KR20220069510A - 조직배양을 통한 일천궁의 대량 증식 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 조직배양을 통한 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 대량 증식 방법에 관한 것으로, 일천궁의 살균소독 및 생장점 배양, 다신초 유도 배양, 기내 발근 배양, 기외 순화 및 필드 이식으로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 조건을 제공하여 약용작물인 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 대량으로 생산할 수 있다.
Description
본 발명은 조직배양을 통한 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 대량 증식 방법에 관한 것이다.
천궁 (川芎, Cnidii Rhizoma)은 산형과 (Umbelliferae)에 속하는 여러해살이풀로 원산지는 중국이고, 대한민국, 일본 등지에 분포한다. 기원식물에 따라 중국천궁 (Ligusticum chuanxiong Hort), 일천궁 (Cnidium officinale), 토천궁 (Ligusticum chuanxiong)으로 불린다. 분류학적으로 일천궁은 천궁속 (Cnidium)에 속하고 토천궁은 고본속 (Ligusticum)에 속한다. 일천궁의 학명은 Cnidium offcinale Makino이고, 토천궁은 중국천궁과 같은 Ligusticum chuanxiong Hort로 명명되어 있고, 영문 명칭은 없다.
최근 웰니스 (Wellness) 사회의 진입으로 자연에서 채취한 한약재에 대한 관심과 선호가 높아지고 있다. 국내 대표적인 4대 한약재 중 하나인 천궁은 예로부터 고혈압, 보혈, 진정, 진통의 효과가 뛰어난 것으로 알려져 있으며, 최근에는 항산화, 항진균 및 뇌질환 관련 효능에 관한 연구도 보고되고 있다.
한편, 일천궁 (Cnidium officinale Makino)은 국내 약용작물 중 생산량이 10위권 내외의 중요한 작물이나 고온에 매우 취약하여 해마다 농가별 생산량 변동이 심한 작물이다. 또한, 일천궁은 고온에 취약한 성질로 인해 여름철 기온이 급상승하지 않고 오전 또는 오후에 산그늘이 지는 산간고랭지와 같은 매우 제한된 지역에서 재배가 가능한 작물이나, 최근 기후변화에 의한 기온상승으로 인해 일천궁의 수량 및 품질뿐만 아니라 재배지가 크게 축소되고 있다. 이와 같은 문제점을 해소하기 위하여, 양질의 종묘를 생산하기 위한 효과적인 조직배양 방법에 대한 요구는 계속되고 있어, 일천궁을 단기간 내에 효과적으로 대량 증식시킬 수 있는 기내 배양방법에 대한 연구가 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 발근 유도용 배지 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 CoCl2·6H2O, CuSO4·5H2O, FeNaEDTA, H3BO3, KI, MnSO4·H2O, Na2MoO4·2H2O, ZnSO4·7H2O, CaCl2, KNO3, MgSO4, (NH4)H2PO4, myo-Inositol, Nicotinic acid, Pyridoxine HCl 및 Thiamine HCl을 유효성분으로 포함하는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 발근 유도용 배지 조성물을 제공한다.
이어서, 본 발명은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 진공장치를 이용하여 살균소독하는 1단계; 식물생장조절제를 포함하는 MS (Murashige and Skoog) 배지에서 상기 눈 (bud)을 배양하여 다신초를 유도하는 2단계; 및 제1항의 배지 조성물에서 상기 다신초를 배양하여 발근을 유도하는 3단계;를 포함하는 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면 채취된 일천궁의 살균소독 및 생장점 배양, 다신초 유도 배양, 기내 발근 배양, 기외 순화 및 필드 이식으로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 조건을 제공하여 약용작물인 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 대량으로 생산할 수 있다.
도 1은 일천궁의 기내 대량 증식 과정을 나타낸 사진이다.
도 2는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 및 뿌리 눈을 나타낸 사진이다.
도 3은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기내 배양 결과를 나타낸 사진이다.
도 4는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기외 순화 4 주후 모습을 나타낸 사진이다.
도 2는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 및 뿌리 눈을 나타낸 사진이다.
도 3은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기내 배양 결과를 나타낸 사진이다.
도 4는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기외 순화 4 주후 모습을 나타낸 사진이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세하게 설명하도록 한다.
본 발명은 약용작물의 조직 배양에 관한 것으로, 본 발명자들은 채취된 일천궁의 살균소독 및 생장점 배양, 다신초 유도 배양, 기내 발근 배양, 기외 순화 단계로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 최적 조건을 확립함으로써 본 발명을 완성하였다 (도 1 참조).
도 1은 본 발명의 조직배양을 통한 대량 증식 과정을 나타낸 사진이다. 도 1a는 일천궁의 눈 (bud) 배양을 나타낸 사진이고, 도 1b는 다신초 유도 결과 사진이며, 도 1c는 기내 발근 유도 결과 사진이고, 도 1d는 기외 순화 및 생육 결과 사진이다.
본 발명에서 사용되는 용어 “조직배양”이란 물의 눈, 잎, 줄기, 뿌리 등의 조직을 인공적인 기내 환경에서 배양하여 온전한 식물체로 생산하는 기술을 의미하며, 구체적으로는 온도 및 습도가 조절되는 배양실 안에서 유리병이나 시험관 등의 배양용기 내에 식물체가 자랄 수 있는 양분을 넣고 오염이 없는 무균상태에서 식물체를 키우는 기술을 말한다. 이러한 조직배양 기술은 계절에 상관없이 연중 묘목 생산이 가능하여, 적정한 배양조건이 확립되면 기내 식물체를 일시에 대량으로 생산할 수 있는 이점이 있다.
또한, 본 발명은 배양기관 중 뿌리 조직을 이용하여 신초 형성 및 식물체 재분화를 유도하는 배양 방법으로, 식물이 가지고 있는 분화능력인 전형성능 (totipotency, 全形成能)을 이용하는 것이다. 단세포 혹은 식물 조직 일부분으로부터 완전한 식물체가 재생되는 능력을 말한다. 모든 세포가 전형성능을 지니고 있지만 세포조직의 분화 정도, 채취 부위, 배지의 조성, 배양 환경 등에 따라 발현되는 결과는 현저히 차이가 나므로, 작물의 종류 또는 품종의 종류에 따른 배양 조건의 최적화가 필요하다.
따라서, 본 발명은 CoCl2·6H2O, CuSO4·5H2O, FeNaEDTA, H3BO3, KI, MnSO4·H2O, Na2MoO4·2H2O, ZnSO4·7H2O, CaCl2, KNO3, MgSO4, (NH4)H2PO4, myo-Inositol, Nicotinic acid, Pyridoxine HCl 및 Thiamine HCl을 유효성분으로 포함하는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 발근 유도용 배지 조성물을 제공한다.
또한, 상기 배지 조성물은 0.03 내지 0.07 mg/L의 CoCl2·6H2O, 0.05 내지 0.15 mg/L의 CuSO4·5H2O, 4.9 내지 14.9 mg/L의 FeNaEDTA, 2.3 내지 2.7 mg/L의 H3BO3, 0.3 내지 0.7 mg/L의 KI, 2 내지 8 mg/L의 MnSO4·H2O, 0.03 내지 0.07 mg/L의 Na2MoO4·2H2O, 0.3 내지 0.7 mg/L의 ZnSO4·7H2O, 65.5 내지 85.5 mg/L의 CaCl2, 1000 내지 1500 mg/L의 KNO3, 87 내지 107 mg/L의 MgSO4, 100 내지 200 mg/L의 (NH4)H2PO4, 900 내지 1100 mg/L의 myo-Inositol, 3 내지 7 mg/L의 Nicotinic acid, 0.3 내지 0.7 mg/L의 Pyridoxine HCl 및 3 내지 7 mg/L의 Thiamine HCl를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.05 mg/L CoCl2·6H2O, 0.1 mg/L CuSO4·5H2O, 9.9 mg/L FeNaEDTA, 2.5 mg/L H3BO3, 0.5 mg/L KI, 5 mg/L MnSO4·H2O, 0.05 mg/L Na2MoO4·2H2O, 0.5 mg/L ZnSO4·7H2O, 75.5 mg/L CaCl2, 1250 mg/L KNO3, 97.525 mg/L MgSO4, 150 mg/L (NH4)H2PO4, 1000 mg/L myo-Inositol, 5 mg/L Nicotinic acid, 0.5 mg/L Pyridoxine HCl 및 5 mg/L Thiamine HCl을 포함할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
또한, 상기 배지 조성물은 일천궁의 대량 증식을 위한 조직배양에 이용될 수 있다.
또한, 상기 배지 조성물은 일천궁의 뿌리 길이 및 뿌리 개수 증진시키는 것일 수 있다.
이어서, 본 발명은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 진공장치를 이용하여 살균소독하는 1단계; 식물 생장조절제를 포함하는 MS (Murashige and Skoog) 배지에서 상기 눈 (bud)을 배양하여 다신초를 유도하는 2단계; 및 상기 배지 조성물에서 상기 다신초를 배양하여 발근을 유도하는 3단계;를 포함하는 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "기내배양 (in vitro culture)"이란 체외배양이라고도 하며, 생물체에서 끄집어낸 물질을 체외에서 재현시키기 위한 실험실 내 배양을 의미한다. 일반적으로 식물체의 기내배양에 사용되는 식물 호르몬의 종류로는 BAP (6-benzyloaminopurine), 키네틴 (Kinetin, N-2-furanylmethyl-1H-purine-6-amine) 및 TDZ (Thiazuron-N-phenyl-N-1,2,3 thiadiazol-5ylurea)와 같은 사이토키닌 (Cytokinins); IAA (Indole acetic acid), IBA (Indole butyric acid), NAA (Naphthalene-acetic acid) 및 2,4-D (2,4-dichlorophenoxy-acetic acid)와 같은 옥신 (Auxins); GA3와 같은 지베렐린 (Gibberellins) 등이 있다. 식물 호르몬은 적용되는 조직의 종류에 따라 유효농도가 다르며, 합성된 장소 이외의 곳에 운반되어 동일한 기능을 나타낼지 여부가 불확실한 경우가 많다. 따라서, 목적에 따라 식물 호르몬의 종류 및 농도를 적절히 선택하는 것이 중요하며, 이는 실제 실험을 통하지 않고는 예측하여 선택하기가 어려울 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 “식물 생장조절제 (plant growth regulator)”란 식물의 생육에 적은 양으로도 큰 영향을 끼치는 합성된 호르몬성 화학물질의 총칭을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 “다신초”란 하나의 절편체에서 조직 배양으로 발생한 여러 개의 신초를 의미한다.
또한, 상기 1단계는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 에탄올 (ethanol)에 넣고 30초 내지 1분 30초간 흔들어 소독하는 1-1단계; 상기 1-1단계의 눈 (bud)을 차아염소산나트륨 (sodium hypochlorite)에 넣고 진공장치를 이용하여 2분 30초 내지 3분 30초간 진공상태를 유지하는 1-2단계; 및 상기 1-2단계의 차아염소산나트륨 (sodium hypochlorite)에 담긴 눈 (bud)을 1분 30초 내지 2분 30초간 흔들어 소독하는 1-3단계;를 포함할 수 있다. 상기 에탄올 (ethanol)은 60 내지 80% 에탄올일 수 있고, 바람직하게는 70% 에탄올일 수 있다. 상기 차아염소산나트륨 (sodium hypochlorite)는 1 내지 3% 차아염소산나트륨일 수 있고, 바람직하게는 2% 차아염소산나트륨일 수 있다.
또한, 상기 식물 생장조절제는 옥신 (auxin)류, 시토키닌 (cytokinin)류, 지베렐린 (Gibberellin)류, 아브시스산 (abscisic acid), 에틸렌, 폴리아민 및 자스모네이트로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다. 바람직하게는 시토키닌 (cytokinin)류 식물 생장조절제일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 제아틴 (Zeatin)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 제아틴 (Zeatin)은 0.2 내지 0.5 mg/L의 농도로 포함되는 것일 수 있다.
또한, 상기 2단계는 24 내지 26℃에서 15 내지 17 시간의 광조건및 6 내지 9 시간의 암조건하에 5 내지 6 주간 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 25℃에서 16 시간의 광조건 및 8 시간의 암조건하에 6 주간 수행되는 것일 수 있다.
또한, 상기 3단계는 24 내지 26℃에서 15 내지 17 시간의 광조건및 6 내지 9 시간의 암조건하에 3 내지 4 주간 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 25℃에서 16 시간의 광조건 및 8 시간의 암조건하에 4 주간 수행되는 것일 수 있다.
또한, 상기 방법은 3단계의 일천궁 (Cnidium officinale Makino)을 펄라이트 및 범이큐라이트를 혼합한 상토에 순화시키는 4단계;를 더 포함할 수 있다.
이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면을 참고하여 보다 상세하게 설명하도록 한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 구체화 하기 위한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아닐 것이다.
<실시예 1> 채취된 일천궁의 살균소독 및 생장점 배양
기내 무균체 확보를 위해 채취된 일천궁의 종근 정단의 눈 (bud)을 적출하여 표면살균을 진행하였다. 구체적으로, 일천궁의 종근 정단 바로 옆 크기가 큰 눈을 적출하였으며 (도 2), 70% ethanol, 2% sodium hypochlorite 및 진공장치를 이용한 표면살균을 진행하였다. 구체적으로, 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 70% ethanol에 넣고 1 분간 흔들어 소독하였다. 70% ethanol에 소독된 눈 (bud)을 2% sodium hypochlorite에 넣고 진공장치(membrane filter size: 0.2㎛, 90mm dia)를 이용하여 3 분간 진공상태를 유지하였다. 2% sodium hypochlorite에 담긴 눈 (bud)을 2 분간 흔들어 소독하였다. 이후 일천궁 뿌리 눈 (bud)배양을 통해 기내 증식 조건을 선발하였다.
도 2는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 및 뿌리 눈을 나타낸 사진이다. 도 2a는 일천궁의 종근, 도 2b 및 도 2c는 종근의 눈 (bud)을 현미경으로 관찰한 사진이다.
이어서, 진공장치 사용 여부에 따른 일천궁의 기내 오염율 조사하였다. 그 결과는 표 1에 나타내었다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 진공장치를 사용하여 살균소독을 진행한 결과 오염율이 약 2배 이상 감소하는 것을 확인하였다.
| 70% ethanol, 1분 | 2% sodium hypochlorite, 5분 | 오염율 (%) | |
| 방법 1 | shaking | shaking (5분) | 67 |
| 방법 2 | shaking | vacuum (3분) + shaking (2분) |
32 |
<실시예 2> 다신초 유도 배지 선정
하기 표 2의 조성으로 기내 배양용 배지에 식물생장조절제로 BA (0.1~2.0 mg/L) 또는 Zeatin (0.1~2.0 mg/L)을 추가로 포함하는 다신초 유도 배지를 제조하였다.
| Micro elements | mg/L |
| CoCl2·6H2O | 0.025 |
| CuSO4·5H2O | 0.025 |
| FeNaEDTA | 36.70 |
| H3BO3 | 6.20 |
| KI | 0.83 |
| MnSO4·H2O | 16.90 |
| Na2MoO4·2H2O | 0.25 |
| ZnSO4·7H2O | 8.60 |
| CaCl2 | 332.02 |
| KH2PO4 | 170.00 |
| KNO3 | 1900.00 |
| MgSO4 | 180.54 |
| NaH2PO·anh | 128.40 |
| NH4NO3 | 1650.00 |
| Glycine | 2.00 |
| myo-Inositol | 100.00 |
| Nicotinic acid | 0.50 |
| Pyridoxine HCl | 0.50 |
| Thiamine HCl | 0.10 |
각각의 배지 조성물을 이용하여 실시예 1에서 진공장치를 통해 살균소독된 일천궁 종근의 눈을 25℃에서 16 시간의 광조건과 8 시간의 암조건으로 6 주간 기내배양하였다. 그 결과는 도 1a, 도 1b 및 표 3에 나타내었다. 도 1a는 눈 (bud) 배양 사진이고, 도 1b는 다신초 유도 결과 사진이다.
표 3에 나타낸 바와 같이, 식물생장조절제 포함 다신초 유도 배지의 다신초 유도 결과 상기 다신초 유도 배지에 식물생장조절제인 BA, Zeatin을 0.1~2.0 mg/L의 농도로 처리하였을 때, Zeatin 0.2 mg/L 처리구에서 다신초 유도 효율이 가장 높은 것을 확인하였다.
| Medium | 식물생장조절제 (mg/L) |
Multi-shoot (%) | No. of shoot/explant | Shoot length (mm) | |
| BA | Zeatin | ||||
| 다신초 유도 배지 | 0.1 | - | 30.6 ± 1.3 | 4.6 ± 0.3 | 36.5 ± 3.1 |
| 0.2 | - | 35.4 ± 2.3 | 4.0 ± 0.3 | 39.2 ± 2.7 | |
| 0.5 | - | 50.7 ± 3.3 | 4.4 ± 0.3 | 42.1 ± 3.8 | |
| 1.0 | - | 51.6 ± 2.9 | 4.0 ± 0.2 | 38.5 ± 2.8 | |
| 2.0 | - | 52.4 ± 4.5 | 3.4 ± 0.2 | 29.2 ± 2.4 | |
| - | 0.1 | 38.4 ± 2.7 | 6.3 ± 0.7 | 35.4 ± 2.8 | |
| - | 0.2 | 50.5 ± 4.8 | 7.4 ± 0.8 | 39.5 ± 2.6 | |
| - | 0.5 | 51.8 ± 4.5 | 7.1 ± 0.5 | 31.2 ± 2.7 | |
| - | 1.0 | 56.1 ± 4.4 | 6.2 ± 0.4 | 29.1 ± 2.4 | |
| - | 2.0 | 57.3 ± 3.4 | 4.8 ± 0.4 | 25.4 ± 2.5 | |
<실시예 3> 기내 발근 배지 선정
기내 발근 유도를 위하여 하기 표 4의 조성으로 발근배지 1 내지 5를 제조하였다.
| 발근배지1 | 발근배지2 | 발근배지3 | 발근배지4 | 발근배지5 | |
| Micro elements | mg/L | mg/L | mg/L | mg/L | mg/L |
| CoCl2·6H2O | 0.025 | 0.025 | 0.05 | 0.10 | 0.20 |
| CuSO4·5H2O | 0.025 | 0.025 | 0.10 | 0.20 | 0.40 |
| FeNaEDTA | 36.70 | 36.70 | 9.90 | 19.80 | 39.60 |
| H3BO3 | 6.20 | 3.00 | 2.50 | 5.00 | 10.00 |
| KI | 0.83 | 0.75 | 0.50 | 1.00 | 2.00 |
| MnSO4·H2O | 16.90 | 10.00 | 5.00 | 10.00 | 20.00 |
| Na2MoO4·2H2O | 0.25 | 0.25 | 0.05 | 0.10 | 0.20 |
| ZnSO4·7H2O | 8.60 | 2.00 | 0.50 | 1.00 | 2.00 |
| CaCl2 | 332.02 | 113.23 | 75.50 | 151.00 | 302.00 |
| KH2PO4 | 170.00 | - | - | - | - |
| KNO3 | 1900.00 | 2500.00 | 1250.00 | 2500.00 | 5000.00 |
| MgSO4 | 180.54 | 121.56 | 97.525 | 195.05 | 390.10 |
| NH4NO3 | 1650.00 | - | - | - | - |
| NaH2PO4 | - | 130.44 | - | - | - |
| (NH4)H2PO4 | - | - | 150.00 | 300.00 | 600.00 |
| Glycine | 2.00 | - | - | - | - |
| (NH4)2SO4 | - | 134.00 | - | - | - |
| myo-Inositol | 100.00 | 100.00 | 1000.0 | 1000.0 | 2000.0 |
| Nicotinic acid | 0.50 | 1.00 | 5.00 | 5.00 | 10.00 |
| Pyridoxine HCl | 0.50 | 1.00 | 0.50 | 0.50 | 1.00 |
| Thiamine HCl | 0.10 | 10.00 | 5.00 | 5.00 | 1.00 |
각각의 발근배지를 이용하여 상기 0.2 mg/L Zeatin을 포함하는 다신초 유도 배지에서 배양된 다신초를 25℃에서 16 시간의 광조건과 8 시간 암조건으로 4 주간 기내배양하였다. 그 결과는 도 1c, 도 3 및 표 5에 나타내었다.
도 3은 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기내 배양 결과를 나타낸 사진이다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 기내배양 4주 간 발근배지 1 내지 5에서 다신초를 배양한 결과, 발근배지 3에서 기내배양 시 발근된 뿌리수는 6.8개, 뿌리 길이는 40.6cm로 조사되었으며, 발근배지 1, 2, 4 및 5와 비교하여 높은 발근 효율을 보이는 것을 확인하였다.
| Medium | Rooting (%) | No. of root / explant | Root length (cm) |
| 발근배지 1 | 100 | 4.9 ± 0.4 | 39.4 ± 3.5 |
| 발근배지 2 | 100 | 3.9 ± 0.4 | 31.3 ± 2.7 |
| 발근배지 3 | 92 | 6.8 ± 0.6 | 40.6 ± 4.1 |
| 발근배지 4 | 100 | 5.3 ± 0.5 | 34.7 ± 3.4 |
| 발근배지 5 | 83 | 4.8 ± 0.5 | 28.2 ± 2.6 |
<실시예 4> 기외 순화
상기 다신초 유도 및 발근 최적화 배지에 배양한 일천궁에 대하여 기외 순화를 진행하였다. 상토 또는 펄라이트, 범이큐라이트를 혼합한 상토를 기외 순화용 상토로 사용하였다. 발근배지3에서 배양된 기내 발근이 완료된 일천궁을 기외 순화용 상토에서 23 ℃, 16 시간의 광조건과 8 시간의 암조건으로 4 주간 생육하였다. 그 결과는 도 1d, 도 4 및 표 6에 나타내었다. 도 1d는 기외 순화 및 생육 결과 사진이고, 도 4는 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 기외 순화 4주 째 모습을 나타낸 사진이다.
표 6에 나타낸 바와 같이, 기내에서 배양한 일천궁에 대하여 상기 기외 순화용 상토에 순화시 4주 차에 생육을 조사한 결과, 초장 10.5 cm, 엽수 12.77 개/주, 근장 13.50 cm로 조사되었으며, 기외 순화시 생존율은 100 %로 나타나 높은 생존율을 보였다.
| 기간 | 신초장 (cm) | 엽수 (개/주) | 근장 (cm) | 생존율 (%) |
| 0주 | 5.43±2.38 | - | 4.13±2.39 | - |
| 4주 | 10.50±1.70 | 12.77±4.14 | 13.50±3.00 | 100% |
이러한 결과는 일천궁의 최적의 생장효율을 나타낼 수 있는 다신초 유도 배지 및 기내 발근 배지와 이를 이용한 일천궁 대량 증식 방법을 제공한 것으로, 본 발명의 0.2 mg/L Zeatin을 포함하는 다신초 유도 배지 및 150 mg/L (NH4)H2PO4를 포함하는 기내 발근 배지를 이용하여 단계별로 기내 배양한 후 기외 순화를 진행한다면 조직 배양 전반에 걸쳐 단기간에 동일한 일천궁 개체를 대량으로 증식시킬 수 있다는 것을 의미한다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (9)
- CoCl2·6H2O, CuSO4·5H2O, FeNaEDTA, H3BO3, KI, MnSO4·H2O, Na2MoO4·2H2O, ZnSO4·7H2O, CaCl2, KNO3, MgSO4, (NH4)H2PO4, myo-Inositol, Nicotinic acid, Pyridoxine HCl 및 Thiamine HCl을 유효성분으로 포함하는, 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 발근 유도용 배지 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 배지 조성물은 0.03 내지 0.07 mg/L CoCl2·6H2O, 0.05 내지 0.15 mg/L CuSO4·5H2O, 4.9 내지 14.9 mg/L FeNaEDTA, 2.3 내지 2.7 mg/L H3BO3, 0.3 내지 0.7 mg/L KI, 2 내지 8 mg/L MnSO4·H2O, 0.03 내지 0.07 mg/L Na2MoO4·2H2O, 0.3 내지 0.7 mg/L ZnSO4·7H2O, 65.5 내지 85.5 mg/L CaCl2, 1000 내지 1500 mg/L KNO3, 87 내지 107 mg/L MgSO4, 100 내지 200 mg/L (NH4)H2PO4, 900 내지 1100 mg/L myo-Inositol, 3 내지 7 mg/L Nicotinic acid, 0.3 내지 0.7 mg/L Pyridoxine HCl 및 3 내지 7 mg/L Thiamine HCl을 포함하는 것을 특징으로 하는, 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 발근 유도용 배지 조성물.
- 일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 진공장치를 이용하여 살균소독하는 1단계;
식물생장조절제를 포함하는 MS (Murashige and Skoog) 배지에서 상기 눈 (bud)을 배양하여 다신초를 유도하는 2단계; 및
제1항 또는 제2항의 배지 조성물에서 상기 다신초를 배양하여 발근을 유도하는 3단계;를 포함하는, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 1단계는
일천궁 (Cnidium officinale Makino)의 종근 정단의 눈 (bud)을 에탄올에 넣고 30초 내지 1분 30초간 흔들어 소독하는 1-1단계;
상기 1-1단계의 눈 (bud)을 치아염소산나트륨 (sodium hypochlorite)에 넣고 진공장치를 이용하여 2분 30초 내지 3분 30초간 진공상태를 유지하는 1-2단계; 및
상기 1-2단계의 치아염소산나트륨 (sodium hypochlorite)에 담긴 눈 (bud)을 1분 30초 내지 2분 30초간 흔들어 소독하는 1-3단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 식물생장조절제는 제아틴 (Zeatin)인 것을 특징으로 하는, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제5항에 있어서,
상기 제아틴 (Zeatin)은 0.2 내지 0.5 mg/L 의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 2단계는 24 내지 26℃에서 15 내지 17 시간의 광조건 및 6 내지 9 시간의 암조건하에 5 내지 6 주간 수행되는 것인, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 3단계는 24 내지 26℃에서 15 내지 17 시간의 광조건 및 6 내지 9 시간의 암조건하에 3 내지 4 주간 수행되는 것인, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 방법은 3단계의 일천궁 (Cnidium officinale Makino)을 펄라이트 및 범이큐라이트를 혼합한 기외 순화용 상토에 순화시키는 4단계;를 더 포함하는 것인, 기내배양에 의한 일천궁 대량증식 방법.
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