KR20220075622A - 항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 okbl-l.fe 1 균주 및 이의 용도 - Google Patents

항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 okbl-l.fe 1 균주 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항염 활성 및 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)에 대한 항균 활성을 가지는 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주 및 이의 용도{Lactobacillus fermentum OKBL-L.FE 1 strain having anti-inflammatory activity and antimicrobial activity against pathogenic microorganism and uses thereof}
본 발명은 항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.
유산균(Lactic acid bacteria)은 다양한 식품의 발효에 관여하여 독특한 풍미를 부여할 뿐 아니라, 항균성 물질을 생산하여 식품의 저장성 및 안정성을 증대시킨다. 이러한 유산균이 생성하는 항균성 물질로는 젖산 등의 유기산 이외에 디아세틸 및 박테리오신 등이 알려져 있다.
프로바이오틱스(probiotics)는 섭취되어 장에 도달하였을 때에 장내 환경에 유익한 작용을 하는 균주를 말하는 것으로, 건조 세포나 발효산물 형태로 사람이나 동물에 공급되어 장내 균총을 개선한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균이며 주로 락토바실러스(Lactobacillus) 속 균주를 이용하여 만들어진 발효유, 과립 또는 분말 등의 형태로 이용되고 있다. 유산균을 비롯한 균주들이 프로바이오틱스로 사용되기 위해서는 위산과 담즙산에서 살아남아 장까지 도달하여 증식 및 정착해야 하고 독성이 없으며 비병원성이어야 한다. 최근에는 기본적인 유산균의 특성 뿐만 아니라 다양한 유용 활성을 가지는 새로운 균주가 분리, 동정되어 보고되고 있다.
한편, 한국등록특허 제1425716호에서는 '신규의 락토바실러스 퍼멘텀 균주, 이를 이용한 화장료 조성물 및 그 제조방법'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1980527호에서는 '신규한 락토바실러스 퍼멘텀 LM1016 균주, 및 이를 포함하는 심혈관질환 예방 또는 치료용 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명의 '항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주 및 이의 용도'에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 청국장으로부터 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주(기탁번호 : KCCM12790P)를 분리하였고, 상기 분리된 균주의 우수한 항염 활성 및 유해 세균에 대한 항균 활성을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 항염 활성 및 항균 활성을 가지는 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 그람 음성균에 대한 항균용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 발효식품 제조용 스타터(starter) 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 균주 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 사료첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주는 항염 활성 및 유해 세균에 대한 항균 활성이 우수하므로 항균용 조성물, 발효식품 제조용 스타터, 프로바이오틱 및 사료첨가제 등으로 활용 가능하므로, 관련 산업 분야에 매우 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주의 리폭시게나아제 저해 활성을 측정한 결과이다. 0.1% IDM은 양성 대조군으로 사용한 인도메타신(indomethacin)이고, MRSB는 음성 대조군으로 사용한 MRS 배지이고, L.FE_O는 본 발명의 균주 배양액을 의미하며, L.FE_A는 본 발명의 균주 배양액+균체를 의미한다.
도 2는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주의 NO 생성 억제능을 측정한 결과이다. C는 증류수이고, LPS는 lipopolysaccharide이며, L.FE_O는 본 발명의 균주 배양액을 의미한다.
도 3은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주의 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)에 대한 항균 활성을 측정한 결과이다. MRSB는 음성 대조군으로 사용한 MRS 배지이고, L.FE_O는 본 발명의 균주 배양액을 의미한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항염 활성 및 항균 활성을 가지는 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주를 제공한다.
본 발명에서는 청국장으로부터 항염 활성 및 항균 활성을 가지는 균주를 분리하였으며, 최종 선별된 균주의 16S rRNA 염기서열 분석을 통해 동정한 결과, 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) 균주임을 확인하였다. 본 발명자는 상기 최종 선별된 균주를 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주로 명명하고 한국미생물보존센터(KCCM)에 2020년 9월 18일자로 기탁하였다(수탁번호: KCCM12790P).
본 발명은 또한, 상기 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 그람 음성균에 대한 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 항균용 조성물에서, 상기 그람 음성균은 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 "항균(antimicrobial)"의 의미는 어떤 농도에서 미생물의 성장 또는 생존을 감소, 방지, 억제, 또는 제거하는 능력을 의미한다.
본 발명의 "항균용 조성물"은 세균과 같은 미생물의 생육을 저해하는 활성을 가진 조성물로서, 항미생물제를 총칭하는 의미인 항생제와 같은 의미일 수 있고, 항균 효과가 요구되는 다양한 분야에 사용되는 모든 형태가 포함될 수 있으며, 예를 들어, 의약품, 의약외품, 식품 첨가제 또는 사료 첨가제 등의 형태일 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물은 상기 균주 또는 상기 균주의 배양액 또는 상기 균주의 배양액의 농축액 그 자체일 수 있고, 제형화에 필요한 부형제나 희석제 등의 통상적으로 사용되는 첨가제가 더 포함될 수 있으며, 본 발명의 균주 또는 이의 배양액 이외의 다른 항균 물질을 더 포함할 수도 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 항균용 조성물에 포함되는 본 발명의 균주 또는 상기 균주의 배양액 또는 상기 균주의 배양액의 농축액의 함량은 사용목적 및 사용방법 등을 고려하여 적절하게 선택될 수 있으며, 예를 들어 전체 조성물을 기준으로 1 ~ 100중량%, 바람직하게는 10 ~ 100중량%, 더욱 바람직하게는 50 ~ 100중량%일 수 있다.
본 발명의 "배양액"은 액체배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(원심분리한 상등액) 등의 배양액 자체로부터 파생되는 가공물을 포함한다. 배양액 중의 배양배지를 제거하고 농축된 균체만을 회수하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며, 이러한 단계는 당업자가 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동(frozen)하거나 또는 냉동건조(lyophilized)하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.
본 발명의 균주를 배양하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법에 따라 배양할 수 있으며, 특별한 방법에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 또한, 상기 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 발효식품 제조용 스타터(starter) 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 발효식품 제조용 스타터(starter)란 발효식품 제조를 위해 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제 또는 조성물을 의미한다. 발효식품 제조 시에 첨가함으로써 발효된 식품에서 생장할 수 있는 미생물 또는 우점종으로 생장할 수 있는 미생물을 제공하기 위하여 사용된다. 상기 발효식품 제조용 스타터를 사용하여 식품을 제조하는 경우, 상기 발효식품 제조용 스타터에 포함된 미생물에 의하여, 식품의 품질을 일정하게 조절하거나, 특정한 목적을 달성할 수 있다. 본 발명에서는 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주 또는 이의 배양액을 스타터 균주로 이용함으로써, 항염 및 항균 효과가 있는 발효식품을 제조할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 발효식품 제조용 스타터 조성물에서, 상기 발효식품은 장류일 수 있고, 바람직하게는 청국장일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한 상기 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱(probiotic) 조성물을 제공한다.
본 발명의 프로바이오틱 조성물은 상기 유효성분 외에 통상적인 약학적 담체 및 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 조성물은 통상적인 프로바이오틱 조성물 제조방법에 따라 열건조 또는 동결-건조하여 생균제 형태로 제조하여 이용할 수 있다.
본 발명의 균주는 상기 전술한 바와 같이 다양한 활성을 가지고 있으므로 식품, 의약품, 화장품, 건강식품 등의 프로바이오틱 조성물 제조에 이용될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 사료첨가제 조성물을 제공한다.
상기 균주는 전술한 바와 같으며, 항염 및 항균을 목적으로 사료첨가제 조성물로 첨가할 수 있다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다.
본 발명의 사료첨가제 조성물은 사료에 첨가될 수 있으며, "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
청국장 시료를 생리식염수에 희석한 후 LB 배지(1% 수크로즈, 1% 효모 추출물 및 0.15% NaH2PO4)에 접종하고 배지가 든 플라스크를 30℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양액을 고체 배지에 도말하여 형성된 콜로니를 선별하여 순수 분리하였다. 선별 균주의 16S rRNA 유전자의 염기서열(서열번호 1)을 분석한 결과, 락토바실러스 퍼멘텀(Lactoobacillus fermentum)으로 판명되었으며, Lactobacillus fermentum OKBL-L.FE 1 균주로 명명하고 한국미생물보존센터(KCCM)에 2020년 9월 18일자로 기탁하였다(기탁번호 : KCCM12790P).
실시예 2. 선별 균주의 특성 분석
선별 균주를 MRS 액체 배지에 접종하여 37℃에서 18시간 동안 배양하고, 3,000 rpm으로 10분 동안 원심분리한 후 상층액을 취하여 균주 배양액(L.FE_O)으로 명명하였고, 균주를 배양한 후 초음파 분해(sonication)하여 3,000 rpm으로 10분 동안 원심분리 후 상층액을 취하여 균주 배양액+균체(L.FE_A)로 명명하였다. 본 발명의 균주의 특성을 분석하기 위하여 균주 배양액(L.FE_O) 및 균주 배양액+균체(L.FE_A)의 당도와 pH를 각각 측정하였다. 당도는 총 가용성 고형물(total soluble solids, Brix) 함량을 당도계(Hand refractormeter, Germany)로 측정하여 나타내었다. pH는 pH 미터기(SevenCompactTM pH/Ion S220, Switzerland)를 이용하여 3회 측정한 평균값으로 나타내었다.
그 결과, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 pH 및 당도는 대조군 대비 낮은 값을 나타내었고, 균주 배양액(L.FE_O) 및 균주 배양액+균체(L.FE_A)는 유사한 특성을 나타내는 것을 확인하였다(표 1).
락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 pH 및 당도
샘플 pH 당도
대조군 MRS 배지 6.69 5.7
실험군 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 배양액(L.FE_O) 4.34 4.7
배양액+균체(L.FE_A) 4.37 4.5
실시예 3. 항염 활성 분석
(1) 리폭시게나아제 저해 활성 측정
리폭시게나아제(lipoxygenase)는 정상적인 세포에서는 활성이 미비하지만, 염증이 유발되면 류코트리엔(leukotrienes) 물질의 증가로 인해 활성이 증가한다. OD600=1.0의 균주 배양액 100 ㎕에 200 mM 보레이트 완충액(borate buffer, pH 9.0) 1 ㎖을 넣은 후, 기질인 리놀렌산(linoleic acid, 0.6 mM/㎖ in ethanol) 2 ㎖을 추가하여 혼합한 후 234 nm에서 보정값을 측정하였다. 이후, 상기 혼합물에 10,000 unit/㎖의 리폭시게나아제 100 ㎕를 넣고 상온에서 10분간 반응시킨 후 234 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군은 인도메타신(indomethacin, IDM)을 0.1%(w/v)로 에탄올에 녹여서 사용하였다. 리폭시게나아제 억제 활성(%)은 다음과 같은 식에 의해 산출되었다.
리폭시게나아제 억제 활성(%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100
a: 효소 무첨가군
a': 효소 첨가군
b: 효소 무첨가 및 시료 첨가군
b': 효소 및 시료 첨가군
실험으로부터 얻어진 결과는 one-way ANOVA 검정에 의한 평균치와 표준 오차(mean±SE)로 표시하였다.
그 결과, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주는 음성 대조군(MRS 배지) 대비 현저한 리폭시게나아제 저해 활성을 가지고 있음을 확인하였으며, 특히 균주 배양액(L.FE_O)은 양성 대조군인 0.05% 인도메타신(Indomethacin, IDM)과 유사한 수준의 리폭시게나아제 저해 활성을 나타내었다(도 1).
(2) NO(Nitric Oxide) 생성 억제율 측정
락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 항염 활성을 분석하기 위하여 LPS(lipopolysaccharide)로 염증이 유도된 RAW 264.7 세포에서의 NO 생성 억제율을 측정하였다. RAW 264.7 세포는 한국세포주은행(KCLB, Korea)에서 구입하여 사용하였으며 10% FBS 및 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 의 조건으로 배양하여 이후 실험에 사용하였다. RAW 264.7 세포를 24웰 플레이트에 1x104 세포/웰로 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 균주 배양액(L.FE_O)을 10%로 전처리한 다음 LPS(1 ㎍/㎖)를 처리하고 24시간 동안 반응시켰다. 이후, 세포 배양액 100 ㎕를 취하여 그리스 시약(1% 설폰산, 0.1% N-1-나프틸 에틸렌 디아민이염산염, 2.5% 인산)과 반응시켜 마이크로플레이트 리더로 546 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 배양액(L.FE_O)은 LPS 처리에 의한 NO의 생성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다(도 2).
실시예 4. 항균 활성 분석
본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 항균 활성을 분석하기 위하여 장출혈성 대장균인 에스케리키아 콜리(Escherichia coli, E.coli) O157:H7(ATCC 43894)를 American Type Culture Collection으로부터 분양받아 디스크 확산법을 이용하여 항균 활성을 측정하였다. E.coli를 LB(Luria-Bertani) 액체 배지에서 37℃, 24시간 동안 배양한 후, 배양액 200 ㎕를 LB 고체 배지에 도말하고 멸균된 10 ㎜ 페이퍼 디스크를 고체 배지위에 올려놓았다. 이후, 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 배양액을 상기 페이퍼 디스크에 처리하고 37℃에서 24시간 동안 배양한 다음 페이퍼 디스크 주변의 억제환(clear zone)을 관찰하였다.
그 결과, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 OKBL-L.FE 1 균주의 배양액(L.FE_O)는 E.coli에 대한 항균 활성이 우수한 것을 확인하였다(도 3).
한국미생물존센터(국외) KCCM12790P 20200918
<110> OKBIOLAND Co., Ltd. <120> Lactobacillus fermentum OKBL-L.FE 1 strain having anti-inflammatory activity and antimicrobial activity against pathogenic microorganism and uses thereof <130> PN20309 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1463 <212> DNA <213> Lactobacillus fermentum <400> 1 gggcgcgggc tatctgcagt cgacgcgttg gcccattgat tgatggtgct tgcacctgat 60 tgattttggt cgccaacgag tggcggacgg gtgagtaaca cgtaggtaac ctgcccagaa 120 gcgggggaca acatttggaa acagatgcta ataccgcata acaacgttgt tcgcatgaac 180 aacgcttaaa agatggcttc tcgctatcac ttctggatgg acctgcggtg cattagcttg 240 ttggtggggt aatggcctac caaggcgatg atgcatagcc gagttgagag actgatcggc 300 cacaatggga ctgagacacg gcccatactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca 360 caatgggcgc aagcctgatg gagcaacacc gcgtgagtga agaagggttt cggctcgtaa 420 agctctgttg ttaaagaaga acacgtatga gagtaactgt tcatacgttg acggtattta 480 accagaaagt cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt 540 tatccggatt tattgggcgt aaagagagtg caggcggttt tctaagtctg atgtgaaagc 600 cttcggctta accggagaag tgcatcggaa actggataac ttgagtgcag aagagggtag 660 tggaactcca tgtgtagcgg tggaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg 720 cggctacctg gtctgcaact gacgctgaga ctcgaaagca tgggtagcga acaggattag 780 ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg agtgctaggt gttggagggt ttccgccctt 840 cagtgccgga gctaacgcat taagcactcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac 900 tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagctac 960 gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatctt gcgccaaccc tagagatagg gcgtttcctt 1020 cgggaacgca atgacaggtg gtgcatggtc gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt 1080 taagtcccgc aacgagcgca acccttgtta ctagttgcca gcattaagtt gggcactcta 1140 gtgagactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggacga cgtcagatca tcatgcccct 1200 tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gacggtacaa cgagtcgcga actcgcgagg 1260 gcaagcaaat ctcttaaaac cgttctcagt tcggactgca ggctgcaact cgcctgcacg 1320 aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380 gtacacaccg cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc aaagtcggtg gggaaccttt 1440 agagccaccg ctaaggacga gtt 1463

Claims (6)

  1. 항염 활성 및 항균 활성을 가지는 기탁번호가 KCCM12790P인 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주.
  2. 제1항의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 그람 음성균에 대한 항균용 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 그람 음성균은 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)인 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
  4. 제1항의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 발효식품 제조용 스타터(starter) 조성물.
  5. 제1항의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 프로바이오틱 조성물.
  6. 제1항의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) OKBL-L.FE 1 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 유효성분으로 함유하는 사료첨가제 조성물.


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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854647A (zh) * 2022-06-16 2022-08-05 广西大学 发酵乳杆菌及其培养和应用
KR102582095B1 (ko) * 2023-03-17 2023-09-26 에스피씨 주식회사 프로바이오틱 특성과 제빵 특성이 우수한 리모시락토바실러스 퍼멘텀 spc l751

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004069178A2 (en) * 2003-01-30 2004-08-19 Biogaia Ab Anti-inflammatory activity from lactic acid bacteria
US7244424B2 (en) * 2001-06-29 2007-07-17 University Of Tartu Strain of micro-organism Lactobacillus fermentum ME-3 as novel anti-microbiol and anti-oxidative probiotic
KR20110051268A (ko) * 2008-09-04 2011-05-17 오엠 파르마 락토바실러스 박테리아 유래 면역조절 추출물 및 이의 제조 방법 및 이의 용도
US20120263695A1 (en) * 2009-08-11 2012-10-18 Jurgen Schrezenmeir Composition having strains of lactobacillus fermentum
KR20150056208A (ko) * 2013-11-15 2015-05-26 한국생명공학연구원 신규 락토바실러스 퍼멘텀 ｓｊ８２５６ 균주 및 이의 용도
KR20190111584A (ko) * 2018-03-23 2019-10-02 (주)바이오일레븐 염증성 장질환의 치료 또는 예방을 위한 락토바실러스 퍼멘툼 균주

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7244424B2 (en) * 2001-06-29 2007-07-17 University Of Tartu Strain of micro-organism Lactobacillus fermentum ME-3 as novel anti-microbiol and anti-oxidative probiotic
WO2004069178A2 (en) * 2003-01-30 2004-08-19 Biogaia Ab Anti-inflammatory activity from lactic acid bacteria
KR20110051268A (ko) * 2008-09-04 2011-05-17 오엠 파르마 락토바실러스 박테리아 유래 면역조절 추출물 및 이의 제조 방법 및 이의 용도
US20120263695A1 (en) * 2009-08-11 2012-10-18 Jurgen Schrezenmeir Composition having strains of lactobacillus fermentum
KR20150056208A (ko) * 2013-11-15 2015-05-26 한국생명공학연구원 신규 락토바실러스 퍼멘텀 ｓｊ８２５６ 균주 및 이의 용도
KR20190111584A (ko) * 2018-03-23 2019-10-02 (주)바이오일레븐 염증성 장질환의 치료 또는 예방을 위한 락토바실러스 퍼멘툼 균주

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
https://www.naturalmedicinejournal.com/blog/lactobacillus-fermentum-me-3-sponsored-essential-formulas-inc* *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854647A (zh) * 2022-06-16 2022-08-05 广西大学 发酵乳杆菌及其培养和应用
CN114854647B (zh) * 2022-06-16 2023-08-29 广西大学 发酵乳杆菌及其培养和应用
KR102582095B1 (ko) * 2023-03-17 2023-09-26 에스피씨 주식회사 프로바이오틱 특성과 제빵 특성이 우수한 리모시락토바실러스 퍼멘텀 spc l751

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