KR20220131222A - 암 치료 방법 및 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 산화된 LDL에 결합하는 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 조성물 및 방법은 종양의 크기를 감소시키고, 대식세포 침윤을 감소시키고, 및/또는 전이를 억제할 수 있다.

Description

암 치료 방법 및 조성물

본 발명은 일반적으로 산화된 저-밀도 지단백질의 생물학적 활성을 억제함으로써 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

비만은 당뇨병 및 여러 유형의 암 발병 위험을 증가시키는 것으로 믿어진다. 비만은 예를 들어, 지방 조직 기능 장애, 저-등급 및 만성 염증, 및 지질 대사 및 순환 호르몬 수치의 변화를 비롯한 다양한 유해한 생리학적 변화와 관련이 있다. 산화된 저-밀도 지단백질 (OxLDL)은 동맥벽에서 LDL의 산화적 변형의 결과로 형성되는 전염증 매개체이다. OxLDL은 심근경색, 뇌졸중, 및 사망을 비롯한 유해한 심혈관 (CV) 결과를 초래할 수 있는 죽상동맥경화증의 발병과 가장 일반적으로 연관된다. OxLDL은 A-형 스캐빈저 수용체 (SR A), 분화 클러스터 36 (CD36), CD68, 뮤신, 렉틴-유사 oxLDL 수용체-1 (LOX 1)을 비롯한 다양한 세포 스캐빈저 수용체를 통해 신호를 보낸다.

LOX-1은 내피 세포에서 발현되지만, 대식세포, 평활근 세포, 섬유아세포, 및 혈소판에서도 발견된다. 또한 LOX-1은 가용성 형태로 분비된다. 여러 연구에서 LOX-1을 통한 oxLDL 신호전달이 죽상동맥경화증의 발달과 진행에 중요한 역할을 한다는 것이 밝혀졌다. 본 발명은 oxLDL 의존성 기전을 이용한 암 치료 방법 및 조성물을 제공한다.

발명의 요약

일 측면에서, 본 발명은 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 단편 (즉, 항-oxLDL 항체 또는 이의 단편)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양으로의 대식세포 침윤을 억제하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 단편 (즉, 항-oxLDL 항체 또는 이의 단편)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양의 전이를 억제하는 방법을 제공한다.

일부 구체예에서, 대상체는 종양을 갖는 것으로 진단된다.

일부 구체예에서, 종양은 LOX-1-양성 종양이다. 다른 구체예에서, 종양은 LOX-1, SR-A, CD36, CD38, 및 뮤신 중 하나 이상에 대해 양성이다.

일부 구체예에서, 종양은 종양은 난소 암종, 방광 요로상피 암종, 신장 투명 세포 암종, 직장 선암종, 결장 선암종, 전립선 선암종, 유선 상피 세포 종양, 교모세포종, 췌장암, 및 식도암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.

일부 구체예에서, 방법은 종양의 성장 속도, 종양의 대식세포 침윤, 및/또는 종양의 전이 가능성을 감소시킨다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 항체 또는 이의 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에게 다음을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:

(a) 화학요법, 방사선 요법, 및 면역요법으로 이루어진 군으로부터 선택된 1차 항암 요법의 치료 유효량, 및

(b) 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 단편.

일부 구체예에서, 암은 LOX-1-양성이다. 다른 구체예에서, 암은 LOX-1, SR-A, CD36, CD38, 및 뮤신 중 하나 이상에 대해 양성이다.

일부 구체예에서, 암은 난소 암종, 방광 요로상피 암종, 신장 투명 세포 암종, 직장 선암종, 결장 선암종, 전립선 선암종, 유선 상피 세포 종양, 교모세포종, 췌장암, 및 식도암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.

일부 구체예에서, 암은 예를 들어, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 비-호지킨 림프종, 및 다발성 골수종을 포함하는 혈액암이다.

일부 구체예에서, 항체 또는 이의 단편은 1차 항암 요법에 대한 보조제로서 투여된다.

일부 구체예에서, 대상체는 혈청 고지혈증, 제2형 당뇨병, 또는 대사 증후군을 갖는 것으로 진단된다.

임의의 상기 측면의 일부 구체예에서, 항-oxLDL 항체 또는 이의 단편은 LOX-1에 대한 oxLDL의 결합을 억제한다. 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 단편은 SR-A, CD36, CD38, 및 뮤신 중 하나 이상에 대한 oxLDL의 결합을 억제한다.

임의의 상기 측면의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 단편은 천연 (산화되지 않은) LDL에 대한 것보다 적어도 10배, 50배, 100배, 또는 1,000배 더 큰 친화도로 oxLDL에 결합한다.

일부 구체예에서, 항체는 인간 항체, 인간화 항체, 뮤린 항체, 또는 토끼 항체, 또는 이의 단편이다.

일부 구체예에서. 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8, 서열번호 9, 및 서열번호 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 LCDR과 실질적으로 동일한 적어도 하나의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함한다.

일부 구체예에서. 항체 또는 이의 단편은 서열번호 5, 서열번호 6, 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 LCDR과 실질적으로 동일한 적어도 하나의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함한다.

일부 구체예에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 11과 실질적으로 동일한 가변 중쇄 영역 (V_H), 서열번호 12와 실질적으로 동일한 가변 경쇄 영역 (V_L), 또는 둘 다를 포함한다

일부 구체예에서, 항체 또는 그의 단편은

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVSSISVGGHRTYYADSVKGRSTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIRVGPSGGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 3)와 실질적으로 동일한 중쇄,

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSNTNIGKNYVSWYQQLPGTAPKLLIYANSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDASLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (서열번호 4)와 실질적으로 동일한 경쇄, 또는 둘 다를 포함한다.

중쇄는, gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaacgcctggatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaagtattagtgttggtggacataggacatattatgcagattccgtgaagggccggtccaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacactgccgtgtattactgtgcacggatacgggtgggtccgtccggcggggcctttgactactggggccagggtacactggtcaccgtgagctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtac

aacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호 1)와 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있고, 경쇄는 cagtctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcctgctctggaagcaacaccaacattgggaagaactatgtatcttggtatcagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctatgctaatagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcgtcatgggatgccagcctgaatggttgggtattcggcggaggaaccaagctgacggtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacg

catgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca (서열번호 2)와 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다.

일부 구체예에서, 항체는 오르티쿠맙이다. 다른 구체예에서, 항체 단편은 오르티쿠맙의 단편이다.

일부 구체예에서, 항체는 적어도 5 mg/kg의 초기 용량으로 정맥내 투여되고, 이후에 각각 적어도 2 mg/kg/주, 적어도 2.5 mg/kg/2주, 또는 적어도 6 mg/kg/월의 복수의 후속 용량이 뒤따른다. 다른 구체예에서, 항체는 적어도 3개월 동안 약 330 mg/월의 용량으로 피하 투여된다.

본원에 사용된 "보조 요법"은 1차 요법의 효과를 증가/극대화하기 위해, 치료 또는 1차 질환의 부작용을 완화하기 위해 및/또는 질환의 재발을 방지하기 위해 치료가 필요한 2차 질환인 1차 질환 (즉, 1차 요법이 지시되는 임상 징후)을 치료하기 위해 투여되는, 2차 요법을 지칭한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편은 1차 질환 (예를 들어, 암 또는 종양)을 치료하거나 oxLDL의 혈장 농도를 감소시키기 위해 애쥬번트로서 투여된다.

본원에 사용된 "투여하는" 및/또는 "투여하는"은 약제학적 조성물을 환자에게 전달하기 위한 임의의 경로를 지칭한다. 전달 경로에는 비-침습적 경구 (입을 통해), 국소 (피부), 경점막 (코, 협측/설하, 질, 안구 및 직장) 및 흡입 경로뿐만 아니라 비경구 경로, 및 당업계에 공지된 다른 방법이 포함될 수 있다. 비경구는 안와내, 주입, 동맥내, 경동맥, 피막내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐내, 척수내, 흉골내, 척추강내, 자궁내, 정맥내, 지주막하, 피막하, 피하, 경점막 또는 경기관를 포함하여 일반적으로 주사와 관련된 전달 경로를 나타낸다. 비경구 경로를 통해, 조성물은 주입용 또는 주사용 용액 또는 현탁액의 형태, 또는 동결건조된 분말의 형태일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "유효량"은 질병 또는 장애의 적어도 하나 이상의 증상을 감소시키기 위한 약학적 조성물의 양을 지칭하고 원하는 효과를 제공하기에 충분한 양의 약학적 조성물에 관한 것이다. 본원에 사용된 "치료학적으로 유효한 양"이라는 문구는 임의의 의학적 치료에 적용할 수 있는 합리적인 이익/위험 비율로 장애를 치료하기에 충분한 양의 조성물을 의미한다.

증상의 치료학적 또는 예방학적으로 유의한 감소는 예를 들어, 대조군 또는 미처리 대상체 또는 본원에 기재된 펩티드를 투여하기 전의 대상체의 상태와 비교하여 측정된 매개변수에서 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 125%, 적어도 약 150% 또는 이상이다. 측정되거나 측정 가능한 매개변수는 임상적으로 검출 가능한 질병의 표지, 예를 들어, 생물학적 표지의 상승 또는 저하된 수준, 뿐만 아니라 임상적으로 허용되는 증상 척도 또는 죽상경화증에 대한 표지와 관련된 매개변수를 포함한다. 그러나, 본 명세서에 개시된 바와 같은 조성물 및 제형의 총 일일 사용량은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 것임을 이해할 것이다. 필요한 정확한 양은 치료 중인 질병의 유형, 성별, 연령 및 대상체의 체중과 같은 요인에 따라 다르다.

"대상체" 또는 "개인" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유류"는 진단, 예후 또는 치료가 필요한 임의의 대상체, 특히 포유동물 대상체를 의미한다. 포유류 개체에는 인간, 가축, 농장 동물, 동물원 동물, 스포츠 동물, 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 쥐, 생쥐, 말, 소 떼, 소와 같은 애완동물; 유인원, 원숭이, 오랑우탄, 및 침팬지와 같은 영장류; 개 및 늑대와 같은 개과 동물; 고양이, 사자, 및 호랑이와 같은 고양이과; 말, 당나귀, 및 얼룩말과 같은 이퀴드; 소, 돼지, 양 등의 식용 동물; 사슴, 및 기린과 같은 유제류; 마우스, 래트, 햄스터, 및 기니피그와 같은 설치류; 등등이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 구체예에서, 포유동물은 인간 대상체이다.

"실질적으로 동일한"은 최적으로 정렬될 때, 예를 들어 하기에 기재된 방법을 사용하여 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 제2 핵산 또는 아미노산 서열과 공유하는 핵산 또는 아미노산 서열을 의미한다. "실질적인 동일성"은 전장 서열, 에피토프 또는 면역원성 펩티드, 기능적 도메인, 암호화 및/또는 조절 서열, 엑손, 인트론, 프로모터, 및 게놈 서열과 같은 다양한 유형 및 길이의 서열을 지칭하는 데 사용될 수 있다. 2개의 폴리펩타이드 또는 핵산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 예를 들어, Smith Waterman Alignment (Smith, T. F. 및 M. S. Waterman (1981) J Mol Biol 147:195-7); GeneMatcher Plus^TM에 통합된 "BestFit" (Smith 및 Waterman, Advances in Applied Mathematics, 482-489 (1981)), Schwarz 및 Dayhof (1979) Atlas of Protein Sequence and Structure, Dayhof, M. O., Ed pp 353-358; BLAST 프로그램 (Basic Local Alignment Search Tool; (Altschul, S. F., W. Gish, 등 (1990) J Mol Biol 215: 403-10), BLAST-2, BLAST-P, BLAST-N, BLAST-X, WU-BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2, CLUSTAL, 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 내에 있는 다양한 방식으로 결정된다. 또한, 당업자는 비교되는 서열의 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 일반적으로, 단백질의 경우, 비교 서열의 길이는 적어도 10개의 아미노산, 바람직하게는 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 250, 300, 350, 또는 400개의 아미노산 또는 그 이상일 것이다. 핵산의 경우, 비교 서열의 길이는 일반적으로 적어도 25, 50, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 800, 900, 1000, 1100, 또는 1200 이상일 것이다. DNA 서열을 RNA 서열과 비교할 때 서열 동일성을 결정하기 위해, 티민 뉴클레오티드는 우라실 뉴클레오티드와 등가인 것으로 이해된다. 보존적 치환은 일반적으로 다음 군 내의 치환을 포함한다: 글리신, 알라닌; 발린, 이소류신, 류신; 아스파트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민; 세린, 트레오닌; 라이신, 아르기닌; 및 페닐알라닌, 티로신.

본 발명은 다음 도면을 참조함으로써 더 잘 이해될 수 있다. 도면의 구성요소는 반드시 일정한 비율로 표시되는 것은 아니며, 대신에 본 개시의 원리를 설명하는 데 중점을 둔다. 도면에서, 도면 부호는 상이한 도면 전체에 걸쳐 대응하는 부분을 나타낸다.
도 1은 천연 (산화되지 않은) LDL 및 MDA-LDL에 대한 오르티쿠맙 결합을 비교하는 선 그래프이다.
도 2a는 오르티쿠맙 및 대조군 항체로 처리된 세포로부터의 MCP-1 방출을 나타내는 막대 그래프이다. 도 2b는 시간 경과에 따른 누적 MCP-1 방출을 나타내는 막대 그래프이다.
도 3은 IκBα에 대해 염색된 웨스턴 블롯의 현미경 사진이다.
도 4a 내지 4b는 오르티쿠맙 또는 대조군 항체로 치료한 후 죽상동맥경화증의 쥐 모델에서 대식세포 침윤 (도 4a) 및 총 플라크 부하(도 4b)를 보여주는 그래프이다.

지방이 풍부한 식이 및 지질 관련 질병이 유방암, 전립선암, 결장암 및 간을 비롯한 특정 유형의 암 발병률을 증가시킨다는 것은 널리 받아들여지고 있다. 혈장 지질은 여러 유형의 암과 상관관계가 있다. 특히, 일부 유방암 환자에서 총 콜레스테롤 (TC), 중성지방 (TG), 및 LDL이 유의하게 더 높은 것으로 밝혀졌다.

고지방식이는 암세포의 발달과 성장을 지원하는 유리한 미세환경으로의 전환을 유도할 수 있다. 전환은 호르몬 환경이나 세포막의 특성 변화로 인해 발생하며, 후자는 지질 구성의 변경으로 인해 발생하거나, 종양 세포에 대한 면역 반응을 조절함으로써 발생한다. 그리고 다른 지질-관련 대사 질환 (예를 들어, 비만 및 NASH)과 마찬가지로 산화 스트레스는 LDL을 oxLDL로 산화시켜 돌연변이 유발 및 발암 유발 효과를 유발한다. 다양한 임상 연구에서 발암 과정에서 oxLDL의 역할이 강조되고 있으며, 증가된 혈청 oxLDL 농도와 암 위험 사이의 양의 상관관계가 췌장암, 결장암, 유방암 및 식도암에 대해 보고되었다. 또한, 결장직장암 (CRC) 환자에 대한 임상 연구에서 oxLDL을 포함한 산화 스트레스의 결과로 지질 산화 생성물이 CRC 발달의 잠재적 마커로 연구되었다. 이 연구에서 CRC 환자와 건강한 대조군 사이의 oxLDL 혈청 수준에서 유의미한 차이가 관찰되지 않았지만, oxLDL 수준은 진행 단계의 원발성 종양 진행 환자에 비해 원발성 종양의 초기 단계를 가진 환자에서 유의하게 더 높은 것으로 나타났다 (Diakowska 등, Gastroenterol. Res. Pract. 2015:146819 (2015)).

LOX-1을 통한 OxLDL 매개 신호전달은 접착 단백질, 기타 전염증 매개체, 및 혈관신생 인자의 상향조절을 유발하며, 이들 모두는 암에서 병원성이다. 이러한 병원성 신호 분자 중에는 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1) 및 핵 인자-카파 B (NFκB)가 있다. MCP-1은 염증 면적으로 대식세포 모집을 유도하는 케모카인이며, 그 발현은 종양-관련-대식세포 (TAM) 침윤 정도와 상관관계가 있다. NFκB는 전염증성 유전자 발현의 주요 조절자 역할을 하는 전사 인자이다. NFκB 활성은 암을 포함한 염증 상태에서 상향 조절되며, 정상 세포에서 종양 세포로의 변형, 종양 세포 생존 및 암에서 지속되는 진행 중인 염증 주기에 기여한다. 중요하게도, oxLDL-Lox-1-매개 신호전달은 MCP-1 상향조절과 NFκB 활성 모두에 연루되어 있다.

본 발명은 부분적으로 항-oxLDL 항체의 항암 특성의 특성화에 기초한다. oxLDL을 직접 간섭하면 LOX-1-매개 종양 형성 및/또는 진행을 억제할 수 있다. 본 발명은 또한 오르티쿠맙이 천연/비산화 LDL에 비해 산화된 형태의 LDL (즉, oxLDL)에 특이적으로 결합한다는 발견에 기초한다. 오르티쿠맙은 oxLDL에 대한 친화도가 약 8 ± 6 nM인 완전 인간 재조합 단클론 IgG1 항체이다.

항-oxLDL 항체

본원에서 논의된 바와 같이, 본 발명은 항-oxLDL 항체를 포함한다. 특히 유용한 항-oxLDL 항체 중 하나는 오르티쿠맙이다. 오르티쿠맙의 합성 및 특성화는 WO 2009/08205에 기재되어 있으며 항체 2D03으로 지칭된다. WO 2009/08205는 그 전체가 참고로 여기에 포함된다.

WO 2009/08205의 도 2는 상보성 결정 영역 (CDR)에 밑줄을 긋는 2D03 중쇄 및 2D03 경쇄의 아미노산 서열을 기재하고 있다.

그 전체가 참고로 본 명세서에 포함되는 WO 2007/025781은 이 발명은 또한 항체 2D03 (즉, 오르티쿠맙)에 의해 선택적으로 결합되는 산화된-LDL 에피토프에 선택적으로 결합하는 항체를 포함하고 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 항체 2D03의 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 (CDR) 모두를 포함하는 항체를 추가로 포함함을 기술한다. (예를 들어, 16, 29, 및 30를 참조한다). 또한, 2D03 항체 CDR에 상응하는 서열을 갖는 3 또는 4개의 CDR을 갖는 항체는 바람직하게는 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 3개의 중쇄 모두 또는 3개의 경쇄 CDR을 모두 갖고; 따라서 본 발명의 이러한 측면은 항체 2D03의 상응하는 3개의 경쇄 CDR의 서열을 갖는 3개의 경쇄 CDR, 또는 항체 2D03의 상응하는 3개의 중쇄 CDR의 서열을 갖는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항체를 포함하고; 더욱 더 바람직하게는, 항체는 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하고; 항체가 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 6개의 CDR 모두를 포함하지 않는 경우, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 "비동일한" CDR 중 일부 또는 전부가 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열, ("변이체"에 의해 WO 2007/025781은 변이체가 상응하는 CDR의 서열과 50% 이상의 서열 동일성을 갖는다는 의미를 포함하고, 더 바람직하게는 적어도 70%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 80% 또는 적어도 90% 또는 적어도 95%; 가장 바람직하게는, 변이체는 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열과 96% 또는 97% 또는 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖고; 전형적으로 "변이체" CDR 서열은 항체 2D03의 상응하는 CDR의 서열과 5 또는 4 또는 3 또는 2 또는 단 1개의 아미노산 잔기 차이를 가지며); 본 발명의 이러한 측면은 항체 2D03을 포함한다.

중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR) 1 (HCDR1), 2 (HCDR2) 및 3 (HCDR3)은 각각 서열번호 5, 6 및 7에 기재되어 있고; 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR) 1 (LCDR1), 2 (LCDR2) 및 3 (LCDR3)은 각각 서열번호 8, 9 및 10에 기재되어 있다. 오르티쿠맙은 서열번호 11의 가변 중부 영역 (VH) 아미노산 서열, 및 서열번호 12의 가변 경부 영역 (VL) 아미노산 서열을 함유한다. 오르티쿠맙은 서열번호 3의 중쇄 아미노산 서열, 서열번호 4의 경쇄 아미노산 서열을 함유한다.

HCDR1은 FSNAWMSWVRQAPG (서열번호 5)이다.

HCDR2는 SSISVGGHRTYYADSVKGR (서열번호 6)이다.

HCDR3은 ARIRVGPSGGAFDY (서열번호 7)이다.

LCDR1은 CSGSNTNIGKNYVS (서열번호 8)이다.

LCDR2는 ANSNRPS (서열번호 9)이다.

LCDR3은 CASWDASLNGWV (서열번호 10)이다.

가변 중부 영역 (V_H)은

EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NAWMSWVRQA PGKGLEWVSS ISVGGHRTYY ADSVKGRSTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARIR VGPSGGAFDY WGQGTLVTVS (서열번호 11)이다.

가변 중부 영역 (V_L)은

QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSNTNIG KNYVSWYQQL PGTAPKLLIY ANSNRPSGVP DRFSGSKSGT SASLAISGLR SEDEADYYCA SWDASLNGWV FGGGTKLTVL (서열번호 12)이다.

일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편은 서열번호 1 및/또는 2에 기재된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 본질적으로 이루어진다.

일부 구체예에서, 본 발명은 각각 서열번호 5 내지 10에 기재된 바와 같은 oxLDL 및 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 중 하나 이상에 결합하는 항체 또는 항체 단편을 제공한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체를 제공한다. 보다 바람직하게는, 항체는 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 2 또는 3 또는 4 또는 5개의 CDR을 갖는다. 항체가 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 3 또는 4개의 CDR을 갖는 경우, 항체가 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 3개의 중쇄 모두 또는 3개의 경쇄 CDR 모두를 갖는 것이 바람직하다. 따라서, 방법의 이러한 측면은 오르티쿠맙의 상응하는 3개의 경쇄 CDR의 서열을 갖는 3개의 경쇄 CDR, 또는 오르티쿠맙의 상응하는 3개의 중쇄 CDR의 서열을 갖는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항체를 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, 항체는 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.

항체가 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열을 갖는 6개의 CDR 모두를 포함하지 않는 경우, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 "비-동일한" CDR 중 일부 또는 전부가 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열의 변이체를 포함하는 경우가 바람직하다. "변이체"는 변이체가 해당 CDR의 서열과 50% 이상의 서열 동일성을 갖는다는 의미를 포함하고, 보다 바람직하게는 70% 이상, 더욱 더 바람직하게는 80% 이상 또는 90% 이상 또는 95% 이상이다. 가장 바람직하게는, 변이체는 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열과 96% 또는 97% 또는 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는다. 전형적으로, "변이체" CDR 서열은 오르티쿠맙의 상응하는 CDR의 서열과 5 또는 4 또는 3 또는 2 또는 단 1개의 아미노산 잔기 차이를 갖는다.

특히, 본 발명은 "HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 중 하나 이상"을 함유하는 항체를 항체가 CDR 중 1개, 임의의 2개, 임의의 3개, 임의의 4개, 임의의 5개 또는 6개 모두 (즉, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 함유하는 구체예를 포함하는 것을 제공한다. 예를 들어, 구체예의 한 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 바와 같은 HCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 6에 기재된 HCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 7에 기재된 바와 같은 HCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 8에 기재된 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 9에 기재된 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 HCDR1 및 서열번호 6에 기재된 HCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 HCDR1 및 서열번호 7에 기재된 HCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 HCDR1 및 서열번호 8에 기재된 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 HCDR1 및 서열번호 9에 기재된 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5에 기재된 HCDR1 및 서열번호 10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 6에 기재된 HCDR2 및 서열번호 7에 기재된 HCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 6에 기재된 HCDR2 및 서열번호 8에 기재된 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 6에 기재된 HCDR2 및 서열번호 9에 기재된 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 6에 기재된 HCDR2 및 서열번호 10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 7에 기재된 HCDR3 및 서열번호 8에 기재된 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 7에 기재된 HCDR3 및 서열번호 9에 기재된 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 7에 기재된 HCDR3 및 서열번호 10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 8에 기재된 LCDR1 및 서열번호 9에 기재된 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 8에 기재된 LCDR1 및 서열번호 10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 9에 기재된 LCDR2 및 서열번호 10에 기재된 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 7에 기재된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6 및 8에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2 및 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6 및 9에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6 및 10에 기재된 HCDR1, HCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7 및 8에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR3 및 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7 및 9에 기재된 HCDR1, HCDR3 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7 및 10에 기재된 HCDR1, HCDR3 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 9 및 10에 기재된 HCDR1, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 7 및 8에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3 및 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 7 및 9에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 7 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 7, 8 및 9에 기재된 바와 같은 HCDR3, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 7, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR3, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 7, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR3, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 8 내지 10에 기재된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 8에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3 및 LCDR1을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 7 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5 내지 7 및 10에 각각 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6, 8 및 9에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 서열번호 5, 7, 8 및 9에 각각 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR3, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7, 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR3, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR3, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 8, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6 내지 9에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6 내지 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 7, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6, 8, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 7 내지 10에 기재된 바와 같은 HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 9에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1 및 LCDR2를 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 8 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 7, 9 및 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 6, 8 내지 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5, 7 내지 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 6 내지 10에 기재된 바와 같은 HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다. 또 다른 측면은 항체가 각각 서열번호 5 내지 10에 기재된 바와 같은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 함유하는 것을 제공한다.

본원에 제공된 임의의 폴리펩티드 서열 (예를 들어, CDR)의 변이체를 만들고 사용할 때, 주어진 아미노산은 유사한 물리화학적 특성, 예를 들어 하나의 지방족 잔기를 다른 것으로 치환 (예를 들어, 서로에 대해 Ile, Val, Leu 또는 Ala), 또는 하나의 극성 잔기를 다른 것으로 치환 (예를 들어, Lys 및 Arg, Glu 및 Asp, 또는 Gln 및 Asn 사이)를 갖는 잔기로 치환될 수 있음이 이해된다. 다른 이러한 보존적 치환, 예를 들어 유사한 소수성 특성을 갖는 전체 영역의 치환 또는 유사한 측쇄 부피를 갖는 잔기의 치환은 잘 알려져 있다. 보존적 아미노산 치환을 포함하는 단리된 항체는 본원에 기재된 임의의 검정에서 시험하여 본원의 다른 곳에서 기재된 검정에 의해 결정된 바와 같이 원하는 활성을 확인할 수 있다.

아미노산은 측쇄 특성의 유사성에 따라 다음과 같이 분류될 수 있다 (A. L. Lehninger, Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)): (1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 비하전 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His (H). 대안적으로, 자연적으로 발생하는 잔기는 공통 측-쇄 특성에 따라 다음 군으로 나눌 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln, Ala, Tyr, His, Pro, Gly; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe, Pro, His, 또는 히드록시프롤린. 비-보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 멤버를 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다.

본원에 기재된 변이체에 사용하기에 특히 바람직한 보존적 치환은 다음과 같다: Ala를 Gly 또는 Ser으로; Arg에서 Lys로; Asn으로 Gln 또는 His로; Asp로 Glu 또는 Asn으로; Cys를 Ser로; Asn으로 Gln; Asp에 Glu; Ala 또는 Pro로 Gly; His로 Asn 또는 Gln으로; Ile에서 Leu로 또는 Val로; Leu에서 Ile 또는 Val로; Lys에서 Arg로, Gln으로 또는 Glu로; Leu, Tyr로 또는 Ile로; Phe에서 Met로, Leu로 또는 Tyr로; Ser을 Thr로; Ser으로 Thr; Trp로 Tyr 또는 Phe로; Tyr을 Phe 또는 Trp로, 및/또는 Phe에서 Val로, Tyr로, Ile로 또는 Leu로. 일반적으로 보존적 치환은 유사한 물리화학적 특성을 가진 잔기 교환을 포함한다 (즉, 소수성 잔기를 다른 소수성 아미노산으로 치환).

본원에 기재된 바와 같은 단리된 펩티드의 적절한 형태를 유지하는 데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 또한 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선하고 비정상적인 가교를 방지할 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)은 안정성을 향상시키거나 다량체화를 촉진하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 단리된 펩티드에 첨가될 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체는 폴리펩티드 및/또는 살아있는 유기체, 예를 들어, Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M), Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q), Asp (D), Glu (E), Lys (K), Arg (R), 및 His (H)의 에피토프에 의해 생성된 단백질에서 일반적으로 발견되는 천연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 대체 아미노산을 포함할 수 있다. 대체 아미노산의 비-제한적 예에는 D-아미노산; 베타-아미노산; 호모시스테인, 포스포세린, 포스포트레오닌, 포스포티로신, 히드록시프롤린, 감마-카르복시글루타메이트; 히푸르산, 옥타하이드로인돌-2-카복실산, 스타틴, 1,2,3,4,-테트라하이드로이소퀴놀린-3-카복실산, 페니실라민(3-머캅토-D-발린), 오르니틴, 시트룰린, 알파-메틸-알라닌, 파라-벤조일페닐알라닌, 파라-아미노 페닐알라닌, p-플루오로페닐알라닌, 페닐글리신, 프로파길글리신, 사르코신 및 tert-부틸글리신), 디아미노부티르산, 7-히드록시-테트라히드로이소퀴놀린카르복실산, 나프틸알라닌, 비페닐알라닌, 시클로헥실알라닌, 아미노이소부티르산, 노르발린, 노르류신, tert-류신, 테트라히드로이소퀴놀린카르복실산, 피페콜산, 페닐글리신, 호모페닐알라닌, 시클로헥실글리신, 디히드로류신, 2,2-디에틸글리신, 1-아미노-1-시클로펜탄카르복실산, 1-아미노-1-시클로헥산카르복실산, 아미노벤조산, 아미노나프토산, 감마아미노부티르산, 디플루오로페닐알라닌, 니페콧산, 알파-아미노 부티르산, 티에닐-알라닌, t-부틸글리신, 트리플루오로발린; 헥사플루오로류신; 플루오르화 유사체; 아지드-변형 아미노산; 알킨-변형 아미노산; 시아노-변형 아미노산; 및 이의 파생물이 포함된다.

일부 구체예에서, 항체는 변형될 수 있으며, 예를 들어 부분은 하나 이상의 아미노산에 추가될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 하나 이상의 모이어티 분자, 예를 들어, 펩티드당 1개 이상의 부분 분자, 펩티드당 2개 이상의 부분 분자, 펩티드당 5개 이상의 부분 분자, 항체당 10개 이상의 부분 분자 또는 항체당 더 많은 부분 분자가 포함될 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체는 하나 이상의 유형의 변형 및/또는 모이어티, 예를 들어, 변형 1 유형, 변형 2 유형, 변형 3 유형 또는 그 이상의 유형을 포함할 수 있다. 변형 및/또는 모이어티의 비제한적인 예에는 페길화; 글리코실화; HESylation; 엘필화; 지질화; 아세틸화; 아미드화; 엔드 캡핑 수정; 시아노기; 인산화; 및 고리화가 포함된다. 일부 구체예에서, 말단 캡핑 변형은 N-말단에서의 아세틸화, N-말단 아실화, 및 N-말단 포르밀화를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 말단 캡핑 변형은 C-말단에서의 아미드화, C-말단 알코올, 알데히드, 에스테르, 및 티오에스테르 모이어티의 도입을 포함할 수 있다.

치료학적 방법

본 발명은 또한 oxLDL에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여함으로써 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 oxLDL에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여함으로써 암이 있는 것으로 진단된 대상체에서 전이를 예방하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편의 결합은 oxLDL의 하나 이상의 생물학적 기능을 억제하거나 차단한다. 일부 구체예에서, 암은 췌장암, 유방암, 직장 선암종 및 결장 선암종을 포함하는 결장직장암, 난소암, 방광 요로상피암, 신장 투명 세포 암종, 전립선암 (전립선 선암종)이다, 일부 구체예에서, 암 세포는 LOX-1을 발현하고/하거나 발현하는 것으로 확인된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편은 LOX-1에 대한 oxLDL의 결합을 억제, 감소 또는 차단한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편은 SR-A, CD36, CD38 및/또는 뮤신에 대한 oxLDL의 결합을 억제, 감소 또는 차단한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항체 단편은 오르티쿠맙, 오르티쿠맙의 단편, 오르티쿠맙의 유도체, 또는 본원에 기재된 임의의 항-oxLDL 항체 또는 항체 단편이다.

다양한 구체예에서, 개시된 방법에서 투여될 조성물은 임의의 투여 경로를 통한 전달을 위해 제제화된다. 예를 들어, 방법은 에어로졸, 비강, 경구, 경점막, 경피, 비경구 또는 장관 경로를 통한 투여를 포함한다. "비경구"는 안와내, 주입, 동맥내, 피막내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐내, 척수내, 흉골내, 척추강내, 자궁내, 정맥내, 지주막하, 피막하, 피하, 경점막 또는 경기관을 포함하여 일반적으로 주사와 관련된 투여 경로를 나타낸다. 비경구 경로를 통해, 조성물은 주입용 또는 주사용 용액 또는 현탁액의 형태, 또는 동결건조된 분말로서 존재할 수 있다. 비경구 경로를 통해, 조성물은 주입 또는 주사용 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 장관 경로를 통해, 약제학적 조성물은 정제, 겔 캡슐, 당-코팅 정제, 시럽, 현탁액, 용액, 분말, 과립, 에멀젼, 미소구체 또는 나노구체 또는 제어 방출을 허용하는 지질 비히클 또는 중합체 비히클의 형태일 수 있다. 전형적으로, 조성물은 주사에 의해 투여된다.

전형적으로, 본원에 개시된 방법에서 유효량의 항-oxLDL은 대상체에서 적어도 4 μg/mL, 바람직하게는 적어도 12 μg/mL의 혈장 농도를 초래한다.

본 발명의 방법은 상기 개시된 항체 또는 항체 단편을 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 개월 이상 동안 약 330 mg/월로 피하 투여하는 단계를 포함할 수 있고, 대상은 성인 인간이다. 다른 구체예는 항체 또는 항체 단편을 매주 2 mg/kg/주 (83 kg의 평균 인간 환자의 경우 166 mg) 이상; 바람직하게는, 약 4 mg/kg/주 (83 kg의 평균 인간 환자의 경우 332 mg)를 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 측면에서, 항-oxLDL 항체의 조성물은 >2.5 mg/kg/2주로 격주로 투여된다 (예를 들어, 83 kg의 평균 인간 환자의 경우 208 mg). 또 다른 측면에서, 항-oxLDL 항체의 조성물은 매달 약 6 mg/kg/월로 투여된다 (예를 들어, 83 kg의 평균 인간 환자의 경우 약 498 mg). 예를 들어, 월간 투여는 12개월 또는 3개월 동안 수행될 수 있다. 또 다른 구체예는 800 내지 900 mg, 900 내지 1000 mg, 1000 내지 1100 mg, 1100 내지 1200 mg, 1200 내지 1300 mg, 1300 내지 1400 mg, 1400 내지 1500 mg, 또는 1500 내지 1600 mg의 초기 용량으로 대상체에게 항체 또는 항체 단편을 투여하는 단계를 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 방법의 유효량은 대략 1000 내지 1500 mg의 오르티쿠맙의 초기 용량, 이어서 2, 3, 4 또는 5주 동안 매주 투여되는 700 내지 900 mg의 항체의 후속 용량 및/또는 1, 2 또는 3개월 동안 매월 투여하는 단계를 포함한다.

다른 구체예는 항-oxLDL 항체 또는 단편의 단계적으로 증량하는 용량을 투여하는 것을 제공한다. 이 구체예에서, oxLDL에 대한 항체 (예를 들어, 오르티쿠맙)의 단일-용량 투여의 예시적인 (시작) 용량은 0.005 내지 0.01 mg/kg (예를 들어, 정맥내)이고; 단일 용량 투여에서 투여될 다른 예시적인 투여량 수준은 0.01 내지 0.15, 0.15 내지 0.75, 0.75 내지 2.5, 2.5 내지 7.5, 및 7.5 내지 30 mg/kg (예를 들어, 정맥내)이다. 예를 들어, 단일 용량 정맥내 투여에서 오르티쿠맙의 시작 용량은 0.007 mg/kg이고; 다른 예시적인 투여량은 후속 단일-투여량 정맥내 투여에서 0.05, 0.25, 1.25, 5.0 또는 15.0 mg/kg일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체의 단일-용량 피하 투여는 0.5 내지 5 mg/kg이고, 다중-용량 피하 투여는 또한 0.5 내지 5 mg/kg이다. 예를 들어, 1.25 mg/kg의 항체는 피하 투여된다. 다양한 구체예에서, 투여량은 각 투여에서 하루의 특정 시간 범위 내에서 투여되고, 다중-투여 치료 (예를 들어, 4회 용량, 3회 용량, 5회 용량, 또는 6회 용량)의 각 용량은 매주 간격으로 투여된다. 시간대는 ±1일이다. 또 다른 예에서, 항체 (예를 들어, 오르티쿠맙)는 인간 대상체에게 300 mg 내지 450 mg (예를 들어, 360 mg)으로 투여되고, 선택적으로 인간 피험자에게 300 mg 내지 450 mg (예를 들어, 360 mg)의 또 다른 용량을 투여하고, 여기서 두 번째 용량은 첫 번째 용량으로부터 적어도 70일 (최대 91일) 떨어져 있다. 항체는 100 내지 170 mg/mL (예를 들어, 150 mg/mL)의 농도로 제형화될 수 있고 추가 희석 없이 피하 투여에 사용하기 위해 또는 정맥내 주입을 위해 큰 부피로 희석될 수 있다.

추가 구체예는 약 10 내지 50 μg/기간, 50 내지 100 μg/기간, 100 내지 150 μg/기간, 150 내지 200 μg/기간, 100 내지 200 μg/기간, 200 내지 300 μg/기간, 300 내지 400 μg/기간, 400 내지 500 μg/기간, 500 내지 600 μg/기간, 600 내지 700 μg/기간, 700 내지 800 μg/기간, 800 내지 900 μg/기간, 900 내지 1000 μg/기간, 1000 내지 1100 μg/기간, 1100 내지 1200 μg/기간, 1200 내지 1300 μg/기간, 1300 내지 1400 μg/기간, 1400 내지 1500 μg/기간, 1500 내지 1600 μg/기간, 1600 내지 1700 μg/기간, 1700 내지 1800 μg/기간, 1800 내지 1900 μg/기간, 1900 내지 2000 μg/기간, 2000 내지 2100 μg/기간, 2100 내지 2200 μg/기간, 2200 내지 2300 μg/기간, 2300 내지 2400 μg/기간, 2400 내지 2500 μg/기간, 2500 내지 2600 μg/기간, 2600 내지 2700 μg/기간, 2700 내지 2800 μg/기간, 2800 내지 2900 μg/기간 또는 2900 내지 3000 μg/기간. 범위의 항체의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 기간은 하루, 일주일, 한 달 또는 다른 기간이다. 일 측면은 항체 (예를 들어, 오르티쿠맙)가 기간당 상기 언급된 임의의 용량의 매주, 격주 또는 매월 빈도로 투여된다는 것이다.

일부 구체예에서, 방법은 1 내지 5일, 1 내지 5주, 1 내지 5개월, 또는 1 내지 5 년 동안 대상체에게 항-oxLDL 항체 (예를 들어, 오르티쿠맙)를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 용량으로 대상체에게 투여되고, 각각의 용량은 적어도 3 일, 5 일, 1 주, 2 주, 1 개월, 2 개월, 또는 이들의 조합으로 분리된다. 다른 구체예에서, 제2 용량은 제1 용량 후 약 2 내지 3 주, 또는 약 3 주 후에 투여되고, 제3 용량은 제1 용량 등의 약 5 내지 6 주 또는 약 6 주 후에 투여된다. 또 다른 구체예에서, 제2 용량은 제1 용량 후 약 2 내지 3 개월, 약 2개월, 약 3 개월 또는 약 4 개월 후에 투여되고, 제3 용량은 제1 용량 후 약 4 내지 6 개월, 약 5 내지 6 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 후에 투여된다.

약제학적 조성물 및 약제

다양한 구체예에서, 본 발명은 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 항-oxLDL 항체 또는 이의 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는 담체"는 관심 화합물을 하나의 조직, 기관 또는 신체 일부로부터 다른 조직, 기관 또는 몸의 일부로 운반하거나 수송하는 데 관여하는 약학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 지칭한다. 예를 들어, 담체는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질, 또는 이들의 조합일 수 있다. 부형제의 예는 전분, 당, 미세결정질 셀룰로스, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제, 방향제, 방부제, 항산화제, 가소제, 겔화제, 증점제, 경화제, 유착제, 현탁제, 계면활성제, 습윤제, 담체, 안정제, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, 담체의 각 성분은 제형의 다른 성분과 상용성이어야 한다는 점에서 "약제학적으로 허용 가능"해야 한다. 또한 접촉할 수 있는 조직이나 기관과 접촉하여 사용하기에 적합해야 하며, 이는 독성, 자극, 알레르기 반응, 면역원성, 또는 치료상의 이점을 과도하게 능가하는 기타 합병증의 위험을 수반하지 않아야 함을 의미한다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 치료학적으로 유효한 양으로 전달될 수 있다. 정확한 치료적 유효량은 주어진 대상에서 치료의 효능 측면에서 가장 효과적인 결과를 산출할 조성물의 양이다. 이 양은 치료학적 화합물 (활성, 약동학, 약력학 및 생체이용률 포함)의 특성, 대상체의 생리학적 상태 (나이, 성별, 질병 유형 및 병기, 일반적인 신체 상태, 주어진 용량에 대한 반응성 및 약물 유형 포함), 제형에서 약제학적으로 허용되는 담체 또는 담체의 성질, 및 투여 경로를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 임상 및 약리학 분야의 숙련자는 예를 들어 화합물 투여에 대한 대상체의 반응을 모니터링하고 그에 따라 투여량을 조정함으로써 일상적인 실험을 통해 치료 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 추가 지침은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro ed. 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA) (2000)를 참조한다.

항체 제조

본 발명은 부분적으로 항-oxLDL 항체, 단편 및 결합 단백질의 사용에 기초한다. 최신 재조합 라이브러리 기술은 oxLDL에 대한 치료 항체를 준비하는 데 사용된다. 뮤린 하이브리도마 세포는 동일한 항체를 다량 생산하지만, 이러한 비인간 항체는 인체에서 이물질로 인식되어 알레르기 반응을 유발할 뿐만 아니라 그 효능 및 혈장 반감기가 감소된다. 이 문제를 해결하기 위해 한 가지 접근 방식은 항체의 쥐 가변 도메인이 인간 불변 영역으로 옮겨져 주로 인간인 항체를 생성하는 키메라 항체를 만드는 것이다. 이 접근법의 추가 개선은 항원과 접촉한 뮤린 항체의 영역인 상보성 결정 영역 (CDR)이 인간 항체 프레임워크로 전달되어 인간화 항체를 생성하는 인간화 항체를 개발하는 것이다. 또 다른 접근법은 특정 항체를 생성하기 위해 동물의 면역화에 의존하지 않는 재조합 기술을 사용하여 완전한 인간 항체를 생성하는 것이다. 대신 재조합 라이브러리는 미리 만들어진 수많은 항체 변이체를 포함하며 라이브러리에는 모든 항원에 대해 특이적인 항체가 하나 이상 있을 가능성이 있다. 파지 디스플레이 시스템은 항체 단편이 필라멘트 파지 입자 표면의 파지 코트 단백질과 융합하여 발현되고 표시되는 반면, 파지 디스플레이 시스템은 표시된 분자를 인코딩하는 유전 정보를 동시에 전달하는 데 사용할 수 있다. 특정 항원에 특이적인 항체 단편을 표시하는 파지는 해당 항원에 대한 결합을 통해 선택될 수 있다. 그 다음 단리된 파지가 증폭될 수 있고 선택된 항체 가변 도메인을 인코딩하는 유전자가 선택적으로 예를 들어, 가령, 다른 항체 형식으로 이전될 수 있다. 전장 면역글로불린 및 당업계에 널리 공지된 적절한 벡터 및 숙주 세포를 사용하여 다량으로 발현된다. 파지 입자에 표시된 항체 특이성의 형식은 다를 수 있다. 가장 일반적으로 사용되는 형식은 항체의 가변 항원 결합 도메인을 모두 포함하는 Fab 및 단일 사슬 (scFv)이다. 단일 사슬 형식은 유연한 링커를 통해 가변 경부 도메인 (VL)에 연결된 가변 중부 도메인 (VH)으로 구성된다. 분석 시약 또는 치료제로 사용하기 전에 표시된 항체 특이성을 가용성 형식, 예를 들어, Fab 또는 scFv로 옮기고 그대로 분석한다. 나중 단계에서 바람직한 특성을 갖는 것으로 확인된 항체 단편은 전장 항체와 같은 또 다른 형식으로 이전될 수 있다.

하이브리도마로부터 항체 생산

세포 융합은 면역학 분야의 숙련자에게 잘 알려진 표준 절차에 의해 달성된다. 융합 파트너 세포주 및 하이브리도마를 융합 및 선택하고 mAb에 대한 스크리닝을 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Ausubel, Harlow, 및 Colligan을 참조하고, 그 내용은 참고문헌으로 전체적으로 본 명세서에 통합된다.

항-oxLDL 항체는 항체를 분비하는 하이브리도마 또는 트랜스펙토마 세포를 마우스의 복강에 주입함으로써 대량으로 생산할 수 있고, 적절한 시간 후, 고역가의 mAb를 함유하는 복수액을 수확하고, 그로부터 mAb를 단리한다. 비-뮤린 하이브리도마 (예를 들어, 래트 또는 인간)를 사용한 mAb의 이러한 생체내 생산을 위해 하이브리도마 세포는 바람직하게는 방사선 조사 또는 흉선이 없는 누드 마우스에서 성장된다. 대안적으로, 항체는 시험관내에서 하이브리도마 또는 트랜스펙토마 세포를 배양하고 분비된 mAb를 세포 배양 배지로부터 분리함으로써 또는 진핵 또는 원핵 세포에서 재조합에 의해 생산될 수 있다.

항체의 재조합 발현

산화된 LDL을 억제하는 재조합 뮤린 또는 키메라 뮤린-인간 또는 인간-인간 항체는 본원에 제공된 교시에 기초한 공지된 기술을 사용하여 본 발명에 따라 제공될 수 있다. 예를 들어, Ausubel 등, eds. Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, N.Y. (1987, 1992, 1993); 및 Sambrook 등 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)를 참조한다.

항-oxLDL 항체를 인코딩하는 DNA는 게놈 DNA 또는 cDNA일 수 있고 이는 중쇄 불변 영역 (Hc), 중쇄 가변 영역 (Hc), 경쇄 가변 영역 (Lv) 및 경쇄 불변 영역 (Lc) 중 적어도 하나를 인코딩한다. 뮤린 V 영역 항원 결합 세그먼트를 인코딩하는 DNA의 소스로서 염색체 유전자 단편의 사용에 대한 편리한 대안은 키메라 면역글로불린 유전자의 구성을 위한 cDNA의 사용이며, 예를 들어, Liu 등 (Proc. Natl. Acad. Sci., USA 84:3439 (1987) 및 J. Immunology 139:3521 (1987))에 보고되었다. cDNA를 사용하려면 원하는 단백질의 합성을 달성하기 위해 숙주 세포에 적합한 유전자 발현 요소가 유전자와 결합되어야 한다. cDNA 서열의 사용은 cDNA 서열이 적절한 RNA 스플라이싱 시스템이 없는 박테리아 또는 기타 숙주에서 발현될 수 있다는 점에서 게놈 서열 (인트론 함유)보다 유리하다.

실시예

하기 실시예는 본 발명에 대한 청구범위의 범위를 제한하도록 의도된 것이 아니라 오히려 특정 실시양태의 예시를 의도한 것이다. 당업자에게 발생하는 예시된 방법의 임의의 변형은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.

실시예 1: 오르티쿠맙은 oxLDL에 특이적으로 결합한다

다양한 형태의 LDL에 대한 오르티쿠맙의 결합 특이성을 조사하였다. 이 실험에서 오르티쿠맙의 천연 (산화되지 않은) LDL 및 말론디알데히드 변형 LDL (MDA-LDL)에 대한 결합을 다양한 농도의 오르티쿠맙에 걸쳐 측정하고 해리 상수 (K_d)를 계산하였다. MDA-LDL은 자연적으로-발생하는 oxLDL 수준을 반영하는 것으로 여겨지는 내인성 LDL 종이기 때문에 이 실험을 위해 선택되었다.

오르티쿠맙은 혈액 공여자의 혈청으로부터 제조된 말론디알데히드 (MDA)-변형 및 천연 인간 LDL에 대한 결합에 대해 ELISA 검정에서 시험되었다. LDL 샘플을 플레이트에 고정시키고 항체 농도를 적정하였다. 멀티웰 플레이트를 웰당 50μl MDA-LDL 또는 천연 LDL로 코팅하고 PBS + 1 mM EDTA로 2 ug/mL로 희석하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 정제된 항체를 희석하고 ELISA 블록 완충액 (0.2% 무지방 분유)에 적정하여 적용하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결합된 항체는 호스래디시 퍼옥시다제 (HRP)-접합된 토끼 항-인간 IgG 항체 (P0214 DAKO)로 검출되었다.

도 1은 천연 LDL 및 MDA-LDL에 대한 오르티쿠맙 (0.01 내지 50 μg/ml)의 예시적인 결합 곡선을 제공한다. 오르티쿠맙은 천연 LDL에 대한 어떠한 유의미한 친화도가 부족했지만 약 8 ± 6 nM의 K_d로 MDA-LDL의 강력하고 특이적 결합을 입증하였다.

실시예 2: 오르티쿠맙은 대식세포에 의한 MCP-1의 oxLDL 유도 방출을 차단한다

잠재적인 항염증 효과를 평가하기 위해 대식세포에 의한 MCP-1의 oxLDL 유도 방출에 대한 오르티쿠맙의 효과를 측정하였다. MCP-1은 염증 면적에서 활성화된 대식세포에 의해 분비되고 염증 반응을 향상시키는 역할을 하는 대식세포 화학유인물질이다. MCP-1 발현은 종양 관련 대식세포 침윤과 상관관계가 있다.

새로 단리된 CD14+ 대식세포를 0.1 ng/mL 지질다당류 (LPS)로 사전 활성화하여 전염증성 M1 대식세포를 생성하였다. 사전 활성화 20 시간 후, 오르티쿠맙, FITC-8 또는 동량의 배지를 최종 농도가 40 nM이 되도록 첨가하고 추가로 24 시간 동안 세포를 배양하였다. 배양 상청액을 수집하고 세포 측정 비드 어레이 (CBA; BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ, USA)를 사용하여 MCP-1 수준에 대해 분석하였다. 도 2a는 3중으로 수행된 처리로 2개의 상이한 실험에서 2명의 상이한 공여자로부터 수득된 평균값 (+/- SD) 또는 합동 및 정규화된 데이터를 나타낸다. 값은 항체 처리를 받지 않은 샘플의 평균 MCP-1 값에 대해 정규화되었다. 통계 분석은 ANOVA-에 이어 GraphPad Instat 3 소프트웨어를 사용한 Tukey-Kramer의 다중 비교 테스트에 의해 수행되었다 (***p<0.001). (파일에 있는 데이터, 보고서 BI 209-68) 결과는 오르티쿠맙 치료가 대조군 항체 (FITC-8) 및 비히클 대조군 ("no Ab")을 사용한 치료에 비해 ox-LDL로 자극된 대식세포에서 MCP-1 분비를 유의하게 감소시켰음을 입증한다.

다른 실험에서, 인간 단핵구 유래 대식세포를 oxLDL 함유 인간 혈청의 존재 하에 14 일 동안 성장시켰다. 그런 다음, 이들 세포를 지시된 기간 동안 대조군 IgG (FITC-8) 또는 오르티쿠맙으로 처리하였다. 상층액을 매일 제거하고 MCP-1 수준을 분석하였다. 도 2b는 오르티쿠맙의 존재 하에, 오르티쿠맙이 MCP-1 분비를 효과적으로 차단함을 나타내는 대조군 항체로 처리된 배양물에서 관찰된 바와 같이 시간이 지남에 따라 MCP-1 수준이 증가하지 않았음을 예시한다. 예를 들어, 4 일 (96 시간) 후, 오르티쿠맙은 MCP-1의 증가를 차단하여 대조군 IgG로 처리한 세포에 비해 대식세포 MCP-1 방출을 최대 60%까지 감소시켰다.

실시예 3: 오르티쿠맙은 IκBα 발현을 증가시킴으로써 NFκB 신호전달을 억제한다

NFκB는 대부분의 세포 유형에서 스트레스 자극에 반응하고 일반적으로 면역 반응 및 염증과 관련된 유전자를 상향 조절하는 잘 알려진 전사 조절자이다. 자극되지 않은 세포에서 NFκB는 주로 세포질이며 핵 국소화 신호를 가리는 IκB를 포함한 억제제에 의해 격리된다. 세포 자극 시, IκB는 IκB 키나제 ("IKK")에 의해 빠르게 인산화되고 후속적으로 유비퀴틴화되고 분해된다. IκB 억제가 해제되면 NFκB는 빠르게 핵으로 이동한다.

oxLDL 신호전달에 대한 오르티쿠맙의 효과를 NFκB 경로에서 조사하였다. 대식세포는 oxLDL의 존재 하에 지질다당류 (LPS)로 자극되었고 오르티쿠맙 또는 oxLDL 및/또는 천연 LDL에 대한 상당한 친화성이 결여된 돌연변이 오르티쿠맙 유사 항체로 처리되었다. 단핵구는 건강한 피험자로부터 분리되었고 0.3 ng/mL 지질다당류 (LPS)의 부재 또는 존재 하에 인큐베이션되었다. 세포를 대조군 항체, 오르티쿠맙 또는 돌연변이 오르티쿠맙으로 동시에 처리하였다. 그런 다음 세포를 수확하고 총 IκBα 또는 대조군 단백질 (액틴)의 총량에 대해 면역블롯팅하였다. 1차 인간 단핵구의 전체 세포 용해물을 RIPA 완충액 (150 mM NaCl, 1.0% IGEPAL CA-630, 0.5% v/v 소듐 데옥시콜레이트, 0.1% w/v SDS 및 50 mM Tris-chloride, pH 8.0)으로 추출하였다. 세포 파편을 제거하기 위한 원심분리 후, 20,000 g 상청액의 분취량을 10% SDS/PAGE로 처리한 후, 단백질을 Hybond-C 추가 니트로셀룰로오스 필터 (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ)로 옮겼다. 필터를 1차 항체와 함께 실온에서 인큐베이션하였다. 결합된 항체는 호스래디시 퍼옥시다제에 접합된 당나귀 항-토끼 IgG, 또는 당나귀 항-마우스 IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA)의 1:5000 희석을 사용하여 화학발광 (Super Signal Substrate; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)에 의해 시각화되었다. 필터는 실온에서 1 내지 60초 동안 Kodak X-Omat BlueXB-1 필름에 노출되었다.

도 3에 도시된 바와 같이, 오르티쿠맙 처리는 LPS로 자극된 대식세포와 대조군 대식세포 모두에서 IκBα의 발현을 유도함을 발견하였다. 이러한 결과는 오르티쿠맙이 증가된 IκBα 발현을 통해 NFκB를 억제함으로써 oxLDL로 자극된 대식세포에서 항염증 활성을 갖는다는 것을 시사한다.

실시예 4: 오르티쿠맙은 대식세포 침윤을 억제한다

상기 생화학적 증거에 기초하여, oxLDL-유도 대식세포 침윤에 대한 오르티쿠맙의 궁극적인 효과를 조사하였다. 죽상 동맥 경화증의 잘 특성화 된 쥐 모델이 사용되었다. LDL 입자에서 전장 apoB-100을 발현하고 LDLR-/-보다 3배 더 높은 혈장 수준을 갖는 apoB-100 마우스인 Jackson Laboratories (메인주 바 하버)의 C57BL/6 배경을 가진 Apobec-1-/-/LDLR-/- 마우스는 고콜레스테롤 식이 (15% 콜레스테롤, 21% 지방, 락타민 AB, Kimstad Sweden)은 4주령부터 임의대로 제공하였다. 첫 번째 치료 1 주 전 (24 주령), 식단을 일반식으로 변경하였다. 1 주 후 (25 주령), 한 군의 마우스가 기준선 대조군으로 희생되었다 (기준선 25w). 나머지 동물은 처리되지 않은 채로 두거나 (대조군 29w) 복강내 (IP) 주사를 통해 대조군 IgG 항체 (플루오레세인 이소티오시아네이트-8 (FITC-8) 또는 오르티쿠맙) 1 mg (0.5 mL)을 투여하였다. 주사는 총 3회에 걸쳐 매주 간격으로 반복하였고, 마지막 주사 후 2 주 (29 주령)에 마우스를 희생시켰다.

대식세포 침윤을 제한하기 위한 오르티쿠맙의 효능을 2개의 종점을 사용하여 평가하였다. 도 4a는 플라크 형성 후 4주 동안의 오르티쿠맙 치료가 처리되지 않거나 대조군 IgG가 투여된 대조군에 비해 관찰된 침윤 대식세포 수를 유의하게 감소시켰음을 입증한다. 이러한 억제는 치료된 대상에서 유익한 생리학적 변화를 초래하였다. MOMA2 단클론 항체 염색을 통해 무명 동맥에서 대식세포 침윤을 평가하였다 (*p<0.05 vs FITC-8). 도 4b는 오르티쿠맙 치료가 치료 전 조건 및 다양한 대조군에 비해 플라크 부담을 유의하게 감소시켰다는 것을 예시한다. Oil Red O 염색을 통해 하행 대동맥에서 플라크 부담을 평가하고 하행 대동맥의 총 면적당 총 플라크 면적의 백분율을 계산하였다. P-값은 플루오레세인 이소티오시아네이트-8 (FITC-8)에 대해 계산되었다 (***p<0.001 vs FITC-8).

여기에 인용된 모든 참고 문헌은 마치 완전히 설명된 것처럼 그 전체가 참고로 포함된다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. Allen 등, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 22nd ed., Pharmaceutical Press (Sep. 15, 2012); Hornyak 등, Introduction to Nanoscience and Nanotechnology, CRC Press (2008); Singleton 및 Sainsbury, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd ed., revised ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 2006); Smith, March's Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 7th ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 2013); Singleton, Dictionary of DNA and Genome Technology 3rd ed., Wiley-Blackwell (Nov. 28, 2012); 및 Green 및 Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, N.Y. 2012), 당업자에게 본 출원에서 사용되는 많은 용어에 대한 일반적인 가이드를 제공한다. 항체 제조 방법에 대한 참고 자료는 Greenfield, Antibodies A Laboratory Manual 2nd ed., Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor N.Y., 2013); Kohler 및 Milstein, Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion, Eur. J. Immunol. 1976 Jul. 6(7):511-9; Queen 및 Selick, Humanized immunoglobulins, 미국 특허 번호 5,585,089 (1996 December); 및 Riechmann 등, Reshaping human antibodies for therapy, Nature 1988 Mar. 24, 332(6162):21-7을 참조한다.

전술한 설명은 여러 구체예에서 본 발명 및 사용 방법을 설명한다. 본 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 그 정신 및 범위를 벗어나지 않고 여기에 설명된 내용을 변경 및 수정할 수 있다. 본 발명은 다른 형태의 다른 구체예에 영향을 받기 쉬우나, 도면에 도시되어 있고 본 개시내용이 본 발명의 원리의 예시로서 고려되어야 한다는 이해 하에 본 발명의 바람직한 구체예가 여기서 상세히 설명될 것이고 본 발명의 넓은 측면을 예시된 구체예로 제한하려는 것은 아니다. 본 명세서에 제공된 임의의 구체예와 관련하여 설명된 모든 특징, 요소, 구성요소, 기능 및 단계는 달리 언급되지 않는 한 임의의 다른 구체예의 것들과 자유롭게 결합 및 대체될 수 있도록 의도된다. 따라서, 도시된 내용은 단지 예시를 위한 것이며 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안됨을 이해해야 한다.

본 발명은 여기에서 광범위하고 일반적으로 설명되었다. 일반 개시 내용에 속하는 보다 좁은 종 및 아속 군 각각은 또한 방법의 일부를 형성한다. 여기에는 절제된 자료가 여기에 구체적으로 언급되었는지 여부에 관계없이 속에서 주제를 제거하는 단서 또는 부정적인 제한이 있는 방법에 대한 일반적인 설명이 포함된다.

다른 실시예는 다음 청구범위 내에 있다. 또한, 방법의 특징 또는 양태가 마쿠쉬 군의 관점에서 설명되는 경우, 당업자는 본 발명이 이에 의해 마쿠쉬 군의 임의의 개별 멤버 또는 멤버의 하위 군의 관점에서도 설명된다는 것을 인식할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Abcentra, LLC <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING CANCER <130> 51473-006WO2 <150> US 62/934,078 <151> 2019-11-12 <160> 12 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide sequence encoding heavy chain of oxLDL-specific antibody <400> 1 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtgttg gtggacatag gacatattat 180 gcagattccg tgaagggccg gtccaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc acggatacgg 300 gtgggtccgt ccggcggggc ctttgactac tggggccagg gtacactggt caccgtgagc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 <210> 2 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide sequence encoding light chain of oxLDL-specific antibody <400> 2 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcaacac caacattggg aagaactatg tatcttggta tcagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gctaatagca atcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgcg tcatgggatg ccagcctgaa tggttgggta 300 ttcggcggag gaaccaagct gacggtccta ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact 360 ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648 <210> 3 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain <400> 3 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Val Gly Gly His Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ile Arg Val Gly Pro Ser Gly Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 4 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain <400> 4 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Thr Asn Ile Gly Lys Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 5 Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 1 5 10 <210> 6 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 6 Ser Ser Ile Ser Val Gly Gly His Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly Arg <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 7 Ala Arg Ile Arg Val Gly Pro Ser Gly Gly Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 8 Cys Ser Gly Ser Asn Thr Asn Ile Gly Lys Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 9 Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 10 Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu Asn Gly Trp Val 1 5 10 <210> 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Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110

Claims (27)

1. 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 항체 또는 이의 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양으로의 대식세포 침윤을 억제하는 방법.
2. 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 항체 또는 이의 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양의 전이를 억제하는 방법.
3. 제1항 및 제2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양은 LOX-1-양성인 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양은 CD36-양성 종양인 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양은 난소 암종, 방광 요로상피 암종, 신장 투명 세포 암종, 직장 선암종, 결장 선암종, 전립선 선암종, 유선 상피 세포 종양, 교모세포종, 췌장암, 및 식도암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 종양의 성장 속도를 감소시키는 방법.
7. 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 항체 또는 이의 단편의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
8. 대상체에게 다음을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법:
   (a) 화학요법, 방사선 요법, 및 면역요법으로 이루어진 군으로부터 선택된, 치료학적으로 유효한 양의 1차 항암 요법, 및
   (b) 산화된 저 밀도 지단백질 (oxLDL)에 결합하는 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 단편.
9. 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 LOX-1-양성인 방법.
10. 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 CD36-양성 종양인 방법.
11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 난소 암종, 방광 요로상피 암종, 신장 투명 세포 암종, 직장 선암종, 결장 선암종, 전립선 선암종, 유선 상피 세포 종양, 교모세포종, 췌장암, 및 식도암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
12. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 혈액암인 방법.
13. 제12항에 있어서, 상기 혈액암은 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 비-호지킨 림프종, 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
14. 제7항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 1차 항암 요법에 대한 애쥬번트인 방법.
15. 제7항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 혈청 고지혈증, 제2형 당뇨병, 또는 대사 증후군을 갖는 것으로 진단되는 것인 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 LOX-1에 대한 oxLDL의 결합을 억제하는 것인 방법.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 천연 LDL보다 100배 이상 더 큰 친화도로 oxLDL에 결합하는 것인 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 항체인 방법.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8, 서열번호 9, 및 서열번호 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 LCDR과 적어도 90% 동일한, 적어도 하나의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하는 것인 방법.
20. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8, 서열번호 9, 및 서열번호 10으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 LCDR을 포함하는 것인 방법.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 5, 서열번호 6, 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 LCDR과 적어도 90% 동일한, 적어도 하나의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함하는 것인 방법.
22. 제21항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 5, 서열번호 6, 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 LCDR을 포함하는 것인 방법.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 11의 가변 중쇄 영역 (V_H), 서열번호 12의 가변 경쇄 영역 (V_L), 또는 둘 다를 포함하는 것인 방법.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 3의 중쇄, 서열번호 4의 경쇄, 또는 둘 다를 포함하는 것인 방법.
25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 오르티쿠맙인 방법.
26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 적어도 5 mg/kg의 초기 용량으로 정맥내 투여되고, 이후에 각각 적어도 2 mg/kg/주, 적어도 2.5 mg/kg/2주, 또는 적어도 6 mg/kg/월의 복수의 후속 용량이 뒤따른다는 것인 방법.
27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 적어도 3개월 동안 약 330 mg/월의 용량으로 피하 투여되는 것인 방법.

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