KR20220092877A - 다중 분석물 분변 항원 검사 - Google Patents

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KR20220092877A
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키이스 디. 푸리에
마이클 제이. 도마니코
스테파니 엠. 웨버
탄야 엠. 퀸트
그레이엄 피. 리드가드
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이그잭트 사이언시즈 코포레이션
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Abstract

복수의 상이한 마커 분석물, 예를 들어, 복수의 상이한 인간 단백질, 핵산, 및 다른 분자 마커 분석물에 대해 소량의 인간 분변 샘플을 포함한 분변 샘플을 검사하기 위한 방법, 조성물, 및 시스템.

Description

다중 분석물 분변 항원 검사
본 출원은 2019년 10월 18일 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/923,300호에 대한 우선권을 주장하며, 본원에 참조로 포함된다.
본원에는 복수의 상이한 단백질, 핵산, 및 다른 분자 마커 분석물에 대해 소량의 인간 분변 샘플, 예를 들어, 분변 면역화학 검사(FIT) 샘플 수집 장치에서 수집된 샘플을 포함한 분변 샘플을 검사하기 위한 방법, 조성물, 및 시스템, 예를 들어 물품 세트가 제공된다.
분변 면역화학 검사(FIT 검사)는 대변 검체에서 헤모글로빈을 검출하는 항체-기반 검정이며 대장암(CRC) 스크리닝을 위해 광범위하게 사용된다. 여러 상이한 실험실-기반 또는 현장 진단 FIT 검사가 이용가능하다. 이용가능한 FIT 검사는 전형적으로 특수 장치를 사용하여 대변 검체로부터 소량의 샘플을 수집하고, 샘플을 장치 내에 함유된 완충액에 도입하여 샘플을 검정할 수 있을 때까지 샘플 수집 시간부터 헤모글로빈을 안정화한다. FIT는 CRC 스크리닝을 위한 편리하고 감당할 수 있는 비용의 옵션이다.
대장 선종 및 암과 연관될 수 있는 다른 단백질 바이오마커가 전기영동 및 질량 분석법을 사용하여 비교적 큰 검체를 스크리닝함으로써 대변에서 식별되었지만(예를 들어, Bosch의 미국 특허 공개 2015/0141273 A1 및 2017/0199196 A1을 참조하며, 둘 다 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함됨), 실험실-기반 및 현장 진단 FIT 검사는 헤모글로빈 검사로 계속 제한되고 있다.
본 기술은 FIT 샘플 수집 장치를 사용하여 헤모글로빈 이외, 또는 이에 더하여 단백질 바이오마커를 수집 및 안정화하는 방법 및 조성물을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서 본 기술은 i) 안정화 용액의 부피에 분산된 소량의 인간 분변 샘플을 포함하는 분산된 샘플을 제공하는 단계, 및 ii) 복수의 상이한 마커 분석물의 양에 대해 분산된 샘플을 검정하는 단계를 포함하는, 인간 분변 샘플을 특성화하는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 바와 같이, 상이한 마커 분석물은 단일 분자의 유전자좌의 상이한 부분, 예를 들어, 단백질 또는 핵산 분석물 분자의 상이한 단편 또는 영역을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 상이한 마커 분석물은 상이한 완전히 상이한 분자, 예를 들어, 별개의 단백질 및/또는 별개의 유전자 또는 다른 핵산이다. 바람직한 구현예에서, 복수의 상이한 마커 분석물은 복수의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함하며, 바람직하게는 적어도 3 개의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함한다.
복수의 상이한 마커 분석물은 예를 들어, 3 개의 상이한 유전자로부터 발현되는 단백질일 수 있다. 특정 구현예에서, 복수의 상이한 마커 분석물은 3 개 이하의 상이한 마커 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 복수의 상이한 마커 분석물은 인간 마커 분석물, 예를 들어, 인간 단백질 및/또는 핵산 분석물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 복수의 상이한 마커 분석물은 인간 마커 분석물로 이루어진다.
본원의 기술은 소량의 분변 샘플, 예를 들어, FIT 샘플 수집 장치, 예를 들어, 소량의 분변 샘플을 안정화하기 위한 유체를 포함하는 FIT 샘플 수집 장치를 사용하여 수집된 분변 샘플의 분석에서 용도를 밝혀낸다. 따라서, 일부 구현예에서, 분산된 샘플에서 안정화 용액의 부피는 바람직하게는 FIT 샘플 수집 장치에서 사용하기에 적합한 부피, 예를 들어, 3 mL 미만, 바람직하게는 2 mL 미만이다. 일부 구현예에서, 안정화 용액은 1 mL 미만의 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 분산된 샘플은 FIT 샘플 수집 장치에 제공된다.
유사하게는, 분석을 위한 분변 샘플의 질량이 임의의 특정 질량으로 제한되지 않지만, 특정 구현예에서, 분변 샘플의 질량은 FIT 샘플 수집 장치를 사용하여 수집가능한 샘플의 질량이다. 따라서, 특정 구현예에서, 소량의 분변 샘플은 100 mg 미만, 바람직하게는 50 mg 미만, 바람직하게는 20 mg 미만의 질량을 갖는다.
본 기술은 예를 들어, 분산된 샘플에서 검출하기 위한 임의의 특정 마커 분석물로 제한되지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 복수의 상이한 마커 분석물은 헤모글로빈(Hb), 칼프로텍틴, 합토글로빈(Hp), 보체 성분 3(C3), 보체 성분 3a(C3a), IgG 결합 단백질의 Fc 단편(FCGBP), 레시스틴 유사 베타(RETNLB/RELM), S100 칼슘 결합 단백질 A12(S100A12), 및 세르핀 패밀리 F 구성원 2(SERPIN F2)로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 인간 단백질 마커 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 Hb, Hp, 및 C3을 포함하고, 일부 구현예에서, 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 Hb, Hp, 및 C3으로 이루어진다.
본 기술은 마커 분석물을 검정하는 임의의 특정 방법으로 제한되지 않지만, 특정 구현예에서, 검정은 면역화학 검정을 포함한다.
일부 구현예에서, 안정화 용액은 완충액, 예를 들어, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 완충액을 포함한다. 다른 성분이 또한 예를 들어, 세포 안정화, 단백질 안정화, 세포 성장 지연 등을 위해 안정화 용액에 사용될 수 있다, 따라서, 본 기술은 완충액, 담체 단백질, 세제, 염, 킬레이터, 및 항균제 또는 항생제로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 안정화 용액을 고려한다. 특정 구현예에서, 안정화 용액은 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 완충액; 소 혈청 알부민; 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노라우레이트(TWEEN-20); 아지드화 나트륨; 염화 나트륨; 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 및 겐타마이신 중 하나 이상을 포함한다. 특정 바람직한 구현예에서, 안정화 용액은 20 mM Tris, 10% 소 혈청 알부민, 0.10% TWEEN 20, 0.095% 아지드화 나트륨, 140 mM 염화 나트륨, 10 mM EDTA, 및 15 μg/ml 겐타마이신을 포함한다.
다른 안정화 성분이 또한 예를 들어, 상기 논의된 바와 같은 안정화 용액, 또는 상이한 조성물을 갖는 용액에 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 헤모글로빈을 안정화하는 데 적합한 성분이 포함될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 안정화 용액은 프로토포르피린; 다가 양이온; 당 또는 다당류; 삼투물질 및 임의적으로, 다가 양이온; 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 안정화 성분 및, 임의적으로, 다가 양이온으로부터 선택된 하나 이상의 안정화 시약을 포함한다. 특정 구현예에서, 안정화 용액은 다가 양이온, 바람직하게는 Cr3+ 및 Co3+로부터 선택된 다가 양이온과 착화된 프로토포르피린 IX를 포함한다. 일부 구현예에서, 안정화 용액은 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산 및, 임의적으로, 다가 양이온을 포함한다.
소량의 분변 샘플의 제거 후 남아있는 대변 샘플의 양은 또한 하나 이상의 마커 분석물에 대해 검정될 수 있음이 고려된다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 기술은 본원에 기재된 구현예 중 임의의 것을 제공하며, 여기서 소량의 인간 분변 샘플은 a) 인간 대상체로부터 전체 대변 샘플을 수집하는 단계; b) 전체 대변 샘플의 일부를 제거하여 대변 샘플의 제거된 부분 및 나머지 부분을 생성하되, 여기서 제거된 부분은 소량의 분변 샘플인, 단계; c) 소량의 분변 샘플을 안정화 용액의 부피와 조합하여 분산된 샘플을 생성하는 단계; 및 d) 대변 샘플의 나머지 부분을 안정화하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제공된다.
대변 샘플의 나머지 부분은 다수의 상이한 방식으로 안정화될 수 있다, 예를 들어, 일부 구현예에서, 대변 샘플의 나머지 부분을 안정화하는 것은 i) 안정화 완충액을 대변 샘플의 나머지 부분에 첨가하며, 바람직하게는 안정화 완충액에서 대변 샘플의 나머지 부분을 균질화하여 대변 균질액을 형성하는 단계; ii) 대변 샘플의 나머지 부분을 동결하는 단계 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 특정 바람직한 구현예에서, 안정화 완충액은 약 100 내지 약 300 mM의 킬레이트화제, 바람직하게는 EDTA를 포함하는 킬레이트화제를 포함하고, 약 400 내지 약 600 mM의 Tris 하이드로클로라이드를 포함한다.
일부 구현예에서, 대변 샘플의 나머지 부분을 검정하는 것은 대변 균질액을 처리하여 정화된 유체 분획으로부터 고형물을 분리하는 단계 및 정화된 유체 분획을 검정하는 단계를 포함한다. 정화된 유체 분획을 생성하는 수단은 예를 들어, 정화된 여과액을 생성하기 위한 여과, 및/또는 예를 들어, 정화된 상청액을 생성하기 위한 원심분리를 포함할 수 있다. 대변 샘플을 처리하고, 검정 억제제를 제거하고, 표적 핵산 분자를 단리하는 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 제10,047,390호에 개시된 방법을 포함하며, 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
대변 샘플의 나머지 부분을 분석하기 위해, 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물은 분산된 샘플에서도 검정되는 마커 분석물 또는 복수의 분석물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 분산된 샘플 및 대변 샘플의 나머지 부분은 동일한 마커 분석물 세트에 대해 검정된다. 다른 구현예에서, 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물은 분산된 샘플에서 검정되지 않은 마커 분석물로 이루어진다.
일부 구현예에서, 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 마커 분석물은 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물, 바람직하게는 돌연변이 및 사이토신의 메틸화 상태 중 적어도 하나에 대해 검정되는 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물을 포함한다. 본원에 기재된 방법, 조성물, 및 물품 세트를 사용하여 검정가능한 인간 DNA 마커 분석물의 예는 예를 들어, WO 2015/153289(PCT/US2015/022749)에 기재된 마커를 포함하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 분산된 샘플은 유사하게는 하나 이상의 DNA 마커 분석물, 또는 다른 핵산 분석물에 대해 검정될 수 있음이 고려된다.
본 기술은 또한 상기 제시된 방법 중 임의의 하나를 사용하여 인간 분변 샘플을 특성화하기 위한 물품, 예를 들어, 용기, 수집 장치, 시약 등을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 기술은 안정화 용액의 부피에 분산된 소량의 인간 분변 샘플을 포함하는 분산된 샘플을 함유하는 FIT 샘플 수집 장치, 및 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물의 양에 대해 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트를 포함하는 물품 세트를 제공한다. 바람직한 구현예에서, FIT 샘플 수집 장치에서 안정화 용액의 부피는 3 mL 미만, 바람직하게는 2 mL 미만이다.
일부 구현예에서, 시약 세트에 의해 검정가능한 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 적어도 3 개의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함하고, 특정 바람직한 구현예에서, 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 3 개 이하의 상이한 마커 분석물을 포함한다. 바람직하게는, 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 Hb, 칼프로텍틴, Hp, C3, C3a, FCGBP, RETNLB/RELM) S100A12, 및 SERPIN F2로 이루어진 군으로부터 선택되며, 바람직하게는 Hb, Hp, 및 C3을 포함한다. 특정 구현예에서, 시약 세트에 의해 검정가능한 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물은 Hb, Hp, 및 C3으로 이루어진다. 본 기술은 특정 검정 방법으로 제한되지 않지만, 특정 구현예에서, 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트는 면역화학 검정을 위한 시약 세트를 포함한다.
인간 분변 샘플의 질량은 특정 크기로 제한되지 않지만, 일부 구현예에서 소량의 인간 분변 샘플은 100 mg 미만, 바람직하게는 50 mg 미만, 바람직하게는 20 mg 미만의 질량을 갖는다. 임의의 적합한 안정화 용액, 예를 들어, 상기 논의된 안정화 용액 및 이의 변경 중 임의의 것이 물품 세트에 사용될 수 있다.
소량의 인간 분변 샘플이 전체 대변 샘플로부터 제거된 부분을 포함하는 물품 세트의 일부 구현예에서, 물품 세트는 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분은 안정화 완충액을 포함한다. 임의의 적합한 안정화 완충액, 예를 들어, 상기 논의된 안정화 완충액 및 이의 변경 중 임의의 것이 물품 세트에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분은 안정화 완충액에서 균질화된다.
물품 세트는 하나 이상의 마커 분석물의 양에 대해 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 하나 이상의 마커 분석물은 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 적어도 하나의 인간 단백질 마커 분석물을 포함하고, 일부 구현예에서, 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 하나 이상의 마커 분석물은 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물에 대해 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트는 돌연변이; 및 사이토신의 메틸화 상태 중 적어도 하나를 검정하기 위한 시약을 포함한다.
정의
본 기술의 이해를 용이하게 하기 위해, 다수의 용어 및 어구가 하기에 정의된다. 추가의 정의는 상세한 설명 전반에 걸쳐 제시된다.
본원에 사용된 바와 같이, 단수형은 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 예를 들어, 위젯은 하나의 위젯 또는 복수의 위젯을 의미할 수 있다.
용어 "분변" 및 "대변"은 배설물, 예를 들어, 인간 배설물의 샘플과 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "계량된"은 합리적으로 재현가능한 측정된 양을 갖는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "FIT 샘플 수집 장치"는 분석을 위해 분변 샘플을 수집하기 위한, 바람직하게는 계량된 분변 샘플을 수집하기 위한 장치를 지칭한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 제9,211,112호; 제7,780,915호; 및 제6,780,160호를 참조한다. 일부 구현예에서, FIT 샘플 수집 장치는 성분을 FIT 샘플 수집 장치에 의해 수집된 분변 샘플의 양으로 안정화하는 데 적합한 양으로 안정화제, 예를 들어, 안정화 완충액의 양을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "FIT 장치 샘플"은 FIT 샘플 수집 장치에 의해 수집된 소량의 분변 샘플을 지칭한다. FIT 장치 샘플은 바람직하게는 본원에서 하기에 정의된 바와 같은 소량의 분변 샘플이며, 보다 바람직하게는 계량된 샘플이다. 일부 구현예에서, FIT 장치 샘플은 샘플의 하나 이상의 성분, 예를 들어, 단백질, 핵산, 탄수화물, 또는 분변 샘플의 다른 성분을 안정화하는 데 적합한 양으로 유체 예를 들어, 안정화 완충액의 양과 조합된 소량의 분변 샘플을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "소량의 분변 샘플"은 마이크로그램의 임의의 정수 값 및 그 사이의 마이크로그램의 임의의 분율을 포함하여, 약 100 mg 미만, 바람직하게는 90 mg 미만, 바람직하게는 80 mg 미만, 바람직하게는 70 mg 미만, 바람직하게는 60 mg 미만, 바람직하게는 50 mg 미만, 바람직하게는 40 mg 미만, 바람직하게는 30 mg 미만, 바람직하게는 20 mg 미만, 바람직하게는 10 mg 미만, 바람직하게는 9 mg 미만, 바람직하게는 8 mg 미만, 바람직하게는 7 mg 미만, 바람직하게는 6 mg 미만, 바람직하게는 5 mg 미만, 바람직하게는 4 mg 미만, 바람직하게는 2 mg 미만, 바람직하게는 1 mg 미만의 분변 샘플을 지칭한다. 바람직한 구현예에서, 소량의 분변 샘플은 하나 이상의 성분, 바람직하게는 거대분자 성분, 예를 들어, 단백질, 핵산, 탄수화물, 및 분변 샘플의 다른 성분을 안정화하는 데 적합한 안정화 유체, 예를 들어, 안정화 완충액의 부피와 조합된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전체 대변 샘플"은 대상체의 장 운동에 의해, 예를 들어, 대변 수집 장치, 예를 들어, 그릇, 용기, 또는 표면 위에 또는 내에 직접적으로 대상체의 배변으로 수집가능한 미분할 생성물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "분산된 샘플"은 분산 매트릭스, (예를 들어, 유체, 겔 등)와 조합된 샘플(예를 들어, 분변 샘플)을 지칭하며, 여기서 샘플 물질은 매트릭스 내에 분산되어 있다. 분산된 샘플은 매트릭스에서 균일하게 혼합될 필요가 없다. 예를 들어, 샘플 물질은 존재하는 모든 샘플이 매트릭스 전반에 걸쳐 본질적으로 균일하게 분포되도록 예를 들어, 균질기에 의해 혼합될 수 있거나, 또는 혼합은 샘플의 분산된 분획을 포함하는 매트릭스의 존재 하에, 구별가능한 형태, 예를 들어, 분변 샘플의 잔류 반고형 부분으로 남아있는 원래 샘플 물질의 분획을 초래할 수 있다.
용어 "안정화 용액" 및 "안정화 완충액"은 하나 이상의 성분, 바람직하게는 거대분자 성분, 예를 들어, 단백질, 핵산, 탄수화물, 및 분변 샘플의 다른 성분을 안정화하는 데 적합한 유체 매트릭스와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 안정화 완충액은 단백질(예를 들어, 헤모글로빈) 또는 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 안정화하거나 또는 샘플, 예를 들어, 혈액 또는 대변 샘플에서 둘 다 안정화하도록 선택된 완충액을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 안정화 완충액은 예를 들어, 미국 특허 공개 2019/0302129 A1; PCT 출원 일련 번호 PCT/US2019/022598; 및 미국 특허 번호 제9,211,112호에 기재된 바와 같은 단백질 안정화 완충액; 또는 예를 들어, 미국 특허 번호 제6,551,777호; 제8,722,330호, 제10,064,404호; 제9,376,709호; 제9,657,227호; 및 제9,926,590호; 제10,144,955호에 기재된 바와 같은 핵산 안정화 완충액을 포함하며, 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
하나 이상의 헤모글로빈 안정화 시약을 포함하는 FIT 샘플 수집 장치용 대변 안정화 완충액이 고려된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 헤모글로빈 안정화 시약은 예를 들어, 삼투물질; 다가 양이온; 당 또는 다당류 및, 임의적으로, 다가 양이온; 프로토포르피린; 및 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 안정화 성분 및, 임의적으로, 다가 양이온으로부터 선택될 수 있다. 용액에서 이러한 시약의 예 및 농도는 US 2019/0302129 A1에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, 용액은 삼투물질, 예를 들어, 베타인을 포함할 수 있다. 이들 15 구현예에서, 삼투물질(예를 들어, 베타인)은 2 M 내지 5 M 범위의 농도일 수 있다.
일부 구현예에서, 용액은 당, 예를 들어, 수크로스 또는 트레할로스를 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 당(예를 들어, 수크로스 또는 트레할로스)은 0.1 M 내지 0.5 M 범위의 농도일 수 있다. 어느 경우든, 용액은 임의적으로 다가 양이온, Mg2+ 또는 Ca2+를 함유할 수 있다. 이러한 구현예에서, 다가 양이온(예를 들어, 칼슘 또는 마그네슘 이온)은 5 mM 내지 25 mM 범위의 농도일 수 있다.
일부 구현예에서, 용액은 다당류, 예를 들어, 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산 예컨대 α-(1-4)-연결된 D-갈락투론산을 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 다당류(예를 들어, 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산)는 0.005% 내지 0.5%(예를 들어, 0.01% 내지 0.125%) 범위의 농도일 수 있다. 이러한 구현예에서, 용액은 임의적으로 다가 양이온을 함유할 수 있다. 용액이 다가 양이온을 함유하는 구현예에서, 다가 양이온은 5 mM 내지 25 mM 범위의 농도일 수 있다. 일부 구현예에서, 용액은 5 mM 내지 25 mM 범위의 농도에서 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산 및 다가 양이온(예를 들어, 칼슘 염 또는 마그네슘 염)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 용액은 금속 이온과 착화된 프로토포르피린, 예를 들어, 프로토포르피린 IX 또는 이의 유사체 예컨대 옥타에틸포르피린(H2OEP) 또는 테트라페닐프로피린(H2TPP)을 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 프로토포르피린은 헤민(배위 염화 리간드가 있는 제2철(Fe3+)을 함유하는 프로토포르피린 IX) 또는 헤마틴일 수 있다. 다른 구현예에서, 프로토포르피린은 2가 또는 3가 양이온(예를 들어, Zn2+, Cr3+, 또는 Co3+, 예를 들어)과 착화된 프로토포르피린 IX일 수 있다. 이러한 구현예에서, 프로토포르히린은 0.1 μM 내지 100 μM(예를 들어, 1 μM 내지 10 μM) 범위의 농도로 용액에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 용액은 HRP 접합체 안정화제(PN 85R-102; Fitzgerald Industries), HRP 접합체 안정화제(PN SZ02; Surmodics) 및 HRP 접합체 안정화제(PN ab171537; Abcam)로부터 선택된 HRP 안정화 성분을 포함할 수 있다. 다른 HRP 안정화 성분, 예를 들어, AbGuard(BioRad PN: BUF052; BioRad Laboratories Inc. 94547 캘리포니아주 에르쿨레스 알프레드 노벨 드라이브 2000 소재)가 잠재적으로 사용될 수 있다. 용액이 HRP 안정화 성분을 포함하는 경우, 성분은 1% 내지 20%, 예를 들어, 5% 내지 15% 또는 5% 내지 20% 범위의 농도일 수 있다.
임의의 구현예에서, 용액은 다가 양이온, 예를 들어, 칼슘 또는 마그네슘 이온을 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 다가 양이온은 5 mM 내지 25 mM 범위의 농도일 수 있다. 임의의 구현예에서, 용액은 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 완충액(예를 들어, 10 mM 내지 50 mM Tris, pH 7.5), 소 혈청 알부민(예를 들어, 5% 내지 20% BSA), 폴리소르베이트 20(예를 들어, 0.05% 내지 0.2% 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노라우레이트(TWEEN® 20)), 방부제 예컨대 아지드화 나트륨(예를 들어, 0.05% 내지 0.2% 아지드화 나트륨), 염 예컨대 염화 나트륨(예를 들어, 50 mM 내지 250 mM 염화 나트륨), 킬레이터 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA; 예를 들어, 5 mM 내지 20 mM 에틸렌디아민테트라아세트산), 및 항생제 예컨대 겐타마이신(예를 들어, 5 ug/mL 내지 50 ug/mL)을 추가로 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "마커 분석물"은 가장 넓은 의미로 사용되며, 예를 들어, 질환 또는 병태의 표시, 또는 질환 또는 병태의 부재에 대해 샘플을 특성화하도록 분석 또는 검정될 수 있는 샘플의 임의의 성분 또는 특징을 지칭한다.
도 1은 대장암(CA), 진행성 선종(AA)이 있거나, 또는 암 또는 진행성 선종에 대해 음성일 때 조직 병리학으로 분류된 대상체로부터의 전체 대변 상청액 샘플에서 단백질 마커 목록의 존재에 대한 검사 결과를 나타내는 표(표 2)를 제공한다.
도 2는 대장암(CA), 진행성 선종(AA)이 있거나, 또는 암 및 진행성 선종에 대해 음성일 때 조직 병리학으로 분류된 대상체로부터의 FIT 장치 샘플에서 단백질 마커 목록의 존재에 대한 표(표 3)를 제공한다.
본원에는 헤모글로빈의 분석과 함께 또는 없이, 분변 샘플에서 복수의 마커, 예를 들어, 복수의 상이한 단백질 마커의 분석을 위한 기술이 제공된다. 일부 구현예에서 복수의 상이한 마커는 전체 대변 검체의 상청액 샘플에서 검사되는 반면, 일부 구현예에서, 복수의 상이한 단백질 마커는 예를 들어, FIT 샘플 수집 장치를 사용하여 수집될 수 있는 바와 같은 소량의 샘플에서 검사된다. FIT 샘플 수집 장치는 전형적으로 0.1 g 미만의 샘플, 보다 전형적으로 10 내지 20 mg의 샘플을 수집한다. 또한 다른 구현예에서, 전체 대변 샘플에서 복수의 단백질을 검사한 결과는 FIT 샘플 수집 장치를 사용하여 수집된 동일한 대변 검체의 샘플을 검사한 결과와 조합된다. 또한 다른 구현예에서, 대변 검체는 비-단백질 마커, 예를 들어, DNA 마커에 대해 추가로 검사된다. 하기 논의는 다음 약어를 참조한다: 헤모글로빈(Hb) 칼프로텍틴, 합토글로빈(Hp), 보체 성분 3(C3), 보체 성분 3a(C3a), IgG 결합 단백질의 Fc 단편(FCGBP), 레시스틴 유사 베타(RETNLB/RELM), S100 칼슘 결합 단백질 A12(S100A12), 및 세르핀 패밀리 F 구성원 2(SERPIN F2).
모든 알려진 분변 면역화학 검사(FIT)는 대변 샘플에서 헤모글로빈만을 측정한다. 예는 하기를 포함한다:
1. CAREprime Hb(Alfresa Pharma, 일본 오사카 소재)
2. Hb ELISA(Immundiagnostik, 독일 벤스하임 소재)
3. OC Sensor(Eiken Chemical, 일본 도쿄 소재)(미국에서 Polymedco로 판매됨)
4. RIDASCREEN Hb(R-Biopharm, 독일 다름슈타트 소재)
5. SENTiFIT-FOB Gold(Sentinel Diagnostics, 이탈리아 밀라노 소재)
6. Eurolyser FOB test(Eurolyser Diagnostics, 오스트리아 잘츠부르크 소재)
7. ImmoCARE-C(CARE Diagnostics, 독일 푀어데 소재)
8. QuantOn Hem(Immundiagnostik, 독일 벤스하임 소재)
9. QuikRead go iFOBT(Orion Diagnostica, 핀란드 에스푸 소재)
Anton Gies 등은 대장암에 대한 9 가지 분변 면역화학 검사를 평가하였다. 검사는 동일한 샘플 세트에서 평가하고 비교하였다. 비교 결과는 모든 검사에 대해 ≥93%의 특이성이 설정된 경우, CRC 검출에 대해 거의 동일한 민감도가 관찰됨을 나타낸다. 그러나, 각 검사의 검사 특성은 93%의 특이성에서 어떤 검사도 CRC 검출에 대해 >82%의 민감도를 달성하지 못했고, 97%의 특이성에서 어떤 검사도 이 데이터 세트에서 CRC 검출에 대해 >75%의 민감도를 달성하지 못했음을 입증한다. (Anton Gies 등 Direct Comparison of Diagnostic Performance of 9 Quantitative Fecal Immunochemical Tests for Colorectal Cancer Screening. Gastroenterology 2018; 154:93-104.) 역으로, 이러한 검사의 민감도는 컷오프를 변경함으로써 상향 조절될 수 있지만, 증가된 민감도는 특이성을 잃어가게 된다.
상이한 단백질 분석물을 검사하는 데 있어서 한 가지 어려움은 대변 샘플에서 단백질 안정성이 좋지 않을 수 있다는 점이다. 낮은 분석물 농도 및 좋지 않은 검정 민감도는 대변, 특히 전형적으로 FIT 샘플 수집 장치에 의해 수집된 대변의 소량의 부분에서 단백질의 의미있는 검출 및 분석을 추가로 제한할 수 있다. 예를 들어, 상기 나열된 FIT 검사를 위한 샘플 수집 장치는 검사를 위해 소량으로 계량된 양, 전형적으로 20 mg 이하를 전달하도록 구성된다. 전형적으로, 이러한 장치는 계량된 양의 대변 샘플이 하기 표에 제시된 바와 같이 완충액의 설정 부피를 갖는 그릇 또는 용기로 전달될 수 있도록, 예를 들어, 샘플링 스푼 또는 막대를 긁어 과잉 샘플을 배제하도록 구성된다:
Figure pct00001
상기 기재된 각각의 FIT 수집 장치는 헤모글로빈의 검출을 위한 충분한 양의 샘플을 전달하는 것으로 제시되었지만, 이러한 동일한 소량의 샘플에서 다른 단백질 마커의 검출은 더 많은 도전과제를 보여주었다. 평가된 24 개의 단백질 마커 중 2 개의 마커만이 Hb 검정을 위한 FIT의 민감도 및 특이성을 개선시키는 데 있어서 타당성을 입증하였다.
실험예
FIT 및 전체 대변 샘플을 COLOGUARD 수집 키트(Exact Sciences, 위스콘신주 매디슨 소재)에 따라 장치를 사용하여 수집하였다. FIT 샘플을 장치를 사용하여 수집하고 미국 특허 번호 제9.211,112호에 기재된 바와 같이 완충액에서 안정화하였으며, 생성된 현탁 샘플을 직접 검사하였다.
전체 대변 샘플을 수집하고 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 및 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 완충액을 포함하는 Cologuard 대변 완충액 200204에서 안정화하였다. 대변 샘플의 무게를 측정한 다음, 완충액과 합하였다. 바람직하게는, 완충액 및 대변을 4:1(w:w 또는 v:w) 완충액-대-대변 비로 조합한다. 샘플을 완충액에서 균질화하고, 원심분리하여 고형물을 제거하고, 상청액을 바이오마커 검사를 위해 수집한다.
전체 대변 상청액 및 FIT 샘플을 24 개의 추가 단백질 마커의 존재/검출에 대해 평가하였다. 평가를 위해, 상업적으로 이용가능한 검정 키트를 여러 상이한 공급처로부터 구입하였다. 평가에 사용된 단백질 마커 검정 목록은 표 1에서 찾을 수 있다.
표 1. 단백질 바이오마커 검정 목록.
Figure pct00002
샘플을 제조업체의 지침에 따라 검사하였으며, 유체의 부피는 상이한 검정 요건에 따라 검사하였다. 모든 키트에 걸쳐, 샘플 부피는 25-100 μL로 달라졌다. 일부 절차의 경우, 전체 대변 상청액의 샘플은 예를 들어, 샘플 안정화 완충액에 의해 억제를 감소시키고/시키거나 정량적 검정의 측정 범위 내에서 표적 분석물을 갖는 샘플을 생성하기 위해 검사 전에 희석이 필요하였다. 희석 범위는 미희석에서 150-배 희석까지였다. FIT 수집 장치 샘플은 전형적으로 검사 전에 10-배 희석하였다.
평가를 위해 선택된 샘플은 병리학이 알려진 집단으로 이루어졌다. 모든 샘플이 각각의 단백질 검정으로 평가된 것은 아니었다. 전체 대변 상청액 샘플에서 평가된 단백질 마커 목록 및 이들의 결과는 표 2(도 1)에서 밝혀진다. FIT 장치 샘플에서 평가된 단백질 마커 및 이들의 결과는 표 3(도 2)에서 밝혀진다.
평가된 24 개의 단백질 바이오마커 중, 합토글로빈(Hp) 및 보체 성분 3(C3)은 Hb 결과와 조합될 때, Hb 단독에 대한 FIT에 비해 개선된 민감도 및 특이성을 나타내었다. 이러한 2 개의 바이오마커는 헤모글로빈 결과와 조합될 때 FIT 샘플 검사에 대한 민감도 및 특이성을 개선하는 데 있어서 가장 가능성을 입증하였고 병리학이 알려진 대규모 샘플 패널에서 검사하였다. 샘플 패널은 115 개의 암 샘플(CA), 112 개의 진행성 선종 샘플(AA), 및 488 개의 암에 대한 음성으로 이루어졌다. 전체 대변 샘플을 수집하고 각각의 작은 부분을 FIT 수집 장치로 제거하여 전체 대변 상청액 검사 결과를 FIT 수집 장치를 사용하여 처리된 상응하는 소량의 샘플과 비교할 수 있었다.
암을 검출하는 각각의 바이오마커의 성능을 평가하기 위해, ROC 곡선 분석을 수행하였고, 곡선하 면적(AUC)을 계산하였다.
표 4는 전체 대변 상청액 샘플에서 표 1에 제시된 마커 분석의 AUC 결과를 나타낸다. 0.6 초과의 AUC 결과를 추가 분석을 위해 선택하였다. 좋지 않은 바이오마커 검출을 여러 사례에서 관찰하였으며 이러한 마커는 AUC 계산에 포함되지 않았다.
Figure pct00003
표 5는 FIT 장치 샘플에서 도 2에 제시된 마커 분석의 AUC 결과를 나타낸다. 0.6 초과의 AUC 결과를 추가 분석을 위해 선택하였다. 좋지 않은 바이오마커 검출을 여러 사례에서 관찰하였으며 이러한 마커는 AUC 계산에 포함되지 않았다.
Figure pct00004
전체 대변 및 상응하는 FIT 수집 장치 소량의 샘플을 C3 및 Hp 검정으로 검사하였다. C3 및 Hp 결과, 및 각각의 개별 검정, 및 FIT 수집 장치로 수집된 샘플의 헤모글로빈 결과와 조합된 검정에 대한 특이성 및 민감도를 모델링하였다.
전체 대변 상청액 샘플
전체 대변 상청액 샘플에 대한 결과는 하기 표 6에 나타나 있다. 이러한 데이터는 전체 대변 샘플에서, C3 마커 단독이 헤모글로빈 마커와 비교하여 개선된 암 민감도를 보여주었고, C3, Hp, 및 Hb 마커가 조합된 경우 가장 큰 민감도가 달성되었음을 나타낸다.
Figure pct00005
FIT 장치 샘플
FIT 수집 장치로 수집된 샘플(즉, 대략 20 mg의 샘플)에서, 표 7에 나타낸 바와 같이, C3, Hp, 및 Hb 결과가 조합된 경우 가장 큰 민감도가 달성되었다. 이러한 데이터는 FIT 샘플 분석에 대한 전반적인 민감도가 FIT Hb 분석 단독으로 수득된 결과와 비교하여, Hb 결과가 C3 또는 Hp 결과와 조합된 경우 개선되었음을 나타낸다.
Figure pct00006
전체 대변 상청액 샘플 데이터 + FIT 장치 샘플 데이터
전체 대변 상청액으로부터 수집된 데이터 및 상응하는 FIT 수집 장치 샘플 데이터(즉, 전체 대변 샘플로부터 취하고 동시에 처리된 FIT 샘플)를 또한 조합하였다. 표 8은 해당 마커에 대한 FIT 및 전체 대변 상청액 데이터가 조합된 경우 C3, Hp, 및 Hb 마커의 분석에 대한 AUC 결과를 나타낸다:
Figure pct00007
FIT 샘플 및 전체 대변 상청액 샘플을 둘 다 조합하여 검사한 경우, 결과는 하기 표 9에 나타낸 바와 같이, 전체 대변 또는 FIT 장치 샘플링 단독에서 각각의 개별 마커의 검사와 비교하여 일반적으로 개선된 민감도를 나타내었다. 이러한 데이터는 Hb에 대한 전반적인 민감도가 FIT 샘플 및 상응하는 전체 대변 샘플을 둘 다 검사하고, 결과를 조합한 경우 개선되었음을 나타낸다. Hb에 더하여 Hp 및/또는 C3을 검사한 것은 Hb 분석 단독에 비해 민감도에서 약간 추가의 개선을 제공하였다.
Figure pct00008
상기 기재된 바와 같은 검정은 하나 이상의 다른 분자를 검출하기 위해 검정을 첨가함으로써 추가로 향상될 수 있다. 당업자는 FIT 장치 샘플 및 전체 대변 상청액 샘플을 포함한 분변 샘플에서 단백질 마커의 검출이 전반적인 민감도를 추가로 향상시키기 위해 개별적으로 또는 임의의 조합으로 RNA(들), 메틸화 마커 유전자(들) 및/또는 자가항체(들)를 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 마커, 예를 들어, 대변 샘플에서 메틸화 마커 유전자(들) 또는 다른 핵산, 및/또는 혈액 또는 혈액 생성물의 샘플 내 마커의 검출과 조합될 수 있음을 이해할 것이다.
특허, 특허 출원, 기사, 책, 논문, 및 인터넷 웹 페이지를 포함하나 이에 제한되지 않는 본 출원에 인용된 모든 문헌 및 유사 자료는 임의의 목적을 위해 그 전문이 참조로 명시적으로 포함된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본원에 기재된 다양한 구현예가 속하는 기술 분야에서 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 포함된 참고문헌에서 용어의 정의가 본 교시에 제공되는 정의와 상이한 것으로 나타난 경우, 본 교시에 제공된 정의가 우선할 것이다.
본 기술의 기재된 조성물, 방법, 및 용도의 다양한 변형 및 변경은 기재된 바와 같은 기술의 범위 및 취지를 벗어나지 않고 당업자에게 명백할 것이다. 본 기술은 특정 예시적인 구현예와 함께 기재되었지만, 청구된 바와 같은 본 발명이 이러한 특정 구현예로 과도하게 제한되어서는 안 된다는 것이 이해되어야 한다. 실제로, 약리학, 생화학, 의학, 또는 관련 분야의 숙련자에게 명백한 본 발명을 수행하기 위한 기재된 방식의 다양한 변형은 하기 청구범위의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.

Claims (56)

  1. 인간 분변 샘플을 특성화하는 방법으로서,
    i) 안정화 용액의 부피에 분산된 소량의 인간 분변 샘플을 포함하는 분산된 샘플을 제공하는 단계,
    ii) 복수의 상이한 마커 분석물의 양에 대해 분산된 샘플을 검정하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 안정화 용액의 부피가 3 mL 미만, 바람직하게는 2 mL 미만인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 복수의 상이한 마커 분석물이 복수의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 복수의 상이한 단백질 마커 분석물이 적어도 3 개의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 상이한 마커 분석물이 3 개 이하의 상이한 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 상이한 마커 분석물이 인간 마커 분석물인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 상이한 마커 분석물이 헤모글로빈(Hb), 칼프로텍틴, 합토글로빈(Hp), 보체 성분 3(C3), 보체 성분 3a(C3a), IgG 결합 단백질의 Fc 단편(FCGBP), 레시스틴 유사 베타(RETNLB/RELM), S100 칼슘 결합 단백질 A12(S100A12), 및 세르핀 패밀리 F 구성원 2(SERPIN F2)로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 인간 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3을 포함하는 것인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3으로 이루어지는 것인, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 검정이 면역화학 검정을 포함하는 것인, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 소량의 분변 샘플이 100 mg 미만, 바람직하게는 50 mg 미만, 바람직하게는 20 mg 미만의 질량을 갖는 것인, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 완충액을 포함하는 것인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다음 중 하나 이상을 포함하는 것인, 방법:
    - 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 완충액;
    - 소 혈청 알부민;
    - 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노라우레이트(TWEEN-20);
    - 아지드화 나트륨;
    - 염화 나트륨;
    - 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA);
    - 겐타마이신.
  14. 제13항에 있어서, 상기 안정화 용액이 20 mM Tris, 10% 소 혈청 알부민, 0.10% TWEEN 20, 0.095% 아지드화 나트륨, 140 mM 염화 나트륨, 10 mM EDTA, 및 15 μg/ml 겐타마이신을 포함하는 것인, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다음으로부터 선택된 하나 이상의 안정화 시약을 포함하는 것인, 방법:
    - 프로토포르피린;
    - 다가 양이온;
    - 당 또는 다당류;
    - 삼투물질 및 임의적으로, 다가 양이온;
    - 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 안정화 성분 및, 임의적으로, 다가 양이온.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다가 양이온, 바람직하게는 Cr3+ 및 Co3+로부터 선택된 다가 양이온과 착화된 프로토포르피린 IX를 포함하는 것인, 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산 및, 임의적으로, 다가 양이온을 포함하는 것인, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분산된 샘플이 FIT 샘플 수집 장치에 제공되는 것인, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 소량의 인간 분변 샘플이 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 제공되는 것인, 방법:
    a) 인간 대상체로부터 전체 대변 샘플을 수집하는 단계;
    b) 전체 대변 샘플의 일부를 제거하여 대변 샘플의 제거된 부분 및 나머지 부분을 생성하되, 상기 제거된 부분은 소량의 분변 샘플인, 단계;
    c) 소량의 분변 샘플을 안정화 용액의 부피와 조합하여 분산된 샘플을 생성하는 단계; 및
    d) 대변 샘플의 나머지 부분을 안정화하는 단계.
  20. 제19항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분의 안정화가 다음 단계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 것인, 방법:
    i) 안정화 완충액을 대변 샘플의 나머지 부분에 첨가하며, 바람직하게는 안정화 완충액에서 대변 샘플의 나머지 부분을 균질화하여 대변 균질액을 형성하는 단계;
    ii) 대변 샘플의 나머지 부분을 동결하는 단계.
  21. 제20항에 있어서, 상기 안정화 완충액이 약 100 내지 약 300 mM의 킬레이트화제, 바람직하게는 EDTA를 포함하는 킬레이트화제를 포함하고, 약 400 내지 약 600 mM의 Tris 하이드로클로라이드를 포함하는 것인, 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 하나 이상의 마커 분석물의 양에 대해 대변 샘플의 나머지 부분을 검정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분을 검정하는 것이 대변 균질액을 처리하여 정화된 유체 분획으로부터 고형물을 분리하는 단계 및 정화된 유체 분획을 검정하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 대변 균질액을 처리하는 것이 여과 및 원심분리 중 하나 이상을 포함하는 것인, 방법.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물이 분산된 샘플에서 검정된 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  26. 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물이 분산된 샘플에서 검정된 복수의 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  27. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물이 분산된 샘플에서 검정된 복수의 마커 분석물로 이루어지는 것인, 방법.
  28. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 하나 이상의 마커 분석물이 분산된 샘플에서 검정되지 않은 마커 분석물로 이루어지는 것인, 방법.
  29. 제14항 내지 제26항 및 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 복수의 상이한 마커 분석물이 Hb, 칼프로텍틴, Hp, C3, C3a, FCGBP, RETNLB/RELM) S100A12, 및 SERPIN F2로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 인간 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3을 포함하는 것인, 방법.
  31. 제25항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3으로 이루어지는 것인, 방법.
  32. 제22항 내지 제26항 및 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대변 샘플의 나머지 부분에서 검정된 복수의 상이한 마커 분석물이 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물을 포함하는 것인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물이 다음 중 적어도 하나에 대해 검정되는 것인, 방법:
    - 돌연변이; 및
    - 사이토신의 메틸화 상태.
  34. 인간 분변 샘플을 특성화하기 위한 물품 세트로서,
    i) 안정화 용액의 부피에 분산된 소량의 인간 분변 샘플을 포함하는 분산된 샘플을 함유하는 FIT 샘플 수집 장치,
    ii) 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물의 양에 대해 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트를 포함하는, 물품 세트.
  35. 제34항에 있어서, 상기 FIT 샘플 수집 장치에서 안정화 용액의 부피가 3 mL 미만, 바람직하게는 2 mL 미만인, 물품 세트.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 적어도 3 개의 상이한 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 물품 세트.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 3 개 이하의 상이한 마커 분석물을 포함하는 것인, 물품 세트.
  38. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, 칼프로텍틴, Hp, C3, C3a, FCGBP, RETNLB/RELM) S100A12, 및 SERPIN F2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 물품 세트.
  39. 제38항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3을 포함하는 것인, 물품 세트.
  40. 제39항에 있어서, 상기 복수의 상이한 인간 단백질 마커 분석물이 Hb, Hp, 및 C3으로 이루어지는 것인, 물품 세트.
  41. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트가 면역화학 검정을 위한 시약 세트를 포함하는 것인, 물품 세트.
  42. 제34항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 소량의 인간 분변 샘플이 100 mg 미만, 바람직하게는 50 mg 미만, 바람직하게는 20 mg 미만의 질량을 갖는 것인, 물품 세트.
  43. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 완충액을 포함하는 것인, 물품 세트.
  44. 제34항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다음 중 하나 이상을 포함하는 것인, 물품 세트:
    - Tris 완충액;
    - 소 혈청 알부민;
    - TWEEN-20;
    - 아지드화 나트륨;
    - 염화 나트륨;
    - EDTA;
    - 겐타마이신.
  45. 제44항에 있어서, 상기 안정화 용액이 20 mM Tris, 10% 소 혈청 알부민, 0.10% TWEEN 20, 0.095% 아지드화 나트륨, 140 mM 염화 나트륨, 10 mM EDTA, 및 15 μg/ml 겐타마이신을 포함하는 것인, 물품 세트.
  46. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다음으로부터 선택된 하나 이상의 안정화 시약을 포함하는 것인, 물품 세트:
    - 프로토포르피린;
    - 다가 양이온;
    - 당 또는 다당류;
    - 삼투물질 및 임의적으로, 다가 양이온;
    - 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 안정화 성분 및, 임의적으로, 다가 양이온.
  47. 제34항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 다가 양이온, 바람직하게는 Cr3+ 및 Co3+로부터 선택된 다가 양이온과 착화된 프로토포르피린 IX를 포함하는 것인, 물품 세트.
  48. 제34항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화 용액이 치환 또는 비치환된 폴리갈락투론산 및, 임의적으로, 다가 양이온을 포함하는 것인, 물품 세트.
  49. 제34항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 소량의 인간 분변 샘플이 전체 대변 샘플로부터 제거된 부분을 포함하며, 상기 물품 세트가 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 추가로 포함하는 것인, 물품 세트.
  50. 제49항에 있어서, 상기 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분이 안정화 완충액을 포함하는 것인, 물품 세트.
  51. 제50항에 있어서, 상기 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분 안정화 완충액이 약 100 내지 약 300 mM의 킬레이트화제, 바람직하게는 EDTA를 포함하는 킬레이트화제를 포함하고, 약 400 내지 약 600 mM의 Tris 하이드로클로라이드를 포함하는 것인, 물품 세트.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서, 상기 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분에서, 대변 샘플의 나머지 부분이 안정화 완충액에서 균질화되는 것인, 물품 세트.
  53. 제49항에 있어서, 하나 이상의 마커 분석물의 양에 대해 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트를 추가로 포함하는, 물품 세트.
  54. 제53항에 있어서, 상기 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 하나 이상의 마커 분석물이 분산된 샘플을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 적어도 하나의 인간 단백질 마커 분석물을 포함하는 것인, 물품 세트.
  55. 제53항에 있어서, 상기 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트에 의해 검정가능한 하나 이상의 마커 분석물이 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물을 포함하는 것인, 물품 세트.
  56. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 인간 DNA 마커 분석물에 대해 대변 샘플의 안정화된 나머지 부분을 검정하기 위한 시약 세트가 다음 중 적어도 하나를 검정하기 위한 시약을 포함하는 것인, 물품 세트:
    - 돌연변이; 및
    - 사이토신의 메틸화 상태.
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