KR20220046901A - 당귀 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물 - Google Patents

당귀 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부미백 개선, 자외선 차단용 화장료 조성물에 관한 것으로 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 항산화 효과가 우수하며, 피부미백 개선 및 자외선 차단에 효과가 있다.

Description

당귀 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물{Compositions containing Angelica gigas extract}
본 발명은 프로바이오틱스로 발효시키거나 발효시키지 않은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
현대인들이 건강에 관심이 많아짐에 따라 천연, 친환경적 화장품에 대하여 다양한 연구가 활발하게 이루어져 있다. 기능성 화장품에도 과거 화학성분 기반의 미백, 항산화제, 자외선 차단, 방부, 항균제 등이 들어간 경우보단 천연물 유래 소재를 사용한 화장품에 대한 관심이 높아지고 있다.
여러 천연 소재 중에서 동물유래 소재는 동물복지와 광우병, 돼지콜레라, 조류독감 등으로 동물유래 소재에 대한 소비자의 거부감 증대로 식물성 원료를 이용한 기능성 화장품들의 개발이 활발히 이루어지며 천연물 성분을 사용한 항산화, 미백, 주름개선, 자외선차단 등의 복합 기능성 화장품에 대한 소비자의 수요가 높아지고 있다.
기능성 화장품이란 미백, 주름개선, 자외선 차단과 같이 특정 기능이 첨가된 에센스, 세럼, 크림, 파우더, 베이스 등 다양한 사용단계의 화장품을 말한다. 한 가지 기능을 하는 복합기능 화장품도 개발되어 사용의 간편성이 높아지고, 모공케어, 영양공급, 탄력강화, 여드름 치료, 미백과 자외선 차단 등 다양한 목적에 따라 특화된 제품들도 출시되고 있다.
신규 단일물질의 국내유입이 어렵고 거대 화장품 업체가 미백과 자외선 차단의 복합기능성 제품 개발에 집중하고 있어 미백 소재가 급부상하고 있다.
현재까지 피부 미백과 주름개선 효과를 가지는 화장용 소재의 개발 및 사업화가 활발히 진행되었으며 오존층 파괴로 인한 자외선 노출량 증가로 인해 자외선차단제의 수요와 상품화에 대한 수요가 증가하고 있다.
한편, 당귀는 미나리과(Umbelliferae)에 속하는 다년생 초본으로 주로 한국, 중국, 일본에 분포하고 있으며, 각 지역에 따라 재배하여 생약 재료로 사용되고 있다. 우리나라에서 재배되고 있는 당귀는 중국당귀(Angelica acutiloba Kitagaw), 일본당귀(Angelica sinensis Diels)와 구분되고 있다. 당귀는 예로부터 약성이 따뜻하고, 맛은 달고, 무독하여 부작용이 없는 생약재로서 질병치료와 건강증진 목적으로 사용해온 우리나라의 대표적인 생약재이다. 국내에 재배되고 있는 당귀의 약효성분으로는 데커신(decursin), 데커시놀(decursinol), 안젤레이트(angelate), 노다케네틴(nodakenetin), 노다케닌 (nodakenin), 움펠리페론(umbelliferone), β-시토스테롤(β-sitosterol), α-피넨(α-pinene), 리모넨(limonene) 등이 함유되어 있다. 특히 당귀의 주요 성분인 쿠마린(Coumarine) 유도체 중에서 데커신, 데커시놀 안젤레이트(decursinol angelate)는 가장 풍부한 구성요소로서 항균, 혈관형성 억제, 항암 등의 약리적인 효과가 알려져 있다.
이러한 당귀를 이용하여 항산화, 피부미백 개선 및 지외선 차단에 효과가 있는 화장료 조성물이 요구되고 있다.
대한민국 공개특허 제2020-0048185호 대한민국 등록특허 제2141575호
본 발명의 목적은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 건강기능식품을 제공하는데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있다.
상기 당귀 초음파 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 하에서 추출된 것이며, 바람직하게는 용매로 물을 사용하였다.
상기 당귀 초음파 추출물은 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 5 내지 60분 동안 처리된 것일 수 있다.
상기 초음파 처리 시 추출온도는 50 내지 90 ℃일 수 있다.
상기 당귀 초음파 추출물은 당귀 초음파 추출물을 균주로 발효된 당귀 발효 추출물일 수 있다.
상기 균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
또한, 상기한 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 피부미백 개선 및 자외선 차단용 건강기능식품은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있다.
상기 당귀 초음파 추출물은 균주로 발효된 당귀 발효 추출물일 수 있다.
본 발명의 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 독성이 없으며, 항산화 효과가 우수하고, 피부미백 개선 및 자외선 차단에 효과적이다.
또한, 본 발명의 당귀 초음파 추출물을 프라바이오틱스 균주를 이용한 발효를 통해 유효성이 증진된다.
본 발명은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하며, 상기 당귀 초음파 추출물은 당귀를 용매하에서 초음파로 추출한 추출물 또는 상기 초음파 하에서 용매로 추출한 추출물을 균주, 바람직하게는 프라바이오틱스 균주로 발효시킨 발효 추출물일 수 있다.
상기 당귀는 심한 기침으로 기(氣)가 위로 솟구치는 증상, 학질, 피부가 오싹오싹한 증상, 모든 종기나 부스럼 등에 효과가 있다.
상기 당귀 초음파 추출물은 추출용매 하에서 초음파처리를 통해 추출되는 것으로서, 구체적으로 당귀와 추출용매가 1 : 5 내지 25, 바람직하게는 1 : 10 내지 20의 중량비로 혼합되어 20 내지 50 kHz, 바람직하게는 30 내지 40 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W, 바람직하게는 150 내지 400 W 파워의 초음파기로 50 내지 90 ℃, 바람직하게는 60 내지 70 ℃하에서 5 내지 60분, 바람직하게는 25 내지 30분 동안 처리된다.
당귀를 추출 시 초음파 추출이 아니라 용매 추출 또는 초고압 추출인 경우에는 유효성분이 소량 추출될 뿐만 아니라 항산화, 피부미백 및 자외선 차단 효과가 낮을 수 있다.
상기 당귀와 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 당귀의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
또한, 초음파기의 진동수 및 파워가 상기 하한치 미만인 경우에는 당귀의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 유효성분 외에 다른 물질도 다량으로 추출되어 효과가 저하될 수 있다.
또한, 추출온도 및 추출시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 당귀의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 폴리페놀 및 티로시나아제의 열에 의한 변형으로 인해 기능성이 감소할 수 있다.
상기 추출물을 추출하는 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸렌글리콜, 에틸에테르 또는 이들의 혼합용매이다. 상기 저급알코올로는 20 내지 99 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액을 들 수 있으며, 바람직하게는 우수한 항산화, 피부미백 및 자외선 차단을 위하여 물을 들 수 있다.
본 발명의 당귀 발효 추출물은 상기 당귀 초음파 추출물을 균주로 발효시킨 것이다.
본 발명의 당귀 발효 추출물은 상기 당귀 초음파 추출물, 바람직하게는 당귀 초음파 열수 추출물에 균주를 접종시킨 후 25 내지 50 ℃에서 100 내지 300 rpm으로 10 내지 30일 동안 발효시킨 것이다.
상기 균주로는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으며, 베타-글루코시데아제를 생산한다고 알려진 상기 균주 이외에 다른 균주를 사용하는 경우에는 항산화, 피부미백 및 자외선 차단 효과가 없거나 낮을 수 있다.
상기 발효 시 온도, 혼합 속도 및 시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 당귀의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 생리활성물질의 분해로 인해 원하는 효과가 전혀 발휘되지 못할 수 있다.
본 발명의 당귀 초음파 추출물 및 당귀 발효 추출물은 화장료 조성물 외에 건강기능식품에도 사용될 수 있다.
본 명세서에서 당귀를 언급하면서 사용되는 용어 '추출물'은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 함유하는'이란 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물은 10 내지 1500 ㎍/㎖, 바람직하게는 100 내지 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용된다. 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물은 천연물로서 과량 사용하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기의 화장료 조성물과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있으며, 이러한 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수, 수용성 비타민, 지용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 들 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상 사용되는 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 안료 및 천연향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 미스트, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도우 등과 같은 화장품류와 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저 등이 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품 조성물을 제공한다.
건강기능식품이란, 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 당귀 초음파 추출물 또는 당귀 발효 추출물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
실시예 1. 당귀 초음파 추출물
당귀와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 초음파기(JAC Ultrasinic, Hwaseng, Korea)에 투입 후 60 ℃ 하에서 초음파(40 kHz, 250 W)를 이용하여 30분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 당귀 초음파 추출물을 수득하였다.
실시예 2. 당귀 발효 추출물
배양액
류코노스톡 메센테로이데스를 MRS broth에 1% 접종하여 37 ℃에서 24시간 배양하여 배양액으로 사용하였다.
발효 추출물
실시예 1에서 제조된 당귀 초음파 추출물을 상온에서 식힌 후 상기 당귀 초음파 열수 추출물과 류코노스톡 메센테로이데스를 1 : 2의 중량비로 혼합하여 pH를 6.95~7.05로 조절한 후 상기 혼합액 100 중량부에 당 1 중량부를 추가하여 37 ℃에서 48시간 발효시킨 다음 Homogenizer(HG-15A, DAIHAN, Korea)를 이용해 파쇄하고 pH 4.78±0.05로 조절하여 45 ℃에서 48시간 또 발효한 다음 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 당귀 발효 추출물을 수득하였다.
비교예 1. 당귀 일반 추출물
당귀와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 100 ℃에서 60분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 당귀 추출물을 수득하였다.
비교예 2. 당귀 초고압 추출물
당귀와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 초고압추출기(오토클레브)에 투입 후 1000 atm의 압력 및 300 ℃의 온도 하에서 30분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 당귀 초고압 추출물을 수득하였다.
비교예 3. 당귀 발효 추출물_비교예 1
상기 실시예 2와 동일하게 실시하되, 실시예 1의 당귀 초음파 추출물 대신 비교예 1의 당귀 일반 추출물을 사용하여 당귀 발효 추출물을 수득하였다.
비교예 4. 당귀 발효 추출물_비교예 2
상기 실시예 2와 동일하게 실시하되, 실시예 1의 당귀 초음파 추출물 대신 비교예 2의 당귀 초고압 추출물을 사용하여 당귀 발효 추출물을 수득하였다.
<시험예>
시험예 1. 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량 및 DPPH 소거능 측정
1-1. 총 폴리페놀 함량(mg GAE/g DW): Folin-Denis 방법을 변형하여 측정하였으며, folin-ciocalteu's 페놀 용액(Folin & Ciocalteu's phenol; Sigma-Aldrich, USA)을 시료에 첨가하여 폴리페놀 화합물에 의해 환원되어 발생하는 몰리브덴 청색발색 반응을 원리로 하였다. 시료 0.14 ㎖에 0.2 N F.C용액을 첨가하여 10분 동안 방치 후 7.5% Na2CO3 0.56 ㎖을 첨가하여 1시간 동안 반응시켜 흡광도 값을 756 nm에서 측정하였다. 표준물질로 gallic acid(Sigma-Aldrich, USA)를 사용하였고, 단위는 작성한 gallic acid 검량선과 비교하여 mg gallic acid equivalent(GAE)/g dry weight(DW)로 표시하였다.
1-2. 총 플라보노이드 함량(mg QE/g DM): Zhishen 등의 방법을 변형하여 사용하였다. 플라보노이드에 알칼리를 작용시키면 황색으로 발색되는 원리에 근거하여 흡광도를 측정해 TFC 농도를 측정하였다. 각 시료 0.5 mL에 증류수 2.5 mL와 99.5% (v/v) 에탄올 1.5 mL 가한 후 1 M potassium acetate 0.1 mL와 10% aluminum chloride 0.1 mL를 가하여 교반한 후 실온에서 30분 동안 방치하였다. 415 nm에서 흡광도를 측정하였으며 quercetin (Sigma-Aldrich, Minneapolis, USA)을 25, 50, 100, 200 ug/mL로 희석하여 검량선을 구하여 플라보노이드 함량을 mg quercetin equivalent (QE)/g dry matter (DM)로 나타내었다.
1-3. DPPH 소거능(%): 전자공여능은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였으며 항산화 활성이 있는 물질과 반응하여 짙은 보라색에서 노란색으로 색이 엷어지는 원리를 이용한 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl, Sigma-Aldrich) free radical 소거활성을 통해 시료의 환원력을 측정하였다. 시료 0.25 ㎖에 DPPH 용액 1.25 ㎖을 가하여 암실에서 20분 동안 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도를 기준으로 하기 [수학식 1]에 따라 DPPH 라디칼 소거활성을 백분율로 표시하였다.
[수학식 1]
DPPH radical scavenging activity (%)={1-(Abs(test)-Abs(color))/Abs(control)}X100
구분 실시예 1 실시예 2 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4
총폴리페놀
(mg GAE/g DW)		 9.226 27.678 2.195 2.105 5.227 7.436
총플라보노이드
(mg QE/g DW)		 1.133 0.557 0.299 0.272 0.367 0.315
DPPH 소거능(%) 18.336 26.909 10.198 11.450 12.088 16.679
위 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 당귀 초음파 추출물은 비교예 1 및 3에 비하여 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량이 높으며 DPPH 소거능이 우수한 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예 2에 따라 제조된 당귀 발효 추출물은 비교예 2 및 4에 비하여 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량이 높으며 DPPH 소거능이 우수한 것을 확인하였다.
특히, 비교예 1의 추출물을 발효한 비교예 3, 비교예 2의 추출물을 발효한 비교예 4는 본 발명의 실시예 2와 달리 발효 시 총 폴리페놀 함량 및 DPPH 소거능이 급격히 향상되지 않는 것을 확인하였다.
시험예 2. 티로시나아제(Tyrosinase) 활성 저해
티로시나아제 활성 억제 측정: 티로시나아제의 저해 활성은 Flurkey의 방법을 변형하여 실험하였다. sodium phosphate monobasic anhydrous 0.8039 g, sodium phosphate dibasic anhydrous 0.9511 g을 각각 증류수 100 mL에 녹여 pH를 6.8로 조정하여 buffer를 제조하였다. 제조된 buffer로 기질10 mM 3,4-dihydroxy phenylanin(I-dopa) (20 mg/mL)와 효소 1250 unit tyrosinase를 제조하였으며 1250 unit tyrosinase는 증류수에 10배 희석하여 사용하였다. 양성 대조군으로는 kojic acid(2 mg/mL)를 제조하였다. 2 mL 마이크로튜브에 buffer 0.4 g, 기질 0.2 g, 시료 0.2g, 효소 0.2 g을 순서대로 첨가하여 교반한 뒤 25℃에서 30 분간 반응시켰다. 반응 후 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.
[수학식 2]
티로시나아제 저해율(Inhibitory activity, %) = [1-시료OD/ 대조군OD]*100
구분 실시예 1 실시예 2 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4
티로시나아제 저해율(%) 16.667 47.650 5.602 7.115 8.688 15.195
위 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 당귀 초음파 추출물은 비교예 1 및 3에 비하여 티로시나아제 저해율이 높은 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예 2에 따라 제조된 당귀 발효 추출물 역시 비교예 2 및 4에 비하여 티로시나아제 저해율이 높은 것을 확인하였다.
특히, 비교예 1의 추출물을 발효한 비교예 3, 비교예 2의 추출물을 발효한 비교예 4는 본 발명의 실시예 2와 달리 발효 시 티로시나아제 저해율이 급격히 향상되지 않는 것을 확인하였다.
시험예 3. 자외선 차단
실시예 및 비교예에 따라 제조된 당귀 추출물의 자외선 차단율을 측정하기 위하여 UV/Vis spectrophotometer를 이용하여 자외선 A (320-400 nm)와 지외선 B (290-320 nm) 파장범위에서 차단율을 측정하였고 이를 증류수와 대표적인 폴리페놀인 탄닌 10 mg/mL로의 자외선 차단능과 비교하여 흡광도를 측정하였다.
구분 실시예 1 실시예 2 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4
UV-A 차단율(%)
타닌 대비		 11.3 25.0 5.6 9.4 7.8 10.2
UV-B 차단율(%)
타닌 대비		 32.3 58.0 18.5 22.4 20.6 23.7
위 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 당귀 초음파 추출물은 비교예 1 및 3에 비하여 자외선 차단율이 높으므로 피부에 닿는 자외선 차단에 효과적이다.
또한, 본 발명의 실시예 2에 따라 제조된 당귀 발효 추출물 역시 비교예 2 및 4에 비하여 자외선 차단율이 높으므로 피부에 닿는 자외선 차단에 효과적이다.
즉, 본 발명의 실시예 1 및 2의 추출물은 피부에 도포된 화장료 조성물에서 자외선을 차단하므로 피부에 직접적으로 닿는 자외선은 거의 없다.
시험예 4. MTT assay에 의한 세포 생존율 측정
실시예 및 비교예의 추출물이 세포독성에 미치는 영향을 평가하기 위해서 MTT assay를 이용하였다. MTT assay는 세포의 생존율을 측정하기 위한 실험실 시험법으로써 표준 비색분석법(standard colorimetric assay)이라고 할 수 있다. 세포의 증식과 살아있는 세포를 정확하게 측정할 수 있는 기법인 MTT assay는 생명과학 분야, 특히 종양 생물학에서 필수적인 기법중의 하나이다. 새로운 항암제 개발을 위한 효능 검색이나 기존에 개발된 항암제의 감수성을 알아보기 위하여 동물실험 등 생체에 적용하기 이전에, 생체외에서 약물이 종양세포의 성장을 억제하는 것을 객관적으로 증명하는 과정이 선행되어야 한다.
2X103 cells/㎖로 희석된 B16F0 세포주(생쥐로부터 기원된 흑생종 세포)를 96-웰 플레이트의 각 플레이트에 첨가하고 24시간 동안 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 균주를 배양하였다. 24시간 배양 후 본 발명 조성물의 농도를 4 mg/ml로 희석하여 각 웰에 첨가하고 시스플라틴도 동일한 방법으로 희석하여 웰에 첨가하였다.
이후 다시 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 동안 배양하고 2 ㎎/㎖ MTT 시약 50 ㎕를 가한 후 37 ℃ 배양기에서 4시간 동안 방치하였다.
원심분리기를 이용하여 상등액을 제거하고 DMSO 200 ㎕씩을 각 웰에 가해 MTT 염색침전물을 녹인 후 ELISA 판독기로 540 ㎚ 파장에서 OD540 값을 측정하였다. 50% 억제농도(IC50)는 생존율이 50%가 되도록 하는 약물의 농도이다.
구분 실시예 1 실시예 2 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4
세포생존율(%, IC50=4mg/ml) 3.4 48.1 3.1 12.9 3.5 20.4
위 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2에 따라 제조된 추출물 및 비교예 1 내지 4의 추출물은 우수한 암세포 증식을 억제하는 것을 확인하였다.
특히, 실시예 2는 48.1%의 암세포 증식을 억제하므로 다른 군에 비하여 암세포 증식을 억제능이 우수한 것을 확인하였다.
하기에 본 발명의 분말을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제조예 1. 과립제의 제조
실시예 2에서 얻은 발효물 분말 1,000 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 mg
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 과립제에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 과립제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제조예 2. 기능성 음료의 제조
실시예 2에서 얻은 발효물 분말 1,000 mg
구연산 1,000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
본 발명을 적용하기에 적합한 화장료 조성물의 제조예를 제시하기로 한다.
제조예 3: 화장수
실시예 2의 발효물을 포함하는 화장료 중 화장수의 제조예는 하기 표 5와 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 2의 발효물 5.0
글리세린 6.0
1,3-부틸렌글라이콜 3.0
피이지1500 1.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.04
소듐하이알루로네이트 5.0
에탄올 10.0
폴리소르베이트20 0.2
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 4: 로션
실시예 2의 발효물을 포함하는 화장료 중 로션의 제조예는 하기 표 6과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 2의 발효물 3.0
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 1.2
토코페릴아세테이트 3.0
유동 파라핀 5.0
스쿠알란 3.0
마카다미너트오일 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 1.0
카르복시비닐폴리머 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 5: 영양 크림
실시예 2의 발효물을 포함하는 화장료 중 영양 크림의 제조예는 하기 표 7과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 2의 발효물 1.0
친유형 모노스테아린산글리세린 1.5
세테아릴 알코올 1.5
스테아린산 1.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.6
이소스테아릴이소스테아레이트 5.0
스쿠알란 5.0
광물유 35.0
디메치콘 0.5
하이드록시에칠셀룰로오스 0.12
글리세린 6.0
트리에탄올아민 0.7
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 6: 에센스
실시예 2의 발효물을 포함하는 화장료 중 에센스의 제조예는 하기 표 8과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 2의 발효물 1.5
글리세린 10.0
베타인 5.0
PEG 1500 2.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.04
하이드록시에칠셀룰로오스 0.1
소듐하이알루로네이트 8.0
카르복시비닐폴리머 0.2
트리에탄올아민 0.18
옥틸도데칸올 0.3
옥틸도데세스-16 0.4
에탄올 6.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 7: 마스크 팩용 유액
실시예 2의 발효물을 포함하는 화장료 중 마스크 팩용 유액의 제조예는 하기 표 9와 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 2의 발효물 1.0
폴리비닐알코올 15.0
셀룰로오스 검 0.15
글리세린 3.0
PEG 1500 2.0
사이클로덱스트린 0.15
DL-판테놀 0.4
알란토인 0.1
글리시리진산모노암모늄 0.3
니코틴아마이드 0.5
에탄올 6.0
PEG 40 경화 피마자유 0.3
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100

Claims (9)

  1. 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 당귀 초음파 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 하에서 추출된 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 당귀 초음파 추출물은 물로 추출된 추출물인 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 당귀 초음파 추출물은 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 5 내지 60분 동안 처리된 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 초음파 처리 시 추출온도는 50 내지 90 ℃인 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 당귀 초음파 추출물은 균주로 발효된 당귀 발효 추출물인 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물.
  8. 당귀 초음파 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 건강기능식품.
  9. 제8항에 있어서, 상기 당귀 초음파 추출물은 균주로 발효된 당귀 발효 추출물인 것을 특징으로 하는 피부미백 개선 및 자외선 차단용 건강기능식품.
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