KR20220114043A

KR20220114043A - 항-bcma car 항체, 접합체, 및 사용 방법

Info

Publication number: KR20220114043A
Application number: KR1020227023980A
Authority: KR
Inventors: 케빈 프리드먼; 몰리 리드 퍼킨스
Original assignee: 2세븐티 바이오, 인코포레이티드
Priority date: 2019-12-16
Filing date: 2020-12-16
Publication date: 2022-08-17
Also published as: CN114929277A; EP4076522A4; WO2021127007A1; US20230030085A1; JP2023506262A; EP4076522A1

Abstract

본 발명은 T 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현을 검출하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 본 발명은 일반적으로 항체 및 이의 항원 결합 단편, 이의 접합체, 및 이를 사용하여 하나 이상의 T 세포 상에서 CAR T 세포 및/또는 CAR 발현을 검출, 결정, 또는 측정하는 방법을 제공한다.

Description

항-BCMA CAR 항체, 접합체, 및 사용 방법

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 35 U.S.C. § 119(e)에 의거하여 2019년 12월 16일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/948,488호의 이익을 주장하며, 그 전체는 참조로서 본원에 통합된다.

서열 목록에 관한 진술

본 출원과 연관된 서열 목록은 종이 사본 대신에 텍스트 형식으로 제공되며, 참조로서 본 명세서에 통합된다. 서열 목록이 포함된 텍스트 파일의 명칭은 BLUE-97PC2_ST25.txt이다. 2020년 12월 10일에 생성된 텍스트 파일은 26 KB였으며, 본 명세서의 출원과 동시에 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출된다.

기술 분야

본 발명은 항체 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편, 및 이들의 접합체, 및 이를 사용하여 항-BCMA CAR T 세포를 검출하는 방법에 관한 것이다.

관련 기술에 대한 설명

유전적 접근법은 암 세포의 면역 인식 및 제거를 강화하기 위한 잠재적 수단을 제시한다. 하나의 유망한 전략은, 종양 세포를 향해 세포독성을 재유도하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 면역 효과기 세포를 유전적으로 조작하는 것이다. 그러나, 하나 이상의 입양적으로 전달된 CART 세포에서 CAR 발현을 정밀하게 측정하고 생체 내에서 CAR T 세포의 지속성을 측정하는 것은 어려웠는데, 이는 CAR T 세포 활성을 측정하려는 시도를 혼란스럽게 한다. CAR T 세포를 평가하는 가장 흔한 접근법은 CAR-특이적 프라이머를 사용하는 정량적 PCR이다. 그러나, 이러한 기술은 적절하지 않고 CAR T 세포의 다중 파라미터 분석을 가능하게 하지 않는다.

본 발명은 일반적으로 항체 및 이의 항원 결합 단편, 이들의 접합체, 및 이를 사용하여 하나 이상의 T 세포에서 CAR⁺T 세포 및/또는 CAR 발현을 검출, 결정, 또는 측정하는 방법을 제공한다.

다양한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열 및 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함한다.

소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항원 결합 단편이다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: Fab' 단편, F(ab')2 단편, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), Fv, 단쇄 Fv 단백질("scFv"), 비스-scFv, (scFv)2, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이황화 결합에 의해 안정화된 Fv 단백질("dsFv"), 및 단일 도메인 항체(sdAb, 나노바디).

소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 scFv이다.

소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 경쇄 서열 및 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 중쇄 서열을 포함한다.

소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 9에 제시된 항-BCMA CAR 서열의 하나 이상의 에피토프에 결합한다.

소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 10에 제시된 항-BCMA CAR 서열의 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 마우스 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간화 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 항체이다.

소정의 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 불변 도메인을 포함한다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 도메인은 IgG1 불변 도메인을 포함한다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 도메인은 마우스 IgG1 하위 유형이다.

다양한 구현예에서, 접합체는 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 검출을 위한 수단을 포함한다.

다양한 구현예에서, 접합체는 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 검출 수단을 포함한다.

다양한 구현예에서, 접합체는 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 검출 가능한 표지를 포함한다.

일부 구현예에서, 검출 가능한 표지는: 합텐(hapten), 형광 염료, 형광 단백질, 발색단, 금속 이온, 금 입자, 은 입자, 자기 입자, 폴리펩티드, 효소, 발광 화합물, 또는 올리고뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.

특정 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 염료이다: Oregon Green®, Pacific Blue™, Pacific Orange™, Pacific Green™, Cascade Blue™, Cascade Yellow™, Lucifer Yellow™, Marina Blue™, 및 Texas Red® (TxRed).

소정의 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 AlexaFluor®(AF) 염료이다: AF350, AF405, AF488,AF500, AF514, AF532, AF546, AF555, AF568, AF594, AF610, AF633, AF635, AF647, AF680, AF700, AF710, AF750, AF790, 및 AF800.

일부 구현예에서, 검출 가능한 표지는 AlexaFluor®(AF) 염료 AF488을 포함한다.

일부 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 QDot®이다: Qdot®525, Qdot®565, Qdot®585, Qdot®605, Qdot®655, Qdot®705, 및 Qdot®800.

특정 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 DyLight™(DL) 염료이다: DL549, DL649, DL680, 및 DL800.

소정의 구현예에서, 검출 가능한 표지는 플루오레세인 또는 이의 유도체, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 카복시플루오레세인, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 디곡시게닌, 디니트로페놀(DNP), 트리니트로페놀(TNP), 및 비오틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 합텐이다.

특정 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 Cy 염료이다: Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, Cy7, 및 Cy 7.5.

일부 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 분자이다: 피코에리트린(PE, R-피코에리트린(RPE)), B-피코에리트린(BPE), 페리디닌 클로로필(PerCP), 알로피코시아닌(APC), 및 C-피코시아닌.

특정 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 염료이다: Atto 390, Atto 425, Atto 465, Atto 488, Atto 495, Atto 514Atto 520, Atto 532, Atto 550, Atto 565, Atto 590, Atto 594, Atto 610, Atto 620, Atto 633, Atto 647, Atto 655, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, Atto 740, Super Bright™ 436, Super Bright™ 600, Super Bright™ 645, Super Bright™ 702, Super Bright™ 780, Brilliant™ Violet 421, Brilliant™ Violet 480, Brilliant™ Violet 510, Brilliant™ Violet 605, Brilliant Violet™ 650, Brilliant Violet™ 711, Brilliant Violet™ 786, Brilliant™ Ultraviolet 395 (BUV395), Brilliant™ Ultraviolet 496 (BUV496), Brilliant™ Ultraviolet 563 (BUV563), Brilliant™ Ultraviolet 661 (BUV661), Brilliant™ Ultraviolet 737 (BUV737), Brilliant™ Ultraviolet 805 (BUV805), Brilliant™ Blue 515 (BB515), Brilliant™ Blue 700 (BB700), 및 IR 염료 680, IR 염료 680LT, IR 염료 700, IR 염료 700DX, IR 염료 800, IR 염료 800RS, 및 IR 염료 800CW.

소정의 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 탠덤 형광 염료이다: RPE-Cy5, RPE-Cy5.5, RPE-Cy7, RPE-CF594, RPE-AlexaFluor® 탠덤 접합체; RPE-Alexa610, RPE-TxRed, APC-H7, APC-R700, APC-Alexa600, APC-Alexa610, APC-Alexa750, APC-Cy5, APC- Cy5.5, 및 APC-Cy7.

소정의 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 단백질이다: GFP, eGFP, BFP, CFP, YFP, DsRed, DsRed2, mRFP, mBanana, mOrange, dTomato, tdTomato, mTangerine, mStrawberry, mCherry, mPlum, 및 mRaspberry.

특정 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 효소이다: 알칼리 인산분해효소, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제, 루시페라아제, 및 β-갈락토시다아제.

소정의 구현예에서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 방사성 핵종(radionuclide)을 포함한다: 탄소(14C), 크롬(51Cr), 코발트(57Co), 불소(18F), 가돌리늄(153Gd, 159Gd), 게르마늄(68Ge), 홀뮴(166Ho), 인듐(115In, 113In, 112In, mIn), 요오드(125I, 123I, 121I), 란타늄(140La), 루테튬(177Lu), 망간(54Mn), 몰리브덴(99 Mo), 팔라듐(103 Pd), 인(32 P), 프라세오디뮴(142 Pr), 프로메티움(149Pm), 레늄(186Re, 188Re), 로듐(105Rh), 루테늄(97Ru), 사마륨(153Sm), 스칸듐(47Sc), 셀레늄(75Se), (85 Sr), 황(35S), 테크네튬 (99Tc), 탈륨(201Ti), 주석(113Sn, 117Sn), 트리튬(3H), 크세논(133Xe), 이터비움(169Yb, 175Yb), 및 이트륨(90Y).

다양한 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화한다.

소정의 구현예에서, 숙주 세포는 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.

일부 구현예에서, 조성물은 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 접합체, 폴리뉴클레오티드, 또는 숙주 세포를 포함한다.

다양한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생산하는 방법은 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 숙주 세포에서 발현시키는 단계, 및 항체를 회수하거나 단리하는 단계를 포함한다.

소정의 구현예에서, 키트는 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체, 및 사용 지침을 포함한다.

특정 구현예에서, T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 검출하는 방법은 T 세포를 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 접촉시키는 단계, 및 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다.

다양한 구현예에서, T 세포의 집단에서 항-BCMA CAR의 발현을 검출하는 방법은 T 세포의 집단을 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 접촉시키는 단계, 및 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다.

소정의 구현예에서, T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 방법은 T 세포를 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 접촉시키는 단계, 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계, 및 복합체의 양을 측정하여 T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 단계를 포함한다.

특정 구현예에서, T 세포 집단에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 방법은 T 세포의 집단을 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 접촉시키는 단계, 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계, 및 복합체의 양을 측정하여 하나 이상의 T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 단계를 포함한다.

다양한 구현예에서, T 세포의 집단에서 항-BCMA CAR+ T 세포의 수를 결정하는 방법은 T 세포의 집단을 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 접촉시키는 단계, 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계, 및 항-BCMA CAR을 발현하는 T 세포를 계수하는 단계를 포함한다.

일부 구현예에서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR) 기반 바이오센서(예: BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출한다.

소정의 구현예에서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR) 기반 바이오센서(예: BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항체:항-BCMA CAR 복합체의 양을 측정한다.

특정 구현예에서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR) 기반 바이오센서(예: BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항-BCMA CAR을 발현하는 T 세포를 계수한다.

서열 식별자의 간단한 설명

서열번호 1~3은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 경쇄 CDR 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 4~6은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 중쇄 CDR 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 7은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 가변 경쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 8은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 가변 중쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 9는 서열번호 1~8에 제시된 서열을 포함하는 항체에 의해 결합된 항-BCMA CAR의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 10은 서열번호 1~8에 제시된 서열을 포함하는 항체에 의해 결합된 항-BCMA CAR의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 11은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 경쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 12는 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 중쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 13은 항-BCMA CAR에 결합하는 항체에 대한 예시적인 중쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.

서열번호 14~24는 다양한 링커의 아미노산 서열을 제시한다.

A. 개요

본 발명은 일반적으로 항-BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편, 및 이들의 접합체, 조성물, 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호 9 또는 서열번호 10에 제시된 항-BCMA CAR에 결합하는 항체, 단편, 및 접합체, 조성물, 및 이의 용도에 관한 것이다.

BCMA는 종양 괴사 인자 수용체 상과의 구성원이다(예를 들어, Thompson 등의 문헌[J. Exp. Medicine, 192(1): 129-135, 2000], 및 Mackay 등의 문헌[Annu. Rev. Immunol, 21: 231-264, 2003] 참조). BCMA는 B-세포 활성화 인자(BAFF) 및 증식 유도 리간드(APRIL)에 결합한다(예를 들어, Mackay 등의 2003년 문헌 및 Kalled 등의 문헌[Immunological Reviews, 204: 43-54, 2005] 참조). 비악성 세포 중에서, BCMA는 주로 형질 세포 및 성숙한 B-세포의 하위 집합에서 발현되는 것으로 보고되었다(예를 들어, Laabi 등의 문헌[EMBO J., 77(1 ): 3897-3904, 1992]; Laabi 등의 문헌[Nucleic Acids Res., 22(7): 1147-1154, 1994]; Kalled 등의 2005년 문헌; O'Connor 등의 문헌[J. Exp. Medicine, 199(1): 91-97, 2004]; 및 Ng 등의 문헌[J. Immunol., 73(2): 807-817, 2004] 참조). BCMA 결핍 마우스는 건강하고 B 세포의 수가 정상이지만, 수명이 긴 형질 세포의 생존이 손상된다(예를 들어, O'Connor 등의 2004년 문헌; Xu 등의 문헌[Mol. Cell. Biol, 21(12): 4067-4074, 2001]; 및 Schiemann 등의 문헌[Science, 293(5537): 2111-2114, 2001] 참조). BCMA RNA는 다발성 골수종 세포 및 다른 림프종에서 보편적으로 검출되었고, BCMA 단백질은 다발성 골수종 환자의 형질 세포 표면에서 여러 연구원에 의해 검출되었다(예를 들어, Novak 등의 문헌[Blood, 103(2): 689-694, 2004]; Neri 등의 문헌[Clinical Cancer Research, 73(19): 5903-5909, 2007]; Bellucci 등의 문헌[Blood, 105(10): 3945-3950, 2005]; 및 Moreaux 등의 문헌[Blood, 703(8): 3148-3157, 2004] 참조).

항-BCMA CAR은 다발성 골수종 또는 B 세포 림프종을 가진 대상체에게 잠재적으로 치유성의 1회성 요법을 제공한다. 항-BCMA CAR 발현과 활성을 상관시키는 데 사용되는 기존의 방법은 준최적이며 개선이 요구된다. 기존의 방법을 사용하는 경우, 생체외 및 생체내 모두에서 항-BCMA CAR 발현과 활성을 정밀하게 상관시키고, 환자에서 항-BCMA CAR T 세포의 생존과 지속성을 추적하는 것이 어렵다. 항-BCMA CAR에 결합하는 본원에서 고려되는 항체, 단편, 및 접합체, 조성물, 및 관련 사용 방법은 이들 및 다른 문제에 대한 해결책을 제공한다.

다양한 구현예에서, 항-BCMA 항체 또는 이의 일부에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 검출 가능한 표지를 추가로 포함할 수 있다.

항체 및 이의 항원 결합 단편, 이의 접합체, 및 관련 조성물을 사용하는 방법이 또한 본원에 개시된다.

재조합(즉, 조작된) DNA, 펩티드 및 올리고뉴클레오티드 합성, 면역검정, 조직 배양, 형질변환(예를 들어, 전기천공, 리포펙션), 효소 반응, 정제를 위한 기술 및 관련 기술과 절차는 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 것과 같이 미생물학, 분자 생물학, 생화학, 분자 유전학, 세포 생물학, 바이러스학, 및 면역학에 있어서의 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참조 문헌에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들어, Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제3판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, updated July 2008); Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience; Glover, DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (IRL Press, Oxford Univ. Press USA, 1985); Current Protocols in Immunology (편집: John E. Coligan, Ada M. Kruisbeek, David H. Margulies, Ethan M. Shevach, Warren Strober 2001 John Wiley & Sons, NY, NY); Real-Time PCR: Current Technology and Applications, Julie Logan, Kirstin Edwards 및 Nick Saunders 편, 2009, Caister Academic Press, Norfolk, UK; Anand, Techniques for the Analysis of Complex Genomes, (Academic Press, New York, 1992); Guthrie 및 Fink, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology (Academic Press, New York, 1991); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait 편, 1984); Nucleic Acid The Hybridization (B. Hames & S. Higgins 편, 1985); Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins 편, 1984); Animal Cell Culture (R. Freshney 편, 1986); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Next-Generation Genome Sequencing (Janitz, 2008 Wiley-VCH); PCR Protocols (Methods in Molecular Biology) (Park 편, 제3판, 2010 Humana Press); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller 및 M. P. Calos 편, 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Harlow 및 Lane, Antibodies, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer 및 Walker 편, Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir 및 CC Blackwell 편, 1986); Roitt, Essential Immunology, 제6판 (Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1988); Current Protocols in Immunology (편집: Q. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach 및 W. Strober, 1991); Annual Review of Immunology; 및 Advances in Immunology과 같은 저널의 연구논문.

B. 정의

본 개시를 보다 상세히 제시하기에 앞서, 본원에서 사용될 특정 용어의 정의를 제공하는 것이 본 개시를 이해하는 데 도움이 될 수 있다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 특정 구현예의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 조성물, 방법 및 물질의 바람직한 구현예가 본원에 기술된다. 본 개시의 목적을 위해, 다음의 용어가 아래에 정의된다. 추가의 정의는 본 개시 전체에 걸쳐 제시되어 있다.

단수 표현(관사 "a", "an", 및 "the")은 단수 표현된 문법적 객체의 하나 또는 둘 이상(즉, 적어도 하나, 또는 하나 이상)을 지칭하도록 본원에서 사용된다. 예를 들어, "하나의 요소(an element)"는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.

대안예(예를 들어, "또는(or)")의 사용은 대안예 중 하나, 둘 다, 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.

용어 "및/또는(and/or)"은 대안예 중 어느 하나 또는 둘 다를 의미하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 기준 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량, 또는 길이에 대해 많게는 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 만큼 달라지는 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량, 또는 길이를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 기준 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량, 또는 길이에 대해 ± 15%, ± 10%, ± 9%, ± 8%, ± 7%, ± 6%, ± 5%, ± 4%, ± 3%, ± 2%, 또는 ± 1% 범위인 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량, 또는 길이를 지칭한다.

본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥이 달리 요구하지 않는 한, "포함하다(comprise, comprises, 및 comprising)"라는 단어는 언급된 단계나 요소 또는 단계나 요소의 군을 포함하는 것을 의미하지만 임의의 다른 단계나 요소 또는 단계나 요소의 군을 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다. "이루어지는(consisting of)"이란 "이루어지는"이라는 문구에 이어지는 것 포함하고, 이에 한정됨을 의미한다. 따라서, 문구 "이루어지는"은 열거된 요소가 요구되거나 필수적이며, 다른 요소가 존재할 수 없음을 나타낸다. "본질적으로 이루어지는(consisting essentially of)"이란, 해당 문구에 이어지는 열거된 임의의 요소를 포함하고, 열거된 요소에 대해 본 개시에서 명시된 활성 또는 작용을 방해하거나 이에 기여하지 않는 다른 요소로 제한됨을 의미한다. 따라서, 문구 "본질적으로 이루어지는"은 열거된 요소가 요구되거나 필수적이지만, 열거된 요소의 활성 또는 작용에 중대하게 영향을 미치는 다른 요소는 존재하지 않음을 나타낸다.

본 명세서 전반에 걸쳐 "일 구현예(one embodiment, an embodiment)", "특정 구현예(a particular embodiment, a certain embodiment)", "연관 구현예(a related embodiment)", 또는 "추가 구현예(an additional embodiment 또는 a further embodiment)" 또는 이들의 조합은 구현예와 관련하여 기술된 특정 특징, 구조, 또는 특성이 본 발명의 적어도 하나의 구현예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전반에 걸쳐 다양한 위치에서 나타나는 전술한 문구 모두가 본질적으로 동일한 구현예를 지칭하는 것은 아니다. 또한, 특정 특징, 구조, 또는 특성은 하나 이상의 구현예에서 임의의 적절한 방식으로 조합될 수 있다. 또한, 일 구현에서 특징을 확실하게 언급하는 것(positive recitation)이 특정 구현예에서 해당 특징을 배제하기 위한 기초의 역할을 한다는 것도 이해가 될 것이다.

C. 항체

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.

용어 "항체"는 항원 결정인자를 함유하는 핵산, 펩티드, 지질, 또는 다당류와 같은 항원, 예컨대 면역 세포에 의해 인식되는 항원의 하나 이상의 에피토프를 특이적으로 인식하여 이에 결합하고, 적어도 하나의 경쇄 또는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 폴리펩티드인 결합제를 지칭한다.

"에피토프" 또는 "항원 결정인자"는 결합제가 결합하는 항원의 영역을 지칭한다. 에피토프는 단백질의 3차 접힘에 의해 병치된 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산 둘 모두로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 통상적으로 변성 용매에 노출시 유지되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 통상적으로 변성 용매로 처리시 손실된다. 에피토프는 일반적으로 적어도 3개, 보다 일반적으로 적어도 5개, 약 9개, 또는 약 8 내지 10개의 아미노산을 고유의 공간 형태로 포함한다.

"단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편"은 자연 환경의 성분으로부터 식별되고 분리되고/되거나 회수된 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다.

본원에서 사용되는 용어 "특이적 결합 친화도" 또는 "특이적으로 결합하는(specifically binds 또는 specifically bound)" 또는 "특이적으로 표적화하는(specifically targets)"는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 배경 결합보다 더 큰 결합 친화도로 항-BCMA CAR에 결합하는 것을 기술한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 예를 들어 약 10⁵ M^-1 이상의 친화도 또는 K_a(즉, 특정 결합 상호작용의 평형 결합 상수(단위: 1/M))로 항-BCMA CAR에 결합하는 경우, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-BCMA CAR에 "특이적으로 결합"한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 10⁶ M^-1, 10⁷ M^-1, 10⁸ M^-1, 10⁹ M^-1, 10¹⁰ M^-1, 10¹¹ M^-1, 10¹² M^-1, 또는 10¹³ M^-1이상의 K_a로 항-BCMA CAR에 결합한다. "고 친화도(high affinity)" 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 10⁷ M^-1, 적어도 10⁸ M^-1, 적어도 10⁹ M^-1, 적어도 10¹⁰ M^-1, 적어도 10¹¹ M^-1, 적어도 10¹² M^-1, 적어도 10¹³ M^-1, 또는 그 이상의 K_a를 갖는다.

대안적으로, 친화도는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(K_d)로서 정의될 수 있으며, 단위는 M이다(예를 들어, 10^-5 M 내지 10^-13 M, 또는 그 미만). 본원에서 고려되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 친화도는 종래의 기술을 사용하여, 예를 들어 경쟁 ELISA(효소 결합 면역흡착 검정)에 의해, 또는 결합 회합(binding association) 또는 표지된 리간드를 사용하는 변위 검정에 의하거나, Biacore T100(Biacore, Inc., Piscataway, NJ로부터 입수 가능함)과 같은 표면-플라즈몬 공명 장치, 또는 EPIC 시스템(Corning으로부터 입수 가능함)이나 EnSpire(Perkin Elmer로부터 입수 가능함)와 같은 광학 바이오센서 기술을 사용해 쉽게 결정될 수 있다(예를 들어 Scatchard 등의 문헌[(1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660]; 및 미국 특허 제5,283,173호; 제5,468,614호, 또는 등가물을 또한 참조함).

일 구현예에서, 특이적 결합의 친화도는 배경 결합보다 약 2배 더 크거나, 배경 결합보다 약 5배 더 크거나, 배경 결합보다 약 10배 더 크거나, 배경 결합보다 약 20배 더 크거나, 배경 결합보다 약 50배 더 크거나, 배경 결합보다 약 100배 더 크거나, 배경 결합보다 약 1000배 더 크다.

"항원(Ag)"는 동물에게 주입되거나 흡수되는 조성물(예를 들어, 암-특이적 단백질을 포함하는 조성물)을 포함하여, 동물에서 항체의 생성 또는 T 세포 반응을 자극할 수 있는 화합물, 조성물, 또는 물질을 지칭한다. 항원은, 개시된 항원과 같은 이종 항원에 의해 유도된 것들을 포함하여 특이적 체액성 또는 세포성 면역의 산물과 반응한다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 항-BCMA CAR을 포함한다.

항체는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 낙타 Ig, Ig NAR, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 단편, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), Fv, 단쇄 Fv 단백질("scFv"), 비스-scFv, (scFv)₂, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이황화 결합으로 안정화된 Fv 단백질("dsFv"), 및 단일 도메인 항체(sdAb, 나노바디) 및 항원 결합을 담당하는 전장 항체의 일부분을 포함한다. 전술한 용어는 또한 키메라 항체(예를 들어, 인간화 쥣과 항체), 이종접합체 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 및 이들의 항원 결합 단편과 같은 유전자 조작된 형태를 포함한다. Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J.의 문헌[Immunology, 3^rd Ed, W. H. Freeman & Co., New York, 1997]을 또한 참조한다.

당업자에 의해 이해되고 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같이, 완전한 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 각각의 중쇄는 가변 영역 및 제1, 제2 및 제3 불변 영역으로 구성되는 반면, 각각의 경쇄는 가변 영역 및 불변 영역으로 구성된다. 포유류 중쇄는 α, δ, ε, γ, 및 μ로 분류된다. 포유류 경쇄는 λ 또는 κ로 분류된다. α, δ, ε, γ, 및 μ 중쇄를 포함하는 면역글로불린은 면역글로불린 (Ig)A, IgD, IgE, IgG, 및 IgM으로 분류된다. 완전한 항체는 "Y" 형상을 형성한다. Y의 줄기는 함께 결합된 2개의 중쇄의 제2 및 제3 불변 영역(및 IgE 및 IgM의 경우, 제4 불변 영역)으로 이루어지고, 힌지 내에 이황화 결합(간쇄)이 형성된다. 중쇄 γ, α, 및 β는 3개의 탠덤(일렬) Ig 도메인으로 이루어진 불변 영역, 및 유연성을 더하기 위한 힌지 영역을 가지며; 중쇄 μ 및 ε은 4개의 면역글로불린 도메인으로 이루어진 불변 영역을 갖는다. 제2 및 제3 불변 영역은 각각 "CH2 도메인" 및 "CH3 도메인"으로 지칭된다. Y의 각각의 아암은 단일 경쇄의 가변 및 불변 영역에 결합된 단일 중쇄의 가변 영역 및 제1 불변 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다.

경쇄 및 중쇄 가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로도 지칭되는 3개의 초가변 영역에 의해 차단된 "프레임워크" 영역을 포함한다. CDR은 종래의 방법, 예컨대 Kabat 등(Wu, TT 및 Kabat, E. A., J Exp Med. 132(2):211-50, (1970); Borden, P. 및 Kabat E. A., PNAS, 84: 2440-2443 (1987); (Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991 참조, 이는 본원에 참조로서 포함됨)에 따른 서열, 또는 Chothia 등(Chothia, C. 및 Lesk, A.M., J Mol. Biol., 196(4): 901-917 (1987), Chothia, C. 등, Nature, 342: 877 - 883 (1989))에 따른 구조에 의해 정의되거나 식별된다.

경쇄 CDR을 예측하기 위한 규칙의 예시적인 예는 다음을 포함한다: CDR-L1은 대략 잔기 24에서 시작하고, Cys가 선행하고, 약 10 내지 17개의 잔기이고, Trp가 이어지고(일반적으로 Trp-Tyr-Gln이지만, Trp-Leu-Gln, Trp-Phe-Gln, Trp-Tyr-Leu이기도 함); CDR-L2는 CDR-L1의 단부 이후 대략 16개의 잔기에서 시작하고, 일반적으로 Ile-Tyr이 선행하지만, Val-Tyr, Ile-Lys, Ile-Phe가 선행하기도 하고, 7개의 잔기이며; CDR-L3은 CDR-L2의 단부 이후 대략 33개의 잔기에서 시작하고, Cys가 선행하고, 7 내지 11개의 잔기이고, Phe-Gly-XXX-Gly(XXX는 임의의 아미노산임)(서열번호 25)가 이어진다.

중쇄 CDR을 예측하기 위한 규칙의 예시적인 예는 다음을 포함한다: CDR-H1은 대략 잔기 26에서 시작하고, Cys-XXX-XXX-XXX(서열번호 26)가 선행하고, 10 내지 12개의 잔기이고, Trp(일반적으로 Trp-Val이지만, Trp-Ile, Trp-Ala이기도 함)가 이어지고; CDR-H2는 CDR-H1의 단부 이후 약 15개의 잔기에서 시작하고, 일반적으로 Leu-Glu-Trp-Ile-Gly(서열번호 27) 또는 단수의 변형이 선행하고, 16 내지 19개의 잔기이고, Lys/Arg-Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala가 이어지며; CDR-H3은 CDR-H2의 단부 이후 대략 33개의 잔기에서 시작하고, Cys-XXX-XXX(일반적으로 Cys-Ala-Arg)가 선행하고, 3 내지 25개의 잔기이고, Trp-Gly-XXX-Gly(서열번호 28)이 이어진다.

일 구현예에서, 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR은 Kabat 방법에 따라 결정된다.

일 구현예에서, 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR2 및 CDR3은 Kabat 방법에 따라 결정되고, 중쇄 CDR1은 Kabat 방법과 Clothia 방법 사이에 포함되는 AbM 방법에 따라 결정된다(예를 들어, Whitelegg N & Rees AR의 문헌[Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24] 및 [Methods Mol Biol. 2004;248:51-91] 참조). CDR 예측을 위한 프로그램은 공개적으로 이용할 수 있다(예를 들어, AbYsis(www.bioinf.org.uk/abysis/)).

상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역의 서열은 인간과 같은 종 내에서 상대적으로 보존된다. 항체의 프레임워크 영역, 즉 구성 경쇄 및 중쇄의 합쳐진 프레임워크 영역은 CDR을 3차원 공간에 위치시키고 정렬하는 역할을 한다. CDR은 주로 항원의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 것을 담당한다. 각 사슬의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 지칭되고, N-말단에서 시작하여 순차적으로 번호가 매겨지며, 일반적으로 특정 CDR이 위치하는 사슬에 의해서도 식별된다. 따라서, 항체의 중쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3으로 지칭되는 반면, 항체의 경쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3으로 지칭된다. 상이한 특이성(즉, 상이한 항원에 대해 상이한 결합 부위)을 갖는 항체는 상이한 CDR을 갖는다. 항체마다 다른 것이 CDR이지만, CDR 내의 제한된 수의 아미노산 위치만이 항원 결합에 직접 관여한다. CDR 내의 이러한 위치를 특이성 결정 잔기(SDR)라고 한다. 경쇄 CDR의 예시적인 예는 서열번호 1~39로 제시된 CDR 서열을 포함한다. 중쇄 CDR의 예시적인 예는 서열번호 4~6으로 제시된 CDR 서열을 포함한다.

"V_L" 또는 "VL"에 대한 언급은 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 지칭하며, 항체, Fv, scFv, dsFv, Fab, 또는 본원에 개시된 것과 같은 다른 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 경쇄 가변 영역의 예시적인 예는 서열번호 7에 제시된 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.

"V_H" 또는 "VH"에 대한 언급은 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 지칭하며, 항체, Fv, scFv, dsFv, Fab, 또는 본원에 개시된 것과 같은 다른 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 중쇄 가변 영역의 예시적인 예는 서열번호 8에 제시된 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다.

"단클론 항체"는 B 림프구의 단일 클론에 의해, 또는 단일 항체의 경쇄 및 중쇄 유전자가 형질감염된 세포에 의해 생산된 항체이다. 단클론 항체는, 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어 골수종 세포를 면역 비장 세포와 융합시켜 하이브리드 항체 형성 세포를 제조함으로써 생산된다. 단클론 항체는 인간화 단클론 항체를 포함한다.

"키메라 항체"는 인간과 같은 하나의 종으로부터의 프레임워크 잔기, 및 마우스와 같은 다른 종으로부터의 CDR(대체로 항원 결합을 부여함)을 갖는다. 특정 바람직한 구현예에서, 항체는 키메라 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 항원 특이적 결합 도메인을 포함한다.

특정 구현예에서, 항체는 인간 항체(예를 들어, 인간 단클론 항체) 또는 이의 단편이다. 인간 항체는 인간 유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열(들)을 전술한 바와 같은 공지된 인간 불변 도메인 서열(들)과 조합함으로써 작제될 수 있다. 대안적으로, 인간 단클론 항체는 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는, 예를 들어 Kozbor의 문헌[J. Immunol., 133: 3001 (1984)]; Brodeur 등의 문헌[Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]; 및 Boerner 등의 문헌[J. Immunol., 147: 86 (1991)]에 기술되어 있다. 또한, 유전자이식 동물(예를 들어, 마우스)가 내인성 면역글로불린 생산의 부재 하에서의 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생산하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어 Jakobovits 등의 문헌[PNAS USA, 90: 2551 (1993)]; Jakobovits 등의 문헌[Nature, 362: 255 (1993)]; Bruggermann 등의 문헌[Year in Immunol., 7: 33 (1993)] 참조. 유전자 셔플링은 또한, 인간 항체가 시작 비-인간 항체에 대해 유사한 친화도 및 특이성을 갖는, 비-인간 항체, 예를 들어, 설치류 항체로부터 인간 항체를 유도하는 데 사용될 수 있다. (1993년 4월 1일에 공개된 PCT WO 93/06213 참조). CDR 접목에 의한 비-인간 항체의 전통적인 인간화와는 달리, 이 기술은 비인간 기원의 FR 또는 CDR 잔기를 갖지 않는 완전한 인간 항체를 제공한다.

일 구현예에서, 항체는 "인간화" 항체이다. 인간화 항체는 인간 프레임워크 영역 및 비인간(예를 들어, 마우스, 랫트, 또는 합성) 면역글로불린으로부터의 하나 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린이다. CDR을 제공하는 비인간 면역글로불린은 "공여자"로 지칭되고, 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "수용자"로 지칭된다. 일 구현예에서, 모든 CDR은 인간화 면역글로불린에서의 공여자 면역글로불린으로부터 유래한다. 불변 영역은 존재할 필요는 없지만, 존재하는 경우, 이들은 인간 면역글로불린 불변 영역과 실질적으로, 즉 적어도 약 85 내지 90%, 예컨대 약 95% 이상 동일해야 한다. 따라서, 가능한 CDR을 제외한 인간화 면역글로불린의 모든 부분은 천연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분과 실질적으로 동일하다. 인간화 또는 다른 단클론 항체는 항원 결합 또는 다른 면역글로불린 기능에 실질적으로 영향을 미치지 않는 추가적인 보존적 아미노산 치환을 가질 수 있다. 인간화 항체는 유전자 조작에 의해 작제될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호 참조).

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카멜 Ig(카멜리드 항체(VHH)), Ig NAR, Fab 단편, F(ab')₂ 단편, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), Fv, 단쇄 Fv 항체("scFv"), 비스-scFv, (scFv)2, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이황화 결합으로 안정화된 Fv 단백질("dsFv"), 및 단일 도메인 항체(sdAb, 나노바디)를 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "카멜 Ig" 또는 "카멜리드 VHH"는 중쇄 항체의 알려진 가장 작은 항원 결합 단위를 지칭한다(Koch-Nolte 등의 문헌[FASEB J., 21: 3490-3498 (2007)]). "중쇄 항체" 또는 "카멜리드 항체"는 2개의 VH 도메인을 함유하고 경쇄가 없는 항체를 지칭한다(Riechmann L. 등의 문헌[J. Immunol. Methods 231:25-38 (1999)]; WO94/04678; WO94/25591; 미국 특허 제6,005,079호).

"면역글로불린 신규 항원 수용체"의 "IgNAR"는 하나의 가변 신규 항원 수용체(VNAR) 도메인 및 5개의 불변 신규 항원 수용체(CNAR) 도메인의 동종이량체로 이루어진 상어 면역 레퍼토리로부터의 항체 클래스를 지칭한다. IgNAR은 알려진 가장 작은 면역글로불린 기반 단백질 스캐폴드 중 일부를 대표하며, 매우 안정적이고 효율적인 결합 특성을 갖는다. 고유 안정성은 (i) 쥣과 항체에서 발견되는 종래의 항체 VH 및 VL 도메인과 비교하여 상당한 수의 하전되고 친수성 표면 노출된 잔기를 제시하는, 아래에 놓인 Ig 스캐폴드; 및 (ii) 루프 간 이황화 가교를 포함하는 상보적 결정 영역(CDR) 루프에서의 구조적 특징, 및 루프 내 수소 결합의 패턴 둘 모두에 기인할 수 있다.

항체의 파페인(papain) 소화는 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편 및 용이하게 결정화하는 능력을 나타내는 명칭을 갖는 잔여 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교 결합할 수 있는 F(ab')2단편을 생성한다.

"Fv"는 완전한 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 일 구현예에서, 2-쇄 Fv 종은 긴밀하게, 비공유 결합된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 단쇄 Fv(scFv) 종에서, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인은, 경쇄 및 중쇄가 2-쇄 Fv 종에서의 것과 유사한 "이량체" 구조에서 연관될 수 있도록, 가요성 펩티드 링커에 의해 공유 결합될 수 있다. 이러한 구성에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 초가변 영역(HVR)은 상호 작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 HVR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 하나의 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)은, 전체 결합 부위보다 낮은 친화도일지라도 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.

Fab 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유하며, 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은, 항체 힌지 영역 유래의 하나 이상의 시스테인을 포함하여 몇개의 잔기가 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 첨가됨으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'은 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')₂ 항체 단편은 원래 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링 또한 알려져 있다. 이중특이적 Fab 이량체(Fab2)는 2개의 Fab' 단편을 가지며, 각각은 상이한 항원에 결합한다. 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3)는 3개의 Fab' 단편을 가지며, 각각은 상이한 항원에 결합한다.

용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 지칭하며, 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬(VH-VL)에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이의 페어링을 허용하기에 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또 다른 사슬의 상보성 도메인과 페어링되도록 강제되고, 2개의 항원 결합 부위를 생성한다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있다. 디아바디는, 예를 들어, EP 404,097; WO1993/01161; Hudson 등의 문헌[Nat. Med. 9:129-134 (2003)]; 및 Hollinger 등의 문헌[PNAS USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 자세히 기술되어 있다.. 트리아바디 및 테트라비디는 또한 Hudson 등의 문헌[Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기술되어 있다.

"단일 도메인 항체" 또는 "sdAb" 또는 "나노바디"는 항체 중쇄의 가변 영역(VH 도메인) 또는 항체 경쇄의 가변 영역(VL 도메인)으로 이루어진 항체 단편을 지칭한다(Holt, L. 등, Trends in Biotechnology, 21(11): 484-490 참조).

"단쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 여기에서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재하며 어느 한 방향(예를 들어, VL-VH 또는 VH-VL)으로 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv에 대한 검토에 대해, 예를 들어, Pluckthun의 문헌[The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315]을 참조한다.

특정 구현예에서, 항원 결합 단편은 scFv이다. 특정 구현예에서, scFv는 쥣과, 인간, 또는 인간화 scFv이다. 단쇄 항체는 원하는 표적에 대해 특이적인 하이브리도마의 V 영역 유전자로부터 클로닝될 수 있다. 이러한 하이브리도마의 생산은 일상적인 것이 되었다. 가변 영역 중쇄(V_H) 및 가변 영역 경쇄(V_L)를 클로닝하는 데 사용될 수 있는 기술은, 예를 들어 Orlandi 등의 문헌[PNAS, 1989; 86: 3833-3837]에 기술되어 있다.

다양한 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 1~3에 제시된 CDRL1~CDRL3 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 4~6에 제시된 CDRH1~CDRH3 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열 및/또는 서열번호 8 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 것과 같은 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 것과 같은 중쇄 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 경쇄 서열 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 1~3에 제시된 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-BCMA 항체 또는 항체 단편 또는 항-BCMA CAR의 항-BCMA scFv 부분에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 1~3에 제시된 경쇄 CDR 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 경쇄 CDR 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 4~6에 제시된 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 4~6에 제시된 중쇄 CDR 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 중쇄 CDR 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 1~3 중 어느 하나에 제시된 것과 같은 하나 이상의 경쇄 CDR 및 서열번호 4~6 중 어느 하나에 제시된 것과 같은 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 경쇄 서열 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 중쇄 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 9 또는 서열번호 10에 제시된 항-BCMA CAR에 결합하는 가변 경쇄 서열 및/또는 가변 중쇄 서열을 포함한다.

D. 접합체

다양한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 표지를 포함하는 접합체가 제공된다. 바람직한 구현예에서, 접합체는 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 검출 가능한 표지 또는 표지를 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 접합체는, 항-BCMA CAR에 결합하고 검출 가능한 표지에 결합된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 더욱 더 바람직한 구현예에서, 접합체는, 항-BCMA CAR에 결합하고 검출 가능한 표지에 공유 결합되거나 화학적으로 결합된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "표지(label)"는 검출 가능한 표지 또는 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지를 지칭한다. 특정 구현예에서, 표지는 방사성 핵종, 핵산, 소분자, 또는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 표지는 직접적으로 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 표지는 간접적으로 검출 가능하다.

특정 구현예에서 고려되는 접합체에 사용하기에 적합한 검출 가능한 표지의 예시적인 예는, 합텐, 형광 분자, 형광 염료, 형광 단백질, 발색단, 금속 이온, 금 입자, 은 입자, 자기 입자, 방사성 핵종, 폴리펩티드, 효소, 발광 화합물, 또는 올리고뉴클레오티드를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

특정 구현예에서 검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 분자의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다: Oregon Green®; Pacific Blue™; Pacific Orange™; Pacific Green™; Cascade Blue™; Cascade Yellow™; Lucifer Yellow™; Marina Blue™; Texas Red® (TxRed); AlexaFluor®(AF) 염료(예: AF350, AF405, AF488, AF500, AF514, AF532, AF546, AF555, AF568, AF594, AF610, AF633, AF635, AF647, AF680, AF700, AF710, AF750, AF790, 및 AF800); QDot® 나노결정(예: Qdot®525, Qdot®565, Qdot®585, Qdot®605, Qdot®655, Qdot®705, 및 Qdot®800); DyLight™ 염료(DL)(예: DL549, DL649, DL680, 및 DL800); 플루오레세인 또는 이의 유도체(예: 플루오레세인 이소티오시아네이트, 카복시플루오레세인, 및 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인); 디곡시게닌; 디니트로페놀(DNP); 트리니트로페놀(TNP); 비오틴; Cy 염료(예: Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, Cy7, 및 Cy 7.5); 피코에리트린(PE, R-피코에리트린(RPE)); B-피코에리트린(BPE); 페리디닌 클로로필(PerCP); 알로피코시아닌(APC); C-피코시아닌; Atto® 염료(예: Atto 390, Atto 425, Atto 465, Atto 488, Atto 495, Atto 514, Atto 520, Atto 532, Atto 550, Atto 565, Atto 590, Atto 594, Atto 610, Atto 620, Atto 633, Atto 647, Atto 655, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, 및 Atto 740); Super Bright™ 염료(예: Super Bright™ 436, Super Bright™ 600, Super Bright™ 645, Super Bright™ 702, 및 Super Bright™ 780); Brilliant™ 염료(예: Brilliant™ Violet 421, Brilliant™ Violet 480, Brilliant™ Violet 510, Brilliant™ Violet 605, Brilliant Violet™ 650, Brilliant Violet™ 711, Brilliant Violet™ 786, Brilliant™ Ultraviolet 395 (BUV395), Brilliant™ Ultraviolet 496 (BUV496), Brilliant™ Ultraviolet 563 (BUV563), Brilliant™ Ultraviolet 661 (BUV661), Brilliant™ Ultraviolet 737 (BUV737), Brilliant™ Ultraviolet 805 (BUV805), Brilliant™ Blue 515 (BB515), 및 Brilliant™ Blue 700 (BB700); 및 IR 염료(예: IR Dye 680, IR Dye 680LT, IR Dye 700, IR Dye 700DX, IR Dye 800, IR Dye 800RS, 및 IR Dye 800CW).

검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 탠덤 형광 염료 분자의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다: RPE-Cy5, RPE-Cy5.5, RPE-Cy7, RPE-CF594, RPE-AlexaFluor® 탠덤 접합체; RPE-Alexa610, RPE-TxRed, APC-H7, APC-R700, APC-Alexa600, APC-Alexa610, APC-Alexa750, APC-Cy5, APC- Cy5.5, 및 APC-Cy7.

검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 형광 단백질의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다: GFP, eGFP, BFP, CFP, YFP, DsRed, DsRed2, mRFP, mBanana, mOrange, dTomato, tdTomato, mTangerine, mStrawberry, mCherry, mPlum, 및 mRaspberry.

검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 효소의 예시적인 예는 알칼리 포스파타아제, 서양고추냉이 퍼옥시다아제, 루시페라아제, 및 β-갈락토시다아제를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 방사성 핵종의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다: 탄소(14C), 크롬(51Cr), 코발트(57Co), 불소(18F), 가돌리늄(153Gd, 159Gd), 게르마늄(68Ge), 홀뮴(166Ho), 인듐(115In, 113In 112In mIn), 요오드(125I, 123I, 121I), 란타늄(140La), 루테튬(177Lu), 망간(54Mn), 몰리브덴(99 Mo), 팔라듐(103 Pd), 인(32 P), 프라세오디뮴(142 Pr), 프로메티움(149Pm), 레늄(186Re, 188Re), 로듐(105Rh), 루테늄(97Ru), 사마륨(153Sm), 스칸듐(47Sc), 셀레늄(75Se), (85Sr), 황(35S), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 주석(113Sn, 117Sn), 트리튬(3H), 크세논(133Xe), 이터비움(169Yb, 175Yb), 및 이트륨(90Y).

특정 구현예에서, 접합체는 하나 이상의 표지에 접합되거나, 결합되거나, 연결된(예를 들어, 공유 결합된) 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 표지는 항체 또는 단편에 직접 또는 간접적으로(예를 들어, 링커기를 통해) 접합되거나, 결합되거나, 연결될 수 있다. 항체와 표지가 서로 반응할 수 있는 치환기를 각각 갖는 경우, 항체는 하나 이상의 표지에 직접 공유 결합될 수 있다. 예를 들어, 하나 상의 친핵성 기(예: 아미노기 또는 설프하이드릴기)는 다른 하나 상의 카르보닐-함유 기(예: 무수물 또는 산 할라이드)와 반응하거나 좋은 이탈기(예: 할라이드)를 함유하는 알킬기와 반응할 수 있다.

특정 구현예에서, 1가 또는 다가 링커 또는 스페이서를 통해 항체 또는 항체 단편을 하나 이상의 표지에 결합, 접합, 연결하는 것이 바람직할 수 있다. 항체 결합력에 대한 입체 장애 또는 간섭을 피하기 위해 링커 또는 스페이서를 사용해 항체와 표지 사이에 충분한 거리를 제공할 수 있다. (Pierce Chemical Co., Rockford, IL의 카탈로그에 기술된 것과 같은) 동종-기능성 및 이종-기능성 둘 다인 다양한 이기능성 또는 다기능성 시약이 링커 기로서 사용될 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 결합은, 예를 들어 아미노기, 카복실기, 설프하이드릴기, 또는 산화된 탄수화물 잔기를 통해 이루어질 수 있다. 이러한 방법론을 기술한 다수의 참조 문헌이 있다(예: Rodwell 등의 미국 특허 제4,671,958호).

소정의 구현예에서, 링커는 약 1~100개 원자, 1~80개 원자, 1~60개 원자, 1~40개 원자, 1~30개 원자, 1~20개 원자, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 원자의 전체 사슬 길이를 가지며, 여기서 사슬 내의 원자는 C, S, N, P, 및 O를 포함한다.

본 발명의 특정 구현예에 유용한 링커 또는 결합의 예시적인 예는 다음 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다: ―C(O)―, ―NH―C(O)―, ―C(O)―NH―, ―C(O)―NH―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―NH―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―트리아졸―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―S―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―S-(CH₂)_0-6―CH(CONH₂)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)―, ―S-(CH₂)_0-6―CH(CONH―PEG)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)―, ―S―S―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―S―S-(CH₂)_0-6―CH(CONH₂)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)―, ―S―S-(CH₂)_0-6―CH(CONH―PEG)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)―, ―NH-(CH₂)_0-6―CH(CONH―PEG)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)―, ―NH-(CH₂)_0-6―CH(CONH₂)―(CH₂)_0-6―NH―C(O)― ―C=N―O ―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―C=N―NH―(CO) ―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―숙신아미드―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, ―디아조디카복스아미드―(페닐)―J―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, J는 O임, CH₂, NH, S, NH (CO), (CO)NH, ―NH―(CH₂)_2-6―, (CH₂)_1-6―NH―C(O)―NH―(CH₂)_2-6―, ―C(S)―(CH₂)_0-6―,― (CH₂)_1-6―C(O)―NH―(CH₂)_2-6―, ―(CH₂)_1-6―NH―C(O)―(CH₂)_2-6―, ― (CH₂)_1-6―O―C(O)―NH―(CH₂)_2-6―, ― (CH₂)_1-6―NH―C(O)―O―(CH₂)_2-6―, (CH₂)_1-6―NH―(CH₂)_2-6, (CH₂)_1-6―C(O―(CH₂)_2-6―, 분지형 또는 비분지형 ―C1-C16― 알킬, 분지형 또는 비분지형 ―C1-C16― 알킬 (식 중 탄소 원자 중 하나는 헤테로원자로 임의 치환됨), R²―NH―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, R²―S―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, R²―트리아졸―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, R²―NH―O ―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, R²=N―NH―(CO) ―(CH₂)_2-6―NH―C(O)―, R²는 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 이기능성 또는 삼기능성 치환된 가교 결합 유기 라디칼임[즉, -(CH₂CH₂O)_1-20].

특정 구현예에서, 접합체는 하기의 본원의 다른 곳에서 고려되는 폴리펩티드 링커를 통해 폴리펩티드 계열 표지(예를 들어, 형광 단백질 또는 효소)에 공유 결합된 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 접합체는, 항-BCMA CAR에 결합하고 PE 표지에 공유 결합된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.

E. 폴리펩티드

항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하는 (이에 한정되지는 않음) 다양한 폴리펩티드, 융합 폴리펩티드, 및 폴리펩티드 변이체가 본원에서 고려된다. 바람직한 구현예에서, 폴리펩티드는 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.

"폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 반대로 명시되지 않는 한, 통상적인 의미에 따라, 즉 아미노산의 서열로서 상호 교환적으로 사용된다. 폴리펩티드는 특정 길이로 제한되지 않으며, 예를 들어, 이들은 전장 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 단편을 포함할 수 있고, 폴리펩티드의 하나 이상의 번역 후 변형, 예를 들어, 당질화, 아세틸화, 인산화 등을 비롯하여 당업계에 공지된 다른 변형을 포함할 수 있으며, 자연 발생 및 비자연 발생 변형을 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "단리된 단백질", "단리된 펩티드" 또는 "단리된 폴리펩티드" 등은 세포 환경으로부터, 또는 세포의 다른 성분과의 결합으로부터 펩티드 또는 폴리펩티드 분자를 시험관내 합성, 단리, 및/또는 정제하는 것을 지칭하며, 이는 생체 내 물질과 유의하게 결합하지 않는다.

폴리펩티드는 “폴리펩티드 변이체”를 포함한다. 폴리펩티드 변이체는 하나 이상의 치환, 결실, 추가, 및/또는 삽입에 있어서 자연 발생 폴리펩티드와 상이할 수 있다. 이러한 변이체는 자연적으로 발생할 수 있거나, 예를 들어 상기 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 변형시킴으로써 합성에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 추가, 및/또는 삽입을 도입함으로써 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 고려된 기준 서열 중 어느 하나에 대해 적어도 약 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 86%, 97%, 98%, 또는 99%의 아미노산 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 일반적으로 여기서 변이체는 기준 서열의 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지한다.

폴리펩티드는 “폴리펩티드 단편”을 포함한다. 폴리펩티드 단편은 단량체 또는 다량체일 수 있는 폴리펩티드를 지칭하며, 이는 아미노-말단 결실, 카복실-말단 결실, 및/또는 자연 발생 폴리펩티드 또는 재조합적으로 생성된 폴리펩티드의 내부 결실 또는 치환을 갖는다. 생물학적으로 활성인 폴리펩티드 단편의 예시적인 예는 항체 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 “생물학적 활성 단편” 또는 “최소 생물학적 활성 단편”은 자연 발생 폴리펩티드 활성의 적어도 100%, 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 적어도 50%, 적어도 40%, 적어도 30%, 적어도 20%, 적어도 10%, 또는 적어도 5%를 보유하는 폴리펩티드 단편을 지칭한다. 바람직한 구현예에서, 생물학적 활성은 에피토프에 대한 결합 친화도이다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드 단편은 적어도 5 내지 약 500개 아미노산 길이의 아미노산 사슬을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 단편은 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 또는 450개 아미노산의 길이이다. 특히 유용한 폴리펩티드 단편은 항체의 항원 결합 도메인 또는 단편을 포함하는 기능적 도메인을 포함한다. 항체의 경우, 유용한 단편은 다음을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다: 하나 이상의 CDR 영역, 중쇄 또는 경쇄의 CDR3 영역; 중쇄 또는 경쇄의 가변 영역; 2개의 CDR을 포함하는 항체 사슬의 일부분 또는 가변 영역; 등.

전술한 바와 같이, 폴리펩티드는 아미노산 치환, 결실, 절단, 및 삽입을 포함하는 다양한 방식으로 변경될 수 있다. 이러한 조작을 위한 방법은 일반적으로 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 기준 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체는 DNA에서의 돌연변이에 의해 제조될 수 있다. 돌연변이 유발 및 뉴클레오티드 서열 변경을 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Kunkel (1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82: 488-492), Kunkel 등, (1987, Methods in Enzymol, 154: 367-382), 미국 특허 제4,873,192호, Watson, J. D. 등, (Molecular Biology of the Gene, 제4판, Benjamin/Cummings, Menlo Park, Calif., 1987) 및 이에 인용된 문헌을 참조한다. 관심 단백질의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 적절한 아미노산 치환에 대한 지침은 Dayhoff 등의 모델에서 확인할 수 있다(Dayhoff 등, (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.)).

특정 구현예에서, 폴리펩티드 변이체는 하나 이상의 보존적 치환을 포함한다. “보존적 치환”은 아미노산이 유사한 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환되는 것이므로, 펩티드 화학 분야의 당업자는 폴리펩티드의 이차 구조 및 소수성 성질(hydropathic nature)이 실질적으로 변하지 않을 것으로 예상하게 된다. 바람직하게는, 본원에 개시된 단백질 변이체에서의 아미노산 변화는 보존적 아미노산 변화, 즉 유사하게 하전되거나 하전되지 않은 아미노산의 치환이다. 보존적 아미노산 변화는 이들의 측쇄에 관련된 아미노산 군 중 하나의 치환을 포함한다. 자연 발생 아미노산은 일반적으로 다음의 4개의 군으로 나누어진다: 산성(아스파르트산염, 글루탐산염) 아미노산, 염기성(리신, 아르기닌, 히스티딘) 아미노산, 비극성(알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판) 아미노산, 및 하전되지 않은 극성(글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레온, 티로신) 아미노산. 페닐알라닌, 트립토판, 및 티로신은 때때로 방향족 아미노산으로서 함께 분류된다. 펩티드 또는 단백질에서, 아미노산의 적절한 보존적 치환은 당업자에게 공지되어 있고, 일반적으로 생성되는 분자의 생물학적 활성을 변화시키지 않고 이루어질 수 있다. 당업자는 일반적으로, 폴리펩티드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인식한다(예를 들어, Watson 등의 문헌[Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224] 참조).

폴리펩티드 변이체는 글리코실화된 형태, 다른 분자와의 응집 접합체, 및 무관한 화학적 모이어티를 갖는 공유 접합체(예를 들어, PEG화된 분자)를 추가로 포함한다. 공유 변이체는 당업계에 공지된 바와 같이, 아미노산 사슬 내 또는 N-말단 또는 C-말단 잔기에서 발견되는 기에 작용기를 연결함으로써 제조될 수 있다. 변이체는 또한 대립유전자 변이체, 종 변이체, 및 돌연변이단백질(mutein)을 포함한다. 단백질의 기능적 활성에 영향을 미치지 않는 영역의 잘림 또는 결실 또한 변이체이다.

특정 구현예에서, 폴리펩티드는 폴리펩티드 링커를 포함한다. “링커”는 2개 이상의 폴리펩티드 도메인 간의 복수의 아미노산 잔기를 지칭하며, 분자의 적절한 간격, 형태, 및 기능을 위해 추가된다.

특정 구현예에서, 폴리펩티드 링커는 가변 영역 연결 서열이다. “가변 영역 연결 서열”은 V_H 도메인과 V_L 도메인을 연결하는 아미노산 서열로서, 생성된 폴리펩티드가 동일한 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 동일한 표적 분자에 대한 특이적 결합 친화도를 유지하도록 2개의 하위 결합 도메인의 상호작용과 양립할 수 있는 스페이서 기능을 제공한다.

특정 구현예에서, 접합체는 항체 또는 항체 단편을 하나 이상의 단백질 계열 표지, 예를 들어 형광 단백질 또는 효소에 공유 결합시키는 폴리펩티드 링커를 포함한다.

본원에서 고려되는 특정 구현예에서 사용하기에 적합한 링커의 예시된 예는 다음의 아미노산 서열을 포함하나 이에 한정되지는 않는다: GGG; DGGGS(서열번호 14); TGEKP(서열번호 15)(예를 들어, Liu 등의 문헌[PNAS 5525-5530 (1997)]); GGRR(서열번호 16)(Pomerantz 등의 전술한 1995 문헌); (GGGGS)_n 여기서 n = 1, 2, 3, 4 또는 5임(서열번호 17) (Kim 등의 문헌[PNAS 93, 1156-1160 (1996)]); EGKSSGSGSESKVD(서열번호 18)(Chaudhary 등의 문헌[1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:1066-1070]); KESGSVSSEQLAQFRSLD(서열번호 19)(Bird 등의 문헌[1988, Science 242:423-426]), GGRRGGGS(서열번호 20); LRQRDGERP(서열번호 21); LRQKDGGGSERP(서열번호 22); LRQKD(GGGS)₂ ERP(서열번호 23). 대안적으로, 가요성 링커는 DNA 결합 부위 및 펩티드 자체 둘 다를 모델링할 수 있는 컴퓨터 프로그램을 사용하거나(Desjarlalis & Berg의 문헌[PNAS 90:2256-2260 (1993)], [PNAS 91:11099-11103 (1994)]) 파지 디스플레이 방법에 의해 합리적으로 설계될 수 있다. 일 구현예에서, 링커는 다음 아미노산 서열을 포함한다: GSTSGKPGSGEGSTKG(서열번호 24)(Cooper 등의 문헌[Blood, 101(4): 1637-1644 (2003)]).

바람직한 구현예에서, 폴리펩티드는 서열번호 7 또는 8에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 경쇄 서열 및 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 중쇄 서열을 포함한다.

F. 폴리뉴클레오티드

바람직한 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “폴리뉴클레오티드” 또는 “핵산”은 전령 RNA(mRNA), RNA, 게놈 RNA(gRNA), 상보적 DNA(cDNA), 또는 재조합 DNA를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 단일 및 이중 가닥 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에서 고려되는 기준 서열 중 어느 하나와 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 86%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 변이체를 포함된다. 다양한 예시적인 구현예에서, 서열번호 7 또는 8에 제시된 폴리펩티드 서열을 포함하는 (이에 한정되지는 않음), 본원에 고려되는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.

특정 구현예에서, 폴리펩티드의 적어도 약 5, 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 500, 1000, 1250, 1500, 1750, 또는 2000개 또는 그 이상뿐만 아니라 모든 중간 길이의 연속 아미노산 잔기를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 이러한 맥락에서, “중간 길이”는 인용된 값들 사이의 임의의 길이, 예컨대 6, 7, 8, 9 등; 101, 102, 103 등; 151, 152, 153 등; 201, 202, 203 등을 의미한다는 것을 쉽게 이해할 것이다.

특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 코돈 최적화될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 “코돈 최적화(codon-optimized)”는 폴리펩티드의 발현, 안정성, 및/또는 활성을 증가시키기 위해 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 코돈을 치환하는 것을 지칭한다. 코돈 최적화에 영향을 미치는 인자는 다음 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다: (i) 둘 이상의 유기체 또는 유전자 간의 코돈 편향의 변동 또는 합성으로 작제된 편향 테이블; (ii) 유기체, 유전자, 또는 유전자 세트 내 코돈 편향 정도의 변동; (iii) 맥락을 포함하는 코돈의 체계적인 변동; (iv) 코돈의 복호화 tRNA에 따른 코돈의 변동; (v) 삼중항 전체에서 또는 이중 하나의 위치에서 GC 백분율(%)에 따른 코돈의 변동; (vi) 자연 발생 서열과 같은 기준 서열에 대한 유사성의 정도에 있어서의 변동; (vii) 코돈 빈도 컷오프에서의 변동; (viii) DNA 서열로부터 전사된 mRNA의 구조적 특성; (ix) 코돈 치환 세트 설계의 기초가 되는 DNA 서열의 기능에 대한 사전 지식; (x) 각각의 아미노산에 대한 코돈 세트의 체계적인 변동; 및/또는 (xi) 허위 번역 개시 부위의 단리된 제거.

본원에서 사용되는 용어 “폴리뉴클레오티드 변이체” 및 “변이체” 등은 기준 폴리뉴클레오티드 서열과 실질적인 서열 동일성을 나타내는 폴리뉴클레오티드, 또는 이하에서 정의되는 엄격한 조건 하에서 기준 서열과 혼성화되는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 이들 용어는 하나 이상의 뉴클레오티드가 추가 또는 결실되었거나, 기준 폴리뉴클레오티드에 비해 상이한 뉴클레오티드로 치환된 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이와 관련하여, 돌연변이, 추가, 결실, 및 치환을 포함하는 특정 변경이 기준 폴리뉴클레오티드에 만들어질 수 있고, 이에 의해 변경된 폴리뉴클레오티드가 기준 폴리뉴클레오티드의 생물학적 기능 또는 활성을 보유한다는 것이 당업계에서 잘 이해된다.

폴리뉴클레오티드 변이체는 생물학적으로 활성인 폴리펩티드 단편 또는 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 “폴리뉴클레오티드 단편”은 자연 발생 폴리뉴클레오티드 활성의 적어도 100%, 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 적어도 50%, 적어도 40%, 적어도 30%, 적어도 20%, 적어도 10%, 또는 적어도 5%를 보유하는 폴리펩티드 변이체를 암호화하는, 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700 또는 그 이상 길이의 뉴클레오티드인 폴리뉴클레오티드 단편을 지칭한다. 폴리뉴클레오티드 단편은, 아미노-말단 결실, 카복실-말단 결실, 및/또는 자연 발생 또는 재조합적으로 생성된 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산의 내부 결실 또는 치환을 갖는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.

본원에서 사용되는 예를 들어, “50%가 동일한 서열”을 포함하는 “서열 동일성”이란 용어는 비교 윈도우 상에서 뉴클레오티드-대-뉴클레오티드 기반 또는 아미노산-대-아미노산 기반으로 서열이 동일한 정도를 지칭한다. 따라서, “서열 동일성의 백분율”은 비교 윈도우 상에서 최적으로 정렬된 2개의 서열을 비교하고; 동일한 핵산 염기(예: A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기(예: Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, GLu, Asn, Gln, Cys, 및 Met)가 양 서열에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 일치하는 위치의 수를 얻고; 일치된 위치의 수를 비교 윈도우 내의 위치 총수(즉, 윈도우 크기)로 나누고; 그 결과에 100을 곱해서 서열 동일성의 백분율을 얻음으로써 계산될 수 있다. 일반적으로 폴리펩티드 변이체가 기준 폴리펩티드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 경우, 본원에 기술된 임의의 기준 서열 중 어느 하나와 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 86%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 및 폴리펩티드가 포함된다.

2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 사이의 서열 관계를 기술하는 데 사용되는 용어는 “기준 서열”, “비교 윈도우”, “서열 동일성”, “서열 동일성 백분율”, 및 “실질적 동일성”을 포함한다. “기준 서열”은, 뉴클레오티드 및 아미노산 잔기를 포함하여, 적어도 12개의 단량체 단위의 길이이지만, 빈번하게는 15 내지 18개, 및 종종 적어도 25개의 단량체 단위의 길이이다. 2개의 폴리뉴클레오티드는 각각 (1) 2개의 폴리뉴클레오티드들 간에 유사한 서열(즉, 완전한 폴리뉴클레오티드 서열의 단지 일부), 및 (2) 2개의 폴리뉴클레오티드들 간에 발산되는 서열을 포함할 수 있기 때문에, 2개의 (또는 그 이상의) 폴리뉴클레오티드 간의 서열 비교는 일반적으로 “비교 윈도우” 상에서 2개의 폴리뉴클레오티드의 서열을 비교하고, 서열 유사성의 국소 영역을 식별함으로써 수행된다. “비교 윈도우”는 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후 동일한 수의 연속 위치에서 하나의 서열을 기준 서열과 비교하는 개념적 구간으로서, 적어도 6개의 연속 위치, 일반적으로는 약 50 내지 약 100개의 위치, 더 일반적으로는 약 100 내지 약 150개의 위치로 이루어진 개념적 구간을 지칭한다. 비교 윈도우는 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 기준 서열(추가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교해 약 20% 이하의 추가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 비교 윈도우를 정렬하기 위한 최적의 서열 정렬은, 컴퓨터화된 알고리즘 구현예(575 Science Drive Madison, WI, USA 소재 Genetics Computer Group의 Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0에 포함된 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의하거나, 선택된 다양한 방법 중 어느 하나에 의해 생성된 검사 및 최상의 정렬(즉, 비교 윈도우 상에서 가장 높은 상동성 백분율을 생성함)에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어 Altschul 등의 문헌[1997, Nucl. Acids Res. 25:3389]에 개시된 것과 같은 BLAST 계열 프로그램을 참조할 수도 있다. 서열 분석에 대한 상세한 논의는 Ausubel 등의 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15의 Unit 19.3]에서 확인할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, “단리된 폴리뉴클레오티드”는 자연 발생 상태에서 측면에 위치하는 서열로부터 정제된 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, 일반적으로 단편에 인접한 서열로부터 제거된 DNA 단편을 지칭한다. “단리된 폴리뉴클레오티드”는 또한 상보적 DNA(cDNA), 재조합 DNA, 또는 자연에서 존재하지 않고 사람의 손에 의해 만들어진 기타 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.

또한, 당업자는 유전자 코드 축퇴의 결과로서, 본원에 기술된 것과 같이, 폴리펩티드 또는 이의 변이체의 단편을 암호화할 수 있는 많은 뉴클레오티드 서열이 존재한다는 것을 이해할 것이다. 이들 폴리뉴클레오티드 중 일부는 임의의 고유 서열의 뉴클레오티드 서열과 최소한의 상동성을 갖는다. 그럼에도 불구하고, 코돈 사용의 차이로 인해 달라지는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 인간 및/또는 영장류 코돈 선택에 최적화된 폴리뉴클레오티드가 특정 구현예에서 구체적으로 고려된다.폴리뉴클레오티드는, 당업계에 공지되어 있고 이용 가능한 잘 확립된 다양한 기술 중 어느 하나를 사용하여 제조, 조작 및/또는 발현될 수 있다. 원하는 폴리펩티드를 발현시키기 위해, 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이 적절한 벡터 내에 삽입될 수 있다.

G. 조성물

본원에서 고려되는 조성물은 하나 이상의 항체 또는 이의 항체 단편 및 항원 결합 단편, 접합체, 폴리펩티드, 및 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 조성물은 약학적 조성물을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 추가 제제가 조성물의 활성 성분의 기능 또는 활성에 유해한 영향을 미치지 않는다면, 조성물에 포함될 수도 있는 다른 성분에는 사실상 제한이 없다.

특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체의 양을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “양”은 항체가 표적 폴리펩티드에 결합하는 데 “효과적인 양” 또는 “유효량”을 지칭한다.

조성물은 하나 이상의 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

본원에서 고려되는 조성물에 혼입하기에 적합한 담체의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다: 인산염, 구연산염, 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸, 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 포도당, 만노스, 또는 덱스트린과 같은 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예: Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제.

허용 가능한 담체도 다음을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다: 인산염, 구연산염, 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸, 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 포도당, 만노스, 또는 덱스트린과 같은 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예: Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제.

H. 키트

다양한 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 하나 이상의 면역 효과기 세포 또는 항-BCMA CAR T 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현을 검출, 결정, 및/또는 측정하는 데 항체를 사용하기 위한 지침을 포함하는 키트가 제공된다.

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 하나 이상의 면역 효과기 세포 또는 항-BCMA CAR T 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현을 검출, 결정, 측정, 및/또는 계수하는 데 항체를 사용하기 위한 지침을 포함하는 키트가 제공된다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 것과 같은 경쇄 서열, 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 것과 같은 가변 중쇄 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 키트는 항체 또는 항체 단편, 및 검출 가능한 표지, 및 접합을 위한 지침을 포함한다. 특정 구현예에서, 키트는 검출 가능한 표지에 접합된 항체 또는 항체 단편, 및 사용을 위한 지침을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 직접 검출형이다. 더 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 형광 표지이다. 더욱 더 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 RPE이다.

I. 방법

항-BCMA CAR T 세포 활성은 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현과 부분적으로 관련이 있다. 환자에서 완제 의약품의 활성을 추정하고 항-BCMA CAR T 세포 생존률 및 지속성을 추적하기 위해서는 생체외 또는 시험관내 및 생체내 모두에서 항-BCMA CAR 발현을 정확하게 평가하는 능력이 필요하다.

특정 구현예에서, 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하는 방법이 제공된다. 항체는 항-BCMA CAR의 발현을 검출하거나 측정하는 데 사용된다. 본원에서 고려되는 항체, 단편, 및 접합체는 집단에서 항-BCMA CAR 및/또는 항-BCMA CAR+ 면역 효과기 세포를 결합시키고, 항-BCMA CAR 발현의 존재 또는 수준을 검출, 결정, 식별, 측정, 정량화하고/하거나 항-BCMA CAR⁺ 면역 효과기 세포의 수를 계수하는 데 사용된다.

다양한 구현예에서, 방법은 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현을 검출하는 단계를 포함한다. 면역 효과기 세포(예: T 세포, NK 세포, NKT 세포)는 항체가 항-BCMA CAR에 결합하여 항체:항-BCMA CAR 복합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 효과적인 양으로 항-BCMA CAR의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다.

특정 구현예에서, 방법은 면역 효과기 세포의 집단에서 하나 이상의 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR 발현을 검출하는 단계를 포함한다. 하나 이상의 면역 효과기 세포(예: T 세포, NK 세포, NKT 세포)는 항체가 항-BCMA CAR에 결합하여 항체:항-BCMA CAR 복합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 효과적인 양으로 항-BCMA CAR의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 면역 효과기 세포의 적어도 25%는 항-BCMA CAR⁺이다. 또 다른 구현예에서, 면역 효과기 세포의 적어도 50%는 항-BCMA CAR⁺이다. 또 다른 구현예에서, 면역 효과기 세포의 적어도 75%는 항-BCMA CAR⁺이다.

소정의 구현예에서, 방법은 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현량을 결정하는 단계를 포함한다. 면역 효과기 세포(예: T 세포, NK 세포, NKT 세포)는 항체가 항-BCMA CAR에 결합하여 항체:항-BCMA CAR 복합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 효과적인 양으로 항-BCMA CAR의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 항체:항-BCMA CAR 복합체의 양을 측정하고 대조군과 비교한다.

일부 구현예에서, 방법은 면역 효과기 세포의 집단을 대상으로 하나 이상의 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현량을 결정하는 단계를 포함한다. 하나 이상의 면역 효과기 세포(예: T 세포, NK 세포, NKT 세포)는 항체가 항-BCMA CAR에 결합하여 항체:항-BCMA CAR 복합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 효과적인 양으로 항-BCMA CAR의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 항체:항-BCMA CAR 복합체의 양을 측정하고 대조군과 비교한다.

특정 구현예에서, 방법은 면역 효과기 세포의 집단을 대상으로 다수의 항-BCMA CAR+ 면역 효과기 세포를 결정하는 단계를 포함한다. 하나 이상의 면역 효과기 세포(예: T 세포, NK 세포, NKT 세포)는 항체가 항-BCMA CAR에 결합하여 항체:항-BCMA CAR 복합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 효과적인 양으로 CAR의 항-BCMA scFv 부분의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 그런 다음, 항체:항-BCMA CAR 복합체를 포함하는 면역 효과기 세포를 계수할 수 있다.

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR 발현 또는 항-BCMA CAR⁺ T 세포를 검출, 결정, 또는 계수하는 방법은 항-BCMA CAR⁺ T 세포가 투여된 대상체로부터 생물학적 샘플을 단리하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 샘플은 항-BCMA CAR⁺ T 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 의심된다. 바람직한 구현예에서, 샘플은 성분채집 샘플, 백혈구성분채집 샘플, 말초 혈액, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위 유래의 조직, 복수, 흉막 삼출액, 비장 조직, 또는 종양 생검이다.

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR에 결합하는 본원에서 고려되는 항체 및 접합체는 대상체에서 및/또는 하나 이상의 시점에 대상체로부터 수집된 샘플에서 항-BCMA CAR⁺ T 세포의 양을 검출함으로써 측정되거나 평가된 약동학, 증식, 및/또는 지속성을 연구하는 데 사용된다. 특정 구현예에서, 샘플은 대상체에게 항-BCMA CAR+ T 세포를 투여하고 약 24시간, 약 48시간, 약 72시간, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 10일, 약 14일, 약 21일, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 3개월, 약 4개월, 약 6개월, 약 1년 후에, 또는 매주, 매월, 또는 매년 대상체로부터 수집, 단리, 및/또는 수확된다.

일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열 및/또는 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 경쇄 서열 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 중쇄 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 항-BCMA CAR 발현 또는 항-BCMA CAR⁺ T 세포를 검출, 결정, 또는 계수하는 방법은 검출 가능한 표지에 접합된 항체 또는 항체 단편을 사용하는 것을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 직접 검출형이다. 더 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 형광 표지이다. 더욱 더 바람직한 구현예에서, 검출 가능한 표지는 RPE이다.

항체:항-BCMA CAR 복합체의 존재는 특정 구현예에서 다음의 검정 중 하나 이상을 사용하여 검출, 결정, 및/또는 계수할 수 있다: 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR)-기반 바이오센서(예를 들어, BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 형광 활성화 세포 분류(FACS), 또는 웨스턴 블롯.

바람직한 구현예에서, 항체:항-BCMA CAR 복합체의 존재는 유세포 계측법을 사용하여 검출, 결정, 및/또는 계수된다. 더 바람직한 구현예에서, 항체:항-BCMA CAR 복합체의 존재는 FACs를 사용하여 검출, 결정, 및/또는 계수된다.

특정 구현예에서, 하나 이상의 면역 효과기 세포 상에서 항-BCMA CAR의 배경 발현 수준을 결정하고, 하나 이상의 면역 효과기 세포 상에서 측정되거나 측정을 정규화하는 데 사용된 항체:항-BCMA CAR 복합체의 양으로부터 이를 차감한다.

본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 및 발행된 특허는 각각의 개별 간행물, 특허 출원, 또는 발행된 특허가 구체적으로 그리고 개별적으로 참조에 의해 포함되는 것으로 표시된 것처럼 본원에 참조로서 통합된다.

전술한 발명이 이해를 밝힐 목적으로 예시 및 예로서 일부 상세히 기술되었지만, 첨부된 청구범위의 사상 또는 범주로부터 벗어나지 않고도 소정의 변경 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 본 발명의 교시에 비추어 당업자에게 쉽게 명백해질 것이다. 하기 실시예들은 단지 예시로서 제공되며, 제한하기 위한 것은 아니다. 당업자는 본질적으로 유사한 결과를 얻기 위해 변경되거나 수정될 수 있는 중요하지 않은 다양한 파라미터를 쉽게 인식할 것이다.

실시예

실시예 1

항-BCMA CAR에 대해 유도된 항체

서열번호 9에 제시된 항-BCMA CAR 서열에 대한 마우스 단클론 항체를 생성하였다. 항체 중 하나를 시퀀싱하였다(GenScript).

TRIzol® 시약의 기술 매뉴얼에 따라 하이브리도마 세포로부터 총 RNA를 단리하였다. 그런 다음, PrimeScript™ 1st Strand cDNA 합성 키트의 기술 매뉴얼에 따라 이소형-특이적 안티-센스 프라이머 또는 범용 프라이머를 사용하여 총 RNA를 cDNA에 역-전사시켰다. cDNA 단부의 신속 증폭(RACE)에 대한 표준 운영 절차(SOP)에 따라 중쇄 및 경쇄의 항체 단편을 증폭시켰다. 증폭된 항체 단편을 표준 클로닝 벡터에 별도로 클로닝하고 시퀀싱하였다.

일반적으로, 다음의 청구범위에서, 사용된 용어는 청구범위를 본 명세서 및 청구범위에 개시된 특정 구현예로 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며, 이러한 청구범위가 부여되는 등가물의 전체 범위와 함께 모든 가능한 구현예를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구범위는 본 개시에 의해 제한되지 않는다.

SEQUENCE LISTING <110> bluebird bio, Inc. Friedman, Kevin Perkins, Molly Reed <120> ANTI-BCMA CAR ANTIBODIES, CONJUGATES, AND METHODS OF USE <130> BLUE-97PC2 <150> US 62/948,488 <151> 2019-12-16 <160> 28 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Light chain CDR1 <400> 1 Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Thr Val Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Light chain CDR2 <400> 2 Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Light Chain CDR3 <400> 3 Gln Gln Tyr Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Heavy chain CDR1 <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Heavy chain CDR2 <400> 5 Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - 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Claims

서열번호 7에 제시된 가변 경쇄 서열 및 서열번호 8에 제시된 가변 중쇄 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항원 결합 단편인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1한 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편: Fab' 단편, F(ab')₂ 단편, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), Fv, 단쇄 Fv 단백질("scFv"), 비스-scFv, (scFv)₂, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이황화 결합으로 안정화된 Fv 단백질("dsFv"), 및 단일 도메인 항체(sdAb, 나노바디).
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 scFv인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 11에 제시된 경쇄 서열 및/또는 서열번호 12 또는 서열번호 13에 제시된 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 9에 제시된 항-BCMA CAR 서열의 하나 이상의 에피토프에 결합하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 10에 제시된 항-BCMA CAR 서열의 하나 이상의 에피토프에 결합하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 마우스 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 불변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1 불변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 검출을 위한 수단을 포함하는, 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 검출 수단을 포함하는, 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 검출 가능한 표지를 포함하는, 접합체.
제15항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체: 합텐, 형광 염료, 형광 단백질, 발색단, 금속 이온, 금 입자, 은 입자, 자기 입자, 폴리펩티드, 효소, 발광 화합물, 또는 올리고뉴클레오티드.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 염료인, 접합체: Oregon Green®, Pacific Blue™, Pacific Orange™, Pacific Green™, Cascade Blue™, Cascade Yellow™, Lucifer Yellow™, Marina Blue™, 및 Texas Red® (TxRed).
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 AlexaFluor ® (AF) 염료인, 접합체: AF350, AF405, AF488, AF500, AF514, AF532, AF546, AF555, AF568, AF594, AF610, AF633, AF635, AF647, AF680, AF700, AF710, AF750, AF790, 및 AF800.
제18항에 있어서, 검출 가능한 표지는 AlexaFluor®(AF) 염료 AF488인, 접합체.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 QDot®인, 접합체: Qdot®525, Qdot®565, Qdot®585, Qdot®605, Qdot®655, Qdot®705, 및 Qdot®800.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 DyLight™ 염료(DL)인, 접합체: DL549, DL649, DL680, 및 DL800.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 합텐인, 접합체: 플루오레세인 또는 이의 유도체, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 카복시플루오레세인, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 디곡시게닌, 디니트로페놀(DNP), 트리니트로페놀(TNP), 및 비오틴.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 Cy 염료인, 접합체: Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, Cy7, 및 Cy 7.5.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 분자인, 접합체: 피코에리트린(PE, R-피코에리트린(RPE)), B-피코에리트린(BPE), 페리디닌 클로로필(PerCP), 알로피코시아닌(APC), 및 C-피코시아닌.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 염료인, 접합체: Atto 390, Atto 425, Atto 465, Atto 488, Atto 495, Atto 514Atto 520, Atto 532, Atto 550, Atto 565, Atto 590, Atto 594, Atto 610, Atto 620, Atto 633, Atto 647, Atto 655, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, Atto 740, Super Bright™ 436, Super Bright™ 600, Super Bright™ 645, Super Bright™ 702, Super Bright™ 780, Brilliant™ Violet 421, Brilliant™ Violet 480, Brilliant™ Violet 510, Brilliant™ Violet 605, Brilliant Violet™ 650, Brilliant Violet™ 711, Brilliant Violet™ 786, Brilliant™ Ultraviolet 395 (BUV395), Brilliant™ Ultraviolet 496 (BUV496), Brilliant™ Ultraviolet 563 (BUV563), Brilliant™ Ultraviolet 661 (BUV661), Brilliant™ Ultraviolet 737 (BUV737), Brilliant™ Ultraviolet 805 (BUV805), Brilliant™ Blue 515 (BB515), Brilliant™ Blue 700 (BB700), 및 IR 염료 680, IR 염료 680LT, IR 염료 700, IR 염료 700DX, IR 염료 800, IR 염료 800RS, 및 IR 염료 800CW.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 탠덤 형광 염료인, 접합체: RPE-Cy5, RPE-Cy5.5, RPE-Cy7, RPE-CF594, RPE-AlexaFluor® 탠덤 접합체; RPE-Alexa610, RPE-TxRed, APC-H7, APC-R700, APC-Alexa600, APC-Alexa610, APC-Alexa750, APC-Cy5, APC- Cy5.5, 및 APC-Cy7.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 형광 단백질인, 접합체: GFP, eGFP, BFP, CFP, YFP, DsRed, DsRed2, mRFP, mBanana, mOrange, dTomato, tdTomato, mTangerine, mStrawberry, mCherry, mPlum, 및 mRaspberry.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 효소인, 접합체: 알칼리 인산분해효소, 서양고추냉이 퍼옥시다아제, 루시페라아제, 및 β-갈락토시다아제.
제15항 또는 제16항에 있어서, 검출 가능한 표지는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 방사성 핵종을 포함하는, 접합체: 탄소(14C), 크롬(51Cr), 코발트(57Co), 불소(18F), 가돌리늄(153Gd, 159Gd), 게르마늄(68Ge), 홀뮴(166Ho), 인듐(115In, 113In 112In mIn), 요오드(125I, 123I, 121I), 란타늄(140La), 루테튬(177Lu), 망간(54Mn), 몰리브덴(99 Mo), 팔라듐(103 Pd), 인(32 P), 프라세오디뮴(142 Pr), 프로메티움(149Pm), 레늄(186Re, 188Re), 로듐(105Rh), 루테늄(97Ru), 사마륨(153Sm), 스칸듐(47Sc), 셀레늄(75Se), (85Sr), 황(35S), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 주석(113Sn, 117Sn), 트리튬(3H), 크세논(133Xe), 이터비움(169Yb, 175Yb), 및 이트륨(90Y).
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제30항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
제1항 내지 제12항 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체, 제30항의 폴리뉴클레오티드, 또는 제31항의 숙주 세포를 포함하는, 조성물.
항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생산하는 방법으로서, 숙주 세포에서 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현시키는 단계 및 항체를 회수하거나 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체, 및 사용 지침을 포함하는, 키트.
T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 검출하는 방법으로서, T 세포를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체와 접촉시키는 단계; 및 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
T 세포 집단을 대상으로 항-BCMA CAR의 발현을 검출하는 방법으로서, T 세포의 집단을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체와 접촉시키는 단계; 및 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 방법으로서, T 세포를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체와 접촉시키는 단계; 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및 상기 복합체의 양을 측정하여 T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 단계를 포함하는, 방법.
T 세포 집단을 대상으로 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 방법으로서, T 세포 집단을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체와 접촉시키는 단계; 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및 상기 복합체의 양을 측정하여 하나 이상의 T 세포 상에서 항-BCMA CAR의 발현을 결정하는 단계를 포함하는, 방법.
T 세포 집단을 대상으로 항-BCMA CAR+ T 세포의 수를 결정하는 방법으로서, T 세포의 집단을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체와 접촉시키는 단계; 하나 이상의 T 세포 상에서 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및 항-BCMA CAR을 발현하는 T 세포를 계수하는 단계를 포함하는, 방법.
제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR)-기반 바이오센서(예를 들어, BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항체:항-BCMA CAR 복합체의 형성을 검출하는, 방법.
제37항 또는 제38항에 있어서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR)-기반 바이오센서(예를 들어, BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항체:항-BCMA CAR 복합체의 양을 측정하는, 방법.
제39항에 있어서, 면역조직화학, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역흡착 검정, 화학발광 검정, 전기화학발광 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR)-기반 바이오센서(예를 들어, BIAcore), 형광 현미경, 유세포 계측법, 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 항-BCMA CAR을 발현하는 T 세포를 계수하는, 방법.