KR102619963B1 - 프로바이오틱스를 이용한 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름개선 및 자외선 차단용 조성물 - Google Patents
프로바이오틱스를 이용한 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름개선 및 자외선 차단용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로 율피 발효 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 항산화 효과가 우수하며, 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단에 효과가 있다.
Description
본 발명은 프로바이오틱스로 발효시킨 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 화학적 합성물의 사용을 화장품의 경우에는 피부 자극성에 대한 부작용 때문에 소비자들에 대한 거부감이 갈수록 심해지고 있으므로 화학적 합성품의 사용을 줄이는 동시에 천연재료의 탐색 등이 이루어지고 있다.
여러 천연 소재 중에서 동물유래 소재는 동물복지와 광우병, 돼지콜레라, 조류독감 등으로 동물유래 소재에 대한 소비자의 거부감 증대로 식물성 원료를 이용한 기능성 화장품들의 개발이 활발히 이루어지며 천연물 성분을 사용한 항산화, 미백, 주름개선, 자외선 차단 등의 복합 기능성 화장품에 대한 소비자의 수요가 높아지고 있다.
기능성 화장품이란 미백, 주름개선, 자외선 차단과 같이 특정 기능이 첨가된 에센스, 세럼, 크림, 파우더, 베이스 등 다양한 사용단계의 화장품을 말한다. 한 가지 기능을 하는 복합기능 화장품도 개발되어 사용의 간편성이 높아지고, 모공케어, 영양공급, 탄력강화, 여드름 치료, 미백과 자외선 차단 등 다양한 목적에 따라 특화된 제품들도 출시되고 있다.
신규 단일물질의 국내유입이 어렵고 거대 화장품 업체가 미백과 자외선 차단의 복합기능성 제품 개발에 집중하고 있어 미백 소재가 급부상하고 있다.
현재까지 피부 미백과 주름개선 효과를 가지는 화장용 소재의 개발 및 사업화가 활발히 진행되었으며 오존층 파괴로 인한 자외선 노출량 증가로 인해 자외선차단제의 수요와 상품화에 대한 수요가 증가하고 있다.
한편, 우리나라는 전 세계 밤(chestnut) 생산량의 약 22%를 생산하는 최대 생산국이지만, 산림청(Korea forest service, 2014) 조사에 따르면 국내 밤 생산은 농촌 인구감소와 인건비 상승으로 인해 2013년 64,184 톤으로 최대 생산을 보인 이후, 2017년 53,042 톤으로 감소하고 있는 추세이다. 충남의 밤 생산비율은 전국의 40.9%이며 전년 대비 16.6%가 증가하여 전국의 밤 생산 감소에도 충남의 밤 생산은 꾸준히 유지되고 있다.
상기 밤은 조단백질 6.6%, 조섬유 2.3%, 조회분 1.7%, 조지방 0.9% 및 여러 가지 무기질 등으로 구성되어 있으며, 밤의 부산물인 율피는 버려지지 않고 현재 차, 화장품, 사료 등으로 많이 활용되고 있다. 그뿐만 아니라, 율피는 중금속 흡착률이 높아 생물흡착제로 사용할 수 있으며, 천연염료, 반추가축용 사료 등 율피의 기능성 연구도 활발히 진행 중이다.
본 발명은 천연물인 율피를 이용하여 우수한 기능성 및 항산화능을 가지면서 인체에 무해한 화장품 소재를 제공하고자 한다.
본 발명의 목적은 프로바이오틱스로 발효시킨 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물은 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있다.
상기 율피 발효 추출물은 율피 용매 추출물을 균주로 발효시킨 발효 추출물일 수 있다.
상기 균주는 바실러스 테퀼렌시스(Bacillus tequilensis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 율피 용매 추출물은 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 5 내지 60 분 동안 처리된 것일 수 있다.
본 발명의 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 독성이 없으며, 티로시나제 저해능 및 콜라게나제 저해능이 우수할 뿐만 아니라 총 폴리페놀의 함량, 총 플라보노이드의 함량 및 DPPH 라디칼 소거능이 높으므로, 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단용으로 사용될 수 있다.
본 발명은 프로바이오틱스로 발효시킨 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물은 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유한다.
본 발명에서 사용되는 율피는 밤의 과육으로부터 외피를 제거하여 과육의 표면에 보존된 것으로서 밤의 속껍질을 의미한다. 이러한 율피는 다수의 페놀성 수산기를 지닌 축합형 탄닌이 25%의 함유량으로 함유되어 있어 다양한 곳에 사용되고 있다.
본 발명의 율피 발효 추출물은 용매 추출물을 균주로 발효시킨 것이다.
상기 율피 용매 추출물은 추출용매 하에서 초음파처리를 통해 추출되는 것으로서, 구체적으로 율피와 추출용매가 1 : 5 내지 25, 바람직하게는 1 : 10 내지 20의 중량비로 혼합되어 20 내지 50 kHz, 바람직하게는 30 내지 40 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W, 바람직하게는 150 내지 400 W 파워의 초음파기로 50 내지 90 ℃, 바람직하게는 70 내지 80 ℃하에서 5 내지 60 분, 바람직하게는 15 내지 30 분 동안 처리된 것이다.
율피를 추출 시 초음파로 추출하는 것이 아니라 용매로 추출 또는 초고압으로 추출하는 경우에는 유효성분이 소량 추출될 뿐만 아니라 항산화, 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단 효과가 낮을 수 있다.
상기 율피와 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 율피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
또한, 초음파기의 진동수 및 파워가 상기 하한치 미만인 경우에는 율피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 유효성분 외에 다른 물질도 다량으로 추출되어 효과가 저하될 수 있다.
또한, 추출온도 및 추출시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 율피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 폴리페놀 및 티로시나아제의 열에 의한 변형으로 인해 기능성이 감소할 수 있다.
상기 추출물을 추출하는 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸렌글리콜, 에틸에테르 또는 이들의 혼합용매이다. 상기 저급알코올로는 20 내지 99 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액을 들 수 있으며, 바람직하게는 우수한 항산화 효과, 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단 효과를 위하여 물을 들 수 있다.
본 발명의 율피 발효 추출물은 상기 율피 초음파 용매 추출물, 바람직하게는 율피 초음파 열수 추출물에 균주를 접종시킨 후 25 내지 50 ℃에서 100 내지 300 rpm으로 1 내지 10일 동안 발효시킨 것이다.
상기 균주로는 바실러스 테퀼렌시스(Bacillus tequilensis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으며, 베타-글루코시데아제를 생산한다고 알려진 상기 균주 이외에 다른 균주를 사용하는 경우에는 항산화 효과, 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단 효과가 없거나 낮을 수 있다.
상기 발효 시 온도, 혼합 속도 및 시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 율피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 생리활성물질의 분해로 인해 원하는 효과가 전혀 발휘되지 못할 수 있다.
본 명세서에서 율피를 언급하면서 사용되는 용어 '추출물'은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 율피 발효 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 율피 발효 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 함유하는'이란 율피 발효 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 율피 발효 추출물은 10 내지 1500 ㎍/㎖, 바람직하게는 100 내지 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용된다. 율피 발효 추출물은 천연물로서 과량 사용하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 율피 발효 추출물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기의 화장료 조성물과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있으며, 이러한 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수, 수용성 비타민, 지용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 들 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상 사용되는 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 안료 및 천연향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 미스트, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도우, 입술보호제 등과 같은 화장품류와 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저 등이 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
실시예 1. 초음파 열수 발효 추출물
배양액
바실러스 테퀼렌시스(B. tequilensis SM18)[기탁번호: BP1429751]를 MRS broth에 1% 접종하여 진탕배양기에서 35 ℃에서 150 rpm으로 24 시간 배양하여 배양액을 수득하였다.
초음파 열수 발효 추출물
60 ℃의 오븐에서 48 시간 동안 건조시킨 율피와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 초음파기(JAC Ultrasinic, Hwaseng, Korea)에 투입 후 80 ℃ 하에서 초음파(40 kHz, 200 W)를 이용하여 30 분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 율피 초음파 열수 추출물을 수득하였다. 상기 수득한 율피 초음파 열수 추출물을 상온에서 냉각 후 율피 초음파 열수 추출물 4 mL와 상기 바실러스 테퀼렌시스 배양액 8 mL을 혼합하여 pH를 6.95~7.05로 조절한 후 당 1 중량%를 추가하여 37 ℃에서 48 시간 발효를 수행하였다. 48시간 후 호모게나이저(HG-15A, DAIHAN, Korea)로 세포를 파쇄하고 pH 4.78±0.05가 되도록 조절하여 45 ℃에서 48시간 효소분해 한 후 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 율피 발효 추출물을 수득하였다.
실시예 2. 열수 발효 추출물_초음파 생략
배양액
바실러스 테퀼렌시스(B. tequilensis SM18)[기탁번호: BP1429751]를 MRS broth에 1% 접종하여 진탕배양기에서 35 ℃에서 150 rpm으로 24 시간 배양하여 배양액을 수득하였다.
열수 발효 추출물
60 ℃의 오븐에서 48시간 동안 건조시킨 율피와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 80 ℃ 하에서 50 분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 율피 열수 추출물을 수득하였다. 상기 수득한 율피 열수 추출물을 상온에서 냉각 후 율피 열수 추출물 4 mL와 상기 바실러스 테퀼렌시스 배양액 8 mL을 혼합하여 pH를 6.95~7.05로 조절한 후 당 1 중량%를 추가하여 37 ℃에서 48 시간 발효를 수행하였다. 48 시간 후 호모게나이저(HG-15A, DAIHAN, Korea)로 세포를 파쇄하고 pH 4.78±0.05가 되도록 조절하여 45 ℃에서 48시간 효소분해 한 후 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 율피 발효 추출물을 수득하였다.
실시예 3. 율피 직접 발효물
배양액
바실러스 테퀼렌시스(B. tequilensis SM18)[기탁번호: BP1429751]를 MRS broth에 1% 접종하여 진탕배양기에서 35 ℃에서 150 rpm으로 8 시간 배양하여 배양액을 무균상태에서 0.1 M HCl과 0.1 M NaOH를 이용하여 pH를 6.95~7.05로 조정하였다.
율피 직접 발효
상기의 배양액과 멸균을 완료한 (121 ℃, 15 분) 율피 분말을 20 : 1의 중량비로 혼합하여 35 ℃에서 48 시간 배양을 진행하여 세포성장과 함께 효소분해를 병행하여 수행하고 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 율피 발효물을 수득하였다.
비교예 1.
초음파 열수 추출물_발효생략
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 율피와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 초음파기(JAC Ultrasinic, Hwaseng, Korea)에 투입 후 80 ℃ 하에서 초음파(40 kHz, 200 W)를 이용하여 30 분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 발효가 생략된 율피 초음파 열수 추출물을 수득하였다.
비교예 2. 열수 추출물_초음파 및 발효생략
상기 실시예 2와 동일하게 실시하되, 율피와 물을 1 : 20의 중량비로 혼합하여 80 ℃ 하에서 50 분 동안 추출한 다음 추출물을 1000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 초음파 및 발효가 생략된 율피 열수 추출물을 수득하였다.
<시험예>
시험예 1. 세포독성 측정
세포독성은 Moseman의 방법(Moseman T., J. Immuno. Methods, 65, 55 (1983)) 및 Skaper 등의 방법(Skaper S.D., et al., Cell Culture, 2, 17-33 (1990))을 이용한 MTT((3-4,5-디메틸티아졸-2릴)-2,5-디페닐-2H-테트라졸리움 브로마이드)((3-4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) 측정법을 이용하여 수행하였다. 인간 섬유아세포 HS68를 96 웰 플레이트에 배양하였다. 실시예 및 비교예에 따라 제조된 추출물을 각각 처리한지 12 시간 후, MTT 5 mg/mL 용액을 각 웰에 처리한 후에 37 ℃에서 4 시간 동안 반응시켰다. 배지를 제거한 후 DMSO를 넣어 형성된 포마르잔 크리스탈을 녹여서 ELISA 판독기를 이용하여 595 nm에서 측정하였다. 세포에 대한 독성은 대조구의 평균 흡광도 값에 대한 백분율로 나타냈다.
섬유아세포에서 추출물의 세포독성을 조사하기 위하여 1, 20, 50 μg/mL 농도의 추출물을 처리하였을 때, 대조구인 DMSO만을 처리한 것과 비교하여 세포증식의 변화 정도를 계산하여 세포독성을 조사하였다.
| 구분 | 농도(㎍/㎖) | |||
| 0 | 1 | 20 | 50 | |
| 실시예 1 | 94.2 | 93.9 | 93.1 | 92.7 |
| 실시예 2 | 94.1 | 93.8 | 94.0 | 93.1 |
| 실시예 3 | 93.4 | 93.9 | 92.8 | 92.4 |
| 비교예 1 | 94.5 | 94.6 | 92.8 | 92.5 |
| 비교예 2 | 93.2 | 92.9 | 93.1 | 92.8 |
위 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 3에 따라 제조된 율피 발효 추출물 및 비교예 1 내지 2의 율피 추출물 모두 세포 생존율이 90% 이상으로 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.
시험예 2. 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량 및 DPPH 소거능 측정
2-1. 총 폴리페놀 함량(mg GAE/mg DW): Folin-Denis 방법을 변형하여 측정하였으며, folin-ciocalteu's 페놀 용액(Folin & Ciocalteu's phenol; Sigma-Aldrich, USA)을 시료에 첨가하여 폴리페놀 화합물에 의해 환원되어 발생하는 몰리브덴 청색발색 반응을 원리로 하였다. 시료 0.14 ㎖에 0.2 N F.C용액을 첨가하여 10 분 동안 방치 후 7.5% Na2CO3 0.56 ㎖을 첨가하여 1 시간 동안 반응시켜 흡광도 값을 756 nm에서 측정하였다. 표준물질로 gallic acid (Sigma-Aldrich, USA)를 사용하였고, 단위는 작성한 gallic acid 검량선과 비교하여 mg gallic acid equivalent(GAE)/g dry weight(DW) 로 표시하였다.
2-2.총 플라보노이드 함량(total flavonoid content, TFC) : TFC 함량은 Zhishen 등의 방법을 변형하여 사용하였다[21]. 플라보노이드에 알칼리를 작용시키면 황색으로 발색되는 원리에 근거하여 흡광도를 측정해 TFC 농도를 측정하였다. 각 시료 0.5 mL에 증류수 2.5 mL와 99.5% (v/v) 에탄올 1.5 mL 가한 후 1 M potassium acetate 0.1 mL와 10% aluminum chloride 0.1 mL를 가하여 교반한 후 실온에서 30 min 방치하였다. 415 nm 에서 흡광도를 측정하였으며 quercetin (Sigma-Aldrich, Minneapolis, USA)을 25, 50, 100, 200 ㅅg/mL로 희석하여 검량선을 구하여 플라보노이드 함량을 mg quercetin equivalent (QE)/g dry matter (DM)로 나타내었다.
2-3. DPPH 소거능(%): 전자공여능은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였으며 항산화 활성이 있는 물질과 반응하여 짙은 보라색에서 노란색으로 색이 엷어지는 원리를 이용한 DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl, Sigma-Aldrich) free radical 소거활성을 통해 시료의 환원력을 측정하였다. 시료 0.25 ㎖에 DPPH 용액 1.25 ㎖을 가하여 암실에서 20 분 동안 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도를 기준으로 하기 [수학식 1]에 따라 DPPH 라디칼 소거활성을 백분율로 표시하였다.
[수학식 1]
DPPH radical scavenging activity (%)={1-(Abs(test)-Abs(color))/Abs(control)}X100
| 구분 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 |
| 총폴리페놀 (mg GAE/g DW) |
53.4±0.78 | 40.15±0.92 | 28.15±1.06 | 31.8±0.82 | 32.5±0.85 |
| 총플라보노이드 (mg QE/g DM) |
6.31±0.07 | 5.02±0.05 | 4.39±0.11 | 4.51±0.07 | 3.15±0.18 |
| DPPH 소거능(%) | 85.4±1.15 | 74.62±1.57 | 69.82±1.06 | 69.4±1.10 | 71.7±2.85 |
위 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2에 따라 제조된 율피 발효 추출물은 실시예 3 및 비교예 1 내지 2의 율피 추출물에 비하여 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량이 높으며 DPPH 소거능이 우수한 것을 확인하였다.
특히, 실시예 1의 율피 발효 추출물이 다른 군에 비하여 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량이 더욱 높으며 DPPH 소거능이 더욱 우수한 것을 확인하였다.
폴리페놀 및 플라보노이드는 항산화 효과가 우수하므로 실시예 1 및 2에 따라 제조된 율피 발효 추출물이 다른 군에 비하여 항산화 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.
또한, 항산화 활성의 지표인 DPPH radical 소거능을 측정한 결과, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량과 비례 관계를 확인하였다.
시험예 3. 티로시나아제(Tyrosinase) 및 콜라게나아제(Collagenase) 활성 저해
3-1. 티로시나아제 활성 억제: 티로시나아제의 저해 활성은 Flurkey의 방법을 변형하여 실험하였다. sodium phosphate monobasic anhydrous 0.8039 g, sodium phosphate dibasic anhydrous 0.9511 g을 각각 증류수 100 mL에 녹여 pH를 6.8로 조정하여 buffer를 제조하였다. 제조된 buffer로 기질10mM 3,4-dihydroxy phenylanin (I-dopa) (20 mg/mL)와 효소 1250 unit tyrosinase를 제조하였으며 1250 unit tyrosinase는 증류수에 10배 희석하여 사용하였다. 양성 대조군으로는 kojic acid (2 mg/mL)를 제조하였다. 2 mL 마이크로튜브에 buffer 0.4 g, 기질 0.2 g, 시료 0.2g, 효소 0.2 g을 순서대로 첨가하여 교반한 뒤 25 ℃에서 30 분간 반응시켰다. 반응 후 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.
[수학식 2]
티로시나아제 저해율(Inhibitory activity, %) = [1-시료OD/ 대조군OD]*100
3-2. 콜라게나아제 저해 효과: 콜라게나아제 저해 효과는 Wusch와 Heidrich의 방법을 변형하여 측정하였다. 0.1 M tris와 4 mM cacl2 혼합액에 1 M Hcl을 첨가하여 buffer의 pH를 7.5로 조정하였다. 제조된 buffer에 기질 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg (1.2 mg/mL)와 효소 collagenase (0.4 mg/mL)를 제조하였으며 양성 대조군 L-ascorbic acid를 추출 시료의 고액비에 맞추어 제조하였다. 마이크로튜브에 조건별로 추출한 시료 0.05 g, 음성대조군과 양성대조군에는 시료대신 각각 증류수와 L-ascorbid acid를 첨가한 후 효소 0.075 g, 기질 0.125 g을 순서대로 첨가하여 교반한 뒤 37 ℃에서 30 분간 반응시켰다. 반응 후 20% citric acid 0.25 mL를 첨가하여 반응을 정지시킨 다음 ethyl acetate 1.2 mL을 첨가하여 10 분간 rpm 120에 교반하였다. 그 후 원심분리한 뒤 상등액만 분리하여 320 nm에서 흡광도를 측정하였다.
[수학식 3]
콜라게나아제 저해율(Inhibitory activity, %) = [1-시료OD/ 대조군OD]*100
| 구분 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 |
| 티로시나아제 저해율(%) | 77.7±1.51 | 67.14±1.30 | 62.04±1.06 | 60.1±1.64 | 62.5±2.15 |
| 콜라게나아제 저해율(%) | 81.2±1.50 | 76.77±1.66 | 73.50±1.12 | 71.3±1.71 | 75.0±2.28 |
위 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2에 따라 제조된 율피 발효 추출물은 실시예 3 및 비교예 1 내지 2의 율피 추출물에 비하여 티로시나아제 저해율 및 콜라게나아제 저해율이 높은 것을 확인하였다.
특히, 실시예 1의 율피 발효 추출물이 실시예 2의 율피 발효 추출물에 비해서도 티로시나아제 저해율 및 콜라게나아제 저해율이 높은 것을 확인하였다.
시험예 4. 자외선 차단
실시예 및 비교예에 따라 제조된 율피 발효 추출물의 자외선 차단율을 측정하기 위하여 UV/Vis spectrophotometer를 이용하여 자외선 A (320-400 nm)와 자외선 B (290-320 nm) 파장범위에서 차단율을 측정하였고 이를 대표적인 폴리페놀인 탄닌 10 mg/mL로의 자외선 차단능과 비교하여 흡광도를 측정하였다.
| 구분 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 |
| UV-A 차단율(%) 타닌 대비 |
15.7 | 12.0 | 9.1 | 8.4 | 3.0 |
| UV-B 차단율(%) 타닌 대비 |
38.4 | 34.4 | 25.1 | 27.6 | 11.2 |
위 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2에 따라 제조된 율피 발효 추출물은 실시예 3 및 비교예 1 내지 2의 율피 추출물에 비하여 자외선 차단율이 높으므로 피부에 닿는 자외선 차단에 효과이다.
즉, 피부에 도포된 화장료 조성물에서 자외선을 차단하므로 피부에 직접적으로 닿는 자외선은 거의 없다.
본 발명을 적용하기에 적합한 화장료 조성물의 제조예를 제시하기로 한다.
제조예 1: 화장수
실시예 1의 로스팅 율피 추출물을 포함하는 화장료 중 화장수의 제조예는 하기 표 5와 같다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| 실시예 1의 추출물 | 5.0 |
| 글리세린 | 6.0 |
| 1,3-부틸렌글라이콜 | 3.0 |
| 피이지1500 | 1.0 |
| 알란토인 | 0.1 |
| DL-판테놀 | 0.3 |
| EDTA-2Na | 0.02 |
| 벤조페논-9 | 0.04 |
| 소듐하이알루로네이트 | 5.0 |
| 에탄올 | 10.0 |
| 폴리소르베이트20 | 0.2 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 |
| 합계 | 100 |
제조예 2: 로션
실시예 1의 로스팅 율피 추출물을 포함하는 화장료 중 로션의 제조예는 하기 표 6과 같다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| 실시예 1의 추출물 | 3.0 |
| 프로필렌글리콜 | 6.0 |
| 글리세린 | 4.0 |
| 트리에탄올아민 | 1.2 |
| 토코페릴아세테이트 | 3.0 |
| 유동 파라핀 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 3.0 |
| 마카다미너트오일 | 2.0 |
| 폴리소르베이트 60 | 1.5 |
| 소르비탄세스퀴올레이트 | 1.0 |
| 카르복시비닐폴리머 | 1.0 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 |
| 합계 | 100 |
제조예 3: 영양 크림
실시예 1의 로스팅 율피 추출물을 포함하는 화장료 중 영양 크림의 제조예는 하기 표 7과 같다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| 실시예 1의 추출물 | 1.0 |
| 친유형 모노스테아린산글리세린 | 1.5 |
| 세테아릴 알코올 | 1.5 |
| 스테아린산 | 1.0 |
| 폴리소르베이트 60 | 1.5 |
| 소르비탄 스테아레이트 | 0.6 |
| 이소스테아릴이소스테아레이트 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 5.0 |
| 광물유 | 35.0 |
| 디메치콘 | 0.5 |
| 하이드록시에칠셀룰로오스 | 0.12 |
| 글리세린 | 6.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.7 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 |
| 합계 | 100 |
제조예 4: 에센스
실시예 1의 로스팅 율피 추출물을 포함하는 화장료 중 에센스의 제조예는 하기 표 8과 같다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| 실시예 1의 추출물 | 1.5 |
| 글리세린 | 10.0 |
| 베타인 | 5.0 |
| PEG 1500 | 2.0 |
| 알란토인 | 0.1 |
| DL-판테놀 | 0.3 |
| EDTA-2Na | 0.02 |
| 벤조페논-9 | 0.04 |
| 하이드록시에칠셀룰로오스 | 0.1 |
| 소듐하이알루로네이트 | 8.0 |
| 카르복시비닐폴리머 | 0.2 |
| 트리에탄올아민 | 0.18 |
| 옥틸도데칸올 | 0.3 |
| 옥틸도데세스-16 | 0.4 |
| 에탄올 | 6.0 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 |
| 합계 | 100 |
제조예 5: 마스크 팩용 유액
실시예 1의 로스팅 율피 추출물을 포함하는 화장료 중 마스크 팩용 유액의 제조예는 하기 표 9와 같다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| 실시예 1의 추출물 | 1.0 |
| 폴리비닐알코올 | 15.0 |
| 셀룰로오스 검 | 0.15 |
| 글리세린 | 3.0 |
| PEG 1500 | 2.0 |
| 사이클로덱스트린 | 0.15 |
| DL-판테놀 | 0.4 |
| 알란토인 | 0.1 |
| 글리시리진산모노암모늄 | 0.3 |
| 니코틴아마이드 | 0.5 |
| 에탄올 | 6.0 |
| PEG 40 경화 피마자유 | 0.3 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 |
| 합계 | 100 |
Claims (4)
- 율피 초음파 추출물을 바실러스 테퀼렌시스(Bacillus tequilensis)로 발효시킨 율피 초음파 발효 추출물을 유효성분으로 함유하며,
상기 율피 초음파 추출물은 율피와 물을 혼합하여 50 내지 90 ℃에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 5 내지 60 분 동안 처리한 것을 특징으로 하는 피부미백 개선, 주름 개선 및 자외선 차단용 화장료 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210135784A KR102619963B1 (ko) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 프로바이오틱스를 이용한 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름개선 및 자외선 차단용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210135784A KR102619963B1 (ko) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 프로바이오틱스를 이용한 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름개선 및 자외선 차단용 조성물 |
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|---|---|
| KR20230052570A KR20230052570A (ko) | 2023-04-20 |
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| KR1020210135784A KR102619963B1 (ko) | 2021-10-13 | 2021-10-13 | 프로바이오틱스를 이용한 율피 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선, 주름개선 및 자외선 차단용 조성물 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010081359A (ko) | 2000-02-14 | 2001-08-29 | 전병관 | 밤차 |
| KR101671909B1 (ko) | 2014-12-12 | 2016-11-03 | 주식회사 명진에프앤비 | 율피를 이용한 발효 음료 및 그 제조방법 |
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-
2021
- 2021-10-13 KR KR1020210135784A patent/KR102619963B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 구율리 외 2명. 효소처리 및 가압추출공정을 이용한 율피 추출물의 항산화, 피부미백 및 주름개선 효과. 한국식품저장유통학회, 2018 |
| 김근정. 석류피 가공 소재의 자외선 차단연구. 이화여자대학교 의류학과 석사학위논문, 2019년1월 |
| 최미옥 외 6명. 유산균 발효에 의한 율피(Castanea crenata inner shell) 열수추출물의 아토피 피부질환에 관한 효과연구. 한국식품저장유통학회, 2013 |
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| KR20230052570A (ko) | 2023-04-20 |
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