KR20220079906A - 다이아실글리세롤 아실 전달효소 2 억제제 - Google Patents
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Abstract
하기 화학식 I의 화합물, 다이아실글리세롤 아실 전달효소 2(DGAT2) 억제제로서 이의 용도, 상기 억제제를 함유하는 약학 조성물, 및 예를 들어 NASH를 치료하기 위한 상기 억제제의 용도가 본원에 기재된다:
[화학식 I]
상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 본원에 정의된 바와같다.
[화학식 I]
상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 본원에 정의된 바와같다.
Description
본 발명은 새로운 약학 화합물, 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물, 및 다이아실글리세롤 아실 전달효소 2(DGAT2)의 활성을 억제하는 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.
다이아실글리세롤 아실 전달효소(DGAT)는 트라이아실글리세리드(TAG) 합성의 종결 단계, 구체적으로 TAG의 형성을 야기하는 다이아실글리세롤에 의한 지방산의 에스터화에 촉매 작용한다. 포유동물에서, 2개의 DGAT 효소(DGAT1 및 DGAT2)는 특성규명되었다. 이들 효소는 동일한 효소 반응에 촉매 작용하지만, 이들 각각의 아미노산 서열은 관련이 없고 이들은 별개의 유전자 패밀리를 차지한다. DGAT2는 간 및 지방에서 고도로 발현되고, DGAT1과는 달리, 다이아실글리세리드(DAG)에 대한 강한 기질 특이성을 나타낸다. 설치류의 DGAT2 유전자 결실은 불완전한 자궁내 성장, 심각한 지방혈증, 피부 장벽 기능 장애 및 조기 출산후 사망을 초래한다. DGAT2의 억제는 스테아로일 조절 요소-결합 단백질 1c(SREBP1c) 및 스테아로일 CoA-불포화 효소 1(SCD1)을 포함하는, 지방 생성에 관여하는 단백질을 암호화하는 다수의 유전자 발현의 하향 조절을 야기하는 것이 분명하다. 동시에, 유전자, 예컨대 카르니틴 팔미토일 전달 효소 1(CPT1)의 증가된 발현에 의해 입증되는 바와 같이 산화 경로가 유도된다. 이러한 변화의 최종 결과는 간 DAG 및 TAG 지질 수준을 감소시키고, 이는 차례로 간에서 개선된 인슐린 반응성을 야기한다. 또한, DGAT2 억제는 간 VLDL TAG 분비를 저해하고 순환하는 콜레스테롤 수준의 감소를 야기한다. 마지막으로, 혈장 아포리포단백질 B(APOB) 수준은 아마 새로 합성된 APOB 단백질의 지질화를 위한 TAG의 감소된 공급으로 인해 저해된다. 혈당 조절 및 혈장 콜레스테롤 프로파일 둘 다에 대한 DGAT2 억제의 유익한 효과는 이러한 표적이 대사성 질병의 치료에 가치 있다는 것을 시사한다(문헌[Choi, C. S. et.al. 2007. J Biol Chem 282: 22678-22688]).
또한, DGAT2 활성 억제가 감소된 간장 지질 축적을 야기한다는 관찰은, 이러한 효소의 억제제가 간에서의 과잉의 지방의 축적을 특징으로 하는 매우 일반적인 간 질환인 비알코올성 지방간염(NASH)의 치료에서의 유용성을 가질 수 있음을 시사한다.
최근에, DGAT2의 여러 소분자 억제제가 문헌 및 특허출원(WO2013150416, WO2013137628, US20150259323, WO2015077299, WO2016036633, WO2016036638, WO2016036636)에 보고되었다. 최근에, DGAT2의 소분자 억제제를 개시하는 PCT/IB2017/054862가 WO2018/033832로 2018년 2월 22일에 공개되었다.
그럼에도 불구하고, DGAT2 억제 활성을 가지며 본원에 기재된 질병의 징후의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 약학 제제에 대한 필요성이 여전히 존재한다. 또한, 개선된 약동학적 특성, 예컨대 용해도, 제거율 및 반감기를 갖는 DGAT2 억제제에 대한 필요성이 여전히 존재한다. 인간에서의 더 긴 반감기는 더 낮은 제거율 및/또는 증가된 분포 부피로 인해 발생할 수 있다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R1은 H 또는 플루오로이고;
R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, (C1-C3)알킬, (C1-C3)플루오로알킬, (C1-C3)하이드록시알킬 및 -(C1-C3)알킬-(C1-C2)알콕시로부터 선택되고;
R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, 플루오로, 하이드록시, (C1-C3)알킬, (C1-C3)플루오로알킬, (C1-C3)하이드록시알킬, (C1-C2)알콕시, (C1-C2)플루오로알콕시 및 -(C1-C3)알킬-(C1-C2)알콕시로부터 선택되되,
R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 중 0, 1 또는 2개는 H가 아니다.
또한, 본 발명은 지방간, 비알코올성 지방간 질환, 비알코올성 지방간염, 간 섬유증을 동반하는 비알코올성 지방간염, 간경변을 동반하는 비알코올성 지방간염, 또는 간경변 및 간세포 암종을 동반하는 비알코올성 지방간염의 치료 방법에 관한 것으로서, 이는 이러한 치료를 필요로 하는 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 심부전, 울혈성 심부전, 관상동맥성 심장병, 말초혈관 질환, 심혈관 질환, 폐 고혈압, 혈관염, 급성 관동맥 증후군 및 심혈관 위험 조정을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 이는 이러한 치료를 필요로 하는 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 제I형 당뇨병, 제II형 진성 당뇨병, 특발성 제I형 당뇨병(제Ib형), 성인 잠복 자가면역 당뇨병(LADA), 조기-발병 제2형 당뇨병(EOD), 청소년-발병 비정형 당뇨병(YOAD), 성숙기 발병 당뇨병(MODY), 영양실조-관련 당뇨병, 임신성 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 허혈성 뇌졸중, 혈관형성후 재협착증, 말초혈관 질환, 간헐성 파행증, 심근경색증, 이상지질혈증, 식후 지방혈증, 내당능 장애(IGT) 질환, 공복 혈장 포도당 장애 질환, 대사성 산증, 케톤증, 관절염, 당뇨병성 망막증, 황반변성, 백내장, 당뇨병성 신증, 사구체경화증, 만성 신부전, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, X 증후군, 고혈당증, 고인슐린혈증, 고중성지방혈증, 인슐린 저항성, 포도당 대사 장애, 피부 및 결합조직 장애, 족부 궤양 및 궤양성 대장염, 내피 기능장애 및 혈관 유순도 장애, 고 아포 B 리포단백혈증 또는 단풍시럽뇨병의 치료 방법에 관한 것으로서, 이는 이러한 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 간세포 암종, 신장 투명세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 대장 선암종, 중피종, 위 선암종, 부신피질 암종, 신장 유두상 세포 암종, 자궁 및 자궁경내 암종, 방광 요로상피 암종 또는 폐 선암종의 치료 방법에 관한 것으로서, 이는 이러한 치료를 필요로 하는 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 기선으로부터 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 활동 점수(NAS)의 중증도를 적어도 1 또는 2점 감소시키는 방법에 관한 것으로서, 이는 인간에서의 기선 NAS를 측정하는 단계, 상기 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 효과량을 투여하는 단계, 및 상기 인간의 NAS를 측정하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량, 및 약학적으로 허용되는 담체, 비히클 또는 희석제를 갖는 약학 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은
화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염인 제1 화합물;
항당뇨병제, 비알코올성 지방간염 치료제, 비알코올성 지방간 질환 치료제 또는 항심부전 치료제인 제2 화합물; 및
약학 담체, 비히클 또는 희석제
를 갖는 조성물의 치료 효과량을 포함하는 약학 조합 조성물에 관한 것이다.
전술한 일반적인 설명 및 다음의 상세한 설명은 모두 예시적이고 설명적인 것이며 청구된 바와 같이 본 발명을 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 실시예 4, 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 2는 실시예 4, 하이드로클로라이드 염 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 3은 실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염, 무수물, 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 4는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 혈장 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다수의 투여량 효과를 플롯팅한다(수직축: 혈장 트라이글리세리드 (mg/dL), 수평축: 서구 식단 BID 투여(mg/kg)).
도 5는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 간 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다수의 투여량 효과을 플롯팅한다(수직축: 간 트라이글리세리드(μg/mg), 수평축: 서구 식단 BID 투여(mg/kg)).
도 6은 제제 P1, 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 7은 제제 P1, 형태 2의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 8은 제제 P1, 형태 3의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 2는 실시예 4, 하이드로클로라이드 염 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 3은 실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염, 무수물, 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 4는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 혈장 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다수의 투여량 효과를 플롯팅한다(수직축: 혈장 트라이글리세리드 (mg/dL), 수평축: 서구 식단 BID 투여(mg/kg)).
도 5는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 간 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다수의 투여량 효과을 플롯팅한다(수직축: 간 트라이글리세리드(μg/mg), 수평축: 서구 식단 BID 투여(mg/kg)).
도 6은 제제 P1, 형태 1의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 7은 제제 P1, 형태 2의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
도 8은 제제 P1, 형태 3의 특징적 x-선 분말 회절 패턴을 보여준다(수직축: 강도(CPS); 수평축: 2θ(°)).
본 발명은 본 발명의 예시적인 실시양태에 대한 하기의 상세한 설명 및 이에 포함된 실시예를 참조함으로써 보다 용이하게 이해될 수 있다.
본 발명은 물론 다양할 수 있는 특정한 합성 방법으로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위한 것이며 한정하려는 의도가 아님을 이해해야 한다. 본원 및 하기 청구범위에서, 다음과 같은 의미를 갖는 것으로 정의되어야 하는 다수의 용어에 대한 참조가 이루어질 것이다:
본원에서 사용된 단수형은 하나 이상을 의미할 수 있다. 청구범위에서 사용된 바와 같이, "포함하는"이라는 단어와 함께 사용될 때, 단수형은 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 본원에 사용된 "또 다른"은 적어도 두 번째 이상을 의미할 수 있다.
용어 "약"은 명목 값의 ±10%의 근사치를 나타내는 상대적인 용어를 지칭하고, 이는 하나의 실시양태에서 ±5%, 또 다른 실시양태에서 ±2%를 지칭한다. 본원의 분야의 경우, 더 좁은 범위를 요구하는 값이 구체적으로 언급되지 않는 한 이 근사 수준은 적절하다.
본원에서 사용될 때 "화합물"은 형태 이성질체(예를 들어 시스 및 트랜스 이성질체) 및 모든 광학 이성질체(예를 들어 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체), 라세미체, 부분입체 이성질체 및 이러한 이성질체를 포함하는 기타 혼합물, 뿐만 아니라 용매화물, 수화물, 이형체, 다형체, 호변 이성질체, 에스터, 염 형태 및 전구 약물을 포함하는 모든 약학적으로 허용되는 유도체 또는 변형을 포함한다. 용어 "전구 약물"은 투여 후에 어떤 화학적 또는 생리학적 과정을 통해 생체내 약물을 방출하는 약물 전구체인인 화합물을 지칭한다(예를 들어 전구 약물은 생리학적 pH에 도달하거나 효소 작용을 통해 원하는 목적하는 약물 형태로 전환된다).
용어 "알킬"은, 단독으로 또는 조합으로, 화학식 CnH2n+1 의 비환형 포화 탄화수소 기를 의미하며, 이는 선형 또는 분지형일 수 있다. 이러한 기의 예는 비제한적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 부틸, sec-부틸, 이소부틸 및 t-부틸을 포함한다. 알킬 및 다양한 기타 탄화수소-함유 잔기의 탄소 원자 함량은 잔기의 탄소 원자의 하위 숫자 및 상위 숫자를 표기하는 접두사에 의해 표시되고, 즉 접두사 Ci-Cj는 정수 "i" 내지 정수 "j"개의 탄소 원자의 잔기를 표시한다. 따라서, 예를 들어, C1-C3 알킬은 1 내지 3개의 탄소 원자의 알킬을 지칭한다.
"플루오로알킬"은 1, 2 또는 3개의 플루오로 원자로 치환된, 본원에 정의된 알킬을 의미한다. 예시적 (C1)플루오로알킬 화합물은 플루오로메틸, 다이플루오로메틸 및트라이플루오로메틸을 포함하고; 예시적 (C2)플루오로알킬 화합물은 1-플루오로에틸, 2-플루오로에틸, 1,1-다이플루오로에틸, 1,2-다이플루오로에틸, 1,1,1-트라이플루오로에틸, 1,1,2-트라이플루오로에틸 등을 포함한다.
"하이드록시알킬"은 1개의 원자로 치환된, 본원에 정의된 알킬을 의미한다. 예시적 하이드록시알킬 화합물은 하이드록시메틸, 1-하이드록시에틸, 2-하이드록시에틸 등을 포함한다.
"알콕시"는 옥시를 통해 결합된 직쇄 포화 알킬 또는 분지쇄 포화 알킬을 의미한다. 이러한 알콕시 기의 예는(지정된 길이가 특정 예를 포함한다고 가정함) 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, 3차 부톡시, 펜톡시, 이소펜톡시, 네오펜톡시, 3차 펜톡시, 헥속시, 이소헥속시, 헵톡시 및 옥톡시이다.
"플루오로알콕시"는 1, 2 또는 3개의 플루오로 원자로 치환된, 본원에 정의된 알콕시를 의미한다. 예시적 (C1)플루오로알콕시 화합물은 플루오로메톡시, 다이플루오로메톡시 및 트라이플루오로메톡시를 포함하고; 예시적 (C2)플루오로알킬 화합물은 1-플루오로에톡시, 2-플루오로에톡시, 1,1-다이플루오로에톡시, 1,2-다이플루오로에톡시, 1,1,1-트라이플루오로에톡시, 1,1,2-트라이플루오로에톡시 등을 포함한다.
"환자"는 온혈 동물, 예컨대 기니피그, 마우스, 래트, 게르빌루스쥐, 고양이, 토끼, 개, 소, 염소, 양, 말, 원숭이, 침팬지 및 인간을 지칭한다.
용어 "약학적으로 허용되는"은 환자에 대한 투여에 적합한 물질(예를 들어 본 발명의 화합물) 및 이의 임의의 염, 또는 본 발명의 물질 또는 염을 포함하는 조성물을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "반응-불활성 용매" 및 "불활성 용매"는 목적하는 생성물의 수율에 부정적으로 영향을 미치지 않는 방식으로 출발 물질, 시약, 중간체 또는 생성물과 상호작용하지 않는 용매 또는 이의 혼합물을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "선택성" 또는 "선택적"은 제2 분석에서의 동일한 화합물의 효과과 비교한 제1 분석에서의 화합물의 보다 큰 효과를 지칭한다. 예를 들어, "소화관 선택적" 화합물에서, 제1 분석은 장에서의 화합물의 반감기에 대한 것이고, 제2 분석은 간에서의 화합물의 반감기에 대한 것이다.
"치료 효과량"은, (i) 특정 질병, 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하거나, (ii) 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 개선하거나 제거하거나, (iii) 본원에 기재된 특정 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발현을 예방하거나 지연시키는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "치료함", "치료하다" 또는 "치료"는 환자의 질병(또는 질환) 또는 상기 질병과 관련된 임의의 조직 손상의 진행의 예방적 치료(즉 방지용) 및 완화적 치료(즉 완화, 경감 또는 감속) 둘 다를 포함한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 II]
상기 식에서,
R1은 H 또는 플루오로이고;
R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, (C1-C3)알킬, (C1-C3)플루오로알킬, (C1-C3)하이드록시알킬 및 -(C1-C3)알킬-(C1-C2)알콕시로부터 선택되고;
R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, 플루오로, 하이드록시, (C1-C3)알킬, (C1-C3)플루오로알킬, (C1-C3)하이드록시알킬, (C1-C2)알콕시, (C1-C2)플루오로알콕시 및 -(C1-C3)알킬-(C1-C2)알콕시로부터 선택되고;
R10, R11, R12, R13 및 R14는 각각 독립적으로 H 및 중수소로부터 선택되되;
R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 중 0, 1 또는 2개는 H가 아니다.
본 발명의 한 실시양태는 R2, R3, R4 및 R5가 각각 독립적으로 H 및 (C1)플루오로알킬로부터 선택되고, R6, R7, R8 및 R9가 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되고; R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 중 0, 1 또는 2개가 H가 아닌 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 R2, R3, R4, R5, R6 및 R7이 H이고; R8 및 R9가 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되; R8 및 R9 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 R2, R3, R4, R5, R8 및 R9가 H이고; R6 및 R7이 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R6 및 R7 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 R2, R3, R4, R5, R6 및 R9가 H이고; R7 및 R8이 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R7 및 R8 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 R2, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9가 H이고; R7이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 R2, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9가 H이고; R7이 플루오로인, 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는
2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드; 및
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드
로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
또 다른 실시양태는 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 결정을 포함한다:
또 다른 실시양태에서, 화합물은 2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-(5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드이다.
모든 예 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 개별적으로 또는 본원에 기재된 많은 실시양태 각각 모두와 임의의 조합으로 함께 군으로 청구될 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함하되, 특히 상기 약제는 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는, 지방간, 비알코올성 지방간 질환, 비알코올성 지방간염, 간 섬유증을 동반하는 비알코올성 지방간염, 간경변을 동반하는 비알코올성 지방간염 또는 간경변 및 간세포 암종을 동반하는 비알코올성 지방간염의 치료에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는, 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 지방간, 비알코올성 지방간 질환, 비알코올성 지방간염, 간 섬유증을 동반하는 비알코올성 지방간염, 간경변을 동반하는 비알코올성 지방간염 또는 간경변 및 간세포 암종을 동반하는 비알코올성 지방간염의 치료에 있어서 약제의 제조를 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함하되, 특히 상기 약제는 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 심부전, 울혈성 심부전, 관상동맥성 심장병, 말초혈관 질환, 심혈관 질환, 폐 고혈압, 혈관염, 급성 관동맥 증후군 또는 심혈관 위험 조정의 치료에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 심부전, 울혈성 심부전, 관상동맥성 심장병, 말초혈관 질환, 심혈관 질환, 폐 고혈압, 혈관염, 급성 관동맥 증후군 또는 심혈관 위험 조정의 치료에 있어서 약제의 제조를 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함하되, 상기 약제는 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 제I형 당뇨병, 제II형 진성 당뇨병, 특발성 제I형 당뇨병(제Ib형), 성인 잠복 자가면역 당뇨병(LADA), 조기-발병 제2형 당뇨병(EOD), 청소년-발병 비정형 당뇨병(YOAD), 성숙기 발병 당뇨병(MODY), 영양실조-관련 당뇨병, 임신성 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 허혈성 뇌졸중, 혈관형성후 재협착증, 말초혈관 질환, 간헐성 파행증, 심근경색증, 이상지질혈증, 식후 지방혈증, 내당능 장애(IGT) 질환, 공복 혈장 포도당 장애 질환, 대사성 산증, 케톤증, 관절염, 당뇨병성 망막증, 황반변성, 백내장, 당뇨병성 신증, 사구체경화증, 만성 신부전, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, X 증후군, 고혈당증, 고인슐린혈증, 고중성지방혈증, 인슐린 저항성, 포도당 대사 장애, 피부 및 결합조직 장애, 족부 궤양 및 궤양성 대장염, 내피 기능장애 및 혈관 유순도 장애, 고 아포 B 리포단백혈증, 및 단풍시럽뇨병의 치료에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 제I형 당뇨병, 제II형 진성 당뇨병, 특발성 제I형 당뇨병(제Ib형), 성인 잠복 자가면역 당뇨병(LADA), 조기-발병 제2형 당뇨병(EOD), 청소년-발병 비정형 당뇨병(YOAD), 성숙기 발병 당뇨병(MODY), 영양실조-관련 당뇨병, 임신성 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 허혈성 뇌졸중, 혈관형성후 재협착증, 말초혈관 질환, 간헐성 파행증, 심근경색증, 이상지질혈증, 식후 지방혈증, 내당능 장애(IGT) 질환, 공복 혈장 포도당 장애 질환, 대사성 산증, 케톤증, 관절염, 당뇨병성 망막증, 황반변성, 백내장, 당뇨병성 신증, 사구체경화증, 만성 신부전, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, X 증후군, 고혈당증, 고인슐린혈증, 고중성지방혈증, 인슐린 저항성, 포도당 대사 장애, 피부 및 결합조직 장애, 족부 궤양 및 궤양성 대장염, 내피 기능장애 및 혈관 유순도 장애, 고 아포 B 리포단백혈증, 및 단풍시럽뇨병의 치료에 있어서 약제의 제조를 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함하되, 특히 상기 약제는 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 간세포 암종, 신장 투명세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 대장 선암종, 중피종, 위 선암종, 부신피질 암종, 신장 유두상 세포 암종, 자궁 및 자궁경내 암종, 방광 요로상피 암종 또는 폐 선암종의 치료에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 치료를 필요로 하는 포유동물, 예컨대 인간에게 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 것을 포함하는 간세포 암종, 신장 투명세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 대장 선암종, 중피종, 위 선암종, 부신피질 암종, 신장 유두상 세포 암종, 자궁 및 자궁경내 암종, 방광 요로상피 암종 또는 폐 선암종의 치료에 있어서 약제의 제조를 위한 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 포함한다.
본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 함유할 수 있고, 따라서 상이한 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 발명의 화합물의 모든 입체 이성질체 형태, 뿐만 아니라 라세미 혼합물을 비롯한 그의 혼합물이 본 발명의 일부를 형성하는 것으로 의도된다. 또한, 본 발명은 모든 기하 및 위치 이성질체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물이 이중 결합 또는 융합된 고리를 포함하는 경우, 시스- 및 트랜스- 형태, 뿐만 아니라 혼합물 모두가 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 키랄 화합물(및 이의 키랄 전구체)은, 비대칭 고정상 및 이동상(0 내지 50% 이소프로판올(전형적으로 2 내지 20%), 및 0 내지 5%의 알킬아민(전형적으로 0.1% 다이에틸아민(DEA) 또는 이소프로필아민)을 함유하는 탄화수소(전형적으로 헵탄 또는 헥산)로 이루어짐)를 갖는 수지 상에서 크로마토그래피, 전형적으로 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 또는 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)를 사용하여 거울상 이성질체가 농축된 형태로 수득될 수 있다. 용리액의 농축은 농축된 혼합물을 제공한다. SFC가 사용되는 경우, 이동상은 2 내지 50% 알코올, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 이소프로판올을 함유하는, 초임계 유체, 전형적으로 이산화 탄소로 이루어질 수 있다.
부분입체 이성질체 혼합물은 당업자에게 주지된 방법, 예컨대 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 물리적 화학적 차이에 기초하여 개별 부분입체 이성질체로 분리될 수 있다. 거울상 이성질체는 거울상 이성질체 혼합물을 적절한 광학 활성 화합물(예를 들어 키랄 보조제, 예컨대 키랄 알코올 또는 모셔 산 클로라이드)과 반응시킴으로써 거울상 이성질체 혼합물을 부분입체 이성질체 혼합물로 전환시키고, 부분입체 이성질체를 분리하고, 개별적 부분입체 이성질체를 상응하는 순수한 거울상 이성질체로 전환(예를 들어 가수분해)하여 분리할 수 있다. 또한, 거울상 이성질체는 키랄 HPLC 컬럼을 사용하여 분리할 수 있다. 대안적으로, 특정 입체 이성질체는 광학 활성 출발 물질의 사용에 의해, 광학 활성 시약, 기질, 촉매 또는 용매를 사용하는 비대칭 합성에 의해, 또는 비대칭 변환에 의한 하나의 입체 이성질체를 나머지 입체 이성질체로 전환하는 것에 의해 합성될 수 있다.
본 발명의 화합물이 2개 이상의 입체 중심을 갖고 절대 또는 상대 입체 화학이 이름에 주어지는 경우, 지정 R 및 S는 각 분자에 대한 통상적 IUPAC 번호 체계에 따라 각각의 입체 중심을 오름차순(1, 2, 3 등)으로 지칭한다. 본 발명의 화합물이 하나 이상의 입체 중심을 갖고 이름 또는 구조에 입체 화학이 제공되지 않는 경우, 이름 또는 구조는 라세미 형태를 포함하는 화합물의 모든 형태를 포함하는 것으로 이해된다.
본 발명의 화합물은 올레핀 유사 이중 결합을 함유할 수 있다. 이러한 결합이 존재할 때, 본 발명의 화합물은 시스 및 트랜스 배열 및 이들의 혼합물로 존재한다. 용어 "시스"는 서로 및 고리 평면에 대한 2개의 치환기의 배향을 나타낸다(둘 다 "위" 또는 둘 다 "아래"). 유사하게, 용어 "트랜스"는 서로 및 고리의 평면에 대한 2개의 치환기의 배향을 지칭한다(치환기는 고리의 반대쪽에 있음).
또한, 본 발명의 중간체 및 화합물은 상이한 호변 이성질체 형태로 존재할 수 있고, 이러한 모든 형태는 본 발명의 범위 내에 포함된다. 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조적 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변 이성질체(양성자성 호변 이성질체로도 공지됨)에는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-엔올 및 이민-엔아민 이성질체화가 포함된다.
원자가 호변 이성질체는 결합 전자 중 일부의 재구성에 의한 상호전환을 포함한다.
본 발명에 청구된 화합물의 범위에는 하나 초과의 유형의 이성질체를 나타내는 화합물 및 이들 중 하나 이상의 것의 혼합물을 포함하는 화학식 I 또는 II의 화합물의 모든 입체 이성질체, 기하 이성질체 및 호변 이성질체 형태가 포함된다. 또한, 반대이온이 광학적으로 활성인 산 부가염 또는 염기 염, 예를 들어 D-락테이트 또는 L-리신, 또는 라세미체, 예를 들어 DL-타르트레이트 또는 DL-아르기닌이 포함된다.
본 발명은 하나 이상의 원자가, 동일한 원자 번호를 갖지만 원자량 또는 질량수가 자연에서 일반적으로 발견되는 원자량 또는 질량수와 상이한 원자로 대체된 화학식 I 또는 II의 모든 약학적으로 허용되는 동위원소 표지된 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대 2H 및 3H, 탄소의 동위원소, 예컨대 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대 36Cl, 불소의 동위원소, 예컨대 18F, 요오드의 동위원소, 예컨대 123I, 124I 및 125I, 질소의 동위원소, 예컨대 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대 32P, 및 황의 동위원소, 예컨대 35S를 포함한다.
특정 동위원소 표지된 화학식 I 또는 II의 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소를 포함하는 것은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 3H 및 탄소-14, 즉 14C는 혼입이 용이하고 검출 수단이 용이하다는 점에서 이러한 목적에 특히 유용하다.
더 무거운 동위원소, 예컨대 중수소, 즉 2H에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체 내 반감기 증가 또는 투여량 필요요건 감소로 인한 특정 치료 이점을 얻을 수 있고, 따라서 일부 상황에서는 바람직할 수 있다.
양전자 방출 동위원소, 예컨대 11C, 18F, 15O 및 13N에 의한 치환은 기질 수용체 점유를 검사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에서 유용할 수 있다.
동위원소 표지된 화학식 I 또는 II의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상적인 기술에 의해, 또는 이전에 사용된 비표지 시약 대신에 적절한 동위원소 표지된 시약을 사용하여 첨부된 실시예 및 제조에 기재된 것과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 그 자체로, 또는 가능한 경우 이의 약학적으로 허용되는 염의 형태로 단리되고 사용될 수 있다. 용어 "염"은 본 발명의 화합물의 무기 및 유기 염을 지칭한다. 이들 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 동일반응계에서 제조되거나, 화합물을 적합한 유기산 또는 무기산으로 개별적으로 처리하고 이렇게 형성된 염을 단리함으로써 제조될 수 있다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"에 포함되는 염은 일반적으로 유리 염기를 적합한 유기산 또는 무기산과 반응시켜 투여에 적합한 본 발명의 화합물의 염을 제공함으로써 제조되는, 환자에게 투여하기에 적합한 본 발명의 화합물을 지칭한다. 적합한 산 부가염은 무독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 예는 아세테이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 보레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 사이클라메이트, 에디실레이트, 에실레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 헥사플루오로포스페이트, 하이드로클로라이드/클로라이드, 하이드로브로마이드/브로마이드, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 메실레이트, 메틸 설페이트, 나프틸레이트, 2-납실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/수소 포스페이트/이수소 포스페이트, 피로글루타메이트, 사카레이트, 스테아레이트, 석시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트라이플루오로아세테이트 및 지노포에이트 염을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Berge, et al. J. Pharm. Sci. 66, 1-19 (1977); Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002)]을 참조한다.
화학식 I 또는 II의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 용매화되지 않은 형태 및 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 용어 '용매화물'은 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 용매 분자, 예를 들어 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하기 위해 본원에 사용된다. 용어 '수화물'은 상기 용매가 물일 때 사용된다.
유기 수화물에 대해 현재 허용되는 분류 시스템은 단리 부위, 채널 또는 금속 이온 배위 수화물을 정의하는 것이다 - 문헌[Polymorphism in Pharmaceutical Solids by K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Marcel Dekker, 1995)]을 참조한다. 단리 부위 수화물은 유기 분자를 개재하여 물 분자가 서로 직접 접촉하지 않도록 분리된 것이다. 채널 수화물에서, 물 분자는 다른 물 분자 옆에 있는 격자 채널에 놓인다. 금속 이온 배위 수화물에서, 물 분자는 금속 이온에 결합된다.
용매 또는 물이 단단히 결합된 경우 복합체는 습도와 무관하게 명확한 화학량론을 가질 수 있다. 그러나, 채널 용매화물 및 흡습성 화합물과 같이 용매 또는 물이 약하게 결합된 경우 물/용매 함량은 습도 및 건조 조건에 의존적일 수 있다. 이러한 경우 비화학량론이 표준이 된다.
또한, 본 발명의 범위에는 약물 및 하나 이상의 다른 성분이 화학량론적 또는 비화학량론적 양으로 존재하는 다성분 복합체(염 및 용매화물 제외)가 포함된다. 이러한 유형의 복합체에는 포접물(약물-호스트 포함 복합체) 및 공결정이 포함된다. 후자는 전형적으로 비공유 상호작용을 통해 함께 결합되는 중성 분자 구성요소의 결정질 복합체로 정의되지만, 중성 분자와 염의 복합체일 수도 있다. 공결정은 용융 결정화에 의해, 용매로부터 재결정화에 의해, 또는 구성요소를 물리적으로 함께 분쇄함으로써 제조될 수 있다 - 문헌[Chem Commun, 17, 1889-1896, by O. Almarsson and M. J. Zaworotko (2004)]을 참조한다. 다성분 복합체에 대한 일반적인 검토는 문헌[J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, by Haleblian (August 1975)]을 참조한다.
본 발명의 화합물은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I 또는 II의 화합물, 하기에 정의되는 바와 같은 이의 다형체 및 이성질체(광학, 기하 및 호변 이성질체 포함) 및 동위원소 표지된 화학식 I 또는 II의 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물은 전구 약물로서 투여될 수 있다. 따라서, 자체적으로 약리학적 활성을 거의 또는 전혀 가지지 않는 화학식 I 또는 II의 화합물의 특정 유도체는 체내로 또는 신체 상에 투여될 때, 예를 들어 가수분해 절단에 의해, 목적하는 활성을 갖는 화학식 I 또는 II의 화합물로 전환될 수 있다. 이러한 유도체는 '전구 약물'로 지칭된다. 전구 약물 사용에 대한 추가적 정보는 문헌['Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)] 및 ['Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association)]에서 찾아볼 수 있다.
예를 들어, 전구 약물은 예를 들어 문헌["Design of Prodrugs" by H. Bundgaard (Elsevier, 1985)]에 기재된 바와 같이 화학식 I 또는 II의 화합물에 존재하는 적절한 작용기를 당업자에게 공지된 특정 잔기로 대체함으로써 생성될 수 있다.
이러한 전구 약물의 몇 가지 예는 하기를 포함한다:
(i) 화학식 I 또는 II의 화합물이 알코올 작용기(-OH)를 함유하는 경우, 이의 에터, 예를 들어 (C1-C6)알카노일옥시메틸에 의한 수소의 대체; 또는 포스페이트 에스터(PO3H2) 또는 약학적으로 허용되는 염; 및
(ii) 아미노 NH 기의 수소가 각각 (C1-C10)알카노일 또는 (C1-C10)알콕시카본일로 대체된 화학식 I 또는 II에 존재하는 아미노 작용기의 아미드 또는 카바메이트.
또한, 화학식 I 또는 II의 화합물(전구 약물을 포함함)의 활성 대사산물, 즉 종종 산화 또는 탈알킬화에 의해 약물 투여시 생체내에서 형성된 화합물이 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명에 따른 대사산물의 일부 예는 하기를 포함한다:
(i) 화학식 I 또는 II의 화합물이 메틸 기를 함유하는 경우, 이의 하이드록시메틸 유도체(-CH3 -> -CH2OH) 및
(ii) 화학식 I 또는 II의 화합물이 알콕시 기를 함유하는 경우, 이의 하이드록시 유도체(-OR -> -OH).
본 발명의 특정 화합물은 하나 초과의 결정 형태(일반적으로 "다형체"로 지칭됨)로 존재할 수 있다. 다형체는 다양한 조건 하에, 예를 들어 재결정화를 위한 다양한 용매 또는 다양한 용매 혼합물; 다양한 온도에서의 결정화; 및/또는 결정화 동안 매우 빠른 냉각에서 매우 느린 냉각에 이르는 다양한 냉각 모드를 사용하여 결정화에 의해 제조될 수 있다. 또한, 다형체는 본 발명의 화합물을 가열 또는 용융시킨 후에 점진적 또는 급속 냉각에 의해 수득될 수 있다. 다형체의 존재는 고체 프로브 NMR 분광법, IR 분광법, 시차 주사 열량측정법, 분말 X-선 회절법 또는 기타 기술에 의해 결정될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 화합물은 특히 본원에 포함된 설명에 비추어 화학 분야에 공지된 것과 유사한 공정을 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물의 특정 제조 방법은 본 발명의 추가 특징으로서 제공되고 하기 반응식에 의해 예시된다. 다른 방법은 실험 섹션에서 기재될 것이다. 화학식 I 또는 II의 화합물의 제조를 위한 구체적인 합성 반응식은 하기에 요약되어 있다. 테트라졸은 일반적으로 고에너지 작용기이며 테트라졸 함유 분자의 합성 및 취급에 주의해야 한다.
초기 노트로서, 화학식 I 또는 II의 화합물의 제조에서, 본원에 기재된 화합물의 제조에 유용한 제조 방법 중 일부는 원격 작용기(예를 들어 화학식 I 또는 II의 전구체의 1차 아민, 2차 아민 또는 카복실)의 보호가 필요하다. 이러한 보호의 필요성은 원격 작용기의 특성 및 제조 방법의 조건에 따라 달라진다. 이러한 보호의 필요성은 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 이러한 보호/탈보호 방법의 사용은 또한 당업계의 기술 범위 내에 있다. 보호기 및 이의 사용에 대한 일반적인 설명은 문헌[T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.
예를 들어, 특정 화합물은 보호되지 않은 상태로 두면 분자의 다른 부위에서 반응을 방해할 수 있는 1차 아민 또는 카복시산 작용기를 포함한다. 따라서, 이러한 작용기는 후속 단계에서 제거될 수 있는 적절한 보호기에 의해 보호될 수 있다. 아민 및 카복시산 보호에 적합한 보호기는 펩티드 합성에 통상적으로 사용되는 보호기(예컨대 아민의 경우 N-tert-부톡시카본일, 벤질옥시카본일 및 9-플루오렌일메틸렌옥시카본일, 및 카복시산의 경우 저급 알킬 또는 벤질 에스터)(이는 일반적으로 기재된 반응 조건 하에 화학적으로 화학적으로 반응성이고 일반적으로 화학식 I 또는 II의 화합물의 다른 작용기를 화학적으로 변경하지 않고 제거될 수 있다)를 포함한다.
본 발명의 화합물은 특히 본원에 포함된 설명에 비추어 화학 분야에 주지된 것과 유사한 공정을 포함하는 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 상업적 공급원, 예컨대 MilliporeSigma(Milwaukee, WI)로부터 입수가능하거나 당업자에게 주지된 방법을 사용하여 용이하게 제조된다(예를 들어 일반적으로 문헌[Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.)] 또는 [Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin(부록 포함)](또한 Beilstein 온라인 데이터베이스를 통해 입수가능함)에 기재된 방법에 의해 제조된다). 본원에 사용된 많은 화합물은 큰 과학적 관심과 상업적 필요가 있는 화합물과 관련되거나 그로부터 유도되며, 따라서 많은 그러한 화합물은 상업적으로 입수가능하거나 문헌에 보고되어 있거나 문헌에 보고된 방법에 의해 통상적으로 입수가능한 다른 물질로부터 용이하게 제조될 수 있다.
개별 반응 단계에 대한 자세한 설명은 하기 실시예 섹션에 제공된다. 당업자는 다른 합성 경로를 사용하여 화합물을 합성할 수 있음을 이해할 것이다. 특정 출발 물질 및 시약이 하기에 논의되지만, 다른 출발 물질 및 시약은 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위해 쉽게 치환될 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 본원에 비추어 당업자에게 널리 공지된 통상적인 화학 반응을 사용하여 추가로 변형될 수 있다.
조합 제제
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합으로 투여될 수 있다. "조합으로 투여되는" 또는 "조합 요법"은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제가 치료받는 포유동물에게 동시에 투여됨을 의미한다. 조합하여 투여되는 경우, 각 성분은 동시에 투여되거나 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 각 성분은 개별적으로 투여될 수 있지만 목적하는 치료 효과를 제공하기 위해 시간적으로 충분히 밀접하게 투여될 수 있다. 용어 "동반 투여", "공동 투여", "동시 투여" 및 "동시에 투여되는"은 화합물을 조합하여 투여함을 의미한다. 따라서, 본원에 기재된 예방 및 치료 방법은 조합 제제의 사용을 포함한다.
조합 제제는 치료 효과량으로 포유동물에게 투여된다. "치료 효과량"이란 포유동물에게 단독으로 또는 추가 치료제와 조합하여 투여할 때 목적하는 질병/질환(예를 들어 NASH, 심부전 또는 당뇨병)을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.
본 발명의 화합물의 NASH/NAFLD 활성을 고려할 때, 이는 비알코올성 지방간염(NASH) 및/또는 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 관련 질병/질환의 치료를 위한 다른 제제, 예컨대 오르리스타트(Orlistat), TZD 및 기타 인슐린-민감성 제제, FGF21 유사체, 메트포르민(metformin), 오메가-3-산 에틸 에스터(예를 들어 로바자(Lovaza)), 피브레이트, HMG CoA-리덕타제 억제제, 에제티미브(Ezetimibe), 프로부콜(Probucol), 우르소데옥시콜산, TGR5 작용제, FXR 작용제, 비타민 E, 베타인, 펜톡시필린(Pentoxifylline), CB1 길항제, 카르니틴, N-아세틸시스테인, 환원된 글루타티온, 로르카세린(lorcaserin), 날트렉손(naltrexone)과 부프로프리온(buproprion)의 조합, SGLT2 억제제(다파글리플로진(dapagliflozin), 카나글리플로진(canagliflozin), 엠파글리플로진(empagliflozin), 토포글리플로진(tofogliflozin), 에르투글리플로진(ertugliflozin), ASP-1941, THR1474, TS-071, ISIS388626 및 LX4211, 뿐만 아니라 WO2010023594에 개시된 것을 포함함), 펜터민(Phentermine), 토피라메이트(Topiramate), GLP-1 수용체 작용제, GIP 수용체 작용제, 이중 GLP-1 수용체/글루카곤 수용체 작용제(예를 들어 OPK88003, MEDI0382, JNJ-64565111, NN9277, BI 456906), 이중 GLP-1 수용체/GIP 수용체 작용제(예를 들어 티르제파티드(Tirzepatide)(LY3298176), NN9423), 안지오텐신-수용체 차단제 아세틸-CoA 카복실라제(ACC) 억제제, BCKDK 억제제, 케토헥소키나제(KHK) 억제제, ASK1 억제제, 분지쇄 알파 케토 산 탈수소효소 키나제 억제제(BCKDK 억제제), CCR2 및/또는 CCR5의 억제제, PNPLA3 억제제, DGAT1 억제제, FGF21 유사체, FGF19 유사체, PPAR 작용제, FXR 작용제, AMPK 활성화제(예를 들어 ETC-1002(벰페도익산(bempedoic acid))), SCD1 억제제 또는 MPO 억제제와 공동 투여될 수 있다.
예시적 GLP-1 수용체 작용제는 하기를 포함하여, 리라글루티드(liraglutide), 알비글루티드(albiglutide), 엑세나티드(exenatide), 알비글루티드, 릭시세나티드(lixisenatide), 둘라글루티드(dulaglutide), 세마글루티드(semaglutide), HM15211, LY3298176, Medi-0382, NN-9924, TTP-054, TTP-273, 에페글레나티드(efpeglenatide), WO2018109607에 기재된 것, 2019년 6월 11일에 출원된 PCT/IB2019/054867에 기재된 것, 및 2019년 6월 13일에 출원된 PCT/IB2019/054961에 기재된 것을 포함한다:
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-7-플루오로-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-7-플루오로-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-시아노-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-3-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(1-에틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-1H-벤즈이미다졸-6- 카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-(1,3-옥사졸-4-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-(피리딘-3-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-(1,3-옥사졸-5-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(1-에틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-7-플루오로-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(4-시아노-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-7-플루오로-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-7-플루오로-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-시아노-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(1-에틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2R)-2-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(1-에틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2S)-2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[(2R)-2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-({4-[2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸-1,3-벤조다이옥솔-4-일]피페리딘-1-일}메틸)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산, DIAST-X2;
2-[(4-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-3-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-[(4-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-3-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-[(4-{2-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-3-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-[(4-{2-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-3-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-[(4-{3-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]피라진-2-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-(6-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-2-일}-6-아자스피로[2.5]옥트-1-일)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-(6-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]-5-플루오로피리미딘-4-일}-6-아자스피로[2.5]옥트-1-일)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-(6-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]-5-플루오로피리미딘-4-일}-6-아자스피로[2.5]옥트-1-일)-1-(1,3-옥사졸-2-일메틸)-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-(6-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]-5-플루오로피리딘-2-일}-6-아자스피로[2.5]옥트-1-일)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-(6-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]-3-플루오로피리딘-2-일}-6-아자스피로[2.5]옥트-1-일)-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-[(4-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]피리미딘-4-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-{[(2S)-4-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]-5-플루오로피리미딘-4-일}-2-메틸피페라진-1-일]메틸}-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산;
2-{[(2S)-4-{2-[(4-클로로-2-플루오로벤질)옥시]피리미딘-4-일}-2-메틸피페라진-1-일]메틸}-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산; 및
2-[(4-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-2-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산, 및 이들의 약학적으로 허용되는 염.
예시적 ACC 억제제는 4-(4-[(1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로-1'H-스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)카본일]-6-메톡시피리딘-2-일)벤조산, 젬카빈(gemcabene) 및 피르소코스타트(firsocostat)(GS-0976), 및 이들의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
예시적 FXR 작용제는 트로피펙소르(tropifexor) (2-[(1R,3R,5S)-3-({5-사이클로프로필-3-[2-(트라이플루오로메톡시)페닐]-1,2-옥사졸-4-일}메톡시)-8-아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일]-4-플루오로-1,3-벤조티아졸-6-카복시산), 실로펙소르(cilofexor)(GS-9674), 오베티콜산(obeticholic acid), LY2562175, Met409, TERN-101 및 EDP-305, 및 이들의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
예시적 KHK 억제제는 [(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-메틸아제티딘-1-일]-6-(트라이플루오로메틸)피리미딘-4-일}-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥스-6-일]아세트산 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
예시적 BCKDK 억제제는 하기를 포함하여 2019년 6월 28일에 출원된 US 62/868,057에 기재된 것, 및 2019년 6월 28일에 출원된 US 62/868,542에 기재된 것을 포함한다:
5-(5-클로로-4-플루오로 3-메틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(5-클로로-3-다이플루오로메틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(5-플루오로-3-메틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(5-클로로-3-메틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(3,5-다이클로로티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(4-브로모-3-메틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(4-브로모-3-에틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
5-(4-클로로-3-에틸티오펜-2-일)-1H-테트라졸;
3-클로로-5-플루오로티에노[3,2-b]티오펜-2-카복시산;
3-브로모-5-플루오로티에노[3,2- b]티오펜-2-카복시산;
3-(다이플루오로메틸)-5-플루오로티에노[3,2-b]티오펜-2-카복시산;
5,6-다이플루오로티에노[3,2-b]티오펜-2-카복시산; 및
3,5-다이플루오로티에노[3,2-b]티오펜-2-카복시산;
또는 이들의 약학적으로 허용되는 염.
본 발명의 화합물의 항당뇨병 활성을 고려할 때, 이는 다른 항당뇨병제와 공동 투여될 수 있다. 적합한 항당뇨병제는 인슐린, 메트포르민, GLP-1 수용체 작용제(본원 상기에 기재됨), 아세틸-CoA 카복실라제(ACC) 억제제(본원 상기에 기재됨), SGLT2 억제제(본원 상기에 기재됨), 모노아실글리세롤 O-아실 전달효소 억제제, 포스포다이에스터라제(PDE)-10 억제제, AMPK 활성화제(예를 들어 ETC-1002(벰페도익산)), 설폰일우레아(예를 들어 아세토헥사미드(acetohexamide), 클로로파미드(chlorpropamide), 디아비네즈(diabinese), 글리벤클라미드(glibenclamide), 글리피지드(glipizide), 글리부리드(glyburide), 글리메피리드(glimepiride), 글리클라지드(gliclazide), 글리펜티드(glipentide), 글리퀴돈(gliquidone), 글리솔라미드(glisolamide), 톨라자미드(tolazamide) 및 톨부타미드(tolbutamide)), 메글리티니드(meglitinide), α-아밀라제 억제제(예를 들어 텐다미스타트(tendamistat), 트레스타틴(trestatin) 및 AL-3688), α-글루코시드 가수분해 효소 억제제(예를 들어 아카보즈(acarbose), α-글루코시다제 억제제(예를 들어 아디포신(adiposine), 카미글리보즈(camiglibose), 에미글리테이트(emiglitate), 미글리톨(miglitol), 보글리보즈(voglibose), 파라디미신-Q(pradimicin-Q) 및 살보스타틴(salbostatin)), PPARγ 작용제(예를 들어 발라글리타존(balaglitazone), 시글리타존(ciglitazone), 다르글리타존(darglitazone), 엔글리타존(englitazone), 아이사글리타존(isaglitazone), 피오글리타존(pioglitazone) 및 로지글리타존(rosiglitazone)), PPAR α/γ 작용제(예를 들어 CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 및 SB-219994), 단백질 티로신 포스파타제-1B(PTP-1B) 억제제(예를 들어 트로더스케민(trodusquemine), 하이르티오잘(hyrtiosal) 추출물, 및 문헌[Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)]에 개시된 화합물), SIRT-1 활성화제(예를 들어 레스베라트롤(resveratrol), GSK2245840 또는 GSK184072), 다이펩티딜 펩티다제 IV(DPP-IV) 억제제(예를 들어 WO2005116014에 개시된 것, 시타글립틴(sitagliptin), 빌다글립틴(vildagliptin), 알로글립틴(alogliptin), 두토글립틴(dutogliptin), 리나글립틴(linagliptin) 및 삭사글립틴(saxagliptin)), 인슐린 분비 촉진제, 지방산 산화 억제제, A2 길항제, c-jun 아미노-말단 키나제(JNK) 억제제, 글루코키나제 활성화제(GKa), 예컨대 WO2010103437, WO2010103438, WO2010013161, WO2007122482에 기재된 것, TTP-399, TTP-355, TTP-547, AZD1656, ARRY403, MK-0599, TAK-329, AZD5658 또는 GKM-001, 인슐린, 인슐린 모방체, 글리코겐 포스포릴라제 억제제(예를 들어 GSK1362885), VPAC2 수용체 작용제, 글루카곤 수용체 조절제, 예컨대 문헌[Demong, D.E. et al. Annual Reports in Medicinal Chemistry 2008, 43, 119-137]에 기재된 것, GPR119 조절제, 특히 작용제, 예컨대 WO2010140092, WO2010128425, WO2010128414, WO2010106457, 문헌[Jones, R.M. et al. in Medicinal Chemistry 2009, 44, 149-170]에 기재된 것(예를 들어 MBX-2982, GSK1292263, APD597 및 PSN821), FGF21 유도체 또는 유사체, 예컨대 문헌[Kharitonenkov, A. et al. et al., Current Opinion in Investigational Drugs 2009, 10(4)359-364]에 기재된 것, TGR5(GPBAR1로도 지칭됨) 수용체 조절제, 특히 작용제, 예컨대 문헌[Zhong, M., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10(4), 386-396]에 기재된 것 및 INT777, GPR40 작용제, 예컨대 문헌[Medina, J.C., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2008, 43, 75-85]에 기재된 것, 예컨대 비제한적으로 TAK-875, GPR120 조절제, 특히 작용제, 고 친화도 니코틴산 수용체(HM74A) 활성화제, 및 SGLT1 억제제, 예컨대 GSK1614235를 포함한다. 본 발명의 화합물과 조합될 수 있는 항당뇨병제의 추가 대표적 목록은 예를 들어 WO2011005611의 28면 35행 내지 30면 19행에서 찾아볼 수 있다.
다른 항당뇨병제는 카르니틴 팔미토일 트랜스퍼라제 효소의 억제제 또는 조절제, 프룩토스 1,6-다이포스파타제의 억제제, 알도스 리덕타제의 억제제, 무기질 코르티코이드 수용체 억제제, TORC2의 억제제, CCR2 및/또는 CCR5의 억제제, PKC 이소폼(예를 들어 PKCα, PKCβ, PKCγ)의 억제제, 지방산 합성 효소의 억제제, 세린 팔미토일 트랜스퍼라제의 억제제, GPR81, GPR39, GPR43, GPR41, GPR105, Kv1.3, 레티놀 결합 단백질 4, 글루코코르티코이드 수용체, 소마토스테인 수용체(예를 들어 SSTR1, SSTR2, SSTR3 및 SSTR5)의 조절제, PDHK2 또는 PDHK4의 억제제 또는 조절제, MAP4K4의 억제제, IL1 패밀리(IL1beta를 포함함)의 조절제, RXRalpha의 조절제를 포함할 수 있다. 또한, 적합한 항당뇨병제는 문헌[Carpino, P.A., Goodwin, B. Expert Opin. Ther. Pat, 2010, 20(12), 1627-51]에 나열된 메커니즘을 포함한다.
본 발명의 화합물은 항심부전제, 예컨대 ACE 억제제(예를 들어 캅토프릴(captopril), 에날라프릴(enalapril), 포시노프릴(fosinopril), 리시노프릴(lisinopril), 페린도프릴(perindopril), 퀴나프릴(quinapril), 라미프릴(ramipril), 트란돌라프릴), 안지오텐신 II 수용체 차단제(예를 들어 칸데자르탄(candesartan), 로자르탄(losartan), 발자르탄(valsartan)), 안지오텐신-수용체 네프릴리신 억제제(사쿠비트릴(sacubitril)/발자르탄), If 채널 차단제 이바브라딘(Ivabradine), 베타-아드레날린 차단제(예를 들어 비소프롤롤(bisoprolol), 메토프롤롤(metoprolol) 석시네이트, 카르베딜롤(carvedilol)), 알도스테론 길항제(예를 들어 스피로노락톤(spironolactone), 에플레레논(eplerenone)), 하이드랄라진(hydralazine) 및 이소소르비드(isosorbide) 다이니트레이트, 이뇨제(예를 들어 푸로세미드(furosemide), 부메타니드(bumetanide), 토르세미드(torsemide)), 클로로티아지드, 아밀로리드(amiloride), 하이드로클로로티아지드, 인다파미드(Indapamide), 메톨라존(Metolazone), 트리암테렌(Triamterene))) 또는 디곡신(digoxin)과 공동 투여될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 하기 예시적 제제를 포함하는 콜레스테롤 또는 지질 저하제와 공동 투여될 수 있다: HMG CoA 리덕타제 억제제(예를 들어 프라바스타틴(pravastatin), 피타바스타틴(pitavastatin), 로바스타틴(lovastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin), 심바스타틴(simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), NK-104(즉 이타바스타틴(itavastatin), 니스바스타틴(nisvastatin) 또는 니스바스타틴(nisbastatin)) 및 ZD-4522(즉 로주바스타틴(rosuvastatin), 아타바스타틴(atavastatin) 또는 비자스타틴(visastatin)); 스쿠알렌 합성 효소 억제제; 피브레이트(예를 들어 젬피브로질(gemfibrozil), 페마피브레이트(pemafibrate), 페노피브레이트(fenofibrate), 클로피브레이트(clofibrate)); 담즙산 격리제(예컨대 퀘스트란(questran), 콜레스티폴(colestipol), 콜레세벨람(colesevelam)); ACAT 억제제; MTP 억제제; 피로옥시게나제 억제제; 콜레스테롤 흡수 억제제(예를 들어 에제티미브); 니코틴산제(예를 들어 니아신(niacin), 니아코르(niacor), 슬로-니아신(slo-niacin)); 오메가-3 지방산(예를 들어 에파노바(epanova), 어유, 에이코사펜타엔산); 콜레스테릴 에스터 전달 단백질 억제제(예를 들어 오비세트라핍(obicetrapib)) 및 PCSK9 조절제(예를 들어 알리로쿠맙(alirocumab), 에볼로쿠맙(evolocumab), 보코시주맙(bococizumab), ALN-PCS(인클리시간(inclisiran))).
또한, 본 발명의 화합물은 항고혈압제와 조합으로 사용될 수 있고, 이러한 항고혈압 활성은 표준 분석(예를 들어 혈압 분석)에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 적합한 항고혈압제의 예는 알파 아드레날린 차단제; 베타 아드레날린 차단제; 칼슘 채널 차단제(예를 들어 딜티아젬(diltiazem), 베라파밀(verapamil), 니페디핀(nifedipine) 및 암로디핀(amlodipine)); 혈관확장제(예를 들어 하이드랄라진), 이뇨제(예를 들어 클로로티아지드, 하이드로클로로티아지드, 플루메티아지드(flumethiazide), 하이드로플루메티아지드, 벤드로플루메티아지드(bendroflumethiazide), 메틸클로로티아지드, 트라이클로로메티아지드(trichloromethiazide), 폴리티아지드, 벤즈티아지드, 에타크린산 트리크리나펜(ethacrynic acid tricrynafen), 클로르탈리돈(chlorthalidone), 토르세미드, 푸로세미드, 무솔리민(musolimine), 부메타니드, 트리암트레닌(triamtrenene), 아밀로리드, 스피로노락톤); 레닌 억제제; ACE 억제제(예를 들어 캅토프릴, 조페노프릴(zofenopril), 포시노프릴, 에날라프릴, 세라노프릴(ceranopril), 실라조프릴(cilazopril), 델라프릴(delapril), 펜토프릴(pentopril), 퀴나프릴, 라미프릴, 리시노프릴); AT-1 수용체 길항제(예를 들어 로자르탄, 이르베자르탄(irbesartan), 발자르탄); ET 수용체 길항제(예를 들어 시탁스젠탄(sitaxsentan), 아트르젠탄(atrsentan) 및 US 5,612,359 및 6,043,265에 개시된 화합물); 이중 ET/AII 길항제(예를 들어 WO 00/01389에 개시된 화합물); 중성 엔도펩티다제(NEP) 억제제; 바소펩시다제(vasopepsidase) 억제제(이중 NEP-ACE 억제제)(예를 들어 제모파트릴라트(gemopatrilat) 및 니트레이트)를 포함한다. 예시적 항협심증제는 이바프라딘(ivabradine)이다.
적합한 칼슘 채널 차단제(L-형 또는 T-형)의 예는 딜티아젬, 베라파밀, 니페디핀, 암로디핀 및 마이베프라딜(mybefradil)을 포함한다.
적합한 강심배당체의 예는 디기탈리스(digitalis) 및 와베인(ouabain)을 포함한다.
하나의 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 화합물은 하나 이상의 이뇨제와 공동 투여될 수 있다. 적합한 이뇨제의 예는 (a) 루프 이뇨제, 예컨대 푸로세미드(예컨대 LASIX(상표)), 토르세미드(예컨대 DEMADEX(상표)), 베메타니드(bemetanide)(예컨대 BUMEX(상표)) 및 에타크린산(예컨대 EDECRIN(상표)); (b) 티아지드-유형 이뇨제, 예컨대 클로로티아지드(예컨대 DIURIL(상표), ESIDRIX(상표) 또는 HYDRODIURIL(상표)), 하이드로클로로티아지드(예컨대 MICROZIDE(상표) 또는 ORETIC(상표)), 벤즈티아지드, 하이드로플루메티아지드(예컨대 SALURON(상표)), 벤드로플루메티아지드, 메티클로르티아지드, 폴리티아지드, 트라이클로르메티아지드, 및 인다파미드(예컨대 LOZOL(상표)); (c) 프탈이미딘-유형 이뇨제, 예컨대 클로르탈리돈(예컨대 HYGROTON(상표)) 및 메톨라존(예컨대 ZAROXOLYN(상표)); (d) 퀴나졸린-유형 이뇨제, 예컨대 퀴네타존; 및 (e) 칼륨 보전 이뇨제, 예컨대 트리암테렌(예컨대 DYRENIUM(상표)) 및 아밀로리드(예컨대 MIDAMOR(상표) 또는 MODURETIC(상표))를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 화합물은 루프 이뇨제와 공동 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 루프 이뇨제는 푸로세미드 및 토르세미드로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물은 푸로세미드와 공동 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물은 토르세미드(이는 임의적으로 방출 제어 또는 방출 변형 형태의 토르세미드일 수 있음)와 공동 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 화합물은 티아지드-유형 이뇨제과 공동 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 티아지드-유형 이뇨제는 클로로티아지드 및 하이드로클로로티아지드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물은 클로로티아지드와 공동 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물은 하이드로클로로티아지드와 공동 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물은 프탈이미딘-유형 이뇨제와 공동 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 프탈이미딘-유형 이뇨제는 클로르탈리돈이다.
적합한 무기질 코르티코이드 수용체 길항제의 예는 스프리오노락톤(spironolactone) 및 에플레레논을 포함한다.
적합한 포스포다이에스터라제 억제제의 예는 PDE III 억제제(예컨대 실로스타졸(cilostazol)); 및 PDE V 억제제(예컨대 실데나필(sildenafil))을 포함한다.
당업자는 본 발명의 화합물이 또한 PCI, 스텐트 삽입, 약물 용출 스텐트, 줄기 세포 요법 및 의료 장치, 예컨대 이식된 심박 조율기, 제세동기 또는 심장 재동기화 요법을 비롯한 기타 심혈관 또는 뇌혈관 치료와 함께 사용될 수 있음을 알 것이다.
특히 단일 투여량 단위로 제공되는 경우, 조합된 활성 성분들 사이의 화학적 상호작용 가능성이 존재한다. 이러한 이유로, 화학식 I 또는 II의 화합물 및 제2 치료제가 단일 투여 단위로 조합될 때, 활성 성분이 단일 투여량 단위로 조합되더라도 활성 성분들 사이의 물리적 접촉이 성분이 최소화된다(즉, 감소된다). 예를 들어, 하나의 활성 성분은 장용 코팅될 수 있다. 활성 성분 중 하나를 장용 코팅함으로써 조합된 활성 성분들 사이의의 접촉을 최소화할 수 있을 뿐만 아니라 위장관에서 이러한 성분 중 하나의 방출을 제어하여 이들 성분 중 하나가 위에서 방출되지 않고 오히려 장에서 방출되는 것이 가능하다. 활성 성분 중 하나는, 또한 위장관 전체에 걸쳐 서방성에 영향을 미치고 또한 조합된 활성 성분들 사이의 물리적 접촉을 최소화하는 역할을 하는 물질로 코팅될 수 있다. 또한, 서방성 성분은 이들 성분의 방출이 장내에서만 방출되도록 추가로 장용 코팅될 수 있다. 또 다른 접근법은 한 성분이 서방성 및/또는 장 방출 중합체로 코팅되고, 다른 성분은 또한 활성 성분을 추가로 분리하기 위해 중합체, 예컨대 저점도 등급의 하이드록시프로필 메틸셀룰로스(HPMC) 또는 당업계에 공지된 다른 적절한 물질로 코팅되는 조합 제품의 제형을 포함할 것이다. 중합체 코팅은 다른 성분과의 상호작용에 대한 추가 장벽을 형성하는 역할을 한다.
본 발명이 제공된 후에, 단일 투여량 형태로 투여되든 별개의 형태로 동시에 동일한 방식으로 투여되든, 본 발명의 조합 제품의 성분들 사이의 접촉을 최소화하는 상기 방법 및 기타 방법은 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.
조합 요법 치료에서, 본 발명의 화합물 및 다른 약물 요법 둘 모두는 통상적인 방법에 의해 포유동물(예를 들어 인간, 남성 또는 여성)에게 투여된다. 화학식 I 또는 II의 화합물 및 이의 염은 모두 포유동물, 특히 인간에서 다이아실글리세롤 아실 전달효소 2를 억제하는 제제로서 치료 용도에 적합하고, 따라서 이러한 조치가 관련된 다양한 질환(예를 들어 본원에 기재된 것)의 치료에 유용하다.
본 발명에 따라 치료할 수 있는 질병/질환은 비제한적으로 심혈관 질환, 당뇨병(예를 들어 제II형) 및 당뇨병 합병증, 혈관 질환, NASH(비알코올성 지방간염), NAFLD(비알코올성 지방간 질환) 및 신장 질환을 포함한다.
DGAT2 억제는 혈당 조절 및 혈장 콜레스테롤 프로파일 둘 다에 유익한 효과를 나타내어 이 표적이 대사 질환의 치료에 가치가 있는 것으로 생각된다(문헌[Choi, C. S. et.al. 2007. J Biol Chem 282: 22678-22688]). DGAT2의 억제와 대사 및 관련 질병/질환 사이의 양의 상관관계를 고려할 때, 약리학적 작용으로 인해 화학식 I 또는 II의 화합물은 대사 및 관련 질병 상태(예를 들어 제II형 당뇨병, NASH, NAFLD)의 예방, 정지 및/또는 퇴보에 유용하다.
간 트라이글리세리드(TG)는 하기 3가지 주요 공급원에서 파생된다: 새로운 지방 생성(DNL), 지방에 의해 공급되는 지방산(FA)으로부터의 재에스터화 및 식이 섭취(문헌[Cohen J. C. et al. 2011, Science, 332, 1519-1523]). 간 TG 풀에 대한 가장 큰 기여는 지방세포에서 유래하는 지방분해 생성물에서 유래된 것으로 보이지만, 지방생성 경로는 NAFLD의 발달 및 NASH로의 진행에 중요한 역할을 한다. NAFLD의 질병 진행에 대한 DNL의 기여는 NAFLD가 있거나 없는 개체에서 TG의 FA 조성을 분석함으로써 뒷받침된다. 데이터에 따르면 NAFLD 환자에서 포화 FA 수준이 증가했으며, 이는 포화 FA가 DNL의 주요 산물을 나타내므로 DNL 경로가 간 지방증의 중요한 기여자임을 암시한다. 이러한 발견은 NAFLD의 VLDL 입자에 DNL 유래 TG의 포함 증가와 일치하며, 이때 생성된 TG의 15%는 DNL에서 유래한 반면, 전형적인 서구 식단을 섭취하는 정상 개체에서는 2 내지 5%에 불과한다(문헌[Sanders, F. W. B. and, Griffin J. L., 2016, Biol. Rev., 91, 452-468]). 또한, 간 DNL의 증가된 비율은 NAFLD의 독특한 특징으로 보고되었다. 간 지방이 증가한 인간 개체는 정상 간 지방을 가진 개체에 비해 간 DNL 비율이 3배 초과 증가했지만 지방 유리 지방산(FFA) 플럭스에서 또는 FFA로부터의 VLDL의 생성에서 군들 사이에 차이는 감지되지 않았다. 결과적으로, VLDL TG에 포함된 FA의 절대 공급원을 비교할 때, 간 지방이 높은 개체에서 상승된 간 DNL만이 유의하게 상승된 유일한 공급원이었다(문헌[Lambert J. E. and Ramos-Roman, M. A., 2014, Gastroenterology, 146, 726-735]).
다이아실글리세롤 아실 전달효소(DGAT)는 TG 합성의 최종 단계에 촉매 작용하고; 구체적으로 다이아실글리세롤(DAG)에 의한 지방산(FA)의 에스터화로 인해 TG가 형성된다(문헌[Yen, C. L. et al. 2008, J. Lipid Res., 49, 2283-2301]). 포유동물에서 두 개의 구조적으로 관련이 없는 DGAT 효소(DGAT1 및 DGAT2)가 특성 규명되었다. DGAT1은 장에서 고도로 발현되며 지방 흡수에서 중심적인 역할을 한다(문헌[Buhman, K. K., et al., 2002, J. Biol. Chem., 277, 25474-25479]). DGAT2는 간 및 지방에서 고도로 발현된다(문헌[Cases, S., et al., 2001, J. Biol. Chem., 276, 38870-38876]). 전임상 모델에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 간 DGAT2를 차단하면 지방 생성에 관여하는 단백질을 암호화하는 여러 유전자의 발현이 하향 조절되고 산화 경로에서 병렬 유도가 발생한다. 이러한 변화의 최종 결과는 간 DAG 및 TG 지질 수준의 감소이며, 이는 차례로 간세포 지질 부담을 감소시키고 간 초저밀도 지단백(VLDL) TG 분비를 감소시킨다(문헌[Choi, C. S. et.al. 2007. J Biol Chem 282: 22678-22688] 및 [Yu, X. X. et al. 2005, Hepatology, 42, 362-371]). 따라서 DGAT2의 약리학적 억제는 NAFLD/NASH 및 혈당 조절 및 혈장 콜레스테롤을 비롯한 기타 대사 질환의 치료에 유익한 효과를 나타낼 것으로 생각된다.
특히, NASH/NAFLD에 의한 DGAT2 억제 및 관련 질병/질환 사이의 양의 상관관계를 고려할 때, 약리학적 작용으로 인해 화학식 I 또는 II의 화합물은 NASH/NAFLD 및 관련 질병 상태의 예방, 정지 및/또는 퇴행에 유용하다.
또한 규제 당국은 NASH에 대한 III상 연구에 대한 조건부 승인이 간 생검으로 얻은 조직학적 대리 마커를 기반으로 한다고 인정하였다. 이러한 일반적으로 허용되는 대리 마커는 i) 섬유증의 악화 없이 NASH의 해결(즉, 섬유증 단계의 수치적 증가); ii) NASH의 악화 없이 섬유증의 하나 이상의 단계 감소이다. 자세한 내용은 문헌[Ratziu, A critical review of endpoints for non-cirrhotic NASH therapeutic trials, Journal of Hepatology, 2018, 68. 353-361] 및 이의 참고문헌에서 찾아볼 수 있다.
또한, 규제 당국은 기선으로부터의 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 활동 점수(NAS)의 변화를 고려한다. NAFLD 활동 점수(NAS)는 간 중앙집중식 병리학자 점수로부터의 지방증 등급(0-3), 소엽 염증 등급(0-3) 및 간세포 팽창 등급(0-2)의 합과 동일한 복합 점수이다. NAS의 전체 규모는 0 내지 8이며, 점수가 높을수록 질병이 더 심각한 것을 나타낸다. 결과 측정값(NAFLD 활동 점수(NAS)의 기준선으로부터의 변화)의 가능한 범위는 -8에서 +8까지이며, 음수 값은 더 나은 결과(개선)를 나타내고 양수 값은 더 나쁜 결과를 나타낸다. NAS의 구성요소는 하기와 같이 채점된다: 지방증 등급 0=<5% 지방증, 1=5-33% 지방증, 2=34-66% 지방증, 3=>66% 지방증. 소엽 염증 등급=소엽 염증의 양(단핵구, 지방 육아종 및 다형핵(pmn) 병소 합): 0=0, 20배 배율에서 1=<2, 20배 배율에서 2=2-4, 20배 배율에서 3=>4. 간세포 팽창: 0=없음, 1=경증, 2=경증 이상.
이의 약리학적 작용으로 인해, 화학식 I 또는 II의 화합물은 고지혈증, 제I형 당뇨병, 제II형 진성 당뇨병, 특발성 제I형 당뇨병(제Ib형), 성인 잠복 자가면역 당뇨병(LADA), 조기-발병 제2형 당뇨병(EOD), 청소년-발병 비정형 당뇨병(YOAD), 성숙기 발병 당뇨병(MODY), 영양실조-관련 당뇨병, 임신성 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 허혈성 뇌졸중, 혈관형성후 재협착증, 말초혈관 질환, 간헐성 파행증, 심근경색증, 이상지질혈증, 식후 지방혈증, 내당능 장애(IGT) 질환, 공복 혈장 포도당 장애 질환, 대사성 산증, 케톤증, 관절염, 비만, 골다공증, 고혈압, 울혈성 심부전, 좌심실비대, 말초 동맥 질환, 당뇨병성 망막증, 황반변성, 백내장, 당뇨병성 신증, 사구체경화증, 만성 신부전, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, X 증후군, 월경전 증후군, 협심증, 혈전증, 죽상경화증, 일과성 허혈성 발작, 뇌졸중, 혈관 재협착증, 고혈당증, 고인슐린혈증, 고중성지질혈증, 인슐린 저항성, 포도당 대사 장애, 발기 부전, 피부 및 결합조직 장애, 족부 궤양 및 궤양성 대장염, 내피 기능장애 및 혈관 유순도 장애, 고 아포 B 리포단백혈증, 알츠하이머병, 조현병, 인지 장애, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병 및 과민성 대장 증후군, 비알코올성 지방간염(NASH) 또는 비알코올성 지방간 질환(NAFLD)의 치료에 유용하다.
본 발명의 화합물의 투여는 본 발명의 화합물을 전신 및/또는 국부적으로 전달하는 임의의 방법을 통해 이루어질 수 있다. 이러한 방법은 경구 경로, 비경구, 십이지장내 경로, 협측, 비강내 등을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 경구 투여되지만, 예를 들어 경구 투여가 표적에 부적절하거나 환자가 약물을 복용할 수 없는 경우 비경구 투여(예를 들어 정맥내, 근육내, 피하 또는 골수내)가 사용될 수 있다.
인간 환자에 대한 투여의 경우, 본원의 화합물의 경구 1일 투여량은 물론 투여 방식 및 빈도, 질병 상태, 및 환자의 연령 및 상태 등에 따라 1 mg 내지 5000 mg 범위일 수 있다. 경구 1일 투여량은 3 mg에서 2000 mg의 범위에서 사용될 수 있다. 추가 경구 1일 투여량 5 mg에서 1000 mg 범위이다. 편의상, 본 발명의 화합물은 단위 투여량 형태로 투여될 수 있다. 필요에 따라, 단위 투여량 형태의 1일 다중 투여량을 사용하여 총 1일 투여량을 증가시킬 수 있다. 단위 투여량 형태는 예를 들어 약 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 500 또는 1000 mg의 본 발명의 화합물을 함유하는 정제 또는 캡슐일 수 있다. 총 1일 투여량은 단일 또는 분할 투여량으로 투여될 수 있으며 의사의 재량에 따라 본원에 제공된 전형적인 범위를 벗어날 수 있다.
인간 환자에 대한 투여의 경우, 본원의 화합물의 주입 1일 투여량은 물론 투여 방식 및 빈도, 질병 상태, 및 환자의 연령 및 상태 등에 따라 1 mg 내지 2000 mg 범위일 수 있다. 추가 주입 1일 투여량은 5 mg에서 1000 mg의 범위이다. 총 1일 투여량은 단일 또는 분할 투여량으로 투여될 수 있으며 의사의 재량에 따라 본원에 제공된 전형적인 범위를 벗어날 수 있다.
본 발명의 치료 방법에 따르면, 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물과 적어도 하나의 추가 약학 제제의 조합(본원에서 "조합"으로 지칭됨)은 치료가 필요한 개체에게 바람직하게는 약학 조성물의 형태로 투여된다. 본 발명의 조합 측면에서, 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 다른 약학 제제(예를 들어 다른 항비만제)는 별도로 또는 둘 다를 포함하는 약학 조성물로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 경구인 것이 일반적으로 바람직하다.
본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 약학 제제의 조합이 함께 투여되는 경우, 이러한 투여는 시간적으로 순차적이거나 동시적일 수 있다. 약물 조합의 동시 투여가 일반적으로 바람직하다. 순차적 투여의 경우, 본 발명의 화합물 및 추가 약학 제제는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 경구인 것이 일반적으로 바람직하다. 이러한 투여는 경구 및 동시 투여인 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 화합물 및 추가 약학 제제가 순차적으로 투여되는 경우, 각각의 투여는 동일하거나 상이한 방법에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 방법에 따르면, 본 발명의 화합물 또는 조합물은 바람직하게는 약학 조성물의 형태로 투여된다. 따라서, 본 발명의 화합물 또는 조합은 환자에게 별개로 또는 함께 임의의 통상적인 경구, 직장, 경피, 비경구(예를 들어 정맥내, 근육내 또는 피하), 수조내, 질내, 복강내, 국소(예를 들어 분말, 연고, 크림, 스프레이 또는 로션), 협측 또는 비강 투여량 형태(예를 들어 스프레이, 점적제 또는 흡입제)로 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 조합물은 단독으로 투여될 수 있지만 일반적으로 당업계에 공지되어 있고 의도된 투여 경로 및 표준 제약 관행과 관련하여 선택되는 하나 이상의 적합한 약학적 부형제, 보조제, 희석제 또는 담체와의 혼합물로 투여될 것이다. 본 발명의 화합물 또는 조합은 치료 요구에 상응하는 목적하는 투여 경로 및 방출 프로파일의 특이성에 따라 즉시, 지연, 변형, 지속, 펄스 또는 제어 방출 투여량 형태를 제공하도록 제형화될 수 있다.
약학 조성물은 일반적으로 조성물의 약 1% 내지 약 75%, 80%, 85%, 90% 또는 심지어 95%(중량 기준) 범위, 일반적으로 약 1%, 2% 또는 3% 내지 약 50%, 60% 또는 70% 범위, 보다 빈번하게는 약 1%, 2% 또는 3% 내지 50% 미만, 예컨대 약 25%, 30% 또는 35%의 양으로 본 발명의 화합물 또는 조합물을 포함한다.
특정 양의 활성 화합물을 갖는 다양한 약학 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어 문헌[Remington: The Practice of Pharmacy, Lippincott Williams and Wilkins, Baltimore Md. 20.sup.th ed. 2000]을 참조한다.
비경구 주사에 적합한 조성물은 일반적으로 약학적으로 허용되는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 유화액, 및 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 분말을 포함한다. 적합한 수성 및 비수성 담체 또는 희석제(용매 및 비히클 포함)의 예는 물, 에탄올, 폴리올(프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 등), 이들의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일을 포함하는 트라이글리세리드, 및 주사 가능한 유기 에스터, 예컨대 에틸 올리에이트를 포함한다. 바람직한 담체는 글리세린 또는 프로필렌 글리콜을 포함하는 Miglyol.RTM. 브랜드 카프릴산/카프르산 에스터(예를 들어 Miglyol.RTM. 812, Miglyol.RTM. 829, Miglyol.RTM. 840)(Condea Vista Co.(Cranford, N.J.)로부터 입수가능)이다. 적절한 유동성이 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기 유지에 의해, 및 계면활성제 사용에 의해 유지될 수 있다.
이러한 비경구 주사용 조성물은 또한 부형제, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 조성물의 미생물 오염 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등으로 달성될 수 있다. 또한 등장제, 예를 들어 당, 염화 나트륨 등을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 주사용 약학 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시킬 수 있는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 야기될 수 있다.
경구 투여를 위한 고체 투여량 형태는 캡슐, 정제, 츄, 로젠지, 환제, 분말 및 다중-미립자 제제(과립)를 포함한다. 이러한 고체 투여량 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 조합은 하나 이상의 불활성 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합된다. 적합한 부형제, 희석제 또는 담체에는 시트르산 나트륨 또는 인산 이칼슘 및/또는 (a) 하나 이상의 충전제 또는 증량제(예를 들어 미세결정질 셀룰로스(FMC Corp.로부터 Avicel.TM으로 입수가능) 전분, 락토스, 수크로스, 만니톨, 규산, 자일리톨, 소르비톨, 덱스트로스, 인산 수소 칼슘, 덱스트린, 알파-사이클로덱스트린, 베타-사이클로덱스트린, 폴리에틸렌 글리콜, 중쇄 지방산, 산화 티타늄, 산화 마그네슘, 산화 알루미늄 등); (b) 하나 이상의 결합제(예를 들어 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 젤라틴, 아라비아 고무, 에틸 셀룰로스, 폴리비닐 알코올, 풀루란, 전호화 전분, 한천, 트라가칸트, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 수크로스, 아카시아 등); (c) 하나 이상의 습윤제(예를 들어 글리세롤 등); (d) 하나 이상의 붕해제(예를 들어 한천, 탄산 칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 복합 실리케이트, 탄산 나트륨, 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 전분 글리콜레이트(Edward Mendell Co.로부터 Explotab.TM.으로 입수가능), 가교 폴리비닐 피롤리돈, 크로스카멜로스 나트륨 A형(Ac-di-sol.TM.으로 입수가능), 폴리아크릴린 칼륨(이온 교환 수지) 등); (e) 하나 이상의 용액 지연제(예를 들어 파라핀 등); (f) 하나 이상의 흡수 촉진제(예를 들어 4차 암모늄 화합물 등); (g) 하나 이상의 습윤제(예를 들어 세틸 알코올, 글리세롤 모노스테아레이트 등); (h) 하나 이상의 흡착제(예를 들어 카올린, 벤토나이트 등); 및/또는 하나 이상의 윤활제(예를 들어 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 폴리옥실 스테아레이트, 세탄올, 활석, 경화 피마자유, 지방산의 수크로스 에스터, 다이메틸폴리실록산, 미세결정질 왁스, 황색 밀랍, 백색 밀랍, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트 등)를 포함한다. 캡슐 및 정제의 경우, 투여량 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 연질 또는 경질 충전 젤라틴 캡슐의 충전제로서 사용될 수 있다.
고체 투여량 형태, 예컨대 정제, 당의정, 캡슐 및 과립은 예컨대 장용 코팅 및 당업계에 주지된 다른 것과 같은 코팅 및 쉘로 제조될 수 있다. 이들은 또한 불투명화제를 함유할 수 있고, 본 발명의 화합물 및/또는 추가 약학 제제를 지연된 방식으로 방출하도록 하는 조성물일 수도 있다. 사용될 수 있는 임베딩 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스이다. 약물은 또한 적절한 경우 상기 언급된 부형제 중 하나 이상과 함께 마이크로 캡슐화된 형태일 수 있다.
정제의 경우, 활성제는 전형적으로 제형의 50% 미만(중량 기준), 예를 들어 약 10 중량% 미만, 예컨대 5 중량% 또는 2.5 중량%를 차지할 것이다. 제형의 주요 부분은 충전제, 희석제, 붕해제, 윤활제 및 임의적으로 향료를 포함한다. 이러한 부형제의 조성물은 당업계에 주지되어 있다. 흔히 충전제/희석제는 미정질 셀룰로스, 만니톨, 락토스(모든 유형), 전분 및 인산 이칼슘 중 2가지 이상의 것의 혼합물을 포함할 수 있다. 충전제/희석제 혼합물은 전형적으로 제형의 98% 미만, 바람직하게는 95% 미만, 예를 들어 93.5%를 차지한다. 바람직한 붕해제는 Ac-di-sol.TM., Explotab.TM., 전분 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다. 존재하는 경우 붕해제는 일반적으로 제형의 10% 미만 또는 5% 미만, 예를 들어 약 3%를 차지할 것이다. 바람직한 윤활제는 마그네슘 스테아레이트이다. 존재하는 경우 윤활제는 일반적으로 제형의 5% 미만 또는 3% 미만, 예를 들어 약 1%를 구성할 것이다.
정제는 표준 정제화 공정, 예를 들어 직접 압축 또는 습식, 건식 또는 용융 과립화, 용융 응고 공정 및 압출에 의해 제조될 수 있다. 정제 코어는 단층 또는 다층(들)일 수 있고 당업계에 공지된 적절한 오버코트로 코팅될 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 투여량 형태는 약학적으로 허용되는 유화액, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 본 발명의 화합물 또는 조합에 더하여, 액체 투여량 형태는 당업계에서 일반적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 물 또는 기타 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 다이메틸포름아미드, 오일(예를 들어 면실유, 땅콩유, 옥수수 배아유, 올리브유, 피마자유, 참기름 등), Miglyole.RTM.(CONDEA Vista Co.( Cranford, N.J.)로부터 입수가능), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스터, 또는 이들 물질의 혼합물 등을 함유할 수 있다.
이러한 불활성 희석제 외에, 조성물은 또한 부형제, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향미제 및 방향제를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 조합물의 경구 액체 형태는 활성 화합물이 완전히 용해된 용액을 포함한다. 용매의 예는 경구 투여에 적합한 모든 약학적으로 선례가 있는 용매, 특히 본 발명의 화합물이 우수한 용해도를 나타내는 것, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 식용 오일 및 글리세릴- 및 글리세리드-기재 시스템을 포함한다. 글리세릴 및 글리세리드-기재 시스템은 예를 들어 하기 브랜드 제품(및 상표 없는 상품)이 포함될 수 있다: Captex.TM. 355 EP(글리세릴 트라이카프릴레이트/카프레이트, Abitec(Columbus Ohio)의 것), Crodamol.TM. GTC/C(중쇄 트라이글리세리드, Croda(Cowick Hall, UK)의 것) 또는 Labrafac.TM. CC(중쇄 트라이글라이드, Gattefosse의 것), Captex.TM. 500P(글리세릴 트라이아세테이트, 즉 트라이아세틴, Abitec의 것), Capmul.TM. MCM(중쇄 모노- 및 다이글리세리드, Abitec의 것), Migyol.TM. 812(카프릴릭/카프릭 트라이글리세리드, Condea(Cranford N.J.)의 것), Migyol.TM. 829(카프릴릭/카프릭/석시닉 트라이글리세리드, Condea의 것), Migyol.TM. 840(프로필렌 글리콜 다이카프릴레이트/다이카프레이트, Condea의 것), Labrafil.TM. M1944CS(올레오일 마크로골-6 글리세리드, Gattefosse의 것), Peceol.TM.(글리세릴 모노올리에이트, Gattefosse의 것) 및 Maisine.TM. 35-1(글리세릴 모노올리에이트, Gattefosse의 것). 중쇄(약 C8 내지 C10) 트라이글리세리드 오일이 특히 중요하다. 이들 용매는 종종 조성물의 주요 부분, 즉 약 50% 초과, 일반적으로 약 80% 초과, 예를 들어 약 95% 또는 99%를 구성한다. 보조제 및 첨가제는 또한 주로 맛 차폐제, 기호성 및 향미제, 항산화제, 안정제, 질감 및 점도 조절제 및 가용화제로서 용매와 함께 포함될 수 있다.
현탁액은 본 발명의 화합물 또는 조합에 더하여 담체, 예컨대 현탁제, 예를 들어 에톡실화된 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스터, 미정질 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 한천 및 트라가칸트, 또는 이들 물질의 혼합물 등을 추가로 포함할 수 있다.
직장 또는 질 투여용 조성물은 바람직하게는 본 발명의 화합물 또는 조합을 적합한 비자극성 부형제 또는 담체, 예컨대 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 좌약 왁스와 혼합함으로써 제조될 수 있는 좌제를 포함하고, 이는 통상적인 실온에서 고체이나 체온에서는 액체이고 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 활성 성분을 방출한다.
본 발명의 화합물 또는 조합의 국소 투여를 위한 투여량 형태는 연고, 크림, 로션, 분말 및 스프레이를 포함한다. 약물은 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체, 및 필요할 수 있는 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합된다.
본 발명의 화합물 중 일부는 예를 들어 약 1㎍/mL 미만으로 물에 잘 용해되지 않을 수 있다. 따라서, 상기 논의된 가용성 비수성 용매, 예컨대 중쇄 트라이글리세리드 오일 중의 액체 조성물이 이러한 화합물에 대한 바람직한 투여량 형태이다.
분무-건조 공정에 의해 형성된 분산체를 포함하는 고체 비정질 분산체는 또한 본 발명의 난용성 화합물에 대한 바람직한 투여량 형태이다. "고체 비정질 분산체"는 난용성 화합물의 적어도 일부가 비정질 형태이고 수용성 중합체에 분산된 고체 물질을 의미한다. "비정질"은 난용성 화합물이 결정질이 아님을 의미한다.
"결정질"은 화합물이 각 차원에서 100개 이상의 반복 단위의 3차원에서 장거리 규칙도를 나타내는 것을 의미한다. 따라서, 용어 비정질은 본질적으로 차수를 갖지 않는 물질뿐만 아니라 약간의 차수를 가질 수 있으나 차수가 3차원 미만이고/이거나 단지 짧은 거리에 있는 물질을 포함하도록 의도된다. 비정질 물질은 당업계에 공지된 기술, 예컨대 분말 x-선 회절(PXRD) 결정학, 고체 상태 NMR, 또는 열적 기술, 예컨대 시차 주사 열량계(DSC)에 의해 특성규명될 수 있다.
바람직하게는, 고체 비정질 분산체에서 난용성 화합물의 적어도 대부분(즉, 약 60 중량% 이상)은 비정질이다. 화합물은 중합체 전체에 균질하게 분포된 화합물의 고용체로서, 또는 이들 상태의 조합 또는 이들 사이에 중간에 있는 상태의 것으로서, 비교적 순수한 비정질 도메인 또는 영역의 고체 비정질 분산체 내에 존재할 수 있다. 바람직하게는, 고체 비정질 분산체는 비정질 화합물이 중합체 전체에 가능한 한 균질하게 분산되도록 실질적으로 균질하다. 본원에 사용된 "실질적으로 균질한"은 고체 비정질 분산체 내의 비교적 순수한 비정질 도메인 또는 영역에 존재하는 화합물의 분율이 약물의 총량의 약 20 중량% 미만, 바람직하게는 10 중량% 미만 정도로 비교적 작다는 것을 의미한다.
고체 비정질 분산체에 사용하기에 적합한 수용성 중합체는 불리한 방식으로 난용성 화합물과 화학적으로 반응하지 않는다는 점에서 불활성이어야 하고, 약학적으로 허용가능하고, 생리학적 관련 pH(예를 들어 1 내지 8)에서 수용액에서 적어도 약간의 용해도를 가져야 한다. 중합체는 중성이거나 이온화될 수 있고 pH 1 내지 8 범위의 적어도 일부에 걸쳐 적어도 0.1 mg/mL의 수용해도를 가져야 한다.
본 발명에 사용하기에 적합한 수용성 중합체는 셀룰로스 또는 비셀룰로스일 수 있다. 중합체는 수용액에서 중성이거나 이온화될 수 있다. 이들 중, 이온화가능한 셀룰로스 중합체가 바람직하고, 이온화가능한 셀룰로스 중합체가 더 바람직하다.
예시적인 수용성 중합체는 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 아세테이트 석시네이트(HPMCAS), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스(HPMC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 프탈레이트(HPMCP), 카복시 메틸 에틸 셀룰로스(CMEC), 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트(CAP), 셀룰로스 아세테이트 트라이멜리테이트(CAT), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 하이드록시프로필 셀룰로스(HPC), 메틸 셀룰로스(MC), 에틸렌옥사이드 및 프로필렌 옥사이드의 블록 공중합체(PEO/PPO, 폴록사머로도 공지됨) 및 이들의 혼합물을 포함한다. 특히 바람직한 중합체는 HPMCAS, HPMC, HPMCP, CMEC, CAP, CAT, PVP, 폴록사머 및 이들의 혼합물을 포함한다. HPMCAS가 가장 바람직하다. 개시내용이 본원에 참고로 인용된 EP 0 901 786 A2를 참조한다.
고체 비정질 분산체는 난용성 화합물의 적어도 대부분(60% 이상)이 비정질 상태가 되도록 하는 고체 비정질 분산체를 형성하기 위한 임의의 공정에 따라 제조될 수 있다. 이러한 공정에는 기계적, 열적 및 용매 공정이 포함된다. 예시적인 기계적 공정은 밀링 및 압출; 고온 융합, 용매 개질 융합 및 용융-응고 공정을 포함하는 용융 공정; 및 비용매 침전, 분무 코팅 및 분무 건조를 포함하는 용매 공정을 포함한다. 예를 들어, 관련 개시내용이 본원에 참고로 인용된 다음 미국 특허를 참조한다: 압출 공정에 의한 분산체 형성을 기술하는 US 5,456,923 및 5,939,099; 밀링 공정에 의한 분산체 형성을 기술하는 US 5,340,591 및 4,673,564; 및 용융 응고 공정에 의한 분산체 형성을 기술하는 US 5,707,646 및 4,894,235. 바람직한 공정에서, EP 0 901 786 A2에 개시된 바와 같이 분무 건조에 의해 고체 비정질 분산체를 형성한다. 이 공정에서 화합물 및 중합체를 용매, 예컨대 아세톤 또는 메탄올에 용해시킨 후에, 분무 건조를 통해 용매를 빠르게 제거하여 고체 비정질 분산체를 형성한다. 고체 비정질 분산체는 필요에 따라 화합물의 최대 약 99 중량%, 예를 들어 1 중량%, 5 중량%, 10 중량%, 25 중량%, 50 중량%, 75 중량%, 95 중량% 또는 98 중량%를 구성한다.
고체 분산체는 투여량 형태 자체로 사용될 수 있거나 다른 투여량 형태, 예컨대 캡슐, 정제, 용액 또는 현탁액의 제조에서 제조용 제품(MUP)으로 사용될 수 있다. 수성 현탁액의 예는, 2% 폴리소르베이트-80에 2.5 mg/mL의 화합물을 함유하는 1:1(w/w) 화합물/HPMCAS-HF 분무 건조 분산체의 수성 현탁액이다. 정제 또는 캡슐에 사용하기 위한 고체 분산체는 일반적으로 이러한 투여량 형태에서 전형적으로 발견되는 다른 부형제 또는 보조제와 혼합될 것이다. 예를 들어, 예시적 캡슐용 충전제는 2:1(w/w) 화합물/HPMCAS-MF 분무 건조 분산체(60%), 락토스(빠른 유동)(15%), 미세결정질 셀룰로스(예를 들어 Avicel.sup.(R0-102)(15.8%)), 나트륨 전분(7%), 나트륨 라우릴 설페이트(2%) 및 마그네슘 스테아레이트(1%)를 함유한다.
HPMCAS 중합체는 Shin-Etsu Chemical Co., LTD(Tokyo, Japan)에서 각각 Aqoa.sup.(R)-LF, Aqoat.sup.(R)-MF 및 Aqoat.sup.(R)-HF로 저급, 중금 및 고급 등급으로 입수가능하다. 일반적으로 더 높은 MF 및 HF 등급이 바람직하다.
편리하게는, 본 발명의 화합물(또는 조합)은 화합물의 치료 투여량이 매일 물 공급과 함께 섭취되도록 음용수에 운반될 수 있다. 화합물은 바람직하게는 액체, 수용성 농축액(예를 들어 수용성 염의 수용액)의 형태로 음용수에 직접 계량될 수 있다.
이들 화합물은 또한 예를 들어 상기에 상세히 설명된 적응증에 대해 인간 이외의 동물에게 투여될 수 있다. 각 활성 성분의 정확한 투여량은 동물의 유형 및 치료하는 질병 상태의 유형, 동물의 나이 및 투여 경로를 포함하나 이에 제한되지 않는 많은 인자에 따라 달라질 것이다.
치료하는 적응증에 효과적인, 화학식 I 또는 II의 화합물과 함께 사용되는 조합 약학 제제의 투여량이 사용된다. 이러한 투여량은 표준 검정, 예컨대 상기에 언급되고 본원에 제공된 것에 의해 결정될 수 있다. 조합 제제는 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다.
이러한 투여량은 체중이 약 60 kg 내지 70 kg인 평균 인간 개체를 기준으로 한다. 의사는 상기 범위를 벗어나는 개체, 예컨대 유아 및 노인에 대한 투여량을 쉽게 결정할 수 있다.
최적의 목적하는 반응을 제공하기 위해 투여량 양생법을 조정할 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있고, 시간이 지남에 따라 여러 분할 투여량이 투여될 수 있거나, 치료 상황의 긴급성에 따라 투여량이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 투여의 용이성과 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여량 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 투여량 단위 형태는 치료받을 포유동물 개체에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하고; 각 단위는 필요한 약학적 담체와 관련하여 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 사양은 (a) 화학요법제의 독특한 특성 및 달성할 특정 치료 또는 예방 효과, 및 (b) 개체에서 감수성의 치료를 위한 활성 화합물의 배합 기술에 내재된 제한에 의해 지시되고 이에 직접적으로 의존적이다.
따라서, 당업자는 본원에 제공된 개시내용에 기초하여 투여량 및 투여량 양생법이 치료 분야에 주지된 방법에 따라 조정된다는 것을 인식할 것이다. 즉, 최대 허용 투여량이 쉽게 설정될 수 있고, 환자에게 검출가능한 치료 이점을 제공하기 위해 각각의 제제를 투여하기 위한 시간적 요구 사항과 같이, 환자에게 검출 가능한 치료 이점을 제공하는 유효량도 결정될 수 있다. 따라서, 특정 투여량 및 투여 양생법이 본원에 예시되어 있지만, 이들 예는 본 발명을 실시함에 있어서 환자에게 제공될 수 있는 투여량 및 투여 양생법을 결코 제한하지 않는다.
투여량 값은 완화시킬 질환의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있고, 단일 또는 다중 투여량을 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 임의의 특정 개체에 대해, 특정 투여량 양생법은 개별적 필요 및 조성물의 투여를 관리하거나 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정되어야 하며, 본원에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적인 것으로서 청구된 조성물의 범위 또는 실행을 청구된 구성의 범위 또는 실행을 제한하려는 것이 아님을 추가로 이해해야 한다. 예를 들어, 투여량은 임상 효과, 예컨대 독성 효과 및/또는 실험실 값을 포함할 수 있는 약동학적 또는 약력학적 파라미터를 기반으로 조정될 수 있다. 따라서, 본 발명은 당업자에 의해 결정된 바와 같이 환자내 투여량 증량을 포함한다. 화학요법제의 투여를 위한 적절한 투여량 및 양생법을 결정하는 것은 관련 기술분야에 주지되어 있고, 일단 본원에 개시된 교시가 제공되면 당업자에 의해 포함되는 것으로 이해될 것이다.
본 발명은 약제(예컨대 단위 투여량 정제 또는 단위 투여량 캡슐)로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물의 용도를 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 방법을 논의하는 상기 섹션에서 이전에 확인된 질환 중 하나 이상을 치료하기 위한 약제(예컨대 단위 투여 정제 또는 단위 투여 캡슐)의 제조를 위한 화학식 I 또는 II의 화합물의 용도를 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 단일 단위 투여량으로 또는 복수의 단일 단위 투여량으로 대량으로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 본원에 사용된 "단위 투여량"은 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 약학 조성물의 별개의 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 개체에게 투여될 활성 성분의 투여량 또는 이러한 투여량의 편리한 분획, 예를 들어 이러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.
본 발명의 이들 제제 및 화합물은 약학적으로 허용되는 비히클, 예컨대 식염수, 링거 용액, 덱스트로스 용액 등과 조합될 수 있다. 특정 투여량 양생법, 즉 투여량, 시기 및 반복은 특정 개친 및 해당 개인의 병력에 따라 다를 수 있다.
허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산; 염, 예컨대 염화 나트륨; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 방부제(예컨대 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 Ig; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당류, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예를 들어 Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN(상표), PLURONICS(상표) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함할 수 있다.
이들 제제 및/또는 본 발명의 화합물을 함유하는 리포솜은 US 4,485,045 및 4,544,545에 기재된 것과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포솜은 US 5,013,556에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하는 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포솜은 정의된 기공 크기의 필터를 통해 압출되어 목적하는 직경의 리포솜을 생성한다.
이들 제제 및/또는 본 발명의 화합물은 또한 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐(예를 들어 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐), 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로유화액, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로유화액으로 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing (2000)]에 개시되어 있다.
서방성 제제를 사용할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 본 발명의 화합물을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예를 들어 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 '폴리(비닐알코올)), 폴리락티드(US 3,773,919), L-글루탐산 및 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 LUPRON DEPOT(상표)(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미소구체)에 사용되는 것, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트 및 폴리-D -(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
정맥내 투여에 사용되는 제제는 멸균되어야 한다. 이는 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다. 본 발명의 화합물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘로 관통할 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알 내에 위치된다.
적합한 유화액은 상업적으로 입수가능한 지방 유화액, 예컨대 예컨대 Intralipid(상표), Liposyn(상표), Infonutrol(상표), Lipofundin(상표) 및 Lipiphysan(상표)을 사용하여 제조할 수 있다. 활성 성분은 미리 혼합된 유화액 조성물에 용해될 수 있거나 대안적으로 오일(예를 들어 대두유, 홍화유, 면실유, 참기름, 옥수수유 또는 아몬드유), 및 인지질(예를 들어 계란 인지질, 대두 인지질 또는 대두 레시틴) 및 물과 혼합시 형성된 유화액에 용해될 수 있다. 유화액의 장성을 조절하기 위해 다른 성분, 예를 들어 글리세롤 또는 글루코스가 첨가될 수 있음을 이해할 것이다. 적합한 유화액은 전형적으로 최대 20%, 예를 들어 5 내지 20%의 오일을 함유할 것이다. 지방 유화액은 0.1 내지 1.0㎛, 특히 0.1 내지 0.5 ㎛의 지방 액적을 포함할 수 있고, 5.5 내지 8.0 범위의 pH를 가질 수 있다.
유화액 조성물은 본 발명의 화합물을 Intralipid(상표) 또는 이의 성분(대두유, 계란 인지질, 글리세롤 및 물)과 혼합하여 제조된 것일 수 있다.
흡입용 또는 흡기용 조성물은 약학적으로 허용되는 수성 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물 중의 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 상기 기재된 바와 같은 적합한 약학적으로 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡 경로에 의해 투여된다. 바람직하게는 멸균된 약학적으로 허용되는 용매 중의 조성물은 기체의 사용에 의해 분무될 수 있다. 분무된 용액을 분무 장치로부터 직접 흡입할 수 있거나, 분무 장치를 안면 마스크, 텐트 또는 간헐적 양압 호흡 기계에 부착할 수 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물은 적절한 방식으로 제형을 전달하는 장치로부터 바람직하게는 경구 또는 비강으로 투여될 수 있다.
본원의 화합물은 경구, 협측, 비강내, 비경구(예를 들어 정맥내, 근육내 또는 피하) 또는 직장 투여용으로 또는 흡입에 의한 투여에 적합한 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 서방성 전달을 위해 제형화될 수 있다.
특정 양의 활성 성분을 갖는 다양한 약학 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 본 개시내용에 비추어 명백할 것이다. 약학 조성물을 제조하는 방법의 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2000)]을 참조한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 화합물을 0.1% 내지 95%, 바람직하게는 1% 내지 70% 함유할 수 있다. 어쨌든, 투여될 조성물은 치료받는 개체의 질병/질환을 치료하기에 효과적인 양의 본 발명에 따른 화합물의 양을 함유할 것이다.
본 발명은 별도로 투여될 수 있는 활성 성분의 조합으로 본원에 기술된 질병/질환의 치료에 관한 양상을 갖기 때문에, 본 발명은 또한 키트 형태의 별개의 약학 조성물을 조합하는 것에 관한 것이다. 키트는 2개의 개별 약학 조성물(화학식 I 또는 II의 화합물, 이의 전구약물, 또는 이러한 화합물 또는 전구약물의 염, 및 상기 기재된 바와 같은 제2 화합물)을 포함한다. 키트는 별도의 조성물을 포함하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 전형적으로 키트는 개별 성분의 투여에 대한 지침을 포함한다. 키트 형태는, 개별 성분이 바람직하게는 상이한 투여량 형태(예를 들어 경구 및 비경구)로 투여되고 상이한 투여 간격으로 투여될 때, 또는 조합의 개별 성분의 적정이 처방 의사에 의해 요구될 때 특히 유리하다.
이러한 키트의 예는 소위 블리스터 팩이다. 블리스터 팩은 포장 산업에서 주지되어 있으며 약학 단위 투여량 형태(정제, 캡슐 등)의 포장에 널리 사용되고 있다. 블리스터 팩은 일반적으로 바람직하게는 투명한 플라스틱 물질의 호일로 덮인 비교적 단단한 물질의 시트로 구성된다. 포장 과정에서 플라스틱 호일에 홈이 형성된다. 홈은 포장할 정제 또는 캡슐의 크기 및 모양을 갖는다. 다음으로, 정제 또는 캡슐을 홈에 넣고 비교적 단단한 물질의 시트를 홈이 형성된 방향과 반대인 호일 면의 플라스틱 호일에 대해 밀봉한다. 결과적으로 정제 또는 캡슐은 플라스틱 호일과 시트 사이의 홈에 밀봉된다. 바람직하게는 시트의 강도는 홈에 수동으로 압력을 가함으로써 정제 또는 캡슐이 블리스터 팩으로부터 제거될 수 있도록 함으로써 홈의 위치에서 시트에 구멍이 형성되도록 한다. 이어서, 정제 또는 캡슐은 상기 구멍을 통해 제거될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 옆에 숫자 형태로 키트에 기억 보조 장치를 제공하는 것이 바람직할 수 있다(숫자는 그렇게 명시된 정제 또는 캡슐을 복용해야 하는 양생법의 날짜와 상응한다). 이러한 기억 보조 장치의 또 다른 예는 예를 들어 "제1주, 월요일, 화요일 등... 제2주, 월요일, 화요일..."과 같이 카드에 인쇄된 달력이다. 기억 보조 장치의 다른 변형이 쉽게 명백할 수 있다. "1일 투여량"은 주어진 날에 복용해야 하는 단일 정제 또는 캡슐 또는 여러 환제 또는 캡슐일 수 있다. 또한, 화학식 I 또는 II의 화합물의 1일 투여량은 1개의 정제 또는 캡슐로 구성될 수 있는 반면에, 제2 화합물의 1일 투여량은 여러 정제 또는 캡슐로 구성될 수 있고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 기억 보조 장치는 이를 반영해야 한다.
본 발명의 또 다른 특정 실시양태에서, 의도된 사용 순서로 한 번에 하나씩 1일 투여량을 분배하도록 설계된 디스펜서가 제공된다. 바람직하게는, 디스펜서에는 양생법에 대한 순응을 더욱 용이하게 하기 위해 기억 보조 장치가 장착된다. 이러한 기억 보조 장치의 예는 분배된 1일 투여량의 수를 나타내는 기계식 카운터이다. 이러한 기억 보조 장치의 또 다른 예는 액정 리드아웃과 결합된 배터리 구동 마이크로칩 메모리, 또는 예를 들어 마지막 1일 투여량을 복용한 날짜를 읽고/읽거나 다음 투여량을 복용해야 하는 날짜를 상기시키는 리마인더 음향 신호이다.
또한, 본 발명은 함께 투여될 수 있는 활성 성분의 조합으로 본원에 기재된 질병/질환의 치료에 관한 양상을 갖기 때문에, 본 발명은 또한 단일 투여량 형태, 예컨대 (비제한적으로) 단일 정제 또는 캡슐, 이중층 또는 다층 정제 또는 캡슐로, 또는 정제 또는 캡슐 내의 분리된 성분 또는 구획의 사용을 통해 개별 약학 조성물을 조합하는 것에 관한 것이다.
활성 성분은 추가의 용매, 공용매, 부형제, 또는 약학적으로 허용되는 희석제, 부형제, 비히클 또는 담체로부터 선택되는 복합화제의 존재 또는 부재 하에 수성 또는 비수성 비히클 중의 용액으로서 전달될 수 있다.
활성 성분은 약학적으로 허용되는 부형제와 함께 고체 분산체 또는 자가 유화 약물 전달 시스템(SEDDS)으로서 제형화될 수 있다.
활성 성분은 즉시 방출 또는 연기 방출 정제 또는 캡슐로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 추가 부형제 없이 활성 성분으로서 캡슐 외피 내에서 단독으로 전달될 수 있다.
실시예
실험 절차
달리 명시되지 않는 한, 출발 물질은 일반적으로 상업 공급처, 예컨대 Aldrich Chemicals Co.(Milwaukee, WI), Lancaster Synthesis, Inc.(Windham, NH), Acros Organics(Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd.(Cornwall, England) 및 Tyger Scientific(Princeton, NJ)으로부터 입수가능하다. 특정 통상적 약어 및 두문자어를 사용하였고, 이는 하기를 포함할 수 있다: AcOH(아세트산), DBU(1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운데크-7-엔), CDI(1,1'-카본일다이이미다졸), DCM(다이클로로메탄), DEA(다이에틸아민), DIPEA(N,N-다이이소프로필에틸아민), DMAP(4-다이메틸아미노피리딘), DMF(N,N-다이메틸포름아미드), DMSO(다이메틸 설폭사이드), EDCI(1-[3-(다이메틸아미노)프로필]-3-에틸카보다이이미드 하이드로클로라이드), Et2O(다이에틸 에터), EtOAc(에틸 아세테이트), EtOH(에탄올), HATU(O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU(O-벤조트라이아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), HOBT(1-하이드록시벤조트라이아졸), iPrOH(2-프로판올), KHMDS(칼륨 비스(트라이메틸실릴)아미드), MeOH(메탄올), MTBE(tert-부틸 메틸 에터), NaBH(OAc)3(나트륨 트라이아세톡시보로하이드라이드), NaHMDS(나트륨 비스(트라이메틸실릴)아미드), NMP(N-메틸피롤리돈), SEM([2-(트라이메틸실릴)에톡시]메틸), TEA(트라이에틸아민), TFA(트라이플루오로아세트산), THF(테트라하이드로푸란) 및 T3P(프로판 포스폰산 안하이드라이드; 2,4,6-트라이프로필-1,3,5,2,4,6-트라이옥사포스피난 2,4,6-트라이옥사이드).
반응을 공기 중에서 수행하거나, 산소 또는 습기에 민감한 시약 또는 중간체가 사용되는 경우 불활성 대기(질소 또는 아르곤)에서 수행하였다. 적절한 경우, 반응 장치를 히트 건을 사용하여 동적 진공 하에 건조하였고, 무수 용매(Aldrich Chemical Company(Milwaukee, Wisconsin)의 Sure-Seal(상표) 제품 또는 EMD Chemicals(Gibbstown, NJ)의 DriSolv(상표) 제품)를 사용하였다. 일부 경우에는, 물에 대한 하기 QC 표준이 달성될 때까지, 상업용 용매를 4Å 분자체로 채워진 컬럼에 통과시켰다: a) 다이클로로메탄, 톨루엔, N,N-다이메틸포름아미드 및 테트라하이드로푸란의 경우 <100 ppm; b) 메탄올, 에탄올, 1,4-다이옥산 및 다이이소프로필아민의 경우 <180 ppm. 매우 민감한 반응의 경우, 용매를 금속 나트륨, 수소화 칼슘 또는 분자체로 추가 처리하고 사용 직전에 증류하였다. 다른 상업용 용매 및 시약을 추가 정제 없이 사용하였다. 다른 실시예 또는 방법의 절차를 참조하는 합성의 경우 반응 조건(반응 시간 및 온도)이 다를 수 있다. 일반적으로 추가 반응을 수행하거나 생물학적 테스트를 위해 제출되기 전에 생성물을 진공 상태에서 건조하였다.
지시된 경우, 반응을 Biotage Initiator 또는 Personal Chemistry Emrys Optimizer 마이크로웨이브를 사용하여 마이크로파 조사에 의해 가열하였다. 박층 크로마토그래피(TLC), 액체 크로마토그래피-질량 분석(LCMS) 및/또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 반응 진행을 모니터링하였다. TLC를, 형광 지시약(254 nm 여기 파장)이 있는 사전 코팅된 실리카겔 플레이트에서 수행하였고, UV 광 하에 및/또는 I2, KMnO4, CoCl2, 포스포몰리브덴산 및/또는 세륨 암모늄 몰리브데이트 염색을 사용하여 시각화하였다. Leap Technologies 자동 시료 주입기, Gemini C18 컬럼, MeCN/물 구배, 및 TFA, 포름산 또는 수산화 암모늄 개질제가 포함된 Agilent 1100 시리즈 기기에서 LCMS 데이터를 수집하였다. 컬럼 용리액을, 100 내지 1200 Da의 양이온 모드 및 음이온 모드 둘 다에서 스캔하는 Waters ZQ 질량 분석기를 사용하여 분석하였다. 다른 유사한 기기를 또한 사용하였다. Agilent 1100 시리즈 기기에서 Gemini 또는 XBridge C18 컬럼, MeCN/물 구배, 및 TFA 또는 수산화 암모늄 개질제를 사용하여 HPLC 데이터를 수집하였다. 샘플을, 전자 이온화를 사용하여 50 Da에서 550 Da까지 스캐닝하는 HP 5973 질량 선택성 검출기에서 분석하였다. Isco CombiFlash Companion, AnaLogix IntelliFlash 280, Biotage SP1 또는 Biotage Isolera One 기기, 및 사전 패킹된 Isco RediSep 또는 Biotage Snap 실리카 카트리지를 사용하여 MPLC(중간 성능 액체 크로마토그래피)로 정제를 수행하였다. Berger 또는 Thar 기기; ChiralPAK-AD, -AS, -IC, Chiralcel-OD 또는 -OJ 컬럼; 및 단독으로 또는 TFA 또는iPrNH2를 사용하여 개질된, MeOH, EtOH, iPrOH 또는 MeCN과 CO2의 혼합물을 사용하여 키랄 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)에 의해 키랄 정제를 수행하였다. UV 검출을 사용하여 분획 수집을 촉발하였다. 다른 실시예 또는 방법의 절차를 참조하는 합성의 경우, 정제는 다양할 수 있다: 일반적으로 용리액/구배에 사용되는 용매 및 용매 비율을, 적절한 Rf 또는 체류 시간을 제공하도록 선택하였다.
질량 분석 데이터를 LCMS 분석으로부터 기록하였다. 질량 분석법(MS)을 대기압 화학 이온화(APCI), 전자분무 이온화(ESI), 전자 충격 이온화(EI) 또는 전자 산란(ES) 이온화 소스를 통해 수행하였다. 양성자 핵 자기 분광법(1H NMR) 화학적 이동은 테트라메틸실란의 다운필드에서 ppm 단위로 제공되며 300, 400, 500 또는 600 MHz Varian, Bruker 또는 Jeol 분광계에 기록하였다. 화학적 이동을, 중수소화된 용매 잔류 피크(클로로포름, 7.26 ppm, CD2HOD, 3.31 ppm, 아세토니트릴-d2, 1.94 ppm, 디메틸 설폭사이드-d5, 2.50 ppm, DHO, 4.79 ppm)를 참조하여 백만분율(ppm, δ)로 표시하였다. 피크 모양은 하기와 같이 기재하였다: s, 단일항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; quin, 오중항; m, 다중항; br s, 넓은 단일항; app: 겉보기. 분석 SFC 데이터를, 상기에 기재된 바와 같이 Berger 분석 기기에서 수집하였다. 1 dm 셀을 사용하여 PerkinElmer 모델 343 편광계에서 광학 회전 데이터를 획득하였다. 실리카 겔 크로마토그래피를, Biotage 및 ISCO를 비롯한 다양한 상업용 공급업체에서 미리 패킹한 컬럼을 사용하는 중압 Biotage 또는 ISCO 시스템을 주로 사용하여 수행하였다. 미량 분석을 Quantitative Technologies Inc.에서 수행했였고 계산된 값의 0.4% 이내였다.
달리 언급하지 않는 한, 화학 반응은 실온(약 23℃)에서 수행하였다.
달리 언급하지 않는 한, 모든 반응물을 추가 정제 없이 상업적으로 입수하거나 문헌에 공지된 방법을 사용하여 제조하였다.
용어 "농축된", "증발된" 및 "진공에서 농축된"은 수조 온도가 60℃ 미만인 회전식 증발기에서 감압에서의 용매의 제거를 지칭한다. 약어 "min" 및 "h"는 각각 "분" 및 "시간"을 나타낸다. 용어 "TLC"는 박막 크로마토그래피를 지칭하고, "실온 또는 주위 온도"는 18 내지 25℃의 온도를 의미하고, "LCMS"는 액체 크로마토그래피-질량 분석법을 지칭하고, "UPLC"는 초고성능 액체 크로마토그래피를 의미하고, "HPLC"는 고성능 액체 크로마토그래피를 지칭하고, "SFC"는 초임계 유체 크로마토그래피를 지칭한다.
수소화는 가압된 수소 기체 하에 Parr Shaker에서, 또는 Thales-nano H-Cube 유동 수소화 장치에서 지정된 온도에서 1 내지 2 mL/분의 유속 및 최대 수소에서 수행될 수 있다.
HPLC, UPLC, LCMS 및 SFC 체류 시간을 절차에 명시된 방법을 사용하여 측정했였다.
일부 예에서, 본 발명의 특정 화합물의 거울상 이성질체를 분리하기 위해 키랄 분리를 수행하였다(일부 예에서, 분리된 거울상 이성질체는 용출 순서에 따라 ENT-1 및 ENT-2로 지정되고; 유사하게, 분리된 부분입체 이성질체는 용출 순서에 따라 DIAST-1 및 DIAST-2로 지정된다). 일부 예에서, 거울상 이성질체의 광학 회전을 편광계를 사용하여 측정하였다. 이의 관찰된 회전 데이터(또는 이의 특정 회전 데이터)에 따라, 시계 방향으로 회전하는 거울상 이성질체를 (+)-거울상 이성질체로 지정하고 시계 반대 방향으로 회전하는 거울상 이성질체를 (-)-거울상 이성질체로 지정하였다. 라세미 화합물은 그려지거나 기술된 입체화학 없이 또는 구조에 인접한 (+/-) 제시로 표시되고; 후자의 경우, 표시된 입체화학은 라세미 혼합물을 구성하는 두 거울상 이성질체 중 하나만을 나타낸다.
하기는 본 발명의 다양한 화합물의 합성을 예시한다. 본 발명의 범위 내의 추가 화합물은 단독으로 또는 당업계에 일반적으로 공지된 기술과 조합하여 이들 실시예에 예시된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 이들 제조 및 실시예의 모든 출발 물질은 상업적으로 입수가능하거나 당업계에 공지된 방법 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
하기에 기재되는 화합물 및 중간체를, ACD/ChemSketch 2017.2.1, File Version C40H41, Build 99535(Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, Canada)에 의해 제공된 명명 규칙을 사용하여 명명하였다. ACD/ChemSketch 2017.2.1에 의해 공되는 명명 규칙은 당업자에게 주지되어 있으며, ACD/ChemSketch 2017.2.1에 의해 제공되는 명명 규칙은 일반적으로 IUPAC(International Union for Pure and Applied Chemistry) 유기 화학 명명법 및 CAS 인덱스 규칙에 대한 권장 사항에 적합한 것으로 생각된다.
제제 P1
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시산(P1)
단계 1. 2-[(5-브로모피리딘-3-일)옥시]-3-에톡시피리딘(C1)의 합성
N,N-다이메틸포름아미드(5.4 L) 중의 2-브로모-3-에톡시피리딘(841 g, 4.16 mol)의 용액에 구리(I) 브로마이드(538 g, 3.75 mol)를 첨가한 후에, 탄산 칼륨(1.04 kg, 7.52 mol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 교반하고, 5-브로모피리딘-3-올(652 g, 3.75 mol)을 하나의 분획으로 첨가하고, 이후 반응 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 이를 30℃로 냉각하고, 부순 얼음(9.0 kg) 및 10% 수중 암모니아 용액(7.0 L)의 혼합물에 서서히 부었다. 생성된 현탁액을 1시간 동안 교반한 후에, 침전물을 여과에 의해 수집하고, 필터 케이크를 물(3 x 5 L)로 세척하였다. 이어서, 이를 1시간 동안 에틸 아세테이트(8 L)에서 교반하고 여과하고; 여과액을 포화 염화 나트륨 수용액(5 L)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 페트롤륨 에터(2 L)에서 교반하고, 고체를 여과에 의해 수집하여 C1을 제공하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고, 잔사를 페트롤륨 에터(200 mL)로 마쇄하여 추가적 C1을 수득하였다. 2개의 배취를 합하여 C1을 황색 고체로 제공하였다. 수율: 835 g, 2.83 mol, 75%. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.48 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 2.2, 2.1 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 2. 5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-카보니트릴(C2)의 합성
N,N-다이메틸포름아미드(3.0 L) 중의 C1(324 g, 1.10 mol)의 용액에 칼륨 페로시아나이드(II) 삼수화물(697 g, 1.65 mol)을 하나의 분획으로 첨가한 후에, 물(300 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 진공 하에 탈기시킨 후에, 질소로 퍼징하고; 이러한 배출-퍼징 주기를 총 4회 수행하였다. 이어서, 팔라듐(II) 아세테이트(4.94 g, 22.0 mmol) 및 2-다이사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트라이이소프로필바이페닐(XPhos; 18.7 g, 39.2 mmol)을 첨가하고, 배출-퍼징 주기를 총 5회 수행하였고, 반응 혼합물을 105℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 50℃로 냉각한 후에, 이를 여과하고, 여과액을 얼음물(3 L)에 부은 후에, 약 1시간 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고 에틸 아세테이트(1.5 L)에 용해시키고 포화 염화 나트륨 수용액(1 L)으로 세척하고 건조하고 여과하고 진공에서 농축하여 C2(209 g)를 황색 고체로 수득하였다. 상기로부터 수득한 수성 여과액을 tert-부틸 메틸 에터(2 x 3 L)로 추출하고, 합한 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(0.5 L)으로 세척하고 건조하고 여과하고 감압 하에 농축하여 추가적 C2(20 g)를 제공하였다. 합한 수율: 229 g, 0.949 mol, 86%. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.71 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 1H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 7.08 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.49 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 3. 5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-카복스이미드아미드, 하이드로클로라이드 염(C3)의 합성
메탄올(1.3 L) 중의 C2(180 g, 0.746 mol)의 0℃ 내지 5℃ 현탁액에 메탄올 중의 나트륨 메톡사이드의 용액(5 M; 30 mL, 150 mmol)을 첨가하였다. 메탄올(500 mL)을 첨가하여 교반을 용이하게 하고, 이후 반응 혼합물을 실온(18℃)으로 가온하고 20시간 동안 교반하였다. 이어서, 이를 -40℃로 냉각하고 하나의 분획의 염화 암모늄(48.0 g, 897 mmol)으로 처리하고, 이때 혼합물을 실온(18℃)으로 가온하고 40시간 동안 교반하였다. 진공에서 농축하여 메탄올의 약 절반을 제거한 후에, 생성된 백색 침전물(무기 염)을 여과를 통해 제거하였다. 여과액을 에틸 아세테이트(400 mL)로 희석하고 감압 하에 약 400 mL의 부피로 농축하였다. 이러한 에틸 아세테이트 희석-농축 절차를 2회 반복하여 에틸 아세테이트에 의한 메탄올의 교환을 수행하였다. 생성된 현탁액의 여과로 C3을 백색 고체로 수득하였다. 수율: 175 g, 0.594 mol, 80%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.82 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 2, 2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.17 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 4. 메틸 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시레이트(C4)의 합성
나트륨 2-(다이메톡시메틸)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-올레이트(201 g, 1.01 mol)를 메탄올(1.75 L) 중의 C3(249 g, 0.845 mol)의 용액에 하나의 분획으로 첨가하였다. 반응 혼합물, 진한 현탁액을 18℃에서 20시간 동안 교반하고, 이후 침전물을 여과에 의해 수집하여 C4를 백색 고체로 수득하였다. 수율: 259 g, 0.735 mol, 87%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H), 8.67 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.8, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 5. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시산(P1)의 합성
이 반응을 2개의 병렬 배취에서 수행하였다: C4(321 g, 0.911 mol)를 메탄올(1.6 L)에 현탁하고 빙수욕에서 냉각하고 수산화 나트륨 용액(2 M; 684 mL, 1.37 mol)으로 점적식으로 처리하였다. 첨가를 완료한 후에, 반응 혼합물을 14℃에서 16시간 동안 교반하고, 이후 2개의 배취를 합하였다. 생성된 현탁액을 물(3.2 L)로 희석하고 빙수욕(약 5℃ 내지 10℃)으로 냉각하고 1 M 염산의 적가에 의해 pH 3 내지 4로 조정하였다. 혼합물을 14℃에서 2시간 동안 교반한 후에, 여과하였고; 필터 케이크를 순차적으로 물(2 x 1 L) 및 에틸 아세테이트(1 L)로 세척하여 P1을 백색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 557 g, 1.65 mol, 91%. LCMS m/z 338.9 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.31 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
상기에 기재된 것과 유사한 절차를 사용하여 제조한 제제 P1 물질을 Cu 방사선원(K-α 평균)이 장착된 Bruker AXS D8 Endeavor 회절계에서 수행된 분말 X-선 회절 분석을 사용하여 추가로 분석하였다. 발산 슬릿을 15 mm 연속 조명으로 설정하였다. 회절된 방사선을 PSD-Lynx Eye 검출기로 검출하였고, 이때 검출기 PSD 개방도는 3.00도로 설정하였다. X-선 튜브 전압 및 암페어 수를 각각 40 kV 및 40 mA로 설정하였다. 데이터를 0.01도의 단계 크기 및 1.0초의 단계 시간을 사용하여 3.0 내지 40.0 ° 2θ까지의 Cu 파장에서 Theta-Theta 각도계에서 수집하였다. 산란 방지 스크린을 1.5 mm의 고정 거리로 설정하였다. 수집하는 동안 샘플을 15/분으로 회전시켰다. 샘플을 실리콘 저배경 샘플 홀더에 두고 제조하고 수집하는 동안 회전시켰다.
Bruker DIFFRAC Plus 소프트웨어를 사용하여 데이터를 수집하고, EVA 회절 플러스 소프트웨어를 사용하여 분석을 수행하였다. PXRD 데이터 파일을 피크 검색 전에 처리하지 않았다. EVA 소프트웨어의 피크 검색 알고리즘을 사용하여, 임계값 1로 선택된 피크를 사용하여 예비 피크 할당을 수행하였다. 유효성을 보장하기 위해, 수동으로 조정하였고; 자동 할당의 출력을 시각적으로 확인하고, 피크 위치를 피크 최대값에 대해 조정하였다. 3% 이상의 상대 강도를 갖는 피크를 일반적으로 선택하였다. 분석되지 않거나 노이즈와 일치하는 피크는 선택하지 않았다. USP에 명시된 PXRD의 피크 위치와 관련된 일반적인 오차는 최대 ± 0.2° 2θ(USP-941)이다. 결정 크기 및 형태 변화에 따라 상대적 피크 높이의 약간의 변화가 예상된다. 특징적 x-선 분말 회절 패턴은 도 6에 제공된다. 이러한 도면의 PXRD 데이터는 하기 표 AA에 추가로 기재되어 있다. 유사한 절차를 사용하여, 제제 P1의 결정질 물질의 2개의 추가 배취를 제조하고 상기 기재된 바와 같이 분석하였다. 이러한 배취에 대한 특징적 x-선 분말 회절 패턴은 도 7 및 8에 제공된다.
[표 AA]
[표 AB]
C2의 대안적 합성
5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-카보니트릴(C2)
1,4-다이옥산(250 mL) 중의 2-브로모-3-에톡시피리딘(10.0 g, 49.5 mmol)의 용액을 질소로 2분 동안 플러싱하였다. 이어서, 5-하이드록시피리딘-3-카보니트릴(6.54 g, 54.4 mmol), 팔라듐(II) 아세테이트(556 mg, 2.48 mmol), 1,1'-비스(다이-tert-부틸포스피노)페로센(1.41 g, 2.97 mmol) 및 탄산 세슘(32.3 g, 99.1 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 105℃에서 16시간 동안 교반하였고, 이후 이를 2-브로모-3-에톡시피리딘(7.00 g, 34.6 mmol)을 사용하여 수행한 유사한 반응의 생성물과 합하고 실온으로 냉각하였다. 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석한 후에, 합한 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고 진공에서 건조 상태로 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고 포화 염화 나트륨 수용액(2 x 200 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 감압 하에 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(구배: 페트롤륨 에터 중 0% 내지 35% 에틸 아세테이트)로 C2를 황색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 18.0 g, 74.6 mmol, 89%. LCMS m/z 242.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.70 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
제제 P2
2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시산(P2)
단계 1: 2-브로모-3-에톡시-5-플루오로피리딘(C5)의 합성
탄산 칼륨(697 g, 5.04 mol)을 N,N-다이메틸포름아미드(4 L) 중의 2-브로모-5-플루오로피리딘-3-올(745 g, 3.88 mol)의 용액에 첨가하고, 이후 반응 용기를 비우고 질소로 충전하였다. 배출 주기를 2회 반복한 후에, 반응 혼합물을 35℃로 가열하였다. 요오도에탄(372 mL, 4.65 mol)을 30분에 걸쳐 적가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 이를 25℃로 냉각하고 물(6 L)로 희석하였다. 교반을 15분 동안 25℃에서 계속하고; 생성된 고체를 여과를 통해 수집하고, 여과액을 tert-부틸 메틸 에터(3 x 1.5 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 제1 여과로부터 수득한 고체와 합하여 C5를 갈색 고체로 수득하였다. 수율: 756 g, 3.44 mol, 89%. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.88 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 4.10 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 2. 5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-카보니트릴(C6)의 합성
본 반응을 4개의 병렬 배취에서 수행하였다. 5-하이드록시피리딘-3-카보니트릴(112.6 g, 937.5 mmol) 및 탄산 세슘(389 g, 1.19 mol)을 1,4-다이옥산(2.5 L) 중의 C5(187.5 g, 852.1 mmol)의 용액에 하나의 분획으로 첨가하였다. 반응 용기를 비우고 질소로 충전하였다. 이러한 배출 주기를 2회 반복하고, 이때 팔라듐(II) 아세테이트(9.57 g, 42.6 mmol) 및 1,1'-비스(다이-tert-부틸포스피노)페로센(20.2 g, 42.6 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 배출-질소 주기를 상기와 같이 반복한 후에, 반응 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 16시간 후에 완료되지 않은 임의의 반응 생성물을 추가적 팔라듐(II) 아세테이트(9.57 g, 42.6 mmol) 및 1,1'-비스(다이-tert-부틸포스피노)페로센(20.2 g, 42.6 mmol)으로 처리하고 85℃에서 추가적 16시간 동안 교반하였다. 이때, 4개의 반응 혼합물을 합하고 여과하고; 여과액을 진공에서 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트(3 L)에 용해시킨 후에, 물(6 L)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 15분 동안 교반하고, 이후 층들을 분리하고, 수층을 에틸 아세테이트(3 x 1 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(2 x 3 L)으로 세척한 후에, 이를 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 tert-부틸 메틸 에터(1 L) 및 페트롤륨 에터(2 L)의 혼합물에서 25℃에서 20분 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과를 통해 수집하여 C6(813 g)을 고체로 수득하였다. 여과액을 진공에서 농축하고 실리카겔 크로마토그래피(구배: 페트롤륨 에터 중 0% 내지 30% 에틸 아세테이트)하여 추가적 C6(52 g)을 갈색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 865 g, 3.34 mol, 98%. LCMS m/z 259.8 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.73 - 8.64 (m, 2H), 7.77 (br s, 1H), 7.56 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 3. 5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-카복스이미드아미드, 하이드로클로라이드 염(C7)의 합성
에틸 아세테이트(3 L) 중의 C6(919 g, 3.54 mol)의 용액을 활성탄(약 200 g)으로 처리한 후에, 77℃에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과한 후에, 여과액을 진공에서 농축하여 C6(894 g, 3.45 mol)을 제공하였다. 이어서, 하기 반응을 3개의 병렬 배취에서 수행하였다. 나트륨 메톡사이드(12.4 g, 230 mmol)를 메탄올(2 L) 중의 C6(298 g, 1.15 mol)의 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온한 후에, 25℃에서 20시간 동안 교반한 후에, -40℃로 냉각하고 염화 암모늄(67.6 g, 1.26 mol)으로 처리하였다. 이때, 반응 혼합물을 25℃로 가온하고 25℃에서 40시간 동안 교반하고, 이때 3개의 배취를 합하고 진공에서 농축하여 C7을 갈색 검(1.15 kg)으로 수득하였다. 이러한 물질을 하가 단계에 직접 사용하였다. LCMS m/z 276.8 [M+H]+.
단계 4. 메틸 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시레이트(C8)의 합성
본 반응을 3개의 병렬 배취에서 수행하였다. 나트륨 2-(다이메톡시메틸)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-올레이트(357 g, 1.80 mol)를 메탄올(2.5 L) 중의 C7(이전 단계의 것; 383 g, ≤1.15 mol)의 25℃ 용액에 하나의 분획으로 첨가하였다. 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에, LCMS 분석에 의해 평가하여 3개의 반응 중 2개를 완료하였다. 제3 (미완료) 반응을 추가적 나트륨 2-(다이메톡시메틸)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-올레이트(54.9 g, 277 mmol)로 처리하고, 교반을 25℃에서 6시간 동안 계속하였다. 이때 3개의 배취를 합하고 물(8 L)로 희석하고 여과하였다. 필터 케이크를 물(2 x 2 L)로 세척한 후에, 이를 메탄올(1 L) 및 tert-부틸 메틸 에터(1 L)의 혼합물에서 3시간 동안 25℃에서 교반하였고, 이때 현탁액을 여과하여 C8을 갈색 고체로 수득하였다. 2개의 단계에 걸친 수율: 1.0 kg, 2.7 mol, 78%. LCMS m/z 370.8 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.54 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.32 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 5. 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-카복시산(P2)의 합성
메탄올(2 L) 중의 C8(500 g, 1.35 mol)의 현탁액을 수산화 나트륨 용액(2 M; 1.01 L, 2.02 mol)으로 점적식으로 처리하였다. 첨가를 완료한 후에, 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 이를 물(2 L)로 희석하였다. 이어서, pH를 염산(1 M; 약 1.5 L)의 적가에 의해 3 내지 4로 조정하고; 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 물(2 x 1 L)로 세척하여 P2를 회백색 고체로 제공하였다. 수율: 405 g, 1.14 mol, 84%. LCMS m/z 356.8 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.31 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 - 8.34 (m, 1H), 7.71 (d, component of AB quartet, J = 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, component of ABX system, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
제제 P3
tert-부틸 (3S,5S)-3-아미노-5-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(P3)
이 전체 시퀀스를 대규모로 수행하였다. 일반적으로, 반응 전에, 및 시약의 첨가 후에, 반응기를 -0.07 MPa 이하로 비운 후에, 상압까지 질소로 채웠다. 상기 공정을 일반적으로 3회 반복한 후에, 산소 함량을 평가하여 1.0% 이하임을 확인하였다. 급냉, 추출, 및 유기층 세척 공정에서, 혼합물을 일반적으로 15 내지 60분 동안 교반한 후에, 층을 분리하기 전에 15 내지 60분 동안 침전시켰다.
단계 1. 메틸 (2S,4R)-1-벤질-4-하이드록시피롤리딘-2-카복시레이트(D1)의 합성
트라이에틸아민(93.55 kg, 924.5 mol)을 다이클로로메탄(968 kg) 및 메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-2-카복시레이트, 하이드로클로라이드 염(56.05 kg, 308.6 mol)의 15℃ 내지 25℃ 혼합물에 80 내지 120 kg/시간의 기준 속도로 충전하였다. 혼합물을 10 내지 20분 동안 교반한 후에, 벤질 브로마이드(79.00 kg, 461.9 mol)를 20 내지 30 kg/시간의 기준 속도로 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃ 내지 25℃에서 교반하고; 12시간 후에, 출발 물질의 면적%가 2% 미만이 될 때까지 이를 HPLC를 통해 2 내지 6시간마다 분석을 위해 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 헵타플루오로부티르산을 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 3분 동안 10% B, 이어서 10분에 걸쳐 10% 내지 40% B, 이어서 5분에 걸쳐 40% 내지 90% B; 유속: 1.0 mL/분). 메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-2-카복시레이트의 전형적 체류 시간: 3.8분.
이어서, 물(280 kg)을 100 내지 150 kg/시간의 기준 속도 및 15℃ 내지 25℃에서 반응기에 첨가하였다. 수층을 다이클로로메탄(372 kg, 281 L, 5 부피)으로 1회 추출하고; 합한 유기층을 물(280 kg) 중의 염화 나트륨(93.0 kg)의 용액으로 세척한 후에, 35℃ 미만으로 온도를 유지하면서 -0.08 MPa에서 100 내지 150 L의 부피로 농축하였다. 테트라하이드로푸란(497 kg)을 생성된 혼합물에 2개의 분획으로 충전하였다. 35℃ 미만으로 온도를 유지하면서 혼합물을 다시 -0.08 MPa에서 100 내지 150 L의 부피로 농축하였다. 잔여 다이클로로메탄에 대한 Karl Fischer 분석 및 샘플링을 수행하여 함수량이 0.30% 이하이고 잔여 다이클로로메탄이 4% 이하임을 확인하였다. 생성된 용액을 15℃ 내지 30℃로 조정하여, D1을 함유하는 황색 용액을 수득하였다. 수율: D1(69.14 kg, 293.9 mol, 95%)을 함유하는 용액 136.8 kg. HPLC 순도: 90%(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D1의 체류 시간: 4.72분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d) δ 7.34 - 7.21 (m, 5H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 3.90 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (dd, J = 7.9, 7.8 Hz, 1H), 3.32 (dd, J = 10.1, 5.7 Hz, 1H), 2.57 (br s, 1H), 2.45 (dd, J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 2.24 (ddd, J = 13.2, 7.7, 6.9 Hz, 1H), 2.07 (ddd, J = 13.3, 8.0, 3.2 Hz, 1H).
단계 2. 메틸 (2S,4S)-1-벤질-4-플루오로피롤리딘-2-카복시레이트(D2)의 합성
테트라하이드로푸란 중의 D1의 용액(128.4 kg, D1 64.90 kg, 275.8 mol을 함유함)을 15℃ 내지 25℃에서 테트라하이드로푸란(575 kg)을 함유하는 반응기에 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(114.2 kg, 1129 mol)을 35 내지 45 kg/시간의 기준 첨가 속도로 첨가하였다. 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(66.70 kg, 413.7 mol)를 혼합물에 충전한 후에, 노나플루오로부탄-1-설폰일 플루오라이드(128.0 kg, 423.7 mol)를 60 내지 80 kg/시간의 기준 속도로 충전하고, 반응을 15℃ 내지 25℃에서 진행시켰다. 4시간 후에, D1의 면적%가 1% 미만이 될 때까지, 반응 혼합물을 HPLC를 통해 2 내지 6시간마다 분석을 위해 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D1의 전형적 체류 시간: 5.0분.
이어서, 혼합물을 10℃ 내지 15℃로 냉각하고, 물(325 kg)을 100 내지 120 kg/시간의 기준 속도로 첨가한 후에, tert-부틸 메틸 에터(240.5 kg)를 15℃ 내지 25℃에서 첨가하였다. 유기상을 물(198 kg) 중의 중탄산 나트륨(18.2 kg, 217 mol)의 용액으로 2회 세척한 후에, 물(130 kg) 중의 염화 나트륨(47.2 kg)의 용액으로 2회 세척하였다. 이어서, 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 이를 -0.08 MPa 이하에서 150 내지 200 L의 부피로 농축하였다. 생성된 혼합물을 20℃ 내지 30℃로 조정한 후에, tert-부틸 메틸 에터(123 kg, 166 L, 2.5 부피) 및 n-헵탄(112 kg, 163 L, 2.5 부피)을 첨가하였다. 거의 모든 물질을 여과할 때까지, 생성된 혼합물을 실리카겔 컬럼(112 kg 실리카겔)을 통해 여과하였다. 이어서, 반응기를 20℃ 내지 30℃에서 tert-부틸 메틸 에터(481 kg, 10 부피) 및 n-헵탄(444 kg, 10 부피)으로 헹구고, 이러한 헹굼액을 또한 실리카겔 컬럼을 통해 여과하였다. 합한 여과액을 실리카겔(40 kg)을 함유하는 새로운 컬럼을 통해 용리하고, 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 용리액을 -0.08 MPa 이하에서 80 내지 100 L의 부피로 농축하였다. 생성된 용액을 20℃ 내지 30℃로 조정하여 D2를 함유하는 황색 용액을 수득하였다. 수율: D2(52.64 kg, 221.8 mol, 80%)를 함유하는 용액 104.3 kg. HPLC 순도: 83% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D2의 체류 시간: 7.34분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d) δ 7.37 - 7.22 (m, 5H), 5.10 (br ddd, J = 54.8, 5, 5 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.34 - 3.21 (m, 2H), 2.65 - 2.42 (m, 2H), 2.29 (br ddd, J = 29.8, 14.8, 6.3 Hz, 1H).
단계 3. [(2S,4S)-1-벤질-4-플루오로피롤리딘-2-일]메탄올(D3)의 합성
테트라하이드로푸란(352 kg)을 15℃ 내지 25℃에서 질소 하에 리튬 알루미늄 하이드라이드(8.20 kg, 216 mol)에 첨가하였다. 첨가를 완료한 후에, 혼합물을 10 내지 15분 동안 교반하고, 질소를 반응기의 하부 포트로부터 3 내지 5분 동안 버블링하였다. 혼합물을 8℃ 내지 15℃로 조정한 후에, 테트라하이드로푸란 중의 D2의 용액(99.10 kg, D2 50.02 kg, 210.8 mol을 함유함)을 35 내지 45 kg/시간의 기준 속도에서 8℃ 내지 15℃에서 나누어 첨가하였다. 기질의 3분의 1을 첨가한 후에, 반응 혼합물을 0.5 내지 1시간 동안 교반하고, 분석을 위해 샘플링하였다. D2 충전물 중 10% 이하가 남아있을 때까지 추가적 물질을 첨가하지 않았다. 전체 D2 첨가의 완료 후에, 반응을 8℃ 내지 15℃에서 진행시켰고; 1시간 후에, 2% 이하의 D2가 관찰될 때까지 이를 1 내지 3시간마다 HPLC 분석을 위해 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D2의 전형적 체류 시간: 7.5분.
이어서, 반응을 물(8.00 kg) 및 테트라하이드로푸란(44.5 kg)의 혼합물의 첨가를 통해 급냉하고; 이를 0℃ 내지 20℃에서 6 내지 8 kg/시간의 기준 속도로 첨가하였다. 이어서, 물(30.0 kg) 중의 수산화 나트륨(1.40 kg, 35 mol)의 용액을 10℃ 내지 25℃에서 10 내지 20 kg/시간의 기준 속도로 혼합물 내로 충전하였다. 이러한 첨가 후에, 혼합물을 0.5 내지 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 질소를 4 내지 6시간 동안 15℃ 내지 25℃에서 반응기의 하부 포트로부터 혼합물 내로 버블링하였다. 혼합물을 여과하고, 수집한 고체를 테트라하이드로푸란(317 kg)과 함께 15℃ 내지 25℃에서 1 내지 2시간 동안 교반하고; 이어서, 이러한 혼합물을 여과하였다. 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 합한 여과액을 1 내지 1.2 부피로 -0.08 MPa 이하에서 농축하였다. 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서, 2-메틸테트라하이드로푸란(388 kg)을 혼합물 내로 나누어 충전하였다. 각각의 첨가 후에, 혼합물을 5 내지 10분 동안 교반하고, 이어서 상기와 같이 1 내지 1.2 부피로 농축하였다. 샘플링을 수행하여 잔여 테트라하이드로푸란이 2% 이하이고, 함수량(Karl Fischer 분석)이 0.1% 이하임을 확인하였다. 생성된 혼합물을 15℃ 내지 25℃로 조정하고 2-메틸테트라하이드로푸란(43.0 kg)으로 처리하고; 교반하여 D3을 함유하는 황색 용액을 제공하였다. 수율: D3(41.05 kg, 196.2 mmol, 93%)을 함유하는 용액 102.7 kg. HPLC 순도: 90% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D3의 체류 시간: 5.38분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d), 특징적 피크: δ 7.37 - 7.23 (m, 5H), 5.05 (br ddd, J = 54.5, 4.7, 4.5 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.54 - 3.45 (m, 1H), 3.33 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.23 (br dd, J = 18.5, 11.7 Hz, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.63 (br d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.49 - 2.10 (m, 3H).
단계 4: (3R,5S)-1-벤질-5-플루오로피페리딘-3-올(D4)의 합성
2-메틸테트라하이드로푸란 중의 D3의 용액(102.6 kg, D3 41.03 kg, 196.1 mol을 함유함)을 15℃ 내지 25℃에서 2-메틸테트라하이드로푸란(160 kg)에 첨가하였다. 이어서, 트라이플루오로아세트산 무수물(42.20 kg, 200.9 mol)을 35 내지 45 kg/시간의 기준 속도로 첨가한 후에, 트라이에틸아민(61.1 kg, 604 mol)을 35 내지 45 kg/시간의 기준 속도로 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃ 내지 25℃에서 1시간 동안 유지한 후에, 77℃ 내지 82℃로 가열하였다. 12시간 후에, D3의 면적%가 3% 이하가 될 때까지, 반응을 분석을 위해 1 내지 12시간마다 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D3의 전형적 체류 시간: 5.8분.
이때, 반응 혼합물을 10℃ 내지 20℃로 냉각하고 온도를 10℃ 내지 30℃로 유지하면서 물(41.1 kg) 중의 수산화 나트륨(3.30 kg, 82 mol)의 용액으로 34 내지 45 kg/시간의 기준 속도로 처리하였다. 첨가를 완료한 후에, 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 이를 15℃ 내지 30℃에서 물(82.2 kg) 중의 염화 나트륨(23.1 kg)의 용액으로 세척하였다. 수층을 15℃ 내지 30℃에서 tert-부틸 메틸 에터(150 kg, 203 L, 5 부피)로 1회 세척하고, 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 합한 유기층을 -0.08 MPa 이하에서 1 내지 1.2 부피로 농축하였다. 혼합물을 15℃ 내지 30℃에서 2회 물(162 kg)로 세척하고, 유기상을 트라이에틸아민에 대해 샘플링하여 트라이에틸아민 수준이 3% 이하임을 확인하였다. 이어서, 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 이를 -0.08 MPa 이하에서 1 내지 1.2 부피로 농축하였다. 테트라하이드로푸란(110 kg)을 첨가하고, 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 생성된 혼합물을 다시 -0.08 MPa 이하에서 1 내지 1.2 부피로 농축하였다. 생성된 물질을 20℃ 내지 30℃로 냉각하여 D4를 함유하는 암갈색 용액을 수득하였다. 수율: D4(36.50 kg, 174.4 mmol, 89%)를 함유하는 용액 153.5 kg. HPLC 순도: 85% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D4의 체류 시간: 5.88분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d) δ 7.36 - 7.23 (m, 5H), 4.84 - 4.66 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.62 - 3.59 (m, 2H), 2.92 - 2.76 (m, 2H), 2.69 (dd, J = 11.5, 5.0 Hz, 1H), 2.54 - 2.39 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.95 - 1.78 (m, 1H).
단계 5. tert-부틸 (3S,5R)-3-플루오로-5-하이드록시피페리딘-1-카복시레이트(D5)의 합성
15℃ 내지 30℃에서 테트라하이드로푸란 중의 D4(D4 30.03 kg, 143.5 mol을 함유함), 테트라하이드로푸란(218 kg), 및 다이-tert-부틸 다이카보네이트(47.10 kg, 215.8 mol)의 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 질소로 0.2 내지 0.3 MPa로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 MPa로 벤팅(venting)하였다. 이러한 퍼징 및 벤팅 절차를 5 내지 8회 반복하였다. 숯 상의 팔라듐(10%, 3.00 kg)을 15℃ 내지 30℃에서 반응기로 충전한 후에, 고체 첨가 깔때기를 물(0.26 kg)로 헹궜다. 반응 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.1 내지 0.2 Mpa로 질소로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 Mpa로 15℃ 내지 30℃에서 벤팅하고; 이러한 퍼징 및 벤팅 절차를 5 내지 8회 반복하였다. 이어서, 동일한 퍼징-벤팅 프로토콜을 수소를 사용하여 수행하였다. 최종 수소 교환 후에, 압력을 수소에 의해 0.1 내지 0.2 MPa로 증가시켰다. 이어서, 반응 혼합물 질소로 2회 1 내지 3시간 마다 교환하고, 표면 아래 파이프를 통해 0.1 내지 0.2 MPa로 수소로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 MPa로 벤팅하였다. 교환 후에, 수소 압력을 0.1 내지 0.2 MPa로 증가시키고, 반응 혼합물을 20℃ 내지 30℃에서 유지하였다. 8시간 후에, D4의 수준이 1.0% 이하가 될 때까지 반응을 HPLC 분석을 1 내지 12시간마다 위해 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XSelect 페닐-헥실, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 트라이플루오로아세트산을 함유하는 물; 이동상 B: 0.1% 트라이플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 15분에 걸쳐 5% 내지 35% B; 유속: 1.0 mL/분).
이어서, 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.2 내지 0.3 MPa로 질소로 퍼징하고, 0.02 내지 0.05 MPa로 15℃ 내지 30℃에서 벤팅하고; 이러한 주기를 9회 이상 반복하였다. 반응 혼합물을 20℃ 내지 30℃에서 스테인리스 강 누체 필터에 통과시키고, 필터 케이크를 테트라하이드로푸란(26.6 kg, 29.9 L, 1 부피)으로 헹구고; 합한 여과액을 실리카겔(15.1 kg)이 적재된 필터에 통과시키고, 실리카 필터 케이크를 테트라하이드로푸란(52.7 kg, 59.3 L, 2 부피)으로 헹궜다. 이러한 합한 여과액을 15℃ 내지 30℃에서 인-라인 필터에 통과시키고 온도를 45℃ 미만으로 유지하면서 -0.08 MPa 이하에서 1.1 내지 1.4 부피로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 15℃ 내지 45℃에서 n-헵탄(102 kg)으로 처리하고 10분 동안 교반하고, 이후 혼합물을 샘플링하여 잔여 테트라하이드로푸란이 8% 미만임을 확인하였다. 테트라하이드로푸란(6.90 kg) 및 n-헵탄(101 kg)을 15℃ 내지 45℃에서 첨가하고, 혼합물을 50℃ 내지 55℃로 가열한 후에, 18℃ 내지 25℃로 냉각하고 1시간 동안 교반하였다. D5의 시드 결정(0.06 kg; 하기 출처 참조)을 혼합물 내로 충전한 후에, 온도를 18℃ 내지 25℃에서 유지하면서 이를 1 내지 2시간 동안 교반하였다. 교반을 15℃ 내지 20℃에서 8 내지 12시간 동안 결정화를 위해 계속하였다. 질소를 반응기의 하부 포트로부터 2 내지 3시간마다 버블링하여 농축을 수행하였다. 이어서, 혼합물을 스테인리스 강 누체 필터를 사용하여 여과하고; 필터 케이크를 n-헵탄(20.4 kg) 및 테트라하이드로푸란(0.81 kg)의 혼합물로 헹군 후에, 샘플링이 잔여 테트라하이드로푸란이 720 ppm 이하고 잔여 n-헵탄이 5000 ppm 이하임을 나타낼 때까지 20℃ 내지 30℃에서 건조하였다. 생성물 D5를 회백색 고체로 수득하였다. 분석에 의한 수율: 12.15 kg, 97.5%; 수집한 중량: 11.84 kg, 54.00 mol. 모액 회수로부터의 추가적 물질: 5.17 kg, 23.6 mmol. 합한 수율: 54%. HPLC 순도: 94% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XSelect 페닐-헥실, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 트라이플루오로아세트산을 함유하는 물; 이동상 B: 0.1% 트라이플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 15분에 걸쳐 5% 내지 35% B; 유속: 1.0 mL/분). D5의 체류 시간: 12.58분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d) δ 4.69 (br d, JHF = 47.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.76 (m, 1H), 3.62 - 3.35 (m, 3H), 2.64 - 2.44 (m, 1H), 2.18 - 1.92 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
D5의 시드 결정의 제조: D4의 소규모 수소화 반응을 상기와 같이 수행하였고; 탄소 상의 팔라듐의 제거 후에, 테트라하이드로푸란 중의 D5의 생성된 용액을 약 1 내지 1.2 부피로 농축하였다(사용된 D4의 양 기준). 생성된 혼합물을 테트라하이드로푸란(0.2 부피) 및 n-헵탄(15 부피)으로 처리하고 50℃ 내지 55℃로 가열한 후에, 15℃ 내지 20℃로 냉각하였다. 현탁액을 6 내지 8시간 동안 교반한 후에, 이를 여과하고 D5를 고체로 수득하였고; 이러한 물질을 시드 결정으로 사용하였다.
단계 6. tert-부틸 (3S,5R)-3-플루오로-5-[(메틸설폰일)옥시]피페리딘-1-카복시레이트(D6)의 합성
다이클로로메탄(229 kg)을 15℃ 내지 25℃에서 반응기 내로 충전한 후에, D5(17.40 kg; 분석 결과로부터 보정: 16.96 kg, 77.35 mol)를 충전하고; 이어서, 질소를 하부 포트를 통해 버블링하였다. 트라이에틸아민(9.80 kg, 96.8 mol)을 15℃ 내지 25℃에서 첨가하였고, 이후 반응 혼합물을 0℃ 내지 5℃로 냉각하였다. 혼합물을 0℃ 내지 10℃에서 유지하면서, 메탄설폰일 클로라이드(10.18 kg, 88.88 mol)를 첨가하고, 반응을 0℃ 내지 10℃에서 진행하였다. 1시간 후에, D5의 면적%가 1% 미만이 될 때까지 이를 1 내지 3시간마다 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 30% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D5의 전형적 체류 시간: 4.31분.
이때, 물(52.0 kg)을 0℃ 내지 5℃에서 혼합물 내로 20 내지 38 kg/시간의 기준 속도로 충전하였다. 생성된 혼합물의 수상을 0℃ 내지 10℃에서 다이클로로메탄(70.4 kg, 53.1 L, 3 부피)으로 추출하고, 합한 유기층을 0℃ 내지 15℃에서 물(17.4 kg) 중의 염화 나트륨(4.30 kg)으로 세척한 후에, 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 -0.09 MPa 이하에서 2 내지 3 부피로 농축하였다. 잔사를 0℃ 내지 30℃에서 tert-부틸 메틸 에터(128 kg)로 나누어 희석한 후에, 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 혼합물을 -0.09 MPa 이하에서 2 내지 3 부피로 농축하였다. tert-부틸 메틸 에터(65.0 kg)를 다시 0℃ 내지 30℃에서 혼합물 내로 나누어 충전하고, 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 혼합물을 다시 -0.09 MPa 이하에서 2 내지 3 부피로 농축하였다. 이러한 프로토콜을, 다이클로로메탄에 대한 분석이 잔여 다이클로로메탄 수준이 2% 이하임을 제공할 때까지 반복하였다. 이어서, 혼합물을 35℃ 내지 40℃로 가열하고, n-헵탄(116 kg)을 40 내지 60 kg/시간의 기준 속도로 첨가하고, 이후 혼합물을 10℃ 내지 15℃/시간의 기준 속도로 서서히 0℃ 내지 10℃로 냉각하였다. 이어서, 이를 0℃ 내지 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 여과하여 필터 케이크를 제공하고, 이를 n-헵탄(22.5 kg)으로 헹군 후에, 35℃ 내지 40℃에서 질소 유동 하에 건조하였다. 생성된 고체를 15℃ 내지 30℃에서 tert-부틸 메틸 에터(59.4 kg)와 혼합한 후에, 35℃ 내지 40℃로 가열하였다. n-헵탄(119 kg)을 35℃ 내지 40℃에서 40 내지 60 kg/시간의 기준 속도로 첨가하고, 생성된 혼합물을 10℃ 내지 15℃/시간의 기준 속도로 서서히 0℃ 내지 10℃로 냉각하였다. 혼합물을 0℃ 내지 10℃에서 2시간 동안 교반한 후에, 이를 여과하고, 필터 케이크를 n-헵탄(23.6 kg)으로 헹궜다. 잔여 tert-부틸 메틸 에터가 5000 ppm 이하이고, 잔여 n-헵탄이 5000 ppm 이하이고, Karl Fischer 분석이 0.1% 이하의 함수량을 나타낼 때까지 수집한 고체를 35℃ 내지 40℃에서 건조하였다. 생성된 물질을 15℃ 내지 30℃로 냉각하여 D6을 백색 고체로 수득하였다. 분석에 의한 수율: 19.35 kg, 98.3%; 수집한 중량: 19.02 kg, 63.97 mol, 83%. HPLC 순도: 99% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 수중 10 mM 암모늄 아세테이트; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 30% 내지 95% B ; 유속: 1.0 mL/분). D6의 체류 시간: 4.98분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d) δ 4.79 - 4.52 (m, 2H), 3.72 - 3.53 (m, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.36 - 2.11 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
단계 7. tert-부틸 (3S,5S)-3-아지도-5-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(D7)의 합성
N,N-다이메틸포름아미드(174 kg) 및 D6(18.45 kg; 분석에서 수집: 18.14 kg, 61.01 mol)을 반응기 내로 충전하고 용액을 수득할 때까지 15℃ 내지 30℃에서 교반하였고, 이후 나트륨 아지드(6.05 kg, 93.1 mol)를 15℃ 내지 30℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 78℃ 내지 88℃로 20℃ 내지 35℃/시간의 기준 속도로 가열한 후에, 78℃ 내지 88℃에서 반응시켰다. 6 내지 12시간 후에, D6의 면적%가 0.5% 미만이 될 때까지 반응 혼합물을 HPLC 분석을 위해 2 내지 8시간마다 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 암모늄 아세테이트를 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D6의 전형적 체류 시간: 6.4분.
혼합물을 10℃ 내지 20℃로 냉각한 후에, tert-부틸 메틸 에터(68.7 kg) 및 물(185 kg)을 35 내지 85 kg/시간의 기준 속도로 첨가하고, 교반을 10 내지 20분 동안 계속하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액의 수층을 tert-부틸 메틸 에터(2 x 69 kg, 93 L, 5 부피)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(2 x 56 kg, 56 L, 3 부피)로 세척하여 D7을 tert-부틸 메틸 에터 중의 연황색 용액으로 수득하였다. 수율: 185.4 kg; tert-부틸 메틸 에터 중의 용액, D7 14.90 kg, 61.01 mol을 함유하는 것으로 추정됨, 100%. HPLC 순도: 80% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 암모늄 아세테이트를 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D7의 체류 시간: 8.37분.
단계 8. tert-부틸 (3S,5S)-3-아미노-5-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(P3)의 합성
메탄올(30.2 kg) 및 D7(이전 단계의 tert-부틸 메틸 에터 용액 중 185.4 kg; 61.01 mmol D7을 함유하는 것으로 추정됨)을 반응기 내로 15℃ 내지 30℃에서 충전하였다. 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.2 내지 0.3 MPa로 질소로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 MPa로 벤팅하고; 산소 함량이 1.0% 미만이 될 때까지 이러한 퍼징/벤팅 작업을 5 내지 8회 수행하였다. 숯 상의 팔라듐(10%, 0.95 kg)을 15℃ 내지 30℃에서 첨가하고, 이후, 첨가 깔때기를 물(0.15 kg)로 헹궜다. 생성된 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.2 내지 0.3 MPa로 질소로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 MPa로 15℃ 내지 30℃에서 벤팅하였다. 이러한 퍼징/벤팅 절차를 9회 이상 반복하였다. 이어서, 동일한 절차를 질소 대신 수소를 사용하여 5 내지 8회 수행하였다. 이어서, 반응 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.1 내지 0.2 MPa로 수소로 퍼징하고, 20℃ 내지 30℃에서 반응시켰다. 수소를 2회 1 내지 3시간마다 하기 방법으로 교환하였다: 혼합물을 표면 아래 파이프를 통해 0.1 내지 0.2 MPa로 수소로 퍼징한 후에, 0.02 내지 0.05 MPa로 벤팅하고, 마지막으로 0.1 내지 0.2 MPa로 수소로 퍼징하였다. 20℃ 내지 30℃에서 6 내지 12시간 후에, D7의 면적%가 1.0% 이하가 될 때까지 반응 혼합물을 3 내지 12시간마다 HPLC 분석을 위해 샘플링하였다(HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 암모늄 아세테이트를 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). D7의 전형적 체류 시간: 8.6분.
이어서, 반응 혼합물을 0.2 내지 0.3 MPa로 질소로 퍼징하고 0.02 내지 0.05 MPa로 15℃ 내지 30℃에서 벤팅하였다. 이러한 퍼징/벤팅 절차를 9회 이상 수행하였다. 20℃ 내지 30℃에서 여과한 후에, 필터 케이크를 tert-부틸 메틸 에터(30.0 kg, 40.5 L, D6에 대해 2 부피)로 헹궈 여과액을 제공하고, 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 이를 -0.08 MPa에서 20 내지 30 L의 부피로 농축하였다. n-헵탄(25.0 kg)을 15℃ 내지 30℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 동일한 방법으로 19 내지 30 L의 부피로 농축하였다. n-헵탄(25.0 kg)을 다시 첨가하고, 농축을 동일한 방법으로 35 내지 40 L의 부피로 수행하고; 이를 40℃ 내지 50℃로 가열하고, 상기 온도에서 1 내지 2시간 동안 교반하고 48℃ 내지 53℃에서 여과하였다. 수집한 고체를 35℃ 내지 45℃에서 질소 유동 하에 건조하였다. 6 내지 12시간 후에, 잔여 tert-부틸 메틸 에터가 5000 ppm 이하이고, 잔여 n-헵탄이 5000 ppm 이하이고, 잔여 메탄올이 3000 ppm 이하일 때까지 물질을 2 내지 12시간 마다 분석을 위해 샘플링하였다. 이어서, 고체를 15℃ 내지 30℃로 냉각하고, 생성물의 외관이 균일할 때까지 체질하고, 20℃ 내지 30℃에서 다이클로로메탄(187 kg)에 용해시켰다. 이를 1 내지 2시간 동안 교반한 후에, 이를 여과하고, 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 유기층을 -0.08 MPa에서 25 내지 35 L의 부피로 농축하였다. 생성된 혼합물을 n-헵탄(3 부피)으로 희석하고 18 내지 22 L(약 3 부피)의 부피로 농축하고; 이러한 작업을 총 3회 반복하여 다이클로로메탄에 대한 n-헵탄의 교환을 수행하였다. 생성된 혼합물을 교반하고 20℃ 내지 30℃에서 결정화하고; 이어서, 이를 여과하여 P3을 회백색 고체로 단리하였다. 분석에 의한 수율: 5.60 kg, 98%; 2 단계에 걸쳐 수집한 중량: 5.48 kg, 25.1 mol, 41%. HPLC 순도: 99% (HPLC 조건. 컬럼: Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 0.1% 암모늄 아세테이트를 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 10분에 걸쳐 20% 내지 95% B; 유속: 1.0 mL/분). P3의 체류 시간: 4.93분. 1H NMR (401 MHz, 클로로포름-d), 특징적 피크: δ 4.78 (br d, JHF = 46.7 Hz, 1H), 4.27 - 3.91 (m, 2H), 3.21 - 3.11 (m, 1H), 3.02 - 2.84 (m, 1H), 2.62 - 2.35 (m, 1H), 2.29 - 2.17 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
제제 P4
2-(5-((3-(에톡시-d
5
)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)피리미딘-5-카복시산(P4)
단계 1. 3-(에톡시-d5)피리딘의 합성
반응을 2개의 병렬 배취에서 수행하였고; 예시적 배취 제조는 하기와 같다: 트라이-n-부틸포스핀(8.40 mL, 33.6 mmol, 2.0 당량)을 25℃에서 테트라하이드로푸란(60 mL) 중의 3-하이드록시피리딘(1600 mg, 16.8 mmol, 1.0 당량) 및 에탄올-d6(1.18 mL, 20.2 mmol, 1.2 당량)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 1,1'-(아조다이카본일)다이피페리딘(8490 mg, 33.6 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 황색 용액을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액에 물(50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트(2x50 mL)로 추출하였다. 유기층을 식염수(50 mL)로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 농축하여 미가공 생성물을 수득하였다. 미가공 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(ISCO 80 g, 페트롤륨 에터 중 3% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로 수득하였다. 합한 배취는 3.70 g(86%)을 산출하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.12-7.24 (m, 2H).
단계 2. 3-(에톡시-d5)피리딘-1-옥사이드의 합성
m-클로로퍼옥시벤조산(7620 mg, 37.5 mmol, 1.3 당량)을 0℃에서 다이클로로메탄(150 mL) 중의 3-(에톡시-d5)피리딘(3700 mg, 28.9 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 3일 동안 교반하였다. 수성 나트륨 티오설페이트(100 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 다이클로로메탄(100 mL)으로 추출하였다. 유기층을 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 농축하여 미가공 생성물을 수득하였다. 미가공 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(다이클로로메탄-10:1 다이클로로메탄:메탄올)로 정제하여 표제 화합물(2500.0 mg, 60.1%)을 적색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.93-8.00 (m, 1H), 7.86-7.92 (m, 1H), 7.15 (dd, J = 8.6, 6.4 Hz, 1H), 6.87 (ddd, J = 8.6, 2.2, 0.7 Hz, 1H).
단계 3. 2-((5-브로모피리딘-3-일)옥시)-3-(에톡시-d5)피리딘의 합성
다이이소프로필에틸아민(11.3 mL, 65.0 mmol, 3.75 당량) 및 브로모트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(10.5 g, 22.5 mmol, 1.3 당량)를, 0℃에서 테트라하이드로푸란(60 mL) 중의 3-(에톡시-d5)피리딘-1-옥사이드(2500 mg, 17.3 mmol, 1.0 당량) 및 3-브로모-5-하이드록시피리딘(3020 mg, 17.3 mmol, 1.0 당량)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 건조 상태로 농축하고 다이클로로메탄(150 mL)에 용해시켰다. 유기층을 1 N 수산화 나트륨(150 mL), 물(100 mL) 및 식염수(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 농축하여 오일을 수득하였다. 미가공 오일을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(페트롤륨 에터-80:20 페트롤륨 에터:에틸 아세테이트)로 정제하여 생성물(3600.0 mg, 69.2%)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.48 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.65-7.74 (m, 2H), 7.19-7.29 (m, 1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H).
단계 4. (5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)보론산의 합성
비스(피나콜라토)다이보론(3800 mg, 15.0 mmol, 1.2 당량), 칼륨 아세테이트(3670 mg, 37.4 mmol, 3.0 당량) 및 [1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센]다이클로로팔라듐(II)(Pd(dppf)Cl2; 456 mg, 0.62 mmol, 0.05 당량)을 다이옥산(120 mL) 중의 2-((5-브로모피리딘-3-일)옥시)-3-(에톡시-d5)피리딘(3740 mg, 12.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 후에, 100℃에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 건조 상태로 농축하여 미가공 생성물(7000.0 mg)을 갈색 오일로 수득하고, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. MS (ES+) 265.8 (M+H).
단계 5. 에틸 2-(5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)피리미딘-5-카복시레이트의 합성
반응을 2개의 병렬 배취에서 수행하였고; 예시적 배취 제조는 하기와 같다: 에틸 2-클로로피리미딘-5-카복시레이트(1000 mg, 5.4 mmol, 1.5 당량), 탄산 칼륨(980 mg, 7.1 mmol, 2.0 당량) 및 [1,1'-비스 (다이페닐포스피노)페로센]다이클로로팔라듐(II), 다이클로로메탄 복합체(130 mg, 0.18 mmol, 0.05 당량)를 다이옥산(25 mL) 및 물(2.5 mL) 중의 (5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)보론산(1880 mg, 3.6 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소로 플러싱한 후에, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 생성물을 여과하고, 여과액을 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고 염수(2x100 mL)로 세척하였다. 유기층을 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 농축하여 미가공 생성물을 수득하였다. 미가공 물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(페트롤륨 에터 : 에틸 아세테이트; 70:30)로 정제하여 생성물을 황색 고체로 수득하였다. 합한 배취는 2.3 g(50%)을 산출하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.57 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.34 (s, 2H), 8.68 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 2.6, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.28-7.28 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 8.1, 4.9 Hz, 1H), 7.00-7.08 (m, 1H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 4H). MS (ES+) 372.1 (M+H).
단계 6. 2-(5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)피리미딘-5-카복시산(P4)
반응을 2개의 병렬 배취에서 수행하였고; 예시적 배취 제조는 하기와 같다: 수산화 나트륨 (1080 mg, 26.9 mmol, 5.0 당량)을 15℃에서 테트라하이드로푸란(70 mL) 및 물(35 mL) 중의 에틸 2-(5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)피리미딘-5-카복시레이트(2000 mg, 5.4 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 테트라하이드로푸란을 제거하였다. 수성 혼합물을 4 M 염산에 의해 pH 4로 산성화시키고 물(50 mL)로 희석하고 15℃에서 20분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 물(3x10 mL)로 세척하고 건조하여 2-(5-((3-(에톡시-d5)피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)피리미딘-5-카복시산을 녹색 고체로 수득하였다. 합한 배취는 1.28 g(60%)을 산출하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.41 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.33 (s, 2H) 8.67 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 8.33-8.41 (m, 1H) 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 7.8, 4.9 Hz, 1H). HRMS (TOF) 344.1402 (M+H).
실시예 1
2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염(1)
단계 1. 벤질 (3R,4S)-3-[(tert-부톡시카본일)아미노]-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C9)의 합성
벤질 클로로포르메이트(0.116 mL, 0.813 mmol)를 테트라하이드로푸란(8 mL) 중의 tert-부틸 [(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]카바메이트(150 mg, 0.69 mmol) 및 탄산 나트륨(146 mg, 1.38 mmol)의 0℃ 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 3일 동안 교반하였다. 이어서, 이를 물(20 mL)로 처리하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(50 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하여 C9를 무색 오일(290 mg)로 수득하였다. 이러한 물질은 1H NMR 분석으로 확인시 불순물을 함유하였으나 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d), 특징적 피크: δ 4.95 - 4.76 (m, 2H), 3.87 - 3.68 (m, 1H), 3.12 - 2.99 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
단계 2. 벤질 (3R,4S)-3-아미노-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트, 하이드로클로라이드 염(C10)의 합성
C9(이전 단계의 것; 290 mg, ≤0.69 mmol) 및 염화 수소(1,4-다이옥산 중 4 M 용액; 6.0 mL)의 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후 이를 진공에서 농축하여 C10을 백색 고체로 수득하였다. 2개의 단계에 걸친 정량적 수율: 200 mg, 0.69 mmol. 1H NMR (400 MHz, 중수소 옥사이드) δ 7.48 - 7.33 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 5.11 (br d, JHF = 48 Hz, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.88 - 3.28 (m, 4H), 2.14 - 2.01 (m, 1H), 2.01 - 1.81 (m, 1H).
단계 3. 벤질 (3R,4S)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C11)의 합성
N,N-다이메틸아세트아미드(3.0 mL)중의 P2(50.0 mg, 0.140 mmol)의 25℃ 용액에 C10(48.6 mg, 0.168 mmol), 트라이에틸아민(58.7 μL, 0.421 mmol) 및 2-클로로-1,3-다이메틸-4,5-다이하이드로-1H-이미다졸-3-이움 클로라이드(71.2 mg, 0.421 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반한 후에, 이를 물(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(20 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(용리제: 9:1 에틸 아세테이트/페트롤륨 에터)로 C11을 황색 고체로 수득하였다. 수율: 80.0 mg, 0.135 mmol, 96%. LCMS m/z 591.2 [M+H]+.
단계 4. 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염(1)의 합성
탄소 상의 10% 팔라듐(60.0 mg)을 테트라하이드로푸란(10 mL) 중의 C11(60.0 mg, 0.102 mmol)의 용액에 첨가하고, 이후 혼합물을 진공 하에 탈기시킨 후에, 수소로 퍼징하고; 이러한 배출-퍼징 주기를 총 3회 수행하였다. 이어서, 반응 혼합물을 수소 벌룬 하에 2시간 동안 25℃에서 교반하고, 이때 이를 C11(20.0 mg, 33.9 μmol)을 사용하여 수행한 유사한 반응의 생성물과 합하고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하고 역상 HPLC(컬럼: Agela Durashell C18, 5 μm; 이동상 A: 수중 0.1% 트라이플루오로아세트산; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 14% 내지 44% B)를 사용하여 정제하여 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염을 황색 검으로 수득하였다. 합한 수율: 28.1 mg, 41.1 μmol, 30%. LCMS m/z 457.4 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d), 특징적 피크: δ 9.52 (br s, 1H), 9.16 (br s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.78 - 8.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.06 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 1H), 4.99 (br d, JHF = 50 Hz, 1H), 4.91 - 4.70 (m, 1H), 4.12 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 2.41 - 2.09 (m, 2H), 1.48 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 2
2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(2)
단계 1. tert-부틸 (3S,5S)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-5-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C12)의 합성
N,N-다이이소프로필에틸아민(2.79 mL, 16.0 mmol) 및 P3(500 mg, 2.29 mmol)을 N,N-다이메틸포름아미드(10 mL) 중의 P2(816 mg, 2.29 mmol)의 실온 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃로 냉각한 후에, 2,4,6-트라이프로필-1,3,5,2,4,6-트라이옥사포스피난 2,4,6-트라이옥사이드(T3P; 에틸 아세테이트 중의 50% 용액; 1.6 mL, 2.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이때 LCMS 분석은 C12의 존재를 나타냈다: LCMS m/z 557.4 [M+H]+. 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 수층을 2회 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 2회 물로 세척하고, 1회 포화 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하고, 1회 포화 염화 나트륨 수용액으로 세척한 후에, 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하여 C12를 황색 고체로 수득하였다. 수율: 1.00 g, 1.80 mmol, 79%.
단계 2. 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(2)의 합성
p-톨루엔설폰산 일수화물(684 mg, 3.60 mmol)을 에틸 아세테이트(10 mL) 중의 C12(1.00 g, 1.80 mmol)의 용액에 첨가하고, 용액을 수득할 때까지 혼합물을 실온세서 교반하였다. 반응 혼합물을 환류 온도에서 2시간 동안 교반한 후에, 실온에서 2시간 동안 교반한 후에, 용매를 기울여 제거하여 생성된 검을 수득하고, 검을 4회 에틸 아세테이트로, 및 2회 헵탄으로 마쇄하였다. 수득한 고체를 에틸 아세테이트와 1 M 수산화 나트륨 수용액 사이에 분배하고, 수층을 4회 에틸 아세테이트로 추출하고; 합한 유기층을 황산 마그네슘으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 생성된 물질을 에틸 아세테이트(약 70 mL)에 환류 온도에서 용해시키고 혼합물이 약간 탁해질 때까지 헵탄(300 mL)으로 처리하였고, 이후 혼합물을 실온으로 냉각하고 밤새 교반하였다. 여과한 후에, 필터 케이크를 1:1 에틸 아세테이트 / 헵탄으로 세척하여 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드를 백색 고체를 수득하였다. 수율: 580 mg, 1.27 mmol, 71%. LCMS m/z 457.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.26 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.59 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.35 (dd, J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.71 (d, half of AB quartet, J = 2.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, component of ABX system, J = 9.8, 2.7 Hz, 1H), 4.82 (br d, JHF = 48 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 1H), 3.02 - 2.86 (m, 2H), 2.77 - 2.62 (m, 1H), 2.5 - 2.43 (m, 1H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 3
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염(3)
단계 1. 벤질 (3R,4S)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C13)의 합성
N,N-다이메틸아세트아미드(3.0 mL) 중의 P1(50.0 mg, 0.148 mmol)의 25℃ 용액에 C10(51.2 mg, 0.177 mmol), 2-클로로-1,3-다이메틸-4,5-다이하이드로-1H-이미다졸-3-이움 클로라이드(75.0 mg, 0.444 mmol) 및 트라이에틸아민(61.8 μL, 0.443 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후 물(20 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(20 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하고 실리카겔 크로마토그래피(용리제: 4:1 에틸 아세테이트 / 페트롤륨 에터)하여 C13을 황색 고체로 수득하였다. 수율: 80.0 mg, 0.140 mmol, 95%. LCMS m/z 573.2 [M+H]+.
단계 2. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염(3)의 합성
테트라하이드로푸란(10 mL) 중의 C13(60.0 mg, 0.105 mmol)의 용액에 탄소 상의 10% 팔라듐(60.0 mg)을 첨가하고, 이후 혼합물을 진공 하에 탈기시킨 후에, 수소로 퍼징하고; 이러한 배출-퍼징 주기을 총 3회 수행하였다. 반응 혼합물을 수소 벌룬 하에 5시간 동안 25℃에서 교반한 후에, C13을 사용하여 수행한 유사한 반응의 생성물(20.0 mg, 34.9 μmol)과 합하였다. 이러한 혼합물을 여과한 후에, 여과액을 진공에서 농축하고 역상 HPLC(컬럼: YMC-Actus Triart C18, 5 μm; 이동상 A: 0.05% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 물; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 24% 내지 64% B)를 사용하여 정제하였다. 유리 염기 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드를 백색 고체로 수득하였다. 유리 염기 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드의 합한 수율: 12 mg, 27 μmol, 19%. LCMS m/z 439.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.17 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.58 - 8.54 (m, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.27 - 7.23 (m, 1H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 7.02 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.68 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.93 (br d, JHF = 49 Hz, 1H), 4.48 - 4.31 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.10 (dd, J = 12.1, 4.5 Hz, 1H), 3.00 - 2.80 (m, 3H), 2.15 - 2.01 (m, 1H), 1.97 - 1.77 (m, 1H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
유리 염기 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(12 mg, 27 μmol)를 트라이플루오로아세트산 수용액(수중 0.1% 트라이플루오로아세트산; 12 mL)에 용해시킨 후에, 16시간 동안 동결건조하여 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염을 황색 검으로 제공하였다. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 비스(트라이플루오로아세테이트) 염의 합한 수율: 12.9 mg, 19.4 μmol, 14%. LCMS m/z 439.4 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 10.56 - 10.28 (br s, 1H), 9.80 - 9.55 (br s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.24 (s, 2H), 9.09 (br s, 1H), 8.86 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.97 (br d, JHF = 49 Hz, 1H), 4.96 - 4.78 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.83 - 3.72 (m, 1H), 3.5 - 3.2 (m, 3H), 2.42 - 2.11 (m, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 4
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(4)
단계 1. tert-부틸 (3S,5S)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-5-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C14)의 합성
N,N-다이이소프로필에틸아민(53.1 mL, 305 mmol) 및 P3(9.50 g, 43.5 mmol)을 아세토니트릴(210 mL) 중의 P1(14.7 g, 43.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각한 후에, 2,4,6-트라이프로필-1,3,5,2,4,6-트라이옥사포스피난 2,4,6-트라이옥사이드(T3P; 에틸 아세테이트 중의 50% 용액; 30.5 mL, 51.2 mmol)를 시린지를 통해 약 4분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반한 후에, 빙욕을 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 만들고 17시간 동안 교반하였다. 이어서, 이를 진공에서 농축하고, 잔사를 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 수층을 2회 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 순차적으로 포화 중탄산 나트륨 수용액 및 포화 염화 나트륨 수용액 세척하고; 포화 수성 염화 나트륨 세척 동안 나타난 침전물을 여과를 통해 제거하고 폐기하였다. 포화 수성 염화 나트륨 층을 1회 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기층을 진공에서 농축하였다. 잔사를 메틸렌클로라이드 및 메탄올의 혼합물에 용해시키고 실리카겔 상에 사전 흡착시켰다. 실리카겔 크로마토그래피(구배: 헵탄 중 30% 내지 100% 에틸 아세테이트)를 수행하고, 생성물이 에틸 아세테이트 / 헵탄 용리제에서 제한된 용해도의 것임을 관찰하였다. 이러한 정제로 C14를 회백색 고체로 수득하였다. 수율: 19.1 g, 35.5 mmol, 82%. LCMS m/z 539.3 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.48 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.12 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.97 - 6.37 (v br m, 1H), 4.78 (br d, JHF = 46.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.33 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.08 - 3.05 (v br m, 4H), 2.41 - 2.11 (m, 1H), 2.02 - 1.79 (m, 1H), 1.49 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.49 (s, 9H).
단계 2. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(4)의 합성
1,4-다이옥산 중의 염화 수소 용액(4 M; 520 mL, 2.1 mol)을 10분에 걸쳐 테트라하이드로푸란(850 mL) 중의 C14(159 g, 295 mmol)의 실온 용액에 첨가하고; 반응 온도를 35℃ 내지 40℃로 증가시키고, 이러한 온도를 가열 맨틀을 사용하여 유지하였다. 첨가를 완료한 후에, 반응 혼합물을 3시간 동안 35℃ 내지 40℃에서 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 20%가 남아 있음을 나타냈고, 따라서 1,4-다이옥산 중의 염화 수소 용액(4 M; 150 mL, 600 mmol)을 다시 반응 혼합물에 첨가하고, 교반을 35℃ 내지 40℃에서 30분 동안 계속하였다. 이때, LCMS 분석을 통해 출발 물질 중 5%가 남아있음을 확인하였고, 반응 혼합물을 1,4-다이옥산 중의 염화 수소 용액(4 M; 60 mL, 240 mmol)으로 처리하였다. 35℃ 내지 40℃에서 추가적 45분 후에, 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 생성된 고체를 물(1 L)에 용해시켰다. 용액을 수산화 나트륨 수용액(1 M; 900 mL, 900 mmol)으로 처리한 후에, 물(400 mL)로 희석하여 교반하고; 실온에서 15분 후에, 침전물을 여과를 통해 수집하고 물(4 x 250 mL)로 세척하였다. 고체를 물의 첨가에 의해 800 mL의 총 부피를 만든 후에, 오버헤드 교반기를 사용하여 메탄올(800 mL)에 의해 실온에서 2시간 동안 슬러리화시켰다. 슬러리를 여과하고, 필터 케이크를 메탄올 및 물의 혼합물(1:1, 1 L)로 세척하였다. 고체를 C14를 사용하여 수행한 여러 유사한 반응의 생성물(≤946 mmol)과 합하고; 합한 배취를 에틸 아세테이트(1.1 L)에 현탁하고 기계적 교반기를 사용하여 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집한 후에, 이를 에틸 아세테이트로 세척하여 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드를 회백색 고체로 수득하였다. 4의 구조를 하기 토실레이트 염 형태에 기재되는 바와 같이 단결정 X-선 결정학을 기반으로 확립하였다. 2개의 단계에 걸친 수율: 330 g, 753 mmol, 61%. LCMS m/z 439.3 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.26 (s, 2H), 8.64 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.60 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.81 (br d, JHF = 48.3 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 4.17 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.02 - 2.86 (m, 2H), 2.69 (br dd, J = 35.1, 14.2 Hz, 1H), 2.5 - 2.38 (m, 2H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Cu 방사선원(K-α 평균)이 장착된 Bruker AXS D8 Endeavor 회절계를 사용하여 본 실시예의 고체에 대해 분말 X-선 회절 분석을 수행하였다. 발산 슬릿을 15 mm 연속 조명으로 설정하였다. 회절된 방사선을 PSD-Lynx Eye 검출기로 검출하였고, 이때 검출기 PSD 개방도는 3.00도로 설정하였다. X-선 튜브 전압 및 암페어 수를 각각 40 kV 및 40 mA로 설정하였다. 데이터를 0.01도의 단계 크기 및 1.0초의 단계 시간을 사용하여 3.0 내지 40.0 ° 2θ까지의 Cu 파장에서 Theta-Theta 각도계에서 수집하였다. 산란 방지 스크린을 1.5 mm의 고정 거리로 설정하였다. 수집하는 동안 샘플을 15/분으로 회전시켰다. 샘플을 실리콘 저배경 샘플 홀더에 두고 제조하고 수집하는 동안 회전시켰다.
Bruker DIFFRAC Plus 소프트웨어를 사용하여 데이터를 수집하고, EVA diffract plus 소프트웨어를 사용하여 분석을 수행하였다. PXRD 데이터 파일을 피크 검색 전에 처리하지 않았다. EVA 소프트웨어의 피크 검색 알고리즘을 사용하여, 임계값 1로 선택된 피크를 사용하여 예비 피크 할당을 수행하였다. 유효성을 보장하기 위해, 수동으로 조정하였고; 자동 할당의 출력을 시각적으로 확인하고, 피크 위치를 피크 최대값에 대해 조정하였다. 3% 이상의 상대 강도를 갖는 피크를 일반적으로 선택하였다. 분석되지 않거나 노이즈와 일치하는 피크는 선택하지 않았다. USP에 명시된 PXRD의 피크 위치와 관련된 일반적인 오차는 최대 ± 0.2° 2θ(USP-941)이다. 결정 크기 및 형태 변화에 따라 상대적 피크 높이의 약간의 변화가 예상된다. 특징적 x-선 분말 회절 패턴은 도 1에 제공된다. 이러한 도면의 PXRD 데이터는 하기에 추가로 기재되어 있다.
[표 A]
[표 B]
실시예 4, 하이드로클로라이드 염
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 하이드로클로라이드 염(4, 하이드로클로라이드 염)
에틸 아세테이트(40 mL) 중의 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(4.0 g, 9.1 mmol)의 현탁액을 약 50℃로 가온하고, 이후 1,4-다이옥산 중의 염화 수소 용액(4 M; 2.5 mL, 10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 이어서, 이를 여과하고, 필터 케이크를 2회 따뜻한 에틸 아세테이트로 세척하여 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, 하이드로클로라이드 염을 백색 고체로 수득하였다. 수율: 4.1 g, 8.6 mmol, 94%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.90 (br d, J = 11 Hz, 1H), 9.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H), 9.26 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 9.24 - 9.10 (m, 1H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 5.23 (br d, JHF = 45.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.53 - 3.41 (m, 1H), 3.39 - 3.15 (m, 2H), 3.03 - 2.88 (m, 1H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.90 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Cu 방사선원이 장착된 Bruker AXS D4 Endeavor 회절계를 사용하여 본 실시예의 고체에 대해 분말 X-선 회절 분석을 수행하였다. 발산 슬릿은 0.6 mm로 설정되었으며 보조 광학 장치는 가변 슬릿을 사용하였다. 회절된 방사선을 PSD-Lynx Eye 검출기에 의해 검출하였다. X-선 튜브 전압 및 암페어 수를 각각 40 kV 및 40 mA로 설정하였다. 데이터를 0.020도의 단계 크기 및 0.3초의 단계 시간을 사용하여 3.0 내지 40.0 ° 2θ까지의 Cu 파장에서 Theta-2Theta 각도계에서 수집하였다. 샘플을 실리콘 저배경 샘플 홀더에 두고 제조하고 수집하는 동안 회전시켰다. 데이터를 Bruker DIFFRAC Plus 소프트웨어를 사용하여 수집하고 EVA diffract plus 소프트웨어를 사용하여 분석을 수행하였다. 특징적 x-선 분말 회절 패턴은 도 2에 제공된다.
실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염(4, p-톨루엔설포네이트 염)
에틸 아세테이트(40 mL) 중의 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(4.0 g, 9.1 mmol)의 현탁액을 약 50℃로 가온하고, 이후 p-톨루엔설폰산 일수화물(1.9 g, 10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 생성된 덩어리 진 고체를 스패출러로 부수고, 현탁된 고체를 1시간 동안 실온에서 격렬히 교반하였다. 여과하여 필터 케이크를 제공하고, 이를 2회 따뜻한 에틸 아세테이트로 세척하여 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염을 백색 고체로 수득하였다. 수율: 5.3 g, 8.7 mmol, 96%. LCMS m/z 439.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.28 (s, 2H), 9.24 - 9.03 (br m, 2H), 8.98 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d, JHF = 45.1 Hz, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.43 - 3.17 (m, 2H), 2.98 - 2.85 (m, 1H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06 - 1.85 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염의 결정화
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염(4, p-톨루엔설포네이트 염)
실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염(19.1 g, 31.3 mmol)을 물 및 에탄올의 혼합물(9:1, 300 mL)로 처리한 후에, 용액을 수득할 때까지 히트 건으로 최소로 가온하였다. 이를 실온으로 밤새 냉각한 후에, 추가적 24시간 동안 교반하였고, 이후 용매 비를 에탄올(35 mL)의 첨가에 의해 약 4:1 물 / 에탄올로 조정하였다. 생성된 혼합물을 85℃로 가열하여 용액을 수득하고, 이를 실온으로 3시간에 걸쳐 냉각한 후에, 실온에서 밤새 교반하였다. 여과를 통해 침전물을 수집하여 고체를 수득하고, 이를 질소 블리드를 갖추고 40℃로 예열된 진공 오븐에서 건조하였다. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염을 백색 분말로 수득하였다. 수율: 11.8 g, 19.3 mmol, 62%. LCMS m/z 439.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.27 (s, 2H), 9.13 (br s, 2H), 8.99 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.11 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.24 (br d, JHF = 45.1 Hz, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.18 (m, 2H), 2.92 (dd, J = 11.9, 11.8 Hz, 1H), 2.37 - 2.22 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.08 - 1.84 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
이 물질의 대부분(11.6 g)을 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염의 또 다른 샘플(7.4 g)과 합하고; 개별적 샘플은 분말 X-선 회절 분석시 동일한 회절 패턴을 나타냈다. 2개의 샘플의 혼합물은 솜털 같은 백색 고체(19.0 g)를 제공하였다.
Cu 방사선원(K-α 평균)이 장착된 Bruker AXS D8 Endeavor 회절계를 사용하여 본 실시예의 고체에 대해 분말 X-선 회절 분석을 수행하였다. 발산 슬릿을 15 mm 연속 조명으로 설정하였다. 회절된 방사선을 PSD-Lynx Eye 검출기로 검출하였고, 이때 검출기 PSD 개방도는 3.00도로 설정하였다. X-선 튜브 전압 및 암페어 수를 각각 40 kV 및 40 mA로 설정하였다. 데이터를 0.01도의 단계 크기 및 1.0초의 단계 시간을 사용하여 3.0 내지 40.0 ° 2θ까지의 Cu 파장에서 Theta-Theta 각도계에서 수집하였다. 산란 방지 스크린을 1.5 mm의 고정 거리로 설정하였다. 수집하는 동안 샘플을 15/분으로 회전시켰다. 샘플을 실리콘 저배경 샘플 홀더에 두고 제조하고 수집하는 동안 회전시켰다.
Bruker DIFFRAC Plus 소프트웨어를 사용하여 데이터를 수집하고, EVA 회절 플러스 소프트웨어를 사용하여 분석을 수행하였다. PXRD 데이터 파일을 피크 검색 전에 처리하지 않았다. EVA 소프트웨어의 피크 검색 알고리즘을 사용하여, 임계값 1로 선택된 피크를 사용하여 예비 피크 할당을 수행하였다. 유효성을 보장하기 위해, 수동으로 조정하였고; 자동 할당의 출력을 시각적으로 확인하고, 피크 위치를 피크 최대값에 대해 조정하였다. 3% 이상의 상대 강도를 갖는 피크를 일반적으로 선택하였다. 분석되지 않거나 노이즈와 일치하는 피크는 선택하지 않았다. USP에 명시된 PXRD의 피크 위치와 관련된 일반적인 오차는 최대 ± 0.2° 2θ(USP-941)이다. 결정 크기 및 형태 변화에 따라 상대적 피크 높이의 약간의 변화가 예상된다. 특징적 x-선 분말 회절 패턴은 도 3에 제공된다. 이러한 도면의 PXRD 데이터는 하기에 추가로 기재되어 있다.
[표 C]
[표 D]
실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염의 대안적 합성
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염(4, p-톨루엔설포네이트 염)
아세토니트릴(90.0 mL) 중의 C14(9.47 g, 17.6 mmol), p-톨루엔설폰산 일수화물(98%, 3.58 g, 18.4 mmol) 및 물(4.74 mL, 263 mmol)의 용액을 90℃로 10분에 걸쳐 가열하였다(내부 반응 온도 76℃). 12시간 후에, 반응 혼합물을 25℃로 10분에 걸쳐 냉각하고 25℃에서 밤새 유지하였다. 이어서, 이를 10℃로 냉각하고 여과하였다. 필터 케이크를 10℃로 냉각한 95:5 아세토니트릴 / 물 혼합물 1 부피로 2회 헹궈 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드, p-톨루엔설포네이트 염을 황색 고체로 수득하였다. 수율: 8.30 g, 13.6 mmol, 77%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.27 (s, 2H), 9.17 - 9.07 (br s, 2H), 8.97 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.47 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 7.11 (br d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d, JHF = 45.1 Hz, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.19 (m, 2H), 2.90 (dd, J = 11.8, 11.8 Hz, 1H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06 - 1.84 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염의 단결정 X-선 구조 결정
톨루엔 및 물(1:1)의 느린 확산과 함께 에탄올(3 mL)로부터 실시예 4, p-톨루엔설포네이트 염(10 mg)을 결정화하여 X-선 구조 결정에 적합한 결정을 수득하였다.
단결정 X-선 분석
데이터 수집을 -100℃에서 Bruker D8 Venture 회절계에서 수행하였다. 데이터 수집은 오메가 및 파이 스캔으로 구성되었다.
구조를 비대칭 단위당 2개의 분자로서 삼사정계 공간군 P1의 SHELX 소프트웨어 제품군을 사용하여 고유 위상 조정에 의해 해석하였다. 이어서, 구조를 풀 매트릭스 최소 제곱법에 의해 보정하였다. 모든 비수소 원자를 이방성 변위 파라미터를 사용하여 발견하고 보정하였다.
질소 및 산소 상에 위치한 수소 원자는 푸리에 차이 맵에서 발견되고 거리를 제한하면서 보정하였다. 나머지 수소 원자를 계산된 위치에 배치하고 운반 원자에 타도록 했다. 최종 보정은 모든 수소 원자에 대한 등방성 변위 파라미터를 포함하였다.
확인한 토실레이트 염의 결정화
채널에 있는 에탄올의 낮은 점유율 및 적층판으로 관찰된 결정질 프리즘 입자의 한계 품질로 인해 보정이 어렵다(PLM 그림 참조). NMR 실험을 통해 확인된 에탄올 혼입을 기반으로 각각 0.33의 점유율로 두 개의 에탄올 독립체로 분자 모델을 보정하였다.
가능성 방법(Hooft 2008)을 사용한 절대 구조 분석은 PLATON(Spek 2010)을 사용하여 수행하였다. 제출한 샘플이 거울상 이성질체적으로 순수하다고 가정하면, 결과는 절대 구조가 올바르게 할당되었음을 나타낸다. 이 방법은 구조가 올바르게 할당될 확률이 100%라고 계산한다. Hooft 파라미터는 Esd가 (4)인 0.075로 보고되고 Parson 파라미터는 Esd가 (5)인 0.087로 보고된다.
C18_C21 / C40_C43에서의 표적 절대 구성은 비대칭 단위당 두 동일한 분자에 대해 (-S)_(-S) / (-S)_(-S)로 확인되었다.
적절한 결정, 데이터 수집 및 보정 정보는 표 D1에 요약되어 있다. 원자 좌표, 결합 길이, 결합 각 및 변위 파라미터는 표 D2 내지 D4에 나열되어 있다.
소프트웨어 및 참고문헌
[표 D1]
[표 D2]
[표 D3]
[표 D4]
실시예 5
2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(5)
단계 1. 벤질 (3R,4R)-3-[(tert-부톡시카본일)아미노]-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C15)의 합성
벤질 클로로포르메이트(258 mg, 1.51 mmol)를 테트라하이드로푸란(15 mL) 및 탄산 나트륨 수용액(1 M; 2.75 mL, 2.75 mmol) 중의 tert-부틸 [(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]카바메이트(300 mg, 1.37 mmol)의 0℃ 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 물(20 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(50 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하여 C15를 백색 고체로 제공하였다. 수율: 485 mg, 1.38 mmol, 정량적. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.43 - 7.28 (m, 5H), 5.14 (AB quartet, JAB = 12.3 Hz, ΔνAB = 14.2 Hz, 2H; 다운필드 이중항은 넓어졌다), 4.83 - 4.53 (m, 2H), 3.87 - 3.33 (m, 4H), 2.06 - 1.75 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
단계 2. 벤질 (3R,4R)-3-아미노-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트, 하이드로클로라이드 염(C16)의 합성
메탄올(6 mL) 중의 C15(485 mg, 1.38 mmol)의 용액을 염화 수소(에틸 아세테이트 중의용액; 12 mL)로 처리하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반한 후에, 진공에서 농축하여 C16을 백색 고체로 수득하였다. 수율: 370 mg, 1.28 mmol, 93%. 1H NMR (400 MHz, 중수소 옥사이드) δ 7.50 - 7.39 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.93 - 4.71 (m, 1H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 4.42 - 4.27 (m, 1H), 4.24 - 3.98 (m, 1H), 3.51 - 3.39 (m, 1H), 3.21 - 2.99 (m, 2H), 2.29 - 2.16 (m, 1H), 1.86 - 1.71 (m, 1H).
단계 3. 벤질 (3R,4R)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C17)의 합성
N,N-다이메틸포름아미드(8 mL) 중의 P1(170 mg, 0.502 mmol), C16(145 mg, 0.502 mmol) 및 N,N-다이이소프로필에틸아민(0.263 mL, 1.51 mmol)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU; 287 mg, 0.755 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18℃에서 2시간 동안 교반하고, 이후 이를 C16을 사용하여 수행한 2개의 유사한 반응의 생성물(42.7 mg, 0.148 mmol 및 171 mg, 0.592 mmol)과 합하고 물(50 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(50 mL)을 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 감압 하에 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(구배: 페트롤륨 에터 중 0% 내지 100% 에틸 아세테이트) 후에, C17을 황색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 540 mg, 0.943 mmol, 76%. LCMS m/z 573.1 [M+H]+.
단계 4. 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(5)의 합성
에탄올(20 mL) 중의 C17(300 mg, 0.524 mmol) 및 탄소 상의 10% 팔라듐(300 mg)의 혼합물을 수소 벌룬 하에 2시간 동안 15℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 C17을 사용하여 수행한 2개의 유사한 반응의 생성물(200 mg, 0.349 mmol 및 40 mg, 70 μmol)과 합한 후에, 이를 규조토 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를 역상 HPLC(컬럼: Agela Durashell C18, 5 μm; 이동상 A: 수중 0.05% 암모늄 하이드록사이드; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 30% 내지 50% B)을 사용하여 정제하여 2-{5-[(3-에톡시피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드를 백색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 174 mg, 0.397 mmol, 42%. LCMS m/z 439.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.28 - 7.23 (m, 1H, 추정됨; 용매 피크로 인해 부분적으로 모호함), 7.17 (br d, J = 8 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.86 - 4.66 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd, J = 12.3, 3.4, 3.4 Hz, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.86 - 2.75 (m, 2H), 2.11 - 1.81 (m, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 6
2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(6)
단계 1. 벤질 (3R,4R)-3-{[(2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}피리미딘-5-일)카본일]아미노}-4-플루오로피페리딘-1-카복시레이트(C18)의 합성
N,N-다이메틸포름아미드(2 mL) 중의 P2(50 mg, 0.14 mmol), C16(40.5 mg, 0.140 mmol) 및 N,N-다이이소프로필에틸아민(73.3 μL, 0.421 mmol)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU; 80 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18℃에서 2시간 동안 교반한 후에, 이를 C16를 사용하여 수행한 유사한 반응의 생성물(24.3 mg, 84.2 μmol)과 합하고, 이어서 물(20 mL)로 급냉하고 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 염화 나트륨 수용액(50 mL)으로 세척하고 황산 나트륨으로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 분취 박막 크로마토그래피(용리제: 에틸 아세테이트)를 통한 잔사의 정제로 C18을 황색 고체로 수득하였다. 합한 수율: 90 mg, 0.152 mmol, 68%. LCMS m/z 591.1 [M+H]+.
단계 2. 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드(6)의 합성
에탄올(20 mL) 중의 C18(70 mg, 0.12 mmol) 및 탄소 상의 10% 팔라듐(100 mg)의 혼합물을 수소 벌룬 하에 2시간 동안 15℃에서 교반하였고, 이후 이를 C18을 사용하여 수행한 유사한 반응의 생성물(20 mg, 34 μmol)과 합하고 규조토 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축한 후에, 잔사를 역상 HPLC(컬럼: Agela Durashell C18, 5 μm; 이동상 A: 수중 0.05% 암모늄 하이드록사이드; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 30% 내지 50% B)를 사용하여 정제하고; 2-{5-[(3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시]피리딘-3-일}-N-[(3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일]피리미딘-5-카복스아미드를 백색 고체로 수득하였다. 수율: 14.2 mg, 31.1 μmol, 20%. LCMS m/z 457.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.09 (br m, 1H), 7.06 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 4.86 - 4.68 (m, JHF = 47.2 Hz, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd, J = 12.2, 3.5, 3.4 Hz, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 2H), 2.11 - 1.82 (m, 2H), 1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 7 내지 25
[표 1]
[표 2]
실시예 D1 내지 D3
표 3은 중수소화된 에틸 기를 포함하는 3가지 예언적 예를 포함한다. 이들 화합물의 제조는 당업계의 통상적 기술을 사용하여 상기 기재된 방법의 변형을 사용할 것이다. 실시예 D1은 실시예 4에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 중간체 P3 및 P4로부터 제조될 수 있다. 실시예 D2 및 D3은 각각 실시예 2 및 1에 대해 사용된 방법을 통해 P2의 중수소화 버전으로부터 제조될 수 있다.
[표 3]
약리학적 데이터
하기 프로토콜은 당연히 당업자에 의해 변경될 수 있다.
인간 DGAT2(hDGAT2) 구축물의 생성
N-말단 FLAG 태그(아미노산 서열 AspTyrLysAspAspAspAspLys를 갖는 옥타펩티드)를 사용하여 hDGAT2에 대한 구축물을 생성하였다. FLAG-태깅된 hDGAT2 구축물의 경우, hDGAT2에 대한 cDNA를 Genscript에서 맞춤 합성하고 BamHI/XhoI 제한 효소를 사용하여 pFastBac1 벡터(Invitrogen)에 클로닝하여 N-말단 FLAG-태깅된 pFastBac1-FLAG-hDGAT2 구축물(아미노산 1 내지 388)을 생성하였다. 양방향으로 서열분석함으로써 구축물을 확인하였다.
DGAT2 발현 및 DGAT2 막 분획의 제조
제조업체의 프로토콜에 따라 Bac-to-Bac 배큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen)을 사용하여 FLAG-태깅된 hDGAT2에 대한 재조합 배큘로바이러스를 SF9 곤충 세포에서 생성하였다. hDGAT2의 발현을 위해, Sf900II 배지에서 성장시킨 SF9 세포(20 L)를 Wave Bioreactor System 20/50P 웨이브 백(GE Healthcare)에서 1의 감염 다중도로 hDGAT2 배큘로바이러스로 감염시켰다. 감염 40시간 후에, 세포를 5,000 x g에서 원심분리에 의해 채취하였다. 세포 펠릿을 포스페이트 완충된 식염수(PBS)에 재현탁하여 세척하고 5,000 x g에서 원심분리하여 수집하였다. 세포 페이스트를 액체 N2에서 급속 동결하고 필요할 때까지 -80℃에서 보관하였다. 하기 모든 작업을, 달리 명시되지 않는 한, 4℃에서 수행하였다. 세포를 세포 페이스트 1 g 당 3 mL 완충제의 비율로 1 mM 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA) 및 완전 프로테아제 억제제 칵테일(Roche Diagnostics)을 포함하는 용해 완충제(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 250 mM 수크로스)에 재현탁시켰다. 세포를 다운스 균질화기로 용해시켰다. 세포 파편을 1,000 x g에서 20분 동안 원심분리하여 제거하고, 상청액을 100,000 x g에서 1시간 동안 원심분리하였다. 디켄팅하기 전에, 생성된 펠릿을 초원심분리기 튜브를 매우 찬 PBS로 상단까지 채워서 3회 헹궜다. 세척된 펠릿을 원래 세포 페이스트 1 g당 완충제 1 mL의 비율로 8 mM 3-[(3-콜아미도프로필)다이메틸암모니오]-1-프로판설포네이트(CHAPS)를 함유하는 용해 완충제에서 1시간 동안 부드럽게 교반하면서 재현탁하고 1시간 동안 100,000 x g에서 다시 원심분리하였다. 생성된 상청액을 분취하고 액체 N2에서 급속 동결하고 사용할 때까지 -80℃에서 보관하였다.
시험관내 DGAT2 분석 및 DGAT2 억제제에 대한 IC
50
값 결정
IC50 값을 결정하기 위해, 총 부피 20 μL의 384-웰 백색 폴리프로필렌 플레이트(Nunc)에서 반응을 수행하였다. 100% DMSO에 용해되고 각 웰의 바닥에 스폿팅된 화합물 1 L에 0.04% 소 혈청 알부민(BSA)(무지방산, Sigma Aldrich) 5 μL를 첨가하고 혼합물을 실온에서 15 분 동안 배양하였다. hDGAT2 막 분획을 100 mM Hepes-NaOH, pH 7.4, 200nM 메틸 아라키돈일 플루오로포스포네이트를 함유하는 20 mM MgCl2(Cayman Chemical; 아르곤 기체 하에 에틸 아세테이트 스톡 용액으로부터 건조시키고 5 mM 스톡으로서 DMSO에 용해됨)에 희석하였다. 10 μL의 이러한 효소 작업 용액을 플레이트에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 배양을 계속하였다. DGAT2 반응을, 12.5% 아세톤에 용해된 30 μM [1-14C]데카노일-CoA(Perkin Elmer에 의해 맞춤 합성됨, 50 mCi/mmol) 및 125 μM 1,2-다이데카노일-sn-글리세롤(Avanti Polar Lipids)을 함유하는 4 μL 기질의 첨가에 의해 개시하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 배양하고 5 μL의 1% H3PO4의 첨가에 의해 반응을 중단시켰다. 45 μL MicroScint-E(Perkin-Elmer)의 첨가 후에, 플레이트를 Top Seal-A 커버(Perkin-Elmer)로 밀봉하고 HT-91100 마이크로플레이트 오비탈 쉐이커(Big Bear Automation, Santa Clara, CA)를 사용하여 기질 및 생성물의 상 분할을 달성하였다. 플레이트를 Allegra 6R 원심분리기(Beckman Coulter)에서 1분 동안 2,000 xg에서 원심분리한 후에, 1450 Microbeta Wallac Trilux 섬광 계수기(Perkin Elmer)에서 판독하기 전에, 새 커버로 다시 밀봉하였다. DGAT2 활성은 상부 유기상에서 생성된 생성물 [14C]트라이데카노일글리세롤을 정량화하여 측정하였다.
DGAT2의 완전 억제에 대한 50 μM의 ((R)-1-(2-((S)-1-(4-클로로-1H-피라졸-1-일)에틸)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일)피페리딘-3-일)(피롤리딘-1-일)메탄온(WO 2013150416, 실시예 196-A)을 사용하여 수득한 배경 활성을 모든 반응에서 제외하였다. 억제제를 11가지 다른 농도에서 시험하여 각 화합물에 대한 IC50 값을 생성하였다. 사용된 11가지 억제제 농도는 전형적으로 50, 15.8, 5, 1.58, 0.50, 0.16, 0.05, 0.016, 0.005, 0.0016 및 0.0005 μM을 포함하였다. 데이터를 억제제 농도에 대한 억제의 백분율로서 플롯팅하였고 식 y = 100/[1 + (x/IC50)z]에 적합하였고, 이때 IC50은 50% 억제에서의 억제제의 농도이고, z는 힐 기울기(변곡점에서 곡선의 기울기)이다.
하기 표 4는 전술한 분석에 따른 DGAT2 억제에 대한 실시예의 IC50 값을 제공한다. 결과는 표시된 반복 횟수(n)와 함께 기하 평균 IC50 값으로 보고된다.
[표 4]
이때, 본원에 인용된 WO2018033832의 실시예를 하기 표 4A에 나타냈다.
[표 4A]
인간 간세포에서 DGAT2 억제제에 대한 IC
50
값 측정
세포 기반 환경에서 DGAT2 억제제의 효과를 평가하기 위해, 냉동보존된 인간 간세포(Lot DOO, Celsis, Baltimore, MD)를 해동하고 제조업체의 지침에 따라 유형 I 콜라겐-코팅된 플레이트에 플레이팅하였다. 18시간의 밤새 회복 기간 후에, 세포를 250 μg/mL Geltrex Basement Membrane Matrix(Thermo Fisher)를 포함하는 배지로 오버레이하였다. 다음 날, 배지를 흡인하고 400 μM 나트륨 도데카노에이트(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 및 2 mM GlutaMAX(Thermo Fisher)를 함유하는 무혈청 Williams 배지 E(Thermo Fisher)로 교체하였다. 45분 후에, 선택적 DGAT1 억제제(실시예 2, WO2009016462, 25% DMSO, 75% PBS에서 100X 스톡으로 제조)를 내인성 DGAT1 활성을 완전히 억제하는 최종 농도(3 M)로 모든 웰에 첨가하였다. 이어서, DGAT2 억제제를 목적하는 최종 농도로 첨가하였다. 15분 사전 배양 후에, 0.2 μCi [14C(U)]-글리세롤(Perkin Elmer)을 각 웰에 첨가하고, 이어서 3시간 동안 배양하였다. 이 시점에서 배지를 제거하고, 세포를 이소프로필 알코올:테트라히드로푸란(9:1)에서 15분 동안 오비탈 진탕을 통해 세포를 용해시킨 후에, 10분 동안 3000 rpm에서 원심분리하였다. 방사성 표지된 지질을 헥산:다이에틸 에터:빙초산(75:23:2, v/v/v)으로 이루어진 용매를 사용하여 박층 크로마토그래피에 의해 용매 시스템을 사용하여 분리하였다. 분리 후에, 방사성 표지된 지질을, Typhoon 9500 인형상화 시스템(GE)을 사용하여 시각화하였다. 반 최고치 억제 농도(IC50 값)를, GraphPad Prism(GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA)을 사용하여 % 억제 투여량 반응 곡선의 비선형 회귀 분석에 의해 결정하였다.
하기 표 5는 전술된 분석에 따라 인간 간세포에서 DGAT2의 억제에 대한 선택된 실시예의 IC50 값을 제공한다. 결과는 표시된 반복 횟수(n)와 함께 기하 평균 IC50 값으로 보고된다.
[표 5]
혈장 및 간 트라이글리세리드 수준에 대한 DGAT2 억제제의 생체내 효과
래트 서구 식단 모델을 생체내 혈장 트라이글리세리드 생성 및 간 트라이글리세리드 함량에 대한 DGAT2 억제제 처리의 효과를 평가하는 데 사용하였다. 수컷 Sprague-Dawley 래트를 표준 실험실 조건 하에 12시간 명암 주기(06:00에 조명을 켬)로 사육하였다. 연구 시작 2주 전에, 동물에게 고 지방, 고 수크로스, 고 콜레스테롤 식단(D12079b, Research Diets, New Brunswick, NJ)을 제공하였다. 이러한 식단은 탄수화물에서 kcal의 약 43%의 및 지방에서 kcal의 약 41%를 제공한다. 실시예 4를, pH 7.0 내지 7.5의 탈이온수 중의 0.5% 메틸셀룰로스 용액(10 mL/kg 투여 부피)으로 경구 투여하였다(메틸셀룰로스는 Sigma Aldrich, St. Louis, MO에서 구입). 비히클-처리된 동물은 pH 7.0 내지 7.5의 탈이온수 단독 중의 0.5% 메틸셀룰로스의 수용액을 제공받았다. 각 처리는 3, 10, 30 및 100 mg/kg 에서 7일 동안 08:00 및 16:00에 1일 2회 경구 투여되었으며, 1일 총 투여량은 6, 20, 60 및 200 mg/kg/일이었다. 제8에, 동물에게 10:00에 비히클 또는 실시예 4를 투여하였고 투여 2시간 후에 희생시켰다. 래트를 이산화 탄소 질식으로 희생시키고 측면 꼬리 정맥을 통해 혈액을 수집하였다. 혈장 TG 수준은 제조업체의 지침에 따라 Roche Hitachi Chemistry 분석기를 사용하여 결정하고(Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, IN), 데이터를 GraphPad Prism(GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA)을 사용하여 분석하였다. 간 트라이글리세리드의 결정을 위해 희생된 간을 수집하고, 조직을 즉시 액체 질소에서 동결하고 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다. 간의 트라이글리세리드 수준을 평가하기 위해, 알루미늄 호일로 싼 간 절편을 액체 질소 욕조의 알루미늄 열 블록 상에서 망치로 분쇄하였다. 간 조직을 분쇄하면 균일한 분말이 생성하였다. 균질화 완충제(Tris pH 7.4, 98.9 ml 0.9% NaCl 및 100 μl Triton X 100)를 사용하기 전에 교반 플레이트에서 10분 동안 혼합하였다. 약 100 mg 균질한 간 조직의 샘플 중량을 칭량하고 1 mL의 균질화 완충제와 함께 Lysing Matrix D 튜브(MP Biomedicals, 카탈로그 번호 6913-100)에 넣었다. 이어서, 모든 모든 샘플을 2분 동안 또는 조직이 균질화될 때까지 FastPrep FP120(MP Biomedicals, 카탈로그 번호 6001-120)에 넣었다. 이어서, 모든 샘플을 10,000 g에서 30초 동안 회전시켜 균질화로부터 거품을 제거하였다. 50μl 샘플을 450 μl Dulbecco 포스페이트-완충된 식염수(DPBS)와 함께 멸균 혼합 플레이트로 옮겨 1:10 희석액을 제조하였다. 새로운 샘플의 재현탁 후에, 모든 샘플을 Siemens Advia XPT Clinical 분석기용 샘플링 튜브로 옮겼다. 트라이글리세리드 분석을 흡광도를 통해 수행하였고 mg/dl로 보고하였다. 이어서, 트라이글리세리드를 Microsoft Excel에서 조직 그램에 대하여 정규화하였다. 도 4 및 5에 요약된 바와 같이, 실시예 4를 투여받은 래트에서 혈장(최대 약 70%) 및 간(최대 48%) 트라이글리세리드의 투여량 의존적 감소가 있었다. 순환 트라이글리세리드 반응의 경우, 실시예 4를 사용하여 관찰한 생성된 수준은 음식물 공급받은 비히클 동물의 것에 근접하였다.
도 4는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 혈장 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다중 투여량 효과를 보여주고, 이때 실시예 4의 최종 투여량 2시간 후에 측부 꼬리 정맥에서 채취한 혈액에서 혈장 트라이글리세리드 수준을 결정하였다. 데이터는 8 마리의 동물의 평균 ± 표준 편차이다. 비히클에 대한 군 평균 간의 차이는 1-원 ANOVA, 이어서 Dunnett의 다중 비교 시험에 의해 수행되었다. **** = p<0.0001(서구 식단 비히클 동물과 비교).
도 5는 서구 식단 공급받은 Sprague-Dawley 래트의 간 트라이글리세리드에 대한 실시예 4의 다중 투여량 효과를 보여주고, 이때 실시예 4의 최종 투여 2시간 후에 측부 꼬리 정맥에서 채취한 혈액에서 간 트라이글리세리드 수준을 측정하였다. 데이터는 8마리 동물의 평균 ± 표준 편차이다. 서구 식단 비히클에 대한 군 평균 간의 차이는 1-원 ANOVA, 이어서 Dunnett의 다중 비교 시험에 의해 수행되었다. *=p<0.05, *** = p<0.001, ****=p<0.0001(서구 식단 비히클 동물과 비교).
pKa의 결정
예시된 화합물은 DGAT2의 염기성 억제제로 설계되었다. 선택한 실시예의 pKa는 문헌[Shalaeva, M., et al. 2008, J. Pharm. Sci., 97, 2581-2606]에 기재된 모세관 전기영동법에 따라 Analiza, Inc.(Cleveland, OH)에서 결정하였다. 하기 표 6은 실시예에 대해 결정된 가장 염기성 pKa를 보여주며 반복 횟수(n)와 함께 평균으로 제시된다. 염기성 화합물은 생체 내 분포의 더 큰 부피와 관련이 있다(문헌[Obach, R. S., et al. 2009, Drug Metab. Dispos., 36, 1385-1405; Smith, D. A., et al. 2015, J. Med. Chem., 58. 5691-5698]).
[표 6]
인간 간세포의 고유 클리어런스 결정(릴레이 방법)
고유 클리어런스(CLint) 측정을 위해, 간세포 릴레이 방법을 사용하였다(문헌[Di, L., et al. 2012, Drug Metab. Dispos., 40, 1860-1865] 및 [Di, L., et al. 2013, Drug Metab. Dispos., 41, 2018-2023]). 동결보존된 인간 간세포(BioreclamationIVT의 Lot DCM)를 사용하였다. 해동 시 간세포를 Hepes 및 Na2CO3가 보충된 Williams 배지 E(맞춤 포뮬라 번호 91-5233EA; Gibco, Grand Island, NY)에 재현탁하였다. 트리판 블루(trypan blue) 배제 방법을 사용하여 세포 수를 세고 5*105 세포/mL를 함유하는 24-웰 간세포 플레이트에 1 μM의 최종 농도(다이메틸 설폭사이드, 최종 농도 0.025%; 메탄올, 최종 농도 0.1125%)에서 0.50 mL의 최종 배양 부피에서 시험 화합물을 스파이킹하였다. 플레이트를 가습 인큐베이터에서 150 rpm에서 4시간 동안 95% 공기/5% CO2에서 75% 상대 습도에서 37℃에서 배양하였다. 0 및 4시간에, 25 μL의 간세포 현탁액을 배양에서 제거하고 50 μL의 매우 찬 아세토니트릴(내부 기준물로서 메토프롤롤, 인도메타신 및 테르페나딘 함유)에 첨가하여 반응을 급냉하였다. 샘플을 실온에서 10분 동안 3000 rpm(1439 x g)에서 원심분리하고(Eppendorf, Hauppauge, NY), 50 μL의 상청액을 깨끗한 플레이트로 옮기고 완전히 건조시키고 액체 크로마토그래피/탠덤 질량 분석기(LC-MS/MS) 분석 전에 재구성하였다. 배양 플레이트에 남아있는 간세포 현탁액을 원심분리하였다(3000 rpm, 1439 x g, 10분, 실온). 300 μL의 상청액을 깨끗한 24-웰 플레이트로 옮기고 다음 릴레이 실험까지 -80℃에서 보관하였다. 제2 릴레이 실험을 위해, 상청액 플레이트를 먼저 실온으로 30분 동안 가온한 후에, 37℃로 30분 동안 가온하고, 간세포를 샘플에 첨가하여 최종 세포 밀도가 5*105 세포/mL가 되도록 했다. 플레이트를 37℃에서 4시간 동안 배양하고 샘플링하고 상기에 기재된 바와 같이 처리하였다. 5개의 릴레이를 수행하여 총 20시간의 배양 시간을 제공하였다(샘플링 지점: 0, 4, 8, 12, 16 및 20시간). LC-MS/MS 분석에 의해 각 시점에서 결정한 시험 화합물의 농도를 사용하여 고유 클리어런스를 계산하였다.
하기 표 7은 상기에 기재된 방법에 의해 결정한 바와 같이 선택한 실시예에 대한 고유 클리어런스를 보여준다. 데이터는 평균 +/- 표준 편차로 표시되며 반복 횟수(n)가 표시된다.
[표 7]
인간 간세포에서 고유 클리어런스의 고 처리량 측정
고 처리량 인간 간세포 안정성 분석을 384-웰 포맷으로 수행하였다(문헌[Di, L., et al. 2012, Eur. J. Med. Chem., 57, 441-448]). BioreclamationIVT(Baltimore, MD, Lot DCM)에서 10명의 기증자에서 모은 냉동보존 인간 간세포를 구입하였다. 동결보존된 인간 간세포를 해동하고 HEPES 및 Na2CO3이 보충된 Williams E 배지(WEM GIBCO, 맞춤 포뮬라 번호 A28859EA)에 재현탁하였다. 트리판 블루 배제 방법을 사용하여 세포를 계수하였다. Multidrop(등록상표) 액체 디스펜서(Multidrop DW, Thermo Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 간세포 현탁액을 384-웰 플레이트에 첨가하였다. 셀 플레이트를 덮고 2개의 6-포지션 Mecour 열교환기가 장착된 Sciclone(등록상표) ALH 3000 워크스테이션(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA)에 옮겼다. 시험 화합물을 완충제로 Sciclone(등록상표) 상에서 희석하고 간세포에 첨가하였다. 최종 배양물은 0.01% DMSO가 포함된 15 μL 총 부피에 5*105 세포/mL 및 1 μM 시험 화합물을 함유하였다. 배양을 37℃에서 수행하였다. 다양한 시점(0, 3, 10, 30, 60, 120, 240분)에서, 내부 기준물을 함유하는 찬 아세토니트릴로 반응을 급냉하였다(실시예 39A, WO1999/57125). 샘플을 4℃에서 5분 동안 3000 rpm에서 원심분리하였다(Eppendorf, Hauppauge, NY). BioMek(등록상표) FX 액체 처리기(Beckman Coulter, Inc. Danvers MA)를 사용하여 상청액을, LC-MS/MS 분석 전에 밀봉한 물이 첨가된 새로운 플레이트로 옮겼다. 하기 표 8은 상기에 기재된 고 처리량 인간 간세포 분석에서 결정된 선택한 실시예에 대한 고유 클리어런스를 보여준다. 데이터는 평균 +/- 표준 편차로 표시되며 반복 횟수(n)가 표시된다.
[표 8]
인간 간 마이크로솜의 고유 클리어런스 결정
고 처리량 인간 마이크로솜 안정성 분석을 384-웰 포맷으로 수행하였다(문헌[Di, L., et al. 2012, Eur. J. Med. Chem., 57, 441-448]). 모든 액체 취급 및 배양을 하나의 3-포지션 Mecour 가열 데크 포지션이 장착된 Biomek FX(Beckman Coulter, Inc., Indianapolis, IN)로 수행하였다. 50명의 기증자에서 모은 인간 간 마이크로솜(Lot: HLM-103)을 BD Biosciences(Bedford, MA)에서 구입하였다. 각 배양에는 시험 화합물(1 μM), 인간 간 마이크로솜(0.806 mg/mL 단백질 농도에 해당하는 0.25 μM CYP 단백질), NADPH 20.9 mM, MgCl2(3.3 mM) 및 칼륨 포스페이트 완충제(pH 7.4에서 100 mM)이 포함되었다. 최종 반응 부피는 0.1% DMSO를 포함하여 45 μL였다. 배양을 37℃에서 수행하였다. 다양한 시점(예를 들어 1, 4, 7, 12, 20, 25, 45 및 60분)에서 질량 분석(MS) 내부 기준물이 있는 찬 아세토니트릴(실시예 39A, WO1999/57125)을 첨가하여 반응을 급냉하였다. 플레이트를 4℃에서 3000 rpm에서 1분 동안 원심분리하였다(Sorvall RC 3C Plus, Thermo Scientific, Waltham, MA). 플레이트를 밀봉한 후에, LC-MS/MS를 사용하여 분석하였다. NADPH 보조인자를 첨가하지 않고 동일한 방식으로 대조군 플레이트를 제조하여 임의의 비-CYP/FMO 촉매 작용 감소를 모니터링하였다. 하기 표 9는 상기에 기재된 인간 간 마이크로솜 분석에서 결정된 선택한 실시예에 대한 고유 클리어런스를 보여준다. 데이터는 평균 +/- 표준 편차로 표시되며 반복 횟수(n)가 표시된다.
[표 9]
다양한 매질에서의 열역학적 용해도 결정
활성 약학 성분의 용해도는 약물 개발 동안 생물학적 성능 및 제형의 용이성을 결정하는 중요한 특성이며, 높은 용해도가 바람직하다(문헌[Klein, S. 2010, The AAPS Journal, 12, 397-406; Di, L., et al 2012, Drug Disc. Today, 17. 486-495]). 열역학적 용해도를 표 10에 나타낸 바와 같이 다양한 생체 관련 매질에서 측정하였다. 결정질 고체의 시험 샘플(약 7 mg)을 관련 완충제 용액 1 mL가 포함된 바이알에서 합하고, 혼합물을 와동시켜 합하였다. 고체가 완전히 용해되면, 포화 용액을 수득할 때까지 와동시키면서 추가 고체를 첨가하였다. 포화 용액/고체 혼합물을 캡핑하고 하기와 같이 온도 순환에 적용시켰다: 25℃에서 1분; 40℃에서 8시간; 15℃에서 5시간; 및 25℃에서 12시간. 혼합물을 원심 여과 장치(0.22 μm PVDF 필터, MilliporeSigma, Milwaukee, WI)에서 13,000 rpm에서 여과하고, 여과액 중 시험 화합물의 농도를 3-점 표준 곡선을 참조하여 HPLC/UPLC에 의해 결정하였다. 포스페이트 완충된 식염수(PBS, pH 6.8, 50 mM 포스페이트 완충제, 250 mM NaCl). 모의 위액(SGN pH 1.2, USP 제조법). 공복 상태 모의 장액(FaSSIF, 3 mM 타우로콜산 나트륨, 대두 레시틴으로부터의 0.75 mM 인지질, 50 mM 포스페이트 완충제, NaCl로 250 mM로 조정된 이온 강도, pH 6.8) 및 섭식 상태 모의 장액(FeSSIF, 15 mM 타우로콜산 나트륨, 대두 레시틴으로부터의 3.75 mM 인지질, 144 mM 아세트산, 50 mM 포스페이트 완충제, NaCl을 사용하여 250 mM로 조정된 이온 강도, pH 6.8).
[표 10]
본원 전반에서 다양한 간행물이 참조된다. 이들 간행물의 전체 내용은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 인용된다.
본 발명의 범위 또는 사상을 벗어남이 없이 본 발명에서 다양한 수정 및 변형이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명의 다른 실시양태는 본원에 개시된 본 발명의 명세서 및 실시를 고려함으로써 당업자에게 명백할 것이다. 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 간주되어야 하며, 본 발명의 진정한 범위 및 사상은 하기 청구범위에 의해 표시된다.
Claims (32)
- 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
[화학식 I]
상기 식에서,
R1은 H 또는 플루오로이고,
R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H 및 (C1-C3)플루오로알킬로부터 선택되고,
R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, 플루오로 및 (C1-C3)플루오로알킬로부터 선택되되,
R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 중 1 또는 2개는 H가 아니다. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4 및 R5가 각각 독립적으로 H 및 (C1)플루오로알킬로부터 선택되고, R6, R7, R8 및 R9가 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 중 1 또는 2개는 H가 아닌, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4, R5, R6 및 R7이 H이고, R8 및 R9가 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R8 및 R9 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4, R5, R8 및 R9가 H이고, R6 및 R7이 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R6 및 R7 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4, R5, R6 및 R9가 H이고, R7 및 R8이 각각 독립적으로 H, (C1)플루오로알킬 및 플루오로로부터 선택되되, R7 및 R8 중 하나 이상이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9가 H이고, R7이 (C1)플루오로알킬 또는 플루오로인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제1항에 있어서,
R2, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9가 H이고, R7이 플루오로인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4S)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드;
2-(5-((3-에톡시-5-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3R,4R)-4-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드; 및
2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드
로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 화합물또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 화합물 2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드.
- 화합물 2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드 하이드로클로라이드.
- 화합물 2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-((3S,5S)-5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드 토실레이트.
- 화합물 2-(5-((3-에톡시피리딘-2-일)옥시)피리딘-3-일)-N-(5-플루오로피페리딘-3-일)피리미딘-5-카복스아미드.
- 지방간, 비알코올성 지방간 질환, 비알코올성 지방간염, 간 섬유증을 동반하는 비알코올성 지방간염, 간경변을 동반하는 비알코올성 지방간염 또는 간경변 및 간세포 암종을 동반하는 비알코올성 지방간염의 치료 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 인간에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
- 제14항에 있어서,
비알코올성 지방간염을 치료하는, 치료 방법. - 제14항에 있어서,
비알코올성 지방간 질환을 치료하는, 치료 방법. - 제14항에 있어서,
간 섬유증을 동반하는 비알코올성 지방간염을 치료하는, 치료 방법. - 기선(baseline)으로부터 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 활동 점수(NAS)의 중증도를 1점 이상 감소시키는 방법으로서, 인간에서 기선 NAS를 측정하는 단계, 상기 인간에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 효과량을 투여하는 단계, 및 상기 인간의 NAS를 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
- 기선으로부터 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 활동 점수(NAS)의 중증도를 2점 이상 감소시키는 방법으로서, 인간에서 기선 NAS를 측정하는 단계, 상기 인간에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 효과량을 투여하는 단계, 및 상기 인간의 NAS를 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
- 고중성지방혈증, 죽상경화증, 심근경색증, 이상지질혈증, 관상동맥성 심장병, 고 아포 B 리포단백혈증, 허혈성 뇌졸중, 제2형 진성 당뇨병, 제2형 진성 당뇨병 환자의 혈당 조절, 내당능 장애(IGT)의 질환, 공복 혈장 포도당 장애의 질환, 대사 증후군, X 증후군, 고혈당증, 고인슐린혈증, 인슐린 저항성 또는 포도당 대사 장애의 치료 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 인간에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 치료 효과량을 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법.
- 제20항에 있어서,
고중성지방혈증을 치료하는, 치료 방법. - 치료 효과량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 담체, 비히클 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물인 제1 화합물, 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염;
항당뇨병제; 비알코올성 지방간염 치료제, 비알코올성 지방간 질환 치료제, 콜레스테롤 또는 지질 저하제; 또는 항심부전 치료제인 제2 화합물; 및
약학 담체, 비히클 또는 희석제
를 포함하는 조성물의 치료 효과량을 포함하는 약학 조합 조성물. - 제23항에 있어서,
상기 비알코올성 지방간염 치료제 또는 비알코올성 지방간 질환 치료제가 ACC 억제제, KHK 억제제, BCKDK 억제제, FXR 작용제(agonist), 메트포르민(metformin), 인크레틴(incretin) 유사체 또는 GLP-1 수용체 작용제인, 약학 조합 조성물. - 제23항에 있어서,
상기 비알코올성 지방간염 치료제 또는 비알코올성 지방간 질환 치료제가 4-(4-(1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카본일)-6-메톡시피리딘-2-일)벤조산; [(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-메틸아제티딘-1-일]-6-(트라이플루오로메틸)피리미딘-4-일}-3-아자바이사이클로[3.1.0]헥스-6-일]아세트산; 2-[(1R,3R,5S)-3-({5-사이클로프로필-3-[2-(트라이플루오로메톡시)페닐]-1,2-옥사졸-4-일}메톡시)-8-아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일]-4-플루오로-1,3-벤조티아졸-6-카복시산; 2-((4-((S)-2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸벤조[d][1,3]다이옥솔-4-일)피페리딘-1-일)메틸)-1-(((S)-옥세탄-2-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-카복시산; 또는 2-[(4-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-2-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산, 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염인, 약학 조합 조성물. - 제23항에 있어서,
상기 항당뇨병제가 SGLT-2 억제제, BCKDK 억제제, 메트포르민, 인크레틴 유사체, 인크레틴 수용체 조절제, DPP-4 억제제 또는 PPAR 작용제인, 약학 조합 조성물. - 제26항에 있어서,
상기 항당뇨병제가 메트포민(metfomin), 시타글립틴(sitagliptin), 에르투글리포진(ertuglifozin), 2-[(4-{6-[(4-시아노-2-플루오로벤질)옥시]피리딘-2-일}피페리딘-1-일)메틸]-1-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]-1H-벤즈이미다졸-6-카복시산 또는 2-((4-((S)-2-(5-클로로피리딘-2-일)-2-메틸벤조[d][1,3]다이옥솔-4-일)피페리딘-1-일)메틸)-1-(((S)-옥세탄-2-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-카복시산인, 약학 조합 조성물. - 제23항에 있어서,
상기 항심부전제, 또는 콜레스테롤 또는 지질 저하제가 ACE 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제, BCKDK 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제 - 네프릴리신 억제제, 베타 아드레날린 수용체 차단제, 칼슘 채널 차단제, 피브레이트(fibrate), HMG CoA 리덕타제 억제제 또는 혈관확장제인, 약학 조합 조성물. - 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 결정:
.
- 제29항에 있어서,
결정이 화합물의 p-톨루엔설포네이트 염을 포함하는, 결정. - 제29항에 있어서,
7.2 ± 0.2, 14.5 ± 0.2, 15.8 ± 0.2 및 27.7 ± 0.2의 2-쎄타 값을 포함하는 분말 x-선 회절 패턴(CuKα 방사선, 파장: 1.54056 Å)을 갖는 결정. - 제30항에 있어서,
3.8 ± 0.2, 7.7 ± 0.2, 8.8 ± 0.2, 22.4 ± 0.2 및 24.6 ± 0.2의 2-쎄타 값을 포함하는 분말 x-선 회절 패턴(CuKα 방사선, 파장: 1.54056 Å)을 갖는 결정.
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