KR20220134274A - 털머위 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 털머위 추출물을 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 털머위 추출물은 인체에 무해하며 안정성이 높을 뿐만이 아니라, 우수한 피부 주름 개선 효과 및 보습 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 함유하기 때문에 합성 화학물질을 함유하여 피부에 자극을 주는 여러 화장료에 대한 소비자의 거부감을 해소할 수 있다.

Description

털머위 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물 {Cosmetic composition containing the extract of Farfugium Japonicum for skin wrinkle-repairing and Moisturizing}

본 발명은 털머위(Farfugium japonicum) 추출물 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 털머위 추출물을 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 신체의 가장 바깥 부분에 위치하여 다양한 외부인자에 가장 많이 노출되는 부위이다. 피부에 영향을 미치는 대표적인 인자로는 자외선, 대기오염, 흡연, 환경호르몬 등이 있다. 특히, 자외선은 노출 시간이 길어짐에 따라 다양한 피부 질환과 피부 노화를 유발하기도 한다.

일반적으로 나이가 들어감에 따라 피부는 내·외적인 환경에 의하여 수분, 탄력성, 색 및 윤기를 잃고 거칠어지는데, 이러한 과정을 피부 노화라 한다. 피부 노화는 크게 두 종류로 나눌 수 있는데, 하나는 세월이 흘러감에 따라 피할 수 없는 노화 현상인 내인성 노화 (intrinsic aging)이고, 다른 하나는 오랫동안 햇빛에 노출된 피부에서 관찰되는 노화 현상인 광노화 (photo aging)가 있다. 내인성노화 및 광노화는 모두 유해한 활성산소에 의해 발생하는 점에서 같지만 광노화는 이 활성산소가 자외선에 의해 생성되는 점에 차이가 있다.

광노화 (photo aging)의 주원인인 자외선은 그 파장 크기에 따라 UV-C (240~280nm), UV-B (280~320nm), 및 UV-A (320~400nm)로 분류되며. UV-C는 오존층에 의해 차단되고, 지구상에는 UV-A 및 UV-B만 작용하는 것으로 알려졌다. 피부가 UV-A 및 UV-B에 노출되었을 때 피부에 존재하는 섬유아세포에서 활성산소가 과다 생성되어 단백질분해효소인 MMP-1의 생성을 촉진한다. 더욱 구체적으로 설명하자면, MMP-1은 세포외 기질인 콜라겐을 분해하는 효소로 기질 금속단백질 분해효소 (matrix metalloproteinase, 이하 'MMP')의 한 종류로서, 활성산소에 의해 과다 생성된 MMP-1은 콜라겐 타입1 단백질과 특이적으로 결합하여 분해한다. 따라서 자외선 노출로 인해 MMP-1이 과다 생성되면 콜라겐 합성 감소로 인해 피부에 주름이 발생하게 된다.

이에 상기에서 살펴본 바와 같이 피부 노화의 중요한 원인 중 하나인 MMP-1 발현 촉진 억제를 해결하기 위해 독성과 부작용이 없는 천연 소재 발굴이 필요하다.

또한, 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도지만 표피층으로 갈수록 함량은 감소하여 표피층에서는 약 10% 내지 30%가 된다. 표피층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호 기능을 잃게 되어 노화 현상이 일어난다. 표피는 외부로부터 각질층, 과립층, 유극층, 기저층의 4개 층으로 구분되는데 각질층의 세포들은 벽돌과 같은 역할을 하고 각질세포 사이 세포 간 지질들은 몰타르와 같은 역할로 피부 장벽을 이루고 있다.

건강한 사람의 각질세포에는 고농도의 자연보습인자(Natural Moisturizing Factor, NMF)가 존재하며, 이는 피부의 수분함유를 돕는 기능을 한다. 하지만, 피부의 이러한 기능에도 불구하고, 실내난방, 오염된 대기 및 자외선 등의 외부환경에 의한 외인성 노화, 내인성 노화 및 마찰, 면도, 세안 등의 물리화학적 자극에 따른 피부 구성성분의 탈락으로 인하여 수분 불균형이 생겨 피부 건조가 유발된다. 이를 방지하기 위해 피부 보습제의 필요성이 중요시되고 있으며, 피부 보습 효능을 세포 수준에서 확인하기 위한 다양한 연구가 진행되고 있다.

따라서, 피부에서 각질세포층의 수분함량을 적절하게 유지하는 것은 매우 중요하다. 이를 위하여 화장품에는 피지와 유사한 성분이나 NMF 성분, 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 첨가된다. 다만, 수용성 폴리올로서 수산기(OH group)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 나타내나 끈적임이 심하여 사용할 때 불쾌감을 느끼게 하며, 수산기가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부의 부작용이 발생하기도 한다. 또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 해치는 문제점이 있으며, 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습 능력이 있다고는 하나 그 보습 능력에 한계가 있어 피부 보습력을 높이기 위한 천연물화장료 조성물에 대한 개발이 필요한 실정이다.

대한민국등록특허 제10-1685581호(2016.12.06)에는, 와송을 포함하는 천연유래물질을 이용한 피부 주름 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물이 개시되어 있다. 대한민국공개특허 제10-2012-0115436호(2012.10.18)에는, 백자인 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 조성물이 개시되어 있다.

본 발명은 털머위(F.japonicum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물을 개발하여 제공하고자 한다.

본 발명은 털머위(Farfugium japonicum) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 털머위 추출물은, 바람직하게는 용매 추출법, 아임계 추출법 및 초임계 추출법 중 선택되는 어느 하나 이상으로 제조된 것이 좋다.

이때, 상기 용매 추출법은, 일 예로 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출 용매를 이용한 것일 수 있다.

본 발명에 있어, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게는 피부 주름 개선용 또는 보습용인 것이 좋다.

본 발명에 있어, 상기 화장료 조성물의 제형은, 일 예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스; 파운데이션; 스킨커버; 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 및 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다.

본 발명의 털머위 추출물은 인체에 무해하며 안정성이 높을 뿐만이 아니라, 우수한 피부 주름 개선 효과 및 보습 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 함유하기 때문에 합성 화학물질을 함유하여 피부에 자극을 주는 여러 화장료에 대한 소비자의 거부감을 해소할 수 있다.

도 1은 털머위 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이다.
도 2는 털머위 아임계 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이다.
도 3은 털머위 초임계 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이다.

본 발명은 털머위(Farfugium japonicum) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

털머위의 학명은 Farfugium japonicum이며, 한국의 울릉도, 남해안 및 제주도에서 자라는 상록 다년초이다. 주로 바닷가 숲속에서 자라며 부엽질이 혼합된 토양에 습기가 충분한 반그늘 지역에서 잘 자라는 특성을 가진다. 잎에 노랑 또는 흰무늬를 가지는 반엽종도 있으며, 꽃은 9-10월 경에 피고 전체가 산방상으로 되며 지름 4~6㎝의 황색꽃이 핀다. 상록성이므로 관상식물로 개발 가능성이 높으며 엽병은 식용으로 쓰이기도 한다. 전초를 연봉초(蓮蓬草)라 하며 약용하며 청열, 해독, 활혈의 효능이 있고 풍열감기, 인두종통, 정창, 타박상의 치료에 사용되기도 한다.

한편, 현재까지 알려진 털머위에 대한 연구는 일본 특허로써 단백질 글리케이션 억제제(protein glycation inhibitor), 항산화 효과, 티로시나아제 억제 효과 등에 대한 연구가 있으며, 국내 특허로는 꽃 향수(flower perfume), 꽃 초(flower candles), 꽃 방향제(flower air freshener)에 관한 연구 및 털머위 꽃 또는 털머위에서 추출한 세스퀴테르페노이드(sesquiterpenoids)의 항염증 효과에 대한 논문이 존재한다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 털머위 추출물은, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 다양한 추출 방법을 이용하여 그 특별한 방법에 제한없이 추출될 수 있으나, 바람직하게는 용매 추출법, 아임계 추출법 및 초임계 추출법 중 선택되는 어느 하나 이상으로 제조된 것이 좋다.

본 발명에서 선택한 각 추출법을 하기에서 더욱 구체적으로 설명하고자 한다.

우선, 본 발명의 용매 추출법은 음건하여 파쇄한 털머위를, 일 예로 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출 용매를 이용하여 추출한 것일 수 있다.

이때, 상기 용매는, 바람직하게는 파쇄한 털머위의 1~20배, 더욱 바람직하게는 5~15배를 첨가하는 것이 좋고, 상기에서 물을 제외한 용매들은 바람직하게는 50~100%(v/v), 더욱 바람직하게는 60~80%(v/v)의 희석된 용매를 이용하는 것이 좋다. 상기한 조건 미만의 용매를 첨가하면 기대하는 털머위 추출물의 기능성 성분이 추출되지 않거나, 그 작용 효과가 미미할 수 있어 바람직하지 못하다. 또한, 상기한 조건을 초과하는 용매를 첨가하면 기대하는 털머위 추출물의 기능성 성분이 추출되지 않거나, 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하다.

또한, 상기 추출은 바람직하게는 -10~100℃, 보다 바람직하게는 0~60℃, 더욱 바람직하게는 20~30℃에서 1~10일 동안 추출하는 것이 좋은데, 이 조건의 미만의 온도나 기간으로 추출하게 되면 기대하는 효과가 미미하여 바람직하지 못하고, 이 조건을 초과하는 온도나 기간으로 추출하게 되면 기대하는 털머위 추출물의 기능성 성분이 파괴되어 원하는 효과를 기대하기 어렵기 때문에 바람직하지 못하다.

또한, 본 발명의 털머위 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라 다른 방법을 덧붙여 추출된 추출물도 포함한다. 예컨대, 초고압 추출법에 의한 추출; 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리; 다양한 크로마토그래피, 예를 들어 크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 크로마토그래피에 의한 분리 등 추가적 방법을 덧붙여 추출 또는 분리/정제한 추출물도 포함하는 것이다.

초고압 추출하는 경우, 바람직하게는 압력 100~3000 MPa, 온도 40~90℃에서 20~30시간 처리하며, 더욱 바람직하게는 압력 500~1000 MPa, 온도 40~60℃에서 23~25시간 처리하는 것이 좋다. 또한, 초고압 추출 시 pH는 특정 pH에 한정하는 것은 아니나, 바람직하게는 초고압기 내부 물의 pH를 1~6으로 낮춰 처리하는 것이 좋다.

또한, 본 발명은 상기와 같이 다양한 방법으로 추출한 털머위 추출물을 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 용매를 이용하여 환류 추출하고 냉침한 후, 여과시킨 여과액을 농축조로 이송하여 바람직하게는 50~100℃에서 감압농축 및 동결건조할 수도 있다.

또한, 본 발명은 이렇게 수득한 추출물, 감압농축물 또는 동결건조물을 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 액상으로 제형화할 수도 있다.

또한, 본 발명의 털머위 추출물은 상기한 용매 중 선택된 용매로 털머위를 추출한 뒤, 바람직하게는 50~100℃에서 감압농축 및/또는 동결건조할 수도 있으며, 추출 단계와 감압농축 및/또는 동결건조 단계 사이에 추출물을 여과하는 단계를 더 포함할 수도 있다.

한편, 털머위 추출물을 아임계 추출하는 경우, 음건하여 파쇄한 털머위를 40~200℃, 1기압 내지 122기압의 조건에서 아임계 추출법으로 추출할 수 있다. 보다 바람직하게는 100~150℃ 및 1.2기압 내지 30기압의 추출 조건일 수 있다. 상기한 조건의 미만의 온도나 기압으로 추출하게 되면 기대하는 효과가 미미하여 바람직하지 못하고, 상기한 조건을 초과하는 온도나 기압으로 추출하게 되면 기대하는 털머위 추출물의 기능성 성분이 파괴되어 원하는 효과를 기대하기 어렵기 때문에 바람직하지 못하다. 상기한 아임계 추출법은 적은 양의 소재와 용매로 짧은 시간 안에 높은 추출 효율을 갖는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 털머위 추출물은 아임계 추출을 이용하여 털머위를 추출한 뒤, 바람직하게는 50~100℃에서 감압농축 및/또는 동결건조할 수도 있으며, 추출 단계와 감압농축 및/또는 동결건조 단계 사이에 추출물을 여과하는 단계를 더 포함할 수도 있다.

한편, 털머위 추출물을 초임계 추출하는 경우, 음건하여 파쇄한 털머위를 20~100℃, 200기압 내지 400기압의 조건에서 초임계 추출법으로 추출할 수 있다. 상기한 조건의 미만의 온도나 기압으로 추출하게 되면 기대하는 효과가 미미하여 바람직하지 못하고, 상기한 조건을 초과하는 온도나 기압으로 추출하게 되면 기대하는 털머위 추출물의 기능성 성분이 파괴되어 원하는 효과를 기대하기 어렵기 때문에 바람직하지 못하다. 초임계 추출법은 낮은 표면 장력을 이용한 추출방법으로 친환경적이며 경제적이다.

또한, 본 발명의 털머위 추출물은 초임계 추출을 이용하여 털머위를 추출한 뒤, 바람직하게는 25~75℃에서 감압농축 및/또는 동결건조할 수도 있으며, 추출 단계와 감압농축 및/또는 동결건조 단계 사이에 추출물을 여과하는 단계를 더 포함할 수도 있다.

한편, 본 발명에 있어, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게는 피부 주름 개선용 또는 보습용인 것이 좋다.

특히, 본 실시예 및 실험예에 의하면, 본 발명의 털머위 추출물은 인체에 무해하며 안정성이 높을 뿐만이 아니라, MMP-1 생성 억제 효과 및 AQP-3 증가 효과가 우수한 것으로 확인되었다. 또한, 화장료를 인체에 적용시, 피부 주름 개선 효과 및 수분보유능에도 탁월한 효능을 보였다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 함유하기 때문에 합성 화학물질을 함유하여 피부에 자극을 주는 여러 화장료에 대한 소비자의 거부감을 해소할 수 있다. 따라서, 이를 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 피부 주름 개선 효과 및 보습 효과를 발휘 할 수 있다.

따라서 털머위 용매 추출물, 털머위 아임계 추출물 또는 털머위 초임계 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 활용하여 우수한 피부 주름 개선 효과 및/또는 피부 보습 효과를 갖는 다양한 제형으로 제공될 수 있다.

한편, 아쿠아포린 (Aquaporin, AQP)은 세포막에서 물의 수송을 담당하는 막단백질의 일종으로 이온과 용질의 이동을 방해하면서 선택적으로 세포 안팎으로 물 분자의 출입을 조절하는 수분통로로 알려졌다. 포유류에는 13개의 AQP (AQP-0 내지 AQP-12)이 존재하는데, AQP-1, 2, 4, 5 및 8은 주로 물을 선택적으로 운반하며, AQP-3, 7, 9 및 10은 물뿐만 아니라 글리세롤과 다른 작은 용질들을 운반하는 기능을 한다고 알려졌다. 특히, AQP-3는 표피의 기저층 각질형성세포에서 발현되는 것으로 보고되어 있으며, 각질형성세포에서 AQP-3의 활성화는 피부 깊숙이 수분을 전달하여 우수한 피부보습효과를 얻을 수 있으리라 기대할 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 털머위(F.japonicum) 추출물은, 바람직하게 총 중량 대비 0.0001~30중량%가 함유되는 것이 좋다. 0.0001 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 본 발명에서 확인한 여러 피부 기능성의 발휘 효과가 미미하고, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하다.

한편, 본 발명에 있어, 상기 화장료 조성물의 제형은, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제한없이 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 일 예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스; 파운데이션; 스킨커버; 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 및 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나로 제조될 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 털머위 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제, 염료 등을 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총중량에 대해 0.0001 내지 30중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예 및 실험예를 통하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리 범위가 하기 실시예 및 실험예로만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 모두 포함한다.

[실시예 1 : 털머위 에탄올 추출물의 제조]

털머위를 음건하여 파쇄한 후, 파쇄한 털머위 100g에 10배 가량의 70%(v/v) 에탄올 수용액을 첨가한 뒤, 상온에서 3일 동안 추출하였다. 이후, 추출물을 와트만(whatman) #5 여과지로 여과하였다. 그 후, 100℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 털머위 에탄올 추출물을 제조하였다.

[실시예 2 : 털머위 아임계 추출물의 제조]

털머위를 음건하여 파쇄 한 후, 분쇄물 50g을 50℃, 2기압인 아임계 상에서 2시간 동안 추출한 후, 실온으로 냉각시켰다. 아임계로 처리한 털머위 분쇄물을 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하여 냉침한 뒤, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이후, 여과액을 다시 0.25uM 여과기를 이용하여 농축조로 이송한 후, 50℃에서 감압 농축 및 동결건조하여 털머위 아임계 추출물을 제조하였다.

[실시예 3 : 털머위 초임계 추출물의 제조]

털머위를 음건하여 파쇄 후 분쇄물 50g을 얻은 뒤, 초임계 추출 용기에 넣고 액체 크로마토그래피 펌프를 이용하여 순수한 이산화탄소를 60℃, 300기압으로 하여 초임계 상태를 만들었다. 공용매로 에틸알코올을 흘려보내며 매 5분씩 120분까지 추출물을 수득하였다. 그 후, 냉각 콘덴서가 장착된 증류장치를 이용하여 50℃ 온도에서 감압 농축하여 추출물을 수득하였다.

[실험예 1 : 본 발명 털머위 추출물의 세포 생존율 측정]

본 실험에서는 상기 실시예 1 내지 3에서 수득한 털머위 추출물이 세포에 미치는 독성을 측정하였다. 이를 위하여, 세포독성은 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyl tetrazolium bromide) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 '모스만(Mosmann)'의 방법을 변형하여 실시하였다.

더욱 구체적으로, 인간 피부 섬유아세포(HDFn, Human Dermal Fibroblast neonatal)를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 1×10⁵ cells/㎖의 농도로 분주하고, 37℃, 5% CO₂의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양 배지를 제거하고, 상기 실시예 1 내지 3에서 수득한 추출물을 각각 25, 50, 100㎍/㎖ 농도별로 처리한 배지에서 세포를 24시간 동안 배양하였다. 그 후, PBS에 5㎎/㎖로 녹인 MTT 시약을 20㎕ 첨가하여 37℃, 5% CO₂의 조건에서 3시간 동안 배양하였다. 이후, 10분 동안 교반하여 세포를 완전히 용해시킨 후, 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

	CONTROL	25㎍/㎖	50㎍/㎖	100㎍/㎖
실시예 1	100.0	99.767	99.896	87.230
실시예 2	100.0	99.835	99.919	98.067
실시예 3	100.0	99.941	99.712	99.085

실험 결과, 실시예 1 내지 3의 털머위 추출물은 각각 25㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖ 농도 모두에서 세포독성을 나타내지 않았다. 이로부터 본 발명의 털머위 추출물이 인체에 무해하며 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다.

[실험예 2 : 본 발명 털머위 추출물의 MMP-1 발현 억제율 평가]

본 실험에서는 털머위 추출물의 MMP-1 발현 억제율을 평가하고자 하였다. 이를 위하여, 사람 정상 섬유아세포(human dermal fibroblast neonatal, 이하 HDFn)를 1×10⁵ cells/well 농도로 24-웰 플레이트(24-well plate)에 1㎖씩 접종하고 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 조건의 인큐베이터에서 안정화시켰다. 이후, 세포를 PBS로 2번 헹군 뒤, PBS가 있는 상태에서 UV를 1 J/cm²로 조사하고 2% FBS가 첨가된 배지로 교환과 동시에 각 시료를 농도별로 처리하였다.

48시간 반응 후, PBS를 이용하여 세포를 수득한 다음, 세포 용해 버퍼를 이용해 얼음상에서 30분간 반응시켜 세포막을 파괴하였다. 이를 1,200rpm에서 15분간 원심분리한 뒤, 상층액만을 따로 옮겨 BCA 어세이법을 이용하여 단백질을 정량하였다.

이후, 일정량의 단백질을 SDS-겔 로딩 버퍼와 혼합하여 100℃에서 3분간 가열하여 불활성화시키고, SDS-폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gel)을 이용하여 전기영동을 실시하였다. 그 후, SDS-폴리아크릴아마이드겔을 60mM에서 90분간 PVDF 멤브레인으로 전이(transfer)시키고, 5% 스킴 밀크에서 1시간 동안 블러킹(blocking)한 뒤, 블러킹을 마친 PVDF 멤브레인에 1차 항체(MMP-1)를 4℃에서 24시간 동안 반응시키고, 1X TTBS용액을 10분 간격으로 3번 교환하여 30분간 세척하였다.

이후, 5% 스킴 밀크에서 1차 항체-특이적 2차 항체(primary-specific secondary antibody)를 2시간 동안 반응시키고, 다시 1X TTBS 용액을 이용하여 10분 간격으로 30분간 세척하였다. 그 후, PVDF 멤브레인을 ECL 용액으로 반응시키고 Chemi Doc^TM XRS+ machine을 이용해 밴드를 분석하였다.

측정 결과는 도 1 내지 도 3에 나타내었다. 도 1은 털머위 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이고, 도 2는 털머위 아임계 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이며, 도 3은 털머위 초임계 추출물의 농도에 따른 MMP-1 억제능을 측정한 그래프이다.

각 시료의 농도별 MMP-1 발현 억제율을 확인한 결과, 농도 의존적으로 MMP-1 발현이 저해되는 양상을 보였다. 실시예 1의 경우, 50㎍/㎖ 농도에서 약 43%의 MMP-1 발현이 저해됨을 확인할 수 있었으며, 실시예 2의 경우, 100㎍/㎖ 농도에서 약 76%의 MMP-1 발현이 저해됨을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 3의 경우 100㎍/㎖ 농도에서 약 74%의 MMP-1 발현이 저해됨을 확인할 수 있었다. 이를 통해 본 발명의 털머위 추출물이 MMP-1 발현을 저해함으로써 우수한 주름개선 효과를 발휘하는 것으로 판단하였다.

[실험예 3 : 본 발명 털머위 추출물의 아쿠아포린(Aquaporin, AQP)-3 발현 양상 평가]

본 실험에서는 털머위 추출물의 아쿠아포린-3의 발현 양상을 평가하고자 하였다. 이를 위하여, 각질세포인 HaCaT(Human Adult low Calcium High Temperature) 세포를 6-웰 플레이트에 3×10⁵ cell/well로 분주하고, 37^oC, 5% CO₂의 세포 배양기에서 하루 동안 세포를 안정화시켰다.

이후, 실시예 1 내지 3의 털머위 추출물을 농도별로 처리하고 6시간 동안 반응시킨 후 스크래퍼(scraper)를 이용하여 세포를 수집하였다. 그 후, 1X 세포 용해 버퍼(cell lysis buffer)를 이용하여 단백질을 분리하고 BCA 에세이법으로 단백질을 정량한 후, 일정량의 단백질을 10% SDS-폴리아크릴아마이드겔에서 전기영동 시켰다.

이후, 겔 상의 분리된 단백질을 PVDF 멤브레인에 전이시키고 5% 스킴 밀크를 이용하여 1시간 동안 블러킹(blocking)하였다. 그 후, 1X TTBS 용액으로 3회 세척하고 1차 항체(AQP-3, Santa cruz)를 4℃에서 오버나잇(over night) 반응시킨 후, HRP가 결합된 2차 항체를 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 이후, 1X TTBS로 3회 세척하고 ECL용액을 반응시켜 Chemi Doc^TM XRS+ machine으로 밴드를 검출하였다.

AQP-3 발현량의 계산은 베타-액틴(β-actin)의 발현을 기준으로 정량하였으며, Image J 1.47 software를 이용하여 수치화하였다. 양성대조군으로는 덱사메타손(dexamethasone)을 사용하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

시료	처리 농도	AQP-3 증가율 (%)
양성대조군 (Dexamethasone)	1μM	60.58
실시예 1	12.5㎍/㎖	14.50
	25㎍/㎖	22.58
	50㎍/㎖	45.61
실시예 2	25㎍/㎖	19.52
	50㎍/㎖	31.36
	100㎍/㎖	67.87
실시예 3	25㎍/㎖	18.26
	50㎍/㎖	29.17
	100㎍/㎖	70.94

실험 결과, 양성대조군인 덱사메타손은 60.58%의 AQP-3 발현 증가 양상을 나타내었고, 실시예 1은 최고 농도인 50㎍/㎖ 농도에서 45.61%의 AQP-3 발현 증가 양상을 나타내었다. 또한, 실시예 2는 100㎍/㎖ 농도에서 67.87%, 실시예 3은 100㎍/㎖ 농도에서 70.94%의 AQP-3 발현 증가율을 나타내었다. 이를 통해 본 발명의 털머위 추출물이 아쿠아포린(AQP)-3 발현을 증가시킴으로써 우수한 보습 효과를 발휘하는 것으로 판단하였다.

[제조예 1 내지 3 및 비교제조예 1: 본 발명 털머위 추출물을 함유하는 화장료의 제조]

상기 실험을 통해 본 발명 털머위 추출물의 우수한 MMP-1 발현 저해 및 아쿠아포린-3 발현 증가 효과를 확인함으로써, 본 발명 털머위 추출물이 주름개선 및 보습 효능을 가질 것이라 판단하고 이를 화장품에 적용 시 화장품에 실질적 기능성을 부여할 수 있을지 확인하기 위하여 하기와 같이 화장료를 제조하였다.

더욱 구체적으로, 실시예 1 내지 3의 털머위 추출물을 각각 10.0 중량% 함유하는 화장료 조성물을 제조하고, 이들 각각을 제조예 1 내지 3이라 칭하고 하기 실험에 이용하였다. 한편, 효능의 비교를 위해 털머위 추출물이 포함되지 않은 화장료 조성물을 제조하여, 이를 비교제조예 1이라 칭하고 하기 실험에 이용하였다. 제조예 1 내지 3 및 비교제조예 1의 구체적 조성은 하기 표 3에 나타내었다.

성분	제조예 1 함량(중량%)	제조예 2 함량(중량%)	제조예 3 함량(중량%)	비교제조예 1 함량(중량%)
실시예 1	10.0	-	-	-
실시예 2	-	10.0	-	-
실시예 3	-	-	10.0	-
1,3-부틸렌글라이콜	10.0	10.0	10.0	10.0
글리세린	5.1	5.1	5.1	5.1
프로필렌글라이콜	4.2	4.2	4.2	4.2
토코페릴라세테이트	3.0	3.0	3.0	3.0
유동파라핀	4.8	4.8	4.8	4.8
트리에탄올아민	1.0	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	3.1	3.1	3.1	3.1
마카다미아너트오일	2.5	2.5	2.5	2.5
폴리솔베이트60	1.6	1.6	1.6	1.6
솔비탄세스퀴롤레이트	1.6	1.6	1.6	1.6
프로필파라벤	0.6	0.6	0.6	0.6
카복실비닐폴리머	1.5	1.5	1.5	1.5
향, 방부제	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량
계	100.0	100.0	100.0	100.0

[실험예 4: 본 발명 털머위 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 확인]

본 실험에서는 본 발명의 털머위 추출물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여, 건강한 35세~50세의 여성 60명을 대상으로 측정하였다. 먼저, 1조 당 15명씩 4개 그룹으로 나누어 A조는 제조예 1을, B조는 제조예 2를, C조는 제조예 3을, D조는 비교제조예 1의 제형을 안면부에 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 3개월간 도포하였다.

3개월 후 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 주름의 영상분석을 통하여 평가하였다. 피험자의 설문은 사용 전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선 및 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료	개선없음	약간의 개선	중등도의 개선	상당한 개선
제조예 1	3	7	4	1
제조예 2	2	6	5	2
제조예 3	3	5	6	1
비교제조예 1	10	3	2	-

한편, 주름의 영상분석에 의한 평가는, 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후 레플리카를 눈 밑의 동일부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다.

영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전과 비교한 주름 밀도에 대한 감소율로 하기 표 5에 나타내었다.

시료	주름 밀도 감소율 (%)
제조예 1	49
제조예 2	53
제조예 3	52
비교제조예 1	16

상기 표 4 및 표 5의 결과로부터, 털머위 추출물을 함유한 제조예 1 내지 3의 피부 주름 개선 효과가 우수함을 확인하였다.

[실험예 5: 본 발명 털머위 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선 효과 확인]

본 실험에서는 본 발명의 털머위 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선 효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다.

피부 질환이 없는 20~40대 80명을 대상으로 1조 당 20명씩 4개조로 나누고, 각 조별로 A조는 제조예 1을, B조는 제조예 2를, C조는 제조예 3을, D조는 비교제조예 1을 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 1개월간 전박부에 도포하였다.

도포 시작 전 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 corneometer(CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값으로 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후 피부 전도도 증가율(%)을 측정하여 그 증가율을 하기 표 6에 나타내었다.

	피부 전도도 증가율 (%)
	1주 후	2주 후	4주 후
제조예 1	48	54	58
제조예 2	52	56	59
제조예 3	52	55	58
비교제조예 1	25	32	37

상기 표 6의 결과와 같이, 본 발명의 털머위 추출물을 함유하는 제조예 1 내지 제조예 3의 경우, 비교제조예 1에 비하여 피부 전도도 증가율이 우수하였다. 일반적으로 피부 전도도는 피부의 수분량과 비례하므로 상기 표 6의 결과는 털머위 추출물을 함유하는 화장료가 추출물을 함유하지 않는 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지시킨다는 것을 확인한 것이다.

Claims (5)

1. 털머위(Farfugium japonicum) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 털머위 추출물은,
   용매 추출법, 아임계 추출법 및 초임계 추출법 중 선택되는 어느 하나 이상으로 제조된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 용매 추출법은,
   물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출 용매를 이용한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은,
   피부 주름 개선용 또는 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물의 제형은,
   화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스; 파운데이션; 스킨커버; 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 및 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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