcccg gtccttaggt agtgctagtg 3540 tggtctgtaa tatcttacta aggcctttgg tatacgaccc agagataaca cgatgcgtat 3600 tttagttttg caaagaaggg gtttggtctc tgtgccagct ctataattgt tttgctacga 3660 ttccactgaa actcttcgat caagctactt tatgtaaatc acttcattgt tttaaaggaa 3720 taaacttgat tatattgttt ttttatttgg cataactgtg attcttttag gacaattact 3780 gtacacatta aggtgtatgt cagatattca tattgaccca aatgtgtaat attccagttt 3840 tctctgcata agtaattaaa atatacttaa aaattaatag ttttatctgg gtacaaataa 3900 acaggtgcct gaactagttc acagacaagg aaacttctat gtaaaaatca ctatgatttc 3960 tgaattgcta tgtgaaacta cagatctttg gaacactgtt taggtagggt gttaagactt 4020 acacagtacc tcgtttctac acagagaaag aaatggccat acttcaggaa ctgcagtgct 4080 tatgagggga tatttaggcc tcttgaattt ttgatgtaga tgggcatttt tttaaggtag 4140 tggttaatta cctttatgtg aactttgaat ggtttaacaa aagatttgtt tttgtagaga 4200 ttttaaaggg ggagaattct agaaataaat gttacctaat tattacagcc ttaaagacaa 4260 aaatccttgt tgaagttttt ttaaaaaaag ctaaattaca tagacttagg cattaacatg 4320 tttgtggaag aatatagcag acgtatattg tatcatttga gtgaatgttc ccaagtaggc 4380 attctaggct ctatttaact gagtcacact gcataggaat ttagaaccta acttttatag 4440 gttatcaaaa ctgttgtcac cattgcacaa ttttgtccta atatatacat agaaactttg 4500 tggggcatgt taagttacag tttgcacaag ttcatctcat ttgtattcca ttgatttttt 4560 ttttcttcta aacatttttt cttcaaacag tatataactt tttttagggg attttttttt 4620 agacagcaaa aactatctga agatttccat ttgtcaaaaa gtaatgattt cttgataatt 4680 gtgtagtaat gttttttaga acccagcagt taccttaaag ctgaatttat atttagtaac 4740 ttctgtgtta atactggata gcatgaattc tgcattgaga aactgaatag ctgtcataaa 4800 atgaaacttt ctttctaaag aaagatactc acatgagttc ttgaagaata gtcataacta 4860 gattaagatc tgtgttttag tttaatagtt tgaagtgcct gtttgggata atgataggta 4920 atttagatga atttagggga aaaaaaagtt atctgcagat atgttgaggg cccatctctc 4980 cccccacacc cccacagagc taactgggtt acagtgtttt atccgaaagt ttccaattcc 5040 actgtcttgt gttttcatgt tgaaaatact tttgcatttt tcctttgagt gccaatttct 5100 tactagtact atttcttaat gtaacatgtt tacctggaat gtattttaac tatttttgta 5160 tagtgtaaac tgaaacatgc acattttgta cattgtgctt tcttttgtgg gacatatgca 5220 gtgtgatcca gttgttttcc atcatttggt tgcgctgacc taggaatgtt ggtcatatca 5280 aacattaaaa atgaccactc ttttaattga aattaacttt taaatgttta taggagtatg 5340 tgctgtgaag tgatctaaaa tttgtaatat ttttgtcatg aactgtacta ctcctaatta 5400 ttgtaatgta ataaaaatag ttacagtgac 5430 <210> 146 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> KRAS, wild type <400> 146 Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr 20 25 30 Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly 35 40 45 Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr 50 55 60 Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys 65 70 75 80 Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr 85 90 95 Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val 100 105 110 Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys 115 120 125 Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr 130 135 140 Ser Ala Lys Thr Arg Gln Arg Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Leu Lys Lys Ile Ser Lys Glu Glu Lys 165 170 175 Thr Pro Gly Cys Val Lys Ile Lys Lys Cys Ile Ile Met 180 185 <210> 147 <211> 4326 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> NRAS, wild type <400> 147 ggggccggaa gtgccgctcc ttggtggggg ctgttcatgg cggttccggg gtctccaaca 60 tttttcccgg ctgtggtcct aaatctgtcc aaagcagagg cagtggagct tgaggttctt 120 gctggtgtga aatgactgag tacaaactgg tggtggttgg agcaggtggt gttgggaaaa 180 gcgcactgac aatccagcta atccagaacc actttgtaga tgaatatgat cccaccatag 240 aggattctta cagaaaacaa gtggttatag atggtgaaac ctgtttgttg gacatactgg 300 atacagctgg acaagaagag tacagtgcca tgagagacca atacatgagg acaggcgaag 360 gcttcctctg tgtatttgcc atcaataata gcaagtcatt tgcggatatt aacctctaca 420 gggagcagat taagcgagta aaagactcgg atgatgtacc tatggtgcta gtgggaaaca 480 agtgtgattt gccaacaagg acagttgata caaaacaagc ccacgaactg gccaagagtt 540 acgggattcc attcattgaa acctcagcca agaccagaca gggtgttgaa gatgcttttt 600 acacactggt aagagaaata cgccagtacc gaatgaaaaa actcaacagc agtgatgatg 660 ggactcaggg ttgtatggga ttgccatgtg tggtgatgta acaagatact tttaaagttt 720 tgtcagaaaa gagccacttt caagctgcac tgacaccctg gtcctgactt ccctggagga 780 gaagtattcc tgttgctgtc ttcagtctca cagagaagct cctgctactt ccccagctct 840 cagtagttta gtacaataat ctctatttga gaagttctca gaataactac ctcctcactt 900 ggctgtctga ccagagaatg cacctcttgt tactccctgt tatttttctg ccctgggttc 960 ttccacagca caaacacacc tctgccaccc caggtttttc atctgaaaag cagttcatgt 1020 ctgaaacaga gaaccaaacc gcaaacgtga aattctattg aaaacagtgt cttgagctct 1080 aaagtagcaa ctgctggtga tttttttttt ctttttactg ttgaacttag aactatgcta 1140 atttttggag aaatgtcata aattactgtt ttgccaagaa tatagttatt attgctgttt 1200 ggtttgttta taatgttatc ggctctattc tctaaactgg catctgctct agattcataa 1260 atacaaaaat gaatactgaa ttttgagtct atcctagtct tcacaacttt gacgtaatta 1320 aatccaactt tcacagtgaa gtgccttttt cctagaagtg gtttgtagac ttcctttata 1380 atatttcagt ggaatagatg tctcaaaaat ccttatgcat gaaatgaatg tctgagatac 1440 gtctgtgact tatctaccat tgaaggaaag ctatatctat ttgagagcag atgccatttt 1500 gtacatgtat gaaattggtt ttccagaggc ctgttttggg gctttcccag gagaaagatg 1560 aaactgaaag cacatgaata atttcactta ataattttta cctaatctcc acttttttca 1620 taggttacta cctatacaat gtatgtaatt tgtttcccct agcttactga taaacctaat 1680 attcaatgaa cttccatttg tattcaaatt tgtgtcatac cagaaagctc tacatttgca 1740 gatgttcaaa tattgtaaaa ctttggtgca ttgttattta atagctgtga tcagtgattt 1800 tcaaacctca aatatagtat attaacaaat tacattttca ctgtatatca tggtatctta 1860 atgatgtata taattgcctt caatcccctt ctcaccccac cctctacagc ttcccccaca 1920 gcaatagggg cttgattatt tcagttgagt aaagcatggt gctaatggac cagggtcaca 1980 gtttcaaaac ttgaacaatc cagttagcat cacagagaaa gaaattcttc tgcatttgct 2040 cattgcacca gtaactccag ctagtaattt tgctaggtag ctgcagttag ccctgcaagg 2100 aaagaagagg tcagttagca caaacccttt accatgactg gaaaactcag tatcacgtat 2160 ttaaacattt ttttttcttt tagccatgta gaaactctaa attaagccaa tattctcatt 2220 tgagaatgag gatgtctcag ctgagaaacg ttttaaattc tctttattca taatgttctt 2280 tgaagggttt aaaacaagat gttgataaat ctaagctgat gagtttgctc aaaacaggaa 2340 gttgaaattg ttgagacagg aatggaaaat ataattaatt gatacctatg aggatttgga 2400 ggcttggcat tttaatttgc agataatacc ctggtaattc tcatgaaaaa tagacttgga 2460 taacttttga taaaagacta attccaaaat ggccactttg ttcctgtctt taatatctaa 2520 atacttactg aggtcctcca tcttctatat tatgaatttt catttattaa gcaaatgtca 2580 tattaccttg aaattcagaa gagaagaaac atatactgtg tccagagtat aatgaacctg 2640 cagagttgtg cttcttactg ctaattctgg gagctttcac agtactgtca tcatttgtaa 2700 atggaaattc tgcttttctg tttctgctcc ttctggagca gtgctactct gtaattttcc 2760 tgaggcttat cacctcagtc atttcttttt taaatgtctg tgactggcag tgattctttt 2820 tcttaaaaat ctattaaatt tgatgtcaaa ttagggagaa agatagttac tcatcttggg 2880 ctcttgtgcc aatagccctt gtatgtatgt acttagagtt ttccaagtat gttctaagca 2940 cagaagtttc taaatggggc caaaattcag acttgagtat gttctttgaa taccttaaga 3000 agttacaatt agccgggcat ggtggcccgt gcctgtagtc ccagctactt gagaggctga 3060 ggcaggagaa tcacttcaac ccaggaggtg gaggttacag tgagcagaga tcgtgccact 3120 gcactccagc ctgggtgaca agagagactt gtctccaaaa aaaaagttac acctaggtgt 3180 gaattttggc acaaaggagt gacaaactta tagttaaaag ctgaataact tcagtgtggt 3240 ataaaacgtg gtttttaggc tatgtttgtg attgctgaaa agaattctag tttacctcaa 3300 aatccttctc tttccccaaa ttaagtgcct ggccagctgt cataaattac atattccttt 3360 tggttttttt aaaggttaca tgttcaagag tgaaaataag atgttctgtc tgaaggctac 3420 catgccggat ctgtaaatga acctgttaaa tgctgtattt gctccaacgg cttactatag 3480 aatgttactt aatacaatat catacttatt acaattttta ctataggagt gtaataggta 3540 aaattaatct ctattttagt gggcccatgt ttagtctttc accatccttt aaactgctgt 3600 gaattttttt gtcatgactt gaaagcaagg atagagaaac actttagaga tatgtggggt 3660 ttttttacca ttccagagct tgtgagcata atcatatttg ctttatattt atagtcatga 3720 actcctaagt tggcagctac aaccaagaac caaaaaatgg tgcgttctgc ttcttgtaat 3780 tcatctctgc taataaatta taagaagcaa ggaaaattag ggaaaatatt ttatttggat 3840 ggtttctata aacaagggac tataattctt gtacattatt tttcatcttt gctgtttctt 3900 tgagcagtct aatgtgccac acaattatct aaggtatttg ttttctataa gaattgtttt 3960 aaaagtattc ttgttaccag agtagttgta ttatatttca aaacgtaaga tgatttttaa 4020 aagcctgagt actgacctaa gatggaattg tatgaactct gctctggagg gaggggagga 4080 tgtccgtgga agttgtaaga cttttatttt tttgtgccat caaatatagg taaaaataat 4140 tgtgcaattc tgctgtttaa acaggaacta ttggcctcct tggccctaaa tggaagggcc 4200 gatattttaa gttgattatt ttattgtaaa ttaatccaac ctagttcttt ttaatttggt 4260 tgaatgtttt ttcttgttaa atgatgttta aaaaataaaa actggaagtt cttggcttag 4320 tcataa 4326 <210> 148 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> NRAS, widl type <400> 148 Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr 20 25 30 Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly 35 40 45 Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr 50 55 60 Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys 65 70 75 80 Val Phe Ala Ile Asn Asn Ser Lys Ser Phe Ala Asp Ile Asn Leu Tyr 85 90 95 Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Asp Asp Val Pro Met Val 100 105 110 Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Thr Arg Thr Val Asp Thr Lys 115 120 125 Gln Ala His Glu Leu Ala Lys Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr 130 135 140 Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Met Lys Lys Leu Asn Ser Ser Asp Asp 165 170 175 Gly Thr Gln Gly Cys Met Gly Leu Pro Cys Val Val Met 180 185 <210> 149 <211> 2393 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> IDH1, wild type <400> 149 gggctgagga ggcggggcct gggaggggac aaagccggga agaggaaaag ctcggaccta 60 ccctgtggtc ccgggtttct gcagagtcta cttcagaagc ggaggcactg ggagtccggt 120 ttgggattgc caggctgtgg ttgtgagtct gagcttgtga gcggctgtgg cgccccaact 180 cttcgccagc atatcatccc ggcaggcgat aaactacatt cagttgagtc tgcaagactg 240 ggaggaactg gggtgataag aaatctattc actgtcaagg tttattgaag tcaaaatgtc 300 caaaaaaatc agtggcggtt ctgtggtaga gatgcaagga gatgaaatga cacgaatcat 360 ttgggaattg attaaagaga aactcatttt tccctacgtg gaattggatc tacatagcta 420 tgatttaggc atagagaatc gtgatgccac caacgaccaa gtcaccaagg atgctgcaga 480 agctataaag aagcataatg ttggcgtcaa atgtgccact atcactcctg atgagaagag 540 ggttgaggag ttcaagttga aacaaatgtg gaaatcacca aatggcacca tacgaaatat 600 tctgggtggc acggtcttca gagaagccat tatctgcaaa aatatccccc ggcttgtgag 660 tggatgggta aaacctatca tcataggtcg tcatgcttat ggggatcaat acagagcaac 720 tgattttgtt gttcctgggc ctggaaaagt agagataacc tacacaccaa gtgacggaac 780 ccaaaaggtg acatacctgg tacataactt tgaagaaggt ggtggtgttg ccatggggat 840 gtataatcaa gataagtcaa ttgaagattt tgcacacagt tccttccaaa tggctctgtc 900 taagggttgg cctttgtatc tgagcaccaa aaacactatt ctgaagaaat atgatgggcg 960 ttttaaagac atctttcagg agatatatga caagcagtac aagtcccagt ttgaagctca 1020 aaagatctgg tatgagcata ggctcatcga cgacatggtg gcccaagcta tgaaatcaga 1080 gggaggcttc atctgggcct gtaaaaacta tgatggtgac gtgcagtcgg actctgtggc 1140 ccaagggtat ggctctctcg gcatgatgac cagcgtgctg gtttgtccag atggcaagac 1200 agtagaagca gaggctgccc acgggactgt aacccgtcac taccgcatgt accagaaagg 1260 acaggagacg tccaccaatc ccattgcttc catttttgcc tggaccagag ggttagccca 1320 cagagcaaag cttgataaca ataaagagct tgccttcttt gcaaatgctt tggaagaagt 1380 ctctattgag acaattgagg ctggcttcat gaccaaggac ttggctgctt gcattaaagg 1440 tttacccaat gtgcaacgtt ctgactactt gaatacattt gagttcatgg ataaacttgg 1500 agaaaacttg aagatcaaac tagctcaggc caaactttaa gttcatacct gagctaagaa 1560 ggataattgt cttttggtaa ctaggtctac aggtttacat ttttctgtgt tacactcaag 1620 gataaaggca aaatcaattt tgtaatttgt ttagaagcca gagtttatct tttctataag 1680 tttacagcct ttttcttata tatacagtta ttgccacctt tgtgaacatg gcaagggact 1740 tttttacaat ttttatttta ttttctagta ccagcctagg aattcggtta gtactcattt 1800 gtattcactg tcactttttc tcatgttcta attataaatg accaaaatca agattgctca 1860 aaagggtaaa tgatagccac agtattgctc cctaaaatat gcataaagta gaaattcact 1920 gccttcccct cctgtccatg accttgggca cagggaagtt ctggtgtcat agatatcccg 1980 ttttgtgagg tagagctgtg cattaaactt gcacatgact ggaacgaagt atgagtgcaa 2040 ctcaaatgtg ttgaagatac tgcagtcatt tttgtaaaga ccttgctgaa tgtttccaat 2100 agactaaata ctgtttaggc cgcaggagag tttggaatcc ggaataaata ctacctggag 2160 gtttgtcctc tccatttttc tctttctcct cctggcctgg cctgaatatt atactactct 2220 aaatagcata tttcatccaa gtgcaataat gtaagctgaa tcttttttgg acttctgctg 2280 gcctgtttta tttcttttat ataaatgtga tttctcagaa attgatatta aacactatct 2340 tatcttctcc tgaactgttg attttaatta aaattaagtg ctaattacca tta 2393 <210> 150 <211> 414 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> IDH1, wild type <400> 150 Met Ser Lys Lys Ile Ser Gly Gly Ser Val Val Glu Met Gln Gly Asp 1 5 10 15 Glu Met Thr Arg Ile Ile Trp Glu Leu Ile Lys Glu Lys Leu Ile Phe 20 25 30 Pro Tyr Val Glu Leu Asp Leu His Ser Tyr Asp Leu Gly Ile Glu Asn 35 40 45 Arg Asp Ala Thr Asn Asp Gln Val Thr Lys Asp Ala Ala Glu Ala Ile 50 55 60 Lys Lys His Asn Val Gly Val Lys Cys Ala Thr Ile Thr Pro Asp Glu 65 70 75 80 Lys Arg Val Glu Glu Phe Lys Leu Lys Gln Met Trp Lys Ser Pro Asn 85 90 95 Gly Thr Ile Arg Asn Ile Leu Gly Gly Thr Val Phe Arg Glu Ala Ile 100 105 110 Ile Cys Lys Asn Ile Pro Arg Leu Val Ser Gly Trp Val Lys Pro Ile 115 120 125 Ile Ile Gly Arg His Ala Tyr Gly Asp Gln Tyr Arg Ala Thr Asp Phe 130 135 140 Val Val Pro Gly Pro Gly Lys Val Glu Ile Thr Tyr Thr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Gly Thr Gln Lys Val Thr Tyr Leu Val His Asn Phe Glu Glu Gly Gly 165 170 175 Gly Val Ala Met Gly Met Tyr Asn Gln Asp Lys Ser Ile Glu Asp Phe 180 185 190 Ala His Ser Ser Phe Gln Met Ala Leu Ser Lys Gly Trp Pro Leu Tyr 195 200 205 Leu Ser Thr Lys Asn Thr Ile Leu Lys Lys Tyr Asp Gly Arg Phe Lys 210 215 220 Asp Ile Phe Gln Glu Ile Tyr Asp Lys Gln Tyr Lys Ser Gln Phe Glu 225 230 235 240 Ala Gln Lys Ile Trp Tyr Glu His Arg Leu Ile Asp Asp Met Val Ala 245 250 255 Gln Ala Met Lys Ser Glu Gly Gly Phe Ile Trp Ala Cys Lys Asn Tyr 260 265 270 Asp Gly Asp Val Gln Ser Asp Ser Val Ala Gln Gly Tyr Gly Ser Leu 275 280 285 Gly Met Met Thr Ser Val Leu Val Cys Pro Asp Gly Lys Thr Val Glu 290 295 300 Ala Glu Ala Ala His Gly Thr Val Thr Arg His Tyr Arg Met Tyr Gln 305 310 315 320 Lys Gly Gln Glu Thr Ser Thr Asn Pro Ile Ala Ser Ile Phe Ala Trp 325 330 335 Thr Arg Gly Leu Ala His Arg Ala Lys Leu Asp Asn Asn Lys Glu Leu 340 345 350 Ala Phe Phe Ala Asn Ala Leu Glu Glu Val Ser Ile Glu Thr Ile Glu 355 360 365 Ala Gly Phe Met Thr Lys Asp Leu Ala Ala Cys Ile Lys Gly Leu Pro 370 375 380 Asn Val Gln Arg Ser Asp Tyr Leu Asn Thr Phe Glu Phe Met Asp Lys 385 390 395 400 Leu Gly Glu Asn Leu Lys Ile Lys Leu Ala Gln Ala Lys Leu 405 410 <210> 151 <211> 3745 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 70 <400> 151 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgccgcc accatgggga gcagcaagag caagcccaag gaccccagcc agcgcggggg 120 acatttatat gaagaatata cccgcacatc ccaggaaatc caaatgaaaa ggacagctat 180 tgaagcattt aatgaaacca taaaaatatt tgaagaacag tgccagaccc aagagcggta 240 cagcaaagaa tacatagaaa agtttaaacg tgaaggcaat gagaaagaaa tacaaaggat 300 tatgcataat tatgataagt tgaagtctcg aatcagtgaa attattgaca gtagaagaag 360 attggaagaa gacttgaaga agcaggcagc tgagtatcga gaaattgaca aacgtatgaa 420 cagcattaaa ggcggcatca gcggcggcgg cggcggcatc gtagaatgtt tactaccaaa 480 tggaatgata gtgactttag aatgcctccg tgaggctaca ttaataacca taaagcatga 540 actatttaaa gaagcaagaa aataccccct ccatcaactt cttcaagatg aatcttctta 600 cattttcgta agtgttactc aagaagcaga aagggaagaa ttttttgatg aaacaagacg 660 actttgtgac cttcggcttt ttcaaccctt tttaaaagta attgaaccag taggcaaccg 720 tgaagaaaag atcctcaatc gagaaattgg ttttgctatc ggcatgccag tgtgtgaatt 780 tgatatggtt aaagatccag aagtacagga cttccgaaga aatattctga acgtttgtaa 840 agaagctgtg gatcttaggg acctcaattc acctcatagt agagcaatgt atgtctatcc 900 tccaaatgta gaatcttcac cagaattgcc aaagcacata tataataaat tagataaagg 960 gcaaataata gtggtgatct gggtaatagt ttctccaaat aatgacaagc agaagtatac 1020 tctgaaaatc aaccatgact gtgtaccaga acaagtaatt gctgaagcaa tcaggaaaaa 1080 aactcgaagt atgttgctat cctctgaaca actaaaactc tgtgttttag aatatcaggg 1140 caagtatatt ttaaaagtgt gtggatgtga tgaatacttc ctagaaaaat atcctctgag 1200 tcagtataag tatataagaa gctgtataat gcttgggagg atgcccaatt tgatgttgat 1260 ggctaaagaa agcctttatt ctcaactgcc aatggactgt tttacaatgc catcttattc 1320 cagacgcatt tccacagcta caccatatat gaatggagaa acatctacaa aatccctttg 1380 ggttataaat agtgcactca gaataaaaat tctttgtgca acctacgtga atgtaaatat 1440 tcgagacatt gataagatct atgttcgaac aggtatctac catggaggag aacccttatg 1500 tgacaatgtg aacactcaaa gagtaccttg ttccaatccc aggtggaatg aatggctgaa 1560 ttatgatata tacattcctg atcttcctcg tgctgctcga ctttgccttt ccatttgctc 1620 tgttaaaggc cgaaagggtg ctaaagagga acactgtcca ttggcatggg gaaatataaa 1680 cttgtttgat tacacagaca ctctagtatc tggaaaaatg gctttgaatc tttggccagt 1740 acctcatgga ttagaagatt tgctgaaccc tattggtgtt actggatcaa atccaaataa 1800 agaaactcca tgcttagagt tggagtttga ctggttcagc agtgtggtaa agttcccaga 1860 tatgtcagtg attgaagagc atgccaattg gtctgtatcc cgagaagcag gatttagcta 1920 ttcccacgca ggactgagta acagactagc tagagacaat gaattaaggg aaaatgacaa 1980 agaacagctc aaagcaattt ctacacgaga tcctctctct gaaatcactg agcaggagaa 2040 agattttcta tggagtcaca gacactattg tgtaactatc cccgaaattc tacccaaatt 2100 gcttctgtct gttaaatgga attctagaga tgaagtagcc cagatgtatt gcttggtaaa 2160 agattggcct ccaatcaaac ctgaacaggc tatggaactt ctggactgta attacccaga 2220 tcctatggtt cgaggttttg ctgttcggtg cttggaaaaa tatttaacag atgacaaact 2280 ttctcagtat ttaattcagc tagtacaggt cctaaaatat gaacaatatt tggataactt 2340 gcttgtgaga tttttactga agaaagcatt gactaatcaa aggattgggc actttttctt 2400 ttggcattta aaatctgaga tgcacaataa aacagttagc cagaggtttg gcctgctttt 2460 ggagtcctat tgtcgtgcat gtgggatgta tttgaagcac ctgaataggc aagtcgaggc 2520 aatggaaaag ctcattaact taactgacat tctcaaacag gagaagaagg atgaaacaca 2580 aaaggtacag atgaagtttt tagttgagca aatgaggcga ccagatttca tggatgctct 2640 acagggcttt ctgtctcctc taaaccctgc tcatcaacta ggaaacctca ggcttgaaga 2700 gtgtcgaatt atgtcctctg caaaaaggcc actgtggttg aattgggaga acccagacat 2760 catgtcagag ttactgtttc agaacaatga gatcatcttt aaaaatgggg atgatttacg 2820 gcaagatatg ctaacacttc aaattattcg tattatggaa aatatctggc aaaatcaagg 2880 tcttgatctt cgaatgttac cttatggttg tctgtcaatc ggtgactgtg tgggacttat 2940 tgaggtggtg cgaaattctc acactattat gcaaattcag tgcaaaggcg gcttgaaagg 3000 tgcactgcag ttcaacagcc acacactaca tcagtggctc aaagacaaga acaaaggaga 3060 aatatatgat gcagccattg acctgtttac acgttcatgt gctggatact gtgtagctac 3120 cttcattttg ggaattggag atcgtcacaa tagtaacatc atggtgaaag acgatggaca 3180 actgtttcat atagattttg gacacttttt ggatcacaag aagaaaaaat ttggttataa 3240 acgagaacgt gtgccatttg ttttgacaca ggatttctta atagtgatta gtaaaggagc 3300 ccaagaatgc acaaagacaa gagaatttga gaggtttcag gagatgtgtt acaaggctta 3360 tctagctatt cgacagcatg ccaatctctt cataaatctt ttctcaatga tgcttggctc 3420 tggaatgcca gaactacaat cttttgatga cattgcatac attcgaaaga ccctagcctt 3480 agataaaact gagcaagagg ctttggagta tttcatgaaa caaatgaatg atgcacatca 3540 tggtggctgg acaacaaaaa tggattggat cttccacaca attaaacagc atgcattgaa 3600 ctgaggctgc tgcagctgca tgggtgcctg ctgctgcctg ccttggcctg atggccaggc 3660 cagagtgctg ccagtcctct gcatgttctg ctcttgtgcc cttctgagcc cacaataaag 3720 gctgagctct tatcttgcaa aaggc 3745 <210> 152 <211> 1333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN77 <400> 152 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgggga gcagcaagag caagcccaag gaccccagcc agcgcggggg 120 acatttgcaa ttgaagaggg caaatgtgca aaggagaatg gcccaagcct tccaaaacgt 180 gagggaagaa ccagctgtgc agttcaactc agggactctg gccctaaaca ggaaggtcaa 240 aaacaaccca gatcctacaa tttatccagt gcttgactgg aatgacatca aatttcaaga 300 tgtgattggg gagggcaatt ttggccaagt tcttaaggcg cgcatcaaga aggatgggtt 360 atggatggat gctgccatca aaagaatgaa agaatatgcc tccaaagatg atcacaggga 420 ctttgcagga gaactggaag ttctttgtaa acttggacac catccaaaca tcatcaatct 480 cttaggagca tgtgaacatc gaggctactt gtacctggcc attgagtacg cgccccatgg 540 aaaccttctg gacttcttcc gcaagagccg tgtgctggag acggacccag catttgccat 600 tgccaatagc accgcgtcca cactgtcctc ccagcagctc cttcacttcg ctgccgacgt 660 ggcccggggc atggactact tgagccaaaa acagtttatc cacagggatc tggctgccag 720 aaacatttta gttggtgaaa actatgtggc aaaaatagca gattttggat tgtcccgagg 780 tcaagaggtg tatgtgaaaa agacaatggg aaggctccca gtgcgctgga tggccatcga 840 gtcactgaat tacagtgtgt acacaaccaa cagtgatgta tggtcctatg gtgtgttact 900 atgggagatt gttagcttag gaggcacacc ctactgcggg atgacttgtg cagaactcta 960 cgagaagctg ccccagggct acagactgga gaagcccctg aactgtgatg atgaggtgta 1020 tgatctaatg agacaatgct ggcgggagaa gccttatgag aggccatcat ttgcccagat 1080 attggtgtcc ttaaacagaa tgttagagga gcgaaagacc tacgtgaata ccacgcttta 1140 tgagaagttt acttatgcag gaattgactg ttctgctgaa gaagcggcct agggctgctg 1200 cagctgcatg ggtgcctgct gctgcctgcc ttggcctgat ggccaggcca gagtgctgcc 1260 agtcctctgc atgttctgct cttgtgccct tctgagccca caataaaggc tgagctctta 1320 tcttgcaaaa ggc 1333 <210> 153 <211> 1579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN78 <400> 153 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgacctggg cccccagatg ctgagggagc tgcaggagac 180 caacgccgcc ctgcaggacg tgagggagct gctgaggcag caggtgaggg agatcacctt 240 cctgaagaac accgtgatgg agtgcgacgc ctgcggcggc ggcatcagcg gcggcggcgg 300 cggcatcata gccatccttg gctctgctgg aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt 360 tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca 420 aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt caactcaggg actctggccc taaacaggaa 480 ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt 540 tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga 600 tgggttatgg atggatgctg ccatcaaaag aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca 660 cagggacttt gcaggagaac tggaagttct ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat 720 caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc 780 ccatggaaac cttctggact tcttccgcaa gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt 840 tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc 900 cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc 960 tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc 1020 ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc 1080 catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt 1140 gttactatgg gagattgtta gcttaggagg cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga 1200 actctacgag aagctgcccc agggctacag actggagaag cccctgaact gtgatgatga 1260 ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc 1320 ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt agaggagcga aagacctacg tgaataccac 1380 gctttatgag aagtttactt atgcaggaat tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg 1440 ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt 1500 gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag 1560 ctcttatctt gcaaaaggc 1579 <210> 154 <211> 1333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 82 <400> 154 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgggga gcagcaagag caagcccaag gaccccagcc agcgcggggg 120 acatttgcaa ttgaagaggg caaatgtgca aaggagaatg gcccaagcct tccaaaacgt 180 gagggaagaa ccagctgtgc agttcaactc agggactctg gccctaaaca ggaaggtcaa 240 aaacaaccca gatcctacaa tttatccagt gcttgactgg aatgacatca aatttcaaga 300 tgtgattggg gagggcaatt ttggccaagt tcttaaggcg cgcatcaaga aggatgggtt 360 acggatggat gctgccatca aaagaatgaa agaatatgcc tccaaagatg atcacaggga 420 ctttgcagga gaactggaag ttctttgtaa acttggacac catccaaaca tcatcaatct 480 cttaggagca tgtgaacatc gaggctactt gtacctggcc attgagtacg cgccccatgg 540 aaaccttctg gacttccttc gcaagagccg tgtgctggag acggacccag catttgccat 600 tgccaatagc accgcgtcca cactgtcctc ccagcagctc cttcacttcg ctgccgacgt 660 ggcccggggc atggactact tgagccaaaa acagtttatc cacagggatc tggctgccag 720 aaacatttta gttggtgaaa actatgtggc aaaaatagca gattttggat tgtcccgagg 780 tcaagaggtg tatgtgaaaa agacaatggg aaggctccca gtgcgctgga tggccatcga 840 gtcactgaat tacagtgtgt acacaaccaa cagtgatgta tggtcctatg gtgtgttact 900 atgggagatt gttagcttag gaggcacacc ctactgcggg atgacttgtg cagaactcta 960 cgagaagctg ccccagggct acagactgga gaagcccctg aactgtgatg atgaggtgta 1020 tgatctaatg agacaatgct ggcgggagaa gccttatgag aggccatcat ttgcccagat 1080 attggtgtcc ttaaacagaa tgttagagga gcgaaagacc tacgtgaata ccacgcttta 1140 tgagaagttt acttatgcag gaattgactg ttctgctgaa gaagcggcct agggctgctg 1200 cagctgcatg ggtgcctgct gctgcctgcc ttggcctgat ggccaggcca gagtgctgcc 1260 agtcctctgc atgttctgct cttgtgccct tctgagccca caataaaggc tgagctctta 1320 tcttgcaaaa ggc 1333 <210> 155 <211> 1333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 83 <400> 155 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgggga gcagcaagag caagcccaag gaccccagcc agcgcggggg 120 acatttgcaa ttgaagaggg caaatgtgca aaggagaatg gcccaagcct tccaaaacgt 180 gagggaagaa ccagctgtgc agttcaactc agggactctg gccctaaaca ggaaggtcaa 240 aaacaaccca gatcctacaa tttatccagt gcttgactgg aatgacatca aatttcaaga 300 tgtgattggg gagggcaatt ttggccaagt tcttaaggcg cgcatcaaga aggatgggtt 360 acggatggat gctgccatca aaagaatgaa agaatatgcc tccaaagatg atcacaggga 420 ctttgcagga gaactggaag ttctttgtaa acttggacac catccaaaca tcatcaatct 480 cttaggagca tgtgaacatc gaggcttctt gtacctggcc attgagtacg cgccccatgg 540 aaaccttctg gacttccttc tgaagagccg tgtgctggag acggacccag catttgccat 600 tgccaatagc accgcgtcca cactgtcctc ccagcagctc cttcacttcg ctgccgacgt 660 ggcccggggc atggactact tgagccaaaa acagtttatc cacagggatc tggctgccag 720 aaacatttta gttggtgaaa actatgtggc aaaaatagca gattttggat tgtcccgagg 780 tcaagaggtg tatgtgaaaa agacaatggg aaggctccca gtgcgctgga tggccatcga 840 gtcactgaat tacagtgtgt acacaaccaa cagtgatgta tggtcctatg gtgtgttact 900 atgggagatt gttagcttag gaggcacacc ctactgcggg atgacttgtg cagaactcta 960 cgagaagctg ccccagggct acagactgga gaagcccctg aactgtgatg atgaggtgta 1020 tgatctaatg agacaatgct ggcgggagaa gccttatgag aggccatcat ttgcccagat 1080 attggtgtcc ttaaacagaa tgttagagga gcgaaagacc tacgtgaata acccccttta 1140 tgagaagttt acttatgcag gaattgactg ttctgctgaa gaagcggcct agggctgctg 1200 cagctgcatg ggtgcctgct gctgcctgcc ttggcctgat ggccaggcca gagtgctgcc 1260 agtcctctgc atgttctgct cttgtgccct tctgagccca caataaaggc tgagctctta 1320 tcttgcaaaa ggc 1333 <210> 156 <211> 1579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 84 <400> 156 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgacctggg cccccagatg ctgagggagc tgcaggagac 180 caacgccgcc ctgcaggacg tgagggagct gctgaggcag caggtgaggg agatcacctt 240 cctgaagaac accgtgatgg agtgcgacgc ctgcggcggc ggcatcagcg gcggcggcgg 300 cggcatcata gccatccttg gctctgctgg aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt 360 tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca 420 aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt caactcaggg actctggccc taaacaggaa 480 ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt 540 tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga 600 tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca 660 cagggacttt gcaggagaac tggaagttct ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat 720 caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc 780 ccatggaaac cttctggact tccttcgcaa gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt 840 tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc 900 cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc 960 tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc 1020 ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc 1080 catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt 1140 gttactatgg gagattgtta gcttaggagg cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga 1200 actctacgag aagctgcccc agggctacag actggagaag cccctgaact gtgatgatga 1260 ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc 1320 ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt agaggagcga aagacctacg tgaataccac 1380 gctttatgag aagtttactt atgcaggaat tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg 1440 ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt 1500 gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag 1560 ctcttatctt gcaaaaggc 1579 <210> 157 <211> 1579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 85 <400> 157 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgacctggg cccccagatg ctgagggagc tgcaggagac 180 caacgccgcc ctgcaggacg tgagggagct gctgaggcag caggtgaggg agatcacctt 240 cctgaagaac accgtgatgg agtgcgacgc ctgcggcggc ggcatcagcg gcggcggcgg 300 cggcatcata gccatccttg gctctgctgg aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt 360 tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca 420 aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt caactcaggg actctggccc taaacaggaa 480 ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt 540 tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga 600 tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca 660 cagggacttt gcaggagaac tggaagttct ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat 720 caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg cttcttgtac ctggccattg agtacgcgcc 780 ccatggaaac cttctggact tccttctgaa gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt 840 tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc 900 cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc 960 tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc 1020 ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc 1080 catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt 1140 gttactatgg gagattgtta gcttaggagg cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga 1200 actctacgag aagctgcccc agggctacag actggagaag cccctgaact gtgatgatga 1260 ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc 1320 ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt agaggagcga aagacctacg tgaataaccc 1380 cctttatgag aagtttactt atgcaggaat tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg 1440 ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt 1500 gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag 1560 ctcttatctt gcaaaaggc 1579 <210> 158 <211> 1414 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 86 <400> 158 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctatagccat ccttggctct gctggaatga cctgcctgac 180 tgtgctgttg gcctttctga tcatattgca attgaagagg gcaaatgtgc aaaggagaat 240 ggcccaagcc ttccaaaacg tgagggaaga accagctgtg cagttcaact cagggactct 300 ggccctaaac aggaaggtca aaaacaaccc agatcctaca atttatccag tgcttgactg 360 gaatgacatc aaatttcaag atgtgattgg ggagggcaat tttggccaag ttcttaaggc 420 gcgcatcaag aaggatgggt tatggatgga tgctgccatc aaaagaatga aagaatatgc 480 ctccaaagat gatcacaggg actttgcagg agaactggaa gttctttgta aacttggaca 540 ccatccaaac atcatcaatc tcttaggagc atgtgaacat cgaggctact tgtacctggc 600 cattgagtac gcgccccatg gaaaccttct ggacttcttc cgcaagagcc gtgtgctgga 660 gacggaccca gcatttgcca ttgccaatag caccgcgtcc acactgtcct cccagcagct 720 ccttcacttc gctgccgacg tggcccgggg catggactac ttgagccaaa aacagtttat 780 ccacagggat ctggctgcca gaaacatttt agttggtgaa aactatgtgg caaaaatagc 840 agattttgga ttgtcccgag gtcaagaggt gtatgtgaaa aagacaatgg gaaggctccc 900 agtgcgctgg atggccatcg agtcactgaa ttacagtgtg tacacaacca acagtgatgt 960 atggtcctat ggtgtgttac tatgggagat tgttagctta ggaggcacac cctactgcgg 1020 gatgacttgt gcagaactct acgagaagct gccccagggc tacagactgg agaagcccct 1080 gaactgtgat gatgaggtgt atgatctaat gagacaatgc tggcgggaga agccttatga 1140 gaggccatca tttgcccaga tattggtgtc cttaaacaga atgttagagg agcgaaagac 1200 ctacgtgaat accacgcttt atgagaagtt tacttatgca ggaattgact gttctgctga 1260 agaagcggcc tagggctgct gcagctgcat gggtgcctgc tgctgcctgc cttggcctga 1320 tggccaggcc agagtgctgc cagtcctctg catgttctgc tcttgtgccc ttctgagccc 1380 acaataaagg ctgagctctt atcttgcaaa aggc 1414 <210> 159 <211> 1333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 87 <400> 159 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgggga gcagcaagag caagcccaag gaccccagcc agcgcggggg 120 acatttgcaa ttgaagaggg caaatgtgca aaggagaatg gcccaagcct tccaaaacgt 180 gagggaagaa ccagctgtgc agttcaactc agggactctg gccctaaaca ggaaggtcaa 240 aaacaaccca gatcctacaa tttatccagt gcttgactgg aatgacatca aatttcaaga 300 tgtgattggg gagggcaatt ttggccaagt tcttaaggcg cgcatcaaga aggatgggtt 360 acggatggat gctgccatca aaagaatgaa agaatatgcc tccaaagatg atcacaggga 420 ctttgcagga gaactggaag ttctttgtaa acttggacac catccaaaca tcatcaatct 480 cttaggagca tgtgaacatc gaggctactt gtacctggcc attgagtacg cgccccatgg 540 aaaccttctg gacttccttc gcaagagccg tgtgctggag acggacccag catttgccat 600 tgccaatagc accgcgtcca cactgtcctc ccagcagctc cttcacttcg ctgccgacgt 660 ggcccggggc atggactact tgagccaaaa acagtttatc cacagggatc tggctgccag 720 aaacatttta gttggtgaaa actatgtggc aaaaatagca gattttggat tgtcccgagg 780 tcaagaggtg tatgtgaaaa agacaatggg aaggctccca gtgcgctgga tggccatcga 840 gtcactgaat tacagtgtgt acacaaccaa cagtgatgta tggtcctatg gtgtgttact 900 atgggagatt gttagcttag gaggcacacc ctactgcggg atgacttgtg cagaactcta 960 cgagaagctg ccccagggct acagactgga gaagcccctg aactgtgatg atgaggtgta 1020 tgatctaatg agacaatgct ggcgggagaa gccttatgag aggccatcat ttgcccagat 1080 attggtgtcc ttaaacagaa tgttagagga gcgaaagacc tacgtgaata acccccttta 1140 tgagaagttt acttatgcag gaattgactg ttctgctgaa gaagcggcct agggctgctg 1200 cagctgcatg ggtgcctgct gctgcctgcc ttggcctgat ggccaggcca gagtgctgcc 1260 agtcctctgc atgttctgct cttgtgccct tctgagccca caataaaggc tgagctctta 1320 tcttgcaaaa ggc 1333 <210> 160 <211> 1579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic - PAN 88 <400> 160 gaggaaccga gaggctgaga ctaacccaga aacatccaat tctcaaactg aagctcgcac 60 tctcgcctcc agcatgaaag tctctgccgc ccttctgtgc ctgctgctca tagcagccac 120 cttcattccc caagggctcg ctgacctggg cccccagatg ctgagggagc tgcaggagac 180 caacgccgcc ctgcaggacg tgagggagct gctgaggcag caggtgaggg agatcacctt 240 cctgaagaac accgtgatgg agtgcgacgc ctgcggcggc ggcatcagcg gcggcggcgg 300 cggcatcata gccatccttg gctctgctgg aatgacctgc ctgactgtgc tgttggcctt 360 tctgatcata ttgcaattga agagggcaaa tgtgcaaagg agaatggccc aagccttcca 420 aaacgtgagg gaagaaccag ctgtgcagtt caactcaggg actctggccc taaacaggaa 480 ggtcaaaaac aacccagatc ctacaattta tccagtgctt gactggaatg acatcaaatt 540 tcaagatgtg attggggagg gcaattttgg ccaagttctt aaggcgcgca tcaagaagga 600 tgggttacgg atggatgctg ccatcaaaag aatgaaagaa tatgcctcca aagatgatca 660 cagggacttt gcaggagaac tggaagttct ttgtaaactt ggacaccatc caaacatcat 720 caatctctta ggagcatgtg aacatcgagg ctacttgtac ctggccattg agtacgcgcc 780 ccatggaaac cttctggact tccttcgcaa gagccgtgtg ctggagacgg acccagcatt 840 tgccattgcc aatagcaccg cgtccacact gtcctcccag cagctccttc acttcgctgc 900 cgacgtggcc cggggcatgg actacttgag ccaaaaacag tttatccaca gggatctggc 960 tgccagaaac attttagttg gtgaaaacta tgtggcaaaa atagcagatt ttggattgtc 1020 ccgaggtcaa gaggtgtatg tgaaaaagac aatgggaagg ctcccagtgc gctggatggc 1080 catcgagtca ctgaattaca gtgtgtacac aaccaacagt gatgtatggt cctatggtgt 1140 gttactatgg gagattgtta gcttaggagg cacaccctac tgcgggatga cttgtgcaga 1200 actctacgag aagctgcccc agggctacag actggagaag cccctgaact gtgatgatga 1260 ggtgtatgat ctaatgagac aatgctggcg ggagaagcct tatgagaggc catcatttgc 1320 ccagatattg gtgtccttaa acagaatgtt agaggagcga aagacctacg tgaataaccc 1380 cctttatgag aagtttactt atgcaggaat tgactgttct gctgaagaag cggcctaggg 1440 ctgctgcagc tgcatgggtg cctgctgctg cctgccttgg cctgatggcc aggccagagt 1500 gctgccagtc ctctgcatgt tctgctcttg tgcccttctg agcccacaat aaaggctgag 1560 ctcttatctt gcaaaaggc 1579 <210> 161 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 161 atggggagca gcaagagcaa gcccaaggac cccagccagc gc 42 <210> 162 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 162 gggggacat 9 <210> 163 <211> 1119 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule in PAN77 <400> 163 atggggagca gcaagagcaa gcccaaggac cccagccagc gcgggggaca tttgcaattg 60 aagagggcaa atgtgcaaag gagaatggcc caagccttcc aaaacgtgag ggaagaacca 120 gctgtgcagt tcaactcagg gactctggcc ctaaacagga aggtcaaaaa caacccagat 180 cctacaattt atccagtgct tgactggaat gacatcaaat ttcaagatgt gattggggag 240 ggcaattttg gccaagttct taaggcgcgc atcaagaagg atgggttatg gatggatgct 300 gccatcaaaa gaatgaaaga atatgcctcc aaagatgatc acagggactt tgcaggagaa 360 ctggaagttc tttgtaaact tggacaccat ccaaacatca tcaatctctt aggagcatgt 420 gaacatcgag gctacttgta cctggccatt gagtacgcgc cccatggaaa ccttctggac 480 ttcttccgca agagccgtgt gctggagacg gacccagcat ttgccattgc caatagcacc 540 gcgtccacac tgtcctccca gcagctcctt cacttcgctg ccgacgtggc ccggggcatg 600 gactacttga gccaaaaaca gtttatccac agggatctgg ctgccagaaa cattttagtt 660 ggtgaaaact atgtggcaaa aatagcagat tttggattgt cccgaggtca agaggtgtat 720 gtgaaaaaga caatgggaag gctcccagtg cgctggatgg ccatcgagtc actgaattac 780 agtgtgtaca caaccaacag tgatgtatgg tcctatggtg tgttactatg ggagattgtt 840 agcttaggag gcacacccta ctgcgggatg acttgtgcag aactctacga gaagctgccc 900 cagggctaca gactggagaa gcccctgaac tgtgatgatg aggtgtatga tctaatgaga 960 caatgctggc gggagaagcc ttatgagagg ccatcatttg cccagatatt ggtgtcctta 1020 aacagaatgt tagaggagcg aaagacctac gtgaatacca cgctttatga gaagtttact 1080 tatgcaggaa ttgactgttc tgctgaagaa gcggcctag 1119 <210> 164 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 164 ggcggcatca gcggcggcgg cggcggcatc 30 <210> 165 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN78 <400> 165 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctg acctgggccc ccagatgctg agggagctgc aggagaccaa cgccgccctg 120 caggacgtga gggagctgct gaggcagcag gtgagggaga tcaccttcct gaagaacacc 180 gtgatggagt gcgacgcctg cggcggcggc atcagcggcg gcggcggcgg catcatagcc 240 atccttggct ctgctggaat gacctgcctg actgtgctgt tggcctttct gatcatattg 300 caattgaaga gggcaaatgt gcaaaggaga atggcccaag ccttccaaaa cgtgagggaa 360 gaaccagctg tgcagttcaa ctcagggact ctggccctaa acaggaaggt caaaaacaac 420 ccagatccta caatttatcc agtgcttgac tggaatgaca tcaaatttca agatgtgatt 480 ggggagggca attttggcca agttcttaag gcgcgcatca agaaggatgg gttatggatg 540 gatgctgcca tcaaaagaat gaaagaatat gcctccaaag atgatcacag ggactttgca 600 ggagaactgg aagttctttg taaacttgga caccatccaa acatcatcaa tctcttagga 660 gcatgtgaac atcgaggcta cttgtacctg gccattgagt acgcgcccca tggaaacctt 720 ctggacttct tccgcaagag ccgtgtgctg gagacggacc cagcatttgc cattgccaat 780 agcaccgcgt ccacactgtc ctcccagcag ctccttcact tcgctgccga cgtggcccgg 840 ggcatggact acttgagcca aaaacagttt atccacaggg atctggctgc cagaaacatt 900 ttagttggtg aaaactatgt ggcaaaaata gcagattttg gattgtcccg aggtcaagag 960 gtgtatgtga aaaagacaat gggaaggctc ccagtgcgct ggatggccat cgagtcactg 1020 aattacagtg tgtacacaac caacagtgat gtatggtcct atggtgtgtt actatgggag 1080 attgttagct taggaggcac accctactgc gggatgactt gtgcagaact ctacgagaag 1140 ctgccccagg gctacagact ggagaagccc ctgaactgtg atgatgaggt gtatgatcta 1200 atgagacaat gctggcggga gaagccttat gagaggccat catttgccca gatattggtg 1260 tccttaaaca gaatgttaga ggagcgaaag acctacgtga ataccacgct ttatgagaag 1320 tttacttatg caggaattga ctgttctgct gaagaagcgg cctag 1365 <210> 166 <211> 1119 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN82 <400> 166 atggggagca gcaagagcaa gcccaaggac cccagccagc gcgggggaca tttgcaattg 60 aagagggcaa atgtgcaaag gagaatggcc caagccttcc aaaacgtgag ggaagaacca 120 gctgtgcagt tcaactcagg gactctggcc ctaaacagga aggtcaaaaa caacccagat 180 cctacaattt atccagtgct tgactggaat gacatcaaat ttcaagatgt gattggggag 240 ggcaattttg gccaagttct taaggcgcgc atcaagaagg atgggttacg gatggatgct 300 gccatcaaaa gaatgaaaga atatgcctcc aaagatgatc acagggactt tgcaggagaa 360 ctggaagttc tttgtaaact tggacaccat ccaaacatca tcaatctctt aggagcatgt 420 gaacatcgag gctacttgta cctggccatt gagtacgcgc cccatggaaa ccttctggac 480 ttccttcgca agagccgtgt gctggagacg gacccagcat ttgccattgc caatagcacc 540 gcgtccacac tgtcctccca gcagctcctt cacttcgctg ccgacgtggc ccggggcatg 600 gactacttga gccaaaaaca gtttatccac agggatctgg ctgccagaaa cattttagtt 660 ggtgaaaact atgtggcaaa aatagcagat tttggattgt cccgaggtca agaggtgtat 720 gtgaaaaaga caatgggaag gctcccagtg cgctggatgg ccatcgagtc actgaattac 780 agtgtgtaca caaccaacag tgatgtatgg tcctatggtg tgttactatg ggagattgtt 840 agcttaggag gcacacccta ctgcgggatg acttgtgcag aactctacga gaagctgccc 900 cagggctaca gactggagaa gcccctgaac tgtgatgatg aggtgtatga tctaatgaga 960 caatgctggc gggagaagcc ttatgagagg ccatcatttg cccagatatt ggtgtcctta 1020 aacagaatgt tagaggagcg aaagacctac gtgaatacca cgctttatga gaagtttact 1080 tatgcaggaa ttgactgttc tgctgaagaa gcggcctag 1119 <210> 167 <211> 1119 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN83 <400> 167 atggggagca gcaagagcaa gcccaaggac cccagccagc gcgggggaca tttgcaattg 60 aagagggcaa atgtgcaaag gagaatggcc caagccttcc aaaacgtgag ggaagaacca 120 gctgtgcagt tcaactcagg gactctggcc ctaaacagga aggtcaaaaa caacccagat 180 cctacaattt atccagtgct tgactggaat gacatcaaat ttcaagatgt gattggggag 240 ggcaattttg gccaagttct taaggcgcgc atcaagaagg atgggttacg gatggatgct 300 gccatcaaaa gaatgaaaga atatgcctcc aaagatgatc acagggactt tgcaggagaa 360 ctggaagttc tttgtaaact tggacaccat ccaaacatca tcaatctctt aggagcatgt 420 gaacatcgag gcttcttgta cctggccatt gagtacgcgc cccatggaaa ccttctggac 480 ttccttctga agagccgtgt gctggagacg gacccagcat ttgccattgc caatagcacc 540 gcgtccacac tgtcctccca gcagctcctt cacttcgctg ccgacgtggc ccggggcatg 600 gactacttga gccaaaaaca gtttatccac agggatctgg ctgccagaaa cattttagtt 660 ggtgaaaact atgtggcaaa aatagcagat tttggattgt cccgaggtca agaggtgtat 720 gtgaaaaaga caatgggaag gctcccagtg cgctggatgg ccatcgagtc actgaattac 780 agtgtgtaca caaccaacag tgatgtatgg tcctatggtg tgttactatg ggagattgtt 840 agcttaggag gcacacccta ctgcgggatg acttgtgcag aactctacga gaagctgccc 900 cagggctaca gactggagaa gcccctgaac tgtgatgatg aggtgtatga tctaatgaga 960 caatgctggc gggagaagcc ttatgagagg ccatcatttg cccagatatt ggtgtcctta 1020 aacagaatgt tagaggagcg aaagacctac gtgaataacc ccctttatga gaagtttact 1080 tatgcaggaa ttgactgttc tgctgaagaa gcggcctag 1119 <210> 168 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN84 <400> 168 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctg acctgggccc ccagatgctg agggagctgc aggagaccaa cgccgccctg 120 caggacgtga gggagctgct gaggcagcag gtgagggaga tcaccttcct gaagaacacc 180 gtgatggagt gcgacgcctg cggcggcggc atcagcggcg gcggcggcgg catcatagcc 240 atccttggct ctgctggaat gacctgcctg actgtgctgt tggcctttct gatcatattg 300 caattgaaga gggcaaatgt gcaaaggaga atggcccaag ccttccaaaa cgtgagggaa 360 gaaccagctg tgcagttcaa ctcagggact ctggccctaa acaggaaggt caaaaacaac 420 ccagatccta caatttatcc agtgcttgac tggaatgaca tcaaatttca agatgtgatt 480 ggggagggca attttggcca agttcttaag gcgcgcatca agaaggatgg gttacggatg 540 gatgctgcca tcaaaagaat gaaagaatat gcctccaaag atgatcacag ggactttgca 600 ggagaactgg aagttctttg taaacttgga caccatccaa acatcatcaa tctcttagga 660 gcatgtgaac atcgaggcta cttgtacctg gccattgagt acgcgcccca tggaaacctt 720 ctggacttcc ttcgcaagag ccgtgtgctg gagacggacc cagcatttgc cattgccaat 780 agcaccgcgt ccacactgtc ctcccagcag ctccttcact tcgctgccga cgtggcccgg 840 ggcatggact acttgagcca aaaacagttt atccacaggg atctggctgc cagaaacatt 900 ttagttggtg aaaactatgt ggcaaaaata gcagattttg gattgtcccg aggtcaagag 960 gtgtatgtga aaaagacaat gggaaggctc ccagtgcgct ggatggccat cgagtcactg 1020 aattacagtg tgtacacaac caacagtgat gtatggtcct atggtgtgtt actatgggag 1080 attgttagct taggaggcac accctactgc gggatgactt gtgcagaact ctacgagaag 1140 ctgccccagg gctacagact ggagaagccc ctgaactgtg atgatgaggt gtatgatcta 1200 atgagacaat gctggcggga gaagccttat gagaggccat catttgccca gatattggtg 1260 tccttaaaca gaatgttaga ggagcgaaag acctacgtga ataccacgct ttatgagaag 1320 tttacttatg caggaattga ctgttctgct gaagaagcgg cctag 1365 <210> 169 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN85 <400> 169 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctg acctgggccc ccagatgctg agggagctgc aggagaccaa cgccgccctg 120 caggacgtga gggagctgct gaggcagcag gtgagggaga tcaccttcct gaagaacacc 180 gtgatggagt gcgacgcctg cggcggcggc atcagcggcg gcggcggcgg catcatagcc 240 atccttggct ctgctggaat gacctgcctg actgtgctgt tggcctttct gatcatattg 300 caattgaaga gggcaaatgt gcaaaggaga atggcccaag ccttccaaaa cgtgagggaa 360 gaaccagctg tgcagttcaa ctcagggact ctggccctaa acaggaaggt caaaaacaac 420 ccagatccta caatttatcc agtgcttgac tggaatgaca tcaaatttca agatgtgatt 480 ggggagggca attttggcca agttcttaag gcgcgcatca agaaggatgg gttacggatg 540 gatgctgcca tcaaaagaat gaaagaatat gcctccaaag atgatcacag ggactttgca 600 ggagaactgg aagttctttg taaacttgga caccatccaa acatcatcaa tctcttagga 660 gcatgtgaac atcgaggctt cttgtacctg gccattgagt acgcgcccca tggaaacctt 720 ctggacttcc ttctgaagag ccgtgtgctg gagacggacc cagcatttgc cattgccaat 780 agcaccgcgt ccacactgtc ctcccagcag ctccttcact tcgctgccga cgtggcccgg 840 ggcatggact acttgagcca aaaacagttt atccacaggg atctggctgc cagaaacatt 900 ttagttggtg aaaactatgt ggcaaaaata gcagattttg gattgtcccg aggtcaagag 960 gtgtatgtga aaaagacaat gggaaggctc ccagtgcgct ggatggccat cgagtcactg 1020 aattacagtg tgtacacaac caacagtgat gtatggtcct atggtgtgtt actatgggag 1080 attgttagct taggaggcac accctactgc gggatgactt gtgcagaact ctacgagaag 1140 ctgccccagg gctacagact ggagaagccc ctgaactgtg atgatgaggt gtatgatcta 1200 atgagacaat gctggcggga gaagccttat gagaggccat catttgccca gatattggtg 1260 tccttaaaca gaatgttaga ggagcgaaag acctacgtga ataaccccct ttatgagaag 1320 tttacttatg caggaattga ctgttctgct gaagaagcgg cctag 1365 <210> 170 <211> 1200 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN86 <400> 170 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgcta tagccatcct tggctctgct ggaatgacct gcctgactgt gctgttggcc 120 tttctgatca tattgcaatt gaagagggca aatgtgcaaa ggagaatggc ccaagccttc 180 caaaacgtga gggaagaacc agctgtgcag ttcaactcag ggactctggc cctaaacagg 240 aaggtcaaaa acaacccaga tcctacaatt tatccagtgc ttgactggaa tgacatcaaa 300 tttcaagatg tgattgggga gggcaatttt ggccaagttc ttaaggcgcg catcaagaag 360 gatgggttat ggatggatgc tgccatcaaa agaatgaaag aatatgcctc caaagatgat 420 cacagggact ttgcaggaga actggaagtt ctttgtaaac ttggacacca tccaaacatc 480 atcaatctct taggagcatg tgaacatcga ggctacttgt acctggccat tgagtacgcg 540 ccccatggaa accttctgga cttcttccgc aagagccgtg tgctggagac ggacccagca 600 tttgccattg ccaatagcac cgcgtccaca ctgtcctccc agcagctcct tcacttcgct 660 gccgacgtgg cccggggcat ggactacttg agccaaaaac agtttatcca cagggatctg 720 gctgccagaa acattttagt tggtgaaaac tatgtggcaa aaatagcaga ttttggattg 780 tcccgaggtc aagaggtgta tgtgaaaaag acaatgggaa ggctcccagt gcgctggatg 840 gccatcgagt cactgaatta cagtgtgtac acaaccaaca gtgatgtatg gtcctatggt 900 gtgttactat gggagattgt tagcttagga ggcacaccct actgcgggat gacttgtgca 960 gaactctacg agaagctgcc ccagggctac agactggaga agcccctgaa ctgtgatgat 1020 gaggtgtatg atctaatgag acaatgctgg cgggagaagc cttatgagag gccatcattt 1080 gcccagatat tggtgtcctt aaacagaatg ttagaggagc gaaagaccta cgtgaatacc 1140 acgctttatg agaagtttac ttatgcagga attgactgtt ctgctgaaga agcggcctag 1200 <210> 171 <211> 1119 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN87 <400> 171 atggggagca gcaagagcaa gcccaaggac cccagccagc gcgggggaca tttgcaattg 60 aagagggcaa atgtgcaaag gagaatggcc caagccttcc aaaacgtgag ggaagaacca 120 gctgtgcagt tcaactcagg gactctggcc ctaaacagga aggtcaaaaa caacccagat 180 cctacaattt atccagtgct tgactggaat gacatcaaat ttcaagatgt gattggggag 240 ggcaattttg gccaagttct taaggcgcgc atcaagaagg atgggttacg gatggatgct 300 gccatcaaaa gaatgaaaga atatgcctcc aaagatgatc acagggactt tgcaggagaa 360 ctggaagttc tttgtaaact tggacaccat ccaaacatca tcaatctctt aggagcatgt 420 gaacatcgag gctacttgta cctggccatt gagtacgcgc cccatggaaa ccttctggac 480 ttccttcgca agagccgtgt gctggagacg gacccagcat ttgccattgc caatagcacc 540 gcgtccacac tgtcctccca gcagctcctt cacttcgctg ccgacgtggc ccggggcatg 600 gactacttga gccaaaaaca gtttatccac agggatctgg ctgccagaaa cattttagtt 660 ggtgaaaact atgtggcaaa aatagcagat tttggattgt cccgaggtca agaggtgtat 720 gtgaaaaaga caatgggaag gctcccagtg cgctggatgg ccatcgagtc actgaattac 780 agtgtgtaca caaccaacag tgatgtatgg tcctatggtg tgttactatg ggagattgtt 840 agcttaggag gcacacccta ctgcgggatg acttgtgcag aactctacga gaagctgccc 900 cagggctaca gactggagaa gcccctgaac tgtgatgatg aggtgtatga tctaatgaga 960 caatgctggc gggagaagcc ttatgagagg ccatcatttg cccagatatt ggtgtcctta 1020 aacagaatgt tagaggagcg aaagacctac gtgaataacc ccctttatga gaagtttact 1080 tatgcaggaa ttgactgttc tgctgaagaa gcggcctag 1119 <210> 172 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Effector molecule of PAN88 <400> 172 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctg acctgggccc ccagatgctg agggagctgc aggagaccaa cgccgccctg 120 caggacgtga gggagctgct gaggcagcag gtgagggaga tcaccttcct gaagaacacc 180 gtgatggagt gcgacgcctg cggcggcggc atcagcggcg gcggcggcgg catcatagcc 240 atccttggct ctgctggaat gacctgcctg actgtgctgt tggcctttct gatcatattg 300 caattgaaga gggcaaatgt gcaaaggaga atggcccaag ccttccaaaa cgtgagggaa 360 gaaccagctg tgcagttcaa ctcagggact ctggccctaa acaggaaggt caaaaacaac 420 ccagatccta caatttatcc agtgcttgac tggaatgaca tcaaatttca agatgtgatt 480 ggggagggca attttggcca agttcttaag gcgcgcatca agaaggatgg gttacggatg 540 gatgctgcca tcaaaagaat gaaagaatat gcctccaaag atgatcacag ggactttgca 600 ggagaactgg aagttctttg taaacttgga caccatccaa acatcatcaa tctcttagga 660 gcatgtgaac atcgaggcta cttgtacctg gccattgagt acgcgcccca tggaaacctt 720 ctggacttcc ttcgcaagag ccgtgtgctg gagacggacc cagcatttgc cattgccaat 780 agcaccgcgt ccacactgtc ctcccagcag ctccttcact tcgctgccga cgtggcccgg 840 ggcatggact acttgagcca aaaacagttt atccacaggg atctggctgc cagaaacatt 900 ttagttggtg aaaactatgt ggcaaaaata gcagattttg gattgtcccg aggtcaagag 960 gtgtatgtga aaaagacaat gggaaggctc ccagtgcgct ggatggccat cgagtcactg 1020 aattacagtg tgtacacaac caacagtgat gtatggtcct atggtgtgtt actatgggag 1080 attgttagct taggaggcac accctactgc gggatgactt gtgcagaact ctacgagaag 1140 ctgccccagg gctacagact ggagaagccc ctgaactgtg atgatgaggt gtatgatcta 1200 atgagacaat gctggcggga gaagccttat gagaggccat catttgccca gatattggtg 1260 tccttaaaca gaatgttaga ggagcgaaag acctacgtga ataaccccct ttatgagaag 1320 tttacttatg caggaattga ctgttctgct gaagaagcgg cctag 1365

Claims (20)

  1. 5'-> 3' 방향으로
    - 5' UTR,
    - 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역, 및
    - 3' UTR
    을 포함하는 재조합 핵산 작제물로서,
    여기서 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴(Galectin)-9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 GADD34 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 EDN1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70m5 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 E-셀렉틴(selectin) 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ICAM-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR로 구성된 군으로부터 선택되며,
    여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 GADD34 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 EDN1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR로 구성된 군으로부터 선택되며,
    여기서, 이펙터 분자는 세포의 세포 기능을 회복시키는 데 효과적이거나 세포 내 또는 세포에 치료 효과를 발휘하는 데 효과적이며,
    여기서, 이펙터 분자는 돌연변이 이펙터 분자이고, 돌연변이 이펙터 분자는 기능 획득 돌연변이 이펙터 분자 및/또는 고차형 돌연변이 이펙터 분자이고,
    여기서, 재조합 작제물의 5' UTR 및 3' UTR은 상이한 기원을 갖고,
    여기서, 재조합 핵산 작제물은 이펙터 분자를 암호화하는 야생형 mRNA와 상이한, 재조합 핵산 작제물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 돌연변이 이펙터 분자는 돌연변이 Tie-2이고, 바람직하게 돌연변이 Tie-2는 Tie-2 L914 F, Tie-2 R849E L914F, Tie-2 Y897F R915L 및 Tie-2 T1105N T1106P를 포함하는 군으로부터 선택되는, 재조합 핵산 작제물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 돌연변이 이펙터 분자는 돌연변이 PIK3이고, 바람직하게 돌연변이 PIK3CA는 PIK3CA E542K, PIK2CA E545K 및 PIK3CA H1047R을 포함하는 군으로부터 선택되는, 재조합 핵산 작제물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 돌연변이 이펙터 분자는 돌연변이 P110이고, 바람직하게 돌연변이 P110은 촉매 서브유닛 p110알파의 조작된 미리스토일화된 형태인, 재조합 핵산 작제물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    b) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    c) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    또는
    d) 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR이고, 여기서 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되는, 재조합 핵산 작제물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    b) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    c) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되거나,
    또는
    d) 3' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR이고, 5' UTR은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR을 포함하는 군으로부터 선택되는, 재조합 핵산 작제물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 작제물은
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 ANG-2 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 HSP70 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물,
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 H3.3. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물, 및
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 갈렉틴 9 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물
    을 포함하는 군으로부터 선택되는 작제물이고,
    바람직하게 상기 작제물은
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물, 또는
    5' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 RPL12s.c. 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 5' UTR, 및 3' UTR이 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 vWF 또는 이의 유도체를 암호화하는 유전자의 3' UTR인, 작제물인, 재조합 핵산 작제물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 작제물은 바람직하게는 재조합 핵산 작제물의 3' 말단에 폴리-A-테일을 포함하는, 재조합 핵산 작제물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 작제물은 바람직하게는 재조합 핵산 작제물의 5' 말단에 캡 구조를 포함하는, 재조합 핵산 작제물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 작제물은 IRES(내부 리보솜 진입 부위) 서열을 포함하고, 바람직하게는 IRES 서열을 재조합 핵산 작제물의 5' 말단에 포한하는 것인, 재조합 핵산 작제물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 바람직하게 신호 펩타이드는 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열과 인-프레임이고, 5' UTR과 이펙터 분자를 암호화하는 암호화 영역 사이에 배열되는, 재조합 핵산 작제물.
  12. 제11항에 있어서,
    신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 MCP-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 IL-6 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-2 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 및 적어도 85%의 뉴클레오타이드 동일성을 갖는 Ang-1 또는 이의 유도체의 신호 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 군으로부터 선택되는, 재조합 핵산 작제물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포 기능이 회복된 세포 및/또는 내부 또는 상부에서 치료 효과가 발휘되는 세포는 내피 세포, 바람직하게는 혈관 내피 세포이고, 보다 바람직하게 혈관 내피 세포는 미세혈관 내피 세포인, 재조합 핵산 작제물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포 기능은 내피 세포의 항-투과도 효과, 항-혈관 누출 효과, 내피 세포의 항-세포자멸사 효과 또는 내피 세포의 항-염증 효과, 또는 항-스트레스 반응 효과를 갖는 이펙터 분자에 의해 회복될 수 있는 기능이며, 바람직하게 상기 효과는 Tie-2 신호전달 경로, VEGF-수용체 경로, NOTCH 신호전달 경로, PI3-키나제 경로, eNOS 신호전달 경로, 시르투인-의존성 대사 및 에너지 항상성 경로, 산화 스트레스 경로, 전단 응력 반응 경로, ET-1 신호 변환 경로, NO-매개 신호 변환 경로, 및 기계화학적 변환 경로와 연결되거나, 이와 관련된, 재조합 핵산 작제물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 핵산 작제물을 포함하는 벡터.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 핵산 작제물 및/또는 제15항의 벡터를 포함하는 세포.
  17. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 핵산 작제물을 포함하는 전달 비히클로서, 상기 전달 비히클은 양이온성 지질 전달 입자이고, 바람직하게 입자는 나노입자이고, 보다 바람직하게 나노입자의 평균 크기는 약 30 nm 내지 약 200 nm, 바람직하게는 약 30 nm 내지 약 140 nm 및 보다 바람직하게는 약 30 nm 내지 약 60 nm인, 전달 비히클.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 핵산 작제물, 제15항의 벡터, 제16항의 세포 및/또는 제17항의 전달 비히클, 및 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
  19. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 재조합 핵산 작제물.
  20. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포의 세포기능을 회복시키는 방법에 사용하기 위한, 재조합 핵산 작제물.
KR1020227031424A 2020-02-11 2021-02-11 재조합 핵산 작제물 및 이의 용도 KR20220139969A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20000064 2020-02-11
EP20000064.4 2020-02-11
EP20156987.8A EP3865579A1 (en) 2020-02-12 2020-02-12 Recombinant nucleic acid construct and use thereof
EP20156987.8 2020-02-12
EP21156423 2021-02-10
EP21156423.2 2021-02-10
PCT/EP2021/053370 WO2021160758A2 (en) 2020-02-11 2021-02-11 Recombinant nucleic acid construct and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220139969A true KR20220139969A (ko) 2022-10-17

Family

ID=74587067

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227031424A KR20220139969A (ko) 2020-02-11 2021-02-11 재조합 핵산 작제물 및 이의 용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230295651A1 (ko)
EP (1) EP4103720A2 (ko)
JP (1) JP2023512732A (ko)
KR (1) KR20220139969A (ko)
CN (1) CN115867660A (ko)
AU (1) AU2021218962A1 (ko)
BR (1) BR112022014682A2 (ko)
CA (1) CA3168458A1 (ko)
IL (1) IL294771A (ko)
WO (1) WO2021160758A2 (ko)
ZA (1) ZA202207670B (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023224992A2 (en) * 2022-05-16 2023-11-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Targeted integration at alpha-globin locus in human hematopoietic stem and progenitor cells

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6043062A (en) 1995-02-17 2000-03-28 The Regents Of The University Of California Constitutively active phosphatidylinositol 3-kinase and uses thereof
CN102712935B (zh) 2009-11-04 2017-04-26 不列颠哥伦比亚大学 含有核酸的脂质粒子及相关的方法
JP6301906B2 (ja) * 2012-03-27 2018-03-28 キュアバック アーゲー ５’ｔｏｐｕｔｒを含む人工核酸分子
US11389546B2 (en) 2015-12-09 2022-07-19 Modernatx, Inc. Heterologous UTR sequences for enhanced mRNA expression

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021160758A3 (en) 2021-09-23
ZA202207670B (en) 2023-05-31
WO2021160758A2 (en) 2021-08-19
EP4103720A2 (en) 2022-12-21
IL294771A (en) 2022-09-01
US20230295651A1 (en) 2023-09-21
CN115867660A (zh) 2023-03-28
CA3168458A1 (en) 2021-08-19
BR112022014682A2 (pt) 2022-09-13
AU2021218962A1 (en) 2022-08-04
JP2023512732A (ja) 2023-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020270508B2 (en) C/EBP alpha short activating RNA compositions and methods of use
KR102185465B1 (ko) 부계 ube3a 발현을 유도하기 위한 올리고뉴클레오티드
KR102124228B1 (ko) 안드로겐 수용체 발현의 조절
CN101142321B (zh) 治疗眼病的方法和组合物
KR102651423B1 (ko) 접합된 안티센스 화합물 및 그것의 용도
KR101778036B1 (ko) 전립선암 마커로서의 포스포디에스테라제 4ｄ7
KR102110469B1 (ko) 악성의 호르몬 민감성 전립선 암에 대한 마커로서의 포스포디에스테라제 4ｄ7
KR20210025055A (ko) Lrrk2 발현 감소용 화합물 및 방법
KR20210027384A (ko) Scn9a 발현을 조절하기 위한 올리고뉴클레오티드
KR20220113743A (ko) 병태 및 질환의 치료를 위한 안티센스 올리고머
CN111315882A (zh) 癌症促进因子表达抑制剂、其有效成分的筛选方法、对该方法有用的表达盒、诊断药和诊断方法
KR20210044240A (ko) 재조합 핵산 구조물
KR20230043914A (ko) App 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법
KR20220139969A (ko) 재조합 핵산 작제물 및 이의 용도
US20160250182A1 (en) Rab7l1 interacts with lrrk2 to modify intraneuronal protein sorting and parkinson&#39;s disease risk
CN107223162A (zh) 用于诊断前列腺癌的新型rna‑生物标志物标签
TW202227102A (zh) 治療脂肪肝病之方法
CN116157522A (zh) A1cf抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
KR20230048052A (ko) Scn2a를 조절하는 화합물 및 방법
US20160184454A1 (en) Rab7l1 interacts with lrrk2 to modify intraneuronal protein sorting and parkinson&#39;s disease risk
KR102642320B1 (ko) 항암제에 대한 내성 진단용 조성물
US20040238597A1 (en) Isolated human secreted proteins, nucleic acid molecules encoding human secreted proteins, and uses thereof
TW202305132A (zh) 用於抑制α-突觸核蛋白表達之反義寡核苷酸
AU2021202471A1 (en) Cancer therapeutic methods
US20030224393A1 (en) Gene for peripheral arterial occlusive disease