KR20220122615A

KR20220122615A - Ｔ 세포 요법 및 (ｓ)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 병용

Info

Publication number: KR20220122615A
Application number: KR1020227018962A
Authority: KR
Inventors: 마이클 포츠; 젠스 하스칼; 샌드린 몬트허드; 마이클 푸어덴나드; 팀 풀햄; 짐 킨
Original assignee: 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
Priority date: 2019-11-07
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2022-09-02
Also published as: BR112022007548A2; WO2021092498A1; MX2022005524A; AU2020379043A1; EP4054623A1; US20220401483A1; JP2022554353A; IL292667A; CN114980918A; AU2020379043A8

Abstract

어떤 B 세포 악성종양과 같은 질병 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하기 위해, 입양 세포 요법과 같은 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접체(clathrate), 또는 다형체의 사용을 포함하는 병용 요법의 방법, 조성물, 용도 및 제조품 및 관련 방법, 조성물, 용도 및 제조품이 제공된다. 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체(CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 재발성 또는 불응성 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL) 또는 구체적 NHL 아형과 같은 NHL이다.

Description

T 세포 요법 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 병용

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 "T 세포 요법 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 병용"이라는 명칭으로 2019년 11월 7일자 출원된 미국 가출원 제62/932,500호 및 "T 세포 요법 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 병용"이라는 명칭으로 2020년 4월 28일자 출원된 미국 가출원 제63/016,977호에 대한 우선권을 주장하고, 그 내용들은 그 전체가 참조로 포함된다.

서열 목록의 참조 포함

본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2020년 11월 2일자 생성된 735042022440SeqList.txt라는 명칭의 파일로 제공되며, 이의 크기는 35,330 bytes이다. 서열 목록 내 전자 형식의 정보는 그 전체가 참조로 포함된다.

본 개시내용은 일부 측면에서, 어떤 B 세포 악성종양과 같은 질병 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하기 위해, 입양 세포 요법과 같은 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접체(clathrate), 또는 다형체의 사용을 포함하는 병용 요법의 방법, 조성물, 용도 및 제조품 및 관련 방법, 조성물, 용도 및 제조품과 관련된다. T 세포 요법은 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptors, CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 재발성 또는 불응성 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL) 또는 구체적 NHL 아형과 같은 NHL이다.

면역 요법, 예를 들어 입양 요법을 위해 조작된 T 세포를 투여하기 위한 다양한 전략이 이용 가능하다. 예를 들어, 유전자 조작된 항원 수용체, 예컨대 CAR을 발현하는 T 세포를 조작하고 상기 세포를 함유하는 조성물을 대상체에 투여하기 위한 전략이 이용 가능하다. 세포의 효능 개선, 예를 들어 대상체에 투여시 세포의 지속성, 활성 및/또는 증식을 개선하기 위한 개선된 전략이 요구된다. 상기 요구를 충족시키는 방법, 조성물, 키트 및 시스템이 제공된다.

세포 요법, 예컨대 T 세포 요법을 포함하는 면역 요법의 투여 및 본원에 기재된 화합물 A를 암, 예를 들어 B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 병용 요법을 포함하는 방법, 조성물, 용도, 및 제조품이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, B 세포 악성 종양은 재발성 또는 불응성 NHL 또는 구체적 NHL 아형과 같은 비호지킨 림프종(NHL)이다. 일부 측면에서, 제공된 방법, 용도 및 제조품은 B 세포 상에 발현되는 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-발현T 세포와 같은 T 세포 요법의 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 항원은 CD19이다.

B 세포 악성종양을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은: (a) B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 T 세포 요법을 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함함; 및 (b) 후속적으로 상기 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, (i) 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, (ii) 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 (iii) 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간을 포함하는 순환 요법으로 수행된다.

일부 구현예에서, 방법은 상기 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 대상체는 상기 화합물의 투여 전, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하는 T 세포 요법을 투여받은 적이 있으며, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, (i) 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, (ii) 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 (iii) 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간을 포함하는 순환 요법으로 수행된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 각각의 4주 주기 동안, 화합물은 화합물이 매일 투여되는 연속 3주 후에 1주 동안은 투여되지 않는다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 그 초과 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월까지 또는 그 초과까지 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월까지 연장된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여는 상기 대상체에서 T 세포 요법의 최대 증폭 시 또는 그 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 최대 증폭은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 11일 내지 (약) 15일 사이이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시의 동일한 날에 시작한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 11일(수치 포함)에 시작한다. 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일 내지 (약) 15일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일에 시작한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 다른 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 7일에 시작한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 다른 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일에 시작한다. 특정 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 14일에 시작한다. 특정 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 15일에 시작한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 21일에 시작한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 대상체의 B 세포 혈액 수치 수준이 상기 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 또는 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속된다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 (약) 1주이다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 약 1주이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 28일에 시작한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 29일에 시작한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 29일에 시작한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 (약) 3개월 내지 (약) 6개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 약 3개월 또는 약 6개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 3개월 내지 6개월 동안 연장된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월까지 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 적어도 (약) 3개월까지 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 적어도 (약) 3개월까지 및 대상체가 질병 진행을 나타낼 때까지 연장된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체가 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 암(예: B 세포 악성종양)이 진행 또는 재발했던 경우, 제2 투여 기간은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 이전에, 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은, 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 달성한 경우, T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은, 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 달성한 경우, T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 6개월(까지) 연장된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체가 (약) 6개월 전, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 암(예: B 세포 악성종양)이 진행 또는 재발했던 경우, 제2 투여 기간은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 이전에, 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은, 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 달성한 경우, T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은, 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 달성한 경우, T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 부분 반응 (PR) 또는 안정한 질병 (SD)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 부분 반응 (PR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여는 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 안정한 질병 (SD)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여는 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 부분 반응 (PR) 또는 안정한 질병 (SD)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 부분 반응 (PR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여는 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 안정한 질병 (SD)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여는 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 전, 상기 치료 후 부분 반응 (PR) 또는 안정한 질병 (SD)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 적어도 (약) 3개월까지 연장되고, B 세포 악성종양이 진행 또는 재발되었을 때 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월 이하에 종료된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 제2 투여 기간 동안 및 상기 제2 투여 기간의 종료 전에 완전 반응(CR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 대상체가 상기 제2 투여 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우라도 계속된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여 개시 시점에, 대상체는 T 세포 요법의 투여 이후에 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS), 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 CRS이고/거나; 중증 독성은 중증 신경 독성, 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 신경 독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 3급 이상 CRS이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 지연성 3급 이상 CRS이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 4급 CRS이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 5급 CRS이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 중증 신경 독성이다. . 일부 구현예에서, 중증 독성은 3급 이상 신경 독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 지연성 3급 이상 신경 독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 4급 신경 독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 5급 신경 독성이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 만일 대상체가 상기 화합물의 투여 이후 독성, 선택적으로 혈액성 독성을 나타내는 경우 상기 화합물의 투여는 유예되고/거나 상기 순환 요법은 변경된다. 일부 구현예에서, 대상체가 화합물의 투여 후 독성을 나타내는 경우 화합물의 투여는 유예된다. 일부 구현예에서, 대상체가 화합물의 투여 후 독성을 나타내는 경우 순환 요법은 변형된다. 일부 구현예에서, 독성은 혈액성 독성이다. 일부 구현예에서, 독성은 중증 호중구 감소증, 선택적으로 열성 호중구 감소증, 지연성 3급 이상 호중구 감소증에서 선택된다. 일부 구현예에서, 독성은 열성 호중구 감소증이다. 일부 구현예에서, 독성은 지연성 3급 이상 호중구 감소증이다. 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여는 대상체가 더는 상기 독성을 나타내지 않은 후에 재시작된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 암은 B 세포 악성종양이다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 림프종은 비호지킨 림프종(NHL)이다. 일부 구현예에서, NHL은 공격성 NHL; 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL); DLBCL-NOS, 선택적으로 형질 전환된 무통성; EBV 양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-농축 거대 B 세포 림프종; 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B); 및/또는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고도 B 세포 림프종(이중/삼중 히트)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 단위 용량의 투여 시점 또는 직전에, 상기 대상체는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 용량 이외의 NHL에 대한 하나 이상의 선행 요법, 선택적으로 1, 2 또는 3개의 선행 요법으로의 치료 후 관해 후에 재발했거나 이에 대해 불응성이 되었다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량의 투여 시 또는 전에, 대상체는 이중/삼중 히트 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고; 대상체는 화학요법 불응성(chemorefractory) 림프종, 선택적으로 화학요법 불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고; 및/또는 대상체는 선행 요법에 반응하여 완전 관해(CR)를 달성하지 않았다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체는 1 이하의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 상태를 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다.

본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 수화물이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 용매화물이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이거나 이를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 경구 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, CD19는 인간 CD19이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, CAR은 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR)는 공자극 신호 전달 영역을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의, 임의적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함하고; 선택적으로 CAR은 막관통 도메인과 scFv 사이에 스페이서를 더 포함하거나; CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인인 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하거나; 또는 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인인 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 스페이서를 포함하고, 상기 스페이서는 (a) 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나, 약 15개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나, 이로 구성되고/거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/거나 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34의 서열, 서열번호 2에 의해 암호화된 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 임의의 것의 변이체를 갖거나 이로 구성되거나; 또는 (e) 화학식 X1PPX2P (서열번호 58)(여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고, X2는 시스테인 또는 트레오닌임)를 포함하거나 이로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 12 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하고; 및/또는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15, 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하고; 및/또는 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 CDRL2 서열 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 CDRH2 서열 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함하거나 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 상기 중 어느 하나와 결합을 두고 경쟁하거나 이와 동일한 에피토프에 결합하고 선택적으로 상기 scFv는 VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커 및 VL 순서로 포함하고/거나 scFv는 가요성 링커를 포함하고/거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인인 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인인 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 스페이서이다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되고, 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 길이가 (약) 12개 아미노산이고, 및/또는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34에 의해 암호화된 서열 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 임의의 것의 변이체를 갖거나 이로 구성된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 공자극 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 12 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15, 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하고, 선택적으로 상기 scFv는 서열번호 41을 포함하는 VH 및 서열번호 42로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 또는 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포(각 수치 포함)를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 적어도 (약) 1 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 10⁸개 CAR-발현 세포를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁸개의 CAR-발현 세포를 포함한다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포의 단위 용량은 비경구적으로, 선택적으로 정맥 내 투여된다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포의 단위 용량은 정맥 내 투여된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, T 세포는 대상체에 대해 자가이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, T 세포는 대상체에 대해 동종이계이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고, 단위 용량의 투여는 다수의 개별 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 다수의 개별 조성물은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포 중 다른 것을 포함하는 제2 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나, 제1 조성물의 투여 및 제2 조성물의 투여는 동일한 날에 수행되고, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/거나; 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 2시간 이내, 1시간 이내, 30분 이내, 15분 이내, 10분 이내 또는 5분 이내의 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 제2 조성물 전에 투여된다.

일부 구현예에서, 단위 용량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 제1 조성물 및 제2 조성물은 (약) 0 내지 (약) 12시간 간격으로, (약) 0 내지 (약) 6시간 간격으로 또는 (약) 0 내지 (약) 2시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 (약) 2시간 이내, (약) 1시간 이내 또는 (약) 30분 이내의 간격, (약) 15분 이내, (약) 10분 이내 또는 (약) 5분 이내의 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여 개시 및/또는 완료는 (약) 2시간 이내, (약) 1시간 이내 또는 (약) 30분 이내의 간격, (약) 15분 이내, (약) 10분 이내 또는 (약) 5분 이내의 간격으로 수행된다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 투여 전, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전 조절되었다. 본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 투여 직전, 상기 대상체에 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 투여하는 단계를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 요법은 2 내지 4일 동안, 선택적으로 3일 동안 매일, 약 200-400mg/m², 선택적으로 (약) 300mg/m²(수치 포함)의 사이클로포스파미드의 투여, 및/또는 약 20-40mg/m², 선택적으로 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하거나, 또는 림프구 고갈 요법은 약 500mg/m²의 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 요법은 (약) 300mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈을 3일 동안 매일 투여하는 것을 포함하고; 및/또는 림프구 고갈 요법은 (약) 500mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈을 3일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다.

본 명세서에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.

본원에 제공된 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료를 받은 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(CR)을 달성하며, 상기 완전 반응은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는 6개월까지 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 반응을 유지하고, CR을 유지하고, 및/또는 생존하거나 진행 없이 생존하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료를 받은 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 달성하고 선택적으로 여기서 OR은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는 6개월까지 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 반응을 유지하거나 생존을 유지한다.

본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여는: 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형을 역전시키거나; 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 시작을 예방, 억제 또는 지연하거나; 또는 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 수준 또는 정도를 감소시키거나; 또는 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 총 수 중에서 탈진 표현형을 가진 백분율을 감소시킨다. 임의의 상기 구현예의 일부에서, 상기 화합물의 투여 개시는 상기 T 세포 요법의 투여 이후에 수행되고, 상기 화합물의 투여 또는 이의 개시 이후에, 상기 대상체는 상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 항원- 또는 종양-특이적 활성 또는 기능의 복구 또는 구제(rescue)를 나타내고, 선택적으로 상기 복구, 구제 및/또는 상기 화합물의 투여 개시는 상기 대상체 내 또는 상기 대상체의 혈액 내 CAR-발현 T 세포가 탈진된 표현형을 나타낸 후의 시점이다.

본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여는: 상기 화합물의 상기 투여의 부재와 비교하여, 항원(예: CD19)에 또는 항원 수용체 특이적인 제제에 T 세포의 노출 이후에, 상기 대상체에서 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한 나이브(또는 '미분화') 또는 비탈진된(non-exhausted) T 세포의 항원 특이적(예: CD19 항원) 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 가져오기에; 또는 상기 화합물의 상기 투여의 부재와 비교하여, 항원(예: CD19)에 또는 항원 수용체 특이적인 제제에 T 세포의 노출 이후에, 상기 대상체에서 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한 나이브 또는 비탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형의 시작을 예방, 억제 또는 지연시키기에; 또는 상기 대상체의 상기 투여의 부재와 비교하여, 상기 대상체에서 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형을 역전시키기에; 효과적인 양, 빈도 및/또는 기간으로 투여하는 것을 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 화합물의 투여는 상기 활성의 증가를 초래하기에, 및 상기 탈진 표현형의 상기 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고, 및/또는 상기 탈진 표현형을 역전시키기에, 효과적인 양, 빈도 및 기간으로의 투여를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 화합물의 투여는 상기 활성의 증가를 초래하기에, 및 상기 탈진 표현형의 상기 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고, 및/또는 상기 탈진 표현형을 역전시키기에, 효과적인 양, 빈도 또는 기간으로의 투여를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 대상체 내의 T 세포는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하고, 상기 항원은 CD19 표적 항원이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 대상체 내의 T 세포는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하거나 상기 항원은 CD19이다.

본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, T 세포 또는 T 세포의 집단과 관련하여 상기 탈진 표현형은 동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, T 세포 또는 T 세포들 상에서 표면 발현의 수준 또는 정도의 증가 또는 하나 이상의 탈진 마커, 선택적으로 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탈진 마커의 표면 발현을 나타내는 상기 T 세포의 집단의 백분율의 증가를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, T 세포 또는 T 세포의 집단과 관련하여 상기 탈진 표현형은 동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 노출 시 상기 T 세포 또는 T 세포의 집단에 의해 나타나는 활성의 수준 또는 정도의 감소를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 수준, 정도 또는 백분율의 증가는 (약) 1.2배 이상, (약) 1.5배 이상, (약) 2.0배 이상, (약) 3배 이상, (약) 4배 이상, (약) 5배 이상, (약) 6배 이상, (약) 7배 이상, (약) 8배 이상, (약) 9배 이상, (약) 10배 또는 그 이상이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 수준, 정도 또는 백분율의 감소는 (약) 1.2배 이상, (약) 1.5배 이상, (약) 2.0배 이상, (약) 3배 이상, (약) 4배 이상, (약) 5배 이상, (약) 6배 이상, (약) 7배 이상, (약) 8배 이상, (약) 9배 이상, (약) 10배 또는 그 이상이다.

임의의 구현예 중 일부에서, 상기 기준 T 세포 집단은 비-탈진된 표현형을 가진 것으로 알려진 T 세포의 집단이거나, 나이브 T 세포의 집단이거나, 중앙 기억 T 세포의 집단이거나, 또는 줄기 중앙 기억 T 세포의 집단이고, 선택적으로 이들은 동일한 대상체로부터 유래했거나 또는 상기 대상체와 동일한 종의 것이고, 이 대상체로부터 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된다. 본원에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 상기 기준 T 세포 집단은 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체의 혈액으로부터 단리된 벌크 T 세포를 포함하는 대상체 일치 집단(subject-matched population)이고, 선택적으로 상기 벌크 T 세포는 상기 CAR을 발현하지 않음, 및 상기 CAR을 발현하는 T 세포의 단위 용량의 투여를 받기 전, 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체로부터 수득된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 기준 T 세포 집단은 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체의 혈액으로부터 단리된 벌크 T 세포를 포함하는 대상체 일치 집단(subject-matched population)이고, 선택적으로 상기 벌크 T 세포는 상기 CAR을 발현하지 않음, 또는 상기 CAR을 발현하는 T 세포의 단위 용량의 투여를 받기 전, 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체로부터 수득된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 기준 T 세포 집단은 상기 T 세포 요법의 샘플을 포함하는 조성물, 또는 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 약학 조성물이고, 상기 대상체에 이의 투여 전, 선택적으로 상기 조성물은 동결보존된 샘플이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 탈진 마커는 억제성 수용체이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 탈진 마커는 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, BTLA, 2B4, CD160, CD39, VISTA 및 TIGIT 중에서 선택된다.

본원에 제공된 임의의 방법의 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 활성은 염증성 사이토카인의 하나 또는 조합의 증식, 세포독성 또는 생산 중 하나 이상이고, 선택적으로 상기 사이토카인의 하나 또는 조합은 IL-2, IFN-감마 및 TNF-알파로 구성된 군에서 선택된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 상기 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제, 선택적으로 CAR에 결합하는 제제와의 인큐베이션에 의해 T 세포를 노출하는 것을 포함하고, 여기서 상기 항원은 선택적으로 CD19 항원이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 T 세포를 CD19 항원-발현 표적 세포, 선택적으로 암, 예를 들어 B 세포 악성종양과 같은 질병, 장애 또는 병태의 세포와 인큐베이션하는 것을 포함한다.

또한, B 세포 악성종양을 치료하는 방법에서 T 세포 요법 및 화합물을 포함하는 병용 요법의 용도가 본원에 일부 구현예에서 제공되며, 상기 방법은: (a) B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 T 세포 요법을 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함함; 및 (b) 후속적으로 상기 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간을 포함하는 순환 요법으로 수행된다.

또한, B 세포 악성종양을 치료하는 방법에서 화합물의 용도가 본원에 일부 구현예에서 제공되며, 상기 방법은: 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 대상체는 상기 화합물의 투여 전, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하는 T 세포 요법을 투여받은 적이 있으며, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간을 포함하는 순환 요법으로 수행된다.

또한, B 세포 악성종양의 치료를 위한 약제의 제조에서 T 세포 요법 및 화합물을 포함하는 병용 요법의 용도가 본원에 일부 구현예에서 제공되며, 여기서, (a) 상기 T 세포 요법은 B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 투여되는 것이고, 상기 T 세포 요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하며; (b) 대상체는 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여받는 것이며, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작되는(또는 개시되는) 것이고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함하는 순환 요법으로 수행되는 것이다.

또한, B 세포 악성종양의 치료를 위한 약제의 제조에서 화합물의 용도가 본원에 제공되며, 여기서, 상기 대상체는 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여받는 것이며, 상기 대상체는 상기 화합물의 투여 전, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하는 T 세포 요법을 투여받은 적이 있으며, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작되는(또는 개시되는) 것이고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함하는 순환 요법으로 수행되는 것이다.

본원에 제공된 임의의 용도 중 일부에서, 병용 요법은 본원에 제공된 방법의 상기 구현예 중 임의의 것에 따라 사용된다.

본원에 제공된 임의의 용도 중 일부에서, 화합물은 본원에 제공된 방법의 상기 구현예 중 임의의 것에 따라 사용된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 그 초과 동안 연장된다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월까지 연장된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물의 투여는 상기 대상체에서 T 세포 요법의 최대 증폭 시 또는 그 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법의 최대 증폭은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 11일 내지 (약) 15일 사이이다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시의 동일한 날에 시작한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 11일(수치 포함)에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 14일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 15일에 시작한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 21일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 대상체의 B 세포 혈액 수치 수준이 상기 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 또는 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속된다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 휴지 기간은 약 1주이다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 28일에 시작한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 29일에 시작한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 수화물이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 용매화물이거나 이를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이거나 이를 포함한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 림프종은 비-호지킨 림프종(NHL)이고, 선택적으로 상기 NHL은 공격성 NHL; 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL); DLBCL-NOS, 선택적으로 형질 전환된 무통성; EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-농축 거대 B 세포 림프종; 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B); 및/또는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고도 B 세포 림프종(이중/삼중 히트)을 포함한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, CD19는 인간 CD19이다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, CAR은 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR)는 공자극 신호 전달 영역을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의, 임의적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 또는 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포(각 수치 포함)를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 적어도 (약) 1 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 10⁸개 CAR-발현 세포를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁸개의 CAR-발현 세포를 포함한다.

본원에 제공된 용도 중 일부 구현예에서, 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고, 단위 용량의 투여는 다수의 개별 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 다수의 개별 조성물은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포 중 다른 것을 포함하는 제2 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다.

도 1은 다양한 농도의 화합물 A(사각형) 또는 화합물 B(원)와 인큐베이션 후에 항-CD19 자극된 CAR-발현 T 세포에서 세포내 이카로스 및 아이올로스 발현을 도시한다.
도 2a는 5일 동안 K562.CD19 표적 세포와의 배양에 의해 새로 해동되었거나 만성적으로 자극된(예를 들어, 탈진 표현형을 나타냄) 항-CD19 CAR T 세포의 사이토카인 생성물을 도시한다.
도 2b는 5일 동안 K562.CD19 표적 세포와의 배양에 의해 새로 해동되고 만성적으로 자극되지 않았거나(예를 들어, 나이브 표현형을 나타냄) 만성적으로 자극된(예를 들어, 탈진 표현형을 나타냄) 항-CD19 CAR T 세포의 사이토카인 생성물을 도시한다.
도 2c는 다양한 농도의 화합물 A(삼각형) 또는 화합물 B(원)의 존재 하에 세 공여자(평균 ± SEM)에 대한 항-CD19 CAR T 세포의 증식을 나타낸다. 도 2d는 CAR T 세포의 자극이 3 μg/mL 항-ID (왼쪽 패널) 또는 30 μg/mL 항-ID (오른쪽 패널)로 수행될 때 세포 생존력에 대한 다양한 농도의 화합물 A (사각형) 또는 화합물 B (원)의 효과를 나타낸다. 도 2e는 1000nM 화합물 B 또는 100nM 화합물 A로 처리 후 항-CD19 CAR T 세포의 세포 주기 분석을 도시한다. 도 2f는 다양한 농도의 화합물 A (사각형) 또는 화합물 B (원)에 노출될 때 세포 주기의 G1 단계에서 항-CD19 CAR T 세포의 백분율을 나타낸다. CAR T 세포를 3 μg/mL 항-ID (왼쪽 패널) 또는 30 μg/mL 항-ID (오른쪽 패널)에 노출시켰다. 도 2g는 30 μg/mL 항-ID로 24시간 (왼쪽 패널) 또는 72시간 (오른쪽 패널) 동안 자극되고 화합물 A 또는 화합물 B에 노출된 항-CD19 CAR T 세포에서 IFNγ, 퍼포린, 그랜자임 B 및 IL-2의 세포내 사이토카인 발현 수준을 나타낸다.
도 3a는 화합물 A (10 nM 또는 100 nM)의 존재 하에서 만성 자극을 받은 항-CD19 CAR T 세포에서 이카로스의 발현을 도시한다. 도 3b는 CD19-발현 표적 세포를 재투여하기 전에 화합물의 부재(대조군)와 비교하여 화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 존재 하에서 동시에 인큐베이션된 만성적으로 자극된 세포에 대하여, 시간에 따라 종양 세포 수에 의해 측정한, 세포 용해 활성을 도시한다. 도 3c는 1μM 화합물 B(왼쪽 패널) 또는 0.001μM 또는 0.01μM 화합물 A(오른쪽 패널)과 공배양 후에 여러 기간의 Granta-519 종양 구상체의 크기를 도시한다. 도 3d는 화합물 A의 존재 하에서 9일 후에 Granta-519 종양 구상체의 평균 종양 체적을 도시한다. 도 3e는 만성 자극 및 화합물 A와의 동시 인큐베이션 후 항-CD19 CAR T 세포와 공동-배양될 때 제9일에 3차원 구상체로서 성장된 Granta-519 종양 세포의 대표적인 이미지를 도시한다. 도 3f는 5일 동안 CD19 종양 구상체와 공배양되고 화합물 A 또는 화합물 B로 처리된 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포의 상등액으로부터 측정된 IFNγ, IL-2 및 TNF알파의 사이토카인 수준을 도시한다. 도 3g는 세 공여자 및 2개의 독립적인 실험으로부터의 풀링된 데이터로부터 결정된 바와 같이, 공동-배양 5일 후 측정된 상등액으로부터의 평균 IFNγ 농도를 도시한다 (각각의 처리 사이의 통계적으로 유의한 차이는 * P < .05, *** P < .001, 및 **** P < .0001로서 표시됨). 도 3h는 만성 자극 동안 1 nM 또는 10 nM의 화합물 A로의 각각의 동시 처리에 의해 유도된 차등적으로 발현된 유전자를 보여주는 볼카노 플롯을 도시한다. 도 3i는 만성 자극에 의해 및 만성 자극 동안 화합물 A 10 nM에 의해 유도된 유전자 발현 프로파일에 대한 효과의 비교를 도시한다. 도 3j는 차등적으로 발현된 유전자의 KEGG 경로 농축 분석을 도시한다.
도 4a는 CD19(K562.CD19), Raji 세포 또는 Granta-519 세포로 형질도입된 K562 세포를 표적하는 항-CD19 CAR T 세포의 세포 용해 활성에 대한 화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 효과를 도시한다. 도 4b는 CAR T 세포와 공배양 후 9일차에 Granta-519 종양 구상체의 크기의 평균 측정치를 도시한다. 도 4c는 5일 동안 CD19 종양 구상체와 공배양되고 화합물 A 또는 화합물 B로 처리된 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포의 상등액으로부터 측정된 IFNγ, IL-2 및 TNF알파의 사이토카인 수준을 도시한다.
도 5a는 화합물 A(0.001μM, 0.01μM 또는 0.1μM)의 존재 하에서 CAR T 세포와 공배양 후 9일차에 A549.CD19 종양 구상체의 크기의 평균 측정치를 도시한다. 도 5b는 화합물 A (0.01 μM 또는 0.1 μM)로의 처리에 의해 5일째에 측정된, A549.CD19 종양 구상체와 공동-배양한 CAR T 세포의 수의 배수 변화를 도시한다. 도 5c는 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포 및 화합물 A 구제(rescue) 배양과 함께 공동-배양한 후 9일째에 Granta-519 구상체 및 A549.CD19 구상체의 대표적인 이미지를 도시한다. 도 5d는 항-CD19 CAR T 세포 및 화합물 A와 공동-배양한 후 시간에 따른 종양 구상체 크기의 평균 측정치를 도시한다.
도 5e는 5일 동안 CD19 종양 구상체와 공배양되고 화합물 A 또는 화합물 B로 처리된 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포의 상등액으로부터 측정된 IFNγ, IL-2 및 TNF알파의 사이토카인 수준을 도시한다. 도 5f는 세 공여자 및 2개의 독립적인 실험으로부터의 데이터로부터 풀링된 5일째에 공동-배양 상등액으로부터 취해진 평균 IFNγ 농도를 도시한다(각 처리 간의 통계학적으로 유의한 차이는 * P <.05 및 **** P <.0001로 표시됨).
도 5g는 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포와의 공동-배양 9일 후 화합물 A로의 구제 처리에 의해 유도된 차등적으로 발현된 유전자를 나타내는 볼카노 플롯을 도시한다. 도 5h는 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포에 대한 10 nM 화합물 A 구제 처리에 의해 유도된 유전자 발현 프로파일에 대한 효과(log2-배수 변화)의 비교를 도시한다. 도 5i는 화합물 A로의 구제 처리 후 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포에서 차등적으로 발현된 유전자의 KEGG 경로 강화 분석을 도시한다.
도 6a는 화합물 A (0.001 μM, 0.01 μM 또는 0.1 μM)의 존재 하에 RL CD19+ 종양 세포와 공배양된 항-CD19 CAR T 세포의 종양 세포 수에 의해 측정된 세포용해 활성을 도시한다. 도 6b 및 도 6c는 화합물 B (1 μM) 또는 화합물 A (0.001 μM, 0.01 μM 또는 0.1 μM)의 존재 하에 항-CD19 CAR T 세포와 공배양된 RL 종양 구상체의 종양 크기 (도 6b) 및 종양 세포 수 (도 6c)를 도시한다.
도 7a는 항-CD19 CAR T 세포를 화합물 A로 3일 처리 후 세포내 사이토카인의 히트 맵(heat map)이다. 상기 도면은 배양 중인 매개물 대조군(vehicle control)에 대한 사이토카인의 평균 형광(MFI)의 log2-배수 변화를 나타낸다.
도 7b는 화합물 A로 처리된 항-CD19 CAR T 세포를 3일 동안 Raji 또는 Granta-519 림프종 표적 세포와 공배양한 후, 종양 세포의 수에 기초하여 나타낸 세포용해 활성을 나타낸다.
도 7c는 화합물 A를 3일간 처리한 후 항-CD19 CAR T 세포의 증식을 나타낸다.
도 7d는 화합물 A로 3일 동안 처리한 후 G1기에서의 항-CD19 CAR T 세포의 백분율의 플롯을 나타낸다 (평균 ± 세 공여자로부터 수집된 데이터 및 2명의 독립적인 실험으로부터의 SEM).

암 또는 증식성 질병을 갖는 대상체를 치료하기 위해, 조작된 세포, 예컨대 T 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온

(I)

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 입체 이성질체, 호변 이성질체 또는 라세미 혼합물(화합물 A)의 방법 및 용도, 및 이의 조성물이 제공된다. 일부 측면에서, T 세포 요법은 암 또는 증식성 질병과 관련된 항원, 예를 들어 B 세포 악성 종양(예: 비호지킨 림프종 또는 이의 아형)과 관련된 항원을 특이적으로 인식 및/또는 표적화하는 T 세포를 포함하는 입양 T 세포 요법이다. 일부 측면에서, T 세포 요법은 항원에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된 T 세포를 포함한다. 일부 경우에, T 세포 요법에 의해 표적화되는 항원은 CD19이다. T 세포 요법을 포함하는 조성물 및/또는 화합물 A를 포함하는 조성물을 함유하는 조합물 및 키트와 같은 제조품, 및 암, 예컨대 B 세포 악성종양을 포함한 질병, 병태 및 장애를 치료 또는 예방하기 위한 상기 조성물 및 조합물의 용도가 또한 본원에 제공된다.

(S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A)은 세레블론 E3 리가아제 조절 화합물 (CELMoD)이다. 화합물 A는 CRBN을 조절하고, 이는 전사 인자 아이올로스 및 이카로스의 유비퀴틴화를 유도하여, 그의 프로테아좀 의존성 분해를 증가시키고 T 세포 기능을 증강시킨다. 화합물 A는 레날리도마이드 및 포말리도마이드보다 더 강력하게 CRBN에 결합하고, 아이올로스 및 이카로스를 분해하는 데 더 효율적이며, 림프종 세포에 강력한 직접적인 항증식 효과를 갖는다. 화합물 A는 또한 화합물 B에 비해 이카로스 및 아이올로스를 분해하는 데 10-20배 더 강력하다. 화합물 A는 림프종 세포에 직접적인 항증식 효과를 갖는다. 본원에 나타난 바와 같이, 화합물 A는 또한 T 세포 기능을 증강시킨다.

T 세포 기반 요법과 같은 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법(다른 입양 면역 세포 요법 및 입양 T 세포 요법뿐만 아니라 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 목적 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것을 포함)은 B 세포 악성 종양과 같은 질병 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. T 세포의 표면 상에서 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체의 조작된 발현은 T 세포 특이성의 방향 전환을 가능하게 한다. 임상 연구에서, CAR-T 세포, 예를 들어 항-CD19 CAR-T 세포는 백혈병과 림프종 환자 모두에서 지속적인, 완전 관해(complete response)를 생성했다(Porter et al. (2015) Sci Transl Med., 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33: 540-9; Lee et al. (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al. (2014) N Engl J Med, 371:1507-17).

특정 맥락에서, 입양 세포 요법에 대한 이용 가능한 접근법이 항상 완전히 만족스럽지 않을 수 있다. 예를 들어, CAR T 세포 지속성이 림프종을 가진 많은 대상체에서 검출될 수 있다 하더라도, ALL을 가진 대상체에 비해 NHL을 가진 대상체에서 보다 적은 완전 반응(complete response, CR)이 관찰되었다. 보다 구체적으로, CAR T 세포 주입 후에 최대 80%의 보다 높은 전체 반응률(47% 내지 60%의 CR률)이 보고되었지만, 일부 반응은 일시적이며 대상체는 지속적인 CAR T 세포의 존재 하에 재발하는 것으로 나타났다(Neelapu, 58th Annual Meeting of the American Society of Hematology (ASH): 2016; San Diego, CA, USA. Abstract No. LBA-6.2016; Abramson, Blood. 2016 Dec 01;128(22):4192). 다른 연구에서 40%의 장기간 CR률이 보고되었다(Schuster, Ann Hematol. 2016 Oct;95(11):1805-10).

일부 측면에서, 상기에 대한 설명은 CAR 발현 T 세포 순환의 면역학적 탈진 및/또는 T 림프구 집단의 변화이다. 이는 특정 맥락에서, 최적의 효능이 활성화, 증폭되고, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함한 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기간을 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태(예컨대 장기 기억, 덜분화된 및 이펙터 상태)로의 분화, 전환 또는 재프로그래밍에 관여하고, 질병의 국소 미세 환경에서 면역 억제 상태를 감소시키거나 피하고, 클리어런스 및 표적 리간드 또는 항원에 대한 재노출 후에 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 탈진(exhaustion), 면역성 결여(anergy), 말초 내성, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는 투여된 세포의 능력에 따라 달라질 수 있기 때문이다.

일부 구현예에서, 조작된 세포의 노출, 지속성 및 기능은 대상체에 투여 후 감소 또는 하락한다. 그러나, 관찰 결과, 일부 경우에, 재조합 수용체를 발현하는 투여된 세포가 재증폭 및/또는 생체내 재활성화되어(예를 들어, 시간에 따라 세포 수 또는 기간의 증가를 나타냄) 입양 세포 요법의 효능 및 치료 결과를 개선할 수 있음이 관찰되었다.

일부 구현예에서, 장기간 자극 또는 항원에 대한 노출 및/또는 종양 미세 환경의 조건 하에서 노출 후, T 세포는 시간이 지남에 따라 기능 저하가 되고/거나 탈진 상태와 관련된 특징을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 이는 항원에 대한 T 세포의 지속성 및 효능을 감소시키고 효과적인 능력을 제한한다. CAR T 세포의 효능 및 기능을 향상하기 위한, 구체적으로 기능 저하 또는 탈진된 상태를 최소화, 감소, 예방 또는 역전시키기 위한 방법이 필요하다.

제공된 방법은 특정 면역조절 화합물, 예를 들어 화합물 A는 T 세포의 하나 이상의 사이토카인, 세포독성, 증폭, 증식 및 지속성을 생성하는 능력과 관련된 기능을 포함하는 T 세포 기능을 개선시킨다는 관찰에 기초한다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 T 세포 요법(예를 들어, CAR-발현 T 세포)의 투여와 관련된 T 세포 활성의 증식 및/또는 활성을 증진 또는 조절한다. 상기 방법 및 용도는 향상된 또는 더 큰 T 세포 기능성을 제공 또는 달성하고, 그로 인해 향상된 항-종양 효능을 제공하는 것으로 확인된다.

T 세포 기능을 강화하는 것에 더하여, 상기 면역 조절 화합물(예를 들어, 화합물 A)은 T 세포 신호 전달을 증가시키고/거나 만성 자극 후에 분화에 의해 조절된 하나 이상의 유전자를 변경함에 의한 것을 포함하여, T 세포 탈진을 역전, 지연 또는 예방하는 데 효과를 나타내는 것으로 본원에서 또한 확인된다. 따라서, 일부 경우에 T 세포 활성을 증가 또는 강화시키는 제제가 세포를 탈진된 상태로 몰아넣을 수 있는 반면, 상기 면역 조절 화합물(예를 들어, 화합물 A)의 활성은 T 세포 활성에 강화 효과를 발휘하기 위해 T 세포 탈진으로부터 분리되는 것으로 본원에서 확인된다. 더욱이, 본원의 관찰은 면역 조절 화합물(예를 들어, 화합물 A)이 세포가 탈진의 특징을 나타낸 후에 하나 이상의 T 세포 활성을 복구하거나 부분적으로 복구하는 등에 의해 T 세포 탈진으로부터 T 세포를 구제하는 데 활성을 나타내는 것을 보여준다. 주목할만한 점은, 본원의 결과가 만성적으로 자극되어 탈진된 T 세포의 특징을 나타내는 T 세포를 본원에 기술된 화합물 A와 같은 면역 조절 화합물에 노출하면 활성을 회복할 수 있거나 활성이 복구 또는 부분 복구됨을 보여준다는 것이다. 본원의 관찰은 제공된 방법이 또한 예컨대 치료를 받은 특정 그룹의 대상체에서 특정 대체 방법과 비교하여 향상된 또는 더 지속되는 반응을 달성할 수 있음을 뒷받침한다.

본원에서의 관찰은 만성 자극 검정에서 기능저하가 된 항-CD19 CAR T 세포 및 급성 자극된 항-CD19 CAR T 세포에 대한 화합물 A의 처리 효과 후 개선된 T 세포 기능성을 나타낸다. 화합물 A 처리는 24시간 처리 후 활성화된 항-CD19 CAR T 세포의 이카로스 및 아이올로스 발현을 완전히 분해하는 것으로 나타났다. 화합물 A는 항-CD19 CAR T 세포의 이펙터 사이토카인 생산 (예를 들어, IFN-γ)을 증가시키는 한편, 동시에 그의 증식 속도를 늦추는 것으로 나타났다. 증식에 대한 이러한 효과는 시험된 모든 농도 (1 내지 100 nM)에서 관찰되었고, G1 단계에서 항-CD19 CAR T 세포의 축적으로 인한 것이었다. 증식 속도로부터 이펙터 사이토카인 생산의 이러한 디커플링은 임상적으로 유익할 수 있었다. 화합물 A (1 및 10 nM)에 의한 동시 만성 자극 및 처리는 CD19+ 림프종 세포주 및 CD19+ 림프종 구상체에 대한 세포용해, 및 개선된 이펙터 사이토카인 분비 및 발현에 의해 평가된 항-CD19 CAR T 세포 저기능성 소진의 개시를 제한하는 것으로 나타났다. 화합물 A (1 및 10 nM)는 소진된 항-CD19 CAR T 세포에 첨가될 때, CD19+ 구상체에 대한 세포용해 활성을 회복시키고, 이펙터 사이토카인 발현을 개선시켰다. 종합하면, 화합물 A 및 항-CD19 CAR T 세포의 조합은 종양 미세환경을 조절하고, CAR T 세포의 지속적 항-종양 기능을 개선하고, 잠재적으로 림프종 세포에 대한 직접적인 항-종양 효과에 의해 B-세포 악성종양에 걸친 항-CD19 CAR T 세포의 활성을 향상시키고 연장시키기 위한 유용한 치료적 접근법을 제공할 수 있다(Lonial, 2019 J Clin Oncol., 37:8006).

이러한 관찰은 CAR T 세포를 기능이 저하(예를 들어, 세포 용해 및 IL-2 분비 감소)되도록 하기 위해 만성 자극 분석법을 사용하여 이루어졌다. 이 모델을 사용하여, 기능 저하의 탈진된 상태로 이르는 조건에 노출 중에(동시) 또는 이후에(구제) 존재할 때 CAR T 세포 기능에 대한 화합물 A의 영향을 평가하기 위해 CAR T 세포를 조사하였다. 항원 재투여 시, 본원에 제공된 연구결과는 상기 조건 중에 CAR T 세포의 동시 치료는 CAR T 세포 기능 저하와 관련된 활성 및 유전자 시그니처(gene signature)를 포함한 활성 및 표현형을 역전시키고 더 많은 이펙터 기능을 보존함을 입증한다. 마찬가지로, 결과는 화합물 A가 탈진된 T 세포의 사이토카인 생산 및 세포 용해 활성을 포함하여 T 세포 기능을 구제 또는 복구할 수 있음을 보여준다.

본원에 제공된 관찰은 또한 화합물 A가 CAR T 세포에 의한 이펙터 사이토카인 생산을 증가시키는 동시에 증식률을 늦추는 데 활성을 나타냄을 입증한다. 이 결과는 T 세포의 생존력에 대한 상기 화합물의 효과 때문은 아니다. 이 증식에 대한 효과는 다양한 농도에서 관찰되었고, G1기에 T 세포의 축적 때문인 것으로 밝혀졌다. 이 증식률로부터 이펙터 사이토카인 생산의 분리는 효능을 제한할 수도 있는 생체 내 T 세포의 분화를 제한하는 등에 의해 임상적으로 유익할 수 있다.

제공된 방법은 화합물 A가 T 세포의 증폭, 증식 및 지속성과 관련된 기능을 포함하는 조작된 T 세포 요법의 T 세포 기능을 개선시킨다는 것을 보여준다. 일부 구현예에서, 본 방법은 입양 세포 요법, 예를 들어 예컨대 T 세포 요법(예: CAR-발현 T 세포)을 위한 세포를 포함하는 조성물과 같은 T 세포 요법을 화합물 A와 병용하여 투여하는 것에 의해 이점이 있다. 일부 관점에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 대안적 방법과 비교하여 개선되거나 더 지속되는 반응 또는 효능을 제공하거나 달성한다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 T 세포 요법(예를 들어, CAR-발현 T 세포)의 투여와 관련된 T 세포 활성의 증식 및/또는 활성을 증진 또는 조절한다. 특정 구현예에서, 화합물 A를 이용한 병용 요법은 B 세포 악성 종양에서 종양 미세 환경을 조절하고, CAR T 세포의 항-종양 기능 지속을 향상함으로써 CAR T 세포의 활성을 증진하고 연장시키기 위한 유용한 치료적 접근법을 제공할 수 있다. 일부 경우에, 상기 화합물은 림프종 세포에 직접적인 항-종양 효과를 가질 수도 있다.

화합물 A는 원발성 종양 성장을 직접 손상시키고 면역억제성 종양 미세환경을 조절하며 보다 강력한 항종양 염증 반응을 촉진할 수 있는 다면발현성 소분자인 면역 조절 의약물이다. 화합물 A는 B 세포에 대하여 항-증식 활성을 발휘하고 B 세포 림프 악성 종양에서 종양을 표적화하는 단일 제제 치료로서 평가되고 있다. 화합물 A 및 레날리도마이드와 같은 다른 면역 조절 의약물은 이카로스족 전사인자의 분해를 통해 악성 림프구에 직접적으로 영향을 미치는 것으로 나타났다. 화합물 A의 분자 표적은 쿨린(Cullin) 4 RING E3 유비퀴틴 리가아제 복합체의 기질 수용체인, 단백질 세레블론(CRBN)으로 식별되었다. CRBN 내의 소수성 트리-트립토판 포켓에 화합물 A의 결합은 아이올로스(IKZF3)및 이카로스(IKZF1)를 포함한 여러 단백질 기질의 모집, 유비퀴틴화 및 후속적인 프로테아좀에 의한 분해를 증진시킨다.

본원에 기재된 연구에서, 1 및 10 nM의 화합물 A 농도는 CD19 CAR T 세포 탈진의 발병을 지연시키고 탈진으로부터 항-CD19 CAR T 세포를 구제하였다. 0.3 mg 및 1.0 mg의 건강한 대상체에서의 화합물 A의 용량은 2.41 nM 내지 11.79 nM의 Cmax를 나타내었다. 일부 측면에서, 용량은 화합물의 면역조절 효과를 매개하기 위한 효과적인 용량이다. 일부 측면에서, 용량은 중증 독성, 예컨대 3급 호중구 감소증 및 피부염을 유발할 것으로 예상되지 않는 것이다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 대상체에 T 세포 요법 및/또는 화합물 A의 투여 이후 독성을 최소화하거나 방지한다. 일부 측면에서, 본원에 제공된 방법은 기존의 단일요법 접근법에서 화합물 A의 직접적인 종양 효과에 사용될 수 있는 용량보다 실질적으로 더 낮은 용량을 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 (약) 0.1 mg 내지 (약) 1 mg의 양으로 투여된다. 용량은 순환 요법에 걸쳐 매일 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 1일 당 1mg (이하), 예컨대 (약) 0.9 mg, 0.8 mg, 0.7 mg, 0.6 mg, 0.5 mg, 0.4 mg, 0.3 mg, 0.2 mg, 또는 0.1 mg, 또는 상기 중 임의의 것 사이의 임의의 값인 화합물의 양을 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 1일 당 (약) 0.3 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 1일 당 (약) 0.45 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 1일 당 (약) 0.6 mg의 양으로 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 림프구 고갈 요법을 받은 지 충분한 시간 후에, 화합물 A 및 림프구 고갈 요법의 골수억제 효과가 최소화되도록, 대상체에 투여된다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포)이 탈진의 특징을 나타낼 수 있거나 나타낼 가능성이 있는 시점에 사용된다. 일부 구현예에서, 탈진 표현형은 T 세포가 피크 증폭에 도달하고 대상체의 혈액에서 수가 감소하기 시작한 후에 명백하다. 일부 구현예에서, T 세포 요법(CAR T 세포)의 T 세포를 화합물 A에 노출 또는 접촉시키는 방법은 T 세포를 항원에 노출하기 바로 전 시점(기준선) 또는 세포가 항원에 노출되었지만 계속 증식 중이고 아직 피크 증폭에 도달하지 않은 시점과 비교하여 T 세포가 기능 저하 또는 탈진된 상태의 증가를 나타내는 시점에 수행된다. 일부 구현예에서, 기능 저하 또는 탈진된 상태의 증가는 이전 이른 시점과 비교하여 탈진 마커의 발현 증가에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 탈진 마커의 발현 증가와 같은 기능 저하 또는 탈진된 상태의 증가는 T 세포 요법이 표적화한 항원과 관련된 질병 또는 병태를 가진 대상체에 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포)을 투여한 이후 시점에 발생한다. 대상체에 투여 후에 말초 혈액 내 T 세포와 같은 T 세포는 PD-1, TIM-3 및 LAG-3과 같은 세포 활성화 또는 탈진 마커에 대해 모니터링될 수 있다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 T 세포 요법, 예를 들어 CAR T 세포의 투여, 및 CAR T 세포가 탈진 표현형을 나타내거나 또는 나타낼 가능성이 있는 시간 전에 화합물 A의 투여 개시를 필요로 한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 CAR T 세포가 여전히 증폭되거나 또는 여전히 증폭될 수 있는 시점에서 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체의 혈액 중 피크 CAR T 세포 수의 존재 전에 또는 이전으로 의심되는 시점에 개시된다. 일부 측면에서, 이러한 시점에서의 화합물 A 투여의 개시는 CAR T 세포 기능을 강화시킨다. 일부 측면에서, 이러한 시점에서의 화합물 A 투여의 개시는 또한 CAR T 세포 탈진을 지연시키거나 또는 예방한다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체의 혈액에 피크 CAR-T 세포가 존재하기 전 또는 대략 그 시점 또는 그럴 것이 의심되거나 가능성이 있는 시점(예를 들어 T 세포의 투여 개시 후 21일 이내)에 개시된다. 일부 경우에, 피크 CAR-T 세포는 CAR T 세포의 투여 후 11-15일 이내에 존재한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 세포 요법의 투여 개시 후 1 내지 15일, 예를 들어 약 1일 또는 8일 또는 15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 대상체가 세포 요법의 투여 이후 중증 독성을 나타내지 않는 시점에 투여된다.

일부 측면에서, 임의의 제공된 방법에서, 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 4주 기간에 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 및 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.30 mg, 0.45 mg, 또는 0.60 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 4주 주기 중 하나 이상 동안, 화합물은 연속 3주 후 1주 동안 투여되지 않는다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은, 예컨대 다른 특정 세포 요법 또는 면역 조절 의약물 요법과 비교하여, 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나, 또는 독성 또는 독성 결과, 예컨대 신경 독성(NT) 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS), 또는 혈액성 독성, 예컨대 호중구 감소증의 비율 또는 가능성을 낮춘다.

일부 구현예에서, 본 방법은 호중구 감소증 또는 혈소판 감소증과 같은 특정 혈액성 독성의 위험을 초래하지 않거나 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체의 50% 이내가 3급보다 더 높은 호중구 감소증, 예컨대 지연성 3급 호중구 감소증 또는 4급 호중구 감소증, 및/또는 3급보다 더 높은 혈소판 감소증, 예컨대 3급 또는 4급 혈소판 감소증을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료 받은 대상체의 적어도 50% 이상(예를 들어, 치료 받은 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)이 3급 또는 3급 이상의 중증 호중구 감소증 또는 중증 혈소판 감소증을 나타내지 않는다.

일부 구현예에서, 본 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식 세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 동안 적어도 (약) 섭씨 38도 이상의 열 및 적어도 (약) 20mg/dL의 CRP의 혈장 수준을 초래하지 않거나, 이의 위험을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료받은 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 또는 그 이상이 어느 등급의 CRS든 또는 어느 등급의 신경 독성이든 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료받은 대상체의 50% 이내(예를 들어, 치료받은 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)가 2급보다 높은 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 2급보다 높은 신경 독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료받은 대상체의 적어도 50% 이상(예를 들어, 치료받은 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)이 중증 독성 결과(예를 들어, 중증 CRS 또는 중증 신경 독성)를 나타내지 않고, 예컨대 3급 이상의 신경 독성을 나타내지 않고/거나 중증 CRS를 나타내지 않고, 또는 치료 이후 특정 기간 이내에, 예컨대 세포의 투여 후 1주, 2주, 또는 1개월 이내에 나타내지 않는다.

일부 경우에, 화합물 A는 세포를 효율적으로/효과적으로 부스트하거나 프라이밍할 수 있는 시점에 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체의 혈액에서 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수준이 검출 가능할 때 또는 그 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)을 강화할 수 있고, 일부 측면에서, 이는 치료 성과를 향상할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 T 세포 요법의 세포가 약한 증폭을 나타내고, 탈진되고, 대상체에서 축소된 또는 감소된 지속성을 나타내고/거나, 다른 요법에 대해 저항성 또는 불응성인 암을 갖고/거나 공격적 또는 고위험 암인 대상체에서 특히 유리하다.

일부 구현예에서, T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포)의 투여를 받은 대상체에서 대상체 내의 예컨대 대상체의 생물학적 샘플 내의, 예를 들어 대상체의 혈액 내의 상기 요법의 T 세포의 존재, 부재 또는 수준을 모니터링한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 유전자 조작된 세포가 투여된 대상체에서 지속성 증가 및/또는 더 나은 효능을 가져온다. 일부 구현예에서, 대상체에서 CAR-발현 T 세포와 같은 유전자 조작된 세포의 지속성은 T 세포 요법의 투여를 수반하나 화합물 A의 투여의 부재 하에서 이루어지는 방법과 같은 다른 방법에 의해 달성될 수 있는 것과 비교하여 더 크다. 일부 구현예에서, 지속성은 적어도 (약) 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배 또는 그 이상 증가한다.

일부 구현예에서, 투여된 세포의 지속성의 정도 또는 범위는 대상체에 투여 후에 검출 또는 정량화할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직(예를 들어, 질병 부위)에서 재조합 수용체(예를 들어, CAR-발현 세포)를 발현하는 세포의 양을 평가하기 위해 정량적 PCR(qPCR)을 사용한다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA 마이크로그램당 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 DNA 또는 플라스미드의 복제본(copies)로 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청 마이크로리터당 수용체 발현, 예를 들어, CAR 발현 세포 수로 또는 샘플 마이크로리터당 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당으로 정량화된다. 일부 구현예에서, 일반적으로 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석법도 수행될 수 있다. 세포 기반 분석법 또한 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현하거나 질병 또는 병태의 세포에 대해 반응, 예를 들어 세포 독성 반응을 유도하고 및/또는 중화하고 및/또는 이에 결합할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 상기 구현예의 어느 하나에서, 대상체에서 투여된 세포와 내인성 세포를 구분하기 위해 재조합 수용체(예를 들어, CAR 발현 세포)와 관련된 다른 마커의 발현 정도 또는 수준을 사용할 수 있다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 반응의 지속성을 향상, 증가 또는 최적화하기 위해 일정 기간 동안 투여된다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 3 개월, 예컨대 일반적으로 6 개월에서 완전 관해(CR)를 달성하거나 또는 완전 관해(CR)에 있는 대상체가 장기간 반응을 유지, 예컨대 치료 종료 후 또는 병용 요법의 투여 후 완전 반응(CR)을 처음 달성한 후 (약) 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월 또는 12 개월 이상 동안 생존하거나 또는 진행 없이 생존할 가능성이 더 크다는 관찰에 기초한다. 일부 측면에서, 방법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 적어도 3 개월, 예컨대 적어도 4 개월, 적어도 5 개월 또는 적어도 6 개월인 일정 기간 동안, 예컨대 기재된 바와 같은 특정 순환 요법으로 화합물 A를 투여하기 위해 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 T 세포 요법의 투여 개시 후 적어도 6 개월 또는 적어도 180 일 동안, 예컨대 기재된 바와 같은 특정 순환 요법으로 투여된다. 일부 구현예에서, 일정 기간의 종료시, 대상체가 CR을 나타내는 경우 또는 질환 또는 병태가 치료(병용 요법)를 받은 후 관해 후 대상체에서 진행되거나 또는 재발된 경우 화합물 A의 투여는 종료되거나 또는 중단된다. 일부 측면에서, 화합물 A의 연속 투여는 일정 기간(예를 들어, 또는 (약) 3 개월 또는 6 개월)의 종료 시 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)을 나타내는 대상체에서 수행될 수 있다. 다른 측면에서, 일정 기간은 고정된 지속기간이고, 화합물 A의 추가의 투여는 수행되지 않는다.

일부 측면에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 대안적 방법, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 단일요법으로서 또는 병용 요법으로서 함께 투여하지 않고 T 세포 요법 또는 화합물 A의 투여를 포함하는 방법에 비해 개선된 또는 보다 내구성 있는 반응 또는 효능을 제공하거나 달성한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 입양 세포 요법, 예를 들어 예컨대 T 세포 요법(예: CAR-발현 T 세포)을 위한 세포를 포함하는 조성물과 같은 T 세포 요법 및 화합물 A를 투여하는 것에 의해 이점이 있다. 일부 구현예에서, 이러한 반응은 불량한 예후를 갖는 고위험 환자, 예컨대 고위험 질병, 예를 들어 고위험 NHL을 갖는 환자에서 관찰된다. 일부 측면에서, 방법은 표준 치료에 대해 재발했거나 표준 치료에 불응성(R/R)이거나 불량한 예후를 갖는 NHL과 같은 공격적이고/거나 불량한 예후의 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)의 형태를 갖는 대상체를 치료한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL) 또는 여포성 림프종을 갖는다.

일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조품, 키트 또는 조성물로 치료받은 대상체 중 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70% 또는 적어도 75% 또는 그 이상이 완전 반응(CR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 대상체는 CR에 있고, 최소 잔류 질병(MRD)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 CR에 있고, MRD이다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조품, 키트 또는 조성물로 치료된 대상체 중 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상 또는 90% 이상이 부분 반응(PR)의 객관적인 반응을 달성한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조품, 키트 또는 조성물로 치료받은 대상체 중 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 이상이 세포 요법의 투여 개시 후 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 1년에 CR 또는 PR을 달성한다.

일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조품, 키트 또는 조성물로 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상이 세포 요법 투여 개시 후 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월 이상까지 CR 또는 객관적 반응(OR)과 같은 반응을 유지한다. 일부 구현예에서, CR 또는 OR과 같은 상기 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월까지 CR을 달성한 상기 대상체에서 또는 예컨대 제공된 방법에 따라 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상, 또는 약 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상에서, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월 또는 그 이상 동안 지속 가능하다. 일부 구현예에서, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월까지 CR을 달성한 상기 대상체 또는 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조품, 키트 또는 조성물로 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상이 (약) 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월 또는 보다 더 오랫동안 진행없이 생존하거나 생존한다.

본 출원에서 언급된 특허 문헌, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 달리 부합하지 않는 경우, 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.

본원에 사용된 섹션 제목은 단지 구성을 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

Ⅰ. 병용 요법

암을 갖는 대상체를 치료하기 위해, 조작된 세포, 예컨대 T 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 및 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 화학식 I의 화합물

(화학식 I)

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 입체 이성질체, 호변 이성질체 또는 라세미 혼합물(화합물 A), 및 이의 조성물 포함,의 방법 및 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 B 세포 악성종양을 갖는 대상체를 치료하기 위한 것이다. 일부 측면에서, 방법은 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL)과 같은 백혈병 또는 림프종을 치료하기 위한 것이다. 일부 측면에서, 본 방법과 용도는 특정 대안적인 방법에 비해 예를 들어 처리된 특정 그룹의 대상체에서 개선된 반응 및/또는 보다 지속적인 반응 또는 효능을 제공하거나 달성한다.

일부 구현예에서, 방법 및 용도는 1) 유전적으로 조작된 세포 표면 수용체 (예를 들어, 재조합 항원 수용체)를 발현하는 T 세포, 일반적으로 키메라 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)인 T 세포를 포함하는 T 세포 요법을 대상체에게 투여하는 단계, B 세포 악성종양, 예컨대 백혈병 또는 림프종 (예를 들어, NHL) 및/또는 그로부터 유래된 세포 유형에 의해 발현되고, 그와 연관되고, 및/또는 그에 특이적인 항원을 인식하는 단계, 및 2) 대상체에게 화합물 A를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후(후속적으로) 또는 T 세포 요법의 투여를 개시한 후(후속적으로) 개시된다. 일부 경우에, 화합물 A는 T 세포 요법의 투여를 받은 대상체에게 투여된다. 방법은 일반적으로 하나 이상의 용량의 세포 및 하나 초과의 용량의 화합물 A를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

예를 들어, 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 화합물 A 또는 본원에 기재된 조작된 세포 및/또는 화합물 A를 포함하는 조성물을 포함하는 병용 요법은 다양한 치료, 진단 및 예방 적응증에서 유용하다. 예를 들어, 병용은 대상체에서 다양한 질병 및 장애를 치료하는 데 유용하다. 상기 방법 및 용도는 예를 들어, 조작된 세포, 화합물 A 및/또는 하나 또는 둘 모두를 함유하는 조성물을 종양 또는 암과 같은 질병, 병태 또는 장애가 있는 대상체에 투여하는 것을 포함한 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포, 화합물 A 및/또는 하나 또는 둘 모두를 함유하는 조성물은 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로 투여된다. 용도는 상기 방법 및 치료에서, 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 조작된 세포, 화합물 A 및/또는 하나 또는 둘 모두를 함유하는 조성물의 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 조작된 세포, 화합물 A 및/또는 하나 또는 둘 모두를 함유하는 조성물을, 질병 또는 병태를 가진 또는 가진 것으로 의심되는 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 이를 통해 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 섹션 II에 설명된 바와 같다..

일부 구현예에서, 병용 요법은 특정 B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 투여된다. 치료되는 B 세포 악성종양은 항원의 발현이 B 세포 악성종양의 병인과 관련되고/거나 병인에 수반되는, 예를 들어, B 세포 악성종양을 일으키거나, 악화하거나 또는 그렇지 않으면 그에 수반되는, 임의의 것일 수 있다. 예시적인 B 세포 악성종양은 세포의 악성 종양 또는 형질 전환(예를 들어 암)과 관련된 질병 또는 병태를 포함할 수 있다. 치료할 수 있는 다양한 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는 예시적인 항원들이 본원에 기술된다. 구체적인 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 관련되는 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 B 세포(인간 B 세포 포함)에 의해 또는 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이다. 일부 구현예에서, 항원은 CD19이고, 키메라 항원 수용체는 CD19에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD19 항원은 인간 CD19이다. CAR-발현 T 세포가 CD19에 특이적인 본원에 제공된 임의의 방법의 설명은 또한 또 다른 B 세포 항원 또는 T 세포 악성종양의 세포와 연관되거나 그 상에서 발현된 항원, 예컨대 임의의 상기 기재된 항원의 표적화에 의해 수행될 수 있는 것으로 이해된다.

일부 구현예에서, 치료되는 B 세포 악성종양은 백혈병 및 림프종, 예를 들어, 급성 골수성(또는 골수형성) 백혈병(acute myeloid (or myelogenous) leukemia, AML), 만성 골수성(또는 골수형성) 백혈병(chronic myeloid (or myelogenous) leukemia, CML), 급성 림프구성(또는 림프모구) 백혈병(acute lymphocytic (or lymphoblastic) leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 모발 세포 백혈병(hairy cell leukemia, HCL), 소형 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma, SLL), 외투 세포 림프종(Mantle cell lymphoma, MCL), 변연부 림프종, 버킷 림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma, HL), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL), 역형성 거대 세포 림프종(Anaplastic large cell lymphoma, ALCL), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 불응성 여포성 림프종 및 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병(chronic lymphoblastic leukemia, CLL), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL) 및 미만성 거대 B 세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma, DLBCL)에서 선택된 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 NHL이고 상기 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(비활동성으로부터 다시 형질전환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL), T 세포/조직-농축 거대 B 세포 림프종(T cell/histocyte-rich large B cell lymphoma, TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 임의적으로, 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B)으로 구성된 군에서 선택된다.

일부 구현예에서, 본 방법은 항원 수용체-발현 세포(예를 들어, CAR 발현 세포) 및 화합물 A를 투여함으로써 비호지킨 림프종(NHL)과 같은 림프종 또는 백혈병을 가진 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어, CAR-발현 세포)의 투여 후 또는 후속하여, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어, CAR-발현 세포)의 투여를 개시한 후 또는 후속하여 투여된다.

일부 구현예에서, NHL은 Lugano 분류에 기초한 단계일 수 있다(예를 들어 Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5 참조). 일부 경우에, 단계는 로마 숫자 I부터 IV(1-4)로 기재되고 림프 시스템 외부 장기(림프절외 장기)에 영향을 미치는 제한된 단계(I 또는 II) 림프종은 E로 표시된다. I 단계는 하나의 노드 또는 인접한 노드 그룹 또는 노드 관여없는 단일 림프절외 병변(IE)의 관여를 나타낸다. 2 단계는 횡격막의 같은 쪽에 있는 2 이상의 노드 그룹 또는 제한된 인접하는 림프절외 관여(IIE)를 갖는 노드 규모에 의한 I 또는 II 단계의 관여를 나타낸다. III 단계는 비장 관여와 함께 횡경막 위의 노드 또는 횡경막 양쪽에 있는 노드의 관여를 나타낸다. IV 단계는 추가의 비인접한 림프절 외 개입의 관여를 나타낸다. 또한, "부피가 큰 질병(bulky disease)"은 특히 II 단계에 관한 가슴의 거대 종양을 설명하는데 사용될 수 있다. 질병의 정도는 열성 림프종에 대해서는 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및 비열성 조직 구조에 대해서는 CT에 의해 결정된다.

일부 구현예에서, ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group) 수행도 지표는 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법으로부터 성과가 좋지 않았던 대상체를 평가하거나 선별하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Oken et al.(1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655] 참조). 일부 구현예에서, 대상체는 1 이하의 ECOG 상태를 갖는다. 수행도의 ECOG 척도는 스스로를 돌보는 능력, 일상 활동 및 신체 능력(예를 들어, 걷기, 일하기 등)의 관점에서 환자의 기능 수준을 설명한다. 일부 구현예에서, 0의 ECOG 수행도는 대상체가 정상적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 1의 ECOG 수행도를 갖는 대상체는 신체 활동에 일부 제한을 보이나 대상체는 완전히 보행할 수 있다. 일부 측면에서, 2의 ECOG 수행도를 갖는 환자는 50% 이상 보행할 수 있다. 일부 경우에, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 스스로를 돌볼 수도 있다; 예를 들어, 문헌[Sørensen et al., (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775]을 참조한다. ECOG 수행도를 반영하는 기준이 아래 표 1에 기술된다.

표 1. ECOG 수행도 기준
등급	ECOG 수행도
0	제한없이 모든 질병 전 수행을 수행할 수 있는, 완전히 활동적임
1	육체적으로 격렬한 활동이 제한되나 걸을 수 있고 가볍거나 앉아서 하는 성질의 일, 예를 들어 가벼운 집안 일, 사무실 작업을 수행할 수 있음
2	깨어있는 시간의 50 % 이상에서 걸을 수 있고 모든 자기 관리가 가능하나 어떠한 작업 활동도 수행할 수 없음.
3	제한된 자기 돌봄만 가능하며; 깨어 있는 시간의 50% 이상 침대나 의자에서 지냄
4	완전히 지체 부자유한; 어떠한 자기 관리도 수행할 수 없음; 침대나 의자에 완전히 국한
5	죽음

일부 구현예에서, 대상체는 이중/삼중 히트 림프종 또는 이중/삼중 히트 분자 하위 유형의 림프종을 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC(골수 세포증 종양 유전자), BCL2(B-세포 림프종 2) 및/또는 BCL6(B-세포 림프종 6) 유전자 재배열(예를 들어, 전좌)의 존재를 특징으로 하는 이중 히트 림프종이다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC, BCL2 및 BCL6 유전자 재배열의 존재를 특징으로 하는 삼중 히트 림프종이고; 예를 들어, Aukema et al., (2011) Blood 117:2319-2331을 참조한다. 이러한 구현예의 일부 측면에서 대상체는 ECOG 0-1이다. 측면에서, 요법은 상기 대상체에 대해 표시되고/거나 지침은 상기 집단 내의 대상체에 대한 투여를 나타낸다. 일부 구현예에서, 2016년 WHO 기준(Swerdlow et al., (2016) Blood 127(20):2375-2390)에 기초하여, 이중/삼중 히트 림프종은 DLBCL 조직 구조(이중/삼중 히트)를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고급 B 세포 림프종으로 간주될 수 있다.

일부 구현예에서, 병용 요법은 세포 요법(예를 들어, CAR+ T 세포)의 단위 용량으로의 치료에 대해 특정 시기 내에 및/또는 특정한 정도로 반응하지 않거나 반응하지 않을 것으로 예상되는 대상체 및/또는 반응하지 않고, 반응하지 않을 가능성이 있고/거나 불량한 반응자로 예상되거나 불량한 반응자일 가능성이 있거나 불량한 반응자인 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 세포 요법의 투여 개시 후 예컨대 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 완전한 반응 또는 전반적인 반응을 나타낼 것으로 예측되지 않거나 나타낼 가능성이 없거나 나타내지 않는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 세포 요법의 투여 후 예컨대 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 진행성 질병(progressive disease, PD)을 나타낼 것으로 예측되거나 나타낼 가능성이 있거나 나타내는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법으로 치료되거나 이전에 치료되었기 때문에 유사한 입장에 있는 다수의 대상체에 기초한 반응 또는 특정 반응을 나타내지 않을 것으로 예측되거나 나타내지 않을 가능성이 있다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 특정 그룹 또는 하위 세트의 대상체, 예를 들어, 고위험 질병, 예를 들어 고위험 NHL을 가진 것으로 식별된 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 표준 치료에 대해 재발했거나 표준 치료에 불응성(R/R)이거나 불량한 예후를 갖는 NHL과 같은 공격적이고/거나 불량한 예후의 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)의 형태를 갖는 대상체를 치료한다. 일부 경우에, 요법이 표시된 질병 및/또는 환자 집단을 위한 이용 가능한 요법, 치료의 표준 또는 기준 요법에 대한 전반적인 반응률(overall response rate, ORR)은 40 % 미만이고/거나 완전한 반응(CR)은 20 % 미만이다. 일부 구현예에서, 화학 요법 불응성(chemorefractory) DLBCL에서, 기준 또는 이용 가능한 치료 또는 표준 치료 요법에서의 ORR은 약 26 %이고 CR은 약 8 %이다(Crump et al. Outomes in refractory aggressive diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL): Results from the international SCHOLAR study. ASCO 2016 [Abstract 7516]). 일부 측면에서, 제공된 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품은 이용 가능한 요법에 대한 개선되고 우수한 반응을 달성한다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 대상체의 치료를 위한 방법 및 용도는 예를 들어 특정 유형의 질병, 진단 기준, 선행 치료 및/또는 선행 치료에 대한 반응에 기초하여, 특정 그룹 또는 하위 세트의 대상체를 선별하거나 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 관해된 이후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어, 하나 이상의 본원에 기재된 것을 포함하는 표준 요법 방식에 대해 재발했거나 불응성(R/R)인 대상체를 치료하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 대상체는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 초과의 선행 요법을 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 1개의 선행 요법을 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 2개 내지 4개의 선행 요법을 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 5개 내지 6개의 선행 요법을 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 6개 초과의 선행 요법을 받은 적이 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 투여 전에 B 세포 악성종양(예를 들어, NHL)를 표적으로 하는 요법 또는 치료제로 이전에 치료받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법 (예를 들어, CAR+ T 세포)으로 이전에 치료받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT로 이전에 치료받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 표준 요법으로 치료 후 예후가 좋지 않았고/거나 선행 요법 중 하나 이상의 방식에 실패하였다. 일부 구현예에서, 대상체는 림프구 고갈 요법 외 NHL을 치료하기 위해 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7가지 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7가지의 다른 요법으로 치료받았거나 이를 이전에 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 화학요법 또는 방사선 요법으로 이전에 치료받았다. 일부 측면에서, 대상체는 다른 요법 또는 치료제에 대해 불응성이거나 반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어, 화학요법 또는 방사선을 포함한 다른 요법 또는 치료적 개입으로 치료 후, 질병이 지속되거나 재발하였다.

일부 구현예에서, 병용 요법은 선행 치료에 대해 진행된 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 선행 치료에 대한 반응을 중단한 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 선행 치료 후 완화 후 재발한 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 선행 치료에 불응성인 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 선행 치료에 대해 최적 반응 (예를 들어, 완전 반응, 부분 반응 또는 안정한 질병) 미만의 반응을 갖는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 대상체는 마지막 선행 요법에 대해 불응성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 마지막 선행 요법에 재발했다. 대상체가 마지막 선행 요법에 대해 부분 미만의 반응을 달성한 경우 상태는 불응성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 선행 화학 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 선행 화학 요법에 대해 화학 요법 불응성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 선행 요법에 대해 화학 민감성이다. 상태는 화학 요법 불응성이고 대상체는 자가 줄기 세포 이식 후 12개월 미만에 재발했거나 마지막 화학 요법 함유 요법에 대해 안정한 질병(stable disease, SD) 또는 진행성 질병(progressive disease, PD)을 달성했다. 그렇지 않으면 상태는 화학 민감성이다.

일부 구현예에서, 선행 치료 또는 요법은 CD20 표적 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 선행 치료 또는 요법은 안트라사이클린을 포함한다. 일부 구현예에서, 선행 치료 또는 요법은 세포 요법(예: T 세포 요법, 예를 들어, CAR T 세포 요법)을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 방법, 용도 및 제조품은 예를 들어 특정 유형의 질병, 진단 기준, 선행 치료 및/또는 선행 치료에 대한 반응에 기초하여, 예컨대 기재된 바와 같은 임의의 그룹의 특정 그룹 또는 하위 세트의 대상체를 선별하거나 식별하는 것을 포함한 대상체의 치료를 수반하거나 치료를 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 관해된 이후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어, 하나 이상의 표준 요법, 예를 들어, 세포 요법(예: CAR+ T 세포)에 대해 재발했거나 불응성(R/R)인 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 달리 명시되지 않은(NOS; 드 노보(de novo) 및 무통성으로부터 형질 전환), 원발성 종격동(흉선) 거대 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종 3B 등급(FL3B), EBV 양성 DLBCL 또는 EBV 양성 NOS를 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 1 미만, 예컨대 0-1의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status)를 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 하나 이상, 예컨대 2 또는 3의 염색체 전위(예컨대 “이중-히트(double-hit)” 또는 “삼중-히트(triple-hit)”로 명명되고, 이는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고급 B 세포 림프종이고; 보통 t (14; 18) (q32; q21) bcl-2 유전자 및/또는 BCL6/3q27 염색체 전위와 조합으로 MYC/8q24 유전자좌 전위를 가짐; 예를 들어 Xu et al. (2013) Int J Clin Exp Pathol. 6(4): 788-794 참조)를 갖고, 및/또는 재발, 선택적으로 12개월 내에 재발하였고, 및/또는 화학 요법 불응성으로 간주되어온 집단과 같이 요법 또는 특정 기준 요법에 대해 일반적으로 불량하게 반응하는 불량한 예후 집단 또는 DLBCL 환자 또는 이의 대상체 집단을 치료한다.

일부 측면에서, 대상체는 배중심-유사(GCB) DLBCL인 DLBCL을 갖는다. 일부 측면에서, 대상체는 비-배중심-유사(비-GCB) DLBCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 이중-히트 림프종 (DHL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 삼중-히트 림프종 (THL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 화합물 A로의 치료의 반응성을 나타내는 유전자의 발현에 대해 양성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 유전자의 발현에 대해 음성이다. Blood 2017 130:4118을 참조한다.

일부 구현예에서, 항원 수용체(예를 들어, CAR)는 질병 또는 병태와 관련된, 예컨대 NHL과 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 관련된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, CD19 항원은 인간 CD19이다.

일부 구현예에서, 방법은 B 세포 악성 종양의 위험이 있거나 또는 가질 것으로 의심되는 대상체에게 세포 요법 및 화합물 A를 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 방법은 NHL의 특정 예후 또는 위험을 갖는 것으로 선별되거나 식별된 대상체에 세포의 투여를 포함한다. 비호지킨 림프종(NHL)은 가변적인 질병일 수 있다. NHL을 가진 일부 대상체는 다른 대상체라면 즉각적인 개입이 필요할 수 있는 반면, 치료하지 않고 생존할 수도 있다. 일부 경우에, NHL을 가진 대상체는 질병 예후 및/또는 권장되는 치료 전략을 알려줄 수 있는 그룹으로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 상기 그룹은 “저위험(low risk)”, “중간 위험(intermediate risk)”, “고위험(high risk)” 및/또는 “매우 고위험(very high risk)”일 수 있고, 환자는 유전적 이상 및/또는 형태학적 또는 물리적 특성을 포함하되 이에 국한되지 않는 여러 요인에 따라 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법 및/또는 제조품 또는 조성물에 따라 치료된 대상체는 NHL의 위험에 기초하여 분류 또는 식별된다. 일부 구현예에서, 대상체는 고위험 NHL을 가진 대상체이다.

일부 구현예에서, 치료될 대상체는 공격성 NHL, 특히 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 달리 명시되지 않은(NOS; 드 노보(de novo) 및 무통성으로부터 형질 전환), T 세포/조직구-농축 거대 B 세포 림프종, 원발성 종격동 (흉선) 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), 여포성 림프종 3B 등급(FL3B), EBV 양성 DLBCL, EBV 양성 NOS, 또는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고도 B 세포 림프종 ("이중-히트" 또는 "삼중-히트" 림프종)을 갖는 대상체 그룹을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병은 2개 이상의 선행 요법 방식에 대해 불응성이거나 재발하였다. 일부 구현예에서, 선행 요법은 CD20 표적 제제 및/또는 안트라사이클린을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 스크리닝 시 0-1의 ECOG 점수를 가진다. 일부 구현예에서, 대상체는 루가노 분류(Lugano Classification)에 따라 양전자 방출 단층 촬영(PET)-양성 질병을 가진다(Cheson, 2014). 일부 구현예에서, 대상체는 선택적으로 동종 줄기 세포 이식(stem cell transplantation, SCT)으로 앞서 치료되었을 수 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 성인이다. 일부 구현예에서, 대상체는 남성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 여성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법을 투여받을 때(예를 들어, 세포 요법을 투여받을 때) 적어도 40세이다. 일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법을 투여받을 때(예를 들어, 세포 요법을 투여받을 때) 40세 미만이다. 일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법을 투여받을 때(예를 들어, 세포 요법을 투여받을 때) 약 40-65세이다. 일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법을 투여받을 때(예를 들어, 세포 요법을 투여받을 때) 적어도 65세이다.

A. 세포 요법의 투여

입양 세포 요법을 위해 세포의 투여 방법이 공지되어 있으며 제공된 방법, 조성물 및 제조품 및 키트와 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은, 예를 들어, 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기술되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol . 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.

일부 구현예에서, 제공된 방법과 관련하여 사용 또는 투여되는 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 조작된 항원 수용체 또는 T 세포 수용체(TCR)를 함유하거나 함유하도록 조작된다. 조성물 중에는 예컨대 입양 세포 요법을 위한 투여용 약학 조성물 및 제형이 있다. 제공된 방법, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물에 부합되게, 대상체, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 또한 제공된다.

세포는 일반적으로 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR), 및 형질전환 T 세포 수용체(TCR)와 같은 다른 항원 결합 수용체를 포함하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 또한 수용체 중에는 다른 키메라 수용체가 있다. 제공된 방법에서 세포 요법으로서 투여하기 위한 예시적인 조작된 세포는 섹션 II에 기재된다.

일부 구현예에서, 세포 요법(예를 들어, 입양 T 세포 요법)은 자가 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 예정인 대상체로부터 또는 상기 대상체로부터 유래된 샘플로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료가 필요한 대상체, 예를 들어, 환자로부터 유래되고, 세포는 단리 및 가공 후에 동일한 대상체에 투여된다.

일부 구현예에서, 세포 요법(예를 들어, 입양 T 세포 요법)은 동종이계 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 예정이거나 최종적으로 받은 대상체, 예를 들어 제1 대상체 외의 대상체로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 상기 구현예에서, 세포는 이어서 같은 종의 상이한 대상체, 예를 들어, 제2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스(HLA class) 또는 수퍼타입(supertype)을 발현한다.

T 세포 요법의 세포는 투여를 위해 제형화된 조성물 또는 대안적으로 별도의 투여를 위해 제형화된 하나 이상의 조성물(예를 들어, 2개의 조성물)로 투여될 수 있다. 단위 용량(들)의 세포는 특정 수 또는 상대적인 수의 세포 또는 조작된 세포의 특정 수 또는 상대적인 수 및/또는 CD4 대 CD8 T 세포와 같은 조성물 내에 2개 이상의 하위 유형의 정의된 비율 또는 조성물을 포함할 수 있다.

세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 단위 용량이 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 예를 들어, 3일 이내의 기간에 걸쳐 세포의 다중 볼루스 투여에 의해, 또는 세포의 지속적인 주입 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 단위 용량 또는 임의의 추가 요법, 예를 들어 림프구 고갈 요법, 개입 요법 및/또는 병용 요법의 투여는 통원 전달을 통해 수행된다.

질병의 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 선행 요법, 대상체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응 및 주치의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서 조성물 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다.

일부 측면에서 면역 고갈(예를 들어, 림프구 고갈) 요법으로 대상체를 사전 조절하면 입양 세포 요법(ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다.

따라서, 일부 구현예에서, 본 방법은 세포 요법의 개시 전에 대상체에 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 이의 조합물과 같은 림프구 고갈제 또는 화학 요법제와 같은 사전 조절제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상체는 세포 요법을 개시하기 적어도 2일 전, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일 전에 사전 조절제를 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법의 개시 7일 이내 전, 예컨대 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내 전에 사전 조절제를 투여받는다.

일부 구현예에서, 대상체는 (약) 20mg/kg 내지 100mg/kg, 예컨대 (약) 40mg/kg 내지 80mg/kg의 단위 용량의 사이클로포스파미드로 사전 조절된다. 일부 측면에서, 대상체는 (약) 60mg/kg의 사이클로포스파미드로 사전 조절된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 매일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 사이클로포스파미드를 포함하는 경우, 대상체에 (약) 100mg/m² 내지 500mg/m², 예컨대 (약) 200 mg/m² 내지 400mg/m² 또는 250mg/m² 내지 350mg/m²(수치 포함)의 단위 용량으로 사이클로포스파미드가 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 약 300mg/m²의 사이클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 500mg/m²의 사이클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 3 내지 5일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 300mg/m²의 사이클로포스파미드가 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 500mg/m²의 사이클로포스파미드가 투여된다.

일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체에 (약) 1mg/m² 내지 100mg/m², 예컨대 (약) 10mg/m² 내지 75mg/m², 15mg/m² 내지 50mg/m², 20 mg/m² 내지 40 mg/m² 또는 24mg/m² 내지 35mg/m²(수치 포함)의 단위 용량으로 플루다라빈이 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 약 30mg/m²의 플루다라빈이 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 3 내지 5일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 30mg/m²의 플루다라빈이 투여된다.

일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합물과 같은 제제의 조합물을 포함한다. 따라서, 제제의 조합물은 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 사이클로포스파미드 및 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 플루다라빈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체에 제1 또는 후속 단위 용량 전에 60mg/kg(~2g/m²)의 시클로포스파미드 및 25mg/m² 플루다라빈의 3 내지 5 단위 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 300mg/m²의 사이클로포스파미드 및 30 mg/m²의 플루다라빈 둘 다 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 500mg/m²의 사이클로포스파미드 및 30 mg/m²의 플루다라빈 둘 다 투여된다.

일부 구현예에서 세포의 투여 후에, 조작된 세포의 집단의 생물학적 활성이 예를 들어, 공지된 다수의 방법 중 하나에 의해 측정된다. 평가 매개변수는 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포를 특이적으로 결합하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기술된 세포 독성 분석과 같은 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 하나 이상의 사이토카인, 예컨대 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF의 발현 및/또는 분비를 분석하여 측정된다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가하여 측정된다.

1. 조성물 및 제형

일부 구현예에서, 재조합 항원 수용체, 예를 들어, CAR 또는 TCR로 조작된 세포를 포함하는 T 세포 요법과 같은 세포 요법의 단위 용량의 세포는 약학 조성물 또는 제형과 같은 조성물 또는 제형으로 제공된다. 상기 조성물은 예컨대 B 세포 악성 종양의 치료에서 제공된 방법 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물과 부합되게 사용될 수 있다.

용어 “약학적 제형(pharmaceutical formulation)”은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태이고, 상기 제형이 투여되는 대상체에 허용 가능하지 않을 정도로 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 조제품(preparation)을 지칭한다.

“약학적으로 허용 가능한 운반체(pharmaceutically acceptable carrier)”는 활성 성분 외의 약학적 제형 안에 있는 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용 가능한 운반체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

일부 구현예에서, 조작된 T 세포(예를 들어 CAR T 세포)와 같은 세포 요법은 약학적으로 허용 가능한 운반체와 함께 제형화된다. 일부 측면에서, 운반체의 선택은 특정 세포 또는 제제 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 적합한 제형이 다양하게 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화 벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.0001% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 운반체는 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 운반체는 사용된 용량 및 농도에서 일반적으로 수용체(recipient)에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로 헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 마노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 설탕; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제가 포함되나 이에 한정되지 않는다.

일부 측면에서 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제에는 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염이 포함된다. 일부 측면에서, 2개 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.001중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 보다 상세하게 기술되어 있다.

제형에는 수용액이 포함될 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한 세포 또는 제제로 치료될 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 상기 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적합하게 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학요법제, 예를 들어 아스파라기나아제, 부설판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성제 또는 의약물을 더 포함한다.

일부 구현예에서, 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 질병 또는 병태를 치료하기에 효과적인 양으로 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료 효능은 치료된 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 병태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 질병 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 원하는 투여량이 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.

세포는 표준 투여 기술, 제형 및/또는 디바이스를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를 위해 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 디바이스가 제공된다. 세포에 관하여, 투여는 자가 조직 또는 이종 기원일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체(progenitor)는 하나의 대상체로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이하고, 양립 가능한 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내, 생체 외 시험 또는 시험관 내 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥내 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 이는 주사 가능한 단위 투여량 형태(용액, 현탁액, 에멀션)로 제형화될 것이다.

제형에는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 볼, 설하 또는 좌약 투여를 위한 것이 포함된다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 “비경구(parenteral)”는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에 투여된다.

일부 구현예에서 조성물은 멸균 액체 제제로서, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀션, 분산액 또는 점성 조성물로 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 보다 용이하다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 반면에, 점성 조성물은 적절한 점도 범위 내에서 제형화되어 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공할 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있는 운반체를 포함할 수 있다.

멸균 주사용 용액은 적합한 운반체, 희석제 또는 멸균수, 생리 식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 부형제와의 혼화물과 같은 용매에 세포를 통합함으로써 제조될 수 있다.

생체 내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은, 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.

2. 투여(dosing)

일부 구현예에서, 세포의 단위 용량이 제공된 방법, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물에 부합되게 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 크기 또는 투여 시기는 대상체에서 특정 질병 또는 병태(예: 암, B 세포 악성 종양)에 대한 작용으로서 결정된다. 일부 경우에, 제공된 기재의 관점에서 특정 질병에 대한 단위 용량의 크기 또는 투약 시기는 경험적으로 결정될 수 있다.

일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2 x 10⁵개 세포/kg 내지 (약) 2 x 10⁶개 세포/kg, 예컨대 (약) 4 x 10⁵개 세포/kg 내지 (약) 1 x 10⁶개 세포/kg 또는 (약) 6 x 10⁵개 세포/kg 내지 (약) 8 x 10⁵개 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 대상체 체중 1 킬로그램 당 2 x 10⁵ 이내의 세포(예를 들어, 항원 발현, 예컨대 CAR 발현 세포)(세포/kg), 예컨대 (약) 3 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 4 x 10 ⁵ 이내의 세포/kg, (약) 5 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 6 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 7 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 8 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 9 x 10⁵ 이내의 세포/kg, (약) 1 x 10⁶ 이내의 세포/kg 또는 (약) 2 x 10⁶ 이내의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 대상체의 체중 1 킬로그램 당 적어도 (약) 또는 (약) 2 x 10⁵의 세포(예를 들어 항원 발현, 예컨대 CAR 발현 세포)(세포/kg), 예컨대 적어도 (약) 또는 (약) 3 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 4 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 5 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 6 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 7 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 8 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 9 x 10⁵ 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 1 x 10⁶ 세포/kg, 또는 적어도 (약) 또는 (약) 2 x 10⁶의 세포/kg를 포함한다.

특정 구현예에서, 세포 또는 아형의 세포의 개별 집단은, 약 1백만 내지 약 1000억 세포의 범위로 및/또는 체중 1kg당 세포의 해당 양으로, 예컨대, 예를 들어, 1백만 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 5백만 세포, 약 2천 5백만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 1천만 내지 약 1000억 세포(예를 들어, 약 2천만 세포, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 및 일부 경우에 약 1억 세포 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 1억 2천만 세포, 약 2억 5천만 세포, 약 3억 5천만 세포, 약 4억 5천만 세포, 약 6억 5천만 세포, 약 8억 세포, 약 9억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포) 또는 상기 범위 사이의 임의의 수치 및/또는 체중 1kg당 세포의 양으로 대상체에 투여된다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료의 구체적인 속성에 따라 달라질 수 있다.

일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 세포의 단위 용량이 대상체의 체표면적 또는 체중에 결부되거나 그에 기초하지 않는 균일한 세포 단위 용량 또는 고정된 세포 단위 용량이다.

일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우에, 단위 용량은 약 5 x 10⁸개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를, 예를 들어, 약 1 x 10⁶ 내지 5 x 10⁸개의 상기 세포 수 범위내에서, 예컨대, 2 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸ 2 x 10⁸, 3 x 10⁸, 또는 4 x 10⁸개의 총 상기 세포 수의 범위내에서, 또는 전술한 수치 중 임의의 두 개 수치 사이의 범위 내에서 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체가 인간인 경우에, 단위 용량은 약 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁸개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, 예를 들어 약 1 x 10⁷ 내지 2 x 10⁸의 범위, 예컨대 1 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸ 또는 1.5 x 10⁸개의 총 그러한 세포, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 단위 용량으로 투여받고, 각각의 단위 용량 또는 총 용량은 전술한 수치 중 어느 하나 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 또는 (약) 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 (각 수치 포함)의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 단위 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.

일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량에 포함된 단위 용량의 CD8+ T 세포는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포, 예를 들어, 약 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 상기 세포의 범위내, 예컨대 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷, 7.5 x 10⁷ 또는 1 x 10⁸개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 단위 용량으로 투여받고, 각각의 단위 용량 또는 총 용량은 전술한 수치 중 어느 하나 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(각 수치 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 7.5 x 10⁷ 또는 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량에 포함된 단위 용량의 CD4+ T 세포는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD4+ 세포, 예를 들어, 약 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 상기 세포의 범위내, 예컨대 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷, 7.5 x 10⁷ 또는 1 x 10⁸개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 단위 용량으로 투여받고, 각각의 단위 용량 또는 총 용량은 전술한 수치 중 어느 하나 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포, (약) 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포, (약) 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포(각 수치 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 7.5 x 10⁷ 또는 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포의 단위 용량이 단일 단위 용량으로 대상체에 투여되거나 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 이상의 기간 내에 1회만 투여된다.

입양 세포 요법의 맥락에서, 주어진 “단위 용량(dose)”의 투여는 단일 조성물 및/또는 단일 비중단 투여, 예를 들어 단일 주사 또는 연속 주입으로서 주어진 세포의 양 또는 수의 투여를 포괄하며, 또한 다중 개별 조성물 또는 주입제로 제공된 경우 명시된 기간에 걸쳐, 예컨대 3일 이내에 걸쳐 분할된 단위 용량 또는 복수의 조성물로서 주어진 세포의 양 또는 수의 투여를 포괄한다. 따라서, 일부 맥락에서, 단위 용량은 단일 시점에서 주어진 또는 개시된, 명시된 세포 수의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나, 일부 맥락에서, 단위 용량은 3일 동안 또는 2일 동안 하루에 한 번 또는 하루의 기간에 걸쳐 다중 주입에 의한 것과 같이 3일 이내의 기간에 걸쳐 다중 주사 또는 주입으로 투여된다.

따라서, 일부 측면에서, 단위 용량의 세포는 단일 약학 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 세포는 총체적으로 단위 용량의 세포를 함유하는 복수의 조성물로 투여된다.

일부 구현예에서, 용어 “분할 단위 용량(split dose)”은 1일 이상에 걸쳐 투여되도록 분할된 단위 용량을 지칭한다. 상기 유형의 투약은 본 방법에 포괄되고 단일 단위 용량으로 간주된다.

따라서, 단위 용량의 세포는 분할 단위 용량, 예를 들어, 시간에 걸쳐 투여되는 분할 단위 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 단위 용량은 2일 또는 3일에 걸쳐 대상체에 투여될 수 있다. 분할 투약에 대한 예시적인 방법은 첫 날에 단위 용량의 25%를 투여하고 두 번째 날에 단위 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 단위 용량의 33%가 첫 날에 투여되고 두 번째 날에 나머지 67%가 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 단위 용량의 10%가 첫 날에 투여되고, 단위 용량의 30%가 두 번째 날에 투여되며, 단위 용량의 60%가 셋째 날에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 단위 용량은 3일을 초과하는 기간에 걸쳐 나뉘지는 않는다.

일부 구현예에서, 단위 용량의 세포는 복수의 조성물 또는 용액, 예컨대 제1 및 제2, 선택적으로 그 이상의 투여로 투여될 수 있고, 각각은 단위 용량의 세포를 일부 함유한다. 일부 측면에서, 각각이 상이한 세포의 집단 및/또는 아형을 함유하는 복수의 조성물이 별도로 또는 독립적으로 선택적으로 특정 기간 내에 투여된다. 예를 들어, 세포의 집단 및/또는 아형은 각각 CD8⁺ 및 CD4⁺ T 세포, 및/또는 각각 CD8+ 및 CD4+ 농축된 집단, 예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있고 각각은 개별적으로 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 투여는 CD8+ T 세포의 단위 용량 또는 CD4+ T 세포의 단위 용량을 포함하는 제1 조성물의 투여 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 다른 단위 용량을 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 조성물 또는 단위 용량의 투여, 예를 들어, 복수의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물의 별도 투여를 수반한다. 일부 측면에서, 별도 투여는 동시에, 또는 임의의 순서로 순차적으로 수행된다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격으로, 0 내지 6시간 간격또는 0 내지 2시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 2시간 이내, 1시간 이내 또는 30분 이내의 간격, 15분 이내, 10분 이내 또는 5분 이내의 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여 개시 및/또는 완료는 2시간 이내, 1시간 이내 또는 30분 이내의 간격, 15분 이내, 10분 이내 또는 5분 이내의 간격으로 수행된다.

일부 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 대상체에 투여되기 전에 혼합된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 투여 전 짧은 시간(예를 들어, 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 2시간, 1.5시간, 1시간, 또는 0.5시간 이내)에 혼합된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 투여 직전에 혼합된다.

일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 단위 용량의 제1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 단위 용량의 제1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 제2 조성물 전에 투여된다.

일부 구현예에서, 단위 용량의 세포 또는 세포 조성물은 CD4+ 세포 발현 재조합 수용체 대 CD8+ 세포 발현 재조합 수용체 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 정의된 비율 또는 표적 비율을 포함하고, 상기 비율은 선택적으로 대략 1:1이거나 대략 1:3 내지 대략 3:1, 예컨대 대략 1:1이다. 일부 측면에서, 표적 또는 원하는 비율의 상이한 세포 집단(예컨대 CD4+:CD8+ 비율 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비율, 예를 들어, 1:1)을 갖는 조성물 또는 단위 용량의 투여는 집단들 중 하나를 함유하는 세포 조성물의 투여 후 집단들 중 다른 하나를 포함하는 별도의 세포 조성물의 투여를 수반하고, 상기 투여는 표적 또는 원하는 비율이거나 대략적인 표적 또는 원하는 비율로 수행된다. 일부 측면에서, 정의된 비율로 단위 용량의 세포 또는 세포 조성물의 투여는 T 세포 요법의 증폭, 지속성 및/또는 항종양 활성의 향상으로 이어진다.

일부 구현예에서, 대상체는 세포의 다중 단위 용량, 예를 들어 둘 이상의 단위 용량 또는 다중 연속 단위 용량을 받는다. 일부 구현예에서, 두 단위 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연속적인 단위 용량, 예를 들어 제2 단위 용량을 첫 번째 단위 용량 후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 받는다. 일부 구현예에서, 다중 연속 단위 용량은 제1 단위 용량 후에 투여되어, 추가적인 단위 용량 또는 단위 용량들이 연속 단위 용량의 투여 후에 투여되도록 한다. 일부 측면에서, 추가 단위 용량으로 대상체에 투여되는 세포의 수는 제1 단위 용량 및/또는 연속 단위 용량과 동일하거나 이와 유사하다. 일부 구현예에서, 추가 단위 용량 또는 단위 용량들은 선행 단위 용량들보다 더 크다.

일부 측면에서, 제1 및/또는 연속 단위 용량의 크기는 하나 이상의 기준 예컨대 선행 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 부피, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.

일부 측면에서, 제1 단위 용량의 투여와 연속 단위 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35일, 약 14일 내지 약 28일 또는 15일 내지 27일이다. 일부 구현예에서, 연속 단위 용량의 투여는 제1 단위 용량의 투여 후 약 14일 초과 및 약 28일 미만의 시점에 수행한다. 일부 측면에서, 제1 단위 용량 및 연속 단위 용량 사이 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가 단위 용량 또는 단위 용량들, 예를 들어, 연속 단위 용량들은 연속 단위 용량 투여 후 투여된다. 일부 측면에서, 추가 연속 단위 용량 또는 단위 용량들은 선행 단위 용량 투여 후 약 14일 이상 및 약 28일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 단위 용량은 선행 단위 용량 후 약 14일 미만에, 예를 들어, 선행 단위 용량 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13일에 투여된다. 일부 구현예에서, 선행 단위 용량 후 약 14일 미만 및/또는 선행 단위 용량 후 약 28일 이상에는 어떤 단위 용량도 투여되지 않는다.

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체 발현 세포의 단위 용량은 제1 단위 용량의 T 세포 및 연속 단위 용량의 T 세포를 포함한 2 단위 용량(예를 들어, 2배 단위 용량)을 포함하며, 여기서 제1 단위 용량 및 제2 단위 용량 중 하나 또는 둘 모두는 T 세포의 분할 단위 용량 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 일반적으로 질병 부담을 감소시키는 데 효과적일 만큼 충분히 크다.

일부 구현예에서, 세포는 원하는 투여량으로 투여되며, 이는 일부 측면에서 원하는 단위 용량 또는 세포 수 또는 세포 유형(들) 및/또는 세포 유형의 원하는 비율을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서 세포의 투여량은 세포의 총 수(또는 체중 1kg당 수) 및 개별 집단 또는 아형의 원하는 비율, 예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율에 기초한다. 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 개별 집단 내 세포 또는 개별 세포 유형의 원하는 총 수(또는 체중 1kg당 수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 투여량은 개별 집단에서 원하는 총 세포의 수, 원하는 비율 및 원하는 세포의 총 수와 같은 상기 특성의 조합에 기초한다.

일부 구현예에서, CD8⁺ 및 CD4⁺ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 아형의 세포는 원하는 T 세포의 단위 용량과 같이 원하는 총 세포의 단위 용량의 허용된 차이로 또는 허용된 차이 내로 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 단위 용량은 원하는 세포 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위 당 원하는 세포 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 단위 용량은 최소 세포 수 또는 체중 단위당 최소 세포 수 이상이다. 일부 측면에서, 원하는 단위 용량으로 투여되는 총 세포 중, 개별 집단 또는 하위 유형은 원하는 산출 비율(예컨대 CD4⁺ 대 CD8⁺ 비율)로 또는 부근의 비율로, 예를 들어 상기 비율의 특정 허용된 차이 또는 오차 내로 존재한다.

일부 구현예에서, 세포는 CD4+ 세포의 원하는 단위 용량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 단위 용량과 같은 하나 이상의 개별 세포 집단 또는 아형의 세포의 원하는 단위 용량의 허용된 차이 또는 차이 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 단위 용량은 원하는 하위 유형 또는 집단의 세포 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 상기 세포 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 단위 용량은 집단 또는 아형의 최소 세포 수 또는 체중 단위당 집단 또는 아형의 최소 세포 수 이상이다.

따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 총 세포의 원하는 고정 단위 용량 및 원하는 비율에 기초하고/거나 하나 이상, 예를 들어 각각의 개별 하위 유형 또는 하위 집단의 원하는 고정 단위 용량에 기초한다. 따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 단위 용량 및 CD4⁺ 대 CD8⁺ 세포의 원하는 비율에 기초하고/거나 CD4⁺ 및/또는 CD8⁺ 세포의 원하는 고정 또는 최소 단위 용량에 기초한다.

일부 구현예에서, 세포는 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 아형과 같은 다중 세포 집단 또는 아형의 원하는 산출 비율의 허용된 범위에서 또는 범위 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비율은 특정 비율일 수 있거나 비율의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 원하는 비율(예를 들어, CD4⁺대 CD8⁺ 세포의 비율)은 (약) 5:1 내지 (약) 5:1(또는 약 1:5 초과 내지 약 5:1 미만), 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1(또는 약 1:3 초과 내지 약 3:1 미만), 예컨대 (약) 2:1 내지 (약) 1:5(또는 약 1:5 초과 내지 약 2:1 미만), 예컨대 (약) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 허용된 차이는 원하는 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% (상기 범위 사이의 임의의 수치 포함) 이내이다.

특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 수 또는 농도를 지칭한다.

일부 측면에서, 단위 용량의 크기는 하나 이상의 기준 예컨대 선행 치료, 예를 들어 화학 요법에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 규모, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계(stage) 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식 세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.

일부 구현예에서, 본 방법은 또한 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포 및/또는 림프구 고갈 요법의 하나 이상의 추가 단위 용량의 투여를 포함하고/거나 본 방법 중 하나 이상의 단계가 반복된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 단위 용량은 초기 단위 용량과 동일하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 단위 용량은 초기 단위 용량과 상이하며, 예를 들어, 초기 단위 용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상만큼 더 높거나, 초기 단위 용량보다 예를 들어 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상만큼 더 낮다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 단위 용량의 투여는 초기 치료 또는 임의의 선행 치료에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 부피, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.

B. 화합물 A의 투여

본원에 제공된 방법, 조성물, 조합, 키트 또는 제조품의 일부 구현예에서, 병용 요법은 화학명 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온을 갖고 및/또는 화학식 I:

(화학식 I)

의 구조를 갖는 화합물 A 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접체(clathrate), 또는 다형체를 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물, 또는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접체, 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 용매화물이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 수화물이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 화학식 I의 구조를 가지고 있다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 미국 특허 번호 9,221,788 및 WO2011/100380에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 화합물 A는 또한 본원의 교시에 기초하여 다른 이용가능한 방법에 따라 합성될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 약학 조성물 및 단위 투여 형태는 미국 특허 번호 10,080,801에 기재된 것에 따라 사용된다. 다른 구현예에서, 화합물 A는 미국 특허 공개 번호 2014/0045843에 따라 제조 또는 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 화합물 A는 고체이다. 특정 구현예에서, 화합물 A는 수화된다. 특정 구현예에서, 화합물 A는 용매화된다. 특정 구현예에서, 화합물 A는 무수이다. 특정 구현예에서, 화합물 A는 비흡습성이다.

특정 구현예에서, 화합물 A는 무정형이다. 특정 구현예에서, 화합물 A는 결정질이다. 특정 구현예에서, 고체 화합물 A는 미국 특허 번호 9,221,788에 기재된 결정질 형태이며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

화합물 A의 고체 형태는 미국 특허 번호 9,221,788의 개시내용에 기재된 방법 또는 임의의 하나 또는 조합된 이용가능한 방법(들)에 따라 제조될 수 있다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 염산염, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 용매화물, 수화물, 공결정, 포접체, 또는 다형체이다. 특정 구현예에서, 염산염은 고체이다. 특정 구현예에서, 염산염은 무수이다. 특정 구현예에서, 염산염은 비흡습성이다. 특정 구현예에서, 염산염은 무정형이다. 특정 구현예에서, 염산염은 결정질이다.

화합물 A의 염산염 및 이의 고체 형태는 미국 특허 번호 9,221,788의 개시내용에 기재된 방법 또는 임의의 하나 또는 조합된 이용가능한 방법(들)에 따라 제조될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 A는 하나의 키랄 중심을 함유하고, 거울상이성질체의 혼합물, 예를 들어 라세미 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 개시내용은 이러한 화합물의 입체이성질체적으로 순수한 형태의 사용, 뿐만 아니라 이들 형태의 혼합물의 사용을 포괄한다. 예를 들어, 본원에 제공된 화합물 A의 거울상이성질체의 동일하거나 또는 불균등한 양을 포함하는 혼합물은 본원에 개시된 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 이들 이성질체는 표준 기술, 예컨대 키랄 컬럼 또는 키랄 분해제를 사용하여 비대칭적으로 합성 또는 분해될 수 있다. 예를 들어, Jacques, J., et al, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al, Tetrahedron 33 :2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); 및 Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972)를 참조한다.

도시된 구조와 그 구조에 주어진 명칭 사이에 불일치가 있는 경우, 도시된 구조는 더 많은 중량을 부여받아야 한다는 점에 유의해야 한다. 또한, 구조 또는 구조의 일부의 입체화학이, 예를 들어, 굵은선 또는 점선으로 표시되지 않는 경우, 구조 또는 구조의 일부는 구조의 모든 입체이성질체를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.

1. 조성물 및 제형

본원에 제공된 병용 요법 방법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 병용 요법은 하나 이상의 조성물, 예를 들어, 화합물 A를 함유하는 약학 조성물로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 조성물, 예를 들어 화합물 A를 함유하는 약학 조성물은 화합물 A 및/또는 세포와 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 비히클과 같은 담체를 포함할 수 있다. 적합한 약학적 운반체의 예가 문헌[“Remington’s Pharmaceutical Sciences” by E. W. Martin]에 기재되어 있다. 상기 조성물은 환자에게 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 운반체와 함께 일반적으로 정제된 형태로, 치료적 유효량의 화합물 A를 함유할 것이다. 상기 약학적 운반체는 땅콩유, 대두유, 광유 및 참기름과 같은 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것을 포함한 오일 및 물과 같은 멸균 액체일 수 있다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로오스 및 글리세롤 용액이 또한 액체 운반체로, 특히 주사용 용액으로 이용될 수 있다. 약학 조성물은 희석제(들), 보조제(들), 항점착제(들), 결합제(들), 코팅제(들), 충진제(들), 풍미제(들), 착색제(들), 윤활제(들), 활공제(들), 보존제(들), 세정제(들), 흡착제(들), 유화제(들), 약학적 부형제(들), pH 완충제(들) 또는 감미료(들) 및 이의 조합물 중 어느 하나 이상을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 액체, 고체, 냉동건조된 분말, 겔 형태 및/또는 이의 조합일 수 있다. 일부 측면에서, 운반체의 선택은 특정 억제제 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다.

약학적으로 허용 가능한 운반체는 사용된 용량 및 농도에서 일반적으로 수용체(recipient)에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로 헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 마노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 설탕; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 안정화제 및/또는 보존제와 같은 비이온 계면활성제를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 화합물 A를 함유하는 조성물은 또한 동결건조될 수 있다.

일부 구현예에서, 약학 조성물은 근육내, 정맥내, 피하내, 병변내, 복강내 주사, 피하, 종양내, 경막외, 비강, 구강, 질, 직장, 국소, 국부, 귀, 흡입, 볼(예: 설하) 및 경피 투여 또는 임의의 경로를 포함하여 당업자에게 공지된 임의의 경로에 의한 투여를 위해 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 다른 투여 방식이 또한 고려된다. 일부 구현예에서, 투여는 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의한다. 일부 구현예에서, 투여는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의한다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 단위 용량은 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 예를 들어, 3일 이내의 기간에 걸쳐 다중 볼루스 투여에 의해 또는 지속적인 주입 투여에 의해 투여된다.

일부 구현예에서, 투여는 치료 위치에 따라 국부, 국소 또는 전신일 수 있다. 일부 구현예에서 치료가 필요한 부위에 대한 국부 투여는 예를 들어, 주사, 카테터, 좌약 또는 이식에 의해 수술 후 상처 드레싱과 함께 국소 도포, 수술 중 국부 주입에 의해 달성될 수 있으며, 이 수단에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 조성물은 또한 다른 생물학적 활성제와 함께 순차적으로, 간헐적으로 또는 동일한 조성물로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 또한 펌프에 의한 것과 같은 제어 방출 제형 및 디바이스 제어 방출을 포함한 제어 방출 시스템을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 경구이다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 전형적으로 단위 투여량 형태 또는 다중 투여량 형태로 제형화되고 투여된다. 각 단위 용량 단위는 필요한 약학적 운반체, 매개물 또는 희석제와 함께 원하는 치료 효과를 생성하기에 충분한 미리 결정된 양의 치료적 활성 화합물 A를 함유한다. 일부 구현예에서, 단위 투여량 형태는 정제, 캡슐, 환약, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액 및 경구 용액 또는 현탁액 및 적합한 양의 화합물 A를 함유하는 오일 물 에멀션을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 단위 용량 단위 형태는 앰플 및 주사기 또는 개별 포장된 정제 또는 캡슐에 함유될 수 있다. 단위 용량 단위 형태는 분획 또는 이의 다수로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 다중 단위 용량 형태는 분리된 단위 용량 단위 형태로 투여되도록 단일 용기에 포장된 다수의 동일한 단위 투여량 형태이다. 다중 단위 용량 형태의 예에는 바이알, 정제 또는 캡슐 병 또는 파인트 또는 갤런 병이 포함된다.

2. 투여(dosing)

일부 구현예에서, 제공된 병용 요법 방법은 T 세포 요법(예를 들어, CAR 발현 T 세포) 요법과 같은 세포 요법의 개시 전에, 후에, 중에, 수행 과정 중에, 동시에, 거의 동시에, 순차적으로, 함께(concurrently) 및/또는 간헐적으로 화합물 A의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 병용 요법 방법에서 화합물 A의 투여의 개시는 T 세포 요법의 투여 개시 후에 또는 후속하여 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 세포 요법, 예컨대 T 세포 요법(예를 들어, CAR-발현 T 세포)의 개시 후에(그에 후속하여) 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체의 혈액에서 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수준이 검출 가능할 때 또는 그 전에 개시된다.

일부 경우에, 화합물 A의 투여 개시는: (i) T 세포 요법의 피크 또는 최대 수준의 세포가 대상체의 혈액에서 검출 가능한 시점; (ii) 혈액에서 검출 가능해진 뒤, 혈액에서 검출 가능한 T 세포 요법의 세포 수가 검출 가능하지 않거나 감소되거나, 선택적으로 T 세포 요법 투여 후 선행 시점에 비해 감소되고/거나; (iii) 혈액에서 검출 가능한 T 세포 요법의 세포 수가 T 세포 요법의 투여 개시 후 대상체의 혈액에서 검출 가능한 T 세포 요법의 피크 또는 최대 세포 수의 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 10배 또는 그 이상 감소되고/거나; (iv) T 세포 요법의 피크 또는 최대 수준의 세포가 대상체의 혈액에서 검출 가능한 이후 시기에, 대상체로부터의 혈액에서 검출 가능한 세포 또는 이로부터 유래된 세포의 수가 대상체의 혈액 중 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만의 전체 말초 혈액 단핵세포(PBMC)이고/거나; (v) 대상체가 T 세포 요법으로 치료 후 관해된 이후 질병 진행을 나타내고/거나 재발하였고/거나; (iv) 대상체가 세포의 투여 이전 또는 이후 시점 및 화합물 1의 투여 개시 전 시점에서의 종양 부담에 비해 종양 부담 증가를 나타낸; 전 일주일에 또는 일주일 이내에, 예컨대 1, 2 또는 3일 이내에 수행된다. 특정 측면에서, 제공된 방법은 대상체에서 T 세포 요법에 대한 반응을 개선시키기 위해, 예를 들어 T 세포의 존재 및/또는 종양 부담의 감소를 증진시키기 위해 수행된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 세포 요법, 예컨대 T 세포 요법(예를 들어, CAR-발현 T 세포)의 개시 후에(그에 후속하여) 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 개시 후에 (그에 후속하여) 및 T 세포 요법의 개시와 동일한 날에 조기에(즉, T 세포 요법의 개시 후에 0 일에 조기에) 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 0일 내지 (약) 21일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 7일 내지 약 14일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 0일 내지 (약) 14일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 0일에 개시된다(즉, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 개시와 동일한 날에 개시된다).

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 1일 내지 약 21일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 1일 내지 약 15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 8일 내지 약 15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A 의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 1일, (약) 2일, (약) 3일, (약) 4일, (약) 5일, (약) 6일, (약) 7일, (약) 8일, (약) 9일, (약) 10일, (약) 11일, (약) 12일, (약) 13일, (약) 14일, (약) 15일, (약) 16일, (약) 17일, (약) 18일, (약) 19일, 또는 (약) 20일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 14일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 8일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 7일에 개시된다. 다른 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 1일에 개시된다.

따라서, T 세포 요법이 병용 요법의 제1일에 투여되는 병용 요법과 관련하여, 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제2일 내지 (약) 제22일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제2일 내지 (약) 제16일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제9일 내지 (약) 제16일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제8일 내지 (약) 제15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제2일, (약) 제3일, (약) 제4일, (약) 제5일, (약) 제6일, (약) 제7일, (약) 제8일, (약) 제9일, (약) 제10일, (약) 제11일, (약) 제12일, (약) 제13일, (약) 제14일, (약) 제15일, (약) 제16일, (약) 제17일, (약) 제18일, (약) 제19일, (약) 20일, 또는 (약) 21일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제16일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제15일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제9일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제8일에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제2일에 개시된다.

다른 구현예에서, 화합물 A의 투여는 병용 요법의 (약) 제1일에 개시된다.

일부 구현예에서, 대상체에 화합물 A가 처음으로 투여된 시점에 및/또는 투여 개시 후 임의의 후속 시점에, 상기 대상체는 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 독성과 같은 중증 독성의 징후나 증상을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체가 중증 CRS의 징후나 증상을 나타내지 않고/거나 지연성 3급 CRS 또는 4급 또는 5급 CRS와 같이 3급 이상의 CRS를 나타내지 않는 시점에 이루어진다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 대상체가 중증 신경 독성의 징후나 증상을 나타내지 않고/거나 지연성 3급 신경 독성 또는 4급 또는 5급 신경 독성과 같이 3급 이상의 신경 독성을 나타내지 않는 시점에 이루어진다. 일부 측면에서, T 세포 요법의 투여 개시의 시점과 화합물 A의 투여의 시점 사이에, 대상체는 중증 CRS를 나타낸 적이 없고/거나 지연성 3급 CRS 또는 4급 또는 5급 CRS와 같이 3급 이상의 CRS를 나타낸 적이 없다. 일부 경우에, T 세포 요법의 투여 개시의 시점과 화합물 A의 투여의 시점 사이에, 대상체는 중증 신경 독성을 나타낸 적이 없고/거나 지연성 3급 신경 독성 또는 4급 또는 5급 신경 독성과 같이 3급 이상의 신경 독성을 나타내지 않는다.

일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 (약) 0.1 mg 내지 1.0 mg의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.2 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.3 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.4 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.5 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.6 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.7 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.8 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.9 mg 내지 약 1.0 mg, 약 0.1 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.2 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.3 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.4 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.5 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.6 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.7 mg 내지 약 0.80 mg, 약 0.1 mg 내지 약 0.60 mg, 약 0.2 mg 내지 약 0.60 mg, 약 0.3 mg 내지 약 0.60 mg, 약 0.4 mg 내지 약 0.60 mg, 약 0.5 mg 내지 약 0.60 mg, 약 0.1 mg 내지 약 0.40 mg, 약 0.2 mg 내지 약 0.40 mg, 약 0.3 mg 내지 약 0.40 mg, 약 0.1 mg 내지 약 0.20 mg, 또는 약 0.1 mg 내지 약 0.3 mg의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 1일 당 약 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 적어도 (약) 0.1 mg의 양 또는 (적어도) 0.1 mg 이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 적어도 (약) 0.2 mg의 양 또는 (적어도) 0.2 mg 이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 적어도 (약) 0.3 mg의 양 또는 (적어도) 0.3 mg 이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 적어도 (약) 0.4 mg의 양 또는 (적어도) 0.4 mg 이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 적어도 (약) 0.5 mg의 양 또는 (적어도) 0.5 mg 이다. 임의의 상기 구현예의 일부에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 5.0 mg 미만의 양이다. 임의의 상기 구현예의 일부에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 1.0 mg 미만의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 0.8 mg 미만의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 0.6 mg 미만의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 약 0.5 mg 미만의 양이다.

일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 (약) 0.5 mg의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 (약) 0.45 mg의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 (약) 0.30 mg의 양이다. 일부 구현예에서, 화합물 A가 투여되는 1일당 투여는 (약) 0.60 mg의 양이다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 혈액 내 화합물 A의 최대 농도(C_max)를 달성하는 양으로, 예컨대 순환 요법의 매주 또는 순환 요법의 적어도 1주 동안, (약) 1 nM 내지 (약) 20 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 15 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 12 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 10 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 5 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 2.5 nM, (약) 2.5 nM 내지 (약) 20 nM, (약) 2.5 nM 내지 (약) 15 nM, (약) 2.5 nM 내지 (약) 12 nM, (약) 2.5 nM 내지 (약) 10 nM, (약) 2.5 nM 내지 (약) 5 nM, (약) 5 nM 내지 (약) 20 nM, (약) 5 nM 내지 (약) 15 nM, (약) 5 nM 내지 (약) 12 nM, (약) 5 nM 내지 (약) 10 nM, (약) 10 nM 내지 (약) 20 nM, (약) 10 nM 내지 (약) 15 nM 및 (약) 15 nM 내지 (약) 20 nM의 범위(각 수치포함)로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 적어도 약 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 16시간 또는 24시간 동안의 범위에서 C_max를 유지하는 양으로 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 예컨대 순환 요법의 매주 동안 또는 순환 요법의 적어도 1주 동안, (적어도) 약 1 nM의 혈액 내 화합물 A의C_max를 달성하는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 예컨대 순환 요법의 매주 동안 또는 순환 요법의 적어도 10주 동안, (적어도) 약 1 nM의 혈액 내 화합물 A의C_max를 달성하는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 예컨대 순환 요법의 매주 동안 또는 순환 요법의 적어도 5주 동안, (적어도) 약 1 nM의 혈액 내 화합물 A의C_max를 달성하는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 예컨대 순환 요법의 매주 동안 또는 순환 요법의 적어도 2.5주 동안, (적어도) 약 1 nM의 혈액 내 화합물 A의C_max를 달성하는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 적어도 약 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 16시간 또는 24시간 동안 C_max를 유지하는 양으로 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 명시된 기간 또는 지속 기간 동안 화합물의 반복 투약을 포함하는 순환 요법(순환 치료법(cycling therapy)으로도 지칭됨)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 매 투여 시 또는 투여되는 1일당 화합물 A의 양은 1.0mg 이내(예를 들어, 1.0mg 이내, 0.9mg, 0.8mg, 0.7mg, 0.6mg, 0.5mg)이다. 일부 구현예에서, 매 투여 시 또는 투여되는 1일당 화합물 A의 양은 (약) 0.6 mg, (약) 0.5 mg, (약) 0.45 mg, (약) 0.40 mg, (약) 0.30 mg, (약) 0.2 mg이다. 일부 구현예에서, 매 투여 시 또는 투여되는 1일당 화합물 A의 양은 약 0.30 mg 내지 약 0.60 mg (예를 들어, (약) 0.30 mg, (약) 0.45 mg, 또는 (약) 0.60 mg)이다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 21일, 또는 20일, 또는 19일, 또는 18일, 또는 17일, 또는 16일, 또는 15일, 또는 14일, 또는 13일, 또는 12일, 또는 11일, 또는 10일, 또는 9일, 또는 8일, 또는 7일, 또는 6일, 또는 5일, 또는 4일, 또는 3일, 또는 2일, 또는 1일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 15일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 14일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 8일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 7일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 1 또는 2일에 시작한다 (또는 개시된다).

따라서, T 세포 요법이 병용 요법의 제1일에 투여되는 병용 요법과 관련하여, 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제22일에 또는 그 전에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제22일에, 또는 제21일에, 또는 제20일에, 또는 제19일에, 또는 제18일에, 또는 제17일에, 또는 제16일에, 또는 제15일에, 또는 제14일에, 또는 제13일에, 또는 제12일에, 또는 제11일에, 또는 제10일에, 또는 제9일에, 또는 제8일에, 또는 제7일에, 또는 제6일에, 또는 제5일에, 또는 제4일에, 또는 제3일에, 또는 제2일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제16일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제15일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제9일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제8일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제2일 또는 제3일에 시작한다 (또는 개시된다).

다른 구현예에서, 순환 요법에서의 화합물 A의 투여는 병용 요법의 제1일에 시작한다 (또는 개시된다).

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여를 위한 순환 요법은: 화합물이 최대 연속 3주 동안 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 4주 기간에 연속 3주 동안 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 21일, 또는 20일, 또는 19일, 또는 18일, 또는 17일, 또는 16일, 또는 15일, 또는 14일, 또는 13일, 또는 12일, 또는 11일, 또는 10일, 또는 9일, 또는 8일, 또는 7일, 또는 6일, 또는 5일, 또는 4일, 또는 3일, 또는 2일, 또는 1일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 15일±3일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 14일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 8일±3일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 7일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 1 또는 2일에 시작한다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 1일 당 약 1.0 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 동안 1일 당 약 0.45 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 동안 1일 당 약 0.3 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 동안 1일 당 약 0.60 mg으로 투여된다.

따라서, T 세포 요법이 병용 요법의 제1일에 투여되는 병용 요법과 관련하여, 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제22일에 또는 그 전에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제22일에, 또는 제21일에, 또는 제20일에, 또는 제19일에, 또는 제18일에, 또는 제17일에, 또는 제16일에, 또는 제15일에, 또는 제14일에, 또는 제13일에, 또는 제12일에, 또는 제11일에, 또는 제10일에, 또는 제9일에, 또는 제8일에, 또는 제7일에, 또는 제6일에, 또는 제5일에, 또는 제4일에, 또는 제3일에, 또는 제2일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제16일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제15일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제9일±3일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제8일에 시작한다 (또는 개시된다). 일부 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제2일 또는 제3일에 시작한다 (또는 개시된다).

다른 구현예에서, 제1 투여 기간은 병용 요법의 제1일에 시작한다.

일부 구현예에서, 화합물 A는 제1 투여 기간 중, (약) 1 내지 21 일, 1 내지 19 일, 1 내지 17 일, 1 내지 15 일, 1 내지 13 일, 1 내지 11 일, 1 내지 9 일, 1 내지 7 일, 1 내지 5 일, 또는 1 내지 3 일(각 수치 포함) 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 제1 투여 기간 중, (약) 1 내지 21 일(수치 포함) 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 제1 투여 기간 중, (약) 1 내지 14 일(수치 포함) 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 제7 투여 기간 중, (약) 1 내지 21 일(수치 포함) 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 투여 기간 중, (약) 21 일 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 투여 기간 중, (약) 14 일 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A는 투여 기간 중, (약) 7 일 동안 매일 투여된다.

제1 투여는 휴지 기간이 시작할 때 종료되는 것으로 이해된다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 약 22일에 시작한다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 약 19 일, 또는 20 일, 또는 21 일, 또는 22 일, 또는 23 일, 또는 24 일에 시작한다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 22일에 시작한다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작한다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 약 1주이다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 5 일 또는 6 일 또는 7 일 또는 8 일 또는 9 일이다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 7일이다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 절대 호중구 수 (ANC)가 T 세포 요법을 투여하기 전에 측정된 수준과 동일하거나 거의 동일할 때까지 지속된다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 7일이다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 절대 호중구 수 (ANC)가 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 거의 동일할 때까지 지속된다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 대상체의 B 세포 혈액 수 수준이 T 세포 요법을 투여하기 전에 측정된 수준과 동일하거나 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속된다. 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 상기 대상체의 B 세포 혈액 수치 수준이 상기 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 또는 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속된다.

휴지 기간은 제2 투여 기간이 시작될 때 종료되는 것으로 이해된다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 약 29일에 시작한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 T 세포 요법을 투여한 후 약 또는 27 일, 또는 28 일, 또는 29 일, 또는 30 일, 또는 31 일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 29일에 시작한다. 일부 구현예에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 28일에 시작한다. 일부 구현예에서, 화합물은 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 1일 당 약 1.0 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.45 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.3 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.60 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 화합물이 4주 기간에 연속 3주 동안 매일 투여되는 4주 주기를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 4주 주기에, 화합물은 화합물이 매일 투여되는 연속 3주 후에 1주 동안은 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 4주 주기를 하나 이상 함유한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 2 개의 4주 주기, 또는 3 개의 4주 주기, 또는 4 개의 4주 주기, 5 개의 4주 주기, 또는 6 개의 4주 주기, 또는 7 개의 4주 주기, 8 개의 4주 주기, 또는 9 개의 4주 주기, 또는 10 개의 4주 주기, 11 개의 4주 주기, 또는 12 개의 4주 주기, 또는 13 개의 4주 주기, 14 개의 4주 주기, 또는 15 개의 4주 주기, 또는 16 개의 4주 주기를 함유한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 약 2 내지 11 개의 4주 주기, 2 내지 9 개의 4주 주기, 2 내지 7 개의 4주 주기, 2 내지 5 개의 4주 주기, 또는 2 내지 4 개의 4주 주기(각 수치 포함)를 함유한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 약 2 내지 11 개의 4주 주기(수치 포함)을 함유한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 2 개의 4주 주기를 함유한다. 일부 구현예에서, 제5 투여 기간은 2 개의 4주 주기를 함유한다. 일부 구현예에서, 제11 투여 기간은 2 개의 4주 주기를 함유한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 2 개의 4주 주기로 구성된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고, 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간, 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및 화합물이 4주 기간에 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물은 제1 투여 기간 및 제2 투여 기간 동안 1일 당 약 0.30 mg, 0.45 mg, 또는 0.60 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제15일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제8일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제1일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 휴지 기간은 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제22일에 시작하고 제28일 후에 종료된다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작한다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작하고 제180일에 또는 그 후에 종료된다. 특정 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제15일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제22일에 시작하고 제28일 후에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작하는 제2 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제8일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제22일에 시작하고 제28일 후에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작하는 제2 투여 기간을 포함한다. 다른 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제8일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제22일에 시작하고 제28일 후에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작하는 제2 투여 기간을 포함한다. 다른 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제1일에 시작하고 제21일 후에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제22일에 시작하고 제28일 후에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법(제1일에 투여되는 T 세포 요법과 관련하여)을 투여한 후 제29일에 시작하는 제2 투여 기간을 포함한다.

일부 구현예에서, 화합물 A를 투여하기 위한 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 뒤의 기간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 일주일이 넘는 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 한 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 두 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 세 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 네 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 다섯 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 여섯 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 여덟 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 10 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 약 또는 적어도 약 12 달의 기간 동안 연장된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 적어도 세 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 90일, (약) 100일, (약) 105일, (약) 110일, (약) 115일, (약) 120일, (약) 125일, (약) 130일, (약) 135일, (약) 140일, (약) 145일, (약) 150일, (약) 155일, (약) 160일, (약) 165일, (약) 170일, (약) 175일, (약) 180일, (약) 185일, (약) 190일, (약) 195일, 또는 (약) 200일 또는 그 이상의 기간 동안 연장된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 (약) 90일 또는 (약) 세 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 (약) 120일 또는 네 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 (약) 150일 또는 다섯 달의 기간 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 (약) 180일 또는 여섯 달의 기간 동안 연장된다.

일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 4개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 5개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 8개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 10개월에 종료된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 12개월에 종료된다.

일부 구현예에서, 순환 요법은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 84 일에 종료된다. 일부 구현예에서, 제2 투여 기간은 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 84 일에 종료된다. 따라서, T 세포 요법이 병용 요법의 제1일에 투여되는 병용 요법과 관련하여, 제2 투여 기간은 병용 요법의 제85일에 종료된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 14일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 20일에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 27일에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법을 투여한 후 28일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 84일에 종료되는 제2 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 후 7일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 20일에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 27일에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법을 투여한 후 28일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 84일에 종료되는 제2 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법을 투여한 날과 동일한 날에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 20일에 종료되는 제1 투여 기간, T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 27일에 종료되는 휴지 기간, 및 T 세포 요법을 투여한 후 28일에 시작하고 T 세포 요법을 투여한 후 84일에 종료되는 제2 투여 기간을 포함한다.

따라서, T 세포 요법이 병용 요법의 제1일에 투여되는 병용 요법과 관련하여, 일부 구현예에서, 순환 요법은 병용 요법의 제15일에 시작하고 제21일에 종료하는 제1 투여 기간, 병용 요법의 제22일에 시작하는 휴지 기간, 및 병용 요법의 제29일에 시작하고 제85일에 종료하는 제2 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 병용 요법의 제8일에 시작하고 제21일에 종료하는 제1 투여 기간, 병용 요법의 제22일에 시작하는 휴지 기간, 및 병용 요법의 제29일에 시작하고 제85일에 종료하는 제2 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 병용 요법의 제1일에 시작하고 제21일에 종료하는 제1 투여 기간, 병용 요법의 제22일에 시작하는 휴지 기간, 및 병용 요법의 제29일에 시작하고 제85일에 종료하는 제2 투여 기간을 포함한다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 (약) 6개월 이내에 치료 이후 완전 반응(CR)을 달성하였거나 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발하였다면, T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 상기 해당 기간(예를 들어, (약) 3, 4, 5, 또는 6개월)의 종료 시에 종료 또는 중지된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 이내에 치료 이후 완전 반응(CR)을 달성하였거나 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발하였다면, T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 3개월에 종료 또는 중지된다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응(CR)을 달성한 경우라도 상기 기간 동안 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여가 계속되도록, 고정된 기간으로 된다. 일부 구현예에서, 대상체는 최소 잔류 질병(MRD)이 있는 CR을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 MRD인 CR을 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 치료 후에 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)을 나타내는 경우, T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포)의 투여 개시 후에 상기 기간의 종료 후에 계속되는데, 예를 들어, (약) 3, 4, 5 또는 6개월 더 길게 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 3개월 넘는 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 6개월 넘는 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 최초 기간의 종료 시에 PR 또는 SD를 나타낸 대상체의 경우, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 치료 이후 완전 반응(CR)을 달성할 때까지 또는 암(예를 들어, B 세포 악성 종양, 예컨대 NHL, 예를 들어, DLBCL)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발할 때까지 계속된다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 화합물 A를 1일 당 약 1.0 mg 이하 (예를 들어, 0.1 내지 1.0 mg, 0.30 mg, 0.45 mg, 또는 0.60 mg)의 양으로 투여하는 것을 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여 시점에, 대상체는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포)의 투여 이후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 재발성/불응성 공격성 NHL 또는 DLBCL과 같은 NHL이다. 일부 구현예에서, CAR 발현 T 세포와 같은 세포 요법은 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, B 세포 항원은 CD19이다.

일부 구현예에서, 화합물 A 의 투여는 세포 요법(예를 들어, T 세포 요법)의 투여 개시 후 (약) 3개월 이상, (약) 4개월 이상, (약) 5개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안 연장되는 유효량의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 기간은 (약) 3개월, (약) 4개월, (약) 5개월 또는 (약) 6개월 동안 연장된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여 시점에, 대상체는 세포 요법의 투여 이후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 치료 이후 상기 해당 기간의 종료 전에 또는 (거의) 종료 시점에 완전 반응(CR)을 달성하였거나 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발하였다면, 종료 또는 중지된다. 일부 구현예에서, 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응(CR)을 달성한 경우라도 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 상기 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, T 세포 요법의 투여 개시 후 대상체가 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)을 나타내는 경우, 초기 기간의 종료 후에 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 대상체가 치료 이후에 완전 반응(CR)을 달성할 때까지 또는 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행되거나 재발할 때까지 반복된다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 재발성/불응성 공격성 NHL 또는 DLBCL과 같은 NHL이다. 일부 구현예에서, CAR 발현 T 세포와 같은 T 세포 요법은 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, B 세포 항원은 CD19이다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 T 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포 요법)의 투여 개시 후 약 3개월 이상의 기간 동안(예를 들어, (약) 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월의 기간 동안) 1 주일당 5일 이내(예를 들어, 3일, 4일 또는 5일) 중 매일 1일당 약 3mg 이내(예를 들어, 1 내지 3mg, 1mg, 2mg, 또는 3mg)의 양으로 화합물 A를 투여하는 단계를 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여 시점에, 대상체는 세포 요법의 투여 이후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 재발성/불응성 공격성 NHL 또는 DLBCL과 같은 NHL이다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 (약) 6개월 이내에 치료 이후 완전 반응(CR)을 달성하였거나 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발하였다면, T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료 또는 중지된다. 일부 구현예에서, 순환 요법은 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응(CR)을 달성한 경우라도 전체 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, (약) 6개월에 대상체가 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후에 더 계속되는데, 예컨대 세포 요법의 투여 개시 후 6개월 넘는 동안 더 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 대상체가 치료 이후에 완전 반응(CR)을 달성할 때까지 또는 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행되거나 재발할 때까지 계속된다. 일부 구현예에서, CAR 발현 T 세포와 같은 세포 요법은 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, B 세포 항원은 CD19이다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 세포 요법(예를 들어, T 세포 요법)의 개시 후 (약) 6개월 이상의 기간 동안, 1일당 약 1mg 내지 약 3mg(예를 들어, 1mg, 2mg 또는 3mg)의 양의 화합물 A를 투여하는 것을 포함하는 순환 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 세포 요법의 투여 개시 후 약 14일 내지 35일(예를 들어, 약 21일 내지 35일, 예를 들어 (약) 28일)이 넘는 때에 개시된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여 시점에, 대상체는 세포 요법의 투여 이후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 (약) 6개월에 치료 이후 완전 반응(CR)을 달성하였거나 암(예를 들어, B 세포 악성 종양)이 치료 후 관해된 이후에 진행 또는 재발하였다면, 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 중지된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는, 대상체가 (약) 6개월 전의 시점에 완전 반응(CR)을 달성한 경우라도 상기 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는(약) 6개월에 대상체가 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)을 나타내는 경우, T 세포 요법의 투여 개시 후 6개월 넘는 동안 더 투여된다. 일부 구현예에서, 투여, 예를 들어, 순환 요법에서 화합물 A의 투여는 대상체가 치료 이후에 완전 반응(CR)을 달성할 때까지 또는 B 세포 악성 종양이 치료 후 관해된 이후에 진행되거나 재발할 때까지 계속된다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 재발성/불응성 공격성 NHL 또는 DLBCL과 같은 NHL이다. 일부 구현예에서, CAR 발현 T 세포와 같은 세포 요법은 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, B 세포 항원은 CD19이다.

일부 경우에, 순환 요법은 언제든지, 및/또는 한 번 이상 중단될 수 있다. 일부 경우에, 순환 요법은 대상체가 하나 이상의 유해 효과, 용량 제한 독성(DLT), 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증, 혈소판 감소증, 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 신경 독성(NT), 예컨대 섹션 IV에 기술된 것들을 일으키는 경우 중단되거나 변경된다. 일부 구현예에서, 일주일 중 특정 일들에 매 투여 시 또는 1일당 화합물 A의 양은 섹션 IV에 기술된 바와 같이, 대상체가 하나 이상의 유해 효과, 용량 제한 독성(DLT), 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증, 혈소판 감소증, 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 신경 독성(NT)을 일으킨 후에 변경된다.

Ⅱ. 세포 요법 및 조작된 세포

일부 구현예에서, 제공된 병용 요법 방법에 부합하는 용도를 위한 세포 요법(예: T 세포 요법)은 암(예: B 세포 악성종양)과 같은 질병 또는 병태과 관련된 항원을 인식하고/거나 이에 특이적으로 결합하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원에 대한 결합은 이러한 항원에 대한 면역 반응과 같은 반응을 초래한다. 일부 구현예에서, 세포는 조작된 수용체 또는 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 조작된 항원 수용체를 함유하거나 함유하도록 조작된다. CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분에, 일부 측면에서 링커 및/또는 막관통 도메인(들)을 통해 연결된 세포외 항원(또는 리간드) 결합 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 조작된 세포는 입양 세포 요법과 같은 대상체에 투여하기에 적합한 약학 조성물 및 제형으로서 제공된다. 대상체, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 섹션 I에 설명된 바와 같다.

일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 유전자 전달은 먼저 세포를 자극하고, 예컨대 세포를 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하고, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 뒤이어 활성화된 세포의 형질도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서 증폭시켜 달성된다.

A. 키메라 항원 수용체

제공된 방법 및 용도(예: 섹션 I에 기재된 임의의 것)의 일부 구현예에서, T 세포와 같은 조작된 세포는 원하는 항원(예를 들어, 종양 항원)에 대한 특이성을 제공하는 리간드-결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)을 세포내 신호 전달 도메인과 결합하는 하나 이상의 도메인을 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 키메라 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포 활성화 도메인과 같은 활성화 세포내 도메인 부분이고, 1차 활성화 신호를 제공한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 이펙터 기능을 촉진하기 위한 공자극 신호 전달 도메인을 함유하거나 추가로 함유한다. 분자(예를 들어, 항원)에 특이적 결합 시, 수용체는 일반적으로 면역 자극 신호, 예컨대 ITAM-변환 신호를 세포에 전달하여 질병 또는 병태에 표적화된 면역 반응을 촉진한다. 일부 구현예에서, 면역 세포로 유전자 조작될 때 키메라 수용체는 T 세포 활성을 조절할 수 있고, 일부 경우에, T 세포 분화 또는 항상성을 조절할 수 있으며, 이로써 예컨대 입양 세포 요법 방법에서 사용하기 위해, 생체 내 수명, 생존 및/또는 지속성이 향상된 유전자 조작된 세포를 초래한다.

CAR을 포함하는 예시적 항원 수용체 및 상기 수용체를 조작하고 세포 내로 도입하는 방법은 예를 들어 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 및 미국 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353 및 8,479,118 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416]에 기재된 것들 및/또는 문헌[Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 기재된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 문헌[미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 바와 같은 CAR 및 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO/2014055668 A1]에 기재된 것을 포함한다. CAR의 예로는 전술한 간행물 중 어느 하나, 예컨대 문헌[WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, U.S. Patent No.: 7,446,190, US Patent No.: 8,389,282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; and Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177)]에 개시된 바와 같은 CAR이 포함된다. 또한 문헌[WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190 및 미국 특허 번호 8,389,282]을 참조한다.

일부 구현예에서, T 세포와 같은 조작된 세포는 특정 세포 유형의 표면 상에 발현된 항원과 같은 특정 항원(또는 마커 또는 리간드)에 대한 특이성을 갖는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 또는 비-표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질병 또는 병태의 세포 상에서, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포 상에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포 상에서 발현되고/거나 조작된 세포 상에서 발현된다.

일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 연관된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이다. 특정 관점에서, 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은 인간 B 세포에서 발현되는 항원이다.

CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 항체 분자의 항원 결합 부분 또는 부분들인 세포외 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 항체 분자의 부분이고, 일반적으로 항체의 가변 중쇄 (VH) 영역 및/또는 가변 경쇄 (VL) 영역, 예를 들어, scFv 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 sdFv와 같은 단일 도메인 항체 (sdAb), 나노바디, V_HH 및 V_NAR _.이다. 일부 구현예에서, 항원 결합 단편은 가요성 링커에 의해 연결되는 항체 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, scFv 또는 V_H 도메인)은 CD19와 같은 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD19에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 유래하거나 이의 변이체이다.

일부 구현예에서, 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 V_H 및 V_L을 함유한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어, 문헌[미국 특허 공개 번호 US 2016/0152723]에 기재된 바와 같은 인간 항체이다.

일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 일부 측면에서 scFv일 수 있는 FMC63로부터 유래된 V_H 및/또는 V_L을 포함한다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체를 지칭한다(Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열번호 38 및 39에 각각 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2 및 서열번호 40 또는 54에 제시된 CDR-H3 서열번호 35에 제시된 CDR-L1 및 서열번호 36 또는 55에 제시된 CDR-L2 및 서열번호 37 또는 56에 제시된 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H) 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함한다.

일부 구현예에서, scFv는 서열번호 35의 CDR-L1 서열, 서열번호 36의 CDR-L2 서열, 서열번호 37의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 38의 CDR-H1 서열, 서열번호 39의 CDR-H2 서열, 및 서열번호 40의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 41에 제시된 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 서열번호 42에 제시된 FMC63의 가변 경쇄 영역, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 59에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 V_H, 링커 및 V_L을 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 V_L, 링커 및 V_H를 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 57에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 57에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 43에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 일부 측면에서 scFv일 수 있는 SJ25C1로부터 유래된 V_H 및/또는 V_L을 포함한다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체이다(Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열번호 47-49에 각각 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 및 서열번호 44-46에 각각 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H) 및 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 44의 CDR-L1 서열, 서열번호 45의 CDR-L2 서열, 서열번호 46의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 47의 CDR-H1 서열, 서열번호 48의 CDR-H2 서열, 및 서열번호 49의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 50에 제시된 SJ25C1의 가변 중쇄 영역 및 서열번호 51에 제시된 SJ25C1의 가변 경쇄 영역, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 52에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 V_H, 링커 및 V_L을 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 V_L, 링커 및 V_H를 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 53에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.

본 명세서에서 용어 “항체(antibody)”는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원-결합) 항체 단편을 포함하는 다클론성 및 단클론성 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab’)₂ 단편, Fab’ 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 가변 중쇄(V_H) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody), V_HH 또는 V_NAR) 또는 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작된 및/또는 달리 변형된 형태의 면역글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 완전한 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중특이성(예를 들어, 이중 특이성) 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포괄한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 이의 기능성 항체 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포괄한다. 일부 측면에서, CAR은 예를 들어 상이한 특이성을 갖는 2개의 항원 결합 도메인을 함유하는 이중특이성 CAR이다.

일부 구현예에서, 항원 결합 단백질, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 전장일 수 있거나 또는 항원 결합 부분(Fab, F(ab’)2, Fv 또는 단일 사슬 Fv 단편(scFv))일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 불변 영역은 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 구체적으로 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되고, 더 구체적으로, IgG1(예를 들어, 인간 IgG1)로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 항체 경쇄 불변 영역은 예를 들어, 카파 또는 람다, 특히 카파로부터 선택된다.

일부 경우에 용어 “초가변 영역(hypervariable region)” 또는 “HVR”과 동의어인 “상보성 결정 영역(complementarity determining region)” 및 “CDR”은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. 일부 경우에, “프레임워크 영역(framework region)” 및 “FR”은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다.

주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” 넘버링 체계); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” 넘버링 체계); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (“Contact” 넘버링 체계); Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” 넘버링 체계); Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” 넘버링 체계); 및 Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM” 넘버링 체계)]에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.

주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 체계는 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면 Chothia 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. Kabat 및 Chothia 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 “30a”에 의해 수용되는 삽입(insertion) 및 일부 항체에서 나타나는 결실(deletion)이 있는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기반한다. 이 두 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(“삽입-결실(indel)”)을 배치하여 차이가 있는 넘버링이 된다. Contact 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 기반하며 여러 관점에서 Chothia 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular’s AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기반한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다.

하기 표 2는 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 각각 식별된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계 둘 다를 사용하여 잔기 넘버링이 나열된다. FR들은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR들 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.

다양한 넘버링 체계에 따른 CDR의 경계

CDR	Kabat	Chothia	AbM	Contact
CDR-L1	L24--L34	L24--L34	L24--L34	L30--L36
CDR-L2	L50--L56	L50--L56	L50--L56	L46--L55
CDR-L3	L89--L97	L89--L97	L89--L97	L89--L96
CDR-H1 (Kabat 넘버링¹)	H31--H35B	H26--H32..34	H26--H35B	H30--H35B
CDR-H1 (Chothia 넘버링²)	H31--H35	H26--H32	H26--H35	H30--H35
CDR-H2	H50--H65	H52--H56	H50--H58	H47--H58
CDR-H3	H95--H102	H95--H102	H95--H102	H93--H101

1 - Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD

2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948

따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 “CDR” 또는 “상보적 결정 영역(complementary determining region)” 또는 개별 지정 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 V_H 또는 V_L 영역 아미노산 서열에 있는 해당 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급될 경우, 상기 CDR은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내의 해당 CDR(예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는다고 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계를 사용하여 기재되지만, 제공된 항체는 전술한 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.

마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계는 Kabat, Chothia, AbM 또는 Contact 방법 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같이 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.

용어 “가변 영역(variable region)” 또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 V_H 및 V_L) 가변 영역은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다). 단일 V_H 또는 V_L 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보적 V_L 또는 V_H 도메인 라이브러리를 각각 선별하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 V_H 또는 V_L 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.

제공된 항체 중에는 항체 단편이 있다. “항체 단편(antibody fragment)”은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)₂; 디아바디; 선형 항체; 가변 중쇄(V_H) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 단일 도메인 V_H 단일 항체; 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 구체적인 구현예에서, 항체는 scFv와 같은, 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편이다.

용어 “가변 영역(variable region)” 또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 V_H 및 V_L) 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다). 단일 V_H 또는 V_L 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보적 V_L 또는 V_H 도메인 라이브러리를 각각 선별하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 V_H 또는 V_L 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.

단일 도메인 항체(sdAb)는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 본원에 기술되거나 공지된 표적 항원 중 어느 하나와 같이, 종양 세포 또는 암세포와 같은 표적화될 세포 또는 질병의 암 마커 또는 세포 표면 항원과 같은 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함한다. 예시적인 단일 도메인 항체는 sdFv, 나노바디, V_HH 또는 V_NAR을 포함한다.

항체 단편은 온전한 항체의 단백질 가수 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 합성 링커, 예를 들어 펩타이드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것과 같이 자연적으로 발생하지 않고/거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않을 수 있는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합으로 생성된 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 scFv이다.

“인간화된(humanized)” 항체는, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된, 항체이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 “인간화된 형태(humanized form)”는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서, 통상적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)의 해당 잔기로 치환되어 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화도가 회복되거나 개선된다.

일부 측면에서, 재조합 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 이의 단편과 같은 하나 이상의 리간드-(예를 들어, 항원-)결합 도메인을 함유하는 세포외 부분, 및 하나 이상의 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인(상호 교환적으로 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역으로도 불림)을 포함한다. 일부 측면에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)는 스페이서 및/또는 막관통 도메인 또는 부분을 더 포함한다. 일부 측면에서, 스페이서 및/또는 막관통 도메인은 리간드-(예를 들어, 항원-)결합 도메인을 함유하는 세포외 부분과 세포내 신호 전달 영역(들) 또는 도메인(들)을 연결할 수 있다.

일부 구현예에서, CAR과 같은 재조합 수용체는, 면역글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전, 예컨대 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 C_H1/C_L 및/또는 Fc 영역의 적어도 일부이거나 이를 포함할 수 있는 스페이서를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 부분은 항원-인식 성분, 예를 들어, scFv와 막관통 도메인 사이에서 스페이서 영역으로 기능한다. 스페이서는 스페이서의 부재와 비교하여 항원 결합 후에 세포의 반응성 증가를 제공하는 길이의 것일 수 있다. 일부 예에서, 스페이서는 (약) 12개 아미노산 길이이거나 또는 12개 이내의 아미노산 길이이다. 예시적인 스페이서는 적어도 약 10 내지 229개 아미노산, 약 10 내지 200개 아미노산, 약 10 내지 175개 아미노산, 약 10 내지 150개 아미노산, 약 10 내지 125개 아미노산, 약 10 내지 100개 아미노산, 약 10 내지 75개 아미노산, 약 10 내지 50개 아미노산, 약 10 내지 40개 아미노산, 약 10 내지 30개 아미노산, 약 10 내지 20개 아미노산, 또는 약 10 내지 15개의 아미노산을 갖는 것을 포함하고, 열거된 범위 중 임의의 종점들 사이 임의의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12개 이하의 아미노산, 약 119개 이하의 아미노산, 또는 약 229개 이하의 아미노산을 갖는다. 예시적인 스페이서는 IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서는 문헌[Hudecek et al. (2013) Clin . Cancer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3(2):125-135 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687]에 기재된 것을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 1에 제시된 힌지 단독 스페이서와 같은 IgG4 또는 IgG1의 힌지 단독 같은 IgG의 힌지 영역 단독을 함유하며, 서열 번호: 2에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 C_H2 및/또는 C_H3 도메인에 연결된 Ig 힌지(예를 들어, IgG4 힌지)이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 3에 제시된 바와 같이 C_H2 및 C_H3 도메인에 연결된 Ig 힌지(예를 들어, IgG4 힌지)이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 4에 제시된 바와 같이 C_H3 도메인에만 연결된 Ig 힌지(예를 들어, IgG4 힌지)이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 공지된 가요성 링커(flexible linker)와 같은 다른 가요성 링커이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 1, 3, 4 및 5 중 어느 하나에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.

일부 측면에서, 스페이서는 (a) 면역 글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나, 약 15개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나; (b) 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되고/거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나; (c) (약) 12개의 아미노산 길이이고/거나 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나; (d) 서열번호 1, 3-5, 27-34 또는 58에 제시된 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 어느 하나의 변이체로 구성되거나 이를 포함하거나; 또는 (e) 화학식 X₁PPX₂P(여기에서 X₁은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X₂는 시스테인 또는 트레오닌)을 포함하거나 이로 구성되는; 폴리펩타이드 스페이서이다.

일부 구현예에서, 항원 수용체는 세포외 도메인에 직접 또는 간접적으로 연결된 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 신호 전달 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 ITAM을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 항원 인식 도메인(예를 들어, 세포외 도메인)은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 모방하는 신호 전달 성분과 같은 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분에 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 세포외 도메인(예를 들어, scFv) 및 세포내 신호 전달 도메인 사이에 연결되거나 융합된 막관통 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원 결합 성분(예를 들어, 항체)은 하나 이상의 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인에 연결된다.

일 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 회합하는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합을 피하도록 아미노산 치환에 의해 변형되거나 선택되어 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용이 최소화된다.

일부 구현예에서, 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막 관통 영역은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137(4-1BB) 또는 CD154로부터 유래된 것을 포함한다(즉, 적어도 이들의 막관통 영역(들)을 포함한다). 대안적으로 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿(triplet)이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인에 의한 것이다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28 또는 이의 변이체의 막관통 부분을 함유한다. 세포외 도메인과 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인과 막관통은 본원에 기술된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다.

일부 구현예에서, 수용체(예를 들어, CAR)의 막관통 도메인은 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 변이체, 예를 들어 인간 CD28(수탁 번호: P10747.1)의 27-아미노산 막관통 도메인이고, 또는 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 8에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 부분을 함유하는 막관통 도메인은 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.　

일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)는 적어도 하나의 세포내 신호 전달 성분 또는 성분들, 예컨대 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, T 세포 활성화는 두 종류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR을 통한 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 서열(1차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2차 또는 공자극 신호를 제공하는 서열(2차 세포질 신호 전달 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 신호 전달 성분 중 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 세포내 신호 전달 영역 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합으로 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예컨대 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿(doublet)을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포질 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.

일부 구현예에서, CAR의 결찰시, CAR의 세포질 도메인 또는 세포내 신호 전달 영역은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 작동체 기능 또는 반응 중 하나 이상을 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 맥락에서, CAR은 T 세포의 기능, 예컨대 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예컨대 사이토카인 또는 기타 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포내 신호 전달 영역의 절단 부분은 예를 들어 그것이 작동체 기능 신호를 형질도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 세포내 도메인 또는 도메인들을 포함하는 세포내 신호 전달 영역은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열 및 일부 측면에서 천연 맥락에서 항원 수용체 결합 후에 신호 전달을 개시하기 위해 상기 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체 및/또는 상기 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열의 세포질 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 세포내 도메인 또는 도메인들을 포함하는 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호를 제공하는 데 관여하는 영역 또는 도메인의 세포질 서열을 포함한다.

일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예에는 CD3 제타 사슬, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유래된 것이 포함된다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 CD3 제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 부분, 또는 서열을 함유한다.

일부 구현예에서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타 사슬과 같은 TCR 복합체의 세포내 성분을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 항원 결합 부분은 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 또한 Fc 수용체 γ, CD8alpha, CD8beta, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는 CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와 CD8alpha, CD8beta, CD4, CD25 또는 CD16 사이에 키메라 분자를 포함한다.

일부 구현예에서, 세포내 (또는 세포질) 신호 전달 영역은 인간 CD3 사슬, 임의적으로 CD3 제타 자극성 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체, 예컨대 인간 CD3ζ의 이소형 단백질 3의 112 AA 세포질 도메인(수탁 번호: P20963.2) 또는 문헌[미국 특허 번호 7,446,190 또는 미국 특허 번호 8,911,993]에 기술된 바와 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다.　일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열번호 13, 14 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 13, 14 또는 15에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호가 필요하다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR이 동일한 세포에서 발현되고 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.

일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자의 세포내 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 공자극 수용체, 예컨대 CD28, 4-1BB, OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS 및/또는 다른 공자극 수용체의 신호 전달 도메인 및/또는 막관통 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 인간 CD28 또는 인간 4-1BB와 같은 CD28 또는 4-1BB의 공동자극 영역 또는 도메인을 포함한다.

일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인은 인간 CD28 또는 이의 기능적 변이체 또는 이의 일부의 세포내 공자극 신호 전달 도메인, 예컨대 이의 41개의 아미노산 도메인 및/또는 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL의 GG로의 치환을 갖는 상기 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 서열번호 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 10 또는 11에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 영역은 4-1BB 또는 이의 기능성 변이체 또는 이의 일부의 세포내 공자극 신호 전달 도메인, 예컨대 인간 4-1BB 또는 이의 기능성 변이체 또는 이의 일부의 42-아미노산 세포질 도메인(수탁 번호: Q07011.1), 예컨대 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 12에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 측면에서, 동일한 CAR은 1차 (또는 활성화) 세포질 신호 전달 영역 및 공자극 신호 전달 성분 둘 모두를 포함한다.

일부 구현예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR, 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO2014/055668 참조). 일부 측면에서, 세포는 하나 이상의 자극성 또는 활성화 CAR 및/또는 공자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR(iCAR, Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013) 참조), 예컨대 질병 또는 병태에 특이적이고/거나 이와 관련된 것 외의 항원을 인식하는 - 이로써 질병 표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 신호가 예를 들어 표적외 효과를 감소시키도록 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되는 - CAR을 추가로 포함한다.

일부 경우에, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합 시 CD3 사슬 유도 신호만을 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2 세대 CAR은 상기 신호 및 CD28 또는 CD137과 같은 공자극 수용체로부터 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 공자극 신호를 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 일부 측면에서 상이한 공자극 수용체의 다중 공자극 도메인을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에서 하나 이상의, 예를 들어 2개 이상의 공자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR에는 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포내 성분이 포함된다.

일부 구현예에서, 항원 수용체는 마커를 추가로 포함하고, 및/또는 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 세포는 수용체를 발현하기 위한 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는 데 사용될 수 있는 대리 마커, 예컨대 세포 표면 마커를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 마커는 CD34, NGFR, 또는 표피 성장 인자 수용체, 예컨대 이러한 세포 표면 수용체(예: tEGFR)의 절단된 버전의 전부 또는 일부(예를 들어, 절단 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커를 암호화하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열(예를 들어, T2A)과 같은 링커 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 임의적으로 링커 서열은 문헌[특허 출원 번호 WO2014031687]에 개시된 바와 같은 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 마커는 선택적으로 링커 서열, 예컨대 T2A 절단 가능한 링커 서열에 연결된 절단형 EGFR(tEGFR)일 수 있다.

절단형 EGFR(예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 서열번호 6 또는 17에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 6 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 마커는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 분자(예를 들어, 세포 표면 단백질) 또는 이의 부분이다. 일부 구현예에서, 분자는 비자기(non-self) 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 “자기(self)”로 인식되지 않는 분자이다.

일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고/거나 유전자 조작, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것 외에 다른 효과를 생성하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 치료적 분자 또는 달리 일부 원하는 효과를 나타내는 분자, 예컨대 생체 내에서 세포가 조우하게 될 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우 시 세포의 반응을 강화하고/거나 약화시키는 공자극 또는 면역 관문 분자일 수 있다.

일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 본원에 기술된 항체 또는 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 본원에 기술된 항체 또는 단편을 함유하는 세포외 부분 및 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv 또는 단일 도메인 V_H 항체를 포함하고, 세포내 도메인은 ITAM을 함유한다. 일부 측면에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3-제타 사슬은 인간 CD3-제타 사슬이다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공자극 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, CD28는 인간 CD28이다. 일부 구현예에서, 4-1BB는 인간 4-1BB이다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막관통 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 세포외 도메인과 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인과 막관통은 본원에 기술된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다.

일부 구현예에서, CAR은 항체(예를 들어, 항체 단편), CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD28의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체와 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 scFv(예: 상기 기술된 임의의 것과 같이 CD19에 특이적임)를 포함한 항체 단편과 같은 항체, 스페이서, 예컨대 면역글로불린 분자의 부분, 예컨대 힌지 영역을 및/또는 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역을 함유한 스페이서, 예컨대 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인의 전부 또는 일부를 함유한 막관통 도메인, CD28-유래 세포내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다.　

일부 구현예에서, CAR은 항체(예를 들어, 항체 단편), CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 4-1BB의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체와 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 상기 구현예에서, 수용체는 Ig 분자, 예컨대 인간 Ig 분자의 일부, 예컨대 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지, 예컨대 힌지 단독 스페이서를 함유하는 스페이서를 더 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 scFv(예: 상기 기술된 임의의 것과 같이 CD19에 특이적임)와 같은 항체 또는 단편, 임의의 Ig-힌지 함유 스페이서와 같은 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인, 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타-유래 신호 전달 도메인을 포함한다.

B. 유전자 조작을 위한 핵산, 벡터 및 방법

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, T 세포는 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다. 일부 구현예에서, 조작은 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 도입함으로써 수행된다. 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 핵산 및/또는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 벡터 또는 작제물이 또한 제공된다.

일부 경우에, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩타이드로부터 유래된 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 서열번호 24에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 서열번호 25에 제시된 GMCSFR 알파 사슬의 예시적인 신호 펩타이드와 같은 이종 또는 비천연 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열은 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 신호 펩타이드의 비제한적인 예시적인 예에는 예를 들어, 서열번호 24에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 서열번호 25에 제시된 GMCSFR 알파 사슬 신호 펩타이드 또는 서열번호 26에 제시된 CD8 알파 신호 펩타이드가 포함된다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 재조합 수용체의 발현을 제어하도록 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 프로모터를 함유한다. 일부 예에서, 폴리뉴클레오타이드는 재조합 수용체의 발현을 제어하도록 작동 가능하게 연결된 2개, 3개 이상의 프로모터를 함유한다.

핵산 분자가 두 개 이상의 상이한 폴리펩타이드 사슬, 예를 들어, 재조합 수용체 및 마커를 암호화하는 특정 경우에, 각각의 폴리펩타이드 사슬은 별도의 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 2개의 별도의 핵산이 제공되고, 각각은 세포 내 발현을 위해 세포로 개별적으로 전달되거나 도입될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 및 마커를 암호화하는 핵산은 동일한 프로모터에 작동 가능하게 연결되고 선택적으로 내부 리보솜 진입 부위(internal ribosome entry site, IRES) 또는 자가 절단 펩타이드 또는 선택적으로 T2A, P2A, E2A 또는 F2A인 리보솜 건너뛰기를 야기하는 펩타이드를 암호화하는 핵산에 의해 분리되어 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 및 마커를 암호화하는 핵산은 2개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 및 마커를 암호화하는 핵산은 세포의 게놈 내의 상이한 위치에 존재하거나 이에 삽입된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 레트로바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해 배양된 세포를 함유하는 조성물로 도입된다.

일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드가 제1 및 제2 핵산 서열을 함유하는 것과 같이 각각의 상이한 폴리펩타이드 사슬을 암호화하는 코딩 서열은 동일하거나 상이할 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 둘 이상의 상이한 폴리펩타이드 사슬의 발현을 구동하는 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 핵산 분자는 다중 시스트론(이중 시스트론 또는 삼중 시스트론, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,060,273 참조)일 수 있다. 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 유전자 산물(예를 들어, 마커 암호화 및 재조합 수용체 암호화)의 공발현을 허용하는 IRES(internal ribosome entry site, 내부 리보솜 진입 부위)를 함유하는 이중시스트론 단위로 조작될 수 있다. 대안적으로, 일부 경우에, 단일 프로모터는 단일 오픈 리딩 프레임(open reading frame, ORF)에 자가-절단 펩타이드(예를 들어, 2A 서열) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어, 푸린)를 암호화하는 서열에 의해 서로 분리된, 2 개 또는 3 개의 유전자(예를 들어, 마커 암호화 및 재조합 수용체 암호화)를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서, ORF는 번역 동안(2A의 경우) 또는 번역 후에 개별 단백질로 가공되는 단일 폴리펩타이드를 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 건너뛰기) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음 펩타이드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 de Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004) 참조). 다양한 2A 요소가 공지되어 있다. 본원에 개시된 방법 및 시스템에 사용될 수 있는 2A 서열의 예에는 문헌[미국 특허 공개 번호 20070116690]에 기술된 바와 같은 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열번호 21), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열번호 20), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열번호 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열번호 18 또는 19)이 있으며, 하지만 이에 한정되지 않는다.

본 명세서에 기재된 재조합 수용체 중 어느 하나는 재조합 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열을 임의의 조합 또는 배열로 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 1개, 2개, 3개 이상의 폴리뉴클레오타이드는 1개, 2개, 3개 이상의 상이한 폴리펩타이드, 예를 들어 재조합 수용체를 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 벡터 또는 작제물은 마커를 암호화하는 핵산 서열을 함유하고, 별도의 벡터 또는 작제물은 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 및 마커를 암호화하는 핵산은 2개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산은 마커를 암호화하는 핵산의 하류에 존재한다.

일부 구현예에서, 벡터 백본은 하나 이상의 마커(들)를 암호화하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 마커(들)는 형질도입 마커, 대리 마커 및/또는 선택 마커이다.

일부 구현예에서, 마커는 형질도입 마커 또는 대리 마커이다. 형질도입 마커 또는 대리 마커는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포를 검출하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 형질도입 마커는 세포의 변형을 나타내거나 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)와 함께 세포 표면 상에 공발현되도록 만들어진 단백질이다. 구체적인 구현예에서, 상기 대리 마커는 거의 또는 전혀 활성을 갖지 않도록 변형된 표면 단백질이다. 특정 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체를 암호화하는 동일한 폴리뉴클레오타이드 상에 암호화된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은, 선택적으로 내부 리보솜 유입점(IRES)에 의해 분리되는, 마커를 암호화하는 핵산 서열에 또는 자가 절단 펩타이드 또는 T2A, P2A, E2A 또는 F2A와 같은 2A 서열과 같은 리보솜 스키핑을 일으키는 펩타이드를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된다. 외인성 마커 유전자는 일부 경우에 세포의 검출 또는 선택을 가능하게 하도록, 일부 경우에 또한 세포 자살을 촉진하도록, 조작된 세포와 관련하여 사용될 수 있다.

예시적인 대리 마커는, 비기능적이며 신호 또는 일반적으로 전장 형태의 세포 표면 폴리펩타이드에 의해 전달되는 신호를 전달할 수 없거나 전달하지 않고/거나 내재화될 수 없거나 내재화되지 않는 절단 형태와 같은, 세포 표면 폴리펩타이드의 절단 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절단된 세포 표면 폴리펩타이드는 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2(tHER2), 절단된 표피 성장 인자 수용체(tEGFR, 서열번호 7 또는 16에 제시된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 또는 이의 변형된 형태와 같은 성장 인자 또는 다른 수용체의 절단 형태를 포함한다. tEGFR은 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 tEGFR 작제물 및 암호화된 외인성 단백질로 조작된 세포를 식별 또는 선택하기 위해 및/또는 암호화된 외인성 단백질을 발현하는 세포를 제거 또는 분리하기 위해 사용될 수 있다. 문헌[미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434]을 참조한다. 일부 측면에서, 마커(예를 들어, 대리 마커)에는 CD34의 전부 또는 일부(예를 들어, 절단 형태), NGFR, CD19 또는 절단된 CD19(예를 들어, 절단된 비-인간 CD19), 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, tEGFR)가 포함된다.

일부 구현예에서, 마커는 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체, 및 코돈-최적화된 및/또는 강화된 변이체를 포함하여, 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 강화된 녹색 형광 단백질(EGFP), 예컨대 슈퍼-폴드 GFP(super-fold GFP, sfGFP), 적색 형광 단백질(red fluorescent protein, RFP), 예컨대 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(cyan fluorescent protein, CFP), 청록 형광 단백질(blue green fluorescent protein, BFP), 강화된 청색 형광 단백질(EBFP) 및 노랑 형광 단백질(YFP) 및 이들의 변이체와 같은 형광 단백질이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 루시퍼라아제, 대장균(E. Coli )의 lacZ 유전자, 알칼리 포스파타아제, 분비 배아 알칼리 포스파타아제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제(CAT)와 같은 효소이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자에는 루시퍼라아제(luc), β-갈락토시다아제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라아제(CAT), β-글루쿠로니다아제(GUS) 또는 이들의 변이체가 포함된다.

일부 구현예에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 외인성 제제 또는 약물에 대한 내성을 부여하는 폴리펩타이드이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 포유류 세포에 대해 항생제 내성을 부여하는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 퓨로마이신 내성 유전자, 히그로마이신 내성 유전자, 블라스티사이딘 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 게네티신 내성 유전자 또는 제오신 내성 유전자 또는 이들의 변형된 형태이거나 이를 포함한다.

일부 구현예에서, 분자는 비자기(non-self) 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 “자기(self)”로 인식되지 않는 분자이다.

일부 구현예에서, 마커를 암호화하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열(예를 들어, T2A)과 같은 링커 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 선택적으로 링커 서열은 문헌[국제 출원 공개 번호 WO2014031687]에 개시된 바와 같은 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 마커는 선택적으로 링커 서열, 예컨대 T2A 절단 가능한 링커 서열에 연결된 절단형 EGFR(tEGFR)일 수 있다. 절단된 EGFR(예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열 번호: 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 재조합 핵산은 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스(adeno-associated virus, AAV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, Koste et al. (2014) Gene Therapy, 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp . Hematol ., 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol . Ther . Nucl . Acids., 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol ., 2011 November 29(11): 550-557 참조).

일부 구현예에서, 벡터는 아데노 연관 바이러스(AAV)이다.

일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(long terminal repeat sequence, LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식육종 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아 줄기세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV), 비장 병소 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV)로부터 유래된 레트로바이러스 벡터를 갖는다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스는 통상적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽(amphotropic)이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag(객), pol(폴) 및/또는 env(엔브) 서열을 대체한다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 시스템이 문헌[예를 들어, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109]에 기술되어 있다.

렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505]에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기 천공법을 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, 문헌[Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437] 참조). 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전위(transposition)를 통해 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌[Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126] 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 다른 방법에는 인산칼슘 형질주입(예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜-매개 형질주입; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 인산스트론튬 DNA 공동 침전(Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))이 포함된다.

재조합 산물을 암호화하는 핵산 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는 예를 들어, 문헌[국제 특허 출원 공개 번호: WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 것이다.

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, T 세포는 증폭 중 또는 증폭 후에 예를 들어 T 세포 수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)로 형질주입될 수 있다. 원하는 수용체의 유전자 도입을 위한 상기 형질주입은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 이어서 유전자 변형 세포의 집단은 초기 자극(예를 들어, 항-CD3/항-CD28 자극)으로부터 유리될 수 있으며, 후속적으로 제2 유형의 자극으로, 예를 들어 새로이 도입된 수용체를 통해 자극될 수 있다. 상기 제2 유형의 자극은 새로운 수용체의 프레임워크 내에서 직접 결합하는(예를 들어, 수용체 내의 불변 영역을 인지함으로써) 유전자 도입된 수용체의 펩타이드/MHC 분자, 즉 동종(교차 결합) 리간드(예를 들어, CAR의 천연 리간드) 또는 임의의 리간드(예컨대 항체) 형태의 항원 자극을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol . 2012; 907:645-66 또는 Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014)]을 참조한다.

일부 경우에, 세포, 예를 들어, T 세포가 활성화되는 것이 필요하지 않은 벡터를 사용할 수 있다. 일부 상기의 경우에, 세포는 활성화되기 전에 선택 및/또는 형질도입될 수 있다. 따라서, 세포는 세포 배양 이전에 또는 이후에 조작될 수 있고, 일부 경우에는 배양의 적어도 일부와 동시에 또는 그 동안에 조작될 수 있다.

추가 핵산 중에서, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예컨대 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진함으로써 요법의 효능을 개선하기 위한 유전자; 예컨대 생체 내 생존 또는 국소화를 평가하기 위한 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하기 위한 유전자; 문헌[Lupton S. D. et al., Mol . and Cell Biol., 11:6 (1991); and Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]에 기재된 바와 같이 예를 들어 생체 내에서 음성 선택에 세포를 예민하게 만들어 안정성을 개선하기 위한 유전자가 있고; 또한 우성 양성 선택 가능한 마커를 음성 선택 가능한 마커와 융합시켜 유래된 2작용성 선택 가능한 융합 유전자의 용도를 기술하는 문헌[국제 출원 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton et al.]을 참조한다. 예를 들어, 문헌[Riddell et al., 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17열]을 참조한다.

C. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포 제조

일부 구현예에서, 핵산은 이종 기원인데, 즉, 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않으며, 예를 들어, 이는 조작되는 세포 및/또는 상기 세포가 유래된 유기체에서 보통 발견되지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 발생이 아니고, 예컨대 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함해, 자연에서 발견되지 않는 핵산이다.

세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 통상적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프, 또는 림프성 기관으로부터 유래되며, 선천성 또는 적응성 면역 세포와 같은, 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 통상적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 다른 예시적인 세포에는 유도된 다능성 줄기 세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)를 포함한, 다분화능 및 다능성 줄기 세포와 같은 줄기 세포가 포함된다. 세포는 통상적으로 대상체로부터 직접 단리되고/거나 대상체로부터 단리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포에는 T 세포 또는 다른 세포 유형의 하나 이상의 서브세트, 예컨대 전체 T 세포의 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 증폭, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 용량, 항원 특이성, 항원 수용체 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것이 포함된다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 상기 방법 중에는 기성 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 기성 기술에 대해, 세포는 유도된 다능성 줄기세포(iPSC)와 같은 줄기세포 등과 같은 다능성 및/또는 다분화능이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 세포를 단리하고, 세포를 제조, 가공, 배양 및/또는 조작하고, 동결보존 전 또는 후에 동일한 대상체에 이 세포를 재도입하는 것을 포함한다.

T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 아형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(naive T, T_N) 세포, 이펙터 T 세포(effector T cell, T_EFF), 기억 T 세포 및 이의 하위-유형, 예컨대 줄기 세포 기억 T(stem cell memory T, T_SCM), 중앙 기억 T(central memory T, T_CM), 이펙터 기억 T(effector memory T, T_EM) 또는 말단 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 연관 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(regulatory T, Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 있다.

일부 구현예에서, 세포는 자연 살해(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.

일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종 기원인데, 즉, 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않으며, 예를 들어, 이는 조작되는 세포 및/또는 상기 세포가 유래된 유기체에서 보통 발견되지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 발생이 아니고, 예컨대 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함해, 자연에서 발견되지 않는 핵산이다.

일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. CAR과 같은 형질전환 수용체를 암호화하는 핵산의 도입을 위한 세포는, 생물학적 샘플, 예를 들어 대상체로부터 수득되거나 유래된 것과 같은 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는 질병 또는 병태가 있거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.

따라서, 일부 구현예에서 세포는 1차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플에는 대상체에서 직접 채취한 조직, 체액 및 기타 샘플뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전자 조작(예를 들어, 바이러스 벡터를 이용한 형질도입), 세척 및/또는 인큐베이션과 같은 하나 이상의 가공 단계에서 생성된 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 수득된 샘플 또는 가공된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플에는 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀과 같은 체액, 조직 및 장기 샘플(이들로부터 유래된 가공 샘플 포함)이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술 산물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 창자, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁경부, 고환, 난소, 편도 또는 기타 장기 및/또는 이들로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플에는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 맥락에서 자가 및 동종이계 공급원으로부터의 샘플이 포함된다.

일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 세포는 이종성 공급원, 예를 들어 마우스, 랫트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.

일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 단계 및/또는 비친화도 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 실시예에서, 세포는 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용해하거나 제거하기 위해, 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심분리 및/또는 인큐베이션된다. 일부 실시예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예컨대 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 내성에 기초하여 분리된다.

일부 예에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.

일부 구현예에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 가공 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 배치하기 위해 세척한다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 반자동 “플로우-쓰루(flow-through)” 원심 분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 접선 유동 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충제, 예를 들어 Ca⁺⁺/Mg⁺⁺이 없는 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고 이 세포는 배양 배지에서 직접 재현탁된다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예컨대 적혈구를 용해시켜 말초 혈액으로부터 백혈구의 제조 및 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리를 포함한다.

일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어, 표면 단백질, 세포내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마커에 기초한 분리를 위한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역 친화도-기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리에는 하나 이상의 마커, 통상적으로 세포 표면 마커의 세포 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포의 집단의 분리가 포함된다.

상기 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 유지되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일부 실시예에서, 두 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 마커에 기초하여 가장 잘 수행된다.

분리는 특정 마커를 발현하는 특정 세포 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거로 귀결될 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 상기 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재로 귀결될 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 상기 모든 세포의 완전한 제거로 귀결될 필요는 없다.

일부 예에서, 다수 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거친다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는 예컨대 각각 음성 선택을 위해 표적화된 마커에 대해 특이적인 다수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 다수의 마커를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다수의 세포 유형이 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.

예를 들어, 일부 측면에서, 예컨대 하나 이상의 표면 마커를 높은 수준으로 발현하거나 양성인 세포와 같은 T 세포, 예를 들어 CD28⁺, CD62L⁺, CCR7⁺, CD27⁺, CD127⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD45RA⁺ 및/또는 CD45RO⁺ T 세포의 특정 하위 집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.

예를 들어, CD3⁺, CD28⁺ T 세포는 항-CD3/항-CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)를 사용하여 양성 선택될 수 있다.

일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포의 집단에 대한 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포의 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 발현(마커⁺)되거나 상대적으로 보다 높은 수준으로 발현(마커^high)된 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 인큐베이션함으로써 달성된다.

일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단핵구 또는 다른 백혈구, 예컨대 CD14와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4⁺ 또는 CD8⁺ 선택 단계는 CD4⁺ 헬퍼 및 CD8⁺ 세포 독성 T 세포를 분리하는 데 사용된다. 상기 CD4⁺ 및 CD8⁺ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 이펙터(effector) T 세포 하위 집단 상에서 발현되거나 상대적으로 보다 높은 정도로 발현되는 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다.

일부 구현예에서, CD8⁺ 세포는 예컨대 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 이펙터 기억 및/또는 중앙 기억 줄기 세포에 대해 추가로 농축되거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 T(T_CM) 세포의 농축은 효능을 증가시키기 위해, 예컨대 투여 후의 장기간 생존, 증폭 및/또는 생착을 향상하기 위해 수행되며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다. 문헌[Terakura et al. (2012) Blood,1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother . 35(9):689-701]을 참조한다. 일부 구현예에서, T_CM-농축 CD8⁺ T 세포 및 CD4⁺ T 세포의 병용은 효능을 더욱 향상시킨다.

일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8⁺ 말초 혈액 림프구의 CD62L⁺ 및 CD62L^- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여 CD62L^-CD8⁺ 및/또는 CD62L⁺CD8⁺ 분획에 대해 농축되거나 고갈될 수 있다.

일부 구현예에서, 중앙 기억 T(T_CM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 고도의 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, T_CM 세포에 대해 농축된 CD8⁺ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 관점에서, 중앙 기억 T(T_CM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선택을 거친다. 일부 측면에서, 상기 선택은 동시에 수행되며, 다른 관점에서, 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8⁺ 세포의 집단 또는 하위 집단을 제조하는 데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계가 CD4⁺ 세포의 집단 또는 하위 집단을 생성하는 데 또한 사용되어, CD4 기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획 모두가 유지되고, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계 후에 본 방법의 후속 단계에서 사용된다.

구체적인 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은, 음성 및 양성 분획 모두가 유지되는 CD4⁺ 세포의 선택을 거친다. 이어서 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포의 특유한 마커에 기초한 양성 선택을 거치고, 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.

CD4⁺ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 식별하여 나이브, 중앙 기억 및 이펙터 세포(effector cell)로 분류된다. CD4⁺ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4⁺ T 림프구는 CD45RO^-, CD45RA⁺, CD62L⁺, CD4⁺ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 CD4⁺ 세포는 CD62L⁺ 및 CD45RO⁺이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4⁺ 세포는 CD62L^- 및 CD45RO^-이다.

일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4⁺ 세포를 농축하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 통상적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리가 가능하도록 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포의 집단은 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기법을 사용하여 분리되거나 단리된다(문헌[Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ]에서 검토됨).

일부 측면에서, 분리될 세포 샘플 또는 세포 조성물은 작고, 자화 가능한 또는 자성 반응성 물질, 예컨대 자성 반응성 입자 또는 미세입자, 예컨대 상자성 비드(예를 들어, Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 함께 인큐베이션된다. 자성 반응성 물질(예를 들어, 입자)은 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포 또는 세포의 집단에 존재하는 분자(예를 들어, 표면 마커)에 특이적으로 결합하는 결합 파트너(예를 들어, 항체)에 직접 또는 간접적으로 부착된다.

일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특이적인 결합 부재에 결합되는 자성 반응성 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 널리 공지된 많은 자성 반응 물질이 있다. 적합한 자성 입자에는 본 명세서에 참조로 통합된 문헌[Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B]에 기재된 것이 포함된다. 콜로이드 크기의 입자, 예컨대 문헌[Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti et al., 미국 특허 번호 5,200,084]에 기재된 것이 다른 예이다.

인큐베이션은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 다른 시약이 샘플 내의 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 수행된다.

일부 측면에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응성 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌려당겨지고 표지되지 않은 세포로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌려당겨진 세포가 유지되고; 음성 선택의 경우, 끌려당겨지지 않은 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 동안 수행되며, 상기 양성 및 음성 분획은 유지되고 추가적으로 가공되거나 추가적인 분리 단계를 거친다.

특정 구현예에서, 자성 반응성 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 2차 항체- 또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자는 비오틴이 부착된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.

일부 구현예에서, 자성 반응성 입자는 후속적인 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있는다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응성 입자는 세포로부터 제거된다. 세포에서 자화 가능 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체 및 절단 가능한 링커에 접합된 자화 가능 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능 입자는 생분해성이다.

일부 구현예에서, 친화도 기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(magnetic-activated cell sorting, MACS)(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS) 시스템은 자화된 입자가 부착되어 있는 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 외부 자기장의 적용 후에 비 표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 방식으로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 제자리에 유지되는 반면 부착되지 않은 종(species)은 용리된다. 이어서, 상기 제1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리가 방지된 종은 용리 및 회수될 수 있는 상당한 방식으로 해제된다. 특정 구현예에서, 비 표적 세포는 표지되고 이종 세포의 집단으로부터 고갈된다.

특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 본 방법의 단리, 세포 조제, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템은 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각을 수행하는 데 사용된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003, 또는 US 20110003380 A1]에 기재된 바와 같은 시스템이다.

일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합 또는 독립 언어 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가하고/거나 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 다양한 관점을 조정할 수 있게 하는, 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.

일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준으로 세포의 자동 분리를 위해 CliniMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소에는 통합 마이크로 컴퓨터, 자성 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 통합 컴퓨터는 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템에 표준화된 순서로 반복된 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서, 자성 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 컬럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유량을 제어하고, 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충제의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.

일부 측면에서, CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액에 담겨 공급되는 항체 결합 자화 가능 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 조제 백은 배관 세트에 연결되고, 이는 차례로 완충제를 함유한 백 및 세포 수집 백에 연결된다. 배관 세트는 전치 컬럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 배관으로 구성되며 일회용이다. 분리 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 유지되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되지 않고 컬럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되고 컬럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 자기장을 제거한 후 컬럼으로부터 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.

특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, CliniMACS Prodigy 시스템에는 원심 분리에 의한 세포의 자동 세척 및 세포의 분획화가 가능한 세포 가공 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 공급원 세포 산물의 거시적인 층을 식별하여 최적의 세포 분획화 종점을 결정하는 내장 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함될 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 또한 예를 들어, 세포 분화 및 증폭, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버가 포함될 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게 할 수 있고 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Klebanoff et al. (2012) J Immunother . 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang et al. (2012) J Immunother . 35(9):689-701]을 참조한다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유세포 분석을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되고, 여기서 다수의 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 제조 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 FACS 기반 검출 시스템과 조합된 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376] 참조). 두 경우 모두에서, 세포는 다수의 마커로 표지될 수 있으며, 이는 고순도로 명확한 T 세포 서브세트의 단리를 가능하게 한다.

일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과 조합하여 예컨대 제조 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 다수의 마커에 기초하여 양성 및 음성 선택을 동시에 가능하게 한다.

일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전이든 후이든 세포를 동결하는 단계, 예를 들어, 동결보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 이후에 동결 용액에서 현탁된다. 일부 측면에서, 공지된 임의의 다양한 동결 용액 및 매개변수가 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS, 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 상기를 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 배지로 1:1로 희석시킨다. 이어서 세포를 일반적으로 분당 1℃의 속도로 -80℃까지 동결시키고 액체 질소 저장 탱크에 기체상(vapor phase)으로 저장한다.

일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작과 연결하여 또는 그 전에 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 양성, 자극, 활성화 및/또는 번식(propagation)을 포함할 수 있다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰(well), 컬럼, 관, 배관 세트, 밸브, 바이알(vial), 배양 접시, 백(bag) 또는 세포 배양 또는 양성을 위한 다른 용기에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다.

상기 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화시키기 위해 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화 또는 자극할 수 있는 하나 이상의 제제(예를 들어, 리간드)를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 전달 계단식 다단계 반응을 켜거나 개시한다. 상기 제제는 항체, 예컨대 TCR에 특이적인 것, 예를 들어 항-CD3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 조건은 공자극 수용체, 예를 들어 항-CD28을 자극할 수 있는 하나 이상의 제제(예를 들어, 리간드)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제 및/또는 리간드는 비드와 같은 고체 지지체 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합될 수 있다. 선택적으로, 증폭 방법은 (예를 들어, 적어도 약 0.5ng/ml 이상의 농도에서) 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 적어도 약 10단위/mL이다.

일부 측면에서, 인큐베이션은 예컨대 문헌[미국 특허 번호 6,040,177 Riddell et al., Klebanoff et al. (2012) J Immunother . 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82 및/또는 Wang et al. (2012) J Immunother . 35(9):689-701]에 기술된 기술에 따라 수행된다.

일부 구현예에서, T 세포는 배양-개시 조성물 배양보조 세포, 예컨대 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가하고(예를 들어, 생성된 세포의 집단은 증폭될 초기 집단 중 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유하도록); 상기 배양물을 (예를 들어, T 세포 수를 증폭시키기에 충분한 시간 동안) 인큐베이션하여, 증폭된다. 일부 측면에서, 비분할 배양보조 세포는 감마-조사된(gamma-irradiated) PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC에 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열을 방지한다. 일부 측면에서, 배양보조 세포는 T 세포의 집단의 첨가 전에 배양 배지에 첨가된다.

일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 적어도 약 25℃ 이상, 일반적으로 적어도 약 30℃ 이상 및 일반적으로 (약) 37℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분할 EBV 형질전환 림프아구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 배양보조 세포는 임의의 적합한 양으로 제공되며, 예컨대 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율이 적어도 약 10:1 이상으로 제공된다.

구현예에서, 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원 특이적 T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 시토메갈로 바이러스 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 같은 항원에 대해 생성될 수 있다.

Ⅲ. 예시적인 치료 결과 및 치료 결과를 평가하기 위한 방법

본원에 제공된 방법, 조성물, 병용, 용도, 키트 및 제조품의 일부 구현예에서, 제공된 병용 요법은 하기 기재된 바와 같이 요법 또는 치료와 관련된 하나 이상의 임의의 매개변수와 관련된 특징과 같은 하나 이상의 치료 결과를 초래한다. 일부 구현예에서, 방법은 섹션 I에 설명된 바와 같다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 T 세포, 예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포의 노출, 지속성 및 증식의 평가를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 세포, 예를 들어 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법)을 위해 투여된 세포의 기능적 활성 또는 세포 표현형에 있어서의 변화 및/또는 세포의 노출 또는 장기 증폭 및/또는 지속성은 시험관 내(in vitro) 또는 생체 외 시험(ex vivo)에서 T 세포의 특성을 평가하여 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 분석은 본원에 제공된 병용 요법의 투여 전, 동안 또는 후에 T 세포, 예를 들어, T 세포 요법의 기능을 결정하거나 확인하기 위해 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 병용 요법은 병용 요법으로 치료하기 위한 및/또는 병용 요법을 지속하기 위한 대상체 확인을 위한 하나 이상의 선별 단계, 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위한 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가를 위한 단계는 치료를 평가 및/또는 모니터링 및/또는 요법의 추가 또는 잔여 단계의 투여 및/또는 반복 요법을 위한 대상체를 확인하기 위한 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계는 본원에 제공된 병용 요법의 단위 용량, 빈도, 지속 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는 데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 결과의 평가 및/또는 임의의 선별 단계는 제공된 병용 요법, 예를 들어 T 세포 요법(예를 들어, CAR 발현 T 세포) 및/또는 화합물 A의 투여의 하나 이상의 단계의 투여 전, 중, 수행 과정 중 또는 후에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 중 어느 하나를 수행하기 전, 중, 수행 과정 중, 또는 후에 평가가 이루어진다. 일부 구현예에서, 평가는 본원에 제공된 방법을 수행하기 전에 이루어진다. 일부 구현예에서, 평가는 본원에 제공된 방법의 하나 이상의 단계를 수행한 후에 이루어진다. 일부 구현예에서, 평가는 예를 들어, 병용 요법을 받기에 적합하고/거나 민감한 환자를 선별 및 확인하기 위해 제공된 병용 요법의 하나 이상의 단계의 투여 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 중간 또는 최종 치료 결과를 평가하기 위해, 예를 들어, 치료의 효능을 결정하고/거나 치료를 계속하거나 반복할지 여부를 결정하고/거나 병용 요법의 나머지 단계를 투여할지 여부를 결정하기 위해, 제공된 병용 요법의 하나 이상의 단계의 투여 중, 투여 과정 중 또는 투여 후에 평가이 수행된다.

일부 구현예에서, 치료 결과는 면역 기능, 예를 들어 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포 및/또는 체내 내인성 T 세포의 면역 기능의 개선을 포함한다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과는, 대상체에 투여된 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-T 세포와 관련된 특징과 같은 향상된 T 세포 증식, 향상된 T 세포 기능적 활성, 면역 세포 표현형 마커 발현의 변화를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과는 감소된 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담, 개선된 임상 결과 및/또는 향상된 치료 효능을 포함한다.

일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계는 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포의 생존 및/또는 기능을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계는 사이토카인 또는 성장 인자의 수준을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계는 질병 부담 및/또는 개선을 평가하는 것, 예를 들어 종양 부담 및/또는 임상 결과를 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계 중 어느 하나는 임의의 평가 방법 및/또는 본원에 기재되고/거나 당업계에 공지된 분석을 포함할 수 있고, 예를 들어 병용 요법의 하나 이상의 단계의 투여 전, 중, 투여 과정 중 또는 투여 후에 1회 이상 수행될 수 있다. 본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서 평가될 수 있는 치료 결과와 관련된 매개변수의 예시적인 세트는 말초 혈액 면역 세포 집단 프로파일 및/또는 종양 부담을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 방법은 대상체에서 세포 요법의 효능에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 화합물 A를 이용한 방법에서 세포의 단위 용량의 투여 이후 대상체에서 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR-발현) 세포의 지속성, 증폭, 및/또는 존재는 화합물 A의 투여를 하지 않은 방법을 통해 달성된 것과 비교하여 더 크다. 일부 구현예에서, 투여된 T 세포 요법, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 대상체에서의 증폭 및/또는 지속성은 T 세포 요법이 화합물 A의 부재 하에 대상체에게 투여되는 방법과 비교하여 평가된다. 일부 구현예에서, 본 방법은, T 세포 요법이 화합물 A의 부재 하에서 대상체에 투여되는 방법과 비교하여, 대상체에서 투여된 T 세포가 증가되거나 연장된 증폭 및/또는 지속성을 나타내는 결과를 가져온다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량이 화합물 A의 부재 하에서 대상체에 투여되는 방법과 비교하여, 대상체에서 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담을 감소시킨다. 일부 구현예에서 화합물 A의 투여는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량이 화합물 A의 부재 하에서 대상체에 투여되는 방법과 비교하여, 대상체에서 아골수(blast marrow)를 감소시킨다. 일부 구현예에서 화합물 A의 투여는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량이 화합물 A의 부재 하에서 대상체에 투여되는 방법과 비교하여, 임상 결과, 예를 들어, 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존율(PFS) 및 전체 생존율(OS)의 향상을 초래한다.

일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법의 하나 이상의 단계의 투여 전에 선별될 수 있다. 예를 들어, 대상체는 병용 요법의 투여 전에, 병용 요법 투여에 대한 적합성, 반응성 및/또는 민감도를 결정하기 위해 질병의 특성 및/또는 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담에 대해 선별될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 및/또는 선별 단계는 본원에 제공된 병용 요법의 단위 용량, 빈도, 지속 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는 데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 병용 요법의 나머지 단계를 받을 대상체를 결정 및 식별하고/거나 요법의 효능을 모니터링하기 위해 병용 요법의 단계 중 하나의 투여 후에 선별될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여된 T 세포의 수, 수준 또는 양 및/또는 투여된 T 세포의 증식 및/또는 활성은 화합물 A의 투여 전 및/또는 투여 후에 평가된다.

일부 구현예에서, 상이한 평가 시점, 상이한 조건, 기준점 및/또는 상이한 대상체에서의 매개변수 또는 결과의 수준, 수치 또는 측정치에 비해 동일한 매개변수 또는 결과의 수준, 수치 또는 측정치에 있어서 변화 및/또는 변경, 예를 들어 증가, 상승, 하락 또는 감소가 결정되거나 평가된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 특정 매개변수, 예를 들어, 샘플 내 조작된 T 세포 갯수의 배수 변화(예를 들어, 증가 또는 감소)는 상이한 조건의 동일한 매개변수와 비교하여, 예를 들어, 화합물 A의 투여 전 또는 후에 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 둘 이상의 매개변수의 수준, 수치 또는 측정치가 결정되고 상대적 수준이 비교된다. 일부 구현예에서, 매개변수의 결정된 수준, 수치 또는 측정치를 대조군 샘플 또는 처리되지 않은 샘플로부터의 수준, 수치 또는 측정치와 비교한다. 일부 구현예에서, 매개변수의 결정된 수준, 수치 또는 측정치를 동일한 대상체의 샘플의 그러나 상이한 시점에서의 수준과 비교한다. 개별 매개변수의 정량화에서 수득된 수치는 예를 들어 다중 매개변수 분석을 사용하여 매개변수의 수준, 수치 또는 측정치에 산술적 또는 논리적 연산을 형성함으로써 질병 평가의 목적을 위해 조합될 수 있다. 일부 구현예에서, 둘 이상의 특정 매개변수의 비율을 계산할 수 있다.

A. T 세포 노출, 지속성 및 증식

일부 구현예에서, 선별 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위해 평가될 수 있는 매개변수를 포함한, 요법 또는 치료 결과와 관련된 매개변수는, T 세포, 예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포의 노출, 지속성 및 증식의 평가이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 세포, 예를 들어 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법)을 위해 투여된 세포의 기능적 활성 또는 세포 표현형에 있어서의 변화 및/또는 세포의 노출 또는 장기 증폭 및/또는 지속성 증가는 시험관 내(in vitro) 또는 생체 외 시험(ex vivo)에서 T 세포의 특성을 평가하여 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 분석은 본원에 제공된 병용 요법의 하나 이상의 단계 투여 전 또는 후에 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법에 사용된 T 세포의 기능을 결정하거나 확인하기 위해 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 예컨대 시간에 따른 증폭 및/또는 지속성을 촉진함으로써 세포, 예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포에 대한 대상체의 노출을 촉진하도록 설계된다. 일부 구현예에서, T 세포 요법은 화합물 A의 부재 하에서 대상체에 투여되는 방법과 비교하여, 대상체에서 증가되거나 연장된 증폭 및/또는 지속성을 나타낸다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 투여된 세포에 대한 대상체의 노출을 증가(예를 들어, 시간에 따른 세포 수 또는 지속 기간의 증가)시키고/거나 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법의 효능 및 치료 결과를 향상시킨다. 일부 측면에서, 본 방법은 재조합 수용체를 발현하는 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포에 대한 더 많은 및/또는 더 오랜 노출은 다른 방법에 비해 치료 결과를 향상시킨다는 점에서 유리하다. 상기 결과는 중증의 종양 부담을 가진 개인에게서 조차 환자의 생존 및 완화를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 화합물 A의 부재 하에서 T 세포 단독으로 투여와 비교하여 대상체에서 세포, 예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포에 대한 노출의 최대치, 총 수, 및/또는 기간을 증가시킬 수 있다. 일부 측면에서, 높은 질병 부담(및 따라서 보다 많은 양의 항원) 및/또는 보다 공격적이거나 내성이 있는 B 세포 악성종양의 맥락에서, 화합물 A의 투여는, 세포의 증폭 및/또는 지속성을 방해할 수 있는 면역 억제, 면역성 결여 및/또는 탈진을 초래할 수 있는 동일한 맥락에서 화합물 A의 부재 하에 T 세포 단독으로 투여와 비교하여 효능을 향상시킨다.

일부 구현예에서, T 세포의 투여 이후 및 화합물 A의 투여 이전, 도중 및/또는 이후 대상체 내 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR 발현 세포)의 존재 및/또는 양을 검출한다. 일부 측면에서, 정량적 PCR(qPCR)을 사용하여 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 샘플(예를 들어, 질병 부위, 예를 들어, 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR 발현 세포)의 양을 평가한다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA 마이크로그램, 예를 들어 샘플로부터 수득된 총 DNA 당 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 DNA 또는 플라스미드의 복제본(copies)로 또는 샘플의, 예를 들어, 혈액 또는 혈청의 마이크로리터당 수용체 발현(예를 들어, CAR 발현) 세포의 수로, 또는 샘플의 마이크로리터당 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당으로 정량화된다.

일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포의 투여 이후 4, 7, 10, 14, 18, 21, 24, 27 또는 28일 이상 후에 대상체에서 검출된다. 일부 측면에서, 세포는 T 세포 투여 후 2, 4 또는 6주 또는 2, 4 또는 6주 이상 후 또는 3, 6 또는 12, 18 또는 24 또는 30 또는 36개월 후 또는 1, 2, 3, 4, 5년 이상 후에 검출된다.

일부 구현예에서, 본 방법에 의해, T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포 및/또는 화합물 A의 투여 이후, 대상체에서 수용체 발현 세포(예를 들어, CAR 발현 세포)의 지속성은 면역 요법 단독으로 투여, 예를 들어, 화합물 A의 부재 하에서 T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포의 투여를 포함하는 것과 같은 다른 방법에 의해 달성될 수 있는 것과 비교하여 더 크다.

증폭 및/또는 지속성을 나타내는, 노출, 예를 들어, 세포(예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포) 수는, 대상체가 노출된 최대 세포 수, 특정 수 또는 백분율 이상의 검출 가능한 세포 또는 세포의 지속 기간, 시간에 따른 세포 수에 대한 곡선 아래 면적 및/또는 이들의 조합 및 이들의 지표의 관점에서 명시될 수 있다. 특정 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예컨대 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총 양에 비해 재조합 수용체를 암호화하는 핵산의 복제수를 검출하기 위해 qPCR과 같은 공지 방법, 및/또는 일반적으로 수용체에 특이적인 항체를 이용하여 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석법을 사용하여 상기 결과를 평가할 수 있다. 세포 기반 분석법 또한 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현하거나 질병 또는 병태의 세포에 대해 반응, 예를 들어 세포 독성 반응을 유도하고 및/또는 중화하고 및/또는 이에 결합할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하기 위해 사용될 수 있다.

일부 측면에서, 세포에 대한 대상체의 노출 증가는 세포의 증폭 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포(예를 들어 CAR 발현 세포)를 발현하는 수용체는 T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포)의 투여 이후, 및/또는 화합물 A의 투여 이후 대상체 내에서 증폭한다. 일부 측면에서, 본 방법은 화합물 A를 투여하는 단계의 부재 하에서, T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포의 투여를 수반하는 방법과 같은 다른 방법에 비해 세포의 더 많은 증폭을 초래한다.

일부 측면에서, 본 방법은, 예를 들어, 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같이 투여된 세포의 고도의 생체 내 증식을 초래한다. 일부 측면에서, 세포의 높은 피크 비율이 검출된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포 및/또는 화합물 A의 투여 이후에 피크 또는 최대 수준에서, 대상체의 혈액 또는 질병 부위 또는 이의 백혈구 분획, 예를 들어, PBMC 분획 또는 T 세포 분획에서, 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80% 또는 적어도 약 90%가 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 발현한다.

일부 구현예에서, 본 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 기관 또는 조직에서, DNA 마이크로그램당 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 복제본(copies) 이상의 핵산 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 전체 수당, 단핵 세포 전체 수당, T 세포 전체 수당 또는 마이크로리터 중 전체 수당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 또는 0.9의 수용체 발현, 예를 들어, CAR 발현 세포의 최대 농도를 초래한다. 일부 구현예에서, 수용체를 발현하는 세포는, T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포 및/또는 화합물 A의 투여 이후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48 또는 52주 동안 또는 상기 투여 이후 1, 2, 3, 4 또는 5년 또는 그 이상 동안 대상체의 혈액에서 전체 PBMC의 적어도 10, 20, 30, 40, 50 또는 60% 및/또는 상기 수준으로 검출된다.

일부 측면에서, 본 방법은 예를 들어, 대상체의 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어, 종양 샘플에서 DNA 마이크로그램당 재조합 수용체(예를 들어, CAR)을 암호화하는 핵산의 복제본(copies)에 있어서 적어도 2배, 적어도 4배, 적어도 10배 또는 적어도 20의 증가를 초래한다.

일부 구현예에서, 수용체를 발현하는 세포는, T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포)의 투여 이후 또는 화합물 A의 투여 이후 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60일 또는 그 이상일에, 또는 T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포) 및/또는 화합물 A의 투여 이후 적어도 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24주 또는 그 이상 동안, 예를 들어, qPCR 또는 유세포 분석 기반 검출 방법과 같은 명시된 방법에 의해 대상체의 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어, 종양 샘플에서 검출 가능하다.

일부 측면에서, 적어도 약 1 x 10², 적어도 약 1 x 10³, 적어도 약 1 x 10⁴, 적어도 약 1 x 10⁵, 또는 적어도 약 1 x 10⁶ 또는 적어도 약 5 x 10⁶ 또는 적어도 약 1 x 10⁷ 또는 적어도 약 5 x 10⁷ 또는 적어도 약 1 x 10⁸개의 재조합 수용체 발현, 예를 들어, CAR 발현 세포, 및/또는 마이크로리터당 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000개의 재조합 수용체 발현 세포, 예를 들어, 마이크로리터당 적어도 10개가 대상체 또는 이의 체액, 혈장, 혈청, 조직 또는 구획에서, 예컨대 이의 혈액, 예를 들어, 말초 혈액, 또는 질병 부위, 예를 들어, 종양에서 검출 가능하거나 존재한다. 일부 구현예에서, 세포의 상기 수 또는 농도가 T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포)의 투여 이후 및/또는 화합물 A의 투여 이후 적어도 약 20일, 적어도 약 40일, 또는 적어도 약 60일, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월, 또는 적어도 2 또는 3년 동안 대상체에서 검출 가능하다. 상기 세포 수는 유세포 분석 기반 또는 정량적 PCR 기반 방법 및 공지된 방법을 이용한 총 세포 수에 대한 추정에 의해 검출될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Brentjens et al., Sci Transl Med . 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828]을 참조한다.

일부 측면에서, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서, 면역 조직 화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같이, 100개의 세포당 재조합 수용체를 암호화하는 핵산의 복제수, 예를 들어, 벡터 복제수는, 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포) 및/또는 화합물 A의 투여 이후 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주 또는 적어도 약 6주, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년 이후에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1, 또는 적어도 10이다. 일부 구현예에서, 유전체 DNA의 마이크로그램당 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 벡터의 복제수는, T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포), 또는 화합물 A의 투여 이후 약 1주, 약 A 주, 약 3주 또는 적어도 약 4주의 시점에, 또는 상기 투여 이후에 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년의 시점에 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000, 또는 적어도 10,000, 또는 적어도 15,000, 또는 적어도 20,000이다.

일부 측면에서, 세포에 의해 발현된 수용체(예를 들어, CAR)는, 세포의 투여 이후, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포), 및/또는 화합물 A의 투여 개시 이후, 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 또는 3년 이상의 시점에, 대상체, 이의 혈장, 혈청, 혈액, 조직 및/또는 질병 부위, 예를 들어, 종양 부위에서 정량적 PCR(qPCR) 또는 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.

일부 구현예에서, T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포) 및/또는 화합물 A의 투여 이후 시간에 따라 대상체의 체액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 기관 및/또는 질병 부위(예를 들어, 종양 부위)에서 수용체-(예를 들어, CAR-)발현 세포의 농도에 대한 곡선 아래 면적(AUC)은 대상체에 화합물 A의 투여 부재 하에서 T 세포(예를 들어, CAR 발현 T 세포)를 투여하는 다른 투여 요법을 통해 달성한 것과 비교하여 더 크다.

일부 측면에서, 본 방법은, 예를 들어, 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같이 투여된 세포의 고도의 생체 내 증식을 초래한다. 일부 측면에서, 세포의 높은 피크 비율이 검출된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, CAR 발현 T 세포 및/또는 화합물 A의 이후에 피크 또는 최대 수준에서, 대상체의 혈액, 혈장, 혈청, 조직 또는 질병 부위 또는 이의 백혈구 분획, 예를 들어, PBMC 분획 또는 T 세포 분획에서, 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80% 또는 적어도 약 90%가 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 발현한다.

일부 측면에서, 화합물 A가 투여된 대상체에서 단위 용량의 세포의 증가되거나 연장된 증폭 및/또는 지속성은 대상체의 종양 관련 결과에서의 이점과 관련된다. 일부 구현예에서, 종양 관련 결과에는 대상체의 종양 부담 감소 또는 아골수의 감소가 포함된다. 일부 구현예에서, 종양 부담은 본 방법 투여 후 적어도 (약) 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 감소된다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 체적, 종양 질량 및/또는 종양 부하 또는 규모는 세포의 단위 용량의 투여 이후 화합물 A의 투여를 수반하지 않는 방법으로 치료된 대상체에 비해 적어도 (약) 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 감소된다.

B. T 세포 기능적 활성

일부 구현예에서, 선별 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위해 평가될 수 있는 매개변수를 포함한, 요법 또는 치료 결과와 관련된 매개변수에는 T 세포의 활성, 표현형, 증식 또는 기능 중 하나 이상이 포함된다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하기 위해 당업계에 공지된 임의의 분석을 이용할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 및/또는 화합물 A의 투여 전 및/또는 후에, 조작된 세포 집단의 생물학적 활성이, 예를 들어, 다수의 공지된 임의의 방법으로 측정된다. 평가 매개변수는 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외 시험에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포를 특이적으로 결합하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy , 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 분석과 같은 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정할 수 있다.

일부 구현예에서, 재조합 발현(예를 들어, CAR) T 세포와 같은 T 세포는 화합물 A의 투여 전 및/또는 후에 상기 T 세포가 탈진의 특징들을 나타내는지 평가 또는 결정하기 위해 평가될 수 있다. 일부 경우에, 탈진은 T 세포 기능의 손실, 예컨대 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 감소 또는 하락, 예컨대 사이토카인을 생산하거나 표적 항원에 대하여 세포 용해 활성을 촉진하는 능력의 감소 또는 하락을 모니터링하여 평가할 수 있다. 일부 경우에, 탈진은 또한 탈진 표현형과 관련된 T 세포(예를 들어, CD4 및/또는 CD4 T 세포) 상에서 표면 마커의 발현을 모니터링하여 평가할 수 있다. 탈진 마커 중에는 PD-1, CTLA-4, LAG-3 및 TIM-3과 같은 억제성 수용체가 있다.

일부 구현예에서, 상기 활성의 감소 또는 하락은 대상체에 대한 투여 이후 및/또는 항원에 대한 장기간 노출 이후 시간에 따라 관찰된다.

특정 구현예에서, 제공된 방법은 (i) 상기 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 초래하기에 및 (ii) 상기 탈진 표현형의 시작을 예방, 억제 또는 지연시키고/거나 상기 탈진 표현형을 역전시키기에 효과적이다. 일부 구현예에서, 상기 양, 기간 및/또는 빈도는 (i) 상기 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 초래하기에 및 (ii) 상기 탈진 표현형의 시작을 예방, 억제 또는 지연시키기에 효과적이다. 다른 구현예에서, 상기 양, 기간 및/또는 빈도는 (i) 상기 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 초래하기에 및 (ii) 상기 탈진 표현형의 시작을 예방, 억제 또는 지연시키고 상기 탈진 표현형을 역전시키기에 효과적이다.

일부 구현예에서, T 세포 또는 T 세포의 집단과 관련하여 탈진 표현형은: 동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, T 세포 또는 T 세포들 상의 표면 발현의 수준 또는 정도의, 또는 하나 이상의 탈진 마커, 선택적으로 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탈진 마커 중 표면 발현을 나타내는 상기 T 세포의 집단의 백분율의 증가; 또는 동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, 항원 또는 항원 수용체 특이적 제제에 노출시 상기 T 세포 또는 T 세포의 집단이 나타내는 활성의 수준 또는 정도의 감소. T 세포 또는 T 세포들 상의 표면 발현의 수준 또는 정도의, 또는 하나 이상의 탈진 마커, 선택적으로 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탈진 마커 중 표면 발현을 나타내는 상기 T 세포의 집단의 백분율의 증가; 또는 동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, 항원 또는 항원 수용체 특이적 제제에 노출시 상기 T 세포 또는 T 세포의 집단이 나타내는 활성의 수준 또는 정도의 감소를 포함한다.

특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 하나 이상의 사이토카인, 예컨대 CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF 및 TNFα의 발현 및/또는 분비를 분석하고/거나 세포 용해 활성을 평가하여 측정한다.

일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능에 대한 분석법에는 ELISPOT, ELISA, 세포 증식, 세포 독성 림프구(CTL) 분석, T 세포 에피토프, 항원 또는 리간드에 대한 결합, 또는 세포내 사이토카인 염색, 증식 분석, 림포카인 분비 분석, 직접적인 세포 독성 분석 및 한계 희석 분석이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, T 세포의 증식 반응은, 예를 들어, 이의 DNA로 ³H-티미딘, BrdU(5-브로모-2’-데옥시우리딘) 또는 2’-데옥시-5-에티닐우리딘(EdU)의 통합에 의해 또는 카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙신이미딜 에스테르(CFSE), CellTrace Violet, 또는 막 염료 PKH26과 같은 염료를 이용한 염료 희석 분석에 의해 측정될 수 있다.

일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것에는 T 세포로부터 사이토카인 생산을 측정하는 것 및/또는 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예를 들어, 혈장, 혈청, 혈액 및/또는 조직 샘플, 예를 들어, 종양 샘플에서 사이토카인의 생산을 측정하는 것이 포함된다. 일부 경우에, 상기 측정된 사이토카인에는 인터루킨-2(IL-2), 인터페론-감마(IFNγ), 인터루킨-4(IL-4), TNF-알파(TNFα), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-10(IL-10), 인터루킨-12(IL-12), 과립구-대식 세포 집락-자극 인자(GM-CSF), CD107a 및/또는 TGF-베타(TGFβ)가 포함될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 사이토카인 측정 분석법은 널리 공지되어 있으며, ELISA, 세포내 사이토카인 염색, 세포 계량 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 관련 사이토카인에 대해 반응하는 세포가 테스트 샘플의 존재 하에 반응성(예를 들어, 증식)이 테스트되는 생체 분석을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것에는 세포 표현형, 예를 들어, 특정 세포 표면 마커의 발현을 평가하는 것이 포함된다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포는 T 세포 활성화 마커, T 세포 탈진 마커, 및/또는 T 세포 분화 마커의 발현에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 투여 전에 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 세포 요법 및/또는 화합물 A의 투여 동안 또는 후에 평가된다. 평가을 위한 T 세포 활성화 마커, T 세포 탈진 마커 및/또는 T 세포 분화 마커에는 특정 서브세트의 T 세포, 예를 들어, CD25, CD38, 인간 백혈구 항원-DR(HLA-DR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62L^low, CCR7^low, CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), 림프구 활성화 유전자 3 단백질(LAG-3), T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 단백질 3(TIM-3), 세포 독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4), B 및 T 림프구 감쇠인자(B and T lymphocyte attenuator, BTLA) 및/또는 T-세포 면역글로불린 및 면역수용체 티로신 기반 억제성 모티프 도메인(TIGIT)에 대해 공지된 임의의 마커가 포함된다(예를 들어, 문헌[Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792] 참조). 일부 구현예에서, 탈진 마커는 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, BTLA, 2B4, CD160, CD39, VISTA, 및 TIGIT 중 임의의 하나 이상이다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25, PD-1 및/또는 TIM-3이다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25이다.

일부 측면에서, 발현 수준을 검출하는 것에는 시험관 내 분석을 수행하는 것이 포함된다. 일부 구현예에서, 시험관 내 분석은 면역분석, 앱타머(aptamer) 기반 분석, 조직학적 또는 세포학적 분석 또는 mRNA 발현 수준 분석이다. 일부 구현예에서, 각각의 하나 이상의 인자, 이펙터, 효소 및/또는 표면 마커 중 하나 이상에 대한 매개변수(들)는 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역블로팅, 면역침강법, 방사선면역분석(RIA), 면역 염색법, 유세포 분석법, 표면 플라스몬 공명(SPR), 화학발광 분석, 측면 유동 면역분석(lateral flow immunoassay), 억제 분석 또는 친화도 분석에 의해 검출된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 및/또는 표면 마커의 검출은 적어도 하나의 생체마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약을 사용하여 결정된다. 일부 경우에, 결합 시약은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 앱타머 또는 핵산 프로브이다.

일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 CAR T 세포를 순환시키는 수준을 증가시킨다.

C. 반응, 효능 및 생존

일부 구현예에서, 선별 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위해 평가될 수 있는 매개변수를 포함한, 요법 또는 치료 결과와 관련된 매개변수에는 종양 또는 질병 부담이 포함된다. T 세포 요법(예를 들어, CAR-발현 T 세포)과 같은 면역요법 및 화합물 A의 투여는 대상체에서 질병 또는 병태의 확장 또는 부담을 감소 또는 예방할 수 있다. 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양인 경우, 본 방법은 일반적으로 골수 또는 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양에서 종양 크기, 규모, 전이, 아세포(blast)의 백분율을 감소시키고/거나 예후 또는 생존 또는 종양 부담과 관련된 다른 증상을 개선한다.

일부 측면에서, 제공된 방법, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물에 부합되는 투여는 일반적으로 대상체에서 질병 또는 병태의 증폭 또는 부담을 감소시키거나 방지한다. 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양인 경우, 본 방법은 일반적으로 골수 또는 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양에서 종양 크기, 규모, 전이, 아세포(blast)의 백분율을 감소시키고/거나 예후 또는 생존 또는 종양 부담과 관련된 다른 증상을 개선한다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 T 세포 요법(예를 들어 CAR 발현 T 세포)과 같은 면역 요법이 화합물 A의 투여없이 제공되는 다른 방법에 비해 치료된 대상체에서 종양 부담의 감소를 초래한다. 실제로 병용 요법을 받는 모든 대상체에서 종양 부담이 감소될 필요는 없으나, 예컨대 상기 병용 요법으로 치료받은 대상체의 대다수가 종양 부담의 감소를 나타내는, 예컨대 병용 요법으로 치료받은 대상체의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상이 종양 부담의 감소를 나타내는 임상 데이터에 근거하여, 치료받은 대상체에서 종양 부담은 평균적으로 감소된다.

질병 부담은 대상체 내에서 또는 종양 또는 예를 들어, 전이를 나타내는 다른 위치의 기관 또는 조직과 같은 대상체의 기관, 조직 또는 체액 내에서 질병이 있는 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액학적 악성 종양의 맥락에서 혈액, 림프 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 부담은 종양의 질량, 전이의 수 또는 범위 및/또는 골수에 존재하는 아세포의 백분율을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 골수종, 림프종 또는 백혈병을 가지고 있다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수 내 잔류 백혈병의 평가에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 비호지킨 림프종(NHL), 급성 림프모구 백혈병(ALL), 만성 림프성 백혈병(CLL), 또는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 MM 또는 DBCBL을 가지고 있다.

일부 측면에서, NHL을 갖는 대상체와 같은 대상체의 반응 속도는 루가노 기준(Lugano criteria)에 기초한다. (Cheson et al., (2014) JCO ., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin. Oncol . 4(1):5). 일부 측면에서, 반응 평가는 임상적, 혈액학적 및/또는 분자적 방법 중 어느 하나를 활용한다. 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 적절한 것으로 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및/또는 CT의 사용을 수반한다. PET-CT 평가는 FDG-친화성 림프종(FDG-avid lymphoma)에 대한 플루오로데옥시글루코스(fluorodeoxyglucose, FDG)의 사용을 더 포함할 수 있다. 일부 측면에서, PET-CT가 FDG-친화성 조직 구조에서 반응을 평가하는 데 사용될 경우, 5점 척도를 사용할 수 있다. 일부 측면에서, 5점 척도는 다음 기준을 포함한다: 1, 바탕 위 흡수 없음; 2, 흡수 ≤ 종경막; 3, 흡수 > 종경막이나 ≤ 간; 4, 적당히 흡수 > 간; 5, 간 및/또는 새로운 병변에서보다 현저히 많은 흡수; X, 림프종과 관련이 있을 것 같지 않은 새로운 영역 흡수.

일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 완전 반응은 다양한 측정 가능한 부위에서의 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 부위는 림프절 및 림프 외 부위를 포함하며, 여기서 CR은 PET-CT가 사용될 경우 5점 척도에서 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기재된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 많거나 비장 또는 골수 내 활성화(예를 들어, 화학 요법 또는 골수성 콜로니 자극 인자 사용)가 있는 왈데이어 고리(Waldeyer’s ring) 또는 결절 외 부위에서, 흡수가 정상 종격막 및/또는 간에서 보다 더 많을 수 있다. 상기 상황에서, 조직이 많은 생리적 흡수를 하더라도 초기 관여 부위에서의 흡수가 주변 정상 조직보다 더 많지 않으면 완전한 대사 반응이 유추될 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 CR은 질병 및 표적 결절/결절의 집합체의 림프 외 부위가 병변의 가장 긴 횡방향 직경(LDi)에서 ≤ 1.5 cm까지 퇴화해서는 안되는 것으로 설명된다. 추가 평가 부위는 골수를 포함하며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 골수에서 FDG-친화성 질병의 증거가 부족함을 나타내야 하고, CT 기반 평가는 정상적인 형태를 나타내야 하며, 불명확한 경우 IHC 음성이어야 한다. 추가 부위는 정상으로 회귀해야 하는 기관 확대의 평가를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, 이는 CR의 경우에는 없어야 한다(Cheson et al., (2014) JCO ., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin . Oncol . 4(1):5).

일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 부분 반응(PR)은 다양한 측정 가능한 부위에서의 부분적인 대사 반응 및/또는 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 부위는 림프절 및 림프 외 부위를 포함하며, 여기서 PR은 PET-CT가 사용될 경우 기준선 및 잔류 질량(들)의 임의의 크기와 비교하여 섭취가 감소된 4 또는 5의 점수로 기재된다. 잠정적으로, 상기 발견은 반응하는 질병을 나타낼 수 있다. 치료 말기에, 상기 발견은 잔류 질병을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6개의 측정 가능한 표적 결절 및 결절 외 부위의 SPD에서 ≥50% 감소로 설명된다. 병변이 CT에서 측정하기에 너무 작은 경우, 5 mm × 5 mm가 기본 값으로 할당되고; 병변이 더 이상 보이지 않는 경우, 상기 값은 0 mm × 0 mm이며; 결절이 >5 mm × 5 mm이나 정상보다 더 작은 경우, 실제 측정치가 계산에 사용된다. 추가 평가 부위는 골수를 포함하며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 기준선(허용된 화학 요법으로부터의 반응 변화와 양립 가능한 확산 흡수)과 비교하여 감소되나 정상 골수에서의 흡수보다 더 많은 잔류 흡수를 나타내야 한다. 일부 측면에서, 결절 반응의 맥락에서 골수에서 지속적인 병소의 변화가 있는 경우, MRI 또는 생검법 또는 간격 검사로 추가 평가를 하는 것이 고려되어야 한다. 일부 측면에서, 추가 부위는 기관 확대의 평가를 포함할 수 있으며, 비장은 길이에 있어 정상 이상으로 >50%까지 퇴화되었어야 한다. 일부 측면에서, 비측정 병변 및 새로운 병변이 평가되고, PR의 경우 부재/정상, 퇴화되어야 하나 증가해서는 안된다. 무반응/안정한 질병(SD) 또는 진행성 질병(PD)도 PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 사용하여 측정할 수 있다. (Cheson et al., (2014) JCO ., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin . Oncol . 4(1):5).

일부 측면에서, 무진행 생존(progression-free survival, PFS)은 대상체가 질병을 갖고 살지만 악화되지 않는 B 세포 악성 종양과 같은 질병의 치료 중 및 치료 후의 시간 길이로 설명된다. 일부 측면에서, 객관적 반응(objective response, OR)은 측정 가능한 반응으로 설명된다. 일부 측면에서, 객관적 반응률(objective response rate, ORR)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 비율로 설명된다. 일부 측면에서, 전체 생존(overall survival, OS)은 질병으로 진단된 대상체가 여전히 살아 있는, B 세포 악성 종양과 같은 질병에 대한 치료 시작 또는 진단일 중 하나로부터의 시간 길이로 설명된다. 일부 측면에서, 이벤트 없는 생존(event-free survival, EFS)은 치료가 방해 또는 지연되도록 의도된 특정 합병증 또는 이벤트 없는 채로 대상체가 존속하는 치료 후 B 세포 악성 종양 말기 동안 시간의 길이로 설명된다. 상기 이벤트는 뼈에까지 퍼지는 B 세포 악성 종양으로부터의 뼈 통증과 같은 특정 증상의 개시 또는 B 세포 악성 종양의 재발 또는 죽음을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 반응 기간(duration of response, DOR)의 측정은 종양 반응의 문서화에서 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하기 위한 매개변수에는 오래 지속되는 반응, 예를 들어, 요법 개시로부터 일정 기간 후에 지속되는 반응이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 오래 지속되는 반응은 요법 개시 후 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월에서의 반응률로 표시된다. 일부 구현예에서, 반응은 3개월 또는 6개월보다 더 오랫동안 지속된다.

일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적인 종양 반응을 결정하기 위해 이용된다. (Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.) 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변을 위한 객관적인 종양 반응을 결정하기 위해 이용된다. 일부 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 바와 같은 완전 반응은 모든 표적 병변의 소멸로 설명되고, 임의의 병리적 림프절(표적이건 비표적이건)이 단축에서 <10 mm까지 축소되어야 한다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 바와 같은 부분 반응은 기준선 합계 직경을 기준으로 하여, 표적 병변의 직경의 합계에서 30% 이상의 감소로 설명된다. 다른 관점에서, 진행성 질병(PD)은 연구 중 가장 작은 합계를 기준으로 하여(이는 상기 값이 연구 중 가장 작은 경우 기준선 합계를 포함함) 표적 병변의 직경의 합계에서 20% 이상의 증가로 설명된다. 20%의 상대적 증가 외에, 합계는 5mm 이상의 절대적인 증가를 또한 입증해야 한다(일부 측면에서, 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행성으로 간주된다). 다른 관점에서, 안정한 질병(stable disease, SD)은 연구 중인 가장 작은 합계 직경을 기준으로 하여, PR에 적격인 충분한 축소도 없고, PD에 적격인 충분한 증가도 없는 것으로 설명된다.

MM의 경우, 질병 부담의 정도를 평가하는 예시적인 매개변수는 클론성 형질 세포의 수(예를 들어, 골수 생검에서 >10% 또는 다른 조직; 형질세포종으로부터의 생검에서 임의의 양), 혈청 또는 소변 중 하나에서 단클론성 단백질(파라단백질)의 존재, 형질 세포 장애와 관련된 것으로 여겨지는 말단 기관 손상의 증거(예를 들어, 고칼슘혈증(교정 칼슘 > 2.75mmol/l); 골수종에 기인하는 신장 기능 부전; 빈혈(헤모글로빈 < 10g/dl); 및/또는 뼈 병변(압박 골절을 동반한 용해성 병변 또는 골다공증)과 같은 매개변수를 포함한다.

DLBCL의 경우, 질병 부담의 정도를 평가하는 예시적인 매개변수는 세포 형태(예를 들어, 중심아세포, 면역아세포 및 역형성 세포), 유전자 발현, miRNA 발현 및 단백질 발현(예를 들어, BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC 및 p21의 발현)과 같은 매개변수를 포함한다.

일부 측면에서, CLL을 가진 대상체와 같은 대상체에서의 반응율은 만성 림프구성 백혈병에 대한 국제 워크숍(International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia, IWCLL) 반응 기준에 기초한다(Hallek, et al ., Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456). 일부 측면에서, 상기 기준은, 일부 측면에서 면역 표현형에 의한 말초 혈액 클론성 림프구의 부재, 림프샘 장애(lymphadenopathy)의 부재, 간 비대 또는 비장 비대의 부재, 체질상의 증상 및 충분한 혈액 수의 부재를 요구하는, 완전한 진정(complete remission, CR); 일부 측면에서 정상적인 혈액 수를 갖지 않는, 상기 CR로 기술되는 불완전한 골수 회복을 갖는 완전한 진정(complete remission with incomplete marrow recovery, CRi); 일부 측면에서 말초 혈액 수에서의 개선과 함께, 림프구 수에서 ≥ 50%에 속하고, 림프샘 장애에서 ≥ 50% 감소 또는 간 또는 비장에서 ≥ 50%의 감소로 기술되는, 부분적인 진정(partial remission, PR); 일부 측면에서 림프구 수에 있어서 > 5 x10⁹/L까지의 ≥ 50% 상승, 림프샘 장애에 있어서 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기에 있어서 ≥ 50% 증가, 리히터의 형질전환(Richter’s transformation) 또는 CLL로 인한 새로운 혈구 감소증(cytopenia)으로 기술되는 진행성 질병(progressive disease, PD); 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족하지 않는 것으로 기술되는 안정적인 질병;으로 기술된다.

일부 구현예에서, 대상체는 단위 용량의 세포 투여 후 1개월 이내에, 대상체의 림프절 크기가 (약) 20mm 미만, (약) 10mm 미만 또는 (약) 10mm 미만인 경우 CR 또는 OR을 나타낸다.

일부 구현예에서, CLL의 지표 클론은 대상체의 골수에서(또는 본 방법에 따라 치료받은 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 지표 클론은 IgH 심층 염기서열분석(deep sequencing)에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지표 클론은 세포의 투여 후 (약) 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월의 시점에 검출되지 않는다.

일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출된 바와 같이, 골수에서 5% 이상의 아세포, 예컨대 골수에서 10% 이상의 아세포, 골수에서 20% 이상의 아세포, 골수에서 30% 이상의 아세포, 골수에서 40% 이상의 아세포 또는 골수에서 50% 이상의 아세포가 존재할 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 아세포가 있을 경우, 대상체는 완전 반응 또는 임상적 관해를 나타낸다.

일부 구현예에서, 대상체는 완전 반응을 나타낼 수 있으나, 형태학적으로 검출 불가능한(광학 현미경 기술에 의함) 작은 비율의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질병(minimum residual disease, MRD)을 나타낸다고 말한다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양은 소수 세포의 민감한 검출이 가능한 다양한 임의의 분자 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 기술은 염색체 전좌(chromosome translocation)에 의해 생성된 유일한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전사물을 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석은 백혈병 특이적 면역 표현형에 기초한 B 세포 악성 종양 세포 식별에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양의 분자적 검출은 100,000개 정상 세포 중에서 1개의 백혈병 세포만큼 적은 수를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 예컨대 PCR 또는 유세포 분석에 의해, 100,000개 세포 중에서 적어도 1개 이상의 백혈병 세포가 검출되는 경우, 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 일부 경우에 PCR 또는 유세포 분석 기술을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포를 검출할 수 없는 정도로, 분자적으로 검출 가능하지 않거나 MRD^-이다.

백혈병의 경우, 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수 내 잔류 백혈병의 평가에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출된 바와 같이, 골수에 5% 이상의 아세포(blast)가 있을 경우, 대상체는 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 아세포가 있을 경우, 대상체는 완전 반응 또는 임상적 관해를 나타낸다.

일부 구현예에서, 백혈병에 대해, 대상체는 완전 반응을 나타낼 수 있으나, 형태학적으로 검출 불가능한(광학 현미경 기술에 의함) 작은 비율의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질병(minimum residual disease, MRD)을 나타낸다고 말한다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양은 소수 세포의 민감한 검출이 가능한 다양한 임의의 분자 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 기술은 염색체 전좌(chromosome translocation)에 의해 생성된 유일한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전사물을 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석은 백혈병 특이적 면역 표현형에 기초한 B 세포 악성 종양 세포 식별에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양의 분자적 검출은 100,000개 정상 세포 중에서 1개의 백혈병 세포만큼 적은 수를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 예컨대 PCR 또는 유세포 분석에 의해, 100,000개 세포 중에서 적어도 1개 이상의 백혈병 세포가 검출되는 경우, 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 일부 경우에 PCR 또는 유세포 분석 기술을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포를 검출할 수 없는 정도로, 분자적으로 검출 가능하지 않거나 MRD^-이다.

일부 구현예에서, 본 방법 및/또는 T 세포 요법(예를 들어, CAR 발현 T 세포)와 같은 세포 요법 및/또는 화합물 A의 투여는 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법) 및/또는 화합물 A의 투여 바로 전 시점의 질병 부담과 비교하여 질병 부담을 감소시킨다.

일부 측면에서, 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법 및/또는 화합물 A의 투여는 질병 부담의 증가를 예방할 수 있고, 이는 질병 부담의 변화가 없음으로 입증될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 방법은 질병 또는 병태의 부담, 예를 들어, 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자의 생존 또는 무사건 생존 기간을, 대상체가 화합물 A의 투여 부재 하에서 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법만을 받는 요법과 같은 다른 요법을 사용한 비교 방법에서 관찰될 수 있는 감소와 비교하여, 더 큰 정도로 및/또는 더 큰 기간 동안 감소시킨다. 일부 구현예에서, 질병 부담은 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법, 및 화합물 A의 투여의 병용 요법 이후에, 상기 제제 각각을 단독으로 투여하여, 예를 들어, 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법)을 받지 않은 대상체에 화합물 A를 투여하여, 또는 상기 화합물 A를 투여받지 않은 대상체에 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법)을 투여하여 가져올 수 있는 감소와 비교하여, 더 큰 정도로 또는 더 긴 기간 동안 감소한다.

일부 구현예에서, 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 검출, 평가 또는 측정한다. 질병 부담은 일부 측면에서 대상체 내, 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액, 예컨대 혈액 또는 혈청 내의 질병 또는 질병 관련 세포, 예를 들어, 종양 세포의 총 수를 검출하여 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담은 전이의 수 또는 정도를 측정하여 평가한다. 일부 측면에서, 대상체의 생존, 특정 기간 내의 생존, 생존의 정도, 무사건 또는 무증상 생존의 존재 또는 기간, 또는 재발 없는 생존을 평가한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태의 임의의 증상을 평가한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태 부담의 측정이 명시된다. 일부 구현예에서, 결정을 위한 예시적인 매개변수는 질병 또는 병태, 예를 들어, 종양의 개선 또는 향상을 나타내는 특정 임상적 결과를 포함한다. 상기 매개변수는: 완전 반응(CR), 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)(예를 들어, 고형암 반응 평가 기준(RECIST) 지침 참조)을 포함한 질병 통제의 기간, 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)을 포함한다. 본원에 제공된 병용 요법의 방법의 효능을 결정하기 위해 상기 매개변수에 대한 구체적인 임계값을 설정할 수 있다.

일부 관점에서, 질병 부담은 면역요법(예: T 세포 요법)의 투여 후 면역요법(예: T 세포 요법)의 투여 전에 그러나 화합물 A의 투여 전에 및/또는 면역요법(예: T 세포 요법) 및 화합물 A 모두의 투여 후에 측정되거나 검출된다. 병용 요법의 하나 이상의 단계의 다중 투여의 맥락에서, 일부 구현예에서, 질병 부담은 임의 단계의 투여, 투여의 단위 용량 및/또는 주기 전에 또는 이후에, 또는 임의의 단계의 투여, 투여의 단위 용량 및/또는 주기 사이의 시점에 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 적어도 2개의 주기(예를 들어, 28일 주기)로 수행되고, 질병 부담은 각 주기 이전, 도중 및/또는 이후에 측정되거나 검출된다.

일부 구현예에서, 부담은 화합물 A 및 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법)의 투여 바로 전과 비교하여 제공된 방법에 의해 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100% 또는 적어도 (약) 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100% 감소한다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 체적, 종양 질량, 및/또는 종양 부하 또는 규모는 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법) 및 화합물 A의 투여 이후에 면역 요법(예를 들어, T 세포 요법) 및/또는 화합물 A의 투여 바로 전과 비교하여 적어도 (약) 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% 또는 그 이상 감소한다.

일부 구현예에서, 본 방법에 의한 질병 부담의 감소는 병용 요법의 투여, 예를 들어, 개시 후 예를 들어 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 6개월 이상 시점에 평가했을 때, 형태적인 완전 반응의 유도를 포함한다.

일부 측면에서, 최소 잔류 질병에 대한 분석은, 예를 들어, 다중 매개변수 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같이, 음성이고, 또는 최소 잔류 질병의 수준은 약 0.3% 미만, 약 0.2% 미만, 약 0.1% 미만, 또는 약 0.05% 미만이다.

일부 구현예에서, 대상체의 무사건 생존율 또는 전체 생존율은 다른 방법과 비교하여 본 방법에 의해 향상된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 병용 요법의 방법 이후 6개월 시점에 본 방법에 의해 치료 받은 대상체의 무사건 생존율 또는 확률은 약 40%보다 크거나, 약 50%보다 크거나, 약 60%보다 크거나, 약 70%보다 크거나, 약 80%보다 크거나, 약 90%보다 크거나, 또는 약95%보다 크다. 일부 측면에서, 전체 생존율은 약 40%보다 크거나, 약 50%보다 크거나, 약 60%보다 크거나, 약 70%보다 크거나, 약 80%보다 크거나, 약 90%보다 크거나, 또는 약95%보다 크다. 일부 구현예에서, 본 방법으로 치료 받은 대상체는 적어도 6개월까지, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년까지 무사건 생존, 재발 없는 생존, 또는 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 종양진행시간(TTP)은 (약) 6개월보다 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년보다 더 긴 종양진행시간과 같이, 향상된다.

일부 구현예에서, 본 방법에 의한 치료 이후에, 재발 확률은 다른 방법과 비교하여 감소된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병용 요법의 방법 이후 6개월 시점에 재발 확률은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만이다.

일부 경우에, 투여된 세포의 이용률, 예를 들어, 생체이용률을 평가하기 위해 투여된 세포, 예를 들어, 입양으로 전달된 세포의 약동학적 특성(PK)이 측정된다. 입양으로 전달된 세포의 약동학적 특성을 측정하는 방법은 조작된 세포를 투여받은 대상체로부터 말초 혈액을 채혈하는 것과 말초 혈액에서 조작된 세포의 수 또는 비율을 측정하는 것을 포함한다. 세포를 선택 및/또는 단리하는 접근법은 키메라 항원 수용체(CAR)-특이적 항체의 사용(예를 들어, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): (177ra38) Protein L (Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29)), 에피토프 표지, 예컨대 CAR 내 특이적 부위로 직접 도입되는 Strep-Tag 서열의 사용을 포함하며, 이로써 Strep-Tag를 위한 결합 시약이 사용되어 CAR(Liu et al. (2016) Nature Biotechnology, 34:430; 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015095895)을 직접 평가하고 그리고 CAR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 단클론 항체를 직접 평가한다(국제 특허 출원 공개 번호 WO2014190273 참조). 외인성 마커 유전자는 일부 경우에 세포의 검출 또는 선택을 가능하게 하도록, 일부 경우에 또한 세포 자살을 촉진하도록, 조작된 세포 요법과 관련하여 사용될 수 있다. 일부 경우에 절단형 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFRt)는 형질도입된 세포에서 관심 전이 유전자(예: CAR)와 함께 공발현될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 EGFRt 작제물 및 다른 재조합 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된 세포를 식별 또는 선택하기 위해 및/또는 상기 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하기 위해 사용될 수 있다. 문헌[미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434]을 참조한다.

일부 구현예에서, 환자로부터 수득된 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액) 내 CAR+ T 세포의 수를 세포 요법의 투여 후 일정 기간에 측정하여 예를 들어 세포의 약동학적 특성을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체의 혈액에서, 또는 본 방법에 의해 치료받은 대상체의 대부분에서 검출 가능한 CAR+ T 세포, 선택적으로 CAR+ CD8+ T 세포 및/또는 CAR+ CD4+ T 세포의 수는 1개 세포/μL 초과, 5개 세포/μL 초과 또는 10개 세포/μL 초과이다.

Ⅳ. 독성 및 역 결과

제공된 방법의 구현예에서, 세포 요법(예를 들어, T 세포 요법) 및 화합물 A를 포함하는 제공된 병용 요법을 투여 받은 대상체에서, 치료 관련 결과, 예를 들어, 호중구 감소증, 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경 독성(NT)의 발생을 포함하여 독성 또는 역 결과에 대해 대상체를 모니터링한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 독성 결과 또는 증상, 독성 촉진 프로파일, 인자 또는 특성, 예컨대 중증 호중구 감소증, 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 신경 독성과 관련된 또는 이를 나타내는 증상 또는 결과의 위험을 줄이기 위해 수행된다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나, 또는 예컨대 다른 특정 세포 요법과 비교하여, 독성 또는 독성 결과, 예컨대 중증 신경 독성(NT) 또는 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 비율 또는 가능성을 낮춘다. 일부 구현예에서, 본 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식 세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 동안 적어도 (약) 섭씨 38도 이상의 열 및 적어도 (약) 20mg/dL의 CRP의 혈장 수준을 초래하지 않거나, 이의 위험을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료받은 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 또는 그 이상이 어느 등급의 CRS든 또는 어느 등급의 신경 독성이든 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료 받은 대상체의 50% 이내(예를 들어, 치료 받은 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)가 2급보다 높은 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 2급보다 높은 신경 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료 받은 대상체의 적어도 50% 이상(예를 들어, 치료 받은 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)이 중증 독성 결과(예를 들어, 중증 CRS 또는 중증 신경 독성)를 나타내지 않고, 예컨대 3급 이상의 신경 독성을 나타내지 않고/거나 중증 CRS를 나타내지 않고, 또는 치료 이후 특정 기간 이내에, 예컨대 세포의 투여 후 1주, 2주, 또는 1개월 이내에 나타내지 않는다.

D. 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경 독성

일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 CRS(sCRS)이거나 이와 관련이 있거나 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어, sCRS는 일부 경우에 입양 T 세포 요법 및 대상체에 다른 생물학적 산물의 투여 이후에 발생할 수 있다. 문헌[Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78]을 참조한다.

통상적으로, CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵구, 및/또는 대식 세포에 의해 매개되는 과도한 전신 면역 반응에 의해 일어난다. 상기 세포들은 사이토카인 및 케모카인과 같은 많은 양의 염증성 매개인자를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 촉발할 수 있고/거나 내피 기관 손상을 유도할 수 있으며, 이는 미세 혈관 누출, 심부전, 또는 사망을 초래할 수 있다. 중증의 생명을 위협하는 CRS는 폐침윤 및 폐손상, 신부전, 또는 파종성 혈관내 응고로 이어질 수 있다. 다른 중증의 생명을 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡곤란, 신경학상 독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다. CRS는 항-염증 요법 예컨대 항-IL-6 요법, 예를 들어, 항-IL-6 항체, 예를 들어, 토실리주맙, 또는 항생제 또는 기술된 바와 같은 다른 제제를 사용하여 치료될 수 있다.

CRS의 결과, 징후 및 증상은 공지되어 있으며 본원에 기술된 것들이 포함된다. 일부 구현예에서, 특정 투여량 요법 또는 투여가 주어진 CRS-관련 결과, 징후, 또는 증상에 효과가 있거나 효과가 없는 경우, 특정 결과, 징후, 및 증상 및/또는 이의 수량 또는 정도가 명시될 수 있다.

CAR 발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 통상적으로 CAR을 발현하는 세포의 주입 후 6 내지 20일에 발생한다. 문헌[Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78]을 참조한다. 일부 경우에, CRS는 CAR T 세포 주입 후 6일 미만 또는 20일 넘어서 발생한다. CRS의 발생률 및 시기는 주입 시점의 기준선 사이토카인 수준 또는 종양 부담과 관련이 있을 수 있다. 보통으로, CRS는 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α, 및/또는 인터루킨(IL)-2의 혈청 수준 상승을 수반한다. CRS에서 급속하게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8, 및 IL-10이다.

CRS와 관련된 예시적인 결과에는 열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡장애, 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 뇌병증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경계 장애, 및 사망이 포함된다. 신경계 합병증에는 섬망, 발작 유사 활성, 착란상태, 단어 찾기 장애, 실어증, 및/또는 둔감해짐 등이 있다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 구역질, 두통, 발작, 심계 항진, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애, 및 신부전이 포함된다. 일부 측면에서, CRS는 혈청 페리틴, d-2량체, 아미노기 전달효소, 젖산 탈수소효소 및 트리글리세리드와 같은 하나 이상의 인자의 증가와 관련되거나 또는 저섬유소원혈증 또는 간비장비대증과 관련된다.

일부 구현예에서, CRS와 관련된 결과는: 지속적인 열, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어, 3일 이상, 예를 들어, 4일 이상 또는 적어도 3연속일 이상 동안, 지정된 온도의, 예를 들어, (약) 섭씨 38도를 넘는 열; (약) 섭씨 38도 넘는 열; 적어도 둘 이상의 사이토카인(예를 들어, 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNFα)로 구성된 군 중 적어도 둘 이상)의 치료전 수준, 또는 예를 들어, 상기 사이토카인들 중 적어도 하나 이상의 적어도 (약) 250의 최대 배수 변화와 비교하여, 예를 들어, 적어도 (약) 75의 최대 배수 변화와 같은 사이토카인의 상승; 및/또는 저혈압(예를 들어, 적어도 하나 이상의 정맥 혈관 승압제에 의해 측정된 바와 같음)과 같은 적어도 하나 이상의 임상적 독성 징후; 저산소증(예를 들어, (약) 90% 미만의 혈장 산소(PO₂) 수준; 및/또는 (정신 상태 변화, 둔감, 및 발작을 포함한) 하나 이상의 신경 장애 중 하나 이상을 포함한다.

예시적인 CRS 관련 결과는 사이토카인과 케모카인, 및 CRS와 관련된 다른 인자를 포함하여 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 상기 인자들 중 하나 이상의 합성 또는 분비의 증가를 더 포함한다. 상기 합성 또는 분비는 T 세포, 또는 선천 면역 세포 또는 B 세포와 같이 T 세포와 상호작용하는 세포에 의한 것일 수 있다.

일부 구현예에서, CRS와 관련된 혈청 인자 또는 CRS 관련 결과는 인터페론 감마(IFN-γ), TNF-a, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, 과립구 대식 세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 대식 세포 염증성 단백질(MIP)-1, 종양 괴사 인자 알파(TNFα), IL-6, 및 IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프렉탈카인, 및/또는 IL-5를 포함한, 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질(CRP)을 포함한다. 초기에 그리고 쉽게 측정 가능한 CRS 위험 인자인 것에 더하여, CRP는 또한 세포 증폭에 대한 마커이다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP, 예컨대 ≥ 15mg/dL을 가진 것으로 측정되는 대상체는 CRS를 가지고 있다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 가진 것으로 측정된 대상체는 CRS를 가지고 있지 않다. 일부 구현예에서, CRS의 측정은 CRP 및 CRS를 나타내는 다른 인자의 측정을 포함한다.

일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인은 CAR 치료 및/또는 화합물 A 치료 전, 도중, 또는 이후에 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식 세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 또는 대식 세포 염증성 단백질(MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α, 및 IL-6이 모니터링된다.

어느 환자가 sCRS 발생 위험 가능성이 더 있는지 예측하기 위해 CRS의 시작과 상관관계가 있는 것으로 보이는 CRS 기준이 개발되었다(문헌[Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25] 참조). 인자들에는 열, 저산소증, 저혈압, 신경계 변화, 염증성 사이토카인의 혈청 수준 상승, 예컨대 치료로 인해 유도된 상승이 치료전 종양 부담 및 sCRS 증상 모두와 상관관계가 있을 수 있는 일곱 가지 사이토카인(IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 GM-CSF) 세트가 포함된다. CRS의 진단 및 관리에 대한 다른 지침은 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95] 참조). 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 아래 표 3에 세부 사항이 나와 있다.

표 3: 예시적인 CRS 등급 매기기 기준
등급	증상의 설명
1 경미함(Mild)	생명을 위협하는 정도는 아니고, 해열제 및 항구토제와 같은 증상 치료만 필요함(예를 들어, 열, 구역질, 피로, 두통, 신체불쾌감)
2 보통(Moderate)	중도적 개입이 필요하며 이에 대해 대응함: ·산소 요구량 < 40%, 또는 ·체액 또는 저용량의 단일 승압약에 빠르게 반응하는 저혈압, 또는 ·2급 기관 독성(CTCAE v4.0에 의함)
3 중증(Severe)	공격적 개입이 필요하며 이에 대해 대응함: ·산소 요구량≥ 40%, 또는 ·고용량의 단일 승압약(예를 들어, 노르에피네프린 ≥ 20μg/kg/min, 도파민 ≥ 10μg/kg/min, 페닐에프린 ≥ 200μg/kg/min, 또는 에피네프린 ≥ 10μg/kg/min)을 필요로 하는 저혈압, 또는 ·다수의 승압약(예를 들어, 바소프레신 + 상기 제제들 중 하나, 또는 ≥ 20μg/kg/min 노르에피네프린에 상응하는 조합 승압약들)을 필요로 하는 저혈압, 또는 ·3급 기관 독성 또는 4급 transaminitis(간 효소 수치 상승 현상)(CTCAE v4.0에 의함)
4 생명 위협	생명 위협: ·산소호흡기 지원 필요, 또는 ·4급 기관 독성(transaminitis 제외)
5 치명적	사망

일부 구현예에서, 세포 요법 또는 이의 세포의 단위 용량의 투여 이후에 대상체가: (1) 적어도 3일 이상 동안 적어도 섭씨 38도 이상의 열; (2) (a) 투여 직후 수준과 비교하여 다음 일곱 가지 사이토카인 그룹: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 IL-5 중 적어도 두 개 이상에 대하여 적어도 75 이상의 최대 배수 변화 및/또는 (b) 투여 직후 수준과 비교하여 다음 일곱 가지 사이토카인 그룹: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 IL-5 중 적어도 한 개 이상에 대하여 적어도 250 이상의 최대 배수 변화; 및 (c) (적어도 하나 이상의 정맥 혈관 승압제를 필요로 하는) 저혈압 또는 저산소증(PO₂ < 90%)과 같은 독성 또는 (정신 상태 변화, 둔감, 및/또는 발작을 포함한) 하나 이상의 신경 장애 중 적어도 하나 이상의 임상적 징후; 중 하나를 포함하는 사이토카인 상승을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 이의 세포의 단위 용량의 투여에 반응하여 또는 이에 대해 부차적으로 “중증 CRS”(“sCRS”)가 발생한 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 중증 CRS에는 표 4에 제시된 바와 같이 3급 이상의 CRS가 포함된다.

일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 3급 CRS 이상, 예컨대 4급 이상과 관련된 결과는: 지속적인 열, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어, 3일 이상, 예를 들어, 4일 이상 또는 적어도 3연속일 이상 동안, 지정된 온도의, 예를 들어, (약) 섭씨 38도를 넘는 열; (약) 섭씨 38도 넘는 열; 적어도 둘 이상의 사이토카인(예를 들어, 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNFα)로 구성된 군 중 적어도 둘 이상)의 치료전 수준, 또는 예를 들어, 상기 사이토카인들 중 적어도 하나 이상의 적어도 (약) 250의 최대 배수 변화와 비교하여, 예를 들어, 적어도 (약) 75의 최대 배수 변화와 같은 사이토카인의 상승; 및/또는 저혈압(예를 들어, 적어도 하나 이상의 정맥 혈관 승압제에 의해 측정된 바와 같음)과 같은 적어도 하나 이상의 임상적 독성 징후; 저산소증(예를 들어, (약) 90% 미만의 혈장 산소(PO₂) 수준; 및/또는 (정신 상태 변화, 둔감, 및 발작을 포함한) 하나 이상의 신경 장애 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 중증 CRS에는 집중 치료실(ICU)에서 관리 또는 치료가 필요한 CRS가 포함된다.

일부 구현예에서, 중증 CRS와 같은 CRS는 (1) 지속적인 열(적어도 3일 이상 동안 적어도 섭씨 38도 이상의 열) 및 (2) 적어도 (약) 20mg/dL 이상의 CRP의 혈청 수준의 조합을 포괄한다. 일부 구현예에서, CRS는 둘 이상의 승압약의 사용을 필요로 하는 저혈압 또는 기계적 인공호흡이 필요한 호흡부전을 포괄한다. 일부 구현예에서, 승압약의 투여량은 두 번째 또는 후속 투여에서 증가한다.

일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 3급 CRS는 알라닌 아미노기 전달효소의 증가, 아스파르트산 아미노기 전달효소의 증가, 오한, 열성 호중구 감소증, 두통, 좌심실 기능 부전, 뇌병증, 뇌수종, 및/또는 떨림을 포괄한다.

다양한 결과를 측정 또는 검출하는 방법은 명시될 수 있다.

일부 측면에서, 세포 요법과 같은 요법의 독성 결과는 신경 독성 또는 중증 신경 독성이거나 이와 관련되거나 이를 나타낸다. 일부 구현예에서, 신경 독성의 임상적 위험과 관련된 증상에는 착란상태, 섬망, 표현실어증, 둔감, 간대성 근경련, 무기력, 정신 상태 변화, 경련, 발작 유사 활성, 발작(선택적으로 뇌전도[EEG]에 의해 확인된 바와 같음), 베타 아밀로이드(Aβ)의 수준 상승, 글루타메이트의 수준 상승, 및 산소 라디칼의 수준 상승이 포함된다. 일부 구현예에서, 신경 독성은 예를 들어, 1~5급 척도를 사용하는 중증도에 기초하여 등급이 매겨진다(예를 들어, 문헌[Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)] 참조).

일부 경우에, 신경계 증상은 sCRS의 가장 초기 증상일 수 있다. 일부 구현예에서, 신경계 증상은 세포 요법 주입 후 5 내지 7일 후에 시작되는 것으로 보인다. 일부 구현예에서, 신경계 변화의 기간은 3 내지 19일 범위일 수 있다. 일부 경우에, sCRS의 다른 증상이 해결된 후에 신경계 변화의 회복이 발생한다. 일부 구현예에서, 신경계 변화의 해결의 시간 또는 정도는 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)를 이용한 치료로 앞당겨지지 않는다.　

일부 구현예에서, 세포 요법 또는 이의 세포의 단위 용량의 투여 이후에, 대상체가: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 변성(degeneration)을 포함한, 말초 운동 신경 장애의 증상들; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 변성을 포함한 말초 감각 신경 장애; 비정상적이고 불쾌한 감각을 초래하는 감각 지각의 왜곡과 같은 감각 장애; 신경 또는 신경군을 따라 느껴지는 극심하게 고통스러운 감각과 같은 신경통; 및/또는 따끔거림, 무감각, 압박감, 자극이 없는 차가움 및 따뜻함의 비정상적인 피부 감각을 초래하는 감각 뉴런의 기능 장애와 같은 감각 이상의 증상들; 중에서 자기 스스로 돌보기(예를 들어, 목욕, 옷 입고 벗기, 음식 먹기, 변기 사용하기, 약 복용)를 제한하는 증상들을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 이의 세포의 단위 용량의 투여에 반응하여 또는 이에 대해 부차적으로 “중증 신경 독성”이 발생한 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 중증 신경 독성에는 표 4에 제시된 바와 같이 3급 이상의 신경 독성이 포함된다. 일부 구현예에서, 증상 또는 3급 신경 독성이 10일 이상 지속되는 경우 중증 신경 독성은 지연성 3급인 것으로 간주된다.

표 4: 예시적인 신경 독성 등급 매기기 기준
등급	증상의 설명
1 무증상 또는 경미함	경미한 증상 또는 무증상
2 보통(Moderate)	식사 준비, 식료품이나 의복 구매, 전화기 사용, 돈 관리 등 수단적 일상 생활 활동(ADL)을 제한하는 증상의 존재
3 중증(Severe)	목욕, 옷 입고 벗기, 스스로 음식 먹기, 변기 사용하기, 약 복용하기 등 자기 스스로를 돌보는 ADL을 제한하는 증상의 존재
4 생명 위협	긴급한 개입이 필요한, 생명을 위협하는 증상
5 치명적	사망

일부 구현예에서, 본 방법은 다른 방법과 비교하여 CRS 또는 신경 독성과 관련된 증상을 감소시킨다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 다른 방법과 비교하여 중증 CRS 또는 3급 이상의 CRS와 관련된 증상, 결과 또는 인자를 포함하여, CRS와 연관된 증상, 결과 또는 인자를 감소시킨다. 예를 들어, 본 방법에 따라 치료 받은 대상체에서 예를 들어 표 3에 제시된 임의의 기술된 바와 같은 CRS, 예를 들어, 중증 CRS 또는 3급 이상 CRS의 증상, 결과 또는 인자가 검출 가능하지 않고/거나 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료받은 대상체는 다른 방법으로 치료받은 대상체와 비교하여, 팔다리 쇠약 또는 무감각; 기억, 시력 및/또는 지적 능력의 손실; 통제할 수 없는 집착적이고/거나 강박적인 행동; 망상; 두통; 운동 통제력 상실, 인지 열화, 및 자율 신경계 기능 장애를 포함한 인지 및 행동 문제; 및 성 기능 장애와 같은, 신경 독성의 증상이 감소할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료받은 대상체는 말초 운동 신경 장애, 말초 감각 신경 장애, 감각 장애, 신경통 또는 감각 이상과 관련된 증상이 감소될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 방법은 뉴런의 사멸과 같이 신경계 및/또는 뇌의 손상을 포함한 신경 독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 측면에서, 본 방법은 베타 아밀로이드(Aβ), 글루타메이트, 및 산소 라디칼과 같은 신경 독성과 관련된 인자의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, 독성 결과는 용량 제한 독성(DLT)이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량 제한 독성의 부재이다. 일부 구현예에서, 용량 제한 독성(DLT)은, 예컨대 상기 설명된 바와 같은 그리고 미국 국립 암 연구소(NCI)의 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events) 버전 4.0을 포함하는, 특정 독성을 평가하기 위한 임의의 공지된 또는 출판된 지침에 의해 설명된 또는 평가되는 바와 같은 임의의 3급 이상 독성으로 정의된다. 일부 구현예에서, 용량 제한 독성(DLT)은 세포 요법(예를 들어, T 세포 요법) 및/또는 화합물 A의 투여 이후에 a) 열성 호중구 감소증; b) 약 7일 이상 지속되는 4급 호중구 감소증; 임상적으로 상당한 출혈이 동반하는 3급 또는 4급 혈소판 감소증; 및 d) 24시간을 초과하여 지속되는 4급 혈소판 감소증을 포함한 사건들 중 어느 하나가 발생할 때로 정의된다.

일부 구현예에서, 제공된 구현예는 예컨대 제공된 병용 요법에 따라 T 세포의 단위 용량을 투여하고, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물을 함께 투여하고 관찰하였을 때, 독성, 예를 들어, CRS 또는 신경 독성 또는 중증 CRS 또는 신경 독성, 예를 들어, 3급 이상 CRS 또는 신경 독성의 낮은 비율 또는 위험을 초래한다. 일부 경우에, 이는 외래 환자 기준(통원)으로 세포 요법의 투여를 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따른 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 단위 용량의 투여, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물과 함께 투여는 외래 환자 기준(통원)으로 수행되거나 또는 숙박이 필요한 병원 입원 등처럼 대상체가 병원에 입원할 필요가 없다.

일부 측면에서, 제공된 방법에 따른 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 단위 용량을 투여 받은, 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물과 함께 투여 받은 대상체는, 외래 환자 기준으로 치료 받은 대상체를 포함하여, 대상체가 독성, 예컨대 신경 독성 또는 CRS의 징후 또는 증상을 나타내지 않는 한 또는 나타낼 때까지, 세포 단위 용량의 투여 전에 또는 투여와 함께 임의의 독성을 치료하기 위한 개입을 받지 않는다.

일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 단위 용량을 투여 받은 대상체가, 외래 환자 기준으로 치료 받은 대상체를 포함하여, 열을 나타내면, 대상체는 열을 낮추기 위한 치료를 제공받거나 해당 치료를 받거나 실시하도록 안내를 받는다. 일부 구현예에서, 대상체의 열은 특정 임계 온도 또는 수준 이상인 (또는 그렇게 측정된) 대상체의 신체 온도를 특징으로 한다. 일부 측면에서, 임계 온도는 적어도 낮은 등급 이상의 열, 적어도 중간 정도의 열, 및/또는 적어도 높은 등급의 열과 관련된다. 일부 구현예에서, 임계 온도는 특정 온도 또는 범위이다. 예를 들어, 임계 온도는 (약) 섭씨 38, 39, 40, 41 또는 42도 또는 적어도 (약) 섭씨 38, 39, 40, 41 또는 42도 이상일 수 있고/거나, (약) 섭씨 38도 내지 (약) 섭씨 39도의 범위, (약) 섭씨 39도 내지 (약) 섭씨 40도의 범위, (약) 섭씨 40도 내지 (약) 섭씨 41도의 범위, 또는 (약) 섭씨 41도 내지 (약) 섭씨 42도의 범위일 수 있다.

일부 구현예에서, 열을 줄이기 위해 설계된 치료는 해열제를 이용한 치료를 포함한다. 해열제에는 NSAID(이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 및 니메설라이드 등); 아스피린, 살리실산콜린, 살리실산마그네슘, 및 살리실산나트륨과 같은 살리실산염; 파라세타몰; 아세트아미노펜; 메타미졸, 나부메톤, 페낙손(Phenaxone), 안티피린, 해열제(febrifuge)와 같이 해열 효과가 있는 것으로 공지된 다수의 임의의 제제 중 하나와 같이 열을 내리는 임의의 제제, 조성물, 또는 성분이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 해열제는 아세트아미노펜이다. 일부 구현예에서, 아세트아미노펜은 12.5mg/kg의 용량으로 최대 4시간마다 경구로 또는 정맥 내로 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 이것은 이부프로펜 또는 아스피린이거나 이를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 열이 지속열인 경우, 대상체는 독성을 치료하기 위해 다른 치료를 받는다. 통원 기준으로 치료받는 대상체의 경우, 대상체가 지속열을 가졌고/거나 가진 것으로 확인된 경우 대상체는 병원으로 돌아가도록 안내 받는다. 일부 구현예에서, 대상체가 타당한 임계 온도 이상의 열을 나타내는 경우, 그리고 지정된 치료 이후에, 예컨대 열을 내리기 위해 설계된 치료, 예컨대 해열제, 예를 들어, NSAID 또는 살리실산염, 예를 들어, 이부프로펜, 아세트아미노펜 또는 아스피린을 이용한 치료 이후에, 대상체의 열 또는 신체 온도가 내려가지 않거나, 또는 지정된 양 이상(예를 들어, 1°C 이상, 그리고 일반적으로 변동되지 않고, 또는 약 0.5°C, 0.4°C, 0.3°C, 또는 0.2°C 이상) 내려가지 않는 경우, 대상체는 지속열이 있고/거나 가진 것으로 확인되거나 간주된다. 예를 들어, 대상체가 적어도 (약) 섭씨 38 또는 39도 이상의 열을 나타내거나 나타내는 것으로 확인되고, 아세트아미노펜과 같은 해열제로 치료를 받은 이후에도, 6시간 동안, 8시간 동안, 또는 12시간 동안, 또는 24시간 동안, 열이 (약) 0.5°C, 0.4°C, 0.3°C, 또는 0.2°C 이상, 또는 (약) 1%, 2%, 3%, 4%, 또는 5% 이상 내려가지 않는 경우, 대상체는 지속열을 가진 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 해열제의 투여량은 열 또는 세균 또는 바이러스 감염, 예를 들어, 국소 또는 전신 감염과 관련된 열과 같은 특정 유형의 열을 내리기 위해 대상체 등에 일반적으로 효과적인 투여량이다.

일부 구현예에서, 대상체가 타당한 임계 온도 이상의 열을 나타내는 경우, 그리고 대상체의 열 또는 신체 온도가 약 1°C 이상 변동되지 않고, 그리고 일반적으로 약 0.5°C, 0.4°C, 0.3°C, 또는 0.2°C 이상 변동되지 않는 경우, 대상체는 지속열이 있고/거나 가진 것으로 확인되거나 간주된다. 상기 특정 양 이상의 변동의 부재는 일정 기간 동안(예컨대 24시간, 12시간, 8시간, 6시간, 3시간, 또는 1시간 동안, 열의 첫 징후부터 또는 표시된 임계값을 넘는 첫 온도부터 측정할 수 있음) 측정된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체가 적어도 (약) 섭씨 38 또는 39도 이상의 열을 나타내거나 나타내는 것으로 확인되고, 6시간 동안, 8시간 동안, 또는 12시간 동안, 또는 24시간 동안, (약) 0.5°C, 0.4°C, 0.3°C, 또는 0.2°C 이상 변동이 없으면, 대상체는 지속열을 나타내는 것으로 간주되거나 확인된다.

일부 구현예에서, 열은 지속열이고; 일부 측면에서, 독성을 유도할 잠재성이 있는 최초 요법, 예컨대, 세포 요법, 예컨대 T 세포의 단위 용량(예를 들어, CAR+ T 세포) 투여 이후에, 대상체가 지속열을 가진 것으로 확인된 시점에, 예컨대 상기 확인한 지 또는 첫 번째로 상기 확인한 지 1, 2, 3, 4, 5, 6시간 또는 더 적은 시간 내에, 대상체는 치료를 받는다.

일부 구현예에서, 예를 들어, 전술한 구현예 중 어느 하나에 따라 측정된 바와 같이, 대상체가 지속열을 나타내는 것으로 확인되거나 확정된(예컨대 처음으로 확인 또는 확정된) 시점에 또는 직후에 독성을 치료하기 위한 하나 이상의 개입 또는 제제, 예컨대 독성-표적화 요법이 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 독성-표적화 요법은 상기 확정 또는 확인된 지 특정 시간 내에, 예컨대 그로부터 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 또는 8시간 내에 투여된다.

E. 혈액성 독성

일부 측면에서, 독성 결과는 혈소판 감소증 및/또는 호중구 감소증과 같은 혈액성 독성과 연관되거나 이를 나타낸다. 일부 경우에, 혈소판 감소증 및 호중구 감소증을 포함한 혈액성 독성은 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events; 버전 4.03; 미국 국립 암 연구소, Bethesda, MD, USA)에 따라 등급을 매긴다. 일부 경우에, 혈소판 감소증 및/또는 호중구 감소증과 같은 혈액성 독성은 화합물 A의 투여(들) 전, 도중, 및 후에 모니터링된다. 일부 경우에, 혈소판 감소증 및/또는 호중구 감소증과 같은 혈액성 독성은 화합물 A의 각 투여 전에 모니터링된다. 일부 경우에, 혈소판 감소증 및/또는 호중구 감소증과 같은 혈액성 독성은 화합물 A의 투여 후 적어도 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일에 모니터링된다.

일부 구현예에서, 호중구와 혈소판을 포함하여 대상체 내 백혈구(백혈구 세포)의 수준을 모니터링하기 위해 전체 혈구 계산이 수행된다. 전체 혈구 세포(CBC) 계수 및/또는 백혈구 감별 계수를 수행하기 위해 다양한 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 혈구 분석기(hematology analyzer)가 사용된다.

호중구 감소증은 혈액 호중구수의 감소를 특징으로 하며, 종종 이는 세균 및 곰팡이 감염에 대한 민감성 증가로 이어진다. 환자에게서 일반적인 호중구 감소증의 증상은, 예를 들어, 열, 구강점막 질환, 및 이염을 포함한다. 깊은 호중구 감소증이 있는 환자는 종종 패혈증, 피부 봉와직염, 간농양, 절창증, 폐렴, 구내염, 치은염, 직장 주위 염증, 대장염, 부비동염, 중이염과 같은 고름형성감염으로 고통받는다.

일부 구현예에서, 호중구 감소증의 수준을 정의하기 위해 절대호중구수(ANC)가 사용된다. ANC는 전체 혈구 계산의 구성 요소로부터 계산할 수 있다. 일부 구현예에서, 호중구 감소증의 중증도는 혈액의 마이크로리터당 세포에서 측정된 절대호중구수(ANC)에 기초하여: a) 경미한 호중구 감소증(1000 내지 1500 세포/mL); b) 보통 호중구 감소증(3급; 500 내지 1000 세포/mL); c) 중증 호중구 감소증(4급; < 500 세포/mL)으로 분류된다. 일부 구현예에서, 호중구 감소증은 표 5에 제시된 기준에 따라서 등급이 매겨질 수 있다. 중증 호중구 감소증이 있는 대상체는 종종 심각한 감염 위험이 있다.

표 5: 호중구 감소증 등급 매기기
등급	ANC
1급	< 2.0 x 10⁹/L (< 2000/mm³) 및 > 1.5 x 10⁹/L (> 1500/mm³)
2급	< 1.5 x 10⁹/L (< 1500/mm³) 및 > 1.0 x 10⁹/L (> 1000/mm³)
3급	< 1.0 x 10⁹/L (< 1000/mm³) 및 > 0.5 x 10⁹/L (> 500/mm³)
4급	< 0.5 x 10⁹/L (< 500/mm³)

일부 경우에, 호중구 감소증은 열성 호중구 감소증이다(또한 호중구 감소성 열 또는 호중구 감소성 패혈증으로도 불림). 열성 호중구 감소증은 환자가 온도가 38ºC를 넘고 낮은 수준의 호중구 또는 호중구 감소증이 있을 때 발생한다. 일부 구현예에서, 열성 호중구 감소증은 표 6에 제시된 기준에 따라서 등급이 매겨질 수 있다.

표 6: 열성 호중구 감소증에 대한 예시적인 등급 매기기 기준
등급	증상의 설명
3급	ANC <1000/mm³ 및 >38.3℃(101℉)의 한 번의 온도 또는 1시간 넘게 >=38℃(100.4℉)의 지속적인 온도
4급	생명을 위협하는 결과 및 긴급한 개입을 시사함
5급	사망

일부 구현예에서, 대상체는 혈소판 감소증에 대해 모니터링된다. 혈소판 감소증은 마이크로리터(μL)당 150,000개 세포 미만의 혈소판 수를 특징으로 한다. 특히 더 중증 등급의 환자들 중에서 혈소판 감소증은 출혈, 반상출혈, 점상출혈, 자반병, 및 비장기능항진증 등으로 표현될 수 있다. 혈소판 감소증은 1급 혈소판 감소증(즉, 75,000 내지 150,000/μL의 혈소판 수), 2급(즉, 50,000 내지 <75,000/μL의 혈소판 수), 3급(즉, 25,000 내지 <50,000/μL의 혈소판 수), 또는 4급(즉, 25,000/μL 미만의 혈소판 수)으로 특징지을 수 있다.

제공된 방법의 일부 구현예에서, 대상체가 혈소판 감소증 및/또는 호중구 감소증과 같은 혈액성 독성 또는 이의 특정 등급을 나타내는 것으로 확인된 경우, 화합물 A를 이용한 순환 치료법은 변경될 수 있다. 일부 측면에서, 화합물 A의 투여 후에, 대상체가 3급 이상의 혈소판 감소증; 3급 호중구 감소증; 지속성(예컨대 적어도 3, 5, 또는 7일 이상)인 3급 호중구 감소증; 4급 호중구 감소증; 3급 이상의 열성 호중구 감소증이 있는 경우, 순환 치료법은 변경된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 영구적으로 중단되거나 독성의 징후 또는 증상이 해결, 완화 또는 감소될 때까지 유예된다. 독성의 하나 이상의 징후 또는 증상을 평가하기 위해 예컨대 CBC 또는 백혈구 감별 분석에 의해 대상체에 대한 지속적인 모니터링을 수행할 수 있다. 일부 경우에, 독성이 해결되거나 감소되는 경우, 화합물 A의 투여는 순환 치료법을 유예하기 전과 동일한 용량 또는 투여 요법으로, 더 낮거나 감소된 용량으로, 및/또는 더 적은 빈도의 투여를 수반하는 투여 요법으로 재시작할 수 있다. 일부 구현예에서, 순환 치료법을 재시작하는 경우에, 단위 용량은 적어도 (약) 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 또는 60% 낮아지거나 감소된다. 일부 구현예에서, 세포 요법을 유예하기 전의 단위 용량이 2mg(예를 들어, 5/7일 제공)이면, 단위 용량은 1mg(5/7일 제공)으로 감소한다. 일부 측면에서, 혈액성 독성이 순환 치료법의 유예가 4주를 넘는 중증도인 경우, 순환 치료법은 영구적으로 중단될 수 있다.

일부 구현예에서, 혈액성 독성과 관련된 하나 이상의 증상을 치료, 개선 또는 감소시키기 위해 하나 이상의 제제를 대상체에 투여할 수 있다. 일부 경우에, 혈액성 독성이 개선될 때까지 G-CSF 또는 GM-CSF와 같은 골수 성장 인자를 대상체에 투여한다. 상기 요법의 예에는 과립구 집락 자극 인자(filgrastim) 또는 페그필그라스팀이 포함된다. 일부 측면에서, 상기 제제는 임의의 기간의 임의의 3급 이상 호중구 감소증을 포함하여 중증의 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증을 겪는 대상체에 투여한다.

F. 비-혈액성 독성

일부 측면에서, 독성 결과는 화합물 A의 투여 이후에 하나 이상의 비-혈액성 독성이거나 이와 관련되거나 이를 나타낸다. 비-혈액성 독성의 예에는 종양 발적 반응, 감염, 종양 용해 증후군, 심장 실험실 이상, 혈전색전증(심부 정맥 혈전증 및 폐 색전증 등), 및/또는 간질성 폐렴이 포함되나 이에 한정되지 않는다.

일부 측면에서, 비-혈액성 독성은 종양 발적 반응(TFR)이다(때때로 가진행(pseudoprogression)으로도 지칭됨). TFR은 림프절, 비장 및/또는 간을 포함하여 질병 보유 부위의 갑작스런 크기 증가이며, 종종 미열, 압통 및 종창, 확산성 발진 및 일부 경우에 말초 혈액 림프구 수 증가를 수반하기도 한다. 일부 구현예에서, TFR은 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events; 버전 3.0; 미국 국립 암 연구소, Bethesda, MD, USA)에 따라 등급을 매긴다. 일부 구현예에서, TFR은 다음과 같이 등급이 부여된다: 1급, 기능을 방해하지 않는 경미한 통증; 2급, 보통의 통증, 기능을 방해하지만 일상 생활 활동(ADL)은 방해하지 않는 통증 또는 진통제; 3급, 심한 통증, 기능을 방해하고 ADL도 방해하는 통증 또는 진통제; 4급, 장애 초래; 5급, 사망. 일부 구현예에서, TFR과 관련된 하나 이상의 증상을 치료, 개선 또는 감소시키기 위해, 코르티코스테로이드, NSAID 및/또는 마약성 진통제를 포함하여 하나 이상의 제제를 대상체에 투여할 수 있다.

일부 측면에서, 비-혈액성 독성은 종양 용해 증후군(TLS)이다. 일부 구현예에서, TLS는 Cairo-Bishop 등급제에 의해 명시된 기준에 따라 등급을 부여할 수 있다(Cairo and Bishop (2004) Br J Haematol, 127:3-11). 일부 구현예에서, 대상체에 고요산혈증을 감소시키기 위해 정맥내 수분 공급을 제공할 수 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 ECGS, LVEF를 모니터링하고 트로포닌-T 및 BNP의 수준을 모니터링하는 등에 의해 심장 독성에 대해 모니터링될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 심장 증상이 동반하는 트로포닌-T 및 BNP의 수준 상승이 관찰되면 잠재적으로 화합물 A의 보류 또는 유예가 필요할 수 있는 심장 독성이 발생할 수 있다.

제공된 방법의 일부 구현예에서, 대상체가 TFR 또는 기타 비-혈액성 독성과 같은 비-혈액성 독성 또는 이의 특정 등급을 나타내는 것으로 확인된 경우, 화합물 A를 이용한 순환 치료법은 변경될 수 있다. 일부 측면에서, 화합물 A의 투여 후에 대상체가 3급 이상의 TFR과 같은 3급 이상의 비-혈액성 독성이 있는 경우, 순환 치료법은 변경된다. 일부 구현예에서, 화합물 A의 투여는 영구적으로 중단되거나 독성의 징후 또는 증상이 해결, 완화 또는 감소될 때까지 유예된다. 독성의 하나 이상의 징후 또는 증상을 평가하기 위해 대상체에 대한 지속적인 모니터링을 수행할 수 있다. 일부 경우에, 독성이 해결되거나 감소되는 경우, 화합물 A의 투여는 순환 치료법을 유예하기 전과 동일한 용량 또는 투여 요법으로, 더 낮거나 감소된 용량으로, 및/또는 더 적은 빈도의 투여를 수반하는 투여 요법으로 재시작할 수 있다. 일부 구현예에서, 순환 치료법을 재시작하는 경우에, 단위 용량은 적어도 (약) 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 또는 60% 낮아지거나 감소된다. 일부 구현예에서, 세포 요법을 유예하기 전의 단위 용량이 2mg(예를 들어, 5/7일 제공)이면, 단위 용량은 1mg(5/7일 제공)으로 감소한다. 일부 구현예에서, 단위 용량 감소 이후에도 3급 독성이 재발하면, 단위 용량을 더 줄일 수 있다. 일부 구현예에서, 단위 용량 감소 이후에도 4급 독성이 재발하면, 순환 치료법은 영구적으로 중단될 수 있다. 일부 측면에서, 혈액성 독성이 순환 치료법의 유예가 4주를 넘는 중증도인 경우, 순환 치료법은 영구적으로 중단될 수 있다.

Ⅴ. 제조품 및 키트

또한 화합물 A, 및 면역 요법(예: 항체 또는 그의 항원 결합 단편) 또는 T 세포 요법(예: 조작된 세포)을 위한 구성요소, 및/또는 이의 조성물을 함유하는 제조품이 제공된다. 제조품에는 용기 및 표지(label) 또는 용기 위의 또는 그와 연관된 포장 삽입물 등이 포함될 수 있다. 적합한 용기에는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, IV 용액백 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서 용기는 조성물을 그 자체로 또는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는 데 효과적인 다른 조성물과 조합하여 담는다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기에는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 있는 것 또는 경구 투여 제제를 위한 병 또는 바이알을 포함하여 정맥내 주사용 용액백, 바이알 등이 포함된다. 라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이 질병 또는 병태를 치료하는 데 사용되는 것임을 나타낼 수 있다.

제조품은 (a) 내부에 조성물이 함유되어 있고, 조성물이 면역 요법(예: T 세포 요법)에 사용되는 조작된 세포를 포함하는 제1 용기; 및 (b) 내부에 조성물이 함유되어 있고, 조성물이 화합물 A를 포함하는 제2 용기를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 제1 용기는 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 여기서 제1 조성물은 면역요법, 예를 들어 CD4+ T 세포 요법에 사용되는 조작된 세포의 제1 집단을 포함하고, 제2 조성물은 조작된 세포의 제2 집단을 포함하고, 여기서 제2 집단은 제1 집단, 예를 들어, CD8+ T 세포 요법과 별도로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 세포 조성물은 조작된 세포, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ 세포의 정의된 비율(예: CD4+:CD8+ CAR+ T 세포의 1:1의 비율)을 포함한다.

제조품은 조성물이 특정 병태를 치료하는 데 사용할 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 더 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조품은 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 다른 용기 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같이 다른 물질이 추가로 포함될 수 있다.

Ⅵ. 정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본원에서 정의되며, 본원에 상기 정의를 포함하는 것이 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.

본원에 사용된 바와 같이, “대상체(subject)”는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유동물이며, 통상적으로 인간이다. 일부 구현예에서, 화합물 A, 조작된 세포, 또는 조성물이 투여되는 대상체(예를 들어, 환자)는 포유동물, 통상적으로 영장류, 예컨대 인간이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성(수컷) 또는 여성(암컷)일 수 있으며, 유아, 소아, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은 비영장류 포유동물이다.

본원에서 사용된 바와 같은 “치료(treatment, treat, treating)”는 질병 또는 병태 또는 장애 또는 이와 관련된 증상, 역효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과 중 어느 하나의 감소, 전이 예방, 질병 진행의 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 관해(remission) 또는 향상된 예후를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 용어는 질병의 완전한 치료 또는 임의의 증상의 완전한 제거 또는 모든 증상 또는 결과에 대한 효과(들)를 의미하지 않는다.

본원에서 사용된 바와 같은 “질병의 발병 지연(delaying development of a disease)”은 질병(예컨대 B 세포 악성종양)의 발병을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 치료 중인 개체 및/또는 질병의 이력에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 자명하게도, 충분하거나 유의미한 지연은 개체에 질병이 발병하지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발병과 같이 말기 B 세포 림프종이 지연될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은 “예방(preventing)”은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발과 관련하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포 및 조성물은 질병의 발병을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추는 데 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 “억제(suppress)”한다는 것은 다른 조건과 비교하여 또는 대안적으로 관심 조건 또는 매개변수를 제외하고 달리 동일한 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는 세포의 부재 시에 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.

제제(예: 조작된 세포 또는 항-PD-L1 또는 항원 결합 단편), 또는 약학적 제형 또는 이의 조성물의 “유효량(effective amount)”은 투여의 맥락에서, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 원하는 결과를 달성하기 위해 투여량/양에서와 필요한 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다.

제제(예: 조작된 세포 또는 항-PD-L1 또는 항원 결합 단편), 또는 약학적 제형 또는 이의 조성물의 “치료적 유효량(therapeutically effective amount)”은 예컨대 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 원하는 치료적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중 및 투여된 면역 조절 폴리펩타이드 또는 조작된 세포와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 화합물 A, 조작된 세포(예: 세포 요법), 또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.

“예방적 유효량(prophylactically effective amount)”은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 시간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 통상적으로, 예방적 투여량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.

본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태(“a”, “an” 및 “the”)는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, 단수 형태(“a” 또는 “an”)는 “적어도 하나(at least one)” 또는 “하나 이상(one or more)”을 의미한다. 본원에 기재된 관점 및 변형은 관점 및 변형으로 “구성되는(consisting)” 및/또는 “필수적으로 포함하여 구성되는(consisting essentially of)”을 포함하는 것으로 이해된다.

본 개시 내용 전체에서, 청구된 주제의 다양한 관점이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 모든 가능한 하위 범위 및 상기 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이 각각의 사이에 오는 값과 상기 언급된 범위에서 임의의 다르게 언급되거나 사이에 오는 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 상기 더 작은 범위의 상한 내지 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한계를 조건으로, 청구된 주제 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 상기 포함된 한계 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 청구된 주제에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.

본원에 사용된 용어 “약(about)”은 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 “약(about)”의 값 또는 매개변수에 대한 언급은 상기 값 또는 매개변수 자체에 관한 구현예를 포함(및 기술)한다. 예를 들어, “약 X”를 지칭하는 기재는 “X”의 기재를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치가 서열 목록에 제시된 것과 같은 개시된 서열의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치에 “해당(correspond to)”한다는 기재는 GAP 알고리즘과 같은 표준 정렬 알고리즘을 사용하여 동일성을 극대화하기 위해 개시된 서열과 정렬 시 확인된 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치를 지칭한다. 서열을 정렬함으로써, 당업자는 예를 들어 보존되고 동일한 아미노산 잔기를 가이드로 사용하여 해당하는 잔기를 확인할 수 있다. 일반적으로, 해당 위치를 확인하기 위해, 아미노산 서열은 가장 높은 순서의 일치가 수득되도록 정렬된다(예를 들어 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073] 참조).

본원에 사용된 바와 같은 용어 “벡터(vector)”는 이에 연결된 다른 핵산을 번식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 편입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 자신이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본원에서 “발현 벡터(expression vector)”로 지칭한다. 벡터 중에는 레트로바이러스, 예를 들어 감마레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 있다.

용어 “숙주 세포(host cell)”, “숙주 세포주(host cell line)” 및 “숙주 세포 배양물(host cell culture)”은 상호 교환적으로 사용되며, 상기 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 “형질 전환체(transformants)” 및 “형질 전환된 세포(transformed cells)”를 포함하고, 이는 1차 형질 전환된 세포 및 계대 수(number of passages)에 관계없이 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으나 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질 전환된 세포에서 선별되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.

본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 마커에 대해 “양성(positive)”이라는 진술은 특정 마커, 통상적으로 표면 마커가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 마커를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 존재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.

본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 마커에 대해 “음성(negative)”이라는 진술은 특정 마커, 통상적으로 표면 마커가 세포 상에 또는 세포 내에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 마커를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 부재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.

본원에 사용된 바와 같이, “아미노산 서열 동일성 백분율(percent (%) amino acid sequence identity)” 및 “동일성 백분율(percent identity)”이 아미노산 서열(기준 폴리펩타이드 서열)에 대하여 사용될 때, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고 최대 백분율의 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 필요하다면 갭을 도입한 후 기준 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어, 대상체 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 목적의 정렬은 예를 들어 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 당업계 기술 범위 내에서 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다.

아미노산 치환은 폴리펩타이드에서 하나의 아미노산을 다른 아미노산으로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 아미노산 치환은 관심 결합 분자(예를 들어, 항체)에 도입될 수 있고, 그 산물은 원하는 활성, 예를 들어 유지/향상된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 선별된다.

아미노산은 일반적으로 하기와 같은 공통적인 측쇄(side-chain) 특성에 따라 그룹화될 수 있다: (1) 소수성: 노르루신(Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu;(4) 염기성: His, Lys, Arg;(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

일부 구현예에서, 보존적 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤버를 동일한 클래스의 다른 멤버로 교환하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 비보존적 아미노산 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤버를 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 조성물(compostion)은 세포를 포함하여 세레블론을 표적하는 둘 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합물일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, “대상체(subject)”는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유동물이며, 통상적으로 인간이다.

Ⅶ. 예시적인 구현예

제공된 구현예 중에는 하기가 있다:

1. B 세포 악성종양을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은:

(a) B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 T 세포 요법을 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함함; 및

(b) 후속적으로 상기 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계;를 포함하고, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고,

화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간,

화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및

화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,을 포함하는 순환 요법으로 수행된다.

2. B 세포 악성종양을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은: 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 상기 화합물의 투여 전, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하는 T 세포 요법을 투여받은 적이 있으며, 여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고,

3. 구현예 1 또는 구현예 2의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제1 투여 기간에 투여된다.

4. 구현예 1-3 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 제2 투여 기간에 투여된다.

5. 구현예 1-4 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 그 초과 동안 연장된다.

6. 구현예 1-5 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다.

7. 구현예 1-6 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물의 투여는 상기 대상체에서 T 세포 요법의 최대 증폭 시 또는 그 전에 개시된다.

8. 구현예 7의 방법에서, 상기 T 세포 요법의 최대 증폭은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 11일 내지 (약) 15일 사이이다.

9. 구현예 1-8 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작한다.

10. 구현예 1-9 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 11일(수치 포함)에 시작한다.

11. 구현예 1-9 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작한다.

12. 구현예 1-10 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일에 시작한다.

13. 구현예 1-11 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일에 시작한다.

14. 구현예 1-9 및 11 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 15일에 시작한다.

15. 구현예 1-14 중 어느 하나의 방법에서, 상기 휴지 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일에 시작한다.

16. 구현예 1-15 중 어느 하나의 방법에서, 상기 휴지 기간은 상기 대상체의 B 세포 혈액 수치 수준이 상기 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 또는 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속된다.

17. 구현예 1-16 중 어느 하나의 방법에서, 상기 휴지 기간은 약 1주이다.

18. 구현예 1-17 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 29일에 시작한다.

19. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

20. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

21. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

22. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

23. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

24. 구현예 1-18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여된다.

25. 구현예 1-24 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염이거나 이를 포함한다.

26. 구현예 1-24 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 수화물이거나 이를 포함한다.

27. 구현예 1-24 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 용매화물이거나 이를 포함한다.

28. 구현예 1-24 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이거나 이를 포함한다.

29. 구현예 1-5 및 7-28 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체가 (약) 3개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 암이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다.

30. 구현예 29의 방법에서, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장된다.

31. 구현예 1-5 및 7-28 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다.

32. 구현예 1-5 및 7-28 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체가 (약) 6개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 암이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다.

33. 구현예 32의 방법에서, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장된다.

34. 구현예 1-33 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제2 투여는 상기 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우라도 계속된다.

35. 구현예 1-34 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물의 투여 개시 시점에, 상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 이후에 중증 독성을 나타내지 않는다.

36. 구현예 35의 방법에서,

상기 중증 독성은 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS), 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 CRS이고; 및/또는

상기 중증 독성은 중증 신경 독성, 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 신경 독성인, 방법.

37. 구현예 1-36 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체가 상기 화합물의 투여 후 독성, 선택적으로 혈액성 독성을 나타내는 경우, 상기 화합물의 투여는 유예되고/거나(suspended) 상기 순환 요법은 변형된다.

38. 구현예 37의 방법에서, 상기 독성은 중증 호중구 감소증, 선택적으로 열성 호중구 감소증, 지연성 3급 이상 호중구 감소증에서 선택된다.

39. 구현예 37 또는 38의 방법에서, 상기 화합물의 투여는 상기 대상체가 더는 상기 독성을 나타내지 않은 후에 재시작된다.

40. 구현예 1-39 중 어느 하나의 방법에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다.

41. 구현예 40의 방법에서, 상기 B 세포 악성 종양은 림프종이다.

42. 구현예 41의 방법에서, 상기 림프종은 비호지킨 림프종(NHL)이다.

43. 구현예 42의 방법에서, 상기 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질 전환된 무통성; EBV 양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-농축 거대 B 세포 림프종; 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL); 여포성 림프종(follicular lymphoma, FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B); 및/또는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고도 B 세포 림프종(이중/삼중 히트)을 포함한다.

44. 구현예 1-43 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 1 이하의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 상태를 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다.

45. 구현예 1-44 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물은 경구로 투여된다.

46. 구현예 1-45 중 어느 하나의 방법에서, 상기 CD19는 인간 CD19이다.

47. 구현예 1-46 중 어느 하나의 방법에서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다.

48. 구현예 47의 방법에서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다.

49. 구현예 47 또는 구현예 48의 방법에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공자극 신호 전달 영역을 더 포함한다.

50. 구현예 49의 방법에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함한다.

51. 구현예 49 또는 구현예 50의 방법에서, 상기 공자극 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.

52. 구현예 1-51 중 어느 하나의 방법에서, 상기 CAR은 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인,; 선택적으로 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함한다.

53. 구현예 1-52 중 어느 하나의 방법에서, 상기 CAR은 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인인 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다.

54. 구현예 1-53 중 어느 하나의 방법에서, 상기 CAR은 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인인 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다.

55. 구현예 52-54 중 어느 하나의 방법에서, 상기 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 스페이서이다.

56. 구현예 52-55 중 어느 하나의 방법에서, 상기 스페이서는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되고, 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함한다.

57. 구현예 55 또는 구현예 56의 방법에서, 상기 스페이서는 길이가 (약) 12개 아미노산이고, 및/또는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성된다.

58. 구현예 52-57 중 어느 하나의 방법에서, 상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34에 의해 암호화된 서열 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 임의의 것의 변이체를 갖거나 이로 구성된다.

59. 구현예 52-58 중 어느 하나의 방법에서, 상기 공자극 도메인은 서열번호 12 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

60. 구현예 52 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15, 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

61. 구현예 52-60 중 어느 하나의 방법에서, 상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함한다.

62. 구현예 52-61 중 어느 하나의 방법에서, 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하고, 선택적으로 상기 scFv는 서열번호 41을 포함하는 VH 및 서열번호 42로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

63. 구현예 52-61 중 어느 하나의 방법에서, 상기 scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

64. 구현예 1-63 중 어느 하나의 방법에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 또는 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포(각 수치 포함)를 포함한다.

65. 구현예 1-64 중 어느 하나의 방법에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 적어도 (약) 1 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 10⁸개 CAR-발현 세포를 포함한다.

66. 구현예 1-65 중 어느 하나의 방법에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 5 x 10⁷개 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.

67. 구현예 1-65 중 어느 하나의 방법에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁸개 CAR-발현 세포를 포함한다.

68. 구현예 1-67 중 어느 하나의 방법에서, 상기 세포의 단위 용량은 비경구적으로, 선택적으로 정맥내 투여된다.

69. 구현예 1-68 중 어느 하나의 방법에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포이다.

70. 구현예 1-69 중 어느 하나의 방법에서, 상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 자가(autologous)이다.

71. 구현예 1-70 중 어느 하나의 방법에서, 상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 동종이계(allogeneic)이다.

72. 구현예 1-71 중 어느 하나의 방법에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 단위 용량의 투여는 복수의 개별 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 개별 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 또는 상기 CD8+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제2 조성물을 포함한다.

73. 구현예 72의 방법에서, 상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되고, 또는 상기 제1 조성물의 투여 및 상기 제2 조성물의 투여는 동일한 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 약 2시간 간격으로 수행되고; 및/또는 상기 제1 조성물의 투여 개시 및 상기 제2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행된다.

74. 구현예 72 또는 구현예 73의 방법에서, 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여된다.

75. 구현예 72-74 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 조성물은 상기 CD4+ T 세포를 포함한다.

76. 구현예 72-74 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 조성물은 상기 CD8+ T 세포를 포함한다.

77. 구현예 72-76 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제1 조성물은 상기 제2 조성물 전에 투여된다.

78. 구현예 1-77 중 어느 하나의 방법에서, 상기 투여 전, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전 조절되었다.

79. 구현예 1-77 중 어느 하나의 방법에서, 상기 투여 직전, 상기 대상체에 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 투여하는 단계를 더 포함한다.

80. 구현예 78 또는 구현예 79의 방법에서, 상기 림프구 고갈 요법은 2 내지 4일 동안, 선택적으로 3일 동안 매일, 약 200-400mg/m², 선택적으로 (약) 300mg/m²(수치 포함)의 사이클로포스파미드의 투여, 및/또는 약 20-40mg/m², 선택적으로 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구 고갈 요법은 약 500mg/m²의 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다.

81. 구현예 78-80 중 어느 하나의 방법에서,

상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 (약) 300mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하고; 및/또는

상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 (약) 500mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함한다.

82. 구현예 1-81 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 인간이다.

83. 구현예 1-82 중 어느 하나의 방법에서,

상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(CR)을 달성하며, 상기 완전 반응은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 상기 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는 6개월까지 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 반응을 유지하고, CR을 유지하고, 및/또는 생존하거나 진행 없이 생존하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 달성하고, 선택적으로 상기 OR은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 또는 상기 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는

6개월까지 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 반응 또는 생존을 유지한다.

84. 구현예 42-83 중 어느 하나의 방법에서, 상기 세포의 단위 용량의 투여 시점 또는 직전에, 상기 대상체는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 용량 이외의 NHL에 대한 하나 이상의 선행 요법, 선택적으로 1, 2 또는 3개의 선행 요법으로의 치료 후 관해 후에 재발했거나 이에 대해 불응성이 되었다.

85. 구현예 42-84 중 어느 하나의 방법에서, 상기 세포의 단위 용량의 투여 시 또는 전에:

상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고;

상기 대상체는 화학요법 불응성(chemorefractory) 림프종, 선택적으로 화학요법 불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고; 및/또는

상기 대상체는 선행 요법에 반응하여 완전 관해(CR)를 달성하지 않았다.

86. 구현예 1-85 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물의 투여는:

상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형을 역전시키고;

상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고;

상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 수준 또는 정도를 감소시키고; 또는

상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 총 수 중에서 탈진 표현형을 갖는 백분율을 감소시킨다.

87. 구현예 1-86 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물의 투여 개시는 상기 T 세포 요법의 투여 이후에 수행되고, 상기 화합물의 투여 또는 이의 개시 이후에, 상기 대상체는 상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 항원- 또는 종양-특이적 활성 또는 기능의 복구 또는 구제(rescue)를 나타내고, 선택적으로 상기 복구, 구제 및/또는 상기 화합물의 투여 개시는 상기 대상체 내 또는 상기 대상체의 혈액 내 CAR-발현 T 세포가 탈진된 표현형을 나타낸 후의 시점이다.

88. 구현예 1-87 중 어느 하나의 방법에서, 상기 화합물의 투여는:

(a) 상기 화합물의 상기 투여의 부재와 비교하여, CD19 항원에 또는 항원 수용체-특이적 제제에 상기 T 세포의 노출 후, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는, 나이브 또는 비탈진된 T 세포의 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 초래하기에; 또는

(b) 상기 화합물의 상기 투여의 부재와 비교하여, CD19 항원에 또는 항원 수용체-특이적 제제에 상기 T 세포의 노출 후, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는, 나이브 또는 비탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형의 발현을 예방, 억제 또는 지연시키기에; 또는

(c) 상기 대상체의 상기 투여의 부재와 비교하여, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는 탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형을 역전시키기에; 효과적인 양, 빈도 및/또는 기간의 투여를 포함한다.

89. 구현예 88의 방법에서, 상기 화합물의 투여는 (i) 상기 활성의 증가를 초래하기에, 및 (ii) 상기 탈진 표현형의 상기 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고, 및/또는 상기 탈진 표현형을 역전시키기에,

효과적인 양, 빈도 및/또는 기간의 투여를 포함한다.

90. 구현예 88 또는 89의 방법에서, 상기 대상체 내의 상기 T 세포는 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하고, 및/또는 상기 항원은 CD19이다.

91. 구현예 86-90 중 어느 하나의 방법에서, T 세포 또는 T 세포의 집단과 관련하여, 상기 탈진 표현형은:

동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, T 세포 또는 T 세포들 상에서 표면 발현의 수준 또는 정도, 또는 하나 이상의 탈진 마커, 선택적으로 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탈진 마커의 표면 발현을 나타내는 상기 T 세포의 집단의 백분율의 증가; 또는

동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 노출 시 상기 T 세포 또는 T 세포의 집단에 의해 나타나는 활성의 수준 또는 정도의 감소를 포함한다.

92. 구현예 91의 방법에서, 상기 수준, 정도 또는 백분율의 증가는 (약) 1.2배 이상, (약) 1.5배 이상, (약) 2.0배 이상, (약) 3배 이상, (약) 4배 이상, (약) 5배 이상, (약) 6배 이상, (약) 7배 이상, (약) 8배 이상, (약) 9배 이상, (약) 10배 초과 또는 그 이상이다.

93. 구현예 91의 방법에서, 상기 수준, 정도 또는 백분율의 감소는 (약) 1.2배 이상, (약) 1.5배 이상, (약) 2.0배 이상, (약) 3배 이상, (약) 4배 이상, (약) 5배 이상, (약) 6배 이상, (약) 7배 이상, (약) 8배 이상, (약) 9배 이상, (약) 10배 초과 또는 그 이상이다.

94. 구현예 91-93 중 어느 하나의 방법에서, 상기 기준 T 세포 집단은 비-탈진된 표현형을 가진 것으로 알려진 T 세포의 집단이거나, 나이브 T 세포의 집단이거나, 중앙 기억 T 세포의 집단이거나, 또는 줄기 중앙 기억 T 세포의 집단이고, 선택적으로 이들은 동일한 대상체로부터 유래했거나 또는 상기 대상체와 동일한 종의 것이고, 이 대상체로부터 상기 탈진된 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된다.

95. 구현예 91-94 중 어느 하나의 방법에서, 상기 기준 T 세포 집단은 (a) 상기 탈진된 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체의 혈액으로부터 단리된 벌크 T 세포를 포함하는 대상체 일치 집단(subject-matched population)이고, 선택적으로 상기 벌크 T 세포는 상기 CAR을 발현하지 않음, 및/또는 (b) 상기 CAR을 발현하는 T 세포의 단위 용량의 투여를 받기 전, 상기 탈진된 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체로부터 수득된다.

96. 구현예 91-95 중 어느 하나의 방법에서, 상기 기준 T 세포 집단은 상기 T 세포 요법의 샘플을 포함하는 조성물, 또는 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 약학 조성물이고, 상기 대상체에 이의 투여 전, 선택적으로 상기 조성물은 동결보존된 샘플이다.

97. 구현예 91-96 중 어느 하나의 방법에서, 상기 하나 이상의 탈진 마커는 억제성 수용체이다.

98. 구현예 91-97 중 어느 하나의 방법에서, 상기 하나 이상의 탈진 마커는 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, BTLA, 2B4, CD160, CD39, VISTA 및 TIGIT 중에서 선택된다.

99. 구현예 91-98 중 어느 하나의 방법에서, 상기 활성은 염증성 사이토카인의 하나 또는 조합의 증식, 세포독성 또는 생산 중 하나 이상이고, 선택적으로 상기 사이토카인의 하나 또는 조합은 IL-2, IFN-감마 및 TNF-알파로 구성된 군에서 선택된다.

100. 구현예 91-99 중 어느 하나의 방법에서,

상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제, 선택적으로 상기 CAR의 항원-결합 도메인에 결합하는 제제와의 인큐베이션을 포함한다.

101. 구현예 100의 방법에서, 상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 T 세포를 CD19 항원-발현 표적 세포, 선택적으로 암 세포에 노출시키는 것을 포함한다.

Ⅷ. 실시예

하기 실시예들은 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.

실시예 1: 화합물 B 및 화합물 A의 존재 하에서 항-CD19 CAR 발현 T 세포 내 아이올로스 및 이카로스 전사인자의 약력학적 반응 평가

항-CD19 CAR 발현 T 세포를 함유한 T 세포 조성물을 건강한 세 인간 성인 공여자의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 생성하였는데, 상기 샘플로부터 (CD4+ 및 CD8+ 세포를 포함한) T 세포의 면역 친화도 기반 선택을 포함한 공정에 의해 두 조성물을 생성하였으며, 각각 CD8+ 및 CD4+ 세포에 대해 농축되었다. 세포를 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A) 또는 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)피페리딘-2,6-디온(화합물 B)의 존재 하에 인큐베이션하였고, 전사 인자 이카로스 및 아이올로스의 발현을 평가하였다.

농축된 CD4+ 및 CD8+ 조성물의 세포를 항-CD3/항-CD28 비드로 따로따로 활성화하고 항-CD19 CAR을 암호화하는 벡터로 렌티바이러스 형질도입을 거쳤다. 항-CD19 CAR은 뮤린 항체로부터 유래한 항-CD19 scFv(FMC63으로부터 유래한 가변 영역), 면역글로불린 유래 스페이서, CD28로부터 유래한 막관통 도메인, 4-1BB로부터 유래한 공자극 영역, 및 CD3-제타 세포내 신호 전달 도메인을 함유하였다. 상기 바이러스 벡터 내 발현 작제물은 또한, T2A 리보솜 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리된, CAR 발현에 대한 대리 마커 기능을 하는 절단된 수용체를 암호화하는 서열을 함유하였다. 그런 후 형질도입된 집단을 세포 발현을 위한 자극 시약의 존재 하에서 따로따로 인큐베이션하였다. 증폭된 CD8+ 및 CD4+ 세포를 제형화하고 따로따로 동결보존하여 저장하였다. 각 공여자로부터 유래한 동결보존된 CD4+ 및 CD8+ 항-CD19 CAR 발현 세포를 해동하고, 사용 전에 대략 1:1의 CAR+ CD4+:CD8+ 비율로 조합하였다.

생성된 CAR+ T 세포 조성물의 대략 2.5×10⁵개 세포를 10 내지 10000nM 범위 농도의 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)피페리딘-2,6-디온(화합물 B) 또는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A)의 존재 하에서 또는 매개물 대조군의 존재 하에서 밤새 37°C, 5% CO2에 CAR 특이적 항-이디오타입 항체 1μg/ml로 밤새 자극하였다. 밤새 인큐베이션 후, 항-CD19 CAR 발현 T 세포를 항체로 염색하고 유세포 분석에 의해 분석하여, 중간 형광 강도(MFI)로 측정한 바와 같이, CD4+CAR+ 또는 CD8+CAR+ 세포 내 이카로스 및 아이올로스의 세포내 수준을 평가하였다. 이카로스 및 아이올로스에 대한 중간 형광 강도(MFI) 값을 정규화하고 매개물 대조군에 대한 백분율로 계산하였다.

화합물 B 또는 화합물 A 와의 인큐베이션 후 항-CD19 자극된 CAR 발현 T 세포에서 세포내 이카로스 및 아이올로스 발현의 농도 의존적 감소가 관찰되었다(도 1). 억제제의 부재 하에서 최대 MFI의 50%로 아이올로스 또는 이카로스 MFI를 감소시킨 억제제의 농도로부터 결정된 바와 같이 아이올로스 및 이카로스 발현을 감소시키는 EC50을 계산하였다. 화합물 B 및 화합물 A의 EC50 값이, 5 공여자의 평균으로(공여자 사이의 범위는 95% 신뢰 구간에 기초하여 도시됨) 표 E1에 도시된다. 결과는 CAR 발현 T 세포 내 이카로스 및 아이올로스의 화합물-매개 분해에 있어서 화합물 A가 화합물 B 보다 대략 10 내지 20배 더 강력함을 보여준다.

[표 E1] CAR+ T 세포에서 아이올로스 및 이카로스 EC50(nM)

실시예 2: 장기간 자극 후 CAR T 기능에 대한 면역 조절 화합물의 평가

(CD4+ 및 CD8+ 세포를 1:1 비율로 조합하여 함유한) 항-CD19 CAR 발현 T 세포 조성물을 실질적으로 실시예 1에 기술된 바와 같이 건강한 상이한 세 공여자로부터 생성하였다.

만성 자극의 효과를 평가하기 위해, 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 6일 기간에 걸쳐 30 μg/mL 플레이트-결합 항-이디오타입(항-ID) 항체(예를 들어 WO2018/023100 참조)와 함께 인큐베이션함으로써 자극하였다. 6일 배양물로부터의 수확된 세포, 또는 동일한 공여자로부터 유래한 만성적으로 자극되지 않은 새로 해동된 항-CD19 CAR 발현 세포를 5일 동안 K562.CD19 표적 세포와 공배양하고 및 사이토카인 생산 능력을 평가하였다. 도 2a에 도시된 바와 같이, IFN-γ 및 IL-2 분비의 수준은 동일한 공여자로부터의 새로 해동된 항-CD19 CAR-발현 T 세포에 의한 사이토카인 생성과 비교하여, 만성적으로 자극된 세포(예를 들어, 탈진 표현형을 나타냄)에서 감소하였다. 새로 해동된 세포와 비교하여, 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR 발현 세포에 의한 세포 용해 활성도 감소하였으며, 감소된 종양 세포 수(도 2b)에 의해 입증되는 바와 같다. 결과는 6일 배양으로 CAR T 세포를 만성 자극 조건에 노출시키면 T 세포의 탈진 상태를 초래한다는 결론과 일치하였다. 세포를 만성 자극 조건에 노출하기 위해, CAR+ T 세포를 30μg/mL 플레이트 결합 항-이디오타입(항-ID) 항체(예를 들어, WO2018/023100 참조)와 인큐베이션하고, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)피페리딘-2,6-디온(화합물 B) 또는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A)의 적정(titrating) 양의 존재 하에서 6일의 기간 동안 37°C에서 인큐베이션하였다.

세 공여자(평균 ± SEM)에 대해 배양 중 T 세포의 증식을 평가하고 도 2c에 도시하였다. 도시된 바와 같이, 면역 조절 화합물의 존재는 CAR T 세포 수를 감소시켰다. 생/사(live/dead) 염료를 사용하여 유세포 분석에 의해 처리 6일차에 생존력을 평가하였다. 도 2d에 도시된 바와 같이(평균 ± SEM), 면역 조절 화합물은 자극이 3μg/mL 항-ID(왼쪽 패널) 또는 30μg/mL 항-ID(오른쪽 패널)로 수행되었을 때 세포 생존력에 효과가 없었다. 그와 함께, 결과는 세포 생존력에 영향을 주지 않고 세포 배가에 대한 면역 조절 화합물의 효과를 입증한다.

세포 주기에 대한 가능한 효과를 설명하기 위해, 3일의 면역 조절 화합물을 이용한 자극과 처리 후 2시간 동안 EDU 통합을 사용하여 세포 주기를 결정하였다. 도 2e의 결과는 면역 조절 화합물을 이용한 처리가 세포 주기의 G1기에서 CAR T 세포의 백분율을 증가시켰음을 보여준다. 면역 조절 화합물의 농도를 증가시키면서 세포 주기의 G1기에서 세포의 백분율이 도 2f에 도시된다(왼쪽 패널 3μg/mL 항-ID, 오른쪽 패널 30μg/mL 항-ID). 이론에 얽매이지 않고, 면역 조절 화합물로 처리할 때 세포 주기의 G1기에서 CAR T 세포의 축적은 면역 조절 화합물이 만성 자극 동안 탈진의 시작을 제한하는 메커니즘들 중 하나를 설명할 수 있다.

30μg/mL 항-ID로 24시간 또는 72시간 동안 자극한 CAR T 세포에서 세포내 사이토카인 수준을 측정하였다. T 세포를 골지(Golgi) 억제제의 존재 하에서 4시간 동안 항-ID-접합 비드와 배양하였다. IFNγ, 퍼포린, 그랜자임 B 및 IL-2의 세포내 사이토카인 수준을 유세포 분석에 의해 측정하였다. 도 2g에 도시된 바와 같이, 면역 조절 화합물을 이용한 세포의 처리는, 평균 형광 강도에 의해 측정했을 때, 이펙터 사이토카인(IFNγ, 퍼포린, 그랜자임 B)의 세포내 발현을 증가시켰지만, IL-2 생산에 있어서는 유의미한 변화가 없었다. 상기 사이토카인들에 양성인 세포의 백분율을 측정했을 때 비슷한 결과가 관찰되었다.

실시예 3: 장기간 자극 동안 동시 처리 후 CAR T 기능에 대한 면역 조절 화합물의 효과

항-CD19 CAR-발현 T 세포를 실시예 1에 기재된 바와 같이 실질적으로 생산하였다. 만성 자극 조건에 세포를 적용하기 위해, CAR+ T 세포를, 만성 자극을 유도하기 위해, (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A) 또는 매개물 대조군의 존재 하에서 6일 동안 30μg/mL 플레이트 결합 항-이디오타입(항-ID) 항체(예를 들어, WO2018/023100 참조)로 자극하였다. 6일 배양 기간 후, 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 배양물로부터 제거하고, 달리 나타내지 않는 한, 화합물 A의 존재 하에 최대 10일 동안 0.001 μM 내지 10 μM 범위의 농도에서 2.5:1의 이펙터 대 표적 비로 K562 세포 (K562.CD19), Raji 종양 세포, 및 Granta-519 종양 세포로 형질도입된 CAR-T 세포와 함께 인큐베이션하였다. K562.CD19, Raji, 및 Granta-519 종양 세포를 분석 동안 현미경 검사법에 의한 종양 세포 용해의 모니터링을 가능하게 하기 위해 염료로 표지하였다. 만성 자극 조건에 노출되지 않은 막 해동된 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 대조군으로서 구상체와 동시에 인큐베이션하였다. 여러 시점에 세포의 세포 용해 기능, CAR T 세포 수 및 사이토카인 생산에 대해 평가하였다.

화합물 A를 이용한 동시 처리로 장기적 만성 자극 후, CAR T 세포의 이카로스 발현에 대해 또는 CD19 발현 표적 세포를 재투여 후 CAR T 기능에 대해 평가하였다.

A. 이카로스 발현

화합물 A(1nM, 10nM 또는 100nM)의 존재 하에서 만성 자극에 노출된 CAR T 세포 내 이카로스의 발현을 이카로스에 대한 항체를 사용하여 세포내 유세포 분석에 의해 측정하였다. 도 3a에 도시된 바와 같이, 화합물 A 100nM으로 처리한 만성적으로 자극된 세포에서 이카로스 발현의 감소가 유지되었지만 10nM으로는 그렇지 않았다.

B. 세포 용해 활성

화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 존재 하에서 항-ID로 동시에 6일 동안 자극된 CAR T 세포를 화합물이 없어지도록 세척하고 화합물 A의 부재 하에서 1:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율로 CD19+ 종양 세포와 공배양하였다. 평가된 CD19+ 종양 세포는 CD19가 형질도입된 K562 세포(K562.CD19), Raji 세포 또는 Granta-519 세포를 포함하였다. 도 3b에 도시된 바와 같이, CD19-발현 표적 세포를 재투여하기 전에 화합물의 부재(대조군)와 비교하여 화합물 A의 존재 하에서 동시에 인큐베이션된 만성적으로 자극된 세포에 대하여, 시간에 따라 종양 세포 수에 의해 측정한, 세포 용해 활성은 향상되었다. 이 결과들은 상기 면역 조절 화합물이 만성 자극에 반응하여 탈진된 표현형의 발생을 감소시키거나 예방할 수 있다는 발견과 일치한다.

C. 구상체 종양 성장 분석

화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 존재 하에서 항-ID로 동시에 6일 동안 자극된 CAR T 세포를 Granta-519 종양 구상체와 인큐베이션에 의해 공배양하고 여러 시점에 CAR T 세포의 세포 용해 기능 및 사이토카인 기능을 평가하였다. 비교를 위해, 1μM 또는 0.1μM 화합물 B의 존재 하에서 항-ID로 비슷하게 만성적으로 자극된 세포에 대해서도 세포 용해 활성을 평가하였다. CAR T 세포와 공배양 후 여러 시점에 종양 구상체 크기의 평균 측정치를 모니터링하였다. 도 3c에 도시된 바와 같이, 항-ID로 만성 자극 도중 화합물 A의 동시 처리는 향상된 세포 용해 기능을 가진 CAR T 세포를 생산하여 Granta-519 구상체 성장을 감소시켰다. 9일 후 평균 종양 체적이 도 3d에 도시되고, 이는 화합물 A가 Granta-519 종양 구상체에 대하여 CAR T 세포의 세포 용해 기능을 크게 증가시켰음을 입증한다. 도 3e는 만성 자극 및 화합물 A와의 동시 인큐베이션 후 항-CD19 CAR T 세포와 공동-배양될 때 제9일에 3차원 구상체로서 성장된 Granta-519 종양 세포의 대표적인 이미지를 도시한다. 세포 용해 기능의 향상은 화합물 B보다 화합물 A를 이용한 동시 처리에서 더 컸다.

CD19 종양 구상체와 5일 동안 공배양한 상기 만성적으로 자극된 CAR T 세포의 상등액으로부터 사이토카인(IFNγ, IL-2 및 TNF알파)을 측정하였다. 대조군 세포(화합물 A 면역 조절 화합물로 동시 처리하지 않은 만성적으로 자극된 세포)와 비교한 log2 배수 변화가 도 3f에 도시된다. 도 3g는 세 공여자 및 2개의 독립적인 실험으로부터의 풀링된 데이터로부터 결정된 바와 같이, 공동-배양 5일 후 측정된 상등액으로부터의 평균 IFNγ 농도를 도시한다 (각각의 처리 사이의 통계적으로 유의한 차이는 * P < .05, *** P < .001, 및 **** P < .0001로서 표시됨). 도시된 바와 같이, 화합물 A로 동시에 처리한 만성적으로 자극된 세포와 인큐베이션한 배양물 내 IFNγ의 통계적으로 유의미한 증가가 있었다.

결과는 또한 만성 자극 도중과 같이 탈진을 촉진할 수 있는 조건 도중 면역 조절 화합물의 존재는 CAR T 세포 기능을 향상 또는 보존하고 CAR T 세포 탈진을 제한, 감소 또는 예방할 수 있음을 뒷받침한다. 그와 함께, 상기 결과는 화합물 A와 같은 면역 조절 화합물의 사용은 CAR 항원에 반응하는 것과 같이 탈진을 일으킬 가능성이 있는 조건에서를 포함하여 CAR T 세포 기능을 향상시킴을 뒷받침한다. 화합물 A의 상기 효과는 다른 면역 조절 화합물보다 우수할 수 있으며, 또한 이카로스 분해에 대한 화합물 A의 10 내지 20배 효능으로 인해 더 낮은 용량에서도 달성될 수 있다.

D. 유전자 발현

장기간 자극된 CAR 발현 T 세포로부터 단리된 RNA로부터 제조된 상보성 DNA(cDNA) 샘플에서 또는 장기간 자극을 거치지 않은 CAR 발현 T 세포에서 RNA 서열분석(RNA-seq)에 의해, 상기 기재된 바와 같이 공동-배양 5일 후 종양 구상체로부터 분류된 항-CD19 CAR T 세포의 유전자 발현을 분석하였다. RNA-seq에 대한 라이브러리를 Illumina NextSeq 시스템 상에서 서열분석하였다. 판독물을 인간 참조 게놈 GRCh38에 맵핑하고, 유전자 발현 수준을 Array Studio에서 정량화하였다. 차등 발현 (DE, RNA-seq) 분석을 DESeq2를 사용하여 수행하였다.

도 3h의 볼카노 플롯은 만성 자극 대조군 대비 장기간 자극 및 후속으로 화합물 A와의 인큐베이션 둘 모두 후에 항-CD19 CAR-T 세포에서 유전자 발현(y축) 대 만성적으로 자극되고 장기간 자극 분석에서 자극되지 않은 것과 비교한 항-CD19 CAR+ T 세포에서 유전자 발현(x축)의 log2 배수 변화(log2FC)를 도시한다. 도 3i는 만성 자극에 의해 및 만성 자극 동안 10 nM 화합물 A에 의해 유도된 유전자 발현 프로파일에 대한 효과의 비교를 도시한다. 상부 좌측 사분면 상의 점은 만성 자극에 의해 유도된 유전자를 나타내고, 하부 우측 사분면 상의 점은 화합물 A에 의해 역전된 유전자를 나타낸다.

차등적으로 발현된 유전자의 경로 강화 분석은 clusterProfiler을 사용하여 수행하였다. 도 3j는 T-세포 기능과 관련된 경로가 강조된, 유전자 및 게놈의 Kyoto Encyclopedia (KEGG) 경로 강화 분석을 나타낸다. KEGG를 사용한 항-CD19 CAR T 세포 RNA-seq 데이터의 경로 분석은 T-세포 기능과 관련된 경로가 강화된다는 것을 나타내었다. 이들 결과는 만성 자극 후, T 세포 기능과 관련된 경로에 관련된 유전자의 발현 변화가 화합물 A로의 동시 처리에 의해 화합물 A에 의해 역전될 수 있다는 발견과 일치한다.

실시예 4: 장기간 자극 후 CAR T 기능을 구제하는 면역 조절 화합물의 효과

실시예 1에 기술된 바와 같이 생산된, 세 공여자로부터 유래한 항-CD19 CAR 발현 T 세포를 만성 자극을 유도하기 위한(기능 저하의 탈진된 T 세포를 생산하기 위한) 조건에서 자극한 후, 후속으로 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A) 또는 매개물 대조군으로 처리하였다(구제). 실질적으로 실시예 3에 기술된 바와 같지만 화합물 A의 부재 하에 CAR T 세포를 30μg/mL 플레이트 결합 항-이디오타입(항-ID) 항체로 6일 동안 자극하여 장기간 만성 자극을 수행하였다. 만성 자극 후, CAR T 세포에 화합물 A의 존재 하에서 CD19 발현 표적 세포를 재투여하였고, 세포 용해 활성 또는 사이토카인 생산을 평가하였다.

A. 세포 용해 활성

항-ID로 6일 동안 자극된 CAR T 세포를 화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 존재 하에서 1:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율로 CD19+ 종양 세포와 공배양하였다. 평가된 CD19+ 종양 세포는 CD19가 형질도입된 K562 세포(K562.CD19), Raji 세포 또는 Granta-519 세포를 포함하였다. 도 4a에 도시된 바와 같이, 화합물의 부재(대조군)와 비교하여 화합물 A의 존재 하에서 만성적으로 자극된 세포에 CD19 발현 세포를 재투여했을 때, 시간에 따른 종양 세포 수를 측정하였을 때, 세포 용해 활성의 통계적으로 유의미한 향상이 있었다. 이 결과들은 상기 면역 조절 화합물이 만성 자극에 의해 유발된 탈진된 표현형을 구제할 수 있다는 발견과 일치한다.

B. 구상체 종양 성장 분석

항-ID로 6일 동안 자극된 CAR T 세포를 화합물 A(0.001μM 또는 0.01μM)의 존재 또는 부재 하에서 Granta-519 종양 구상체와 인큐베이션에 의해 공배양하였다. 여러 시점에 세포의 세포 용해 기능 및 사이토카인 기능을 평가하였다. 비교를 위해, 항-ID로 비슷하게 만성적으로 자극된 세포에 대해서도 1μM 또는 0.1μM 화합물 B의 존재 하에서 공배양 후 세포 용해 활성을 산정하였다. CAR T 세포와 공배양 후 9일차에 종양 구상체 크기의 평균 측정치를 평가하였다. 도 4b에 도시된 바와 같이, 화합물 A를 이용한 구제 처리는 CAR T 세포의 세포 용해 기능을 향상시켜 Granta-519 구상체 성장을 감소시켰다. 세포 용해 기능의 향상은 화합물 B보다 화합물 A를 이용한 구제 처리 후 더 컸다. CD19 종양 구상체와 5일 동안 공배양한 상기 만성적으로 자극된 CAR T 세포의 상등액으로부터 사이토카인(IFNγ, IL-2 및 TNF알파)을 측정하였다. 대조군 세포(면역 조절 화합물로 처리하지 않은 만성적으로 자극된 세포)와 비교한 log2 배수 변화가 도 4c에 도시된다. 도시된 바와 같이, CD19 발현 종양 구상체 재투여 동안 화합물 A로 후속적으로 처리한 만성적으로 자극된 세포와 인큐베이션한 배양물 내 IFNγ의 통계적으로 유의미한 증가가 있었다.

상기 화합물들의 T 세포 조절 활성을 설명하기 위해 A549.CD19 종양 구상체 모델을 더 사용하였다. A549.CD19 종양 구상체 성장은 면역 조절 화합물을 이용한 단일요법 처리에 민감하지 않다. 항-ID로 6일 동안 자극된 CAR T 세포를 화합물 A(0.001μM, 0.01μM 또는 0.1μM)의 존재 하에서 A549.CD19 종양 구상체와 인큐베이션에 의해 공배양하였다. CAR T 세포와 공배양 후 9일차에 종양 구상체 크기의 평균 측정치를 평가하였다. 도 5a에 도시된 바와 같이, 화합물 A를 이용한 구제 처리는 CAR T 세포의 세포 용해 기능을 향상시켜 A549.CD19 구상체 성장을 감소시켰다. 5일차에 측정한, 종양 구상체와 공배양물 내 CAR T 세포의 수는 화합물 A의 처리로 증가하였다(도 5b). 도 5c는 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포 및 화합물 A 구제(rescue) 배양과 함께 공동-배양한 후 9일째에 Granta-519 구상체 및 A549.CD19 구상체의 대표적인 이미지를 도시한다. 도 5d는 항-CD19 CAR T 세포 및 화합물 A와 공동-배양한 후 시간에 따른 종양 구상체 크기의 평균 측정치를 도시한다.

CD19 종양 구상체와 5일 동안 공배양한 상기 만성적으로 자극된 CAR T 세포의 상등액으로부터 사이토카인(IFNγ, IL-2 및 TNF알파)을 측정하였다. 대조군 세포(면역 조절 화합물로 동시 처리하지 않은 만성적으로 자극된 세포)와 비교한 log2 배수 변화가 도 5e에 도시된다. 도시된 바와 같이, CD19 발현 종양 구상체 재투여 동안 화합물 A로 후속적으로 처리한 만성적으로 자극된 세포와 인큐베이션한 배양물 내 IFNγ의 통계적으로 유의미한 증가가 있었다. 도 5f는 세 공여자 및 2개의 독립적인 실험으로부터의 데이터로부터 풀링된 5일째에 공동-배양 상등액으로부터 취해진 평균 IFNγ 농도를 도시한다(각 처리 간의 통계학적으로 유의한 차이는 * P <.05 및 **** P <.0001로 표시됨).

이 결과들은 또한 화합물 A와 같은 면역 조절 화합물이 탈진된 CAR T 세포를 구제 또는 역전시킬 수 있음을 뒷받침한다. 이 결과는 면역 조절 화합물에 민감한 것으로 알려진 Granta 구상체 및 면역 조절 화합물에 내성이 있는 A549.CD19 구상체 모두를 포함하여, 생리적으로 적절한 3D 구상체 종양 배양 모델에서 관찰되었다. 모든 산정된 면역 조절 화합물이 CAR T 세포 기능을 구제하는 능력을 나타내지만, 화합물 A는 화합물 B와 비교하여 항-종양 기능성을 구제하는 능력을 더 우수하게 나타냈으며 효과가 훨씬 더 낮은 용량에서 관찰되었으므로 더 강력하였다.

C. 유전자 발현

RNA-seq에 의한 유전자 발현 분석은 실질적으로 실시예 3에 기재된 바와 같이 수행하였다. 도 5g의 볼카노 플롯은 만성 자극 동안 각각의 구제 인큐베이션에 의해 유도된 차등적으로 발현된 유전자를 도시한다. 도 5h는 10 nM 화합물 A 구제 처리에 의해 유도된 유전자 발현 프로파일(log2-배수 변화)에 대한 효과의 비교를 도시한다. 상부 좌측 사분면 상의 점은 만성 자극에 의해 유도된 유전자를 나타내고, 하부 우측 사분면 상의 점은 화합물 A에 의해 역전된 유전자를 나타낸다. 도 5i는 T-세포 기능 및 세포 주기와 관련된 경로가 강조된 KEGG 경로 강화 분석을 도시한다.

이들 결과는 실시예 3에 기재된 바와 같은 화합물 A로의 동시 처리 후의 결과와 유사하게, 만성 자극 후, T 세포 기능과 관련된 경로에 관련된 유전자의 발현 변화가 화합물 A에 의해 역전될 수 있다는 발견과 일치한다. 흥미롭게도, 구제 실험의 KEGG 분석은 만성 자극-유도된 유전자의 세트가 농축된 특이적 세포 증식 경로의 변화가 화합물 A에 의해 역전될 수 있다는 것을 발견하였다.

실시예 5: CAR T 세포 내성 라인(Cell Resistant Lines)에서 항-CD19 CAR T 세포에 대한 면역 조절 화합물의 효과

항-CD19 CAR T 세포를 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온(화합물 A)(0.001μM, 0.01μM 또는 0.1μM)의 존재 하에서, 1:1의 이펙터 대 표적의 비율로 RL CD19+ 종양 세포와 공배양하였다. 시간에 따른 종양 세포 수에 의해 급성 세포 용해 활성을 측정하였다. 도 6a에 도시된 바와 같이, RL 종양 세포주는 0.01μM 또는 0.1μM 용량에서 화합물 A 단일요법에 민감했다. 화합물 A의 존재 하에서 CAR T 세포와 RL 내성 종양 세포의 공배양은 CAR T 세포의 세포 용해 기능을 향상시켰다.

세포 용해 활성을 구상체 모델에서도 평가하였다. 약 5,000 RL 세포를 5,000 항-CD19 CAR T 세포의 첨가 전(1:1 E:T 비율) 48시간 동안 평판 배양하였다. 항-CD19 CAR T 세포를 화합물 B(1μM) 또는 화합물 A(0.001μM, 0.01μM 또는 0.1μM)의 존재 하에서 RL 종양 구상체와 공배양하였다. CAR T 세포와 인큐베이션 후 4일차에 종양 크기를 평가하였다. 도 6b는 RL 종양 구상체가 면역 조절 화합물에 민감한데, 특히 화합물 B의 1μM 용량 또는 화합물 A의 0.01μM 또는 0.1μM 용량에서 그러함을 보여준다. 항-CD19 CAR T 세포와 테스트한 모든 용량의 면역 조절 화합물의 병용에서 종양 크기의 감소가 관찰되었다.

면역 조절 화합물이 항-CD19 CAR T 세포를 탈진으로부터 구조 또는 역적시키는 능력을 평가하기 위해 RL 세포를 더 사용하였다. 항-CD19 CAR 발현 T 세포를 만성 자극을 유도하기 위한 조건에서 자극한 후 후속적으로 화합물 B(1μM) 또는 화합물 A(0.001μM, 0.01μM 또는 0.1μM), 또는 매개물 대조군으로 처리(구제)하였다. 실질적으로 실시예 3에 기술된 바와 같이 CAR T 세포를 30μg/mL 플레이트 결합 항-이디오타입(항-ID) 항체로 6일 동안 자극하여 장기간 만성 자극을 수행하였다. 만성 자극 후, CAR T 세포를 화합물 B 또는 화합물 A의 존재 하에서 RL 세포와 배양하였다. 배양물 내 종양 세포를 측정하여 시간에 따른 세포 용해 활성을 평가하였다. 도 6에 도시된 바와 같이, 화합물 B 또는 화합물 A를 이용한 구제 처리는 CAR T 세포의 세포 용해 활성을 실질적으로 향상시켜 RL 세포 성장을 감소시켰다. 이 결과들은 평가된 면역 조절 화합물이 만성적으로 자극된 항-CD19 CAR T 세포를 구제하여 RL 내성 라인의 제거를 가능하게 할 수 있음을 입증하였다.

실시예 6: 급성 CAR T 세포 기능에 대한 세포 면역 조절 화합물의 효과

항-CD19 CAR T 세포의 이펙터 및 증식 활성을 화합물 A의 부재 하에 인큐베이션한 후 평가하였다. 항-CD19 CAR+ T 세포 조성물을 실시예 1에 기재된 바와 같이 생성하였다.

A. 사이토카인 생산

항-CD19 CAR T 세포를 매개물 대조군 (ctrl) 또는 화합물 A로 처리하면서 CAR (30 μg/mL; WO2018/023100)에 대한 효능제 항체로 자극하였다. 세포내 사이토카인을 처리 3일 후에 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 사용하여 측정하였다. 도 7a는 배양 중인 매개물 대조군에 비해 사이토카인의 평균 형광 강도 (MFI)의 log2-배수 변화를 기반으로 하여 나타낸 바와 같은 사이토카인 발현의 히트맵(heatmap)을 도시한다. 결과는 화합물 A가 항-CD19 CAR T 세포에 의한 이펙터 사이토카인 생산을 강화한다는 것을 입증한다.

B. 세포 용해 활성

화합물 A를 사용한 처리 3일 후, 항-CD19 CAR T 세포를 세포 용해 검정을 사용하여 Raji 또는 Granta-519 림프종 세포와 공동-배양하였다. 세포 용해 활성을 평가하기 위해, 표적 세포를 NucLight Red (NLR)로 표지하여 형광 현미경검사에 의한 추적을 허용하였다. 사멸 활성은 (INCUCYTE® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience를 사용하여) 동력학적 형광 현미경검사에 의해 시간에 따른 형광 신호의 손실에 의해 결정되는 바와 같이, 200시간에 걸쳐 생존 표적 세포의 손실을 측정함으로써 평가하였다. 종양 세포 수를 시간 0으로 정규화하고 시간에 걸쳐 측정하였다(평균 ± SEM).

도 7b는 매개물 대조군 (화합물 A 없음) 및 종양 단독과 비교하여 1 nM, 10 nM, 또는 100 nM 화합물 A로 처리된 항-CD19 CAR T 세포의 종양 세포 수를 도시한다. 결과는 항-CD19 CAR T 세포를 화합물 A와 함께 인큐베이션하는 것이 이 검정에서 표적 세포에 대한 그의 세포 용해 활성을 개선시켰음을 보여주었다.

C. 증식

항-CD19 CAR T 세포의 세포 주기 및 증식은 Click-iT™ EdU Cell Proliferation Kit를 사용하여 세포를 표지하여 측정하였고, 그 후 제조된 세포를 DNA 함량에 대해 유세포 분석기로 분석하였다. 항-CD19 CAR T 세포의 수는 IIncuCyte^® Live-Cell Analysis System을 사용하여 시간에 따라 측정하였다.

세포 수의 분석에 기초하여, 도 7c는 매개물 대조군 (화합물 A 없음)과 비교하여 1 nM, 10 nM, 또는 100 nM 화합물 A로 인큐베이션한 후 항-CD19 CAR T 세포의 배수 변화를 도시한다. 도시된 바와 같이, 화합물 A의 처리는 항-CD19 CAR T 세포의 증식을 감소시켰다. 증식 감소에 대한 효과를 추가로 평가하기 위해, 세포 주기를 DNA 함량을 분석함으로써 유동 세포측정법에 의해 측정하였다. 도 7d는 G1기에서의 세포의 백분율의 플롯 (평균 ± 세 공여자로부터 풀링된 데이터 및 2개의 독립적인 실험으로부터의 SEM)을 도시한다. 데이터는 화합물 A로 처리된 CAR T 세포에서 G1기에서의 세포의 백분율이 통계적으로 유의하게 증가하였다는 것을 보여주었다(각각의 처리 사이의 통계적으로 유의한 차이는 *** P <.001 및 **** P <.0001로서 표시됨).

D. 결론

본 실시예에서의 결과는 급성 활성화 동안 화합물 A를 임상적으로 적절한 농도로 처리한 경우 항-CD19 CAR T 세포 이펙터 사이토카인 생산 및 세포 용해 기능을 증가시켰으나 증식 속도를 늦추는 것을 보여준다.

본 발명은 본 발명의 다양한 관점을 설명하기 위해, 예를 들어 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위를 제한하려는 것이 아니다. 기술된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본 명세서의 기재 및 가르침에서 명백해질 것이다. 상기 변형은 본 개시의 진정한 범위와 정신에서 벗어나지 않고 실시될 수 있으며, 본 개시의 범위에 속하도록 의도된다.

서열

SEQUENCE LISTING <110> Juno Therapeutics, Inc. <120> COMBINATION OF A T CELL THERAPY AND (S)-3-[4-(4-MORPHOLIN-4-YLMETHYL-BENZYLOXY)-1-OXO-1,3-DIHYDR O-ISOINDOL-2-YL]-PIPERIDINE-2,6-DIONE <130> 735042022440 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/932,500 <151> 2019-11-07 <150> US 63/016,977 <151> 2020-04-28 <160> 59 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 6 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 7 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 7 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 153-179 of Accession No. P10747) <400> 8 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 9 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 114-179 of Accession No. P10747) <400> 9 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 10 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 180-220 of P10747) <400> 10 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 11 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (LL to GG) <400> 11 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB (amino acids 214-255 of Q07011.1) <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 14 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 15 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 17 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 18 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 19 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 20 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 21 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> REPEAT <222> (5)...(9) <223> SGGGG is repeated 5 times <400> 22 Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 23 Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GMCSFR alpha chain signal sequence <400> 24 atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60 atccca 66 <210> 25 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GMCSFR alpha chain signal sequence <400> 25 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro 20 <210> 26 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD8 alpha signal peptide <400> 26 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro 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<400> 35 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 36 Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 51 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe 210 215 220 Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Ile Lys Arg 245 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC-CDR3 <400> 54 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC-CDR2 <400> 55 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC-CDR3 <400> 56 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 57 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 57 gacatccaga tgacccagac cacctccagc 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Claims

B 세포 악성종양을 치료하는 방법으로서,
상기 방법은:
(a) B 세포 악성종양을 갖는 대상체에 T 세포 요법을 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함함; 및
(b) 후속적으로 상기 대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계;
를 포함하고,
여기서 상기 화합물의 투여는
상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고,
상기 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간,
상기 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 상기 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및
상기 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,
을 포함하는 순환 요법으로 수행되는, 방법.
B 세포 악성종양을 치료하는 방법으로서,
상기 방법은:
대상체에 하기의 구조:

를 갖는 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 포접체(clathrate), 또는 다형체인 화합물을 투여하는 단계를 포함하되,
상기 대상체는 상기 화합물의 투여 전, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량을 포함하는 T 세포 요법을 투여받은 적이 있으며,
여기서 상기 화합물의 투여는 상기 T 세포 요법을 투여한 후 21일 이내에 시작(또는 개시)되고,
상기 화합물이 최대 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 제1 투여 기간,
상기 화합물이 투여되지 않는 적어도 1주 동안의, 상기 제1 투여 기간의 종료 시 시작하는 휴지 기간, 및
상기 화합물이 각각의 4주 주기에서 연속 3주 동안 1일 당 약 0.1 mg 내지 약 1.0 mg으로 매일 투여되는 4주 주기를 포함하는 제2 투여 기간,
을 포함하는 순환 요법으로 수행되는, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.3 mg 내지 약 0.6 mg의 양으로 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 그 초과 동안 연장되는, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월까지 연장되는, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여는 상기 대상체에서 상기 T 세포 요법의 최대 증폭 시 또는 그 전에 개시되는, 방법.
제7항에 있어서,
상기 T 세포 요법의 최대 증폭은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 11일 내지 (약) 15일 사이인, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시의 동일한 날에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일 내지 (약) 11일(수치 포함)에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일 내지 (약) 15일(수치 포함)에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 1일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 7일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항 및 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 8일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항, 제10항 및 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 14일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제8항, 제10항 및 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 15일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 휴지 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 21일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 휴지 기간은 상기 대상체의 B 세포 혈액 수치 수준이 상기 제1 투여 기간 전에 측정된 수준과 동일하거나 또는 거의 동일한 수준으로 회복될 때까지 지속되는, 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 휴지 기간은 약 1주인, 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 28일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법을 투여한 후 (약) 29일에 시작하는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.3 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.45 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고/되거나 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (약) 0.6 mg의 양으로 상기 제1 투여 기간에 투여되고 상기 제2 투여 기간에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 약학적으로 허용 가능한 염이거나 이를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 수화물이거나 이를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온의 용매화물이거나 이를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 (S)-3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이거나 이를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제4항 및 제7항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료되는, 방법.
제33항에 있어서,
상기 대상체가 3개월에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 3개월에 종료되는, 방법.
제1항 내지 제4항 및 제7항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료되는, 방법.
제1항 내지 제4항 및 제7항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체가 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월 이전에, 상기 치료 후 완전 반응 (CR)을 달성했거나 상기 치료 후 관해 후 상기 B 세포 악성종양이 진행 또는 재발했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료되는, 방법.
제36항에 있어서,
상기 대상체가 6개월에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우, 상기 제2 투여 기간은 상기 T 세포 요법의 투여 개시 후 (약) 6개월에 종료되는, 방법.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 투여 기간은 상기 대상체가 상기 제2 투여 기간의 종료 전의 시점에 완전 반응 (CR)을 달성했던 경우라도 계속되는, 방법.
제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여 개시 시점에, 상기 대상체는 상기 T 세포 요법의 투여 후에 중증 독성을 나타내지 않는, 방법.
제39항에 있어서,
상기 중증 독성은 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS), 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 CRS이고; 및/또는
상기 중증 독성은 중증 신경 독성, 선택적으로 3급 이상, 지연성 3급 이상 또는 4급 또는 5급 신경 독성인, 방법.
제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체가 상기 화합물의 투여 후 독성, 선택적으로 혈액성 독성을 나타내는 경우, 상기 화합물의 투여는 유예되고/되거나 상기 순환 요법은 변형되는, 방법.
제41항에 있어서,
상기 독성은 중증 호중구 감소증, 선택적으로 열성 호중구 감소증, 지연성 3급 이상 호중구 감소증에서 선택되는, 방법.
제41항 또는 제42항에 있어서,
상기 화합물의 투여는 상기 대상체가 더 이상 상기 독성을 나타내지 않은 후에 재시작되는, 방법.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 B 세포 악성종양은 림프종인, 방법.
제44항에 있어서,
상기 림프종은 비-호지킨 림프종(NHL)이고, 선택적으로 상기 NHL은 공격성 NHL; 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL); DLBCL-NOS, 선택적으로 형질 전환된 무통성; EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-농축 거대 B 세포 림프종; 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B); 및/또는 DLBCL 조직 구조를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고도 B 세포 림프종(이중/삼중 히트)을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CD19는 인간 CD19인, 방법.
제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
제47항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
제47항 또는 제48항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는, 방법.
제49항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
제49항 또는 제50항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함하고;
선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함하는, 방법.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인; 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3제타 신호 전달 도메인인 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하는, 방법.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR은 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인인 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하는, 방법.
제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 스페이서인, 방법.
제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되고, 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함하는, 방법.
제55항 또는 제56항에 있어서,
상기 스페이서는 길이가 (약) 12개 아미노산이고, 및/또는 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되는, 방법.
제52항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34에 의해 암호화된 서열 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 임의의 것의 변이체를 갖거나 이로 구성되는, 방법.
제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
공자극 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 12 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는, 방법.
제52항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15, 또는 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는, 방법.
제52항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함하는, 방법.
제 52 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하고,
선택적으로 상기 scFv는 서열번호 41을 포함하는 VH 및 서열번호 42로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 방법.
제52항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는, 방법.
제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포, 또는 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개 총 CAR-발현 T 세포(각 수치 포함)를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 적어도 (약) 1 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁵개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁶개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 10⁷개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 10⁸개 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 10⁸개 CAR-발현 세포를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 5 x 10⁷ 개 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 10⁸ 개 CAR-발현 세포를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포의 단위 용량은 비경구적으로, 선택적으로 정맥 내 투여되는, 방법.
제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인, 방법.
제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 자가(autologous)인, 방법.
제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 동종이계(allogeneic)인, 방법.
제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 단위 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고,
상기 단위 용량의 투여는 복수의 개별 조성물을 투여하는 것을 포함하고,
상기 복수의 개별 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 또는 상기 CD8+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제2 조성물을 포함하는, 방법.
제72항에 있어서,
상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되고, 또는
상기 제1 조성물의 투여 및 상기 제2 조성물의 투여는 동일한 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 약 2시간 간격으로 수행되고; 및/또는
상기 제1 조성물의 투여 개시 및 상기 제2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는, 방법.
제72항 또는 제73항에 있어서,
상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는, 방법.
제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 조성물은 상기 CD4+ T 세포를 포함하는, 방법.
제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 조성물은 상기 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
제72항 내지 76항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 조성물은 상기 제2 조성물 전에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포 요법의 투여 전, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전 조절되었던, 방법.
제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포 요법의 투여 직전, 상기 대상체에 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
제78항 또는 제79항에 있어서,
상기 림프구 고갈 요법은 2 내지 4일 동안, 선택적으로 3일 동안 매일, 약 200-400 mg/m², 선택적으로 (약) 300 mg/m²(수치 포함)의 사이클로포스파미드, 및/또는 약 20-40 mg/m², 선택적으로 30 mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하고, 또는
상기 림프구 고갈 요법은 약 500 mg/m²의 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는, 방법.
제78항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 (약) 300mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하고; 및/또는
상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 (약) 500mg/m²의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m²의 플루다라빈의 투여를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 인간인, 방법.
제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(CR)을 달성하며, 상기 완전 반응은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 상기 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는
6개월까지 CR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 반응을 유지하고, CR을 유지하고, 및/또는 생존하거나 진행 없이 생존하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 달성하고, 선택적으로 상기 OR은 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하거나 또는 상기 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 지속 가능하고; 및/또는
6개월까지 OR을 달성한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 반응 또는 생존을 유지하는, 방법.
제45항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포의 단위 용량의 투여 시점 또는 직전에, 상기 대상체는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 용량 이외의 NHL에 대한 하나 이상의 선행 요법, 선택적으로 1, 2 또는 3개의 선행 요법으로의 치료 후 관해 후에 재발했거나 이에 대해 불응성이 되었던, 방법.
제45항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포의 단위 용량의 투여 시 또는 전에:
상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고;
상기 대상체는 화학요법 불응성(chemorefractory) 림프종, 선택적으로 화학요법 불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었고; 및/또는
상기 대상체는 선행 요법에 반응하여 완전 관해(CR)를 달성하지 않았던, 방법.
제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여는:
상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형을 역전시키고;
상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고;
상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포 내 탈진 표현형의 수준 또는 정도를 감소시키고; 또는
상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 총 수 중에서 탈진 표현형을 갖는 백분율을 감소시키는, 방법.
제1항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여 개시는 상기 T 세포 요법의 투여 이후에 수행되고,
상기 화합물의 투여 또는 이의 개시 이후에, 상기 대상체는 상기 대상체에서 CAR-발현 T 세포의 항원- 또는 종양-특이적 활성 또는 기능의 복구 또는 구제(rescue)를 나타내고,
선택적으로 상기 복구, 구제 및/또는 상기 화합물의 투여 개시는 상기 대상체 내 또는 상기 대상체의 혈액 내 CAR-발현 T 세포가 탈진된 표현형을 나타낸 후의 시점인, 방법.
제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여는:
(a) 상기 화합물의 상기 투여의 부재(absence)와 비교하여, CD19 항원에 또는 항원 수용체-특이적 제제에 상기 T 세포의 노출 후, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는, 나이브 또는 비탈진된 T 세포의 항원 특이적 또는 항원 수용체-추진 활성의 증가를 초래하기에; 또는
(b) 상기 화합물의 상기 투여의 부재와 비교하여, CD19 항원에 또는 항원 수용체-특이적 제제에 상기 T 세포의 노출 후, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는, 나이브 또는 비탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형의 발현을 예방, 억제 또는 지연시키기에; 또는
(c) 상기 대상체의 상기 투여의 부재와 비교하여, 상기 대상체에서 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 선택적으로 포함하는 탈진된 T 세포 내의 탈진 표현형을 역전시키기에;
효과적인 양, 빈도 및/또는 기간의 투여를 포함하는, 방법.
제88항에 있어서,
상기 화합물의 투여는
(i) 상기 활성의 증가를 초래하기에, 및
(ii) 상기 탈진 표현형의 상기 발현을 예방, 억제 또는 지연시키고, 및/또는 상기 탈진 표현형을 역전시키기에,
효과적인 양, 빈도 및/또는 기간의 투여를 포함하는, 방법.
제88항 또는 제89항에 있어서,
상기 대상체 내의 상기 T 세포는 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하고, 및/또는 상기 항원은 CD19인, 방법.
제86항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서,
T 세포 또는 T 세포의 집단과 관련하여, 상기 탈진 표현형은:
동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, T 세포 또는 T 세포들 상에서 표면 발현의 수준 또는 정도, 또는 하나 이상의 탈진 마커, 선택적으로 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탈진 마커의 표면 발현을 나타내는 상기 T 세포의 집단의 백분율의 증가; 또는
동일한 조건에서 기준 T 세포 집단과 비교하여, CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 노출 시 상기 T 세포 또는 T 세포의 집단에 의해 나타나는 활성의 수준 또는 정도의 감소;
를 포함하는, 방법.
제91항에 있어서,
상기 수준, 정도 또는 백분율의 증가는 (약) 1.2배, (약) 1.5배, (약) 2.0배, (약) 3배, (약) 4배, (약) 5배, (약) 6배, (약) 7배, (약) 8배, (약) 9배, (약) 10배 초과 또는 그 이상인, 방법.
제91항에 있어서,
상기 수준, 정도 또는 백분율의 감소는 (약) 1.2배, (약) 1.5배, (약) 2.0배, (약) 3배, (약) 4배, (약) 5배, (약) 6배, (약) 7배, (약) 8배, (약) 9배, (약) 10배 초과 또는 그 이상인, 방법.
제91항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 T 세포 집단은 비-탈진된 표현형을 가진 것으로 알려진 T 세포의 집단이거나, 나이브 T 세포의 집단이거나, 중앙 기억 T 세포의 집단이거나, 또는 줄기 중앙 기억 T 세포의 집단이고,
선택적으로 이들은 동일한 대상체로부터 유래했거나 또는 상기 대상체와 동일한 종의 것이고,
이 대상체로부터 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래되는, 방법.
제91항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 T 세포 집단은
(a) 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체의 혈액으로부터 단리된 벌크 T 세포를 포함하는 대상체 일치 집단(subject-matched population)이고, 선택적으로 상기 벌크 T 세포는 상기 CAR을 발현하지 않음, 및/또는
(b) 상기 CAR을 발현하는 T 세포의 단위 용량의 투여를 받기 전, 상기 탈진 표현형을 갖는 상기 T 세포 또는 T 세포들이 유래된 대상체로부터 수득되는, 방법.
제91항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 T 세포 집단은 상기 T 세포 요법의 샘플을 포함하는 조성물, 또는 상기 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 약학 조성물이고, 상기 대상체에 이의 투여 전, 선택적으로 상기 조성물은 동결보존된 샘플인, 방법.
제91항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 탈진 마커는 억제성 수용체인, 방법.
제91항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 탈진 마커는 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, BTLA, 2B4, CD160, CD39, VISTA, 및 TIGIT 중에서 선택되는, 방법.
제91항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 활성은 염증성 사이토카인의 하나 또는 조합의 증식, 세포독성 또는 생산 중 하나 이상이고,
선택적으로 상기 사이토카인의 하나 또는 조합은 IL-2, IFN-감마 및 TNF-알파로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
제91항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제, 선택적으로 상기 CAR의 항원-결합 도메인에 결합하는 제제와의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
제100항에 있어서,
상기 CD19 항원 또는 항원 수용체-특이적 제제에 대한 노출은 T 세포를 CD19 항원-발현 표적 세포, 선택적으로 B 세포 악성종양의 세포에 노출시키는 것을 포함하는, 방법.