CN114787146A - 二酰基甘油酰基转移酶2抑制剂 - Google Patents

二酰基甘油酰基转移酶2抑制剂 Download PDF

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Abstract

本文描述了式(I)化合物
Figure DDA0003670580340000011
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8及R9如本文所定义；其作为二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)抑制剂的用途，包含此抑制剂的药物组合物以及此抑制剂治疗例如NASH的用途。

Description

二酰基甘油酰基转移酶2抑制剂
发明领域
本发明涉及新的药物化合物、包含该化合物的药物组合物和该化合物抑制二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)的活性的用途。
发明背景
二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)催化甘油三酯(TAG)合成的最终步骤，特别地，脂肪酸与二酰基甘油的酯化导致TAG的形成。在哺乳动物中，已经表征了两种DGAT酶(DGAT1和DGAT2)。尽管这些酶催化相同的酶反应，但其各自的氨基酸序列不相关且其占据不同的基因家族。DGAT2在肝脏和脂肪中高度表达，且与DGAT1不同，其对甘油二酯(DAG)表现出出色的底物特异性。啮齿动物中DGAT2基因的缺失会导致子宫内生长缺陷、严重脂血症、皮肤屏障功能受损以及出生后早期死亡。显然，抑制DGAT2会导致多种编码参与脂肪生成(lipogensis)的蛋白质(包括固醇调控元件结合蛋白1c(SREBP1c)和硬脂酰基CoA去饱和酶1(SCD1))的基因表达下调。同时，诸如肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)的基因表达增加证明氧化途径的诱导。这些变化的净结果是降低肝DAG和TAG脂质水平，进而导致肝脏中胰岛素反应性的改善。此外，DGAT2抑制使肝VLDL TAG分泌抑制并导致循环胆固醇水平降低。最后，血浆载脂蛋白B(APOB)水平受到抑制，这可能是由于对新合成的APOB蛋白脂化的TAG供应减少所致。DGAT2抑制对血糖控制和血浆胆固醇谱(profile)的有益功效表明此靶标对代谢性疾病的治疗有价值(Choi,C.S.等人，2007.J Biol Chem 282:22678-22688)。
此外，对DGAT2活性的抑制导致肝脂质累积减少的观察结果表明此酶的抑制剂可能在治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中有用，NASH是高度流行的肝脏疾病，其特征在于肝脏中过量的脂肪沉积。
近年来，在文献和专利申请案(WO2013150416、WO2013137628、US20150259323、WO2015077299、WO2016036633、WO2016036638、WO2016036636)中已经报导数种DGAT2的小分子抑制剂。最近，共同转让的PCT申请案PCT/IB2017/054862在2018年2月22日公开为WO2018/033832，公开了DGAT2的小分子抑制剂。
然而，仍然需要具有DGAT2抑制活性并且用于治疗、预防或减轻本文所述疾病的临床表现的药剂。此外，仍然需要具有改善的药代动力学性质(诸如：溶解度、清除率和半衰期)的DGAT2抑制剂。较长的人半衰期可能是因为较低的清除率及/或增加的分布容积。
发明内容
本申请涉及式(I)的化合物
Figure BDA0003670580320000021
其中，
R1为H或氟；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)氟烷基、(C1-C3)羟基烷基和-(C1-C3)烷基-(C1-C2)烷氧基；且
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、氟、羟基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)氟烷基、(C1-C3)羟基烷基、(C1-C2)烷氧基、(C1-C2)氟烷氧基和-(C1-C3)烷基-(C1-C2)烷氧基；且
其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的0个、1个或2个不为H；
或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎或伴随肝硬化和肝细胞癌的非酒精性脂肪性肝炎的方法，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明还涉及治疗心力衰竭、充血性心力衰竭、冠心病、周围血管病、肾血管病、肺动脉高压、血管炎、急性冠状动脉综合征和心血管风险调整的方法，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明还涉及治疗I型糖尿病、II型糖尿病、原发性I型糖尿病(Ib型)、成人潜伏性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年发病非典型糖尿病(YOAD)、青年人中成年发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、冠心病、缺血性卒中、血管成形术后再狭窄、周围血管病、间歇性跛行、心肌梗塞、血脂异常、餐后脂血症、糖耐量受损(IGT)的病症、空腹血糖受损的病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、白内障、糖尿病肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病变、代谢综合征、X综合征、高血糖症、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、胰岛素抵抗、糖代谢受损、皮肤和结缔组织障碍、足部溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损、高载脂蛋白B脂蛋白血症和枫糖尿症的方法，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明还涉及治疗肝细胞癌、肾脏肾透明细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠腺癌、间皮瘤、胃腺癌、肾上腺皮质癌、肾乳头状细胞癌、宫颈与宫颈内癌、膀胱尿路上皮癌或肺腺癌的方法，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明还涉及使非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活动性评分(NAS)的严重程度自基线降低至少一个点的或两个点的方法，包括测量人的基线NAS、给予所述人有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐和测量所述人的NAS的步骤。
本发明还涉及含有治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、溶媒或稀释剂的药物组合物。
本发明还涉及药物联合组合物(pharmaceutical combination composition)，其包含：治疗有效量的组合物，所述组合物含有：
第一化合物，所述第一化合物为式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐；
第二化合物，所述第二化合物为抗糖尿病剂；非酒精性脂肪性肝炎治疗剂、非酒精性脂肪肝病治疗剂或抗心力衰竭治疗剂，和
药用载体、溶媒或稀释剂。
应当理解，前述一般性描述和下述详细描述都只是示例性和说明性的，并不限制所要求保护的本发明。
附图简述
图1为显示实施例4形式1的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
图2为显示实施例4盐酸盐形式1的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
图3为显示实施例4对甲苯磺酸盐无水形式1的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
图4绘制了实施例4对在西方饮食喂养的Sprague-Dawley大鼠中血浆甘油三酯的多剂量作用(垂直轴：血浆甘油三酯(mg/dL)，水平轴：西方饮食BID给药(mg/kg))。
图5绘制了实施例4对在西方饮食喂养的Sprague-Dawley大鼠中肝甘油三酯的多剂量作用(垂直轴：肝甘油三酯(μg/mg)，水平轴：西方饮食BID给药(mg/kg))。
图6为显示制备P1形式1的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
图7为显示制备P1形式2的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
图8为显示制备P1形式3的特征性x射线粉末衍射图(垂直轴：强度(CPS)；水平轴：2θ(度))。
发明详述
参考下述本发明示例性实施方案的详细描述和其中包括的实施例，可以更容易地理解本发明。
应当理解，本发明不限于当然可以变化的特定合成方法。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而不旨在进行限制。在本说明书和随后的权利要求中，将提到许多术语，这些术语应定义为具有下述含义：
如本文在说明书中所使用，“一个(a)或一个(an)”可以是指一个或多个。如本文在权利要求书中所使用，当与词语“包含”结合使用时，词语“一个(a)或一个(an)”可以是指一或多于一个。如本文所用，“另一个”可以指至少第二个或更多个。
术语“约”是指相对术语，表示标称值的正或负10％的近似值，在一实施方案中，它是指正或负5％，在另一个实施方案中是正或负2％。对于本申请的领域，此近似值水平是适当的，除非该值被特别声明为要求更严格的范围。
当在本文中使用时，“化合物”包括任何药学上可接受的衍生物或变体，包括构象异构体(例如，顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如，对映异构体和非对映异构体)、外消旋、非对映异构体和此类异构体的其他混合物、以及溶剂合物、水合物、同晶体、多晶型物、互变异构体、酯、盐形式和前药。表述“前药”是指作为药物前驱体的化合物，其在给药之后通过一些化学或生理过程在体内释放药物(例如，前药在达到生理pH时或通过酶作用转化为期望的药物形式)。
单独或组合使用的术语“烷基”是指式CnH2n+1的非环状饱和烃基，其可以是直链或支链的。这样的基团的实例包括但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。烷基和各种其他含烃部分的碳原子含量由前缀表示，该前缀指定该部分中的较低和较高的碳原子数，即，前缀Ci-Cj表示整数“i”至整数“j”(含i和j)个碳原子的部分。因此，例如，C1-C3烷基是指1至3(含1和3)个碳原子的烷基。
“氟烷基”是指被一、二或三个氟原子取代的本文所定义的烷基。示例性(C1)氟烷基化合物包括氟甲基、二氟甲基和三氟甲基；示例性(C2)氟烷基化合物包括1-氟乙基、2-氟乙基、1,1-二氟乙基、1,2-二氟乙基、1,1,1-三氟乙基、1,1,2-三氟乙基等。
“羟基烷基”是指被一个原子取代的本文所定义的烷基。示例性羟基烷基化合物包括羟基甲基、1-羟基乙基、2-羟基乙基等。
“烷氧基”是指通过氧基结合的直链饱和烷基或支链饱和烷基。这样的烷氧基的实例(假设指定的长度涵盖特定实例)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、叔戊氧基、己氧基、异己氧基、庚氧基和辛氧基。
“氟烷氧基”是指被一个、两个或三个氟原子取代的本文所定义的烷氧基。示例性(C1)氟烷氧基化合物包括氟甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；示例性的(C2)氟烷基化合物包括1-氟乙氧基、2-氟乙氧基、1,1-二氟乙氧基、1,2-二氟乙氧基、1,1,1-三氟乙氧基、1,1,2-三氟乙氧基等。
“患者”是指温血动物，诸如：豚鼠、小鼠、大鼠、沙鼠、猫、兔、狗、牛、山羊、绵羊、马、猴子、黑猩猩和人。
术语“药学上可接受的”是指适于给予患者的物质(例如，本发明化合物)和其任何盐或包含本发明的物质或盐的组合物。
如本文所使用的，表述“反应惰性溶剂”和“惰性溶剂”是指不以不利地影响期望的产品的收率的方式与起始原料、试剂、中间体或产物相互作用的溶剂或其混合物。
如本文所使用的，术语“选择性”或“选择性的”是指与第二试验中相同化合物的作用相比，第一试验中化合物的作用更大。例如，在“肠选择性的”化合物中，第一试验用于肠道中化合物的半衰期，而第二试验用于肝脏中化合物的半衰期。
“治疗有效量”是指(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。
本文所使用的术语“治疗(treating)、(treat)或(treatment)”包括预防性(preventative)，即预防性(prophylactic)和舒缓治疗，即，缓解、减轻或减缓患者疾病(或病症)或任何与疾病有关的组织损伤的进展。
本申请进一步涉及式(II)的化合物
Figure BDA0003670580320000071
其中：
R1为H或氟；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)氟烷基、(C1-C3)羟基烷基和-(C1-C3)烷基-(C1-C2)烷氧基；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、氟、羟基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)氟烷基、(C1-C3)羟基烷基、(C1-C2)烷氧基、(C1-C2)氟烷氧基和-(C1-C3)烷基-(C1-C2)烷氧基；且
R10、R11、R12、R13和R14各自独立地选自H和氘；且
其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的0个、1个或2个不为H；
或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4和R5各自独立地选自H和(C1)氟烷基且R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟；其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的0个、1个或2个不为H；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4、R5、R6和R7为H；且R8和R9独立地选自H、(C1)氟烷基和氟；其中，R8和R9中的至少一个为(C1)氟烷基或氟；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4、R5、R8和R9为H；且R6和R7各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟，其中，R6和R7中的至少一个为(C1)氟烷基或氟；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4、R5、R6和R9为H；且R7和R8各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟，其中R7和R8中的至少一个为(C1)氟烷基或氟；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4、R5、R6、R8和R9为H；且R7为(C1)氟烷基或氟；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物，其中，R2、R3、R4、R5、R6、R8和R9为H；且R7为氟；或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括选自以下的化合物：
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4R)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4R)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；和
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
另一个实施方案包括具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003670580320000091
或其药学上可接受的盐和包括该化合物或其药学上可接受的盐的晶体。
在另一个实施方案中，化合物为2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-(5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺。
每个实施例或其药学上可接受的盐可以单独要求保护或以任何组合与任何数量的本文所描述的各个与每个实施方案组合在一起。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用作药物的用途，特别是其中所述药物用于治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎或伴随肝硬化和肝细胞癌的非酒精性脂肪性肝炎，包括以治疗有效量给予需要此治疗的哺乳动物，诸如人。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用于制备治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎或伴随肝硬化和肝细胞癌的非酒精性脂肪性肝炎的药物的用途，包括以治疗有效量给予需要此治疗的哺乳动物，诸如人。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用作药物的用途，特别是其中所述药物用于治疗心力衰竭、充血性心力衰竭、冠心病、周围血管病、肾血管病、肺动脉高压、血管炎、急性冠状动脉综合征和心血管风险调整，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用于制备治疗心力衰竭、充血性心力衰竭、冠心病、周围血管病、肾血管病、肺动脉高压、血管炎、急性冠状动脉综合征和心血管风险调整的药物的用途，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用作药物的用途，特别是其中所述药物用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病、原发性I型糖尿病(Ib型)、成人潜伏性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年发病非典型糖尿病(YOAD)、青年人中成年发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、冠心病、缺血性卒中、血管成形术后再狭窄、周围血管病、间歇性跛行、心肌梗塞、血脂异常、餐后脂血症、糖耐量受损(IGT)的病症、空腹血糖受损的病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、白内障、糖尿病肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病变、代谢综合征、X综合征、高血糖症、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、胰岛素抵抗、糖代谢受损、皮肤和结缔组织障碍、足部溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损、高载脂蛋白B脂蛋白血症和枫糖尿症，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用于制备治疗I型糖尿病、II型糖尿病、原发性I型糖尿病(Ib型)、成人潜伏性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年发病非典型糖尿病(YOAD)、青年人中成年发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、冠心病、缺血性卒中、血管成形术后再狭窄、周围血管病、间歇性跛行、心肌梗塞、血脂异常、餐后脂血症、糖耐量受损(IGT)的病症、空腹血糖受损的病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、白内障、糖尿病肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病变、代谢综合征、X综合征、高血糖症、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、胰岛素抵抗、糖代谢受损、皮肤和结缔组织障碍、足部溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损、高载脂蛋白B脂蛋白血症和枫糖尿症的药物的用途，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用作药物的用途，特别是其中所述药物用于治疗肝细胞癌、肾脏肾透明细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠腺癌、间皮瘤、胃腺癌、肾上腺皮质癌、肾乳头状细胞癌、宫颈与宫颈内癌、膀胱尿路上皮癌或肺腺癌，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案包括式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐用于制备治疗肝细胞癌、肾脏肾透明细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠腺癌、间皮瘤、胃腺癌、肾上腺皮质癌、肾乳头状细胞癌、宫颈与宫颈内癌、膀胱尿路上皮癌或肺腺癌的药物的用途，包括给予需要此治疗的诸如人的哺乳动物治疗有效量的式(I)或(II)的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明的化合物可以包含不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。除非另有说明，否则预期本发明化合物的所有立体异构形式及其混合物，包括外消旋混合物，均构成本发明的一部分。此外，本发明涵盖所有几何和位置异构体。例如，如果本发明的化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式以及混合物均涵盖在本发明的范围内。
本发明的手性化合物(和其手性前体)可以使用色谱法，通常是高效液相色谱法(HPLC)或超临界流体色谱法(SFC)，在具有不对称固定相的树脂上和使用由烃(通常是庚烷或己烷)组成的流动相(包含0至50％的异丙醇(通常是2至20％)和0至5％的烷基胺(通常是0.1％二乙胺)(DEA)或异丙胺)，以对映异构体富集的形式获得。洗脱液浓缩提供富集的混合物。在使用SFC的情况下，流动相可以由超临界流体(通常是二氧化碳)组成，其包含2至50％的醇，例如甲醇、乙醇或异丙醇。
通过本领域技术人员已知的方法，诸如通过色谱法和/或分馏结晶，基于其物理化学差异，可将非对映异构体混合物分离成其个别非对映异构体。可以通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂，诸如手性醇或莫氏酸氯化物(Mosher’s acid chloride))反应，将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离非对映异构体，且将个别非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体，来分离对映异构体。也可以通过使用手性HPLC柱来分离对映异构体。或者，可以通过使用光学活性起始原料，通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转变将一种立体异构体转化为另一种，来合成特定的立体异构体。
当本发明化合物具有两个或更多个立体中心，且名称中给出绝对或相对立体化学时，根据对每个分子的常规IUPAC编号方案，R和S的命名依升序数字顺序(1、2、3等)分别指每个立体中心。当本发明化合物具有一个或多个立体中心并且名称或结构未给出立体化学时，应理解该名称或结构旨在涵盖所有形式的化合物，包括外消旋形式。
本发明化合物可以包含烯烃类双键。当存在这样的键时，本发明的化合物以顺式和反式构型及其混合物存在。术语“顺式”是指两个取代基相对于彼此和环的平面的取向(二者均向“上”或二者均向“下”)。类似地，术语“反式”是指两个取代基相对于彼此和环平面的取向(取代基在环的相对侧)。
本发明的中间体和化合物也可能以不同的互变异构形式存在，并且所有这样的形式均涵盖在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指可通过低能量壁垒相互转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的相互转化，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。
价键互变异构体包括通过一些结合电子的重组而进行的相互转化。
在本发明要求保护的化合物的范围内包括式(I)或(II)的化合物的所有立体异构体、几何异构体和互变异构形式，包括呈现一种以上类型的异构性的化合物，及其一种或多种的混合物。还包括酸加成盐或碱式盐，其中抗衡离子是光学活性的，例如D-乳酸或L-赖氨酸，或外消旋的，例如DL-酒石酸盐或DL-精氨酸。
本发明包括所有药学上可接受的同位素标记的式(I)或(II)的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数，但原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子替代。
适于包含在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，诸如2H和3H，碳的同位素，诸如11C、13C和14C，氯的同位素，诸如36Cl，氟的同位素，诸如18F，碘的同位素，诸如123I、124I和125I，氮的同位素，诸如13N和15N，氧的同位素，诸如15O、17O和18O，磷的同位素，诸如32P，和硫的同位素，诸如35S。
某些同位素标记的式(I)或(II)的化合物，例如包含放射性同位素的那些，用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)易于掺入和现成的检测手段，其特别用于此目的。
用更重的同位素诸如氘(即2H)取代，由于更大的代谢稳定性，例如，体内半衰期增加或剂量需求降低，可以提供某些治疗优势，因此在某些情况下是优选的。
用正电子发射同位素(诸如11C、18F、15O和13N)取代可用于在正电子发射断层扫描术(PET)研究中检查底物受体占有率。
同位素标记的式(I)或(II)的化合物通常可以使用合适的同位素标记试剂代替先前使用的非标记试剂，通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备中所述类似的方法来制备。
本发明的化合物本身，或当可能时以其药学上可接受的盐的形式被分离和使用。术语“盐”是指本发明化合物的无机盐和有机盐。这些盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过用合适的有机或无机酸分别处理化合物并分离由此形成的盐来制备。
术语“药学上可接受的盐”中所涵盖的盐是指本发明的化合物，其通常是通过使游离碱与合适的有机或无机酸反应以提供适合给予患者的本发明化合物的盐而制备。合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己氨基磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘二甲酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐(2-napsylate)、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐(orotate)、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐(pyroglutamate)、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和羟萘酸盐(xinofoate)。见例如Berge,等人，J.Pharm.Sci.66,1-19(1977)；Handbookof Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use by Stahl andWermuth(Wiley-VCH,2002)。
式(I)或(II)的化合物，及其药学上可接受的盐可以非溶剂化形式和溶剂化形式存在。术语“溶剂化物”在本文用来描述分子络合物，其包含式(I)或(II)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的溶剂分子，例如乙醇。当溶剂为水时，使用术语“水合物”。
目前接受的有机水合物分类系统是定义分离位点、通道或金属离子配位的水合物的系统-见K.R.Morris的Polymorphism in Pharmaceutical Solids(Ed.H.G.Brittain,Marcel Dekker,1995)。分离位点水合物是其中通过介入有机分子而使水分子彼此之间从直接接触分离的水合物。在通道水合物中，水分子位于晶格通道中，其中这些水分子与其他水分子相邻。在金属离子配位的水合物中，水分子与金属离子结合。
当溶剂或水紧密结合时，络合物可具有与湿度无关的明确的化学计量。然而，当溶剂或水较弱结合时(如在通道溶剂化物和吸湿性化合物中)，则水/溶剂含量可能取决于湿度和干燥条件。在这种情况下，非化学计量将是正常的。
还包括在本发明范围内的为多组分络合物(除盐和溶剂化物以外)，其中药物和至少一种其他组分以化学计量或非化学计量的量存在。这种类型的络合物包括笼形包合物(药物-宿主包容络合物)和共晶体。后者通常定义为中性分子成分的结晶络合物，其通过非共价相互作用而结合在一起，但也可能是中性分子与盐的络合物。共晶体可通过熔融结晶、从溶剂中再结晶或通过一起物理研磨组分来制备-见Chem Commun,17,1889-1896,O.Almarsson和M.J.Zaworotko(2004)。对于多组分络合物的一般综述，见J Pharm Sci,64(8),1269-1288,Haleblian(1975年8月)。
本发明化合物包括上文定义的式(I)或(II)的化合物、多晶型物及下文定义的其异构体(包括光学、几何和互变异构体)和经同位素标记的式(I)或(II)的化合物。
本发明化合物可以作为前药给予。因此，某些本身可能具有极少或无药理活性的式(I)或(II)的化合物的衍生物，当给予到体内或身体上时，可以转化为具有期望的活性的式(I)或(II)的化合物，例如，通过水解裂解。这样的衍生物被称为“前药”。[有关使用前药的更多信息可见于‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14,ACS SymposiumSeries(T Higuchi and W Stella)和’Bioreversible Carriers in Drug Design’,Pergamon Press,1987(ed.E.B.Roche,American Pharmaceutical Association)。]
例如，前药可以通过用本领域技术人员已知为例如在H.Bundgaard的“Design ofProdrugs”(Elsevier,1985)所述的“前部分”的某些部分来替代式(I)或(II)的化合物中存在的适当官能团来制备。
这样的前药的一些实例包括：
(i)在式(I)或(II)的化合物包含醇官能团(-OH)的情况下，其醚，例如用(C1-C6)烷酰基氧基甲基替换氢；或磷酸酯(PO3H2)或其药学上可接受的盐；且
(ii)式(I)或(II)中存在的氨基官能团的酰胺或氨基甲酸酯，其中，氨基NH基团的氢分别被(C1-C10)烷酰基或(C1-C10)烷氧基羰基替代。
还包括在本发明范围的为式(I)或(II)的化合物的活性代谢物(包括前药)，即，在药物给予后通常通过氧化或脱烷基化在体内形成的化合物。
根据本发明的代谢物的一些实例包括：
(i)在式(I)或(II)的化合物包含甲基的情况下，其羟基甲基衍生物(-CH3->-CH2OH)，和
(ii)在式(I)或(II)的化合物包含烷氧基的情况下，其羟基衍生物(-OR->-OH)。
某些本发明化合物可以以一种以上的晶体形式存在(一般称为“多晶型物”)。可以通过在各种条件下结晶来制备多晶型物，例如，使用不同的溶剂或不同的溶剂混合物进行重结晶；在不同的温度下结晶；和/或各种冷却模式，在结晶期间从极快冷却到极慢冷却。也可以通过加热或熔融本发明化合物，然后逐渐或快速冷却来获得多晶型物。多晶型物的存在可以通过固体探针NMR光谱法、IR光谱法、差示扫描量热法、粉末x射线衍射或这样的其他技术测定。
一般来说，本发明化合物可以通过包括与化学领域中已知方法类似的方法的方法来制备，特别是根据本文所包含的描述。提供某些制备本发明化合物的方法作为本发明的进一步特征，并通过以下反应方案说明。其他过程可能会在实验部分中进行描述。以下概述制备式(I)或(II)的化合物的具体合成方案。注意，四唑通常是高能量官能团，且在合成和处理包含四唑的分子时应格外小心。
作为初步说明，在制备式(I)或(II)化合物时，应注意，一些可用于制备本文所述化合物的制备方法可能需要保护远程官能团(例如，伯胺、仲胺、式(I)或(II)前体中的羧基)。这种保护的需求将根据远程官能团的性质和制备方法的条件而有所不同。对于这种保护的需要是本领域技术人员容易地确定的。这种保护/脱保护方法的使用也在本领域技术内。对于保护基及其使用的一般说明，见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
例如，某些化合物包含伯胺或羧酸官能团，如果不加保护，可能会干扰分子其他位点的反应。因此，可以通过合适的保护基团来保护此官能团，所述保护基团可以在随后的步骤中除去。合适的用于胺和羧酸保护的保护基团包括常用于肽合成的保护基团(诸如N-叔丁氧羰基、苄氧羰基和9-芴基甲氧基羰基用于胺，并且低级烷基或苄基酯用于羧酸)，其通常在所述反应条件下不具有化学反应性，且通常可以在不化学改变式(I)或(II)化合物其他官能团的情况下除去。
本发明化合物可以通过包括与化学领域熟知的方法类似的方法的合成途径合成，特别是根据本文所包含的描述合成。起始原料通常可从商业来源，诸如MilliporeSigma(Milwaukee,WI)获得，或使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如，通过LouisF.Fieser与Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,New York(1967-1999ed.)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin，包括副刊(也可通过Beilstein在线数据库获得)中一般描述的方法制备)。本文使用的许多化合物与有很大的科学兴趣和商业需求的化合物有关，或衍生自该化合物，且因此许多这样的化合物可商购获得或在文献中报导，或易于通过文献报导的方法从其他通常可得的物质制备。
在以下实施例部分中提供个别反应步骤的详细描述。本领域技术人员将理解，可以使用其他合成路径来合成化合物。尽管以下讨论特定的起始原料和试剂，但是其他起始原料和试剂可以容易地取代以提供各种衍生物和/或反应条件。另外，根据此公开内容，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。
组合药剂
本发明化合物可以单独给予或与一种或多种另外的治疗剂组合给予。“组合给予”或“组合治疗”是指将本发明化合物和一种或多种另外的治疗剂同时给予待治疗的哺乳动物。当组合给予时，各组分可以同时或以任何顺序在不同的时间点依次给予。因此，可以分开但在时间上足够紧密地给予各组分以提供期望的治疗效果。短语“共同给予(oncurrentadministration)”、“共同给予(co-administration)”、“同时给予”和“同时给予的”是指将化合物组合给予。因此，本文所述的预防和治疗方法包括使用组合药剂。
组合药剂以治疗有效量给予哺乳动物。“治疗有效量”是指当单独给予或与另外的治疗剂组合给予哺乳动物时，有效治疗期望的疾病/病症(例如，NASH、心力衰竭或糖尿病)的本发明化合物的量。
鉴于本发明化合物的NASH/NAFLD活性，可以将它们与其他治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和相关疾病/病症的药剂共同给予，所述药剂诸如奥利司他、TZD及其他胰岛素敏化剂、FGF21类似物、二甲双胍、ω-3-酸乙基酯(例如Lovaza)、贝特类、HMG CoA-还原酶抑制剂、依泽替米贝、普罗布考、熊去氧胆酸、TGR5激动剂、FXR激动剂、维生素E、甜菜碱、己酮可可碱、CB1拮抗剂、肉碱、N-乙酰基半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、氯卡色林、纳曲酮与安非他酮(buproprion)的组合、SGLT2抑制剂(包括达格列净、卡格列净、恩格列净、托格列净、艾格列净(ertugliflozin)、ASP-1941、THR1474、TS-071、ISIS388626和LX4211以及WO2010023594中那些)、芬他命、托吡酯、GLP-1受体激动剂、GIP受体激动剂、双重GLP-1受体/胰高血糖素受体激动剂(例如OPK88003、MEDI0382、JNJ-64565111、NN9277、BI456906)、双重GLP-1受体/GIP受体激动剂(例如，泰瑞帕肽(Tirzepatide)(LY3298176)、NN9423)、血管紧张素-受体阻断剂、乙酰CoA羧化酶(ACC)抑制剂、BCKDK抑制剂、己酮糖激酶(KHK)抑制剂、ASK1抑制剂、支链α酮酸脱氢酶激酶抑制剂(BCKDK抑制剂)、CCR2和/或CCR5抑制剂、PNPLA3抑制剂、DGAT1抑制剂、FGF21类似物、FGF19类似物、PPAR激动剂、FXR激动剂、AMPK活化剂(例如ETC-1002(贝派地酸(bempedoicacid))、SCD1抑制剂或MPO抑制剂。
示例性的GLP-1受体激动剂包括利拉鲁肽、阿比鲁肽、艾塞那肽、阿比鲁肽、利西拉来、杜拉鲁肽(dulaglutide)、司马鲁肽(semaglutide)、HM15211、LY3298176、Medi-0382、NN-9924、TTP-054、TTP-273、艾培格那肽(efpeglenatide)、WO2018109607中所述的那些、2019年6月11日提交的PCT/IB2019/054867中所述的那些和2019年6月13日提交的PCT/IB2019/054961中所述的那些，包括以下：
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-3-(1,3-噁唑-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-噁唑-4-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(吡啶-3-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-噁唑-5-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-噁唑-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-7-氟-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-噁唑-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2R)-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[(2R)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸，DIAST-X2；
2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-(1,3-噁唑-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-[(4-{2-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-(1,3-噁唑-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-[(4-{2-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-[(4-{3-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡嗪-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}-6-氮杂螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-(6-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-6-氮杂螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-(6-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-6-氮杂螺[2.5]辛-1-基)-1-(1,3-噁唑-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]-5-氟吡啶-2-基}-6-氮杂螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]-3-氟吡啶-2-基}-6-氮杂螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]嘧啶-4-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-{[(2S)-4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-2-甲基哌嗪-1-基]甲基}-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；
2-{[(2S)-4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]嘧啶-4-基}-2-甲基哌嗪-1-基]甲基}-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸；和
2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸，及其药学上可接受的盐。
示例性ACC抑制剂包括4-(4-[(1-异丙基-7-氧代-1,4,6,7-四氢-1’H-螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-基)羰基]-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸、吉卡宾(gemcabene)和菲可司他(firsocostat)(GS-0976)及其药学上可接受的盐。
示例性FXR激动剂包括曲匹法索(tropifexor)(2-[(1R,3R,5S)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-羧酸)、昔洛法索(cilofexor)(GS-9674)、奥贝胆酸、LY2562175、Met409、TERN-101和EDP-305及其药学上可接受的盐。
示例性KHK抑制剂包括[(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-甲基氮杂环丁烷-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]乙酸及其药学上可接受的盐。
示例性BCKDK抑制剂包括2019年6月28日提交的美国第62/868,057序列号和2019年6月28日申请的美国第62/868,542序列号中所述的那些，包括以下：
5-(5-氯-4-氟3-甲基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(5-氯-3-二氟甲基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(5-氟-3-甲基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(5-氯-3-甲基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(3,5-二氯噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(4-溴-3-甲基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(4-溴-3-乙基噻吩-2-基)-1H-四唑；
5-(4-氯-3-乙基噻吩-2-基)-1H-四唑；
3-氯-5-氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；
3-溴-5-氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；
3-(二氟甲基)-5-氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；
5,6-二氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；和
3,5-二氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；
或其药学上可接受的盐。
鉴于本发明化合物的抗糖尿病活性，它们可以与其他抗糖尿病剂共同给予。合适的抗糖尿病剂包括胰岛素，二甲双胍，GLP-1受体激动剂(上文所述)，乙酰CoA羧化酶(ACC)抑制剂(上文所述)，SGLT2抑制剂(上文所述)，单酰基甘油O-酰基转移酶抑制剂，磷酸二酯酶(PDE)-10抑制剂，AMPK活化剂(例如，ETC-1002(贝派地酸(bempedoic acid)))，磺酰基脲(例如，乙酰苯磺酰环己脲、氯磺丙脲、特泌胰(diabinese)、格列本脲(glibenclamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、格列美脲(glimepiride)、格列齐特(gliclazide)、格列戊脲(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、格列索脲(glisolamide)、妥拉磺脲(tolazamide)和甲苯磺丁脲(tolbutamide))，美格列脲(meglitinide)，α-淀粉酶抑制剂(例如，淀粉酶抑肽(tendamistat)、萃他丁(trestatin)和AL-3688)，α-葡萄糖苷水解酶抑制剂(例如，阿卡波糖(acarbose))，α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如，脂解素(adiposine)、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、帕地霉素-Q(pradimicin-Q)和沙司他丁(salbostatin))，PPARγ激动剂(例如，巴格列酮(balaglitazone)、环格列酮(ciglitazone)、达格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊格列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)和罗格列酮(rosiglitazone))，PPARα/γ激动剂(例如，CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767和SB-219994)，蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂(例如，特罗杜明(trodusquemine)、西替欧醛提取物(hyrtiosalextract)和Zhang,S.等人,Drug Discovery Today,12(9/10),373-381(2007)所公开的化合物)，SIRT-1活化剂(例如，白藜芦醇、GSK2245840或GSK184072)，二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂(例如，WO2005116014中的那些、西他列汀、维格列汀、阿格列汀、度格列汀(dutogliptin)、利拉利汀和沙格列汀)，胰岛素促分泌素(secreatagogues)，脂肪酸氧化抑制剂，A2拮抗剂，c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂，葡萄糖激酶活化剂(GKa)(诸如WO2010103437、WO2010103438、WO2010013161、WO2007122482中所述的那些、TTP-399、TTP-355、TTP-547、AZD1656、ARRY403、MK-0599、TAK-329、AZD5658或GKM-001)，胰岛素，胰岛素模拟物，糖原磷酸化酶抑制剂(例如，GSK1362885)，VPAC2受体激动剂，胰高血糖素受体调节剂(诸如Demong,D.E.等人，Annual Reports in Medicinal Chemistry 2008,43,119-137中所述的那些)，GPR119调节剂，特别是激动剂，诸如WO2010140092、WO2010128425、WO2010128414、WO2010106457、Jones,R.M.等人的Medicinal Chemistry 2009,44,149-170中所述的那些(例如，MBX-2982、GSK1292263、APD597和PSN821)，FGF21衍生物或类似物(诸如Kharitonenkov,A.等人，Current Opinion in Investigational Drugs 2009,10(4)359-364中所述的那些)，TGR5(也称为GPBAR1)受体调节剂，特别是激动剂，诸如Zhong,M.,Current Topics in Medicinal Chemistry,2010,10(4),386-396中所述的那些和INT777，GPR40激动剂，诸如Medina,J.C.,Annual Reports in Medicinal Chemistry,2008,43,75-85中所述的那些，包括但不限于TAK-875，GPR120调节剂，特别是激动剂，高亲和性烟酸受体(HM74A)活化剂，和SGLT1抑制剂，诸如GSK1614235。可与本发明化合物组合的抗糖尿病剂的进一步代表性列表可见于例如WO2011005611的第28页第35行至第30页第19行。
其他抗糖尿病剂可包括肉碱棕榈酰基转移酶的抑制剂或调节剂，果糖1,6-二磷酸酶的抑制剂，醛醣还原酶的抑制剂，盐皮质激素受体抑制剂，TORC2的抑制剂，CCR2和/或CCR5的抑制剂，PKC同工型(例如，PKCα、PKCβ、PKCγ)的抑制剂，脂肪酸合成酶的抑制剂，丝氨酸棕榈酰基转移酶的抑制剂，GPR81、GPR39、GPR43、GPR41、GPR105、Kv1.3的调节剂，视黄醇结合蛋白4，糖皮质激素受体，生长激素抑制素(somatostain)受体(例如，SSTR1、SSTR2、SSTR3和SSTR5)，PDHK2或PDHK4的抑制剂或调节剂，MAP4K4的抑制剂，包括IL1β在内的IL1家族的调节剂，RXRα的调节剂。此外，适合的抗糖尿病剂包括Carpino,P.A.,Goodwin,B.Expert Opin.Ther.Pat,2010,20(12),1627-51所列的机制。
本发明化合物可与抗心力衰竭剂共同给予，诸如ACE抑制剂(例如，卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利)、血管紧张素II受体阻断剂(例如，坎地沙坦、氯沙坦、缬沙坦)、血管紧张素-受体脑啡肽酶抑制剂(沙库比曲(sacubitril)/缬沙坦)、If通道阻断剂伊伐布雷定、β-肾上腺素阻断剂(例如，比索洛尔、琥珀酸美托洛尔、卡维洛尔)、醛固酮拮抗剂(例如，螺内酯(spironolactone)、依普利酮(eplerenone))、肼屈嗪和二硝酸异山梨醇酯、利尿剂(例如，呋塞米(furosemide)、丁苯氧酸(bumetanide)、托拉塞米(torsemide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、阿米洛利(amiloride)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、吲达帕胺(Indapamide)、美托拉宗(Metolazone)、三氨蝶呤(Triamterene))或地高辛(digoxin)。
本发明化合物也可与胆固醇或脂质降低剂共同给予，包括以下示例性剂：HMG CoA还原酶抑制剂(例如，普伐他汀、匹伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、NK-104(又名伊伐他汀(itavastatin)或尼伐他汀或尼贝司他汀(nisbastatin))和ZD-4522(又名罗素伐他汀(rosuvastatin)或阿他伐他汀(atavastatin)或维沙他汀(visastatin)))；角鲨烯合成酶抑制剂；贝特类(例如，吉非罗齐(gemfibrozil)、佩玛贝特(pemafibrate)、非诺贝特、氯贝特(clofibrate))；胆酸螯合剂(诸如贵舒醇(questran)、考来替泊(colestipol)、考来维仑(colesevelam))；ACAT抑制剂；MTP抑制剂；脂加氧酶(lipooxygenase)抑制剂；胆固醇吸收抑制剂(例如，依泽替米贝(ezetimibe)；烟酸剂(例如，烟酸、速释烟酸(niacor)、缓释烟酸)；ω-3脂肪酸(例如，依泮瓦(epanova)、鱼油、二十碳五烯酸)；胆固醇酯转移蛋白抑制剂(例如，奥比塞曲匹(obicetrapib))和PCSK9调节剂(例如，阿利库单抗(alirocumab)、依伏库单抗(evolocumab)、伯考赛珠单抗(bococizumab)、ALN-PCS(英克西兰(inclisiran)))。
本发明化合物也可与抗高血压剂组合使用，并且本领域技术人员根据标准试验(例如，血压测量)容易确定这样的抗高血压活性。合适的抗高血压剂的实例包括：α-肾上腺素能阻滞剂；β肾上腺素能阻滞剂；钙通道阻滞剂(例如，地尔硫卓、维拉帕米、硝苯地平和氨氯地平)；血管舒张剂(例如，肼屈嗪)；利尿剂(例如，氯噻嗪、氢氯噻嗪、氟甲噻嗪、氢氟甲噻嗪(hydroflumethiazide)、苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、甲基氯噻嗪(methylchlorothiazide)、三氯甲噻嗪(trichloromethiazide)、泊利噻嗪(polythiazide)、苄噻嗪(benzthiazide)、依地尼酸替尼酸(ethacrynic acidtricrynafen)、氯噻酮(chlorthalidone)、托拉塞米(torsemide)、呋塞米(furosemide)、姆索利胺(musolimine)、丁苯氧酸(bumetanide)、三氨蝶呤(triamtrenene)、阿米洛利(amiloride)、螺内酯)；肾素抑制剂；ACE抑制剂(例如，卡托普利、佐芬普利、福辛普利、依那普利、西那普利(ceranopril)、西拉普利(cilazopril)、地拉普利、喷托普利(pentopril)、喹那普利、雷米普利、赖诺普利)；AT-1受体拮抗剂(例如，氯沙坦、依贝沙坦、缬沙坦)；ET受体拮抗剂(例如，西他生坦、阿曲生坦(atrsentan)和美国专利案第5,612,359和6,043,265号中公开的化合物)；双重ET/AII抗拮剂(例如，WO 00/01389中公开的化合物)；中性胜肽内切酶(NEP)抑制剂；血管活性肽酶(vasopepsidase)抑制剂(双重NEP-ACE抑制剂)(例如，吉莫曲拉(gemopatrilat)和硝酸盐)。示例性抗心绞痛剂为伊伐布雷定。
合适的钙通道阻滞剂(L-型或T-型)的实例包括地尔硫卓、维拉帕米、硝苯地平与氨氯地平和米贝地尔(mybefradil)。
合适的强心苷的实例包括洋地黄(digitalis)和哇巴因(ouabain)。
在一个实施方案中，式(I)或(II)化合物可与一种或多种利尿剂共同给予。合适的利尿剂的实例包括(a)袢利尿剂，诸如呋塞米(诸如LASIXTM)、托拉塞米(诸如DEMADEXTM)、贝美他尼(bemetanide)(诸如BUMEXTM)和依地尼酸(诸如EDECRINTM)；(b)噻嗪型利尿剂，诸如氯噻嗪(诸如DIURILTM、ESIDRIXTM或HYDRODIURILTM)、氢氯噻嗪(诸如MICROZIDETM或ORETICTM)、苄噻嗪、氢氟甲噻嗪(诸如SALURONTM)、苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、甲基氯噻嗪(methychlorthiazide)、泊利噻嗪、三氯甲噻嗪和吲达帕胺(诸如LOZOLTM)；(c)苄甲内酰胺(phthalimidine)型利尿剂，诸如氯噻酮(诸如HYGROTONTM)和美托拉宗(诸如ZAROXOLYNTM)；(d)喹唑啉型利尿剂，诸如喹乙唑酮；和(e)保钾利尿剂，诸如三氨蝶呤(诸如DYRENIUMTM)和阿米洛利(诸如MIDAMORTM或MODURETICTM)。
在另一个实施方案中，式(I)或(II)的化合物可与袢利尿剂共同给予。在又另一个实施方案中，袢利尿剂系选自呋塞米和托拉塞米。在又另一个实施方案中，一种或多种式(I)或(II)的化合物可与呋塞米共同给予。在又另一个实施方案中，一种或多种式(I)或(II)的化合物可与托拉塞米共同给予，所述托拉塞任选地为托拉塞米的控制释放或调节释放形式。
在另一个实施方案中，式(I)或(II)的化合物可与噻嗪型利尿剂共同给予。在又另一个实施方案中，噻嗪型利尿剂选自氯噻嗪和氢氯噻嗪。在又另一个实施方案中，一种或多种式(I)或(II)的化合物可与氯噻嗪共同给予。在又另一个实施方案中，一种或多种式(I)或(II)的化合物可与氢氯噻嗪共同给予。
在另一个实施方案中，一种或多种式(I)或(II)的化合物可与苄甲内酰胺型利尿剂共同给予。在又另一个实施方案中，苄甲内酰胺型利尿剂为氯噻酮。
合适的盐皮质激素受体拮抗剂的实例包括螺内酯和依普利酮。
合适的磷酸二酯酶抑制剂的实例包括：PDE III抑制剂(诸如西洛他唑)；和PDE V抑制剂(诸如西地那非)。
本领域技术人员应理解本发明化合物也可与其他心血管或脑血管治疗联合使用，所述其他心血管或脑血管治疗包括PCI、支架术、药物洗脱支架、干细胞疗法和医疗装置，例如植入起搏器、除颤器或心脏再同步化治疗。
特别是当以单一剂量单位提供时，在组合的活性成分之间存在化学相互作用的可能性。出于该原因，当将式(I)或(II)化合物和第二治疗剂组合在单一剂量单位中时，将其调配成使得尽管活性成分组合在单一剂量单位中，但活性成分之间的物理接触被最小化(即，减少)。例如，一种活性成分可以包肠溶衣。通过对活性成分之一包肠溶衣，不仅可以使组合的活性成分之间的接触最小化，而且可以控制这些成分之一在胃肠道中的释放，从而使这些成分之一不是在胃中释放，而是在肠中释放。活性成分之一也可以用实现在整个胃肠道中的持续释放，并且还用于使组合的活性成分之间的物理接触最小化的材料包衣。此外，持续释放组分可以另外地包肠溶衣，使得此组分的释放仅在肠中发生。又另一方法仍将涉及组合产品的配制，其中一种组分用持续释放和/或肠溶释放聚合物包衣，而另一种组分也以诸如低粘度等级的羟丙甲纤维素(HPMC)的聚合物或本领域已知的其他合适的材料包衣，以进一步使活性成分分开。聚合物涂层用于形成对于与其他组分相互作用的另外的屏障。
一旦掌握本申请，这些方法及其他使本发明的组合产品的组分之间的接触最小化的方法，无论是以单一剂型给予还是以分开的形式但以相同的方式同时给予，对于本领域技术人员来说都是显而易见的。
在组合疗法治疗中，通过常规方法将本发明化合物及其他药物疗法二者给予哺乳动物(例如，人，男性或女性)。式(I)或(II)化合物及其盐均适合作为抑制哺乳动物，特别是人的二酰基甘油酰基转移酶2的药剂的治疗用途，且因此可用于治疗其中涉及此作用的各种病症(例如，本文所述的病症)。
根据本发明可治疗的疾病/病症包括但不限于，心血管病症、糖尿病(例如、II型)和糖尿病并发症、血管病症、NASH(非酒精性脂肪性肝炎)、NAFLD(非酒精性脂肪肝病)和肾病。
认为DGAT2抑制对血糖控制和血浆胆固醇谱均呈现有益功效，使得此靶标在代谢性疾病的治疗中是有价值的(Choi,C.S.等人，2007.JBiol Chem 282:22678-22688)。鉴于DGAT2的抑制与代谢性和相关疾病/病症之间的正相关性，式(I)或(II)化合物凭借药理作用可用于预防、阻止和/或消退代谢和相关的疾病状态(例如，II型糖尿病；NASH；NAFLD)。
肝甘油三酯(TG)源自3个主要来源：脂肪从头生成(DNL)、脂肪提供的脂肪酸(FA)的再酯化和饮食摄入(Cohen J.C.等人，2011,Science,332,1519-1523)。尽管对肝TG池的最大贡献似乎是源自起源于脂肪细胞的解脂产品，但脂肪生成途径在NAFLD的发展和进展为NASH扮演重要角色。通过分析患有和未患有NAFLD的受试者中TG的FA组成，DNL对在NAFLD中疾病进展的贡献得到了支持。数据证实，患有NAFLD的受试者的饱和FA水平增加，这表明DNL途径是肝脂肪变性的重要因素，因为饱和FA代表DNL的主要产物。这些发现与在NAFLD中的VLDL颗粒中源自DNL的TG内含物增加一致，其中与食用典型西方饮食的正常受试者中仅2％到5％相比，15％的TG产生源自DNL(Sanders,F.W.B.和Griffin J.L.,2016,Biol.Rev.,91,452-468)。另外，据报导肝DNL的升高率是NAFLD的独特特征。相对于具有正常肝脂肪的受试者，肝脂肪升高的人受试者显示肝DNL速率增加超过3倍，但两组之间在脂肪游离脂肪酸(FFA)通量或由FFA产生VLDL方面未检测到差异。因此，当比较掺入VLDL TG的FA的绝对来源时，升高的肝DNL是具有高肝脂肪的受试者中显著升高的唯一来源(Lambert J.E.和Ramos-Roman,M.A.,2014,Gastroenterology,146,726-735)。
二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)催化TG合成的最终步骤；具体而言，脂肪酸(FA)与二酰基甘油(DAG)的酯化导致TG形成(Yen,C.L.等人，2008,J.Lipid Res.,49,2283-2301)。在哺乳动物中，已经表征了两种结构上不相关的DGAT酶(DGAT1和DGAT2)。DGAT1在肠中高表达，并且在脂肪吸收中起到核心作用(Buhman,K.K.,等人，2002,J.Biol.Chem.,277,25474-25479)。DGAT2在肝脏和脂肪中高度表达(Cases,S.,等人，2001,J.Biol.Chem.,276,38870-38876)。在临床前模型中，使用反义寡核苷酸阻断肝DGAT2导致多个编码参与脂肪生成的蛋白质的基因表达下调和在氧化途径中的平行诱导。这些变化的净结果是降低肝DAG和TG脂质水平，进而降低肝细胞脂质负担，并降低肝极低密度脂蛋白(VLDL)TG分泌(Choi,C.S.等人，2007.J Biol Chem 282:22678-22688和Yu,X.X.等人，2005,Hepatology,42,362-371)。因此，认为DGAT2的药理抑制将对NAFLD/NASH及其他代谢性疾病包括血糖控制和血浆胆固醇的治疗呈现有益效果。
特别地，鉴于用NASH/NAFLD抑制DGAT2与相关疾病/病症之间存在正相关性，式(I)或(II)化合物凭借药理作用可用于预防、阻止和/或消退NASH/NAFLD和相关疾病状态。
此外，监管机构认可的NASH III期研究的条件批准基于肝活检获得的组织学替代标志物。这些一般接受的替代方案是：i)NASH消退而无纤维化恶化(即，纤维化分期的数值增加)；ii)纤维化减少一个或多个分期而无NASH恶化。细节可以见于以下文献：Ratziu,Acritical review of endpoints for non-cirrhotic NASH therapeutic trials,Journal of Hepatology,2018,68.353-361，及其中的参考文献。
另外，监管机构希望非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活动性评分(NAS)自基线改变。NAFLD活动性评分(NAS)是综合评分，等同于脂肪变性分级(0至3)、小叶炎症分级(0至3)和肝细胞气球样变性分级(0至2)的总和，来自肝活检的集中病理学家评分。NAS的总体规模为0至8，得分越高表示疾病越严重。结果测量，即在NAFLD活动性评分(NAS)中自基线的改变，具有-8至+8的可能范围，负值表示较好的结果(改善)，而正值表示较差的结果。NAS的组成部分评分如下：脂肪变性等级0＝<5％脂肪变性，1＝5-33％脂肪变性，2＝34-66％脂肪变性，3＝>66％脂肪变性。小叶炎症等级＝小叶炎症的量(合并单核、脂肪肉芽肿和多形核(pmn)病灶)：0＝0，1＝在20x放大倍率下<2，2＝在20x放大倍率下2-4，3＝在20x放大倍率下>4。肝细胞气球样变性0＝无，1＝轻度，2＝轻度以上。
由于其药理作用，式(I)或(II)化合物可用于治疗高脂血症、I型糖尿病、II型糖尿病、原发性I型糖尿病(Ib型)、成人潜伏性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年发病非典型糖尿病(YOAD)、青年人中成年发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、冠心病、缺血性卒中、血管成形术后再狭窄、周围血管病、间歇性跛行、心肌梗塞、血脂异常、餐后脂血症、糖耐量受损(IGT)的病症、空腹血糖受损的病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨质疏松症、高血压、充血性心力衰竭、左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、白内障、糖尿病肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病变、代谢综合征、X综合征、经前综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、暂时性脑缺血、中风、血管再狭窄、高血糖症、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、胰岛素抵抗、糖代谢受损、勃起障碍、皮肤和结缔组织障碍、足部溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿兹海默氏症、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和肠易激综合征、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。
本发明化合物的给药可以经由任何全身性和/或局部递送本发明化合物的方法。这些方法包括口服途径、肠胃外、十二指肠内途径、颊、鼻内等。一般而言，本发明的化合物经口服给予，但是例如在口服给药不适合目标或患者无法摄入药物的情况下，可以使用肠胃外给予(例如，静脉内、肌肉内、皮下或髓内)。
为了给予人患者，本文化合物的口服每日剂量可以在1mg至5000mg的范围内，这当然取决于给药的模式和频率、疾病状态以及患者的年龄和病症等。可使用的口服每日剂量在3mg至2000mg的范围内。另外的口服每日剂量在5mg至1000mg的范围内。为了方便起见，本发明化合物可以单位剂型给药。如果希望，可以使用每天多个剂量的单位剂量形式来增加每日总剂量。例如，单位剂型可以是包含约0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、250、300、500或1000mg的本发明化合物的片剂或胶囊。每日总剂量可以单次或分次剂量给药，并且在医生的判断下可能超出本文给出的典型范围。
为了给予人患者，本文中化合物的每日输注剂量可以在1mg至2000mg的范围内，这当然取决于给药的模式和频率、疾病状态以及患者的年龄和病症等。另外的每日输注剂量在5mg至1000mg的范围内。每日总剂量可以单次或分次剂量给药，并且在医生的判断下可能超出本文给出的典型范围。
根据本发明的治疗方法，将本发明化合物或本发明化合物与至少一种另外的药剂的组合(本文称为“组合”)给予需要此治疗的受试者，优选地以药物组合物的形式。在本发明的组合方面中，本发明化合物和至少一种其他药剂(例如，另一种抗肥胖剂)可以分开给药或以包含二者的药物组合物给药。一般优选的是这样的给药为口服给药。
当一起给予本发明化合物和至少一种其他药剂的组合时，此给药可以是按时间依次或是同时给药。一般优选同时给予药物组合。对于依次给药，可以以任何顺序给予本发明化合物和另外的药剂。一般优选这样的给药为口服给药。特别优选此给药为口服且同时给药。当依次给予本发明化合物和另外的药剂时，各自的给药可以通过相同或不同的方法来进行。
根据本发明的方法，本发明化合物或组合优选以药物组合物的形式给药。因此，可以将本发明化合物或组合以任何常规口服、直肠、经皮、肠胃外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(例如，粉剂、软膏、乳膏、喷雾剂或洗剂)、颊或鼻腔剂型(例如，喷雾剂、滴剂或吸入剂)分开或一起给予患者。
本发明化合物或组合物可以单独给予，但是一般与本领域已知并且根据预期的给药途径和标准药学实践选择的一种或多种合适的药物赋形剂、辅助剂、稀释剂或载体混合给予。可以配制本发明化合物或组合以提供立即释放、延迟释放、调节释放、持续释放、脉冲释放或控制释放剂型，这取决于与治疗需要相称的期望的给药途径和释放曲线的特异性。
药物组合物以通常在以下范围内的量包含本发明化合物或组合：组合物的约1％至约75％、80％、85％、90％或甚至95％(按重量计)，通常在约1％、2％或3％至约50％、60％或70％的范围内，更经常在约1％、2％或3％至小于50％，诸如约25％、30％或35％的范围内。
制备具有特定量的活性化合物的各种药物组合物的方法是本领域技术人员已知的。例如，见Remington:The Practice of Pharmacy,Lippincott Williams and Wilkins,Baltimore Md.20.sup.th ed.2000。
适用于肠胃外注射的组合物一般包含药学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重构为无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体或稀释剂(包括溶剂和溶媒)的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合适的混合物、甘油三酯(包括植物油，诸如橄榄油)、和可注射的有机酯类(诸如油酸乙酯)。优选的载体是可得自Condea Vista Co.,Cranford,N.J的具有甘油或丙二醇的Miglyol.RTM牌辛酸/癸酸酯(例如，Miglyol.RTM.812、Miglyol.RTM.829、Miglyol.RTM.840)。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣，在分散体的情况下通过保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂可以保持适当的流动性。
用于肠胃外注射的这些组合物也可以包含赋形剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以用各种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来实现防止组合物的微生物污染。还期望包含等张剂，例如糖、氯化钠等。通过使用能够延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射药物组合物的延长的吸收。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、咀嚼剂、锭剂、丸剂、粉剂和多颗粒制剂(颗粒剂)。在此固体剂型中，将本发明化合物或组合与至少一种惰性赋形剂、稀释剂或载体混合。合适的赋形剂、稀释剂或载体包括诸如以下物质：柠檬酸钠或磷酸二钙和/或(a)一种或多种填充剂或增量剂(例如，微晶纤维素(可从FMC Corp.以Avicel.TM.获得)淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、硅酸、木糖醇、山梨醇、右旋糖、磷酸氢钙、糊精、α-环糊精、β-环糊精、聚乙二醇、中链脂肪酸、氧化钛、氧化镁、氧化铝等)；(b)一种或多种粘合剂(例如，羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、明胶、阿拉伯胶、乙基纤维素、聚乙烯醇、普鲁兰多糖、预胶化淀粉、琼脂、黄蓍胶、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等；(c)一种或多种保湿剂(例如，甘油等)；(d)一种或多种崩解剂(例如，琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合硅酸盐、碳酸钠、月桂基硫酸钠、羟乙酸淀粉钠(从EdwardMendell Co.以Explotab.TM.获得)、交联聚乙烯吡咯烷酮、A型交联羧甲基纤维素钠(以Ac-di-sol.TM.获得)、波拉克林钾(polyacrilin potassium)(离子交换树脂)等)；(e)一种或多种溶液缓聚剂(retarder)(例如石蜡等)；(f)一种或多种吸收促进剂(例如，季铵化合物等)；(g)一种或多种润湿剂(例如十六烷醇、甘油单硬脂酸酯等)；(h)一种或多种吸附剂(例如高岭土、膨润土等)；和/或(i)一种或多种润滑剂(例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸聚乙二醇酯(polyoxyl stearate)、鲸蜡醇、滑石粉、氢化蓖麻油、脂肪酸的蔗糖酯、二甲基聚硅氧烷、微晶蜡、黄蜂蜡、白蜂蜡、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠等)。在胶囊与片剂情况下，剂型也可包含缓冲剂。
相似类型的固体组合物也可作为在使用如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)的此赋形剂和高分子量聚乙二醇等的软或硬充填明胶胶囊中的填充剂。
固体剂型(诸如片剂、糖锭、胶囊与颗粒)可制备有包衣和壳，诸如，肠溶包衣和其他本领域众所周知的。其也可含有遮光剂，并且还可以具有这样的组成，使其以延迟方式释放本发明的化合物和/或另外的药剂。可用的包埋组合物实例是聚合物质与蜡。药物也可呈微囊封形式，如果合适的话，具有上述赋形剂中的一种或多种。
对于片剂，活性剂将通常占制剂的少于50(重量)％，例如少于约10重量％，诸如5重量％或2.5重量％。制剂的主要部分包含填充剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂和任选的调味剂。这些赋形剂的组成是本技术领域众所周知的。通常，填充剂/稀释剂将包含以下组分中的两种或更多种的混合物：微晶纤维素、甘露糖醇、乳糖(所有类型)、淀粉和磷酸二钙。填充剂/稀释剂混合物通常占制剂的少于98％且优选少于95％，例如93.5％。优选的崩解剂包括Ac-di-sol.TM.、Explotab.TM.、淀粉和月桂基硫酸钠。当存在时，崩解剂通常会占制剂的少于10％或少于5％，例如约3％。优选的润滑剂为硬脂酸镁。当存在时，润滑剂通常将占制剂的少于5％或少于3％，例如约1％。
片剂可通过标准压片过程例如直接压片法或湿法、干法或熔融制粒法、熔融凝固法和挤出法来制备。片剂芯可为单层或多层并可以经本领域已知的合适外层包衣。
口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、混悬剂、糖浆和酏剂。除本发明的化合物或组合之外，液体剂型可包含在本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂、共溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(例如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、芝麻籽油等)、Miglyole.RTM.(从CONDEA Vista Co.,Cranford,N.J.获得)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨糖醇酐的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。
除了此惰性稀释剂之外，组合物还可包含赋形剂，诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
本发明的化合物或组合的口服液体形式包括溶液，其中活性化合物被完全溶解。溶剂的实例包括适合口服给药的所有药学上有先例的溶剂，特别是其中本发明的化合物显示良好溶解性的溶剂，例如聚乙二醇、聚丙二醇、食用油和基于甘油基和甘油酯的体系。基于甘油基和甘油酯的体系可包括例如下列品牌产品(与对应的通用产品)：Captex.TM.355EP(三辛酸甘油酯/癸酸甘油酯，来自Abitec,Columbus Ohio)、Crodamol.TM.GTC/C(中链甘油三酯，来自Croda,Cowick Hall,UK)或Labrafac.TM.CC(中链甘油三酯，来自Gattefosse)、Captex.TM.500P(三乙酸甘油酯，即三醋精，来自Abitec)、Capmul.TM.MCM(中链甘油单酯与中链甘油二酯，来自Abitec)、Migyol.TM.812(辛酸/癸酸甘油三酯，来自Condea,Cranford N.J.)、Migyol.TM.829(辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯，来自Condea)、Migyol.TM.840(丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯，来自Condea)、Labrafil.TM.M1944CS(油酰基聚乙二醇-6甘油酯，来自Gattefosse)、Peceol.TM.(单油酸甘油酯，来自Gattefosse)和Maisine.TM.35-1(单油酸甘油酯，来自Gattefosse)。特别关注的是中链(约C8至C10)甘油三酯油类。这些溶剂通常构成组合物的主要部分，即，大于约50％，通常大于约80％，例如约95％或99％。也可与溶剂一起包含的辅助剂与添加剂主要是掩味剂、适口剂(palatability agent)和调味剂、抗氧化剂、稳定剂、质地与粘度调节剂和增溶剂。
除了本发明的化合物或组合之外，混悬剂还可进一步包含载体，诸如助悬剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇与山梨醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍胶或这些物质的混合物等。
用于直肠或阴道给药的组合物优选包含栓剂，其可以通过将本发明化合物或组合与诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡的合适的非刺激性赋形剂或载体混合而制备，所述赋形剂或载体在普通室温下为固体，但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔内融化，从而释放出一种或多种活性成分。
用于本发明化合物或组合的局部给药的剂型包括软膏、乳膏、洗剂、粉剂和喷雾剂。将药物与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体和可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
一些本发明化合物可能难溶于水，例如，小于约1μg/mL。因此，在增溶的非水性溶剂(诸如以上讨论的中链甘油三酯油)中的液体组合物是这些化合物的优选剂型。
固体非晶形分散体，包括通过喷雾干燥法形成的分散体，也是难溶性的本发明化合物的优选剂型。“固体非晶形分散体”是指其中至少一部分难溶性化合物是呈非晶形形式并分散在水溶性聚合物中的固体物质。“非晶形”是指难溶性化合物不是结晶。“结晶”是指化合物在各维度中，在100个重复单元的三个维度上呈现长程有序。因此，术语非晶形不仅旨在包括基本上无序的物质，还包括可能具有一些低度有序的物质，但该有序少于三个维度和/或仅在短距离上。非晶形物质可以通过本领域已知的技术表征，诸如粉末x射线衍射(PXRD)结晶学、固态NMR或热技术，诸如差示扫描量热法(DSC)。
优选地，固体非晶形分散体中的难溶性化合物的至少主要部分(即，至少约60重量％)是非晶形的。化合物可以相对纯的非晶形域或区域存在于固体非晶形分散体中，作为均匀地分布在整个聚合物中的化合物的固溶体或这些状态或位于它们之间的那些状态的任何组合。优选地，固体非晶形分散体是基本上均匀的，使得非晶形化合物尽可能均匀地分散在整个聚合物中。如本文所使用的，“基本上均匀的”是指以相对纯的非晶形域或区域存在于固体非晶形分散体中的化合物的分数相对小，约为药物总量的小于20重量％，优选小于10重量％。
适用于固体非晶形分散体的水溶性聚合物应是惰性的，即其不会以不良方式与难溶性化合物产生化学反应，为药学上可接受的，并且在生理相关pH值(例如，1-8)的水溶液中具有至少一定的溶解度。聚合物可以是中性的或可离子化，并且在1-8的pH范围的至少一部分应具有至少0.1mg/mL的水溶解度。
适用于本发明的水溶性聚合物可以是纤维素或非纤维素。聚合物在水溶液中可以是中性或可离子化的。其中，优选可离子化和纤维素聚合物，更优选可离子化纤维素聚合物。
示例性水溶性聚合物包括羟丙甲纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)、羟丙甲纤维素(HPMC)、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、邻苯二甲酸乙酸纤维素(CAP)、偏苯三酸乙酸纤维素(CAT)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟丙基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物(PEO/PPO，也称为泊洛沙姆)及其混合物。特别优选的聚合物包括HPMCAS、HPMC、HPMCP、CMEC、CAP、CAT、PVP、泊洛沙姆及其混合物。最优选的是HPMCAS。参见欧洲专利申请公开案第0 901 786 A2号，其公开以引用方式并入本文。
固体非晶形分散体可以根据形成固体非晶形分散体的任何方法制备，其导致至少大部分(至少60％)的难溶性化合物处于非晶形状态。这样的方法包括机械、热和溶剂方法。示例性的机械方法包括研磨和挤压；熔融方法包括高温熔合(fusion)、溶剂改性熔合和熔体凝固方法；并且溶剂方法包括非溶剂沉淀、喷涂和喷雾干燥。参见例如以下美国专利，其相关公开内容以引用方式并入本文：第5,456,923号和第5,939,099号，其描述通过挤出方法形成分散体；第5,340,591号和第4,673,564号，其描述通过研磨方法形成分散体；和第5,707,646号和第4,894,235号，其描述通过熔体凝固方法形成分散体。在优选的方法中，固体非晶形分散体通过喷雾干燥形成，如欧洲专利申请公开案第0 901 786 A2号中所公开。在此方法中，将化合物和聚合物溶解在诸如丙酮或甲醇的溶剂中，且随后通过喷雾干燥将溶剂从溶液中迅速去除，以形成固体非晶形分散体。固体非晶形分散体可以被制备成包含至多约99重量％的化合物，例如，根据需要为1重量％、5重量％、10重量％、25重量％、50重量％、75重量％、95重量％或98重量％。
固体分散体可以本身用作剂型，或者可以在制备其他剂型，诸如胶囊、片剂、溶液或混悬剂中用作制备用途产品(MUP)。水性混悬剂的实例是1:1(w/w)化合物/HPMCAS-HF喷雾干燥的分散体的水性悬浮液，其包含在2％的聚山梨醇酯-80中的2.5mg/mL的化合物。用于片剂或胶囊的固体分散体一般将与通常在这样的剂型中发现的其他赋形剂或辅助剂混合。例如，用于胶囊的示例性填充剂包含2:1(w/w)化合物/HPMCAS-MF喷雾干燥的分散体(60％)、乳糖(快速流动)(15％)、微晶纤维素(例如，Avicel.sup.(R0-102)(15.8％)、淀粉钠(7％)、月桂基硫酸钠(2％)和硬脂酸镁(1％)。
HPMCAS聚合物可分别从Shin-Etsu Chemical Co.,LTD,Tokyo,Japan以低、中和高等级的Aqoa.sup.(R)-LF、Aqoat.sup.(R)-MF和Aqoat.sup.(R)-HF获得。较高的MF和HF等级通常是优选的。
方便地，可以在饮用水中携带本发明化合物(或组合)，以便在每日供水中摄取治疗剂量的化合物。化合物可以直接计量加入饮用水中，优选以液态水溶性浓缩物(诸如水溶性盐的水溶液)形式。
例如，对于以上详述适应症，也可将这些化合物给予除人以外的动物。各活性成分的精确给药剂量将根据许多因素变化，包括但不限于，动物的类型和所治疗的疾病状态的类型、动物的年龄和给药途径。
使用与式(I)或(II)化合物联合使用的组合药剂的剂量对于所治疗的适应症是有效的。此剂量可以通过诸如以上提到并在本文中提供的标准试验来测定。组合药剂可以同时或以任何顺序依次给药。
这些剂量基于具有约60kg至70kg的重量的普通人类受试者。对于重量超出此范围的受试者(诸如婴儿和老年人)，医师将很容易确定剂量。
可以调整剂量方案以提供最佳的期望的反应。例如，可给予单次推注，可以随时间给予数个分开剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度所指示按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物是特别有利的，因为易于给药且剂量均匀。如本文所使用的，剂量单位形式是指适合作为待治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理上离散的单位；各单位包含经计算以产生与所需药用载体结合的期望的治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格由以下规定且直接取决于以下：(a)化学治疗剂的独特特征和要达到的特定治疗或预防功效，和(b)配制用于治疗个体敏感性的此活性化合物的领域中固有的局限性。
因此，基于本文提供的公开内容，本领域技术人员将理解，根据治疗领域众所周知的方法调节剂量和给药方案。即，可以容易地建立最大可耐受剂量，并且也可以确定向患者提供可检测的治疗益处的有效量，给予各药剂以向患者提供可检测的治疗益处的时间要求也可以如此。因此，尽管本文举例说明某些剂量和给药方案，但是这些实例绝不限制在实施本发明时可以提供给患者的剂量和给药方案。
应当注意，剂量值可以随要减轻的病症的类型和严重程度而变化，并且可以包括单剂量或多剂量。还应理解，对于任何特定受试者，应根据个体需要和给予或监督组合物的给药人员的专业判断，随时间调整特定的剂量方案，并且本文列出的剂量范围仅是示例性且不旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。例如，可以基于药代动力学或药效动力学参数调节剂量，其可以包括临床效果，诸如毒性作用和/或实验室值。因此，本发明涵盖由技术人员所确定的患者内剂量递增。确定用于给予化学治疗剂的合适剂量和方案在相关领域中是众所周知的，并且一旦提供本文所公开的教导，技术人员就应当理解其被涵盖在内。
本发明进一步包括式(I)或(II)的化合物用作药物(诸如单位剂量片剂或单位剂量胶囊)的用途。在另一个实施方案中，本发明包括式(I)或(II)的化合物用于制备治疗一种或多种在上述讨论治疗方法的部分中在先前所确定的病症的药物(诸如单位剂量片剂或单位剂量胶囊)的用途。
本发明的药物组合物可以作为单一单位剂量或作为多个单一单位剂量制备、包装或批量出售。如本文所使用的，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于将被给予受试者的活性成分的剂量或此剂量的方便的部分，诸如此剂量的二分之一或三分之一。
这些药剂和本发明化合物可以与药学上可接受的溶媒组合，诸如盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液等。特定的剂量方案(即剂量、时机和重复)将取决于特定个体和该个体的病史。
可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且可以包含：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；盐，诸如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八基二甲基苄基氯化铵；六羟季铵氯化物；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基醇或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或Ig；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐的抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
包含这些药剂和/或本发明化合物的脂质体通过本领域已知的方法制备，诸如描述于美国专利案第4,485,045号和第4,544,545号的方法。在美国专利案第5,013,556号中公开了具有增强的循环时间的脂质体。特别有用的脂质体可以通过逆相蒸发法，用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物产生。通过经限定孔径的过滤器挤出脂质体，以产生具有期望的直径的脂质体。
这些药剂和/或本发明化合物也可被包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米粒子和纳米胶囊)中或在粗乳剂中的羟甲基纤维素或明胶-微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊。此技术公开于Remington,The Science and Practice of Pharmacy,第20版,MackPublishing(2000)。
可以使用持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括包含本发明化合物的固体疏水性聚合物的半渗透基质，所述基质呈成形制品形式，例如膜或微囊。持续释放基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如，聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯基醇))，聚乳酸(美国专利案第3,773,919号)，L-谷氨酸和L-谷氨酸乙酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如用于LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林组成的可注射微球)的那些，蔗糖乙酸异丁酸酯，和聚D-(-)-3-羟基丁酸。
用于静脉内给药的制剂必须是无菌的。这很容易通过例如通过无菌过滤膜过滤来实现。通常将本发明化合物置于具有无菌进入端口的容器中，例如静脉内溶液袋或具有通过皮下注射针可刺穿的塞子的小瓶。
合适的乳剂可以使用商业上可获得的脂肪乳剂制备，诸如IntralipidTM、LiposynTM、InfonutrolTM、LipofundinTM和LipiphysanTM。活性成分可以溶解在预混合的乳剂组合物中，或者可以溶解在油(例如，大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)中，并在与磷脂(例如，卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合后形成乳剂。应当理解，可以添加其他成分，例如，甘油或葡萄糖，以调节乳剂的张力。合适的乳剂通常包含最多20％，例如5至20％的油。脂肪乳剂可包含0.1至1.0μm，特别是0.1至0.5μm的脂肪滴，并且具有5.5至8.0的pH。
乳剂组合物可以是通过将本发明化合物与IntralipidTM或其组分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合而制备的那些。
用于吸入或吹入的组合物包含在药学上可接受的水性或有机溶剂中的溶液和悬浮液或其混合物和粉末。液体或固体组合物可包含如上所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，通过口服或经鼻呼吸途径给予组合物用于局部或全身作用。在优选无菌的药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过使用气体雾化。雾化的溶液可以直接从雾化装置中吸入，或者雾化装置可以连接到面罩、帷幕或间歇性正压呼吸机上。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置，优选口服或经鼻给药。
本文的化合物可以配制为用于口服、经颊、鼻内、肠胃外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)或直肠给药或适于通过吸入给药的形式。本发明化合物也可经配制用于持续递送。
制备具有一定量活性成分的各种药物组合物的方法对于本领域技术人员而言是已知，或者根据本公开内容将是显而易见的。对于制备药物组合物的方法的实例，参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,第20版(Lippincott Williams&Wilkins,2000)。
根据本发明的药物组合物可包含0.1％至95％的本发明化合物，优选1％至70％。在任何情况下，待给药的组合物将包含一定量的根据本发明的化合物，其量有效治疗所治疗的受试者的疾病/病症。
由于本发明具有涉及用可以分开给予活性成分的组合来治疗本文所述的疾病/病症的方面，因此本发明还涉及以药盒形式组合分开的药物组合物。药盒包含两种分开的药物组合物：式(I)或(II)的化合物、其前药或此化合物或前药的盐，以及上述第二化合物。药盒包括用于容纳分开的组合物的工具，诸如容器、分开的瓶子或分开的铝箔包装。典型地，药盒包含给予分开的组分的指导。当分开的组分优选以不同的剂型(例如，口服和肠胃外)给药、以不同的剂量间隔给药或者当处方医师需要调整组合中的个别组分时，药盒形式是特别有利的。
这种药盒的实例是所谓的泡罩包装。泡罩包装在包装产业中是众所周知的，并且被广泛用于药物单位剂型(片剂、胶囊等)的包装。泡罩包装一般由优选透明塑料材料的箔覆盖的相对硬的材料片所组成。在包装过程中，在塑料箔中形成凹部。凹部具有待包装的片剂或胶囊的尺寸和形状。接下来，将片剂或胶囊置于凹部中，并将相对硬的材料片在与其中形成凹部的方向相反的箔面上对着塑料箔密封。因此，片剂或胶囊被密封在塑料箔和片之间的凹部中。优选地，片的强度使得可以通过在凹部上手动施加压力从而在片中在凹部的位置形成开口，而从泡罩包装中取出片剂或胶囊。然后可以通过所述开口将片剂或胶囊取出。
可能需要在药盒上以例如片剂或胶囊旁边的数字的形式提供记忆辅助，其中数字对应于应摄入如此规定的片剂或胶囊的方案的天数。该记忆辅助的另一个实例是印在卡上的日历，例如，如下“第一周，星期一，星期二等…第二周，星期一，星期二…”等。记忆辅助的其他变化将是显而易见的。“每日剂量”可以是在给定日期服用的单个片剂或胶囊或数个丸剂或胶囊。同样，式(I)或(II)化合物的每日剂量可由一个片剂或胶囊所组成，而第二化合物的每日剂量可以由数个片剂或胶囊组成，反之亦然。记忆辅助应该反映这一点。
在本发明的另一个具体实施方案中，提供了分配器，该分配器被设计成按其预期用途的顺序一次一个地分配每日剂量。优选地，分配器配备有记忆辅助，以便进一步有利于对方案的依从性。此记忆辅助的实例是机械计数器，该机械计数器指示已经分配的每日剂量的数目。此记忆辅助的另一个实例是电池供电的微芯片存储器，其与液晶读数或声音提醒信号偶连，例如，读出上一次已服用的每日剂量的日期和/或提示何时服用下一次剂量。
同样，由于本发明具有涉及用可以联合给药的活性成分的组合来治疗本文所述的疾病/病症的方面，因此本发明还涉及将分开的药物组合物组合成单一剂型，诸如(但不限于)单个片剂或胶囊，双层或多层片剂或胶囊，或通过使用片剂或胶囊中的分隔的成分或隔室。
活性成分可以在水性或非水性溶媒中以溶液形式递送，所述溶液含有或不含从药学上可接受的稀释剂、赋形剂、溶媒或载体中选择的另外的溶剂、共溶剂、赋形剂或络合剂。
可以将活性成分与药学上可接受的赋形剂配制成固体分散体或自乳化药物递送系统(SEDDS)。
活性成分可以配制成立即释放或缓慢释放(suspended release)片剂或胶囊。供选择地，活性成分可以作为单独地在胶囊壳内的活性成分递送，而无需另外的赋形剂。
实施例
实验程序
除非另有规定，否则起始原料一般可从商业来源获得，诸如Aldrich ChemicalsCo.(Milwaukee,WI)、Lancaster Synthesis,Inc.(Windham,NH)、Acros Organics(Fairlawn,NJ)、Maybridge Chemical Company,Ltd.(Cornwall,England)和TygerScientific(Princeton,NJ)。已使用某些常见的缩写和首字母缩写词，包括：AcOH(乙酸)、DBU(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯)、CDI(1,1’-羰基二咪唑)、DCM(二氯甲烷)、DEA(二乙胺)、DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)、DMAP(4-二甲基氨基吡啶)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲基亚砜)、EDCI(1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、Et2O(二乙基醚)、EtOAc(乙酸乙酯)、EtOH(乙醇)、HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯)、HBTU(O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯)、HOBT(1-羟基苯并三唑)、iPrOH(2-丙醇)、KHMDS(双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾)、MeOH(甲醇)、MTBE(叔丁基甲基醚)、NaBH(OAc)3(三乙酰氧基硼氢化钠)、NaHMDS(双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠)、NMP(N-甲基吡咯烷酮)、SEM([2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基)、TEA(三乙胺)、TFA(三氟乙酸)、THF(四氢呋喃)和T3P(丙烷膦酸酐；2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物)。
反应在空气中进行，或在使用氧气或潮湿敏感试剂或中间体时在惰性气氛(氮气或氩气)下进行。适当时，使用热枪在动态真空下干燥反应设备，并使用无水溶剂(来自Aldrich化学Company的Sure-SealTM产品，来自EMD Chemicals,Gibbstown,NJ的Milwaukee、Wisconsin或DriSolvTM产品)。在一些情况下，使商业溶剂通过装填有
Figure BDA0003670580320000451
分子筛的柱，直到达到以下水的QC标准：a)对于二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃<100ppm；b)对于甲醇、乙醇、1,4-二噁烷和二异丙胺<180ppm。对于非常敏感的反应，将溶剂用金属钠、氢化钙或分子筛进一步处理，并在使用前蒸馏。其他商业溶剂和试剂无需进一步纯化即可使用。对于其他实施例或方法中的合成参考程序，反应条件(反应时间和温度)可能不同。在进行进一步的反应或提交用于生物学测试之前，产物通常在真空下干燥。
当指示时，使用Biotage Initiator或Personal Chemistry Emrys Optimizer微波炉通过微波辐射加热反应。使用薄层色谱法(TLC)、液相色谱法-质谱法(LCMS)和/或高效液相色谱法(HPLC)监控反应进程。TLC在带有荧光指示剂(254nm激发波长)的预涂硅胶板上进行，并在UV光下和/或以I2、KMnO4、CoCl2、磷钼酸和/或钼酸铵铈染色来显色。LCMS数据在配备Leap Technologies自动进样器、Gemini C18柱，MeCN/水梯度和TFA、甲酸或氢氧化铵改性剂的Agilent 1100系列仪器上获得。以100到1200Da的正离子和负离子模式使用Waters ZQ质谱仪扫描分析柱洗脱液。还使用其他类似的仪器。HPLC数据是在Agilent1100系列仪器上使用Gemini或XBridge C18柱、MeCN/梯度和TFA或氢氧化铵改性剂获得。使用电子离子化在HP 5973质量选择性检测器上从50到550Da扫描分析样品。使用IscoCombiFlash Companion、AnaLogix IntelliFlash 280、Biotage SP1或Biotage IsoleraOne仪器和预装填的Isco RediSep或Biotage Snap硅胶柱，通过中效液相色谱法(MPLC)进行纯化。使用Berger或Thar仪器；ChiralPAK-AD、-AS、-IC、Chiralcel-OD或-OJ柱；和单独的或使用TFA或iPrNH2改性的含MeOH、EtOH、iPrOH或MeCN的CO2混合物，通过手性超临界流体色谱法(SFC)进行手性纯化。UV检测用于触发馏分收集。对于其他实施例或方法中的合成参考程序，纯化方法可能不同：一般而言，选择溶剂和洗脱剂/梯度所用的溶剂比以提供适当的Rf或保留时间。
由LCMS分析报告质谱法数据。质谱法(MS)通过大气压化学电离(APCI)、电喷雾电离(ESI)、电子碰撞电离(EI)或电子散射(ES)电离源进行。质子核磁光谱法(1H NMR)化学位移以自四甲基硅烷的低场的百万分率给出，并记录在300、400、500或600MHz Varian、Bruker或Jeol光谱仪上。化学位移以相对于氘代溶剂残留峰的百万分率(ppm，δ)表示(氯仿，7.26ppm；CD2HOD，3.31ppm；乙腈-d2，1.94ppm；二甲基亚砜-d5，2.50ppm；DHO，4.79ppm)。峰形描述如下：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；quin，五重峰；m，多重峰；br s，宽单峰；app，明显。如上所述，在Berger分析仪器上获得分析性SFC数据。使用1dm池在PerkinElmer 343型旋光仪上获取旋光数据。硅胶色谱法主要使用中压Biotage或ISCO系统，使用包括Biotage和ISCO的各商业供货商预装填的柱进行。微量分析由QuantitativeTechnologies Inc.进行，且在计算值的0.4％以内。
除非另有说明，否则化学反应在室温(约23摄氏度)下进行。
除非另有说明，否则所有反应物为商业上可获得而无需进一步纯化，或使用文献中已知的方法制备。
术语“浓缩”、“蒸发”和“真空浓缩”是指在浴温低于60℃的旋转蒸发器上减压除去溶剂。缩写“min”和“h”分别代表“分钟”和“小时”。术语“TLC”是指薄层色谱法，“室温或环境温度”是指18至25℃之间的温度，“LCMS”是指液相色谱法-质谱法，“UPLC”是指超高效液相色谱法，而“HPLC”是指高效液相色谱法，“SFC”是指超临界流体色谱法。
氢化可在Parr振荡器中在加压氢气下进行，或在Thales-nano H-Cube流动氢化设备中以全氢和1至2mL/min的流速在指定温度下进行。
HPLC、UPLC、LCMS和SFC保留时间使用程序中所提到的方法测量。
在一些实施例中，进行手性分离以分离本发明的某些化合物的对映异构体(在一些实施例中，分离的对映异构体根据洗脱顺序被命名为ENT-1和ENT-2；同样地，根据其洗脱顺序，将分离的非对映异构体命名为DIAST-1和DIAST-2。在一些实施例中，使用旋光仪测量对映异构体的旋光度。根据其观察到的旋转数据(或其特定旋转数据)，将具有顺时针方向旋转的对映异构体命名为(+)-对映异构体，且将具有逆时针方向旋转的对映异构体命名为(-)-对映异构体。外消旋化合物通过不绘制或描述的立体化学表示，或通过在结构旁(+/-)的存在表示；在后一种情况下，所示的立体化学仅表示构成外消旋混合物的两种对映异构体中的一种。
以下说明各种本发明化合物的合成。本发明范围内的另外的化合物可以使用这些实施例中所说明的方法单独制备，或与本领域通常已知的技术组合制备。这些制备和实施例中的所有起始原料都是可商业获得的，或者可以通过本领域已知的方法或者如本文所述的方法制备。
使用ACD/ChemSketch 2017.2.1，文件版本C40H41，Build99535(AdvancedChemistry Development,Inc.,Toronto,Ontario,Canada)提供的命名约定来命名以下描述的化合物和中间体。ACD/ChemSketch 2017.2.1提供的命名约定是本领域技术人员众所周知，并且认为ACD/ChemSketch 2017.2.1提供的命名约定通常与IUPAC(InternationalUnion for Pure and Applied Chemistry)关于有机化学命名法和CAS索引规则的建议一致。
制备P1
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸(P1)
Figure BDA0003670580320000481
Figure BDA0003670580320000491
步骤1.2-[(5-溴吡啶-3-基)氧基]-3-乙氧基吡啶(C1)的合成。
向2-溴-3-乙氧基吡啶(841g,4.16mol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.4L)中的溶液添加溴化铜(I)(538g，3.75mol)，接着添加碳酸钾(1.04kg，7.52mol)。在25℃下搅拌所得混合物，且5-溴吡啶-3-醇(652g，3.75mol)以一批添加，之后在120℃下加热反应混合物16小时。然后冷却到30℃，缓慢倒入碎冰(9.0kg)和10％氨的水溶液(7.0L)的混合物。将所得悬浮液搅拌1小时之后，通过过滤收集沉淀物，并用水(3x 5L)洗涤滤饼。之后在乙酸乙酯(8L)中搅拌1小时并过滤；用饱和氯化钠水溶液(5L)洗涤滤液，用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。残余物在石油醚(2L)中搅拌，且通过过滤收集固体以提供C1。在减压下浓缩滤液，且用石油醚(200mL)研磨残余物以提供另外的C1。合并两批次以提供呈黄色固体的C1。收率：835g，2.83mol,75％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.48(d,J＝1.9Hz,1H),8.44(d,J＝2.4Hz,1H),7.71(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.69(dd,J＝2.2,2.1Hz,1H),7.24(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.03(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),4.14(q,J＝7.0Hz,2H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤2.5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-甲腈(C2)的合成。
向C1(324g，1.10mol)在N,N-二甲基甲酰胺(3.0L)中的溶液中一批添加亚铁氰化钾(II)三水合物(697g，1.65mol)，接着添加水(300mL)。将所得悬浮液在真空下脱气，然后用氮吹扫；进行此抽空吹扫循环总共4次。然后添加乙酸钯(II)(4.94g，22.0mmol)和2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(XPhos；18.7g，39.2mmol)，进行抽空吹扫循环5次，并将反应混合物在105℃下加热18小时。在反应混合物冷却到50℃之后，过滤，且将滤液倒到冰水(3L)中，然后搅拌大约1小时。过滤收集所得固体，溶解于乙酸乙酯(1.5L)，用饱和氯化钠水溶液(1L)洗涤，干燥，过滤并真空浓缩以提供呈黄色固体的C2(209g)。来自以上的水性滤液用叔丁基甲基醚(2x 3L)萃取，且将合并有机层用饱和氯化钠水溶液(0.5L)洗涤，干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供另外的C2(20g)。合并收率：229g，0.949mol，86％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.71(d,J＝2.7Hz,1H),8.68(d,J＝1.8Hz,1H),7.80(dd,J＝2.7,1.7Hz,1H),7.70(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.29–7.25(m,1H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),7.08(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),4.16(q,J＝7.0Hz,2H),1.49(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤3.5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-甲脒，盐酸盐(C3)的合成。
向C2(180g，0.746mol)在甲醇(1.3L)中的0℃至5℃悬浮液添加甲醇钠在甲醇(5M；30mL，150mmol)中的溶液。添加甲醇(500mL)以协助搅拌，之后使反应混合物回温到室温(18℃)并搅拌20小时。然后冷却到-40℃并用氯化铵(48.0g，897mmol)以一批处理，之后混合物回温到室温(18℃)并搅拌40小时。真空浓缩以移除大约一半的甲醇之后，通过过滤移除所得白色沉淀物(无机盐)。用乙酸乙酯(400mL)稀释滤液并在减压下浓缩到大约400mL的体积。该乙酸乙酯稀释-浓缩程序重复两次以实现甲醇与乙酸乙酯的交换。过滤所得悬浮液得到呈白色固体的C3。收率：175g，0.594mol，80％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(d,J＝2Hz,1H),8.77(d,J＝2.6Hz,1H),8.05(dd,J＝2,2Hz,1H),7.66(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.18(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),4.17(q,J＝7.0Hz,2H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤4.2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸甲酯(C4)的合成。
将2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(201g，1.01mol)以一批添加到C3(249g，0.845mol)在甲醇(1.75L)中的溶液。反应混合物为浓稠悬浮液，在18℃下搅拌20小时，之后通过过滤收集沉淀物以得到呈白色固体的C4。收率：259g，0.735mol，87％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(d,J＝1.8Hz,1H),9.35(s,2H),8.67(d,J＝2.7Hz,1H),8.37(dd,J＝2.8,1.8Hz,1H),7.69(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.58(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.19(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.93(s,3H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤5.2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸(P1)的合成。
该反应以平行的两批进行：C4(321g，0.911mol)悬浮于甲醇(1.6L)，在冰水浴中冷却，并以逐滴方式用氢氧化钠溶液处理(2M；684mL，1.37mol)。在完成添加之后，在14℃下搅拌反应混合物16小时，之后合并两批次。用水(3.2L)稀释所得悬浮液，用冰水浴冷却(大约5℃至10℃)，并通过逐滴添加1M盐酸调整到pH 3至4。在14℃下搅拌混合物2小时，然后过滤；用水(2x 1L)和乙酸乙酯(1L)依次洗涤滤饼，得到呈白色固体的P1。合并收率：557g，1.65mol，91％。LCMS m/z 338.9[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(d,J＝1.8Hz,1H),9.31(s,2H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.36(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.68(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.56(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.17(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),4.16(q,J＝7.0Hz,2H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H)。
使用如上所述的类似程序制备的制备P1物质进一步使用在配备有Cu辐射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪上进行的粉末X射线衍射分析来分析。将发散狭缝设定为15mm连续照明。通过PSD-Lynx Eye检测器检测到衍射辐射，检测器PSD的开口设在3.00度。X射线管电压和安培数分别设定为40kV和40mA。在Cu波长为3.0到40.0度2-θ的θ-θ测角仪中使用0.01度的步长和1.0秒的步进时间来收集数据。抗散射屏幕设置为1.5mm的固定距离。在收集过程中，样品以15/min旋转。通过将样品放置在硅低背景样品架中准备样品，并在收集过程中旋转。
使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集数据，并通过EVA diffract plus软件进行分析。峰搜索之前未处理PXRD数据文件。使用EVA软件中的峰搜索算法，将以阈值1选择的峰用于初步的峰归属。为确保有效性，手动进行调整；目视检查自动归属的输出，并调整峰位置以达到峰最大值。一般选择相对强度≥3％的峰。未选择未分辨或与噪声一致的峰。USP中规定的与PXRD的峰位置有关的典型误差最高达±0.2°2θ(USP-941)。基于晶体尺寸和形态的变化，预期相对峰高有一些变化。图6提供特征性x射线粉末衍射图。来自该图的PXRD数据在表AA中进一步描述。使用类似的程序，如上所述准备另外两批次制备P1的结晶物质并分析。图7和图8提供这些批次的特征性X射线粉末衍射图。
表AA：制备P1形式1的结晶物质的PXRD峰
Figure BDA0003670580320000521
表AB：表征制备P1形式1的结晶物质的主要PXRD峰
制备P1形式1
2θ角(°)±0.2°
7.6,10.0,14.9,16.2,19.6
C2的替代合成
5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-甲腈(C2)
Figure BDA0003670580320000531
用氮吹洗2-溴-3-乙氧基吡啶(10.0g，49.5mmol)在1,4-二噁烷(250mL)中的溶液2分钟。然后添加5-羟基吡啶-3-甲腈(6.54g，54.4mmol)、乙酸钯(II)(556mg，2.48mmol)、1,1′-双(二-叔丁基膦基)二茂铁(1.41g，2.97mmol)和碳酸铯(32.3g，99.1mmol)，并在105℃下搅拌反应混合物16小时，之后与使用2-溴-3-乙氧基吡啶(7.00g，34.6mmol)进行的类似反应合并且冷却到室温。用乙酸乙酯(200mL)稀释之后，通过硅藻土过滤合并的反应混合物且在真空中浓缩至干。用乙酸乙酯(200mL)稀释残余物，用饱和氯化钠水溶液(2x 200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。硅胶色谱法(梯度：在石油醚中的0％至35％乙酸乙酯)得到呈黄色固体的C2。合并收率：18.0g，74.6mmol，89％。LCMS m/z242.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.70(d,J＝2.7Hz,1H),8.66(d,J＝1.8Hz,1H),7.79(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.69(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.26(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),4.15(q,J＝7.0Hz,2H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H)。
制备P2
2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸(P2)
Figure BDA0003670580320000541
步骤1.2-溴-3-乙氧基-5-氟吡啶(C5)的合成。
将碳酸钾(697g，5.04mol)添加到2-溴-5-氟吡啶-3-醇(745g，3.88mol)在N,N-二甲基甲酰胺(4L)中的溶液，之后将反应容器抽空并充入氮。此抽空循环重复两次，之后加热反应混合物到35℃。在30分钟内逐滴添加碘乙烷(372mL，4.65mol)，并在35℃下搅拌反应混合物16小时之后，将其冷却到25℃且用水(6L)稀释。在25℃下继续搅拌15分钟；通过过滤收集所得固体，并用叔丁基甲基醚(3x 1.5L)萃取滤液。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。残余物与从第一次过滤获得的固体合并，得到呈褐色固体的C5。收率：756g，3.44mol，89％。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(d,J＝2.5Hz,1H),6.90(dd,J＝9.5,2.5Hz,1H),4.10(q,J＝7.0Hz,2H),1.51(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤2.5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-甲腈(C6)的合成。
此反应分四个平行批次进行。将5-羟基吡啶-3-甲腈(112.6g，937.5mmol)和碳酸铯(389g，1.19mol)以一批添加到C5(187.5g，852.1mmol)在1,4-二噁烷(2.5L)中的溶液。将反应容器抽空并充入氮。此抽空循环重复两次，之后将乙酸钯(II)(9.57g，42.6mmol)和1,1′-双(二-叔丁基膦基)二茂铁(20.2g，42.6mmol)添加到反应混合物。如上述重复抽空-氮循环，之后在85℃下搅拌反应混合物16小时。16小时后未完成的任何反应均用另外的乙酸钯(II)(9.57g，42.6mmol)和1,1′-双(二-叔丁基膦基)二茂铁(20.2g，42.6mmol)处理并在85℃下搅拌另外的16小时。此时，将四个反应混合物合并并过滤；真空浓缩滤液，并将残余物溶解于乙酸乙酯(3L)，且之后用水(6L)稀释。在25℃下搅拌所得混合物15分钟，之后分层，且用乙酸乙酯(3x 1L)萃取水层。在合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(2x 3L)洗涤之后，将其用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。在25℃下在叔丁基甲基醚(1L)和石油醚(2L)的混合物中搅拌残余物20分钟，并通过过滤收集所得固体以得到呈固体的C6(813g)。真空浓缩滤液且进行硅胶色谱法(梯度：在石油醚中的0％至30％乙酸乙酯)以提供另外的呈褐色固体的C6(52g)。合并收率：865g，3.34mol，98％。LCMS m/z 259.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.73-8.64(m,2H),7.77(br s,1H),7.56(d,J＝2.5Hz,1H),7.06(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),4.14(q,J＝7.0Hz,2H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤3.5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-甲脒，盐酸盐(C7)的合成。
C6(919g，3.54mol)在乙酸乙酯(3L)中的溶液用活性碳(大约200g)处理，且之后在77℃下搅拌3小时。在所得混合物过滤之后，真空浓缩滤液以提供C6(894g，3.45mol)。然后以三个平行批次进行以下反应。将甲醇钠(12.4g，230mmol)添加到0℃的C6(298g，1.15mol)在甲醇(2L)中的溶液。在冷却到-40℃之前，使反应混合物回温到25℃，然后在25℃下搅拌20小时，并用氯化铵处理(67.6g，1.26mol)。在此时，使反应混合物回温到25℃，并在25℃下搅拌40小时，之后合并三个批次并真空浓缩，得到呈棕色胶状物的C7(1.15kg)。此物质直接用于下述步骤。LCMS m/z 276.8[M+H]+。
步骤4.2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸甲酯(C8)的合成。
此反应分三个平行批次进行。将2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(357g，1.80mol)一批添加到C7(来自之前的步骤；383g，≤1.15mol)在甲醇(2.5L)中的25℃溶液。在25℃下搅拌16小时之后，如LCMS分析评估，三个反应中的两个反应完成。第三个(不完全)反应用另外的2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(54.9g，277mmol)处理，并在25℃下继续搅拌6小时。在此时，合并三个批次，用水(8L)稀释，并过滤。在滤饼用水(2x 2L)洗涤之后，在25℃下在甲醇(1L)和叔丁基甲基醚(1L)的混合物中搅拌3小时，之后过滤悬浮液以提供呈褐色固体的C8。两个步骤收率：1.0kg，2.7mol，78％。LCMSm/z370.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.54(d,J＝1.8Hz,1H),9.32(s,2H),8.63(d,J＝2.7Hz,1H),8.55(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.57(d,J＝2.5Hz,1H),7.05(dd,J＝9.2,2.5Hz,1H),4.16(q,J＝7.0Hz,2H),4.00(s,3H),1.51(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤5.2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-羧酸(P2)的合成。
以逐滴方式用氢氧化钠溶液(2M；1.01L,2.02mol)处理C8(500g，1.35mol)在甲醇(2L)中的悬浮液。在完成添加之后，在25℃下搅拌反应混合物16小时，之后用水(2L)稀释。然后通过逐滴添加盐酸(1M；大约1.5L)将pH调整到3至4；在25℃下搅拌所得混合物1小时，并通过过滤收集固体。用水(2x 1L)洗涤滤饼以提供呈灰白色固体的P2。收率：405g，1.14mol，84％。LCMS m/z 356.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(d,J＝1.7Hz,1H),9.31(s,2H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.37–8.34(m,1H),7.71(d,AB四重峰的组分,J＝2.6Hz,1H),7.68(dd,ABX系统的组分,J＝9.8,2.6Hz,1H),4.19(q,J＝7.0Hz,2H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H)。
制备P3
(3S,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(P3)
Figure BDA0003670580320000581
按整个顺序大规模进行。一般来说，在反应之前和添加试剂之后，将反应器抽真空至≤-0.07MPa，然后用氮气充至常压。一般重复此过程3次，然后评估氧含量以确保其为≤1.0％。对于有机层的淬灭、萃取和洗涤过程，一般将混合物搅拌15至60分钟，然后在分离各层之前使其沉降15至60分钟。
步骤1.(2S,4R)-1-苄基-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(D1)的合成。
以80至120kg/小时的参考速度将三乙胺(93.55kg，924.5mol)加入到二氯甲烷(968kg)和(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯，盐酸盐(56.05kg，308.6mol)的15℃至25℃混合物中。搅拌混合物10至20分钟之后，以20至30kg/小时的参考速度添加溴化苄(79.00kg，461.9mol)。在15℃至25℃下搅拌反应混合物；12小时之后，每2至6小时取样用于通过HPLC分析，直到起始原料的面积百分比为低于2％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEHC18,4.6x 150mm，3.5μm；流动相A：含0.1％七氟丁酸的水；流动相B：乙腈；梯度：10％B持续3分钟，然后在10分钟内10％至40％B，然后在5分钟内40％至90％B；流速：1.0mL/分钟)。(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯的典型保留时间：3.8分钟。
然后将水(280kg)以100至150kg/小时的参考速度和15℃至25℃加入反应器中。用二氯甲烷(372kg，281L，5体积)萃取水层一次；将合并的有机层用氯化钠(93.0kg)在水(280kg)中的溶液洗涤，然后在-0.08MPa下浓缩至100至150L的体积，同时温度维持在35℃以下。将四氢呋喃(497kg)分两部分加入所得混合物中。再次在-0.08MPa下浓缩混合物至100至150L的体积，同时温度维持在35℃以下。对残余二氯甲烷进行Karl Fischer分析和取样以确保水含量为≤0.30％且残余二氯甲烷为≤4％。将所得溶液调节到15℃至30℃，得到包含D1的黄色溶液。收率：136.8kg的溶液，包含D1(69.14kg，293.9mol，95％)。HPLC纯度：90％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D1的保留时间：4.72分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d)δ7.34-7.21(m,5H),4.48-4.39(m,1H),3.90(d,J＝12.9Hz,1H),3.65(d,J＝12.9Hz,1H),3.65(s,3H),3.59(dd,J＝7.9,7.8Hz,1H),3.32(dd,J＝10.1,5.7Hz,1H),2.57(br s,1H),2.45(dd,J＝10.2,4.1Hz,1H),2.24(ddd,J＝13.2,7.7,6.9Hz,1H),2.07(ddd,J＝13.3,8.0,3.2Hz,1H)。
步骤2.(2S,4S)-1-苄基-4-氟吡咯烷-2-羧酸甲酯(D2)的合成。
在15℃至25℃下将D1在四氢呋喃中的溶液(128.4kg，包含64.90kg，275.8mol的D1)添加到包含四氢呋喃(575kg)的反应器中。然后以35至45kg/小时的参考添加速度添加三乙胺(114.2kg，1129mol)。将三乙胺三氢氟化物(66.70kg，413.7mol)加入混合物中，接着以60至80kg/小时的参考速度加入九氟丁烷-1-磺酰氟(128.0kg，423.7mol)，并使反应在15℃至25℃下进行。4小时之后，每2至6小时对反应混合物取样用于通过HPLC分析，直到D1面积百分比低于1％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D1的典型保留时间：5.0分钟。
然后将混合物冷却至10℃至15℃，并以100至120kg/小时的参考速度添加水(325kg)，接着在15℃至25℃下添加叔丁基甲基醚(240.5kg)。用碳酸氢钠(18.2kg，217mol)在水(198kg)中的溶液洗涤有机相两次，然后用氯化钠(47.2kg)在水(130kg)中的溶液洗涤两次。然后在≤-0.08MPa下浓缩至150至200L的体积，同时维持温度低于45℃。将所得混合物调节到20℃至30℃之后，添加叔丁基甲基醚(123kg，166L,2.5体积)和正庚烷(112kg，163L，2.5体积)。通过硅胶柱(112kg的硅胶)过滤所得混合物，直到几乎所有物质都已被过滤。然后用叔丁基甲基醚(481kg，10体积)和正庚烷(444kg，10体积)在20℃至30℃下冲洗反应器，并且此冲洗液也通过硅胶柱过滤。通过包含硅胶(40kg)的新柱洗脱合并的滤液，并且洗脱液在≤-0.08MPa下浓缩至80至100L的体积，同时温度维持在低于45℃。将所得溶液调节到20℃至30℃，得到包含D2的黄色溶液。收率：104.3kg的溶液，包含D2(52.64kg，221.8mol，80％)。HPLC纯度：83％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D2的保留时间：7.34分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d)δ7.37–7.22(m,5H),5.10(br ddd,J＝54.8,5,5Hz,1H),4.03(d,J＝13.0Hz,1H),3.70(s,3H),3.59(d,J＝13.0Hz,1H),3.34–3.21(m,2H),2.65–2.42(m,2H),2.29(br ddd,J＝29.8,14.8,6.3Hz,1H)。
步骤3.[(2S,4S)-1-苄基-4-氟吡咯烷-2-基]甲醇(D3)的合成。
在15℃至25℃下，在氮下，将四氢呋喃(352kg)添加到氢化铝锂(8.20kg，216mol)中。在完成添加之后，搅拌混合物10至15分钟，并将氮从反应器的下部端口鼓泡3至5分钟。将混合物调节到8℃至15℃，然后以35至45kg/小时的参考速度在8℃至15℃下分批添加D2在四氢呋喃中的溶液(99.10kg，包含50.02kg，210.8mol的D2)。加入三分之一的底物之后，搅拌反应混合物0.5至1小时，然后取样分析。不添加另外的材料直到剩余≤10％的D2装料。完成整个D2添加后，使反应在8℃至15℃下进行；1小时之后，每1至3小时取样用于HPLC分析，直到观察到≤2％的D2(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D2的典型保留时间：7.5分钟。
然后通过添加水(8.00kg)和四氢呋喃(44.5kg)的混合物淬灭反应；其在0℃至20℃下以6至8kg/小时的参考速度添加。然后在10℃至25℃下，以10至20kg/小时的参考速度将氢氧化钠(1.40kg，35mol)在水(30.0kg)中的溶液加入混合物中。此添加完成之后，搅拌混合物0.5至1小时。在15℃至25℃下将氮从反应器的下部端口鼓泡到混合物中4至6小时。过滤混合物，并将所收集的固体与四氢呋喃(317kg)在15℃至25℃下搅拌1至2小时；然后过滤此混合物。将合并的滤液在≤-0.08MPa下浓缩至1至1.2体积，同时温度维持在低于45℃。将2-甲基四氢呋喃(388kg)分批加入混合物中，同时温度维持在低于45℃。每次添加之后，搅拌到5至10分钟，然后如上浓缩至1至1.2体积。进行取样以确保残余的四氢呋喃为≤2％，且水含量(通过Karl Fischer分析)为≤0.1％。将所得混合物调节至15℃至25℃并用2-甲基四氢呋喃(43.0kg)处理；搅拌得到包含D3的黄色溶液。收率：102.7kg的溶液，包含D3(41.05kg，196.2mmol，93％)。HPLC纯度：90％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D3的保留时间：5.38分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d),特征峰：δ7.37-7.23(m,5H),5.05(br ddd,J＝54.5,4.7,4.5Hz,1H),4.04(d,J＝13.3Hz,1H),3.54-3.45(m,1H),3.33(d,J＝13.3Hz,1H),3.23(br dd,J＝18.5,11.7Hz,1H),2.83-2.75(m,1H),2.63(br d,J＝9.2Hz,1H),2.49-2.10(m,3H)。
步骤4.(3R,5S)-1-苄基-5-氟哌啶-3-醇(D4)的合成。
在15℃至25℃下将D3在2-甲基四氢呋喃中的溶液(102.6kg，包含41.03kg，196.1mol的D3)添加到2-甲基四氢呋喃(160kg)中。然后以35至45kg/小时的参考速度加入三氟乙酸酐(42.20kg，200.9mol)，接着以35至45kg/小时的参考速度加入三乙胺(61.1kg，604mol)。将反应混合物维持在15℃至25℃下持续1小时，然后加热至77℃至82℃。12小时之后，每1至12小时取样用于HPLC分析，直到D3的面积百分比为≤3％(HPLC条件.柱：WatersXBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D3的典型保留时间：5.8分钟。
此时，将反应混合物冷却至10℃至20℃并用氢氧化钠(3.30kg，82mol)在水(41.1kg)中的溶液以34至45kg/小时的参考速度处理，同时温度维持在10℃至30℃之间。在完成添加之后，将混合物搅拌1小时，随后在15℃至30℃下用氯化钠(23.1kg)在水(82.2kg)中的溶液洗涤。用叔丁基甲基醚(150kg，203L，5体积)在15℃至30℃下萃取水层一次，并将合并的有机层在≤-0.08MPa下浓缩至1至1.2体积，同时温度维持在低于45℃。将混合物在15℃至30℃下用水(162kg)洗涤两次，并针对三乙胺对有机相进行取样，以确保三乙胺水平为≤3％。然后在≤-0.08MPa的条件下浓缩至1至1.2体积的量，同时温度维持在低于45℃。添加四氢呋喃(110kg)，并将所得混合物再次在≤-0.08MPa下浓缩至1至1.2体积的量，同时温度维持在低于45℃。将所得物质冷却至20℃至30℃，得到包含D4的深棕色溶液。收率：153.5kg的溶液，包含D4(36.50kg，174.4mmol，89％)。HPLC纯度：85％(HPLC条件.柱：WatersXBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D4的保留时间：5.88分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d)δ7.36-7.23(m,5H),4.84-4.66(m,1H),3.90-3.81(m,1H),3.62-3.59(m,2H),2.92-2.76(m,2H),2.69(dd,J＝11.5,5.0Hz,1H),2.54-2.39(m,2H),2.10-1.98(m,1H),1.95-1.78(m,1H)。
步骤5.(3S,5R)-3-氟-5-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(D5)的合成。
将在四氢呋喃中的D4(包含30.03kg，143.5mol的D4)、四氢呋喃(218kg)和二碳酸二叔丁酯(47.10kg，215.8mol)的混合物在15℃至30℃下通过表面下管道用氮吹扫至0.2至0.3MPa，然后排气至0.02至0.05MPa。重复此吹扫和排气程序5至8次。在15℃至30℃下将钯碳(10％，3.00kg)加入反应器中，然后用水(0.26kg)冲洗固体加料漏斗。通过表面下管道用氮将反应混合物吹扫至0.1至0.2MPa，然后在15℃至30℃下排气至0.02至0.05MPa；此吹扫和排气程序重复5至8次。然后使用氢进行相同的吹扫-排气过程。在最后的氢交换之后，用氢将压力增加至0.1至0.2MPa。然后每1至3小时用氮交换反应混合物两次，并通过表面下管道用氢吹扫至0.1至0.2MPa，接着排气至0.02至0.05MPa。交换后，将氢压力增加至0.1至0.2MPa，并将反应混合物维持在20℃至30℃。8小时后，每1至12小时对反应取样用于HPLC分析，直到D4量为≤1.0％(HPLC条件.柱：Waters XSelect苯基-己基,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：含0.1％三氟乙酸的水；流动相B：含0.1％三氟乙酸的乙腈；梯度：在15分钟内5％至35％B；流速：1.0mL/分钟)。
然后将混合物通过表面下管道用氮吹扫至0.2到0.3MPa，并在15至30℃下排气到0.02到0.05MPa；重复此循环不少于9次。在20℃至30℃下，将反应混合物通过不锈钢吸滤器，并用四氢呋喃(26.6kg，29.9L，1体积)冲洗滤饼；将合并的滤液通过装载有硅胶(15.1kg)的滤器，然后将二氧化硅滤饼用四氢呋喃(52.7kg，59.3L，2体积)冲洗。将合并的滤液在15℃至30℃下通过在线滤器且在≤-0.08MPa下浓缩至1.1至1.4体积的量，同时温度维持在低于45℃。用正庚烷(102kg)在15℃至45℃下处理所得混合物，并搅拌10分钟，之后对混合物取样以确保残余的四氢呋喃为<8％。在15℃至45℃下加入四氢呋喃(6.90kg)和正庚烷(101kg)，且将混合物加热至50℃至55℃，然后冷却至18℃至25℃并搅拌1小时。将D5的晶种(0.06kg；参见以下来源)加入混合物中，然后搅拌1至2小时，同时将温度维持在18至25℃。在15℃至20℃下继续搅拌8至12小时以结晶。每2到3小时从反应器下部端口鼓入氮，以进行浓缩。然后使用不锈钢吸滤器过滤混合物；滤饼用正庚烷(20.4kg)和四氢呋喃(0.81kg)的混合物冲洗，然后在20℃至30℃下干燥直至取样显示残余的四氢呋喃≤720ppm以及残余的正庚烷≤5000ppm。获得呈灰白色固体的产物D5。收率：12.15kg，测定为97.5％；校正重量：11.84kg，54.00mol。来自母液回收的另外的物质：5.17kg，23.6mmol。合并收率：54％。HPLC纯度：94％(HPLC条件.柱：Waters XSelect苯基-己基，4.6x 150mm，3.5μm；流动相A：含0.1％三氟乙酸的水；流动相B：含0.1％三氟乙酸的乙腈；梯度：在15分钟内5％至35％B；流速：1.0mL/分钟)。D5的保留时间：12.58分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d)δ4.69(brd,JHF＝47.2Hz,1H),3.86-3.76(m,1H),3.62-3.35(m,3H),2.64-2.44(m,1H),2.18-1.92(m,2H),1.46(s,9H)。
D5的晶种的制备：如上所述进行D4的较小规模的氢化反应；在除去钯碳后，将所得的D5在四氢呋喃中的溶液浓缩至大约1至1.2体积(基于所用的D4量)。将所得混合物用四氢呋喃(0.2体积)和正庚烷(15体积)处理，加热至50℃至55℃，然后冷却至15℃至20℃。将悬浮液搅拌6至8小时后，过滤以得到呈固体的D5；此物质用作晶种。
步骤6.(3S,5R)-3-氟-5-[(甲基磺酰基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(D6)的合成。
在15℃至25℃下将二氯甲烷(229kg)加入反应器，接着加入D5(17.40kg；从分析结果校正为：16.96kg，77.35mol)；然后从下部端口鼓入氮。在15℃至25℃下添加三乙胺(9.80kg，96.8mol)，之后将反应混合物冷却至0℃至5℃。在将混合物维持在0℃至10℃的同时，添加甲磺酰氯(10.18kg，88.88mol)，并使反应在0℃至10℃下进行。1小时后，每1至3小时取样，直到D5的面积百分比为低于1％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内30％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D5的典型保留时间：4.31分钟。
此时，将水(52.0kg)在0℃至5℃下以20至38kg/小时的参考速度加入混合物中。在0℃至10℃下，用二氯甲烷(70.4kg，53.1L，3体积)萃取所得混合物的水相，且将合并的有机层用氯化钠(4.30kg)在水(17.4kg)中的溶液在0℃至15℃下洗涤，随后在≤-0.09MPa下浓缩至2至3体积，同时将温度维持在低于30℃。在0℃至30℃下用叔丁基甲基醚(128kg)分批稀释残余物，然后将混合物在≤-0.09MPa下浓缩至2至3体积，同时温度维持在低于30℃。在0℃至30℃下再次分批将叔丁基甲基醚(65.0kg)加入混合物，并在≤-0.09MPa下再次浓缩混合物至2至3体积，同时温度维持在低于30℃。重复此过程，直到对二氯甲烷的分析表明残余二氯甲烷量为≤2％。然后将混合物加热至35℃至40℃，并以40至60kg/小时的参考速度添加正庚烷(116kg)，之后以10℃至15℃/小时的参考速度将混合物缓慢冷却至0℃至10℃。然后在0℃至10℃下搅拌2小时。过滤得到滤饼，将其用正庚烷(22.5kg)冲洗洗，然后在氮气流下在35℃至40℃下干燥。将所得固体与叔丁基甲基醚(59.4kg)在15℃至30℃下混合，然后加热至35℃至40℃。在35℃至40℃下以40至60kg/小时的参考速度添加正庚烷(119kg)，并将所得混合物以10℃至15℃/小时的参考速度缓慢冷却至0℃至10℃。在0℃至10℃下搅拌混合物2小时后，过滤，并用正庚烷(23.6kg)冲洗滤饼。将所收集的固体在35℃至40℃下干燥直至残余的叔丁基甲基醚为≤5000ppm，残余的正庚烷为≤5000ppm，且Karl Fischer分析显示水含量≤0.1％。将所得物质冷却至15℃至30℃，得到呈白色固体的D6。收率：19.35kg，测定为98.3％；校正的重量：19.02kg，63.97mol，83％。HPLC纯度：99％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内30％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D6的保留时间：4.98分钟。1HNMR(401MHz,氯仿-d)δ4.79–4.52(m,2H),3.72–3.53(m,4H),3.06(s,3H),2.36–2.11(m,2H),1.46(s,9H)。
步骤7.(3S,5S)-3-叠氮基-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(D7)的合成。
将N,N-二甲基甲酰胺(174kg)和D6(18.45kg；针对试验校正为18.14kg，61.01mol)加入反应器中，并在15℃至30℃下搅拌直到得到溶液，之后叠氮化钠(6.05kg，93.1mol)在15℃至30℃下添加。将反应混合物以20℃至35℃/小时的参考速度加热至78℃至88℃，然后使其在78℃至88℃下反应。6至12小时之后，每2至8小时对反应混合物取样用于HPLC分析，直到D6的面积百分比小于0.5％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：含0.1％乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D6的典型保留时间：6.4分钟。
将混合物冷却至10℃至20℃后，以35至85kg/小时的参考速度添加叔丁基甲基醚(68.7kg)和水(185kg)，并继续搅拌10至20分钟。过滤混合物，并用叔丁基甲基醚(2x 69kg，93L，5体积)萃取滤液的水层。将合并的有机层用水(2x 56kg，56L，3体积)洗涤以得到呈在叔丁基甲基醚中的浅黄色溶液的D7。收率：185.4kg；在叔丁基甲基醚中的溶液，假设包含14.90kg，61.01mol的D7，100％。HPLC纯度：80％(HPLC条件.柱：Waters XBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：含0.1％乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D7的保留时间：8.37分钟。
步骤8.(3S,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(P3)的合成。
在15℃至30℃下将甲醇(30.2kg)和D7(来自之前的步骤的185.4kg的叔丁基甲基醚溶液；假设包含61.01mmol D7)加入反应器中。通过表面下管道用氮吹扫混合物至0.2至0.3MPa，然后排气至0.02至0.05MPa；此吹扫/排气操作进行5至8次，直到氧含量低于1.0％。钯碳(10％，0.95kg)在15℃至30℃下添加，之后用水(0.15kg)冲洗加料漏斗。在15℃至30℃下将所得混合物经表面下管道用氮吹扫至0.2至0.3MPa，然后排气至0.02至0.05MPa。重复此吹扫/排气步骤不少于9次。然后进行相同程序5至8次，除了使用氢代替氮。然后通过表面下管道用氢将反应混合物吹扫至0.1至0.2MPa，并使其在20℃至30℃下反应。氢按以下方式每1至3小时交换两次：通过表面下管道用氢吹扫混合物至0.1至0.2MPa，然后排气至0.02至0.05MPa，且最后用氢吹扫至0.1至0.2MPa。在20℃至30℃下6至12小时之后，每3至12小时对反应混合物取样用于HPLC分析，直到D7的面积百分比为≤1.0％(HPLC条件.柱：WatersXBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：含0.1％乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。D7的典型保留时间：8.6分钟。
然后将反应混合物用氮气吹扫至0.2至0.3MPa，并在15℃至30℃下排气至0.02至0.05MPa。吹扫/排气程序进行不少于9次。在20℃至30℃下过滤，然后用叔丁基甲基醚(30.0kg，40.5L，相对于D6为2体积)吹洗滤饼，得到滤液，将其在-0.08MPa下浓缩至20至30L的体积，同时温度维持在低于40℃。在15℃至30℃下添加正庚烷(25.0kg)，并以相同方式浓缩至19至30L的体积。再次添加正庚烷(25.0kg)，并以相同方式进行浓缩至35至40L的体积；将其加热至40℃至50℃，在该温度下搅拌1至2小时，并在48℃至53℃下过滤。将所收集的固体在氮气流下在35℃至45℃下干燥。6至12小时之后，每2至12小时对物质取样用于分析，直到残余的叔丁基甲基醚为≤5000ppm，残余的正庚烷为≤5000ppm，且残余的甲醇为≤3000ppm。然后将固体冷却至15℃至30℃，过筛直至产品外观均匀，并在20℃至30℃下溶解于二氯甲烷(187kg)。将其搅拌1至2小时之后，过滤，并将有机层在-0.08MPa下浓缩至25至35L的体积，同时温度维持在低于40℃。将所得化合物用正庚烷(3体积)稀释，且浓缩至18至22L的体积(大约3体积)；此操作重复共3次，从而将正庚烷交换为二氯甲烷。在20℃至30℃下搅拌所得混合物并结晶；然后过滤以分离呈灰白色固体的P3。2个步骤的收率：5.60kg，测定为98％；校正的重量：5.48kg，25.1mol，41％。HPLC纯度：99％(HPLC条件.柱：WatersXBridge BEH C18,4.6x 150mm,3.5μm；流动相A：包含0.1％乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内20％至95％B；流速：1.0mL/分钟)。P3的保留时间：4.93分钟。1H NMR(401MHz,氯仿-d),特征峰：δ4.78(br d,JHF＝46.7Hz,1H),4.27–3.91(m,2H),3.21–3.11(m,1H),3.02–2.84(m,1H),2.62–2.35(m,1H),2.29–2.17(m,1H),1.44(s,9H)。
制备P4
2-(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸(P4)
Figure BDA0003670580320000681
Figure BDA0003670580320000691
步骤1.3-(乙氧基-d5)吡啶的合成
反应以两个平行批次进行；示例批次制备如下：在25℃下将三正丁基膦(8.40mL，33.6mmol，2.0当量)添加到3-羟基吡啶(1600mg，16.8mmol，1.0当量)和乙醇-d6(1.18mL，20.2mmol，1.2当量)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中。然后添加1,1’-(偶氮基二羰基)二哌啶(8490mg，33.6mmol，2.0当量)，且将黄色溶液在40℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并向滤液中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(2x50 mL)萃取混合物。用盐水(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥、过滤并浓缩以得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(ISCO 80g，3％EtOAc的石油醚溶液)纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物。合并的批次收率为3.70克(86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝2.5Hz,1H),8.19(d,J＝4.0Hz,1H),7.12-7.24(m,2H)。
步骤2.3-(乙氧基-d5)吡啶-1-氧化物的合成
在0℃下将间氯过氧苯甲酸(7620mg，37.5mmol，1.3当量)添加到3-(乙氧基-d5)吡啶(3700mg，28.9mmol，1.0当量)在二氯甲烷(150mL)中的溶液。在15℃下搅拌反应混合物3天。添加水性硫代硫酸钠(100mL)。在15℃下搅拌反应混合物0.5小时。将混合物用二氯甲烷(100mL)萃取。用硫酸钠干燥有机层，过滤并浓缩以得到粗产物。将该粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷–10:1二氯甲烷:甲醇)纯化，以得到呈红色固体的标题化合物(2500.0mg，60.1％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.93-8.00(m,1H),7.86-7.92(m,1H),7.15(dd,J＝8.6,6.4Hz,1H),6.87(ddd,J＝8.6,2.2,0.7Hz,1H)。
步骤3.2-((5-溴吡啶-3-基)氧基)-3-(乙氧基-d5)吡啶的合成
在0℃下将二异丙基乙胺(11.3mL，65.0mmol，3.75当量)和溴三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(10.5g，22.5mmol，1.3当量)添加到3-(乙氧基-d5)吡啶-1-氧化物(2500mg，17.3mmol，1.0当量)和3-溴-5-羟基吡啶(3020mg，17.3mmol，1.0当量)在四氢呋喃(60mL)中的搅拌的溶液。在15℃下搅拌反应混合物18小时。将反应混合物浓缩至干，并溶解于二氯甲烷(150mL)。将有机层用1N氢氧化钠(150mL)、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到油状物。将粗油状物用硅胶柱色谱法(石油醚–80:20石油醚:乙酸乙酯)纯化以得到呈白色固体的产物(3600.0mg，69.2％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm8.48(d,J＝1.8Hz,1H),8.44(d,J＝2.3Hz,1H),7.65-7.74(m,2H),7.19-7.29(m,1H),7.03(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H)。
步骤4.(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)硼酸的合成
将双(频哪醇合)二硼(3800mg，15.0mmol，1.2当量)、乙酸钾(3670mg，37.4mmol，3.0当量)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(Pd(dppf)Cl2；456mg，0.62mmol，0.05当量)添加到2-((5-溴吡啶-3-基)氧基)-3-(乙氧基-d5)吡啶(3740mg，12.5mmol，1.0当量)在二噁烷(120mL)中的溶液。将所得化合物脱气并用氮吹扫3次，然后在100℃下在N2下搅拌2小时。将所得混合物浓缩，并用乙酸乙酯(200mL)稀释残余物且用盐水(100mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干，以得到呈棕色油状物的粗产物(7000.0mg)，其直接用于下一步骤。MS(ES+)265.8(M+H)。
步骤5.2-(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
反应以两个平行批次进行；示例批次制备如下：将2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(1000mg，5.4mmol，1.5当量)、碳酸钾(980mg，7.1mmol，2.0当量)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)、二氯甲烷络合物(130mg，0.18mmol，0.05当量)添加到(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)硼酸(1880mg，3.6mmol，1.0当量)在二噁烷(25mL)和水(2.5mL)中的溶液。将所得混合物用氮吹洗，然后在90℃下搅拌2小时。过滤反应并浓缩滤液。用乙酸乙酯(200mL)稀释残余物并用盐水(2x100 mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗产物。将粗物质通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯；70:30)纯化，以得到呈黄色固体的产物。合并批次产生2.3g(50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.57(d,J＝1.7Hz,1H),9.34(s,2H),8.68(d,J＝2.7Hz,1H),8.61(dd,J＝2.6,1.8Hz,1H),7.73(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.28-7.28(m,1H),7.04(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),7.00-7.08(m,1H),4.48(q,J＝7.1Hz,2H),1.46(t,J＝7.1Hz,4H)。MS(ES+)372.1(M+H)。
步骤6：2-(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸(P4)
反应以两个平行批次进行；示例批次制备如下：在15℃下将氢氧化钠(1080mg，26.9mmol，5.0当量)添加到2-(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(2000mg，5.4mmol，1.0当量)在四氢呋喃(70mL)和水(35mL)中的溶液。将所得溶液在15℃下搅拌1小时。将混合物浓缩以除去四氢呋喃。用4M盐酸将水性混合物酸化至pH为4，用水(50mL)稀释且在15℃下搅拌20分钟。将固体过滤，用水(3x10 mL)洗涤并干燥产生呈绿色固体的2-(5-((3-(乙氧基-d5)吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸。合并批次产生1.28g(60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.41(d,J＝1.7Hz,1H),9.33(s,2H)8.67(d,J＝2.7Hz,1H),8.33-8.41(m,1H)7.70(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.58(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.19(dd,J＝7.8,4.9Hz,1H)。HRMS(TOF)344.1402(M+H)。
实施例1
2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺双(三氟乙酸)盐(1)
Figure BDA0003670580320000721
步骤1.(3R,4S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C9)的合成。
将氯甲酸苄酯(0.116mL，0.813mmol)添加到[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.69mmol)和碳酸钠(146mg，1.38mmol)在四氢呋喃(8mL)中的0℃混合物，并在25℃下搅拌反应混合物3天。然后将其用水(20mL)处理，并用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到呈无色油状物的C9(290mg)。通过1H NMR分析，此物质包含杂质，但无需另外的纯化即可用于下一步骤。1H NMR(400MHz,氯仿-d),特征峰：δ4.95-4.76(m,2H),3.87-3.68(m,1H),3.12-2.99(m,1H),2.11-1.96(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤2.(3R,4S)-3-氨基-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯盐酸盐(C10)的合成。
在15℃下搅拌C9(来自之前的步骤；290mg，≤0.69mmol)和氯化氢(4M在1,4-二噁烷中的溶液；6.0mL)的混合物1小时，之后真空浓缩，得到呈白色固体的C10。两步收率：200mg，0.69mmol，定量。1H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.48–7.33(m,5H),5.14(s,2H),5.11(brd,JHF＝48Hz,1H),4.11–3.94(m,1H),3.88–3.28(m,4H),2.14–2.01(m,1H),2.01–1.81(m,1H)。
步骤3.(3R,4S)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C11)的合成。
向P2(50.0mg，0.140mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(3.0mL)中的25℃溶液添加C10(48.6mg，0.168mmol)、三乙胺(58.7μL，0.421mmol)和2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-3-鎓氯化物(71.2mg，0.421mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌1小时之后，用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机层用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。硅胶色谱法(洗脱剂：9:1乙酸乙酯/石油醚)得到呈黄色固体的C11。收率：80.0mg，0.135mmol，96％。LCMS m/z 591.2[M+H]+。
步骤4.2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺双(三氟乙酸)盐(1)的合成。
将10％钯碳(60.0mg)添加到C11(60.0mg，0.102mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液，之后将混合物在真空下脱气，然后用氢吹扫；此抽空吹扫循环进行共3次。然后将反应混合物在氢气球下在25℃下搅拌2小时，此时与使用C11(20.0mg，33.9μmol)进行的类似反应合并并过滤。真空浓缩滤液并使用反相HPLC(柱：Agela Durashell C18,5μm；流动相A：0.1％三氟乙酸的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：14％至44％B)纯化以得到呈黄色胶状物的2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，双(三氟乙酸)盐。合并收率：28.1mg，41.1μmol，30％。LCMS m/z 457.4[M+H]+。1HNMR(400MHz,氯仿-d),特征峰：δ9.52(br s,1H),9.16(br s,2H),8.80(s,1H),8.78–8.57(m,2H),7.54(s,1H),7.06(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),4.99(br d,JHF＝50Hz,1H),4.91–4.70(m,1H),4.12(q,J＝6.9Hz,2H),2.41–2.09(m,2H),1.48(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例2
2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(2)
Figure BDA0003670580320000751
步骤1.(3S,5S)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(C12)的合成。
将N,N-二异丙基乙胺(2.79mL，16.0mmol)和P3(500mg，2.29mmol)加入P2(816mg，2.29mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的室温溶液。将所得溶液冷却至0℃之后，添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P；50％在乙酸乙酯中的溶液；1.6mL，2.7mmol)，并使反应混合物在室温下搅拌2小时。此时的LCMS分析表明存在C12：LCMS m/z 557.4[M+H]+。反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，并用乙酸乙酯萃取水层两次。将合并的有机层用水洗涤两次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，并用饱和氯化钠水溶液洗涤一次，然后用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩以得到呈黄色固体的C12。收率：1.00g，1.80mmol，79％。
步骤2.2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(2)的合成。
将对甲苯磺酸单水合物(684mg，3.60mmol)添加到C12(1.00g，1.80mmol)在乙酸乙酯(10mL)中的溶液，并在室温下搅拌混合物，直到得到溶液。将反应混合物在回流下搅拌2小时之后，然后在室温下搅拌2小时，从所得胶状物倾析出溶剂，并用乙酸乙酯将胶状物研磨四次，并用庚烷研磨两次。将所获得固体在乙酸乙酯和1M氢氧化钠水溶液之间分配，并用乙酸乙酯萃取水层四次；将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。将所得物质在回流下溶解于乙酸乙酯(大约70mL)，并用庚烷(300mL)处理，直到混合物变得略微浑浊，之后使混合物冷却至室温并搅拌过夜。过滤，接着用1:1乙酸乙酯/庚烷洗涤滤饼，得到呈白色固体的2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺。收率：580mg，1.27mmol，71％。LCMS m/z 457.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(d,J＝1.7Hz,1H),9.26(s,2H),8.63(d,J＝2.7Hz,1H),8.59(br d,J＝7.8Hz,1H),8.35(dd,J＝2.7,1.7Hz,1H),7.71(d,AB四重峰的一半,J＝2.7Hz,1H),7.68(dd,ABX系统的组分,J＝9.8,2.7Hz,1H),4.82(br d,JHF＝48Hz,1H),4.20(q,J＝7.0Hz,2H),4.18-4.08(m,1H),3.02-2.86(m,2H),2.77-2.62(m,1H),2.5-2.43(m,1H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),2.19-2.08(m,1H),1.91-1.72(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例3
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺双(三氟乙酸)盐(3)
Figure BDA0003670580320000771
步骤1.(3R,4S)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C13)的合成。
向P1(50.0mg，0.148mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(3.0mL)中的25℃溶液中添加C10(51.2mg，0.177mmol)、2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-3-鎓氯化物(75.0mg，0.444mmol)和三乙胺(61.8μL，0.443mmol)。在50℃下搅拌反应混合物1小时，之后添加水(20mL)，并将所得混合物用乙酸乙酯(20mL)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，并进行硅胶色谱法(洗脱剂：4:1乙酸乙酯/石油醚)，得到呈黄色固体的C13。收率：80.0mg，0.140mmol，95％。LCMS m/z 573.2[M+H]+。
步骤2.2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，双(三氟乙酸)盐(3)的合成。
向C13(60.0mg，0.105mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液添加10％/钯碳(60.0mg)，之后将混合物在真空下脱气，然后用氢吹扫；此抽空吹扫循环进行共3次。将反应混合物在氢气球下在25℃下搅拌5小时，然后与使用C13(20.0mg，34.9μmol)进行的类似反应合并。在过滤此混合物之后，真空浓缩滤液，并使用反相HPLC纯化(柱：YMC-Actus Triart C18,5μm；流动相A：含0.05％氢氧化铵的水；流动相B：乙腈；梯度：24％至64％B)。获得呈白色固体的游离碱2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺。游离碱2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺的合并收率：12mg，27μmol，19％。LCMS m/z 439.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.52(d,J＝1.8Hz,1H),9.17(s,2H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.58–8.54(m,1H),7.70(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.27–7.23(m,1H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),7.02(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),6.68(br d,J＝8.8Hz,1H),4.93(br d,JHF＝49Hz,1H),4.48–4.31(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.10(dd,J＝12.1,4.5Hz,1H),3.00–2.80(m,3H),2.15–2.01(m,1H),1.97–1.77(m,1H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。
将游离碱2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(12mg，27μmol)溶解于三氟乙酸的水溶液(0.1％三氟乙酸的水溶液；12mL)，然后冻干16小时以提供呈黄色胶状物的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，双(三氟乙酸)盐。2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4S)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，双(三氟乙酸)盐的合并收率：12.9mg，19.4μmol，14％。LCMS m/z 439.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.56–10.28(br s,1H),9.80–9.55(br s,1H),9.71(s,1H),9.24(s,2H),9.09(br s,1H),8.86(br d,J＝7.9Hz,1H),8.77(d,J＝2.5Hz,1H),7.72(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.32(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.14(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),4.97(br d,JHF＝49Hz,1H),4.96–4.78(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.83–3.72(m,1H),3.5–3.2(m,3H),2.42–2.11(m,2H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例4
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(4)
Figure BDA0003670580320000791
步骤1.(3S,5S)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(C14)的合成。
将N,N-二异丙基乙胺(53.1mL，305mmol)和P3(9.50g，43.5mmol)添加到P1(14.7g，43.4mmol)在乙腈(210mL)中的溶液。将混合物冷却至0℃，然后通过注射器在大约4分钟内添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P；50％在乙酸乙酯中的溶液；30.5mL，51.2mmol)。在0℃下将反应混合物搅拌45分钟后，移开冰浴，并使反应混合物达到室温并搅拌17小时。然后将其真空浓缩，将残余物分配在水和乙酸乙酯之间，并用乙酸乙酯萃取水层两次。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层；通过过滤除去在饱和水性氯化钠洗涤过程中出现的沉淀并丢弃。饱和氯化钠水层用乙酸乙酯萃取一次，并将合并的有机层真空浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷和甲醇的混合物中，并预先吸附到硅胶上。进行硅胶色谱法(梯度：30％至100％乙酸乙酯的庚烷溶液)，并观察到产物在乙酸乙酯/庚烷洗脱剂中的溶解度有限。此纯化得到呈灰白色固体的C14。收率：19.1g，35.5mmol，82％。LCMS m/z 539.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.48(d,J＝1.8Hz,1H),9.12(s,2H),8.63(d,J＝2.6Hz,1H),8.55(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.70(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.26(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.03(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),6.97–6.37(vbr m,1H),4.78(br d,JHF＝46.7Hz,1H),4.46–4.33(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),4.08–3.05(v br m,4H),2.41–2.11(m,1H),2.02–1.79(m,1H),1.49(t,J＝7.0Hz,3H),1.49(s,9H)。
步骤2.2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(4)的合成。
将氯化氢在1,4-二噁烷(4M；520mL，2.1mol)中的溶液在10分钟内添加到C14(159g，295mmol)在四氢呋喃(850mL)中的室温溶液；反应温度从35℃增加到40℃，并用加热罩维持此温度。添加完成之后，在35℃至40℃下搅拌反应混合物3小时。LCMS分析显示剩余20％的起始原料，因此再次将氯化氢在1,4-二噁烷(4M；150mL，600mmol)中的溶液添加到反应混合物中，并在35℃至40℃下继续搅拌30分钟。在此时，通过LCMS分析出剩余5％的起始原料，并用氯化氢在1,4-二噁烷(4M；60mL，240mmol)中的溶液处理反应混合物。在35℃至40℃下再过45分钟之后，将反应混合物真空浓缩，并将所得固体溶解于水(1L)。此溶液以氢氧化钠水溶液(1M；900mL，900mmol)处理，然后用水(400mL)稀释以协助搅拌；在室温下15分钟之后，通过过滤收集沉淀物，并用水(4x 250mL)洗涤。通过添加水使该固体达到800mL的总体积，然后使用顶置搅拌器在室温下与甲醇(800mL)打浆2小时。将浆液过滤，并用甲醇和水(1:1，1L)的混合物洗涤滤饼。将此固体与使用C14(≤946mmol)进行的几次相似反应的产物合并；将合并的批次悬浮在乙酸乙酯(1.1L)中，并在室温下使用机械搅拌器搅拌1小时。通过过滤收集固体的后，将其用乙酸乙酯洗涤以得到呈灰白色固体的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺。依据如下针对甲苯磺酸盐形式所述的单晶X射线结晶学，确立4的结构。两步收率：330g，753mmol，61％。LCMSm/z 439.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(d,J＝1.8Hz,1H),9.26(s,2H),8.64(d,J＝2.7Hz,1H),8.60(br d,J＝7.9Hz,1H),8.36(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.68(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.56(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.17(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),4.81(br d,JHF＝48.3Hz,1H),4.22–4.07(m,1H),4.17(q,J＝7.0Hz,2H),3.02–2.86(m,2H),2.69(br dd,J＝35.1,14.2Hz,1H),2.5–2.38(m,2H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),2.19–2.07(m,1H),1.91–1.72(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
使用配备有Cu辐射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪对此实施例的固体进行粉末x射线衍射分析。发散狭缝设置在15mm连续照明下。通过PSD-Lynx Eye检测器检测衍射辐射，检测器PSD的开口设置为3.00度。X射线管电压和安培数分别设定为40kV和40mA。使用0.01度的步长和1.0秒的步进时间，在Cu波长为3.0至40.0度2-θ下，在θ-θ测角器中收集数据。抗散射屏幕设置为1.5mm的固定距离。在收集期间，样品以15/min旋转。通过将样品放置在硅低背景样品架中来准备样品，并在收集期间旋转样品。
使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集数据，并通过EVA diffract plus软件进行分析。在峰搜索之前未处理PXRD数据文件。使用EVA软件中的峰搜索算法，将以阈值1选择的峰用于进行初步峰归属。为确保有效性，手动进行调整；目测检查自动归属的输出，并调整峰位置以达到最大峰。一般选择相对强度≥3％的峰。未选择未分辨或与噪声一致的峰。USP中规定的与PXRD的峰位置有关的典型误差最高达±0.2°2θ(USP-941)。基于晶体尺寸和形态的变化，预期相对峰高有一些变化。图1提供特征性x射线粉末衍射图。来自该图的PXRD数据在下面进一步描述。
表A：实施例4形式1的结晶物质的PXRD峰
Figure BDA0003670580320000821
表B：表征实施例4形式1的结晶物质的主要PXRD峰
实施例4形式1
2θ角(°)±0.2°
7.2,14.5,15.8,27.7
实施例4盐酸盐
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐(4，盐酸盐)
Figure BDA0003670580320000831
将2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(4.0g，9.1mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的悬浮液回温至大约50℃，之后添加氯化氢在1,4-二噁烷(4M；2.5mL，10mmol)中的溶液，且在室温下搅拌反应混合物4天。然后将其过滤，并用温乙酸乙酯洗涤滤饼两次，得到呈白色固体的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，盐酸盐。收率：4.1g，8.6mmol，94％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.90(br d,J＝11Hz,1H),9.39(d,J＝1.8Hz,1H),9.35(s,2H),9.26(br d,J＝7.7Hz,1H),9.24–9.10(m,1H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.37(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.69(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.18(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),5.23(br d,JHF＝45.3Hz,1H),4.54–4.40(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.53–3.41(m,1H),3.39–3.15(m,2H),3.03–2.88(m,1H),2.35–2.21(m,1H),2.13–1.90(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
使用配备有Cu辐射源的Bruker AXS D4 Endeavor衍射仪，对此实验的固体进行粉末x射线衍射分析。发散狭缝设置为0.6mm，而次要光学件使用可变狭缝。通过PSD-Lynx Eye检测器检测衍射辐射。X射线管电压和安培数分别设定为40kV和40mA。在Cu波长为3.0到40.0度2-θ的θ-θ测角仪中使用0.020度的步长和0.3秒的步进时间来收集数据。通过将样品放置在硅低背景样品架中来准备样品，并在收集期间旋转样品。使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集数据，并通过EVA diffract plus软件进行分析。图2中提供特征性x射线粉末衍射图案。
实施例4对甲苯磺酸盐
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺对甲苯磺酸盐(4，对甲苯磺酸盐)
Figure BDA0003670580320000841
将2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(4.0g，9.1mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的悬浮液回温至大约50℃，之后添加对甲苯磺酸单水合物(1.9g，10mmol)，并在室温下搅拌反应混合物3天。用刮勺将所得的块状固体破碎，并在室温下将悬浮的固体剧烈搅拌1天。过滤得到滤饼，将其用温乙酸乙酯洗涤两次以提供呈白色固体的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，对甲苯磺酸盐。收率：5.3g，8.7mmol，96％。LCMS m/z439.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(d,J＝1.8Hz,1H),9.28(s,2H),9.24–9.03(brm,2H),8.98(br d,J＝7.6Hz,1H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.37(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.68(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),7.18(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.11(d,J＝7.9Hz,2H),5.24(br d,JHF＝45.1Hz,1H),4.51–4.38(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.59–3.47(m,1H),3.43–3.17(m,2H),2.98–2.85(m,1H),2.36–2.24(m,1H),2.28(s,3H),2.06–1.85(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例4对甲苯磺酸盐的结晶
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺对甲苯磺酸盐(4，对甲苯磺酸盐)
Figure BDA0003670580320000851
用水和乙醇(9:1，300mL)的混合物对实施例4对甲苯磺酸盐(19.1g，31.3mmol)处理，之后用热风枪进行最低程度的回温，直到获得溶液。使此冷却至室温过夜，然后再搅拌24小时，之后通过添加乙醇(35mL)将溶剂比调节至大约4:1水/乙醇。将所得混合物加热至85℃以得到溶液，将其在3小时内冷却至室温，然后在室温下搅拌过夜。通过过滤收集沉淀，得到固体，将其在配备有氮排放的真空烘箱中干燥，并预热至40℃。获得呈白色粉末的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，对甲苯磺酸盐。收率：11.8g，19.3mmol，62％。LCMS m/z 439.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(d,J＝1.8Hz,1H),9.27(s,2H),9.13(br s,2H),8.99(br d,J＝7.6Hz,1H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.37(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.68(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.49(br d,J＝8.0Hz,2H),7.18(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.11(brd,J＝8.0Hz,2H),5.24(br d,JHF＝45.1Hz,1H),4.52–4.38(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.59–3.47(m,1H),3.44–3.18(m,2H),2.92(dd,J＝11.9,11.8Hz,1H),2.37–2.22(m,1H),2.27(s,3H),2.08–1.84(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
将大多数此物质(11.6g)与2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，对甲苯磺酸盐(7.4g)的另一样品合并；通过粉末x射线衍射分析，个别样品已显示相同的衍射图案。两种样品的混合物提供蓬松的白色固体(19.0g)。
使用配备有Cu辐射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪对此实施例的固体进行粉末x射线衍射分析。发散狭缝设置在15mm连续照明下。通过PSD-Lynx Eye检测器检测衍射辐射，检测器PSD的开口设置为3.00度。X射线管电压和安培数分别设定为40kV和40mA。使用0.01度的步长和1.0秒的步进时间，在Cu波长为3.0至40.0度2-θ下，在θ-θ测角器中收集数据。抗散射屏幕设置为1.5mm的固定距离。在收集期间，样品以15/min旋转。通过将样品放置在硅低背景样品架中来准备样品，并在收集期间旋转样品。
使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集数据，并通过EVA diffract plus软件进行分析。在峰搜索之前未处理PXRD数据文件。使用EVA软件中的峰搜索算法，将以阈值1选择的峰用于进行初步峰归属。为确保有效性，手动进行调整；目测检查自动归属的输出，并调整峰位置以达到最大峰。一般选择相对强度≥3％的峰。未选择未分辨或与噪声一致的峰。USP中规定的与PXRD的峰位置有关的典型误差最高达±0.2°2θ(USP-941)。基于晶体尺寸和形态的变化，预期相对峰高有一些变化。图3提供特征性x射线粉末衍射图。来自该图的PXRD数据在下面进一步描述。
表C:实施例4对甲苯磺酸盐形式1的结晶物质的PXRD峰
Figure BDA0003670580320000861
Figure BDA0003670580320000871
表D：表征实施例4对甲苯磺酸盐形式1的结晶物质的主要PXRD峰
实施例4对甲苯磺酸盐形式1
2θ角(°)±0.2°
3.8,7.7,8.8,22.4,24.6
实施例4对甲苯磺酸盐的替代合成
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺对甲苯磺酸盐(4，对甲苯磺酸盐)
Figure BDA0003670580320000872
Figure BDA0003670580320000881
在10分钟内，将C14(9.47g，17.6mmol)、对甲苯磺酸单水合物(98％，3.58g，18.4mmol)和水(4.74mL，263mmol)在乙腈(90.0mL)中的溶液加热至90℃(内部反应温度76℃)。12小时之后，将反应混合物在10分钟内冷却至25℃，并在25℃下保持过夜。然后冷却到10℃，并过滤。滤饼用已冷却到10℃的1体积的95:5乙腈/水混合物冲洗两次，得到呈黄色固体的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3S,5S)-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺，对甲苯磺酸盐。收率：8.30g，13.6mmol，77％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(d,J＝1.8Hz,1H),9.27(s,2H),9.17-9.07(br s,2H),8.97(br d,J＝7.6Hz,1H),8.65(d,J＝2.7Hz,1H),8.37(dd,J＝2.7,1.7Hz,1H),7.68(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.47(br d,J＝8.0Hz,2H),7.18(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),7.11(br d,J＝7.9Hz,2H),5.24(br d,JHF＝45.1Hz,1H),4.52-4.38(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.59-3.47(m,1H),3.44-3.19(m,2H),2.90(dd,J＝11.8,11.8Hz,1H),2.36-2.25(m,1H),2.28(s,3H),2.06-1.84(m,1H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例4对甲苯磺酸盐的单晶X射线结构测定
在甲苯和水(1:1)缓慢扩散的情况下，实施例4对甲苯磺酸盐(10mg)从乙醇(3mL)的结晶得到适合X射线结构测定的晶体。
单晶X射线分析
数据收集是在-100℃的Bruker D8 Venture衍射仪上进行。数据收集由ω和
Figure BDA0003670580320000891
扫描所组成。
结构使用三斜空间群P1中的SHELX软件套件，通过固有定相(intrinsic phasing)解析为每个不对称单元两个分子。随后通过全矩阵最小平方法对结构进行精修。发现所有非氢原子，并使用异向性位移参数进行精修。
从傅立叶差值图中发现位于氮和氧上的氢原子，并在限制距离下精修。剩余的氢原子被放置在所计算的位置，并允许其载于其载体原子上。最终的精修包括所有氢原子的各向同性位移参数。
经确认的结晶的甲苯磺酸盐。
由于乙醇在通道中的低占有率，且还由于作为堆叠板观察到的结晶棱柱形粒子的边缘质量(参见PLM图片)，精修具有挑战性。基于通过NMR实验确认的乙醇掺入，精修具有两个乙醇实体的分子模型，各实体占有率为0.33。
使用PLATON(Spek 2010)进行使用似然法(Hooft 2008)的绝对结构分析。假设所提交的样品是对映异构纯的，结果显示绝对结构已被正确归属。方法计算出结构被正确归属的概率为100％。Hooft参数报告为0.075，Esd为(4)，而Parson氏参数报告为0.087，Esd为(5)。
对于每不对称单元的两个相同分子，在C18_C21/C40_C43处的目标绝对构形确认为(-S)_(-S)/(-S)_(-S)。
表D1总结了相关晶体、数据收集和精修信息。原子坐标、键长、键角和位移参数列在表D2-D4中。
软件和参考文献
SHELXTL,5.1版,Bruker AXS,1997.
PLATON,A.L.Spek,J.Appl.Cryst.2003,36,7-13.
MERCURY,C.F.Macrae,P.R.Edington,P.McCabe,E.Pidcock,G.P.Shields,R.Taylor,M.Towler和J.van de Streek,J.Appl.Cryst.2006,39,453-457.
OLEX2,O.V.Dolomanov,L.J.Bourhis,R.J.Gildea,J.A.K.Howard和H.Puschmann,J.Appl.Cryst.2009,42,339-341.
R.W.W.Hooft,L.H.Straver和A.L.Spek,J.Appl.Cryst.2008,41,96-103.
H.D.Flack,Acta Cryst.1983,A39,867-881.
表D1.实施例4对甲苯磺酸盐的晶体数据和结构细化。
Figure BDA0003670580320000901
Figure BDA0003670580320000911
表D2.实施例4对甲苯磺酸盐的原子坐标(x 104)和等效各向同性位移参数
Figure BDA0003670580320000912
U(eq)定义为正交化Uij张量迹线的三分之一。
Figure BDA0003670580320000921
Figure BDA0003670580320000931
Figure BDA0003670580320000941
Figure BDA0003670580320000951
表D3.实施例4对甲苯磺酸盐的键长
Figure BDA0003670580320000962
和键角[°]
Figure BDA0003670580320000961
Figure BDA0003670580320000971
Figure BDA0003670580320000981
Figure BDA0003670580320000991
Figure BDA0003670580320001001
Figure BDA0003670580320001011
Figure BDA0003670580320001021
Figure BDA0003670580320001031
Figure BDA0003670580320001041
Figure BDA0003670580320001051
Figure BDA0003670580320001061
Figure BDA0003670580320001071
Figure BDA0003670580320001081
Figure BDA0003670580320001091
Figure BDA0003670580320001101
Figure BDA0003670580320001111
Figure BDA0003670580320001121
Figure BDA0003670580320001131
表D4.对甲苯磺酸盐的各向异性位移参数
Figure BDA0003670580320001132
各向异性位移因子指数采用以下形式：-2π2[h2 a*2U11+...+2h k a* b* U12].
Figure BDA0003670580320001133
Figure BDA0003670580320001141
Figure BDA0003670580320001151
Figure BDA0003670580320001161
实施例5
2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(5)
Figure BDA0003670580320001171
步骤1.(3R,4R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C15)的合成。
将氯甲酸苄酯(258mg，1.51mmol)添加到[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.37mmol)在四氢呋喃(15mL)和碳酸钠水溶液(1M；2.75mL，2.75mmol)的0℃混合物中。在15℃下搅拌反应混合物16小时之后，添加水(20mL)，并用乙酸乙酯(2x 30mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩以提供呈白色固体的C15。收率：485mg，1.38mmol，定量。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43–7.28(m,5H),5.14(AB四重峰,JAB＝12.3Hz,ΔνAB＝14.2Hz,2H；低场双峰变宽),4.83–4.53(m,2H),3.87–3.33(m,4H),2.06–1.75(m,2H),1.44(s,9H)。
步骤2.(3R,4R)-3-氨基-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯，盐酸盐(C16)的合成。
用氯化氢(在乙酸乙酯中的溶液；12mL)处理C15(485mg，1.38mmol)在甲醇(6mL)中的溶液。将反应混合物在20℃下搅拌1小时之后，真空浓缩，得到呈白色固体的C16。收率：370mg，1.28mmol，93％。1H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.50–7.39(m,5H),5.17(s,2H),4.93–4.71(m,1H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),4.42–4.27(m,1H),4.24–3.98(m,1H),3.51–3.39(m,1H),3.21–2.99(m,2H),2.29–2.16(m,1H),1.86–1.71(m,1H)。
步骤3.(3R,4R)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C17)的合成。
向P1(170mg，0.502mmol)、C16(145mg，0.502mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.263mL，1.51mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(HATU；287mg，0.755mmol)。在18℃下搅拌反应混合物2小时，之后与使用C16(42.7mg，0.148mmol和171mg，0.592mmol)进行的两个类似反应合并，用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。经硅胶色谱法(梯度：0％至100％乙酸乙酯的石油醚溶液)，获得呈黄色固体的C17。合并收率：540mg，0.943mmol，76％。LCMS m/z 573.1[M+H]+。
步骤4.2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(5)的合成。
将C17(300mg，0.524mmol)和10％钯碳(300mg)在乙醇(20mL)中的混合物在氢气球下在15℃下搅拌2小时。将反应混合物与使用C17(200mg，0.349mmol和40mg，70μmol)进行的两个类似反应合并之后，通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，并使用反相HPLC纯化残余物(柱：Agela Durashell C18，5μm；流动相A：0.05％氢氧化铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：30％至50％B)，得到呈白色固体的2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺。合并收率：174mg，0.397mmol，42％。LCMS m/z 439.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.52(d,J＝1.8Hz,1H),9.20(s,2H),8.65(d,J＝2.8Hz,1H),8.56(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.28–7.23(m,1H,假设值；被溶剂峰部分遮盖),7.17(br d,J＝8Hz,1H),7.02(dd,J＝7.9,4.9Hz,1H),4.86–4.66(m,1H),4.37–4.26(m,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,2H),3.36(ddd,J＝12.3,3.4,3.4Hz,1H),3.09–2.99(m,1H),2.86–2.75(m,2H),2.11–1.81(m,2H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例6
2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(6)
Figure BDA0003670580320001191
Figure BDA0003670580320001201
步骤1.(3R,4R)-3-{[(2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}嘧啶-5-基)羰基]氨基}-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(C18)的合成。
向P2(50mg，0.14mmol)、C16(40.5mg，0.140mmol)和N,N-二异丙基乙胺(73.3μL，0.421mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(HATU；80mg，0.21mmol)。在反应混合物在18℃下搅拌2小时之后，与使用C16(24.3mg，84.2μmol)进行的类似反应合并，然后用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。通过制备薄层色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯)纯化残余物得到呈黄色固体的C18。合并收率：90mg，0.152mmol，68％。LCMS m/z 591.1[M+H]+。
步骤2.2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺(6)的合成。
将C18(70mg，0.12mmol)和10％钯碳(100mg)在乙醇(20mL)中的混合物在氢气球下在15℃下搅拌2小时，之后与使用C18(20mg，34μmol)进行的类似反应合并，并通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩之后，使用反相HPLC(柱：Agela Durashell C18，5μm；流动相A：0.05％氢氧化铵的水溶液；流动相B：乙腈；梯度：30％至50％B)纯化残余物；这得到呈白色固体的2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N-[(3R,4R)-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲酰胺。收率：14.2mg，31.1μmol，20％。LCMS m/z 457.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.52(d,J＝1.8Hz,1H),9.20(s,2H),8.63(d,J＝2.7Hz,1H),8.53(dd,J＝2.7,1.8Hz,1H),7.58(d,J＝2.6Hz,1H),7.16–7.09(br m,1H),7.06(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),4.86–4.68(m,JHF＝47.2Hz,1H),4.37–4.27(m,1H),4.16(q,J＝7.0Hz,2H),3.36(ddd,J＝12.2,3.5,3.4Hz,1H),3.09–2.99(m,1H),2.87–2.76(m,2H),2.11–1.82(m,2H),1.51(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例7-25
表1.实施例7-25的合成方法和结构。以下实施例由与所确定的实施例类似的方法且由适当的类似起始原料制备。
Figure BDA0003670580320001211
Figure BDA0003670580320001221
Figure BDA0003670580320001231
Figure BDA0003670580320001241
Figure BDA0003670580320001251
1.在此情况下，以叔丁氧基羰基基团保护哌啶侧链试剂的氮。酰胺偶联反应之后，使用三氟乙酸使产物脱保护。
2.在N,N-二异丙基乙胺的存在下，氯甲酸苄酯与[6-(三氟甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯反应，得到5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-(三氟甲基)哌啶-1-羧酸苄酯，其用三氟乙酸脱保护以得到需要的5-氨基-2-(三氟甲基)哌啶-1-羧酸苄酯作为立体异构体的混合物。
3.在此情况下，酰胺偶联是由2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物(Mukaiyama试剂)和三乙胺介导的。
4.使用反相HPLC(柱：Waters XBridge C18 OBD,5μm；流动相A：包含0.04％氢氧化铵和10mM碳酸氢铵的水；流动相B：乙腈；梯度：23％至53％B)分离外消旋顺式和反式产物。第一洗脱异构体指定为实施例8，第二洗脱异构体指定为实施例9。
5.使用超临界流体色谱法{柱：Phenomenex Lux Amylose-1,5μm；流动相：7:3二氧化碳/[包含0.2％(7M氨的甲醇溶液)的乙醇]}将实施例9分离成其组分对映异构体。第一洗脱对映异构体指定为实施例10，而第二洗脱对映异构体指定为实施例11。实施例10的保留时间：6.48分钟[柱：Phenomenex Lux Amylose-1，4.6x 250mm，5μm；流动相A：二氧化碳；流动相B：包含0.2％(7M氨的甲醇溶液)的乙醇；梯度：5％B持续1.0分钟，然后在8.0分钟内5％至60％B；流速：3.0mL/分钟；背压：120巴]。实施例11的保留时间：6.68分钟(分析条件与实施例10所用的那些相同)。这两个化合物是彼此的对映异构体，但具有未测定的相对和绝对立体化学。
6.实施例13所用的哌啶侧链为(3S,4S)-3-氨基-4-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯；在酰胺偶联之后，使用三氟乙酸进行脱保护。
7.外消旋-(3R,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯与氯甲酸苄酯和碳酸钠反应，接着将产物用1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并碘杂氧杂环戊烷-3-(1H)-酮(Dess-Martin高碘烷)氧化，得到3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯。使用三氟化(二乙氨基)硫对此物质进行二氟化，得到3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4,4-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯，其通过超临界流体色谱法[柱：Chiral Technologies ChiralpakAD,10μm；流动相：85:15二氧化碳/(包含0.15％氢氧化铵的乙醇)]分离成其组分对映异构体。第一洗脱对映异构体具有2.73分钟的保留时间(柱：Chiral Technologies ChiralcelOJ-H,4.6x 250mm,5μm；流动相A：二氧化碳；流动相B：包含0.05％二乙胺的乙醇；梯度：在5分钟内5％至40％B；流速：2.5mL/分钟)。在相同条件下，第二洗脱对映异构体显示3.08分钟的保留时间。通过在氢氧化钯上氢化而使第一洗脱对映异构体脱保护，以得到3-氨基-4,4-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯的一个对映异构体；此物质显示负(-)旋转，并用于实施例15的合成。以相同的方式使第二洗脱对映异构体脱保护，以得到3-氨基-4,4-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯的另一个对映异构体，其显示正(+)旋转，并用于实施例16的合成。
8.使用超临界流体色谱法[柱：Chiral Technologies Chiralpak IC,5μm；流动相：3:2二氧化碳/(包含0.1％氢氧化铵的乙醇)]将实施例17分离成其组分对映异构体。将第一洗脱对映异构体指定为实施例18，并给出3.42分钟的保留时间([柱：ChiralTechnologies Chiralpak IC,3μm；流动相：3:2二氧化碳/(包含0.05％二乙胺的乙醇)；流速2.5mL/分钟]。将第二洗脱对映异构体指定为实施例19，并给出4.42分钟的保留时间(分析条件与实施例@521所使用的相同)。
9.实施例25所用的哌啶侧链为外消旋-(3R,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯；在酰胺偶联之后，用三氟乙酸进行脱保护。
表2.实施例7–25的化合物名称与理化数据.
Figure BDA0003670580320001271
Figure BDA0003670580320001281
Figure BDA0003670580320001291
Figure BDA0003670580320001301
Figure BDA0003670580320001311
Figure BDA0003670580320001321
Figure BDA0003670580320001331
1.分析HPLC的条件。柱：Waters Atlantis dC18,4.6x 50mm,5μm；流动相A：0.05％三氟乙酸的水溶液(v/v)；流动相B：0.05％三氟乙酸的乙腈溶液(v/v)；梯度：5.0％至95％B，在4.0分钟内线性；流速：2mL/分钟。
2.分析HPLC的条件。柱：Waters XBridge C18,2.1x 50mm,5μm；流动相A：0.0375％三氟乙酸的水溶液；流动相B：0.01875％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度：在0.6分钟内1％至5％B；在3.4分钟内5％至100％B；流速：0.8mL/分钟。
实施例D1–D3
表3包括掺入氘代乙基的三个预测实施例。这些化合物的制备将采用以上使用本领域普通技术描述的方法的变型。实施例D1可以以类似于实施例4中所述方式，由中间体P3和P4制备。实施例D2和D3可以分别通过用于实施例2和1的方法由氘代形式的P2制备。
表3.实施例D1–D3的化学名称和结构
Figure BDA0003670580320001341
药理数据
当然，本领域技术人员可以改变以下方案。
人类DGAT2(hDGAT2)构建体的生成
生成具有N末端FLAG标签(具有AspTyrLysAspAspAspAspLys的氨基酸序列的八肽)的hDGAT2的构建体。对于FLAG标记的hDGAT2构建体，在Genscript定制合成hDGAT2的cDNA并通过使用BamHI/XhoI限制酶克隆到pFastBac1载体(Invitrogen)以生成N末端经FLAG标记的pFastBac1-FLAG-hDGAT2构建体(氨基酸1至388)。通过双向测序确认构建体。
DGAT2表达和DGAT2膜组分的制备
根据制造商的方案，使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Invitrogen)在SF9昆虫细胞中生成针对经FLAG标记之hDGAT2的重组杆状病毒。为了表达hDGAT2，在Sf900II培养基中生长的SF9细胞(20L)在Wave Bioreactor System 20/50P wave袋(GE Healthcare)中以感染复数为1感染hDGAT2杆状病毒。感染40小时之后，然后通过以5,000x g离心收集细胞。通过再悬浮于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤细胞团块，并通过以5,000x g离心收集。将细胞糊状物在液态N2中快速冷冻，并在-80℃下储存直至需要。除非另有说明，以下所有操作均在4℃下。将细胞以每1g细胞糊状物3mL缓冲液的比例重悬浮于裂解缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 8.0，250mM蔗糖)，所述裂解缓冲液包含1mM乙二胺四乙酸(EDTA)和完整的蛋白酶抑制剂混合物(Roche Diagnostics)。以杜恩斯匀浆器裂解细胞。通过以1,000x g离心20min去除细胞碎片，并以100,000x g离心上清液1小时。在倾析液体之前，通过以冰冷的PBS将超速离心管填充至顶部而将所得的团块冲洗3次。以每1g原始细胞糊状物1mL缓冲液的比例，将所洗涤的团块在缓慢搅拌1小时下重悬浮于包含8mM 3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵基]-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)的裂解缓冲液中，并在100,000x g再次离心1小时。将所得上清液等分，在液N2中快速冷冻，并于-80℃下储存直至使用。
体外DGAT2试验和DGAT2抑制剂的IC50值测定
为了测定IC50值，在总体积为20μL的384孔白色聚丙烯板(Nunc)中进行反应。对溶解于100％DMSO并在各孔的底部点样的1μL的化合物中添加5μL的0.04％牛血清白蛋白(BSA)(不含脂肪酸，Sigma Aldrich)，且将混合物在室温下孵育15分钟。将hDGAT2膜组分在100mM Hepes-NaOH，pH 7.4，20mM MgCl2中稀释，其含有200nM花生四烯酸氟膦酸甲酯(Cayman Chemical；在氩气下由乙酸乙酯母液干燥且溶解在DMSO中作为5mM储备液)。将10μL的该酶工作溶液添加至板中且在室温下继续孵育2小时。DGAT2反应通过添加溶解在12.5％丙酮中的包含30μM[1-14C]癸酰基-CoA(由Perkin Elmer定制合成，50mCi/mmol)和125μM 1,2-二癸酰基-sn-甘油(Avanti Polar Lipids)的4μL底物引发。将反应混合物在室温下孵育40分钟且通过添加5μL的1％H3PO4停止反应。在添加45μL MicroScint-E(Perkin-Elmer)之后，将板以Top Seal-A覆盖物(Perkin-Elmer)密封，且使用HT-91100微板定轨振荡器(Big Bear Automation,Santa Clara,CA)实现底物与产物的相分配。在1450Microbeta Wallac Trilux闪烁计数器(Perkin Elmer)中读数之前，将板在Allegra6R离心机(Beckman Coulter)中以2,000x g离心1分钟，然后再以新的覆盖物密封。DGAT2活性通过定量在上层有机相中所生成的产物[14C]十三酰基甘油来测量。
从所有反应中减去使用用于完全抑制DGAT2的50μM的((R)-1-(2-((S)-1-(4-氯-1H-吡唑-1-基)乙基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)哌啶-3-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(WO2013150416，实施例196-A)获得的背景活性。抑制在11种不同的浓度下测试以生成各化合物的IC50值。所使用的11种抑制剂浓度通常包括50、15.8、5、1.58、0.50、0.16、0.05、0.016、0.005、0.0016和0.0005μM。数据绘制为抑制百分比相对于抑制剂浓度且拟合为方程式y＝100/[1+(x/IC50)z]，其中IC50为50％抑制的抑制剂浓度，且z为Hill斜率(在其拐点的曲线斜率)。
下表4依照上述试验提供对DGAT2抑制的实施例的IC50值。结果报告为几何平均IC50值，并显示重复次数(n)。
表4.对DGAT2抑制的实施例的IC50值
Figure BDA0003670580320001371
其中，下表4A中显示本文引用的WO2018033832的实施例：
表4A：来自WO2018033832的实施例的化学结构(注：以下描绘的立体化学构型如WO2018033832中所显示/描述)
Figure BDA0003670580320001381
Figure BDA0003670580320001391
人肝细胞中DGAT2抑制剂的IC50值测定
用于评估DGAT2抑制剂在基于细胞的环境中的功效，将冷冻保存的人肝细胞(批号DOO,Celsis,Baltimore,MD)解冻且根据制造商指示平铺在I型胶原涂布的板上。在18小时的过夜复苏期之后，将细胞以包含250μg/mL Geltrex基底膜基质(Thermo Fisher)的培养基覆盖。接下来的一天，将培养基吸出且以包含400μM十二烷酸钠(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)和2mM GlutaMAX(Thermo Fisher)的无血清Williams培养基E(ThermoFisher)替代。在45分钟之后，以完全抑制内源性DGAT1活性的最终浓度(3μM)将选择性DGAT1抑制剂(实施例2，WO2009016462，制备成在25％DMSO，75％PBS中的100X储备液)添加至所有孔中。然后添加DGAT2抑制剂至期望的最终浓度。在15分钟预孵育之后，将0.2μCi[14C(U)]-甘油(Perkin Elmer)添加至各孔中，接着孵育3小时。在此时移除培养基，在异丙醇:四氢呋喃(9:1)中通过定轨振荡裂解细胞15分钟，然后在3000rpm下离心10分钟。经放射标记的脂质使用溶剂系统通过薄层色谱法使用溶剂分离，所述溶剂由己烷:二乙基醚:冰乙酸(75:23:2，v/v/v)组成。在分离之后，使用Typhoon 9500磷光成像(phosphorimaging)系统(GE)可视化经放射标记d的脂质。半数最大抑制浓度(IC50值)使用GraphPad Prism(GraphPad Software,Inc.,La Jolla,CA)通过百分比抑制剂量反应曲线的非线性回归分析测定。
下表5提供根据上述试验在人肝细胞中抑制DGAT2的选择实施例的IC50值。结果报告为几何平均IC50值，并显示重复次数(n)。
表5.在人肝细胞中抑制DGAT2的实施例的IC50值
Figure BDA0003670580320001401
DGAT2抑制剂对血浆和肝甘油三酯水平的体内作用
使用大鼠西方饮食模型来评估DGAT2抑制剂治疗对体内血浆甘油三酯产生和肝甘油三酯含量的作用。将雄性Sprague-Dawley大鼠饲养在12小时光照，12小时黑暗循环(06:00开灯)的标准实验室条件下。研究开始之前两周，将动物置于高脂肪、高蔗糖、高胆固醇饮食(D12079b，由Research Diets,New Brunswick,NJ提供)下。此饮食提供来自碳水化合物的～43％的卡路里，和来自脂肪的～41％的卡路里。实施例4作为在pH7.0至7.5的0.5％甲基纤维素的去离子水溶液中的溶液(10mL/kg给药体积)口服给予(甲基纤维素购自Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)。用溶媒处理的动物仅接受pH 7.0至7.5的0.5％甲基纤维素的去离子水溶液。各治疗物以每天两次在08:00和16:00以3、10、30和100mg/kg口服给予7天，每日总剂量为6、20、60和200mg/kg/天。在第8天，在10:00，动物以溶媒或实施例4给药，并在给药后2小时处死。通过二氧化碳窒息处死大鼠并通过侧尾静脉采血。根据制造商指示(RocheDiagnostics Corporation,Indianapolis,IN)，使用Roche Hitachi Chemistry分析仪测定血浆TG水平，并使用GraphPad Prism(GraphPad Software,Inc.,La Jolla,CA)分析数据。在处死时收集肝脏用于测定肝甘油三酯，并将组织立即在液态氮中冷冻，且维持在–80℃下直至分析。为了评估肝甘油三酯水平，用锤子在液态氮浴中的铝加热块上将包裹在铝箔中的肝脏部分粉碎。肝组织的粉碎产生均匀的粉末。在使用前，将匀浆缓冲液Tris pH7.4、98.9毫升0.9％NaCl和100微升的Triton X 100在搅拌板上混合10分钟。称量大约100毫克的匀浆肝组织的样品重量，并将其置于具有1mL的匀浆缓冲液的Lysing Matrix D管(MP Biomedicals,Cat#6913-100)中。然后将所有样品置于FastPrep FP120(MPBiomedicals,Cat#6001-120)2分钟或直到组织被匀浆。然后将所有样品以10,000g旋转30秒，以清除来自匀浆的泡沫。将50微升的样品转移到含有450微升的杜氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)的无菌混合板中，以测试1:10稀释。再悬浮新样品之后，所有样品均转移至用于Siemens Advia XPT临床分析仪的采样管中。通过吸光度进行甘油三酯测定，并报告为毫克/分升。然后在Microsoft excel中将每克组织中的甘油三酯标准化。如图4和5所总结，在给予实施例4的大鼠中，血浆(最高达～70％)和肝脏(最高达48％)甘油三酯有剂量依赖性降低。在循环甘油三酯反应的实例中，以实施例4观察到的所得水平接近以喂食溶媒的动物的水平。
图4绘制了实施例4对西方饮食喂养的Sprague-Dawley大鼠中的血浆甘油三酯的多剂量作用，其中在实施例4的最后剂量之后2小时，从侧尾静脉抽取的血液测定血浆甘油三酯水平。数据为8只动物的平均值±标准偏差。通过单因素ANOVA，接着Dunnett多重比较检验进行相对于溶媒的组平均值间差异。相对于西方饮食溶媒动物，****＝p<0.0001。
图5绘制了对西方饮食喂养的Sprague-Dawley大鼠中的肝甘油三酯的实施例4的多剂量作用，其中在实施例4的最后剂量之后2小时，从侧尾静脉抽取的血液测定肝甘油三酯水平。数据为8只动物的平均值±标准偏差。相对于西方饮食溶媒的组平均值之间差异通过单因素ANOVA，接着Dunnett多重比较检验进行。相对于西方饮食溶媒动物，*＝p<0.05，***＝p<0.001，****＝p<0.0001。
pKa的测定
例示的化合物被设计为DGAT2的基础抑制剂。所选的实施例的pKa由Analiza,Inc.(Cleveland,OH)根据Shalaeva,M.,等人，2008,J.Pharm.Sci.,97,2581-2606中描述的毛细管电泳法确定。下表6显示针对实施例测定的最基本pKa，并表示为平均值以及重复次数(n)。基础化合物与体内更高的分布量有关(Obach,R.S.,等人，2009,Drug Metab.Dispos.,36,1385-1405；Smith,D.A.,等人，2015,J.Med.Chem.,58.5691-5698)。
表6.选择的实施例的最基本pKa
Figure BDA0003670580320001421
人肝细胞中内在清除率的测定(中继法(Relay Method))
为了内在清除率(CLint)测量，使用肝细胞中继法(Di,L.,等人，2012,DrugMetab.Dispos.,40,1860-1865和Di,L.,等人，2013,Drug Metab.Dispos.,41,2018-2023)。使用冷冻保存的人肝细胞(来自BioreclamationIVT的批号DCM)。解冻后，将肝细胞重悬在补充有Hepes和Na2CO3的Williams氏培养基E(定制配方号91-5233EA；Gibco,Grand Island,NY)中。以台盼蓝排除法对细胞计数，并以0.50mL的最终孵育体积，以1μM的最终浓度(二甲基亚砜，最终浓度0.025％；甲醇，最终浓度0.1125％)，将测试化合物加入包含50万个细胞/mL的24孔肝细胞板。将板在加湿培养箱中于37℃，95％空气/5％CO2，75％相对湿度下以150rpm孵育4小时。在0和4小时的时间，从孵育中取出25μL的肝细胞悬液，并添加到50μL的冰冷的乙腈(包含美托洛尔、吲哚美辛和特非那定作为内标)中以淬灭反应。在室温下将样品以3000rpm(1439x g)离心(Eppendorf,Hauppauge,NY)10分钟，且将50μL的上清液转移到干净板中，完全干燥，并在液态色谱法/串联质谱法(LC-MS/MS)分析前重新配制。将孵育板上剩余的肝细胞悬浮液离心(3000rpm，1439x g，10分钟，室温)。将300μL的上清液转移到干净的24孔板中，并在-80℃下储存直至下一次中继实验。对第二中继实验，将上清液板先回温至室温持续30分钟，然后回温至37℃持续30分钟，且将肝细胞添加到样品中，以得到50万个细胞/mL的最终细胞密度。将板在37℃下孵育4h，取样，并如上所述处理。进行5次中继，给出总孵育时间为20h，采样点在(0、4、8、12、16和20h)。使用通过LC-MS/MS分析在各时间点所测定的测试化合物的浓度以计算内在清除率。
下表7显示通过上述方法所测定的选择的实施例的内在清除率。数据呈现为平均值+/-标准偏差，并显示重复次数(n)。
表7：在中继肝细胞试验中的CLint,u
Figure BDA0003670580320001431
人肝细胞的内在清除率的高通量测定
以384孔形式进行高通量人肝细胞稳定性试验(Di,L.,等人，2012,Eur.J.Med.Chem.,57,441-448)。从BioreclamationIVT(Baltimore,MD,Lot DCM)购买10个供体的合并冷冻保存的人肝细胞。将冷冻保存的人肝细胞解冻，并重悬于补充HEPES和Na2CO3的Williams E培养基(WEM GIBCO，定制配方#A28859EA)中。使用台盼蓝排除法对细胞计数。使用
Figure BDA0003670580320001442
液体分配器(Multidrop DW,Thermo Scientific,Waltham,MA)以向384孔板添加肝细胞悬液。盖上细胞板，并转移至配备有两个6-位Mecour热交换器的
Figure BDA0003670580320001443
ALH 3000工作站(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)。将测试化合物用缓冲液在
Figure BDA0003670580320001444
上稀释，并添加到肝细胞中。最终孵育在含有0.01％DMSO的15μL总体积中包含50万个细胞/mL和1μM测试化合物。在37℃下进行孵育。在各时间点(0、3、10、30、60、120、240分钟)，用包含内标(实施例39A，WO1999/57125)的冷乙腈淬灭反应。将样品在4℃下以3000rpm离心(Eppendorf,Hauppauge,NY)5分钟。使用
Figure BDA0003670580320001445
FX液体处理器(BeckmanCoulter,Inc.Danvers MA)将上清液转移到加入水的新板，在LC-MS/MS分析之前将其密封。下表8显示在上述高通量人肝细胞试验中测定的选择的实施例的内在清除率。数据呈现为平均值+/-标准偏差，并显示重复次数(n)。
表8：在高通量人干细胞试验中的CLint
Figure BDA0003670580320001441
Figure BDA0003670580320001451
人肝微粒体中内在清除率的测定
以384孔形式(Di,L.,等人，2012,Eur.J.Med.Chem.,57,441-448)进行高通量人微粒体稳定性试验。所有液体处理和孵育用配备有一个3-位Mecour加热平台位置的BiomekFX(Beckman Coulter,Inc.,Indianapolis,IN)进行。从BD Biosciences(Bedford,MA)购买50个供体的合并人肝脏微粒体(批次：HLM-103)。每次孵育包含测试化合物(1μM)、人肝脏微粒体(0.25μM CYP蛋白，相当于0.806mg/mL蛋白质浓度)、NADPH 20.9mM、MgCl2(3.3mM)和磷酸钾缓冲液(100mM，pH 7.4)。最终反应体积为45μL，包含0.1％DMSO。在37℃下进行孵育。在各时间点(例如，1、4、7、12、20、25、45和60分钟)，添加含质谱法(MS)内标(实施例39A，WO1999/57125)的冷乙腈淬灭反应。将板在4℃下以3000rpm离心1min(Sorvall RC 3CPlus,Thermo Scientific,Waltham,MA)。将板密封并随后使用LC-MS/MS分析。以相同方式制备对照板，而不添加NADPH辅因子以监测任何非CYP/FMO催化的下降。下表9显示如在上述人肝脏微粒体试验中所测定的选择的实施例的内在清除率。数据呈现为平均值+/-标准偏差，并显示重复次数(n)。
表9：人肝微粒体试验中的CLint
Figure BDA0003670580320001461
各种培养基中的热力学溶解度测定
活性药物成分的溶解度是在药物开发过程中确定生物性能和制剂容易性的重要特征，优选具有高溶解度(Klein,S.2010,The AAPS Journal,12,397-406；Di,L.，等人2012,Drug Disc.Today,17.486-495)。如在表10中所示，在各种生物相关培养基中测量热力学溶解度。将结晶固体的测试样品(
Figure BDA0003670580320001462
7mg)在小瓶中与1mL的相关缓冲溶液合并，并涡旋震荡混合物来合并。如果固体完全溶解，则涡旋震荡下添加另外的固体，直至获得饱和溶液。对饱和溶液/固体混合物封盖并经历以下温度循环：在25℃下1min；在40℃下8h；在15℃下5h和在25℃下12h。以13,000rpm，在离心过滤装置(0.22μm PVDF过滤器，MilliporeSigma，Milwaukee，WI)中过滤混合物，且参照三点标准曲线，通过HPLC/UPLC测定滤液中测试化合物的浓度。磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH 6.8，50mM磷酸盐缓冲液，250mMNaCl)。模拟胃液(SGN pH 1.2，USP配方)。空腹状态模拟肠液(FaSSIF，3mM牛磺胆酸钠，来自大豆卵磷脂的0.75mM磷脂，50mM磷酸盐缓冲液，离子强度以NaCl调节至250mM，pH 6.8)和进食状态模拟肠液(FeSSIF，15mM牛磺胆酸钠，来自大豆卵磷脂的3.75mM磷脂，144mM乙酸，50mM磷酸盐缓冲液，离子强度以NaCl调节至250mM，pH 6.8)。
表10：生物相关培养基中的热力学溶解度
Figure BDA0003670580320001471
Figure BDA0003670580320001481
在整个申请中，引用各种出版物。出于所有目的通过引用方式将这些出版物的公开内容整体并入本申请。
对于本领域技术人员而言将显而易见的是，在不脱离本发明的范围或精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和变化。考虑到本文公开的本发明的说明书和实践，本发明的其他实施方案对本领域技术人员将是显而易见的。说明书和实施例旨在仅被认为是示例性的，本发明的真实范围和精神由所附的权利要求表示。

Claims (32)

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003670580310000011
其中
R1为H或氟；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H和(C1-C3)氟烷基，且
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、氟和(C1-C3)氟烷基；且
其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的一个或两个不为H。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4和R5各自独立地选自H和(C1)氟烷基，且R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟；其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的一个或两个不为H。
3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5、R6和R7为H；且R8和R9独立地选自H、(C1)氟烷基和氟；其中R8和R9中的至少一个为(C1)氟烷基或氟。
4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5、R8和R9为H；且R6和R7各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟，其中R6和R7中的至少一个为(C1)氟烷基或氟。
5.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5、R6和R9为H；且R7和R8各自独立地选自H、(C1)氟烷基和氟，其中R7和R8中的至少一个为(C1)氟烷基或氟。
6.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5、R6、R8和R9为H；且R7为(C1)氟烷基或氟。
7.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5、R6、R8和R9为H；且R7为氟。
8.化合物，其选自由以下所组成的群组：
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4R)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；
2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3R,4R)-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺；和
2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺，
或其药学上可接受的盐。
9.化合物
Figure FDA0003670580310000031
或其药学上可接受的盐。
10.化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺。
11.化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。
12.化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺甲苯磺酸盐。
13.化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-(5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲酰胺。
14.一种治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎、伴随肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎或伴随肝硬化和肝细胞癌的非酒精性脂肪性肝炎的方法，包括给予需要该治疗的人治疗有效量的如权利要求1至13的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。
15.如权利要求14中所述的方法，其中治疗非酒精性脂肪性肝炎。
16.如权利要求14中所述的方法，其中治疗非酒精性脂肪肝病。
17.如权利要求14中所述的方法，其中治疗伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎。
18.一种使非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活动性评分(NAS)的严重程度自基线降低至少一个点的方法，包括测量人的基线NAS、给予所述人有效量的根据权利要求1至13中任一项的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐和测量所述人的NAS的步骤。
19.一种使非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活动性评分(NAS)的严重程度自基线降低至少两个点的方法，包括测量人的基线NAS、给予所述人有效量的根据权利要求1至13中任一项的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐和测量所述人的NAS的步骤。
20.一种治疗高甘油三酯血症、动脉粥样硬化、心肌梗塞、血脂异常、冠心病、高载脂蛋白B脂蛋白血症、缺血性卒中、2型糖尿病、在患有2型糖尿病的患者中的血糖控制、糖耐量受损(IGT)的病症、空腹血糖受损的病症、代谢综合征、X综合征、高血糖症、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、糖代谢受损的方法，包括给予需要该治疗的人治疗有效量的根据权利要求1至13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求20所述的用途，其中治疗高甘油三酯血症。
22.一种药物组合物，其包含治疗有效量的如权利要求1至13所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、溶媒或稀释剂。
23.一种药物联合组合物，其包含：治疗有效量的组合物，所述组合物包含：
第一化合物，所述第一化合物为权利要求1至13所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐；
第二化合物，所述第二化合物为抗糖尿病剂；非酒精性脂肪性肝炎治疗剂、非酒精性脂肪肝病治疗剂、胆固醇或脂质降低剂或抗心力衰竭治疗剂，和
药用载体、溶媒或稀释剂。
24.如权利要求23所述的药物联合组合物，其中所述非酒精性脂肪性肝炎治疗剂或非酒精性脂肪肝病治疗剂为ACC抑制剂、KHK抑制剂、BCKDK抑制剂、FXR激动剂、二甲双胍、肠促胰岛素类似物或GLP-1受体激动剂。
25.如权利要求23所述的药物联合组合物，其中所述非酒精性脂肪性肝炎治疗剂或非酒精性脂肪肝病治疗剂为4-(4-(1-异丙基-7-氧代-1,4,6,7-四氢螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸；[(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-甲基氮杂环丁烷-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]乙酸；2-[(1R,3R,5S)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-羧酸；2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸；或2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸或其药学上可接受的盐。
26.如权利要求23所述的药物联合组合物，其中所述抗糖尿病剂为SGLT-2抑制剂、BCKDK抑制剂、二甲双胍、肠促胰岛素类似物、肠促胰岛素受体调节剂、DPP-4抑制剂或PPAR激动剂。
27.如权利要求26所述的药物联合组合物，其中所述抗糖尿病剂为二甲双胍、西他列汀、埃格列净(ertuglifozin)、2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸或2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸。
28.如权利要求23所述的药物联合组合物，其中所述抗心力衰竭剂或胆固醇或脂质降低剂为ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、BCKDK抑制剂、血管紧张素受体阻断剂-脑啡肽酶抑制剂、β肾上腺素受体阻断剂、钙通道阻滞剂、贝特类、HMG CoA还原酶抑制剂或血管舒张剂。
29.一种晶体，其包含具有以下结构的化合物：
Figure FDA0003670580310000071
或其药学上可接受的盐。
30.如权利要求29所述的晶体，其中所述晶体包含该化合物的对甲苯磺酸盐。
31.如权利要求29所述的晶体，其具有包含2-θ值为(CuKα辐射，波长为
Figure FDA0003670580310000072
)7.2±0.2、14.5±0.2、15.8±0.2和27.7±0.2的粉末x射线衍射图。
32.如权利要求30所述的晶体，具有包含2-θ值为(CuKα辐射，波长为
Figure FDA0003670580310000073
)3.8±0.2、7.7±0.2、8.8±0.2、22.4±0.2和24.6±0.2的粉末x射线衍射图。
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